KR20230084283A - 항-il12/il23 항체로 크론병을 치료하는 방법 - Google Patents

항-il12/il23 항체로 크론병을 치료하는 방법 Download PDF

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KR20230084283A
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Abstract

환자의 크론병, 특히 중등도 내지 중증의 활동성 크론병의 임상적으로 입증된 안전하고 효과적인 치료를 위한 방법 및 조성물은 항-IL12/IL23p40 항체의 정맥내 초기 투여 및 임상 지표를 평가함으로써 결정된 유지 용량 간격을 갖는 피하 유지 투여를 포함한다.

Description

항-IL12/IL23 항체로 크론병을 치료하는 방법
본 발명은 임상 반응이 16주차에 측정되고 항-IL12/23 항체의 정맥내 및/또는 피하 투여를 사용하여 치료 요법이 평가되고 선택적으로 조정되는 환자에서 크론병, 특히 중등도 내지 중증의 활동성 크론병의 임상적으로 입증된 안전하고 임상적으로 입증된 효과적인 치료를 제공하는 방법에 관한 것이다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명이 "JBI6409WOPCT1SEQLIST.txt"이고, 작성일이 2021년 10월 1일이며, 크기가 15 KB인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
크론병(CD)을 포함하는 염증성 장 질환(IBD)은 위장(GI) 관에서의 파괴적 염증 및 상피 손상을 특징으로 하는 만성 재발성 장애이다(문헌[Baumgart 및 Sandborn, j Clin Invest. 98:1010-1020 (1996)]; 문헌[Danese and Fiocchi, N Engl J Med. 365:1715-1725 (2011)]).
IBD의 발병기전에서 IL12/23 경로의 관련성은 잘 확립되어 있으며, 장 염증에서 IL12/IL-23 경로의 중요한 역할은 대장염에서 밝혀졌다(문헌[Ahern et al., immunity. 33(2):279-288 (2010)]; 문헌[Uhlig et al., Immunity. 25:309 318 (2006)]; 문헌[Yen et al., J Clin Invest. 116(5):1310-1316 (2006)]). 초기 연구는 항-IFNγ(문헌[Berg et al., j Clin Invest. 98:1010-1020 (1996)]; 문헌[Davidson et al., J Immunol. 161:3143-3149 (1998)]) 또는 항-IL-12p40 단일클론 항체(mAb)를 사용한 처리가 실험적 대장염 모델에서 질환을 예방하였음을 보였으며, 이는 장 염증을 촉진시키는 데 있어서 1형 T 헬퍼(Th-1) 세포의 중요한 역할을 시사한다(문헌[Nurath et al., j Exp Med. 182(5):1281-1290 (1995)]).
현재, 중등도 내지 중증의 활동성 크론병의 치료에 대해 하기 3개 부류의 생물학적 제제가 승인되어 있다: 종양 괴사 인자(TNF) 길항제 요법(인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙), 인테그린 억제제(나탈리주맙 및 베돌리주맙), 및 IL12/23 억제제(우스테키누맙). 크론병에서의 유도 요법으로서의 정맥내(IV) 우스테키누맙의 효능 및 안전성은 임상 연구 CRD3001 및 CRD3002에 평가되어 있다. 연구 CRD3001에서는, 하나 이상의 TNF 길항제에 대해 이전에 실패 또는 불내약성을 보여주었던 대상체를 평가하였으며, CRD3002에서는 코르티코스테로이드 또는 면역조절제에 대해서는 부적절한 반응 또는 불내약성의 이력을 갖지만, TNF 길항제에 대해서는 부적절한 반응 또는 불내약성의 이력을 갖지 않는 대상체를 평가하였다. 이들 연구에서는, 다음 2개의 IV 용량을 평가하였다: 130 mg IV 고정 용량(mg/㎏ 기준으로 약 2 mg/㎏)을 저용량군에 대해 선택하였고, 한편 약 6 mg/㎏ IV로 근사되는 체중 범위 기반 용량(body-weight range based dose)(체중 ≤ 55 ㎏: 우스테키누맙 260 mg; 체중 >55 및 ≤85 ㎏: 우스테키누맙 390 mg; 체중 >85 ㎏: 우스테키누맙: 520 mg)을 고용량군으로서 선택하였다. 두 연구 모두에서, 우스테키누맙은 플라세보와 비교하여 임상적으로 유의한 효능을 입증하였으며, 양호한 안전성 프로파일과 함께 우수한 내약성을 나타내었다.
생물학적 제제의 도입이 중등도 내지 중증의 활동성 크론병을 갖는 환자의 임상 관리를 유의하게 개선하였지만, 표적 환자 집단의 상당한 비율은 비반응성이거나 시간 경과에 따라 반응을 상실할 것이다. 승인된 생물학적 제제에 대한 이용가능한 데이터의 검토는, 특히 이전에 생물학적 치료를 실패한 환자들 중에서, 장기 관해를 달성하고 유지함에 있어서 충족되지 않은 필요성을 강조하였다. 모든 치료 환자(즉, 평가된 연구의 주수 0에서 무작위배정된 모든 환자)에서, 생물학적제제 실패 또는 불내약성(BIO-Failure) 집단에서의 1년째의 추정된 임상 관해율은 약 20%이고, 통상적 요법 실패 또는 불내약성(CON-Failure) 집단에서는 20% 내지 50%의 범위이다.
더 높은 비율의 환자에 대한 개선된 효능을 달성하기 위해 크론병, 특히 중등도 내지 중증의 활동성 크론병을 치료하는 개선된 방법에 대한 필요성이 당업계에 존재한다.
본 출원은 항-IL12/IL23p40 항체(항-IL12/IL23 항체)를 대상체에 초기 정맥내 용량으로 투여하고, 초기 용량 후 8주차에 피하 용량을 투여하고, 임상 종점, 바이오마커 및/또는 임상 반응의 평가에 기초하여 초기 용량 후 16주차에 임상 반응(효능)의 지표를 측정하고, 초기 용량 후 16주차에 및 그 후 매 4주차, 그 후 매 8주차 또는 그 후 매 12주차에 항체를 피하 용량으로 투여함으로써 중등도 내지 중증의 활동성 크론병을 치료하기 위한 임상적으로 입증된 안전하고 임상적으로 입증된 효과적인 방법 및 조성물에 관한 것이다.
일반적인 일 태양에서, 본 출원은 중등도 내지 중증의 활동성 크론병의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 크론병을 치료하는 임상적으로 입증된 안전하고 임상적으로 입증된 효과적인 방법으로서, 항-IL12/IL-23p40 항체의 안전하고 효과적인 양을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열 번호 1의 상보성 결정 영역 중쇄 1(CDRH1) 아미노산 서열; 서열 번호 2의 CDRH2 아미노산 서열; 및 서열 번호 3의 CDRH3 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 서열 번호 4의 상보성 결정 영역 경쇄 1(CDRL1) 아미노산 서열; 서열 번호 5의 CDRL2 아미노산 서열; 및 서열 번호 6의 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 방법에 관한 것이다.
소정 실시 형태에서, 본 출원의 방법은 (i) 서열 번호 7의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열; 및 (ii) 서열 번호 8의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항-IL12/23p40 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 정맥내(IV) 및/또는 피하(SC) 투여하는 단계를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 본 출원의 방법은 (i) 서열 번호 10의 중쇄 아미노산 서열; 및 (ii) 서열 번호 11의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-IL12/23p40 항체 우스테키누맙을 포함하는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 정맥내(IV) 및/또는 피하(SC) 투여하는 단계를 포함한다.
소정 실시 형태에서, 주수 0에서의 IV 용량은 약 6.0 mg/㎏이다. 예를 들어, IV 용량은 체중이 35 ㎏ 이상 및 55 ㎏ 이하인 대상체에 대해서는 260 mg이고, 체중이 55 ㎏ 초과 및 85 ㎏ 이하인 대상체에 대해서는 390 mg이고, 체중이 85 ㎏ 초과인 대상체에 대해서는 520 mg이다.
소정 실시 형태에서, 본 출원의 실시 형태에 따른 방법에 의해 치료되는 대상체는 통상적인 또는 기존의 요법에 대해 부적절한 반응을 가졌거나 이에 대해 불내약성이다. 일부 실시 형태에서, 상기 대상체는 생물학적 요법, 예컨대 항-TNF 및/또는 베돌리주맙에 대해 이전에 실패하였거나 이에 대해 불내약성이었다. 일부 실시 형태에서, 상기 대상체는 비생물학적 요법, 예컨대 코르티코스테로이드, 아자티오프린(AZA), 및/또는 6 메르캅토푸린(6 MP)에 의한 치료에 대해 이전에 실패하였거나 이에 대해 불내약성이었다. 일부 실시 형태에서, 상기 대상체는 코르티코스테로이드 의존성을 보여주었다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 대상체에서 중등도 내지 중증의 활동성 크론병을 치료하는 임상적으로 입증된 안전하고 임상적으로 입증된 효과적인 방법을 제공하며, 여기서 대상체는 항체를 사용한 치료에 대한 반응자(responder)이고, 다음으로부터 선택된 임상 지표 및 임상 종점에 의해 결정되는 바와 같은 질환 활동성에 있어서의 통계적으로 유의한 개선을 갖는 것으로 확인된다:
(i) 내시경적 반응(50% 이상의 SES-CD 점수의 기준선으로부터의 감소)
(ii) 전반적인 내시경적 관해(2 이하의 SES-CD 점수)
(iii) 점막 치유(임의의 회결장 분절(ileocolonic segment)에서의 점막 궤양의 완전 부재)
(iv) CDAI 70 반응(기준선 대비 70점 이상의 CDAI 총 점수의 개선)
(v) 임상 반응(기준선 CDAI 총 점수로부터의 100점 이상 감소, 또는 150 미만의 CDAI 총 점수)
(vi) 임상 관해(150점 미만의 CDAI 총 점수)
(vii) 바이오마커(fCal 및 CRP)의 기준선으로부터의 변화
(viii) CDAI(Crohn's Disease Activity Index) 점수의 기준선으로부터의 변화. CDAI 점수는 점수 범위가 0 내지 약 600인 8개의 서로 다른 크론병 관련 변수에 대한 정보를 수집함으로써 평가될 것이다. 시간 경과에 따른 감소는 질환 활동성의 개선을 나타낸다.
(ix) 평균 일일 대변 빈도(SF) 및 평균 일일 복부 통증(AP) 점수에 기초하여 정의되는 주수 16 또는 주수 48에서의 환자-보고 결과(Patient-Reported Outcome, PRO)-2 관해.
(x) CDAI 점수에 기초한 임상 반응 및 C-반응성 단백질(CRP) 또는 대변 칼프로텍틴의 기준선으로부터의 감소를 이용하여 정의되는 임상-바이오마커 반응.
(xi) 크론병에 대한 단순 내시경 점수(SES-CD)에 의해 측정되는 내시경적 반응. SES-CD는 5개의 회결장 분절에 걸친 4개의 내시경 성분의 평가에 기초하며, 총점은 0 내지 56의 범위이다.
(xii) 주수 48에서의 CDAI 점수가 150 미만이고 주수 48에 코르티코스테로이드가 투여되지 않는 것으로 정의되는 주수 48에서의 코르티코스테로이드 무사용(Corticosteroid-Free) 임상 관해.
(xiii) 평균 일일 대변 빈도(SF) 및 평균 일일 복부 통증(AP) 점수에 기초하여 정의되는 주수 48에서의 PRO-2 관해. 환자-보고 결과 측정 정보 시스템(PROMIS: Patient-Reported Outcomes Measurement Information System)에 기초한 주수 12에서의 피로 반응. 피로 단축 양식 7a는 피로의 중증도를 평가하는 7개의 항목을 포함하며, 더 높은 점수는 더 큰 피로를 나타낸다.
다른 실시 형태에서, 항-IL12/IL-23p40 항체의 유지 용량은 주수 16에서의 치료 후 4주마다, 주수 16에서의 치료 후 8주마다 또는 주수 16에서의 치료 후 12주마다 투여되고, 임상 반응은 적어도 48주 동안 대상체에 의해 유지된다.
소정 실시 형태에서, 본 출원은 대상체에서 크론병을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 IV 투여에 사용하기 위한 항-IL12 및/23p40 항체는 10 mM L-히스티딘, 8.5% (w/v) 수크로스, 0.04% (w/v) 폴리소르베이트 80, 0.4 mg/mL L-메티오닌, 및 20 ㎍/mL EDTA 이나트륨 염(디하이드레이트(dehydrate))을 포함하는 용액(pH 6)을 포함하는 약제학적 조성물 중에 존재한다.
소정 실시 형태에서, 본 출원은 대상체에서 크론병을 치료하는 임상적으로 입증된 안전하고 임상적으로 입증된 효과적인 방법을 제공하며, 여기서 피하 투여에 사용하기 위한 항-IL12/IL23p40 항체는 6.7 mM L-히스티딘, 7.6% (w/v) 수크로스, 0.004% (w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하는 용액(pH 6)을 포함하는 약제학적 조성물 중에 존재한다.
전술한 요약뿐만 아니라 본 발명의 하기의 상세한 설명도 첨부 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 본 발명은 도면에 나타낸 정확한 실시 형태로 제한되지 않음이 이해되어야 한다.
도 1은 크론병에서 항-IL-12/IL-23p40 항체(우스테키누맙)의 STARDUST 목표지향치료(treat to target) 3b상 연구 설계의 개략도를 도시한다.
도 2는 시험을 위한 항-IL-12/IL-23p40 항체(우스테키누맙)의 용량 조정을 결정하기 위한 치료 결정의 흐름도를 도시한다.
도 3은 시험에서 환자 처분(RAS)을 도시한다.
도 4는 무작위배정된 목표지향치료(T2T) 아암 및 표준 치료(SoC) 아암의 시험에서의 환자 처분(RAS)을 도시한다.
도 5a(NRI) 및 도 5b(LOCF)는 기준선 SES-CD 점수(≤16,>16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(없음 또는 1)에 의해 계층화된 코크란-멘텔-헨젤(Cochran-Mantel-Haenszel) 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초한 p-값(공칭)과 함께 주수 48에서의 내시경 결과(좌측 막대 T2T 및 우측 막대 SoC)를 도시한다. 내시경 평가가 누락된 환자는 비-반응자/비-관해자(remitter)로 간주된다. 내시경적 반응은 25% 이상 또는 100%의 SES-CD의 기준선으로부터의 감소를 나타내는 것으로 정의된다. 내시경적 관해는 2 이하의 SES-CD 점수로 정의된다. 점막 치유는 임의의 회결장 분절에서의 점막 궤양의 완전 부재로 정의된다. 코르티코스테로이드 무사용 내시경적 반응은 SES-CD 점수가 기준선으로부터 50% 이상 감소하고 종점 전 적어도 30일 동안 임의의 코르티코스테로이드를 투여받지 않는 것으로 정의된다. LOCF(도 5b) = 마지막 측정값 이월; NRI(도 5a) = 비-반응자 대체(imputation).
도 6a(NRI) 및 도 6b(LOCF)는 기준선 SES-CD 점수(≤16,>16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(없음 또는 1)에 의해 계층화된 코크란-멘텔-헨젤(Cochran-Mantel-Haenszel) 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초한 p-값(공칭)과 함께 주수 48에서의 임상 결과(좌측 막대 T2T 및 우측 막대 SoC)를 도시한다. 누락된 데이터를 갖는 환자는 비-반응자/비-관해자로 간주된다. CDAI 70 반응은 기준선 대비 70점 이상의 CDAI 총 점수의 개선을 나타내는 것으로 정의된다. 임상 반응은 기준선 CDAI 총 점수로부터의 100점 이상 감소, 또는 150 미만의 CDAI 총 점수로 정의된다. 임상 관해는 150점 미만의 CDAI 총 점수로 정의된다. 주수 48에, 높은 비율의 임상 반응이 T2T 및 SoC 아암에서 달성되었다: 68.2% 대 77.8%(p = 0.0212; NRI)/89.5% 대 89.6% (유의하지 않음[NS]; LOCF); 임상 관해 61.4% 대 69.7% (NS; NRI)/76.8% 대 78.3% (NS; LOCF). T2T(n=220) 및 SoC(n=221).
도 7은 내시경적 반응(주수 48(RAS)에서의 50% 이상의 SES-CD 개선[95% CI]으로, T2T(좌측 막대)의 경우 n=220이고, SoC의 경우(우측 막대) n=221임)을 도시한다. p<0.05. 누락된 데이터를 갖는 대상체는 무반응자로서 분석되었다. p 값(공칭)은 기준선 SES-CD 점수(≤16, >16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(0 또는 1)에 의해 계층화된 CMH 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초한다. 주수 48에 누락된 SES-CD 점수를 갖거나 주수 48에 도달하기 전에 치료를 중단한 대상체는 마지막 SES-CD 점수가 이월될 것이다. 효능의 결여/상실 이외의 이유로 인해 주수 48에 도달하기 전에 치료를 중단한 대상체를 제외한 모든 무작위배정된 환자.
도 8은 주수 48(RAS NRI)에서의 임상 결과를 도시하며, T2T(좌측 막대)의 경우 n=220이고, SoC(우측 막대)의 경우 n=221이다. p<0.05, p-값(공칭)은 기준선 SES-CD 점수(≤16,>16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(없음 또는 1)에 의해 계층화된 CMH 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초한다. 누락된 데이터를 갖는 대상체는 비-반응자/비-관해자로 간주된다. CDAI 70 반응은 기준선 대비 70점 이상의 CDAI 총 점수의 개선을 나타내는 것으로 정의된다. 임상 반응은 기준선 CDAI 총 점수로부터의 100점 이상 감소, 또는 150 미만의 CDAI 총 점수로 정의된다. 임상 관해는 150점 미만의 CDAI 총 점수로 정의된다. 종점에서의 코르티코스테로이드 무사용 임상 관해는 CDAI 점수가 150 미만이고 종점 평가 전 30일 이상 동안 어떠한 코르티코스테로이드도 투여되지 않는 것으로 정의된다.
도 9는 주수 48(RAS LOCF)에서의 임상 결과를 도시하며, T2T(좌측 막대)의 경우 n=220이고, SoC(우측 막대)의 경우 n=221이다. p-값(공칭)은 기준선 SES-CD 점수(≤16,>16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(없음 또는 1)에 의해 계층화된 CMH 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초한다. b CDAI 70 반응은 기준선 대비 70점 이상의 CDAI 총 점수의 개선을 나타내는 것으로 정의된다. c 임상 반응은 기준선 CDAI 총 점수로부터의 100점 이상의 감소, 또는 150 미만의 CDAI 총 점수로 정의된다. d 임상 관해는 150점 미만의 CDAI 총 점수로 정의된다. e 종점에서의 코르티코스테로이드 무사용 임상 관해는 CDAI 점수가 150 미만이고 종점 평가 전 30일 이상 동안 어떠한 코르티코스테로이드도 투여되지 않는 것으로 정의된다.
도 10a(RAS NRI) 및 도 10b(RAS LOCF)는 환자 수에 대한 바이오마커 결과(Y축에서의 %)를 도시한다. 도 10a의 경우, p<0.05이며, p-값(공칭)은 기준선 SES-CD 점수(≤16,>16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(없음 또는 1)에 의해 계층화된 CMH 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초한다. 누락된 데이터를 갖는 대상체는 개선이 없는 것으로 간주된다. fCal 개선은 50% 이상의 fCal의 기준선으로부터의 감소를 나타내는 것으로 정의된다. 기준선에서 정규화된 fCal(250 ug/g 이하)을 갖는 대상체는 제외된다. CRP 개선은 50% 이상의 CRP의 기준선으로부터의 감소를 나타내는 것으로 정의된다. 기준선에서 정규화된 CRP(3 mg/L 이하)를 갖는 대상체는 제외된다. 정규화된 fCal은 250 ug/g 이하의 fCal로 정의된다. 기준선에서 정규화된 fCal을 갖는 대상체는 제외된다. 정규화된 CRP는 3 mg/L 이하의 CRP로 정의된다. 기준선에서 정규화된 CRP를 갖는 대상체는 제외된다. 완전한 바이오마커 반응은 CRP 및 fCal 모두가 정규화된 것으로 정의된다. 기준선에서 정규화된 CRP 및 fCal을 갖는 대상체가 제외되고, 기준선에서 CRP 및 fCal 모두가 누락된 대상체도 제외된다. 정규화된 CRP는 3 mg/L 이하의 CRP로 정의된다. 정규화된 fCal은 250 ug/g 이하의 fCal로 정의된다. 도 10b의 경우, p-값(공칭)은 기준선 SES-CD 점수(≤16,>16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(없음 또는 1)에 의해 계층화된 CMH 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초한다. fCal 개선은 50% 이상의 fCal의 기준선으로부터의 감소를 나타내는 것으로 정의된다. 기준선에서 정규화된 fCal(250 ug/g 이하)을 갖는 대상체는 제외된다. CRP 개선은 50% 이상의 CRP의 기준선으로부터의 감소를 나타내는 것으로 정의된다. 기준선에서 정규화된 CRP(3 mg/L 이하)를 갖는 대상체는 제외된다. 정규화된 fCal은 250 ug/g 이하의 fCal로 정의된다. 기준선에서 정규화된 fCal을 갖는 대상체는 제외된다. 정규화된 CRP는 3 mg/L 이하의 CRP로 정의된다. 기준선에서 정규화된 CRP를 갖는 대상체는 제외된다. 완전한 바이오마커 반응은 CRP 및 fCal 모두가 정규화된 것으로 정의된다. 기준선에서 정규화된 CRP 및 fCal을 갖는 대상체가 제외되고, 기준선에서 CRP 및 fCal 모두가 누락된 대상체도 제외된다. 정규화된 CRP는 3 mg/L 이하의 CRP로 정의된다. 정규화된 fCal은 250 ug/g 이하의 fCal로 정의된다.
다양한 간행물, 논문, 및 특허가 배경기술에 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되어 있거나 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성하는 것을 인정하는 것은 아니다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용되는 소정의 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다. 본 명세서에 인용된 모든 특허, 공개된 특허 출원 및 간행물은 마치 본 명세서에 완전히 기재되어 있는 것처럼 참고로 포함된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소 앞의 용어 "적어도"는 일련 내의 각각의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 단지 일반적인 실험을 사용하여, 본 명세서에서 설명된 본 발명의 구체적인 실시 형태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 본 발명에 의해 포함되도록 의도된다.
본 명세서 및 후술되는 청구범위 전체에 걸쳐, 문맥상 달리 필요로 하지 않는 한, 단어 "포함하다" 및 변형 형태, 예컨대 "포함한다" 및 "포함하는"은 언급된 정수 또는 단계 또는 정수들 또는 단계들의 군을 포함하지만, 어떠한 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 군을 배제하지는 않음을 내포하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "포함하는"은 용어 "함유하는" 또는 "구비하는"으로 치환될 수 있거나, 경우에 따라서는 본 명세서에 사용될 때 용어 "갖는"으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용될 때, "~로 이루어진"은 청구범위 요소에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 구성성분을 배제한다. 본 명세서에서 사용될 때, "~로 본질적으로 이루어진"은 청구항의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 주지 않는 재료 또는 단계를 배제하지 않는다. 본 발명의 태양 또는 실시 형태와 관련하여 본 명세서에 사용되는 모든 경우에, 임의의 전술한 용어 "포함하는", "함유하는", "구비하는" 및 "갖는"은 본 발명의 범주를 변동시키기 위해 용어 "~로 이루어진" 또는 "~로 본질적으로 이루어진"으로 대체될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 다수의 언급된 요소들 사이의 접속 용어 "및/또는"은 개별 선택지 및 조합된 선택지 둘 모두를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2개의 요소들이 "및/또는"에 의해 결합되는 경우, 제1 선택지는 제2 요소 없이 제1 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제2 선택지는 제1 요소 없이 제2 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제3 선택지는 제1 요소와 제2 요소가 함께 적용가능함을 지칭한다. 이들 선택지 중 어느 것이든 하나는 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 본 명세서에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다. 이들 선택지 중 하나 초과의 동시 적용가능성 또한 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "대상체"는 본 발명의 일 실시 형태에 따른 방법에 의해 치료될 것이거나 치료된 적이 있는 임의의 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포유동물"은 임의의 포유동물을 포함한다. 포유동물의 예에는 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼, 기니 피그, 비인간 영장류 (NHP), 예컨대 원숭이 또는 유인원, 인간 등, 더 바람직하게는 인간이 포함되지만 이로 제한되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 대상체에 대한 2가지 이상의 요법의 투여와 관련하여 용어 "병용하여"는 하나 초과의 요법의 사용을 지칭한다. 용어 "병용하여"의 사용은 요법이 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 대상체에게 제2 요법을 투여하기 전에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전에), 그와 동시에, 또는 그 후에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 제1 요법(예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물)이 투여될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "항-IL12/23p40 항체", 또는 "IL12/23 항체"는 사이토카인 인터류킨-12 및 인터류킨-23에 의해 공유되는 40 kDa(p40) 서브유닛(IL12/23p40)에 결합하는 단일클론 항체(mAb) 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다. 항체는 RNA, DNA 또는 단백질 합성, IL12/23 방출, IL12/23 수용체 신호전달, 막 IL12/23 절단, IL12/23 활성, IL12/23 생성 및/또는 합성과 같지만 이로 한정되지 않는 하나 이상의 IL12/23 활성 또는 기능에 영향을 줄 수 있다.
용어 "항체"는 추가로 항체, 이의 분해 단편, 특정 부분 및 변이체를 포함하고자 하며, 항체 모방체(mimetic)를 포함하거나, 단일쇄 항체 및 이의 단편을 포함하는, 항체 또는 이의 특정 단편 또는 부분의 구조 및/또는 기능을 모방하는 항체의 부분을 포함한다. 기능성 단편은 포유류 IL-12/23에 결합하는 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들어, Fab (예를 들어, 파파인 분해에 의해), Fab' (예를 들어, 펩신 분해 및 부분적인 환원에 의해), 및 F(ab')2 (예를 들어, 펩신 분해에 의해), facb (예를 들어, 플라스민 분해에 의해), pFc' (예를 들어, 펩신 또는 플라스민 분해에 의해), Fd (예를 들어, 펩신 분해, 부분적인 환원 및 재응집에 의해), Fv 또는 scFv (예를 들어, 분자생물학 기술에 의해) 단편을 포함하지만 이로 한정되지 않는, IL-12/23 또는 이의 일부분에 결합할 수 있는 항체 단편이 본 발명에 포함된다 (예를 들어, 상기 문헌[Colligan, Immunology] 참조).
그러한 단편들은 당업계에 알려져 있는 바와 같은, 그리고/또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 효소적 절단, 합성 또는 재조합 기법에 의해 생산될 수 있다. 항체는 또한 하나 이상의 정지 코돈이 천연 정지 부위의 상류에 도입된 항체 유전자를 사용하여 다양한 절단된(truncated) 형태로 생성될 수 있다. 예를 들어, 중쇄의 CH1 도메인 및/또는 힌지 영역을 인코딩하는 DNA 서열을 포함하도록, F(ab')2 중쇄 부분을 인코딩하는 조합 유전자를 설계할 수 있다. 항체의 다양한 부분은 통상의 기술에 의해 화학적으로 함께 연결될 수 있거나, 유전 공학 기술을 사용하여 연속 단백질로서 제조될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 단백질의 실질적으로 모든 부분(예를 들어, CDR, 프레임워크, CL, CH 도메인(예를 들어 CH1, CH2, CH3), 힌지, (VL, VH))이, 단지 사소한 서열 변화 또는 변형만을 가지면서, 인간에서 실질적으로 비면역원성인 항체를 지칭한다. "인간 항체"는 또한 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래되거나 이와 거의 일치하는 항체일 수 있다. 인간 항체는 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 인코딩되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내(in vitro)에서의 랜덤 또는 부위-특이적 돌연변이 생성에 의해 또는 생체내(in vivo)에서의 체세포 돌연변이에 의해 도입되는 돌연변이)를 포함할 수 있다. 종종, 이는 인간 항체가 인간에서 실질적으로 비면역원성임을 의미한다. 인간 항체는 이들의 아미노산 서열 유사성에 기초하여 그룹으로 분류된다. 따라서, 서열 유사성 검색을 사용하여, 유사한 선형 서열을 갖는 항체를 주형으로 선택하여 인간 항체를 생성할 수 있다. 유사하게, 영장류(원숭이, 개코원숭이, 침팬지 등), 설치류(마우스, 래트, 토끼, 기니 피그, 햄스터 등) 및 다른 포유동물에 지정된 항체는 그러한 종, 아속, 속, 아과, 및 과 특이적 항체를 지정한다. 추가로, 키메라 항체는 상기의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 이러한 변화 또는 변이는 선택적으로 그리고 바람직하게는, 변형되지 않은 항체에 비해 인간 또는 다른 종에서의 면역원성을 유지시키거나 감소시킨다. 따라서, 인간 항체는 키메라 또는 인간화 항체와 구별된다.
인간 항체는 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린 (예를 들어, 중쇄 및/또는 경쇄) 유전자를 발현할 수 있는 비인간 동물 또는 원핵 또는 진핵세포에 의해 생성될 수 있다는 점이 주목된다. 또한, 인간 항체가 단일쇄 항체일 때, 인간 항체는 천연 인간 항체에서는 발견되지 않는 링커 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, Fv는 중쇄의 가변 영역 및 경쇄의 가변 영역을 연결시키는 링커 펩티드, 예를 들어 2 내지 약 8개의 글리신 또는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러한 링커 펩티드는 인간 기원인 것으로 간주된다.
본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 항-IL12/23p40 항체(또한 IL12/23p40 항체로 명명됨)는 선택적으로 IL12/23p40으로의 고친화도 결합, 선택적으로 그리고 바람직하게는 낮은 독성을 가짐을 특징으로 할 수 있다. 특히, 개별 성분, 예를 들어 가변 영역, 불변 영역 및 프레임워크가 개별적으로 및/또는 공동으로, 선택적으로 그리고 바람직하게는 낮은 면역원성을 갖는 본 발명의 항체, 특정 단편 또는 변이체가 본 발명에서 유용하다. 본 발명에서 사용할 수 있는 항체는 선택적으로 측정가능한 정도로 증상을 완화하고, 낮고/낮거나 허용가능한 독성을 보이면서 장기간 동안 대상체를 치료할 수 있는 능력을 특징으로 한다. 낮거나 허용가능한 면역원성 및/또는 높은 친화도뿐만 아니라 다른 적합한 특성이 달성되는 치료 결과에 기여할 수 있다. 본 명세서에서 "낮은 면역원성"은 치료한 대상체의 약 75% 미만, 또는 바람직하게는 약 50% 미만에서 유의한 HAHA, HACA, 또는 HAMA 반응을 야기하고/하거나 치료한 대상체에서 낮은 역가(이중 항원 효소 면역검정으로 측정할 때, 약 300 미만, 바람직하게는 약 100 미만)를 야기하는 것으로서 정의된다 (전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Elliott et al., Lancet 344:1125-1127 (1994)]). "낮은 면역원성"은 또한 항-IL-12 항체로 치료한 대상체에서 항-IL-12 항체에 대한 항체의 적정 수준의 발생률이 치료 기간 동안 권장 치료 과정에서 권장 용량으로 치료한 대상체의 25% 미만, 바람직하게는 치료한 대상체의 10% 미만으로 발생하는 것으로 정의될 수 있다.
용량, 투여 요법(dosage regimen), 치료, 또는 방법과 관련하여 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "임상적으로 입증된 효능" 및 "임상적으로 입증된 효과적인"은 특정 용량, 투여량, 또는 치료 요법의 유효성을 지칭한다. 효능은 본 발명의 작용제에 반응하는 질병 경과의 변화에 기초하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-IL12/23p40(예를 들어, 우스테키누맙)은 치료되는 장애의 중증도를 반영하는 적어도 하나의 지표의 개선, 바람직하게는 지속적인 개선을 유도하기에 충분한 양으로 그리고 충분한 시간 동안 대상체에게 투여된다. 치료의 양 및 시간이 충분한지 여부를 결정하기 위해 대상체의 병, 질병, 또는 질환의 정도를 반영하는 다양한 지표를 평가할 수 있다. 이러한 지표는, 예를 들어 문제의 장애의 질병 중증도, 증상, 또는 징후의 임상적으로 인정된 지표를 포함한다. 개선의 정도는 일반적으로 의사에 의해 결정되며, 의사는 징후, 증상, 생검체, 또는 다른 검사 결과에 기초하여 이러한 결정을 할 수 있고, 또한 의사는 대상체에게 제공되는 설문지, 예컨대 주어진 질병에 대해 개발된 삶의 질 설문지를 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-IL12/23p40 또는 항-IL23 항체는 크론병과 관련된 대상체의 상태의 개선 또는 임상 관해를 달성하기 위해 투여될 수 있다.
개선은 질환 활동성 지수의 개선에 의해, 임상 증상의 호전에 의해 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 질환 활동성의 임의의 다른 척도에 의해 나타날 수 있다. 하나의 그러한 질환 지수는 크론병 활동성 지수(CDAI) 점수 또는 CD의 단순 내시경 점수(SES-CD)이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "임상 반응"은 약물 투여에 대한 대상체의 반응에 관한 것이며, 또한 크론병에서 측정되며 당업계에 알려져 있는 바와 같은 "임상 관해"를 지칭할 수 있다.
용어 "임상적으로 입증된 안전한"은, 본 발명의 항-IL12/IL-23p40 항체(예를 들어, 우스테키누맙)를 이용한 용량, 투여 요법, 치료, 또는 방법에 관한 것일 때, 치료 표준 또는 다른 대조약에 비교한, 치료로 인한 유해 사건(AE 또는 TEAE로 지칭됨)의 허용가능한 빈도 및/또는 허용가능한 중증도를 갖는 유리한 위험:이익 비를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "유해 사건", "치료-유발 유해 사건(treatment-emergent adverse event)" 및 "유해 반응"은 약제학적 조성물 또는 치료제의 투여와 관련되거나 그에 의해 야기되는 임의의 해로운, 바람직하지 않은, 의도치 않은, 또는 원치 않는 징후 또는 결과를 의미한다. 그것은 의약품이 투여된 대상체에서의 바람직하지 않은 의료 사건이다. 그러나, 비정상적인 값 또는 관찰은 연구자에 의해 임상적으로 유의한 것으로 간주되지 않는 한 유해 사건으로 보고되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 유해 사건을 언급할 때, "임상적으로 명백한"은 당업자에게 허용가능한 표준을 사용하여 의사 또는 연구자에 의해 결정되는 바와 같이 임상적으로 유의함을 의미한다. 유해 사건의 해롭거나 원치 않는 결과가 그러한 중증도 수준에 도달할 때, 규제 기관은 약제학적 조성물 또는 치료제가 제안된 용도에 대해 허용 불가능한 것으로 여길 수 있다. 특히, "안전한"은, 본 발명의 항-IL12/23p40 항체를 이용한 용량, 투여 요법, 또는 치료에 관한 것일 때, 속성이 항-IL12/23p40 항체의 사용으로 인한 것일 가능성이 있거나, 개연성이 있거나, 가능성이 매우 높은 것으로 간주되는 경우에 항체의 투여와 관련된 유해 사건의 허용가능한 빈도 및/또는 허용가능한 중증도를 갖는 것을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 달리 언급되지 않는 한, (독립적으로 사용되거나 용어 "안전한" 및/또는 "유효한"을 수식하는 데 사용되는) 용어 "임상적으로 입증된"은 임상 시험에 의해 입증된 것임을 의미할 것인데, 여기서 임상 시험은 미국 식품 의약국(U.S. Food and Drug Administration), EMEA 또는 상응하는 국가 규제 기관의 승인 표준을 만족시켰다. 예를 들어, 임상 연구는 약물의 효과를 임상적으로 입증하는 데 사용되는 충분한 크기, 무작위배정, 이중-맹검 연구일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "mg/㎏" 단위의 항-IL12/IL23p40 항체의 투여량은 항체가 투여되는 대상체의 체중 1 킬로그램당 밀리그램으로의 항-IL12/IL23p40 항체의 양을 지칭한다.
본 발명의 항체 - 생성 및 생산
본 발명의 방법에 사용되는 적어도 하나의 항-IL12/23p40은 당업계에 잘 알려진 바와 같이, 세포주, 혼합 세포주, 불멸화(immortalized) 세포 또는 불멸화 세포의 클론 집단에 의해 선택적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001)]; 문헌[Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor, NY (1989)]; 문헌[Harlow and Lane, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989)]; 문헌[Colligan, et al., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001)]; 문헌[Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001)]을 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
단리된 IL-12/23p40 단백질, IL-23 단백질 및/또는 이의 일부분 (합성 펩티드와 같은 합성 분자를 포함함)과 같은 적절한 면역원성 항원에 대해 인간 IL-12/23p40 단백질, 또는 이의 단편에 특이적인 인간 항체를 발생시킬 수 있다. 다른 특이적 또는 일반적 포유류 항체를 유사하게 발생시킬 수 있다. 면역원성 항원의 제조 및 단일클론 항체 생성은 본 발명을 고려하여 임의의 적합한 기법을 사용하여 수행될 수 있다.
한 방법에서, 하이브리도마(hybridoma)는 적합한 불멸화 세포주 (예를 들어, Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, NS1, NS2, AE-1, L.5, L243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144, ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMALWA, NEURO 2A 등과 같지만 이로 한정되지 않는 골수종 세포주, 또는 이종골수종(heteromyeloma), 이의 융합 산물, 또는 이로부터 유도되는 임의의 세포 또는 융합 세포, 또는 당업계에 알려진 임의의 다른 적합한 세포주) (예를 들어, www.atcc.org, www.lifetech.com. 등 참조)를, 내인성 또는 이종 핵산으로서, 재조합 또는 내인성 바이러스, 세균, 조류, 원핵생물, 양서류, 곤충, 파충류, 어류, 포유동물, 설치류, 말, 양(ovine), 염소, 양, 영장류, 진핵생물, 게놈 DNA, cDNA, rDNA, 미토콘드리아 DNA 또는 RNA, 엽록체 DNA 또는 RNA, hnRNA, mRNA, tRNA, 단일, 이중 또는 삼중 가닥, 혼성화된 것 등, 또는 이들의 임의의 조합으로서, 단리되거나 클로닝된 비장, 말초 혈액, 림프선, 편도선, 또는 다른 면역 세포 또는 B 세포 함유 세포, 또는 중쇄 또는 경쇄 불변 또는 가변 또는 프레임워크 또는 CDR 서열을 발현하는 임의의 다른 세포와 같지만 이로 한정되지 않는 항체 생성 세포와 융합시켜 생성된다. 예를 들어, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함되는, 문헌[Ausubel, 상기 문헌] 및 문헌[Colligan, Immunology, 상기 문헌, 챕터 2]을 참조한다.
항체 생성 세포는 또한, 목적 항원으로 면역화된 인간 또는 다른 적합한 동물의 말초 혈액, 또는 바람직하게는 비장 또는 림프절로부터 얻을 수 있다. 임의의 다른 적합한 숙주 세포를 사용하여 본 발명의 항체, 이의 특정 단편 또는 변이체를 인코딩하는 이종 또는 내인성 핵산을 또한 발현할 수 있다. 융합된 세포 (하이브리도마) 또는 재조합 세포는 선택적 배양 조건 또는 다른 적합한 공지 방법을 사용하여 단리될 수 있고, 제한 희석 또는 세포 분류, 또는 다른 공지의 방법에 의해 클로닝될 수 있다. 원하는 특이성을 갖는 항체를 생성하는 세포를 적합한 검정 (예를 들어, ELISA)에 의해 선별할 수 있다.
필요한 특이성의 항체를 생성하거나 단리하는 다른 적합한 방법이 사용될 수 있으며, 이는 펩티드 또는 단백질 라이브러리(이에 제한되지 않지만, 예를 들어 박테리오파지, 리보솜, 올리고뉴클레오티드, RNA, cDNA 등, 디스플레이 라이브러리; 예를 들어, 영국 캠브리지셔 소재의 Cambridge antibody Technologies; 독일 마르틴스레이드/플라네그 소재의 MorphoSys; 영국 스코틀랜드 아버딘 소재의 Biovation; 스웨덴 룬드 소재의 BioInvent; Dyax Corp., Enzon, Affymax/Biosite; 미국 캘리포니아주 버클리 소재의 Xoma; Ixsys로부터 입수가능 함)로부터 재조합 항체를 선택하는 방법을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, EP 368,684호, PCT/GB91/01134호; PCT/GB92/01755호; PCT/GB92/002240호; PCT/GB92/00883호; PCT/GB93/00605호 US 08/350260(5/12/94)호; PCT/GB94/01422호; PCT/GB94/02662호 PCT/GB97/01835호 (CAT/MRC); WO90/14443호; WO90/14424호; WO90/14430호; PCT/US94/1234호; WO92/18619호; WO96/07754호 (Scripps); WO96/13583호, WO97/08320호(MorphoSys); WO95/16027호(BioInvent); WO88/06630호; WO90/3809호(Dyax); US 4,704,692호(Enzon); PCT/US91/02989호(Affymax); WO89/06283호; EP 371 998호; EP 550 400호; (Xoma); EP 229 046호; PCT/US91/07149호(Ixsys)를 참조함; 또는 추계적으로 생성된 펩티드 또는 단백질 - US 5723323, 5763192, 5814476, 5817483, 5824514, 5976862, WO 86/05803, EP 590 689(Ixsys, Applied Molecular Evolution(AME)의 전신, 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨))로부터 재조합 항체를 선택하는 방법, 또는 당업계에 알려지고/알려지거나 본 명세서에 기재된 바와 같이 인간 항체의 레퍼토리를 생성할 수 있는 유전자도입(transgenic) 동물(예를 들어, SCID 마우스, 문헌[Nguyen et al., Microbiol. Immunol. 41:901-907 (1997)]; 문헌[Sandhu et al., Crit. Rev. Biotechnol. 16:95-118 (1996)]; 문헌[Eren et al., Immunol. 93:154-161 (1998)], 관련 특허 및 출원과 더불어 각각 전체적으로 참고로 포함됨)의 면역화에 의존하는 방법을 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다. 그러한 기법은 리보솜 디스플레이(문헌[Hanes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:4937-4942 (Can 1997)]; 문헌[Hanes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:14130-14135 (Nov. 1998)]); 단세포 항체 생성 기술(예를 들어, 선택된 림프구 항체 방법("SLAM")(미국 특허 제5,627,052호, 문헌[Wen et al., J. Immunol. 17:887-892 (1987)]; 문헌[Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7843-7848 (1996)]); 겔 마이크로소적 및 유세포측정(문헌[Powell et al., Biotechnol. 8:333-337 (1990)]; 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 One Cell Systems; 문헌[Gray et al., J. Imm. Meth. 182:155-163 (1995)]; 문헌[Kenny et al., Bio/Technol. 13:787-790 (1995)]); B-세포 선택(문헌[Steenbakkers et al., Molec. Biol. Reports 19:125-134 (1994)]; 문헌[Jonak et al., Progress Biotech, Vol. 5, In Vitro Immunization in Hybridoma Technology, Borrebaeck, ed., Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, Netherlands (1988)])을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
또한, 비인간 또는 인간 항체를 유전자 조작하거나 인간화하는 방법이 사용될 수 있으며, 이는 당업계에 잘 알려져 있다. 일반적으로, 인간화되거나 유전자 조작된 항체는, 예를 들어 마우스, 래트, 토끼, 비인간 영장류 또는 다른 포유동물과 같지만 이로 한정되지 않는 비인간 공급원으로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이러한 비인간 아미노산 잔기는 종종 "유입(import)" 잔기로 지칭되고, 전형적으로 공지의 인간 서열의 "유입" 가변, 불변 또는 기타 도메인으로부터 취한 잔기로 대체된다.
공지의 인간 Ig 서열은, 예를 들어 www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi; www.ncbi.nih.gov/igblast; www.atcc.org/phage/hdb.html; www.mrc-cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php; www.kabatdatabase.com/top.html; ftp.ncbi.nih.gov/repository/kabat; www.sciquest.com; www.abcam.com; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html; www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html; mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html; www.immunologylink.com; pathbox.wustl.edu/~hcenter/index.html; www.appliedbiosystems.com; www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody; www.m.ehime-u.ac.jp/~yasuhito/Elisa.html; www.biodesign.com; www.cancerresearchuk.org; www.biotech.ufl.edu; www.isac-net.org; baserv.uci.kun.nl/~jraats/links1.html; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu; www.mrc-cpe.cam.ac.uk; www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; http://www.bioinf.org.uk/abs; antibody.bath.ac.uk; www.unizh.ch; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.html; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html; www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.jerini.de; 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983)]에 개시되어 있으며, 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
이러한 유입된 서열은 면역원성을 감소시키거나, 결합, 친화도, 결합 속도(on-rate), 해리 속도(off-rate), 결합력(avidity), 특이성, 반감기, 또는 당업계에 알려진 임의의 다른 적합한 특성을 감소시키거나, 향상시키거나, 변형시키기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 직접적이고 가장 실질적으로 항원 결합에 영향을 준다. 따라서, 가변 및 불변 영역의 비인간 서열은 인간 또는 다른 아미노산으로 대체될 수 있는 반면에, 비인간 또는 인간 CDR 서열의 일부 또는 전부가 유지된다.
항체는 또한 선택적으로 항원에 대한 높은 친화도와 다른 유리한 생물학적 특성을 유지하면서 인간화 또는 인간 항체로 유전자 조작될 수 있다. 이러한 목적을 달성하기 위해, 인간화 (또는 인간) 항체는 선택적으로 모(parental) 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 사용하여 모 서열 및 다양한 개념적(conceptual) 인간화 생성물을 분석하는 과정에 의해 제조될 수 있다. 3차원 면역글로불린 모델은 일반적으로 구매가능하며, 당업자에게 익숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체형태 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이들 디스플레이에 대한 조사는 후보 면역글로불린 서열의 기능에 있어서의 잔기의 가능성이 있는 역할의 분석, 즉 후보 면역글로불린이 그의 항원과 결합하는 능력에 영향을 주는 잔기의 분석을 가능하게 한다. 이러한 방식으로, 프레임워크(FR) 잔기가 컨센서스 및 유입 서열로부터 선택 및 조합되어, 원하는 항체 특성, 예컨대 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화도가 달성되도록 할 수 있다.
게다가, 본 발명의 방법에 사용된 인간 항i-IL12/23p40 항체는 인간 생식세포계열 경쇄 프레임워크를 포함할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 경쇄 생식세포계열 서열은 A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3, A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, O1, O11, O12, O14, O18, O2, O4 및 O8을 포함하지만 이에 한정되지 않는 인간 VK 서열로부터 선택된다. 소정 실시 형태에서, 이러한 경쇄 인간 생식세포계열 프레임워크는 V1-11, V1-13, V1-16, V1-17, V1-18, V1-19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, V1-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-4, V4-1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4 및 V5-6으로부터 선택된다.
다른 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 인간 항-IL-12/23p40 (또는 항-IL-23) 특이적 항체는 인간 생식세포계열 중쇄 프레임워크를 포함할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 이러한 중쇄 인간 생식세포계열 프레임워크는 VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64, VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1 및 VH7-81로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역은 프레임워크 영역 또는 프레임워크 영역의 적어도 일부 (예를 들어, 2 또는 3개의 하위영역, 예컨대 FR2 및 FR3을 함유함)를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 적어도 FRL1, FRL2, FRL3 또는 FRL4는 완전 인간이다. 다른 실시 형태에서, 적어도 FRH1, FRH2, FRH3 또는 FRH4는 완전 인간이다. 일부 실시 형태에서, 적어도 FRL1, FRL2, FRL3 또는 FRL4는 생식세포계열 서열 (예를 들어, 인간 생식세포계열)이거나, 특정 프레임워크에 대한 인간 공통 서열 (상술한 공지의 인간 Ig 서열의 공급원에서 용이하게 입수가능함)을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 적어도 FRH1, FRH2, FRH3 또는 FRH4는 생식세포계열 서열 (예를 들어, 인간 생식세포계열)이거나, 특정 프레임워크에 대한 인간 공통 서열을 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 프레임워크 영역은 완전 인간 프레임워크 영역이다.
각각 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Winter](문헌[Jones et al., Nature 321:522 (1986)]; 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323 (1988)]; 문헌[Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)]), 문헌[Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993)]; 문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987)], 문헌[Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:4285 (1992)]; 문헌[Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993)], 미국 특허 제5723323호, 제5976862호, 제5824514호, 제5817483호, 제5814476호, 제5763192호, 제5723323호, 제5,766886호, 제5714352호, 제6204023호, 제6180370호, 제5693762호, 제5530101호, 제5585089호, 제5225539호; 제4816567호, PCT/: US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, EP 229246, 그 안에 인용된 참고문헌에 기재된 것들과 같지만 이로 한정되지 않는 임의의 알려진 방법을 사용하여, 본 발명의 항체의 인간화 또는 유전자 조작을 수행할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 항체는 변경된 (예를 들어, 돌연변이된) Fc 영역을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, Fc 영역을 변경하여 항체의 이펙터 기능을 감소시키거나 향상시킨다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 IgM, IgA, IgG, IgE 또는 다른 동종형으로부터 선택된 동종형이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 아미노산 변형을 IL-23 결합 분자의 Fc 영역의 C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 기능을 변경하는 하나 이상의 추가의 아미노산 변형과 조합하는 데 유용할 수 있다. 특정 목적 출발 폴리펩티드는 C1q에 결합하여, 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 나타내는 것일 수 있다. 기존의 C1q 결합 활성, 선택적으로 CDC를 매개하는 능력을 추가로 가진 폴리펩티드는 변형되어, 이러한 활성의 하나 또는 둘 모두가 향상될 수 있다. C1q를 변경하고/하거나 이의 보체 의존성 세포독성 기능을 변형시키는 아미노산 변형이, 예를 들어 본 명세서에 참고로 포함되는, WO0042072에 기재되어 있다.
상기 개시된 바와 같이, 예를 들어 C1q 결합 및/또는 FcγR 결합을 변형시킴으로써, 보체 의존성 세포독성 (CDC) 활성 및/또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성을 변화시켜, 변경된 이펙터 기능을 갖는 본 발명의 인간 항-IL12/23p40 항체의 Fc 영역이 고안될 수 있다. "이펙터 기능"은 (예를 들어, 대상체에서) 생물학적 활성을 활성화하거나 감소시키는 것을 담당한다. 이펙터 기능의 예는 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 이러한 이펙터 기능은 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 도메인)과 조합될 것을 필요로 할 수 있으며, 다양한 검정(예를 들어, Fc 결합 검정, ADCC 검정, CDC 검정 등)을 사용하여 평가할 수 있다.
예를 들어, 개선된 C1q 결합 및 개선된 FcγRIII 결합을 갖는 (예를 들어, 개선된 ADCC 활성 및 개선된 CDC 활성을 갖는) 인간 항-IL12/23p40 항체의 변이체 Fc 영역이 생성될 수 있다. 대안적으로, 이펙터 기능이 감소되거나 제거되기를 원하는 경우, 변이체 Fc 영역을 감소된 CDC 활성 및/또는 감소된 ADCC 활성으로 유전자 조작할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 이러한 활성 중 하나만을 증가시킬 수 있고, 선택적으로, 다른 활성도 감소시킬 수 있다(예를 들어, 개선된 ADCC 활성을 갖지만 감소된 CDC 활성을 가지거나, 그 반대의 경우인 Fc 영역 변이체를 생성하기 위해).
Fc 돌연변이는 또한 유전자 조작(engineer)에 도입되어, 이들과 신생아 Fc 수용체 (FcRn)의 상호작용을 변경하고, 이들의 약동학적 특성을 개선할 수 있다. FcRn에 대한 개선된 결합을 갖는 인간 Fc 변이체들의 수집이 기재되어 있다(문헌[Shields et al., (2001). High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for FcγRI, FcγRII, FcγRIII, and FcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the FcγR, J. Biol. Chem. 276:6591-6604]).
다른 유형의 아미노산 치환은 인간 항-IL12/23p40 항체의 Fc 영역의 글리코실화 패턴을 변경하는 역할을 한다. Fc 영역의 글리코실화는 전형적으로 N-결합 또는 O-결합이다. N-결합은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티(moiety)의 부착을 지칭한다. O-결합 글리코실화는 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신이 또한 사용될 수 있지만, 가장 일반적으로는 세린 또는 트레오닌인 하이드록시아미노산에 대한 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나의 부착을 지칭한다. 아스파라긴 측쇄 펩티드 서열에 대한 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열은 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌이며, 이때 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다. 따라서, 폴리펩티드에서 이러한 펩티드 서열 중 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성한다.
예를 들어, 폴리펩티드에서 발견되는 하나 이상의 글리코실화 부위(들)를 제거하고/하거나 폴리펩티드에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위를 부가하여 글리코실화 패턴을 변경할 수 있다. 항체의 Fc 영역으로의 글리코실화 부위의 부가는 (N-결합 글리코실화 부위의 경우) 상기 기재된 트라이펩티드 서열 중 하나 이상을 함유하도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 수행된다. 예시적인 글리코실화 변이체는 중쇄의 잔기 Asn 297의 아미노산 치환을 갖는다. (O-결합 글리코실화 부위의 경우) 변경은 원래 폴리펩티드의 서열에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가에 의해 또는 이에 의한 치환에 의해 또한 이루어질 수 있다. 추가로, Asn 297의 Ala로의 변경은 글리코실화 부위 중 하나를 제거할 수 있다.
소정 실시 형태에서, 본 발명의 인간 항-IL-12/23p40 항체는 베타 (1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라아제 III(GnT III)를 발현하는 세포에서 발현되어, GnT III가 인간 항-IL-12/23p40(또는 항-IL-23) 항체에 GlcNAc를 부가한다. 이러한 방식으로 항체를 생성하는 방법이 WO/9954342, WO/03011878, 특허 출원 공개 제20030003097A1호, 및 문헌[Umana et al., Nature Biotechnology, 17:176-180, Feb. 1999]에 제공되며; 이들 모두는 전체적으로 본 명세서에 참고로 구체적으로 포함된다.
또한 인간 항-IL12/23p40 항체는 본 명세서에 기재되고/되거나 당업계에 알려진 바와 같이, 인간 항체의 레퍼토리를 생성할 수 있는 유전자도입 동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 비인간 영장류 등)의 면역화에 의해 선택적으로 생성될 수 있다. 인간 항-IL12/23p40 항체를 생성하는 세포는 본 명세서에 기재된 방법과 같은 적합한 방법을 사용하여 그러한 동물로부터 단리되고 불멸화될 수 있다.
인간 항원에 결합하는 인간 항체의 레퍼토리를 생성할 수 있는 유전자도입 마우스는 알려진 방법(비제한적인 예를 들어, 각각 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된, Lonberg 등에게 허여된 미국 특허 제5,770,428호, 제5,569,825호, 제5,545,806호, 제5,625,126호, 제5,625,825호, 제5,633,425호, 제5,661,016호, 및 제5,789,650호; Jakobovits 등의 WO 98/50433, Jakobovits 등의 WO 98/24893, Lonberg 등의 WO 98/24884, Lonberg 등의 WO 97/13852, Lonberg 등의 WO 94/25585, Kucherlapate 등의 WO 96/34096, Kucherlapate 등의 EP 0463 151 B1, Kucherlapate 등의 EP 0710 719 A1, Surani 등의 미국 특허 제5,545,807호, Bruggemann 등의 WO 90/04036, Bruggemann 등의 EP 0438 474 B1, Lonberg 등의 EP 0814 259 A2, Lonberg 등의 GB 2 272 440 A, 문헌[Lonberg et al. Nature 368:856-859 (1994)], 문헌[Taylor et al., Int. Immunol. 6(4)579-591 (1994)], 문헌[Green et al, Nature Genetics 7:13-21 (1994)], 문헌[Mendez et al., Nature Genetics 15:146-156 (1997)], 문헌[Taylor et al., Nucleic Acids Research 20(23):6287-6295 (1992)], 문헌[Tuaillon et al., Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724 (1993)], 문헌[Lonberg et al., Int Rev Immunol 13(1):65-93 (1995)], 및 문헌[Fishwald et al., Nat Biotechnol 14(7):845-851(1996)])에 의해 생성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 마우스는 기능적으로 재배열되거나, 기능적으로 재배열될 수 있는 하나 이상의 인간 면역글로불린 유전자좌로부터의 DNA를 포함하는 하나 이상의 도입유전자(transgene)를 포함한다. 상기 마우스에서 내인성 면역글로불린 유전자좌는 파괴되거나 결실되어, 내인성 유전자에 의해 인코딩되는 항체를 생성하는 동물의 능력을 제거할 수 있다.
통상적으로 펩티드 디스플레이 라이브러리를 사용하여 유사한 단백질 또는 단편에 특이적으로 결합하는 항체를 스크리닝할 수 있다. 이러한 방법은 원하는 기능 또는 구조를 갖는 개별 구성원에 대하여 거대 펩티드 집단을 스크리닝하는 것을 포함한다. 펩티드 디스플레이 라이브러리의 항체 스크리닝은 당업계에 잘 알려져 있다. 디스플레이된 펩티드 서열의 길이는 3 내지 5000개 이상의 아미노산, 종종 5 내지 100개의 아미노산, 종종 약 8 내지 25개의 아미노산일 수 있다. 펩티드 라이브러리를 생성하기 위한 직접적인 화학적 합성 방법 외에도, 여러 가지 재조합 DNA 방법이 기재되어 있다. 하나의 유형은 박테리오파지 또는 세포의 표면 상에 펩티드 서열을 디스플레이하는 것을 포함한다. 각각의 박테리오파지 또는 세포는 특정 디스플레이된 펩티드 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 이러한 방법이 PCT 특허 공개 91/17271호, 91/18980호, 91/19818호 및 93/08278호에 기재되어 있다.
펩티드의 라이브러리를 생성하는 다른 시스템은 시험관내에서의 화학적 합성 및 재조합 방법 모두의 태양을 포함한다. PCT 특허 공개 92/05258호, 92/14843호 및 96/19256호를 참조한다. 또한 미국 특허 제5,658,754호; 및 제5,643,768호를 참조한다. 펩티드 디스플레이 라이브러리, 벡터, 및 스크리닝 키트는 Invitrogen(미국 캘리포니아주 칼스배드 소재) 및 Cambridge Antibody Technologies(영국 캠브리지셔 소재)와 같은 공급처로부터 구매가능하다. 예를 들어, Enzon에 양도된 미국 특허 제4704692호, 제4939666호, 제4946778호, 제5260203호, 제5455030호, 제5518889호, 제5534621호, 제5656730호, 제5763733호, 제5767260호 및 제5856456호; Dyax에 양도된 제5223409호, 제5403484호, 제5571698호, 제5837500호, Affymax에 양도된 제5427908호, 제5580717호; Cambridge antibody Technologies에 양도된 제5885793호; Genentech에 양도된 제5750373호, Xoma, Colligan에 양도된 제5618920호, 제5595898호, 제5576195호, 제5698435호, 제5693493호, 제5698417호, 상기 문헌; 문헌[Ausubel, 상기 문헌]; 또는 문헌[Sambrook, 상기 문헌]을 참조하며, 상기 특허 및 간행물 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
이들의 우유에 이러한 항체를 생성하는 유전자도입 동물 또는 포유류, 예를 들어 염소, 소, 말, 양 토끼 등을 제공하기 위해 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체를 인코딩하는 핵산을 사용하여 본 발명의 방법에 사용되는 항체를 또한 제조할 수 있다. 이러한 동물은 알려진 방법을 사용하여 제공할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,827,690호; 제5,849,992호; 제4,873,316호; 제5,849,992호; 제5,994,616호; 제5,565,362호; 제5,304,489호 등을 참조하지만, 이로 한정되지 않으며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
추가로, 식물 부분, 또는 그로부터 배양된 세포에서 이러한 항체, 특정 부분 또는 변이체를 생성하는 유전자도입 식물 및 배양된 식물 세포 (예를 들어, 담배 및 옥수수와 같지만 이로 한정되지 않음)를 제공하기 위해 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체를 인코딩하는 핵산을 사용하여 본 발명의 방법에 사용되는 항체를 제조할 수 있다. 비제한적인 예로서, 재조합 단백질을 발현하는 유전자도입 담배 잎이, 예를 들어 유도성 프로모터를 사용하여 다량의 재조합 단백질을 제공하는 데 성공적으로 사용되었다. 예를 들어, 문헌[Cramer et al., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240:95-118 (1999)] 및 그 안에 인용된 참고문헌을 참조한다. 또한, 유전자도입 옥수수는 다른 재조합 시스템에서 생성되거나, 천연 공급원으로부터 정제된 것과 동등한 생물학적 활성으로, 상업 생산 수준으로 포유류 단백질을 발현하는 데 사용되어 왔다. 예를 들어, 문헌[Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999)] 및 그 안에 인용된 참고문헌을 참조한다. 항체는 또한 항체 단편, 예를 들어 단일쇄 항체 (scFv's)를 포함하는, 유전자도입 식물 종자, 예를 들어 담배 종자 및 감자 덩이줄기(potato tuber)로부터 다량으로 생성되었다. 예를 들어, 문헌[Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998)] 및 그 안에 인용된 참고문헌을 참조한다. 따라서, 본 발명의 항체는 또한 알려진 방법에 따라 유전자도입 식물을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (Oct., 1999)], 문헌[Ma et al., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995)]; 문헌[Ma et al., Plant Physiol. 109:341-6 (1995)]; 문헌[Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22:940-944 (1994)]; 및 그 안에 인용된 참고문헌을 또한 참조한다. 상기 참고문헌 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
본 발명의 방법에 사용되는 항체는 광범위한 친화도(KD)로 인간 IL12/IL23p40에 결합할 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 인간 mAb는 선택적으로 고친화도로 인간 IL12/IL23p40에 결합할 수 있다. 예를 들어, 인간 mAb는 약 10-7 M 이하, 비제한적인 예로서 0.1 내지 9.9 (또는 상기 범위 내의 임의의 범위 또는 값) X 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 10-12, 10-13 또는 상기 범위 내의 임의의 범위 또는 값의 KD로 인간 IL12/23p40에 결합할 수 있다.
항원에 대한 항체의 친화도 또는 결합력은 임의의 적합한 방법을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. (예를 들어, 문헌[Berzofsky, et al., "Antibody-Antigen Interactions," In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, NY (1984)]; 문헌[Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, NY (1992)]; 및 본 명세서에 기재된 방법을 참조한다). 특정 항체-항원 상호작용의 측정된 친화도는 상이한 조건(예를 들어, 염 농도, pH) 하에서 측정된다면 변동될 수 있다. 따라서, 친화도 및 기타 항원-결합 파라미터(예를 들어, KD, Ka, Kd)의 측정은 바람직하게는 항체 및 항원의 표준화된 용액, 및 표준화된 완충액, 예컨대 본 명세서에 기재된 완충액을 사용하여 행해진다.
벡터 및 숙주 세포
본 발명은 또한, 당업계에 잘 알려진 바와 같이, 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터, 재조합 벡터로 유전자 조작된 숙주 세포, 및 재조합 기술에 의한 하나 이상의 항-IL12/23p40 항체의 생성에 관한 것이다. 예를 들어, 각각 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Sambrook, et al., 상기 문헌]; 문헌[Ausubel, et al., 상기 문헌]을 참조한다.
폴리뉴클레오티드는 숙주 내에서의 증식을 위해 선택가능한 마커를 함유하는 벡터에 선택적으로 결합될 수 있다. 일반적으로, 플라스미드 벡터가 침전물, 예를 들어 인산칼슘 침전물 내에, 또는 하전된 지질과의 복합체 내에 도입된다. 벡터가 바이러스인 경우, 적합한 패키징(packaging) 세포주를 사용하여 시험관내에서 패키징된 후, 숙주 세포 내로 형질도입될 수 있다.
DNA 삽입물은 적합한 프로모터에 작동가능하게 연결되어야 한다. 발현 작제물은 전사 개시를 위한 부위, 종결을 위한 부위 및 전사된 영역에서 번역을 위한 리보솜 결합 부위를 추가로 함유할 것이다. 작제물에 의해 발현된 성숙 전사물의 코딩 부분은 바람직하게는 번역될 mRNA의 시작부에서 개시하는 번역 개시 코돈 및 그의 말단부에 적절하게 위치한 종료 코돈(예를 들어, UAA, UGA 또는 UAG)을 포함할 것이며, 포유류 또는 진핵 세포 발현에는 UAA 및 UAG가 바람직하다.
발현 벡터는 바람직하게는 그러나 선택적으로 하나 이상의 선택가능한 마커를 포함할 것이다. 그러한 마커는, 예를 들어, 진핵 세포 배양을 위한 메토트렉세이트(MTX), 다이하이드로폴레이트 리덕타제(DHFR, 미국 특허 제4,399,216호; 제4,634,665호; 제4,656,134호; 제4,956,288호; 제5,149,636호; 제5,179,017호), 암피실린, 네오마이신(G418), 마이코페놀산, 또는 글루타민 신테타제(GS, 미국 특허 제5,122,464호; 제5,770,359호; 제5,827,739호) 내성 및 E. 콜라이(E. coli) 및 다른 세균 또는 원핵세포에서의 배양을 위한 테트라사이클린 또는 암피실린 내성 유전자를 포함하지만 이로 한정되지 않는다(상기 특허는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨). 전술된 숙주 세포에 적절한 배양 배지 및 조건이 당업계에 알려져 있다. 적절한 벡터는 당업자에게 명백할 것이다. 숙주 세포 내로의 벡터 구조물의 도입은 인산칼슘 형질주입, DEAE-덱스트란 매개 형질주입, 양이온성 지질 매개 형질주입, 전기천공, 형질도입, 감염 또는 다른 알려진 방법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 방법은 문헌[Sambrook, 상기 문헌, 챕터 1-4 및 16-18]; 문헌[Ausubel, 상기 문헌, Chapters 1, 9, 13, 15, 16]과 같이 당업계에 기재되어 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 적어도 하나의 항체는 융합 단백질과 같은 변형된 형태로 발현될 수 있고, 분비 신호뿐만 아니라 추가의 이종성 기능 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, 추가의 아미노산, 특히 하전된 아미노산의 영역이 정제 동안, 또는 후속 취급 및 저장 동안 숙주 세포에서의 안정성 및 지속성을 개선하기 위해 항체의 N-말단에 부가될 수 있다. 또한, 펩티드 모이어티가 정제를 용이하게 하기 위해 본 발명의 항체에 부가될 수 있다. 그러한 영역은 항체 또는 적어도 하나의 이의 단편의 최종 제조 전에 제거될 수 있다. 이러한 방법은 많은 표준 실험실 매뉴얼, 예컨대 문헌[Sambrook, 상기 문헌, 챕터 17.29-17.42 및 18.1-18.74]; 문헌[Ausubel, 상기 문헌, 챕터 16, 17, 및 18]에 기재되어 있다.
당업자는 본 발명의 방법에 사용되는 단백질을 인코딩하는 핵산의 발현에 이용가능한 많은 발현 시스템에 대해 잘 알고 있다. 대안적으로, 핵산은 항체를 인코딩하는 내인성 DNA를 함유하는 숙주 세포 내에서 (조작에 의해) 턴온(turn on)하여 숙주 세포 내에서 발현될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함되는, 미국 특허 제5,580,734호, 제5,641,670호, 제5,733,746호 및 제5,733,761호에 기재되어 있는 바와 같이 당업계에 알려져 있다.
항체, 이의 특정 부분 또는 변이체의 생성에 유용한 세포 배양물의 예는 포유류 세포이다. 포유류 세포 시스템은 종종 세포의 단일층 형태로 존재할 수 있지만, 포유류 세포 현탁액 또는 생물반응기도 사용될 수 있다. 온전한 글리코실화 단백질을 발현할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주가 당업계에 개발되어 있고, COS-1(예를 들어, ATCC CRL 1650), COS-7(예를 들어, ATCC CRL1651), HEK293, BHK21(예를 들어, ATCC CRL-10), CHO(예를 들어, ATCC CRL 1610) 및 BSC-1(예를 들어, ATCC CRL-26) 세포주, Cos-7 세포, CHO 세포, hep G2 세포, P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14, 293 세포, HeLa 세포 등을 포함하며, 이들은, 예를 들어 미국 버지니아주 매나서스 소재의 American Type Culture Collection(www.atcc.org)으로부터 용이하게 입수가능하다. 바람직한 숙주 세포는 림프구 기원의 세포, 예를 들어 골수종 및 림프종 세포를 포함한다. 특히 바람직한 숙주 세포는 P3X63Ag8.653 세포 (ATCC 기탁 번호 CRL-1580) 및 SP2/0-Ag14 세포 (ATCC 기탁 번호 CRL-1851)이다. 특히 바람직한 실시 형태에서, 재조합 세포는 P3X63Ab8.653 또는 SP2/0-Ag14 세포이다.
이들 세포에 대한 발현 벡터는 하기 발현 제어 서열 중 하나 이상, 비제한적인 예로서 복제 기점; 프로모터(예를 들어, 후기 또는 초기 SV40 프로모터, CMV 프로모터(미국 특허 제5,168,062호; 제5,385,839호), HSV tk 프로모터, pgk(포스포글리세레이트 키나제) 프로모터, EF-1 알파 프로모터(미국 특허 제5,266,491호), 하나 이상의 인간 면역글로불린 프로모터; 인핸서, 및/또는 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40 라지 T Ag 폴리 A 부가 부위), 및 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Ausubel et al., 상기 문헌]; 문헌[Sambrook, et al., 상기 문헌]을 참조한다. 본 발명의 핵산 또는 단백질 생성에 유용한 다른 세포가 알려져 있고/있거나, 예를 들어 세포주 및 하이브리도마의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 카탈로그 (www.atcc.org) 또는 다른 공지의 또는 상업 공급원으로부터 이용가능하다.
진핵 숙주 세포가 사용될 경우, 폴리아데닐화 또는 전사 종결자 서열은 전형적으로 벡터에 통합된다. 종결자 서열의 예는 소 성장 호르몬 유전자로부터의 폴리아데닐화 서열이다. 전사물의 정확한 스플라이싱을 위한 서열이 또한 포함될 수 있다. 스플라이싱 서열의 예는 SV40으로부터의 VP1 인트론이다 (문헌[Sprague, et al., J. Virol. 45:773-781 (1983)]). 추가로, 당업계에 알려진 바와 같이, 숙주 세포 내의 복제를 조절하는 유전자 서열은 벡터 내로 도입될 수 있다.
항체의 정제
항-IL12/23p40 항체는 단백질 A 정제, 황산암모늄 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로스 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 및 렉틴 크로마토그래피를 포함하지만 이로 한정되지 않는 잘 알려진 방법에 의해 재조합 세포 배양물로부터 회수 및 정제될 수 있다. 고성능 액체 크로마토그래피 ("HPLC")도 정제를 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 각각이 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함되는, 문헌[Colligan, Current Protocols in Immunology] 또는 문헌[Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), 예를 들어, 챕터 1, 4, 6, 8, 9, 10]을 참조한다.
본 발명의 방법에 사용되는 항체는 천연 정제된 생성물, 화학적 합성 절차의 생성물, 및 예를 들어 효모, 고등 식물, 곤충 및 포유류 세포를 포함하는 진핵 숙주로부터 재조합 기술에 의해 생성된 생성물을 포함한다. 재조합 생성 절차에 사용된 숙주에 따라, 항체는 글리코실화되거나 비-글리코실화될 수 있고, 글리코실화가 바람직하다. 이러한 방법은 많은 표준 실험실 매뉴얼, 예컨대 문헌[Sambrook, 상기 문헌, 섹션 17.37-17.42]; 문헌[Ausubel, 상기 문헌, 챕터 10, 12, 13, 16, 18, 및 20], 문헌[Colligan, Protein Science, 상기 문헌, 챕터 12-14]에 기재되어 있으며, 이들 모두는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
항-IL12/23p40 항체.
본 발명에 따른 항-IL12/23p40 항체는 면역글로불린 분자의 적어도 일부, 비제한적인 예로서, 하나 이상의 리간드 결합 부분 (LBP), 비제한적인 예로서, 중쇄 또는 경쇄의 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, FR4 또는 이의 단편, 선택적으로 하나 이상의 치환, 삽입 또는 결실을 추가로 포함함), 중쇄 또는 경쇄 불변 영역 (예를 들어, 하나 이상의 CH1, 힌지1, 힌지2, 힌지3, 힌지4, CH2 또는 CH3, 또는 이의 단편을 포함하고, 선택적으로 하나 이상의 치환, 삽입 또는 결실을 추가로 포함함), 또는 이의 임의의 부분을 포함하는 분자를 함유하는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함하며, 이는 항체 내로 도입될 수 있다. 항체는 인간, 마우스, 토끼, 래트, 설치류, 영장류, 또는 이의 임의의 조합 등과 같으나 이에 한정되지 않는 임의의 포유류를 포함하거나 이로부터 유래될 수 있다.
바람직하게는, 인간 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 IL12/23p40에 결합하고, 이에 의해 부분적으로 또는 실질적으로 단백질의 하나 이상의 생물학적 활성을 중화시킨다. 하나 이상의 IL12/23p40 단백질 또는 단편의 하나 이상의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 바람직하게는 실질적으로 중화시키는 항체, 이의 특정 부분, 또는 변이체는 단백질 또는 단편에 결합함으로써, IL-12 및/또는 IL-23 수용체에 대한 IL12/23p40 또는 IL-23의 결합을 통해 또는 다른 IL12/23p40 또는 IL-23-의존성 또는 매개 기전을 통해 매개되는 활성을 억제할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "중화 항체"는 IL12/23p40 또는 IL-23-의존성 활성을 검정에 따라 약 20 내지 120%, 바람직하게는 적어도 약 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% 또는 그 이상으로 억제할 수 있는 항체를 말한다. IL12/23p40 또는 IL-23-의존성 활성을 억제하는 항-IL12/23p40 또는 IL-23 항체의 능력은 바람직하게는 본 명세서에 기재되고/되거나 당업계에 알려진 바와 같이, 하나 이상의 적합한 IL12/23p40 또는 IL-23 단백질 또는 수용체 검정에 의해 평가된다. 인간 항체는 임의의 종류 (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD 등) 또는 동종형일 수 있고, 카파 또는 람다 경쇄를 포함할 수 있다. 일 실시 형태에서, 인간 항체는 IgG 중쇄 또는 정의된 단편, 예를 들어, 동종형, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 중 하나 이상을 포함한다(예를 들어, γ1, γ2, γ3, γ4). 이러한 유형의 항체는, 본 명세서에 기재되고/되거나 본 기술 분야에 알려진 바와 같이, 하나 이상의 인간 경쇄 (예를 들어, IgG, IgA 및 IgM) 도입유전자를 포함하는 유전자도입 마우스 또는 다른 유전자도입 비인간 포유류를 사용함으로써 제조될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 인간 항체는 IgG1 중쇄 및 IgG1 경쇄를 포함한다.
항체는 하나 이상의 IL12/23p40 단백질, 하위단위는, 단편, 부분, 또는 이들의 임의의 조합에 특이적인 하나 이상의 특정 에피토프에 결합한다. 하나 이상의 에피토프는 단백질의 적어도 하나의 부분을 포함하는 하나 이상의 항체 결합 영역을 포함하고, 에피토프는 바람직하게는 상기 단백질의 하나 이상의 세포외, 가용성, 친수성, 외부 또는 세포질 부분으로 이루어진다.
일반적으로, 인간 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 하나의 중쇄 가변 영역의 적어도 하나의 인간 상보성 결정 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3) 또는 변이체 및 적어도 하나의 경쇄 가변 영역의 적어도 하나의 인간 상보성 결정 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3) 또는 변이체를 포함하는 항원-결합 영역을 포함할 것이다. CDR 서열은 인간 생식세포계열 서열로부터 유래되거나, 인간 생식세포계열 서열과 거의 일치할 수 있다 예를 들어, 원래 비인간 CDR로부터 유래된 합성 라이브러리로부터의 CDR을 사용할 수 있다. 이러한 CDR은 원래의 비인간 서열로부터의 보존적 치환의 도입에 의해 형성될 수 있다. 다른 특정 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 부분 또는 변이체는 상응하는 CDR 1, 2 및/또는 3의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 경쇄 CDR(즉, CDR1, CDR2 및/또는 CDR3)의 적어도 일부분을 포함하는 항원-결합 영역을 가질 수 있다.
그러한 항체는, 종래의 기법을 사용하여 항체의 다양한 부분들(예를 들어, CDR, 프레임워크)을 함께 화학적으로 연결하거나, 재조합 DNA 기술의 종래 기법을 사용하여 항체를 인코딩하는 (하나 이상의) 핵산 분자를 제조하고 발현시키거나, 임의의 다른 적합한 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
일 실시 형태에서, 본 발명에 유용한 항-IL12/23p40 항체는 각각 서열 번호 1, 2, 및 3의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 및 각각 서열 번호 4, 5, 및 6의 경쇄 CDR LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 단일클론 항체, 바람직하게는 인간 mAb이다.
항-IL12/23p40 항체는 정의된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 예를 들어, 바람직한 실시 형태에서, 항-IL12/23p40 항체는 서열 번호 7과 적어도 85%, 바람직하게는 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95%, 그리고 가장 바람직하게는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 8과 적어도 85%, 바람직하게는 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95%, 그리고 가장 바람직하게는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-IL12/23p40 항체를 포함한다.
항-IL12/23p40 항체는 또한 정의된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 또는 경쇄 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 다른 바람직한 실시 형태에서, 항-IL12/23p40 항체는 서열 번호 10과 적어도 85%, 바람직하게는 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95%, 그리고 가장 바람직하게는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 11과 적어도 85%, 바람직하게는 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95%, 그리고 가장 바람직하게는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
바람직하게는, 항-IL12/23p40 항체는 우스테키누맙(Stelara®)으로서, 이는 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 본 발명에 유용한 항-IL12/23p40 항체의 다른 예에는 브리아키누맙(ABT-874, Abbott) 및 미국 특허 제6,914,128호, 제7,247,711호, 제7700739호에 기재된 다른 항체가 포함되지만 이로 한정되지 않으며, 이들의 전체 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체, 항원-결합 단편, 면역글로불린 사슬 및 CDR에 관한 것이다. 바람직하게는, 이러한 항체 또는 항원-결합 단편 및 이러한 사슬 또는 CDR을 포함하는 항체는 고친화도(예를 들어, 약 10-9 M 이하의 KD)로 인간 IL12/23p40 또는 IL-23에 결합할 수 있다. 본 명세서에 기재된 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열은 보존적 아미노산 치환 및 아미노산 결실 및/또는 삽입을 포함하는 서열을 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 제1 아미노산의 것과 유사한 화학적 및/또는 물리적 특성 (예를 들어, 전하, 구조, 극성, 소수성/친수성)을 갖는 제2 아미노산에 의한 제1 아미노산의 대체를 말한다. 보존적 치환은 하기 그룹의 하나의 아미노산의 다른 아미노산에 의한 대체를 제한 없이 포함한다: 라이신 (K), 아르기닌 (R) 및 히스티딘 (H); 아스파르테이트 (D) 및 글루타메이트 (E); 아스파라긴 (N), 글루타민 (Q), 세린 (S), 트레오닌 (T), 티로신 (Y), K, R, H, D 및 E; 알라닌 (A), 발린 (V), 류신 (L), 아이소류신 (I), 프롤린 (P), 페닐알라닌 (F), 트립토판 (W), 메티오닌 (M), 시스테인 (C) 및 글리신 (G); F, W 및 Y; C, S 및 T.
인간 IL-12/IL-23p40 또는 IL-23에 결합하고 정의된 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체는 적합한 방법, 예컨대 파지 디스플레이(문헌[Katsube, Y., et al., Int J Mol. Med, 1(5):863-868 (1998)]) 또는 당업계에 공지되고/되거나 본 명세서에 기재된 바와 같은 유전자도입 동물을 사용하는 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린 중쇄 도입유전자 및 기능적으로 재배열될 수 있는 인간 면역글로불린 경쇄 유전자좌로부터의 DNA를 포함하는 도입유전자를 포함하는 유전자도입 마우스를 인간 IL12/23p40 또는 IL-23 또는 이의 단편으로 면역화하여 항체의 생성을 유도할 수 있다. 필요한 경우, 항체 생성 세포가 단리될 수 있고, 하이브리도마 또는 다른 불멸화 항체-생성 세포는 본 명세서에 기재된 및/또는 당업계에 알려진 바와 같이 제조될 수 있다. 대안적으로, 항체, 특정 부분 또는 변이체는 적합한 숙주 세포에서 코딩 핵산 또는 이의 일부를 사용하여 발현될 수 있다.
본 발명의 방법에서 사용되는 항-IL12/23p40 항체는 본 명세서에 특정된 바와 같이 천연 돌연변이 또는 인간에 의한 조작된 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다.
숙련자에 의해 생성되는 아미노산 치환의 수는 상기 기재된 것을 포함하는 다수의 인자에 따라 달라진다. 일반적으로 말하면, 임의의 주어진 항-IL12/23p40 항체, 단편 또는 변이체에 대한 아미노산 치환, 삽입 또는 결실의 수는 본 명세서에 특정된 바와 같이 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1개 이하, 예를 들어 1 내지 30개 또는 상기 범위 내의 임의의 범위 또는 값일 것이다.
기능에 필수적인 항-IL12/23p40 항체 내의 아미노산을 당업계에 알려진 방법, 예컨대 부위 지정 돌연변이유발 또는 알라닌-스캐닝 돌연변이유발(예를 들어, 문헌[Ausubel, 상기 문헌, 챕터 8, 15]; 문헌[Cunningham and Wells, Science 244:1081-1085(1989)])에 의해 확인할 수 있다. 후자의 절차는 분자 내의 모든 잔기에 단일 알라닌 돌연변이를 도입한다. 이어서, 생성된 돌연변이 분자를 하나 이상의 IL12/23p40 또는 IL-23 중화 활성과 같지만 이로 한정되지 않는 생물학적 활성에 대해 시험한다. 항체 결합에 결정적인 부위를 또한 결정화, 핵자기 공명 또는 광친화도 표지화 (문헌[Smith, et al., J. Mol. Biol. 224:899-904 (1992)] 및 문헌[de Vos, et al., Science 255:306-312 (1992)])와 같은 구조 분석에 의해 확인할 수 있다.
항-IL12/23p40 항체는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 또는 11 중 적어도 하나의 연속 아미노산 중 5개 내지 전부로부터 선택되는 하나 이상의 부분, 서열 또는 조합을 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
항-IL12/23p40 항체 또는 특정 부분 또는 변이체는, 상기 서열 번호의 적어도 3 내지 5개의 연속 아미노산; 상기 서열 번호의 5 내지 17개의 연속 아미노산, 상기 서열 번호의 5 내지 10개의 연속 아미노산, 상기 서열 번호의 5 내지 11개의 연속 아미노산, 상기 서열 번호의 5 내지 7개의 연속 아미노산; 상기 서열 번호의 5 내지 9개의 연속 아미노산으로부터 선택된 하나 이상의 부분, 서열, 또는 조합을 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
선택적으로, 항-IL12/23p40 항체는 상기 서열 번호의 5, 17, 10, 11, 7, 9, 119, 108, 449, 또는 214개의 연속 아미노산의 70 내지 100% 중 하나 이상의 폴리펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 일 실시 형태에서, 면역글로불린 사슬, 또는 이의 일부분(예를 들어 가변 영역, CDR)의 아미노산 서열은 상기 서열 번호 중 하나 이상의 상응하는 사슬의 아미노산 서열에 대해 약 70 내지 100%의 동일성(예를 들어, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값)을 갖는다. 예를 들어, 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 상기 서열 번호의 서열과 비교될 수 있거나, 중쇄 CDR3의 아미노산 서열은 상기 서열 번호와 비교될 수 있다. 바람직하게는, 70 내지 100% 아미노산 동일성(즉, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값)은 당업계에 공지된 바와 같이 적합한 컴퓨터 알고리즘을 이용하여 결정된다.
당업계에 알려진 바와 같은 "동일성"은 서열을 비교하여 결정되는, 둘 이상의 폴리펩티드 서열 또는 둘 이상의 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 관계이다. 당업계에서, "동일성"은 또한 이러한 서열의 스트링 사이의 매치에 의해 결정되는, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열 사이의 서열 관련도를 의미한다. "동일성" 및 "유사성"은 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988]; 문헌[Biocomputing:Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993]; 문헌[Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994]; 문헌[Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987]; 및 문헌[Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991]; 및 문헌[Carillo, H., and Lipman, D., Siam J. Applied Math., 48:1073 (1988)]에 기재된 것들을 포함하지만 이로 한정되지 않는 알려진 방법에 의해 용이하게 계산할 수 있다. 또한, 동일성 백분율 값은 벡터 NTI 스윗 8.0(Vector NTI Suite 8.0) (미국 메릴랜드주 프레데릭 소재의 Informax)의 얼라인엑스(AlignX) 요소에 대한 디폴트 설정치를 이용하여 생성된 아미노산 및 뉴클레오티드 서열 정렬로부터 얻을 수 있다.
동일성을 결정하는 바람직한 방법은 시험한 서열 사이에서 가장 큰 매치를 제공하도록 설계된다. 동일성 및 유사성을 결정하는 방법은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램에 코딩되어 있다. 2개의 서열 사이의 동일성 및 유사성을 결정하는 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법은 GCG 프로그램 패키지(문헌[Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1984)]), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA(문헌[Atschul, S. F. et al., J. Molec. Biol. 215:403-410 (1990)])를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. BLAST X 프로그램은 NCBI 및 다른 공급원으로부터 공개적으로 입수가능하다(문헌[BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBINLM NIH Bethesda, Md. 20894]: 문헌[Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)]). 또한, 잘 알려진 스미스 와트만(Smith Waterman) 알고리즘을 사용하여 동일성을 결정할 수 있다.
예시적인 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열 및 이의 일부분이 상기 서열 번호에 제공된다. 본 발명의 항체 또는 이의 특정 변이체는 본 발명의 항체로부터의 임의의 수의 연속 아미노산 잔기를 포함할 수 있으며, 그 수는 항-IL12/23p40 항체 내의 10 내지 100%의 연속 잔기의 수로 이루어진 정수의 군으로부터 선택된다. 선택적으로, 연속된 아미노산들의 이러한 하위서열(subsequence)은 적어도 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250개 또는 그 이상의 아미노산 길이 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값이다. 또한, 그러한 하위서열의 개수는 1 내지 20, 예컨대 적어도 2, 3, 4, 또는 5로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 정수일 수 있다.
당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 생물학적으로 활성인 항체를 포함한다. 생물학적으로 활성인 항체는 천연(비-합성) 내인성이거나 관련되고 공지된 항체의 적어도 20%, 30%, 또는 40%, 바람직하게는 적어도 50%, 60%, 또는 70%, 가장 바람직하게는 적어도 80%, 90%, 또는 95% 내지 100%, 또는 그 이상 (제한 없이 최대 10배의 비활성도(specific activity)를 포함함)의 비활성도를 갖는다. 효소 활성 및 기질 특이성을 검정하는 방법 및 정량화하는 수단이 당업자에게 잘 알려져 있다.
다른 태양에서, 본 발명은 유기 모이어티의 공유 부착에 의해 변형된, 본 명세서에 기재된 인간 항체 및 항원-결합 단편에 관한 것이다. 이러한 변형은 약동학적 특성이 개선된 (예를 들어, 생체내 혈청 반감기 증가) 항체 또는 항원-결합 단편을 생성할 수 있다. 유기 모이어티는 선형 또는 분지형 친수성 중합체기, 지방산기 또는 지방산 에스테르기일 수 있다. 특정 실시 형태에서, 친수성 중합체기는 약 800 내지 약 120,000 달톤의 분자량을 가질 수 있으며, 폴리알칸 글리콜 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜 (PPG)), 탄수화물 중합체, 아미노산 중합체 또는 폴리비닐 피롤리돈일 수 있고, 지방산 또는 지방산 에스테르기는 약 8 내지 약 40개의 탄소 원자를 포함할 수 있다.
변형된 항체 및 항원-결합 단편은 항체에 직접 또는 간접적으로 공유결합된 하나 이상의 유기 모이어티를 포함할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편에 결합되는 각각의 유기 모이어티는 독립적으로 친수성 중합체기, 지방산기 또는 지방산 에스테르기일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "지방산"은 모노-카르복실산 및 다이-카르복실산을 포함한다. 본 명세서에서 사용될 때 용어 "친수성 중합체기"는 옥탄 중에서보다 물 중에서 더 가용성인 유기 중합체를 지칭한다. 예를 들어, 폴리라이신은 옥탄 중에서보다 물 중에서 더 가용성이다. 따라서, 폴리라이신의 공유 부착에 의해 변형된 항체가 본 발명에 포함된다. 본 발명의 항체의 변형에 적합한 친수성 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 예를 들어 폴리알칸 글리콜 (예를 들어, PEG, 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜 (mPEG), PPG 등), 탄수화물 (예를 들어, 덱스트란, 셀룰로스, 올리고당, 다당류 등), 친수성 아미노산의 중합체 (예를 들어, 폴리라이신, 폴리아르기닌, 폴리아스파르테이트 등), 폴리알칸 옥사이드 (예를 들어, 폴리에틸렌옥사이드, 폴리프로필렌 옥사이드 등) 및 폴리비닐 피롤리돈을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체를 변형시키는 친수성 중합체는 별개의 분자 실체(entity)로서 약 800 내지 약 150,000 달톤의 분자량을 갖는다. 예를 들어, PEG5000 및 PEG20,000 (이때, 하첨자는 중합체의 평균 분자량 (달톤)임)이 사용될 수 있다. 친수성 중합체기는 1 내지 약 6개의 알킬, 지방산 또는 지방산 에스테르기로 치환될 수 있다. 지방산 또는 지방산 에스테르기로 치환된 친수성 중합체를 적합한 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 아민기를 포함하는 중합체는 지방산 또는 지방산 에스테르의 카르복실레이트와 커플링될 수 있으며, 지방산 또는 지방산 에스테르 상의 활성화된 카르복실레이트(예를 들어, N,N-카르보닐 다이이미다졸로 활성화됨)는 중합체 상의 하이드록실기와 커플링될 수 있다.
본 발명의 항체의 변형에 적합한 지방산과 지방산 에스테르는 포화될 수 있거나, 하나 이상의 불포화 단위를 함유할 수 있다. 본 발명의 항체를 변형시키기에 적합한 지방산은, 예를 들어 n-도데카노에이트(C12, 라우레이트), n-테트라데카노에이트(C14, 미리스테이트), n-옥타데카노에이트(C18, 스테아레이트), n-에이코사노에이트(C20, 아라키데이트), n-도코사노에이트(C22, 베헤네이트), n-트라이아콘타노에이트(C30), n-테트라콘타노에이트(C40), 시스-Δ9-옥타데카노에이트(C18, 올레에이트), 모든 시스-Δ5,8,11,14-에이코사테트라에노에이트(C20, 아라키도네이트), 옥탄다이오산, 테트라데칸다이오산, 옥타데칸다이오산, 도코산다이오산 등을 포함한다. 적합한 지방산 에스테르에는 선형 또는 분지형 저급 알킬기 포함하는 다이카르복실산의 모노-에스테르가 포함된다. 저급 알킬기는 1 내지 약 12개, 바람직하게는 1 내지 약 6개의 탄소 원자를 포함할 수 있다.
변형된 인간 항체 및 항원-결합 단편은 적합한 방법을 사용하여, 예를 들어 하나 이상의 변형제와의 반응에 의해 제조될 수 있다. 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "변형제"는 활성화기를 포함하는 적합한 유기기 (예를 들어, 친수성 중합체, 지방산, 지방산 에스테르)를 지칭한다. "활성화기"는 적절한 조건 하에 제2 화학기와 반응하여 변형제와 제2 화학기 사이의 공유 결합을 형성할 수 있는 화학 모이어티 또는 작용기이다. 예를 들어, 아민-반응성 활성화기에는 토실레이트, 메실레이트, 할로 (클로로, 브로모, 플루오로, 요오도), N-하이드록시석신이미딜 에스테르 (NHS) 등과 같은 친전자성 기가 포함된다. 티올과 반응할 수 있는 활성화기에는, 예를 들어 말레이미드, 요오도아세틸, 아크릴롤일, 피리딜 다이설파이드, 5-티올-2-니트로벤조산 티올 (TNB-티올) 등이 포함된다. 알데하이드 작용기는 아민- 또는 히드라지드-함유 분자와 커플링될 수 있고, 아지드기는 3가 인산기와 반응하여 포스포르아미데이트 또는 포스포르이미드 결합을 형성할 수 있다. 활성화기를 분자 내로 도입하기에 적합한 방법은 당업계에 알려져 있다 (예를 들어, 문헌[Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)]을 참조한다). 활성화기는 유기기 (예를 들어, 친수성 중합체, 지방산, 지방산 에스테르)에 직접 결합되거나, 링커 모이어티, 예를 들어 2가 C1 내지 C12 기 (이때, 하나 이상의 탄소 원자는 산소, 질소 또는 황과 같은 헤테로원자에 의해 대체될 수 있음)를 통해 결합될 수 있다. 적합한 링커 모이어티는, 예를 들어 테트라에틸렌 글리콜, -(CH2)3-, -NH-(CH2)6-NH-, -(CH2)2-NH- 및 -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-를 포함한다. 예를 들어, 모노-Boc-알킬다이아민 (예를 들어, 모노-Boc-에틸렌다이아민, 모노-Boc-다이아미노헥산)을 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필) 카르보다이이미드 (EDC)의 존재 하에 지방산과 반응시켜 유리 아민과 지방산 카르복실레이트 사이에 아미드 결합을 형성함으로써 링커 모이어티를 포함하는 변형제를 제조할 수 있다. 기재된 바와 같이, 다른 카르복실레이트에 커플링될 수 있거나, 말레산 무수물과 반응시키고 생성되는 생성물을 환화하여 지방산의 활성화 말레이미도 유도체를 제조할 수 있는 1차 아민을 노출시키기 위해, 트라이플루오로아세트산 (TFA)으로 처리함으로써 생성물로부터 Boc 보호기를 제거할 수 있다. (예를 들어, 전체 교시 내용이 본 명세서에 참고로 포함되는, 국제 특허 출원 공개 WO 92/16221호 (Thompson 등)를 참조한다.)
변형된 항체는 인간 항체 또는 항원-결합 단편을 변형제와 반응시켜 제조될 수 있다. 예를 들어, 유기 모이어티는 아민-반응성 변형제, 예를 들어 PEG의 NHS 에스테르를 사용함으로써 부위 비특이적 방식으로 항체에 결합될 수 있다. 변형된 인간 항체 또는 항원-결합 단편은 또한 항체 또는 항원-결합 단편의 이황화물 결합 (예를 들어, 사슬내 이황화물 결합)을 환원시킴으로써 제조될 수 있다. 이어서, 환원된 항체 또는 항원-결합 단편을 티올-반응성 변형제와 반응시켜 본 발명의 변형된 항체를 제조할 수 있다. 본 발명의 항체의 특이적인 부위에 결합하는 유기 모이어티를 포함하는 변형된 인간 항체 및 항원-결합 단편은 적합한 방법, 예컨대 역 단백질 분해(reverse proteolysis)(문헌[Fisch et al., Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992)]; 문헌[Werlen et al., Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994)]; 문헌[Kumaran et al., Protein Sci. 6(10):2233-2241 (1997)]; 문헌[Itoh et al., Bioorg. Chem., 24(1): 59-68 (1996)]; 문헌[Capellas et al., Biotechnol. Bioeng., 56(4):456-463 (1997)]), 및 문헌[Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)]에 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
본 발명의 방법은 또한 본 명세서에 기재되고/되거나 당업계에 알려진 바와 같은 항-IL12/23p40 항체를 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상 또는 그 이상 포함하는 항-IL12/23p40 항체 조성물을 사용하며, 이는 비-천연 발생 조성물, 혼합물 또는 형태로 제공된다. 이러한 조성물은 상기 서열 번호의 연속 아미노산의 70 내지 100%, 또는 이의 특정 단편, 도메인, 또는 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-IL12/23p40 항체 아미노산 서열의 1개 또는 2개 이상의 전장 C- 및/또는 N-말단 결실 변이체, 도메인, 단편, 또는 특정 변이체를 포함하는 비-천연 발생 조성물을 포함한다. 바람직한 항-IL12/23p40 항체 조성물은 본 명세서에 기재된 항-IL12/23p40 항체 서열의 하나 이상의 CDR 또는 LBP 함유 부분으로서 1개 또는 2개 이상의 전장, 단편, 도메인, 또는 변이체, 예를 들어, 상기 서열 번호의 70 내지 100%, 또는 이의 특정 단편, 도메인, 또는 변이체를 포함한다. 추가로 바람직한 조성물은, 예를 들어, 상기 서열 번호 등의 70 내지 100%, 또는 이의 특정 단편, 도메인, 또는 변이체 중 하나 이상의 40 내지 99%를 포함한다. 이러한 조성 비율은 당업계에 공지되거나 본 발명에 기재된 바와 같이, 액체 또는 무수 용액, 혼합물, 현탁액, 에멀젼, 입자, 분말 또는 콜로이드로서 중량, 부피, 농도, 몰농도, 몰랄 농도를 기준으로 한 것이다.
치료적으로 활성인 성분을 추가로 포함하는 항체 조성물
본 발명의 방법에 사용되는 항체 조성물은 선택적으로 항감염약, 심혈관(CV)계 약물, 중추신경계(CNS) 약물, 자율신경계(ANS) 약물, 기도 약물, 위장(GI)관 약물, 호르몬 약물, 체액 또는 전해질 균형을 위한 약물, 혈액 약물, 항신생물제, 면역조절 약물, 눈, 귀 또는 코 사용을 위한 약물, 국소 약물, 영양제 약물 등 중의 적어도 하나로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물 또는 단백질의 유효량을 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 제시된 각각에 대한 제형, 적응증, 용법, 및 투여를 포함하여, 이러한 약물은 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001]; 문헌[Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ]; 문헌[Pharmcotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT] 참조, 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨).
본 발명의 방법의 항체와 배합할 수 있는 약물의 예로서, 항-감염성 약물은 살아메바제 또는 적어도 하나의 항원충제, 구충제, 항진균제, 항말라리아제, 항결핵제 또는 적어도 하나의 항나병약, 아미노글리코시드, 페니실린, 세팔로스포린, 테트라사이클린, 설폰아미드, 플루오로퀴놀론, 항바이러스제, 마크롤리드 항감염제 및 기타 항감염제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 호르몬 약물은 코르티코스테로이드, 안드로겐, 또는 적어도 하나의 단백동화 스테로이드, 에스트로겐 또는 적어도 하나의 프로게스틴, 생식선자극호르몬, 항당뇨병 약물 또는 적어도 하나의 글루카곤, 갑상선 호르몬, 갑상선 호르몬 길항제, 뇌하수체 호르몬 및 부갑상선-유사 약물로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 세팔로스포린은 세파클로르, 세파드록실, 세파졸린 나트륨, 세프디니르, 세페피메 염산염, 세픽시메, 세프메타졸 나트륨, 세포니시드 나트륨, 세포페라존 나트륨, 세포탁심 나트륨, 세포테탄 이나트륨, 세폭시틴 나트륨, 세프포독심 프록세틸, 세프프로질, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심 나트륨, 세프트리악손 나트륨, 세푸록심 악세틸, 세푸록심 나트륨, 세팔렉신 염산염, 세팔렉신 1수화물, 세프라딘 및 로라카르베프로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다.
적어도 하나의 코리코스테로이드는 베타메타손, 베타메타손 아세테이트 또는 베타메타손 나트륨 인산염, 베타메타손 나트륨 인산염, 코르티손 아세테이트, 덱사메타손, 덱사메타손 아세테이트, 덱사메타손 나트륨 인산염, 플루드로코르티손 아세테이트, 하이드로코르티손, 하이드로코르티손 아세테이트, 하이드로코르티손 시피오네이트, 하이드로코르티손 나트륨 인산염, 하이드로코르티손 나트륨 석시네이트, 메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 나트륨 석시네이트, 프레드니솔론, 프레드니솔론 아세테이트, 프레드니솔론 나트륨 인산염, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니손, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드 및 트리암시놀론 다이아세테이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 안드로겐 또는 단백동화 스테로이드는 다나졸, 플루옥시메스테론, 메틸테스토스테론, 난드롤론 데카노에이트, 난드롤론 펜프로피오네이트, 테스토스테론, 테스토스테론 시피오네이트, 테스토스테론 에난테이트, 테스토스테론 프로피오네이트 및 테스토스테론 경피 시스템으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다.
적어도 하나의 면역억제제는 아자티오프린, 바실릭시맙, 사이클로스포린, 다클리주맙, 림프구 면역 글로불린, 뮤로모납-CD3, 미코페놀레이트 모페틸, 미코페놀레이트 모페틸 염산염, 시롤리무스, 6-메르캅토푸린, 메토트렉세이트, 미조리빈, 및 타크롤리무스로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다.
적어도 하나의 국소 항-감염제는 아시클로비르, 암포테리신 B, 아젤라산 크림, 바시트라신, 부토코나졸 니트레이트, 클린다마이신 인산염, 글로트리마졸, 에코나졸 니트레이트, 에리트로마이신, 겐타마이신 설페이트, 케토코나졸, 마페니드 아세테이트, 메트로니다졸 (국소용), 미코나졸 니트레이트, 무피로신, 나프티핀 염산염, 네오마이신 설페이트, 니트로푸라존, 니스타틴, 실버 설파디아진, 테르비나핀 염산염, 테르코나졸, 테트라사이클린 염산염, 티오코나졸 및 톨나프테이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 옴약 또는 이살충제는 크로타미톤, 린단, 퍼메트린 및 피레트린으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 국소용 코르티코스테로이드는 베타메타손 다이프로피오네이트, 베타메타손 발레레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 데소니드, 데속시메타손, 덱사메타손, 덱사메타손 나트륨 인산염, 디플로라손 다이아세테이트, 플루오시놀론 아세토니드, 플루오시노니드, 플루란드레놀리드, 플루티카손 프로피오네이트, 할시오니드, 하이드로코르티손, 하이드로코르티손 아세테이트, 하이드로코르티손 부티레이트, 하이드로코르티손 발레레이트, 모메타손 푸로에이트 및 트리암시놀론 아세토니드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. (예를 들어, 문헌[Nursing 2001 Drug Handbook, pp. 1098-1136]을 참조한다.)
항-IL12/23p40 항체 조성물은 이러한 조절, 치료 또는 요법이 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 대상체에게 접촉되거나 투여되는 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체를 포함하고, 선택적으로 적어도 하나의 TNF 길항제 (예를 들어, TNF 화학물질 또는 단백질 길항제, TNF 단일클론 또는 다클론 항체 또는 단편, 가용성 TNF 수용체 (예를 들어, p55, p70 또는 p85) 또는 단편, 이의 융합 폴리펩티드, 또는 소분자 TNF 길항제, 예를 들어 TNF 결합 단백질 I 또는 II (TBP-I 또는 TBP-II), 네렐리몬맙, 인플릭시맙, 에테르나셉트, CDP-571, CDP-870, 아펠리모맙, 레네르셉트 등과 같지만 이로 한정되지 않음), 항류마티즘제 (예를 들어, 메토트렉세이트, 아우라노핀, 아우로티오글루코스, 아자티오프린, 에타너셉트, 금 나트륨 티오말레이트, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 레플루노마이드, 설파살진), 면역제, 면역글로불린, 면역억제제 (예를 들어, 아자티오프린, 바실릭시맙, 사이클로스포린, 다클리주맙), 사이토카인 또는 사이토카인 길항제로부터 선택되는 적어도 하나를 추가로 포함하는 적어도 하나의 조성물 또는 약제학적 조성물의 임의의 적합하고 유효한 양을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 사이토카인의 비제한적인 예에는 IL-1 내지 IL-23 등 (예를 들어, IL-1, IL-2 등) 중 하나가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 적합한 투여량은 본 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000)]; 문헌[PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000)]을 참조하며, 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 발명의 방법에 사용되는 항-IL12/23p40 항체 화합물, 조성물 또는 조합물은 희석제, 결합제, 안정화제, 완충제, 염, 친유성 용매, 방부제, 애쥬번트(adjuvant) 등과 같지만 이로 한정되지 않는 적어도 하나의 임의의 적합한 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 보조제가 바람직하다. 이러한 무균 용액의 제조 방법의 비제한적인 예는 문헌[Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990]과 같은 그러나 이로 한정되지 않는 문헌에 기재된 바와 같이 당업계에 잘 알려져 있다. 당업계에 잘 알려지거나 본 명세서에 기재된 바와 같이 항-IL12/23p40, 단편, 또는 변이체 조성물의 투여 방식, 용해도, 및/또는 안정성에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체는 일상적으로 선택될 수 있다.
본 조성물에 유용한 약제학적 부형제 및 첨가제는 단백질, 펩티드, 아미노산, 지질, 및 탄수화물(예를 들어, 단당류, 이당류, 삼당류, 사당류, 및 올리고당류를 포함하는 당; 유도체화된 당, 예컨대 알디톨, 알돈산, 에스테르화된 당 등; 및 다당류 또는 당 중합체)을 포함하지만 이로 한정되지 않으며, 이는 단독으로 또는 조합하여 1 내지 99.99 중량% 또는 부피%를 차지하면서 개별적으로 또는 조합하여 존재할 수 있다. 예시적인 단백질 부형제는 혈청 알부민, 예컨대, 인간 혈청 알부민(HSA), 재조합 인간 알부민(rHA), 젤라틴, 카제인 등을 포함한다. 완충 용량에서도 기능할 수 있는 대표적인 아미노산/항체 성분은 알라닌, 글리신, 아르기닌, 베타인, 히스티딘, 글루탐산, 아스파르트산, 시스테인, 라이신, 류신, 아이소류신, 발린, 메티오닌, 페닐알라닌, 아스파탐 등을 포함한다. 바람직한 아미노산은 글리신이다.
본 발명에 사용하기에 적합한 탄수화물 부형제는, 예를 들어, 프럭토스, 말토스, 갈락토스, 글루코스, D-만노스, 소르보스 등과 같은 단당류; 락토스, 수크로스, 트레할로스, 셀로비오스 등과 같은 이당류; 라피노스, 멜레지토스, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등과 같은 다당류; 및 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨 소르비톨(글루시톨), 미오이노시톨 등과 같은 알디톨을 포함한다. 본 발명에 사용하기 바람직한 탄수화물 부형제는 만니톨, 트레할로스 및 라피노스이다.
항-IL12/23p40 항체 조성물은 완충제 또는 pH 조정제를 또한 포함할 수 있으며; 전형적으로, 완충제는 유기산 또는 유기 염기로부터 제조된 염이다. 대표적인 완충제는 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타르타르산, 석신산, 아세트산, 또는 프탈산의 염과 같은 유기산 염; 트리스, 트로메타민 염산염 또는 인산염 완충제를 포함한다. 본 발명의 조성물에서 사용하기 바람직한 완충제는 시트레이트와 같은 유기산 염이다.
추가로, 항-IL12/23p40 항체 조성물은 폴리비닐피롤리돈, 피콜 (중합체 당), 덱스트레이트 (예를 들어, 2-하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린과 같은 사이클로덱스트린), 폴리에틸렌 글리콜, 향료, 항미생물제, 감미제, 항산화제, 대전방지제, 계면활성제 (예를 들어, "트윈(TWEEN) 20" 및 "트윈 80"과 같은 폴리소르베이트), 지질 (예를 들어, 인지질, 지방산), 스테로이드 (예를 들어, 콜레스테롤) 및 킬레이트제 (예를 들어, EDTA)와 같은 중합체 부형제/첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 항-IL12/23p40 항체, 부분, 또는 변이체 조성물에 사용하기에 적합한 이들 및 추가의 알려진 약제학적 부형제 및/또는 첨가제는, 예를 들어 문헌["Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 19th ed., Williams & Williams, (1995)], 및 문헌["Physician's Desk Reference", 52nd ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998)]에 열거된 바와 같이 당업계에 알려져 있으며, 이들의 개시 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 바람직한 담체 또는 부형제 물질은 탄수화물 (예를 들어, 당류 및 알디톨) 및 완충제 (예를 들어, 시트레이트) 또는 중합체 물질이다. 예시적인 담체 분자에는 뮤코다당류, 하이알루론산이 있으며, 이는 관절내 전달에 유용할 수 있다.
제형
상기 언급된 바와 같이, 본 발명은 안정적인 제형을 제공하며, 이는 바람직하게는 염수 또는 선택된 염을 포함하는 인산염 완충제뿐만 아니라, 보존된 용액 및 방부제를 함유하는 제형과, 약제학적 또는 수의학적 용도에 적합한 다용도의 보존된 제형을 포함하고, 약제학적으로 허용되는 제형 내에 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체를 포함한다. 보존된 제형은 하나 이상의 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 페닐머큐릭 니트라이트, 페녹시에탄올, 포름알데하이드, 클로로부탄올, 염화마그네슘(예를 들어, 6수화물), 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 데하이드로아세트산나트륨 및 티메로살, 또는 수성 희석제 중의 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택적으로 선택되는 하나 이상의 공지의 방부제를 함유한다. 임의의 적합한 농도 또는 혼합물, 예를 들어 0.001 내지 5%, 또는 그 범위 내의 임의의 범위 또는 값, 예를 들어 0.001, 0.003, 0.005, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 그 범위 내의 임의의 범위 또는 값 (이에 한정되지 않음)이 본 기술 분야에 알려진 바대로 사용될 수 있다. 비제한적인 예는 방부제를 포함하지 않거나, 0.1 내지 2%의 m-크레졸(예를 들어, 0.2, 0.3. 0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.1 내지 3%의 벤질 알코올(예를 들어, 0.5, 0.9, 1.1, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), 0.001 내지 0.5%의 티메로살(예를 들어, 0.005, 0.01), 0.001 내지 2.0%의 페놀(예를 들어, 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.0005 내지 1.0%의 알킬파라벤(들)(예를 들어, 0.00075, 0.0009, 0.001, 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01, 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 1.0%) 등을 포함한다.
상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 방법은 포장 재료, 및 선택적으로 수성 희석제 중의 규정된 완충제 및/또는 방부제와 함께 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체의 용액을 포함하는 적어도 하나의 바이알을 포함하는 제조 물품을 사용하며, 상기 포장 재료는 이러한 용액이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72시간 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 유지될 수 있음을 표시하는 라벨을 포함한다. 본 발명은 포장 재료, 및 동결건조된 항-IL12/23p40 항체를 포함하는 제1 바이알, 및 규정된 완충제 또는 방부제의 수성 희석제를 포함하는 제2 바이알을 포함하는 제조 물품을 추가로 사용하고, 상기 포장 재료는 항-IL12/23p40 항체를 수성 희석제 중에 재구성하여 24시간 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 유지될 수 있는 용액을 형성하도록 대상체에게 지시하는 라벨을 포함한다.
본 발명에 따라 사용되는 항-IL12/23p40 항체는 포유류 세포 또는 유전자도입 제제로부터의 것을 포함하는 재조합 수단에 의해 제조될 수 있거나, 본 명세서에 기재되거나 본 기술 분야에 알려진 바와 같은 다른 생물학적 공급원으로부터 정제될 수 있다.
항-IL12/23p40 항체의 범위는 재구성시에, 습윤/건조 시스템의 경우, 약 1.0 ㎍/ml 내지 약 1000 mg/ml 농도를 생성하는 양을 포함하지만, 더 낮거나 높은 농도가 사용가능하고 의도하는 전달 비히클에 좌우되는데, 예를 들어 용액 제형은 경피 패치, 폐, 경점막, 또는 삼투압 또는 마이크로 펌프 방법과는 상이할 것이다.
바람직하게는, 선택적으로 수성 희석제는 약제학적으로 허용되는 방부제를 추가로 포함한다. 바람직한 방부제는 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 데하이드로아세트산나트륨 및 티메로살, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 포함한다. 제형 내에 사용되는 방부제의 농도는 항-미생물 효과를 내기에 충분한 농도이다. 이러한 농도는 선택된 방부제에 좌우되며, 당업자에 의해 쉽게 결정된다.
다른 부형제, 예를 들어 등장화제, 완충제, 산화방지제 및 보존성 인핸서가 선택적으로 그리고 바람직하게 희석제에 첨가될 수 있다. 글리세린과 같은 등장화제는 공지의 농도에서 통상 사용된다. 생리학적으로 허용되는 완충제는 바람직하게는 향상된 pH 제어를 제공하기 위해 첨가된다. 제형은 약 pH 4 내지 약 pH 10과 같은 넓은 범위의 pH를 포함할 수 있고, 바람직한 범위는 약 pH 5 내지 약 pH 9이며, 가장 바람직한 범위는 약 6.0 내지 약 8.0이다. 바람직하게는 본 발명의 제형은 약 6.8 내지 약 7.8의 pH를 갖는다. 바람직한 완충제는 인산염 완충제, 가장 바람직하게는 인산나트륨, 특히 인산염 완충 식염수 (PBS)를 포함한다.
약제학적으로 허용되는 가용화제, 예를 들어 트윈 20 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트), 트윈 40 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노팔미테이트), 트윈 80 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트), 플루로닉(Pluronic) F68 (폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체), 및 PEG (폴리에틸렌 글리콜) 또는 폴리소르베이트 20 또는 80 또는 폴록사머 184 또는 188, 플루로닉® 폴리올과 같은 비이온성 계면활성제, 다른 블록 공중합체, 및 EDTA 및 EGTA 같은 킬레이트제와 같은 다른 첨가제가 응집을 감소시키기 위해 제형 또는 조성물에 선택적으로 첨가될 수 있다. 이러한 첨가제는 펌프 또는 플라스틱 용기가 제형을 투여하기 위해 사용될 경우에 특히 유용하다. 약제학적으로 허용되는 계면활성제의 존재는 단백질 응집 성향을 완화시킨다.
제형은 수성 희석제 중의 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 데하이드로아세트산나트륨 및 티메로살 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 방부제와 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체를 혼합하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 수성 희석제 중에 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체와 보존제를 혼합하는 단계는 통상적 용해 및 혼합 절차를 사용하여 수행된다. 적합한 제형을 제조하기 위해, 예를 들어 완충액 중의 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체의 측정된 양을 원하는 농도의 단백질 및 방부제를 제공하기에 충분한 양의 완충액 중의 원하는 방부제와 배합한다. 이러한 방법의 변형법이 당업자에 의해 인식될 것이다. 예를 들어, 성분이 첨가되는 순서, 추가의 첨가제 사용 여부, 제형 제조 온도 및 pH는 모두 사용되는 농도 및 투여 수단에 대해 최적화될 수 있는 인자이다.
제형은 투명한 용액으로서, 또는 물, 방부제 및/또는 부형제, 바람직하게는 인산염 완충제 및/또는 염수 및 선택된 염을 수성 희석제 중에 함유하는 제2 바이알로 재구성되는, 동결건조된 항-IL12/23p40 항체의 바이알을 포함하는 이중 바이알로서 대상체에게 제공될 수 있다. 단일 용액 바이알 또는 재구성이 필요한 이중 바이알은 수회 재사용될 수 있고, 대상체 치료의 단회 또는 다회의 사이클에 충분하므로 현재 사용되는 것보다 더 편리한 치료 요법을 제공할 수 있다.
본 발명의 제조 물품은 즉시 내지 24시간 또는 그 이상의 범위의 기간에 걸쳐 투여하는 데 유용하다. 따라서, 본 발명에서 청구되는 제조 물품은 대상체에게 상당한 이점을 준다. 본 발명의 제형은 선택적으로 약 2℃ 내지 약 40℃의 온도에서 안전하게 저장하고 장기간 동안 단백질의 생물학적 활성을 유지할 수 있으며, 따라서 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 또는 96시간 이상의 기간에 걸쳐 용액이 유지 및/또는 사용될 수 있음을 패키지 라벨에 표시하는 것이 가능하다. 보존된 희석제가 사용된 경우, 상기 라벨은 1 내지 12달, 반년, 1년 반 및/또는 2년의 사용을 포함할 수 있다.
항-IL12/23p40 항체의 용액은 수성 희석제 중에 적어도 하나의 항체를 혼합하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 혼합을 통상의 용해 및 혼합 절차를 사용하여 수행한다. 적합한 희석제를 제조하기 위하여, 예를 들어 물 또는 완충제 중의 측정된 양의 적어도 하나의 항체를, 원하는 농도의 단백질 및 선택적으로 방부제 또는 완충제를 제공하기에 충분한 양으로 배합한다. 이러한 방법의 변형법이 당업자에 의해 인식될 것이다. 예를 들어, 성분이 첨가되는 순서, 추가의 첨가제 사용 여부, 제형 제조 온도 및 pH는 모두 사용되는 농도 및 투여 수단에 대해 최적화될 수 있는 인자이다.
청구된 생성물은 투명한 용액으로서, 또는 수성 희석제를 함유하는 제2 바이알을 이용하여 재구성되는 동결건조된 항-IL12/23p40 항체의 바이알을 포함하는 이중 바이알로서 대상체에게 제공될 수 있다. 단일 용액 바이알 또는 재구성이 필요한 이중 바이알은 수회 재사용될 수 있고, 대상체 치료의 단회 또는 다회의 사이클에 충분하므로 현재 사용되는 것보다 더 편리한 치료 요법을 제공한다.
청구된 생성물은, 투명한 용액, 또는 수성 희석제를 함유하는 제2 바이알을 이용하여 재구성되는 동결건조된 항-IL12/23p40 항체의 바이알을 포함하는 이중 바이알을 약국, 병원, 또는 다른 그러한 기관 및 시설에 제공함으로써 대상체에게 간접적으로 제공될 수 있다. 이 경우 투명한 용액은 1리터 또는 그보다 훨씬 더 큰 크기일 수 있는데, 소량의 적어도 하나의 항체 용액을 1회 또는 다회 회수하여 소량의 바이알에 옮기고, 약국 또는 병원을 통해 고객 및/또는 대상체에게 제공할 수 있는 큰 저장고를 제공한다.
단일 바이알 시스템을 포함하는 승인된 장치는 용액 전달을 위한 펜-주입기(pen-injector device), 예를 들어 BD Pens, BD Autojector®, Humaject®, NovoPen®, B-D®Pen, OnePress®(SelfDose®), AutoPen®, 및 OptiPen®, GenotropinPen®, Genotronorm Pen®, Humatro Pen®, Reco-Pen®, Roferon Pen®, Biojector®, Iject®, J-tip Needle-Free Injector®, Intraject®, Medi-Ject®, Smartject®; 예를 들어, Becton Dickensen (미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스 소재, www.bectondickenson.com), Disetronic (스위스 부르그도르프 소재, www.disetronic.com); Bioject (미국 오레곤주 포틀랜드 소재, www.bioject.com); National Medical Products, Weston Medical (영국 피터보로우 소재, www.weston-medical.com), Medi-Ject Corp (미국 미네소타주 미네아폴리스 소재, www.mediject.com)로부터 제조되거나 개발된 것, 및 유사하게 적합한 장치를 포함한다. 이중 바이알 시스템을 포함하는 승인된 장치는 HumatroPen®과 같은 재구성된 용액의 전달을 위한 카트리지에 동결건조된 약물을 재구성하기 위한 펜-인젝터 시스템을 포함한다. 적합한 다른 장치의 예에는 사전 충전 시린지, 자동 주사기, 니들이 없는 주사기 및 니들이 없는 IV 주입 세트가 포함된다.
상기 제품은 포장 재료를 포함할 수 있다. 포장 재료는 규제 당국이 요구하는 정보 이외에 제품을 사용할 수 있는 조건을 제공한다. 본 발명의 포장 재료는, 적용가능한 경우, 2개의 바이알, 습윤/건조 제품에 대하여 적어도 하나의 항-IL12/23p40 항체를 수성 희석제에 재구성하여 용액을 형성하고, 용액을 2 내지 24시간, 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 사용하기 위한 설명서를 대상체에게 제공한다. 단일 바이알, 용액 제품, 사전 충전 시린지, 또는 자동 주사기의 경우, 라벨은 상기 용액을 2 내지 24시간 이상의 기간에 걸쳐 사용할 수 있음을 나타낸다. 제품은 인간의 의약품 용도로 유용하다.
본 발명의 방법에 사용되는 제형은 항-IL12/23p40 및 선택된 완충제, 바람직하게는 염수 또는 선택된 염을 함유하는 인산염 완충제와 혼합하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 수성 희석제 중에서 완충제와 항-IL12/23p40 항체를 혼합하는 단계는 통상의 용해 및 혼합 절차를 사용하여 실행된다. 적합한 제형을 제조하기 위하여, 예를 들어 물 또는 완충제 중의 측정된 양의 적어도 하나의 항체를, 원하는 농도의 단백질 및 완충제를 제공하기 충분한 양의 수중의 원하는 완충제와 배합한다. 이러한 방법의 변형법이 당업자에 의해 인식될 것이다. 예를 들어, 성분이 첨가되는 순서, 추가의 첨가제 사용 여부, 제형 제조 온도 및 pH는 모두 사용되는 농도 및 투여 수단에 대해 최적화될 수 있는 인자이다.
본 발명의 방법은 인간 또는 동물 대상체에게 투여하기에 유용하고 허용가능한 다양한 제형을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 이러한 약제학적 조성물은 희석제로서 "표준 상태"에서의 물을 그리고 당업자에게 잘 알려진 통상의 방법을 사용하여 제조된다. 예를 들어, 완충 성분, 예컨대 히스티딘 및 히스티딘 모노하이드로클로라이드 수화물이 먼저 제공된 후, 적절한 비최종 부피의 "표준 상태"에서의 물 희석제, 수크로스 및 폴리소르베이트 80이 첨가될 수 있다. 이어서, 단리된 항체가 첨가될 수 있다. 마지막으로, 약제학적 조성물의 부피는 물을 희석제로 사용하여 "표준 상태" 조건 하에서 원하는 최종 부피로 조정된다. 약제학적 조성물의 제조에 적합한 다수의 다른 방법을 당업자는 인지할 것이다.
약제학적 조성물은 물의 단위 부피당 각 성분의 지시된 질량을 포함하거나, "표준 상태"에서 지시된 pH를 갖는 수용액 또는 현탁액일 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "표준 상태"는 25℃ +/- 2℃의 온도 및 1 기압의 압력을 의미한다. 용어 "표준 상태"는 당업계에서 기술이 인정한 단일의 온도 또는 압력의 세트를 지칭하기 위해 사용되는 것이 아니라, 대신 기준 "표준 상태" 조건 하에서 특정 조성을 갖는 용액 또는 현탁액을 기술하기 위해 사용되는 온도 및 압력을 명시하는 기준 상태이다. 이는 용액의 부피가 부분적으로 온도와 압력의 함수이기 때문이다. 여기에 개시된 것과 동등한 약제학적 조성물이 다른 온도 및 압력에서 생성될 수 있음을 당업자는 인지할 것이다. 이러한 약제학적 조성물이 여기에 개시된 것과 동등한지 여부는 상기 정의된 "표준 상태" 조건(예를 들어 25℃ +/- 2℃ 및 1 기압의 압력) 하에서 결정되어야 한다.
중요하게는, 이러한 약제학적 조성물은 약제학적 조성물 단위 부피당 "약" 소정 값 (예를 들어 "약 0.53 mg의 L-히스티딘")의 성분 질량을 함유할 수 있거나, 약 소정 값의 pH 값을 가질 수 있다. 단리된 항체가 약제학적 조성물에 존재하는 동안, 또는 단리된 항체가 약제학적 조성물로부터 제거된 후에(예를 들어, 희석에 의해), 약제학적 조성물에 존재하는 단리된 항체가 펩티드 사슬에 결합할 수 있는 경우, 약제학적 조성물에 존재하는 성분의 질량 또는 pH 값은 주어진 수치 값에 대해 "약"이다. 달리 말하면, 약제학적 조성물에 단리된 항체를 배치한 후 단리된 항체의 결합 활성이 유지되고 검출될 수 있는 경우, 성분의 질량 값 또는 pH 값과 같은 값은 주어진 수치 값에 대해 "약"이다.
경쟁 결합 분석을 수행하여, 항-IL12/23p40 mAb가 유사하거나 상이한 에피토프에 결합하고/하거나 서로 경쟁하는지를 결정한다. Ab를 ELISA 플레이트 상에 개별적으로 코팅한다. 경쟁 mAb를 첨가한 후, 비오틴화 hrIL-12 또는 IL-23을 첨가한다. 양성 대조군의 경우, 코팅을 위해 동일한 mAb를 경쟁 mAb로서 사용할 수 있다 ("자기-경쟁"). 스트렙타비딘을 사용하여 IL12/IL23p40 또는 IL-23 결합을 검출한다. 이러한 결과는 mAb가 IL12/23p40 또는 IL-23 상에서 유사하거나 부분적으로 중첩되는 에피토프를 인지하는지 여부를 보여준다.
약제학적 조성물의 일 실시 형태에서, 단리된 항체 농도는 약제학적 조성물 1 ml 당 약 77 내지 약 104 mg이다. 약제학적 조성물의 다른 실시 형태에서, pH는 약 5.5 내지 약 6.5이다.
안정하거나 보존된 제형은 투명한 용액으로서, 또는 수성 희석제 중에 방부제 또는 완충제 및 부형제를 함유하는 제2 바이알을 이용하여 재구성되는, 동결건조된 하나 이상의 항-IL12/23p40의 바이알을 포함하는 이중 바이알로서 대상체에게 제공될 수 있다. 단일 용액 바이알 또는 재구성이 필요한 이중 바이알은 수회 재사용될 수 있고, 대상체 치료의 단회 또는 다회의 사이클에 충분하므로 현재 사용되는 것보다 더 편리한 치료 요법을 제공한다.
항-IL12/23p40을 안정화시키는 다른 제형 또는 방법은, 항체를 포함하는 동결건조된 분말의 투명한 용액 이외의 것을 생성할 수 있다. 투명하지 않은 용액 중에는 미립자 현탁액을 포함하는 제형이 있으며, 상기 미립자는 가변 치수의 구조 내에 항-IL12/23p40을 함유하는 조성물이고, 마이크로구체, 마이크로입자, 나노입자, 나노구체, 또는 리포좀으로서 다양하게 알려져 있다. 활성제를 함유하는 상대적으로 균질하고 본질적으로 구형인 이러한 미립자 제형은 미국 특허 제4,589,330호에 교시된 바와 같이, 활성제 및 중합체를 함유하는 수성 상과 비수성 상을 접촉시킨 후, 비수성 상을 증발시켜 수성 상으로부터 입자를 응결시켜 형성될 수 있다. 다공성 마이크로입자는 미국 특허 제4,818,542호에 교시된 바와 같이 연속 용매 중에 분산되어 있는 활성제 및 중합체를 포함하는 제1 상을 사용하고, 동결-건조 또는 희석-추출-침전에 의해 현탁액으로부터 상기 용매를 제거하여 제조될 수 있다. 이러한 제조에 바람직한 중합체는 천연 또는 합성 공중합체 또는 중합체이고, 이는 젤라틴 아가, 전분, 아라비노갈락탄, 알부민, 콜라겐, 폴리글리콜산, 폴리락트산, 글리콜라이드-L(-) 락티드, 폴리(엡실론-카프로락톤), 폴리(엡실론-카프로락톤-코-락트산), 폴리(엡실론-카프로락톤-코-글리콜산), 폴리 (β-하이드록시 부티르산), 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리에틸렌, 폴리(알킬-2-시아노아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸 메타크릴레이트), 폴리아미드, 폴리(아미노산), 폴리(2-하이드록시에틸 DL-아스파르타미드), 폴리(에스테르 우레아), 폴리(L-페닐알라닌/에틸렌 글리콜/1,6-다이아이소시아나토헥산) 및 폴리(메틸 메타크릴레이트)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특히 바람직한 중합체는 폴리에스테르, 예를 들어 폴리글리콜산, 폴리락트산, 글리콜라이드-L(-) 락티드, 폴리(엡실론-카프로락톤), 폴리(엡실론-카프로락톤-코-락트산) 및 폴리(엡실론-카프로락톤-코-글리콜산)이다. 중합체 및/또는 활성 물질의 용해에 유용한 용매는 물, 헥사플루오로아이소프로판올, 메틸렌클로라이드, 테트라하이드로푸란, 헥산, 벤젠 또는 헥사플루오로아세톤 세스퀴수화물을 포함한다. 제2 상과 함께 활성 물질을 함유하는 상을 분산시키는 방법은 노즐 내 오리피스를 통해 상기 제1 상에 압력을 가하여 소적 형성에 영향을 주는 단계를 포함할 수 있다.
건조 분말 제형은 동결건조 이외의 공정으로부터, 예컨대 분무 건조에 의해, 또는 증발에 의한 용매 추출에 의해, 또는 결정질 조성물의 침전 후, 수성 또는 비수성 용매를 제거하는 하나 이상의 단계에 의해 생성될 수 있다. 분무 건조된 항체 제제의 제조가 미국 특허 제6,019,968호에 교시되어 있다. 항체-기반 건조 분말 조성물은 흡입할 수 있는 건조 분말을 제공하기 위한 조건 하에서 용매 중의 항체 및 선택적으로 부형제의 용액 또는 슬러리를 분무 건조시켜 제조될 수 있다. 용매는 용이하게 건조될 수 있는 극성 화합물, 예를 들어 물 및 에탄올을 포함할 수 있다. 산소의 부재 하에, 예를 들어, 질소 블랭킷(nitrogen blanket) 하에 또는 건조 기체로서 질소를 사용하여 분무 건조법을 수행하여 항체 안전성을 증진시킬 수 있다. 상대적으로 건조한 다른 제형은 국제특허 공개 WO9916419호에 교시된 바와 같이 전형적으로 하이드로플루오로알칸 추진제를 포함하는 현탁 매질 중에 분산된 복수의 천공된 미세구조물의 분산물이다. 안정화된 분산물을 정량 흡입기를 사용하여 대상체의 폐로 투여할 수 있다. 분무 건조된 약제의 상업적 제조에 유용한 장치는 부치 리미티드(Buchi Ltd.) 또는 니로 코포레이션(Niro Corp.)에 의해 제작된다.
본 명세서에 기재된 안정하거나 보존된 제형 또는 용액 중의 항-IL12/23p40 항체는 SC 또는 IM 주사; 경피, 폐, 경점막, 임플란트, 삼투압 펌프, 카트리지, 마이크로펌프, 또는 당업계에 잘 알려진 바와 같이 당업자가 인정하는 다른 수단을 포함하는 다양한 전달 방법을 통해 본 발명에 따라 대상체에게 투여될 수 있다.
치료적 응용
본 발명은 또한, 당업계에 알려지거나 본 명세서에 기재된 바와 같이, 본 발명의 항-IL12/23p40 항체를 사용하여, 예를 들어 치료적 유효량의 항-IL12/23p40 항체를 세포, 조직, 기관, 동물, 또는 대상체에게 투여하거나 접촉시켜 세포, 조직, 기관, 동물, 또는 대상체에서 궤양성 결장염을 조절 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 임의의 방법은 항-IL12/23p40 항체를 포함하는 조성물 또는 약제학적 조성물의 유효량을 이러한 조절, 치료, 또는 요법을 필요로 하는 세포, 조직, 기관, 동물, 또는 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 방법은 선택적으로 이러한 질병 또는 장애의 치료를 위한 병용 투여 또는 조합 요법을 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 항-IL12/23p40 항체, 이의 특정 부분 또는 변이체를 투여하는 단계는 하나 이상의 TNF 길항제(비제한적인 예를 들어, TNF 화학물질 또는 단백질 길항제, TNF 단일클론 또는 다중클론 항체 또는 단편, 가용성 TNF 수용체(예를 들어, p55, p70, 또는 p85) 또는 이의 단편, 융합 폴리펩티드, 또는 소분자 TNF 길항제, 예를 들어 TNF 결합 단백질 I 또는 II(TBP-I 또는 TBP-II), 네렐리몬맙, 인플릭시맙, 에테르나셉트(Enbrel™), 아달리물랍(Humira™), CDP-571, CDP-870, 아펠리모맙, 레네르셉트 등), 항류머티즘제(예를 들어, 메토트렉세이트, 아우라노핀, 아우로티오글루코스, 아자티오프린, 금 나트륨 티오말레이트, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 레플루노마이드, 설파살진), 근육 이완제, 마약류(narcotic), 비스테로이드성 항염증제(NSAID)(예를 들어, 5-아미노살리실레이트), 진통제, 마취제, 진정제, 국소 마취제, 신경근육 차단제, 항미생물제(예를 들어, 아미노글리코시드, 항진균제, 구충제, 항바이러스제, 카르바페넴, 세팔로스포린, 플루오르퀴놀론, 마크롤리드, 페니실린, 설폰아미드, 테트라사이클린, 다른 항미생물제), 건선치료제, 코르티코스테로이드, 단백동화 스테로이드, 당뇨병 관련 작용제, 미네랄, 영양제, 갑상선제, 비타민, 칼슘 관련 호르몬, 지사제, 진해제, 구토방지제, 항궤양제, 완하제, 항응고제, 에리트로포이에틴(예를 들어, 에포에틴 알파), 필그라스팀(예를 들어, G-CSF, Neupogen), 사르그라모스팀(GM-CSF, Leukine), 면역화, 면역글로불린, 면역억제제(예를 들어, 바실릭시맙, 사이클로스포린, 다클리주맙), 성장 호르몬, 호르몬 대체 약물, 에스트로겐 수용체 조절제, 산동제, 조절마비제, 알킬화제, 항대사물질, 유사분열 억제제, 방사성 의약품, 항우울제, 항조병제, 항정신병약, 불안 완화제, 수면제, 교감신경흥분제, 흥분제, 도네페질, 타크린, 천식 약물, 베타 작용제, 흡입 스테로이드, 류코트리엔 억제제, 메틸잔틴, 크로몰린, 에피네프린 또는 유사체, 도르나제 알파(Pulmozyme), 사이토카인 또는 사이토카인 길항제로부터 선택되는 하나 이상을 투여하기 전에, 그와 동시에, 및/또는 그 후에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 적합한 투여량은 본 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000)]; 문헌[PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000)]; 문헌[Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001]; 문헌[Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ]을 참조하며, 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
치료적 치료
궤양성 결장염의 치료는 이를 필요로 하는 대상체에서 항-IL12/23p40 항체 조성물의 유효량 또는 투여량을 투여함으로써 달성된다. 투여되는 투여량은 알려진 인자, 예컨대 특정 작용제의 약력학적 특징, 및 그의 투여 방식 및 경로; 수용자의 연령, 건강, 및 체중; 증상의 성질 및 정도, 병행 치료의 종류, 치료의 빈도, 및 원하는 효과에 따라 변동될 수 있다. 일부의 경우, 요구되는 치료량을 달성하기 위해, 반복 투여, 즉 요구되는 일일 용량 또는 효과가 달성될 때까지 특정 모니터링 또는 계량 용량의 개별적인 투여를 반복하는 것이 필요할 수 있다.
크론병의 안전하고 효과적인 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 크론병의 안전하고 효과적인 치료를 제공하는 하나의 예시적인 요법에서, 투여당 약 130 mg의 총 투여량의 항-IL12/23p40 항체가 대상체에게 정맥내 투여된다. 예를 들어, 투여되는 조성물의 총 부피는 투여당 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg 또는 180 mg의 항체의 목표 투여량을 대상체에게 제공하도록 적절하게 조정된다.
중증의 활동성 UC의 안전하고 효과적인 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 UC의 안전하고 효과적인 치료를 제공하는 다른 예시적인 요법에서, 투여당 약 6.0 mg/㎏ ± 1.5 mg/㎏의 총 투여량의 항-IL12/23p40 항체가 대상체에게 정맥내 투여된다. 예를 들어, 투여되는 조성물의 총 부피는 투여당 대상체의 체중 1 ㎏당 3.0 mg, 3.5 mg, 4.0 mg, 4.5 mg, 5.0 mg, 5.5 mg, 6.0 mg, 6.5 mg, 7.0 mg, 7.5 mg, 8.0 mg, 8.5 mg, 또는 9.0 mg의 항체의 목표 투여량을 대상체에게 제공하도록 적절하게 조정된다.
대상체에게 투여되는 항-IL12/23p40 항체의 투여당 총 투여량은 약 30분 내지 180분, 바람직하게는 60분 내지 120분, 예컨대 30분, 60분, 90분, 120분, 150분, 또는 180분의 기간에 걸쳐 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다.
중증의 활동성 UC의 안전하고 효과적인 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 UC의 안전하고 효과적인 치료를 제공하는 또 다른 예시적인 요법에서, 투여당 약 90 mg의 총 투여량의 항-IL12/23p40 항체가 대상체에게 피하 투여된다. 예를 들어, 투여되는 조성물의 총 부피는 투여당 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg 또는 140 mg의 항체의 목표 투여량을 대상체에게 제공하도록 적절하게 조정된다. 투여당 목표 투여량은 단회 피하 주사로 또는 다회 피하 주사로, 예컨대 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 또는 그 이상의 횟수의 피하 주사로 투여될 수 있다.
항-IL12/23p40 항체의 총 투여량은 1일, 1주, 1개월, 6개월, 1년, 2년 또는 그 이상의 기간 동안 하루당 1회, 주당 1회, 개월당 1회, 매 6개월마다 1회 등으로 투여될 수 있다. 본 명세서에 기재된 총 투여량에서의 항-IL12/23p40 항체의 각각의 다회 투여가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다.
체내 투여에 적합한 투여형(조성물)은 일반적으로 단위 또는 용기당 약 0.001 밀리그램 내지 약 500 밀리그램의 활성 성분을 함유한다.
비경구 투여의 경우, 항체는 약제학적으로 허용되는 비경구 비히클과 함께 또는 별도로 제공되는 용액, 현탁액, 에멀젼, 입자, 분말 또는 동결건조 분말로서 제형화될 수 있다. 이러한 비히클의 예는 물, 염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 1 내지 10% 인간 혈청 알부민이다. 리포솜 및 비수성 비히클, 예를 들어 고정유가 또한 사용될 수 있다. 비히클 또는 동결건조 분말은 등장성 (예를 들어, 염화나트륨, 만니톨) 및 화학적 안정성 (예를 들어, 완충제 및 방부제)을 유지하는 첨가제를 함유할 수 있다. 제형을 알려진 기술 또는 적합한 기술에 의해 살균시킨다.
적합한 약제학적 담체는 본 분야의 표준 참고문헌인 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol]의 최신판에 기재되어 있다.
알려지고 개발된 많은 방식이 본 발명에 따라 약제학적 유효량의 IL12/23p40 항체의 투여에 사용될 수 있다. 본 발명의 항-IL12/23p40 항체는 흡입 또는 본 명세서에 기재되거나 당업계에 알려진 다른 방식에 의한 투여에 적합한 임의의 다양한 장치 및 방법을 사용하여, 용액, 에멀젼, 콜로이드 또는 현탁액, 또는 건조 분말로서 담체 중에 전달될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제형은 통상적인 부형제로서 멸균수 또는 염수, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리알킬렌 글리콜, 식물 기원의 오일, 수소화 나프탈렌 등을 함유할 수 있다. 주사를 위한 수성 또는 유성 현탁액은 알려진 방법에 따라 적당한 유화제 또는 습윤화제 및 현탁제를 사용하여 제조될 수 있다. 주사를 위한 약제는 용매 중의 수용액, 멸균 주사용 용액 또는 현탁액과 같은 비독성의 비경구 투여가능 희석제일 수 있다. 사용가능한 비히클 또는 용매로서, 물, 링거액, 등장성 염수 등이 허용되며; 통상의 용매 또는 현탁 용매로서, 멸균 비휘발성 오일이 사용될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 천연 또는 합성 또는 반합성 지방 오일 또는 지방산; 천연 또는 합성 또는 반합성 모노- 또는 다이- 또는 트라이-글리세라이드를 포함하는 임의의 종류의 비휘발성 오일 및 지방산이 사용될 수 있다. 비경구적 투여는 당업계에 공지되어 있으며, 미국 특허 제5,851,198호에 기재된 기체 가압 무-바늘 주사 장치, 및 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,839,446호에 기재된 레이저 천공 장치와 같은 통상적인 주사 수단을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
대안적 전달
본 발명은 또한 비경구, 피하, 근내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 관절낭내, 연골내, 강내, 체강내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경부내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장주위내, 복막내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 병변내, 볼루스, 질내, 직장, 협측, 설하, 비강내, 또는 경피 수단에 의한 항-IL12/23p40 항체의 투여에 관한 것이다. 항-IL12/23p40 항체 조성물은, 특히 액체 용액 또는 현탁액 형태로 비경구(피하, 근육내, 또는 정맥내) 또는 임의의 다른 투여에 사용하기 위해; 특히 크림 및 좌약과 같으나 이에 한정되지 않는 반고체 형태로 질 또는 직장 투여에 사용하기 위해; 정제 또는 캡슐의 형태와 같으나 이에 한정되지 않는 구강 또는 설하; 또는, 분말, 점비제(nasal drop), 또는 에어로졸 또는 소정 작용제의 형태와 같으나 이에 한정되지 않는 비강내; 또는 피부 구조를 변형시키거나 경피 패치 내의 약물 농도를 증가시키기 위한 다이메틸 설폭사이드와 같은 화학적 인핸서를 갖거나(전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Junginger, et al. In "Drug Permeation Enhancement;"Hsieh, D. S., Eds., pp. 59-90 Marcel Dekker, Inc. New York 1994]), 단백질 및 펩티드를 함유하는 제형의 피부 상의 적용을 가능하게 하는 산화제(WO 98/53847), 또는 전기천공과 같이 일시적 수송 경로를 생성하거나 이온영동법과 같이 피부를 통해 하전된 약물의 이동성을 증가시키기 위한 전기장의 적용, 또는 음파영동과 같은 초음파의 적용(미국 특허 제4,309,989호 및 제4,767,402호)을 갖는, 겔, 연고, 로션, 현탁액, 또는 패치 전달 시스템과 같지만 이로 한정되지 않는 경피 투여를 위해 제조될 수 있다(상기 간행물 및 특허는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨).
실시 형태
본 발명은 또한 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
1. 크론병의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 크론병을 치료하는 방법으로서,
크론병에 대한 기준선 단순 내시경 점수(SES-CD) 및 기준선 CDAI를 측정하기 위해 치료 전에 상기 대상체에 대해 내시경검사를 수행하는 단계;
임상적으로 입증된 안전하고 임상적으로 입증된 효과적인 양의 항-IL-12/IL-23p40 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 - 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 중쇄 가변 영역은 서열 번호 1의 상보성 결정 영역 중쇄 1(CDRH1) 아미노산 서열; 서열 번호 2의 CDRH2 아미노산 서열; 및 서열 번호 3의 CDRH3 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 서열 번호 4의 상보성 결정 영역 경쇄 1(CDRL1) 아미노산 서열; 서열 번호 5의 CDRL2 아미노산 서열; 및 서열 번호 6의 CDRL3 아미노산 서열을 포함함 - 상기 대상체의 ㎏ 중량당 6 mg의 항체의 초기 중량 기반 IV 용량 및 상기 초기 용량의 투여 후 8주차의 90 mg의 항체의 피하 용량으로 투여하는 단계;
상기 초기 용량의 투여 후 16주차에 상기 대상체의 (i) C-반응성 단백질(CRP) 및/또는 대변 칼프로텍틴(FCal) 수준으로부터 선택된 크론병-관련 바이오마커, 및 (ii) CDAI 및 SES-CD로부터 선택된 임상 증상을 측정하는 단계; 및
(iii) 220 미만의 CDAI, 기준선 CDAI로부터의 70점 미만 개선, 10 mg/L 이하의 CRP 및/또는 250 ug/g 이하의 FCal을 갖는 것으로 측정된 대상체에게 상기 초기 용량의 투여 후 16주차에 피하 용량에 의해 그리고 16주차의 상기 피하 용량 후 4주마다 90 mg의 항체를 투여하거나, (iv) 기준선 SES-CD 점수 대비 SES-CD 점수의 25% 미만의 개선을 갖는 것으로 측정된 대상체에게 상기 초기 용량의 투여 후 16주차에 피하 용량에 의해 그리고 16주차의 상기 피하 용량 후 8주마다 90 mg의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
2. 실시 형태 1에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 7의 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
3. 실시 형태 1에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 10의 아미노산 서열의 중쇄 및 서열 번호 11의 아미노산 서열의 경쇄를 포함하는, 방법.
4. 실시 형태 1 내지 실시 형태 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는, 바람직하게는 상기 치료의 주수 0에서, 상기 대상체의 체중 1 ㎏당 약 6.0 mg 또는 투여당 130 mg의 투여량으로 상기 대상체에게 정맥내 투여되는, 방법.
5. 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는, 바람직하게는 상기 치료의 주수 8 및 16에 및 바람직하게는 측정된 임상 파라미터에 의해 결정되는 바와 같이 그 후 4주 또는 8주마다, 투여당 약 90 mg의 투여량으로 상기 대상체에게 추가로 피하 투여되는, 방법.
6. 실시 형태 1 내지 실시 형태 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 항-TNF, 베돌리주맙, 코르티코스테로이드, 아자티오프린(AZA), 및 6 메르캅토푸린(6 MP)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 요법에 대해 이전에 실패하였거나 이에 대해 불내약성이었거나, 상기 대상체는 코르티코스테로이드 의존성을 보여주었던, 방법.
7. 실시 형태 1 내지 실시 형태 6 중 어느 하나에 있어서, 정맥내 투여를 위한 상기 약제학적 조성물은 10 mM L-히스티딘, 8.5% (w/v) 수크로스, 0.04% (w/v) 폴리소르베이트 80, 0.4 mg/mL L-메티오닌, 및 20 ㎍/mL EDTA 이나트륨 염(디하이드레이트)을 포함하는 용액(pH 6)을 추가로 포함하는, 방법.
8. 실시 형태 1 내지 실시 형태 6 중 어느 하나에 있어서, 피하 투여를 위한 상기 약제학적 조성물은 6.7 mM L-히스티딘, 7.6% (w/v) 수크로스, 0.004% (w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하는 용액(pH 6.0)을 추가로 포함하는, 방법.
본 발명을 일반적으로 설명하였지만, 본 발명은 예시를 위해 제공되고 본 발명을 제한하는 것으로서 간주되지 않는 하기 실시예를 참고하여 보다 쉽게 이해될 것이다. 본 발명의 추가의 세부사항이 하기 비제한적인 실시예에 의해 예시된다. 본 명세서의 모든 인용문의 개시 내용은 본 명세서에 참고로 명백히 포함된다.
실시예
실시예: 목표지향치료 전략(T2T)을 표준 치료(SoC)와 비교하기 위한 크론병 환자의 치료를 위한 우스테키누맙의 3b상 연구 (SoC)
방법 요약
통상적 요법 및/또는 하나의 생물학적제제에 실패한 중등도 내지 중증의 활동성 크론병(CD)(220 내지 450의 CD 활동성 지수[CDAI] 및 3 이상의 CD의 단순 내시경 점수[SES-CD])이 있는 성인 환자들을 포함시켰다. 환자들은 주수 0(기준선[BL])에 약 6 mg/㎏의 IV, 중량-기준 우스테키누맙(UST)을 투여받고; 주수 8에 피하(SC) UST 90 mg을 투여받았다. 주수 16에, 환자에서 내시경검사를 수행한 후, CDAI 70 반응자를 T2T 또는 SoC 치료 아암에 무작위배정하였다(1:1). T2T 아암의 환자들을 BL 대비 SES-CD 점수의 25% 개선에 기초하여 SC UST q12w 또는 q8w에 할당하였다. 주수 16 내지 48로부터, 하기 목표가 충족되지 않는 경우 UST 용량을 q4w까지 추가로 조정하였다: 220 미만의 CDAI 및 BL로부터의 70점 이상의 개선, 및 10 mg/L 이하의 C-반응성 단백질(CRP) 또는 250 ㎍/g 이하의 대변 칼프로텍틴(FCal). UST q4w에도 불구하고 치료 목표에 실패한 환자들은 중단하였다. SoC 아암에서, EU SmPC에 기초하여 연구자에 의해 UST 용량을 할당하였다(q12w 또는 q8w). 1차 종점: 주수 48에서의 내시경적 반응(중심부에서 판독된 내시경검사에서 BL 대비 SES-CD 점수의 50% 이상 감소). 비-반응자 대체(NRI) 및 마지막 측정값 이월(LOCF)을 각각 누락된 이분 및 연속 변수에 대해 사용하였다. LOCF 분석은 또한 1차 종점에 대한 사전 계획된 민감도 분석이었다. 보고된 모든 p-값은 공칭이다.
결과 요약
총 500명의 환자가 등록하였다. 주수 16에, 441명은 CDAI 70 반응을 달성하였으며, 이들을 T2T(n=220) 또는 SoC(n=221)에 무작위배정하였고; T2T 및 SoC에서 각각 75% 및 86%가 48주를 완료하였다. SoC 대비 T2T 아암에서 수치적으로 더 높은 비율의 환자가 주수 48에 1차 종점을 달성하였다: 29.9% 대비 37.7%(p=0.0933). 사전 지정된 민감도 분석(LOCF)에서, 유의한 차이가 아암들 사이에서 나타났고: 40.0%(T2T) 대 30.8%(SoC)(p=0.0494 [LOCF]); 주수 48에, T2T 및 SoC 아암 둘 모두에서 높은 비율의 임상 반응이 달성되었다: 68.2% 대 77.8%(p=0.0212)(NRI)/89.5% 대 89.6% (LOCF; NS); 임상 관해 61.4% 대 69.7%(NRI)/76.8% 대 78.3%(LOCF; NS); FCal의 50% 이상의 개선 39.4% 대 46.5%(NRI)/63.1% 대 60.6%(LOCF; NS) 및 CRP 수준 41.7% 대 53.3% p=0.032(NRI)/53.2% 대 57.2%(LOCF, NS). 다른 종점에 대한 표를 참조한다. T2T 및 SoC 아암에서, 환자의 59.2%(122/206) 및 53.2%(116/218)는 UST q12w로 시작하였고; 환자의 59.8%(73/122) 및 63.8%(74/116)는 주수 48에 여전히 q12w를 유지하였다. q8w로 시작한 환자 중 40.5%(34/84) 및 78.4%(80/102)는 각각 T2T 및 SoC 아암에서 주수 48에 이 요법을 유지하였다. 주수 48에 환자의 17%(35/206)는 T2T 아암에서 q4w 투여를 받았다. 새로운 안전성 신호는 보고되지 않았다.
장기 연장(LTE; 주수 48 내지 주수 104) 기간은 임상 증상, 내시경검사 및 바이오마커-기반 용량 조정(감량(de-escalation)을 포함함) 알고리즘을 탐색하도록 설계되었다. 주수 48부터, 환자는 최대 주수 104까지 LTE 기간에 피하 우스테키누맙을 계속 투여받았다. q12w/q8w/q4w 사이의 증량(escalation)/감량을 갖는 우스테키누맙 투여의 빈도는 하기 목표에 기초하고: 주수 48에서의 내시경적 관해(2 이하의 CD에 대한 단순 내시경 점수[SES-CD]) 및 코르티코스테로이드(CS) 무사용 임상 관해(16주 이상의 기간의 [150점 미만의 CDAI 점수]); 이후에, 8주 간격의 2회 연속 방문에서 CS-무사용 임상 관해 및 바이오마커 관해(10 mg/L 이하의 C-반응성 단백질 및 250 ㎍/g 이하의 대변 칼프로텍틴)에 기초하였다. 목표에 도달하지 못한 q4w 투여를 받는 환자들은 중단하였다. 제시된 결과는 비-반응자 대체(NRI) 분석이며, LTE에 진입한 환자(수정된 RAS[mRAS])에 대해서만 나타나 있다.
주수 16에 T2T 또는 SoC에 무작위배정된 440명의 환자 중에서, 74명은 주수 48 전에 탈락했다. 주수 48을 완료한 나머지 366명의 환자 중에서, 43명이 중단하였으며 LTE에 진입하지 않았고; 이들 중 q4w 투여를 받는 15명의 환자는 목표가 충족되지 않아 중단하였다. 주수 48에, 323명의 환자가 LTE(mRAS)에 진입하였다: 환자의 7.7%는 q4w 투여를, 48.6%는 q8w를, 그리고 43.6%는 q12w 투여를 유지하였다. 이러한 비율은 주수 104에/8명의 미치료 환자를 제외시킨 후의 조기 탈락 시 각각 14.3%, 39.4%, 및 46.3%였다. 주수 104를 완료하기 전에 환자의 총 20.1%가 중단하였다. 전반적으로, 환자의 38.4%의 경우, 용량은 LTE 동안 적어도 1회 증량/감량되었으며, 유사한 비율의 환자가 용량 증량(22.9%) 또는 감량(19.2%)을 적용받았다. 임상 반응 및 관해는 주수 48에 LTE에 진입한 환자의 높은 비율에서 관찰되었고(각각 92.6% 및 83.9%), 주수 104에 높게 유지되었다(각각 70.9% 및 68.4%). LTE 과정에 걸쳐, 내시경적 반응 및 관해에서 환자의 비율은 LTE로의 진입 시 43.7% 및 17.0%이며, 주수 104에 각각 39.3% 및 14.6%였다(표 4). LTE 동안 새로운 안전성 신호는 관찰되지 않았다.
결론 요약
STARDUST는 CD 환자에서 용량 증량을 안내하기 위해 주수 16에 내시경검사를 사용하기 위한 첫 번째의 무작위배정된 T2T 시험이다. UST를 사용한 유지 요법 48주 후, 더 높은 비율의 환자가 SoC 아암과 비교하여 T2T 아암에서 내시경적 반응에 도달하였다. T2T는 의사가 UST를 사용한 투여 요법 결정을 안내하는 추가적인 도구일 수 있다. 전반적으로, UST를 사용한 높은 임상 관해 및 바이오마커 반응은 주수 48에 UST를 사용하는 두 아암 모두에서 달성되었다. 유사한 비율의 환자들(약 20%)이 설정된 목표에 따라 LTE 동안 용량 증량/감량을 거쳤지만; 대다수의 환자는 라벨(label) 우스테키누맙 투여에서 주수 104를 완료하였다. LTE에 진입하고 주수 104에서 대다수의 환자는 임상 반응 및 관해 상태에 있었다. 유연한 우스테키누맙 투여는 LTE 동안 임상 및 내시경적 반응 및 관해 상태에 있는 환자의 비율의 보존을 가능하게 하였다. 우스테키누맙은 주수 104에 유리한 위험-이익 비를 가졌다.
목적
Figure pct00001
초기 내시경검사에 이은;
Figure pct00002
다음을 사용한 바이오마커(fCal, CRP) 및 임상 증상(CDAI)의 규칙적 평가;
Figure pct00003
목표를 달성하기 위한 치료의 후속 조정
에 기초한 UST를 사용한 유지 전략이 UST를 사용한 48주 요법 후 분석을 이용한 실용적인 유지 전략보다 내시경적 개선을 얻는 데 더 성공적이라는 가설을 시험하기 위한 것이다.
도 2는 CDAI, CRP 및 FCal 측정에 기초한 연구 설계 및 용량 조정 기준을 도시한다. 활동성 질환의 존재 하에 BL에서 상승된 CRP를 갖지 않는(즉, 주수 0에 CRP가 2.87 mg/L 이하인) 환자의 경우, CRP는 용량 조정을 위한 바이오마커 목표로 간주되지 않으므로, 이러한 환자에 대한 치료 목표는 다음의 달성일 것이다:
220 미만의 CDAI와 BL(주수 0)로부터의 CDAI 점수의 70점 이상의 개선 및 250 ㎍/g 이하의 FCal.
다음이 시험에 포함되었다:
Figure pct00004
통상적인 요법 및/또는 하나의 생물학적제제에 실패한 중등도 내지 중증의 활동성 크론병(220 내지 450의 CDAI 및 3 이상의 SES-CD)을 갖는 환자(18세 이상의 연령)가 시험에 등록되는 데 적격이었음
Figure pct00005
적격인 환자는 단일 용량의 IV, 중량-단계화(weight-tiered), UST 약 6 mg/㎏에 이어 주수 8에 SC UST 90 mg을 투여받았음
Figure pct00006
주수 16에, CDAI 70 반응자를 T2T 또는 SoC 치료 아암으로 무작위배정하였음(1:1 비)
Figure pct00007
주요 종점(NRI 및 LOCF 대체)은 주수 8, 16 및 48에 분석되었음
- 1차 종점
Figure pct00008
내시경적 반응 (50% 이상의 SES-CD 점수의 기준선으로부터의 감소)
- 주요 2차 종점
Figure pct00009
전반적인 내시경적 관해(2 이하의 SES-CD 점수)
Figure pct00010
점막 치유(임의의 회결장 분절에서의 점막 궤양의 완전 부재)
Figure pct00011
CDAI 70 반응 (기준선 대비 70점 이상의 CDAI 총 점수의 개선)
Figure pct00012
임상 반응(기준선 CDAI 총 점수로부터의 100점 이상 감소, 또는 150 미만의 CDAI 총 점수)
Figure pct00013
임상 관해(150점 미만의 CDAI 총 점수)
Figure pct00014
바이오마커(fCal 및 CRP)의 기준선으로부터의 변화
통계 분석은 다음과 같이 수행하였다:
Figure pct00015
FAS는 UST의 적어도 1회 용량을 투여받은 모든 등록된 환자를 포함하였음
Figure pct00016
RAS는 주수 16에 무작위배정된 모든 환자(CDAI 70 반응자)를 포함하였음
Figure pct00017
비-반응자 대체(NRI) 및 마지막 측정값 이월(LOCF)을 각각 누락된 이분 및 연속 변수에 대해 사용하였음. LOCF 분석은 또한 1차 종점에 대한 사전 계획된 민감도 분석이었다.
Figure pct00018
이분 종점의 경우, CMH 카이-제곱(chi-square) 검정이 치료 그룹 간 시험에 사용됨. p-값(공칭)은 기준선 SES-CD 점수(≤16,>16) 및 생물학적 제제로의 사전 노출(없음 또는 1)에 의해 계층화된 CMH 검정(0.05의 양측 α 수준)에 기초함
Figure pct00019
연속 종점은 분산 분석(ANOVA) 또는 공분산분석(ANCOVA)을 사용하여 기준선 값 및 공변량으로서의 계층화 인자와 비교될 것임. 정규성 가정이 문제가 되는 경우, 반 데르 웨어덴(van der Waerden) 정규 점수에 대한 ANOVA 또는 ANCOVA가 사용될 것임
Figure pct00020
타임투이벤트(time to event) 종점은 달리 명시되지 않는 한 계층화 인자로서 생물학적제제로의 사전 노출 및 기준선 SES-CD 점수(≤16 또는 >16)를 갖는 계층화된 로그-순위 검정을 이용하여 치료 그룹 사이에서 비교될 것임
T2T 아암에서의 용량 분포의 경우, 59%는 주수 16에 q12w에 있었고, 41%는 주수 16에 q8w에 있었다(n=206). T2T에서 주수 48에, 36%는 q12w에 있었고, 27%는 q8w에 있었고, 17%는 q4w에 있었다(20%가 중단함). q12w로 시작한 환자들 중 59.8%(73/122)는 주수 48에 여전히 q12w에 있었다. q8w로 시작한 환자들 중 40.5%(34/84)는 주수 48에 q8w를 유지하였다.
SoC 아암에서의 용량 분포의 경우, 53%는 주수 16에 q12w에 있었고, 47%는 주수 16에 q8w에 있었다(n=218). SoC에서 주수 48에, 35%는 q12w에 있었고, 52%는 q8w에 있었다(13%가 중단함). q12w로 시작한 환자들 중 63.8%(74/116)는 주수 48에 여전히 q12w에 있었다. q8w로 시작한 환자들 중 78.4%(80/102)는 주수 48에 이 요법을 유지하였다.
도 5a, 도 5b, 도 6a, 도 6b 및 도 7은 서로 다른 변수로 측정된 내시경적 반응을 도시한다. 1차 종점은 48주차의 내시경적 반응(50% 이상의 SES-CD 개선)이다. 이는 SoC 그룹 대비 T2T 그룹에서 수치적으로 더 높았다(NRI 대체) 29.9% 대비 37.7% p = 0.09. 효능없음(inefficacy)으로 연구를 중단한 환자만을 포함하는 LOCF 또는 NRI: 유의성은 SoC 그룹 대비 T2T 그룹에 유리함 LOCF의 경우 30.8% 대비 40.0% p<0.05, NRI의 경우 32.3% 대비 43.0% p=0.036(효능없음 단독의 D/C를 포함함). 2차 종점(LOCF)은 BL 대비 w48에서의 평균 SES-CD 변화, SES-CD의 25% 이상 개선을 갖는 % 포인트, T2T 및 SoC 그룹에서 유사한 내시경적 관해 및 점막 치유이다. BL 대비 SES-CD의 의미있는 변화는 T2T의 경우 주수 16에 도달하여, 주수 48까지 진행하였다.
도 8 및 도 9는 임상 종점을 도시한다. 주수 48에 2차 종점은 기준선 대비 평균 CDAI 변화이며, T2T 및 SoC에서 유사하였고; BL 대비 의미있는 변화는 주수 8에 도달하여, 주수 48까지 진행하였다. 두 연구 아암에서 유사한 임상 반응(100 이상의 변화 또는 150 미만의 CDAI 점수), 임상 관해(150 미만의 CDAI 점수) 및 CDAI 70 반응.
도 10a 및 도 10b는 RAS NRI 및 RAS LOCF에 대한 주수 48에서의 바이오마커 결과를 도시한다. 2차 종점은 다음과 같다: fCal 및 CRP의 기준선 대비 평균 변화가 모든 시점에서 T2T 및 SoC에서 유사하였다. BL 대비 의미있는 변화는 주수 8에 도달하여, 주수 48까지 진행하였다. 48주차에서의 fCal 및 CRP의 50% 이상 개선 달성 및 fCal 및 CRP 수준의 정규화 및 완전한 바이오마커 반응은 두 연구 아암에서 유사하였다.
[표 1]
Figure pct00021
[표 2]
Figure pct00022
[표 3]
Figure pct00023
[표 4]
Figure pct00024
서열 목록
<400> 1
Thr Tyr Trp Leu Gly
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 중쇄 2
<400> 2
Figure pct00025
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 중쇄 3
<400> 3
Figure pct00026
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 경쇄 1
<400> 4
Figure pct00027
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 경쇄 2
<400> 5
Figure pct00028
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 상보성 결정 영역 경쇄 3
<400> 6
Figure pct00029
<210> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 가변 중쇄 영역
<400> 7
Figure pct00030
Figure pct00031
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 가변 경쇄 영역
<400> 8
Figure pct00032
Figure pct00033
<210> 9
<211> 503
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 알파 및 베타 하위단위를 갖는 인간 IL-12
<400> 9
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
<210> 10
<211> 449
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 중쇄
<400> 10
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
<210> 11
<211> 214
<212> PRT
<213> 인공 서열
<220>
<223> 항-IL-12/IL-23p40 항체 경쇄
<400> 11
Figure pct00040
Figure pct00041
SEQUENCE LISTING <110> JANSSEN BIOTECH, INC. LAVIE, FREDERIC LE BARS, MANUELA PLOTNICK, MICHAEL SLOAN, SHELDON <120> Method for Treating Crohn's Disease with Anti-IL12/IL23 Antibody <130> JBI6409WOPCT1 <140> To Be Assigned <141> 2021-10-07 <150> 63/089786 <151> 2020-10-09 <150> 63/235188 <151> 2021-08-20 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL-12/Il-23p40 antibody complementarity determining region heavy chain 2 <400> 1 Thr Tyr Trp Leu Gly 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Seaquence <220> <223> Anti-IL-12/IL-23p40 antibody complementarity determining region heavy chain 2 <400> 2 Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Anti-IL-12/IL-23p40 antibody complementarity determining region light chain 1 <400> 3 Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL-12/IL23p40 antibody complementarity determining region light chain 1 <400> 4 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL-12/IL-23p40 antibody complementarity determining region light chain 2 <400> 5 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL-12/IL-23p40 Antibody Complementarity Determining Region light chain 3 <400> 6 Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-IL12-IL23p40 antibody variable heavy chain region <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Asn Ser 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Claims (14)

  1. 크론병의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 크론병을 치료하는 방법으로서,
    크론병에 대한 기준선 단순 내시경 점수(SES-CD) 및 기준선 CDAI를 측정하기 위해 치료 전에 상기 대상체에 대해 내시경검사를 수행하는 단계;
    임상적으로 입증된 안전하고 임상적으로 입증된 효과적인 양의 항-IL-12/IL-23p40 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 - 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 중쇄 가변 영역은 서열 번호 1의 상보성 결정 영역 중쇄 1(CDRH1) 아미노산 서열; 서열 번호 2의 CDRH2 아미노산 서열; 및 서열 번호 3의 CDRH3 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 서열 번호 4의 상보성 결정 영역 경쇄 1(CDRL1) 아미노산 서열; 서열 번호 5의 CDRL2 아미노산 서열; 및 서열 번호 6의 CDRL3 아미노산 서열을 포함함 - 상기 대상체의 ㎏ 중량당 6 mg의 항체의 초기 중량 기반 IV 용량 및 상기 초기 용량의 투여 후 8주차의 90 mg의 항체의 피하 용량으로 투여하는 단계;
    상기 초기 용량의 투여 후 16주차에 상기 대상체의 (i) C-반응성 단백질(CRP) 및/또는 대변 칼프로텍틴(FCal) 수준으로부터 선택된 크론병-관련 바이오마커, 및/또는 (ii) CDAI 및 SES-CD로부터 선택된 임상 증상을 측정하는 단계;
    (iii) 220 미만의 CDAI, 기준선 CDAI로부터의 70점 미만 개선, 10 mg/L 이하의 CRP 및/또는 250 ug/g 이하의 FCal을 갖는 것으로 측정된 대상체에게 상기 초기 용량의 투여 후 16주차에 피하 용량에 의해 그리고 16주차의 상기 피하 용량 후 4주마다 90 mg의 항체를 투여하거나, (iv) 기준선 SES-CD 점수 대비 SES-CD 점수의 25% 미만의 개선을 갖는 것으로 측정된 대상체에게 상기 초기 용량의 투여 후 16주차에 피하 용량에 의해 그리고 16주차의 상기 피하 용량 후 8주마다 90 mg의 항체를 투여하는 단계; 및
    상기 초기 용량의 투여 후 48주차 및/또는 104주차에 상기 대상체의 (i) C-반응성 단백질(CRP) 및/또는 대변 칼프로텍틴(FCal) 수준으로부터 선택된 크론병-관련 바이오마커, 및/또는 (ii) CDAI 및 SES-CD로부터 선택된 임상 증상을 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 초기 용량의 초기 투여 후 16주차의 상기 측정은 내시경검사로 수행되는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 초기 투여 후 16주차의 상기 측정은 장 초음파에 의해 수행되는, 방법.
  4. 제1항에 있어서, 치료된 상기 대상체는 상기 초기 용량 후 48주차 및/또는 상기 초기 용량 후 104주차에 기준선 SES-CD로부터 SES-CD의 적어도 50% 감소의 내시경적 개선을 달성하는, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 치료된 상기 대상체는 전반적인 내시경적 관해(2 이하의 SES-CD 점수), 점막 치유, 기준선 CDAI로부터 70 이상의 CDAI 개선, 기준선 CDAI 점수로부터 100 이상의 감소를 갖는 임상 반응, 150 미만의 CDAI 총 점수, 및/또는 fCal 및 CRP의 기준선으로부터의 변화를 달성하는, 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 7의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열 번호 8의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 10의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 11의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 대상체는 220 내지 450의 CDAI 또는 3 이상의 단순 내시경 점수 SES-CD에 의해 측정된 바와 같은 중등도 내지 중증의 활동성 크론병을 갖는, 방법.
  9. 제1항에 있어서, 초기 투여 후 48주차의 상기 측정은 내시경검사에 의해 수행되는, 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 대상체는 초기 투여 후 48주차에 임상 관해 상태에 있는, 방법.
  11. 제9항에 있어서, 상기 대상체는 초기 투여 후 104주차에 임상 관해 상태에 있는, 방법.
  12. 제1항에 있어서, 상기 대상체는 항-TNF, 베돌리주맙, 코르티코스테로이드, 아자티오프린(AZA), 및 6 메르캅토푸린(6 MP)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 요법에 대해 이전에 실패하였거나 이에 대해 불내약성이었거나, 상기 대상체는 코르티코스테로이드 의존성을 보여주었던, 방법.
  13. 제1항에 있어서, 정맥내 투여를 위한 상기 약제학적 조성물은 10 mM L-히스티딘, 8.5% (w/v) 수크로스, 0.04% (w/v) 폴리소르베이트 80, 0.4 mg/mL L-메티오닌, 및 20 ㎍/mL EDTA 이나트륨 염(디하이드레이트(dehydrate))을 포함하는 용액(pH 6)을 추가로 포함하는, 방법.
  14. 제1항에 있어서, 피하 투여를 위한 상기 약제학적 조성물은 6.7 mM L-히스티딘, 7.6% (w/v) 수크로스, 0.004% (w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하는 용액(pH 6.0)을 추가로 포함하는, 방법.
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