ES2867748T3 - Agentes inmunorreguladores - Google Patents

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ES2867748T3 ES15857810T ES15857810T ES2867748T3 ES 2867748 T3 ES2867748 T3 ES 2867748T3 ES 15857810 T ES15857810 T ES 15857810T ES 15857810 T ES15857810 T ES 15857810T ES 2867748 T3 ES2867748 T3 ES 2867748T3
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alkyl
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English (en)
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Hilary Plake Beck
Juan Carlos Jaen
Maksim Osipov
Jay Patrick Powers
Maureen Kay Reilly
Hunter Paul Shunatona
James Ross Walker
Mikhail Zibinsky
James Aaron Balog
David K Williams
Jay A Markwalder
Steven P Seitz
Emily Charlotte Cherney
Liping Zhang
Weifang Shan
Weiwei Guo
Audris Huang
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Flexus Bioscience Inc
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Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula (I): **(Ver fórmula)** o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde, el subíndice n es 1 o 0; G es un quinolinilo opcionalmente sustituido; J1 es CH, N o C(R2), cuando R2 está unido al vértice del anillo identificado como J1; R1 y R2 son independientemente hidrógeno, halógeno, haloalquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3- C6 opcionalmente sustituido, cicloheteroalquilo de 3 a 6 miembros opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituido, CN, SO2NH2, NHSO2CH3, NHSO2CF3, OCF3, SO2CH3, SO2CF3 o CONH2, y cuando R1 y R2 están en vértices adyacentes de un anillo de fenilo, pueden unirse para formar un anillo de cicloheteroalquilo de 5 o 6 miembros que tiene uno o dos vértices de anillo seleccionados independientemente entre O, N y S, en donde dicho anillo cicloheteroalquilo está opcionalmente sustituido con uno a tres miembros seleccionado entre flúor y alquilo C1-C3; R3 y R4 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, flúor, OH, CN, CO2H, C(O)NH2, N(R5a)2, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, - (CR5R5)m-OH, -(CR5R5)m-CO2H, -(CR5R5)m-C(O)NH2, -(CR5R5)m-C(O)NHR5a, -(CR5R5)mN(R5a)2, - NH(CR5R5)mCO2H o -NH(CR5R5)m-C(O)NH2; cada R5 es independientemente H, F, OH, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido u -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; cada R5a es independientemente H o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; R6 es H, OH, F, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o -N(R5a)2; y cada m es independientemente 1, 2 o 3; en donde los sustituyentes opcionales para los grupos alquilo se seleccionan entre halógeno, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R''', -NR"C(O)2R', - NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN y -NO2 en un número que varía de cero a (2 m'+1), donde m' es el número total de átomos de carbono en tal radical y R', R" y R''' cada uno se refiere independientemente a hidrógeno, alquilo C1-8 no sustituido, arilo sin sustituir, arilo sustituido con 1-3 halógenos, alquilo C1-8 no sustituido, grupos alcoxi C1-8 o tioalcoxi C1-8, o grupos aril-alquilo C1-4 no sustituidos, en donde cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 3, 4, 5, 6 o 7 miembros; en donde los sustituyentes opcionales para los grupos arilo y heteroarilo se seleccionan entre -halógeno, -OR', - OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2, -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R', -NR'- C(O)NR"R''', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", - N3, perfluoroalcoxi (C1-C4) y perfluoroalquilo (C1-C4), en un número que varía entre cero y el número total de valencias abiertas en el sistema de anillo aromático; y donde R', R" y R''' se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-8, haloalquilo C1-8, cicloalquilo C3-6, alquenilo C2-8 y alquinilo C2-8; y como alternativa cada uno de los anteriores sustituyentes arilo pueden unirse a un átomo del anillo mediante una cadena de alquileno de entre 1-4 átomos de carbono; en donde dos de los sustituyentes en los átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden opcionalmente reemplazarse con un sustituyente de la fórmula -T-C(O)-(CH2)q-U-, en donde T y U son independientemente -NH-, -O-, -CH2- o un enlace sencillo y q es un número entero de 0 a 2; o dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo de arilo o de heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -A-(CH2)r-B-, en donde A y B son independientemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)- , -S(O)2-, -S(O)2NR'- o un enlace sencillo y r es un número entero de 1 a 3; en donde uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo así formado puede sustituirse opcionalmente por un enlace doble; o, dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes de los anillos arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -(CH2)s-X-(CH2)t-, donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3, y X es -O-, -NR'-, -S- , -S(O)-, -S(O)2- o -S(O)2NR'-; en donde el sustituyente R' en -NR'- y -S(O)2NR'- se selecciona entre hidrógeno o alquilo C1-6 sin sustituir.

Description

DESCRIPCIÓN
Agentes inmunorreguladores
Antecedentes de la invención
La indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO; también conocida como IDOI) es un gen diana del IFN-y que desempeña un papel en la inmunomodulación. La IDO es una oxidorreductasa y una de las dos enzimas que catalizan la primera etapa, limitante de la velocidad, en la conversión de triptófano en N-formilquinurenina. Existe como un monómero de 41 kD que se encuentra en varias poblaciones celulares, incluidas las células inmunitarias, las células endoteliales y los fibroblastos. La IDO está relativamente bien conservada entre especies, con el ratón y el ser humano compartiendo una identidad de secuencia del 63 % a nivel de aminoácidos. Los datos obtenidos de su estructura cristalina y por mutagénesis específica del sitio muestran que tanto la unión al sustrato como la relación entre el sustrato y la dioxigenasa unida a hierro son necesarias para la actividad. Se ha identificado un homólogo de la IDO (IDO2) que comparte una homología de secuencia de aminoácidos del 44 % con la IDO, pero su función es en gran medida distinta a la de la IDO. (Véanse, por ejemplo, Serafini, P. et al., Semin. Cancer Biol., 16(1):53-65 (feb. de 2006) y Ball, H.J. et al., Gene, 396(1):203-213 (1 de jul., 2007)).
La IDO desempeña un papel importante en la regulación inmunitaria y su función inmunosupresora se manifiesta de varias maneras. De manera importante, la IDO regula la inmunidad a nivel de linfocitos T y existe un nexo entre la IDO y la producción de citocinas. Además, los tumores manipulan con frecuencia la función inmunitaria mediante la regulación al alza de la IDO. Por tanto, la modulación de la IDO puede tener un impacto terapéutico en varias enfermedades, trastornos y afecciones.
Existe una relación fisiopatológica entre la IDO y el cáncer. La alteración de la homeostasis inmunitaria está íntimamente relacionada con el crecimiento y la progresión tumoral, y la producción de IDO en el microambiente tumoral parece ayudar en el crecimiento y la metástasis tumorales. Además, los niveles aumentados de actividad de la IDO están asociados con diversos tumores distintos (Brandacher, G. et al., Clin. Cancer Res., 12(4):1144-1151 (15 de feb., 2006)).
El tratamiento del cáncer con frecuencia implica una resección quirúrgica seguida de quimioterapia y radioterapia. Los regímenes de tratamiento convencionales muestran grados muy variables de éxito a largo plazo debido a la capacidad de las células tumorales para escapar esencialmente mediante la regeneración del crecimiento del tumor primario y, a menudo, de forma más importante, sembrar metástasis a distancia. Los avances recientes en el tratamiento del cáncer y las enfermedades, trastornos y afecciones relacionadas con el cáncer comprenden el uso de una terapia combinada que incorpora inmunoterapia con quimioterapia y radioterapia más tradicionales. En la mayoría de las circunstancias, la inmunoterapia se asocia con menos toxicidad que la quimioterapia tradicional debido a que utiliza el sistema inmunitario del propio paciente para identificar y eliminar las células tumorales.
Además del cáncer, se ha implicado a la IDO en, entre otras afecciones, inmunosupresión, infecciones crónicas y enfermedades o trastornos autoinmunitarios (por ejemplo, artritis reumatoide). Por tanto, la supresión de la degradación del triptófano mediante la inhibición de la actividad de la IDO tiene un valor terapéutico tremendo. Además, los inhibidores de la IDO pueden utilizarse para potenciar la activación de los linfocitos T cuando los linfocitos T están suprimidos por un embarazo, una neoplasia maligna o un virus (por ejemplo, el VIH). Aunque sus papeles no están tan bien definidos, los inhibidores de la IDO también pueden ser útiles en el tratamiento de pacientes con enfermedades o trastornos neurológicos o neuropsiquiátricos (por ejemplo, depresión).
Se han desarrollado inhibidores de la IDO de molécula pequeña para tratar o prevenir enfermedades relacionadas con la IDO. Por ejemplo, los inhibidores de la IDO 1-metil-DL-triptófano; p-(3-benzofuranil)-DL-alanina; p-[3-benzo(b)tienil]-DL-alanina; y 6-nitro-L-triptófano se han utilizado para modular la inmunidad mediada por linfocitos T al alterar las concentraciones extracelulares locales de triptófano y metabolitos de triptófano (documento WO 99/29310). Los compuestos que tienen actividad inhibidora de la IDO se informan además en las publicaciones PCT n.° WO 2004/094409 y WO 2007/095050.
En vista del papel que desempeña la indolamina 2,3-dioxigenasa en una amplia gama de enfermedades, trastornos y afecciones, y las limitaciones (por ejemplo, eficacia) de los inhibidores de la IDO actuales, se necesitan nuevos moduladores de la IDO, y composiciones y métodos asociados con ellos.
Breve sumario de la invención
La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas. La presente invención se refiere a compuestos que modulan la enzima oxidorreductasa indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) y a composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprenden los compuestos. Dichos compuestos, incluidos los métodos para su síntesis, y las composiciones, se describen en detalle a continuación.
La presente invención también se refiere al uso de tales compuestos y composiciones para el tratamiento y/o la prevención de una amplia gama de enfermedades, trastornos y afecciones mediados, en su totalidad o en parte, por la IDO. Dichas enfermedades, trastornos y afecciones se describen en detalle en otra parte en el presente documento. A menos que se indique otra cosa, cuando los usos de los compuestos de la presente invención se describen en el presente documento, debe entenderse que tales compuestos pueden estar en forma de una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica).
Como se analiza a continuación, aunque se cree que los compuestos de la presente invención efectúan su actividad mediante la inhibición de la IDO, no se precisa una comprensión precisa del mecanismo de acción subyacente de los compuestos para poner en práctica la invención. Se prevé que los compuestos pueden efectuar alternativamente su actividad mediante la inhibición de la actividad de la triptófano-2,3-dioxigenasa (TDO). Se prevé también que los compuestos pueden efectuar su actividad mediante la inhibición de la función tanto de la IDO como de la TDO. Aunque los compuestos de la invención se denominan generalmente en el presente documento inhibidores de la IDO, debe entenderse que la expresión "inhibidores de la IDO" abarca compuestos que actúan individualmente mediante la inhibición de la TDO o la IDO, y/o compuestos que actúan mediante la inhibición tanto de la IDO como de la TDO.
En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos representado por la fórmula (Ia3):
Figure imgf000003_0001
o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde,
el subíndice n es 1 o 0;
G es un quinolinilo opcionalmente sustituido;
J1 es CH, N o C(R2), cuando R2 está unido al vértice del anillo identificado como J1;
R1 y R2 son independientemente hidrógeno, halógeno, haloalquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido, opcionalmente cicloheteroalquilo de 3 a 6 miembros sustituido, opcionalmente fenilo sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituido, CN, SO2NH2 , NHSO2CH3, NHSO2CF3, OCF3 , SO2CH3 , SO2CF3 o CONH2, y cuando R1 y R2 están en vértices adyacentes de un anillo de fenilo, pueden unirse para formar un anillo de cicloheteroalquilo de 5 o 6 miembros que tiene uno o dos vértices de anillo seleccionados independientemente entre O, N y S, en donde dicho anillo cicloheteroalquilo está opcionalmente sustituido con uno a tres miembros seleccionado entre flúor y alquilo C1-C3 ;
R3 y R4 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, flúor, OH, CN, CO2H, C(O)NH2 , N(R5a)2, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -(CR5R5)m-OH, -(CR5R5)m-CO2H, -(CR5R5)m-C(O)NH2 , -(CR5R5)m-C(O)NHR5a, -(CR5R5)mN(R5a)2, -NH(CR5R5)mCO2H o -NH(CR5R5)m-C(O)NH2 ;
cada R5 es independientemente H, F, OH, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido u -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
cada R5a es independientemente H o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
R6 es H, OH, F, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o -N(R5a)2 ; y cada m es independientemente 1,2 o 3,
en donde los sustituyentes opcionales para los grupos alquilo se seleccionan entre halógeno, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN y -NO2 en un número que varía de cero a (2 m'+1), en donde m' es el número total de átomos de carbono en tal radical y R', R" y R"' cada uno se refiere independientemente a hidrógeno, alquilo C1-8 no sustituido, arilo sin sustituir, arilo sustituido con 1-3 halógenos, alquilo C1-8 no sustituido, grupos alcoxi C1-8 o tioalcoxi C1-8, o grupos aril-alquilo C1-4 no sustituidos, en donde cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 3, 4, 5, 6 o 7 miembros;
en donde los sustituyentes para los grupos arilo y heteroarilo se seleccionan entre -halógeno, -OR', -OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2 , -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R', -NR'-C(O)NR"R'", -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -N3 , perfluoroalcoxi (C1-C4) y perfluoroalquilo (C1-C4), en un número que varía entre cero y el número total de valencias abiertas en el sistema de anillo aromático; y en donde R', R" y R'" se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-8, haloalquilo C1-8, cicloalquilo C3-6, alquenilo C2-8 y alquinilo C2-8; y como alternativa cada uno de los sustituyentes arilo pueden unirse a un átomo del anillo mediante una cadena de alquileno de entre 1-4 átomos de carbono; en donde dos de los sustituyentes en los átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden opcionalmente reemplazarse con un sustituyente de la fórmula -T-C(O)-(CH2)q-U-, en donde T y U son independientemente -NH-, -O-, -CH2- o un enlace sencillo y q es un número entero de 0 a 2; o dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -A-(CH2)r-B-, en donde A y B son independientemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- o un enlace sencillo y r es un número entero de entre 1 a 3; en donde uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo así formado puede sustituirse opcionalmente por un enlace doble; o, dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -(CH2)s-X-(CH2)t-, en donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3, y X es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- o -S(O)2NR'-; en donde el sustituyente R' en -NR'- y -S(O)2NR'- se selecciona entre hidrógeno o alquilo C1-6 sin sustituir.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona composiciones en las que los compuestos de fórmula (Ia3) se combinan con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, la presente invención contempla inhibidores de la IDO descritos en el presente documento para su uso en métodos para el tratamiento o la prevención del cáncer en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la IDO descrito en el presente documento. La presente divulgación incluye métodos de tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto mediante la administración al sujeto de un inhibidor de la IDO en una cantidad eficaz para invertir o detener la progresión de la inmunosupresión mediada por la IDO. En algunas realizaciones, la inmunosupresión mediada por la IDO está mediada por una célula presentadora de antígenos (CPA).
Los ejemplos de los cánceres que pueden tratarse utilizando los compuestos y composiciones descritos en el presente documento incluyen, pero sin limitación: cánceres de la próstata, colorrectal, páncreas, cuello uterino, estómago, endometrio, cerebro, hígado, vejiga, ovario, testículo, cabeza, cuello, piel (incluidos melanoma y carcinoma basal), recubrimiento mesotelial, glóbulos blancos (incluidos linfoma y leucemia) de esófago, mama, músculo, tejido conjuntivo, pulmón (incluido carcinoma microcítico de pulmón y carcinoma no microcítico), glándula suprarrenal, tiroides, riñón o hueso; glioblastoma, mesotelioma, carcinoma de células renales, carcinoma gástrico, sarcoma, coriocarcinoma, carcinoma basocelular cutáneo y seminoma testicular. En algunas realizaciones de la presente invención, el cáncer es melanoma, cáncer de colon, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, leucemia, un tumor cerebral, linfoma, sarcoma, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de cuello de útero y sarcoma de Kaposi. Los cánceres que son candidatos para el tratamiento con los compuestos y composiciones de la presente invención se analizan adicionalmente a continuación.
La presente invención contempla métodos de tratamiento de un sujeto que recibe un trasplante de médula ósea o un trasplante de células madre de sangre periférica, mediante la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la IDO suficiente para aumentar la reacción de hipersensibilidad de tipo retardado para el antígeno tumoral, retrasar el tiempo de recidiva de la neoplasia maligna postrasplante, aumentar el tiempo de supervivencia sin recidiva postrasplante y/o aumentar la supervivencia prolongada postrasplante.
En determinadas realizaciones, la presente invención contempla métodos para el tratamiento o la prevención un trastorno infeccioso (por ejemplo, una infección vírica) en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la IDO (por ejemplo, un inhibidor novedoso de la presente invención). En algunas realizaciones, el trastorno infeccioso es una infección vírica (por ejemplo, una infección vírica crónica), una infección bacteriana o una infección parasitaria. En determinadas realizaciones, la infección vírica es el virus de la inmunodeficiencia humana o el citomegalovirus. En otras realizaciones, la infección bacteriana es una infección por Mycobacterium (por ejemplo, Mycobacterium leprae o Mycobacterium tuberculosis). En aún otras realizaciones, la infección parasitaria es Leishmania donovani, Leishmania trópica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania mexicana, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale o Plasmodium malariae. En realizaciones adicionales, el trastorno infeccioso es una infección fúngica.
En aún otras realizaciones, la presente invención contempla métodos para el tratamiento o la prevención de una enfermedad, trastorno o afección inmunomediada en un sujeto (por ejemplo, un ser humano), que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la IDO (por ejemplo, preferentemente un inhibidor novedoso de la presente invención). A continuación, se describen ejemplos de enfermedades, trastornos y afecciones inmunomediadas.
Otras enfermedades, trastornos y afecciones que pueden tratarse o prevenirse, en su totalidad o en parte, por la modulación de la actividad da la IDO son indicaciones candidatas para los compuestos inhibidores de la IDO que se describen en el presente documento.
La presente invención contempla además el uso de los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento en combinación con uno o más agentes adicionales. El uno o más agentes adicionales pueden tener alguna actividad moduladora de la IDO y/o pueden funcionar a través de distintos mecanismos de acción. En algunas realizaciones, tales agentes comprenden radiación (por ejemplo, radioterapia localizada o radioterapia de todo el cuerpo) y/u otras modalidades de tratamiento de naturaleza no farmacológica. Cuando se utiliza una terapia combinada, el inhibidor (o inhibidores) de la IDO y el agente (o agentes) adicional pueden estar en forma de una única composición o de múltiples composiciones, y las modalidades de tratamiento pueden administrarse de forma simultánea, de forma secuencial, o mediante algún otro régimen. A modo de ejemplo, la presente invención contempla un régimen de tratamiento en donde una fase de radiación va seguida de una fase quimioterapéutica. La terapia combinada puede tener un efecto aditivo o sinérgico. Otros beneficios de la terapia combinada se describen a continuación.
En algunas realizaciones, la presente invención comprende además el uso de los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento en combinación con trasplante de médula ósea, trasplante de células madre de sangre periférica u otros tipos de terapia por trasplante.
En realizaciones particulares, la presente invención contempla el uso de los inhibidores de la función de la IDO descritos en el presente documento en combinación con inhibidores de puntos de control inmunitario. El bloqueo de los puntos de control inmunitarios, que da como resultado la amplificación de las respuestas de los linfocitos T específicos de antígeno, se ha demostrado que es un enfoque prometedor en tratamientos del cáncer humano. Los ejemplos de puntos de control inmunitarios (ligandos y receptores), algunos de los cuales están regulados al alza de forma selectiva en diversos tipos de células tumorales, que son candidatos para el bloqueo, incluyen PD1 (proteína muerte celular programada 1); PDL1 (ligando de PD1); BTLA (atenuador de linfocitos B y T); CTLA4 (antígeno asociado a linfocitos T citotóxicos 4); TIM3 (proteína 3 de membrana de linfocitos T); LAG3 (gen de activación de linfocitos 3); A2aR (receptor de adenosina A2a A2aR); y receptores inhibidores de células NK. Los inhibidores de puntos de control inmunitario y la terapia combinada con ellos, se analizan en detalle en otra parte en el presente documento.
En otras realizaciones, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la IDO y al menos un agente quimioterapéutico, incluyendo tales agentes, pero sin limitación, agentes alquilantes (por ejemplo, mostazas nitrogenadas tales como clorambucilo, ciclofosfamida, isofamida, mecloretamina, melfalán y mostaza de uracilo; aziridinas tales como tiotepa; ésteres de metanosulfonato tales como busulfán; análogos de nucleósidos (por ejemplo, gemcitabina); nitrosoureas tales como carmustina, lomustina y estreptozocina; inhibidores de la topoisomerasa 1 (por ejemplo, irinotecán); complejos de platino, tales como cisplatino y carboplatino; alquilantes biorreductores tales como mitomicina, procarbacina, dacarbacina y altretamina); agentes de rotura de cadenas de ADN (por ejemplo, bleomicina); inhibidores de la topoisomerasa II (por ejemplo, amsacrina, dactinomicina, daunorrubicina, idarrubicina, mitoxantrona, doxorrubicina, etopósido y tenipósido); agentes de unión al surco menor del ADN (por ejemplo, plicamidina); antimetabolitos (por ejemplo, antagonistas de folatos tales como metotrexato y trimetrexato; antagonistas de pirimidinas tales como fluorouracilo, fluorodesoxiuridina, CB3717, azacitidina, citarabina y floxuridina; antagonistas de purinas tales como mercaptopurina, 6-tioguanina, fludarabina, pentostatina; asparagina; e inhibidores de la ribonucleótido reductasa tales como hidroxiurea); agentes interactivos con tubulina (por ejemplo, vincristina, estramustina, vinblastina, docetaxol, derivados de epotilona y paclitaxel); agentes hormonales (por ejemplo, estrógenos; estrógenos conjugados; etinilestradiol; dietilestilbesterol; clortrianiseno; idenestrol; progestinas tales como caproato de hidroxiprogesterona, medroxiprogesterona y megestrol; y andrógenos tales como testosterona, propionato de testosterona, fluoximesterona y metiltestosterona); corticoesteroides suprarrenales (por ejemplo, prednisona, dexametasona, metilprednisolona y prednisolona); agentes liberadores de la hormona luteinizante o antagonistas de la hormona liberadora de gonadotropina (por ejemplo, acetato de leuprolida y acetato de goserelina); y antígenos antihormonales (por ejemplo, tamoxifeno, agentes antiandrógenos tales como flutamida; y agentes antisuprarrenales tales como mitotano y aminoglutetimida). La presente invención también contempla el uso de inhibidores de la IDO en combinación con otros agentes conocidos en la técnica (por ejemplo, trióxido de arsénico) y otros agentes quimioterapéuticos desarrollados en el futuro.
En algunas realizaciones referidas a métodos de tratamiento del cáncer, la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la IDO en combinación con al menos un agente quimioterapéutico da como resultado una tasa de supervivencia al cáncer mayor que la tasa de supervivencia al cáncer observada administrando cualquiera de ellos solo. En realizaciones adicionales referidas a métodos de tratamiento del cáncer, la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la IDO en combinación con al menos un agente quimioterapéutico da como resultado una reducción del tamaño del tumor o una ralentización del crecimiento del tumor mayor que la reducción del tamaño del tumor o el crecimiento del tumor observado mediante la administración de un agente solo.
En realizaciones adicionales, la presente invención contempla métodos para el tratamiento o la prevención del cáncer en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la IDO y al menos un inhibidor de la transducción de señales (STI, forma siglada de signal transduction inhibitor). En una realización particular, el al menos un STI se selecciona del grupo que consiste en inhibidores de la bcr/abl cinasa, inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF), inhibidores del receptor her-2/neu e inhibidores de la farnesil transferasa (los IFT). En otras partes del presente documento se exponen otros agentes STI candidatos.
La presente invención también contempla métodos para aumentar el rechazo de células tumorales en un sujeto, que comprende administrar un inhibidor de la IDO junto con al menos un agente quimioterapéutico y/o radioterapia, en donde el rechazo de células tumorales resultante es mayor que el obtenido al administrar el inhibidor de la IDO, el agente quimioterapéutico o la radioterapia solos.
En realizaciones adicionales, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la IDO y al menos un inmunomodulador distinto de un inhibidor de la IDO. En realizaciones particulares, el al menos un inmunomodulador se selecciona del grupo que consiste en CD40L, B7, B7RP1, anti-CD40, anti-CD38, anti-ICOS, ligando de 4-IBB, vacuna contra el cáncer de células dendríticas, IL2, IL12, ELC/CCL19, SLC/CCL21, MCP-1, IL-4, IL-18, TNF, IL-15, MDC, IFN-a/-p, M-CSF, IL-3, GM-CSF, IL-13 y anti-IL-10. En otras partes del presente documento se exponen otros agentes inmunomoduladores candidatos.
La presente invención contempla realizaciones que comprenden métodos para el tratamiento o la prevención un trastorno infeccioso (por ejemplo, una infección vírica) en un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un inhibidor de la IDO y una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente (o agentes) antinfeccioso
En algunas realizaciones de la presente invención, el agente terapéutico adicional es una citocina, incluyendo, por ejemplo, el factor estimulante de las colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) o el ligando de flt3. La presente invención también contempla métodos para el tratamiento o la prevención de una infección vírica (por ejemplo, una infección vírica crónica) que incluyen, pero sin limitación, virus de la hepatitis C (VHC), virus del papiloma humano (VPH), citomegalovirus (CMV), virus de Epstein Barr (VEB), virus varicela zóster, virus de Coxsackie y virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). El uso de los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento para tratar (solos o como un componente de una terapia combinada) la infección se analiza adicionalmente a continuación.
En realizaciones adicionales, el tratamiento de un trastorno infeccioso se efectúa mediante la coadministración de una vacuna en combinación con la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la IDO de la presente invención. En algunas realizaciones, la vacuna es una vacuna antivírica, incluyendo, por ejemplo, una vacuna contra el VIH. En otras realizaciones, la vacuna es eficaz contra la tuberculosis o la malaria. En aún otras realizaciones, la vacuna es una vacuna contra tumores (por ejemplo, una vacuna eficaz contra el melanoma); la vacuna contra tumores puede comprender células tumorales modificadas genéticamente o una línea celular modificada genéticamente, incluyendo células tumorales modificadas genéticamente o una línea celular modificada genéticamente que se ha transfectado para expresar el factor estimulante de granulocitos y macrófagos (GM-CSF). En realizaciones particulares, la vacuna incluye uno o más péptidos inmunogénicos y/o células dendríticas.
En algunas realizaciones, la presente invención contempla métodos de uso de los inhibidores de la IDO divulgados en el presente documento en combinación con uno o más agentes antimicrobianos.
En determinadas realizaciones referidas al tratamiento de una infección mediante la administración de un inhibidor de la IDO y al menos un agente terapéutico adicional, un síntoma de infección observado después de administrar tanto el inhibidor de la IDO como el agente terapéutico adicional mejora con respecto al mismo síntoma de infección observado después de administrar cualquiera de los dos solos. En algunas realizaciones, el síntoma de infección observado puede ser una reducción de la carga vírica, un aumento del recuento de linfocitos T CD4+, una disminución de infecciones oportunistas, un aumento del tiempo de supervivencia, la erradicación de una infección crónica, o una combinación de los mismos.
Breve descripción de los dibujos
Las Figuras 1A, 1B, 1C y 1D proporcionan las estructuras y la actividad biológica para los compuestos descritos en el presente documento.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se describirá con más detalle.
Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta el décimo de la unidad del límite inferior, a menos que el contexto indique claramente otra cosa, entre el límite superior e inferior de ese intervalo y cualquier otro valor declarado o intermedio en el intervalo indicado, está comprendido dentro de la invención. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden estar incluidos independientemente en los intervalos más pequeños, y también están comprendidos dentro de la invención, sujetos a cualquier límite excluido específicamente en el intervalo indicado. Cuando el intervalo indicado incluye uno o ambos límites, también se incluyen en la invención intervalos que excluyen alguno de los límites incluidos o ambos. A menos que definan de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por un experto en la materia a la que pertenece la presente invención.
Cabe destacar que, como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "una" y "el/la" incluyen referencias en plural a menos que el contexto indique claramente otra cosa. Se destaca además que las reivindicaciones pueden redactarse para excluir cualquier elemento opcional. Así pues, esta afirmación pretende servir como fundamento para el uso de tal terminología excluyente, tal como "únicamente", "solo" y similares en relación con la cita de los elementos de las reivindicaciones o para el uso de una limitación "negativa".
Las publicaciones analizadas en el presente documento se proporcionan únicamente para su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Además, las fechas de publicación proporcionadas pueden ser distintas de las fechas de publicación reales, que pueden necesitar ser confirmadas de forma independiente.
Aspectos generales
La desregulación inmunitaria está estrechamente asociada con la evasión tumoral del sistema inmunitario del hospedador, dando como resultado el crecimiento y la progresión tumoral. Los enfoques de los tratamientos tradicionales que comprenden quimioterapia y radioterapia son generalmente difíciles de tolerar para el paciente y se vuelven menos eficaces a medida que los tumores evolucionan para sobrevivir a tales tratamientos. Al utilizar el propio sistema inmunitario del paciente para identificar y eliminar células tumorales, la inmunoterapia tiene el beneficio de una toxicidad reducida. Como la regulación al alza de la enzima inmunorreguladora indolamina 2,3-dioxigenasa comprende un mecanismo manipulado por los tumores para estimular el crecimiento, los agentes (por ejemplo, los compuestos de molécula pequeña) que inhiben la actividad enzimática presentan una vía prometedora para la profilaxis y/o el tratamiento.
Además, una gran cantidad de datos experimentales indica un papel de la inhibición de la IDO en la inmunosupresión, la resistencia y/o el rechazo tumoral, las infecciones crónicas, la infección por VIH y las enfermedades o trastornos autoinmunitarios. La inhibición de la IDO también puede ser una estrategia de tratamiento importante para pacientes con enfermedades o trastornos neurológicos o neuropsiquiátricos tales como la depresión. Los compuestos, composiciones y métodos de la presente invención abordan la necesidad de nuevas clases de moduladores de la IDO.
Definiciones
A menos que se indique otra cosa, los siguientes términos pretenden tener el significado que se establece a continuación. Otros términos se definen en otras partes de la memoria descriptiva.
El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se indique otra cosa, un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, que tiene el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-8 significa uno a ocho carbonos). Los ejemplos de grupos alquilo incluyen grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, f-butilo, isobutilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo y similares.
El término "cicloalquilo" se refiere a anillos de hidrocarburo que tienen el número indicado de átomos en el anillo (por ejemplo, cicloalquilo C3-6) y que están totalmente saturados o que no tienen más de un doble enlace entre los vértices del anillo. "Cicloalquilo" también se refiere a anillos de hidrocarburos policíclicos y bicíclicos tales como, por ejemplo, biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2] octano, etc.
El término "cicloheteroalquilo" se refiere a un anillo de cicloalquilo que tiene el número indicado de vértices (o miembros) del anillo y que tiene de uno a cinco heteroátomos seleccionados entre N, O y S, que reemplazan de uno a cinco de los vértices de carbono, y donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados, y el átomo o átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. El cicloheteroalquilo puede ser un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o policíclico. Ejemplos no limitantes de grupos cicloheteroalquilo incluyen pirrolidina, imidazolidina, pirazolidina, butirolactama, valerolactama, imidazolidinona, hidantoína, dioxolano, ftalimida, piperidina, 1,4-dioxano, morfolina, tiomorfolina, tiomorfolin-S-óxido, tiomorfolin-S,S-óxido, piperazina, pirano, piridona, 3-pirrolina, tiopirano, pirona, tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, quinuclidina, y similares. Se puede unir un grupo cicloheteroalquilo al resto de la molécula a través de un anillo de carbono o un heteroátomo.
Como se usa en el presente documento, una línea ondulada, "MAT, que cruza un enlace sencillo, doble o triple en cualquier estructura química representada en el presente documento, representa el punto de unión del enlace sencillo, doble o triple al resto de la molécula. Adicionalmente, un enlace que se extiende hasta el centro de un anillo (por ejemplo, un anillo de fenilo) está destinado a indicar unión en cualquiera de los vértices de anillo disponibles. Un experto en la materia comprenderá que múltiples sustituyentes que se muestran unidos a un anillo ocuparán los vértices del anillo que proporcionan compuestos estables y, por lo demás, son estéricamente compatibles. Para un componente divalente, una representación debe incluir una orientación (hacia adelante o hacia atrás). Por ejemplo, el grupo "-C(O)NH-" pretende incluir un enlace en cualquier orientación: -C(O)NH- o -NHC(O)- y de forma similar, "-O-CH2CH2-" pretende incluir tanto -O-CH2CH2- como -CH2CH2-O-.
Los términos "alcoxi", "alquilamino" y "alquiltio" (o tioalcoxi) se usan en su sentido convencional, y se refieren a aquellos grupos alquilo unidos al resto de la molécula a través de un átomo de oxígeno, un grupo amino, o un átomo de azufre, respectivamente. Adicionalmente, para grupos dialquilamino, las porciones alquilo pueden ser iguales o diferentes y también se pueden combinar para formar un anillo de 3-7 miembros con el átomo de nitrógeno al que está unido cada uno. Por consiguiente, un grupo representado como dialquilamino o -NRaRb está destinado a incluir piperidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo, azetidinilo y similares.
Los términos "halo" o "halógeno", por sí mismos o como parte de otro sustituyente, significan, a menos que se indique otra cosa, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Adicionalmente, términos tales como "haloalquilo", pretenden incluir monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, la expresión "haloalquilo C1-4" pretende incluir trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y similares.
El término "arilo" significa, a menos que se indique otra cosa, un grupo hidrocarburo poliinsaturado, un grupo hidrocarburo, normalmente aromático, que puede ser un único anillo o múltiples anillos (hasta tres anillos) que están condensados entre sí o unidos covalentemente. Los ejemplos no limitantes de grupos arilo incluyen fenilo, naftilo y bifenilo.
El término "heteroarilo" se refiere a grupos arilo (o anillos) que contienen de uno a cinco heteroátomos seleccionados entre N, O y S, donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados y el átomo o átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. Un grupo heteroarilo se puede unir al resto de la molécula a través de un heteroátomo. Los ejemplos no limitantes de grupos heteroarilo incluyen piridilo, piridazinilo, pirazinilo, pirimidinilo, triazinilo, quinolinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinolinilo, ftalazinilo, benzotriazinilo, purinilo, benzoimidazolilo, benzopirazolilo, benzotriazolilo, benzoisoxazolilo, isobenzofurilo, isoindolilo, indolizinilo, benzotriazinilo, tienopiridinilo, tienopirimidinilo, pirazolopirimidinilo, imidazopiridinas, benzotiaxolilo, benzofuranilo, benzotienilo, indolilo, quinolilo, isoquinolilo, isotiazolilo, pirazolilo, indazolilo, pteridinilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, pirrolilo, tiazolilo, furilo, tienilo y similares. Los sustituyentes de un anillo heteroarilo se pueden seleccionar del grupo de sustituyentes aceptables que se describen a continuación.
Los términos anteriores (por ejemplo, "alquilo", "arilo" y "heteroarilo"), en algunas realizaciones, estarán opcionalmente sustituidos. A continuación se proporcionan sustituyentes seleccionados para cada tipo de radical.
Los sustituyentes opcionales para los radicales alquilo (incluidos los grupos a menudo denominados alquileno, alquenilo, alquinilo y cicloalquilo) pueden ser diversos grupos seleccionados entre: halógeno, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R'", -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN y -NO2 en un número que varía entre cero y (2 m'+1), donde m' es el número total de átomos de carbono en dicho radical. R', R" y R"' cada uno se refiere independientemente a hidrógeno, alquilo C1-8 no sustituido, arilo sin sustituir, arilo sustituido con 1-3 halógenos, alquilo C1-8 no sustituido, grupos alcoxi C1-8 o tioalcoxi C1-8, o grupos aril-alquilo C1-4 no sustituidos. Cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, se pueden combinar con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 3, 4, 5, 6 o 7 miembros. Por ejemplo, -NR'R" pretende incluir 1 -pirrolidinilo y 4-morfolinilo.
De forma análoga, los sustituyentes opcionales para los grupos arilo y heteroarilo son variados y generalmente se seleccionan entre: -halógeno, -OR', -OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2, -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R', -NR'-C(O)NR"R''', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -N3, perfluoroalcoxi (C1-C4) y perfluoroalquilo (C1-C4), en un número que varía entre cero y el número total de valencias abiertas en el sistema de anillo aromático; y en donde R', R" y R'" se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-8, haloalquilo C1-8, cicloalquilo C3-6, alquenilo C2-8 y alquinilo C2-8. Otros sustituyentes adecuados incluyen cada uno de los sustituyentes arilo anteriores unidos a un átomo del anillo mediante una cadena de alquileno de 1-4 átomos de carbono.
Dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -T-C(O)-(CH2)q-U-, en donde T y U son independientemente -NH-, -O-, -CH2- o un enlace sencillo, y q es un número entero de 0 a 2. Como alternativa, dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -A-(CH2)r-B-, en donde A y B son independientemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- o un enlace sencillo, y r es un número entero de 1 a 3. Uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo así formado puede reemplazarse opcionalmente por un doble enlace. Como alternativa, dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -(CH2)s-X-(CH2)t-, en donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3, y X es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- o -S(O)2NR'-. El sustituyente R' en -Nr '- y -S(O)2NR'- se selecciona entre hidrógeno o alquilo C1-6 no sustituido.
Como se usa en el presente documento, el término "heteroátomo" está destinado a incluir oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S) y silicio (Si).
El término "sales farmacéuticamente aceptables" está destinado a incluir las sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares que se encuentren en los compuestos descritos en el presente documento. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, se pueden obtener sales de adición de bases poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, pura o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales derivadas de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, férrico, ferroso, litio, magnesio, mangánico, manganoso, potasio, sodio, cinc y similares. Las sales obtenidas a partir de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, incluyendo aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas de origen natural y similares, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, W,W'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, W-etilmorfolina, W-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácidos poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, pura o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen las procedentes de ácidos inorgánicos como ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico o fosforoso, y similares, así como las sales procedentes de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutírico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen sales de aminoácidos, tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónico o galactunórico y similares (véase, por ejemplo, Berge, S.M. et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977)). Determinados compuestos específicos de la presente invención contienen funcionalidades tanto básicas como ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición de bases o de ácidos.
Las formas neutras de los compuestos se pueden regenerar poniendo en contacto la sal con una base o un ácido y aislando el precursor de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en determinadas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás, las sales son equivalentes a la forma precursora del compuesto para los fines de la presente invención.
Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que están en forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en el presente documento son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos en condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos pueden convertirse en los compuestos de la presente invención mediante métodos químicos o bioquímicos en un entorno ex vivo. Por ejemplo, los profármacos pueden convertirse lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un depósito de parche transdérmico con una enzima o un reactivo químico adecuado.
Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y pretenden incluirse dentro del alcance de la presente invención. Determinados compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados en la presente invención y se pretende que estén dentro del alcance de la presente invención.
Determinados compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o dobles enlaces; los racematos, diastereómeros, isómeros geométricos, los regioisómeros y los isómeros individuales (por ejemplo, enantiómeros separados) están todos destinados a estar abarcados dentro del alcance de la presente invención. Cuando se muestra una descripción estereoquímica, se entiende que se refiere al compuesto en el que está presente uno de los isómeros y sustancialmente libre del otro isómero. "Sustancialmente libre de" otro isómero indica al menos una relación 80/20 de los dos isómeros, más preferiblemente 90/10 o 95/5 o más. En algunas realizaciones, uno de los isómeros estará presente en una cantidad de al menos el 99 %.
Los compuestos de la presente invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Las proporciones no naturales de un isótopo pueden definirse como que van desde la cantidad encontrada en la naturaleza hasta una cantidad que consiste en el 100 % del átomo en cuestión. Por ejemplo, los compuestos pueden incorporar isótopos radiactivos, tales como, por ejemplo, tritio (3H), yodo 125 (125I) o carbono 14 (14C) o isótopos no radioactivos, tales como deuterio (2H) o carbono-13 (13C). Tales variaciones isotópicas pueden proporcionar utilidades adicionales a las descritas en otros lugares dentro de esta solicitud. Por ejemplo, las variantes isotópicas de los compuestos de la invención pueden encontrar una utilidad adicional, entre los que se incluyen, pero sin limitación, como reactivos de diagnóstico y/o de formación de imágenes, o como agentes terapéuticos citotóxicos/radiotóxicos. Adicionalmente, las variantes isotópicas de los compuestos de la invención pueden tener características farmacocinéticas y farmacodinámicas alteradas que pueden contribuir a potenciar la seguridad, la tolerabilidad o la eficacia durante el tratamiento. Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean radioactivas o no, pretenden incluirse dentro del alcance de la presente invención.
Los términos "paciente" o "sujeto" se usan indistintamente para referirse a un ser humano o a un animal no humano (por ejemplo, un mamífero).
Los términos "administración", "administrar" y similares, como se aplican a, por ejemplo, un sujeto, célula, tejido, órgano o líquido biológico, se refiere el contacto de, por ejemplo, un inhibidor de la IDO, una composición farmacéutica que lo comprende, o un agente de diagnóstico con el sujeto, célula, tejido, órgano o líquido biológico. En el contexto de una célula, la administración incluye el contacto (por ejemplo, in vitro o ex vivo) de un reactivo con una célula, así como el contacto de un reactivo con un líquido, en que el líquido está en contacto con la célula.
Las expresiones "tratar", "que trata", "tratamiento", y similares, se refieren a un curso de acción (tal como la administración de un inhibidor de la IDO o una composición farmacéutica que lo comprenda) iniciado después de que una enfermedad, trastorno o afección, o un síntoma de los mismos, se haya diagnosticado, observado, y similares, para eliminar, reducir, suprimir, mitigar o mejorar, ya sea de manera temporal o permanente, al menos una de las causas subyacentes de una enfermedad, trastorno o afección que aqueja a un sujeto, o al menos uno de los síntomas asociados con una enfermedad, trastorno, afección que aqueja a un sujeto. Por tanto, el tratamiento incluye inhibir (por ejemplo, detener el desarrollo o el desarrollo posterior de la enfermedad, trastorno o afección, o la asociación de síntomas clínicos con los mismos) una enfermedad activa.
La expresión "que necesita tratamiento", como se usa en el presente documento, se refiere a la decisión, tomada por un médico u otro profesional sanitario, de que un sujeto necesita o se beneficiará del tratamiento. Esta decisión se basa en diversos factores que están en el ámbito de la experiencia del médico o profesional sanitario.
Las expresiones "prevenir", "que previene", "prevención", y similares, se refieren a un curso de acción (tal como administrar un inhibidor de la IDO o una composición farmacéutica que lo comprende) iniciado de una manera (por ejemplo, antes del inicio de una enfermedad, trastorno, afección o síntoma de los mismos) para prevenir, suprimir, inhibir o reducir, ya sea de manera temporal o permanente, el riesgo de un sujeto de desarrollar una enfermedad, trastorno, afección o similar (según lo determinado por, por ejemplo, la ausencia de síntomas clínicos) o retrasar su aparición, generalmente en el contexto de un sujeto predispuesto a tener una enfermedad, trastorno o afección particular. En determinados casos, los términos también se refieren a ralentizar la progresión de la enfermedad, trastorno o afección, o a inhibir la progresión de la misma a un estado nocivo o de otro modo no deseado.
La expresión "que necesita prevención", como se usa en el presente documento, se refiere a la decisión, tomada por un médico u otro profesional sanitario, de que un sujeto necesita o se beneficiará del tratamiento preventivo. Esta decisión se basa en diversos factores que están en el ámbito de la experiencia de un médico o profesional sanitario.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la administración de un agente a un sujeto, ya sea solo o como parte de una composición farmacéutica y en una sola dosis o como parte de una serie de dosis, en una cantidad capaz de tener un efecto positivo detectable sobre cualquier síntoma, aspecto o característica de una enfermedad, trastorno o afección cuando se administra al sujeto. La cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse midiendo los efectos fisiológicos pertinentes y puede ajustarse con respecto al régimen de dosificación y al análisis diagnóstico de la afección del sujeto, y similares. A modo de ejemplo, la medición del nivel sérico de un inhibidor de la IDO (o, por ejemplo, un metabolito del mismo) en un momento particular posadministración puede ser indicativa de si se ha utilizado una cantidad terapéuticamente eficaz.
La expresión "en una cantidad suficiente para efectuar un cambio" significa que hay una diferencia detectable entre un nivel de un indicador medido antes (por ejemplo, un nivel basal) y después de la administración de una terapia particular. Los indicadores incluyen cualquier parámetro objetivo (por ejemplo, concentración sérica) o parámetro subjetivo (por ejemplo, la sensación de bienestar de un sujeto).
La expresión "moléculas pequeñas" se refiere a compuestos químicos que tienen un peso molecular que es inferior a aproximadamente 10kDa, inferior a aproximadamente 2 kDa o inferior a aproximadamente 1 kDa. Las moléculas pequeñas incluyen, pero sin limitación, moléculas inorgánicas, moléculas orgánicas, moléculas orgánicas que contienen un componente inorgánico, moléculas que comprenden un átomo radioactivo y moléculas sintéticas. Desde el punto de vista terapéutico, una molécula pequeña puede ser más permeable en las células, menos susceptible a la degradación y tener menos probabilidad de inducir una respuesta inmunitaria que las moléculas grandes.
Como se usa en el presente documento, las expresiones "inhibidor de la IDO", "bloqueante de la IDO" y términos similares a los mismos se refieren a agentes capaces de inhibir la actividad de la IDO, invirtiendo de este modo la inmunosupresión mediada por la IDO. Un inhibidor de la IDO puede ser un inhibidor de la IDO competitivo, no competitivo o irreversible. "Un inhibidor de la IDO competitivo" es un compuesto que inhibe de forma reversible la actividad de la enzima IDO en el sitio catalítico; "un inhibidor de la IDO no competitivo" es un compuesto que inhibe de forma reversible la actividad de la enzima IDO en un sitio no catalítico; y "un inhibidor de la IDO irreversible" es un compuesto que elimina de forma irreversible la actividad de la enzima IDO al forma un enlace covalente (u otro medio estable de inhibición de la función enzimática) con la enzima. Están disponibles en el mercado varios inhibidores de la IDO (por ejemplo, 5-Br-4-Cl-indoxil 1,3-diacetato y 1-metil-DL-triptófano (1 MT); ambos disponibles en Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y puede utilizarse como, por ejemplo, compuestos de "herramienta" o "referencia"
El término "ligando" se refiere a, por ejemplo, un péptido, un polipéptido, una molécula asociada a membrana o unida a membrana, o un complejo de los mismos, que puede actuar como agonista o antagonista de un receptor. Un ligando abarca ligandos naturales y sintéticos, por ejemplo, citocinas, variantes de citocinas, análogos, muteínas y composiciones de unión obtenidos de anticuerpos, así como moléculas pequeñas. La expresión también abarca un agente que no es ni agonista ni antagonista, pero que puede unirse a un receptor sin influir significativamente en sus propiedades biológicas, por ejemplo, la señalización o la adhesión. Además, la expresión incluye un ligando unido a membrana que se ha cambiado mediante, por ejemplo, métodos químicos o recombinantes, a una versión soluble del ligando unido a membrana. Un ligando o receptor puede ser completamente intracelular, es decir, puede residir en el citosol, el núcleo o algún otro compartimento intracelular. El complejo de ligando y receptor se denomina "complejo ligando-receptor".
Los términos "inhibidores" y "antagonistas", o "activadores" y "agonistas", se refieren a moléculas inhibidoras o activadoras, respectivamente, por ejemplo, para la activación de, por ejemplo, un ligando, receptor, cofactor, gen, célula, tejido u órgano. Los inhibidores son moléculas que disminuyen, bloquean, previenen, retrasan la activación, inactivan, desensibilizan o regulan a la baja, por ejemplo, un gen, proteína, ligando, receptor o célula. Los activadores son moléculas que aumentan, activan, facilitan, potencian la activación, sensibilizan o regulan al alza, por ejemplo, un gen, proteína, ligando, receptor o célula. Un inhibidor también puede definirse como una molécula que reduce, bloquea o inactiva una actividad constitutiva. Un "agonista" es una molécula que interactúa con una diana para provocar o estimular un aumento en la activación de la diana. Un "antagonista" es una molécula que se opone a la acción (o acciones) de un agonista. Un antagonista impide, reduce, inhibe o neutraliza la actividad de un agonista, y un antagonista también puede impedir, inhibir o reducir la actividad constitutiva de una diana, por ejemplo, un receptor diana, incluso cuando no hay un agonista identificado.
Los términos "modular", "modulación" y similares se refieren a la capacidad de una molécula (por ejemplo, un activador 0 un inhibidor) para aumentar o disminuir la función o actividad de la IDO, ya sea directa o indirectamente. Un modulador puede actuar solo, o puede usar un cofactor, por ejemplo, una proteína, ion metálico o molécula pequeña. Los ejemplos de moduladores incluyen compuestos de molécula pequeña y otras moléculas bioorgánicas. Están disponibles en el mercado numerosas bibliotecas de compuestos de molécula pequeña (por ejemplo, bibliotecas combinatorias) y pueden servir como punto de partida para la identificación de un modulador. El experto en la materia puede desarrollar uno o más ensayos (por ejemplo, ensayos bioquímicos o basados en células) en los que tales bibliotecas de compuestos pueden cribarse para identificar uno o más compuestos que tengan las propiedades deseadas; a continuación, el farmacoquímico experto es capaz de optimizar uno o más de tales compuestos mediante, por ejemplo, la síntesis y evaluación de análogos y derivados de los mismos. Además, pueden utilizarse estudios de modelado sintético y/o molecular en la identificación de un activador.
La "actividad" de una molécula puede describir o referirse a la unión de la molécula con un ligando o con un receptor; a la actividad catalítica; a la capacidad de estimular la expresión génica o la señalización diferenciación o maduración celular; a la actividad antigénica; a la modulación de actividades de otras moléculas; y similares. El término "actividad proliferativa" abarca una actividad que estimula, que es necesaria para, o que está específicamente asociada con, por ejemplo, la división celular normal, así como con el cáncer, tumores, displasia, la transformación celular, metástasis y angiogénesis.
Como se usa en el presente documento, "comparable", "actividad comparable", "actividad comparable a", "efecto comparable", "efecto comparable a", y similares, son expresiones relativas que pueden verse desde un punto de vista cuantitativo y/o cualitativo. El significado de las expresiones depende con frecuencia del contexto en el que se utilizan. A modo de ejemplo, puede considerarse que dos agentes que activan un receptor tienen un efecto comparable desde una perspectiva cualitativa, pero se puede considerar que los dos agentes carecen de un efecto comparable desde una perspectiva cuantitativa si un agente solo puede lograr el 20 % de la actividad del otro agente según lo determinado en un ensayo aceptado en la técnica (por ejemplo, un ensayo de respuesta a la dosis) o en un modelo animal aceptado en la técnica. Al comparar un resultado con otro resultado (por ejemplo, un resultado con un patrón de referencia), "comparable" con frecuencia (aunque no siempre) significa que un resultado se desvía de un patrón de referencia en menos del 35 %, en menos del 30 %, en menos del 25 %, en menos del 20 %, en menos del 15 %, en menos del 10 %, en menos del 7 %, en menos del 5 %, en menos del 4 %, en menos del 3 %, en menos del 2 % o en menos del 1 %. En realizaciones particulares, un resultado es comparable a un patrón de referencia si se desvía en menos del 15 %, en menos del 10 % o en menos del 5 % del patrón de referencia. A modo de ejemplo, pero sin limitación, la actividad o efecto puede referirse a la eficacia, estabilidad, solubilidad o inmunogenicidad.
"Sustancialmente puro" indica que un componente constituye más de aproximadamente el 50 % del contenido total de la composición, y normalmente más de aproximadamente el 60 % del contenido total de polipéptidos. Más normalmente, "sustancialmente puro" se refiere a composiciones en que al menos el 75 %, al menos el 85 %, al menos el 90 % o más de la composición total es el componente de interés. En algunos casos, el polipéptido constituirá más de aproximadamente el 90 %, o más de aproximadamente el 95 % del contenido total de la composición.
Las expresiones "se une específicamente" o "se une selectivamente", cuando hace referencia a un ligando/receptor, anticuerpo/antígeno u otro par de unión, indica una reacción de unión que es determinante de la presencia de la proteína en una población heterogénea de proteínas y otros productos biológicos. Por tanto, en condiciones designadas, un ligando específico se une con un receptor en particular y no se une en una cantidad significativa con otras proteínas presentes en la muestra. El anticuerpo, o composición de unión procedente del sitio de unión a antígeno de un anticuerpo, del método contemplado, se une a su antígeno, o una variante o muteína del mismo, con una afinidad que es al menos dos veces mayor, al menos diez veces mayor, al menos 20 veces mayor o al menos 100 veces mayor que la afinidad con cualquier otro anticuerpo o composición de unión procedente del mismo. En una realización particular, el anticuerpo tendrá una afinidad que es mayor que aproximadamente 109 litros/mol, según se determina mediante, por ejemplo, análisis de Scatchard (Munsen et al., Analyt. Biochem., 107:220-239 (1980)).
El término "respuesta", por ejemplo, de una célula, tejido, órgano u organismo, abarca un cambio en el comportamiento bioquímico o fisiológico, por ejemplo, concentración, densidad, adhesión o migración dentro de un compartimento biológico, tasa de expresión génica o estado de diferenciación, donde el cambio se correlaciona con la activación, estimulación o tratamiento, o con mecanismos internos tales como la programación genética. En determinados contextos, los términos "activación", "estimulación", y similares, se refieren a la activación celular regulada por mecanismos internos, así como por factores externos o ambientales; mientras que las expresiones "inhibición", "regulación a la baja", y similares, se refieren a los efectos opuestos.
Los términos "polipéptido", "péptido" y "proteína", utilizados indistintamente en el presente documento, se refieren a una forma polimérica de aminoácidos de cualquier longitud, que puede incluir aminoácidos codificados genéticamente y no codificados genéticamente, aminoácidos modificados o derivatizados químicamente o bioquímicamente y polipéptidos que tienen estructuras principales polipeptídicas modificadas. Los términos incluyen proteínas de fusión, incluyendo, pero sin limitación, proteínas de fusión con una secuencia de aminoácidos heteróloga, proteínas de fusión con secuencias líder heterólogas y homólogas, con o sin restos de metionina en el extremo N; proteínas etiquetadas inmunológicamente; y similares.
Como se usa en el presente documento, los términos "variantes" y "homólogos" se utilizan indistintamente para referirse a secuencias de aminoácidos o de ADN que son similares a las secuencias de aminoácidos o de ácidos nucleicos de referencia, respectivamente. El término abarca variantes de origen natural y variantes de origen no natural. Las variantes de origen natural incluyen homólogos (polipéptidos y ácidos nucleicos que difieren en la secuencia de aminoácidos o nucleótidos, respectivamente, de una especie a otra) y variantes alélicas (polipéptidos y ácidos nucleicos que difieren en la secuencia de aminoácidos o nucleótidos, respectivamente, de un individuo a otro dentro de una especie). Por tanto, las variantes y homólogos abarcan secuencias de ADN de origen natural y proteínas codificadas por ellas y sus isoformas, así como variantes de corte y empalme de una proteína o gen. Los términos también abarcan secuencias de ácido nucleico que varían en una o más bases con respecto a una secuencia de ADN de origen natural pero que aún se traducen en una secuencia de aminoácidos que corresponde a la proteína de origen natural debido a la degeneración del código genético. Las variantes y homólogos de origen no natural incluyen polipéptidos y ácidos nucleicos que comprenden un cambio en la secuencia de aminoácidos o de nucleótidos, respectivamente, en que el cambio en la secuencia se introduce artificialmente (por ejemplo, muteínas); por ejemplo, el cambio se genera en el laboratorio mediante la intervención humana ("por la mano de hombre"). Por lo tanto, variantes y homólogos de origen no natural también puede referirse a las que difieren de las secuencias de origen natural en una o más sustituciones conservativas y/o etiquetas y/o conjugados.
El término "muteínas" como se usa en el presente documento se refiere ampliamente a proteínas recombinantes mutadas. Estas proteínas portan habitualmente sustituciones de aminoácidos únicas o múltiples y, con frecuencia, proceden de genes clonados que se han sometido a mutagénesis específica del sitio o al azar, o de genes completamente sintéticos.
Las expresiones "ADN", "ácido nucleico", "molécula de ácido nucleico", "polinucleótido" y similares, se usan indistintamente en el presente documento para referirse a una forma polimérica de nucleótidos de cualquier longitud, ya sean desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos, o análogos de los mismos. Los ejemplos no limitantes de polinucleótidos incluyen ácidos nucleicos lineales y circulares, ARN mensajero (ARNm), ADN complementario (ADNc), polinucleótidos recombinantes, vectores, sondas, cebadores y similares.
Indolamina 2,3-dioxigenasa
Como se mencionó anteriormente, la IDO es una enzima reguladora inmunitaria que normalmente se expresa en células tumorales y en células inmunitarias activadas. La IDO es uno de varios puntos de control de la respuesta inmunitaria que están implicados en el escape inmunitario del tumor; por tanto, los inhibidores de la IDO alteran los mecanismos por los cuales los tumores evaden el sistema inmunitario normal del organismo.
La IDO regula a la baja la respuesta inmunitaria mediada a través de la oxidación del triptófano. Esto da como resultado la inhibición de la activación de los linfocitos T y la inducción de la apoptosis de los linfocitos T, creando un entorno en el que los linfocitos T citotóxicos específicos de tumor se vuelven funcionalmente inactivos o ya no pueden atacar las células cancerosas de un sujeto. Por lo tanto, son convenientes agentes terapéuticos dirigidos a la supresión de la degradación del triptófano mediante la inhibición de la actividad de la IDO. Los inhibidores de la IDO pueden utilizarse para activar linfocitos T y, por lo tanto, potenciar la activación de linfocitos T cuando los linfocitos T están suprimidos por un embarazo, una neoplasia maligna o un virus tal como el VIH. La inhibición de la IDO también puede ser una estrategia de tratamiento importante para pacientes con enfermedades o trastornos neurológicos o neuropsiquiátricos tales como la depresión. Los compuestos, composiciones y métodos de la presente invención ayudan a satisfacer la necesidad actual de moduladores de la IDO.
La expresión de la IDO está modulada por una compleja variedad de señales, implicando así una serie de mecanismos de acción distintos. Por ejemplo, la IDO puede inducirse mediante la inhibición de las ADN metil transferasas o las histona desacetilasas. La ruta de señalización de NF-kB también se ha implicado en la función de la IDO. La inhibición de la actividad de NF-kB bloquea la expresión de la IDO y produce respuestas antitumorales robustas que son dependientes tanto de linfocitos T como de la IDO; como alternativa, la activación de NF-kB (que puede ser afectada por diversos factores tales como la señalización del interferón-YR1/-YR2 y la activación del receptor de tipo toll) induce la expresión del gen de la IDO.
Otros mecanismos están vinculados a la modulación de la función de la IDO. A modo de ejemplo, los inhibidores de las especies reactivas del oxígeno (ROS, forma siglada de reactive oxidative species) pueden efectuar la estabilización de la IDO; los niveles de la IDO pueden modularse mediante la inhibición o activación de rutas que están tanto aguas abajo como aguas arriba de la IDO; y la activación del interferón-y puede activar una inducción autocrina de la IDO.
Los estudios indican que la ruta de la IDO está activa en muchos cánceres, tanto dentro de las células tumorales como defensa directa contra el ataque de los linfocitos T, como también dentro de las células presentadoras de antígenos (las CPA) en los ganglios linfáticos que drenan los tumores, lo que da como resultado una tolerancia periférica a antígenos asociados a tumores (los TAA, forma siglada de tumor-associated antigens). Los cánceres pueden utilizar la ruta de la IDO para facilitar la supervivencia, el crecimiento, la invasión y la metástasis de las células malignas que expresan los TAA, que de otro modo podrían ser reconocidas y atacadas por el sistema inmunitario.
Como se menciona en el presente documento, el catabolismo del triptófano en el tejido tumoral por la enzima limitante de la velocidad IDO brinda una oportunidad para el uso de inhibidores de la IDO como una alternativa terapéutica, o junto con, la quimioterapia convencional. Sin embargo, determinados cánceres son capaces de catabolizar el triptófano, pero son principalmente negativos para IDO. Estudios recientes indican que la ruta enzimática alternativa del catabolismo del triptófano que implica a la triptófano-2,3-dioxigenasa (TDO) también es importante en el cáncer. La TDO, que se considera responsable de regular los niveles sistémicos de triptófano en el hígado, se expresa constitutivamente en algunos cánceres y también es capaz de suprimir respuestas inmunitarias antitumorales (véanse, por ejemplo, Platten, M. et al., Cancer Res., 72(21):5435-5440 (1 de noviembre de 2012)).
La IDO se expresa en una amplia diversidad de tumores y de líneas de células tumorales humanos, así como en las CPA del hospedador, lo que se correlaciona con un peor pronóstico clínico. Por lo tanto, la inhibición de la IDO puede mejorar la supervivencia en pacientes con cáncer con inmunosupresión mediada por IDO. En comparación, la TDO se expresa en una amplia diversidad de tumores y líneas de células tumorales humanos, y la expresión de la TDO es evidente en glioblastomas humanos avanzados. La identificación de tumores que expresan altos niveles de IDO o TDO puede permitir una inhibición más selectiva de las rutas inmunosupresoras reguladas por triptófano. Como alternativa, los compuestos que inhiben tanto la IDO como la TDO podrían proporcionar la mayor cobertura para impedir el escape tumoral mediante la expresión compensadora de la otra enzima de degradación de triptófano. Por lo tanto, el uso de inhibidores duales de IDO/TDO o combinaciones de inhibidores específicos de la IDO y la TDO puede demostrar ser una alternativa de tratamiento mejor en la inmunoterapia del cáncer para bloquear la inmunosupresión mediada por el metabolismo del triptófano.
Aunque para practicar la invención no se necesita una comprensión precisa del mecanismo de acción subyacente por el cual los compuestos de la presente invención efectúan su actividad, se cree que los compuestos (o un subconjunto de los mismos) inhiben la función de la IDO. Como alternativa, los compuestos (o un subconjunto de los mismos) pueden inhibir la función de la TDO. Los compuestos (o un subconjunto de los mismos) también pueden tener actividad inhibidora sobre la función tanto de la IDO como de la TDO. Aunque los compuestos de la invención se denominan generalmente en el presente documento inhibidores de la IDO, debe entenderse que la expresión "inhibidores de la IDO" abarca compuestos que actúan individualmente mediante la inhibición de la TDO o la IDO, y/o compuestos que actúan mediante la inhibición tanto de la IDO como de la TDO.
Identificación de inhibidores de la IDO que poseen características convenientes
La presente invención se refiere, en parte, a la identificación de inhibidores de la IDO con al menos una propiedad o característica de importancia terapéutica. Los inhibidores candidatos se pueden identificar utilizando, por ejemplo, un ensayo o modelo aceptado en la técnica, cuyos ejemplos se describen en el presente documento.
Después de la identificación, los inhibidores candidatos pueden evaluarse adicionalmente utilizando técnicas que proporcionan datos con respecto a las características de los inhibidores (por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, medios para determinar la solubilidad o la estabilidad). Las comparaciones de los inhibidores candidatos con un patrón de referencia (que puede ser el "mejor de su clase" de los inhibidores actuales) son indicativas de la viabilidad potencial de tales candidatos.
COMPUESTOS DE LA INVENCION Y DIVULGACION ADICIONAL
La presente divulgación proporciona compuestos representados por la fórmula (I):
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o una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato o solvato del mismo, en donde,
el subíndice n es 1 o 0;
A es -C(O)-, -NH-, -SO2-, -CH2- o -CHR3-;
B es un enlace, -C(O)-, -NH-, -CH2- o -CHR3-;
T es un enlace, -CH2-, -NH-, -O-, -OCH2-, -C(O)CH2- o -CR3R4-;
en donde cuando A es -NH- y B es -C(O)-, entonces T es distinto de -C(R3)(R4)-;
D es N o C(R5);
E es N o C(R6);
V es un enlace, -O- o -C(R5a)2;
G es un arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo bicíclico condensado de 9 o 10 miembros opcionalmente sustituido;
J1 es CH, N o C(R2), cuando R2 está unido al vértice del anillo identificado como J1;
R1 y R2 son independientemente hidrógeno, halógeno, haloalquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido, opcionalmente cicloheteroalquilo de 3 a 6 miembros sustituido, opcionalmente fenilo sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituido, CN, SO2NH2 , NHSO2CH3, NHSO2CF3, OCF3 , SO2CH3 , SO2CF3 o CONH2, y cuando R1 y R2 están en vértices adyacentes de un anillo de fenilo, pueden unirse para formar un anillo de cicloheteroalquilo de 5 o 6 miembros que tiene uno o dos vértices de anillo seleccionados independientemente entre O, N y S, en donde dicho anillo cicloheteroalquilo está opcionalmente sustituido con uno a tres miembros seleccionado entre flúor y alquilo C1-C3 ;
R3 y R4 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, flúor, OH, CN, CO2H, C(O)NH2 , N(R5a)2, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -(CR5R5)m-OH, -(CR5R5)m-CO2H, -(CR5R5)m-C(O)NH2, -(CR5R5)m-C(O)NHR5a, -(CR5R5)mN(R5a)2 , -NH(CR5R5)mCO2H o -NH(CR5R5)m-C(O)NH2 ;
cada R5 es independientemente H, F, OH, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido u -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
cada R5a es independientemente H o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
R6 es H, OH, F, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o -N(R5a)2 ; y cada m es independientemente 1, 2 o 3.
En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en el presente documento tienen la fórmula (Ia):
Figure imgf000014_0002
En algunas realizaciones seleccionadas de fórmula (Ia), se proporcionan compuestos que tienen las fórmulas (Ia1) o (Ia2). Los compuestos de la invención tienen la fórmula (Ia3):
En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en el presente documento tienen la fórmula (Ib), (Ic) o (Id):
Figure imgf000015_0001
En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en el presente documento tienen la fórmula (Ie):
Figure imgf000015_0002
En algunas realizaciones seleccionadas de fórmula (Ie), se proporcionan los compuestos que tienen la fórmula (Ie1):
Figure imgf000015_0003
En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en el presente documento tienen la fórmula (If), (Ig) o (Ih):
Figure imgf000015_0004
En algunas realizaciones, los compuestos proporcionados en el presente documento tienen la fórmula (Ii) o (Ij):
Figure imgf000015_0005
Para cada una de las anteriores fórmulas (Ia), (Ia1), (Ia2), (Ia3), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (Ie1), (If), (Ig), (Ih), (Ii) y (Ij), cada uno de los subíndices, letras, J1, R1, R2, R3, R4 y R5 tienen los significados proporcionados con referencia a la fórmula (I), a menos que se indique de otro modo.
En un grupo de realizaciones seleccionadas, se proporciona cualquier compuesto de la Figura 1.
En otro grupo de realizaciones seleccionadas, se proporciona cualquier compuesto de la Figura 1 que tiene un nivel de actividad identificado como "A" o "B".
En otro grupo de realizaciones seleccionadas, se proporciona cualquier compuesto de la Figura 1 que tiene un nivel de actividad identificado como "A".
MÉTODOS DE SÍNTESIS
Los compuestos de la presente invención pueden prepararse a partir de materiales de partida que se conocen en la bibliografía química o están disponibles comercialmente mediante métodos tales como los ilustrados en los siguientes Esquemas utilizando transformaciones químicas conocidas por los expertos en la materia de la química orgánica. Disolventes, temperaturas, presiones y otras condiciones de reacción pueden seleccionarse fácilmente por un experto habitual en la materia. Estos Esquemas son ilustrativos y no pretenden limitar las posibles técnicas que un experto en la materia puede usar para fabricar los compuestos desvelados en el presente documento. Los diferentes métodos pueden ser evidentes para los expertos en la materia. Adicionalmente, las diversas etapas de la síntesis pueden realizarse en una secuencia alternativa u orden para dar el compuesto o los compuestos deseados. Además, la representación de las reacciones en estos Esquemas como etapas discretos no excluye que se realicen en tándem, ya sea telescópicamente múltiples pasos en el mismo recipiente de reacción o realizando múltiples pasos sin purificar o caracterizar el intermedio o los intermedios. Además, muchos de los compuestos preparados mediante los procedimientos a continuación, pueden modificarse usando química convencional bien conocida para los expertos en la materia. Todos los documentos citados en el presente documento se incorporan en el presente documento como referencia en su totalidad.
Las referencias a muchas de estas transformaciones químicas empleadas en el presente documento se pueden encontrar en Smith, M.B. et al., March's Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms, and Structure", Quinta edición, Wiley-Interscience, Nueva York (2001) u otros textos convencionales sobre el tema de la química orgánica sintética. Determinadas transformaciones pueden requerir que los grupos funcionales reactivos estén enmascarados mediante un grupo o grupos protectores. Una referencia conveniente que proporciona condiciones para la introducción, eliminación y susceptibilidad relativa a las condiciones de reacción de estos grupos es Greene, T.W. et al., Protective Groups in Organic Synthesis, Tercera Edición, Wiley-Interscience, Nueva York (1999).
(Esquema 1: amidas y sulfonamidas inversas, núcleo de cicloalquilo, G directo o unido a O )
Esquema 1
Figure imgf000017_0001
El tratamiento de un éster de fosfonoacetato (III), con una base tal como hidruro de sodio en un disolvente tal como THF (esquema 1) seguido de una cetona de estructura general II proporciona una olefina trisustituida. Los análogos sustituidos de III (R3 no es H) producen olefinas tetrasustituidas. Este método y los métodos adicionales que se describen a continuación son transformaciones familiares para los expertos en la técnica de la química orgánica/medicinal. Se conocen métodos alternativos para la olefinación y las transformaciones que se describen a continuación y serán seleccionados por un experto en la materia basándose en su aplicabilidad al sustrato específico en consideración. La reducción se logra agitando o sacudiendo una solución de la olefina en un disolvente adecuado en una atmósfera o más de H2 en presencia de un catalizador, normalmente paladio sobre carbono. La hidrólisis del grupo cetal proporciona una cetona de estructura general IV. Normalmente, esto se logra calentando con un ácido acuoso como HCl en presencia de un codisolvente, tal como THF. Además del cetal cíclico basado en etilenglicol mostrado, podrían usarse otros grupos protectores cetal cíclicos y acíclicos. Las cetonas se desprotonan con bases, tal como LiHMDS y reaccionan con A/-feniltrifluorometanosulfonimida o reactivos similares para producir triflatos de estructura general V. Estos triflatos participan en acoplamientos de Suzuki (T. Ishiyama, M. Murata, N. Miyaura, J. Org. Chem., 1995, 60, 7508-7510) con ácidos o ésteres borónicos G-B(OR)2 para proporcionar productos acoplados. Se conocen muchas variaciones de esta reacción, pero generalmente implica calentar los dos sustratos y un catalizador, tal como (Ph3P)4Pd en un disolvente, tal como DMF con una base, tal como carbonato potásico ac. La reducción de la olefina proporciona el intermedio VI (en donde V = un enlace y E = CH). Las cetonas IV se pueden reducir mediante NaBH4 o agentes reductores de hidruro similares para producir alcoholes de la estructura general VII. Estos alcoholes se pueden desprotonizar con bases, tales como hidruro sódico o KHMDS, y los alcóxidos resultantes pueden reaccionar con haluros de arilo o heteroarilo en condiciones de SNAr para producir intermedios VI adicionales (en donde V = O y E = CH). Como alternativa, la reacción se puede realizar mediante la activación del alcohol VII con DIAD, DEAD o un azodicarboxilato relacionado y un trialquilo o triarilfosfina y el acoplamiento con un fenol o un heteroarilo relacionado GOH. (Reacción de Mitsunobu) Los intermedios VI (y los intermedios posteriores) se pueden obtener como mezclas de isómeros cis y trans. Los métodos para el control del resultado estereoquímico de las reacciones anteriores son conocidos por aquellos familiarizados en la técnica de la química orgánica/medicinal. Adicionalmente, los métodos para la separación de estos isómeros son conocidos y se describen en detalle en los ejemplos sintéticos. Si se requiere, el grupo R4 se puede unir mediante alquilación del intermedio VI. Los métodos para el control de la estereoquímica absoluta del centro asimétrico resultante son conocidos por los familiarizados con la técnica, al igual que los métodos de separación quiral. Saponificación del éster calentando con LiOH ac. o una base similar, generalmente en presencia de un codisolvente orgánico, tal como THF, proporciona los ácidos carboxílicos VIII. Los ácidos VIII se pueden reorganizar, generalmente mediante calentamiento con DPPA y trietilamina (Curtius y reordenamientos relacionados), y los isocianatos intermedios reaccionan con base ac. para producir aminas primarias IX. Estos pueden reaccionar con electrófilos que incluyen, pero no se limitan a, cloruros de ácido y cloruros de sulfonilo XVIa para producir compuestos de la invención I. Otro medio de preparar compuestos I a partir de IX en donde A es CO usa el derivado de ácido carboxílico de XVIa y reactivos de acoplamiento de péptidos. Para una revisión reciente de los métodos de acoplamiento de péptidos, véase: Ayman El-Faham and Fernando Albericio. Chem.Rev. 2011, 111, 6557-6602.
(Esquema 2: amidas y sulfonamidas inversas, núcleo de piperidina, G directo o unido a C)
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Los ésteres de piperidina y pirrolidina X son compuestos conocidos y pueden sufrir reacciones de SNAr (V = un enlace) y N-alquilación (V = C(R5a)2) para proporcionar los intermedios VI (E = N). Estos intermedios se pueden transformar en compuestos de la invención I como se muestra en el Esquema I.
(Esquema 3: amidas y sulfonamidas inversas, núcleo de cicloalquilo o piperidina, G directo o unido a C u O, método alternativo)
Figure imgf000018_0002
El esquema 3 ilustra un método para hacer un VI intermedio realizando los pasos del esquema 1 en un orden diferente. El intermedio II puede convertirse en un triflato como se describió anteriormente y acoplarse con un ácido o éster borónico G-B(OR)2 para dar el intermedio XI (V = un enlace). Los análogos en donde V = O se pueden preparar mediante la reducción de la cetona II y la conversión en el éter XI como se describió anteriormente. La hidrólisis cetal proporciona la cetona XII. La transformación en el intermedio VI se realiza mediante olefinación y reducción como se ha descrito anteriormente. Los intermedios XII en los que E = N se pueden preparar a partir de cetonas XIII usando la química SNAr (V = un enlace) o alquilación (V = C(R5a)2).
(Esquema 4: amidas normales truncadas, núcleo de cicloalquilo o piperidina, G directo o unido a C u O)
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El esquema 4 ilustra un método para preparar compuestos adicionales de la invención. La cetona XII se puede transformar en un nitrilo mediante el uso de TosMIC (reacción de Van Leusen). La hidrólisis del nitrilo proporciona el ácido XIV que puede convertirse en compuestos de la invención I mediante tratamiento con aminas en condiciones de acoplamiento de amidas.
(Esquema 5: ureas y fenilacéticamidas de ciclohexilamina o 4-aminopiperidina, G directo o unido a C u O)
Figure imgf000019_0002
El esquema 5 ilustra un método para preparar compuestos adicionales de la invención. Las cetonas XII se pueden transformar en aminas primarias XV mediante aminación reductora con amoniaco o una sal de amonio. Esta reacción se realiza generalmente usando cianoborohidruro sódico en un disolvente alcohólico. El tratamiento con isocianatos XVIc proporciona ureas que son compuestos de la invención I. Las arilacetamidas que son compuestos de la invención I se obtienen acoplando amina XV con ácidos arilacéticos XVId usando un reactivo tal como Bop y una base de amina terciaria en un disolvente tal como DMF.
(Esquema 6: Control de la estereoquímica absoluta en la conversión de VI a VIII)
Figure imgf000020_0001
El esquema 6 ilustra un método para controlar la estereoquímica absoluta del intermedio VIII y los materiales que surgen de él. La saponificación de los ésteres VI proporciona los ácidos carboxílicos XVII. El tratamiento de estos ácidos con un cloruro de ácido tal como cloruro de pivaloílo proporciona un intermedio de anhídrido mixto. En un recipiente separado, una oxazolidinona ópticamente pura de estereoquímica conocida y estructura general XVIII se desprotona mediante tratamiento con una base fuerte, tal como n-BuLi. Estas especies activadas se combinan para formar la aciloxazolidinona XIX que se desprotona con bases tales como NaHMDS. La alquilación del enolato resultante procede con un control predecible de la estereoquímica en el centro recién formado para proporcionar los materiales XX. La retirada del auxiliar quiral para dar ácidos carboxílicos VIII ópticamente activos se logra mediante tratamiento con una solución de peróxido de hidrógeno básico. Para una revisión de la historia y el alcance del alcance de esta reacción, véase: D. A. Evans, M. D. Ennis, D. J. Mathre. J. Am. Chem. Soc., 1982, 104 (6), pág. 1737-1739.
(Esquema 7: Síntesis de compuestos de la invención (I) en donde R6 = OH)
Figure imgf000021_0001
Como se muestra en el Esquema 7, una cetona de estructura general IV se puede tratar con el litiado G-Li, que se puede generar mediante varios métodos bien conocidos por los expertos en la materia, para producir un alcohol terciario de estructura general XXI. El éster de estructura general XXXI se puede convertir en un compuesto de estructura general I mediante métodos ya descritos en el presente documento. Como alternativa, la cetona IV se puede tratar con el organometálico MgBr-V-G (reactivo de Grignard) para dar un alcohol terciario de estructura general XXII.
(Esquema 8: Síntesis de compuestos de la invención (I) en donde R5 = OH)
Figure imgf000021_0002
Como se muestra en el Esquema 8, una cetona de estructura general XII se puede tratar con un acetato de halo en donde X = Br en presencia de cinc metálico (reacción de Reformatsky) para dar un alcohol terciario de estructura general XXIII. El éster XXIII se puede convertir en un compuesto de la invención (I) mediante métodos ya descritos en el presente documento.
Además de los esquemas generales anteriores, los compuestos descritos en el presente documento se pueden preparar mediante métodos representativos como se proporciona en los Ejemplos a continuación.
Modificaciones para potenciar las características de los inhibidores
Con frecuencia es beneficioso, y a veces imperativo, mejorar una o más propiedades físicas de las modalidades de tratamiento divulgadas en el presente documento y/o la forma en que se administran. Las mejoras de las propiedades físicas incluyen, por ejemplo, métodos para aumentar la solubilidad en agua, la biodisponibilidad, la semivida en suero y/o la semivida terapéutica; y/o modular la actividad biológica.
Las modificaciones conocidas en la técnica incluyen pegilación, fusión de Fc y fusión de albúmina. Aunque generalmente se asocian con agentes de molécula grande (por ejemplo, polipéptidos), tales modificaciones se han evaluado recientemente con moléculas pequeñas particulares. A modo de ejemplo, Chiang, M. et al., (J. Am. Chem. Soc., 136(9):3370-3373 (2014)) describen un agonista de molécula pequeña del receptor de adenosina 2a conjugado con el dominio Fc de inmunoglobulina. El conjugado de molécula pequeña-Fc retuvo potentes interacciones con el receptor de Fc y el receptor de adenosina 2a y mostró propiedades mejores en comparación con la molécula pequeña no conjugada. Además, se ha descrito la unión covalente de moléculas de PEG a agentes terapéuticos de molécula pequeña (Li, W. et al., Progress in Polymer Science, 38:421-444 (2013)).
Usos terapéuticos y profilácticos
La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento en el tratamiento o la prevención de una amplia gama de enfermedades, trastornos y/o afecciones, y/o de los síntomas de los mismos. Si bien los usos particulares se describen en detalle a continuación, debe entenderse que la presente invención no se limita a ellos. Adicionalmente, aunque a continuación se exponen categorías generales de enfermedades, trastornos y afecciones particulares, algunas de las enfermedades, trastornos y afecciones pueden pertenecer a más de una categoría y otros pueden no ser miembros de ninguna de las categorías divulgadas.
Trastornos relacionados con la oncología. En conformidad con la presente invención, puede utilizarse un inhibidor de la IDO para el tratamiento o la prevención de una afección o trastorno proliferativo, incluyendo un cáncer, por ejemplo, cáncer del útero, cuello uterino, mama, de próstata, de testículos, del tracto gastrointestinal (por ejemplo, esófago, orofaringe, estómago, intestino delgado o grueso, colon o recto), de riñón, de célula renal, vejiga, de hueso, de médula ósea, de piel, de cabeza o cuello, hígado, de vesícula biliar, de corazón, de pulmón, páncreas, de glándula salival, glándula suprarrenal, tiroides, de cerebro (por ejemplo, gliomas), de ganglios, de sistema nervioso central (SNC) y de sistema nervioso periférico (SNP), y cánceres del sistema hematopoyético y del sistema inmunitario (por ejemplo, bazo o timo). La presente invención también proporciona métodos de tratamiento o prevención de otras enfermedades, trastornos o dolencias relacionados con el cáncer, incluyendo, por ejemplo, tumores inmunógenos, tumores no inmunógenos, tumores inactivos, cánceres inducidos por virus (por ejemplo, cánceres de células epiteliales, cánceres de células endoteliales, carcinomas de células escamosas y virus del papiloma), adenocarcinomas, linfomas, carcinomas, melanomas, leucemias, mielomas, sarcomas, teratocarcinomas, cánceres inducidos químicamente, metástasis y angiogénesis. La invención contempla la reducción de la tolerancia a una célula tumoral o antígeno de célula cancerosa, por ejemplo, mediante la modulación de la actividad de un linfocito T regulador y/o un linfocito T CD8+ (véase, por ejemplo, Ramirez-Montagut et al., Oncogene, 22:3180-3187 (2003); y Sawaya et al., New Engl. J. Med., 349:1501-1509 (2003)). En realizaciones particulares, el tumor o cáncer es cáncer de colon, cáncer de ovario, cáncer de mama, melanoma, cáncer de pulmón, glioblastoma o leucemia. El uso del término (o términos) enfermedades, trastornos y afecciones relacionadas con el cáncer tiene la intención de referirse ampliamente a las afecciones que están asociadas, directa o indirectamente, con el cáncer, e incluye, por ejemplo, angiogénesis y afecciones precancerosas tales como displasia.
En algunas realizaciones, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento de una afección proliferativa, un cáncer, un tumor o una afección precancerosa con un inhibidor de la IDO y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional, ejemplos de los cuales se exponen en otra parte en el presente documento.
Trastornos inmunomediados e inflamatorios. Como se usa en el presente documento, las expresiones tales como "enfermedad inmunitaria", "afección inmunitaria", "trastorno inmunitario", "enfermedad inflamatoria", "afección inflamatoria", "trastorno inflamatorio", y similares, pretenden abarcar ampliamente cualquier afección inmunomediada o inflamatoria (por ejemplo, inflamación patológica y enfermedades autoinmunitarias). Dichas afecciones con frecuencia están estrechamente relacionadas con otras enfermedades, trastornos y afecciones. A modo de ejemplo, una "afección inmunitaria" puede referirse a afecciones proliferativas, tales como el cáncer, tumores y angiogénesis; incluyendo infecciones (agudas y crónicas), tumores y cánceres que resisten la erradicación por el sistema inmunitario.
Un listado no limitante de enfermedades, trastornos y afecciones inmunomediadas o inflamatorias que pueden tratarse o prevenirse con los compuestos y composiciones de la presente invención incluyen, artritis (por ejemplo, artritis reumatoide), insuficiencia renal, lupus, asma, psoriasis, colitis, pancreatitis, alergias, fibrosis, complicaciones quirúrgicas (por ejemplo, cuando las citocinas inflamatorias impiden la cicatrización), anemia y fibromialgia. Otras enfermedades y trastornos que pueden estar asociados con la inflamación crónica incluyen enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardíaca congestiva, ictus, estenosis de la válvula aórtica, arteriesclerosis, osteoporosis, enfermedad de Parkinson, infecciones, enfermedad inflamatoria del intestino (por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), dermatitis alérgica de contacto y otros eccemas, esclerosis sistémica, trasplante y esclerosis múltiple.
Entre otros trastornos inmunomediados, se contempla que la inhibición de la función de la IDO también puede desempeñar un papel en la tolerancia inmunitaria y la prevención del rechazo fetal en el útero.
En algunas realizaciones, un inhibidor de la IDO descrito en el presente documento se puede combinar con un agente inmunosupresor para reducir el número de células inmunitarias efectoras.
Algunas de las enfermedades, trastornos y afecciones mencionados anteriormente para los que un inhibidor de la IDO puede ser particularmente eficaz (debido a, por ejemplo, limitaciones de las terapias actuales) se describen con más detalle a continuación.
La artritis reumatoide (AR), que generalmente se caracteriza por una inflamación crónica en el revestimiento membranoso (la membrana sinovial) de las articulaciones, afecta aproximadamente al 1 % de la población de los EE.UU. (~2,1 millones de personas). Una mayor comprensión del papel de las citocinas, incluidas TNF-a e IL-1, en el proceso inflamatorio, ha permitido el desarrollo y la introducción de una nueva clase de fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (FARME). Los agentes (algunos de los cuales se superponen con las modalidades de tratamiento para la AR) incluyen ENBREL® (etanercept), REMICADE® (infliximab), HUMIRA® (adalimumab) y KINERET® (anakinra). Aunque algunos de estos agentes alivian los síntomas, inhiben la progresión del daño estructural y mejoran la función física en poblaciones particulares de pacientes, todavía existe la necesidad de agentes alternativos con una eficacia mejorada, mecanismos de acción complementarios y menos efectos adversos o menos graves.
La psoriasis, una constelación de enfermedades cutáneas crónicas comunes inmunomediadas, afecta a más de 4,5 millones de personas en los EE.UU., de los cuales se considera que 1,5 millones tienen una forma de la enfermedad de moderada a grave. Además, más del 10 % de los pacientes con psoriasis desarrollan artritis psoriásica, que daña el hueso y el tejido conjuntivo alrededor de las articulaciones. Una mejor comprensión de la fisiología subyacente de la psoriasis ha dado como resultado la introducción de agentes que, por ejemplo, se dirigen a la actividad de los linfocitos T y las citocinas responsables de la naturaleza inflamatoria de la enfermedad. Dichos agentes incluyen los inhibidores de TNF-a (también utilizados en el tratamiento de la artritis reumatoide (AR)), incluyendo ENBREL® (etanercept), REMICADE® (infliximab) y HUMIRA® (adalimumab)), e inhibidores de linfocitos T, tales como AMEVIVE® (alefacept) y RAPTIVA® (efalizumab). Aunque varios de estos agentes son eficaces hasta cierto punto en determinadas poblaciones de pacientes, ninguno ha demostrado poder tratar de forma eficaz a todos los pacientes.
Los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento pueden ayudar particularmente a los sujetos que padecen esclerosis múltiple (EM), una enfermedad autoinmunitaria gravemente debilitante que comprende múltiples áreas de inflamación y cicatrización de la mielina en el cerebro y la médula espinal, ya que los tratamientos actuales solo alivian los síntomas o retrasan la progresión de la discapacidad.
De forma similar, los inhibidores de la IDO pueden ser particularmente ventajosos para sujetos aquejados por trastornos neurodegenerativos, tales como la enfermedad de Alzheimer (EA), un trastorno cerebral que perjudica gravemente los procesos de pensamiento, de memoria y del lenguaje de los pacientes; y la enfermedad de Parkinson (EP), un trastorno progresivo del SNC caracterizado por, por ejemplo, un movimiento anómalo, rigidez y temblor. Estos trastornos son progresivos y debilitantes, y no se dispone de agentes curativos.
Trastornos relacionados con virus. La presente invención contempla el uso de inhibidores de la IDO en el tratamiento y/o la prevención de cualquier enfermedad, trastorno o afección víricos, para los que el tratamiento con un inhibidor de la IDO puede ser beneficioso. En realizaciones particulares, el trastorno vírico es un trastorno vírico crónico. Los ejemplos de enfermedades, trastornos y afecciones víricas que se contemplan incluyen, pero sin limitación, virus de la hepatitis B (VHB), virus de la hepatitis C (VHC), virus del papiloma humano (VPH), VIH, SIDA (incluidas sus manifestaciones tales como caquexia, demencia y diarrea), virus del herpes simple (VHS), virus de Epstein Barr (VEB), virus varicela zóster, virus de Coxsackie y citomegalovirus (CMV).
Trastornos relacionados con bacterias y parásitos. Las realizaciones de la presente invención contemplan la administración de los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento a un sujeto para el tratamiento de una infección bacteriana, por ejemplo, una infección por Mycobacterium (por ejemplo, Mycobacterium leprae o Mycobacterium tuberculosis) o una infección provocada por Listeria monocytogenes o Toxplasma gondii. Otras realizaciones contemplan el tratamiento de una infección parasitaria que incluye, pero sin limitación, Leishmania donovani, Leishmania tropica, Leishmania major, Leishmania aethiopica, Leishmania mexicana, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale o Plasmodium malariae. Con frecuencia, la terapia antiparasitaria se administra profilácticamente (por ejemplo, antes de que un sujeto viaje a una zona con una alta frecuencia de una infección parasitaria).
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS
Los inhibidores de la IDO de la presente invención pueden estar en forma de composiciones adecuadas para la administración a un sujeto. En general, tales composiciones son "composiciones farmacéuticas" que comprenden un inhibidor (o inhibidores) de la IDO y uno o más diluyentes, transportadores o excipientes farmacéuticamente aceptables o fisiológicamente aceptables. En determinadas realizaciones, los inhibidores de la IDO están presentes en una cantidad terapéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas pueden utilizarse en los métodos de la presente invención; por tanto, por ejemplo, las composiciones farmacéuticas pueden administrarse ex vivo o in vivo a un sujeto para poner en práctica los métodos y usos terapéuticos y profilácticos descritos en el presente documento.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden formularse para que sean compatibles con el método o la vía de administración previstos; en el presente documento se exponen vías de administración de ejemplo. Adicionalmente, las composiciones farmacéuticas pueden utilizarse en combinación con otros agentes o compuestos terapéuticamente activos como se describe en el presente documento para tratar o prevenir las enfermedades, trastornos y afecciones contempladas por la presente invención.
Las composiciones farmacéuticas que contienen el principio activo (por ejemplo, un inhibidor de la función de la IDO) pueden estar en una forma adecuada para el uso oral, por ejemplo, como comprimidos, cápsulas, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes, soluciones, microperlas o elixires. Las composiciones farmacéuticas destinadas al uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas, y tales composiciones pueden contener uno o más agentes tales como, por ejemplo, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes para proporcionar preparaciones sabrosas y farmacéuticamente elegantes. Los comprimidos, cápsulas y similares contienen el principio activo mezclado con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de los comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes granulantes y disgregantes, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o goma arábiga y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco.
Los comprimidos, cápsulas y similares adecuados para la administración oral pueden estar sin recubrir o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregación y absorción en el tracto gastrointestinal y, de ese modo, proporcionar una acción sostenida. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo temporal tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Además, pueden recubrirse mediante técnicas conocidas en la técnica para formar comprimidos terapéuticos osmóticos para la liberación controlada. Los agentes adicionales incluyen partículas biodegradables o biocompatibles o una sustancia polimérica tal como poliésteres, ácidos de poliamina, hidrogel, polivinilpirrolidona, polianhídridos, ácido poliglicólico, etilen-vinilacetato, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, sulfato de protamina o copolímeros de lactida/glicolida, copolímeros de polilactida/glicolida o copolímeros de etilenvinilacetato, para controlar el suministro de una composición administrada. Por ejemplo, el agente oral puede quedar atrapado en microcápsulas preparadas mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, mediante el uso de hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina o microcápsulas de poli(metacrilato de metilo), respectivamente, o en un sistema coloidal de suministro de fármacos. Los sistemas de dispersión coloidal incluyen complejos de macromoléculas, nanocápsulas, microesferas, microperlas y sistemas a base de lípidos, incluyendo emulsiones de aceite en agua, micelas, micelas mixtas y liposomas. Los métodos para la preparación de las formulaciones mencionadas anteriormente serán evidentes para los expertos en la materia.
Las formulaciones para el uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura en donde el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio, caolín o celulosa microcristalina, o como cápsulas de gelatina blanda en donde el principio activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de las mismas. Dichos excipientes pueden ser agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinil pirrolidona, goma de tragacanto y goma arábiga; agentes dispersantes o humectantes, por ejemplo, por ejemplo, un fosfátido de origen natural (por ejemplo, lecitina) o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos (por ejemplo, estearato de polioxietileno), o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga (por ejemplo, para heptadecaetilenoxicetanol), o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitol polioxietilenado), o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitán polietilenado). Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes.
Pueden formularse suspensiones oleosas suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de maní, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo, cera de abeja, parafina dura o alcohol cetílico. Para proporcionar una preparación oral de sabor agradable, se pueden añadir agentes edulcorantes tal como los expuestos anteriormente y como agentes saborizantes.
Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el principio activo mezclado con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. En el presente documento se ejemplifican agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva, o aceite de maní, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina líquida o mezclas de estos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas de origen natural, por ejemplo, goma arábiga o goma de tragacanto; fosfátidos de origen natural, por ejemplo, soja, lecitina, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos; anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitán; y productos de condensación de ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de sorbitán polietilenado.
Las formulaciones también pueden incluir transportadores para proteger la composición frente a la degradación o eliminación rápida del organismo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes, liposomas, hidrogeles, profármacos y sistemas de suministro microencapsulados. Por ejemplo, pueden emplearse un material de retardo temporal tal como monoestearato de glicerilo o estearato de glicerilo, solo o en combinación con una cera.
Las composiciones farmacéuticas normalmente comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la IDO contemplado por la presente invención y uno o más agentes de formulación farmacéutica y fisiológicamente aceptables. Los diluyentes, transportadores o excipientes farmacéuticamente aceptables o fisiológicamente aceptables adecuados incluyen, pero sin limitación, antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico y bisulfato de sodio), conservantes (por ejemplo, alcohol bencílico, metil parabenos, etilo o n-propilo, p-hidroxibenzoato), agentes emulsionantes, agentes de suspensión, agentes dispersantes, disolventes, rellenos, agentes formadores de volumen, detergentes, tampones, vehículos, diluyentes y/o adyuvantes. Por ejemplo, un vehículo adecuado puede ser solución salina fisiológica o solución salina tamponada con citrato, posiblemente complementada con otros materiales comunes en composiciones farmacéuticas para la administración parenteral. La solución salina tamponada neutra o la solución salina mezclada con seroalbúmina son vehículos de ejemplo adicionales. Los expertos en la materia reconocerán fácilmente diversos tampones que pueden utilizarse en las composiciones farmacéuticas y las formas farmacéuticas contempladas en el presente documento. Los tampones típicos incluyen, pero sin limitación, ácidos débiles farmacéuticamente aceptables, bases débiles o mezclas de los mismos. Como ejemplo, los componentes tamponantes pueden ser materiales hidrosolubles tales como ácido fosfórico, ácidos tartáricos, ácido láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido acético, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido glutámico y sales de los mismos. Los agentes tamponantes aceptables incluyen, por ejemplo, un tampón Tris, ácido N-(2-hidroxietil)piperazin-N'-(2-etanosulfónico) (HEPES), ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico (MES), sal de sodio de ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico (MES), ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico (MOPS) y ácido N-tris[hidroximetil]metil-3-aminopropanosulfónico (TAPS).
Una vez que se ha formulado una composición farmacéutica, puede almacenarse en viales estériles como una solución, suspensión, gel, emulsión, sólido o polvo deshidratado o liofilizado. Dichas formulaciones pueden almacenarse en una forma lista para su uso, una forma liofilizada que precisa reconstitución antes del uso, una forma líquida que precisa dilución antes del uso u otra forma aceptable. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se proporciona en un recipiente de un solo uso (por ejemplo, un vial, ampolla, jeringa o autoinyector de un solo uso (similar a, por ejemplo, un EPIPEN®)), mientras que en otras realizaciones se proporciona un recipiente de múltiples usos (por ejemplo, un vial de múltiples usos). Para suministrar un inhibidor de la IDO puede utilizarse cualquier aparato para el suministro de fármacos, incluyendo sistemas de implantes (por ejemplo, bombas implantables) y catéteres, bombas y dispositivos de inyección lenta, todos los cuales son bien conocidos por los expertos en la materia. Para liberar los polipéptidos divulgados en el presente documento durante un período de tiempo definido también pueden utilizarse inyecciones de absorción lenta, las que generalmente se administran por vía subcutánea o intramuscular. Las inyecciones de absorción lenta son habitualmente a base de aceite o sólido y generalmente comprenden al menos uno de los componentes de formulación expuestos en el presente documento. Un experto en la materia está familiarizado con las posibles formulaciones y usos de las inyecciones de absorción lenta.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión oleosa o acuosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con la técnica conocida utilizando los agentes de dispersión o humectantes adecuados y agentes de suspensión mencionados en el presente documento. La preparación inyectable estéril puede ser también una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, en forma de una solución en 1,3-butanodiol. Los diluyentes, disolventes y medios de dispersión que pueden emplearse incluyen agua, solución de Ringer, solución isotónica de cloruro de sodio, CREMOPHOR® EL (BASF, Parsippany, NJ) o solución salina tamponada con fosfato
(PBS), etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido) y mezclas adecuadas de los mismos. Además, como disolvente o medio de suspensión se utilizan convencionalmente aceites fijos estériles. Para este fin puede emplearse cualquier aceite suave no volátil, incluyendo monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico, encuentran uso en la preparación de los inyectables. Puede conseguirse la absorción prolongada de formulaciones inyectables particulares incluyendo un agente que retarde la absorción (por ejemplo, monoestearato de aluminio o gelatina).
La presente invención contempla la administración de los inhibidores de la IDO en forma de supositorios para administración rectal. Los supositorios pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas normales pero líquido a la temperatura rectal y, por lo tanto, se funda en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales incluyen, pero sin limitación, manteca de cacao y polietilenglicoles.
Los inhibidores de la IDO contemplados por la presente invención pueden estar en forma de cualquier otra composición farmacéutica adecuada (por ejemplo, nebulizadores para su uso nasal o por inhalación) conocida actualmente o desarrollada en el futuro.
La concentración de un polipéptido o fragmento del mismo en una formulación puede variar ampliamente (por ejemplo, de menos de aproximadamente el 0,1 %, habitualmente en o al menos aproximadamente el 2% a tanto como del 20 % al 50 % o más en peso) y habitualmente se seleccionará principalmente basándose en los volúmenes de líquido, las viscosidades y en factores basados en el sujeto en conformidad con, por ejemplo, el modo particular de administración seleccionado.
Vías de administración
La presente invención contempla la administración de inhibidores de la IDO y composiciones de los mismos de cualquier manera apropiada. Las rutas adecuadas de administración incluyen, la parenteral (por ejemplo, intramuscular, intravenosa, subcutánea (por ejemplo, inyección o implante), intraperitoneal, intracisternal, intrarticular, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa) e intracerebroventricular), nasal, vaginal, sublingual, intraocular, rectal, tópica (por ejemplo, transdérmica), sublingual e inhalación. Para liberar los inhibidores de la IDO divulgados en el presente documento durante un período de tiempo definido también pueden utilizarse inyecciones de absorción lenta, las que generalmente se administran por vía subcutánea o intramuscular.
Realizaciones particulares de la presente invención contemplan la administración oral.
Terapia combinada
La presente invención contempla el uso de inhibidores de la IDO en combinación con uno o más agentes terapéuticos activos (por ejemplo, agentes quimioterapéuticos) u otras modalidades profilácticas o terapéuticas (por ejemplo, radiación). En tal terapia combinada, los diversos agentes activos tienen con frecuencia distintos mecanismos de acción complementarios. Dicha terapia combinada puede ser especialmente ventajosa al permitir una reducción de la dosis de uno o más de los agentes, reduciendo o eliminando de este modo los efectos adversos asociados con uno o más de los agentes. Adicionalmente, tal terapia combinada puede tener un efecto terapéutico o profiláctico sinérgico sobre la enfermedad, trastorno o afección subyacente.
Como se usa en el presente documento, "combinación" pretende incluir terapias que se pueden administrar por separado, por ejemplo, formuladas por separado para administración separada (por ejemplo, como se puede proporcionar en un kit), y terapias que se pueden administrar juntas en una única formulación (es decir, una "coformulación").
En determinadas realizaciones, los inhibidores de la IDO se administran o aplican secuencialmente, por ejemplo, cuando un agente se administra antes que uno o más de otros agentes. En otras realizaciones, los inhibidores de la IDO se administran simultáneamente, por ejemplo, cuando se administran dos o más agentes al mismo tiempo o aproximadamente; los dos o más agentes pueden estar presentes en dos o más formulaciones separadas o combinados en una sola formulación (es decir, una coformulación). Independientemente de si los dos o más agentes se administran de forma secuencial o simultánea, para los fines de la presente invención se considera que se administran en combinación.
Los inhibidores de la IDO de la presente invención pueden utilizarse en combinación con al menos otro agente (activo) de cualquier manera apropiada según las circunstancias. En una realización, el tratamiento con al menos un agente activo y al menos un inhibidor de la IDO de la presente invención se mantiene durante un período de tiempo. En otra realización, el tratamiento con al menos un agente activo se reduce o se interrumpe (por ejemplo, cuando el sujeto está estable), mientras que el tratamiento con un inhibidor de la IDO de la presente invención se mantiene en un régimen de dosificación constante. En una realización adicional, el tratamiento con al menos un agente activo se reduce o se interrumpe (por ejemplo, cuando el sujeto está estable), mientras que el tratamiento con un inhibidor de la IDO de la presente invención se reduce (por ejemplo, una dosis más baja, una dosificación menos frecuente o un régimen de tratamiento más corto). En otra realización más, el tratamiento con al menos un agente activo se reduce o se interrumpe (por ejemplo, cuando el sujeto está estable), y se aumenta el tratamiento con el inhibidor de la IDO de la presente invención (por ejemplo, una dosis más alta, una dosificación más frecuente o un régimen de tratamiento más largo). En otra realización más, el tratamiento con al menos un agente activo se mantiene y se reduce o interrumpe el tratamiento con el inhibidor de la IDO de la presente invención (por ejemplo, una dosis más baja, una dosificación menos frecuente o un régimen de tratamiento más corto). En otra realización más, el tratamiento con el al menos un agente activo y el tratamiento con el inhibidor de IDO de la presente invención se reducen o interrumpen (por ejemplo, una dosis más baja, una dosificación menos frecuente o un régimen de tratamiento más corto).
Trastornos relacionados con la oncología. La presente invención proporciona métodos para el tratamiento y/o la prevención de una afección proliferativa, un cáncer, un tumor o de una enfermedad, trastorno o afección precancerosa, con un inhibidor de la IDO y al menos un agente terapéutico adicional, tal como radiación, un agente inmunomodulador o un agente quimioterapéutica, o un agente de diagnóstico. Los agentes inmunomoduladores adecuados que pueden utilizarse en la presente invención incluyen CD40L, B7 y B7RP1; activación de anticuerpos monoclonales (mAb) para receptores estimulantes, tales como, anti-CD40, anti-CD38, ligando anti-ICOS y ligando de 4-IBB; carga de antígeno de células dendríticas (in vitro o in vivo); vacunas contra el cáncer tales como vacunas contra el cáncer de células dendríticas; citocinas/quimiocinas, tales como, IL1, IL2, IL12, IL18, ELC/CCL19, SLC/CCL21, MCP-1, IL-4, IL-18, TNF, IL-15, MDC, IFNa/b, M-CSF, IL-3, GM-CSF, IL-13 y anti-IL-10; lipopolisacáridos bacterianos (LPS); y oligonucleótidos inmunoestimulantes.
Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen, pero sin limitación, agentes alquilantes tales como tiotepa y ciclofosfamida; alquilsulfonatos, tales como busulfán, improsulfán y piposulfán; aciridinas, tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilmelaminas, incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolomelamima; mostazas nitrogenadas, tales como clorambucilo, clornafacina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas, tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos tales como aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, caliqueamicina, carabicina, caminomicina, carcinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, cinostatina, zorrubicina; antimetabolitos, tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos del ácido fólico, tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina, tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina, tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, 5-FU; andrógenos, tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antisuprarrenales, tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reabastecedor de ácido fólico, tal como ácido frolínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diacicuona; elformitina; acetato de eliptinio; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano; lonidamina; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; ácido podofilínico; 2-etilhidracida; procarbacina; razoxano; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triacicuona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; uretano; vindesina; dacarbacina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido (Ara-C); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por ejemplo, paclitaxel y doxetaxel; clorambucilo; gemcitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; platino y complejos de coordinación de platino, tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitomicina C; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina; navelbina; novantrona; tenipósido; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT11; inhibidores de la topoisomerasa; difluorometilornitina (DMFO); ácido retinoico; esperamicinas; capecitabina; y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Los agentes quimioterapéuticos también incluyen agentes antihormonales que actúan regulando o inhibiendo la acción hormonal sobre tumores tales como los antiestrógenos, incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno, raloxifeno, 4(5)-imidazoles inhibidores de aromatasa, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, onapristona, y toremifeno; y antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores. En determinadas realizaciones, la terapia combinada comprende la administración de una hormona o agente hormonal relacionado.
Los agentes quimioterapéuticos también incluyen inhibidores de la transducción de señales (STI). La expresión "inhibidor de la transducción de señales" se refiere a un agente que inhibe selectivamente una o más etapas de en una ruta de señalización. Los inhibidores de la transducción de señales (STI) de la presente invención incluyen: (i) inhibidores de la cinasa bcr/abl (por ejemplo, GLEEVEC); (ii) inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF), incluyendo inhibidores de cinasas y anticuerpos; (iii) inhibidores del receptor her-2/neu (por ejemplo, HERCEPTIN); (iv) inhibidores de las quinasas de la familia Akt o la ruta de Akt (por ejemplo, rapamicina); (v) inhibidores de cinasas del ciclo celular (por ejemplo, flavopiridol); y (vi) inhibidores de la fosfatidil inositol cinasa.
Las modalidades de tratamiento adicionales que se pueden utilizar en combinación con un inhibidor de la IDO incluyen una citocina o un antagonista de citocina, tal como IL-12, IFN, o anti receptor de factor de crecimiento epidérmico, radioterapia, un anticuerpo monoclonal contra otro antígeno tumoral, un complejo de un anticuerpo monoclonal y una toxina, un adyuvante de linfocitos T, trasplante de médula ósea o células presentadoras de antígenos (por ejemplo, terapia con células dendríticas). Además, en el presente documento se proporcionan vacunas (por ejemplo, como una proteína soluble o como un ácido nucleico que codifica la proteína).
Enfermedades cardiovasculares. La presente invención proporciona métodos para el tratamiento y/o la prevención de determinadas enfermedades, trastornos y afecciones cardiovasculares o metabólicas, así como los trastornos asociados a los mismos, con un inhibidor de la IDO y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional.
Los ejemplos de agentes terapéuticos útiles en la terapia combinada para el tratamiento de la hipercolesterolemia (y también de la ateroesclerosis) incluyen estatinas (por ejemplo, CRESTOR, LESCOL, LIPITOR, MEVACOR, PRAVACOL y ZOCOR), que inhiben la síntesis enzimática del colesterol; resinas para ácidos biliares (por ejemplo, COLESTID, LO-CHOLEST, PREVALITE, QUESTRAN y WELCHOL), que secuestran el colesterol e impiden su absorción; ezetimiba (ZETIA), que bloquea la absorción del colesterol; ácido fíbrico (por ejemplo, TRICOR), que reduce los triglicéridos y puede aumentar moderadamente la HDL; niacina (por ejemplo, NIACOR), que reduce moderadamente el colesterol de las LDL y los triglicéridos; y/o una combinación de los mencionados anteriormente (por ejemplo, VYTORIN (ecetimiba con simvastatina). Los tratamientos alternativos para el colesterol que pueden ser candidatos para su uso en combinación con los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento incluyen diversos complementos y plantas medicinales (por ejemplo, ajo, policosanol y guggul). La presente invención abarca sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Trastornos inmunomediados e inflamatorios. La presente invención proporciona métodos para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, trastornos y afecciones inmunomediadas y/o inflamatorias, así como los trastornos asociados a los mismos, con un inhibidor de la IDO y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional.
Los ejemplos de agentes terapéuticos útiles en la terapia combinada incluyen, pero sin limitación, los siguientes: fármacos antinflamatorios no esteroideos (AINE) tales como la aspirina, el ibuprofeno y otros derivados del ácido propiónico (alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, indoprofeno, ketoprofeno, miroprofeno, naproxeno, oxaprocina, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico y tioxaprofeno), derivados del ácido acético (indometacina, acemetacina, alclofenaco, clidanaco, diclofenaco, fenclofenaco, ácido fenclózico, fentiazaco, fuirofenaco, ibufenaco, isoxepaco, oxpinaco, sulindaco, tiopinaco, tolmetina, cidometacina y zomepiraco), derivados del ácido fenámico (por ejemplo, ácido flufenámico, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico y ácido tolfenámico), derivados del ácido bifenilcarboxílico (por ejemplo, diflunisal and flufenisal), oxicámicos (isoxicam, piroxicam, sudoxicam y tenoxican), salicilatos (ácido acetilsalicílico, sulfasalacina) y pirazolonas (apazona, benzpiperilona, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona, fenilbutazona). Otras combinaciones incluyen inhibidores de la ciclooxigenasa-2 (COX-2).
Otros agentes activos para la combinación incluyen esteroides tales como prednisolona, prednisona, metilprednisolona, betametasona, dexametasona o hidrocortisona. Dicha combinación puede ser especialmente ventajosa ya que uno o más efectos adversos del esteroide pueden reducirse o incluso eliminarse disminuyendo gradualmente la dosis de esteroide necesaria.
Los ejemplos adicionales de agentes activos que pueden utilizarse en combinaciones para tratar, por ejemplo, la artritis reumatoide, incluyen fármacos antinflamatorios supresores de citocinas (CSAIDs, forma siglada de cytokine suppressive anti-inflammatory drugs); anticuerpos para, o antagonistas de, otras citocinas o factores de crecimiento humanos, por ejemplo, TNF, LT, IL-1 p, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF o PDGF.
Las combinaciones particulares de agentes activos pueden interferir en distintos puntos de la cascada autoinmunitaria e inflamatoria posterior, e incluyen antagonistas del TNF tales como anticuerpos para TNF quiméricos, humanizados o humanos, REMICADE, fragmentos de anticuerpo anti-TNF (por ejemplo, CDP870) y receptores de TNF p55 o p75 solubles, derivados de los mismos, p75TNFRIgG (ENBREL.) o p55TNFR1gG (LENERCEPT), receptor de IL-13 soluble (sIL-13) y también inhibidores de la enzima convertidora de TNFa (TACE, forma siglada de TNFa-converting enzyme); de forma similar, Los inhibidores de IL-1 (por ejemplo, inhibidores de la enzima convertidora de interleucina-1) pueden ser eficaces. Otras combinaciones incluyen interleucina 11, anti-P7s y ligando de glicoproteína de p-selectina (PSGL, forma siglada de p-selectin glycoprotein ligand). Otros ejemplos de agentes útiles en combinación con los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento incluyen interferón-p1a (AVONEX); interferón-p1b (BETASERON); copaxone; oxígeno hiperbárico; inmunoglobulina intravenosa; clabribina; y anticuerpos para, o antagonistas de, otras citocinas o factores de crecimiento humanos (por ejemplo, anticuerpos contra el ligando de CD40 y CD80).
Inhibidores de puntos de control inmunitario. La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la función de la IDO descritos en el presente documento en combinación con inhibidores de puntos de control inmunitario adicionales.
La enorme cantidad de alteraciones genéticas y epigenéticas que son características de todos los cánceres proporciona un conjunto diverso de antígenos que el sistema inmunitario puede utilizar para distinguir las células tumorales de sus equivalentes normales. En el caso de los linfocitos T, la amplitud final (por ejemplo, los niveles de producción o proliferación de citocinas) y la calidad (por ejemplo, el tipo de respuesta inmunitaria generada, tal como el patrón de producción de citocinas) de la respuesta, que se inicia a través del reconocimiento de antígenos por el receptor de linfocitos T (TCR), está regulada por un equilibrio entre señales coestimulantes e inhibidoras (puntos de control inmunitario). En condiciones fisiológicas normales, los puntos de control inmunitario son cruciales para la prevención de la autoinmunidad (es decir, el mantenimiento de la autotolerancia) y también para la protección de los tejidos del daño cuando el sistema inmunitario responde a una infección patógena. Los tumores pueden desregular la expresión de las proteínas de puntos de control inmunitario como un importante mecanismo de resistencia inmunitaria.
Los linfocitos T han sido el foco principal de los esfuerzos para manipular terapéuticamente la inmunidad antitumoral endógena debido a i) su capacidad para el reconocimiento selectivo de péptidos derivados de proteínas en todos los compartimentos celulares; ii) su capacidad para reconocer y destruir directamente las células que expresan antígenos (por los linfocitos T efectores CD8+; también conocidos como linfocitos T citotóxicos (los CTL); y iii) su capacidad para orquestar diversas respuestas inmunitarias por parte de los linfocitos T auxiliares CD4+, que integran mecanismos efectores adaptativos e innatos. En el contexto clínico, el bloqueo de los puntos de control inmunitarios, que da como resultado la amplificación de las respuestas de linfocitos T específicos de antígeno, ha demostrado ser un enfoque prometedor en los tratamientos del cáncer humano.
La inmunidad mediada por linfocitos T incluye múltiples etapas secuenciales, cada una de las cuales está regulada contrarrestando señales estimulantes e inhibidoras para optimizar la respuesta. Si bien casi todas las señales inhibidoras en la respuesta inmunitaria modulan en última instancia rutas de señalización intracelular, muchas se inician a través de receptores de membrana, cuyos ligandos están unidos a membrana o son solubles (citocinas). Si bien los ligandos y receptores coestimulantes e inhibidores que regulan la activación de los linfocitos T con frecuencia no se sobreexpresan en los cánceres con respecto a los tejidos normales, los ligandos y receptores inhibidores que regulan las funciones efectoras de los linfocitos T en los tejidos se sobreexpresan comúnmente en las células tumorales o en las células no transformadas asociadas con el microentorno tumoral. Las funciones de los puntos de control inmunitario de ligando-receptor soluble y unido a la membrana se pueden modular utilizando anticuerpos agonistas (para las vías coestimulantes) o anticuerpos antagonistas (para las vías inhibidoras). Por tanto, a diferencia de la mayoría de los anticuerpos aprobados actualmente para la terapia del cáncer, los anticuerpos que bloquean los puntos de control inmunitario no se dirigen directamente a las células tumorales, sino que se dirigen a receptores de linfocitos o sus ligandos para potenciar la actividad antitumoral endógena. [Véase Pardoll, (abril de 2012) Nature Rev. Cancer 12:252-64].
Los ejemplos de puntos de control inmunitarios (ligandos y receptores), algunos de los cuales están regulados al alza de forma selectiva en diversos tipos de células tumorales, que son candidatos para el bloqueo, incluyen PD1 (proteína muerte celular programada 1); PDL1 (ligando de PD1); BTLA (atenuador de linfocitos B y T); CTLA4 (antígeno asociado a linfocitos T citotóxicos 4); TIM3 (proteína 3 de membrana de linfocitos T); LAG3 (gen de activación de linfocitos 3); A2aR (receptor de adenosina A2a A2aR); y receptores inhibidores de células NK, los cuales pueden dividirse en dos clases basándose en sus características estructurales: i) receptores de tipo inmunoglobulina de linfocitos citolíticos naturales (los KIR, forma siglada de killer cell immunoglobulin-like receptor), y ii) receptores de lectina de tipo C (miembros de la familia de receptores transmembrana de tipo II). En la bibliografía se han descrito otros puntos de control inmunitario menos bien definidos, incluyendo tanto receptores (por ejemplo, el receptor 2B4 (también conocido como CD244)) como ligandos (por ejemplo, determinados ligandos inhibidores de la familia B7 como B7-H3 (también conocido como CD276) y B7-H4 (también conocido como B7-S1, B7x y VCTN1)). [Véase Pardoll, (abril de 2012) Nature Rev. Cancer 12:252-64].
La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la función de la IDO descritos en el presente documento en combinación con inhibidores de los ligandos y receptores de puntos de control inmunitarios mencionados anteriormente, así como ligandos y receptores de puntos de control inmunitarios aún por describir. Actualmente se encuentran disponibles determinados moduladores de puntos de control inmunitarios, mientras que otros están en fases finales de desarrollo. A modo ilustrativo, cuando se aprobó para el tratamiento del melanoma en 2011, el anticuerpo monoclonal CTLA4 completamente humanizado ipilimumab (YERVOY; Bristol-Myers Squibb) se convirtió en el primer inhibidor de puntos de control inmunitario en recibir aprobación reglamentaria en los EE.UU. Las proteínas de fusión que comprenden CTLA4 y un anticuerpo (Ig para CTLA4; abatcept (ORENCIA; Bristol-Myers Squibb)) se han utilizado para el tratamiento de la artritis reumatoide y se ha demostrado que otras proteínas de fusión son eficaces en pacientes con trasplante renal sensibilizados frente al virus de Epstein Barr. Los anticuerpos para PD1 también están disponibles para el tratamiento del cáncer, incluyendo, por ejemplo, nivolumab (Bristol-Myers Squibb) y pembroluzimab (Merck), y también se están evaluando anticuerpos anti-PDL1 (por ejemplo, MPDL3280A (Roche)). Nivolumab (Opdivo®) se ha mostrado prometedor en pacientes con melanoma, cáncer de pulmón y riñón, así como otras neoplasias malignas.
En un aspecto de la presente invención, los inhibidores de la IDO reivindicados se combinan con un agente inmunoncológico que es (i) un agonista de un receptor estimulante (incluido uno coestimulante) o (ii) un antagonista de una señal inhibidora (incluida una coinhibidora) en linfocitos T, dando ambos como resultado la amplificación de respuestas de linfocitos T específicos de antígeno. Determinadas moléculas estimulantes e inhibidoras son miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas (IgSF, forma siglada de immunoglobulin super family). Otra familia importante de ligandos unidos a membrana que se unen a receptores coestimulantes o coinhibidores es la familia B7, que incluye B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) y B7-H6. Otra familia de ligandos unidos a membrana que se unen a receptores coestimulantes o coinhibidores es la familia TNF de moléculas que se unen a miembros de la familia del receptor de TNF análogos, que incluye CD40 y CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTpR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, linfotoxina a/TNFp, TNFR2, TNFa, LTpR, linfotoxina a 1p2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR.
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es una citocina que inhibe la activación de linfocitos T (por ejemplo, IL-6, IL-10, TGF-p, VEGF y otras citocinas inmunosupresoras) o una citocina que estimula la activación de linfocitos T, para estimular una respuesta inmunitaria.
En un aspecto, las respuestas de linfocitos T pueden estimularse mediante una combinación de los inhibidores de la IDO reivindicados y uno o más de (i) un antagonista de una proteína que inhibe la activación de linfocitos T (por ejemplo, inhibidores de puntos de control inmunitario) tal como CTLA-4, p D-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectina-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 y TIM-4, y/o (ii) un agonista de una proteína que estimula la activación de linfocitos T tal como B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 y CD2. Otros agentes que pueden combinarse con los inhibidores de la IDO de la presente invención para el tratamiento del cáncer incluyen antagonistas de receptores inhibidores en linfocitos NK o agonistas de receptores activadores en linfocitos NK. Por ejemplo, los compuestos de la presente pueden combinarse con antagonistas de KIR, tales como lirilumab.
Otros agentes más para terapias combinadas incluyen agentes que inhiben o reducen macrófagos o monocitos, incluyendo, pero sin limitación, antagonistas de CSF-1R, tales como anticuerpos antagonistas de CSF-1R, incluyendo RG7155 (documentos WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) o FPA-008 (documentos WO11/140249; WO13169264; WO14/036357).
En otro aspecto, los inhibidores de la IDO reivindicados pueden utilizarse con uno o más agentes agonistas que se unen a receptores coestimulantes positivos, agentes bloqueantes que atenúan la señalización a través de receptores inhibidores, antagonistas y uno o más agentes que aumentan sistémicamente la frecuencia de linfocitos T antitumorales, agentes que superan distintas rutas inmunosupresoras dentro del microentorno tumoral (por ejemplo, bloquean el reconocimiento del receptor inhibidor (por ejemplo, interacciones PD-L1/PD-1), reducen o inhiben los Treg (por ejemplo, utilizando un anticuerpo monoclonal anti-CD25 (por ejemplo, daclizumab) o por reducción ex vivo por perlas anti-CD25), o invierten/impiden la anergia o el agotamiento de los linfocitos T) y agentes que desencadenan la activación inmunitaria innata y/o la inflamación en los sitios de tumor.
En un aspecto, el agente inmunoncológico es un antagonista de CTLA-4, tal como un anticuerpo antagonista de CTLA-4. Los anticuerpos para CTLA-4 adecuados incluyen, por ejemplo, YERVOY (ipilimumab) o tremelimumab.
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un antagonista de PD-1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-1. Los anticuerpos para PD-1 adecuados incluyen, por ejemplo, OPDIVO (nivolumab), KEYTRUDA (pembrolizumab/lambrolizumab) o MEDI-0680 (AMP-514; WO2012/145493). El agente inmunoncológico también puede incluir pidilizumab (CT-011), aunque su especificidad para la unión a PD-1 se ha puesto en duda. Otro enfoque para dirigirse al receptor de PD-1 es la proteína recombinante compuesta del dominio extracelular de PD-L2 (B7-DC) fusionado con la porción Fc de IgG1, denominada AMP-224
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un antagonista de PD-L1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-L1. Los anticuerpos para PD-L1 adecuados incluyen, por ejemplo, MPDL3280A (RG7446; documento WO2010/077634), durvalumab (MEDI4736), BMS-936559 (documento WO2007/005874) y MSB0010718C (documento WO2013/79174).
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un antagonista de LAG-3, tal como un anticuerpo antagonista de LAG-3. Los anticuerpos para LAG3 adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986016 (documentos WO10/19570, WO14/08218), o IMP-731 o IMP-321 (documentos WO08/132601, WO09/44273).
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un agonista de CD137 (4-1BB), tal como un anticuerpo agonista de CD137. Los anticuerpos para CD137 adecuados incluyen, por ejemplo, urelumab y PF-05082566 (documento WO12/32433).
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un agonista de GITR, tal como un anticuerpo agonista de GITR. Los anticuerpos de GITR adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986153, BMS-986156, TRX-518 (documentos WO06/105021, WO09/009116) y MK-4166 (documento WO11/028683).
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un agonista de OX40, tal como un anticuerpo agonista de OX40. Los anticuerpos para OX40 adecuados incluyen, por ejemplo, MEDI-6383 o MEDI-6469.
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un antagonista de OX40L, tal como un anticuerpo antagonista de OX40. Los antagonistas de OX40L adecuados incluyen, por ejemplo, RG-7888 (documento WO06/029879).
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un agonista de CD40, tal como un anticuerpo agonista de CD40. En otra realización más, el agente inmunoncológico es un antagonista de CD40, tal como un anticuerpo antagonista de CD40. Los anticuerpos para CD40 adecuados incluyen, por ejemplo, lucatumumab o dacetuzumab.
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es un agonista de CD27, tal como un anticuerpo agonista de CD27. Los anticuerpos para CD27 adecuados incluyen, por ejemplo, varlilumab.
En otro aspecto, el agente inmunoncológico es MGA271 (para B7H3) (documento WO11/109400).
La presente invención abarca sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Enfermedades víricas. La presente invención proporciona métodos para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, trastornos y afecciones víricas, así como los trastornos asociados a los mismos, con un inhibidor de la IDO y al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional (por ejemplo, uno o más de otros agentes antivíricos y/o uno o más agentes no asociados con la terapia vírica).
Dicha terapia combinada incluye agentes antivíricos dirigidos a diversas fases del ciclo de vida vírico y que tienen distintos mecanismos de acción, incluyendo, pero sin limitación, los siguientes: inhibidores de la eliminación de la cubierta vírica (por ejemplo, amantadina y rimantidina); inhibidores de la transcriptasa inversa (por ejemplo, aciclovir, zidovudina y lamivudina); agentes que se dirigen a la integrasa; agentes que bloquean la unión de factores de transcripción al ADN vírico; agentes (por ejemplo, moléculas antisentido) que afectan la traducción (por ejemplo, fomivirsen); agentes que modulan la función de la traducción/ribozima; inhibidores de proteasas; moduladores de ensamblaje vírico (por ejemplo, rifampicina); antirretrovíricos tales como, por ejemplo, inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de nucleósidos (por ejemplo, azidotimidina (AZT), ddl, ddC, 3TC, d4T); inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleosídicos (por ejemplo, efavirenz, nevirapina); inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de nucleótidos; y agentes que impiden la liberación de partículas víricas (por ejemplo, zanamivir y oseltamivir). El tratamiento y/o la prevención de determinadas infecciones víricas (por ejemplo, VIH) implica con frecuencia un grupo ("cóctel") de agentes antivíricos.
Otros agentes antivíricos contemplados para su uso en combinación con un inhibidor de la IDO incluyen, pero sin limitación, los siguientes: abacavir, adefovir, amantadina, amprenavir, ampligen, arbidol, atazanavir, atripla, boceprevirertet, cidofovir, combivir, darunavir, delavirdina, didanosina, docosanol, edoxudina, emtricitabina, enfuvirtida, entecavir, famciclovir, fosamprenavir, foscarnet, fosfonet, ganciclovir, ibacitabina, imunovir, idoxuridina, imiquimod, indinavir, inosina, diversos interferones (por ejemplo, peginterferón alfa-2a), lopinavir, lovirida, maraviroc, moroxidina, metisazona, nelfinavir, nexavir, penciclovir, peramivir, pleconarilo, podofilotoxina, raltegravir, ribavirina, ritonavir, piramidina, saquinavir, estavudina, telaprevir, tenofovir, tipranavir, trifluridina, trizivir, tromantadina, truvada, valaciclovir, valganciclovir, vicriviroc, vidarabina, viramidina y zalcitabina.
La presente invención abarca sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Trastornos parasitarios. La presente invención contempla el uso de los inhibidores de la función de la IDO descritos en el presente documento en combinación con agentes antiparasitarios. Dichos agentes incluyen, pero sin limitación, tiabendazol, pamoato de pirantel, mebendazol, pracicuantel, niclosamida, bitionol, oxamniquina, metrifonato, ivermectina, albendazol, eflornitina, melarsoprol, pentamidina, benznidazol, nifurtimox y nitroimidazol. El experto en la materia conoce otros agentes que pueden resultar útiles para el tratamiento de trastornos parasitarios.
La presente invención abarca sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Infecciones bacterianas. Las realizaciones de la presente invención contemplan el uso de los inhibidores de la IDO descritos en el presente documento en combinación con agentes útiles en el tratamiento o la prevención de trastornos bacterianos. Los agentes antibacterianos pueden clasificarse de diversas maneras, incluyendo el mecanismo de acción, la estructura química y el espectro de actividad. Los ejemplos de agentes antibacterianos incluyen los que se dirigen a la pared celular bacteriana (por ejemplo, cefalosporinas y penicilinas) o la membrana celular (por ejemplo, polimixinas), o que interfieren con enzimas bacterianas esenciales (por ejemplo, sulfonamidas, rifamicinas y quinolinas). La mayoría de los agentes antibacterianos que se dirigen a la síntesis de proteínas (por ejemplo, tetraciclinas y macrólidos) son bacteriostáticos, mientras que agentes tales como el aminoglucósido son bactericidas. Otro medio de categorizar los agentes antibacterianos se basa en su especificidad de diana; Los agentes de "espectro estrecho" se dirigen a tipos específicos de bacterias (por ejemplo, bacterias grampositivas tales como Streptococcus), mientras que los agentes de "amplio espectro" tienen actividad contra una gama más amplia de bacterias. El experto en la materia conoce los tipos de agentes antibacterianos que son apropiados para su uso en infecciones bacterianas específicas.
La presente invención abarca sales, ácidos o derivados de los agentes (y miembros de las clases de agentes) indicados anteriormente farmacéuticamente aceptables.
Dosificación
Los inhibidores de la IDO de la presente invención pueden administrarse a un sujeto en una cantidad que depende de, por ejemplo, el objetivo de la administración (por ejemplo, el grado de resolución deseado); la edad, el peso, el sexo, la salud y el estado físico del sujeto al que se administra la formulación; la vía de administración; y la naturaleza de la enfermedad, trastorno, afección o síntoma de los mismos. El régimen de dosificación también puede tener en cuenta la existencia, naturaleza y alcance de cualquier efecto adverso asociado con el agente (o agentes) que se administran. Las cantidades de dosificación y los regímenes de dosificación eficaces pueden determinarse fácilmente a partir de, por ejemplo, ensayos de seguridad y aumento de la dosis, estudios in vivo (por ejemplo, modelos animales) y otros métodos conocidos por el experto en la materia.
En general, los parámetros de dosificación dictan que la cantidad de dosificación sea menor que una cantidad que podría ser irreversiblemente tóxica para el sujeto (la dosis máxima tolerada (DMT)) y no menor que la cantidad necesaria para producir un efecto medible en el sujeto. Dichas cantidades se determinan mediante, por ejemplo, los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos asociados con la ADME, teniendo en cuenta la vía de administración y otros factores.
Una dosis eficaz (DE) es la dosis o cantidad de un agente que produce una respuesta terapéutica o el efecto deseado en alguna fracción de los sujetos que lo toman. La "dosis media eficaz" o DE50 de un agente es la dosis o cantidad de un agente que produce una respuesta terapéutica o un efecto deseado en el 50 % de la población a la cual se le administra. Aunque la DE50 se utiliza comúnmente como una medida de expectativa razonable del efecto de un agente, no es necesariamente la dosis que un médico podría considerar apropiada teniendo en cuenta todos los factores pertinentes. Por tanto, en algunas situaciones, la cantidad eficaz es mayor que la DE50 calculada, en otras situaciones, la cantidad eficaz es menor que la DE50 calculada y, en aún otras situaciones, la cantidad eficaz es la misma que la DE50 calculada.
Además, una dosis eficaz de los inhibidores de la IDO de la presente invención puede ser una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un sujeto, produce un resultado deseado con respecto a un sujeto sano. Por ejemplo, para un sujeto que padece un trastorno en particular, una dosis eficaz puede ser una que mejora un parámetro de diagnóstico, medida, marcador y similares del trastorno en al menos aproximadamente el 5 %, al menos aproximadamente el 10%, al menos aproximadamente el 20%, al menos aproximadamente el 25%, al menos aproximadamente el 30 %, al menos aproximadamente el 40 %, al menos aproximadamente el 50 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 70 %, al menos aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 %, o más del 90 %, donde el 100 % se define como el parámetro de diagnóstico, medida, marcador, y similares, presentados por un sujeto normal.
Para la administración de un agente oral, las composiciones pueden proporcionarse en forma de comprimidos, cápsulas, y similares, que contengan de 1,0 a 1000 miligramos del principio activo, particularmente 1,0, 3,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0 y 1000,0 miligramos del principio activo.
En determinadas realizaciones, la dosificación del inhibidor de la IDO deseado está contenida en una "forma farmacéutica unitaria". La expresión "forma farmacéutica unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada del inhibidor de la IDO, ya sea solo o en combinación con uno o más de principios activos adicionales, suficiente para producir el efecto deseado. Se apreciará que los parámetros de una forma farmacéutica unitaria dependerán del agente particular y del efecto a conseguir.
Kits
La presente divulgación también contempla kits que comprenden un inhibidor de la IDO y composiciones farmacéuticas del mismo. Los kits generalmente están en forma de una estructura física que aloja diversos componentes, como se describe a continuación, y pueden utilizarse, por ejemplo, en la práctica de los métodos descritos anteriormente.
Un kit puede incluir uno o más inhibidores de la IDO divulgados en el presente documento (proporcionados en, por ejemplo, un recipiente estéril), que pueden estar en forma de una composición farmacéutica adecuada para la administración a un sujeto. Los inhibidores de la IDO pueden proporcionarse en una forma que esté lista para su uso (por ejemplo, un comprimido o cápsula) o en una forma que precise, por ejemplo, la reconstitución o dilución (por ejemplo, un polvo) antes de la administración. Cuando los inhibidores de la iDo están en una forma que necesita ser reconstituida o diluida por un usuario, el kit puede incluir también diluyentes (por ejemplo, agua estéril), tampones, excipientes farmacéuticamente aceptables y similares, envasados con o por separado de los inhibidores de la IDO. Cuando se contempla una terapia combinada, el kit puede contener los distintos agentes por separado o ya pueden estar combinados en el kit. Cada componente del kit puede estar contenido dentro de un recipiente individual y todos los diversos recipientes pueden estar dentro de un solo envase. Un kit de la presente divulgación puede estar diseñado para las condiciones necesarias para mantener apropiadamente los componentes alojados en el mismo (por ejemplo, refrigeración o congelación).
Un kit puede contener una etiqueta o un prospecto de envase que incluya información identificativa de los componentes del mismo e instrucciones para su uso (por ejemplo, los parámetros de dosificación, la farmacología clínica del principio (o principios) activo, incluyendo el mecanismo de acción, la farmacocinética y la farmacodinámica, los efectos adversos, las contraindicaciones, etc.). Las etiquetas o prospectos incluyen información del fabricante, tal como números de lote y fechas de caducidad. La etiqueta o el prospecto puede estar, por ejemplo, integrado en la estructura física que aloja los componentes, contenidos por separado dentro de la estructura física o incluidos en un componente del kit (por ejemplo, una ampolla, tubo o vial).
Las etiquetas o prospectos incluyen adicionalmente, o se incorporan en, un medio legible por ordenador, tal como un disco (por ejemplo, disco duro, tarjeta, disco de memoria), disco óptico tal como CD o DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, cinta magnética o un medio de almacenamiento eléctrico, tal como una RAM y ROM o híbridos de estos, tales como medios de almacenamiento magnéticos/ópticos, medios FLASH o tarjetas de memoria. En algunas realizaciones, las instrucciones propiamente dichas no están presentes en el kit, pero se proporcionan medios para obtener las instrucciones de una fuente remota, por ejemplo, a través de Internet.
PARTE EXPERIMENTAL
Los siguientes Ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la materia una divulgación y descripción completas de cómo hacer y utilizar la presente invención. Se han realizado esfuerzos para garantizar la exactitud con respecto a los números utilizados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.), pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales.
A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular promedio ponderal, la temperatura está en grados Celsius (°C) y la presión es igual o cercana a la atmosférica. Se utilizan abreviaturas convencionales, que incluyen las siguientes: ts = tipo silvestre; pb = par (o pares) de bases; kb = kilobase (o kilobases); nt = nucleótido (o nucleótidos); aa = aminoácido (o aminoácidos); s o sec = segundo (o segundos); min = minuto (minutos); h u hr = hora (u horas); ng = nanogramo; |jg = microgramos; mg = miligramo; g = gramo; kg = kilogramo; dl o dL = decilitro; j l o jL = microlitro; ml o mL = mililitro; 1 o L = litro; jM = micromolar; mM = milimolar; M = molar; kDa = kilodalton; i.m. = (por vía) intramuscular; i.p. = (por vía) intraperitoneal; s.c. o SQ = subcutáneo (por vía subcutánea); QD = diario; BID = dos veces al día; QW = semanal; QM = mensual; HPLC = cromatografía líquida de alto rendimiento; PC = peso corporal; U = unidad; ns = no estadísticamente significativo; PBS = solución salina tamponada con fosfato; IHQ = inmunohistoquímica; DMEM = modificación de Dulbecco del medio de Eagle; EDTA = ácido etilendiaminotetraacético.
Materiales y métodos
Se utilizaron los siguientes materiales y métodos, cuando se indique, o pueden utilizarse en los siguientes Ejemplos:
Los métodos convencionales de biología molecular se describen en la bibliografía científica (véanse, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning, Tercera Edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); y Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, vol. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. Nueva York, NY (20 01 ), que describen la clonación en células bacterianas y la mutagénesis del ADN (vol. 1 ), la clonación en células de mamífero y en levadura (vol. 2), glucoconjugados y expresión de proteínas (vol. 3) y bioinformática (vol. 4).
La bibliografía científica describe métodos para la purificación de proteínas, incluida la inmunoprecipitación, la cromatografía, la electroforesis, la centrifugación y la cristalización, así como el análisis químico, la modificación química, la modificación postraduccional, la producción de proteínas de fusión y la glucosilación de proteínas (véase, por ejemplo, Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 1-2, John Wiley and Sons, Inc., NY (2000)).
Están disponibles paquetes de programas informáticos y bases de datos para determinar, por ejemplo, los fragmentos antigénicos, las secuencias líderes, el plegamiento de proteínas, los dominios funcionales, los sitios de glucosilación y los alineamientos de secuencias (véanse, por ejemplo, Paquete GCG® Wisconsin (Accelrys, Inc., San Diego, CA); y DECYPHER® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, NV).
En la bibliografía hay muchos ensayos y otras técnicas experimentales que pueden servir como base para la evaluación de los compuestos descritos en el presente documento.
Un ensayo enzimático para la IDO y la producción celular de quinurenina (KYN) se describen en Sarkar, S.A. et al., Diabetes, 56:72-79 (2007). Brevemente, todos los productos químicos pueden adquirirse en Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) a menos que se especifique otra cosa. Se pueden cultivar grupos de 1000 islotes humanos durante 24 h en 1 ml de medio con citocinas, se recuperan mediante centrifugación durante 5 min a 800 x g y tratamiento con ultrasonidos en 150 j l de PBS que contiene un cóctel inhibidor de proteasa (Conjunto 2; Calbiochem, EMD Biosciences, San Diego, CA). El producto del tratamiento con ultrasonidos puede centrifugarse durante 10 min a 10.000 x g, y el sobrenadante puede someterse a ensayo por triplicado incubando una muestra de 40 j l con un volumen igual de tampón de fosfato de potasio 100 mmol/l, pH 6,5, que contiene ácido ascórbico 40 mmol/l (neutralizado a pH 7,0), de azul de metileno 100 jmol/l, catalasa 200 jg/m l y L-Trp 400 jmol/l durante 30 min a 37 °C. El ensayo puede terminarse mediante la adición de 16 j l de ácido tricloroacético (TCA) al 30 % (p/v) e incubarse adicionalmente a 60 °C durante 15 min para hidrolizar la W-formilquinurenina a KYN. A continuación, puede centrifugarse la mezcla a 12.000 rpm durante 15 min, y la KYN puede cuantificarse mezclando un volumen igual de sobrenadante con reactivo de Ehrlich al 2 % (p/v) en ácido acético glacial en una placa de microtitulación de 96 pocillos y leyendo la absorbancia a 480 nm utilizando L-KYN como patrón. La proteína de las muestras de islotes puede cuantificarse mediante el ensayo Bio-Rad Protein a 595 nm. Para la detección de la L-KYN en los sobrenadantes de cultivo de islotes, las proteínas pueden precipitarse con TCA al 5 % (p/v) y centrifugarse a 12.000 rpm durante 15 min, y la determinación de la KYN en el sobrenadante con reactivo de Ehrlich se puede determinar como se describió anteriormente. Se pueden añadir al medio de incubación IL-4 (10 |jg/ml; 500-2.000 unidades/ml) y 1-a-metil Trp (1-MT; 40 |jmol/l), como se indica. Este ensayo también puede formar la base de un ensayo basado en células y puede cuantificarse mediante CLEM/EM como alternativa a la detección por UV/Vis.
Análisis de transferencia de Western. Se pueden recoger grupos de 1.000-1.200 islotes incubados durante 24 h en medio Miami en presencia de citocinas y someterlos a ultrasonidos en PBS como anteriormente, y pueden someterse a electroforesis en geles de SDS-PAGE al 10 % muestras de proteína de 50 jg . Pueden utilizarse respectivamente como control positivo y negativo células COS7 (0,6 x 106 células/placa de Petri de 60 mm3) transfectadas con plásmido con la IDO humana (3 jg ) o células con vector vacío. Las proteínas pueden transferirse electroforéticamente a membranas de fluoruro de polivinilidina mediante el método semiseco y bloquearse durante 1 h con leche en polvo desnatada al 5 % (p/v) en solución salina tamponada con Tris y Tween al 0,1 %, y a continuación incubarse durante una noche con anticuerpo anti-IDO humana de ratón (1:500; Chemicon, Temecula, CA), fosfo-STAT-ic, p91 y STAT-ic, p91 (1:500; Zymed, San Francisco, CA). Las proteínas inmunorreactivas pueden visualizarse con el reactivo de detección para transferencia de Western ECL PLUS® (Amersham BioSciences, Buckinghamshire, RU) después de una incubación durante 1 h con anticuerpo secundario antirratón conjugado con peroxidasa de rábano picante (Jackson Immunolabs, West Grove, PA).
Detección inmunohistoquímica de la IDO. Los islotes pueden fijarse en paraformaldehído al 4 % en PBS (Invitrogen) durante 1 h, inmovilizarse en bloques de gelatina de piel porcina al 10 % fundida (37 °C) e incluirse en un compuesto de temperatura de corte óptima. La tinción inmunofluorescente sobre el tejido de islotes puede realizarse en cortes de 7 jm que se tiñeron con anticuerpos producidos contra la homeobox pancreático duodenal 1 (PDX1) e IDO. La recuperación del antígeno puede realizarse en un baño de agua durante 30 min en un tampón que contenga Tris 10 mmol/l y EDTA 1 mmol/l (pH 9,0) a 97 °C. Los cortes pueden bloquearse durante 1 h con suero de cabra normal al 5 % en PBS. A continuación, pueden hacer reaccionarse los tejidos con anticuerpo monoclonal anti-IDO humana de ratón (1:20; Chemicon) y anticuerpo policlonal anti-PDX1 humano de cabra (1:2000; que puede solicitarse al Dr. Chris Wright, School of Medicine, Vanderbilt, TN) durante una noche a temperatura ambiente en una cámara húmeda. Los anticuerpos secundarios anticabra (marcados con Cy3) y antirratón (marcados con Cy2) pueden adquirirse en Jackson Immunolabs y pueden utilizarse a una concentración de 1:200. Los núcleos pueden teñirse con Hoechst 33258 (Molecular Probes, Eugene, OR). Las imágenes pueden adquirirse mediante el programa informático Intelligent Imaging System a partir de un microscopio motorizado invertido Olympus 1X81 equipado con Olympus DSU (confocal de disco giratorio) y cámara CCD monocromática ORCA HER de Hamamatsu.
Los medios alternativos para evaluar los inhibidores de la IDO de la presente invención se describen en el documento WO 2010/0233166 y se resumen a continuación.
Ensayo bioquímico. Se han aislado y verificado mediante secuenciación clones de ADNc para IDO tanto humana como de ratón, y están disponibles en el mercado. Para preparar IDO para estudios bioquímicos, puede producirse la proteína iDo etiquetada con His C-terminal en E. coli utilizando el sistema de vector pET5a inducible por IPTG y aislarse en una columna de níquel. El rendimiento de la proteína parcialmente purificada puede verificarse por electroforesis en gel y la concentración estimarse por comparación con patrones de proteínas. Para someter a ensayo la actividad enzimática de la IDO, puede ejecutarse un ensayo espectrofotométrico en placas de 96 pocillos para la producción de quinurenina siguiendo los procedimientos publicados (véase, por ejemplo, Littlejohn, T.K. et al., Prot. Exp. Purif., 19:22-29 (2000)). Para explorar la actividad inhibidora de la IDO, los compuestos pueden evaluarse a una única concentración de, por ejemplo, 200 jM frente a 50 ng de enzima IDO, en volúmenes de reacción de 100 j l con triptófano añadido en concentraciones crecientes a, por ejemplo, 0, 2, 20 y 200 jM . La producción de quinurenina puede medirse en 1 hora.
Ensayos basados en células. Las células COS-1 pueden transfectarse transitoriamente con un plásmido dirigido por promotor de CMV que exprese un ADNc de la iDo utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen) como recomienda el fabricante. Se puede transfectar de forma transitoria un conjunto complementario de células con el plásmido que expresa la TDO. Cuarenta y ocho horas después de la transfección, las células pueden distribuirse en un formato de 96 pocillos a 6 x 104 células por pocillo. Al día siguiente, pueden lavarse los pocillos y puede añadirse medio nuevo (sin rojo de fenol) que contenga triptófano 20 jg/m l junto con el inhibidor. La reacción puede detenerse a las 5 horas y el sobrenadante se retira y se someterse a ensayo espectrofotométricamente en cuanto a la quinurenina como se describió anteriormente para el ensayo enzimático. Para obtener la confirmación inicial de la actividad de IDO, los compuestos pueden evaluarse a una única concentración de, por ejemplo, 100 jM . Pueden obtenerse perfiles de aumento de la dosis más extensos para compuestos seleccionados.
Evaluación farmacodinámica y farmacocinética. Un ensayo farmacodinámico puede basarse en la medición de los niveles en suero de quinurenina y triptófano, y el cálculo de la relación quinurenina/triptófano proporciona una estimación de la actividad de IDO que es independiente de los niveles de triptófano basales. Los niveles en suero de triptófano y quinurenina pueden determinarse mediante análisis de HPLC, y los niveles en suero de los compuestos también pueden opcionalmente determinarse en la misma ejecución de HPLc .
Los compuestos pueden evaluarse inicialmente exponiendo a ratones a LPS y administrando posteriormente una dosis en embolada de compuesto en el momento en que el nivel de quinurenina en suero se estabiliza. Como el conjunto de la quinurenina se renueva rápidamente, con una semivida en suero de menos de 10 minutos, no es de esperar que la quinurenina preexistente enmascare indebidamente el efecto que tenga un inhibidor de la IDO en la producción de quinurenina. Cada experimento puede incluir ratones no expuestos a LPS (para determinar los niveles basales de quinurenina con los que comparar los otros ratones) y un conjunto de ratones expuestos a LPS a los que se les administra dosis de vehículo solo (para proporcionar un control positivo para la activación de la IDO). Cada compuesto puede evaluarse inicialmente en ratones a una única dosis alta en embolada i.p. en el intervalo de al menos 100 mg/kg. La sangre puede recogerse a intervalos de tiempo definidos (por ejemplo, una muestra de 50 pl a los 5, 15, 30 min, 1, 2, 4, 6 , 8 y 24 h. después de la administración del compuesto) para el análisis por HPLC de los niveles de quinurenina y triptófano (análisis farmacodinámico), así como para el nivel de compuesto (análisis farmacocinético). A partir de los datos farmacocinéticos, puede determinarse la concentración máxima en suero del compuesto alcanzada, así como la tasa estimada de depuración. Al comparar el nivel de compuesto en suero con respecto a la relación quinurenina/triptófano en diversos puntos de tiempo, puede estimarse aproximadamente la CI50 eficaz para inhibición in vivo de la iDo. Los compuestos que presentan eficacia pueden evaluarse para determinar una dosis máxima que logre una inhibición de la iDo del 100 % a la concentración máxima.
Métodos HPLC/EM y HPLC preparatoria/analítica empleados en la caracterización o purificación de los Ejemplos
La HPLC/EM analítica se realizó usando los siguientes métodos:
Método A: Waters Acquity SDS usando el siguiente método: Gradiente lineal de disolvente B del 2 % al 98 % durante 1,7 min; visualización de UV a 220 nm; Columna: BEH C18 2,1 mm x 50 mm; 1,7 pm de partícula (calentada a temp. 50 °C); Caudal: 0,8 ml/min; Fase móvil A: agua al 100 %, TFA al 0,05%; Fase móvil B: acetonitrilo al 100 %, TFA al 0,05 %.
Método B: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con acetato de amonio 10 mM; Temperatura: 50 °C; Gradiente: B al 0-100 % durante 3 minutos, después una parada de 0,75 minutos a B al 100 %; Flujo: 1,00 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Método C: Waters SFC-100 MS, Columna: Chiral OJ-H 25 x 3 cm ID, 5 pm Caudal: 100,0 ml/min, Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH, Longitud de onda del detector: 220 nm.
Método D: SFC analítica Aurora, Columna: Chiral OJ-H 250 x 4,6 mm ID, 5 pm, Caudal: 2,0 ml/min, Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH.
Método E: Berger Prep SFC, Columna: Chiral AS 25 x 3 cm ID, 5 pm Caudal: 85,0 ml/min, Fase móvil: 82/18 de CO2/MeOH p/DEA al 0,1 %, Longitud de onda del detector: 220 nm.
Método F: SFC analítica Aurora, Columna: Chiral AS 250 x 4,6 mm ID, 5 pm, Caudal: 2,0 ml/min, Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH p/DEA al 0,1 %.
Método G: Berger Prep SFC, Columna: Chiral AS 25 x 3 cm ID, 5 pm Caudal: 85,0 ml/min, Fase móvil: 86/14 de CO2/MeOH, Longitud de onda del detector: 220 nm.
Método H: SFC analítica Aurora, Columna: Chiral AS 250 x 4,6 mm ID, 5 pm, Caudal: 2,0 ml/min, Fase móvil: 85/15 de CO2/MeOH.
Método I: Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Temperatura: 50 °C; Gradiente: B al 0-100 % durante 3 minutos, después una parada de 0,75 minutos a B al 100 %; Flujo: 1,0 ml/min; Detección: UV a 220 nm.
Método J: Condiciones cromatográficas preparativas: Instrumento: Berger Prep SFC MGII (LVL-L4021 Lab) Columna: Chiral IC 25 x 3 cm ID, 5 pm; Caudal: 85,0 ml/min; Fase móvil: 74/26 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm.
Método K: Condiciones cromatográficas preparativas: Instrumento: Berger Prep SFC MGII (LVL-L4021 Lab) Columna: Chiral IC 25 x 3 cm ID, 5 pm; Caudal: 85,0 ml/min; Fase móvil: 75/25 de CO2/MeOH mantenido durante 18 minutos, 60/40 de CO2/MeOH mantenido durante 11 minutos, 75/25 de CO2/MeOH mantenido durante 3 minutos; Longitud de onda del detector: 220 nm.
Método L: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Etapa 1: Columna: Chiral OD-H 25 x 3 cm ID, partículas de 5 pm; Fase móvil: 82/18 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Etapa 2: Chiral IF 25 x 3 cm ID, partículas de 5 pm; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Etapa 1: Columna: Chiral OD-H 250 x 4,6 mm ID, 5 pm; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Etapa 2: Columna: Chiral IF 250 x 4,6 mm ID, 5 pm; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min. Tr corresponde a la condición analítica.
Método M: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Etapa 1: Columna: Chiral OD-H 25 x 3 cm ID, partículas de 5 |jm; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Etapa 2: Chiral IF 25 x 3 cm ID, partículas de 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Etapa 1: Columna: Chiral OD-H 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Etapa 2: Columna: Chiral IF 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min. Tr corresponde a la condición analítica.
Método N: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: WHELK-O® 1 KROMASIL® 25 x 3 cm ID, partículas de 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: WHELK-O® 1 KROMASIL® 250 x 4,6 mm iD, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método O: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral OJ 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 90/10 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral OJ 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 90/10 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método P: Condiciones preparativas: Waters SFC-100 MS; Columna: PHENOMENEX® LUX Celulosa-225 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 75/25 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 100 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: PHENOMENEX® LUX Celulosa-2250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 75/25 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método Q: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral AD 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral AD 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método R: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral AD 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 87/13 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral AD 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 85/15 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método S: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral IF 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 75/25 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral IF 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método T: Condiciones preparativas: Waters SFC100-MS; Columna: Chiral IC 25 x 3 cm ID, 5 jm acoplado a WHELK-O® R,R KROmAs iL® 25x3 cm ID 5 jm ; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 100 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral IC 250 x 4,6 mm ID, 5 jm acoplado a WHELK-O® R,R KROMASIL® 25x3 cm ID 5 jm ; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Flujo: 2.0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método U: Condiciones preparativas: Waters SFC100-MS; Columna: Chiral OJ-H 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 100 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral OJ-H 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método V: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral WHELK-O® 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral WHELK-O® 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2.0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método W: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral IC 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 85/15 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral IC 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 85/15 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método X: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral IC 25 x 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil:75/25 de CO2/MeOH p/dietilamina al 0,1 %; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral IC 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil:75/25 de CO2/MeOH p/dietilamina al 0,1 %; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método Y: Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH/CAN 50/50; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral AD 25 x 3 cm, 5 |jm; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH/CAN 50/50; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral AD 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; a la condición analítica.
Método Z: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral IC 25 x 3 cm, 5 jm ; Fase móvil: 83/17 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral IC 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 80/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método AA: Condiciones preparativas: Waters SFC100-MS; Columna: Chiral ASH acoplado Chiral OJ-H 25 x 3 cm, 5 jm ; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 100 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica AGILENT®; Columna: Chiral AS-H acoplado a Chiral OJ-H 250 x 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método AB: Waters Acquity SDS usando el siguiente método: Gradiente lineal de disolvente B del 2 % al 98 % durante 1,6 min; visualización de UV a 220 nm; Columna: BEH C18 2,1 mm x 50 mm; 1,7 jm de partícula (calentada a temp. 50 °C); Caudal: 1 ml/min; Fase móvil A: agua al 100 %, TFA al 0,05 %; Fase móvil B: acetonitrilo al 100 %, TFA al 0,05%.
Método AC: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Chiral AD 25 X 3 cm ID, 5 jm ; Fase móvil: 90/10 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Chiral AD 250 X 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 90/20 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método AD: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Whelk-O1 Kromasil 25 X 3 cm ID, partículas de 5 jm ; Fase móvil: 85/15 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Whelk-O1 Kromasil 250 X 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 85/15 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
Método AE: Condiciones preparativas: Berger SFC MGII; Columna: Whelk-O1 Kromasil 25 X 3 cm ID, partículas de 5 jm ; Fase móvil: 75/25 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Condiciones analíticas: SFC analítica Aurora; Columna: Whelk-O1 Kromasil 250 X 4,6 mm ID, 5 jm ; Fase móvil: 75/25 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min; Tr corresponde a la condición analítica.
RMN empleada en la caracterización de los ejemplos
Se obtuvieron los espectros de RMN 1H (a menos que se indique lo contrario) con espectrómetros de transformación de JEOL® o Bruker Fo URIER® que funcionan a 400 MHz o 500 MHz.
Los datos espectrales se presentan como cambios químicos (multiplicidad, número de hidrógenos, constantes de acoplamiento en Hz) y se presentan en ppm ( 8 unidades) en referencia tanto a un patrón interno (tetrametil silano = 0 ppm) para espectros RMN 1H o en referencia al pico residual solvente (2,49 ppm para CD3SOCD2H, 3,30 ppm para CD2HOD, 1,94 para CHD2CN, 7,26 ppm para CHCl3, 5,32 ppm para Cd Hc I2). Abreviaturas usadas en la descripción de picos de RMN: "ap" = aparente, "s a" = singlete ancho.
Ejemplos
Procedimientos generales:
Procedimiento general A. Formación de enlaces amida a partir de ácido.
Figure imgf000037_0001
A una solución en agitación de ácido carboxílico (4,4 mmol) en dimetilformamida (DMF, 15 ml) se le añadieron anilina (6 , 6 mmol), diisopropiletilamina (1,53 ml, 8 , 8 mmol) y hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (HATU) (2,00 g, 5,28 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a ta durante 3 h, momento en el cual se añadieron HCl 3 M (30 ml) y CH2Cl2 (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (2 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo en bruto resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el producto o productos deseados.
Procedimiento general B. Reacción entre aminas y cloruros de acilo.
Figure imgf000038_0001
A una solución de la amina (1,1 equiv.) y NEt3 (5,0 equiv.) en CH2CI2 (0,1 M) se le añadió el cloruro de acilo (1,0 equiv.). La mezcla de reacción resultante se agitó a ta durante 15 min y después se concentró a presión reducida. La mezcla de reacción en bruto se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 100 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado.
Figure imgf000038_0002
C/s-4-fenilciclohexano-1-carbaldehído: Preparado de acuerdo con el procedimiento bibliográfico (Fox, B.M. et al., J. Med. Chem., 57:3464-3483 (2014)). La mezcla en bruto se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 10 % en hexano) para proporcionar el producto deseado como el isómero que eluyó en primer lugar.
Figure imgf000038_0003
C/s-(4-fenilciclohexil)metanol: A una solución de c/s-4-fenilciclohexano-1-carbaldehído (825 mg, 4,4 mmol) en THF (25 ml) y MeOH (7 ml) a ta se le añadió NaBH4 en porciones durante 5 min. La mezcla resultante se agitó a ta durante 45 min. Después, se añadió gota a gota HCl (1 M). La mezcla se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. La mezcla resultante en bruto se purificó empleando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 25 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado.
Figure imgf000038_0004
C/s-(4-(yodometil)ciclohexil)benceno: A una solución de c/s-(4-fenilciclohexil)metanol (2 g, 10,5 mmol), trifenilfosfina (3,3 g, 12,6 mmol) e imidazol (1,1 g, 15,8 mmol) en CH2Ch (70 ml) a 0 °C se le añadió yodo (3,5 g, 13,7 mmol). La mezcla se calentó a ta y se agitó a ta durante 2 h. La mezcla se diluyó con CH2Ch y se lavó con tiosulfato sódico (2 M). La capa orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. La mezcla de reacción en bruto se purificó empleando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 25 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un aceite (3 g, 95 %).
Figure imgf000038_0005
C/s-(4-(azidometil)ciclohexil)benceno: A una solución de c/s-(4-(yodometil)ciclohexil)benceno (2,6 g, 8 , 8 mmol) en DMF (44 ml) se le añadió azida sódica (2,8 g, 43,8 mmol). La mezcla se agitó a ta durante 2 h. Después se añadió más azida sódica (1,14 g, 17,5 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante 18 h. La mezcla se diluyó con Et2O y se lavó con agua, LiCl 1 M (2x) y salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida para dar el producto deseado (1,5 g, 80 %).
Figure imgf000039_0001
C/s-(4-fenilcidohexil)metanamina: A una solución de c/s-(4-(azidometil)cidohexil)benceno (1,5 g, 7,0 mmol) en THF (35 ml) se le añadió trifenilfosfina (2,56 g, 9,8 mmol). La mezcla se agitó a ta durante 30 min y después se añadió agua (0,83 ml). La mezcla se agitó a ta durante 24 h. La mezcla se preabsorbió sobre gel de sílice y se purificó empleando cromatografía sobre gel de sílice [(NH3 2 M en MeOH) del 0 % al 5 % en CH2Ch] para proporcionar el producto deseado en forma de un aceite (1,2 g, 94 %).
Ejemplo de referencia 1
C/s-4-ciano-W-((4-fenilciclohexil)metil)benzamida
Figure imgf000039_0002
Preparada con el Procedimiento General B empleando c/s-(4-fenilciclohexil)metanamina (19 mg, 0,1 mmol), cloruro de 4-cianobenzoílo (17 mg, 0,1 mmol) y NEt3 (51 mg, 0,5 mmol) en CH2Ch (1 ml). Se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 10 % al 30 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 7,89-7,86 (m, 2H), 7,74-7,71 (m, 2H), 7,32-7,17 (m, 5H), 6,32-6,30 (m, 1H), 3,58 (dd, J = 7,7, 6,0 Hz, 2H), 2,66-2,59 (m, 1H), 2,06-2,00 (m, 1H), 1,80-1,69 (m, 8 H). m/z 319,3 (M+H+).
Ejemplo de referencia 2
C/s-3-ciano-W-((4-fenilciclohexil)metil)benzamida
Figure imgf000039_0003
Preparada con el Procedimiento General B empleando c/s-(4-fenilciclohexil)metanamina (19 mg, 0,1 mmol), cloruro de 3-cianobenzoílo (17 mg, 0,1 mmol) y NEt3 (51 mg, 0,5 mmol) en CH2Ch (1 ml). Se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 10 % al 30 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 8,09-8,08 (m, 1H), 8,04 (dt, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H), 7,76 (dt, J = 7,7, 1,3 Hz, 1H), 7,56 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,32-7,17 (m, 5H), 6,49-6,46 (m, 1H), 3,58 (dd, J = 7,7, 6,0 Hz, 2H), 2,66-2,59 (m, 1H), 2,07-2,01 (m, 1H), 1,80-1,68 (m, 8 H). m/z 319,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 3
C /s -4 -c lo ro -A /-( (4 - fe n ilc ic lo h e x il)m e t il)b e n z a m id a
Figure imgf000040_0001
Preparada con el Procedimiento General B empleando c/s-(4-fenilcidohexil)metanamina (19 mg, 0,1 mmol), cloruro de 4-clorobenzoílo (19 mg, 0,1 mmol) y NEt3 (51 mg, 0,5 mmol) en CH2Cl2 (1 ml). Se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 20 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 7,73-7,69 (m, 2H), 7,41-7,38 (m, 2H), 7,31-7,23 (m, 4H), 7,20-7,16 (m, 1H), 3,55 (dd, J = 7,7, 5,9 Hz, 2H), 2,63-2,59 (m, 1H), 2,04-1,98 (m, 1H), 1,79-1,67 (m, 8 H). m/z 328,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 4
C/s-3-cloro-A/-((4-fen¡lc¡clohexil)met¡l)benzam¡da
Figure imgf000040_0002
Preparada con el Procedimiento General B empleando c/s-(4-fenilciclohexil)metanamina (19 mg, 0,1 mmol), cloruro de 3-clorobenzoílo (19 mg, 0,1 mmol) y NEt3 (51 mg, 0,5 mmol) en CH2Cl2 (1 ml). Se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 20 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 7,76 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,64 (dt, J = 7,7, 1,4 Hz, 1H), 7,47-7,44 (m, 1H), 7,38-7,34 (m, 1H), 7,31-7,23 (m, 4H), 7,20-7,16 (m, 1H), 6,30-6,27 (m, 1H), 3,56 (dd, J = 7,7, 6,0 Hz, 2H), 2,64-2,58 (m, 1H), 2,04-1,99 (m, 1H), 1,79-1,66 (m, 8 H). m/z 328,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 5
C/s-4-fluoro-W-((4-fenilciclohexil)metil)benzamida
Figure imgf000040_0003
Preparada con el Procedimiento General B empleando c/s-(4-fenilciclohexil)metanamina (16 mg, 0,1 mmol), cloruro de 4-fluorobenzoílo (19 mg, 0,1 mmol) y NEt3(51 mg, 0,5 mmol) en CH2C h (1 ml). Se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 20 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco.
Ejemplo de referencia 6
C /s -4 -c lo ro -A /-( (4 - fe n i lc ic lo h e x i l)m e t il)b e n c e n o s u lfo n a m id a
Figure imgf000041_0001
Preparada de la manera del Procedimiento General B empleando c/s-(4-fenilcidohexil)metanamina (38 mg, 0,2 mmol), cloruro de 4-clorobencenosulfonilo (42 mg, 0,2 mmol) y NEt3 (101 mg, 0,5 mmol) en CH2Ch (1 ml). Se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 25 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCla): 8 7,87-7,83 (m, 2H), 7,52-7,48 (m, 2H), 7,31-7,27 (m, 2H), 7,20-7,16 (m, 3H), 5,10 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 3,01 (dd, J = 7,7, 6,3 Hz, 2H), 2,56 (dt, J = 9,8, 5,0 Hz, 1H), 1,87-1,81 (m, 1H), 1,68-1,52 (m, 8 H). m/z 364,1 (M+H+).
Ejemplo de referencia 7
(4-Bencilpiperidin-1-il)(4-clorofenil)metanona
Figure imgf000041_0002
A isocianato de 4-clorofenilo (154 mg, 1,0 mmol) en Et2O (5 ml) se le añadió 4-bencil piperidina (193 mg, 1,1 mmol). La mezcla de reacción homogénea produjo un precipitado durante 15 min. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y los sólidos se recogieron por filtración lavándose con Et2O adicional (25 ml) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCl3): 8 7,31-7,28 (m, 4H), 7,25-7,21 (m, 3H), 7,16-7,14 (m, 2H), 6,32 (s, 1H), 4,05-4,01 (m, 2H), 2,83 (td, J = 12,9; 2,1 Hz, 2H), 2,57 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,77-1,70 (m, 3H), 1,31­ 1,20 (m, 2H). m/z 329,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 8
(4-Bencilpiperidin-1-il)(3-clorofenil)metanona
Figure imgf000041_0003
A isocianato de 3-clorofenilo (154 mg, 1,0 mmol) en Et2O (5 ml) se le añadió 4-bencil piperidina (193 mg, 1,1 mmol). La mezcla de reacción homogénea produjo un precipitado durante 15 min. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y los sólidos se recogieron por filtración lavándose con Et2O adicional (25 ml) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCl3): 8 7,47 (t, J = 1,2 Hz, 1H), 7,29 (c, J = 6,4 Hz, 2H), 7,23-7,14 (m, 5H), 7,01-6,96 (m, 1H), 6,33 (s, 1H), 4,05-4,01 (m, 2H), 2,83 (td, J = 12,9; 2,1 Hz, 2H), 2,59-2,52 (m, 2H), 1,78-1,71 (m, 3H), 1,31-1,21 (m, 2H). m/z 329,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 9
C/s-W-4-cloro-(2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)etil)anilina
Figure imgf000041_0004
9A. Trietilfosfonoacetato de 2-(4-(4-hidroxifenil)ciclohexilideno)acetato de etilo
Se añadió gota a gota (46,9 ml, 236 mmol) en THF (250 ml) durante 1 hora a 0 °C a una solución de NaH (dispersión al 60 % en aceite, 11,8 g, 295 mmol) en THF (120 ml). La mezcla se calentó a ta y se agitó a ta durante 1 h. En un matraz separado, se añadió cuidadosamente una solución de 4-(4-hidroxifenil)ciclohexanona (37,5 g, 197 mmol) en THF (250 ml) a una mezcla de NaH (dispersión al 60 % en aceite, 8,67 g, 216 mmol) en THF (100 ml) a 0 °C. La mezcla se agitó a ta durante 2 horas. La mezcla de la ciclohexanona se añadió a la mezcla de fosfonato a 0 °C a través de canulación. La mezcla se calentó a ta y se agitó a ta durante 2 h. La mezcla se inactivó mediante la adición cuidadosa de hielo y agua (1 l) y posteriormente se extrajo con acetato de etilo (3x 500 ml) y los orgánicos combinados se lavaron después con salmuera (1 l), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron para proporcionar 2-(4-(4-hidroxifenil)ciclohexilideno)acetato de etilo con un rendimiento del 97 % en forma de un sólido de color blanco.
9B. 2-(4-(4-Hidroxifenil)ciclohexil)acetato de etilo
A una solución de 2-(4-(4-hidroxifenil)ciclohexilideno)acetato de etilo (9,74 g, 35,8 mmol) en acetato de etilo se le añadió Pd/C (0,974 g, 10 % en peso). La solución de reacción se roció con un globo de gas H2 y se agitó durante una noche en una atmósfera de hidrógeno durante 2 días. La mezcla de reacción se filtró a través de CELITE®, se lavó generosamente con acetato de etilo y se concentró a presión reducida para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido cristalino de color blanco con rendimiento cuantitativo como una mezcla de diastereómeros.
9C. 2-(4-(4-Metoxifenil)ciclohexil)acetato de etilo
Una solución del producto del Ejemplo 9B (20,0 g, 76,2 mmol, 1,0 equiv.) se disolvió en 770 ml de DMF. A esta solución se le añadieron 6 ml (95 mmol, 1,25 equiv.) de yodometano seguido de carbonato de cesio (43,3 g, 133 mmol, 1,75 equiv.). Después, esta mezcla se agitó durante 16 horas hasta que se consumió el material de partida como se controló mediante CLEM. Después, la reacción se interrumpió enfriándose a 0 °C y la posterior adición de 1,35 l de agua. Después, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (1 l) y se secó sobre sulfato sódico antes de la filtración y la concentración. El residuo en bruto se purificó a través de cromatografía en columna (acetato de etilo al 5 % en hexanos) para proporcionar el compuesto final en forma de un aceite transparente con un rendimiento del 69 %. (Fr = 0,5 en acetato de etilo al 10 % en hexanos).
9D. Ácido 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acético
Se añadió hidróxido de litio (1,58 g, 66,2 mmol) a agua ( 8 ml). La suspensión se dejó en reposo a ta durante 30 min antes de filtrarse. El filtrado se añadió a una solución del producto del Ejemplo 9C (2,95 g, 10,67 mmol) en EtOH (9 ml). La suspensión se agitó a ta durante 2 d y se diluyó con agua. La mezcla se filtró y el sólido se diluyó con EtOAc y HCl 1 M. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida para proporcionar ácido 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acético.
9E y 9F. c/s-N-(4-Clorofenil)-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida y trans-N-(4-Clorofenil)-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida
Preparadas con el Procedimiento General A empleando ácido 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acético (producto del Ejemplo 9D, 124 mg, 0,5 mmol), 4-cloroanilina (97 mg, 0,75 mmol), hAt U (435 mg, 0,75 mmol) e 'P^NEt (323 mg, 2,5 mmol) en DMF (1,0 ml). La purificación usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0% al 25% en hexanos) proporcionó c/s-N-(4-clorofenil)-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida (Ejemplo 9E), un sólido de color blanco, como el primer isómero de elución y trans-N-(4-clorofenil)-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida (Ejemplo 9F) como el isómero que eluyó en segundo lugar.
C/s-N-(4-Clorofenil)-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida: RMN 1H (400 MHz; CDCla): 8 7,49-7,45 (m, 2H), 7,29­ 7,26 (m, 2H), 7,17-7,15 (m, 3H), 6,87-6,83 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 2,63-2,55 (m, 1H), 2,45-2,37 (m, 3H), 1,77-1,64 (m, 8 H). m/z 358,2 (M+H+).
Figure imgf000042_0001
Ejemplo 9. C/s-N-4-cloro-(2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)etil)anilina
A una solución de c/s-N-(4-clorofenil)-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida (33 mg, 0,092 mmol) en THF (0,5 ml) a ta se le añadió una solución de complejo de borano tetrahidrofurano (0,5 ml, 0,5 mmol, 1 M en THF). La mezcla resultante se agitó durante 2,5 h a ta momento en el cual se añadió HCl acuoso (1 M) y la mezcla se agitó a ta durante 30 min. Se observó desprendimiento de gas. La mezcla se basificó con Na2CO3 sat. y se extrajo con CH2Ch (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla resultante en bruto se purificó empleando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 10 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,19 - 7,09 (m, 4H), 6,90 - 6,81 (m, 2H), 6,56 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,17 -3,07 (m, 2H), 2,55 (s, 1H), 1,85 (s, 1H), 1,80 - 1,63 (m, 10H). m/z 344,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 10
Trans-N-4-cloro-(2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)etil)anilina
Figure imgf000043_0001
Se preparó usando el procedimiento del ejemplo previo empleando 73 mg de trans-N-(4-clorofenil)-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida. Se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0% al 10% en hexanos) para proporcionar el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,17 - 7,09 (m, 4H), 6,89 - 6,81 (m, 2H), 6,58 - 6,51 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,18 - 3,09 (m, 2H), 2,45 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 1,90 (d, J = 12,3 Hz, 4H), 1,67 -1,47 (m, 4H), 1,44 (dd, J = 17,5, 7,8 Hz, 2H), 1,14 (dd, J = 22,1, 12,0 Hz, 2H). m/z 344,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 11
(4-Clorofenil)carbamato de (+/-)-c/s-3-fenilciclopentilo
Figure imgf000043_0002
11A. (+/-)-C/s-3-fenilciclopentan-1-ol
Se preparó 3-fenilciclopentan-1-ona como se ha descrito previamente (Yamamoto, T. et al., J. Organomet. Chem., 694:1325-1332 (2009)). A una solución de 3-fenilciclopentan-1-ona (1,0 g, 6,2 mmol) en 30 ml de metanol enfriado a 0 °C se le añadió NaBH4 (0,27 g, 7,2 mmol). El baño de hielo se retiró, y la reacción se dejó calentar a ta y se agitó durante 3 h. La reacción se interrumpió con HCl 1 M y se diluyó con EtOAc (30 ml) y las capas se separaron. Los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla en bruto resultante de ~1,6:1 alcoholes c/s:trans se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 15 % en pentano) para proporcionar el c/s-3-fenilciclopentan-1-ol deseado en forma de un aceite incoloro (118 mg, 12 %). RMN 1H (400 MHz; CDCla): 8 7,16-7,09 (m, 5 H), 4,43-4,40 (m, 1 H), 3,06-3,00 (m, 1 H), 2,70 (s a, 1 H), 2,53-2,43 (m, 1 H), 2,06-1,63 (m, 5 H).
Ejemplo 11. (4-Clorofenil)carbamato de (+/-)-c/s-3-fenilciclopentilo
A una solución de c/s-3-fenilciclopentan-1-ol (150 mg, 0,95 mmol) en CH2CH2 se le añadió isocianato de 4-clorofenilo (150 mg, 0,95 mmol). Después de 5 min, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se trituró con éter dietílico (10 ml). La mezcla se filtró, aclarándose con éter dietílico, para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; DMSO-d6): 8 9,79 (s a, 1H), 7,49 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,33-7,14 (m, 7 H), 5,09-5,04 (m, 1 H), 3,13-3,02 (m, 1 H), 2,60-2,48 (m, 1H), 2,08-1,61 (m, 6 H).
Ejemplo de referencia 12
(4 -F lu o ro fe n il)c a rb a m a to d e c /s -(4 - fe n ilc ic lo h e x il)m e ti lo
Figure imgf000044_0001
A una solución de c/s-(4-fenilciclohexil)metanol (200 mg, 1,05 mmol) en éter dietílico (5 ml) se le añadió isocianato de 4-fluorofenilo (144 mg, 1,05 mmol). Tras el consumo de los materiales de partida, la solución resultante se concentró para proporcionar un sólido de color blanco, que se trituró en éter dietílico (3 ml) y se filtró para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; DMSO-d6): 8 9,65 (s a, 1H), 7,48-7,42 (m, 2 H), 7,18-7,06 (m, 7 H), 4,20 (d, J = 9,5 Hz, 2H), 2,61-2,51 (m, 1H), 2,07-2,01 (m, 1 H), 1,77-1,57 (m, 8 H).
Ejemplo de referencia 13
Trans-1-(4-fluorofenil)-3-(4-fenilciclohexil)urea
Figure imgf000044_0002
A una solución en agitación de frans-4-fenilciclohexilamina (Combi-Blocks, San Diego, CA) (50 mg, 0,3 mmol) en éter dietílico se le añadió isocianato de 4-fluorofenilo (0,032 ml, 0,3 mmol) a ta. Después de agitar durante 30 min el precipitado voluminoso de color blanco se aisló por filtración al vacío para producir el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,35 -7,14 (m, 7H), 7,07 -6,97 (m, 2H), 6,00 (s, 1H), 4,41 -4,30 (m, 1H), 3,83 -3,65 (m, 1H), 2,56 -2,39 (m, 1H), 2,21 -2,10 (m, 2H), 1,99 - 1,88 (m, 2H), 1,72 - 1,46 (m, 2H), 1,37 - 1,07 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 14
7rans-1-(4-clorofenil)-3-(4-fenilciclohexil)urea
Figure imgf000044_0003
A una solución en agitación de frans-4-fenilciclohexilamina (50 mg, 0,3 mmol) en éter dietílico se le añadió isocianato de 4-clorofenilo (44 mg, 0,3 mmol) a ta. Después de agitar durante 30 min el precipitado voluminoso de color blanco se aisló por filtración al vacío para producir el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,38 - 7,12 (m, 9H), 6,05 (s, 1H), 4,39 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,88 -3,61 (m, 1H), 2,56 -2,40 (m, 1H), 2,28 -2,12 (m, 2H), 2,00 - 1,89 (m, 2H), 1,71 -1,59 (m, 2H), 1,36 -1,16 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 15
7rans-1-(3-clorofenil)-3-(4-fenilciclohexil)urea
A una solución en agitación de trans-4-fenilciclohexilamina (50 mg, 0,3 mmol) en éter dietílico (1,4 ml) se le añadió isocianato de 3-clorofenilo (0,035 ml, 0,3 mmol) a ta. Después de agitar durante 30 min, el precipitado voluminoso de color blanco se aisló por filtración al vacío y se concentró a presión reducida para producir el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,42 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 7,34 -7,11 (m, 7H), 7,08 -7,02 (m, 1H), 6,14 (s, 1H), 4,47 (s, 1H), 3,85 - 3,62 (m, 1H), 2,61 -2,39 (m, 1H), 2,27 -2,12 (m, 2H), 2,02 - 1,89 (m, 2H), 1,74 - 1,57 (m, 2H), 1,39 -1,19 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 16
Trans-2-(3-clorofenil)-A/-(4-fenilciclohexil)acetamida
Figure imgf000045_0001
Se preparó de acuerdo con el Procedimiento General A usando trans-4-fenilciclohexilamina y ácido 3-clorofenilacético. Se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo del 0 % al 50 % en hexanos) que proporcionó el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,36 - 7,12 (m, 9h ), 5,21 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 3,84 (tdt, J = 12,0, 8,1, 4,0 Hz, 1H), 3,53 (s, 2H), 2,51 -2,37 (m, 1H), 2,13 - 1,99 (m, 2H), 1,99 - 1,85 (m, 2H), 1,67 - 1,49 (m, 2H), 1,29 - 1,09 (m, 2H). m/z 328,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 17
C/s-1-(4-clorofenil)-3-(4-fenilciclohexil)urea
Figure imgf000045_0002
A una solución en agitación de c/s-4-fenilciclohexilamina (Li, G. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 18:1146-1150 (2008)) (60 mg, 0,34 mmol) en éter dietílico (1,4 ml) se le añadió isocianato de 4-clorofenilo (53 mg, 0,34 mmol) a ta. Después de agitar durante 30 min, el precipitado voluminoso de color blanco se aisló por filtración al vacío y se concentró a presión reducida para producir el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,37 - 7,09 (m, 9H), 6,28 (s, 1H), 4,88 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,17 -4,03 (m, 1H), 2,68 -2,49 (m, 1H), 1,98 - 1,87 (m, 2H), 1,87 - 1,69 (m, 4H), 1,65 - 1,50 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 18
C/s-1-(3-clorofenil)-3-(4-fenilciclohexil)urea
Figure imgf000045_0003
A una solución en agitación de c/s-4-fenilciclohexilamina (60 mg, 0,36 mmol) en éter dietílico (1,4 ml) se le añadió isocianato de 3-clorofenilo (0,042 ml, 0,34 mmol) a ta. Después de agitar durante 30 min, el precipitado voluminoso de color blanco se aisló por filtración al vacío y se concentró a presión reducida para producir el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,47 - 7,42 (m, 1H), 7,35 - 7,14 (m, 7H), 7,04 (dt, J = 7,5, 1,7 Hz, 1H), 6,37 (s, 1H), 4,98 (d, J = 6 , 6 Hz, 1H), 4,21 -4,02 (m, 1H), 2,68 -2,50 (m, 1H), 2,00 - 1,87 (m, 2H), 1,88 - 1,67 (m, 4H), 1,67 - 1,49 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 19
C/s-2-(4-clorofenil)-A/-(4-fenilciclohexil)acetamida
Figure imgf000046_0001
Preparada de acuerdo con el Procedimiento General A usando c/s-4-fenilcidohexilamina y ácido 4-clorofenilacético (Li, G. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 18:1146-1150 (2008)). Se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo del 0 % al 50 % en hexanos) que proporcionó el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 8 7,43-7,17 (m, 7H), 7,07 (dd, J = 7,5, 0,8 Hz, 2H), 5,86 (s, 1H), 4,25 - 4,05 (m, 1H), 3,60 (s, 2H), 2,60 - 2,46 (m, 1H), 1,89 - 1,55 (m, 6 H), 1,42 - 1,22 (m, 2H). m/z 328,2 (M+H+).
Procedimiento General C: Reacción entre ésteres y anilinas.
Figure imgf000046_0002
A una solución de la anilina (2,0 equiv.) en THF (0,25 M) a 0 °C se le añadió una solución de 'PrMgCl (2,0 equiv, 2 M en THF). La solución resultante se calentó a ta y se agitó durante 5 min, momento en el cual se añadió gota a gota el éster (1,0 equiv.). La mezcla de reacción resultante se agitó a ta durante 8 h y se vertió en agua. Se añadió EtOAc y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla de reacción en bruto se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 100 % en hexanos) para proporcionar el(los) producto(s) deseado(s).
Ejemplo de referencia 20
C/s-4-bencil-W-(4-clorofenil)ciclohexano-1-carboxamida
Figure imgf000046_0003
Se preparó usando el Procedimiento General C empleando 4-bencilciclohexano-1-carboxilato de etilo (250 mg, 1,0mmol), que puede prepararse por métodos mostrados en el documento WO2005080317A2 y 4-cloroanilina (191 mg, 1,5 mmol). La purificación usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 50 % en hexanos) proporcionó el producto deseado. RMN 1H (400 MHz; CDCla): 8 7,49 (d, J = 8 , 8 Hz, 2 H), 7,28 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 7,23-7,10 (m, 5 H), 2,62 (d, J = 7,7 Hz, 2 H), 2,48-2,37 (m, 1 H), 2,04-1,93 (m, 2 H), 1,88-1,82 (m, 2 H), 1,74-1,43 (m, 4 H), 1,10-0,93 (m, 1H); m/z 328,1 (M+H+).
Ejemplo de referencia 21
7rans-4-bencil-W-(4-clorofenil)ciclohexano-1-carboxamida
Figure imgf000046_0004
La elución adicional de la columna en el ejemplo anterior proporcionó el producto deseado como isómero que eluyó en segundo lugar. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 7,46 (d, J = 8 , 8 Hz, 2 H), 7,31-7,26 (m, 3 H), 7,26-7,24 (m, 1 H), 7,22­ 7,11 (m, 4 H), 2,52 (d, J = 7,1 Hz, 2 H), 2,20-2,10 (m, 1 H), 1,97 (d, J = 11,4 Hz, 2 H), 1,86-1,73 (m, 2 H), 1,57-1,45 (m, 3 H), 1,38-1,24 (m, 2H); m/z 328,1 (M+H+).
Ejemplo de referencia 22
C/s-4-bendl-W-(4-danofen¡l)c¡clohexano-1-carboxam¡da
Figure imgf000047_0001
Se preparó usando el Procedimiento General C empleando 4-bendldclohexano-1-carbox¡lato de etilo (250 mg, 1,0 mmol) y 4-aminobenzonitrilo (177 mg, 1,5 mmol). La purificación usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 50 % en hexanos) proporcionó el producto deseado. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 7,73-7,63 (m, 2 H), 7,63­ 7,55 (m, 2 H), 7,51 (s, 1 H), 7,32-7,24 (m, 2 H), 7,23-7,10 (m, 3 H), 2,61 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,49-2,45 (m, 1 H), 2,04­ 1,91 (m, 1 H), 1,89-1,77 (m, 1 H), 1,74-1,46 (m, 7H); m/z 319,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 23
Trans-4-bendl-W-(4-danofen¡l)c¡clohexano-1-carboxam¡da
Figure imgf000047_0002
La elución adicional de la columna en el ejemplo anterior proporcionó el producto deseado como isómero que eluyó en segundo lugar. RMN 1H (400 MHz; CDCla): 87,73-7,63 (m, 2 H), 7,63-7,55 (m, 2H)), 7,46 (s, 1 H), 7,32-7,24 (m, 2 H), 7,23-7,10 (m, 3 H), 2,52 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 2,21 (tt, J = 12,1, 3,4 Hz, 1 H), 2,04-1,91 (m, 2 H), 1,89-1,77 (m, 2 H), 1,74-1,46 (m, 3 H), 1,03 (cd, J = 13,2, 3,5 Hz, 2 H).; m/z 319,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 24
C/s-4-bendl-W-(4-fluorofen¡l)dclohexano-1-carboxam¡da
Figure imgf000047_0003
Se preparó usando el Procedimiento General C empleando 4-bencilciclohexano-1-carboxilato de etilo (250 mg, 1,0 mmol) y 4-fluoroanilina (0,15 ml, 1,5 mmol). La purificación usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 50% en hexanos) proporcionó el producto deseado. RMN 1H (400 MHz; CDCla): 87,48 (ddd, J = 10,5, 6,9, 4,8 Hz, 2 H), 7,34-7,11 (m, 5 H), 7,09-6,94 (m, 3 H), 2,62 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,48-2,36 (m, 1 H), 2,04-1,92 (m, 2 H), 1,88-1,76 (m, 1 H), 1,74-1,40 (m, 5 H), 1,12-0,94 (m, 1 H); m/z 312,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 25
Trans-4-bendl-W-(4-fluorofen¡l)dclohexano-1-carboxam¡da
Figure imgf000048_0001
La elución adicional de la columna en el ejemplo anterior proporcionó el producto deseado como isómero que eluyó en segundo lugar. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 87,46 (dd, J = 9,0, 4,8 Hz, 2 H), 7,33-7,11 (m, 5 H), 7,10-6,95 (m, 3 H), 2,52 (d, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,20-2,11 (m, 1H), 1,97 (d, J = 10,4 Hz, 2 H), 1,84 (d, J = 13,0 Hz, 2 H), 1,61-1,44 (m, 3 H), 1,00 (dd, J = 29,4, 10,9 Hz, 2 H); m/z 312,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 26
C/s-4-bendl-A/-(4-metox¡fen¡l)dclohexano-1-carboxam¡da
Figure imgf000048_0002
Se preparó usando el Procedimiento General C empleando 4-bencilciclohexano-1-carboxilato de etilo (250 mg, 1,0 mmol) y 4-metoxianilina (185 mg, 1,5 mmol). La purificación usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 50 % en hexanos) proporcionó el producto deseado. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 57,46-7,38 (m, 2 H), 7,33­ 7,23 (m, 2 H), 7,22-7,09 (m, 4 H), 6,92-6,80 (m, 2 H), 3,79 (s, 3 H), 2,62 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,48-2,35 (m, 1 H), 2,05­ 1,95 (m, 2 H), 1,86-1,75 (m, 1 H), 1,70-1,63 (m, 2 H), 1,65-1,48 (m, 4 H); m/z 324,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 27
7rans-4-bencil-W-(4-metoxifenil)ciclohexano-1-carboxamida
Figure imgf000048_0003
La elución adicional de la columna en el ejemplo anterior proporcionó el producto deseado como isómero que eluyó en segundo lugar. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 57,40 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 7,29 (d, J = 7,0 Hz, 2 H), 7,23-7,09 (m, 3 H), 7,01 (s, 1 H), 6,84 (d, J = 8,9 Hz, 2 H), 3,78 (s, 3 H), 2,52 (d, J = 6,9 Hz, 2 H), 2,15 (tt, J = 12,2, 3,5 Hz, 1 H), 1,98 (d, J = 11,2 Hz, 2 H), 1,83 (d, J = 13,6 Hz, 2 H), 1,55-1,49 (m, 3 H), 1,04 (cd, J = 13,3, 3,3 Hz, 2 H); m/z 324,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 29
A/-Bencil-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida
Figure imgf000048_0004
A una solución de ácido 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acético (producto de 9D, 152 mg, 0,61 mmol) en CH2Ch (1,2 ml) a ta se le añadieron cloruro de oxalilo (63 |jl, 0,73 mmol) y una gota de DMF. Se observó desprendimiento de gas y la mezcla se volvió de color amarillo. La mezcla se agitó a ta durante 1 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2Ch (1,2 ml) y se añadieron bencil amina (67 jl, 0,61 mmol) y trietilamina (85 jl, 0,61 mmol) a ta. Se formó un precipitado de color blanco y se añadieron más trietilamina (170 jl, 1,22 mmol) y C ^ C h (1,2 ml). La mezcla homogénea se agitó a ta durante 3 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHCO3 sat. y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 35 % en hexanos) para proporcionar una mezcla de isómeros. El residuo se recristalizó en heptano/IPA para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco como una mezcla 2:1 de isómeros trans:cis. m/z 338,3 (M+H+).
Ejemplo de referencia 30
Cis-W-bencil-2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida
Figure imgf000049_0001
Las aguas madre del ejemplo previo se concentraron a presión reducida para dar el producto deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 7,45-7,23 (m, 5 H), 7,20-7,07 (m, 2 H), 6,92-6,71 (m, 2 H), 5,80 (s, 1 H), 4,46 (d, J = 5,7 Hz, 2 H), 3,79 (s, 3 H), 2,66-2,48 (m, 1 H), 2,38-2,28 (m, 3 H), 1,79-1,58 (m, 8 H); m/z 338,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 31
W-(4-Clorofenil)-4-fenoxipiperidin-1-carboxamida
Figure imgf000049_0002
31A. A/-(4-Clorofenil)-4-oxop¡per¡d¡n-1-carboxam¡da
Se disolvió clorhidrato de piperidin-4-ona (1,37 g, 10,1 mmol) en CH2Ch, se lavó con NaOH 1 M (60 ml), se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar la base libre en forma de un aceite incoloro, transparente. La piperidin-4-ona se diluyó con CH2Ch ( 6 ml) y la solución se enfrió a 0 °C. Se añadió Se añadió isocianato de 4-clorofenilo (1,59 g, 10,1 mmol) a la solución y el baño de hielo se retiró inmediatamente. Después de 3 h, la mezcla de reacción se diluyó con salmuera (10 ml) y NaOH 1 M (2 ml) y se extrajo con CH2Ch (2 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el intermedio deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCla): 8,80 (s, 1 H), 7,50 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 7,27 (d, J = 8 , 8 Hz, 2 H), 3,72 (t, J = 6,2 Hz, 4 H), 2,38 (t, J = 6,2 Hz, 4 H); m/z 253,1 (M+H+).
31B. A/-(4-Clorofenil)-4-hidroxipiperidin-1-carboxamida
A una solución de A/-(4-clorofenil)-4-oxop¡per¡d¡n-1-carboxam¡da (401 mg, 1,58 mmol) en metanol (20 ml) se le añadió NaBH4 (89 mg, 2,36 mmol) a ta. La reacción se dejó en agitación durante 14 h antes de añadir HCl 1 M (20 ml). La solución se extrajo con CH2Ch (60 ml), se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar el producto deseado en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8,57 (s, 1 H), 7,46 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 4,70 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,79 (td, J = 4,3, 13,6 Hz, 2 H), 3,68-3,58 (m, 1H), 3,02 (ddd, J = 3,2, 10,0, 13,3 Hz, 2 H), 1,75-1,67 (m, 2 H), 1,34-1,21 (m, 2 H).
Figure imgf000049_0003
Ejemplo 31. W-(4-Clorofenil)-4-fenoxipiperidin-1-carboxamida
A una solución de A/-(4-clorofenil)-4-hidroxipiperidin-1-carboxamida (100 mg, 0,39 mmol) y PPh3 (430 mg, 1,6 mmol) en THF (2 ml) a ta se le añadieron azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (0,068 ml, 0,43 mmol) y fenol (41 mg, 0,43 mmol). La solución se dejó en agitación a ta durante 16 h antes de concentrarse a presión reducida. El residuo en bruto se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 30 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de una película incolora transparente. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 7,34-7,22 (m, 6 H), 6,99-6,90 (m, 3 H), 6,48 (s a, 1 H), 4,59-4,54 (m, 1 H), 3,75-3,67 (m, 2 H), 3,52-3,46 (m, 2 H), 2,4-1,97 (m, 2 H), 1,94-1,86 (m, 2 H); m/z 331,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 32
W-(4-Clorofenil)-4-fenoxiciclohexano-1-carboxamida
Figure imgf000050_0001
32A. A/-(4-Clorofenil)-4-hidroxiciclohexano-1-carboxamida
Se añadieron ácido 4-hidroxiciclohexano-1-carboxílico (2,0 g, 14 mmol), 4-cloroanilina (1,8 g, 14 mmol) y hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (HATU) (6,3, 17 mmol) a un matraz de fondo redondo de 100 ml seguido de DMF (46 ml) y diisopropiletilamina (2,5 ml, 28 mmol). La solución se agitó en atmósfera de argón durante 16 h. La solución de reacción se diluyó con EtOAc (60 ml), se lavó con NaOH 1 N (50 ml), se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 100 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. m/z 254,2 (M+H+).
Ejemplo 32. W-(4-Clorofenil)-4-fenoxiciclohexano-1-carboxamida
A un matraz de fondo redondo de 50 ml se le añadieron W-(4-clorofenil)-4-hidroxiciclohexano-1-carboxamida (1,6 g, 6,3 mmol), PPh3 unido a polímero (3,0 mmol/g de PPh3, 8,4 g, 25 mmol) y fenol (0,894 g, 9,5 mmol). El matraz se evacuó y se volvió a llenar argón. Al matraz se le añadió THF (30 ml), y la mezcla se enfrió a 0 °C. Se añadió gota a gota DEAD (1,49 ml, 9,5 mmol) mediante una jeringa y el baño de hielo se retiró. La mezcla se dejó calentar a ta y se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (50 ml), se filtró a través de una capa de 1:1 de CELITE®:gel de sílice y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (0 % al 18 %, después EtOAc del 18 % al 30 % en hexanos) para proporcionar el producto deseado en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 8 7,48 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 7,32-7,27 (m, 4 H), 7,15 (s a, 1 H), 6,99-6,84 (m, 3 H), 4,34-4,14 (m, 1 H), 2,36-2,19 (m, 3 H), 2,08 (d, J = 11,7 Hz, 2 H), 1,81-1,68 (m, 2 H), 1,55­ 1,43 (m, 2 H); m/z 330,2 (M+H+).
Ejemplo de referencia 33
2-(4-Clorofenil)-A/-((frans)-4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida
Figure imgf000050_0002
33A. Metanosulfonato de c/s-4-(4-metoxifenil)ciclohexilo
A una solución de c/s-4-(4-metoxifenil)-ciclohexanol (Chem. Commun., 48:9376 (2012)) (366 mg, 1,77 mmol) y trietilamina (0,49 ml, 3,55 mmol) en tetrahidrofurano (9 ml), a 0 °C, se le añadió cloruro de metanosulfonilo (0,21 ml, 2,66 mmol). La mezcla se agitó durante 1,5 h antes de inactivarse con agua, se diluyó con EtOAc, después se lavó secuencialmente con HCl diluido, solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y salmuera. Las fases orgánicas se secaron sobre sulfato sódico, después se concentraron a presión reducida antes de que el residuo resultante se purificara usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 20 % al 50 % en hexanos) para proporcionar metanosulfonato de c/s-4-(4-metoxifenil)cidohexilo, en forma de un sólido de color blanco.
33B. (trans)-4-(4-Metoxifenil)ciclohexan-1-amina
A una mezcla de metanosulfonato de c/s-4-(4-metoxifenil)cidohexilo (430 mg, 1,51 mmol) en DMF (7,5 ml) se le añadió azida sódica (108 mg, 1,66 mmol). Después, la mezcla se calentó a 70 °C durante 4 h. La mezcla se enfrió a ta, se inactivó con agua, después se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó varias veces con agua, después salmuera, antes de concentrarse a presión reducida a ~10 ml. A esta mezcla se le añadió Pd húmedo al 10 %/C (70 mg, 10 % p/p) y el recipiente de reacción se puso en una atmósfera de hidrógeno, a ta, durante 16 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo que se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (metanol del 10% al 20% en diclorometano) para formar el producto deseado, (trans)-4-(4-metoxifenil)ciclohexan-1 -amina, en forma de un sólido de color blanquecino.
Ejemplo 33. 2-(4-Clorofenil)-A/-((trans)-4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida
Una solución que contenía ácido 4-clorofenilacético (109 mg, 0,64 mmol) y hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-6]piridinio (266 mg, 0,70 mmol) en DMF ( 6 ml) se agitó a ta durante 10 minutos antes de añadirse (trans)-4-(4-metoxifenil)ciclohexan-1-amina (131 mg, 0,64 mmol). Después de agitar durante 20 minutos, se añadió W,W-diisopropiletilamina (0,33 ml, 1,92 mmol) y la mezcla se agitó durante un adicional de 1 h. Después, los contenidos del matraz se vertieron en salmuera (30 ml) y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo que se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (MeOH al 5 % en CH2Cl2) para producir la 2-(4-clorofenil)-W-((trans)-4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetamida deseada en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CDCla): 8 7,33 (d, J = 8,4 Hz. 2H), 7,21 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,09 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 9 Hz, 2H), 5,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,85-3,78 (m, 4H), 3,52 (s, 2H), 2,43-2,34 (m, 1H), 2,05­ 2,00 (m, 2H), 1,90-1,85 (m, 2H), 1,51-1,04 (m, 4H) ppm. m/z 358,2 (M+H)+.
Ejemplo de referencia 34
4-Fluoro-W-(1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-il)anilina, HCl
Figure imgf000051_0001
34A. 2-(4-(4-Hidroxifenil)ciclohexilideno)acetato de etilo
A un matraz secado en horno (Matraz n.° 1) se le añadió NaH (dispersión al 60 % en aceite, 11,8 g, 295 mmol) y 120 ml de THF, antes de que la mezcla se enfriase a 0 °C. A esta mezcla se le añadió gota a gota, durante 1 hora, una mezcla de trietil-fosfonoacetato (46,9 ml, 236 mmol) en 250 ml de THF. Una vez completada la adición, la mezcla se agitó durante 1 h a ta.
A un matraz separado (Matraz n.° 2), que contenía 0 °C un mezcla de NaH (dispersión al 60 % en aceite, 8,67 g, 216 mmol) en 100 ml de THF, se le añadió cuidadosamente, durante 45 minutos, una solución de 37,47 g (196,9 mmol) de 4-(4-hidroxifenil)ciclohexanona en 250 ml de THF. Después de completar la adición, la mezcla se agitó a ta durante 2 h hasta que la mezcla se convirtió en una solución transparente. Una vez que esta solución fue transparente, el Matraz n.° 1 se enfrió a 0 °C y los contenidos del Matraz n.° 2 se añadieron a través de canulación. Después de que esta adición se completase, la mezcla se calentó a ta y se agitó durante 2 h. Después, la mezcla se inactivó mediante la adición cuidadosa de hielo y agua (1 l) y posteriormente se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Después, las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1 l), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar 2-(4-(4-hidroxifenil)ciclohexilideno)acetato de etilo con un rendimiento del 97 % en forma de un sólido de color blanco.
34B. 2-(4-(4-Hidroxifenil)ciclohexil)acetato de etilo
A una solución de 2-(4-(4-hidroxifenil)ciclohexilideno)acetato de etilo (9,74 g, 35,8 mmol) en EtOAc se le añadió Pd/C (0,974 g, 10 % en peso). La solución se roció con un globo de H2 (g) y se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 2 días. Después, la mezcla se filtró a través de una capa de CELITE®, que se aclaró a fondo con EtOAc. Después, el filtrado combinado se concentró a presión reducida para proporcionar 2-(4-(4-hidroxifenil)ciclohexil)acetato de etilo en forma de un sólido cristalino de color blanco con rendimiento cuantitativo como una mezcla de diastereómeros.
34C. 2-(4-(4-Metoxifenil)ciclohexil)acetato de etilo
A una solución de 2-(4-(4-hidroxifenil)ciclohexil)acetato de etilo (34B, 34,1 g, 130 mmol) en DMF (300 ml) se le añadió Cs2COa (65,0 g, 200 mmol) seguido de yodometano (21,3 g, 150 mmol). La suspensión resultante se agitó a ta durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se repartió entre EtOAc (150 ml) y agua (200 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3x 150 ml). Estos extractos orgánicos combinados, se combinaron con la capa orgánica original y se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó empleando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 0 % al 30 % en hexanos) para proporcionar 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetato de etilo en forma de un aceite transparente.
34D. 2-(4-(4-Metoxifenil)ciclohexil)etan-1-ol
Se disolvió 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetato de etilo (34C, 1,45 g, 5,25 mmol) en THF (26 ml) y se enfrió a 0 °C. Después, se añadió en porciones LiAlH4 (596 mg, 15,7 mmol) y la mezcla se calentó a ta durante 2 h. La mezcla se inactivó con agua, después HCl acuoso 2 N, antes de extraerse con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida para formar 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)etan-1-ol (1,17 g, 95 %).
34E. 2-(4-(4-Metoxifenil)ciclohexil)acetaldehído
A una mezcla de 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)etan-1-ol (34D, 1,17 g, 5,00 mmol) en diclorometano (50 ml) se le añadió bicarbonato sódico (1,26 g, 15,0 mmol), seguido de peryodinano de Dess-Martin (3,19 g, 7,5 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a ta durante 16 h, antes de diluirse con diclorometano, después se lavó con agua. La capa orgánica se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo que se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 20 % en hexanos) para formar 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetaldehído (609 mg, 52 %) en forma de un aceite incoloro.
34F. 1,1,1-Trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-ol
Una solución de 2-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)acetaldehído (34E, 609 mg, 2,62 mmol) y TMS-CF3 (0,58 ml, 3,93 mmol) en THF ( 6 ml) se trató con una solución 1 M de TBAF en THF (15,72 ml, 15,72 mmol) a 0 °C. La mezcla se dejó calentar a ta durante 16 h, después se inactivó con HCl acuoso 2 N (3 ml) durante 30 minutos. La mezcla se repartió entre EtOAc y agua y las capas se separaron. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida para proporcionar un residuo que se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 15% en hexanos) para suministrar 1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-ol (565 mg, 71 %) en forma de un aceite incoloro.
34G. 1,1,1-Trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-ona
A una solución de 1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-ol (34F, 565 mg, 1,89 mmol) en CH2Ch (19 ml) se le añadió bicarbonato sódico (476 mg, 5,67) seguido de peryodinano de Dess-Martin (1,04 g, 2,46 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a ta durante 16 h, después se diluyó con CH2Ch y se lavó con agua. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 10 % en hexanos) para proporcionar 1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-ona (356 mg, 63 %) en forma de un aceite incoloro que cristalizó después de un periodo de reposo.
34H. W-(4-Clorofenil)-1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-imina y (Z)-4-cloro-W-(3,3,3-trifluoro-1-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)prop-1-en-2-il)anilina
Una mezcla de 1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-ona (34G, 178 mg, 0,59 mmol), 4-fluoroanilina (0,14 ml, 1,19 mmol) y p-TsOH (5 mg, 0,03 mmol), disuelto en tolueno (5 ml), se calentó a reflujo utilizando un purgador Dean-Stark durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo que se purificó por cromatografía en columna en alúmina neutra (EtOAc al 7 %/hexanos) para dar una mezcla de imina W-(4-clorofenil)-1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-imina y (Z)-4-cloro-A/-(3,3,3-trifluoro-1-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)prop-1-en-2 -il)anilina en forma de un aceite incoloro viscoso.
Ejemplo 34. 4-Fluoro-A/-(1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-il)anilina
A una mezcla del producto de 34H (A/-(4-clorofenil)-1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-imina y (Z)-4-cloro-A/-(3,3,3-trifluoro-1-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)prop-1-en-2-il)anilina) (34H, 160 mg, 0,41 mmol) en MeOH (10 ml), a ta, se le añadió borohidruro sódico (46 mg, 1,2 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante 1,5 h antes de inactivarse con cloruro de amonio ac. sat., después se extrajo con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa (Varían ProStar usando una columna Hamilton C18 PRP-1 (15 x 250 mm) con caudal de 20 ml/min, Fase móvil A: ácido fórmico al 0,5 % en agua; Fase móvil B: ácido fórmico al 0,5 % en acetonitrilo; elución de gradiente B del 0 % al 100 % durante 30 minutos) para dar un residuo. El residuo se diluyó con HCl 2 M en éter dietílico y se concentró a presión reducida para dar la sal HCl del compuesto deseado en forma de una mezcla racémica de isómeros cis/trans. RMN 1H (300 MHz; CDCh): 8 7,16-7,08 (m, 2H), 6,95-6,81 (m, 4H), 6,65-6,59 (m, 2H), 3,93-3,85 (m, 1H), 3,85-3,71 (m, 3H), 3,41 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,55-2,50 (m, 1H), 2,41 (tt, J = 12,3, 3,0 Hz, 1H), 2,17-2,08 (m, 1H), 1,99-1,00 (m, 9H) ppm. m/z 396,15 (M+H)+.
Ejemplo de referencia 35
Hidrogenocloruro de 4-cloro-W-(1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-il)anilina
Figure imgf000053_0001
Preparado utilizando los procedimientos usados para proporcionar 4-fluoro-W-(1,1,1-trifluoro-3-(4-(4-metoxifenil)ciclohexil)propan-2-il)anilina reemplazando 4-fluoroanilina con 4-cloroanilina. EM(ES): m/z = 412,10 [M+H]+. tR = 2,94 min (Método M).
Ejemplo de referencia 36
2-(4-C¡anofenil)-A/-((trans)-4-fen¡lc¡clohex¡l)acetam¡da
Figure imgf000053_0002
El siguiente compuesto se preparó de la misma manera del Procedimiento General A, empleando trans-4-fenilciclohexanamina (Publicación p Ct n.° WO 2001/092204) (138 mg, 0,79 mmol), ácido 2-(4-cianofenil)acético (138 mg, 0,86 mmol), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-6]piridinio (360 mg, 0,95 mmol) y DMF (4 ml). El residuo se purificó mediante TLC preparativa (EtOAc al 33 % en hexanos), seguido por HPLC preparativa (Varian ProStar usando una columna Hamilton C18 PRP-1 (15 x 250 mm) con caudal de 20 ml/min, Fase móvil A: ácido fórmico al 0,5 % en agua; Fase móvil B: ácido fórmico al 0,5 % en acetonitrilo; elución de gradiente B del 0 % al 100 % durante 30 minutos) para dar el producto deseado. RMN 1H (300 MHz; CDCla): 8 7,64 (dd, J = 8,4, 1,8 Hz, 2H), 7,40 (dd, J = 8,4, 1,8 Hz, 2H), 7,32-7,24 (m, 2H), 7,21-7,16 (m, 3H), 5,31 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 3,89-3,79 (m, 1H), 3,60 (s, 2H), 2,45 (tt, J = 16,0, 3,6 Hz, 1H), 2,10-1,90 (m, 4H), 1,66-1,56 (m, 2H), 1,30-1,16 (m, 2H) ppm. m/z 319 (M+H)+.
Ejemplo de referencia 37
2-(4-Clorofen¡l)-A/-((trans)-4-fenilc¡clohex¡l)propanam¡da
Figure imgf000054_0001
El siguiente compuesto se preparó de la misma manera del Procedimiento General A, empleando frans-4-fenilciclohexanamina (Publicación Pc T n.° WO 2001/092204) (138 mg, 0,79 mmol), ácido 2-(4-clorofenil)propanoico (158 mg, 0,86 mmol), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-6]piridinio (360 mg, 0,95 mmol) y DMF (4 ml). El residuo se purificó mediante TLC preparativa (EtOAc al 33 % en hexanos) para dar un residuo. El residuo se purificó adicionalmente por HPLC preparativa (Varian ProStar usando una columna Hamilton C18 PRP-1 (15 x 250 mm) con caudal de 20 ml/min, Fase móvil A: ácido fórmico al 0,5 % en agua; Fase móvil B: ácido fórmico al 0,5 % en acetonitrilo; elución de gradiente B del 0 % al 100 % durante 30 minutos) para dar el producto deseado como una mezcla racémica. RMN 1H (300 MHz; CDCh): 8 7,34-7,14 (m, 9H), 5,16 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,86-3,75 (m, 1H), 3,48 (c, J = 7,2 Hz, 1H), 2,42 (tt, J = 12,3, 3,3 Hz, 1H), 2,09-1,84 (m, 4H), 1,68-1,52 (m, 2H), 1,49 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,26-1,06 (m, 2H) ppm. m/z 342 (M+H)+.
Ejemplo de referencia 38
2-(4-Clorofenil)-A/-((frans)-4-(quinolin-4-il)ciclohexil)acetamida
Figure imgf000054_0002
38A. 4-(1,4-Dioxaespiro[4,5]dec-7-en-8-il)quinolina
Se puso trifluorometanosulfonato de 1,4-dioxaespiro[4,5]dec-7-en-8-ilo (Bioorg. Med. Chem. Lett., 24:5377 (2014)) (6,9 g, 23,9 mmol) en un matraz de fondo redondo de 500 ml, seguido de ácido quinolona-4-borónico (4,55 g, 26,3 mmol), Pd(Pph3)4 (1,39 g, 1,2 mmol, 5 %mol), KBr (2,85 g, 23,94 mmol) y carbonato sódico (6,34 g, 59,85 mmol). El matraz se evacuó y se volvió a llenar con N2 tres veces, antes de desgasificarse se añadieron dioxano (100 ml) y agua (10 ml) a los sólidos y la mezcla se agitó y se calentó a 90 °C en atmósfera de N2. Después de 16 h, la mezcla se enfrió a ta y se añadió S¡O2. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc del 0% al 100% en hexanos) para dar 4-(1,4-dioxaespiro[4,5]dec-7-en-8-il)quinolina (3,2 g, 50 %).
38B. 4-(1,4-Dioxaespiro[4,5]decan-8-il)quinolona
Una mezcla de 4-(1,4-dioxaespiro[4,5]dec-7-en-8-il)quinolona (3,2 g, 12,0 mmol), NaHCO3 (500 mg, 6,0 mmol) y MeOH (70 ml) se purgó con N2 (g), antes de añadirse 20 % en peso de Pd/C (seco activado, 10 % en peso) a la mezcla. Se burbujeó H2 (g) a través de la solución hasta la desaparición completa del material de partida. La mezcla se purgó con N2 (g), se filtró a través de CELITE® y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida para dar 4-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-il)quinolona (2,9 g, 90 %).
38C. 4-(Quinolin-4-il)ciclohexan-1-ona
A una mezcla de 4-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-il)quinolona (3,0 g, 11 mmol) en acetona (30 ml) se le añadió HCl acuoso 3 M (30 ml). Después de la mezcla se agitó a ta durante 24 h, se concentró a presión reducida y se añadió NaHCO3 (solución acuosa sat.) para ajustar el pH por encima de 8,0. Después, la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 y se concentraron a presión reducida para formar 4-(quinolin-4 il)ciclohexan-1-ona en forma de un aceite de color amarillo (2,3 g, 90 %), que se solidificó después de un periodo de reposo.
38D. 4-(Quinolin-4-il)cidohexan-1-amina
La amina deseada se preparó a través de aminación reductora de 4-(quinolin-4-il)ciclohexan-1-ona con acetato amónico y cianoborohidruro sódico para dar 4-(quinolin-4-il)ciclohexan-1-amina.
Figure imgf000055_0001
38E. 2-(4-Clorofenil)-W-((frans)-4-(quinolin-4-il)ciclohexil)acetamida
El Procedimiento General A se empleó usando 4-(quinolin-4-il)ciclohexan-1-amina y ácido 2-(4-clorofenil)acético. El residuo se purificó usando HPLC preparativa (Varian ProStar usando una columna Hamilton C18 PRP-1 (15 x 250 mm) con caudal de 20 ml/min, Fase móvil A: ácido fórmico al 0,5 % en agua; Fase móvil B: ácido fórmico al 0,5% en acetonitrilo; elución de gradiente B del 0 % al 100 % durante 30 minutos) para dar el compuesto deseado en forma de un polvo de color blanco. RMN 1H (400 MHz; CD3OD): 8 8,77-8,74 (m, 1H), 8,26-8,21 (m, 1H), 8,05-8,01 (m, 1H), 7,79­ 7,73 (m, 1H), 7,68-7,63 (m, 1H), 7,49-7,45 (m, 1H), 7,34-7,27 (m, 4H), 3,82-3,77 (m, 1H), 3,50-3,42 (m, 3H), 2,13-2,03 (m, 4H), 1,82-1,70 (m, 2H), 1,65-1,60 (m, 2H) ppm. m/z 379 (M+H)+.
Ejemplo de referencia 40
W-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-Fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)-3-metilbencenosulfonamida
Figure imgf000055_0002
Preparación 40A:
Figure imgf000055_0003
A una solución en agitación de 1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-ona (300 g, 1920,86 mmol, 1,0equiv.) y feniltrifluorometanosulfonimida (823,47 g, 2305,03 mmol, 1 ,2 equiv.) en MTBE (7,5 l) en atmósfera de N2 a -78 °C se le añadió NaHMDS 2,0 M en Th F (1152,2 ml, 2305,03 mmol, 1,2 equiv.) durante 70 minutos y la mezcla se agitó durante un adicional de 60 minutos. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante una noche hasta que la TLC mostró el consumo completo del material de partida. La mezcla se inactivó con KHSO4 acuoso (100 ml), se filtró para retirar el sólido y el filtrado se concentró completamente. Al residuo se le añadieron 3 l de MTBE, después se lavó con NaOH al 5 % (1,5 l x 3). La fase orgánica se concentró para obtener 567 g en bruto de la Preparación 40A (aceite de color amarillo claro, rendimiento del 102%). El producto en bruto puede usarse directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Preparación 40A: RMN 1H (400 MHz CDCI3): 5 (ppm) 5,65 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 1,5 Hz, 4H), 2,53 (s, 2H), 2,40 (s, 2H), 1,90 (t, J = 6 , 6 Hz, 2H)
Preparación 40B:
Figure imgf000056_0001
Una mezcla de la Preparación 40A en bruto (600 g, 2,08 mol, 1 equiv.), B2Pin2 (687,1 g, 2,71 mol, 1,3 equiv.), KOAc (613 g, 6,24 mol, 3 equiv.), NaBr ( 86 g 0,833 mol,0,4 equiv.) y Pd(dppf)Cl2 (76 g, 0,1 mol, 0,05 equiv.) en dioxano (6,5 l) se calentó a reflujo durante una noche. Una vez que la reacción se completó, la mezcla se concentró y se purificó por FCC (2 % ^ 10 % ^ 720 % EtOAc/PE) para dar la Preparación 40B (369 g, 66 %).
Preparación 40B: CL-EM: 267,1 (M+1)+, RMN 1H (400 MHz, CDCh) 56,46 (s, 1H), 3,98 (s, 4H), 2,37-2,35 (m, 4H), 1,74-1,60 (t, 2H), 1,24 (s, 12H).
Preparación 40C:
Figure imgf000056_0002
Una mezcla de la Preparación 40B (368 g, 1,38 mol, 1,3 equiv.), 4-cloro-6-fluoroquinolina (195 g, 1,07 mol, 1 equiv.), K2CO3 (445 g, 3,22 mol,3 equiv.) y Pd(PPh3)4 (25 g, 22 mmol, 0,02 equiv.) en dioxano-agua (3 l, 4:1) se calentó a reflujo durante una noche. Después, la solución se concentró y se extrajo con EtOAc. La purificación por FCC (EtOAc al 38 %/éter de petróleo) dio la Preparación 40C (236 g, 77 %).
Preparación 40C: CL-EM: 286,1 (M+1)+, RMN 1H (400 MHz, CDCla) 58,80-8,29 (d, 1H), 8,11-8,07 (c, 1H), 7,63-7,61 (c, 1H), 7,47-7,46 (c, 1H), 7,26-7,22 (m,1H), 5,75-5,74 (m, 1H), 4,08-4,05 (m, 4H), 2,63-2,59 (m, 2H), 2,59-2,53 (m,2H), 2,0-1,97 (m,2H).
Preparación 40D:
Figure imgf000056_0003
A la Preparación 40C (125 g, 0,44 mol) en IPA (2 l) a 55 °C se le añadió Pd al 10 %/C y la mezcla se agitó en una atmósfera de H2 durante una noche. La mezcla se filtró y se concentró para dar la Preparación 40D en bruto (130 g), que se usó directamente en la siguiente etapa.
Preparación 40E:
La Preparación 40D (100 g, 0,348 mol) se trató con HCl 4 N (300 ml) en acetona (1200 ml) a 45 °C durante una noche. La mezcla se controló por TLC. Después, la solución se concentró al vacío. El residuo se ajustó a pH 9 con NaOH 6 N y la mezcla se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para dar un sólido de color amarillo claro, que después, se purificó mediante una columna sobre gel de sílice usando hexanos y acetato de etilo (acetato de etilo 20 por ciento a acetato de etilo al 70 %) para proporcionar la Preparación 40E en forma de un sólido de color blanco, (47 g+ mezcla de 20 g, rendimiento >55 %). Preparación 40E: CL-EM: 244,0 (M+1)+, RMN 1H (400 MHz, CDCla) 8 8,84 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,16 (dd, J = 9,3; 5,7 Hz, 1H), 7,72 (dd, J = 10,3; 2,8 Hz, 1H), 7,52 (ddd, J = 9,2, 7,8, 2,7 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,69 (ddd, J = 12,1, 9,0, 3,3 Hz, 1H), 2,77 - 2,54 (m, 4H), 2,37 (ddd, J = 13,4, 5,9, 3,0 Hz, 2H), 2,04 (cd, J = 12,6, 5,3 Hz, 2H).
Preparación 40F:
Figure imgf000057_0001
La Preparación 40E (57,8 g, 237,8 mmol) se disolvió en EtOH (240 ml) y se enfrió a 0 °C. Se añadió NaBH4 (9,94 g, 261,6 mmol) en porciones manteniendo la temperatura dentro de un intervalo de 0-10 °C (reacción exotérmica). La suspensión resultante se agitó durante 20 minutos. Una CL/EM de una alícuota de la mezcla de reacción indicó el consumo de cetona (m/z (M+H)+ = 244). La reacción se interrumpió a 0 °C mediante la adición lenta de acetona (58 ml) durante 15 minutos (exotermia). La reacción se vertió lentamente en 500 ml de cloruro de amonio acuoso saturado y 500 g de hielo. La solución acuosa resultante se extrajo con EtOAc (3 x 300 ml) y las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de amonio acuoso saturado (250 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (250 ml). La porción orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró a presión reducida. Se añadió suficiente sílice para adsorber el aceite y se diluyó con MeOH al 10 % en CH2Ch. Se usó una cantidad similar de sílice como tapón de sílice para purificar el material. El tapón de sílice se lavó con MeOH al 10 % en CH2Ch hasta que ya no se pudo detectar el material con actividad UV mediante TLC (7:3 de EtOAc/Hexanos, Fr= 0,4). El filtrado se concentró, después se suspendió en 500 ml de tolueno y se concentró de nuevo. La Preparación 40F en bruto se aisló en forma de un sólido de color amarillo (58,2 g) que se usó en la etapa posterior sin purificación adicional.
Preparación 40G:
Figure imgf000057_0002
A la Preparación 40F (58,2 g, 237,8 mmol) se le añadieron MeCN (125 ml) y piridina (38,7 ml, 480 mmol) y la mezcla de reacción se enfrió a 5 °C usando un baño de hielo/agua. Se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (26,0 ml, 336 mmol) a 5 °C (reacción exotérmica), la mezcla de reacción se agitó durante 1 h a 5 °C y después se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante un adicional de 16 h, tiempo durante el cual se formó un precipitado de color blanco. La mezcla heterogénea se inactivó mediante la adición de cloruro de amonio acuoso saturado (200 ml) y se extrajo con CH2Ch (3 x 300 ml). Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron a presión reducida. Se retiró azeotrópicamente el exceso de piridina del tolueno (3 x 300 ml). El material en bruto se recristalizó en H2O/MeOH como sigue a continuación: Se añadió 1 ml/mmol de H2O y la suspensión se calentó a 120 °C en un baño de aceite. Se añadió MeOH hasta que los sólidos estuvieron en solución (~0,5 l). Después de enfriarse, los cristales de color blanco se recogieron por filtración para dar le Preparación 40G (58,6 g, >20:1 rd, 76 % en dos etapas). m/z (M+H)+= 324,1. RMN 1H (400 MHz; CDCla): 8 8,82 (dd, J = 4,6, 0,2 Hz, 1H), 8,15-8,11 (m, 1H), 7,64-7,61 (m, 1H), 7,52-7,46 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 4,78 (tt, J = 10,9, 5,2 Hz, 1H), 3,24-3,16 (m, 1H), 3,07 (d, J = 1,0 Hz, 3H), 2,42-2,38 (m, 2H), 2,16-2,12 (m, 2H), 1,93-1,66 (m, 4H).
Preparación 40H:
Figure imgf000058_0001
Se añadió gota a gota malonato de di-ferc-butilo (33,5 ml, 150mmol) a una suspensión agitada de NaH (6,0 g, suspensión al 60 % en aceite, 150 mmol) en 1,2-dimetoxietano (100 ml) en atmósfera de Ar, se enfrió en un baño de agua enfriada con hielo. Después de agitar durante 10 min, se añadió la Preparación 40G (16,2 g, 50 mmol) y la reacción se calentó a 85 °C durante 20 h. Después de este tiempo, se añadió ácido acético (100 ml), el matraz de reacción se equipó con un cabezal de destilación y la temperatura se elevó a 130 °C. Se retiró por destilación 1,2-dimetoxietano a presión atmosférica hasta que el destilado fue ácido (~100 ml). El cabezal de destilación se retiró, se unió un condensador de reflujo, se añadió agua (20 ml) y la reacción se calentó a 130 °C durante 12 h. La reacción se concentró a presión reducida y se vertió en 200 g de hielo y 100 ml de NaOAc acuoso saturado. La Preparación 40H se aisló en forma de un sólido de color blanco por filtración y además se secó por reflujo con tolueno en un aparato Dean-Stark (11,0 g, 76%). m/z (M+H)+ = 288,2. RMN 1H (400 MHz; DMSO-da): 512,05 (s a, 1H), 8,79 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,06 (dd, J = 9,2, 5,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J = 11,0, 2,8 Hz, 1H), 7,66-7,61 (m, 1H), 7,50 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 2,41 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 2,28-2,23 (m, 1H), 1,87-1,78 (m, 2H), 1,73-1,64 (m, 6 H).
Preparación 40I:
Figure imgf000058_0002
A una solución de Preparación 40H (1,4 g, 4,8 mmol) en THF (15 ml) se le añadió NEt3 (1,3 ml, 9,6 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota cloruro de trimetilacetilo (0,713 ml, 5,8 mmol) y la solución resultante se agitó durante 30 min a 0 °C. En un matraz separado, se trató (R)-4-feniloxazolidin-2-ona (3, 1,01 g, 6,24 mmol) en THF (45 ml) a 0 °C con una solución 1 M de Líh Md S en THF (adición gota a gota de 6,24 ml, 6,24 mmol) y se agitó a 0 °C. El litiado se añadió a través de una cánula al primer matraz. La mezcla de reacción se dejó calentar a ta y se agitó durante 3 horas. La CL/EM indicó el consumo completo del ácido carboxílico de partida y la formación de la imida deseada. La mezcla de reacción se vertió en cloruro de amonio acuoso saturado (50 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se sometieron a cromatografía sobre sílice usando un gradiente de EtOAc/Hexanos del 0 al 100 % para dar la Preparación 40I en forma de una espuma de color blanco con un rendimiento del 83 %. m/z (M+H)+ = 433,3. RMN 1H (400 MHz; CDCh): 58,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,11 (dd, J = 9,1, 5,7 Hz, 1H), 7,63 (dd, J = 10,5, 2,5 Hz, 1H), 7,48-7,43 (m, 1H), 7,40-7,30 (m, 6 H), 5,47-5,44 (m, 1H), 4,71 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 4,31-4,28 (m, 1H), 3,20-3,11 (m, 3H), 2,49-2,46 (m, 1H), 1,82-1,67 (m, 6 H).
Preparación 40J:
Figure imgf000059_0001
Una solución de Preparación 40I (21,6 g, 50 mmol) en THF anhidro (200 ml) se enfrió a -40 °C (usando baño de acetonitrilo/hielo seco, se produce algo de precipitación) y se añadió una solución 2 M de NaHMDS en THF (30 ml, 60 mmol) durante 5 min (se observó un aumento de temperatura de 5-8 °C). La mezcla de reacción resultante de color amarillo se agitó durante 10 min, se volvió homogénea y se añadió gota a gota Mel (10,6 g, 75 mmol) durante 2 min (se observó un aumento de temperatura de 10 °C). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a -40 °C y la CL/EM indicó el consumo completo del material de partida y la formación de la metil imida deseada. La mezcla de reacción se diluyó rápidamente con una solución acuosa de cloruro de amonio (400 ml) y la mezcla bifásica se agitó durante 15 min. Se añadió 'PrOAc (100 ml), las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con 'PrOAc (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron. El residuo resultante se recristalizó disolviéndose en 400 ml de acetona caliente y añadiendo H2O hasta que se formó una solución lechosa, después se volvió a disolver con calentamiento (~3:1 de acetona/H2O). La Preparación 40J se obtuvo en forma de agujas de color blanco (15,04 g, 2 cultivos, 68 %). m/z (M+H)+ = 447,3. r Mn 1H (400 MHz; CDCh): 5 8,81 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,10 (dd, J = 9,2, 5,7 Hz, 1H), 7,65 (dd, J = 10,6, 2,7 Hz, 1H), 7,47-7,42 (m, 1H), 7,41-7,29 (m, 6 H), 5,47 (dd, J = 8 ,8 , 3,8 Hz, 1H), 4,69 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 4,38-4,30 (m, 1H), 4,26 (dd, J = 8,9, 3,9 Hz, 1H), 3,26­ 3,21 (m, 1H), 2,18-2,15 (m, 1H), 1,93-1,64 (m, 8 H), 1,09 (d, J = 6,9 Hz, 3H).
Preparación 40K:
Figure imgf000059_0002
A una solución de Preparación 40J (82,0 g, 183,6 mmol) en THF (610 ml) a 0 °C se le añadieron H2O2 acuoso (35 % en peso, 82 ml) y LiOH (7,04 g, 293,8 mmol) en H2O (189 ml). La mezcla de reacción resultante se dejó calentar lentamente a ta y se agitó durante una noche. La reacción se enfrió a 0 °C y se añadió una solución acuosa saturada de bisulfito sódico (250 ml). Después de agitar durante 30 min, la THF se retiró a presión reducida. Se añadió ácido acético (34 ml) seguido de EtoAc (300 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La mezcla de reacción en bruto de color pardo se suspendió en MeCN (400 ml) y la suspensión se llevó a reflujo con agitación vigorosa. Después de enfriar a ta, los sólidos se recogieron por filtración lavándose con MeCN adicional. La Preparación 40K se obtuvo en forma de un sólido de color blanco (45,4 g, 82 %). m/z (M+H)+ = 302,2. RMN 1H (400 MHz; DMSO-d6 ): 512,10 (s, 1H), 8,79 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 9,2, 5,9 Hz, 1H), 7,97­ 7,94 (m, 1H), 7,67-7,62 (m, 1H), 7,49 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,41-3,36 (m, 1H), 2,73-2,65 (m, 1H), 1,83-1,61 (m, 9H), 1,08 (d, J = 6 , 8 Hz, 3H). Chiral HPLC, >99 % ee (ChiralPak IC-3, 3 |j M, 4,6 x 250 mm, 15 min isocrático, heptano al 70 %, '-PrOH al 30 % con detección de 230 nm) a un caudal de 0,75 ml/min, el enantiómero deseado tenía un tiempo de retención de 8 , 6 min con el enantiómero no deseado eluyendo a 9,5 min.
Preparación 40L:
Figure imgf000060_0001
La Preparación 40K (2 g, 6,64 mmol) se recogió en tolueno (22,12 ml) y se añadieron fosforazidato de difenilo (2,009 g, 7,30 mmol) y trietilamina (1,110 ml, 7,96 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 70 °C. Después de 2 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se recogió en 40 ml de THF y se añadieron 40 ml de agua e hidróxido de litio (1,589 g, 66,4 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se acidificó con HCl 1 N (forma un precipitado de color blanco) y se extrajo con EtOAc. Después, la porción acuosa se basificó con NaOH 1 N (forma un precipitado) y se extrajo con EtOAc 5 veces. Los extractos básicos se concentraron al vacío para dar 40L (1,68 g, 6,17 mmol, rendimiento del 93 %). CLEM Anal. Calc. para C17H21FN2272,17, encontrado [M+H] 273,1 Tr = 0,50 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 8 : 8,80 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,11 (dd, J = 9,3; 5,7 Hz, 1H), 7,67 (dd, J = 10,6; 2,8 Hz, 1H), 7,46 (ddd, J = 9,2, 8,0, 2,8 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,27-3,37 (m, 1H), 3,13 (dc, J = 9,3, 6,3 Hz, 1H), 2,01-2,10 (m, 1H), 1,67-1,92 (m, 6 H), 1,37-1,55 (m, 4H), 1,15 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
Ejemplo 40. N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-Fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)-3-metilbencenosulfonamida
La Preparación 40L (20 mg, 0,073 mmol) se disolvió DCM (0,2 ml) y se añadió a un vial que contenía sulfonilcloruro de fenilo (26 mg, 0,147 mmol) y DCM (0,2 ml) seguido inmediatamente después de la adición de DIPEA (64,1 pl, 0,367 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de una noche, la reacción se concentró al vacío, se recogió en 2 ml de DMF, se filtró y se purificó mediante HPLC para dar el Ejemplo 40 (12,2 mg, 0,28 mmol, 39 %) CL-EM Anal. Calc. para C24H27FN2O2S 426,18, encontrado [M+H] 427,3 Tr = 2,065 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 9,2; 5,8 Hz, 1H), 7,90 (dd, J = 10,9; 2,5 Hz, 1H), 7,60-7,72 (m, 3H), 7,50 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 3,29 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 1,64-1,83 (m, 3H), 1,41-1,64 (m, 4H), 1,23-1,41 (m, 2H), 0,92 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
Ejemplos de referencia 41 a 46
Figure imgf000060_0002
Los ejemplos 41 a 46 se prepararon a partir de la Preparación 40L siguiendo el procedimiento para el Ejemplo 40 usando los correspondientes sulfonilcloruros.
Figure imgf000060_0003
continuación
Figure imgf000061_0003
Ejemplo 47
4-Cloro-W-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il) ciclohexil)etil)benzamida
Figure imgf000061_0001
La Preparación 40L (4 mg, 0,015 mmol) se recogió en DMF (147 pl) y se añadieron HOBT (2,92 mg, 0,019 mmol), EDC (3,66 mg, 0,019 mmol), ácido 4-clorobenzoico (4,60 mg, 0,029 mmol) y TEA (10,23 pl, 0,073 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción después se diluyó con 1,8 ml de DMF y se purificó a través de HPLC preparativa para dar el Ejemplo 47 (2,3 mg, 0,006 mmol, 38 %). CLEM Anal. Calc. para C24H24CFN2 410,16, encontrado [M+H] 411,0 Tr = 2,057 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 9,2; 5,8 Hz, 1H), 7,95 (dd, J = 11,0; 2,7 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 8 , 6 Hz, 2H), 7,65 (td, J = 8,7; 2,7 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,47 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 6 , 6 Hz, 1H), 1,74-1,91 (m, 6 H), 1,56-1,73 (m, 4H), 1,18 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Ejemplos 48 a 69
Figure imgf000061_0002
Los Ejemplos 48 a 69 se prepararon a partir de la Preparación 40L siguiendo el procedimiento para el Ejemplo 47 usando los correspondientes ácido benzoicos.
Figure imgf000062_0001
continuación
Figure imgf000063_0002
Ejemplo 70
W-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da
Figure imgf000063_0001
Ejemplo 70: W-((R)-1-((c/s)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l) et¡lH1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da
La Preparac¡ón 40L (50 mg, 0,184 mmol) se recog¡ó en DMF (1836 pl) y se añad¡eron HOBT (36,5 mg, 0,239 mmol), EDC (45,8 mg, 0,239 mmol), ác¡do [1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxíl¡co (54,6 mg, 0,275 mmol) y TEA (128 pl, 0,918 mmol) y la reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 3 horas. La reacc¡ón se d¡luyó con EtOAc y se lavó con 5:1 de agua/soluc¡ón acuosa saturada de NaHCO3. Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron con sulfato sód¡co, se f¡ltraron y se concentraron al vacío. El res¡duo en bruto se pur¡f¡có a través de cromatografía en columna ultrarráp¡da sobre gel de síl¡ce para dar el Ejemplo 70 (63 mg, 0,132 mmol, rend¡m¡ento del 72,0%). CLEM Anal. Calc. para C30H29FN2O 452,23, encontrado [M+H] 453,3 Tr = 2,297 m¡n (Método B). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 : 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,13 (dd, J = 9,2; 5,7 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8 , 6 Hz, 2H), 7,64-7,70 (m, 3H), 7,58-7,64 (m, J = 7,0 Hz, 2H), 7,36-7,50 (m, 5H), 5,91 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,58-4,70 (m, 1H), 3,30 (tt, J = 10,6, 3,6 Hz, 1H), 1,96-2,15 (m, 3H), 1,80 (s a, 6 H), 1,33 (d, J = 6 , 6 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 71
4-Cloro-W-(1-((frans)-4-(qu¡nol¡n-4-¡lox¡)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da
Figure imgf000064_0001
Intermedio 71A. 2-(1,4-D¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l¡deno)acetato de et¡lo
Se añad¡ó fosfonoacetato de tr¡et¡lo (21,79 ml, 109 mmol) a una suspens¡ón de h¡druro sód¡co (3,84 g, 96 mmol) en THF (64,0 ml) y 0 °C. La reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. Después de 30 m¡nutos, la reacc¡ón se volv¡ó a enfr¡ar a 0 °C y se añad¡ó una soluc¡ón de 1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-ona (10 g, 64,0 mmol) en 5 ml de THF. Después, la reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos antes de ¡nterrump¡rse con agua. La mezcla se extrajo con DCM tres veces. Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron con sulfato sód¡co, se f¡ltraron y se concentraron al vacío. El res¡duo en bruto se pur¡f¡có por cromatografía sobre gel de síl¡ce para dar el Intermed¡o 71A (13,88 g, 61,3 mmol, rend¡m¡ento del 96%). TLF: el producto se t¡ñó como una mancha púrpura en an¡saldehído (Fr = 0,75 en 1:1 Hex/EtOAc). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 6 : 5,65 (s, 1H), 4,13 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 3,92-3,99 (m, 4H), 2,94-3,02 (m, 2H), 2,31-2,40 (m, 2H), 1,71-1,79 (m, 4H), 1,26 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Intermed¡o 71B. 2-(1,4-D¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l)acetato de et¡lo
El Intermed¡o 71A (13,88 g, 61,3 mmol) se recog¡ó en EtOAc (61,3 ml) y se añad¡ó a una botella de h¡drogenac¡ón Parr que contenía palad¡o húmedo al 10 % sobre carbono (1,306 g, 12,27 mmol) (54 % p/p agua) en una atmósfera de n¡trógeno. La botella de reacc¡ón se purgó y se volv¡ó a llenar con n¡trógeno tres veces y después con h¡drógeno. Después de llenar la botella con h¡drógeno a 0,34 MPa (50 ps¡), la botella se puso en un ag¡tador Parr y se ag¡tó. Después de 4 horas, la reacc¡ón se f¡ltró sobre CELITE® prensado y se concentró al vacío para dar el Intermed¡o 71B (13,78 g, 60,4 mmol, rend¡m¡ento del 98 %). CLEM Anal. Calc. para C12H20O4228,14, encontrado [M+H] 229,1 Tr = 0,83 m¡n (Método A). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 6 : 4,11 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 3,88-3,95 (m, 4H), 2,21 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 1,83 (dqd, J = 11,0, 7,5, 3,5 Hz, 1H), 1,68-1,78 (m, 4H), 1,50-1,61 (m, 2H), 1,27-1,35 (m, 2H), 1,24 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Intermed¡o 71C. 2-(1,4-D¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l)butanoato de et¡lo
Se recog¡ó d¡¡soprop¡lam¡na (2,347 ml, 16,63 mmol) en THF seco (15,99 ml) (en atmósfera de N2) y se enfr¡ó a -78 °C. Se añad¡ó n-BuL¡ (6,14 ml, 15,35 mmol) (2,5 M en hexanos) durante ~5 m¡nutos a -78 °C. Después de ag¡tar durante 45 m¡nutos, la reacc¡ón se calentó a temperatura amb¡ente durante 10 m¡nutos y se volv¡ó a -78 °C. Después, se añad¡ó 1,3-d¡met¡ltetrah¡drop¡r¡m¡d¡n-2(1H)-ona (1,541 ml, 12,79 mmol) segu¡do de una soluc¡ón del Intermed¡o 71B (2,92 g, 12,79 mmol) en THF (15,99 ml) (gota a gota durante ~5 m¡nutos). Después de 1 hora, se añad¡ó gota a gota yodoetano (1,125 ml, 14,07 mmol) (puto) durante ~5 m¡nutos. La reacc¡ón se ag¡tó otras 2 horas a -78 °C antes de calentarse lentamente a temperatura amb¡ente. Después, la reacc¡ón se ag¡tó durante una noche a temperatura amb¡ente. La reacc¡ón se ¡nterrump¡ó vert¡éndose en 1:1 de agua/salmuera y se extrajo con EtOAc. Los orgán¡cos comb¡nados se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato sód¡co, se f¡ltraron y se concentraron al vacío. El res¡duo en bruto se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce para dar el Intermed¡o 71C (2,27 g, 8 , 86 mmol, rend¡m¡ento del 69 %). TLF: el producto se t¡ñó como una mancha púrpura en an¡saldehído (Fr = 0,80 en 1:1 hex/EtOAc). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 6 : 4,14 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 3,88-3,95 (m, 4H), 2,09 (td, J = 8,4; 5,6 Hz, 1H), 1,69-1,83 (m, 4H), 1,45-1,64 (m, 6 H), 1,33-1,42 (m, 1H), 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 0,86 (t, J = 7,5 Hz, 3H). Intermed¡o 71D. 2-(4-Oxoc¡clohex¡l)butanoato de et¡lo
El Intermed¡o 71C (2,00 g, 7,80 mmol) se recog¡ó en THF (39,0 ml) y se añad¡ó ác¡do clorhídr¡co 1 M (39,0 ml). La reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 2 horas. La reacc¡ón se concentró al vacío, se d¡luyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgán¡cos comb¡nados se secaron con sulfato sód¡co, se f¡ltraron y se concentraron al vacío. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có sobre cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce para dar el Intermed¡o 71D (1,47 g, 6,92 mmol, rendimiento del 89 %). TLF: el producto se tiño de un color ligeramente rosa en anisaldehído (Fr = 0,65 en 1:1 Hex/EtOAc). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8 : 4,15 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 2,25-2,42 (m, 4H), 2,18 (ddd, J = 9,3, 7,8, 5,2 Hz, 1H), 2,10 (ddt, J = 13,1,6,2, 3,3 Hz, 1H), 1,90-2,03 (m, 2H), 1,56-1,70 (m, 2H), 1,38-1,56 (m, 2H), 1,25 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,89 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Intermedio 71E. 2-((frans)-4-Hidroxiciclohexil)butanoato de etilo
El Intermedio 71D (1,47 g, 6,92 mmol) se disolvió en EtOH (13,85 ml) y se enfrió a 0 °C. Se añadió NaBH4 (0,314 g, 8,31 mmol) y después la reacción se dejó agitar a 0 °C durante 1 hora. La reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el Intermedio 71E (1,22 g, 5,69 mmol, rendimiento del 82 %) junto con (138 mg, 0,644 mmol, rendimiento del 9,30 %) del isómero cis. RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8 : 4,14 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,53 (t, J = 10,5 Hz, 1H), 1,92-2,08 (m, 2H), 1,80-1,89 (m, 1H), 1,63-1,70 (m, 1H), 1,52-1,62 (m, 4H), 1,37-1,52 (m, 2H), 1,26 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,95-1,17 (m, 2H), 0,87 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Intermedio 71F. 2-((frans)-4-(Quinolin-4-iloxi)ciclohexil)butanoato de etilo
El Intermedio 71E (100 mg, 0,467 mmol) se recogió en DMSO (933 pl) y se añadió lentamente NaH (22,40 mg, 0,933 mmol), en porciones a ta. Después de 1 hora, se añadió 4-bromoquinolina (117 mg, 0,560 mmol) y la reacción se calentó a 80 °C. Después de 16 horas, la reacción se interrumpió con cloruro de amonio y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron con sulfato sódico, se filtraron, se concentraron al vacío. El residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el Intermedio 71F (89 mg, 0,261 mmol, rendimiento del 55,9 %). CLEM Anal. Calc. para C21H27NO3341,20, encontrado [M+H] 342,3 Tr = 0,84 min (Método A).
Intermedio 71G. Ácido 2-((frans)-4-(quinolin-4-iloxi)ciclohexil)butanoico
El Intermedio 71F (89 mg, 0,261 mmol) se recogió en THF (1043 pl), agua (1043 pl) y MeOH (521 pl). Se añadió hidróxido de litio (62,4 mg, 2,61 mmol) y la reacción se agitó a 60 °C durante 24 horas. La reacción se concentró al vacío, se diluyó con agua, se acidificó con ácido acético añadido (formas precipitadas) y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para dar el Intermedio 71G (74 mg, 0,236 mmol, rendimiento del 91 %. CLEM Anal. Calc. para C19H23NO3 313,17, encontrado [M+H] 314,2 Tr = 0,69 min (Método A).
Intermedio 71H. 1-((frans)-4-(Quinolin-4-iloxi)ciclohexil)propan-1-amina
El Intermedio 71G (190 mg, 0,606 mmol) se recogió en tolueno (2021 pl) en un vial y se añadieron fosforazidato de difenilo (184 mg, 0,667 mmol) y TEA (101 pl, 0,728 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 80 °C. Después de 2 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se recogió en 1 ml de THF y se añadieron 1 ml de agua y LiOH (145 mg, 6,06 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se acidificó con HCl 1 N (formas precipitadas de color blanco) y se extrajo con EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. Después, la reacción se basificó con NaOH 1 N (de nuevo, formas precipitadas) y se extrajo con EtOAc (x5). Los extractos básicos se concentraron al vacío para dar el Intermedio 71H (35 mg, 0,123 mmol, rendimiento del 20,30 %). CLEM Anal. Calc. para C18H24N2O 284,19, encontrado [M+H] 285,2 Tr = 0,55 min (Método A).
Ejemplo 71. 4-Cloro-A/-(1-((frans)-4-(quinolin-4-iloxi) ciclohexil)propil)benzamida
El Intermedio 71H (35 mg, 0,123 mmol) se recogió en DMF (1231 pl) y se añadieron HOBT (24,50 mg, 0,160 mmol), EDC (30,7 mg, 0 ,160 mmol), ácido 4-clorobenzoico (38,5 mg, 0,246 mmol) y TEA ( 86 pl, 0,615 mmol) y la reacción se agitó a ta. Después de 2 horas, la reacción se diluyó con DMF, se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa para dar el Ejemplo 71 (24,6 mg, 0,058, rendimiento del 46,8 %). CLEM Anal. Calc. para C25H27ClN2O2422,18, encontrado [M+H] 423,3 Tr= 0,82 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,67 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,87-7,94 (m, 3H), 7,72 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,49-7,58 (m, 3H), 7,10 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,62 (t, J = 10,2 Hz, 1H), 3,74-3,85 (m, J = 8,9 Hz, 1H), 2,21 (d, J = 10,1 Hz, 2H), 1,86 (t, J = 14,3 Hz, 2H), 1,39-1,71 (m, 5H), 1,28 (c, J = 12,3 Hz, 2H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Enantiómero 1 y Enantiómero 2
Enantiómero 1: Ejemplo de referencia 71
4-Cloro-W-(1-((frans)-4-(quinolin-4-iloxi) ciclohexil)propil)benzamida (homoquiral, estereoquímica desconocida)
Figure imgf000066_0001
Enantiómero 2: Ejemplo de referencia 71
4-Cloro-W-(1-((frans)-4-(quinolm-4-ilox¡) cidohexil)propil)benzamida (homoquiral, estereoquímica desconocida)
Figure imgf000066_0002
Ejemplo 71 Enantiómero 1 y Enantiómero 2: La separación quiral de la muestra racémica (Método C) dio el Enantiómero 1 Tr = 5,195 min (Método D) y el Enantiómero 2 T, = 8,226 min (Método D) No se determinó la estereoquímica absoluta.
Enantiómero 1: EM(ES): m/z = 423,3 [M+H]+. Tr = 2,126 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8: 8,78 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,14-8,22 (m, 2H), 7,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,82 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,65-4,75 (m, 1H), 3,75-3,84 (m, J = 8,8 Hz, 1H), 2,22 (d, J = 10,4 Hz, 2H), 1,81-1,92 (m, 2H), 1,43-1,70 (m, 5H), 1,28 (c, J = 12,2 Hz, 2H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Enantiómero 2: EM(ES): m/z = 423,3 [M+H]+. Tr = 2,126 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,67 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,85-7,94 (m, 3H), 7,72 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,2 Hz, 3H), 7,09 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,61 (t, J = 10,1 Hz, 1H), 3,75-3,83 (m, J = 8,5 Hz, 1H), 2,21 (d, J = 10,2 Hz, 2H), 1,85 (t, J = 14,0 Hz, 2H), 1,39-1,69 (m, 5H), 1,22-1,33 (m, 2H), 0,85 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 72
4-Cloro-W-(1-((frans)-4-((8-(tr¡fluoromet¡l)qu¡nol¡n-4-¡l)ox¡)c¡clohex¡l) propil)benzamida
Figure imgf000066_0003
El Ejemplo 72 se preparó a partir del Intermedio 71E y los procedimientos análogos descritos para preparar 71F, 71G, 71H y el Ejemplo 71 excepto que se usó 4-cloro-8-(tr¡fluoromet¡l)qu¡nol¡na en la parte F. CL-EM Anal. Calc. para C26H26C 1 F3N2O2490,16, encontrado [M+H] 491,2 Tr = 0,99 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,80 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,65 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,66 (t, J = 10,0 Hz, 1H), 3,74-3,84 (m, J = 6,6 Hz, 1H), 2,21 (d, J = 10,2 Hz, 2H), 1,85 (t, J = 13,5 Hz, 2H), 1,40-1,71 (m, 5H), 1,27 (c, J = 12,1 Hz, 2H), 0,84 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 73 y Ejemplo de referencia 74
(frans)-N-(4-Clorobenc¡l)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanocarboxam¡da (c/s)-N-(4-Clorobenc¡l)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-N)ddohexanocarboxamida (homoqu¡ral, estereoquímica absoluta y relat¡va no as¡gnada)
Figure imgf000067_0001
Intermed¡o 73A. Tr¡fluorometano sulfonato de 1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]dec-7-en-8-¡lo
A una soluc¡ón en ag¡tac¡ón de 1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-ona (300 g, 1920,86 mmol, 1,0equ¡v.) y N-fen¡ltr¡fluorometanosulfon¡m¡da (823,47 g, 2305,03 mmol, 1,2 equ¡v.) en MTBE (7,5 l) en una atmósfera de n¡trógeno a -78 °C se le añad¡ó NaHMDS 2,0 M en THF (1152,2 ml, 2305,03 mmol, 1,2 equ¡v.) durante 70 minutos y la mezcla se ag¡tó durante un ad¡c¡onal de 60 minutos. La mezcla de reacc¡ón se calentó a temperatura amb¡ente y se ag¡tó durante una noche hasta que la TLC mostró el consumo completo del mater¡al de part¡da. La mezcla se ¡nact¡vó con KHSO4 acuoso (100 ml), se f¡ltró para ret¡rar el sól¡do y el f¡ltrado se concentró completamente. Al res¡duo se le añad¡eron 3 l de MTBE, después se lavó con NaOH al 5 % (1,5 lx3). La fase orgán¡ca se concentró para obtener el Intermed¡o 34A (567 g, ace¡te de color amar¡llo claro, rend¡m¡ento del 102%). TLC Fr: 0,7 (EP/EtOAc=10/1, KMnO4). RMN 1H (400 MHz,CDCl3): 8 (ppm) 5,65 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 1,5 Hz, 4H), 2,53 (s, 2H), 2,40 (s, 2H), 1,90 (t, J = 6 ,6 Hz, 2H).
Intermed¡o 73B. 4,4,5,5-Tetramet¡l-2-(1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]dec-7-en-8-¡l)-1,3,2-d¡oxaborolano
Una mezcla del Intermed¡o 73A (600 g,2,08 mol, 1 equ¡v.), B2P¡n2 (687,1 g, 2,71 mol, 1,3equ¡v.), KOAc (613 g, 6,24 mol, 3 equ¡v.), NaBr (86 g 0,833 mol,0,4 equ¡v.) y Pd(dppf)Cl2 (76 g, 0,1 mol, 0,05 equ¡v.) en d¡oxano (6,5 l) se calentó a reflujo durante una noche. Una vez que la reacc¡ón se completó, la mezcla se concentró y se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce para dar el Intermed¡o 73B (369 g, rend¡m¡ento del 66 %). CLEM Anal. Calc. para C14H23BO4266,17, encontrado [M+H] 267,1. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 8 6,46 (s, 1H), 3,98 (s, 4H), 2,37­ 2,35 (m, 4H), 1,74-1,60 (t, 2H), 1,24 (s, 12H).
Intermed¡o 73C. 6-Fluoro-4-(1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]dec-7-en-8-¡l)qu¡nol¡na
Una mezcla del Intermed¡o 73B (368 g, 1,38 mol, 1,3equ¡v.), 4-cloro-6-fluoroqu¡nol¡na (195 g, 1,07 mol, 1 equ¡v.), K2CO3 (445 g, 3,22 mol,3 equ¡v.) y Pd(PPh3)4 (25 g, 22 mmol, 0,02 equ¡v.) en d¡oxano-agua (3 l, 4:1) se calentó a reflujo durante una noche. La soluc¡ón se concentró y se extrajo con EtOAc. El res¡duo en bruto se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce para dar el Intermed¡o 73C (236 g, rend¡m¡ento del 77 %). CLEM Anal. Calc. para C17H16FNO2285,12, encontrado [M+H] 286,1. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 8 8,80-8,29 (d, 1H), 8,11-8,07 (c, 1H), 7,63-7,61 (c, 1H), 7,47-7,46 (c, 1H), 7,26-7,22 (m,1H), 5,75-5,74 (m, 1H), 4,08-4,05 (m, 4H), 2,63-2,59 (m, 2H), 2,59-2,53 (m,2H), 2,0-1,97 (m,2H).
Intermed¡o 73D. 6-Fluoro-4-(1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l)qu¡nol¡na
Al Intermed¡o 73C (125 g, 0,44 mol) en IPA (2 l) a 55 °C se le añad¡ó Pd al 10 %/C y la mezcla se ag¡tó en una atmósfera de H2 durante una noche. La mezcla se f¡ltró y se concentró para dar el Intermed¡o 73D en bruto (128 g, rend¡m¡ento del 100 %), que se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente etapa. CLEM Anal. Calc. para C17H18FNO2287,13, encontrado [M+H] 288,2, tr = 0,62 m¡n (Método A).
Intermed¡o 73E. 4-(6-Fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanona
El Intermed¡o 73D (100 g, 0,348 mol) se trató con HCl 4 N (300 ml) en acetona (1200 ml) a 45 °C durante una noche. Después, la soluc¡ón se concentró al vacío. El res¡duo se ajustó pH 9 con NaOH 6 N. Se repart¡ó la mezcla entre acetato de et¡lo y agua. La capa orgán¡ca se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anh¡dro, se f¡ltró y se concentró para dar un sól¡do de color amar¡llo claro, que después, se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce para proporc¡onar el Intermed¡o 73E en forma de un sól¡do de color blanco (67 g, rend¡m¡ento del 55 %). CLEM Anal.
Calc. para C15H4FNO 243,11, encontrado [M+H] 244,0. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 58,84 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,16 (dd, J = 9,3; 5,7 Hz, 1H), 7,72 (dd, J = 10,3; 2,8 Hz, 1H), 7,52 (ddd, J = 9,2, 7,8, 2,7 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,69 (ddd, J = 12,1, 9,0, 3,3 Hz, 1H), 2,77 - 2,54 (m, 4H), 2,37 (ddd, J = 13,4, 5,9, 3,0 Hz, 2H), 2,04 (cd, J = 12,6, 5,3 Hz, 2H).
Intermedio 73F. 4-(6-Fluoroquinolin-4-il)cidohexanocarbonitrilo
A una solución del Intermedio 73E (500 mg, 2,055 mmol) y 1-((isocianometil)sulfonil)-4-metilbenceno (522 mg, 2,67 mmol) en DMSO (10,100 ml) y metanol (0,202 ml) se le añadió 2-metilpropan-2-olato potásico (554 mg, 4,93 mmol). Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se agitó temperatura ambiente. Después de 1 hora, la reacción se diluyó con éter dietílico (30 ml) y se lavó con agua (20 ml). La capa orgánica se secó con MgSO4 anhidro, se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el Intermedio 73F (280 mg, 1,101 mmol, rendimiento del 53,6 %) como una mezcla de isómeros cis y trans (relación ~2:1). CLEM Anal. Calc. para C16H15FN2 254,12, encontrado [M+H] 255,1, tr = 0,60 (primer diastereómero de elución) y 0,62 min (diastereómero que eluyó en segundo lugar) (Método A).
Intermedio 73G. Ácido 4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanocarboxílico.
El Intermedio 73F (280 mg, 1,101 mmol) se recogió en metanol (5505 j l) y ácido clorhídrico, 37% (5505 jl). La reacción calentó a 70 °C. Después de 48 horas, la reacción se añadió lentamente a 100 ml de agua y se basificó con bicarbonato sódico (ac. sat.). El acuoso se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron con sulfato sódico, se filtra y se concentraron al vacío para dar 4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanocarboxilato de metilo en bruto. Este material en bruto se recogió en THF (4260 jl), se añadieron agua (4260 jl), MeOH (2130 j l ) e hidróxido de litio (255 mg, 10,65 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después, la reacción se concentró, se acidificó con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para dar un residuo en bruto. Este residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el Intermedio 73G (mezcla de cis y trans) (63 mg, 0,231 mmol, rendimiento del 21,64 %). CLEM Anal. Calc. para C16H16FNO2273,1, encontrado [M+H] 274,1, tr = 0,55 (Método A).
Ejemplo 73 y Ejemplo 74. W-(4-Clorobencil)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanocarboxamida (mezcla de isómeros cis-y trans)
Se disolvió el Intermedio 73G (15 mg, 0,055 mmol) en cloruro de tionilo (40,1 jl, 0,549 mmol) y se añadió DMF (2,125 jl, 0,027 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después, la reacción se concentró al vacío, se recogió en tolueno, se concentró de nuevo y se colocó a alto vacío. Después de 15 minutos, el cloruro de acilo en bruto se recogió en ACN (274 j l) y se añadió a una solución de (4-clorofenil)metanamina (15,54 mg, 0,110 mmol) en ACN (274 ml) y TEA (38,2 jl, 0,274 mmol) a 0 °C. Después, la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 1 hora, la reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los orgánicos se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo en bruto se recogió en DMF, se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa para dar dos diastereómeros.
El diastereómero que eluyó en primer lugar, Ejemplo 73 (4,9 mg, 0,012 mmol, rendimiento del 22%). CLEM Anal. Calc. para C23H22CFN2O 396,14, encontrado [M+H] 397,0, tr = 1,891 (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 5: 8,80 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,40 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 9,0; 5,9 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,26 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 4,26 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 3,33 (t, J = 11,9 Hz, 1H), 2,32 (t, J = 11,9 Hz, 1H), 1,92 (t, J = 11,2 Hz, 4H), 1,71-1,83 (m, 2H), 1,56 (c, J = 12,3 Hz, 2H).
El enantiómero que eluyó en segundo lugar, Ejemplo 74 (3,6 mg, 0,009 mmol, rendimiento del 17 %) CL-EM Anal. Calc. para C23H22CFN2O 396,14, encontrado [M+H] 397,0, tr = 1,940 (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 5: 8,78 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,37 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 8,9; 6,0 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,23-7,31 (m, 3H), 4,27 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 3,33 (s a, 1H), 2,61 (s a, 1H), 2,01­ 2,13 (m, 2H), 1,74-1,85 (m, 4H), 1,65-1,74 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 75 y Ejemplo de referencia 76
(trans)-A/-(4-Clorofenil)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanocarboxamida (cis)-W-(4-Clorofenil)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanocarboxamida (homoquiral, estereoquímica absoluta y relativa no asignada)
Figure imgf000069_0001
El Ejemplo 75 y el Ejemplo 76 se prepararon a partir del Intermedio 73G utilizando el procedimiento para preparar el Ejemplo 73 y el Ejemplo 74.
Diastereómero que eluyó en primer lugar: (7,1 mg, 0,018 mmol, rendimiento del 34% ) CL-EM Anal. Calc. para C22H20CFN2O 382,13, encontrado [M+H] 383,2, tr = 2,011 (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8: 10,00 (s, 1H),
8,78 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 9,1; 5,8 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,59-7,68 (m, 3H), 7,39 (d, J = 4,4 Hz 1H), 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 3,37 (s
Figure imgf000069_0002
a, 1H), 2,78 (s a, 1H), 2,09 (d, J = 12,1 Hz, 2H), 1,81-2,00 (m, 4H), 1,75 (d, J = 11,4 Hz, 2H).
Diastereómero que eluyó en segundo lugar: (8,4 mg, 0,021 mmol, rendimiento del 39%) CL-EM Anal. Calc. para C22H20CFN2O 382,13, encontrado [M+H] 383,0, tr = 1,988 (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8: 10,09 (s, 1H),
8,81 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 9,0; 5,9 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,61-7,71 (m, 3H), 7,46 (d, J = 4,4 Hz 1H), 7,34 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 3,36 (t, J = 11,9 Hz, 1H), 2,41-2,48 (m, 1H) (triplete enterrado en DMSO), 1,97 (d, J 9,7 Hz, 4H), 1,76-1,88 (m, 2H), 1,54-1,65 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 77a
(±)-4-Cloro-W-(1-((c/s)-4-(piridin-4-iloxi)ciclohexil)propil)benzamida
Figure imgf000069_0003
Intermedio 77A. 2-((c/s)-4-(Piridin-4-iloxi)ciclohexil)butanoato de etilo
El Intermedio 71E (100 mg, 0,467 mmol) se disolvió en THF (1867 j l) y se añadieron piridin-4-ol (98 mg, 1,027 mmol) y trifenilfosfina (269 mg, 1,027 mmol). La solución se enfrió a 0 °C en un baño de hielo. Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (200 jl, 1,027 mmol) y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente una vez que la adición se completó. Se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el Intermedio 77A (89 mg, 0,205 mmol, rendimiento del 43,9 %).
CLEM Anal. Calc. para C17H25NO3 291,18, encontrado [M+H] 292,3 Tr = 0,84 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8: 8,34-8,42 (m, 2H), 6,71-6,79 (m, 2H), 4,57-4,64 (m, 1H), 4,15 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 2,14 (ddd, J = 9,8,
7,9, 4,6 Hz, 1H), 1,97-2,07 (m, 2H), 1,38-1,69 (m, 9H), 1,24-1,29 (m, 3H), 0,88 (t, J = 7,4 Hz, 3H)
Intermedio 77B. Ácido 2-((c/s)-4-(piridin-4-iloxi)ciclohexil)butanoico
El Intermedio 77A (89 mg, 0,305 mmol) se recogió en THF (244 jl), agua (244 j l) y MeOH (122 jl). Se añadió hidróxido de litio (73,1 mg, 3,05 mmol) y la reacción se agitó a 60 °C durante 16 horas. De nuevo, se añadió hidróxido de litio
(73,1 mg, 3,05 mmol) y la reacción se agitó durante otras 24 horas a 60 °C. La reacción se concentró al vacío. se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Después, la capa acuosa se trató con AcOH y se extrajo con EtOAc. La CLEM muestra que el producto permanece en la capa acuosa. Extraído de nuevo con cloroformo:propanol 7:3. La CLEM muestra que el producto se extrajo con éxito de la capa acuosa. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para dar el Intermedio 77B (73 mg, 0,277 mmol, rendimiento del
91 %). El material no se purificó adicionalmente. CLEM Anal. Calc. para C15H21NO3263,15, encontrado [M+H] 264,2
Tr = 0,58 min (Método A).
Intermedio 77C. 1-((c/s)-4-(Piridin-4-iloxi)cidohexil)propan-1-amina
El Intermedio 77B (35 mg, 0,133 mmol) se recogió en tolueno (443 pl) y se añadieron fosforazidato de difenilo (40,2 mg, 0,146 mmol) y TEA (22,23 pl, 0,159 mmol). El vial de reacción se cerró herméticamente (se ventiló con una aguja mientras alcanzaba la temperatura) y se calentó a 80 °C. Después de 2 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se recogió en 1 ml de THF y se añadió 1 ml de agua LiOH (31,8 mg, 1,329 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se acidificó con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc (se descartaron los extractos). Después, la porción acuosa se basificó con NaOH 1 N y se extrajo con EtOAc (x2). Los extractos orgánicos, básicos, combinados se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para dar el Intermedio 77C (25 mg, 0,107 mmol, rendimiento del 80 %). CLEM Anal. Calc. para C14H22N2O 234,17, encontrado [M+H] 235,1 Tr = 0,43 min (Método A).
Ejemplo 77a. (±)-4-Cloro-A/-(1-((c/s)-4-(piridin-4-iloxi)ciclohexil) propil)benzamida
El Intermedio 77C (25 mg, 0,107 mmol) se recogió en DMF (1067 pl) y se añadieron HOBT (21,24 mg, 0,139 mmol), EDC (26,6 mg, 0,139 mmol), ácido 4-clorobenzoico (33,4 mg, 0,213 mmol) y TEA (74,3 pl, 0,533 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 2 horas, la reacción se diluyó con DMF para llevar el volumen total a 2 ml, se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa para dar Ejemplo 77a (23,2 mg, 0,062 mmol, rendimiento del 58 %). CLEM Anal. Calc. para C2-iH25ClN2O2 372,16, encontrado [M+H] 373,3 Tr = 0,73 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,30 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 8,17 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,91 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,69 (s a, 1H), 1,88 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 1,25-1,68 (m, 9H), 0,81 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplos de referencia 77b y c
4-Cloro-W-((R)-1-((c/s)-4-(piridin-4-iloxi)ciclohexil)propil)benzamida 4-Cloro-W-((S)-1-((c/s)-4-(piridin-4-iloxi)ciclohexil)propil)benzamida (homoquiral, estereoquímica absoluta y relativa no asignada)
Figure imgf000070_0001
Ejemplo 77b y Ejemplo 77c: La separación quiral del Ejemplo 77a racémico (Método E) dio el Ejemplo 77b Tr = 3,391 min (Método F) y el Ejemplo 77c Tr = 3,851 min (Método F) No se determinó la estereoquímica absoluta.
Ejemplo 77b: EM(ES): m/z = 373,3 [M+H]+. Tr = 1,783 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,34 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 8,12 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 4,71 (s a, 1H), 1,89 (s a, 2H), 1,27-1,69 (m, 10H), 0,83 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 77c: EM(ES): m/z = 373,3 [M+H]+. Tr = 1,793 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,34 (d, J = 3,6 Hz, 2H), 8,12 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 4,72 (s a, 1H), 1,86-1,94 (m, J = 5,0 Hz, 2H), 1,29-1,68 (m, 10H), 0,83 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 78
(±)-4-Cloro-W-(1-((c/s)-4-((6-(trifluorometil)quinolin-4-il)oxi)ciclohexil) propil)benzamida
Figure imgf000071_0001
El Ejemplo 78 se sintetizó a partir del Intermedio 71E siguiendo los mismos procedimientos usados para preparar los Intermedios 77A, 77B, 77C y Ejemplo 77a usando 4-hidroxi-6-trifluorometilquinolina en lugar de piridin-4-ol en la síntesis de 77A. CLEM Anal. Calc. para C26H26ClF3N2O2490,16, encontrado [M+H] 491,2 Tr = 0,86 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8: 8,81 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,16 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,98 (s a, 1H), 2,07 (t, J = 15,6 Hz, 2H), 1,37-1,74 (m, 9H), 0,82 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 79a
(±)-4-Cloro-N-(1-((c/s)-4-((2-(trifluorometil)quinolin-4-il)oxi)ciclohexil) propil)benzamida
Figure imgf000071_0002
El Ejemplo 79a se sintetizó a partir del Intermedio 71E siguiendo los mismos procedimientos usados para preparar los Intermedios 77A, 77B, 77C y Ejemplo 77a usando 4-hidroxi-2-trifluorometilquinolina en lugar de piridin-4-ol en la síntesis de 77A. CLEM Anal. Calc. para C26H26C F 3 N2O2490,16, encontrado [M+H] 491,2 Tr = 1,13 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,17 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,81-7,91 (m, 3H), 7,50-7,58 (m, 3H), 7,39 (s, 1H), 5,18 (s a, 1H), 2,07 (t, J = 13,9 Hz, 2H), 1,40-1,74 (m, 9H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplos de referencia 79b y c
4-Cloro-N-((R)-1-((c/s)-4-(2-(trifluorometil)quinolin-4-iloxi)ciclohexil)propil)benzamida y 4-Cloro-N-((S)-1-((c/s)-4-(2-(trifluorometil)quinolin-4-iloxi)ciclohexil)propil)benzamida (homoquiral, estereoquímica absoluta y relativa no asignada)
Figure imgf000071_0003
Ejemplo 79b y Ejemplo 79c: La separación quiral del Ejemplo 79a racémico (Método G) dio el Ejemplo 79b Tr = 3,998 min (Método H) y el Ejemplo 79c Tr = 5,009 min (Método H) No se determinó la estereoquímica absoluta. Ejemplo 79b: EM(ES): m/z = 491,3 [M+H]+. Tr = 2,438 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8: 8,11-8,20 (m, 2H), 8,05 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,81-7,89 (m, J = 7,0 Hz, 3H), 7,49-7,57 (m, 3H), 7,37 (s, 1H), 5,16 (s a, 1H), 3,83 (s a, 1H), 2,06 (t, J = 13,4 Hz, 2H), 1,56-1,76 (m, 6H), 1,39-1,56 (m, 3H), 0,84 (t, J = 6,9 Hz, 3H)
Ejemplo 79c: EM(ES): m/z = 491,3 [M+H]+. Tr = 2,438 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,16 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,85 (m, 3H), 7,49-7,56 (m, 3H), 7,37 (s, 1H), 5,15 (s a, 1H), 3,83 (s a, 1H), 2,00­ 2,11 (m, 2H), 1,56-1,73 (m, 6H), 1,40-1,55 (m, 3H), 0,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H)
Ejemplo de referencia 80
4-Cloro-W-(1-(c/s-4-(quinolin-4-iloxi)ciclohexil)propil)benzamida
Figure imgf000072_0001
El Ejemplo 80 se sintetizó a partir del Intermedio 71E siguiendo los mismos procedimientos usados para preparar los Intermedios 77A, 77B, 77C y Ejemplo 77 usando 4-hidroxiquinolina en lugar de piridin-4-ol como en la síntesis de 77A. CLEM Anal. Calc. para C25H2/ClN2O2422,18, encontrado [M+H] 423,2 Tr = 0,78 min (Método A). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,66 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,70 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,36 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,95 (s a, 1H), 2,06 (t, J = 13,9 Hz, 2H), 1,38-1,71 (m, 9H), 0,84 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Ejemplo de referencia 81
4-Cloro-W-((1-(6-fluoroquinolin-4-il)-4-hidroxipiperidin-4-il)metil)benzamida
Figure imgf000072_0002
81A. 4-((4-Clorobenzamido)metil)-4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Una solución de 4-(aminometil)-4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,25 g, 1,086 mmol) y ácido 4-clorobenzoico (0,204 g, 1,303 mmol) en d Mf (2 ml) se trató con trietilamina (0,454 ml, 3,26 mmol) seguido de BOP (0,576 g, 1,303 mmol). La reacción se agitó durante 2 h, después se interrumpió con HOAc ac. dil. Esto dio como resultado la formación de un precipitado, por lo que la mezcla se filtró y se enjuagó con agua. Después, se suspendió bicarbonato sódico ac. dil., se sonicó, después se filtró, se enjuagó con agua y se secó al aire para proporcionar 4-((4-clorobenzamido)metil)-4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,38 g, rendimiento del 90%) en forma de un sólido incoloro, pf 172-173 °C. EM(ES): m/z = 369 [M+H]+. tR = 0,93 min (Método A).
81B. 4-Cloro-W-((4-hidroxipiperidin-4-il)metil)benzamida, HCl
Una solución de HCl (3,56 ml, 14,23 mmol) en dioxano se trató con 4-((4-clorobenzamido)metil)-4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo, (0,35 g, 0,949 mmol). Inicialmente, el material se disolvió a medida que se añadió, pero finalmente se formó una goma de mascar. Esto se agitó durante 15 min. Después, se añadieron ~3 ml de diclorometano y la agitación se continuó durante 2 h. Durante este tiempo, el producto tomó la forma de una suspensión finamente dividida. La concentración a presión reducida proporcionó 4-cloro-A/-((4-hidroxipiperidin-4-il)metil)benzamida, HCl (0,29 g, rendimiento cuantitativo) en forma de un polvo de color blanco. EM(ES): m/z = 269 [M+H]+. tR = 0,55 min (Método A).
Ejemplo 81. 4-Cloro-A/-((1-(6-fluoroquinolin-4-il)-4-hidroxipiperidin-4-il)metil) benzamida
Una suspensión de 4-cloro-6-fluoroquinolina (0,119 g, 0,655 mmol) y 4-cloro-W-((4-hidroxipiperidin-4-il)metil)benzamida, HCl (0,2 g, 0,655 mmol) en NMP (1 ml) se trató con DIEA (0,286 ml, 1,638 mmol) y se calentó a 135 °C durante 5 h. Después de aproximadamente 45 min la reacción se había vuelto homogénea. La reacción se enfrió a ~80 °C y se trató con ~3 ml de HOAc ac. al 5 % dando como resultado la formación de un precipitado. Esto se agitó brevemente, se filtró, se enjuagó varias veces con agua y una vez con EtOAc-hexanos al 10 % y se secó al aire para proporcionar 4-cloro-A/-((1-(6-fluoroquinolin-4-il)-4-hidroxipiperidin-4-il)metil)benzamida (0,21 g, rendimiento del 74 %) en forma de un sólido de color blanquecino, pf 91-94 °C. EM(ES): m/z = 414 [M+H]+. tR = 0,68 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 88,67 (d, 1H, J = 4,9 Hz), 8,46 (t, 1H, J = 6,1 Hz), 7,99-8,04 (m, 1H), 7,94 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,55-7,63 (m, 4H), 7,05 (d, 1H, J = 5,0 Hz), 4,71 (s, 1H), 3,42 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 3,24-3,31 (m, integración oscurecida por el pico de agua), 3,10-3,18 (m, 2H), 1,85-1,94 (m, 2H), 1,67-1,72 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 84
W-([1,1'-Bifenil]-4-il)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)piperazin-1-carboxamida
Figure imgf000073_0001
84A. 4-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
A una mezcla homogénea de 4-cloro-6-fluoroquinolina (500,0 mg, 2,8 mmol) en NMP (5 ml), en un vial cerrable herméticamente, se añadió 1-Boc-piperazina (750,0 mg, 4,0 mmol) seguido de DIPEA (2 ml, 11,6 mmol). Después de que se completara la adición, el vial se tapó y la mezcla se agitó a 120 °C. Después de 15 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se repartió entre agua y Et2O. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces más con Et2O, después una vez con EtOAc. Estos extractos orgánicos se combinaron con la capa orgánica original y se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar el producto en bruto en forma de un aceite. La purificación por cromatografía Isco, proporcionó 4-(6-fluoroquinolin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo en forma de un sólido (719,3 mg; rendimiento del 77 %). EM(ES): m/z = 332 [M+H]+. tR = 0,70 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 88,70 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,04 (dd, J = 9,2; 5,6 Hz, 1H), 7,76 - 7,58 (m, 2H), 7,07 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 3,71 - 3,54 (m, 4H), 3,14 - 3,01 (m, 4H), 1,44 (s, 9H).
84B. 6-Fluoro-4-(piperazin-1-il)quinolina
A una mezcla homogénea de 4-(6-fluoroquinolin-4-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (700,0 mg, 2,1 mmol) en dioxano anhidro (4 ml), a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió HCl (4 N en dioxano, 10 ml, 40,0 mmol). Después de 6 horas, se había formado un precipitado que se aisló por filtración al vacío, se aclaró con dioxano anhidro y se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título (508,0 mg, rendimiento del 79 %) como una sal HCl que se usó sin purificación adicional. EM(ES): m/z = 232 [M+H]+. tR = 0,38 min (Método A).
84 W-([1,1'-Bifenil]-4-il)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)piperazin-1-carboxamida
A una mezcla heterogénea de la sal HCl de 6-fluoro-4-(piperazin-1-il)quinolina (84B, 25,0 mg, 0,09 mmol) en DMF anhidra (1 ml), a temperatura ambiente, se le añadió DIPEa (0,05 ml, 0,29 mmol) seguido de 4-isocianato-1,1'-bifenilo (23,0 mg, 0,12 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 96 horas, antes de diluirse con DMF, se pasó a través de un filtro de jeringa, después se purificó mediante HPLC preparativa/EM para proporcionar el compuesto del título (12,9 mg; rendimiento del 21 %). EM(ES): m/z = 427 [M+H]+. tR = 1,55 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8 8,69 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 9,2; 5,1 Hz, 1H), 7,99 - 7,96 (m, 1H), 7,93 - 7,90 (m, 1H), 7,63 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,58 - 7,57 (m, 4H), 7,44 - 7,41 (m, 2H), 7,33 - 7,26 (m, 2H), 7,20 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,87-3,81 (m, 4H), 3,81 -3,73 (m, 4H).
Ejemplo de referencia 86
W-((1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metil)-4-metilbenzamida
Figure imgf000074_0001
86A. ((1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metil)carbamato de ferc-butilo
A una mezcla homogénea de 4-cloro-6-fluoroquinolina (220,0 mg, 1,2 mmol) en NMP anhidra (4 ml), en un vial cerrable herméticamente, se le añadió (piperidin-4-ilmetil)carbamato de ferc-butilo (350,0 mg, 1,6 mmol) seguido de DIPEA (0,8 ml, 4,6 mmol). El vial se cerró herméticamente y la mezcla se agitó a 60 °C durante 2 horas, después a 90 °C durante 17 horas antes de agitarse a 120 °C durante 24 horas. Después del enfriamiento hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se purificó por cromatografía Isco sobre gel de sílice para proporcionar ((1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metil)carbamato de ferc-butilo en forma de un sólido de color blanquecino (323,7 mg; rendimiento del 74 %). EM(ES): mlz = 360 [M+H]+. tR = 0,71 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 88,66 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,01 (dd, J = 9,1; 5,7 Hz, 1H), 7,66 - 7,51 (m, 2H), 7,01 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 6,93 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,48 (d, J = 12,2 Hz, 2H), 2,94 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,76 (t, J = 11,2 Hz, 2H), 1,80 (d, J = 11,1 Hz, 2H), 1,67 - 1,55 (m, 1H), 1,51 -1,42 (m, 2H), 1,40 (s, 9H).
86B. (1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metanamina
A una mezcla homogénea de ((1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metil)carbamato de ferc-butilo (308,1 mg, 0,9 mmol) en DCM (10 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió TFA (1,2 ml, 15,6 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos antes de concentrarse al vacío para proporcionar la sal TFA del compuesto del título en forma de un aceite de color dorado, que se usó sin purificación adicional. EM(ES): m/z = 260 [M+H]+. tR = 0,43 min (Método A).
Ejemplo 86. W-((1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metil)-4-metilbenzamida
A una mezcla homogénea de la sal TFA de (1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metanamina (86B, 41,8 mg, 0,09 mmol), ácido 4-metilbenzoico (14,0 mg, 0,1 mmol) y DIPEA (0,06 ml, 0,3 mmol) en THF anhidro (1 ml), dioxano (0,5 ml) y DMF (0,5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió PyBOP (44,6 mg, 0,09 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 15 horas, la mezcla se diluyó con DMSO, se pasó a través de un filtro de jeringa, después se purificó mediante HPLC preparativa/EM para proporcionar el compuesto del título (21,1 mg; rendimiento del 65 %). EM(ES): m/z = 378 [M+H]+. tR = 1,25 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 88,63 - 8,53 (m, 2H), 7,97 (dd, J = 8,9; 5,7 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,63 - 7,51 (m, 2H), 7,25 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,00 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,47 (d, J = 11,4 Hz, 2H), 2,76 (t, J = 11,6 Hz, 2H), ~2,53 (m, integración, intervalo exacto de desplazamiento químico oscurecido por el pico de disolvente), 2,31 (s, 3H), 1,87 - 1,73 (m, 3H), 1,55 -1,41 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 87
3,4-Dicloro-A/-((1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metil)benzamida
Figure imgf000075_0001
A una mezcla heterogénea de la sal TFA de (1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metanamina (86B, 41,8 mg, 0,09 mmol) en THF anhidro (1 ml) y dioxano (0,5 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió DIPEA (0,06 ml, 0,3 mmol) seguido de cloruro de 3,4-diclorobenzoílo (18,9 mg, 0,09 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 16 horas, la mezcla se diluyó con DMF, se filtró a través de un filtro de jeringa, después se purificó mediante HPLC preparativa/EM para proporcionar el compuesto del título (23,1 mg; rendimiento del 62 %). e M(ES): m/z = 432 [M+H]+. tR = 1,51 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 88,83 - 8,76 (m, 1H), 8,63 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,99 (dd, J = 8,8; 5,7 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,64 - 7,54 (m, 2H), 7,01 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,71 - 3,44 (m, 2H), 3,34 - 3,21 (m, 2H), 2,76 (t, J = 11,7 Hz, 2H), 1,88 - 1,75 (m, 3H), 1,56 - 1,45 (m, 2H).
Ejemplos de referencia 88 a 90
La reacción de la sal TFA de (1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)metanamina con un cloruro de ácido apropiado, en las condiciones descritas para el Ejemplo 87 (Esquema 1, a continuación), proporcionó los compuestos de la invención mostrados en la Tabla 1 a continuación.
Figure imgf000075_0002
Tabla 1
Figure imgf000075_0003
Ejemplo de referencia 91
1-(1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)-3-(p-tolil)urea
Figure imgf000076_0001
91A. (1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)carbamato de ferc-butilo
A una mezcla homogénea de 4-cloro-6-fluoroquinolina (200,0 mg, 1,1 mmol) en anhidro NMP (5 ml), en un vial cerrable herméticamente, se añadió 4-Boc-aminopiperazina (309,0 mg, 1,5 mmol) seguido de DIPEA (0,8 ml, 4,6 mmol). El vial se cerró herméticamente y la mezcla se agitó a 120 °C durante 15 horas. Después del enfriamiento hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se repartió entre EtOAc y agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces más con EtOAc. Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar el producto en bruto que se usó sin purificación adicional, basado en el rendimiento cuantitativo. EM(e S): m/z = 346 [M+H]+. tR = 0,70 min (Método A).
91B. 1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-amina
A una mezcla homogénea de (1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)carbamato de ferc-butilo (380,0 mg, 1,1 mmol) en dioxano (2 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió HCl 4 M en dioxano (2 ml, 8,0 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas, tiempo durante el cual se formó un precipitado. La filtración al vacío proporcionó la sal HCl del compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo pálido (358 mg, rendimiento del 100 %) que se usó sin purificación adicional. EM(ES): m/z = 246 [M+H]+. tR = 0,42 min (Método A).
Ejemplo 91. 1-(1-(6-Fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)-3-(p-tolil)urea
A una mezcla heterogénea de la sal HCl de 1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-amina (91B, 30,0 mg, 0,09 mmol) en THF anhidro (1 ml), a temperatura ambiente, se le añadió DIPEA (0,05 ml, 0,29 mmol) seguido de 1-isocianato-4-metilbenceno (15,1 mg, 0,11 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 88 horas, antes de diluirse con DMSO, se pasó a través de un filtro de jeringa, después se purificó mediante HPLC preparativa/EM para proporcionar el compuesto del título (21,7 mg; rendimiento del 60 %). EM(ES): m/z = 379 [M+H]+. tR = 1,30 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 58,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,11 - 7,96 (m, 1H), 7,70 - 7,57 (m, 2H), 7,27 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,12 - 6,97 (m, 3H), 6,23 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,79 - 3,68 (m, 1H), 3,53 - 3,37 (m, 2H), 3,05 - 2,90 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,11 -1,98 (m, 2H), 1,81 -1,65 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 92
1-(4-Cloro-2-fluorofenil)-3-(1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)urea
Figure imgf000076_0002
El Ejemplo 92 (19,3 mg; rendimiento del 49 %) se preparó siguiendo un procedimiento análogo al de para la síntesis del Ejemplo de referencia 91, excepto que se usó 4-cloro-2-fluoro-1-isocianatobenceno (19,4 mg, 0,11 mmol) en lugar de 1-isocianato-4-metilbenceno. EM(ES): m/z = 417 [M+H]+. Tr = 1,42 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 5 8,67 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,16 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 8,02 (dd, J = 9,9; 5,6 Hz, 1H), 7,68 -7,56 (m, 2H), 7,39 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,82 - 3,70 (m, 1H), 3,50 - 3,37 (m, 2H), 2,98 (t, J = 10,8 Hz, 2H), 2,12 - 2,01 (m, 2H), 1,78 - 1,65 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 93
1-(4-Fluorofenil)-3-(1-(6-fluoroquinolin-4-il)piperidin-4-il)urea
Figure imgf000077_0001
El Ejemplo 93 (21,8 mg; rendimiento del 61 %) se preparó siguiendo un procedimiento análogo al de para la síntesis del Ejemplo 91, excepto que se usó 1-fluoro-4-isocianatobenceno (15,5 mg, 0,11 mmol) en lugar de 1-isocianato-4-metilbenceno. EM(ES): m/z = 383 [M+H]+. Tr = 1,18 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 58,57 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,00 (dd, J = 9,2; 5,2 Hz, 1H), 7,84 -7,71 (m, 2H), 7,35 (dd, J = 8,4; 4,9 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 6,31 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 3,86 -3,85 (m, 3H), 3,35 (t, J = 11,1 Hz, 2H), 2,07 -2,00 (m, 2H), 1,74 -1,61 (m, 2H).
Ejemplo de referencia 97
frans-A/-(4-Metoxibencil)-4-fenilciclohexanamina
Figure imgf000077_0002
Una suspensión de frans-4-fenilciclohexanona (2g, 11,48 mmol) en DCM (30 ml) se trató con (4-metoxifenil)metanamina (1,575 g, 11,48 mmol) y perclorato de magnesio (0,128 g, 0,574 mmol). Después de agitar a ta durante 16 h, se añadió Na2SO4 y la agitación se continuó a ta durante 1 h. La mezcla se filtró, se lavó con MeOH y el licor madre se concentró para producir un aceite viscoso de color amarillo. El aceite se disolvió en MeOH (10 ml) y se trató con NaBH4 (0,651 g, 17,22 mmol) en porciones, después se agitó a ta durante 30 min hasta que se realizó la reacción. La reacción se interrumpió con agua (75 ml) y se extrajo con EtOAc (3x). Los extractos orgánicos combinados se secaron, se filtraron y se concentraron. El residuo de color amarillo se purificó en una columna de sílice ISCO (40 g), eluyendo con (DCM: MeOH al 10 % en DCM que contenía NH4OH al 2,5 % = 0 %-70 %) en 20 min para producir (1r,4r)-A/-(4-metoxibencil)-4-fenilciclohexanamina (870 mg, 2,94 mmol, 25 %) RMN 1H (500 MHz, clororformod) 57,32 - 7,22 (m, 3H), 7,22 - 7,10 (m, 4H), 6,92 - 6,77 (m, 2H), 3,84 - 3,70 (m, 5H), 2,60 - 2,46 (m, 2H), 2,15 - 2,02 (m, 2H), 1,97 - 1,82 (m, 2H), 1,49 (cd, J = 12,9, 3,0 Hz, 2H), 1,36 - 1,15 (m, 2H) EM: Anal. Calc. para C20H25NO 295,194, encontrado [M+H] 296,1 CL: tr = 1,4 min (Método I)
Ejemplo de referencia 119
1-(4-Clorofenil)-3-(frans-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)urea
Figure imgf000078_0001
119A. frans-4-(6-Fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanam¡na
A una solución de 4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanona (350 mg, 1,439 mmol) en EtOH (6 ml) en un vial de microondas se le añad¡ó acetato amón¡co (1663 mg, 21,58 mmol). La suspens¡ón resultante se trató con c¡anoboroh¡druro sód¡co (108 mg, 1,726 mmol). La reacc¡ón se tapó y se somet¡ó a m¡croondas a 130 °C durante 5 m¡n. La reacc¡ón se enfr¡ó a TA y se d¡luyó con MeOH y se pur¡f¡có por HPLC preparat¡va (PHENOMENEX® Luna 5 p 30 x 100 mm), caudal de 40 ml/m¡n con grad¡ente de B al 0 % a B al 100 % durante 12 m¡nutos. Se mantuvo B al 100 % durante 2 m¡n. (A: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (90:10), B: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (10:90) que se controló a 254 nm. Las fracc¡ones que contenían el producto se comb¡naron y se concentraron para dar frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanam¡na (310 mg, 0,624 mmol, rend¡m¡ento del 43,4%) RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 8,88 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8,19 - 8,05 (m, 2H), 7,92 (s a, 3H), 7,73 (td, J = 8,7; 2,8 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,36 (s a, 1H), 3,22 - 3,02 (m, 1H), 2,09 (s a, 2H), 1,96 (s a, 2H), 1,77 - 1,52 (m, 4H) EM: Anal. Calc. para C15H17FN2 244,138, encontrado [M+H] 245,1 c L: t r = 0,42 m¡n (Método A)
Ejemplo 119. 1-(4-Clorofen¡l)-3-(frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)urea
A una soluc¡ón de frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanam¡na (20 mg, 0,042 mmol) en THF (0,5 ml) a TA se le añad¡ó 1-cloro-4-¡soc¡anatobenceno (9,76 mg, 0,064 mmol). La reacc¡ón se ag¡tó a TA durante 3 h. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có med¡ante CL/EM preparat¡va con las s¡gu¡entes cond¡c¡ones: Columna: XBr¡dge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móv¡l A: 5:95 de aceton¡tr¡lo: agua con acetato de amon¡o 10 mM; Fase móv¡l B: 95:5 de aceton¡tr¡lo: agua con acetato de amon¡o 10 mM; Grad¡ente: B al 30-70 % durante 22 m¡nutos, después una parada de 5 m¡nutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/m¡n. Las fracc¡ones que contenían el producto deseado se comb¡naron y se secaron med¡ante evaporac¡ón por centr¡fugac¡ón. El rend¡m¡ento del producto fue 11,4 mg (0,029 mmol, 67 %) RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,10 (dd, J = 9,3; 5,9 Hz, 1H), 8,03 (dd, J = 11,1; 2,8 Hz, 1H), 7,68 (td, J = 8,7; 2,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,46 - 7,35 (m, 2H), 7,33-7,19 (m, 2H), 6,19 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3,70 -3,52 (m, 1H), 3,42-3,34 (m, 1H), 2,04 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 1,92 (d, J = 12,1 Hz, 2H), 1,79 - 1,63 (m, 2H), 1,61 - 1,45 (m, 2H) EM: Anal. Calc. para C22H21CFN3O 397,136, encontrado [M+H] 398,2 CL: tr = 1,39 m¡n (Método I).
Estos compuestos se obtuv¡eron s¡gu¡endo los proced¡m¡entos del Ejemplo de referenc¡a 119 usando los ¡soc¡anatos correspond¡entes.
Figure imgf000078_0002
Figure imgf000078_0003
continuación
Figure imgf000079_0002
Ejemplo de referencia 125
1-(4-Clorofenil)-3-(c/s-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)urea
Figure imgf000079_0001
125A. c/s-4-(6-Fluoroquinolin-4-il)ciclohexanamina
A una solución de 4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanona (350 mg, 1,439 mmol) en EtOH (6 ml) en un vial de microondas se le añadió acetato amónico (1663 mg, 21,58 mmol). A la suspensión resultante se le añadió cianoborohidruro sódico (108 mg, 1,726 mmol). La reacción se tapó y se sometió a microondas a 130 °C durante 5 min. La reacción se enfrió a TA y se diluyó con MeOH y se purificó por HPLC preparativa (PHENOMENEX® Luna 5 p 30 x 100 mm), caudal de 40 ml/min con gradiente de B al 0 % a B al 100 % B durante 12 minutos. Se mantuvo a B al 100 % durante 2 min. (A: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (90:10), B: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (10:90) que se controló a 254 nm. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron para dar c/s-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanamina (100 mg, 0,201 mmol, rendimiento del 14 %) RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 88,94 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,19 - 8,03 (m, 2H), 7,94 (s a, 1H), 7,74 (td, J = 8,7; 2,8 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,59 (s a, 1H), 3,49 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 2,10 -1,82 (m, 6H), 1,75 (d, J = 10,8 Hz, 2H) EM: Anal. Calc. para C15H17FN2244,138, encontrado [M+H] 245,1 CL: tr = 0,45 min (Método A).
Ejemplo 125. 1-(4-Clorofenil)-3-(c/s-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)urea
A una solución de c/s-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanamina (25 mg, 0,053 mmol) en THF (0,5 ml) a TA se le añadió 1-cloro-4-isocianatobenceno (16,27 mg, 0,106 mmol). La reacción se agitó a TA durante 2 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 30-70 % durante 22 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100%; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue 14,7 mg (0,034 mmol, 64% ) RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 88,95 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,21 - 8,08 (m, 2H), 7,78 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 6,69 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,01 (s a, 1H), 3,59 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 1,96 - 1,78 (m, 4H), 1,76 (s a, 4H) EM: Anal. Calc. para C2 2 H21CFN3O 397,136, encontrado [M+H] 398,2 CL: tr = 1,44 min (Método I).
Ejemplo de referencia 130
frans-A/-Benc¡l-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanam¡na
Figure imgf000080_0001
A una soluc¡ón de 4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡dohexanona (100 mg, 0,411 mmol) y benc¡lam¡na ( 66 mg, 0,617 mmol) en CH2Cl2 (2 ml) a TA se le añad¡ó ác¡do acét¡co (0,024 ml, 0,411 mmol), segu¡do de tr¡acetox¡boroh¡druro sód¡co (131 mg, 0,617 mmol). La reacc¡ón se ag¡tó a TA durante 4 h. Después, se d¡luyó con MeOH y se pur¡f¡có con HPLC prep. (Phen Luna 5u 30 x 100 mm), caudal de 40 ml/m¡n con grad¡ente de B al 0 % a B al 100 % B durante 12 m¡nutos. Se mantuvo a B al 100 % durante 2 m¡n. (A: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (90:10), B: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (10:90) que se controló a 254 nm. La evaporac¡ón del producto que contenía fracc¡ones d¡o (1r,4r)-W-benc¡l-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanam¡na (150 mg). Una alícuota (15 mg) de este mater¡al se pur¡f¡có ad¡c¡onalmente en las s¡gu¡entes cond¡c¡ones: Columna: XBr¡dge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móv¡l A: 5:95 de aceton¡tr¡lo: agua con acetato de amon¡o 10 mM; Fase móv¡l B: 95:5 de aceton¡tr¡lo: agua con acetato de amon¡o 10 mM; Grad¡ente: B al 10-50% durante 18 m¡nutos, después una parada de 5 m¡nutos a B al 100%; Flujo: 20 ml/m¡n. Las fracc¡ones que contenían el producto deseado se comb¡naron y se secaron med¡ante evaporac¡ón por centr¡fugac¡ón. El rend¡m¡ento del producto fue 3,1 mg,
RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,78 (d a, J = 4,2 Hz, 1H), 8,08 (dd a, J = 8 ,8 , 6,0 Hz, 1H), 7,96 (d a, J = 10,6 Hz, 1H), 7,72 - 7,62 (m, 1H), 7,43 (d a, J = 7,0 Hz, 3H), 7,37 (t a, J = 7,3 Hz, 2H), 7,34 - 7,25 (m, 1H), 3,94 (s, 1H), 3,74 - 3,63 (m, 1H), 3,29 (s a, 1H), 2,78 (s a, 1H), 2,14 (s a, 2H), 1,99 -1,84 (m, 3H), 1,55 (s a, 4H). EM: Anal. Calc. para C22H23FN2 334,185, encontrado [M+H] 335,1 CL: tr = 0,78 m¡n (Método I).
Ejemplo de referenc¡a 131
c/s-W-Benc¡l-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanam¡na
Figure imgf000080_0002
El Ejemplo 131 se obtuvo s¡gu¡endo los proced¡m¡entos en el Ejemplo 130 usando la c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohexanona y benc¡lam¡na correspondentes. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,84 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,14 - 8,04 (m, 1H), 8,00 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 7,67 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 7,55 - 7,46 (m, 3H), 7,41 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,01 (s a, 2H), 3,41 (s a, 1H), 3,17 (s a, 1H), 2,09 - 1,99 (m, 2H), 1,99-1,80 (m, 4H), 1,67 (d, J = 12,0 Hz, 2H). EM: Anal. Calc. para C22H23FN2334,185, encontrado [M+H] 335,2 CL: tr = 0,90 m¡n (Método I).
Ejemplo de referenc¡a 139
Ác¡do 2-(4-(((frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)am¡no)met¡l)fen¡l)acét¡co
Figure imgf000080_0003
El Ejemplo 139 se obtuvo siguiendo los procedimientos en el Ejemplo 130 usando el frans-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanona y clorhidrato del ácido 2-(4-(aminometil)fenil)acético correspondientes RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,91 (s a, 2H), 8,83 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 8,20 - 8,08 (m, 1H), 8,03 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 7,71 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 7,9 Hz, 3H), 7,35 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 4,21 (s a, 2H), 3,60 (d, J = 19,4 Hz, 2H), 3,41 - 3,28 (m, 1H), 3,21 (s a, 1H), 2,28 (d, J = 10,6 Hz, 2H), 2,01 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 1,81 -1,59 (m, 4H) EM: Anal. Calc. para C24H25FN2O2392,190, encontrado [M+H] 393,1 CL: tr = 0,72 min (Método I).
Ejemplo de referencia 140
Ácido 2-(4-(((c/s-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)amino)metil)fenil)acético
Figure imgf000081_0001
El Ejemplo 140 se obtuvo siguiendo los procedimientos en el Ejemplo 130 usando el c/s-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanona y clorhidrato del ácido 2-(4-(aminometil)fenil)acético correspondientes RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,81 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,16 - 8,03 (m, 1H), 7,98 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,73 - 7,60 (m, 1H), 7,51 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,42 - 7,29 (m, J = 7,6 Hz, 2H), 7,26 - 7,08 (m, J = 7,5 Hz, 2H), 3,81 (s a, 1H), 3,64 (s a, 1H), 3,49 (s, 1H), 3,34 (s a, 1H), 3,16 (s, 1H), 2,99 (s a, 1H), 2,01 - 1,87 (m, 4H), 1,83 - 1,68 (m, 2H), 1,61 (d, J = 11,9 Hz, 2H). EM: Anal. Calc. para C24H25FN2O2392,190, encontrado [M+H] 393,2 CL: tr = 0,79 min (Método I).
Ejemplo de referencia 144
2-(4-Clorofenil)-A/-(frans-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)acetamida
Figure imgf000081_0002
A una solución de frans-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexanamina (20 mg, 0,042 mmol)(Intermedio 119A) en THF (0,5 ml) a TA se le añadió cloruro de 2-(4-clorofenil)acetilo (16,02 mg, 0,085 mmol), seguido de trietilamina (0,024 ml, 0,169 mmol). La reacción se agitó a TA durante 3 h. El material en bruto se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 50-100 % durante 20 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto fue 11,5 mg (0,029 mmol, 68 %) RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,76 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 9,1; 5,8 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 8 ,8 Hz, 1H), 7,71 -7,58 (m, 1H), 7,46 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,36 -7,30 (m, J = 8,2 Hz, 2H), 7,29 -7,13 (m, J = 8,2 Hz, 2H), 3,94 -3,81 (m, 2H), 3,61 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,25 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 1,88 (t, J = 13,7 Hz, 4H), 1,66 - 1,43 (m, 4H) EM: Anal. Calc. para C23H22CFN2O 396,140, encontrado [M+H] 397,0 CL: tr = 1,37 min (Método I).
Figure imgf000082_0001
Figure imgf000083_0002
Estos compuestos se obtuvieron siguiendo los procedimientos del Ejemplo 144 usando las correspondientes aminas y cloruro de ácido.
Ejemplo de referencia 157 a, b, c, d, e
4-Cloro-W-(1-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida
4-Cloro-W-((S)-1-(c/s-4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida
4-Cloro-W-((R)-1-(c/s-4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida
4-Cloro-W-((S)-1-(frans-4-(2-metil piridin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida
4-Cloro-W-((R)-1-(frans-4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida
Figure imgf000083_0001
A una suspensión de NaH (0,307 g, 7,68 mmol) en THF (8 ml) enfriada a 0 °C, se le añadió 2-(dietoxifosforil)propanoato de etilo (1,830 g, 7,68 mmol) lentamente. Después de 30 min, se añadió 1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-ona (1 g, 6,40 mmol). La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 2 h, después se calentó a TA durante una noche. La mezcla se inactivó con agua y el THF se retiró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua y salmuera. La solución se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El material en bruto se purificó por ISCO(EtoAc/Hex al 0-30%). Las fracciones que contenían el producto se concentraron para producir 2-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-ilideno)propanoato de etilo (1,2 g, rendimiento del 78%) en forma de un aceite de color amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 4,19 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 4,03 - 3,89 (m, 4H), 2,68 - 2,53 (m, 2H), 2,46 -2,28 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,78 - 1,66 (m, 4H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
157B. 2-(1,4-Dioxaespiro[4,5]decan-8-il)propanoato de etilo
Una suspensión de 2-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-ilideno)propanoato de etilo (500 mg, 2,081 mmol) y paladio al 10 % sobre carbono (25 mg, 0,024 mmol) en EtOAc (5 ml) se hidrogenó en un agitador Parr a 0,31 MPa (45 psi) durante 6 h. El catalizador se filtró y el filtrado se concentró para producir 2-(4-(3-metilpiridin-4-il)ciclohexil)propanoato de etilo (450 mg, rendimiento del 89 %) en forma de un aceite claro. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 4,12 (dtt, J = 10,7, 7,1,3,6 Hz, 2H), 3,98 -3,81 (m, 4H), 2,35 -2,17 (m, 1H), 1,83 - 1,68 (m, 3H), 1,66 - 1,45 (m, 4H), 1,43 - 1,28 (m, 2H), 1,27 - 1,22 (m, 3H), 1,14-1,07 (m, 3H)
157C. 2-(4-Oxociclohexil)propanoato de etilo
A una solución de 2-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-il)propanoato de etilo (450 mg, 1,857 mmol) en THF (5 ml) se le añadió cloruro de hidrógeno 1 M (acuoso) (0,929 ml, 3,71 mmol). La mezcla se calentó a 50 °C durante 6 h. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua (2x) y salmuera. La solución se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El material en bruto se purificó con ISCO(EtOAc/Hex al 0-30 %). Las fracciones que contenían el producto se concentraron para producir 2-(4-oxociclohexil)propanoato de etilo (290 mg, rendimiento del 79 %) en forma de un aceite transparente. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 4,22-4,06 (m, 2H), 2,46 - 2,30 (m, 5H), 2,13 -1,91 (m, 3H), 1,56 - 1,42 (m, 2H), 1,31 -1,24 (m, 3H), 1,18 (d, J = 7,1 Hz, 3H).
157D. 2-(4-(((Trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo
Se disolvieron 2-(4-oxociclohexil)propanoato de etilo (200 mg, 1,01 mmol) y 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina (238 mg, 1,16 mmol) en DCM seco (10 ml). A la mezcla de reacción, se le añadió gota a gota trifluorometanosulfónico anhídrido (0,186 ml, 1,11 mmol) y se agitó durante 2 h. La suspensión se filtró y el filtrado se diluyó con DCM, se lavó con HCl 1 N (2x), solución sat. de bicarbonato sódico, agua y salmuera. La solución se secó sobre Na2SO4 y se concentró para producir 2-(4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo (320 mg, rendimiento del 96%) en forma de un aceite de color pardo. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 5,73 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 4,28 - 4,05 (m, 2H), 2,52 -2,17 (m, 4H), 2,08 - 1,79 (m, 3H), 1,49 (dt, J = 11,1, 6 ,6 Hz, 1H), 1,31-1,20 (m, 3H), 1,19-1,04 (m, 3H)
157E. 2-(4-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo
A una solución de 2-(4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo (300 mg, 0,908 mmol) en DMSO (5 ml) se le añadieron 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (230 mg, 0,908 mmol) y acetato potásico (267 mg, 2,72 mmol). Después de la mezcla se desgasificó con N2 durante 10 minutos, Se añadió PdCh(dppf) (19,9 mg, 0,027 mmol). La mezcla se calentó a 80 °C durante una noche. La mezcla se repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se concentró y se purificó por columna sobre gel de sílice ISCO. Las fracciones que contenían el producto se concentraron para producir 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo (168 mg, rendimiento del 60 %) en forma de un aceite de color pardo. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 6,66-6,40 (m, 1H), 4,31 -4,00 (m, 2H), 2,34 -2,26 (m, 1H), 2,25 -2,19 (m, 1H), 2,19 -2,04 (m, 2H), 1,95 - 1,75 (m, 3H), 1,73 - 1,60 (m, 1H), 1,29 - 1,24 (m, 15H), 1,13 (dd, J = 11,6, 7,0 Hz, 3H)
157F. 2-(4-(2-Metilpiridin-4-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo
A una solución de 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo (120 mg, 0,389 mmol) en dioxano (3 ml) se le añadieron 4-bromo-2-metilpiridina (67,0 mg, 0,389 mmol), agua (1 ml) y Na2CO3 (165 mg, 1,557 mmol). La mezcla se desgasificó con N2 durante 10 minutos. Después, se añadió Pd(Ph3P)4 (22,49 mg, 0,019 mmol). La mezcla se calentó a 100 °C durante 16 h. La mezcla enfriada se diluyó con EtOAc, se lavó con agua y salmuera. La solución se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice ISCO (EtOAc al 0-50 %/Hexano). Las fracciones que contenían el producto se concentraron para producir 2-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo (100 mg, 0,366 mmol, rendimiento del 94 %) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 8 8,61 - 8,11 (m, 1H), 7,09 - 6 ,68 (m, 2H), 4,15 (qdd, J = 7,1, 3,3, 1,8 Hz, 2H), 2,71 -2,57 (m, 1H), 2,53 (d, J = 5,3 Hz, 3H), 2,47 -2,35 (m, 0.5H), 2,29 (t, J = 7,1 Hz, 0.5H), 1,98 - 1,75 (m, 3H), 1,67 - 1,38 (m, 4H), 1,32 - 1,22 (m, 4H), 1,21 - 1,09 (m, 4H).
157G 2-(4-(2-Metilpiridin-4-il)ciclohexil)propanoato de etilo
Se disolvió 2-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo (100 mg, 0,366 mmol) en MeOH (5 ml). Se añadieron formiato amónico (115 mg, 1,829 mmol) y paladio sobre carbono (10%) (10,51 mg, 0,099 mmol). El recipiente estaba equipado con un condensador de reflujo, se evacuó y se lavó abundantemente con N2 tres veces. Después, la reacción se calentó a reflujo. Después de una hora, la reacción se enfrió y se filtró. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con una solución de bicarbonato sódico, agua y salmuera. La solución se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El producto en bruto se usó directamente en la siguiente etapa.
157H. Ácido 2-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)propanoico
A una mezcla de 2-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)propanoato de etilo (320 mg, 1,162 mmol) en THF (2 ml), MeOH (2 ml) y agua se le añadió LiOH (278 mg, 11,62 mmol). La mezcla se calentó a 70 °C durante 4 h. la CL-EM indicó la finalización de la reacción. La mezcla se enfrió a TA, se neutralizó con HCl 1 N hasta pH~4 y se extrajo con EtOAc 3 veces. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera. La solución se secó sobre Na2SO4 y se concentró. RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8 8,41 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,09 -6,94 (m, 2H), 2,75 -2,59 (m, 1H), 2,54 (d, J = 3,5 Hz, 3H), 2,44 (s a, 1H), 2,35 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 1,98 - 1,82 (m, 3H), 1,77 -1,61 (m, 4H), 1,56 - 1,39 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,7 Hz, 3H); EM: Anal. Calc. para C15H21NO2247,16, encontrado [M+H] 248,08 CL: tr = 0,55 min.
157I. 1-(4-(2-Metilpiridin-4-il)ciclohexil)etanamina
Se recogió ácido 2-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)propanoico (240 mg, 0,970 mmol) (157B) en tolueno (5 ml) y se añadieron fosforazidato de difenilo (0,230 ml, 1,067 mmol) y trietilamina (0,162 ml, 1,164 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 70 °C. Después de aproximadamente 2 h, la reacción se enfrió a ta y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se recogió en 40 ml de THF y se añadieron 40 ml de agua e hidróxido de litio (1,589 g, 66,4 mmol). La reacción se agitó a ta. La CLEM después de 1 hora mostró que se consumió el isocianato. La reacción se acidificó con HCl 1 N (formas precipitadas de color blanco) y se extrajo con EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. La solución se hizo básica con NaOH 1 N (de nuevo, formas precipitadas) y se extrajo con EtOAc (x5). Los extractos básicos se concentraron al vacío para dar 1-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etanamina (140 mg, 0,641 mmol, rendimiento del 66,1 %) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 8 8,65 - 8,17 (m, 1H), 7,08 - 6 ,86 (m, 2H), 2,97 (dd, J = 8 ,6 ; 6,4 Hz, 0.5H), 2,79 - 2,62 (m, 1H), 2,52 (d, J = 2,8 Hz, 3H), 2,48 -2,33 (m, 0.5H), 2,03 - 1,90 (m, 2H), 1,90 - 1,68 (m, 4H), 1,50 -1,11 (m, 3H), 1,08 (dd, J = 6,4, 2,8 Hz, 3H). EM: Anal. Calc. para C14H22N2218,18, encontrado [M+H] 219,2 CL: tr = 0,43 min.
Ejemplo 157a. 4-Cloro-A/-(1-(4-(2-met¡lp¡r¡d¡n-4-il)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da
Figure imgf000085_0001
A una solución de 1-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etanamina (100 mg, 0,458 mmol) (1571) en THF (2 ml) se le añadieron ácido 4-clorobenzoico (108 mg, 0,687 mmol), HOBT (140 mg, 0,916 mmol), EDC (176 mg, 0,916 mmol) y TEA (0,192 ml, 1,374 mmol). La mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla de reacción se filtró y se purificó mediante CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con ácido trifluoroacético al 0,1 %; Gradiente: B al 25-100 % durante 20 minutos, después una parada de 4 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para producir 4-cloro-A/-(1-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida (136,8 mg, rendimiento del 84 %). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,52 - 8,20 (m, 2H), 7,84 (dd, J = 10,6; 8,7 Hz, 2H), 7,52 (dd, J = 8,4; 2,4 Hz, 2H), 7,27 - 6,85 (m, 2H), 4,24 (s a, 0.5H), 3,87 (d, J = 7,4 Hz, 0.5H), 3,62 - 3,37 (m, 1H), 2,42 (d, J = 9,1 Hz, 3H), 1,94 -1,31 (m, 8 H), 1,20 - 1,02 (m, 4H).
Ejemplo 157b, c, d, e. 4-Cloro-W-(1-(4-(2-metilpiridin-4-il)ciclohexil)etil) benzamida (homoquiral con estereoquímica absoluta y relativa no determinada)
Figure imgf000085_0002
El material se purificó adicionalmente a través de separación quiral. Se resolvió una muestra de aproximadamente 140 mg. El material se purificó mediante SFC preparativo con las siguientes condiciones: Columna: Chiral AD 25 x 3 cm ID, partículas de 5 pm; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Las fracciones ("Pico 1" tr= 10,117, "Pico 2" tr= 11,355, "Pico 3" tr =14,873 y "Pico 4" tr = 18,312; condiciones analíticas: Columna: Chiral AD 250 x 4,6 mm ID, partículas de 5 pm; Fase móvil: 70/30 de CO2/MeOH Flujo: 2,0 ml/min) se recogieron en MeOH.
157b Isómero que eluyó en primer lugar: RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,44 - 8,18 (m, 2H), 7,84 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,24 - 6,96 (m, 2H), 4,26 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,60 (s a, 1H), 2,43 (s, 3H), 1,84 - 1,36 (m, 9H), 1,14 (d, J = 6,5 Hz, 3H). EM: Anal. Calc. para C2-iH25ClN2O 356,17, encontrado [M+H] 357,0 CL: tr= 1,826 (Método A).
157c Isómero que eluyó en segundo lugar: RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,48 - 8,19 (m, 2H), 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,27 -6,82 (m, 2H), 4,24 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,60 (s a, 1H), 2,42 (s, 3H), 1,83 - 1,37 (m, 9H), 1,13 (d, J = 6,4 Hz, 3H). EM: Anal. Calc. para C21H25CIN2O 356,17, encontrado [M+H] 356,9 CL: tr = 1,864 (Método A).
157d Isómero que eluyó en tercer lugar: RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,28 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,23 - 6,87 (m, 2H), 3,87 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 2,40 (s, 4H), 1,96 -1,71 (m, 4H), 1,58 -1,28 (m, 3H), 1,21 -0,99 (m, 5H). EM: Anal. Calc. para C2-iH25ClN2O 356,17, encontrado [M+H] 356,9 CL: tr = 1,857(Método A).
157e Isómero que eluyó en cuarto lugar: RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,28 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,24 - 6,84 (m, 2H), 4,06 - 3,74 (m, 1H), 2,46 - 2,28 (m, 4H), 1,95 - 1,71 (m, 4H), 1,61 -1,29 (m, 3H), 1,21 - 1,02 (m, 5H) EM: Anal. Calc. para C2-iH25ClN2O 356,17, encontrado [M+H] 356,8 CL: tr= 1,857(Método A).
Los siguientes compuestos se obtuvieron usando los procedimientos en el Ejemplo 157.
Figure imgf000086_0001
Figure imgf000086_0002
continuación
Figure imgf000087_0001
continuación
Figure imgf000088_0002
Ejemplo 163
5-Etox¡-W-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)p¡colmamida
Figure imgf000088_0001
163A. 5-Etox¡p¡col¡nato de met¡lo
A una soluc¡ón de 5-h¡drox¡p¡col¡nato de met¡lo (0,1 g, 0,653 mmol) en DMF (2 ml) se le añad¡eron EtI (0,06 ml, 0,72 mmol) y K2CO3 (0,135 g, 0,980 mmol). La mezcla de reacdón se ag¡tó a ta durante 2 h. La mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con una soluc¡ón saturada de NaHCO3 y acetato de et¡lo. La capa orgán¡ca se separó y se concentró al vacío para dar el Intermed¡o 163A (sól¡do de color blanco, 0,09 g, 0,497 mmol, rend¡m¡ento del 76 %). CLEM Anal. Calc. para C9H11NO3181,07, encontrado [M+H] 182,1, Tr = 0,66 m¡n (Método A). RMN 1H (400 MHz, metanol-d4) 8: 8,29 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,11 (dd, J = 8,6; 0,4 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 8,7; 3,0 Hz, 1H), 4,20 (c, J = 7,0 Hz, 2H), 3,94 (s, 3H), 1,45 (t, J = 6,9 Hz, 3H).
163B. Ác¡do 5-etox¡p¡colín¡co
A una soluc¡ón de 5-etox¡p¡col¡nato de met¡lo (0,09 g, 0,497 mmol) en THF (1 ml) y MeOH (1 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón de h¡dróx¡do de l¡t¡o (1,49 ml, 2,98 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a ta durante 3 h. La mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con una soluc¡ón 1 N de HCl y acetato de et¡lo. La capa orgán¡ca se separó y se secó sobre MgSO4. El f¡ltrado se concentró al vacío para dar el Intermed¡o 163B (sól¡do de color blanco, 0,06 g, 0,359 mmol, rend¡m¡ento del 72,3%). CLEM Anal. Calc. para C8H9NO3 167,06, encontrado [M+H] 168,1, Tr = 0,49 m¡n (Método A). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8: 12,75 (s a, 1H), 8,35 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 8,8; 2,9 Hz, 1H), 4,19 (c, J = 6,9 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 6,9 Hz, 3H)
Ejemplo 163. 5-Etox¡-W-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)p¡col¡nam¡da
A una soluc¡ón de ác¡do 5-etox¡p¡colín¡co (14,36 mg, 0,086 mmol) en DMF (1 ml) se le añad¡ó HATU (33 mg, 0,086 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a ta durante 5 m¡n, segu¡do de la ad¡c¡ón de (R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)etanam¡na (18 mg, 0,066 mmol), el Intermed¡o 40L y A/-met¡lmorfol¡na (0,032 ml, 0,264 mmol). La mezcla resultante se ag¡tó a ta durante 2 h. La mezcla de reacc¡ón se concentró al vacío y el res¡duo se d¡solv¡ó en MeOH, se f¡ltró y se pur¡f¡có med¡ante HPLC preparat¡va para dar el Ejemplo 163 (16 mg, 0,038 mmol, rend¡m¡ento del 57 %). CLEM Anal. Calc. para C25H28FN3O2421,22, encontrado [M+H] 422,3. Tr = 1,63 m¡n (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,81 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 9,1; 5,8 Hz, 1H), 7,99 - 7,85 (m, 2H), 7,73 - 7,59 (m, 1H), 7,55 - 7,39 (m, 2H), 4,39 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,14 (c, J = 6,9 Hz, 2H), 3,71 -3,52 (m, 1H), 1,94 - 1,52 (m, 9H), 1,34 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,19 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
Ejemplo 164a, b, c, d
4-Cloro-A/-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)propil)benzam¡da
4-Cloro-A/-((S)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)propil)benzam¡da
4-Cloro-A/-((R)-1-(frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da
4-Cloro-A/-((S)-1-(frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da (homoqu¡ral con estereoquímica absoluta y relat¡va no determinada)
Figure imgf000089_0001
164A. 2-(1,4-D¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l¡deno)acetato de et¡lo
Al matraz que contenía h¡druro sód¡co (46,1 g, 1153 mmol) se le añad¡ó THF (1200 ml) a 0 °C en una atmósfera de n¡trógeno. Después, se añad¡ó gota a gota fosfonoacetato de tr¡et¡lo (258 g, 1153 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 0 °C durante 30 m¡nutos. Después, se añad¡ó 1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-ona (150 g, 960 mmol) y se ag¡tó a 0 °C durante 2 h. La mezcla de reacc¡ón se calentó a ta y se ag¡tó durante 16 h. La reacc¡ón se ¡nterrump¡ó con agua (500 ml) y la mezcla se concentró al vacío. El res¡duo se extrajo con acetato de et¡lo (3 x 1000 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con agua (500 ml) y salmuera (500 ml) sucesivamente. El f¡ltrado se secó sobre sulfato sód¡co y se concentró al vacío. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có a través de cromatografía en columna ultrarráp¡da, eluyendo con acetato de et¡lo al 0-30 % en éter de petróleo para dar el Intermed¡o 164A (ace¡te de color amar¡llo pál¡do, 135 g, 597 mmol, rend¡m¡ento del 62,1 %). CLe M Anal. Calc. para C12H18O4, 226,12 encontrado [M+H]. RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8 : 5,66 (s, 1H), 4,14 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 4,02 - 3,82 (m, 4H), 3,24 - 2,86 (m, 2H), 2,63 - 2,27 (m, 2H), 1,98 - 1,68 (m, 4H), 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
164B. 2-(1,4-D¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l)acetato de et¡lo
Se recog¡ó 2-(1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l¡deno)acetato de et¡lo (13,88 g, 61,3 mmol) en EtOAc (61,3 ml) y se añad¡ó una botella de h¡drogenac¡ón Parr que contenía palad¡o al 10 % sobre carbono (1,306 g, 12,27 mmol) (54 % p/p agua) en una atmósfera de n¡trógeno. La botella de reacc¡ón se purgó con n¡trógeno, después con h¡drógeno. Después de llenar la botella con hidrógeno a 0,34 MPa (50 ps¡), la botella se puso en un ag¡tador Parr y se ag¡tó. Después de 4 horas, la mezcla de reacc¡ón se f¡ltró sobre CELlTE® prensado y se concentró al vacío para dar el Intermed¡o 164B, 2-(1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l)acetato de et¡lo (ace¡te ¡ncoloro, 13,78 g, 60,4 mmol, rend¡m¡ento del 98 %). CLEM Anal. Calc. para C12H20O4228,14, encontrado [M+H] 229,1. Tr = 0,83 m¡n (Método A). RMN 1H (400 MHz, clororformod) 8 : 4,31 - 4,08 (m, 2H), 4,00 - 3,86 (m, 4H), 2,22 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 1,91 - 1,79 (m, 1H), 1,78 - 1,70 (m, 4H), 1,63 -1,50 (m, 2H), 1,37-1,14 (m, 5H).
164C. 2-(4-Oxoc¡clohex¡l)acetato de et¡lo
En un reactor de 10 l¡tros se recog¡ó 2-(1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l)acetato de et¡lo (67,5 g, 296 mmol) en acetona (5000 ml). A la mezcla de reacc¡ón se le añad¡ó una soluc¡ón 1 M de HCl (1183 ml, 1183 mmol) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacc¡ón se concentró para ret¡rar acetona. El res¡duo se extrajo con acetato de et¡lo (3 x 1000 ml). La capa orgán¡ca comb¡nada se lavó con agua y salmuera. La capa orgán¡ca se secó sobre sulfato sód¡co y se concentró al vacío. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có a través de cromatografía en columna ultrarráp¡da, eluyendo con acetato de et¡lo al 0-20 % en éter de petróleo para dar el Intermed¡o 164C (líqu¡do de color amar¡llo pál¡do, 40 g, 217 mmol, rend¡m¡ento del 73,4 %). CG-EM Anal. Calc. para C10H16O3, 184,11 encontrado [M] 184. Tr= 10,03 m¡n (Método J).
164D. 2-(4-(Tr¡fluoromet¡lsulfon¡lox¡)c¡clohex-3-en¡l)acetato de et¡lo
Un matraz de 4 bocas de 2 l¡tros se cargó con 2,6-d¡-terc-but¡l-4-met¡lp¡r¡d¡na (84 g, 407 mmol) en d¡clorometano (500 ml) en una atmósfera de n¡trógeno. Se añad¡ó gota a gota Tf2O (55,0 ml, 326 mmol). Después, se añad¡ó lentamente una soluc¡ón de 2-(4-oxoc¡clohex¡l)acetato de et¡lo (50 g, 271 mmol) en d¡clorometano (500 ml). Después de la f¡nal¡zac¡ón de la ad¡c¡ón, la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a ta durante una noche. La mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con 1000 ml de d¡clorometano y se lavó con agua y una soluc¡ón de carbonato sód¡co y después, agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El material en bruto se purificó a través de cromatografía en columna ultrarrápida, eluyendo con acetato de etilo al 0-10 % en éter de petróleo para dar el Intermedio 164D (aceite de color amarillo pálido, 65 g, 206 mmol, rendimiento del 76 %). CG-EM Anal. Calc. para C11H15F3O5S, 316,06 encontrado [M] 317. Tr = 10,16 min (Método J).
164E. 2-(4-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-enil)acetato de etilo
En un matraz de 4 bocas de 2 litros se recogieron 2-(4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi) ciclohex-3-en-1-il)acetato de etilo (120 g, 379 mmol), BISPIN (106 g, 417 mmol) y acetato potásico (112 g, 1138 mmol) en 1,4-dioxano (1200 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se purgó nitrógeno dentro de la mezcla de reacción durante 10 minutos. Después, se añadió un complejo de dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino) ferroceno-paladio diclorometano (15,49 g, 18,97 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se repartió entre acetato de etilo y agua, se filtró a través de un lecho de CELITE®. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3X). La capa orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, y se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El material en bruto se purificó a través de cromatografía en columna ultrarrápida, eluyendo con acetato de etilo al 0-10% en éter de petróleo para dar el Intermedio 164E (aceite de color amarillo pálido, 56 g, 190 mmol, rendimiento del 50,2 %). CG-EM Anal. Calc. para C16H27BO4, 294,20 encontrado [M] 295,3. Tr = 1,10 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8: 6,52 (dd, J = 4,1; 1,9 Hz, 1H), 4,14 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 2,62 - 1,97 (m, 6H), 1,94 - 1,68 (m, 2H), 1,33 -1,21 (m, 16H).
164F. 2-(4-(6-Fluoroquinolin-4-il)ciclohex-3-en-1-il)acetato de etilo
Se recogió 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-en-1-il)acetato de etilo (Intermedio 164E) (5 g, 17,00 mmol) en dioxano (28,3 ml) y agua (7,08 ml). Se añadió 4-cloro-6-fluoroquinolina (2,57 g, 14,15 mmol) seguido de K2CO3 (5,87 g, 42,5 mmol). La mezcla se burbujeó con gas nitrógeno durante 5 minutos antes de la adición de Pd(Ph3P)4 (0,327 g, 0,283 mmol). Después de la adición, la reacción se evacuó y se volvió a llenar con N2 tres veces y después se cerró herméticamente (vial cerrado herméticamente con parafilm) y se calentó a 100 °C durante 16 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó directamente a través de cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar el Intermedio 164f (4,22 g, 13,47 mmol, rendimiento del 95%). CLEM Anal. Calc. para C19H20FNO2313,15, encontrado [M+H] 314,1 Tr = 0,75 min (Método A).
164G. 2-(4-(6-Fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)acetato de etilo
El Intermedio 164F (4,22 g, 13,47 mmol) se disolvió en MeOH (67,3 ml) y se añadió formiato amónico (4,25 g, 67,3 mmol). El recipiente estaba equipado con un condensador de reflujo y se evacuó y se lavó abundantemente con gas nitrógeno 3 veces. Después, se añadió paladio sobre carbono (0,143 g, 1,347 mmol) (húmedo, tipo Degussa) y la reacción se calentó a reflujo durante 1 hora. La reacción se enfrió, se concentró al vacío y se diluyó con DCM. Los sólidos se retiraron por filtración y el filtrado se concentró para dar el Intermedio 164G en bruto (4,20 g, 13,32 mmol, rendimiento del 99 %) como una mezcla de diastereómeros cis y trans. CLEM Anal. Calc. para C19H22FNO2315,16, encontrado [M+H] 316,2 Tr = 0,76 min (Método A).
164H. 2-(4-(6-Fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)butanoato de etilo
Al matraz que contenía THF (6 ml) se le añadió diisopropilamida de litio (solución 2,0 M en THF) (3,17 ml, 6,34 mmol) a -78 °C, seguido de la adición de 1,3-dimetiltetrahidropirimidin-2(1H)-ona (0,573 ml, 4,76 mmol) y una solución de 2-(4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)acetato de etilo (1,0 g, 3,17 mmol) en THF (10 ml) gota a gota a -78 °C. La mezcla resultante se volvió una solución de color pardo y se agitó a -78 °C durante 1 h, después se añadió lentamente yodoetano (0,51 ml, 6,34 mmol). Después, la mezcla de reacción se agitó a la temperatura del baño de hielo durante 1 h, se calentó a ta durante una noche. La reacción se interrumpió vertiéndola en agua y extrayendo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se disolvió en DCM y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 0-20 % en hexano para dar el Intermedio 164H (aceite, 0,81 g, 2,359 mmol, rendimiento del 74,4 %). CLEM Anal. Calc. para C21H26FNO2, 343,19 encontrado [M+H] 344,3. Tr = 0,87-0,88 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8: 8,88 -8,77 (m, 1H), 8,18 -8,06 (m, 1H), 7,66 (dd, J = 10,6; 2,6 Hz, 1H), 7,47 (ddd, J = 9,2, 8,0, 2,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,25 - 4,15 (m, 2H), 3,34 - 3,09 (m, 1H), 2,70 - 2,16 (m, 1H), 2,13 -1,49 (m, 13 H), 1,36 - 1,24 (m, 3H), 1,00 -0,90 (m, 3H).
164I. Ácido 2-(4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)butanoico
A una solución de 2-(4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)butanoato de etilo (0,81 g, 2,359 mmol) en THF (4 ml) y MeOH (7 ml) se le añadió una solución 2,0 M de LiOH (7,1 ml, 14,2 mmol) lentamente. La mezcla de reacción se agitó a ta durante una noche. Al día siguiente, se añadió más solución de LiOH (7,1 ml, 14,2 mmol) a la reacción y la mezcla resultante se calentó a 70 °C durante 28 h. La mezcla de reacción se enfrió y se añadió acetato de etilo. La capa acuosa se separó y a la capa acuosa se le añadió una solución 1 N de HCl para ajustar el pH a 5-6. La mezcla resultante se diluyó con agua y CHCl3:2-propanol (2:1). La capa orgánica se separó y se secó sobre MgSO4. El filtrado se concentró al vacío para dar el Intermedio 1641 como una mezcla de isómeros cis y trans (3:2) (0,64 g, 2,029 mmol, rendimiento del 86 %). CLEM Anal. Calc. para C19H22FNO2315,16 encontrado [M+H] 316,3. Tr = 0,72 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, clororformo-d) 8 : 8,83 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,30 - 8,03 (m, 1H), 7,67 (dd, J = 10,6; 2,4 Hz, 1H), 7,48 (ddd, J = 9,2, 7,9, 2,6 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,32 - 7,27 (m, 1H), 3,37 - 3,07 (m, 1H), 2,77 - 2,21 (m, 1H), 2,11 -1,30 (m, 11H), 1,07 - 1,00 (m, 3H).
164J. 1-(4-(6-Fluoroquinolin-4-il)cidohexil)propan-1-amina
A una suspensión de ácido 2-(4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)butanoico (0,31 g, 0,983 mmol) en tolueno (8 ml) se le añadieron difenilfosforil azida (0,245 ml, 1,13 mmol) y trietilamina (0,15 ml, 1,28 mmol). La mezcla de reacción se volvió una solución transparente después de la adición de TEA. El vial se cerró herméticamente y se calentó a 70 °C durante 2,5 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadieron THF (10 ml) y una solución 2,0 M de hidróxido de litio (4,91 ml, 9,83 mmol) y la mezcla resultante se agitó a ta durante 1 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl 1 N (formas precipitadas de color blanco) y se extrajo con EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. Después, la capa acuosa se basificó con NaOH 1 N (de nuevo, formas precipitadas) y se extrajo con EtOAc cuatro veces. Los extractos básicos se combinaron, se secaron sobre MgSO4 y el filtrado se concentró al vacío para dar un aceite incoloro como una mezcla de cis y trans, se secó a alto vacío durante una noche para dar el Intermedio 164J (aceite, 0,245 g, 0,855 mmol, rendimiento del 87 %). CLEM Anal. Calc. para C18H23 FN2286,19, encontrado [M+H] 287,3. Tr = 0,54 min, 0,55 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, clororformod) 8: 8,81 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,12 (dd, J = 9,1; 5,8 Hz, 1H), 7,67 (dd, J = 10,6; 2,6 Hz, 1H), 7,47 (ddd, J = 9,2, 8,0, 2,9 Hz, 1H), 7,37 - 7,28 (m, 1H), 3,41 -3,09 (m, 1H), 2,97 -2,50 (m, 1H), 2,19 -1,23 (m, 11H), 1,06 -0,93 (m, 3H).
Ejemplo 164. 4-Cloro-A/-(1-(4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)propil)benzamida
A una solución de ácido 4-clorobenzoico (42,6 mg, 0,272 mmol) en DMF (2 ml) se le añadió HATU (104 mg, 0,272 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 10 min, seguido de la adición de 1-(4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)propan-1-amina (60 mg, 0,210 mmol)(Intermedio 164J) en THF (0,5 ml) y W-metil morfolina (0,10 ml, 0,838 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se disolvió en MeOH, se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa para dar una mezcla que contenía cuatro isómeros. Además, los isómeros se separaron por SFC preparativa (Método C) para dar:
Ejemplo 164a que eluyó en primer lugar (15 mg, 0,035 mmol, rendimiento del 16,7%). CLEM Anal. Calc. para C25H26CFN2O 424,17 encontrado [M+H] 424,9 Tr= 1,57 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,82 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,12 - 8,03 (m, 1H), 7,94 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,65 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,27 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,37 (s a, 1H), 1,92 - 1,54 (m, 10H), 1,40 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 0,86 (t, J = 6,9 Hz, 3H).
Ejemplo 164b que eluyó en segundo lugar (8 ,6 mg, 0,020 mmol, rendimiento del 9,6 %). CLEM Anal. Calc. para C25H26CFN2O 424,17 encontrado [M+H] 424,9 Tr= 1,55 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,78 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 9,0; 5,8 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,71 -7,59 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,80 (s a, 1H), 3,27 (t, J = 11,3 Hz, 1H), 1,97 -1,81 (m, 4H), 1,74 - 1,29 (m, 7H), 0,86 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 164c que eluyó en tercer lugar (6,5 mg, 0,015 mmol, rendimiento del 6,9%). CLEM Anal. Calc. para C25H26CFN2O 424,17 encontrado [M+H] 425,0 Tr= 1,55 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,78 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 8,9; 5,8 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,71 - 7,60 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,81 (s a, 1H), 3,36 - 3,21 (m, 1H), 1,90 (d, J = 12,5 Hz, 4H), 1,73 - 1,28 (m, 7H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Ejemplo 164d que eluyó en cuarto lugar (13,9 mg, 0,032 mmol, rendimiento del 15,5%). CLEM Anal. Calc. para C25H26CFN2O 424,17 encontrado [M+H] 425,1 Tr= 1,58 min (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,82 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 9,0; 5,9 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,37 (s a, 1H), 1,92 - 1,53 (m, 10H), 1,39 (dt, J = 14,7, 7,6 Hz, 1H), 0,87 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Ejemplo 165a, b, c, d
4-Ciano-W-((R)-1-(cis-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)propil)benzamida
4-Ciano-W-((S)-1-(cis-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)propil)benzamida
4-Ciano-W-((R)-1-(trans-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)propil)benzamida
4-Ciano-W-((S)-1-(trans-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)propil)benzamida (homoquiral con estereoquímica absoluta y relativa no determinada)
Figure imgf000092_0001
Ejemplo 165. 4-C¡ano-W-(1-(4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da
A una soluc¡ón de ác¡do 4-c¡anobenzo¡co (33,4 mg, 0,227 mmol) en DMF (2 ml) se le añad¡ó HATU ( 86 mg, 0,227 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a ta durante 10 m¡n, segu¡do de la ad¡c¡ón de 1-(4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)propan-1-am¡na (50 mg, 0,175 mmol) (Intermed¡o 164J) en THF (0,5 ml) y W-met¡l morfol¡na (0,10 ml, 0,838 mmol). La mezcla resultante se ag¡tó a ta durante 2 h. La mezcla de reacc¡ón se concentró al vacío y el res¡duo se d¡solv¡ó en MeOH, se f¡ltró y se pur¡f¡có med¡ante HPLC preparat¡va para dar una mezcla que contenía los cuatro ¡sómeros. Además, los ¡sómeros se separaron por SFC preparat¡va (Método K) para dar:
Ejemplo 165a que eluyó en pr¡mer lugar (10,7 mg, 0,025 mmol, rend¡m¡ento del 14,6 %). CLEM Anal. Calc. para C26H26FN3O 415,21 encontrado [M+H] 416,2, Tr = 1,40 m¡n (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,37 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 9,0; 5,8 Hz, 1H), 8,02 - 7,87 (m, 5H), 7,69 - 7,58 (m, 1H), 7,46 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,53 - 3,42 (m, 1H), 1,96 - 1,56 (m, 10H), 1,50 - 1,31 (m, 1H), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 165b que eluyó en segundo lugar (5,7 mg, 0,014 mmol, rend¡m¡ento del 7,8 %). CLEM Anal. Calc. para C26H26FN3O 415,21 encontrado [M+H] 416,0, Tr = 1,51 m¡n (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,78 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,13 - 7,99 (m, 3H), 7,99 - 7,86 (m, 3H), 7,74 - 7,57 (m, 1H), 7,43 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3,81 (s a, 1H), 3,27 (t, J = 11,4 Hz, 1H), 2,00 -1,81 (m, 4H), 1,76 - 1,30 (m, 7H), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 165c que eluyó en tercer lugar (5,5 mg, 0,013 mmol, rend¡m¡ento del 7,5%). CLEM Anal. Calc. para C26H26FN3O 415,21 encontrado [M+H] 416,0, Tr = 1,51 m¡n (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,79 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,13 - 8,00 (m, 3H), 7,99 - 7,86 (m, 3H), 7,72 - 7,55 (m, 1H), 7,43 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,28 (t, J = 11,7 Hz, 1H), 1,99 - 1,80 (m, 4H), 1,75 - 1,29 (m, 7H), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 165d que eluyó en cuarto lugar (12 mg, 0,029 mmol, rend¡m¡ento del 16,4%). CLEM Anal. Calc. para C26H26FN3O 415,21 encontrado [M+H] 416,0, Tr = 1,52 m¡n (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 : 8,81 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,38 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 9,1; 5,8 Hz, 1H), 8,01 - 7,88 (m, 5H), 7,70 - 7,60 (m, 1H), 7,47 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,49 - 3,28 (m, 1H), 1,96 - 1,56 (m, 10H), 1,48 -1,31 (m, 1H), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplos 176 a 196
Figure imgf000092_0002
Los Ejemplos 176 a 196 se prepararon a part¡r del Intermed¡o 40L s¡gu¡endo el proced¡m¡ento para el Ejemplo 164 usando el ác¡do correspond¡ente.
Figure imgf000093_0002
Ejemplo de referencia 197
4-cloro-W-(1-(4-(p¡razolo[1,5-a]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da,
4-cloro-W-((R)-1-(c/s-4-(p¡razolo[1,5-a]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da,
4-cloro-W-((S)-1-(c/s--4-(p¡razolo[1,5-a]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da,
4-cloro-W-((R)-1-(frans-4-(p¡razolo[1,5-a]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da,
4-cloro-W-((S)-1-(frans-4-(p¡razolo[1,5-a]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da estereoquím¡ca absoluta y relat¡va desconoc¡da, as¡gnada arb¡trar¡amente
Figure imgf000093_0001
197A. 2-(1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-¡l¡deno)propanoato de et¡lo
A una suspens¡ón de NaH (0,307 g, 7,68 mmol) en THF (8 ml) enfr¡ada a 0 °C, se le añad¡ó 2-(d¡etox¡fosfor¡l)propanoato de et¡lo (1,830 g, 7,68 mmol) lentamente. Después de 30 m¡n, se añad¡ó 1,4-d¡oxaesp¡ro[4,5]decan-8-ona (1 g, 6,40 mmol). La mezcla resultante se ag¡tó a 0 °C durante 2 horas, después se calentó hasta temperatura amb¡ente durante una noche. La mezcla se ¡nact¡vó con agua, se ret¡ró THF a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se d¡solv¡ó en EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto en bruto se purificó por ISCO (EtOAc/Hex al 0-30 %). Las fracciones que contenían el producto se concentraron para producir el Intermedio 197A (1,2 g, rendimiento del 78 %) en forma de un aceite de color amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 84,19 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 4,03 - 3,89 (m, 4H), 2,68 - 2,53 (m, 2H), 2,46 - 2,28 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,78 - 1,66 (m, 4H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H)
197B. 2-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-il)propanoato de etilo
Una suspensión del Intermedio 143A (500 mg, 2,081 mmol)(lA) y paladio al 10 % sobre carbono (25 mg, 0,024 mmol) en EtOAc (5 ml) se hidrogenó en un agitador Parr a 0,31 MPa (45 psi) durante 6 h. El catalizador se filtró, y el filtrado se concentró para producir el Intermedio 197B (450 mg, rendimiento del 89 %) en forma de un aceite claro. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 84,12 (dtt, J = 10,7, 7,1, 3,6 Hz, 2H), 3,98 - 3,81 (m, 4H), 2,35 - 2,17 (m, 1H), 1,83 -1,68 (m, 3H), 1,66 - 1,45 (m, 4H), 1,43 - 1,28 (m, 2H), 1,27 -1,22 (m, 3H), 1,14-1,07 (m, 3H)
197C. 2-(4-oxociclohexil)propanoato de etilo
A una solución de 2-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-il)propanoato de etilo (450 mg, 1,857 mmol) (1B) en THF (5 ml) se le añadió cloruro de hidrógeno 1 M (acuoso) (0,929 ml, 3,71 mmol). La mezcla se calentó a 50 °C durante 6 h. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua (2X) y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El producto en bruto se purificó con ISCO (EtOAc/Hex al 0-30 %). Las fracciones que contenían el producto se concentraron para producir el Intermedio 197C (290 mg, rendimiento del 79 %) en forma de un aceite transparente. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 84,22-4,06 (m, 2H), 2,46 - 2,30 (m, 5H), 2,13 - 1,91 (m, 3H), 1,56 - 1,42 (m, 2H), 1,31 -1,24 (m, 3H), 1,18 (d, J = 7,1 Hz, 3H)
197D. 2-(4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo
El Intermedio 143C (200 mg, 1,01 mmol)(1C) y 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina (238 mg, 1,16 mmol) se disolvieron en DCM seco (10 ml). A la mezcla de reacción, se le añadió gota a gota trifluorometanosulfónico anhídrido (0,186 ml, 1,11 mmol) y se agitó durante 2 h. La suspensión se filtró y el filtrado se diluyó con DCM, se lavó con HCl 1 N (2X), solución sat. de bicarbonato sódico, agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4 y se concentró para producir el Intermedio 197D (320 mg, rendimiento del 96%) en forma de un aceite de color pardo. Rm N 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 85,73 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 4,28 - 4,05 (m, 2H), 2,52 - 2,17 (m, 4H), 2,08 - 1,79 (m, 3H), 1,49 (dt, J = 11,1, 6,6 Hz, 1H), 1,31 - 1,20 (m, 3H), 1,19-1,04 (m, 3H)
197E. 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo
A una solución del Intermedio 143D (300 mg, 0,908 mmol)(1D) en DMSO (5 ml) se le añadieron 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (230 mg, 0,908 mmol) y acetato potásico (267 mg, 2,72 mmol). Después de la mezcla se desgasificó con N2 durante 10 min, Se añadió PdCh(dppf) (19,9 mg, 0,027 mmol). La mezcla se calentó a 80 °C durante una noche. La mezcla se repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se concentró y se purificó por ISCO. Las fracciones que contenían el producto se concentraron para producir el Intermedio 197E (168 mg, rendimiento del 60 %) en forma de un aceite de color pardo. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 86,66-6,40 (m, 1H), 4,31 - 4,00 (m, 2H), 2,34 - 2,26 (m, 1H), 2,25 - 2,19 (m, 1H), 2,19 - 2,04 (m, 2H), 1,95 - 1,75 (m, 3H), 1,73 - 1,60 (m, 1H), 1,29 -1,24 (m, 15H), 1,13 (dd, J = 11,6, 7,0 Hz, 3H)
197F. 2-(4-(Pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)ciclohex-3-en-1-il)propanoato de etilo
Una mezcla de 7-cloropirazolo[1,5-a]pirimidina (0,193 g, 1,260 mmol), Intermedio 143E (0,400 g, 1,298 mmol), Na2CO3 (0,534 g, 5,04 mmol) y Pd(Ph3P)4 (0,073 g, 0,063 mmol) en dioxano (11,67 ml) y agua (3,89 ml) se calentó a 100 °C durante una noche. La reacción se interrumpió con agua y se diluyó con EtOAc. Las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3X). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo de color pardo. La purificación del material en bruto por cromatografía sobre gel de sílice usando una máquina ISCO (40 g columna, 40 ml/min, EtOAc al 0-70 % en hexanos sobre 16 min, tr = 10,5 min) dio 197F (0,224 g, 0,748 mmol, rendimiento del 59,4 %) en forma de un residuo de color amarillo. IEN EM (M+H)+ = 300,2. HPLC Pico tr = 0,95 minutos. Condiciones HPLC: método A.
197G. 2-(4-(Pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)ciclohexil)propanoato de etilo
A una solución de 143F (0,224 g, 0,748 mmol) en MeOH (3,74 ml) se le añadió formiato amónico (0,236 g, 3,74 mmol) seguido de Pd/C (0,021 g, 0,202 mmol). La reacción se calentó a 70 °C durante 1 h. La reacción se filtró a través de CELITE® y la torta de filtro se lavó con CH2Ch. El filtrado se concentró. El material en bruto se recogió en EtOAc y se lavó con una solución ac. sat. de NaHCO3 (1X). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para proporcionar 197G (220 mg, 98 %) en forma de un residuo de color amarillo. IEN EM (M+H)+ = 302,2. HPLC Pico tr = 0,94 minutos. Condiciones HPLC: método A.
197H. Ácido 2-(4-(pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)ciclohexil)propanoico
A una solución de 197G (0,1112 g, 0,369 mmol) en THF (1,318 ml) y MeOH (0,527 ml) se le añadió hidróxido de litio (3,69 ml, 3,69 mmol). La reacción se calentó a 70 °C durante 2,5 h, después se dejó enfriar a ta. La reacción se ajustó a pH 7 con HCl 1 N, después se diluyó con EtOAc. Las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (5X). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar 197H (82,7 mg, 82 %) en forma de un residuo de color amarillo. IEN EM (M+H)+ = 274,1. HPLC Pico tr = 0,73 minutos. Condiciones HPLC: método A.
197I. 1-(4-(Pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)ciclohexil)etanamina
Se recogió 197H (0,0823 g, 0,301 mmol) en tolueno (1,004 ml) en un vial de reacción y se añadieron fosforazidato de difenilo (0,071 ml, 0,331 mmol) y trietilamina (0,050 ml, 0,361 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 80 °C. Después de aproximadamente 2 h, la reacción se enfrió a ta. El residuo en bruto se recogió en 1 ml de THF y se añadieron 1 ml de agua e hidróxido de litio (0,072 g, 3,01 mmol). La reacción se agitó a ta. La reacción se acidificó a pH=1 con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. La capa orgánica se descartó. Después, la capa acuosa se basificó a pH=12 con NaOH 1 N y se extrajo con EtOAc (3X). Las fases orgánicas combinadas se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para dar 1971 (46,5 mg, 0,190 mmol, rendimiento del 63,2 %) en forma de un residuo de color naranja. IEN EM (M+H)+ = 245,2. Hp Lc Pico tr = 0,52 minutos. Condiciones HPLC: método A.
Ejemplo de referencia 197a
(+/-)-C/s- y frans-4-cloro-W-(1-(4-(pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il)ciclohexil)etil)benzamida
A una solución de 1971 (46,5 mg, 0,190 mmol) en THF (1359 pl) a ta se le añadió ácido 4-clorobenzoico (89 mg, 0,571 mmol), seguido de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (109 mg, 0,571 mmol), 4-hidroxibenzotriazol (77 mg, 0,571 mmol) y base de Hunig (133 pl, 0,761 mmol). La reacción se agitó a ta durante 16 h. La reacción se concentró, después se purificó mediante CL/EM preparativas con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-70 % durante 20 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron a través de evaporación centrífuga para proporcionar el compuesto del título como una mezcla de 4 isómeros (22,5 mg, 30%). IEN EM (M+H)+ = 383,0. HPlC Pico tr = 1,714 minutos. Pureza = 98%. Condiciones HPLC: método B.
Aproximadamente 20,6 mg del Ejemplo 197a se resolvieron mediante el siguiente método. La mezcla isomérica se purificó mediante SFC preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Chiral AD, DI 25 x 3 cm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 70/30 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Las fracciones ("Pico 1" tr = 7,485, "Pico 2" tr = 9,868, "Pico 3" tr = 11,635, "Pico 4" tr = 16,651; condiciones analíticas: Columna: Chiral AD, DI 250 x 4,6 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 70/30 de CO2/MeOH; Flujo: 2,0 ml/min) se recogieron en MeOH. Se estimó que la pureza estereoisomérica de cada fracción era superior al 99 % basándose en los cromatogramas SFC prep. Cada diastereómero o enantiómero se purificó adicionalmente a través de CL/EM preparativa:
Ejemplo 197b, isómero que eluyó en primer lugar: El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-70 % durante 20 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron a través de evaporación centrífuga para proporcionar el Isómero 1 (5,0 mg, 6,6 %). IEN EM (M+H)+ = 383,3. HPLC Pico tr = 1,764 minutos. Pureza = 96 %. Condiciones HPLC: B. Estereoquímica absoluta no determinada.
Ejemplo 197 c, isómero que eluyó en segundo lugar: El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-70 % durante 20 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El material se purificó adicionalmente a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 35-65 % durante 25 minutos, después una parada de 2 minutos a B al 65 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron a través de evaporación centrífuga para proporcionar el Isómero 2 (5,2 mg, 7,0%). IEN EM (M+H)+ = 383,1. HPLC Pico tr = 1,726 minutos. Pureza = 98%. Condiciones HPLC: B. Estereoquímica absoluta no determinada.
Ejemplo 197d, isómero que eluyó en tercer lugar: El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-70 % durante 20 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron a través de evaporación centrífuga para proporcionar el Isómero 3 (4,7 mg, 6,3 %). IEN EM (M+H)+ = 383,2. HPLC Pico tr= 1,848 minutos. Pureza = 97 %. Condiciones HPLC: B. Estereoquímica absoluta no determinada.
Ejemplo 197e, isómero que eluyó en cuarto lugar: El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 |jm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 20-70 % durante 20 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron a través de evaporación centrífuga para proporcionar el Isómero 4 (4,5 mg, 5,9 %). IEN EM (M+H)+ = 383 ,2. HPLC Pico tr = 1,806 minutos. Pureza = 96 %. Condiciones HPLC: B. Estereoquímica absoluta no determinada.
Ejemplo de referencia 198
4-cloro-W-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il) ciclohexil) but-3-en-1-il) benzamida
Figure imgf000096_0001
198A. (R)-3-((R)-2-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)pent-4-enoil)-4-feniloxazolidin-2-ona
Figure imgf000096_0002
A una solución de la Preparación 401 (50 mg, 0,116 mmol) en THF (2 ml) a -40 °C se le añadió NaHMDS (1 M en THF) (0,139 ml, 0,139 mmol) gota a gota. La mezcla se agitó de -40 °C a -30 °C durante 15 min. Después, se añadió gota a gota 3-bromoprop-1-eno (28,0 mg, 0,231 mmol) en THF (0,5 ml). La reacción se agitó a -20 °C durante 16 h. La reacción se interrumpió a -20 °C vertiéndola en una solución saturada de NH4Cl. El acuoso se extrajo con EtOAc. El orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para dar un material en bruto. Este material en bruto se añadió MeOH y se filtró para retirar el sólido. El filtrado se purificó con HPLC prep. (Phen Luna 5u 30 x 100 mm), caudal de 40 ml/min con gradiente de B al 20 % a B al 100 % B durante 10 minutos. Se mantuvo a B al 100 % durante 5 min. (A: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (90:10), B: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (10:90) que se controló a 254 nm. Fracciones combinadas (tr = 9,428 min) que contenían el producto. Después de la concentración, se obtuvo (R)-3-((R)-2-((1s, 4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il) ciclohexil) pent-4-enoil)-4-feniloxazolidin-2-ona (25 mg, 0,052 mmol, rendimiento del 44,8 %) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMo-d) 8 9,12 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,64 (dd, J = 9,3; 5,0 Hz, 1H), 8,01 - 7,89 (m, 2H), 7,89 - 7,75 (m, 1H), 7,47 - 7,31 (m, 5H), 5,62 - 5,45 (m, 2H), 4,84 -4,76 (m, 1H), 4,76 -4,68 (m, 1H), 4,68 -4,52 (m, 1H), 4,36 (dd, J = 9,0; 3,9 Hz, 1H), 3,55 -3,33 (m, 1H), 2,49 - 2,35 (m, 1H), 2,33 - 2,21 (m, 2H), 2,12 - 1,97 (m, 2H), 1,93 - 1,65 (m, 6H) CL-EM: M+H=473,3 (tr=0,90 min) (Método A)
198B: ácido (R)-2-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)pent-4-enoico
Figure imgf000097_0001
A una solución de la Preparación 198A (250 mg, 0,529 mmol) en THF (2 ml) a 0 °C se le añadió LiOH 2,0 M en H2O (0,476 ml, 0,952 mmol), seguido de H2O2 al 30 % (0,360 ml, 3,17 mmol). La reacción se agitó a 0 °C durante 10 min. Después, se calentó a TA y se agitó a TA durante 16 h. La reacción se interrumpió cuidadosamente a 0 °C mediante la adición de Na2SO3 saturado. El pH se ajustó a 5~6 con HCl 1 N y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó con HPLC prep. (9 inyecciones) (Phen Luna 5u 30 x 100 mm), caudal de 40 ml/min con gradiente de B al 20 % a B al 100 % B durante 10 minutos. Se mantuvo a B al 100 % durante 5 min. (A: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (90:10), B: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (10:90) que se controló a 254 nm. 1B (78 mg, 0,236 mmol, rendimiento del 44,6 %) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 89,22 (s a, 1H), 8,63 (dd, J = 9,0; 5,0 Hz, 1H), 7,98 - 7,75 (m, 4H), 5,85 (dd, J = 16,9; 9,7 Hz, 1H), 5,25 -5,03 (m, 2H), 3,50 (s a, 1H), 2,89 -2,75 (m, 1H), 2,54 -2,32 (m, 2H), 2,16 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 2,06 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 2,01 -1,71 (m, 6H) CL-EM: M+H=328 (tr = 0,69 min)
(Método A)
198C: (R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)but-3-en-1-amina
Figure imgf000097_0002
La Preparación 198B (55 mg, 0,168 mmol) se recogió en tolueno (1 ml) y se añadieron difenilfosforil azida (0,040 ml, 0,185 mmol) y trietilamina (0,028 ml, 0,202 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 70 C. Después de aproximadamente 3 h, se añadieron difenilfosforil azida (0,040 ml, 0,185 mmol) y trietilamina (0,028 ml, 0,202 mmol). La reacción se calentó durante otras 3 h. La reacción se enfrió a ta y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se recogió en THF (0,2 ml) y LiOH 2 M (0,840 ml, 1,680 mmol). La Reacción se agitó a ta durante 16 h. La CLEM mostró isocianato consumido. Nuevo pico con M+1 de deseado a ta = 0,56 min. La reacción se acidificó con HCl 1 N (formas precipitadas de color blanco) a pH1 y se extrajo EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. El material se purificó con HPLC prep. (Phen Luna 5u 30 x 100 mm), caudal de 40 ml/min con gradiente de B al 0 % a B al 100 % B durante 10 minutos. Se mantuvo a B al 100 % durante 5 min. (A: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (90:10), B: TFA al 0,1 % en agua/MeOH (10:90) que se controló a 254 nm. Se obtuvo la Preparación 198C (30 mg, 0,040 mmol, rendimiento del 23,77 %). CL-EM: M+H=299,2 (TR=0,56 min) (Método A).
Ejemplo 198: 4-cloro-W-((R)-1-((1s, 4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il) ciclohexil) but-3-en-1-il)benzamida
A una solución de la Preparación 198C (15 mg, 0,029 mmol) en THF (0,5 ml) a TA se le añadió base de Hunig (0,015 ml, 0,086 mmol), seguido de cloruro de 4-clorobenzoílo (9,98 mg, 0,057 mmol). La reacción se agitó a TA durante 2 h. El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 200 mm, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 50-100 % durante 20 minutos, después una parada de 10 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación por centrifugación. El rendimiento del producto 1 fue 3,8 mg (8,70 umol, 30,5 %).
RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 88,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,09 (dd, J = 9,0; 5,9 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,66 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,57 - 7,43 (m, 3H), 5,90 - 5,73 (m, 1H), 5,07 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 4,98 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 3,39 (s a, 1H), 2,26 -2,13 (m, 1H), 1,94 -1,71 (m, 7H), 1,68 (s a, 1H), 1,62 (d, J = 11,1 Hz, 1H) CL-EM: M+H=437,3 tr = 2,23 min
(Método B)
Ejemplo de referencia 199
W-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinol¡n-4-¡l) ciclohexil) but-3-en-1-il)-[1,1'-bifenil]-4-carboxamida
Figure imgf000098_0001
Se obtuvo el Ejemplo 199 siguiendo los procedimientos en el Ejemplo 198 usando 198C y cloruro de [1,1'-bifenil]-4-carbonilo. RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 88,83 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 8,09 (dd, J = 9,1; 5,8 Hz, 1H), 8,01 - 7,84 (m, 3H), 7,80 -7,61 (m, 5H), 7,54 -7,45 (m, 3H), 7,45 - 7,27 (m, 1H), 5,90 -5,79 (m, 1H), 5,10 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 3,40 (s a, 1H), 2,31 -2,16 (m, 1H), 2,01 - 1,78 (m, 6H), 1,75 (s a, 2H), 1,69 (s a, 1H), 1,63 (d, J = 12,2 Hz, 1H) CL-EM: M+H=470,3 tr = 2,41 min (Método B)
Ejemplo 200 y Ejemplo 201
(Quiral) W-1-((1s,4S)-4-(qumolin-3-il) ciclohexil) prop¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da
Figure imgf000098_0002
200A: 2-(4-(quinolin-3-il) ciclohex-3-en-1-il) acetato de etilo
Figure imgf000098_0003
Se recogió 2-(4-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)c¡clohex-3-en-1-¡l)acetato de etilo (5,26 g, 17,88 mmol) en dioxano (40 ml) y agua (10,00 ml). Se añadió 3-bromoquinolina (3,1 g, 14,90 mmol) seguido de carbonato potásico (6,18 g, 44,7 mmol). La mezcla se burbujeó con N2 durante 5 minutos antes de la adición de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,344 g, 0,298 mmol). Después de la adición, la reacción se evacuó y se volvió a llenar con N2 tres veces y después, se cerró herméticamente y se calentó a 100 °C durante 16 h. La reacción se diluyó con EtOAc y agua. El orgánico se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío y se purificó directamente a través de ISCO (120 g columna, 85 ml/min, EtOAc al 0-30 % en hexanos) para dar la Preparación 200A (4,47 g, 14,38 mmol, rendimiento del 96 %). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 59,05 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,86 - 7,76 (m, 1H), 7,67 (ddd, J = 8,4, 6,9, 1,5 Hz, 1H), 7,58 - 7,45 (m, 1H), 6,38 - 6,18 (m, 1H), 4,20 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 2,67 - 2,56 (m, 2H), 2,55 - 2,43 (m, 1H), 2,42 -2,35 (m, 2H), 2,30 -2 ,18 (m, 1H), 2,12 -1,92 (m, 2H), 1,57 (ddt, J = 12,8, 10,8, 7,9 Hz, 1H), 1,36 - 1,27 (m, 3H) CL-EM: M+H=296,2 tr = 0,74 min (Método A)
200B: 2-(4-(quinolin-3-il)ciclohexil)acetato de etilo
Figure imgf000099_0001
La Preparación 200A (3,5 g, 11,85 mmol) se disolvió en MeOH (70 ml) y se añadió formiato amónico (3,74 g, 59,2 mmol). El recipiente estaba equipado con un condensador de reflujo y se vació y se lavó abundantemente con N2 3 veces. Después, se añadió Pd al 10 %/C (1,256 g, 1,185 mmol) y la reacción se calentó a 70 °C. La CLEM, después de 1 hora, mostró la reducción completa. La reacción se enfrió, los sólidos se separaron por filtración y el filtrado se concentró para dar material en bruto. Este material en bruto se purificó con ISCO de 120 g, 85 ml/min. EtOAc al 0-50 %/Hexano. La Preparación 200B (0,71 g, 2,308 mmol, rendimiento del 19,48 %) se eluyó con EtOAc al 10 %/Hexano. CL-EM: M+H=302,2 tr = 0,81 min (Método A)
200C: 2-(4-(quinolin-3-il)ciclohexil)butanoato de etilo
Figure imgf000099_0002
A una solución de la Preparación 200B (920 mg, 3,09 mmol) en THF (10 ml) a 0 °C se le añadió NaHMDS 1 M en THF (7,73 ml, 7,73 mmol) gota a gota. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min. Después, se añadió gota a gota yodoetano (0,3 ml, 3,75 mmol). La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 45 min. [El color de la solución no cambió mucho]. Se añadió gota a gota yodoetano (0,4 ml, 5,00 mmol) y la reacción se agitó a 0 °C [El color de la solución se volvió un poco más oscuro]. Después de 1 h, se añadió yodoetano (0,15 ml, 1,875 mmol) y la reacción se agitó a TA durante 2 h. La CL-EM mostró el producto deseado formado pero todavía quedaba material de partida. La reacción se vertió en una solución saturada de NH4CL Se añadió EtOAc y el orgánico se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para dar un material en bruto. Este material en bruto se purificó con una columna ISCO de 80 g, 60 ml/min. EtOAc al 0-30 %/Hexano en 40 min. El producto deseado se eluyó con EtOAc al 25 %/Hexano. Fracciones combinadas 5-11. Después de la concentración, se obtuvo la Preparación 200C (386 mg, 1,174 mmol, rendimiento del 38,0 %) en forma de un líquido transparente. CL-EM; M+H=326,2 (TR = 0,81, 0,82 min)
(Método A)
200D: ácido 2-(4-(quinolin-3-il)cidohexil)butanoico
Figure imgf000100_0001
A una solución de la Preparación 200C (385 mg, 1,183 mmol) en THF (1 ml) y MeOH (5 ml) a ta se le añadieron LiOH 2 M (5,91 ml, 11,83 mmol) y NaOH 1 M (2,366 ml, 2,366 mmol). La reacción se agitó a 60 °C durante 48 h. La CL-EM todavía mostraba un poco de material de partida y éster metílico. Se enfrió a TA. La mezcla se ajustó a pH 5 con HCl concentrado. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc. El orgánico se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para dar la Preparación 200D (400 mg, 1,076 mmol, rendimiento del 91 %) en forma de un sólido de color blanco. CL-EM: M+H=298,2 (tr = 0,67 min) (Método A)
200E: 1-(4-(quinolin-3-il) ciclohexil) propan-1-amina
Figure imgf000100_0002
La Preparación 200D (200 mg, 0,673 mmol) se recogió en tolueno (2 ml) y se añadieron difenilfosforil azida (0,290 ml, 1,345 mmol) y trietilamina (0,187 ml, 1,345 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 70 C durante 16 h. La reacción se enfrió a TA y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se recogió en THF (2 ml) y LiOH 2 M (2,354 ml, 4,71 mmol). La reacción se agitó a TA durante 3 días. La CLEM mostró isocianato consumido. Nuevo pico con M+1 de deseado a TR = 0,50 min. La reacción se acidificó con HCl 1 N a pH1 y se extrajo EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. Después, la capa acuosa se ajustó a pH 10 con LiOH 2 M. Se extrajo con EtOAc (3x). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron para dar la Preparación 200E (110 mg, 0,398 mmol, rendimiento del 59,1 %) en forma de un líquido transparente. CL-EM: M+H=269,2 (tr = 0,50 min) (Método A)
Ejemplo 200a y Ejemplo 200b: A/-(1-((1r,4r)-4-(quinol¡n-3-¡l) ciclohexil) propil)-[1,1'-bifenil]-4-carboxamida y N-(1-((1r,4r)-4-(quinolin-3-il) ciclohexil) propil)-[1,1'-bifenil]-4-carboxamida (estereoquímica relativa y absoluta no confirmada, asignada arbitrariamente)
Figure imgf000101_0001
A una solución de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (102 mg, 0,533 mmol) en DMF (4 ml) a TA se le añadieron ácido [1,1'-bifenil]-4-carboxílico (162 mg, 0,820 mmol), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (102 mg, 0,533 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (82 mg, 0,533 mmol) y trietilamina (0,171 ml, 1,230 mmol). La reacción se agitó a TA durante 16 h. La reacción se diluyó con EtOAc y agua. El orgánico se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó con una columna ISCO de 40 g, 40 ml/min, EtOAc al 0-70 %/Hexano en 40 min. 3F (90 mg, 0,197 mmol, 48 %) se eluyó con EtOAc al 60 %/Hexano.
Ejemplo 200a RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 68,86 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,15 - 8,01 (m, 2H), 7,89 - 7,77 (m, 3H), 7,74 - 7,58 (m, 5H), 7,58 - 7,47 (m, 3H), 7,47 - 7,34 (m, 1H), 5,81 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,56 - 4,27 (m, 1H), 2,96 (s a, 1H), 2,26 - 2,09 (m, 1H), 2,01 - 1,78 (m, 8H), 1,77 - 1,64 (m, 1H), 1,52 - 1,36 (m, 1H), 1,08 - 0,96 (m, 3H) CL-EM: M+H= 449,3 (tr = 0,88 min) (Método A)
El Ejemplo 200b (65 mg, 0,142 mmol, 35 %) se eluyó con EtOAc al 70 %/Hexano. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 68,83 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,96 - 7,85 (m, 3H), 7,79 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,73 - 7,61 (m, 5H), 7,58 - 7,47 (m, 3H), 7,45 - 7,31 (m, 1H), 5,92 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,21 - 4,01 (m, 1H), 2,82 - 2,55 (m, 1H), 2,18 - 1,95 (m, 4H), 1,83 (ddd, J = 14,0, 7,4, 4,5 Hz, 1H), 1,75 - 1,47 (m, 4H), 1,47 - 1,32 (m, 2H), 1,05 (t, J = 7,4 Hz, 3H) CL-EM: M+H= 449,3 (tr = 0,88 min) (Método A)
Ejemplos 200c y 200d: N-((R)-1-((1s,4S)-4-(quinolin-3-il)ciclohexil)propil)-[1,1'-bifenil]-4-carboxamida y N-((S)-1-((1s,4R)-4-(quinolin-3-il)ciclohexil)propil)-[1,1'-bifenil]-4-carboxamida (estereoquímica relativa y absoluta no confirmada, asignada arbitrariamente)
Figure imgf000101_0002
El racemato del Ejemplo 200a se purificó a través de SFC preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Chiral AD-H 25 x 3 cm ID, partículas de 5 pm; Fase móvil A: 50/50 de CO2/MeOH; Longitud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/min. Las fracciones ("Pico " tr = 10,78 min (Ejemplo 200c) y "Pico 2" tr = 23,917 min (Ejemplo 200d);
RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 68,86 (d, J = 22 Hz, 1H), 8,15 - 8,01 (m, 2H), 7,89 - 7,77 (m, 3H), 7,74 - 7,58 (m, 5H), 7,58 - 7,47 (m, 3H), 7,47 - 7,34 (m, 1H), 5,81 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,56 - 4,27 (m, 1H), 2,96 (s a, 1H), 2,26 -2,09 (m, 1H), 2,01 -1,78 (m, 8H), 1,77 - 1,64 (m, 1H), 1,52 - 1,36 (m, 1H), 1,08 - 0,96 (m, 3H) CL-EM: M+H= 449,3 (tr = 0,88 min) (Método A)
Ejemplos 201 y 202
W-((R)-1-((1r,4R)-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡lH1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da y W-((S)-1-((1r,4S)-4-(qu¡nol¡n-3-il)cidohexil)propil)-[1,1'-bifenil]-4-carboxamida (estereoquímica relat¡va y absoluta no confirmada, as¡gnada arb¡trar¡amente)
Figure imgf000102_0001
El racemato del Ejemplo 200b se pur¡f¡có a través de SFC preparativa con las s¡gu¡entes cond¡c¡ones: Columna: Ch¡ral IC-H 25 x 3cm ID, partículas de 5 pm; Fase móv¡l A: 50/50 de CO2/MeOH; Long¡tud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/m¡n. Las fracc¡ones ("P¡co 1" tr = 10,811 m¡n (Ejemplo 201) y "P¡co 2" tr = 10,842 m¡n (Ejemplo 202); RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 88,83 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,96 - 7,85 (m, 3H), 7,79 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,73 - 7,61 (m, 5H), 7,58 - 7,47 (m, 3H), 7,45 - 7,31 (m, 1H), 5,92 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,21 - 4,01 (m, 1H), 2,82 -2,55 (m, 1H), 2,18 -1,95 (m, 4H), 1,83 (ddd, J = 14,0, 7,4, 4,5 Hz, 1H), 1,75 - 1,47 (m, 4H), 1,47 -1,32 (m, 2H), 1,05 (t, J = 7,4 Hz, 3H) CL-EM: M+H=449,2 (tr = 0,86 m¡n) (Método A)
Ejemplo 203
4-cloro-W-((R)-1-(c/s-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da
4-cloro-W-((S)-1-(c/s-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da
4-cloro-W-((R)-1-(frans-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da
4-cloro-W-((S)-1-(frans-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da estereoquímica absoluta y relat¡va desconoc¡da
Figure imgf000102_0002
Los Ejemplos 203a-d se obtuv¡eron s¡gu¡endo los proced¡m¡entos en los Ejemplos 200 y 201 usando 200E y cloruro de 4-clorobenzoílo. El racemato se pur¡f¡có a través de SFC preparativa con las s¡gu¡entes cond¡c¡ones: Columna: Ch¡ral IC-H 25 x 3 cm ID, partículas de 5 pm; Fase móv¡l A: 65/35 de CO2/MeOH; Long¡tud de onda del detector: 220 nm; Flujo: 85 ml/m¡n. Las fracc¡ones ("P¡co 1" tr = 5,98 m¡n (Ejemplo 203a) y "P¡co 2" tr = 6,29 m¡n (Ejemplo 203b); ("P¡co 3" tr = 8,0 m¡n (Ejemplo 203c) y "P¡co -4" tr = 9,0 m¡n (Ejemplo 203d);
Los Ejemplos 203a y 203b RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 88,86 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,16 -8,00 (m, 2H), 7,80 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,73 - 7,63 (m, 3H), 7,59 - 7,46 (m, 1H), 7,45 - 7,35 (m, 2H), 5,71 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,49 -4,23 (m, 1H), 3,06 -2,83 (m, 1H), 2,24 -2,05 (m, 1H), 2,00 - 1,83 (m, 5H), 1,83 - 1,73 (m, 3H), 1,73 - 1,63 (m, 1H), 1,51 1.35 (m, 1H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H) CL-EM: M+H=407,2 (tr = 0,81 min)
(Método A)
Los Ejemplos 203c y 203d RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 88,86 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,16 -8,00 (m, 2H), 7,80 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,73 - 7,63 (m, 3H), 7,59 - 7,46 (m, 1H), 7,45 - 7,35 (m, 2H), 5,71 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,49 -4,23 (m, 1H), 3,06 - 2,83 (m, 1H), 2,24 -2,05 (m, 1H), 2,00 - 1,83 (m, 5H), 1,83 - 1,73 (m, 3H), 1,73 - 1,63 (m, 1H), 1,51 -1.35 (m, 1H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H) CL-EM: M+H=407,2 (tr = 0,81 min)
(Método A)
Ejemplo de referencia 207
rac-4-doro-A/-(1-((frans)-4-((3-doro-2-met¡lp¡ndm-4-¡l)ox¡)c¡dohex¡l)etil)benzam¡da
Figure imgf000103_0001
207A. 2-((frans)-4-((3-doro-2-met¡lp¡nd¡n-4-¡l)ox¡)ddohex¡l)propanoato de rac-et¡lo
Una soluc¡ón de rac-2-((frans)-4-h¡drox¡ddohex¡l)propanoato de et¡lo (1,001 g, 5 mmol) en THF (4 ml) se enfr¡ó a 0 °C y se trató con hexamet¡ld¡s¡laz¡da potás¡ca (5,50 ml, 5,50 mmol) durante 1 m¡n. La reacc¡ón se ag¡tó 10 m¡n, después se trató con 3,4-d¡doro-2-met¡lp¡nd¡na (0,851 g, 5,25 mmol). La reacc¡ón se ag¡tó 40 m¡n a 0 °C, después se ¡nterrump¡ó con cloruro de amon¡o ac. Las fases se ag¡taron justas 1 h, después se extrajeron con 1:1 de EtOAc-hexano y el extracto orgán¡co se secó y se dest¡ló para proporc¡onar un ace¡te. La HPLC prep. proporc¡onó 2-((trans)-4-((3-cloro-2-met¡lpmd¡n-4-¡l)ox¡)ddohex¡l)propanoato de rac-et¡lo (0,47 g, rend¡m¡ento del 29 %) en forma de un ace¡te dorado. EM (EN): m/z = 326 [M+H]+. tp = 0,78 m¡n (Método A).
207B. ác¡do rac-2-((trans)-4-((3-doro-2-metilpiridin-4-il)oxi)ddohexil)propanoico
Una soluc¡ón de la Preparac¡ón 207A (0,42 g, 1,289 mmol) en THF (4 ml) se trató con h¡dróx¡do de l¡t¡o (0,154 g, 6,45 mmol) en agua (4 ml). Se añad¡ó metanol, ~4 ml se para dar una ún¡ca fase y la reacc¡ón se ag¡tó durante 1 h a 50 °C. Después, la reacc¡ón se enfr¡ó y se ag¡tó a TA. La mayoría del d¡solvente se ret¡ró en una corr¡ente de n¡trógeno y la reacc¡ón se d¡luyó a ~6 ml con agua. Esta suspens¡ón turb¡a se f¡ltró y el pH de la soluc¡ón f¡ltrada se ajustó a ~5,5 con soluc¡ón ac. de HOAc. El prec¡p¡tado resultante se f¡ltró, aclarándose con agua y secándose al a¡re para proporc¡onar ác¡do rac-2-((trans)-4-((3-doro-2-metilpmdin-4-il)oxi)ddohexil)propanoico (0,16 g, rend¡m¡ento del 42 %) en forma de un sól¡do de color blanco. EM (EN): m/z = 298 [M+H]+. tR = 0,63 m¡n (Método A).
207C. rac-1-((frans)-4-((3-cloro-2-met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)ox¡)dclohex¡l)etanam¡na
Una soluc¡ón de la Preparac¡ón 207B (0,26 g, 0,873 mmol) en tolueno (4,37 ml) se trató con tr¡et¡lam¡na (0,158 ml, 1,135 mmol) segu¡do de d¡fen¡lfosf¡n¡l az¡da (0,244 g, 1,004 mmol). La soluc¡ón se calentó a 70 °C (mucho burbujeo). Después de 30 m¡n, la soluc¡ón se enfr¡ó y se dest¡ló. El res¡duo se volv¡ó a d¡solver en THF (5 ml) y se añad¡ó a una soluc¡ón de h¡dróx¡do de l¡t¡o (0,836 g, 34,9 mmol) en 20 ml de agua y 8 ml de THF. Esta mezcla se ag¡tó a TA durante 30 m¡n, después se d¡luyó con éter y se lavó dos veces con HCl ac. 1 M. Las fases acuosas comb¡nadas se drenaron en una soluc¡ón ac. sat. de carbonato sód¡co (pH f¡nal ~12), y esta mezcla se extrajo con EtOAc y después, cloroformo-IPA 3:1. Estos dos extractos orgán¡cos se comb¡naron, se secaron y se dest¡laron para proporc¡onar rac-1-((trans)-4-((3-cloro-2-met¡lp¡nd¡n-4-¡l)ox¡)dclohex¡l)etanam¡na (0,18 g, rend¡m¡ento del 77 %) en forma de un ace¡te. EM (EN): m/z = 269 [M+H]+. tp = 0,47 m¡n (Método A).
Ejemplo 207: rac-4-cloro-A/-(1-((trans)-4-((3-cloro-2-met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)ox¡)dclohex¡l)et¡l)benzam¡da
Una soluc¡ón de la Preparac¡ón 207C (0,01 g, 0,037 mmol) y ác¡do 4-clorobenzo¡co (6,99 mg, 0,045 mmol) en DMF (0,25 ml) se trató con tr¡et¡lam¡na (0,016 ml, 0,112 mmol) segu¡do de BOP (0,021 g, 0,048 mmol). La reacc¡ón se ag¡tó 2 h a TA, después se ¡nterrump¡ó con una gota de agua y se d¡luyó con DMF a 2 ml. Después, esta soluc¡ón se pur¡f¡có med¡ante HPLC prep. La concentrac¡ón de las fracc¡ones aprop¡adas proporc¡onó 0,0088 g (50 %) del compuesto del título. EM (EN): m/z = 407 [M H]+. tR = 2,05 min (Método B).
Ejemplos de referencia 208-210: El acoplamiento Bop (Esquema 9, a continuación) de la amina 207C (preparada en el ejemplo anterior) con los ácidos benzoicos apropiados en las condiciones descritas para la conversión de 207C en el Ejemplo 207 proporciona los compuestos de la invención que se muestran en la Tabla 1 a continuación. (Todas las entradas son racémicas con estereoquímica relativa trans en el ciclohexilo).
Figure imgf000104_0001
Tabla 2.
Figure imgf000104_0002
continuación
Figure imgf000105_0001
continuación
Figure imgf000106_0002
Ejemplo de referencia 226
4-Cloro-W-((1-(6-fluoroqumol¡n-4-¡l)-4-met¡lp¡pend¡n-4-¡l)met¡l)benzamida
Figure imgf000106_0001
226A. 4-((4-dorobenzam¡do)met¡l)-4-met¡lp¡pend¡n-1-carbox¡lato de ferc-butNo
A una mezcla homogénea de 4-(am¡nomet¡l)-4-met¡lp¡pend¡n-1-carbox¡lato de ferc-butNo (53,0 mg, 0,23 mmol) en DCM anh¡dro (2 ml), en una atmósfera de n¡trógeno, se le añad¡ó DIPEA (0,17 ml, 0,97 mmol) segu¡do de cloruro de 4-clorobenzoílo (0,05 ml, 0,390 mmol). La mezcla resultante se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 4 horas, antes de repart¡rse entre DCM y agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces más con DCM. Estos extractos orgánicos se combinaron con la capa orgánica original y se concentraron al vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de un residuo de color ámbar, que se usó en la siguiente etapa sin purificación. EM(ES): m/z = 367 [M+H]+. tR = 1,00 min (Método A).
226B. 4-Cloro-A/-((4-met¡lp¡per¡d¡n-4-il)met¡l)benzam¡da
A una mezcla homogénea de 4-((4-clorobenzamido)metil)-4-metilpiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (226A, 0,23 mmol) en dioxano anhidro (3 ml), en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió HCl (4 N en dioxano, 0,5 ml, 2,0 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 45 horas antes de repartirse entre agua y EtOAc. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo una vez más con EtOAc. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua y esta capa acuosa se añadió a la capa acuosa original. La capa acuosa combinada se liofilizó para producir la sal HCl del compuesto del título como un residuo de color pardo que se usó sin purificación adicional. EM (EN): m/z = 267 [M+H]+. tR = 0,59 min (Método A).
Ejemplo 226: 4-Cloro-A/-((1-(6-fluoroquinolin-4-il)-4-metilpiperidin-4-il)metil)benzamida
A un matraz cerrable herméticamente cargado con 4-cloro-6-fluoroquinolina (15,0 mg, 0,08 mmol) se le añadió una mezcla homogénea de la sal HCl de 4-cloro-A/-((4-metilpiperidin-4-il)metil)benzamida (226B, 23,4 mg, 0,09 mmol) y DIPEA (0,07 ml, 0,40 mmol) en NMP anhidro (1 ml). El vial se cerró herméticamente y la mezcla se agitó a 120 °C. Después de 65 horas, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con DMF, se pasó a través de un filtro de jeringa, después se purificó a través de HPLC preparativa/EM para proporcionar el compuesto del título (19,4 mg; rendimiento del 57 %). EM(ES): m/z = 412 [M+H]+. tR = 1,91 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8 8,63 - 8,53 (m, 2H), 8,00 (dd, J = 9,1; 5,3 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,81 - 7,71 (m, 2H), 7,52 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 3,71 - 3,60 (m, 1H), 3,55 - 3,43 (m, 1H), 3,31 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 2,95 - 2,85 (m, 1H), 2,56 - 2,54 (m, 1H), 1,79 - 1,68 (m, 2H), 1,58 - 1,49 (m, 2H), 1,04 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 227
4-Cloro-W-((4-metil-1-(2-(trifluorometil)piridin-4-il)piperidin-4-il)metil)benzamida
Figure imgf000107_0001
El Ejemplo 227 (13,9 mg; rendimiento del 41 %) se preparó siguiendo un procedimiento análogo al que se usó para la síntesis del Ejemplo 226 excepto que se usó 4-cloro-2-(trifluorometil)piridina en lugar de 4-cloro-6-fluoroquinolina, en la etapa final. EM(ES): m/z = 412 [M+H]+. tR = 1,96 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 88,57 - 8,48 (m, 1H), 8,19 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,13 (s, 1H), 7,01 - 6,91 (m, 1H), 3,74 - 3,54 (m, 2H), 3,34 - 3,24 (m, 2H), 3,21 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 1,55 - 1,43 (m, 2H), 1,39 - 1,30 (m, 2H), 0,96 (s, 3H). Ejemplo de referencia 228
W-((4-Metil-1-(2-(trifluorometil)piridin-4-il)piperidin-4-il)metil)-[1,1'-bifenil]-4-carboxamida
El Ejemplo 228 (15,6 mg; rendimiento del 44 %) se preparó siguiendo un procedimiento análogo al que se usó para la síntesis del Ejemplo 227 excepto que se usó cloruro de [1,1'-bifenil]-4-carbonilo en lugar de cloruro de 4-clorobenzoílo, en la etapa inicial. EM(ES): m/z = 454 [M+H]+. tR = 2,12 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 88,49 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,79 - 7,65 (m, 4H), 7,48 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,44 - 7,36 (m, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,04 -6,94 (m, 1H), 3,69 - 3,53 (m, 2H), 3,31 (t, J = 9,8 Hz, 2H), 3,25 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 1,59 -1,48 (m, 2H), 1,41 -1,32 (m, 2H), 0,99 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 229
(+/-)-4-cloro-W-(1-((1r,4r)-4-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)oxi)ciclohexil)etil) benzamida
Figure imgf000108_0001
Preparación 229A. 2-((1r,4r)-4-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)oxi)ciclohexil)propanoato de etilo
Figure imgf000108_0002
A una solución de 2-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)propanoato de etilo (0,1294 g, 0,646 mmol) en DMF (1,077 ml) se le añadió NaH (0,043 g, 1,077 mmol). Después de 30 min, se añadió 4-bromo-2-(trifluorometil)piridina (0,071 ml, 0,538 mmol). La reacción se calentó a 80 °C durante una noche. La reacción se interrumpió con una sol. ac. sat. de NH4Cl y se diluyó con EtOAc. Las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2X). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar un residuo de color pardo. La purificación del material en bruto por cromatografía sobre gel de sílice usando una máquina ISCO (40 g columna, 40 ml/min, EtOAc al 0-30 % en hexanos sobre 14 min, tr = 9,5 min) dio el compuesto del título (0,0646 g, 0,187 mmol, rendimiento del 34,7 %) en forma de un residuo incoloro. IEN EM (M+H)+ = 346,2. HPLC Pico tr = 1,09 minutos. Condiciones HPLC: A.
Preparación 229B. ácido 2-((1r,4r)-4-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)oxi)ciclohexil)propanoico
Figure imgf000108_0003
A una solución de la Preparación 229A (0,0437 g, 0,127 mmol) en THF (0,452 ml) y MeOH (0,181 ml) se le añadió hidróxido de litio (1,265 ml, 1,265 mmol). La reacción se calentó a 70 °C durante 2 h, después se dejó enfriar a ta. La reacción se ajustó a pH 7 con HCl 1 N, después se diluyó con EtOAc. Las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3X). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto del título en forma de un residuo incoloro (18,2 mg, rendimiento del 45 %). IEN EM (M+H)+ = 318,1. HPLC Pico tr = 0,89 minutos. Condiciones HPLC: A.
Preparación 229C. 1-((1r,4r)-4-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)oxi)ciclohexil)etanamina
Figure imgf000109_0001
La Preparación 229B (18,2 mg, 0,057 mmol) se recogió en tolueno (191 |jl) y se añadieron fosforazidato de difenilo (13,59 jl, 0,063 mmol) y trietilamina (9,59 jl, 0,069 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 80 °C. Después de aproximadamente 2 h, la reacción se enfrió a ta. La reacción se calentó un adicional de 2 h, después se dejó enfriar a ta. A esta reacción se le añadieron 1 ml de THF y 1 ml de agua e hidróxido de litio (13,74 mg, 0,574 mmol). La reacción se agitó a ta durante una noche. La reacción se acidificó a pH=1 con HCl 1 N (~5,5 ml) y se extrajo con EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. Después, la fase acuosa se basificó a pH=12 con NaOH 1 N y se extrajo con EtOAc (3X). Los extractos orgánicos se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (3,8 mg, 0,013 mmol, rendimiento del 22,98 %) en forma de un residuo de color amarillo.
Ejemplo 229: (+/-)-4-cloro-A/-(1-((1r,4r)-4-((2-(tr¡fluoromet¡l)pir¡d¡n-4-¡l)ox¡)c¡clohex¡l)et¡l) benzamida
A una solución de la Preparación 229C (3,8 mg, 0,013 mmol) en THF (132 j l) a ta se le añadió base de Hunig (6,91 jl, 0,040 mmol), seguido de cloruro de 4-clorobenzoílo (3,38 jl, 0,026 mmol). La reacción se agitó a ta durante 2 h. El material en bruto se purificó a través de CL/EM preparativa con las siguientes condiciones: Columna: XBridge C18, 19 x 150 mm, partículas de 5 jm ; Fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo: agua con acetato de amonio 10 mM; Gradiente: B al 25-100 % durante 20 minutos, después una parada de 5 minutos a B al 100 %; Flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron a través de evaporación centrífuga para proporcionar el compuesto del título (2,5 mg, 44 %). IEN EM (M+H)+ = 427,2. HPLC Pico tr = 2,101 minutos. Pureza = 100 %. Condiciones HPLC: B.
Ejemplo 230
W-(1-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)propil)bifenil-4-carboxamida
Figure imgf000109_0002
230A. 2-(4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohex-3-enil)acetato de etilo
A una solución de 4-cloro-6-(trifluorometil)quinolina (2,05 g, 8,85 mmol), 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-en-1-il)acetato de etilo (3,12 g, 10,62 mmol) en 1,4-dioxano (35 ml) se le añadieron carbonato potásico (3,67 g, 26,6 mmol) y agua (7 ml). La mezcla de reacción se purgó con una corriente de nitrógeno durante 3 min, seguido de la adición de Pd(Ph3P)4 (0,409 g, 0,354 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100 °C en una corriente de nitrógeno durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió y se diluyó con acetato de etilo y una solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se separó y se lavó con una solución sat. de NaHCO3 y se secó sobre MgSO4. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se purificó a través de cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 0-50% en hexano para dar el Intermedio 230A (aceite, 3,0 g, 8,26 mmol, rendimiento del 93 %). CLEM Anal. Calc. para C20H20F3NO2, 363,14, encontrado [M+H] 364,5. Tr = 0,97 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 : 8,95 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8 ,8 Hz, 1H), 7,87 (dd, J = 8 ,8 ; 2,0 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,86 (dd, J = 2,8; 1,7 Hz, 1H), 4,20 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 2,65 - 2,24 (m, 5H), 2,15-1,96 (m, 2H), 1,73 - 1,54 (m, 2H), 1,36 - 1,29 (m, 3H)
230B. 2-(4-(6-(Trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)acetato de etilo
La mezcla de reacción de 2-(4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohex-3-en-1-il)acetato de etilo (3,0 g, 8,26 mmol), formiato amónico (2,08 g, 33,0 mmol) en MeOH (50 ml) se purgó con una corriente de nitrógeno durante 3 min, seguido de la adición de Pd-C (0,88 g, 0,41 mmol). La mezcla resultante se calentó a 85 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de CELITE® y la torta de filtro se lavó con MeOH. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo y se lavó con una solución saturada de NaHCO3, salmuera sucesivamente. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y el filtrado se concentró al vacío para dar el Intermedio 230B (aceite, 2,6 g, 7,12 mmol, rendimiento del 86 %) en forma de una mezcla de diastereómeros de cis y trans. CLEM Anal. Calc. para C20H22F3NO2 365,16, encontrado [M+H] 366,2. Tr = 0,94 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8: 9,05 - 8,85 (m, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,24 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 8,9; 1,7 Hz, 1H), 7,51 - 7,33 (m, 1H), 4,29 - 4,03 (m, 2H), 3,51 - 3,23 (m, 1H), 2,61 - 2,29 (m, 2H), 2,12 - 1,35 (m, 9H), 1,32-1,21 (m, 3H)
230C 2-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)butanoato de etilo
Al matraz que contenía THF (15 ml) se le añadió diisopropilamida de litio (solución 2,0 M en THF) (7,65 ml, 15,30 mmol) a -78 °C, seguido de la adición de 1,3-dimetiltetrahidropirimidin-2(1H)-ona (1,29 ml, 10,67 mmol) y una solución de 2-(4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)acetato de etilo (2,6 g, 7,12 mmol) en THF (10 ml) gota a gota a -78 °C. La mezcla resultante se volvió una solución de color pardo y se agitó a -78 °C durante 1 h, después se añadió lentamente yodoetano (1,14 ml, 14,23 mmol). La mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La reacción se interrumpió vertiéndose en agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y el filtrado se concentró al vacío. El extracto se purificó a través de cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 0-20 % en hexano para dar el isómero menor y el isómero mayor como cis Intermedio 230C (aceite, 1,1 g, 2,77 mmol, rendimiento del 39 %). CLEM Anal. Calc. para C22H26F3NO2393,19, encontrado [M+H] 394,3. Tr = 0,97 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8: 8,97 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,24 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 8 ,85 2,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,20 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 3,57 - 3,32 (m, 1H), 2,64 (td, J = 10,8; 4,0 Hz, 1H), 2,14 - 1,58 (m, 11H), 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
230D. ácido 2-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)butanoico
A la mezcla de reacción de 2-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)butanoato de etilo (1,1 g, 2,80 mmol) en THF (20 ml) y MeOH (8 ml) se le añadió una solución de hidróxido de litio (solución 2,0 M) (13,98 ml, 28,0 mmol). La mezcla resultante se calentó a 65 °C durante el fin de semana. La mezcla de reacción se enfrió y se diluyó con agua. A la mezcla se le añadió una solución 1 N de HCl para ajustar el pH a aproximadamente 5. Un sólido de color blanco precipitó a pH 5-6. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo dos veces. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4. El filtrado se concentró al vacío para dar el Intermedio 230D como un racemato (sólido de color amarillo, 0,93 g, 2,55 mmol, rendimiento del 91 %). CLEM Anal. Calc. para C20H22F3NO2 365,16, encontrado [M+H] 366,3. Tr = 0,81 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8: 12,10 (s a, 1H), 8,99 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,23 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 8,00 (dd, J = 8,7; 1,9 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 1,96 - 1,54 (m, 11H), 1,49 - 1,29 (m, 1H), 0,90 (t, J = 7,4 Hz, 3H)
230E 1-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)propan-1-amina
A una suspensión de ácido 2-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)butanoico (0,58 g, 1,587 mmol) en tolueno (15 ml) se le añadieron difenilfosforil azida (0,40 ml, 1,83 mmol) y trietilamina (0,24 ml, 2,06 mmol).La mezcla de reacción se volvió una solución transparente después de la adición de TEA. La mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 2 h. La reacción se enfrió a ta. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadieron THF (15 ml) y una solución 2,0 M de hidróxido de litio (7,94 ml, 15,87 mmol) y la mezcla resultante se agitó a ta durante 4 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl 1 N (formas precipitadas de color blanco) y se extrajo con EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. Después, la capa acuosa se basificó con NaOH 1 N (de nuevo, formas precipitadas) y se extrajo con EtOAc cuatro veces. Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre MgSO4 y el filtrado se concentró al vacío para dar un aceite de color amarillo claro, se concentró a alto vacío durante una noche para dar el Intermedio 230E (aceite, 0,47 g, 1,397 mmol, rendimiento del 88 %). CLEM Anal. Calc. para C19H23F3N2, 336,18, encontrado [M+H] 337,2. Tr = 0,68 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8: 8,95 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,24 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 8,8; 1,8 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,57 - 3,44 (m, 1H), 2,90 (td, J = 8,5; 3,0 Hz, 1H), 2,22 - 1,20 (m, 13H), 1,01 (d, J = 15,0 Hz, 3H)
Ejemplo 230 W-(1-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)propil)bifenil-4-carboxamida
A una solución de ácido [1,1'-bifenil]-4-carboxílico (21,2 mg, 0,107 mmol) en DMF (1,5 ml) se le añadió HATU (44 mg, 0,116 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 10 min, seguido de la adición de una solución de 1-((1s,4s)-4-(6-(trifluorometil)quinolin-4-il)ciclohexil)propan-1-amina (30 mg, 0,089 mmol) en THF (0,8 ml) y DIPEA (0,03 ml, 0,178 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 2 h y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en MeOH, se filtró y se purificó a través de HPLC preparativa para dar un Ejemplo 230 racémico (33 mg, 0,063 mmol, rendimiento del 71 %). CLEM Anal. Calc. para C32H31F3N2O, 516,24, encontrado [M+H] 517,0. Tr = 2,02 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-da) 8: 9,01 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,30 -8,21 (m, 1H), 8,17 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 8,03 -7,91 (m, 3H), 7,79 - 7,67 (m, 4H), 7,61 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,48 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 7,43 - 7,37 (m, 1H), 4,33 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,02 - 3,49 (m, 1H), 1,99 - 1,33 (m, 11H), 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H)
Ejemplo de referencia 231a-e (estereoquímica absoluta y relativa desconocida)
4-cloro-W-(1-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)propil)benzamida
Figure imgf000111_0001
231A. 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)cidohex-3-enil)acetato de etilo
A la mezcla de reacción de 2-bromo-6-(difluorometil)piridina (1,55 g, 7,45 mmol), 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclohex-3-en-1-il)acetato de etilo (2,52 g, 8,57 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se le añadió una solución de K2CO3 (7,45 ml, 22,36 mmol) y la mezcla resultante se purgó con corriente de nitrógeno durante 3 min, seguido de la adición de Pd(Ph3P)4 (0,431 g, 0,373 mmol) y la mezcla de reacción se purgó adicionalmente con corriente de nitrógeno y después se calentó a 110 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 20 h. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera y acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se purificó a través de cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 0-20 % en hexano para dar el Intermedio 231A (aceite, 2,2 g, 7,45 mmol, rendimiento del 99%). CLEM Anal. Calc. para C16H19F2NO2, 295,14, encontrado [M+H] 296,2. Tr = 1,10 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) 8: 7,92 - 7,80 (m, 1H), 7,60 (dd, J = 8,0; 0,8 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,71 (dd, J = 3,1; 2,0 Hz, 1H), 6,65 -6,44 (m, 1H), 4,20 -4,08 (m, 2H), 2,79 -2,65 (m, 1H), 2,56 -2,39 (m, 2H), 2,36 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 2,20 - 1,92 (m, 3H), 1,48 (dtd, J = 13,0, 10,6, 5,5 Hz, 1H), 1,30-1,22 (m, 3H)
231B. 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)acetato de etilo
La mezcla de reacción del 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohex-3-en-1-il)acetato de etilo en bruto (2,1 g, 7,11 mmol), formiato amónico (1,794 g, 28,4 mmol) en MeOH (40 ml) se purgó con una corriente de nitrógeno durante 3 min, seguido de la adición de Pd al 5 %-C (0,757 g, 0,356 mmol). La mezcla resultante se calentó a 85 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió. La mezcla de reacción se filtró y la torta de filtro se lavó con MeOH. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo y se lavó con una solución saturada de NaHCO3, salmuera sucesivamente. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y el filtrado se concentró al vacío para dar el Intermedio 231B (aceite, 1,8 g, 6,05 mmol, rendimiento del 85 %) en forma de una mezcla de diastereómeros de cis y trans. CLEM Anal. Calc. para C16H21F2NO2, 297,15 encontrado 298,2 [M+H]. Tr = 1,09 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8: 7,75 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,55 - 7,42 (m, 1H), 7,34 - 7,23 (m, 1H), 6,98 (dd, J = 14,0; 7,8 Hz, 1H), 6,80 - 6,42 (m, 1H), 4,33 - 4,04 (m, 2H), 2,91 - 2,59 (m, 1H), 2,55 - 2,36 (m, 2H), 2,34 - 2,20 (m, 1H), 2,07 - 1,52 (m, 8H), 1,32 - 1,23 (m, 3H) 231C 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)butanoato de etilo
Al matraz que contenía THF (8 ml) se le añadió diisopropilamida de litio (solución 2,0 M en THF) (3,70 ml, 7,40 mmol) a -78 °C, seguido de la adición de 1,3-dimetiltetrahidropirimidin-2(1H)-ona (0,81 ml, 6,73 mmol) y una solución de 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)acetato de etilo (1,0 g, 3,36 mmol) en THF (10 ml) gota a gota a -78 °C. La mezcla resultante se volvió una solución de color pardo y se agitó a -78 °C durante 1 h, después se añadió lentamente yodoetano (0,54 ml, 6,73 mmol). Después, la mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 0,5 h, se calentó a ta durante 20 h. A la mezcla de reacción se le añadió más diisopropilamida de litio (solución 2,0 M en THF) (3,70 ml, 7,40 mmol) (1,8 ml) a temperatura de baño de hielo. La mezcla de reacción se agitó a una temperatura de baño de hielo durante 2 h. La reacción se interrumpió vertiéndose en agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato sódico, se filtraron y se concentraron al vacío. El extracto se purificó a través de cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 0­ 16 % en hexano para dar el Intermedio 231C (aceite, 0 ,365 g, 1,122 mmol, rendimiento del 33 %). CLEM Anal. Calc. para C18H25F2NO2, 325,18 encontrado [M+H] 326,3. Tr= 1,12 min (Método A). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8: 7,82 - 7,69 (m, 1H), 7,45 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 7,9 Hz, 0.5H), 7,26 - 7,21 (m, 0.5H), 6,84 - 6,33 (m, 1H), 4.17 (cd, J = 7,1, 5,9 Hz, 2H), 2,90 (dt, J = 8,8, 4,4 Hz, 0,5H), 2,70 (tt, J = 12,2, 3,4 Hz, 0.5H), 2,53 - 2,36 (m, 0.5H), 2.18 -2,09 (m, 0.5H), 2,06 - 1,73 (m, 5H), 1,71 -1,57 (m, 4H), 1,55 - 1,44 (m, 1H), 1,27 (dt, J = 12,8, 7,2 Hz, 4H), 0,90 (t, J = 7,4 Hz, 3H)
231D. ácido 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)butanoico
A la mezcla de reacción de 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)cidohexil)butanoato de etilo (0,4 g, 1,229 mmol) en THF (6 ml) y MeOH (3 ml) se le añadió una solución de LiOH (6,15 ml, 18,44 mmol) a ta. Después, la mezcla de reacción se calentó 60 °C durante una noche. A la mezcla de reacción se le añadieron más THF (4 ml) y solución de LiOH (6,15 ml, 18,44 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante otros 3 días. A la mezcla de reacción se le añadió una solución 2 N de HCl para ajustar el pH a aproximadamente 5-6 y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo dos veces. La capa orgánica se separó y se secó sobre MgSO4. El filtrado se concentró al vacío para dar el Intermedio 231D (sólido de color amarillo, 0,37 g, 1,22 mmol, rendimiento del 99%). CLEM Anal. Calc. para C16H21F2NO2, 297,15, encontrado [M+H] 298,3, Tr = 0,96 min (Método A).
RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) 8: 7,86 (td, J = 7,8; 1,5 Hz, 1H), 7,50 -7,37 (m, 2H), 6,86 -6,47 (m, 1H), 2,99 -2,84 (m, 0.5H), 2,72 (tt, J = 12,2, 3,4 Hz, 0.5H), 2,53 -2,37 (m, 0.5H), 2,15 -1,42 (m, 10.5H), 1,36 -1,12 (m, 1H), 0,94 (td, J = 7,4, 2,9 Hz, 3H)
231E. 1-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)propan-1-amina
A una suspensión de ácido 2-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)butanoico (0,32 g, 1,076 mmol) en tolueno (8 ml) se le añadieron difenilfosforil azida (0,27 ml, 1,24 mmol) y trietilamina (0,17 ml, 1,40 mmol). La mezcla de reacción en un vial cerrado herméticamente se volvió una solución transparente después de la adición de TEA. La mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 2,5 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadieron THF (10 ml) y una solución 2,0 M de hidróxido de litio (5,4 ml, 10,76 mmol) y la mezcla resultante se agitó a ta durante 1 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl 1 N (formas precipitadas de color blanco) y se extrajo con EtOAc para retirar las impurezas relacionadas con DPPA. Después, la capa acuosa se basificó con NaOH 1 N (de nuevo, formas precipitadas) y se extrajo con EtOAc 3 veces. Los extractos básicos se combinaron, se secaron sobre MgSO4 y el filtrado se concentró al vacío para dar un aceite incoloro, se secó a alto vacío durante una noche para dar el Intermedio 231E (aceite, 95 mg, 0,35 mmol, rendimiento del 33 %). CLEM Anal. Calc. para C15H22 F2N2 , 268,17, encontrado [M+H] 2 69 ,5. Tr = 0,71 min (Método A).
RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) 8: 7,84 (td, J = 7,8; 2,2 Hz, 1H), 7,54 - 7,34 (m, 2H), 6,82 - 6,39 (m, 1H), 2,98 (dt, J = 7,6, 3,5 Hz, 0,5H), 2,80 -2,64 (m, 1H), 2,49 (dt, J = 8,1, 4,7 Hz, 0,5H), 2,21 - 1,17 (m, 11H), 0,96 (c, J = 7,4 Hz, 3H)
Ejemplo 231, cuatro isómeros 4-cloro-A/-(1-(4-(6-(difluorometil)piridin-2-il)ciclohexil)propil)benzamida
A una solución de ácido 4-clorobenzoico (30,1 mg, 0,192 mmol) en DMF (1 ml) se le añadió HATU (79 mg, 0,208 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 3 min, seguido de la adición de una solución del Intermedio 231C (43 mg, 0,160 mmol) en THF (1 ml) y DIPEA (0,1 ml, 0,50 mmol). La mezcla de reacción se agitó a ta durante 1 h y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en MeOH, se filtró y se purificó a través de HPLC preparativa para dar una mezcla de diastereómeros del Ejemplo 231a.
Además, los isómeros se separaron mediante SFC preparativa (Método R) para dar el primer eluído del Ejemplo 231b (11,3 mg, 0,027 mmol, rendimiento del 16,8%). CLe M Anal. Calc. para C22H25C F 2N2O, 406,16, encontrado [M+H] 406,9. Tr = 2,15 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,11 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,90 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,57 - 7,41 (m, 4H), 7,02 -6,68 (m, 1H), 4,02 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 2,86 (s a, 1H), 2,02 - 1,82 (m, 2H), 1,77 - 1,26 (m, 9H), 0,82 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Segundo eluído del Ejemplo 231c (10,5 mg, 0,025 mmol, rendimiento del 15,8%). CLEM Anal. Calc. para C22H25C F 2N2O, 406,16, encontrado [M+H] 407,2. Tr = 2,28 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,09 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,92 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,59 -7,38 (m, 4H), 7,04 -6,73 (m, 1H), 4,03 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,88 (s a, 1H), 2,06- 1,24 (m, 11H), 0,83 (t, J = 7,2 Hz, 3H)
Tercer eluído del Ejemplo 231d(8 mg, 0,019 mmol, rendimiento del 12,0%). CLEM Anal. Calc. para C22H25C F 2N2O, 406.16, encontrado [M+H] 407,0. Tr = 2,12 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,15 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7.95 - 7,77 (m, 3H), 7,52 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,49 - 7,35 (m, 2H), 7,05 -6,59 (m, 1H), 3,75 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 2,79 -2,58 (m, 1H), 1,97 - 1,77 (m, 4H), 1,71 -1,36 (m, 5H), 1,17 (s a, 2H), 0,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Cuarto eluído del Ejemplo 231E (8,9 mg, 0,021 mmol, rendimiento del 13,4 %). CLEM Anal. Calc. para C22H25C F 2N2O, 406.16, encontrado [M+H] 406,9. Tr = 2,12 min (Método B). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,15 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7.96 - 7,80 (m, 3H), 7,53 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,99 - 6,72 (m, 1H), 3,75 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 2,78 -2,58 (m, 1H), 1,99 - 1,77 (m, 4H), 1,70 - 1,38 (m, 5H), 1,17 (s a, 2H), 0,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H)
Ejemplo 232
W-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)-4-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)benzamida
Figure imgf000113_0001
232A. 4-bromo-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da
A una soluc¡ón de ác¡do 4-bromobenzo¡co (354 mg, 1,762 mmol) en DMF (6 ml) se le añad¡ó HATU (670 mg, 1,762 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a ta durante 5 m¡n, segu¡do de la ad¡c¡ón de una soluc¡ón de (R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)etanam¡na (400 mg, 1,469 mmol) en THF (3 ml) y DIPEA (0,77 ml, 4,41 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a ta durante 3 h. La mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con acetato de et¡lo y una soluc¡ón saturada de NaHCO3. La capa orgán¡ca se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4. El f¡ltrado se concentró al vacío y el res¡duo se pur¡f¡có a través de cromatografía en columna ultrarráp¡da sobre gel de síl¡ce, eluyendo con acetato de et¡lo al 0-70 % en hexano para dar el Intermed¡o 232A (sól¡do de color blanco, 0,55 g, 1,208 mmol, rend¡m¡ento del 82 %). CLEM Anal. Calc. para C24H24BrFN2O, 454,1, encontrado [M+H] 455,1, 457,1. Tr = 0,85 m¡n (Método A). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8: 8,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,12 (dd, J = 9,3; 5,7 Hz, 1H), 7,73 - 7,63 (m, 3H), 7,62 - 7,56 (m, 2H), 7,47 (ddd, J = 9,2, 8,0, 2,8 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,85 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 4,61 (tq, J = 9,7, 6,5 Hz, 1H), 3,45 -3,17 (m, 1H), 2,15 -1,68 (m, 9H), 1,32 (d, J = 6,6 Hz, 3H)
232B. N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)benzam¡da
A una soluc¡ón de 4-bromo-A/-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da (0,55 g, 1,208 mmol) en 1,4-d¡oxano (20 ml) se le añad¡eron acetato potás¡co (0,356 g, 3,62 mmol) y b¡s(p¡nacolato)d¡boro (0,368 g, 1,449 mmol). La mezcla de reacc¡ón se purgó con una comente de n¡trógeno durante 3 m¡n, segu¡do de la ad¡c¡ón de PdCh(dppf) (0,088 g, 0,121 mmol). La mezcla de reacc¡ón se calentó a 90 °C durante una noche. La mezcla de reacc¡ón se enfr¡ó y se d¡luyó con una soluc¡ón saturada de NaHCO3 y acetato de et¡lo. La capa orgán¡ca se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4. El f¡ltrado se concentró al vacío para dar el Intermed¡o 232B en bruto como éster borón¡co y mezcla de ác¡do (sól¡do de color negro, 0,6 g, 1,208 mmol, rend¡m¡ento del 99 %). CLEM Anal. Calc. para C30H36BFN2O3 , 502,28, encontrado [M+H] 503,5. Tr = 0,87 m¡n (Método A).
Ejemplo 232: A/-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(5-met¡l-1,3,4-oxad¡azol-2-¡l)benzam¡da
A la mezcla de reacc¡ón de 2-bromo-5-met¡l-1,3,4-oxad¡azol (15,57 mg, 0,096 mmol) y N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)benzam¡da en bruto (40 mg, 0,080 mmol) en d¡oxano (2 ml) se le añad¡ó Na2CO3 (soluc¡ón 2,0 M) (0,12 ml, 0,24 mmol). La mezcla de reacc¡ón se purgó con una comente de n¡trógeno durante 2 m¡n, segu¡do de la ad¡c¡ón de PdCh(dppf) (5,8 mg, 0,0080 mmol). La mezcla resultante en el tubo cerrado hermét¡camente se calentó a 90 °C durante 16 h. La mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con acetato de et¡lo y una soluc¡ón sat. de NaHCO3. La capa orgán¡ca se separó y se concentró al vacío. El res¡duo se d¡solv¡ó en DMF, se f¡ltró y se pur¡f¡có a través de HPLC preparat¡va para dar el Ejemplo 232 (17 mg, 0,037 mmol, rend¡m¡ento del 46,1 %). CLEM Anal. Calc. para C27H27FN4O2 458,21, encontrado [M+H] 458,9. Tr = 1,23 m¡n (Método I). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,83 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 8,14 -8,00 (m, 5H), 7,97 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,66 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 4,46 (s a, 1H), 3,38 (s a, 1H), 2,59 (s, 3H), 1,96 - 1,54 (m, 9H), 1,22 (d, J = 6,4 Hz, 3H)
Ejemplos 233-253
Figure imgf000114_0001
Los Ejemplos 233-253 se prepararon a partir del Intermedio 40L siguiendo el procedimiento del Ejemplo 47 usando el ácido correspondiente o siguiendo el procedimiento del Ejemplo 231.
Figure imgf000114_0002
continuación
Figure imgf000115_0001
continuación
Figure imgf000116_0002
Ejemplos 254-256
Figure imgf000116_0001
Los Ejemplos 254-256 se prepararon a partir del Intermedio 230E siguiendo el procedimiento para el Ejemplo 230 usando el ácido correspondiente.
Figure imgf000116_0003
continuación
Figure imgf000117_0002
Ejemplos 257-263
Figure imgf000117_0001
Los Ejemplos 257-263 se prepararon a partir del Intermedio 164J siguiendo el procedimiento para el Ejemplo 164 usando el ácido correspondiente.
Figure imgf000117_0003
continuación
Figure imgf000118_0001
EJEMPLOS BIOLOGICOS
Evaluación de la actividad inhibidora en un ensayo de indolamina 2,3-dioxigenasa (IDO) basado en células HeLa. Se obtuvieron células HeLa (ATCC® CCL-2) de la ATCC® y se cultivaron en medio Eagle modificado por Dulbecco complementado con glucosa 4,5 g/l, L-glutamina 4,5 g/l y piruvato de sodio 4,5 g/l (n.° 10-013-CV, Corning), dipéptido L-alanil-L-glutamina 2mM (n.° 35050-061, Gibco), penicilina 100 U/ml, estreptomicina 100 pg/ml (n.° SV30010, HyClone) y suero fetal bovino al 10% (n.° SH30071.03 HyClone). Las células se mantuvieron en una incubadora humidificada a 37 °C en CO2 al 5 %.
La actividad de IDO se evaluó en función de la producción de quinurenina de la siguiente manera: Las células HeLa se sembraron en una placa de cultivo de 96 pocillos a una densidad de 5.000 células/pocillo y se dejaron equilibrar durante la noche. Después de 24 horas, el medio se aspiró y se reemplazó por medio que contenía IPNy (n.° 285-IF/CF, R&D Systems) a una concentración final de 25 ng/ml. Se añadió a las células una dilución en serie de cada compuesto de prueba en un volumen total de 200 pl de medio de cultivo. Después de 48 horas de incubación adicionales, se transfirieron 170 pl de sobrenadante de cada pocillo a una placa de 96 pocillos nueva. se añadieron a cada pocillo 12,1 pl de ácido tricloroacético 6,1 N (n.° T0699, Sigma-Aldrich) y se mezcló, seguido de incubación a 65 °C durante 20 minutos para hidrolizar la N-formilquinurenina, el producto de la indolamina 2,3-dioxigenasa, a quinurenina. Después, la mezcla de reacción se centrifugó durante 10 minutos a 500xg para sedimentar el precipitado. se transfirieron 100 pl del sobrenadante de cada pocillo a una placa de 96 pocillos nueva. se añadieron 100 pl de pdimetilaminobenzaldehído al 2 % (p/v) (n.° 15647-7, Sigma-Aldrich) en ácido acético (n.° A6283, Sigma-Aldrich) a cada pocillo, se mezcló y se incubó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se determinaron las concentraciones de quinurenina midiendo la absorbancia a 480 nm y calibrando frente a una curva patrón de L-quinurenina (n.° K8625, Sigma-Aldrich) utilizando un lector de microplacas SPECTRAMAX® M2e (Molecular Devices). Se determinó el porcentaje de actividad a cada concentración de inhibidor y se evaluaron los valores de la CI50 utilizando regresión no lineal.
La actividad de los compuestos descritos en el presente documento se proporciona en la Figura 1, en donde los niveles de potencia se proporcionan como sigue: (Potencia: CI50 de la IDO: A < 0,1 pM; B < 1 pM; C < 10 pM) EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA
Se analizaron compuestos de ejemplo para la inhibición de la actividad de la IDO. Los procedimientos experimentales y los resultados se proporcionan a continuación.
Se transfectaron células HEK293 con un vector de expresión de mamífero basado en pCDNA que portaba el ADNc de IDO1 humana (NM 002164.2) mediante electroporación. Se cultivaron en medio (Dm EM con SFB al 10%) que contenía G418 1 mg/ml durante dos semanas. Se seleccionaron y expandieron clones de células HEK293 que expresaban de forma estable la proteína IDO1 humana para el ensayo de inhibición de la IDO.
Las células IDO1 humana/HEK293 se sembraron a 10.000 células por 50 pl por pocillo con medio RPMI/sin rojo fenol que contenía SFB al 10 % en una placa de cultivo de tejidos de fondo transparente de pared negra de 384 pocilios (Matrix Technologies LLC), a continuación, se añadieron a cada pocillo l0o nl de determinada concentración de compuesto utilizando sistemas de manipulación de líquidos ECHO. Las células se incubaron durante 20 horas en una incubadora a 37 °C con CO2 al 5 %.
Los tratamientos con los compuestos se detuvieron añadiendo ácido tricloroacético (Sigma-Aldrich) a una concentración final del 0,2 %. La placa de células se incubó adicionalmente a 50 °C durante 30 minutos. Se mezclaron sobrenadante de igual volumen (20 j l) y reactivo de Ehrlich (4-dimetilaminobenzaldehído, Sigma-Aldrich) al 0,2 % (p/v) en ácido acético glacial en una nueva placa de fondo transparente de 384 pocillos. A continuación, esta placa se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se midió la absorbancia a 490 nm en el lector de placas Envision. Se calcularon los valores de CI50 del compuesto utilizando los recuentos de 500 nM de un tratamiento patrón de referencia como una inhibición al cien por ciento, y los recuentos sin compuesto, pero tratados con DMSo , como inhibición del cero por ciento.
La actividad de los compuestos descritos en el presente documento se proporciona en la Figura 1, en donde los niveles de potencia se proporcionan como sigue: (Potencia: CI50 de la IDO: A < 0,05 jM ; B < 0,25 jM ; C <2 jM )
Los resultados de los ensayos de IDO se muestran a continuación en la tabla.
IDO-1 humana de HEK
Figure imgf000119_0001
continuación
Figure imgf000120_0001
continuación
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continuación
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En el presente documento se describen realizaciones particulares de la presente invención, incluido el mejor modo conocido por los inventores para llevar a cabo la invención.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto que tiene la fórmula (I):
    Figure imgf000123_0001
    o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde,
    el subíndice n es 1 o 0;
    G es un quinolinilo opcionalmente sustituido;
    J1 es CH, N o C(R2), cuando R2 está unido al vértice del anillo identificado como J1;
    R1 y R2 son independientemente hidrógeno, halógeno, haloalquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido, cicloheteroalquilo de 3 a 6 miembros opcionalmente sustituido, fenilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-C4 opcionalmente sustituido, CN, SO2NH2, NHSO2CH3, NHSO2CF3, OCF3, SO2CH3, SO2CF3 o CONH2, y cuando R1 y R2 están en vértices adyacentes de un anillo de fenilo, pueden unirse para formar un anillo de cicloheteroalquilo de 5 o 6 miembros que tiene uno o dos vértices de anillo seleccionados independientemente entre O, N y S, en donde dicho anillo cicloheteroalquilo está opcionalmente sustituido con uno a tres miembros seleccionado entre flúor y alquilo C1-C3;
    R3 y R4 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, flúor, OH, CN, CO2H, C(O)NH2, N(R5a)2, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -(CR5R5)m-OH, -(CR5R5)m-CO2H, -(CR5R5)m-C(O)NH2, -(CR5R5)m-C(O)NHR5a, -(CR5R5)mN(R5a)2, -NH(CR5R5)mCO2H o -NH(CR5R5)m-C(O)NH2;
    cada R5 es independientemente H, F, OH, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido u -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
    cada R5a es independientemente H o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
    R6 es H, OH, F, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -O-alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o -N(R5a)2; y cada m es independientemente 1, 2 o 3;
    en donde los sustituyentes opcionales para los grupos alquilo se seleccionan entre halógeno, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R''', -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN y -NO2 en un número que varía de cero a (2 m'+1), donde m' es el número total de átomos de carbono en tal radical y R', R" y R''' cada uno se refiere independientemente a hidrógeno, alquilo C1-8 no sustituido, arilo sin sustituir, arilo sustituido con 1-3 halógenos, alquilo C1-8 no sustituido, grupos alcoxi C1-8 o tioalcoxi C1.8, o grupos aril-alquilo C1-4 no sustituidos, en donde cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 3, 4, 5, 6 o 7 miembros;
    en donde los sustituyentes opcionales para los grupos arilo y heteroarilo se seleccionan entre -halógeno, -OR', -OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2, -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R', -NR'-C(O)NR"R''', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -N3, perfluoroalcoxi (C1-C4) y perfluoroalquilo (C1-C4), en un número que varía entre cero y el número total de valencias abiertas en el sistema de anillo aromático; y donde R', R" y R''' se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilo C1-8, haloalquilo C1-8, cicloalquilo C3-6, alquenilo C2-8 y alquinilo C2-8; y como alternativa cada uno de los anteriores sustituyentes arilo pueden unirse a un átomo del anillo mediante una cadena de alquileno de entre 1-4 átomos de carbono; en donde dos de los sustituyentes en los átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden opcionalmente reemplazarse con un sustituyente de la fórmula -T-C(O)-(CH2)q-U-, en donde T y U son independientemente -NH-, -O-, -CH2- o un enlace sencillo y q es un número entero de 0 a 2; o dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes del anillo de arilo o de heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -A-(CH2)r-B-, en donde A y B son independientemente -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- o un enlace sencillo y r es un número entero de 1 a 3; en donde uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo así formado puede sustituirse opcionalmente por un enlace doble; o, dos de los sustituyentes de los átomos adyacentes de los anillos arilo o heteroarilo pueden reemplazarse opcionalmente por un sustituyente de fórmula -(CH2)s-X-(CH2)t-, donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3, y X es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- o -S(O)2NR'-; en donde el sustituyente R' en -NR'- y -S(O)2NR'- se selecciona entre hidrógeno o alquilo C1-6 sin sustituir.
    2. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
    Figure imgf000124_0001
    o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo. 3. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
    Figure imgf000124_0002
    o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo. 4. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
    Figure imgf000124_0003
    o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo. 5. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
    Figure imgf000124_0004
    o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo. 6. El compuesto de la reivindicación 1, que se selecciona entre:
    4-Cloro-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida; N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)-2-metilbenzamida; N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)-3-metilbenzamida; N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)-4-metilbenzamida; N-((R)-1-((1 s,4S)-4-(6-fluoroqu¡ nolin-4-il)ciclohexil)etil)-2-metoxi benzamida; N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)-3-metoxibenzamida; 2- fluoro-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida; 3- fluoro-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida; 2-cloro-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida; 3- doro-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)benzam¡da;
    3.4- d¡doro-A/-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)etil)benzam¡da;
    4- fluoro-A/-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4s)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)-[1,1'-b¡feml]-3-carboxam¡da;
    3.5- d¡doro-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4s)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)p¡colmam¡da;
    N-((R)-1-((l s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-metox¡ benzam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-2-carboxam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-[l,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da;
    5- Etox¡-N-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)p¡col¡nam¡da
    4-Cloro-N-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-Cloro-N-((S)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-Cloro-N-((R)-1-(frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-Cloro-N-((S)-1-(frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-C¡ano-N-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-C¡ano-N-((S)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-C¡ano-N-((R)-1-(frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-C¡ano-N-((S)-1-(frans-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4- dano-N-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)benzam¡da;
    5- (3-fluoro-4-metox¡fen¡l)-N-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)p¡col¡nam¡da;
    (R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)-N-met¡letanam¡na;
    N-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(1H-p¡rrol-1-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-(c/s-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(lH-¡m¡dazol-1-¡l)benzam¡da;
    N-1-((1S,4S)-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da;
    N-(1-((1R,4R)-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da;
    N-((S)-1-((1s,4R)-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-[l,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da;
    N-((R)-1-((lr,4R)-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da;
    N-((s )-1-((1 r,4S)-4-(qu¡ nol¡ n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-[1,1'-b¡fen¡l]-4-carboxam¡da;
    4-cloro-N-((R)-1-(c/s-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-cloro-N-((S)-1-(c/s-4-(qu¡nol¡n-3-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-doro-N-((R)-1-(frans-4-(qumol¡n-3-¡l)cycohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-doro-N-((S)-1-(frans-4-(qumol¡n-3-¡l)cycohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    N-(1-((1 s,4s)-4-(6-(tr¡fluoromet¡l)qu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)b¡fen¡l-4-carboxam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(5-met¡l-1,3,4-oxad¡azol-2-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(p¡raz¡n-2-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)-4-(pmm¡d¡n-5-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((l s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(l-met¡l-1H-¡m¡dazol-4-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡dohex¡l)et¡l)-4-(2-metox¡p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡dohex¡l)et¡l)-4-(6-met¡lsulfon¡l)p¡r¡d¡n-3-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4s)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(2-met¡lt¡azol-5-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(5-metox¡p¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
    4-(2-c¡anop¡r¡m¡d¡n-5-¡l)-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)ddohex¡l)et¡l)-4-(2-metox¡t¡azol-4-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4'-(2-h¡drox¡propan-2-¡l)b¡fen¡l-4-carboxam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(t¡azol-4-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4s)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(l,3,4-oxad¡azol-2-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(6-metox¡p¡r¡d¡n-3-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-morfol¡nobenzam¡da;
    4-c¡doprop¡l-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((1 s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(1-met¡lc¡doprop¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(oxazol-5-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4s)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(l-met¡l-1H-1,2,4-tr¡azol-5-¡l)benzam¡da;
    N-((R)-1-((ls,4s)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)-4-(5-met¡lt¡azol-2-¡l)benzam¡da;
    4-(5-c¡anot¡azol-2-¡l)-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)et¡l)benzam¡da;
    4-cloro-N-(1-((1s,4s)-4-(6-(tr¡fluoromet¡l)qu¡nol¡n-4-¡l)cylcohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    4-(1H-p¡rrol-1-¡l)-N-(1-((1s,4S)-4-(6-(tr¡floromet¡l)qu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)benzam¡da;
    6- metox¡-N-(1-((1s,4s)-4-(6-(tr¡fluoromet¡l)qu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)n¡cot¡nam¡da;
    N-(1-(4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-4-(t¡azol-2-¡l)benzam¡da;
    N-(1-(4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)b¡-fen¡l-4-carboxam¡da; y
    N-(1-(4-(6-fluoroqu¡nol¡n-4-¡l)c¡clohex¡l)prop¡l)-6-metox¡n¡cot¡nam¡da;
    a sal, un h¡drato o un solvato farmacéut¡camente aceptables de los m¡smos.
    El compuesto de una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones anter¡ores que es 4-cloro-N-((R)-1-((1s,4S)-4-(6fluoroquinolin-4-il)cidohexil)etil)benzamida
    Figure imgf000126_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
    9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en donde el compuesto es 4-cloro-W-((R)-1-((1s,4S)-4-(6-fluoroquinolin-4-il)ciclohexil)etil)benzamida
    Figure imgf000126_0002
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    10. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, para uso en un método para tratar una enfermedad, un trastorno o un afección, mediados al menos en parte por IDO.
    11. El compuesto para el uso de la reivindicación 10, en donde el compuesto es
    Figure imgf000126_0003
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    12. El compuesto o la sal, el hidrato o el solvato farmacéuticamente aceptables del mismo para el uso de la reivindicación 10, en donde dichos enfermedad, trastorno o afección son cáncer, opcionalmente en donde dicho cáncer es un cáncer de próstata, colon, recto, páncreas, cuello uterino, estómago, endometrio, cerebro, hígado, vejiga, ovario, testículo, cabeza, cuello, piel (incluidos melanoma y carcinoma basal), recubrimiento mesotelial, glóbulos blancos (incluidos linfoma y leucemia), esófago, mama, músculo, tejido conjuntivo, pulmón (incluido carcinoma microcítico de pulmón y carcinoma no microcítico), glándula suprarrenal, tiroides, riñón o hueso; o es glioblastoma, mesotelioma, carcinoma de células renales, carcinoma gástrico, sarcoma (incluido sarcoma de Kaposi), coriocarcinoma, carcinoma basocelular cutáneo o seminoma testicular; u opcionalmente en donde dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de colon, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, leucemia, un tumor cerebral, linfoma, cáncer de ovario y sarcoma de Kaposi.
    13. Una combinación que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal, un hidrato o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, y al menos un agente terapéutico adicional.
    14. La combinación de la reivindicación 13, en donde el al menos un agente terapéutico adicional es un agente inmunoncológico seleccionado de un antagonista de CTLA-4, un antagonista de PD-1, un antagonista de PD-L1, un antagonista de LAG-3, un agonista de CD137, un agonista de GITR, un agonista de OX40, un antagonista de OX40L, un agonista o antagonista de CD40, un agonista de CD27, un antagonista de BTLA, un antagonista de TIM-3, un antagonista de A2aR, un antagonista del receptor inhibidor de linfocitos citolíticos naturales, o un anticuerpo de B7H3.
    15. La combinación de la reivindicación 14, en donde el agente inmunoncológico es ipilimumab.
    16. La combinación de la reivindicación 14, en donde el agente inmunoncológico es nivolumab.
    17. La combinación de la reivindicación 13, en donde el al menos un agente terapéutico adicional es un agente quimioterapéutico.
    18. La combinación de la reivindicación 14, en donde el agente inmunoncológico es BMS-986016, BMS-936559, urelumab, BMS-986153 o BMS-986156.
    19. La combinación de la reivindicación 14, en donde el agente inmunoncológico adicional es tremelimumab, pembrolizumab, MEDI-0680, pidilizumab, MPDL3280A, durvalumab, MSB0010718C, IMP-731, IMP-321, PF-05082566, TRX-518, MK-4166, MEDI-6383, MEDI-6469, RG-7888, lucatumumab, dacetuzumab, varlilumab o MGA271.
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