FI77227C - Foerfarande foer framstaellning farmakologiskt aktiva 1-metyl-5-p-toluoylpyrrol-2-aettiksyra amider. - Google Patents

Description

77227

Menetelmä farmakologisesti aktiivisten l-metyyli-5-p-toluoyy-lipyrroli-2-etikkahappoamidien valmistamiseksi

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää uusien 1-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahappoamidien valmistamiseksi, joilla on arvokkaat tulehdusta estävät, analgeettiset, antipyreetti-set, limanesto- ja yskänesto-ominaisuudet ja joilla on yleinen kaava CH VcO—l! J—CH -CON^ (I) 3 \_ / ^ N' 2 \ l Ri

CH

3 jossa R on H ja on 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, joka on subs-tituoitu ryhmällä COOR ja/tai ryhmällä SH, jossa R on H, CH^, C^H^ ta^ alfc°fcsi"sukstituoitu fenyyliryhmä, jolloin alkoksiryhmä sisältää 1-3 hiiliatomia, tai R on 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliaminoryhmä, joka on substituoitu ryhmällä COR , jossa R on 4 4 / \

-N N-R

\_V 5 jossa R on 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 5 R^ on fenyyliryhmä, joka on substituoitu yhdellä tai useammalla 1-3 hiiliatomia sisältävällä alkyyliryhmällä, karbok-syyliryhmällä tai sen esterillä, joka on muodostettu 1-3 hiiliatomia sisältävän alkoholin kanssa, tai R^ on metyyli-substituoitu pyridyyliryhmä, tai R ja R^ muodostavat yhdessä viereisen typpiatomin kanssa ryhmän, jolla on kaava 2 77227

-/ ^3 tai -N ^Si-CH

w v__y 3

Edullisia esimerkkejä yleisen kaavan (I) mukaisista amideista ovat seuraavat: l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahappo; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahappoetyy-liesteri ; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahappoguaja-kyyliesteri; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-(2-merkapto-l-etyyli)-asetamidi; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-(l-karboksimetyyli-2-mer-kapto-l-etyyli)asetamidi; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-(4-metyyli-2-pyridyyli)-asetamidi; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-(4-karboksietyyli-fenyyli)-asetamidi; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-(4-karboksifenyyli)-asetamidi; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-(3,5-dimetyylifenyyli)-asetamidi; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahappo-2-/N-(4-metyy- li-l-piperatsinyyli)asetamidi7hydratsidi; l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-/T4-metyyli-l-piperatsin-yyli/asetamidi; ja l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-N-(4-morfolinyyli)asetamidi.

Kaikki edellä esitetyt yhdisteet muistuttavat rakenteeltaan DK-kuulutusjulkaisusta 136 059 ja SE-kuulutusjulkaisusta 389 670 tunnettua l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahappoa, joka on tulehdusta estävä aine, joka tunnetaan tavaramerkillä TOLMETIN ja jota on käytetty terapiassa natriumsuola-dihyd- raatin muodossa (TOLMETIN Na . 2H O). TOLMETIN kuuluu tu- 2 i 77227 3 lehdusta estävien aineiden sellaiseen luokkaan, jolla on pyr-roli-rakenne, samalla tavoin kuin tuotteilla CLOPIRAC, (1-p-kloorifenyyli-2,5-dimetyylipyrroli-3-yyli)etikkahappo, ja ZOMEPIRAC, 5-(4-klooribentsoyyli)-l,4-dimetyylipyrroli-2-yyli-etikkahappo.

Nämä tulehdusta estävät aineet aikaansaavat myrkyllisiä vaikutuksia ruuansulatuskanavassa, esim. verenvuotoa ja sulatus-haavaumia, johtuen siitä, että niiden molekyyleissä esiintyy karboksyyliryhmiä.

Tarkoituksella eliminoida näitä myrkyllisiä vaikutuksia on jo tutkittu sellaisia TOLMETIN-johdannaisia, joissa esteriryhmä

korvaa karboksyyliryhmän. Näiden esterijohdannaisten on kui- I

tenkin todettu oevan tuotteen TOLMETIN esiyhdisteitä, koska hydrolyyttiset entsyymit muuttavat in vivo esterin takaisin hapoksi. j

Edellä mainituissa julkaisuissa SE-B 389 670 ja DK-B 136 059 i on myöskin kuvattu 5-aroyyli-pyrroli-etikkahapon amideja ja j tietyllä tavalla substituoituja amideja. Molempien julkaisu- j jen Taulukosta 1 (SE-389 670 sivu 14 ja DK-136 059 sivu 7) ilmenee,että yhdiste 5-(p-metyylibentsoyyli)-l-metyylipyrroli- 2-etikkahappo eli TOLMETIN aikaansaa annoksella 25 mg/kg 44 %:sen inhibition, kun taas Taulukossa 1 luetellut 3 amidia aikaansaavat huomattavasti alhaisemman inhibition jopa kaksi kertaa suuremmalla annoksella (vrt. erityisesti 5-(p-kloori-bentsoyyli)-l-metyylipyrroli-2-asetamido, annos 50 mg/kg, in-hibitio 35 %). Näiden vertailutulosten valossa on varsin yllättävää, että keksinnön mukaisilla amideilla on jopa paremmat farmakologiset ominaisuudet kuin TOLMETIN'illa.

Nyt on todettu, että kaavan (i) mukaisten yhdisteiden amidi-johdannaisiin eivät vaikuta entsyymien hydrolyyttiset vaikutukset in vivo. Näillä yhdisteillä on tulehdusta estävä aktiivisuus sellaisinaan, eikä tämä vaikutus johdu amidin muut- 77227 i i 4 tumisesta hapoksi, so. ne eivät ole tuotteen TOLMETIN esiyh- disteitä. Lisäksi niillä on voimakkaampi ja pitkäaikaisempi tulehdusta estävä aktiivisuus kuin tuotteella TOLMETIN. Niillä on lisäksi kipuja lieventävä, antipyreettinen sekä liman eritystä ja yskää estävä ominaisuus, mikä tekee ne terapeuttisesti tehokkaiksi aineiksi.

I Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan keksinnön mukaisesti j valmistaa siten, että i a) amiini, jolla on yleinen kaava i i i

ί NHRR

i 1 t | jossa R ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan 1 1 reagoimaan l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahapon akti- i voidun johdannaisen kanssa, jolla on yleinen kaava ! i

! /ΓΛ I

ch -r NVco —J—ch -co-x I 3 2

i : I

CH

i · 3 I * * jossa X on aktivoiva ryhmä, joka on sopiva edistämään amidi- sidoksen muodostumista edellä kuvattujen amiinien kanssa, o o lämpötilassa välillä noin 0 C ja 35 C joko aproottisen tai proottisen liuottimen läsnäollessa aktivoivan ryhmän luonteesta riippuen, ja mahdollisesti siinä tapauksessa, että

vaiheen a) mukainen tuote sisältää ryhmän COOR , jossa R

3 3 tarkoittaa samaa kuin edellä, lukuunottamatta sitä tapausta, että R = H, 3 b) vaiheesta a) saatu tuote hydrolysoidaan vastaavan hapon muodostamiseksi, ja mahdollisesti c) vaiheesta b) saatu happo esteröidään sellaisen yhdisteen kanssa, jolla on kaava R OH, jossa R tarkoittaa sa- 3 3 maa kuin edellä, lukuunottamatta sitä tapausta, että R = H.

3 5 77227

Sopivia aktivoituja johdannaisia, joilla on kaava CH -C V~co — ^ *LcH -CO-X 3 \ _ / N ^ 2

CH

3 ovat sellaiset, joissa X on halogeeniatomi (edullisesti kloori), jäännös -O-C-NH-R , jossa R ja R ovat alkyyli- |l 6 6 7

N-R

7 radikaaleja, joissa on 1-3 hiiliatomia, tai sykloalkyyliradi-kaaleja, joissa on 5-6 hiiliatomia, edullisesti sykloheksyyli, tai jäännös [=]

- N^N

Kaikki nämä aktivoidut johdannaiset voidaan valmistaa hyvin tunnetuilla menetelmillä.

Kun X on halogeeni (esim. kloori), voidaan vastaava aktivoitu johdannainen valmistaa halogenoimalla (esim. klooraamalla) 1-metyy1i-5-p-to1uoyy1ipyrro1i-2-etikkahappo.

Kun X on jäännös -O-C-NH-R (edullisesti R = R = syklo- | 6 6 7

N-R

7 heksyyli), valmistetaan vastaava aktivoitu johdannainen kon-densoimalla l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahappo N,N'-dialkyylikarbodi-imidin (edullisesti N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidin) kanssa. Tämä kondensoimisreaktio voidaan toteuttaa edullisesti katalyytin, kuten p-tolueenisulfonihapon tai 4-dimetyyliaminopyridiinin läsnäollessa.

Kun X on jäännös |- | , niin vastaava aktivoitu johdan- nainen valmistetaan kondensoimalla l-metyyli-5-p-toluoyyli-pyrroli-2-etikkahappo Ν,Ν'-karbonyylidi-imidatsolin kanssa.

e 77227 6 Tämä kondensoimisreaktio voidaan toteuttaa sopivasti katalyy tin, kuten natrium- tai magnesiumetylaatin läsnäollessa.

Amiinin määrä vaihtelee yleensä välillä 1 ja 1,5, edullisesti 1,2, kertaa aktivoidun johdannaisen ekvivalenttinen määrä. Seuraavassa taulukossa I on esitetty esimerkkeinä eräitä amiineja, jotka ovat sopivia käytettäväksi reaktiossa edellä mainitun aktivoidun johdannaisen kanssa.

Taulukko I

C H OCOCH NH C H OCO-i \-NH

2 5 2 2 2 5 \_/ 2

HSCH CH NH HOOC-t >NH

2 2 2 ^_f/ 2 HSCH CH-NH CH-v 21 2 3/=\ COOCH / Vnh 3 W" 2 0 \)H 3

- : CH -N NH

3 \ / U. J—NH

- 2 7 77227

Menetelmän vaihe (a) toteutetaan tavallisesti ei-polaari-sessa ympäristössä, vaikkakin voidaan käyttää myös vesi-dioksaani- ja vesi-tetrahydrofuraaniseoksia silloin, kun kondensöimisaineena käytetään N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä, katalyytin läsnäollessa tai ilman sitä. Edullisia liuottimia ovat seuraavat: dikloorimetaani, dikloorietaani, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetyylisulfoksidi ja N,N-dimetyyliformamidi. Parhaat saannot saadaan käytettäessä vedettömiä liuottimia niiden määrän ollee-sa alueella 50-90 %. Keskimääräinen saanto on noin 70 %. Reaktiolämpötila on välillä noin 0 ja 35°C, optimilämpötilan ollessa noin 20°C. Reaktioseosta sekoitetaan edullisesti voimakkaasti typpike-hässä tai jossain muussa inertisen kaasun kehässä. Reagoivat aineet lisätään hitaasti toisiinsa siten, että reaktio-lämpötila pysyy optimiarvossa. Reaktio on päättynyt noin 15 minuutin - noin 6 tunnin kuluessa käytetystä amiinista riippuen.

Reaktioseosten edelleenkäsittely suoritetaan tavanomaisella tavalla käyttäen hyvin tunnettua erotustekniikkaa, kuten suodatusta, kromatografista käsittelyä piidioksidigeelipat-saassa, alumiinioksidia (jota käytetään sellaisenaan tai osittain deaktivoituna), tai käyttäen jotain muuta inert-tiä materiaalia.

Yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden farmakologisesti sopivia suoloja "Voidaan saada hyvin tunnetuilla menetelmillä saattamalla yleisen kaavan (I) mukainen happo tai emäksinen yhdiste reagoimaan vastaavasti farmakologisesti sopivan myrkyttömän emäksen tai hapon kanssa. Tällaiset farmakologisesti sopivat myrkyttömät emäkset ja hapot ovat alan asiantuntijalle hyvin tunnettuja. Suolat, jotka muodostetaan happamien yhdisteiden kanssa ovat edullisesti natrium-, kalium-, glusamiini- ja dietanoliamiinisuoloja. Suolat, jotka muodostetaan emäksisten yhdisteiden kanssa, ovat edullisesti hydroklorideja, sulfaatteja, salisylaatteja, bentsoaatteja ja palmoaatteja.

8 77227

Seuraavat esimerkit ja taulukot II ja III kuvaavat keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamista ja niiden kemiallis-fysikaalisia ominaisuuksia.

Esimerkki 1 l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahappo-etyyliesterin (1-b, katso taulukkoa II) valmistus Liuos, jossa oli 3,4 g (0,021 moolia) 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia 70 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania, lisättiin samalla voimakkaasti sekoittaen ja jäähdyttäen jääve-den avulla siten, että lämpötila pysyi arvossa noin 20°C, sellaiseen liuokseen, jossa oli 4,6 g (0,018 moolia) 1-me-tyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahappoa 150 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania (THF). Lisääminen kesti noin 30 min. Tämän jälkeen saadun seoksen annettiin seistä sitä samalla voimakkaasti sekoittaen lämpötilassa 20°C 1 h. Tämän jälkeen seokseen lisättiin 3,2 g (0,023 moolia) aminoetikka-happo-etyyliesterihydrokloridia ja saatua suspensiota sekoitettiin voimakkaasti samalla kun siihen lisättiin tipot-tain 3,2 ml (2,3 g; 0,023 moolia) trietyyliamiinia liuotettuna 20 ral:aan vedetöntä THF:ää (tämän reagoivan aineen lisääminen voidaan jättää pois niissä tapauksissa, joissa vapaata amiinia käytetään hydrokloridin sijasta). Seosta sekoitettiin lämpötilassa 20°C 3 h, tämän jälkeen saostunut trietyyliamiinihydrokloridi erotettiin suodattamalla ja täten saatu kirkas liuos haihdutettiin alipaineessa vesikyl-vyllä lämpötilassa 55°C. Muodostunut paksu öljymäinen jäännös liuotettiin 200 mitään etyyliasetaattia ja johdettiin erotussuppiloon. Orgaaninen liuos pestiin ensin IN NaOHtlla (3 x 30 ml) tarkoituksella poistaa reagoimaton 1-metyyli- 5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahappo ja sitten vedellä (3 x 30 ml). Tämän jälkeen pesunesteitä käsiteltiin IN V HCltllä (3 x 30 ml) tarkoituksella poistaa ylimääräinen lähtöaineamiini, joka ei reagoinut, ja lopuksi orgaanista liuosta pestiin kyllästetyllä NaCl:n liuoksella (3 x 30 ml) siksi, kunnes aikaansaatiin neutraalisuus. Orgaaninen liuos kuivattiin antamalla sen seistä 12 h vedettömän natriumsul-faatin kanssa. Suodattamisen jälkeen liuotin poistettiin 9 77227 haihduttamalla tyhjössä vesikylvyssä lämpötilassa 50°C. Tällöin saatiin kiinteä jäännös, josta kiteyttämisen jälkeen bentseeni-sykloheksaanista (1:1) saatiin 4,8 g yhdistettä, jolla oli kaava: ch3-^ '/)— CO-L N J—ch2-conh-ch2cooc2h5 W iH3 ja jolla oli seuraavat kemiallis-fysikaatlset ominaisuudet: - «aava : C19H22N2o4 - Molekyylipaino : 342,38

- Sulamispiste : 132-133°C

- Saanto : 78,7 % teoreettisesta arvosta - Liukoisuus : liukenee tavanomaisiin orgaani siin liuottimiin

Analyysi: ClgH22N204 laskettu % C 66,65; H 6,48; N 8,18 todettu % C 66,47; H 6,40; N 7,90 I.R.-spektri (nujol): 3275 cm-^ (amidi NH); 1750, 1725, 1640 ja 1620 cm ^ (C = 0 esteri-, keto- ja amidiryhmät) .

Esimerkki 2 l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahapon (1-c; katso taulukkoa II) valmistus

Seosta, jossa oli 4,45 g (0,013 moolia) l-metyyli-5-p-toluo-yylipyrroli-2-asetamidoetikkahappoetyyliesteriä (1-b), 50 ml etanolia, 25 ml THF ja 19,5 ml (0,0195 moolia) IN NaOH, pidettiin samalla sekoittaen huoneen lämpötilassa (20-25°C) 1,5 h. Seos laimennettiin sitten vedellä 300 ml:ksi ja tehtiin hitaasti happamaksi 37 %:sella Helillä. Kiinteä tuote saostui, joka suodattamisen ja kuivaamisen jälkeen painoi 3,4 g. Tuote kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 2,3 g yhdistettä, jolla oli kaava 10 7 7227

CH3—^ )-CO—IJLcH2 - CONH - CH2COOH

ch3 ja jolla oli seuraavat kemiallis-fysikaaliset ominaisuudet: - Kaava : Cl7H18N204 - Molekyylipaino : 314,33

- Sulamispiste : 203-205°C

- Saanto : 57,8 % teoreettisesta arvosta - Liukoisuus : liukenee alkaliin.

Analyysi: ci7HigN2°4 laskettu % C 64,95; H 5,77; N 8,91 todettu % C 64,65; H 5,67; N 8,65 I.R.-spektri (nujol): 3275 cm ^ (amidi NH) , 1738 cm ^ (C = O karboksyyliryhmä), 1625 cm ^ (C = O keto- ja amidi-ryhmät) .

NMR-spektri (liuotin DMSO-d6: standardi TMS): δ 2,4 (3H, s, CH3p-toluoyyli); 3,7 (2H, s, CH2CONH); 3,8-3,9 (2H, d, CH2COOH); 3,9 (3H, s, CH3-N=); 6,2 (1H, d, protoni asemassa 3 pyrrolirenkaassa); 6,6 (1H, d, protoni asemassa 4 pyrrolirenkaassa); 7,3-7,7 (4H, kaksinkertainen kaksoisviiva, bentseenirenkaan protonit); 8,45 (1H, t, NH) ppm.

Massaspektri: m/e 314 (M ® ) m/e 299 /M - CH3_7 ® m/e 212 CH3 O CO -C> CH2® <!:h3

m/e 119 CH3Ci=o ® m/e 91 O

11 77227

Esimerkki 3 l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahappo-guajasiiliesterin (1-d, katso taulukkoa II) valmistus Liuokseen, jossa oli l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahappoa (1-c) (2,4 g; 7,64 mmoolia) vedettö mässä THF:ssä (150 ml), lisättiin tipottain 30 min kuluessa liuos, jossa oli 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia (1,5 g; 9,17 mmoolia) vedettömässä THF:ssä (70 ml). Lisäämisen aikana muodostui sakka, jonka muodosti mainitun yhdisteen imi-datsolidi (1-c). Lisäämisen päättymisen jälkeen sekoitettiin saatua suspensiota huoneen lämpötilassa 1 h, tämän jälkeen lisättiin guajakoiin liuosta (1,4 g; 9,17 mmoolia) vedettömässä THF:ssä (30 ml). Suspensiota sekoitettiin voimakkaasti huoneen lämpötilassa 2 h ja sitä kuumennettiin sitten lämpötilassa 70°C 1/2 h. Täten saadusta kirkkaasta liuoksesta poistettiin liuotin kuumalla vesihauteella tyhjössä ja saatu öljymäinen jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (150 ml). Orgaaninen liuos pestiin ensin IN NaOH:lla (1 x 100 ml) tarkoituksella poistaa lähtöaineena käytetty happo, ja tämän jälkeen NaCl:n kyllästetyllä liuoksella (3 x 100 ml) siksi, kunnes aikaansaatiin neutraalisuus. Kuivaamisen jälkeen vedettömän natriumsulfaatin avulla liuos suodatettiin ja liuotin poistettiin suodoksesta haihduttamalla tyhjössä kuumalla vesikylvyllä. Täten saatiin jäännös, jonka muodosti kiinteä tuote (2,7 g), joka kiteytettiin sykloheksaanin ja bentseenin seoksesta (1:1), jolloin saatiin 2,3 g yhdistettä, jolla oli kaava _ ch3°>. _ CH3-C^C°-V — CH2-C0NH-CH2C00-^ ^ CH3 ja jolla oli seuraavat kemiallis-fysikaaliset ominaisuudet: - Empiirinen kaava : C24H24N2°5 - Molekyylipaino : 420,45

- Sulamispiste : 117-120°C

- Saanto : 71,8 % teoreettisesta arvosta 12 77227 - Liukoisuus : liukenee tavallisiin orgaani siin liuottimiin.

Analyysi: C24H24N205 laskettu % C 68,56; H 5,75; N 6,66 saatu % C 68,35; H 5,85; N 6,97 I.R.-spektri (nujol): 3270 cm"^ (amidi NH), 1770 cm ^ (C = 0 esteri), 1650 cm ^ (C = O ketoni) ja 1620 cm 1 (C = O amidi).

Ne yhdisteet, jotka on valmistettu edellä esitettyjen menetelmien avulla ja joilla on kaavat (1) ja (3) , on esitetty taulukoissa II ja III. Kustakin yhdisteestä on esitetty seuraavat arvot: molekyylipaino, sulamispiste, kiteytys-liuotin, saanto ja reaktioaika.

Yhdiste (1-c) saatiin hydrolysoitaessa alkalisesti esteriä (1-b) käyttäen stökiömetristä määrää IN NaOH:ta siten- kuin yksityiskohtaisesti on kuvattu esimerkissä 2, koska 1-metyy- li-5-p-toluoyylipyrroli-2-etikkahapon suoraa amidoimista ei ollut mahdollista suorittaa glysiinin avulla. Yhdiste (1-d) saatiin esteröimällä happoa (1-c) guajakolin avulla sopivan kondensoimisaineen läsnäollessa siten kuin esimerkissä 3 on yksityiskohtaisesti esitetty.

13 77227 -p — ^ τ'·

nj I <—i I H 4J

[/) -rt ·· -rt ·· -P

-rt C rrt G rrt Hj

rrt (O'— *0 '—' ftJ

C <0 <0 -P , c I t/1 -H in -rt <]) (Ö wa) Ai G r* G « c

rrt >, £ HI O) rl dl o li -H <U

jZ -P -rt χΙφιΗΛΟΙ-Ρ* ^ o >, rfl 0 W 0 0 in rrt 0 w

•|—) QJ -H <—i -P G r—I -P rrt G *P

-Prrt 44 c Λ fi >1 « £ 4J -rt :«J >i <D -P >i <1) -P -p 5>

3 z > in xi cd w λ <u Q> -Q

Ό

*w C

0 xj d I ε -η -2 o x: -G x: c 4J -p CO I I ·£

t/i (tJ co ro r-l B

xi m x: _ 3 (U -rt o tn 05 (tl ^ °° 0

G

1 ° * I -P * „ 2 C in <j\ o ro o o (fl<#> - - - ' 3 — nj cor^rrtotntN m -rt rrt to C- n C- CM 00 I rt· •O —

•H

S X

(tl -P I I u dl tn o co m o cr> in cn n· tn K -rt CO o CN VO (N r- co Z Ed) rrt (N l—1 rrt rrt rrt rrt

I o (0 -P I I I I I I I

cm cj r-ι in (Ncor^inojr-H ro | 3-rt CO O rrt to CM C'· oo -rt I tn OJ rrt (N rrt rrt rrt rrt rrt

H

O CN

P K

P CJ l : >1 I H _

Cu ._! co r—i co co m m co o m ' . ‘. -rt \ B Srt co ro TT CO CO rt· rt· . . . Z “ U >1 ~ ' >, . ^ o CM -θ’ O VO rt· I rt·

• .'. >, -/ d> G rt· rrt CN rrt rt· O

:.: : O | r-i-rt coco rr ro co co rt· 3 1 o (tl cH o s oj 0 u ά rT^ c CO to 1 d) rt· rt· un (N rt· cm rt·

: : m I J G O O O O O O O

| .XX -rt (N CM CM CM CN CO CM

-rt T P z z — z z z z · - z rrt CO -rt (t) CM 00 rt· O CM rrt rt·

>1 K -rt > CM .rt CM CM CM CM CN

> u Qr (ti a · k a a a a a 4J £(0 CCl Γ" rt· CTl rrt rt·

d) H 4C rrt rrt CN rrt rrt CM CM

g U U CJ CJ CJ U (J

7 nf \T) K s10 CM a Q rj^ h cj a T co o ö

H O O o Λ CM U ro Q

x ooo^aa-a o 0 cj υ cj gj cj i : I s' s' s'" s' in (1

1 ' ' ' 1 ? t V

‘ ' E-ι d)

-P

tn ja υ tj <u ·ρ 01 -C

•rt I I I I I I I

X) rrt rrt rrt rrt rrt *rt rrt x: x 14 77227

Z

- I

I Z -H -H

01 (U I ΗΌ >1 C Ή >ι Ή -H ·Ρ 4-1 *Ρ ι—I 6 Ή r—1 >1 (0 Ο 4-1 (0 Ο Ο αι ·ρ c αι ε c c uh m e μ to m

•H :n3 -P -H o 4-> -P

« > φ T3 ‘P 0) 01 I * o * •H *

-P -G A .G <S

X «J 1-1

(ö M CN <N CN P

Ql -P 01 OS G 01

-P

cn

0 G

4-1 CN CN OP*

G k - — d) ftJ

cO <*> cp <N o Cu en nj m t-' vo en W C Φ 0) i—l ai h

-P -P

1 u -P -Ό U10 00 I—1 O dl •p CN 0 3 6 g 01 O cn cn -P :<0 a -p ex» ι ι ctj fp rH cn cn p· en χ cn 3 -P λ cn σ\ CO >i

Ui CL· cn H 03 -P

P >1 T3

I G X

•p -P :rxJ

rP -P :n3 >i ai ·γ-ι >i o p oo x cn X O p* p* p* en 3

Q) e ·* - - eO -P

rH -P SO O vo P1 3 ; : o cfl r·' vo o ctj 2 ÖJ en cp m -h k nj * a.

: X

G p· cn n

01 O O O · rP

: C CN CN P· G

•p 2 'Z Z 01 CO

p O P· 00 Q) -O

-P Π3 CN CN CN X

— -P>K S 3ö rl n)

Qj eO cn cp cn :ra tn —. g <o cn cn cn -n cn ea W X U U U cd

0 C iP

λ: oi -h 4-1 en 4-> cd X =0 IS cp >1 di — I :fl g K u cn :<T5 1 O - 2- -P lp O f 1 1-1 - H X U P g M ι V- ,) G 01 ι JL >a -h oi

O rT^ o -H G

x \\ \ 1 1 u e o ^ p /1 n /] cn φ 3

3 M G

P T cp fp U G

G k S S 4-1 X

(0 u u Z -p p ai ι ai p -P x en cn ^ p co * T3 p G O G * X I I I ~ -ie P P P * ~ 15 77227

O

—. -H C

CO X> * Ή χ ro ε χι ra χ χ: 3 α> -η ο Ό K (0 ro Ή ·Η ι C J ο -γΗ 2 -U Ο- ο -Ρ O C ~ M U (ΰ c*> r- ro η (0 νο uo

3 I W

« cm _ _

Ό S 1 —t t ι—I

I ^ ·Η ·· ·Η ·· s I c ^ c ^ - r \ ro dl '—' «T3 '— 2 '2 (0 ifl 2 - U I 11 -H M Ή C / 0) Q) a: c ac c -H —/ >i G 3 d> 0) Q) T3 Xl -H 2 Cl) X! <1> -h I >i cö O w O m

£ O 0) -H .H+JrH-P

(ö U xl H aj c: a: c X> I -H :r0 >1 Q) >1 Q) 0) /k. X > Κ1Λ ΜΛ ? Q ,u <N eno co r- | T -H ro r-p

•H ro ε (1) Ή rH

ι—ι 2 cd χ) Il 0 U H in r~ ro

p 3 -H ro iH

p CO DJ I—I I—I

>1 CU

-Η I

i—I >1 O 00 CN

>1 >i C ro >i X -P ' : ; O cu nJ vD «τι 3 rP CU rs ro f—I O -H ro ro O 2 Ή x> cu ta 1 .p > ro rs ·

- - uo <l) fO O O C

IW nj es ro 0) -H -H X 2 2 Cl) rP rt I rs uo λ:

~ >1 G H C rs rs 'H

3 Ή Q) 2 2 »iti χ) ra CU e en O -n <D Ό E -H Ή rs

E 2 WP O O C

I O <D

rP -ro ro 0)

2 X

| N O U >1

I :<TJ

H 2 W

M -H

M Ή

♦H

o n X -h x 3 ε rp 10 3 " 3 3 &p x> ..... Xl (1) Φ

Xl Ai 0) 0) •P rt .3 rt

Ό I I W

2 ro ro X -tt 16 77227

Farmakologiset ominaisuudet

Ne kokeet, jotka suoritettiin käyttäen taulukossa II ja III esitettyjä l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstituoituja ja N,N-disubstituoituja johdannaisia, osoittavat, että näillä tuotteilla on farmakologisia ominaisuuksia, jotka ovat sopivia terapeuttisen vaikutuksen aikaansaamiseksi määrätyissä patologisissa tiloissa. Valmisteet, jotka annosteltiin käyttäen oraalista ja/tai parente-raalista annostustapaa, olivat suspensiona 0,5 %:sessa karb-oksimetyyliselluloosassa neutraalin pH-arvon omaavassa fysiologisessa suolaliuoksessa. Erikoisesti keksinnön mukaisilla yhdisteillä oli akuuttinen tulehdusta estävä vaikutus yhdessä huomattavan analgeettisen vaikutuksen kanssa. Kuten alempana on esitetty, on myös todettu, että näillä johdannaisilla on huomattava antiterminen aktiivisuus ja niillä on in vivo kokeissa hyvä liman eritystä ja yskää estävä aktiivisuus. Kaikki nämä farmakoterapeuttiset vaikutukset aikaansaatiin käyttäen sellaisia annoksia ja annostelu jaksoja, jotka eivät aikaansaaneet oleellisia myrkyllisiä vaikutuksia. Yleisesti ottaen on näiden aineiden myrkyllisyys erittäin alhainen, ja erikoisesti ruuansulatuskanavan vauriot pienenevät huomattavasti, kuten alempana olevissa esimerkeissä on esitetty. Annokset, annostustavat ja yleisesti ottaen ne menetelmät, joiden avulla vaikutukset eläimiin on aikaansaatu, osoittivat, että nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia ihmisten terapiassa sellaisissa sairaustiloissa, joille on luonteenomaista tulehdukset ja kipu. Esimerkkinä on jäljempänä kuvattu muutamien näiden yhdisteiden aktiivisuuden koear-voja verrattuna niihin arvoihin, jotka on saatu käytettäessä l-metyyli-5-p-toluoyyli-2-etikkahapon dihydrattua natriumsuo-laa (TOLMETIN Na* 21^0) ekvimolaarisia määriä käytettäessä ja myös indometasiiniin verrattuna tulehduksenestokokeissa.

Tulehdusta estävä aktiivisuus Tämä vaikutus arvosteltiin käyttäen koemallia, joka aikaansai akuuttisen tulehduksen: tässä tarkoituksessa käytettiin karrageenin aikaansaamaa ödeemakoetta seuraamalla menetelmää, jonka on kuvannut C.A. Winter (J. Pharmac. Exp. Ther. 141: 17 77227 369, 1963) käyttäen sellaista vertailuainetta, jolla on tunnettu tulehdusta estävä aktiivisuus, nimittäin yhdisteitä "indomethacin" ja "tolmetin" Na. 21^0 (S. Wong, J.F.

Gardocki ja T.P. Pruss, J. Pharmac. Exp. Ther. 185 (1) : 127, 1973).

Urospuolisia albino-Wistar-rottia, joiden paino oli 140-160 g, pidettiin häkeissä 10 vrk lämpötilassa 22 + 1°C ja niille annettiin tasapainotettua ruokaa ja vettä ad libitum. Kahdeksantoista tuntia ennen koetta jaettiin eläimet mielivaltaisesti 10 ryhmiin eikä niille annettu ravintoa, mutta vapaasti vettä. Kukin annos kokeiltiin kolmen rottaryhmän avulla. Kukin yhdiste annettiin joko oraalisesti letkun avulla tai parenteraalisesti intraperitoneaalisena injektiona, jolloin annostus tapahtui seuraavasti: - vertailu: 0,5 % karboksimetyyliselluloosasuspensiota fy siologisessa suolaliuoksessa, 10 ml/kg - käsittely: kokeiltavien yhdisteiden suspensio samassa väli aineessa ja käyttäen samaa tilavuutta (10 ml/kg), jota käytettiin vertailuryhmässä ja käyttäen alempana esitettyjä annoksia.

Yksi tunti yhdisteiden ja väliaineen antamisen jälkeen, tarkoituksella aikaansaada ödeemaa kokeiltavien aineiden suojavaikutuksen määräämiseksi, annettiin jokaiselle rotalle sub-kutaanisena injektiona vasemmanpuoleisen käpälän sileälle pinnalle 0,1 ml 1 %:sta steriiliä karrageenisuspensiota.

Kunkin eläimen tilavuusmuutokset määrättiin plethysmometri-sella menetelmällä käyttäen digitaalista vesi-plethysmograa-fia (malli 7150-Basile) 2, 4, 6, 24, 48 ja 72 h ödeeman aikaansaavan aineen antamisen jälkeen, ödeeman esto laskettiin vertailemalla käsittelemättömän käpälän sileään pintaan ja tulehdusasteeseen vertailueläimissä.

Taulukossa IV on esitetty kokeillut yhdisteet, niiden väkevyys, annostustapa ja suhteellinen ödeemanestoprosentti.

Näitä arvoja on käsitelty taulukon lopussa.

is 77227

Taulukko IV - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstituoitujen ja N,N-disubstituoitujen johdannaisten tulehdusta estävä aktiivisuus Ödeeman esto-%

Yhdisteet Annos mg/kg per os 2 h 4 h 6 h 24 h 48 h 72 h Väliaine - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Indometasiini 2,5 20,6 33,7 25,2 6,0 0,0 0,0 " 5 34,3 45,9 42,1 4,2 0,0 0,0 " 10 66,4 53,2 51,6 20,0 6,0 0,0

ToImetin Na.H O 10 44,8 29,2 10,2 0,0 0,0 0,0 2 " 50 48,0 55,3 55,2 0,0 0,0 0,0 " 100 50,8 57,3 54,8 9,7 7,8 0,0 1-b 25 45,1 30,3 29,9 2,1 0,0 0,0 " 50 52,4 57,0 56,1 5,0 0,0 0,0 " 100 59,0 60,3 58,0 10,1 2,0 0,0 1-c 25 38,6 39,1 37,2 12,1 0,0 0,0 50 51,8 58,9 60,4 18,7 0,0 0,0 100 69,0 70,1 67,0 26,0 10,0 0,0 1-d 2,5 50,0 34,6 23,1 0,0 0,0 0,0 5 51,4 38,8 24,0 10,0 10,0 6,0 " 10 61,5 41,2 34,9 12,6 14,0 9,0 20 62,1 48,7 32,8 26,6 25,9 3,3 " 50 66,9 66,8 57,8 30,9 36,3 38,6 " 100 68,0 74,0 67,5 40,3 38,0 33,0 1-f 25 42,9 40,0 36,9 1,2 0,0 0,0 50 55,3 59,0 59,3 3,5 0,0 0,0 100 66,0 68,0 68,5 12,5 0,0 0,0 1-g 25 30,0 33,9 34,0 0,8 0,0 0,0 50 41,7 56,0 52,1 8,9 0,9 0,0 100 67,1 68,0 68,0 9,0 2,1 0,0 1-h 25 28,9 30,1 29,0 8,3 0,0 0,0 50 48,9 49,0 47,1 9,9 0,0 0,0 100 66,9 67,1 69,0 22,0 13,0 0,0 i9 7 7227

Taulukko IV - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin jatkuu N-monosubstituoitujen ja N,N-disubstituoitujen johdannaisten tulehdusta estävä aktiivisuus Ödeeman esto-% yhdisteet Annos rag/hg per os 2 h 4 h 6 h 24 h 48 h 72 h 1-i 25 39,6 40,1 38,7 1,5 0,0 0,0 " 50 49,1 57,8 59,1 10,7 2,5 0,0 " 100 70,6 69,0 69,1 22,4 12,4 2,4 1-n 25 40,0 38,0 38,6 0,0 0,0 0,0 " 50 50,3 57,1 57,9 11,7 0,0 0,0 " 100 63,4 65,0 67,1 25,9 10,2 3,0 l-o 25 37,1 42,0 44,0 12,1 0,0 0,0 " 50 49,2 50,1 50,0 22,1 4,5 0,0 " 100 70,1 73,4 77,5 33,5 8,6 0,0 3-a 25 27,1 29,0 32,3 7,1 0,0 0,0 50 46,0 49,1 48,0 13,4 0,0 0,0 100 60,0 55,2 69,7 18,1 0,0 0,0 3-b 25 28,1 33,4 30,0 10,2 0,0 0,0 50 49,1 48,0 49,7 15,2 0,0 0,0 100 69,7 68,0 69,0 35,0 8,9 0,0 20 77227

Taulukko IV - osa 2 Ödeeman esto-%

Yhdisteet Annos mg/kg i.p.

2 h 4 h 6 h 24 h 48 h 72 h Väliaine - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Indometasiini 2,5 25,7 38,0 30,0 5,0 0,0 0,0 " 5 39,0 50,1 48,0 7,0 0,0 0,0 " 10 70,8 66,6 65,0 16,0 0,0 0,0

Tolmetin Na.H O 10 46,0 39,1 20,0 0,0 0,0 0,0 2 " 50 53,8 60,0 58,4 0,0 0,0 0,0 " 100 57,0 66,0 67,1 8,7 2,0 0,0 1-b 25 44,0 32,6 31,9 0,0 0,0 0,0 " 50 56,7 55,4 58,1 0,0 0,0 0,0 " 100 57,0 60,1 63,0 2,0 0,0 0,0 1-c 25 40,0 44,8 45,0 9,0 0,0 0,0 " 50 55,0 64,0 65,4 20,0 8,0 0,0 100 74,8 77,5 74,0 30,4 12,0 0,0 1-d 2,5 52,3 37,0 26,0 14,0 0,0 0,0 5 54,0 40,0 24,6 10,1 0,0 0,0 " 10 60,0 46,9 36,7 16,5 6,3 0,0 20 65,0 50,4 48,6 23,5 9,1 8,4 50 69,7 74,0 67,2 34,5 20,8 15,3 100 76,5 79,5 73,4 42,4 33,0 31,6 1-f 25 43,6 46,0 45,2 1,3 0,0 0,0 " 50 58,3 60,1 60,0 8,9 0,0 0,0 " 100 69,1 70,2 69,0 12,1 5,6 2,3 1-g 25 38,0 38,6 40,1 0,0 0,0 0,0 50 42,0 50,3 52,0 10,3 0,0 0,0 100 71,2 70,3 72,5 25,2 0,0 0,0 1-h 25 30,1 27,9 29,0 13,0 0,0 0,0 50 50,2 51,0 47,0 15,1 0,0 0,0 100 70,1 68,9 66,0 19,0 10,0 0,0 21 7722 7

Taulukko IV - osa 2 - jatkuu Ödeeman esto-%

Yhdisteet Annos mg/kg i.p.

2 h 4 h 6 h 24 h 48 h 72 h 1-i 25 46,0 47,9 45,0 2,3 0,0 0,0 " 50 62,1 65,6 64,0 12,5 2,9 1,1 " 100 76,3 76,0 74,0 25,3 15,6 10,1 1-n 25 42,6 39,2 39,0 0,0 0,0 0,0 " 50 55,5 59,1 60,0 10,2 1,1 0,0 " 100 69,1 70,2 70,1 20,1 8,9 2,3 1-0 25 39,0 37,1 36,0 11,1 0,0 0,0 11 50 52,1 55,0 43,0 17,9 0,0 0,0 " 100 79,1 78,0 77,3 24,1 0,0 0,0 3-a 25 28,9 32,7 34,0 10,1 0,0 0,0 " 50 50,7 48,9 42,0 11,2 0,0 0,0 ·· 100 69,8 69,0 63,0 13,1 0,0 0,0 3-b 25 33,2 36,0 30,0 10,0 0,0 0,0 50 52,3 55,6 58,9 11,2 0,0 0,0 ; '· 100 73,4 77,1 72,9 25,6 1,4 0,0 22 77227

Analgeettinen aktiivisuus Käyttäen fenyylikinonin avulla aikaansaatua kouristuskoet-ta, jonka on kuvannut E. Siegmund (Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 95: 729, 1957), arvioitiin eräiden taulukoissa II ja III esitettyjen yhdisteiden analgeettinen aktiivisuus verrattuna siihen tunnettuun analgeettiseen aktiivisuuteen, joka aikaansaadaan tuotteen TOLMETIN Na-21^0: n avulla (H. Nakamura ja M. Shimizu, Br. J. Pharmacol. 7_3.: 779, 1981). Urospuolisia Wistar-rottia, joiden paino oli 110 + 5 g, pidettiin häkissä 10 vrk lämpötilassa 22 + 1°C ja niille annettiin tasapainoitettua ruokaa ja vapaasti vettä. 24 h ennen koetta jaettiin eläimet mielivaltaisiin 10 eläimen ryhmiin ja niitä pidettiin nälässä 14 h, mutta niille annettiin vapaasti vettä. Kukin annos kokeiltiin käyttäen kolmea rottaryh-mää. 30 min sen jälkeen, kun eläimille oli annettu joko oraalisesti tai parenteraalisesti kokeiltavia tuotteita tai pelkästään väliaineita (0,5 %:sta karboksimetyyliselluloo-saa fysiologisessa suolaliuoksessa), annettiin jokaiselle rotalle 2 ml 5 %:sta absoluuttisen etanolin vesiliuosta, joka sisälsi 0,36 % fenyyli-p-kinonia (Sigma Chemical Company) tarkoituksella aikaansaada kouristus. 15 min fenyyli-p-ki-nonin annostelun jälkeen laskettiin kouristusten määrä 20 min aikana. Kokeiltavien yhdisteiden estovaikutus abdominaa-liseen kouristukseen, joka aikaansaatiin fenyyli-p-kinonin avulla, laskettiin seuraavan kaavan avulla: suoja-% = kouristusten määrä vertailueläimissä - kouristus-ten määrä käsitellyissä rotissa_ χ kouristusten määrä vertailueläimissä

Taulukossa V on esitetty kokeillut yhdisteet, annokset, annostustavat ja näiden yhdisteiden vaikutus esitettynä suo-japrosenttina ottaen huomioon, että fenyyli-p-kinoni annettiin 30 min yhdisteiden jälkeen.

Taulukossa V-a on esitetty yhdisteiden I-d analgeettinen aktiivisuus verrattuna tuotteeseen TOLMETIN ottaen huomioon, että nämä yhdisteet annettiin oraalisesti 1, 2, 4, 6, 8, 16 ja 24 h ennen fenyyli-p-kinonin antamista.

23 77227

Taulukko V - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstituoitujen ja Ν,Ν-disubstituoitujen johdannaisten analgeettinen aktiivisuus (f enyy1i-p-k inoni-kouri stuskoe)

Yhdiste »“»· --:- mg/kg per os ι.ρ.

Väliaine - 0,00 0,0

ToImetin Na-2H20 5 15,0 16,5 " 10 40,0 46,2 " 20 62,0 69,1 1-c 5 25,3 27,1 " 10 49,0 46,3 " 20 85,1 82,0 1-d 5 29,1 22,1 " 10 53,4 56,0 " 20 80,2 87,0 1-h 5 16,2 18,0 " 10 37,9 44,0 " 20 70,1 79,0 l-o 5 29,3 35,1 " 10 60,4 63,9 " 20 86,2 87,0 3-a 5 16,0 18,0 " 10 39,0 48,0 " 20 65,0 76,0 3-b 5 20,0 28,0 " 10 52,0 50,0 " 20 78,0 80,3 24 77227

Taulukko V - a l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamido- etikkahappoguajasyyliesterin (1-d) ja tuotteen "tolmetin" Na*2H20 analgeettinen aktiivisuus oraalisen annostelun jälkeen 1, 2, 4, 6, 8, 16, 24 h ennen fenyylikinonin antamista.

Suoja-%

Yhdiste Annos - mg/kg lh 2 h 4h 6h 8h 16 h 24 h Väliaine - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Tolmetin Na-2H20 10 51,8 35,5 32,0 17,2 20,2 3,0 5,0 " 20 79,6 78,0 50,0 45,3 40,1 8,7 4,2 ” 50 81,0 84,6 62,5 49,7 45,0 9,3 3,8 1-d 10 55,7 43,3 40,1 44,0 32,0 12,1 10,0 " 20 78,1 80,6 70,5 66,3 71,0 23,6 25,0 " 50 86,4 87,0 81,5 76,8 75,0 60,7 64,0

Antipyreettinen aktiivisuus

Tarkoituksella määrätä tämä aktiivisuus aikaansaatiin liika-lämpöisyys urospuolisissa Wistar-albinorotissa, joiden paino oli 250 + 10 g, injektoimalla intraperitoneaalisesti 10 ml/kg 1,5 %:sta kuivan, puhdistetun leipomishiivan suspensiota (Carlo Erba). Tuote, jota käytettiin vertailussa, oli TOLMETIN Na*2H20, jonka antipyreettinen aktiivisuus on hyvin tunnettu (S. Wong, S.F. Gardocki ja T.P. Pruss, J. Pharmac. Exp. Ther. 185(1) : 127, 1973) . Eläimet pidettiin häkissä samoissa olosuhteissa kuin edellä olevissa kokeissa. Viisi tuntia hiivan antamisen jälkeen ne eläimet, joiden ruumiin lämpötila oli noussut 1,5°C tai enemmän normaalilämpötilaan verrattuna määrättynä rektaalimittauksella, joka oli yhdistetty YSI-lämpömittariin (malli 73 ATP, Yellow Springs Instrument Company), valittiin kokeita varten. Eläimet jaettiin sitten mielivaltaisesti 10 eläimen ryhmiin ja tutkittavat yhdisteet ja väliaine annettiin oraalisesti ja parente-raalisesti, jolloin kukin annos kokeiltiin kahdessa ryhmässä. Ruumiin lämpötila määrättiin 1, 2 ja 3 h yhdisteiden antamisen jälkeen. Näiden määräysten avulla oli mahdollista määrätä prosentuaaliset muutokset ruumiin lämpötilassa käsitel- 25 77227 lyillä ryhmillä vertailuryhmiin verrattuna, joille oli annettu ainoastaan väliainetta. Taulukossa VI on esitetty yhdisteet, annokset, annostustavat ja ruumiin lämpötilan alenemisprosentti.

Taulukko VI - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstituoitujen ja N,N-disubstituoitu-jen johdannaisten antipyreettinen aktiivisuus Lämpötilan alenemis-%_

Annos _per os_ _i .p._

Yhdiste mg/kg lh 2h 3h lh 2h 3h

Toimetin Na-2H20 50 12,0 20,0 29,5 15,0 19,0 30,5 " 75 13,0 26,0 27,0 18,0 29,0 34,0 " 100 18,0 30,9 47,0 28,0 39,0 51,0 1-c 50 15,0 23,0 32,0 20,0 21,9 36,0 ” 75 16,5 30,7 42,1 19,0 32,6 45,2 " 100 27,1 31,2 57,9 35,0 49,1 65,7 1-d 50 14,0 22,0 31,6 16,0 23,0 37,5 " 75 18,5 23,4 29,1 22,1 33,4 39,8 " 100 22,0 42,5 59,0 28,1 37,2 60,4 1-h 50 13,0 28,0 31,1 12,0 29,1 36,2 " 75 17,0 29,1 39,4 18,0 27,2 39,4 " 100 21,0 35,1 51,8 23,1 39,3 60,2 l-o 50 12,0 23,1 35,2 13,0 27,5 39,6 " 75 16,0 25,2 40,2 18,0 27,0 49,6 " 100 29,1 33,7 59,0 30,1 45,0 62,1 3-a 50 15,5 23,0 32,1 16,0 26,0 36,7 " 75 16,2 29,1 39,4 19,0 30,2 39,4 " 100 22,0 29,5 56,1 21,3 36,1 58,1 3-b 50 13,1 21,0 36,2 12,9 23,0 38,3 ” 75 19,0 29,1 40,6 23,4 29,0 48,5 " 100 27,0 35,0 59,7 32,9 39,0 60,1 26 77227

Liman eritystä estävä aktiivisuus

Koe suoritettiin käyttäen menetelmää, jonka on kuvannut Y. Kase (Folia Pharmacol. Jap. JA1 605, 1977) tarkoituksella tutkia aikaansaavatko tutkittavat yhdisteet, vai eivätkö aikaansaa, muutoksia sen liman määrässä, joka erittyy hengitysteistä. Neljän urospuolisen, uusi-seelantilaisen albino-kaniinin (keskipaino 2,5 kg) muodostamia ryhmiä käytettiin kokeiltaessa yhtä annosta yhteen ryhmään. Eläimet anesteti-soitiin uretaanilla (1,1 g/kg r.p.) intraperitoneaalisesti ja Y-neula sovitettiin henkitorveen. Tarkoituksella stimuloida liman eritystä yhdistettiin kostutuslaite tähän neulaan ja se mahdollisti sen, että eläimet kykenivät spontaanisesti hengittämään ilmaa, jonka kosteus oli 100 %, vakio-lämpötilassa 39°C. Erittynyt lima otettiin talteen toisen neulassa olevan aukon kautta ja mitattiin 3 ja 6 h tutkittavien yhdisteiden antamisen jälkeen, tai annettiin pelkästään väliainetta 2 mg/kg (vertailu). Liman erityksen kasvu tai pienentyminen perustuivat prosenttieroavaisuuksiin niiden ryhmien välillä, joita oli käsitelty tutkittavilla yhdisteillä, ja vertailuryhmän välillä. Taulukko VII esittää prosent-tieroavaisuudet liman erityksessä ja kokeillut yhdisteet sekä suhteelliset annokset ja annostustavat.

27 7 7 2 2 7

Taulukko VII - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstituoitujen ja N,N-disubstituoitu-jen johdannaisten liman eritystä estävä aktiivisuus %-ero liman erityksessä_

Annos per os i.p.

Yhdisteet —c- -c- g/kg 3 h 6 h 3 h 6 h

Tolmetin Na*2H20 50 +5% +10% +3% +7% " 75 0,0 +2% +8% +10% " 100 +5% 0,0 +7% 0,0 1-c 50 0,0 +6% 0,0 0,0 " 75 -10% -8% -12% -7% " 100 -35% -22% -37% -25% 1-d 50 0,0 0,0 -5% -5% " 75 -15% -10% -18% -15% " 100 -32% -27% -38% -30% 1-h 50 -5% 0,0 -8% -3% " 75 -19% -16% -26% -20% " 100 -39% -32% -41% -38% 3-a 50 -7% -8% -10% -7% " 75 -15% -10% -20% -18% " 100 -32% -25% -38% -29% 3-b 50 -9% -5% -12% -10% " 75 -18% -10% -25% -22% " 100 -36% -30% -40% -36%

Yskää estävä aktiivisuus

Yskänestovaikutus albinomarsuissa, joiden paino oli 300 g, määrättiin käyttäen menetelmää, jonka on kuvannut Y. Kas£ (Selected Pharmacological Testing Methods, p. 363, Marcel Dekker Inc., New York, 1968). Kukin annos tutkittiin käyttäen eläinryhmää, jonka kurkkutorveen oli sovitettu Y-ka-nyyli. Tarkoituksella aikaansaada yskiminen stimuloitiin mekaanisesti henkitorven haarauman limakalvo sovittamalla siihen villikarjun jouhi kanyylissa olevan aukon lävitse 29 77227 toisen aukon ollessa yhdistettynä kymografiin amplitudin ja/tai jakson merkitsemiseksi. Yskimismäärän pieneneminen määrättiin 1 h tutkittavien yhdisteiden annostelun jälkeen seuraamalla piirroksia 20 min ja vertaamalla niitä vertai-lueläimistä saatuihin tuloksiin. Taulukossa VIII on esitetty kokeillut yhdisteet, annokset, annostustavat ja yskimis-prosentti.

Taulukko VIII - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstituoitujen ja N,N-disubstituoitu-jen johdannaisten yskänestoaktiivisuus _esto-%_

Yhdisteet -£ϋΓ 03 -- _" Amplitudi Jakso Amplitudi Jakso

Toimetin Na*2H20 50 0 0 0 0 " 75 7 0 0 10 " 100 5 5 7 10 1-c 50 12 20 10 25 " 75 20 22 15 27 " 100 38 45 40 51 1-d 50 10 18 12 15 " 75 22 29 20 36 " 100 30 49 30 45 1-h 50 13 10 20 18 " 75 22 18 29 35 " 100 40 50 45 53 3-a 50 15 16 20 15 " 75 30 18 30 16 " 100 35 45 40 56 3-b 50 18 29 20 28 " 75 30 18 30 20 " 100 45 39 52 40 29 77227

Ulserogeeninen aktiivisuus

Urospuolisia Wistar-rottia, joiden paino oli 180 g, jaettiin mielivaltaisesti 10 eläimen ryhmiin. Kutakin yhdistettä annettiin kolme annosta. Yksi ryhmä sai pelkästään väliainetta (10 ml/kg r.p.). Kutakin annosta annettiin oraalisesti neljä vrk ja rotat tapettiin viidentenä päivänä ruumiinavausta varten. Ulserogeeninen vaikutus arvosteltiin käyttäen seuraavaa mittakaavaa: - vaurioiden lukumäärä: 1) jokainen verenvuotokohta, jonka halkaisija oli vähintään 1 mm, arvioitiin 1 vaurioksi, 2) verenvuotokohdat, jotka olivat pienempiä halkaisijaltaan kuin 1 mm, arvioitiin seuraavalla tavalla: a) 1-9 = yksi vauriokohta b) 10-19 = kaksi vauriokohtaa c) 20-29 = kolme vauriokohtaa - vaurioituneiden kohtien vakavuus: 1) ei vaurioitumista 0 2) limakalvon ärsyyntyminen ilman verenvuotoa 1 3) verenvuotokohtia, halkaisija pienempi kuin 1 mm 2 4) " " välillä 1 ja 3 mm 3 5) " " suurempi kuin 3 mm 4 6) reikiä 5 Tämän mittakaavan avulla oli mahdollista saada mahan vau-rioitumisarvo: I = vaurioitumiskohtien keskiarvo + vaikeusasteen keskiarvo + 10

Tulokset on esitetty taulukossa IX.

50 7722 7

Taulukko IX - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstituoitujen ja Ν,Ν-disubstituoitujen johdannaisten ulserogeeninen aktiivisuus

Annos Vaurioi- Keski-

Yhdisteet mg/kg den kes- määräi- Esiin- Mahan kimääräi- nen vai- tyrnis-% vaurio- _ _ nen luku keusaste 10 arvo Väliaine - 1 1 68

Tolmetin Na*2H20 50 2 2 7 11 " 100 2,5 3,5 10 16 " 200 3 4 10 17 1-c 50 1 1,5 7 9,5 " 100 2 2 8 12 " 200 2,5 2 9 13,5 1-d 50 1,5 1 6 8,5 " 100 2 1,5 9 12,5 " 200 2 2 9 13 1-h 50 1 1 79 " 100 1,5 ] 8 10,5 " 200 2 1,5 8 11,5 1-0 50 1 1 79 " 100 2 1 9 12 " 200 2 2 8 12 3-a 50 1 1 79 " 100 1,5 2 8 11,5 " 200 1,5 2 9 12,5 3-b 50 1 1 79 " 100 1 2 7 10 " 200 2 3 8 13

Myrkyllisyys

Tutkittavien yhdisteiden akuuttinen myrkyllisyys määrättiin käyttäen urospuolisia sveitsiläisiä albinohiiriä (23 + 1 g) 31 77227 ja urospuolisia Wistar-rottia (110 g) sekä oraalista että intraperitoneaalista annostustapaa käyttäen. Taulukossa X on esitetty LD^-arvot (mg/kg) .

Taulukko X - l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidin N-monosubstatuoitujen ja Ν,Ν-disubstituoitujen johdannaisten akuuttinen myrkyllisyys

Yhdisteet Eläin- LD (mg/kg) 50 lajit per os i.p.

Tolmetin Na.2H O Hiiret 899 550 2

Rotat 914 612 1-b Hiiret >2000 >2000

Rotat >2000 >2000 1-c Hiiret 1000 700

Rotat 1300 780 1-d Hiiret >1500 1370

Rotat 1450 1100 1-f Hiiret >1800 1600

Rotat >2000 1500 1-g Hiiret >1500 >1500

Rotat >1500 >1500 1-h Hiiret >2400 >2000

Rotat 1800 1609 1-i Hiiret >1800 1600

Rotat >1800 1450 1-n Hiiret >1300 1200

Rotat >1300 1000 l-o Hiiret 910 590

Rotat 978 700 3-a Hiiret >2000 1500

Rotat >2400 1370 1-b Hiiret 1200 770

Rotat 1000 590

Ne arvot, jotka on esitetty taulukoissa IV-VIII, osoittavat 1-metyyli-5-p-toluoyyli-pyrroli-2-asetamidin N-monosubstatuoitujen ja Ν,Ν-disubstituoitujen johdannaisten huomattavaa far- 77227 32 makoterapeuttista vaikutusta kokeiltuina annoksina verrattuna vertailutuotteisiin. Erikoisesti mitä tulee tulehdusta estävään aktiivisuuteen, estettiin tulehdus pidemmän aikaa kuin 24 h karrageenin aiheuttamassa ödeemakokeessa. Edellä esitettyjen johdannaisten alhainen myrkyllisyys takaa niille suuren terapeuttisen arvon: voidaan todeta, että akuuttiset myrkyl-lisyysarvot (taulukko X) ovat moninkertaisesti suuremmat kuin ne, joita käytettiin farmakologisesti aktiivisten annosten aikaansaamiseksi. Lisäksi on mielenkiintoista todeta, että ulserogeeninen vaikutus on kohtuullinen, mitä tulee mahan vaurioiden lukumäärään ja niiden vaikeusasteeseen (taulukko X) toisin kuin yleensä tulehduksia estävien aineiden kysymyksessä ollessa, jotka aikaansaavat huomattavia ulserogeenisia vaikutuksia. Annostelu terveille eläimille annoksina ja annostustapoina, joita kokeissa käytettiin, ei aiheuttanut kuolemaa lyhytaikaisessa eikä pitkäaikaisessa käytössä, eikä oleellisia merkkejä myrkyllisistä vaikutuksista. Taulukoissa IV-VIII esitetyt tulokset todistavat keksinnön mukaisten farmaseuttisten seosten terapeuttisesta edullisuudesta.

Potilaille, jotka tarvitsevat tulehdusta estäviä analgeetti-sia, antipyreettisiä ja limaa estäviä farmaseuttisia seoksia, annetaan oraalisesti tai parenteraalisesti terapeuttisesti tehokas määrä yleisen kaavan (I) mukaista yhdistettä.

Oraalisena tai parenteraalisena annoksena annettu yleisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen annos on yleensä välillä noin 2 ja 15 mg/kg ruumiinpaino/vrk, vaikkakin suurempia tai pienempiä määriä voidaan antaa lääkärin määräyksestä riippuen potilaan iästä, painosta ja yleistilasta.

Käytännössä voidaan keksinnön mukaisia yhdisteitä annostella oraalisesti tai parenteraalisesti missä hyvänsä tavanomaisessa farmaseuttisessa muodossa, jotka ovat hyvin tunnettuja alan asiantuntijoille. Tällaisia annostusmuotoja ovat esim. kiinteät ja nestemäiset annostusmuodot, kuten tabletit, kapselit, peräpuikot, liuokset, siirapit yms. samoin kuin injektoitavat muodot, kuten steriilit liuokset ampulleissa tai pikkupulloissa.

Claims (9)

77227

1. Menetelmä farmakologisesti aktiivisen l-metyyli-5-p- toluoyylipyrroli-2-etikkahappoamidin valmistamiseksi, jolla on yleinen kaava /r\ _j il /R CH -C x)-CO-k. CH -CON (I) 3 \ / ^rr 2 \ I R1 CH 3 jossa R on H ja on 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, joka on subs-tituoitu ryhmällä COOR^ ja/tai ryhmällä SH, jossa R^ on H, CH^, C^H^_ tai alkoksi-substituoitu fenyyliryhmä, jossa alkoksiryhmä sisältää 1-3 hiiliatomia, tai R^ on 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliaminoryhmä, joka on substituoitu ryhmällä COR , jossa R on 4 4 -/ \?-r5 jossa R^ on 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai R^ on fenyyliryhmä, joka on substituoitu yhdellä tai useam-* maila 1-3 hiiliatomia sisältävällä alkyyliryhmällä, karbok- syyliryhmällä tai sen esterillä, joka on muodostettu 1-3 hiiliatomia sisältävän alkoholin kanssa, tai R^ on metyyli-substituoitu pyridyyliryhmä, tai R ja R^ muodostavat yhdessä viereisen typpiatomin kanssa ryhmän, jolla on kaava Γ~\ /“Λ -NO tai -N N-CH v_y Y__7 3 tunnettu siitä, että 34 7 7 2 2 7 a) amiini, jolla on yleinen kaava NHRR jossa R ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan l-metyyli-5-p-toluoyyiipyrroli-2-etikkahapon aktivoidun johdannaisen kanssa, jolla on yleinen kaava CH \ 7-CO —t i— CH -CO-X 3 \ _ / ΪΤ 2 CH 3 jossa X on aktivoiva ryhmä, joka on sopiva edistämään amidi- sidoksen muodostumista edellä kuvattujen amiinien kanssa, 00 lämpötilassa välillä noin 0 C ja 35 C joko aproottisen tai proottisen liuottimen läsnäollessa aktivoivan ryhmän luonteesta riippuen, ja mahdollisesti siinä tapauksessa, että vaiheen a) mukainen tuote sisältää ryhmän COOR , jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, lukuunottamatta sitä tapausta, että R = H, . 3 b) vaiheesta a) saatu tuote hydrolysoidaan vastaavan hapon muodostamiseksi, ja mahdollisesti c) vaiheesta b) saatu happo esteröidään sellaisen yhdisteen kanssa, jolla on kaava R OH, jossa R tarkoittaa sa- 3 3 maa kuin edellä, lukuunottamatta sitä tapausta, että R = H. 3

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että X on halogeeniatomi, edullisesti kloori.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että X on -O—C—NH—R , jossa R ja R ovat 1—3 Il 6 6 7 N-R 7 hiiliatomia sisältäviä alkyyliryhmiä tai 5-6 hiiliatomia sisältäviä sykloalkyyliryhmiä, edullisesti sykloheksyyli. 35 77227

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu r=i siitä, että X on N.

5. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään katalyyttiä, joka on p-tolueenisulfoni-happo tai 4-dimetyyliaminopyridiini.

6. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään katalyyttiä, joka on natrium- tai mag-nesiumetylaatti.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahapon guajasiiliesteri.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan l-metyyli-5-p-toluoyylipyrroli-2-asetamidoetikkahapon etyyliesteri.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan l-metyyli-5-p-toluoyyiipyrroli-2-asetamidoetikkahappo .* 36 772 27