FI118538B - Menetelmä geeniterapiassa käytettävien adenoviraalisten eläinperäisten vektoreiden valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä geeniterapiassa käytettävien adenoviraalisten eläinperäisten vektoreiden valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI118538B FI118538B FI955552A FI955552A FI118538B FI 118538 B FI118538 B FI 118538B FI 955552 A FI955552 A FI 955552A FI 955552 A FI955552 A FI 955552A FI 118538 B FI118538 B FI 118538B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- adenovirus
- human
- therapeutic
- adenoviruses
- gene
- Prior art date
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 title description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 title description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims abstract description 73
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 44
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 claims description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 claims description 10
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 claims description 4
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 3
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 claims description 3
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 claims description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 3
- -1 trophic factors Proteins 0.000 claims description 3
- 101150047856 Cav2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 claims description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 claims 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 claims 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 claims 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 65
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 28
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 description 25
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 description 24
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 8
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 7
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 6
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 6
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 4
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- PXKSAXUKRMRORY-ZWKOTPCHSA-N 2-(3,4-dichlorophenyl)-n-[(1s,2r)-2-(2,5-dihydropyrrol-1-yl)cyclohexyl]-n-methylacetamide Chemical compound N1([C@@H]2CCCC[C@@H]2N(C)C(=O)CC=2C=C(Cl)C(Cl)=CC=2)CC=CC1 PXKSAXUKRMRORY-ZWKOTPCHSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035888 Caveolin-1 Human genes 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 101150005585 E3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150066038 E4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101000715467 Homo sapiens Caveolin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 241000701168 Murine adenovirus 1 Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 241000188845 Porcine adenovirus Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 101100379247 Salmo trutta apoa1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 241000701792 avian adenovirus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Inorganic materials [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
118538
Menetelmä geeniterapiassa käytettävien adenoviraalisten eläinperäisten vektoreiden valmistamiseksi
Esillä oleva keksintö liittyy uusiin virusvekto-5 reihin, niiden valmistukseen sekä niiden käyttöön geeniterapiassa. Keksinnön kohteena on menetelmä eläinperäisen, ei-ihmisperäisen, yhdistelmä-DNA-teknisen adenoviruksen valmistamiseksi, jonka perimästä puuttuu replikaatiolle välttämättömät sekvenssit, ja joka sisältää vähintään yhden is-10 tutetun geenin, joka koodaa hoitavan proteiinimaisen tuotteen. Keksinnön kohteena on myös menetelmä kyseistä adenovirusta sisältävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi .
Geeniterapiassa puute tai epänormaali tila (mutaa-15 tio, vääristynyt ilmentyminen tai vastaava) korjataan siirtämällä geneettistä informaatiota soluun tai elimeen, jossa tällainen häiriö esiintyy. Tätä geneettistä informaatiota voidaan siirtää joko in vitro tällaisesta elimestä peräisin olevaan soluun, minkä jälkeen tämä muokattu 20 solu siirretään takaisin organismiin, tai suoraan in vivo sopivaan kudokseen. Tätä toista tapausta varten käytettävissä on erilaisia tekniikoita, joista voidaan mainita erilaiset transfektiotekniikat, joissa tarvitaan DNA:n ja DEAE-dekstraanin välisiä komplekseja [Pagano et ai., J. 25 Virol. 1 (1967) 891], DNA:n ja tumaproteiinien välisiä komplekseja [Kaneda et ai., Science 243 (1989) 375], DNA:n ja lipidien välisiä komplekseja (Feigner et ai., PNAS 84 (1987) 7413] , tai joissa on käytettävä liposomeja [Fraley et ai., J. Biol. Chem. 255 (1980) 10431], sekä muut vas- 30 taavat. Viime aikoina virusten käyttö vektoreina geenien siirtämiseksi on todettu lupaavaksi vaihtoehdoksi fasikaa-lisille transfektiotekniikoille. Tähän liittyen erilaisia viruksia testaamalla on selvitetty niiden kyky infektoida tiettyjä solupopulaatioita. Erityisesti voidaan mainita i t· 2 118538 retrovirukset (RSV, HMS, MMS, jne.) HSV-virus, adenoviruk-sen kaltaiset virukset ja adenovirukset.
Näistä viruksista adenoviruksilla on tiettyjä ominaisuuksia, jotka ovat mielenkiintoisia ajatellen näiden 5 virusten käyttöä geeniterapiassa. Erityisesti niillä on melko laaja isäntäkirjo, ne kykenevät infektoimaan lepotilassa olevia soluja, ja ne eivät yhdisty infektoidun solun perimään. Näistä syistä adenoviruksia on jo käytetty in vivo geenisiirroissa. Tätä tarkoitusta varten on valmis-10 tettu erilaisia, adenoviruksesta peräisin olevia vektoreita, jotka sisältävät erilaisia geenejä (β-gal, OTC, ä-lAT, sytokiinit, jne.). Tähän saakka kaikki tekniikan nykytason mukaiset, adenoviruksesta peräisin olevat, ihmisen geeniterapiaan tarkoitetut vektorit on valmistettu ihmisestä 15 peräisin olevista adenoviruksista. Ne näyttävätkin soveltuvan kaikkein parhaiten tällaiseen käyttöön. Jotta voitaisiin rajoittaa vaarana olevaa monistumista ja infek-toivien virushiukkasten muodostumista in vivo, niin käytettyjä adenoviruksia on yleensä muokattu siten, että ne 20 eivät kykene repiikoitumaan infektoidussa solussa. Niinpä tekniikan nykytason mukaiset kuvatut muodosteet ovat adenoviruksia, joista on hävitetty El-alueet (Elä ja/tai Elb) sekä mahdollisesti E3-alueet, jotka sisältävät tähän liittyvät sekvenssit [Levero et ai.. Gene 101 (1991) 195; 25 Gosh-Choudhury et ai., Gene 50 (1986) 161]. Kuitenkin vielä tämän välttämättömän muokkausvaiheen lisäksi tekniikan nykytason mukaisiin kuvattuihin vektoreihin liittyy muita haittoja, jotka rajoittavat niiden käyttöä geeniterapiassa, ja joista voidaan mainita erityisesti geneettinen yh-30 distyminen ("rekombinaatio”) villeihin adenoviruksiin. Esillä olevassa keksinnössä on saatu aikaan edullinen ratkaisu tähän ongelmaan.
Esillä oleva keksintö liittyy siis eläinperäisten yhdistelmä-DNA-teknisten adenovirusten käyttöön ihmisen 35 geeniterapiassa. Esillä oleva keksintö perustuu siihen ha- 3 118538 vaintoon, että eläinperäiset adenovirukset kykenevät infektoimaan hyvin tehokkaasti ihmissoluja. Keksintö perustuu samoin siihen havaintoon, että eläinperäiset adenovirukset eivät kykene lisääntymään niissä ihmissoluissa, 5 joissa niitä on testattu. Keksintö perustuu lopuksi vielä siihen yllättävään havaintoon, että ihmisestä peräisin olevat adenovirukset eivät voi toimia lainkaan eläinperäisten adenovirusten trans-komplementteina, mikä estää täydellisesti vaarana olevan ja infektoivien hiukkasten 10 muodostumiseen johtavan rekombinaation ja lisääntymisen in vivo ihmisestä peräisin olevan adenoviruksen läsnä ollessa. Keksinnön kohteena on menetelmä eläinperäisen, ei-ihmisperäisen adenoviruksen tai virusta sisältävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, jolle on tunnus-15 omaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 tai vastaavasti 10 esitetään. Näin ollen keksinnön mukaisesti valmistetut vektorit ovat erityisen edullisia, koska ne vaarat, jotka liittyvät virusten käyttöön vektoreina geeniterapiassa, kuten patogeenisyys, tarttuminen, replikaatio, rekombinaa-20 tio sekä muut vastaavat, ovat huomattavasti pienemmät tai niitä ei esiinny lainkaan.
Esillä olevassa keksinnössä saadaan siis aikaan virusvektorit, joita voidaan käyttää erityisen hyvin toivottujen DNA-sekvenssien siirtämiseksi ihmiseen ja niiden • - 25 ilmentämiseksi ihmisessä.
Näin ollen esillä olevan keksinnön ensimmäisenä tavoitteena on valmistaa heterologisen DNA-sekvenssin sisältävä, eläinperäinen yhdistelmä-DNA-tekninen adenovirus, jota voidaan käyttää ihmiselimistön hoitavaan ja/tai ki-30 rurgiseen käsittelyyn tarkoitetun farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi.
Esillä olevan keksinnön puitteissa käyttökelpoisten, eläinperäisten adenovirusten alkuperä voi olla hyvin erilainen, ihmisen adenoviruksia lukuunottamatta. Ihmisen . t 4 118538 adenovirukset voivat luonnollisestikin infektoida ihmisen, ja niistä käytetään yleensä lyhennettä HAd tai Ad.
Erityisesti, esillä olevassa keksinnössä käyttökelpoiset, eläinperäiset adenovirukset voivat olla peräi-5 sin koirasta, naudasta, hiirestä [esim. Mavl, Beard et ai., Virology 75 (1990) 81], lampaasta, siasta, linnusta tai apinasta (esimerkiksi SAV).
Erityisemmin, lintujen adenoviruksista voidaan mainita kantakokoelmasta ATCC saatavat serotyypit 1-10, 10 esimerkiksi kannat Phelps (ATCC VR-432), Fontes (ATCC VR-280), P7-A (ATCC VR-827), IBH-2A (ATCC VR-828), J2-A (ATCC VR-829), T8-A (ATCC VR-830), K-ll (ATCC VR-921) tai vielä kannat, joiden tunnuksina on ATCC VR-831-835. Naudan adenoviruksista voidaan käyttää erilaisia tunnettuja sero-15 tyyppejä, ja erityisesti niitä, joita on saatavana kanta-kokoelmasta ATCC (tyypit 1-8) tunnuksilla ATCC VR-313, 314, 639-642, 768 ja 769. Samoin voidaan mainita hiiren adenovirukset FL (ATCC VR-550) sekä E20308 (ATCC VR-528), lampaan adenovirus tyyppi 5 (ATCC VR-1343) tai tyyppi 6 20 (ATCC VR-1340); sian adenovirus 5359 tai apinan adenovirukset kuten erityisesti ne adenovirukset, jotka on talletettu kantakokoelmaan ATCC numeroilla VR-591-594, 941-943, 195-203, ja muut vastaavat.
Esillä olevan keksinnön puitteissa käytetään edul-25 lisesti koirasta peräisin olevia adenoviruksia ja erityisesti kaikkia CAV2-adenoviruksen kantoja [esimerkiksi man-hattan-kanta tai A26/61 (ATCC VR-800)]. Koiran adenovirus-ten rakennetta on selvitetty lukuisissa tutkimuksissa. Niinpä alalla on jo kuvattu CAV1- ja CAV2-adenovirusten 30 täydelliset restriktiokartat (Spibey et ai., J. Gen. Vi-* rol. 70 (1989) 165] , ja Elä ja E3-geenit sekä ITR-sek- venssit on kloonattu ja niiden sekvenssi määritetty [katso erityisesti Spibey et ai., Virus Res. 14 (1989) 241;
Linnä, Virus Res. 23 (1992) 119, WO 91/11525]. Lisäksi 35 koiran adenoviruksia on jo käytetty sellaisten rokotteiden 5 118538 valmistamiseksi, jotka rokotteet on tarkoitettu koirien immunisoimiseksi vesikauhua vastaan, parvovirukset ja muut vastaavat (W0 91/11525). Tähän mennessä tekniikan nykytason mukaisissa ratkaisuissa ei ole kuitenkaan ehdotettu 5 sitä mahdollisuutta, että näitä adenoviruksia käytettäisiin ihmisen geeniterapiassa. Lisäksi tällaisen käytön merkitystä ei ole myöskään koskaan arvioitu.
Keksinnön puitteissa käytettävien adenovirusten on edullisesti oltava puutteellisia, eli niiden on oltava ky-10 vyttömiä lisääntymään itsenäisesti organismissa, joihin ne on siirretty. Kuten edellä on mainittu, hakija on osoittanut, että eläinperäiset adenovirukset kykenevät infektoimaan ihmisen soluja, mutta ne eivät kykene lisääntymään näissä soluissa. Tässä suhteessa ne ovat siis luonnostaan 15 puutteellisia ihmisessä ja toisin kuin siinä tapauksessa, että käytetään ihmisen adenoviruksia, niitä ei tarvitse muokata geneettisesti tässä suhteessa. Kuitenkin näiden adenovirusten tätä puutteellista ominaisuutta voidaan tehostaa muokkaamalla perimää geneettisesti, erityisesti 20 muokkaamalla niitä sekvenssejä, jotka ovat välttämättömät tämän viruksen replikaatiolle soluissa. Nämä alueet voidaan joko poistaa (täydellisesti tai osittain), tai ne voidaan tehdä toimintakyvyttömiksi, tai niitä voidaan muokata istuttamalla muita sekvenssejä ja erityisesti hetero-- 25 loginen DNA-sekvenssi.
Adenoviruksen alkuperästä riippuen replikaatiolle välttämättömät sekvenssit voivat vaihdella jonkin verran. Ne sijaitsevat kuitenkin yleensä perimän päiden läheisyydessä. Niinpä CAV-2:n tapauksessa Ela-alue on tunnistettu, 30 kloonattu ja sen sekvenssi on määritetty [Spibey et ai., Virus Res. 14 (1989) 241]. Se sijaitsee 2 kb:n suuruisessa kappaleessa adenoviruksen perimän vasemmassa päässä.
Lisäksi näihin adenoviruksiin voidaan tehdä muita geneettisiä muokkauksia, erityisesti ihmisessä epätoivot-35 tujen virusproteiinien syntymisen estämiseksi, suurten he- 6 118538 terologieten DNA-sekvenssien istutuksen mahdollistamiseksi ja/tai toisen eläin- tai ihmisperäisen adenoviruksen perimästä saatujen määrättyjen alueiden istuttamiseksi (esimerkiksi E3-geeni).
5 Esillä olevassa keksinnössä käsitteellä "heterolo- ginen DNA-sekvenssi" tarkoitetaan niitä kaikkia virukseen siirrettyjä DNA-sekvenssejä, joiden siirto ja/tai ilmentyminen ihmisessä on tavoitteena.
Erityisesti tämä heterologinen DNA-sekvenssi voi 10 käsittää yhden tai useamman hoitavan geenin ja/tai yhden tai useamman sellaisen geenin, joka koodaa antigeenisiä peptidejä.
Keksinnön erään erityisen suoritusmuodon kohteena on siis erityisesti eläinperäisen adenoviruksen käyttö 15 sellaisten farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi, joiden koostumusten avulla on tarkoitus siirtää hoitavia geenejä ihmiseen. Näitä hoitavia geenejä, joita voidaan siirtää tällä tavalla, ovat ne kaikki geenit, joiden kopioituminen ja mahdollinen luenta kohdesolussa johtaa hoita-20 vasti vaikuttavien tuotteiden syntymiseen.
Kysymyksessä voivat olla erityisesti geenit, joihin koodautunei'lla proteiinimaisilla tuotteilla on hoitavaa vaikutusta. Tällä tavalla koodautunut proteiinimainen tuote voi olla proteiini, peptidi, aminohappo tai vastaa- o 25 va. Tämä proteiinimainen tuote voi olla homologinen koh-desoluun verrattuna (eli kyseinen tuote ilmentyy normaalisti kohdesolussa, kun solussa ei esiinny patologisia muutoksia). Tässä tapauksessa proteiinin ilmentyminen voi esimerkiksi täydentää riittämätöntä ilmentymistä solussa 30 tai muokkautumisen seurauksena inaktiivisen tai heikosti ‘ aktiivisen proteiinin ilmentymistä tai tämä ilmentyminen voi peittää mainitun proteiinin. Hoitava geeni voi myös koodata soluproteiinin mutanttia, jonka stabiilisuus on parantunut, aktiivisuus muuttunut, tai vastaavaa. Tämä 35 proteiinimainen tuote voi myös olla heterologinen koh- . t 7 118538 desoluun nähden. Tässä tapauksessa ilmentynyt proteiini voi esimerkiksi täydentää solua tai sen avulla voidaan saada aikaan solusta puuttuva aktiivisuus, jonka avulla solu voi torjua patologisen tilan.
5 Esillä olevaan keksintöön soveltuvista hoitavista tuotteista voidaan mainita erityisemmin entsyymit, veren johdannaiset, hormonit, lymfokiinit: interleukiinit, in terferonit ja muut vastaavat (FR 9203120), kasvutekijät, hermovälittäjät tai niiden esiasteet tai synteesientsyy-10 mit, trofiset tekijät: BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, jne.; apolipoproteiinit: ApoAI, ApoAIV,
ApoE, jne (FR 93 05125), dystrofiini tai minidystrofiini (FR 9111947), kasvaimia tukahduttavat geenit: p53, Rb,
RapIA, DCC, k-rev, jne. (FR 93 04745), hyytymiseen välttä-15 mättömiä tekijöitä koodaavat geenit: tekijät VII, VIII, IX ja muut vastaavat.
Tämä hoitava geeni voi olla myös vastasuuntainen ("antisense") geeni tai sekvenssi, jonka ilmentyminen koh-desolussa tekee mahdolliseksi geenin ilmentymisen tai solun 20 mRNArn kopioitumisen säätelyn. Tällaiset sekvenssit voidaan esimerkiksi kopioida EP-patenttijulkaisussa 140 308 kuvatulla tekniikalla kohdesolussa RNA:ksi, joka on solun mRNA:n komplementti, jolloin solun mRNA:n luenta proteiiniksi salpautuu.
25 Kuten edellä on esitetty, tämä heterologinen DNA- sekvenssi voi myös käsittää yhden tai useamman sellaisen geenin, joka koodaa sellaista antigeenistä peptidiä, joka voi tuottaa ihmisessä immuunivasteen. Keksinnön erään erityisen suoritusmuodon mukaisesti aikaan voidaan siis saada 30 rokotteita, joiden avulla ihminen voidaan immunoida erityisesti mikro-organismeja tai viruksia vastaan. Kysymykseen tulevat erityisesti sellaiset antigeeniset peptidit, joiden spesifisyys kohdistuu Epstein-Barr-virukseen, hepatitis B-virukseen (EP 185 573), valevesikauhua aiheutta- 8 118538 vaan virukseen tai jotka ovat spesifisiä kasvaimille (EP 259 212).
Yleensä heterologinen DNA-sekvenssi käsittää samoin sekvenssit, jotka tekevät mahdolliseksi hoitavan gee-5 nin ja/tai antigeenistä peptidiä koodaavan geenin ilmentymisen infektoidussa solussa. Kysymyksessä voivat olla sekvenssit, jotka vastaavat luonnollisella tavalla kyseisen geenin ilmentymisestä, kun nämä sekvenssit kykenevät toimimaan infektoidussa solussa. Kysymykseen tulevat samoin 10 erilaista alkuperää olevat sekvenssit (jotka vastaavat muiden proteiinien ilmentymisestä, tai jotka voivat olla jopa synteettisiä). Kysymykseen tulevat erityisesti euka-riootti- tai virusgeenien promoottorisekvenssit. Kysymyksessä voivat olla esimerkiksi promoottorisekvenssit, jotka 15 ovat peräisin sen solun, joka halutaan infektoida, perimästä. Mahdollisia ovat myös viruksen, käytetty adenovirus mukaan lukien, perimästä peräisin olevat promoottorisekvenssit. Tähän liittyen voidaan mainita esimerkiksi geenien E1A, MLP, CMV, RSV, ja muiden promoottorit. Lisäksi 20 näitä ilmentämissekvenssejä voidaan muokata lisäämällä niihin aktivoivia, sääteleviä tai muita vastaavia sekvenssejä. Lisäksi, kun istutetussa geenissä ei ole ilmentämissekvenssejä, niin se voidaan istuttaa tämän puutteellisen viruksen perimään tällaisen sekvenssin jälkeen.
’ 25 Edelleen, heterologinen DNA-sekvenssi voi käsittää samoin erityisesti ennen hoitavaa geeniä signaalisekvens-sin, joka ohjaa syntetisoidun hoitavan tuotteen koh-desolusta ulos johtaville erityspoluille. Tämä signaalise-kvenssi voi olla hoitavan tuotteen luonnollinen signaa-30 lisekvenssi, mutta kysymykseen voivat tulla samoin kaikki muutkin toiminnalliset signaalisekvenssit tai keinotekoinen signaalisekvenssi.
Keksinnön mukaisesti puutteelliset adenovirukset voidaan valmistaa millä tahansa alan asiantuntijalle tu-35 tulla tekniikalla. Ne voidaan erityisesti valmistaa menet- f · 9 118538 telemällä WO-patenttihakemuksessa 91/11 525 kuvatulla tavalla. Perinteinen valmistustekniikka perustuu eläinperäisen adenoviruksen ja plasmidin, joka käsittää muun muassa istutettavan heterologisen DNA-sekvenssin, väliseen homo-5 logiseen rekombinaatioon. Homologinen rekombinaatio saadaan aikaan transfektoimalla sekä mainitut adenovirukset että plasmidi samaan sopivaan solulinjaan. Käytetyn solu-linjan on edullisesti oltava sellainen, että se voidaan transformoida näillä elementeillä, ja siinä tapauksessa, 10 että käytetään muokattua eläinperäistä adenovirusta, tämä solulinja voi käsittää, mikäli tarpeen, sekvenssejä, jotka voivat toimia puutteellisen adenoviruksen perimän osan komplementtina, ja jotka ovat edullisesti yhdentyneessä muodossa rekombinaatiovaarojen välttämiseksi. Esimerkkinä 15 solulinjöistä voidaan mainita vinttikoiran munuaisista saatu solulinja GHK (Flow Laboratories) tai solulinja MDCK. Olosuhteet näiden solujen viljelemiseksi sekä virusten tai virusperäisen DNA:n preparoimiseksi on samoin kuvattu kirjallisuudessa [katso erityisesti Macatney et ai., 20 Science 44 (1988) 9; Fowlkes et ai., J. Mol. Biol., 132 (1979) 163] .
Tämän jälkeen monistetut vektorit otetaan talteen ja ne puhdistetaan molekyylibiologiassa perinteisillä tekniikoilla.
25 Esillä olevan keksinnön mukaisesti voidaan valmis taa eläinperäinen yhdistelmä-DNA-tekninen adenovirus, jonka sisältämä heterologinen DNA-sekvenssi käsittää vähintään yhden, edellä määritellyn hoitavan geenin.
Keksinnön mukaisesti voidaan myös valmistaa mikä 30 tahansa sellainen farmaseuttinen koostumus, joka sisältää edellä esitetyn määritelmän mukaisen, eläinperäisen, yh-distelmä-DNA-teknisen adenoviruksen. Kyseiset farmaseuttiset koostumukset voidaan valmistaa muotoon, jota voidaan käyttää paikallisesti tai jota voidaan antaa suun kautta, 35 ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta, nenän sisäisesti, las- 10 118538 kimon sisäisesti, lihaksen sisäisesti, ihon alaisesti, silmän sisäisesti tai muulla tavalla.
Tämä farmaseuttinen koostumus sisältää edullisesti kuljettimia, jotka ovat farmaseuttisesti hyväksyttäviä in-5 jektoitavassa valmisteessa. Kysymykseen voivat tulla erityisesti suolaliuokset (mononatriumfosfaatti, dinatrium-fosfaatti, natrium-, kalium-, kalsium- tai magnesiumklori-di tai vastaavat tai näiden suolojen seokset), jotka ovat steriilejä ja isotonisia, tai kuivat koostumukset, erityi-10 sesti lyofilisoidut koostumukset, joista voidaan valmistaa injektoitavia liuoksia lisäämällä niihin tapauksesta riippuen steriloitua vettä tai fysiologista seerumia.
Injektointiin käytetty virusannoksen suuruus riippuu erilaisista parametreistä, tämän annoskoon riippuessa 15 erityisesti käytetystä antamistavasta, kyseessä olevasta patologisesta tilasta, ilmennettävästä geenistä tai vielä hoidon toivotusta kestosta. Yleisesti, keksinnön mukaisista yhdistelmä-DNA-teknisistä adenoviruksista tehtyjä valmisteita annetaan annoksina, joiden suuruus on alueella 20 104 - 1014 pfu/ml, edullisesti alueella 106 - 1016 pfu/ml.
Käsite pfu ("plaque forming unit") vastaa virusliuoksen infektointikykyä, ja se määritetään infektoimalla sopiva soluviljelmä ja mittaamalla yleensä 5 vuorokauden kuluttua infektoituneista soluista syntyneet täplät. Tekniikat, o 25 joilla voidaan määrittää liuoksen pfu-tiitteri, on dokumentoitu hyvin kirjallisuudessa.
Istutetusta heterologisesta DNA-sekvenssstä riippuen keksinnön mukaisesti valmistettuja adenoviruksia voidaan käyttää lukuisten patologisten tilojen hoitamiseen 30 tai ehkäisyyn, joista tiloista voidaan mainita geneettiset sairaudet (dystrofia, kystinen fibroosi, jne.), hermoston rappeutumisesta johtuvat sairaudet (alzheimerin tauti, Parkinsonin tauti, ALS, jne.), syöpäsairaudet, hyytymishäiriöihin tai dyslipoproteinemiaan liittyvät patologiset
IX
118538 tilat, virusinfektioihin liittyvät sairaudet (maksatulehdukset, AIDS, jne) sekä muut vastaavat.
Esillä olevaa keksintöä kuvataan täydellisemmin seuraavilla esimerkeillä, jotka havainnollistavat keksin-5 töä sitä rajoittamatta.
Kuvioiden selitykset
Kuvio 1 esittää Manhattan-kantaan kuuluvan CAV2-adenoviruksen restriktiokarttaa (edellä mainitusta julkaisusta Spibey et ai.).
10 Kuvio 2 esittää plasmidien pl, p2 (kuvio 2a) ja p3 (kuvio 2b) karttaa.
Kuvio 3 esittää strategiaa koirasta saadun, hete-rologisen DNA-sekvenssin sisältävän, yhdistelmä-DNA-teknisen adenoviruksen valmistamiseksi.
15 Molekyylibiologiassa yleisesti käytetyt tekniikat
Molekyylibiologiassa perinteisesti käytetyt menetelmät kuten plasmidi-DNA:n preparatiivinen eristäminen, plasmidi-DNA:n sentrifugointi kesiumkloridigradientin avulla, elektroforeesi agaroosi- tai akryyliamidigeeleil-20 lä, DNA-kappaleiden puhdistaminen sähköeluutiolla, proteiinien uutto fenolilla tai fenoli-kloroformilla, DNA:n sa-ostaminen suolapitoisessa ympäristössä etanolilla tai iso-propanolilla, transformointi Escherichia coli-bakteeriin ja muut vastaavat ovat hyvin tuttuja alan asiantuntijalle, ' ' 25 ja niitä on kuvattu laajasti kirjallisuudessa [Maniatis T.
et ai., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982,-Ausubel F.M. et al. (toim.), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987].
30 pBR322- ja pUC-tyypin plasmidit ja M13-sarjan faa- git on hankittu kaupallisesti (Bethesda Research Laboratories) .
Ligaatiota varten DNA-kappaleet voidaan erottaa kokonsa mukaan elektroforeettisesti agaroosi- ja akryy-35 liamidigeeleillä, uuttaa fenolilla tai fenolin ja kloro- f e 12 118538 formin seoksella, saostaa etanolilla, minkä jälkeen niitä inkuboidaan T4-faagin DNA-ligaasin (Biolabs) läsnä ollesa toimittajan suositusten mukaisesti.
Irralliset 5'-päät voidaan täyttää E. coli:sta 5 saadulla DNA-polymeraasin Klenow-kappaleella (Biolabs) toimittajan esittämällä tavalla. Irralliset 3·-päät tuhotaan T4-faagin DNA-polymeraasin (Biolabs) läsnä ollessa, jota polymeraasia käytetään valmistajan suositusten mukaisesti. Irralliset 5'-päät tuhotaan varovasti Sl-nukle-10 aasilla käsittelemällä.
Synteettisillä oligonukleotideillä ohjattu in vit-ro-mutageneesi voidaan toteuttaa Tayloriin et ai. kehittämällä menetelmällä (Nucleic Acids Res. 13 (1985) 8749 - 8764] käyttäen yhtiöstä Amersham saatua reagenssipakkaus-15 ta.
DNA-kappaleiden entsymaattinen monistaminen niin kutsutulla PCR-tekniikalla [Polymerase-catalyzed Chain Reaction, Saiki R.K. et al., Science 230 (1985) 1350-1354; Mullis K.B. ja Faloona F.A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-20 350] voidaan toteuttaa käyttäen "DNA thermal cycler"- laitetta (Perkin Elmer Cetus) valmistajan esittämien ohjeiden mukaisesti.
Nukleotidisekvenssien varmistus voidaan toteuttaa Sanger:in et ai. kehittämällä menetelmällä [Proc. Natl.
; 25 Acad. Sei. USA, 74 (1977) 5463 - 5467] käyttäen yhtiöstä
Amersham saatua reagenssipakkausta.
Esimerkit
El. Ihmissolujen infektointi koirasta peräisin olevilla adenoviruksilla 30 Tämä esimerkki osoittaa eläimestä (koirasta) pe räisin olevan adenoviruksen kyvyn infektoida ihmissoluja.
El.l. Käytetyt solulinjat Tässä esimerkissä käytettiin seuravia solulinjoja:
Ihmissikiön munuaisesta saatu linja 293 [Graham et 35 ai., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59]. Tämä linja sisältää 13 118538 erityisesti perimään yhdentyneenä vasemman osan ihmisen adenoviruksen Ad5 perimästä (12 %).
Ihmisestä saatu KB-solulinja, joka on peräisin ihmisen orvaskeden syövästä, ja joka on saatavana kantako-5 koelmasta ATCC (tunnuksella CCL17) samoin kuin ne olosuhteet, jotka sallivat sen viljelyn.
Ihmisestä saatu Hela-solulinja, joka on peräisin ihmisen epiteelisyövästä, ja joka on saatavana kantako-koelmasta ATCC (tunnuksella CCL2) samoin kuin ne olosuh-10 teet, jotka sallivat sen viljelyn.
Koirasta saatu MDCK-solulinja: olosuhteet MDCK- solujen viljelemiseksi on kuvattu erityisesti julkaisussa Macatney et ai., Science 44 (1988) 9.
El.2. Infektointi 15 Edellä mainittujen solulinjojen solut infektoitiin CAV2-viruksella (Manhattan-kanta). Tätä tarkoitusta varten soluja (noin 107/malja) inkuboitiin 1 tunnin ajan 37 °C:ssa 10 pfu/solu olevan virusmäärän läsnä ollessa. Sitten lisättiin 5 ml viljelyalustaa ja soluja viljeltiin 37 20 °C:ssa noin 48 tuntia. Tässä vaiheessa analysoitiin infek-toiduissa soluissa episomaalisessa muodossa läsnä oleva DNA. Saadut tulokset osoittavat, että kaikkien tähän solu-linjaan kuuluvien solujen tumassa on läsnä CAV2-viruksen DNA:ta, mikä osoittaa sen, että koiran adenovirukset voi-25 vat infektoida nämä solut.
E2. Koirasta peräisin olevien adenovirusten li-sääntymättömyys ihmissoluissa Tämä esimerkki osoittaa, että vaikka koiran adenovirukset kykenevätkin infektoimaan ihmissoluja, niin 30 ne eivät kuitenkaan lisäänny niissä.
Sen jälkeen, kun solut oli infektoitu esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, CAV2-viruksen DNA-määrä määritettiin ajan kuluessa seuraavalla tavalla: soluissa läsnä oleva episomaalinen DNA otettiin talteen tekniikalla, joka on 35 kuvattu julkaisussa Hirt et ai., J. Virol. 45 (1983) 91, 14 118538 ja tämä DNA-määrä määritettiin vertaamalla sitä kalibroin-tiasteikkoon. Saadut tulokset osoittavat, ettei virus-DNA:n määrä lisäänny KB- ja 293-soluissa, mikä osoittaa CAV2-replikaation täydellisen puuttumisen näissä soluissa.
5 Todetaan, että MDCK- ja Hela-soluissa CAV2-viruksesta peräisin olevan DNA:n määrä on kasvanut hieman. Kuitenkin virushiukkasten muodostumisen määrittäminen osoittaa, ettei ihmisestä peräisin olevissa 293-, KB- ja Hela-soluissa tapahdu minkäänlaista CAV2:n lisääntymistä, vaan että täl-10 laista lisääntymistä esiintyy ainoastaan koirasta peräisin olevassa MDCK-solulinjassa. Lisääntyminen määritettiin ottamalla talteen infektoidut solut, vapauttamalla mahdolliset virukset jäädyttämällä ja sulattamalla, ja infektoimalla MDCK-solut tällä tavalla saadulla supernatantilla 15 edellä kuvatuissa olosuhteissa. Viljelyn kestettyä 48 tuntia virus-DNA:n puuttuminen tällä tavalla infektoiduista MDCK-soluista osoittaa, ettei ihmissoluissa ollut tapahtunut lainkaan virusten lisääntymistä.
Nämä tulokset osoittavat selvästi, etteivät koiran 20 adenovirukset kykene lisääntymään ihmissoluissa.
E3. Koiran adenovirusten ja ihmisen adenovirusten välisen trans-komplementtisuuden puuttumisen osoitus Tämä esimerkki osoittaa, ettei ihmisen adenovirusten läsnäolo transkomplementoi koiran adenovirusten li- 1 25 sääntymättömyyttä ihmissoluissa.
Ihmisestä saatujen solulinjojen 293, KB ja Hela solut sekä koiran solulinjan MDCK-solut infektoitiin sekä CAV2-adenoviruksella että ihmisen adenoviruksella Ad5. Vi-rus-DNA:n (koira- ja ihmisperäinen) läsnäolo soluissa 30 osoitettiin samalla tavalla kuin esimerkissä El, ja DNA-määrä sekä lisääntyminen määritettiin ajan kuluessa. Saaduista tuloksista nähdään, ettei CAV2:sta peräisin olevan DNA:n määrä kasva ajan kuluessa soluissa KB ja 293, mikä osoittaa, ettei ihmisen adenoviruksen Ad5 läsnäolo aiheuta 35 transkomplementoinnin seurauksena CAV2:n replikaatiota 15 118538 näissä soluissa. Virus-DNA:n puuttuminen MDCK-soluista, jotka infektoitiin mahdollisesti KB-, 293- ja Hela-soluista saaduilla viruksilla, osoittaa samalla tavalla, ettei CAV2-adenovirus lisäänny lainkaan ihmisen solu-5 linjoissa edes ihmisen adenoviruksen läsnäollessa.
E4. DNA-pankin muodostaminen CAV2:n perimästä
Plasmidipankki muodostettiin lähtien CAV2-adenoviruksen perimästä saaduista restriktiokappaleista. Tämä pankki saatiin pilkkomalla CAV2 entsyymeillä Smal ja PstI 10 ja kloonaamalla Smal-kappaleet A, B, C, D, E, F, IkaJ sekä PstI-kappaleet: A, B, C, D, E, F, G, H (kuvio 1) vektoriin pGem3Zf+ (Promega). Sitten Sma C-kappaleen käsittävä plasmidi transfektoitiin MDCK-soluihin yhdessä plasmi-din pUC4KIXX (Pharmacia) kanssa, joka plasmidi käsitti 15 neomysiinin vastustuskyvyn aiheuttavan geenin, sellaisen MDCK-linjan aikaansaamiseksi, joka linja ilmentää pysyvästi CAV2:n geenejä E1A ja E1B. Tämän linjan avulla voidaan valmistaa yhdistelmä-DNA-teknisiä viruksia, joista nämä alueet puuttuvat (vrt. E5.2.).
20 E5. Koirasta peräisin olevan, yhdistelmä-DNA- teknisen adenoviruksen muodostaminen, joka virus käsittää interleukiini-2:n geenin Ad2:n MLP-promoottorin säätelyn alaisuudessa
Kaksi erilaista strategiaa on kehitetty sellaisen, 25 koirasta peräisin olevan, yhdistelmä-DNA-teknisen adenoviruksen muodostamiseksi, joka virus käsittää interleukiini-2:n geenin ihmisen Ad2:n MLP-promoottorin säätelyn alaisuudessa.
E5.1. Ensimmäisen strategian mukaisesti toivottu 30 heterologinen DNA-sekvenssi (MLP-promoottori - interleukiini-2 :n geeni) istutetaan E4-alueen ja CAV2:n koko perimän oikean ITR:n väliin Smal-restriktiokohtaan. Tällainen yhdistelmä muodostetaan toivotun heterologisen DNA-sekvenssin käsittävän plasmidin ja CAV2:n perimän välisel-35 lä ligaatiolla tai in vivo-rekombinaatiolla. Plasmidit, 16 118538 joita käytetään MLP-promoottorin säätelyn alaisuudessa olevan interleukiini-2:n geenin käsittävien, yhdistelmä-DNA-teknisten adenovirusten muodostamiseksi, muodostetaan seuraavalla tavalla (kuvio 2): 5 ensimmäinen plasmidi, josta käytetään lyhennettä pl, saadaan kloonaamalla CAV2:n SallB-kappale (kuvio l) , joka sisältää erityisesti oikean ITR:n, Smal-kohdan ja E4-geenin, plasmidiin pGEM3Zf+ (Promega), Smal-kohdan ollessa ainoa pl:ssä; 10 heterologinen DNA-sekvenssi (MLP-promoottori - in- terleukiini-2:n geeni) istutetaan plasmidissa pl Smal-kohtaan plasmidin p2 muodostamiseksi; ja perimäpankin PstI D-kappaleessa läsnä oleva Pstl-Sall-kappale, joka sisältää osan E3-geenistä, kloonataan 15 sitten vastaavaan kohtaan plasmidissa p2 plasmidin p3 aikaansaamiseksi (kuvio 2) .
Täten saatuja plasmideja käytetään yhdistelmä-DNA-teknisten adenovirusten valmistamiseksi seuraavaa kahta menettelytapaa käyttäen (katso kuvio 3): 20 a) Entsyymillä Sali pilkotun plasmidin p2 ligaatio in vitro CAV2:n Sali A-kappaleeseen ja ligaatiotuotteen transfektio MDCK-soluihin (kuvio 3a).
b) Plasmidin p3 ja CAV2:n Sali A-kappaleen välinen rekombinaatio sen jälkeen, kun ne oli transfektoitu yhdes-1 25 sä MDCK-soluihin (kuvio 3b). Sitten nämä saadut, yhdistel- mä-DNA-tekniset adenovirukset eristettiin ja monistettiin alan asiantuntijalle tutuilla tekniikoilla.
Näiden toimenpiteiden avulla voidaan muodostaa koirasta peräisin olevia, yhdistelmä-DNA-teknisiä adenovi-30 ruksia, joissa on interleukiini-2:n geeni, ja joita voidaan käyttää tämän hoitavan geenin siirtämiseksi ihmiseen (kuvio 3).
E5.2. Toisessa aikaansaadussa strategiassa käytetään hyväksi MDCK-solulinjaa, joka ilmentää pysyvästi 35 CAV2:n geenejä E1A ja ElB (vrt. esimerkki E4) . Tämän Iin- < « 118538 π jän avulla voidaan todella trans-komplementoida sellaiset koiran adenovirukset, joista nämä alueet on hävitetty, ja muodostaa täten sellaiset yhdistelmä-DNA-tekniset virukset, joissa heterologinen DNA-sekvenssi on korvautunut El-5 alueella. Tätä tarkoitusta varten muodostetaan plasmidi, joka käsittää vasemman pään CAV2:n perimästä (ITR-sekvenssin ja sekä kapsidin muodostukseen tarvittavan sek-venssin) sekä heterologisen DNA-sekvenssin. Tämä plasmidi transfektoidaan samoin edellä kuvattuihin MDCK-soluihin 10 CAV2-adenoviruksen perimän läsnä ollessa, josta perimästä on hävitetty sen oma vasen pää. Syntyneet, koirasta peräisin olevat, yhdistelmä-DNA-tekniset adenovirukset otetaan talteen, ne mahdollisesti monistetaan ja niitä säilytetään ihmisessä käyttöä varten.
15
Claims (11)
1. Menetelmä eläinperäisen, ei-ihmisperäisen, yh-distelmä-DNA-teknisen adenoviruksen valmistamiseksi, jonka 5 perimästä puuttuu replikaatiolle välttämättömät sekvenssit, ja joka sisältää vähintään yhden istutetun geenin, joka koodaa hoitavan proteiinimaisen tuotteen, tunnettu siitä, että eläinperäinen, ei-ihmisperäinen adenovirus modifioidaan geneettisesti siten, että se menettää repii-10 kaatiokykynsä, ja siihen viedään vähintään yksi geeni, joka koodaa terapeuttista proteiinimaista tuotetta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, jossa hoitava proteiinimainen tuote on valittu entsyymien, veren 15 johdannaisten, hormonien, lymfokiinien, kasvutekijöiden, hermovälittäjien tai niiden esiasteiden tai synteettisten entsyymien, trofisten tekijöiden, apolipoproteiinien, dys-trofiinin tai minidystrofiinin, kasvaimia tukahduttavien tuotteiden sekä hyytymiseen osallistuvien tekijöiden jou-20 kosta.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, joka sisältää vähintään yhden istutetun vastasuuntaisen sekvenssin.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen mene telmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, joka lisäksi käsittää promoottorisekvenssit, jotka tekevät mahdolliseksi yhden tai useamman istutetun hoitavan geenin ilmentymisen.
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen mene telmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, joka lisäksi käsittää signaalisekvenssit, jotka mahdollistavat hoitavan geenin ilmentymistuotteen erittymiseen.
6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen mene-35 telmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, 19 118538 joka on valittu koiran, naudan, hiiren, lampaan, sian, linnun ja apinan adenovirusten joukosta.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, joka on 5 koiran adenovirus, joka on edullisesti valittu CAV-2-adenoviruksen kannoista.
8. Jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, joka käsittää alueen toisesta adenoviruksesta, joka on ih- 10 mis- tai eläinperäinen.
9. Jonkin patenttivaatimuksen 1-8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan adenovirus, jonka perimästä puuttuu E1A- ja ElB-alueet.
10. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmis-15 tamiseksi, joka käsittää eläinperäisen, ei-ihmisperäisen, yhdistelmä-DNA-teknisen adenoviruksen, jonka perimästä puuttuu replikaatiolle välttämättömät sekvenssit, ja joka sisältää vähintään yhden istutetun geenin, joka koodaa hoitavan proteiinimaisen tuotteen, ja farmaseuttisesti hy-20 väksyttävän kuljettimen, tunnettu siitä, että eläinperäinen, ei-ihmisperäinen adenovirus modifioidaan geneettisesti siten, että se menettää replikaatiokykynsä, ja siihen viedään vähintään yksi geeni, joka koodaa terapeuttista proteiinimaista tuotetta, ja yhdistelmä-DNA-tekninen 25 adenovirus sekoitetaan farmaseuttisesti hyväksyttävän kuljettimen kanssa.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan farmaseuttisesti hyväksyttävä koostumus, jossa hoitava proteiinimainen tuote 30 on valittu entsyymien, veren johdannaisten, hormonien, lymfokiinien, kasvutekijöiden, hermovälittäjien tai niiden esiasteiden tai synteettisten entsyymien, trofisten tekijöiden, apolipoproteiinien, dystrofiinin tai minidystro-fiinin, kasvaimia tukahduttavien tuotteiden sekä hyytymi-35 seen osallistuvien tekijöiden joukosta. 20 118538
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9305954 | 1993-05-18 | ||
| FR9305954A FR2705361B1 (fr) | 1993-05-18 | 1993-05-18 | Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique. |
| FR9400531 | 1994-05-06 | ||
| PCT/FR1994/000531 WO1994026914A1 (fr) | 1993-05-18 | 1994-05-06 | Vecteurs adenoviraux d'origine animale et utilisation en therapie genique |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI955552A0 FI955552A0 (fi) | 1995-11-17 |
| FI955552A FI955552A (fi) | 1995-12-27 |
| FI118538B true FI118538B (fi) | 2007-12-14 |
Family
ID=9447235
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI955552A FI118538B (fi) | 1993-05-18 | 1995-11-17 | Menetelmä geeniterapiassa käytettävien adenoviraalisten eläinperäisten vektoreiden valmistamiseksi |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6294377B1 (fi) |
| EP (1) | EP0698108B2 (fi) |
| JP (2) | JP3995259B2 (fi) |
| KR (1) | KR100379569B1 (fi) |
| CN (1) | CN1067722C (fi) |
| AT (1) | ATE209686T1 (fi) |
| AU (1) | AU696495B2 (fi) |
| BR (1) | BR9406720A (fi) |
| CA (1) | CA2163256C (fi) |
| CZ (1) | CZ284903B6 (fi) |
| DE (1) | DE69429260T3 (fi) |
| DK (1) | DK0698108T4 (fi) |
| ES (1) | ES2167365T5 (fi) |
| FI (1) | FI118538B (fi) |
| FR (1) | FR2705361B1 (fi) |
| HU (1) | HU221340B1 (fi) |
| IL (1) | IL109644A (fi) |
| NO (1) | NO320818B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ266475A (fi) |
| PL (1) | PL182814B1 (fi) |
| PT (1) | PT698108E (fi) |
| RU (1) | RU2233333C2 (fi) |
| SK (1) | SK282354B6 (fi) |
| UA (1) | UA66417C2 (fi) |
| WO (1) | WO1994026914A1 (fi) |
| ZA (1) | ZA943358B (fi) |
Families Citing this family (119)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5747469A (en) | 1991-03-06 | 1998-05-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53 |
| CA2108144A1 (en) | 1991-03-06 | 1992-09-07 | Jack A. Roth | Methods and compositions for the selective inhibition of gene expression |
| US6410010B1 (en) | 1992-10-13 | 2002-06-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant P53 adenovirus compositions |
| IL113052A0 (en) | 1994-03-23 | 1995-06-29 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Recombinant viruses, their preparation and their use in gene therapy |
| JP3816518B2 (ja) * | 1994-06-10 | 2006-08-30 | ジェンベク、インコーポレイティッド | 相補的なアデノウイルスベクター系と細胞系 |
| FR2722507B1 (fr) * | 1994-07-12 | 1996-08-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Adenovirus comportant un gene codant pour une no synthase |
| FR2724320B1 (fr) * | 1994-09-13 | 1996-12-20 | Transgene Sa | Nouvel implant pour le traitement des maladies acquises |
| FR2725213B1 (fr) * | 1994-10-04 | 1996-11-08 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Vecteurs viraux et utilisation en therapie genique |
| FR2726285B1 (fr) | 1994-10-28 | 1996-11-29 | Centre Nat Rech Scient | Adenovirus depourvus de particules contaminantes viables, preparation et utilisation |
| FR2727689A1 (fr) | 1994-12-01 | 1996-06-07 | Transgene Sa | Nouveau procede de preparation d'un vecteur viral |
| US6752987B1 (en) | 1995-02-28 | 2004-06-22 | The Regents Of The University Of California | Adenovirus encoding human adenylylcyclase (AC) VI |
| EA001616B1 (ru) | 1995-02-28 | 2001-06-25 | Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифоньэ | Способ лечения болезни сердца, способ лечения недостаточности периферических сосудов и способ ограничения доставки и экспрессии трансгенной конструкции в определенном органе или структуре |
| FR2731710B1 (fr) * | 1995-03-14 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Virus recombinants exprimant la lecithine cholesterol acyltransferase et utilisations en therapie genique |
| FR2732357B1 (fr) * | 1995-03-31 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Vecteurs viraux et utilisation pour le traitement des desordres hyperproliferatifs, notamment de la restenose |
| US6281010B1 (en) | 1995-06-05 | 2001-08-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adenovirus gene therapy vehicle and cell line |
| US5756283A (en) * | 1995-06-05 | 1998-05-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for improved production of recombinant adeno-associated viruses for gene therapy |
| US5698202A (en) * | 1995-06-05 | 1997-12-16 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a rabies vaccine carrier |
| AU6261696A (en) | 1995-06-05 | 1996-12-24 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | A replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a vaccine carrier |
| DE69638058D1 (de) | 1995-06-15 | 2009-11-26 | Crucell Holland Bv | Verpackungssysteme für humane rekombinante Adenoviren zur Gentherapie |
| US6265212B1 (en) | 1995-06-15 | 2001-07-24 | Introgene B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| US6783980B2 (en) | 1995-06-15 | 2004-08-31 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| AUPN477695A0 (en) * | 1995-08-14 | 1995-09-07 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Gene therapy |
| FR2740344B1 (fr) * | 1995-10-31 | 1997-11-21 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Application de la proteine gax au traitement de cancers |
| JP2002512501A (ja) * | 1996-07-03 | 2002-04-23 | メリアル インコーポレイテッド | 外来性ｄｎａを含む組換えイヌアデノウィルス（ｃａｖ） |
| US6083716A (en) * | 1996-09-06 | 2000-07-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Chimpanzee adenovirus vectors |
| CN1177934C (zh) | 1997-04-28 | 2004-12-01 | 阿文蒂斯药物股份有限公司 | 腺病毒介导的肿瘤内投送血管生成拮抗剂用于肿瘤的治疗 |
| ATE374247T1 (de) | 1997-10-14 | 2007-10-15 | Darwin Molecular Corp | Thymidinkinase mutanten und fusionproteine mit thymidinkinase und guanylatekinase aktivitäten |
| US6875606B1 (en) | 1997-10-23 | 2005-04-05 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Human α-7 nicotinic receptor promoter |
| US6653088B1 (en) | 1997-10-24 | 2003-11-25 | Aventis Pharma S.A. | Interaction test for the investigation of inhibitory molecules of the interaction between a presenilin and the β-amyloid peptide |
| PT1049767E (pt) | 1998-01-08 | 2005-10-31 | Agronomique Inst Nat Rech | Coelho transgenico que expressa uma lipoproteina (a) humana funcional |
| US6670188B1 (en) | 1998-04-24 | 2003-12-30 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| US6225456B1 (en) | 1998-05-07 | 2001-05-01 | University Technololy Corporation | Ras suppressor SUR-5 |
| US6506889B1 (en) | 1998-05-19 | 2003-01-14 | University Technology Corporation | Ras suppressor SUR-8 and related compositions and methods |
| JP4351807B2 (ja) | 1998-08-11 | 2009-10-28 | ダーウィン・ディスカバリー・リミテッド | マウスのｓｃｕｒｆｙの表現型を引き起こす遺伝子およびそのヒトのオルソログの同定 |
| EP1133558B2 (en) | 1998-11-27 | 2016-04-13 | UCB Pharma S.A. | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
| US20040009535A1 (en) | 1998-11-27 | 2004-01-15 | Celltech R&D, Inc. | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
| US7063850B1 (en) | 1998-12-22 | 2006-06-20 | University Of Tennessee Research Foundation | Protective antigen of group A Streptococci |
| US6441156B1 (en) * | 1998-12-30 | 2002-08-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Calcium channel compositions and methods of use thereof |
| FR2794771B1 (fr) | 1999-06-11 | 2001-08-10 | Aventis Pharma Sa | Adenovirus recombinants codant pour le transporteur specifique de l'iode (nis) |
| FR2799472B1 (fr) | 1999-10-07 | 2004-07-16 | Aventis Pharma Sa | Preparation d'adenovirus recombinants et de banques adenovirales |
| WO2001048164A2 (en) * | 1999-12-27 | 2001-07-05 | The Regents Of The University Of California | Modified adenylylcyclase type vi useful in gene therapy for congestive heart failure |
| ES2341842T3 (es) | 2000-01-12 | 2010-06-29 | Yale University | Bloqueo del crecimiento axonal mediado por el receptor de nogo. |
| ES2551164T3 (es) | 2000-03-24 | 2015-11-16 | Biosphere Medical, Inc. | Microesferas para embolización activa |
| GB0018307D0 (en) | 2000-07-26 | 2000-09-13 | Aventis Pharm Prod Inc | Polypeptides |
| US7060442B2 (en) | 2000-10-30 | 2006-06-13 | Regents Of The University Of Michigan | Modulators on Nod2 signaling |
| IL155726A0 (en) | 2000-12-28 | 2003-11-23 | Wyeth Corp | Recombinant protective protein from streptococcus pneumoniae |
| JP4353701B2 (ja) | 2001-05-08 | 2009-10-28 | ダーウィン モレキュラー コーポレイション | Ｆｏｘｐ３蛋白質を用いた霊長類における免疫機能の調節方法 |
| AUPR518501A0 (en) | 2001-05-22 | 2001-06-14 | Unisearch Limited | Yin yang-1 |
| WO2003004088A2 (en) | 2001-07-05 | 2003-01-16 | Aventis Pharma S.A. | Method of administration of a gene of interest to the heart and vasculature |
| US7582425B2 (en) | 2001-09-21 | 2009-09-01 | The Regents Of The University Of Michigan | Atlastin |
| US7108975B2 (en) | 2001-09-21 | 2006-09-19 | Regents Of The University Of Michigan | Atlastin |
| US20040023910A1 (en) * | 2001-09-28 | 2004-02-05 | Zhiming Zhang | Use of cyr61 in the treatment and diagnosis of human uterine leiomyomas |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| JP2005523000A (ja) | 2001-10-26 | 2005-08-04 | アイディー バイオメディカル コーポレイション オブ ワシントン | 多価連鎖球菌性ワクチン組成物および使用方法 |
| JP2005517394A (ja) | 2001-12-12 | 2005-06-16 | エフ エイチ フォールディング アンド カンパニー リミテッド | ウイルス保存のための組成物 |
| US20030158112A1 (en) | 2002-02-15 | 2003-08-21 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Selective induction of apoptosis to treat ocular disease |
| NZ571508A (en) | 2002-05-24 | 2010-05-28 | Schering Corp | Neutralizing human anti-IGFR antibody |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| FR2845395B1 (fr) * | 2002-10-08 | 2008-05-30 | Agronomique Inst Nat Rech | Vecteurs adenoviraux recombinants et leurs applications |
| WO2005020928A2 (en) | 2003-08-29 | 2005-03-10 | The Regents Of The University Of California | Agents and methods for enhancing bone formation by oxysterols in combination with bone morphogenic proteins |
| US7432057B2 (en) | 2004-01-30 | 2008-10-07 | Michigan State University | Genetic test for PSE-susceptible turkeys |
| ATE491799T1 (de) | 2004-05-26 | 2011-01-15 | Bayer Schering Pharma Ag | Chimäre adenoviren zur verwendung in der krebsbehandlung |
| US7604798B2 (en) | 2004-07-15 | 2009-10-20 | Northwestern University | Methods and compositions for importing nucleic acids into cell nuclei |
| ATE527281T1 (de) | 2004-07-16 | 2011-10-15 | Us Gov Health & Human Serv | Impfstoffe gegen aids umfassend cmv/r nucleinsäurekonstrukte |
| ES2564823T3 (es) | 2005-05-27 | 2016-03-29 | Ospedale San Raffaele S.R.L. | Vector génico que comprende miARN |
| EP1993558B1 (en) | 2006-02-27 | 2014-07-30 | The Regents of The University of California | Oxysterol compounds and the hedgehog pathway |
| RU2500815C2 (ru) | 2006-07-28 | 2013-12-10 | Санофи-Авентис | Композиция и способ лечения опухолей |
| ES2658239T3 (es) | 2006-10-19 | 2018-03-08 | Csl Limited | Antagonistas de anticuerpos de alta afinidad del receptor alfa 1 de interleucina-13 |
| JP2010507365A (ja) | 2006-10-19 | 2010-03-11 | メルク アンド カンパニー インコーポレイテッド | 抗ＩＬ−１３Ｒα１抗体およびその使用 |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| AU2008331808B2 (en) | 2007-03-16 | 2014-08-21 | The Regents Of The University Of California | Oxysterols for activation of hedgehog signaling, osteoinduction, antiadipogenesis, and Wnt signaling |
| CA2741691C (en) | 2008-11-05 | 2019-11-26 | Ingrid Lea Dodge | Multicomponent immunogenic composition for the prevention of beta-hemolytic streptococcal (bhs) disease |
| EP3115063A3 (en) | 2008-12-03 | 2017-04-19 | The John Hopkins University | Galectin-3 and annexin-a2 as immunological target |
| US8921329B2 (en) * | 2008-12-04 | 2014-12-30 | Curna, Inc. | Treatment of erythropoietin (EPO) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to EPO |
| WO2010096561A1 (en) | 2009-02-18 | 2010-08-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Synthetic hiv/siv gag proteins and uses thereof |
| CA2793521A1 (en) | 2010-03-19 | 2011-09-22 | University Of South Alabama | Use of antisense gli1 for reducing the dosage of a therapeutic compound to treat needed to treat a cancer |
| US8895528B2 (en) * | 2010-05-26 | 2014-11-25 | Curna, Inc. | Treatment of atonal homolog 1 (ATOH1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ATOH1 |
| RU2588654C2 (ru) * | 2010-06-23 | 2016-07-10 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с альфа-субъединицей потенциалзависимого натриевого канала (scna), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена scna |
| EP3831406B1 (en) | 2010-08-23 | 2024-06-05 | Wyeth LLC | Stable formulations of neisseria meningitidis rlp2086 antigens |
| AU2011300409B2 (en) | 2010-09-10 | 2015-03-26 | Wyeth Llc | Non-lipidated variants of Neisseria meningitidis ORF2086 antigens |
| WO2012135696A2 (en) | 2011-04-01 | 2012-10-04 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer |
| WO2013103401A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| MX351993B (es) | 2012-03-09 | 2017-11-03 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y metodos de las mismas. |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| KR20150013232A (ko) | 2012-05-07 | 2015-02-04 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 골형성 및 헤지호그 신호전달을 유도하고 지방생성을 억제하는 옥시스테롤 유사체 oxy133 |
| WO2014107739A1 (en) | 2013-01-07 | 2014-07-10 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Antibodies against pcsk9 |
| WO2014113436A1 (en) * | 2013-01-15 | 2014-07-24 | The Regents Of The University Of California | Adenoviruses and their use |
| CA2903716C (en) | 2013-03-08 | 2019-04-09 | Pfizer Inc. | Immunogenic fusion polypeptides |
| US10981961B2 (en) | 2013-03-11 | 2021-04-20 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Delivery of card protein as therapy for occular inflammation |
| JP2016517888A (ja) | 2013-05-02 | 2016-06-20 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 骨選択的骨形成のオキシステロール骨標的薬剤 |
| MX369534B (es) | 2013-09-08 | 2019-11-11 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y sus metodos. |
| SG11201602887QA (en) | 2013-10-25 | 2016-05-30 | Psioxus Therapeutics Ltd | Oncolytic adenoviruses armed with heterologous genes |
| EP3107939B1 (en) | 2014-02-19 | 2020-06-17 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Delivery of nrf2 as therapy for protection against reactive oxygen species |
| LT3159409T (lt) | 2014-06-17 | 2020-01-27 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Antiprasminė nukleorūgštis, skirta panaudoti diušeno raumenų distrofijos gydymui |
| WO2016122791A1 (en) | 2015-01-30 | 2016-08-04 | The Regents Of The University Of California | Spinal subpial gene delivery system |
| RU2723045C2 (ru) | 2015-02-19 | 2020-06-08 | Пфайзер Инк. | Композиции neisseria meningitidis и способы их получения |
| CN108396015B (zh) | 2015-04-30 | 2022-02-18 | 皮斯奥克斯治疗公司 | 编码b7蛋白质的溶瘤腺病毒 |
| WO2017070237A1 (en) | 2015-10-19 | 2017-04-27 | University Of Maryland, Baltimore | Methods for generating engineered human primary blood dendritic cell lines |
| KR20180107105A (ko) | 2015-12-17 | 2018-10-01 | 싸이오서스 테라퓨틱스 엘티디. | 항-tcr-복합체 항체 또는 단편을 암호화하는 군 b 아데노바이러스 |
| CN108884022B (zh) | 2016-03-28 | 2022-01-28 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于治疗神经元的过度兴奋的方法和组合物 |
| US11560412B2 (en) | 2016-04-01 | 2023-01-24 | University Of Maryland, Baltimore | Compositions comprising GRIM-19 therapeutics and methods of use |
| US11286501B2 (en) | 2016-04-20 | 2022-03-29 | Centro De Investigaciones Energeticas, Medioambientales Y Tecnologicas O.A, M.P. | Methods of treating or preventing pyruvate kinase deficiency |
| GB201713765D0 (en) | 2017-08-28 | 2017-10-11 | Psioxus Therapeutics Ltd | Modified adenovirus |
| UY37405A (es) | 2016-09-20 | 2018-03-23 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Vectores de adenovirus canino |
| KR102566066B1 (ko) | 2016-09-20 | 2023-08-16 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 신규한 돼지 인플루엔자 백신 |
| US10619169B2 (en) | 2016-09-20 | 2020-04-14 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | EHV insertion site ORF70 |
| BR112019005418A2 (pt) | 2016-09-20 | 2019-10-01 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | novos promotores |
| JP7010961B2 (ja) | 2017-01-31 | 2022-02-10 | ファイザー・インク | 髄膜炎菌組成物およびその方法 |
| US20200237799A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-07-30 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| AU2018352236A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-04-23 | The Curators Of The University Of Missouri | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
| CA3076253A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Centro De Investigaciones Energeticas, Medioambientales Y Tecnologicaso.A., M.P. | Lentiviral vectors for delivery of pklr to treat pyruvate kinase deficiency |
| EP3818161A1 (en) | 2018-07-02 | 2021-05-12 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
| WO2020010035A1 (en) | 2018-07-02 | 2020-01-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cannula system |
| WO2021247995A2 (en) | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating neuropathic pain |
| KR20230043869A (ko) | 2020-08-07 | 2023-03-31 | 스페이스크래프트 세븐, 엘엘씨 | Aav 벡터를 사용한 플라코필린-2(pkp2) 유전자 요법 |
| EP4329786A1 (en) | 2021-04-30 | 2024-03-06 | KaliVir Immunotherapeutics, Inc. | Oncolytic viruses for modified mhc expression |
| WO2023069987A1 (en) | 2021-10-20 | 2023-04-27 | University Of Rochester | Rejuvenation treatment of age-related white matter loss cross reference to related application |
| WO2023081633A1 (en) | 2021-11-02 | 2023-05-11 | University Of Rochester | Tcf7l2 mediated remyelination in the brain |
| WO2024091824A1 (en) | 2022-10-26 | 2024-05-02 | Ada Forsyth Institute, Inc. | Differentiation and reprogramming of chondrocyte |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA858044B (en) * | 1984-11-01 | 1987-05-27 | American Home Prod | Oral vaccines |
| IE903130A1 (en) * | 1989-09-15 | 1991-03-27 | Regeneron Pharma | Ciliary neurotrophic factor |
| GB9001766D0 (en) * | 1990-01-25 | 1990-03-28 | Univ Court Of The University O | Vaccines |
| FR2681786A1 (fr) * | 1991-09-27 | 1993-04-02 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs recombinants d'origine virale, leur procede d'obtention et leur utilisation pour l'expression de polypeptides dans des cellules musculaires. |
| FR2688514A1 (fr) * | 1992-03-16 | 1993-09-17 | Centre Nat Rech Scient | Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant. |
| AU670933B2 (en) * | 1992-03-27 | 1996-08-08 | Collimore Enterprises Pty Ltd | Formwork device |
-
1993
- 1993-05-18 FR FR9305954A patent/FR2705361B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-05-06 AU AU67878/94A patent/AU696495B2/en not_active Expired
- 1994-05-06 RU RU95122419/13A patent/RU2233333C2/ru active
- 1994-05-06 HU HU9503297A patent/HU221340B1/hu unknown
- 1994-05-06 NZ NZ266475A patent/NZ266475A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 KR KR1019950705128A patent/KR100379569B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 UA UA95114778A patent/UA66417C2/xx unknown
- 1994-05-06 CA CA002163256A patent/CA2163256C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 ES ES94916259T patent/ES2167365T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 DK DK94916259T patent/DK0698108T4/da active
- 1994-05-06 PT PT94916259T patent/PT698108E/pt unknown
- 1994-05-06 AT AT94916259T patent/ATE209686T1/de active
- 1994-05-06 CZ CZ953028A patent/CZ284903B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 WO PCT/FR1994/000531 patent/WO1994026914A1/fr active IP Right Grant
- 1994-05-06 EP EP94916259A patent/EP0698108B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 JP JP52504994A patent/JP3995259B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 BR BR9406720A patent/BR9406720A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-05-06 CN CN94192150A patent/CN1067722C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 PL PL94311660A patent/PL182814B1/pl unknown
- 1994-05-06 US US08/553,317 patent/US6294377B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 SK SK1447-95A patent/SK282354B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 DE DE69429260T patent/DE69429260T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-12 IL IL10964494A patent/IL109644A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-16 ZA ZA943358A patent/ZA943358B/xx unknown
-
1995
- 1995-11-07 NO NO19954466A patent/NO320818B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-11-17 FI FI955552A patent/FI118538B/fi not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-02-05 JP JP2004029636A patent/JP2004180689A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI118538B (fi) | Menetelmä geeniterapiassa käytettävien adenoviraalisten eläinperäisten vektoreiden valmistamiseksi | |
| KR100356615B1 (ko) | 결함아데노바이러스벡터및유전자치료에서그의사용 | |
| RU2361611C2 (ru) | Конструирование рекомбинанта онколитического аденовируса, специфически экспрессирующего иммуномодуляторный фактор gm-csf в опухолевых клетках, и его применение | |
| EP0704534A2 (en) | Recombinant DNA viral vector for transfecting animal cells | |
| JP4376454B2 (ja) | アデノウイルスベクター及び相同組換えイベントの低減方法 | |
| FI120046B (fi) | Menetelmä yhdistelmä-DNA-adenovirusgenomin valmistamiseksi | |
| JPH10507922A (ja) | 生存汚染粒子を持たないアデノウィルス、その製造および使用 | |
| JP4386971B2 (ja) | スプライシング配列を含んでなる組換えアデノウイルスベクター | |
| JPH10506018A (ja) | 不活化ＩＶａ２遺伝子を有する欠陥組換えアデノウィルス | |
| ES2239841T3 (es) | Vectores adenovirales quimericos. | |
| Wu et al. | Effective modifications for improved homologous recombination and high-efficiency generation of recombinant adenovirus-based vectors | |
| US7264818B2 (en) | BAV packaging regions and E1 transcriptional control regions | |
| WO2004078987A1 (fr) | Produit de recombinaison construit a partir d'un vecteur viral et d'un gene humain suppresseur de tumeur et utilisation dudit produit de recombinaison |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Ref document number: 118538 Country of ref document: FI |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: AVENTIS PHARMA S.A. Free format text: AVENTIS PHARMA S.A. |
|
| MA | Patent expired |