FI108138B

FI108138B - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 3,4-[(N,N'-1,1')-substituoitu alkyleeni)-bis(3,3'-indolyyli)]-1H-pyrroli-2,5-dionijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI108138B
Application number: FI945706A
Authority: FI
Inventors: Michael Robert Jirousek; Iii John Hampton Mcdonald; Christopher John Rito; Jr William Francis Heath
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1993-12-07
Filing date: 1994-12-02
Publication date: 2001-11-30
Also published as: SG63570A1; EP0657458A1; NO944643D0; AU687909B2; NO944643L; CY2413B1; KR950018010A; EP0657458B1; CO4340622A1; BR9404831A; JP3581731B2; MY125587A; NZ270048A; UA44690C2; FI20011109A; JP2004269543A; NO308798B1; RU94042922A; HUT71130A; KR100340159B1

Description

108128

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 3,4-[(N,Ν'-1,1')-substituoitu alkyleeni)-bis(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionijohdannaisten valmistamiseksi 5 Keksinnön kohteena on menetelmä uusien terapeutti sesti käyttökelpoisten 3,4-[ (N,Ν'-1,1')-(substituoitu alkyleeni) -bis(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionijohdannais-ten valmistamiseksi, joilla on kaava 1' 10

Oji0

15 ,N N

l I

(°Η2)2 (CH2)2 (w r jossa: 20 Won -O-, -CH2-0-CH(R')-, -O-CH (R' ) - , -0-CH2-CH (R' ) - , - (CH2) n- , -CH2-CH(R')-, -CH2-CH(R')-ch2-, -ch2-s-ch2-, -CH(R1 ) - , -CH2-CH(R' ' )-CH2- tai -CH2-C(=R' ' 1 )-CH2-, jolloin n on kokonaisluku 1-4, R' on ryhmä, jolla on kaava -CH2-R, jossa R on -OH, .25 -NH2, -NHCHj, -N(CH3)2, -NHCH2Ph, -N(CH2Ph)2, -NHCOCH3, -NHC(0)0CH2Ph, -NHS02Ph, -N [- (CH2) 4-] , -N[-(CH2)2-N(C1.4-al- kyyli) - (CH2) 2-] , -N [- (CH2) 2-0- (CH2) 2-] , -pyrrolyyli, -imi- datsolyyli, -OCH3, -0C00CH2Ph, -0CH2Ph, -OCOCH3 tai -0S02CH3, R' ' on -NH2, -NHCH2Ph tai -NHCOCH3 ja 30 R''' on -0CH2CH20- tai =0, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen • · valmistamiseksi.

Kemialliselta rakenteeltaan melko läheisiä, terapeuttisia ominaisuuksia omaavia yhdisteitä on kuvattu suo-35 malaisessa patenttijulkaisussa 89362 sekä Eurooppa-patent- i 108138 2 tijulkaisussa 383919 ja 508792 ja WO-patenttijulkaisuissa 88/07045 ja 94/07895. Kyseinen tunnettu tekniikka kuvaa kuitenkin molekyylejä, joissa on seitsenrenkainen aromaattinen systeemi, jossa maleimidi- ja indoliosuudet muodosta-5 vat osan keskeistä, aromaattista bentseenirengasta. Tämä tunnettu rakenne on jäykkä systeemi, jonka elektroninen ja geometrinen luonne ovat täysin erilaiset kuin uusien kaavan 1' mukaisten, makrosyklisen rengassysteemin omaavien yhdisteiden vastaavat luonteet. On huomattava, että uusien kaa-10 van 1' mukaisten yhdisteiden makrosyklisessä rengassystee- missä indolirenkaiden 2- ja 21-asemat ovat substituoimatto-mia eivätkä ne ole kytkeytyneet toisiinsa. Sitä vastoin edellä esitetyn tunnetun tekniikan mukaisissa yhdisteissä 2- ja 2'-asemat ovat kytkeytyneet toisiinsa ja sisältyvät 15 bentseenirenkaaseen.

Uudet kaavan 1' mukaiset yhdisteet ovat proteiini-kinaasi C -inhibiittoreita.

Proteiinikinaasi C (PKC) koostuu hyvin toistensa kaltaisten entsyymien suvusta, jotka entsyymit toimivat 20 seriini/treoniinikinaaseina. Proteiinikinaasi C:llä on tär keä rooli solu-solu-viestinnässä, geeni-ilmaisussa ja solun erilaistumisen ja kasvun kontrolloimisessa. Nykyään on olemassa vähintään kymmenen tunnettua PKC:n isoentsyymiä, jotka eroavat niiden kudosjakautumisessa, entsymaattisessa 25 spesifisyydessä ja säätelyssä. Nishizuka Y. Annu. Rev.

«

Biochem. 58.: 31 - 44 (1989) ; Nishizuka Y. Science 258: 607 - 614 (1992).

Proteiinikinaasi C -isoentsyymit ovat yksittäisiä polypeptidiketjuja, joiden pituus on alueella 592 - 737 30 aminohappoa. Isoentsyymit sisältävät säätöalueen ja kata-: lyyttisen alueen, jotka on liitetty linkkeripeptidillä.

Säätö- ja katalyyttiset alueet voidaan jakaa edelleen va- * kio- ja muuttuja-alueisiin. Proteiinikinaasin C katalyyttinen alue on hyvin samanlainen kuin se, joka havaitaan 35 muissa proteiinikinaaseissa, kun taas säätöalue on ainut- 3 '08138 laatuinen PKC-isotsyymeille. PKC-isotsyymit osoittavat 40 -80 % :n homologian aminohappo tasolla ryhmän keskellä. Yksittäisen isotsyymin homologia eri hiukkasten välillä on kuitenkin yleensä suurempi kuin 97 %.

5 Proteiinikinaasi C on membraaniin liittyvä entsyymi, jota säädellään allosteerisesti lukuisilla tekijöillä, mukaan lukien membraanifosfolipidit, kalsium ja tietyt memb-raanilipidit, kuten diasyyliglyserolit, jotka vapautuvat vastauksena fosfolipaasien toiminnalle. Bell, R. M. ja 10 Burns, D. J. , J. Biol. Chem. 266: 4661 - 4664 (1991);

Nishizuka, Y. Science 258: 607 - 614 (1992). Proteiinikinaasi C -isotsyymit, alfa, beeta-1, beeta-2 ja gamma, vaativat membraanifosfolipidin, kalsiumin ja diasyyliglysero-li/ forboliesterit täyttä aktivoitumista varten. PKC:n del-15 ta-, epsilon-, eeta- ja theta-muodot ovat kalsiumista riippumattomia aktivointimallissaan. PKC:n zeta- ja lambda-muo-dot ovat' riippumattomia sekä kalsiumista että diasyyligly-serolista ja niiden uskotaan vaativan vain membraanifosfo-lipidi aktivoitumista varten.

20 Vain yksi tai kaksi proteiinikinaasi C -isotsyymeis- tä voidaan sisällyttää annettuun tautitilaan. Esimerkiksi kohonneet veren glukoositasot, joita havaitaan diabeteksessa, johtavat isotsyymispesifiseen beeta-2 isotsyymin kohoamiseen vaskulaarisissa kudoksissa. Inoguchi et ai., 25 Proc. Natl. Acad. Sei. USA 8jJ: 11059 - 11065 (1992) . Diabetekseen liittyvä beeta-isotsyymin kohoaminen ihmisen verihiutaleissa on korjattu niiden muutetulla vastauksella agonisteille. Bastyr III, E. J. ja Lu, J. Diabetes 42.: (Suppl. 1) 97A (1993). Ihmisen vitamiini D -reseptorin on 30 osoitettu olevan selektiivisesti fosforyloitu proteiinikinaasi C beetalla. Tämä fosforylointi on liitetty muutoksiin reseptorin toiminnassa. Hsieh et ai., proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 9315 - 9319 (1991); Hsieh et ai., J. Biol. Chem. 268: 15118 - 15126 (1993) . Lisäksi äskettäi-35 nen tutkimus on osoittanut, että beeta-2-isotsyymi on vas- 108138 4 tuussa erytroleukemian solujakautumisesta, kun taas alfa-isotsyymi on osallisena megakariosyytin erilaistumisessa näissä samoissa soluissa. Murray et ai., J. Biol. Chem. 268: 15847 - 15853 (1993) .

5 Proteiinikinaasi C -isotsyymien kaikkialla läsnä oleva luonne ja niiden tärkeät roolit fysiologiassa tarjoavat kannustimia tuottamaan erittäin selektiivisiä PKC-inhi-biittoreita. Kun annetaan todistus, joka osoittaa tiettyjen isotsyymien sidoksen sairaustiloihin, on järkevää olettaa, 10 että inhibiittiyhdisteet, jotka ovat selektiivisiä yhdelle tai kahdelle proteiinikinaasi C -isotsyymille suhteessa muihin PKC-isotsyymeihin ja muihin proteiinikinaaseihin, ovat ylivoimaisia terapeuttisia aineita. Tällaisten yhdisteiden tulisi osoittaa suurempaa tehokkuutta ja alhaisempaa 15 toksisuutta niiden spesifisyyden nojalla.

Mikrobinen indolokarbatsoli, staurosporiini, on voimakas proteiinikinaasi C:n inhibiittori, joka vuorovaikuttaa entsyymin katalyyttisen alueen kanssa. Tamaoki et ai., Biochem. Biophvs. Res. Commun. 135: 397 - 402 (1986) ; Gross 20 et ai., Biochem. Pharmacol. 40: 343 - 350 (1990). Tämän molekyylin ja hyvin sen kaltaisten yhdisteiden terapeuttista käyttökelpoisuutta rajoittaa kuitenkin spesifisyyden puute proteiinikinaasi C:lle verrattuna muihin proteiinikinaaseihin. Ruegg, U. T. ja Burgess, G. M., Trends ». 25 Pharmacol. Sei. 10: 218 - 220 (1989) . Tästä selektiivisyy- den puutteesta johtuu hyväksymättömissä oleva toksisuus tässä molekyylien luokassa.

Staurosporiinin kaltaisten yhdisteiden lisäluokka, bisindolimaleimidit, on ollut äskettäisen tutkimuksen tar-30 kastelun kohteena. Davis et ai., FEBS Lett. 259: 61 - 63 (1989) ; Twoemy et ai., Biochem. Biophvs. Res. Commun. 171: 1087 - 1092 (1990); Toullec et ai., J. Biol. Chem. 266: 15771 - 15781 (1991); Davis et ai., J. Med. Chem. 35: 994 -1001 (1992); Bit et ai., J. Med. Chem. 36: 21 - 29 (1993). 35 Jotkut näistä yhdisteistä ovat osoittaneet enemmän selek- 5 1C8138.

tiivisyyttä proteiinikinaasi C:tä kuin muita proteiiniki-naaseja kohtaan.

Vaikka on löydetty yhdisteitä, jotka osoittavat spesifisyyttä proteiinikinaasi C:lle, tunnetaan hyvin vähän 5 isotsyymiselektiivisyydestä. Esimerkiksi staurosporiinin isotsyymiselektiivisyyden analyysi osoittaa vähäisen iso-tsyymiselektiivisyyden zeta-isotsyymin huonon inhibition poikkeuksella suhteessa muihin isotsyymeihin. McGlynn et ai., J. Cell. Biochem. 49: 239 - 250 (1992); Ward, N. E. ja 10 01 Brian, C.A., Molec. Pharmacol. 41: 387 - 392 (1992). PKC- selektiivisen yhdisteen, 3-[1-(3-dimetyyliaminopropyyli)-indol-3-yyli]-4-(lH-indol-3-yyli)-lH-pyrroli-2,5-dionin, tutkimukset ehdottavat jonkinlaista selektiivisyyttä kal-siumriippuvaisille isotsyymeille. Toullec et ai., J. Biol. 15 Chem. 266: 15771 - 15781 (1991). Tämän yhdisteen myöhemmät tutkimukset eivät havainneet mitään eroa, tai mahdollisesti hieman selektiivisyyttä, alfalle verrattuna beeta-1- ja beeta-2-isotsyymeihin. Martiny-Baron et ai., J. Biol. Chem. 268: 9194 - 9197 (1993); Wilkinson, et ai., Biochem. J.

20 294: 335 - 337 (1993). Siksi huolimatta vuosien tutkimuk sesta ja yhdisteluokkien, jotka inhiboivat proteiinikinaasi C:tä muita proteiinikinaaseja vastaan, identifioinnista, on jäänyt tarve terapeuttisesti tehokkaille isotsyymiselektii-visille inhibiittoreille.

·. 25 Tämä keksintö tarjoaa uusia, voimakkaita proteiini- kinaasi C -inhibiittoreita. Tämän keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet ovat selektiivisiä proteiinikinaasi Chile verrattuna muihin kinaaseihin, ja ne ovat melko yllättäen erittäin isotsyymiselektiivisiä. Selektiivisinä inhibiitto-30 reina yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa tiloja, * · · jotka liittyvät sokeritautiin ja sen komplikaatioihin, is-kemiaan, tulehdukseen, keskushermostosairauksiin, kar-diovaskulaariseen sairauteen, dermatologiseen sairauteen tai syöpään.

108138 6

Termi "halogeeni" merkitsee fluoria, klooria, bromia tai jodia.

Termi "C1.4-alkyyli" merkitsee syklistä, suoran tai haarautuneen ketjun alkyyliryhmää, jossa on 1 - 4 hiiliato-5 mia, kuten metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, syklo-propyyli, n-butyyli, isobutyyli, sek-butyyli, t-butyyli ja niiden kaltaiset.

Termi "farmaseuttisesti vaikuttava määrä" , merkitsee sellaista yhdisteen määrää, joka pystyy inhiboimaan PKC-10 aktiivisuus nisäkkäissä. Tietty kaavan I mukaisen yhdisteen annos määritetään tietenkin tapauksen erityisissä olosuhteissa, mukaan lukien annettavan yhdisteen, antamisreitin, tietyn hoidettavan tilan ja samanlaiset näkökohdat. Yhdisteet voidaan antaa erilaisia reittejä, mukaan lukien oraa-15 lisen, rektaalisen, ihon läpi, ihonalaisen, paikallisen, laskimonsisäisen, lihaksensisäisen tai nenänsisäisen reitin. Kaikkiin oireisiin tyypillinen vuorokausiannos sisältää noin 0,01 - 20 mg/kg kaavan 1' mukaista aktiivista yhdistettä. Edulliset vuorokausiannokset ovat noin 0,05 - 10 20 mg/kg, ihanteellisesti noin 0,1 - 5 mg/kg. Paikallista antamista varten tyypillinen annos on kuitenkin noin 500 μg yhdistettä vahingoittuneen kudoksen cm2:ä kohti. Edullisesti yhdisteen levitetty määrä on noin 30 - 300 μg/cm2, edullisemmin noin 50 - 200 μg/cm2, ja edullisimmin noin 60 -. 25 100 μg/cm2.

Termi "hoitaminen" kuvaa potilaan käsittelyä ja huolenpitoa sairautta, olotilaa tai häiriötä vastaan taistelemista varten, ja se käsittää yhdisteen antamisen, jolloin ehkäistään oireiden tai komplikaatioiden puhkeamista, lie-30 vitetään oireita tai komplikaatioita, tai eliminoidaan sai-raus, olotila tai häiriö.

Termi "isotsyymiselektiivinen" tarkoittaa proteiini-kinaasi C beeta-1- tai beeta-2-isotsyymin suosivaa inhibi-tiota verrattuna proteiinikinaasi C -isotsyymeihin alfa, 35 gamma, delta, epsilon, zeta ja eeta. Yleensä yhdisteet 7 if, /Λ f*K Λ . I u b 1 3 8 osoittavat vähintään kahdeksankertaisen eron (edullisesti 10-kertaisen eron) annoksessa, joka vaaditaan inhiboimaan PKC beeta-1- tai beeta-2-isotsyymi, ja annoksessa, joka vaaditaan inhiboimaan yhtäläisesti alfa proteiinikinaasi C 5 -isotsyymi, kuten on mitattu PKC-analyysissä. Yhdisteet osoittavat tämän eron läpi koko inhibointialueen ja sitä havainnollistetaan IC50:llä, so. 50 %:n inhibitiolla. Siten isotsyymiselektiiviset yhdisteet inhiboivat beeta-1 ja bee-ta-2 proteiinikinaasi C:n isotsyymejä paljon alhaisemmissa 10 pitoisuuksissa alhaisemmalla toksisuudella niiden muiden PKC-isotsyymien minimi-inhibition nojalla.

Happamien ryhmiensä nojalla kaavan 1' mukaiset yhdisteet käsittävät niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät emäsadditiosuolat. Tällaiset suolat käsittävät sellaiset, 15 jotka johdetaan epäorgaanisista emäksistä, kuten ammonium-ja alkali- ja maa-alkalimetallihydroksidit, -karbonaatit, -bikarbonaatit ja niiden kaltaiset, samoin kuin suolat, jotka on johdettu emäksisistä orgaanisista amiineista, kuten alifaattiset ja aromaattiset amiinit, alifaattiset dia-20 miinit, hydroksialkamiinit ja niiden kaltaiset. Tällaisiin emäksiin, jotka ovat käyttökelpoisia valmistettaessa tämän keksinnön suoloja, kuuluvat siten ammoniumhydroksidi, kaliumkarbonaatti, natriumbikarbonaatti, kalsiumhydroksidi, metyyliamiini, dietyyliamiini, etyleenidiamiini, syklohek-25 syyliamiini, etanoliamiini ja niiden kaltaiset.

Emäksisen ryhmän vuoksi kaavan I' mukaiset yhdisteet voivat esiintyä myös farmaseuttisesti hyväksyttävinä happo-additiosuoloina. Hapot, joita yleensä käytetään muodostamaan tällaisia suoloja, käsittävät epäorgaaniset hapot, 30 kuten vetykloridi-, vetybromidi-, vetyjodidi-, rikki- ja i fosforihapon, samoin kuin orgaaniset hapot, kuten para-to- lueenisulfoni-, karboksyyli-, meripihka-, sitruuna-, bent-soe-, etikkahapon ja niiden kaltaiset epäorgaaniset ja orgaaniset hapot. Tällaisiin farmaseuttisesti hyväksyttäviin 35 suoloihin kuuluvat siten sulfaatti, pyrosulfaatti, bisul- 8 >03138 faatti, sulfiitti, bisulfiitti,'fosfaatti, monovetyfosfaat-ti, divetyfosfaatti, metafosfaatti, pyrofosfaatti, kloridi, bromidi, jodidi, asetaatti, propionaatti, dekanoaatti, kap-rylaatti, akrylaatti, formaatti, isobutyraatti, heptanoaat-5 ti, propiolaatti, oksalaatti, malonaatti, sukkinaatti, su-beraatti, sebakaatti, fumaraatti, maleaatti, 2-butyyni-l,4-dioaatti, 3-heksyyni-2,5-dioaatti, bentsoaatti, klooribent-soaatti, hydroksibentsoaatti, metoksibentsoaatti, ftalaat-ti, ksyleenisulfonaatti, fenyyliasetaatti, fenyylipro-10 pionaatti, fenyylibutyraatti, sitraatti, laktaatti, hippu-raatti, β-hydroksibutyraatti, glykollaatti, maleaatti, tartraatti, metaanisulfonaatti, propaanisulfonaatti, nafta-leeni-l-sulfonaatti, naftaleeni-2-sulfonaatti, mandelaatti ja niiden kaltaiset suolat.

15 Farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen lisäksi keksintöön kuuluu muita suoloja. Ne voivat soveltua välituotteiksi puhdistettaessa yhdisteitä, valmistettaessa muita suoloja tai identifioitaessa ja karakterisoitaessa yhdisteitä tai välituotteita.

20 Kaavan I1 mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hy väksyttävät suolat voivat esiintyä myös erilaisina solvaat-teina, kuten veden, metanolin, etanolin, dimetyyliformami-din, etyyliasetaatin ja niiden kaltaisten kanssa. Tällaisten solvaattien seoksia voidaan myös valmistaa. Tällaisen . 25 solvaatin lähde voi olla kiteytyksen liuottimesta, sisäinen * valmistuksen tai kiteytyksen liuottimessa, tai hankittu tällaiseen liuottimeen. Tällaiset solvaatit ovat tämän keksinnön piirissä.

Tunnustetaan, että kaavan I1 mukaisten yhdisteiden 30 erilaisia stereoisomeerisiä muotoja voi esiintyä; esimer-• kiksi W voi sisältää kiraalisen hiiliatomin substituoidussa alkyleeniryhmässä. Yhdisteet valmistetaan normaalisti ra-semaatteina, ja niitä voidaan sopivasti käyttää sellaisenaan, mutta yksittäiset enantiomeerit voidaan eristää tai 35 syntetisoida tavanomaisilla menetelmillä, jos niin halu- 9 ^08138 taan. Tällaiset rasemaatit ja yksittäiset enantiomeerit ja niiden seokset muodostavat osan tästä keksinnöstä.

Keksintö käsittää myös farmaseuttisesti hyväksyttävät kaavan I1 mukaisten yhdisteiden lääkkeen esiasteet.

5 Lääkkeen esiaste on lääke, jota on modifioitu kemiallisesti ja joka voi olla biologisesti inaktiivinen vaikutuskoh-dassaan, mutta joka voidaan hajottaa tai modifioida yhdellä tai useammalla entsymaattisella tai muulla in vivo -menetelmällä alkuperäiseen bioaktiiviseen muotoon. Tällä 10 lääkkeen esiasteella tulisi olla erilainen farmakokineet-tinen profiili kuin alkuperäisellä, mahdollistaen helpomman imeytymisen limakalvoepiteelin kautta, paremman suolan muodostumisen tai liukoisuuden ja/tai parantuneen systeemisen stabiilisuuden (esimerkiksi plasma puoliintumisajan 15 kasvamisen). Tyypillisesti tällaiset kemialliset modifikaatiot käsittävät seuraavat: 1) esteri- tai amidijohdannaiset, jotka voidaan pilkkoa esteraaseilla tai lipaaseilla; 2) peptidit, jotka voidaan tunnistaa spesifisillä 20 tai ei-spesifisillä proteaaseilla; tai 3) johdannaiset, jotka kasaantuvat vaikutuskohdas-sa lääke-esiastemuodon tai modifioidun lääke-esiastemuodon membraanivalinnan avulla; tai mikä tahansa kohtien 1-3 yllä yhdistelmä. Tavanomaiset menetelmät sopivan lääkkeen 25 esiastejohdannaisten valintaa ja valmistusta varten kuvataan esimerkiksi julkaisussa H. Bundgaard, Design of Prod-• rugs, (1985) .

Tiettyjen bis-indoli-N-maleimidijohdannaisten synteesi kuvataan julkaisussa Davis et ai. US-patentti 30 5 057 614.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien, kaavan 1' mukaisten yhdisteiden ja niiden suolojen valmistamisek- i« si on tunnusomaista, että yhdiste, jolla on kaava II' 1C8138 10 o^°y^o 5 ^ ^ (II') (ch2)2 (ch2)2 N(wr 10 jossa W merkitsee samaa kuin edellä, muutetaan heksametyy-lidisilatsaanilla ammonolysoimalla vastaavaksi kaavan 1' mukaiseksi yhdisteeksi.

15 Yleensä uudet kaavan 1' mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa seuraavasti:

Kaavio 1 ch3

ch3 I

20 0 *0 halogeeni halogeeni Mghalogeeni ^ H h <ΙΙ:Π (IV) (V) 25 jolloin halogeeni on sama kuin on aikaisemmin määritelty, edullisesti halogeeni on kloori, bromi tai jodi. Yhdiste III on edullisesti 2,3-dikloori-N-metyylimaleimidi.

Reaktio yhdisteen III ja indolin, yhdiste IV, välil-30 lä tunnetaan yleisesti Grignard-reaktiona. Reaktio suorite-:: taan inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten tolueenis- sa, lämpötilassa välillä huoneenlämpötila ja reaktioseoksen palautusjäähdytyslämpötila. Merkittävimmin reaktio, joka kuvataan kaaviossa 1, on riippuvainen liuotinolosuhteista. 3 5 Kun reaktio suoritetaan tolueeni : THF: eetteri-liuot insystee- '08138 missä, se tarjoaa yhdisteen V yli 80 %:n saannolla ja yli 95 %:n puhtaudella. Tuote saostetaan reaktioseoksesta am-moniumkloridilla, NH4C1. Saatu välituote, yhdiste V, voidaan eristää standardimenetelmillä.

5 Bis-3,4-(31-indolyyli)-lN-metyylipyrroli-2,5-dioni, yhdiste V, voidaan sitten muuttaa alkalisella hydrolyysillä vastaavaksi kaavan VI mukaiseksi anhydridiksi alalla tunnetuilla menetelmillä, jotka on kuvattu julkaisussa Brenner et ai., Tetrahedron 44: 2887 - 2892 (1988). Edullisesti 10 yhdiste V saatetaan reagoimaan 5 N KOH:n kanssa etanolissa lämpötilassa 25 °C - palautusjäähdytyslämpötila.

N N

H H

(VI)

Kaavan V mukaiset yhdisteet ovat yleensä stabiilim-20 pia kuin kaavan VI mukaiset yhdisteet. Siksi on edullista, että yhdisteet V saatetaan reagoimaan kaavion 2 mukaisesti, jolloin valmistetaan kaavan II mukaisia yhdisteitä. Alan ammattimies tunnistaa kuitenkin, että kaavan VI mukaiset yhdisteet voidaan saattaa reagoimaan myös kaavion 2 mukai-25 sesti.

Kaavio 2

L-X

(VI) \ 3 0 tai + W -(II) (V) /

L-Y

(VII) v jolloin X ja Y ovat -(CH2)2- ja W on sama kuin aikaisemmin 35 on määritelty. L on hyvä poistuva ryhmä, kuten kloori, bromi, jodi, mesyyli, tosyyli ja niiden kaltaiset. L voi olla myös hydroksi tai muu prekursori, joka voidaan helposti 12 08138 muuttaa hyväksi poistuvaksi ryhmäksi alalla tunnetuilla menetelmillä. Esimerkiksi hydroksi voidaan muuttaa helposti sulfonihapon esteriksi, kuten mesyyli, saattamalla hydroksi reagoimaan metaanisulfonyylikloridin kanssa, jolloin val-5 mistetaan mesylaatti poistuva ryhmä.

Kaaviolla 2 esitetty reaktio suoritetaan millä tahansa tunnetulla N-substituoitujen indolien valmistusmenetelmällä. Tämä reaktio käsittää yleensä suunnilleen ekvimo-laariset määrät kahta reagenssia, vaikka muut suhteet, eri-10 tyisesti ne, joissa alkylointiaine on ylimääränä, ovat käytännöllisiä. Reaktio suoritetaan parhaiten polaarisessa aproottisessa liuottimessa käyttäen alkalimetallisuolaa, tai muita sellaisia alkylointiolosuhteita kuten alalla ymmärretään. Kun poistuva ryhmä on bromi tai kloori, kata-15 lyyttinen määrä jodidisuolaa, kuten kaliumjodidia, voidaan lisätä nopeuttamaan reaktiota. Reaktio-olosuhteet käsittävät seuraavat: Kaliumheksametyylidisilatsidi dimetyyliform-amidissa tai tetrahydrofuraanissa, natriumhydridi dimetyy-liformamidissa.

20 Edullisesti reaktio suoritetaan käyttäen hidasta käänteistä lisäystä cesiumkarbonaatilla joko asetonitrii-lissä, dimetyyliformamidissa (DMF) tai tetrahydrofuraanissa (THF). Reaktion lämpötila on edullisesti noin ympäristön lämpötila - reaktioseoksen palautusjäähdytyslämpötila.

25 Alan ammattimies tunnistaa, että kaaviossa 2 kuvat tua reaktiota voidaan käyttää kaavan Vila mukaisten yhdisteiden kanssa: L-Y· 30 L-X‘ *: Vila X' ja Y' ovat suojattu karboksi, suojattu hydroksi tai suojattu amiini. Kaavion 2 alkyloinnin jälkeen X' ja Y' voi-35 daan muuttaa ryhmiksi, jotka pystyvät kytkeytymään, jolloin '08138 13 muodostuu W. Tämä menetelmä on'edullinen niiden kaavan 1' mukaisten yhdisteiden valmistuksessa, joissa yhdisteissä W on -0-. X' :n ja Y' :n kytkentä, jolloin muodostuu erilaisia eetterijohdannaisia, tunnetaan alalla ja kuvataan esimer-5 kiksi julkaisuissa Ito, et ai., Chem. Pharm. Bull. 41(6) : 1066 - 1073 (1993); Katso, et ai., J. Chem. Pharm. Bull. 34: 4 86 (1986); Goodrow, et ai., Synthesis 1981: 457;

Harpp, et ai., J, Am. Chem. Soc, 93: 2437 (1971); ja Evans, et ai., J. Ora. Chem. 50: 1830 (1985).

10 Alan ammattimies tunnistaa, että kaavan V mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa kaavan II mukaisiksi yhdisteiksi kaksivaiheisella synteesillä, kuten on kuvattu kaaviossa 3.

Kaavio 3 15 cwy° tai + L-X-W-Y-L2 ΟΠΜ! _► (II)

/ H

X

2 0 \yW^ L2 (VIII) (IX) joloin X ja Y ovat -(CH2)2-, V on I tai N-CH3 ja W ja L ovat samoja kuin on aikaisemmin määritelty. L2 on suojattu hyd-. 25 roksi tai muu ryhmä, joka voidaan helposti muuttaa hyväksi φ poistuvaksi ryhmäksi alalla tunnetuilla menetelmillä. Kytkentä yhdisteen V tai VI ja yhdisteen VIII välillä on alky-lointi, kuten aikaisemmin on keskusteltu. Monoalkyloidusta välituotteesta IX poistetaan suojaus ja L2 muutetaan pois-30 tuvaksi ryhmäksi. Esimerkiksi jos hydroksi on suojattu t-butyylidimetyylisilyylillä (TBDMS) , TBDMS poistetaan selek-tiivisesti käyttäen hapanta metanolia. Saatu vapaa hydroksi muutetaan sitten poistuvaksi ryhmäksi, kuten alkyylihalo-genidiksi, edullisesti alkyylijodidiksi tai -bromidiksi 35 (CBr4 trifenyylifosfiinissa) tai sulfonaatiksi (mesyyliklo- 108138 14 ridi trietyyliamiinissa). Makrolidi muodostetaan sitten alkyloimalla käyttäen hidasta käänteislisäystä emäksen, kuten kaliumheksametyylidisilatsidin tai natriumhydridin, mutta edullisesti Cs2C03:n liuokseen polaarisessa aprootti-5 sessa liuottimessa, kuten asetonitriilissä, DMF:ssa, THFrssa, lämpötiloissa ympäristö - palautusjäähdytys.

Kaaviot 2 ja 3 havainnollistavat välituotteiden valmistusta. Aivan odottamatta kaavan II mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa oleellisesti suuremmalla saannolla, kun 10 alkylointi suoritetaan käyttäen hidasta käänteislisäystä Cs2C03:iin polaarisessa aproottisessa liuottimessa. Hidas käänteislisäys käsittää seoksen, jonka muodostavat yhdiste ja alkylointiaine (kaavio 2) tai yhdiste (kaavio 3) , yhdistämisen emäksen kanssa nopeudella noin 0,1 - 2,0 ml/tunti. 15 Kunkin reagenssin pitoisuus seoksessa on noin 1,5 -0,001 M. Kun reaktio suoritetaan monoalkyloidulla yhdisteellä (kaavio 3), pitoisuus on noin 3 - 0,001 M. Hitaasta lisäyksestä saadaan noin 0,01 μΜ - 1,5 M reagenssipitoisuus reaktioastiassa. Alan ammattimies tunnistaa, että suurem-2 0 maila lisäysnopeudella reaktiossa voitaisiin käyttää alhaisempia reagenssipitoisuuksia. Samalla tavalla hitaammalla lisäysnopeudella reaktiossa voitaisiin käyttää suurempia reagenssipitoisuuksia. Edullisesti yhdiste lisätään nopeudella noin 0,14 ml/tunti yhdisteen ja alkylointiaineen ol-. 25 lessa 0,37 M. On edullista, että Cs2C03 lisätään ylimäärä nä -- edullisimmin Cs2C03:n suhteessa alkylointiaineeseen 4:1. Edullisia polaarisia aproottisia liuottimia ovat ase-tonitriili, dimetyyliformamidi (DMF), asetoni, dimetyyli-sulfoksidi (DMSO), dioksaani, dietyleeniglykolimetyylieet-30 teri (diglyymi), tetrahydrofuraani (THF) tai muut polaariset aproottiset liuottimet, joihin reagenssit ovat liukenevia. Reaktio suoritetaan lämpötiloissa noin 0 °C - pa-lautusjäähdytyslämpötila. Alan ammattimies tunnistaa, että yhdisteen ja alkylointiaineen seoksen suhde ei ole ratkai-35 seva. On kuitenkin edullista, että reagenssit sekoitetaan 15 1 081 58 suhteessa 0,5 - 3 ekvivalenttia kutakin. Edullisimmin rea-genssit sekoitetaan 1:1.

Kun V on N-CH3, yhdiste II muutetaan vastaavaksi anhydridiksi (V on O) alkalisella hydrolyysillä. Alkalinen 5 hydrolyysi käsittää vaiheen, jossa yhdiste saatetaan reagoimaan emäksen kanssa, kuten natriumhydroksidin tai ka-liumhydroksidin, C^-alkoholissa (edullisesti etanolissa), DMSO/vedessä, dioksaani/vedessä tai asetonitriili/vedessä lämpötilassa noin 25 °C - palautusjäähdytyslämpötila. Rea-10 goivien yhdisteiden pitoisuus ei ole ratkaiseva.

Anhydridi (V on O) muutetaan kaavan I mukaiseksi maleimidiksi ammonolyysillä. Ammonolyysi käsittää vaiheen, jossa anhydridi saatetaan reagoimaan ylimäärän kanssa hek-sametyylidisilatsaania tai ammoniumsuolaa (ammoniumasetaat-15 ti, bromidi tai kloridi) ja C^-alkoholia (edullisesti me-tanolia) polaarisessa aproottisessa liuottimessa, kuten DMF:ssa huoneenlämpötilassa. Edullisesti heksametyyli-disilatsaani tai ammoniumsuola saatetaan reagoimaan suhteessa, joka on suurempi kuin noin 5:1 ekvivalenttia anhyd-20 ridiä.

Kaikissa yllä olevissa kaavioissa on edullista, että reaktiot suoritetaan sopivien suojaryhmien kanssa. Alan ammattimies kuitenkin tunnistaa, että monet näistä reaktioista voidaan suorittaa ilman suojaryhmiä, jos käytetään sopi-25 via reaktio-olosuhteita, estoreagensseja tai niiden kaltai sia. On edullista, että kun W sisältää hydroksiryhmän, se suojataan tert-butyylidifenyylisilyylioksina (TBDPS) tai trifenyylimetyylinä (trityyli) indolin alkyloinnin tai asy-loinnin aikana. Saadut kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan 30 eristää ja puhdistaa standardimenetelmillä.

··. Yhdisteet III, IV, V, VII, Vila ja VIII ja mitkä tahansa muut reagenssit, jotka vaaditaan edellä olevia reaktioita varten, ovat joko kaupallisesti saatavilla, alalla tunnettuja tai ne voidaan valmistaa alalla tunne-35 tuilla menetelmillä. Esimerkiksi yhdiste III voidaan vai- 16 108138 mistaa menetelmillä, jotka on kuvattu julkaisussa Edge et ai., Chem. and Ind. 130 (1991); yhdiste IV valmistetaan edullisesti in situ saattamalla sopivasti substituoitu indoli reagoimaan alkyylimagnesiumhalogenidin kanssa, kuten 5 etyylimagnesiumbromidi, tunnetulla tavalla.

Kuten aikaisemmin on mainittu, tämän keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet ovat voimakkaita prote-iinikinaasi C -inhibiittoreita. Yhdisteet ovat selektiivi-sempiä proteiinikinaasi C:tä kuin muita kinaaseja kohtaan. 10 Tämän keksinnön mukaisesti saatavien yhdisteiden kyky selektiivisesti inhiboida proteiinikinaasi C:tä määritettiin kalsiumkalmodulin-riippuvainen proteiinikinaasi -analyysillä, kaseiini proteiinikinaasi II -analyysillä, cAMP-riippuvaisen proteiinikinaasin katalyyttinen alayksik-15 kö -analyysillä ja proteiini-tyrosiinikinaasi -analyysillä.

Kalsiumkalmodulin-riippuvainen proteiinikinaasi -analyysi (CaM)

Kalsiumkalmodulin-riippuvainen proteiinikinaasi -analyysi on kuvattu julkaisussa Journal of Neuroscience. 20 3.: 818 - 831 (1983) . Analyysikomponentit ovat kokonaisti lavuudeltaan 250 μΐ: 55 mM HEPES (4-(2-hydroksietyyli)-1-piperatsiinietaanisulfonihappo), pH 7,5, 2,75 mM ditiotrei-toli, 2,2 mM EGTA (etyleenibis(oksietyleeninitrilo)tetra-etikkahappo, käytetty nollapuskurissa), 1,1 mM kalsiumklo-25 ridi (Sigma, St. Louis, Missouri) (käytetty kontrolli-puskurissa), 10 mM magnesiumkloridi (Sigma, St. Louis, Missouri), 200 μg/ml histoni tyyppi HL (Worthington), 10 μΐ DMSO tai DMSO/inhibiittori ja 30 μΜ (gamma 32P) ATP (DuPont). Reaktio aloitetaan lisäämällä kalsiumkalmodulin-30 riippuvainen proteiinikinaasi (eristetty rotan aivohomo-: genaatista), inkuboidaan huoneenlämpötilassa 10 minuuttia ja pysäytetään lisäämällä 0,5 ml jääkylmää trikloorietikka-happoa (Amresco).minkä jälkeen 100 μΐ 1 mg/ml naudan see-rumialbumiinia (Sigma, St. Louis, Missouri). Sakka otetaan 108138 17 talteen tyhjösuodatuksella lasikuitusuodattimilla ja kvan-tifioidaan laskemalla beeta-tuikelaskimella.

Puskurikomponentit:

Kontrollipuskuri Nollapuskuri 5 200 mM HEPES pH 7,5 3 125 μΐ 625 μΐ 50 mM DTT 625 μΐ 125 μΐ histoni 1 250 μΐ 250 μΐ 100 mM kalsium 125 μΐ ----- 100 mM EGTA ------- 50 μΐ 10 tisl. vesi 2375 μΐ 450 μΐ

Analyysikomponentit: 165 μΐ puskuria 25 μΐ kalmodulin (250 μg/ml) 10 μΐ DMSO tai DMSO/inhibiittoria 15 25 μΐ kinaasientsyymiä 25 μΐ AT32P:ta

Kaseiini proteiinikinaasi II -analyysi (CK-II)

Kaseiini proteiinikinaasi II -analyysi on kuvattu julkaisussa Neurochem. Res.. 13: 829 - 836 (1988) . Analyy-20 sikomponentit ovat kokonaistilavuudeltaan 250 μΐ: 20 mM

Tris-HCl, pH 7,5, 5 mM natriumfluoridi, 50 mg/ml kaseiini (Sigma, St. Louis, Missouri), 10 mM magnesiumkloridi (Sigma, St. Louis, Missouri), 10 μΐ DMSO tai DMSO/inhibiit-tori ja 30 μιη (gamma- 32P) ATP (DuPont) . Reaktion aloitus 25 suoritetaan lisäämällä kaseiini proteiinikinaasi II (eristetty rotan aivohomogenaatista), inkuboidaan huoneenlämpö-tilassa 10 minuuttia ja pysäytetään lisäämällä 0,5 ml jääkylmää trikloorietikkahappoa (Amresco), minkä jälkeen 100 μΐ 1 mg/ml naudan seerumialbumiinia (Sigma, St. Louis, 30 Missouri). Sakka otetaan talteen tyhjösuodatuksella lasikuitusuodattimilla ja kvantitioitiin laskemalla beeta-tuikelaskimella.

Analyysikomponentit lisäysjärjestyksessä 175 μΐ puskuria 35 10 μΐ DMSO tai DMSO/inhibiittoria 108138 18 25 μΐ ΑΤ32Ρ 300 μΜ magnesiumkloridissa 40 μΐ entsyymiä (laimentamaton)

Puskuri valmistetaan seuraavasti: (Lopullinen tilavuus = 3,5 ml: 20 analyysin määrä) 5 500 μΐ kutakin: 200 mM Tris-HCl pH 7,5 50 mM natriumfluoridi 50 mg/ml kaseiini + 2 ml tisl. vesi_

Kokonaistilavuus 3,5 ml 10 cAMP-riippuvaisen proteiinikinaasin katalyyttinen alayksikkö -analyysi

Analyysikomponentit ovat kokonaistilavuudeltaan 250 μΐ: 55 mM HEPES-puskuri (Sigma, St. Louis, Missouri) pH 7,5, 200 μg/ml histoni tyyppi HL (Worthington), 10 mM mag-15 nesiumkloridi (Sigma, St. Louis, Missouri), 10 μΐ DMSO tai DMSO/inhibiittori ja 3 0 μΜ (gamma 32P) ATP (DuPont) . Reaktio aloitetaan lisäämällä naudan sydän cAMP-riippuvaisen kinaasin katalyyttinen alayksikkö (Sigma, St. Louis, Missouri) , inkuboidaan 30 °C:seen 10 minuutin ajan ja pysäyte-20 tään lisäämällä 0,5 ml jääkylmää trikloorietikkahappoa (Amresco), minkä jälkeen lisätään 100 μΐ 1 mg/ml naudan seerumialbumiinia (Sigma). Sakka otetaan talteen tyh-jösuodatuksella lasikuitusuodattimilla käyttäen TOMTEC™:a ja kvantitioidaan laskemalla beeta-tuikelaskimella. Tämä . 25 analyysi tehdään identtisesti proteiinikinaasi C (PKC) ent- syymianalyysille, paitsi että fosfolipidejä eikä diasyyli-glyserolia käytetä lainkaan analyysissä, ja histonisubs-traatti on spesifinen cAMP-riippuvaiselle katalyyttiselle alayksikköentsyymille.

30 Proteiini-tyrosiinikinaasi -analyysi (src)

Analyysikomponentit ovat seuraavat: 10 μΐ Raytideä 10 μΐ kinaasia 4 μΐ DMSO tai DMSO/inhibiittoria 35 6 μΐ 200 mM HEPES pH 7,5:tä 19 10 8138 10 μΐ ΑΤ32Ρ:tä Tämä analyysi on kuvattu julkaisussa Onogene Science, Inc. Cat. #PK02 ja PK03 (1990).

Yllättäen tämän keksinnön mukaisesti saatavat yhdis-5 teet ovat myös isotsyymiselektiivisiä inhibiittoreita, siis yhdisteet inhiboivat selektiivisesti proteiinikinaasi C beeta-1- ja beeta-2-isotsyymejä. Tämä isotsyymiselektiivi-syys määritettiin PKC-entsyymianalyysillä.

PKC-entsyymianalyysi 10 PKC-entsyymit = alfa, beeta I, beeta II, gamma, del ta, epsilon, eeta ja zeta.

Analyysikomponentit, kokonaistilavuudeltaan 250 μΐ, ovat seuraavat:

Vehikkelit koostuvat 120 ^g/ml:sta fosfatidyylise-15 riiniä (Avanti Polar Lipids) ja riittävästä diasyyli- glyserolista (Avanti Polar Lipids), jolloin aktivoidaan entsyymi maksimiaktiivisuuteen 20 mMrssa HEPES-puskurissa (Sigma, St. Louis, Missouri) pH 7,5, 940 ^M:ssa kalsiumklo-ridissa (Sigma, St. Louis, Missouri) vain alfa-, beeta-1-, 20 beeta-2- ja gamma-entsyymin analysoimiseksi, 1 mM:ssa EGTA:ssa kaikkia entsyymejä varten, 10 mMrssa magnesiumklo-ridissa (Sigma, St. Louis, Missouri) ja 3 0 μΜ.-ssa (gamma-32P) ATPrssä (DuPont). Kaikkia entsyymejä varten käytetään joko histoni tyyppi HL (Worthington) tai myeliiniemäspro-. 25 teiinia substraattina. Analyysi aloitetaan lisäämällä pro- teiinikinaasi C entsyymi, inkuboidaan 30 °C:ssa 10 minuutin ajan ja pysäytetään lisäämällä 0,5 ml kylmää trikloorietik-kahappoa (Amresco), minkä jälkeen 100 μΐ 1 mg/ml naudan seerumialbumiinia (Sigma, St. Louis, Missouri). Sakka ote-30 taan talteen tyhjösuodatuksella lasikuitusuodattimilla käyttäen TOMTEC™-suodatussysteemiä ja kvantifioidaan laskemalla beeta-tuikelaskimella.

Taulukko 1 osoittaa tyypillisten yhdisteiden PKC-selektiivisyyden edellä olevissa analyyseissä.

35 ao TCS138

Taulukko 1 IC50(μΜ)

Esim. PKC-α PKC-βΙ ΡΚθβ2 ΡΚΑ CaM CK-II src 1 1 0,05 0,04 ΝΑ ΝΑ >100 ΝΑ 2 4 0,4 0,2 >100 >100 >100 >100 3 0,3 0,03 0,02 >100 3 >100 >100 4 0,3 0,02 0,008 ΝΑ 3 >100 37 4s 1,3 0,048 0,033 >100 2,5 >100 63 4r 0,30 0,005 0,021 >100 0,69 >100 33 10 5 0,28 0,012 0,005 >100 4,0 >100 21 5s 0,36 0,0047 0,0059 >100 8 >100 >100 5r 0,4 0,01 0,01 >100 5 >100 63 6 4,2 0,043 0,035 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 7 >5,0 0,15 0,18 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 15 8 2,5 0,037 0,032 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 9 3,0 0,35 0,16 >100 26 >100 58 11 5 0,3 0,1 >100 20 >100 >100 12 19 0,6 0,5 >100 93 >100 ΝΑ 13 >5,0 1,9 0,94 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 20 15 >5,0 2,9 0,83 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 16 >5,0 3,2 2,3 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 17s 0,24 <0,005 <0,005 0,16 2,2 >100 ΝΑ 18s 6,4 0,38 0,30 >100 4,4 >100 >100 18r 3,4 0,083 0,087 >100 8,8 >100 ΝΑ 19r 0,48 0,032 0,030 >100 2,2 >100 >100 25 20r 0,89 0,04 0,03 >100 7,3 >100 74 20s · 3 0,1 0,05 >100 6,7 >100 16 21r 68 0,18 0,05 >100 56 >100 >100

21s >5,0 0,17 0,044 ΝΑ ΝΑ ΝΑ NA

23s 1,8 0,30 0,24 ΝΑ ΝΑ ΝΑ NA

30 24s 3,5 0,49 0,38 NA NA NA NA

25r 94 0,043 0,12 >100 22 >100 NA

27 2,2 0,049 0,026 NA NA NA NA

28 1 0,07 0,08 NA 2 >100 >100

29 >100 0,7 0,8 NA NA NA NA

35 30 >100 1 2 >100 >10 >10 >100 31 0,3 0,02 0,03 >100 0,47 >100 >100

31r 0,24 0,019 0,008 NA NA _NA NA

32 0,1 0,01 0,008 >100 0,9 >100 72 Γ 33 0,4 0,05 0,04 NA 0,6 >100 61 108138 21 34 1 0,1 0,1 ΝΑ 4 >100 >100 35 9 3 2 ΝΑ 82 >100 >100 36r 0,45 0,005 0,014 >100 7,1 >100 61 37 0 7 0,05 0,04 >100 5 >100 >100 38 4 0,2 0,1 >100 9 >100 >100 5 39 31 0,4 0,3 >100 >100 >100 >100 40 0,6 0,05 0,03 >100 5 >100 4,4 40s 0,4 0,03 0,02 >100 41 >100 ΝΑ 40r 0,30 0,01 0,01 >100 8,0 >100 71 41 0,3 0,03 0,03 ΝΑ 3 >100 91 10 42 >100 0,5 0,6 >100 >100 >100 >100 43 0,4 0,04 0,03 ΝΑ 0,6 >100 >100 44 >100 2 2 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 45 3 0,1 0,1 >100 39 >100 >125 46 3 0,04 0,04 >100 63 >100 >100 47 2 0,07 0,06 >100 70 >100 >125 15 48 >100 0,5 0,3 >100 >100 >100 >100 49 10 0,6 0,4 >100 >100 >100 >100 51 49 0,5 0,5 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 54 0,16 0,005 0,004 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 55 >5,0 0,41 0,38 ΝΑ ΝΑ ΝΑ ΝΑ 20 ΝΑ - tietoja ei ole saatavilla.

Keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet inhiboivat proteiinikinaasi C:tä IC50-arvon ollessa alle 100 μτη. Lisäk-·. 25 si keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet inhiboivat se lektiivisesti beeta-1 ja beeta-2 proteiinikinaasi C -isot-syymejä ja niiden IC50-arvo on suhteessa näihin isotsyymei-hin alle 10 μτη.

Proteiinikinaasi C:n inhibiittorina yhdisteet ovat 30 käyttökelpoisia hoidettaessa tiloja, joissa proteiinikinaa- si C on osoittanut roolin patologiassa. Tiloihin, jotka tunnistetaan alalla, kuuluvat: sokeritauti ja sen komplikaatiot, iskemia, tulehdus, keskushermoston häiriöt, kar-diovaskulaarinen sairaus, Alzheimerin tauti, dermatologinen 35 sairaus ja syöpä.

108138 22

Proteiinikinaasi C -inhibiittorit ovat osoittaneet estävänsä tulehdusvasteita, kuten neutrofiilin oksidatiivi-nen purkaus, CD3 säätely alaspäin T-lymfosyyteissä ja for-bolin aiheuttama käpäläturvotus. Twoemy, B. et ai. Biochem.

5 Biophvs. Res♦ Commun. 171: 1087 - 1092 (1990) ; Mulqueen, M.

J. et ai. Agents Actions 37: 85 - 89 (1992) . Siis PKC:n inhibiittoreina nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa tulehdusta.

Proteiinikinaasi C -aktiivisuudella on keskeinen 10 rooli keskushermoston toiminnassa. Huang, K. P. Trends Neurosci. 12: 425 - 432 (1989) . Lisäksi proteiinikinaasi C -inhibiittorit ovat osoittaneet ehkäisevänsä vauriota, jota havaitaan keskeisessä ja keskusiskeemisessä aivovauriossa ja aivoturvotuksessa. Hara, H. et ai. J. Cereb. Blood Flow 15 Metab. 10: 646 - 653 (1990); Shibata, S. et ai. Brain Res.

594: 290 - 294 (1992). Äskettäin proteiinikinaasin C:n on määritetty olevan sotkeutunut Alzheimerin tautiin. Shimo-hama, S. et ai., Neurology 43: 1407 - 1413 (1993). Siis tämän keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet ovat käyttö-20 kelpoisia hoidettaessa Alzheimerin tautia ja iskeemistä aivovauriota.

Proteiinikinaasi C -aktiivisuus on pitkään liitetty solukasvuun, kasvaimen edistymiseen ja syöpään. Rotenberg, S. A. ja Weinstein, I. B. Biochem. Mol. Aspects Sei. Cancer . 25 1.: 25 - 73 (1991). Ahmad et ai. , Molecular Pharmacology: 43 858 - 862 (1993) . Tiedetään, että proteiinikinaasi C:n inhibiittorit ovat tehokkaita ehkäistäessä kasvaimen kasvua eläimissä. Meyer, T. et ai. Int. J. Cancer 43.: 851 - 856 (1989); Akinagaka, S. et ai. Cancer Res. 51: 4888 - 4892 30 (1991). Tämän keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet toi- : mivat myös monilääke käänteisaineina (MDR) tehden niistä tehokkaita yhdisteitä annettaessa muiden kemoterapeuttisten aineiden yhteydessä.

Proteiinikinaasi C aktiivisuudella on tärkeä rooli 35 myös kardiovaskulaarisessa sairaudessa. Kasvaneen proteii- 23 1°8138 nikinaasi C -aktiivisuuden verisuonistossa on osoitettu aiheuttavan lisääntynyttä verisuonien supistumista ja kohonnutta verenpainetta. Tunnettu proteiinikinaasi C -inhibiittori ehkäisi tämän lisääntymisen. Bilder, G. E. et ai.

5 J, Pharmacol. Exp. Ther. 252: 526 - 530 (1990) . Koska proteiinikinaasi C -inhibiittorit osoittavat neutrofiilin ok-sidatiivisen purkauksen inhibitiota, proteiinikinaasi C:n inhibiittorit ovat käyttökelpoisia myös hoidettaessa kar-diovaskulaarista iskemiaa ja parannettaessa iskemiaa seulo raavaa sydämen toimintaa. Muid, R. E. et ai. FEBS Lett.

293: 169 - 172 (1990); Sonoki, H. et ai. Kokvu-To Junkan 37: 669 - 674 (1989) . Proteiinikinaasi C:n roolia veri- hiutaletoiminnassa on myös tutkittu, ja kuten on osoitettu kohonneiden proteiinikinaasi C -tasojen ollessa korjattu 15 kasvaneella vasteella agonisteihin. Bastyr III, E. J. ja Lu, J. Diabetes 42: (Suppl. 1) 97A (1993). PKC on osallis tunut biokemialliseen reittiin mikrovaskulaarisen permeabi-liteetin verihiutaleaktiivisuustekijän modulaatiossa. Ko-bayashi et ai., Amer. Phvs. Soc. H1214-H1220 (1994). Voi-2 0 makkaiden proteiinikinaasi C -inhibiittoreiden on osoitettu vaikuttavan agonistin aiheuttamaan kasaantumiseen verihiutaleissa. Toullec, D. et ai. J. Biol. Chem. 266: 15771 -15781 (1991). Proteiinikinaasi C -inhibiittorit estävät myös agonistin aiheuttaman sileän lihaksen solujakautumis-' 25 ta. Matsumoto, H. ja Sasaki, Y. Biochem. Biophvs. Res.

Commun. 158: 105 - 109 (1989) . Siksi nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa kardiovaskulaarista sairautta, ateroskleroosia ja restenoosia.

Proteiinikinaasi C:n epänormaali aktiivisuus on myös 30 liitetty dermatologisiin sairauksiin, kuten psoriasikseen. Horn, F. et ai. J. Invest. Dermatol. 88: 220 - 222 (1987); Raynaud, F. ja Evain-Brion, D. Br. J. Dermatol. 124: 542 -546 (1991). Psoriasis on karakterisoitu kerätinosyyttien epänormaalilla solujakautumisella. Tunnetut proteiinikinaa-35 si C -inhibiittorit ovat osoittaneet inhiboivansa keratino- 24 >08138 syytin solujakautumista tavalla, joka vastaa niiden voimakkuutta PKC-inhibiittoreina. Hegemann, L. et ai. Arch. Dermatol. Res. 283: 456 - 460 (1991); Bollag, W. B. et ai.

J. Invest. Dermatol. 100: 240 - 246 (1993) . Siis yhdisteet 5 ovat käyttökelpoisia PKC-inhibiittoreina hoidettaessa psoriasista .

Proteiinikinaasi C on liitetty useisiin diabeteksen eri näkökohtiin. Proteiinikinaasi C:n liiallinen aktiivisuus on liitetty insuliini merkkivirheisiin ja siksi insu-10 liiniresistenssiin, jota havaitaan tyypin II diabeteksessä.

Karasik, A. et ai. J. Biol. Chem. 265: 10226 - 10231 (1990); Chen, K. S. et ai. Trans. Assoc. Am. Physicians 104: 206 - 212 (1991); Chin, J.E. et ai. J. Biol. Chem.

268: 6338 - 6347 (1993). Lisäksi tutkimukset ovat osoitta-15 neet selvän kasvun proteiinikinaasi C -aktiivisuudessa kudoksissa, joiden tiedetään olevan altis diabeettisille komplikaatioille, kun ne altistetaan hyperglyseemisille olotiloille. Lee, T.-S. et ai. J. Clin. Invest. 83: 90 - 94 (1989); Lee, T.-S. et ai. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86: 20 5141 - 5145 (1989); Craven, P. A. ja DeRubertis, F. R. J.

Clin. Invest. 83: 1667 - 1675 (1989); Wolf, B. A. et ai. J. Clin. Invest. 87: 31 - 38 (1991); Tesfamariam, B. et ai. J. Clin. Invest. 87: 1643 - 1648 (1991).

Keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet ovat myös . 25 isotsyymiselektiivisiä. Yhdisteet inhiboivat edullisemmin proteiinikinaasi C beeta-1- ja beeta-2-isotsyymiä kuin proteiinikinaasi C -isotsyymejä, so. alfa, gamma, delta, epsilon, zeta ja eeta. Yleensä yhdisteet osoittavat minimissään 10-kertaista eroa annoksessa, joka vaaditaan inhiboimaan 30 PKC-beeta-1- tai -beeta-2-isotsyymiä, ja annoksessa, joka • vaaditaan alfa proteiinikinaasin C -isotsyymin yhtäläistä inhibitiota varten mitattuna PKC-analyysissä. Siis tämän keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet inhiboivat proteiinikinaasi C:n beeta-1- ja beeta-2-isotsyymejä paljon al-35 haisemmissa pitoisuuksissa samalla kun muita PKC-isotsyy- '108138 25 mejä inhiboidaan minimissään. Tämä isotsyymiselektiivisyys osoitetaan taulukossa 2 tyypilliselle yhdisteelle.

Taulukko 2 5 Isotsyymit ED50 (μΜ)

Yhdiste a SI &2 γ 6 e ζ η (esim.) 5 0,28 0,01 0,005 0,23 0,31 1,0 38 0,035 9 10

Selektiivisyyden vuoksi yhdisteet ovat erityisen käyttökelpoisia hoidettaessa niitä sairaustiloja, joihin proteiinikinaasi C -isotsyymi beeta-1 tai beeta-2 liitty-15 vät. Esimerkiksi diabeteksessä todetut kohonneet veren glu-koositasot johtavat beeta-2-isotsyymin isotsyymispesifiseen kohoamiseen vaskulaarisissa kudoksissa. Inoguchi et ai., Proc. Natl. Äcad. Sei. USA 89: 11059 - 11065 (1992). Diabetekseen liittyvä beeta-isotsyymin kohoaminen ihmisen veri-20 hiutaleissa on korjattu niiden muutetulla vasteella agonis-teihin. Bastyr III, E. J. ja Lu, J. Diabetes 42: (Suppl 1) 97A (1993) . Ihmisen D-vitamiinireseptorin on osoitettu olevan selektiivisesti fosforyloitu proteiinikinaasi C beetal-: la. Tämä fosforylaatio on liitetty muutoksiin reseptorin 25 toiminnassa. Hsieh et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 9315 - 9319 (1991); Hsieh et ai., J. Biol. Chem. 268: 15118 - 15126 (1993) . Lisäksi äskettäinen tutkimus on osoittanut, että beeta-2-isotsyymi on vastuussa erytro-leukemian solujakautumisesta, kun taas alfa-isotsyymi liit-·* 30 tyy megakariosyytin erilaistumiseen näissä samoissa soluissa. Murray et ai., J. Biol. Chem. 268: 15847 - 15853 (1993).

108138 26

Kaavan 1' mukaiset yhdisteet formuloidaan edullisesti ennen antamista farmaseuttiseksi formulaatioksi, joka käsittää kaavan I mukaisen yhdisteen ja yhden tai useamman farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan, laimentimen tai 5 täyteaineen.

Nämä farmaseuttiset formulaatiot valmistetaan tunnetuilla menetelmillä käyttäen hyvin tunnettuja ja helposti saatavia ainesosia. Valmistettaessa kyseisiä koostumuksia aktiivinen ainesosa sekoitetaan yleensä kantajan kanssa, 10 tai laimennetaan kantajalla, tai suljetaan kantajan kanssa, joka voi olla kapselin, lääkepussin, paperin tai muun säiliön muodossa. Kun kantaja toimii laimentimena, se voi olla kiinteä aine, puolikiinteä aine tai nestemateriaali, joka toimii vehikkelinä, täyteaineena tai väliaineena aktiivi-15 selle ainesosalle. Siten koostumukset voivat olla tablet tien, pillerien, jauheiden, pastillien, lääkepussien, kapselien (cachet), eliksiirien, suspensioiden, emulsioiden, liuosten, siirappimaisten aineiden, aerosolien (kiinteänä aineena tai nestemäisessä väliaineessa), pehmeä- tai kova-20 gelatiinikapseleiden, peräpuikkojen, steriilien injektoita vien liuoksien ja steriilien pakattujen jauheiden muodossa.

Joihinkin esimerkkeihin sopivista kantajista, täyteaineista ja laimentimista kuuluvat laktoosi, dekstroosi, sakkaroosi, sorbitoli, mannitoli, tärkkelykset, akaasiaku-25 mi, kalsiumfosfaatti, alginaatit, tragantti, gelatiini, kalsiumsilikaatti, mikrokiteinen selluloosa, polyvinyyli-pyrrolidoni, selluloosa, vesisiirappi, metyyliselluloosa, metyyli- ja propyylihydroksibentsoaatit, talkki, magnesium-stearaatti ja mineraaliöljy. Formulaatioihin voivat lisäksi 30 kuulua voiteluaineet, kostutusaineet, emulgointi- ja sus-pendointiaineet, säilöntäaineet, makeutusaineet tai makuaineet . Kyseiset koostumukset voidaan formuloida siten, että saadaan nopea, jatkuva tai viivyttynyt aktiivisen ainesosan vapautuminen potilaalle antamisen jälkeen. Koostumukset 35 formuloidaan edullisesti yksikköannosmuodossa, kukin annos 108138 27 sisältää noin 1 - 500 mg, tavallisemmin noin 5 - 300 mg, aktiivista ainesosaa. On kuitenkin ymmärrettävä, että annettavan terapeuttisen annoksen määrittää lääkäri relevanttien seikkojen valossa, mukaan lukien hoidettavan tilan, 5 annettavan yhdisteen valinnan ja valitun antamisreitin, ja siksi edellä olevia annosalueita ei ole tarkoitettu rajoittamaan keksinnön piiriä millään tavalla. Termi "yksikköan-nosmuoto" viittaa fyysisesti erillisiin yksiköihin, jotka sopivat yksikköannoksiksi ihmiskohteille ja muille nisäk-10 käille, kukin yksikkö sisältää ennalta määritetyn määrän aktiivista materiaalia, jonka on laskettu tuottavan haluttu terapeuttinen vaikutus sopivan farmaseuttisen kantajan yhteydessä .

Edellä olevien formulaatioiden lisäksi tämän keksin-15 nön mukaisesti saatavat yhdisteet voidaan antaa paikallisesti. Paikallisia formulaatioita ovat salvat, voiteet ja geelit.

Salvat valmistetaan yleensä käyttäen joko (1) öljyistä pohjaa, so. sellaista, joka koostuu sitoutuneista 20 öljyistä tai hiilivedyistä, kuten valkovaseliinista tai mineraaliöljystä, tai (2) imukykyistä pohjaa, so. sellaista, joka koostuu vedettömästä aineesta tai aineista, jotka voivat imeä vettä, esimerkiksi vedettömästä lanoliinista. Tavallisesti seuraten pohjan muodostumista, joko öljyisen 25 tai imukykyisen, aktiivinen ainesosa (yhdiste) lisätään määrään, josta saadaan haluttu pitoisuus.

Voiteet ovat öljy/vesi-emulsioita. Ne koostuvat öl-jyfaasista (sisäinen faasi), joka käsittää tyypillisesti sitoutuneet öljyt, hiilivedyt ja niiden kaltaiset, kuten 30 vahat, vaseliini, mineraaliöljy, ja niiden kaltaiset, ja vesifaasista (jatkuva faasi), joka käsittää veden ja minkä • · tahansa veteeniiukenevan aineen, kuten lisätyt suolat. Kaksi faasia stabiloidaan käyttämällä emulgointlainetta, esimerkiksi pinta-aktiivista ainetta, kuten natriumlauryyli-35 sulfaattia, hydrofiilisiä kolloideja, kuten akaasia kolloi- 1 Γ Ρ ·ι -ν ,- 28 ' " ° 7 ί 8 diset savet, veekumi ja niiden kaltaiset. Muodostettaessa emulsiota aktiivinen ainesosa (yhdiste) lisätään yleensä sellaiseen määrään, jolla saadaan aikaan haluttu pitoisuus.

Geelit käsittävät pohjan valinnan öljyisestä pohjas-5 ta, vedestä tai emulsio-suspensio-pohjasta. Pohjaan lisätään hyytelöimisaine, joka muodostaa matriisin pohjaan, lisäten sen viskositeettiä. Esimerkkejä hyytelöimisaineista ovat hydroksipropyyliselluloosa, akryylihappopolymeerit ja niiden kaltaiset. Tavallisesti aktiivinen ainesosa (yhdis-10 te) lisätään formulaatioon halutussa pitoisuudessa sellaisessa kohdassa, joka edeltää hyytelöimisaineen lisäystä.

Paikalliseen formulaatioon sisällytetyn yhdisteen määrä ei ole ratkaiseva, pitoisuuden tulisi vain olla alueella, joka on riittävä sallimaan formulaation helpon le-15 vittämisen vahingoittuneelle kudosalueelle sellaisessa määrässä, joka toimittaa halutun määrän yhdistettä.

Vahingoittuneelle kudokselle levitettävän paikallisen formulaation tavallinen määrä riippuu vahingoittuneen kudoksen koosta ja yhdisteen pitoisuudesta formulaatiossa.

2 0 Yleensä formulaatio levitetään vahingoittuneelle kudokselle määrässä, josta saadaan noin 1 - 500 μg yhdistettä vahingoittuneen kudoksen cm2:ä kohti. Edullisesti levitetyn yhdisteen määrä on alueella noin 30 - 300 μg/cτn2, edullisemmin noin 50 - 200 μg/cm2 ja edullisimmin noin 60 - 100 • # 25 μg/cm2.

Seuraavat formulaatioesimerkit ovat havainnollistavia .

Formulaatio 1 3 0 Kovagelatiinikapselit valmistetaan käyttäen seuraa- : via ainesosia: 29 ΐί 3138 Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen aine 250 Tärkkelys, kuivattu 200

Magnesiumstearaatti 10 5 Yhteensä 460 mg

Edellä mainitut ainesosat sekoitetaan ja täytetään kovagelatiinikapseleihin 460 mg:n määrissä.

10 Formulaatio 2

Tabletti valmistetaan käyttäen alla olevia ainesosia : Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen aine 250 15 Selluloosa, mikrokiteinen 400

Piidioksidi, höyrystetty 10

Steariinihappo 5_

Yhteensä 665 mg 20 Komponentit sekoitetaan ja puristetaan, jolloin muo dostuu tabletteja, joista kukin painaa 665 mg.

Formulaatio 3

Valmistetaan aerosoliliuos, joka sisältää seuraavat komponentit: . 25 Määrä (mg/kapseli) ' Aktiivinen aine 0,25 etanoli 29,75

Propellant 22 (klooridifluorimetaani) 70.00 30 Yhteensä 100,00 » ·

Aktiivinen yhdiste sekoitetaan etanolin kanssa. Seos lisätään Propellant 22 erään, jäähdytetään -30 °C:seen ja siirretään täyttölaitteeseen. Vaadittu määrä syötetään sit-35 ten ruostumatonta terästä olevaan säiliöön ja laimennetaan 30 Ί 08138 jäljelle jääneellä ponneaineella. Sitten venttiiliyksiköt sovitetaan säiliöön.

Formulaatio 4 5 Tabletit, joista kukin sisältää 60 mg aktiivista ainesosaa, tehdään seuraavasti: Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen aine 60 mg Tärkkelys 45 mg 10 Mikrokiteinen selluloosa 35 mg

Polyvinyylipyrrolidoni (10-%:isena liuoksena vedessä) 4 mg

Natriumkarboksimetyylitärkkelys 4,5 mg

Magnesiumstearaatti 0,5 mg 15 Talkki 1 mg

Yhteensä 150 mg

Aktiivinen ainesosa, tärkkelys ja selluloosa viedään 355 μτη:η seulan läpi (45 mesh US-standardi) ja sekoitetaan 20 huolellisesti. Polyvinyylipyrrolidonin liuos sekoitetaan saatujen jauheiden kanssa, jotka sitten viedään 1,41 mm:n seulan läpi (14 mesh US-standardi) . Näin valmistetut rakeet kuivataan 50 °C:ssa ja viedään 1,0 mm:n seulan läpi (18 mesh US-standardi). Natriumkarboksimetyylitärkkelys, mag-25 nesiumstearaatti ja talkki, jotka on aikaisemmin viety 250 μτη:η seulan läpi (60 mesh US-standardi) , lisätään sitten rakeisiin, jotka sekoittamisen jälkeen puristetaan tablet-tikoneella, jolloin saadaan tabletteja, joista kukin painaa 150 mg.

30

Formulaatio 5 • ·

Kapselit, joista kukin sisältää 80 mg lääkeainetta, tehdään seuraavasti: 108138 31 Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen aine 80 mg Tärkkelys 59 mg

Mikrokiteinen selluloosa 59 mg 5 Magnesiumstearaatti 2 ma

Yhteensä 200 mg

Aktiivinen ainesosa, tärkkelys ja magnesiumstearaatti sekoitetaan, viedään 355 μτη:η seulan läpi (45 mesh US-10 standardi), ja täytetään kovagelatiinikapseleihin 200 mg:n määrissä.

Formulaatio 6

Peräpuikot, joista kukin sisältää 225 mg aktiivista 15 ainesosaa, voidaan valmistaa seuraavasti: Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen aine 225 mg tyydyttyneet rasvahappoglyseridit 2 000 ma 20 Yhteensä 2 225 mg

Aktiivinen ainesosa viedään 250 μτη:η seulan läpi (60 mesh US-standardi) ja suspendoidaan tyydyttyneisiin rasva-happoglyserideihin, jotka on aikaisemmin sulatettu käyttäen 25 tarpeellista minimilämpöä. Seos kaadetaan sitten peräpuik-komuottiin, jonka nimelliskapasiteetti on 2 g, ja annetaan j äähtyä.

Formulaatio 7 3 0 Suspensiot, joista kukin sisältää 50 mg lääkeainetta 5 ml:n annosta kohti, valmistetaan seuraavasti: • ♦ 108138 32 Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen aine 50 mg

Natriumkarboksimetyyliselluloosa 50 mg

Siirappimainen aine 1,25 ml 5 Bentsoehappoliuos 0,10 ml

Makuaine q.v.

Väriaine q.v.

Puhdistettu vesi yhteensä 5 ml 10 Lääkeaine viedään 355 μπΐ:η seulan läpi (45 mesh US- standardi) ja sekoitetaan natriumkarboksimetyyliselluloosan ja siirappimaisen aineen kanssa, jolloin muodostuu sileä tahna. Bentsoehappoliuos, maku- ja väriaine laimennetaan pienellä määrällä vettä ja lisätään sekoittaen. Lisätään 15 sitten riittävästi vettä, jolloin saadaan vaadittu tila vuus .

Formulaatio 8

Laskimonsisäinen formulaatio voidaan valmistaa seu-20 raavasti: Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen aine 250 mg

Isotoninen suolaliuos 1 000 mg 25 Edellä mainittujen ainesosien liuos annetaan laski monsisäisesti nopeudella 1 ml/min hoidon tarpeessa olevalle kohteelle.

Seuraavat esimerkit ja valmistukset tarjotaan ainoastaan havainnollistamaan keksintöä lisää. Erityisesti esi-30 merkit 1 - 9, 11 - 13, 15 - 21, 23 - 25 ja 28 - 55 kuvaavat keksintöä. Alan ammattimiehen auttamiseksi tarjotaan seu- / · « raava rakenne havainnollistamaan tyypillisen yhdisteen nimityksen ollessa omaksuttu tässä: ! i 1 081*38 33 1 w °

H

ft W-( 3· · ) 4“ ‘

R

10

Seuraavissa esimerkeissä ja valmistuksissa sulamispiste, ydinmagneettisen resonanssin spektrit, massaspektrit, korkean paineen nestekromatografia silikageelillä, N,N-dime-tyyliformamidi, palladium puuhiilellä, tetrahydrofuraani ja 15 etyyliasetaatti lyhennetään sp., NMR, MS, HPLC, DMF, Pd/C, THF ja vastaavasti EtOAc. Termit "NMR" ja "MS" osoittavat, että spektri vastaa haluttua rakennetta.

Valmistus 1 2,3-bis- (3'-indolyyli)furaani-1,4-dioni 20 Natriumetoksidi (3,56 g, 50 mmol) lisättiin liuok seen, joka sisälsi 2,3-dikloorimaleiinihappoanhydridin (5,56 g, 33,3 mmol) ja metyyliamiinivetykloridin (3,50 g, 55,0 mmol) 40 ml:ssa etikkahappoa. Seosta sekoitettiin käyttäen CaCl2-kuivausputkea 25 °C:ssa 16 tuntia ja palau-25 tusjäähdytettiin sitten 4 tuntia. Jäähdytetty seos kaadet tiin veteen (350 ml) ja uutettiin EtOAc:11a (3 x 75 ml) .

Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin 100 ml:n annoksilla kylläistä vesipitoista NaHC03:a, vettä ja suolaliuosta ja kuivattiin (MgS04) . Liuotin haihdutettiin käyttäen alennet-30 tua painetta. Jäännös uudelleenkiteytettiin etanolista, • · jolloin saatiin 3,82 g (64 %) 2,3-dikloori-N-metyylimale-imidiä valkoisina kiteinä. Emäliuoksen väkevöinnistä ja jäännöksen kromatografiästä radiaalisella preparatiivisella kerroskromatografiällä (Chromatotron, Harrison Research) 108138 34 saatiin lisäksi 0,81 g 2,3-dikloori-N-metyylimaleimidiä, jolloin saanto kohosi 77-%:iin.

Indolin (10,5 g, 90 mmol) liuosta 175 ml:ssa kuivaa tolueenia käsiteltiin tipoittain 1 tunnin aikana käyttäen 5 N2:ä etyylimagnesiumbromidin liuoksella (1,0 M THF:ssa, 90 ml, 90 mmol) . Kun lisäys oli suoritettu, vaaleanvihreää liuosta kuumennettiin 40 °C:ssa 30 minuuttia ja jäähdytettiin sitten 25 °C:seen. 2,3-dikloori-N-metyylimaleimidin (3,8 g, 21 mmol) liuos 50 ml:ssa tolueenia lisättiin 30 10 minuutin jakson aikana. Reaktioseosta kuumennettiin 100 °C:ssa 3 tuntia, jäähdytettiin sitten 25 °C:seen ja vaimennettiin 100 ml :11a 20-%:ista vesipitoista sit ruunahappoa. Kerrokset erotettiin. Vesipitoista faasia uutettiin EtOAc:lla (50 ml) . Yhdistetyt orgaaniset kerrokset 15 kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin käyttäen alennettua painetta. Jäännös otettiin talteen 30 ml:aan asetonia ja sen annettiin seistä 5 °C:ssa 40 tuntia. Kiinteät aineet otettiin talteen ja pestiin jääkylmällä eetterillä, jolloin saatiin 5,25 g (73 %) 3,4-bis-(3'-in-20 dolyyli)-l-metyylipyrroli-2,5-dionia punaisena kiinteänä aineena, sp. 276 - 278 °C.

3,4-bis-(3'-indolyyli)-l-metyylipyrroli-2,5-dionin liuokseen 150 ml:ssa etanolia lisättiin 5 N KOH (50 ml). Seosta sekoitettiin 4 tuntia 25 °C:ssa ja se laimennettiin ,· 25 150 ml:lla vettä. Suurin osa etanolista haihdutettiin käyt täen alennettua painetta. Seos tehtiin sitten happamaksi pH-arvoon 1. Saostunut tuote suodatettiin ja pestiin vedellä. Raaka tuote liuotettiin minimimäärään CH2Cl2:a ja suodatettiin hitaasti kahden tuuman silikageelipylvään läpi elu-30 oiden 50-%:isella EtOAc:lla heksaanissa, jolloin saatiin • · otsikon yhdiste (3,10 g, 79 %) punaisena kiinteänä aineena. Sp. 225 - 228 °C.

1-081 38 35

Valmistus 2

Bis-2,6-dibromimetyylipyridiini

Seokseen, joka sisälsi 2,6-pyridiinidimetanolin (735 mg, 5,28 mmol) ja trifenyylifosfiinin (3,20 g, 12,2 5 mmol) 35 ml:ssa kuivaa CH2Cl2:a, 0 °C:ssa käyttäen N2:ä lisättiin N-bromisukkinimidi (2,16 g, 12,2 mmol) annoksissa 10 minuutin aikana. Seosta sekoitettiin l tunti 0 °C:ssa ja annettiin sitten seistä 5 °C:ssa 16 tuntia. Suurin osa liuottimesta poistettiin käyttäen alennettua painetta. Eet-10 teri (100 ml) lisättiin jäännökseen. Eetterikerros dekan-toitiin ja väkevöitiin 20 ml:ksi, sitten laimennettiin 3:1 heksaani/EtOAc:11a (50 ml) . Samea liuos asetettiin jääkaappiin yöksi. Liuottimien haihdutuksen tyhjössä jälkeen raaka tuote uudelleenkiteytettiin heksaanista, jolloin saatiin 15 766 mg (55 %) bis-2,6-dibromimetyylipyridiiniä valkoisena kiteisenä kiinteänä aineena. MS.

Valmistus 3 (±)-3-(bentsyylioksi)metyleeni-l,6-dibromiheksaani

Kalium-t-butoksidin liuos (1,0 M THF:ssa, 8,27 ml, 20 8,27 mmol) lisättiin tipoittain (+)-3-syklohekseeni-l-me- tanolin (853 mg, 7,60 mmol) liuokseen THF:ssa (35 ml) 25 °C:ssa käyttäen N2:ä. Saatua seosta sekoitettiin 25 °C:ssa 30 minuuttia. Bentsyylibromidi (1,0 ml, 8,37 mmol) lisättiin tipoittain. Reaktioseoksen annettiin se-25 koittua huoneenlämpötilassa 16 tuntia ja sitä käsiteltiin sitten kylläisellä vesipitoisella NH4Cl:lla (5 ml) ja väkevöitiin. Jäännös liuotettiin eetteriin (50 ml) , pestiin vedellä (20 ml) ja suolaliuoksella (20 ml), ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin käyttäen alennettua pai-30 netta. Jäännös altistettiin radiaaliselle kromatografiälle • · silikageelillä eluoiden 5-%:isella EtOAc.-lla heksaanissa, jolloin saatiin (±)-3-(bentsyylioksi)metyyli-l-sykloheksee-ni (1,42 g, 92 %) värittömänä öljynä. NMR.

Otsonia kuplitettiin (+)-3-bentsyylioksimetyleeni-l-35 syklohekseenin (1,35 g, 6,70 mmol) liuoksen CH2Cl2:ssa (65 108138 36 ml) läpi -78 °C:ssa kunnes reagoimattoman otsonin sininen väri säilyi. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneenlämpö-tilaan, samalla kun typpeä kuplitettiin reaktioseoksen läpi. Boraani-dimetyylisulfidi-kompleksi (10,0 M THF:ssa, 2,7 5 ml, 27,8 mmol) lisättiin ruiskun kautta useiden minuuttien aikana, ja reaktioseoksen annettiin seistä huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Reaktioseosta käsiteltiin 5-%:isella vesipitoisella HCl:lla (1 ml) ja sekoitettiin voimakkaasti yhden tunnin ajan. Kiinteää NaHC03 lisättiin, kunnes seoksen 10 testattiin litmuspaperilla olevan emäksinen. Seos kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Reaktioseos suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin raaka (±)-3-(bentsyylioksi.)metyyli-1, 6-heksaanidioli (1,49 g, n. 100 %) öljynä. Tätä ainetta, joka osoitti oleellisesti yksittäisen pisteen TLC-15 analyysillä, Rf = 0,25, 25-% : a EtOAc : a heksaanissa, käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman lisäpuhdistusta.

N-bromisukkinimidi (2,49 g, 14,0 mmol) lisättiin sekoitettuun seokseen, jonka muodostivat (±)-3-(bentsyy-lioks^metyyli-l, 6-heksaanidioli (1,45 g, 6,10 mmol) ja 20 trifenyylifosfiini (3,67 g, 14,0 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml) 0 °C:ssa käyttäen N2:ä. 12 tunnin kuluttua reak tioseos väkevöitiin ja eetteri (100 ml) lisättiin jäännökseen. Seosta sekoitettiin 15 minuuttia, ja eetterikerros dekantoitiin kiinteistä aineista. Tämä toistettiin 50 25 ml :11a eetteriä. Yhdistetyt eetteriuutteet väkevöitiin 50 ml:ksi, sitten laimennettiin heksaanilla (100 ml). Kun liuos oli seissyt 5 °C:ssa yön yli, se dekantoitiin saostuneista kiinteistä aineista ja väkevöitiin, jolloin saatiin dibromidi-(±)-3-(bentsyylioksi)metyyli-1, 6-dibromiheksaani 30 (1,09 g, 49 %) vaalean keltaisena öljynä, joka oli oleel- • < lisesti homogeeninen TLC:llä, Rf = 0,75 (10 % EtOAc:a heksaanissa) . NMR.

108138 37

Valmistus 4 1- (tert-butyylidimetyylisilyylioksi) -4- (tert-butyy-lidifenyylisilyylioksi)butan-3-oli 3-buten-l-olin (15 g, 0,21 mmol) vedettömään CH2Cl2-5 liuokseen (110 ml) lisättiin imidatsoli (28,6 g, 0,42 mol, 2 ekv.), minkä jälkeen tert-butyylidimetyylisilyylikloridi (32 g, 0,22 mol). 90 minuutin kuluttua reaktio oli täydellinen TLC:llä osoitettuna (10 % EtOAc/heksaani). CH2C12- liuos siirrettiin erotussuppiloon, laimennettiin CH2Cl2:lla 10 (110 ml) , pestiin vedellä (200 ml) ja suolaliuoksella (200 ml) . Orgaaninen kerros otettiin talteen, kuivattiin MgS04:lla, suodatettiin, ja liuotin poistettiin, jolloin saatiin öljy (1-(O-TBDMS)-3-buteeni), joka vietiin seuraa-vaan reaktioon. MS.

15 Edellä saatu öljy liuotettiin asetonin (400 ml) ja veden (50 ml) seokseen. N-metyylimorfoliini-N-oksidi (85,2 g, 0,63 mol, 3 ekv.) lisättiin sitten. Saatu liete jäähdytettiin 0 °C:seen, ja 10 minuutin kuluttua lisättiin katalyyttinen määrä 0s04:a (0,3 g) . Saadun lietteen annet-20 tiin sekoittua yön yli, lämmeten asteittain huoneenlämpötilaan. TLC (25 % EtOAc/heksaani) osoitti reaktion olevan täydellinen. Reaktioseos vaimennettiin natriumbisulfiitil-la, laimennettiin eetterillä (1 1), pestiin vedellä (400 ml) ja suolaliuoksella (400 ml) . Orgaaninen kerros otettiin ·, 25 talteen. Vesikerrosta uutettiin eetterillä (2 x 500 ml) .

Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 4-(O-TBDMS)-1,2-butaanidioli öljynä, joka vietiin seuraavaan reaktioon.

Edellä saatu öljy liuotettiin vedettömään CH2Cl2:iin 30 (250 ml). Imidatsoli (30 g, 0,44 mol, 2,5 ekv.) lisättiin } liuokseen kiinteänä aineena sekoittaen. Saatu liuos jäähdy tettiin 0 °C:seen. 15 minuutin jäähdytyksen jälkeen tert-butyylidifenyylisilyylikloridin (50 g, 0,18 mol, 1 ekv.) CH2C12-liuos (50 ml) lisättiin tipoittain 45 minuutin aika-35 na. Kun lisäys oli tehty, sekoitusta jatkettiin 0 °C:ssa 38 7 08 7 38 2,5 tuntia. Liuos siirrettiin erotussuppiloon, laimennettiin CH2Cl2:lla (250 ml), pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja suodatettiin. Liuotin poistettiin käyttäen alennettua painetta, jolloin saatiin raaka tuote 5 öljynä. Raaka tuote puhdistettiin eluoimalla (10 % EtOAc/ heksaani) se lyhyen silikageelipylvään läpi. Eluointiliuo-tin poistettiin tyhjössä, jolloin jäi otsikon välituotteen viskoosi öljy. (78,1 g, 93 % kokonaissaanto). MS.

Valmistus 5 10 1-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-3-(3-jodipro- pyylioksi)-4-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)butaani

Valmistuksen 4 alkoholin metyleenikloridi (20 ml)/ sykloheksaani (100 ml) liuokseen lisättiin allyylitrikloo-riasetimidaatti (17,82 g, 88 mmol, 2,2 ekv.) käyttäen N2-15 ilmapalloa, minkä jälkeen trifluorimetaanisulfonihappo (50 μΐ/g lähtöainetta, 0,92 ml). 20 tunnin kuluttua liuos suodatettiin, ja suodos pestiin kylläisellä vesipitoisella NaHC03:lla, vedellä ja sitten suolaliuoksella. Orgaaninen kerros otettiin talteen ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin 20 poistettiin, jolloin saatiin öljy, joka puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä eluoiden heksaaneilla ja kohottaen liikkuvan faasin polaarisuuden 5-%:ksi etyyliasetaattia heksaaneissa useiden litrojen aikana, jolloin saatiin 19,27 g allyylieetteriä, 1-(tert-butyylidimetyyli-. 25 silyylioksi)-3-(propeenioksi)-4-(tert-butyylidifenyylisi- lyylioksi)butaani vaalean ruskeana öljynä (97 %:n saanto). MS.

Edellä saadun allyylieetterin (14,16 g, 28,38 mmol, 1 ekv.) THF-liuokseen (60 ml) lisättiin 9-BBN (9-borabisyk-30 lo[3.3.l]nonaani, 0,5 M liuos THF:ssa, 60 ml, 30 mmol, 1,1 ekv.) tipoittain käyttäen typpeä. Kolmen tunnin kuluttua reaktion TLC (10 % EtOAc heksaaneissa) osoitti, että lähtöaine oli kulutettu. Tähän liuokseen lisättiin 3 M vesipitoinen NaOH (10,41 ml, 31,22 mmol, 1,1 ekv.), minkä jälkeen 35 lisättiin hitaasti (1,5 h) 30-%:inen vetyperoksidi (10,3 108138 39 ml, 90,82 mmol, 3,2 ekv.). Reaktiolämpötila peroksidivai-mennuksen aikana pidettiin alle 50 °C:ssa (jäähaude).

30 minuutin kuluttua natriumkloridia lisättiin, kunnes liuos oli kylläinen. Orgaaninen kerros poistettiin, 5 vesikerrosta uutettiin eetterillä, yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin ja suodatettiin, ja suodos väkevöi-tiin, jolloin saatiin öljy. Raaka öljy puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä eluoiden 10-%:isella EtOAc/heksaaneilla ja kohottaen polaarisuus 20-%:iin 10 EtOAc/heksaaneja noin 1,5 litran liuotinta jälkeen, jolloin saatiin 9,53 g vaalean keltaista öljyä (65 %:n saanto) . MS.

Edellä saadun alkoholin vedettömään 0-°C:iseen eet-teriliuokseen (150 ml) lisättiin trietyyliamiini (2,93 g, 28,91 mmol, 1,5 ekv.), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 15 mesyylikloridi (3,31 g, 28,91 mmol, 1,5 ekv.) sekoittaen voimakkaasti. Kolmen tunnin kuluttua 0 °C:ssa TLC (10 % EtOAc heksaaneissa) osoitti lähtöaineen olevan kulutettu. Reaktioseos laimennettiin eetterillä, pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:11a, ja liuotin poistettiin.

20 Saatu öljy vietiin silikakakun läpi eluoiden 25-%:isella EtOAc/heksaaneilla, ja eluentti väkevöitiin. Saadun öljyn asetoniliuokseen (200 ml) lisättiin NaHC03 (0,17 g, 1,93 mmol, 0,1 ekv.) ja Nai (28,88 g, 192,7 mmol, 10 ekv.). 30 minuutin huoneenlämpötilassa sekoittamisen jälkeen käyttäen .·. 25 typpi-ilmakehää reaktioseos kuumennettiin 50 °C:seen vesi- hauteella. 2,5 tunnin kuluttua TLC (10 % EtOAc heksaaneissa) osoitti, että mesylaatti oli kulutettu. Reaktioseos laimennettiin eetterillä (500 ml) , pestiin kylmällä kylläisellä vesipitoisella Na2S03:lla, vedellä, suolaliuoksella, 30 kuivattiin (MgS04) , ja liuotin poistettiin. Saatu öljy vie- • · tiin silikakakun läpi eluoiden 5-%:isella EtOAc :11a heksaaneissa, jolloin saatiin puhdistettua otsikon yhdistettä 10,3 g värittömänä öljynä (85 %:n saanto).

'08138 40

Valmistus 6 3-bromipropyyliasetaatti 3-bromipropan-l-olia (0,54 mol, 75 g) CH2Cl2:ssa (500 ml) 0 °C:ssa käyttäen N2:ä käsiteltiin asetyylikloridilla 5 (0,5 mol, 40,2 ml). Tähän liuokseen lisättiin trietyy- liamiini (0,54 mol, 75 ml) annoksina (5 ml) hitaasti ruiskulla. Reaktioseoksen annettiin asteittain (12 tuntia) tulla huoneenlämpötilaan. Sakka suodatettiin ja suodos pestiin CH2Cl2:lla. Suodos pestiin vedellä (2x), suolaliuoksella 10 (2x) ja kuivattiin Na2S04:lla ja suodatettiin. Suodos väke- vöitiin, jolloin saatiin otsikon asetaattia 91 g (93 %:n saanto) öljynä. MS.

Valmistus 7 N-(3-asetoksipropyyli)indoli 15 Sekoitettuun 0-°C:iseen NaH:n (60-%:inen mineraali- öljyssä, 0,705 mol, 28,2 g, 1,5 ekv.) DMF-suspensioon (400 ml) kolmikaulakolvissa, joka on varustettu palautusjäähdyt-timellä ja lisäyssuppilolla, lisättiin tipoittain indolin (55 g, 0,47 mol) DMF-liuos (150 ml).30-60 minuutin ku-2 0 luttua lisättiin alkyylihalogenidin, 3-bromipropyyliasetaa- tin (170 g, 0,94 mol) DMF-liuos (50 ml) . Reaktioseosta kuumennettiin 50 °C.-ssa 6 tuntia ja annettiin sitten sekoittua huoneenlämpötilassa 5-15 tuntia.

Liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös jakouutettiin .·, 25 CH2Cl2:11a ja vedellä. Orgaaninen kerros pestiin 1 N HCl:lla (3x) , vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:lla ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin, jolloin saatiin otsikon alkyyli-indolia 102 g öljynä, joka kiteytyi hitaasti. MS.

Valmistus 8 30 N-(tert-butoksikarbonyyli)indol-3-yylietikkahappo I · t

Sekoitettuun indoli-3-etikkahapon (26,25 g, 0,15 mol) asetoniliuokseen (800 ml) lisättiin cesiumkarbonaatti (48,9 g, 0,15 mol), minkä jälkeen allyylibromidi (15 ml, 0,17 mol, 1,16 ekv.). 12 tunnin kuluttua liuotin poistet-35 tiin. Jäännöstä jakouutettiin vedellä ja CHCl3:lla. Or- 108138 41 gaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:lla ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin, jolloin saatiin allyyliesteriä 27,9 g (74 %:n saanto) öljynä.

Allyyliesterin (27,9 g) asetonitriililiuokseen (500 5 ml) lisättiin di-tert-butyylidikarbonaatti (29,1 g, 0,133 mol, 1,2 ekv.) ja 4-dimetyyliaminopyridiini (1,36 g, 0,011 mol, 0,1 ekv.) . 15 minuutin kuluttua reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (1,2 1) ja pestiin 0,1 N HCl:lla, vedellä (2x) ja suolaliuoksella (2x) . Orgaaninen kerros kuivattiin 10 Na2S04:lla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin BOC-suojattu esteriä (32,9 g, 94 %) öljynä, joka kiteytyi hitaasti.

BOC-suojatun esterin CH2Cl2/EtOAc-liuokseen 10:3 (325 ml) lisättiin natrium-2-etyyliheksanoaatti (17,3 g, 15 0,104 mol), trifenyylifosfiini (4,93 g, 18,8 mol, 0,18 ekv.) ja Pd(PPh3)4 (4,56 g, 3,95 mmol, 0,04 ekv.). Yhden tunnin kuluttua liuotin poistettiin. Jäännöstä jakouutet-tiin EtOAc:lla ja vedellä. Emäksinen vesipitoinen kerros palautusuutettiin EtOAc:lla, sitten eetterillä, ja sitten 20 tehtiin varovasti happamaksi 0,10 N HCl:lla. Hapanta vesipitoista kerrosta uutettiin sitten EtOAc:lla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:lla ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin, jolloin saatiin BOC-suojattua happoa (21,8 g, 77 %:n saanto) öljynä, .·, 25 joka kiteytyi hitaasti. Otsikon yhdisteen saanto oli 53 % kolmesta vaiheesta. MS.

Valmistus 9 (±)-3,4-[(N,N'-1,1')-(3''-3-tert-butyylidifenyyli-silyylioksimetyleeni)heksaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1-(me-3 0 tyyli)pyrroli-2,5-dioni • ·

Bis-(3,3'-indolyyli)]-1-(metyyli)pyrroli-2,5-dionin (3,41 g, 10,0 mmol) DMF-liuos (50 ml), joka sisälsi dibro-midi-3-tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni-l,6-dibro-miheksaania (5,64 g, 11 mmol, valmistettu tavalla, joka on 35 analoginen valmistuksen 2 bentsoyylijohdannaisen kanssa), 108138 42 lisättiin käyttäen ruiskupumppua 15 tunnin jakson aikana Cs2C03:n (11,2 g, 34,3 mmol) DMF-lietteeseen (350 ml) 60 °C:ssa. Neljä tuntia lisäyksen lopettamisen jälkeen reaktioseos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, kaadettiin 5 veteen (1,5 1) ja uutettiin CH2Cl2:lla (3 x 300 ml) . Orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin, suodatettiin ja väkevöitiin. Väkevöite puhdistettiin flash-kromatografiällä eluoiden 10 - 25-% : isella etyyliasetaatti/heksaanilla, jolloin saatiin makrorengas 3,4-[(N,Ν'-1,1')-(31 1-3-tert-bu-10 tyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)heksaani)bis-(3,3'-indo-lyyli(]-1-(metyyli)pyrroli-2,5-dionia 2,95 g (43 %:n saanto) punaisena öljynä. MS.

Valmistus 10 (S)-metyyli-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-3-15 (allyylioksi)butyraatti (S) -metyyli-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-3-(hydroksi)butyraatin (20,0 g, 53,7 mmol) sykloheksaani-liuokseen (400 ml) lisättiin allyylitriklooriasetimidaatti (21,74 g, 107,4 mmol), minkä jälkeen trifluorimetaanisulfo-20 nihappo (1 ml, 50 ml/g alkoholia) viidessä erässä 30 minuutin aikana sekoittaen typpi-ilmakehässä. 70 tunnin kuluttua muodostuneet kiinteät aineet suodatettiin ja suodatinkakku pestiin sykloheksaanilla, ja haihtuvat aineet poistettiin tyhjössä. Saatu öljy laitettiin silikatulpalle ja pestiin 25 heksaanilla, ja tuote eluoitiin 10-%: isella etyyliasetaat ti/heksaanilla. NMR osoitti jäljelle jääneen imidaatin läsnäolon (n. 10 %), materiaalia käytettiin kuitenkin ilman lisäpuhdistusta. Jäännöksestä saatiin 24,76 g materiaalia, josta n. 22,2 g oli haluttua tuotetta (100 %). MS.

30 Valmistus 11 (S)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-3-(2-jodi-etoksi)-1-jodibutaani DIBAL-H (231 ml, 1,0 M tolueenissa, 231 mmol) lisättiin tipoittain 40 minuutin aikana (S)-metyyli-4-tert-bu-35 tyylidifenyy1isilyylioksi-3 -(allyylioksi)butyraatin 108138 43 (23,8 g, 57 mmol), joka on liuotettu vedettömään THFriin (1,0 1), liuokseen -75 °C:ssa käyttäen N2:ä. 1,5 tunnin sekoituksen jälkeen seoksen annettiin lämmetä -10 °C:seen ja vaimennettiin 5-%:isella vedellä metanolissa ja suurella 5 määrällä Celiteä. Vaimennettu reaktioseos suodatettiin

Celite-kakun läpi, suodos väkevöitiin ja jakouutettiin eetterillä ja 20-%:isella sitruunahapolla. Eetterikerros kuivattiin ja väkevöitiin tyhjössä. Jäljelle jäänyt öljy vietiin silikakakun läpi eluoiden kloroformilla, jolloin saa-10 tiin 20,6 g (93 %) (S)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-3-allyylioksibutan-l-olia.

(S)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-3-allyyliok-sibutan-l-olin (20,6 g, 53,6 mmol) metanoliliuokseen (500 ml) lisättiin otsonia -78 °C:ssa noin 12 minuutin ajan.

15 Reaktioseokseen kehittyi heikko sininen väri, NaBH4 (12,2 g, 321 mmol, 6 ekv.) lisättiin reaktioastiaan. Reaktioseoksen annettiin tulla huoneenlämpöiseksi, haihtuvat aineet poistettiin tyhjössä. Jäännös vietiin silikatul-pan läpi eluoiden etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 16,4 20 g (79 %) (S)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-3-(2-hyd- roksietoksi)butan-l-olia värittömänä öljynä.

(S)-4-tert-nutyylidifenyylisilyylioksi-3-(2-hydrok-sietoksi)butan-l-olin (15,7 g, 40,4 mmol) eetteriliuokseen (600 ml) 0 °C:ssa käyttäen typpeä lisättiin trietyyliamiini . 25 (16,8 ml, 121 mmol), minkä jälkeen mesyylikloridi (9,38 ml, 121 mmol). Kolmen tunnin kuluttua liuos suodatettiin, suodos pestiin vedellä (2x), suolaliuoksella (2x), kuivattiin Na2S04:lla ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännöksestä saatiin 21,9 g (> 99 %) bismesylaattia keltaisena öljynä, joka käy-30 tettiin suoraan. Bismesylaatti liuotettiin asetoniin (1,4 1) , joka oli tislattu kaliumkarbonaatista. Tähän liuokseen ·♦* lisättiin Nai (90,4 g, 603 mmol) ja 0,05 ekv. NaH0O3:a (170 mg, 2 mmol). Reaktioseosta pidettiin 56 °C:ssa 24 tuntia ja suodatettiin, ja suodos väkevöitiin tyhjössä. Jäännös jako-35 uutettiin eetterillä ja 10-%:isella Na2S03:lla, eetteriker- 1Ö8138 44 ros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:lla ja väke-vöitiin, jolloin saatiin 17,9 g (73,2 %) (S)-4-tert-butyy- lidifenyylisilyylioksi-3-(2-jodietoksi)-1-jodibutaania värittömänä öljynä. Kokonaissaanto oli 54 %. MS: MP = 608,39; 5 havaittu: 559 (M-tertbutyyli; FD, CHC13) .

H

aido

U

*-O-SO2CH)

Valmistus 12 (S)-3,4-[(Ν,Ν'-Ι,Ι')-((2'’-etoksi)-3'»'-(O)-4''- (me-15 taanisulfonyylioksi)butaani)-(bis)-(3-indolyyli)]-lH-pyrro-li-2,5-dioni 3,4-(bis)-(3-indolyyli)-lH-pyrrol-2,5-dioni (10,04 g, 29,4 mmol) ja (S)-4-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)-3-(2-jodietoksi)-1-(jodi)butaani (17,9 g, 29,4 mmol) yhdis-20 tettiin ja liuotettiin vedettömään DMF:iin (80 ml). Liuos lisättiin ruiskupumppulisäyksen kautta 72 tunnin aikana ce-siumkarbonaatin (38,3 g, 118 mmol) suspensioon vedettömässä DMF:ssa (1,7 1) 50 °C:ssa käyttäen N2:ä. DMF poistettiin tyhjössä. Jäännös jakouutettiin CHCl3/l N HCl:lla. Hapan 25 kerros palautusuutettiin kloroformilla ja etyyliasetaatil la. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin 1 N HCl:lla (lx), vedellä (2x), suolaliuoksella (2x), kuivattiin Na2S04:lla ja pelkistettiin, jolloin saatiin aniliininpunai-nen kiinteä aine. Raakaa reaktioseosta käytettiin ilman 30 lisäpuhdistusta.

.. Raaka reaktioseos suspendoitiin etanoliin (700 ml) ja käsiteltiin 5 N KOH:lla (800 ml). Reaktiolämpötilaa kohotettiin 80 °C:seen. 72 tunnin kuluttua etanoli poistettiin tyhjössä, vesipitoinen suspensio jäähdytettiin 35 0 °C:seen ja tehtiin happamaksi 5 N HCl:lla. Violetti sakka 108138 45 otettiin talteen ja vietiin silikatulpan läpi eluoiden etyyliasetaatilla. Eluentti väkevöitiin, jolloin saatiin 8,7 g osittain silyloitua maleimidiä aniliinipunaisena kiinteänä aineena, jota käytettiin seuraavassa reaktiossa 5 ilman lisäpuhdistusta.

Edellä saadun anhydridin (8,7 g, 19,7 mmol) DMF-liuokseen (1 1) lisättiin 1,1,1,3,3,3-heksametyylidisilat-saani (41,6 ml, 197 mmol) ja metanoli (4 ml, 98,5 mmol) käyttäen typpeä ympäristön lämpötilassa. 40 tunnin kuluttua 10 reaktioseos väkevöitiin tyhjössä, 2:1 (tilavuus/tilavuus)

MeCN/1 N HC1 -liuos (100 ml) lisättiin. Jäännöstä sekoitettiin yhden tunnin ajan. Orgaaninen liuotin poistettiin, ja vesipitoista suspensiota uutettiin etyyliasetaatilla. Liuottimet poistettiin, jolloin saatiin 8,9 g maleimidiä, 15 jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta.

Edellä saadun maleimidin (8,9 g, 20 mmol) CH2Cl2-sus-pensioon (800 ml) käyttäen typpeä ympäristön lämpötilassa lisättiin pyridiini (4,85 ml, 60 mmol) ja pieni ylimäärä metaanisulfonihappoanhydridiä (4,21 g, 24 mmol). 16 tunnin 20 kuluttua reaktioseos pestiin 0,1 N HCl:lla, suolaliuoksel la, ja orgaaninen kerros väkevöitiin. Jäännös vietiin silikatulpan läpi eluoiden hitaalla 0 - 10-%:isella MeCN:n gra-dientilla CH2Cl2.-ssa. Eluenttifraktio, joka sisälsi halutun mesylaatin, väkevöitiin, jolloin saatiin 2,8 g otsikon yh- .·, 25 distettä aniliinipunaisena kiinteänä aineena. Kokonaissaan to dijodidista on 18 %. MS: MP = 520; havaittu 520 (FD; CHC13) .

Valmistus 13 3- (tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni) -1-syk-3 0 lohekseeni • # ,, Seokseen, jonka muodostivat 3-syklohekseeni-1-meta noli (Aldrich, 13,0ml, 0,11 mmol), N,N-di-isopropyylietyy-liamiini (43 ml, 0,244 mol) ja 4-dimetyyliaminopyridiini (2,70 g, 0,022 mol) 375 ml: ssa kuivaa CH2Cl2:a, käyttäen 35 N2:ä 25 °C: ssa lisättiin tert-butyylidifenyylikloorisilaani 46 108.138 (32 ml, 0,123 mol). Seosta sekoitettiin 25 °C:ssa 48 tuntia. Reaktioseos pestiin peräkkäin 150 ml:n annoksilla 1 N HCl.-a, vettä, suolaliuosta, ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin. Jäännös panostettiin 5 10 cm x 10 cm (4" x 4") silikapylvääseen ja eluoitiin hitaasti käyttäen heksaaneja eluenttina. 3- (tert-butyylidi-fenyylisilyylioksimetyleeni)-l-syklohekseeni, 33,6 g (86 %), saatiin värittömänä öljynä, joka oli homogeeninen TLCrllä (Rf = 0,4, heksaanit).

10 Analyyttinen, laskettu C23H30OSi (0,3 H20):lle: C 77,6; H 8,67.

Todettu: C 77,38; H 8,72.

Valmistus 14 3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)-1,6-15 heksaanidioli

Otsonia kuplitettiin hyvin sekoitettuun 3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)-1-syklohekseenin (18,0 g, 51,3 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (550 ml) -78 °C:ssa, kunnes reagoimattoman otsonin sininen väri säi-20 lyi. Reaktioseoksen annettiin lämmetä 25 °C:seen. Kuivaa N2:ä kuplitettiin liuoksen läpi 30 minuutin ajan. Boraani-dimetyylisulfidi-kompleksi (10,0 M, 23 ml, 0,23 mol) lisättiin tipoittain 10 minuutin aikana. Seosta sekoitettiin hitaasti käyttäen N2:ä 25 °C:ssa 24 tunnin ajan. 5-%:inen 25 HCl (15 ml) lisättiin, ja reaktioseosta sekoitettiin 1 tunnin ajan. Kiinteää NaHC03:a lisättiin, kunnes seos oli pH-paperilla testattuna emäksinen (ulkoinen kosteus). Suodatuksen jälkeen suodos pestiin 200 ml:n annoksilla 5-%:ista NaHC03:a ja vettä ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla.

3 0 Liuottimen haihdutuksen jälkeen alennetussa paineessa raaka .. tuote puhdistettiin kromatografiällä 10 x 10 cm (4" x 4") silikageelikakun läpi eluoiden EtOAc:lla. 3-(tert-butyyli-difenyylisilyylioksi)metyleeni)-1,6-heksaanidioli 17,8 g (90 %) saatiin värittömänä viskoosina öljynä, joka oli ho-35 mogeeninen TLC:llä (Rf 0,5, eetteri).

47 7 081 38

Analyyttinen, laskettu C23H3403Si (0,2 H20):lle: C 70,80; H 8,88.

Todettu: C 70,72; H 8,86.

Valmistus 15 5 3-tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni-l, 6-di- bromiheksaani N-bromisukkinimidi (19,3 g, 109 mmol) lisättiin annoksina viiden minuutin aikana sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)-1,6-10 heksaanidiolin (17,5 g, 45,2 mmol) ja trifenyylifosfiinin (28,6 g, 109 mmol) kuivassa CH2CI2:ssa (550 ml) 0 °C:ssa käyttäen N2:ä. Reaktioseosta sekoitettiin 5 tuntia 0 °C:ssa, sitten laitettiin jääkaappiin 5 °C:seen 16 tunniksi. Kun suurin osa liuottimesta oli poistettu, kuiva 15 eetteri (300 ml) lisättiin hitaasti jäännökseen. Eetteri-kerros dekantoitiin saostuneista kiinteistä aineista. Kiinteät aineet pestiin vielä 200 ml:11a tuoretta eetteriä. Yhdistetty eetterikerros väkevöitiin (100 ml) , trituroitiin 300 ml :11a heksaaneja, ja dekantoitiin saostuneista kiin-20 teistä aineista. Kiinteät aineet pestiin 25-%:isella eetterillä heksaaneissa, ja yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin vedettömällä MgS04:lla ja väkevöitiin. Raaka tuote laitettiin 10 x 10 cm (4" x 4") silikageelipylvääseen ja eluoitiin 25-%:isella eetterillä heksaaneissa, jolloin saa-25 tiin 3-tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni-l,6-dibro-miheksaania 20,1 g (86 %) värittömänä öljynä, joka oli homogeeninen TLC:llä (Rf = 0,75, 10-%:inen EtOAc heksaaneissa) .

^-NMR (300 MHz, CDCl3) 1,06 (s, 9H) , 1,35 - 2,10 (m, 7H) , 30 3,55 (m, 4H) , 3,56 (ilm. d, 2H, J = 4 Hz), 7,40 ja 7,64 (m, 10H) .

13C-NMR (75 MHz, CDC13) 19,2, 26,9, 29,3, 30,0, 31,9, 33,8, 34,7, 38,5, 65,0, 127,7, 129,7, 133,4, 135,5.

108138 48

Valmistus 16 (S)-(-)-3-syklohekseeni-l-metanoli

LiAlH4:n liuos (1,0 M THFrSsa, 75,8 ml, 75,8 mmol) lisättiin tipoittain 15 minuutin aikana jäähdytettyyn tun-5 netun esterin (Ireland et ai. , J. Org. Chem. 1992, 57(19), 5071 - 5073 ja sen viittaukset) , (S) - (-)-3-syklohekseeni-l-metyleenioksi-(S)-N-metyyli-2-hydroksisukkinimidin (8,20 g,

34,5 mmol) liuokseen THF:ssa (90 ml) . Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin 25 °C:ssa 10 2 tuntia, jäähdytettiin ja vaimennettiin vedellä ja 1 N

NaOH:lla. Seos suodatettiin Celiten läpi. Kiinteät aineet pestiin THF:lla (100 ml) . Suodoksen haihdutuksen jälkeen alennetussa paineessa jäännös liuotettiin 150 ml:aan eetteriä ja pestiin vedellä (2 x 50 ml) ja suolaliuoksella (50 15 ml) ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Liuottimen haihdutuksesta saatiin (S)-(-)-3-syklohekseeni-l-metanolia 3,24 g (83 %) kirkkaana öljynä [a]D = -90:3 (C = 1, CH3OH). Sekä tämän materiaalin TLC-ominaisuudet että ^H-NMR-spektri olivat identtiset joka suhteessa raseemisen materiaalin 20 kanssa (Aldrich).

*Η-NMR (300 MHz, CDCI3) , 1,21 - 1,42 (m, 2H) , 1,68 - 1,88 (m, 3H), 2,04 - 2,21 (m, 3H), 3,54 (leveä s, 2H), 5,69 (s, 2H) .

Valmistus 17 25 (S) - (-) -3-tertbutyylidifenyylisilyylioksimetyleeni- 1-syklohekseeni (S)-(-)-3-syklohekseeni-l-metanolia (3,17 g, 28,3 mmol) käsiteltiin tert-butyylidifenyylikloorisilaanilla (8,15 ml, 31,1 mmol), N-N-di-isopropyylietyyliamiinilla 30 (10,9 ml, 62,3 mmol) ja dimetyyliaminopyridiinillä (1,03 g, .. 8,5 mmol) CH2CI2:ssa (100 ml), jolloin saatiin käsittelyn ja kromatografiän jälkeen silyylieetteri (S)-(-)-3-tert-butyylidif enyyl is ilyyli oksimetyleeni - 1 - sy k loheks e en iä 8,73 g (88 %) kirkkaana öljynä. Sekä tämän materiaalin TLC-35 ominaisuudet että ^-NMR-spektrit olivat identtiset joka 49 •-cl ss suhteessa raseemisen silyylieetteri-3-tertbutyylidifenyyli-silyylioksimetyleeni-l-syklohekseenin kanssa.

Hl-NMR (300 MHz, CDC13) 1,05 (s, 9H) , 1,29 (m, 1H) , 1,71 -2,18 (m, 4H), 3,54 (d, 2H, J = 6 Hz), 5,66 (leveä s, 2H), 5 7,38 ja 7,66 (τη, 10H) .

Valmistus 18 (S) - (-) -3- (tert-butyylidifenyylisilyylioksimetylee-ni)-1,6-heksaanidioli

Seuraten samaa menetelmää, joka on kuvattu raseemi-10 sen diolin 3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)- 1.6- heksaanidiolin valmistamiseksi, silyylieetteri-(S) - (-)- 3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)-1-syklohek-seeni (8,35 g, 23,9 mmol) otsonoitiin, sitten käsiteltiin pelkistävästi (BH3-Me2S), jolloin saatiin (S)-(-)-3-(tert- 15 butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)-1,6-heksaanidiolia -5,01 g (55 %) värittömänä viskoosina öljynä, joka oli homogeeninen TLC:llä (Rf = 0,4 EtOAc).

^-NMR (300 MHz, CDC13) 1,05 (s, 9H) , 1,21 - 1,81 (m, 7H) , 2,32 (leveä s, 2H), 3,50 - 3,75 (m, 6H), 7,32 ja 7,70 (m, 20 10H).

Valmistus 19 (S)-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)- 1.6- dibromiheksaani

Seuraten samaa menetelmää, joka on kuvattu raseemi-25 sen dibromidin 3- (tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyyli) - 1.6- dibromiheksaanin valmistamiseksi, (S)-(-)-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyyli)-1,6-heksaanidioli (4,85 g, 12,53 mmol) saatettiin reagoimaan N-bromisuk-kinimidin (5,35 g, 30,1 mmol) ja trifenyylifosfiinin 30 (7,87 g, 30,1 mmol) kanssa CH2Cl2:ssa (150 ml) 0 °C:ssa, jolloin saatiin yhdiste (S) - (-)-3-(tert-butyylidifenyy-lisilyylioksimetyyli)-1,6-dibromiheksaania 4,81 g (75 %) kirkkaana, värittömänä öljynä, joka oli homogeeninen TLC:llä (Rf = 0,8, 10 % EtOAc heksaaneissa) . Sekä tämän 108138 50 yhdisteen TLC-ominaisuudet että Ή-spektrit olivat identtiset joka suhteessa raseemisen isomeerin kanssa. MS.

^-NMR (300 MHz, CDCl3) 1,06 (s, 9H) , 1,35 - 2,10 (m, 7H) , 3.55 (m, 4H), 3,56 (ilm. d, 2H, J = 4 Hz), 7,40 ja 7,64 (m, 5 10H).

Valmistus 20 (R)-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)- 1,6-dibromiheksaani

Seuraten samaa menetelmää, joka on kuvattu (S)-(-)-10 3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)-1,6-dibromi- heksaanin valmistamiseksi, (S) - (-) -3- (tert-butyylidifenyy-lisilyylioksimetyleeni)-1,6-heksaanidioli (5,05 g, 13,04 mmol) saatettiin reagoimaan N-bromisukkinimidin (5,57 g, 31,32 mmol) ja trifenyylifosfiinin (8,21 g, 31,32 mmol) 15 kanssa CH2Cl2:ssa (160 ml) 0 °C:ssa, jolloin saatiin kiraa- linen dibromidi (R) - (-)-3-(tert-butyylidifenyylisilyyliok-simetyleeni)-1,6-dibromiheksaania 5,85 g (87 %) kirkkaana, värittömänä öljynä, joka oli homogeeninen TLCrllä (Rf = 0,8, 10 % EtOAc heksaaneissa). MS.

20 XH-NMR (300 MHz, CDCl3) 1,06 (s, 9H) , 1,35 - 2,10 (m, 7H) , 3.55 (m, 4H), 3,56 (ilm. d, 2H, J = 4 Hz), 7,40 ja 7,64 (m, 10H) .

Valmistus 21 2-ailyy1i-4-penteenihappo i 25 Natriummetoksidin (59,4 g, 1,1 mol) sekoitettuun suspensioon kuivassa metanolissa (1 1) 0 °C:ssa lisättiin dimetyylimalonaatti (57 ml, 0,5 mol) tipoittain käyttäen N2:ä. 30 minuutin kuluttua allyylibromidi (95 ml, 1,1 mol) lisättiin yhdessä erässä. 14 tunnin kuluttua ympäröivässä 30 lämpötilassa reaktioseos väkevöitiin tyhjössä. Jäännös ' liuotettiin metanoliin (0,5 1) ja käsiteltiin 5 N NaOH:lla (500 ml). 24 tunnin sekoituksen jälkeen metanoli poistettiin tyhjössä ja emäksinen vesikerros pestiin etyyliasetaatilla (2x) . Vesikerros tehtiin happamaksi 5 N HClrlla 35 (0,5 1) ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen uute 108138 51 pestiin vedellä (2x) , suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:11a ja väkevöitiin tyhjössä valkoiseksi kiinteäksi aineeksi. Saadun kiinteän aineen trituroinnista pentaanilla ja atmosfäärisestä kuivauksesta saatiin 51,4 g (57 %:n saanto) di-5 happoa. Dihappoa (50 g, 274 mmol) kuumennettiin kunnes C02:n kehittyminen lakkasi (noin 2 tuntia). Jäljelle jäänyt ruskea öljy eluoitiin etyyliasetaatilla pienen silikatulpan läpi, jolloin saatiin otsikon yhdistettä 32,8 g (85 %) kullanvärisenä öljynä. Kokonaissaanto kolmesta vaiheesta on 10 48 %. Ή-NMR: (CD3CN) δ 2,4 (m, 4H) ; 2,5 (m, 1H) ; 5,05 (dd, 2H); 5,15 (dd, 2H); 5,9 (m, 2H); 12,8 (leveä, 1H). MS.

Valmistus 22 3- (tertbutyylidifenyylisilyylioksimetyleeni) pentaa-ni-l,5-dioli 15 LAH:n (4,33 g, 114 mmol) 0-°C:iseen sekoitettuun suspensioon vedettömässä eetterissä (125 ml) lisättiin 2-allyyli-4-penteenihappo (16,0 g, 114 mmol) tipoittain käyttäen N2:ä. Reaktioseoksen annettiin tulla huoneenlämpöiseksi. 16 tunnin kuluttua reaktio vaimennettiin etano-20 lilla (25 ml), minkä jälkeen 4 N HCl:lla (40 ml), uutettiin, uutettiin eetterillä (2x), kuivattiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin alkoholi, 2-allyyli-4-penten-l-oli, värittömänä öljynä 11,7 g (82 %) , jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta.

25 2-allyyli-4-penten-l-olin (11,7 g, 93 mmol) kuivaan CH2Cl2:n (0,5 ml) liuokseen lisättiin imidatsoli (12,6 g, 185 mmol), minkä jälkeen klooritertbutyylidifenyylisilaani (25,48 g, 93 mmol), ja sekoitettiin 16 tunnin ajan. Reak-tioseos suodatettiin, suodos pestiin vedellä, suolaliuok-30 sella, kuivattiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin : silyylieetteri, 3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetylee- ni)pent-l,4-eeni, 32,5 g (96 %) öljynä, jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta.

Otsonia kuplitettiin -78-°C:isen 3- (tert-butyylidi-35 fenyylisilyylioksimetyleeni)-1,5-pentaanidiolin (17 g, 47 108138 52 mmol) kuivan metanoiin (500 ml) läpi, kunnes sininen väri säilyi (30 minuuttia). Reaktioseos puhdistettiin typellä (20 min), ja NaBH4 (17,6 g, 47 mmol) lisättiin. Kylmä haude poistettiin ja reaktio vietiin huoneenlämpötilaan. Reaktio-5 seos väkevöitiin tyhjössä, ja jäännös jakouutettiin eetterillä ja suolaliuoksella. Eetterikerros väkevöitiin ja jäännös eluoitiin silikatulpalla 0 - 50-%:isella etyyli-asetaatti/heksaaneilla. Vähäisempi komponentti yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin dioli, 3-(tertbutyylidifβίο nyylisilyylioksimetyleeni)pentaani-1,5-dioli, 3,8 g (22 %) haluttua diolia värittömänä öljynä. Kokonaissaanto kolmelle vaiheelle on 17 %. MS.

"H-NMR: δ 1,17 (s, 9H) ; 1,6 (dt, 4H) ; 1,83 (m, 1H) , 2,14 (s, 2H), 3,6 (m, 6H); 7,41 (t, 4H); 7,45 (t, 2H); 7,66 (d, 15 4H).

Valmistus 23 1,5-di jodi-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimety-leeni)pentaani 3- (tertbutyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)pentaa-20 ni-1,5-diolin (6,9 g, 19 mmol) 0-°C:iseen eetterin (300 ml) liuokseen lisättiin metaanisulfonyylikloridi (4,3 ml, 56 mmol), minkä jälkeen Et3N:llä (7,7 ml, 56 mmol). 3-16 tunnin kuluttua lämmittäen asteittain ympäristön lämpötilaan reaktioseos pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivat-25 tiin MgS04:lla ja väkevöitiin, jolloin saatiin l,5-bis(me- taanisulfonyylioksi)-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksime-tyleeni)pentaania 8,5 g (90 %) värittömänä öljynä, jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta.

Bis-mesylaatin, 1,5-bis(metaanisulfonyylioksi)-3-30 (tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni) pentäänin .. (8,5 g, 16 mmol) juuri tislatun asetonin (500 ml) liuokseen lisättiin ylimäärä Nal:a (36,1 g, 241 mmol) ja NaHC03:a (67 mg, 0,8 mmol). Reaktioseosta palautusjäähdytettiin (57 °C) 72 tuntia, jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja suodatet-35 tiin. Suodos väkevöitiin tyhjössä. Jäännös laimennettiin S3 108138 eetterillä, pestiin 10-%:isella Na2S03:lla, kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä 7,4 g (78 %:n saanto) värittömänä öljynä. Kokonaissaanto kahdelle vaiheelle on 70 %. MS.

5 ^-NMR: (DMSO-d6) 6 1,06 (s, 9H) ; 1,78 (m, 1H) ; 1,8 - 2,06 (m, 4H); 3,13 (m, 4H); 3,57 (d, 2H); 7,38 - 7,46 (m, 3H); 7,64 (d, 2H).

Valmistus 24 2-(2'-bromietoksx)bentsyylibromidi 10 Otsonia kuplitettiin -78-°C:isen 2-(allyylioksi)- bentsyylialkoholin (LaChapelle et ai. Tetrahedron. 44(16). 5033 - 5044 (1988)) (7,0 g, 43 mmol) kuivan metanolin liuoksen läpi 13 minuutin ajan, tarkistaen TLC-profiilin joka 2 minuutin kuluttua lähtöaine olefiinin täydellistä 15 häviämistä varten (Rf = 0,8, 75-%:inen EtOAc/heksaani).

Reaktioseos puhdistettiin typellä, NaBH4 (9,7 g, 0,25 mol) lisättiin ja reaktiolämpötila vietiin 0 °C:seen. 30 minuutin kuluttua reaktioseos lämmitettiin huoneenlämpötilaan, väkevöitiin, laimennettiin eetterillä, pestiin vedellä, 20 suolaliuoksella, kuivattiin ja väkevöitiin jäännökseksi.

Jäännös eluoitiin silikakakun läpi EtOAc/heksaaneilla (gra-dienttieluointi 25 - 75-%:inen EtOAc). Eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin dioli, 2-(2’-hydroksietoksi)bentsyy-lialkoholi, (4,8 g, 67 %) öljynä. MS: MP = 168; havaittu 25 168, FD, CHC13) .

Diolin, 2-(2'-hydroksietoksi)bentsyylialkoholin, (4,38 g, 26 mmol) 0-°C:iseen kuivaan CH2Cl2:n (250 ml) liuokseen lisättiin trifenyylifosfiini (15,8 g, 60 mmol) ja N-bromisukkinimidi (10,7 g, 60 mmol). Kahden tunnin kulut-30 tua 0 °C:ssa reaktio oli täydellinen TLC-analyysillä • · (20-%:inen EtOAc/CH2Cl2) , ja reaktioseos väkevöitiin tyhjössä. Väkevöite eluoitiin (heksaani - 15-% : inen EtOAc/heksaani gradientti) silikageelikakun läpi. Eluointifraktioiden väkevöinnistä saatiin dibromidi, 2-(2'-bromietoksi)bentsyy- 108138 54 libromidi, (6,91 g, 90 %:n sääntö) värittömänä kiinteänä aineena. MS.

13C-NMR (CHC13, 75,4 MHz) δ 28,7, 29,1, 68,2, 112,3, 121,6, 126,8, 130,2, 131,1, 156,0.

5 ^-NMR (CHC13, 200 MHz) δ 3,72 (2H, t, J = 5 Hz) , 4,34 (2H, t, J = 5 Hz), 4,59 (2H, s), 6,84 (H, d, J = 7 Hz), 6,95 (H, t, J = 7 Hz), 7,25 - 7,38 (2H).

Valmistus 25 1- (tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-3-(2-jodietok-10 si)-4-(tert-butyylidifenyyli)butaani

Allyylieetteri, 1-(tert-butyylidimetyylisilyyliok-si)-3- (allyylioksi)-4-(tert-butyylidifenyyli)butaani, (21,6 g, 43,4 mmol) liuotettiin metanoliin (500 ml) ja jäähdytettiin -78 °C:seen käyttäen typpeä. Otsonia kupli-15 tettiin reaktioseokseen ja 11 minuutin kuluttua sen pääteltiin olevan täydellinen TLC:llä (9 heksaani/l etyyliasetaatti) . Natriumboorihydridi (9,9 g, 6 ekv.) lisättiin, ja 5 minuutin kuluttua reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan. Metanoli poistettiin tyhjössä. Jäännös 20 suspendoitiin eetteriin (800 ml) . Eetteri pestiin vedellä, ja vesipitoinen kerros palautuspestiin eetterillä. Yhdistetyt orgaaniset aineet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy. Materiaali vietiin silikakaun läpi 5-%:isella 25 etyyliasetaatti/heksaanilla, minkä jälkeen tuote eluoitiin 25-%:isella etyyliasetaatti/heksaanilla, jolloin saatiin 11,0 g (50 %:n saanto) alkoholia, 1-(tert-butyylidimetyyli-silyylioksi)-3-(2-(hydroksi)etoksi)-4-(tert-butyylidifenyy-li)butaani vaaleankeltaisena öljynä. MS. NMR.

30 Alkoholin, 1-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-3 - (2 -(hydroksi)etoksi)-4-(tert-butyylidifenyyli)butaanin, (11,0 g, 21,9 mmol) vedettömän eetterin (200 ml) liuokseen käyttäen typpeä 5 °C:ssa lisättiin trietyyliamiini (4,6 ml, 1,5 ekv.) ja metaanisulfonyylikloridi (2,5 ml, 1,5 ekv.). 35 1,5 tunnin kuluttua reaktio oli täydellinen TLC:llä 108138 55 (5-%:inen etyyliasetaatti/dikloorimetaani). Reaktioseos laimennettiin eetterillä (250 ml) , pestiin vedellä (2x) , suolaliuoksella (2x), kuivattiin (Na2S04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy. Materiaali vie-5 tiin silikakakun läpi eluoiden 5-%:isella etyyliasetaat-ti/heksaanilla, minkä jälkeen 25-%:isella etyyliasetaat-ti/heksaanilla, jolloin saatiin 11,6 g (91 %:n saanto) me-sylaattia, 1-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-3-(2-(me-taanisulfonyylioksi)etoksi)-4-(tert-butyylidifenyyli)butaa-10 nia öljynä. MS. NMR.

Mesylaatin, 1-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-3-(2-(metaanisulfonyylioksi)etoksi)-4-(tert-butyylidifenyyli) butaanin, (11,6 g, 20 mmol) asetonin (300 ml) liuokseen käyttäen typpeä lisättiin natriumjodidi (44 g, 15 ekv.) ja 15 natriumbikarbonaatti (170 mg, 0,1 ekv.). Seosta palautus-jäähdytettiin 18 tuntia, minkä jälkeen asetoni poistettiin tyhjössä. Saatu jäännös suspendoitiin eetteriin, pestiin vedellä (2x) , ja vesipitoinen kerros palautusuutettiin eetterillä. Yhdistetyt eetterikerrokset pestiin 10-%:isella 20 natriumsulfiittiliuoksella, suolaliuoksella (2x), kuivat tiin (MgS04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin 10,7 g (87 %:n saanto) otsikon jodidia öljynä, jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta. MS. NMR.

Valmistus 26 . 2 5 1- (2- (metyylisulfonyylioksi) etoksi) -2- ((metyylisul- fonyylioksi)etyyli)-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)-propaani

Sekoitettuun dimetyyliallyylimalonaatin (34 g, 0,2 mol) liuokseen t-butyylialkoholissa (0,51) lisättiin kiin-30 teä natriumboorihydridi (19 g, 0,5 mol). Reaktioseos kuumennettiin (70 °C), ja metanoli (162 ml) lisättiin tipoit- • »< tain yhden tunnin jakson aikana. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa. Vesi (20 ml) lisättiin tuhoamaan boorihydridin ylimäärä, saatu seos suodatettiin celiten 35 läpi. Suodos väkevöitiin (100 ml) ja uutettiin etyy- 1 08.1 38 56 liasetaatilla (20 ml x 4) . Yhdistetyt uutteet kuivattiin MgS04:lla ja väkevöitiin käyttäen alennettua painetta, jolloin saatiin suhteellisen puhdas dioli, 2-allyylipropan-1,3-dioli, (19 g, 83 %:n saanto), joka vietiin seuraavaan 5 reaktioon ilman lisäpuhdistusta.

Diolin, 2- (2-propen-1-yyli) propan-1,3-diolin, (23,2 g, 0,19 mol) sekoitettuun liuokseen tolueenissa (1 1) lisättiin anisaldehydi (27,3 g, 0,20 mol) ja PPTS-happo (4 g, 10 mol-%). Kolvi varustettiin Dean Stark -loukulla, 10 ja reaktioseosta palautusjäähdytettiin. 5 tunnin kuluttua reaktioseos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, laimennettiin eetterillä (1 1), pestiin kyll. NaHC03:lla (50 ml x 3), vedellä (50 ml x 3) ja suolaliuoksella (50 ml) . Orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:lla ja väkevöitiin käyttäen alen-15 nettua painetta, jolloin saatiin jäännös. Jäännös eluoitiin lyhyen silikageelipylvään läpi 10-%:isella etyyliasetaatilla heksaanissa, ja eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin anisylideeni, 1,3-0-anisylideeni-2-(2-propen-l-yyli)-propaani (40 g, 89 %). (Rf =0,62 (25-%:inen etyyliasetaat-20 ti heksaanissa)).

Anisylideenin, 1,3-O-anisylideeni-2-(2-propen-l-yy-li)propaanin, (20,0 g, 85,3 mmol) sekoitettuun seokseen CH2Cl2:ssa (500 ml) ja pH 7,0 puskurissa (25 ml) 0 °C:ssa lisättiin DDQ (38,7 g, 170,7 mmol). Reaktioseosta sekoitet-25 tiin voimakkaasti ja annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan.

12 tunnin kuluttua reaktioseos laimennettiin eetterillä (1 1), pestiin kyll. vesipit. NaHC03:lla (200 ml x 2) ja 10-%:isella vesipit. Na2S03:lla (200 ml x 3), kuivattiin ja väkevöitiin käyttäen alennettua painetta jäännökseksi.

30 Jäännös eluoitiin silikageelipylvään läpi etyyliasetaat- ti/heksaanilla (10 - 25-%:inen etyyliasetaattigradientti), eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin anitsoaatti, joka sisälsi alkoholin, 3-0-(4-metoksibentsoaatti)-2-(2-propen-1-yyli)propan-l-oli (12,7 g, 61 %). (Rf = 0,14 (25-%:inen 35 etyyliasetaatti heksaanissa). NMR.

108138 57

Alkoholin, 3-0-(4-metoksibentsoaatti)-2-(2-propen-l- ! yyli)propan-l-olin, (16,58 g, 66,32 mmol) sekoitettuun liuokseen CH2Cl2:ssa (250 ml) lisättiin triklooriallyyli-imidaatti (24,80 g, 132,64 mmol) sykloheksaanissa (500 ml) .

5 Tähän seokseen lisättiin trifluorietikkahappo (1 ml) käyttäen N2-ilmakehää. 12 tunnin kuluttua oli muodostunut valkoinen sakka. Reaktioseos suodatettiin. Suodos laimennettiin eetterillä (500 ml), pestiin vedellä (100 ml x 3) ja suolaliuoksella (100 ml), kuivattiin ja väkevöitiin käyt-10 täen alennettua painetta jäännökseksi. Jäännös eluoitiin silikageelipylvään läpi etyyliasetaatti/heksaanilla (0 -25-%:isella etyyliasetaattigradientilla). Dieeni, 1-(2-pro-peeni-l-oksi)-2-(2-propen-l-yyli)-3-0-(4-metoksibentsoaatti) propaani (24 g) , joka sisälsi hieman asetamidia, vietiin 15 seuraavaan vaiheeseen ilman mitään lisäpuhdistusta. (Rf = 0,38 (25-%:inen etyyliasetaatti heksaanissa).

Esteri, 1-(2-propeeni-l-oksi)-2-(2-propen-l-yyli)-3-0-(4-metoksibentsoaatti)propaani, (24 g) liuotettiin THF:iin (60 ml) ja metanoli (100 ml) ja 1 N vesipitoinen 20 NaOH (40 ml) lisättiin. Saatua seosta sekoitettiin yön yli, minkä jälkeen metanoli ja THF poistettiin käyttäen alennettua painetta. Väkevöity reaktioseos laimennettiin eetterillä (250 ml), uutettiin eetterillä (100 ml x 3), kuivattiin ja väkevöitiin käyttäen alennettua painetta, jolloin saa-25 tiin jäännös. Jäännös eluoitiin silikageelipylvään läpi 10-%-.isella etyyliasetaatti/heksaanilla, ja eluointiliuot-timen haihdutuksesta saatiin alkoholi, 1-(2-propeeni-1-oksi) -2-(2-propen-l-yyli)propan-3-oli (4,10 g, 30 % kahdelle vaiheelle). NMR. Rf = 0,23 (25-%:inen etyyliasetaatti hek-30 saanissa).

*]·' Alkoholin, 1- (2-propen-l-oksi) -2- (2-propen-l-yyli) - propan-3-olin (4,10 g, 26,2 mmol) sekoitettuun CH2Cl2:n (150 ml) liuokseen lisättiin imidatsoli (2,70 g, 39,7 mmol) käyttäen N2-ilmakehää. Kun imidatsoli oli liuennut, tert-35 butyyliklooridifenyylisilaani (8,24 g, 29,97 mmol) 5s 108138 CH2Cl2:ssa (50 ml) lisättiin 10 minuutin aikana. 12 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos laimennettiin eetterillä (100 ml), vaimennettiin vedellä (100 ml) ja uutettiin eetterillä (100 ml x 3). Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin 5 suolaliuoksella (100 ml), kuivattiin ja väkevöitiin käyttäen alennettua painetta, jolloin saatiin jäännös. Jäännös eluoitiin lyhyen silikageelipylvään läpi etyyliasetaat-ti/heksaanilla (0 - 25-%:inen etyyliasetaattigradientti), ja eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin silyylieette-10 ri, 1-(2-propen-l-oksi)-2-(2-propen-l-yyli)-3-(tert-butyy-lidifenyylisilyylioksi)propaani (7,41 g, 72 %:n saanto). Rf = 0,76 (25-%:inen etyyliasetaattiheksaanissa).

Otsonia kuplitettiin -78-°C:isen dieenin, 1-(2-pro-pen-l-oksi)-2-(2-propen-l-yyli)-3-(tert-butyylidifenyylisi-15 lyylioksi)propaanin, (7,41 g, 18,80 mmol) metanoliliuoksen (500 ml) läpi. Lähtöaineen häviämisen jälkeen (TLC, 25-%:inen etyyliasetaatti/heksaani) reaktioseos puhdistettiin N2:lla, ja natriumboorihydridi (2,13 g, 56,30 mmol) lisättiin. Reaktioseos lämmitettiin huoneenlämpötilaan. 12 20 tunnin kuluttua reaktioseos väkevöitiin. Valkoinen jäännös vaimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla (100 ml x 3). Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella, kuivattiin ja väkevöitiin käyttäen alennettua painetta, jolloin saatiin jäännös. Jäännös eluoitiin lyhyen ,·, 25 silikageelipylvään läpi etyyliasetaatti/heksaanilla (10 - 50-%:inen etyyliasetaattigradientti) , ja eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin 1,7-dioli, 1-(2-hydroksietoksi)-2-(2-hydroksietyyli)-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)propaani (5,48 g, 72 %:n saanto). Rf = 0,21 (50-%:inen etyy-30 liasetaatti heksaanissa). NMR.

• ·

Diolin, 1-(2-hydroksietoksi)-2-(2-hydroksietyyli)-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)propaanin, (5,48 g, 13,6 mmol) sekoitettuun CH2Cl2-liuokseen (400 ml) käyttäen N2-ilmakehää lisättiin TEA (11,2 ml, 78 mmol), minkä jälkeen 35 lisättiin tipoittain metaanisulfonyylikloridi (3 ml, 39,00 59 108138 mmol) CH2Cl2:ssa (100 ml) 3 0 minuutin jakson aikana. 12 tunnin kuluttua reaktioseos laimennettiin eetterillä (500 ml) , pestiin vedellä (100 ml x 3) , suolaliuoksella (100 ml) , kuivattiin ja väkevöitiin käyttäen alennettua painetta 5 jäännökseksi. Jäännös eluoitiin lyhyen silikageelipylvään läpi etyyliasetaatti/heksaanilla (10 - 50-%:inen etyyli-asetaattigradientti), ja eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin bismesylaatti, 1-(2-(metyylisulfonyylioksi)etoksi)- 2-((metyylisulfonyylioksi)etyyli)-3-(tert-butyylidifenyyli-10 silyylioksi)propaani (7,40 g, 97 %). Rf = 0,55 (50-%:inen etyyliasetaatti heksaanissa). NMR.

H

o^HyO

CupO

cr

Esimerkki 1 3,4- [ (N,Ν' -1,1' -etoks ie tyyli) -bis- (3,3' -indolyyli) ] -2 0 lH-pyrroli-2,5-dioni

Natriumhydridi (60-% : inen dispersio mineraaliöljyssä, 113 mg, 2,82 mmol) lisättiin annoksina 15 minuutin aikana 3,4-bis(3'-indolyyli)furaani-2,5-dionin (337 mg, 1,02 mmol) liuokseen 5 ml:ssa kuivaa DMF:a käyttäen N2:ä. Seosta 25 sekoitettiin 1,5 tuntia ja laimennettiin sitten 5 ml:11a « DMF:a. Bis-2,21-dibromietyylieetteri (0,14 ml, 1,13 mmol) lisättiin tipoittain vihreään liuokseen. Reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia 25 °C:ssa ja kuumennettiin sitten 50 °C:ssa yön yli. Jäähdytetty seos kaadettiin laimeaan 30 vesipitoiseen sitruunahappoon (75 ml) ja uutettiin oi EtOAc:11a (2 x 40 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pes tiin vedellä (3 x 20 ml) ja suolaliuoksella (20 ml) , ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Liuotin poistettiin käyttäen alennettua painetta. Jäännös vietiin lyhyen sili-35 kageelipylvään läpi (50-%:inen EtOAc/heksaanit) ja altis- 60 1 0 8 1 33 tettiJn sitten radiaaliselle preparatiiviselle kerroskroma-tografialle (Chromatotron) eluoiden 50-%:isella EtOAc-hek-saaneilla, jolloin saatiin 82 mg (20 %) 2,3 - [ (N, N'-1,1' - etoksietyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-furaani-2,5-dionia 5 burgundinvärisenä kiinteänä aineena, sp. > 320 °C.

2,3 - [ (N,N'-1,1'-etoksietyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-furaani-2,5-dionin (58 mg, 0,15 mmol) liuosta DMF:ssa (1,5 ml) käyttäen N2: ä käsiteltiin 1,1,1,3,3,3-heksametyy-lidisilatsaanin (0,33 ml, 1,45 mmol) ja CH3OH:n (23 mg, 10 0,73 mmol) seoksella (esisekoitettu 10 minuuttia). Kun seosta oli sekoitettu 16 tuntia huoneenlämpötilassa, se kaadettiin veteen (20 ml) ja uutettiin EtOAc:lla (3 x 5 ml) . Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin useita kertoja vedellä, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin. Jäännös puhdis-15 tettiin radiaalisella kromatografiällä eluoiden 3-%:isella CH3OH:lla CHCl3:ssa, jolloin saatiin 3,4-[(N,Ν'-1,1'-etoksietyyli) -bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni (41,5 mg, 72 %) violettina kiinteänä aineena, sp. > 320 °C. MS.

Laskettu C24H19N303: lie : 397,1426.

20 Todettu: 397,1438.

H

0γΚγ,0 • 25 M,

Esimerkki 2 3,4-[(N,N'-l,l')-((3''-propoksi)-3'''(O)-4'''(hyd-30 roksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni ··· Bis-(3,3 '-indolyyli) ]-1-(metyyli) pyrroli-2,5-dionin (4,35 g, 12,8 mmol) sekoitettuun DMF-liuokseen (125 ml), joka sisälsi cesiumkarbonaattia (8,31 g, 25,5 mmol), lisättiin tipoittain 15 minuutin aikana 1-(tert-butyylidimetyy-35 lisilyylioksi)-3-(3-jodipropyylioksi)-4-(tert-butyylidife- 108138 61 nyylisilyylioksi)butaanin (4,0 g, 6,4 mmol) DMF-liuos (20 ml) käyttäen N2:ä. 3 tunnin kuluttua TLC (1:1 etyyli" asetaatti/heksaani) osoitti lähtöaine jodidin kulutuksen. Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml) ja 5 pestiin vedellä. Vesikerrosta uutettiin etyyliasetaatilla (200 ml), ja yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin ja väkevöitiin. Väkevöite puhdistettiin flash-kromatografiällä eluoiden 10 - 25: isella etyyliasetaatti/heksaanilla, jolloin saatiin haluttu monoalkyloitu tuote 3- [ (N-l- (3-propok-10 si-3(O)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-l-tert-butyyli- dimetyylisilyylioksi)butaani]-4-(3'-indolyyli)-1-(metyyli)-pyrroli-2,5-dionia 3,94 g (69 %:n saanto) punaisena öljynä. MS.

Edellä saadun tuotteen (3,14 g, 3,74 mmol) metanoli-15 liuokseen (100 ml) lisättiin tolueenisulfonihappo (60 mg, 2 %). Kahden tunnin kuluttua TLC (50-%:inen etyyliasetaat-ti/heksaani) osoitti lähtöaineen kulutuksen. Reaktioseos väkevöitiin puoleen tilavuuteensa, laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), pestiin 1 N NaOHrlla, suolaliuok-20 sella, kuivattiin ja väkevöitiin. Väkevöite puhdistettiin eluoimalla silikakakun läpi 50-% .-isella etyyliasetaatti/heksaanilla, jolloin saatiin haluttu alkoholi 3-[(N-l-(3-propoksi-30-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksibutan-l-oli]-4-(3'-indolyyli)-1(metyyli)pyrroli-2,5-dionia 1,76 g 25 (65 %:n saanto) punaisena vaahtona. MS.

Edellä saadun alkoholin 3-[(N-l-(3-propoksi-3(0)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksibutan-l-oli]-4-(3'-indolyyli) -1 (metyyli) pyrroli-2 , 5-dionin (1,76 g, 2,4 mmol) 0-°C:iseen eetteriliuokseen (200 ml) lisättiin trietyyli-30 amiini (0,5 ml, 1,5 ekv.), minkä jälkeen mesyylikloridi (0,28 ml, 1,5 ekv.). Reaktio vietiin huoneenlämpötilaan ja se oli täydellinen 1 tunnin kuluttua. Reaktioseos laimennettiin eetterillä (200 ml), pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin ja väkevöitiin. Väkevöite vietiin sili-35 kakakun läpi eluoiden 50-%:isella etyyliasetaatti/hek- 62 1 08 1 38 saanilla, jolloin saatiin mesylaattituote, jota käytettiin heti.

Edellä saadun mesylaatin asetoniliuokseen (250 ml) lisättiin natriumjodidi (3,6 g, 10 ekv.) ja NaHC03 (20 mg) .

5 Neljän tunnin sekoittamisen jälkeen lähtöainetta oli edelleen olemassa (TLC, 50-%:inen etyyliasetaatti/heksaani) ja lisämäärä natriumjodidia (10 ekv.) lisättiin, ja reaktio-seosta kuumennettiin 60 °C:ssa. Neljän tunnin kuluttua lähtöaine oli kulutettu (TLC, 50-%:inen etyyliasetaatti/hek-10 saani). Reaktioseos väkevöitiin, laimennettiin etyyliasetaatilla (250 ml) , pestiin vedellä, 10-%:isella natriumsul-fiitiliä, kuivattiin ja väkevöitiin. Väkevöite puhdistettiin viemällä se silikakakun läpi eluoiden 50-%:isella etyyliasetaatti/heksaanilla, jolloin saatiin haluttu jodidi 15 öljynä 3 -[(N-l-(3-propoksi-3(O)-4-tert-butyylidifenyylisi-lyylioksi-1-jodibutaani]-4-(3'-indolyyli)-1-(metyyli)pyrro-li-2,5-dioni 1,71 g (85 %:n saanto). MS.

Edellä saadun jodidin 3-[(N-l-(3-propoksi-3(O)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-1-jodibutaani]-4-(3'-indo-20 lyyli)-1-(metyyli) pyrroli-2,5-dionin (2,0 g, 2,4 mmol) DMF-liuos (10 ml) lisättiin hitaasti ruiskupumpulla 80 tunnin aikana cesiumkarbonaatin (3,12 g, 9,6 mmol) DMF-lietteeseen (400 ml). Kolme tuntia lisäyksen lopettamisen jälkeen TLC (50-%:inen etyyliasetaatti/heksaani) osoitti lähtöaineen 25 kulutuksen. Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (1 1), pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vesiosaa uutettiin etyyliasetaatilla (500 ml) . Yhdistetyt orgaaniset kerrokset väkevöitiin ja väkevöite puhdistettiin viemällä se silikakakun läpi eluoimalla 50-%:isella etyyliasetaat-30 ti/heksaanilla. Eluentin väkevöinnistä saatiin haluttua ,* makrorengasta 3,4-[ (N,Ν'-1,1') - ( (3 1 ' ' -propoksi) -3 1 1 ' (0) - 4'''(hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1-(metyyli)pyr-roli-2,5-dionia 1,65 g (97 %:n saanto).MS.

Edellä saadun N-metyylimaleimidin, 3,4-[(N,N'-l,l')-3 5 ((3' 1 1-propoksi)-3' 1 ' (0)-41 ' ' (hydroksi)butaani)bis-(3,3 ' - 63 108138 ' indolyyli)]-1(metyyli)pyrroli-2,5-dionin (1,7 g, 2,4 mmol) etanoliliuokseen (100 ml) lisättiin 5 N KOH (50 ml) . 12 tunnin kuluttua reaktioseosta kuumennettiin 50 °C:ssa 2 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, väke-5 voitiin, laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin vedel lä. Orgaaninen faasi kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin haluttua anhydridia 2,3- [ (N,Ν' -1,11) - ((3 ' ' -propok-si-3 1 1 ' (O)-4'1' (hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-fu-raani-1,4-dionia 1,37 g (83 %:n saanto) punaisena kiinteä-10 nä aineena. MS.

Edellä saadun 2,3-[(Ν,Ν1-1,1'-((31'-propoksi-3'''-(O)-4 ’ ’ ’ (hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani- 1,4-dionin (1,37 g, 3 mmol) DMF-liuokseen (100 ml) lisättiin 1,1,1,3,3,3-heksametyylidisilatsaani (12,6 ml, 20 15 ekv.) ja metanoli (1,21 ml, 10 ekv.). 24 tunnin kuluttua lähtöaine oli kulutettu kokonaan (TLC, 50-%:inen etyy-liasetaatti/heksaani). Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin 1 N HCl:lla, vedellä, kuivattiin ja väkevöitiin. Väkevöitettä sekoitettiin 1 N HCl:ssa tai ce-20 siumfluoridin kanssa, jolloin poistettiin jäljelle jäänyt TMS-ryhmä. Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä, kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin haluttua maleimidia, 3,4-[(N,N'-1,11)-((3''-propoksi)-3 ' ' ' (O)-41' ' (hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-; i 25 pyrroli-2,5-dionia, 1,02 g (75 %:n saanto) punaisena kiinteänä aineena. MS.

^-NMR: (300 MHz d6-DMS0: ssa) : 2,1 (m, 4H) , 2,4 (m, 2H), 3,28 (leveä, m), 3,4 (m, 1H), 4,25 (m, 4H), 4,5 (t, J = 6 Hz, 1H), 7,0 - 7,9 (m, 10H), 11,0 (s, 1H).

30 13C-NMR: (75 MHz ds-DMSO: ssa) : 20,9, 28,9, 30,3, 30,9, 34,3, 40,2, 41,6, 42,4, 62,4, 65,9, 78,1, 104,0, 104.1, 110,0, 110,1, 119,6, 119,7, 121,4, 121,8, 124,8, 126,5, 126,6, 127,9, 131,5, 131,6, 131,7, 135,8, 135,9, 139.1, 151,4, 172,2.

35 64 1 08 1 38

H

Cu~uO

"Λ-c

Esimerkki 3 3,4-[ (N,Ν'-1,1')-((21'-etoksi)-3' ' ' (O)-4' ' ' (hydrok-si)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni 10 Bis-(3,3'-indolyyli)-1-(metyyli)pyrroli-2,5-dionin (17,9 g, 52,5 mmol, 3 ekv.) dimetyyliformamidiliuokseen (250 ml) käyttäen typpeä lisättiin cesiumkarbonaatti (68,4 g, 4 ekv.). Saatuun suspensioon lisättiin jodidi, 1-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-3-(2-jodietoksi)-4-15 (tert-butyylidifenyylisilyylioksi)butaani (10,7 g, 17,5 mmol) . Reaktioseosta sekoitettiin 18 tuntia huoneenlämpötilassa. TLC (5-%:inen etyyliasetaatti/heksaani) osoitti jo-didin häviämisen. Reaktioseos kaadettiin etyyliasetaattiin (1 200 ml) ja pestiin 1 N HCl:lla (400 ml), minkä jälkeen 20 pestiin takaisin etyyliasetaatilla (2x). Yhdistetyt etyy-liasetaattiosat pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatti-liuoksella, suolaliuoksella (2x), kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja väkevöitiin pieneksi tyhjössä. Dimetyylifor-maatti poistettiin atseotropoimalla ksyleenin kanssa. Saatu • 25 punainen kumi lietettiin dikloorimetaaniin ja asetonitrii- liin, jolloin saatiin kiinteä suspensio. Se väkevöitiin pieneksi, lisättiin lisää dikloorimetaania, jäähdytettiin ja suodatettiin, jolloin saatiin punainen kiinteä aine. Hieman haluttua tuotetta uutettiin tästä kiinteästä ainees-30 ta toisella trituroinnilla dikloorimetaanissa ja sitten etyyliasetaatissa. Suodokset väkevöitiin tyhjössä ja saatu jäännös absorboitiin silikaan ja levitettiin laajalle flash-kolonnille. Dialkyloitu sivutuote poistettiin eluoi-malla 5 heksaani/1 etyyliasetaatilla, minkä jälkeen eluoi-35 maila tuote 3 heksaani/1 etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 65 1081 38 8,2 g (57 %) monoalkyloitua tuotetta, 3-[(N-l-(2-etoksi-(3'''-(0)-41''-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)-1'''-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)butaani))indol-3-yyli]-4-[indol-3-yyli]-IN(metyyli)pyrroli-2,5-dionia. MS. NMR.

5 Tert-butyylidimetyylisilyylieetterin, 3-[(N-l-(2- etoksi-(311'-(0)-4''1 -(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)-1' 1 '-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)butaani))indol-3-yyli]-4- [indol-3-yyli]-IN(metyyli)pyrroli-2,5-dionin, (8,2 g, 9,9 mmol) metanoliliuokseen (450 ml) käyttäen typ-10 peä 5 °C: ssa lisättiin p-tolueenisulfonihappo monohydraatti (0,16 g, 0,085 ekv.). Kahden tunnin kuluttua TLC (50-%:inen etyyliasetaatti/heksaani) osoitti reaktion olevan lähes täydellinen. Reaktio vaimennettiin kiinteällä natriumbikarbonaatilla (0,14 g). Metanoli poistettiin tyhjössä. Saatu 15 jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin 0,1 N nat-riumhydroksidilla, suolaliuoksella (2x), kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin punainen vaahto. Tämä materiaali absorboitiin silakalle ja asetettiin silikakakulle. Eluointi 2 heksaani/l etyy-20 liasetaatilla poisti jäljelle jääneen lähtöaineen, minkä jälkeen eluoimalla 1 heksaani/l etyyliasetaatilla ja 1 hek-saani/2 etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 6,4 g (91 %) alkoholia, 3- [ (N-l-(2-etoksi-(3111 -(O)-4 1 ''-(tert-butyyli-difenyylisilyylioksi)-1'''-(hydroksi)butaani))indol-3-yy-• 25 li] -4-[indol-3-yyli]-IN(metyyli)pyrroli-2,5-dionia. MS.

NMR.

Alkoholin, 3-[(N-l-(2-etoksi-(3'''-(O)-4' 1 1 -(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)-1'1'-(hydroksi)butaani))indol- 3-yyli] -4-[indol- 3-yyli]-IN(metyyli)pyrroli-2,5-dionin, 30 (6,36 g, 8,9 mmol) vedettömään eetteriliuokseen (500 ml) ;· käyttäen typpeä 5 °C:ssa lisättiin trietyyliamiini (1,9 ml, 1,5 ekv.) ja metaanisulfonyylikloridi (1,0 ml, 1,5 ekv.). Kolmen tunnin kuluttua lisättiin vielä trietyyliamiinia (1,25 ml, 1,0 ekv.) ja metaanisulfonyylikloridia (0,7 ml, 35 1,0 ekv.). Yhden tunnin kuluttua reaktio osoittautui olevan 108138 66 täydellinen TLC:llä (50-%:inen etyyliasetaatti/heksaani). Reaktioseos laimennettiin eetterillä (250 ml) , pestiin vedellä, 0,1 N HCl:11a ja suolaliuoksella (2x). Eetteri kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jol-5 loin saatiin 7,0 g mesylaattia, 3-[(N-l-(2-etoksi-(3'''-(0)-4'''-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)-1'''-(metaani-sulfonyylioksi)butaani))indol-3-yyli] -4-[indol-3-yyli]-1N-(metyyli)pyrroli-2,5-dionia. MS.

Mesylaatin, 3- [ (N-l-(2-etoksi-(3'''-(0)-4'''-(tert-10 butyylidifenyylisilyylioksi)-1' ' 1 -(metaanisulfonyyliok-si)butaani))indol-3-yyli]-4-[indol-3-yyli]-IN(metyyli)pyrroli-2 , 5-dioni n, (7,0 g, 8,9 mmol) asetoniliuokseen (200 ml) käyttäen typpeä lisättiin natriumjodidi (13,3 g, 10 ekv.) ja natriumbikarbonaatti (75 mg, 0,1 ekv.). Seosta 15 sekoitettiin 50 °C:ssa 13 tuntia. Reaktioseos väkevöitiin tyhjössä, ja jäännös liuotettiin eetteriin ja pestiin 10-%:isella natriumsulfiittiliuoksella. Kerrokset erotettiin, ja eetteriosa pestiin 10-%:isella natriumsulfiitti-liuoksella, vedellä, suolaliuoksella (2x), kuivattiin ja 20 väkevöitiin tyhjössä. Jäännös vietiin silikakakun läpi eluoiden 1 heksaani/1 etyyliasetaatilla ja 1 heksaani/2 etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 7,6 g jodidia, 3-[(N-l-(2-etoksi-(3 ' ' ’-(O)-4'''-(tert-butyylidifenyylisilyyliok-si)-11' '-(jodi)butaani))indol-3-yyli] -4-[indol-3-yyli]-1N-ll 25 (metyyli)pyrroli-2,5-dionia punaisena kiinteänä aineena (kvantitatiivinen saanto kahdelle vaiheelle). MS. NMR.

Cesiumkarbonaatin (12,0 g, 4 ekv.) dimetyyliformami-din (1 1) suspensioon käyttäen typpeä lisättiin jodidi, 3-[(N-l-(2-etoksi-(3''1-(0)-411'-(tert-butyylidifenyylisi-3 0 lyylioksi)-1' ' '-(jodi)butaani))indol-3-yyli]-4 -[indol-3-·; yyli]-IN (metyyli) pyrroli-2,5-dioni (7,6 g, 9,2 mmol), liuotettuna dimetyyliformamidiin (25 ml) ruiskupumpun kautta 65 tunnin aikana. Kolme tuntia lisäyksen lopettamisen jälkeen reaktioseos väkevöitiin tyhjössä. Jäännös liuotet-35 tiin etyyliasetaattiin (700 ml), pestiin vedellä (2 x 67 1 08 1 38 300 ml), ja vesikerros pestiin takaisin etyyliasetaatilla (2 x 200 ml) . Yhdistetyt etyyliasetaattiosat pestiin suolaliuoksella (2 x 200 ml) , kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin purppuranpunainen 5 jäännös. Materiaali absorboitiin silikaan ja levitettiin flash-kolonniin. Eluoitiin 3 heksaani/1 etyyliasetaatilla ja sitten 1 heksaani/l etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 5,2 g (82 %) makrorengasta, 3,4-[(N,Ν'-1,1')-((2' 1-etoksi)-3'''(O)-4'''-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)butaani)bis-10 (3,3'-indolyyli)]-1(H)pyrroli-2,5-dionia. MS. NMR.

N-metyylimaleimidin, 3,4- [ (N,N' -1,1')-((2''-etoksi)-3'''(O)-4'1'-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)butaani)bis-(3,31-indolyyli)]-1(H)pyrroli-2,5-dionin suspensiota 5 N KOH:ssa (150 mlrssa) ja etanolissa (300 ml) sekoitettiin 15 huoneenlämpötilassa 65 tuntia ja sitten yhden tunnin ajan 60 °C:ssa. Reaktioseos väkevöitiin (150 ml) tyhjössä, jäännös suspendoitiin veteen, jäähdytettiin 5 °C:seen ja tehtiin happamaksi (pH 3) väkevällä kloorivetyhapolla. Punaista vesipitoista suspensiota uutettiin etyyliasetaatilla 20 (4 x 200 ml), kuivattiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin 3,3 g raakaa anhydridialkoholia, 2,3-[(N,Ν'-1,1'-((21 '-etoksi)-31 ' 1 (O)-4' 11 -(hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli) ]-furaani-1, 4-dionia purppuranpunaisena kiinteänä aineena. MS.

25 Anhydridin, 2,3-[ (Ν,Ν'-1,1')-((2' '-etoksi)-3' 1 ' (0) - 4 ' ' 1 -(hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-1,4-dionin, (3,3 g, 7,5 mmol) dimetyyliformamidiliuokseen (250 ml) käyttäen typpeä lisättiin 1,1,1,3,3,3-heksametyyli-disilatsaani (32 ml, 2 ekv.) ja metanoli (3 ml, 10 ekv.).

30 Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tunnin ajan ja sitten kuumennettiin 60 °C:ssa 2 tuntia. Dimetyyli-formamidi poistettiin tyhjössä, ja saatu jäännös liuotettiin asetonitriiliin (250 ml). 1 N HCl (50 ml) lisättiin. Reaktioseosta sekoitettiin 15 minuuttia. Reaktioseos väke-35 voitiin, jakouutettiin etyyliasetaatilla (1 1) ja vedellä 68 1 08 1 38 (250 ml). Tuote oli kiinteä aine, joka saostui antaen alko-holimaleimidin, Β^-ΠΝ,Ν'-Ι,Ι'ί-ί^'1 -etoksi) - 3 ' ' ' (O) -4'''-(hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2,5-dionin, 0,92 (28 %) tuotetta. Pieni määrä (50 mg) ab-5 sorboitiin silikaan ja levitettiin flash-kolonniin. Eluoi-tiin dikloorimetaanilla, 5-%:isella asetonitriili/dikloori-metaanilla ja sitten 10-%:isella asetonitriili/dikloorime-taanilla, jolloin saatiin 38 mg analyyttisesti puhdasta materiaalia. Etyyliasetaatti väkevöitiin ja kromatografoi-10 tiin, jolloin saatiin vielä 8 % raakaa tuotetta. MS.

1H-NMR (d6-DMSO): δ 1,96 (1H, m); 2,09 (1H, m); 3,31 (1H, m); 3,40 (1H, m); 3,51 (1H, m); 3,62 (1H, m); 3,89 (1H, m); 4,18 (3H, m); 4,35 (1H, m); 4,68 (1H, t, J = 2

Hz); 7,11 (2H, m); 7,19 (2H, m); 7,44 (1H, s); 7,46 (1H, d, 15 J = 9 Hz); 7,51 (1H, s); 7,53 (1H, d, J = 9 Hz); 7,79 (1H, d, J = 8 Hz); 7,83 (1H, d, J = 8 Hz); 10,91 (1H, s).

H

20 ΟΛΰ '—nh2 - cf3co2h

Esimerkki 4 : 25 3,4-[(Ν,Ν’-1,1’) -((2’’-etoksi)-3’' '(O)-4' ' ' - (amino) - • · butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dionin tri-fluoriasetaattisuola

Alkoholin, 3,4- [ (N,Ν' -1,1' ) - ( (2 ' ' -etoksi) -3' ' ' (O) -4' ' 1 -(hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-30 2,5-dionin, (155 mg, 0,35 mmol) vedettömään tetrahydrofu- ·· raaniliuokseen (15 ml) käyttäen typpeä lisättiin 2,4,6-ko- llidiini (280 /xl, 3 ekv.). Liuos jäähdytettiin -78 °C:seen ja käsiteltiin trifluorimetaanisulfonihappoanhydridillä (118 /xl, 2 ekv.). 1,5 tunnin kuluttua -78 °C;ssa lisättiin 35 suuri ylimäärä väkevää ammoniumhydroksidia (2 ml). 10 mi- 69 1 08 1 38 nuutin kuluttua reaktioseos lämmitettiin -42 °C:seen hiili-happo jää/asetonitriilihauteella ja sitten sekoitettiin 18 tuntia sallien sen samalla lämmetä huoneenlämpötilaan. Reaktioseos väkevöitiin tyhjössä. Saatu jäännös liuotettiin 5 etyyliasetaattiin (400 ml) , pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin raaka primaarinen amiini. Amiini absorboitiin silikaan ja levitettiin flash-kolonniin, jota eluoitiin peräkkäin 1 etyyliasetaatti/1 heksaanilla, etyyliasetaatilla, etyyli-10 asetaatti/5-%:isella metanolilla ja lopulta 50 etyyliase-taatti/45 asetonitriili/4 metanoli/2 isopropyyliamiinilla amiinin, 3,4- [ (N,Ν' -1,1')-((2''-etoksi)-3' '1 (O)-4'' '-(hyd-roksi) butaani)bis-(3,3'-indolyyli) ] -1(H)-pyrroli-2,5-dio-nin, (38 mg) eluoimiseksi. Lähtöaine alkoholi (104 mg, 15 67 %) otettiin myös talteen. Tuote puhdistettiin edelleen käyttäen käänteisfaasi kokoekskluusiokromatografiaa eluoi-malla 85 asetonitriili/15 (0,01-%:inen TFA/vesi). Talteen otetut fraktiot atseotropoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 23 mg (12 %) jauhetta TFA-suolana. MS.

20 1H-NMR (d6-DMSO): δ 1,99 (1H, m); 2,08 (1H, m); 2,82 (1H, m); 3,18 (1H, m); 3,57 (2H, m); 3,75 (1H, m); 4,13 (2H, m); 4,29 (1H, m); 4,44 (1H, m); 7,09 (2H, t, J = 7

Hz); 7,18 (2H, t, J = 7 Hz); 7,47 (4H, m); 7,70 (3H, leveä s); 7,78 (2H, m).

25 Analogisella tavalla valmistettiin S-enantiomeeri, 4s HCl-suolana, ja R-enantiomeeri, 4r HCl-suolana.

• · 70 1 08 1 38

H

COpQ

5

Esimerkki 5 n(ch,)2 - hci 3,4-[(N,N'-1,1') - ((2' ' -etoksi) -3' " (O)-4 · · '-(N,N-di-metYyliamino)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2.5- dionin HCl-suola 10 Alkoholin, 3,4-[(Ν,Ν'-1,1'-)((2''-etoksi)-3'''(O)- 4'1'-(hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2.5- dionin (472 mg, 1,07 mmol), vedettömään dikloorimetaa-nisuspensioon (140 ml) käyttäen typpeä lisättiin pyridiini (260 μΐ, 3 ekv.) ja metaanisulfonihappoanhydridi (242 mg, 15 1,3 ekv.) . Neljän tunnin kuluttua reaktioseos laimennettiin dikloorimetaanilla, pestiin 0,1 N HCI:11a (2x) ja suodatettiin lähtöaineen poistamiseksi (54 mg) . Dikloorimetaanierä pestiin suolaliuoksella (2x), kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin raaka mesylaatti purppuranpunaisena kiin-20 teänä aineena. Materiaali absorboitiin silikaan ja levitettiin flash-kolonniin, joka eluoitiin peräkkäin dikloorimetaanilla, 5-%:isella asetonitriili/dikloorimetaanilla ja 10-%:isella asetonitriili/dikloorimetaanilla, jolloin saatiin 288 mg (52 %:n saanto) mesylaattia, 3,4-[(N,Ν'-1,1') -: 25 ((2' '-etoksi)-31 ' 1 (O)-411 1 -(metaanisulfonyylioksi)butaani)- bis-(3,31-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dionia. MS. NMR.

Mesylaatin, 3,4-[(N,N'-l,l')-((2'1-etoksi)-3'''(O) -4'''-(metaanisulfonyylioksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dionin (304 mg, 0,59 mmol), tetrahydrofu-30 raaniliuokseen (20 ml) lisättiin 8,9 M dimetyyliamiinin liuos tetrahydrofuraanissa (7 ml, 100 ekv.). Kun reaktio-seosta oli kuumennettu (65 °C) 24 tuntia suljetussa putkessa, se laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml), pestiin suolaliuoksella (2x), kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin 35 saatiin raaka dimetyyliamiinijohdannainen kiinteänä ainee- 108138 71 j na. Materiaali absorboitiin silikaan ja levitettiin flash-kolonniin, jota eluoitiin peräkkäin 3 etyyliasetaatti/1 heksaanilla, etyyliasetaatilla ja 2-%:isella isopropyy-liaraiini/etyyliasetaatilla, jolloin saadaan dimetyyliamii-5 nijohdannaista 193 mg (70 %:n saanto), joka oli 90-%:isen puhdas HPLC:lla. Dimetyyliamiinijohdannainen, 3,4-[(N,N'-1,1')-((2'1-etoksi)-3'1'(0)-4'''-(N,N-dimetyyliamino)butaa-ni)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni, puhdistettiin yli 95 %:n puhtauteen trifluoriasetaattisuolana käyt-10 täen käänteisfaasi kokoekskluusio-HPLC:tä eluoiden 85 ase-tonitriili/15 (0,01-%:inen TFA/vesi).

3,4-[(N,N'-1,1')-((21 1-etoksi)-3' ' ' (0)-41 ' '-(N,N-di-metyyliamino)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2,5-dionin trifluoriasetaattisuola muutettiin HCl-suolaksi 15 suspendoimalla suola etyyliasetaattiin ja pesemällä varovasti 0,1 N NaOH:lla (5 x 50 ml). Etyyliasetaattiosa pestiin suolaliuoksella (2x), kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin vapaa emäs, 3,4-((N,Ν'-1,1')-((2''-etoksi)-3' 1 ' (O)-4' ' 1 -(N,N-dimetyyliamino)butaani)bis-(3,3'-indolyy-20 li)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni. Vapaan emäksen, 3,4-[(N,N'-1,1')-((211-etoksi)-31''(O)-41''-(N,N-dimetyyliamino)butaani) bis- (3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dionin, vedettömään metanolisuspensioon (50 ml) lisättiin 1 N HCl vedettö-männä eetterissä (13 ml, 50 ekv.). Eetteri haihdutettiin, ' : 25 ja jäännös kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 143 mg (52 %:n saanto) 3,4-[(Ν,Ν'-1,1')-((2''-etoksi)-3'''(0)-4 ' ' ' -(N,N-dimetyyliamino)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H) -pyrroli-2,5-dioni vetykloridisuola punaisena kiinteänä aineena. MS.

30 ^-NMR (d6-DMSO) : δ 2,03 (1H, m); 2,26 (1H, m); 2,68 (6H, t, J = 5 Hz); 3,24 (1H, m); 3,28 (1H, m, D20 ravistelun jälkeen); 3,64 (1H, m); 3,77 (2H, m); 4,07 - 4,38 (4H, m); 7,08 (2H, m); 7,17 (2H, m); 7,43 (3H, m); 7,52 (1H, d, J = 8 Hz); 7,79 (2H, m); 10,33 (1H, leveä s); 10,92 (1H, 35 S) .

108138 72

H

0^Ny,0

COuQ

u *—N(CHj)2 - HC1

Esimerkki 5s (S)-3,4-[(N,N'-1,1')-((2' '-etoksi)-3 " ' (O)-4 ’ " -(N, N-dimetyyliamino) butaani) bis- (3,3' -indolyyli) ] -1 (H) -pyr-10 roli-2,5-dioni vetykloridisuola

Mesylaatin, (S)-3,4-[(N,Ν'-1,1’)-((2·1-etoksi)-3111(o)-4iii_(metaanisulfonyylioksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli) ]-1(H)-pyrroli-2,5-dionin (2,8 g, 5,39 mmol), THF-liuokseen (300 ml) lisättiin dimetyyliamiini (100 ml, 15 40-%:inen vedessä) suljetussa astiassa. Kun reaktioseosta oli kuumennettu (50 °C) 24 tuntia, se väkevöitiin. Jäännös vietiin silikakakun läpi eluoiden etyyliasetaatilla ja sitten 10-%:isella trietyyliamiini/etyyliasetaatilla, joka eluoi halutun (S)-dimetyyliamiinijohdannaisen. Eluentti 20 väkevöitiin, jolloin saatiin 1,7 g (67 %:n saanto) vapaata emästä (S)-3,4-[(N,N'-1,1')-((2''-etoksi)-3'''(O)-4'''-(metaanisulfonyylioksi) butaani) bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2 ,5-dionia violettina kiinteänä aineena. Vapaa emäs muutettiin vetykloridisuolaksi suspendoimalla vapaa emäs ·.: 25 3,4-[(Ν,Ν*-1,1')-(4' '-(N,N-dimetyyliamino-3-(S)- 1 'etoksi- butaani)]-(bis)-(3-indolyyli)-lH-pyrroli-2,5-dioni (1,7 g, 3,6 mmol) metanoliin (300 ml) ja lisäämällä 1,0 N vedetön HCl eetterissä (10 ml, 10 mmol) . 0,5 tunnin kuluttua ympäristön lämpötilassa kirkkaan oranssi sakka otettiin tal-30 teen, pestiin eetterillä ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 1,4 g (77 %:n saanto) 3,4-[ (N,Ν'-1,1' ) - (4 ' ' - (N,N-dimetyyliamino-3-(S)-''etoksibutaani)]-(bis)-(3-indolyyli)-lH-pyrroli-2,5-dioni vetykloridisuolaa. MS.

1H-NMR: (d6-DMSO) δ 2,1 (m, 1H) ; 2,35 (m, 1H) ; 2,68 35 (s, 6H); 3,2 (m, 1H); 3,33 (m, 1H); 3,66 (leveä t, 1H); 3,8 108138 73 (leveä t, 1H); 3,85 (m, 1H); 4,17 (m, 1H); 4,2 - 4,4 (m, 3H); 7,1 (d, 1H); 7,13 (d, 1H); 7,2 (m, 2H); 7,44 (s, 1H); 7,48 (S, 1H) ; 7,5 (d, 1H) ; 7,56 (d, 1H) ; 7,82 (leveä t, 2H) ; 10,59 (leveä, 1H) ; 10,96 (s, 1H) .

5 Esimerkki 5r (R)-3,4-[(N,N'-l,l')-((2*'-etoksi)-3' ' * (O)-4' "-(N,N-dimetyyliamino)butaani)bis- (3,3' -indolyyli) ] -1 (H) -pyr-roli-2,5-dionin vetykloridisuola R-enantiomeeri valmistettiin (S) -enantiomeerin kansio sa identtisellä tavalla, paitsi että käytettiin (R)-4-tert-butyylidifenyylisilyylioksi-3-(2-jodietoksi)-1-jodibutaania lähtöaineena. MS. NMR.

H

OH

20 Esimerkki 6 3,4-[(N,N'-1,1')-(2''-etoksi-3'''((O)-metyleeni)-4'''-(hydroksi)butaani)bis-(3,3’-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2,5-dioni (Bis)mesylaatin, 1-(2-metyylisulfonyylioksi)etoksi)- 25 2-((metyylisulfonyylioksi)etyyli)-3 -(tert-butyylidifenyy- lisilyylioksi)propaanin (7,4 g, 13,30 mmol) ja bis-(3,3'- indolyyli)]-1(metyyli)pyrroli-2,5-dionin (4,43 g, 13,30 mmol) kuiva DMF-liuos (100 ml) lisättiin 16 tunnin aikana

Cs2C03:n sekoitettuun suspensioon (25,4 g, 78 mmol) DMFtssa 30 (400 ml) 50 °C:ssa. Kahdeksan tunnin kuluttua reaktioseos ·; väkevöitiin käyttäen alennettua painetta 8 0 °C:ssa, jolloin » > saatiin jäännös. Jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml), pestiin vedellä (50 ml). Orgaaninen kerros erotettiin, ja vesikerrosta uutettiin etyyliasetaatilla (50 35 ml x 3). yhdistetty orgaaninen osa kuivattiin ja väkevöi- 108138 74 tiin jäännökseksi. Jäännös eluoitiin silikageelikolonnin läpi 25-%:isella etyyliasetaatilla heksaanissa, minkä jälkeen 5-%:isella metanolilla CH2Cl2:ssa, jolloin saatiin kolme vallitsevaa tuotetta: silyylieetterimakrorengastuote, 5 2,3-[(N,N'-1,1')-(4'11-etoksi-1'-yyli-(31''-(tert-butyyli- difenyylisilyylioksi)metyleeni)butan-l-yyli)-bis-(3,3'-in-dolyyli)]-1(metyyli)-pyrrol-1,4-dioni, (2,35 g), MS: las kettu C44H45N304Si: lie: Mol.paino: 707,31, todettu 708, Rf = 0,84 (50-%:inen etyyliasetaatti heksaanissa), desilyloitu 10 alkoholi makrorengastuote (600 mg). MS.

N-metyylimakrorenkaan, 2,3-[(N,Ν'-1,1')-(4'''-etoksi-1 1 -yyli- (3''' — (tert-butyylidifenyylisilyylioksi)metyleeni) butan-l-yyli) -bis-(3,3'-indolyyli)]-1(metyyli)-pyrrol- 1,4-dionin, (1,65 g, 2,33 mmol) sekoitettuun EtOH-liuokseen 15 (500 ml) lisättiin 5 N KOH (100 ml) . 12 tunnin kuluttua 50 °C:ssa reaktioseos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja väkevöitiin käyttäen alennettua painetta jäännökseksi. Jäännös tehtiin happamaksi väkevällä HCl:lla pH-arvoon 1 ja uutettiin etyyliasetaatilla (200 ml x 5) . Yhdistetty orgaa-20 ninen faasi kuivattiin, väkevöitiin käyttäen alennettua painetta ja eluoitiin lyhyen silikapylvään läpi 5-%:isella metanolilla dikloorimetaanissa. Eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin jäännös, joka sisälsi anhydridin, 2,3-[(Ν,Ν'-Ι,Ι'ί-Η1'' -etoksi-11 -yyli - (3 ' ' ' - (tert-butyylidife-25 nyylisilyylioksi)metyleeni)butan-l-yyli)-bis-(3,3'-indolyy li) ]-1(metyyli)-pyrrol-1,4-dionin, jota käytettiin seuraa-vassa reaktiossa.

Anhydridin, 2,3-[(N,N'-l,l')-(4' 1 1-etoksi-1'-yyli-(3'''-(tert-butyylidifenyylisilyylioksi)metyleeni)butan-1-30 yyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(metyyli)-pyrrol-1,4-dionin, (600 mg, 1,3 mmol) kuivaan DMF-liuokseen (250 ml) lisättiin HMDS (2,1 g, 13 mmol), minkä jälkeen metanoli (209 mg, 6,5 mmol) . 4 8 tunnin kuluttua reaktioseos väkevöitiin, ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (100 ml), pestiin 1 N aq 35 HCl:lla (25 ml), vedellä (25 ml) ja vastaavasti suolaliuok- 108138 75 sella (25 ml). Saatu orgaaninen faasi kuivattiin sitten ja väkevöitiin, jolloin saatiin jäännös. Jäännös eluoitiin silikageelikolonnin läpi metanoli/CH2Cl2:11a (0 - 5 % meta-nolia). Eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin imidi, 5 3,4-[(Ν,Ν'-Ι,Ι1)-(21'-etoksi-(3'''-((O)-metyleeni-4' 1 ' - (hydroksi)butaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni, kiinteänä aineena (300 mg, 50 %.-n saanto). MS.

^H-NMR (CDC13) δ 9,65 (s, 1H) , 7,79 (t, J = 7,65 Hz) , 7,61 (s, 1H) , 7,54 (s, 1H) , 7,46 - 7,40 (m, 2H) , 7,24 - 10 7,08 (m, 2H), 7,07 - 7,02 (m, 2H) , 4,43 - 4,33 (m, 2H) , 4,30 - 4,21 (m, 1H) , 4,14 - 4,06 (m, 1H) , 3,64 (t, J = 4,64 Hz), 3,58 - 3,38 (m, 5H), 3,71 (t, J = 8,64 hz, 1H) , 1,89 -1,85 (m, 1H) .

15 ΟζΓΧΟ \/v -HC1 ° ^ 20 ^_

Esimerkki 7 3,4-[(Ν,Ν'-Ι,Ι’)“(2''-etoksx-(3'''((O)-metyleeni)-4'11_(N-pyrrolidino)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyr-roli-2,5-dioni vetykloridisuola ; 25 Imidialkoholin, 3,4 -[(N,N'-1,11)-(21 '-etoksi(31 ' '- ((O)-metyleeni)-41 ' 1 -(hydroksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli) ]-1(H)-pyrroli-2,5-dionin (140 mg, 0,30 mmol) kuivaan CH2C12-liuokseen (50 ml), joka sisälsi pyridiiniä (120 mg, 1,5 mmol), lisättiin metaanisulfonihappoanhydridi (106 mg, 30 0,61 mmol) käyttäen N2-atmosfääriä. 12 tunnin kuluttua reaktioseos vaimennettiin vedellä (25 ml) , laimennettiin CH2Cl2:lla (50 ml), pestiin 0,2 N HCl:lla (20 ml x 2) , aq natriumbikarbonaatilla (20 ml) , vedellä (20 ml) , suolaliuoksella (20 ml) , kuivattiin ja väkevöitiin jäännöksek-35 si. Jäännös eluoitiin lyhyen silikageelikolonnin läpi 108138 76 5-%:isella metanolilla dikloorimetaanissa, ja eluointili-uottimen haihdutuksesta saatiin mesylaatti, 3,4-[(N,N'~ 1,1'- (2 ' '-etoksi-(3 ' 1 ' ((0)-metyleeni)-4' ' '-(metaanisul-fonyylioksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-5 dioni, jota käytettiin seuraavassa reaktiossa.

Mesylaatin, 3/4-[(N,N'-l,l,-(2l'-etoksi-(3'''((0)-metyleeni)-4'''-(metaanisulfonyylioksi)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dionin, (157 mg, 0,29 mmol) suljetussa putkessa olevaan THF-liuokseen (20 ml) lisättiin 10 pyrrolideeni (203 mg, 2,90 mmol). Kun reaktioseosta oli kuumennettu (50 °C) .12 tuntia, se jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, väkevöitiin käyttäen alennettua painetta, liuotettiin CH2Cl2:iin (50 ml), pestiin vedellä (20 ml x 2), suolaliuoksella (20 ml), kuivattiin ja väkevöitiin käyttäen 15 alennettua painetta jäännökseksi. Jäännös eluoitiin lyhyen silikageelikolonnin läpi 5-% : isella metanolilla dikloorimetaanissa, ja eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin pyrrol idiini, 3,4-[(N,N'-1,1'-(2''-etoksi-(3'''((O)-metyleeni) -4 ' ''-(N-pyrrolidino)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-20 pyrroli-2,5-dioni, MS: laskettu : lie : Mol.paino: 508,62, todettu 508, Rf = 0,14 (5-% : inen met anoi i dikloorimetaanissa, jälki trietyyliamiini) . Pyrrolidiini puhdistettiin edelleen käänteisfaasi geelipermeaatiokromatografiällä, jolloin saatiin pyrrolimakrorengas trifluorietikkahapon 25 suolana (55 mg, 37 %:n saanto). Pyrrolin trif luorietikkahapon suola muutettiin vetykloridi otsikon yhdisteeksi uuttamalla trifluorietikkahapon suolan (55 mg) 1 N NaOH-lietettä (5 ml) etyyliasetaatti (25 ml)/metanolilla (2 ml), uute kuivattiin ja väkevöitiin jäännökseksi. Jäännös lietettiin 30 eetteri/metanoliin (10:1), ja eetterin HCl-liuos lisättiin.

·* 30 minuutin kuluttua liete väkevöitiin ja kuivattiin tyh jössä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (48 mg, 88 %:n saanto) . MS.

1H-NMR: δ 10,98 (s, 1H), 7,90 (s, 1H) , 7,82 (s, 1H) , 35 7,70 - 7,62 (m, 3H), 7,56 - 7,50 (m, 1H), 7,24 - 7,02 (m, 108138 77 4H), 4,50 - 4,20 (m, 4H), 3,76 - 3,42 (m, 4H), 2,82 - 2,44 (m, 4H), 2,26 - 2,24 (m, 1H), 1,82 - 1,60 (m, 6H), 1,26 - 1.02 (m, 2H).

H

5 o«w^N\^o o^fxo u io L Λ . HCl CH 3

Esimerkki 8 3,4-[(N,N'-1,1'-(2''-etoksi-(3'''((0)-metyleeni)-4' ' ' -(N,N-dimetyyliamino)butaani)bis-(3,3'-indolyyli)]-15 1(H)-pyrroli-2,5-dioni vetykloridisuola

Otsikon tertiaarinen amiini valmistettiin korvaamalla mesylaatti dimetyyliamiinilla (58 mg, 75 %:n saanto).

MS.

XH (CDC13) d 10,93 (s, 1H) , 7,84 (s, 1H) , 7,77 (s, 20 1H), 7,69 - 7,64 (m, 3H), 7,47 (d, J =7,97 Hz, 1H), 7,13 - 7.02 (m, 4H), 4,40 - 4,11 (m, 4H), 3,73 - 3,20 (m, 4H), 2,50 (s, 3H) , 2,33 (s, 1H) , 2,13 - 1,96 (m, 2H) , 1,86 - 1,70 (m, 1H), 1,,21 - 1,10 (m, 2H).

Seuraavat yhdisteet valmistettiin tässä kuvattujen 25 esimerkkien kanssa analogisella tavalla ja keksinnön mukaisesti saatavia yhdisteitä havainnollistetaan edelleen. Seu-raavissa esimerkeissä yhdisteen rakenne varmistettiin NMR:llä, MS:llä ja/tai alkuaineanalyysillä. Synteesin aikana R on suojattu hydroksi, edullisesti silyylieetteri, 30 edullisesti tert-butyylidifenyylisilyylioksi (TBDPS). Si-lyylieetteri voidaan muuttaa poistuvaksi ryhmäksi ja subs-tituoida, jolloin muodostuvat seuraavat esimerkit: 1 081 38 78 S.

CO KO

tau/ \(CH2)n2 / 10 \

Esimerkki n nl n2 R

9 3 2 0 -NH2 10 3 2 0 -NH2 · HCl 15 11 320 -N(CH3)2 · HCl -ΓΛ 12 3 2 0 · HCl 13 3 2 0 -NHCH2C6H5 · HCl 14 320 -NHCOCH3 2Q 15 3 2 0 -NHSO2C6H5 16 '320 -NHC(0)0CH2C6H5 17s S-enantiomeeri 220 -NHCH3 - HCl 18s S-enantiomeeri 220 -NHCH2C6H5 · HCl 18r R-enantiomeeri 19r R-enantiomeeri 220 -NHCOCH3

=· 25 -O

20r R-enantiomeeri 2 2 0 · HCl 20s S-enantiomeeri 21r R-enantiomeeri 2 2 0 -NHS02C6H5 21s S-enantiomeeri 30 22 2 2 0 -NHCH2(pyridyyli) · .HCl / \ -N N—CHj 23s S-enantiomeeri 2 2 0 \-/ · HCl /“λ

-H O

35 24s S-enantiomeeri 2 2 0 \-/ - HCl 25r R-enantiomeeri 220 -NHC(O)OCH2C6Hs 79 1 08 1 38

H

0*,γ·ΝνΛ.0 cxfxp 5 Vy

Esimerkki 26 3.4- [N,Ν'-1,1'-(2-metyleeni-6-metyleenipyridiini)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni

Seuraten esimerkissä 1 kuvattua menetelmää 2,3-bis-10 indolimaleiinihappoanhydridiä (287 mg, 0,88 mmol 5 ml:ssa DMF:a) käsiteltiin natriumhydridillä (60-%:inen öljyssä, 88 mg, 2,19 mmol) 1,5 tunnin ajan, sitten laimennettiin 11 ml .-aan DMF: 11a ja käsiteltiin bis-2,6-dibromimetyylipyri-diinillä (245 mg, 0,93 mmol). Kun reaktioseosta oli sekoi-15 tettu 50 °C:ssa yön yli, sitä käsiteltiin (EtOAc) ja suodatettiin lyhyen silikatulpan läpi (50-%:inen EtOAc heksaa-neissa). N,N'-(2,6-pyridiinisilta)-bis-indolimaleiinihappo-anhydridi (142 mg, 37 %) saatiin tummanpunaisena kiinteänä aineena, joka osoitti oleellisesti yksittäisen pisteen TLC-2 0 analyysillä ja jota käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman lisäpuhdistusta.

3.4- [N,N'-1,1'-(2-metyleeni-6-metyleenipyridiini)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-furaani-2,5-dionia (140 mg, 0,32 mmol) 2 ml:ssa DMF:a käsiteltiin 1,1,1,3,3,3-heksametyyli- ;*. 25 disilatsaanin (0,72 ml, 3,2 mmol) ja CH3OH:n (0,063 ml, 1,6

mmol) seoksella, jolloin saatiin käsittelyn ja radiaalisel-la kromatografiällä puhdistamisen silikageelillä jälkeen 42 mg otsikon N,N' - (2,6-pyridiinisilta) -bis-indolimaleimi-diä burgundinvärisenä kiinteänä aineena. Tämä materiaali 30 oli homogeeninen TLC:llä (Rf = 0,35, 3-%:inen CH3OH

.* CHC13: ssa) .

80 h 108138

COpO

• vr>

Esimerkki 27 \=/ 3,4-[(Ν,Ν'-1,1'-(2''-etoksi)bentsyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dionivetykloridi

Kuiva DMF-liuos (45 ml) , jonka muodostivat dibromi-10 di, 2-(2'-bromietoksi)bentsyylibromidi, (2,0 g, 6,8 mmol) ja bis-(3,3'-indolyyli)]-1(metyyli)-pyrroli-2,5-dioni (2,3 g, 6,8 mmol), lisättiin ruiskupumpun kautta 20 tunnin aikana Cs2C03:n (8,9 g, 27 mmol) suspensioon kuivassa DMF:ssa (550 ml) sekoittaen voimakkaasti 55 °C:ssa käyttäen 15 N2:ä. Vielä 2 tunnin kuluttua reaktioseos väkevöitiin tyh jössä, jäännös liuotettiin CH2Cl2:iin, pestiin 1 N HClrlla, suolaliuoksella, kuivattiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin violetti öljy. Öljy vietiin silikatulpan läpi eluoiden 1:1 heksaanit/etyyliasetaatilla. Eluentti pelkis-20 tettiin, jolloin saatiin makrorengas, 3,4-[ (Ν,Ν1 -1,1' - (2 ' ' -etoksi)bentsyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni 2,76 g (71 %:n saanto) aniliininpunaisena kiinteänä aineena. Uudelleenkiteytyksestä isopropanoli/metyleeniklo-ridista saatiin analyyttisesti puhdas aine. MS: MP = 473; 25 havaittu 473, FD, CHC13) , AA: laskettu (havaittu): C 76,09 (75,86); H 4,90 (4,93); N 8,87 (8,79).

Makrorenkaan, 3,4-[(Ν,Ν1-1,1'-(2''-etoksi)bentsyyli) -bis-(3,3'-indolyyli)]-1(metyyli)-pyrroli-2,5-dionin (710 mg, 15 mmol) etanolisuspensioon (100 ml) , joka sisälsi 30 THF:a (20 ml) lisättiin 5 N KOH (80 ml) . Reaktioseosta kuu-.* mennettiin (55 °C) 70 tuntia sekoittaen, jäähdytettiin huo neenlämpötilaan, ja etanoli poistettiin tyhjössä. Väkevöite tehtiin happamaksi pH-arvoon 1 5 N HCl:lla (325 ml) , uutettiin etyyliasetaatilla, pestiin suolaliuoksella (2x), kui-35 vattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin anhydridi, 3,4- 108138 81 [(Ν,Ν'-1,1'-(2'1-etoksi)bentsyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-2,5-dionia 700 mg (kvantitatiivinen konversio) j äännöksenä.

Anhydridin, 3i4-[(N,N'-l/l,-(2''-etoksi)bentsyyli)-5 bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-2,5-dionin (760 mg, 17 mmol), kuivaan DMF-liuokseen (500 ml) lisättiin metanolin (0,34 ml, 8,3 mmol) ja 1,1,1,3,3,3-heksametyylidisilatsaanin (3,5 ml, 17 mmol) liuos. Kun reaktioseosta oli kuumennettu (55 °C) 22 tuntia, se väkevöitiin tyhjössä, laimennettiin 10 etyyliasetaatilla, pestiin 0,1 N HCl:lla. Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin ja väkevöitiin violetiksi jäännökseksi. Jäännös levitettiin lyhyelle silikatulpalle ja eluoitiin CH2Cl2/heksaanilla (gradientti 0 - 100 % CH2C12) . Eluointiliuottimen haihdutuksesta saatiin NH-maleimidia, 15 3,4-[(N,N' —1,1'-(2 *'-etoksi)bentsyyli)-bis-(3,3'-indolyy li) ]-1 (H) -pyrroli-2,5-dionia 483 mg (70 %:n saanto) purppuranpunaisena kiinteänä aineena. Otsikon yhdiste kiteytettiin CH2Cl2/heksaanista. MS.

XH-NMR: (DMSO-d6) δ 4,29 (2H, leveä s); 4,59 (2H, 20 leveä s) ; 5,23 (2H, leveä s); 6,90 - 6,99 (2H) , 7,01 - 7,18 (3H), 7,20 - 7,27 (2H), 7,59 - 7,68 (2H), 7,71 - 7,80 (5H); 10,92 (H, s) .

H

' ” CdtO

30 Esimerkki 28 .. 3,4-[(N,Ν'-1,11-heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1H- t pyrroli-2,5-dioni 3,4-bis-(3-indolyyli)-l-metyylipyrroli-2,5-dionin (499 mg, 1,46 mmol) liuokseen 10 ml:ssa DMF:a käyttäen N2:ä 35 lisättiin natriumhydridi (60-%:inen öljyssä, 146 mg, 3,65 82 1 08 1 38 mmol) erissä 30 minuutin aikana. Saatua vihreää liuosta sekoitettiin 1 tunti. Seos laimennettiin 10 ml :11a DMF:a ja käsiteltiin sitten tipoittain 1,6-dibromiheksaanilla (0,24 ml, 1,57 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia 5 huoneenlämpötilassa ja kuumennettiin sitten 45 °C:ssa 16 tuntia. Jäähdytetty seos kaadettiin laimeaan vesipitoiseen NH4Cl:iin (125 ml) ja uutettiin EtOAc:lla (3 x 40 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä ja kuivattiin (MgS04) . Kun liuotin oli poistettu tyhjössä, jäännös puh-10 distettiin flash-kromatografiällä silikageelillä eluoiden CH2Cl2-heksaaneilla, 1:1 - 3:1 (gradienttieluutio) , jolloin saatiin yhdiste 3,4-[(Ν,Ν1-1,1'-heksaani)-bis-(3,31-indo-lyyli)]-l-metyylipyrroli-2,5-dioni (137 mg, 22 %) purppuranpunaisena kiinteänä aineena, sp. > 320 °C.

15 Seosta, joka sisälsi 3,4-[(Ν,Ν1-1,11-heksaani)-bis- (3,3'-indolyyli)]-l-metyylipyrroli-2,5-dionin (137 mg, 322 mmol), etanolin (15 ml), 5 N KOH:n (5 ml) ja THF:n (2 ml), sekoitettiin 4 tuntia huoneenlämpötilassa. Tällöin TLC-ana-lyysi osoitti lähtöaineen olevan kuluneen. Seos laimennet-20 tiin vedellä (15 ml) ja väkevöitiin kiertohaihduttimellä.

Seos jäähdytettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 1 3 N

HC1:11a ja uutettiin CH2Cl2:lla (3 x 10 ml) . Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin hyvin vedellä, kuivattiin vedettömällä MgS04:lla ja väkevöitiin. Saadun purppuranpunaisen . 25 kiinteän aineen (116 mg) havaittiin NMR-analyysillä olevan 4:1 halutun anhydridin ja lähtöaineen seos. Lähtöaine käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman lisäpuhdistus-ta.

Samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 1, 3,4-30 [(N,N 1 -1,1'-heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-2,5- .· dionin (108 mg, 0,263 mmol) liuosta DMF:ssa (1,5 ml) käyt täen N2 : äkäsiteltiin 1,1,1,3,3,3-heksametyylidisilatsaanin (0,59 ml, 2,62 mmol) ja CH3OH:n (0,05 ml, 1,31 mmol) seoksella yön yli. Käsittelyn (EtOAc) jälkeen raaka tuote al-35 tistettiin flash-kromatografiälle silikageelillä (CH2C12- 108138 83

EtOAc, 10:1 - 5:1, gradienttieluutio), jolloin saatiin kaksi värittynyttä fraktiota. Ensimmäinen eluoituva värittynyt fraktio sisälsi 3,4-[ (Ν,Ν'-1,1'-heksaani)-bis-(3,3'-indo-lyyli)]-l-metyylipyrroli-2,5-dioniepäpuhtauden, joka on 5 tuotu aikaisemmista reaktioista. Toinen värittynyt fraktio sisälsi halutun tuotteen, 3,4-[(Ν,Ν'-1,1'-heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionin (56 mg). Sp.

> 320 °C. MS.

Laskettu C26H23N302 (0,3 H20):lle: 10 C 76,26; H 5,66; N 10,26.

Todettu: C 75,21; H 5,65; N 10,05.

H

- CoeO

X^yrQ

Esimerkki 29 2 0 3,4- [ (N,Ν' -1,1' - (3' ' - (bentsyylikarbonaatti)metylee- ni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni 3,4-((1^,1^-1,1^(31 ' - (hydroksi) metyleeni) heksaani) -bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionin (24 mg, 0,054 mmol) 0-°C:iseen dikloorimetaaniliuokseen lisättiin di-iso-;j 25 propyylietyyliamiini (10,6 mg, 0,081 mmol), minkä jälkeen bentsyyliklooriformaatti (13,8 mg, 0,081 mmol). 72 tunnin kuluttua reaktioseos vaimennettiin 2,5 N natriumbikarbonaatilla, orgaaninen kerros poistettiin ja vesikerrosta uutettiin dikloorimetaanilla. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset 30 yhdistettiin, pestiin suolaliuoksella, kuivattiin magne-.* siumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saa tiin öljy, joka puhdistettiin käänteisfaasi-HPLC:llä (5-%:inen asetonitriili vedessä 0,l-%:isella TFA-gradien-tilla 100-%:iseen asetonitriiliin C18-kolonnilla), jolloin 35 saatiin 6 mg otsikon yhdistettä. MS.

108138 84 ti o«,^Ns^*o

CvyO

Esimerkki 30 (±)-3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-(bentsyylioksimetyleeni)-10 heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni

Seuraten samaa menetelmää kuin on kuvattu aikaisemmissa esimerkeissä, 3,4-bis-(3'-indolyyli)-1-metyylipyrro-li-2,5-dionia (400 mg, 1,17 mmol) 8 ml:ssa DMF:a käsiteltiin natriumhydridillä (60-%:inen öljyssä, 117 mg, 2,93 15 mmol), minkä jälkeen käsiteltiin (±)-3-bentsyylioksimetyleeni -1, 6 -dibromiheksaanilla 7 ml:ssa DMF:a. Kun seosta oli kuumennettu 50 °C:ssa yön yli, raaka tuote puhdistettiin käsittelyn jälkeen flash-kromatografiällä silikageelillä eluoiden CH2Cl2-heksaaneilla, 1:1 - 2:1 (gradienttieluutio) , 20 jolloin saatiin puhdas (±)-3,4-[ (N,N'-1,1'-(3(bentsyylioksimetyleeni) heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli) ] -1-metyylipyr-roli-2,5-dioni (149 mg, 23 %) violettina kiinteänä aineena.

Seosta, joka sisälsi (±)-3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3(bentsyylioksimetyleeni) heksaani) -bis-(3,3'-indolyyli)]-1-metyy-;*j 25 lipyrroli-2,5-dionin (141 mg, 0,259 mmol), etanolin (15 ml) ja 5 N KOH:n (5 ml) , sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 tuntia, jolloin TLC-analyysi osoitti lähtöaineen olevan kuluneen. Kun seos oli tehty happamaksi ja uutettu CH2Cl2:lla, raaka tuote (101 mg) osoitti kaksi pistettä TLC-30 analyysillä (CH2Cl2), jotka pisteet vastasivat lähtöainetta .* ja haluttua anhydridiä (±)-3,4-[ (N,Ν'-1,1'-(3 ' 1 - (bentsyyli oksimetyleeni) heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-2,5-dionia. NMR-analyysi osoitti karkeasti 4:1 anhydridin ja vastaavasti lähtöaineen seoksen. Tätä ainetta käytettiin 35 suoraan seuraavassa vaiheessa ilman lisäpuhdistusta.

108138 85 (±)-3,4-[(Ν,Ν1-1,1'-(3''-(bentsyylioksimetyleeni)- 1 heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)-furaani-2,5-dionia (98 mg, 0,180 mmol) 1 ml:ssa DMF:a käsiteltiin 1,1,1,3,3,3-heksame-tyylidisilatsaanin (0,41 ml, 1,80 mmol) ja CH3OH:n (0,036 5 ml, 0,9 mmol) seoksella 25 °C:ssa yön yli. Seosta käsiteltiin (EtOAc) ja flash-kromatografoitiin silikageelillä elu-oiden CH2C12:11a, CH2C12-EtOAc : 11a 10 :1 (gradienttieluutio) , jolloin saatiin 30 mg puhdistettua ( + ) -3,4- [N,Ν' -1,1' - (3 ' ' -(bentsyylioksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)-1H-10 pyrroli-2,5-dionia. Sp. 171 - 173 °C. MS.

H

N

oylyo öAo li

'-OH

Esimerkki 31 3,4- [ (Ν,Ν' -1,1' - (3 ' ' - (hydroksi)metyleeni) heksaani) -20 bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni

Seos, jonka muodostivat bis-(3,3'indolyyli)-1-(metyyli) pyrroli-2,5-dioni (3,41 g, 10,0 mmol) ja 3-tert-bu-tyylidifenyylisilyylioksimetyleeni-1,6-dibromiheksaani (5,64 g, 11,0 mmol) 50 ml:ssa DMF:a, lisättiin ruiskupumpun 25 kautta 30 tunnin aikana hyvin sekoitettuun cesiumkarbo-naatin (11,2 g, 34,3 mmol) liuokseen DMF:ssa (350 ml) 55 °C:ssa käyttäen N2:ä. Kun lisäys oli tehty, reaktioseos-ta kuumennettiin tässä lämpötilassa vielä 16 tuntia. Jäähtynyt seos kaadettiin 1,2 l:aan vettä, joka sisälsi 20 ml 30 3 N HCl:a, ja uutettiin kolmella 300 ml:n annoksella ··. CH2C12: a. Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä ja suolaliuoksella, sitten kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin.

Jäännös vietiin 7,5 x 7,5 cm (3M x 3") silikageelikolonnin läpi eluoiden CHCl3:lla. Näin saatu raaka tuote puhdistet-35 tiin flash-kromatografiällä silikageelillä (CHC13) , jolloin 108138 86 saatiin 2,87 g (41%) 3,4 -[(N,N'-1,1'-(3' 1-tert-butyylidi-fenyylisilyylioksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyy-li)] -1 (metyyli) pyrroli-2,5-dionia purppuranpunaisena kiinteänä aineena, sp. 220 - 224 °C. HRMS laskettu C44H45N3SiO 5 [M+l]: 692,3307. Todettu: 692,3299.

Seosta, joka sisälsi 3,4-[(N,N'-1,1'-(3''-tert-bu-tyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-in-dolyyli)]-1(metyyli)-pyrroli-2,5-dionin (1,55 g, 2,22 mmol) , 4 N K0H:n (100 ml), THF :n (10 ml) ja 95-% risen 10 EtOH:n (200 ml), kuumennettiin 90 °C:ssa 16 tuntia. Kun suurin osa EtOHrsta oli poistettu kiertohaihduttimellä, seos tehtiin happamaksi pH-arvoon 1 6 N HCl:lla ja uutettiin CH2Cl2:lla (3 x 75 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä ja suolaliuoksella ja kuivattiin vedettö-15 mällä Na2S04:lla. Kun liuottimet oli poistettu tyhjössä, jäännös liuotettiin minimimäärään 5-%:ista metanolia CHC13:ssa ja panostettiin 7,5 x 7,5 cm (3" x 3") silika-geelikolonniin. Eluoinnista CHCl3:lla, minkä jälkeen 10-%:isella metanolilla CHCl3:ssa saatiin kaksi fraktiota, 20 toisen fraktion haihdutuksesta saatiin 676 mg (69 %) anhyd-ridi-alkoholia purppuranpunaisena kiinteänä aineena, joka oli homogeeninen TLC:llä (Rf = 0,5, 10-%:inen metanoli CHCl3:ssa) . Tätä materiaalia käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman lisäpuhdistusta.

25 Edellä saadun anhydridin (510 mg, 1,15 mmol) liuok seen DMF:ssa (11 ml) lisättiin esisekoitettu liuos, joka sisälsi 1,1,1,3,3,3-heksametyylidisilatsaanin (5,14 ml, 23 mmol) ja CH30H:n (0,45 ml, 11,5 mmol). Saatha seosta kuumennettiin 50 °C:ssa 24 tuntia käyttäen N2:ä. Jäähdytetty 30 reaktioseos kaadettiin 100 ml:aan vettä. Saostunut tuote : pestiin vedellä ja kuivattiin yön yli, jolloin saatiin 409 mg 3,4-[(N,Ν'-1,11 -(31 '-hydroksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionia punertava-purppuranpunaisena kiinteänä aineena. Tämän materiaalin todet-35 tiin olevan 93-%:isen puhdas HPLC-analyysillä (käänteisfaa- „ 108138 87 si) , ja se oli kontaminoitunut identifioimattomalla yhdisteellä, jolla on samanlainen Rf. HRMS laskettu ^-•27^25^3^3 : He : 439,1896. Todettu: 439,1911.

Esimerkki 31r 5 (R) -3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-(hydroksimetyleeni)heksaa- ni) -bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni

Seuraten samaa menetelmää kuin on kuvattu edellä esimerkin 31 valmistukselle, (R)-3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-(hydroksimetyleeni) heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-10 2,5-dioni valmistettiin 25 %:n kokonaissaannolla dibromi- dista, (R)-3 -(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)- 1,6-dibromiheksaani, dialkyloimalla bis- (3,3' indolyyli) -1-(metyyli)pyrroli-2,5-dioni, hydrolyysillä ja 1-H-pyrroli- 2.5- dionin muodostamisella. Sp. > 300 °C.

15 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) 1,05 - 2,25 (m, 7H) , 4,04 - 4,45 (m, 6H) (m, 8H), 7,08 - 7,88 (m, 10H).

Esimerkki 31s (S) -3,4- [ (N,N' ~1,1' - (3 " ' - (hydroksimetyleeni) heksaani) -bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni 20 Seuraten samaa menetelmää kuin on kuvattu edellä esimerkin 31 valmistukselle, (S) -3,4- [ (N,Ν' -1,1' - (3 ' ' - (hydroksimetyleeni) heksaani) -bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli- 2.5- dioni valmistettiin (4,5 g) 39 %:n kokonaissaannolla dibromidista, (S)-3- (tert-butyylidifenyylisilyylioksimety- 25 leeni)-1,6-dibromiheksaani, dialkyloimalla bis-(3,3'indolyyli) -1-(metyyli)pyrroli-2,5-dioni, hydrolyysillä ja 1-H-pyrroli-2,5-dionin muodostamisella. MS.

"H-NMR (d6, DMSO) δ 1,05 - 1,15 (2H) , 1,23 - 1,24 (1H), 1,50 - 1,52 (1H), 1,71 (1H), 1,94 (1H), 2,07 - 2,12 30 (1H), 4,05 - 4,4 (m, 6H), 7,09 - 7,21 (m, 4H), 7,35 (d, J = 15 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,8 (d, J = 9 Hz, 2H), * * 10,93 (s, 1H).

es 108138

H

0^Ny,0 °Λ°

Esimerkki 32 ja 33 3,4-[(Ν,Ν'-1,1'-(3''-aminometyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni 10 Esimerkki 32 TFA-suolana

Esimerkki 33 HCl-suolana

Anhydridialkoholin 2,3-[(N,N,-l;l'-(3''-hydroksime-tyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-1,4-dionin (0,18 g, 0,41 mmol) sekoitettuun liuokseen vedettömässä 15 dikloorimetaanissa (10 ml) käyttäen typpeä lisättiin tri-etyyliamiini (0,10 g, 1,06 mmol) ja metaanisulfonyyliklori-di (0,11 g, 0,98 mmol). Saatua liuosta sekoitettiin 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin 10 ml:aan vedetöntä dimetyyliformami-20 dia, minkä jälkeen lisättiin natriumatsidi (0,26 g, 4,1 mmol). Reaktioseosta kuumennettiin 1,5 tuntia 50 °C:ssa käyttäen typpeä. Jäähdytetty reaktioseos jakouutettiin 0,2 N HClilla ja etyyliasetaatilla. Yhdistetty orgaaninen uute kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja . 25 haihdutettiin, jolloin saatiin 185 mg atsidia, joka käytet tiin suoraan seuraavassa reaktiossa. Raaka atsidi liuotettiin dimetyyliformamidiin (3 ml) käyttäen typpeä, ja 1,1,1,3,3,3-heksametyylidisilatsaani (1,25 g, 7,75 mmol) ja metanoli (0,12 g, 3,87 mmol) lisättiin. Reaktioseosta kuu-30 mennettiin 50 °C:ssa. 12 tunnin kuluttua reaktioseos jääh-dytettiin, laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä, kloorivetyhapolla 2 N. Vesipitoiset pesuliuokset palau-tusuutettiin etyyliasetaatilla (3 x 50 ml) . Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suoda-35 tettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin atsidi-imidi, 89 1 08 1 38 3,4-[(Ν,Ν'-1,11 -(3''-atsidometyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni (175 mg) purppuranpunaisena kiinteänä aineena. Tuote kromatografoitiin Rainin DynamexR-60 C18-kolonnilla (21,4 x 250 mm) käyttäen lineaa-5 rista gradienttia 80-%:isesta A:sta (0,l-%:inen TFA ja 5-%:inen asetonitriili vedessä) 100-%:iseen B:hen (puhdas asetonitriili) 60 minuutin aikana nopeudella 15 ml/min, jolloin saatiin puhdistunut 3,4-[(N,Ν'-1,11 -(3' 1-atsidometyleeni) heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-10 dioni 57 %:n kokonaissaannolla. MS. NMR.

Atsidin 3,4 - [ (N,Ν' -1,1' - (3 ' ' -atsidometyleeni) heksaani)-bis-(3, 3 '-indolyyli) ]-lH-pyrroli-2, 5-dionin (0,1 g, 0,21 mmol) liuokseen etyyliasetaatissa (15 ml) ja etanolissa (5 ml) lisättiin Lindlarin katalyytti (0,1 g). Reaktio-15 seosta sekoitettiin käyttäen vetyä (101 kPa (1 atm)) huoneenlämpötilassa. 12 tunnin kuluttua katalyytti poistettiin suodattamalla, ja suodos väkevöitiin tyhjössä. Puhdistuksesta preparatiivisella käänteisfaasi-HPLC:llä Rainin Dynamax R-60 C18:lla (21,4 x 250 mm) käyttäen lineaarista 20 gradienttia 80-%:inen A (0,l-%:inen TFA ja 5-%:inen asetonitriili vedessä) - 100-%:inen B (puhdas asetonitriili) 60 minuutin aikana nopeudella 15 ml/min saatiin primaarinen amiini TFA-suolana, 3,4-[(Ν,Ν'-1,1'-(3''-aminometyleeni)-heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionin tri-, 25 fluorietikkahapon suolana kiinteänä aineena (80 mg) 63 %:n saanto. MS.

^H-NMR (d6 asetoni) δ 0,77 - 0,78 (m, 1H) , 1,0 - 1,1 (m, 1H), 1,27 - 1,34 (m, 1H), 1,43 (m, 1H), 1,52 - 1,56 (m, 4H), 1,60 - 1,68 (m, 1H), 1,90 - 1,94 (m, 1H), 3,17 - 3,21 30 (m, 1H) , 3,35 - 3,38 (m, 1H), 3,64 - 3,67 (m, 1H) , 3,75 - 3,82 (m, 2H) , 6,61 - 6,72 (m, 4H) , 6,824 (d, J = 16 Hz, 2H) , 6,936 (t, J = 8,31 Hz, 2H) , 7,397 (t, J = 7,83 Hz, 2H), 9,3 (s, 1H).

13C-NMR (d6 asetoni) Ö 26,0, 28,0, 32,1, 35,4, 40,8, 35 41,0, 41,1, 45,1, 45,8, 50,9, 105,1, 105,2, 110,8, 111,0, 108138 90 121,24, 121,29, 122,7, 122,9, 123,0, 128,4, 128,6, 131,5, 132,0, 134,0, 134,1, 136,8, 137,1, 172,6, 172,7, 192,5.

H

M_rO

- CF3CO2H H

10 Esimerkki 34 3,4- [ (N,N' -1,1' - (3' ' -N-bentsyyliamino)metyleeni) hek-saani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni trifluo-riasetaattisuola

Primaarisen amiinin, 3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-aminomety-15 leeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli) ] -lH-pyrroli-2,5-dionin (40 mg, 0,05 mmol) sekoitettuun liuokseen vedettömässä THF:ssa (2 ml) käyttäen typpeä lisättiin bentsaldehydi (9,39 mg, 0,08 mmol). 30 minuutin kuluttua lisättiin nat-riumtriasetoksiboorihydridi (18,75 mg, 0,08 mmol). Yhden 20 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos laimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 25 ml) . Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä. Puhdistuksesta kään-teisfaasi-HPLC:llä Rainin Dynamax R-60 C18-kolonnilla . 25 (21,4 x 250 mm) käyttäen lineaarista gradienttia 80-%:isesta A:sta (0,l-%:inen TFA ja 5-%:inen asetonitriili vedessä) 100-%:iseen B:hen (puhdas asetonitriili) 60 minuutin aikana nopeudella 15 ml/min saatiin monobentsyyliyhdis-teen, 3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-(N-bentsyyliamino)metyleeni)hek-30 saani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionin (16 mg), **; kaksi eri fraktiota 66 %:n saannolla, ja dibentsyyliamino- • · yhdiste, 3,4-[(N,N'-l,l'-(3' '-(N,N-dibentsyyliamino)metyleeni) heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni (7 mg) 20 %:n saannolla. MS.

108138 91 "H-NMR (d6 asetoni) δ 1,1 - 1,3 (τη, 1Η) , 1,5 - 1,6 (τη, 1Η) , 1,71 - 1,77 (m, 1H) , 1,93 - 2,10 (m, 3H) , 2,5 (m, 1H), 3,1 - 3,2 (m, 1H), 3,37 - 3,41 (ra, 1H), 4,13 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,28 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,36 (d, J = 3,6 Hz, 5 2H), 7,13 - 7,24 (m, 4H), 7,33 (d, J = 25 Hz, 2H), 7,39 - 7,51 (m, 7H), 7,89 - 7,96 (m, 2H), 9,76 (s, 1H).

13C-NMR (d6 asetoni) δ 25,6, 27,3, 32,1, 32,9, 44,7, 45,4, 50,1, 52,2, 105,0, 105,2, 110,8, 111,1, 121,2, 121,3, 122,8, 122,9, 123,1, 128,5, 129,8, 130,3, 131,2, 131,3, 10 132,0, 132,4, 133,7, 134,0, 136,8, 137,0, 172,5, 172,6.

H

N

Ow''y&O

αΛΰ

- CF’C01" \_Q

Esimerkki 35 20 3,4-[ (N,N' -1,1' - (3' ' - (N,N-dibentsyyliamino)metylee- ni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni trifluoriasetaattisuola 3,4 - [ (N,N'-1,1'-(3'1 -(Ν,Ν-dibentsyyliamino)metylee-ni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni . 25 valmistettiin esimerkin 34 kanssa analogisella tavalla. MS.

1H-NMR (dg-asetoni) δ 0,2 - 0,3 (m, 1H) , 0,6 - 0,9 (m, 4H) , 1,2 - 1,3 (m, 1H) , 1,50 (d, J = 5,4 Hz, 2H) , 2,27 (m, 1H) , 3,3 - 3,8 (m, 8H), 6,6 - 6,9 (m, 18H), 7,35 (dd, J = 7,5 Hz, J = 24,9 Hz, 2H), 9,1 (s, 1H).

· • · « 108138 92

H

o^yo

Cu~cO

Kq

Esimerkki 36r 10 (R) -3,4-[(Ν,Ν'-1,1'-(3''-(N-pyrrolidino)metyleeni)- heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni vety-kloridisuola

Sekoitettua seosta, jonka muodostivat mesylaatti, (R)-3,4-[(N,Ν'-1,1'-(31'-(metaanisulfonyylioksi)metyleeni)-15 heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni (202 mg) ja pyrrolidiini (1,5 ml) THF:ssa (15 ml) , kuumennettiin 50 °C:ssa, kunnes TLC osoitti lähtöaineen olevan kulunut (16 tuntia). EtOAc (30 ml) lisättiin. Orgaaninen faasi pestiin 10 ml:n annoksilla 5-%:ista NaHC03:a, vettä ja suola-20 liuosta. Väkevöinnistä saatiin syvän punainen jäännös, joka altistettiin preparatiiviselle HPLC:lle (Waters käänteis-faasi, 0,l-%:inen TFA ja 5-%:inen CH3CN vedessä - 100- %:inen CH3CN gradientti), jolloin saatiin puhdas (R)-3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-N-pyrrolidinometyleeni)heksaani)-bis-• # 25 (3,3 '-indolyyli) ]-lH-pyrroli-2,5-dioni TFA-suolana. Muutta misesta HCl-suolaksi samalla tavalla saatiin (R)-3,4-[ (Ν,Ν1 -l,11 - (31'-N-pyrrolidinometyleeni)heksaani)-bis-(3,3’ -indolyyli) ] -lH-pyrroli-2,5-dioni vetykloridisuola (42 mg) vaaleanpunaisena kiinteänä aineena. Sp. 220 °C (haj.).

30 HRMS laskettu C31H33N402: lie [M+l] : 493,2604. Todettu: 493,2605.

93 1 081 38

H

°V°

Esimerkki 37 \-o-ch3 3.4- [ (Ν,Ν' -1,1'-(3''-metoksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni 3.4- [ (N,N' -1,1' - (3 ' ' -tert-butyylidifenyylisilyyliok-10 simetyleeni)heksaani)-bis-(3,31-indolyyli)]-1(metyyli)-pyr- roli-2,5-dionin (1,25 g, 1,81 mmol) liuosta THF:ssa (20 ml) käsiteltiin tetra-n-butyyliammoniumfluoridin liuoksella THF:ssa (1 M, 2,0 ml, 2,0 mmol) . Seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan 25 °C:ssa. Reaktioseos vaimennettiin 1 N HCl.-lla 15 (5 ml) ja laimennettiin EtOAc:lla (75 ml). Vedellä ja suo laliuoksella pesemisen jälkeen orgaaninen kerros kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin. Jäännös puhdistettiin flash-kroma-tografiällä silikageelillä eluoiden 3 - 5-%:isella me-tanolilla THF/heksaaneissa (1:1), jolloin saatiin alkoholi, 2 0 3,4-[(Ν,Ν1-1,11 -(31 '-hydroksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'- indolyyli)]-1(metyyli)-pyrroli-2,5-dioni 509 mg (62 %) purppuranpunaisena kiinteänä aineena. Tätä materiaalia käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa. Sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi edellä saadun alkoholin (285 mg, 0,63 . 25 mmol) ja 47-%:isen vesipitoisen tetrafluoriboorihapon (170 mg, 0,95 mmol) CH2Cl2:ssa (6 ml), 0 °C:ssa lisättiin tipoit-tain trimetyylisilyylidiatsometaanin (Aldrich, 2,0 M hek-saanit, 0,47 ml, 0,95 mmol) liuos 5 minuutin aikana. Saatua seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 2 tuntia, sitten 25 °C:ssa 4 30 tuntia. Reaktioseoksen TLC-analyysi osoitti suuren määrän reagoimatonta lähtöainetta. Seos jäähdytettiin ja ekviva- ··( lentti lisämäärä tetrafluoriboorihappotrimetyylisilyyli-diatsometaania lisättiin. Seosta sekoitettiin 2 tuntia 0 °C:ssa, sitten 6 tuntia 25 °C:ssa ja laimennettiin 35 CH2Cl2:lla (20 ml) ja pestiin 2 N HCl:lla (10 ml) ja vedellä 94 1°8138 (10 ml) . Orgaaninen kerros kuivattiin (MgS04) , väkevöitiin. Jäännös panostettiin 7,5 x 7,5 cm (3''x3'') silikageeliko-lonniin ja eluoitiin CH2Cl2:lla, jolloin saatiin metyylieet-teri, 3,4-f(N,Ν'-1,1'-(3’'-metoksimetyleeni)heksaani)-bis-5 (3,3'-indolyyli)]-1(metyyli)-pyrroli-2,5-dioni, 114 mg (39 %) punertava-purppuranpunaisena kiinteänä aineena, sp. 234 - 236 °C. NMR.

HRMS laskettu C29H29N303: lie: 467,2208. Todettu: 467,2210.

10 3,4-[(N,N'-1,1'-(3 ' 1 -metoksimetyleeni)heksaani)-bis- (3,3'-indolyyli)]-1.(metyyli)-pyrroli-2,5-dionin (110 mg, 0,243 mmol) ja 5 N K0H:n (8 m) seosta 15 ml:ssa EtOHra, joka sisälsi 1 ml:n THF:a, kuumennettiin 90 °C:ssa 24 tuntia. Kun suurin osa etanolista oli poistettu käyttäen alen-15 nettua painetta, seos tehtiin happamaksi pH-arvoon 1 6 N HC1:11a ja uutettiin CH2Cl2:lla (3 x 15 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin laimealla vesipitoisella NaHC03:lla ja vedellä ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Kun liuottimet oli poistettu tyhjössä, raaka tuote panos-20 tettiin 5 x 5 cm (2" x 2") silikageelikolonniin ja eluoitiin CH2Cl2:lla, jolloin saatiin anhydridi, jota käytettiin suoraan seuraavassa reaktiossa.

Edellä saadun anhydridin (76 mg, 0,17 mmol) liuokseen DMF:ssa (1,5 ml) lisättiin 1,1,1,3,3,3-heksametyylidi-. 25 silatsaanin (0,75 ml, 3,34 mmol) ja CH30H:n (0,07 ml, 1,67 mmol) liuos., jota oli esisekoitettu 5 minuuttia. Reaktio-seosta sekoitettiin 1 tunti 25 °C:ssa, sitten kuumennettiin 50 °C:ssa 20 tuntia, jolloin TLC-analyysi osoitti reaktion olevan täydellinen. Jäähdytettyä reaktioseosta käsiteltiin 30 (EtOAc) kuten aikaisemmin on kuvattu. Raaka tuote puhdis-tettiin flash-kromatografiällä silikageelillä (CH2C12 - 4-%:inen EtOAc CH2Cl2:ssa, gradienttieluutio), jolloin saatiin 42 mg (55 %) 3,4-[(N,N1-1,11-(3’’-metoksimetylee ni) heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(metyyli)-pyrroli-2,5-35 dionia tumman punaisena kiinteänä aineena. Uudelleenkitey- 108138 95 tyksestä asetoni-vedestä saatiin 28 mg analyyttisesti puhdasta 3,4-[ (Ν,Ν1-1,1' - (3 ' 1-metoksimetyleeni) heksaani)-bis- | (3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionia punertavan violettina kiinteänä aineena, sp. 272 - 274 °C.

5 Analyyttinen laskettu C28H27N303 (0,1 H20):lle: C 73,86; H 6,02; N 9,23.

Todettu: C 73,51; H 5,92; N 8,99.

H

o«,yNysO

10 V/

Cdro '—( V-CHj >—<f 15 Esimerkki 38 3,4-[(Ν,Ν'-Ι,1'-(3'' -(asetoksi)metyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni

Etikkahappoanhydridi (0,064 ml, 0,68 mmol) lisättiin sekoitettuun seokseen, jonka muodostivat anhydridi, 2,3-20 [(N,N'-1,1'-(3''-(hydroksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'- indolyyli)]-furaani-1,4-dioni (1,49 mg, 0,34 mmol), 4-di-metyyliaminopyridiini (27 mg, 0,22 mmol), pyridiini (0,75 ml) ja THF (1,5 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 25 °C:ssa käyttäen N2:ä 16 tuntia. Seos laimennettiin EtOAcrlla . 25 (20 ml) ja pestiin 2 N HCl:lla (2 x 10 ml) ja vedellä (2 x 10 ml) ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Kun liuottimet 011 haihdutettu käyttäen alennettua painetta, raaka tuote puhdistettiin kromatografiällä lyhyellä silikageelikolon-nilla eluoiden CH2Cl2:lla, jolloin saatiin O-asetaattianhyd- 30 ridi, 2,3-[(Ν,Ν'-1,1'-(3''-(asetoksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-1,4-dioni, 111 mg (68 %) ♦ · purppuranpunaisena kiinteänä aineena, sp. 252 - 254 °C.

O-asetaattianhydridin, 2,3-[(N,N’-1,1'-(3’'-(asetok-simetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli) ] -furaani-1,4-35 dionin (103 mg, 0,22 mmol), sekoitettuun liuokseen DMF:ssa 108138 96 (2 ml) lisättiin liuos, joka sisälsi 1,1,1,3,3,3-heksame-tyylidisilatsaanin (0,48 ml, 2,2 mmol) ja CH3OH:n (0,043 ml, 1,1 mmol), joita oli esisekoitettu 5 minuuttia. Reak-tioseosta käsiteltiin (EtOAc) kuten aikaisemmin on kuvattu, 5 ja raaka tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silika-geelillä (gradienttieluutio: CH2C12 - 5-%:inen EtOAc CH2CI2 ·· ssa) , jolloin saatiin O-asetyylimaleimidia, 3,4-[(Ν,Ν'-Ι,Ι'-Ο1 ' - (ase t oksi) metyleeni) heksaani) -bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionia 74 mg (72 %) syvän pu-10 naisena kiinteänä aineena, joka oli homogeeninen TLC:llä (CH2C12). Uudelleenkiteytyksestä asetoni-vedestä saatiin otsikon yhdiste punaisena kiinteänä aineena. Sp. 250 -252 °C.

Analyyttinen laskettu C29H27N304 (0,1 H20):lle: 15 C 72,06; H 5,67; N 8,69.

Todettu: C 71,72; H 5,67; N 8,29.

Seuraavat yhdisteet valmistettiin tavalla, joka oli analoginen kuvattujen esimerkkien kanssa, ja ne havainnollistavat edelleen keksinnön mukaisesti saatavia yhdisteitä. 20 Seuraavissa esimerkeissä rakenne varmistettiin NMR:llä, MS:llä ja/tai alkuaineanalyysillä.

B

ciAo 30 N (

'-R

Esimerkki__R__ 39 -NHC(0)0CH2(C6H5) 35 40 -N(CH3)2 * HC1 97 1 08 1 38

H

I '

N

Ow' WO

0Λ0 !

'-N

\ ch3

Esimerkki 4Or (R) -3,4- [ (N,N' -1,1' - (3 ' ' - (N,N-dimetyyliamino)mety-10 leeni) heksaani) -bis- (3,3' -indolyyli) ] -lH-pyrroli-2,5-dioni- vetykloridisuola

Metaanisulfonihappoanhydridi (94 mg, 0,54 mmol) lisättiin 10 minuutin aikana sekoitettuun liuokseen, jonka muodostivat kiraalinen alkoholi, (R) -3,4- [ (N,Ν' -1, l' - (3 ' ' -15 (hydroksi)metyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyr- roli-2,5-dioni (200 mg, 0,45 mmol) ja pyridiini (0,11 ml, 1,3 5 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml) 0 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin 25 °C:ssa 4 tuntia. CH2C12 (20 ml) lisättiin, ja’ seos pestiin 10 ml:n annoksilla 3-%:ista HCl:a, vettä ja 20 suolaliuosta, ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Liuottimen poistosta tyhjössä jäi raaka mesylaatti (205 mg) , joka oli homogeeninen TLC:llä (l-%:inen metanoli CHCl3:ssa). Tämä materiaali vietiin suoraan seuraavaan vaiheeseen.

25 Edellä saadun mesylaatin (205 mg) liuokseen 10 ml:ssa THF:a lisättiin 40-%:inen vesipitoinen dimetyy-liamiini (2 ml), ja reaktioseosta kuumennettiin 50 °C:ssa 36 tuntia. Kun THF oli poistettu käyttäen alennettua painetta, CH2C12 (20 ml) lisättiin jäännökseen. Seos pestiin 30 5-%:isella vesipitoisella NaHC03:lla, vedellä ja suola-" liuoksella, ja kuivattiin vedettömällä MgS04:11a. Väkevöin nistä saatiin raaka (R)-3,4-[(N,N'-l,l'-(3''-(N,N-dimetyy-liamiini)metyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyr-roli-2,5-dioni (158 mg) punaisena kiinteänä aineena, joka 35 puhdistettiin preparatiivisella HPLC:llä (Waters käänteis- 7 08 7 38 98 faasi, 0,l-%:inen TFA ja 5-%:inen CH3CN vedessä - 100- %:inen CH3CN gradientti) , jolloin saatiin amiini-TFA-suola, joka liuotettiin CH2Cl2:iin ja muutettiin vapaaksi emäkseksi laimealla vesipitoisella KOHrlla. Kun orgaaninen faasi oli 5 kuivattu MgS04:lla (15 min) , liuotin haihdutettiin ja vapaa amiini (60 mg) liuotettiin 1:1 metyleeni/THF:iin (5 ml), jäähdytettiin 0 °C:seen käyttäen N2:ä ja tehtiin hitaasti happamaksi pH-arvoon 4-5 (ulkoinen kosteus pH-paperi) vedettömällä 1 N HCl:lla eetterissä. Saostunut suola suoda-10 tettiin ja pestiin kuivalla eetterillä käyttäen ^-kerrosta, sitten kuivattiin tyhjöeksikaattorissa CaS04:llä yön yli. Dimetyyliamiini-HCl-suola, (R)-3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3'1-(N,N-dimetyyliamiini)metyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli) ] -lH-pyrroli-2 , 5-dionivetykloridisuola (43 mg) saatiin 15 vaaleanpunaisena kiinteänä aineena, sp. 230 °C (haj .) . MS.

^H-NMR (300 MHz, asetoni-d6) 0,9 - 3,5 (m, 7H) , 3,20 - 3,42 (m, 8H), 4,05 - 4,18 (m, 4H), 7,02 - 7,80 (m, 10H) , 10,94 (s, 1H) .

Esimerkki 40s 2 0 (S)-3,4-[(Ν,Ν'-1,1'-(3''- (N,N-dimetyyliamiini)mety- leeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionivetykloridisuola

Seuraten samaa menetelmää, joka on kuvattu esimerkin 4 Or valmistukselle, (S)-3,4 -[(N,N'-1,1'-(3' '-(N,N-dimetyy-25 liamiini)metyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli) ]-lH-pyr- roli-2,5-dionivetykloridisuola valmistettiin (90 mg) 27 %:n kokonaissaannolla alkoholista, (S)-3,4-[(Ν,Ν'-1,1'- (3' '-(hydroksimetyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyr-roli-2,5-dionista muodostamalla mesylaatti ja korvaamalla 30 dimetyyliamiinilla. MS.

\ 1H-NMR (d6 DMSO) δ 0,92 (s suuri, 1H) , 1,35 (s suuri, 1H), 1,60 (s, suuri, 2H), 1,85 (s, suuri, 1H), 2,37 - 2,42 (m, 2H), 2,91 - 3,05 (m, 2H), 4,13 (s suuri, 2H), 4,23 (s, suuri, 2H), 7,11 - 7,23 (m, 4H), 7,34 (d, J = 20 Hz, 2H), 99 Ί η ρ η - ο

J ^ ' V. C

* 7,50 (dd, J = 8,1 Hz, J = 12,6 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 8 Hz, 2H) , 9,92 (s, suuri, 1H) , 10,98 (s, 1H) .

H

N

ίο

Esimerkki. 41 3,4- [ (N,Ν' -1,1' - (3' ' - (N-imidatsoli)metyleeni) heksaa-ni)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni

Metaanisulfonyylikloridi (0,025 ml, 0,32 mmol) li-15 sättiin tipoittain sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 3,4-[(N,N'-l,1'-(3'1 -(hydroksi)metyleeni)heksaani)-bis-(3,31-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dionin (100 mg, 0,23 mmol) ja trietyyliamiinin (0,05 ml, 0,36 mmol) kuivassa CHCl3:ssa 25 °C:ssa käyttäen N2:ä. Kun reaktioseosta oli sekoitettu 20 20 minuuttia, se laimennettiin CHCl3:lla (15 ml), pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin, suodatettiin ja väke-vöitiin. Punainen jäännös puhdistettiin kromatografiällä lyhyellä silikageelikolonnilla eluoiden CHCl3:lla, minkä jälkeen 10-%:isella EtOAc:lla CHCl3:ssa, jolloin saatiin 25 3,4-[(N,Ν'-1,1' - (3''-(metaanisulfonyylioksimetyleeni)hek saani)-bis-(3 , 3 '-indolyyli) ]-lH-pyrroli-2 , 5-dionia 53 mg punaisena kiinteänä aineena, joka oli homogeeninen TLCillä (5 - % : inen EtOAc CH2C12: ssa) . 3,4 -[ (N,N'-1,1'-(3' ' - (metaani-sulfonyylioksi)metyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-30 lH-pyrroli-2,5-dionin (49 mg, 0,095 mmol) sekoitettuun li- ·* uokseen DMFtssa (0,75 ml) käyttäen N2:ä lisättiin tipoit- . « « tain imidatsolin natriumsuolan liuos DMFrssa (valmistettu lisäämällä 60-%:inen NaH (8,7 mg, 0,22 mmol) imidatsolin (16 mg, 0,24 mmol) liuokseen DMF:ssa (0,5 ml)). Reaktio-35 seosta sekoitettiin 15 minuuttia 25 °C:.ssa, sitten kuuttien- 108138 100 nettiin 50 °C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos laimennettiin 25 ml :11a CH2Cl2:a, joka sisälsi 3-%:a metanolia. Seos pestiin 10 ml:n annoksilla vettä ja suolaliuosta, ja kuivattiin vedettömällä Na2S04:lla. Kun liuottimet oli haihdutettu 5 käyttäen alennettua painetta, raaka tuote panostettiin 7,5 x 7,5 cm (3"x3") silikageelikolonniin eluoiden CH2Cl2:lla, minkä jälkeen 5-%: isella metanolilla CH2Cl2:ssa, joka sisälsi 1 % :n trietyyliamiinia, jolloin saatiin 3,4- [ (N, N'-1,1' -(3''-(N-imidatsoli)metyleeni)heksaani)-bis-(3,3'-indolyy-10 li)]-lH-pyrroli-2,5-dionia 21,5 mg (46 %) punaisena kiinteänä aineena. Tämä materiaali altistettiin käänteisfaasi-HPLC:lle (gradienttieluutio, 5-%:inen CH3CN vedessä, joka sisälsi 0,1 % TFA - CH3CN), jolloin saatiin analyyttisesti puhdas 3,4-[(N,Ν'-1,11 -(3''-(N-imidatsoli)metyleeni)heksaa-15 ni)-bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni (12,4 mg) punaisena kiinteänä aineena. Sp. 261 - 266 °C. NMR. HRMS laskettu C30H27N5O2: lie [M+l]: 490,2244. Todettu: 490,2242.

Seuraavat yhdisteet valmistettiin tavalla, joka oli analoginen tässä kuvattujen esimerkkien kanssa, ja ne ha-20 vainnollistavat edelleen keksinnön mukaisesti saatavia yhdisteitä. Seuraavissa esimerkeissä yhdisteen rakenne varmistettiin NMR:llä, MSrllä ja/tai alkuaineanalyysillä.

. . t 108138 101

H

cW'V^o j[^j

R

10 Esimerkki_n nl_q_ R

42 3 3 CH H

43 2 2 CH H

44 3 4 CH H

45 3 3 CH NH2 15 46 3 3 CH NHCOCH3 47 3 3 CH NHCH2C6H5 48 3 3 C (-OCH2CH2O-) 49 3 3 C =0 20

H

Esimerkki 50 3,4-[ (N,Ν'-1,1'-(propyylitiopropyyli)-bis-(3,3'-in-3 0 dolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni .· N-(3-asetoksipropyyli)indolin (102 mg, 0,47 mol) 0-°C:iseen sekoitettuun vedettömään CH2C12-liuokseen (1,0 1) lisättiin oksalyylikloridi (43,04 ml, 0,494 mol, 1,05 ekv. ) tipoittain. 15 minuutin kuluttua jäähaude poistettiin. 35 Reaktioseoksen annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan 102 108138 4 sekoittaen kolme tuntia, haihtuvat aineet poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin aniliininpunainen kiinteä aine, joka liuotettiin uudelleen kuivaan CH2Cl2:iin (1,0 1) käyttäen N2:ä. Sekoittaen voimakkaasti, N-tert-butoksikarbonyyli-5 indoli-3-etikkahappo (129,25 g, 0,47 mol) lisättiin, minkä jälkeen lisättiin nopeasti trietyyliamiini (130,6 ml, 0,94 mol, 2 ekv.) . 16 tunnin kuluttua reaktioseos väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kolonnikromatografiällä eluoiden 3:1 heksaani/etyyliasetaatilla. Värittynyt pääfraktio väkevöi-10 tiin, jolloin saatiin anhydridi (101 g, 40 %:n saanto) 2-[1-(3-asetoksipropyyli)-3-indolyyli]-3-[1-tert-butoksi-karbonyyli-3-indolyyli] furaani-1,4-dioni punaisena kiteisenä kiinteänä aineena. MS.

BOC-suojattuun anhydridiin (7,4 g, 14 mmol) lisät-15 tiin sekoittaen trifluorietikkahappo (27 ml, 350 mmol), joka sisälsi etaanitiolia (1 ml, 14 mmol). Yhden tunnin kuluttua reaktioseos jakouutettiin CH2Cl2:lla ja kylläisellä NaHC03:lla. Orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin Na2S04:11a ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin, jol-20 loin saatiin raaka anhydridi, josta suojaus oli poistettu, punaisena puolikiinteänä aineena. Jäännös levitettiin lyhyelle silikakakulle, pestiin heksaanilla ja sitten CH2Cl2:lla. Värittynyt nauha eluoitiin silikasta etyyliasetaatilla ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin puh-' 25 distettu anhydridi, josta suojaus oli poistettu, 2- [1- (ase- toksipropyyli)-3-indolyyli]-3-(3-indolyyli)furaani-1,4-dioni (5,7 g, 95 %:n saanto) punaisena kiinteänä aineena. MS.

Anhydridin (3,0 g, 7 mmol), josta suojaus oli poistettu, sekoitettuun vedettömään DMF-liuokseen (125 ml) li-30 sättiin NaH (420 mg, 10,5 mmol, 60-% : inen mineraaliöljyssä) huoneenlämpötilassa. Värin vaihtuminen kirkkaan oranssista violettiin havaittiin heti. 30 minuutin kuluttua lisättiin nopeasti 3 ekvivalenttia 3-bromipropyyliasetaattia. Reaktioseos kuumennettiin 75 °C:seen ja sen väri palautui as-35 teittäin oranssiksi. Kuuden tunnin kuluttua DMF poistettiin 108138 103 tyhjössä. Jäännös levitettiin flash-silikakromatografiako-lonnille eluoiden 3:2 heksaani/etyyliasetaatilla. Punainen päänauha otettiin talteen, ja liuotin poistettiin, jolloin saatiin alkyloitu anhydridi, 2,3-bis[1-(3-asetoksipropyy-5 li)-3-indolyyli]furaani-1,4-dioni (1,32 g, 36 %) punaisena kiinteänä aineena. MS.

2.3- bis [1-(3-asetoksipropyyli)-3-indolyyli]furaani- 1,4-dioni (1,32 g, 2,52 mmol) suspendoitiin absoluuttiseen etanoliin (125 ml) sekoittamalla ja käsiteltiin 5 N KOHrlla 10 (125 ml) . 16 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos väke- vöitiin 126 mitään. Jäännös tehtiin hitaasti happamaksi (5 N HC1), kunnes punainen kiinteä aine saostui. Sakka suodatettiin ja kuivattiin tyhjöuunissa 60 °C:Ssa, jolloin saatiin alkoholianhydridi 1,1 g (99 %) punaisena jauheena.

15 Alkoholianhydridi (1,1 g, 2,47 mmol) liuotettiin vedettömään DMFtiin (30 ml) käyttäen N2-ilmakehää sekoittaen. Lisättiin esisekoitettu 1,1,1,3,3,3-heksametyyli-disilatsaanin (5,22 ml, 24,7 mmol, 10 ekv.) ja metanolin (0,50 ml, 12,4 mmol, 5 ekv.) liuos. Reaktioseoksen annet- 20 tiin sekoittua 16 tuntia ympäristön lämpötilassa. DMF poistettiin tyhjössä. Tähän jäännökseen lisättiin asetoni (100 ml) ja ylimäärä CsF:a (n. 500 mg). Neljän tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos väkevöitiin. Jäännös jakouutet-tiin etyyliasetaatilla ja vedellä. Orgaaninen kerros pes-.V 25 tiin 1 N HCl:lla (5x), suolaliuoksella (2x), kuivattiin Na2S04:lla ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin, jolloin saatiin bisindolyylimaleimidi, 3,4-bis(1-(3-hydroksipropyyli)- 3-indolyyli]-lH-pyrroli-2,5-dioni 1,0 g (91 %:n saanto) punaisena jauheena. Kokonaissaanto oli 90 % kahdesta vai- 30 heesta. MS.

3.4- bis- [1- (3-hydroksipropyyli) -3-indolyyli] -lH-pyr-roli-2,5-dioni (1,0 g, 2,25 mmol) liuotettiin vedettömään CH2Cl2:iin (250 ml) ympäristön lämpötilassa käyttäen N2:ä.

Cbr4 (2,09 g, 6,3 mmol, 2,8 ekv.) ja trifenyylifosfiini 35 (2,83 g, 10,8 mmol, 4,8 ekv.) lisättiin yhdessä reaktioas- 104 7 08 7 38 tiaan. Seoksen annettiin sekoittua 16 tuntia. Raaka reak-tioseos väkevöitiin ja puhdistettiin silikageeli flash-pyl-väskromatografiällä eluoiden 7:3 heksaani/etyyliasetaatil-la. Haluttu tuote eluoitui yhtenä punaisena päänauhana.

5 Liuottimien poistosta tästä fraktiosta saatiin dibromiyh-distettä, 3,4-bis[1-(3-bromipropyyli)-3-indolyyli]-lH-pyr-roli-2,5-dionia 876 mg (68 %:n saanto) punaisena jauheena.

Dibromiyhdiste (47,8 mg, 0,084 mmol) liuotettiin asetoniin ympäristön lämpötilassa sekoittaen. Lisättiin 10 ylimäärä natriumsulfidinonahydraattia (229 mg, 0,95 mmol, 11,3 ekv.). Heterogeenista seosta sekoitettiin yön yli. Asetoni poistettiin sitten tyhjössä. Jäännös jakouutettiin vedellä ja CH2Cl2:lla. Orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin natriumsulfaatilla ja väkevöitiin, jol-15 loin saatiin 35,5 mg (94 %:n saanto) otsikon tuotetta puna-oranssina kiinteänä aineena. MS.

H

N

OTTO

TO

2 5 Esimerkki 51 3,4-^(11,^-1,1^(31 ' - (hydroksi)metyleeni)pentaani) -bis-(3,3'-indolyyli)]-lH-pyrroli-2,5-dioni

Kuiva DMF-liuos (35 ml) , jonka muodostivat 1,5-dijo-di-3-(tert-butyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)pentaani 30 (7,3 g, 12 mmol) ja bis-(3,3'-indolyyli)-1(H)-pyrroli-2,5-

dioni (4,21 g, 12 mmol), lisättiin ruiskupumpun kautta 48 tunnin aikana Cs2C03:n (16,06 g, 49,3 mmol) suspensioon kuivassa DMF:ssa (1 1) sekoittaen voimakkaasti 55 °C:ssa käyttäen N2:ä. Kahden lisätunnin kuluttua reaktioseos väkevöi-35 tiin tyhjössä, jäännös liuotettiin CH2Cl2:iin, pestiin 1 N

7 0 8 7 38 105 HCl:lla, suolaliuoksella, kuivattiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin violetti öljy. Öljy vietiin silikatul-pan läpi eluoiden 4:1 heksaanit/etyyliasetaatilla. Eluentti , pelkistettiin, jolloin saatiin makrorengas, 3,4-[(N,N'- 5 1,1'-(3''-(tertbutyylidifenyylisilyylioksimetyleeni)penta- nyyli)-bis-(3,3'-indolyyli) ] -1(metyyli)-pyrroli-2,5-dionia 4,5 g (55 %:n saanto) aniliininpunaisena kiinteänä aineena.

3,4- [ (N,N' -1,1' - (3' ' - (tertbutyylidifenyylisilyyliok-simetyleeni)pentanyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(metyyli)-10 pyrroli-2,5-dionin (4,2 g, 6,2 mmol) etanolisuspensioon (300 ml) lisättiin 5 N KOH (300 ml). Reaktioseosta palautus jäähdytettiin (86 °C) 48 tuntia sekoittaen, jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, ja etanoli poistettiin tyhjössä. Väkevöite tehtiin happamaksi pH-arvoon l 5 N HCl:lla (325 15 ml), uutettiin etyyliasetaatilla, pestiin suolaliuoksella (2x), kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin anhydri-diä, 3,4- [ (N,Ν'-1,1'-(3''-(hydroksimetyleeni)pentaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-2,5-dionia 2,6 g (100 %:n saanto) jäännöksenä.

20 Anhydridin, 3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-(hydroksimetylee ni) pentaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-furaani-2,5-dionin (2,6 g, 6,2 mmol) kuivaan DMF-liuokseen (500 ml) lisättiin metanolin (1,25 ml, 31 mmol) ja 1,1,1,3,3,3-heksametyyli-disilatsaanin (13,1 ml, 62 mmol) liuos. Kun reaktioseosta .V 25 oli kuumennettu (55 °C) 36 tuntia, se väkevöitiin tyhjössä, laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin 1 N HCl:lla. Hap-popesuliuos sisälsi hieman kiinteitä aineita, jotka palau-tusuutettiin kloroformilla. Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin ja väkevöitiin violetiksi jäännökseksi. Jäännös 30 levitettiin lyhyelle silikatulpalle ja eluoitiin 2 - * t · « 10-%:isella MeCN/CH2Cl2:11a. Fraktio, joka sisälsi päätuotteen väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin otsikon alkoholi 3,4-[(N,Ν'-1,1'-(3''-(hydroksimetyleeni)pentanyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni (650 mg (25 %)) 35 aniliinipunaisena kiinteänä aineena. MS.

106 7 °8 7 38 ^-NMR: (DMSO-d6) δ 0,7 (m, 1H) ; 1,48 (m, 2H) ; 1,82 (m, 2H); 3,19 (dd, 2H); 4,16 (m, 4H); 4,4 (t, 1H); 7,05 (t, 2H) ; 7,16 (t, 2H) ; 7,17 (s, 2H) ; 7,46 (d, 2H) ; 7,65 (d, 2H); 10,96 (s, 1H).

5 ΐ

CnyO

V

10 OS02CH3

Esimerkki 52 3.4- [ (Ν,Ν' -1,1' - (3' ' - (metaanisulfonyylioksi)metylee-15 ni)pentan-l'',5'’-yyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2.5- dioni 3.4- [ (N,N'-1,1' - (3 ' ' -(metaanisulfonyylioksi)metylee-ni)pentan-1'',51'-yyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2.5- dionin (334120) (650 mg, 1,5 mmol) kuivaan CH2Cl2-liuok-20 seen (80 ml) lisättiin metaanisulfonihappoanhydridi (400 mg, 2,29 mmol), minkä jälkeen ylimäärä pyridiiniä (370 ml, 4,58 mmol) . 16 tunnin kuluttua ympäristö lämpötilassa reak- tioseos levitettiin suoraan lyhyelle silikatulpalle ja elu- oitiin 0 - 7-%:isella MeCN/CH2Cl2:11a. Värittynyt fraktio .·. 25 väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin mesylaattia, 3,4- • « [(N,Ν'-1,1'-(3''-(metaanisulfonyylioksi)metyleeni)pentan-1' ' ,5" -yyli) -bis- (3,3' -indolyyli) ] -1 (H) -pyrroli-2,5-dionia 501 mg (67 %:n saanto), violettia kiinteää ainetta. MS.

^-NMR: (DMSO-d6) δ 0,89 (m, 1H) ; 1,61 (m, 2H) ; 1,82 30 (m, 2H); 2,99 (s, 3H); 4,02 (d, 2H); 4,22 (m, 4H); 7,06 (t, 2H) ; 7,17 (t, 2H) ; 7,17 (s, 2H) ; 7,54 (d, 2H) ; 7,63 (d, 2H); 10,98 (s, 1H).

108738 107 J°

H

I ,

’ O^bO

5 - HCl nh2

Esimerkki 53 3,4-[(N,N'-1,1'-(3' ' - (aminometyleeni) pentan-1' ' , 5' ' -yyli)-bis-(3,31-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dionivetyklo-10 ridisuola

Suljetussa putkireaktioastiassa, joka sisälsi mesy-laatin 3,4 - [ (N,N' -1,1'- (3''-(metaanisulfonyylioksi)metylee-ni)pentan-1'',5''-yyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli- 2,5-dionin (250 mg, 0,5 mmol) THF-liuoksen (20 ml), lisät-15 tiin NH4OH (33-%:inen aq, 10 ml), reaktioputki suljettiin ja kuumennettiin (60 °C) . 48 tunnin kuluttua reaktioseos jäähdytettiin ja eluoitiin silikageelitulpan läpi etyyliasetaatilla, minkä jälkeen asetonilla. Asetonifraktio pelkistettiin tyhjössä, jolloin saatiin punertava kiinteä 20 aine. Tämän jäännöksen erä puhdistettiin käyttäen kään- teisfaasigeelisuodatus HPLC:tä (85-%:inen MeCN/vesi, 0,01-%:inen TFA) . Puhtaat fraktiot yhdistettiin ja väkevöi-tiin punaiseksi kiinteäksi aineeksi. Kiinteä aine jakouu-tettiin sitten etyyliasetaatti/0,1 N NaOH:lla. Orgaaninen ,·, 25 kerros väkevöitiin, jolloin saatiin vapaa emäs jäännöksenä.

• < Jäännös liuotettiin metanoliin (2 ml) ja käsiteltiin HCl:11a (2 ml, 1,0 M eetterissä) yhden tunnin ajan. Reaktioseos väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin aniliinin-punaista kiinteää otsikon yhdistettä 28,5 mg (13 %), joka 30 on >95-%:isen puhdas HPLC-analyysillä. MS.

J ^-NMR: (DMSO-d6) δ 1,17 (m, 1H) ; 1,5 - 1,63 (m, 2H) ; 1,8 - 1,95 (m, 2H); 2,73 (m, 2H); 4,18 (m, 4H); 7,12 (t, 2H) ; 7,15 (s, 2H) ; 7,23 (t, 2H) ; 7,56 (d, 2H) ; 7,75 (d, 2H); 7,8 (leveä, 3H); 11,01 (s, 1H).

35 108138 108

H

o^Nyo οΛο ; 5 - HC1 k/CHi \

Esimerkki 54 ch 3 3,4-[(N,N'-1,1'-(3''-(N,N-(dimetyyliamino)metylee-ni)pentanyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-di-10 onivetykloridi

Otsikon yhdiste valmistettiin vetykloridisuolana käyttämällä dimetyyliamiinia (40-%:inen aq, 5 ml) korvaamaan mesylaatti 3,4- [ (N,Ν' -1,1' - (3 11 - (metaanisulfonyyliok-si)metyleeni)pentanyyli)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrro-15 li-2,5-dioni (110 mg, 0,2 mmol) ja myöhemmin muuttamalla vetykloridisuolaksi, jolloin muodostuu otsikon yhdiste (28 mg, 26 %:n saanto). MS.

Hi-NMR: (DMSO-d6) 6 1,17 (m, 1H) ; 1,5 - 1,63 (m, 2H) ; 1,8 - 1,95 (m, 2H); 2,73 (m, 2H); 4,18 (m, 4H); 7,12 (t, 20 2H) ; 7,15 (s, 2H) ; 7,23 (t, 2H) ; 7,56 (d, 2H) ; 7,75 (d, 2H); 7,8 (leveä, 3H); 11,01 (s, 1H).

Seuraavat yhdisteet valmistetaan analogisella tavalla ja ne havainnollistavat edelleen keksinnön yhdisteitä: φ > 108138 109

JJ

'wo coco 5 / \ <CH2)n^

W-R

Esimerkki n nl W R

10 55 3 2 0 =CHCH2NHCH2C6H5 56 3 2 0 =CHCH20CONH(C6H5) 57 3 2 0 =CHCH2NHCOCH3 58 3 2 0 =CHCH2NHS02C6H5

59 3 2 0 =CHCH2CH2OH

15 60 3 2 0 =CHCH2CH2NH2 61 2 2 0 =CHCH20CONH(C6Hs)

62 2 2 0 =CHCH2CH2OH

63 2 2 0 =CHCH2CH2NR2 64 2 2 CH =CHCH2NHCH3 65 2 2 CH =CHCH2NRS02C6H5 20

66 22 CH =CHCH2CH20H

67 2 2 CH =CHCH2CH2NHCH2C6H5 68 2 2 CH =CHCH2CH2NH2 69 22 CH =CHCH2CH20CONH(C5H5) 70 2 2 CH =CHCH2CH2NHS02CH3 25 71 22 CH =CHCH2CH2N(CH3)2 72 . 2 2 CH =CHCH2CH2NHCH3 73 2 2 CH =CHCH20CH2CH2NH2 74 2 2 -OCH2- =CHCH2NH2 75 2 2 -0CH2- =CHCH2NHCH3 30 76 2 2 -OCH2- =CHCH2NHCH2C6H5 77 22 -0CH2- =CHCH20C0NH(C6H5) 78 2 2 -0CH2- =CHCH2NHCOCH3 79 2 2 -0CH2- =CHCH2NHS02C6H5

80 22 -0CH2- =CHCH2CH2OH

108738 110 ϋ° 81 2 2 -OCH2- =CHCH2CH2NH2 \ 7^0CH3 c 82 2 3 N -CH- v 83 2 3 m2 -CH- 10 84 2 3 ^ -CH- 'X"

V

15 I

85 2 3 COOH -CH- 86 2 3 -CH- 20

N

87 2 3 ^ -CH- * 108138 111

H

Λ-γυ^Λ XXj to., * N(CHj)2

Esimerkki_R_1_Ria_Rib_Ele

10 88 H CH3 H H

89 OCH3 H H H

90 H CH3 Cl H

91 H N02 H H

92 CF3 H H H

15 93 OH H CH3 H

94 N(CH3)2 H H H

„ "'ö'"

CdlpO

n(H2C)— 2 5

* I

R

Esimerkki n nl Q R

95 3 3 S =0 30 96 3 3 S (=0)2 , . 97 3 3 0 --- «

98 3 3 CH -OH

99 3 3 CH OCONHC6H5

100 3 3 N H

101 3 3 N CH3 35 102 3 3 CH NHSO2C6H5 112 7 O 8 1 5 β 103 3 3 CH · NHCH3 104 3 3 CH NHCH2C6H5 105 3 3 CH N(CH3)2

-O

106 3 3 CH ^

107 3 3 CH CH2CN

108 3 3 CH CH2NH2 109 3 3 CH CH2NHCOCH3 10 HO 3 3 CH CH2N (CH3) 2 111 3 3 CH CH2NHSO2C6H5 112 3 3 CH CH2NHCH2C6H5 113 2 2 C =0

Claims

113 1 081 3δ

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten ,, 3,4- [ (N,N' -1,1') - (substituoitu alkyleeni)-bis(3,3'-indolyy- 5 li)]-lH-pyrroli-2,5-dionijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava 1' H cy~x a,) \ I (CH2)2 (CH2}2 jossa: W on -0- , -CH2-0-CH(R')-, -0-CH (R ' ) - , -0-CH2-CH (R' ) - , - (CH2) n- , -CHa-CH(R')-, -CHa-CH(R')-CH2-, -CH2-S-CH2-,

20 -CH (R1 ) - / -CH2-CH(R' ' )-CH2- tai -CH2-C (=R ' ' 1 ) -CH2-, jolloin n on kokonaisluku 1-4, R' on ryhmä, jolla on kaava -CH2-R, jossa R on -OH, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2Ph, -N(CH2Ph)2, -NHC0CH3, -NHC (0) 0CH2Ph, -NHS02Ph, -N [- (CH2) 4-] , -N [-(CH2) 2-N (C^-al-25 kyyli) - (CHa) 2-] , -N [-(CH2) 2-0- (CH2) 2-] , -pyrrolyyli, -imi-datsolyyli, -0CH3, -0C00CH2Ph, -0CH2Ph, -OCOCH3 tai -0S02CH3, R' ’ on -NH2, -NHCH2Ph tai -NHC0CH3 ja R' ' ' on -0CH2CH20- tai =0, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen 30 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että yhdiste, jolla on kaava II' 114 10 8138 0^y°y^.0 N N I I di') <ch2)2 (ch2)2 x(wr 10 v ' jossa W merkitsee samaa kuin edellä, muutetaan heksametyy-lidisilatsaanilla ammonolysoimalla vastaavaksi kaavan 1' 15 mukaiseksi yhdisteeksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 3,4-[ (N,Ν'-1,1')-((2''-etoksi)-3'''(O)-4'''-(N,N-dimetyyliamino)butaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 3,4 -[ (N, Ν'-1,1') -((2''-etoksi)-3'''(O)-4'''-(N-pyrrolidiini)butaani)-bis-(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että valmistetaan 3,4-[(N,Ν'-1,11)-((2''-etoksi)-3'''(O)-4’''-(N-fenyylisulfonamido)butaani)-bis(3,3'-indolyyli)]-1(H)-pyrroli-2,5-dioni. 30 t 115 7087ofc