ES2712098T3

ES2712098T3 - Tratamiento de infecciones por VHS con nanofibras de poli-N-acetilglucosamina

Info

Publication number: ES2712098T3
Application number: ES12771138T
Authority: ES
Inventors: John Vournakis; Sergio Finkielsztein
Original assignee: Marine Polymer Technologies Inc
Current assignee: Marine Polymer Technologies Inc
Priority date: 2011-04-15
Filing date: 2012-04-16
Publication date: 2019-05-09
Anticipated expiration: 2032-04-16
Also published as: NZ732118A; EP2696680A1; WO2012142581A1; CN107412256A; AU2012242479B2; US20170304354A1; US20140127310A1; IL228759A0; MX356877B; JP6328690B2; CN103648279B; EP2696680A4; JP2016166237A; JP2014514309A; CN107362171A; US10765698B2; IL266368A; MX2013011971A; IL266368B; CA2832859C

Abstract

Una composición que comprende una cantidad eficaz fibras acortadas de poli-N-acetilglucosamina (nanofibras de sNAG) para su uso en un método de tratamiento o prevención de una infección por virus de herpes simple (VHS) o un síntoma producido por una infección por VHS en un paciente humano, método que comprende la administración tópica de dicha composición a diario al paciente humano en la zona o proximidad de un herpes labial o lesión relacionada con la infección por VHS; en donde las nanofibras de sNAG son el único principio activo en la composición; y en donde las nanofibras de sNAG comprenden monosacáridos de N-acetilglucosamina y monosacáridos de glucosamina, en donde más del 70% de los monosacáridos son monosacáridos de N-acetilglucosamina; y en donde (i) más del 50% de las nanofibras de sNAG tienen una longitud comprendida entre 1 y 15 μm, o (ii) las nanofibras de sNAG se produjeron por irradiación de fibras de poli-N-acetilglucosamina con una dosis de radiación que reduce la longitud media de las nanofibras de sNAG a menos de aproximadamente 15 μm de longitud.

Description

DESCRIPCION

Tratamiento de infecciones por VHS con nanofibras de poli-N-acetilglucosamina

1. Introduccion

Esta solicitud se refiere a composiciones que comprenden fibras acortadas de poli-N-acetilglucosamina ("nanofibras sNAG") y al uso de dichas composiciones en el tratamiento de infecciones por VHS.

2. Antecedentes

Las defensinas son peptidos cationicos pequenos (3-4 kDa), ricos en cistema, que se encuentran en mairnferos, insectos y plantas que se clasifican en diferentes familias (a, p y 0) en funcion de su tipo de enlace disulfuro. Los peptidos pequenos son importantes efectores de inmunidad innata y, en consecuencia, desempenan un papel importante en la lucha del cuerpo contra diversas enfermedades.

Algunas enfermedades son incurables actualmente o tienen tratamientos suboptimos disponibles, debido a la eficacia parcial de dichos tratamientos o a los efectos secundarios relacionados con dichos tratamientos. Dichas enfermedades incluyen, entre otras, cancer, algunas enfermedades vmcas, algunas enfermedades fungicas, enfermedades inflamatorias del intestino (p. ej., la enfermedad de Crohn) y enfermedades dermatologicas como la soriasis y la dermatitis. Sigue habiendo necesidad de un tratamiento eficaz para estas enfermedades que se pueda usar solo, o en combinacion con una terapia convencional, que sea segura y eficaz.

3. Compendio

En un aspecto, la invencion proporciona una composicion que comprende una cantidad eficaz fibras acortadas de poli-N-acetilglucosamina ("nanofibras de sNAG") Para su uso en un metodo de tratamiento o prevencion de una infeccion por virus de herpes simple (VHS) o un smtoma producido por una infeccion por VHS en un paciente humano, metodo que comprende la administracion topica de dicha composicion a diario al paciente humano en la zona o su proximidad de un herpes labial o lesion relacionada con la infeccion por VHS; en donde las nanofibras de sNAG son el unico principio activo en la composicion; y en donde las nanofibras de sNAG comprenden monosacaridos de N-acetilglucosamina y monosacaridos de glucosamina, en donde mas del 70% de los monosacaridos son monosacaridos de N-acetilglucosamina; y en donde (i) mas del 50% de las nanofibras de sNAG tienen una longitud comprendida entre 1 y 15 pm, o (ii) las nanofibras de sNAG se produjeron por irradiacion de fibras de poli-N-acetilglucosamina con una dosis de irradiacion que reduce la longitud media de las nanofibras de sNAG a menos de aproximadamente 15 pm de longitud.

En una realizacion, la cantidad de la composicion es eficaz para: (i) reducir la gravedad de la infeccion por VHS o uno o mas de sus smtomas; (ii) reducir la duracion de la infeccion por VHS o uno o mas de sus smtomas; (iii) erradicar uno o mas de sus smtomas relacionados con la infeccion por VHS; (iv) reducir el numero de smtomas relacionados con la infeccion por VHS; y/o (v) evitar el comienzo, desarrollo o recafda de la infeccion por VHS y/o y uno o mas de sus smtomas.

En otra realizacion, la composicion que comprende nanofibras de sNAG se administra a la piel o a las membranas de mucosas del paciente.

En otra realizacion, las nanofibras de sNAG se formulan en forma de una membrana, un polvo, una suspension, una solucion lfquida, una pomada, una crema, una pulverizacion o un gel.

En otra realizacion, mas del 50% de las nanofibras de sNAG tienen una longitud comprendida entre aproximadamente 2 y 10 pm, o ente entre aproximadamente 4 y 7 pm. En otra realizacion, al menos el 90% de las nanofibras de sNAG tienen una longitud comprendida entre aproximadamente 1 y 15 pm.

En otra realizacion, las nanofibras de sNAG se produjeron por irradiacion de poli-N-acetilglucosamina, y (i) la poli-N-acetilglucosamina se irradio en forma de fibras secas a 500-2000 kgy, preferiblemente a 750-1250 kgy; o (ii) la poli-N-acetilglucosamina se irradio en forma de fibras humedas a 100-500 kgy, preferiblemente a 150-250 kgy. En otra realizacion, la radiacion es radiacion gamma.

En otra realizacion, la microestructura de las fibras de poli-N-acetilglucosamina no se altera por la irradiacion utilizada para reducir su longitud. En otra realizacion, las nanofibras de sNAG irradiadas tienen la estructura qmmica y ffsica de las fibras de poli-N-acetilglucosamina determinada por el espectro infrarrojo (IR), analisis elemental y analisis microscopico electronico de barrido (SEM).

En otra realizacion, las nanofibras de sNAG se produjeron a partir de poli-N-acetilglucosamina de microalgas.

En otra realizacion, mas del 90% de los monosacaridos de las nanofibras de sNAG son monosacaridos de poli-N-acetilglucosamina. En una realizacion mas, mas del 95% de los monosacaridos de las nanofibras de sNAG son monosacaridos de poli-N-acetilglucosamina.

En otra realizacion, las nanofibras de sNAG no son reactivas cuando se prueban en una prueba de elucion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea y/o una prueba general.

En otra realizacion, las nanofibras de sNAG aumentan el mdice metabolico de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo MTT y/o no rescatan la apoptosis de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en una prueba de exclusion con azul de tripano.

En otra realizacion, la composicion no se administra junto con otro tratamiento.

En la presente memoria se describen metodos para evitar y/o tratar infecciones y/o enfermedades para las que puede ser beneficioso un aumento en la produccion y/o secrecion de defensina, que comprende administrar al sujeto una composicion que comprende fibras acortadas de poli p-1 ^ 4-N-acetilglucosamina y/o derivados de la misma (mencionados en la presente memoria como "nanofibras de sNAG"). Los ejemplos de dichas infecciones y/o enfermedades incluyen, entre otros, canceres de tumores solidos, cancer de piel, infecciones vmcas, infecciones por levadura, infecciones por hongos, enfermedades inflamatorias del intestino, enfermedad de Crohn, dermatitis y psoriasis.

En un caso, en la presente memoria se describe un metodo para tratar una infeccion vmca en un sujeto, que comprende administrar una composicion que comprende nanofibras de sNAG a un sujeto que ha sido (p. ej., diagnosticado de) una infeccion vmca (p. ej., una infeccion por VHS). En otro caso, descrito en la presente memoria es un metodo para evitar una enfermedad vmca en un ser humano, que comprende administrar una composicion que comprende nanofibras de sNAG a un sujeto en situacion de riesgo de desarrollar una enfermedad vmca (p. ej., un smtoma de una infeccion por VHS, como un herpes labial o una lesion). En un caso espedfico, la composicion de nanofibra de sNAG se administra por via topica al sujeto (p. ej., a la piel o a la membrana mucosa). En casos espedficos, el paciente es un ser humano.

En otro caso, en la presente memoria se describe un metodo para tratar un tumor solido en un sujeto, que comprende administrar una composicion que comprende nanofibras de sNAG a un sujeto diagnosticado con un tumor solido. En un caso espedfico, todo o parte del tumor solido se ha extirpado del sujeto (p. ej., extirpado quirurgicamente) y las nanofibras de sNAG se administran en la zona del tumor solido antes, durante y/o despues de la extirpacion de todo o parte del tumor solido. En casos espedficos, el sujeto es un ser humano.

En otro caso, en la presente memoria se describe un metodo para tratar un cancer de piel en un sujeto, que comprende administrar por via topica una composicion que comprende nanofibras de sNAG a un paciente humano diagnosticado con un cancer de piel. En un caso espedfico, la totalidad o parte del cancer de piel se ha extirpado del paciente (p. ej., extirpado quirurgicamente) y las nanofibras de sNAG se administran en la zona del cancer de piel antes, durante y/o despues de la eliminacion de la totalidad o parte del cancer de piel. En casos espedficos, el sujeto es un ser humano.

En otro caso, en la presente memoria se proporciona un metodo para tratar la enfermedad inflamatoria intestinal en un sujeto, que comprende administrar una composicion que comprende nanofibras de sNAG a un sujeto con enfermedad inflamatoria intestinal (p. ej., diagnosticado con enfermedad inflamatoria intestinal). En un caso espedfico, en la presente memoria se describe un metodo para tratar la enfermedad de Crohn en un sujeto, que comprende administrar una composicion que comprende nanofibras de sNAG a un sujeto con enfermedad de Crohn (p. ej., un sujeto diagnosticado con la enfermedad de Crohn). En un caso espedfico, la composicion de nanofibras de sNAG se administra por via topica al sujeto (p. ej., por via rectal mediante un supositorio). En casos espedficos, el sujeto es un ser humano.

Las nanofibras de sNAG contempladas en los metodos descritos en la presente memoria pueden ser de longitudes, anchuras y pesos moleculares variables, como se describe en en el apartado 5.1, mas adelante. En determinadas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos o mas del 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 99%) de las nanofibras de sNAG, o el 100% de las nanofibras de sNAG, estan comprendidas entre alrededor de 1 a 15 pm de longitud. En algunas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos o mas del 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 99%) de las nanofibras de snAg , o el 100% de las nanofibras de sNAG, estan comprendidas entre alrededor de 2 a 10 pm, 4 a 7 pm, 4 a 10 pm, o 5 a 10 pm en longitud. Las nanofibras de sNAG de la longitud descrita se pueden obtener, por ejemplo, como se describe a continuacion en el apartado 5.2, mas adelante.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG se produjeron por irradiacion, por ejemplo, radiacion gamma, de poli-N-acetilglucosamina o uno de sus derivados. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG se producen por irradiacion de la poli-p-1^4-N-acetilglucosamina en forma de fibras secas (p. ej., a 500-2000 kgy), o irradiacion de la poli- p-1^4-N- acetilglucosamina en forma de fibras humedas (p. ej., a 100-500 kgy).

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG proceden de microalgas. En otra realizacion, las nanofibras de sNAG no proceden de crustaceos. En otra realizacion mas, las nanofibras de sNAG pueden proceder de microalgas, crustaceos (p. ej., gambas), hongos o de cualquier otro origen.

En una realizacion, las nanofibras de sNAG comprenden monosacaridos de N-acetilglucosamina y monosacaridos de glucosamina, en los que mas del 70%, 80%, 90%, 95% o 99% de los monosacaridos de las nanofibras de sNAG son monosacaridos de N-acetilglucosamina. En otra realizacion, las nanofibras de sNAG comprenden monosacaridos de N-acetilglucosamina y monosacaridos de glucosamina, en donde mas del 70% de los monosacaridos de las nanofibras de sNAG son monosacaridos de N-acetilglucosamina.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria no son reactivas en una prueba o pruebas de biocompatibilidad. Por ejemplo, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria pueden no ser reactivas cuando se analizan en una prueba de elucion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea o una prueba general. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria no son reactivas cuando se prueban en una prueba de elucion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea o una prueba general. En otras realizaciones, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria tienen un grado 0 o un grado 1 cuando se prueban en una prueba de elucion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea o una prueba general. En otra realizacion mas, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria son, como mmimo, ligeramente reactivas cuando se prueban en una prueba de elucion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea o una prueba general. En una realizacion, las nanofibras de sNAG o las composiciones que comprenden dichas nanofibras no son reactivas segun se determina por una prueba de implantacion intramuscular. En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria no producen una reaccion alergenica o una irritacion, p. ej., en la zona de aplicacion. En otras realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria producen a lo sumo una reaccion alergenica leve o una irritacion leve, p. ej., en la zona de aplicacion.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria aumentan el mdice metabolico de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo del MTT y/o no rescatan la apoptosis de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en una prueba de exclusion con azul de tripano. En algunas formas de realizacion, las nanofibras de sNAG aumentan el mdice metabolico de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo del MTT y no rescatan la apoptosis de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo de exclusion con azul de tripano.

Los modos de administracion contemplados de las composiciones descritas en la presente memoria son topicos, p. ej., topicos sobre la piel; topico en la zona de una herida, una intervencion quirurgica, una infeccion vrnca, una infeccion por hongos o un smtoma de una infeccion (p. ej., una inflamacion, una ampolla, una erupcion, una lesion); y topica para una superficie del cuerpo, como la piel, las membranas mucosas (p. ej., la vagina, el ano, la garganta, los ojos, las orejas) o la superficie de otros tejidos. En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG o composiciones que comprenden dichas nanofibras se formulan como un vendaje, una venda, una almohadilla, un aerosol, un lfquido, una suspension (p. ej., una suspension espesa), una membrana, un polvo, una pomada, una crema, una pasta, un supositorio o un gel. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o las composiciones que comprenden dichas nanofibras se formulan como una suspension, una crema, una solucion lfquida, un gel, una pomada, una membrana, un polvo, un aerosol o un supositorio. En una realizacion, las nanofibras de sNAG o las composiciones que comprenden dichas nanofibras se formulan como una suspension (p. ej., una suspension espesa). En casos espedficos, las composiciones que comprenden las nanofibras de sNAG no son solidas o formadoras de barrera.

En la presente memoria se proporcionan composiciones para su uso en los metodos descritos en la presente memoria. Las composiciones de la invencion comprenden nanofibras de sNAG. En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria comprenden nanofibras de sNAG y uno o mas principios activos adicionales utiles para evitar y/o tratar canceres de tumores solidos, cancer de piel, infecciones vmcas, enfermedades vmcas, infecciones por levaduras, infecciones fungicas, enfermedades fungicas, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, dermatitis y psoriasis. En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria no comprenden ningun agente antibacteriano adicional (p. ej., un antibiotico). Las composiciones de la invencion comprenden las nanofibras de sNAG como unico principio activo y no comprenden ningun principio activo mas.

En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran junto con uno o mas tratamientos adicionales. En otras realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria no se administran junto con ningun otro tratamiento.

En el contexto de la invencion, las referencias a los metodos de tratamiento y a los metodos de prevencion deben entenderse como referencias a los compuestos y composiciones de la invencion para su uso en dichos metodos definidos a continuacion. Por consiguiente, los aspectos y realizaciones relativos a los metodos deben entenderse como relativos a un compuesto o composicion para su uso en el sentido anterior.

3.1 Terminologfa

Como se emplea en la presente memoria, los terminos "nanofibra de sNAG", "sNAG", "Taliderm" o "Talymed" (anteriormente conocido como "Taliderm") se usan indistintamente para referirse a fibras acortadas de poli-N-acetilglucosamina. Las nanofibras de sNAG pueden consistir completamente en fibras acortadas de poli-Nacetilglucosamina. Taliderm o Talymed son ejemplos de nanofibras de sNAG que son membranas que consisten completamente en fibras acortadas de poli-N-acetilglucosamina.

Como se emplea en la presente memoria, el termino "aproximadamente" significa un intervalo alrededor de un valor dado en el que el valor resultante es el mismo o sustancialmente el mismo (p. ej., dentro del 10%, 5% o 1%) como el valor expresado expresamente. En un caso, "aproximadamente" significa dentro del 10% de un valor o intervalo dado. En otro caso, el termino "aproximadamente" significa dentro del 5% de un valor o intervalo dado. En otro caso, el termino "aproximadamente" significa dentro del 1% de un valor o intervalo dado.

Como se emplea en la presente memoria, los terminos "enfermedad" y "trastorno" se usan indistintamente para referirse a una afeccion en un sujeto. Ejemplos de enfermedades/trastornos que pueden tratarse o prevenirse de acuerdo con los metodos descritos en la presente memoria incluyen, sin limitacion, canceres de tumores solidos, canceres de piel, enfermedades vmcas, enfermedades por levaduras, enfermedades por hongos, enfermedades inflamatorias del intestino y enfermedad de Crohn, psoriasis y dermatitis. En el contexto de las enfermedades vmcas, las enfermedades por levaduras y las enfermedades por hongos, la enfermedad es el estado patologico resultante de la infeccion por un virus, una levadura o un hongo, respectivamente.

Como se emplea en la presente memoria, el termino "infeccion" significa la invasion por, multiplicacion y/o presencia de un patogeno (p. ej., un virus, levadura u hongo) en una celula o un sujeto.

Como se emplea en la presente memoria, el termino numerico "log" se refiere a log-io.

Como se emplea en la presente memoria, el termino "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente para referirse a un animal (p. ej., vaca, caballo, oveja, cerdo, pollo, pavo, codorniz, gato, perro, raton, rata, conejo, cobaya, etc.). En algunos casos, el sujeto es un mairnfero tal como un no primate y un primate (p. ej., mono y ser humano). En casos espedficos, el sujeto es un ser humano.

Como se emplea en la presente memoria, el termino "cantidad eficaz" en el contexto de la administracion de una nanofibra de sNAG o una de sus composiciones a un sujeto se refiere a la cantidad de una nanofibra de sNAG o una de sus composiciones que da como resultado un efecto beneficioso o terapeutico. Una "cantidad eficaz" de una nanofibra de sNAG o una de sus composiciones se refiere a una cantidad de una nanofibra de sNAG o una de sus composiciones que sea suficiente para conseguir al menos uno, dos, tres, cuatro o mas de los siguientes efectos: (i) reduccion o mejora de la gravedad de una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos o un smtoma relacionado con el mismo; (ii) reduccion de la duracion de una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos o un smtoma relacionado con el mismo; (iii) prevencion de la evolucion de una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos o un smtoma relacionado con el mismo; (iv) regresion de una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos o un smtoma relacionado con el mismo; (v) prevencion del desarrollo o aparicion de una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos o un smtoma relacionado con la misma; (vi) la prevencion de la recafda de una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos o un smtoma relacionado con la misma; (vii) prevencion o reduccion de la propagacion de una enfermedad del sujeto o la poblacion de sujetos a otro sujeto o poblacion de sujetos; (viii) reduccion en la insuficiencia organica relacionada con una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos; (ix) reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del sujeto o la poblacion de sujetos; (x) reduccion de la duracion de la hospitalizacion del sujeto o de la poblacion de sujetos; (xi) un aumento de la supervivencia del sujeto o poblacion de sujetos; (xii) eliminacion de una enfermedad en el sujeto o poblacion de sujetos; (xiii) aumento o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente o la poblacion de sujetos; (xiv) prevencion de la propagacion de un patogeno en una celula, tejido, organo del sujeto a otra celula, tejido, organo del sujeto; (xv) reduccion del numero de smtomas de una enfermedad en el sujeto o la poblacion de sujetos; (xvi) la eliminacion de una infeccion con un patogeno (p. ej., un virus, un hongo o una levadura); (xvii) la erradicacion de uno o mas smtomas relacionados con una infeccion; (xviii) la reduccion del tiempo requerido para eliminar una infeccion; (xix) la reduccion del tiempo requerido para eliminar una infeccion; (xx) la reduccion o la mejora de la gravedad de una infeccion y/o uno o mas smtomas relacionados con la misma; (xxi) la prevencion de la recafda de una infeccion y/o uno o mas smtomas relacionados con ella; (xxii) la reduccion o eliminacion de un patogeno medido, p. ej., por recuento vmco; (xxiii) la reduccion o eliminacion en la propagacion de un patogeno de un sujeto a otro sujeto, o de un organo o tejido a otro organo o tejido; (xxiv) la prevencion de un aumento en el numero de patogenos medido, p. ej., por recuento vmco; (xxv) la prevencion del desarrollo o aparicion de una infeccion o uno o mas smtomas relacionados con la misma; (xxvi) la reduccion en el numero de smtomas relacionados con una infeccion; (xxvii) la estabilizacion o reduccion de la inflamacion relacionada con una infeccion; (xxviii) la induccion de la expresion de una o mas protemas defensinas y/o protemas del tipo defensina; (xxix) la induccion de la expresion de uno o mas receptores tipo Toll; (xxx) la induccion de la expresion de una o mas protemas que son beneficiosas para la eliminacion o reduccion de una infeccion por patogenos o uno o mas smtomas relacionados con la misma; (xxxi) la reduccion de la insuficiencia organica relacionada con una infeccion por patogenos o una enfermedad relacionada con ella; (xxxii) la prevencion de la aparicion, el desarrollo o la recafda de una afeccion producida o relacionada con una infeccion por patogenos; (xxxiii) la reduccion de la mortalidad; (xxxiv) la inhibicion de la evolucion de un cancer y/o uno o mas smtomas relacionados con el mismo; (xxxv) una reduccion o eliminacion en la poblacion de celulas cancerosas; (xxxvi) una reduccion en el crecimiento de un tumor o neoplasia; (xxxvii) una disminucion en el tamano del tumor (p. ej., de volumen o diametro); (xxxvii) una reduccion en la formacion de un tumor recien formado; (xxxviii) erradicacion, extirpacion o control del cancer primario, regional y/o metastasico; (xxxix) una disminucion en el numero o tamano de las metastasis; (xxxx) un aumento en el mdice de supervivencia sin tumores de los pacientes; (xxxxi) un aumento en la supervivencia sin recafda; (xxxxii) un aumento en el numero de pacientes en remision; (xxxxiii) el tamano de un tumor se mantiene y no aumenta o aumenta en menos del aumento de un tumor despues de la administracion de un tratamiento convencional segun se mide por metodos convencionales disponibles para un experto en la tecnica, como la evaluacion de las concentraciones de PSA, examen rectal digital, ecograffa (p. ej., ecograffa transrectal), gammagraffa osea, tomograffa computarizada (TC), resonancia magnetica nuclear (RMN), RMN con contraste dinamico (DCE-RMN), o tomograffa por emision de positrones (PET); (xxxxiv) un aumento en la duracion de la remision en los pacientes; (xxxxv) un aumento en la supervivencia sin smtomas de pacientes con cancer; (xxxxvi) estabilizacion o reduccion de un tumor o inflamacion peritumoral o edema; (xxxxvii) inhibicion o disminucion del metabolismo o perfusion del tumor; y/o (xxxiii) mejora en la calidad de vida segun lo evaluado por metodos bien conocidos en la tecnica, p. ej., un cuestionario. En casos espedficos, una "cantidad eficaz" de una nanofibra de sNAG se refiere a una cantidad de una composicion de nanofibras de sNAG especificada en la presente memoria, p. ej., en en el apartado 5.6, mas adelante.

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "lactante prematuro humano" se refiere a un lactante humano nacido a menos de 37 semanas de edad de gestacion.

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "lactante humano" se refiere a un ser humano de recien nacido a 1 ano de edad.

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "lactante humano prematuro" se refiere ser humano desde recien nacido hasta un de 1 ano de edad que nacio con menos de 37 semanas de edad de gestacion (p. ej., antes de 37 semanas, 36 semanas, 35 semanas, 34 semanas, 33 semanas, 32 semanas, 31 semanas, 30 semanas, 29 semanas, 28 semanas o menos de 28 semanas de embarazo).

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "criatura humana" se refiere a un ser humano que tiene de 1 ano a 3 anos de edad.

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "nino humano" se refiere a un ser humano que tiene de 1 ano a 18 anos de edad.

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "adulto humano" se refiere a un ser humano que tiene 18 anos o mas.

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "humano anciano" se refiere a un ser humano de 65 anos o mas.

Como se emplea en la presente memoria, la expresion "expresion baja ", en el contexto de la expresion de un gen (p. ej., basado en el nivel de protema o peptido producido por el gen) se refiere a una expresion que es menor que la expresion "normal" expresion del gen. En un caso espedfico, "expresion baja" se refiere a la expresion de un gen que es menos del 99%, menos del 95%, menos del 90%, menos del 85%, menos del 75%, menos del 70%, menos del 65% %, menos del 60%, menos del 55%, menos del 50%, menos del 45%, menos del 40%, menos del 35%, menos del 30%, menos del 25% o menos del 20% de la expresion "normal" del gen. En otro caso espedfico, "expresion baja" se refiere a la expresion de un gen que es aproximadamente 20 veces, aproximadamente 15 veces, aproximadamente 10 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 2 veces, o alrededor de 1.5 veces menos que la expresion "normal" del gen.

Como se emplea en la presente memoria, el termino "mayona" se refiere a mas del 50%, incluidos, p. ej., 50.5%, 51%, 55%, etc. Como se emplea en la presente memoria, los terminos "tratamientos" y "tratamiento" pueden referirse a cualquier protocolo(s), metodo(s), composiciones, formulaciones y/o agente(s) que se pueden usar en la prevencion y/o o el tratamiento de una infeccion con un patogeno o una enfermedad o uno de sus smtomas, o una enfermedad descrita en la presente memoria (como la enfermedad de Crohn, la enfermedad inflamatoria intestinal, la psoriasis, la dermatitis y el tumor solido). Un patogeno puede ser un virus, un hongo o una levadura. En determinados casos, los terminos "tratamientos" y "tratamiento" se refieren a tratamiento farmacologico, tratamiento adyuvante, radiacion, intervencion quirurgica, bioterapia, tratamiento complementario y/u otras terapias utiles en el tratamiento y/o prevencion de una infeccion con un patogeno o una enfermedad, o uno de sus smtomas, o una enfermedad descrita en la presente memoria. En determinados casos, el termino "tratamiento" se refiere a un tratamiento que no sea con una nanofibra de sNAG o una de sus composiciones farmaceuticas. En casos espedficos, un "tratamiento adicional" y "tratamientos adicionales" se refieren a una terapia diferente de un tratamiento que utiliza una nanofibra de sNAG o una de sus composiciones farmaceuticas. En un caso espedfico, una terapia incluye el uso de una nanofibra de sNAG como una terapia adyuvante. Por ejemplo, usando una nanofibra de sNAG junto con un tratamiento farmacologico, bioterapia, intervencion quirurgica y/o tratamiento complementario.

4. Breve descripcion de las figuras

Figura 1. Las nanofibras estimulan la activacion de Akt1, un regulador aguas arriba de Ets1. (A) Analisis de transferencia Western de fosfo-Akt en respuesta a la estimulacion con NAG y sNAG de las CE sin suero. (B) Analisis de RT-PCR de CE infectadas con referencia aleatorizada ("SCR") o lentivirus de ARNt Akt1 y se evaluo la expresion de Ets1 y S26 como control de carga. (C) Esquema de una via de transduccion de senales que transduce una senal desde las nanofibras de sNAG a Akt1, Ets1 y Defensinas.

Figura 2. La curacion ta ^ a de heridas en animales con Akt1 geneticamente modificados se rescata parcialmente mediante el tratamiento con Taliderm. (A) Imagenes representativas de ratones con WT y AKT1 heridos, geneticamente modificados con y sin tratamiento de Taliderm. (B) Tincion con hematoxilina-eosina de cortes representativas de la piel del raton de las heridas del dfa 3.

Figura 3. Las nanofibras de sNAG estimulan la expresion de citoquinas y defensinas en celulas endoteliales primarias. (A) Inmunohistoqmmica de CE tratada con o sin sNAG usando un anticuerpo dirigido contra adefensina. (B) ELISA que muestra que el tratamiento con nanofibras de la CE da como resultado la secrecion de adefensinas 1-3 (privadas de suero, tratadas con 5 pg/ml o 10 pg/ml de sNAG).

Figura 4. Las nanofibras de sNAG estimulan la expresion de defensina en celulas endoteliales primarias en funcion de Akt1. (A) y (B) Analisis cuantitativos por RT-PCR de CE privadas de suero ("ss") tratadas con o sin sNAG ("snag"), con o sin PD98059 (inhibidor de MAPK, "PD"), Wortmannin (inhibidor de P13K, "wtm") o infectado con un control aleatorizado ("SCR"), o Akt1 ("AKT1") lentivirus de shARN y se evaluo la expresion de los genes indicados. Figura 5. Las nanofibras de sNAG estimulan la expresion de p-defensina 3 en queratinocitos de raton. (A) Tincion inmunofluorescente con p-defensina 3 (visible como tincion brillante en el cuadro superior derecho; vease, p. ej., flechas blancas gruesas) y anticuerpos Involucrina de cortes de heridas cutaneas de ratones incluidos en parafina de animales WT y Akt1 geneticamente modificados el dfa 3. (B) Cuantificacion de la tincion inmunofluorescente de pdefensina 3 utilizando el programa informatico NIHImageJ (TX = Taliderm; Akt1 = Akt1 nulo). (C) Tincion inmunofluorescente de queratinocitos tratados con WT y Akt1 y geneticamente modificados y sin tratar con p-Defensin 3 (visible como tincion brillante; vease, p. ej., flechas blancas gruesas) y TOPRO-3 (tincion de nucleos; vease, p. ej., flechas blancas delgadas). Observese el aumento en la tincion de p-Defensina 3 en las heridas tratadas con WT y Akt1 Taliderm.

Figura 6. Puntos de union del factor de transcripcion dependiente de Akt1. Esquema de los puntos de union del factor de transcripcion dependiente de Akt1. Usando el programa informatico Genomatix, se analizaron 500 pb aguas arriba del punto de inicio de la transcripcion para los puntos conservados en el ARNm de DEF1, 4 y 5 (ETS-ovalos negros; FKHD-ovalos de rayas; CREB-ovalos blancos; NFKB-ovalos a cuadros).

Figura 7. El tratamiento con sNAG da como resultado la expresion y secrecion de defensinas in vitro.

(A) Analisis RT-PCR de celulas endoteliales primarias sin suero ("SS") tratadas con sNAG (50 pg/ml) durante los tiempos indicados y evaluados para la expresion de p-defensina 3 y a-defensina 1.

(B) Marcaje inmunofluorescente de celulas endoteliales ya sea sin suero (sin tratar) o tratadas con nanofibras de sNAG (10 pg/ml durante 5 h). Los anticuerpos se dirigen contra a-defensina 5 (FITC, cuadro superior izquierdo), pdefensina 3 (Texas Red, cuadro superior derecho). Los nucleos estan tenidos con TOPRO-3 (azul, cuadro inferior izquierdo). El cuadro inferior derecho representa una superposicion triple. (C) Marcaje inmunofluorescente de queratinocitos (HaCat) que estan sin suero (sin tratar) o tratados con nanofibras de sNAG (10 pg/ml durante 5 horas). Los anticuerpos se dirigen contra a-defensina 5 (FITC, cuadro superior izquierdo), p-defensina 3 (Texas Red, cuadro superior derecho). Los nucleos se tinen con TOPRO-3 (azul, cuadro inferior izquierdo).

Figura 8. La expresion de defensina inducida por sNAG depende de Akt1. (A) Analisis cuantitativos por RT-PCR que utilizan cebadores dirigidos contra a-defensina 1 de ARN completo aislado de celulas endoteliales sin suero tratadas con o sin sNAG durante 3 horas, con o sin tratamiento previo con PD098059 ("PD") (50 pM), wortmannin ("WTM") (100nm). La cuantificacion es con relacion a la subunidad de la protema S26. (B) Cuantificacion de la expresion de p-defensina 3 a partir de ARN completo aislado de celulas endoteliales sin suero tratadas con o sin sNAG durante 3 horas, con o sin PD98059 (50pm), wortmanina (100 nm) y mostradas como relativas a S26. (C) Analisis de transferencia Western de fosfo-Akt en celulas endoteliales (SS) sin suero estimuladas con sNAG durante los tiempos indicados. La lmea indica donde se han eliminado los carriles (D) Analisis cuantitativos por RT-PCR de las celulas endoteliales sin suero infectadas con un control aleatorizado (SCR) o lentivirus Akt1 shARN, tratados con o sin sNAG y evaluados para la expresion de a-defensina 4. La cuantificacion se muestra en relacion con S26. (E) Cuantificacion de la expresion de p-defensina 3 a partir de ARN completo aislado de celulas endoteliales sin suero infectadas con un control aleatorizado (SCR) o lentivirus Akt1 shARN, tratadas con o sin sNAG. La cuantificacion se muestra en relacion con S26. Todos los experimentos se realizaron al menos por triplicado y se repitieron al menos tres veces independientes y se muestran los valores de p.

Figura 9. La expresion de defensina inducida por sNAG in vivo requiere Akt1. (A) apartados incluidas en parafina de heridas cutaneas recogidas el dfa 3 despues de la herida tanto de ratones con WT (n = 3) como de Akt1. Las heridas no se trataron o se trataron con membrana de sNAG. La inmunofluorescencia se realizo utilizando anticuerpos dirigidos contra la p-defensina 3 (verde, visible como tincion brillante en el cuadro superior derecho; vease, p. ej., flechas blancas gruesas), Involucrin (rojo) y Topro (azul, tincion de nucleos; vease, p. ej., flechas finas blancas). (B) corte incluido en parafina de WT tratado con sNAG recogida el dfa 3. La inmunofluorescencia se realizo usando anticuerpos dirigidos contra p-defensina 3 (verde, visible como tincion brillante; vease, p. ej., flechas blancas gruesas), Involucrin (Rojo), y Topro (azul, tincion de nucleos; vease, por ejemplo, flechas blancas delgadas). Este aumento inferior (20*) se incluye para ilustrar mejor las capas epidermicas que expresan p-defensina 3. Barras de escala = 50 pm. (C) La cuantificacion de la expresion de p-defensina 3 de los cortes incluidos en parafina se realizo utilizando el programa informatico NIH ImageJ. Los experimented se repitieron tres veces independientes y se muestran los valores de p.

Figura 10. El tratamiento con sNAG aumenta el cierre de la herida en ratones naturales. Tincion con hematoxilinaeosina de cortes de tejido de la herida procedentes de animales naturales C57B16 sin tratar o tratados con membrana de sNAG. El dfa posterior a la herida se indica a la izquierda de cada cuadro. La lmea negra continua sigue la capa celular de queratinocitos que indica el cierre de la herida. Las flechas negras indican el borde del lecho de la herida.

Figura 11. El tratamiento con sNAG reduce la infeccion bacteriana en funcion de Akt1. (A) Tincion de Gram en tejido de heridas infectadas con S. aureus de ratones con WT. Se hirieron ratones con WT utilizando un sacabocados de biopsia de 4 mm. Inmediatamente despues de herir los ratones se inocularon con 1 x 109cfu/ml. 30 minutos despues de la infeccion, los ratones del grupo tratado se trataron con Taliderm. Se tomaron muestras de piel 5 dfas despues del tratamiento y se cortaron para el analisis. Se realizo la tincion de gram del tejido. La tincion purpura oscura indica bacterias gram-positivas y neutrofilos que tienen bacterias envueltas. Se muestran los cortes de 20* y 40* aumentos. (B) Tincion de Gram en tejidos de heridas infectadas con S. aureus incluidas en parafina de ratones con WT y Akt1 geneticamente modificados (n = 3). Las heridas infectadas no se trataron o se trataron con membrana de sNAG y los lechos de la herida se recogieron el dfa 3 y el dfa 5 para su analisis. La tincion purpura oscura indica la presencia de bacterias gram positivas en el lecho de la herida. Las flechas negras indican ejemplos de tincion gram positiva. Tener en cuenta la acumulacion de tincion positiva en WT sin tratar que falta en los animales con WT tratados con sNAG. Barras de escala = 50 pm. (C) Las UFC del dfa 5 despues de la herida se cuantificaron en heridas infectadas con S. aureus utilizando ratones con WT tanto tratados como no tratados (n = 3) y Akt1 (n = 3). Los ratones naturales que fueron tratados con sNAG presentan una disminucion significativa (p<0.01) en la carga de bacterias en los lechos de la herida en comparacion con los animales con Akt1 geneticamente modificados. Todos los experimentos se repitieron tres veces independientes y se muestran los valores de p. (D) UFC cuantificadas en heridas infectadas el dfa 3 despues de las heridas de manera similar a la descrita en (C). El tratamiento con sNAG de las heridas infectadas presenta una disminucion significativa en las UFC tanto de los animales con WT como con Akt1 geneticamente modificados el dfa 3, pero los animales con WT presentan una diferencia aproximada de 10 veces en comparacion con una diferencia de 2 veces en los animales con Akt1. (E) Cuantificacion de las UFC en cultivos de S. aureus que no se trataron o se trataron con diversas cantidades de nanofibras de sNAG. Cada experimento se realizo tres veces independientes y se muestran los valores de p. (F) Tincion de Gram de tejido de heridas infectadas con S. aureus recogidas el dfa 3 despues de la herida de ratones con WT (n = 3) que se trataron con o sin peptido p-defensina 3 (1.0 uM). A destacar la disminucion en la tincion gram positiva en heridas infectadas que fueron tratadas con peptido p-defensina 3. (G) Cuantificacion de las UFC de ratones con WT infectados con S. aureus (n = 3) tratados con o sin peptido p-defensina 3. Las heridas infectadas que fueron tratadas con peptido muestran una disminucion significativa (p <0.05) en UFC. Barras de escala = 50pm. Cada experimento se realizo tres veces independientes y se muestran los valores de p.

Figura 12. Induccion rapida de la expresion de defensina mediante el tratamiento con sNAG de heridas infectadas por S. aureus. (A) Los cortes de tejido incluidos en parafina de las heridas infectadas por S. aureus, recogidas el dfa 3, se sometieron a inmunofluorescencia utilizando anticuerpos dirigidos contra la p-defensina 3 (verde, visible como tincion brillante en el cuadro superior derecho y en el cuadro inferior en el medio; vease, p. ej., flechas blancas gruesas), Involucrina (rojo) para marcar la capa de queratinocitos, y Topro (azul, tincion de nucleos; vease, p. ej., flechas blancas finas) tanto de ratones con WT tratados con sNAG (n = 3) como de ratones con WT sin tratar (n = 3). La tincion no espedfica de queratina esta indicada por la referencia no primaria que se tino solo con el anticuerpo secundario. Barra de escala = 50pm. (B) Cuantificacion de la expresion de p-defensina 3 de los cortes incluidos en parafina utilizando el programa informatico NIH ImageJ. Las heridas infectadas con S. aureus que fueron tratadas con sNAG muestran un aumento significativo (p<0.05) en la tincion con p-defensina 3. Los experimentos se repitieron tres veces independientes y se muestran los valores de p.

Figura 13. Los anticuerpos contra p-defensina 3 impiden los efectos antibacterianos del tratamiento con sNAG. (A) Tincion de Gram en tejido de heridas infectadas con S. aureus incluidas en parafina tratadas con sNAG de ratones con WT (n = 3) que se recogieron el dfa 3. Las heridas tratadas con sNAG se trataron con anticuerpo p-defensina 3 o con anticuerpo de IgG de cabra con control de isotipo antes del tratamiento con sNAG. Las imagenes representativas muestran una mayor acumulacion de tincion gram positiva (flechas negras) en los lechos de heridas de ratones tratados con un anticuerpo dirigido contra p-defensina 3. Barra de escala = 20 pm. (B) Cuantificacion de UFC de ratones con WT infectados por S. aureus tratados con anticuerpo p-defensina 3 (n=3) o anticuerpo IgG de referencia (n=3) antes del tratamiento con sNAG. La aplicacion de p-defensina 3 aumento significativamente(p<0.05) las UFC.

Figura 14. Efecto de la irradiacion sobre la estructura qmmica y ffsica de las fibras de poli-N-acetilglucosamina ("pGlcNAc"). (A) Correlacion entre el peso molecular de pGlcNAc y el nivel de irradiacion/formulacion para la irradiacion. (B) Espectro infrarrojo (IR) de la suspension de pGlcNAc no irradiada (lmea superior), la suspension de pGIcNAc irradiada a 100 kGy (lmea de fondo) y la suspension de pGIcNAc irradiada a 200 kGy (lmea media). (C) Analisis de microscopia electronica de barrido (SEM) de pGlcNAc. (D) Analisis de microscopia electronica de barrido (SEM) de sNAG.

Figura 15. pGlcNAc no afecto el mdice metabolico. Para cada penodo de tiempo (es decir, a las 24 y 48 horas), la identidad de cada una de las cuatro barras (de izquierda a derecha) es la siguiente: sin suero (SS), VEGF y pGlcNAc (NAG) a 50 y 100 pg/ml.

Figura 16. pGlcNAc protegio la celula endotelial (CE) de la vena umbilical humana de la muerte celular inducida por la privacion de suero. Para cada penodo de tiempo (es decir, a las 24, 48 y 72 horas), la identidad de cada una de las cinco barras (de izquierda a derecha) es la siguiente: sin suero (SS), VEGF y pGlcNAc (NAG) a 50, 100, y 250 Hg/ml.

Figura 17. sNAG indujo un aumento notable en el mdice metabolico. La identidad de cada una de las cinco barras (de izquierda a derecha) es la siguiente: sin suero (SS), VEGF y sNAG a 50, 100 y 200 pg/ml.

Figura 18. sNAG no protegio las CE de la muerte celular inducida por la privacion de suero. Para cada penodo de tiempo (es decir, a las 24 y 48 horas), la identidad de cada una de las cinco barras (de izquierda a derecha) es la siguiente: sin suero (SS), VEGF y ^snA^ga 50, 100 y 200 pg/ml.

Figura 19. Escala numerica de intensidad de dolor.

Figura 20. Esquema que muestra la configuracion experimental del 3% de enfermedad inflamatoria intestinal inducida por DSS (dextrano sulfato de sodio) (en especial, colitis ulcerosa) en un modelo de raton.

Figura 21. El tratamiento con sNAG disminuyo la inflamacion en un modelo animal de enfermedad inflamatoria intestinal. (A) Tincion hematoxilina-eosina de un corte del epitelio intestinal de un grupo de referencia de 10 ratones a los que se administro DSS al 3% en agua potable durante 7 dfas (dfa 0 al dfa 7) y solucion salina en supositorio rectal el dfa 0 y el dfa 3 (100 pl). (B) Tincion hematoxilina-eosina de un corte del epitelio intestinal de un grupo de referencia de 10 ratones a los que se administro DSS al 3% en agua potable durante 7 dfas (dfa 0 al dfa 7), y sNAG en supositorio rectal los dfas 0 y 3 (100 pl en total con 12 pg/pl de sNAG). La flecha delgada y el corchete apuntan a la zona del edema, y la flecha gruesa apunta a la zona de la infiltracion leucocftica.

Figura 22. El tratamiento con sNAG disminuyo la fibrosis en un modelo animal de enfermedad inflamatoria intestinal. (A) tincion para la fibrosis de un corte del epitelio intestinal de un grupo de referencia de 10 ratones a los que se administro DSS al 3% en agua potable durante 7 dfas (del dfa 0 al dfa 7) y solucion salina enl supositorio rectal el dfa 0 y el dfa 3 (100 pl). (B) tincion para la fibrosis de un corte del epitelio intestinal de un grupo de referencia de 10 ratones a los que se administro DSS al 3% en agua potable durante 7 dfas (del dfa 0 al dfa 7), y sNAG en supositorio rectal el dfa 0 y el dfa 3 (100 pl en total con 12pg/pl de sNAG).

5. Descripcion detallada

Los inventores de la presente invencion han descubierto que las nanofibras de sNAG pueden estimular la expresion de defensinas, lo que puede estimular la respuesta inmunitaria innata. Es generalmente aceptado que las defensinas son protagonistas en la inmunidad innata. Como se demuestra en los ejemplos presentados en los apartados 6.1 y 6.2, mas adelante, los inventores de la presente invencion han descubierto que las nanofibras de sNAG pueden aumentar la expresion de las defensinas tanto de tipo a como p en celulas endoteliales y las defensinas de tipo p en queratinocitos in vitro y en un modelo de cicatrizacion de heridas in vivo.

Ademas, como se demuestra en los ejemplos presentados en los apartados 6.1 y 6.2, mas adelante, pero sin estar vinculado por ningun mecanismo espedfico de accion, Akt1 parece ser importante para la expresion de defensina dependiente de sNAG in vitro e in vivo, en un modelo de cicatrizacion de heridas.

Los inventores de esta invencion tambien han descubierto que algunos receptores de tipo Toll pueden aumentar por el tratamiento con sNAG de celulas endoteliales humanas. Los receptores tipo Toll ("TLR") son receptores muy conservados que activan la inmunidad innata. Trabajos recientes han vinculado la expresion de defensina humana a la activacion de TLR, en particular, la estimulacion de TLR puede conducir a un aumento de la smtesis de defensina. Por lo tanto, sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, las nanofibras de sNAG pueden actuar como un estimulador de inmunidad innata.

Por consiguiente, en la presente memoria se describe el uso de nanofibras de sNAG como un metodo novedoso para prevenir y/o tratar infecciones y enfermedades para las que puede ser beneficioso un aumento en la expresion y/o secrecion de una o mas de las defensinas y receptores tipo Toll. En determinadas realizaciones, el tratamiento de infecciones vmcas, por levaduras u hongos con nanofibras de sNAG disminuye el recuento de patogenos en los pacientes. En casos espedficos, el uso de nanofibras de sNAG mejora el cierre de la herida al mismo tiempo que erradica, disminuye o evita una infeccion vmca, fungica o de levadura de la herida. En otras realizaciones, las nanofibras de sNAG pueden usarse para tratar una afeccion dermatologica tal como dermatitis o psoriasis, por ejemplo, aliviando uno o mas smtomas de dichas enfermedades. Las nanofibras de sNAG pueden usarse para tratar una enfermedad inflamatoria intestinal (p. ej., la enfermedad de Crohn), por ejemplo, aliviando uno o mas smtomas de dichas enfermedades.

Los inventores han descubierto, de hecho, que las nanofibras de sNAG pueden ser eficaces para tratar infecciones vmcas. En particular, los inventores descubrieron que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar la infeccion por VHS cuando se administran por via topica a pacientes humanos. El ejemplo 8, mas adelante, demuestra que la administracion topica de nanofibras de sNAG a los herpes labiales reduce el dolor relacionado con los herpes labiales y reduce la duracion de los herpes labiales en pacientes humanos. Los herpes labiales generalmente son producidas por la infeccion por VHS-1. Por lo tanto, en la presente memoria se describen los usos de nanofibras de sNAG para tratar infecciones vmcas, en particular, infecciones vmcas topicas. En casos espedficos, en la presente memoria se describen los usos de las nanofibras de sNAG para tratar una infeccion por VHS, o para tratar y/o prevenir un smtoma relacionado con una infeccion por VHS (p. ej., un herpes o una lesion labial) mediante la administracion topica de nanofibras de sNAG a un paciente (p. ej., en la zona de la infeccion por VHS o en la zona de un smtoma de infeccion por VHS o en la zona donde se conoce que ocurre un smtoma de infeccion).

Los inventores tambien han descubierto que las nanofibras de sNAG pueden ser eficaces para tratar la enfermedad intestinal inflamatoria (EII). En particular, los inventores descubrieron que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar la EII en un modelo animal de EII cuando se administran por via rectal (como mediante un supositorio). El ejemplo 9, mas adelante, demuestra que la administracion de nanofibras de sNAG reduce la inflamacion y la fibrosis relacionada con la EII en un modelo de raton de EII. Por lo tanto, en la presente memoria se describen los usos de las nanofibras de sNAG para tratar la EII, como la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn. En casos espedficos, en la presente memoria se describen los usos de las nanofibras de sNAG para tratar la EII (p. ej., colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn) mediante la administracion topica de nanofibras de sNAG a un paciente (p. ej., al ano o por via rectal mediante un supositorio, una crema, una suspension), una solucion lfquida, un gel o una pomada).

5.1 Nanofibras de sNAG

En la presente memoria se describen composiciones de nanofibras de sNAG. Las nanofibras de sNAG comprenden fibras de poli-N-acetilglucosamina, la mayona de los cuales tienen una longitud inferior a 30 micras y una longitud de al menos 1 micra, medida por cualquier metodo conocido por un experto en la materia, por ejemplo, por microscopia electronica de barrido ("SEM"). Dichas nanofibras de sNAG pueden obtenerse, por ejemplo, como se describe en la presente memoria.

En determinados casos, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen menos de aproximadamente 30, 25, 20, 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 o 3 micras de longitud, y una longitud de al menos 1 micra, medida por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM. En casos espedficos, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9%, o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95%, o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen menos de aproximadamente 15 micras o menos de aproximadamente 12 micras de longitud, y una longitud de al menos 1 micra, medida por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM. En casos espedficos, todas (100%) las nanofibras de sNAG tienen menos de aproximadamente 15 micras o menos de aproximadamente 10 micras de longitud, y una longitud de al menos 1 micra, medidas por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM. En determinadas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9%, o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95%, o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen una longitud igual o inferior a 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 o 7 micras, y una longitud de al menos 1 micra, medidas por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM. En algunas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9%, o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95%, o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG estan comprendidas entre 1 a 15, 2 a 15, 2 a 14, 1 a 12, 2 a 12, 1 a 10, 2 a 10, 3 a 12, 3 a 10, 4 a 12, 4 a 10, 5 a 12, 5 a 10, 1 a 9, 2 a 9, 3 a 9, 1 a 8, 2 a 8, 3 a 8, 4 a 8, 1 a 7, 2 a 7, 3 a 7, 4 a 7, 1 a 6, 1 a 5, 1 a 4 o 1 a 3, medidas por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM.

En un caso espedfico, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen aproximadamente 8, 7, 6, 5, 4, 3 o 2 micras de pulgada de longitud medida por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM. En otra caso espedfico, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG estan comprendidas entre aproximadamente 2 y aproximadamente 10 micras, aproximadamente 3 a aproximadamente 8 micras, aproximadamente 4 a aproximadamente 7 micras, aproximadamente 4 a aproximadamente 10 micras, o de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 micras de longitud, medidas por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM. En otro caso espedfico, todas (100%) las nanofibras de sNAG estan comprendidas entre aproximadamente 2 y aproximadamente 10 micras, aproximadamente 3 a aproximadamente 8 micras, aproximadamente 4 a aproximadamente 7 micras, aproximadamente 4 a aproximadamente 10 micras o aproximadamente 5 a aproximadamente 10 micras de longitud medidas por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, por ejemplo, por SEM.

En determinadas realizaciones, las fibras de nanofibras de sNAG estan comprendidas en un intervalo entre 0.005 y 5 micras de espesor y/o diametro, determinado por microscopia electronica. En casos espedficos, las nanofibras de sNAG son aproximadamente 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.25, 0.3, 0.35, 0.4, 0.45, 0.5, 0.55, 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.2, 2.4, 2.6, 2.8, 3 o 4 micras de espesor y/o diametro en promedio, o cualquier intervalo entre (p. ej., 0.02 a 2 micras, 0.02 a 1 micras, 0.02 a 0.75 micras, 0.02 a 0.5 micras, 0.02 a 0.5 micras, 0.05 a 1 micras, 0.05 a 0.75 micras, 0.05 a 0.5 micras, 0.1 a 1 micras, 0.1 a 0.75 micras, 0.1 a 0.5 micras, etc.). En casos espedficos, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95%, o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen un grosor o diametro de aproximadamente 0.02 a 1 micras. En otras casos espedficos, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95%, o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen un grosor o diametro de aproximadamente 0.05 a 0.5 micras. En casos espedficos, todas (100%) las nanofibras de sNAG tienen un grosor o diametro de aproximadamente 0.02 a 1 micras o aproximadamente de 0.05 a 0.5 micras. En determinadas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100% o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95%, o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen un grosor o diametro de aproximadamente 0.02 a 2 micras, 0.02 a 1 micra, 0.02 a 0.75 micras, 0.02 a 0.5 micras, 0.02 a 0.5 micras, 0.05 a 1 micra, 0.05 a 0.75 micras, 0.05 a 0.5 micras, 0.1, a 1 micras, 0.1 a 0.75 micras o 0.1 a 0.5 micras.

En determinadas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre el 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99 %) de las nanofibras de sNAG estan comprendidas entre 1 y 15 micras, o entre (o en el intervalo de) 1 a 10 micras, 2 a 10 micras, 3 a 10 micras, 4 a 10 micras, 4 a 7 micras, 5 a 10 micras o 5 a 15 micras de longitud y tienen un grosor o diametro de aproximadamente 0.02 a 1 micras.

En determinadas realizaciones, el peso molecular de las nanofibras de sNAG es menor que 100 kDa, 90 kDa, 80 kDa, 75 kDa, 70 kDa, 65 kDa, 60 kDa, 55 kDa, 50 kDa, 45 kDA, 40 kDa, 35 kDa, 30 kDa o 25ka. En determinadas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre el 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95%, o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen un peso molecular inferior a 100 kDa, 90 kDa, 80 kDa, 75 kDa, 70 kDa, 65 kDa, 60 kDa, 55 kDa, 50 kDa, 45 kDA, 40 kDa, 35 kDa, 30 kDa o 25 kDa. En otras realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre el 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen un peso molecular comprendido entre aproximadamente 5kDa y 100 kDa, aproximadamente 10 kDa y 100 kDa, aproximadamente 20 kDa y 100 kDa, aproximadamente 10 kDa y 80 kDa, aproximadamente 20 kDa y 80 kDa, 20 kDa y 75 kDa, aproximadamente 25 kDa y aproximadamente 75 kDa, aproximadamente 30 kDa y aproximadamente 80 kDa, aproximadamente 30 kDa y aproximadamente 75 kDa, aproximadamente 40 kda y aproximadamente 80 kDa, aproximadamente 40 kDa y aproximadamente 75 kDa, aproximadamente 40 kDa y aproximadamente 70 kDa, aproximadamente 50 kDa y aproximadamente 70 kDa o aproximadamente 55 kDa a aproximadamente 65 kDa. En una realizacion, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre el 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99%) de las nanofibras de sNAG tienen un peso molecular de aproximadamente 60 kDa.

En determinadas realizaciones, del 1% al 5%, del 5% al 10%, del 5% al 15%, del 20% al 30% o del 25% al 30% de las nanofibras de sNAG estan desacetiladas. En algunas realizaciones, el 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% o 30% de las nanofibras de sNAG estan desacetiladas. En otras realizaciones, menos del 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% o 1% de las nanofibras de sNAG estan desacetiladas. En algunos casos, el o mas del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 99%, o la totalidad (100%) de las nanofibras de sNAG estan desacetiladas. En otros casos, menos del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% o 100% de las nanofibras de sNAG estan desacetiladas.

En determinadas realizaciones, 70% a 80%, 75% a 80%, 75% a 85%, 85% a 95%, 90% a 95%, 90% a 99% o 95% a 100% de las nanofibras de sNAG estan acetiladas. En algunas realizaciones, el 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% o 100% de las nanofibras de sNAG estan acetiladas. En otras realizaciones, mas del 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 99.5% o 99.9% de las nanofibras de sNAG estan acetiladas. En algunos casos, el o mas del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% o 99%, o la totalidad (100%) de las nanofibras de sNAG estan acetiladas. En otros casos, menos del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% o 100% de las nanofibras de sNAG estan acetiladas.

En algunas realizaciones, la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% o 100%) de las nanofibras de sNAG estan comprendidas entre (o en el intervalo de) 2 a 12 micras, 2 a 10 micras, 4 a 15 micras, 4 a 10 micras, 5 a 15 micras o 5 a 10 micras, y dichas nanofibras de sNAG estan al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% o 100% acetiladas.

En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG comprenden al menos un monosacarido de glucosamina, y pueden comprender ademas al menos el 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 99% de los monosacaridos de N-acetilglucosamina. En otros casos, las nanofibras de sNAG comprenden al menos un monosacarido de N-acetilglucosamina, y pueden comprender ademas al menos el 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 99% de los monosacaridos de glucosamina.

En un aspecto, las nanofibras de sNAG aumentan el mdice metabolico de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humanas ("CE") sin suero en un ensayo MTT. Un ensayo MTT es una prueba de laboratorio y un ensayo colorimetrico normalizado (un ensayo que mide los cambios de color) para medir la proliferacion celular (crecimiento celular). En resumen, el MTT amarillo bromuro de (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio, un tetrazol) se reduce a formazan purpura en las mitocondrias de las celulas vivas. Esta reduccion tiene lugar solo cuando las enzimas reductasas mitocondriales estan activas y, por lo tanto, la conversion puede relacionarse directamente con el numero de celulas viables (vivas). El ensayo MTT se describe en el ejemplo 6, mas adelante, donde se utiliza para evaluar el efecto de las nanofibras de sNAG en el mdice metabolico de las celulas CE. El mdice metaboloco de las celulas puede determinarse tambien por otras tecnicas normalmente conocidas por el experto en la tecnica.

En otro aspecto, las nanofibras de sNAG no rescatan la apoptosis de las CE sin suero en una prueba de exclusion con azul de tripano. Una prueba de exclusion de azul de tripano es una prueba de exclusion con tinte utilizada para determinar el numero de celulas viables presentes en una suspension celular. Se basa en el principio de que las celulas vivas poseen membranas celulares intactas que excluyen determinados colorantes, como el azul de tripano, la eosina o el propidio, mientras que las celulas muertas no lo hacen. El ensayo con azul de tripano se describe en el ejemplo 6, mas adelante, donde se utiliza para evaluar el efecto de las nanofibras de sNAG sobre la viabilidad celular de las celulas CE. La viabilidad de las celulas tambien puede determinarse mediante otras tecnicas frecuentemente conocidas por los expertos en la tecnica.

En determinadas realizaciones, se describen composiciones que comprenden las nanofibras de sNAG, en donde las nanofibras de sNAG aumentan el mdice metabolico de celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo MTT y/o no rescatan la apoptosis de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en una prueba de exclusion con azul de tripano. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG aumentan el mdice metabolico de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo MTT y no rescatan la apoptosis de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo de exclusion con azul de tripano.

En un caso espedfico, las nanofibras de sNAG son biocompatibles. La biocompatibilidad se puede determinar mediante una variedad de tecnicas, incluidas, entre otras, procedimientos como la prueba de elucion, la implantacion intramuscular o la inyeccion intracutanea o general en animales. Dichas pruebas se describen en la patente de EE. UU. n° 6686342 (vease, p. ej., el ejemplo 10). Algunas de las pruebas de biocompatibilidad se describen en el ejemplo 7, mas adelante, que muestran que las nanofibras de sNAG no son reactivas en dichas pruebas.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria no son reactivas en una prueba o pruebas de biocompatibilidad. Por ejemplo, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria pueden ser no reactivas cuando se prueban en una prueba de eiucion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea y/o una prueba general. En otras realizaciones, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria tienen una puntuacion en la prueba de Grado 0 o Grado 1 cuando se prueban en una prueba de contaminacion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea o una prueba general. En otra realizacion mas, las nanofibras de sNAG utilizadas en los metodos descritos en la presente memoria son, como maximo, ligeramente reactivas cuando se prueban en una prueba de contaminacion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea y/o una prueba general. En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria no causan una reaccion alergenica o una irritacion. En otras realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria causan a lo sumo una reaccion alergenica leve o una irritacion leve, p. ej., en la zona de aplicacion. Las pruebas aplicables y la evaluacion de los resultados de las pruebas se describen, p. ej., en la patente de EE. UU. n° 6686342 y en en el apartado 6.8, mas adelante.

En un caso espedfico, las nanofibras de sNAG no son reactivas cuando se prueban en una prueba de implantacion intramuscular. En un aspecto, una prueba de implantacion intramuscular es una prueba de implantacion intramuscular-ISO 4 semanas de implantacion, como se describe en en el apartado 6.8.3, mas adelante. En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG no presentan reactividad biologica determinada por una prueba de elucion (grado de de prueba de elucion = 0). En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG tienen una puntuacion en la prueba igual a "0" y/o son a lo sumo un irritante insignificante segun se determina por la prueba de inyeccion intracutanea. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG no provocan ninguna reaccion intradermica (es dedr, reaccion de Grado 1) en la prueba de Kligman y/o tienen un potencial alergenico debil segun se determina por la prueba de Kligman. El ejemplo 7, mas adelante, muestra que las nanofibras de sNAG no son reactivas en una prueba de implantacion intramuscular, una prueba de inyeccion intracutanea y la prueba de Kligman.

En determinados aspectos, las nanofibras de sNAG son inmunoneutrales (es decir, no provocan una respuesta inmunitaria).

En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG son biodegradables. Las nanofibras de sNAG se degradan preferiblemente en aproximadamente 1 dfa, 2 dfas, 3 dfas, 5 dfas, 7 dfas (1 semana), 8 dfas, 10 dfas, 12 dfas, 14 dfas (2 semanas), 17 dfas, 21 dfas (3 semanas) ), 25 dfas, 28 d^as (4 semanas), 30 dfas, 1 mes, 35 dfas, 40 d^ as, 45 d^as, 50 dfas, 55 d^as, 60 dfas, 2 meses, 65 d^as, 70 dfas, 75 d^as, 80 dfas, 85 d^as, 90 d^as, 3 meses, 95 dfas, 100 dfas o 4 meses despues de la administracion o implantacion en un paciente.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG no producen una reaccion detectable de cuerpo extrano. Una reaccion de cuerpo extrano, que puede ocurrir durante la cicatrizacion de la herida, incluye la acumulacion de exudado en la zona de la lesion, la infiltracion de celulas inflamatorias para asear el area y la formacion de tejido de granulacion. La presencia persistente de un cuerpo extrano puede inhibir la curacion total. En lugar de la reabsorcion y reconstruccion que se produce en la curacion de heridas, la reaccion del cuerpo extrano se caracteriza por la formacion de celulas gigantes de cuerpo extrano, la encapsulacion del objeto extrano y la inflamacion cronica. La encapsulacion se refiere a la cascara firme de colageno, generalmente avascular, depositada alrededor de un cuerpo extrano, aislandolo eficazmente de los tejidos del anfitrion. En una realizacion, el tratamiento de una zona (p. ej., una herida o una zona de una infeccion bacteriana en una herida) con las nanofibras de sNAG no provoca una reaccion detectable de cuerpo extrano en 1 dfa, 3 dfas, 5 dfas, 7 dfas, 10 dfas o 14 dfas despues del tratamiento. En una tal realizaciopn, el tratamiento de una zona (p. ej., una herida) con las nanofibras de sNAG no produce encapsulaciones de cuerpos extranos en 1 dfa, 3 dfas, 5 dfas, 7 dfas, 10 dfas o 14 dfas despues del tratamiento.

En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG (i) comprenden fibras, en las que la mayona de las fibras tienen una longitud de aproximadamente 1 a 15 micras, y (ii) (a) aumentan el mdice metabolico de las CE sin suero en un ensayo MTT y/o no rescatan la apoptosis de las CE sin suero en una prueba de exclusion con azul de tripano, y (b) no son reactivos cuando se analizan en una prueba de implantacion intramuscular. En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG (i) comprenden fibras, en las que la mayona de las fibras tienen una longitud de aproximadamente 1 a 12 micras, y (ii) (a) aumentan el mdice metabolico de las CE sin suero en un ensayo del MTT y/o no rescatan la apoptosis de las CE sin suero en una prueba de exclusion con azul de tripano, y (b) no son reactivas cuando se prueban en una prueba de implantacion intramuscular. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG (i) comprenden fibras, en donde la mayona de las fibras estan comprendidas entre (o en el intervalo de) 1 y 10 micras, 2 y 10 micras, 4 y 10 micras, 5 y 10 micras o 5 y 15 micras de longitud, y (ii) (a) aumentan el mdice metabolico de las CE carentes de suero en un ensayo del MTT y/o no rescatan la apoptosis de las CE carentes de suero en una prueba de exclusion con azul de tripano, y (b) no son reactivas cuando se prueban en una prueba de implantacion intramuscular. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG (i) comprenden fibras, en las que la mayona de las fibras tienen una longitud de aproximadamente 4 a 10 micras, y (ii) (a) aumentan el mdice metabolico de CE sin suero en un ensayo del MTT y/o no rescatan la apoptosis de las CE carentes de suero en una prueba de exclusion con azul de tripano, y (b) no son reactivas cuando se prueban en una prueba de implantacion intramuscular. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG (i) comprenden fibras, en donde la mayona de las fibras estan comprendidas entre 4 y 7 micras de longitud, y (ii) (a) aumentan el mdice metabolico de las Ce carentes de suero en un ensayo del MTT y/o no rescatan la apoptosis de las CE carentes de suero en una prueba de exclusion con azul de tripano, y (b) no son reactivas cuando se prueban en una prueba de implantacion intramuscular.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG no tienen un efecto directo sobre el crecimiento o la supervivencia de bacterias, tales como S. aureus, segun lo determinado por un experto en la tecnica. En otras realizaciones, las nanofibras de sNAG no tienen un efecto directo sobre el crecimiento o la supervivencia de bacterias, como S. aureus, segun lo determinado por los metodos eindicados en en el apartado 6.2.2.5, mas adelante. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG no tienen un efecto directo in vitro sobre el crecimiento o la supervivencia de las bacterias. En una realizacion, las nanofibras de sNAG no tienen un efecto directo (p. ej., in vitro) sobre el crecimiento o la supervivencia de bacterias gramnegativas. En otra realizacion, las nanofibras de sNAG no tienen un efecto directo (p. ej., in vitro) sobre el crecimiento o la supervivencia de bacterias grampositivas. En otra realizacion mas, las nanofibras de sNAG no tienen un efecto directo (p. ej., in vitro) sobre el crecimiento o la supervivencia de bacterias grampositivas o bacterias gram-negativas.

En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG (i) comprenden fibras, en donde la mayona de las fibras estan comprendidas entre (o en el intervalo de) aproximadamente 1 y 15 micras, 1 y 12 micras, 1 y 10 micras, 4 y 10 micras, 4 y 15 micras, 5 y 10 micras, 5 y 15 micras o 4 y 7 micras de longitud, (ii) no tienen un efecto sobre el crecimiento bacteriano o la supervivencia de los cultivos bacterianos de Staphylococcus aureus in vitro, y (iii) no son reactivas cuando se ensayan en una prueba de biocompatibilidad (p. ej., una prueba de implantacion intramuscular).

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG inducen un determinado tipo de expresion genica (expresion de ARN o protema determinada por, p. ej., RT-PCR, chip o ELISA) en una celula, tejido u organo tratado con una composicion de nanofibras sNAG o expuesto a la misma. Espedficamente, en algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de una o mas protemas defensinas, una o mas protemas similares a la defensina y/o uno o mas receptores tipo Toll. En otras realizaciones mas, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de una o mas protemas que se sabe que tienen un efecto antibacteriano.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de una o mas defensinas (p. ej., DEFA1 (es decir, defensina 1), DEFA1B, DEFA3, DEFA4, DEFA5, DE^fA6), una o mas p-defensinas (p. ej., ^dE^fBI (es decir, p-defensina 1), D^eFB2, DEFB4, DEFB103A, DEFB104A, DEFB105B, DEFB107B, DEFB108B, DEFB110, DEFB112, DEFB114, DEFB118, DEFB119, DEFB123, DEFB124, DEFB125, DEFB126, DEFB127, DEFB128, DEFB129, DEFB131, DEFB136) y/o uno o mas 0-defensinas (p. ej., DEFT1P). En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de uno o mas de DEFA1, DEFA3, DEFA4, DEFA5, DEFB1, DEFB3, DEFB103A, DEFB104A, DEFB108B, DEFB112, DEFB114, DEFB118, DEFB119, DEFB123, DEFB124, DEFB125, DEFB126, DEFB128, DEFB129 y DEFB131. En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de una o mas receptores tipo Toll (p. ej., TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11 y/o TLR12). En otras realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de una o mas de IL-1, CEACAM3, SPAG11, SIGIRR (receptor tipo IL1), IRAKI, IRAK2, IRAK4, TBK1, TRAF6 y IKKi. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de uno o mas de IRAK2, SIGIRR, TLR1, T^lR2, TLR4, TLR7, TLR8, TLR10 y TRAF6. En una realizacion, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de al menos uno de los productos genicos enumerados anteriormente.

En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de uno o mas de los genes enumerados anteriormente en una cantidad igual o superior a aproximadamente 0.25 veces, 0.5 veces, 1 vez, 1.5 veces. 2 veces, 2.5 veces, 3 veces, 3.5 veces, 4 veces, 4.5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 12 veces, 15 veces o 20 veces en comparacion con el nivel de expresion de uno o mas de los genes enumerados anteriormente en una celula, tejido u organo de un sujeto antes del tratamiento con las nanofibras de sNAG (p. ej., un nivel de expresion promedio conocido de uno o mas de los genes enumerados anteriormente). En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de uno o mas de los genes enumerados anteriormente en una cantidad igual o superior a aproximadamente el 10%, 25%, 50%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 225%, 250%, 275%, 300%, 350%, 400%, 450%, 500%, 550%, 600%, 650%, 700%, 750%, 800%, 900% o 1000% el nivel de expresion de uno o mas de los genes enumerados anteriormente en una celula, tejido u organo de un sujeto antes del tratamiento con las nanofibras de sNAG (p. ej., un nivel de expresion promedio conocido de uno o mas de los genes enumerados anteriormente).

En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG, pero no poli-N-acetilglucosamina larga, quitina y/o quitosano inducen la expresion de uno o mas genes enumerados anteriormente, segun lo determinado por un metodo conocido por un experto en la tecnica, o descrito en la presente memoria. En algunas de estas realizaciones, la poli-N-acetilglucosamina larga, quitina y/o quitosano no inducen la expresion de uno o mas de los genes enumerados anteriormente ni inducen un nivel inferior (p. ej., mas de 1.25 veces, 1.5 veces, 2 veces, 2.5 veces), 3 veces, 3.5 veces, 4 veces, 4.5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces o 10 veces menos) de la expresion de uno o mas genes enumerados anteriormente en comparacion con el nivel de expresion de uno o mas genes listados anteriormente inducidos por las nanofibras de sNAG, segun lo determinado por un metodo conocido por un experto en la tecnica, o descrito en la presente memoria.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen un perfil de expresion genica que es coherente con, similar a, aproximadamente el mismo o equivalente a uno o mas perfiles de expresion genica demostrados en las tablas I, II, III, V, VIII y IX, apartados 6.2-6.5, mas adelante. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de uno o mas de los genes que se ha demostrado que aumentan por el tratamiento con sNAG en las tablas I, II, III, V, VIII y IX, apartados 6.2-6.5, mas adelante. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen la expresion de la mayona o todos los genes que se ha demostrado que aumentan por el tratamiento con sNAG en las tablas I, II, III, V, VIII y IX, apartados 6.2-6.5, mas adelante. En algunas de estas realizaciones, los niveles de expresion genica se miden a la hora, 2 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 14 horas, 16 horas, 18 horas, 20 horas, 24 horas, 48 horas, 3 dfas, 5 dfas despues del tratamiento de una celula, tejido u organo con una composicion de nanofibras de sNAG por un metodo conocido por un experto en la tecnica o descrito en la presente memoria.

En determinadas realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen un perfil de expresion genica que difiere del perfil inducido por polfmeros o fibras largos de poli-N-acetilglucosamina. En casos espedficos, un perfil de expresion genica inducido por las nanofibras de sNAG es coherente con, similar a, aproximadamente el mismo, o equivalente al que se muestra en las tablas I, II, III, V, VIII y IX, apartados 6.2-6.5, mas adelante, mientras que el perfil de expresion genica inducido por poUmeros o fibras largas de poli-N-acetilglucosamina es consistente con, similar a, casi igual o equivalente al que se muestra en las tablas VIII y/o IX, apartado 6.5, mas adelante. En otras realizaciones, las nanofibras de sNAG o una composicion que comprende las nanofibras de sNAG inducen un perfil de expresion genica que difiere del perfil inducido por quitina o quitosan.

En un caso espedfico, las nanofibras de sNAG se obtienen irradiando poli-N-acetilglucosamina. Vease el apartado 5.1.1, mas adelante, con respecto a la poli-N-acetilglucosamina y el apartado 5.2, mas adelante, con respecto a los metodos para producir las nanofibras de sNAG utilizando irradiacion. La irradiacion se puede usar para reducir la longitud de las fibras de poli-N-acetilglucosamina para formar fibras de poli-p-1 — 4-N-acetilglucosamina, es decir, nanofibras de sNAG. Espedficamente, la irradiacion se puede usar para reducir la longitud y el peso molecular de la poli-N-acetilglucosamina sin alterar su microestructura. El espectro infrarrojo (IR) de las nanofibras de sNAG es similar a, casi lo mismo que, o equivalente a la de la poli-p-1 — 4-N-acetilglucosamina no irradiada.

En una realizacion, las nanofibras de sNAG no proceden de quitina o quitosan. Mientras que en otra realizacion, las composiciones descritas en la presente memoria pueden proceder de quitina o quitosan, o las nanofibras de sNAG pueden proceder de quitina o quitosan.

5.1.1 Poli-N-acetilglucosamina y sus derivados

Las patentes de EE.UU. n° 5622834; n° 5623064; n° 5624679; n° 5686115; n° 5858350; n° 6599720; n° 6686342; n° 7115588 y la publicacion de patente de EE.UU. n° 2009/0117175 describen la poli-N-acetilglucosamina y sus derivados, y los metodos para producirlos. En algunas realizaciones, la poli-N-acetilglucosamina tiene una configuracion p-1 —^4. En otras realizaciones, la poli-N-acetilglucosamina tiene una configuracion a-1—4. La poli-N-acetilglucosamina y sus derivados pueden estar en forma de un polfmero o en forma de una fibra.

La poli-N-acetilglucosamina puede producirse, por ejemplo, mediante microalgas, preferiblemente diatomeas. Las diatomeas que pueden usarse como materias de partida para la produccion de la poli-N-acetilglucosamina incluyen, entre otros miembros del genero Coscinodiscus, el genero Cyclotella y el genero Thalassiosira. La poli-N-acetilglucosamina se puede obtener a partir de cultivos de diatomeas por varios metodos diferentes, incluido el metodo de fuerza mecanica y el metodo qmmico/biologico conocido en la tecnica (vease, p. ej., las patentes de EE. UU. n° 5622834; n° 5623064; n° 5624679; n° 5686115; n° 5858350; n° 6599720; n° 6686342 y n° 7115588. En determinadas realizaciones, la poli-N-acetilglucosamina no procede de uno o mas de los siguientes seres vivos: un marisco, un crustaceo, un insecto, un hongo o levaduras.

En una realizacion, la poli-p-1 — 4-N-acetilglucosamina procede de un proceso que comprende a) tratar una microalga que comprende un cuerpo celular y una fibra de polfmero poli-p-1 — 4-N-acetilglucosamina con un agente biologico (tal como fluorlddrico) capaz de separar la fibra polimerica de N-acetilglucosamina del cuerpo celular durante un tiempo suficiente de modo que la fibra polimerica de poli-p-1 — 4-N-acetilglucosamina se libere del cuerpo celular; b) segregar la fibra polimerica de poli-p-1 — 4-N-acetilglucosamina del cuerpo celular; y c) eliminar los contaminantes de la fibra polimerica de poli- p-1 — 4-N-acetilglucosamina segregada, de modo que el polfmero de poli- β-1 → 4-N-acetilglucosamina se aisle y purifique.

En otras realizaciones, la poli-p-1 —4-N-acetilglucosamina puede proceder de uno o mas de los siguientes seres vivos: un marisco, un crustaceo, un insecto, un hongo o levaduras. En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria no comprenden quitina o quitosano.

Una o mas de las unidades de monosacarido de la poli-N-acetilglucosamina pueden estar desacetiladas. En determinadas realizaciones, 1% a 5%, 5% a 10%, 5% a 15%, 20% a 30% o 25% a 30% de la poli-N-acetilglucosamina estan desacetiladas. En algunas realizaciones, el 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% o 30% de la poli-N-acetilglucosamina esta desacetilada. En otras realizaciones, menos del 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% o 1% de la poli-N-acetilglucosamina esta desacetilada. En algunos casos, el o mas del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 99%, o la totalidad (100%) de la poli-N-acetilglucosamina esta desacetilada. En otros casos, menos del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% o el 100% de la poli-N-acetilglucosamina esta desacetilada.

En determinadas realizaciones, una composicion de poli-N-acetilglucosamina comprende 70% a 80%, 75% a 80%, 75% a 85%, 85% a 95%, 90% a 95%, 90% a 99% o 95% a 100% de los monosacaridos de acetilglucosamina acetilada (es decir, N-acetilglucosamina). En algunas realizaciones, una composicion de poli-N-acetilglucosamina comprende 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% o 100% de monosacaridos de glucosamina acetilada (es decir, N-acetilglucosamina). En otras realizaciones, una composicion de poli-N-acetilglucosamina comprende mas del 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 99.5% o 99.9% de la glucosamina acetilada. En algunos casos, una composicion de poli-N-acetilglucosamina comprende igual o mas del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% o 99% o la totalidad (100%), de la glucosamina acetilada. En otros casos, una composicion de poli-N-acetilglucosamina comprende menos del 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% o el 100% de la glucosamina acetilada.

En algunos casos, una composicion de poli-N-acetilglucosamina comprende al menos un monosacarido de glucosamina, y puede comprender ademas al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 99% de monosacaridos de N-acetilglucosamina. En otros casos, una composicion de poli-N-acetilglucosamina comprende al menos un monosacarido de N-acetilglucosamina, y puede comprender ademas al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 99% de los monosacaridos de glucosamina.

Los derivados de poli-N-acetilglucosamina tambien se pueden usar en una composicion descrita en la presente memoria. Los derivados de poli-N-acetilglucosamina y los metodos para elaborar dichos derivados se describen en la patente de EE. UU. n° 5623064 (vease, por ejemplo, el apartado 5.4). Los derivados de poli-N-acetilglucosamina pueden incluir, entre otros, poli-N-acetilglucosamina parcial o completamente desacetilada, o sus derivados desacetilados. Ademas, la poli-N-acetilglucosamina puede modificarse al ser sulfatada, fosforilada y/o nitrada. Los derivados de poli-N-acetilglucosamina incluyen, p. ej., derivados sulfatados de poli-N-acetilglucosamina, derivados fosforilados de poli-N-acetilglucosamina, o derivados nitrados de poli-N-acetilglucosamina. Ademas, una o mas de las unidades de monosacaridos de la poli-N-acetilglucosamina pueden contener uno o mas grupos sulfonilo, uno o mas grupos O-acilo. Ademas, uno o mas de los monosacaridos de la poli-N-acetilglucosamina desacetilada pueden contener un grupo N-acilo. Uno o mas de los monosacaridos de la poli-N-acetilglucosamina o de su derivado desacetilado, pueden contener un grupo O-alquilo. Una o mas de las unidades de monosacaridos de la poli-N-acetilglucosamina puede ser un derivado alcalino. Una o mas de las unidades de monosacaridos del derivado desacetilado de poli-N-acetilglucosamina pueden contener un grupo N-alquilo. Una o mas de las unidades de monosacaridos del derivado desacetilado de poli-N-acetilglucosamina pueden contener al menos un derivado desoxihalogenado. Una o mas de las unidades de monosacaridos del derivado desacetilado de poli-N-acetilglucosamina pueden formar una sal. Una o mas de las unidades monosacaridas del derivado desacetilado de poli-N-acetilglucosamina pueden formar un quelato metalico. En un caso espedfico, el metal es cinc. Una o mas de las unidades de monosacaridos del derivado desacetilado de poli-N-acetilglucosamina pueden contener un grupo N-alquilideno o N-arilideno. En un caso, el derivado es un derivado de acetato. En otro caso, el derivado no es un derivado de acetato. En un caso, la poli-N-acetilglucosamina o la poli-N-acetilglucosamina desacetilada se modifican con acido lactico. En donde, en otro caso, el derivado no se modifica con acido lactico.

5.2 Metodos para producir nanofibras de sNAG

Los polfmeros o fibras de poli-N-acetilglucosamina descritos anteriormente, pueden irradiarse como polfmeros o fibras secos o polfmeros o membranas de fibras. Alternativamente, los polfmeros o fibras de poli-N-acetilglucosamina y cualquier derivado de los polfmeros o fibras de poli-N-acetilglucosamina descritos anteriormente, pueden irradiarse cuando estan humedos. Los metodos para fabricar nanofibras de sNAG por irradiacion y las nanofibras de sNAG asf producidas se han descrito en la publicacion de patente de EE. UU. n° 2009/01 17175.

En determinadas realizaciones, los polfmeros o fibras de poli-N-acetilglucosamina se formulan en una suspension/lechada en suspension o torta humeda para irradiacion. La irradiacion se puede realizar antes, simultaneamente o despues de la formulacion de los polfmeros o fibras en su formulacion final, como un vendaje. Generalmente, el contenido de polfmero o fibra de las suspensiones/lechadas y tortas humedas puede variar, por ejemplo, de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 50 mg de polfmero o fibra por cada ml de agua destilada se utilizan para lechadas y de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 1000 mg de polfmero o fibra por cada ml de agua destilada se utilizan para formulaciones de torta humeda. El polfmero o la fibra pueden liofilizarse en primer lugar, congelarse en nitrogeno lfquido y pulverizarse, para hacerlos mas sensibles a formar una suspension/lechada o torta humeda. Ademas, las suspensiones/lechadas se pueden filtrar para eliminar el agua de manera que se forme una torta humeda. En determinados aspectos, el poifmero o la fibra se irradia como una suspension que comprende aproximadamente 0.5 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 12 mg, 15 mg, 18 mg, 20 mg, 25 mg o 50 mg de polfmero o fibra por ml de agua destilada, o cualquier intervalo entre las realizaciones anteriores (p. ej., 1-10 mg/ml, 5-15 mg/ml, 2-8 mg/ml, 20-50 mg/ml, etc.). En otros aspectos, el polfmero o la fibra se irradia como una torta humeda, que comprende aproximadamente 50-1000 mg de polfmero o fibra por cada ml de agua destilada. En casos espedficos, la torta humeda comprende aproximadamente 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o 1000 mg de polfmero o fibra por cada ml de agua destilada, o cualquier intervalo entre ellos (p. ej., 100 -500 mg ml, 300-600 mg/ml, 50-1000 mg/ml, etc.).

La irradiacion es preferiblemente en forma de radiacion gamma, radiacion de haz de electrones o rayos X. Se prefieren dos fuentes de irradiacion: los nuclidos radiactivos y la electricidad. En un caso espedfico, los nuclidos radiactivos son cobalto-60 y cesio-137. Ambos nuclidos emiten rayos gamma, que son fotones que no contienen masa. Los rayos gamma tienen energfas de 0.66 a 1.3 MeV. Usando electricidad, los electrones se generan y aceleran a energfas de hasta 10 MeV o mas. Cuando se irradian polfmeros o fibras para reducir su tamano, se debe tener en cuenta que la profundidad de penetracion de los materiales con densidades similares al agua de 10 MeV electrones esta limitada a aproximadamente 3.7 cm con exposicion unilateral o aproximadamente 8.6 cm con exposicion por las dos caras. La profundidad de penetracion disminuye a energfas electronicas inferiores. La energfa electronica se puede convertir en rayos X colocando un objetivo de metal (generalmente tungsteno o tantalo) en la trayectoria del haz de electrones. La conversion a rayos X se limita a electrones con energfas de hasta 5 MeV. Los rayos X son fotones sin masa y pueden penetrar poUmeros o fibras como los rayos gamma. Solo hay un 8% de eficiencia en la conversion de energfa de electrones en energfa de rayos X. Las maquinas de haz de electrones de alta potencia son necesarias en las instalaciones de produccion de rayos X para tener en cuenta la baja eficiencia de conversion.

En un caso espedfico, la radiacion es radiacion gamma.

La dosis absorbida de radiacion es la energfa absorbida por unidad de peso del producto, medida en gray (gy) o kilogray (kgy). Para polfmeros o fibras secos, la dosis absorbida preferida es de aproximadamente 500-2000 kgy de radiacion, mas preferiblemente alrededor de 750-1250 kgy o alrededor de 900-1100 kgy de radiacion. Para polfmeros o fibras humedos, la dosis absorbida preferida es aproximadamente 100-500 kgy de radiacion, mas preferiblemente alrededor de 150-250 kgy o alrededor de 200-250 kgy de radiacion.

La dosis de radiacion se puede describir en terminos de su efecto sobre la longitud de los polfmeros o fibras. En casos espedficos, la dosis de radiacion utilizada reduce preferiblemente la longitud del polfmero o fibra en cualquier parte del 10% al 90% de la longitud inicial del polfmero o fibra, respectivamente. En casos espedficos, la longitud promedio se reduce en aproximadamente un 10%, en aproximadamente un 20%, en aproximadamente un 30%, en aproximadamente un 40%, en aproximadamente un 50%, en aproximadamente un 60%, en aproximadamente un 70%, en aproximadamente un 80%, o en aproximadamente el 90%, o cualquier intervalo entre (p. ej., 20-40%, 30 70%, y asf sucesivamente). Alternativamente, la dosis de radiacion utilizada preferiblemente reduce la longitud del polfmero o fibra a cualquier lugar de 1 a 100 micras. En casos espedficos, y dependiendo de la longitud de fibra inicial, la longitud media del polfmero o fibra se reduce a menos de unas 15 micras, menos de unas 14 micras, menos de unas 13 micras, menos de unas 12 micras, menos de unas 11 micras, menos de unas 10 micras, menos de unas 8 micras, menos de unas 7 micras, menos de unas 5 micras menos de unas 4 micras, menos de unas 3 micras, menos de 2 micras o menos de 1 micra. En determinadas realizaciones, la longitud de la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%), o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99 %) de los polfmeros o fibras se reduce a no mas de unas 20 micras, no mas de unas 15 micras, no mas de unas 12 micras, no mas de unas 10 micras, no mas de unas 8 micras, no mas de unas 7 micras micras o no mas de unas 5 micras. En determinadas realizaciones, la irradiacion de los polfmeros o fibras reduce la longitud de la mayona (y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre el 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99%) de las fibras en cualquier parte entre aproximadamente 1 a 20 micras, entre aproximadamente 1 a 15 micras, entre aproximadamente 2 a 15 micras, entre aproximadamente 1 a 12 micras, entre aproximadamente 2 a 12 micras, entre aproximadamente 1 a 10 micras, entre aproximadamente 2 a 10 micras, entre aproximadamente 1 a 8 micras, entre aproximadamente 2 a 8 micras, entre aproximadamente 1 a 7 micras, entre aproximadamente 2 a 7 micras, entre aproximadamente 3 a 8 micras, entre aproximadamente 4 a 10 micras, entre aproximadamente 4 a 7 micras, entre aproximadamente 5 a 10 micras, entre aproximadamente 1 a 5 micras, entre aproximadamente 2 a 5 micras, entre aproximadamente 3 a 5 micras, entre aproximadamente 4 a 10 micras, o cualquier intervalo entre las anteriores longitudes, que estan tambien comprendidas.

La dosis de radiacion tambien se puede describir por lo que se refiere a su efecto sobre el peso molecular del polfmero o fibra. En casos espedficos, la dosis de radiacion utilizada reduce preferiblemente el peso molecular del polfmero o fibra en cualquier parte entre aproximadamente el 10% y el 90% del peso inicial del polfmero o fibra. En casos espedficos, el peso molecular promedio se reduce en aproximadamente el 10%, en aproximadamente el 20%, en aproximadamente el 30%, en aproximadamente el 40%, en aproximadamente el 50%, en aproximadamente el 60%, en aproximadamente el 70%, en aproximadamente el 80%, o en aproximadamente el 90%, o cualquier intervalo intermedio (p. ej., 20-40%, 30-70%, etc.). Alternativamente, la dosis de radiacion utilizada reduce preferiblemente el peso molecular del polfmero o fibra en cualquier parte entre 1000 y 1000000 daltons. En casos espedficos, y dependiendo del peso molecular inicial, el peso molecular promedio del polfmero o fibra se reduce a menos de 1000000 daltons, menos de 750000 daltons, menos de 500000 daltons, menos de 300000 daltons, menos de 200000 daltons, menos de 100000 daltons, menos de 90000 daltons, menos de 80000 daltons, menos de 70000 daltons, menos de 60000 daltons, menos de 50000 daltons, menos de 25000 daltons, menos de 10000 daltons o menos de 5000 daltons. En determinadas realizaciones, el peso molecular promedio se reduce a no menos de 500 daltons, no menos de 1000 daltons, no menos de 2000 daltons, no menos de 3500 daltons, no menos de 5000 daltons, no menos de 7500 daltons, no menos de 10000 daltons, no menos de 25000 daltons, no menos de 50000 daltons, no menos de 60000 daltons o no menos de 100000 daltons. Tambien se incluye cualquier intervalo entre los pesos moleculares medios anteriores; por ejemplo, en determinadas realizaciones, la irradiacion del polfmero o fibra reduce el peso molecular promedio en cualquier parte entre 10000 y 100000 daltons, entre 1000 y 25000 daltons, entre 50000 y 500000 daltons, entre 25000 y 100000 daltons, entre 30000 y 90000 daltons, entre alrededor de 40000 y 80000 daltons, entre alrededor de 25000 y 75000 daltons, entre alrededor de 50000 y 70000 daltons, o entre alrededor de 55000 y 65000 daltons y asf sucesivamente. En determinadas realizaciones, la irradiacion de los polfmeros o fibras reduce el peso molecular de la mayona y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9% o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% o 95% a 99%) de las fibras en cualquier parte entre aproximadamente 20000 y 100000 daltons, aproximadamente 25000 y 75000 daltons, aproximadamente 30000 y 90000 daltons, aproximadamente 40000 y 80000 daltons, aproximadamente 50000 y 70000 daltons, o aproximadamente 55000 y 65000 daltons. En determinadas realizaciones, la irradiacion de los poKmeros o fibras reduce el peso molecular de la mayona y en determinadas realizaciones, al menos el 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99.5%, 99.8%, 99.9%, o 100%, o entre 55% a 65%, 55% a 75%, 65% a 75%, 75% a 85%, 75% a 90%, 80% a 95%, 90% a 95% % o 95% a 99%) de las fibras a aproximadamente 60000 daltons.

Despues de la irradiacion, las lechadas se pueden filtrar y secar, y las tortas humedas se pueden secar, para formar composiciones (p. ej., vendajes y otras composiciones descritas en la presente memoria) que son utiles en la practica de la invencion.

5.3 Composiciones que comprenden nanofibras de sNAG

Las nanofibras de sNAG se pueden formular en una variedad de composiciones para administracion topica como se describe en la presente memoria.

Una composicion que comprende las nanofibras de sNAG puede formularse como una crema, una membrana, una pelfcula, una solucion lfquida, una suspension (p. ej., una suspension espesa), un polvo, una pasta, una pomada, un supositorio, una composicion gelatinosa, un aerosol, un gel o un aerosol. En una realizacion, una composicion que comprende las nanofibras de sNAG se formula como una membrana ultrafina. En algunas realizaciones, una composicion que comprende las nanofibras de sNAG se formula como un vendaje, una alfombrilla o un vendaje. En casos concretos, las composiciones que comprenden nanofibras de sNAG no son solidas ni formadoras de barrera. Tambien se contemplan formulaciones solidas adecuadas para solucion o suspension en lfquidos antes de la administracion. Tambien es posible que dichas composiciones se incorporen o esten recubiertos en dispositivos implantables, como implantes ortopedicos (para cadera, rodilla, hombro; alfileres, tornillos, etc.), implantes cardiovasculares (endoprotesis vasculares, cateteres, etc.) y similares donde la actividad antibacteriana sena beneficiosa.

Una composicion que comprende las nanofibras de sNAG puede incluir uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables. Los excipientes adecuados pueden incluir agua, solucion salina, solucion de sal, dextrosa, glicerol, etanol y similares, o combinaciones de los mismos. Los excipientes adecuados tambien incluyen almidon, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, creta, gel de sflice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, aceite (incluidos los del petroleo, los de origen animal, vegetal o sintetico, como el aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sesamo y similares), talco, cloruro de sodio, leche descremada en polvo, propilenglicol y similares. Ademas, una composicion que comprende las nanofibras de sNAG puede incluir uno o mas de agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes amortiguadores de pH y otros agentes. Las composiciones de nanofibra de sNAG tambien pueden incorporarse en un portador fisiologicamente aceptable, por ejemplo en un portador fisiologicamente aceptable adecuado para aplicacion topica. La expresion "farmaceuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal o listado en la Farmacopea de los EE. UU. U otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales, y mas especialmente en seres humanos. Ejemplos de portadores farmaceuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E. W. Martin.

La cantidad final de las nanofibras de sNAG en una composicion puede variar. Por ejemplo, la cantidad de nanofibras de sNAG en una composicion (p. ej., preparada para la administracion a un paciente) puede ser mayor o igual a aproximadamente el 50%, aproximadamente el 60%, aproximadamente el 70%, aproximadamente el 75%, aproximadamente el 80%, aproximadamente 85%, aproximadamente 90%, aproximadamente 95%, aproximadamente 98%, o aproximadamente 99% en volumen. En una realizacion, la cantidad de nanofibras de sNAG en una composicion es aproximadamente 95%, aproximadamente 98%, aproximadamente 99, o aproximadamente 100%. Ademas, la cantidad de nanofibras de sNAG en una composicion (p. ej., preparada para la administracion a un paciente) puede ser de aproximadamente 50%-100%, aproximadamente 60%-100%, aproximadamente 70%-100%, aproximadamente 75%-100%, aproximadamente 80%-100%, aproximadamente 90%-100%, aproximadamente 95%-100%, aproximadamente 70%-95%, aproximadamente 75% -95%, aproximadamente 80% -95%, aproximadamente 90% -95%, aproximadamente 70% -90%, aproximadamente 75% -90%, o aproximadamente 80% -90% peso/volumen.Una composicion puede comprender mas del 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95% o 99% de solucion de las nanofibras de sNAG.

Una composicion de nanofibras de sNAG puede formularse en un vendaje para heridas. En determinadas realizaciones, una composicion de nanofibras de sNAG se formula como un vendaje para heridas en forma de una barrera, una membrana o una pelfcula. Alternativamente, se puede agregar una composicion de nanofibras de sNAG a los soportes del vendaje, como barreras, membranas o pelfculas. Se puede suministrar una barrera, membrana o pelfcula en una variedad de tamanos normales, que pueden cortarse y dimensionarse ademas para el area que se esta tratando. El soporte puede ser un material de vendaje convencional, como un vendaje o una gasa al que se agrega o recubre un polfmero o fibra, antes de la aplicacion al paciente. Alternativamente, las nanofibras de sNAG pueden formularse como una barrera, membrana o pelfcula hecha de cuerdas, microperlas, microesferas o microfibrillas, o la composicion puede formularse como una alfombrilla formadora de barrera. En determinadas realizaciones, al menos el 75%, al menos el 85%, al menos el 90%, o al menos el 95% de un vendaje esta compuesto por las nanofibras de sNAG. En determinados aspectos, un vendaje no contiene un material de vendaje convencional, como una gasa o una venda. En dichas realizaciones, la propia nanofibra de sNAG se formula como un vendaje para heridas.

Una composicion que comprende las nanofibras de sNAG puede comprender ademas cualquier poKmero o fibra natural o sintetico adecuado. Los ejemplos de poUmeros o fibras adecuados incluyen poUmeros de celulosa, xantano, poliaramidas, poliamidas, poliimidas, poliamidas/imidas, poliamidahidrazidas, polihidrazidas, poliimidazoles, polibenzoxazoles, poliester/amida, poliester/imida, policarbonato/amidas, policarbonato/imidas, polisulfona/amidas, polisulfona/imidas y similares, copolfmeros y mezclas de los mismos. Otras clases adecuadas de polfmeros o fibras incluyen fluoruros de poliviniledeno y poliacrilonitrilos. Los ejemplos de estos polfmeros o fibras incluyen los descritos en las patentes de EE. UU. n° RE 30351; n° 4705540, n° 4717393; n° 4717394; n° 4912197; n° 4838900; n° 4935490; n° 4851505; n° 4880442; n° 4863496; n° 4961539; y la Solicitud de Patente Europea 0219 878. Los polfmeros o fibras pueden incluir al menos uno de los polfmeros de celulosa, poliamidas, poliaramidas, poliamida/imidas o poliimidas. En determinadas realizaciones, los polfmeros o fibras incluyen poliaramidas, poliester, uretano y politetrafluoroetileno. En una realizacion, las composiciones descritas en la presente memoria comprenden mas de un tipo de polfmero (p. ej., la nanofibra de sNAG y celulosa).

En determinados aspectos, la nanofibra de sNAG es el unico principio activo en una composicion.

En algunos casos, una composicion comprende uno o mas principios activos adicionales, p. ej., un agente antivmco, un agente antifungico, un agente antilevadura, un agente quimioterapeutico o cualquier otro agente. En algunos casos, el principio activo adicional es uno o mas de un agente antivmco, un agente antifungico, un agente antilevadura, un peptido defensina, un peptido tipo defensina, o un peptido tipo receptor Toll), o un factor de crecimiento. En casos espedficos, el principio activo adicional es un factor de crecimiento tal como uno o mas de PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PDGF-CC, PDGF-DD, FGF-1, FGF-2, FGF-5, FGF-7, FGF-10, EGF, TGF-a, (HB-EGF), anfiregulina, epiregulina, betacelulina, neuregulinas, epigen, VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, factor de crecimiento de la placenta (PLGF), angiopoyetina-1, angiopoyetina-2, IGF-I, IGF-II, factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) y protema estimulante de macrofagos (MSP). En otros casos, el principio activo adicional es un agente que estimula el sistema inmunologico, un agente de alivio del dolor o un agente de alivio de la fiebre.

En determinados casos, el principio activo adicional es un agente antivmco. Se puede usar cualquier agente antivmco bien conocido por un experto en la tecnica en una composicion de nanofibras de sNAG. Los ejemplos no restringidos de agentes antivmcos incluyen protemas, polipeptidos, peptidos, anticuerpos de protemas de fusion, moleculas de acido nucleico, moleculas organicas, moleculas inorganicas y moleculas pequenas que inhiben y/o reducen la union de un virus a su receptor, la interiorizacion de un virus en una celula, la replicacion de un virus o la liberacion de virus desde una celula. En particular, los agentes antivmcos incluyen, entre otros, analogos de nucleosidos (p. ej., zidovudina, aciclovir, gangciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina y ribavirina), foscarnet, amantadina, peramivir, rimantadina, saquinavir, indinavir, interferones alfa y otros interferones, AZT, zanamivir (Relenza®) y oseltamivir (Tamiflu®). Otros agentes antivmcos incluyen vacunas contra el virus de la gripe, p. ej., Fluarix® (GlaxoSmithKline), FluMist® (Medlmmune Vaccines), Fluvirin® (Chiron Corporation), Flulaval® (GlaxoSmithKline), Afluria® (CSL Biotherapies Inc.), Agriflu® (Novartis) o Fluzone® (Aventis Pasteur).

En determinados casos, el principio activo adicional es un agente antineoplasico. En un caso espedfico, el agente antineoplasico es un agente quimioterapeutico. Cualquier agente antineoplasico conocido por un experto en la tecnica puede usarse en combinacion de nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus combinaciones. Los ejemplos de agentes antineoplasicos incluyen: acivicina; antraciclina; antramicina; azacitidina (Vidaza); bifosfonatos (p. ej., pamidronato (Aredria), clondronato de sodio (Bonefos), acido zoledronico (Zometa), alendronato (Fosamax), etidronato, ibandornato, cimadronato, risedromato y tiludromato); carboplatino; clorambucilo; cisplatino; citarabina (Ara-C); hidrocloruro de daunorrubicina; decitabina (Dacogen); agentes de desmetilacion, docetaxel; doxorrubicina; inhibidores de EphA2; etoposido; fazarabina; fluorouracilo; gemcitabina; inhibidores de histona desacetilasa (HDAC); interleucina II (incluida la interleucina II biotecnologica, o rIL2), interferon alfa; interferon beta; interferon gamma; lenalidomida (Revlimid); antianticuerpos CD2 (p. ej., siplizumab (Medlmmune Inc.; Publicacion Internacional n° WO 02/098370)); melfalan; metotrexato; mitomicina;

oxaliplatino; paclitaxel; puromicina; riboprina; espiroplatino; tegafur; teniposido; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vorozol; zeniplatino; zinostatina e hidrocloruro de zorrubicina.

Otros ejemplos de tratamientos contra el cancer incluyen, entre otros, inhibidores de angiogenia; oligonucleotidos complementarios; moduladores del gen de la apoptosis; reguladores de la apoptosis; antagonistas de BCR/ABL; derivados de beta-lactama; inhibidores de casema cinasa (ICOS); agonistas de estrogenos; antagonistas de estrogenos; inhibidores de glutation; inhibidores de HMG CoA reductasa; peptidos inmunoestimulantes; inhibidor del receptor 1 del factor de crecimiento insulinoide; agonistas de interferones; interferones; interleucinas; compuestos lipofilos de platino; inhibidores de matrilisina; inhibidores de metaloproteinasa de la matriz; ARN bicatenario con emparejamiento incorrecto; moduladores de oxido mtrico; oligonucleotidos; compuestos de platino; inhibidores de la protema cinasa C, inhibidores de la protema tirosina fosfatasa; inhibidores de nucleosido purina fosforilasa; antagonistas de raf; inhibidores de la transduccion de senales; moduladores de transduccion de senales; inhibidores de traduccion; inhibidores de tirosina cinasa y antagonistas del receptor de urocinasa.

En algunas realizaciones, el o los tratamientos empleados en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o una de sus combinaciones es con un agente antiangiogenico. Los ejemplos no restrictivos de agentes antiangiogenicos incluyen protemas, polipeptidos, peptidos, conjugados, anticuerpos (p. ej., humanos, humanizados, hforidos, monoclonales, policlonales, fragmentos Fv, ScFv, Fab, fragmentos F(ab)2 y uno de sus fragmentos de union a antigenos), tales como los anticuerpos que se unen espedficamente a TNF-a, moleculas de acido nucleico (p. ej., moleculas complementarias o triples helices), moleculas organicas, moleculas inorganicas y pequenas moleculas que reducen o inhiben la angiogenia. Se pueden encontrar otros ejemplos de agentes antiangiogenicos, por ejemplo, en la publicacion de EE. UU. n° 2005/0002934 A1 en los parrafos 277-282. En otras realizaciones, el o los tratamientos empleados segun la invencion no es/son un agente antiangiogenico.

En algunas realizaciones, el o los tratamientos empleados en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o una de sus combinaciones es con un agente antinflamatorio. Los ejemplos no restrictivos de agentes antinflamatorios incluyen medicamentos antinflamatorios no esteroideos (AlNE) (p. ej., celecoxib (CELEBREX™), diclofenaco (VOLTAREN™), etodolaco (LODINE™), fenoprofeno (NALFON™), indometacina (iNDOCIN™), cetoralaco (TORADOL™), oxaprozina (DAYPRO™), nabumentona (RELAFe N™), sulindaco (CLINORIL™), tolmentina (TOLECTIN™), rofecoxib (VIOXX™), naproxeno (ALEVE™, NAPROSYN™), cetoprofeno (ACTRON™) y nabumetona (RELAFEN™), medicamentos antinflamatorios esteroideos (p. ej., glucocorticoides, dexametasona (DECADRON™), corticosteroides (p. ej., Metilprednisolona (MEDROL™)), cortisona, hidrocortisona, prednisona (PREDNISONE™ y DELTASONE™), y prednisolona (PREL^oN^e™ y PEDⁱA^pRED™), anticolinergicos (p. ej., sulfato de atropina, metilnitrato de atropina y bromuro de ipratropio (ATRO^vENT™)), beta2-agonistas (p. ej., abuterol (VENTOLIN™ y PROVENTIL™), bitolterol (TORNALATE™), levalbuterol (XOPONEX™), metaproterenol (ALUPENT™), pirbuterol (MAXAIR™), terbutlaina (BRETHAIRE™ y BRETHINE™), albuterol (PROVENTIL™, REPETABS™ y VOLMAX™), formoterol (FORADIL AEROLIZER™), y salmeterol (SEREVENT™ y SEREVENT DISKUS™)) y metilxantinas (p. ej., teofilina (UNIPHYL™, THEO-DUR™, SLO-BID™ y TEHO-42™)).

En determinados casos, el principio activo adicional es un agente alquilante, una nitrosourea, un antimetabolito, una antraciclina, un inhibidor de topoisomerasa II o un inhibidor mitotico. Los agentes alquilantes incluyen, entre otros, busulfan, cisplatino, carboplatino, clorambucilo, ciclofosfamida, ifosfamida, decarbazina, mecloretamina, mephalen y temozolomida. Las nitrosoureas incluyen, entre otras, carmustina (BCNU) y lomustina (CCNU). Los antimetabolitos incluyen, entre otros, 5-fluorouracilo, capecitabina, metotrexato, gemcitabina, citarabina y fludarabina. Las antraciclinas incluyen, entre otras, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y mitoxantrona. Los inhibidores de la topoisomerasa II incluyen, entre otros, topotecan, irinotecan, etopisida (VP-16) y teniposido. Los inhibidores mitoticos incluyen, entre otros, taxanos (paclitaxel, docetaxel) y los alcaloides de las vincas (vinblastina, vincristina y vinorelbina).

Una composicion de nanofibras de sNAG puede contener colageno, aunque en determinados aspectos una composicion de nanofibra de sNAG no contiene colageno.

En determinadas realizaciones, una composicion de nanofibra de sNAG no comprende ningun tratamiento adicional. En determinadas realizaciones, una composicion de nanofibra de sNAG no comprende ningun agente antivmco, agente antineoplasico, agente antifungico, agente antilevadura, agente antinflamatorio, agente quimioterapeutico, agente anti-angiogenico, un peptido de defensina, un peptido de tipo defensina, un peptido de tipol receptor Toll ni un factor de crecimiento adicional.

En algunos casos, el principio activo adicional no es un agente antibacteriano (p. ej., un antibiotico, un peptido defensina, un peptido tipo defensina, o un peptido tipo receptor Toll), o un factor de crecimiento. En casos espedficos, el principio activo adicional no es un factor de crecimiento, tal como PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PDGF-CC, PDGF-DD, FGF-1, FGF-2, FGF-5, FGF-7, FGF-10, EGF, TGF-a, (HB-EGF), anfirregulina, epirregulina, betacelulina, neurregulinas, epigen, VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, factor de crecimiento de la placenta (PLGF), angiopoyetina-1, angiopoyetina-2, IGF-I, IGF-II, factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) y protema estimulante de macrofagos (MSP). En determinados casos, el principio activo adicional no es un agente que estimule el sistema inmunitario, un agente para aliviar el dolor o un agente para aliviar la fiebre.

En determinados casos, el principio activo adicional no es un antibiotico de una de las siguientes clases de antibioticos: microlidos (p. ej., eritromicina, azitromicina), aminoglucosidos (p. ej., amikacina, gentamicina, neomicina, estreptomicina), cefalosporinas (p. ej., cefadroxilo, cefaclor, cefotaxima, cefepima), fluoroquinolonas (p. ej., ciprofloxacina, levofloxacina), penicilinas (p. ej., penicilina, ampicilina, amoxicilina), tetraciclinas (p. ej., tetraciclina, doxiciclina) y carbapenemicos (p. ej., meropenem, imipenem). En algunos casos, el principio activo adicional no es vancomicina, sulfamida (p. ej., co-trimoxazol/trimetoprim-sulfametoxazol), tetraciclina (p. ej., doxiciclina, minociclina), clindamicina, oxazolidinonas (p. ej., linezolid), daptomicina, teicoplanina, quinupristina/dalfopristina (sinercid), tigeciclina, alicina, bacitracina, nitrofurantoma, peroxido de hidrogeno, novobiocina, netilmicina, metilglioxal, defensina-1 de abejas, tobramicina, digluconato de clorhexidina, gluconato de clorhexidina, levofloxacina, cinc y/o plata.

En otros aspectos, una composicion de nanofibra de sNAG no comprende una cantidad significativa de material proteico. En casos espedficos, el contenido de protema de una composicion de nanofibra de sNAG no es mayor del 0.1%, 0.5% o 1% en peso. En otras realizaciones, el contenido de protema de la composicion es indetectable por tincion Coomassie.

En una realizacion, el cinc tambien se incluye en una composicion de nanofibras de sNAG. Ademas de sus propiedades antimicrobianas, el cinc tambien desempena una funcion en la curacion de heridas (vease Andrews et al., 1999, Adv. Wound Care 12:137-8). El cinc se agrega preferiblemente en forma de una sal, tal como oxido de cinc, sulfato de cinc, acetato de cinc o gluconato de cinc.

5.4 Usos profilacticos y terapeuticos.

En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria pueden usarse para prevenir y/o tratar infecciones y/o enfermedades para las que es beneficioso un aumento en la produccion y/o secrecion de defensina. Dichas enfermedades pueden ser el resultado de una insuficiencia de defensina o pueden beneficiarse de una mayor presencia de defensinas.

En un caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar y/o prevenir una enfermedad que esta relacionada con un nivel de expresion nulo o bajo de uno o mas peptidos de defensina; o una mutacion/eliminacion/bajo numero de copias de genes ("NCG") en un gen o genes que codifican uno o mas de los peptidos de la defensina. Los ejemplos de genes de defensina que pueden estar mutados/eliminados/tienen bajo NCG/no expresados o cuya expresion puede ser baja o alterada incluyen cualquiera de las a-defensinas conocidas (p. ej., DEFA1, DEFA1B, D^eFA3, DE^fA4, DEFA5, DEFA6), cualquiera de las p-defensinas conocidas (p. ej., DEFB1, DEFB2, DEFB4, DEFB103A, DEFB104A, DEFB105B, DEFB107B, DEFB108B, DEFB110, DEFB112, DEFB114, DEFB118, DEFB119, DEFB123, DEFB124, DEFB125, DEFB126, DEFB127, DEFB128, DEFB129, DEFB131, DEFB136) y cualquiera de las 0-defensinas conocidas (p. ej., DEFTIP). En alguna realizacion, las composiciones descritas en la presente memoria se utilizan para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion que esta relacionada con un nivel de expresion nulo, bajo o alterado de uno o mas de los genes enumerados anteriormente o una mutacion/eliminacion/bajo NCG de estos. En un caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion que esta relacionada con un nivel de expresion nulo, bajo, alterado o alterado de uno o mas de DEFA1, DEFA3, De FA4, DEFA5, DEFB1, DEFB3, DEFB103A, DEFB104A, DEFB108B, DEFB112, DEFB114, DEFB118, DEFB119, DEFB123, DEFB124, DEFB125, DEFB126, DEFB128, DEFB129 y DEFB131 o una mutacion/supresion/bajo NCG de estos. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion que esta relacionada con un nivel de expresion nulo, bajo o alterado de uno o mas receptores de Toll (p. ej., TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, y/o TLR12) o una mutacion/supresion/NCG bajo de estos. En otras realizaciones mas, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion que esta relacionada con un nivel de expresion nulo, bajo o alterado o una mutacion/eliminacion/NCG bajo de uno o mas de IL-1, CEACAM3, SPAG11, SIGIRR (receptor tipo IL1), IRAK1, IRAK2, IRAK4, TBK1, TRAF6 e IKKi. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion que esta relacionada con un nivel de expresion nulo, bajo o alterado de uno o mas de IRAK2, SIGIRR, TLR1, TLR2, TLR4, TLR7, TLR8, TLR10 y TRAF6 o una mutacion/supresion/NCG bajo de estos

Un nivel bajo de expresion de un gen es un nivel mas bajo (p. ej., mas de 1.25 veces, 1.5 veces, 2 veces, 2.5 veces, 3 veces, 3.5 veces, 4 veces, 4.5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces mas bajo) que el nivel de expresion "normal". Un nivel de expresion alterado de un gen es un nivel que difiere (p. ej., en mas del 20%, 25%, 30%, 50%, 75%, 100%, 150%, 200%, 250%, 300%) del nivel de expresion "normal". En determinadas realizaciones, la expresion de uno o mas genes de defensina (p. ej., Genes de defensina listados anteriormente) en un paciente al que se le administrara una composicion descrita en la presente memoria puede ser menos del 90%, menos del 75%, menos del 60%, menos del 50%, menos del 30% o menos del 20% de la expresion "normal" de uno o mas genes de defensina. En donde la expresion "normal" de uno o mas genes de defensina es: (i) el nivel de expresion promedio que se sabe que se encuentra en sujetos que no presentan smtomas o que no han sido diagnosticados con la enfermedad o infeccion a tratar; (ii) el nivel de expresion promedio detectado en tres, cinco, diez, veinte, veinticinco, cincuenta o mas sujetos que no presentan smtomas o que no heyan sido diagnosticados con la enfermedad o infeccion a tratar; y/o (iii) el nivel de expresion detectado en un paciente al que se administra una composicion descrita en la presente memoria antes del inicio de la enfermedad o infeccion.

En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se utilizan para tratar un cancer de tumor solido. Sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, la capacidad de las nanofibras de sNAG para inducir alfa y beta defensinas (p. ej., beta-defensina 1) puede contribuir a la actividad anticancengena de las nanofibras de sNAG. Se ha demostrado que las alfa y beta defensinas humanas (p. ej., beta-defensina 1) tienen actividad contra el cancer. Ejemplos de canceres de tumores solidos que pueden tratarse con las composiciones descritas en la presente memoria incluyen, entre otros, sarcomas de tejido oseo y conjuntivo, cancer cerebral, cancer de mama, cancer ovarico, cancer renal, cancer pancreatico, cancer de esofago, cancer de estomago, cancer pulmonar (p. ej., cancer pulmonar microdtico (CPM), cancer pulmonar amicrodtico (CPAM), cancer de garganta y mesotelioma), cancer de hngado, y el cancer de prostata. En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar un cancer producido por una infeccion vmca o relacionado con esta. En un caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar el sarcoma de Kaposi. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene un tumor solido mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion en el tamano del tumor solido; prevencion de la metastasis del tumor solido; prevencion de la recafda en el tumor solido; reduccion en la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas relacionados con el tumor solido; reduccion en el numero de smtomas relacionados con el tumor solido; prevencion del aumento del tamano del tumor solido; reduccion/inhibicion de la proliferacion de celulas cancerosas del tumor solido; reduccion en la insuficiencia organica relacionada con el tumor solido; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del paciente; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del paciente; aumento de la supervivencia del paciente; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente.

En otro caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar el cancer de piel. Ejemplos de canceres de piel que pueden tratarse con las composiciones descritas en la presente memoria incluyen, entre otros, melanoma, carcinoma de celulas basales y carcinoma espino-celular. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene un cancer de piel mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion en el tamano del cancer de piel; prevencion de la metastasis del cancer de piel; prevencion de la recafda del cancer de piel; reduccion en la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas relacionados con el cancer de piel; reduccion en el numero de smtomas relacionados con el cancer de piel; reduccion de la insuficiencia organica relacionada con el cancer de piel; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del paciente; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del paciente; aumento de la supervivencia del paciente; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente.

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar la enfermedad inflamatoria intestinal (EII). Sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, la capacidad de las nanofibras de sNAG para producir alfa y beta defensinas puede contribuir a la actividad anti-EII de las nanofibras de sNAG. Las alfa y beta defensinas han demostrado tener actividad anti-EII. La EII incluye, entre otras, la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene EII mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion de la recafda de EII; reduccion en la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas relacionados con EII; reduccion en el numero de smtomas relacionados con la EII; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del paciente; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del paciente; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente. Algunos de los smtomas de la EII incluyen dolor abdominal, vomitos, diarrea, sangrado rectal, calambres internos graves/espasmos musculares en la region de la pelvis, perdida de peso y diversas dolencias o enfermedades relacionadas como artritis, pioderma gangrenoso y colangitis esclerosante primaria. En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria evitan la aparicion o el desarrollo de uno o mas de los smtomas enumerados anteriormente u otros smtomas conocidos en la tecnica, o reducen la duracion y/o la gravedad de uno o mas de estos smtomas. En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar la colitis ulcerosa. Los smtomas de la colitis ulcerosa pueden incluir los smtomas de la EII enumerados anteriormente, y tambien pueden incluir la defecacion, a menudo mucoide y con sangre, tenesmo y/o fiebre. El ejemplo 9, mas adelante, demuestra que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar la EII segun los datos obtenidos en un modelo animal de EII. Una composicion que comprende nanofibras de sNAG que pueden usarse para tratar la EII puede ser cualquier composicion sNAG descrita en la presente memoria. En un caso, una composicion que comprende nanofibras de sNAG que pueden usarse para tratar la EII es la misma o similar a la composicion descrita en el ejemplo 9.

En un caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar la enfermedad de Crohn (p. ej., la enfermedad de Crohn ileal). Sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, la capacidad de las nanofibras de sNAG para producir alfa y beta defensinas puede contribuir a la actividad contra la enfermedad de Crohn de las nanofibras de sNAG. Se ha demostrado que las alfa y beta defensinas tienen actividad contra la enfermedad de Crohn. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que padece la enfermedad de Crohn mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion de la recafda de la enfermedad de Crohn; reduccion en la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas relacionados con la enfermedad de Crohn; reduccion en el numero de smtomas relacionados con la enfermedad de Crohn; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del paciente; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del paciente ; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente. Algunos de los smtomas de la enfermedad de Crohn incluyen dolor abdominal, vomitos, diarrea, sangrado rectal, calambres internos graves/espasmos musculares en la region de la pelvis, perdida de peso y diversas afecciones o enfermedades relacionadas como artritis, pioderma gangrenoso y colangitis esclerosante primaria. Los smtomas de la enfermedad de Crohn tambien pueden incluir defecacion, a menudo similar a papilla y, a veces, esteatorrea, fiebre, fistulas, flatulencia, distension abdominal, malestar perianal como prurito y dolor, incontinencia fecal, ulceras aftosas en la boca y/o perdida de peso. En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria previenen la aparicion o el desarrollo de uno o mas de los smtomas enumerados anteriormente u otros smtomas conocidos en la tecnica, o reducen la duracion y/o la gravedad de uno o mas de estos smtomas.

En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar la mucositis. La mucositis es la inflamacion dolorosa y la ulceracion de las membranas mucosas que recubren el tubo digestivo (p. ej., como un efecto secundario de la quimioterapia o del tratamiento de radioterapia para el cancer). La mucositis puede ocurrir en cualquier lugar a lo largo del aparato digestivo, por ejemplo, en la boca (es decir, mucositis bucal). Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica a un paciente (p. ej., a un paciente diagnosticado con o con smtomas de mucositis) para tratar la mucositis (p. ej., se administra por via topica en el area inflamada o ulcerada de la boca, o se administra por via topica en el ano o el area rectal, tal como mediante una crema, un supositorio, una suspension, una solucion lfquida, un gel o una pomada). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una inflamacion o ulcera producida por la mucositis o relacionada con ella (p. ej., en la boca). En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de la mucositis disminuyan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas). En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene mucositis mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de la mucositis; reduccion en la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas relacionados con la mucositis (p. ej., dolor, ulceracion); reduccion en el numero de smtomas relacionados con la mucositis; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del paciente; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del paciente y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente.

En un caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion vmca o un smtoma producido por la misma o relacionada con esta. Sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, la capacidad de las nanofibras de sNAG para producir beta defensinas (p. ej., beta-defensina 1) puede contribuir a la actividad antivmca de las nanofibras de sNAG. Se ha demostrado que las beta-defensinas (p. ej., la beta defensina 1) tienen actividad antivmca. Ejemplos de virus que pueden hacer que la infeccion o enfermedad se evite y/o se trate con las composiciones descritas en la presente memoria incluyen, otros, el virus sincitial respiratorio (VSR), virus de la gripe (virus de la gripe A, virus de la gripe B o virus de la gripe C), metaneumovirus humano (MNVH), rhinovirus, virus paragripal, Coronavirus SARS, virus de inmunodeficiencia humana (VIH), virus de la hepatitis (A, B, C), virus del ebola, virus del herpes simple (p. ej., VHS-1, VHS-2, VHS-6, VHS-7), varicela, virus de varicela-zoster, virus del papiloma humano (VPH), parapoxvirus, morbillivirus, virus ECHO, adenovirus, virus de Epstein Barr, virus Coxsackie, enterovirus, rubeola, viruela mayor y viruela menor. En determinadas realizaciones, la prevencion de una infeccion vmca en un paciente o una enfermedad producida o relacionada con ella por la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion del desarrollo o aparicion de una enfermedad producida por o relacionada con infeccion vmca; y/o prevencion de la propagacion de una infeccion vmca o una enfermedad producida por o relacionada con la misma desde el sujeto a otro sujeto o poblacion de sujetos. En determinadas realizaciones, el tratamiento de un paciente que tiene una infeccion vmca o una enfermedad producida por o relacionada con esta, por administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion de la recafda de la infeccion vmca; reduccion en el numero de smtomas relacionados con la infeccion vmca o una enfermedad producida o relacionada con ella; reduccion de la insuficiencia organica relacionada con la infeccion vmca o una enfermedad producida o relacionada con ella; reduccion de la gravedad y/o la duracion de la infeccion vmca o una enfermedad producida o relacionada con ella; reduccion de la gravedad y/o la duracion de uno o mas smtomas de la infeccion vmca o una enfermedad producida o relacionada con ella; reduccion en la carga vmca o en el recuento (p. ej., en mas de aproximadamente 0.25 log, 0.5 log, 0.75 log, 1 log, 1.5 log, 2 logs, 2.5 logs, 3 logs, 4 logs, 5 logs, 6 logs, 7 logs, 8 logs, 9 logs o 10 logs); reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del paciente; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del paciente; aumento de la supervivencia del sujeto; intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente; prevencion de la propagacion de un virus de una celula, tejido, organo del paciente a otra celula, tejido, organo del paciente; prevencion del desarrollo o aparicion de una enfermedad producida por o relacionada con la infeccion vmca, o uno o mas de sus smtomas; y/o prevencion de la propagacion de una infeccion vmca o una enfermedad producida por o relacionada con la misma desde el sujeto a otro sujeto o poblacion de sujetos.

En un caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria no se usan para prevenir y/o tratar una infeccion por VIH o una enfermedad producida por una infeccion por VIH o relacionada con esta.

Los smtomas de una infeccion vmca pueden incluir, entre otros, fiebre, escalofnos, dolor de cabeza, rigidez en el cuello, irritabilidad, adenopatfas, diarrea, nauseas, vomitos, una anomalfa de la piel o de la membrana mucosa relacionada con una infeccion vmca (p. ej., una erupcion, una ulceracion, una ulcera bucal, una lesion, una inflamacion, enrojecimiento, prurito, una papula, una vesmula, una pustula, una ampolla, una costra) y/o dolor relacionado con dicha anomalfa, dolor abdominal, dolor de garganta, dolor de ofdo, tos, perdida de peso, fatiga, dolores corporales y/u otros smtomas similares a la gripe. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria evitan la aparicion o el desarrollo de uno o mas de los smtomas enumerados anteriormente u otros smtomas conocidos en la tecnica, o reducen la duracion y/o la gravedad de uno o mas de estos smtomas.

En otro caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion vmca de una herida (p. ej., una herida abierta como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura). En otro caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria no se usan para prevenir y/o tratar una infeccion vmca de una herida. Hay dos tipos de heridas, abiertas y cerradas. Las heridas abiertas se clasifican de acuerdo con el objeto que causo la herida. Por ejemplo, las incisiones o heridas incisas (incluidas las heridas quirurgicas) son producidas por un objeto limpio y afilado, como un cuchillo, una maquinilla de afeitar o una astilla de vidrio. Las laceraciones son heridas irregulares producidas por un impacto contundente en el tejido blando que se encuentra sobre el tejido duro (p. ej., laceracion de la piel que cubre el craneo) o desgarro de la piel y otros tejidos como los producidos por el parto. Las abrasiones o rozaduras son heridas superficiales en las que se raspa la capa superior de la piel (la epidermis). Las heridas por puncion son producidas por un objeto que perfora la piel, como un clavo o una aguja. Las heridas de penetracion son producidas por un objeto como un cuchillo que penetra en el cuerpo. Las heridas de bala son producidas por una bala o un proyectil similar que se dirige hacia el cuerpo (p. ej., una herida de entrada) y/o a traves del mismo (p. ej., una herida de salida). En un contexto medico, todas las punaladas y heridas de bala se consideran heridas abiertas. Las heridas abiertas tambien incluyen quemaduras provocadas por lesiones termicas, qmmicas o electricas. Las heridas cerradas incluyen contusiones (mas frecuentemente conocidas como moretones, producidas por un traumatismo por fuerza contundente que dana el tejido debajo de la piel), hematomas (tambien llamados quistes hemorragicos, producidos por el dano a un vaso sangumeo que a su vez produce sangre para recoger bajo la piel) y lesiones por aplastamiento (producidas por una gran o extrema cantidad de fuerza aplicada durante un largo periodo de tiempo).

En determinadas realizaciones, las composiciones de sNAG descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion vmca topica en un paciente (p. ej., en un paciente diagnosticado con infeccion vmca o que muestra un smtoma de una infeccion vmca). En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion vmca o un smtoma de una infeccion vmca en la piel, membranas mucosas (p. ej., ojos, ofdos, garganta, vagina, ano), o la superficie de otros tejidos. En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran directamente a la piel, membrana mucosa (p. ej., ojos, ofdos, garganta, cavidad bucal, vagina, ano), o la superficie de otros tejidos. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar fases de ulcera vesicular (tal como una vesfcula, una pustula o una ampolla), o de costra de una infeccion vmca (p. ej., infeccion por el virus del herpes simple o infeccion por varicela zoster). En otras realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar fases de prodromos, de eritema/macula o papula/edema de una infeccion vmca (p. ej., infeccion por el virus del herpes simple o infeccion por varicela zoster). En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona o cerca de la zona de una infeccion vmca o en la zona o cerca de la zona de un smtoma de una infeccion vmca (p. ej., a un herpes labial, lesion, ampolla, pustula, ulcera, fiebre, hinchazon o costra relacionada con una infeccion vmca). En algunas realizaciones, el tratamiento de un sujeto que tiene una infeccion vmca topica mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma de una infeccion vmca topica (p. ej., una prurito, una lesion, una ulcera, una ampolla, una papula, una erupcion, una costra o cualquier otro smtoma de una infeccion vmca topica descrita en la presente memoria o conocido en la tecnica); reduccion del dolor relacionado con un smtoma de una infeccion vmca topica; reduccion en el numero de smtomas relacionados con una infeccion vmca topica; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de una infeccion vmca topica; prevencion de la propagacion de una infeccion vmca topica del sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de uno o mas de los smtomas de una infeccion vmca topica descrita en la presente memoria o conocida en la tecnica; y/o intensificacion o mejora del efecto o efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento (p. ej., otro tratamiento antivmco) en el sujeto. En casos espedficos, las composiciones de sNAG descritas en la presente memoria se formulan en una forma sin barrera para su uso en el tratamiento de infecciones vmcas topicas. Por ejemplo, las composiciones descritas en la presente memoria se formulan en forma de una solucion lfquida, una suspension (p. ej., una suspension espesa), una crema o una pomada para usar en el tratamiento de infecciones vmcas topicas. En una realizacion, las composiciones de sNAG descritas en la presente memoria no estan en forma solida cuando se usan en el tratamiento de infecciones vmcas topicas. En otras realizaciones mas, las composiciones de sNAG descritas en la presente memoria son formadoras de barrera y/o solidas para uso en el tratamiento de infecciones vmcas topicas. El ejemplo 8, mas adelante, demuestra que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar infecciones vmcas topicas basandose en los datos obtenidos en pacientes humanos. En especial, el ejemplo 8 demuestra que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar una infeccion por VHS, como un herpes labial producido por o relacionado con una infeccion por VHS, en pacientes humanos. Una composicion que comprende nanofibras de sNAG que pueden usarse para tratar una infeccion vmca topica puede ser cualquier composicion de sNAG descrita en la presente memoria. En una realizacion, una composicion que comprende nanofibras de sNAG que pueden usarse para tratar una infeccion vmca topica (p. ej., VHS) puede ser la misma o similar a la composicion descrita en el ejemplo 8.

En la presente memoria se describen infecciones vmcas y enfermedades/afecciones de la piel relacionadas con infecciones vmcas que pueden tratarse por via topica usando las composiciones descritas en la presente memoria incluyen, entre otras, sarampion (morbillivirus), rubeola (virus de la rubeola), varicela (virus de la varicela), quinta enfermedad (eritema infeccioso, debida a parvovirus), roseola, mononucleosis infecciosa o fiebre glandular (virus de Epstein Barr), infecciones por enterovirus, pitiriasis rosada (posiblemente producida por el herpes 6 o 7), enfermedad de manos, pies y boca (debida a la infeccion de Coxsackie), Smdrome de Gianotto-Crosti (acrodermatitits papular que ocurre en ninos; mas a menudo producida por mononucleosis infecciosa debida al virus de Epstein Barr o hepatitis B), exantema laterotoracico (exantema periflexural asimetrico de la infancia o EPAI), viruela, viruela bovina, epidermodisplasia verruciforme, afecciones de la piel producidas o relacionadas con infecciones por VIH y/o sarcoma de Kaposi, enfermedades rickettsiales, fiebre amarilla (debida a una infeccion por flavivirus), herpes simple (herpes labial y herpes genital), eccema herpetico, herpes zoster (culebrilla), herpangina/estomatitis vesicular (ulceras bucales), molusco contagioso, verrugas vmicas (p. ej., verrugas, verrugas genitales o condilomas, papilomas espino-celulares), panadizo herpetico, infeccion cutanea herpetica traumatica (herpes gladiatorum), Orf y nodulos de los ordenadores.

En un caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion con un virus del herpes simple (p. ej., VHS-1, VHS-2), o una enfermedad o afeccion producida por un virus del herpes simple (p. ej., VHS-1, VHS-2). Los smtomas del virus del herpes simple tipo 1 (VHS-1) pueden incluir ampollas o lesiones en la boca, garganta, labios (p. ej., herpes labial peribucal) y los smtomas del virus del herpes simple tipo 2 (VHS-2) pueden incluir ampollas o lesiones (p. ej., papulas y/o vesmulas) en la superficie externa de los genitales. Ambos tipos de VHS residen en estado latente en los nervios sensoriales de la piel. Durante un ataque, el virus se propaga por los nervios y se extiende hacia la piel o las membranas mucosas donde se multiplica, causando la lesion clmica. Despues de cada ataque, retrocede la fibra nerviosa y vuelve a estar latente. Durante la fase activa, hay un considerable desprendimiento de virus y las lesiones son muy contagiosas. Las infecciones primarias de tipo 1 ocurren principalmente en lactantes y ninos pequenos y generalmente son leves o subclmicas. En las areas mas pobladas y subdesarrolladas del mundo, hasta el 100% de los ninos se han infectado a la edad de 5 anos. El tipo 2 generalmente se adquiere sexualmente, despues de la pubertad y con frecuencia es menos asintomatico. El virus se elimina en la saliva y en las secreciones genitales, durante un ataque clmico y durante algunos dfas o semanas despues. La cantidad eliminada de las lesiones activas es de 100 a 1000 veces mayor que cuando esta inactiva. La propagacion del VHS es generalmente por contacto directo con las secreciones infectadas. Cuando la inmunidad es deficiente, las infecciones tienden a ocurrir con mayor frecuencia y a ser mas pronunciadas y persistentes. La recafda puede ser desencadenada por: traumatismo menor; otras infecciones incluida la coriza, radiacion ultravioleta (exposicion al sol); factores hormonales (se producen brotes premenstruales); estres emocional; operaciones o procedimientos realizados en la cara (incluyendo odontologfa). Por consiguiente, en algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la infeccion por VHS-1 o una lesion o herpes labial relacionado con la infeccion por VHS-1 (p. ej., administrada por via bucal o peribucal). En otras realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la infeccion por VHS-2 o una lesion genital relacionada con la infeccion por VHS-2 (p. ej., administrada por via topica en el area genital, tal como por via vaginal). En algunas realizaciones, el tratamiento de un sujeto que tiene una infeccion por VHS o una enfermedad producida o relacionada con ello por administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma de una infeccion por VHS (p. ej., un herpes labial, una lesion, o cualquier otro smtoma de una infeccion por VHS descrita en la presente memoria o conocida en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas relacionados con una infeccion por VHS, reduccion del dolor relacionado con un smtoma de una infeccion por VHS (p. ej., una ulcera bucal o una lesion); prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de una infeccion por VHS; prevencion de la propagacion de una infeccion por VHS del sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion del desarrollo de uno o mas smtomas de una infeccion por VHS; y/o intensificacion o mejora del efecto o los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente. En realizaciones especiales, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante humano, a un nino pequeno, a un nino, a un adulto humano y a un anciano que tiene una infeccion por VHS o un smtoma de una infeccion por VHS. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica en una superficie (p. ej., peribucal, o bucal o genital de la piel o membranas mucosas) en el momento en que el area comienza a hormiguear, picar o hincharse (en la que el cosquilleo, el prurito o la hinchazon en la superficie esta relacionada con una infeccion por VHS (p. ej., VHS-1 o VHS-2)). En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica en la zona, o cerca de la zona, de una lesion o herpes labial (p. ej., una lesion peribucal, bucal o genital en la piel o en una membrana mucosa) (en donde el herpes labial o la lesion estan relacionados con una infeccion por VHS (p. ej., VHS-1 o VHS-2)). El ejemplo 8 demuestra que una composicion de nanofibras de sNAG fue eficaz para tratar el herpes labial relacionado con la infeccion por VHS en pacientes humanos cuando se aplico por via topica en la zona del herpes labial en un paciente, y que el tratamiento de los herpes labiales relacionados con VHS con una composicion de nanofibras de sNAG dio lugar a la reduccion de la gravedad y la duracion de los herpes labiales y del dolor relacionado con los herpes labiales. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar etapas de ulcera vesicular (tal como una vesmula, una pustula o una ampolla), o costras de una infeccion por VHS (p. ej., VHS-1 o VHS-2). En otras realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar etapas de prodromos, de eritema/macula o papula/edema de una infeccion por VHS (p. ej., VHS-1 o VHS-2). En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en combinacion con un farmaco antivmco (p. ej., aciclovir o cualquier otro farmaco antivmco descrito en la presente memoria o conocido en la tecnica) en el tratamiento de una infeccion por VHS. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de una infeccion por VHS desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, o mas de 4 semanas).

En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion con virus de la varicela, o una enfermedad o afeccion producida por el virus de la varicela (herpes zoster, culebrilla o varicela). Durante la infeccion por varicela (vease Shingles, Clinical Knowledge Summaries (2008)), que suele ocurrir en la infancia, el virus se siembra en las celulas nerviosas, generalmente en las celulas sensoriales. El herpes zoster o la culebrilla se caracteriza por su distribucion en un solo dermatoma. Puede que no afecte a todo el dermatoma, pero generalmente se limita al area de un dermatoma y, por lo tanto, no cruza la lmea media. Los smtomas del herpes zoster incluyen, sin limitacion, una erupcion, que consiste en maculas y papulas, y se desarrolla en lesiones vesiculares en una distribucion dermatomal (mas frecuentemente en el torax) y dolor. La erupcion tiende a durar de 7 a 10 dfas y la curacion puede durar de 2 a 4 semanas. Puede ocurrir una enfermedad mas larga en pacientes inmunodeficientes (p. ej., con linfomas y VIH). El herpes zoster puede ocurrir a cualquier edad, pero es mas frecuente en los ancianos y algo mas frecuente en las mujeres (aunque la varicela afecta a ambos sexos por igual). Las complicaciones de la piel pueden incluir infeccion secundaria, cicatrizacion y cambios en la pigmentacion. Los ancianos son mas propensos a tener complicaciones debido al herpes zoster (especialmente la neuralgia posherpetica). Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la infeccion por herpes zoster o varicela (p. ej., administrada en la piel). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una erupcion (p. ej., una macula o papula en la piel (en donde la erupcion se asocia a la infeccion por herpes zoster). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto con infeccion por herpes zoster o una enfermedad producida o relacionada con ella por la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma de infeccion por herpes zoster (p. ej., una erupcion, o cualquier otro smtoma de infeccion por herpes zoster enumerado en la presente memoria o conocido en la tecnica); reduccion en la cantidad de smtomas relacionados con la infeccion por herpes zoster; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de infeccion por herpes zoster; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de infeccion por herpes zoster; prevencion de la propagacion de la infeccion por herpes zoster desde el sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de infeccion por herpes zoster y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento (p. ej., otro tratamiento antivmco) en el sujeto. En casos especiales, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante humano, un nino pequeno, un nino, un adulto humano y/o un anciano que tiene una infeccion por herpes zoster o un smtoma de infeccion por herpes zoster. En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en combinacion con un farmaco antivmco (p. ej., aciclovir o cualquier otro farmaco antivmco descrito en la presente memoria o conocido en la tecnica) en el tratamiento de la infeccion por herpes zoster. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de la infeccion por herpes zoster desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, o mas de 4 semanas).

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se utilizan para prevenir y/o tratar la infeccion por molusco contagioso. El molusco contagioso es frecuente y generalmente afecta a lactantes y ninos pequenos, y, solo rara vez, a adultos (vease Molluscum contagiosum. Clinical Knowledge Summaries (2008)). Los smtomas del molusco contagioso incluyen, entre otros, grupos de papulas pequenas, en particular, en los lugares humedos y calidos, como la axila, la ingle o detras de las rodillas. Las papulas vanan en tamano desde 1 a 6 mm y pueden ser blancas, rosadas o marrones. A menudo tienen un aspecto ceroso y rosado y estan umbilicados (una depresion central de la superficie). A medida que se resuelven, pueden inflamarse, formar costras o tener rona. Pueden ser unos pocos o varios centenares en cualquier individuo. La enfermedad puede persistir durante meses u ocasionalmente durante un par de anos. En raras ocasiones, puede dejar pequenas cicatrices en forma de pequenos hoyos (induracion). El molusco contagioso se puede transmitir de una persona a otra, generalmente entre los ninos, por contacto directo con la piel; y el contacto sexual en adultos puede transmitir la infeccion. Las lesiones tienden a ser mas numerosas y mas persistentes en ninos con eccema atopico y en pacientes infectados por el VIH. En los ninos, las lesiones son frecuentes en la cara y el tronco. Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la infeccion por molusco contagioso (p. ej., administrada en la piel). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una erupcion (p. ej., una macula o papula en la piel) (en donde la erupcion esta relacionada con la infeccion por molusco contagioso). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene molusco contagioso o una enfermedad producida por o relacionada con esta por administracion de una composicion descrita en la presente memoria produce uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o duracion de un smtoma de molusco contagioso (p. ej., una erupcion, o cualquier otro smtoma de molusco contagioso enumerado en la presente memoria o conocido en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas de molusco contagioso; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de molusco contagioso; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de molusco contagioso; prevencion de la propagacion del molusco contagioso de un sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de molusco contagioso; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el sujeto. En casos particulares, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante, un nino pequeno, un nino, un adulto humano y/o un anciano que tiene molusco contagioso o un smtoma de molusco contagioso. En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en combinacion con un tratamiento conocido (p. ej., compresion, perforacion, legrado, crioterapia, tintes para verrugas tal como acido silfcico y podofilina; agente inmunomodulador tal como crema de imiquimod; crema de hidrocortisona al 1%; o crema de acido fusfdico al 2%) en el tratamiento de la infeccion por molusco contagioso. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria se pueden administrar diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de la infeccion por molusco contagioso desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, o mas de 4 semanas).

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se utilizan para prevenir y/o tratar el virus del papiloma humano o las verrugas o verrugas relacionadas con el virus del papiloma humano. Se conocen mas de 80 subtipos de VPH (vease Warts and verrucae, Clinical Knowledge Summaries (junio de 2009)), de los cuales 20 pueden afectar el aparato genital. La presentacion y el aspecto de la infeccion por VPH vanan segun la zona de la infeccion. Por ejemplo, las verrugas plantares ocurren en areas que soportan presion y se aplanan en lugar de elevarse. Las verrugas son mas frecuentes en la infancia y se propagan por contacto directo o autoinoculacion; puede pasar hasta 12 meses para que aparezca la verruga. Las verrugas por VPH son mas frecuentes y mas problematicas en asociacion con la inmunosupresion, y son mas infecciosas cuando estan mojadas o cuando sangran por un traumatismo (p. ej., al rascarse). La infeccion por VPH es mas persistente en adultos que en ninos. Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la infeccion por el VPH o verrugas o verrugas relacionadas con la infeccion por el VPH (p. ej., administradas en la piel). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una verruga o verrugas (en donde la verruga o verrugas es producida por el VPH o esta relacionada con este). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene una infeccion por VPH o una enfermedad producida o relacionada con este mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria produce uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma de infeccion por VPH ( por ejemplo, una verruga, verrugas, o cualquier otro smtoma de infeccion por VPH descrito en la presente memoria o conocido en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas relacionados con la infeccion por VPH; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de infeccion por VPH; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de infeccion por VPH; prevencion de la propagacion de la infeccion por VPH desde el sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o el desarrollo de un smtoma de infeccion por VPH; y/o intensificacion o mejora del efecto o de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente. En casos especiales, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante humano, a un nino pequeno, a un nino, a un adulto y a un anciano que tiene una infeccion por VPH o un smtoma de infeccion por VPH. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse a diario (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de la infeccion por VPH desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas).

En otro caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar orf. Orf se contrae con ovejas y cabras (vease Orf, Health Protection Agency (2010)). Es producida por un parapoxvirus, que infecta principalmente a corderos y cabras jovenes que contraen la infeccion entre sf (o posiblemente por la persistencia del virus en los pastos). Las lesiones humanas son producidas por la inoculacion directa de material infectado. Puede ocurrir en granjeros, carniceros, veterinarios, ninos que se alimentan de tarritos de cordero con y posiblemente incluso ninos que juegan en pastizales donde las ovejas han pastoreado. El periodo de incubacion del parapoxvirus es de 5 o 6 dfas. Las lesiones orf suelen ser solitarias, pero se dan lesiones multiples. Las lesiones orf suelen ser pequenas, firmes, de color rojo o azul rojizo, formando un bulto que se agranda para formar una pustula o una ampolla con una superficie plana y tenida de sangre. La lesion completamente desarrollada suele ser de 2 o 3 cm de diametro, pero puede ser tan grande como 5 cm; y aunque parece haber pus debajo de la piel blanca, al incidir esta mostrara un tejido firme y rojo debajo. La lesion es a veces irritable durante las primeras fases y suele ser blanda. Suelen producirse en los dedos, las manos o los antebrazos, pero tambien pueden producirse en la cara. Pueden producirse lmeas linfaticas rojas en el lado interno del codo hasta la axila. Puede haber una fiebre leve relacionada con orf. Por consiguiente, en algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar orf (p. ej., administradas en la piel). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una lesion, una pustula o una ampolla (en donde la lesion, pustula o ampolla es producida por orf o relacionada con esta). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene orf mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma de orf (p. ej., una lesion, una pustula, una ampolla o cualquier otro smtoma de orf descrito en la presente memoria o conocido en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas relacionados con orf; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de orf; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de orf; prevencion de la propagacion del orf desde el sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de orf; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente. En casos especiales, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante humano, a un nino pequeno, a un nino, a un adulto humano y/o a un anciano que tiene orf o un smtoma de orf. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de orf desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas).

En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar infecciones vmcas que producen erupciones cutaneas. Los ejemplos de infecciones vmcas que producen erupciones incluyen, entre otros, sarampion (morbillivirus), rubeola (virus de la rubeola), varicela (virus de la varicela), quinta enfermedad (eritema infecciosa, debida al parvovirus), roseola (eritema subitum, debido a herpes virus 6), pitiriasis rosada (se desconoce la causa, pero puede ser producida por los tipos de herpes virus 6 y 7), infecciones por virus ECHO y adenovirus, virus de Epstein Barr de mononucleosis infecciosa o fiebre glandular e infeccion primaria por VIH. En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar erupciones no espedficas relacionadas con infecciones vmcas (p. ej., erupcion eritematosa tal como erupcion eritematosa enrojecida). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona de una erupcion producida por una infeccion vmca o relacionada con esta o en proximidad de la zona de una erupcion producida por una infeccion vmca o relacionada con esta. En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria reducen la gravedad de las erupciones, la duracion de las erupciones y/o el dolor relacionado con las erupciones producidas por una infeccion vmca.

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar la enfermedad de manos, pies y boca o una infeccion producida por el virus Coxsackie o el enterovirus. La enfermedad de manos, pies y boca es frecuente, leve y breve, que afecta con mayor frecuencia a ninos pequenos durante los meses de verano (vease Hand, foot and mouth disease, Clinical Knowledge Summaries (marzo de 2010)). La enfermedad de manos, pies y boca es producida por el virus Coxsackie A16, aunque tambien puede deberse al enterovirus 71. El penodo de incubacion de dichos virus es de 3 a 5 dfas. Los smtomas de la enfermedad de manos, pies y boca incluyen pequenas ampollas planas en las manos y los pies, ulceras bucales, que a veces son dolorosas, y la enfermedad puede ir acompanada de una fiebre leve o una erupcion en las nalgas (en ninos pequenos). Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la enfermedad de manos, pies y boca o una afeccion producida por el virus Coxsackie o relacionada con este o la infeccion por enterovirus (p. ej., administrada en la piel). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una ampolla, ulcera o erupcion (en donde la ampolla, ulcera o erupcion esta relacionada con una enfermedad de manos, pies y boca o una afeccion producida por el virus Coxsackie o relacionada con este o una infeccion por enterovirus). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene la enfermedad de manos, pies y boca mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma de la enfermedad de manos, pies y boca (p. ej., una erupcion, una ampolla, una ulcera o cualquier otro smtoma de la enfermedad de manos, pies y boca descrita en la presente memoria o conocida en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas de la enfermedad de manos, pies y boca; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de enfermedad de manos, pies y boca; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de enfermedad de manos, pies y boca; prevencion de la propagacion de la enfermedad de manos, pies y boca, fiebre desde el sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o el desarrollo de un smtoma de enfermedad de manos, pies y boca; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente. En casos especiales, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante, un nino pequeno, un nino, un adulto humano y/o un anciano que tiene una enfermedad de manos, pies y boca o un smtoma de la enfermedad de manos, pies y boca. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de la enfermedad de manos, pies y boca desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas).

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar el smdrome de Crosti-Gianotti. El smdrome de Crosti-Gianotti es una respuesta de la piel a una infeccion vmca con una erupcion papular que dura varias semanas. Esta afeccion tambien se conoce como acrodermatitis papulovesicular de la infancia, acrodermatitis papular de la infancia y acrodermatitis papulosa infantil. El smdrome de Crosti-Gianotti puede ser producido por el virus de la Hepatitis B, el virus de Epstein Barr, los virus de Coxsackie, los virus ECHO o el virus sincitial respiratorio. Afecta a ninos entre 6 y 12 meses. En esta afeccion, se puede desarrollar una erupcion profusa de manchas rojas mate durante 3 o 4 dfas. Suelen aparecer en primer lugar en los muslos y las nalgas, luego en la parte externa de los brazos y, finalmente, en la cara, a menudo en una configuracion asimetrica (vease Chuh, Cutis 68 (3): 207-13 (2001)). Las manchas pueden tener un diametro de 5 a 10 mm, pueden tener un color rojo intenso o purpura (especialmente en las piernas, debido a la perdida de sangre de los capilares), y pueden convertirse en ampollas llenas de lfquido. Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar el smdrome de Crosti-Gianotti (p. ej., administradas en la piel). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una mancha roja, erupcion o fiebre (en donde la mancha roja, erupcion o fiebre esta relacionada con el smdrome de Crosti-Gianotti o una infeccion producida por el virus de la hepatitis B, el virus de Epstein Barr, el virus de Coxsackie, virus ECHO o virus sincitial respiratorio). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto con smdrome de Crosti-Gianotti mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma del smdrome de Crosti-Gianotti (p. ej., una mancha roja, una erupcion, fiebre o cualquier otro smtoma del smdrome de Crosti-Gianotti descrito en la presente memoria o conocido en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas relacionados con el smdrome de Crosti-Gianotti; reduccion del dolor relacionado con un smtoma del smdrome de Crosti-Gianotti; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma del smdrome de Crosti-Gianotti; prevencion de la propagacion del smdrome de Crosti-Gianotti del sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de Crosti-Gianotti; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente. En casos concretos, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante (en particular, a un lactante de entre 6 y 12 meses de edad), a un nino pequeno, a un nino, a un adulto humano y/o a un anciano que tiene el smdrome de Crosti-Gianotti o un smtoma del mismo. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas del smdrome de Crosti-Gianotti desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas).

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar el herpes gladiatororum o "impetigo". El herpes gladiatorum se transmite principalmente por el contacto directo piel a piel y las abrasiones pueden facilitar un portal de entrada (vease Becker et al., Am. J. Sports Med. 16(6): 665-9 (1988)). La mayona de las lesiones debidas al herpes gladiatorum ocurren en la cabeza o la cara, seguidas del tronco y las extremidades. Los smtomas del herpes gladiatorum incluyen, entre otros, prurito prodromico o sensacion de ardor, que pueden ser seguidos por vesmulas agrupadas en una base eritematosa que se curan con costras durante aproximadamente 1 a 2 semanas. Otros smtomas menos frecuentes del herpes gladiatorum incluyen, entre otros, dolor de cabeza, malestar general, dolor de garganta y fiebre. Los episodios de recafda pueden seguir a la infeccion inicial. Se puede hacer un diagnostico preciso mediante inmunofluorescencia vmca, y se pueden obtener cultivos rompiendo suavemente una vesmula intacta y frotando firmemente la punta del hisopo a traves de la base de la erosion. Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la infeccion por herpes gladiatorum (p. ej., administrada sobre la piel). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de un prurito, una lesion, una vesmula o una costra (en donde la zona de prurito, de una lesion, de una vesmula o de una costra esta producida por infeccion con herpes gladiatorum o relacionada con este). En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en combinacion con un farmaco antivmco (p. ej., aciclovir o cualquier otro medicamento antivmco descrito en la presente memoria o conocido en la tecnica) en el tratamiento de la infeccion por herpes gladiatorum. En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene herpes gladiatorum mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria produce uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o duracion de un smtoma de herpes gladiatorum (p. ej., una prurito, una lesion, una vesmula, una costra o cualquier otro smtoma de infeccion por VPH descrito en la presente memoria o conocido en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas relacionados con el herpes gladiatorum; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de herpes gladiatorum; prevencion de la recafda de un smtoma de herpes gladiatorum; prevencion de la propagacion del herpes gladiatorum del sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de herpes gladiatorum y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el sujeto. En casos concretos, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante, a un nino pequeno, a un nino, a un adulto humano y/o a un anciano que tiene herpes gladiatorum o un smtoma de herpes gladiatorum. En casos espedficos, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un atleta (p. ej., un atleta profesional) con un proposito profilactico y/o terapeutico. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas del herpes gladiatorum desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas).

En otro caso espedfico, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar verrugas frecuentes relacionadas con una infeccion vmca (p. ej., verrugas plantares, verrugas en callos). En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de una verruga producida por una infeccion vmca o relacionada con esta o cerca de la zona de una verruga producida por una infeccion vmca o relacionada con esta. En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria reducen el numero de verrugas, la gravedad de las verrugas, la duracion de las verrugas y el dolor relacionado con las verrugas producidas por una infeccion vmca.

En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar infecciones vmcas en pacientes inmunodeficientes (p. ej., pacientes infectados por VIH).

En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar gastroenteritis (p. ej., gastroenteritis producida por una infeccion vmca o relacionada con esta, o gastroenteritis producida por una infeccion por protozoos o relacionada con esta). Los ejemplos de virus que pueden causar gastroenteritis incluyen, entre otros, rotavirus, noravirus, adenovirus y astrovirus. Los ejemplos de protozoos que pueden causar gastroenteritis incluyen, entre otros, Giardia lamblia, Cryptosporidium y Entamoeba histolytica. En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via rectal (p. ej., como una crema o supositorio) para tratar la gastroenteritis. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene gastroenteritis mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion de la recafda de la gastroenteritis; reduccion en la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas relacionados con la gastroenteritis; reduccion en el numero de smtomas relacionados con la gastroenteritis; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del sujeto; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del sujeto y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el sujeto.

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion fungica o una enfermedad producida por o relacionada con la misma. Sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, la capacidad de las nanofibras de sNAG para inducir beta defensinas (p. ej., beta-defensina 1) puede contribuir a la actividad antifungica de las nanofibras de sNAG. Se ha demostrado que las defensinas beta (p. ej., la beta-defensina 1) tienen actividad antifungica. Ejemplos de hongos que pueden producir que la infeccion o enfermedad se evite y/o se trate con las composiciones descritas en la presente memoria incluyen, sin limitacion, Blastomyces, Paracoccidiodes, Sporothrix, Cryptococcus, Candida, Aspergillus, Histoplasma, Cryptococcus, Bipolaris, Cladophialophora, Cladosporium, Drechslera, Exophiala, Fonsecaea, Phialophora, Xylohypha, Ochroconis, Rhinocladiella, Scolecobasidium y Wangiella. En determinados casos, la prevencion de una infeccion por hongos en un sujeto o una enfermedad producida por por la administracion de una composicion descrita en la presente memoria o relacionada con ella da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion del desarrollo o aparicion de una enfermedad producida por una infeccion por hongos o relacionada con esta; y/o prevencion de la propagacion de una infeccion por hongos o una enfermedad producida desde el sujeto a otro sujeto o poblacion de sujetos o relacionada con la misma. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene una infeccion por hongos o una enfermedad producida por la administracion de una composicion descrita en la presente memoria o relacionada con la misma da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion de la recafda de la infeccion por hongos o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma; reduccion en el numero de smtomas relacionados con la infeccion por hongos o una enfermedad producida o relacionada con ella; reduccion de la insuficiencia organica relacionada con la infeccion por hongos o una enfermedad producida por ella o relacionada con la misma; reduccion de la duracion y/o la gravedad de la infeccion por hongos o una enfermedad producida por ella o relacionada con la misma; reduccion de la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas de la infeccion por hongos o una enfermedad producida poe ella o relacionada con la miama; reduccion en el recuento de celulas fungicas; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del sujeto; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del sujeto; un aumento de la supervivencia del sujeto; intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente; prevencion de la propagacion de un hongo de una celula, tejido, organo del sujeto a otra celula, tejido, organo del sujeto; prevencion del desarrollo o aparicion de una enfermedad producida por o relacionada con la infeccion micotica, o uno o mas de sus smtomas; y/o prevencion de la propagacion de una infeccion fungica o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma desde el sujeto a otro sujeto o poblacion de sujetos.

Los smtomas de una infeccion por hongos con tina inguinal pueden incluir prurito en la ingle y/o una erupcion roja escamosa. Los smtomas del pie de atleta pueden incluir descamacion, desprendimiento de la piel, prurito de los pies y/o unas amarillas de los pies. Los smtomas de una infeccion vaginal pueden incluir prurito e irritacion, ardor al orinar y/o flujo vaginal espeso. Los smtomas de la gastroenteritis por hongos pueden incluir vomitos y/o diarrea. Los smtomas de una infeccion micotica de los pulmones pueden incluir fiebre, tos y/o smtomas de neumoma. Los smtomas de la infeccion por levaduras en la boca (candidosis bucal, candidosis) pueden incluir lesiones/llagas parcheadas de color amarillo-blanco en la boca o la lengua. Los smtomas de candidosis de los genitales (p. ej., vagina, vulva, pene) incluyen prurito, ardor, dolor, irritacion y/o flujo. En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria evitan la aparicion o el desarrollo de uno o mas de los smtomas enumerados anteriormente u otros smtomas conocidos en la tecnica, o reducen la duracion y/o la gravedad de uno o mas de estos smtomas.

En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar el pie de atleta, la tina inguinal, la tina o una infeccion fungica de unas, cuero cabelludo o cabello. Estas infecciones por hongos pueden causar enrojecimiento, descamacion, formacion de ampollas y descamacion de la piel, prurito, deformacion y fragilidad de las unas afectadas y/o cabello quebradizo. Son producidas por dermatofitos, un grupo de hongos que incluye especies de Trichophyton, Microsporum y Epidermophyton. Los dermatofitos se alimentan de queratina y rara vez penetran debajo de la piel. El pie de atleta (tinea pedis) se encuentra entre los dedos de los pies y algunas veces cubre la parte inferior del pie. La tina inguinal (tinea cruris) puede extenderse desde la ingle hasta el muslo interno. La infeccion del cuero cabelludo y el cabello (tinea capitis) afecta el tallo del cabello, principalmente en ninos. La infeccion de las unas de los dedos de las manos o pies (tinea unguium) suele afectar a las unas de los pies, pero tambien puede afectar a las unas de las manos. La tina del cuerpo (tinea corporis) se puede encontrar en cualquier parte del cuerpo. La tina de los barberos (tinea barbae) afecta la porcion de la barba de la cara. En casos concretos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar cualquiera de las infecciones fungicas enumeradas anteriormente (tales como pie de atleta, tina inguinal, unas, cuero cabelludo e infecciones capilares). En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de enrojecimiento, escoriacion, formacion de ampollas o descamacion de la piel, o prurito, deformacion o fragilidad de la una (en donde dichos smtomas estan relacionados con una infeccion micotica). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene una de las infecciones fungicas enumeradas anteriormente mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o la duracion de un smtoma de la infeccion fungica (p. ej., prurito, enrojecimiento, descamacion, ampollas o cualquier otro smtoma de la infeccion por hongos descrita en la presente memoria o conocida en la tecnica); reduccion en el numero de smtomas de la infeccion por hongos; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de la infeccion por hongos; prevencion de la recafda de un smtoma de la infeccion micotica; prevencion de la propagacion de la infeccion fungica del sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de la infeccion por hongos y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos y/o terapeuticos de otro tratamiento (p. ej., tratamiento antifungico) en el sujeto. En casos concretos, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un lactante, un nino pequeno, un nino, un adulto humano y/o un anciano que tiene una de las infecciones fungicas enumeradas anteriormente o un smtoma de la misma. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de una infeccion micotica disminuyan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, o mas de 4 semanas).

En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar la esporotricosis. La esporotricosis es una afeccion producida por el hongo Sporothrix schenckii, que no es un dermatofito. Es una infeccion de la piel y del tejido subcutaneo que han sido erosionados por plantas espinosas, agujas de pino y musgo de turbera donde normalmente reside este hongo. En casos concretos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la esporotricosis. En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de la infeccion por esporotricosis. En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene esporotricosis mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o duracion de un smtoma de esporotricosis, reduccion en el numero de smtomas de esporotricosis; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de esporotricosis; prevencion o reduccion de la frecuencia de recafda de un smtoma de esporotricosis; prevencion de la propagacion de esporotricosis del sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de esporotricosis y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos y/o terapeuticos de otro tratamiento (p. ej., tratamiento antifungico) en el sujeto. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de la Esporotricosis disminuyan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas).

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion micotica de una herida (p. ej., una herida abierta, tal como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura). En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria no se usan para prevenir y/o tratar una infeccion fungica de una herida.

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar una infeccion por levadura o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma. Sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, la capacidad de las nanofibras de sNAG para inducir beta defensinas puede contribuir a la actividad contra la levadura de las nanofibras de sNAG. Se ha demostrado que las defensinas beta tienen actividad contra la levadura. Ejemplos de levaduras que pueden hacer que la infeccion o enfermedad se evite y/o se trate con las composiciones descritas en la presente memoria incluyen, sin limitacion, Aciculoconidium, Botryoascus, Brettanomyces, Bullera, Bulleromyces, Candida, Citeromyces, Clavispora, Cryptococcus, Cystofilobasidium, Debaromyces, Debaryomyces, Dekkera, Dipodascus, Endomyces, Endomycopsis, Erythrobasidium, Fellomyces, Filobasidium, Guilliermondella, Hanseniaspora, Hansenula, Hasegawaea, Hyphopichia, Issatchenkia, Kloeckera, Kluyveromyces, Komagataella, Leucosporidium, Lipomyces, Lodderomyces, Malassezia-Mastigomyces, Metschnikowia, Mrakia, Nadsonia, Octosporomyces, Oosporidium, Pachysolen, Petasospora, Phaffia, Pichia, Pseudozyma, Rhodosporidium, Rhodotorula, Saccharomyces, Saccharomycodes, Saccharomycopsis, Schizoblastosporion, Schizosaccharomyces, Schwanniomyces, Selenotila, Sirobasidium, Sporidiobolus, Sporobolomyces, Stephanoascus, Sterigmatomyces, Syringospora, Torulaspora, Torulopsis, Tremelloid, Trichosporon, Trigonopsis, Udeniomyces, Waltomyces, Wickerhamia, Williopsis, Wingea, Yarrowia, Zygofabospora, Zygolipomyces o Zygosaccharomyces. En determinados casos, la prevencion de una infeccion por levadura de un sujeto o una enfermedad producida por la administracion de una composicion descrita en la presente memoria o relacionada con ella da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion del desarrollo o aparicion de una enfermedad producida por una infeccion de levadura o relacionada con ella; y/o prevencion de la propagacion de una infeccion por levadura o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma desde el sujeto a otro sujeto o poblacion de sujetos. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene una infeccion por levadura o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma por administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion de la recafda de la infeccion por levadura o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma; reduccion en el numero de smtomas relacionados con la infeccion por levadura o una enfermedad producida o relacionada con ella; reduccion de la insuficiencia organica relacionada con la infeccion por levaduras o una enfermedad producida por ella o relacionada con la misma; reduccion de la duracion y/o gravedad de la infeccion por levaduras o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma; reduccion de la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas de la infeccion por levaduras o una enfermedad producida esta o relacionada con la misma; reduccion en el recuento de celulas de levadura; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del sujeto; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del sujeto; un aumento de la supervivencia del sujeto; intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente; prevencion de la propagacion de una levadura de una celula, tejido, organo del sujeto a otra celula, tejido, organo del sujeto; prevencion del desarrollo o aparicion de una enfermedad producida por la infeccion por levadura o relacionada con esta, o uno o mas de sus smtomas; y/o prevencion de la propagacion de una infeccion por levadura o una enfermedad producida por esta o relacionada con la mismadel sujeto a otro sujeto o poblacion de sujetos.

En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar la candidosis. La candidosis es una infeccion frecuente por levadura que se debe principalmente al crecimiento excesivo de Candida albicans y otras especies de Candida, que forman parte de la flora normal. En la boca, la candidosis causa enrojecimiento y manchas blancas y se llama "candidosis bucal". En los ninos, Candida puede causar dermatitis del panal. En las mujeres, puede causar prurito genital y flujo vaginal que se conoce como "infeccion por levadura". La candidosis tambien puede producir una variedad de otras infecciones, incluidas las infecciones en las unas, y pueden llegar a ser generales, especialmente en aquellos que son inmunodeficientes. Actualmente es la cuarta causa mas frecuente de septicemia adquirida en el hospital en los Estados Unidos. En casos concretos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la candidosis (p. ej., se administran por via topica a la piel o por via topica al area genital tal como por via intravaginal). En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de enrojecimiento, manchas blancas o prurito genital (en donde dichos smtomas estan relacionados con candidosis). En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene candidosis mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o duracion de un smtoma de candidosis, reduccion en el numero de smtomas de candidosis; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de candidosis; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de candidosis; prevencion de la propagacion de la candidosis de un sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de candidosis; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos y/o terapeuticos de otro tratamiento (p. ej., tratamiento contra la levadura) en el sujeto. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de una infeccion por Candida desaparezcan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, o mas de 4 semanas).

En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar la pitiriasis versicolor. Los smtomas de pitiriasis versicolor incluyen, entre otros, parches multicolores o lesiones en la piel. Es una afeccion que es frecuente en adultos jovenes. En casos concretos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica para tratar la tina versicolor. En un caso, las composiciones descritas en la presente memoria se administran en la zona, o cerca de la zona, de la infeccion por pitiriasis versicolor. En algunos casos, el tratamiento de un sujeto que tiene pitiriasis versicolor mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria produce uno o mas de los siguientes efectos: reduccion de la gravedad y/o duracion de un smtoma de pitiriasis versicolor, reduccion en el numero de smtomas de pitiriasis versicolor; reduccion del dolor relacionado con un smtoma de pitiriasis versicolor; prevencion o reduccion de la frecuencia de la recafda de un smtoma de pitiriasis versicolor; prevencion de la propagacion de la tina versicolor de un sujeto a otro sujeto; prevencion de la aparicion o desarrollo de un smtoma de pitiriasis versicolor; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos y/o terapeuticos de otro tratamiento (p. ej., tratamiento contra la levadura) en el sujeto. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse diariamente (p. ej., una o dos veces al dfa) hasta que los smtomas de una infeccion por pitiriasis versicolor disminuyan (p. ej., durante 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 dfas, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas o mas de 4 semanas).

En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para prevenir y/o tratar la osteomielitis. La osteomielitis es una infeccion de los huesos o la medula osea, que puede ser producida por una bacteria o un hongo. La osteomielitis se puede diagnosticar basandose en los resultados radiologicos que muestran un centro lttico con un anillo de esclerosis, y el cultivo de material se puede extraer de una biopsia osea para identificar el patogeno espedfico. Por consiguiente, en algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran a un paciente que tiene (p. ej., se le diagnostica con) osteomielitis para tratar la osteomielitis. En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar la osteomielitis producida por una infeccion fungica. En un caso concreto, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar una infeccion, en donde la infeccion no es producida por una bacteria. Aun en otros casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar la osteomielitis producida por cualquier infeccion (incluida, entre otras, una infeccion bacteriana). En casos espedficos, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica a una superficie de un tejido (p. ej., a la superficie de un hueso o en la proximidad a la superficie de un hueso) de un paciente despues de la intervencion quirurgica. Por ejemplo, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse en un area de la rodilla despues de una intervencion quirurgica de sustitucion de rodilla, en un area de la cadera despues de una intervencion quirurgica de sustitucion de cadera, o en un area del codo despues de una intervencion quirurgica de sustitucion de codo. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene osteomielitis mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: reduccion en la duracion y/o gravedad de uno o mas smtomas relacionados con osteomielitis (p. ej., dolor, inflamacion); reduccion en el numero de smtomas relacionados con osteomielitis; prevencion o reduccion de la frecuencia o recafda de osteomielitis; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del sujeto; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del sujeto y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el sujeto.

En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria se utilizan para prevenir y/o tratar una infeccion por levadura de una herida (p. ej., una herida abierta tal como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura). En otro caso, las composiciones descritas en la presente memoria no se usan para prevenir y/o tratar una infeccion por levadura de una herida.

En realizaciones espedficas, un sujeto tratado de una infeccion vmca, una infeccion fungica o una infeccion por levaduras (tal como cualquiera de las infecciones vmicas, fungicas o por levaduras descritas en la presente memoria) usando las composiciones de sNAG descritas en la presente memoria no tiene una infeccion bacteriana. En otras realizaciones, un sujeto tratado de una infeccion vmca, fungica o por levaduras (como cualquiera de las infecciones vmcas, fungicas o por levaduras descritas en la presente memoria) que utiliza las composiciones de sNAG descritas en la presente memoria tiene una infeccion tanto bacteriana como vmca, una infeccion fungica o por levadura. En algunas realizaciones, dichas infecciones estan en la misma ubicacion en el organismo del sujeto. En otras realizaciones, dichas infecciones estan en diferentes ubicaciones en el organismo del sujeto.

En determinados casos, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar enfermedades de la piel. Sin estar vinculado por ningun mecanismo de accion, la capacidad de las nanofibras de sNAG para inducir beta defensinas puede contribuir a la actividad de las nanofibras de sNAG en el tratamiento de enfermedades de la piel. Se ha demostrado que las defensinas beta tienen actividad en enfermedades de la piel. En una realizacion espedfica, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar la dermatitis (p. ej., dermatitis atopica). En una realizacion espedfica, las composiciones se usan para prevenir y/o tratar la dermatitis atopica en un lactante humano prematuro, un lactante humano, un nino pequeno o un nino. En otra realizacion espedfica, las composiciones descritas en la presente memoria se usan para tratar la psoriasis (p. ej., psoriasis comun, psoriasis eritroderma, psoriasis pustular, psoriasis ungueal o psoriasis en gotas). En una realizacion espedfica, las composiciones se usan para tratar la psoriasis en un lactante humano prematuro, un lactante humano, un nino pequeno o un nino. En determinados casos, el tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad de la piel mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria da como resultado uno o mas de los siguientes efectos: prevencion de la recafda de la enfermedad de la piel; reduccion en el numero de smtomas relacionados con la enfermedad de la piel; reduccion en la gravedad o duracion de uno o mas smtomas relacionados con la enfermedad de la piel; reduccion de la frecuencia de hospitalizacion del sujeto; reduccion de la duracion de la hospitalizacion del sujeto; y/o intensificacion o mejora de los efectos profilacticos o terapeuticos de otro tratamiento en el paciente.

Los smtomas de la dermatitis incluyen, entre otros, erupciones cutaneas (p. ej., erupciones con bultos), ampollas, enrojecimiento de la piel, hinchazon, prurito, lesiones cutaneas, supuracion y/o cicatrizacion. Dichos smtomas a menudo aparecen en el cuello, la muneca, el antebrazo, el muslo o el tobillo; pero tambien pueden aparecer en el area genital. Los smtomas frecuentes de la dermatitis atopica incluyen, entre otros, piel seca, con prurito y/o enrojecida. Los smtomas de la psoriasis incluyen, entre otros, placas (p. ej., areas elevadas de piel inflamada cubierta con piel escamosa de color blanco plateado), prurito, hinchazon, dolor, pustulas (p. ej., protuberancias elevadas llenas de pus no infeccioso), parches de piel inflamados y suaves, pequenas lesiones escamosas y/o engrosamiento y decoloracion de las unas. En algunos casos, las composiciones descritas en la presente memoria evitan la aparicion o el desarrollo de uno o mas de los smtomas enumarados anteriormente u otros smtomas conocidos en la tecnoca o reducen la duracion y/o gravedad de uno o mas de estos smtomas.

En un caso, una composicion descrita en la presente memoria no se usa para prevenir y/o tratar una infeccion bacteriana o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma. En un caso, la composicion descrita en la presente memoria no se usa para prevenir y/o tratar la infeccion por S. aureus o una enfermedad producida por esta o relacionada con dicha infeccion. En otro caso, una composicion descrita en la presente memoria no se usa para prevenir y/o tratar una infeccion bacteriana de una herida (p. ej., una herida abierta, tal como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura).

En un caso espedfico, la enfermedad a tratar y/o prevenir mediante la administracion de una composicion descrita en la presente memoria no es una herida (p. ej., una herida abierta, tal como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura).

5.5 Poblaciones de pacientes

En determinadas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria puede administrarse a un sujeto sin tratamiento previo, es decir, un sujeto que no tiene una enfermedad o infeccion. En una realizacion, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un sujeto sin tratamiento previo que esta en riesgo de adquirir una enfermedad o infeccion.

En una realizacion, una composicion de nanofibra de sNAG descrita en la presente memoria puede administrarse a un paciente que ha sido diagnosticado con una enfermedad o infeccion. En otra realizacion, una composicion descrita en la presente memoria puede administrarse a un paciente que muestra uno o mas smtomas de una enfermedad o infeccion. En determinados casos, a un paciente se le diagnostica una enfermedad o infeccion antes de la administracion de una composicion descrita en la presente memoria.

En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran a pacientes diagnosticados con una infeccion. Por ejemplo, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse a un paciente cuando se detecta un patogeno (p. ej., virus, hongos o levadura) en una muestra biologica tomada del paciente. En una realizacion, se obtiene una muestra biologica de la zona o area a tratar por las composiciones descritas en la presente memoria o un area a la que se administraran las composiciones descritas en la presente memoria. En una realizacion, se usa un hisopo para recoger celulas o pus de la zona de la infeccion sospechada para detectar una infeccion. En otra realizacion, se aspira un fluido de la zona sospechosa de infeccion (p. ej., una herida) para detectar una infeccion. En otra realizacion mas, se realiza una biopsia de tejido para detectar una infeccion. En una realizacion en la que la zona sospechosa de infeccion es una herida, se puede realizar un cultivo de la herida para detectar una infeccion. En otra realizacion, la muestra biologica se obtiene de sangre, orina, esputo o heces del paciente. En algunas realizaciones, se puede realizar un analisis de sangre o de orina para detectar una infeccion (p. ej., cuando se sospecha que una infeccion se ha propagado a la sangre u otros tejidos/organos). En algunas realizaciones, la muestra recogida (p. ej., celulas, tejidos o fluidos) se analiza utilizando metodos de deteccion de ADN tales como PCR para detectar la presencia de uno o mas tipos de bacterias. En otras realizaciones, el analisis de inmunofluorescencia, la serologfa, el cultivo (p. ej., el cultivo de agar-agar con sangre) o cualquier otro analisis conocido y/o practicado en la tecnica pueden usarse para el diagnostico de laboratorio de una infeccion.

En otras realizaciones espedficas, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse a un paciente diagnosticado de uno o mas smtomas de una enfermedad o que muestra estos, p. ej., un cancer, una EII, la enfermedad de Crohn, dermatitis, psoriasis o una infeccion (p. ej., infeccion vmca, por levaduras u hongos). En algunas realizaciones, a un paciente se le diagnostica una enfermedad (p. ej., una de las enfermedades enumeradas anteriormente) o presenta uno o mas smtomas de una enfermedad antes de la administracion de una composicion descrita en la presente memoria. Una enfermedad puede ser diagnosticada por cualquier metodo conocido por un experto en la tecnica, incluida la evaluacion de los smtomas del paciente y/o la deteccion de un patogeno en una muestra biologica del paciente (p. ej., como se describio anteriormente). En un ejemplo, las composiciones descritas en la presente memoria pueden administrarse a un paciente diagnosticado con una enfermedad por un medico tratante u otro profesional medico. En otro ejemplo, un paciente puede usar las composiciones descritas en la presente memoria tras la deteccion de uno o mas smtomas de una enfermedad.

En algunas realizaciones, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es un sujeto con un nivel de expresion bajo o nulo de uno o mas peptidos de defensina o una mutacion/eliminacion en un gen o genes que codifican uno o mas peptidos de defensina. En algunas realizaciones, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es un sujeto con un nivel de expresion nulo o bajo o alterado de una o mas a-defensinas (p. ej., DEFA1, DEFA1B, DEFA3, DEFA4, DEFA5, DEFA6), una o mas pdefensinas (p. ej., DEFB1, DEFB2, DEFB4, DEFB103A, DEFB104A, DEFB105B, DEFB107B, DEFB108B, DEFB110, DEFB112, DEFB114, DEFB118, DEFB119, DEFB123, DEFB124, DEFB125, DEFB126, DEFB127, DEFB128, DEFB129, DEFB131, DEFB136), y/o una o mas 0-defensinas (p. ej., DEFT1P). En alguna realizacion, un sujeto a quien se le administra una composicion descrita en la presente memoria es un sujeto con un nivel de expresion nulo, bajo o alterado de uno o mas de DEFA1, DEFA3, DEFA4, DEFA5, DEFB1, DEFB3, DEFB103A, DEFB104A, DEFB108B, DEFB112, DEFB114, DEFB118, DEFB119, DEFB123, DEFB124, DEFB125, DEFB126, DEFB128, DEFB129 y DEFB131. En determinadas realizaciones, un sujeto a quien se va a administrar una composicion descrita en la presente memoria es un sujeto con nivel de expresion nulo, bajo o alterado de uno o mas receptores de Toll (p. ej., TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11 y/o TLR12). En otras realizaciones mas, un sujeto a quien se va a administrar una composicion descrita en la presente memoria es un sujeto con un nivel de expresion nulo, bajo o alterado de uno o mas de IL-1, CEACAM3, SPAG11, SIGIRR (receptor de tipo IL1), IRAKI, IrAk2, IRAK4, TBK1, TRAF6 y IKKi. En algunas realizaciones, un sujeto a quien se va a administrar una composicion descrita en la presente memoria es un sujeto con nivel de expresion nulo, bajo o alterado de uno o mas de IRAK2, SIGIRR, TLR1, TLR2, TLR4, TLR7, TLR8, TLR10 y TRAF6. Un nivel de expresion bajo de un gen es un nivel que es mas bajo (p. ej., mas de 1.25 veces, 1.5 veces, 2 veces, 2.5 veces, 3 veces, 3.5 veces, 4 veces, 4.5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces mas bajo) que el nivel de expresion normal. Un nivel alterado de expresion de un gen es un nivel que difiere (p. ej., en mas del 20%, 25%, 30%, 50%, 75%, 100%, 150%, 200%, 250%, 300%) del nivel normal de expresion. En donde la expresion "normal" de uno o mas genes de defensina es: (i) el nivel de expresion promedio conocido que se encuentra en los sujetos que no presentan smtomas o que no han sido diagnosticados con la enfermedad o infeccion a tratar; (ii) el nivel de expresion promedio detectado en tres, cinco, diez, veinte, veinticinco, cincuenta o mas sujetos que no presentan smtomas o que no hayan sido diagnosticados con la enfermedad o infeccion a tratar; y/o (iii) el nivel de expresion detectado en un paciente a quien se administra una composicion descrita en la presente memoria antes de la aparicion de la enfermedad o infeccion.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente a quien se ha diagnosticado un cancer de tumor solido, como sarcomas de tejido oseo y conectivo, cancer cerebral, cancer de mama, cancer de ovario, cancer renal, cancer de pancreas, cancer de esofago, cancer de estomago, cancer pulmonar (p. ej., cancer pulmonar microdtico (SCLC), cancer pulmonar amicrodtico (CPCNP), cancer de garganta y mesotelioma), cancer de hngado y cancer de prostata. En una realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente a quien se le ha sido diagnosticado sarcoma de Kaposi.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente a quien se ha diagnosticado un cancer de piel, tal como melanoma, carcinoma de celulas basales y carcinoma espino-celular.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que tiene (p. ej., se le ha diagnosticado) una enfermedad inflamatoria intestinal (p. ej., colitis ulcerosa) o presenta uno, dos o mas smtomas de enfermedad inflamatoria intestinal.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente a quien (p. ej., se le ha diagnosticado) la enfermedad de Crohn (p. ej., la enfermedad de Crohn ileal) o presenta uno o mas smtomas de la enfermedad de Crohn.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que (p. ej., se le ha diagnosticado) una enfermedad producida por un virus o una infeccion relacionada con un virus (tal como cualquier enfermedad producida por un virus o una infeccion relacionada con un virus descrito en la presente memoria), p. ej., el paciente ha sido infectado por el virus sincitial respiratorio (VSR), virus de la gripe (virus de la gripe A, virus de la gripe B o virus de la gripe C), metapneumovirus humano (MNVH), rhinovirus, virus paragripal, coronavirus SARS, virus de inmunodeficiencia humana (VIH), virus de la hepatitis (A, B, C), virus del ebola, virus del herpes simple (p. ej., VHS-1, VHS-2), rubeola, viruela mayor, y/o viruela menor. En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que presenta uno, dos o mas smtomas de una enfermedad producida por un virus o una infeccion relacionada con un virus (como cualquier enfermedad producida por un virus o una infeccion relacionada con un virus descrito en la presente memoria).

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que (p. ej., ha sido diagnosticado con) una herida (p. ej., una herida abierta como una incision, una lacduraracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura) que ha sido infectado por un virus. En una realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria no se administra a un paciente que ha sido diagnosticado con una herida infectada por un virus.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que (p. ej., ha sido diagnosticado con) una enfermedad producida por un hongo o una infeccion relacionada con un hongo (cualquier enfermedad producida por un hongo o una infeccion relacionada con un hongo descrito en la presente memoria), p. ej., el paciente ha sido infectado por Blastomyces, Paracoccidiodes, Sporothrix, Cryptococcus, Candida, Aspergillus, Cryptococcus, Bipolaris, Cladophialophora, Cladosporium, Drechslera, Exophiala, Fonsecaea, Phialophora, Xylohypha, Ochroconis, Rhinocladiella, Scolecobasidium, y/o Wangiella. En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que muestra uno o mas smtomas de una enfermedad causada por un hongo o una infeccion relacionada con un hongo (tal como una enfermedad producida por un virus o una infeccion relacionada con un hongo descrito en la presente memoria).

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que (p. ej., ha sido diagnosticado con) una herida (p. ej., una herida abierta como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura) que ha sido infectada por un hongo. En una realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria no se administra a un paciente que ha sido diagnosticado de una herida que ha sido infectada por un hongo.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que (p. ej., ha sido diagnosticado con) una enfermedad producida por una levadura o una infeccion relacionada con una levadura, p. ej., el paciente ha sido infectado por Aciculoconidium, Botryoascus, Brettanomyces, Bullera, Bulleromyces, Candida, Citeromyces, Clavispora, Cryptococcus, Cystofilobasidium, Debaromyces, Debaryomyces, Dekkera, Dipodascus, Endomyces, Endomycopsis, Erythrobasidium, Fellomyces, Filobasidium, Guilliermondella, Hanseniaspora, Hansenula, Hasegawaea, Hyphopichia, Issatchenkia, Kloeckera, Kluyveromyces, Komagataella, Leucosporidium, Lipomyces, Lodderomyces, Malassezia-Mastigomyces, Metschnikowia, Mrakia, Nadsonia, Octosporomyces, Oosporidium, Pachysolen, Petasospora, Phaffia, Pichia, Pseudozyma, Rhodosporidium, Rhodotorula, Saccharomyces, Saccharomycodes, Saccharomycopsis, Schizoblastosporion, Schizosaccharomyces, Schwanniomyces, Selenotila, Sirobasidium, Sporidiobolus, Sporobolomyces, Stephanoascus, Sterigmatomyces, Syringospora, Torulaspora, Torulopsis, Tremelloid, Trichosporon, Trigonopsis, Udeniomyces, Waltomyces, Wickerhamia, Williopsis, Wingea, Yarrowia, Zygofabospora, Zygolipomyces, and/or Zygosaccharomyces.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que (p. ej., ha sido diagnosticado con) una herida (p. ej., una herida abierta, tal como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura) que ha sido infectada por una levadura. En una realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria no se administra a un paciente que ha sido diagnosticado con una herida que ha sido infectada por una levadura.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que (p. ej., ha sido diagnosticado con) una enfermedad de la piel o presenta uno, dos o mas smtomas de una enfermedad de la piel. En una realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que ha sido diagnosticado con dermatitis (p. ej., dermatitis atopica) o presenta uno, dos o mas smtomas de dermatitis. En otra realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente que ha sido diagnosticado con psoriasis o presena uno, dos o mas smtomas de psoriasis.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente inmunodeprimido, y/o a un paciente sensible a una enfermedad o infeccion aguda o cronica (p. ej., un paciente positivo a VIH, o un paciente inmunodeprimido como resultado de un tratamiento contra el cancer o un procedimiento de trasplante). En una realizacion, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente diagnosticado con fibrosis qrnstica.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente con una enfermedad o infeccion antes de que se manifiesten los smtomas de la enfermedad o infeccion o antes de que los smtomas de la enfermedad o infeccion sean graves (p. ej., antes de que el paciente requiera tratamiento u hospitalizacion). En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria se administra a un paciente con una enfermedad o infeccion despues de que los smtomas de la enfermedad o infeccion se manifiestan o despues de que los smtomas de la enfermedad o infeccion sean graves (p. ej., despues de que el paciente requiera tratamiento u hospitalizacion).

En algunos casos, un sujeto al que va a administrate una composicion descrita en la presente memoria es un animal. En algunas realizaciones, el animal es un ave. En algunos casos, el animal es un canino. En algunos casos, el animal es un felino. En algunos casos, el animal es un caballo. En algunos casos, el animal es una vaca. En algunos casos, el animal es un mairnfero, p. ej., un caballo, cerdo, raton o primate, preferiblemente un ser humano. En algunas realizaciones, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es una persona adulta. En determinados casos, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es una persona adulta de mas de 50 anos de edad. En algunas realizaciones, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es una persona de edad avanzada.

En algunas realizaciones, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es un nino pequeno. En algunas realizaciones, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es un nino. En algunas realizaciones, un sujeto al que se va a administrar una composicion descrita en la presente memoria es un lactante humano. En algunas realizaciones, un sujeto al que va a administrarse una composicion descrita en la presente memoria es un lactante humano prematuro.

En una realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria no se administra a un sujeto para prevenir y/o tratar una infeccion bacteriana o una enfermedad producida por esta o relacionada con la misma. En una realizacion, una composicion descrita en la presente memoria no se administra a un sujeto para prevenir y/o tratar una infeccion por S. aureus o una enfermedad producida por esta o relacionada con dicha infeccion. En otra realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria no se administra a un sujeto para prevenir y/o tratar una infeccion bacteriana de una herida (p. ej., una herida abierta, tal como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura).

En una realizacion espedfica, una composicion descrita en la presente memoria no se administra a un sujeto para tratar una herida (p. ej., una herida abierta, tal como una incision, una laceracion, una penetracion, una abrasion o una quemadura).

5.6 Modos de administracion

En algunas realizaciones, en la presente memoria se describen metodos para tratar o prevenir una infeccion y/o una enfermedad o un smtoma de la misma, en donde una composicion que comprende las nanofibras de sNAG se administra por via topica a un paciente que necesita dicho tratamiento. En algunas realizaciones, una composicion de nanofibras de sNAG se aplica por via topica a un tejido u organo que tiene un mayor riesgo de una infeccion o una enfermedad.

En algunas realizaciones, se administra a un sujeto una cantidad eficaz de nanofibras de sNAG y/o una composicion de nanofibras de sNAG.

En algunas realizaciones, una composicion que comprende las nanofibras de sNAG se administra por via topica en la zona de una infeccion o en una enfermedad en un paciente o en la zona afectada por una infeccion o una enfermedad. En otras realizaciones mas, una composicion que comprende las nanofibras de sNAG se administra por via topica en la zona y alrededor de la zona de una infeccion o una enfermedad en un paciente o en la zona afectada por una infeccion o una enfermedad. En otras realizaciones mas, una composicion que comprende nanofibras de sNAG se aplica cerca de la zona de una infeccion o enfermedad en un paciente o cerca de la zona afectada por una infeccion o una enfermedad. En otra realizacion mas, una composicion que comprende las nanofibras de sNAG se administra por via topica en la zona con un alto riesgo de infeccion o enfermedad relacionada con dicha infeccion.

Las composiciones de nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria pueden administrarse por cualquiera de los muchos medios adecuados de administracion topica que son bien conocidos por los expertos en la tecnica, incluidos, pero no restringidos, por via topica a la piel, por via topica a cualquier otra superficie del cuerpo (p. ej., superficie de la mucosa), por inhalacion, por via intranasal, vaginal, rectal, bucal o sublingual. El modo de administracion topica puede variar dependiendo de la infeccion o enfermedad a tratar o prevenir. Las composiciones de nanofibras de sNAG pueden formularse para los diversos tipos de administracion topica.

En una realizacion espedfica, las composiciones descritas en la presente memoria se aplican por via topica, por ejemplo, a la piel de un paciente que necesita dicho tratamiento o a otro tejido de un paciente que necesita dicho tratamiento. En algunas realizaciones, las composiciones pueden aplicarse directamente en la zona de una enfermedad o infeccion y/o cerca de la zona de una enfermedad o infeccion. En algunas realizaciones, las composiciones se pueden aplicar directamente en una zona donde podna desarrollarse potencialmente una enfermedad o infeccion (p. ej., a una herida abierta).

En una realizacion, una composicion que comprende nanofibras de sNAG se aplica a la piel de un paciente. Por ejemplo, una composicion de este tipo puede aplicarse por via topica a la piel de un paciente para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion de la piel.

En otra realizacion, una composicion descrita en la presente memoria puede aplicarse por via topica a una superficie de la mucosa de un paciente. Por ejemplo, una composicion de este tipo puede aplicarse por via topica a la mucosa bucal para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion de la boca o las endas.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria puede aplicarse por via topica a una superficie/area genital, urinaria o anal de un paciente. Por ejemplo, dicha composicion puede aplicarse por via topica a la superficie/area genital, urinaria o anal para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion genital, urinaria o anal. Los metodos enumerados anteriormente para la administracion topica pueden incluir la administracion de una nanofibra de sNAG en forma de suspension (p. ej., una suspension espesa), una crema, una pomada, un gel, una solucion lfquida, una membrana, un aerosol, una pasta, un polvo o cualquier otra formulacion descrita en la presente memoria o conocida en la tecnica. Una nanofibra de sNAG tambien se puede aplicar en un vendaje o una venda, por ejemplo para tratar enfermedades o infecciones localizadas en la piel de un paciente. En realizaciones concretas, las composiciones que comprenden nanofibras de sNAG no son solidas o formadoras de barrera.

En algunos casos, una composicion descrita en la presente memoria puede aplicarse en forma de aerosol en la cavidad bucal y/o el sistema respiratorio de un paciente. Por ejemplo, una composicion de este tipo puede aplicarse en forma de aerosol para tratar o prevenir una enfermedad o infeccion de la boca, nariz, endas, garganta o pulmones. En una realizacion de este tipo, la composicion puede formularse para administrarse en forma de inhalador.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria puede aplicarse como un supositorio en el recto, la vagina o la uretra de un paciente. Por ejemplo, tal composicion puede aplicarse en forma de supositorio para tratar o evitar una enfermedad o infeccion del tubo digestivo, aparato urinario o aparato reproductor.

En algunas realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria puede aplicarse por via topica con una jeringuilla u otro tipo de aplicador (p. ej., una espatula, un hisopo de algodon, un tubo tal como un tubo de compresion) adecuado para la administracion topica de la composicion al paciente. Por ejemplo, una composicion descrita en la presente memoria formulada en forma de suspension (p. ej., suspension espesa), solucion lfquida, crema, pomada o gel puede administrarse por via topica a la piel, membrana mucosa u otro tejido de superficie de un paciente mediante un aplicador (p. ej., jeringuilla).

En otra realizacion, una composicion descrita en la presente memoria puede aplicarse en la zona de un procedimiento quirurgico. Por ejemplo, dicha composicion se puede atomizar, aplicar como en forma de crema, suspension (p. ej., una suspension espesa), solucion lfquida, pomada, gel, membrana o polvo, o recubrir la superficie del tejido u organo que va a someterse a un procedimiento quirurgico o que se ha sometido al procedimiento quirurgico. En una realizacion, una composicion descrita en la presente memoria se aplica en la zona de la incision quirurgica, en la zona del tejido cortado, o en la zona de puntos o suturas quirurgicos. Dicha administracion de una composicion descrita en la presente memoria puede evitar una infeccion posquirurgica o puede evitar la recafda de una enfermedad para la cual se indico la intervencion quirurgica. Por ejemplo, una composicion descrita en la presente memoria se puede usar durante o despues de un procedimiento quirurgico que se sabe que presenta un alto riesgo de infeccion vmca, por levadura o por hongos. Los procedimientos quirurgicos que se sabe que presentan un alto riesgo de infeccion incluyen reseccion intestinal, procedimientos quirurgicos gastrointestinales, intervencion quirurgica renal, etc. Una composicion descrita en la presente memoria puede aplicarse en la zona de cualquiera de los procedimientos quirurgicos enumerados anteriormente u otros.

En otras realizaciones mas, una composicion descrita en la presente memoria puede recubrirse en un dispositivo, por ejemplo, un producto de higiene bucal, un cateter, un instrumento quirurgico u otro producto, para ser utilizado o insertado en un paciente, con el fin de tratar o evitar una enfermedad o infeccion en un paciente.

En una realizacion espedfica, las composiciones descritas en la presente memoria se aplican por via topica en la zona de un tumor solido o cancer de piel. En algunas realizaciones, las composiciones se aplican directamente al propio tumor solido o cancer de piel. En algunas realizaciones, las composiciones se aplican directamente en la zona de un tumor solido o cancer de piel, en donde la totalidad o parte del tumor o cancer de piel se ha eliminado (p. ej., eliminado quirurgicamente). En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria se administran por via topica en la zona y o alrededor de la zona del que se ha extirpado o eliminado un tumor solido o cancer de piel. En algunas de estas realizaciones, dichas composiciones pueden pulverizarse, aplicarse en forma de suspension, solucion lfquida, crema, pomada, gel, membrana o polvo, o recubrirse sobre la superficie de un organo o tejido del que se extirpo un tumor solido. En realizaciones espedficas, las composiciones descritas en la presente memoria se pulverizan o se recubren en la zona o zonas y alrededor de las mismas del tumor solido o cancer de piel eliminado o extirpado.

En algunas realizaciones, los metodos contemplados en la presente memoria incluyen una etapa que incluye la deteccion/diagnostico de una enfermedad o una infeccion en un paciente. En algunas realizaciones, la deteccion/diagnostico implica una prueba o analisis de uno o mas patogenos (p. ej., un virus, un hongo o una levadura) en una muestra biologica del paciente. En otras realizaciones, el diagnostico implica evaluar si el paciente tiene uno o mas smtomas de una enfermedad (p. ej., EII, enfermedad de Crohn, cancer, dermatitis, psoriasis o una enfermedad relacionada con una infeccion vmca, micotica o por levaduras).

Las composiciones descritas en la presente memoria pueden presentar propiedades de liberacion lenta y/o pueden administrarse en una formulacion que da como resultado una liberacion lenta de dichas composiciones. En algunas realizaciones, las nanofibras de sNAG se biodegradan con el tiempo como se describe en en el apartado 5.1, anteriormente, y estas propiedades de las nanofibras de sNAG pueden conducir o contribuir a la liberacion lenta de las composiciones descritas en la presente memoria. En otras realizaciones mas, las composiciones descritas en la presente memoria estan formuladas para mostrar capacidades de liberacion lenta usando cualquier metodo conocido en la tecnica. Las composiciones descritas en la presente memoria pueden presentar una liberacion lenta durante un penodo de tiempo igual o superior a aproximadamente 6 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas (1 dfa), 2 dfas, 3 dfas, 5 dfas, 7 dfas (1 semana), 10 dfas, 14 dfas (2 semanas), 3 semanas o 4 semanas despues de la administracion de la composicion al paciente.

Los regfmenes de tratamiento contemplados incluyen una dosis unica o una aplicacion unica de una composicion de nanofibras de sNAG; dos dosis o dos aplicaciones de una composicion de nanofibras de sNAG; o una gran cantidad de dosis multiples o aplicaciones multiples de una composicion de nanofibras de sNAG. Se puede administrar una dosis o una aplicacion cada hora, diariamente, semanalmente o mensualmente. Por ejemplo, una dosis de una composicion de nanofibras de sNAG se puede administrar una vez al dfa, dos veces al dfa, tres veces al dfa, cuatro veces al dfa, una vez a la semana, 2 veces a la semana, 3 veces a la semana, cada dos dfas, una vez cada 2 semanas, una vez cada 3 semanas, una cada 4 semanas, una vez al mes o una vez cada dos meses.

Una composicion de nanofibras de sNAG puede administrarse durante un periodo igual o superior a 2 dfas, 3 dfas, 4 dfas, 5 dfas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 9 meses, 1 ano, 1.5 anos, 2 anos, 2.5 anos, 3 anos, 4 anos, 5 anos, 7 anos, 10 anos o mas. En algunos casos, una composicion de fibra sNAG se administra a un paciente una o dos veces al dfa durante un periodo igual o superior a 2 dfas, 3 dfas, 4 dfas, 5 dfas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 9 meses o 1 ano. En dicha realizacion, una composicion de nanofibras de sNAG no produce ningun efecto secundario o produce solo efectos secundarios leves durante el tratamiento. En otra realizacion, una composicion de nanofibras de sNAG no produce irritacion (p. ej., irritacion moderada o grave) o alergia (p. ej., alergia moderada o grave).

La concentracion de nanofibras de sNAG en una composicion puede variar. En general, se usa una cantidad eficaz de nanofibras de sNAG en las composiciones descritas en la presente memoria para tratar las enfermedades descritas en la presente memoria. Una cantidad eficaz puede ser una cantidad suficiente para conseguir uno o mas de los efectos descritos en la presente memoria, por ejemplo, una cantidad eficaz para tratar una enfermedad o reducir o erradicar uno o mas smtomas de una enfermedad. Por ejemplo, una composicion puede comprender aproximadamente 0.2 a 20 mg/cm2 de nanofibras de sNAG por dosis/aplicacion de la composicion en una forma adecuada para la administracion topica a un paciente. En determinados casos, una composicion descrita en la presente memoria comprende de aproximadamente 0.25 a 20 mg/cm2, aproximadamente 0.5 a 20 mg/cm2, aproximadamente 1 a 20 mg/cm2, aproximadamente 1 a 15 mg/cm2, aproximadamente 1 a 12 mg/cm2, aproximadamente 1 a 10 mg/cm2, aproximadamente 1 a 8 mg/cm2, aproximadamente 1 a 5 mg/cm2, aproximadamente 2 a 8 mg/cm2, o alrededor de 2 a 6 mg/cm2 de nanofibras de sNAG por dosis/aplicacion de la composicion en una forma adecuada para la administracion topica a un paciente. En algunas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria pueden comprender aproximadamente de 5 a 50 mg/ml de nanofibras de sNAG por dosis/aplicacion de la composicion en una forma adecuada para la administracion topica a un paciente. En determinados realizaciones, una composicion descrita en la presente memoria comprende aproximadamente 5 a 40 mg/ml, aproximadamente 5 a 35 mg/ml, aproximadamente 10 a 50 mg/ml, aproximadamente 10 a 40 mg/ml, aproximadamente 10 a 35 mg/ml, aproximadamente 10 a 30 mg/ml, aproximadamente 15 a 40 mg/ml, aproximadamente 15 a 35 mg/ml, aproximadamente 15 a 30 mg/ml o aproximadamente 20 a 30 mg/ml de nanofibras de sNAG por dosis/aplicacion de la composicion en una forma adecuada para la administracion topica a un paciente. En realizaciones espedficas, una composicion descrita en la presente memoria comprende aproximadamente 10 mg/ml, 12 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml o 30 mg/ml de nanofibras de sNAG por dosis/aplicacion de la composicion en una forma adecuada para la administracion topica a un paciente. En determinadas realizaciones, las composiciones descritas en la presente memoria pueden comprender una cantidad de solucion o suspension total (que comprende nanofibras de sNAG) en el intervalo de aproximadamente 50 a 100 |jl, 50 a 200 |jl, 50 a 250 |jl, 50 a 300 |jl, 50 a 350 |jl, 50 a 400 |jl, 50 a 450 |jl, 50 a 500 |jl, 100 a 200 jil, 100 a 300 jil, 100 a 400 jil, 100 a 500 jil por 0.5 cm2 o 1 cm2 de la superficie a tratar en un paciente (p. ej., piel, superficie de la mucosa u otra superficie de tejido). La solucion o suspension total puede comprender solucion salina, amortiguador, solucion (p. ej., solucion amortiguadora de Hank) o cualquier otra solucion fisiologicamente compatible.

5.7 Politerapia

En diversas realizaciones, las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones pueden administrarse a un sujeto en combinacion con uno o mas tratamientos diferentes. Uno o mas tratamientos diferentes pueden ser beneficiosos en el tratamiento o la prevencion de una enfermedad o pueden mejorar un smtoma o afeccion relacionado con una enfermedad. En determinados realizaciones, los tratamientos se administran con menos de 5 minutos de diferencia, con menos de 30 minutos de diferencia, con 1 hora de diferencia, con aproximadamente 1 hora de diferencia, con aproximadamente de 1 a aproximadamente 2 horas de diferencia, con aproximadamente de 2 horas con aproximadamente 3 horas de diferencia, con aproximadamente de 3 horas a aproximadamente 4 horas de diferencia, con aproximadamente de 4 horas a aproximadamente 5 horas de diferencia,con aproximadamente de 5 horas a aproximadamente 6 horas de diferencia, con aproximadamente de 6 horas a aproximadamente 7 horas de diferencia, con aproximadamente de 7 horas a aproximadamente 8 horas de diferencia, con aproximadamente de 8 horas a aproximadamente 9 horas de diferencia, con aproximadamente de 9 horas a aproximadamente 10 horas de diferencia, con aproximadamente de 10 horas a aproximadamente 11 horas de diferencia, de aproximadamente 11 horas a aproximadamente 12 horas de diferencia, con aproximadamente de 12 a 18 horas de diferencia, de 18 a 24 horas de diferencia, de 24 a 36 horas de diferencia, de 36 a 48 horas de diferencia, de 48 horas a 52 horas de diferencia, de 52 horas a 60 horas de diferencia, de 60 horas a 72 horas de diferencia, de 72 horas a 84 horas de diferencia, de 84 horas a 96 horas de diferencia o de 96 horas a 120 horas de diferencia. En realizaciones espedficas, se administran dos o mas tratamientos dentro de la misma visita de patente.

En determinadas realizaciones, uno o mas tratamientos es la intervencion quirurgica. En una realizacion espedfica, la intervencion quirurgica se realiza para extirpar todo o parte de un tumor solido o del cancer de piel, y una composicion descrita en la presente memoria se administra en la zona del tumor antes, durante y despues de la intervencion quirurgica. En determinados casos, uno o mas tratamientos es la radioterapia.

En determinadas realizaciones, uno o mas tratamientos es un agente antivmco. Cualquier agente antivmco bien conocido por un experto en la tecnica puede usarse en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones. Los ejemplos no restrictivos de agentes antivmcos incluyen protemas, polipeptidos, peptidos, anticuerpos de protemas de fusion, moleculas de acido nucleico, moleculas organicas, moleculas inorganicas y moleculas pequenas que inhiben y/o reducen la union de un virus a su receptor, la interiorizacion de un virus en una celula, la replicacion de un virus o la liberacion de virus desde una celula. En concreto, los agentes antivmcos incluyen, entre otros, analogos de nucleosidos (p. ej., zidovudina, aciclovir, gangciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina y ribavirina), foscarnet, amantadina, peramivir, rimantadina, saquinavir, indinavir, ritonavir, interferones alfa y otros interferones, AZT, zanamivir (Relenza®) y oseltamivir (Tamiflu®). Otros agentes antivmcos incluyen vacunas contra el virus de la gripe, p. ej., Fluarix® (GlaxoSmithKline), FluMist® (Medlmmune Vaccines), Fluvirin® (Chiron Corporation), Flulaval® (GlaxoSmithKline), Afluria® (CSL Biotherapies Inc.), Agriflu® (Novartis) o Fluzone® (Aventis Pasteur).

En determinadas realizaciones, uno o mas tratamientos es con un agente antineoplasico. En una realizacion espedfica, el agente antineoplasico es un agente quimioterapeutico. Cualquier agente antineoplasico conocido por un experto en la tecnica puede usarse en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones. Los agentes antineoplasicos ejemplares incluyen: acivicina; antraciclina; antramicina; azacitidina (Vidaza); bifosfonatos (p. ej., pamidronato (Aredria), clondronato de sodio (Bonefos), acido zoledronico (Zometa), alendronato (Fosamax), etidronato, ibandornato, cimadronato, risedromato y tiludromato); carboplatino; clorambucilo; cisplatino; citarabina (Ara-C); hidrocloruro de daunorrubicina; decitabina (Dacogen); agentes de desmetilacion, docetaxel; doxorrubicina; inhibidores de EphA2; etoposido; fazarabina; fluorouracilo; gemcitabina; inhibidores de histona desacetilasa (HDAC); interleucina II (incluida la interleucina II biotecnologica, o rIL2), interferon alfa; interferon beta; interferon gamma; lenalidomida (Revlimid); anticuerpos anti-CD2 (p. ej., siplizumab (Medlmmune Inc.; Publicacion Internacional n° WO 02/098370)); melfalan; metotrexato; mitomicina; oxaliplatino; paclitaxel; puromicina; riboprina; espiroplatino; tegafur; t eniposido; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; y hidrocloruro de zorrubicina.

Otros ejemplos de tratamientos contra el cancer incluyen, entre otros, inhibidores de la angiogenia; oligonucleotidos complementarios; moduladores del gen de la apoptosis; reguladores de la apoptosis; antagonistas de BCR/ABL; derivados de betalactama; inhibidores de la casema ciinasa (ICOS); agonistas de estrogenos; antagonistas de estrogenos; inhibidores de glutation; Inhibidores de la HMG CoA reductasa; peptidos inmunoestimulantes; inhibidor del receptor 1 del factor de crecimiento insulinoide; agonistas de interferones; interferones; interleucinas; compuestos lipofilos de platino; inhibidores de matrilisina; inhibidores de la metaloproteinasa de matriz; ARN bicatenario mal emparejado; moduladores de oxido mtrico; oligonucleotidos; compuestos de platino; inhibidores de la protema cinasa C, inhibidores de la protema tirosina fosfatasa; inhibidores de la nucleosido purina fosforilasa; antagonistas de raf; inhibidores de la transduccion de senales; moduladores de transduccion de senales; inhibidores de traduccion; inhibidores de tirosina cinasa; y antagonistas del receptor de urocinasa .

En algunas realizaciones, la terapia o las terapias utilizadas en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones son con un agente antiangiogenico. Los ejemplos no restrictivos de agentes antiangiogenicos incluyen protemas, polipeptidos, peptidos, conjugados, anticuerpos (p. ej., humanos, humanizados, hubridos, monoclonales, policlonales, fragmentos Fvs, ScFvs, Fab, fragmentos F(ab)2 y uno de sus fragmentos de union al antfgeno), tales como los anticuerpos que se unen espedficamente a TNF-a, moleculas de acido nucleico (p. ej., moleculas complementarias o triples helices), moleculas organicas, moleculas inorganicas y pequenas moleculas que reducen o inhiben la angiogenia. Se pueden encontrar otros ejemplos de agentes antiangiogenicos, por ejemplo, en la publicacion de EE. UU. n° 2005/0002934 A1 en los parrafos 277-282. En otras realizaciones, la(s) terapia(s) utilizada(s) segun la invencion no es con un agente antiangiogenico.

En algunas realizaciones, el tratamiento o tratamientos empleados en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones son con un agente antinflamatorio. Los ejemplos no restrictivos de agentes antinflamatorios incluyen medicamentos antinflamatorios no esteroideos (AlNE) (p. ej., celecoxib (CELEBREX™), diclofenaco (VOLTAREN™), etodolaco (LODINE™), fenoprofeno (NALFON™), indometacina (INDOCINTM), cetoralaco (TORADOL™), oxaprozina (^dA^yPRO™), nabumentone (R^eLAFEN™), sulindaco (CLINORIL™), tolmentina (TOLECTIN™), rofecoxib (VIOXX™), naproxeno (ALEVE™, NAPROSYN™), cetoprofeno (ACTRON™) y nabumetona (RELAFEN™), medicamentos antinflamatorios esteroideos (p. ej., glucocorticoides, dexametasona (DECADRON™)), corticosteroides (p. ej., metilprednisolona (MEDROL™)), cortisona, hidrocortisona, prednisona (PREDNISONE™ y DELTASONE™), y prednisolona (PRELONE™ y PEDIAPRED™), anticolinergicos (p. ej., sulfato de atropina, metilitrato de atropina, y bromuro de ipratopropio) (ATROVENT™), beta2-agonistas (p. ej., abuterol (VENTOLIN™ y PROVENTIL™), bitolterol (TORNALATE™), levalbuterol (XOPONEX™), metaproterenol (ALUPENT™), pirbuterol (MAXAIR™), terbutlaina (BRETHAIRE™ y BRETHINE™), albuterol (PROVENTIL™, REPETABS™ y VOLMAX™, formoterol (FORADIL AEROLIZER™) y salmeterol (SEREVENT™ y SEREVENT DISKUS™) y metilxantinas (p. ej., teofilina (UNIPHYL™, THEO-DUR™, SLO-BID™, Y TEHO-42™)).

En algunas realizaciones, el tratamiento o tratamientos utilizados en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones son con un agente alquilante, una nitrosourea, un antimetabolito, una antraciclina, un inhibidor de la topoisomerasa II o un inhibidor mitotico. Los agentes alquilantes incluyen, entre otros, busulfan, cisplatino, carboplatino, clorombucilo, ciclofosfamida, ifosfamida, decarbazina, mecloretamina, mefaleno y temozolomide. Las nitrosoureas incluyen, entre otras, carmustina (BCNU) y lomustina (CCNU). Los antimetabolitos incluyen, entre otros, 5-fluorouracilo, capecitabina, metotrexato, gemcitabina, citarabina y fludarabina. Las antraciclinas incluyen, entre otras, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y mitoxantrona. Los inhibidores de topoisomerasa II incluyen, entre otros, topotecan, irinotecan, etopisida (VP-16) y teniposido. Los inhibidores mitoticos incluyen, entre otros, taxanos (paclitaxel, docetaxel) y los alcaloides de las vincas (vinblastina, vincristina y vinorelbina).

En algunas realizaciones, el tratamiento o tratamiento(s) utilizado(s) en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones son una medicacion contra el dolor (p. ej., un analgesico). En algunas realizaciones, el tratamiento o tratamiento(s) utilizado(s) en combinacion con las nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria o sus composiciones es con una medicacion contra la fiebre.

5.8 Equipos

En la presente memoria tambien se proporciona un paquete o equipo farmaceutico que comprende una o mas de las composiciones de nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria. El paquete o equipo puede comprender uno o mas recipientes llenos con uno o mas ingredientes que comprenden las composiciones descritas en la presente memoria. La composicion esta preferiblemente contenida dentro de un envase sellado, impermeable, esteril que facilita la eliminacion de la composicion sin contaminacion. Los materiales a partir de los cuales se pueden fabricar los recipientes incluyen papel de aluminio, plastico u otro material convencional que se esteriliza facilmente. El equipo puede contener material para una sola administracion o para multiples administraciones de la composicion, preferiblemente en donde el material para cada administracion se proporciona en un paquete independiente, impermeable y esteril.

En otro caso, se proporciona un recipiente que tiene dos compartimentos. Un primer compartimiento contiene cualquiera de las composiciones de nanofibras de sNAG descritas anteriormente, mientras que el segundo compartimiento contiene otro agente activo tal como otro agente para usar en combinacion con la composicion de nanofibras de sNAG. En el campo o la clmica, la composicion en el primer compartimento puede combinarse facilmente con el agente en el segundo compartimento para su posterior administracion a un paciente.

El equipo tambien puede contener un aplicador para la administracion de una o mas de las composiciones de nanofibras de sNAG descritas en la presente memoria, y/o para la administracion de otro agente activo tal como otro agente para usar en combinacion con la composicion de nanofibras de sNAG. En un caso, el equipo comprende un aplicador para la administracion topica de una composicion de nanofibras de sNAG. Los ejemplos de aplicadores para la administracion topica de una composicion de nanofibras de sNAG incluyen, entre otros, una jeringuilla, una espatula, un tubo (un tubo de compresion) y un hisopo de algodon.

Ademas, un equipo disenado para uso de urgencia o militar tambien puede contener instrumentos desechables esterilizados previamente, como tijeras, bistun, pinzas, torniquete, vendas elasticas o inelasticas, o similares.

Opcionalmente relacionado con dicho equipo o paquete puede ser un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricacion, uso o venta de productos farmaceuticos o productos biologicos, cuyo aviso refleja la aprobacion de la agencia de fabricacion, uso o venta para administracion humana. Por ejemplo, un equipo puede comprender un aviso con respecto a la aprobacion de la FDA y/o instrucciones de uso.

Los equipos incluidos en la presente memoria se pueden usar en las aplicaciones y metodos anteriores.

6. Ejemplos

6.1 Ejemplo 1 de referencia: Las nanofibras de sNAG de una diatomea marina estimulan la cicatrizacion de heridas y la expresion de las defensinas a traves de una via dependiente de Akt1/Ets1

Este ejemplo demuestra que las nanofibras de sNAG estimulan la cicatrizacion de heridas cutaneas y la expresion de las defensinas, y que la via Akt1 —»Etsl desempena un papel principal en la regulacion de la cicatrizacion de heridas cutaneas por nanofibras de sNAG.

6.1.1 Materiales y metodos

Las nanofibras de sNAG (en especial, Taliderm) son producidas y suministradas por Marine Polymer Technologies y formadas en parches adecuados para el tratamiento de heridas. Se alojaron ratones C57 Black naturales y Akt1 geneticamente modificados en las instalaciones para animales de la Medical University de Carolina del Sur. Se anestesiaron con 50% de oxfgeno puro y 50% de gas isoflurano, ratones naturales y Akt1 geneticamente modificados, con edades comprendidas entre ocho y 12 semanas. Inmediatamente antes de la herida, se aplico Nair Hair Removal Lotion en su dorso para eliminar cualquier vello no deseado. Se extrajo un area circular dorsal de 4 mm de la piel utilizando un sacabocados de biopsia por escision. Se coloco Taliderm en cada herida el dfa 0 o las heridas se dejaron sin tratar. Los dfas 1, 3, 5 y 7, las heridas se fotografiaron, se midieron y se extirparon con un sacabocados de biopsia de 8 mm para asegurar la eliminacion completa de la herida y la piel circundante. Las heridas de los ratones naturales y Akt1 geneticamente modificados con tratamiento y sin tratamiento con Taliderm se embebieron en parafina en preparacion para la tincion Hematoxilina-Eosina y la inmunofluorescente.

Se cortaron cortes incluidas en parafina y se colocaron en portaobjetos de microscopio para la tincion. Los portaobjetos se lavaron con xilenos para eliminar la parafina y se rehidrataron mediante una serie de alcoholes graduados. Los cortes se incubaron luego en Triton x100 al 0.1% para la permeabilizacion. Los cortes se incubaron en una solucion Antigen Retrival en ebullicion. Se uso suero animal al 1% para bloquear antes de incubar en el anticuerpo primario de cabra, dilucion en p-defensina 3 1:400. Los cortes se incubaron luego en el anticuerpo primario durante la noche a 4°C en una camara de humedad. Se uso un anticuerpo secundario Donkey a-cabra 488 inmunofluorescente con dilucion 1:200, seguido de tincion nuclear con TOPRO-3. Las imagenes fueron captadas utilizando microscopia confocal.

Se utilizo tincion con hematoxilina y eosina para visualizar estructuras basicas como la epidermis, la dermis, los musculos y los vasos sangumeos y para determinar la orientacion y la ubicacion aproximada en la herida. La tincion con hematoxilina-eosina tambien se uso para comenzar a identificar que tipos de celulas son estimuladas por Taliderm de una manera independiente de Akt1.

Otros materiales y metodos se describen en las descripciones de las figuras y en en el apartado de resultados a continuacion, y se realizan segun los metodos conocidos en la tecnica.

6.1.2 Resultados

Las nanofibras de sNAG estimulan la activacion de Akt 1, un regulador aguas arriba de Ets1. La figura 1A muestra un analisis de transferencia Western de fosfo-Akt en respuesta a la estimulacion por sNAG y sNAG de las CE sin suero. La figura 1B muestra el analisis por RT-PCR de CE infectadas con referencia revueltas o lentivirus shARN Akt1 y se evaluo la expresion de Ets1 y S26 como control de la carga. La figura 1C ilustra una ruta de transduccion de senales que transduce una senal de las nanofibras de sNAG a Akt1, Ets1 y Defensinas.

El tratamiento con Taliderm (sNAG) rescata parcialmente la cicatrizacion retardada de la herida en animales con Akt1 geneticamente modificado. La figura 2A muestra imagenes representativas de ratones WT y AKT1 geneticamente modificados heridos con y sin tratamiento de Taliderm. La figura 2B muestra la tincion hematoxilinaeosina de cortes de piel de raton representativas de las heridas del dfa 3. La tincion con hematoxilina-eosina de escisiones de heridas de ratones naturales y Akt1 indican un aumento dependiente de Taliderm en la proliferacion y migracion de queratinocitos. Las lmeas discontinuas indican el area de proliferacion de queratinocitos en todo el margen de la herida. Tanto en las heridas tratadas de ratones naturales como en las de Akt1, hay un aumento evidente en la reepitelizacion en todo el margen de la herida en comparacion con el el tipo natural y la referencia Akt1. Esto indica que Taliderm aumenta la seleccion de queratinocitos independientemente de la via Akt1. Aunque Taliderm provoca una reepitelizacion completa de la epidermis en todo el margen de la herida, todavfa hay una falta sustancial de revascularizacion en el tejido subyacente en comparacion con el natural. Esto es evidente por una hemorragia e infiltracion sustanciales de globulos rojos en los aminales Akt1.

Las nanofibras de sNAG estimulan la expresion de citoquinas y defensinas en celulas endoteliales primarias. La figura 3A muestra la inmunohistoqmmica de CE tratadas con o sin sNAG utilizando un anticuerpo dirigido contra adefensina. La figura 3B presenta ELISA que muestra que el tratamiento con nanofibras de la CE produce la secrecion de a-defensinas 1-3.

Las nanofibras de sNAG estimulan la expresion de defensina en celulas endoteliales primarias en funcion de Akt1. Las figuras 4A y 4B muestran analisis cuantitativos de RT-PCR de CE carentes de suero tratadas con o sin sNAG, con o sin PD98059 (inhibidor de MAPK), Wortmannin (inhibidor de PI3K) o infectadas con una referencia aleatoria o lentivirus de Akt1 shARN y evaluadas para la expresion de los genes indicados.

Las nanofibras de sNAG estimulan la expresion de p-defensina 3 en queratinocitos de raton. La figura 5A muestra la tincion inmunofluorescente con p-defensina 3 y anticuerpos Involucrina de cortes de herida cutanea de raton incluidos en parafina de animales WT y Akt1 geneticamente modificados el dfa 3. Se desarrollo un modelo de cicatrizacion de heridas cutaneas en tanto en ratones WT como Akt1 geneticamente modificados para evaluar los efectos de Taliderm in vivo. Estos resultados demuestran que la expresion de p-defensina 3 aumenta en los animales tratados con Taliderm en funcion de Akt1. La capacidad de Taliderm para aumentar la expresion de defensina en una herida en cicatrizacion tiene implicaciones importantes para tratar y controlar la infeccion de la herida. La figura 5B muestra la cuantificacion de la tincion inmunofluorescente de p-defensina 3 utilizando el programa informatico NIHImageJ. La figura 5C muestra la tincion inmunofluorescente de queratinocitos de WT y Akt1 geneticamente modificados tratados y sin tratar con p-Defensina 3 y TOPRO-3. Observese el aumento en la tincion con p-Defensina 3 verde en las heridas tratadas con Taliderm en W^ty Akt1. El marcaje inmunofluorescente de los cortes de la herida ilustra que las heridas tratadas con Taliderm muestran un aumento en la expresion de la pdefensina 3 en funcion de Aktl.Aunque las heridas tratadas de Akt1 muestran un aumento razonable en pdefensina 3, las heridas tratadas del tipo natural ilustran un aumento mas notable. Esto indica que la expresion de pdefensina 3 no solo aumenta con la aplicacion de la nanofibra, sino que al menos depende parcialmente de la via Akt1. La expresion de p-defensina 3 parece limitada a los queratinocitos que indican que esta expresion es espedfica de queratinocitos.

Sitios de union al factor de transcripcion dependiente de Akt1. La figura 6 muestra un esquema de los puntos de union del factor de transcripcion dependiente de Akt1. Usando el programa informatico Genomatix, se analizaron 500 pb aguas arriba de la zona de inicio de la transcripcion en busca de zonas conservadas en el ARNm de DEF1, 4 y 5.

6.1.3 Conclusiones

Los datos proporcionados demuestran que la estimulacion de nanofibras de sNAG de los resultados de Ets1 de la activacion de Akt1 por estas nanofibras. El tratamiento con nanofibras dio como resultado aumentos notables en la expresion de genes implicados en la seleccion celular, como IL-1 (un objetivo conocido de Etsl), VEGF y varias defensinas (p3, a l, a4 y a5), pequenos peptidos antimicrobianos recientemente mostrados para actuar como quimiotaxinas. Tanto la inhibicion farmacologica de la via de PI3K/Akt1 como Akt1 geneticamente modificado usando shARN produjeron una disminucion de la expresion de estos factores quimiotacticos. Los ratones geneticamente modificados Akt1 presentaron un fenotipo de cicatrizacion de heridas retrasado que fue parcialmente rescatado por nanofibras de Taliderm. Las heridas tratadas con Taliderm tambien presentaron un aumento en la expresion de defensina que depende de Akt1.

El aumento de la expresion de p-defensina 3 y la proliferacion de queratinocitos en las heridas tratadas con Taliderm demuestra el uso beneficioso de Taliderm como un producto eficaz para la cicatrizacion de heridas. Taliderm actua para aumentar la expresion del peptido antimicrobiano en los queratinocitos en funcion de Akt1, lo que sugiere el papel esencial de Akt1 en la funcion de las nanofibras de sNAG. Esto se correlaciona con los resultados de otros estudios en el laboratorio (Buff, Muise-Helmericks, no publicados) que la inhibicion de la ruta PI3K/Akt1 y Akt1 geneticamente modificado utilizando shARN produce una disminucion en la expresion de estos factores quimiotacticos.

Aunque la expresion aumentada de p-defensina 3 depende de Akt1, la tincion hematoxilina-eosina de las escisiones de la herida de 8 mm (figura 2B) indico que Taliderm actua independientemente de Akt1 en la reepitelizacion de la herida. Aun cuando los nuevos queratinocitos abarcan todo el margen de la herida, el tejido subyacente no demostro la misma estimulacion en el crecimiento vascular. Esto indica que las fugas de los vasos sangumeos y la gran cantidad de globulos rojos flotantes en la dermis se deben a la ausencia de Akt1. Esto sugiere que Taliderm depende de la via de Akt1 para un aumento en la vascularizacion.

En resumen, (i) las nanofibras de sNAG (como Taliderm) aumentan la curacion de heridas en parte al estimular la angiogenia; (ii) el tratamiento con nanofibras de sNAG de celulas endoteliales activa una via dependiente de Akt1/Ets1 que conduce a cambios en la motilidad celular y la secrecion de citocinas; (iii) las heridas tratadas con Taliderm muestran una mayor expresion de p-defensina 3 en funcion de AKT1; (iv) el tratamiento de animales con Akt1 geneticamente modificados con Taliderm rescata parcialmente el fenotipo, lo que lleva a un aumento notable de la proliferacion/migracion de queratinocitos; y (v) el analisis bioinformatico indica que ETS1 esta probablemente involucrado en la ruta activada por sNAG que conduce a un aumento de la cicatrizacion de heridas y la secrecion de citocinas.

En conjunto, estos resultados sugieren un papel central de la via Akt1 ^ Etsl en la regulacion de la cicatrizacion de heridas cutaneas mediante nanofibras de sNAG y apoyan el uso de estas nanofibras como un metodo novedoso y eficaz para mejorar la cicatrizacion de heridas.

6.2 Ejemplo 2 de referencia: Las nanofibras de sNAG aumentan la expresion de la defensina, aumentan la cinetica del cierre de la herida y tienen un efecto antibacteriano indirecto dependiente de defensina.

Este ejemplo demuestra que las nanofibras de sNAG tienen un potente efecto antibacteriano contra Staphylococcus aureus in vivo, que es indirecto y dependiente de la defensina. Este ejemplo tambien demuestra que las nanofibras de sNAG inducen la expresion de defensinas in vitro en queratinocitos y celulas endoteliales e in vivo en heridas cutaneas, dependiendo de Akt-1, y aumentan la cinetica de cierre de la herida.

6.2.1 Materiales y metodos

Cultivo de tejidos, inhibicion farmacologica, ELISA: CE de la vena del cordon umbilical humano (Lonza) se mantuvo a 37°C con un 5% de CO2 en medio basal endotelial 2 (Lonza).

Medio basal endotelial 2 (EBM2) se enriquecio con medio de crecimiento de CE 2 SingleQuots como se describe en los procedimientos de Lonza y 1% de estreptomicina/penicilina (Invitrogen). La privacion de suero se realizo a 80 90% de confluencia en EBM2 enriquecido con 0.1% de suero de ternera fetal (Valley Biomedical) durante 24 horas, seguido de estimulacion con pGlcNAc muy purificada (50 pg/ml) de nanofibras (sNAG) en agua esteril (proporcionada por Marine Polymer Technologies, Inc., Danvers, Mass., EE. UU.). Las nanofibras procedentes de diatomeas con pGlcNAc utilizadas en este estudio son fibras biodegradables cortas procedentes de una forma mas larga (NAG), y tienen una longitud promedio de 4-7 pm y un peso molecular del polfmero de aproximadamente 60000 Da. Para la inhibicion usando PD098059 (50pM) o wortmannin (100 nM), las celulas se trataron previamente durante 45 minutos antes de la estimulacion de 3 horas con sNAG (50 pg/ml).

Analisis estad^stico: Cada experimento cuantitativo se realizo al menos por triplicado al menos tres veces independientes. Todos los analisis estadfsticos se realizaron utilizando Microsoft Excel para calcular las medias, las desviaciones tfpicas y la prueba de la t de Student.

Infeccion lentivkica: Montajes lentivmcos de shARN de Mission dirigidos contra Akt1 se adquirieron de Sigma/ Aldrich. Se adquirio un vector de shARN pLKO.1 aleatorio de Addgene. Se propagaragaron lentivirus en celulas 293T, mantenidas en DMEM enriquecido como anteriormente. La produccion de lentivirus se realizo utilizando los vectores de encapsulacion psPAX2 y pMD2.G adquiridos de Addgene utilizando el protocolo para producir partfculas lentivmcas de Addgene. Para la infeccion de dianocitos, se colocaron en placas 7.5 x 105 celulas en placas de 100 mm2 y se dejaron incubar durante la noche. Al dfa siguiente, las celulas se transdujeron utilizando una concentracion final de 1 pg/ml de polibreno y una referencia aleatoria o lentivirus de shARN de Akt1. Despues de la transduccion, las celulas endoteliales se privaron de suero durante la noche y se estimularon con sNAG (50 g/ml) durante 3 horas. En todas las infecciones se contolo la modificacacion genetica apropiada por RT-PCR.

RT-PCR: Para la RT-PCR semicuantitativa, el ARN se extrajo con RNAsol (Teltest, Inc.) siguiendo las instrucciones del fabricante. El ADNc se sintetizo a partir de 2 pg de ARN completo con un equipo de smtesis Superscript First Strand (Invitrogen), utilizando Oligo(dT) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las reacciones de PCR conteman cantidades iguales de ADNc y 1.25 uM del par de cebadores apropiado (Sigma-Proligo, St. Louis, MO, EE. UU.). Todas las secuencias de cebadores utilizadas en estos analisis son las siguientes:

Las condiciones de ciclacion fueron: 94°C durante 5 minutos; 30-35 ciclos de 94°C durante 1 min, 55-65°C (basados en el cebador Tm) durante 1 min, 72°C durante 1 min; 72°C durante 7 min y se enfrio a 4°C. Se determino empmcamente que el numero de ciclos esta dentro del intervalo lineal del ensayo para cada par de cebadores utilizado. Todas las RT-PCR semicuantitativas se realizaron con los cebadores de la subunidad S26 de la protema ribosomica como referencias internas. Los productos se visualizaron en un sistema de diagnostico por la imagen molecular de BioRad (Hercules, CA, EE. UU.). La PCR en tiempo real se realizo con un equipo Brilliant CYBR green QPCR en combinacion con un sistema de PCR en tiempo real Mx3000P, ambos adquiridos en Stratagene. Los cebadores que detectan la subunidad ribosomica S26 se utilizaron como referencias internas.

Modelo de cicatrizacion de heridas por escision: Se utilizaron C57B1/6 y Akt1 -/- naturales [43] en todos los experimented. Los animales con Akt1 geneticamente modificados se crearon utilizando una estrategia de mutagenia de insercion en la zona de inicio de la traduccion que bloquea la expresion de la protema completa. La herida se realizo en ratones macho adultos anestesiados entre 8 y 12 semanas de edad. Se crearon dos heridas cutaneas en todo el espesor utilizando un sacabocados de biopsia de 4 mm (Miltex), para crear dos heridas identicas en cada lado. Los ratones se anestesiaron utilizando una maquina de anestesia por vaporizacion con 02/isoflurano (VetEquip, Inc.). Se utilizo isoflurano al 4% para la induccion; 2% para intervencion quirurgica. Antes de la intervencion quirurgica, se elimino el pelo por depilacion y el area se lavo y se esterilizo con etanol al 70%. Las heridas se trataron con membrana de sNAG humedecida con agua destilada o se dejaron sin tratar. Los dfas 3 y 5, los animales se sacrificaron sin dolor y se recogieron todas las heridas, incluida la piel circundante, utilizando un sacabocados de biopsia de 8 mm (Miltex). Las heridas se fijaron en paraformaldetudo al 4% durante la noche a 4°, se incluyeron en parafina y se cortaron para su analisis.

Tincion con hematoxilina y eosina (hematoxilina-eosina): Toda la tincion con hematoxilina-eosina se realizo en el Centro de Histologfa de la Universidad de Medicina de Carolina del Sur, Departamento de Medicina regenerativa y Biologfa celular. En resumen, los cortes se purificaron en xileno, se rehidrataron con una serie de alcoholes graduados, se colocaron en hematoxilina seguido de alcohol acido. Las muestras se colocaron luego a continuacion en agua amoniacal, se enjuagaron en etanol y se expusieron a eosina antes de deshidratarlas con alcoholes graduados y purificarlas en xileno. Los cortes se montaron utilizando Cytoseal-XYL (Richard-Allan Scientific). Los cortes en hematoxilina-eosina se visualizaron usando un microscopio Olympus BX40 (lente delobjetivo 4x, 0.13) y se captaron usando una camara Olympus (modelo DP25) y un programa informatico de adquisicion DP2-BSW.

Inoculacion bacteriana, tincion de Gram de tejido, cuantificacion de unidades de formacion de colonias: Se hirieron ratones machos de entre 8 y 12 semanas como se describio anteriormente. Se seleccionaron colonias aisladas de Staphylococcus aureus (ATC^c25923) y se cultivaron durante la noche a 37°C y se ajusto a una absorbancia de DO600 = 0.53. Se centrifugo 1 ml de S. aureus a 10000 rpm, se volvio a poner en suspension en PBS esteril y se usaron 15 |jl para inocular cada herida. Se aplicaron membranas de sNAG al grupo tratado treinta minutos despues de la inoculacion. Los ratones se sometieron a eutanasia los dfas 3 y 5 despues de la herida y las heridas se recogieron utilizando un sacabocados de biopsia de 8 mm. Una herida por animal se fijo durante la noche en paraformaldel'ndo al 4% a 4°C y la otra herida se cultivo y se coloco en placas en medio LB sin antibiotico para la cuantificacion bacteriana (vease mas abajo). Las heridas para la tincion de Gram de tejido se incluyeron en parafina y se cortaron. Se purificaron los cortes en xileno y se rehidrataron con una serie de alcohol y se tineron usando tincion gram para tejidos (Sigma-Aldrich) por los procedimientos descritos por el fabricante.

Para el cultivo, los cortes de la herida se colocaron en 0.5 ml de medio bacteriano y se incubaron durante 30 minutos a 37°C en agitacion. Las unidades formadoras de colonias (UFC) se cuantificaron utilizando una serie de dilucion en placa durante la noche a 37°C. Se contaron el numero de colonias por placa/por dilucion y se calcularon las UFC/ml. Para determinar las UFC/ml de los cultivos bacterianos tratados con sNAG, los cultivos de S. aureus en solucion se trataron con concentraciones variables de sNAG (10 j l y 20 j l de 10.8 mg/ml de sNAG) durante tres horas. Los cultivos se colocaron en placas durante la noche a 37°C y se determinaron las UFC/ml.

Aplicacion del peptido p-defensina 3: Se analizo a tres concentraciones de prueba (1.0 jM, 2.5 jM y 5.0 jM ) de peptido p-defensina 3 humano biologicamente activo (Peptide Institute, Inc.) su efecto sobre el crecimiento bacteriano en el modelo de curacion de la herida infectada descrito anteriormente. Cada concentracion afecto negativamente el crecimiento bacteriano, por lo que se eligio la concentracion mas baja para los analisis. Una vez infectada cada herida con S. aureus, se aplicaron 10 |jl de peptido. Despues de tres dfas, las heridas se recogieron, se incluyeron para el corte y la tincion de Gram, o se cultivaron para la cuantificacion de UFC/ml como se describio anteriormente.

Bloqueo de anticuerpo p-defensina 3: Se hirieron ratones macho naturales y se infectaron con 15 j l de S. aureus como se describio anteriormente. Despues de la inoculacion, una herida se trato con 0.2 jg/ml de anticuerpo pdefensina 3 (Santa Cruz), mientras que la otra se trato con 0.2 jg/ml de anticuerpo de referencia IgG de cabra normal (Santa Cruz). Las membranas de sNAG se aplicaron a todos los ratones despues del tratamiento con anticuerpos el dfa 0. El anticuerpo se aplico cada 24 horas. Se practico la eutanasia a los ratones el dfa 3 y las heridas se recogieron con un sacabocados de biopsia de 8 mm. Las heridas se fijaron durante la noche en paraformaldel'ndo al 4% a 4°C, se incluyeron en parafina, se cortaron y se analizaron usando tincion gram de tejido. Se realizo la cuantificacion de UFC/ml de las heridas recogidas en el dfa 3 como se describio anteriormente. Microscopia de inmunofluorescencia: Los cortes de tejido incluidos en parafina se rehidrataron con xileno y una serie de alcoholes graduados. Los cortes se trataron con Triton-X100 al 0.01% y se sometieron a recuperacion de antfgeno utilizando una solucion de desenmascaramiento de antfgeno (Vector Laboratories) en una olla a presion durante 5 minutos y se dejaron enfriar. Los cortes de piel se marcaron con el anticuerpo policlonal de cabra pdefensina 3 (Santa Cruz), el anticuerpo policlonal de conejo involucrina (Santa Cruz) y el yoduro de TO-PRO 3 (Molecular Probes). Los cortes se incubaron en anticuerpo primario durante la noche a 4°C y anticuerpos inmunofluorescentes secundarios apropiados (Invitrogen) durante 1 hora a temperatura ambiente. Los cortes de control para cada anticuerpo se tineron sin anticuerpo primario. Los cortes de tejido se visualizaron utilizando un microscopio confocal de barrido laser Olympus FluroView (Modelo IX70) y se captaron a temperatura ambiente utilizando una camara Olympus (Modelo FV5-ZM) y el programa informatico de adquisicion Fluoview 5.0. Se tomaron imagenes de todos los cortes de tejido utilizando una lente de inmersion en aceite 60x (Olympus Immersion Oil).

Las HUVEC fueron privadas de suero o se trataron con sNAG durante 5 horas en cultivo y se tineron con anticuerpos dirigidos contra a-defensina 5 (FITC), p-defensina 3 (Texas Red) o TOPRO 3 (Azul). Las imagenes se tomaron utilizando microscopia inmunofluorescente. La expresion de defensina del cultivo celular se visualizo utilizando un microscopio confocal Zeiss Axiovert 100M y se capto a temperatura ambiente, usando agua como medio, utilizando una camara LSM 510 (objetivo Zeiss Fluor 63xW/1.2A).

Analisis de transferencia Western: Las celulas endoteliales se privaron de suero antes de la estimulacion con sNAG (50|jl/ml) durante un tiempo determinado. Las celulas se lisaron a continuacion y se sometieron a analisis de transferencia Western. Los anticuerpos utilizados para el analisis de transferencia Western son los siguientes: subunidad anti-p85 de PI3K y anticuerpo Akt fosfoespedfico (Cell Signaling Technologies).

6.2.2 Resultados

6.2.2.1. Los queratinocitos y las celulas endoteliales expresan y segregan defensinas cuando se estimulan con sNAG

Este ejemplo demuestra que el tratamiento con sNAG modula la expresion de las defensinas, pequenos peptidos antimicrobianos que forman parte de la respuesta inmunitaria innata.

Para investigar el efecto del tratamiento con sNAG sobre la expresion de defensina in vitro, se utilizaron celulas endoteliales de la vena umbilical humana primaria en cultivo. Las celulas endoteliales expresan defensinas tanto de tipo a como de tipo p cuando se estimulan con sNAG. Como se muestra en la figura 7A, las celulas endoteliales tratadas con sNAG presentan un aumento de la expresion del ARNm de p-defensina 3 y a-defensina 1 1 hora despues de la estimulacion. Tambien se observo un aumento similar de a-defensina 4 y 5 por el tratamiento con sNAG (datos no mostrados). Se usaron matrices de genes personalizados que contienen mas de 25 genes de defensina diferentes para confirmar la expresion de las defensinas de tipo a en celulas endoteliales primarias y las defensinas de tipo p en los queratinocitos. Se demostro que la estimulacion por sNAG de las celulas endoteliales aumenta la expresion espedficamente de las a-defensinas 1, 4 y 5 y p-defensina 3. Ademas, la estimulacion con sNAG de queratinocitos humanos aumento la expresion de genes similares a p-defensina, varios de los cuales se enumeran en la tabla 1. Estos resultados sugieren que al menos tres genes de a-defensina y p-defensina 3 se expresan en celulas endoteliales primarias y varios genes de defensina se expresan en queratinocitos primarios en respuesta a la estimulacion por sNAG.

Tabla I: El analisis de la matriz de genes muestra numerosos genes de defensina aumentados por sNAG HUVEC Nombre del gen Veces Queratinocitos Nombre del gen Veces de cambio de cambio a-defensina 1 1.36 p-defensina 1 1.4 a-defensina 4 2.74 p-defensina 126 1.73 a-defensina 5 2.46 p-defensina 105B 2.55 p-defensina 1 2.19 p-defensina 123 1.65 p-defensina 4 3.06 p-defensina 129 1.46

Para probar si la expresion de defensina dependiente de sNAG tambien se produjo a nivel proteico, las celulas endoteliales estimuladas por sNAG se sometieron a inmunofluorescencia utilizando anticuerpos dirigidos tanto contra las a-defensinas como contra las p. Como se muestra en la figura 7B, tanto la p-defensina 3 como la adefensina 5 aumentan tras la estimulacion de sNAG en este tipo de celulas. Sin embargo, la estimulacion de queratinocitos humanos primarios (HaCat) con sNAG no produjo un aumento en la expresion de a-defensina, pero sf un aumento en la expresion de p-defensina 3 (figura 7C). En conjunto, estos experimentos sugieren que la estimulacion de sNAG produce un aumento de los peptidos defensina tanto en queranocitos primarios como en celulas endoeliales primarias.

6.2.2.2. La expression de defensina dependiente de sNAG requiere Akt1

Los datos publicados previamente demuestran que la estimulacion por sNAG de celulas endoteliales primarias da como resultado un aumento de la activacion de la integrina, la expresion de Etsl y la activacion de la MAP cinasa. (Voumakis, J.N., et al., 2008, J. Vas. Res. 45(3): 222-32). Los resultados colocan Akt1 aguas arriba de Etsl en celulas endoteliales y en Drosophila. (Lavenburg, K. R., et al., 2003, FASEB J.17(15): 2278-80). Para comenzar a determinar la v^a de senalizacion responsable de la expresion de las defensinas, las celulas endoteliales se privaron de suero y se trataron previamente con inhibidores farmacologicos dirigidos contra PI3K (wortmannin) o MAP cinasa (PD098059) antes de la estimulacion de sNAG. El analisis cuantitativo de PCR en tiempo real demuestra que los niveles de ARNm en a-defensina 1 disminuyen en gran medida despues de la inhibicion de la via PI3K/Akt o de la via MAP cinasa (figura 8A). El analisis por RT-PCR de la p-defensina 3 tambien demuestra que los niveles tambien se reducen por la inhibicion de estas vfas (figura 8B). El tratamiento con sNAG de las celulas endoteliales durante un corto penodo de tiempo conduce a la fosforilacion de Akt1, un indicador tfpico de su activacion (figura 8C). Para confirmar que Akt1 es realmente necesario para la expresion de defensina, se utilizo la administracion lentivmca de shARN dirigido contra Akt1. La RT-PCR cuantitativa de las celulas endoteliales sin suero infectadas con el control aleatorio (SCR) o shARN de Akt1 seguido del tratamiento con sNAG confirma que la expresion de Akt1 se necesita para la expresion de a-defensina dependiente de sNAG (figura 8D). Dado que se sabe que las p-defensinas se expresan en celulas epiteliales, se uso administracion lentivmca de shARN dirigido contra Akt1 en queratinocitos humanos (HaCat). El tratamiento con sNAG de los queratinocitos privados de suero infectados con la referencia aleatoria (SCR) conduce a un aumento significativo en la expresion de p-defensina 3 que se suprime con Akt1 modificado geneticamente (figura 8E). Estos resultados ilustran que el tratamiento con sNAG activa Akt1 en celulas endoteliales y sugiere firmemente que la expresion de defensina dependiente de sNAG requiere Akt1 tanto en celulas endoteliales como en queratinocitos.

6.2.2.3. El tratamiento con sNAG de las heridas cutaneas aumenta la expresion de defensina in vivo

Para confirmar la dependencia de Akt1 de la expresion de defensinas in vivo, se utilizaron animales de naturales y geneticamente modificados con Akt1 en un modelo de curacion de heridas por escision. Aunque la mayona de los leucocitos de mairnferos expresan a-defensinas (ser humano, conejo, rata y hamster), los leucocitos de raton no expresan a-defensinas. Por lo tanto, se centro la expresion de la p-defensina en estos modelos de raton. El tratamiento de las heridas cutaneas con una forma seca de sNAG, una membrana delgada y biodegradable, durante tres dfas da como resultado un aumento estadfsticamente significativo en la expresion de p-defensina 3 en queratinocitos de animales naturales (figura 9A). Se utilizo la tincion (roja) de involucrina (Watt, F. M., 1983, J. Invest. Dermatol. 81 (Supl. 1): 100s-3s) para marcar las capas de celulas de queratinocitos y mostrar que la expresion de p-defensina 3 esta confinada en la capa epidermica. Para evaluar si la expresion de defensina dependiente de sNAG depende de Akt1, se realizo un ensayo similar utilizando un modelo animal modificado geneticamente con Akt1. Las heridas de los ratones geneticamente modificados con Akt1 tratados con membranas sNAG muestran una induccion notablemente reducida de la expresion de p-defensina 3 (figura 9A). Para visualizar mejor las capas epidermicas que expresan p-defensina 3, la figura 9B muestra una imagen representativa de una herida natural tratada con sNAG recogida el dfa 3. El tratamiento con sNAG de las heridas cutaneas indujo la expresion de p-defensina 3 principalmente en las capas suprabasales de la piel (figura 9B). Los analisis cuantitativos mostrados en la figura 9C muestran un aumento aproximado de 5 veces en la expresion de p-defensina 3 en animales naturales tratados con sNAG y que se requiere Akt1 para este aumento.

6.2.2.4. El tratamiento con sNAG aumenta la cinetica del cierre de la herida en animales WT

Los resultados anteriores han mostrado una cinetica aumentada del cierre de la herida en modelos de ratones diabeticos en respuesta al tratamiento con sNAG. Se probaron los sNAG para un efecto similar en animales naturales. Se crearon heridas por escision en animales naturales que se trataron con la forma de membrana de sNAG o se dejaron sin tratar. Los cortes de tejido se tomaron a los 1, 3 y 5 dfas despues de la herida y se sometieron a tincion hematoxilina-eosina. Como se muestra en la figura 10, el tratamiento con sNAG de heridas naturales da como resultado un cierre completo, como se observa en la lmea continua, en el dfa 3 despues de la herida. Esto ocurre dos dfas antes que en las heridas de referencia. Los animales geneticamente modificados con Akt1 presentan un retraso en el cierre de la herida; estos animales no cierran completamente la herida hasta 7 dfas despues de la herida. El retraso en el cierre de la herida en los animales geneticamente modificados con Akt1 no se rescata mediante el tratamiento con sNAG (datos no mostrados). Estos resultados sugieren que sNAG no solo induce la expresion de defensina sino que tambien aumenta la cinetica de la cicatrizacion de la herida en ratones naturales y puede ser un agente terapeutico novedoso y eficaz.

6.2.2.5. sNAG es un antimicrobiano eficaz contra S. aureus

Se sabe que los peptidos de la defensina poseen propiedades antimicrobianas que son activas contra las bacterias grampositivas y gramnegativas. Dado que el tratamiento de las celulas endoteliales con sNAG aumenta la expresion de defensina (tanto del tipo a como del tipo p) y el tratamiento de las heridas cutaneas con sNAG aumenta drasticamente la expresion de p-defensina 3 in vivo, se evaluo la eficacia antimicrobiana del tratamiento con sNAG en heridas infectadas con bacterias.

Para determinar si el sNAG disminuye la carga bacteriana en heridas cutaneas, los animales naturales y geneticamente modificados con Akt1 se sometieron a curacion de heridas cutaneas, seguido de infeccion con Staphylococcus aureus. Las heridas infectadas se trataron con sNAG o se dejaron sin tratar durante 3 y 5 dfas despues de la infeccion. Como se muestra por la tincion gram de tejido en las figuras 11A y 11B, los animales naturales tratados con sNAG muestran una reduccion significativa en la tincion gram positiva el dfa 5 despues de la herida en comparacion con las heridas no tratadas. Por el contrario, el tejido tenido con Gram procedente de las heridas no tratadas en animales geneticamente modificados con Akt1 5 dfas despues de la herida muestran una acumulacion de neutrofilos que se tinen gram positivo (figura 11B), lo que indica una posible falta de depuracion bacteriana en estos animales que no se rescata con el tratamiento con sNAG. Estos resultados sugieren que los animales geneticamente modificados con Akt1 tienen un defecto en los mecanismos de depuracion inmunitaria que no es rescatado por el tratamiento con sNAG.

Para cuantificar los cambios bacterianos espedficos de sNAG en unidades formadoras de colonias (UFC), se recogieron y se cultivaron heridas infectadas tanto de ratones naturales como geneticamente modificados con Akt1 tratados con sNAG o no tratados. Como se muestra en la figura 11C, a los 5 dfas despues de la herida, el numero de bacterias se reduce notablemente (10 veces) en los animales naturales tratados con sNAG. Sin embargo, aunque el numero de bacterias detectadas en los animales geneticamente modificados con Akt1 se reduce en comparacion con el tipo natural, el tratamiento con sNAG tuvo poco efecto sobre el numero de bacterias absolutas en los animales geneticamente modificados con Akt1. A los 3 dfas despues de la infeccion (figura 11D), hay una disminucion similar de 10 veces la UFC en ratones naturales tratados con sNAG en comparacion con las referencias no tratadas. Los animales geneticamente modificados con Akt1 tratados con sNAG muestran una disminucion de 2 veces en UFC en comparacion con los animales geneticamente modificados con Akt1 no tratados. En general, Los animales geneticamente modificados con Akt1 tienen una menor carga bacteriana por herida que puede reflejar un efecto dependiente de Akt1 en otros procesos ademas de la expresion de defensina. Estos resultados sugieren que el tratamiento con sNAG produce una reduccion marcada en la carga bacteriana en las heridas cutaneas infectadas en ratones naturales pero no en los ratones geneticamente modificados con Akt1, lo que sugiere la posibilidad de que las defensinas esten mediando la respuesta antibacteriana.

Para demostrar que el efecto antibacteriano del tratamiento con sNAG no se debe al efecto directo de las nanofibras sobre el crecimiento bacteriano o sobre su supervivencia, los cultivos bacterianos de S. aureus se trataron en solucion con diferentes cantidades de sNAG, durante 3 horas y se determinaron las unidades formadoras de colonias. Como se muestra en la figura 11E, el tratamiento con sNAG no tuvo un efecto directo sobre el crecimiento de S. aureus, lo que indica que sNAG no esta inhibiendo directamente el crecimiento bacteriano y puede estar funcionando mediante el aumento de las defensinas.

6.2.2.6. La aplicacion del peptido Defensina imita el efecto antibacteriano de sNAG

Para determinar si la adicion del peptido defensina puede bloquear la infeccion bacteriana de manera similar a la mostrada para el tratamiento con sNAG, los ratones naturales se hirieron e inocularon con S. aureus como se describio anteriormente y luego se trataron con peptido p-defensina 3 humana biologicamente activo (1.0 pm) durante tres dfas. Las biopsias de tejido se tineron usando una tincion de Gram de tejido y se cuantifico las UFC. La figura 11 F-G muestra los resultados de estos experimentos. Los ratones infectados tratados con peptido pdefensina 3 tienen una carga bacteriana disminuida, una disminucion aproximada de 7.5 veces en las bacterias viables (figura 11G), similar a la que se muestra en los ratones naturales tratados con sNAG.

Uno de los mecanismos por los cuales se induce la expresion de defensina es a traves de la estimulacion por LPS bacteriano, posiblemente mediante la activacion de receptores tipo Toll. (Selsted, M. E. y A. J. Ouellette, 2005, Nat. Immunol. 6(6): 551-7). Para probar si la infeccion bacteriana sola es capaz de inducir la expresion de p-defensina dentro de los penodos de tiempo evaluados, se evaluo la expresion de p-defensina en heridas infectadas de animales naturales despues de tres dfas despues de la herida. Como se muestra en la figura 12A, la infeccion bacteriana sola no induce la expresion de p-defensina en los 3 dfas de la infeccion, como se muestra con el tratamiento con sNAG. Sin embargo, en animales naturales, el tratamiento con sNAG de las heridas infectadas provoca un aumento aproximado de 3 a 5 veces en la expresion de la p-defensina en un penodo de tiempo similar (figura 12B). Estos resultados sugieren que el tratamiento con sNAG induce rapidamente la expresion de defensina que produce norable deouracion bacteriana en heridas infectadas con S. aureus.

6.2.2.7. Anticuerpos dirigidos contra p-defensina 3 bloquean el efecto antibacteriano de sNAG

Dado que las defensinas son protemas segregadas, los inventores supusieron que los anticuerpos dirigidos contra pdefensina 3 podnan bloquear las actividades antibacterianas. Para probar esta hipotesis, se crearon heridas, se infectaron con S. aureus y se trataron con sNAG como se describio anteriormente. Las heridas se trataron con un anticuerpo p-defensina 3 o un control de isotipo; una aplicacion cada dfa durante tres dfas. Se obtuvieron cortes de la herida y se tineron para bacterias gram positivas. Como se muestra en la figura 13A, los cortes procedentes de heridas tratadas con anticuerpo p-defensina tienen mas bacterias gram positivas que las tratadas con anticuerpos control de isotipo. Cada corte mostrado procedfa del area de la herida directamente bajo la costra. La cuantificacion de UFC en estas heridas demuestra que la neutralizacion de p-defensina 3 antes del tratamiento con sNAG en las heridas infectadas con S. aureus da como resultado un aumento significativo en bacterias. Los animales que fueron tratados con un control de isotipo IgG presentan una reduccion aproximada de 5 veces en bacterias viables (figura 13B). En conjunto, estos resultados sugieren que el tratamiento con sNAG no solo produce una mayor cinetica de cicatrizacion de la herida, sino que tambien favorece una respuesta antibacteriana endogena y apoya el uso de esta nanofibra como una terapia novedosa para mejorar la cicatrizacion de heridas a la vez que disminuye la infeccion de la herida.

6.2.3 Conclusiones

Los resultados presentados en la presente memoria demuestran que se puede usar una nanofibra procedente de diatomeas marinas, sNAG, como un metodo nuevo y eficaz para mejorar la cicatrizacion de heridas a la vez que disminuye simultaneamente la infeccion de la herida. Los datos demuestran que este material aprobado por la FDA, que se utiliza actualmente para la hemostasia, estimula la expresion de las defensinas tanto de tipo a como de tipo p en las celulas endoteliales primarias y un aumento del tipo p en los queratinocitos primarios.

Las defensinas son un componente esencial del sistema inmunitario innato. Estos peptidos poseen propiedades antimicrobianas que son activas contra bacterias grampositivas y negativas, hongos y muchos virus. Las defensinas son peptidos cationicos pequenos (3-4 kDa), ricos en cistema, que se encuentran en mairnferos, insectos y plantas que se clasifican en diferentes familias (a, p y 0) en funcion de su tipo de enlace disulfuro. Se cree que las adefensinas son espedficos para los neutrofilos, se encuentran en concentraciones muy altas (que comprenden aproximadamente el 5-7% de las protemas celulares totales) (Ganz, T. y R. I. Lehrer, 1994, Curr. Opin. Immunol.

6(4):584-9), y se segregan durante las respuestas antimicrobianas (Ganz, T., 1987, Infect. Immun. 55 (3):568-71). Tambien se ha demostrado que los macrofagos alveolares del conejo poseen a-defensinas en cantidades comparables a los neutrofilos de conejo. (Ganz, T., et al., 1989, J. Immunol. 143(4):1358-65). Las p-defensinas se encuentran en tipos de celulas epiteliales como queratinocitos, celulas epiteliales de la mucosa (Harder, J., et al., 1997, Nature 387(6636):861; y Harder, J., et al., 2001, J. Biol. Chem. 276(8):5707-13), tejidos de la cavidad bucal y secreciones salivales (Mathews, M., et al., 1999, Infect. Immun. 67(6):2740-5), y el rinon, donde pueden aumentar en respuesta a estfmulos infecciosos o inflamatorios (Ganz, T. y R. I. Lehrer, 1994, Curr. Opin. Immunol. 6(4):584-9). La p-defensina humana 1 (hDEFB1) es uno de los peptidos antimicrobianos mas importantes en los tejidos epiteliales. La expresion y la secrecion de la defensina podnan ser sumamente importantes para crear productos terapeuticos para heridas. La accion antimicrobiana mediante defensinas se considera parte de una inmunidad innata y no es espedfica y de amplio espectro. Por consiguiente la resistencia bacteriana adquirida, segun se observa con el uso excesivo de antibioticos, no es una solucion.

Los datos presentados en la presente memoria tambien demuestran que se requiere Akt1 tanto in vitro como in vivo para la expresion de defensina. El tratamiento con sNAG disminuye la infeccion por Staphilococcus aureus de las heridas cutaneas en animales de referencia naturales, pero no en animales geneticamente modificados con Akt1 tratados de manera similar. Tambien es importante tener en cuenta que la estimulacion por sNAG de las heridas cutaneas naturales da como resultado un aumento de la cinetica del cierre de la herida. El bloqueo por anticuerpos de p-defensina produce una reduccion en la actividad antibacteriana de sNAG. En conjunto, estos resultados sugieren un papel central para Akt1 en la regulacion de la expresion de defensina que es responsable de la eliminacion de la infeccion bacteriana y que el tratamiento con sNAG activa estas vfas en animales naturales.

Los datos que sugieren que el tratamiento con sNAG de las heridas infectadas podna disminuir drasticamente la carga bacteriana en los pacientes, al menos en parte, por la induccion de la expresion de defensina. Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra con frecuencia colonizando la piel y en la nariz. Todavfa es una causa frecuente de infecciones hospitalarias, que a menudo causan infecciones posoperatorias en las heridas. Las infecciones por S. aureus en hospitales han plagado a los trabajadores sanitarios durante anos y el uso generalizado de antibioticos para el tratamiento ha dado lugar a cepas resistentes a los antibioticos. Los datos presentados en la presente memoria demuestran que el tratamiento de las heridas infectadas por estafilococos con sNAG disminuyo drasticamente la carga bacteriana. Por ejemplo, la falta de tincion gram purpura intenso en ratones WT tratados en las figuras 11A y 11B indica que la infeccion por S. aureus se ha eliminado de estas heridas. Los datos tanto in vitro como in vivo proporcionan pruebas firmes para el empleo de sNAG (en esoecial, Taliderm) en el tratamiento de heridas para disminuir la infeccion bacteriana y por lo tanto aumentar la cicatrizacion de la herida.

Los experimentos de control indican que el efecto antibacteriano de sNAG no se debe a una interaccion directa del material con la bacteria, sino a efectos posteriores como la regulacion de las defensinas por la activacion de Akt1. Es ampliamente aceptado que las defensinas son actores importantes en la inmunidad innata y funcionan en actividades antimicrobianas. La mayona de las pruebas para su funcion es la destruccion directa de bacterias mediante experimentos de mezcla in vitro con peptidos de defensina purificados (Selsted, M. E. y A. J. Ouellette, 2005, Nat. Immunol. 6(6):551-7) o en experimentos similares como se muestra en la figura 11 con aplicacion directa del peptido activo purificado. Los datos en la presente memoria demuestran que una induccion de la expresion de defensina en animales naturales utilizando una aplicacion topica de sNAG da como resultado una respuesta antibacteriana. Recientemente se ha demostrado que los modelos de ratones transgenicos que expresan el gen de la defensina 5 humana son resistentes a S. typhimurium, una infeccion que causa la muerte de animales salvajes (Salzman, N. H., et al., 2003, Nature 422(6931):522-6) sugiriendo nuevamente la importancia de las defensinas en la regulacion de la respuesta antimicrobiana.

Se ha aceptado que el subtipo a de defensinas se expresa espedficamente en neutrofilos, mientras que las defensinas de tipo p son de origen epitelial. Se detecto la expresion de defensina de tipo p inducida en respuesta a sNAG en queratinocitos humanos tanto en cultivo como en el modelo de cicatrizacion de herida cutanea. Los datos in vivo ilustran que la p-defensina 3 se expresa principalmente en las capas suprabasales despues del tratamiento con sNAG. Esto es coherente con los datos anteriores que localizaron la p-defensina 2 humana en las capas espinosas y granulares de la piel. (Oren, A., et al., 2003, Exp. Mol. Pathol. 74(2):180-2). La piel esta en contacto constante con lesiones e infecciones y funciona no solo como una barrera mecanica sino que tambien mantiene la capacidad de montar una defensa activa contra la infeccion. La expresion de p-defensina en las capas externas de la piel apoya su papel en la inmunidad innata cutanea. Sin embargo, los datos demuestran que sNAG estimula espedficamente la expresion de tres a-defensinas diferentes (1, 4 y 5) en celulas endoteliales. Esto se muestra por RT-PCR, analisis de matrices genicas, inmunofluorescencia y ELISA (datos no mostrados). La interaccion entre las celulas endoteliales y los leucocitos en la reparacion de tejidos es uno de los pasos iniciales y mas importantes en la cicatrizacion de heridas. El proceso de extravasado de leucocitos de los vasos sangumeos es iniciado por factores quimiotacticos, por lo tanto; es interesante que las a-defensinas sean inducidas por sNAG y puedan contribuir a las necesarias interacciones entre los neutrofilos y las celulas endoteliales. Mas recientemente, ha salido a la luz que las defensinas presentan actividades biologicas mas alla de la inhibicion de las celulas microbianas, incluida su contribucion a la respuesta inmunitaria adaptativa al presentar actividad quimiotactica en celulas dendnticas (Hubert, P., et al., 2007, FASEB J. 21(11): 2765-75) y linfocitos T, monocitos y macrofagos (Garda, J. R., et al., 2001, Cell Tissue Res. 306 (2): 257-64) y queratinocitos (Niyonsaba, F., et al., 2007, J. Invest. Dermatol. 127(3):594-604). Trabajos previos demuestran que las p-defensinas 1 y 2 humanas tienen capacidad de factor quimiotactico de celulas dendnticas inmaduras y linfocitos T mediante el receptor 6 de CC-quimiocinas (CCR6) (Yang, D., et al., 1999, Science 286(5439): 525-8), y que la p-defensina humana 2 puede ser factor quimiotactico para neutrofilos tratados con TNFa a traves del receptor CCR6 (Niyonsaba, F., H. Ogawa e I. Nagaoka, 2004, Immunology 111(3):273-81). Tambien ha demostrado que las p-defensinas humanas 2 y 3 inducen la quimiotaxia al interactuar con CCR2, un receptor expresado en macrofagos, monocitos y neutrofilos. (Rohrl, J., et al., 2010, J. Immunol., 2010). Curiosamente, los datos demuestran que el tratamiento con sNAG induce la expresion tanto de a- como pdefensina en las celulas endoteliales. En conjunto, los datos recientes sugieren que las defensinas pueden mediar la cicatrizacion de las heridas no solo por sus propiedades antimicrobianas, sino tambien por ser factores quimiotacticos para otros tipos de celulas necesarios para una cicatrizacion adecuada. Sin embargo, la aplicacion de p-defensina 3 sola no produjo un aumento en el cierre de la herida (datos no mostrados), lo que implica que la aplicacion topica de una sola defensina no mantiene las interacciones celulares requeridas para aumentar la quimiotaxia, la seleccion celular y el cierre de la herida.

Los datos in vivo que utilizan animales naturales y geneticamente modificados con Akt1 confirman el requisito de Akt1 en la expresion de p-defensina 3 inducida por sNAG. Dado que los leucocitos de raton no expresan adefensinas como la mayona de los otros leucocitos de mairnferos (Ganz, T., 2004, CR Biol. 327(6):539-49) no fue posible la tincion in vivo de a-defensina de inmunocitos infiltrantes. El tratamiento de las celulas epiteliales de las vfas respiratorias in vitro con defensinas alfa 1-3 provoca un aumento de migracion celular dependiente de la dosis y el tiempo que requiere la activacion de las vfas PI3K y MAPK (Aarbiou, J., et al., 2004, Am J. Respir. Cell Mol. Biol.

30(2):193-201). Se ha demostrado que la estimulacion con sNAG de celulas endoteliales da como resultado la activacion de MAPK (Vournakis, J. N., et al. 2008, J. Vasc. Res. 45(3): 222-32) y en los datos presentados en la presente memoria, la inhibicion farmacologica de MEK tambien inhibe la expresion de las defensinas in vitro. Estos resultados sugieren que ambas vfas afectan la regulacion de la expresion de defensina por parte de sNAG, sin embargo, la ablacion de Akt1 produce una notable reduccion de su expresion tanto in vitro como in vivo. En las celulas mieloides, la expresion de p-defensina 1 se controla al nivel de la transcripcion, en parte, por el miembro PU.1. de la familia Ets (Yaneva, M., et al., 2006, J. Immunol. 176(11): 6906-17; y Ma, Y., Q. Su y P. Tempst, 1998, 273 (15) 8727-40). PU.1 es un objetivo aguas abajo de de Akt1 en el linaje de los linfocitos B. (Rieske, P. y J. M. Pongubala, 2001, J. Biol. Chem. 276(11):8460-8). En las celulas endoteliales primarias, se ha demostrado que Akt1 esta aguas arriba de Ets1 tanto in vitro como in vivo durante el desarrollo traqueal de Drosophila. (Lavenburg, K. R., et al., 2003, FASEB J. 17(15):2278-80). La estimulacion por sNAG de celulas endoteliales da como resultado un aumento de la expresion de Ets1 (probablemente a traves de Akt1) que se requiere para la migracion de celulas endoteliales. (Voumakis, J. N., et al., 2008, J. Vasc. Res. 45(3): 222-32).

Hasta ahora, el tratamiento con sNAG ha dado como resultado una serie de actividades aguas abajo; hemostasia, migracion celular, proliferacion celular, aumento del cierre de la herida y, como se describe en la presente memoria, estimulacion de la respuesta inmunitaria innata que da como resultado funciones antibacterianas.

Dado el drastico aumento de pacientes diabeticos en la poblacion que presentan heridas cronicas y complicaciones debido a la infeccion de la herida, los nuevos tratamientos clmicos tienen una gran demanda. En la presente memoria, se describen nanofibras pGlcNAc de origen marino que no solo aumentan la cinetica de la cicatrizacion de las heridas, sino que actuan para estimular la inmunidad innata, lo que proporciona una actividad antibacteriana. La importancia obvia de estas observaciones es la aplicacion a las infecciones hospitalarias. De las infecciones hospitalarias predominan las infecciones por herida quirurgica; con estadfsticas que muestran hasta el 8% de todos los pacientes quirurgicos. El costo directo de este tipo de infecciones es de aproximadamente 4500 millones de dolares al ano. Dado que las defensinas forman parte del sistema inmunitario innato, la activacion de estas vfas impedira la generacion de organismos resistentes y permitira la eliminacion de la infeccion bacteriana independiente de antibioticos. El uso de sNAG en las instalaciones hospitalarias sufragana gran parte del costo y reducina notablemente la produccion de especies resistentes a los antibioticos. En conjunto, estos resultados sugieren que estas nanofibras pGlcNAc de origen marino seran muybeneficiosas en el ambito clmico.

6.3 Ejemplo 3 de referencia: Las nanofibras de sNAG aumentan la expresion de un numero de defensinas y genes receptores Toll.

Este ejemplo demuestra que varias defensinas y receptores tipo Toll estan regulados aumentan mediante el tratamiento con sNAG de celulas endoteliales humanas.

Materiales y metodos: Se imprimieron sondas de chip humano en extensiones epoxfdicas. Se cultivaron celulas HUVEC como se describe en en el apartado 6.2 y se trataron con nanofibras sNAG ("sNAG") durante 5 horas. El ARN se extrajo con RNAsol (Teltest, Inc.) siguiendo las instrucciones del fabricante, se amplifico utilizando el equipo de amplificacion de ARNa Amino Allyl MessageAMP™ II (Applied Biosystems) y se marco. Las extensiones se prepararon para hibridacion con ARNa remojando en solucion de bloqueo (solucion salina amortiguada de Sigma con Tris pH 8.0, en 1000 ml de dH2O, BSA al 1% p/v, NaN3al 0.05%) a temperatura ambiente O/N, luego se enjuaga y se seca. Las muestras que conteman ARNa diana marcado de celulas tratadas con sNAG se hibridaron con las extensiones (65 pl/extension; se desnaturalizaron a 95°C durante 5 min; se hibridaron durante 48 horas a 37°C en SDS al 0.1% y 5 X SSC y BSA al 1%) se enjuagaron y secaron. Las extensiones se escanearon y la hibridacion se detecto utilizando el equipo Scan Array de Perkin-Elmer y el programa informatico ScanArray Express V3.0, actualizado. Para identificar los genes incrementados, los datos de chips se analizaron utilizando Agilent GeneSpring GX v.11 Bioinformation Data Analisis.

Genes de interes analizados: IL-1, CEACAM3, SPAG11, defensinas ("DEFA" = a-defensina y "DEFB" = pdefensina); Receptores de tipo Toll ("TLR"), SIGIRR (receptor relacionado con IG IL-1 individual) y TRAF6 (factor 6 relacionado con el receptor de TNF). Controles positivos: 1433Z (protema de adicion tirosina-3-monohidrogenasa/ triptofano 5 monohidrogenasa); GAPD (gliceraldetndo-3-fosfato deshidrogenasa); RPL13A (protema ribosomica LI3a); UBC (Ubiquitina C); ACTB (Actina B).

Resultados: Los resultados de los analisis de chips de genes y la validacion Q-PCR de los resultados de los chips se presentan en las Tablas II-VI a continuacion. Usando un chip genetico personalizado, se determino que varias defensinas y receptores tipo Toll se incrementan por el tratamiento con sNAG de celulas endoteliales humanas. Los receptores tipo Toll (TLR) son receptores muy conservados que reconocen patrones moleculares espedficos de componentes bacterianos que conducen a la activacion de la inmunidad innata. Curiosamente, Drosophila carece de un sistema inmunitario adaptativo, pero aun son resistentes a las infecciones microbianas. (Imler, J. L. y J. A. Hoffmann, 2000, Curr. Opin. Microbiol., 3(1):16-22). Esta defensa del anfitrion es el resultado de un sistema inmunitario innato que proporciona proteccion al sintetizar los peptidos antimicrobianos dToll y 18 ruedas que son inducidas por TLRs. (Lemaitre, B., et al., 1996, Cell 86(6):973-83; y Williams, M. J., et al., 1997, EMBO J. 16 (20): 6120-30. Un trabajo reciente tambien ha vinculado la expresion de la defensina humana a la activacion de TLR. Se demostro que la p-defensina 2 humana se induda en celulas epiteliales de las vfas respiratorias en funcion de TLR-2. (Hertz, C. J., et al., 2003, J. Immunol. 171(12): pags. 6820-6). Se ha demostrado que el receptor 4 tipo Toll media las inducciones de la p-defensina 2 humana en respuesta a la neumoma por Chlamydia en monocitos. (Romano Carratelli, C., et al., 2009, FEMS Immunol. Med. Microbiol. 57(2):116-24). Curiosamente, la ruta PI3K/Akt es un componente clave en la transduccion de senales TLR, que controla las respuestas celulares a los patogenos. (Weichhart, T. y M. D. Saemann, 2008, Ann. Rheum. Dis. 67 Supl. 3:iii70-4). Dado que se sabe que la estimulacion de los TLR puede conducir a un aumento de la smtesis de defensina, este trabajo sugiere el potencial de sNAG como estimulador de inmunidad innata y eliminacion bacteriana mediante la activacion de Akt1.

Tabla II: Lista de algunos genes incrementados en respuesta a la estimulacion de sNAG

Tabla III: Expresion genica del chip de Defensina (respuesta de HUVEC a sNAG 10|jg/ml 5 horas)

Tabla IV: Validacion del gen de chips DEFCB3

(AB Prism 7000; sNAG (10pg/ml), HUVEC durante 5 h)

Tabla V: Expresion genica de chips de receptores tipo Toll

_________________ _______________ __________ 6.4 Ejemplo 4 de referencia: sNAG y fibras largas NAG difieren en sus perfiles de expresion genica.

Este ejemplo demuestra que las nanofibras de sNAG difieren de las fibras p-GlcNAc largas en su efecto sobre la expresion genica, y espedficamente en su efecto sobre la expresion de algunas de las defensinas y receptores tipo Toll.

Materiales y metodos: Se imprimieron sondas de chip de Defensina humana (concentracion: 20 |^jM, cantidad 18-20, disolvente: amortiguador de localizacion a base de SSC) en portaobjetos epoxfdicos usando tecnicas normalizadas. Las celulas HUVEC y HaCat se cultivaron como se describe en en el apartado 6.2 y se trataron con fibras largas ("LNAG") o con nanofibras de sNAG ("sNAG"), durante 2 horas o 20 horas. El ARN se extrajo con RNAsol (Teltest, Inc.) siguiendo las instrucciones del fabricante y se amplifico utilizando el equipo de amplificacion de ARNa Amino Allyl MessageAMP™ II (Applied Biosystems). Durante la amplificacion del A^rN, el aARN de las celulas tratadas con LNAG y el aARN de las celulas tratadas con sNAG se marcaron de formas diferentes con colorantes fluorescentes Cy3 o Cy5. Las extensiones se prepararon para la hibridacion con aARN empapandolas en solucion de bloqueo (solucion salina amortiguada con Tris de Sigma pH 8.0) en 1000 ml de dH2O, BSA al 1% p/v, NaN3 al 0.05%) a temperatura ambiente O/N, a continuacion se enjuagaron y se secaron. Se mezclaron muestras que conteman cantidades iguales de aARN diana marcado diferencialmente de LNAG y celulas tratadas con sNAG, se hibridaron con las extensiones (65 jl/extension; se desnaturalizaron a 95°C durante 5 min; se hibridaron durante 48 horas a 37°C en SDS al 0.1% y 5 X SSC y 1% BSA), se enjuagaron y se secaron. Los siguientes ejemplos de graficos en la tabla VII ilustran la configuracion experimental:

Las extensiones se escanearon y se detecto la hibridacion utilizando el equipo de Scan Array de Perkin-Elmer y el programa informatico ScanArray Express V3.0, actualizado. Para cada portaobjetos, se visualizaron Cy5, Cy3 y fluorescencia compuesta. Para identificar el aumento y la disminucion de genes se analizaron los datos de chips usando Agilent GeneSpring GX v.11 Bioinformation Data Analisis. Genes de interes analizados: DEFA1, DEFA3, DEFA4, DEFA5, DEFA6, DEFB1, DEFB013A, DEFB104A, DEFB105B, DEFB108B, DEFB112, DEFB114, DEFB118, DEFB119, DEFB123, DEFB124, DEFB125, DEFB126, DEFB127, DEFB128, DEFB129, DEFB131 y DEFB4 ("DEFA" = a-defensina, y "DEFB" = p-defensin); TLR1, TLR10, TL2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 y TLR8 ("TLR" = receptor Toll); SIGIRR (receptor relacionado con IG IL-1 individual); IRAK2 (cinasa 1 relacionada con el receptor de IL-1);TRAF6 (factor 6 relacionado con el receptor de TNF); D106A (p-defensina 106), D107A (p-defensina 107). Controles negativos: tres secuencias aleatorias (1, 2, 3). Controles positivos: 1433Z (protema de adicion tirosina-3-monohidrogenasa/triptofano 5 monohidrogenasa); GAPD (gliceraldehndo-3-fosfato deshidrogenasa); RPL13A (protema ribosomica L13a); UBC (Ubiquitina C); ACTB (Actina B).

Resultados: Los resultados de los analisis de chip de genes se presentan en las Tablas VIII y IX a continuacion. La Tabla VIII muestra la expresion genica en celulas endoteliales de la vena umbilical humana ("HUVEC") despues de 2 h o 24 h de exposicion a fibras de LNAG o nanofibras de sNAG. La Tabla IX muestra la expresion genica en la estirpe celular de queratinocitos humanos (HaCat) despues de 2 h o 24 h de exposicion a fibras de LNAG o nanofibras de sNAG. Los resultados demuestran que el perfil de expresion genica inducido por fibras largas de poli-N-acetilglucosamina ("LNAG") difiere del perfil de expresion genica inducido por las nanofibras de sNAG ("sNAG"). Espedficamente, LNAG y sNAG difieren en su efecto sobre la expresion de los genes de defensina y los genes del receptor Toll.

Tabla VIII: Expresion del gen de defensina en chip en celulas endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC), cambio doble

Tabla IX: Expresion genica de defensina en chip en la estirpe celular de queratinocitos humanos (HaCat), cambio doble

6.5 Ejemplo 5 de referencia: Efecto de la irradiacion en las membranas de sNAG

Metodo de preparacion de la membrana de sNAG. La membrana sNAG procede de las fibras pGlcNAc de microalgas producidas como se describio anteriormente (vease Vournakis et al. Patentes de EE. UU. n° 5623064 y 5 624 679. En resumen, se cultivaron microalgas en condiciones unicas de biorreactores utilizando un medio de crecimiento definido. Tras la recoleccion de microalgas de cultivos de alta densidad, se aislaron las fibras por un proceso de separacion y purificacion por etapas, dando como resultado lotes de fibras puras en suspension en agua para inyectablees (wfi). Las fibras se formularon en parches por concentracion y secado en estufa, y se envasaron y esterilizaron por irradiacion gamma. Las dimensiones medias de la fibra sonn 20-50 nm x 1-2 nm x ~ 100 pm. Cada uno de los lotes de fibras se controlaron mediante controles de calidad usando parametros analfticos qmmicos y ffsicos, y cada lote cumplio con estrictos criterios de pureza antes de la entrega. Se exigfa que los lotes finales estuvieran sustancialmente exentoss de protemas, iones metalicos y otros componentes. Las fibras se acortaron luego por irradiacion para producir membranas de sNAG. En resumen, el material de partida contema 60 g de suspension de pGlcNAc a una concentracion de 1 mg/ml. La concentracion de la suspension de pGlcNAc se confirmo filtrando 5 ml en un filtro de 0.2 pm. Se filtraron 15 l de suspension de pGlcNAc que contema 15 g de pGlcNAc hasta la formacion de una torta humeda. La torta humeda se transfirio luego a una bolsa de aluminio, que es un recipiente compatible con radiacion gamma, y se sometio a una radiacion gamma de 200 kGy. Se probaron otras condiciones de irradiacion para determinar sus efectos en las composiciones de pGlcNAc, como se refleja en la figura 14A.

Efecto de la irradiacion sobre las membranas pGIcNAc. Mientras la irradiacion reduce el peso molecular de pGIcNAc, la irradiacion no altero la microestructura de las fibras. Se irradio pGlcNAc bajo diferentes condiciones: como material seco y liofilizado; como una membrana seca; como una suspension concentrada (30:70 peso por volumen); y como una suspension diluida (5 mg/ml). Se logro una reduccion de peso molecular adecuada (hasta un peso molecular de 500000-1000000 daltons) a una dosis de irradiacion de 1000 kgy para el polfmero seco y 200 kgy para el polfmero humedo (figura 14A).

La estructura qmmica y ffsica de las fibras se mantuvo a lo largo de la irradiacion segun se verifico por el espectro infrarrojo (IR) (figura 14B), analisis elemental y analisis en microscopios electronicos de barrido (SEM). La observacion microscopica de las fibras irradiadas mostro una disminucion en la longitud de las partmulas (figuras 14C y 14D). La mayona de las fibras tienen una longitud inferior a aproximadamente 15 pm, con una longitud promedio de aproximadamente 4 pm.

6.6 Ejemplo 6 de referencia: Nanofibras de sNAG y fibras p-GlcNAc de forma larga difieren en sus efectos sobre el mdice metabolico y la privacion de suero de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical

Materiales y metodos. Celulas endoteliales (CE) agrupadas de la vena del cordon umbilical humano, de multiples donantes (Cambrex) se mantuvieron a 37°C con 5% de CO2en medio basal endotelial 2 (Cambrex) enriquecido con medio de crecimiento 2 SingleQuots para CE como se describe en los procedimientos de Cambrex. La privacion de suero se realizo a 80-90% de confluencia en RPMI-1640 enriquecido con 0.1% de suero de ternera fetal (Gibco BRL) durante 24 h, seguido de estimulacion con VEGF 165 (20 ng/ml, R&D Systems) o con nanofibras pGlcNAc muy purificadas o nanofibras de sNAG en agua esteril (proporcionadas por Marine Polymer Technologies, Inc., Danvers, Mass., EE. UU.) con las cantidades indicadas en las descripciones de las figuras. Para la evaluacion de la proliferacion/viabilidad celular, se utilizaron 2 ensayos diferentes: exclusion en azul de tripano mediante recuentos directos de celulas usando un hemacitometro y un ensayo del MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2il) -2,5-difeniltetrazolio] en los procedimientos descritos por el fabricante (Promega).

Resultados- pGlcNAc:

pGlcNAc no afecto el mdice metabolico. Como se muestra en la figura 15, pGlcNAc no produjo un mdice metabolico mas alto segun lo medido por los ensayos del MTT, lo que indica que este material polimerico no estaba causando aumentos marcados en la proliferacion celular.

CE protegidas por pGlcNAc de la muerte celular inducida por privacion serica. Para probar si las fibras de pGlcNAc teman un efecto directo sobre las CE, las celulas CE privadas de suero se trataron con VEGF o con diferentes concentraciones de fibras de pGlcNAc. Como se muestra en la figura 16 a las 48 h y 72 h despues de la privacion del suero, en comparacion con el numero total de celulas en placa (referencia), hubo una reduccion de aproximadamente 2 veces en el numero de celulas despues de 48 h o 72 h. A las 48 h, esta disminucion en el numero de celulas se rescato mediante la adicion de VEGF o mediante la adicion de fibras de pGlcNAc a 50 o 100 pg/ml. A las 72 h, la disminucion en el numero de celulas se rescato mediante la adicion de VEGF o se rescato en gran medida mediante la adicion de fibras de pGlcNAc a 100 pg/ml. Estos resultados indicaron que al igual que VEGF, el tratamiento con fibra pGlcNAc previno la muerte celular inducida por la privacion de suero.

Resultados- sNAG:

sNAG indujo notable aumento en el mdice metabolico. Segun lo medido por los ensayos del MTT, sNAG a 50, 100 o 200 pg/ml dio lugar a un mayor mdice metabolico de CE que VEGF (figura 17).

sNAG no protegio las CE de la muerte celular inducida por la privacion de suero. Para probar si las fibras de sNAG teman un efecto directo sobre las CE, las celulas CE privadas de suero se trataron con VEGF o con diferentes concentraciones de fibras de sNAG. Como se muestra en la figura 18, 48 h despues de la privacion del suero, en comparacion con el numero total de celulas en placa (referencia), hubo una reduccion de aproximadamente 2 veces en el numero de celulas. Esta disminucion en el numero de celulas se rescato mediante la adicion de VEGF, pero no mediante la adicion de fibras sNAG a 50, 100 o 200 pg/ml. Estos resultados indicaron que a diferencia de VEGF, el tratamiento con fibras sNAG no impidio la muerte celular inducida por privacion de suero.

Conclusion: Los resultados anteriores demuestran que sNAG, a diferencia de la forma larga pGlcNAc, aumenta el mdice metabolico de las CE carentes de suero en un ensayo del MTT y no rescata la apoptosis de las CE carentes de suero en una prueba de exclusion en azul de tripano.

6.7 Ejemplo 7 de referencia. Pruebas preclmicas de sNAG

6.7.1 Artmulo de prueba

Se utilizo un artmulo de prueba que comprende sNAG producido como se describe anteriormente en el apartado 6.2.1. El artmulo de prueba fue suministrado esteril por Marine Polymer Technologies, Inc.

6.7.2 Prueba de biocompatibilidad - Prueba de elusion del MEM L929-ISO 10993-5

La biocompatibilidad del artfculo de prueba se probo en celulas L929 de mairnfero de fibroblastos de raton. No se observo reactividad biologica (Grado 0) en las celulas L929 a las 48 horas, despues de la exposicion al arhculo de prueba. La respuesta celular observada obtenida del artfculo de referencia positiva (Grado 4) y del artfculo de referencia negativa (Grado 0) confirmo la idoneidad del sistema de prueba. En base a los criterios del protocolo, el arhculo de prueba se considera atoxico y cumple con los requisitos de la Prueba de Elucion, Organizacion Internacional para la Normalizacion norma (ISO) 10993-5. Vea la Tabla X a continuacion.

Tabla X:

RAD DE REA TI IDAD

6.7.3 Prueba de implantacion intramuscular - ISO - Implantacion de 4 semanas

6.7.3.I. Materiales y metodos

Para evaluar el potencial del arhculo de prueba para inducir efectos toxicos locales, se uso la Prueba de Implantacion Intramuscular - ISO - implantacion de 4 semanas ("Prueba de Implantacion Intramuscular"). En resumen, el artfculo de prueba se implanto en el tejido muscular paravertebral de conejos blancos de Nueva Zelanda durante un penodo de 4 semanas. El arhculo de prueba se evaluo por separado utilizando dos arhculos de referencia: referencia positiva Surgicel (Johnson and Johnson, NJ) y referencia negativa Polietileno de alta densidad (plastico de referencia negativa).

Preparacion de artculos de ensayo y de referenda. El artfculo de prueba media aproximadamente 1 mm de ancho y 10 mm de longitud. Se prepararon los dos artfculos de referencia. La referencia positiva, Surgicel (CI), midio aproximadamente 1 mm de ancho por 10 mm de longitud y se recibio esteril. El plastico de referencia negativa (C2), midio aproximadamente 1 mm de ancho por 10 mm de longitud y se esterilizo sumergiendolo en etanol al 70%. Procedimiento de dosis previa. Cada animal se peso antes de la implantacion. El dfa de la prueba, los lados dorsales de los animales se esquilaron y se elimino el pelo suelto al vacfo. Se anestesio adecuadamente cada animal. Antes de la implantacion, el area se frego con una solucion de preparacion quirurgica.

Administracion de la dosis. Se implantaron quirurgicamente cuatro tiras de artfculos de prueba en cada uno de los musculos paravertebrales de cada conejo, aproximadamente a 2.5 cm de la lmea media y paralela a la columna vertebral y aproximadamente a 2.5 cm entre sf. Las tiras del artfculo de prueba se implantaron en un lado de la columna vertebral. De modo similar, se implantaron tiras de artfculos de referencia positiva (Surgicel) en el musculo contralateral de cada animal. Se implantaron dos tiras de referencia negativa (plastico de referencia negativa) caudal (hacia la cola) en el artfculo de prueba y en las zonas de implante de control C1 a cada lado de la columna vertebral (total de cuatro tiras). Se requiere un total de al menos ocho tiras de artfculos de prueba y ocho de cada una de las tiras de artfculos de control para la evaluacion.

Procedimientos tras la dosis. Los animales se mantuvieron durante un penodo de 4 semanas. Los animales se observaron diariamente durante este penodo para garantizar una cicatrizacion adecuada de las zonas de implante y para detectar signos clmicos de toxicidad. Las observaciones incluyeron todas las manifestaciones clmicas. Al final del penodo de observacion, se pesaron los animales. Cada animal fue sacrificado mediante un barbiturico inyectable. Se dejo transcurrir tiempo suficiente para que el tejido se cortara sin hemorragia.

Observaciones macroscopicas. Los musculos paravertebrales en los que se implantaron los artfculos de prueba o de control se cortaron en su totalidad de cada animal. El tejido muscular se elimino cortando cuidadosamente alrededor de las zonas del implante con un bistun y extrayendo el tejido. Los tejidos del implante extirpado se examinaron de forma generalizada, pero sin utilizar procedimientos invasivos excesivos que podnan haber alterado la integridad de este tejido para la evaluacion histopatologica. Los tejidos se colocaron en recipientes debidamente etiquetados que conteman formalina amortiguada neutra al 10%.

Histopatolog^a. Despues de la fijacion en formalina, cada una de las zonas de implante se extirpo de la masa mas grande de tejido. La zona del implante, que contema el material implantado, se examino macroscopicamente. Se examino en cada zona los signos de inflamacion, encapsulacion, hemorragia, necrosis y decoloracion utilizando la siguiente escala:

0 = Normal

1 = Leve

2 = Moderado

3 = Notable

Despues de la observacion macroscopica, el material del implante se dejo in situ y se proceso una porcion de tejido que contema la zona del implante. Extensiones histologicas de los cortes tenidas con hematoxilina y eosina fueron preparadas por Toxikon. Las extensioness fueron evaluadas y clasificadas por examen microscopico optico.

Evaluacion patologica de los efectos del implante. Las siguientes categonas de reaccion biologica se evaluaron mediante observacion microscopica para cada zona de implante:

1. Respuestas inflamatorias:

a. Leucocitos polimorfonucleares

b. Linfocitos

c. Eosinofilos

d. Celulas de plasma

e. Macrofagos

f. Celulas gigantes

g. Necrosis

h. Degeneracion

2. Respuestas curativas:

a. Fibrosis

b. Infiltrado graso

Cada categona de respuesta se puntuo usando la siguiente escala:

0 = Normal

0.5 = Muy leve

1 = Leve

2 = Moderado

3 = Notable

El tamano relativo del area afectada se puntuo evaluando el ancho del area desde la interfase implante/tejido a las areas no afectadas que tienen las caractensticas de tejido normal y vascularidad normal. El tamano relativo del area involucrada se puntuo usando la siguiente escala:

0 = 0 mm, sin area

0.5 = hasta 0.5 mm, muy pequeno

1 = 0.6-1.0 mm, ligero

2 = 1.1 -2.0 mm, moderado

3 > 2.0 mm, notable

La prueba de implantacion intramuscular se realizo en base a las siguientes referencias:

1. ISO 10993-6, 1994, Evaluacion biologica de dispositivos medicos - Parte 6: Pruebas para efectos locales despues de la implantacion.

2. ISO 10993-12, 2002, Evaluacion biologica de dispositivos medicos - Parte 12: Preparacion de muestras y materiales de referencia.

3. ASTM F981-04, 2004, Practica habitual para la evaluacion de la compatibilidad de biomateriales para implantes quirurgicos con respecto al efecto de los materiales sobre musculos y huesos.

4. ASTM F763-04, 2004, Practica habitual para la seleccion a corto plazo de materiales de implantes.

5. ISO/ICE 17025, 2005, Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de prueba y calibracion. Los resultados de la prueba de implantacion intramuscular se evaluaron en funcion de los siguientes criterios:

1. Puntuacion calculada: Para cada zona implantada, se determina una puntuacion total. La puntuacion media de las zonas de prueba para cada animal se compara con la puntuacion media de las zonas de referencia para ese animal. Se calcula la diferencia media entre las zonas de prueba y de referencia para todos los animales y la puntuacion de biorreactividad inicial se asigna de la siguiente manera:

0-1.5 Sin reaccion *

> 1.5-3.5 Reaccion ligera

> 3.5-6.0 Reaccion moderada

> 6.0 Reaccion notable

* Un calculo negativo se le asigna cero (0).

2. Modificacion de la puntuacion: El observador de patologfa revisa el nivel calculado de biorreactividad. Sobre la base de la observacion de todos los factores (p. ej., tamano relativo, tipo de respuesta, inflamacion frente a resolucion), el observador de patologfa puede revisar la punuacion de biorreactividad. La justificacion de la modificacion de la puntuacion se presenta en el informe descriptivo (el observador de la patologfa proporciona un informe descriptivo sobre la biocompatibilidad del material de prueba).

6.7.3.2. Resultados

Los resultados indicaron que el artfculo de prueba no era reactivo cuando se implanto durante 4 semanas (puntuacion de biorreactividad de 0.2) en comparacion con lareferencia positiva Surgicel; y no reactivo (puntuacion de biorreactividad de 0.0) en comparacion con la referencia negativa de polietileno de alta densidad (plastico de referencia negativa).

Observacion clinica. La tabla XI a continuacion muestra los resultados de la evaluacion macroscopica del artfculo de prueba y las zonas de implante de referencia indicaron que no hay signos significativos de inflamacion, encapsulacion, hemorragia, necrosis o decoloracion en el penodo de 4 semanas. Algunas zonas de prueba y la mayona de la referencia positiva, Surgicel, no se observaron macroscopicamente y se enviaron cortes seriados para su evaluacion microscopica.

Tabla XI:

Observaciones de la zona de implantacion (microscopicas). La tabla XII a continuacion muestra los resultados de la evaluacion microscopica de las zonas de implante del artfculo de prueba que indicaron que no hay signos significativos de inflamacion, fibrosis, hemorragia, necrosis o degeneracion en comparacion con cada una de las zonas del artfculo de referencia. La puntuacion de biorreactividad durante el penodo de 4 semanas (promedio de tres animales) fue de 0.2, (C1 - Surgicel) y 0.0 (C2 - Plastico de referencia negativa), lo que indica que no hay reaccion en comparacion con cualquiera de las zonas de implante de referencia. El patologo observo que habfa un infiltrado polimorfico e histiocitico moderado (macrofagos) alrededor del artfculo de prueba in situ que no era inesperado dada la naturaleza del material de prueba.

5

Tabla XII (Cont.)

6.7.4 Prueba de inyeccion intracutanea - ISO 10993-10

Se evaluo el potencial para producir irritacion despues de la inyeccion intracutanea en conejos blancos de Nueva Zelanda en extractos de cloruro de sodio al 0.9% (NaCl) de USP para inyectables y de aceite de semillas de algodon (CSO) del artfculo de prueba. Las zonas del artfculo de prueba no presentaron una reaccion biologica significativamente mayor que las zonas inyectados con el artfculo de referencia. En base a los criterios del protocolo, el artfculo de prueba se considera un irritante insignificante y cumple con los requisitos de las normas ISO 10993 10. Los resultados se muestran a continuacion en la tabla XIII.

Tabla XIII:

Puntuaciones de la reaccion cutanea en la prueba intracutanea

Extracto en NaCI

f = Inmediatamente despues de la inyeccion, no se utiliza para criterios de evaluacion.

Puntuacion media global* para el artfculo de prueba = 0.0

Puntuacion media global* para el artfculo de referencia = 0.0

Diferencia entre la puntuacion media global del artfculo de prueba y del artfculo de referencia = 0.0-0.0 = 0.0

Extracto en CSO

Puntuacion media global* para el artfculo de prueba = 0.0

Puntuacion media global* para el artfculo de referencia = 0.0

E = Eritema; ED = Edema; T = Zonas de prueba; C = Zonas de referencia

* Puntuacion media global = Puntuaciones de eritema total mas edema dividido por 12

(2 animales x 3 penodos de puntuacion x 2 categonas de puntuacion)

6.7.5 Prueba de maximizacion de Kligman - ISO 10993-10

Los extractos de cloruro de sodio para inyectables (NaCl) al 0.9% de UPS y de aceite de semilla de algodon (CSO) del artfculo de prueba no provocaron reaccion intradermica en cobayas Hartley en la prueba de provocacion (sensibilizacion del 0%), despues de una fase de induccion. Por lo tanto, como lo define el sistema de puntuacion de Kligman, esta es una reaccion de grado I y el artfculo de prueba se clasifica como con un potencial alergenico debil. Segun los criterios del protocolo, un mdice de sensibilizacion de grado I no se considera significativo y el artfculo de prueba cumple con los requisitos de las normas ISO 10993-10. Los resultados se muestran a continuacion en la tabla XIV.

Tabla XIV:

Datos del examen de la piel

6.8 Ejemplo 8: Las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar infecciones vhicas en pacientes humanos Este ejemplo demuestra que las nanofibras de sNAG tienen un potente efecto antivhico, en particular, contra el virus del herpes simple, in vivo. Espedficamente, este ejemplo demuestra que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar el herpes labial relacionado con la infeccion por VHS cuando se administran por via topica, en la zona de la infeccion por herpes, a pacientes humanos. En particular, este ejemplo demuestra que el tratamiento topico de pacientes humanos con composiciones que comprenden nanofibras de sNAG reduce el dolor y la duracion de los smtomas de herpes labial relacionados con la infeccion por VHS.

Infeccion por el virus del herpes simple

El herpes labial simple es una infeccion frecuente que se estima afecta al 20% al 40% de la poblacion (Spruance, 1992; Lowhagen, 2002). La mayona de estas infecciones se deben al herpes simple tipo I, atribuyendose un numero menor al herpes simple tipo II.

La mayona de los individuos sufren una infeccion primaria con herpes gingivostomatitis en una etapa temprana de la vida. Despues de la infeccion primaria, el propio virus se establece en los ganglios sensoriales del trigemino como una infeccion cronica latente. La reactivacion del virus es frecuente y generalmente se presenta como herpes labial a lo largo del borde bermellon del labio. La infeccion primaria con herpes simple esta marcada por un largo penodo de multiplicacion y propagacion vmcas (Harmenberg, 2010). Una vez terminada la replicacion vmca, las lesiones sanan rapidamente. El herpes labial recurrente generalmente se elimina mas rapidamente que la infeccion primaria debido a la respuesta inmunitaria adquirida. Desafortunadamente, la respuesta inmunitaria vigorosa produce una inflamacion significativa que conduce a smtomas clmicos incluidos dolor, enrojecimiento e hinchazon.

El herpes recurrente esta marcado por distintas fases (Harmenberg, 2010). Las fases tienen lugar en una secuencia predecible de la siguiente manera: prodromo, enrojecimiento, papula, vesmula, ulcera, costra dura, hinchazon residual con descamacion seca y piel normal curada. La enfermedad es mas grave durante las fases vesicular, de ulcera y de costra, que tambien se conocen como lesiones ulcerosas o clasicas.

Los tratamientos existentes actualmente para el herpes labial se han centrado principalmente en disminuir la replicacion vmca con medicamentos antivmcos bucales o topicos. Desafortunadamente, dado que la fase de replicacion vmca es bastante breve en infecciones recurrentes, estos medicamentos solo tienen un exito moderado, lo que reduce el tiempo de curacion de las lesiones herpeticas en aproximadamente un 10% (Harmenberg, 2010). Objetivos del estudio

Criterios principales de valoracion. El objetivo principal de este estudio fue explorar la eficacia de las nanofibras de sNAG en el tratamiento de las lesiones peribucales del herpes labial y explorar la duracion e intensidad del dolor de las lesiones peribucales del herpes labial en sujetos tratados con nanofibras de sNAG.

Criterios de inclusion

Los sujetos que cumplfan con todos los criterios de inclusion siguientes eran elegibles para su inscripcion en el estudio:

1. Ser un hombre o una mujer generalmente sano de 18 anos de edad o mas;

2. Tener herpes labial recurrente como se define por unos antecedentes de tres (3) o mas recafdas de herpes labial en los labios y/o la piel que rodea los labios en los 12 meses anteriores;

3. Durante > 50% de los episodios recurrentes, desarrollar una lesion herpetica clasica (es decir, vesmula, ulcera o costra dura);

4. Tener la mayona de sus recafdas de herpes labial seguidas por unos antecedentes bien definidaos de smtomas prodromicos que incluyen enrojecimiento, dolor, ardor, hormigueo, hinchazon o una sensacion de tirantez del labio en la zona del brote;

5. La recafda del herpes labial primario para el estudio debe situarse en o dentro de 1 cm del labio sin intervencion de la mucosa.

Materiales de estudio

Las nanofibras de sNAG se suministraron en cinco tubos de plastico blanco que conteman 200 microlitros cada uno (con una concentracion de sNAG de 50 mg/ml).

Administracion

10 sujetos (pacientes humanos) participaron en el estudio. Las nanofibras de sNAG (la mayona de las nanofibras de sNAG utilizadas teman una longitud de aproximadamente 1 a 15 micras) se aplicaron al herpes labial una vez por noche durante cinco (5) noches consecutivas, inmediatamente antes de acostarse.

Evaluaciones de estudio y diario

A los sujetos que participaron en el estudio un equipo del estudio les evaluo su ulcera herpetica basandose en una escala de puntuacion clmica del herpes labial como se muestra en la tabla XV.

Tabla XV: Puntuacion clm ica del herpes labial

A las personas se les proporcionaron instrucciones para registrar la fecha y la hora de la recafda del herpes labial y la hora de cada aplicacion de tratamiento y la gravedad del dolor. El dolor se evaluo utilizando una escala ordinal de 10 puntos (0 a 10) donde 0 = sin dolor y 10 = dolor intenso. La figura 19 muestra la Escala numerica de intensidad de dolor utilizada en el estudio. La tabla XVI muestra la Evaluacion global del tratamiento al final del estudio del investigador, incluida la pregunta planteada al investigador y la escala por la que se midio la eficacia del tratamiento. La tabla XVII muestra la Evaluacion global del tratamiento al final del estudio del sujeto, incluida la pregunta planteada al sujeto y la escala por la que se midio la eficacia del tratamiento. La tabla XVII tambien muestra que a los sujetos se les pregunto "^Esta recafda en el herpes labial se resolvio mas rapido que en ocasiones anteriores?" y los sujetos podnan responder "SP' o "No" a esta pregunta.

Tabla XVI: Evaluacion global del tratamiento al final del estudio del investigador

Tabla XVII: Evaluacion global del tra tam iento al fin del estudio del sujeto

Resultados y discusion

Se inscribieron diez pacientes y completaron el estudio descrito anteriormente. El equipo de investigacion confirmo que los herpes labiales en estos pacientes correspondieron a la puntuacion clinica y siguieron a los pacientes durante todo el tratamiento prescrito.

En la tabla XVIII se presenta la Evaluacion global del tratamiento al final del estudio de investigador de los 10 sujetos inscritos en este estudio. Al final del estudio, se le hizo la siguiente pregunta al Investigador: segun el curso clinico de esta recafda del herpes labial, ^cual es su evaluacion de la eficacia del tratamiento? Las respuestas del investigador se presentan en la tabla XVIII.

Tabla XVIII:

Por consiguiente, los investigadores encontraron que el tratamiento topico de los herpes labiales que se sabe que son producidos por un virus del Herpes Simple con nanofibras de sNAG fue una terapia muy eficaz.

La Tabla XIX presenta la evaluacion de la eficacia de la terapia por los 10 sujetos incluidos en este estudio. Los pacientes emprendieron la administracion topica de nanofibras de sNAG (como se describio anteriormente) y documentaron la aplicacion del tratamiento y la gravedad del dolor. Los pacientes respondieron las preguntas y comunicaron los resultados. A los sujetos se les hicieron las siguientes preguntas: ^En base a esta recafda del herpes labial, ^cual es su evaluacion de la eficacia del tratamiento? ^Esta recafda del herpes labial se resolvio mas rapidamente que en ocasiones anteriores? Las respuestas de los sujetos se presentan en la tabla XIX.

Los resultados del estudio demuestran que la aplicacion de nanofibras de sNAG redujo la duracion y el dolor relacionado con el herpes labial recurrente. Tanto los investigadores como los pacientes informaron que la terapia fue muy eficaz para tratar la afeccion.

Los resultados de este estudio se aplican no solo al herpes labial, sino que indican el potencial para tratar ulceraciones producidas por virus, incluidos, entre otros, el herpes genital y el herpes zoster.

A continuacion, la eficacia de la aplicacion topica de nanofibras de sNAG se evaluara en un estudio controlado con placebo, utilizando nanofibras de sNAG a una concentracion de 25 mg/ml.

Referencias

Spruance S. L. The natural history of recurrent oral-facial herpes simplex virus infection. Semin. Dermatol. 1992; 11: 200-206.

Lowhagen G. B., Bonde E., Eriksson B., Nordin P., Tunback P., Krantz I. Self-reported herpes labialis in a Swedish population. Scand. J. Infect. Dis. 2002; 34: 664-667.

Harmenberg J., Oberg B., Spruance S. Prevention of ulcerative lesions by episodic treatment of recurrent herpes labialis: Estudio bibliografico. Acta Derm. Venereol. Marzo 2010; 90(2):122-30.

Hull C., McKeough M., Sebastian K, Kriesel J., Spruance S. Valacyclovir and topical clobetasol gel for the episodic treatment of herpes labialis: a patient-initiated, double-blind, placebo-controlled pilot trial. J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. Marzo 2009; 23(3):263-7.

6.9 Ejemplo 9 de referencia: Las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar la enfermedad inflamatoria del intestino in vivo.

Este ejemplo demuestra que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar y/o prevenir el desarrollo de la enfermedad inflamatoria intestinal. En particular, este ejemplo muestra que la administracion rectal de nanofibras de sNAG es eficaz para tratar y/o prevenir la inflamacion relacionada con la enfermedad inflamatoria del intestino inducida qmmicamente en un modelo animal de la enfermedad.

Enfermedad inflamatoria intestinal

Una de las enfermedades inflamatorias cronicas frecuentes con impacto significativo en la morbilidad y la calidad de vida es la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), incluida la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa (CU). Hay dos cuestiones principales relacionadas con la fisiopatologfa de esta enfermedad, a saber, cual es el desencadenante principal y como la enfermedad evoluciona hacia la inflamacion cronica, la reparacion ineficaz del tejido lesionado y la curacion comprometida. El interes creciente en la segunda cuestion ultimamente se asocia con el impacto que los nuevos resultados pueden tener en el tratamiento efectivo de la enfermedad y la mejora de la calidad de vida.

Materiales y metodos:

El modelo utilizado en este estudio es la colitis ulcerosa inducida por DSS que consiste en la administracion de un 3% de DSS (sulfato de dextrano sodico) en agua potable durante 7 dfas a un raton. El pico de la reaccion inflamatoria se observa en el dfa 7 y es seguido por un penodo de reparacion del tejido colonico lesionado y, en ultima instancia, la regeneracion o evolucion a una enfermedad cronica y el desarrollo de fibrosis.

El esquema que muestra la configuracion experimental se presenta en la figura 20. Los dfas 0 a 7, se administro DSS en agua potable a todos los animales (ratones) utilizados en el estudio. A un grupo de animales (N = 10) se le administraron 100 |jl de nanofibras de sNAG (a una concentracion de 12 mg/ml; la mayona de las nanofibras de sNAG utilizadas ternan entre aproximadamente 1 a 15 micras de longitud), por via rectal, el dfa 0 y el dfa 3 del estudio (grupo de referencia). Al segundo grupo de animales (N = 10) se le administro solucion salina de referencia, por via rectal, los dfas 0 y 3 del estudio (grupo de referencia). Todos los ratones se sacrificaron el dfa 7 y su respuesta inflamatoria se evaluo por analisis histologico del epitelio intestinal. El analisis histologico se realizo mediante la tincion de los cortes de epitelio intestinal, tal como la tincion hematoxilina-eosina.

Protocolo para la tincion hematoxilina-eosina de cortes de epitelio intestinal. Para la desparafinizacion, los cortes se incubaron inicialmente en xileno durante 30 min seguidos de concentraciones decrecientes de etanol (100% x2 durante 3 min, 95% durante 3 min, 75% durante 3 min, 50% durante 3 min). Los cortes permanecieron en agua corriente durante 5 minutos para eliminar el exceso de etanol. Luego, los cortes se sumergieron en hematoxilina durante 20 s y se lavaron con 1-2 inmersiones en agua limpia. Los cortes se incubaron posteriormente en eosina durante 45 s y se lavaron otra vez en agua limpia. Luego, los cortes se incubaron en concentraciones crecientes de etanol (80% durante 30 s, 90% durante 30 s y 100% durante 2 min), seguido de incubacion en xileno durante 9 min. Posteriormente, los cortes se montaron con medio de montaje DPX y se colocaron bajo un cubreobjetos.

Resultados y comentarios

Las figuras 21 y 22 muestran que en el modelo de raton inducido por DSS de enfermedad inflamatoria intestinal, el tratamiento con nanofibras de sNAG dio como resultado: una reduccion significativa en la reaccion inflamatoria (segun los criterios histologicos publicados) en comparacion con los ratones de referencia; y efectos protectores en la fase subaguda de la colitis por DSS, que actuan en colaboracion con los mecanismos de reparacion para apoyar la remodelacion de tejidos, incluido el epitelio intestinal.

Espedficamente, la figura 21 muestra resultados histologicos mejorados relacionados con el proceso inflamatorio en los ratones a los que se les administro nanofibras de sNAG pero no en ratones de referencia. En concreto, los ratones del grupo tratado con sNAG, pero no los ratones de referencia presentaron edema reducido (veanse las figuras 21A y 21B; el area de edema se indica mediante una flecha delgada y un corchete) e infiltracion leucodtica reducida (veanse las figuras 21A y 21B); la infiltracion leucodtica esta indicada por una flecha gruesa).

La figura 22 muestra la tincion para la fibrosis en cortes de ratones tratados con nanofibras de sNAG y de ratones de referencia. Las diferencias en la respuesta inflamatoria entre los ratones tratados con sNAG y los ratones de referencia son evidentes. En particular, el grupo de referencia presenta signos de aumento de fibrosis (vease Fig. 22A), mientras que el grupo tratado con sNAG no lo hace (vease Fig. 22B).

Los datos presentados demuestran que las nanofibras de sNAG son eficaces para tratar y/o prevenir la inflamacion relacionada con la enfermedad inflamatoria intestinal en un modelo animal de la enfermedad. Estos resultados demuestran la aplicacion terapeutica potencial de las nanofibras de sNAG en el tratamiento de pacientes con EII. Ademas, de manera ventajosa, las nanofibras de sNAG pueden aplicarse localmente por aplicacion topica (como por via rectal mediante un supositorio) y, por lo tanto, evitar los efectos secundarios generales (frecuentes en farmacos administrados generalmente).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composicion que comprende una cantidad eficaz fibras acortadas de poli-N-acetilglucosamina (nanofibras de sNAG) para su uso en un metodo de tratamiento o prevencion de una infeccion por virus de herpes simple (VHS) o un smtoma producido por una infeccion por VHS en un paciente humano, metodo que comprende la administracion topica de dicha composicion a diario al paciente humano en la zona o proximidad de un herpes labial o lesion relacionada con la infeccion por VHS;

en donde las nanofibras de sNAG son el unico principio activo en la composicion; y

en donde las nanofibras de sNAG comprenden monosacaridos de N-acetilglucosamina y monosacaridos de glucosamina, en donde mas del 70% de los monosacaridos son monosacaridos de N-acetilglucosamina; y en donde (i) mas del 50% de las nanofibras de sNAG tienen una longitud comprendida entre 1 y 15 pm, o (ii) las nanofibras de sNAG se produjeron por irradiacion de fibras de poli-N-acetilglucosamina con una dosis de radiacion que reduce la longitud media de las nanofibras de sNAG a menos de aproximadamente 15 pm de longitud.

2. La composicion para uso de la reivindicacion 1, en donde la cantidad es eficaz para:

(i) reducir la gravedad de la infeccion por VHS o uno o mas de sus smtomas;

(ii) reducir la duracion de la infeccion por VHS o uno o mas de sus smtomas;

(iii) erradicar uno o mas de sus smtomas relacionados con la infeccion por VHS;

(iv) reducir el numero de smtomas relacionados con la infeccion por VHS; y/o

(v) evitar el comienzo, desarrollo o recafda de la infeccion por VHS y/o y uno o mas de sus smtomas.

3. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la composicion que comprende nanofibras de sNAG se administra a la piel o a la membrana mucosa del paciente.

4. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde las nanofibras de sNAG se formulan en forma de una membrana, un polvo, una suspension, una solucion lfquida, una pomada, una crema, una atomizacion o un gel.

5. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde mas del 50% de las nanofibras de sNAG tienen una longitud comprendida entre aproximadamente 2 y 10 pm, o ente entre aproximadamente 4 y 7 pm.

6. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde al menos el 90% de las nanofibras de sNAG tienen una longitud comprendida entre aproximadamente 1 y 15 pm.

7. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde las nanofibras de sNAG se produjeron por irradiacion de poli-N-acetilglucosamina, y en donde

(i) la poli-N-acetilglucosamina se irradio en forma de fibras secas a 500-2000 kgy, preferiblemente a 750-1250 kgy; o (ii) la poli-N-acetilglucosamina se irradio en forma de fibras humedas a 100-500 kgy, preferiblemente a 150-250 kgy.

8. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la radiacion es radiacion gamma.

9. La composicion para uso de la reivindicacion 7 u 8, en donde la microestructura de las fibras de poli-N-acetilglucosamina no se altera por la irradiacion utilizada para reducir su longitud.

10. La composicion para uso de la reivindicacion 8, en donde las nanofibras de sNAG irradiadas tienen la estructura qmmica y ffsica de las fibras de poli-N-acetilglucosamina determinada por el espectro infrarrojo (IR), analisis elemental y analisis microscopico electronico de barrido (SEM).

11. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde las nanofibras de sNAG se produjeron a partir de una poli-N-acetilglucosamina de microalgas.

12. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde mas del 90% de los monosacaridos de las nanofibras de sNAG son monosacaridos de poli-N-acetilglucosamina; o en donde mas del 95% de los monosacaridos de las nanofibras de sNAG son monosacaridos de poli-N-acetilglucosamina.

13. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde las nanofibras de sNAG no son reactivas cuando se prueban en una prueba de elucion, una prueba de implantacion intramuscular, una prueba intracutanea y/o una prueba general.

14. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde las nanofibras de sNAG aumentan el mdice metabolico de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en un ensayo MTT y/o no rescatan la apoptosis de las celulas endoteliales de la vena del cordon umbilical humano sin suero en una prueba de exclusion con azul de tripano.

15. La composicion para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde la composicion no se administra junto con otro tratamiento.