SK282354B6 - Použitie rekombinantného adenovírusu zvieracieho pôvodu na prípravu farmaceutickej kompozície, rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu a farmaceutická kompozícia obsahujúca tento adenovírus - Google Patents
Použitie rekombinantného adenovírusu zvieracieho pôvodu na prípravu farmaceutickej kompozície, rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu a farmaceutická kompozícia obsahujúca tento adenovírus Download PDFInfo
- Publication number
- SK282354B6 SK282354B6 SK1447-95A SK144795A SK282354B6 SK 282354 B6 SK282354 B6 SK 282354B6 SK 144795 A SK144795 A SK 144795A SK 282354 B6 SK282354 B6 SK 282354B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- adenovirus
- adenoviruses
- human
- therapeutic
- gene
- Prior art date
Links
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 title claims abstract description 105
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 51
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 claims description 27
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 claims description 27
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 claims description 12
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 claims description 8
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 4
- -1 trophic factors Proteins 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 241000701168 Murine adenovirus 1 Species 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 241001503524 Ovine adenovirus Species 0.000 claims description 3
- 241000188845 Porcine adenovirus Species 0.000 claims description 3
- 241000701792 avian adenovirus Species 0.000 claims description 3
- 241000990167 unclassified Simian adenoviruses Species 0.000 claims description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 claims description 2
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 claims description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 24
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 68
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 7
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 6
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010024878 Adenovirus E1A Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010087905 Adenovirus E1B Proteins Proteins 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 101150005585 E3 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 101150047856 Cav2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100035888 Caveolin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 101150066038 E4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004038 Glia Maturation Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000495 Glia Maturation Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101000715467 Homo sapiens Caveolin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035028 Nucleic proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 101100379247 Salmo trutta apoa1 gene Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 101150115889 al gene Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037828 epithelial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000009452 underexpressoin Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Je opísané použitie rekombinantného adenovírusu zvieracieho pôvodu, ktorý obsahuje heterológnu sekvenciu DNA na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na terapeutické a/alebo chirurgické ošetrenie ľudského tela. Ďalej zodpovedajúci rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu a tento vírus obsahujúca farmaceutická kompozícia vhodná na použitie v génovej terapii.ŕ
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka nových vírusových vektorov, ich prípravy a ich použitia v génovej terapii. Vynález sa tiež týka farmaceutických kompozícií obsahujúcich tieto vírusové vektory. Vynález sa týka najmä použitia rekombinantných adenovírusov zvieracieho pôvodu ako vektorov na génovú terapiu.
Doterajší stav techniky
Génová terapia spočíva v tom, že sa nedostatočnosť alebo abnormalita (mutácia, aberantná expresia atď.) koriguje zavedením genetickej informácie do postihnutej bunky alebo do postihnutého orgánu. Táto genetická informácia môže byť zavedená buď in vitro do bunky izolovanej z postihnutého orgánu, pričom sa modifikovaná bunka potom opäť zavedie do organizmu, alebo priamo in vivo do príslušného tkaniva. Na tento druhý spôsob zavedenia genetickej informácie boli vyvinuté rôzne techniky, z ktorých možno uviesť niektoré transfekčné techniky, ktoré zahrnujú použitie komplexov DNA a DEAE-dextránu (Pagano a kol., J.Virol. 1 (1967) 891), DNA a nukleových proteínov (Kaneda a kol., Science 243 (1989) 375), DNA a lipidov (Felgner akol., PNAS 84 (1987) 7413), použitie lipozómov (Fraley a kol., J.Biol.Chem. 255 (1980) 10431), atď. V poslednom čase sa ako sľubná alternatíva uvedených fyzikálnych transfekčných techník ukázalo použitie vírusu ako vektoru na prenos génov. Na tento účel už boli testované mnohé vírusy s cieľom stanoviť ich schopnosť infikovať určité bunkové populácie. Ide najmä o retrovírusy (RSV, HMS, MMS atď.), vírus HSV, adeno-pridružené vírusy a adenovírusy.
Medzi týmito vírusmi majú adenovírusy zvláštne postavenie vzhľadom na niektoré vlastnosti, ktoré sú zaujímavé na použitie v génovej terapii. V tejto súvislosti možno uviesť najmä ich pomerne široké hostiteľské spektrum, ich schopnosť infikovať pokojové (quiescentné) bunky a neintegrovať sa do genómu infikovanej bunky, Z týchto dôvodov už boli adenovírusy použité in vivo na prenos génov. Na tento účel boli pripravené rôzne vektory odvodené od adenovírusov a inkorporujúce rôzne gény (beta-gal, OTC, alfa-ΙΑΤ, cytokíny, atď.). Všetky tieto vektory odvodené od adenovírusov a opísané v rámci doterajšieho stavu techniky v súvislosti s ich použitím v humánnej génovej terapii boli až dosiaľ pripravené z adenovírusov ľudského pôvodu. Takéto adenovírusy sa skutočne javia ako najvhodnejšie na uvedené použitie. Na obmedzenie rizika množenia a tvorby infekčných častíc in vivo sú použité adenovírusy všeobecne modifikované tak, aby neboli schopné replikácie v infikovanej bunke. Konštrukcie opísané v rámci doterajšieho stavu techniky sú takto tvorené adenovírusmi s deléciou oblasti El (Ela alebo/a Elb) a prípadne oblasti E3, v úrovni ktorých sú inzerované sekvencie tvoriace prenášanú génovú informáciu (Levrero a kol., Gene 101 (1991) 195; GoshChoudhury a kol. Gene 50 (1986) 161). Okrem tejto nutnej modifikácie majú však vektory opísané v rámci doterajšieho stavu techniky ešte ďalšie nedostatky, ktoré obmedzujú ich využitie v rámci génovej terapie, medzi ktoré patrí najmä riziko rekombinácie s adenovírusmi divého typu. Vynález prináša výhodné riešenie tohto problému.
Podstata vynálezu
Podstata vynálezu spočíva v použití rekombinantných adenovírusov zvieracieho pôvodu na humánnu génovú terapiu. Vynález dokazuje zistenie, že adenovírusy zvieracieho pôvodu sú schopné s vysokou účinnosťou infikovať ľudské bunky. Vynález je tiež založený na zistení, že adenovírusy zvieracieho pôvodu nie sú schopné množiť sa v ľudských bunkách, v ktorých boli testované. Podstatu vynálezu nakoniec tvorí prekvapujúce zistenie, že adenovírusy zvieracieho pôvodu nie sú nijako transkomplementované adenovírusmi ľudského pôvodu, čo eliminuje akékoľvek riziko rekombinácie a propagácie in vivo v prítomnosti ľudských adenovírusov, ktorá by mohla viesť k tvorbe infekčnej častice. Vektory podľa vynálezu sú teda mimoriadne výhodné, pretože v ich prípade je riziko spojené s použitím vírusu ako vektora v génovej terapii a reprezentované napríklad patogenicitou transmisií, replikáciou a rekombináciou silne redukované a prípadne úplne potlačené.
Vynález tak poskytuje vírusové vektory obzvlášť vhodné na prenos a/alebo expresiu požadovaných sekvencií DNA u človeka.
Prvým predmetom vynálezu je teda použitie rekombinantných adenovírusov zvieracieho pôvodu, ktoré obsahujú heterológnu sekvenciu DNA na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na terapeutické a/alebo chirurgické ošetrenie ľudského tela.
Adenovírusy zvieracieho pôvodu, ktoré sú použiteľné v rámci vynálezu, môžu byť adenovírusmi rôzneho špecifického pôvodu s výnimkou adenovírusov ľudského pôvodu. Ľudskými adenovírusmi sú adenovírusy, ktoré sú prirodzeným infekčným faktorom schopným infikovať človeka a ktoré sa všeobecne označujú symbolmi HAd alebo Ad.
Adenovírusy zvieracieho pôvodu, ktoré sú použiteľné v rámci vynálezu, môžu byť adenovírusy psieho, hovädzieho, myšieho (príklad: Mavl, Beard a kol., Virology 75 (1990) 81), ovčieho, prasacieho, vtáčieho alebo tiež opičieho (príklad: SAV) pôvodu.
Z vtáčích adenovírusov možno uviesť najmä sérotypy 1 až 10 dostupné v zbierkach kultúr ATCC, pričom ako príklad takých adenovírusov možno uviesť kmene Phelp (ATCC VR-432), Fontes (ATCC VR-280), P7-A (ATCC VR-827), IBH-2A (ATCC VR-828), A2-A (1TCC VR829), T8-A (ATCC VR-830), K-l 1 (ATCC VR-921) alebo tiež kmene uvádzané ako ATCC VR-831 až 835. Z hovädzích adenovírusov možno použiť rôzne známe sérotypy a najmä sérotypy dostupné v zbierkach kultúr ATCC (typy 1 až 8) pod označením ATCC VR-313, 314, 639-642, 768 a 769. Taktiež možno uviesť myšie adenovírusy FL (ATCC VR-550) a E20308 (ATCC VR-528), ovčí adenovírus typu 5 (ATCC VR-1343) alebo typu 6 (ATCC R-1340), prasací adenovírus 5359 alebo opičie adenovírusy, ako sú najmä adenovírusy vedené v zbierke kultúr ATCC pod číslami VR-591-594, 941-943, 195-203, atď.
V rámci vynálezu sa výhodne použijú adenovírusy psieho pôvodu a najmä všetky kmene adenovírusov CAV2 (napríklad kmeň Manhattan alebo A26/61 (ATCC VR-800) /. Psie adenovírusy už boli predmetom početných štruktúrnych štúdií. V rámci doterajšieho stavu techniky boli takto opísané úplné reštrikčné mapy adenovírusov CAV1 aCAV2 (Spibey a kol., J.Gen.Virol. 70(1989) 165), pričom boli klonované a sekvenované gény Ela a E3, ako aj sekvencie ITR (pozri najmä Spibey a kol., Vírus Res. 14 (1989) 241; Linné, Vírus Res. 23 (1992) 119, WO 91/11525). Psie adenovírusy inak už boli použité na prípravu vakcín určených na imunizáciu psov proti besnote (parvovírusy a pod. (WO 91/11525). Až doteraz však ne2 bola v rámci doterajšieho stavu techniky navrhnutá alebo spomenutá možnosť použitia týchto adenovírusov na génovú humánnu terapiu, ani nebol špecifikovaný pokrok, ktorý by sa takýmto použitím dosiahol.
Adenovírusy použité v rámci vynálezu musia byť výhodne defektné, tzn. neschopné autonómnej propagácie v organizme, do ktorého boli prenesené. Ako už bolo uvedené, preukázalo sa, že adenovírusy zvieracieho pôvodu sú schopné infikovať ľudské bunky, ale nie sú schopné propagácie v týchto ľudských bunkách. V tomto smere sú adenovírusy zvieracieho pôvodu vzhľadom na človeka prirodzene defektné a na rozdiel od použitia ľudských adenovírusov nevyžadujú adenovírusy zvieracieho pôvodu uvedenú genetickú modifikáciu, ktorá robí virusy defektnými. Ale defektná povaha týchto adenovírusov môže byť posilnená genetickými modifikáciami ich genómu, najmä modifikáciou sekvencií nevyhnutných na replikáciu daného vírusu v bunkách. Tieto oblasti sa môžu buď odstrániť (úplne alebo čiastočne), alebo spraviť nefunkčnými alebo sa môžu modifikovať inzerciou ďalších sekvencií a najmä heterológnej sekvencie DNA.
Podľa povahy adenovírusu sa sekvencie nevyhnutné na replikáciu môžu čiastočne meniť. Ale tieto sekvencie sú všeobecne lokalizované v blízkosti koncov genómu. Takto bola v prípade adenovírusu CAV-2 identifikovaná, klonovaná a sekvenovaná oblasť Ela (Spilbey a kol., Vírus Res. 14 (1989) 241). Táto oblasť sa nachádza na fragmente s dĺžkou 2 kb na ľavom konci genómu adenovírusu.
Adenovírusy však môžu byť geneticky modifikované aj inak, najmä na zabránenie produkcie nežiaducich vírusových proteínov u človeka, na umožnenie inzercie heterológnych sekvencií DNA s výraznou dĺžkou a/alebo inzerciu stanovených oblastí genómu iného zvieracieho alebo ľudského adenovírusu (príklad: gén E3).
V rámci tohto vynálezu zahrnuje výraz „heterológna sekvencia DNA“ ľubovoľnú sekvenciu DNA zavedenú do vírusu, ktorej prenos a/alebo expresia je u človeka žiaduca.
Takáto heterológna sekvencia DNA môže zahrnovať najmä jeden alebo niekoľko terapeutických génov a/alebo jeden alebo niekoľko génov kódujúcich antigénne peptidy.
V rámci špecifického uskutočnenia sa teda vynález týka najmä použitia adenovírusu zvieracieho pôvodu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos terapeutických génov u človeka. Terapeutickými génmi, ktoré sa môžu takto preniesť, sú ľubovoľné gény, ktorých transkripcia a pripadne translácia v cieľovej bunke generuje produkty s terapeutickou účinnosťou.
Môže ísť najmä o gény kódujúce proteínové produkty s terapeutickým účinkom. Takto kódovaným proteínovým produktom môže byť proteín, peptid, aminokyselina a podobne. Tento proteínový produkt môže byť homológny vzhľadom na cieľovú bunku (čo znamená, že tento produkt sa normálne exprimuje v cieľovej bunke v prípade, že táto bunka neprejavuje žiadnu patológiu). V tomto prípade expresia proteínu umožňuje napríklad liečiť nedostatočnú expresiu v uvedenej bunke alebo expresiu neúčinného alebo málo účinného proteínu, spôsobenú modifikáciou bunky, alebo tiež umožňuje nadmernú expresiu uvedeného proteínu. Terapeutický gén môže tiež kódovať mutant bunkového proteínu so zvýšenou stabilitou, modifikovanú účinnosť a podobne. Proteínový produkt môže byť tiež heterológny vzhľadom na cieľovú bunku. V tomto prípade môže exprimovaný proteín napríklad kompletovať alebo poskytovať dostatočnú činnosť bunky, čo jej umožňuje bojovať proti danej patológii.
Ako terapeutické produkty možno v zmysle tohto vynálezu uviesť najmä enzýmy, krvné deriváty, hormóny, lymfokíny: interleukiny, interferóny a podobne (FR 9203120), rastové faktory, prenášače nervových vzruchov alebo ich prekurzory alebo syntézne enzýmy, trofické faktory: BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGP, bFGF, NT3, NT5 a podobne, apolipoproteíny: ApoAI, ApoAIV, ApoE a podobne (FR 93 05125), distrofín alebo minidistrofín (FR 9111947), gény, ktoré potláčajú nádory: p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev a podobne (FR 93 04745), gény kódujúce faktory, ktoré sa uplatňujú pri koagulácii: faktory VII, VIII, IX a podobne.
Terapeutickým génom môže byť tiež antimediátorový gén alebo antimediátorová sekvencia, ktorého, resp. ktorej expresia reguluje expresiu génov alebo transkripciu bunkových mRNA. Také sekvencie môžu byť napríklad prepísané do cieľovej bunky ako RNA komplementárne k bunkovým mRNA a môžu takto blokovať ich transláciu na proteín, a to podľa techniky opísanej v európskom patentovom dokumente EP 140 308.
Ako už bolo uvedené, môže heterológna sekvencia DNA tiež obsahovať jeden alebo niekoľko génov kódujúcich antigénny peptid, ktorý je schopný generovať u človeka imunitnú odozvu. V rámci tohto špecifického uskutočnenia vynález umožňuje realizáciu vakcíny umožňujúcej imunizovať človeka, najmä proti mikroorganizmom a vírusom. Môže ísť najmä o špecifické antigénne peptidy vírusu Epsteina a Barrovej, vírusu hepatitídy B (EP 185 573), vírusu pseudobesnoty alebo tiež špecifických nádorových vírusov (EP 259 212).
Všeobecne heterológna sekvencia DNA tiež obsahuje sekvencie, ktoré umožňujú expresiu terapeutického génu a/alebo génu kódujúceho antigénny peptid v infikovanej bunke. Môže ísť o sekvencie, ktoré sú prirodzene zodpovedné za expresiu uvažovaného génu za predpokladu, že sú tieto sekvencie schopné funkcie v infikovanej bunke. Môže isť tiež o sekvencie rôzneho pôvodu (zodpovedné za expresiu ďalších proteínov) alebo dokonca o syntetické sekvencie. Môže ísť najmä o promótorové sekvencie eukaryotických alebo vírusových génov. Môže ísť napríklad o promótorové sekvencie, ktoré pochádzajú z genómu bunky, ktorá má byť infikovaná. Rovnako môže ísť o promótorové sekvencie, ktoré pochádzajú z genómu vírusu vrátane použitého adenovírusu. V tomto ohľade možno napríklad citovať promótory génov E1A, MLP, CMV, RSV a podobne. Okrem toho môžu byť tieto expresné sekvencie modifikované zavedením aktivačných, regulačných a podobných sekvencií. V prípade, že inzerovaný gén neobsahuje expresné sekvencie, potom môže byť inzerovaný do genómu defektného vírusu za takúto sekvenciu.
Inak heterológna sekvencia DNA môže tiež obsahovať, a to najmä pred terapeutickým génom, signálnu sekvenciu smerujúcu syntetizovaný terapeutický produkt do sekrečných ciest cieľovej bunky. Touto signálnou sekvenciou môže byť prirodzená signálna sekvencia terapeutického produktu, i keď tiež môže ísť o ľubovoľnú inú funkčnú signálnu sekvenciu alebo umelú signálnu sekvenciu.
Defektné adenovírusy podľa vynálezu môžu byť pripravené ľubovoľnou známou technikou. Môžu byť pripravené najmä podľa protokolu opísaného v patentovej prihláške WO 91/11525. Klasická technika prípravy spočíva v homológnej kombinácii medzi zvieracím adenovírusom a plazmidom, ktorý nesie okrem iného heterológnu sekvenciu, ktorá má byť inzerovaná. Táto homológna rekombinácia prebehne po ko-transfekcii uvedených adenovírusov a plazmidu vo vhodnom bunkovom rade. Použitý bunkový rad musí byť výhodne transfromovateľný uvedenými prvkami a v prípade, že sa použije modifikovaný adenovírus zvieracieho pôvodu, môže bunkový rad prípadne obsaho3 vať sekvencie, ktoré sú schopné komplementovať časť genómu defektného adenovírusu, výhodne v integrovanej forme na elimináciu rizika rekombinácie. Ako príklady uvedených bunkových radov možno uviesť renálny bunkový rad chrta GHK (Flow laboratoires) alebo bunkový rad MDCK. Podmienky, pri akých sa uskutočňuje kultivácia bunkových radov a príprava vírusov alebo vírusovej DNA, boli tiež opísané v literatúre (pozri najmä Macatney a kol., Science 44 (1988)9; Fowlkes a kol., J.Mol.Biol. 132 (1979) 163).
Multiplikované vektory sa potom izolujú a purifikujú klasickými technikami molekulárnej biológie.
Ďalším predmetom vynálezu je rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu, ktorý obsahuje heterológnu sekvenciu DNA zahrnujúcu aspoň jeden definovaný terapeutický gén.
Predmetom vynálezu je tiež každá farmaceutická kompozícia, ktorý obsahuje definovaný rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu. Tieto farmaceutické prípravky môžu byť formulované vzhľadom na topické, perorálne, parenterálne, intranazálne, intravenózne, intramuskuláme, subkutánne, intraokuláme a ostatné podania.
Výhodne farmaceutická kompozícia obsahuje farmaceutický prijateľné nosiče na injikovateľnú formuláciu. Môže ísť najmä o roztoky solí (sekundárny a terciámy fosforečnan sodný, chlorid sodný, draselný, vápenatý alebo horečnatý a podobne alebo zmesi týchto solí) v sterilnej izotonickej forme, alebo o suché kompozície, najmä lyofilizované, ktoré po pridaní sterilizovanej vody alebo fyziologického roztoku poskytujú injikovateľné roztoky.
Dávky vírusu použité na injekcie môžu byť závislé od rôznych parametrov, najmä od použitého spôsobu podania, typu liečeného patologického stavu, od génu, ktoiý má byť experimovaný alebo tiež od požadovaného času liečenia. Všeobecne sú rekombinantné adenovírusy podľa vynálezu formulované a podané vo forme dávok obsahujúcich medzi 104 a 1014 pfú/ml a výhodne medzi 106 a 1O10 pfú/ml. Výraz pfu („plaque forming unit“) zodpovedá infekčnej potencii roztoku vírusu a je stanovený infikovaním vhodnej bunkovej kultúry a určením (obvykle po 5 dňoch) počtu infikovaných buniek. Technika stanovenia veličiny pfu vírusového roztoku je veľmi dobre dokumentovaná v literatúre.
Podľa inzerovanej heterológnej sekvencie DNA sa môžu adenovírusy podľa vynálezu použiť na liečenie alebo prevenciu mnohých patologických stavov, zahrnujúcich genetické ochorenia (dystrofia, cystická fibróza a podobne), neurodegeneratívne ochorenia (Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, ALS a podobne), rakoviny, patologické stavy spojené s poruchami koagulácie a s dyslipoproteinémiami, patologické stavy združené s vírusovými infekciami (hepatitída, AIDS a podobne) a podobné patologické stavy.
V nasledujúcej časti opisu bude vynález bližšie objasnený na príkladoch jeho konkrétnych uskutočnení, pričom tieto príklady majú iba ilustračný charakter a nijako neobmedzujú rozsah vynálezu, ktorý je jednoznačne vymedzený formuláciou patentových nárokov.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 znázorňuje reštrikčnú mapu kmeňa Manhattan adenovírusu CAV2 (podľa uvedeného odkazu Spilbey a kol.), obr. 2 znázorňuje mapu plazmidov pl, p2 (obr. 2a) a p3 (obr. 2b) a obr. 3 znázorňuje konštrukciu rekombinantného psieho adenovírusu, ktorý obsahuje heterológnu sekvenciu DNA.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Všeobecné techniky molekulárnej biológie
Klasické metódy používané v molekulárnej biológii, ako sú preparatívne extrakcie plazmidovej DNA, odstreďovanie plazmidovej DNA v gradiente chloridu cézneho, elektroforéza na agarózovom géli alebo na akrylamidovom géli, purifikácia fragmentov DNA elektroelúciou, extrakcia proteínov fenolom alebo sústavou fenol/chloroform, precipitácia DNA v soľnom prostredí etanolom alebo izopropanolom, transformácia v Escherichia coli a ďalšie metódy, sú veľmi dobre známe a bohato opísané v literatúre (Maniatis T. a kol. „Molecular Cloning a Laboratory Manual“, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982; Ausubel F.M. a kol. (eds), „Current Protocols in Molecular Biology“, John Wiley and Sons, New York, 1987).
Plazmidy typu pBR322, pUC a fágy radu M13 sú komerčne dostupné vo firme Bethesda Research Laboratories.
Na ligáciu môžu byť fragmenty DNA separované podľa veľkosti elektroforézou na agarózovom alebo akrylamidovom géli, extrahované fenolom alebo sústavou fenol/chloroform, vyzrážané etanolom a potom inkubované v prítomnosti DNA-ligázy fágu T4 (Biolabs) podľa odporúčania dodávateľa.
Zarovnanie proeminentných 5° koncov sa môže uskutočniť Klenowovým fragmentom ADN-polymerázy I Escherichia coli (Biolabs) podľa údajov dodávateľa. Deštrukcia proeminentného konca 3° sa uskutoční v prítomnosti DNA-polymerázy fágu T4 (Biolabs) použitej podľa odporúčania výrobcu. Deštrukcia proeminentného 5° konca sa uskutoční spracovaním pomocou nukleázy SI.
Mutagenéza uskutočnená in vivo syntetickými oligodeoxynukleotidmi sa môže uskutočniť metódou, ktorú vyvinul Taylor a kol. (Nucleic Acids Res. 13 (1985) 87498764) pomocou súpravy distribuovanej firmou Amersham.
Enzymatická amplifikácia fragmentov DNA technikou nazvanou PCR (Polyrase-catalyzed Chain Reaction, Saiki R.K. a kol., Science 230 (1985) 1350-1354; Mullis K.B. a Faloona F.A., Meth.Enzym. 155 (1987) 335-350) sa môže uskutočniť pomocou činidla označeného ako „DNA thermal cycler“ (Perkin Elmer Cetus) podľa údajov výrobcu.
Overenie nukleotidových sekvencií sa môže uskutočniť metódou, ktorú vyvinul Sanger a kol. (Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 74 (1977) 5463-5467) pomocou súpravy distribuovanej formou Amersham.
El Infekcia ľudských buniek adenovírusmi psieho pôvodu
Tento príklad demonštruje schopnosť adenovírusov zvieracieho (psieho) pôvodu infikovať ľudské bunky.
E 1.1 Použité bunkové rady
V tomto príklade boli použité nasledujúce bunkové rady;
- rad z obličky ľudského embrya 293 (Graham a kol., J. Gen.Virol.36 (1977)59); tento bunkový rad obsahuje najmä integrovanú v svojom genóme ľavú časť genómu ľudského adenovírusu Ad5 (12 %),
- ľudský bunkový rad KB: tento bunkový rad pochádza z ľudského epidemického karcinómu aje dostupný v zbierke kultúr ATCC (ref.CCL17), rovnako ako podmienky, ktoré umožňujú jeho kultiváciu,
- ľudský bunkový rad Hela: tento bunkový rad pochádza z ľudského epiteliálneho karcinómu a je dostupný v zbierke kultúr ATCC (ref.CCL2), rovnako ako podmienky, ktoré umožňujú jeho kultiváciu,
- psí bunkový rad MDCK: podmienky kultivácie tohto bunkového radu MDCK opísal najmä Macatney a kol. v Science44 (1988)9.
E 1.2 Infekcia
Uvedené bunkové rady boli infikované vírusom CAV2 (kmeň Manhattan). Na tento účel boli tieto bunky (asi 107/miska) infikované v priebehu 1 hodiny pri teplote 37 °C v prítomnosti 10 pfu virusu/bunka. Potom sa pridalo 5 ml kultivačného prostredia a v kultivácii sa pokračovalo pri teplote 37 “C asi 48 hodín. Po tomto čase bola analyzovaná DNA prítomná v infikovaných bunkách v epizómnej forme. Získané výsledky ukazujú, že všetky bunkové rady majú v svojich jadrách DNA adenovírusu CAV2, čo dokazuje ich infikovateľnosť psími adenovírusmi.
E2 Absencia propagácie adenovírusov psieho pôvodu v ľudských bunkách
Tento príklad demonštruje skutočnosť, že i keď sú psie adenovírusy schopné infikovať ľudské bunky, nedochádza k ich propagácii v týchto ľudských bunkách.
Po infekcii buniek podľa príkladu bolo sledované množstvo DNA adenovírusu CAV2 v závislosti od času podľa nasledujúceho protokolu: Epizomálna DNA prítomná v bunkách sa izoluje technikou, ktorú opísal Hirt a kol. (J.Virol. 45 (1983) 91), pričom množstvo DNA bolo stanovené porovnaním so škálou etanolov. Získané výsledky ukazujú, že sa množstvo vírusovej DNA v bunkách KB a 293 nezväčšuje, čo dokazuje úplnú absenciu replikácie adenovírusu CAV2 v týchto bunkách. V bunkách MDCK a Hela dochádza k miernemu zväčšeniu množstva vírusovej DNA adenovírusu CAV2. Ale stanovenie tvorby vírusových častíc ukazuje, že k žiadnej propagácii adenovírusu CAV2 nedochádza v bunkových radoch 293, KB a Hela, pričom k tejto propagácii dochádza výlučne v psom bunkovom rade MDCK. Uvedená propagácia bola stanovená zberom infikovaných buniek, uvoľnením prípadných vírusov zmrazením a rozmrazením a infikovaním buniek MDCK takto získaným supematantom pri opísaných podmienkach. Po 48 hodinách kultivácia dokazuje neprítomnosť vírusovej DNA v takto infikovaných bunkách, že v ľudských bunkách nedošlo k žiadnej vírusovej propagácii.
Uvedené výsledky jednoznačne dokazujú, že psie adenovírusy nie sú schopné propagácie v ľudských bunkách.
E3 Preukázanie absencie trans-komplementácie psích adenovírusov ľudskými adenovírusmi
Tento príklad preukazuje, že absencia propagácie psích adenovírusov v ľudských bunkách nie je transkomplementovaná prítomnosťou ľudských adenovírusov.
Bunky ľudských bunkových radov 293, KB a Hela a psie bunkové rady MDCK boli ko-infikované adenovírusom CAV2 a ľudským adenovírusom Ad5. Prítomnosť vírusovej DNA (psie a ľudské) v bunkách bola stanovená rovnako ako v príklade El a v závislosti od času bolo sledované množstvo DNA a uvedená propagácia. Získané výsledky ukazujú, že v bunkách KB a 293 sa množstvo DNA adenovírusu CAV2 v priebehu času nezväčšuje, čo dokazuje, že prítomnosť ľudského adenovírusu Ad5 neindikuje trans-komplementáciou replikáciu adenovírusu CAV2 v týchto bunkách. Neprítomnosť vírusovej DNA v bunkách MDCK infikovaných prípadnými vírusmi, ktoré pochádzajú z buniek KB, 293 a Hela dokazuje rovnakým spôso bom, že v ľudských bunkových radoch nedochádza k žiadnej propagácii adenovírusu CAV2 a to dokonca ani v prítomnosti ľudského adenovírusu.
E4 Konštrukcia banky genómovej DNA adenovírusu CAV2
Z reštrikčných fragmentov genómu adenovírusu CAV2 bola vytvorená banka plazmidov. Táto banka sa získala štiepením adenovírusu CAV2 enzýmami Smal a Pstl a klonovaním fragmentov Smal: A, B, C, D, E, F, I a J a Pstl: Á, B, C, D, E, F, G, H (obr. 1) do vektoru pGem3Zf+ (Promega). Plazmid nesúci fragment Smal C sa potom podrobí kotransfekcii v bunkách MDCK s plazmidom pUC4KIXX (Pharmacia), ktorý nesie gén rezistencie proti neomycínu pri vzniku radu MDCK, ktorý konštitučné exprimuje gény E1A a E1B adenovírusu CAV2. Tento rad umožňuje konštrukciu rekombinantných vírusov s deléciami v týchto oblastiach (pozri E5.2).
E5 Konštrukcia psieho rekombinantného adenovírusu, ktorý nesie gén interleukínu-2 pod kontrolou promótora MLP adenovírusu Ad2
Spracovali sa dve stratégie konštrukcie psích rekombinantných adenovírusov, ktoré nesú gén interleukínu-2 pod kontrolou promótora MLP adenovírusu Ad2 ľudského pôvodu.
E5.1 Prvá z týchto stratégií spočíva v inzercii požadovanej sekvencie heterológnej DNA (promótor MLP - gén interleukínu-2) medzi oblasť E4 a pravú oblasť ITR celého genómu adenovírusu CAV2 v úrovni reštrikčného miesta Smal. Konštrukcia takého rekombinantu sa uskutočňuje buď ligáciou alebo rekombináciou in vivo medzi plazmidom, ktorý nesie požadovanú heterológnu sekvenciu DNA a genómom adenovírusu CAV2. Plazmidy použité na získanie rekombinantných adenovírusov, ktoré nesú gén interleukínu-2 pod kontrolou promótora MLP sa konštruujú nasledujúcim spôsobom (obr, 2):
- prvý plazmid s označením pl sa získa klonovaním fragmentu Sali B adenovírusu CAV2 (obr. 1), ktorý obsahuje najmä pravú oblasť ITR, miesto Smal a gén E4 plazmide pGem3Zf+ (Promega), pričom miesto Smal sa výlučne nachádza na plazmide pl,
- v úrovni miesta Smal plazmidu pl sa zavedie heterológna sekvencia DNA (promótor MLP-gén interleukínu-2) pri vzniku plazmidu p2 a
- fragment Pstl-Saľí obsiahnutý vo fragmente Pstl D genómovej banky a nesúci časť génu E3 sa potom klonuje v zodpovedajúcom mieste plazmide p2, pričom vzniká plazmid p3 (obr. 2).
Takto získané plazmidy sa použijú na prípravu rekombinantných adenovírusov podľa nasledujúcich dvoch protokolov (pozri obr. 3):
a) ligácia in vitro plazmidu p2 degenerovaného pôsobením Sali vo fragmente Sali A adenovírusu CAV2 a transfekcia ligačného produktu v bunkách MDCK (obr. 3a),
b) rekombinácia medzi plazmidom p3 a fragmentom Sali A adenovírusu CAV2 po ko-transfekcii v bunkách MDCK (obr. 3b). Získané rekombinantné adenovírusy sa potom izolujú a amplifikujú známymi technikami.
Tieto manipulácie umožňujú konštrukciu psích rekombinantných adenovírusov, ktoré nesú gén interleukínu-2 a použiteľných na prenos tohto terapeutického génu u človeka (obr. 3).
E5.2 Druhá vypracovaná stratégia spočíva v použití bunkového radu MDCK, ktorý konštitučné exprimuje gény E1A a E1B adenovírusu CAV2 (pozri príklad E4). Tento bunkový rad umožňuje transkomplementovať psie adenovírusy s deléciou týchto oblastiach a takto konštruovať rekombinantné vírusy, v ktorých je heterológna sekvencia DNA substituovaná oblasti El. Na tento účel sa konštruuje plazmid, ktorý obsahuje ľavý koniec (sekvencie ITR a enkapsidačnej sekvencie) genómu adenovírusu CAV2 a heterológnej sekvencie DNA. Tento plazmid sa podrobí ko-transfekcii v bunkách MDCK v prítomnosti genómu adenovírusu CAV2 s deléciou jeho vlastného ľavého konca. Produkované rekombinantné psie adenovírusy sa izolujú, prípadne amplifíkujú a konzervujú vzhľadom na následné použitie v humánnom lekárstve.
Claims (18)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použitie rekombinantného adenovírusu zvieracieho pôvodu, ktorý obsahuje heterológnu sekvenciu DNA na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na terapeutické a/alebo chirurgické ošetrenie ľudského tela.
- 2. Použitie podľa nároku 1 na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos terapeutických génov u človeka.
- 3. Použitie podľa nároku 1 na prípravu vakcíny vhodnej pre človeka.
- 4. Použitie podľa nároku 2, vyznačujúce sa t ý m , že terapeutickým génom je gén kódujúci terapeutický proteínový produkt.
- 5. Použitie podľa nároku 2, vyznačujúce sa t ý m , že terapeutickým génom je antimediátorový gén alebo antimediátorová sekvencia.
- 6. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 5, v y značujúce sa tým, že adenovírus je zvolený z množiny zahrnujúcej psie, hovädzie, myšie, ovčie, prasacie, vtáčie a opičie adenovírusy.
- 7. Použitie podľa nároku 6, vyznačujúce sa t ý m , že adenovírusom je psí adenovírus, výhodne zvolený z množiny, ktorá zahrnuje kmene adenovírusu CAV2.
- 8. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 7, v y značujúce sa tým, že genóm adenovírusu je zbavený sekvencií nevyhnutných na replikáciu.
- 9. Použitie podľa nároku 8, vyznačujúce sa t ý m , že genóm adenovírusu je zbavený oblastí E1A a E1B.
- 10. Rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu schopný infikovať a preniesť inzerované terapeutické gény gény do ľudských buniek, ktorý obsahuje aspoň jeden inzerovaný gén kódujúci terapeutický proteínový produkt zvolený z množiny, ktorá zahrnuje enzýmy, krvné deriváty, hormóny, lymfokíny, rastové faktory, prenášače nervových vzruchov alebo ich prekurzory alebo syntézne enzýmy, trofické faktory, apolipoproteíny, distrofln alebo minidistrofín, nádorové supresory a faktory, ktoré sa uplatňujú pri koagulácii.
- 11. Rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu schopný infikovať a preniesť inzerovanú sekvenciu do ľudských buniek, ktorý obsahuje aspoň jednu inzerovanú antimediátorovú sekvenciu.
- 12. Adenovírus podľa nárokov 10 až 11, vyznačujúci sa tým, že tiež obsahuje promótorove sekvencie, ktoré umožňujú expresiu inzerovaného terapeutického génu alebo inzerovaných terapeutických génov.
- 13. Adenovírus podľa nárokov 10 až 12, vyznačujúci sa tým, že tiež obsahuje signálnu sek venciu, ktorá umožňuje indukovať sekréciu produktu expresie terapeutického génu.
- 14. Adenovírus podľa nárokov lOaž 13,vyznačujúci sa tým, že adenovírus je zvolený z množiny, ktorá zahrnuje psie, hovädzie, myšie, ovčie, prasacie, vtáčie a opičie adenovírusy.
- 15. Adenovírus podľa nároku 14, vyznačuj úci sa t ý m , že adenovírusom je psí adenovírus, výhodne zvolený z množiny, ktorá zahrnuje kmene adenovírusu CAV2.
- 16. Adenovírus podľa niektorého z nárokov 10 až 15, vyznačujúci sa tým, že adenovírus je zbavený aspoň sekvencií nevyhnutných na replikáciu.
- 17. Adenovírus podľa nároku 16, vyznačuj úci sa t ý m , že obsahuje oblasti iného zvieracieho alebo ľudského adenovírusu.
- 18. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa t ý m , že obsahuje jeden alebo niekoľko adenovírusov podľa niektorého z nárokov 10 až 17.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9305954A FR2705361B1 (fr) | 1993-05-18 | 1993-05-18 | Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique. |
| PCT/FR1994/000531 WO1994026914A1 (fr) | 1993-05-18 | 1994-05-06 | Vecteurs adenoviraux d'origine animale et utilisation en therapie genique |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK144795A3 SK144795A3 (en) | 1996-04-03 |
| SK282354B6 true SK282354B6 (sk) | 2002-01-07 |
Family
ID=9447235
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1447-95A SK282354B6 (sk) | 1993-05-18 | 1994-05-06 | Použitie rekombinantného adenovírusu zvieracieho pôvodu na prípravu farmaceutickej kompozície, rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu a farmaceutická kompozícia obsahujúca tento adenovírus |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6294377B1 (sk) |
| EP (1) | EP0698108B2 (sk) |
| JP (2) | JP3995259B2 (sk) |
| KR (1) | KR100379569B1 (sk) |
| CN (1) | CN1067722C (sk) |
| AT (1) | ATE209686T1 (sk) |
| AU (1) | AU696495B2 (sk) |
| BR (1) | BR9406720A (sk) |
| CA (1) | CA2163256C (sk) |
| CZ (1) | CZ284903B6 (sk) |
| DE (1) | DE69429260T3 (sk) |
| DK (1) | DK0698108T4 (sk) |
| ES (1) | ES2167365T5 (sk) |
| FI (1) | FI118538B (sk) |
| FR (1) | FR2705361B1 (sk) |
| HU (1) | HU221340B1 (sk) |
| IL (1) | IL109644A (sk) |
| NO (1) | NO320818B1 (sk) |
| NZ (1) | NZ266475A (sk) |
| PL (1) | PL182814B1 (sk) |
| PT (1) | PT698108E (sk) |
| RU (1) | RU2233333C2 (sk) |
| SK (1) | SK282354B6 (sk) |
| UA (1) | UA66417C2 (sk) |
| WO (1) | WO1994026914A1 (sk) |
| ZA (1) | ZA943358B (sk) |
Families Citing this family (119)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6410010B1 (en) | 1992-10-13 | 2002-06-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant P53 adenovirus compositions |
| US5747469A (en) | 1991-03-06 | 1998-05-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53 |
| CA2108144A1 (en) | 1991-03-06 | 1992-09-07 | Jack A. Roth | Methods and compositions for the selective inhibition of gene expression |
| IL113052A0 (en) | 1994-03-23 | 1995-06-29 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Recombinant viruses, their preparation and their use in gene therapy |
| DE69535178T2 (de) * | 1994-06-10 | 2006-12-14 | Genvec, Inc. | Adenoviren-vektor systeme und zelllinien |
| FR2722507B1 (fr) * | 1994-07-12 | 1996-08-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Adenovirus comportant un gene codant pour une no synthase |
| FR2724320B1 (fr) * | 1994-09-13 | 1996-12-20 | Transgene Sa | Nouvel implant pour le traitement des maladies acquises |
| FR2725213B1 (fr) * | 1994-10-04 | 1996-11-08 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Vecteurs viraux et utilisation en therapie genique |
| FR2726285B1 (fr) * | 1994-10-28 | 1996-11-29 | Centre Nat Rech Scient | Adenovirus depourvus de particules contaminantes viables, preparation et utilisation |
| FR2727689A1 (fr) | 1994-12-01 | 1996-06-07 | Transgene Sa | Nouveau procede de preparation d'un vecteur viral |
| US6752987B1 (en) | 1995-02-28 | 2004-06-22 | The Regents Of The University Of California | Adenovirus encoding human adenylylcyclase (AC) VI |
| CN1136920C (zh) | 1995-02-28 | 2004-02-04 | 加利福尼亚大学董事会 | 基因转移介导的血管形成疗法 |
| FR2731710B1 (fr) * | 1995-03-14 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Virus recombinants exprimant la lecithine cholesterol acyltransferase et utilisations en therapie genique |
| FR2732357B1 (fr) | 1995-03-31 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Vecteurs viraux et utilisation pour le traitement des desordres hyperproliferatifs, notamment de la restenose |
| US5756283A (en) * | 1995-06-05 | 1998-05-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for improved production of recombinant adeno-associated viruses for gene therapy |
| US5698202A (en) * | 1995-06-05 | 1997-12-16 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a rabies vaccine carrier |
| US6019978A (en) | 1995-06-05 | 2000-02-01 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a vaccine carrier |
| US6281010B1 (en) | 1995-06-05 | 2001-08-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adenovirus gene therapy vehicle and cell line |
| US6783980B2 (en) | 1995-06-15 | 2004-08-31 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| JP4051416B2 (ja) * | 1995-06-15 | 2008-02-27 | クルーセル ホランド ベスローテン フェンノートシャップ | 遺伝子治療に使用されるヒト組換えアデノウイルス用のパッケージングシステム |
| US6265212B1 (en) | 1995-06-15 | 2001-07-24 | Introgene B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| AUPN477695A0 (en) * | 1995-08-14 | 1995-09-07 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Gene therapy |
| FR2740344B1 (fr) * | 1995-10-31 | 1997-11-21 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Application de la proteine gax au traitement de cancers |
| JP2002512501A (ja) * | 1996-07-03 | 2002-04-23 | メリアル インコーポレイテッド | 外来性ｄｎａを含む組換えイヌアデノウィルス（ｃａｖ） |
| AU4255397A (en) * | 1996-09-06 | 1998-03-26 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Chimpanzee adenovirus vectors |
| CA2288306A1 (en) | 1997-04-28 | 1998-11-05 | Rhone-Poulenc Rorer S.A. | Adenovirus-mediated intratumoral delivery of an angiogenesis antagonist for the treatment of tumors |
| JP2002516061A (ja) | 1997-10-14 | 2002-06-04 | ダーウィン モレキュラー コーポレイション | チミジンキナーゼ変異体ならびにチミジンキナーゼ活性およびグアニル酸キナーゼ活性を有する融合タンパク質 |
| US6875606B1 (en) | 1997-10-23 | 2005-04-05 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Human α-7 nicotinic receptor promoter |
| US6653088B1 (en) | 1997-10-24 | 2003-11-25 | Aventis Pharma S.A. | Interaction test for the investigation of inhibitory molecules of the interaction between a presenilin and the β-amyloid peptide |
| JP2002500039A (ja) | 1998-01-08 | 2002-01-08 | アベンティス ファーマスーティカルズ プロダクツ インコーポレイテッド | 機能あるヒトリポタンパク質（ａ）を発現するトランスジェニックウサギ |
| US6670188B1 (en) | 1998-04-24 | 2003-12-30 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| US6225456B1 (en) | 1998-05-07 | 2001-05-01 | University Technololy Corporation | Ras suppressor SUR-5 |
| US6506889B1 (en) | 1998-05-19 | 2003-01-14 | University Technology Corporation | Ras suppressor SUR-8 and related compositions and methods |
| EP1105479B1 (en) | 1998-08-11 | 2011-01-12 | Darwin Discovery Limited | Identification of the gene causing the mouse scurfy phenotype and its human ortholog |
| NZ552959A (en) | 1998-11-27 | 2008-06-30 | Darwin Discovery Ltd | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
| US20040009535A1 (en) | 1998-11-27 | 2004-01-15 | Celltech R&D, Inc. | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
| US7063850B1 (en) | 1998-12-22 | 2006-06-20 | University Of Tennessee Research Foundation | Protective antigen of group A Streptococci |
| US6441156B1 (en) * | 1998-12-30 | 2002-08-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Calcium channel compositions and methods of use thereof |
| FR2794771B1 (fr) * | 1999-06-11 | 2001-08-10 | Aventis Pharma Sa | Adenovirus recombinants codant pour le transporteur specifique de l'iode (nis) |
| FR2799472B1 (fr) | 1999-10-07 | 2004-07-16 | Aventis Pharma Sa | Preparation d'adenovirus recombinants et de banques adenovirales |
| AU2460001A (en) * | 1999-12-27 | 2001-07-09 | Regents Of The University Of California, The | Gene therapy for congestive heart failure |
| ATE466882T1 (de) | 2000-01-12 | 2010-05-15 | Univ Yale | Nogo rezeptor-vermittelte blockade des axonalen wachstums |
| KR100872884B1 (ko) | 2000-03-24 | 2008-12-10 | 바이오스피어 메디칼 인코포레이티드 | 능동 색전화용 미소구 |
| GB0018307D0 (en) | 2000-07-26 | 2000-09-13 | Aventis Pharm Prod Inc | Polypeptides |
| US7060442B2 (en) | 2000-10-30 | 2006-06-13 | Regents Of The University Of Michigan | Modulators on Nod2 signaling |
| DK1355918T5 (da) | 2000-12-28 | 2012-02-20 | Wyeth Llc | Rekombinant beskyttelsesprotein af streptococcus pneumoniae |
| DE60228477D1 (de) | 2001-05-08 | 2008-10-02 | Darwin Molecular Corp | Verfahren zur regulierung der immunfunktion in primaten unter verwendung des foxp3-proteins |
| AUPR518501A0 (en) | 2001-05-22 | 2001-06-14 | Unisearch Limited | Yin yang-1 |
| AU2002325346A1 (en) | 2001-07-05 | 2003-01-21 | Aventis Pharma S.A. | Method of administration of a gene of interest to the heart and vasculature |
| US7582425B2 (en) | 2001-09-21 | 2009-09-01 | The Regents Of The University Of Michigan | Atlastin |
| US7108975B2 (en) | 2001-09-21 | 2006-09-19 | Regents Of The University Of Michigan | Atlastin |
| US20040023910A1 (en) * | 2001-09-28 | 2004-02-05 | Zhiming Zhang | Use of cyr61 in the treatment and diagnosis of human uterine leiomyomas |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| AU2002365184A1 (en) | 2001-10-26 | 2003-07-30 | Id Biomedical Corporation Of Washington | Efficient protein expression system |
| CA2469623C (en) | 2001-12-12 | 2012-05-29 | F H Faulding & Co Limited | Composition for the preservation of viruses |
| US20030158112A1 (en) | 2002-02-15 | 2003-08-21 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Selective induction of apoptosis to treat ocular disease |
| JP4563171B2 (ja) | 2002-05-24 | 2010-10-13 | シェーリング コーポレイション | 中和ヒト抗ｉｇｆｒ抗体 |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| FR2845395B1 (fr) * | 2002-10-08 | 2008-05-30 | Agronomique Inst Nat Rech | Vecteurs adenoviraux recombinants et leurs applications |
| US9532994B2 (en) | 2003-08-29 | 2017-01-03 | The Regents Of The University Of California | Agents and methods for enhancing bone formation by oxysterols in combination with bone morphogenic proteins |
| US7432057B2 (en) | 2004-01-30 | 2008-10-07 | Michigan State University | Genetic test for PSE-susceptible turkeys |
| NZ551443A (en) | 2004-05-26 | 2010-01-29 | Schering Ag | Chimeric adenoviruses for use in cancer treatment |
| US7604798B2 (en) | 2004-07-15 | 2009-10-20 | Northwestern University | Methods and compositions for importing nucleic acids into cell nuclei |
| JP4772045B2 (ja) | 2004-07-16 | 2011-09-14 | アメリカ合衆国 | Ｃｍｖ／ｒ核酸コンストラクトを含むａｉｄｓに対するワクチン |
| KR20130114758A (ko) | 2005-05-27 | 2013-10-17 | 오스페달레 산 라파엘 에스.알.엘. | Ｍｉ-ｒｎａ를 포함하는 유전자 벡터 |
| US9670244B2 (en) | 2006-02-27 | 2017-06-06 | The Regents Of The University Of California | Oxysterol compounds and the hedgehog pathway |
| CN101495633B (zh) | 2006-07-28 | 2015-01-07 | 塞诺菲-安万特股份有限公司 | 用于治疗肿瘤的组合物和方法 |
| JP5238710B2 (ja) | 2006-10-19 | 2013-07-17 | シーエスエル、リミテッド | インターロイキン−１３レセプターアルファ１の高親和性抗体アンタゴニスト |
| EP2530090A3 (en) | 2006-10-19 | 2013-01-23 | CSL Limited | Anti-IL-13R alpha 1 antibodies and their uses thereof |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| EP2231164A1 (en) | 2007-12-03 | 2010-09-29 | The Regents of the University of California | Oxysterols for activation of hedgehog signaling, osteoinduction, antiadipogenesis, and wnt signaling |
| NZ614064A (en) | 2008-11-05 | 2015-04-24 | Wyeth Llc | Multicomponent immunogenic composition for the prevention of beta-hemolytic streptococcal (bhs) disease |
| WO2010065613A2 (en) | 2008-12-03 | 2010-06-10 | The Johns Hopkins University | Annexina2 as immunological target |
| RU2620970C2 (ru) * | 2008-12-04 | 2017-05-30 | КьюРНА,Инк., | Лечение связанных с эритропоэтином (еро) заболеваний путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к еро |
| WO2010096561A1 (en) | 2009-02-18 | 2010-08-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Synthetic hiv/siv gag proteins and uses thereof |
| AU2011227050B2 (en) | 2010-03-19 | 2016-12-08 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| EP3299464B1 (en) * | 2010-05-26 | 2019-10-02 | CuRNA, Inc. | Treatment of atonal homolog 1 (atoh1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to atoh1 |
| CN109112126B (zh) * | 2010-06-23 | 2024-06-14 | 库尔纳公司 | 通过抑制电压门控钠通道α亚基(SCNA)的天然反义转录物而治疗SCNA相关疾病 |
| HRP20210242T4 (hr) | 2010-08-23 | 2024-05-10 | Wyeth Llc | Stabilne formulacije antigena iz bakterije neisseria meningitidis rlp2086 |
| CN103096920B (zh) | 2010-09-10 | 2016-03-23 | 惠氏有限责任公司 | 脑膜炎奈瑟球菌orf2086抗原的非脂质化变体 |
| US9458456B2 (en) | 2011-04-01 | 2016-10-04 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer |
| WO2013103401A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| BR122016004924A2 (pt) | 2012-03-09 | 2019-07-30 | Pfizer Inc. | Polipeptídeo isolado e composições imunogênicas compreendendo os mesmos |
| JP6262723B2 (ja) | 2012-05-07 | 2018-01-17 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニアＴｈｅ Ｒｅｇｅｎｔｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ | オキシステロールアナログｏｘｙ１３３は、骨発生及びヘッジホッグシグナル伝達を誘導し、脂肪生成を阻害する |
| WO2014107739A1 (en) | 2013-01-07 | 2014-07-10 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Antibodies against pcsk9 |
| US9222142B2 (en) * | 2013-01-15 | 2015-12-29 | The Regents Of The University Of California | Adenoviruses and their use |
| JP6446377B2 (ja) | 2013-03-08 | 2018-12-26 | ファイザー・インク | 免疫原性融合ポリペプチド |
| US10981961B2 (en) | 2013-03-11 | 2021-04-20 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Delivery of card protein as therapy for occular inflammation |
| CA2911205A1 (en) | 2013-05-02 | 2014-11-06 | The Regents Of The University Of California | Bone-selective osteogenic oxysterol-bone targeting agents |
| CA2923129C (en) | 2013-09-08 | 2020-06-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| LT3021859T (lt) | 2013-10-25 | 2018-06-11 | Psioxus Therapeutics Limited | Onkolitiniai adenovirusai su heterologiniais genais |
| EP3107939B1 (en) | 2014-02-19 | 2020-06-17 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Delivery of nrf2 as therapy for protection against reactive oxygen species |
| SG10201912858VA (en) | 2014-06-17 | 2020-02-27 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Antisense nucleic acids |
| US20180008727A1 (en) | 2015-01-30 | 2018-01-11 | The Regents Of The University Of California | Spinal subpial gene delivery system |
| AU2016221318B2 (en) | 2015-02-19 | 2020-06-25 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| EP3391892A1 (en) | 2015-04-30 | 2018-10-24 | Psioxus Therapeutics Limited | Oncolytic adenovirus encoding a b7 protein |
| CN108289909A (zh) | 2015-10-19 | 2018-07-17 | 巴尔的摩马里兰大学 | 用于产生工程改造的人原代血液树突细胞系的方法 |
| JP7064437B2 (ja) | 2015-12-17 | 2022-05-10 | サイオクサス セラピューティクス リミテッド | 抗ｔｃｒ複合体抗体又は断片をコードするｂ群アデノウイルス |
| KR102489437B1 (ko) | 2016-03-28 | 2023-01-16 | 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 뉴런 과흥분성 치료를 위한 방법 및 조성물 |
| US11560412B2 (en) | 2016-04-01 | 2023-01-24 | University Of Maryland, Baltimore | Compositions comprising GRIM-19 therapeutics and methods of use |
| CN116179580A (zh) | 2016-04-20 | 2023-05-30 | 能源环境和技术研究中心O.A., M.P. | 用于增强pklr的基因表达的组合物和方法 |
| GB201713765D0 (en) | 2017-08-28 | 2017-10-11 | Psioxus Therapeutics Ltd | Modified adenovirus |
| NZ751014A (en) | 2016-09-20 | 2023-03-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | New ehv insertion site orf70 |
| CA3036386A1 (en) | 2016-09-20 | 2018-03-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Canine adenovirus vectors |
| AR109538A1 (es) | 2016-09-20 | 2018-12-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Vacuna contra la gripe porcina |
| EP3516064A1 (en) | 2016-09-20 | 2019-07-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | New promoters |
| AU2018215585B2 (en) | 2017-01-31 | 2022-03-17 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| JP7502991B2 (ja) | 2017-10-16 | 2024-06-19 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症（ａｌｓ）の治療 |
| WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
| US11642422B2 (en) | 2017-10-16 | 2023-05-09 | Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas, O.A, M.P. | Lentiviral vectors for delivery of PKLR to treat pyruvate kinase deficiency |
| US20210361318A1 (en) | 2018-07-02 | 2021-11-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cannula system and use thereof |
| US20210254103A1 (en) | 2018-07-02 | 2021-08-19 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
| WO2021247995A2 (en) | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating neuropathic pain |
| EP4192487A1 (en) | 2020-08-07 | 2023-06-14 | Spacecraft Seven, LLC | Plakophilin-2 (pkp2) gene therapy using aav vector |
| JP2024516400A (ja) | 2021-04-30 | 2024-04-15 | カリヴィル イムノセラピューティクス， インコーポレイテッド | 修飾されたｍｈｃ発現のための腫瘍溶解性ウイルス |
| CA3234809A1 (en) | 2021-10-20 | 2023-04-27 | Steven Goldman | Isolated glial progenitor cells for use in the competition treatment of age-related white matter loss |
| WO2023081633A1 (en) | 2021-11-02 | 2023-05-11 | University Of Rochester | Tcf7l2 mediated remyelination in the brain |
| WO2024091824A1 (en) | 2022-10-26 | 2024-05-02 | Ada Forsyth Institute, Inc. | Differentiation and reprogramming of chondrocyte |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA858044B (en) * | 1984-11-01 | 1987-05-27 | American Home Prod | Oral vaccines |
| IE903130A1 (en) * | 1989-09-15 | 1991-03-27 | Regeneron Pharma | Ciliary neurotrophic factor |
| GB9001766D0 (en) * | 1990-01-25 | 1990-03-28 | Univ Court Of The University O | Vaccines |
| FR2681786A1 (fr) * | 1991-09-27 | 1993-04-02 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs recombinants d'origine virale, leur procede d'obtention et leur utilisation pour l'expression de polypeptides dans des cellules musculaires. |
| FR2688514A1 (fr) * | 1992-03-16 | 1993-09-17 | Centre Nat Rech Scient | Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant. |
| AU670933B2 (en) * | 1992-03-27 | 1996-08-08 | Collimore Enterprises Pty Ltd | Formwork device |
-
1993
- 1993-05-18 FR FR9305954A patent/FR2705361B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-05-06 UA UA95114778A patent/UA66417C2/xx unknown
- 1994-05-06 ES ES94916259T patent/ES2167365T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 KR KR1019950705128A patent/KR100379569B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 CN CN94192150A patent/CN1067722C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 AT AT94916259T patent/ATE209686T1/de active
- 1994-05-06 PL PL94311660A patent/PL182814B1/pl unknown
- 1994-05-06 CZ CZ953028A patent/CZ284903B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 RU RU95122419/13A patent/RU2233333C2/ru active
- 1994-05-06 US US08/553,317 patent/US6294377B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 BR BR9406720A patent/BR9406720A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-05-06 WO PCT/FR1994/000531 patent/WO1994026914A1/fr active IP Right Grant
- 1994-05-06 EP EP94916259A patent/EP0698108B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 DE DE69429260T patent/DE69429260T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 SK SK1447-95A patent/SK282354B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 AU AU67878/94A patent/AU696495B2/en not_active Expired
- 1994-05-06 JP JP52504994A patent/JP3995259B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 PT PT94916259T patent/PT698108E/pt unknown
- 1994-05-06 CA CA002163256A patent/CA2163256C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 HU HU9503297A patent/HU221340B1/hu unknown
- 1994-05-06 NZ NZ266475A patent/NZ266475A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 DK DK94916259T patent/DK0698108T4/da active
- 1994-05-12 IL IL10964494A patent/IL109644A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-16 ZA ZA943358A patent/ZA943358B/xx unknown
-
1995
- 1995-11-07 NO NO19954466A patent/NO320818B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-11-17 FI FI955552A patent/FI118538B/fi not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-02-05 JP JP2004029636A patent/JP2004180689A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK282354B6 (sk) | Použitie rekombinantného adenovírusu zvieracieho pôvodu na prípravu farmaceutickej kompozície, rekombinantný adenovírus zvieracieho pôvodu a farmaceutická kompozícia obsahujúca tento adenovírus | |
| RU2219241C2 (ru) | Дефектный рекомбинантный аденовирусный вектор (варианты) | |
| US6669942B2 (en) | Defective adenoviruses including a therapeutic gene and an immunoprotectove gene | |
| KR100403708B1 (ko) | 재조합아데노-수반바이러스(aav)제조방법및이의용도 | |
| ES2264123T3 (es) | Adenovirus recombinantes defectivos para la terapia genica de tumores. | |
| JP4733795B2 (ja) | ヒツジアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療 | |
| JPH11507835A (ja) | 組換えアデノウイルス、ａａｖを作製するためのその使用、相補的細胞系、及び、該アデノウイルスを含む医薬組成物 | |
| KR100796060B1 (ko) | 아데노바이러스 벡터 및 상동 재조합 현상을 줄이는 방법 | |
| AU753809B2 (en) | Recombinant adenoviral vectors comprising a splicing sequence | |
| US20030004091A1 (en) | Medicinal combination useful for in vivo exogenic transfection and expression | |
| AU712304B2 (en) | Deffective recombinant adenoviruses with inactivated IVa2 gene | |
| JP2007530004A (ja) | 疾患を処置するためのサブグループｂアデノウイルスベクター | |
| US7264818B2 (en) | BAV packaging regions and E1 transcriptional control regions | |
| FR2729674A1 (fr) | Cellules pour la production d'adenovirus recombinants |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Expiry date: 20140506 |