ES2901901T3 - Nuevas composiciones nutracéuticas que contienen esteviol y uso de las mismas - Google Patents
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Abstract
Uso no terapéutico de esteviol para mejorar la función cognitiva que se selecciona del grupo que consiste en: mantenimiento del bienestar y el equilibrio cognitivo, aprendizaje, procesamiento del lenguaje, resolución de problemas, funcionamiento intelectual, capacidad para hacer frente a cargas psicosociales, atención y concentración, memoria, la capacidad para recordar, estado de alerta mental, vigilancia mental, fatiga mental, estabilización del estado mental, un alivio del estrés, estrés por sobrecarga laboral, agotamiento y/o cansancio extremo relacionados con el estrés, y para promover la relajación en un animal o un ser humano.
Description
DESCRIPCIÓN
Nuevas composiciones nutracéuticas que contienen esteviol y uso de las mismas
Campo de la invención
La presente invención se refiere al uso de una composición nutracéutica o aditivo alimentario que comprende esteviol como ingrediente activo para mejorar las funciones cognitivas, tales como el aprendizaje, la memoria y el estado de alerta, así como para aliviar la presión psicosocial.
Antecedentes de la invención
La memoria, el aprendizaje y el estado de alerta dependen de los circuitos neuronales del mesencéfalo, especialmente del hipocampo, en el que se procesa la información y se consolida la memoria. El rendimiento mental y el aprendizaje dependen de la plasticidad sináptica; es decir, el fortalecimiento de las conexiones neuronales mediante el reclutamiento de nuevos receptores, la formación de nuevas sinapsis y, finalmente, la generación de nuevas conexiones neuronales.
La formación de la memoria (a largo plazo) y el funcionamiento eficaz del cerebro dependen de la síntesis de nuevas proteínas para el refuerzo de la fuerza comunicativa entre neuronas. La producción de nuevas proteínas destinadas al refuerzo de la sinapsis se desencadena mediante señales químicas y eléctricas dentro de las neuronas.
Potenciación a largo plazo (LTP) es el término utilizado para describir la mejora de larga duración de la transmisión sináptica (horas in vitro, días o semanas in vivo) que se produce en sinapsis particulares dentro del sistema nervioso central (SNC) después de una breve ráfaga condicionante de estimulación eléctrica presináptica (aproximadamente 100 Hz durante 1 segundo). Se considera ampliamente que este fenómeno es uno de los principales mecanismos por los que se forman y se almacenan los recuerdos en el cerebro. Se ha observado LTP tanto in vitro como en animales vivos. En condiciones experimentales, la aplicación de una serie de estímulos eléctricos cortos de alta frecuencia a una sinapsis puede potenciar la fuerza de la sinapsis química durante minutos u horas. Más importante aún, la LTP contribuye a la plasticidad sináptica en animales vivos, proporcionando la base para un sistema nervioso altamente adaptable.
Dos tipos de receptores diferentes están involucrados principalmente en el proceso de LTP, concretamente el complejo receptor de N-metil-D-aspartato (NMDA) y el receptor del ácido a-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazol-propiónico (AMPA). Durante la LTP, el neurotransmisor excitador principal, el glutamato, se libera de la neurona presináptica, se une al receptor de AMPA en la membrana postsináptica y lo activa, lo que da lugar a su despolarización. En los potenciales de membrana en reposo, el canal del receptor de NMDA está bloqueado por iones magnesio, pero la despolarización de la membrana postsináptica elimina este bloqueo, lo que permite la activación del receptor de NMDA y la entrada posterior de calcio en la célula. Se cree que este aumento del calcio intracelular activa las proteínas quinasas, lo que conduce a la transcripción génica y a la construcción de proteínas de refuerzo (Niehoff (2005), The Language of Life: How Cells Communicate in Health and Disease, 210-223) y da como resultado una mayor sensibilidad del receptor de AMPA, lo que facilita aún más la neurotransmisión y el mantenimiento de LTP.
Los receptores de NMDA están compuestos por conjuntos de subunidades NR1 y NR2; el dominio de unión a glutamato se forma en la unión de estas subunidades. Además del glutamato, el receptor de NMDA requiere un coagonista, la glicina, para modular la función del receptor. El sitio de unión de la glicina se encuentra en la subunidad NR1, mientras que la subunidad NR2 posee un sitio de unión para las poliaminas, moléculas reguladoras que modulan el funcionamiento del receptor de NMDA.
Por lo tanto, se sabe que el aminoácido glicina actúa como modulador alostérico positivo y coagonista obligatorio con glutamato en el complejo del receptor de NMDA (Danysz y Parsons 1998 Pharmacol. Rev., 50 (4): 597-664). Los transportadores de glicina (GlyT) desempeñan un papel importante en la terminación de las acciones glicinérgicas postsinápticas y el mantenimiento de concentraciones bajas de glicina extracelular mediante la recaptación de glicina en las terminales nerviosas presinápticas o en las células gliales. Por lo tanto, la terminación de la acción de la glicina está mediada en gran medida por una rápida recaptación. Se conocen dos transportadores de glicina, GlyT1 y GlyT2, que se caracterizan por 12 supuestas regiones transmembrana, mientras que se han identificado tres variantes de GlyT 1 (GlyT1a, byc) codificadas por el mismo gen (Borowsky y Hoffman 1998 J. Biol. Chem., 273 (44): 29077-29085).
El GlyT1 es el único transportador de glicina dependiente de cloruro de sodio en el prosencéfalo, en el que se coexpresa con el receptor de NMDA. En este sitio, se cree que el GlyT1 es responsable de controlar los niveles extracelulares de glicina en la sinapsis (Lopez-Corcuera et al. 2001 Mol. Membr. Biol., 18 (1): 13-20), lo que da como resultado la modulación de la función del receptor de NMDA.
De hecho, en presencia del antagonista selectivo de GlyT1 W-[3-(4'-fluorofenil)-3-(4'-fenilfenoxi)]propilsarcosina (NFPS), se observaron respuestas mejoradas del receptor de NMDA en células piramidales CA1 tras una estimulación colateral de Schaffer en preparaciones de rodajas de hipocampo de rata y de ratón (Bergeron et al. 1998, Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 95 (26): 15730-15734). In vivo, la administración sistémica de NFPS aumentó la LTP en la circunvolución dentada y mejoró la inhibición prepulso de la respuesta de sobresalto acústico en ratones adultos, lo que indica que la inhibición de GlyT1 afecta a la función del receptor de NMDA de una forma conductualmente relevante (Kinney, et al 2003, J. Neurosci., 23 (20): 7586-7591).
Dichos datos destacan la utilidad potencial de compuestos que pueden mejorar la función sináptica del receptor de NMDA mediante la elevación de los niveles extracelulares de glicina en el microambiente local de los receptores de NMDA sinápticos para la prevención de síndromes psicóticos y para mantener o impulsar funciones cognitivas fisiológicas, tales como la memoria y el aprendizaje, en individuos normales.
Existe un interés creciente en el desarrollo de compuestos, así como de composiciones nutracéuticas, que puedan usarse para mejorar el aprendizaje, la memoria y el estado de alerta, tanto en personas ancianas como en personas jóvenes, individuos que necesitan especialmente memoria y atención elevadas en su trabajo diario, incluidos estudiantes, trabajadores de la construcción, conductores, pilotos, médicos, vendedores, ejecutivos, amas de casa, "profesionales de alto desempeño" y personas sometidas a estrés mental o diario, así como personas propensas a una inestabilidad psiquiátrica, tal como esquizofrenia.
Por lo tanto, sería muy deseable un compuesto o una composición nutracéutica que mejore la función del receptor de NMDA y permita mejoras en el aprendizaje, la memoria y el estado de alerta. Se han añadido extractos de estevia a bebidas/composiciones alimenticias en el pasado, (por ejemplo, véase Japanese Kokai (solicitud de patente japonesa no examinada) 2005-278467 para Nippon Paper Chemical Co., Ltd), pero el extracto de estevia actuaba como edulcorante.
El documento US2007/224292 (Brunner et al.) divulga una bebida que contiene: cafeína, polinicotinato de cromo, niacina, calcio, potasio, magnesio, sodio y vitamina C. También se puede añadir polvo de estevia.
Melis, M.S. 1996 Phytomedicine 3 (4): 349-352; XP009151840 divulga que una infusión de esteviol afecta al transporte de sal y agua en los túbulos renales en ratas, y que puede utilizarse como agente hipotensor.
Descripción detallada de la invención
Se ha descubierto, según la presente invención, que los compuestos de fórmulas I y II, a continuación, son activadores de la función del hipocampo, a través de su capacidad para inducir LTP, y como tales son útiles como productos nutracéuticos y/o farmacéuticos que mejoran las funciones cognitivas. Estos compuestos pueden actuar mediante la inhibición del transportador de glicina, GlyT 1, inhibiendo así la recaptación de glicina, o mediante la activación de otra vía que conduzca a la inducción de LTP, o mediante ambos mecanismos. Por lo tanto, la presente invención se refiere a un procedimiento para mejorar las funciones cognitivas mediante la administración de una cantidad de esteviol que mejora la función cognitiva en un animal (incluidos los seres humanos).
Además, se ha encontrado según la presente invención que el esteviol induce LTP.
Otro aspecto de la presente invención es el uso de esteviol para mejorar las funciones cognitivas.
Por lo tanto, un aspecto de la invención es una nueva composición nutracéutica que comprende esteviol.
Fórmula I: véase la tabla 1 para obtener detalles de los grupos R
Tabla 1: Estructuras de esteviol y glucósidos relacionados (fórmula I). Glc, Xyl y Rha representan, respectivamente, restos de azúcar de glucosa, xilosa y ramnosa (Kuznesof (2007) Steviol glycosides - chemical and technical assessment, 68a reunión de JECFA)
Fórmula II: El isosteviol (Número CAS, 27975-19-5) es un producto de descomposición de glicósidos de esteviol.
Los compuestos de fórmula I y II pueden producirse sintéticamente utilizando procedimientos conocidos, extraerse de fuentes naturales, tales como plantas, utilizando procedimientos de extracción conocidos, o pueden usarse como un componente de un extracto vegetal, preferentemente un extracto de estevia, que contiene cantidades suficientes de esteviol y/o esteviósido para ser un potenciador eficaz de la función del hipocampo.
Tal como se ha descrito anteriormente, la base de la memoria, el aprendizaje y la estabilidad mental es la LTP, o el fortalecimiento de las conexiones neuronales, que se produce mediante la activación de los receptores de AMPA y NMDA dentro del cerebro, en particular en el hipocampo. Como inhibidores de la recaptación de glicina, a través de su actividad en GlyT1, los extractos de estevia permiten la acumulación de glicina en la vecindad del receptor de NMDA, activándolo y finalmente dando como resultado la inducción de LTP, el principal mecanismo celular involucrado en la formación y la consolidación de la memoria.
Además, el esteviol, el isosteviol y el esteviósido también inducen la activación de la misma vía bioquímica (aunque en una etapa diferente a la del extracto de estevia), lo que da lugar a la inducción de LTP, y también son beneficiosos
para mejorar las funciones de memoria.
Por lo tanto, el extracto de estevia y sus componentes pueden activar las funciones del hipocampo y mejorar la formación y la consolidación de la memoria, así como la salud mental. Por lo tanto, tal como se utiliza a lo largo de la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, el término "cantidad que mejora la función cognitiva" significa que la dosis es suficiente para activar las funciones del hipocampo y puede dar lugar a una función cognitiva mejorada, que se explica más adelante.
Condiciones mejoradas por la presente invención:
En el contexto de la presente invención, "tratamiento" también abarca el cotratamiento así como la prevención, la disminución de los síntomas asociados con una afección particular, la reducción del tiempo de aparición de una afección particular, la disminución de la gravedad de una afección y la reducción de la probabilidad de que un individuo asintomático muestre una afección en el futuro.
A lo largo de la presente memoria descriptiva y en las reivindicaciones, el término "función cognitiva mejorada" se utiliza para referirse a las condiciones de apoyo y mantenimiento del bienestar y el equilibrio cognitivo, tales como:
• Aprendizaje mejorado, que incluye:
° procesamiento del lenguaje
° resolución de problemas
° funcionamiento intelectual
Capacidad para hacer frente a las cargas psicosociales.
Atención y concentración mejoradas.
Memoria y capacidad para recordar mejoradas, especialmente la memoria a corto plazo.
Estado de alerta mental y vigilancia mental mejoradas, reducción de la fatiga mental
Estabilización del estado mental que incluye:
° Alivio de las afecciones posparto
° Alivio de la carga psicológica por separación de parejas, hijos, muerte de seres queridos o por problemas conyugales
° Alivio de problemas asociados con el cambio de domicilio o de trabajo, o eventos similares
° Alivio de condiciones estresantes después de un accidente de tráfico u otra presión social negativa.
• Alivio del estrés, que incluye:
° tratamiento, prevención y alivio de síntomas relacionados con sobrecarga laboral, agotamiento y/o cansancio extremo
° resistencia o tolerancia al estrés aumentada
° favorecer y facilitar la relajación en individuos sanos normales
• "Mejora de la condición", que incluye:
° reducir la irritabilidad y el cansancio
° capacidad para hacer frente a nuevas situaciones
° reducir, prevenir o aliviar la fatiga física y mental
° promover un sueño de buena calidad, es decir, actuar contra el insomnio y los trastornos del sueño y aumentar la energía en términos más generales, en personas enfermas o normales y sanas.
En un aspecto preferido de la presente invención, las composiciones pueden utilizarse como suplementos nutricionales, particularmente para personas que pueden sentir la necesidad de mejorar una función cognitiva y/o apoyo psicosocial. Una lista no exhaustiva de personas que se beneficiarían de una función cognitiva mejorada incluiría:
- personas de edad avanzada,
- estudiantes o personas que se estén preparando para exámenes,
- niños que participan en una gran cantidad de aprendizaje, es decir, bebés, niños de corta edad, niños en edad preescolar y niños en edad escolar,
- trabajadores de la construcción, o aquellos que operan maquinaria potencialmente peligrosa,
- conductores de camiones, pilotos, conductores de trenes u otros profesionales del transporte,
- controladores de tráfico aéreo,
- vendedores, ejecutivos y otros "profesionales de alto desempeño",
- policías y personal militar,
- amas de casa
o cualquier persona expuesta a altos niveles de estrés en su trabajo diario o que necesite especialmente alta atención/concentración/alto rendimiento mental y psicológico en su trabajo diario, tales como los que participan en deportes, ajedrecistas, golfistas, artistas profesionales (actores, músicos y similares).
Para lograr estas mejoras, se recomienda la administración durante varios días (por ejemplo, al menos seis o diez días), y generalmente se prefiere la administración diaria durante varias semanas.
Aparte de las aplicaciones para seres humanos, las composiciones de la presente invención tienen usos adicionales en el mundo veterinario. Los animales que pueden beneficiarse de una función cognitiva mejorada incluyen aquellos animales que están sujetos a condiciones estresantes. Dichas condiciones tienen lugar, por ejemplo, después de su captura o transporte o pueden deberse a las condiciones del alojamiento (tales como cambio de domicilio o de propietario), cuando los animales desarrollan trastornos análogos y están angustiados o agresivos, o muestran un comportamiento estereotipado, o ansiedad y comportamiento obsesivo-compulsivo. Los animales que están sometidos a estrés también incluirían aquellos que son animales de carreras (por ejemplo, perros, caballos, camellos), o que se utilizan en diversos deportes, animales escénicos (tales como animales de circo y los que aparecen en escenarios, la televisión o el cine) y caballos que realizan doma y otras rutinas muy disciplinadas.
Los "animales" preferidos son mascotas o animales de compañía y animales de granja. Ejemplos de mascotas son perros, gatos, pájaros, peces de acuario, conejillos de indias, conejos, liebres y hurones. Ejemplos de animales de granja son peces de acuicultura, cerdos, caballos, rumiantes (bovinos, ovinos y caprinos) y aves de corral.
Usos/formulaciones/dosis de nutracéuticos
El término "nutracéutico", tal como se utiliza en el presente documento, denota utilidad en los campos de aplicación tanto nutricional como farmacéutico. Por lo tanto, se pueden utilizar nuevas composiciones nutracéuticas como suplementos de alimentos y bebidas y como formulaciones farmacéuticas para administración por vía enteral o parenteral que pueden ser formulaciones sólidas, tales como cápsulas o comprimidos, o formulaciones líquidas, tales como soluciones o suspensiones.
Las composiciones nutracéuticas según la presente invención pueden contener además hidrocoloides protectores (tales como gomas, proteínas, almidones modificados), aglutinantes, agentes formadores de película, agentes/materiales encapsulantes, materiales de pared/cubierta, compuestos de matriz, revestimientos, emulsionantes, tensioactivos, solubilizantes (aceites, grasas, ceras, lecitinas, etc.), adsorbentes, vehículos, materiales de carga, co-compuestos, dispersantes, humectantes, coadyuvantes de procesamiento (disolventes), agentes de flujo, agentes enmascaradores del sabor, agentes ponderantes, agentes gelatinizantes, agentes formadores de gel, antioxidantes y antimicrobianos.
Además, se puede añadir un suplemento multivitamínico y mineral a las composiciones nutracéuticas de la presente invención para obtener una cantidad adecuada de un nutriente esencial que falte en algunas dietas. El suplemento multivitamínico y mineral también puede ser útil para la prevención de enfermedades y la protección contra pérdidas y deficiencias nutricionales debidas a patrones de estilo de vida.
Las composiciones nutracéuticas según la presente invención pueden encontrarse en cualquier forma galénica que sea adecuada para su administración al organismo, especialmente en cualquier forma convencional para administración oral, por ejemplo en formas sólidas tales como (aditivos/suplementos para) alimentos o piensos, premezcla de alimentos o piensos, alimentos o piensos enriquecidos, comprimidos, píldoras, gránulos, grageas, cápsulas y formulaciones efervescentes, tales como polvos y comprimidos, o en formas líquidas, tales como soluciones, emulsiones o suspensiones tales como, por ejemplo, bebidas, pastas y suspensiones oleosas. Las pastas se pueden incorporar en cápsulas de cubierta dura o blanda, por lo que las cápsulas se caracterizan, por ejemplo, por una matriz de gelatina (de pescado, porcina, de ave, de vaca), proteínas vegetales o lignosulfonato. Ejemplos de otras formas de aplicación son las de administración transdérmica, parenteral o inyectable. Las composiciones dietéticas y farmacéuticas pueden encontrarse en forma de formulaciones de liberación controlada (retardada).
Ejemplos de alimentos son productos lácteos que incluyen, por ejemplo, margarinas, cremas para untar, mantequilla, queso, yogures o bebidas lácteas.
Ejemplos de alimentos enriquecidos son maíz dulce, pan, barras de cereales, productos de panadería, tales como pasteles y galletas, y patatas fritas en tiras o en láminas.
Las bebidas abarcan bebidas alcohólicas y no alcohólicas, así como preparaciones líquidas que se añaden al agua potable y a los alimentos líquidos. Las bebidas no alcohólicas son, por ejemplo, refrescos, bebidas deportivas, zumos de frutas, limonadas, tés y bebidas a base de leche. Los alimentos líquidos son, por ejemplo, sopas y productos
lácteos. La composición nutracéutica que contiene extracto de estevia, sus componentes o un extracto de estevia enriquecido se puede añadir a un refresco, una barra energética o un caramelo, de modo que un adulto consuma de 1 a 1000 mg, de forma más preferida de 50 - 750 mg y de la forma más preferida de 100 - 500 mg de extracto de estevia, sus componentes o un extracto de estevia enriquecido por ración diaria.
Si la composición nutracéutica es una formulación farmacéutica, la composición contiene además excipientes, diluyentes o coadyuvantes farmacéuticamente aceptables. Pueden utilizarse técnicas estándar para su formulación, tales como, por ejemplo, las divulgadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a edición, Williams & Wilkins, PA, Estados Unidos. Para la administración oral se utilizan preferentemente comprimidos y cápsulas que contienen un agente aglutinante adecuado, por ejemplo, gelatina o polivinilpirrolidona, un material de carga adecuado, por ejemplo, lactosa o almidón, un lubricante adecuado, por ejemplo, estearato de magnesio y, opcionalmente, otros aditivos. Se prefieren las formulaciones que contienen de 10 a 750 mg, de forma más preferida de 50 a 500 mg, del extracto de estevia o sus constituyentes, por unidad de administración, por ejemplo, por comprimido o cápsula.
Para animales, incluidos los seres humanos, una dosis diaria adecuada de extracto de estevia o sus constituyentes, para los fines de la presente invención, pueden encontrarse dentro del intervalo de 0,15 mg por kg de peso corporal a aproximadamente 10 mg por kg de peso corporal por día. Son más preferidas las composiciones nutracéuticas de la presente invención que contienen extracto de estevia o sus constituyentes, preferentemente en una cantidad suficiente para administrar a un adulto humano (que pesa aproximadamente 70 kg) una dosis de aproximadamente 10 mg/día a aproximadamente 750 mg/día, preferentemente de aproximadamente 50 mg/día a aproximadamente 500 mg/día .
Los ejemplos no limitantes siguientes se presentan para ilustrar mejor la invención.
Ejemplo 1
Inhibición del transportador de glicina 1 en un ensayo
Se cultivaron de manera rutinaria células CHO que expresan de forma estable el ADNc del transportador de glicina humana 1b (GlyT1) en medio Eagle modificado por Dulbecco (Invitrogen, Carlsbad, Estados Unidos) que contenía suero de ternero fetal dializado al 10%, penicilina, estreptomicina, prolina y el antibiótico G418. Las células se recolectaron mediante tripsinización un día antes del ensayo y se sembraron en el medio mencionado anteriormente. Inmediatamente antes del ensayo, el medio se reemplazó por tampón de captación que contenía NaCl 150 mM, CaCl2 1 mM, KCl 2,5 mM, MgCl2 2,5 mM, glucosa 10 mM y ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-etanosulfónico 10 mM (tampón HEPES).
La captación de glicina en las células se determinó mediante la adición de [3H]-glicina radiomarcada 60 nM (Amersham Biosciences GE Healthcare, Slough, Reino Unido) e incubación durante 30 minutos a temperatura ambiente. Tras la eliminación de la marca no incorporada mediante un lavado suave tres veces con el tampón anterior, se cuantificó la glicina incorporada mediante recuento de centelleo líquido.
La captación de glicina por medio del transportador GlyT1 se inhibió mediante la adición de extracto de estevia de forma dependiente de la dosis. Se usaron sarcosina, ORG24598 y ALX5407 (todos de Sigma, St. Louis, Estados Unidos) como inhibidores conocidos de GlyT 1. Los valores de CI50 medidos para la inhibición de la captación de glicina (extracto de estevia, constituyentes del extracto y compuestos de referencia) y una curva de dosis-respuesta representativa (extracto de estevia) se muestran en la tabla 2 y la figura 1, respectivamente.
Tabla 2: Valores de CI50 medidos para la inhibición de la captación de glicina en células CHO por extracto de estevia y sus componentes principales, esteviol, isosteviol y esteviósido, además de los compuestos de referencia sarcosina, ORG24598 y ALX5407. Los datos se muestran como media ± s.e.m. (cuando los experimentos se realizaron más de una vez); CI50 se expresa como pg/ml para el extracto y pM para compuestos puros.
Las hojas molidas de Stevia rebaudiana se mezclan con agua caliente durante 20-30 min. Posteriormente, el extracto acuoso se extrae por escurrimiento, aplicando presión para conseguir la máxima cantidad de extracto.
Ejemplo 2
Cultivos de rodajas de hipocampo
Se decapitaron ratas Wistar de siete días usando una guillotina. En menos de 1 minuto se abrió el cráneo, se separaron y se transfirieron los hemisferios cerebrales y se diseccionaron ambos hipocampos y se transfirieron a tampón helado que contenía NaCl 137 mM, KCl 5 mM, Na2HpO40,85 mM, CaCl21,5 mM, KH2P040,66 mM, MgSO40,28 mM, MgCl2 1 mM, NaHCO32,7 mM, ácido quinurénico 1 mM y D-glucosa al 0,6%.
Se prepararon rodajas transversales de hipocampo (400 pm) utilizando un micrótomo de cuchilla vibrante (VT1200S; Leica Microsystems (Schweiz) AG, Heerbrugg, Suiza) en el mismo tampón. Las rodajas de hipocampo se colocaron individualmente en insertos de membrana (insertos de placa de cultivo Millicell, 0,4 pm) y se cultivaron a 35 °C, 5% de CO2 , 95% de humedad en un medio que contiene una mezcla 1:1 de BME y MEM (ambos de Invitrogen) que contiene suero de caballo inactivado por calor al 25%, 1x GlutaMAX, 1x penicilina/estreptomicina, glucosa al 0,6% y ácido quinurénico 1 mM (Stoppini 1991 J. Neurosci. Methods 37 (2): 173-82).
Después de 48 h en cultivo, los receptores de NMDA sinápticos se activaron mediante la adición de extracto de estevia, sus componentes principales o sustancias de control durante 15 min en NaCl 140 mM, KCl 5 mM, CaCl2 1,3 mM, HEPES 25 mM (pH 7,3), D-glucosa 33 mM y metioduro de bicuculina 0,02 mM. Se usaron de forma rutinaria sarcosina (100 pM) y ALX5407 (20 nM) como controles positivos. Un control positivo adicional comprendió la adición de glicina 200 pM a cultivos hermanos. Después de los tratamientos, las secciones se lavaron y se fijaron para la inmunohistoquímica. Se cuantificaron marcadores de actividad sináptica mejorada, normalmente asociados con potenciación a largo plazo, que representan un modelo ex vivo de aprendizaje y memoria (véase la tabla 3, a continuación).
Tabla 3: Activación relativa de marcadores sinápticos después del tratamiento con extracto de estevia o algunos de sus compuestos constituyentes (esteviol, isosteviol, esteviósido y rebaudiósido A) en comparación con cultivos hermanos tratados con tampón. La activación de cualquiera de estos marcadores (o una combinación de los mismos) se observa en experimentos LTP clásicos.
El tratamiento de cultivos de hipocampo con extracto de estevia, esteviol, isosteviol y esteviósido indujeron uno o más marcadores bioquímicos típicos de LTP (pCREB: forma activada de la proteína de unión al elemento de respuesta a AMPc; pMAPK: forma activada de la proteína quinasa activada por mitógenos; GluR1: presencia en la superficie celular del receptor 1 de AMPA).
Ejemplo 3
Preparación de una cápsula de gelatina blanda
Se puede preparar una cápsula de gelatina blanda que comprenda los ingredientes siguientes:
Se pueden administrar dos cápsulas al día durante 3 meses a un adulto humano. Se considera que mejoran la función cognitiva, el estado de alerta y la capacidad para concentrarse en el trabajo.
Ejemplo 4
Preparación de un refresco instantáneo aromatizado
Todos los ingredientes se mezclan y se tamizan a través de un tamiz de 500 pm. El polvo resultante se dispone en un recipiente apropiado y se mezcla en una batidora tubular durante al menos 20 minutos. Para preparar la bebida, se mezclan 105 g del polvo mezclado obtenido con suficiente agua para producir un litro de bebida.
El refresco listo para beber contiene aprox. 15 mg de extracto de estevia enriquecido por ración (250 ml). Como fortalecedor y para el bienestar general, se pueden beber 2 raciones al día (500 ml). Se considera que mejoran la función cognitiva, el estado de alerta y la capacidad para concentrarse en el trabajo.
Ejemplo 5
Preparación de una barra de cereal no horneada enriquecida
El extracto de estevia enriquecido se mezcla previamente con leche desnatada en polvo y se dispone en una batidora planetaria. Se añaden copos de maíz y arroz inflado crujiente y se mezcla el conjunto suavemente. Después se añaden las manzanas secadas y cortadas. En una olla, se mezclan agua y sal en las cantidades indicadas anteriormente (solución 1). En una segunda olla, se mezclan los jarabes de glucosa, de azúcar invertido y de sorbitol en las cantidades indicadas anteriormente (solución 2). La fase grasa la constituye una mezcla de grasa de hornear, grasa de palmiste, lecitina y emulsionante. La solución 1 se calienta a 110 °C. La solución 2 se calienta a 113 °C y después se enfría en un baño de agua fría.
Posteriormente, se combinan las soluciones 1 y 2. La fase grasa se funde a 75 °C en un baño de agua, después se añade a la mezcla combinada de las soluciones 1 y 2. Se añaden aroma de manzana y ácido cítrico a la mezcla líquida de azúcar/grasa. La masa líquida se añade a los ingredientes secos y se mezcla bien en la batidora planetaria. La masa se dispone en una placa de mármol y se enrolla hasta obtener el espesor deseado. La masa se enfría a temperatura ambiente y se corta en trozos. La barra de cereal sin hornear contiene aprox. 10 mg de extracto de estevia enriquecido por ración (30 g). Para lograr un bienestar general y vitalización, se pueden consumir 1-2 barras de cereales al día. Se considera que mejoran la función cognitiva, el estado de alerta y la capacidad para concentrarse en el trabajo.
Ejemplo 6
Pienso seco para perros que contiene extracto de estevia
Una dieta básica comercial para perros (por ejemplo, Mera Dog "Brocken", MERA-Tiernahrung GmbH, MarienstralJe 80-84, D-47625 Kevelaer-Wetten, Alemania) se pulveriza con una solución de extracto de estevia en agua, junto con antioxidantes tales como vitamina C (por ejemplo, ROVIMIX® C-EC de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) y sus derivados, es decir, ascorbilmonofosfato de sodio (por ejemplo, STAY-C® 50 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) o una mezcla de ésteres de trifosfato, difosfato y monofosfato de L-ascorbato de sodio/calcio (por ejemplo, ROVIMIX® STAY-C® 35 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) en una cantidad suficiente
para administrar a un perro una dosis diaria de 4 mg de extracto de estevia por kg de peso corporal. La composición alimenticia se seca de forma que que presente un contenido de materia seca de aproximadamente el 90% en peso. Para un perro promedio de 10 kg de peso corporal que consume aprox. 200 g de pienso seco al día, la comida para perros contiene aprox. 200 mg de extracto de estevia por kg de alimento. Para perros más pesados, la mezcla de pienso se prepara en consecuencia. Para reducir el estrés, el miedo y la agresividad en los perros, el alimento se puede proporcionar a perros alojados en refugios para animales de forma regular. Antes de las visitas del veterinario o las estancias en clínicas veterinarias o la separación por vacaciones, el alimento se administra al menos una semana antes, durante el evento estresante y una semana después.
Ejemplo 7
Alimento húmedo para gatos que contiene extracto de estevia
Una dieta básica comercial para gatos (por ejemplo, Happy Cat "Adult", Tierfeinnahrung, Südliche HauptstralJe 38, D-86517 Wehringen, Alemania) se mezcla con una solución de extracto de estevia en agua, junto con antioxidantes tales como vitamina C (por ejemplo, ROVIMIX® C-EC de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) y sus derivados, es decir, ascorbilmonofosfato de sodio (por ejemplo, STAY-C® 50 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst , Suiza) o una mezcla de ésteres de trifosfato, difosfato y monofosfato de L-ascorbato de sodio/calcio (por ejemplo, ROVIMIX® STAY-C® 35 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) en una cantidad suficiente para administrar a un gato una dosis diaria de 4 mg de extracto de estevia por kg de peso corporal. Para un gato promedio de 5 kg de peso corporal que consume aprox. 400 g de comida húmeda, el alimento para gatos contiene 50 mg de extracto de estevia por kg de alimento. La composición alimenticia se seca de forma que presente un contenido de materia seca de aproximadamente el 90% en peso. Para reducir el estrés, el miedo y la agresividad en los gatos, el alimento se puede proporcionar a gatos alojados en refugios para animales de forma regular. Antes de las visitas del veterinario o las estancias en clínicas veterinarias, el alimento se administra al menos una semana antes, durante el evento estresante y una semana después.
Ejemplo 8
Golosinas para perros que contienen extracto de estevia
Las golosinas comerciales para perros (por ejemplo, Mera Dog "Biscuit" para perros suministradas por Mera Tiernahrung GmbH, Marienstrasse 80-84, 47625 Kevelaer-Wetten, Alemania) se pulverizan con una solución de extracto de estevia en agua, junto con antioxidantes tales como vitamina C (por ejemplo, ROVIMIX® C-EC de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) y sus derivados, es decir, ascorbilmonofosfato de sodio (por ejemplo, STAY-C® 50 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst , Suiza) o una mezcla de ésteres de trifosfato, difosfato y monofosfato de L-ascorbato de sodio/calcio (por ejemplo, ROVIMIX® STAY-C® 35 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) en una cantidad suficiente para administrar a las golosinas 0,5 - 5 mg de extracto de estevia por g de golosinas. La composición alimenticia se seca de forma que presente un contenido de materia seca de aproximadamente el 90% en peso. Para reducir el miedo y la tensión, la golosina se puede administrar durante el día adicionalmente al alimento, o cuando no se garantice la alimentación, es decir, durante un viaje, hasta 5 veces al día.
Ejemplo 9
Golosinas para gatos que contienen extracto de estevia
Las golosinas comerciales para gatos (por ejemplo, Whiskas Dentabits para gatos suministradas por Whiskas, Masterfoods GmbH, Eitzer Str.215, 27283 Verden/Aller, Alemania) se pulverizan con una solución de extracto de estevia en agua, junto con antioxidantes tales como vitamina C (por ejemplo, ROVIMIX® C-EC de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) y sus derivados, es decir, ascorbilmonofosfato de sodio (por ejemplo, STAY-C® 50 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) o una mezcla de ésteres de trifosfato, difosfato y monofosfato de L-ascorbato de sodio/calcio (por ejemplo, ROVIMIX® STAY-C® 35 de DSM Nutritional Products Ltd, Kaiseraugst, Suiza) en una cantidad suficiente para administrar a las golosinas 0,5 - 5 mg de extracto de estevia por g de golosinas. La composición alimenticia se seca de forma que presente un contenido de materia seca de aproximadamente el 90% en peso. Para reducir el miedo y la tensión, la golosina se puede administrar durante el día adicionalmente al alimento, o cuando no se garantice la alimentación, es decir, durante un viaje, hasta 5 veces al día.
Claims (2)
1. Uso no terapéutico de esteviol para mejorar la función cognitiva que se selecciona del grupo que consiste en: mantenimiento del bienestar y el equilibrio cognitivo, aprendizaje, procesamiento del lenguaje, resolución de problemas, funcionamiento intelectual, capacidad para hacer frente a cargas psicosociales, atención y concentración, memoria, la capacidad para recordar, estado de alerta mental, vigilancia mental, fatiga mental, estabilización del estado mental, un alivio del estrés, estrés por sobrecarga laboral, agotamiento y/o cansancio extremo relacionados con el estrés, y para promover la relajación en un animal o un ser humano.
2. Uso no terapéutico de esteviol según la reivindicación 1, que es para uso veterinario.
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