CN101541337B

CN101541337B - 迷迭香提取物、包含它们的膳食和药物组合物及其用途

Info

Publication number: CN101541337B
Application number: CN2007800435853A
Authority: CN
Inventors: 安东尼·德赛兹尤; 安·福勒; 瑞吉娜·格拉切克; 克劳斯·吉尔泊特; 戈德·斯库勒
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2006-11-24
Filing date: 2007-11-22
Publication date: 2012-02-01
Anticipated expiration: 2027-11-22
Also published as: US20120183635A1; US20100317727A1; WO2008061757A1; JP2010510271A; CN101541337A; EP1930019A1; EP2081582A1; KR20090082908A; JP5737701B2

Abstract

本发明涉及用作治疗与降低的神经传递相关的病症的药物的迷迭香提取物，以及含有这类迷迭香提取物的膳食和药物组合物及其用途。

Description

迷迭香提取物、包含它们的膳食和药物组合物及其用途

发明简述

本发明涉及用作药物，特别是用于治疗与受损的(例如降低的)神经传递相关的病症的迷迭香提取物，以及涉及含有这类迷迭香提取物的膳食和药物组合物及其用途。

发明背景

众所周知，受损的神经传递例如低神经递质水平与精神疾病相关，如抑郁和广泛性焦虑障碍(GAD)，和提高的压力易感性。

能提高脑中的神经递质水平并从而提高它们的传递的化合物可显示抗抑郁特性，并显示对多种其它精神病症的有益作用(Neurotransmitters，Drugs and Brain Function R.A.Webster(ed)，John Wiley & Sons，New York，2001，p.187-211，289-452，477-498)。主要的神经递质是血清素、多巴胺、去甲肾上腺素(noradrenaline)(＝去甲肾上腺素(norepinephrine))、乙酰胆碱、谷氨酸、γ-氨基丁酸以及神经肽。与情绪相关病症尤其相关的这些神经递质包括血清素、去甲肾上腺素和多巴胺。这样达成增强或延长的神经传递：通过抑制进入突触前神经末端的再摄取，来提高突触间隙中的神经递质浓度，或通过抑制降解酶(如单胺氧化酶(MAO)-A和-B)来预防神经递质代谢。。

抗抑郁药和情绪相关病症

三环抗抑郁化合物(TCA)如丙米嗪(imipramine)、阿米替林(amitriptyline)和氯米帕明(clomipramine)抑制血清素和去甲肾上腺素的再摄取。它们被广泛认为是属于可获得的最有效的抗抑郁药，但是它们具有大量缺点，因为它们还与毒蕈碱乙酰胆碱-、组胺-和血清素-受体相互作用。这些活性导致的副作用除包括体位性低血压以外还包括口干燥、视力模糊、便秘和尿潴留。最重要的是，过量服用TCA是不安全的，通常显示急性心脏毒性。

另一类抗抑郁药是阻断血清素转运蛋白(SERT)的所谓的SSRI(选择性血清素再摄取抑制剂)，包括氟西汀(fluoxetine)、帕罗西汀(paroxetine)、舍曲林(sertraline)、西酞普兰(citalopram)和氟伏沙明(fluvoxamine)，它们能封闭血清素转运蛋白(SERT)——高亲和性的氯化钠依赖性神经递质转运蛋白，其通过摄取5-羟色胺来终止血清素激活的神经传递。。它们已被证明在治疗抑郁和焦虑症时与TCA同样有效，但是通常能被更好地耐受。这些药物通常以低剂量开始，并提高至其达到治疗水平。常见的副作用是恶心。其它可能的副作用包括降低的食欲、口干燥、出汗、感染、便秘、震颤、呵欠、嗜睡和性功能障碍。

另外，通过抑制MAOs-A和-B更广泛地预防神经递质代谢的化合物显示抗抑郁的作用。MAOs催化含胺基的神经递质如血清素、去甲肾上腺素和多巴胺的氧化。

另外，神经传递的调节剂(modulator)对精神和认知功能显示多效作用。

存在对治疗或预防精神疾病和/或病症的化合物的需要，所述化合物不显示已知抗抑郁药的不利副作用。许多患者对下述备选疗法感兴趣，所述备选疗法能够最小化高剂量药物相关的副作用，并产生累加的临床益处。严重的抑郁是一种长期并复发的疾病，其通常很少被诊断出来。另外，许多患者患有温和或中度严重的抑郁。因此，对下述化合物以及药物和/或膳食组合物开发的兴趣越来越大，所述化合物或组合物可被用于在风险人群中治疗精神疾病/病症或预防精神疾病/病症(如抑郁)的发生，和稳定情绪并达到感情平衡。

患者通常遭受由于GAD的复合病变(comorbidity)到抑郁或孤独，所述GAD是初级护理(～10％患者)中一种高度盛行的焦虑病症和慢性病(Wittchen，et al 2005 Eur.Neuropsycho.15：357-376)。患者对他们的初级护理医师表达多种生理症状。GAD的特征是慢性紧张和焦虑的担忧和紧张(＞6个月)，这是无能为力并且不能控制的，并且伴随着特征性的警觉过度综合征(包括坐立不安、肌肉紧张和睡眠问题)。如果不治疗的话，GAD进行慢性的、波动的过程，并趋向于随着年龄变得越来越严重。GAD患者遭受亚综合征(subsyndromal)的抑郁，并作用于所有焦虑症和抑郁病症的最高的总体直接和间接健康经济负担。尽管GAD发病率高，但是很少有患者被诊断、开出药物处方或接受精神病治疗；需要帮助患者识别和监测的简单诊断工具。即使有特异的诊断，医师仍需要有效的GAD-症状疗法。SSRI如帕罗西汀对GAD治疗是有效的(Stocchi et al.2003，J.Clin.Psych.，63(3)：250-258)。另外，全身性评估和有安慰剂作对照的RCT(随机化的临床试验)表明一些SSRI(依他普仑(escitalopram)、帕罗西汀和舍曲林)、SNRI(选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂)文拉法辛(venlafaxine)、一些苯并二氮杂卓类(阿普唑仑(alprazolam)和地西泮(diazepam))、TCA、丙米嗪和5-HT_1A部分激动剂、丁螺环酮在急性治疗中均是有效的。一般而言，治疗的影响通常是中等的，当治疗周期停止时症状复发。因此，使用具有比SSRI更少的副作用并可长时间应用的化合物进行连续长期治疗或预防可能比药物治疗更有利。

情绪病症和职业压力(occupational stress)可导致睡眠障碍、失眠、低睡眠质量和昼夜节律(所谓的生物节律)的整体性失调；这些病症的性质通常是慢性和持久的。另外，由远距离航班(飞行时差(jet-lag))和轮班工作导致的昼夜节律失调可引起相似的症状和苦恼(distress)。因此，可能最期望的是用膳食补剂治疗，以维持正常的昼夜节律(人或动物所习惯的昼夜节律)和/或减轻和预防与紊乱的昼夜节律相关的症状，如认知功能和记忆损伤，和精神和生理疲劳。

发明详述

迷迭香提取物及其优选的组分

根据本发明已发现，迷迭香提取物可用于药物中，所述药物用于治疗与降低的神经传递相关的病症。具体地，该要求由通过以下工艺制造的这些迷迭香提取物满足，所述工艺包括下述步骤：

-研磨干燥的Rosmarinus officinalis叶；

-用丙酮提取步骤a)的叶，获得丙酮提取物；

-任选地(优选地)过滤所述丙酮提取物；

-通过(部分地，优选几乎全部地)去除丙酮，浓缩所述丙酮提取物；

-任选地(优选地进一步)喷雾干燥由此浓缩的丙酮提取物。

由此制造的迷迭香提取物含有以迷迭香提取物总重为基础＞35重量-％的鼠尾草酸，优选地＞40重量-％的鼠尾草酸，优选地＞50重量-％的鼠尾草酸。由此制造的迷迭香提取物特别适用于本发明的目的。

特别适用于本发明目的的迷迭香提取物含有：

-迷迭香酚，优选地在从0.05到3重量-％的范围内，更优选地在从0.1到1.0重量-％的范围内，最优选地在从0.2到0.7重量-％的范围内，

-鼠尾草酚，优选地在从0.5到7.0重量-％的范围内，更优选地在从1到5.0重量-％的范围内，最优选地在从2.5到4.0重量-％的范围内，

-鼠尾草酸，优选地在从20到65重量-％的范围内，更优选地在从25到60重量-％的范围内，最优选地在从30到55重量-％的范围内；和

-鼠尾草酸12-甲基醚，优选地在从1到20重量-％的范围内，更优选地在从5到15重量-％的范围内，最优选地在从7到12重量-％的范围内，

上述物质是以迷迭香提取物的总重为基础，并是使用纯物质作为参考，通过HPLC-UV(高效液相色谱-紫外线)在210nm处测量的。

“迷迭香酚”表示外消旋混合物以及纯(4aR，9S，10aS)-迷迭香酚或纯(4aS，9R，10aR)-迷迭香酚或它们的任何混合物或非对映异构体。(4aR，9S，10aS)迷迭香酚是优选的。

“鼠尾草酚”表示外消旋混合物以及纯(4aR，9S，10aS)-鼠尾草酚或纯(4aS，9R，10aR)-鼠尾草酚或它们的任何混合物或非对映异构体。(4aR，9S，10aS)-鼠尾草酚是优选的。

“鼠尾草酸”表示外消旋混合物以及纯(4aR，10aS)-鼠尾草酸或纯(4aS，10aR)-鼠尾草酸或它们的任何混合物或非对映异构体。(4aR，10aS)-鼠尾草酸是优选的。

“鼠尾草酸12-甲基醚”表示外消旋混合物以及纯(4aR，10aS)-鼠尾草酸12-甲基醚或纯(4aS，10aR)-鼠尾草酸12-甲基醚或它们的任何混合物或非对映异构体。(4aR，10aS)-鼠尾草酸12-甲基醚是优选的。

迷迭香提取物及其组分的用途

因此，本发明一方面涉及迷迭香提取物，其用作治疗与降低的神经传递相关病症的药物。

另一方面，本发明涉及迷迭香提取物用于制造组合物(其用于治疗与降低的神经传递相关的病症)的用途，尤其是用于制造抗抑郁药、情绪/生活力改善剂、减压剂(stress reliever)、状况改善剂(condition improver)、焦虑减轻剂(reducer of anxiety)、强迫行为减轻剂(reducer of obsessive-compulsive behaviour)、弛缓剂(relaxant)、睡眠改善剂(sleep improver)和/或失眠缓解剂(insomnia alleviator)的用途。

还在另一方面中，本发明涉及膳食组合物以及药物组合物，所述膳食组合物包含如上定义的迷迭香提取物，所述药物组合物包含如上定义的迷迭香提取物和常规的药物载体。

另外，本发明涉及在动物(包括人)中治疗与降低的神经传递相关的病症的方法，所述方法包括对需要其的动物(包括人)施用如上定义的有效剂量的迷迭香提取物。

在本发明的上下文中，动物包括人，并包括哺乳动物、鱼和鸟。优选的“动物”是人、宠物和伴侣动物和农业动物。宠物和伴侣动物的例子是犬、猫、鸟、水族箱鱼(aquarium fish)、荷兰猪、(jack)兔、野兔和雪貂。农业动物的例子是鱼、猪、马、反刍类(牛、绵羊和山羊)和家禽。

在本发明的上下文中，“治疗”也包括共同治疗以及预防。“预防”可表示第一次发生(一级预防)或复发(二级预防)。

术语“降低的神经传递”在本申请中根据本领域技术人员公知的含义被使用，并涉及神经传递的失调，所述失调可在神经递质生物合成、加工、储存、释放、再摄取和受体结合的水平上发生。降低的神经传递在动物(包括人)中可自身表现为行为、感情、情绪和思考过程紊乱，例如表现为多种类型的抑郁之一。

因此，本发明还涉及在动物(包括人)中预防与降低的神经传递相关的病症的方法，所述方法包括对有需要的动物(包括人)施用有效量的迷迭香提取物，偏好如上所述。在这一点上，有效量的迷迭香提取物可特别用于维持精神正常，用于维持平衡的认知功能，用于帮助降低情绪波动的风险，用于帮助保持积极的情绪和用于支持认知健康，和用于帮助维持良好的睡眠质量。

在本发明的上下文中，术语“病症”还包括疾病。

用于治疗与降低的神经传递相关的病症的药物包括抗抑郁药、情绪/生活力改善剂、减压剂、状况改善剂、焦虑减轻剂和强迫行为减轻剂、弛缓剂、睡眠改善剂和/或失眠缓解剂。它们均改善、增强和支持神经传递，特别是在中枢神经系统中，并因而减轻精神功能障碍。

抗抑郁药是用于治疗精神-、行为-和感情/情感-、神经-、神经变性-、进食-和压力-相关病症的药物/组合物，所述病症如单相抑郁、双相抑郁、急性抑郁、慢性抑郁、亚慢性抑郁、抑郁症、产后抑郁、月经前病理性心境恶劣(dysphoria)/综合征(PMS)、更年期抑郁综合征、攻击、注意力缺陷病症、社交焦虑症、季节性情感障碍和焦虑(病症)如GAD、纤维肌痛综合征、创伤后应激病症、惊恐性障碍(panic disorders)和强制性障碍(obsessive-compulsive disorders)、下肢不宁综合征(restless leg syndrome)、神经质、偏头痛/原发性头痛和一般性疼痛、呕吐、食欲过盛、神经性厌食、狂饮-进食障碍、胃肠道病症、身心衰竭综合征(burn-out syndrome)和易激惹(irritability)。

抗抑郁药也可用于(制造组合物，所述组合物用于)对神经认知损伤进行一级和二级预防和/或治疗。另外，它们也有效治疗抑郁症状或与受干扰的神经传递相关的其它症状，所述受干扰的神经传递作为慢性疾病(如心血管疾病、中风、癌症、阿尔茨海默病、帕金森氏症及其它)中的复合病变发生。

因此，如上定义的迷迭香提取物以及含有它们的膳食/药物组合物适用于治疗动物(包括人)。

在本发明的又一实施方案中，迷迭香提取物可用作一般情绪改善剂，以及用于制造用于这类用途的组合物(膳食/药物组合物)。“情绪改善剂”、“感情健康加强剂”或“生活力改善剂”表示经其治疗的人情绪增强，自我尊重提高，和/或负面想法减少。还表示感情平衡，和/或一般(特别是精神)健康和生活力被改善或维持，以及情绪波动的风险(被帮助)降低，和正面情绪(被帮助)保留。

如上定义的迷迭香提取物一般也可用作用于动物(包括人)的焦虑减轻剂和/或强迫行为减轻剂；优选地用于人、宠物动物和农业动物。

“焦虑减轻剂”表示慢性紧张和焦虑的担忧和紧张被减少或减轻。警觉过度综合征(Hypervigilance syndrome)被减少或缓解，其包括不安(restlessness)、肌肉紧张(muscle tension)和睡眠问题。社交恐怖症和其它恐怖症被解决。一般而言，社交环境被体验为较不具有威胁性。所述人感情放松，体验舒适并享受陪伴和与其它人的接触。

“弛缓剂”、“睡眠改善剂”或“失眠缓解剂”表示改善睡眠开始比国内帮助人容易地进入睡眠，以整晚维持不受干扰的睡眠。其还表示归因于喷气机综合征(jet-lag)或轮班工作的昼夜节律相关的睡眠紊乱被纠正，与失眠相关的症状(即认知功能和记忆受损，精神和生理疲劳，多梦)被除去或缓解，总体生活质量和生机能量(vital energy)被提高。

另外，迷迭香提取物以及包含有效剂量的它们的组合物可用于治疗、预防和缓解压力相关的症状，用于治疗、预防和缓解与超负荷工作、衰竭和/或身心衰竭相关的症状，用于提高对压力的抗性或耐性，和/或在正常健康个体中支持和促进放松，即这些组合物具有“减压剂”的作用。

本发明的又一实施方案涉及如上定义的迷迭香提取物和含有它们的组合物(膳食/药物组合物)作为“状况改善剂”的用途，即作为下述手段的用途，所述手段用于在患病或正常的健康个体中降低应激性和疲劳，降低、预防或缓解生理和精神疲劳，和在更普遍的情况下提高能量，特别是提高脑能量生产。

它们还可用于一般认知改善，用于调节饥饿和饱满感，以及用于调节运动活动。

本发明不仅涉及用作药物、特别是用于治疗与降低的神经传递相关的病症的、如上定义的迷迭香提取物及其组合物(含有它们的膳食/药物组合物)，而且也涉及如上文已提到的、用于治疗这些病症的方法自身。

兽医用途

宠物和农业动物可处于需要增强的或改善的神经传递的状态下，所述增强或改善的神经传递可由本发明提供。动物可针对压力情况显示不利的行为和/或生理反映；在大量生产环境中饲养或在不利条件下运输的动物可显示肉或乳品质或数量的降低；应激的家禽可采取拔掉羽毛(feather-picking)、减少产卵和同种相残。许多动物在不利的居住或运输条件下会变得好斗或显示刻板-(stereotypic-)、焦虑-和强迫的行为。

因此，本发明的另一方面是如上定义的迷迭香提取物作为膳食/药物组合物的兽医用途。

在本发明的一个优选的实施方案中，如上文定义的迷迭香提取物被施用，用于在农业动物中和大量生产的家畜饲养业、运输至屠宰场期间预防压力，和/或用于预防这类环境下所述农业动物的肉品质损失。农业动物优选地是家禽、牛、绵羊、山羊和猪。

在本发明的另一个优选的实施方案中，如上文定义的迷迭香提取物被施用给家禽，用于预防拔掉羽毛和同种相残，所述拔掉羽毛和同种相残导致例如肉品质和卵生产的损失。

本发明的另一方面是在水产养殖中预防和/或缓解压力的方法，包括对有需要的动物施用如上文定义的迷迭香提取物，其中所述动物是鱼或虾。

在本发明的另一个优选的实施方案中，如上文定义的迷迭香提取物被施用给宠物或陪伴动物，用于减轻在压力条件下显示的压力、紧张和进攻性和强迫行为，所述压力条件如主人的分离、改变或丢失，假日分离期间和所谓的“动物旅馆”中的饲养，和动物保护地或保护区中的饲养。

本发明的再一方面是在用于皮毛工业的动物(优选地为水貂、狐狸和野兔)中预防/减少与压力条件相关症状的方法。

本发明优选的剂量和组合物

就本发明的目的而言，用于人的迷迭香提取物的合适的每日剂量可以在每天每kg体重0.001mg到每kg体重100mg的范围内。更优选的是每kg体重从0.01到10mg范围内的每日剂量，特别优选的是每kg体重从0.05到5.0mg范围内的每日剂量。

术语“膳食组合物”包括任何类型的(强化)食物/饲料和饮料，还包含临床营养品和膳食补充剂。根据本发明的膳食组合物可还含有保护性水胶体(如胶质、蛋白质、改性淀粉)、粘合剂、成膜剂、包封剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活性剂、增溶剂(油、脂肪、蜡、卵磷脂等等)、吸附剂、载体、填充剂、辅助化合物、分散剂、湿润剂、加工助剂(溶剂)、流动剂、遮味剂、增重剂、啫喱化剂(jellyfyingagents)、凝胶形成剂、抗氧化剂和抗微生物剂。

除了可药用载体和如上定义的迷迭香提取物以外，根据本发明的药物组合物还可含有常规的药物添加剂和佐剂、赋形剂或稀释剂(包括但不限于水、任何来源的明胶、植物胶、木质素磺酸盐、滑石、糖、淀粉、阿拉伯胶、植物油、聚亚烷基二醇)、调味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、润滑剂、着色剂、湿润剂、填充剂等等。载体材料可以是适用于口/肠胃外/可注射施用的有机或无机惰性载体。

根据本发明的膳食和药物组合物可以是适用于对动物体(包括人体)施用的任何盖仑形式(galenic form)，特别是对经口施用而言常规的任何形式，例如固体形式如食物或饲料(用于食物或饲料的添加剂/补充剂)、食物或饲料预混合物、强化的食物或饲料、片剂、丸剂、颗粒剂、锭剂、胶囊和泡腾配制物如粉末和片剂，或液体形式如溶液、乳液或悬浮液，如例如饮料、糊剂和油悬浮液。糊剂可以被填充进硬壳或软壳胶囊中，从而胶囊具有例如(鱼、猪、家禽、奶牛)明胶、植物蛋白或木质素磺酸盐的基质。其它应用形式的例子是用于经皮、肠胃外或可注射施用的形式。膳食和药物组合物可以是受控(延迟)释放配制物的形式。

强化食物的例子是谷物棒和烘焙物如蛋糕和曲奇。

饮料包括无醇饮品和含酒精的饮品，以及要添加进饮用水和液体食物中的液体制剂。无醇饮品为例如软饮、运动饮品、果汁、柠檬水、茶和基于乳的饮品。液体食物为例如汤和乳制品(例如什锦谷物饮品)。

在用于人的固体剂量单位制剂中，迷迭香提取物以下述用量适当地存在，所述用量在每剂量单位从0.1mg到1000mg的范围内，优选地在从1mg到500mg的范围内。

在膳食组合物，特别是用于人的食物和饮料中，迷迭香提取物以下述量适当地存在，所述量以食物或饮料的总重为基础从0.0001(1mg/kg)到5重量-％(50g/kg)的范围内，优选地在从0.001(10mg/kg)到1重量-％(10g/kg)的范围内，更优选地在从0.01(100mg/kg)到0.5重量-％(5g/kg)的范围内。

在本发明的一个优选的实施方案中，在食物和饮品中，迷迭香提取物的量在每份从10到30mg的范围内，即每kg食物或饮品约120mg。

就本发明的目的而言，对除人之外的动物，迷迭香提取物的合适的每日剂量可在每天每kg体重从0.001mg到每kg体重1000mg的范围内。更优选的是在每kg体重从0.1mg到500mg的范围内的每日剂量，特别优选的是每kg体重从1mg到100mg范围内的每日剂量。

本发明通过以下的实施例进一步阐述。

实施例

实施例1

制备迷迭香提取物

将干燥的Rosmarinus officinalis叶磨碎然后用丙酮提取。过滤由此获得的丙酮提取物，并通过去除丙酮进行浓缩。然后喷雾干燥经浓缩的丙酮提取物。

由此产生的迷迭香提取物(来自Naturex，Avignon，法国的“Oxy’less”(No.993369))含有：

0.5重量-％的迷迭香酚，

3.3重量-％的鼠尾草酚，

36.7重量-％的鼠尾草酸，和

9.0重量-％的鼠尾草酸12-甲基醚，

这均以迷迭香提取物的总重为基础，并是用纯物质作为参考通过HPLC-UV在210nm处测量的。

用于体内效力研究(实施例4和5)的特定剂量迷迭香提取物中含有的各组分含量如下：

实施例2

迷迭香提取物对血清素摄取的抑制

从R.Blakely，Vanderbilt University，USA获得稳定表达人血清素再摄取转运蛋白(hSERT)的人胚肾(HEK-293)细胞。在含10％经透析的胎牛血清(Invitrogen)、青霉素、链霉素、L-谷氨酰胺和抗生素G418的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基(Bioconcept)中培养常规地细胞，并通过胰蛋白酶消化来对细胞加以传代。测定当天，通过用温热的磷酸盐缓冲盐水(PBS)柔和洗涤，从80％汇合烧瓶中收集细胞。然后通过离心将细胞洗涤一次，并以160μl缓冲液中10,000个细胞的浓度重悬于补充了35μM帕吉林(pargyline)、2.2mM CaCl₂、1mM抗坏血酸和5mM N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-甲磺酸(HEPES缓冲液)的Krebs-Ringer碳酸氢盐缓冲液(Sigma)中，并以每孔10,000个细胞分装于圆底聚丙烯96-孔微量滴定板(Corning)中。如下测定进入细胞的血清素摄取：以20nM的浓度添加放射性标记的[³H]-血清素(GE Healthcare)，并在37℃下柔和摇动孵育40分钟。这段时间结束时，使用Tomtec Mach III M细胞收获仪，通过滤经Unifilter 96GF/B平板(Perkin Elmer)去除未掺入的标签。使用Microscint-40/Topcount(PerkinElmer)，通过液体闪烁计数法定量保留在平板上的被掺入的血清素。

如下测定根据实施例1获得的迷迭香提取物对血清素摄取的影响：在添加[³H]-血清素之前10分钟或期间，将其以0.03和100μg/ml的浓度范围包含在测定中。使用SSRI、氟西汀(0.03nM-1μM)作为参考化合物。迷迭香提取物以剂量依赖性的方式抑制血清素通过转运蛋白的摄取。表1中显示针对迷迭香提取物和氟西汀对血清素摄取的抑制所计算的IC₅₀值。

表1：迷迭香提取物和氟西汀对血清素摄取进入经转染的HEK-293细胞的抑制。数据显示为均值±标准误差，其中进行了多次测定。

物质	氚标记的血清素摄取的IC₅₀
		迷迭香提取物(根据实施例1)	6.9±1.4μg/ml(n＝2)
氟西汀	5nM

实施例3

迷迭香提取物对单胺氧化酶的抑制

有机胺对-酪胺或苄胺分别被用作单胺氧化酶A(MAO-A)和B(MAO-B)酶的底物。通过与香草酸的反应定量该反应产生的H₂O₂，所述与香草酸的反应由辣根过氧化物酶(HRP)催化。

反应于37℃下在聚苯乙烯微量滴定板中进行。将MAO酶(终浓度2U/ml)与适宜的对-酪胺(Sigma，终浓度0.5mM)或苄胺(Sigma，终浓度0.5mM)任一和生色溶液(含香草酸(Fluka)、4-氨酰安替比林(Fluka)和辣根过氧化物酶(Sigma)，终浓度分别为0.25mM、0.125mM和1U/ml)在0.2M磷酸钾缓冲液pH 7.6中混合。孵育40分钟后，在微量滴定板吸光度读数器例如Spectramax M5(Molecular Devices Corporation)中于495nm下分析平板。

在与底物孵育之前10分钟和孵育期间，通过在测定中包含浓度范围在0.03和100μM/ml之间的迷迭香提取物，测定它们对单胺氧化酶的影响。为了测定提取物对HRP-催化的反应部分的影响，用H₂O₂(MolecularProbes，终浓度50μM)代替MAO酶。含MAO-A和MAO-B的反应均以浓度依赖的方式被迷迭香提取物抑制，而对照反应未受影响。针对迷迭香提取物对单胺氧化酶活性的抑制所测量的IC₅₀值对于MAO-A和MAO-B而言分别为0.93±0.13μg/ml和3.0±0.4μg/ml(在各情况下n＝2)。

实施例4

Porsolt′s强制游泳测试中迷迭香提取物对行为的影响

强制游泳测试(Forced Swim Test，FST)在1977年被首次报道，用于在大鼠中筛选抗抑郁药样化合物(Porsolt et al 1977 Nature，266：730-732)，并且之后被改造用于测试小鼠(Porsolt et al 1977 Arch.Int.Pharmacodynamie，229：327-336)。藉此论证了“行为绝望(Behavioural despair)”，当强迫大鼠或小鼠在无处可逃的水桶中游泳时，它们最初会显示有力的、以逃避为方向的(escape-oriented)活动，但是最后只进行保持它们头在水上所必需的这些最小动作。测试显示对具有针对抑郁的有效治疗活性的一系列药物是敏感的，所述药物中的一些先前在现有的行为模型中未显示效力。

将小鼠个别地置于无处可逃的含13.5cm水(22℃)的桶内(高度＝24.5cm，直径＝19.5cm)。将小鼠置于水中6分钟，测量最后4分钟期间的不移动(immobility)持续时间。每组研究十只小鼠。在272、409、和545mg/kg体重下，测试前24、5和1小时口服施用，来评价迷迭香提取物(溶于玉米油中)，并与载体处理的对照组比较。使用在相同实验条件下施用的丙米嗪(32mg/kg，口服；溶于蒸馏水中)作为参考物质。通过使用单通道变量分析(ANOVA)和Bonferroni post-hoc检验比较所有组来分析数据。

表2：口服(-24，-5，-1h)施用后小鼠FST中迷迭香提取物(RE)和丙米嗪的影响。数据显示为均值±标准差(n＝9-10)和相对于对照的％改变，其中NS＝不显著的，^**p＜0.01。

结果显示迷迭香提取物(409和545mg/kg)表现了显著的抗抑郁药样活性，这与丙米嗪相似。

实施例5

迷迭香提取物对血清素和去甲肾上腺素脑水平的影响(大鼠中的体内微量渗析)

将成年雄性Sprague Dawley大鼠麻醉(水合氯醛，400mg/kg腹膜内)，然后在背海马中植入单个微量渗析探针(BASi MD2200型，2mm膜，30,000道尔顿的分离点)，用牙科粘固粉(dental cement)固定在位置上，并以1ml/分钟输注人工脑脊液(aCSF)。在所有实验中一直将体温维持于36℃。如下测定细胞外血清素(5-HT)和去甲肾上腺素(NA)水平：每15分钟收集灌注液样品，并使用高效液相色谱(HPLC)用电化学检测来测定。HPLC流动相(5-HT分析：0.5mM EDTA、0.1M一氯醋酸，pH 3.1、0.15g/L辛基硫酸钠、5％乙腈、0.7％四氢呋喃；NA分析：0.5mM EDTA、0.1M NaH₂PO₄，pH 3.1、1mM辛基硫酸钠、6％乙腈)以70μl/分钟被抽吸经过该体系。使用带有5μl注射环的反相1x 100mm ODS 3μm微孔柱分离单胺，并使用Epsilon电化学检测器(BASi)检测，所述检测器带有相对于Ag/AgCl参比电极设置为⁺650mV的玻璃状碳电极。通过将峰洗脱时间与参考标准比较鉴定透析液峰，并使用线性回归分析根据峰面积的测量定量。

在开始微量渗析后(-30和-15分钟)收集的最初两份灌注液样品被用于基线测量，而样品收集持续到最后的化合物施用后90分钟。将迷迭香提取物悬浮于玉米油中，并在0和90分钟腹膜内施用(分别为27和81mg/kg)。

如下计算各剂量的提取物对血清素和去甲肾上腺素总量的影响：在取样周期中于每次剂量施用后估计曲线下面积(AUC)。使用双通道ANOVA，随后使用Bonferronit检验(Graphpad Prism)在各个剂量上进行post-hoc比较，将迷迭香提取物的影响与载体对照组比较，所述影响被计算为基础值的百分比。

表3：迷迭香提取物(RE)对累积的5-HT和NA释放的影响，被测量为施用每个剂量后90分钟期间的AUC。数据显示为％基础值；NS＝不显著的，^*p＜0.05，与对照值相比。

在每个剂量后，5-HT水平瞬时提高，但是随后恢复至与载体相似的值。然而，根据在整个处理时间中的计算，处理不存在显著影响(F(1，102)＝2.689；p＞0.05)，并且当计算为每个剂量后的AUC时，处理没有显著影响(F(1，15)＝1.02；p＞0.05)。在较低的剂量后，NA水平无改变，但是较高的剂量后存在小的(约10％)但是持久的NA水平提高。因此，在整个处理时间中计算时(F(1，128)＝17.63；p＜0.001)，和计算为每个剂量后的AUC时(F(1，20)＝6.84；p＜0.05)，均存在处理的显著影响。

因此，使用体内微量渗析，根据实施例1的迷迭香提取物证明有提高脑细胞外血清素水平的趋势，同时诱导细胞外去甲肾上腺素的显著提高。

实施例6

制备软明胶胶囊

制备包含以下成分的软明胶胶囊：

成分	每粒胶囊的用量
		迷迭香提取物	500mg
卵磷脂	50mg
		大豆油	250mg

可对成人每天施用两粒胶囊持续3个月，用于治疗温和的慢性抑郁症。

实施例7

制备软明胶胶囊

制备包含以下成分的软明胶胶囊：

成分	每粒胶囊用量
		迷迭香提取物	200mg
月见草油	300mg
		维生素B₆	100mg

应当每天服用一粒胶囊持续14天，优选地在月经周期的下半部分服用，用于治疗月经前期综合征和月经前焦虑障碍。

实施例8

制备片剂

可制备包含以下成分的片剂：

对于一般健康、供能和减轻压力而言，每天两次服用一粒药片，持续3个月。

实施例9

制备即食的调味软饮

成分	量[g]
		迷迭香提取物	0.9
蔗糖，精细粉末	922.7
		抗坏血酸，精细粉末	2.0
柠檬酸，无水粉末	55.0
		柠檬味香料	8.0
柠檬酸钠，无水粉末	6.0
		磷酸三钙	5.0
β-胡萝卜素1％CWS来自DNP AG，Kaiseraugst，瑞士	0.4
		总量	1000

将所有成分混合并筛过500μm的筛网。将得到的粉末置于适宜的容器中，并在管状搅拌机中至少混合20分钟。为了制备饮品，向获得的125g混合的粉末中添加足量水，制备一升饮料。

即饮型软饮每份(250ml)含有约30mg迷迭香提取物。作为增强剂(strengthener)或对一般健康而言，每天应当引用2份(240ml)。

实施例10

制备强化的非烘焙的谷物棒

成分	量[g]
		迷迭香提取物	0.95
糖	114.55
		水	54.0
盐	1.5
		葡萄糖浆	130.0
转化糖浆	95.0
		山梨醇糖浆	35.0
棕榈仁油脂	60.0
		烘焙油脂	40.0
卵磷脂	1.5
		硬化的棕榈油	2.5
干燥并切开的苹果	63.0
		玉米脆	100.0
脆米酥(Rice crispies)	120.0
		脆麦酥(Mini Crispini，Wheat)	90.0
烤榛子	40.0
		脱脂乳粉	45.0
苹果味香料74863-33	2.0
		柠檬酸	5.0
总量	1000

将迷迭香提取物与脱脂乳粉预混合，并置于行星式碗状搅拌机(planetary bowl mixer)中。添加玉米脆和脆麦酥，将整体柔和混合。然后添加干燥和切开的苹果。在第一烹调罐中，以上文给定的量混合糖、水和盐(溶液1)。在第二烹调罐中，以上文给定的量混合葡萄糖浆、转化糖浆和山梨醇糖浆(溶液2)。烘焙油脂、棕榈仁油脂、卵磷脂和乳化剂是油脂相。将溶液1加热至110℃。将溶液2加热至113℃，然后在冷水浴中冷却。之后将溶液1和溶液2合并。在水浴中于75℃下熔化油脂相，然后添加至溶液1和2的合并混合物中。向液体的糖-油脂混合物中添加苹果味香料和柠檬酸。将液体物料添加至干燥成分中，并在行星式碗状搅拌机中充分混合。将物料置于大理石板上，并滚至期望的厚度，然后冷却至室温，并切件。未烘焙的谷物棒每份(30g)含有约25mg迷迭香提取物。对于一般健康和供能而言，每天应食用1-2只谷物棒。

实施例11

用于缓解压力和使狗恢复生机(revitalising)的含迷迭香提取物的干燥狗饲料

以足够施用给受试者以迷迭香提取物重量为基础每kg体重50mg每日剂量的量，用迷迭香提取物溶液对狗用商业基础膳食(例如Mera Dog“Brocken”，MERA-Tiernahrung GmbH，Marienstraβe 80-84，D-47625Kevelaer-Wetten，德国)加以喷雾。将食物组合物干燥至含有按重量计约90％的干物质。对于每天消耗约200g干饲料的10kg体重的平均狗而言，狗食物含有约2500mg迷迭香提取物/kg食物。对更重的狗而言，相应地制备饲料混合物。

实施例12

含迷迭香提取物的湿润猫食物

将足够施用给受试者以干迷迭香提取物重量为基础每kg体重100mg每日剂量的量的迷迭香提取物溶液与猫用商业基础膳食(例如Happy Cat“Adult”，Tierfeinnahrung，Südliche Hauptstraβe 38，D-86517 Wehringen，德国)混合。对于消耗约400g湿润食物5kg体重的平均猫而言，猫食物含有1250mg/kg的迷迭香提取物。将食物组合物干燥至含有按重量计约90％的干物质。

实施例13

含迷迭香提取物的狗调剂物

以足够施用给调剂者(treats)以干迷迭香提取物重量为基础每g调剂物(treats)5-50mg的量，用迷迭香提取物溶液对商业狗调剂物(例如由Mera Tiernahrung GmbH，Marienstrasse 80-84，47625 Kevelaer-Wetten，德国提供的狗用Mera Dog“Biscuit”)进行喷雾。将食物组合物干燥至含有按重量计约90％的干物质。

实施例14

含迷迭香提取物的猫调剂物

以足够施用给调剂者以干迷迭香提取物重量为基础每g调剂物5-50mg的量，用迷迭香提取物溶液对商业猫调剂物(例如由Whiskas，Masterfoods GmbH，Eitzer Str.215，27283 Verden/Aller，德国提供的猫用Whiskas Dentabits)进行喷雾。将食物组合物干燥至含有按重量计约90％的干物质。

Claims

1.迷迭香叶丙酮提取物用于生产下述组合物的用途，所述组合物是抗抑郁药、情绪/生活力改善剂、减压剂、状况改善剂、焦虑减轻剂、强迫行为减轻剂、弛缓剂、睡眠改善剂和/或失眠缓解剂，其中，所述丙酮提取物包含：

从0.05到3重量-％的范围内的迷迭香酚，

从0.5到7重量-％的范围内鼠尾草酚，

从20到65重量-％的范围内的鼠尾草酸，和

从1到20重量-％的范围内的鼠尾草酸12-甲基醚；

其中，所有的量以所述丙酮提取物的总重为基础。

2.迷迭香叶丙酮提取物用于生产膳食组合物的用途，其中，所述丙酮提取物包含：

从0.05到3重量-％的范围内的迷迭香酚，

从0.5到7重量-％的范围内鼠尾草酚，

从20到65重量-％的范围内的鼠尾草酸，和

从1到20重量-％的范围内的鼠尾草酸12-甲基醚；

其中，所有的量以所述丙酮提取物的总重为基础。

3.如权利要求2所述的用途，其中所述膳食组合物是食物或饲料。

4.如权利要求2所述的用途，其中所述膳食组合物是膳食补充剂。

5.迷迭香叶丙酮提取物用于生产用于兽医用途的产品的用途，其中，所述丙酮提取物包含：

从0.05到3重量-％的范围内的迷迭香酚，

从0.5到7重量-％的范围内鼠尾草酚，

从20到65重量-％的范围内的鼠尾草酸，和

从1到20重量-％的范围内的鼠尾草酸12-甲基醚；

其中，所有的量以所述丙酮提取物的总重为基础。

6.如权利要求5所述的用途，其中所述用于兽医用途的产品是膳食/药物组合物。

7.迷迭香叶丙酮提取物用于生产药物组合物的用途，其中，所述丙酮提取物包含：

从0.05到3重量-％的范围内的迷迭香酚，

从0.5到7重量-％的范围内鼠尾草酚，

从20到65重量-％的范围内的鼠尾草酸，和

从1到20重量-％的范围内的鼠尾草酸12-甲基醚；

其中，所有的量以所述丙酮提取物的总重为基础。

8.如权利要求7所述的用途，其中所述药物组合物含有所述丙酮提取物和常规药物载体。

9.如权利要求1-8中任意一项所述的用途，其中所述的丙酮提取物通过包含以下步骤的工艺制造：

a)研磨干燥的Rosmarinus officinalis叶；

b)用丙酮提取步骤a)的叶，获得丙酮提取物；

c)任选地过滤所述丙酮提取物；

d)通过去除丙酮，浓缩所述丙酮提取物；

e)任选地喷雾干燥由此浓缩的丙酮提取物。