CZ302588B6

CZ302588B6 - Použití N-substituovaného indol-3-glyoxylamidu pro výrobu léciva

Info

Publication number: CZ302588B6
Application number: CZ20003483A
Authority: CZ
Inventors: Nickel@Bernd; Szelenyi@Istvan; Schmidt@Jürgen; Emig@Peter; Reichert@Dietmar; Günther@Eckhard; Brune@Kay
Original assignee: Ziopharm Oncology, Inc.
Priority date: 1998-04-02
Filing date: 1999-03-22
Publication date: 2011-07-27
Also published as: CZ20003483A3

Abstract

Rešení se týká použití N-substituovaných indol-3-glyoxylamidu obecného vzorce 1 nebo jejich fyziologicky prijatelných adicních solí s kyselinou nebo jejich N-oxidu pro výrobu léciva pro lécení onkologických onemocnení jako je leukémie, karcinom prostaty, ovariální karcinom, epidermální karcinom a Donninguv nádor.

Description

Oblast techniky s

Vynález se týká použití N -substituovaného indol 3-glyoxylamídu pro výrobu léčiva.

Dosavadní stav techniky io

V holandské přihlášce NL 6502481 jsou popsány sloučeniny, které mají protizánětlivý nebo antipyretický účinek a analgetickou aktivitu.

V britské přihlášce GB-PS 1 028 812 se zmiňují deriváty indolyl-3 -glykoxylové kyseliny a její i ? amidy jako analgeticky, antikonvulsivně a β -adrenergieky účinné sloučeniny.

G. Domsehe et al. (Ber. 04, 2353 (1961)) popisuje 3-indolyl -glyoxylamidy, které nejsou farmakologicky charakterizovány.

zo E. Walton referuje v J. Med. Chem. 11, 1252 (1968) o derivátech indolyl-3~gíyoxvlove kyseliny, které inhibičné působí na glycerofosfát dehydrogenázu a laktát -dehydrogenázu.

V evropském patentu EP 675 110 jsou popsány amidy lH-indol-3- glyoxylové kyseliny, které jsou profilovány jako sPLA2-inhibitory a mohou být použity při léčení septického šoku, při pan2? kreatítidě, pri léčení alergické rhinitidy a revmatické artritidy.

Cílem předkládaného vynálezu je dát k dispozici N-substituované indol-3- glyoxylamidy, které disponují protinádorovým účinkem a tím obohatit dostupné léky.

ni Jmenované sloučeniny jsou již známy jako léčiva s antiastmatiekým, antialergiekým a imunosupresivním/imunoinodulačním účinkem z DE - OS 196 36 150 A 1.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je použití N-substituovaného indol -3-glyoxylamidu obecného vzorce 1

nebo jeho fyziologicky přijatelné adiční soli s kyselinou nebo jeho N oxidu, přtčemž ve vzorci 1 -to R znamená atom vodíku;

R_t znamená fenylovou skupinu, která je alespoň jednou substituovaná (Ct -CJ-alkylovou skupinou, (Cj-C„)--alkoxyskupinou. kyanoskupinou, atomem halogenu, trifluormethylovou skupinou, hydroxylovou skupinou, benzyloxyskupinou, nitroskupinou, aminoskupinou, (Cj-C*)— alkytaminoskupinou, (C₍-C_f,)-alkoxykarbonylaminovou skupinou, karboxylovou skupinou nebo karboxylovou skupinou esterifíkovanou (Ci-C\)alkanolem;

- I CZ 302588 B6 nebo

Ri znamená pyridinovou strukturu obecného vzorce 2

nebo její N-oxid. přičemž tato pyridinová struktura je vázaná svým kruhovým uhlíkovým atomem v poloze 2, 3 nebo 4 k odpovídajícímu dusíkovému atomu v obecném vzorci 1 aje případně substituovaná substituenty R₅ a R₆;

ia R₅ a Rf,. které jsou stejné nebo odlišné, jsou zvoleny ze souboru zahrnujícího (Cj C₍,(-alkylovou skupinu, (Cr-C?)—eykloalkylovou skupinu, (Cj-C_ft)-alkoxyskupinu, nitroskupinu, aminoskupinu, hydroxylovou skupinu, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, ethoxykarbonylaminovou skupinu a karboxyalkyloxyskupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy;

η R₂ znamená atom vodíku nebo (Ci-C₍,)-alky lovou skupinu, která je substituovaná (i) fenylovou skupinou, která je případně substituovaná jednou nebo vícekrát atomem halogenu, (Cj-Coj-al kýlovou skupinou, (C₃-C?)-eykIoal kýlo vou skupinou, karboxylovou skupinou, karboxylovou skupinou esterifikovanou C č-alkanolem, trifluormethylovou skupinou, hydroxy 1 o?n vou skupinou, methoxyskupinou, ethoxyskupinou nebo benzyloxyskupinou;

nebo (ií) 2-, 3- nebo 4-pyridylovou skupinou, která je případně substituována jednou nebo vícekrát atomem halogenu, (C|-C₄)-alkylovou skupinou nebo (C|-C₄)-alkoxyskupmou;

Ks a R; znamenají atom vodíku; a

Z znamená O, pro výrobu léčiva pro léčení onkologických onemocnění.

Výhodně v obecném vzorci 1

Ri znamená 4-pyridylovou skupinu nebo 4-fluorfeny lovou skupinu;

a

R₂ znamená benzylovou skupinu, 4-chlorbenzylovou skupinu. 4-fluorbenzylovou skupinu,

4o 3--pyridylmethylovou skupinu nebo 4-brombenzylovou skupinu.

Výhodně je N-substituovaným indol-3-glyoxy (amidem obecného vzorce 1 N—(pyridin—4-y I)—[ 1 ·—(4 -fluorbenzyl)indol-3-yl]glyoxylamid;

4S

N-(pyridín-4-yl)—(1 benzyl indol-3-yl (glyoxylamid;

N—(4—fluorfeny 1)—[ 1 —(3—pyridvlmethy l)indol- -3-vl]glyoxy lamid:

- 2 CZ 302588 B6

N- (pyridin-4 -yl)—1144-eblorbcnzyl)indol-3-y llglyoxylamid;

nebo s

N -(pyridin-4~ylH l-(4-íluorbenzyl)mdol -3-yl]glyoxylamid-hydroehlorid.

Výhodně je onkologické onemocnění zvoleno ze souboru zahrnujícího leukémii, karcinom prostaty, ovariální karcinom, epidermální karcinom a Dunninguv nádor.

ID

Výhodně je N-substiluovaným indol 3-glyoxylamidem obecného vzorce I N-(pyridin-4-yl)[ 1-(4-ťluorbenzyl)índol-3-yl]gIyoxylamíd nebo jeho hydroehloridová sul.

Výhodně je N-substituovaným indol-3-glvoxylaniidem obecného vzorce 1 N-Cpyridin-4~yl)H (I -benzylindol_3-yl)glyoxylamid.

Výhodně je N-substituovaným indol- 3-glyoxylamidem obecného vzorce 1 N- (4-fluorfenyI)L1 -(3-pyridylmethy l)indol-3-y llglyoxylamid.

Výhodně je N-substituovaným indoI-3-glyoxyíamidem obecného vzorce 1 N-(pyridin-4—yl)— (l-(4-ehlorbenzy l)indol-3-vl]glyoxy lainid.

Označením skupin alkyl- alkanol- alkoxy- nebo alky lamino se míní zbytky R. R,. R₂, R₃. R_hRs, R„ zpravidla jak s „přímými“, tak také s „rozvětvenými“ alky (skupinami, přičemž alkvlskupi2? ny s přímým řetězcem mohou znamenat například zbytky jako methyl, ethyl, n-propyl. n-butvl. n-penlvl, n-hexyl a „rozvětvené alky lskupiny“ například zbytky jako izopropyl nebo terč-butyl. „Cykloalkylem“ se rozumí zbytky jako například eyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl. cyklohexyl nebo cykloheptyl. Označení „halogen“ zastupuje fluor, chlor, brom nebo jod. Označení „alkoxyskupina“ představuje zbytky jako například methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, izopro50 poxy, izobutoxy nebo pentoxy.

Sloučeniny mohou být také použity jako adukly s kyselinami typu solí, například jako soli minerálních kyselin, jako je například kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná, soli organických kyselin, jako je například kyselina octová, kyselina mléčná, kyselina malonová.

kyselina maleinová, kyselina fumarová, kyselina glukonová, kyselina glukuronová. kyselina citrónová, kyselina embonová, kyselina methansulfonová, kyselina trifluoroctová, kyselina jantarová a 2- hydroxyethansulfonová kyselina.

Jak sloučeniny vzorce 1, tak také jejich soli jsou biologicky aktivní. Sloučeniny vzorce 1 mohou to být zpracovány ve volné formě nebo jako soli s fyziologicky snášenými kyselinami. Aplikace se muže provádět perorálně, parenterálně, intravenózně. transdermálné nebo inhalačně.

Dále se vynález týká farmaceutických přípravků s obsahem alespoň jedné ze sloučenin vzorce 1 nebo jejich solí s fyziologicky snášenými anorganickými nebo organickými kyselinami a rovněž farmaceuticky použitelnými nosiči a/nebo zřeďovacími respektive pomocnými látkami. Jako aplikační formy jsou vhodné například tablety, dražé, kapsle, infúzní roztoky nebo ampule, čípky náplasti, inhalačně použitelné práškové přípravky, suspenze, krémy a masti.

Způsob přípravy sloučenin podle vynálezu jc popsán v následujících reakčních schématech I a 2 jakož i v obecných předpisech. Všechny sloučeniny lze připravit jak popsáno anebo analogicky.

Sloučeniny obecného vzorce 1, kde Z ~ O, R| - ary l, aralkyl, heteroaryl a heteroaralkvl, jakož i R₂ alkyl, aralkyl a heteroaralkvl, jsou získatelné podle následujícího schématu 1:

- 4 CZ 302588 B6

Schéma I

1- stupeň

1. stupeň

Derivát indolu, který muže být nesubstituovaný nebo jednou nebo několikrát substituovaný na C-2 nebo fenylovém skeletu, se rozpustí v protickém, dipolárním aprotickém nebo nepolárním organickém rozpouštědle, jako je například izopropanol, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyIpyrrolidon, dioxan, toluen nebo methylenchlorid, a po kapkách se přidává vtrojhrdlé baňce pod dusíkovou atmosférou k molární nebo io v přebytku připravené suspenzi použité báze - jako například natriumhydrid, práškový hydroxid draselný, terc-butylát draselný, dimethylaminopyridin nebo natriumamid - ve vhodném rozpouštědle. Pak se přidá například žádaný alkylhalogenid, aralkylhalogenid, případně heteroalkylhalogenid, v daném případě za přidání katalyzátoru jako například mědí, a ponechá se po nějakou dobu například 30 minut až 12 hodin reagovat a teplota se udržuje v oblasti od 0 do 120 °C, s výhodou mezi 30 až 80 °C, zejména mezi 50 až 65 °C. Po ukončení reakce se reakční směs dá do vody, roztok se extrahuje například diethy letherem, dichlormethanem, chloroformem, methylterc-butyletherem nebo tetrahydrofuranem a získaná organická fáze se pokaždé suší bezvodým síranem sodným. Organická fáze se za vakua zahustí, zbytek se krystaluje třením nebo se olejovitý zbytek čistí překrystalizováním, destilací nebo sloupcovou případně rázovou chromatografií na silikagelu nebo aluminiumoxidu. Jako mobilní fáze slouží například směs dichlormethanu a diethyletheru v poměru 8:2 (obj./obj.) nebo směs dichlormethanu a ethanolu v poměru 9:1 (obj ./obj.).

2. stupeň

N-substituovaný indol, získaný shora zmíněným předpisem stupně 1, se za dusíkové atmosféry rozpouští v aprotickém nebo nepolárním organickém rozpouštědle jako je například methyl -terč butylether, tetrahydrofuran, dioxan, toluen, xylen, methylenchloríd nebo chloroform a přidává se za dusíkové atmosféry k roztoku molárního až 60% nadbytečného množství oxalvlchloridu v aprotickém nebo nepolárním rozpouštědle, jako například v diethyletheru, methy l-terc- butyl-4CZ 302588 B6 etheru, tetrahydrofuranu, dioxanu. toluenu, xylenu, methylenchloridu. přičemž teplota se udržuje mezi -5 a 20 °C. Potom se reakční roztok zahřívá na teplotu mezí 10 a 130 °C, s výhodou mezi 20 a 80 °C, zvláště výhodně mezi 30 a 50 °C po dobu 30 minut až 5 hodin a nakonec se odpaří rozpouštědlo. Zůstatek takto vytvořeného chloridu kyseliny indoly)-3-glyoxyíové se rozpustí v aprodckém rozpouštědle jako například tetrahydrofurandioxanu, diethyletheru, toluenu nebo také v dipolárním aprotiekém rozpouštědle, jako například dimethylformamidu, d i methyl acetamidu nebo dimethylsulfoxidu. ochladí se na teplotu mezi 10 a -15 °C. s výhodou mezi -5 a 0 °C a za přítomnosti lapače kyseliny nechá reagovat s roztokem primárního nebo sekundárního aminu ve zřeďovacím prostředku. Jako zřeďovací prostředek přichází v úvahu shora použité rozpouští) tědlo k rozpouštění chloridu kyseliny indoly 1-3-glyoxylové. Jako lapač kyseliny nalézá použití triethylamin, pyridin, dimethylaminopyridin. bazické iontoměniče, uhličitan sodný, uhličitan draselný. práškový hydroxid draselný, jakož i v přebytku do reakce použitý primární nebo sekundární amin. Reakce probíhá při teplotě od 0 do 120 °C přednostně při 20 až 80 °C. zvláště výhodně mezi 40 a 60 °C. Po I až 3 hodinové reakční době a 24 hodinovém stání při pokojové teplotě se is zťiltruje hydrochlorid lapače kyseliny, filtrát se za vakua zahustí a zůstatek se překrystaluje z organického rozpouštědla nebo se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu nebo aluminiumoxidu. Jako mobilní fáze se používá například směs dichlormethanu a ethanolu (95:5 obj., obj.).

Přehled obrázkú na výkresech

Vynález bude blíže vysvětlen prostřednictvím konkrétních příkladu provedení znázorněných na obr. laMuríne leucemia L 1210:13-24851 p.o. a lb Murine leucemia L 1210:D-24851 i.p.

Příklady provedení vynálezu

Podle těchto obecných předpisů pro stupně 1 a 2. pro něž je základem schéma syntézy 1, byly

5o syntetizovány následující sloučeniny, jejichž příslušné chemické označení vyplývá z údajů v následujícím přehledu. V tabulkách la až j jsou z obecných vzorců 1 a substituentů R| až 1<_: a Z patrné struktury těchto sloučenin a jejich teploty tání:

- 5 CZ 302588 B6

- 6CZ 302588 B6

Tabulka lb : Indolylglyoxylamidy podle reakčního schématu

- t CZ 302588 B6

Tabulka lc: Indolylglyoxylamidy podle reakčního schématu

- 8 CZ 302588 B6

Tabulka Id: Indoiyiglyoxylaniáy podle reakčního schématu

- 9 CZ 302588 B6

Tabulka le: Dexivaty kyseliny Indol-3-glyoxylové podle reakčmho schématu n:

0-44037 H —/ % //~^r H t Η I O 2ÍS-221

- 10 CZ 302588 B6

-IICZ 302588 R6

i-tbui.<a in : Dereváty kyseliny .indol - 3-glyoxylcvé podle reakčnítio scíiematu

i

- 13CZ 302588 B6 abujxa ii : Deriváty kyseliny indoi-3-glyoxylové podie reakčního sche^iatn

Ν HOO fabulss ij; Lecivaty ky^elir.y ;naoi s-glyoxylove podle icakSr.<ho schématu

- 15 CZ 302588 B6 ledňáka 2: Indolylglycxylamidy podle reakčního sehemaou

o.set o η η h // V-- c í ctw-a <\!

Tabulka Za: Indoly Iqlyoxylamidy podá e reakčního sohemanu

d >u ,d ctí

O d

1) i—I

Tí o

a >1

-H

I-(

Φ cn >1 'OJ >

O o

>1

1---í

Ο»

I cn i

O

Ό

H

P sO í>

¹ r-i d

Φ

Q b

c-j

Φ b I—I d b d H

- 17 CZ 302588 B6

Příklad 1

N-(Pyridin^l-ylý-J H4-nuorbenzvl)indol-3 -yljglyoxylamid (D 24241)

1. stupeň

- (4-lluorbenzy I )indol

Do směsi 2,64 g hydridu sodného (0, 1 1 mol, suspenze v minerálním oleji) ve 100 ml dimethylsulfoxidu se přidá roztok 1 1,72 g(0,l mol) indolu v 50 ml dimethylsultbxidu. Zahřívá se 1,5 hodiny na 60 °C, potom se nechá ochladit a přikapává se 15,9 g (0, t 1 mol) 4- lltiorben/vlchloridu. Roztok se zahřívá na 60 °C, ponechá stát přes noc a potom se naleje za míchání do 400 ml vody. Vícekrát se extrahuje celkem se 150 ml methylenchloridu, organická fáze se suší bezvodým síranem sodným, filtruje se a filtrát se za vakua zahustí. Zbytek se destiluje za vysokého vakua: 21,0 g (96 % teorie), t.v. (0,5 mm): 140 °C.

2. stupeň

N-( pyridin—4—yl)-[ l-(4-fIuorbenzyl)indol-3- yljglyoxylamid (D 24241)

K roztoku 2.25 ml oxalylehloridu v 25 ml etheru se přidá při 0 °C a pod dusíkem po kapkách roztok 4,75 g (21.1 mmol) 1 -(4-ttuorbenzyl)indolu v 25 ml etheru. Zahřívá se 2 hodiny pod zpětným chladičem a potom se odpaří rozpouštědlo. Pak se přidá ke zbytku 50 ml tetrahydrofuranu, roztok se ochladí na -5 °C a po kapkách se podrobí reakci s roztokem 4,66 g (49,5 mmol) 4aminopyridinu ve 200 ml THF. Zahřívá se 3 hodiny pod zpětným chladičem a nechá se stát přes noc při pokojové teplotě. 4-AminopyridinhydrochlorÍd se odsaje, sraženina se promyje s THF, filtrát se vakuově zahustí a zbytek se překrystaluje z esteru kyseliny octové.

Výtěžky : 7,09 g (90 % teorie)

Teplota tání: 225 až 226 °C

Elementární analýza:

1(1 vypočteno nalezeno

Příklad 2.

Příklad 3.

Příklad 4.

Příklad 5.

Příklad 6.

Příklad 7.

C 70,77 C 71,09

D 24242

D24834

D24835

D24836

D 24840

D 24841

H 4,32 N 11.25

H 4,36 N 1 1,26

N <pyrulín l—y 1) < 1-methy I i ndo 1-3-yl)glyoxy lamid

N-(pyridin-3-yl)-[i-(4-fluorbenzyl)indol-3-yl]glyoxYlamid

N-(pyridin-3- yl) J1 -benzylindol-3-yl)glvoxylamid

N-( pyridin-3-yl> -[ E (2-chlorbenzyl)-3-yl]glyoxy lamid

N-(4-fIuorfěiiyl)-[l-(4-fluorbenzyI)indol-3 yljglyoxy lamid

N-(4-n itro feny l>—f 1 —<4-fluorbenzyl)indol-3-yl]glyoxy lamid

- 18 CZ 302588 B6

Příklad 8.	D 24842	N-(2 -cblorpyridin-3-yl)-[H4-fluorbenzyl)indol-3-yllglyoxylamid
Příklad 9.	□ 24843	N--(pyridin--4-yl)-í 1 -benzylindol-3--y l)glyoxvlamid
Příklad 10.	D 24848	N —(pyridin—4—yl)—[ 14 3- py ridy Imethyl )indol-3~yllgly oxy lamid
Příklad 11.	D 24849	\ uorfeny 1)--U (2 -pyridylniethyl)indol-3-yljglyoxylaniid
Příklad 12.	D 24850	uorfeny IH l-(3-pyridy Imethyl) i ndol-3-yl) gly oxy lamid
Příklad 13.	D 24851	N—(pyridin—4—yl>--[l-<4-chlorbenzyl)indol-3_yl]glyoxy1amid
Příklad 14.	D 24852	N-(pyridin-4-y lf-(l-<2-chlorbenzy l)indol-3- yllglyoxy lamid
Příklad 15.	D 24853	N (p\ridin-2-yl> [l-(4-íluorbenzyl)indol-3-yl]glyoxylamid
Příklad 16.	D 24847	N-(pyridin-4-yl)-(H2-pyridylmethyl)indol-3-y ljglyoxy lamid
Příklad 17.	D 24858	N44-fenyl-piperazin-l-ylHH4-ťluorbenzyl)indol-3-y ljglyoxy 1amid
Příklad 18.	D24854	N--fpy rídin-2-y l)[ l-benzyl-indol?-yl ]glyoxy lamid
Příklad 19.	D25421	N-(pyrid i n-4-yl )-(1-( 4-ťluor benzyl f-6-et ho xy karbony lamin oindol-3-vl Iglyoxy lamid
Příklad 20.	D25422	N-(pyridin-4- yl}~U-{4-f1uorbenzyl}4>-ethoxykarbonylaminoindol 3-yl]glyoxy lamid
Příklad 21.	D25423	N-(pyridin-4-yl)[l-(4_fluorbenzyl)-6-eyklopentyloxykarbonylam ino indo l~3-y ljglyoxy lam id
Příklad 22.	D25420	4 (pyridin-4-yl)piperazin-1 —y 1)—[ 1 44-fluorbenzyl)indol-3-vl]glyoxy lamid
Příklad 23.	D 24866	N43,4,5-trimethoxybenzyl)-N-(allylaminokarbonyl-2-mcthylprop1 v l> \|1 -(441 uor benzyl) indol--3--y 1 ] gly oxy lamid

- 19CZ 302588 B6

Příklad 24. N-(pyridin--4—yl>—[l-(4~ťluorbenz\'l)-5-methoxyindol-3-yl]glyoxylamid

Příklad 25. N-(pyridin-^-yl)-[ l-(4-fluorbenzylý-5-ethoxykarbonylaminoindol-3-y 1]glyoxvlamid

Výchozí stupně pro sloučeniny připraveně podle schématu syntézy 1 o obecném vzorci 1, které v vplývají z tabulky 1.

Pro koncový stupeň syntézy

D 24241	D 24242	D	24834	D	24835
D 24836	D 24840	D	24841	D	24842
D 24843	D 24848	D	24849	D	24850
D 24851	D 24852	D	24853	D	24847
D 24858	D 24854	D	25420	D	25422
D 25421	D 25423

jsou všechny předstupně zakoupitelné.

Dále jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde Z “ O. R, aryl, aralkyl, hetcroaryl, heteroalkyl a skupina allylaminokarbonyl-2~metlo Iprop-1 -yl, jakož i R; - alkyl, aralkyl a heteroalkylová skupina, získatelné také metodou syntézy podle schématu 2;

Schéma 2

ί. stupeň

- 20 CZ 302588 B6

Podle předkládaného schématu 2 byly získány sloučeniny D 24241, D 24841. D 24840 a D 24834 (2. stupeň reakčního schématu 2, viz též tabulka 1) jakož i jejich příslušné předstupně D 24825, D 24831, D 24832 a D 24833 (1. stupeň reakčního schématu 2, viz též tabulka 2).

N--(pyridin—I--y 1)--(l-<4-fiuorbenzyl)indol-3-yl]glyoxylamid (D 24241)

1. stupeň

N-{ pvridin-4—v 1)- {indol3-\ l)glyoxy (amid

K roztoku 9 ml oxalylchloridu ve 100 ml bezvodého etheru byl po kapkách přidáván při 0 °C roztok 10 g (85,3 mmol) indolu ve 100 ml etheru. Směs se udržuje 3 hodiny pod zpětným chladičem. Potom se při -5 °C přikapává suspenze 12 g (127,9 mmol) 4-aminopyridinu v 500 ml tetrahydrofuranu, reakční směs se za míchání zahřívá 3 hodiny na teplotu zpětného toku a ponechá se stát přes noc při pokojové teplotě. Sraženina se filtrovala, promyla vodou a suchá sloučenina se čistila na silikagelovém sloupci (silikagel 60, firma Merck AG, Darmstadt) za použití elučního prostředku methylenchlorid/cthanol (10:1. obj./obj.).

Výtěžek: 9,8 g (43,3 % teorie)

Teplota tání: od 250 °C

2. stupeň

N (pyridin—4-y U-[ l-(4-fluorbenzy l)indol-3-yljglyoxy lam id (D 24241)

N- (pyridin—4-yl)-(indol-3-yl)glyoxylamid) získaný po 1. stupni byl podroben reakci podle „benzy lační ho předpisu“ (strana 5) s 4-fluorbenzy Ichloridem a izolovala se získaná sloučenina D 24241,

V v tě že k: 41 % teorie

Teplota tání: 224 až 225 °C

Elementární analýza:

vypočteno C 70,77 H 4,32 N 11,25 nalezeno C 70,98 H 4,40 N 11,49

Obecný přepis pro přípravu sloučenin obecného vzorce l podle schématu 2

1. stupeň

K roztoku připravenému za dusíkové atmosféry jednomolárního až do 60 procent přebytkového množství oxalylchloridu v aprotickém nebo nepolárním rozpouštědle jako je například diethylether, methy 1-terc-butylether, tetrahydrofuran, dioxan nebo také dichlormethan, se při teplotě mezi -5 a +5 °C po kapkách přidává rozpuštěný indolový derivát, rozpuštěný v rozpouštědle jako například v rozpouštědle udaném výše pro oxalylchlorid, přičemž indolový derivát může být nesubstituovaný nebo substituovaný na C-2 případně na fenylovém kruhu. Potom se reakční roztok zahřívá 1 až 5 hodin na teplotu mezi 10 a 120 °C, s výhodou mezi 20 a 80 °C, zvláště mezi 30 a 60 °C a pak se odpaří rozpouštědlo. Zůstatek chloridu (Índol-3-yl)gIyoxylové kyseliny se rozpustí respektive suspenduje v aprotickém rozpouštědle jako například tetrahydrofuranu, dioxanu, diethyletheru, toluenu, nebo také v dipolárním aprotickém rozpouštědle jako například diniethy Iformamidu, dimethylacetamidu nebo dimethylsulfoxidu, ochladí se na teplotu mezí -10 a M0 °C, přednostně na -5 až 0 °C a za přítomnosti lapače kyseliny se ponechá reagovat s roztokem priCZ 302588 B6 mám ího nebo sekundárního aminu ve zřeďovacím prostředku, Jako zřeďovací prostředek přichází v úvahu rozpouštědlo použité k rozpouštění „chloridu kyseliny ÍndolyI-3-glykoxylovc“. Jako lapače kyseliny nalézají použití triethylamin, pyridin, dimethylaminopyridin, zásadité iontoměniče, uhličitan sodný, uhličitan draselný, práškovitý hydroxid draselný jakož i přebytečný, k reakci s použitý primární nebo sekundami amin. Reakce probíhá při teplotě od 0 do 120 °C, s výhodou při až 80 °C, obzvláště mezi 40 a 60 °C. Po 1 až 4 hodinové reakční době a 24 hodinovém stání při pokojové teplotě se zfiltruje, sraženina se promývá vodou, odsaje a suší za vakua. Žádaná sloučenina se čistí překrystalováním z organického rozpouštědla nebo sloupcovou chromatografií na silikagelu nebo aluminiumoxidu. Jako mobilní fáze nalézá použití například směs dichlorin methanu a ethanolu (10:1 obj./obj.).

2. stupeň „Indol-3-ylglyoxylamid“ získaný podle shora zmíněného předpisu stupněm 1 se rozpustí v pro15 tickém, dipolárně aprotickém nebo nepolárním organickém rozpouštědle jako například v izopropanolu, tetrahydrofuranu, dimethylsulfoxidu, dimethylformamidu, dimethylaeetamidu, Nmethvlpyrrolidonu, dioxanu, toluenu nebo methylenchloridu a po kapkách se přidává k molámí nebo přebytečné použité suspenzi báze, která je připravená za dusíkové atmosféry v trojhrdlé baňce, jako například hydridu sodnému, práškovému hydroxidu draselnému, terc-buty latu sodné,?o mu, dimethylamínopyridinu nebo natriumamidu ve vhodném rozpouštědle. Potom se přidá žádaný alkyl- aralkyl- respektive heteroalkylhalogenid bud' nezreděný, nebo ve zřeďovacím prostředku, který může být například použit také k rozpouštění „indol-3-ylglyoxylamidu“, rovněž za přidání katalyzátoru, jako například mědi a ponechá se určitý čas, například 30 minut až 12 hodin, reagovat a teplota se udržuje v rozmezí 0 a 120 °C, s výhodou mezi 30 a 80 °C, obzvláště mezi 50 a 80 °C. Po ukončení reakce se dá reakční směs do vody, roztok se extrahuje například diethyletherem, dichlormethanem chloroformem, methy 1-terc-buty letherem, tetrahydroťuranem respektive n-butanolem a získaná organická fáze se pokaždé suší bezvodým síranem sodným. Organická fáze se za vakua zahustí, zůstatek se krystaluje třením respektive olejovitý zbytek se čistí destilací nebo sloupcovou respektive rázovou chromatografií na silikagelu nebo atuminiumoi oxidu. Jako mobilní fáze slouží například směs methylenchloridu a dimethylchloridu v poměru 8:2 (obj./obj.) nebo směs methylenchloridu a ethanolu v poměru 9:1 (obj./obj.). Podle těchto obecných předpisů pro stupně 1 a 2, jejichž princip je ve schématu syntézy 2, byly připraveny sloučeniny D 24241, D 24841, D 24840 a D 24834, které byly také již představeny podle průběhu syntézy v reakčním schématu 1 a vyplývají z tabulky 1. Předstupně těchto sloučenin jsou

5? zřejmé z tabulky 2.

Sloučeniny vykazují dobry', na dávkách závislý protinádorový účinek v následujících farmakologických modelech:

io Indoly, zejména D-24851 a D- 24241 byly podrobeny nejprve proliferačnímu testu XTT / cytotoxickému testu (tab. 3 a tab. 3a). V tomto systému testů se zkoumal vliv substancí na proliferaění chování nádorových buněčných linií. Přitom byl sledován cytotoxický potenciál těchto látek. Testovací metoda je popsána v práci Seudiero et al. 1988, Cancer Res. 48, 4827.

Při studiu byly použity následující nádorové buněčné linie: buněčná linie KB epidermálního karcinomu dutiny ústní, buněčná linie L1210 lymfatické leukémie myší, buněčná linie LNCAP karcinomu prostaty a buněčná linie SK-OV-3 karcinomu vajecníků.

a?

Ve všech nádorových buněčných linií byl velký počet různých indolů účinný. Nejsilnější účinky ukázaly D-24851 a D-24241, přičemž D-24851 byl účinnější než D-24241 (tab. 3 a 4). V dalších srovnávacích studiích s D-24851 a 1) 24241 při zkouškách dutých vláken na nahé myši a na L1210 (myš) mohl být u obou sloučenin pozorován silný, na dávkování závislý protinádorový účinek (tabulky 3 a 5). Při analýze dutých vláken (..Hohlfaser) byly obě sloučeniny skoro stejně účinné, zatímco na L1210 účinkoval D-24851 po perorálním a intraperitoneálním podávání výrazně silněji než D-24241. Ve srovnání s protinádorovými látkami, nacházejícími sc na trhuje D-24851 v leukemickém modelu v mnoha případech výrazně silněji účinný než známé srovnávací látky (tab. 5).

io

Další velkou předností D-24851 ve srovnání s protinádorovými látkami, které jsou na trhu, je malá toxicita sloučeniny (tab. 3 a 5). S hodnotami LD50 1000 mg/kg p. o. a větší než 1000 mg/kg i. p. disponuje sloučenina velkou terapeutickou šíří. Dále nebyly pozorovány žádné fragmentace DNA u D-24851. Také pokus hematopoese nepozménil zkoumané parametry' krve intraperitone15 álním podáváním D-24851.

V dalším ehemoterapeutickém modelu Dunningova nádoru na krysách mohl být po několikanásobném perorálním podáváním D-2485 1 zastaven růst nádoru a u některých zvířat byla dokonce pozorována regrese tumoru.

V pokusu KB na nahé myši mohl být rovněž podáváním obou indolů D-24851 a D-24241 pozorován protinádorový účinek (tabulky 3. 3a a 4),

Pří studiích s buněčnými liniemi L1210 nádoru lymfatické leukemie myši se ukázalo po intra25 peritoneálním respektive perorálním podávání D-24851 s 100 a 147 mg/kg vícenásobným podáváním výrazné, na dávkách závislé prodloužení doby života (obrázek la a obrázek lb).

Na základě dobré terapeutické šíře. která byla experimentálně dokázána, lze dávkovat účinnou látku výše než známá obchodní nádorová farmaka.

U)

Aniž bv se chtělo podle následujících údajů omezovat rozsah vynálezu, je třeba konstatovat, že je možné orálně dávkovat od eea 20 až do 500 mg denně. Při intravenosní aplikaci jako injekce nebo jako infuse lze podávat až 250 mg/den nebo více podle tělesné váhy pacienta a individuální snášenlivosti.

CZ 302588 κό

Tabulka 3

Shrnutí D 24851 podle příkladu 13

D 24851 N-(pyridin-4-yl) [ I—(4--ehlorbenzyl)indol -3-yl]giyoxylainid

Model	Výal.	SK-OV-3	KB	L1210 i 1	! LNCaP ί ί	[ MCF-7 r	Tox,
XTT (pg/m!)	EC50	0,03	r- 0,017	0,017 j	'0,03
1x ip (mg/kg)	dl_m						= 1000
1 x per os {mg/kg)	DL^	1			t^- I	[	> íóoo
dutá vlákna intrapentoruálnc 4 x ^6 mg^kg ip	% INH		bez i účinku \|	S 56		36
dutá vlákna irrtraperiíoneálné 4x14/ mg/kg ιρ I	% INH 1		12 I	G0 t		S 68 i I
dutá vlákna subkutánně 4 x 46 mg/kg ip	% INH		44 i	1 bez i účinku		4/
dutá vlákna subkutánně 4 X 1 4 ? mg/kg ip	% INH		35“ r i	67 !		i 68
Ifi vivo'						I	I
l x 681 mg/kg ip 1 x 464 mg/kg ip	% ILS			0 18		i ί
4x215 mg/kg ip 4x147 mg/kg ip	% ILS			“~T3~ 94			i
7 x 1 CO mg/kg ip 7x147 mg/kg ip	% ILS		i (	35 5S		i i
1 x 631 mg/kg po 4x215 mg/kg po 7 x 100 mg/kg po 7x147 mg/kg po	% ILS		i	22 31 63 75	i I	i
/ x 46 mg/kg ip 2x215 mg/kq oo	í % WHi 1		, 33 I 18			I

- 24 CZ 302588 B6

Tabulka 3 a

Látka podle příkladu	Nádorové buňky xtt
D-číslo	KB	L 1210	LNCAP	SK-OV-3
EC» (pg/mll	fug/mi)	EC_W Jug/ml]	EC^c lug/mlj
1 (D 24241)	0.020	C.170	>31.600	0.170
3 (D 24834)	1.75	1.75	9,250	1,750
4 (D 24335)	17.5	1,750	>31,6	0,200
6 (O 24840)	3.100	1.7C?	>31,6	17.5
9 (D 24643)	0 050	0,090	3,240	1,750
10 (D 24348)	4,060	1.75	>31.6	7.220
11 (D 24849)	4.590	1.750	17,500	4,250
12 (D 24850)	>31.6	0,017	>31,6	>31,6
13 (D 24S51)	0,017	0.017	0.030	0,030
14 (D 24852)	1.75	1.75	17.5	2.58
15 (D 24853)	>31.6	3.1	>31.6	>31.6
16 (O 2484 7)	4.59	1.75	17,500	4.250
Tabulka 2 (O 24831)	17.5	17.5	17.5	17,5

Další experimentální výsledky na zvířatech:

U Dunníngova nádoru mohlo být po podání 7x 100 mg/kg a 7x 147 mg/kg p.o. D-24851 pozorováno zastavení růstu nádoru, u některých zvířat dokonce regrese nádoru.

Testování krystalické formy nepřineslo ve srovnání s původní formou žádné rozdíly.

m D-24851 nezpůsobuje žádnou fragmentaci DNA.

V experimentu haematopoese se intraperitoneálním podáváním D-24851 nezměnil žádný ze zkoumaných parametrů krve.

C/. 30258» Bb

Tabulka 4

D 24241 N (pyridin—1-yl/ [1(1 lluorbcnzyl )indol-3-y l]gl\o\y lam id podle příkladu 1

Model	\| Výsl.	SK-OV-3	KB \|	L1210 i	LNCaP !	MCF-7	Tox,
XTT (pg/ml)	ECso	-0,17	- 0,02	-0,17	>31,6 j 1	1
1 x ip (mg/kg)	i DI 50			1 ί	= 153
1x per os (mg/kg)	DLsc	i		*7-- i	> 1000
dutá vlákna intraperitoneálné	% INU		46	43 !	Ί	bez
4 x 15 6 mg/kg ip		I 1-...	1 1		1	účinku 1
dutá vlákna subkutánně 4 x 15.6 mg/kg jp	\| % ÍNH	!	81 j	68 i		33 1 1
In vivo' ) J	! ΐ Γ
1X14 7 mg/kg ip	j% ILS	1	1	bez i účinku I	i		__________I
1 x 30 mg/kg per os	% ILS		bez i účinku I	1
1 x 464 mg/kg per os	% :ls ; I	i 44 \| j
4 x 30 mg/kg per os _	I % t LS i	i	! bez ! 1 j účinku i	r—
6 x 30 mg/kg per os	% ILS			be z 1 účinku i
14 x 30 mg/kg per os	% ILS			bez úč i nku
19 x 50 mg/kg per os \|	% ILS			50	> i
2 x 46.4 mg/kg ip	%WHI		22	i
4 x 21,5 mg/kg ip	%WH!		bez í účinku 1
2x215 mg/kg po í L	%Wl·! i I		47 \|	I	l

Tabulka 5

Srovnání protinádorového účinku D—24851 respektive D—24241 se standardními sloučeninami

io Látka	Tox, mg/kg	L 1210 mg/kg	XTT EC 50 (Ug/ml)
D-2485I I5	*1000 i.p.	4x 147 i.p. 94% ILS	KB «0,017 LI210 ~ 0,017 SKOV3 - 0,03 LNCAP - 0,03
D--24241 20	158 i.p.	I9x 50 p.o. 50% ILS	KB - 0,02 L1210*0.17 SK.OV3 «0,17 LNCAP «31.6
Mitoxantron 25	16 i.v.	1 x 4,64 í.v. 144% ILS	KB -0.17-1 L1210< 0.0003 SKOV3-0J74 LNCAP -0,017

- 26 CZ 302588 B6

5-Fluoruracíl		Ix 147 i.p. 72% ÍLS 4x68. 1 i.p. 83% ILS
Methotrexat	—	1x53,7 i.p 39% ILS	KB ' 0,007 1,1210 n.d. SKOV3 .31,6 LNCAPn.d.
Etoposid	« 158.0 i.p. >68.1 i.v.	Ix 46,4 i.p. 56% ILS	—
Ratjadon	- 16.0 i.p. - 30,0 i.v.	Ix 1,47 i.p. 22% ILS	KB < 0,003 LI210 < 0,003 SKOV3<0,003 LNCAP<0,003
Epothilon B	«100.0 i.p.	Ix 10 i.p. 44% ILS	KB O,0002 L1210-0.0017 SKOV3-0,0031 LNCAP'0,014
Taxol	«158 i.p.	Lx 14,7 i.v. 22% 1 x 46,4 i.v. 61 % ILS	KB < 0,003 LI20 '-0,003 SKOV3<0.003 LNCAP< 0,003
Vineristin	« 3,0 i.v,	1x1.0 i.p. 29% ILS	KB <0,001 LI210 0,004 SKOV3 0,003 LNCAP 0,004
Adriamycin	«27.0 i.v.	1x14,7 i.v. 111% ILS	KB 0,15 L12100.174

SKOV3 0,089

LNCAP 0.17

40 Cisplatin	« 16,0 i.p. «73,0 p.o.	1x3,16 i.p. 38,9% ILS	L12100.30
Carboplatin	« 158.0 i.p. « 841,0 p.o.	1x100 i.p. 41% ILS	— — —
45 Lobaplatin	« 34,0 i.p.	1x14,7 i.p. 55.0% ILS	----. —
Cyclophosphamid 50	«340,7 i.v.	1x46,4 i.v. 40% ILS	—
lfosfamid	«732 i.p.	1x316 i.p. 89% ILS	—

Q7. 302588 B6

Miltefosin « 46,4 i.p. žádný Wkg.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY o 1. Použití N-substituovaného indol-3-glyoxylamidu obecného vzorce 1 nebo jeho fysiologieky přijatelné adiční soli s kyselinou nebo jeho N -oxidu, přičemž ve vzorci 1

R znamená atom vodíku;

Ri znamená fenylovou skupinu, která je alespoň jednou substituovaná (C|-C₆)-alkylovou skupinou, (C, -C₆)-alkoxyskupinou, kyanoskupinou, atomem halogenu, trifluormethylovou skupinou, hydroxylovou skupinou, benzyloxyskupinou, nitroskupinou, aminoskupinou, (C|C₆)-alkylaminoskupinou, (C|C₍,)-alko\\ karbony lam i novou skupinou, karboxylovou skupinou nebo karboxylovou skupinou esterifíkovanou (C|-C_f,)alkanolem;

nebo

Ri znamená pyridinovou strukturu obecného vzorce 2

V*

Re (2) nebo její N-oxid, přičemž tato pyridinová struktura je vázaná svým kruhovým uhlíkovým atomem v poloze 2, 3 nebo 4 k odpovídajícímu dusíkovému atomu v obecném vzorci 1 a je o případné substituovaná substituenty Rs a R_ň;

Rs a R₆, které jsou stejné nebo odlišné, jsou zvoleny ze souboru zahrnujícího (C|-C_ft)-alkyfovou skupinu, (C,—C₇)- cykloalkylovou skupinu, (C4-C_(i)'alkoxyskupinu, nitroskupinu, aminoskupinu, hydroxylovou skupinu, atom halogenu, trifluormethylovou skupinu, ethoxy5 karbonylaminovou skupinu a karboxyalkyloxyskupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje

1 až 4 uhlíkové atomy;

R? znamená atom vodíku nebo (C| Cjalkylovnu skupinu, která je substituovaná

-28 CZ 302588 B6 (i) fenylovou skupinou, která je případně substituovaná jednou nebo vícekrát atomem halogenu, (Cj-C₆)-alky lovou skupinou. (C.A-Cij-cykloalkylovou skupinou, karboxylovou skupinou, karboxylovou skupinou estcrifikovanou (C|-C₆)-alkanotem, trifluormethylovou skupinou, hydroxy lovou skupinou, ínethoxyskupinou, ethoxyskupinou

5 nebo benzyloxyskupinou;

nebo (ii) 2-, 3- nebo 4-pyridylovou skupinou, která je případně substituována jednou nebo víceio krát atomem halogenu, (Ci-C₄)-alky lovou skupinou nebo (Cj-C₄)-alkoxyskupinou;

Ri a Rj znamenají atom vodíku; a

Z znamená O,

IS pro výrobu léčiva pro léčení onkologických onemocnění.
2. Použití podle nároku 1. kde v obecném vzorci 1

?.o Ri znamená 4-pyridylovou skupinu nebo 4-fluorťeny lovou skupinu; a

R_? znamená benzylovou skupinu. 4-chlorbenzy lovou skupinu, 4-fluorben/ylovou skupinu,
3-pyrídylmethy lovou skupinu nebo 4-brombenzy lovou skupinu.

?.s 3. Použití podle nároku 1. kde N-substituovaným indol-3 glyoxy lamidern obecného vzorce 1 j^c

N -4 py ri d i n-4-y I)-[ M 4—fl uor benzy1) i ndo 1-3 -y 1 ] g ly o xy 1 am i d; υ) N (pyridin—4—yl)—(1 - benzylindol-3-yl)glyoxylamid;

N-( 4-fluorfeny 1)-( l-(3-pyTÍdylmethyl)indol-3-ylJglyoxy lamid;

N- (pyridin-l-y!)-[ H4-chlorbenzyI)indol-3-yl]glyoxylamid; nebo

N-ípyridin^J-ylH l-(4-fIuorbenzyl)indol-3-y IJglyoxylamid-hydrochlorid.
4. Použití podle nároku 3, kde N-substituovaným indol-3-glyoxylamidem obecného vzorce 1 je N-(pyr»din-4-yl)-[H4-fluorbenzyl)jndol-3-yl]glyoxylamid nebo jeho hydrochloridová sul.
5. Použití podle nároku 3, kde N-substituovaným indol-3-glyoxylamidern obecného vzorce I je N (pyridin4-yl)(I benzy lindol-3y l)glyo.\y lamid.
6. Použití podle nároku 3, kde N-substituovaným indol-3-glyoxylamidem obecného vzorce 1 4? je N (4-fhiorfenyl)-l l-(3-pyridvlmethyl)indol-3 -yl]glyoxy lamid.
7. Použití podle nároku 3, kde N-substituovaným indol-3-glyoxy lamidern obecného vzorce 1 je N-(pyridin-4-yl)-Ll-(4-chlorbenzyl)indol-3-yl]glyoxylamÍd.

50 8. Použití podle některého z předcházejících nároků, při kterém jsou onkologická onemocněni zvolena ze souboru zahrnujícího leukémií, karcinom prostaty, ovariální karcinom, epidermální karcinom a Dunningův nádor.

CZ 302588 bó . ouziti podle neklereho z předcházejících nároků, při kterém léčivo dále obsahuje farmaceuticky přijatelný nosíc a/nebo ředidlo nebo přísadu aje ve formě tablety, dražé, kapsle, roztoku pro intuzi nebo ampule, cípku, náplasti, práškového přípravku pro inhalaci, suspenze, krému nebo