FI90551C - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen sialosyyliglyseridin valmistamiseksi - Google Patents

Description

1 90551

Menetelma terapeuttisesti kayttfikelpoisen sialosyyligly-seridin valmistamiseksi

Esilia oleva keksinto koskee menetelmaa terapeutti-5 sesti kåyttokelpoisen sialosyyliglyseridin valmistamisek-si, jonka kaava on (I) OH COOR2 ______ 10 cl ° / ·, HO / / — OR3 i1)

OH

15 jossa R2 on alempi alkyyli tai alkalimetalli, R3 on vety tai -CO(CH2)bCH3, R4 on -CO(CH2)nCH3 ja m ja n ovat kumpikin lukuja 0-30.

Monet sairaudet, jotka johtuvat hermostojarjestel-maan liittyvistå vaurioista, ovat vaikeasti hoidettavia.

20 Nåihin sairauksiin tarkoitettuja laakkeita ei ole paljon. Talla hetkelia kaytetaan kliinisesti gangliosidia (tava-ramerkkinimi: Cronassial. Katso JP-patentti, kasittelema-tdn julkaistu hakemus (jota tasta eteenpain merkitaan "J.P. K0KAI":na) nro 52-34912), joka on luonnollinen gli- 25 kolipidi, ja Mecobalaminia (vitamiinityyppinen aine).

Kuitenkaan naiden teho ei ole riittava ja siksi tarve tehokkaamman laakityksen kehittamiseksi on suuri.

Perinpohjaisten tutkimusten, joiden tarkoituksena oli tayttaa edelia mainittu vaatimus, jalkeen patentinha- 30 kijat ovat kehittaneet sialosyyliglyserolipideja, joilla on yleinen kaava OR1 COOR2 *ΐ0^^η-- 35 1 / °l R 0 / / —OC H _ .

AcNH\A-7\ / n 2n+1 / —OC H„ , 1 , n 2n+l OR1 2 90551 jossa R1 on vetyatomi tai CH3CO-, R2 on alkalimetalli, vety-atomi tai alempi alkyyliryhmå, ja n on luku 1 - 30, ja jotka ovat kåyttdkelpoisia lååkkeinå hoidettaessa hermo-sairauksia (katso JP-patenttihakemus nro 62-283491).

5 Yleisesti luonnollisten yhdisteiden esterisidosten måårå on suurempi kuin eetterisidosten måårå. Sialosyyli-glyserolipideisså on kuitenkin eetterisidoksia glyserolin 1-asemassa ja 2-asemassa. Siten nåmå yhdisteet eivåt aina ole riittåvån yhteen sopivia kehon elåvien aineiden kans-10 sa, eivåtkå ne ole aina loistavia antigeeni-vasta-aine -reaktion kannalta. Lisåksi, koska nåisså yhdisteisså on eetterisidoksia, on vaikea valita sopiva suojaryhmå, kun nåitå yhdisteitå valmistetaan. Siten edellå kuvatuista syistå johtuen niitå ei voida valmistaa helposti.

15 Esillå olevan keksinndn kohteena on tarjota uusi yhdiste, joka on kåyttdkelpoinen lååkkeeksi hermostosai-rauksiin ja joka sopii erinomaisesti yhteen elåvien kehon kappaleiden kanssa ja jota voidaan valmistaa helposti.

Edellå kuvatun keksinnon kohteen saamiseksi suori-20 tettujen perinpohjaisten tutkimusten jålkeen keksijåt ovat havainneet, ettå mainittu uusi yhdiste voidaan saada liit-tåmållå esterisidos sialiinihappoa sisåltåvån lipidijoh-dannaisen glyseroliosan 1- tai 2-asemaan. Esillå oleva keksintO perustuu tåhån havaintoon.

25 Esillå olevan keksinnon mukaiselle menetelmålle kaavan ( I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tun-nusomaista, ettå (a) poistetaan monohalogeeniasetyyliryhmå yhdis-teestå, jolla on kaava (II) 30 OR5 COOR6 R50 / / —OR3 (II) 35 Γ 4 OR5 3 90551 jossa R3 ja R4 merkitsevåt samaa kuin edelia, R5 on XCH2CO-, jossa X on halogeeniatomi, ja R6 on vetyatomi tai alempi alkyyli, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (HI) 5 OH “OR7 Η0·^Λγη—— HO* / / — 0R (III)

AcNH / / 4

io ^ / " 0R

OH

jossa R3 ja R4 merkitsevSt samaa kuin edelia ja R7:lla on merkitys alempi alkyyli, tai 15 (b) kaavan (III) mukainen yhdiste kasitellåan alka lisen vesiliuoksen kanssa, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R2 on alkalimetalli.

Esilia olevaa keksintoa kuvataan seuraavaksi yk-sityiskohtaisemmin.

20 Kaavassa (I) oleva alkalimetalli R2 on edullisesti natrium, ja alempi alkyyliryhmå on edullisesti metyyli-ryhmS.

Kaavassa (I) olevat m ja n ovat kumpikin edullisesti 6 - 20, erityisesti 14 - 16.

25 TSman keksinnOn mukaista menetelmaa selostetaan seuraavaksi viitaten seuraavaan reaktionkaavioon (I): 4 90551 r-> rn at ΰ ΰ 5 ~Ξ - — O ΰ a o o / /

8 8 /__/ I

i 10 5 \ ^ ~ = ^ O· --LJ ^ to \ o é '* - . CD ^ ro ro „ a se g U U ,-<5 EC S ¥. / (N £4 ------s.

Η H S V / ° o O / L$ ~ :,0 > i—i—i - ~ e (0 ' ~ a \ ~y> a <ti ^ “ S.-,-\ur >1

« V ' s -¾ M

-*\ -H

>1 >ί 4-· :<0 φ ε w x: <0 >i •HP P -H O -H O >1 i—I >i M w O -P C c S O <L) 5 ε xi 3—11 11

o ^7 ril C

/ / u m

/ / S

So / i = -r —.

I-1-1 " ~ <D

o ~ \ > -P

o s-(-4. s -H

\ -s α ·η „) o ^ 5 90551 η η η x a: X U Ο Η- - c

—· CN CN

οι χ a: x ου ~ ο ο ο ου 8 ° ° Ο I-1-1

ι__ *-> I

ι I / St ο Φ< :u· m \ a \ ϋ m

5c *> g> ί S

CN 0 CN

x J x

CJ <N CJ

o S O

O O O

^ ? § 3 « o _ •o —i—i y λ i—1—1 -π o 8 =-ί\ α «i o* * ~s V""^ £ 5—& J3··: U-: ι ύ -yt - (0 - , Ξ/ (0 !*5 I η = 0.

' .; I 3

. o C

SS

I 1 '

O

... ae

O

s 7 / M ^ : il »

: il N. CN CN

^ \ X X

/ U i Η H

3 - 8 8- a-r-^^r r-5-8 ~ > - · =5 .> O ' 6 90551

Yhdiste (2) valmistetaan esterdimaiia yhdiste (1) happohalogenidin, jolla on seuraava kaava: CH3( CH2 )nCOX 5 jossa n on luku, joka on 0 - 30 ja X on halogeeniatomi, kuten tetradekanoyylikloridin kanssa, tarvittaessa ter-tiSSrisen emåksen, kuten trietyyliamiinin lasna ollessa, liuottimessa, kuten vedettdmassa pyridiinissa, dikloori-10 metaanissa, dikloorietaanissa, THF:ssa, etyyliasetaatis-sa, DMF:ssa tai kloroformissa, låmpotilassa, joka on 0 -80 °C, esimerkiksi huoneen lampdtilassa, reaktion kestaes-sa noin kuudesta tunnista yhteen viikkoon. Happokloridin alkyyliosassa voi olla haara. Voidaan kayttaa myds happo-15 halogenidien seosta. Saannon kannalta X on edullisesti klooriatomi. Yhdiste (1) on kaupallisesti saatavissa ja sen valmistusmenetelma on myds hyvin tunnettu. Vaikka yh-disteen (1 ) bentsyyliryhma voidaan korvata monella eri substituentilla, bentsyyliryhma on kuitenkin edullisin 20 saantoa ajatellen.

Yhdiste (3) muodostetaan eliminoimalla bentsyyliryhma yhdisteesta (2). Tassa vaiheessa bentsyyliryhma eli-minoidaan siten, etta yhdistetta (2) kasiteliaan katalyy-tin, kuten Pd-C:n (palladoitu aktiivihiili) lasna ollessa, 25 liuottimessa, kuten etyyliasetaatissa, metanolissa, etano-lissa, THF:ssa tai etikkahapossa, vetyhoyrysså, lampotilassa, joka on 0 - 40 °C, esimerkiksi huoneen lampotilassa, ja kasittely kestaa viidesta tunnista viiteen paivaan.

Yhdiste (4) valmistetaan N-asetyylineuramiinihapos-30 ta (sialiinihappo). LahtOaineena kaytettava sialiinihappo ja menetelma yhdisteen (4) valmistamiseksi sialiinihaposta tunnetaan hyvin. Yhdiste (4) per se on myds hyvin tunnettu yhdiste ja sita on kaupallisesti saatavissa.

Yhdiste (5) voidaan valmistaa saattamalla yhdiste 35 (4) reagoimaan monohalogenoidun vedettdman etikkahapon,

U

7 90551 kuten monokloorietikkahapon kanssa. Reaktio suoritetaan yleenså vedettdmissa olosuhteissa. Liuottimena DMF on edullinen. LampOtila on -10 °C - 40 "C, tavallisesti se on noin huoneen lémpOtila. Reaktioaika on yleenså noin yhdes-5 ta tunnista kolmeen paivaan.

Yhdiste (6) voidaan valmistaa saattamalla yhdiste (5) reagoimaan kaasumaisen vetyhalogenidin kanssa liuot-timessa, samanaikaisesti jaissa jåahdyttaen. Kayttdkelpoi-sia liuottimia ovat asetyylihalogenidit, kuten asetyyli- 10 kloridi, seka dikloorietaani ja dikloorimetaani. Vetyhalo-genidi on edullisesti kaasumainen vetykloridihappo. Kun reaktio on kyliastetty kaasumaisella vetyhalogenidilla, sen annetaan jatkua -20 °C - 30 °C:ssa noin viidesta tunnista viiteen påivaan.

15 Yhdiste (7) voidaan valmistaa saattamalla yhdiste (3) reagoimaan yhdisteen (6) kanssa katalyytin, kuten elo-hopea(11 )bromidin tai elohopea(II)syanidin kanssa, liuot-timessa, kutendikloorimetaanissa, dikloorietaanissa, DMF:ssa, asetonitriilisså, CH3N02:ssa tai THF:ssa, låmpo-20 tilassa, joka on -10 °C - 50 °C, ja reaktio keståå esimer-kiksi 30 minuutista 10 tuntiin. Saannon kannalta yhdisteen (6) X-ryhma on edullisesti klooriatomi ja karboksylaatin R-ryhma on edullisesti metyyliryhma.

N&in valmistettu yhdiste (7) on seoksena, jossa on 25 yhdisteen o-tyyppiS ja B-tyyppiS.

Nåin valmistettu yhdiste (7) saatetaan sitten reagoimaan tiourean tai vastaavan yhdisteen kanssa monohalo-genoidun asetyyliryhmån eliminoimiseksi, ja nSin saadaan seos, jossa on yhdistettå (8) ja (9), ts. seos, jossa on 30 α-tyypin yhdistettS ja β-tyypin yhdistettå. Liuotin on pyridiini, etanoli, metanoli, THF tai vastaava liuotin. Låmpdtila on 30 - 100 °C, edullisesti noin huoneenlMmpo-tila. Reaktioaika on 10 minuutista kolmeen paivaan, eri-tyisen edullisesti se on 30 minuutista yhteen paivaan.

8 90551

Yhdisteita (8) ja (9) kåsitellåån alkalimetallihyd-roksidilla, kuten NaOH:lla, liuottimessa, kuten THF:ssa, yhdisteiden (10) ja (11) valmistamiseksi, tåssa jSrjestyk-sessa. Reaktio suoritetaan tavallisesti jåisså jaahdyt-5 tSen. Reaktioaika on noin 10 minuutista kahteen påivSån, esimerkiksi noin 30 minuutista yhteen påiv3Sn.

Seuraavat esimerkit valaisevat lisåå esilia olevaa keksintOS.

Esimerkki 1 10 Yhdisteen (2) valmistus (m ja n ovat 12)

Bn03 BnO- 2 “ 0H CH3(CH2)12COC£(M:246,82) - OCO(CH2)12CH3 15 1 0H kuivassa pyridiinissa LOCO(CH2)χ2CH3 C.nH1η O, 10 11 3 C38H66°5 (M:602'91> (1) (2) 3-0-bentsyyli- 1,2-di-0-tetradekano- 20 Sn-glyseroli yyli-3-O-bentsyyli-

Sn-glyseroli 4,30 g (17,4 mmol) tetradekanoyylikloridia lisåt-tiin 20 ml:aan liuosta, jossa oli 1,27 g (6,98 mmol) yh-: : 25 distetta (1) vedettOmåssa pyridiinissa, ja seosta sekoi- 'tettiin huoneen lampOtilassa kolme paivaa. Liuotin tislat-tiin pois ja reaktioneste liuotettiin 300 ml:aan etyyli--·*. asetaattia. Liuos pestiin 0,1 N HCl-liuoksella, kyliaisel- ia natriumvetykarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella, ja 30 sitten se kuivattiin vedettOmaiia magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin ja nain saatiin 6,2 g Oljyista tuo-tetta. Tuote puhdistettiin silikageelikolonnikromatogra-fialla (400 g Kieselgel 60:ta (Merck Co:n tuote), heksaa-ni/etyylieetterisuhde = 20:1 - 10:1), ja nain saatiin 3,88 . *. 35 g (6,44 mmol) yhdistetta (2). Saanto: 92,2 %.

U

9 90551

Yhdisteen (2) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- raavat: 500 MHz, 1H-NMR, CDC13,TMS, δ 0,879 (3H, t, J=7,0Hz CHg) 5 0,883 (3H, t, J=7,0Hz CH3) 1,254 (40H, m, CH2 x 20) 1,600 (4H, m, CS2'3’ x 2) 2,275 (2H, t, J=7,7Hz CH2-2') 2,317 (2H, t, J=7,5Hz C^-2') 10 3,578 (1H, dd, J=ll,6, 5,1Hz H-3) 3,602 (1H, dd, J=ll,6, 5,1Hz H’-3) 4,190 (1H, dd, J=ll,9, 6,4Hz H-l) 4,344 (1H, dd, J-11,9, 39Hz H'-l) 4,538 (2H, dd, J = 20,5, 12,1Hz φ-CH^ ) 15 5,239 (1H, m, Cg-2)

Esimerkki 2

Yhdisteen (3) valmistus (m ja n ovat 12) 20

BnO -i HO —i 3 — 0C0 (CH2) , 2CH3 -»· 2 — OCU (C-H2) , 2CH3 . : —OCO (CH2) , 3CH3 , *—OCO (CHa) , aCH3 25 CaaHeeOs (Ms 602,91) C3>H6 O O S (M : 512 ,79) ( 2 ) ( 3 ) 1,2-di-O-tetradekanoyyli-Sn-glyseroli 30 3,08 g (5,10 mmol) yhdistetta (2) liuotettiin 40 ml:aan etyyliasetaattia. 300 mg 10-%:sta palladoitua ak-tiivihiiltS lisattiin liuokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lampOtilassa vetyatmosfaarissS kaksi pSivaS. Reak-tloseos suodatettiin seliitin ISpi. jaSnntts pestiin kloro-35 formilla. Suodos yhdistettiin pesuliuoksen kanssa. Liuotin 10 90 5 51 haihdutettiin. Syntynyt jSSnnos uudelleenkiteytettiin pet-rolieetteristS, jolloin saatiin 2,51 g (4,89 mmol) yhdis-tetta (3). Saanto: 95,9 %.

Yhdisteen (3) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- 5 raavat:

500 MHz, 1H-NMR, CDClg, TMS

0,880 (6H, t, J=7,0Hz CHg x 2) 1,271 (40H, m, Cg2 x 20) 1,613 (4H, m, q^"3' x 2) 10 2,044 (1H, m, HO) 2,322 (2H, t, J=7,5Hz C^-2') 2,344 (2H, t, J=7,5Hz 0^-2') 3,729 (2H, d, J=4,4Hz CH2~3) 4,236 (1H, dd, J=l,9, 5,7Hz H-l) 15 4,319 (1H, dd, J=ll,9, 4,6Hz H'-l) 5,082 (2H, m, H-2)

Esimerkkl 3

Yhdisteen (5) valmistus (R on Me) 20 nu DMCA (OH) ' OH I p10 ΠH Ϊ yn ° / cooMe : » A IrJj -*

OH 0HCA

(4) (5) 30 Metyyli-(5-asetamidi-2,4,7,8-penta-O-klooriasetyy- li-3,5-dideoksi-S-D-glysero-D-galakto-2-nonulopyranosyy-li)onaatti 5,13 g (15,87 mmol) yhdistettå (4) liuotettiin 50 ml:aan vedetiinta DMF:a. 1,53 g (19,04 mmol) natriumvety-35 karbonaattia ja 20,35 g (119,00 mmol) vedetdntS monokloo- 11 90 551 rietikkahappoa lisattiin liuokseen ja seosta sekoitettiin argonatmosfaarissa huoneen lampdtilassa kuusi tuntia. Reaktioseos kaadettiin jååveteen. Liukenematon tuote ke-rattiin talteen suodattamalla ja liuotettiin 500 ml:aan 5 kloroformia. Liuos pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin vedettomaiia magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin. Syntynyt jaånnds puhdistettiin Si02-kolonnikromatografialla (Wako Gel C-300, CHCl3/MeOH = 50:1), jolloin saatiin 4,8 g penta- ja tetramonoklooriasetyylia, yhdistetta (5). Saan-10 to: 43,9 %.

Yhdistetta (5) kaytettiin seuraavassa vaiheessa puhdistamatta.

Esimerkki 4

Yhdisteen (6) valmistus (R on Me, X on Cl) 15 }mca (oio A FA re QMC/U- .

OMCA 0llCA

(5) <6> 25 Metyyli-(5-asetamidi-4,7,8,9-tetra-O-klooriasetyy- li-2-kloori-2,3,5-trideoksi-6-D-glysero-D-galakto-2-nonu-lopyranosyyli)onaatti 1,80 g yhdistetta (5) liuotettiin 30 ml:aan ase-tyylikloridia. Liuos kyliastettiin vetykloridikaasulla 30 jaahdyttaen samanaikaisesti jaissa, ja sita sekoitettiin kaksi paivaa suljetussa astiassa huoneen lampGtilassa. Liuotin tislattiin pois ja jaannos tislattiin atseotroop-pisesti tolueenin kanssa kolme kertaa, jolloin saatiin 1,6 g yhdistetta (6). Saanto: 94,7 %.

12 90 551

Esimerkki 5

Yhdisteen (7) valmistus (R on Me, m ja n ovat 12) 11° Mil

5 i* L

J r-OCOiCH,) ,,CH, 0—/Vnn<i. .^fO(CHj) i jCHi

OliCA / / C005,e -L3 ) C»,H«.Qt(M;Sn τ<»

AcNH \j / ~ " ' ' *

OilCA

(6) 10

MCA

[OGMe

AcV»\/ In

NcoiCH,),,:!), °'!CA ^OCO(CHj) ,,CH, 15 ( 7) 3-0-[metyyli-[(5-asetamidi-4,7,8,9-tetra-O-kloo-riasetyyli-3,5-dideoksi-a- tai 8-D-glysero-D-galakto-2-nonulopyranosyyli)onaatti]-1,2-di-O-tetradekanoyyli-Sn-20 glyseroli

Seosta, jossa oli 2,5 g molekyyliseuloja 4A, 1,24 g (4,89 mmol) elohopea( II )syanidia ja 1,76 g (4,89 mmol) elohopea(II)bromidia kloroformissa, sekoitettiin 15 minuuttia huoneen låmpdtilassa. Sitten suspensioon lisåt-25 tiin 2,03 g (3,95 mmol) yhdistettå (3) ja seosta sekoitettiin argonatmosfåårisså huoneenlampdtilassa kaksi tuntia.

Reaktioseos jååhdytettiin jåisså. 15 ml liuosta, jossa oli 1,60 g (2,47 mmol) yhdistettå (6) vedettomåsså CHCl3:ssa, lisåttiin reaktioseokseen, jota sekoitettiin 30 huoneenlåmpOtilassa 45 tuntia ja sitten 50 °C:ssa vieia kaksi tuntia. Reaktioseos suodatettiin seliitin låpi. Suo-dos yhdistettiin pesuveden kanssa ja liuotin haihdutet-tiin tyhjOsså. 5,1 g nåin saatua jåånnOstå kromatografoi-tiin silikageelin låpi (230 g Wako Gel C-300, CHCl3/:EtOH 35 = 100:1), jolloin saatiin 1,92 g seosta, jossa oli a-tyy- t! 13 90551 pin ja β-tyypin yhdistettå (7) seka epapuhtauksia. Koska yhdiste (7) oli epSstabiili mååritettaesså sen fysikaali-sia ominaisuuksia (NMR), MCA-ryhmSt poistettiin ja yhdis-teiden (8) ja (9) fysikaaliset ominaisuudet maaritettiin.

5 Tutkittaessa yhdistettå (7) TLC:ssS, havaittiin seuraavat tSplåt:

Re; β-tyyppinen yhdiste 0,78 (CHCl3/MeOH = 40:1, Merck HPTLC) α-tyyppinen yhdiste 0,58 (CHCl3/MeOH = 40:1, 10 Merck HPTLF)

Esimerkki 6

Yhdisteiden (8) ja (9) valmistus (R on Me, m ja n ovat 12) oSca / / 1.,.

OCG(CHj) i jCHj OMCA -QCO(CHi),jCH, (7) 20 -OCOO.J.sCH,

HjC(CHj) , jOCO "

(II

25 CUDMe 0)1 ( 8 ) C',HiiOi)N (M: 818,07) 30 3-0-[metyyli-(5-asetamidi-3,5-dideoksi-B-D-glysero- D-galakto-l-nonylopyranosyyli )onaatti] -1,2-di-O-tetrade-kanoyyli-Sn-glyseroli (8) 14 9G 551

UH

miJ ]0UMe y^i o

Uh / / 5 AcN,l\Ap-^y ~OCO(CHj) i ,CHj O” *-0CD(CHa). ,CHa (9) 3-0- [metyyli-( 5-asetamidi-3, 5-dideoksi-a-D-glysero-10 D-galakto-2-nonylopyranosyyli )onaatti] -1,2-di-O-tetrade- okanoyyli-Sn-glyseroli (9) 1,74 g (1,55 mmol) yhdistettå (7) liuotettiin 20 ml:aan EtOH:a. 0,94 g (12,35 mmol) tioureaa ja 4 ml pyri-diiniå lisåttiin liuokseen, jota sekoitettiin huoneen låm-15 ptttilassa nelja tuntia ja sitten kuumentaen 55 °C:ssa yksi tunti. Liuotin haihdutettiin ja jåånndkseen lisåttiin CHCl3:a ja se suodatettiin liukenemattoman materiaalin poistamiseksi. Liuotin haihdutettiin suodoksesta ja jaån-nds kromatografoitiin silikageelin låpi (Wake Gel C-300, 20 CHClj/MeOH = 10:1), jolloin saatiin 45,3 mg β-tyypin yhdis- tetta (8), 111,5 mg α-tyypin yhdistettå (9) ja 402,0 mg seosta, jossa oli β-tyypin yhdistettå (8) ja α-tyypin yh-distetta (9).

Saanto: seos, jossa oli β-tyypin yhdistettå (8) ja 25 α-tyypin yhdistettå (9): 44,0 %

Yhdisteen (8) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- raavat:

Rf: 0,47 (CHCl3/MeOH = 10:1, Merck HPTLC) 500 MHz, 1H-NMR, CDClg, TMS, 6 30 0,880 (6H, t, J=7,0Hz Cg3 x 2) 1,256 (40H, m, Cg3 x 20) 1,600 (4H, m, (¾-3, X 2) 1,792 (IH, t, J=12,1Hz H-3a ax) 2,090 (3H, S, Cg3CONH) 35 2,350 (4H, m, c\±2~2' x 2) 2,479 (IH, dd, J=13,2, 4,8Hz H-3a eq) is 90551 3,783 (3H, S, COOCHg) 4,238 (IH, dd, J-12,1, 5,5Hz H-l) 4,319 (IH, dd, J=12,1 4,6Hz H'-l) 6.260 (IH, levea, CHgCONp) 5

Yhdisteen (9) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- raavat:

Rf: 0,44 (CHCl3/MeOH = 10:1, Merck HPTLC)

500 MHz, 1H-NMR, CDClg, TMS

10 0,880 (6H, t, J=7,0Hz Cg2 x 2) 1.260 (40H, m, CH3 x 20) 1,590 (4H, m, CS2-3' x 2) 1,855 (IH, t, J=12,3Hz H-3a ax) 2,058 (3H, S, CH3CONH-) 15 2,300 (2H, t, J=7,2Hz C^2~2') 2,315 (2H, t, J=7,2Hz CM2-2') 2,744 (IH, dd, J=13,0, 4,6Hz H-3a eq) 3,635 (IH, ddd, J=10,3, 4,8Hz H-4a) 3,853 (3H, S, COOC|i3) 20 4,106 (IH, dd, J=12,l, 6,6Hz H-l) 4,287 (IH, dd, J=12,l, 3,7Hz H'-l) 5,145 (IH, m, H-2) 6,231 (IH, d, J=7,3Hz CHgCONg)

Esimerkki 7 25 Yhdisteen (10) valmistus (M on Na, m ja n ovat 12) -OCO(CHj) ,,CHS -- OCO(Cllj) ,,αΐ3 H3C(CII3) ,,0C0- lUC(CII3). 2OCO-

[ _J P

30 \ I N-NaOII --- Å 6jrT^0/cme —

AcN,,\//r^V kzU\Ur-^j

Ul! oh <8 ) (10) 35 3-0-[natrium-(5-asetamidi-3,5-dideoksi-B-D-glysero- D-galakto-2-nonulopyranosyyli )onaatti] -1,2-di-O-tetradeka-noyyli-Sn-glyseroli 16 90551 28,0 mg (0,03 mmol) yhdistetta (8) liuotettiin 0,5 ml:aan THF:a ja 0,5 ml:aan vetta. Liuokseen lisattiin 30 μΐ (0,03 mmol) 1 N Na0H:a samanaikaisesti jaahdyttaen, ja seosta sekoitettiin yksi tunti. Reaktioseos neutraloi-5 tiin pH-arvoon 8 Amberlite IRC-50:lia ja se suodatettiin. Hartsi pestiin vedelia. Suodos yhdlstettiin pesuliuoksen kanssa ja seos puhdistettiin pylvaskromatografialla (Yama-mura Kagaku Kenkyujo ODS 60 A 60/200 seula, kehitysliuot-timet: H20 ja MeOH). Metanollpitoiset fraktiot otettiin 10 talteen ja haihdutettiin kuiviin. Sitten jaånnds lyofi-lisoitiin, jolloin saatiin 2,1 mg (0,0025 mmol) valkoista jauhemaista yhdistetta (10) (saanto: 8,3 %).

Yhdisteen (10) fysikaaliset ominaisuudet olivat seuraavat: 15 Rf: 0,23 (CHCl3/MeOH/AcOH = 10:2:0,3, Merck HPTLC) 500 MHz, 1H-NMR, CDC13 + CDgOD (1:1), TMS 0,889 (6H, t, J=7,0Hz CM3 x 2) 1,300 (40H, m, CH2 x 20) 1,650 (4H, m, CH2-3' x 2) 20 2,040 (3H, S, C^CONH) 5,200 (IH, m, H-2)

Esimerkki 8

Yhdisteen (11) valmistus (M on Na, m ja n ovat 12) 25

P DU

nit P00Me COONa OH / / IN NaOII, Oil / / “qc°(oh2)iich, AcNI)^r-^y — oco(ch,) ,acii3 30 0H *— 0C0(CH>) ,,CH3 Oil >-oco(CH,),ICH1 (9) (11) 3-0- [natrium- ( 5-asetamidi-3,5-dideoksi-a-D-glysero-D-galakto-2-nonylopyranosyyli)onaatti-l,2-di-0-tetrade-35 kanoyyli-Sn-glyseroli

B

17 90551 25,0 mg (0,03 mmol) yhdistetta (9) liuotettiin 1 ml:aan THF:a ja 0,5 ml:aan vetta. Liuokseen lisattiin 30 μΐ (0,03 mmol) 1 N NaOH:a samanaikaisesti jaahdyttaen ja seosta sekoitettiin yksi tunti. Reaktioseos neutraloitiin 5 pH-arvoon 8 Amberlite IRC-50:lia ja se suodatettiin. Hart-sl pestiin vedelia. Suodos yhdistettiin pesuliuoksen kans-sa ja seos puhdistettiin pylvaskromatografialla (Yamamura Kagaku Kenkyujo ODS 60 Å 60/200 seula, kehitysliuokset: H20 ja MeOH). Metanolipitoiset fraktiot otettiin talteen, 10 liuotin haihdutettiin ja jaannds lyofilisoitiin, jolloin saatiin 5,9 mg (0,007 mmol) valkoista jauhemaista yhdis-tetta (11) (saanto: 23,2 %).

Yhdisteen (11) fysikaaliset tiedot olivat seuraavat:

Rf: 0,12 (CHClg/MeOH/AcOH = 10:2:0,3, Merck HPTUC)

15 500 MHz, 1H-NMR, CDC13 + CD30D (1:1) TMS

0,889 (6H, t, J=7,0Hz CH3 x 2) 1,300 (40H, m, CM2 * 20) 1,650 (4H, m, cl2-3' x 2) 2,033 (3H, S, CH3CONH) 20 2,300 (4H, m, °^2~2' x 2) 2,822 (IH, m, H-3a eq) 4,170 (IH, m, H-2)

Claims (2)

18 90 551

1. Menetelma terapeuttisesti kåyttOkelpoisen sia-losyyliglyseridin valmistamiseksi, jonka kaava on (I) 5 2 OH COOR H(j / — OR3 (I) AcNH\ / — /

10. OR4 OH jossa R2 on alempi alkyyli tai alkalimetalli, R3 on vety tai -CO(CH2)nCH3, R4 on -CO(CH2)nCH3 ja m ja n ovat kumpikin 15 lukuja 0 - 30, tunnettu siita, ettå (a) poistetaan monohalogeeniasetyyliryhmå yhdis-teestå, jolla on kaava (II) OR5 COOR6 20. f S R °N/yp^ 0^0η rV / / — OR3 (II) AcNH \ / / λ / — OR 25 0r5 jossa R3 ja R4 merkitsevåt samaa kuin edellå, R5 on XCH2C0-, jossa X on halogeeniatomi, ja R6, on vetyatomi tai alempi alkyyli, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (III)

30 COOR7 OH Z' ho' / / -or3 (III) AcNH ^ / / 4 35 ^"^7 - OR OH il 19 90 551 jossa R3 ja R4 merkitsevat samaa kuin edella ja R7:lla on merkitys alempi alkyyli, tai (b) kaavan (III) mukainen yhdiste kasitellaan alka-lisen vesiliuoksen kanssa, jolloin saadaan kaavan (I) mu-5 kalnen yhdiste, jossa R2 on alkalimetalli.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmS, tun n e t t u siita, etta m ja n ovat kumpikin lukuja 6 - 20. 20 90551