RO112765B1 - Procedeu pentru prepararea (s)-cianhidrinelor optic active in prezenta enzimelor - Google Patents

Procedeu pentru prepararea (s)-cianhidrinelor optic active in prezenta enzimelor Download PDF

Info

Publication number
RO112765B1
RO112765B1 RO93-00489A RO9300489A RO112765B1 RO 112765 B1 RO112765 B1 RO 112765B1 RO 9300489 A RO9300489 A RO 9300489A RO 112765 B1 RO112765 B1 RO 112765B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
membrane
enzyme
process according
acid
porous membrane
Prior art date
Application number
RO93-00489A
Other languages
English (en)
Inventor
Stephen Walter Andruski
Bruce Goldberg
Original Assignee
Fmc Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fmc Corp filed Critical Fmc Corp
Publication of RO112765B1 publication Critical patent/RO112765B1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/002—Nitriles (-CN)
    • C12P13/004—Cyanohydrins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
    • C07D237/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D237/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D237/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D237/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
  • Manufacture Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)

Description

Prezenta invenție se referă la un procedeu pentru prepararea cianhidrinelor optic active, în special a (S)-cianhidrinelor optic active, utilizate drept produși intermediari în prepararea insecticidelor pirethroid cunoscute, prin reacția aldehidelor cu acid hidrocianic, în prezența enzimei S-oxinitrilaza.
Tehnologia reacției aldehidelor cu acidul hidrocianic în prezența enzimei oxinitrilaza, folosind drept solvent eter diizopropilic pentru formarea cianhidrinelor, este cunoscută de exemplu din brevetul US 4859784 al lui Effenberg și alții. Așa cum ni se prezintă în lucrarea de referință, reacția se efectuează cu enzimă aflată întro formă imobilizată, cum ar fi fixarea pe suprafața sferelor de sticlă, a rășinilor schimbătoare de ioni sau a particulelor de celuloză, sub forma unui șlam care trebuie să fie filtrat în prealabil din soluție, înainte de a se recupera produsul.
Pentru a fi eficientă în vederea atingerii scopului propus, această metodă se caracterizează printr-o singură trecere a reactanților prin enzimă imobilizată, proces care durează 5 până la 6 zile pentru a fi complet.
în mod similar, cererea de brevet australiană 38104/89 a lui Kula și alții prezintă un procedeu asemănător, în care enzimă S-oxinitrilaza provine de la o sursă specială (Sorghum bicolor). în acest procedeu se utilizează un suport format dintr-o bilă acrilică pentru fixarea enzimei, respectiv bilă de EupergitOC (Rohn, Darmstadt), material disponibil din punct de vedere comercial, care se utilizează în suspensie în mediul de reacție, sau într-o coloană.
Aceste procedee presupun utilizarea unui sistem apos pentru prevenirea oricărui atac al diverșilor solvenți asupra bilei acrilice. în plus, în acest ultim procedeu în care se folosesc enzime fixate se obține un randament de aproximativ 85% în greutate, dar numai după 3 zile de funcționare continuă folosindu-se drept aldehidă 4-hidrobenzenaldehida.
De asemenea, brevetul US 5008192 al lui Neidermeyer, Brevetul
European 326063; brevetul US 3862030 și German Offen 3823864 A-1, tratează procedee de preparare a cianhidrinelor optic active în prezența enzimelor.
în fiecare din brevetele de mai sus se face referire la un reactor cu diafragmă de enzimă. Totuși, așa cum rezultă din literatura tehnică corespunzătoare (vezi de exemplu Aspecte de inginerie ale enzimei; Kragl și alții, Ann N.Y. Acad. Sci., 613, pag. 167-175 (1990), și Vasic-Racki și alții Appl. Microbiol. Biotechnol., 31, pag. 215-222 (1989), astfel de reactori nu reprezintă altceva decât o serie de containere separate prin membrane filtrante care sunt fizic impermeabile pentru enzimă. Astfel, în acest tip de reactor reacția se efectuează într-o soluție care conține o enzimă dispersată cu care reactanții trebuie să intre în final în contact prin difuzie.
Utilizarea reactorilor cu membrană polimerică pentru fixarea enzimelor este cunoscută în general din brevetele US 4102746 și nr. 4169014, ambele ale lui Bruce S. Goldberg. De asemenea, în lucrarea Un nou sistem de reactor cu enzimă imobilizată a lui Bruce S. Goldeberg prezentată la a 27-a sesiune a Simpozionului de primăvară Anual asupra sistemelor de reactoare neconvenționale, AICHE, East Brunswick, N.J. 10 mai 1984 se descriu mai bine reactorii cu membrană din cele două brevete US menționate.
Problema pe care o rezolvă invenția este trecerea soluției de reactanți-aldehide și acid hidrocianic în mediu de solvent printr-o membrană poroasă activată chimic.
Procedeul, conform invenției, înlătură dezavantajele menționate, prin aceea că soluția de reactanți este trecută printr-o membrană poroasă, sau prin straturi de membrană poroasă, de care enzimă a fost legată chimic, membrana menționată fiind constituită dintr-un liant de rășină polimerică, în care sunt dispersate particule de umplutură, fine divizate și având o rețea de pori substanțial interconectați.
RO 112765 Bl
Luând în considerare faptul că formele enantiomere (S) și (R) ale cianhidrinei s-ar forma în mod normal în cantități egale, adică în proporție de 50:50, în absența unui catalizator stereoselectiv, obiectul acestei invenții este creșterea proporției izomerului S față de izomerul R, deci a raportului (S/R) prin alegerea corespunzătoare a unui catalizator îmbunătățit și a condițiilor de reacție. De asemenea, un obiectiv al prezentei invenții este nu numai creșterea selectivității izomerului S față de R, ci și realizarea conversiei sporite în produs util și într-un timp cât mai scurt posibil. Un alt obiectiv al prezentei invenții este atingerea scopurilor de mai sus, fără să fie necesară separarea fizică a enzimei din produsul final.
în conformitate cu procedeul, conform invenției este de dorit ca reacția să se efectueze într-un sistem organic în care, aldehida practic insolubilă în apă și cianhidrina care rezultă sunt solubile. Deși se pot utiliza mici cantități de apă tampon, adică cantități de circa 1% apă din greutatea sistemului, se preferă să se folosească cantități cât mai mici posibil de apă, adică de < 0,03%. Astfel, această invenție cuprinde în esență un sistem constând dintr-un solvent organic (opțional cuprinzând apă tampon), reactanți acizi și aldehide și o enzimă legată chimic la o anumită membrană poroasă, așa cum se descrie în detaliu mai jos.
Reacția poate fi condusă într-un domeniu larg de temperatură și pH care nu sunt critice. Astfel, de exemplu, se acceptă temperaturi de la -6°C până la +30°C și de preferință de la +6°C până la +25°C.
pH-ul mediului de reacție, când nu este critic, poate fi reglat prin sisteme tampon, cum ar fi acetatul de sodiu, citratul de sodiu sau fosfatul de sodiu și poate fi menținut în domeniul de pH de la
3,5 până la 7,5.
Aldehidele utilizate sunt cele convenționale, ca de exemplu, cele din brevetul US 4859784.
Aici sunt incluse, așa cum sunt descrise în acest brevet, toate aldehidele cu formula:
O
II c / \ R H în care R este un radical saturat sau nesaturat, alifatic sau aromatic, și care poate avea substituenți de halogen, sulf, azot sau care conțin oxigen.
Aldehidele selectate pentru acest procedeu ar fi de dorit să fie solubile în solvenții organici prevăzuți în prezenta invenție. Astfel, sunt preferate aldehidele având solubilitățile în apă mai mici de 2,0□,□1 mg/ml și mai mult cele având solubilitățile mai mici de 0,1 mg/ml, reduse până la aproximativ 0,01 mg/ml. Exemple ale acestor aldehide insolubile în apă includ pe cele reprezentate de formulele:
O
II
unde A este hidrogen sau fluorură, B este hidrogen, sau ionii fluorură, clorură sau bromură. Dintre aceste aldehide este preferată 3-fenoxibenzaldehida.
Raportul molar dintre aldehidă și acid cianhidric trebuie să fie cuprins de preferință în domeniul de 1:1 până la 1:100 și mult mai bine de circa 1:1 sau 1:2.
Solventul organic folosit poate fi selectat rapid dintre cei care nu produc efecte nedorite asupra membranelor folosite sau asupra reacției. Astfel, de exemplu, utilizarea cfr-n-butil eterului, pe de o parte, este preferată în această reacție, în timp ce în mod neașteptat folosirea diizopropil eterului, care este utilizat în tehnologia din brevetul 4859784 (de mai sus) nu favorizează desfășurarea prezentului procedeu.
Catalizatorul enzimă S-oxinitrilaza (EC 4.1.2.11) este comercial disponibil de la firma Sigma Chemical Co. sau poate fi izolată din lăstare de sorg prin metode
RO 112765 Bl cunoscute (vezi Bove și alții, J. Biol. Chem., 226 (1), 207, (1961). Cantitatea de enzima utilizată depinde de cantitatea de aldehidă și este de dorit să fie de 50-2500 unități de enzima pe gram de aldehidă și mai bine de aproximativ 500-750 unități pe gram de aldehidă.
Enzima poate fi legată chimic convenabil de membrana poroasă descrisă mai jos prin tratarea membranei cu, de exemplu, o soluție apoasă de polietilenimină, urmată de exemplu de o soluție apoasă de glutaraldehidă de 5% în greutate și în final o soluție de enzimă S-oxinitrilază într-o soluție tampon corespunzătoare.
Enzima rămâne fixată de membrană în mod avantajos timp de câteva zile, reprezentând astfel nu numai o realizare mai stabilă și mai durabilă în comparație cu metodele anterioare, dar de asmenea s-a evitat treapta suplimentară de separare și recuperare a enzimei care se fluidizează sub formă de șlam, conform brevetelor US 4859784 și 5008192
Membranele poroase utilizate în aceste brevete sunt descrise în brevetul US 4102746 (de mai sus), care definește aceste materiale de fixare a enzimei, natura și metoda de preparare a acestora și fixarea și recuperarea enzimei de pe o serie de astfel de materiale. în esență prin aceste membrane cu grosime și/sau straturi selectate, se înțeleg suporturi din rășini polimere tridimensionale conținând particule de umplutură fin dispersate în suportul menționat și o rețea de pori puternic interconectați, unde dimensiunile porilor pot fi cuprinse într-un domeniu foarte larg, cel mai bine în domeniul de la circa 0,01 până la circa 100 microni, iar porozitatea totală a materialului este cuprinsă între 50 și 75% și particulele umpluturii dispersate menționate fiind prezente într-o proporție de circa 25% în greutate din greutatea totală a compoziției.
Una din membranele de acest fel este o membrană MPSR (FMC Corporation, Philadelphia, PA, SUA), care este o foaie microporoasă de poli(clorură de vinil)-silice cu o porozitate de 70-80% în volum.
Dimensiunea porilor determinată prin porozimetria de incluziune cu mecur este cuprinsă în general în domeniul de 0,2 microni până la 2,0 microni.
Acest suport este extrem de hidrofilic, are o sarcină negativă care poate fi transformată în pozitivă și o suprafață superficială de 80 m2/g. De asemenea, acest material este necompactabil în condiții normale și are o densitate redusă în stare uscată de 0,45 g/cm3. Pozițiile active de pe suportul de silice care este format dintr-o matrice poroasă, permite adaosul funcțiilor organice prin intermediul chimiei de fixare a silicei. Această membrană MPS are o capacitate de fixare a DNA de cel puțin circa 260 p/cm2.
Mai mult, s-a găsit că această membrană, ca și alte membrane corespunzătoare, utilizabile în prezenta invenție, care în mod normal se utilizează numai în medii apoase, a fost surprinzător de stabilă în prezența solventului organic din acest procedeu.
Deși polimerii care formează liantul, adică matricea membranei pot fi foarte diferinți, aceștia trebuie să fie, de preferință termoplastici, rășini accesibile comercial, dintre care clorură de polivinil (PVC) este preferată.
Totuși pot fi folosite de asemenea materiale, cum ar fi polietilenă umplută cu silice, sau copolimeri ai PCV cu mici cantități de monomer monoetilenic, cum ar fi acetat de vinii, clorură de viniliden, propilenă sau alte substanțe similare. Alternativ, matricea poate fi formată din materiale cum ar fi politetrafluoretilena (PTFE), acetat sau triacetat de celuloză, poliamide (cum ar fi nailonul) sau altele similare. Dacă se utilizează PTFE, aceasta poate fi sub forma de matrice fibroasă (vezi brevetele US 4152661 și 4373519), având de exemplu particule adsorbante hidrofilice încorporate. Astfel, se poate utiliza, în general, orice rășină termoplastică care se plasticizează rapid cu un solvent sau care poate fi sinterizată prin temperatură sau presiune, sau care poate fi formată rapid pornind de la matricea permeabilă, și care este stabilă fizic și chimic în condițiile acestei invenții.
Umpluturile, de preferință în formă de particule, pot include atât substanțe
RO 112765 Bl anorganice, ca de exemplu compuși de silice menționați anterior sau de exemplu compuși de aluminiu, cum sunt oxidul de aluminiu sau hidroxidul; sau umpluturi organice cum ar fi polizaharidele care includ derivați de celuloză activată. (Celuloza neactivată pe de altă parte a fost ineficientă în combinație cu PVC).
Membrana care rezultă poate fi activată prin tratarea ei printr-un procedeu cunoscut, astfel încât să se realizeze o legătură chimică între membrană și enzima, adică între particulele de umplutură și enzimă. Această legătură poate fi efectuată prin adsorbție chimică, prin legătură covalentă, sau printr-o legătură de rețea între agentul intermediar și enzimă. Printre grupele funcționale care pot fi incluse în membrană se numără resturi de grupe amino libere, carboxil, izonitril, aldehida sau cetone care realizează legături între enzima S-oxinitrilaza și umplutura membranei. Ointre acestea polietilenimină (PEI), care poate fi adsorbită chimic pe umplutură, este preferată, în combinație cu, de exemplu, glutaraldehida la care se leagă apoi enzima.
Așa cum s-a menționat în brevetul 4102746 (de mai sus), membrana utilizată în procedeul din această invenție poate fi rapid preparată prin amestecul cantităților necesare de rășină polimerică sub formă de pulbere fină, umplutura de natură anorganică în stare de pulbere fină, un solvent (de exemplu ciclohexanona) și un nesolvent (de exemplu apa) prin amestecare cu un agitator cu forfecare joasă pentru formarea unei pulberi umede, care nu curge. Amestecul pulverulent poate fi apoi supus operațiilor de extrudere și laminare prin calandrare pentru formarea unei structuri în esență planare sau a unei foi cu dimensiunile dorite, care poate fi trecută mai departe printr-o baie apoasă pentru spălarea solventului și apoi în continuare într-o etuvă cu aer cald pentru eliminarea apei. în conformitate cu prezenta invenție, produsul care rezultă sub formă de membrană permeabilă pentru fluide, microporoasă, stabilă dimensional, semirigidă, insolubilă, poate fi tratată după obținere, printr-un procedeu prin care se cuplează sau se leagă enzimele de aceasta.
într-o formă preferată, membrana inițială neactivată chimic poate fi preparată în modul următor: o foaie de material poros se prepară prin amestecarea uscată la început între 9,07 kg de rășină de polivinilclorură Conoco™ 5385, pulverulentă, cu particule de dimensiuni mici, care trec prin sita de 180 microni și 18,14 kg de HiSil™ 233, un precipitat de silice hidratată, într-un amestecător de tip Patterson Kelley pentru lichide-solide, cu agitator cu palete de forfecare joasă, timp de aproximativ 3 minute. După aceea, în timpul agitării continue, se adaugă 24,8 kg de solvent (ciclohexanona) pe timp de 20 minute prin intermediul unei pompe. Se adaugă produsului, care se agită în amestecător, o camtitate de apă de 26,8 kg în perioada următoare de timp de 20 minute pentru formarea unui produs umed, stabil, care nu curge. Produsul se introduce într-un aparat de extrudare cu melc având o temperatură în rezervor de aproximativ 48,9°C, și extrudatul este trecut între rolele unui calandru pentru obținerea unei foi, în esență plată, cu o grosime de 0,5 mm. Foaia este trecută apoi printr-o baie de extracție a apei la 76,7°C și după aceea uscată într-o etuvă cu aer cald la 107,2°C timp de 6 minute. Foaia finită poroasă conține pori având dimensiuni aflate într-un domeniu de distribuție relativ mare extinse de la aproape 0,01 microni până la aproape 100 microni și un diametru mediu cuprins în domeniul de la circa 0,15 microni până la circa 0,25 microni, așa cum s-a determinat prin metoda Incluziunii mercurului. Porozitatea totală a acestui material este de aproximativ 65% din volum și conținutul umpluturii dispersate (de exemplu silice) cuprinde aproximativ 56% în greutate. De exemplu, într-un test de rutină, apa lichidă va umezi rapid întregul material fără aplicarea nici unei presiuni, indicând că microporii sunt puternic interconectați de la o suprafață la cealaltă.
Membrana preparată după procedeul de mai sus poate fi modificată
RO 112765 Bl chimic cu un agent de fixare prin legături chimice dacă se dorește ca (S)-oxinitrilaza să fie legată mai puternic, prin intermediul următoarelor mijloace: membrana netratată se introduce într-o soluție apoasă 5% greutate/volum de polietilimină (PEI) reticulară cu greutatea moleculară de 5OOOO, la temepratura camerei, timp de o oră.
Suportul tratat este spălat cu apă și soluție 1M de NaCI pentru eliminarea PEI neadsorbită. Testarea produsului poate fi făcută printr-o încercare cu acid trinitrobenzen sulfonic: se observă pe suprafața membranei suport tratate o culoare oranj intensă, care provine de la trinitrofenil amină derivată, demonstrând astfel funcționalitatea în principal a grupării amino alifatice. Conținutul în azot al membranei suport tratate s-a determinat prin analiza elementară, de exemplu, 1,25% azot în greutate produs uscat față de 0,02% azot în produs uscat, în cazul membranei suport netratate. Adsorbția chimică a PEI pe membrana suport tratată este practic ireversibilă, adică, aceasta nu poate fi eliminată prin introducerea în soluții cu tărie ionică mare (de exemplu 1M NaCI sau 1M K2HP04/KH2P04] cu valori ale pH-ului cuprins între 3 și 9. Numai în cazul unor acizi tari (introducerea în acid clorhidric 1M timp de 2 ore) s-ar putea pune în evidență desorbția parțială a unei cantități de 50% din conținutul de azot, așa cum s-a indicat prin analiza elementară. Suprafața superficială a suportului tratat prin procedura standard BET este de 55,4 m2/g față de 81,1 m2/g a suprafeței de control. Membrana suport tratată cu PEI prezintă proprietăți de flux identice cu una netratată, indiferent de soluția tampon sau tăria ionică utilizată.
Enzima se leagă chimic apoi de membrana care a fost activată chimic la început cu PEI, așa cum s-a descris mai sus, și apoi cu o grupare de legătură cum ar fi glutaraldehida de care se leagă enzima în final. Reactanții au fost apoi aduși în contact cu enzima prin trecerea prin porii membranei. Debitul mediului de reacție se reglează după dorință prin fixarea membranei pe un suport, sau a straturilor de membrane, într-o casetă, care rețin marginile membranei în vederea construirii unui reactor, făcând aceste margini impermeabile pentru debitul menționat.
Dacă se dorește, se pot prevedea de asemenea dispozitive de intrare și de ieșire care pot dirija și forța trecerea reactanților prin porii membranei reactorului și deci contactul cu enzima.
Reactorii caracteristici de acest tip, în formă de discuri, sunt de tip ACTI-DISK® și ACTI-MOD® (produși de firma FMC Corporation, Philadelphia, PA, USA). Ultimul tip de reactor, în special, cuprinde câteva straturi de membrane pentru asigurarea unei recuperări mai complete. Prin urmare, în această descriere prin termenul de membrană se va înțelege una sau mai multe straturi de membrane în care grosimea finală necesară poate fi determinată rapid prin teste de rutină. Astfel, în următoarele exemple, matricea ACTI-DISK® cuprinde unul până la 5 straturi de membrane, de exemplu, o membrană în exemplele 2, 3, 6 și 7 și 5 straturi în exemplele 1,4 și 5.
Produsul de reacție dorit, cianhidrina, poate fi apoi obținut prin eliminarea acidului cianhidric și a solventului prin distilare.
Procedeul, conform invenției, prezintă avantaje prin faptul că timpul de reacție poate fi redus la mai puțin de o zi, spre deosebire de metodele anterioare, care necesită 6 sau 7 zile, în timp ce se menține, sau în unele cazuri se mărește randamentul general de formare a produsului, ca și selectivitatea, pentru izomerul S solicitat în comparație cu metodele anterioare. Mai mult și, de preferință, trebuie să se înțeleagă că prin această metodă randamentul general poate fi multiplicat proporțional, dacă se utilizează perioadele de timp din metodele anterioare, de exemplu, de până la 6 - 7 zile.
în continuare se prezintă exemple de realizare a procedeului conform invenției.
în exemplele care urmează dimensiunile sitelor sunt definite conform standardului ASTM E11-87.
RO 112765 Bl
Exemplul 1. Prepararea S-ciano 3-fenoxifenil-metanolului din acid cianhidric și 3-fenoxibenzaldehida în di-n-butil eter la temperatura ambiantă
Treapta A. Fixarea enzimei Soxinitrilaza pe o matrice poroasă într-un reactor cu pompă a fost introdus un dispozitiv cu membrană de tip ACTI-DISK®, cuprinzând o membrană de policlorură de vinii și silice (foi MPS®, FMC Corp., Phila., PA) și pretratată cu polietilenimină. Reactorul constă dintr-o pompă dozatoare de fluid care poate pompa un debit maxim de 10 ml/minut, conectată prin racordul de refulare cu un tub de plastic, flexibil, transparent, la dispozitivul de intrare a membranei suport ACTI-DISK, care a fost conectată la rândul ei prin racordul de ieșire la un rezervor de 100 ml. Acest rezervor a fost conectat printr-un tub la racordul de aspirație a pompei. Membrana suport ACTI-DISK (produsă de Biosupport Materials, Chemical Products Group, FMC Corporation, Philadelphia, PA) constă dintro casetă de plastic cu diamtrul de 63,5 mm și grosime de 6,4 mm, având un dispozitiv de intrare pe o parte plană și un dispozitiv de ieșire la partea plană opusă.
în caseta de plastic sunt fixate 5 straturi de membrane poroase permeabile, constând dintr-o matrice polimerică hidrofobă de policlorură de vinii, o umplutură hidrofilă fin divizată de silice dispersată în matricea de rășină și o rețea de micropori interconectați, formată în acest material.
S-au introdus în rezervor 25 ml soluție apoasă de glutaraldehidă 5% (greutate/volum) în vederea legării azotului terminal al enzimei la PEI modificată din ACTI-DISK și s-au pompat cu un debit de 8 ml/minut prin matricea suport ACTI-DISK timp de 60 minute. Soluția a fost înlocuită cu 50 ml de apă care a fost pompată prin matricea suport ACTI-DISK timp de 30 minute. Apa a fost apoi evacuată din rezervor și s-au obținut 28 ml soluție apoasă de enzimă S-oxiniltrilaza prin extracție cu alcool etilic timp de 7 zile din vlăstare de iarbă hibridă de Sorg/Sudan (analiză proteinică: 5,4 mg proteină/ml;
analiza activității enzimei: 10,7 unități/mg proteină), a fost diluată cu soluție tampon de acetat de sodiu 0,05 M (pH = 5,4) până la completarea volumului de 100 ml și soluția obținută s-a introdus în rezervor.
Soluția a fost pompată prin matricea suport ACTI-DISK timp de 30 minute. După această perioadă de timp, debitul prin matricea suport ACTI-Disk a fost dirijat în reactorul atașat pompei pentru realizarea încărcăturii complete și uniforme cu enzimă. Pomparea soluției de enzimă a fost continuată pentru încă 30 minute suplimentare.
Matricea ACTI-DISK a fost spălată cu 50 ml apă timp de 30 minute, așa cum s-a descris mai sus.
După această perioadă de timp, caseta care conține matricea suport ACTIDISK în care a fost fixată enzimă se scoate din reactor și se depozitează într-un frigider cât timp este nevoie.
Treapta B. Prepararea S-ciano-3fenoxifenil-metanolului din acid cianhidric și 3-fenoxi-benzaldehidă în di-butil eter la temperatura mediului
Matricea suport ACTI-DISK din treapta A, conținând enzimă fixată, s-a montatîntr-un reactor cu pompă standard. Rezervorul acestui sistem a avut o capacitate de 250 ml sau mai mare. Apa reziduală a fost eliminată din matricea suport ACTI-DISK prin pomparea continuă a unei mici cantități de cfAn-butil eter prin matricea suport ACTI-DISK pe o perioadă de timp de 30 minute.
într-o campanie caracteristică de funcționare, rezervorul a fost încărcat cu o soluție de 5,1 greme (0,026) până la 24,8 grame (0,125 mol] de 3fenoxibenzaldehidă în 100 ml de cf/-n-butil. La aceasta s-au adăugat cu seringa 1,1 echivalenți molari de acid cianhidric. Soluția a fost agitată pentru asigurarea dizolvării complete a acidului cianhidric. A fost efectuată apoi vehicularea soluției prin matricea suport ACTI-DISK cu o viteză de pompare de la 1 ml/minut până la 5 ml/minut. Au fost prelevate probe periodic pentru analize, așa cum se descrie mai jos. După terminarea reacției (de obicei după 24 de ore), amestecul a fost evacuat
RO 112765 Bl din reactor. Matricea suport ACTI-DISK a fost spălată apoi prin pomparea prin ea a 25 ml de dAn-butil eter. După spălare, reactorul a fost pus în starea de a prelucra altă șarjă. 5
S-au efectut câte două analize asupra tuturor probelor extrase din amestecul de reacție. 0 analiză s-a efectuat pentru determinarea conversiei totale a 3-fenoxibenzaldehidei în ciano-3- io fenoxi-metanol, iar a doua analiză s-a efectuat pentru determinarea raportului S/R din produsul astfel obținut.
Pentru determinarea gradului de conversie în ciano-3-fenoxi-fenilj-metanol, 15 s-a introdus un eșantion de 0,1 ml din amestecul de reacție într-o cuvă a dispozitivului automat de probe a unui cromatograf de gaze, diluându-se până la cca 1 ml cu clorură de metilen. Acestei 20 soluții i s-a adăugat 1 ml de l\l,O-bis (trimetilsilil)trifluoracetamidă. Cuva a fost închisă și agitată, după care a stat 15 minute pentru liniștire. □ probă din această soluție a fost injectată într-un cromatograf 25 de gaze programat corespunzător.
Pentru determinarea raportului S/R, a ciano(3-fenoxifenil) metanolului, s-au introdus într-o cuvă, în picătură, 0,5 ml din amestecul de reacție. La aceasta s-au adăugat 3 picături de reactiv Mosher acid clorură (S-(-)-a-metoxi-a-trifluorornetil)fenil acid acetic, clorură) și cinci picături de piridină. Amestecul rezultat din reacție a fost agitat și apoi lăsat să reacționeze timp de o oră.
După această perioadă de timp se adaugă în amestecul de reacție 1 ml de apă și 1 ml de acetat de etil. Amestecul a fost agitat și stratul de acetat de etil a fost extras și introdus în cuva dispozitivului automat de probe al unui cromatograf de gaze. O probă prelevată din soluție a fost injectată la un cromatograf de gaze programat corespunzător.
Rezultatele obținute de la prepararea a șapte șarje de (S)-(ciano)(3fenoxi-feniljmetanol sunt prezentate mai jos.
Șarja Aldehidă (moli) Pompare (debit) ml/min Timp funcționare ore Conversie în produs % Raport S/R
1 0,026 1 24 76,3 91,4/8,6
2 0,026 5 23 91,8 91,4/8,6
3 0,026 5 19 88,4 92,4/7,6
4 0,026 5 24 91,2 93,7/6,3
5 0,125 5 24 94,0 91,0/9,0
6 0,125 5 24 90,7 85,7/14,3
7 0,026 5 24 80,7 75,5/24,6
Exemplul 2. Prepararea [S)-(ciano}· (3-fenoxifenilJmetanolului din acid cianhidric și 3-fenoxibenzaldehida în di-n-butil eter la temperatura de 6°C
Produsul (S)-(ciano)(3-fenoxifenil)metanol din acest exemplu a fost preparat prin procedeul descris în exemplul 1. Reactorul cu pompă diferă prin faptul că matricea suport ACTI-DISK conține o membrană formată numai dintr-un strat microporos permeabil pe care a fost fixată enzima S-oxinitrilaza. Matricea suport ACTIDISK utilizată în acest procedeu a fost imersată într-o baie la temperatura constantă menținută la temperatura de 6°C. Au fost prelucrate în total 1 6 șarje prin acest procedeu. Fiecare șarjă a constat din: 1, O gram (0,005 moli) de 3-fenoxibenzaldehidă și 0,4-0,5 ml (în exces) de acid cianhidric în 25 ml c/An-butil
RO 112765 Bl
16 eter. Debitul pompei a fost menținut la prepararea (S)-(ciano)-[3-fenoxifenil)me4 până la 5 ml/minut. Rezultatele celor tanolului sunt prezentate mai jos.
campanii de funcționare pentru
Șarja Timp de funcționare ore Conversia în produs % Raport (S/R)
8 23 70,0 95,0/5,0
9 26 65,8 93,2/6,8
10 24 62,8 94,0/6,0
11 24 62,8 93,0/7,0
12 27 63,9 93,0/7,0
13 24 65,9 93,4/6,6
14 36 76,9 93,0/7,0
15 24 75,0 93,3/6,5
16 23 78,2 95,0/5,0
17 24 77,1 96,0/4,0
18 23 76,4 95,0/5,0
19 24 72,7 94,5/5,5
20 24 69,2 93,0/7,0
21 24 70,2 90,0/10,0
22 24 68,2 87,0/13,0
23 224 56,1 81,0/19,0
Exemplul 3. Prepararea (S}-[ciano][3-fenoxifenil]metanolului din acis cianhidric și [3-fenoxibenzaldehida în terț-butil metil eter la temperatura ambiantă
Produsul [S)(ciano(3-fenoxifenil)metanol din acest exemplu a fost preparat așa cum s-a descris în exemplul 1. Reactorul cu pompă diferă prin faptul că matricea suport ACTI-DISK conține o membrană formată numai dintr-un singur strat microporos permeabil pe care a fost fixată (S)-oxinitrilaza. Au fost prelucrate în total 3 șarje. Fiecare șarjă constă din: 1 ,D gram [0,005 moli) de 3-fenoxibenzaldehida și 0,5 ml de acid cianhidric [acesta din urmă în exces în scopul asigurării conversiei complete și completării datorită evaporării). Solventul pentru prima șarjă a fost c/An-butil eterul în cantitate de 50 ml, iar solventul pentru următoarele două șarje a fost terț-tio-butil metil eterul în cantitate de 50 ml. Fiecare șarjă a fost prelucrată pe o perioadă de 24 ore.
Pompa a funcționat cu debit constant de 5 ml/minut. Rezultatele celor 3 campanii de funcționare pentru prepararea [S)-(ciano][3-fenoxifenil)metanolului sunt prezentate mai os:
Șarja Timp de funcționare Conversia în produs Raport S/R
24 n-Bu20 95,0% 93,0/7,0
25 t-BuOMe 74% 58,0/42,0
26 t-BuOMe 88,5% 53,0/47,0
RO 112765 Bl
Exemplul 4. Prepararea (S)-(ciano](3-fenoxifenil)metanolului din acid cianhidric și 3-fenoxibenzaldehida în acetonitril la temperatura ambiantă
Produsul (S]-(ciano](3-fenoxifenil]me- 5 tanolului din acest exemplu a fost preparat prin procedeul descris în exemplul 1. 0 șarjă constă din 25,0 grame (0,126 moli) de 3-fenoxibenzaldehidă și 6 ml (în exces) de acid cianhidric în 100 ml de acetonitril. io Reacția a fost efectuată timp de 24 ore cu un debit de 5 ml/minut. Conversia în produs a fost de 88,0%, iar raportul S/R al produsului a fost de 52,0/48,0.
Exemplul 5. Prepararea [S]- 15 (ciano)(3-fenoxifenil)metanolului din acid cianhidric și 3-fenoxibenzaldehida în tetrahidrofuran la temperatura ambiantă
Prod usul (S)-(ciano](3-f enoxif eniljmetanol din acest exemplu a fost preparat 20 prin procedeul prezentat în exemplul 1. □ singură șarjă constă din 5,0 grame (0,025 moli) de 3-fenoxibenzaldehidă și
1,5 ml de acid cianhidric (în exces] în 100 ml de tetrahidrofuran. Reacția s-a 25 desfășurat timp de 24 ore prin vehiculare cu debit de 5 ml/minut. Conversia în produs a fost de 82% și raportul S/R în produs a fost de 48,0/52,0.
Exemplul 6. Prepararea (SJ- 30 [ciano](3-fenoxifenil]metanolului din 3-fenoxibenzaldehida la temperatura ambiantă prin utilizarea acidului cianhidric drept solvent
Produsul(SHciano)(3-fenoxifenil)metanol din acest exemplu a fost preparat 35 printr-un procedeu descris în exemplul 1. Reactorul cu pompă diferă prin aceea că matricea suport ACTI-DISK conține numai un strat de membrană microporoasă permeabilă pe care s-a fixat enzima S- 40 oxinitrilaza. □ șarjă constă din 1,0 gram (0,005 moli] de 3-fenoxibenzaldehidă în ml de acid cianhidric. Reacția a fost efectuată timp de 24 ore prin pompare cu un debit de 5 ml/minut. Conversia în produs a fost de 96,7% și raportul S/R a fost de 58,1/41,9.
Exemplul 7. Prepararea (SJ(ciano)(3-fenoxifenil)metanolului din acid cianhidric și 3-fenoxibenzaldehida în eter diizopropilic la temperatura ambiantă
Următorul exemplu arată că solventul eter diizopropilic folosit de exemplu în brevetul US 4859784 (de mai sus] este ineficient ca solvent în acest procedeu.
(S]-(ciano](3-fenoxifenil)metanolul din acest exemplu a fost preparat printr-un procedeu așa cum a fost descris în exemplul 1. Reactorul cu pompă diferă prin aceea că matricea suport ACTI-DISK conține numai un strat de membrană microporoasă permeabilă pe care a fost fixată enzima S-oxinitrilaza. Au fost prelucrate numai două șarje. Fiecare șarjă constă din 2,1 grame (0,011 moli] de 3fenoxibenzaldehidă și 0,6 ml (în exces] de acid cianhidric. Solventul utilizat în prima șarjă a fost eterul c/An-butilic în cantitate de 50 ml, iar cel folosit în a doua șarjă a fost eterul diizopropilic în cantitate de 50 ml. înainte de utilizare 500 ml de eter diizopropilic a fost purificat prin trecerea pe o coloană de alumină neutră cu dimensiunile de 2,5 cm x 28 cm. Eterul diizopropilic a fost depozitat în atmosferă inertă de azot până în momentul utilizării. Reactorul cu pompă a fost spălat, între șarje, cu 75 ml de eter diizopropilic. Timpul de reacție al fiecărei șarje a fost de 23-24 ore. Debitul pompei a fost menținut la 5 ml/minut. Rezultatele prelucrării a două șarje pentru prepararea (S]-(ciano)(3fenoxifeniljmetanolului sunt prezentate mai jos:
Șarja Solvent Conversie în produs % Raport S/R
27 n-Bu20 89,5 94,0/6,0
28 i-Pr20 80,0 66,0/34,0
RO 112765 Bl

Claims (9)

1. Procedeu de preparare a (S)cianhidrinelor optic active, prin reacția unei aldehide cu acid cianhidric în mediu de 5 solvent organic, în prezența enzimei Soxinitrilaza,caracterizat prin aceea că, soluția de reactanți este trecută printr-o membrană poroasă, sau prin straturi de membrană poroasă, de care enzimă a fost io legată chimic, membrana menționată fiind constituită dintr-un liant de rășină polimerică, în care sunt dispersate particule de umplutură fine, divizate și având o rețea de pori substanțial interconectați. 15
2. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, membrana poroasă sau straturile de membrană au cel puțin o pereche de suprafețe opuse, și au o grosime prestabilită, particulele de 20 umplutură fiind prezente în membrana poroasă menționată în proporție de cel puțin 25% în greutate, iar distribuția dimensiunilor porilor menționați variind neuniform de-a latul fiecărei suprafețe și 25 de-a latul grosimii prestabilite, în domeniul de la 0,01 microni până la 100 microni, determinate porozimetric prin Metoda Incluziunii cu Mercur, membrana poroasă fiind permeabilă pentru fluxul de fluid prin 30 cel puțin una din suprafețele menționate.
3. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, membrana este formată dintr-un liant de policlorură de vinii și o umplutură de silice.
4. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, marginea membranei este fixată într-o casetă care previne curgerea fluidului pe la margini, caseta fiind prevăzută cu un dispozitiv de intrare cu acces la o suprafață a membranei și cu un dispozitiv de ieșire cu acces la partea opusă a suprafeței membranei pentru dirijarea reactanților prin porii membranei.
5. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, membrana este activată chimic cu un agent de fixare a enzimei astfel încât enzimă este legată covalent sau încrucișat la agentul de fixare.
6. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, membrana este activată chimic cu polietilenimină și glutaraldehidă.
7. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, solubilitatea aldehidei în apă este mai mică de 2,0 mg/ml.
8. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, aldehidă este 3-fenoxibenzaldehidă.
9. Procedeu conform revendicării
1, caracterizat prin aceea că, solventul organic este eterul JA/T-butilic.
RO93-00489A 1991-12-17 1992-11-13 Procedeu pentru prepararea (s)-cianhidrinelor optic active in prezenta enzimelor RO112765B1 (ro)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/809,803 US5177242A (en) 1991-12-17 1991-12-17 Process for preparing optically active cyanohydrins with enzymes
PCT/US1992/009945 WO1993012072A1 (en) 1991-12-17 1992-11-13 Process for preparing optically active cyanohydrins with enzymes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO112765B1 true RO112765B1 (ro) 1997-12-30

Family

ID=25202264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RO93-00489A RO112765B1 (ro) 1991-12-17 1992-11-13 Procedeu pentru prepararea (s)-cianhidrinelor optic active in prezenta enzimelor

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5177242A (ro)
EP (1) EP0590096B1 (ro)
JP (2) JPH0832243B2 (ro)
KR (1) KR970009155B1 (ro)
CN (1) CN1075166A (ro)
AR (1) AR247921A1 (ro)
AT (1) ATE135047T1 (ro)
AU (1) AU647982B2 (ro)
BG (1) BG61277B1 (ro)
BR (1) BR9205413A (ro)
CA (1) CA2093826C (ro)
CZ (1) CZ280422B6 (ro)
DE (2) DE69208878T2 (ro)
FI (1) FI931583A7 (ro)
HU (1) HUT71308A (ro)
IL (1) IL104046A0 (ro)
MW (1) MW4993A1 (ro)
MX (1) MX9206954A (ro)
OA (1) OA09873A (ro)
PL (1) PL170490B1 (ro)
RO (1) RO112765B1 (ro)
RU (1) RU2092558C1 (ro)
SK (1) SK36293A3 (ro)
TW (1) TW242166B (ro)
WO (1) WO1993012072A1 (ro)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT396252B (de) * 1991-10-31 1993-07-26 Chemie Linz Gmbh Enzymatisches verfahren zur enantioselektiven herstellung optisch aktiver cyanhydrine
GB9222253D0 (en) * 1992-10-23 1992-12-09 Celltech Ltd Chemical compounds
AT400035B (de) * 1993-06-01 1995-09-25 Chemie Linz Gmbh Enzymatisches verfahren zur herstellung aliphatischer s-cyanhydrine
DE4322064A1 (de) * 1993-07-02 1995-01-12 Chemie Linz Deutschland Enzymatisches Verfahren zur Herstellung aliphatischer S-Cyanhydrine
DE19529116A1 (de) * 1995-08-08 1997-03-06 Chemie Linz Deutschland Gmbh I (S)-Hydroxynitrillyase aus Hevea brasiliensis
ATE267264T1 (de) * 1996-02-09 2004-06-15 Degussa Verfahren zur herstellung von (s)-cyanhydrinen
CN1093531C (zh) * 1998-05-04 2002-10-30 中国科学院上海有机化学研究所 氰醇裂解酶催化合成光学活性氰醇化合物
CN1083009C (zh) * 1999-07-16 2002-04-17 中国科学院上海有机化学研究所 一种新酶源的醇腈裂解酶催化合成光学活性氰醇化合物的方法
EP1232277B1 (de) * 1999-11-25 2003-05-28 Degussa AG Verfahren zur herstellung von optisch aktiven cyanhydrinen
JP3709317B2 (ja) * 2000-01-12 2005-10-26 株式会社日本触媒 光学活性シアノヒドリンの合成方法
US7078225B2 (en) * 2000-06-02 2006-07-18 Nippon Shokubai Co., Ltd. Method for enzymatically producing an optically active cyanohydrin
WO2007026623A1 (ja) * 2005-08-30 2007-03-08 Sumitomo Chemical Company, Limited ３−アミノ−６−クロロピリダジンの製造方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3862030A (en) * 1972-12-13 1975-01-21 Amerace Esna Corp Microporous sub-micron filter media
IL46178A (en) * 1974-12-03 1978-10-31 Rehovot Res Prod Method for the performance of enzymatic reactions
US4102746A (en) * 1975-08-29 1978-07-25 Amerace Corporation Immobilized proteins
US4169014A (en) * 1976-08-16 1979-09-25 Amerace Corporation Method of immobilizing proteinaceous substances
US4795704A (en) * 1985-10-11 1989-01-03 Sepracor, Inc. Multiphase asymmetric membrane reactor systems
US4959467A (en) * 1985-11-27 1990-09-25 Allied-Signal Inc. Control of product selectivity in the addition of HCN to arabinose
US4900667A (en) * 1985-12-19 1990-02-13 Allied-Signal Inc. One carbon homologation of carbohydrates by transcyanohydrination
DE3701383A1 (de) * 1987-01-20 1988-07-28 Degussa Verfahren zur herstellung von optisch aktiven cyanhydrinen
US4800162A (en) * 1987-04-01 1989-01-24 Sepracor, Inc. Method for resolution of steroisomers in multiphase and extractive membrane reactors
DE3823864A1 (de) * 1988-01-29 1989-08-10 Kernforschungsanlage Juelich Enymatisches verfahren zur herstellung von optisch aktiven cyanhydrinen
DE3917374A1 (de) * 1988-07-14 1990-12-06 Forschungszentrum Juelich Gmbh Verfahren zur herstellung von s-cyanhydrinen
DK0446826T3 (da) * 1990-03-16 1996-02-12 Forschungszentrum Juelich Gmbh Fremgangsmåde til enzymatisk fremstilling af optisk aktive cyanhydriner
AT396252B (de) * 1991-10-31 1993-07-26 Chemie Linz Gmbh Enzymatisches verfahren zur enantioselektiven herstellung optisch aktiver cyanhydrine

Also Published As

Publication number Publication date
CA2093826A1 (en) 1993-06-18
FI931583A0 (fi) 1993-04-07
DE69208878D1 (de) 1996-04-11
ATE135047T1 (de) 1996-03-15
CA2093826C (en) 1995-08-29
EP0590096B1 (en) 1996-03-06
BG61277B1 (en) 1997-04-30
AU647982B2 (en) 1994-03-31
RU2092558C1 (ru) 1997-10-10
EP0590096A4 (en) 1994-02-18
WO1993012072A1 (en) 1993-06-24
US5177242A (en) 1993-01-05
SK36293A3 (en) 1993-10-06
EP0590096A1 (en) 1994-04-06
PL170490B1 (pl) 1996-12-31
HU9301020D0 (en) 1993-11-29
MX9206954A (es) 1993-06-01
BR9205413A (pt) 1994-05-31
FI931583L (fi) 1993-06-18
AU3141493A (en) 1993-07-19
DE590096T1 (de) 1994-07-28
IL104046A0 (en) 1993-05-13
JPH06506674A (ja) 1994-07-28
KR970009155B1 (ko) 1997-06-07
HUT71308A (en) 1995-11-28
DE69208878T2 (de) 1996-10-31
CN1075166A (zh) 1993-08-11
TW242166B (ro) 1995-03-01
BG97619A (bg) 1994-03-31
MW4993A1 (en) 1994-10-12
AR247921A1 (es) 1995-04-28
FI931583A7 (fi) 1993-06-18
OA09873A (en) 1994-09-15
CZ65193A3 (en) 1994-04-13
JPH05507736A (ja) 1993-11-04
CZ280422B6 (cs) 1996-01-17
JPH0832243B2 (ja) 1996-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zeng et al. Control of pore sizes in macroporous chitosan and chitin membranes
Zeng et al. Membrane chromatography: preparation and applications to protein separation
US3983053A (en) Coated adsorbent materials
EP0066165B1 (en) A totally porous activated gel
CA1131624A (en) Spherically shaped material comprising acylated product of de-n-acetylated chitin
Ulbricht et al. Ultrafiltration membrane surfaces with grafted polymer ‘tentacles’: preparation, characterization and application for covalent protein binding
RU2089283C1 (ru) Био-, гемосовместимые сорбенты на основе сверхсшитых полимеров стирола с модифицированной поверхностью, способ их получения (варианты) и способ получения матрицы сорбента
RO112765B1 (ro) Procedeu pentru prepararea (s)-cianhidrinelor optic active in prezenta enzimelor
EP1924345B1 (en) Process for cross-linking cellulose ester membranes
JPS62288602A (ja) キトサン変性物粒子の製造方法
US5096593A (en) Separation material derived from glucomannan for blood coagulation factor, preparation and use thereof
WO2011051145A1 (en) Enzyme-functionalized supports
FI67560C (fi) Foerbaettrat foerfarande foer framstaellning av agglomererad fibroes cellulosa
CA1229808A (en) Preparation of hydrophobic cotton cloth
JP4228498B2 (ja) ヘパリン吸着体、及びそれを用いたヘパリンの除去方法
JPH0448438B2 (ro)
JPS6115900A (ja) 変性セルロ−ス系多孔質膜
Piskin Potential sorbents for medical and some related applications
JPH0622629B2 (ja) ▲Ｉ▼▲ｇ▼Ｅ吸着材及び装置
JPS6216770A (ja) カ−ボン血液収着剤およびその製造法
JPS5936B2 (ja) 固定化酵素用担体およびその製造法
CS271590B1 (en) Carrier for affine chromatography and method of its preparation