JP5737701B2 - ローズマリー抽出物、これらを含有する食品および医薬品組成物、ならびにその使用 - Google Patents
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Description
本発明は、特に、神経伝達の障害、すなわち低下に関係する障害を治療するための薬剤として使用するためのローズマリー抽出物、ならびにこのようなローズマリー抽出物を含有する食品および医薬品組成物、そしてこれらの使用に関する。
神経伝達の障害、例えば低神経伝達物質レベルが、うつ病および全般性不安障害(GAD)などの精神疾患、およびストレスに対する感受性の増大に関係することはよく知られている。
イミプラミン、アミトリプチリンおよびクロミプラミンなどの三環式抗うつ薬化合物(TCA)は、セロトニンおよびノルアドレナリンの再取り込みを阻害する。これらは、利用可能な最も有効な抗うつ薬の1つとして広く認められているが、これらはさらにムスカリン性アセチルコリン受容体、ヒスタミン受容体およびセロトニン受容体と相互に作用するので多数の欠点を有する。このような活性から生じる副作用には、体位性低血圧に加えて口渇、霧視、便秘および尿閉が含まれる。最も重要なのは、TCAは過剰摂取されると安全ではなく、頻繁に急性心毒性を示すことである。
[ローズマリー抽出物およびその好ましい成分]
本発明に従って、ローズマリー抽出物は、神経伝達の低下に関係する障害を治療するための薬剤において使用可能であることが分かった。特に、この要求は、以下のステップ:
− ロスマリヌス・オフィシナリス(Rosmarinus officinalis)の乾燥葉を粉砕するステップと、
− 粉砕したローズマリー葉をアセトンで抽出し、アセトン抽出物を得るステップと、
− 任意で(好ましくは)、アセトン抽出物をろ過するステップと、
− (部分的に、好ましくはほぼ完全に)アセトンを除去することによってアセトン抽出物を濃縮するステップと、
− 任意で(好ましくはさらに)、このようにして濃縮されたアセトン抽出物をスプレー乾燥するステップと
を含む方法によって製造されるローズマリー抽出物によって満たされる。
好ましくは0.05〜3重量%の範囲、より好ましくは0.1〜1.0重量%の範囲、最も好ましくは0.2〜0.7重量%の範囲のロスマノール、
好ましくは0.5〜7.0重量%の範囲、より好ましくは1〜5.0重量%の範囲、最も好ましくは2.5〜4.0重量%の範囲のカルノソール、
好ましくは20〜65重量%の範囲、より好ましくは25〜60重量%の範囲、最も好ましくは30〜55重量%の範囲のカルノシン酸、および
好ましくは1〜20重量%の範囲、より好ましくは5〜15重量%の範囲、最も好ましくは7〜12重量%の範囲のカルノシン酸12−メチルエーテル
を含有し、純粋な物質を基準として用いHPLC−UV(高性能液体クロマトグラフィ−紫外線)により210nmで測定される。
従って、1つの態様では、本発明は、神経伝達の低下に関係する障害を治療するための薬剤として使用するための、ローズマリー抽出物に関する。
ペットおよび家畜動物は、本発明によって提供することができる神経伝達の向上または改善を必要としている状態にあり得る。動物はストレスの多い状況に逆らう行動的および/または生理的な反応を示すことがあり、大量生産環境で育てられた動物、または好ましくない状態で輸送されている動物は、食肉または乳の品質または量の低下を呈し、ストレスを受けた家禽は、羽根つつき、産卵の低下および共食いという手段をとり得る。多くの動物は、不利な飼育または輸送状態において、攻撃的になるか、あるいは常同行動、不安行動および強迫的行動を表し得る。
ヒトについては、本発明の目的のためのローズマリー抽出物の適切な1日の投与量は、1日あたり、体重1kgにつき0.001mg〜体重1kgにつき100mgの範囲内であり得る。さらに好ましいのは、体重1kgにつき0.01〜10mgの範囲の1日の投与量であり、そして特に好ましいのは、体重1kgにつき0.05〜5.0mgの範囲の1日の投与量である。
[実施例1]
[ローズマリー抽出物の調製]
ロスマリヌス・オフィシナリス(Rosmarinus officinalis)の乾燥葉を粉砕し、次にアセトンで抽出した。このようにして得られたアセトン抽出物をろ過し、アセトンの除去によって濃縮した。次に、濃縮したアセトン抽出物をスプレー乾燥した。
0.5重量%のロスマノール、
3.3重量%のカルノソール、
36.7重量%のカルノシン酸、および
9.0重量%のカルノシン酸12−メチルエーテル
を含有し、純粋な物質を基準として用いてHPLC−UVにより210nmで測定した。
[ローズマリー抽出物によるセロトニン取り込みの阻害]
ヒトセロトニン再取り込み輸送体(hSERT)を安定して発現するヒト胎児腎臓(HEK−293)細胞は、米国ヴァンダービルト大学のR.ブレイクリー(Blakely)から入手した。10%の透析ウシ胎児血清(Invitrogen)、ペニシリン、ストレプトマイシン、L−グルタミンおよび抗生物質G418を含有するダルベッコ変法イーグル培地(Bioconcept)において細胞を日常的に成長させ、トリプシン処理により継代させた。アッセイの当日に、温かいリン酸緩衝食塩水(PBS)で穏やかに洗浄することによって、80%コンフルエントなフラスコからの細胞を収集した。次に、細胞を遠心分離によって1回洗浄し、160μlの緩衝液中10,000個の細胞濃度で、35μMのパージリン、2.2mMのCaCl2、1mMのアスコルビン酸および5mMのN−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N’−2−エタンスルホン酸(HEPES緩衝液)を補充したクレブス・リンゲル重炭酸塩緩衝液(Sigma)中に再懸濁させ、1つのウェルにつき10,000個の細胞で、丸底のポリプロピレンの96ウェルマイクロタイタープレート(Corning)に分注した。20nMの濃度の放射標識[3H]−セロトニン(GE Healthcare)を添加し、穏やかに振とうさせながら37℃で40分間インキュベーションすることによって、セロトニンの細胞への取り込みを決定した。この時間の最後に、Tomtec Mach III M 細胞ハーベスターを用いて、Unifilter 96GF/Bプレート(Perkin Elmer)によるろ過によって、取り込まれなかった標識を除去した。Microscint−40/Topcount(Perkin Elmer)を用いて、液体シンチレーション計数によって、プレート上に保持された、取り込まれたセロトニンを定量した。
[ローズマリー抽出物によるモノアミンオキシダーゼの阻害]
モノアミンオキシダーゼA(MAO−A)およびB(MAO−B)酵素のための基質として、それぞれ有機アミンのp−チラミンまたはベンジルアミンを用いた。この反応により生じるH2O2を、西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP)により触媒されるバニリン酸との反応によって定量した。
[ポルソルト(Porsolt)の強制水泳試験における行動に対するローズマリー抽出物の効果]
強制水泳試験(FST)は、最初に、ラットにおける抗うつ薬様化合物のスクリーニングのために1977年に報告され(ポルソルトら1977年、Nature、266:730−732頁)、その後、マウスを試験するために変更された(ポルソルトら1977年、Arch.Int.Pharmacodynamie、229:327−336頁)。「行動的絶望」を実証し、それにより、逃げ道のない水のシリンダー内で強制的に水泳させたときに、ラットまたはマウスは、最初は活発な逃避志向の活動を示すが、最終的には、その頭を水の上に維持するために必要な最小限の動きしか行わないであろう。試験は、うつ病に対して既知の治療活性を有する様々な薬物(そのうちのいくつかは現存の行動モデルにおいてこれまでは効力を示していない)に感受性があることが示された。
[セロトニンおよびノルアドレナリンの脳レベルに対するローズマリー抽出物の効果(ラットにおけるインビボ微小透析)]
成体雄スプラーグドーリーラットを麻酔し(クロラール水和物、400mg/kg、腹腔内)、次に、単一の微小透析プローブ(BASiタイプMD2200、2mm膜、30,000ダルトンカットオフ)を背側海馬に埋め込み、歯科用セメントで適所に固定し、人工脳脊髄液(aCSF)を1ml/分で灌流させた。全ての実験を通して体温を36℃に保持した。15分ごとに灌流液サンプルを採取することによって、細胞外セロトニン(5−HT)およびノルアドレナリン(NA)レベルを決定し、電気化学的検出による高性能液体クロマトグラフィ(HPLC)を用いて評価した。HPLC移動相(5−HT分析:0.5mMのEDTA、0.1Mのモノクロロ酢酸、pH3.1、0.15g/Lのオクチル硫酸ナトリウム、5%のアセトニトリル、0.7%のテトラヒドロフラン、NA分析:0.5mMのEDTA、0.1MのNaH2PO4、pH3.1、1mMのオクチル硫酸ナトリウム、6%のアセトニトリル)を70μl/分で系に送り込んだ。5μlの注入ループを有する逆相1×100mmODSの3μmマイクロボアカラムを用いて、モノアミンを分離し、Ag/AgCl基準電極に対して+650mVに設定されたガラス状炭素電極を有するEpsilon電気化学検出器(BASi)を用いて検出した。ピーク溶出時間を基準標準物と比較することによって透析液のピークを同定し、直線回帰分析を用いるピーク面積の測定に従って定量した。
[ソフトゼラチンカプセルの調製]
以下の成分を含むソフトゼラチンカプセルが調製され得る。
[ソフトゼラチンカプセルの調製]
以下の成分を含むソフトゼラチンカプセルが調製され得る。
[錠剤の調製]
以下の成分を含む錠剤が調製され得る。
[インスタントフレーバーソフトドリンクの調製]
[焼いていない強化シリアルバーの調製]
[ストレスを緩和してイヌを再活性化するためのローズマリー抽出物を含有するイヌの乾燥飼料]
市販のイヌ用基礎食(例えば、Mera Dog「Brocken」、MERA−Tiernahrung GmbH、Marienstrasse 80−84、D−47625 Kevelaer−Wetten、独国)に、ローズマリー抽出物の重量を基準として体重1kgにつき50mgの1日の用量を被験者に投与するのに十分な量のローズマリー抽出物の溶液をスプレーした。約90重量%の乾燥物質を含有するように食品組成物を乾燥させる。体重10kgの平均的なイヌが1日あたり約200gの乾燥飼料を消費するために、ドッグフードは、食品1kgあたり約2500mgのローズマリー抽出物を含有する。より重いイヌのためには、飼料ミックスはそれに応じて調製される。
[ローズマリー抽出物を含有する、湿ったキャットフード]
市販のネコ用基礎食(例えば、Happy Cat「Adult」、Tierfeinnahrung、Suedliche Hauptstrasse 38、D−86517 Wehringen、独国)を、乾燥ローズマリー抽出物重量を基準として体重1kgにつき100mgの1日の用量を被験者に投与するのに十分な量のローズマリー抽出物の溶液と混合する。体重5kgの平均的なネコが約400gの湿った食品を消費するために、キャットフードは1250mg/kgのローズマリー抽出物を含有する。食品組成物は、約90重量%の乾燥物質を含有するように乾燥される。
[ローズマリー抽出物を含有するドッグトリート]
市販のドッグトリート(例えば、Mera Tiernahrung GmbH、Marienstrasse 80−84、47625 Kevelaer−Wetten、独国により供給されるイヌ用のMera Dog「Biscuit」)に、乾燥ローズマリー抽出物の重量を基準としてトリート1gにつき5〜50mgをトリートに投与するのに十分な量のローズマリー抽出物の溶液をスプレーする。食品組成物は、約90重量%の乾燥物質を含有するように乾燥される。
[ローズマリー抽出物を含有するキャットトリート]
市販のキャットトリート(例えば、Whiskas、Masterfoods GmbH、Eitzer Str.215、27283 Verden/Aller、独国によって供給されるネコ用のWhiskas Dentabits)に、乾燥ローズマリー抽出物の重量を基準としてトリート1gにつき5〜50mgをトリートに投与するのに十分な量のローズマリー抽出物の溶液をスプレーする。食品組成物は、約90重量%の乾燥物質を含有するように乾燥される。
Claims (15)
- 神経伝達の低下に関係する障害の治療のための組成物を製造するためのローズマリー葉のアセトン抽出物の使用であって、
前記組成物が、抗うつ薬、気分/活力改善剤、ストレス緩和剤、状態改善剤、不安の低減剤、強迫的行動の低減剤、弛緩薬、睡眠改善剤および/または不眠軽減剤である、
使用。 - 前記アセトン抽出物が、以下の:
a)ロスマリヌス・オフィシナリス(Rosmarinus officinalis)の乾燥葉を粉砕するステップと、
b)ステップa)の葉をアセトンで抽出し、アセトン抽出物を得るステップと、
d)アセトンを除去することによってアセトン抽出物を濃縮するステップとを含む方法によって製造される、請求項1に記載の使用。 - 前記方法が、ステップb)の後にステップc)を更に含み、
前記ステップc)が、アセトン抽出物をろ過するステップである、
請求項1又は2に記載の使用。 - 前記方法が、ステップd)の後にステップe)を更に含み、
前記ステップe)が、濃縮されたアセトン抽出物をスプレー乾燥するステップである、
請求項1〜3のいずれか一項に記載の使用。 - 前記アセトン抽出物が、ロスマノール、カルノソール、カルノシン酸、およびカルノシン酸12−メチルエーテルを含有し、
前記ロスマノールの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、0.05〜3重量%の範囲であり、
前記カルノソールの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、0.5〜7重量%の範囲であり、
前記カルノシン酸の含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、20〜65重量%の範囲であり、
前記カルノシン酸12−メチルエーテルの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、1〜20重量%の範囲である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の使用。 - ローズマリー葉のアセトン抽出物を含む、神経伝達の低下に関係する障害を治療するための治療剤であって、
前記治療剤が、抗うつ薬、気分/活力改善剤、ストレス緩和剤、状態改善剤、不安の低減剤、強迫的行動の低減剤、弛緩薬、睡眠改善剤および/または不眠軽減剤である、
治療剤。 - 前記アセトン抽出物が、以下の:
a)ロスマリヌス・オフィシナリス(Rosmarinus officinalis)の乾燥葉を粉砕するステップと、
b)ステップa)の葉をアセトンで抽出し、アセトン抽出物を得るステップと、
d)アセトンを除去することによってアセトン抽出物を濃縮するステップとを含む方法によって製造される、請求項6に記載の治療剤。 - 前記方法が、ステップb)の後にステップc)を更に含み、
前記ステップc)が、アセトン抽出物をろ過するステップである、
請求項6又は7に記載の治療剤。 - 前記方法が、ステップd)の後にステップe)を更に含み、
前記ステップe)が、濃縮されたアセトン抽出物をスプレー乾燥するステップである、
請求項6〜8のいずれか一項に記載の治療剤。 - 前記アセトン抽出物が、ロスマノール、カルノソール、カルノシン酸、およびカルノシン酸12−メチルエーテルを含有し、
前記ロスマノールの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、0.05〜3重量%の範囲であり、
前記カルノソールの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、0.5〜7重量%の範囲であり、
前記カルノシン酸の含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、20〜65重量%の範囲であり、
前記カルノシン酸12−メチルエーテルの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、1〜20重量%の範囲である、請求項6〜9のいずれか一項に記載の治療剤。 - 動物において神経伝達の低下に関係する障害を治療するための方法であって、
前記方法は、ローズマリー葉のアセトン抽出物の有効量を動物に投与することを含み、
前記動物が、ペット動物または家畜動物であり、
前記動物が、抗うつ薬、気分/活力改善剤、ストレス緩和剤、状態改善剤、不安の低減剤、強迫的行動の低減剤、弛緩薬、睡眠改善剤および/または不眠軽減剤を必要としている、方法。 - 前記アセトン抽出物が、以下の:
a)ロスマリヌス・オフィシナリス(Rosmarinus officinalis)の乾燥葉を粉砕するステップと、
b)ステップa)の葉をアセトンで抽出し、アセトン抽出物を得るステップと、
d)アセトンを除去することによってアセトン抽出物を濃縮するステップとを含む方法によって製造される、請求項11に記載の方法。 - 前記方法が、ステップb)の後にステップc)を更に含み、
前記ステップc)が、アセトン抽出物をろ過するステップである、
請求項11又は12に記載の方法。 - 前記方法が、ステップd)の後にステップe)を更に含み、
前記ステップe)が、濃縮されたアセトン抽出物をスプレー乾燥するステップである、
請求項11〜13のいずれか一項に記載の方法。 - 前記アセトン抽出物が、ロスマノール、カルノソール、カルノシン酸、およびカルノシン酸12−メチルエーテルを含有し、
前記ロスマノールの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、0.05〜3重量%の範囲であり、
前記カルノソールの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、0.5〜7重量%の範囲であり、
前記カルノシン酸の含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、20〜65重量%の範囲であり、
前記カルノシン酸12−メチルエーテルの含有量が、アセトン抽出物の全重量を基準に、1〜20重量%の範囲である、請求項11〜14のいずれか一項に記載の方法。
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