FI114793B

FI114793B - 1H-indoli-glyoksyyliamidi-sPLA2-inhibiittoreita

Info

Publication number: FI114793B
Application number: FI951553A
Authority: FI
Inventors: Nicholas James Bach; Robert Delane Dillard; Susan Elizabeth Draheim
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1994-04-01
Filing date: 1995-03-31
Publication date: 2004-12-31
Also published as: IL113210A; AU1621795A; EP0675110B1; ES2179088T3; EP1197484A2; US6175021B1; DE69527322T2; EP1081135A2; ES2377223T3; CZ82295A3; FI951553A0; EP0675110A1; DK1950200T3; PL180523B1; RU2128169C1; JPH07285933A; EP1081135A3; EP2341045A1; MY112897A; KR100368707B1

Description

114793 1H-indoli-glyoksyyliamidi-sPLA2-inhibiittoreita Tämä keksintö koskee uusia 1H-indoli-3-glyok-syyliamideja, jotka ovat käyttökelpoisia estettäessä sPLA2-5 välitteistä rasvahappojen vapautumista tiloissa, kuten ve-renmyrkytysshokissa.

Ihmisen ei-haimaperäisen erittyvän fosfolipaasi-A2 (jota tästä eteenpäin kutsutaan "sPLA2":ksi) rakenne ja fysikaaliset ominaisuudet on kuvattu perusteellisesti kahdes-10 sa artikkelissa, nimittäin artikkeleissa "Cloning and Recombinant Expression of Phospholipase A2 Present in Rheumatoid Arthritic Synovial Fluid", Seilhamer, Jeffrey J; Pru-zanski, Waldemar; Vadas Peters; Plant, Shelley; Miller, Judy A.; Kloss, Jean ja Johson, Lorin K.; The Journal of Bio-15 logical Chemistry, Vol. 264, nro 10, julkaisu April 5, s.

5335 - 5338, 1989; ja "Structure and Properties of a Human

Non-pancreatic Phospholipase A2", Kramer, Ruth M. ; Hession, Catherine; Johansen, Berit; Hayes, Cretchen; McGray, Paula;

Chow, E. Pingchang; Tizard, Richard ja Pepinsky, R. Blake 20 The Journal of Biological Chemistry, Vol. 264, nro 10, julkaisu April 5, s. 5768 - 5775, 1989; joissa esille tuodut asiat liitetään tähän viitteellä.

I * : ·. Uskotaan, että sPLA2 on nopeuttava rajoittava ent- ♦ · >* syymi arakidonihapporeaktiosarjassa, jossa kalvon fosfoli- 25 pidejä hydrolysoidaan. Siten on tärkeää kehittää yhdistei- i * tä, jotka estävät sPLA2-välitteistä rasvahappojen (esim.

: arakidonihappo) vapautumista. Tällaiset yhdisteet olisivat ' arvokkaita hoidettaessa yleisesti tiloja, jotka on saanut aikaan ja/tai joita ylläpitää sPLA2:n ylituotanto; ja täi-** 30 laisia tiloja ovat verenmyrkytysshokki, aikuisiän hengitys- vajaatoimintasyndrooma, haimatulehdus, vamma, keuhkoastma, allerginen nuha, nivelreuma, jne.

Artikkelissa "Rescherces en serie indolique. VI sur * > tryptamines substituees", jonka ovat kirjoittaneet Marc Ju-·,/ 35 lia, Jean Igolen ja Hanne Igolen, Bull. Soc. Chim.

» · 114793 2

France, 1962, s. 1060 - 1068, kuvataan tiettyjä indoli-3-glyoksyyliamideja ja niiden muuttamista tryptamiinijohdoksiksi .

Artikkelissa "2-Aryl-3-Indoleglyoxylamides (FGIN-5 1): A New Class of Potent and Specific Ligands for the Mi tochondrial DBI Receptor (MDR)", jonka ovat kirjoittaneet E. Romeo et ai., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, Voi. 262, nro 3, (s. 971 - 978) kuvataan tiettyjä 2-aryyli-3-indoliglyoksyyliamideja, joilla on 10 käyttösovelluksia tutkimustyössä tutkittaessa nisäkkään keskushermostoa.

Tiivistelmässä "Fragmentation of n-benzylindoles in Mass Spectrometry"; Chemical Abstracts, Voi. 67, 1967, 73028h, raportoidaan erilaisia bentsyylisubstituoituja fe-15 noleja, mukaan lukien sellaiset, joissa on glyoksyyliamidi-ryhmiä indoliytimen 3-asemassa.

EP-patentissa 490 263 tuodaan esille indolien okso-asetamidijohdoksia, joilla on serotoniinireseptorivaikutus-ta.

20 US-patentissa nro 3 449 363 kuvataan trifluorime- tyyli-indoleja, joiden indoliytimen 3-asemassa on glyoksyy-liamidiryhmiä. Näiden yhdisteiden on kerrottu olevan kipu-; ,·. lääkkeitä antagonisoitaessa fenyyli-p-kinoni-"vääntelehti- ; V missyndroomaa".

' 25 US-patentissa nro 3 351 63 0 kuvataan alfa- t « * t · substituoituja 3-indolyylietikkahappoyhdisteitä ja niiden - · valmistusta, glyoksyyliamidivälituotteet mukaan lukien.

.· ’ US-patentissa nro 2 825 734 kuvataan 3-(2-amino-l- hydroksietyyli)indolien valmistus käyttäen 3-indoliglyok-30 syyliamidivälituotteita, kuten 1-f enetyyli-2-etyyli-6-kar- boksi-N-propyyli-3-indoliglyoksyyliamidia (katso esimerkki 30) · US-patentissa nro 3 801 594 kuvataan kipulääkkeitä, ;*’ jotka on valmistettu käyttäen 3-indoliglyoksyyliamidiväli- * » 35 tuotteita.

114793 3

Artikkelissa "No. 565 - Inhibiteurs d'enzymes. XII. - Preparation de (propargyamino-2-ethyl)-3-indoles" , jonka ovat kirjoittaneet A. Alemanhy, E. Fernandez Alvarez, O. Nieto Lopey ja M. E. Rubio Herraez; Bulletin Po La So-5 ciete Chimique De France, 1974, nro, 12, s. 2883 - 2888, kuvataan erilaisia indolyyli-3-glyoksiamideja, jotka on ve-tysubstituoitu indoliytimen 6-atomisesta renkaasta.

Artikkelissa "Indol-Umlagerung von 1-Diphenylamino- 2,3-dihydro-2,3-pyrroldionen", jonka ovat kirjoittaneet 10 Gert Kollenz ja Christa Labes; Liebigs Ann. Chem,, 1975, s. 1979 - 1983, kuvataan fenyylisubstituoituja 3-glyoksyyli-amideja.

On toivottavaa, että kehitetään uusia yhdisteitä ja hoitoja sPLA2:n aiheuttamiin sairauksiin.

15 Tämä keksintö koskee myös uutta 1H-indoli-3-glyok- syyliamidien luokkaa, joilla yhdisteillä on voimakas ja selektiivinen teho nisäkkään sPLA2:n estäjinä, ja ne ovat käyttökelpoisia hoidettaessa ja enneltaehkäistäessä veren-myrkytysshokkia, aikuisiän hengityksen vajaatoimintasyn-20 droomaa, haimatulehdusta, vammaa, keuhkoastmaa, allergista nuhaa, nivelreumaa ja vastaavia sairauksia nisäkkäissä.

Määritelmät:

Keksinnön 1H-indoli-3-glykoksyyliamidien määritel-. missä on käytetty seuraavia termejä: ' 25 Termi "alkyyli" itse tai osana toista substituent- tia tarkoittaa, ellei toisin ole määritelty, suora- tai * i · :· ϊ haaraketjuista yhdenarvoista hiilivetyradikaalia, joka on * > · V 1 esimerkiksi metyyli, etyyli, n-propyyli tai isopropyyli.

Termillä "halogeeni" tarkoitetaan fluoria, klooria, ,,30 bromia tai jodia.

Termit "nisäkäs" ja "nisäkkääseen liittyvä" käsit-tävät ihmisen.

* 1 · » 114793 4

Keks innon 1H-indo1i-3 -glyoksyy1i ami diyhdi s tee t:

Esillä oleva keksintö koskee yhdisteitä, joilla on yleinen kaava (I):

X

X I

R4 J NH2 5 Ä-R2 «) s * Rl jolloin X on happi;

Ri on fenyyli-Ci-3-alkyyli, bifenyyli-Ci-3-alkyyli 10 tai naftyyli-Ci-3-alkyyli, jotka ovat mahdollisesti substi-tuoituja 1-3 halogeeniatomilla; R2 on vety, Ci-3-alkyyli tai C3-4-sykloalkyyli; R4 ja R5 ovat toisistaan riippumatta vety, karboksi-Ci-3-alkoksi tai karboksi-Ci-3-alkyyliamino; ja 15 R6 ja Ry ovat kumpikin vetyjä, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja tai alifaattisia esteriaihiolääkejohdannaisia.

* · : · Erityisesti edulliset yhdisteet ja kaikki niiden ·.· · farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja aihiolääkejohdan- 20 naiset, jotka ovat esimerkkejä keksinnön mukaisista yhdis-Ί* teistä, käsittävät seuraavat yhdisteet: (A) [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-1-(fe-nyylimetyyli) -lH-indol-4-yyli] oksi] etikkahappo, (B) dl-2-[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli- 25 1-(f enyy lime tyyli]-lH-indol-4-yyli] oksi] propaanihappo, 114793 5 (C) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife-nyyli]-2-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etik-kahappo, (D) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife-5 nyyli]-3-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etik- kahappo, (E) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife-nyyli]-4-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etik-kahappo, 10 (F) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-[(2,6-dikloo- rifenyyli)metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikka-happo , (G) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-[4-(fluorife- nyyli)metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, 15 (H) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-[(1- naftalenyyli)metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, (I) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-(fe-nyylimetyyli)-H-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, (J) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-[(3-20 kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo , • (K) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife- nyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo , 25 (L) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife- • · , , nyyli]-2-yylimetyyli)-2-propyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etik- • kahappo, '*'* (M) [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-2-syklopropyyli- 1-(fenyylimetyyli)-1H-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, 30 (N) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife- : '· nyyli] -2-yylimetyyli) -2-syklopropyyli-lH-indol-4-yyli] ok- ··. si] etikkahappo, ... (0) 4-[ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l- (fenyylimetyyli)-1H-indol-5-yyli] oksi] voihappo ja v,: 35 (P) (A):n - (0):n seokset minä tahansa yhdistelmä- : .: nä.

6 1 1 4793

Edullisimpia ovat 1H-indoli-3-glyoksyyliamidit, jotka on valittu seuraavista kaavoista:

K \A

j nh2 CH3 5 tai 0 \ 1 . / \ \ Jl

Na ”0 O \ ; J NH2 N CH3 114793 7

Edellä olevien lH-indoli-3-glyoksyyliamidiyhdistei-den suolat muodostavat keksinnön lisänäkökohdan. Tapauksissa, joissa keksinnön mukaisissa yhdisteissä on happamia tai emäksisiä funktionaalisia ryhmiä, voidaan muodostaa erilai-5 siä suoloja, jotka liukenevat paremmin veteen ja ovat fysiologisesti sopivampia kuin kantayhdiste. Esimerkkeinä farmaseuttisesti hyväksyttävistä suoloista ovat, mutta eivät rajoitu näihin, alkali- ja maa-alkalimetallisuolat, kuten litum-, natrium-, kalium-, kalsium-, magnesium-, alumi-10 nium- ja vastaavat suolat. Suolat valmistetaan tarkoituksenmukaisesti vapaasta haposta käsittelemällä happoa liuoksessa emäksellä tai saattamalla happo yhteen ioninvaihto-hartsin kanssa.

Farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen määritelmä 15 käsittää suolat, jotka ovat suhteellisen myrkyttömiä, epäorgaanisia ja orgaanisia esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden emäsadditiosuoloja, esimerkiksi ammonium-, kva-ternaariset ammonium- ja amiinikationit, jotka on johdettu typpipitoisista emäksistä, jotka ovat riittävän emäksisiä 20 muodostamaan suoloja tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden kanssa (katso esimerkiksi S. M. Berge, et ai., "Pharmaceutical Salts", J. Phar. Sei. , 66: 1 - 19 (1977)). Ennen kaikkea keksinnön mukaisen yhdisteen emäksinen (emäksiset) ryhmä (ryhmät) voidaan saattaa reagoimaan sopivien orgaa-! 25 nisten tai epäorgaanisten happojen kanssa, jolloin muodos- , , tuu suoloja, kuten asetaattia, bentseenisulfonaattia, bent- i ♦ • * soaattia, bikarbonaattia, bisulfaattia, bitartraattia, bo- ’ raattia, bromidia, kamsylaattia, karbonaattia, kloridia, klavunaattia, sitraattia, kloridia, edetaattia, edisylaat-30 tia, estolaattia, esylaattia, fluoridia, fumaraattia, glu- ; : septaattia, glukonaattia, glutamaattia, glykolyyliarsani- laattia, heksyyliresorsinaattia, bromidia, kloridia, hyd-roksinaf toaattia, jodidia, isotionaattia, laktaattia, lak- » · tobionaattia, lauraattia, malaattia, mandelaattia, mesy-:,V 35 laattia, metyylibromidia, metyylinitraattia, metyylisul- faattia, mukaattia, napsylaattia, nitraattia, oleaattia, 114793 8 oksalaattia, palmitaattia, pantotenaattia, fosfaattia, po-lygalakturonaattia, salisylaattia, stearaattia, subasetaat-tia, suksinaattia, tannaattia, tartraattia, tosylaattia, trifluoriasetaattia, trifluorimetaanisulfonaattia ja vale-5 raattia.

Tietyissä keksinnön mukaisissa yhdisteissä voi olla yksi tai useampia kiraalisia keskuksia ja ne voivat siten esiintyä optisesti aktiivisina muotoina. Siten, kun yhdisteissä on alkenyyli- tai alkenyleeniryhmä, ne voivat esiin-10 tyä cis- ja trans-isomeerimuodoissa. Tässä keksinnössä tarkastellaan R- ja S-isomeereja sekä niiden seoksia, mukaan lukien raseemiset seokset, kuin myös cis- ja trans-isomeerien seokset. Muita asymmetrisiä hiiliatomia voi olla mukana substituenttiryhmässä, kuten alkyyliryhmässä. Kaik-15 kien tällaisten isomeerien, kuin myös niiden seosten on tarkoitus kuulua keksintöön. Mikäli halutaan saada tietty stereoisomeeri, se voidaan valmistaa kemiassa hyvin tunnetuilla menetelmillä, käyttäen stereospesifisiä menetelmiä sekä lähtöaineita, joissa on asymmetrisiä keskuksia ja jot-20 ka on jo hajoitettu, tai vaihtoehtoisesti menetelmillä, joista saadaan stereoisomeerien seoksia, jotka tämän jäl-keen hajoitetaan tunnetuilla menetelmillä.

\ Aihiolääkemuodot ovat keksinnön mukaisten yhdistei- ♦ •t den johdannaisia, joissa on kemiallisesti tai metabolisesti 25 lohkaistavia ryhmiä ja joista muodostuu solvolyysin kautta , , tai fysiologisissa olosuhteissa keksinnön yhdisteitä, jotka y ovat farmaseuttisesti vaikuttavia in vivo. Tämän keksinnön * · * mukaiset yhdisteiden johdannaiset ovat vaikuttavia sekä niiden happo- että emä sjohdannaisen muodossa, mutta happo-30 johdannainen on usein edullisempi liukoisuutensa, kudosyh- * * » : : teensopivuuden tai viivästyneen vapautumisen vuoksi nisäk- ,·|·( kään elimistössä (katso Bundgard, H., Desing of Prodrugs, » » · s. 7-9, 21 - 24, Elsevier, Amsterdam 1985). Aihiolääke- i · * · *; muotoja ovat kemian asiantuntijoiden hyvin tietämiä happo- 4 » :,v 35 johdannaisia, kuten esimerkiksi estereitä, jotka on valmis- t » j tettu reaktiossa, jossa hapan kantayhdiste on saatettu rea- 1 1 4793 9 goimaan sopivan alkoholin kanssa. Yksinkertaiset alifaatti-set tai aromaattiset esterit, jotka on johdettu tämän keksinnön yhdisteissä olevista happamista ryhmistä, ovat edullisia aihiolääkemuotoja. Joissakin tapauksissa on toivotta-5 vaa valmistaa kaksoisesterityyppisiä aihiolääkemuotoja, kuten (asyylioksi)alkyyliestereitä tai ((alkoksikarbonyyli)-oksi)alkyyliestereitä.

Keksinnön mukaisten 1H-indoli-3-glyoksyyliamidien synteesi voidaan suorittaa hyvin tunnetuilla kemiallisen 10 kirjallisuuden menetelmillä. Menetelmiä, jotka ovat käyttökelpoisia keksinnön mukaisten yhdisteiden syntetisoimisek-si, valaistaan tässä ja esitetään seuraavissa reaktionkul-kukaavioissa 1-6.

* i * • I # ft • · ' » * ‘ a > ‘ 1 - · ‘ i :· a a a s a

Kaavio 1 114793 10 ?CH3 och3 cc - i"· — R4 N°2 NH2 1 2 ?CH3 och3 R4 NHC02t-Bu NHC02t-Bu 3 4 °CH3 Qr.H% — 5 6 f5 on CH3°Y^o ,ρο·* . - "öcy*· —» ^-O "·. '-O" ·'.· Is o n *5 7 0Η3°γΌ S_4 οη3ο^Λ0 βο °0Cvh2c1 —“irVCr2 — • R4 V_/=Y3 n. /=>r3 9 io i5 :· HvS 24...

iQ3-r2 > 114793 11

Glyoksyyliamidien, joiden 4-asema on substituoitu happamalla funktionaalisessa ryhmällä happiatomin kautta, saamiseksi käytetään reaktionkulkukaaviossa 1 esitettyjä reaktioita (muutosreaktioille 1-5, katso viite Robin D.

5 Clark, Joseph M. Muchowski, Lawrence E. Fisher, Lee A. Flippin, David B. Repke, Michel Souchet, Synthesis, 1991, 871 - 878. Orto-nitrotolueeni, 1, pelkistetään helposti 2-metyylianiliiniksi, 2, käyttäen Pd/C:tä katalyyttinä.

Pelkistys voidaan suorittaa etanolissa tai tetrahydrofu-10 raanissa (THF) tai näiden kummankin yhdistelmässä, käyttäen alhaista vetypainetta. Aniliini, 2, muutetaan kuumentamalla di-tert-butyylidikarbonaatin kanssa THF:ssa, palautusjäähdytys lämpötilassa, N-tert-butyylikarbonyylijohdannaiseksi, 3, hyvällä saannolla. Yhdisteen 3 dianionin dilitiumsuola 15 johdetaan -40 - -20 °C:ssa THFrssa, käyttäen sek-butyylili-tiumia, ja se saatetaan reagoimaan sopivasti substituoidun N-metoksi-N-metyylialkanamidin kanssa. Tämä tuote, 4, voidaan puhdistaa kiteyttämällä heksaanista, tai se voidaan saattaa reagoimaan suoraan trifluorietikkahapon kanssa me-20 tyleenikloridissa, jolloin saadaan 1,3-substituoimaton indoli, 5. 1,3-substituoimaton indoli, 5, saatetaan reagoi- *. maan natriumhydridin kanssa dimetyyliformamidissa huoneen- ·, lämpötilassa (20 - 25 °C) 0,5 - 1,0 tunniksi. Syntynyttä / 5:n natriumsuolaa käsitellään ekvivalentilla määrällä aryy- 25 limetyylihalogenidia ja seosta sekoitetaan lämpötilassa, joka on 1 - 100 °C, tavallisesti ympäristön lämpötilassa, • * ' 4-36 tuntia, jolloin saadaan 1-aryy limetyyli-indoli, 6.

' : Tämä indoli, 6, O-metyloidaan sekoittamalla booritribromi- din kanssa metyleenikloridissä noin viiden tunnin ajan 30 (katso viite Tsung-Ying Shem ja Charles A. Winter, Adv.

Drug. Res., 1977, 12, 176, jossa esille tuodut asiat liitetään tähän viitteellä). 4-hydroksi-indoli, 7, alkyloidaan alfa-bromialkaanihappoesterillä dimetyyliformamidissa (DMF) , käyttäen natriumhydridiä emäksenä sekä reaktio-: 35 olosuhteita, jotka kuvattiin muutettaessa yhdistettä 5 yh- ; disteeksi 6. Alfa-[(indol-4-yyli)oksi]alkaanihappoesteri, 114793 12 8, saatetaan reagoimaan oksalyylikloridin kanssa metyleeni-kloridissa, jolloin saadaan 9, jota ei puhdisteta, vaan saatetaan reagoimaan suoraan ammoniakin kanssa, jolloin saadaan glyoksamidi, 10. Tämä tuote hydrolysoidaan, käyttä-5 en 1 N natriumhydroksidia MeOHrssa. Lopputuote, glyoksyy-liamidi, 11, eristetään joko vapaana karboksyylihappona tai sen natriumsuolana tai kumpanakin muotona.

Kaavio 2 10 12 H 13 0 0 0 0 ^C1 CH3°N^Vn^-/ NH2 ttVr2 —XjTVr2 — e;rXn-orj 0 0 0 0 HO^^ NH2 t-BuOCO^^^^v^O^^^^y^ NH2 ! ib 1 « * » 0 o NH2 • χτν12 ! 1 • > t 114793 13

Glyoksyyliamidien, jotka on substituoitu indoliren-kaan 5-asemasta oksivoihapolla ja 2-asemasta alkyyliryhmäl-lä, valmistamiseksi käytetään reaktionkulkukaaviossa 2 kuvattuja reaktioita. 1,3-substituoimattomat indolit, 12, 5 valmistetaan vastaavilla menetelmillä, kuin mitä kuvattiin reaktionkulkukaaviossa 1 yhdisteen 5 valmistamiseksi. Kun yhdistettä 12 käsiteltiin DMFrssa ja THF:ssa ensin

NaH/mineraaliöljyllä ja sitten aryylimetyylihalogenidilla, saatiin hyvällä saannolla 1-aryylimetyyli-indolia, 13. Tämä 10 indoli, 13, joka oli metyleenikloridissa, saatettiin reagoimaan oksalyylikloridin kanssa, ja seos lisättiin suoraan THF:iin, joka oli kyllästetty ammoniakilla, jolloin saatiin 5-metoksiglyoksamidia, 15. 5-metoksijohdannainen 0-deme- tyloitiin 5-hydroksiyhdisteeksi, 16, sekoittamalla boorit- 15 ribromidilla metyleenikloridissa. Tämä tuote saatettiin reagoimaan NaH/mineraalihapon ja edellä kuvatun gamma- bromivoihapon t-butyyliesterin kanssa, jolloin saatiin välituote 17, joka voitiin helposti muuttaa karboksykliseksi tuotteeksi, 18, sekoittamalla trifluorietikkahapon kanssa 20 metyleenikloridissa.

* » » » · > · i » 114793 14

Kaavio 3 ''•CO _ “ICO _ 19 H 20

0 O

HO. - EtOCO. ./-s. ..O. JCl Ί®3 _► XX^> , N^Rj . ^a*· 0 0 0 0 EtOCO.^^O^^y NH2 HOCO. ^.^0^ /"""nH2 Y23 rn - ^O*· 5 Glyoksyyliamidien, jotka on substituoitu 5-asemasta oksivoihapolla ja 2-asemasta vedyllä, valmistamiseksi kaupallisesti saatava indoli, 19, muutettiin reaktionkulkukaa-viossa 3 kuvattujen reaktiovaiheiden kautta glyoksyyliami- \ diksi, 24, käyttäen reaktionkulkukaaviossa 1 kuvattuja re- » ·' 10 aktio-olosuhteita.

* * » · • » φ * · < * · » *

» I

» » » * * • * ►

• I

Kaavio 4 114793 15 jj°2 N02 (^Q-ch2cH3 (^1CVch,ch3 36 H 37 0 n N02 \\ /s NH 0^° ίΤν CH2CH3 (iV^ NHZ ^ ^w=\ lAX^ 38 \J 39

MeOCO^un % ,p ^ 0 o

Ar\ NH2 H0C0 X JML

cq-™ “* n>*» '-O ^“'-o 40 41 '. 5 Glyoksyyliamidien, joissa 4-asemassa oleva karbok- syyliryhmä on kiinnittynyt typpiatomin välityksellä, val->’ mistamiseksi voidaan käyttää reaktionkulkukaaviossa 4 ku vattua reaktiosarjaa. Nitroindoli (36) (joka on saatu mene- i · , , telmällä, joka on esitetty julkaisussa Tetrahedron 46(17) ’ 10 6085 - 6112 (1990), Jan Bergman ja Peter Sand ja jossa esi- ’·' tetty asia liitetään tähän viitteellä) voidaan alkyloida aryylimetyylibromidilla, käyttäen NaH:ä emäksenä, jolloin saadaan yhdiste (37). Käsittelemällä yhdistettä 37 oksalyy-:likloridilla ja sitten ammoniakilla, saadaan glyoksyyliami-, 15 di (38). Pelkistämällä (38) :n nitroryhmä vedyllä, käyttäen katalyyttinä Pt/BaSC>4:a ja tämän jälkeen alkyloimalla 2-bromiasetaatilla, käyttäen emäksenä NaHC03:a, saadaan (40) . Suorittamalla emäksinen hydrolyysi laimeaa NaOH:a käyttäen, saadaan tuote (41) .

16 1 1 4793 Tässä kuvattujen 1H-indoli-3-glyoksyyliamidien uskotaan pääsevän edulliseen terapeuttiseen vaikutukseensa pääasiassa estämällä suoraan nisäkkään (ihminen mukaan lukien) sPLA2:ta, ei toimimalla antagonisteina arakidoniha-5 polle eikä muille vaikuttaville aineille, jotka ovat araki-donihapporeaktiosarjassa arakidonihapon alapuolella, kuten 5-lipo-oksigenaaseille, syklo-oksigenaaseille jne.

sPLA.2-välitteisen rasvahappojen vapautumisen estämiseksi nisäkkään sPLA2 saatetaan yhteen terapeuttisesti 10 vaikuttavan määrän kanssa 1H-indoli-3-glyoksyyliamidia, joka on substituoitu 4- tai 5-asemasta happamalla johdannaisella, sen suolaa tai sen aihiolääkejohdosta.

Edullisessa sPLA2 saatetaan yhteen terapeuttisesti vaikuttavan määrän kanssa 1H-indoli-3-glyoksyyliamidia, jo-15 ka kaavat ovat (I) , (II) , (III) , tai yhdisteiden (A) - (O) , supra, kanssa.

Verenmyrkytysshokin, aikuisiän hengitysvajaatoimin-tasyndrooman, haimatulehduksen, vamman, keuhkoastman, allergisen nuhan, nivelreuman ja vastaavien sairauksien hoi-20 tamiseksi annetaan nisäkkäälle (ihminen mukaan lukien) terapeuttisesti vaikuttava määrä keksinnön mukaista 1H-* indoli-3-glyoksyyliamidia (katso kaava I, II, III tai yh- ·. disteet (A) - (0) , supra) tai sen farmaseuttisesti hyväk syttävää suolaa tai esteriaihiolääkejohdosta. Edullisinta t ! 25 verenmyrkytysshokin hoitamiseksi ihmisissä on antaa tera peuttisesti vaikuttava annos lH-indoli-3-glyoksyyliamideja, * jotka on valittu kaavoista: i * * i7 1 1 4793 o

vA

I T NH2 CH3 y.

tai

O

. >-χ VÄ

Na ‘0 O \ T nh2 *. CH3 : 5 % ; : tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa tai este- riaihiolääkejohdoksia.

Kuten aikaisemmin esitettiin, tämän keksinnön yh- * 10 disteet ovat käyttökelpoisia estettäessä sPLA2-välitteistä - * rasvahappojen, kuten arakidonihapon, vapautumista. Termillä 114793 18 "estää" tarkoitetaan sPLA2-lähtöisten rasvahappojen vapautumisen estämistä tai vapautumisen huomattavaa vähentämistä keksinnön yhdisteiden avulla. "Farmaseuttisesti hyväksyttävällä" tarkoitetaan, että kantaja-aineen, laimentimen tai 5 apuaineen tulee olla yhteensopiva muiden formulaation aineosien kanssa, eivätkä ne saa olla haitallisia formulaation saajalle. Nimenomainen annos, joka yhdistettä annetaan terapeuttisen tai ennalta ehkäisevän vaikutuksen aikaan saamiseksi, määritetään tilanteeseen liittyvien nimenomaisten 10 olosuhteiden perusteella, kuten esimerkiksi annettavan yhdisteen, antotavan ja hoidettavan tilan perusteella. Tyypilliset päivittäiset annokset käsittävät myrkyttömän an-nostason, joka on noin 0,01 - 50 mg/kg ruumiinpainoa kohden tämän keksinnön mukaista vaikuttavaa yhdistettä.

15 Farmaseuttinen formulaatio on edullisesti yksikkö- lääkemuodossa. Yksikkölääkemuoto voi olla kapseli tai tabletti itse, tai se voi olla sopiva määrä näitä. Vaikuttavan aineen määrää koostumuksen yksikköannoksessa voidaan vaihdella tai säätää noin 0,1 - 1 000 milligrammaksi tai suu-20 remmaksi määräksi nimenomaisen hoidon mukaan. Voidaan ymmärtää, että voi olla välttämätöntä tehdä rutiininomaisia muunnoksia näihin annostuksiin, riippuen potilaan iästä ja ·. tilasta. Annostus riippuu myös antotavasta.

Yhdiste voidaan antaa eri antotapoja käyttäen, ku-! 25 ten suun kautta, aerosolina, peräsuolen kautta, ihon kaut- , , ta, ihon alle, suonensisäisesti, lihakseen ja nenän kautta.

• ’ Farmaseuttisia formulaatioita valmistetaan yhdistä- '·’ * mällä (esim. sekoittamalla) terapeuttisesti vaikuttava mää rä keksinnön lH-indoli-3-glyoksyyliamideja farmaseuttisesti li* 30 hyväksyttävän kantaja-aineen tai laimentimen kanssa. Esillä : : olevat farmaseuttiset formulaatiot valmistetaan tunnetuilla menetelmillä käyttäen hyvin tunnettuja ja helposti saatavia aineosia.

y Valmistettaessa koostumuksia vaikuttava aineosa se- '/·'· 35 koitetaan tavallisesti kantaja-aineen kanssa, tai laimenne- : taan kantaja-aineella tai suljetaan kantaja-aineeseen, joka 114793 19 voi olla kapselin, lääkepussin, paperin tai muun säiliön muodossa. Kun kantaja-aine toimii laimentimena, se voi olla kiinteää, puolikiinteää tai nestemäistä ainetta, joka toimii vehiikkelinä, tai se voi olla tablettien, pillereiden, 5 jauheiden, pastillien, eliksiirien, suspensioiden, emulsi oiden, liuosten, siirappien, aerosolien (kiinteänä tai nestemäisenä väliaineena) tai voiteen muodossa, joka sisältää esimerkiksi korkeintaan 10 paino-% vaikuttavaa yhdistettä. Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet formuloidaan 10 edullisesti ennen annostelua.

Farmaseuttisiin formulaatioihin voidaan käyttää kaikkia farmasian teknologiassa tunnettuja sopivia kantaja-aineita. Tällaisessa formulaatiossa kantaja-aine voi olla kiinteää, nestemäistä tai kiinteän ja nesteen seosta. Esi- 15 merkiksi suonensisäisesti annettavaan injektioon keksinnön yhdisteet voidaan liuottaa konsentraationa, joka on 2 mg/ml, 4 % dekstroosi/0,5 % Na-sitraatti -vesiliuokseen. Kiinteämuotoisia formulaatioita ovat jauheet, tabletit ja kapselit. Kiinteä kantaja-aine voi olla yksi tai useampia 20 aineita, jotka voivat toimia myös makuaineina, liukuainei-na, liukoisuutta parantavina aineina, suspensointiaineina, \ sideaineina, tabletin hajoamista edistävinä aineina ja kap- ·, selointiaineina.

Suun kautta annosteltavat tabletit voivat sisältää ! 25 sopivia apuaineita, kuten kalsiumkarbonaattia, natriumkar bonaattia, laktoosia, kalsiumfosfaattia sekä muita hajoi- ‘ · tusaineita, kuten maissia, tärkkelystä tai alginiinihappoa, > * V * ja/tai sideaineita, esimerkiksi gelatiinia tai akaasiaa, ja liukuaineita, kuten magnesiumsteraattia, steariinihappoa , 30 tai talkkia.

: Jauheissa kantaja-aine on hienojakoista kiinteää ainetta, joka on seoksena hienojakoisen vaikuttavan aine- • f » osan kanssa. Tableteissa vaikuttava aineosa on sekoitettu » « kantaja-aineen kanssa, jolla kantaja-aineella on välttämät-ν_ί 35 tömät sideaineominaisuudet, sopivina osuuksina, ja ne on : ·,: puristettu haluttuun muotoon ja kokoon. Jauheet ja tabletit 114793 20 sisältävät edullisesti noin 1-99 paino-% vaikuttavaa aineosaa, joka on tämän keksinnön uusi yhdiste. Sopivia kantaja-aineita ovat magnesiumkarbonaatti, magnesiumstearaat-ti, talkki, sokerilaktoosi, pektiini, dekstriini, tärkke-5 lys, gelatiini, tragantti, metyyliselluloosa, natriumkar-boksimetyyliselluloosa, alhaalla sulavat vahat ja kaakaovoi .

Steriilejä nestemäisiä formulaatioita ovat suspensiot, emulsiot, siirapit ja eliksiirit.

10 Vaikuttava aineosa voidaan liuottaa tai suspensoida farmaseuttisesti hyväksyttävään kantaja-aineeseen, kuten steriiliin veteen, steriiliin orgaanisen liuottimeen tai näiden kummankin seokseen. Vaikuttava aineosa voidaan usein liuottaa sopivaa orgaaniseen liuottimeen, esimerkiksi pro-15 pyleeniglykolin vesiliuokseen. Muita koostumuksia voidaan tehdä dispergoimalla hienojakoinen vaikuttava aineosa tärkkelyksen tai natriumkarboksimetyyliselluloosan vesiliuokseen tai sopivaan öljyyn.

Seuraavat farmaseuttiset formulaatiot 1-8 valai-20 sevat ainoastaan keksintöä, eikä niiden tarkoituksena ole rajoittaa keksinnön suojapiiriä millään tavoin. "Vaikuttava aineosa" tarkoittaa kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, esteriaihiolääkejoh-dosta.

* - * · * · * < · f I » 114793 21

Formulaatio 1

Kovia gelatiinikapseleita valmistetaan seuraavia aineosia käyttäen: Määrä 5 (ma/kapseli)

Vaikuttava aineosa 250 Tärkkelys, kuivattu 200

Magnesiumstearaatti 10

Yhteensä 460 mg 10

Formulaatio 2

Tabletti valmistetaan alla olevia aineosia käyttäen: Määrä 15 (mg/t-ahletti}

Vaikuttava aineosa 250

Selluloosa, mikrokiteinen 400

Piidioksidi, savuava 10

Steariinihappo 5 20 Yhteensä 665 mg ·’: Komponentit sekoitetaan ja puristetaan tableteiksi, joista kukin painaa 665 mg.

» · ► « • » ! 25 Formulaatio 3 I * · . . Valmistetaan aerosoliliuos, joka sisältää seuraavat I · ' ;· komponentit: ‘ * Määrä

Vaikuttava aineosa 0,25 30 Etanoli 25,75 : ! Ponneaine 22 (Klooridifluori- , metaani) 74,00

Yhteensä 100,00 • ' > > < · t > * » 1 1 4793 22

Vaikuttava yhdiste sekoitetaan etanolin kanssa ja seos lisätään osaan ponneainetta 22, jäähdytetään -30 °C:seen ja siirretään täyttölaitteeseen. Haluttu määrä syötetään sitten ruostumattomasta teräksestä valmistettuun 5 säiliöön ja laimennetaan jäljellä olevalla ponneaineella.

Venttiiliyksiköt sovitetaan sitten säiliöön.

Formulaatio 4

Tabletit, jotka kukin sisältävät 60 mg vaikuttavaa 10 aineosaa, valmistetaan seuraavasti:

Vaikuttava aineosa 60 mg Tärkkelys 45 mg

Mikrokiteinen selluloosa 35 mg

Polyvinyylipyrrolidoni (10 % liuos 15 vedessä) 4 mg

Natriumkarboksimetyylitärkkelys 4,5 mg

Magnesiumstearaatti 0,5 mg

Talkki 1 mg

Yhteensä 150 mg 20

Vaikuttava aineosa, tärkkelys ja selluloosa seulo-*; taan nro 45 US-seulakoon seulan läpi ja sekoitetaan perus teellisesti. Vesiliuos, jossa on polyvinyylipyrrolidonia, * * sekoitetaan syntyneen jauheen kanssa ja seos seulotaan US- 25 seulakoon nro 14 seulan läpi. Näin muodostuneet rakeet kui- . , vataan 15 °C:ssa ja seulotaan US-seulakoon nro 18 seulan > · ' " läpi. Natriumkarboksimetyyliselluloosa, magnesiumstearaatti ’ * * ’ ja talkki, jotka aikaisemmin on seulottu US-seulakoon nro 60 seulan läpi, lisätään sitten rakeisiin, jotka sekoitta-;; 30 misen jälkeen puristetaan tabletointikoneessa, jolloin saa- ί daan tabletteja, jotka kukin painavat 150 mg.

> i » > 114793 23

Formulaatio 5

Kapselit, jotka kukin sisältävät 80 mg vaikuttavaa aineosaa, valmistetaan seuraavasti:

Vaikuttava aineosa 80 mg 5 Tärkkelys 59 mg

Mikrokiteinen selluloosa 59 mg

Magnesiumstearaatti 2 mg

Yhteensä 200 mg 10 Vaikuttava aineosa, selluloosa, tärkkelys ja magne siumstearaatti sekoitetaan, seulotaan US-seulakoon nro 45 seulan läpi ja täytetään kopviin gelatiinikapseleihin 200 mg:n määrinä.

15 Formulaatio 6

Peräpuikot, jotka kukin sisältävät 225 mg vaikuttavaa aineosaa, valmistetaan seuraavasti:

Vaikuttava aineosa 225 mg

Tyydyttyneet rasvahappoglyseridit 2 000 mg 20 Yhteensä 2 225 mg ·. Vaikuttava aineosa seulotaan US-seulakoon nro 60 : ,·, seulan läpi ja suspensoidaan tyydyttyneisiin rasvahappogly- * * : serideihin, jotka on aikaisemmin sulatettu mahdollisimman * » 25 vähäistä lämpöä käyttäen. Seos kaadetaan sitten peräpuikko- muottiin, jonka nimelliskapasiteetti on 2 g, ja annetaan ^: j äähtyä.

< · 114793 24

Formulaatio 7

Suspensiot, joista kukin sisältää 50 mg vaikuttavaa aineosaa 5 ml:n annosta kohden, valmistetaan seuraavasti: Vaikuttava aineosa 50 mg 5 Natriumkarboksimetyyliselluloosa 50 mg

Siirappi 1,25 ml

Bentsoehappoliuos 0,10 ml

Makuaine q.v.

Väriaine q.v.

10 Puhdistettu vesi kokonaistilavuuteen 5 ml

Vaikuttava aineosa seulotaan US-seulakoon nro 45 seulan läpi ja sekoitetaan natriumkarboksimetyyliselluloo-san ja siirapin kanssa, jolloin saadaan tasainen tahna.

15 Bentsoehappoliuos, makuaine ja väriaine laimennetaan osalla vettä ja lisätään sekoittaen. Sitten lisätään riittävästi vettä halutun tilavuuden saamiseksi.

Formulaatio 8 20 Suonensisäinen formulaatio voidaan valmistaa seu raavasti :

Vaikuttava aineosa 100 mg : ,·. Isotoninen suolaliuos 1 000 ml > · * 1- · ! 25 Liuos, jossa on edellä olevat aineosat, annetaan ! « · , , suonensisäisesti potilaalle nopeudella 1 ml minuutissa.

* Kaikilla alla kuvatuilla esimerkkien tuotteilla, » '· * kuin myös seuraavissa menetelmissä käytetyillä välituot teilla oli tyydyttävät nrm- ja ir-spektrit. Myös niiden 30 massaspektriarvot olivat oikeita.

> i » ·= » » 25 1 1 4793

Esimerkki 1 [[3-( 2-amino-1,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-1-(fenyy-limetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, yhdiste, jonka kaava on: 5 HCL Ov NH2 Y^° w

° JL

10 /—CH3

Osa A: N-tert-butoksikarbonyyli-3-metoksi-2-metyy-lianiliinin valmistus

Liuosta, jossa oli 44,44 g (344 mmol) 3-metoksi-2-20 metyylianiliinia ja 75 g (344 mmol) di-tert-butyylidikar-bonaattia 400 ml:ssa THF:a, kuumennettiin ja pidettiin palautusjäähdytyslämpötilassa neljä tuntia. Kun oli väke- i vöity alennetussa paineessa, jäännös otettiin talteen * etyyliasetaattiin, pestiin 1 N sitruunahapolla, vedellä ja 25 kuivattiin (MgS04). Kun liuotin oli poistettu alennetussa , paineessa, jäännös kiteytettiin heksaanista, jolloin saa- tiin 64,5 g (84 % saanto) N-tert-butoksikarbonyyli-3-me- » toksi-2-metyylianiliinia, s.p. 56 - 57 °C.

Analyysi C13H19N03:lie: 30 Lasketut arvot: C, 65,80; H, 8,07; N, 5,90 ,·’ Saadut arvot: C, 63,32; H, 7,83; N, 5,56.

Osa B: 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolin valmistus i

Liuos, jossa oli 280 ml (0,36 mol) 1,3 M sek-butyy- s lilitiumia sykloheksaanissa, lisättiin hitaasti N-tert- ,* 35 butoksikarbonyyli-3-metoksi-2~metyylianiliiniin (43 g, »

< I I

114793 26 0,18 mol), joka oli 300 ml:ssa THF:a, pitäen lämpötila alle -40 °C:ssa hiilihappojää-etanolihauteen avulla. Haude poistettiin ja lämpötilan annettiin kohota -20 °C:seen, ja sitten haude laitettiin takaisin. Kun lämpötila oli laske-5 nut -60 °C:seen, lisättiin tipoittain 18,5 g (0,18 mol) N-metoksi-N-metyyliglyoksyyliamidia yhtä suuressa tilavuudessa THF:a. Reaktioseosta sekoitettiin yksi tunti, jääh-dytyshaude poistettiin ja sekoitettiin vielä yksi tunti.

Se kaadettiin sitten seokseen, jossa oli 600 ml eetteriä 10 ja 600 ml 1 N HCl:a. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin MgS04:lla ja väkevöitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 39,5 g seosta, jossa oli l-[2-(tert-butoksikarbonyyliamino)-6-metoksifenyyli] -2-propano-nia ja lähtöaineanilidia. Tämä seos liuotettiin 100 ml:aan 15 metyleenikloridia ja 40 ml:aan trifluorietikkahappoa, ja tätä kokonaisuutta sekoitettiin 26 tuntia. Seos pestiin vedellä, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin CH2Cl2/heksaanista 20 kiteyttämisen jälkeen 13,9 g 4-metoksi-2-metyyli-lH-indo-lia, s.p. 80 - 96 °C.

Analyysi C10H11NO:lie:

Lasketut arvot: C, 74,51; H, 6,88; N, 8,69

Saadut arvot: C, 74,41; H, 7,08; N, 8,47.

' | 25 Osa C: 4-metoksi-2-metyyli-l-(f enyy lime tyyli)-1H- , indolin valmistus

» I

‘ ‘ 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia (1 g, 6,2 mmol) li- > » sättiin 248 mg:aan (6,2 mol) 60 % natriumhydridi/mineraaliöljyä (joka oli pesty heksaanilla ennen DMF:n lisäämis-Γ 30 tä), joka oli 15 ml:ssa DMF:a, ja kun oli sekoitettu 0,5 ‘ ,·* tuntia, lisättiin 0,74 ml (6,2 mol) bentsyylibromidia.

, Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 18 tuntia, se lai- . _ mennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyy- liasetaattiliuos pestiin suolaliuoksella, kuivattiin v.: 35 (MgS04), ja kun se oli väkevöity alennetussa paineessa, 114793 27 jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 1,3 g (84 % saanto) 4-metoksi-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia, joka sulaa 96 - 116 °C:ssa.

5 Analyysi C17H17NO:lie:

Lasketut arvot: C, 81,24; H, 6,82; N, 5,57 Saadut arvot: C, 81,33; H, 6,74; N, 5,29.

Osa D: 4-hydroksi-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-1H-indolin valmistus 10 Liuosta, jossa oli 1,25 g (5 mmol) 4-metoksi-2-me- tyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia ja 20 ml IM BBr3/-CH2Cl2:ta 50 ml:ssa metyleenikloridia, sekoitettiin huoneenlämpötilassa viisi tuntia ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin 15 suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Kun oli väkevöity alennetussa paineessa, jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 577 mg (49 % saanto) 4-hydroksi-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli )-lH-indolia, s.p. 125 - 127 °C.

20 Analyysi C16H15NO: lie:

Lasketut arvot: C, 80,98; H, 6,37; N, 5,90 Saadut arvot: C, 80,76; H, 6,26; N, 5,80.

Osa E: [ [2-metyyli-l-( fenyylimetyyli )-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus , 25 4-hydroksi-2-metyyli-l-( fenyylimetyyli )-lH-indolia : (530 mg, 2,2 mol) lisättiin 88 mg:aan (2,2 mmol) 60 % NaH- /mineraaliöljyä, joka oli 20 ml:ssa DMF:a, ja seosta sekoitettiin 0,67 tuntia. Sitten lisättiin 0,21 ml (2,2 mmol) metyylibromiasetaattia ja sekoittamista jatkettiin : 30 17 tunnin ajan. Seos laimennettiin vedellä ja uutettiin ,,· etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiliuos pestiin suola- liuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin alennetus-·, sa paineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä, ·’ eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 597 mg

I I

114793 28 (88 % saanto) [[2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, s.p. 140 - 143 °C.

Analyysi C19H19N03:lie:

Lasketut arvot: C, 73,77; H, 6,19; N, 4,53 5 Saadut arvot: C, 74,01; H, 6,23; N, 4,32.

Osa F: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyli-esterin valmistus

Oksalyylikloridia (0,16 ml, 1,9 mmol) lisättiin 528 10 mg:aan(l,9 mmol) [[2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol- 4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriin, joka oli 10 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin 1,5 tuntia. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännös otettiin talteen 10 mL:aan metyleenikloridia. Vedettömän ammoniakin 15 annettiin kuplia 0,25 tunnin ajan seokseen ja sitä sekoitettiin 1,5 tuntia, ja se haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännöstä sekoitettiin 20 ml:n kanssa etyyliasetaattia, ja seos suodatettiin. Suodos väkevöitiin, jolloin saatiin 672 mg seosta, jossa oli [[3-(2-amino-l,2-diokso-20 etyyli) -2-metyyli-l- (fenyylimetyyli ) -lH-indol-4-yyli ] ok si] etikkahappometyyliesteriä ja ammoniumkloridia, s.p.

202 - 215 °C.

Osa G: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmis- ! 25 tus • » » > · #

Seosta, jossa oli 660 mg (1,7 mmol) [[3—(2-amino-• l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-( fenyylimetyyli )-lH-indol- 4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä ja 10 ml 1 N NaOH:a 30 ml:ssa metanolia, kuumennettiin ja pidettiin palautus-;* 30 jäähdytyslämpötilassa yksi tunti, se jäähdytettiin huo- neenlämpötilaan ja sitä sekoitettiin 0,5 tuntia. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännös otettiin talteen EtOAc/veteen. Vesikerros erotettiin, tehtiin happa-1' maksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a, ja se uutettiin v 35 Et0Ac:lla. Väkevöitäessä EtOAc-liuos saatiin 431 mg (69 % ♦ > 114793 29 saanto)[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli )-lH-indol-4-yyli] oksi] etikkahappoakiteytyneenä, sulamispiste 218 - 220 °C.

Analyysi C20H18N2O5:lle: 5 Lasketut arvot: C, 65,57; H, 4,95; N, 7,65

Saadut arvot: C, 63,31; H, 4,79; N, 6,91.

Esimerkki 2 dl-2- [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]propionihapon valio mistus, yhdisteen, jonka kaava on: CH3 HOv O NH2 γχΚ rV\ ° y—ch3 20 ; , 25 Osa A: dl-2-[[2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-in- dol-4-yyli]oksi]propionihappometyyliesterin valmistus 4-hydroksi-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia (483 mg, 2,0 mmol) saatettiin reagoimaan 82 mg:n (2,0 mmol) kanssa 60 % NaH/mineraaliöljyä, joka oli 20 ml:ssa 30 DMF:a, ja sitten 0,22 ml:n (2,0 mmol) kanssa esimerkissä ,,· 1, osassa E kuvatun dl-metyyli-2-bromipropionaatin kanssa, .·. jolloin saatiin silikageelillä kromatografoinnin jälkeen, • # eluoitaessa 20 % EtOAc/heksaanilla, 480 mg (74 %) dl-2- * [ [2-metyyli-1-( fenyylimetyyli )-lH-indol-4-yyli]oksi]pro-.·,· 35 pionihappometyyliesteriä.

* · 114793 30

Osa B: dl-2-[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyy-1i-1-(fenyy1imetyy1i)-1H-indol-4-yy1i]oksi]propionxhappo-metyyliesterin valmistus

Oksalyylikloridia (0,16 ml, 1,9 mmol) saatettiin 5 reagoimaan 480 mg:n (1,5 mmol) kanssa dl-2-[[2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]propionihappometyy-liesteriä, ja sitten se saatettiin reagoimaan vedettömän ammoniakin kanssa esimerkissä 1, osassa F kuvatulla tavalla, ja reaktiotuote liuotettiin EtOAc:iin, pestiin vedel-10 lä, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin. Jäännös kromatogra-foitiin silikageelillä (eluoiden EtOAc:lla), jolloin saatiin 531 mg (90 % saanto) dl-2-[[3-(2-amino-l,2-diokso-etyyli )-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]-oksi]propionihappometyyliesteriä, joka sulaa noin 15 175 °C:ssa.

Analyysi C22H22N205: lie:

Lasketut arvot: C, 66,99; H, 4,62; N, 7,10

Saadut arvot: C, 67,28; H, 5,59; N, 7,03.

Osa C: dl-2-[ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-2-metyy-20 li-1- (fenyylimetyyli) -lH-indol-4-yyli]oksi]propionihapon valmistus

Seosta, jossa oli 521 mg (1,3 mmol) dl-2-[[3-(2-amino-1,2-dioksoetyyli )-2-metyyli-l-( fenyylimetyyli )-lH-indol-4-yyli]oksi]propionihappometyyliesteriä ja 10 ml 1 N , 25 NaOH:a 30 ml:ssa metanolia, kuumennettiin palautusjäähdy- ; ^ tyslämpötilassa 0,17 tuntia, jäähdytettiin huoneenlämpöti laan ja sekoitettiin 0,5 tuntia. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännös otettiin talteen EtOAc/veteen. Vesikerros erotettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2-3, 30 käyttäen 1 N HCl:a, ja uutettiin EtOAc:lla. EtOAc-liuos ,·’ väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännöstä sekoitet tiin EtOAc-eetteriseoksessa. Liukenematon materiaali suo- , , datettiin, jolloin saatiin 246 mg (50 % saanto) dl-2-[[3- » (2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-2-metyyli-l-( fenyylimetyyli )- .· 35 lH-indol-4-yyli]oksi]propionihappoa, s.p. 201 - 204 °C.

114793 31

Analyysi C21H20N2O5: lie:

Lasketut arvot: C, 66,31; H, 5,30; N, 7,36

Saadut arvot: C, 65,63; H, 5,61; N, 7,03.

Esimerkki 3 5 [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-1-( [1,1' -bifenyyli] - 2-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: H CL· O NH2 10 Tl \ /

Xrp 20 f=\

·: O

• 25 Osa A: 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-4-metok- si-2-metyyli-lH-indolin valmistus ' · Käyttäen esimerkissä 1, osassa C kuvattua menetel-mää 1 g (6,2 mmol) 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia saatettiin reagoimaan 248 mg:n (6,2 mmol) kanssa 60 % NaH/mine-30 raaliöljyä ja sitten 1,1 ml:n (6,2 mmol) kanssa 2-(bromi-metyyli )bifenyyliä, jolloin saatiin silikageelillä kroma-tografoinnin jälkeen, eluoitaessa 17 % EtOAc/heksaanilla) 1,63 g (80 % saanto) l-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)- 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia öljynä.

» 114793 32

Analyysi C23H21NO:lie:

Lasketut arvot: C, 84,37; H, 6,46; N, 4,28

Saadut arvot: C, 84,11; H, 5,66; N, 3,83.

Osa B: l-( [1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-4-hydrok-5 si-2-metyyli-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetelmää 1,6 g (4,9 mmol) 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)- 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia O-demetyloitiin käsittelemällä 20 ml:11a 1 M BBr3/CH2Cl2:ta. Käsittelemätön tuo- 10 te kromatografoitiin silikageelillä ja eluoitiin 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 841 mg (55 % saanto) 1- ( [1,1' -bifenyyli]-2-yylimetyyli)-4-hydroksi-2-metyyli-lH-indolia.

Analyysi C22H19NO:lie: 15 Lasketut arvot: C, 84,32; H, 6,11; N, 4,47

Saadut arvot: C, 84,59; H, 6,33; N, 4,75.

Osa C: [ [1-([1,1 ’ -bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-me-tyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus 20 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-4-hydroksi-2- metyyli-lH-indolia (767 mg, 2,45 mmol) alkyloitiin käsit-*: telemällä 0,23 ml:11a (2,45 mmol) metyylibromiasetaattia ja 98 mg:11a (2,45 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä DMF:ssa esimerkissä 1, osassa E kuvatulla tavalla. Tuote puhdis- * · · 25 tettiin kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % • , EtOAc/heksaanilla, jolloin satiin 730 mg (77 % saanto) ,* [ [1- ( [1,1' -bifenyyli] -2-yylimetyyli ) -2-metyyli-lH-indol- * ’ 4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, 99 - 101 °C.

Analyysi C25H23N03:lle: , 30 Lasketut arvot: C, 77,90; H, 6,01; N, 3,63 ,'· Saadut arvot: C, 78,11; H, 6,17; N, 3,74.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bi-·, fenyyli] -2-yylimetyyli) -2-metyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] - etikkahappometyyliesterin valmistus 35 Käyttäen esimerkissä 1, osassa F kuvattua menetel- , J mää 715 mg (1,9 mmol) [[1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyy- 114793 33 li )-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyylieste-riä saatettiin reagoimaan ensin 0,16 ml:n (1,9 mmol) kanssa oksalyylikloridia ja sitten ylimäärän kanssa ammoniakkia, jolloin saatiin valkoista kiinteää ainetta. Tätä se-5 koitettiin etyyliasetaatin kanssa ja liukenematon aine erotettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 660 mg seosta, jossa oli [[3—(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyy-li]-2-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikka-happometyyliesteriä ja ammoniumkloridia. Seos suli 144 -10 148 °C:ssa.

Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bi-fenyyli] -2-yylimetyyli) -2-metyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] -etikkahapon valmistus

Seosta, jossa oli 648 mg (1,4 mmol) [[3-(2-amino-15 1,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli) -2- metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä 10 ml:ssa 1 N NaOH:a ja 20 ml:ssa MeOH:a, kuumennettiin palautus jäähdytyslämpötilassa yksi tunti, se jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja sitä sekoitettiin 0,5 tuntia. Seos 20 väkevöitiin, jäännöstä sekoitettiin seoksessa, jossa oli EtOAc/vettä, ja kiinteä aine, joka ei liuennut, suodatet-tiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 227 mg (35 % saanto) *. [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( [1,1' -bifenyyli] -2-yyli- « *, metyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, nat- ,· 25 riumsuolaa, s.p. >265 °C.

* t , , Analyysi C26H21N205Na:lie:

Lasketut arvot: C, 67,24; H, 4,56; N, 6,03

Saadut arvot: C, 69,38; H, 4,88; N, 5,42.

Osa F: 30 Vesikerros erotettiin edellä olevasta suodoksesta ,· ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a.

, Saostuma uutettiin EtOAc:iin, ja kun se haihdutettiin, saostui 1,28 mg (20 % saanto) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyy-li )-1-( [1,1' -bifenyyli] -2-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-35 4-yylijoksi]etikkahappoa, s.p. 228 - 231 °C.

114793 34

Analyysi C26H22N205:lle:

Lasketut arvot: C, 70,58; H, 5,01; N, 6,33 Saadut arvot: C, 73,12; H, 5,37; N, 5,81.

Esimerkki 4 5 [ 13-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( [1,1* -bifenyyli]- 2-yylimetyyli)-3-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: HO. Ov NH2 V^° \ / ϊ JL yi m ° y—ch3 '''q ” o *

Osa A: 1-([1,1?-bifenyyli]-3-yylimetyyli)-4-metok- * 25 si-2-metyyli-lH-indolin valmistus * Käyttäen esimerkissä 1, osassa C kuvattua menetel-,* mää 805 mg (5 mmol) 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia saatet- tiin reagoimaan 200 mg:n (5 mmol) kanssa 60 % NaH/mineraa-liöljyä ja sitten 1,0 g:n (5,0 mmol) kanssa 3-(kloorime- ' * 30 tyyli)bifenyyliä DMF:ssa, jolloin saatiin silikageelillä ,· kromatografoinnin jälkeen (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanil- la) 1,25 g (76 % saanto) 1-([1,1'-bifenyyli]-3-yylimetyyli ) -4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia, s.p. 127 - 131 °C.

Analyysi C23H21NO:lie: 35 Lasketut arvot: C, 84,37; H, 6,46; N, 4,27 * Saadut arvot: C, 83,30; H, 6,55; N, 4,07.

114793 35

Osa B: 1-([ 1,1' -bifenyyli]-3-yylimetyyli)-4-hydrok-si-2-metyyli-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetelmää 1,25 g (3,8 mmol) 1-([1,1'-bifenyyli]-3-yylimetyyli)-5 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia O-demetyloitiin käsittele mällä 15,2 ml:11a 1 M BBr3/CH2Cl2:ta, jolloin saatiin 1,03 g (87 % saanto) käsittelemätöntä 1-([1,1'-bifenyyli]-3-yy1imetyy1i)-4-hydroksi-2-metyyli-1H-indolia.

Osa C: 1-([1,1'-bifenyyli]-3-yylimetyyli)-2-metyy-10 li-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmis tus 1-( [1,1' -bifenyyli]-3-yylimetyyli)-4-hydroksi-2-metyyli-lH-indolia (1,03 g, 3,3 mmol) alkyloitiin käsittelemällä 0,31 ml:11a (3,3 mmol) metyylibromiasetaattia ja 15 132 mg: 11a (3,3 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä DMF:ssa esi merkissä 1, osassa E kuvatulla tavalla. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAC/heksaanilla, jolloin saatiin 1,0 g (79 % saanto) 1 - ( [1,1' -bifenyyli] -3-yylimetyyli )-2-metyyli-lH-indol-4-20 yylijoksi]etikkahappometyyliesteriä, 99 - 102 eC.

Analyysi C25H23N03:lie: *; Lasketut arvot: C, 77,90; H, 6,01; N, 3,63

Saadut arvot: C, 77,61; H, 6,09; N, 3,62.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bi- • · ! 25 fenyyli]-3-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] - , , etikkahappometyyliesterin valmistus » ·

Oksalyylikloridia (0,23 ml, 2,6 mmol) lisättiin 1,0 g:aan (2,6 mmol) 1-([1,1'-bifenyyli]-3-yylimetyyli)-2-me-tyyli-1H-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä 15 30 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin 1,3 tun- ! tia. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa, jäännös liuo tettiin uudelleen 15 ml:aan metyleenikloridia ja ammonia-kin annettiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan, sekoitet- » tiin 0,25 tuntia ja väkevöitiin. Jäännöstä sekoitettiin 35 EtOAc/veden kanssa ja liukenematon aine suodatettiin, joi- t - * 1 1 4793 36 loin saatiin 300 mg [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli )-l-([1,1' -bifenyyli]-3-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä. EtOAc-kerros erotettiin suodoksesta, se pestiin suolaliuoksella, kuivattiin 5 (MgS04) ja väkevöitiin. Jäännös kromatografoitiin silika- geelillä, eluoiden EtOAc:lla, jolloin saatiin vielä 671 mg [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( [1,1' -bifenyyli] -3-yyli-metyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyy-liesteriä, s.p. 175 - 179 °C. Tuotteen kokonaissaanto oli 10 82 %.

Analyys i C27H24N205:lle:

Lasketut arvot: C, 71,04; H, 5,30; N, 6,14

Saadut arvot: C, 71,30; H, 5,41; N, 6,35.

Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-([l,l'-bi-15 fenyyli] -3-yylimetyyli) -2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi] - etikkahapon valmistus Käyttäen esimerkissä 2, osassa E kuvattua menetelmää 956 mg (2,1 mmol) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-([1,1'-bifenyyli]-3-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-20 yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä hydrolysoitiin 10 ml:ssa 1 N Na0H:a ja 20 ml:ssa MeOH:a, jolloin saatiin 403 mg (41 % saanto) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-'j bifenyyli] -3-yylimetyyli )-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi] - etikkahappoa, natriumsuolaa, s.p. >265 °C.

; 25 Analyysi C26H21N205Na: lie: »

Lasketut arvot: C, 67,24; H, 4,56; N, 6,03

Saadut arvot: C, 67,20; H, 4,58; N, 6,03.

Lisäksi saatiin 346 mg (37 % saanto) [[3—(2-amino- 1,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli]-3-yylimetyyli)-2-30 metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, s.p. 236 - 238 °C.

Analyysi C26H22N205:lie:

Lasketut arvot: C, 70,58; H, 5,01; N, 6,33

Saadut arvot: C, 70,58; H, 5,25; N, 6,11.

» > 114793 37

Esimerkki 5 [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( [1,1' -bifenyyli]-4-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: 5 HO. O NH2 \\ 0 \ /

I X

yv\ 10 -ch3

Osa Ä: 1-([1,1'-bifenyyli]-4-yylimetyyli)-4-metok-si-2-metyyli-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa C esitettyä menetel-20 mää 805 mg (5 mmol) 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia saatettiin reagoimaan 200 mg (5 mmol) kanssa 60 % NaH/mineraa-: liöljyä ja sitten 1,0 g:n (5 mmol) kanssa 4-(kloorimetyy- . li)bifenyylin kanssa DMF:ssa, jolloin saatiin silikagee- lillä kromatografoinnin jälkeen (eluoiden 20 % EtOAc/-: 25 heksaanilla) 1,3 g (80 % saanto) 1-([1,1'-bifenyyli]-4- yylimetyyli)-4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia, s.p. 118 -: 123 °C.

• ’ Analyysi C23H21NO: 1 le:

Lasketut arvot: C, 84,37; H, 6,46; N, 4,27 30 Saadut arvot: C, 84,66; H, 6,62; N, 4,00.

Osa B: 1-( [1,1' -bifenyyli] -4-yylimetyyli) -4-hydrok-si-2-metyyli-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetelmää 1,3 g (4,0 mmol) 1-([1,1’-bifenyyli]-4-yylimetyyli)-,· 35 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia O-demetyloitiin käsittele- 114793 38 mällä 16 ml:lla 1 M BBr3/CH2Cl2:ta, jolloin saatiin 970 mg (77 % saanto) käsittelemätöntä 1-([1,1'-bifenyyli]-4-yyli-metyyli)-4-hydroksi-2-metyy1i-ΙΗ-indolia.

Osa C: 1-( [1, 11 -bifenyyli]-4-yylimetyyli)-2-metyy-5 li-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmis tus Käyttäen esimerkissä 1, osassa E kuvattua menetelmää 1-([1,1'-bifenyyli]-3-yylimetyyli)-4-hydroksi-2-me-tyyli-lH-indolia (970 mg, 3,1 mmol) käsiteltiin 241 mg:11a 10 (3,1 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä ja sitten 0,29 ml:11a (3,1 mmol) metyylibromiasetaattia. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAC/-heksaanilla, jolloin saatiin 747 mg (63 % saanto) 1 - ( [1,1’ -bifenyyli] -4-yylimetyyli ) -2-metyyli-lH-indol-4-15 yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, 164 - 167 °C.

Analyysi C25H23N03:lle:

Lasketut arvot: C, 77,90; H, 6,01; N, 3,63

Saadut arvot: C, 78,83; H, 6,10; N, 3,56.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bi-20 fenyyli] -4-yylimetyyli) -2-metyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] - etikkahappometyyliesterin valmistus

Oksalyylikloridia (0,17 ml, 1,9 mmol) lisättiin 747 mg:aan (2,6 mmol) 1-([1,1'-bifenyyli]-4-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä 15 » | 25 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin 1,3 tun tia. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa, jäännös liuotettiin uudelleen 15 ml:aan metyleenikloridia ja ammoniakin annettiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan, sekoitettiin 0,25 tuntia ja väkevöitiin. Jäännöstä sekoitettiin 30 EtOAc/veden kanssa ja liukenematon aine suodatettiin, jol-loin saatiin 818 mg (94 % saanto) [ [3—(2-amino-l, 2-diok-, soetyyli )-1-([1,1'-bifenyyli]-4-yylimetyyli)-2-metyyli- lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, 215 -217 °C.

114793 39

Analyysi C27H24N205: lie:

Lasketut arvot: C, 71,04; H, 5,30; N, 6,14

Saadut arvot: C, 71,32; H, 5,43; N, 6,33.

Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bi-5 fenyyli] -4-yylimetyyli) -2-metyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] -etikkahapon valmistus Käyttäen esimerkissä 2, osassa E kuvattua menetelmää 803 mg (1,8 mmol) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-([1,1'-bifenyyli]-4-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-10 yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä hydrolysoitiin 10 ml:ssa 1 N NaOH:a ja 20 ml:ssa MeOHza, jolloin saatiin 614 mg (74 % saanto) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-([l,l’-bifenyyli] -4-yylimetyyli )-2-metyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] -etikkahappoa, natriumsuolaa, s.p. >265 °C.

15 Analyysi C26H21N205Na: lie:

Lasketut arvot: C, 67,24; H, 4,56; N, 6,03

Saadut arvot: C, 67,48; H, 4,62; N, 6,14.

Lisäksi saatiin 35 mg (4 % saanto) [[3-(2-amino- 1,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli]-4-yylimetyyli )-2-20 metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, s.p. 228 -232 °C.

·’: Analyysi C26H22N205: lie: f. Lasketut arvot: C, 70,58; H, 5,01; N, 6,33

Saadut arvot: C, 70,54; H, 5,08; N, 6,14.

25 Esimerkki 6 [ [3— ( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( - [2,6-dikloori-fenyyli)metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkaha-pon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: » * 40 1 1 4793 Η(λ O, ΝΗ2 τχκ rVA 0 y-ch3 15 Osa A: 1-[(2,6-dikloorifenyyli)metyyli]-4-metoksi- 2-metyyli-lH-indolin valmistus 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia (805 mg, 5 mmol) lisättiin seokseen, jossa oli 160 mg (4 mmol) 60 % NaH/mi-neraaliöljyä (joka oli pesty heksaanilla ennen DMF:n li-20 säämistä) 10 ml:ssa DMF:a, ja kun oli sekoitettu 0,67 tuntia, lisättiin 782 mg (4 mmol) alfa-2,6-triklooritoluee-nia. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa viisi tuntia, se laimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiliuos pestiin suolaliuoksella, kuivattiin 25 (MgS04) ja kun se oli väkevöity alennetussa paineessa, jää nnös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 1,08 g (84 % saanto) 1- [(2,6-dikloorifenyyli )metyyli]-4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia, joka sulaa 154 - 157 °C:ssa.

; 30 Analyysi C17H15C12N0:lie:

Lasketut arvot: C, 63,77; H, 4,72; N, 4,37 ·, Saadut arvot: C, 67,16; H, 5,14; N, 4,19.

Osa B: 1-[ (2,6-dikloorifenyyli)metyyli]-4-hydroksi- 2- metyyli-lH-indolin valmistus .· 35 Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetel- , · mää 1,08 g (3,38 mmol) 1-[(2,6-dikloorifenyyli)metyyli]- 114793 41 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia O-demetyloitiin käsittelemällä 13,5 mlrlla 1 M BBr3/CH2Cl2:ta, jolloin saatiin 862 mg (83 % saanto)1-[(2,6-dikloorifenyyli)metyyli]-4-hydroksi-2-metyyli-lH-indolia sen jälkeen, kun oli kromatografoitu 5 silikageelillä (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla).

Analyysi C16H13C12N0: lie:

Lasketut arvot: C, 62,76; H, 4,28; N, 4,57

Saadut arvot: C, 63,03; H, 4,45; N, 4,56.

Osa C: [[l-[(2,6-dikloorifenyyli)metyyli]-2-metyy-10 li-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmis tus Käyttäen esimerkissä 1, osassa E kuvattua menetel-määl-[(2,6-dikloorifenyyli)metyyli]-4-hydroks i-2-metyyli-lH-indolia (862 mg, 2,8 mmol) käsiteltiin 112 mg:11a (2,8 15 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä ja sitten 0,29 ml:11a (3,1 mmol) metyylibromiasetaattia. Tuote puhdistettiin kromato-grafoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 411 mg (39 % saanto) [[1-[(2,6-dikloorifenyyli )metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikka-20 happometyyliesteriä, s.p. 168 - 169 °C.

Analyysi C19H17C12N03:lie: ',· Lasketut arvot: C, 60,33; H, 4,53; N, 3,70

Saadut arvot: C, 60,55; H, 4,70; N, 3,75.

Osa D: [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-1-([2,6-di-25 kloorifenyyliJmetyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]- etikkahappometyyliesterin valmistus [ Oksalyylikloridia (0,09 ml, 1,07 mmol) lisättiin 405 mgraan (1,07 mmol) [[l-(2,6-dikloorifenyyli)metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä > 30 10 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin 3,0 tuntia. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa, jäännös liuotettiin uudelleen 15 ml:aan metyleenikloridia ja ammoniakin annettiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan, se-koitettiin 0,25 tuntia ja väkevöitiin. Jäännöstä sekoitet-35 tiin EtOAc/veden kanssa. EtOAc-kerros erotettiin, pestiin > · 114 7ί 3 42 suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden EtOAc:11a, jolloin saatiin 426 mg (88 % saanto) [ [3—(2-amino-l, 2-diok-soetyyli )-1-( [2, 6-dikloorifenyyli )metyyli] -2-metyyli-lH-5 indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, s.p. 200 -202 °C.

Analyysi C21H18C12N205:lie:

Lasketut arvot: C, 56,14; H, 4,04; N, 6,24

Saadut arvot: C, 56,39; H, 4,15; N, 6,45.

10 Osa E: [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-1-( [2,6-di kloorifenyyli )metyyli] -2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]-etikkahapon valmistus

Seosta, jossa oli 420 mg (0,94 mmol) [[3-(2-amino- 1,2-dioksoetyyli )-1-( [2,6-dikloorifenyyli )metyyli] -2-me-15 tyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä,5 ml 1 N NaOH;a ja 15 ml Me0H:a, kuumennettiin palautusjäähdy-tyslämpötilassa 0,17 tuntia, se jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja sitä sekoitettiin 0,5 tuntia. Lisättiin etyyliasetaattia ja vettä, vesikerros erotettiin, tehtiin hap-20 pamaksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a, ja seos uutettiin etyyliasetaatilla kaksi kertaa. Osa, joka ei *; liuennut, suodatettiin. Suodos kuivattiin (MgS04) ja väke- vöitiin. Jäljellä oleva kiinteä aine pestiin pienellä ti-*. lavuudella eetteri/metyleenikloridia ja liukenematon aine 25 suodatettiin ja yhdistettiin edellä suodatetun aineen kanssa, jolloin saatiin 251 mg (86 % saanto) [[3-(2-ami-no-1,2-dioksoetyyli )-1-( [2,6-dikloorifenyyli )metyyli]-2- * metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, s.p. 236 -239 °C.

30 Analyysi C20H16C12N205: lie: ,· Lasketut arvot: C, 55,19; H, 3,70; N, 6,44 *. Saadut arvot: C, 55,34; H, 3,72; N, 6,35.

·. Esimerkki 7 [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli ) -1- [4 - ( f luorif enyy- * 35 li)metyylil]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon • valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: 114793 43 HO. O NH2

If 9 \ / 1 Λ\ 5 ΓΤΛ y-ch3

<Sssii^NsF

Osa A: 1-[(4-fluorifenyyli)metyyli]-4-metoksi-2-15 metyyli-lH-indolin valmistus 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia (805 mg, 5 mmol) lisättiin seokseen, jossa oli 200 mg (5 mmol) 60 % NaH/mi-neraaliöljyä (joka oli pesty heksaanilla ennen DMF:n lisäämistä) 10 mlrssa DMF:a, ja kun oli sekoitettu 0,5 tun-20 tia, lisättiin 0,6 ml (5 mmol) 4-fluoribentsyylikloridia. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 18 tuntia, se laimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyy- « *. liasetaattiliuos pestiin suolaliuoksella, kuivattiin • ·. (MgS04) ja kun se oli väkevöity alennetussa paineessa, 25 jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 %

EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 1,1 g (84 % saanto) 1-[(4-fluorifenyyli)metyyli]-4-metoksi-2-metyyli-lH-indo-lia, joka suli 104 - 108 °C:ssa.

Analyysi C17H16FNO:lie: 30 Lasketut arvot: C, 75,82; H, 5,99; N, 5,20 .·* Saadut arvot: C, 73,82; H, 5,95; N, 5,01.

Osa B: 1-[ (4-fluorifenyyli)metyyli]-4-hydroksi-2-metyyli-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetel-35 mää 1,1 g (4,1 mmol) 1-[(4-fluorifenyyli)metyyli]-4-metok- 114793 44 si-2-metyyli-lH-indolia O-demetyloitiin käsittelemällä 16,4 ml:11a 1 M BBr3/CH2Cl2: ta, jolloin saatiin 881 mg (84 % saanto) käsittelemätöntä 1-[(4-fluorifenyyli)metyyli]-4-hydroksi-2-metyyli-lH-indolia.

5 Osa C: [[l-[(4-fluorifenyyli)metyyli]-2-metyyli- lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa E kuvattua menetelmää l-[(4-fluorifenyyli)metyyli]-4-hydroksi-2-metyyli-lH-indolia (881 mg, 3,45 mmol) käsiteltiin 138 mg:11a (3,45 10 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä ja sitten 0,33 ml:11a (3,45 mmol) metyylibromiasetaattia. Tuote puhdistettiin kromato-grafoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanil-la, jolloin saatiin 914 mg (81 % saanto) [[1-[(4-fluorifenyyli )metyyli] -2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahap-15 pometyyliesteriä, s.p. 92 - 98 °C.

Analyysi C19H18FN03: lie:

Lasketut arvot: C, 69,71; H, 5,54; N, 4,28 Saadut arvot: C, 70,83; H, 6,00; N, 4,08.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([4-fluori-20 f enyyli) metyyli ] -2-metyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] etikkahap pometyyliesterin valmistus

Oksalyylikloridia (0,24 ml, 2,6 mmol) lisättiin 914 4 mg:aan (2,8 mmol) [[l-(4-fluorifenyyli)metyyli]-2-metyy-li-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä 15 , 25 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin 1,3 tun- tia. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa, jäännös liuo- » tettiin uudelleen 15 ml:aan metyleenikloridia ja ammonia- « kin annettiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan, sekoitettiin 0,25 tuntia ja väkevöitiin. Jäännöstä sekoitettiin - · 30 EtOAc/veden kanssa ja liukenematon aine suodatettiin, jol-.· loin saatiin 25 mg (4 % saanto) [[3-(2-amino-l,2-diokso- etyyli )-1-( [4-fluorifenyyli )metyyli] -2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä. EtOAc-kerros suo- * doksesta erotettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin .* 35 (MgS04) ja väkevöitiin. Jäännös kromatografoitiin silika- 114793 45 geelillä, eluoiden EtOAcilla, jolloin saatiin vielä 757 mg [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([4-fluorifenyyli)metyy-li] -2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyylieste-riä, s.p. 178 - 180 °C. Tuotteen kokonaissaanto oli 70 %.

5 Analyysi C21HigFN205:lie:

Lasketut arvot: C, 63,31; H, 5,81; N, 7,03 Saadut arvot: C, 62,31; H, 4,78; N, 6,85.

Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-([4-fluori-f enyy1i)metyyli]-2-metyy1i-1H-indol-4-yyli]oksi]et ikkaha-10 pon valmistus

Seosta, jossa oli 767 mg (1,9 mmol) [[3-(2-amino- 1,2-dioksoetyyli)-1-([4-fluorifenyyli)metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, 10 ml 1 N NaOH:a ja 30 ml MeOH:a, kuumennettiin palautusjäätidytys-15 lämpötilassa 0,67 tuntia, se jäähdytettiin huoneenlämpöti laan ja sitä sekoitettiin yksi tuntia. Lisättiin etyyliasetaattia ja vettä, vesikerros erotettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a, ja seos uutettiin etyyliasetaatilla kaksi kertaa. Yhdistetyt etyy-20 liasetaattiuutteet kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin. Jäl jellä oleva kiinteä aine pestiin pienellä tilavuudella etyyliasetaattia, jolloin saatiin 593 mg (81 % saanto) [[3-(2-amino-1,2-dioksoetyyli)-1-([4-fluorifenyyli)metyy-\ li]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, s.p.

j 25 244 - 247 °C.

Analyysi C20H17FN2O5:lle:

Lasketut arvot: C, 62,50; H, 4,46; N, 7,29 Saadut arvot: C, 62,40; H, 4,57; N, 7,00.

Esimerkki 8 30 [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-2-metyyli-l-[(1-naf- talenyyli)metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: 114793 46 H CL Ov NH2

Tl H

5 0 ίΤνΛ 0 /—CH3 15

Osa A: 4-metoksi-2-metyyli-l-[(1-naftalenyyli)me-tyyli]-lH-indolin valmistus 4-metoksi-2-metyyli-lH-indolia (644 mg, 4 mmol) 20 liuotetiin 10 ml:aan DMF:a ja 160 mg (4 mmol) 60 % NaH/mi-neraaliöljyä lisättiin. 0,67 tunnin kuluttua lisättiin 707 mg (4 mmol) l-(kloorimetyyli)naftaleenia. Viiden tunnin * *: kuluttua seos laimennettiin vedellä ja uutettiin kahdesti *. etyyliasetaatilla. Yhdistetyt etyyliasetaatit pestiin suo- ; 25 laliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin alennetus sa paineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 1,17 g (97 % saanto) 4-metoksi-2-metyyli-l-[(1-naftalenyyli)me-tyyli]-lH-indolia.

30 Analyysi C21H19N0:lie: 1 Lasketut arvot: C, 83,69; H, 6,35; N, 4,65 . Saadut arvot: C, 83,71; H, 6,45; N, 4,41.

Osa B: 4-hydroksi-2-metyyli-l-[(1-naftalenyyli)me- i tyyli]-lH-indolin valmistus 35 Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetel- ; mää 1,17 g (3,9 mmol) 4-metoksi-2-metyyli-l-[(1-naftale- 114793 47 nyyli )metyyli]-lH-indolia O-demetelyloitiin käsittelemällä sitä 15,6 ml:11a 1 M BBr3/CH2Cl2:ta, jolloin saatiin ainetta, joka kromatografoitiin silikageelillä (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, sitten 50 % EtOAc/heksaanilla), jolloin 5 saatiin 796 mg (71 % saanto) 4-hydroksi-2-metyyli-l-[(1-naftalenyyli)metyyli]-lH-indolia.

Osa C: [[2-metyyli-l-[(1-naftalenyyli)metyyli]-1H-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa E kuvattua menetel-10 mää 4-hydroksi-2-metyyli-l-[(1-naftalenyyli)metyyli]-1H-indolia (796 mg, 2,8 mmol) käsiteltiin 112 mg: 11a (2,8 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä ja sitten 0,27 ml:11a (0,27 mmol) metyylibromiasetaattia. Tuote puhdistettiin kromato-grafoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanil-15 la, jolloin saatiin 450 mg (45 % saanto) [ [2-metyyli-l-[(1-naftalenyyli)metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahap-pometyyliesteriä, 167 - 171 °C.

Analyysi C23H21N03:lie:

Lasketut arvot: C, 78,86; H, 5,89; N, 3,90 20 Saadut arvot: C, 77,95; H, 6,25; N, 3,72.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-: [(1-naftalenyyli)metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahap pometyyliesterin valmistus . Käyttäen esimerkissä 1, osassa F kuvattua menetel- 25 mää 445 mg (1,24 mmol) [[2-metyyli-l-[(1-naftalenyyliMetyyli] -lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriäsaa-tettiin ensin reagoimaan 0,11 ml:n (1,24 mmol) kanssa ok-salyylikloridia ja sitten ylimäärän kanssa ammoniakkia, jolloin saatiin valkoista kiinteää ainetta. Tätä sekoitet- > · ! 30 tiin etyyliasetaatin ja veden kanssa. EtOAc pestiin suola liuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös kromatgrafoitiin silikageelillä, eluoi-*·. den etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 409 mg [[3-(2-ami- ’’ no-1,2-dioksoetyyli )-2-metyyli-l- [ (1-naftalenyyli )metyy- * i 114793 48 li]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, s.p.

188 - 190 °C.

Analyysi C25H22N205: lie:

Lasketut arvot: C, 69,76; H, 5,15; N, 6,51 5 Saadut arvot: C, 69,94; H, 5,28; N, 6,55.

Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-[ (l-naftalenyyli)metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus

Seosta, jossa oli 402 mg (0,93 mmol) [[3—(2-amino- 10 1,2-dioksoetyyli )-2-metyyli-l-[ (1-naftalenyyli )metyyli] - lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, 5 ml 1 N NaOH:a ja 15 ml Me0H:a, kuumennettiin palautusjäähdytys-lämpötilassa 0,5 tuntia, sitä sekoitettiin huoneenlämpötilassa 0,5 tuntia ja se väkevöitiin alennetussa paineessa.

15 Jäännöstä sekoitettiin eetteri/metyleenikloridin kanssa ja se suodatettiin, jolloin saatiin 284 mg (73 % saanto) [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli) -2-metyyli-l- [ (1-naf talenyy-li)metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, s.p. 233 -235 °C.

20 Analyysi C24H20N2O5: lie:

Lasketut arvot: C, 69,22; H, 4,84; N, 6,73

Saadut arvot: C, 68,98 H, 5,01; N, 6,36.

Esimerkki 9 [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-(fenyyli-, 25 metyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus, yh disteen, jonka kaava on: 114793 49 ho. \ /¾ ΤΙ Η 5 0 0 ^-ch2-ch3

Osa A: 2-etyyli-4-metoksi-lH-indolin valmistus 15 Liuosta, jossa oli 140 ml (0,18 mol) 1,3 M sek-bu- tyylilitiumia sykloheksaanissa, lisättiin hitaasti N-tert-butoksikarbonyyli-3-metoksi-2-metyylianiliiniin (21,3 g, 0,09 mol), joka oli 250 ml:ssa THF:a, pitäen lämpötila alle -40 °C:ssa hiilihappojää-etanolihauteen avulla. Haude 20 poistettiin ja lämpötilan annettiin kohota 0 °C:seen, ja sitten haude laitettiin takaisin. Kun lämpötila oli laske-nut -60 °C:seen, lisättiin tipoittain 18,5 g (0,18 mol) N-metoksi-N-metyylipropanamidia yhtä suuressa tilavuudessa >, THF:a. Reaktioseosta sekoitettiin viisi minuuttia, jäähdy- ! 25 tyshaude poistettiin ja sekoitettiin vielä 18 tuntia. Se , kaadettiin sitten seokseen, jossa oli 300 ml eetteriä ja 400 ml 0,5 N HCl:a. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja väkevöi-tiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 25,5 g käsit-·’ 30 telemätöntä l-(2-(tert-butoksikarbonyyliamino)-6-metoksi- fenyyli)-6-butanonia. Tämä seos liuotettiin 250 ml:aan metyleenikloridia ja 50 ml:aan trifluorietikkahappoa, ja tätä kokonaisuutta sekoitettiin 17 tuntia. Seos väkevöi-tiin alennetussa paineessa ja etyyliasetaattia ja vettä 35 lisättiin jäljellä olevaan öljyyn. Etyyliaetaatti erotet- 114793 50 tiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väke-vöitiin. Jäännös kromatografoitiin kolme kertaa silika-geelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 13,9 g 2-etyyli-4-metoksi-lH-indolia.

5 Analyysi CnH13NO:lie:

Lasketut arvot: C, 75,40; H, 7,48; N, 7,99 Saadut arvot: C, 74,41 H, 7,64; N, 7,97.

Osa B: 2-etyyli-4-metoksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolin valmistus 10 2-etyyli-4-metoksi-lH-indolia (4,2 g, 24 mmol) liuotettiin 30 ml:aan DMF:a ja lisättiin 960 mg:aan (24 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä. 1,5 tunnin kuluttua lisättiin 2,9 ml (24 mmol) bentsyylibromidia. Neljän tunnin kuluttua seos laimennettiin vedellä ja uutettiin kaksi 15 kertaa etyyliasetaatilla. Yhdistetty etyyliasetaatti pes tiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin alennetussa painessa. Jäännös kromatografoitiin silikagee-lillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 3,1 g (49 % saanto) 2-etyyli-4-metoksi-l-(fenyylimetyyli)-20 lH-indolia.

Osa C: 2-etyyli-4-hydroksi-l-(fenyylimetyyli)-1H-indolin valmistus ; Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetel mää 3,1 g (11,7 mmol) 2-etyyli-4-metoksi-l-(fenyylimetyy-: 25 li)-lH-indolia O-demetelyloitiin käsittelemällä sitä 48,6 ml:11a 1 M BBr3/CH2Cl2:ta, jolloin saatiin ainetta, joka kromatografoitiin silikageelillä (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla), jolloin saatiin 1,58 g (54 % saanto) 2-etyyli-4-hydroksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia, s.p. 86 - 90 °C.

30 Analyysi C17H17NO: lie:

Lasketut arvot: C, 81,24; H, 6,82; N, 5,57 Saadut arvot: C, 81,09 H, 6,92; N, 5,41.

Osa D: [[2-etyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus ,· 35 Käyttäen esimerkissä 1, osassa E kuvattua menetel- ·, · mää 2-etyyli-4-hydroksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia 114793 51 (1,56 g, 6,2 mmol) käsiteltiin 60 % NaH/mineraaliöljyä ja sitten 0,6 ml:11a (6,2 mmol) metyylibromiasetaattia. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla silikageelillä, eluoi-den 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 1,37 g (69 % 5 saanto) [[2-etyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]ok- si]etikkahappometyyliesteriä, 89 - 92 °C.

Analyysi C20H21N03:lie:

Lasketut arvot: C, 74,28 H, 6,55; N, 4,33

Saadut arvot: C, 74,03 H, 6,49; N, 4,60.

10 Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l- (fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyli-esterin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa F kuvattua menetelmää 1,36 g (4,2 mmol) [[2-etyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-15 indol-4-yylijoksi]etikkahappometyyliesteriä saatettiin ensin reagoimaan 0,4 ml:n (4,2 mmol) kanssa oksalyyliklo-ridia ja sitten ylimäärän kanssa ammoniakkia, jolloin saatiin valkoista kiinteää ainetta. Tätä sekoitettiin etyyliasetaatin kanssa ja liukenematon aine erotettiin ja kui-20 vattiin, jolloin saatiin 1,37 g seosta, jossa oli [[3-(2-amino-1,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä ja ammonium-kloridia. Tämä seos suli 172 - 187 °C:ssa.

Osa F: [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-25 (fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmis tus / Seosta, jossa oli [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)- » 2-etyyli-l-( fenyylimetyyli )-lH-indol-4-yyli]oksi]etikka-happometyyliesteriä, 10 ml IN NaOH:a ja 30 ml MeOH:a, 30 kuumennettiin palautusjäähdytyslämpötilassa 0,5 tuntia, sitä sekoitettiin huoneenlämpötilassa 0,5 tuntia ja se väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen etyyliasetaattiin ja veteen, vesikerros erotettiin ja '!* tehtiin happamaksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a.

35 Saostuma suodatettiin ja pestiin etyyliasetaatilla, joi- 114793 52 loin saatiin 559 mg (74 % saanto) [[3-(2-amino-l,2-diokso-etyyli )-2-etyyli-l-( fenyylimetyyli )-lH-indol-4-yyli]oksi] -etikkahappoa, s.p. 230 - 234 °C.

Analyysi C21H20N205: lie: 5 Lasketut arvot: C, 65,96 H, 5,80; N, 7,33

Saadut arvot: C, 66,95 H, 5,55; N, 6,99.

Esimerkki 10 [ [3- (2-amino-l, 2-dioksoetyyli) -l-[ (3-kloorifenyy-li)metyyli]-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahaponval-10 mistus, yhdisteen, jonka kaava on: HCL ,1®2

il H

15 0 0 ^-ch2-ch3 20 : Cl : 25

Osa A: l-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-4-me-toksi-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa C kuvattua menetelmää 1,61 g (9,2 mmol) 2-etyyli-4-metoksi-lH-indolia saa-30 tettiin reagoimaan 368 mg:n (9,2 mmol) kanssa 60 % NaH/mi-neraaliöljyä ja sitten 1,2 ml:n (9,2 mmol) kanssa 3-kloo-ribentsyylikloridia 10 ml:ssa DMF:a, jolloin saatiin 1,34 g (49 % saanto) 1-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-4-metoksi-lH-indolia silikageelillä kromatografoinnin jäl-: 35 keen (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla).

114793 53

Osa B: 1-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-4-hyd-roksi-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetelmää 1,34 g (4,5 mmol) 1-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyy-5 li-4-hydraoksi-lH-indolia O-demetelyloitiin käyttäen 48,6 ml 1 M BBr3/CH2Cl2:ta, jolloin saatiin silikageelilä kroma-tografoinnin jälkeen (eluoiden 5 % MeOH/EtOAc:11a) 512 mg (40 % saanto) 1-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-4-hyd-roksi-lH-indolia.

10 Osa C: [[1-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-lH- indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa E kuvattua menetelmää 1-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-4-hydroksi-lH-indolia (512 mg, 1,8 mmol) käsiteltiin 72 mg:11a (1,8 15 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä ja sitten 0,17 ml:11a (1,8 mmol) metyylibromiasetaattia. Tuote puhdistettiin kromato-grafoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksäänillä, jolloin saatiin 418 mg (65 % saanto) [[l-[(3-kloorifenyyli )metyyli]-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahap-20 pometyyliesteriä, s.p. 85 - 90 °C.

Analyysi C20H20ClNO3:lie: : Lasketut arvot: C, 67,13 H, 5,63; N, 3,91

Saadut arvot: C, 64,41 H, 5,63; N, 3,10.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-[(3-kloori-25 fenyyli)metyyli]-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahap pometyyliesterin valmistus » ' Käyttäen esimerkissä 1, osassa F kuvattua menetel mää 410 mg (1,15 mmol) [[l-[(3-kloorifenyyli)metyyli]-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriäsaa-30 tettiin reagoimaan ensin 0,1 ml:n (1,15 mmol) kanssa oksa-lyylikloridia ja sitten ylimäärän kanssa ammoniakkia, jol-loin saatiin valkoista kiinteää ainetta. Tätä sekoitettiin etyyliasetaatin kanssa ja liukenematon aine erotet-tiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 424 mg seosta, jossa 35 oli[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-[(3-kloorifenyyli)me- 114793 54 tyyli] -2-etyyli-lH-indol-4-yyli ] oksi] etikkahappometyylies-teriä ja ammoniumkloridia. Seos suli 173 - 185 °C:ssa.

Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-[(3-kloori-fenyyl i) metyyli ] - 2-etyy li - 1H- indol-4-yyl i ] oks i ] et ikkahapon 5 valmistus Käyttäen esimerkissä 2, osassa E kuvattua menetelmää 418 mg (1 mmol) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-[(3-kloorifenyyli )metyyli] -2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oks±]etik-kahappometyyliesteriä hydrolysoitiin 5 ml:ssa 1 N NaOH:a 10 ja 15 ml:ssa MeOH:a, jolloin saatiin 268 mg (61 % saanto) [[3 — (2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-[(3-kloorifenyyli)metyy-li]-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, natrium-suolaa, s.p. >265 °C.

Analyysi C21H18ClN205Na: lie: 15 Lasketut arvot: C, 57,74; H, 4,15; N, 6,41

Saadut arvot: C, 58,36; H, 4,61; N, 5,57.

Lisäksi saatiin 60 mg (14 % saanto) [[3-(2-amino-1,2-dioksoetyyli ) — !—[(3-kloorifenyyli )metyyli] -2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, s.p. 210 - 212 °C.

20 Analyysi C21H19ClN205Na: lie:

Lasketut arvot: C, 60,88; H, 4,61; N, 6,75 Saadut arvot: C, 60,53; H, 4,78; N, 6,59.

Esimerkki 11 ·. [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-1-( [1,1' -bifenyyli]- 25 2-yylimetyyli )-2-etyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] etikkahapon . valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: 114793 55 HO. °\\ /1^2 II 0 \ / 5 rV\_0 y-ch2-ch3 ίο 15

Osa A: 1-([1,1' -bifenyyli] -2-yylimetyyli) -2-etyyli-4-metoksi-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa C kuvattua menetelmää 1,75 g (10 mmol) 2-etyyli-4-metoksi-lH-indolia saatet-20 tiin reagoimaan 400 mg:n (10 mmol) kanssa 60 % NaH/mine-raaliöljyä ja sitten 1,83 ml:n (10 mmol) kanssa 2-(bromi-metyyli)bifenyyliä, jolloin saatiin silikageelillä kroma-tografoinnin jälkeen (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla) ·. 1,25 g (37 % saanto) 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)- 25 2-etyyli-4-metoksi-lH-indolia öljynä.

Osa B: 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyyli-4-hydroksi-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetelmää 911 mg (2,6 mmol) 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-30 2-etyyli-4-metoksi-lH-indolia O-demetelyloitiin käsittele- ,· mällä sitä 10 ml:11a 1 M BBr3/CH2Cl2:ta. Käsittelemätön \ tuote kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 %

EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 590 mg (69 % saanto) 1 — ( [1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyyli-4-hydroksi-' 35 lH-indolia öljynä.

114793 56

Osa C: [[1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyy-1i-1H-indol-4-yy1i]oksi]etikkahappometyy1iesterin valmi s-tus l-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyyli-4-hyd-5 roksi-lH-indolia (911 mg, 2,8 mmol) alkyloitiin käsittelemällä sitä 0,26 ml:11a (2,8 mmol) metyylibromiasetaattia ja 111 mg mg:11a (2,8 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä DMF:ssa esimerkissä 1, osassa E kuvatulla tavalla. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 10 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 655 mg (59 % saanto) [[1—([1,1’-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyyli-lH-in- dol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli] -2-yylimetyyli)-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]-15 etikkahappometyyliesterin valmistus

Oksalyylikloridia (0,12 ml, 1,4 mmol) lisättiin 555 mg:aan (1,4 mmol) [[1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli )-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, joka oli 10 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitet-20 tiin 2,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Seos väkevöitin alen netussa paineessa, jäännös liuotettiin uudelleen 10 ml:aan metyleenikloridia, vedettömän ammoniakin annettiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan ja saostuma suodatettiin. Tämä saostuma kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 25 EtOAc:lla, jolloin saatiin 605 mg (92 % saanto) [[3—(2— amino-1,2-dioksoetyyli )-1-( [1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli )-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä.

Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bi-30 fenyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]- , ·’ etikkahapon valmistus

Seosta, jossa oli 600 mg (1,3 mmol) [ [3-(2-amino-1,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-etyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä 8 35 ml:ssa 1 N NaOH:a ja 20 ml:ssa MeOH:a, kuumennettiin pa- 114793 57 lautusjäähdytyslämpötilassa 0,67 tuntia, se väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännös otettiin talteen EtOAc/-veteen. Vesikerros erotettiin, tehtiin happamaksi pH-ar-voon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a ja uutettiin EtOAc:lla.

5 EtOAc-liuos kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin ja jäännös kiteytettiin MeOHrsta, jolloin saatiin 352 mg (59 % saanto) t C3 — (2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli ) -2-etyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] etikkahappoa, s.p. 211 - 214 °C.

10 Analyysi C27H24N205:lie:

Lasketut arvot: C, 71,04; H, 5,30; N, 6,14

Saadut arvot: C, 71,26; H, 5,54; N, 5,98.

Esimerkki 12 [ [3 — ( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-1-( [1,1' -bifenyyli] -15 2 -yy 1 imetyy 1 i) - 2 -propyy 1 i - 1H - indol - 4 -yy 1 i ] oks i ] e t ikkahapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: O NH2

” Ti TT

, ΓτΛ- y-CH2-ch2-ch3 * 25 30 *

Osa A: 4-metoksi-2-propyyli-lH-indolin valmistus

Liuosta, jossa oli 50 ml (65 mmol) 1,3 M sek-bu-35 tyylilitiumia sykloheksaanissa, lisättiin hitaasti N-tert- 114793 58 butoksikarbonyyli-3-metoksi-2-metyylianiliiniin (7,7 g, 32,5 mmol), joka oli 100 ml:ssa THF:a, pitäen lämpötila alle -40 °C:ssa hiilihappojää-etanolihauteen avulla. Haude poistettiin ja lämpötilan annettiin kohota -10 °C:seen, ja 5 sitten haude laitettiin takaisin. Kun lämpötila oli laskenut -60 °C:seen, lisättiin tipoittain 4,3 g (32,5 mmol) N-metoksi-N-metyylibutanamidia yhtä suuressa tilavuudessa THF:a. Reaktioseosta sekoitettiin yksi tunti, jäähdytys-haude poistettiin ja sekoitettiin vielä 22 tuntia. Se kaa-10 dettiin sitten seokseen, jossa oli 200 ml eetteriä ja 200 ml 0,5 N HCl:a. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja väkevöitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 9,9 g käsittelemätöntä 1- [2-(tert-butoksikarbonyyliamino)-6-metoksifenyyli)-2-15 pentanonia. Tämä seos liuotettiin 100 ml:aan metyleeniklo- ridia ja 20 ml:aan trifluorietikkahappoa, ja tätä kokonaisuutta sekoitettiin yhteensä 23 tuntia. Seos pestiin vedellä, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 2,19 g 4-metoksi- 2- propyyli-lH-indolia öljynä.

Analyysi C1ZH15N0:lie:

Lasketut arvot: C, 76,16; H, 7,99; N, 7,40 ’ Saadut arvot: C, 74,18; H, 8,10; N, 6,51.

! 25 Osa B: 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-4-metok- si-2-propyyli-lH-indolin valmistus i * Käyttäen esimerkissä 1, osassa C kuvattua menetel- t mää 945 mg (5 mmol) 4-metoksi-2-propyyli-lH-indolia saatettiin ensin reagoimaan 200 mg:n (5 mmol) kanssa 60 % 30 NaH/mineraaliöljyä ja sitten 0,92 ml:n (5 mmol) kanssa : 2-(bromimetyyli )bifenyyliä, jolloin saatiin silikageelillä kromatografoinnin jälkeen (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla) 1,16 g (65 % saanto) 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyy-li)-4-metoksi-2-propyyli-lH-indolia öljynä.

114793 59

Osa C: 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli-4-hydrok-si-2-propyyli-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetelmää 1,16 g (3,27 mmol) 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yyl±metyy- 5 li)-4-metoksi-2-propyyli-lH-indolia O-demetelyloitiin kä sittelemällä sitä 13 ml:lla 1 M BBr3/CH2Cl2: ta. Käsittelemätön tuote kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 794 mg (71 % saanto) 1 — ( [1,1' -bifenyyli] -2-yylimetyyli-4-hydroksi-2-propyyli-10 lH-indolia öljynä.

Osa D: [ [1-([1,1'-bifenyyli-2-yylimetyyli)-2-pro-pyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus 1 — ( [1,1' -bifenyyli] -2-yylimetyyli-4-hydroksi-2-pro-15 pyyli-lH-indolia (794 mg, 2,8 mmol) alkyloitiin käsittelemällä sitä 0,22 ml:11a (2,3 mmol) metyylibromiasetaattia ja 93 mg mgrlla (2,3 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä DMFrssa esimerkissä 1, osassa E kuvatulla tavalla. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % 20 EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 533 mg (56 % saanto) [ [l-( [1,1' -bifenyyli-2-yylimetyyli )-2-propyyli-lH-indol-4-yylioksi]etikkahappometyyliesteriä.

Osa E: [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-1-( [1,1'-bi-fenyyli]-2-yylimetyyli)-2-propyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]-25 etikkahappometyyliesterin valmistus

Oksalyylikloridia (0,11 g, 1,3 mmol) lisättiin 533 mgraan (1,3 mmol) [[1—([1,1'-bifenyyli-2-yylimetyyli)-2-propyyli-lH-indol-4-yylioksi]etikkahappometyyliesteriä, joka oli 10 mlrssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitet- 30 tiin 2,0 tuntia huoneenlämpötilassa. Seos väkevöitiin alennetussa paineessa, jäännös liuotettiin uudelleen 10 ml:aan metyleenikloridia, vedettömän ammoniakin annettiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan ja seos väkevöitiin alen- » netussa paineessa. Jäännös otettiin talteen EtOAc/veteen, ·’ 35 EtOAc erotettiin, pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin > » 114793 60 (MgS04). Väkevöinnin jälkeen jäännös kromatografoitiin si-likageelillä, eluoiden EtOAc:11a, jolloin saatiin 440 mg (70 % saanto) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-( [1,1'-bi-fenyyli]-2-yylimetyyli)-2-propyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]-5 etikkahappometyyliesteriä.

Osa F: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-l-([l,l'-bi-fenyyli]-2-yylimetyyli)-2-propyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]-etikkahapon valmistus

Seosta, jossa oli 440 mg (0,9 mmol) [[3-(2-amino-10 1,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2- propyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä 5 ml:ssa 1 N NaOH:a ja 15 ml:ssa MeOHra, sekoitettiin 0,75 tuntia, se väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännös otettiin talteen EtOAc/veteen. Vesikerros erotettiin, teh-15 tiin happamaksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a, ja uutettiin EtOAc:11a. EtOAc-liuos kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 374 mg (88 % saanto) [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( [1,1' -bifenyyli] -2-yyli-metyyli)-2-propyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa.

20 Analyysi C28H26N205:lie:

Lasketut arvot: C, 71,47; H, 5,57; N, 5,95 Saadut arvot: C, 69,58; H, 5,65; N, 5,53.

Esimerkki 13 : [ [3— (2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-2-syklopropyyli-l- * 25 (fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmis tus, yhdisteen, jonka kaava on: 114793 61 HCL Ov NH2

TVH

CXv<

Osa A: 2-syklopropyyli-4-metoksi-lH-indolinvalmis- 15 tus Käyttäen esimerkissä 9, osassa A kuvattua menetelmää 100 ml (130 mmol) 1,3 M sek-butyylilitiumia syklohek-saanissa saatettiin reagoimaan N-tert-butoksikarbonyyli- 3-metoksi-2-metyylianiliinin kanssa (7,7 g, 32,5 mmol) 100 20 ml:ssa THF:a ja sitten 8,4 g:n (65 mmol) kanssa N-metoksi-N-metyylisyklopropyylikarboksiamidia, jolloin saatiin käsittelemätöntä [2-(tert-butoksikarbonyyliamino)-6-metoksi-fenyyli]metyylisyklopropyyliketonia. Tästä materiaalista *. saatiin käsittelemällä 20 ml:11a trifluorietikkahappoa 300 25 ml:ssa metyleenikloridia kuusi tuntia, ainetta, joka kro-matografoitiin silikageelillä. Eluoiden gradientilla, joka käsitti tolueenia -> 5 % EtOAc/tolueenia, saatiin 6,4 g (52 % saanto) 2-syklopropyyli-4-metoksi-lH-indolia öljynä.

Analyysi C12H13NO:lie: ; 30 Lasketut arvot: C, 76,98; H, 7,00; N, 7,48 .·’ Saadut arvot: C, 74,33; H, 7,11; N, 6,62.

. Osa B: 2-syklopropyyli-4-metoksi-l-(fenyyliraetyy- li)-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa C kuvattua menetel-35 mää 935 mg (5 mmol) 2-syklopropyyli-4-metoksi-lH-indolia 114793 62 saatettiin reagoimaan 200 mg:n (5 mmol) kanssa 60 % NaH/-mineraaliöljyä ja sitten 0,6 ml:n (5 mmol) kanssa bentsyy-libromidia, jolloin saatiin silikageelillä kromatografoin-nin jälkeen (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla) 630 mg (45 % 5 saanto) 2-syklopropyyli-4-metoksi-l-(fenyylimetyyli )-lH- indolia öljynä.

Osa C: 2-sykiopropyyli-4-hydroksi-1-(fenyylimetyyli) -lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetel-10 mää 630 mg (2,3 mmol) 2-syklopropyyli-4-metoksi-l-(fenyylimetyyli )-lH-indolia O-demetelyloitiin käsittelemällä sitä 9 ml:11a 1 M BBr3/CH2Cl2:ta. Käsittelemätön tuote kro-matografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 316 mg (52 % saanto) 2-syklopro-15 pyyli-4-hydroksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia öljynä.

Osa D: [[2-syklopropyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-in-dol-4-yyli]oksi]etikkahappometyy1iesterin valmistus 2-syklopropyyli-4-hydroksi-l-( fenyylimetyyli)-lH-indolia (316 mg, 1,2 mmol) alkyloitiin käsittelemällä sitä 20 0,11 ml:11a (1,2 mmol) metyylibromiasetaattia ja 48 mg:11a (1,2 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä DMF:ssa esimerkissä 1, osassa E kuvatulla tavalla. Tuote puhdistettiin kromato-grafoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanil-·, la, jolloin saatiin 253 mg (63 % saanto) [[2-syklopropyy- 25 li-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappome-tyyliesteriä.

Osa E: [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-syklopro-Pyy 1 i -1 - (f enyy 1 imetyy 1 i) - 1H- indol - 4-yyli]oksi]et ikkahappo -metyyliesterin valmistus ; 30 Oksalyyliklorida (0,07 ml, 0,76 mmol) lisättiin 253 .· mg:aan (0,76 mmol) [[2-syklopropyyli-l-(fenyylimetyyli)- lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä, joka oli 10 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Seos väkevöitiin alennetussa 35 paineessa, jäännös liuotettiin uudelleen 10 ml:aan mety- 114793 63 leenikloridia, vedettömän ammoniakin annettiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan. Muodostunut saostuma erotettiin, jolloin saatiin 226 mg seosta, jossa oli [[3-(2-ami-no-1,2-dioksoetyyli)-2-syklopropyyli-l-( fenyylimetyyli ) -5 lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä ja ammo-niumkloridia.

Osa F: [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-2-syklopro-pyyli-1-(fenyylimetyyli)-1H-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus 10 Seosta, jossa oli 220 mg (0,54 mmol) [[3-(2-amino- 1,2-dioksoetyyli )-2-syklopropyyli-l-( fenyylimetyyli )-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesteriä 5 ml:ssa 1 N NaOH:a ja 15 ml:ssa MeOH:a, kuumennettiin palautusjäähdy-tyslämpötilassa 0,67 tuntia, se väkevöitiin alennetussa 15 paineessa ja jäännös otettiin talteen EtOAc/veteen. Vesi-kerros erotettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a ja lisättiin EtOAcra. Muodostui saostuma ja se erotettiin, jolloin saatiin 169 mg (80 % saanto) [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli ) - 2-syklopropyyli-l-( fenyyli-20 metyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappoa, s.p. 246 -249 °C.

Analyysi ^22^20^2^5 · 11® ·

Lasketut arvot: C, 67,34; H, 5,14; N, 7,14

Saadut arvot: C, 67,11; H, 5,33; N, 6,86.

25 Esimerkki 14 [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( [1,1'-bifenyyli] - » 2-yylimetyyli)-2-syklopropyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: · » 114793 64 HO Ον nh2

Tl H

r ry^i

N

10 15

Osa A: 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-syklo-propyyli-4-metoksi-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa C kuvattua menetelmää 935 mg (5 mmol) 2-syklopropyyli-4-metoksi-lH-indolia 20 saatettiin reagoimaan 200 mg:n (5 mmol) kanssa 60 % NaH/-mineraaliöljyä ja sitten 0,92 ml:n (5 mmol) kanssa 2-(bro-mimetyyli)bifenyyliä, jolloin saatiin silikageelillä kro-'l matografoinnin jälkeen (eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla) 911 mg ( 52 % saanto) 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-25 2-syklopropyyli-4-metoksi-lH-indolia öljynä.

Osa B: 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-syklo-.* propyyli-4-hydroksi-lH-indolin valmistus Käyttäen esimerkissä 1, osassa D kuvattua menetelmää 1,25 g (3,7 mmol) 1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-30 2-syklopropyyli-4-metoksi-lH-indolia O-demetelyloitiin .* käsittelemällä sitä 15 ml: 11a 1 M BBr3/CH2Cl2:ta. Käsittele mätön tuote kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 367 mg (29 % saanto) l-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-syklopropyyli-4-35 hydroksi-lH-indolia öljynä.

114793 65

Osa C: [[1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-syk-lopropyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus 1 — ( [1,1' -bifenyyli] -2-yylimetyyli )-2-syklopropyyli-5 4-hydroksi-lH-indolia (367 mg, 1,1 mmol) alkyloitiin käsittelemällä sitä 0,1 ml:11a (1,1 mmol) metyylibromiase-taattia ja 43 mgrlla (1,2 mmol) 60 % NaH/mineraaliöljyä DMFtssa esimerkissä 1, osassa E kuvatulla tavalla. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla silikageelillä, eluoiden 10 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 265 mg (59 % saan to) [[l-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2-syklopropyyli-lH-indol-4-yylijoksi]etikkahappometyyliesteriä.

Osa D: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli] -2-yylimetyyli)-2-syklopropyyli-lH-indol-4-yyli]-15 oksi]etikkahappometyyliesterin valmistus

Oksalyylikloridia (0,06 ml, 0,64 mmol) lisättiin 265 mg:aan (0,64 mmol) [[1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli ) - 2 - syklopropyy 1 i - 1H- indol - 4 -yy 1 i ] oks i ] e t i kkahappometyy-liesteriä, joka oli 10 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta 20 sekoitettiin 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Seos väkevöi- tiin alennetussa paineessa, jäännös liuotettiin uudelleen 10 ml:aan metyleenikloridia, vedettömän ammoniakin annet-tiin kuplia seokseen 0,25 tunnin ajan ja seos väkevöitiin ·. alennetussa paineessa. Jäännös otettiin talteen EtOAc/ve- * 25 teen, EtOAc erotettiin, pestiin suolaliuoksella ja kuivat- » tiin (MgS04). Väkevöinnin jälkeen jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden EtOAc:11a, jolloin saatiin 181 mg (59 % saanto) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli] -2-yylimetyyli )-2-syklopropyyli-lH-indol-4-yyli] -30 oksijetikkahappometyyliesteriä.

/ Osa E: [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1*-bi fenyyli] -2-yylimetyyli)-2-syklopropyyli-lH-indol-4-yyli)-·. oksi]etikkahapon valmistus

Seosta, jossa oli 175 mg (0,36 mmol) [[3-(2-amino-35 1,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bifenyyli]-2-yylimetyyli)-2- 114793 66 syklopropyyli-lH-indol-4-yyli ] oksi ] etikkahappometyylieste-riä 4 ral:ssa 1 N NaOH:a ja 10 mlrssa MeOH:a, sekoi-tettiin 0,5 tuntia, se väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännös otettiin talteen EtOAc/veteen. Vesikerros erotettiin, 5 tehtiin happamaksi pH-arvoon 2-3, käyttäen 1 N HCl:a, ja uutettiin EtOAc:11a. EtOAc-liuos kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 105 mg (62 % saanto) [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( [1,1' -bifenyyli] -2-yyli-metyyli) -2-syklopropyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] etikkahap-10 poa, s.p. 172 - 174 °C.

Analyysi C28H24N205: lie:

Lasketut arvot: C, 71,78; H, 5,16; N, 5,98

Saadut arvot: C, 72,08; H, 5,30; N, 5,92.

Esimerkki 15 15 4- [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-(fenyy- limetyyli )-lH-indol-5-yyli]oksi]voihapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: o nh2 20 \_/ ho2c- (CH2)3-O.

.·; YV\ i y— ch2 — ch3 25 30

Osa A: N-tert-butoksikarbonyyli-4-metoksi-2-metyy- : lianiliinin valmistus . Käyttäen esimerkissä 1, osassa A kuvattua menetel mää 13,7 g (0,1 mol) 4-metoksi-2-metyylianiliinia saatet-35 tiin reagoimaan 25 g:n (0,1145 mol) kanssa di-tert-butyy- 114793 67 lidikarbonaattia, jolloin saatiin 17,25 g (73 % saanto) N-tert-butoksikarbonyyli-4-metoksi-2-metyylianiliinia, joka suli 80 - 82 °C:ssa, kun se oli kiteytetty heksaanis-ta.

5 Analyysi C13H19N03: lie:

Lasketut arvot: C, 65,80; H, 8,07; N, 5,90 Saadut arvot: C, 65,86; H, 8,15; N, 5,61.

Osa B: 1-[2-(tert-butoksikarbonyyliamino]-5-metok-sifenyyli]-2-butanonin valmistus 10 Liuos, jossa oli 1,3 M sek-butyylilitium/syklohek- saania (81 ml, 0,105 mol), lisättiin hitaasti 11,85 g:aan (0,05 mol) N-tert-butoksikarbonyyli-4-metoksi-2-metyyli-aniliiniin, joka oli 80 ml:ssa THF:a, pitäen lämpötila alle -40 °C:ssa hiilihappojää-etanolihauteen avulla. Haude 15 poistettiin ja lämpötilan annettiin kohota -20 °C:seen, ja sitten haude laitettiin takaisin. Kun lämpötila oli laskenut -60 °C:seen, lisättiin tipoittain 6,1 g (0,052 mol) N-metoksi-N-metyylipropanamidia yhtä suuressa tilavuudessa THF:a. Reaktioseosta sekoitettiin yksi tunti, jäähdytys-20 haude poistettiin ja sekoitettiin vielä 1 tuntia. Se kaadettiin sitten seokseen, jossa oli 200 ml eetteriä ja 200 ml 1 N HCl:a. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedel-lä, kuivattiin Na2S04:lla ja väkevöitiin alennetussa pai-·. neessa, jolloin saatiin 10,9 g (74 % saanto) l-(2-tert- 25 butoksikarbonyyliamino )-5-metoksifenyyli]-2-butanonia, * , joka suli 80 - 81 °C, kromatografoltaessa silikageelillä * ja eluoitaessa 5 % EtOAc/tolueenilla.

Analyysi C16H23N04: lie:

Lasketut arvot: C, 65,51; H, 7,90; N, 4,77 30 Saadut arvot: C, 65,69; H, 7,89; N, 4,90.

,* Osa C: 2-etyyli-5-metoksi-lH-indolin valmistus 1-[2-(tert-butoksikarbonyyliamino]-5-metoksifenyy-·, li]-2-butanonia (7,33 g, 0,025 mol), joka oli 120 ml:ssa CH2Cl2:ta ja 20 ml:ssa trifluorietikkahappoa, sekoitettiin ,· 35 20 tuntia, se pestiin vedellä, NaHC03-liuoksella ja tuote 114793 68 kromatografoltiin piidioksidilla (eluoiden 20 % EtOAc/hek-saanilla), jolloin saatiin 2,54 g (58 % saanto) 2-etyyli- 5-metoksi-lH-indolia valkoisena kiinteänä aineena, sp.

49 - 50 °C.

5 Analyysi C11H13NO:lie:

Lasketut arvot: C, 75,40; H, 7,48; N, 7,99 Saadut arvot: C, 75,64; H, 7,61; N, 8,04.

Osa D: 2-etyyli-5-metoksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolin valmistus 10 2-etyyli-5-metoksi-lH-indolia (5,6 g, 21,5 mmol) liuotettiin 150 ml:aan DMF:a ja 20 ml:aan THF:a ja lisättiin 1,0 g (25 mmol) 60 % natriumhydridiä. Kun oli sekoitettu 0,17 tuntia, 3,0 ml (25 mmol) bentsyylibromidia lisättiin. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 10 tun-15 tia, se laimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiliuos pestiin vedellä, kylläisellä NaCl-liuoksella ja kuivattiin (Na2S04). EtOAc haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden gra-dientilla, joka käsitti 5 % EtOAc/heksaania -» 15 % EtOAc/-20 heksaania, jolloin saatiin 4,6 g (82 % saanto) 2-etyyli- 5-metoksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia.

Osa E: 2-etyyli-5-metoksi-2-metyyli-l-(fenyylime-tyyli)-lH-indoli-3-glyoksyyliamidin valmistus #

Oksalyylikloridia (0,8 ml, 9,2 mmol) lisättiin 2,1 » 25 g:aan 2-etyyli-5-metoksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia, jäähdyttäen samalla -5 °C:seen. Jäähdytyshaude poistettiin, sekoittamista jatkettiin tunnin ajan ja seos lisättiin 0 - -5 °C:ssa 150 ml:aan THF:a, joka oli kyllästetty ammoniakilla. 0,33 tunnin kuluttua seos laimennettiin ve-30 dellä, orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kylläisellä NaCl-liuoksella ja kuivattiin (Na2S04). Kun väkevöitiin oli . suoritettu alennetussa paineessa, jäännös kromatografoi tiin silikageelillä, eluoiden ensin metyleenikloridillä, sitten eetterillä, jolloin saatiin 2,1 g (79 % saanto) 114793 69 2- etyyli-5-metoksi-2-metyyli-l-( f enyy lime tyyli )-lH-indoli- 3- glyoksyyliamidia.

Osa F: 2-etyyli-5-hydroksi-2-metyyli-l-(fenyylime-tyyli)-lH-indoli-3-glyoksyyliamidin valmistus 5 Liuosta, jossa oli 1,3 g (4 mmol) 2-etyyli-5-metok- si-2-metyyli-l-( f enyy lime tyyli )-lH-indoli-3-glyoksyyliami-dia ja 16 ml 1 M BBr3/CH2Cl2:ta 50 ml:ssa metyleenikloridia, sekoitetiin 1,5 tuntia, se sekoitettiin veden kanssa, orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin suolaliuoksella.

10 Kuivaamisen jälkeen liuos väkevöitiin alennetussa paineessa ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä. Aine eluoitiin gradientilla, joka käsitti 1 % MeOH/CH2Cl2 -» 3 % MeOH/CH2Cl2:ta, ja näin saatiin metyleenikloridi-etanolis-ta uudelleenkiteyttämisen jälkeen 270 mg (21 % saanto) 15 2-etyyli-5-hydroksi-2-metyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indo- li-3-glyoksyyliamidia, s.p. 224 - 225 °C.

Analyysi CigHieN203:lle:

Lasketut arvot: C, 70,70; H, 5,63; N, 8,69 Saadut arvot: C, 70,99; H, 5,56; N, 8,43.

20 Osa G: 4- [ [3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-2-etyyli- 1- ( fenyylimetyyli)-lH-indol-5-yyli]oksi]voihappo-tert-*: butyyl ies terin valmistus \ 2-etyyli-5-hydroksi-2-metyyli-l-( fenyylimetyyli )- ·. lH-indoli-3-glyoksyyliamidia (355 mg, 1,1 mmol) liuotet- 25 tiin 10 ml:aan THF:a ja 20 ml:aan DMF ja 50 mg (1,2 mmol) • . 60 % NaH/mineraaliöljyä lisättiin. Kun oli sekoitettu 0,17 * tuntia, 290 mg (1,3 mmol) tert-butyyli-4-bromibutyraattia lisättiin ja sekoittamista jatkettiin 4,75 tunnin ajan.

Seos laimennettiin vedellä, uutettiin EtOAc:lla ja EtOAc ;* 30 pestiin vedellä, kylläisellä NaCl-liuoksella ja kuivattiin (Na2S04). Kun väkevöinti oli suoritettu alennetussa paineessa, jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden gradientilla, joka käsitti CH2C12 -» 2 % MeOH/CH2Cl2:ta, ja näin saatiin eetteri-heksaanista kiteyttämisen jälkeen 460 .* 35 mg (90 % saanto) 4-[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyy- 114793 70 li-l-(fenyylimetyyli )-lH-indol-5-yyli]oksi]voihappo-tert-butyyliesteriä, s.p. 101 - 104 °C.

Analyysi C27H32N205:lle:

Lasketut arvot: C, 69,81; H, 6,94; N, 6,03 5 Saadut arvot: C, 70,54; H, 7,02; N, 6,37.

Osa H: 4-[ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-1-(fenyylimetyyli)-lH-indol-5-yyli]oksi]voihapon valmistus

Liuosta, jossa oli 450 mg (0,97 mmol) 4-[[3-(2-ami-10 no -1,2 -dioksoetyyl i) - 2 -etyy 1 i -1 - (f enyy 1 ime tyy 1 i) -1H - i ndol - 5-yyli]oksi]voihappo-tert-butyyliesteriä 75 ml:ssa mety-leenikloridia ja 1 ml:ssa trifluorietikkahappoa, sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2,25 tuntia ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelil-15 lä ja eluoitiin EtOAc:lla, jolloin saatiin 250 mg (63 % saanto) 4-[[3 — (2-amino-1,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-(fe-nyylimetyyli)-lH-indol-5-yyli]oksi]voihappoa, s.p. 173 -175 °C.

Analyysi C23H24N2Os: lie: 20 Lasketut arvot: C, 67,63; H, 5,92; N, 6,86

Saadut arvot: C, 67,09; H, 6,00; N, 6,76.

Esimerkki 16 « :'· 4- [ [3-( 2-amino-l, 2-dioksoetyyli )-1-( fenyylimetyy- * li)-lH-indol-5-yyli]oksi]voihapon valmistus, yhdisteen, • 25 jonka kaava on: o nh2

: H

ho2c- (CH2)3 °\ 0 • , I l\ 30 / » .*35 .

! 114793 71

Osa A: 5-hydroksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolin valmistus 5-metoksi-lH-indolia (5,6 g, 21,5 mmol) saatettiin reagoimaan 1,0 g:n (25 mmol) kanssa 60 % natriumhydridiä 5 ja sitten 3,0 ml:n (25 mmol) kanssa bentsyylibromidia esimerkissä 1, osassa D kuvatulla tavalla, jolloin saatiin käsittelemätöntä 5-metoksi-l-(fenyylimetyyli)-lH-indolia. Tämä aine liuotettiin 250 ml:aan metyleenikloridia, se jäähdytettiin -5 °C:seen, lisättiin 50 ml IM BBr3/CH2-10 Cl2:ta, jäähdytyshaude poistetiin ja seosta sekoitettiin 1,75 tuntia. Lisättiin jäävettä ja seosta sekoitettiin. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kylläisellä NaCl:lla, kuivattiin (Na2S04) ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä, 15 eluoiden 20 % eetteri/heksaani -» eetterillä, jolloin saatiin 870 mg (19 % kokonaissaanto) käsittelemätöntä 5-hydroksi-l- ( fenyylimetyyli)-lH-indolia.

Osa B: 4-[ [1-(fenyylimetyyli)-lH-indol-5-yyli]oksi ]voihappoetyyliesterin valmistus 20 Liuosta, jossa oli 850 mg (4,0 mmol) 5-hydroksi-l- (fenyylimetyyli)-lH-indolia 75 ml:ssa DMF:a ja 20 ml *: THF:a, käsiteltiin 200 mg:11a (5,0 mmol) 60 % NaH/mineraa- ·. liöljyä, ja kun oli sekoitettu 0,17 tuntia, lisättiin 0,7 ·. ml (4,9 mmol) etyyli-4-bromibutyraattia. 2,75 tunnin ku- | 25 luttua seos laimennettiin vedellä ja uutettiin EtOAc:lla.

EtOAc-liuos pestiin vedellä, kylläisellä NaCl-liuoksella, • kuivattiin (Na2S04) ja väkevöitiin alennetussa paineessa.

* Jäännös kromatografoitiin silikageelillä ja saatiin 545 mg (40 % saanto) 4-[[l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-5-yyli]ok-30 si]voihappoetyyliesteriä eluoitaessa gradientilla, joka käsitti 15 % eetteri/heksaania -> 50 % eetteri/heksaania.

Osa C. 4-[[3-(2-amino-l/2-dioksoetyyli)-l-(fenyyli-metyyli)-lH-indol-5-yyli]oksi]voihappoetyyliesterin vai- * mistus ,1 35 Oksalyylikloridia (0,15 ml, 1,7 mmol) lisättiin 545 j mg:aan(l,6 mmol) 4-[[l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-5-yyli]- 114793 72 oksi]voihappoetyyliesteriä, joka oli 40 ml:ssa metyleeni-kloridia, pitäen lämpötila -5 °C:ssa. Jäähdytyshaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 0,83 tuntia, ja se lisättiin 75 ml:aan THF:a, joka oli kyllästetty ammoniakkikaa-5 sulia, 0 - -5 °C:ssa. 0,25 tunnin kulutltua seos laimennettiin vedellä ja uutettiin metyleenikloridilla. Tämä liuos pestiin kylläisellä NaCl-liuoksella, kuivattiin (Na2-S04) ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäännös kiteytettiin metyleenikloridi-etanolista, jolloin saatiin 490 10 mg (75 % saanto) 4-[[3-(2-amino-l, 2-dioksoetyyli)-1-(fe-nyy1imetyy1i)-1H-indol-5-yy1i]oks i]voihappoetyy1iesteriä, s.p. 168 - 170 °C.

Analyysi C23H24N205:lie:

Lasketut arvot: C, 67,63; H, 5,92; N, 6,86 15 Saadut arvot: C, 67,60; H, 6,13; N, 6,93.

Osa D: 4-[ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-(fenyyli-metyyli)-lH-indol-5-yyli]oksi]voihapon valmistus

Seosta, jossa oli 450 mg (1,1 mmol) 4-[[3-(2-amino-1,2-dioksoetyyli )-1-( fenyylimetyyli ) -lH-indol-5-yyli]ok-20 si]voihappoetyyliesteriä 450 ml:ssa THF:a ja 50 ml:ssa 5 N

HCl:a, sekoitettiin 16 tuntia, se laimennettiin EtOAc:lla ja pestiin vedellä, kylläisellä NaCl-liuoksella, kuivat-tiin (Na2S04). Kun väkevöinti oli suoritettu alennetussa paineessa, jäännös kromatografoitiin silikageelillä, ; 25 eluoiden 2 % Me0H/CH2Cl2:11a, sitten Et0Ac:lla, jolloin saatiin MeOHCH2Cl2:sta uudelleenkiteyttämisen jälkeen 190 ‘ mg (45 % saanto) 4-[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-(fe nyylimetyyli )-lH-indol-5-yyli]oksi]voihappoa, s.p. 193 -195 °C.

30 Analyysi C21H20N205:lie: : Lasketut arvot: C, 66,31; H, 5,30; N, 7,36 . Saadut arvot: C, 60,82; H, 5,08; N, 6,64; jäännös, 1,39 %.

» 1 * » 114793 73

Esimerkki 17 [[3-(amino-oksoasetyyli)-2-etyyli-l-( fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli] amino]etikkahapon valmistus, yhdisteen, jonka kaava on: 5 H0\/\ °W NH2 Y> y-ζ [Λλ. ° 10 y-ch2ch3 " M3 15 Osa A: l-fenyylimetyyli-2-etyyli-4-nitro-lH-indolin valmistus 2-etyyli-4-nitro-lH-indolia (4,75 g, 25 mmol) lisättiin seokseen, jossa oli 1,0 g (25 mmol) 60 % NaH/mine-raaliöljyä (joka oli pesty heksaanilla ennen DMF:n lisää-20 mistä) 40 ml:ssa DMF:a. 45 minuutin kuluttua lisättiin 3,0 ml (25 mmol) bentsyylibromidia. Seosta sekoitettiin huo-neenlämpötilassa neljä tuntia, se laimennettiin vedellä ja uutettiin EtOAc:lla. EtOAc-liuos pestiin suolaliuoksella, » kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin tyhjössä. Jäännös ! 25 kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/hek- saanilla, jolloin saatiin 6,36 g (91 %) 1-fenyylimetyyli-2-etyyli-4-nitro-lH-indolia öljynä.

Analyysi C17H16N202:lie:

Lasketut arvot: C, 72,84; H, 5,75; N, 9,99 :* 30 Saadut arvot: C, 72,67; H, 5,86; N, 9,69.

: Osa B: 2-etyyli-4-nitro-alfa-okso-1-(fenyylimetyy li )-lH-indoli-3-asetamidin valmistus

Oksalyylikloridia (1,98 ml, 22,7 mmol) lisättiin :* 6,36 g:aan (22,7 mmol) l-fenyylimetyyli-2-etyyli-4-nitro- 35 lH-indolia 30 ml:ssa CH2Cl2:ta, ja seosta sekoitettiin 7,5 » » 114793 74 tuntia. Lisättiin vielä O,5 ml (5,7 mmol) oksalyyliklori-dia ja sekoittamista jatkettiin 16,5 tunnin ajan. Seos väkevöitin alennetussa paineessa, jäännös liuotettiin uudelleen 30 ml:aan CH2Cl2:ta ja NH3-kaasun annettiin kuplia 5 seokseen 0,25 tunnin ajan. Jäännös kromatografoitiin sili- kageelillä, eluoiden 20 % EtOAc/heksaanilla, jolloin saatiin 6,0 g (75 %) 2-etyyli-4-nitro-alfa-okso-l-(fenyylime-tyyli)-lH-indoli-3-asetamidia, joka suli 207 - 208 °C:ssa.

Analyysi ^19^17^04: lie: 10 Lasketut arvot: C, 64,95; H, 4,88; N, 11,96

Saadut arvot: C, 65,14; H, 4,98; N, 12,11.

Osa C: 4-amino-2-etyyli-alfa-okso-l-(fenyylimetyy-li)-lH-indoli-3-asetamidin valmistus

Liuosta, jossa oli 6,0 g (17,1 mmol) 2-etyyli-4-15 nitro-alfa-okso-l-(fenyylimetyyli)-lH-indoli-3-asetamidia 140 ml:ssa 1:1 THF:EtOH:a, joka sisälsi 1,0 g 5 % Pt/-BaS04:a, hydrattiin huoneenlämpötilassa 60 psi:ssä (4,22 kg/cm2) neljä tuntia. Katalyytti suodatettiin pois ja suo-dos haihdutettiin tyhjössä. Jäännös kromatografoitiin si-20 likageelillä, eluoiden heksaani/50 - 100 % EtOAc:lla, jolloin saatiin 1,66 g (30 %) 4-amino-2-etyyli-alfa-okso-l-(fenyylimetyyli)-lH-indoli-3-asetamidia, joka suli 140 -144 °C:ssa.

Analyysi C19H17N302:lie: ; 25 Lasketut arvot: C, 71,01; H, 5,96; N, 13,08

Saadut arvot: C, 68,50; H, 5,93; N, 11,88.

: Osa D: [[3-(amino-oksoasetyyli)-2-etyyli-l-(fenyy- ' limetyyli) -lH-indol-4-yyli] amino] et ikkahappometyy lies terin valmistus • 30 Metyylibromiasetaattia (0,07 ml, 0,78 mmol) lisät- : tiin 250 mg:aan (0,78 mmol) 4-amino-2-etyyli-alfa-okso-l- (fenyylimetyyli)-lH-indoli-3-asetamidia, joka oli 4 ml:ssa DMF:a, ja sitä sekoitettiin 60 °C:ssa 0,5 tuntia, sitten huoneenlämpötilassa 20 tuntia. Seos laimennettiin vedellä 35 ja uutettiin EtOAc:lla. EtOAc-liuos pestiin suolaliuoksel- 114793 75 la, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin tyhjössä. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä, eluoiden heksaani/50 -100 % EtOAc:lla, jolloin saatiin 196 mg (64 %) [[3-(ami-no-oksoasetyyli ) -2-etyyli-l- ( fenyylimetyyli ) -lH-indol-4-5 yyli]amino]etikkahappometyyliesteriä, joka suli 188 193 °C:ssa.

Analyysi C22H23N304: lie:

Lasketut arvot: C, 67,16; H, 5,89; N, 10,68

Saadut arvot: C, 67,66; H, 5,71; N, 9,78.

10 Osa E: [[3-(amino-oksoasetyyli)-2-etyyli-l-(fenyy limetyyli) -lH-indol-4-yyli]amino]etikkahapon valmistus

Seosta, jossa oli 190 mg (0,48 mmol) [[3-(amino- oksoasetyyli )-2-etyyli-l-(fenyylimetyyli) -lH-indol-4-yyli]amino]etikkahappometyyliesteriä, 5 ml 1 N NaOH:a ja 15 15 ml MeOH:a, kuumennettiin palautusjäähdytyslämpötilassa 0,33 tuntia, jäähdytettiin ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa yksi tunti. EtOAc ja HCl:n vesiliuosta lisättiin ja EtOAc-kerros pestiin kahdesti suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin tyhjössä. Jäännös kiteytettiin 20 MeOH:sta, jolloin saatiin 96 mg (53 %) [ [3-(amino-oksoasetyyli )-2-etyyli-l-( fenyylimetyyli ) -lH-indol-4-yyli] amino] -. etikkahappoa, joka suli 151 - 157 °C.

Analyysi C21H21N304: lie: ] Lasketut arvot: C, 66,48; H, 5,58; N, 1,08 ! 25 Saadut arvot: C, 66,30; H, 5,61; N, 10,80.

c ·

Koe-esimerkki 1 : Seuraavaa kromogeenistä koemenetelmää käytettiin ihmisen erittämän rekombinantti-fosfolipaasi-A2:n estäjien identifioimiseksi ja arvioimiseksi. Tässä kuvattu koe on 30 sovitettu suuritilavuuksiselle seulonnalle, käyttäen 96-: koloisia mikrotiitterilevyjä. Tämän kokeen yleinen kuvaus löytyy artikkelista "Analysis of Human Synovial Fluid Phospholipase A2 on Short Chain Phosphatidylcholine-Mixed Micelles: Development of Spectrophotometric Assay Suitable 35 for Microtiterplate Reader", jonka ovat kirjoittaneet 114793 76

Laure J. Reynolds. Lori L. Hughes ja Edward A Dennis, Analytical Biochemistry, 204, s. 190 - 197, 1992 (jonka sisältö liitetään tähän viitteellä):

Reagenssit: 5 REAKTIOPUSKURI -

CaCl2.2HZ0 (1,47 g/L) KC1 (7,455 g/L)

Naudan seerumialbumiini (rasvahapoton) (1 g/L) (Sigma A-7030, Sigma-Chemical Co.:n tuote, St.

10 Louis, MO, USA) TRIS HC1 (3,94 g/L) pH 7,5 (säädetty NaOH:lla) ENTSYYMIPUSKURI -0,05 Na0Ac.3H20, pH 4,5 15 0,2 NaCl

pH säädetty arvoon 4,5 etikkahapolla DTNB - 5,5-ditiobis-2-nitrobentsoehappo RASEEMINEN DIHEPTANOYYLITIO - PC

raseeminen 1,2-bis(heptanoyylitio)-l,2-dideoksi-20 sn-glysero-3-fosforyylikoliini TRITON X-100™ valmistetaan konsentraationa 6,249 mg/ml reaktiopuskurissa vastaamaan 10 uM:a.

REAKTIOSEOS -

Mitattu tilavuus raseemista diheptanoyylitio-PC: tä, ! 25 joka on kloroformissa konsentraationa 100 mg/ml, haihdute- taan kuiviin ja liuotetaan uudelleen 10 millimooliseen • TRITON X-100™:aan, ionittoman pesuaineen vesiliuokseen.

Reaktiopuskuri lisätään liuokseen, sitten DTNB, jolloin saadaan reaktioseos.

30 Näin saatu reaktioseos sisältää 1 mM diheptanoyyli- : tio-PC-substraattia, 0,29 mm Triton X-100™ -pesuainetta ja 0,12 mm DTMB:tä puskuroidussa vesiliuoksessa, jonka pH on 7,5.

Koemenetelmä: 35 1. Lisätään 0,2 ml reaktioseosta kaikkiin koloihin; 114793 77 2. Lisätään 10 ui koeyhdistettä (tai blank-liuotin-ta) sopiviin koloihin, sekoitetaan 20 sekuntia; 3. Lisätään 50 nanogrammaa sPLA2:ta (10 mikrolitraa) sopiviin koloihin; 5 4. Inkuboidaan levyä 40 °C:ssa 30 minuuttia; 5. Luetaan kolojen absorbanssi 405 nanometrissä automaattisen levynlukijan avulla.

Kaikki yhdisteet testattiin triplikaatteina. Tavallisesti yhdistettiin testaattiin lopullisena konsentraa-10 tiona, joka oli 5 ug/ml. Yhdisteet katsottiin vaikuttaviksi, kun niillä ilmeni 40 % tai sitä suurempi esto verrattuna ei-estäviin kontrollireaktioihin, mitattuna 405 nanometrissä. Värin kehityksen puuttuminen 405 nanometrissä oli osoituksena estosta. Yhdisteet, joiden aluksi todet-15 tiin olevan vaikuttavia, testattiin uudelleen niiden vaikutuksen varmistamiseksi, ja mikäli ne olivat riittävän vaikuttavia, määritettiin IC50-arvot. Tavallisesti IC50-ar-vot (katso alla oleva Taulukko I) määritettiin laimentamalla koeyhdiste sarjana kaksikertaisesti siten, että lo-20 pullinen konsentraatio reaktiossa oli 45 - 0,35 ug/ml. Tehokkaammat estäjät vaativat huomattavasti suuremman lai-mennoksen. Kaikissa tapauksissa määritettiin prosentuaali->. nen esto, joka mitattiin 405 nanometrissä ja joka syntyi ’ entsyymejä käsittävissä entsyymireaktioissa, suhteessa ei- ; 25 estäviin kontrollireaktioihin. Kukin näyte titrattiin tri- i » plikaattina ja tuloksina saaduista arvoista otettiin kes-• kiarvot IC50-arvojen piirtämistä ja laskemista varte. IC50- arvot määritettiin piirtämällä estoarvot estoalueella 10 -90 % log-konsentraation funktiona.

/ 30 Tulokset ihmisen erittämän fosfolipaasi-A2:n estoko- : keistä lH-indoli-3-glyoksyyliamideille 114793 78

Taulukko I

Yhdiste esimerkistä Ihmisen erittämän PLÄ2:n esto nro IC50 - keskipoikkeama (3-4 koetta) 5 ___,______ _1__10.67 ± 5,51 nM_ _2__9.00 ± 1,73 nM_ _3__5.33 ± 1,15 nM_ _4__9.69 ± lf 14 nM_ 10 _5__49,00 ± 11,53 nM_ _6__6,00 ± 1,00 nM_ _7__6 ? 00 ± 1,00 nM_ _8__32.75 ± 7,04 nM_

9 9,00 ± 1,73 nM

15--i->- _10__6.67 ± 2^89 nM_ _11__4,33 ± 2,31 nM_ _12__82j23 ± 18,01 nM_ _13__27 j 60 ± 13,07 nM_ 20 14__5.57 i 2,89 nM_ _15__210 ± 60 nM_ ·. _16__62 010 ± 3750 nM_ . _17__1148 ± 120 nM_ : 25 Esimerkkien 1-15 yhdisteet ovat erittäin vaikut tavia sPLA2:n estäjinä. Esimerkin 16 yhdiste (jossa hapan substituentti on 5-asemassa ja jossa on ei-edullinen vety indolinytimen 2-asemassa, nimittäin R2 kaavassa I) on paljon tehottomampi.

30 Koe-esimerkki 2

Menetelmä:

Hartley-kannan urosmarsuja (500 - 700 g) lopetettiin saattamalla niskaranka sijoiltaan ja niiden sydän ja t keuhkot poistettiin koskemattomina ja laitettiin ilmattuun 35 (95 % 02:5 % C02) Krebs-puskuriin. Selkäpuolen keuhkopussi- ‘ » 114793 79 leikkeitä (4 x 1 x 25 mm) leikattiin irti koskemattomista parenkymaaiosista (8 x 4 x 25 mm), jotka oli leikattu samansuuntaisesti alempien keuhkolohkojen ulkoreunan kanssa. Kaksi vierekkäistä keuhkopussileikettä, jotka oli saatu 5 yksittäisestä lohkosta ja jotka edustivat yksittäistä kudosnäytettä, sidottiin jommasta kummasta päästä ja kiinnitettiin itsenäisesti metalliseen tukitankoon. Toinen tanko kiinnitettiin Grass-voimansiirtoanturiin (Malli FT03C, Grass Medical Instruments Co.:n tuote, Quincy, MA, USA).

10 Muutokset isometrisessä jännitteessä näkyivät monitorissa ja ne tallennettiin lämpötallentimella (Modular Instruments ' n tuote, Malvern, PA). Kaikki kudokset laitettiin 10 ml:n kudoshauteisiin ja niitä pidettiin 37 °C:ssa. Kudos-hauteita ilmastettiin jatkuvasti muunellulla Krebs-liuok-15 sella, jolla oli seuraava koostumus (millimooleina): NaCl, 118,2; KC1, 4,6; CaCl2.2H20, 2,5; MgS04.7H20, 1,2; NaHC03, 24,8; KH2P04, 1,0; ja dekstroosi, 10,0. Keuhkon vastakkaisista lohkoista saadut keuhkopussileikkeet käytettiin parillisiin kokeisiin. Esitiedot, jotka saatiin jännite/vas-20 takäyristä, osoittivat, että lepojännite 800 mg oli optimaalinen. Kudosten annettiin tasapainottua 45 minuutin ajan, samalla kun hauteen nestettä vaihdettiin aika ajoin.

Kumulatiiviset konsentraatio-vastekäyrät: i

Aluksi kudokset altistettiin kolme kertaa KClrlle * ! 25 (40 mM) koekudosten elinkyvyn testaamiseksi ja vakiovas- teen saamiseksi. Kun maksimivaste KClrlle oli tallennettu, > • kudokset pestiin ja niiden annettiin palautua perusviival- ‘ le ennen seuraavaa altistusta. Kumulatiiviset konsentraa tio-vastekäyrät saatiin keuhkopussileikkeistä lisäämällä 30 agonistikonsentraatiota (sPLA2) kudoshauteessa puoliloga-; ritmisin lisäyksin, samalla kun aikaisempi konsentraatio jäi kosketuksiin kudosten kanssa (viite 1, supra). Agonistikonsentraatiota nostettiin sen jälkeen, kun edeltävän ' konsentraation aikaan saama konsentraation vakaa taso oli ,! 35 saavutettu. Kustakin kudoksesta saatiin yksi konsentraa- I t 114793 80 tio-vastekäyrä. Eri eläimistä saatujen kudosten välisen vaihtelevuuden minimoimiseksi supistusvasteet ilmoitettiin prosentteina maksimivasteesta, joka saatiin lopullisella KCl-altistuksella. Tutkittaessa erilaisten lääkeaineiden 5 vaikutuksia sPLA2:n supistusvaikutuksiin, yhdisteet ja niiden vastaavat vehiikkelit lisättiin kudoksiin 30 min ennen sPLA2-konsentraatio-vastekäyrien aloittamista.

Tilastolliset analyysit:

Tiedot, jotka saatiin eri tutkimuksista, yhdistet-10 tiin ja esitettiin prosentteina KCl:n maksimivasteista (keskiarvo ± SEM). Lääkeaineen aiheuttamien konsentraatio-vastekäyrissä oikealle suuntautuvien siirtymien arvioimiseksi, käyrät analysoitiin samanaikaisesti, käyttäen tilastollisia ei-lineaarisia mallinnusmenetelmiä, jotka ovat 15 samanlaisia kuin jotka on kuvannut Waud (1976), Equation 26, s. 163 (Viite 2). Malli käsittää neljä parametriä: maksimikudosvaste, jonka oletettiin olevan sama kaikille käyrille, ED50 kontrollikäyrälle, käyrien jyrkkyys ja pA2, antagonistikonsentraatio, joka vaatiin agonistin kaksin-20 kertaisen lisäyksen saman vasteen saamiseksi. Schild-kul-makerroin määritettiin l:ksi, käyttäen tilastollisia ei-lineaarisia mallinnusmenetelmiä, jotka ovat samanlaisia kuin jotka on kuvannut Waud (1976), Equation 27, s. 164 (Viite 2). Kun Schild-kulmakerroin on 1, malli vastaa ole-! 25 tuksia kilpailevasta antagonista; siten, pA2 voidaan tulki ta näennäisenä KB:nä, inhibiittorin dissosiaatiovakiona.

• Maksimivasteiden lääkeaineella aiheutetun heikkene misen arvioimiseksi sPLA2-vasteet (10 ug/ml) määritettiin siten, ettei lääkeainetta ollut mukana, ja prosentuaalinen 30 heikkeneminen laskettiin kullekin kudosparille. Esimerkit ‘ estovaikutuksista esitetään alla olevassa Taulukossa 2.

Viite 1 - van, J.M.: Kumulatiiviset annos-vastekäy-rät. II. Menetelmä annos-vastekäyrien tekemiseksi eristetyissä elimissä ja lääkeaineparametrien arviointi. Arch.

: 35 Int. Pharmacodyn. Ther., 143: 299 - 330, 1963.

114793 81

Viite 2 - Waud, D. : Annos-vastesuhteiden analysointi, julkaisussa Advanced in General Cellular Pharmacology, toim. Narahashi, Bianchi 1:145 - 178, 1976.

Tulokset ihmisen erittämän fosfolipaasi-A2:n estoko-5 keistä marsun keuhkokudoksella

Taulukko II

Yhdiste esimerkistä Kudoskoe 10 nro erittynyt PLA2

Näennäinen Kg nM

I 143 ± 67 3 (Na-suola) 67 ? 6 ± 11,8 9 88,7 ± 18,2 15 10 (Na-suola) 110 ± 10 II 57 ± 11 14 75 ± 9 20 Vaikka esillä olevaa keksintöä on valaistu edellä tietyillä spesifisillä suoritusmuodoilla, ei ole tarkoi-: tus, että nämä erityiset esimerkit rajoittaisivat keksin- : nön suojapiiriä, joka on kuvattu mukana olevissa patentti- ; vaatimuksissa.

Claims

114793 82 1. lH-indoli-3-glyoksyyliamidi, tunnettu siitä, että sillä on kaava (I): X X R4 NHz F>5 v. __( f)—r2 ro "•'ll R, R’ 5 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai alifaatti-nen esteriaihiolääkejohdannainen, jolloin 10. on happi; Ri on fenyyli-Ci-3-alkyyli, bifenyyli-Ci-3-alkyyli tai naftyyli-Ci-3-alkyyli, jotka ovat mahdollisesti substi-tuoituja 1-3 halogeeniatomilla; • R2 on vety, Ci-3-alkyyli tai C3-4-sykloalkyyli;

1. R4 ja R5 ovat toisistaan riippumatta vety, karboksi- i Ci-3-alkoksi tai karboksi-Ci-3-alkyyliamino; ja R6 ja R7 ovat kumpikin vetyjä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen lH-indoli-3-gly-oksyyliamidi tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola 20 tai esteriaihiolääkejohdannainen, tunnettu siitä, että se on jokin yhdisteistä (A) - (P): (A) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-(fe- : nyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, ; (B) dl-2-[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli- 25 1-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]propaanihappo, » 114793 83 (C) [[3-(2-araino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife-nyyli]-2-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi] etik-kahappo, (D) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife-5 nyyli]-3-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etik- kahappo, (E) [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife-nyyli]-4-yylimetyyli)-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etik-kahappo, 10 (F) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-[(2,6-dikloo- rifenyyli)metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikka-happo , (G) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-[4-(fluorife- nyyli)metyyli]-2-metyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, 15 (H) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-metyyli-l-[(1- naftalenyyli) metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, (I) [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-(fe-nyylimetyyli)-H-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, (J) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l-[(3- 20 kloorifenyyli)metyyli]-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, (K) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife- ,·’ yyli] -2-yylimetyyli) -2-etyyli-lH-indol-4-yyli] oksi] etik- : kahappo, (L) [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife- .: 25 nyyli]-2-yylimetyyli)-2-propyyli-lH-indol-4-yyli]oksi]- ·. etikkahappo, (M) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-syklopropyyli-1-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]oksi]etikkahappo, (N) [[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-1-([1,1'-bife- • · • 30 nyyli]-2-yylimetyyli)-2-syklopropyyli-lH-indol-4-yyli]- oksi]etikkahappo, ; (0) 4-[[3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-2-etyyli-l- . (fenyylimetyyli)-lH-indol-5-yyli]oksi]voihappo ja (P) (A):n - (0):n seokset. ‘35 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen 1H-indoli-3-gly- oksyyliamidi, tunnettu siitä, että sillä on kaava: 114793 84 O vA T nh2 N CH3 tai O Na* V/\ T nh2 . n ch3 5 ,· 4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdiste, tun nettu siitä, että se on [ [3-(2-amino-l,2-dioksoetyyli)-; 2-etyyli-l-(fenyylimetyyli)-lH-indol-4-yyli]-oksi]etikkaha- 10 pon metyyliesteri. 85 1 1 4793 1. lH-indol-3-glyoxylamid, kännetecknad av att den har formeln (I): X R4 J NHz RiVi\ I —r2 ® "'ll R, R’ 5 eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav eller ett alifatiskt esterprodrugderivat därav varvid

10 X är syre; Ri är fenyl-Ci-3-alkyl, bifenyl-Ci-3-alkyl eller naf-tyl-Ci-3-alkyl, vilka är eventuellt substituerade med 1-3 halogenatomomer; • R2 är väte, Ci-3-alkyl eller C3.4-cykloalkyl; : 15 R4 och R5 oberoende av varandra är väte, karboxi- *: Ci-3-alkoxi eller karboxi-Ci-3-alkylamino; och R6 och R7 bäda är väte. 2. lH-indol-3-glyoxylamid enligt patentkrav 1 eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav eller ett ester- 20 prodrugderivat därav, kännetecknad av att den är I nägon av föreningarna (A)-(P): » '* (A) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-2-metyl-l-(fenylme- ; tyl)-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (B) dl-2-[ [3-(2-amino-l, 2-dioxoetyl)-2-metyl-l-(fe-25 nylmetyl)-lH-indol-4-yl]oxi]propansyra, > (C) [ [3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1-( [1,11-bifenyl]- : 2-ylmetyl)-2-metyl-lH-indol-4-yl]oxi] ättiksyra, 114793 86 (D) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1-([1,1'-bifenyl]- 3- ylmetyl)-2-metyl-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (E) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1-((1,11-bifenyl]- 4- ylmetyl)-2-metyl-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, 5 (F) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1-[(2,6-diklor- fenyl)metyl]-2-metyl-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (G) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1- [4-(fluorfenyl)-metyl]-2-metyl-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (H) [ [3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-2-metyl-l-[(Ι-ΙΟ naftalenyl)metyl]-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (I) [ [3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-2-etyl-l-(fenyl-metyl)-H-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (J) [ [3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-2-etyl-l-[(3-klor-fenyl)metyl]-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, 15 (K) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1-([1,11-bifenyl]- 2-ylmetyl)-2-etyl-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (L) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1-([1,11-bifenyl]-2-ylmetyl)-2-propyl-lH-indol-4-yl]oxi]-ättiksyra, (M) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-2-cyklopropyl-l-20 (fenylmetyl)-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, (N) [[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-1-([1,1’-bifenyl]-2-ylmetyl)-2-cyklopropyl-lH-indol-4-yl]oxi]ättiksyra, : (O) 4-[[3-(2-amino-l,2-dioxoetyl)-2-etyl-l-(fenyl- metyl)-lH-indol-5-yl]oxi]smörsyra och .: 25 (P) blandningar av (A) - (0) . 3. lH-indol-3-glyoxylamid enligt patentkrav 2, » kännetecknad av att den har formeln » » a 114793 87 K J HO O \ T nh2 ch3 eller O V-x Na* -</ \ \x\ ': T nh2 : . 5 : 4. Förening enligt patentkrav 2, känneteck- , nad av att den är metylester av [ [3-(2-amino-1,2- : dioxoetyl)-2-etyl-l-(fenylmetyl)-lH-indol-4-yl]- 10 oxi]ättiksyra.