JPS62288602A - キトサン変性物粒子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 〔技術分野〕 本発明はキトサン変性物粒子の製造方法に関するもので
ある。

〔従来技術〕

キトサンはカニやエビ等の甲殻類の甲皮に存在するキチ
ン（Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンを主構成単位
とする）を瀝アルカリで処理することによって得られる
塩基性多糖である。キトサンは、化学構造的にはＤ−グ
ルコサミンがβ−（ｌ→４）結合したものであるが、キ
チンを感アルカリで処理する時の条件によってグルコサ
ミンのＮ−アセチル基が若干残り、β−Ｄ−グルコサミ
ンとＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンの共重合体の
構造になっている。

キチンは溶解性が悪いために材料化の研究は遅れている
が、キトサンは希酸水溶液に溶解するためはるかに成形
しやすく、フィルム、繊維、スポンジ等の成形体とする
ことができろ。しかし、従来の成形法は、キトサン溶液
を有機溶媒中で乳化、中和して粒子とする方法であるた
め、直径数百ミクロンから数ミリメートルのような粒子
を得ることは非常に困薙である・ また、キトサンは、キチンよりも反応性が高く。

その分子中の反応性のアミノ基や水酸基を利用して種々
の反応性試薬を反応させてキトサン変性物とすることが
容易であるが、従来、このようなキトサン変性物粒子の
有効な製法は知られていない。

〔目　　　的〕

本発明は、キトサン変性物粒子を効率よく製造する方法
を提供することを目的とする。

〔構　　成〕

本発明によれば、キトサン変性物粒子を製造するために
、第１の発明として、キトサンの酸性水溶液をアルカリ
性水性媒体中に滴下し、キトサンの固化粒子を形成させ
、得られた固化粒子を該媒体から分離し、洗浄した後、
変性試薬と反応させる方法が提供され、第２の発明とし
て、キトサンの酸性水溶液に変性試薬を添加反応させて
得た反応生成液を、アルカリ性水性媒体中に滴下し、キ
トサン変性物同化粒子を形成させる方法が提供され、第
３の発明として、キトサンの酸性水溶液に変性試薬を添
加反応させて得た反応生成液を、アルカリ性水性媒体中
に滴下し、キトサン変性物固化粒子を形成させ、得られ
た固化粒子を該媒体から分離し、洗浄後、さらに変性試
薬と反応させる方法が提供される。

本発明で用いる変性試薬は、キトサン中に含まれる反応
性のアミノ基及び水酸基と反応し得ろものであればよく
、その変性目的に応じて従来公知の適宜のものが用いら
れる。このような変性試薬としては１例えば、アシル化
剤、ホスホリル化剤、アルデヒド類、イソシアネート類
等が挙げられる。

この場合、アシル化剤は、キトサン中の水酸基やアミノ
基と反応し、Ｎ−アシル−グルコサミン基や、０−アシ
ル−グルコサミン基及びＮ−アシ、ｌ　−Ｏ−アシル−
グルコサミン基を形成するために使用され、ホスホリル
化剤は、キトサン中の水酸基と反応し、０−ホスホリル
−グルコサミン基を形成するために使用され、アルデヒ
ド類は、キトサン中のアミノ基と反応し、Ｎ−アリリデ
ン−グルコサミン基やＮ−アルキリデン−グルコサミン
基を形成させるために使用される。インシアネート類は
、キトサン中の水酸基と反応し、ウレタン結合を形成す
るために使用される。また、複数の変性試薬を用いるこ
とも可能であり、例えば、アシル化剤とアルデヒドを用
いることにより、Ｎ−アリリデン−〇−７シルーグルコ
サミン基やＮ−アルキリデン−０−アシル−グルコサミ
ン基を形成させることができる。

アシル化剤としては、酸無水物、酸ハロゲン化物、ケテ
ン類、ジケテン類が用いられ、その具体例としては、例
えば、酢酸、プロピオン酸、安息香酸等の有＠酸の無水
物、塩化物又は臭化物等を好ましいものとして挙げるこ
とができる。このアシル化剤は、キ１−サン中のアミノ
基及び水酸基と反応する。

ホスホリル化剤としては、２−クロロ−２−オキ・１？
− ソー１，３．２−ジオキサホスホランや、五酸リン等が
ある。このホスホリル化剤は、キトサン中の水酸基と反
応する。

アルデヒド類としては、芳香族及び脂肪族アルデヒドが
用いられ、その具体例としては、例えば、ホルムアルデ
ヒド、アセトアルデヒド、グルタルアルデヒド、アクロ
レイン、ベンズアルデヒド、Ｐ−ヒドロキシベンズアル
デヒド、アニスアルデヒド等が挙げられる。脂肪族アル
デヒドはキトサン中のアミノ基と反応して、Ｎ−アルキ
リデン−グルコサミン基を形成し、芳香族アルデヒドは
キトサン中のアミノ基と反応して、Ｎ−アリリデン−グ
ルコサミン基を形成する。

インシアネート類としては、脂肪族及び芳香族のものが
挙げられ、キトサン中の水酸基と反応し、ウレタン結合
を生成する。

本発明の第１の方法を好まし〈実施するには。

先ず、キトサンの酸性水溶液を用意するが、この水溶液
は、酸、好ましくはギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、
ジクロロ酢酸の如き有機酸の水溶液にキ１−サンを溶解
することによって得ることができる。この場合、酸１度
は０．２〜２０重斌％、好ましくは０．５〜１０重景％
、キ１−サン濃度は０．１〜５重量％、好ましくは０．
２〜３重量％である。このキトサンの酸性水溶液のｐＨ
は１〜５、好ましくは１〜３程度である。また、この水
溶液は、メタノールやエタノール等のアルコールで希釈
することもできる。

次に、このキトサンの酸性水溶液を原液として用い、こ
れをアルカリ性水性媒体中に滴下する。

この場合、アルカリ性水性媒体としては、水酸化ナトリ
ウムや水酸化カリウム等のアルカリを１〜ＩＯ重量％溶
解したアルカリ水溶液が用いられる。

また、このアルカリ性水溶液には他の溶媒、例えば、メ
タノール、エタノール、１−プロパツール、２−プロパ
ツール等のアルコールを添加することもできる。アルコ
ールの添加量は特に制約されず、全溶媒中、１〜９９重
量％、好ましくは２０〜６０重量％の割合である。アル
カリ性水性媒体に対するキトサンの酸性水溶液の滴下は
、液面から先端を１〜５ｃｍ程度離した内径０．５〜２
ｍｍ程度のノズルを用いて行うことができ、この場合、
その）丙下速度は１分間に１０〜８０個の粒子が形成さ
れるように選定するのがよい。また、アルカリ性水性媒
体は攪拌機により３０〜１２０ｒｐｍの条件で攪拌する
。滴下されたキトサンの酸性水溶液の液滴は、アルカリ
性水性媒体中で凝固し、白色のキトサンの固化粒子とな
る。生成粒子の粒径は、ノズルの直径や原液中のキトサ
ン濃度等により種々変化させることができ１例えば、前
記内径のノズルでは直径２〜４ｍｍ程度の固化粒子を容
易に得ることができる。

前記のようにして形成される白色固化粒子は、媒体から
分離し、洗浄してアルカリ分を除去する。

この洗浄は水又は水とアルコールとの混合物を用いて行
うことができる。このようにして得られる湿、［■した
キトサン粒子は１表面から内部へ多敬の細孔がおいてお
り、大きな表面積を有する。このキトサン粒子は７！ｌ
ｉ潤している限りその多孔性を保持するが、いったん乾
燥すると、その細孔は閉塞し、非多孔性のものとなり、
このものは湿潤させてももはや多孔性のものとはならな
い。従って、多孔性の製品として保持するには、水中な
どに浸漬しておけばよい。一方、非多孔性のキトサン粒
子とするには、前記湿潤した多孔性粒子を乾燥すればよ
い。この乾燥により、粒径０．１〜２ｍｍ程度の非多孔
性の透明粒子を得ることができる。

本発明においては、この多孔粒子に変性試薬を反応させ
る。この反応は、変性試薬に応じた溶媒を選び、この溶
媒中において実施することができる。この場合の溶媒と
しては、例えば、水、メタノール、エタノール、２−プ
ロパツール、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジオキ
サン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等
が挙げられる。多孔性粒子に対する変性試薬は、それぞ
れ単独で用いることができる他、２種以上同時に用いる
こともできるし、また、２種以上を順次加えて多孔性粒
子に順次反応させることもできる。

前記変性反応で得られたキトサン変性物粒子は、反応終
了後、溶媒から分離し、水や水とアルコールとの混合液
等の溶媒で洗浄し、必要に応じて、最後に水で洗浄する
。このようにして得られた湿潤粒子は多孔性のものであ
り、その多孔性を保持するためには、水等のｌｆ；媒中
に保持しておけばよい。この多孔性粒子は、乾燥するこ
とにより、非多孔性粒子とすることができる。

次に、本発明の第２の方法を好まし〈実施するための態
様を示す。

先ず、前記第１の方法の場合と同様にして、キトサンの
酸性水溶液を調製し、これに変性試薬を加えて変性反応
を行う。この場合、酸性水溶液には、前記した如きアル
コールやその他の有＃！＆溶媒を変性試薬の種類に応じ
て加えることができる。

また、この変性反応においては、変性試薬の使用量を調
節して、溶液が変性反応によってゲル化しないように注
意する。このようにして得られた変性反応液を原液とし
て用い、これを前記第１の方法の場合と同様にして、凝
固用のアルカリ性水性媒体中に滴下し、キトサン変性物
固化粒子を形成させる。この粒子は、媒体から分離し、
これを水や水とアルコールの混合液等で洗浄してアルカ
リ分を除くことにより、多孔性粒子を得ることができる
。また、この多孔性粒子は乾燥させることにより、非多
孔性粒子とすることができる。

次に本発明の第３の方法を好まし〈実施するための態様
を示す。

先ず、前記第２の方法と同様にしてキトサン変性物固化
粒子を生成させ１次にこれを病体から分離し、前記第１
の方法の場合と同様にして、洗浄し、アルカリ分を除い
た後、反応溶媒中において。

変性試薬と反応させる。この場合、反応溶媒は変性試薬
に応じた適当なものを用いる。前記第２の方法では、高
い変性反応速度を得ることができるが、変性反応率を高
くとることができない。第３の方法では、この点の問題
はなく、高い変性反応率を得ることができる。

〔効　　果〕

本発明によれば、多孔性又は非多孔性のキトサン変性物
粒子を得ることができる。このキトサン変性物粒子は、
金属捕集剤、酵素固定化担体、薬物徐放出仕担体、細胞
培養基材、イオン交換体等の広範囲の用途に利用するこ
とができる。特に、多孔性のキトサン変性物粒子は、そ
の表面から内部に続く細孔を利用し、酵素や薬剤をその
内部に浸透させることができ、そして、その浸透後乾燥
することにより、内部に酵素や薬剤を包蔵した粒子とす
ることができる。さらに、本発明では、変性試薬の種類
を適当に選定する。ことにより、各用途に応じた性質を
有する粒子を容易に得ることができる。

〔実施例〕

次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。

実施例１ 紅ズワイガニの殻より得たキトサン粉末１０ｇを水５０
０ｍ　Ｑとともにかきまぜ、ここへ酢酸５ＩＩＱを添加
し、キトサン２％の粘稠な原液を得た。この原液をガラ
スフィルター（Ｇ−１）で濾過し、脱泡後、内径１ｍｍ
のガラス管の先から、４％の水酸化ナトリウム水溶液か
らなる凝固媒体２Ｑに、毎分３０個程度の速度で滴下し
た。媒体液面とガラス管の先との距離は４ｃｒａであり
、媒体の攪拌速度は毎分６０回程度であった。５００ｍ
　Ｑ全てを滴下した後、１日間攪拌を続けた。得られた
粒子を分離し、水で十分に洗浄し、洗浄済液のｐＨが中
性であることを確認した。このようにして得られたキト
サンの湿潤粒子は白色で１粒径３ＩＩＩＩ１１程度のも
のであり、電子顕微鏡観察により、粒子表面に１０〜４
０μｍの細孔を多数有することが確認された。

この粒子のうちの１５０個をとり、水とメタノールの１
＝１の混合液でよく洗浄し、水２ｍＡ、メタノール２０
ｍＱ、無水酢酸２ｍＱの混合液に入れ、−昼夜ゆるやか
に攪拌して、アシル化反応を行った。

得られた粒子を水で十分に洗浄した。この粒子はその赤
外吸収スペクトルからアミド尤の１６６０ｃｍ−’の吸
収が確認でき、グルコサミン基のアミノ基がアセチル化
されたことが確認できた。アセチル化度を文献（高分子
論文集（１９８５）、　４２巻、１８１頁）に従って求
めたところ６９％であった。

実施例２ 実施例１で無水酢酸を反応させる前のキトサンからなる
未変性粒子５０個をメタノールでよく洗浄し、ｐ−ヒド
ロキシベンズアルデヒド０．３ｇとメタノールｉｏｎ　
ｍの混合液に入れ、−昼夜ゆるやかに攪拌して、反応を
行った。得られた粒子をメタノールで洗浄した。この粒
子は赤外吸収スペクトルにおいて、アルデヒドとアミノ
基との反応による１６４２ｃｍ−１のシッフ塩基の吸収
がみられ、Ｎ−（Ｐ−ヒドロキシ）ベンジリデン−グル
コサミン基の存在を確認した。粒子の直径は約３．３＋
＋ｖ＋であった。

実施例３ 実施例１で得た未変性のキトサン粒子５０個を１Ｍ酢酸
ナトリウム水溶液で十分に洗浄し、ジケテン２ｍＱ、ベ
ンゼン４ｍＱ、ｎ−ヘキサン１６ｍＱの混合液に入れ、
５０℃で５時間ゆるやかに攪拌して反応を行った。得ら
れた粒子をアセトン、メタノールで洗浄した。この粒子
は、その赤外吸収スペクトルにおいて、１７４７ｃｍ−
’のエステル結合の吸収が見られ、ジケテンがグルコサ
ミン基の水酸基と反応してＯ−アシル−グルコサミン基
となったことを確認した。

実施例４ 実施例１で得た未変性のキトサン粒子５０個を、アクロ
レイン０．５ｍＱとメタノール１ＯＩＩＩＱの混合液に
入れ一昼夜ゆるやかに攪拌して反応させた。得ラした粒
子をメタノールで洗浄した。この粒子はその赤外吸収ス
ペクトルから１６６０ｃｍ−”のシッフ塩基の吸収が確
認され、アクロレインが反応したことを示した。粒子の
直径は約３　、３ｍｍであった。

実施例５ 実施例１で得た未変性のキトサン粒子５０個をテトラヒ
ドロフランで十分に洗浄し、テトラヒドロフランｌＯｍ
　Ｑ、トリエチルアミン１ｍＱ、フェニルイソシアネー
ト２ｍＱの混合液に入れ、−昼夜ゆるやかに攪拌して、
反応させた。得られた粒子をテトラヒドロフラン及びメ
タノールで洗浄した。この粒子は、その赤外吸収スペク
トルにおいて、ウレタン結合の１７２０ｃｍ−１の吸収
及びフェニル基の１６００ｃｍ−’の吸収が見られ、フ
ェニルイソシアネートがキトサンの水酸基と反応したこ
とを確認した。

粒子の直径は約２．１ｍｍであった。

実施例６ キトサン１ｇを２％酢酸水溶液５０ｍ　Ｑに溶解し、メ
タノール７５ｍ　Ｑで希釈した。ここに、無水酢酸０．
２３５＋ｕ１２を添加し、５時間攪拌して反応を行った
。

この反応液のうち８０ＩＩ１１２を注射器にとり、シリ
ンジポンプを用いて針から液層として、４％水酸化ナト
リウム２００＋ａ　Ｑと２−プロパツール２００ｍ　ｎ
の混合液からなる媒体に滴下した。この場合、媒体をモ
ーターで毎分１００回程度の速さで回転させた。

滴下速度は毎分３０個程度であった。得られた粒子を水
とメタノールの１＝１の混合液で洗浄し、洗浄済液のｐ
Ｈが中性であることを確認した。粒子の直径は約２．１
ａｕ＋であった。この粒子は、その赤外吸収スペクトル
から、無水酢酸と７ミノ基との反応によるアミド基の吸
収１６６１．１５５６ｃｍ””が確認され。

Ｎ−アセチル−グルコサミン基が含まれていることがわ
かった。また、このスペクトルからアセチル化度が４５
％であることがわかった。

実施例７ 実施例６で調製した反応液の残りのうち、２８ｍ　Ｑを
とり、これにＰ−ヒドロキシベンズアルデヒド０．０３
４ｇを加え、−昼夜攪拌して反応を行った。この反応液
を注射器にとり、実施例６と同様にして、粒子状に成形
した。得られた粒子の直径は約２．５ｍｍであった・こ
の粒子はその赤外吸収スペクトルから、■６０６，８３
９ｃｏ＋−”の吸収が確認され、Ｎ−（Ｐ−ヒドロキシ
）ベンジリデン−グルコサミン基が含まれていることが
わかった。

実施例８ 実施例６で得た変性粒子５０個をテトラヒドロフランで
洗浄後、３，５−ジニ１へロペンゾイルクロライト０．
５ｇとトリエチルアミン１ｍＱとテトラヒドロフラン１
５＋ｎＱ、の混合液に入れ、−昼夜ゆるやかに攪拌して
反応を行った。得られた粒子をメタノール、水で洗浄し
た。この粒子は、その赤外吸収スペクトルにおいて、エ
ステル基の１７３５ｃｍ””の吸収と、アミド基の１６
６９ｃｍ−１の吸収及びニトロ基の１３４７ｃｍ−’の
吸収が見られ、３，５−ジニ１−ロペンゾイルクロライ
ドがグルコサミン基の水酸基とアミン基の両方に反応し
たことが確認された。粒子の直径は約１．９ｍｍであっ
た。

実施例９ 実施例６で得られたＮ−アセチルークルコサミン基を含
む変性粒子の５０個をメタノールで十分に洗浄し、Ｐ−
ヒドロキシベンズアルデヒド０．２ｇとメタノール１０
ｍ　Ｑの混合液に入れ、−昼夜ゆるやかに攪拌して反応
を行った。得られた粒子をメタノールで洗浄した。この
粒子は、その赤外吸収スペクトルから１６４２ｃｍ−１
のシップ塩基の存在が確認され、Ｎ−（ｐ−ヒドロキシ
）ベンジリデン−グルコサミン基を含む粒子であること
を確認した。粒子の直径は約２．ｌａｍであった。

実施例１０ キトサン１ｇを２％酢酸水溶液Ｌｏｏｍ　Ｑに溶解し、
ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド０．１５２ｇを添加し
、−昼夜攪拌して反応を行った。この反応液を２０ｍｆ
ｌとり、メタノール４０＋ａ　Ｑで希釈した後、４％水
酸化ナトリウム水溶液１００ｍｆｌとエタノール１７０
ｍ１ｌｌの混合液を凝固媒体として用いて滴下した他は
実施例６と同様の方法で変性粒子を得た。この粒子の直
径は約２．９ｍｍで白色であった。また、この粒子は、
その赤外吸収スペクトルにおいて、１６３９ｃｍ−１の
シッフ塩基の吸収が見られ、Ｎ−アリリデン−グルコサ
ミン基が含まれていることが確認された。

実施例１１ キトサン１ｇを２％酢酸水溶液１００ｍ　Ｑに溶解し、
無水酢酸３．５２ａ＋１２を添加し、−昼夜攪拌して反
応を行った。この反応液のうちの２０ｍ　Ｑをメタノー
ル４０ｔａ　Ｑで希釈し、４％水酸化ナトリウム１５０
鳳ｆｌとエタノール３００ｍ　Ｑとの混合液に滴下した
以外は実施例６と同様にして変性粒子を得た。この粒子
の直径は約２．５ａ＋ｍで白色であった。この粒子は、
その赤外吸収スペクトルにおいて、アミド基の１６６１
ｃｍ−’、１５５１Ｃ！＋−’の吸収が見られ、無水酢
酸がグルコサミン基のアミノ基と反応したことが確認さ
れた。また、そのアセチル化度は、その赤外吸収スペク
トルから５２％であることがわかった。

実施例１２ キトサンＩｇを２％酢酸水溶液５０ｍ　Ｑに溶解し、メ
タノール６５ＩＩＱで希釈して原液を得た。この原液に
無水安息香酸０．２８１ｇを添加し、−昼夜攪拌して反
応を行った。この反応液のうち４０ｍ　Ｑを注射器にと
り、シリンジポンプを用いてその液滴を針先から４％水
酸化ナトリウム２００ｍ　Ｑと２−プロパツール２００
ａ＋　ｊ２の混合液からなる凝固媒体に滴下した。

この場合、凝固媒体をモーターで毎分１２０回程程度速
さで攪拌し、滴下速度を毎分６０個程度に保ち、針先と
凝固液の距離をｌＣｗにした。得られた変性粒子を水と
２−プロパツールの２：１の混合液で洗い、洗浄済液の
ｐＨが中性であることを確認した。

この粒子の直径は約２．７ｍ＋ａで白色であった。また
、この粒子は、その赤外吸収スペクトルにおいて。

１６５４ｃｍ−’、　１５４４ｃ＋ａ−”のアミド基と
１６０２ｃｍ−１，８０３ｃｍ−’のフェニル基の吸収
が見られ、Ｎ−ベンゾイル−グルコサミン基の存在を確
認した。

実施例１３ 実施例１２で得た変性粒子５０個をピリジンでよく洗浄
し、ピリジン５ＩＩＱ、無水酢酸ＩＩＩＱの混合液に入
れ、室温で一昼夜攪拌して反応を行った。得られた粒子
をメタノールで洗浄した。この粒子の直径は約２．６ｍ
ｍであった。また、この粒子は、その赤外吸収スペクト
ルにおいて、１７４６ｃｍ−”のエステルの吸収が見ら
れ、無水酢酸が水酸基と反応して、酢酸エステルとなっ
たことがわかった。

実施例１４ 実施例１２で得た変性粒子１００個をメタノール２０ｍ
Ｑと無水安息香酸０．８ｇの混合液に添加し、室温で２
４時間ゆっくりと攪拌して反応を行った。得られた粒子
をメタノールで洗浄した。この粒子は、その赤外吸収ス
ペクトルにおいて、アミド結合の吸収がその反応処理前
の変性粒子よりも著しく増加し、キトサンのアミノ基が
ベンゾイル化されたことを確認した。

次に、この粒子をアセトニトリルで洗い、アセトニトリ
ル１０ｍＱ、トリエチルアミン０．１ｗｒＱ、２−クロ
ロ−２−オキシ−１，３，２−ジオキサホスホラン０．
５ｍ１２の混合液に入れ、冷蔵庫に２時間放置した後、
得られた粒子を０．１規定の水酸化ナトリウム２０ｍ　
Ｑに入れ、■昼夜攪拌した。得られた変性粒子を水で洗
浄した。この粒子は、その赤外吸収スペクトルにおいて
、１２２８ｃ＋ａ−１のリン酸エステルの吸収が見られ
、キトサンに含まれる水酸基がホスホリル化されたこと
を確認した。

実施例１５ 実施例１で得た白色粒子をメタノールで十分に洗浄し、
シャーレに広げて５日間自然乾燥した。

直径約１　、２ａｕｉの透明な非多孔性粒子が得られた
。

実施例１６ 実施例６で得た白色粒子を実施例１５と同様に自然乾燥
し、直径０．６７ｎ＋ｍの非多孔性粒子を得た。

特許出願人　工業技術院長　　等々力　　達指定代理人
　工業技術院製品科学研究所長高橋教司

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）キトサンの酸性水溶液をアルカリ性水性媒体中に
   滴下し、キトサンの固化粒子を形成させ、得られた固化
   粒子を該媒体から分離し、洗浄した後、変性試薬と反応
   させることを特徴とするキトサン変性物粒子の製造方法
   。
2. （２）キトサンの酸性水溶液に変性試薬を添加反応させ
   て得た反応生成液を、アルカリ性水性媒体中に滴下し、
   キトサン変性物固化粒子を形成させることを特徴とする
   キトサン変性物粒子の製造方法。
3. （３）キトサンの酸性水溶液に変性試薬を添加反応させ
   て得た反応生成液を、アルカリ性水性媒体中に滴下し、
   キトサン変性物固化粒子を形成させ、得られた固化粒子
   を該媒体から分離し、洗浄後、さらに変性試薬と反応さ
   せることを特徴とするキトサン変性物粒子の製造方法。