ES2710289T3 - Anticuerpos anti-IL-23, composiciones, procedimientos y usos - Google Patents

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Abstract

Un anticuerpo para IL-23p19 aislado, en donde dicho anticuerpo se une a IL-23p19 humano o un fragmento del mismo en un epítopo que comprende los residuos de aminoácidos 93-102 de la SEC ID NO: 1.

Description

DESCRIPCION
Anticuerpos anti-IL-23, composiciones, procedimientos y usos
CAMPO DE LA INVENCION
La presente invencion se refiere a anticuerpos, que incluyen porciones especificadas o variantes, espedficos para al menos una protema IL-23 o fragmento de la misma, ademas de a anticuerpos antiidiotfpicos, y a acidos nucleicos que codifican anticuerpos anti-IL-23p19, acidos nucleicos complementarios, vectores, celulas huesped y procedimientos de preparacion y uso de los mismos, que incluyen formulaciones terapeuticas, administracion y dispositivos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
La interleucina (IL)-12 es una citocina heterodimerica secretada que comprende 2 subunidades de protemas glicosiladas ligadas por disulfuro, designadas p35 y p40 por sus pesos moleculares aproximados. IL-12 se produce principalmente por celulas presentadoras de antigeno y acciona la inmunidad mediada por celulas uniendose a un complejo de receptor de dos cadenas que se expresa sobre la superficie de linfocitos T o linfocitos citoltticos espontaneos (NK). La cadena del receptor beta-1 de IL-12 (IL-12RI31) se une a la subunidad p40 de IL-12, proporcionando la interaccion primaria entre IL-12 y su receptor. Sin embargo, es la ligacion de IL-12p35 de la segunda cadena del receptor, IL-12RI32, la que confiere senalizacion intracelular (por ejemplo, fosforilacion de STAT4) y activacion de la celula que lleva el receptor (Presky y col., 1996). Se cree que la senalizacion de IL-12 simultanea a la presentacion de antigeno provoca la diferenciacion de linfocitos T hacia el fenotipo 1 de linfocitos T colaboradores (Th1), caracterizado por la produccion de interferon gamma (IFNy) (Trinchieri, 2003). Se cree que las celulas Th1 promueven la inmunidad a algunos patogenos intracelulares, generan isotipos de anticuerpo de fijacion a complemento y contribuyen a la inmunosupervision de tumores. Por tanto, se cree que IL-12 es un componente significativo para los mecanismos inmunes de defensa del huesped.
Se descubrio que la subunidad de protema p40 de IL-12 tambien puede asociarse con una subunidad de protema separada, designada p19, para formar una citocina novedosa, IL-23 (Oppman y col., 2000; documentos EP1072610; US 6.495.667; Oppman y col., 2003; Sehy y col. 2005). IL-23 tambien senaliza mediante un complejo de receptor de dos cadenas. Como la subunidad p40 es compartida entre IL-12 y IL-23, de esto resulta que la cadena de IL-12Rp1 tambien sea compartida entre IL-12 y iL-23. Sin embargo, es la ligacion de IL-23p19 del segundo componente del complejo de receptor de IL-23, IL-23R, la que confiere senalizacion intracelular espedfica para IL-23 (por ejemplo, fosforilacion de STAT3) y posterior produccion de IL-17 por linfocitos T (Parham y col., 2002; Aggarwal y col. 2003). Estudios recientes han demostrado que las funciones biologicas de IL-23 son distintas de las de IL-12, a pesar de la similitud estructural entre las dos citocinas (Langrish y col., 2005).
La regulacion anormal de IL-12 y poblaciones de celulas Th1 se ha asociado a muchas enfermedad mediadas por celulas, ya que la neutralizacion de IL-12 por anticuerpos es eficaz en el tratamiento de modelos animales de psoriasis, esclerosis multiple (EM), artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, diabetes mellitus dependiente de insulina (tipo 1) y uveitis (Leonard y col., 1995, Hong y col., 1999; Malfait y col., 1998; Davidson y col., 1998). Sin embargo, como estos estudios eligieron como diana la subunidad p40 compartida, tanto IL-12 como IL-23 se neutralizaron in vivo. Por tanto, no estaba claro si IL-12 o IL-23 estaban mediando en la enfermedad, o si ambas citocinas necesitaban inhibirse para lograr la supresion de la enfermedad. Estudios recientes han confirmado mediante ratones deficientes en IL-23p19 o neutralizacion de anticuerpos espedficos de IL-23 que la inhibicion de IL-23 puede proporcionar beneficio equivalente como estrategias anti-IL-12p40 (Cua y col., 2003, Murphy y col., 2003, Benson y col. 2004, documento US 2005/0137385). Por tanto, hay cada vez mas pruebas de que la funcion espedfica de IL-23 en enfermedad inmunorrelacionada (por ejemplo, documentos W02004/042009 y W02004/071517) y otra enfermedad (por ejemplo, documento W02004/081190). La neutralizacion de lL-23 sin inhibicion de rutas de IL-12 podna entonces proporcionar terapia eficaz de enfermedad inmunorrelacionada con impacto limitado sobre el mecanismo inmune de defensa del huesped importante. Esto representana una mejora significativa con respecto a las presentes opciones terapeuticas.
RESUMEN DE LA INVENCION
La presente invencion proporciona anticuerpos de mairnfero aislados que incluyen, sin limitacion, humanos, que se unen a la subunidad p19 de IL-23, anticuerpos anti-IL-23p19 (tambien denominados anticuerpos para IL-23p19), inmunoglobulinas, fragmentos, productos de escision y otras porciones especificadas y variantes de los mismos, ademas de composiciones de anticuerpo anti-IL-23p19, acidos nucleicos codificantes o complementarios, vectores, celulas huesped, composiciones, combinaciones, formulaciones, dispositivos, animales transgenicos, plantas transgenicas y procedimientos de preparacion y uso de los mismos.
En un primer aspecto, la invencion proporciona un anticuerpo para IL-23p19 aislado, en el que dicho anticuerpo se une a IL-23P19 humana o un fragmento de la misma en un epitope que comprende los residuos de aminoacidos 93-102 de la SEC ID N°: 1.
En un segundo aspecto, la invencion proporciona un acido nucleico que codifica un anticuerpo de la invencion.
En un tercer aspecto, la invencion proporciona una celula huesped que comprende un acido nucleico de la invencion.
En un cuarto aspecto, la invencion proporciona un procedimiento para producir un anticuerpo de la invencion que comprende traducir una molecula de acido nucleico de la invencion bajo condiciones in vitro, in vivo o in situ, de tal manera que el anticuerpo para IL-23p19 se expresa en cantidades detectables o recuperables.
En un quinto aspecto la invencion proporciona una composicion que comprende un anticuerpo de la invencion y al menos un vehmulo o diluyente farmaceuticamente aceptable.
En un sexto aspecto la invencion proporciona un dispositivo medico que comprende un anticuerpo de la invencion.
DESCRIPCION DE LAS FIGURAS
La Figura 1 muestra que anticuerpos para IL23p19 se unen espedficamente a hrIL-23 y no hrIL-12 o monomero de hrp40. Se muestra que un anticuerpo anti-IL12/IL23p40 se une a IL-23, IL-12 y el monomero p40. Se muestra que un anticuerpo anti-IL12 (20C2) solo se une a IL-12.
La Figura 2 muestra la union de IL-23 a anticuerpos para IL-23p19 inmovilizados en placa de la invencion en que la que los cuatro anticuerpos probados muestran curvas de union similares.
La Figura 3A muestra que anticuerpos C1249 y C1269 bloquean la union de IL-23/IL-23R normal.
La Figura 3B muestra que anticuerpos C1273 y C1275 bloquean la union de IL-23/IL-23R normal.
La Figura 4 muestra que los anticuerpos para IL-23p19 de la invencion inhiben la produccion de IL-17 mediada por hrIL-23.
La Figura 5 muestra el impacto de mutaciones de IL-23 sobre la union de C1249, C1269 y CNTO 209.
La Figura 6 muestra un modelo estructural de IL-23 humana en una representacion en cinta.
La Figura 7 muestra los resultados de analisis de competencia de anticuerpos C1249 y C1269.
La Figura 8A muestra un analisis de ELISA de la union de protemas mutantes IL-23 al anticuerpo C1249. La Figura 8B muestra un analisis de ELISA de la union de protemas mutantes IL-23 al anticuerpo C1269. La Figura 9 muestra una comparacion de la actividad de la union relativa para protemas mutantes IL-23 que se unen a C1249, C1269 y anticuerpo de control.
DESCRIPCION DE LA INVENCION
La presente invencion proporciona anticuerpos anti-IL-23p19 aislados, recombinantes y/o sinteticos que incluyen, sin limitacion, anticuerpos antiidiotfpicos de mairnfero (por ejemplo, anticuerpos humanos) y para IL-23p19 para los mismos, ademas de composiciones y moleculas de acidos nucleicos codificantes que comprenden al menos un polinucleotido que codifica al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 o anticuerpo antiidiotfpico. La presente invencion incluye adicionalmente, pero no se limita a, procedimientos de preparacion y uso de tales acidos nucleicos y anticuerpos y anticuerpos antiidiotfpicos, que incluyen composiciones de diagnostico y terapeuticas, procedimientos y dispositivos.
Como se usa en el presente documento, un “anticuerpo anti-IL-23p19”, “anticuerpo para IL-23p19”, “porcion de anticuerpo anti-IL-23p19” o “fragmento de anticuerpo anti-IL-23p19” y/o “variante de anticuerpo anti-IL-23p19” y similares incluye cualquier molecula que contenga protema o peptido que comprende al menos una parte de una molecula de inmunoglobulina tal como, pero no se limita a, al menos una region determinante de la complementariedad (CDR) de una cadena pesada o ligera o una porcion de union a ligando de la misma, una region variable de la cadena pesada o la cadena ligera, una region constante de la cadena pesada o la cadena ligera, una region estructural, o cualquier porcion de las mismas, o al menos una porcion de un receptor de IL-23 o protema de union, que puede incorporarse en un anticuerpo de la presente invencion. Tal anticuerpo afecta opcionalmente adicionalmente a un ligando espedfico tal como, pero no se limita a, cuando tal anticuerpo modula, disminuye, aumenta, antagoniza, agoniza, mitiga, alivia, bloquea, inhibe, deroga y/o interfiere con al menos una actividad o union de IL-23, o con actividad o union de receptor de IL-23, in vitro, in situ y/o in vivo. Como ejemplo no limitante, un anticuerpo anti-IL-23p19 adecuado, porcion especificada o variante de la presente invencion puede unirse a al menos una molecula de IL-23, o porciones, variantes especificadas o dominios de los mismos. Un anticuerpo anti-IL-23p19 adecuado, porcion especificada, o variante, tambien puede afectar opcionalmente a al menos una de actividad o funcion de IL-23pl9 tal como, pero no se limita a, smtesis de ARN, ADN o protemas, liberacion de IL-23, senalizacion de receptores de IL-23, escision de IL-23 de membranas, actividad de IL-23, produccion y/o smtesis de IL-23.
El termino “anticuerpo” pretende englobar adicionalmente anticuerpos, fragmentos de digestion, porciones especificadas y variantes de los mismos que incluyen, sin limitacion, mimeticos de anticuerpos o que comprenden porciones de anticuerpos que imitan la estructura y/o funcion de un anticuerpo o fragmento especificado o porcion del mismo que incluye, sin limitacion, anticuerpos monocatenarios, anticuerpos de un unico dominio y fragmentos de los mismos. Fragmentos funcionales incluyen fragmentos de union a antfgeno que se unen a una IL-23p19 humana. Por ejemplo, fragmentos de anticuerpos que pueden unirse a IL-23p19 o porciones de los mismos que incluyen, pero no se limitan a, Fab (por ejemplo, por digestion con papama), Fab' (por ejemplo, por digestion con pepsina y reduccion parcial) y F(ab')2 (por ejemplo, por digestion con pepsina), facb (por ejemplo, por digestion con plasmina), pFc' (por ejemplo, por digestion con pepsina o plasmina), Fd (por ejemplo, por digestion con pepsina, reduccion y reagregacion parcial), fragmentos Fv o scFv (por ejemplo, por tecnicas de biologfa molecular), estan englobados por la invencion (vease, por ejemplo, Colligan, Immunology, arriba).
Tales fragmentos pueden producirse por escision enzimatica, tecnicas sinteticas o recombinantes, como se conoce en la tecnica, y/o como se describe en el presente documento. Los anticuerpos tambien pueden producirse en una variedad de formas truncadas usando genes de anticuerpo en los que uno o mas codones de terminacion han sido introducidos en la direccion 5' del sitio de terminacion natural. Por ejemplo, un gen de combinacion que codifica una porcion de la cadena pesada de F(ab')2 puede disenarse para incluir secuencias de ADN que codifican el dominio CH1 y/o la region bisagra de la cadena pesada. Las diversas porciones de anticuerpos pueden unirse juntas qdmicamente por tecnicas convencionales, o pueden prepararse como protema contigua usando tecnicas de ingeniena genetica.
El termino “anticuerpo humano”, como se usa en el presente documento, esta previsto que incluya anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de o estrechamente correspondientes a las secuencias de inmunoglobulina de la lmea germinal humana. Los anticuerpos humanos de la invencion pueden incluir residuos de aminoacidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de la lmea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagenesis al azar o espedficas para sitio in vitro o por mutacion somatica in vivo). Por tanto, como se usa en el presente documento, el termino “anticuerpo humano” se refiere a un anticuerpo en el que sustancialmente cada parte de la protema (por ejemplo, CDR, region estructural, dominios Cl , Ch (por ejemplo, Ch 1, Ch2, Ch 3), bisagra, (Vl , Vh )) es sustancialmente similar a un anticuerpo de la lmea germinal humana. Los anticuerpos humanos se han clasificado en agrupaciones basandose en sus similitudes de secuencias de aminoacidos, vease, por ejemplo, http://people.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s/. Por tanto, usando una busqueda de similitud de secuencias, un anticuerpo con secuencia lineal similar puede elegirse como molde para crear “anticuerpos humanizados”.
La “humanizacion” (tambien llamada remodelacion o injerto de CDR) es ahora una tecnica bien establecida para reducir la inmunogenicidad de anticuerpos monoclonales (mAb) de fuentes xenogeneicas (comunmente de roedor) y para mejorar las funciones efectoras (ADCC, activacion del complemento, union de C1q). El mAb manipulado se manipula usando las tecnicas de molecular biologfa; sin embargo, el simple injerto de CDR de las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de roedor en regiones estructurales humanas frecuentemente produce perdida de afinidad de union y/o especificidad del mAb original. Con el fin de humanizar un anticuerpo, el diseno del anticuerpo humanizado incluye variaciones tales como sustituciones de aminoacidos conservativas en residuos de las CDR, y retro-sustitucion de residuos del mAb de roedor en las regiones estructurales humanas (retro-mutaciones). Las posiciones pueden distinguirse o identificarse por comparacion de secuencias para analisis estructural o por analisis de un modelo de homologfa de la estructura 3D de las regiones variables. El procedimiento de maduracion por afinidad ha usado mas recientemente bibliotecas de fagos para variar los aminoacidos en posiciones elegidas. Similarmente, se han usado muchos enfoques para elegir las regiones estructurales humanas mas apropiadas en las que injertar las CDR de roedor. A medida que aumentan los conjuntos de datos de parametros conocidos para estructuras de anticuerpo, asf aumenta la sofisticacion y el refinamiento de estas tecnicas. Pueden usarse secuencias consenso o de la lmea germinal de un unico anticuerpo o fragmentos de las secuencias de la region estructural dentro de cada region variable de la cadena ligera o pesada de varios mAb humanos diferentes. Otro enfoque para la humanizacion es modificar solo residuos superficiales de la secuencia de roedor con los residuos mas comunes encontrados en mAb humanos, y se ha llamado “acondicionamiento superficial” o “inactivacion”. Secuencias de Ig humana conocidas se desvelan, por ejemplo, w w w .n c b i.n lm .n ih .g o v /e n tre z /q u e ry .fc g i;w w w .n c b i.n ih .g o v / ig b la s t;www.atcc.org/phage/hdb.html; www.kabatdatabase.com/top.html;www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;www.appliedbiosystems.com; www.
biodesign.com; antibody.bath.ac.uk; www.unizh.ch;www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s; Kabat y col., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983).Frecuentemente, el anticuerpo humano o humanizado es sustancialmente no inmunogenico en seres humanos.
Similarmente, los anticuerpos designaron primate (mono, babuino, chimpance, etc.), roedor (raton, rata, conejo, cobaya, hamster, y similares) y otros mairnferos designan tales especies, sub-genero, genero, sub-familia y anticuerpos espedficos para familia. Ademas, anticuerpos quimericos pueden incluir cualquier combinacion de los anteriores. Tales cambios o variaciones retienen o reducen opcionalmente y preferentemente la inmunogenicidad en seres humanos u otras especies con respecto a anticuerpos no modificados. Por tanto, un anticuerpo humano es distinto de un anticuerpo quimerico o humanizado.
Se muestra que un anticuerpo humano puede producirse por un animal no humano o celula procariota o eucariota que puede expresar genes de inmunoglobulina humana funcionalmente reorganizada (por ejemplo, cadena pesada y/o cadena ligera).
Ademas, cuando un anticuerpo humano es un anticuerpo monocatenario o de un unico dominio, puede comprender un peptido ligador que no se encuentra en anticuerpos humanos nativos. Por ejemplo, un Fv puede comprender un peptido ligador, tal como dos a aproximadamente ocho residuos de glicina u otros residuos de aminoacidos, que conecta la region variable de la cadena pesada y la region variable de la cadena ligera. Se considera que tales peptidos ligadores son de origen humano.
Tambien pueden usarse anticuerpos biespedficos, heteroespedficos, heteroconjugados o similares que son anticuerpos monoclonales, preferentemente, humanos o humanizados, que tienen especificidades de union por al menos dos antfgenos diferentes. En el presente caso, una de las especificidades de union es para al menos una subunidad de la protema IL-23p19, la otra es para cualquier otro antfgeno. Procedimientos para la preparacion de anticuerpos biespedficos se conocen en la tecnica. Tradicionalmente, la produccion recombinante de anticuerpos biespedficos se basa en la co-expresion de dos pares de cadena pesada-cadena ligera de la inmunoglobulina, en los que las dos cadenas pesadas tienen diferentes especificidades (Milstein y Cuello, Nature 305:537 (1983)). Debido a la seleccion al azar de cadenas pesadas y ligeras de la inmunoglobulina, estos hibridomas (cuadromas) producen una posible mezcla de 10 moleculas de anticuerpos diferentes, de las que solo una tiene la estructura biespedfica correcta. La purificacion de la molecula correcta se hace normalmente por etapas de cromatograffa de afinidad. Procedimientos similares se desvelan, por ejemplo, en el documento WO 93/08829, patentes de EE.UU. n° 6210668, 6193967, 6132992, 6106833, 6060285, 6037453, 6010902, 5989530, 5959084, 5959083, 5932448, 5833985, 5821333, 5807706, 5643759, 5601819, 5582996, 5496549, 4676980, documentos WO 91/00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker y col., EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh y col., Methods in Enzymology 121:210 (1986).
Los anticuerpos anti-IL-23p19 utiles en los procedimientos y composiciones de la presente invencion pueden caracterizarse opcionalmente por union de alta afinidad con IL-23p19 y, opcionalmente y preferentemente, por tener baja toxicidad. En particular, un anticuerpo, fragmento especificado o variante de la invencion, en el que componentes individuales tales como la region variable, region constante y region estructural, individualmente y/o colectivamente, poseen opcionalmente y preferentemente baja inmunogenicidad, es util en la presente invencion. Los anticuerpos que pueden usarse en la invencion se caracterizan opcionalmente por su capacidad para tratar pacientes durante periodos prolongados con alivio medible de smtomas y toxicidad baja y/o aceptable. Inmunogenicidad baja o aceptable y/o alta afinidad, ademas de otras propiedades adecuadas, pueden contribuir a los resultados terapeuticos alcanzados. “Baja inmunogenicidad” se define en el presente documento como la incidencia de niveles valorables de anticuerpos para el anticuerpo anti-IL-23p19 en pacientes tratados con anticuerpo anti-IL-23p19 que se produce en menos del 25% de pacientes tratados, preferentemente en menos del 10% de pacientes tratados con la dosis recomendada para el transcurso recomendado de terapia durante el periodo de tratamiento.
Los acidos nucleicos aislados de la presente invencion pueden usarse para la produccion de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 o variante especificada del mismo, que puede usarse para medir o efectuar en una celula, tejido, organo o animal (incluyendo mamfferos y seres humanos), para diagnosticar, monitorizar, modular, tratar, aliviar, ayudar a prevenir la incidencia de, o reducir los smtomas de, al menos una afeccion relacionada con IL-23, seleccionada de, pero no se limita a, al menos uno de un trastorno o enfermedad inmunitaria, un trastorno o enfermedad cardiovascular, un trastorno o enfermedad infecciosa, maligna y/o neurologica, u otra afeccion conocida o relacionada con IL-23 especificada.
Un procedimiento tal puede comprender administrar una cantidad eficaz de una composicion o una composicion farmaceutica que comprende al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 a una celula, tejido, organo, animal o paciente en necesidad de tal modulacion, tratamiento, alivio, prevencion o reduccion en smtomas, efectos o mecanismos. La cantidad eficaz puede comprender una cantidad de aproximadamente 0,001 a 500 mg/kg por administracion unica (por ejemplo, bolo), multiple o continua, o para lograr una concentracion en suero de 0,01-5000 |jg/ml de concentracion en suero por administracion unica, multiple o continua, o cualquier intervalo eficaz o valor en su interior, como se hace y se determina usando procedimientos conocidos, como se describen en el presente documento o son conocidos en las ciencias relevantes.
Anticuerpos de la presente invencion - Produccion y generacion
Al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 de la presente invencion puede producirse opcionalmente por una lmea celular, una lmea celular mixta, una celula inmortalizada o poblacion clonica de celulas inmortalizadas, como es muy conocido en la tecnica. Vease, por ejemplo, Ausubel y col., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2o0l); Sambrook y col., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a edicion, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow y Lane, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan y col., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan y col., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).
Los anticuerpos que son espedficos para protemas IL-23p19 humanas o fragmentos de las mismas pueden producirse contra un antfgeno inmunogenico apropiado tal como una protema IL-23p19 aislada y/o una parte de la misma (incluyendo moleculas sinteticas tales como peptidos sinteticos). Otros anticuerpos espedficos o generales que incluyen, sin limitacion, anticuerpos de mairnfero, pueden producirse similarmente. La preparacion de antfgenos inmunogenicos y la produccion de anticuerpos monoclonales puede realizarse usando cualquier tecnica adecuada.
En un enfoque, un hibridoma se produce fusionando una lmea celular inmortal adecuada (por ejemplo, una lmea de celulas de mieloma tal como, pero no se limita a, Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, NS1, NS2, AE-1, L,5, L243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144, ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMALWA, NEURO 2A, o similares, o heteromilomas, productos de fusion de los mismos, o cualquier celula o celula de fusion derivada de las mismas, o cualquier otra lmea celular adecuada como se conoce en la tecnica) (vease, por ejemplo, www.atcc.org, www.lifetech.com., y similares), con celulas productoras de anticuerpos tales como, pero no se limitan a, bazo aislado o clonado, sangre periferica, linfa, tonsil, u otras celulas inmunes o que contienen linfocitos B, o cualquier otra celula que exprese secuencias constantes o variables de la cadena pesada o ligera o de la region estructural o de CDR, tanto como acido nucleico endogeno o heterologo, como ADN recombinante o endogeno, vmco, bacteriano, de alga, procariota, de anfibio, de insecto, de reptil, de pez, de marnffero, de roedor, equino, ovino, de cabra, de oveja, de primate, eucariota, ADN genomico, ADNc, ADNr, ADN o ARN mitocondrial, a Dn o ARN de cloroplasto, ARNnh, ARNm, ARNt, mono, bi o tricatenario, hibridado, y similares, o cualquier combinacion de los mismos. Vease, por ejemplo, Ausubel, arriba, y Colligan, Immunology, arriba, capttulo 2.
Tambien pueden obtenerse celulas productoras de anticuerpos de la sangre periferica o, preferentemente, el bazo o ganglios linfaticos, de seres humanos u otros animales adecuados que han sido inmunizados con el antfgeno de interes. Cualquier otra celula huesped adecuada tambien puede usarse para expresar acido nucleico heterologo o endogeno que codifica un anticuerpo, fragmento especificado o variante del mismo, de la presente invencion. Las celulas fusionadas (hibridomas) o celulas recombinantes pueden aislarse usando condiciones de cultivo selectivas u otros procedimientos conocidos adecuados, y se clonan por dilucion limitante o clasificacion de celulas, u otros procedimientos conocidos. Celulas que producen anticuerpos con la especificidad deseada pueden seleccionarse por un ensayo adecuado (por ejemplo, ELISA).
Procedimientos para manipular o humanizar anticuerpos no humanos o humanos tambien pueden usarse y son muy conocidos en la tecnica. Un anticuerpo humanizado o manipulado puede tener uno o mas residuos de aminoacidos de una fuente que es no humana, por ejemplo, pero no se limita a, raton, rata, conejo, primate no humano u otro mamffero. Estos residuos de aminoacidos no humanos estan sustituidos por residuos que frecuentemente se denominan residuos “de importacion”, que se toman normalmente de un dominio variable “de importacion”, constante u otro de una secuencia humana conocida.
Secuencias de Ig humana conocidas se desvelan, por ejemplo, www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi; w w w .n c b i.n ih .g o v /ig b la s t;w w w .a tc c .o rg /p h a g e /h d b .h tm l;www.mrc-cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.phg; www.kabatdatabase.com/top.html;ftp.ncbi.nih.gov/repository/kabat; w w w .sc iquest.com ;www.abcam.com; w w w .a n t ib o d y re s o u r c e .c o m /o n l in e c o m p .h tm l;www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html; w w w .w h f r e e m a n .c o m / im m u n o lo g y /C H 05 /k u b y 05.h tm ;www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab; w w w .p a th .c a m .a c .u k /~ m rc 7 /m ik e im a g e s .h tm l;m c b .h a rv a rd .e d u /B io L in k s /Im m u n o lo g y .h tm l; www.im m unologylink.com;pathbox.wustl.edu/-hcenter/index.htm l; www.appliedbiosystems.com; www.nal.usda.gov/aw ic/pubs/antibody;www.rn.ehim e-u.ac.jp/~yasuhito/E lisa.htm l;www.biodesign.com; w w w .cancerresearchuk.org ;w w w .b io tech.u fl.edu;www.isac-net.org; baserv.uci.kun.nl/-.jraats/linksl.html; www.recab.uni-hd.de/im m uno.bm e.nwu.edu;www.m rc-cpe.cam .ac.uk;www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; http://www.bioinf.org.uk/abs; antibody.bath.ac.uk; w w w . u n iz h . c h ; www.cryst.bbk.ac.uk/-ubcg07s; www.nimr.mrc.ac.uk/cc/ccaewg/ccaewg.html; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html; www.bt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html;www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html;www.jerini.de; Kabat y col., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983).
Tales secuencias importadas pueden usarse para reducir la inmunogenicidad o reducir, potenciar o modificar la union, afinidad, constante de asociacion, constante de disociacion, avidez, especificidad, semivida, o cualquier otra caractenstica adecuada, como se conoce en la tecnica. En general, los residuos de CDR estan directamente y mas sustancialmente implicados en influir la union a antigeno. Por consiguiente, parte o todas las secuencias de CDR no humanas o humanas se mantienen mientras que las secuencias no humanas de las regiones variables y constantes pueden sustituirse con aminoacidos humanos u otros.
Los anticuerpos tambien pueden humanizarse o manipularse opcionalmente o los anticuerpos humanos pueden manipularse con retencion de alta afinidad por el antigeno y otras propiedades biologicas favorables. Para lograr este objetivo, anticuerpos humanizados (o humanos) pueden prepararse opcionalmente mediante un procedimiento de analisis de las secuencias parentales y diversos productos humanizados u manipulados conceptuales usando modelos tridimensionales de las secuencias parentales, manipuladas y humanizadas. Modelos de inmunoglobulina tridimensional estan comunmente disponibles y son familiares para aquellos expertos en la materia. Estan disponibles programas informaticos que ilustran y muestran estructuras conformacionales tridimensionales probables de secuencias candidatas seleccionadas de inmunoglobulina. La inspeccion de esta muestra permite el analisis de la funcion probable de los residuos en el funcionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidata, es decir, el analisis de residuos que influyen en la capacidad de la inmunoglobulina candidata para unirse a su antigeno.
De esta forma, los residuos de la region estructural (FR) pueden seleccionarse y combinarse de las secuencias consenso y de importacion de manera que se logre la caractenstica de anticuerpo deseada, tal como elevada afinidad por el (los) antfgeno(s) diana.
Ademas, el anticuerpo para IL-23p19 de la presente invencion puede comprender una region estructural de la cadena ligera de la lmea germinal humana. En realizaciones particulares, la secuencia de la lmea germinal de la cadena ligera esta seleccionada de secuencias VK humanas que incluyen, pero no se limitan a, A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3, A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, O1, O11, O12, O14, O18, O2, O4 y O8. En ciertas realizaciones, esta region estructural de la lmea germinal humana de la cadena ligera esta seleccionada de V1-11, V1-13, V1-16, V1-17, V1-18, V1-19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, V1-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-4, V4-1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4 y V5-6. Vease el documento PCT WO 2005/005604 para una descripcion de las diferentes secuencias de la lmea germinal.
En otras realizaciones, el anticuerpo para IL-23 de la presente invencion puede comprender una region estructural de la cadena pesada de la lmea germinal humana. En realizaciones particulares, esta region estructural de la lmea germinal humana de la cadena pesada esta seleccionada de VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64, VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1 y VH7-81. Vease el documento PCT WO 2005/005604 para una descripcion de las diferentes secuencias de la lmea germinal.
En realizaciones particulares, la region variable de la cadena ligera y/o region variable de la cadena pesada comprende una region estructural o al menos una parte de una region estructural (por ejemplo, que contiene 2 o 3 subregiones, tales como FR2 y FR3).
En ciertas realizaciones, al menos FRL1, FRL2, FRL3 o FRL4 es completamente humana. En otras realizaciones, al menos FRH1, FRH2, FRH3 o FRH4 es completamente humana. En algunas realizaciones, al menos FRL1, FRL2, FRL3 o FRL4 es una secuencia de la lmea germinal (por ejemplo, lmea germinal humana) o comprende secuencias consenso humanas para la region estructural particular (facilmente disponible en las fuentes de secuencias de Ig humana conocidas descritas anteriormente). En otras realizaciones, al menos FRH1, FRH2, FRH3 o FRH4 es una secuencia de la lmea germinal (por ejemplo, lmea germinal humana) o comprende secuencias consenso humanas para la region estructural particular. En realizaciones preferidas, la region estructural es una region estructural humana.
La humanizacion o manipulacion de anticuerpos de la presente invencion puede realizarse usando cualquier procedimiento conocido tal como, pero no se limita a, aquellos descritos en Winter (Jones y col., Nature 321:522 (1986); Riechmann y col., Nature 332:323 (1988); Verhoeyen y col., Science 239:1534 (1988)), Sims y col., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chothia y Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Carter y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:4285 (1992); Presta y col., J. Immunol. 151:2623 (1993), patentes de EE.UU. n°: 5723323, 5976862, 5824514, 5817483, 5814476, 5763192, 5723323, 5766886, 5714352, 6204023, 6180370, 5693762, 5530101, 5585089, 5225539; documento 4816567, documentos PCT/: US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; documento WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, EP 229246.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo comprende una region Fc alterada (por ejemplo, mutada). Por ejemplo, en algunas realizaciones, la region Fc ha sido alterada para reducir o potenciar las funciones efectoras del anticuerpo. En algunas realizaciones, la region Fc es un isotipo seleccionado de IgM, IgA, IgG, IgE, u otro isotipo.
Alternativamente o adicionalmente puede ser util combinar modificaciones de aminoacidos con una o mas modificaciones de aminoacidos adicionales que alteran la union de C1q y/o la funcion de citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) de la region Fc de una molecula de union a IL-23p19. El polipeptido de union de interes particular puede ser uno que se une a C1q y muestra citotoxicidad dependiente del complemento. Polipeptidos con actividad de union a C1q pre-existente, que opcionalmente adicionalmente tienen la capacidad para mediar en CDC, pueden modificarse de forma que una o ambas de estas actividades sean potenciadas. Modificaciones de aminoacidos que alteran C1q y/o modifican su funcion de citotoxicidad dependiente del complemento se describen, por ejemplo, en el documento WO/0042072.
Como se ha desvelado anteriormente, puede disenarse una region Fc del anticuerpo para IL-23p19 de la presente invencion con funcion efectora alterada, por ejemplo, modificando la union a C1q y/o union a FcyR y cambiando asf la actividad de CDC y/o actividad de ADCC. Las “funciones efectoras” son responsables de activar o disminuir una actividad biologica (por ejemplo, en un sujeto). Ejemplos de funciones efectoras incluyen, pero no se limitan a: union a C1q; citotoxicidad dependiente del complemento (CDC); union a receptor de Fc; citotoxicidad mediada por celulas dependiente de anticuerpo (ADCC); fagocitosis; regulacion por disminucion de receptores de la superficie celular (por ejemplo, receptor de linfocitos B; BCR), etc. Tales funciones efectoras pueden requerir que la region Fc se combine con un dominio de union (por ejemplo, un dominio variable de anticuerpo) y pueda evaluarse usando diversos ensayos (por ejemplo, ensayos de union a Fc, ensayos de ADCC, ensayos de CDC, etc.).
Por ejemplo, puede generarse una region Fc de variante del anticuerpo para IL-23p19 con union a C1q mejorada y union a FcyRIM mejorada (por ejemplo, que tiene tanto actividad de ADCC mejorada como actividad de CDC mejorada). Alternativamente, si se desea reducir o eliminar la funcion efectora, una variante de la region Fc puede manipularse con actividad de CDC reducida y/o actividad de ADCC reducida. En otras realizaciones, solo una de estas actividades puede aumentarse, y, opcionalmente, tambien la otra actividad reducirse (por ejemplo, para generar una variante de la region Fc con actividad de ADCC mejorada, pero actividad de CDC reducida y viceversa).
Tambien pueden introducirse mutaciones de Fc y manipularse para alterar su interaccion con el receptor de Fc neonatal (FcRn) y mejoran sus propiedades farmacocineticas. Se ha descrito un conjunto de variantes de Fc humanas con union mejorada a FcRn (Shields y col., (2001). High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for FcyRI, FcyRII, FcyRIII, and FcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the FcyR, J. Biol. Chem. 276:6591-6604).
Otro tipo de sustitucion de aminoacidos sirve para alterar el patron de glicosilacion de la region Fc del anticuerpo para IL-23p19. La glicosilacion de una region Fc esta normalmente tanto ligada a N como ligada a O. Ligada a N se refiere a la union del resto de hidrato de carbono a la cadena lateral de un residuo de asparagina. Glicosilacion ligada a O se refiere a la union de uno de los azucares N-acetilgalactosamina, galactosa o xilosa a un hidroxiaminoacido, lo mas comunmente serina o treonina, aunque tambien pueden usarse 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina. Las secuencias de reconocimiento para la union enzimatica del resto de hidrato de carbono a las secuencias de peptidos de la cadena lateral de asparagina son asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina en las que X es cualquier aminoacido, excepto prolina. Por tanto, la presencia de cualquiera de estas secuencias de peptidos en un polipeptido crea un posible sitio de glicosilacion.
El patron de glicosilacion puede alterarse, por ejemplo, delecionando uno o mas sitios de glicosilacion encontrados en el polipeptido, y/o anadiendo uno o mas sitios de glicosilacion que no estan presentes en el polipeptido. La adicion de sitios de glicosilacion a la region Fc de un anticuerpo para IL-23p19 se realiza convenientemente alterando la secuencia de aminoacidos de forma que contenga una o mas de las secuencias de tripeptidos anteriormente descritas (para sitios de glicosilacion ligados a N). Una variante de glicosilacion a modo de ejemplo tiene una sustitucion de aminoacidos del residuo Asn 297 de la cadena pesada. La alteracion tambien puede hacerse mediante la adicion de, o sustitucion con, uno o mas residuos de serina o treonina a la secuencia del polipeptido original (para sitios de glicosilacion ligados a O). Adicionalmente, un cambio de Asn 297 a Ala puede eliminar uno de los sitios de glicosilacion.
En ciertas realizaciones, el anticuerpo para IL-23p19 de la presente invencion se expresa en celulas que expresan beta (1,4)-N-acetilglucosaminiltransferasa III (GnT III), de forma que GnT III anade GlcNAc al anticuerpo para IL-23p19. Procedimientos para producir anticuerpos en un modo tal se proporcionan en los documentos WO/9954342, WO/03011878, publicacion de patente 20030003097A1, y Umana y col., Nature Biotechnology, 17:176-180, Feb. 1999. Un anticuerpo anti-IL-23p19 puede generarse opcionalmente por inmunizacion de un animal transgenico (por ejemplo, raton, rata, hamster, primate no humano y similares) que puede producir un repertorio de anticuerpos humanos, como se describe en el presente documento y/o como se conoce en la tecnica. Celulas que producen un anticuerpo anti-IL-23p19 pueden aislarse de tales animales e inmortalizarse usando procedimientos adecuados, tales como los procedimientos descritos en el presente documento.
Ratones transgenicos que pueden producir un repertorio de anticuerpos humanos que se unen a antigenos humanos pueden producirse mediante procedimientos conocidos (por ejemplo, pero no se limitan a, patentes de EE.UU. n°: 5.770.428, 5.569.825, 5.545.806, 5.625.126, 5.625.825, 5.633.425, 5.661.016 y 5.789.650 concedida a Lonberg y col.; Jakobovits y col., documento WO 98/50433, Jakobovits y col., documento Wo 98/24893, Lonberg y col., documento WO 98/24884, Lonberg y col., documento WO 97/13852, Lonberg y col., documento WO 94/25585, Kucherlapate y col., documento WO 96/34096, Kucherlapate y col., documento EP 0463151 B1, Kucherlapate y col., documento Ep 0710 719 A1, Surani y col., patente de EE.Uu . n° 5.545.807, Bruggemann y col., documento WO 90/04036, Bruggemann y col., documento EP 0438474 B1, Lonberg y col., documento EP 0814 259 A2, Lonberg y col., documento GB 2272440 A, Lonberg y col., Nature 368:856-859 (1994), Taylor y col., Int. Immunol. 6(4)579-591 (1994) , Green y col., Nature Genetics 7:13-21 (1994), Mendez y col., Nature Genetics 15:146-156 (1997), Taylor y col., Nucleic Acids Research 20(23):6287-6295 (1992), Tuaillon y col., Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724 (1993), Lonberg y col., Int Rev Immunol 13(1):65-93 (1995) y Fishwald y col., Nat Biotechnol 14(7):845-851 (1996). Generalmente, estos ratones comprenden al menos un transgen que comprende ADN de al menos un locus de inmunoglobulina humana que esta funcionalmente reordenado, o que pueden someterse a reordenamiento funcional. Los loci de inmunoglobulina endogena en tales ratones pueden romperse o delecionarse para eliminar la capacidad del animal para producir anticuerpos codificados por genes endogenos.
El cribado de anticuerpos para union espedfica a protemas o fragmentos similares puede conseguirse convenientemente usando bibliotecas de expresion de peptidos. Este procedimiento implica el cribado de grandes colecciones de peptidos para miembros individuales que tienen la funcion o estructura deseada. El cribado de anticuerpo de bibliotecas de expresion de peptidos es muy conocido en la tecnica. Las secuencias de peptidos expresadas pueden ser de 3 a 5000 o mas aminoacidos de longitud, frecuentemente de 5-100 aminoacidos de longitud, y frecuentemente de aproximadamente 8 a 25 aminoacidos de longitud. Ademas de procedimientos sinteticos qmmicos directos para generar bibliotecas de peptidos, se han descrito varios procedimientos de ADN recombinante.
Un tipo implica la expresion de una secuencia de peptidos sobre la superficie de un bacteriofago o celula. Cada bacteriofago o celula contiene la secuencia de nucleotidos que codifica la secuencia de peptidos expresada particular. Tales procedimientos se describen en las publicaciones de patente PCT n° 91/17271, 91/18980, 91/19818 y 93/08278.
Otros sistemas para generar bibliotecas de peptidos tienen aspectos de tanto smtesis qrnmica in vitro como procedimientos recombinantes. Veanse las publicaciones de patente PCT n° 92/05258, 92/14843 y 96/19256. Veanse, por tanto, las patentes de EE.UU. n° 5.658.754; y 5.643.768. Las bibliotecas de expresion de peptidos, vector y kits de cribado estan comercialmente disponibles de proveedores tales como Invitrogen (Carlsbad, CA), y Cambridge Antibody Technologies (Cambridgeshire, UK). Veanse, por ejemplo, las patentes de EE.UU. n° 4704692, 4939666, 4946778, 5260203, 5455030, 5518889, 5534621, 5656730, 5763733, 5767260, 5856456, cedidas a Enzon; 5223409, 5403484, 5571698, 5837500, cedidas a Dyax, 5427908, 5580717, cedidas a Affymax; 5885793, cedidas a Cambridge Antibody Technologies; 5750373, cedidas a Genentech, 5618920, 5595898, 5576195, 5698435, 5693493, 5698417, cedidas a Xoma, Colligan, arriba; Ausubel, arriba; o Sambrook, arriba.
Los anticuerpos de la presente invencion tambien pueden prepararse usando al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 que codifica acido nucleico para proporcionar animales o mairnferos transgenicos tales como cabras, vacas, caballos, ovejas, conejos y similares, que producen tales anticuerpos en su leche. Tales animales pueden proporcionarse usando procedimientos conocidos. Vease, por ejemplo, pero no se limitan a, patentes de EE.UU. n° 5.827.690; 5.849.992; 4.873.316; 5.849.992; 5.994.616; 5.565.362; 5.304.489, y similares.
Los anticuerpos de la presente invencion pueden prepararse adicionalmente usando al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 que codifica acido nucleico para proporcionar plantas transgenicas y celulas vegetales cultivadas (por ejemplo, pero no se limitan a, tabaco y mafz) que producen tales anticuerpos, porciones especificadas o variantes en las partes de la planta o en celulas cultivadas de las mismas. Como ejemplo no limitante, hojas de tabaco transgenicas que expresan protemas recombinantes se han usado satisfactoriamente para proporcionar grandes cantidades de protemas recombinantes, por ejemplo, usando un promotor inducible. Vease, por ejemplo, Cramer y col., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240:95-118 (1999) y referencias citadas en su interior. Por tanto, se ha usado mafz transgenico para expresar protemas de mamnfero a niveles de produccion comercial, con actividades biologicas equivalentes a aquellas producidas en otros sistemas recombinantes o purificados de fuentes naturales. Vease, por ejemplo, Hood y col., Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) y referencias citadas en su interior. Tambien se han producido anticuerpos en grandes cantidades de semillas de plantas transgenicas que incluyen fragmentos de anticuerpos tales como anticuerpos monocatenarios (scFv), que incluyen semillas de tabaco y tuberculos de patata. Vease, por ejemplo, Conrad y col., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998) y referencias citadas en su interior. Por tanto, anticuerpos de la presente invencion tambien pueden producirse usando plantas transgenicas, segun procedimientos conocidos. Vease, por tanto, por ejemplo, Fischer y col., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (Oct., 1999), Ma y col., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma y col., Plant Physiol. 109:341-6 (1995) ; Whitelam y col., Biochem. Soc. Trans. 22:940-944 (1994); y referencias citadas en su interior.
Los anticuerpos de la invencion pueden unirse a IL-23p19 humana con un amplio intervalo de afinidades (Kd ). En una realizacion preferida, al menos un mAb de la presente invencion puede unirse opcionalmente a IL-23p19 humana con alta afinidad. Por ejemplo, un mAb humano u otro mAb puede unirse a IL-23p19 humana con una Kd igual a o inferior a aproximadamente 10-7 M tal como, pero no se limitan a, 0,1-9,9 (o cualquier intervalo o valor en su interior) X 10-7, 10-8, 10-9, 10' 1° , 10-11, 10' 12, 10' 13, 10' 14, 10-15 o cualquier intervalo o valor en su interior, como se ha determinado por resonancia de plasmones superficiales o el procedimiento de KinExA, como se ha puesto en practica por aquellos expertos en la materia.
En una realizacion, los anticuerpos de la invencion se unen a IL-23 humana, o mas espedficamente, IL-23p19, con una Kd entre aproximadamente 3,38 X 10' 1° M y aproximadamente 4,3 X 10' 11 M.
La afinidad o avidez de un anticuerpo por un antigeno puede determinarse experimentalmente usando cualquier procedimiento adecuado (vease, por ejemplo, Berzofsky y col., “Antibody-Antigen Interactions”, en Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman y Company: New York, NY (1992); y procedimientos descritos en el presente documento). La afinidad medida de una interaccion anticuerpo-antigeno particular puede variar si se mide bajo diferentes condiciones (por ejemplo, concentracion de sales, pH). Por tanto, las mediciones de afinidad y otros parametros de union a antfgeno (por ejemplo, Kd , Kas, Kdis) se hacen preferentemente con disoluciones normalizadas de anticuerpo y antigeno, y un tampon normalizado, tal como el tampon descrito en el presente documento.
Ciertas realizaciones de los anticuerpos anti-IL-23p19 de la invencion tienen las secuencias mostradas en las tablas de secuencia anteriores. Por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-23p19 de la invencion tiene una de las secuencias de CDR1 de la cadena ligera de SEC ID N°: 9, 19, 29 y 39; una de las secuencias de CDR2 de la cadena ligera de SEC ID N°:10, 20, 30 y 40; una de las secuencias de CDR3 de la cadena ligera de SEC ID N°:11, 21, 31 y 41; una de las secuencias de CDR1 de la cadena pesada de SEC ID N°: 4, 14, 24 y 34; una de las secuencias de CDR2 de la cadena pesada de SEC ID N°: 5, 15, 25 y 35; y/o una de las secuencias de CDR1 de la cadena pesada de SEC ID N°: 6, 16, 26 y 36.
Moleculas de acidos nucleicos
Usando la informacion proporcionada en el presente documento, por ejemplo, las secuencias de nucleotidos que codifican al menos el 70-100% de los aminoacidos contiguos de al menos una de las regiones variables de la cadena ligera de SEC ID N°: 7, 17, 27 y 37 y al menos una de las regiones variables de la cadena pesada de SEC ID N°: 2, 12, 22 y 32, fragmento especificados, variantes o secuencias consenso de las mismas, o un vector depositado que comprende al menos una de estas secuencias, una molecula de acido nucleico de la presente invencion que codifica al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 pueden obtenerse usando procedimientos descritos en el presente documento o como se conocen en la tecnica.
Moleculas de acidos nucleicos de la presente invencion pueden estar en forma de ARN, tal como ARNm, ARNnh, ARNt o cualquier otra forma, o en forma de ADN, que incluye, pero no se limitan a, ADNc y ADN genomico obtenido clonando o producido sinteticamente, o cualquier combinaciones de los mismos. El ADN puede ser tricatenario, bicatenario o monocatenario, o cualquier combinacion de los mismos. Cualquier porcion de al menos una hebra del ADN o ARN puede ser la hebra codificante, tambien conocida como la hebra sentido, o puede ser la hebra antisentido, tambien denominada la hebra antisentido.
Moleculas de acido nucleico aisladas de la presente invencion pueden incluir moleculas de acidos nucleicos que comprenden un marco de lectura abierto (ORF), opcionalmente con uno o mas intrones, por ejemplo, pero no se limitan a, al menos una porcion especificada de al menos una CDR, tal como CDR1, CDR2 y/o CDR3 de al menos una cadena ligera (9, 10, 11, 19, 20, 21, 29, 30, 31, 39, 40, 41) o al menos una cadena pesada (SEC ID N°: 4, 5, 6, 14, 15, 16, 24, 25, 26, 34, 35 y 36); moleculas de acidos nucleicos que comprenden la secuencia codificante para un anticuerpo anti-IL-23p19 o region variable (por ejemplo, regiones variables de la cadena ligera de SEC ID N°: 7, 17, 27 y 37 y regiones variables de la cadena pesada de SEC ID N°: 2, 12, 22 y 32); y moleculas de acidos nucleicos que comprenden una secuencia de nucleotidos sustancialmente diferente de aquellas descritas anteriormente pero que, debido a la degeneracion del codigo genetico, todavfa codifican al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 como se describe en el presente documento y/o como se conoce en la tecnica. Por supuesto, el codigo genetico es muy conocido en la tecnica. Por tanto, sena rutina para un experto en la materia generar tales variantes de acido nucleico degenerado que codifican anticuerpos anti-IL-23p19 espedficos de la presente invencion. Vease, por ejemplo, Ausubel y col., arriba, y tales variantes de acido nucleico estan incluidas en la presente invencion.
Como se indica en el presente documento, las moleculas de acidos nucleicos de la presente invencion que comprenden un acido nucleico que codifica un anticuerpo anti-IL-23p19 pueden incluir, pero no se limitan a, aquellas que codifican la secuencia de aminoacidos de un fragmento de anticuerpo, por sf mismo; la secuencia codificante para el anticuerpo entero o una parte del mismo; la secuencia codificante para un anticuerpo, fragmento o porcion, ademas de secuencias adicionales tales como la secuencia codificante de al menos un conductor senal o peptido de fusion, con o sin las secuencias codificantes adicionales anteriormente mencionadas tales como al menos un intron, junto con secuencias no codificantes adicionales que incluyen, pero no se limitan a, secuencias de 5' y 3' no codificantes tales como las secuencias no traducidas transcritas que desempenan una funcion en la transcripcion, procesamiento de ARNm, que incluye corte y empalme y senales de poliadenilacion (por ejemplo, union a ribosomas y estabilidad de ARNm); una secuencia codificante adicional que codifica aminoacidos adicionales tales como aquellos que proporcionan funcionalidades adicionales. Por tanto, la secuencia que codifica un anticuerpo puede fusionarse con una secuencia de marcador, tal como una secuencia que codifica un peptido que facilita la purificacion del anticuerpo fusionado que comprende un fragmento de anticuerpo o porcion.
Polinucleotidos que se hibridan selectivamente con un polinucleotido como se describe en el presente documento
La presente invencion proporciona acidos nucleicos aislados que se hibridan bajo condiciones de hibridacion selectiva con un polinucleotido desvelado en el presente documento. Por tanto, los polinucleotidos de esta realizacion pueden usarse para aislar, detectar y/o cuantificar acidos nucleicos que comprenden tales polinucleotidos. Por ejemplo, los polinucleotidos de la presente invencion pueden usarse para identificar, aislar o amplificar clones de longitud parcial o completa en una biblioteca depositada. En algunas realizaciones, los polinucleotidos son secuencias genomicas o de ADNc aisladas, o de otro modo complementarias a, un ADNc de una biblioteca de acido nucleico humano o de mairnfero.
Preferentemente, la biblioteca de ADNc comprende al menos el 80% de secuencias de longitud completa, preferentemente al menos el 85% o el 90% de secuencias de longitud completa, y mas preferentemente al menos el 95% de secuencias de longitud completa. Las bibliotecas de ADNc pueden normalizarse para aumentar la representacion de secuencias raras. Condiciones de hibridacion de rigurosidad baja o moderada se emplean normalmente, pero no exclusivamente, con secuencias que tienen una identidad de secuencias reducida con respecto a secuencias complementarias. Condiciones de rigurosidad moderada y alta pueden emplearse opcionalmente para secuencias de mayor identidad. Condiciones de baja rigurosidad permiten la hibridacion selectiva de secuencias que tienen aproximadamente el 70% de identidad de secuencias y pueden emplearse para identificar secuencias ortologas o paralogas.
Opcionalmente, los polinucleotidos de la presente invencion codificaran al menos una parte de un anticuerpo codificado por los polinucleotidos descritos en el presente documento. Los polinucleotidos de la presente invencion engloban secuencias de acidos nucleicos que pueden emplearse para la hibridacion selectiva con un polinucleotido que codifica un anticuerpo de la presente invencion. Vease, por ejemplo, Ausubel, arriba; Colligan, arriba.
Construccion de acidos nucleicos
Los acidos nucleicos aislados de la presente invencion pueden prepararse usando (a) procedimientos recombinantes, (b) tecnicas sinteticas, (c) tecnicas de purificacion, y/o (d) combinaciones de los mismos, como es muy conocido en la tecnica.
Los acidos nucleicos pueden comprender convenientemente secuencias, ademas de un polinucleotido de la presente invencion. Por ejemplo, un sitio de multiple clonacion que comprende uno o mas sitios de restriccion de endonucleasa pueden insertarse en el acido nucleico para ayudar en el aislamiento del polinucleotido. Por tanto, las secuencias traducibles pueden insertarse para ayudar en el aislamiento del polinucleotido traducido de la presente invencion. Por ejemplo, una secuencia de marcador de hexa-histidina proporciona un medio conveniente para purificar las protemas de la presente invencion. El acido nucleico de la presente invencion, excluyendo la secuencia codificante, es opcionalmente un vector, adaptador o ligador para la clonacion y/o expresion de un polinucleotido de la presente invencion.
Secuencias adicionales pueden anadirse a tales secuencias de clonacion y/o expresion para optimizar su funcion en la clonacion y/o expresion, para ayudar en el aislamiento del polinucleotido, o para mejorar la introduccion del polinucleotido en una celula. El uso de vectores de clonacion, vectores de expresion, adaptadores y ligadores es muy conocido en la tecnica. (vease, por ejemplo, Ausubel, arriba; o Sambrook, arriba)
Procedimientos recombinantes para construir acidos nucleicos
Las composiciones de acido nucleico aislado de la presente invencion, tales como ARN, ADNc, ADN genomico, o cualquier combinacion de los mismos, puede obtenerse de fuentes biologicas usando cualquier numero de metodologfas de clonacion conocidas para aquellos expertos en la materia. En algunas realizaciones, sondas de oligonucleotidos que se hibridan selectivamente, bajo condiciones rigurosas, con los polinucleotidos de la presente invencion se usan para identificar la secuencia deseada en una biblioteca de ADNc o ADN genomico. El aislamiento de ARN, y la construccion de bibliotecas de ADNc y genomicas, son muy conocidos para aquellos expertos en la materia (vease, por ejemplo, Ausubel, arriba; o Sambrook, arriba)
Seleccion de acidos nucleicos y procedimientos de aislamiento
Una biblioteca de ADNc o genomica puede cribarse usando una sonda basada en la secuencia de un polinucleotido de la presente invencion, tal como la desvelada en el presente documento. Pueden usarse sondas para hibridarse con secuencias de ADN genomico o ADNc para aislar genes homologos en los mismos organismos u organismos diferentes. Aquellos expertos en la materia apreciaran que pueden emplearse diversos grados de rigurosidad de hibridacion en el ensayo; y tanto la hibridacion como el medio de lavado pueden ser rigurosos. A medida que las condiciones para la hibridacion se vuelven mas rigurosas, debe haber un mayor grado de complementariedad entre la sonda y la diana para que se produzca la formacion del duplex. El grado de rigurosidad puede controlarse por uno o mas de temperatura, fuerza ionica, pH y la presencia de un disolvente parcialmente desnaturalizante, tal como formamida. Por ejemplo, la rigurosidad de hibridacion se vana convenientemente cambiando la polaridad de la disolucion del reactivo mediante, por ejemplo, manipulacion de la concentracion de formamida dentro del intervalo del 0% al 50%. El grado de complementariedad (identidad de secuencias) requerido para la union detectable variara segun la rigurosidad del medio de hibridacion y/o lavado. El grado de complementariedad sera optimamente el 100%, o el 70-100%, o cualquier intervalo o valor en su interior. Sin embargo, debe entenderse que variaciones de secuencias menores en las sondas y cebadores pueden compensarse reduciendo la rigurosidad del medio de hibridacion y/o de lavado.
Los procedimientos de amplificacion de ARN o ADN son muy conocidos en la tecnica y pueden usarse segun la presente invencion sin excesiva experimentacion, basandose en la ensenanza y orientacion presentada en el presente documento.
Los procedimientos conocidos de amplificacion de ADN o ARN incluyen, pero no se limitan a, reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) y procedimientos de amplificacion relacionados (veanse, por ejemplo, las patentes de EE.UU. n° 4.683.195, 4.683.202, 4.800.159, 4.965.188, a Mullis y col.; 4.795.699 y 4.921.794 a Tabor y col.; 5.142.033 a Innis; 5.122.464 a Wilson y col.; 5.091.310 a Innis; 5.066.584 a Gillensten y col.; 4.889.818 a Gelfand y col.; 4.994.370 a Silver y col.; 4.766.067 a Biswas; 4.656.134 a Ringold) y amplificacion mediada por ARN que usa ARN antisentido para la secuencia diana como molde para la smtesis de ADN bicatenario (patente de EE.UU. n° 5.130.238 a Malek y col., con la marca registrada NASBA) (vease, por ejemplo, Ausubel, arriba; o Sambrook, arriba).
Por ejemplo, la tecnologfa de reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) puede usarse para amplificar las secuencias de polinucleotidos de la presente invencion y genes relacionados directamente a partir de bibliotecas de ADN genomico o ADNc. La PCR y otros procedimientos de amplificacion in vitro tambien puede ser utiles, por ejemplo, para clonar secuencias de acidos nucleicos que codifican protemas que van a expresarse, para preparar acidos nucleicos para usar como sondas para detectar la presencia del ARNm deseado en muestras, para la secuenciacion de acidos nucleicos, o para otros fines. Ejemplos de tecnicas suficientes para dirigir a expertos por los procedimientos de amplificacion in vitro se encuentran en Berger, arriba, Sambrook, arriba, y Ausubel, arriba, ademas de Mullis y col., patente de EE.UU. n° 4.683.202 (1987); y Innis y col., PCR Protocols A Guide to Methods and Applications, Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). En la tecnica se conocen kits comercialmente disponibles para amplificacion por PCR genomica. Vease, por ejemplo, kit de PCR Advantage-GC Genomic (Clontech). Adicionalmente, por ejemplo, la protema del gen 32 T4 (Boehringer Mannheim) puede usarse para mejorar el rendimiento de productos de PCR largos.
Procedimientos sinteticos para construir acidos nucleicos
Los acidos nucleicos aislados de la presente invencion tambien pueden prepararse por smtesis qmmica directa mediante procedimientos conocidos (vease, por ejemplo, Ausubel y col., arriba). La smtesis qmmica generalmente produce un oligonucleotido monocatenario, que puede convertirse en ADN bicatenario por hibridacion con una secuencia complementaria, o por polimerizacion con una ADN polimerasa usando la hebra individual como molde. Un experto en la materia reconocera que, aunque la smtesis qmmica de ADN puede limitarse a secuencias de aproximadamente 100 o mas bases, secuencias mas largas pueden obtenerse por la ligacion de secuencias mas cortas.
Casetes de expresion recombinantes
La presente invencion proporciona ademas casetes de expresion recombinantes que comprenden un acido nucleico de la presente invencion. Una secuencia de acidos nucleicos de la presente invencion, por ejemplo, un ADNc o una secuencia genomica que codifica un anticuerpo de la presente invencion, puede usarse para construir un casete de expresion recombinante que puede introducirse en al menos una celula huesped deseada. Un casete de expresion recombinante comprendera normalmente un polinucleotido de la presente invencion operativamente ligado a secuencias reguladoras de la iniciacion de la transcripcion que dirigiran la transcripcion del polinucleotido en la celula huesped prevista. Pueden emplearse promotores tanto heterologos como no heterologos (es decir, endogenos) para dirigir la expresion de los acidos nucleicos de la presente invencion.
En algunas realizaciones, los acidos nucleicos aislados que sirven de promotor, potenciador, u otros elementos, pueden introducirse en la posicion apropiada (en la direccion 5', en la direccion 3' o en el intron) de una forma no heterologa de un polinucleotido de la presente invencion de manera que regulen por incremento o por disminucion la expresion de un polinucleotido de la presente invencion. Por ejemplo, promotores endogenos pueden alterarse in vivo o in vitro por mutacion, delecion y/o sustitucion.
Vectores y celulas huesped
La presente invencion tambien se refiere a vectores que incluyen moleculas de acido nucleico aisladas de la presente invencion, celulas huesped que son geneticamente manipuladas con los vectores recombinantes, y la produccion de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 por tecnicas recombinantes, como es muy conocido en la tecnica. Vease, por ejemplo, Sambrook y col., arriba; Ausubel y col., arriba.
Los polinucleotidos pueden unirse opcionalmente a un vector que contiene un marcador de seleccion para la propagacion en un huesped. Generalmente, un vector de plasmido se introduce en un precipitado, tal como un precipitado de fosfato de calcio, o en un complejo con un ftpido cargado. Si el vector es un virus, puede encapsidarse in vitro usando una lrnea celular de encapsidacion apropiada y luego transducirse en celulas huesped.
El inserto de ADN debe ligarse operativamente a un promotor apropiado. Las construcciones de expresion contendran adicionalmente sitios para la iniciacion de la transcripcion, terminacion y, en la region transcrita, un sitio de union a ribosoma para la traduccion. La porcion codificante de los transcritos maduros expresados por las construcciones incluiran preferentemente un codon de iniciacion de la traduccion al principio y un codon de terminacion (por ejemplo, UAA, UGA o UAG) apropiadamente posicionado al final del ARNm que va a traducirse, siendo UAA y UAG preferidos para la expresion de celulas eucariotas o de mamftero.
Los vectores de expresion incluiran preferentemente, pero opcionalmente, al menos un marcador de seleccion. Tales marcadores incluyen, por ejemplo, pero no se limitan a, resistencia a metrotrexato (MTX), dihidrofolato reductasa (DHFR, patentes de EE.UU. n° 4.399.216; 4.634.665; 4.656.134; 4.956.288; 5.149.636; 5.179.017, ampicilina, neomicina (G418), acido micofenolico o glutamina sintetasa (GS, patentes de EE.UU. n° 5.122.464; 5.770.359; 5.827.739) para cultivo celular eucariota, y genes de resistencia a tetraciclina o ampicilina para cultivar en E. coli y otras bacterias o procariotas. Medios de cultivos y condiciones apropiada para las celulas huesped anteriormente descritas se conocen en la tecnica. Vectores adecuados seran rapidamente evidentes para el experto. La introduccion de una construccion de vector en una celula huesped puede efectuarse por transfeccion con fosfato de calcio, transfeccion mediada por DEAE-dextrano, transfeccion mediada por ftpidos cationicos, electroporacion, transduccion, infeccion u otros procedimientos conocidos. Tales procedimientos se describen en la materia, tales como Sambrook, arriba, Capftulos 1-4 y 16-18; Ausubel, arriba, Capftulos 1, 9, 13, 15, 16.
Al menos un anticuerpo de la presente invencion puede expresarse en una forma modificada, tal como una protema de fusion, y puede incluir no solo senales de secrecion, sino tambien regiones funcionales heterologas adicionales. Por ejemplo, una region de aminoacidos adicionales, particularmente aminoacidos cargados, puede anadirse al extremo N de un anticuerpo para mejorar la estabilidad y persistencia en la celula huesped, durante la purificacion, o durante la posterior manipulacion y almacenamiento. Por tanto, los restos de peptido pueden anadirse a un anticuerpo de la presente invencion para facilitar la purificacion. Tales regiones pueden eliminarse antes de la preparacion final de un anticuerpo o al menos un fragmento del mismo. Tales procedimientos se describen en muchos manuales de laboratorio estandar tales como Sambrook, arriba, Capftulos 17,29-17,42 y 18,1-18,74; Ausubel, arriba, Capftulos 16, 17 y 18.
Aquellos expertos habituales en la materia son conocedores de los numerosos sistemas de expresion disponibles para la expresion de un acido nucleico que codifica una protema de la presente invencion. Alternativamente, los acidos nucleicos de la presente invencion pueden expresarse en una celula huesped por encendido (por manipulacion) en una celula huesped que contiene ADN endogeno que codifica un anticuerpo de la presente invencion. Tales procedimientos son muy conocidos en la tecnica, por ejemplo, como se describen en las patentes de EE.UU. n° 5.580.734, 5.641.670, 5.733.746 y 5.733.761.
Ilustrativo de cultivos celulares utiles para la produccion de los anticuerpos, porciones especificadas o variantes de los mismos son celulas de mamftero. Los sistemas de celulas de mamftero frecuentemente estaran en forma de monocapas de celulas, aunque tambien pueden usarse suspensiones o biorreactores de celulas de mamftero. Varias lrneas de celulas huesped adecuadas que pueden expresar protemas glicosiladas intactas se han desarrollado en la materia, e incluyen las lrneas celulares COS-1 (por ejemplo, ATCC CRL 1650), COS-7 (por ejemplo, ATCC CRL-1651), HEK293, BHK21 (por ejemplo, ATCC CRL-10), CHO (por ejemplo, ATCC CRL 1610) y BSC-1 (por ejemplo, ATc C CRL-26), celulas Cos-7, celulas CHO, celulas hep g 2, P3X63Ag8.653, celulas SP2/0-Ag14.293, celulas HeLa y similares, que estan facilmente disponibles de, por ejemplo, la Coleccion americana de cultivos tipo, Manassas, Va (www.atcc.org). Celulas huesped preferidas incluyen celulas de origen linfoide, tales como celulas de mieloma y de linfoma. Celulas huesped particularmente preferidas son celulas P3X63Ag8.653 (numero de acceso de ATCC CRL-1580) y celulas SP2/0-Ag14 (numero de acceso de ATCC CRL-1851). En una realizacion particularmente preferida, la celula recombinante es una celula P3X63Ab8.653 o SP2/0-Ag14.
Vectores de expresion para estas celulas pueden incluir una o mas de las siguientes secuencias de control de la expresion tal como, pero no se limitan a, un origen de replicacion; un promotor (por ejemplo, promotores de SV40 tempranos o tardms, el promotor del CMV (patentes de EE.UU. n° 5.168.062; 5.385.839), un promotor de HSV tk, un promotor de pgk (fosfoglicerato cinasa), un promotor de EF-1 alfa (patente de EE.UU. n° 5.266.491), al menos un promotor de inmunoglobulina humana; un potenciador, y/o sitios de informacion del procesamiento tales como sitios de union a ribosoma, sitios de corte y empalme de ARN, sitios de poliadenilacion (por ejemplo, un sitio de adicion de poli A del Ag T grande del SV40) y secuencias terminadoras de la transcripcion. Vease, por ejemplo, Ausubel y col., arriba; Sambrooky col., arriba. Otras celulas utiles para la produccion de acidos nucleicos o protemas de la presente invencion son conocidas y/o estan disponibles, por ejemplo, del Catalogo de lmeas celulares e hibridomas de la Coleccion americana de cultivos tipo (www.atcc.org), u otras fuentes conocidas o comerciales.
Cuando se emplean celulas huesped eucariotas, las secuencias terminadoras de la poliadenilacion o transcripcion se incorporan normalmente en el vector. Un ejemplo de una secuencia terminadora es la secuencia de poliadenilacion del gen de la hormona de crecimiento bovina. Tambien pueden incluirse secuencias para el corte y empalme preciso del transcrito. Un ejemplo de una secuencia de corte y empalme es el intron VP1 de SV40 (Sprague y col., J. Virol. 45:773-781 (1983)). Adicionalmente, secuencias de genes para controlar la replicacion en la celula huesped pueden incorporarse en el vector, como se conoce en la tecnica.
Purificacion de un anticuerpo
Un anticuerpo anti-IL-23p19 puede recuperarse y purificarse a partir de cultivos celulares recombinantes por procedimientos muy conocidos que incluyen, pero no se limitan a, purificacion en protema A, precipitacion con sulfato de amonio o etanol, extraccion con acido, cromatograffa de intercambio anionico o cationico, cromatograffa en fosfocelulosa, cromatograffa de interaccion hidrofoba, cromatograffa de afinidad, cromatograffa en hidroxilapatita y cromatograffa en lectina. Tambien puede emplearse cromatograffa ffquida de alta resolucion (“HPLC”) para la purificacion. Vease, por ejemplo, Colligan, Current Protocols in Immunology, o Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), por ejemplo, Capftulos 1, 4, 6, 8, 9, 10.
Los anticuerpos de la presente invencion incluyen productos naturalmente purificados, productos de procedimientos de smtesis qmmica y productos producidos por tecnicas recombinantes de un huesped eucariota que incluyen, por ejemplo, celulas de levadura, de plantas superiores, de insecto y de mairfffero. Dependiendo del huesped empleado en un procedimiento de produccion recombinante, el anticuerpo de la presente invencion puede glicosilarse o puede no glicosilarse, prefiriendose glicosilado. Tales procedimientos se describen en muchos manuales de laboratorio estandar tales como Sambrook, arriba, Secciones 17.37-17.42; Ausubel, arriba, Capftulos 10, 12, 13, 16, 18 y 20, Colligan, Protein Science, arriba, Capftulos 12-14.
Anticuerpos anti-IL-23p19
Un anticuerpo anti-IL-23p19 segun la presente invencion incluye cualquier molecula que contiene protema o peptido que comprende al menos una parte de una molecula de inmunoglobulina tal como, pero no se limita a, al menos una porcion de union a ligando (LBP) tal como, pero no se limita a, una region determinante de la complementariedad (CDR) de una cadena pesada o ligera o una porcion de union a ligando de la misma, una region variable de la cadena pesada o la cadena ligera, una region estructural (por ejemplo, FR1, FR2, FR3, FR4 o fragmento de las mismas, que adicionalmente comprende opcionalmente al menos una sustitucion, insercion o delecion), una region constante de la cadena pesada o la cadena ligera (por ejemplo, que comprende al menos una CH1, bisagra1, bisagra2, bisagra3, bisagra4, CH2, o CH3 o fragmento de las mismas, que adicionalmente comprenden opcionalmente al menos una sustitucion, insercion o delecion), o cualquier porcion de las mismas, que pueden incorporarse en un anticuerpo de la presente invencion. Un anticuerpo de la invencion puede incluir o derivarse de cualquier mairfffero tal como, pero no se limita a, un ser humano, un raton, un conejo, una rata, un roedor, un primate, o cualquier combinacion de los mismos, y similares.
Los anticuerpos aislados de la presente invencion comprenden las secuencias de aminoacidos de anticuerpos desveladas en el presente documento codificadas por cualquier polinucleotido adecuado, o cualquier anticuerpo aislado o preparado. Preferentemente, el anticuerpo humano o fragmento de union a anffgeno se une a IL-23p19 humana y asf neutraliza parcialmente o sustancialmente al menos una actividad biologica de la protema. Un anticuerpo, o porcion especificada o variante del mismo, que neutraliza parcialmente o preferentemente sustancialmente al menos una actividad biologica de al menos una protema IL-23 o fragmento puede unirse a la protema o fragmento y asf inhibir actividades mediadas por la union de IL-23 a uno o mas de los receptores de IL-23 o mediante otros mecanismos dependientes o mediados por IL-23. Como se usa en el presente documento, el termino “anticuerpo neutralizante” se refiere a un anticuerpo que puede inhibir una actividad dependiente de IL-23 aproximadamente el 20-120%, preferentemente al menos aproximadamente el 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% o mas dependiendo del ensayo.La capacidad de un anticuerpo anti-IL-23p19 para inhibir una actividad dependiente de IL-23 se evalua preferentemente por al menos una protema IL-23 adecuada o ensayo de receptor, como se describe en el presente documento y/o como se conoce en la tecnica. Un anticuerpo humano de la invencion puede ser de cualquier clase (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD, etc.) o isotipo y puede comprender una cadena ligera kappa o lambda. En una realizacion, el anticuerpo humano comprende una cadena pesada de IgG o fragmento definido, por ejemplo, al menos uno de los isotipos, IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 (por ejemplo, y1, y2, y3 o y4). Anticuerpos de este tipo pueden prepararse empleando un raton transgenico u otro mairnfero no humano transgenico que comprende al menos un transgen de la cadena ligera humana (por ejemplo, IgG, IgA, y IgM) como se describe en el presente documento y/o como se conoce en la tecnica. En otra realizacion, el anticuerpo anti-IL-23p19 humana comprende una cadena pesada de IgG1 y una cadena ligera de IgG1.
Al menos un anticuerpo desvelado en el presente documento se une a al menos un epitope especificado espedfico para al menos una protema IL-23p19, subunidad, fragmento, porcion o cualquier combinacion de los mismos. El al menos un epitope puede comprender al menos una region de union a anticuerpo que comprende al menos una porcion de la protema, epitope que comprende preferentemente al menos una porcion extracelular, soluble, hidrofila, externa o citoplasmica de la protema. El al menos un epitope especificado puede comprender cualquier combinacion de al menos una secuencia de aminoacidos de al menos 1-3 aminoacidos para la porcion entera especificada de aminoacidos contiguos de los residuos de aminoacidos 93-104 y 127-137 de SEC Id N°:1 (que contiene la secuencia senal de 19 aminoacidos inicial para la subunidad de protema p19) (o residuos de aminoacidos 74-85 y 108-118 de la secuencia p19 sin inclusion de la secuencia senal), por ejemplo, residuos de aminoacidos 93, 93-94, 93-95, 93-96, 97-99, 100-102, 127, 127-128, 128-129, etc. de SEC ID N°:1, etc. que incluyen cualquier porcion o combinaciones de estas secuencias.
Generalmente, el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno de la presente invencion comprendera una region de union a antfgeno que comprende al menos una region determinante de la complementariedad (CDR1, CDR2 y CDR3) o variante de al menos una region variable de la cadena pesada y al menos una region determinante de la complementariedad (CDR1, CDR2 y CDR3) o variante de al menos una region variable de la cadena ligera. Opcionalmente, las secuencias de CDR pueden derivarse de secuencias de la lmea germinal humana o corresponderse estrechamente con las secuencias de la lmea germinal. Por ejemplo, pueden usarse las CDR de una biblioteca sintetica derivada de las CDR de raton originales. Estas CDR pueden formarse por incorporacion de sustituciones conservativas de la secuencia de raton original. Como ejemplo no limitante, el anticuerpo o porcion de union a antfgeno o variante puede comprender al menos una de la CDR3 de la cadena pesada, por ejemplo, seleccionada de SEC ID N°: 6, 16, 26 y 36, y/o una CDR3 de la cadena ligera, por ejemplo, seleccionada de SEC ID N°: 11, 21, 31 y 41. En una realizacion particular, el anticuerpo o fragmento de union a antfgeno puede tener una region de union a antfgeno que comprende al menos una parte de al menos una CDR de la cadena pesada (es decir, CDR1, CDR2 y/o CDR3) (por ejemplo, las desveladas en el presente documento). En otra realizacion particular, el anticuerpo o porcion de union a antfgeno o variante puede tener una region de union a antfgeno que comprende al menos una parte de al menos una CDR de la cadena ligera (es decir, CDR1, CDR2 y/o CDR3) (por ejemplo, las desveladas en el presente documento).
En una realizacion preferida, las tres CDR de la cadena pesada y las tres CDR de la cadena ligera del anticuerpo o fragmento de union a antfgeno pueden prepararse uniendo qmmicamente juntas las diversas porciones (por ejemplo, CDR, region estructural) del anticuerpo usando tecnicas convencionales, preparando y expresando una (es decir, una o mas) moleculas de acido nucleico que codifican el anticuerpo usando tecnicas convencionales de tecnologfa de ADN recombinante o usando cualquier otro procedimiento adecuado.
El anticuerpo anti-IL-23p19 puede comprender al menos una de una region variable de la cadena pesada o ligera que tiene una secuencia de aminoacidos definida. Por ejemplo, en una realizacion preferida, el anticuerpo anti-IL-23p19 comprende al menos una de al menos una region variable de la cadena pesada opcionalmente seleccionada de SEC ID N°: 3, 13, 23 y 33 y/o al menos una region variable de la cadena ligera opcionalmente seleccionada de SEC ID N°: 8, 18, 28 y 38. Anticuerpos que se unen a IL-23p19 humana y que comprenden una region variable de la cadena pesada o ligera definida pueden prepararse usando procedimientos adecuados tales como expresion en fago (Katsube, Y. y col., Int J Mol. Med, 1(5):863-868 (1998)) o procedimientos que emplean animales transgenicos, como se conoce en la tecnica y/o como se describe en el presente documento. Por ejemplo, un raton transgenico, que comprende un transgen de la cadena pesada de inmunoglobulina humana funcionalmente reordenado y un transgen que comprende ADN de un locus de la cadena ligera de inmunoglobulina humana, puede someterse a reordenamiento funcional, puede inmunizarse con IL-23 humana o un fragmento de la misma para provocar la produccion de anticuerpos.Si se desea, las celulas productoras de anticuerpo pueden aislarse e hibridomas u otras celulas productoras de anticuerpo inmortalizadas pueden prepararse como se describe en el presente documento y/o como se conoce en la tecnica. Alternativamente, el anticuerpo, porcion especificada o variante puede expresarse usando el acido nucleico codificante o porcion del mismo en una celula huesped adecuada.
Codigos de aminoacidos
Los aminoacidos que constituyen los anticuerpos anti-IL-23p19 de la presente invencion se abrevian frecuentemente. Las designaciones de aminoacidos pueden indicarse designando el aminoacido por su codigo de una sola letra, su codigo de tres letras, nombre o codon (codones) de tres nucleotidos como es muy entendido en la materia (vease Alberts, B. y col., Molecular Biology of The Cell, tercera ed., Garland Publishing, Inc., Nueva York, 1994). Un anticuerpo anti-IL-23p19 de la presente invencion puede incluir una o mas sustituciones de aminoacidos, deleciones o adiciones, tanto de mutaciones naturales como manipulacion humana, como se ha especificado en el presente documento. Los aminoacidos en un anticuerpo anti-IL-23p19 de la presente invencion que son esenciales para la funcion pueden identificarse mediante procedimientos conocidos en la tecnica, tales como mutagenesis dirigida a sitio o mutagenesis de cribado con alanina (por ejemplo, Ausubel, arriba, Capftulos 8, 15; Cunningham y Pocillos, Science 244:1081-1085 (1989)). El ultimo procedimiento introduce mutaciones de una sola alanina en cada residuo en la molecula. Entonces, las moleculas mutantes resultantes se prueban para actividad biologica tal como, pero no se limitan a, al menos una actividad neutralizante de IL-23. Sitios que son cnticos para la union a anticuerpo tambien pueden identificarse por analisis estructural, tal como cristalizacion, resonancia magnetica nuclear o marcado por fotoafinidad (Smith y col., J. Mol. Biol. 224:899-904 (1992) y de Vos y col., Science 255:306-312 (1992)).
Los anticuerpos anti-IL-23p19 de la presente invencion pueden incluir, pero no se limitan a, al menos una porcion, secuencia o combinacion seleccionada de 5 a todos los aminoacidos contiguos de las secuencias de la region variable de SEC ID N°: 8, 18, 28 y 38 y SEC ID N°: 3, 13, 23 y 33.
Variantes no limitantes que pueden potenciar o mantener al menos una de las actividades enumeradas incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de los polipeptidos anteriores, que comprende ademas al menos una mutacion correspondiente a al menos una sustitucion en los residuos variados entre las secuencias de aminoacidos de variante desveladas.
Un anticuerpo anti-IL-23p19 puede comprender adicionalmente opcionalmente un polipeptido con una secuencia de aminoacidos que vana de la secuencia de SEC ID N°: 3-6, 8-11, 13-16, 18-21, 23-26, 28-31, 33-36 y 38-41 (por ejemplo, una o mas sustituciones conservativas de las secuencias proporcionadas en el presente documento). Por tanto, la presente invencion comprende variantes de la secuencia de aminoacidos de una region variable de la cadena ligera de SEC ID N°: 8, 18, 28 y 38 o la secuencia de aminoacidos de una region variable de la cadena pesada de SEC ID N°: 3, 13, 23 y 33.
Como apreciaran aquellos expertos, la presente invencion incluye al menos un anticuerpo biologicamente activo de la presente invencion. Anticuerpos biologicamente activos tienen una actividad espedfica de al menos el 20%, 30%, o el 40%, y, preferentemente al menos el 50%, 60% o el 70%, y, lo mas preferentemente al menos el 80%, 90% o el 95%-1000% o mas de la del anticuerpo nativo (no sintetico), endogeno o relacionado y conocido. Procedimientos de ensayo y cuantificacion de medidas de actividad enzimatica y especificidad por sustrato son muy conocidos para aquellos expertos en la materia.
En otro aspecto, la invencion se refiere a anticuerpos humanos y fragmentos de union a antfgeno, como se describe en el presente documento, que se modifican por la union covalente de un resto organico. Tal modificacion puede producir un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno con propiedades farmacocineticas mejoradas (por ejemplo, semivida en suero in vivo elevada). El resto organico puede ser un grupo polimerico hidrofilo lineal o ramificado, grupo de acido graso, o grupo ester de acido graso. En realizaciones particulares, el grupo polimerico hidrofilo puede tener un peso molecular de aproximadamente 800 a aproximadamente 120.000 Dalton y puede ser un polialcanoglicol (por ejemplo, polietilenglicol (PEG), polipropilenglicol (PPG)), polfmero de hidrato de carbono, polfmero de aminoacido o polivinilpirrolidona, y el acido graso o grupo ester de acido graso puede comprender de aproximadamente ocho a aproximadamente cuarenta atomos de carbono.
Los anticuerpos modificados y fragmentos de union a antfgeno de la invencion pueden comprender uno o mas restos organicos que estan covalentemente unidos, directamente o indirectamente, al anticuerpo. Cada resto organico que esta unido a un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno de la invencion puede ser independientemente un grupo polimerico hidrofilo, un grupo acido graso o un grupo ester de acido graso. Como se usa en el presente documento, el termino “acido graso” engloba acidos monocarboxflicos y acidos dicarboxflicos. Un “grupo polimerico hidrofilo”, como el termino se usa en el presente documento, se refiere a un polfmero organico que es mas soluble en agua que en octano. Por ejemplo, la polilisina es mas soluble en agua que en octano. Por tanto, un anticuerpo modificado por la union covalente de polilisina esta englobado por la invencion. Polfmeros hidrofilos adecuados para modificar anticuerpos de la invencion pueden ser lineales o ramificados e incluyen, por ejemplo, polialcanoglicoles (por ejemplo, p Eg , monometoxi-polietilenglicol (mPEG), PPG y similares), hidratos de carbono (por ejemplo, dextrano, celulosa, oligosacaridos, polisacaridos y similares), polfmeros de aminoacidos hidrofilos (por ejemplo, polilisina, poliarginina, poliaspartato y similares), poli(oxidos de alcano) (por ejemplo, poli(oxido de etileno), poli(oxido de propileno) y similares) y polivinilpirrolidona. Preferentemente, el polfmero hidrofilo que modifica el anticuerpo de la invencion tiene un peso molecular de aproximadamente 800 a aproximadamente 150.000 Dalton como entidad molecular separada. Por ejemplo, puede usarse PEG5000 y PEG20.000, en el que el submdice es el peso molecular promedio del polfmero en Dalton. El grupo polimerico hidrofilo puede estar sustituido con uno a aproximadamente seis grupos alquilo, acido graso o ester de acido graso. Polfmeros hidrofilos que estan sustituidos con un grupo acido graso o ester de acido graso pueden prepararse empleando procedimientos adecuados. Por ejemplo, un polfmero que comprende un grupo amina puede acoplarse a un carboxilato del acido graso o ester de acido graso, y un carboxilato activado (por ejemplo, activado con N, N-carbonildiimidazol) sobre un acido graso o ester de acido graso puede acoplarse a un grupo hidroxilo sobre un poKmero.
Acidos grasos y esteres de acidos grasos adecuados para modificar anticuerpos de la invencion pueden estar saturados o pueden contener una o mas unidades de insaturacion. Acidos grasos que son adecuados para modificar anticuerpos de la invencion incluyen, por ejemplo, n-dodecanoato (C12, laurato), n-tetradecanoato (C14, miristato), n-octadecanoato (C18, estearato), n-eicosanoato (C20, araquidato), n-docosanoato (C22, behenato), ntriacontanoato (C30), n-tetracontanoato (C40), c/'s-A9-octadecanoato (C18, oleato), todos los c/'s-A5,8,11,14-eicosatetraenoato (C20, araquidonato), acido octanodioico, acido tetradecanodioico, acido octadecanodioico, acido docosanodioico y similares. Esteres de acidos grasos adecuados incluyen monoesteres de acidos dicarboxflicos que comprenden un grupo alquilo inferior lineal o ramificado. El grupo alquilo inferior puede comprender de uno a aproximadamente doce, preferentemente uno a aproximadamente seis, atomos de carbono.
Los anticuerpos humanos modificados y fragmentos de union a antfgeno pueden prepararse usando procedimientos adecuados, tales como mediante reaccion con uno o mas agentes de modificacion. Un “agente de modificacion”, como el termino se usa en el presente documento, se refiere a un grupo organico adecuado (por ejemplo, polfmero hidrofilo, un acido graso, un ester de acido graso) que comprende un grupo activante. Un “grupo activante” es un resto qrnmico o grupo funcional que puede reaccionar, bajo condiciones apropiadas, con un segundo grupo qrnmico, formando asf un enlace covalente entre el agente de modificacion y el segundo grupo qrnmico. Por ejemplo, grupos activantes reactivos con amina incluyen grupos electrofilos tales como tosilato, mesilato, halo (cloro, bromo, fluor, yodo), esteres de N-hidroxisuccinimidilo (NHS) y similares. Grupos activantes que pueden reaccionar con tioles incluyen, por ejemplo, maleimida, yodoacetilo, acrilolilo, disulfuros de piridilo, acido 5-tiol-2-nitrobenzoico-tiol (TNB-tiol), y similares. Un grupo funcional aldehfdo puede acoplarse a moleculas que contienen amina o hidrazida, y un grupo azida puede reaccionar con un grupo fosforoso trivalente para formar enlaces fosforamidato o fosforimida. Procedimientos adecuados para introducir grupos activantes en moleculas se conocen en la tecnica (vease, por ejemplo, Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). Un grupo activante puede unirse directamente al grupo organico (por ejemplo, polfmero hidrofilo, acido graso, ester de acido graso), o mediante un resto de ligador, por ejemplo, un grupo C1-C12 divalente en el que uno o mas atomos de carbono pueden sustituirse con un heteroatomo tal como oxfgeno, nitrogeno o azufre. Restos de ligador adecuados incluyen, por ejemplo, tetraetilenglicol, -(CH2)3-, -NH-(CH2)e-NH-, (CH2)2-NH- y -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-. Agentes de modificacion que comprenden un resto de ligador pueden producirse, por ejemplo, haciendo reaccionar una mono-Boc-alquildiamina (por ejemplo, mono-Boc-etilendiamina, mono-Bocdiaminohexano) con un acido graso en presencia de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) para formar un enlace amida entre la amina libre y el carboxilato de acido graso. El grupo protector de Boc puede eliminarse del producto mediante tratamiento con acido trifluoroacetico (TFA) para exponer una amina primaria que puede acoplarse a otro carboxilato, como se describe, o puede hacerse reaccionar con anhfdrido maleico y el producto resultante ciclarse para producir un derivado de maleimido activado del acido graso (vease, por ejemplo, Thompson y col., documento WO 92/16221).
Los anticuerpos modificados de la invencion pueden producirse haciendo reaccionar un anticuerpo humano o fragmento de union a antfgeno con un agente de modificacion. Por ejemplo, los restos organicos pueden unirse al anticuerpo en un modo no espedfico para sitio empleando un agente de modificacion reactivo con amina, por ejemplo, un ester de NHS de PEG. Tambien pueden prepararse anticuerpos humanos modificados o fragmentos de union a antfgeno reduciendo enlaces disulfuro (por ejemplo, enlaces disulfuro entre cadenas) de un anticuerpo o fragmento de union a antfgeno. El anticuerpo reducido o fragmento de union a antfgeno puede entonces hacerse reaccionar con un agente de modificacion reactivo con tiol para producir el anticuerpo modificado de la invencion. Anticuerpos humanos modificados y fragmentos de union a antfgeno que comprenden un resto organico que esta unido a sitios espedficos de un anticuerpo de la presente invencion pueden prepararse usando procedimientos adecuados, tales como proteolisis inversa (Fisch y col., Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992); Werlen y col., Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994); Kumaran y col., Protein Sci. 6(10):2233-2241 (1997); Itoh y col., Bioorg. Chem., 24(1): 59-68 (1996); Capellas y col., Biotechnol. Bioeng., 56(4):456-463 (1997)), y los procedimientos descritos en Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996).
Composiciones de anticuerpo que comprenden adicionalmente principios terapeuticamente activos
Las composiciones de anticuerpo de la invencion pueden comprender opcionalmente ademas una cantidad eficaz de al menos un compuesto o proterna seleccionada de al menos uno de un farmaco antiinfeccioso, un farmaco para el sistema cardiovascular (CV), un farmaco para el sistema nervioso central (CNS), un farmaco para el sistema nervioso autonomo (SNA), un farmaco para las vfas respiratorias, un farmaco para el tubo gastrointestinal (GI), un farmaco hormonal, un farmaco para el equilibrio en fluidos o electrolitos, un farmaco hematologico, un antineoplasico, un farmaco para inmunomodulacion, un farmaco oftalmico, otico o nasal, un farmaco topico, un farmaco nutricional o similares. Tales farmacos son muy conocidos en la tecnica, que incluyen formulaciones, indicaciones, dosificacion y administracion para cada uno presentado en el presente documento (vease, por ejemplo, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21a edicion, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmacotherapy Handbook, Wells y col., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT).
El farmaco de inmunomodulacion puede ser al menos uno seleccionado de inmunosupresores, vacunas o por lo menos un toxoide, antitoxina o al menos una antivenina, suero inmune, y modificador de la respuesta biologica.
El al menos un corticosteroide puede ser al menos uno seleccionado de betametasona, acetato de betametasona o fosfato sodico de betametasona, fosfato sodico de betametasona, acetato de cortisona, dexametasona, acetato de dexametasona, fosfato sodico de dexametasona, acetato de fludrocortisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, cipionato de hidrocortisona, fosfato sodico de hidrocortisona, succinato sodico de hidrocortisona, metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato sodico de metilprednisolona, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato sodico de prednisolona, tebutato de prednisolona, prednisona, triamcinolona, acetonido de triamcinolona y diacetato de triamcinolona.
El al menos un inmunodepresor puede ser al menos uno seleccionado de azatioprina, basiliximab, ciclosporina, daclizumab, inmunoglobulina de linfocitos, muromonab-CD3, micofenolato mofetilo, clorhidrato de micofenolato mofetilo, sirolimus y tacrolimus. El al menos un corticosteroide topico puede ser al menos uno seleccionado de dipropionato de betametasona, valerato de betametasona, propionato de clobetasol, desonida, desoximetasona, dexametasona, fosfato sodico de dexametasona, diacetato de diflorasona, acetonido de fluocinolona, fluocinonida, flurandrenolida, propionato de fluticasona, halcionida, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, valerato de hidrocorisona, furoato de mometasona y acetonido de triamcinolona (vease, por ejemplo, pag. 1098-1136 de Nursing 2001 Drug Handbook.)
Las composiciones de anticuerpo anti-IL-23p19 de la presente invencion pueden comprender ademas al menos uno de cualquier cantidad adecuada y eficaz de una composicion o composicion farmaceutica que comprende al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 adecuado para poner en contacto o administrar a una celula, tejido, organo, animal o paciente en necesidad de tal modulacion, tratamiento o terapia, que opcionalmente comprende ademas al menos uno seleccionado de al menos un antagonista de TNF (por ejemplo, pero no se limita a, un producto qmmico de TNF o antagonista de protema, anticuerpo monoclonal o policlonal para TNF o fragmento, un receptor de TNF soluble (por ejemplo, p55, p70 o p85) o fragmento, polipeptidos de fusion de los mismos, o un antagonista de TNF de molecula pequena, por ejemplo, protema I o II de union a TNF (TBP-1 o TBP-II), nerelimonmab, infliximab, etanercept, CDP-571, CDP-870, afelimomab, lenercept, y similares), un antirreumatico (por ejemplo, metrotrexato, auranofina, aurotioglucosa, azatioprina, etanercept, tiomalato de oro y sodio, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalazina), un relajante muscular, un narcotico, un farmaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), un analgesico, un anestesico, un sedante, un anestesico local, un bloqueante neuromuscular, un antimicrobiano (por ejemplo, aminoglucosido, un antifungico, un antiparasttico, un antivmico, un carbapenem, cefalosporina, una fluroquinolona, un macrolido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otro antimicrobiano), un antipsoriasico, un corticosteroide, un esteroide anabolico, un agente relacionado con la diabetes, un mineral, un nutritivo, un agente tiroideo, una vitamina, una hormona relacionada con el calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemetico, un antiulceroso, un laxante, un anticoagulante, una eritropoyetina (por ejemplo, epoetina alfa), un filgrastim (por ejemplo, G-CSF, Neupogen), un sargramostim (GM-CSF, Leukine), una inmunizacion, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (por ejemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona de crecimiento, un farmaco de reemplazo hormonal, un modulador de receptores estrogenicos, un midriatico, un cicloplegico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitotico, un radiofarmaceutico, un antidepresivo, agente antimamaco, un antipsicotico, un ansiolftico, un hipnotico, un simpatomimetico, un estimulante, donepezilo, tacrina, una medicacion para el asma, un beta-agonista, un esteroide inhalado, un inhibidor de leucotrieno, una metilxantina, una cromolina, una epinefrina o analogo, dornasa alfa (Pulmozyme), una citocina o un antagonista de citocina. Ejemplos no limitantes de tales citocinas incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de IL-1 a IL-28 (por ejemplo, iL-1, IL-2, etc.). Dosificaciones adecuadas son muy conocidas en la tecnica. Vease, por ejemplo, Wells y col., eds., Pharmacoterapy Handbook, 2a edicion, Appleton y Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, edicion Deluxe, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000).
Los compuestos, composiciones o combinaciones de anticuerpos anti-IL-23p19 de la presente invencion pueden comprender ademas al menos uno de cualquier auxiliar adecuado tal como, pero no se limitan a, diluyente, aglutinante, estabilizador, tampones, sales, disolventes lipofilos, conservante, adyuvante o similares. Se prefieren auxiliares farmaceuticamente aceptables. Ejemplos no limitantes de, y procedimientos de preparacion de tales disoluciones esteriles, son muy conocidos en la tecnica tales como, pero se limitan a, Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edicion, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Pueden seleccionarse rutinariamente vehmulos farmaceuticamente aceptables que son adecuados para el modo de administracion, solubilidad y/o estabilidad del anticuerpo anti-IL-23p19, fragmento o composicion de variante como es muy conocido en la tecnica o como se describe en el presente documento.
Excipientes y aditivos farmaceuticos utiles en la presente composicion incluyen, pero no se limitan a, protemas, peptidos, aminoacidos, lfpidos e hidratos de carbono (por ejemplo, azucares, que incluyen monosacaridos, di-, tri-, tetra- y oligosacaridos; azucares derivatizados tales como alditoles, acidos aldonicos, azucares esterificados y similares; y polisacaridos o polfmeros de azucar), que pueden estar presentes individualmente o en combinacion, que comprenden solos o en combinacion el 1-99,99% en peso o volumen.
Excipientes de protema a modo de ejemplo incluyen albumina de suero tal como albumina de suero humano (HSA), albumina humana recombinante (rHA), gelatina, casema y similares. Componentes de aminoacido/anticuerpo representativos que tambien pueden funcionar en una capacidad de tamponamiento incluyen alanina, glicina, arginina, betama, histidina, acido glutamico, acido aspartico, cistema, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartamo y similares. Un aminoacido preferido es glicina.
Excipientes de hidrato de carbono adecuados para su uso en la invencion incluyen, por ejemplo, monosacaridos tales como fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa y similares; disacaridos tales como lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa y similares; polisacaridos tales como rafinosa, melezitosa, maltodextrinas, dextranos, almidones y similares; y alditoles tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol, sorbitol (glucitol), mioinositol y similares. Excipientes de hidrato de carbono preferidos para su uso en la presente invencion son manitol, trehalosa y rafinosa.
Las composiciones de anticuerpo anti-IL-23p19 tambien pueden incluir un tampon o un agente de ajuste del pH; normalmente, el tampon es una sal preparada a partir de un acido o base organico. Tampones representativos incluyen sales de acido organico tales como sales de acido dtrico, acido ascorbico, acido gluconico, acido carbonico, acido tartarico, acido sucdnico, acido acetico o acido ftalico; tampones Tris, clorhidrato de trometamina o fosfato. Tampones preferidos para su uso en las presentes composiciones son sales de acido organico tales como citrato.
Adicionalmente, las composiciones de anticuerpo anti-IL-23p19 de la invencion pueden incluir excipientes/aditivos polimericos tales como polivinilpirrolidonas, Ficoll (un azucar polimerico), dextratos (por ejemplo, ciclodextrinas tales como 2-hidroxipropil-p-ciclodextrina), polietilenglicoles, aromatizantes, agentes antimicrobianos, edulcorantes, antioxidantes, agentes antiestaticos, tensioactivos (por ejemplo, polisorbatos tales como “TWEEN 20” y “TWEEN 80”), lfpidos (por ejemplo, fosfolfpidos, acidos grasos), esteroides (por ejemplo, colesterol) y agentes quelantes (por ejemplo, e DtA).
Estos excipientes y/o aditivos farmaceuticos conocidos y adicionales adecuados para su uso en las composiciones de anticuerpo anti-IL-23p19, porcion o variante segun la invencion se conocen en la tecnica, por ejemplo, como se enumeran en “Remington: The Science & Practice of Pharmacy”, 19a ed., Williams & Williams, (1995), y en “Physician's Desk Reference”, 52a ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), cuyas divulgaciones se incorporan en su totalidad en el presente documento por referencia. Materiales de vehfculo o excipiente preferidos son hidratos de carbono (por ejemplo, sacaridos y alditoles) y tampones (por ejemplo, citrato) o agentes polimericos. Una molecula de vehfculo a modo de ejemplo es el mucopolisacarido, acido hialuronico, que puede ser util para administracion intraarticular.
Formulaciones
Como se ha observado anteriormente, la invencion proporciona formulaciones estables que preferentemente comprenden un tampon fosfato con solucion salina o una sal elegida, ademas de disoluciones y formulaciones conservadas que contienen un conservante, ademas de formulaciones conservadas de multiples usos adecuadas para uso farmaceutico o veterinario, que comprenden al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 en una formulacion farmaceuticamente aceptable. Formulaciones conservadas contienen al menos un conservante conocido u opcionalmente seleccionado del grupo que consiste en al menos un fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bendlico, nitrito fenilmercurico, fenoxietanol, formaldehudo, clorobutanol, cloruro de magnesio (por ejemplo, hexahidratado), alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, polfmeros, o mezclas de los mismos en un diluyente acuoso. Cualquier concentracion adecuada o mezcla puede usarse como se conoce en la tecnica, tal como aproximadamente 0,0015%, o cualquier intervalo, valor o fraccion en su interior. Ejemplos no limitantes incluyen ningun conservante, aproximadamente 0,1-2% de m-cresol (por ejemplo, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0%), aproximadamente 0,1-3% de alcohol bendlico (por ejemplo, 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5%), aproximadamente 0,001-0,5% de timerosal (por ejemplo, 0,005, 0,01), aproximadamente 0,001-2,0% de fenol (por ejemplo, 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0%), 0,0005-1,0% de alquilparabeno(s) (por ejemplo, 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,75, 0,9, 1,0%), y similares.
Como se ha observado anteriormente, la invencion proporciona un ardculo de fabricacion que comprende material de envasado y al menos un vial que comprende una disolucion de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 con los tampones y/o conservantes prescritos, opcionalmente en un diluyente acuoso, en el que dicho material de envasado comprende una etiqueta que indica que tal disolucion puede mantenerse durante un periodo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 horas o mas. La invencion comprende ademas un artfculo de fabricacion, que comprende material de envasado, un primer vial que comprende liofilizado al menos un anticuerpo anti-IL-23p19, y un segundo vial que comprende un diluyente acuoso de tampon o conservante prescrito, en el que dicho material de envasado comprende una etiqueta que instruye a un paciente para reconstituir el al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 en el diluyente acuoso para formar una disolucion que puede mantenerse durante un periodo de veinticuatro horas o mas.
El al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 usado segun la presente invencion puede producirse por medios recombinantes que incluyen preparaciones de celulas de mairnfero o transgenicas, o pueden purificarse a partir de otras fuentes biologicas, como se describen en el presente documento o como se conocen en la tecnica.
El intervalo de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 en el producto de la presente invencion incluye cantidades que dan tras la reconstitucion, si es un sistema humedo/seco, concentraciones de aproximadamente 1,0 |jg/ml a aproximadamente 1000 mg/ml, aunque concentraciones menores o mayores son operables y dependen del vehmulo de administracion previsto, por ejemplo, las formulaciones de disolucion se diferenciaran de parche transdermico, procedimientos pulmonares, transmucosos, o de bombas osmoticas o microbombas.
Preferentemente, el diluyente acuoso comprende opcionalmente ademas un conservante farmaceuticamente aceptable. Conservantes preferidos incluyen aquellos seleccionados del grupo que consiste en fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bendlico, alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos. La concentracion de conservante usada en la formulacion es una concentracion suficiente para dar un efecto antimicrobiano. Tales concentraciones dependen del conservante seleccionado y son facilmente determinadas por el experto.
Otros excipientes, por ejemplo, agentes de isotonicidad, tampones, antioxidantes y potenciadores conservantes puede anadirse opcionalmente y preferentemente al diluyente. Un agente de isotonicidad, tal como glicerina, se usa comunmente a concentraciones conocidas. Un tampon fisiologicamente tolerado se anade preferentemente para proporcionar control de pH mejorado. Las formulaciones pueden cubrir un amplio intervalo de pH, tal como de aproximadamente pH 4 a aproximadamente pH 10, e intervalos preferidos de aproximadamente pH 5 a aproximadamente pH 9, y un intervalo mas preferido de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 8,0. Preferentemente, las formulaciones de la presente invencion tienen un pH entre aproximadamente 6,8 y aproximadamente 7,8. Tampones preferidos incluyen tampones fosfato, lo mas preferentemente fosfato sodico, particularmente solucion salina tamponada con fosfato (PBS).
Otros aditivos, tales como un solubilizante farmaceuticamente aceptable como Tween 20 (polioxietileno (20)-monolaurato de sorbitano), Tween 40 (polioxietileno (20)-monopalmitato de sorbitano), Tween 80 (polioxietileno (20)-monooleato de sorbitano), Pluronic F68 (copolfmeros de bloques de polioxietileno-polioxipropileno) y PEG (polietilenglicol) o tensioactivos no ionicos, tales como polisorbato 20 o 80 o poloxamero 184 o 188, polioles de Pluronic®, otros co-polfmeros de bloques y quelantes tales como EDTA y EGTA, pueden anadirse opcionalmente a las formulaciones o composiciones para reducir la agregacion. Estos aditivos son particularmente utiles si una bomba o recipiente de plastico se usa para administrar la formulacion. La presencia de tensioactivo farmaceuticamente aceptable mitiga la propension a que la protema se agregue.
Las formulaciones de la presente invencion pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende mezclar al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 y un conservante seleccionado del grupo que consiste en fenol, mcresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bendlico, alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos, en un diluyente acuoso. La mezcla de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 y conservante en un diluyente acuoso se lleva a cabo usando procedimientos de disolucion y mezcla convencionales. Para preparar una formulacion adecuada, por ejemplo, una cantidad medida de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 en disolucion tamponada se combina con el conservante deseado en una disolucion tamponada en cantidades suficientes para proporcionar la protema y conservante a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento senan reconocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, el orden en el que se anaden los componentes, si se usan aditivos adicionales, la temperatura y el pH al que la formulacion se prepara son todos factores que pueden optimizarse para la concentracion y medios de administracion usados.
Las formulaciones reivindicadas pueden proporcionarse a pacientes como disoluciones transparentes o como viales duales que comprenden un vial de liofilizado al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 que se reconstituye con un segundo vial que contiene agua, un conservante y/o excipientes, preferentemente un tampon fosfato y/o solucion salina y una sal elegida, en un diluyente acuoso. Tanto un vial de una unica disolucion como un vial dual que requiere reconstitucion puede reutilizarse multiples veces y puede ser suficiente para un unico ciclo o multiples ciclos de tratamiento del paciente y, por tanto, pueden proporcionar una pauta de tratamiento mas conveniente que la actualmente disponible.
Los presentes artmulos de fabricacion reivindicados son utiles para el administracion durante un periodo que oscila de inmediato a veinticuatro horas o mas. Por consiguiente, los artmulos de fabricacion presentemente reivindicados ofrecen ventajas significativas al paciente. Las formulaciones de la invencion pueden almacenarse con seguridad opcionalmente a temperaturas de aproximadamente 2°C a aproximadamente 40°C y retienen la actividad biologica de la protema durante periodos prolongados de tiempo, permitiendo asf que una etiqueta del envase indique que la disolucion puede mantenerse y/o usarse durante un periodo de 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 o 96 horas o mas. Si se usa diluyente conservado, tal etiqueta puede incluir uso hasta 1-12 meses, medio ano, un ano y medio y/o dos anos.
Las disoluciones de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 de la invencion pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende mezclar al menos un anticuerpo en un diluyente acuoso. La mezcla se lleva a cabo usando procedimientos de disolucion y mezcla convencionales. Para preparar un diluyente adecuado, por ejemplo, una cantidad medida de al menos un anticuerpo en agua o tampon se combina en cantidades suficientes para proporcionar la protema y, opcionalmente, un conservante o tampon a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento senan reconocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, el orden en el que los componentes se anaden, si se usan aditivos adicionales, la temperatura y pH al que la formulacion se prepara, son todos factores que pueden optimizarse para la concentracion y medios de administracion usados.
Los productos reivindicados pueden proporcionarse a pacientes como disoluciones transparentes o como viales duales que comprenden un vial de liofilizado al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 que se reconstituye con un segundo vial que contiene el diluyente acuoso. Tanto un vial de una unica disolucion como un vial dual que requiere reconstitucion pueden reutilizarse multiples veces, y puede ser suficiente para un unico ciclo o multiples ciclos de tratamiento del paciente y, por tanto, proporciona una pauta de tratamiento mas conveniente que la actualmente disponible.
Los productos reivindicados pueden proporcionarse indirectamente a pacientes proporcionandose a farmacias, clmicas u otras instituciones y centros tales, comprendiendo las disoluciones transparentes o viales duales un vial de liofilizado al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 que se reconstituye con un segundo vial que contiene el diluyente acuoso. La disolucion transparente en este caso puede ser hasta un litro o incluso de mayor tamano, proporcionando un recipiente mas grande del que porciones mas pequenas del la menos una disolucion de anticuerpo pueden recuperarse una o multiples veces para la transferencia a viales mas pequenos y proporcionarse por la farmacia o clmica a sus clientes y/o pacientes.
Dispositivos reconocidos que comprenden sistemas de un unico vial incluyen dispositivos de inyector de pluma para la administracion de una disolucion tal como plumas BD, BD Autojector®, Humaject®, NovoPen®, B-D®Pen, AutoPen® y OptiPen®, GenotropinPen®, Genotronorm Pen®, Humatro Pen®, Reco-Pen®, Roferon Pen®, Biojector®, Iject®, J-tip Needle-Free Inyector®, Intraject®, Medi-Ject®, por ejemplo, como se preparan o desarrollan por Becton Dickinson (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickinson.com), Disetronic (Burgdorf, Suiza, www.disetronic.com; Bioject, Portland, Oregon (www.bioject.com); National Medical Products, Weston Medical (Peterborough, UK, www.weston-medical.com), Medi-Ject Corp (Mineapolis, MN, www.mediject.com), y dispositivos adecuados similares. Dispositivos reconocidos que comprenden un sistema de vial dual incluyen aquellos sistemas de inyector de pluma para la reconstitucion de un farmaco liofilizado en un cartucho para la administracion de la disolucion reconstituida, tal como HumatroPen®. Ejemplos de otros dispositivos adecuados incluyen jeringuillas precargadas, autoinyectores, inyectores sin aguja y conjuntos para infusion IV sin aguja.
Los productos presentemente reivindicados incluyen material de envase. El material de envase proporciona, ademas de la informacion requerida por las agencias reguladoras, las condiciones bajo las cuales puede usarse el producto. El material de envase de la presente invencion proporciona instrucciones al paciente para reconstituir el al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 en el diluyente acuoso para formar una disolucion y para usar la disolucion durante un periodo de 2-24 horas o mas para el producto humedo/eco de dos viales. Para el producto de disolucion en un unico vial, la etiqueta indica que tal disolucion puede usarse durante un periodo de 2-24 horas o mas. Los productos presentemente reivindicados son utiles para uso de producto farmaceutico humano.
Las formulaciones de la presente invencion pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende mezclar al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 y un tampon seleccionado, preferentemente un tampon fosfato que contiene solucion salina o una sal elegida. La mezcla del al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 y tampon en un diluyente acuoso se lleva a cabo usando procedimientos de disolucion y mezcla convencionales. Para preparar una formulacion adecuada, por ejemplo, una cantidad medida de al menos un anticuerpo en agua o tampon se combina con el agente de tamponamiento deseado en agua en cantidades suficientes para proporcionar la protema y tampon a las concentraciones deseadas. Las variaciones de este procedimiento senan reconocidas por un experto en la materia. Por ejemplo, el orden en el que los componentes se anaden, si se usan aditivos adicionales, la temperatura y pH al que la formulacion se prepara, son todos factores que pueden optimizarse para la concentracion y medios de administracion usados.
Las formulaciones estables o conservadas reivindicadas pueden proporcionarse a pacientes como disoluciones transparentes o como viales duales que comprenden un vial de liofilizado de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 que se reconstituye con un segundo vial que contiene un conservante o tampon y excipientes en un diluyente acuoso. Tanto un vial de una unica disolucion como un vial dual que requiere reconstitucion pueden reutilizarse multiples veces y puede ser suficientes para un unico ciclo o multiples ciclos de tratamiento del paciente y, por tanto, proporciona una pauta de tratamiento mas conveniente que la actualmente disponible.
Otras formulaciones o procedimientos de estabilizacion del anticuerpo anti-IL-23p19 pueden resultar en otras distintas de una disolucion transparente de polvo liofilizado que comprende el anticuerpo. Entre la disolucion no transparente estan formulaciones que comprenden suspensiones particuladas, siendo dichas partmulas una composicion que contiene el anticuerpo anti-IL-23p19 en una estructura de dimension variable y conocida de diversas formas como una microesfera, micropartmula, nanopartmula, nanoesfera o liposoma. Tales formulaciones particuladas relativamente homogeneas, esencialmente esfericas, que contienen un agente activo pueden formarse poniendo en contacto una fase acuosa que contiene el agente activo y un polfmero y un fase no acuosa, seguido de la evaporacion de la fase no acuosa para producir la coalescencia de partmulas de la fase acuosa como se ensena en el documento U.S. 4.589.330. Pueden prepararse micropartmulas porosas usando una primera fase que contiene agente activo y un polfmero disperso en un disolvente continuo y eliminando dicho disolvente de la suspension por liofilizacion o dilucion-extraccion-precipitacion como se ensena en el documento U.S. 4.818.542. Polfmeros preferidos para tales preparaciones son copolfmeros o polfmeros naturales o sinteticos seleccionados del grupo que consiste en gelatina, agar, almidon, arabinogalactano, albumina, colageno, acido poliglicolico, acido polilactico, glicolida-L(-)lactida poli(epsilon-caprolactona), poli(epsilon-caprolactona-CO-acido lactico), poli(epsilon-caprolactona-CO-acido glicolico), poli(acido (3.-hidroxibut^rico), poli(oxido de etileno), polietileno, poli(2-cianoacrilato de alquilo), poli(hidroximetacrilato de etilo), poliamidas, poli(aminoacidos), poli(DL-aspartamida de 2-hidroxietilo), poli(ester urea), poli(L-fenilalanina/etilenglicol/1,6-diisocianatohexano) y poli(metacrilato de metilo). Polfmeros particularmente preferidos son poliesteres tales como acido poliglicolico, acido polilactico, glicolida-L(-)lactida poli(epsiloncaprolactona), poli(epsilon-caprolactona-CO-acido lactico) y poli(epsilon-caprolactona-CO-acido glicolico. Disolventes utiles para disolver el polfmero y/o el activo incluyen: agua, hexafluoroisopropanol, cloruro de metileno, tetrahidrofurano, hexano, benceno o hexafluoroacetona sesquihidratada. El procedimiento de dispersar la fase que contiene el activo con una segunda fase puede incluir forzar a presion dicha primera fase a traves de un orificio en una boquilla para afectar la formacion de gotitas.
Las formulaciones en polvo seco pueden resultar de procedimientos distintos de liofilizacion, tales como por secado por pulverizacion o extraccion con disolvente mediante evaporacion o mediante precipitacion de una composicion cristalina, seguido de una o mas etapas para eliminar disolvente acuoso o no acuoso. La preparacion de una preparacion de anticuerpo secado por pulverizacion se ensena en el documento U.S. 6.019.968. Las composiciones en polvo seco basadas en anticuerpo pueden producirse secando por pulverizacion disoluciones o suspensiones del anticuerpo y, opcionalmente, excipientes, en un disolvente en condiciones para proporcionar un polvo seco respirable. Los disolventes pueden incluir compuestos polares tales como agua y etanol, que pueden secarse facilmente. La estabilidad de los anticuerpos puede potenciarse realizando los procedimientos de secado por pulverizacion en ausencia de oxfgeno, tal como bajo una inertizacion de nitrogeno o usando nitrogeno como gas de secado. Otra formulacion relativamente seca es una dispersion de una pluralidad de microestructuras perforadas dispersas en un medio de suspension que normalmente comprende un propulsor de hidrofluoroalcano como se ensena en el documento WO 9916419. Las dispersiones estabilizadas pueden administrarse al pulmon de un paciente usando un inhalador de dosis medida. Equipos utiles en la fabricacion comercial de medicamentos secados por pulverizacion se fabrican por Buchi Ltd o Niro Corp.
Al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 en tanto las formulaciones como disoluciones estables o conservadas descritas en el presente documento puede administrarse a un paciente segun la presente invencion mediante una variedad de procedimientos de administracion que incluyen inyeccion SC o IM; transdermica, pulmonar, transmucosa, implante, bomba osmotica, cartucho, microbomba, u otros medios apreciados por el experto, como es muy conocido en la tecnica.
Aplicaciones terapeuticas
En el presente documento se desvela un procedimiento para modular o tratar al menos una enfermedad relacionada con IL-23 en una celula, tejido, organo, animal o paciente, como se conoce en la tecnica o como se describe en el presente documento, usando al menos un anticuerpo para IL-23p19 de la presente invencion, por ejemplo, administrando o poniendo en contacto la celula, tejido, organo, animal o paciente con una cantidad terapeutica eficaz de anticuerpo para IL-23p19. Tambien se desvela un procedimiento para modular o tratar al menos una enfermedad relacionada con IL-23 en una celula, tejido, organo, animal o paciente que incluye, pero no se limita a, al menos una de obesidad, una enfermedad inmunorrelacionada, una enfermedad cardiovascular, una enfermedad infecciosa, una enfermedad maligna o una enfermedad neurologica.
En el presente documento tambien se desvela un procedimiento para modular o tratar al menos una enfermedad inmunorrelacionada relacionada con IL-23 en una celula, tejido, organo, animal o paciente que incluye, pero no se limita a, al menos una de artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis reumatoide juvenil de aparicion sistemica, artritis psoriasica, espondilitis anquilosante, ulcera gastrica, artropatias seronegativas, osteoartritis, osteolisis, aflojamiento aseptico de implantes ortopedicos, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, lupus eritematoso sistemico, smdrome antifosfolfpidos, iridociclitis/uveftis/neuritis optica, fibrosis pulmonar idiopatica, vasculitis sistemica/granulomatosis de Wegener, sarcoidosis, orquitis/procedimientos de inversion de la vasectoirna, enfermedades alergicas/atopicas, asma, rinitis alergica, eccema, dermatitis alergica de contacto, conjuntivitis alergica, neumonitis por hipersensibilidad, trasplantes, rechazo de trasplante de organo, enfermedad de injerto frente a huesped, smdrome de respuesta inflamatoria sistemica, smdrome por septicemia, septicemia por Gram-positiva, septicemia por Gram-negativa, septicemia negativa en cultivo, septicemia fungica, fiebre neutropenica, urosepticemia, meningococcemia, traumatismo/hemorragia, quemaduras, exposicion a radiacion ionizante, pancreatitis aguda, smdrome disneico del adulto, artritis reumatoide, hepatitis inducida por alcohol, patologfas inflamatorias cronicas, sarcoidosis, patologfa de Crohn, anemia de celulas falciformes, diabetes, nefrosis, enfermedades atopicas, reacciones de hipersensibilidad, rinitis alergica, fiebre del heno, rinitis perenne, conjuntivitis, endometriosis, asma, urticaria, anafilaxia sistemica, dermatitis, anemia perniciosa, enfermedad hemoltiica, trombocitopenia, rechazo de injerto de cualquier organo o tejido, rechazo de trasplante de rinon, rechazo de trasplante de corazon, rechazo de trasplante de htigado, rechazo de trasplante de pancreas, rechazo de trasplante de pulmon, rechazo de trasplante de medula osea (TMO), rechazo de aloinjerto de piel, rechazo de trasplante de cartilago, rechazo de injerto de hueso, rechazo de trasplante de intestino delgado, rechazo de implante de timo fetal, rechazo de trasplante paratiroideo, rechazo de xenoinjerto de cualquier organo o tejido, rechazo de aloinjerto, reacciones de hipersensibilidad anti-receptor, enfermedad de Graves, enfermedad de Raynaud, diabetes resistente a insulina tipo B, asma, miastenia grave, citotoxicidad mediada por anticuerpo, reacciones de hipersensibilidad de tipo III, smdrome de POEMS (polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gammapatia monoclonal y smdrome de cambios cutaneos), polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gammapatia monoclonal, smdrome de cambios cutaneos, smdrome antifosfolfpidos, penfigo, esclerodermia, enfermedad mixta del tejido conjuntivo, enfermedad idiopatica de Addison, diabetes mellitus, hepatitis activa cronica, cirrosis biliar primaria, vitiligo, vasculitis, smdrome de cardiotoirtia post-MI, hipersensibilidad de tipo IV, dermatitis de contacto, neumonitis por hipersensibilidad, rechazo de aloinjerto, granulomas debidos a organismos intracelulares, sensibilidad a farmacos, enfermedad metabolica/idiopatica, de Wilson, hemocromatosis, deficiencia de alfa-1-antitripsina, retinopatia diabetica, tiroiditis de Hashimoto, osteoporosis, evaluacion del eje hipotalamico-hipofisario-adrenal, cirrosis biliar primaria, tiroiditis, encefalomielitis, caquexia, fibrosis qmstica, enfermedad pulmonar cronica neonatal, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC), linfohistiocitosis hematofagocftica familiar, afecciones dermatologicas, psoriasis, alopecia, smdrome nefrotico, nefritis, nefritis glomerular, insuficiencia renal aguda, hemodialisis, uremia, toxicidad, preeclampsia, terapia con okt3, terapia con anti-cd3, terapia con citocinas, quimioterapia, radioterapia (por ejemplo, que incluye, pero no se limita a, astenia, anemia, caquexia y similares), intoxicacion cronica por salicilato y similares. Veanse, por ejemplo, the Merck Manual, 12a-17a ediciones, Merck & Company, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells y col., eds., segunda edicion, Appleton y Lange, Stamford, Conn. (1998, 2000).
En el presente documento tambien se desvela un procedimiento para modular o tratar psoriasis, artritis psoriasica, enfermedad de Crohn, esclerosis multiple y neuritis optica, entre las otras enfermedades enumeradas anteriormente como relacionadas con IL-23, en una celula, tejido, organo, animal o paciente que incluyen, pero no se limitan a, al menos una de enfermedad inmunorrelacionada, enfermedad cardiovascular, enfermedad infecciosa, maligna y/o neurologica. Un procedimiento tal puede comprender opcionalmente administrar una cantidad eficaz de al menos una composicion o composicion farmaceutica que comprende al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 a una celula, tejido, organo, animal o paciente en necesidad de tal modulacion, tratamiento o terapia.
Cualquier procedimiento de la presente divulgacion puede comprender administrar una cantidad eficaz de una composicion o composicion farmaceutica que comprende al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 a una celula, tejido, organo, animal o paciente en necesidad de tal modulacion, tratamiento o terapia. Un procedimiento tal puede comprender opcionalmente ademas co-administracion o terapia de combinacion para tratar tales enfermedades o trastornos, en el que la administracion de dicho al menos un anticuerpo anti-IL-23p19, porcion especificada o variante del mismo comprende ademas administrar, antes, simultaneamente y/o despues, al menos uno seleccionado de al menos un antagonista de TNF (por ejemplo, pero no se limita a, un producto qrnmico de TNF o antagonista de protema, anticuerpo monoclonal o policlonal de TNF o fragmento, un receptor de TNF soluble (por ejemplo, p55, p7o o p85) o fragmento, polipeptidos de fusion de los mismos, o un antagonista de TNF de molecula pequena, por ejemplo, protema de union a TNF I o II (TBP-I o TBP-II), nerelimonmab, infliximab, etanercept (Enbrel™), adalimulab (Humira™) , CDP-571, CDP-870, afelimomab, lenercept, y similares), un antirreumatico (por ejemplo, metrotrexato, auranofina, aurotioglucosa, azatioprina, tiomalato de oro y sodio, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalazina), un relajante muscular, un narcotico, un farmaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), un analgesico, un anestesico, un sedante, un anestesico local, un bloqueante neuromuscular, un antimicrobiano (por ejemplo, aminoglucosido, un antifungico, un antiparasftico, un antivtiico, un carbapenem, cefalosporina, una fluroquinolona, un macrolido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otro antimicrobiano), un antipsoriasico, un corticosteroide, un esteroide anabolico, un agente relacionado con la diabetes, un mineral, un nutritivo, un agente tiroideo, una vitamina, una hormona relacionada con el calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemetico, un antiulceroso, un laxante, un anticoagulante, una eritropoyetina (por ejemplo, epoetina alfa), un filgrastim (por ejemplo, G-CSF, Neupogen), un sargramostim (GM-CSf , Leukine), una inmunizacion, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (por ejemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona de crecimiento, un farmaco de reemplazo hormonal, un modulador de receptores estrogenicos, un midriatico, un cicloplegico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitotico, un radiofarmaceutico, un antidepresivo, agente antimamaco, un antipsicotico, un ansiotitico, un hipnotico, un simpatomimetico, un estimulante, donepezilo, tacrina, una medicacion para el asma, un beta-agonista, un esteroide inhalado, un inhibidor de leucotrieno, una metilxantina, una cromolina, una epinefrina o analogo, dornasa alfa (Pulmozyme), una citocina o un antagonista de citocina. Dosificaciones adecuadas son muy conocidas en la tecnica. Veanse, por ejemplo, Wells y col., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a edicion, Appleton y Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, edicion Deluxe, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000); Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21a edicion, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ.
Antagonistas de TNF adecuados para composiciones, terapia de combinacion, co-administracion, dispositivos y/o procedimientos de la presente invencion (que comprenden ademas al menos un anticuerpo, porcion especificada y variante de del mismo, de la presente invencion), incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos anti-TNF (por ejemplo, al menos un antagonista de TNF como se define anteriormente), fragmentos de union a antfgeno de los mismos y moleculas de receptor que se unen espedficamente a TNF; compuestos que previenen y/o inhiben la smtesis de TNF, liberacion de TNF o su accion sobre celulas diana tales como talidomida, tenidap, inhibidores de fosfodiesterasa (por ejemplo, pentoxifilina y rolipram), agonistas de receptores de adenosina A2b y potenciadores de receptores de adenosina A2b; compuestos que previenen y/o inhiben la senalizacion de receptores de TNF tales como inhibidores de protemas cinasas activadas por mitogeno (MAP); compuestos que bloquean y/o inhiben la escision de TNF de la membrana tales como inhibidores de metaloproteinasa; compuestos que bloquean y/o inhiben actividad de TNF tales como inhibidores de la enzima conversora de angiotensina (ACE) (por ejemplo, captoprilo); y compuestos que bloquean y/o inhiben la produccion y/o smtesis de TNF tales como inhibidores de cinasas mAp .
Como se usa en el presente documento, un “anticuerpo para factor de necrosis tumoral”, “anticuerpo para TNF”, “anticuerpo para TNFa”, o fragmento y similares, disminuye, bloquea, inhibe, deroga o interfiere con la actividad de TNFa in vitro, in situ y/o, preferentemente, in vivo. Por ejemplo, un anticuerpo humano para TNF adecuado de la presente invencion puede unirse a TNFa e incluye anticuerpos anti-TNF, fragmentos de union a antfgeno de los mismos y mutantes o dominios especificados de los mismos que se unen espedficamente a TNFa Un anticuerpo de TNF adecuado o fragmento tambien puede disminuir, bloquear, derogar, interferir, prevenir y/o inhibir la smtesis de ARN, ADN o protema de TNF, liberacion de TNF, senalizacion de receptores de t Nf , escision de TNF de membrana, actividad de TNF, produccion y/o smtesis de TNF.
Un ejemplo de un anticuerpo para TNF o antagonista es el anticuerpo quimerico cA2. Ejemplos adicionales de anticuerpos anti-TNF monoclonales que pueden usarse en la presente invencion se describen en la materia (veanse, por ejemplo, la patente de EE.u U. n° 5.231.024; Moller, A. y col., Cytokine 2(3):162-169 (1990); solicitud de EE.UU. n° 07/943.852 (presentada el 11 de septiembre de 1992); Rathjen y col., publicacion internacional n° WO 91/02078 (publicada el 21 de febrero de 1991); Rubin y col., publicacion de patente EPO n° 0218868 (publicada el 22 de abril de 1987); Yone y col., publicacion de patente EPO n° 0288 088 (26 de octubre de 1988); Liang y col., Biochem. Biophys. Res. Comm. 137:847-854 (1986); Meager y col., Hybridoma 6:305-311 (1987); Fendly y col., Hybridoma 6:359-369 (1987); Bringman y col., Hybridoma 6:489-507 (1987); y Hirai y col., J. Immunol. Meth. 96:57­ 62 (1987).
Moleculas de receptores de TNF
Moleculas de receptores de TNF preferidas utiles en la presente invencion son aquellas que se unen a TNFa con alta afinidad (vease, por ejemplo, Feldmann y col., publicacion internacional n°WO 92/07076 (publicada el 30 de abril de 1992); Schall y col., Cell 61:361-370 (1990); y Loetscher y col., Cell 61:351-359 (1990), referencias que se incorporan en su totalidad en el presente documento por referencia) y opcionalmente poseen baja inmunogenicidad. En particular, los receptores de TNF de 55 kDa (p55 TNF-R) y 75 kDa (p75 TNF-R) de la superficie celular son utiles en la presente invencion. Formas truncadas de estos receptores, que comprenden los dominios extracelulares (ECD) de los receptores o porciones funcionales de los mismos (vease, por ejemplo, Corcoran y col., Eur. J. Biochem. 223:831-840 (1994)), tambien son utiles en la presente invencion. Formas truncadas de los receptores de TNF, que comprenden el ECD, se han detectado en orina y suero como protemas de union inhibidoras de TNFa de 30 kDa y 40 kDa (Engelmann, H. y col., J. Biol. Chem. 265:1531-1536 (1990)). Las moleculas multfmeras de receptores de TNF y moleculas de fusion de inmunorreceptores de TNF, y derivados y fragmentos o porciones de los mismos, son ejemplos adicionales de moleculas de de receptores de TNF que son utiles en los procedimientos y composiciones de la presente invencion.
Las moleculas multfmeras de receptores de TNF utiles en la presente invencion comprenden toda o una porcion funcional de la ECD de dos o mas receptores de TNF ligados por uno o mas glicoles de polipeptido (PEG). Un ejemplo de una molecula de fusion de inmunorreceptores de TNF tal es la protema de fusion de receptor de TNF/lgG. Las moleculas de fusion de inmunorreceptores de TNF y procedimientos para su produccion se han descrito en la materia (Lesslauer y col., Eur. J. Immunol. 22:2883-2886 (1991); Ashkenazi y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535-10539 (1991); Peppel y col., J. Exp. Med. 274:1483-1489 (1991); Kolls y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:215-219 (1994); Butler y col., Cytokine 6{6) :616-623 (1994); Baker y col., Eur. J. Immunol. 24:2040­ 2048 (1994); Beutler y col., patente de EE.UU. n° 5.447.851; y solicitud de EE.UU. n° 08/442.133 (presentada el 16 de mayo de 1995). Procedimientos para producir moleculas de fusion de inmunorreceptores tambien pueden encontrarse en Capon y col., patente de EE.UU. n° 5.116.964; Capon y col., patente de EE.UU. n° 5.225.538; y Capon y col., Nature 337:525-531 (1989).
Las citocinas incluyen cualquier citocina conocida. Vease, por ejemplo, CopewithCytokines.com. Los antagonistas de citocinas incluyen, pero no se limitan a, cualquier anticuerpo, fragmento o mimetico, cualquier receptor soluble, fragmento o mimetico, cualquier antagonista de molecula pequena, o cualquier combinacion de los mismos.
Tratamientos terapeuticos
Cualquier procedimiento de la presente divulgacion puede comprender un procedimiento para tratar un trastorno mediado por IL-23 que comprende administrar una cantidad eficaz de una composicion o composicion farmaceutica que comprende al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 a una celula, tejido, organo, animal o paciente en necesidad de tal modulacion, tratamiento o terapia. Un procedimiento tal puede comprender opcionalmente ademas co-administracion o terapia de combinacion para tratar tales enfermedades o trastornos, en el que la administracion de dicho al menos un anticuerpo anti-IL-23p19, porcion especificada o variante del mismo comprende ademas administrar antes, simultaneamente y/o despues al menos uno seleccionado de un farmaco antiinfeccioso, un farmaco para el sistema cardiovascular (CV), un farmaco para el sistema nervioso central (CNS), un farmaco para el sistema nervioso autonomo (SNA), un farmaco para las vfas respiratorias, un farmaco para el tubo gastrointestinal (GI), un farmaco hormonal, un farmaco para el equilibrio en fluidos o electrolitos, un farmaco hematologico, un antineoplasico, un farmaco para inmunomodulacion, un farmaco oftalmico, otico o nasal, un farmaco topico, un farmaco nutricional o similares, al menos un antagonista de TNF (por ejemplo, pero no se limita a, un anticuerpo de TNF o fragmento, un receptor de TNF soluble o fragmento, protemas de fusion de los mismos, o un antagonista de TNF de molecula pequena), un antirreumatico (por ejemplo, metrotrexato, auranofina, aurotioglucosa, azatioprina, etanercept, tiomalato de oro y sodio, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalazina), un relajante muscular, un narcotico, un farmaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), un analgesico, un anestesico, un sedante, un anestesico local, un bloqueante neuromuscular, un antimicrobiano (por ejemplo, aminoglucosido, un antifungico, un antiparasftico, un antivmco, un carbapenem, cefalosporina, una fluroquinolona, un macrolido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otro antimicrobiano), un antipsoriasico, un corticosteroide, un esteroide anabolico, un agente relacionado con la diabetes, un mineral, un nutritivo, un agente tiroideo, una vitamina, una hormona relacionada con el calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemetico, un antiulceroso, un laxante, un anticoagulante, una eritropoyetina (por ejemplo, epoetina alfa), un filgrastim (por ejemplo, G-CSF, Neupogen), un sargramostim (GM-CSF, Leukine), una inmunizacion, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (por ejemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona de crecimiento, un farmaco de reemplazo hormonal, un modulador de receptores estrogenicos, un midriatico, un cicloplegico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitotico, un radiofarmaceutico, un antidepresivo, agente antimamaco, un antipsicotico, un ansiolftico, un hipnotico, un simpatomimetico, un estimulante, donepezilo, tacrina, una medicacion para el asma, un beta-agonista, un esteroide inhalado, un inhibidor de leucotrieno, una metilxantina, una cromolina, una epinefrina o analogo, dornasa alfa (Pulmozyme), una citocina o un antagonista de citocina. Tales farmacos son muy conocidos en la tecnica, que incluyen formulaciones, indicaciones, dosificacion y administracion para cada uno presentado en el presente documento (vease, por ejemplo, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21a edicion, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmacotherapy Handbook, Wells y col., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT).
Normalmente, el tratamiento de afecciones patologicas se efectua administrando una cantidad eficaz o dosificacion de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19, composicion que asciende a, en promedio, un intervalo de al menos aproximadamente 0,01 a 500 miligramos de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 por kilogramo de paciente por dosis, y, preferentemente de al menos aproximadamente 0,1 a 100 miligramos de anticuerpo/kilogramo de paciente por administracion unica o multiple, dependiendo de la actividad espedfica del agente activo contenido en la composicion. Alternativamente, la concentracion en suero eficaz puede comprender 0,1-5000 pg/ml de concentracion en suero por administracion unica o multiple. Dosificaciones adecuadas son conocidas para los medicos y, por supuesto, dependen del estado de enfermedad particular, actividad espedfica de la composicion que se administra y el paciente particular que se somete a tratamiento. En algunos casos, para lograr la cantidad terapeutica deseada, puede ser necesario proporcionar administraciones repetidas, es dedr, administraciones individuales repetidas de una dosis monitorizada o medida particular, en las que las administraciones individuales se repiten hasta que se logra la dosis diaria o efecto deseado.
Dosis preferidas pueden incluir opcionalmente aproximadamente 0,1-99 y/o 100-500 mg/kg/administracion, o cualquier intervalo, valor o fraccion de los mismos, o para lograr una concentracion en suero de aproximadamente 0,1-5000 pg/ml de concentracion en suero por administracion unica o multiple, o cualquier intervalo, valor o fraccion de los mismos. Un intervalo de dosificacion preferido para el anticuerpo anti-IL-23p19 de la presente invencion es de aproximadamente 1 mg/kg hasta aproximadamente 3, aproximadamente 6 o aproximadamente 12 mg/kg de peso corporal del paciente.
Alternativamente, la dosificacion administrada puede variar dependiendo de factores conocidos tales como las caractensticas farmacodinamicas del agente particular, y su modo y via de administracion; edad, salud y peso del receptor; naturaleza y grado de los smtomas, tipo de tratamiento simultaneo, frecuencia de tratamiento y el efecto deseado. Normalmente, una dosificacion de principio activo puede ser aproximadamente 0,1 a 100 miligramos por kilogramo de peso corporal. Generalmente, 0,1 a 50, y, preferentemente 0,1 a 10 miligramos por kilogramo por administracion o en forma de liberacion sostenida es eficaz para obtener resultados deseados.
Como ejemplo no limitante, el tratamiento de seres humanos o animales puede proporcionarse como una dosificacion de una vez o periodica de al menos un anticuerpo de la presente invencion, aproximadamente 0,1 a 100 mg/kg o cualquier intervalo, valor o fraccion de los mismos por dfa, o al menos uno del dfa 1-40, o alternativamente o adicionalmente, al menos uno de la semana 1-52, o alternativamente o adicionalmente, al menos uno de 1-20 anos, o cualquier combinacion de los mismos, usando dosis unica, de infusion o repetidas.
Formas de dosificacion (composicion) adecuadas para administracion interna generalmente contienen de aproximadamente 0,001 miligramos a aproximadamente 500 miligramos de principio activo por unidad o recipiente. En estas composiciones farmaceuticas, el principio activo estara generalmente presente en una cantidad de aproximadamente el 0,5-99,999% en peso basado en el peso total de la composicion.
Para administracion parenteral, el anticuerpo puede formularse como una disolucion, suspension, emulsion, partfcula, polvo o polvo liofilizado en asociacion, o proporcionado por separado, con un vehuculo parenteral farmaceuticamente aceptable. Ejemplos de tales vehfculos son agua, solucion salina, disolucion de Ringer, disolucion de dextrosa y aproximadamente 1-10% de albumina de suero humano. Tambien pueden usarse liposomas y vehfculos no acuosos, tales como aceites no volatiles. El vehfculo o polvo liofilizado puede contener aditivos que mantienen la isotonicidad (por ejemplo, cloruro sodico, manitol) y estabilidad qrnmica (por ejemplo, tampones y conservantes). La formulacion se esteriliza por tecnicas conocidas o adecuadas.
Vehfculos farmaceuticos adecuados se describen en la edicion mas reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, un texto de referencia estandar en este campo.
Administracion alternativa
Muchos modos conocidos y desarrollados pueden usarse segun la presente invencion para administrar cantidades farmaceuticamente eficaces de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 segun la presente invencion. Aunque se usa la administracion pulmonar en la siguiente descripcion, pueden usarse otros modos de administracion segun la presente invencion con resultados adecuados. Anticuerpos para IL-23p19 de la presente invencion pueden administrarse en un vehfculo, como una disolucion, emulsion, coloide o suspension, o como un polvo seco, usando cualquiera de una variedad de dispositivos y procedimientos adecuados para administracion por inhalacion u otros modos descritos aqu dentro o conocidos en la tecnica.
Formulaciones parenterales y administracion
Las formulaciones para administracion parenteral pueden contener como excipientes comunes agua esteril o solucion salina, polialquilenglicoles tales como polietilenglicol, aceites de origen vegetal, naftalenos hidrogenados y similares. Suspensiones acuosas o aceitosas para inyeccion pueden prepararse usando un emulsionante apropiado o humidificador y un agente de suspension, segun procedimientos conocidos. Agentes para inyeccion pueden ser un agente de dilucion no administrable por via oral no toxico tal como disolucion acuosa, una disolucion inyectable esteril o suspension en un disolvente. Como vehfculo o disolvente utilizable se permiten agua, disolucion de Ringer, solucion salina isotonica, etc.; como disolvente o disolvente de suspension habitual, aceite no volatil esteril puede usarse. Para estos fines puede usarse cualquier tipo de aceite y acido graso no volatil, que incluye aceites grasos o acidos grasos naturales o sinteticos o semisinteticos; mono- o di- o trigliceridos naturales o sinteticos o semisinteticos. La administracion parental se conoce en la tecnica e incluye, pero no se limita a, medios convencionales de inyecciones, un dispositivo de inyeccion sin aguja presurizado con gas como se describe en la patente de EE.UU. n° 5.851.198, y un dispositivo perforador laser como se describe en la patente de EE.UU. n° 5.839.446.
Administracion alternativa
La divulgacion se refiere ademas a la administracion de al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 por medios parenteral, subcutaneo, intramuscular, intravenoso, intra-articular, intrabronquial, intra-abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitario, intracelial, intracerebeloso, intracerebroventricular, intracolico, intracervical, intragastrico, intrahepatico, intramiocardico, intraosteo, intrapelvico, intrapericardico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostatico, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretiniano, intraespinal, intrasinovial, intratoracico, intrauterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdermico. Al menos una composicion de anticuerpo anti-IL-23p19 puede prepararse para su uso para administracion parenteral (subcutanea, intramuscular o intravenosa) o cualquier otra administracion, particularmente en forma de disoluciones o suspensiones lfquidas; para su uso en administracion vaginal o rectal, particularmente en formas semisolidas tales como, pero no se limitan a, cremas y supositorios; para administracion bucal o sublingual tal como, pero no se limitan a, en forma de comprimidos o capsulas; o intranasalmente tal como, pero no se limitan a, la forma de polvos, gotas nasales o aerosoles o ciertos agentes; o transdermicamente, tal como, no limitado a, un gel, pomada, locion, suspension o sistema de administracion por parche con potenciadores qmmicos tales como sulfoxido de dimetilo para tanto modificar la estructura de la piel como para aumentar la concentracion de farmaco en el parche transdermico (Junginger y col. en “Drug Permeation Enhancement”; Hsieh, D. S., Eds., pp. 59-90 (Marcel Dekker, Inc. New York 1994), o con agentes de oxidacion que permiten la aplicacion de formulaciones que contienen protemas y peptidos sobre la piel (documento WO 98/53847), o aplicaciones de campos electricos para crear rutas de transporte transitorias tales como electroporacion, o para aumentar la movilidad de farmacos cargados por la piel, tal como iontoforesis, o aplicacion de ultrasonidos, tal como sonoforesis (patentes de EE.UU. n° 4.309.989 y 4.767.402).
Administracion pulmonar/nasal
Para administracion pulmonar, preferentemente, al menos una composicion de anticuerpo anti-IL-23p19 se administra en un tamano de partmula eficaz para alcanzar las vfas respiratorias inferiores del pulmon o senos. Segun la invencion, al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 puede administrarse por cualquiera de una variedad de dispositivos de inhalacion o nasales conocidos en la tecnica para administracion de un agente terapeutico por inhalacion. Estos dispositivos que pueden depositar formulaciones aerosolizadas en la cavidad del seno o alveolos de un paciente incluyen inhaladores de dosis medida, nebulizadores, generadores de polvo seco, pulverizadores y similares. Otros dispositivos adecuados para dirigir la administracion pulmonar o nasal de anticuerpos tambien se conocen en la tecnica. Todos aquellos dispositivos pueden usar formulaciones adecuadas para la administracion para la dispension de anticuerpo en un aerosol. Tales aerosoles pueden estar compuestos por tanto disoluciones (tanto acuosas como no acuosas) como partmulas solidas.
Formulaciones transdermicas y administracion
Para administracion transdermica, el al menos un anticuerpo anti-IL-23p19 se encapsula en un dispositivo de administracion tal como un liposoma o nanopartmulas polimericas, micropartmula, microcapsula o microesferas (denominadas conjuntamente micropartmulas, a menos que se establezca de otro modo). Se conocen varios dispositivos adecuados que incluyen micropartmulas hechas de polfmeros sinteticos tales como polihidroxiacidos tales como acido polilactico, acido poliglicolico y copolfmeros de los mismos, poliortoesteres, poliantndridos y polifosfacenos, y polfmeros naturales tales como colageno, poliaminoacidos, albumina y otras protemas, alginato y otros polisacaridos, y combinaciones de los mismos (patente de EE.UU. n° 5.814.599).
Administracion prolongada y formulaciones
Puede desearse administrar los compuestos de la presente invencion al sujeto durante periodos de tiempo prolongados, por ejemplo, durante periodos de una semana a un ano de una unica administracion. Pueden utilizarse diversas formas de dosificacion de liberacion lenta, de liberacion prolongada o de implante. Por ejemplo, una forma de dosificacion puede contener una sal no toxica farmaceuticamente aceptable de los compuestos que tiene un bajo grado de solubilidad en fluidos corporales, por ejemplo, (a) una sal de adicion de acido con un acido polibasico tal como acido fosforico, acido sulfurico, acido dtrico, acido tartarico, acido tanico, acido pamoico, acido algmico, acido poliglutamico, acidos mono- o di-naftalenosulfonicos, acido poligalacturonico y similares; (b) una sal con un cation metalico polivalente tal como cinc, calcio, bismuto, bario, magnesio, aluminio, cobre, cobalto, mquel, cadmio y similares, o con un cation organico formado a partir de, por ejemplo, N,N'-dibencil-etilendiamina o etilendiamina; o (c) combinaciones de (a) y (b), por ejemplo, una sal de tannato de cinc. Adicionalmente, los compuestos de la presente invencion o, preferentemente, una sal relativamente insoluble, tal como aquellas precisamente descritas, pueden formularse en un gel, por ejemplo, un gel de monoestearato de aluminio con, por ejemplo, aceite de sesamo, adecuado para inyeccion. Sales particularmente preferidas son sales de cinc, sales de tannato de cinc, sales de pamoato, y similares. Otro tipo de formulacion de liberacion prolongada de liberacion lenta para inyeccion contendna el compuesto o sal dispersa para encapsulacion en un polfmero no antigenico no toxico de lenta degradacion tal como un polfmero de acido polilactico/acido poliglicolico, por ejemplo, como se describe en la patente de EE.UU. n° 3.773.919. Los compuestos o, preferentemente, sales relativamente insolubles tales como aquellas descritas anteriormente tambien pueden formularse en pellas silasticas de matriz de colesterol, particularmente para su uso en animales. Formulaciones de liberacion lenta de liberacion prolongada o de implante adicionales, por ejemplo, liposomas de gas o lfquido, son conocidos en la bibliograffa (patente de EE.UU. n° 5.770.222 y “Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems”, J. R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., N.Y., 1978).
Habiendo descrito generalmente la invencion, la misma se entendera mas facilmente por referencia a los siguientes ejemplos, que se proporcionan a modo de ilustracion y no estan previstos como limitantes.
Ejemplos
Ejemplo 1 - Especificidad de subunidad de anticuerpos monoclonales para IL-23p19
mAb de raton anti-IL-23 humana purificados se evaluaron en ELISA de captura de citocinas para determinar su especificidad por subunidad de antfgeno. Brevemente, mAb para IL-23 se recubrieron sobre placas y se incubaron con 100 ng/ml de hrIL-23, hrIL-12 y hrp40 (hr = humano recombinante), respectivamente. Tras la incubacion con mAb anti-p40 biotinilado, la union se detecto usando estreptavidina conjugada con HRP. Como controles se usaron un mAb anti-p40 y un mAb anti-IL-12 (20C2, catalogo n° 555065, BD Pharmingen, San Diego, CA) con especificidad conocida.
La Figura 1 demuestra que cuatro mAb se unen espedficamente a hrIL-23 y no a hrIL-12 o monomero de hrp40. Debido a que la subunidad de IL-23p19 debe asociarse covalentemente con p40 para ser secretada de celulas de mairnfero, los mAb para IL-23 que no reconocen el monomero p40 deben unirse tanto a la subunidad IL-23p19 sola como a un epitope de union del heterodfmero p19-p40. Por tanto, estos mAb para IL-23 se denominan mAb para IL-23p19. Los cuatro mAb anti-IL-23p19 humana demuestran curvas de union similares a hrIL-23 (Figura 2) y analisis de BIAcore posteriores demuestran afinidades que oscilan de 43-338 pM. Se determino adicionalmente que estos mAb para IL-23 no reaccionan de forma cruzada con IL-23 murina (datos no mostrados).
Ejemplo 2 - Inhibicion de la union de receptores de IL-23 por mAb para IL-23p19
Para demostrar que los mAb para IL-23p19 son anticuerpos neutralizantes contra la subunidad p19, los mAb se probaron para su inhibicion de la union de IL-23 y IL-23R. En este experimento, IL-23R se inmovilizo sobre una placa. Se anadio hrIL-23 biotinilada a la placa tanto sola como despues de preincubacion con mAb para IL-23p19 individual. Se uso IL-23R soluble (IL-23R-Fc) como control positivo. La union de IL-23 se detecto con estreptavidina conjugada con HRP. Como se muestra en la Figura 3, los cuatro mAb para IL-23p19 pudieron prevenir la union de IL-23/IL-23R con potencia comparable a IL-23R-Fc soluble. A diferencia, cuando IL-12Rp1 se inmovilizo sobre una placa, ninguno de los mAb para IL-23p19 pudo inhibir la union de IL-23/IL-12Rp1 (datos no mostrados). Similarmente, los mAb para IL-23p19 no bloquean la union de IL-12/IL-12Rp1 (datos no mostrados). La inhibicion selectiva de la union de IL-23/IL-23R y la falta de interferencia con la union de IL-12 o IL-23 a IL-12Rp1 demuestra adicionalmente que estos mAb para IL-23p19 no se unen a la subunidad p40 y, por tanto, son anticuerpos anti-IL-23p19 humana neutralizantes.
Ejemplo 3 - Neutralizacion de la funcion biologica de IL-23 por mAb para IL-23p19
Se sabe que IL-23 induce la fosforilacion intracelular de STAT3 y la produccion de IL-17 por linfocitos T. Por tanto, los mAb para IL-23p19 se probaron para su capacidad para inhibir estas funciones biologicas de IL-23 humana.
En un experimento, linfocitos citolfticos espontaneos (NKL) se estimularon con hrIL-23 tanto sola como despues de la preincubacion con mAb para IL-23p19 individual. Las celulas tratadas se tineron con anticuerpos antifosfo-STAT3 conjugados con fluorocromo y se analizaron por citometna de flujo intracelular. Se mostro que los cuatro mAb para IL-23p19 inhidan la fosforilacion de STAT3 con potencia comparable a un mAb anti-p40 neutralizante.
En otro experimento, esplenocitos murinos recientemente aislados se trataron con hrIL-23 preincubada con mAb para IL-23p19 valorados o mAb de control. hrIL-23 con preincubacion sin anticuerpo se uso como control positivo. Despues de 3 dfas en cultivo, los sobrenadantes de celulas se recogieron y se ensayaron por ELISA usando el conjunto de IL-17 ELISA duo (R&D Systems). Como se muestra en la Figura 4, los mAb para IL-23p19 inhiben la produccion de IL-17 mediada por hrIL-23. Tambien se mostro que estos mAb inhibieron la produccion de IL-17 mediada por IL-23 humana nativa (producida por PBMC humanas).
En comparacion, los mAb para IL-23p19 tambien se probaron para su capacidad para inhibir la produccion de IFNy inducida por IL-12. Brevemente, celulas NK92MI se trataron con IL-12 preincubada con mAb para IL-23p19 valorados o mAb de control. IL-12 con preincubacion sin anticuerpo se uso como control positivo. El analisis de ELISA realizado 24 horas despues de la estimulacion no mostro efecto de mAb para IL-23p19 sobre la produccion de IFNy inducida por IL-12, demostrando que los anticuerpos no se unen a la subunidad p40 compartida por IL-12 y IL-23.
Ejemplo 4 - Identificacion de epitopes de mAb para IL-23p19 y union competitiva
El analisis de union por competencia se realizo para determinar si los cuatro mAb para IL-23p19 neutralizantes se uman a epitopes de IL-23p19 similares o diferentes. mAb para IL-23 se recubrieron individualmente sobre placas de ELISA. Los mAb de competencia se anadieron, seguido de la adicion de hrIL-23 biotinilada. Para el control positivo se uso el mismo mAb para el recubrimiento que el mAb de competencia (“auto-competencia”). La union de IL-23 se detecto usando estreptavidina. C1269, C1273 y C1275 muestran todos competencia cruzada, indicando union a un sitio espacialmente similar. C1249 muestra poca o ninguna competencia con C1269 o C1273 e inhibicion parcial de C1275. Estos resultados indican que los mAb reconocen epitopes similares o que se solapan parcialmente sobre IL-23.
El ELISA de competencia del anticuerpo C1269 marcado unido a IL-23 se realizo como se muestra en la Figura 7. 5 |jl de 20 |jg/ml de hIL-23 se recubrieron sobre placa, se mezclaron con 10 nM de C1269 marcado y se diluyeron seriadamente competidores sin marcar de 3000 nM a 0, C1269 y C1249, en 25 jl. La union relativa se calculo fijando la senal en ausencia de competidor al 100%. Los resultados indican que los anticuerpos C1249 y C1269 no compiten por el mismo epftope de union.
Para mapear directamente sus epitopes de union, los mAb para IL-23p19, 75 jg de C1249 o IgG de raton, se mezclo con aproximadamente 65 jg de IL-23 y se incubo a 4°C durante la noche. El complejo de antigenoanticuerpo se aislo por cromatograffa en gel y se transfirio a tampon de digestion (Tris-HCl 0,1 M a pH 8,5) usando una unidad de filtro de 100.000 NMWL. Entonces se anadieron 4 jg de tripsina (0,16 unidades) en tampon de digestion y se incubaron durante 2 horas a 37°C. Despues de la incubacion, los complejos se capturaron por perlas de protema G, se lavaron dos veces con PBS y una vez con bicarbonato de amonio, y los peptidos capturados se eluyeron en 30 j l de tampon de elucion (10% de acetonitrilo, 0,5% de TFA). La formacion de complejos y la digestion con tripsina de C1269 se llevo a cabo del mismo modo.
Los peptidos eluidos se analizaron por espectrometna de masas de MALDI-TOF como se describe mas adelante. Los eluyentes del complejo de tripsina-digesto se desalaron pipeteando la muestra a traves de una C18 Zip Tip, Zip Tip se humedecio con 100% de acetonitrilo, seguido de equilibrio con 0,1% de TFA. Entonces, el eluyente se unio al medio, se lavo con 0,1% de TFA y se eluyo en un volumen de 2 j l de matriz de a-ciano (10 mg/ml de a-ciano, 0,1% de TFA, 50% de acetonitrilo en agua) y se aplico directamente en puntos sobre la diana de MALDI-TOF. MALDI-TOF (Voyager-DE™ STR, ABI) se calibro con mezcla de calibracion 2 (ABI). Los espectros se obtuvieron a la intensidad laser entre 1500-1800 unidades y el intervalo de masa de adquisicion de 800 a 5000 m/z.
Un peptido p19 a m/z = 1248 (74IHQGLIFYEK83) fue capturado por tanto los mAb C1249 como C1269. Sin embargo, con C1269, este peptido fue menos intenso y puede unirse no espedficamente. Estos resultados indican que la region 74IHQGLIFYEK83 contribuye al epftope de union para C1249 y C1269.
Analisis de epitopes por mutagenesis por intercambio de protemas huIL-23p19/muIL-23p19
Se ha observado que C1269 y C1249 no se unen a IL-23 de raton, sin embargo, C1269, pero no C1249, neutraliza IL-23 nativa de mono cinomolgo. Por tanto, las diferencias de secuencias entre IL-23p19 humana, de mono cinomolgo y de raton se analizaron para identificar regiones de union putativas para estos anticuerpos monoclonales. La subunidad p19 de mono cinomolgo se clono y se secuencio en Centocor. El alineamiento de las secuencias de p19 de ser humano, cinomolgo y raton se muestra de la region identificada como que comprende al menos una parte de la region de epftope para los anticuerpos de la presente invencion - 74IHQGLIFYEK83. En esta region de aminoacidos de 10 residuos solo hay una unica diferencia en H75 entre IL-23p19 humana y de mono cinomolgo. Esto indica que H75 es crftico para la union de C1249, que no neutraliza IL-23p19 de cinomolgo, pero que no parece ser crftico para la union de C1269.
Basandose en el alineamiento de secuencias se realizo mutagenesis por intercambio de especies. Se genero una protema IL-23 humana mutante (designada “3220”) en la que la region del peptido tnptico se muto a la secuencia de raton, 74IRQGLAFYKH83, con las cuatro mutaciones marcadas en negrita (cuatro mutaciones puntuales individuales en 3220 - Humana 75His ^ Raton 75Arg, Humana 79 Ile ^ Raton 79Ala, Humana 82 Glu ^ Raton 82Lys y Human 83Lys ^ Raton 83 His). Se construyo una segunda protema mutante (designada “3397”) que incorporaba las sustituciones D y K inmediatamente al extremo C de este peptido-74IRQGLAFYKHLLDSDIFKg1 (de 74IHQGLIFYEKLLGSDOFT91 natural) con las seis mutaciones marcadas en negrita (las cuatro mutaciones de 3220 junto con dos mutaciones puntuales individuales adicionales - Humana 75His ^ Raton 75Arg, Humana 79 Ile ^ Raton 79Ala, Humana 82 Gu ^ Raton 82Lys y Human 83Lys ^ Raton 83 His, Humana 86 Gly^Raton 86 Asp y Humana 91 Thr ^ Raton 91 Lys) .
Para evaluar la especificidad de union por las protemas mutantes se llevo a cabo union por ELISA para C1249, C1269, ademas del anticuerpo CNTO 209 sustituto de control (de rata anti-IL-23p19 de raton). Los resultados se muestran en las Figuras 8A, 8B y 9. Los resultados de ELISA muestran que las mutaciones en IL-23 p19 (3220) redujeron la actividad de union a C1249 y C1269 mas del 80% (Figura 5 y Figuras 8A y 8B). Las sustituciones adicionales en 3397 mutante redujeron adicionalmente la union el 95% en C1249 y el 90% en C1269.
Aproximadamente 65 jg de IL-23 se mezclaron con 75 jg de C1249, C1269, IgG de raton, respectivamente, y se incubaron durante la noche a 4°C durante la noche. El complejo de antfgeno-anticuerpo se transfirio a tampon de digestion usando una unidad de filtro de 100.000 NMWL. Entonces se anadieron 4 jg de tripsina (0,16 unidades) en tampon de digestion y se incubaron durante 2 horas a 37°C. Despues de la digestion, perlas de protema G se anadieron a anticuerpo de captura y los fragmentos se unieron por anticuerpo. Entonces, las perlas de protema G se lavaron una vez con PBS y dos veces con bicarbonato de amonio 50 mM, y los complejos capturados se eluyeron con 30 j l de tampon de elucion (10% de acetonitrilo, 0,5% de acido trifluoroacetico).
Los eluyentes del complejo de tripsina-digesto se desalaron pipeteando la muestra a traves de ZipTip C18, se lavo con 0,1% de TFA en agua, luego se eluyeron en 2 j l de matriz de a-ciano (10 mg/ml de a-ciano, 0,1% de TFA, 50% de acetonitrilo en agua) y se aplicaron en puntos sobre una diana de MALDI-TOF. MALDI-TOF (Voyager-DET™ STR, ABI) se calibro con mezcla de calibracion 2 (ABI). Los espectros se obtuvieron a la intensidad laser entre 1.500-1.800 unidades y el intervalo de masa de adquisicion de 800-5.000 m/z.
Placas de alta union de MSD (Meso Scale Diagnostics, Gaithersburg, MD) se recubrieron, a 4°C durante la noche, con 5 r|l de muestras seriadamente diluidas, de 100 a 0 pg/ml, de diferentes reactivos de protema, que inclman IL-23 humana, IL-23 murina y dos protemas mutantes de segmentos intercambiados, 3220 y 3397. Ciento cincuenta pl de 5% de tampon de bloqueante A de MSD se anadieron a cada pocillo y se incubaron durante 1 h a temperatura ambiente. Las placas se lavaron tres veces con tampon HEPES 0,1 M, pH 7,4. Estos micro-pocillos de ELISA cargados con protema se incubaron con 25 pl de 2 pg/ml de mAb C1249, C1269, o CNTO 209 marcados con Sulfo-TAG de MSD. Despues de la incubacion durante 2 horas con agitacion a temperatura ambiente, las placas se lavaron 3 veces con tampon HEPES 0,1 M (pH 7,4). El tampon T de lectura de MSD se diluyo con agua destilada (4 veces) y se dispenso a una volumen de 150 pl/pocillo y se analizo con SECTOR imager 6000.
Analisis estructural de IL-23
La Figura 6 muestra el modelo estructural para IL-23 humana basandose en la estructura cristalina de IL-12 humana (codigo de pdb 1f45). Es evidente que los residuos (H75, I79, E82, K83 y G86) estan expuestos en la superficie y agrupados juntos. Esta disposicion es tfpica de epitopes conformacionales para la union a anticuerpo. Por tanto, este segmento (74IHQGLIFYEKLLG86) puede constituir parte del epitope de union para C1249, ademas de determinantes de especificidad de especies del epitope. La union de Ab/Ag tfpica entierra aproximadamente 1000 A2 de area superficial. Esto sugiere que residuos expuestos adicionales de IL-23p19 en la proximidad del segmento anterior tambien senan requeridos para un sitio de union tfpico. La inspeccion del modelo molecular sugiere que los residuos de la helice C vecina (residuos L109, L110, S113, Q114, L116 y Q117) estan expuestos y formanan una agrupacion de superficie extendida junto con los residuos en el segmento 74-86. Los residuos identificados y propuestos que son parte del epitope para C1249 se marcan y se muestran en modelos de varillas en la Figura 6. La subunidad p40 esta marcada 2 y la subunidad p19 marcada 1.
La secuencia para esta parte de la helice C es identica entre p19 humana y murina. Es plausible que como parte del epitope estos residuos contribuyeran a la union residual de los mutantes de intercambio humano a murino descritos anteriormente. Por tanto, el epitope puede estar comprendido por dos segmentos de p19 (74-85 y 108­ 118), siendo los residuos expuestos (H75, 179, E82, K83, G86, L109, L110, S113, Q114, L116 y Q117) los mas probablemente implicados en las interacciones directas de anticuerpos.
El analisis de mutagenesis se realiza con el segmento de IL-23p19 que abarca los residuos 108-118 en el que los residuos se cambian selectivamente individualmente y/o en grupos (es decir, multiples cambios). La actividad de IL-23 se monitoriza despues de hacerse mutaciones como en los experimentos anteriores usando el segmento de IL-23p19 que abarca los residuos de aminoacidos 74-86. El epitope se confirma basandose en el cambio en la actividad que guarda relacion con las diversas combinaciones de mutaciones.
Para los fines de la presente invencion, el 70-100% de la identidad de secuencias de aminoacidos o nucleotidos (es decir, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 o cualquier intervalo o valor en su interior) se determina usando un algoritmo informatico adecuado, como se conoce en la tecnica.
Sera evidente que la invencion puede ponerse en practica de otro modo distinto al particularmente descrito en la descripcion y ejemplos anteriores. Numerosas modificaciones y variaciones de la presente invencion son posibles en vista de las ensenanzas anteriores.
Tablas de secuencias
SEQ ID NO:1 (IL humana subunidad 23p19)
Figure imgf000031_0001
SEQ ID NO:2 - Secuencia de Nucleotidos de la cadena pesada C1273
Figure imgf000031_0002
SEQ ID NO:3 - Secuencia de aminoacido de la cadena pesada C1273 (Secuencias CDR en negrita y subrayadas)
Figure imgf000031_0003
SEQ ID NO:4 - Secuencia de aminoacido CDR1 de la cadena pesada C1273
GFTFSSYTMS SEQ ID NO:5 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena pesada C1273
TISSGGTYTYYPDSVKG SEQ ID NO:6 - Secuencia de aminoacido CDR3 de la cadena pesada C1273
DNHAYDRGPFFDY SEQ ID NO:7 - Secuencia de Nucleotidos de la cadena ligera C1273
Figure imgf000032_0001
SEQ ID NO:8 - Secuencia de aminoacido de la cadena ligera C1273
Figure imgf000032_0002
SEQ ID NO:9 - Secuencia de aminoacido CDR1 de la cadena ligera C1273
KSSQNLFYRSNQKNHLA SEQ ID NO:10 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena ligera C1273
WTSTRES SEQ ID NO:11 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena ligera C1273
QQYYSYPPT SEQ ID NO:12 - Secuencia de nucleotido de la cadena pesada C1269
Figure imgf000032_0003
SEQ ID NO:13 - Secuencia de aminoacido de la cadena pesada C1269
Figure imgf000032_0004
SEQ ID NO:14 - Secuencia de aminoacido CDR1 de la cadena pesada C1269
GFTFSSYTMS SEQ ID NO:15 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena pesada C1269
ISSGGTYTYYPDSVKG SEQ ID NO:16 - Secuencia de aminoacido CDR3 de la cadena pesada C1269
DNHAYDRGPFFDS SEQ ID NO:17 - Secuencia de Nucleotidos de la cadena ligera C1269
Figure imgf000033_0001
SEQ ID NO:18 - Secuencia de aminoacido de la cadena ligera C1269
Figure imgf000033_0002
SEQ ID NO:19 - Secuencia de aminoacido CDR1 de la cadena ligera C1269
KSSQNLFYRNNQKNYLA SEQ ID NO:20 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena ligera C1269
YWTSTRES SEQ ID NO:21 - Secuencia de aminoacido CDR3 de la cadena ligera C1269
QQYYSYPPT SEQ ID NO:22 - Secuencia de Nucleotidos de la cadena pesada C1275
Figure imgf000033_0003
SEQ ID NO:23 - Secuencia de aminoacido de la cadena pesada C1275
Figure imgf000033_0004
SEQ ID NO:24 - Secuencia de aminoacido CDR1 de la cadena pesada C1275
GFTFSNYWMT SEQ ID NO:25 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena pesada C1275 EIRLKSNNYATHYAESVKG SEQ ID NO:26 - Secuencia de aminoacido CDR3 de la cadena pesada C1275
GGGYDVGAWFAY SEQ ID NO:27 - Secuencia de Nucleotidos de la cadena ligera C1275
Figure imgf000034_0001
SEQ ID NO:28 - Secuencia de aminoacido de la cadena ligera C1275
Figure imgf000034_0002
SEQ ID NO:29 - Secuencia de amino acido CDR1 de la cadena ligera C1275
RASENVEYYGTGLIQ SEQ ID NO:30 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena ligera C1275
ASSNVES SEQ ID NO:31 - Secuencia de aminoacido CDR3 de la cadena ligera C1275
QQSRKVPST
SEQ ID NO:32 - Secuencia de Nucleotidos de la cadena pesada C1249
Figure imgf000034_0003
SEQ ID NO:33 - Secuencia de aminoacido de la cadena pesada C1249
Figure imgf000034_0004
SEQ ID NO:34 - Secuencia de aminoacido CDR1 de la cadena pesada C1249
GFNFNTYAMH SEQ ID NO:35 - Secuencia de aminoacido CDR2 de la cadena pesada C1249
IRSKSHNYATDYADPVKD SEQ ID NO:36 - Secuencia de aminoacido CDR3 de la cadena pesada C1249
EGIYGSFAY

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo para IL-23p19 aislado, en donde dicho anticuerpo se une a IL-23p19 humano o un fragmento del mismo en un epttopo que comprende los residuos de aminoacidos 93-102 de la SEC ID NO: 1.
2. Un anticuerpo par aaislado IL-23p19 de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende al menos una region variable de la cadena ligera y al menos una region variable de la cadena pesada:
(i) dicha region variable de la cadena ligera comprendiendo:
una secuencia de aminoacidos de CDRL1 de la SEC ID N°: 19;
una secuencia de aminoacidos de CDRL2 de la SEC ID N°: 20; y
una secuencia de aminoacidos de CDRL3 de la SEC ID N°: 21,
y dicha region variable de la cadena pesada comprendiendo:
una secuencia de aminoacidos de CDRH1 de la SEC ID N°: 14;
una secuencia de aminoacidos de CDRH2 de la SEC ID N°: 15; y
una secuencia de aminoacidos de CDRH3 de la SEC ID N°: 16; o
(ii) dicha region variable de la cadena ligera comprendiendo:
una secuencia de aminoacidos de CDRL1 de la SEC ID N°: 39;
una secuencia de aminoacidos de CDRL2 de la SEC ID N°: 40; y
una secuencia de aminoacidos de CDRL3 de la SEC ID N°: 41,
y dicha region variable de la cadena pesada comprendiendo:
una secuencia de aminoacidos de CDRH1 de la SEC ID N°: 34;
una secuencia de aminoacidos de CDRH2 de la SEC ID N°: 35; y
una secuencia de aminoacidos de CDRH3 de la SEC ID N°: 36.
3. Un anticuerpo aislado para IL-23p19 de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, que comprende:
(i) una secuencia de aminoacidos variable de la cadena ligera de la SEC ID NO: 18 y una secuencia de aminoacidos variable de la cadena pesada de la SEC ID NO: 13; o
(ii) una secuencia de aminoacidos variable de la cadena ligera de la SEC ID NO: 38 y una secuencia de aminoacidos variable de cla adena pesada de la SEC ID NO: 33.
4. Un anticuerpo aislado para IL-23p19 de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consiste de quimerico, humanizado, CDR-injertado, y disenado.
5. Un anticuerpo par aIL-23p19 aislado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde dicho anticuerpo se une a IL-23p19 con al menos una afinidad seleccionada de al menos 10'9 M, al menos 10'1° M y al menos 10'11 M, segun lo determinado por resonancia de plasmones de superficie o el metodo Kinexa, opcionalmente en donde dicho anticuerpo se une a IL-23p19 con una afinidad entre aproximadamente 3,38 X10'1°M y aproximadamente 4,3 X 10'11 M, segun lo determinado por resonancia de plasmones de superficie.
6. Una molecula de acido nucleico aislada que codifica un anticuerpo par aIL-23p19 aislado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5.
7. Una molecula de acido nucleico aislada de acuerdo con la reivindicacion 6, que comprende:
(i) una secuencia de nucleotidos de cadena ligera de la SEC ID NO: 17; y/o una secuencia de nucleotidos de cadena pesada de la SEC ID N°: 12; o
(ii) una secuencia de nucleotidos de cadena ligera de la SEC ID NO: 37; y/o una secuencia de nucleotidos de cadena pesada de la SEC ID NO: 32.
8. Una celula huesped procariota o eucariota que comprende la molecula de acido nucleico aislada de acuerdo con la reivindicacion 6 o la reivindicacion 7, opcionalmente en donde dicha celula huesped es al menos una seleccionada de celulas COS-I, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-I, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, de mieloma o de linfoma, o cualquier derivado, celula inmortalizada o transformada de las mismas.
9. Un metodo para producir al menos un anticuerpo par aIL-23p19, que comprende traducir la molecula de acido nucleico de acuerdo con la reivindicacion 6 o la reivindicacion 7 en condiciones in vitro, in vivo o in situ, de tal manera que el anticuerpo par aIL-23p19 se expresa en cantidades detectables o recuperables.
10. Una composicion que comprende por lo menos un anticuerpo aislado para IL-23p19 de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y al menos un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable, que comprende ademas opcionalmente al menos un compuesto o polipeptido seleccionado de un marcador o informador detectable, un antagonista de TNF, un farmaco antiinfeccioso, un farmaco para el sistema cardiovascular (CV), un farmaco para el sistema nervioso central (SNC), un farmaco para el sistema nervioso autonomo (ANS), un farmaco para el tracto respiratorio, un farmaco para el tracto gastrointestinal (GI), un farmaco hormonal, un farmaco para equilibrio de lfquidos o electrolitos, un farmaco hematologico, un antineoplasico, un farmaco de inmunomodulacion, un farmaco oftalmico, otico o nasal, un farmaco topico, un farmaco nutricional, una citoquina y un antagonista de citoquinas.
11. Una composicion que comprende una cantidad eficaz de al menos un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para su uso en terapia.
12. Una composicion que comprende una cantidad eficaz de al menos un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para su uso en un metodo para diagnosticar o tratar una afeccion relacionada con IL-23 en una celula, tejido, organo o animal, en donde la afeccion relacionada con IL-23 se selecciona del grupo que consiste de psoriasis, artritis psoriasica, enfermedad de Crohn, esclerosis multiple, neuritis optica y smdrome clmicamente aislado.
13. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 12:
(i) en donde dicha cantidad eficaz es aproximadamente 0,001-50 mg/kilogramo de dichas celulas, tejido, organo o animal;
(ii) en donde dicho contacto o dicha administracion es por al menos un modo seleccionado de parenteral, subcutaneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitario, intracelial, intracerebelar, intracerebroventricular, intracolico, intracervical, intragastrico, intrahepatico, intramiocardico, intraosteal, intrapelvico, intrapericardico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostatico, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretiniana, intraespinal, intrasinovial, intratoracico, intrauterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal y transdermico;
(iii) que comprende ademas administrar, antes, concurrentemente o despues de dicho contacto o administracion, al menos una composicion que comprende una cantidad eficaz de al menos un compuesto o polipeptido seleccionado de un marcador o informador detectable, un farmaco antiinfeccioso, un farmaco para el sistema cardiovascular (CV) ), un farmaco para el sistema nervioso central (SNC), un farmaco para el sistema nervioso autonomo (ANS), un farmaco para el tracto respiratorio, un farmaco para el tracto gastrointestinal (GI), un farmaco hormonal, un farmaco para el equilibrio de fluidos o electrolitos, un farmaco hematologico , un antineoplasico, un farmaco de inmunomodulacion, un farmaco oftalmico, otico o nasal, un farmaco topico, un farmaco nutricional, una citoquina y un antagonista de citoquinas.
14. Un dispositivo medico, que comprende un anticuerpo par aIL-23p19 de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde dicho dispositivo es adecuado para poner en contacto o administrar dicho anticuerpo par IL-23p19 por al menos un modo seleccionado de parenteral, subcutaneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitario, intracelial, intracerebelar, intracerebroventricular, intracolico, intracervical, intragastrico, intrahepatico, intramiocardico, intraosteal, intrapelvico, intrapericardico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostatico, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretiniano, intraespinal, intrasinovial, intratoracico, intrauterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal y transdermico
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