CN116348491A - 用抗il12/il23抗体治疗克罗恩病的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及对患者提供临床证实安全并且临床证实有效的治疗克罗恩病(特别是中度至重度活动性克罗恩病)的方法和组合物。该方法包括静脉内施用初始剂量的抗IL12/IL23p40抗体和皮下施用维持剂量的抗IL12/IL23p40抗体，其中维持剂量间隔通过评估临床指标确定。

Description

用抗IL12/IL23抗体治疗克罗恩病的方法
技术领域
本发明涉及通过静脉内和/或皮下施用抗IL12/23抗体对患者(测量其在16周的临床应答，并且治疗方案经评价和任选地调整)提供临床证实安全并且临床证实有效的治疗克罗恩病(特别是中度至重度活动性克罗恩病)的方法。
以电子方式提交的参考序列表
本申请含有序列表，该序列表以电子方式经由EFS-Web作为ASCII格式化序列表提交，文件名为″JBI6409WOPCT1SEQLIST.txt″，创建日期为2021年10月1日，并且大小为15KB。经由EFS-Web提交的该序列表是本说明书的一部分并且全文以引用方式并入本文。
背景技术
炎性肠病(IBD)，包括克罗恩病(CD)，为以胃肠(GI)道中破坏性炎症和上皮损伤为特征的慢性复发性疾病(Baumgart和Sandbom，J Clin Invest.，98：1010-1020(1996)；Danese和Fiocchi，N Engl J Med.，365：1715-1725(2011))。
IL12/23途径参与IBD发病机制已被充分确定，并且IL12/IL-23途径在肠炎中的重要作用在结肠炎中已被阐明(Ahern等人，Immunity.，33(2)：279-288(2010)；Uhlig等人，Immunity.，第25卷，第309-318页，2006年；Yen等人，J Clin Invest.，116(5)：1310-1316(2006))。早期研究显示，用抗IFNγ(Berg等人，J Clin Invest.，98：1010-1020(1996)；Davidson等人，J Immunol.，第161卷，第3143-3149页，1998年)或抗IL-12p40单克隆抗体(mAb)进行治疗预防了实验性结肠炎模型中的疾病，这表明1型T辅助(Th-1)细胞在促进肠炎中起着重要作用(Neurath等人，J Exp Med.，182(5)：1281-1290(1995))。
目前，有三类生物药剂批准用于治疗中度到重度活动性克罗恩病：肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂疗法(英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、赛妥珠单抗(certolizumab))、整合素抑制剂(那他珠单抗(natalizumab)和维多珠单抗(vedolizumab))以及IL12/23抑制剂(优特克单抗(ustekinumab))。在临床研究CRD3001和CRD3002中评估了静脉内注射(IV)优特克单抗作为克罗恩氏病诱导疗法的有效性和安全性。在研究CRD3001中，评估了对一种或多种TNF拮抗剂表现出先前治疗失败或耐受不良的受试者，并且在CRD3002中，评估了对皮质类固醇或免疫调节剂应答不足或耐受不良病史但没有对TNF拮抗剂应答不足或耐受不良病史的受试者。在这些研究中，评估了两种IV剂量：低剂量组选择130mg IV固定剂量(基于mg/kg计～2mg/kg)，而选择逼近～6mg/kg IV的基于体重范围的剂量(体重≤55kg：优特克单抗260mg；体重＞55且≤85kg：优特克单抗390mg；体重＞85kg：优特克单抗520mg)作为高剂量组。在这两项研究中，与安慰剂相比，优特克单抗表现出临床上显著的有效性，并且耐受性良好，具有良好的安全性特征。
尽管生物药剂的引入已经显著改善了患有中度到重度活动性克罗恩病的患者的临床管理，但是相当大比例的目标患者群体是无应答的或将随着时间的推移而失去应答。对经过批准的生物药剂的可用数据的回顾强调了在实现和维持长期缓解方面未满足的需求，尤其是在先前生物治疗已失败的患者中。在所有接受治疗的患者(即，在所评估的研究的第0周随机分配的所有患者)中，在生物学失败或不耐受(BIO-失败)Z群体中，1年的临床缓解率估计为约20％，并且在常规疗法失败或不耐受(CON-失败)群体中，临床缓解率范围估计为20％至50％。
本领域需要改进治疗克罗恩病的方法，以便对更高比例的患者、特别是中度至重度活动性克罗恩病实现更好的有效性。
发明内容
本发明涉及提供临床证实安全并且临床证实有效的治疗中度至重度活动性克罗恩病的方法和组合物。该方法包括向受试者静脉内施用初始剂量的抗IL12/IL23p40抗体(抗IL12/IL23抗体)、在施用初始剂量后八(8)周皮下施用抗IL12/IL23p40抗体(抗IL12/IL23抗体)，在施用初始剂量后16周测量临床应答(有效性)的指标，基于对临床终点、生物标志物和/或临床应答的评估，在施用初始剂量后16周和其后每4周、其后每8周或其后每12周皮下施用该抗体。
在一个一般方面，本申请涉及向对其有需要的受试者提供临床证实安全并且临床证实有效的治疗中度至重度活动性克罗恩病的方法。该方法包括向受试者施用包含安全并且有效量的抗IL12/23p40抗体的药物组合物，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1的互补决定区重链1(CDRH1)氨基酸序列、SEQ ID NO：2的CDRH2氨基酸序列以及SEQ ID NO：3的CDRH3氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含SEQID NO：4的互补决定区轻链1(CDRL1)氨基酸序列、SEQ ID NO：5的CDRL2氨基酸序列以及SEQID NO：6的CDRL3氨基酸序列。
在某些实施方案中，本申请的方法包括向受试者静脉内(IV)和/或皮下(SC)施用包含抗IL12/23p40抗体或抗原结合片段的药物组合物，该抗体或抗原结合片段包含：(i)SEQ ID NO：7的重链可变结构域氨基酸序列；以及(ii)SEQ ID NO：8的轻链可变结构域氨基酸序列。
在某些实施方案中，本申请的方法包括向受试者静脉内(IV)和/或皮下(SC)施用包含抗IL12/23p40抗体优特克单抗的药物组合物，该抗体优特克单抗包含：(i)SEQ ID NO：10的重链氨基酸序列；以及SEQ ID NO：11的轻链氨基酸序列。
在某些实施方案中，第0周的IV剂量为约6.0mg/kg。例如，对于体重≥35kg且≤55kg的受试者，IV剂量为260mg；对于体重≥55kg且≤85kg的受试者，IV剂量为390mg；并且对于体重≥85kg的受试者，IV剂量为520mg。
在某些实施方案中，通过根据本申请的实施方案的方法治疗的受试者对常规疗法或现有疗法的应答不足或耐受不良。在一些实施方案中，受试者先前对生物制剂疗法治疗失败或耐受不良，所述生物制剂疗法诸如抗TNF和/或维多珠单抗。在一些实施方案中，受试者先前对非生物制剂疗法治疗失败或耐受不良，所述非生物制剂疗法诸如用皮质类固醇、硫唑嘌呤(AZA)和/或6巯嘌呤(6MP)治疗。在一些实施方案中，受试者已表现出皮质类固醇依赖性。
在其它实施方案中，本发明提供了治疗受试者的中度至重度活动性克罗恩病的临床证实安全并且临床证实有效的方法，其中该受试者为用该抗体治疗的应答者并且被识别为在疾病活动性方面具有统计意义上的显著改善，如通过选自以下的临床指标和临床终点所确定的：
(i)内窥镜应答(SES-CD评分相对于基线下降≥50％)
(ii)总体内窥镜缓解(SES-CD评分≤2)
(iii)粘膜愈合(在任何回肠结肠段中完全不存在粘膜溃疡)
(iv)CDAI 70应答(CDAI总分相对于基线的改善≥70分)
(v)临床应答(相对于基线CDAI总评分降低≥100分，或CDAI总评分＜150)
(vi)临床缓解(CDAI总分＜150分)
(vii)生物标志物(fCal和CRP)相对于基线的变化
(viii)克罗恩病活动性指数(CDAI)评分相对于基线的变化。CDAI评分将通过收集关于8个不同克罗恩病相关变量的信息来评估，分数范围为0至约600。随时间的减少指示疾病活动的改善。
(iv)在第16周时或48周时的患者报告结局(PRO)-2缓解，该缓解基于平均每日排便频率(SF)和平均每日腹痛(AP)评分来定义。
(x)临床-生物标志物应答，该临床-生物标志物应答使用基于该CDAI评分的临床应答以及C反应性蛋白(CRP)或粪便钙卫蛋白相对于基线的降低来定义。
(xi)内窥镜应答，该内窥镜应答通过克罗恩病的简单内窥镜评分(SES-CD)来测量。SES-CD以评价5个回肠结肠区段的4个内窥镜组分为基础，其中总评分范围为0至56。
(xii)在第48周时的无皮质类固醇的临床缓解，该无皮质类固醇的临床缓解被定义为在第48周时的CDAI评分＜150，以及在第48周时未接受皮质类固醇。
(xiii)在第48周时的PRO-2缓解，该缓解基于平均每日排便频率(SF)和平均每日腹痛(AP)评分来定义。在第12周时的疲劳应答，该疲劳应答基于患者报告结局测量信息系统(PROMIS)。疲劳简表7a含有7个评价疲劳严重程度的项目，其中较高的评分指示较大的疲劳。
在其它实施方案中，抗IL12/23p40抗体的维持剂量在第16周治疗后每4周或第16周治疗后每8周或在第16周治疗后每12周施用一次，并且由受试者维持临床应答至少48周。
在某些实施方案中，本申请提供了治疗受试者的罗恩病的方法，其中与IV施用一起使用的抗IL12/23p40抗体在药物组合物中，该药物组合物包含在pH 6.0下含有10mM的L-组氨酸、8.5％(w/v)的蔗糖、0.04％(w/v)的聚山梨酸酯80、0.4mg/mL的L-甲硫氨酸和20μg/mL的EDTA二钠盐脱水物的溶液。
在某些实施方案中，本申请提供了治疗受试者的罗恩病的临床证实安全并且临床证实有效的方法，其中用于皮下施用的抗IL12/IL23p40抗体在药物组合物中，该药物组合物包含在pH 6.0下含有6.7mM的L-组氨酸、7.6％(w/v)的蔗糖、0.004％(w/v)的聚山梨酸酯80的溶液。
附图说明
当结合附图阅读时，将更好地理解上述发明内容以及下文本发明的详细描述。应当理解，本发明不限于附图中示出的精确实施方案。
图1示出了克罗恩病的抗IL-12/IL-23p40抗体(优特克单抗)的STARDUST达标治疗3b期研究设计的示意图。
图2示出了确定试验中抗IL-12/IL-23p40抗体(优特克单抗)的剂量调整的治疗决策的流程图。
图3示出了试验中的患者处置(RAS)。
图4示出了随机达标治疗(T2T)组和标准护理(SoC)组的试验中的患者处置(RAS)。
图5A(NRI)和图5B(LOCF)示出了第48周的内窥镜结果(左柱为T2T，并且右柱为SoC)，其中p值(名义值)基于Cochran-Mantel-Haenszel检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(无或1)分层。缺少内窥镜检查评估的患者被认为是无应答者/无缓解者。内窥镜应答被定义为显示SES-CD相对于基线降低≥25％或≥100％。内窥镜缓解被定义为SES-CD评分≤2。粘膜愈合被定义为在任何回肠结肠段中完全不存在粘膜溃疡。无皮质类固醇的内窥镜应答被定义为SES-CD评分相对于基线降低≥50％，并且在终点之前不服用任何皮质类固醇至少30天。LOCF(图5B)＝末次观察前推；NRI(图5A)＝无应答者归因。
图6A(NRI)和图6B(LOCF)示出了第48周的临床结果(左柱为T2T，并且右柱为SoC)，其中p值(名义值)基于Cochran-Mantel-Haenszel(CMH)检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(无或1)分层。缺失数据的患者被认为是无应答者/无缓解者。CDAI 70应答被定义为显示出CDAI总分相对于基线的改善≥70分。临床应答被定义为相对于基线CDAI总评分降低≥100分，或CDAI总评分＜150。临床缓解被定义为CDAI总分＜150分。在第48周，T2T组和SoC组获得较高的临床应答率：68.2％对77.8％(p＝0.0212；NRI)/89.5％对89.6％(非显著性[NS]；LOCF)；临床缓解61.4％对69.7％(NS；NRI)/76.8％对78.3％(NS；LOCF)。T2T(n＝220)和SoC(n＝221)。
图7示出了在第48周(RAS)的内窥镜应答(SES-CD改善≥50％[95％CI])，其中对于T2T(左柱)n＝220，对于SoC(右柱)n＝221。p＜0.05。缺失数据的受试者被分析为无应答者。其中p值(名义值)基于CMH检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(0或1)分层。对于第48周SES-CD评分缺失或在达到第48周之前停止治疗的受试者，其最后的SES-CD评分将结转。所有随机患者不包括在达到第48周之前由于除缺乏/失去有效性以外的原因停止治疗的受试者。
图8示出了在第48周的临床结果(RAS NRI)，其中对于T2T(左柱)n＝220，对于SoC(右柱)n＝221。p＜0.05，p值(名义值)基于CMH检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(无或1)分层。缺失数据的受试者被认为是无应答者/无缓解者。CDAI 70应答被定义为显示出CDAI总分相对于基线的改善≥70分。临床应答被定义为相对于基线CDAI总评分降低≥100分，或CDAI总评分＜150。临床缓解被定义为CDAI总分＜150分。在终点时无皮质类固醇的临床缓解被定义为CDAI评分＜150并且在终点评估之前不服用任何皮质类固醇≥30天。
图9示出了在第48周(RAS LOCF)的临床结果，其中对于T2T(左柱)n＝220，对于SoC(右柱)n＝221。p值(名义值)基于CMH检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(无或1)分层。bCDAI 70应答被定义为显示出CDAI总分相对于基线的改善≥70分。c临床应答被定义为相对于基线CDAI总评分降低≥100分，或CDAI总评分＜150。d临床缓解被定义为CDAI总评分＜150分。e在终点时无皮质类固醇的临床缓解被定义为CDAI评分＜150并且在终点评估之前不服用任何皮质类固醇≥30天。
图10A(RAS NRI)和图10B(RAS LOCF)示出了相对于患者数目(Y轴中用％表示)的生物标志物结果。对于图10A，具有p值(名义值)的p＜0.05基于CMH检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(无或1)分层。缺失数据的受试者被认为没有改善。fCal改善被定义为显示fCal相对于基线降低＞＝50％。排除在基线处具有标准化fCal(＜＝250ug/g)的受试者。CRP改善被定义为显示CRP相对于基线降低＞＝50％。排除在基线处具有标准化CRP(＜＝3mg/L)的受试者。标准化fCal被定义为fCal＜＝250ug/g。排除在基线处具有标准化fCal的受试者。标准化CRP被定义为CRP＜＝3mg/L。排除在基线处具有标准化CRP的受试者。完全生物标志物应答被定义为CRP和fCal标准化。排除在基线处具有标准化的CRP和fCal的受试者以及排除在基线处缺失CRP和fCal两者的受试者。标准化CRP定义为CRP＜＝3mg/L。标准化fCal被定义为fCal＜＝250ug/g。对于图10B，具有p值(名义值)基于CMH检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(无或1)分层。fCal改善被定义为显示fCal相对于基线降低＞＝50％。排除在基线处具有标准化fCal(＜＝250ug/g)的受试者。CRP改善被定义为显示CRP相对于基线降低＞＝50％。排除在基线处具有标准化CRP(＜＝3mg/L)的受试者。标准化fCal被定义为fCal＜＝250ug/g。排除在基线处具有标准化fCal的受试者。标准化CRP被定义为CRP＜＝3mg/L。排除在基线处具有标准化CRP的受试者。完全生物标志物应答被定义为CRP和fCal标准化。排除在基线处具有标准化的CRP和fCal的受试者以及排除在基线处缺失CRP和fCal两者的受试者。标准化CRP被定义为CRP＜＝3mg/L。标准化fCal被定义为fCal＜＝250ug/g。
具体实施方式
背景以及说明书全篇中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献中的每一者全文均以引用方式并入本文。本说明书中包括的对文件、行为、材料、装置、文章等的讨论旨在为本发明提供上下文。此类讨论并不是承认这些事项中的任一事项或全部事项均相对于所公开或受权利要求书保护的任何发明形成现有技术的一部分。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。否则，本文所用的某些术语具有本说明书中所述的含义。本文引用的所有专利、公布的专利申请和出版物均以引用方式并入本文，如同在本文中进行了充分阐述。
应该注意的是，除非上下文清楚地指明，否则如本文和所附权利要求中所用的单数形式″一个/一种″和″所述/该″包括复数引用物。
除非另有说明，否则在一系列元素之前的术语″至少″应理解为指代系列中的每个元素。本领域的技术人员将会认识到、或仅使用常规实验就能够确定本文所述发明的具体实施方案的多种等同物。此类等同物旨在由本发明所涵盖。
贯穿本说明书和随后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则词语″包括″以及诸如″包含″和″含有″的变型形式将被理解为暗示包括所陈述的整数或步骤或者整数或步骤的组，但不排除任何其它整数或步骤或者整数或步骤的组。当在本文使用时，术语″包含″可用术语″含有″或″包括″替代，或者有时在本文使用时用术语″具有″替代。
当在本文使用时，″由......组成″排除权利要求要素中未指定的任何要素、步骤或成分。当在本文使用时，″基本上由......组成″不排除没有实质上影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。每当在本文中用于本发明的一个方面或实施方案的情境时，任何前述术语″包含″、″含有″、″包括″和″具有″均可用术语″由......组成″或″基本上由......组成″替代以改变本公开的范围。
如本文所用，多个列举的要素之间的连接术语″和/或″被理解为包含单个选项和组合选项两者。例如，在两个要素由″和/或″连接的情况下，第一种选项是指在没有第二个要素的情况下适用第一个要素。第二种选项是指在没有第一个要素的情况下适用第二个要素。第三种选项是指适合一起使用第一要素和第二要素。这些选项中的任一种均被理解为落在含义内，并且因此满足如本文所用的术语″和/或″的要求。多于一种选项的并行适用性也被理解为落在含义内，并且因此满足术语″和/或″的要求。
如本文所用，″受试者″是指任何动物，优选地哺乳动物，最优选地人，将通过或者已经通过根据本发明的实施方案的方法对其进行治疗。如本文所用，术语″哺乳动物″涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的示例包括但不限于奶牛、马、绵羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、非人灵长类(NHP)(诸如，猴子或猿)、人等，更优选地包括人。
如本文所用，在将两种或更多种疗法施用于受试者的上下文中，术语″联合″是指使用多于一种疗法。术语″联合″的使用并不限制疗法施用于受试者的次序。例如，第一疗法(例如，本文所述的组合物)可在第二疗法施用于受试者之前(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周以前)，与此同时，或之后(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周以后)施用。
如本文所用，″抗IL12/23p40抗体″或″IL12/23抗体″是指结合由细胞因子白介素-12和白介素-23(IL12/23p40)共有的40kDa(p40)亚基的单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段。抗体可影响IL12/23活性或功能中的至少一者，诸如但不限于RNA、DNA或蛋白质合成、IL12/23释放、IL12/23受体信号传导、膜IL12/23切割、IL12/23活性、IL12/23淀粉样蛋白产生和/或合成。
术语″抗体″还旨在涵盖抗体、其消化片段、特定部分和变体，包括抗体模拟物或包含模拟抗体或其特定片段或部分的结构和/或功能的抗体部分，包括单链抗体及其片段。功能片段包括结合哺乳动物IL-12/23的抗原结合片段。例如，本发明涵盖能够结合IL-12/23或其部分的抗体片段，包括但不限于Fab片段(例如通过木瓜蛋白酶消化得到)、Fab′片段(例如通过胃蛋白酶消化和部分还原得到)和F(ab′)2片段(例如通过胃蛋白酶消化得到)、facb片段(例如通过纤溶酶消化得到)、pfc′片段(例如通过胃蛋白酶或纤溶酶消化得到)、Fd片段(例如通过胃蛋白酶消化、部分还原以及重聚集得到)、Fv或scFv片段(例如通过分子生物学技术得到)(参见例如Colligan，Immunology，出处同上)。
此类片段可通过酶促切割、合成或重组技术产生，如本领域中已知的和/或如本文所述的。还可使用其中已在天然终止位点的上游引入一个或多个终止密码子的抗体基因以多种截短形式产生抗体。例如，可以将编码F(ab′)2重链部分的组合基因设计成包括编码重链的CH1结构域和/或铰链区的DNA序列。抗体的各个部分可通过常规技术用化学方法连接在一起，或可使用遗传工程技术制备为连续蛋白质。
如本文所用，术语″人抗体″是指这样的抗体：其中基本上蛋白质的每个部分(例如CDR、框架、CL、CH结构域(例如CH1、CH2、CH3)、铰链(VL、VH))在人类中为基本上无免疫原性的，仅具有小的序列变化或改变。″人抗体″也可以为衍生自或紧密匹配人类生殖系免疫球蛋白序列的抗体。人抗体可包括不由种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，在体外通过随机或位点特异性诱变或体内的体细胞突变引入的突变)。通常，这意味着人抗体在人中为基本上无免疫性的。人抗体已根据它们的氨基酸序列相似性被分类成组。因此，使用序列相似性搜索，可选择具有类似线性序列的抗体作为模板以产生人抗体。类似地，指明属灵长类(猴、狒狒、黑猩猩等)、啮齿类(小鼠、大鼠、兔、豚鼠、仓鼠等)和其它哺乳动物的抗体表示这些种、亚属、属、亚科、科的特异抗体。此外，嵌合抗体可包括上述抗体的任何组合。此类变化或改变任选且优选地相对于未经修饰的抗体而言保持或减少在人或其它物种中的免疫原性。因此，人抗体不同于嵌合抗体或人源化抗体。
应当指出的是，人抗体可由能够表达功能性重排的人免疫球蛋白(例如，重链和/或轻链)基因的非人动物或原核或真核细胞产生。此外，当人抗体是单链抗体时，它可包含在天然人抗体中不存在的连接肽。例如，Fv可包含连接重链可变区和轻链可变区的连接肽，诸如二至约八个甘氨酸或其它氨基酸残基。此类连接肽被认为是人源的。
可用于本发明的方法和组合物中的抗IL12/23p40抗体(也称作IL12/23p40抗体)可任选地特征在于与IL12/23p40高亲和力结合，任选地并且优选地具有低毒性。具体地，本发明的抗体、特定片段或变体(其中各个成分，诸如可变区、恒定区和构架区单独和/或共同地任选且优选地具有低免疫原性)可用于本发明中。可用于本发明的抗体的特征任选地在于它们能长期用于治疗受试者，可测量地减轻症状并具有低毒性和/或可接受的毒性。低的或可接受的免疫原性和/或高亲和力以及其它合适的特性，可有助于实现治疗结果。″低免疫原性″在本文中被定义为在小于约75％，或优选地小于约50％的受治疗的受试者中引起显著的HAHA、HACA或HAMA应答，和/或在受治疗的受试者中引起低滴度(以双抗原酶免疫测定法测量的小于约300，优选地小于约100)(Elliott等人，Lancet 344：1125-1127(1994)，其以引用方式全文并入本文)。″低免疫原性″也可以被定义为在用抗IL-12抗体治疗的受试者中抗IL-12抗体的可滴定水平的发生率，发生率小于25％的受治疗的受试者，优选地，在治疗期间，用所推荐的治疗疗程的推荐剂量，小于10％的受治疗的受试者。
如本文所用，在剂量、剂量方案、治疗或方法的上下文中，术语″临床证实的有效性″和″临床证实有效″是指特定剂量、剂量或治疗方案的有效性。有效性可基于病程响应于本发明药剂发生的变化进行测量。例如，将本发明的抗IL12/23p40(例如，优特克单抗)以足以诱导至少一种反映所治疗障碍严重程度的指标的改善，优选地持续改善的量和时间施用于受试者。可评价反映受试者的病、疾病或病症程度的各种指标，以确定治疗的量和时间是否足够。此类指标包括例如临床上公认的疾病严重程度、症状或所考虑病症的表现的指标。改善程度通常由医师确定，该医师可基于病征、症状、活检或其它测试结果进行该确定，并且还可采用施用给受试者的问卷(诸如针对给定疾病开发的生活质量问卷)进行该确定。例如，可施用本发明的抗IL12/23p40或抗IL23抗体来实现受试者的与克罗恩病相关的病症的临床缓解或改善。
改善可通过疾病活动性指数的改善、通过临床症状的改良或通过本文所述的疾病活动性的任何其它量度来指示。该疾病的一个指标是克罗恩病活动性指数(CDAI)评分或克罗恩病简单内窥镜评分(SES-CD)。
如本文所用，术语″临床应答″涉及受试者对药物施用的应答，并且还可以指如在克罗恩病中测量的并且本领域已知的″临床缓解″。
术语″临床证实安全″在其涉及用本发明的抗IL12/IL-23p40抗体(例如，优特克单抗)进行的剂量、剂量方案、治疗或方法时是指与护理标准或另一个比较物相比具有治疗出现的不良事件(称为AE或TEAE)的可接受频率和/或可接受严重程度的有利风险：效益比。如本文所用，″不良事件″、″治疗出现的不良事件″和″不良反应″意指与施用药物组合物或治疗剂相关联或由施用药物组合物或治疗剂引起的任何伤害、不利、无意或不期望的病征或结果。在施用药品的受试者中，这是一种不良的医学事件。然而，异常值或观察结果不会被报告为不良事件，除非研究人员认为有临床显著意义。如本文所用，当提及不良事件时，″临床上明显的″意指由医生或研究人员使用本领域普通技术人员可接受的标准所确定的有临床显著意义。当不良事件的伤害或不期望的结果达到此类严重程度时，监管机构可认为该药物组合物或治疗剂对于所提议的用途为不可接受的。具体地讲，当涉及使用本发明的抗IL12/23p40抗体的剂量、剂量方案或治疗时，″安全″是指如果认为归因可能、很可能或非常可能是由于使用抗IL12/23p40抗体，则与施用该抗体相关联的不良事件具有可接受的频率和/或可接受的严重程度。
如本文所用，除非另外指明，否则术语″临床证实″(单独使用或用于修改术语″安全″和/或″有效″)可意味着临床试验已经证实其有效，其中临床试验已经符合美国食品与药品监督管理局、EMEA或相应国家监管机构的批准标准。例如，临床研究可能是一项样本量充分、随机分配、双盲研究，用于临床证实药物的效果。
如本文所用，以″mg/kg″计的抗IL12/IL23p40抗体的剂量是指以毫克/千克待施用抗体的受试者体重计的抗IL12/IL23p40抗体的量。
本发明的抗体一制备和产生
如本领域中熟知的，本发明的方法中使用的至少一种抗IL12/23p40抗体可以任选地通过细胞系、混合细胞系、无限增殖化细胞或无限增殖化细胞的克隆群体来制备。参见例如Ausubel等人编辑，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，Inc.，NY，NY(1987-2001)；Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Harlow和Lane，″antibodies，a Laboratory Manual″，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Colligan等人编辑，″Current Protocols inImmunology″，John Wiley&Sons，Inc.，NY(1994-2001)；Colligan等人，″CurrentProtocols in Protein Science″，John Wiley&Sons，NY，NY(1997-2001)，各自以引用方式全文并入本文。
可针对合适的免疫原性抗原产生对人IL-12/23p40蛋白或其片段特异的人抗体，诸如分离的IL-12/23p40蛋白、IL-23蛋白和/或其部分(包括合成分子，诸如合成肽)。可以类似地产生其它特异或一般性的哺乳动物抗体。根据本公开，使用任何合适的技术可执行免疫原性抗原的制备和单克隆抗体的产生。
在一种方式中，杂交瘤是通过融合合适的永生细胞系(例如，骨髓瘤细胞系，诸如但不限于Sp2/0、Sp2/0-AG14、NSO、NS1、NS2、AE-1、L.5、L243、P3X63Ag8.653、Sp2 SA3、Sp2MAI、Sp2 SS1、Sp2 SA5、U937、MLA 144、ACT IV、MOLT4、DA-1、JURKAT、WEHI、K-562、COS、RAJI、NIH 3T3、HL-60、MLA 144、NAMALWA、NEURO 2A等，或异骨髓瘤、其融合产品，或自其衍生的任何细胞或融合细胞，或本领域中已知的任何其它适合的细胞系)(参见，例如，www.atcc.org，www.1ifetech.com.等)和产抗体细胞产生，该产抗体细胞诸如但不限于分离的或克隆的脾、外周血、淋巴，扁桃体或其它含免疫或B细胞的细胞，或表达重链或轻链恒定或可变或框架或CDR序列的任何其它细胞，作为内源或异源核酸，如重组或内源、病毒、细菌、藻类、原核、两栖动物、昆虫、爬行动物、鱼、哺乳动物、啮齿动物、马、绵羊、山羊、羊、灵长类动物、真核生物、基因组DNA、cDNA、rDNA、线粒体DNA或RNA、叶绿体DNA或RNA、hnRNA、mRNA、tRNA、单链、双链或三链，杂交体等或其任何组合。参见，例如以引用方式全文并入本文的Ausubel，出处同上，和Colligan，Immunology，出处同上，第2章。
产抗体细胞还可从人或已用所关注的抗原免疫过的其它合适动物的外周血，或优选脾或淋巴结获得。任何其它合适的宿主细胞也可用于表达编码本发明的抗体、其特定片段或变体的异源或内源核酸。融合细胞(杂交瘤)或重组细胞可使用选择性培养条件或其它合适的已知方法进行分离，并且可通过有限稀释或细胞分选或其它已知方法进行克隆。产生具有所需特异性的抗体的细胞可通过合适的测定法(例如ELISA)进行选择。
可以使用产生或分离具有必需特异性的抗体的其它合适方法，包括但不限于，从以下肽或蛋白质文库选择重组抗体的方法(例如，但不限于，噬菌体、核糖体、寡核苷酸、RNA、cDNA等展示文库；例如，购自Cambridge antibody Technologies，Cambridgeshire，UK；MorphoSys，Martinsreid/Planegg，DE；Biovation，Aberdeen，Scotland，UK；BioInvent，Lund，Sweden；Dyax，Enzon，Affymax/Biosite；Xoma，Berkeley，CA；Ixsys。参见例如EP368,684、PCT/GB91/01134；PCT/GB92/01755；PCT/GB92/002240；PCT/GB92/00883；PCT/GB93/00605；US08/350260(5/12/94)；PCT/GB94/01422；PCT/GB94/02662；PCT/GB97/01835；(CAT/MRC)；WO90/14443；WO90/14424；WO90/14430；PCT/US94/1234；WO92/18619；WO96/07754；(Scripps)；WO96/13583、WO97/08320(MorphoSys)；WO95/16027(BioInvent)；WO88/06630；WO90/3809(Dyax)；US 4,704,692(Enzon)；PCT/US91/02989(Affymax)；WO89/06283；EP 371998；EP 550 400(Xoma)；EP 229 046；PCT/US91/07149(Ixsys)；或随机生成的肽或蛋白质一US 5723323、5763192、5814476、5817483、5824514、5976862、WO 86/05803、EP 590 689(Ixsys，predecessor of Applied Molecular Evolution(AME)，各自以引用方式全文并入本文))或者依赖于转基因动物的免疫(例如SCID小鼠，Nguyen等人，Microbiol.Immunol.41：901-907(1997)；Sandhu等人，Crit.Rev.Biotechnol.16：95-118(1996)；Eren等人，Immunol.93：154-161(1998)，各自以引用方式以及相关专利和申请全文并入本文)能够产生全套人抗体，如本领域中已知和/或如本文所述的。此类技术包括但不限于核糖体展示(Hanes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94：4937-4942(Can 1997)；Hanes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：14130-14135(1998年11月))；单细胞抗体产生技术(例如，选择的淋巴细胞抗体方法(″SLAM″)(美国专利5,627,052，Wen等人，J.Immunol.17：887-892(1987)；Babcook等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7843-7848(1996))；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等人，Biotechnol.8：333-337(1990)；One Cell Systems，Cambridge，MA；Gray等人，J.Imm.Meth.182：155-163(1995)；Kenny等人，Bio/Technol.13：787-790(1995))；B细胞选择(Steenbakkers等人，Molec.Biol.)Reports 19：125-134(1994)；Jonak等人，Progress Biotech，第5卷，″In Vitro Immunization in Hybridoma Technology″，Borrebaeck编辑，Elsevier Science Publishers B.V.，Amsterdam，Netherlands(1988))。
还可使用用于将非人或人抗体进行工程化或人源化的方法，这些方法是本领域中熟知的。一般来讲，人源化或工程化的抗体具有来自非人来源的一个或多个氨基酸残基，该非人来源例如但不限于小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物或其它哺乳动物。它们一般取自已知人序列的″输入″可变结构域、恒定结构域或其它结构域。这些非人氨基酸残基被通常称为″输入″残基的残基取代，所述残基通常取自已知人序列的″输入″变化、恒定或其它结构域。
已知的人Ig序列是公开的，例如，www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi；www.ncbi.nih.gov/igblast；www.atcc.org/phage/hdb.html；www.mrc-cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php；www.kabatdatabase.com/top.html；ftp.ncbi.nih.gov/repository/kabat；www.sciquest.com；www.abcam.com；www.antibodyresource.com/onlinecomp.htmlwww.public.iastate.edu/～pedro/research_tools.html；www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htmwww.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab；www.path.cam.ac.uk/～mrc7/mikeimages.html；mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html；www.immunologylink.com；pathbox.wustl.edu/～hcenter/index.html；www.appliedbiosystems.com；www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody；www.m.ehime-u.ac.jp/～yasuhito/Elisa.html；www.biodesign.com；www.cancerresearchuk.org；www.biotech.ufl.edu；www.isac-net.org；baserv.uci.kun.nl/～jraats/links1.html；www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu；www.mrc-cpe.cam.ac.uk；www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html；http：//www.bioinf.org.uk/abs；antibody.bath.ac.uk；www.unizh.ch；www.cryst.bbk.ac.uk/～ubcg07s；www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.html；www.path.cam.ac.uk/～mrc7/humanisation/TAHHP.html；www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html；www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html；www.jerini.de；Kabat等人，″Sequences of Proteins of Immunological Interest″，U.S.Dept.Health(1983)，各自以引用方式全文并入本文。
此类输入序列可用于降低免疫原性或降低、增强或修饰结合、亲和力、结合率、解离率、亲合力、特异性、半衰期或任何其它合适的特征，如本领域中已知的。通常，CDR残基直接且基本上大多数涉及影响抗原结合。因此，保留部分或全部非人或人CDR序列，而可变区和恒定区的非人序列可以用人或其它氨基酸替换。
抗体还可以任选地为被设计成被保留对抗原的高亲和力和其它有利的生物学特性的人源化的或人抗体。为了达到这个目标，人源化(或人)抗体还可以任选使用亲本和人源化序列的三维模型通过亲本序列和各种概念上的人源化产物的分析过程进行制备。三维免疫球蛋白模型通常是可用的并且是为本领域的技术人员所熟悉的。举例说明且显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序是可用的。这些展示的检测使得能分析在候选免疫球蛋白序列的功能发挥中残基的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白与其抗原结合的能力的残基。以这种方式，可以从共有和输入序列中选择和组合框架(FR)残基，从而能实现所需抗体特征，诸如对靶抗原的增加的亲和力。
除此之外，本发明的方法中使用的人抗IL12/23p40抗体可以包括人类生殖系轻链框架。在具体实施方案中，该轻链生殖系序列选自人VK的序列包括但不限于A1、A10、A11、A14、A17、A18、A19、A2、A20、A23、A26、A27、A3、A30、A5、A7、B2、B3、L1、L10、L11、L12、L14、L15、L16、L18、L19、L2、L20、L22、L23、L24、L25、L4/18a、L5、L6、L8、L9、O1、O11、O12、O14、O18、O2、O4和O8。在某些实施方案中，该轻链人类生殖系框架选自：V1-11、V1-13、V1-16、V1-17、V1-18、V1-19、V1-2、V1-20、V1-22、V1-3、V1-4、V1-5、V1-7、V1-9、V2-1、V2-11、V2-13、V2-14、V2-15、V2-17、V2-19、V2-6、V2-7、V2-8、V3-2、V3-3、V3-4、V4-1、V4-2、V4-3、V4-4、V4-6、V5-1、V5-2、V5-4和V5-6。
在其它实施方案中，本发明的方法中使用的该人抗IL-12/23p40(或抗IL-23)特异性抗体可包括人类生殖系重链框架。在具体实施方案中，该重链人类生殖系框架选自VH1-18、VH1-2、VH1-24、VH1-3、VH1-45、VH1-46、VH1-58、VH1-69、VH1-8、VH2-26、VH2-5、VH2-70、VH3-11、VH3-13、VH3-15、VH3-16、VH3-20、VH3-21、VH3-23、VH3-30、VH3-33、VH3-35、VH3-38、VH3-43、VH3-48、VH3-49、VH3-53、VH3-64、VH3-66、VH3-7、VH3-72、VH3-73、VH3-74、VH3-9、VH4-28、VH4-31、VH4-34、VH4-39、VH4-4、VH4-59、VH4-61、VH5-51、VH6-1和VH7-81。
在具体实施方案中，轻链可变区和/或重链可变区包括框架区域或框架区域的至少一部分(例如，包含2个或3个子区域，诸如FR2和FR3)。在某些实施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4为完全人类的。在其它实施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4为完全人类的。在一些实施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4为生殖系序列(例如，人类生殖系)或包含特定框架的人类共有序列(可容易地在上述已知人Ig序列的来源处获得)。在其它实施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4为生殖系序列(例如，人类生殖系)或包含特定框架的人类共有序列。在优选实施方案中，该框架区为一个完全的人类框架区。
本发明抗体的人源化或工程化可使用任何已知方法执行，诸如但不限于以下中所描述的那些，Winter(Jones等人，Nature 321：522(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323(1988)；Verhoeyen等人，Science 239：1534(1988))；Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993)；Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.)196：901(1987)；Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：4285(1992)；Presta等人，J.Immunol.151：2623(1993)；美国专利：5723323、5976862、5824514、5817483、5814476、5763192、5723323、5，766886、5714352、6204023、6180370、5693762、5530101、5585089、5225539、4816567；PCT/：US98/16280、US96/18978、US91/09630、US91/05939、US94/01234、GB89/01334、GB91/01134、GB92/01755；WO90/14443、WO90/14424、WO90/14430、EP229246，各自以引用方式全文(包括其中引用的参考文献)并入本文。
在某些实施方案中，抗体包含改变的(例如，突变的)Fc区。例如，在一些实施方案中，已经改变Fc区以降低或增强抗体的效应功能。在一些实施方案中，Fc区为选自IgM、IgA、IgG、IgE的同型或其它同型。另选地或除此之外，将氨基酸修饰与一种或多种其它氨基酸修饰组合可能是有用的，所述修饰改变IL-23结合分子的Fc区的C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性功能。特定目的起始多肽可以为结合至C1q并且显示补体依赖性细胞毒性(CDC)的多肽。可以修饰具有预先存在的C1q结合活性的多肽，任选地还具有介导CDC的能力，使得这些活性中的一者或两者得到增强。改变C1q和/或修饰其补体依赖性细胞毒性功能的氨基酸修饰描述于例如WO0042072中，其据此以引用方式并入。
如上文所公开的，人们可以设计具有改变的效应功能的本发明的人抗IL12/23p40抗体的Fc区，例如通过修饰C1q结合和/或FcγR结合，从而改变补体依赖性细胞毒性(CDC)活性和/或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。″效应功能″负责激活或减少生物活性(例如，在受试者中)。效应功能的示例包括但不限于：C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；吞噬作用；细胞表面受体的向下调节(例如，B细胞受体；BCR)等。此类效应功能可能需要Fc区与结合结构域(例如，抗体可变结构域)组合，并且可以使用各种测定法(例如，Fc结合测定法、ADCC测定法、CDC测定法等)进行评价。
例如，人们可以产生人抗IL12/23p40抗体的变体Fc区，其具有改善的C1q结合和改善的FcγRIII结合(例如，具有改善的ADCC活性和改善的CDC活性两者)。另选地，如果期望降低或消除效应功能，可以设计具有降低的CDC活性和/或降低的ADCC活性的变体Fc区。在其它实施方案中，仅这些活性中的一者可增加，并且任选地，还可以减少其它活性(例如，产生具有改善的ADCC活性但降低CDC活性的Fc区变体，反之亦然)。
还可以在设计中引入Fc突变以改变它们与新生Fc受体(FcRn)的相互作用并且改善它们的药代动力学特性。已经描述了具有改善的与FcRn结合的人Fc变体的集合(Shields等人，(2001)，″High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for FcγRI，FcγRII，FcγRIII，and FcRn and design of IgG1 variants with improvedbinding to the FcγR″，J.Biol.Chem.276：6591-6604)。
另一种类型的氨基酸置换用于改变人抗IL12/23p40抗体的Fc区的糖基化模式。Fc区的糖基化通常为N-连接的或O-连接的。N-连接是指碳水化合物部分连接到天冬酰胺残基的侧链。O-连接的糖基化是指糖N-乙酰半乳糖胺/半乳糖或木糖中的一种连接到羟基氨基酸，最常见的为丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。用于将碳水化合物部分酶促连接到天冬酰胺侧链肽序列的识别序列为天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸，其中X为除脯氨酸外的任何氨基酸。因此，多肽中这些肽序列中任一个的存在产生了潜在的糖基化位点。
可以改变糖基化模式，例如，通过缺失多肽中发现的一个或多个糖基化位点，和/或添加多肽中不存在的一个或多个糖基化位点。向抗体的Fc区添加糖基化位点可方便地通过改变氨基酸序列以使其含有一个或多个上述三肽序列来实现(对于N-连接的糖基化位点)。示例性糖基化变体具有重链残基Asn 297的氨基酸取代。也可以通过将一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基添加或取代到原始多肽的序列来进行改变(对于O-连接的糖基化位点)。另外，可以去除一个糖基化位点将Asn 297变化为Ala。
在某些实施方案中，本发明的人抗IL12/23p40抗体在表达β(1，4)-N-乙酰基葡糖胺转移酶III(GnT III)的细胞中表达，使得GnT III将GlcNAc添加到人抗IL-12/23p40(或抗IL-23)抗体中。以这种方式产生抗体的方法提供于WO/9954342、WO/03011878、专利公开20030003097A1和Umana等人，Nature Biotechnology，17：176-180，1999年2月；这些文献中的全部文献以引用方式全文具体并入本文。
如本文所述和/或如本领域中已知的，还可以通过对能够产生全套人抗体的转基因动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、非人灵长类动物等)进行免疫来任选地产生人抗IL12/23p40抗体。可以使用合适的方法(诸如本文所述的方法)从此类动物分离产生人抗IL12/23p40抗体的细胞并且使其无限增殖化。
可以产生与人抗原结合的全套人抗体的转基因小鼠可以通过已知方法产生(例如但不限于美国专利：5,770,428、5,569,825、5,545,806、5,625,126、5,625,825、5,633,425、5,661,016和5,789,650，授予Lonberg等人；Jakobovits等人，WO 98/50433；Jakobovits等人，WO 98/24893；Lonberg等人，WO 98/24884；Lonberg等人，WO 97/13852；Lonberg等人，WO94/25585；Kucherlapate等人，WO 96/34096；Kucherlapate等人，EP 0463 151 B1；Kucherlapate等人，EP 0710 719 A1；Surani等人，美国专利5,545,807；Bruggemann等人，WO 90/04036；Bruggemann等人，EP 0438 474 B1；Lonberg等人，EP 0814 259 A2；Lonberg等人，GB 2 272 440 A；Lonberg等人，Nature 368：856-859(1994)；Taylor等人，Int.Immunol.6(4)579-591(1994)；Green等人，Nature Genetics 7：13-21(1994)；Mendez等人，Nature Genetics 15：146-156(1997)；Taylor等人，Nucleic Acids Research 20(23)：6287-6295(1992)；Tuaillon等人，Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724(1993)；Lonberg等人，Int Rev Immunol 13(1)：65-93(1995)和Fishwald等人，NatBiotechnol 14(7)：845-851(1996)，其各自以引用方式全文并入本文中)。一般来讲，这些小鼠包含至少一种包含来自至少一个发生了功能性重排或可经历功能性重排的人免疫球蛋白基因座的DNA的转基因。此类小鼠中的内源免疫球蛋白基因座可以被破坏或缺失，以消除动物产生由内源基因编码的抗体的能力。
可使用肽展示文库方便地实现对与相似蛋白质或片段特异性结合的抗体的筛选。这个方法涉及从一大批肽中筛选具有期望的功能或结构的个体成员。肽展示文库的抗体筛选是本领域中熟知的。所展示的肽序列的长度可以为3至5000个或更多个氨基酸，常常长为5至100个氨基酸，并且通常长为约8至25个氨基酸。除了用于产生肽文库的直接化学合成方法之外，有几种重组DNA方法也已得到描述。一种类型涉及在噬菌体或细胞表面上展示肽序列。每个噬菌体或细胞均含有编码具体展示的肽序列的核苷酸序列。这类方法描述于PCT专利公布91/17271、91/18980、91/19818和93/08278。
用于产生肽文库的其它系统同时具有体外化学合成方法和重组方法的各方面。参见PCT专利公布92/05258、92/14843和96/19256。还可参见美国专利5,658,754和5,643,768。肽展示文库、载体和筛选试剂盒可从诸如Invitrogen(Carlsbad，CA)和Cambridgeantibody Technologies(Cambridgeshire，UK)的供应商商购获得。参见例如美国专利4704692、4939666、4946778、5260203、5455030、5518889、5534621、5656730、5763733、5767260、5856456，转让给Enzon；5223409、5403484、5571698、5837500，转让给Dyax，5427908、5580717，转让给Affymax；5885793，转让给Cambridge antibody Technologies；5750373，转让给Genentech，5618920、5595898、5576195、5698435、5693493、5698417，转让给Xoma，Colligan，出处同上；Ausubel，出处同上；或Sambrook，出处同上，以上专利和出版物中的每一者以引用方式全文并入本文。
使用至少一种抗IL12/23p40抗体编码核酸来提供转基因动物或哺乳动物，诸如山羊、奶牛、马、绵羊、兔子等，也可以制备本发明的方法中使用的抗体，这些转基因动物或哺乳动物能够在它们的奶中产生此类抗体。此类动物可使用已知的方法提供。参见例如但不限于美国专利5,827,690；5,849,992；4,873,316；5,849,992；5,994,616；5,565,362；5,304,489等，这些美国专利各自以引用方式全文并入本文。
使用至少一种抗IL12/23p40抗体编码核酸来提供转基因植物和培养的植物细胞(例如但不限于烟草和玉米)，也可以制备本发明的方法中使用的抗体，这些转基因植物和培养的植物细胞在其植物部分或从植物部分培养得到的细胞中产生这种抗体、其特定部分或变体。作为非限制性示例，表达重组蛋白质的转基因烟草叶已成功地用于提供大量重组蛋白质，例如使用诱导型启动子。参见，例如Cramer等人，Curr.Top.Microbol.Immunol.240：95-118(1999)，以及其中引用的参考文献。同样，转基因玉米也已用于以商业生产规模表达哺乳动物蛋白质，其生物活性等同于在其它重组系统中生产或从天然来源纯化的那些哺乳动物蛋白质。参见，例如Hood等人，Adv.Exp.Med.Biol.)464：127-147(1999)，以及其中引用的参考文献。也可由转基因植物种子(包括烟草种子和马铃薯块茎)大量生产抗体，包括抗体片段，诸如单链抗体(scFv)。参见，例如Conrad等人，Plant Mol.Biol.)38：101-109(1998)，以及其中引用的参考文献。因此，本发明的抗体还可使用转基因植物根据已知方法进行生产。还可参见，例如Fischer等人，Biotechnol.Appl.Biochem.30：99-108(Oct.，1999)；Ma等人，Trends Biotechnol.13：522-7(1995)；Ma等人，Plant Physiol.109：341-6(1995)；Whitelam等人，Biochem.Soc.胞吞转运22：940-944(1994)；以及其中引用的参考文献。以上参考文献中的每一篇参考文献以引用方式全文并入本文。
本发明的方法中使用的抗体可以数值范围较大的亲和力(KD)结合人IL12/IL23p40。在一个优选的实施方案中，人mAb可任选地以高亲和力结合人IL12/IL23p40。例如，人mAb可以等于或小于约10-7M，例如但不限于0.1-9.9(或其中的任何范围或数值)×10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、10-13或其中的任何范围或数值的KD结合人IL12/23p40。
抗体对抗原的亲和力或亲合力可以使用任何合适的方法通过实验测定。(参见例如Berzofsky等人，″Antibody-Antigen Interactions，″In Fundamental Immunology，Paul，W.E.编辑，Raven Press：New York，NY(1984)；Kuby，Janis immunology，W.H.Freemanand Company：New York，NY(1992)；以及本文所述的方法)。如果在不同的条件(例如，盐浓度、pH)下测量，则测得的特定抗体-抗原相互作用的亲和力会不同。因此，亲和力和其它抗原结合参数(例如KD、Ka、Kd)的测量优选用抗体和抗原的标准溶液以及标准缓冲液(例如本文所述的缓冲液)来进行。
载体和宿主细胞
本发明还涉及包含分离的核酸分子的载体、用重组载体进行遗传工程改造的宿主细胞以及通过本领域公知的重组技术制备至少一种抗IL12/23p40抗体。参见例如Sambrook等人(出处同上)；Ausubel等人(出处同上)，各自以引用方式全文并入本文。
可将所述多核苷酸任选地与包括可选择标记的载体连接，以在宿主中增殖。一般来讲，质粒载体在沉淀物诸如磷酸钙沉淀物中，或在与带电脂质的复合物中被导入。如果载体是病毒，那么它可以使用适当的包装细胞系在体外进行包装并且然后转导进宿主细胞内。
应将DNA插入物与适当的启动子可操作地连接。表达构建体还会含有转录起始位点、终止位点以及在转录区中含有用于翻译的核糖体结合位点。该构建体表达的成熟转录物的编码部分将优选地包括在待翻译的mRNA开始处的翻译起始和在该mRNA末端适当位置的终止密码子(例如，UAA、UGA或UAG)，对于哺乳动物或真核细胞表达优选UAA和UAG。
表达载体将优选但任选地包括至少一个可选择标记。此类标记物包括例如但不限于：对于真核细胞培养物，为甲氨喋呤(MTX)、二氢叶酸还原酶(DHFR，美国专利4,399,216；4,634,665；4,656,134；4,956,288；5,149,636；5,179,017、氨苄青霉素、新霉素(G418)、霉酚酸或谷氨酰胺合成酶(GS，美国专利5,122,464；5,770,359；5,827,739)抗性基因；以及对于大肠杆菌(E.coli)和其它细菌或原核生物培养，为四环素或氨苄青霉素抗性基因(以上专利以引用方式全文并入本文)。用于上述宿主细胞的适当的培养基和条件是本领域中已知的。合适的载体对于技术人员来说将是显而易见的。载体构建体导入宿主细胞可通过磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染或其它已知方法来实现。此类方法已在本领域中有所描述，诸如Sambrook，出处同上，第1-4章和第16-18章；Ausubel，出处同上，第1章、第9章、第13章、第15章、第16章。
本发明的方法中使用的至少一种抗体可以修饰形式(诸如融合蛋白质)表达，并且可不仅包括分泌信号，而且还可包括附加异源功能区。例如，可将附加氨基酸(尤其是带电氨基酸)的区域添加至抗体的N-端，以改善纯化期间或随后的处理和储存期间在宿主细胞中的稳定性和持久性。同样，可将肽部分添加至本发明的抗体以帮助纯化。此类区域可在抗体或其至少一个片段的最终制备之前去除。此类方法在许多标准实验室手册中有所描述，诸如Sambrook，出处同上，第17.29-17.42章和第18.1-18.74章；Ausubel，出处同上，第16章、第17章和第18章。
本领域技术人员可认识到许多表达系统可用于表达编码本发明的方法中使用的蛋白质的核酸。另选地，核酸可在含有编码抗体的内源DNA的宿主细胞中通过开启(通过操纵)而在宿主细胞中表达。此类方法是本领域中熟知的，例如，如美国专利5,580,734、5,641,670、5,733,746和5,733,761中所述，这些专利以引用方式全文并入本文。
可用于生产抗体、其特定部分或变体的例示性细胞培养物是哺乳动物细胞。哺乳动物细胞系统通常将是细胞单层的形式，但也可使用哺乳动物细胞悬浮液或生物反应器。在本领域中已经开发了许多能够表达完整糖基化蛋白的合适宿主细胞系，包括COS-1(例如ATCC CRL 1650)、COS-7(例如ATCC CRL-1651)、HEK293、BHK21(例如ATCC CRL-10)、CHO(例如ATCC CRL 1610)和BSC-1(例如ATCC CRL-26)细胞系，Cos-7细胞、CHO细胞、hep G2细胞、P3X63Ag8.653、SP2/0-Ag14、293细胞、HeLa细胞等，它们可容易地从例如美国典型培养物保藏中心(Manassas，Va(www.atcc.org))获得。优选的宿主细胞包括淋巴来源的细胞，诸如骨髓瘤细胞和淋巴瘤细胞。特别优选的宿主细胞是P3X63Ag8.653细胞(ATCC登记号CRL-1580)和SP2/0-Ag14细胞(ATCC登记号CRL-1851)。在尤其优选的实施方案中，重组细胞是P3X63Ab8.653或SP2/0-Ag14细胞。
这些细胞的表达载体可包括以下的表达控制序列中的一者或多者，诸如但不限于：复制起点；启动子(例如，晚期或早期SV40启动子、CMV启动子(美国专利5,168,062；5,385,839)、HSV tk启动子、pgk(磷酸甘油酸激酶)启动子、EF-1α启动子(美国专利5,266,491)、至少一种人免疫球蛋白启动子；增强子和/或加工信息位点诸如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点(例如SV40大T Ag聚A添加位点)和转录终止子序列。参见例如Ausubel等人(出处同上)；Sambrook等人(出处同上)。可用于产生本发明的核酸或蛋白质的其它细胞也是已知的和/或可例如从美国典型培养物保藏中心细胞系和杂交瘤目录(www.atcc.org)或其它已知的来源或商业来源得到。
当使用真核宿主细胞时，通常会将多腺苷酸化或转录终止序列并入载体内。终止序列的示例是来自牛生长激素基因的多腺苷酸化序列。还可包括用于准确剪接转录物的序列。剪接序列的示例是来自SV40的VP1内含子(Sprague等人，J.Virol.45：773-781(1983))。另外，如本领域中已知的，可将控制在宿主细胞中的复制的基因序列并入载体中。
抗体的纯化
抗IL12/23p40抗体可通过公知的方法从重组细胞培养物中回收和纯化，该方法包括但不限于蛋白质A纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱、磷酸纤维素色谱、疏水相互作用色谱、亲和色谱、羟基磷灰石色谱和凝集素色谱。高效液相色谱(″HPLC″)也可以用于纯化。参见，例如Colligan，Current Protocols in Immunology或Current Protocols in Protein Science，John Wiley&Sons，NY，NY，(1997-2001)，例如第1、4、6、8、9、10章，各自以引用方式全文并入本文。
本发明的方法中使用的抗体包括天然纯化的产物、化学合成操作的产物和通过重组技术从真核宿主产生的产物，所述真核宿主包括例如酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞。根据重组生产方法中所采用的宿主，抗体可以为糖基化的或可以为非糖基化的，糖基化的为优选的。此类方法描述于许多标准实验室手册中，诸如Sambrook，出处同上，第17.37-17.42节；Ausubel，出处同上，第10章、第12章、第13章、第16章、第18章和第20章；Colligan，Protein Science，出处同上，第12-14章，所有上述参考文献均以引用方式全文并入本文。
抗IL12/23p40抗体
根据本发明的抗IL12/23p40抗体包括含有至少一部分免疫球蛋白分子的任何含蛋白质或肽的分子，例如但不限于至少一个配体结合部分(LBP)，例如但不限于重链或轻链的互补决定区(CDR)或其配体结合部分，重链或轻链可变区，框架区，(例如，FR1、FR2、FR3、FR4或其片段，还任选地包含至少一个取代、插入或缺失)，重链或轻链恒定区，(例如，包含至少一个CH1、铰链1、铰链2、铰链3、铰链4、CH2或CH3或其片段，还任选地包含至少一个取代，插入或缺失)或其任何部分，其可以掺入抗体中。抗体可包括或来源于任何哺乳动物，诸如但不限于人、小鼠、兔、大鼠、啮齿类动物、灵长类动物或它们的任何组合等。
优选地，人抗体或抗原结合片段结合人IL12/23p40，从而部分或基本上中和该蛋白质的至少一种生物活性。部分地或优选地基本上中和至少一种IL12/23p40蛋白或片段的至少一种生物学活性的抗体或其特定部分或变体可结合该蛋白质或片段，并由此抑制通过IL12/23p40或IL-23与IL-12和/或IL-23受体的结合或通过其它IL12/23p40或IL-23依赖性的或介导的机制所介导的活性。本文所用的术语″中和抗体″指取决于测定法，可以使IL12/23p40或IL-23依赖性活性被抑制约20-120％的抗体，优选地至少约10、20、30、40、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100％或更多。抗IL12/23p40或IL-23抗体抑制IL12/23p40或IL-23依赖性活性的能力优选地通过至少一种本文所述的和/或本领域公知的合适的IL12/23p40或IL-23蛋白或受体测定法来进行评价。人抗体可以为任何类型(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD等)或同种型，并且可包含K或λ轻链。在一个实施方案中，人抗体包含IgG重链或确定的片段，例如，同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(例如γ1、γ2、γ3、γ4)中的至少一者。这种类型的抗体可以如本文所述的和/或如本领域公知的通过使用转基因小鼠或其它转基因非人哺乳动物来制备，所述动物包含至少一种人轻链(例如IgG、IgA和IgM)转基因。在另一个实施方案中，人抗体包含IgG1重链和IgG1轻链。
抗体结合至少一种指定的表位，该表位对至少一种IL12/23p40蛋白质、亚基、片段、部分或它们的任何组合为特异性的。该至少一个表位可包含至少一个抗体结合区，该抗体结合区包含蛋白质的至少一部分，该表位优选地由蛋白质的至少一个细胞外的、可溶性的、亲水的、外部的或胞质的部分构成。
一般来讲，人抗体或抗原结合片段将包含这样的抗原结合区，该抗原结合区包含至少一个人互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)或至少一个重链可变区的变体以及至少一个人互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)或至少一个轻链可变区的变体。CDR序列可来源于人类生殖系序列或与生殖系序列紧密匹配。例如，可使用来源于原始非人类CDRs的合成文库的CDRs。这些CDRs可以通过掺入来自原始非人序列的保守取代而形成。在另一个具体实施方案中，抗体或抗原结合部分或变体可以具有抗原结合区，所述抗原结合区包含具有相应CDR1、CDR2和/或CDR3的氨基酸序列的至少一个轻链CDR(即CDR1、CDR2和/或CDR3)的至少一部分。
此类抗体可通过以下方法制备：使用常规技术将抗体的各个部分(例如CDR、框架)化学连接在一起，使用重组DNA技术的常规技术或通过使用任何其它合适的方法制备并表达编码该抗体的(即一种或多种)核酸分子。
在一个实施方案中，可用于本发明的抗IL12/23p40抗体为单克隆抗体，优选地人mAb，其包含分别为SEQ ID NO：1、2和3的重链互补决定区(CDR)HCDR1、HCDR2和HCDR3；以及分别为SEQ ID NO：4、5和6的轻链CDR LCDR1、LCDR2和LCDR3。
抗IL12/23p40抗体可以包含具有限定的氨基酸序列的重链可变区或轻链可变区中的至少一者。例如，在一个优选的实施方案中，抗IL12/23p40抗体包含具有重链可变区和轻链可变区的抗IL12/23p40抗体，所述重链可变区包含具有与SEQ ID NO：7有至少85％、优选地至少90％、更优选地至少95％并且最优选地100％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含具有与SEQ ID NO：8有至少85％、优选地至少90％、更优选地至少95％并且最优选地100％同一性的氨基酸序列。
抗IL12/23p40抗体还可包含具有确定氨基酸序列的重链或轻链中的至少一者。在另一个优选的实施方案中，抗IL12/23p40抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含具有与SEQ ID NO：10有至少85％、优选地至少90％、更优选地至少95％并且最优选地100％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含具有与SEQ ID NO：11有至少85％、优选地至少90％、更优选地至少95％并且最优选地100％同一性的氨基酸序列。
优选地，抗IL12/23p40抗体是优特克单抗(
Figure BDA0004164661630000271
)，其包含具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链。可用于本发明的抗IL12/23p40抗体的其它示例包括但不限于布雷奴单抗(Briakinumab)(ABT-874，Abbott)和在美国专利6,914,128、7,247,711、7700739中描述的其它抗体，这些专利的全部内容以引用方式并入本文。
本发明还涉及其包含的氨基酸序列基本上与本文所述的氨基酸序列相同的抗体、抗原结合片段、免疫球蛋白链和CDR。优选地，此类抗体或抗原结合片段和包含此类链或CDR的抗体可以高的亲和力(例如小于或等于约10-9M的KD)结合人IL12/23p40或IL-23。与本文所述序列基本上相同的氨基酸序列包括具有保守氨基酸置换以及氨基酸缺失和/或插入的序列。保守氨基酸置换指用第二种氨基酸置换第一种氨基酸，所述第二种氨基酸具有的化学和/或物理性质(例如电荷、结构、极性、疏水性/亲水性)与第一种氨基酸相似。保守取代包括但不限于在下列组中用一种氨基酸替换另一种氨基酸：赖氨酸(K)、精氨酸(R)和组氨酸(H)；天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)；天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、酪氨酸(Y)、K、R、H、D和E；丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)和甘氨酸(G)；F、W和Y；C、S和T。
与人IL-12/IL-23p40或IL-23结合并且包含确定的重链或轻链可变区的抗体，可如本领域已知和/或如本文所述用合适方法诸如噬菌体展示(Katsube，Y.等人，Int JMol.Med，1(5)：863-868(1998))或采用转基因动物的方法制备。例如，可以用人IL12/23p40或IL-23或其片段，对包含功能性重排的人免疫球蛋白重链转基因和包含来自可经历功能性重排的人免疫球蛋白轻链基因座的DNA的转基因小鼠进行免疫，以引发抗体的产生。如果需要，可以对产生抗体的细胞进行分离，并且可以如本文所述和/或如本领域中已知制备杂交瘤或其它无限增殖化的产生抗体的细胞。另选地，可以使用编码核酸或其部分在合适的宿主细胞中表达抗体、特定部分或变体。
如本文所说明的，本发明的方法中使用的抗IL12/23p40抗体可包括来自天然突变或得自人工操纵的一个或多个氨基酸置换、缺失或添加。
技术人员可进行的氨基酸置换数目取决于许多因素，包括上文所述的那些。如本文所说明的，一般来讲，任何给定的抗IL12/23p40抗体、片段或变体的氨基酸置换、插入或缺失数目将不超过40个、30个、20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个、1个，诸如1个至30个或其中的任何范围或数值。
抗IL12/23p40抗体中对功能必需的氨基酸可以通过本领域中已知的方法鉴别，这些方法诸如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(例如Ausubel，出处同上，第8、15章；Cunningham和Wells，Science 244：1081-1085(1989))。后一程序在分子的每个残基处引入单个丙氨酸突变。随后测试所得突变分子的生物活性，诸如但不限于至少一种IL12/23p40或IL-23中和活性。抗体结合至关重要的位点也可以通过结构分析进行鉴定，例如结晶、核磁共振或光亲和标记(Smith等人，J.Mol.Biol.)224：899-904(1992)以及de Vos等人，Science 255：306-312(1992))。
抗IL12/23p40抗体可包括但不限于选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11中至少一者的5个至全部邻接氨基酸的至少一个部分、序列或组合。
抗IL12/23p40抗体或特定部分或变体可包括但不限于选自以下的至少一个部分、序列或组合：上述SEQ ID NO中的至少3个至5个邻接氨基酸；上述SEQ ID NO的5个至17个邻接氨基酸、上述SEQ ID NO的5个至10个邻接氨基酸、上述SEQ ID NO的5个至11个邻接氨基酸、上述SEQ ID NO的5个至7个邻接氨基酸；上述SEQ ID NO的5个至9个邻接氨基酸。
抗IL12/23p40抗体还可任选地包含上述SEQ ID NO的5个、17个、10个、11个、7个、9个、119个、108个、449个或214个邻接氨基酸中的至少一者的70％-100％的多肽。在一个实施方案中，免疫球蛋白链或其部分(如可变区、CDR)的氨基酸序列与上述SEQ ID NO中至少一者的相应链的氨基酸序列具有约70％-100％的同一性(例如70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100或其中的任何范围或值)。例如，轻链可变区的氨基酸序列可以与上述SEQ ID NO的序列进行比较，或者重链CDR3的氨基酸序列可以与上述SEQ ID NO进行比较。优选地，使用如本领域中已知的合适计算机算法确定出70％至100％氨基酸同一性(即90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100或者其中的任何范围或值)。
如本领域中已知的，″同一性″为介于两个或更多个多肽序列或两个或更多个多核苷酸序列之间的关系，如通过比较该序列所确定的那样。在本领域中，″同一性″还意指多肽或多核苷酸序列之间的序列相关性程度，如由此类序列的字符串之间的匹配所确定的。″同一性″和″相似性″可以通过已知方法容易地计算，该方法包括但不限于″ComputationalMolecular Biology，Lesk″，A.M.编辑，Oxford University Press，New York，1988；″Biocomputing：Informatics and Genome Projects″，Smith，D.W.编辑，Academic Press，New York，1993；″Computer Analysis of Sequence Data″，第I部分，Griffin，A.M.和Griffin，H.G.编辑，Humana Press，New Jersey，1994；″Sequence Analysis in MolecularBiology″，von Heinje，G.，Academic Press，1987；和″Sequence Analysis Primer″，Gribskov，M.和Devereux，J.编辑，M Stockton Press，New York，1991；和Carillo，H.和Lipman，D.，Siam J.Applied Math.，48：1073(1988)中描述的那些。另外，同一性百分比的数值可从用Vector NTI Suite 8.0(Informax，Frederick，MD)的AlignX组件的缺省设置生成的氨基酸和核苷酸序列对比获得。
设计确定同一性的优选方法以给出测试序列之间的最大匹配。确定同一性和相似性的方法在公开可用的计算机程序中编纂。优选的计算机程序方法来确定两个序列之间相似的包括但不限于负责把GCG程序包(Devereux，J.等人，Nucleic Acids Research 12(1)：387(1984))，BLASTP、BLASTN和FASTA(Atschul，S.F.等人，J.Molec.Biol.)215：403-410(1990))。BLAST X程序可购自NCBI和其它来源(BLAST Manual，Altschul，S.等人，NCBINLMNIH Bethesda，Md.20894：Altschul，S.等人，J.Mol.Biol.)215：403-410(1990)。公知的Smith Waterman算法也可用于确定同一性。
在上述SEQ ID NO中提供了示例性重链和轻链可变区序列及其部分。本发明的抗体，或其特定变体可包含任何数目的来自本发明抗体的邻接氨基酸残基，其中该数目选自抗IL12/23p40抗体中邻接残基数目的10％-100％的整数的组。任选地，该邻接氨基酸亚序列长度为至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250或更多个氨基酸，或其中的任何范围或数值。此外，此类亚序列的数目可以为选自由1至20组成的组的任何整数，诸如至少2、3、4或5。
技术人员将会知道，本发明包括本发明的至少一种生物活性抗体。生物活性抗体的比活性为天然(非合成)的、内源性或相关的和已知的抗体比活性的至少20％、30％或40％，并且优选为至少50％、60％或70％，并且最优选为至少80％、90％或95％至100％或更多(包括但不限于，为其比活性的多至10倍)。测定和定量酶促活性和底物特异性的量度的方法是本领域技术人员熟知的。
在另一方面，本发明涉及通过共价连接有机部分进行修饰的、如本文所述的人抗体和抗原结合片段。此类修饰可以产生具有改善的药代动力学特性(例如增加的体内血清半衰期)的抗体或抗原结合片段。有机部分可以是线性或支化的亲水性聚合基团、脂肪酸基团或脂肪酸酯基团。在一个具体实施方案中，亲水性聚合物基团可以具有约800至约120,000道尔顿的分子量，并且可以是聚链烷二醇(例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG))、碳水化合物聚合物、氨基酸聚合物或聚乙烯吡咯烷酮，并且脂肪酸或脂肪酸酯基团可包含约八至约四十个碳原子。
经修饰的抗体和抗原结合片段可包含一个或多个与抗体直接或间接共价键合的有机部分。与本发明的抗体或抗原结合片段键合的每个有机部分可独立地是亲水性聚合物基团、脂肪酸基团或脂肪酸酯基团。如本文所用，术语″脂肪酸″涵盖单羧酸和二羧酸。″亲水性聚合物基团″，该术语在本文中使用时是指在水中比在辛烷中更易溶的有机聚合物。例如，聚赖氨酸在水中比在辛烷中更易溶。因此，通过共价连接聚赖氨酸来修饰的抗体包括在本发明内。适用于修饰本发明抗体的亲水性聚合物可以是直链或支链的，并且包括例如聚链烷二醇(例如PEG、单甲氧基-聚乙二醇(mPEG)、PPG等)、碳水化合物(例如葡聚糖、纤维素、寡糖、多糖等)、亲水性氨基酸聚合物(例如聚赖氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸等)、聚环氧链烷(例如，聚环氧乙烷、聚环氧丙烷等)和聚乙烯吡咯烷酮。优选地，修饰本发明抗体的亲水性聚合物作为单独的分子实体具有约800至约150,000道尔顿的分子量。例如可使用PEG5000和PEG20,000，其中下标为聚合物的平均分子量(道尔顿)。亲水性聚合物基团可用一至约六个烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基团取代。用脂肪酸或脂肪酸酯基团取代的亲水性聚合物可通过采用合适的方法制备。例如，可将包含胺基团的聚合物与脂肪酸或脂肪酸酯的羧酸根偶联，且可将脂肪酸或脂肪酸酯上的活化羧酸根(例如用N，N-羰基二咪唑活化)与聚合物上的羟基偶联。
适用于修饰本发明抗体的脂肪酸和脂肪酸酯可以是饱和的或可含有一个或多个不饱和单位。适于修饰本发明抗体的脂肪酸包括例如正十二烷酸酯(C12，月桂酸酯)、正十四烷酸酯(C14，肉豆蔻酸酯)、正十八烷酸酯(C18，硬脂酸酯)、正二十烷酸酯(C20，花生酸酯)、正二十二烷酸酯(C22，山嵛酸酯)、正三十烷酸酯(C30)、正四十烷酸酯(C40)、顺式-Δ9-十八烷酸酯(C18，油酸酯)、全顺式-Δ5，8，11，14-二十碳四烯酸酯(C20，花生四烯酸酯)、辛二酸、十四烷二酸、十八烷二酸、二十二烷二酸等。合适的脂肪酸酯包括包含直链或支链的低级烷基的二羧酸的单酯。低级烷基可包含一个至约十二个，优选地一个至约六个碳原子。
修饰的人抗体和抗原结合片段可使用合适的方法制备，诸如通过与一种或多种修饰剂反应来制备。如本文所用的术语″修饰剂″是指包含活化基团的合适有机基团(例如亲水性聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)。″活化基团″是化学部分或官能团，它们可在适当的条件下与第二化学基团反应，由此在修饰剂和第二化学基团之间形成共价键。例如，胺反应性活化基团包括亲电子基团，诸如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、卤素(氯、溴、氟、碘)、N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)等。可以与硫醇反应的活化基团包括例如马来酰亚胺、碘代乙酰基、丙烯酰基、吡啶基二硫化物、5-硫醇-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB-硫醇)等。可将醛官能团与含胺或酰肼的分子偶联，并且可将叠氮基团与三价磷基团反应以形成磷酰胺酯或磷酰亚胺键。将活化基团引入分子的合适方法为本领域公知的(参见例如Hermanson，G.T.，BioconjugateTechniques，Academic Press：San Diego，CA(1996))。可将活化基团直接键合到该有机基团(例如亲水性聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)，或者通过连接部分来键合，所述连接部分例如二价C1-C12基团，其中一个或多个碳原子可被杂原子诸如氧、氮或硫取代。合适的连接部分包括例如四乙二醇、-(CH2)3-、-NH-(CH2)6-NH-、-(CH2)2-NH-和-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-。包含连接部分的修饰剂可例如通过以下产生：在存在1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺(EDC)的情况下，使单-Boc-烷基二胺(例如单-Boc-乙二胺、单-Boc-二氨基己烷)与脂肪酸反应，以在游离胺和脂肪酸羧酸根之间形成酰胺键。可通过用三氟乙酸(TFA)处理从产物除去Boc保护基以暴露出伯胺，后者可偶联到另一羧酸酯(如所描述)，或者可与马来酸酐反应并且所得的产物环化以产生脂肪酸的活化马来酰亚胺基衍生物。(参见例如Thompson等人的WO 92/16221，该专利的全部教导内容以引用方式并入本文。)
经修饰抗体可通过使人抗体或抗原结合片段与修饰剂反应来产生。例如，有机部分可以通过使用胺反应性改性剂(例如PEG的NHS酯)以非位点特异性方式与抗体结合。经修饰的人抗体或抗原结合片段还可通过使抗体或抗原结合片段的二硫键(例如链内二硫键)还原来制备。还原的抗体或抗原结合片段随后可与硫醇反应性修饰剂反应，以产生本发明的经修饰的抗体。包含与本发明抗体特定位点键合的有机部分的修饰的人抗体和抗原结合片段可使用合适的方法制备，所述方法例如为逆向蛋白水解作用(Fisch等人，Bioconjugate Chem.，3：147-153(1992)；Werlen等人，Bioconjugate Chem.，5：411-417(1994)；Kumaran等人，Protein Sci.6(10)：2233-2241(1997)；Itoh等人，Bioorg.Chem.，24(1)：59-68(1996)；Capellas等人，Biotechnol.Bioeng.，56(4)：456-463(1997))，以及在Hermanson，G.T.，Bioconjugate Techniques，Academic Press：San Diego，CA(1996)中所描述的方法。
本发明的方法也使用抗IL12/23p40抗体组合物，其包含至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种或更多种其抗IL12/23p40抗体，它们如本文所述和/或本领域公知的以非天然存在的组合物、混合物或形式提供。这些组合物包含非天然存在的组合物，所述非天然存在的组合物包含抗IL12/23p40抗体氨基酸序列的至少一个或两个全长序列、C-端和/或N-端缺失的变体、结构域、片段或特定变体，所述抗IL12/23p40抗体氨基酸序列选自由上述SEQ ID NO的70％-100％的邻接氨基酸或其特定片段、结构域或变体组成的组。优选的抗IL12/23p40抗体组合物包含至少一个或两个全长、片段、结构域或变体作为至少一个含有本文所述抗IL12/23p40抗体序列部分的CDR或LBP，例如，70％-100％的上述SEQ ID NO，或其特定的片段、结构域或变体。更优选的组合物包含，例如，上述SEQ ID NO的70％至100％或其特定片段、结构域或变体中的至少一者的40％至99％。此类组合物百分数按照液体或无水溶液、混合物、悬浮液、乳液、颗粒、粉末或胶体的重量、体积、浓度、摩尔浓度或重量摩尔浓度计算，如本领域中已知或如本文所述。
包含另外的治疗活性成分的抗体组合物
本发明的方法中使用的组合物还可任选包含有效量的至少一种选自以下至少一者的化合物或蛋白质：抗感染药、心血管(CV)系统药物、中枢神经系统(CNS)药物、自主神经系统(ANS)药物、呼吸道药物、胃肠(GI)道药物、激素药物、用于体液或电解质平衡的药物、血液学药物、抗肿瘤药物、免疫调节药物、眼用药物、耳用药物或鼻用药物、局部用药物、营养药物、他汀类药物等。此类药物是本领域中熟知的，包括本文中给出的每种药物的制剂、适应症、给药和施用(参见例如，″Nursing 2001Handbook of Drugs″，第21版，SpringhouseCorp.，Springhouse，PA，2001；″Health Professional’s Drug Guide 2001″，ed.，Shannon，Wilson，Stang，Prentice-Hall，Inc，Upper Saddle River，NJ；″PharmcotherapyHandbook″，Wells等人编辑，Appleton&Lange，Stamford，CT，各自以引用方式全文并入本文)。
作为可以与用于本发明的方法的抗体组合的药物的示例，抗感染药物可以为选自以下的至少一种：抗阿米巴药或者抗原虫药、抗蠕虫药、抗真菌药、抗疟药、抗结核药或者至少一种抗麻风药、氨基糖苷、青霉素、头孢菌素、四环素类、磺胺药物、氟喹诺、抗病毒素、大环内酯抗感染药和其它抗感染药。激素药物可以为选自以下的至少一种：皮质类固醇、雄激素或者至少一种促合成代谢类甾醇、雌激素或者至少一种孕酮、促性腺激素、抗糖尿病药物或者至少一种胰高血糖素、甲状腺激素、甲状腺激素拮抗剂、垂体激素和甲状旁腺激素样药物。该至少一种头孢菌素可以为选自以下的至少一种：头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢唑啉钠、头孢地尼、盐酸头孢吡肟、头孢克肟、头孢美唑钠、头孢尼西钠、头孢哌酮钠、头孢噻肟钠、头孢替坦二钠、头孢西丁钠、头孢泊肟酯、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟钠、头孢曲松钠、头孢呋辛酯、头孢呋辛钠、盐酸头孢氨苄、头孢氨苄一水合物、头孢拉定和氯碳头孢。
该至少一种皮质类固醇可以为选自以下的至少一种：倍他米松、醋酸倍他米松或倍他米松磷酸钠、倍他米松磷酸钠、醋酸可的松、地塞米松、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠、醋酸氟氢可的松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、环戊丙酸氢化可的松、氢化可的松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠、甲基泼尼松龙、醋酸甲基泼尼松龙、甲基泼尼松龙琥珀酸钠、泼尼松龙、醋酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松龙叔丁乙酯、泼尼松、曲安西龙、曲安萘德和二醋酸曲安西龙。该至少一种雄激素或合成代谢类固醇可以为选自以下的至少一种：达那唑、氟甲睾酮、甲基睾酮、癸酸诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、环戊丙酸睾酮、庚酸睾酮、丙酸睾酮和睾酮透皮系统。
该至少一种免疫抑制剂可以为选自以下的至少一种：硫唑嘌呤、巴利昔单抗、环孢霉素、达克珠单抗、淋巴细胞免疫球蛋白、莫罗单抗-CD3、麦考酚酸莫酯、盐酸麦考酚酸莫酯、西罗莫司、6-巯嘌呤、甲氨蝶呤、咪唑立宾和他克莫司。
该至少一种局部抗感染剂可以为选自以下的至少一种：阿昔洛韦、两性霉素B、壬二酸霜、杆菌肽、硝酸布康唑、磷酸克林霉素、克霉唑、硝酸益康唑、红霉素、硫酸庆大霉素、酮康唑、醋酸磺胺米隆、甲硝唑(局部用)、硝酸咪康唑、莫匹罗星、盐酸萘替芬、硫酸新霉素、呋喃西林、制霉菌素、磺胺嘧啶银、盐酸特比萘芬、特康唑、盐酸四环素、噻康唑和托萘酯。该至少一种杀疥剂或杀虱剂可以为选自以下的至少一种：克罗他米通、林丹、扑灭司林和除虫菊酯。该至少一种局部用皮质类固醇可以为选自以下的至少一种：二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、地索奈德、去羟米松、地塞米松、地塞米松磷酸钠、醋酸双氟拉松、醋酸氟轻松、氟轻松、氟氢缩松、丙酸氟替卡松、哈西奈德、氢化可的松、醋酸氢化可的松、丁酸氢化可的松、戊酸氢化可的松、糠酸莫米松和曲安奈德。(参见例如Nursing 2001DrugHandbook的第1098-1136页。)
抗IL12/23p40抗体组合物还可包含任何合适和有效量的组合物或药物组合物中的至少一种，该组合物包含至少一种与需要这种调节、治疗或治疗的细胞、组织、器官、动物或受试者接触或施用于其的抗IL12/23p40抗体，任选地还包含至少一种选自以下的药剂：至少一种TNF拮抗剂(例如但不限于TNF化学拮抗剂或蛋白质拮抗剂、TNF单克隆或多克隆抗体或片段、可溶性TNF受体(例如p55、p70或p85)或其片段、融合多肽、或者小分子TNF拮抗剂，例如TNF结合蛋白I或II(TBP-1或TBP-II)、奈瑞莫单抗(nerelimonmab)、英夫利昔单抗、依坦西普、CDP-571、CDP-870、阿非莫单抗、来那西普等)、抗风湿药(例如甲氨蝶呤、金诺芬、硫代葡萄糖金、硫唑嘌呤、依那西普、硫代苹果酸金钠、硫酸羟氯喹、来氟米特、柳氮磺吡啶)、免疫、免疫球蛋白、免疫抑制剂(例如硫唑嘌呤、巴利昔单抗、环孢霉素、达克珠单抗)、细胞因子或细胞因子拮抗剂。此类细胞因子的非限制性示例包括但不限于IL-1至IL-23等中的任一者。(例如IL-1、IL-2等)。合适的剂量是本领域中熟知的。参见例如Wells等人编辑，Pharmacotherapy Handbook，第2版，Appleton and Lange，Stamford，CT(2000)；″PDRPharmacopoeia，Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000″，Deluxe编辑，TarasconPublishing，Loma Linda，CA(2000)，这些参考文献中的每一篇参考文献以引用方式全文并入本文。
本发明的方法中使用的抗IL12/23p40抗体化合物、组合物或组合可以还包含任何合适的辅助剂中的至少一种，诸如但不限于稀释剂、粘结剂、稳定剂、缓冲剂、盐、亲脂性溶剂、防腐剂、助剂等。药学上可接受的辅助剂是优选的。制备此类无菌溶液的非限制性示例和方法为本领域公知的，诸如但不限于Gennaro编辑，Remington′s PharmaceuticalSciences，第18版，Mack Publishing Co.(Easton，PA)1990。可按常规方式选择适合于抗IL12/23p40、片段或变体组合物的给予方式、溶解性和/或稳定性的可药用载体，如本领域所公知或者如本文所述。
用于本发明组合物的药物赋形剂和添加剂包括但不限于：蛋白质、肽、氨基酸、脂质和碳水化合物(例如糖，包括单糖、二糖、三糖、四糖和低聚糖；衍生糖，诸如糖醇、醛糖酸、酯化糖等；以及多糖或糖聚合物)，药物赋形剂和添加剂可以单独或组合的方式存在，其单独或组合具有1-99.99重量％或体积％。示例性蛋白质赋形剂包括血清白蛋白，诸如人血清白蛋白(HSA)、重组人白蛋白(rHA)、明胶、酪蛋白等。还可以在缓冲能力方面起作用的代表性氨基酸/抗体成分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜等。一种优选的氨基酸是甘氨酸。
适用于本发明的碳水化合物赋形剂包括例如单糖，诸如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；二糖，诸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖等；多糖，诸如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖、淀粉等；以及糖醇，诸如甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇(葡糖醇)、肌醇等。用于本发明的优选碳水化合物赋形剂是甘露糖醇、海藻糖和棉子糖。
抗IL12/23p40抗体组合物还可包含缓冲剂或pH调节剂；通常，缓冲剂是从有机酸或碱制备的盐。代表性缓冲剂包括有机酸盐，诸如柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或邻苯二甲酸的盐；盐酸三羟甲基氨基甲烷或磷酸盐缓冲剂。用于本发明组合物的优选缓冲剂为有机酸盐，诸如柠檬酸盐。
另外，抗IL12/23p40抗体组合物可包括聚合赋形剂/添加剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、聚蔗糖(聚合糖)、葡萄糖结合剂(例如环糊精，例如2-羟丙基-β-环糊精)、聚乙二醇、调味剂、抗微生物剂、增甜剂、抗氧化剂、抗静电剂、表面活性剂(例如聚山梨酸酯，例如″TWEEN20″和″TWEEN 80″)、脂质(例如磷脂、脂肪酸)、类固醇(例如胆固醇)和螯合剂(例如EDTA)。
这些和附加的适用于本发明抗IL12/23p40抗体、部分或变体组合物的已知药物赋形剂和/或添加剂为本领域公知的，例如列于″Remington：The Science&Practice ofPharmacy″，第19版，Williams&Williams，(1995)，和列于″Physician’s Desk Reference″，第52版，Medical Economics，Montvale，NJ(1998)，这两个参考文献的公开内容以引用方式全文并入本文。优选的载体或赋形剂材料是碳水化合物(例如糖和醛醇)和缓冲剂(例如柠檬酸盐)或聚合物试剂。示例性载体分子为粘多糖透明质酸，其可用于关节内递送。
制剂
如上所指出的，本发明提供优选包含具有盐水或选定的盐的磷酸盐缓冲剂的稳定制剂，以及含有防腐剂的防腐溶液和制剂，以及适合于医药用途或兽医用途的多用途防腐制剂，这些制剂包含至少一种在可药用的配方中的抗ILl2/23p40抗体。防腐制剂包括至少一种公知的防腐剂或任选地选自由以下项组成的组：至少一种溶于含水稀释剂的苯酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苄醇、亚硝酸苯汞、苯氧基乙醇、甲醛、氯代丁醇、氯化镁(例如六水合物)、烷基苯甲酸酯(甲基、乙基、丙基、丁基等)、苯扎氯铵、苄索氯铵、脱氢乙酸钠和硫柳汞或它们的混合物。可以使用如本领域中已知的任何合适的浓度或混合物，例如0.001％至5％或其中的任何范围或值，诸如但不限于：0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或其中的任何范围或值。非限制性示例包括：无防腐剂、0.1％至2％间甲酚(例如0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.9％、1.0％)、0.1％至3％苄醇(例如0.5％、0.9％、1.1％、1.5％、1.9％、2.0％、2.5％)、0.001％至0.5％硫柳汞(例如0.005％、0.01％)、0.001％至2.0％苯酚(例如0.05％、0.25％、0.28％、0.5％、0.9％、1.0％)、0.0005％至1.0％对羟基苯甲酸烷基酯(例如0.00075％、0.0009％、0.001％、0.002％、0.005％、0.0075％、0.009％、0.01％、0.02％、0.05％、0.075％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.75％、0.9％、1.0％)等。
如上文指出的，本发明的方法使用包括包装材料和至少一个小瓶的制品，所述小瓶包含至少一种抗IL12/23p40抗体与规定的缓冲剂和/或防腐剂的溶液(任选溶于水性稀释剂中)，其中所述包装材料包括标签，该标签标明此类溶液可以在1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、9小时、12小时、18小时、20小时、24小时、30小时、36小时、40小时、48小时、54小时、60小时、66小时、72小时或更长时间段内保存。本发明还使用制品，其包含包装材料、包含冷干的至少一种抗IL12/23p40抗体的第一个小瓶和包含指定缓冲剂和/或防腐剂的水性稀释剂的第二个小瓶，其中所述包装材料包含指导受试者在水性稀释剂中重构至少一种抗IL12/23p40抗体，以形成可以在二十四小时或更长时间段内保存的溶液的标签。
根据本发明使用的抗IL12/23p40抗体可以通过重组手段制备，包括从哺乳动物细胞或转基因制剂制备，或者可以从其它生物来源纯化，如本文所述或如本领域中已知的。
抗IL12/23p40抗体的范围包括复溶后产生的量，如果在湿润/干燥系统中，则为约1.0μg/ml至约1000mg/ml的浓度，但是更低和更高的浓度也是可行的，并且取决于预期的递送媒介物，例如，溶液制剂将不同于经皮贴剂，肺、经粘膜或者渗透或微量泵方法。
优选地，水性稀释剂还任选地包含药学上可接受的防腐剂。优选的防腐剂包括选自由以下项组成的组的那些：苯酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等)、苯扎氯铵、苄索氯铵、脱氢乙酸钠和硫柳汞或它们的混合物。在制剂中使用的防腐剂的浓度是足以产生抗微生物作用的浓度。该浓度取决于所选防腐剂且容易由技术人员确定。
其它赋形剂例如等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂和防腐增强剂可任选且优选地添加到稀释剂中。等渗剂诸如甘油常常以已知的浓度使用。优选地添加生理学耐受的缓冲剂以提供改善的pH控制。制剂可以覆盖宽的pH范围，诸如约pH 4至约pH 10，优选的范围是约pH 5至约pH 9，最优选的范围是约6.0至约8.0。优选地本发明的制剂具有介于约6.8和约7.8之间的pH。优选的缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂，最优选地磷酸钠，特别是磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
其它的添加剂，诸如药学上可接受的增溶剂，如Tween 20(聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯)、Tween 40(聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单棕榈酸酯)、Tween 80(聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯)、Pluronic F68(聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物)和PEG(聚乙二醇)或者非离子型表面活性剂诸如聚山梨酸酯20或80或者泊洛沙姆184或188、
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多元醇、其它嵌段共聚物，以及螯合物诸如EDTA和EGTA，可以任选地被添加到制剂或组合物中以减少聚集。如果使用泵或塑料容器来施用制剂，则这些添加剂是特别有用的。药学上可接受的表面活性剂的存在减轻了蛋白质聚集的倾向。
该制剂可通过这样一种方法来制备，该方法包括将至少一种抗IL12/23p40抗体和防腐剂在水性稀释剂中混合，所述防腐剂选自由以下项组成的组：苯酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸烷基酯、(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等)、苯扎氯铵，氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞或它们的混合物。使用常规的溶解和混合程序将所述至少一种抗ILl2/23p40抗体和防腐剂在水性稀释剂中混合。为了制备合适的制剂，例如，将缓冲液中的测定量的至少一种抗IL12/23p40抗体与所需的防腐剂在缓冲液中以足以提供所需浓度的蛋白质和防腐剂的量组合。该方法的变型形式会是本领域普通技术人员认识到的。例如，成分添加的顺序、是否使用附加添加剂、制剂制备时的温度和pH都是可以为所用的施用浓度和方式进行最优化的因素。
这些制剂可以作为澄清溶液或作为双小瓶提供给受试者，所述双小瓶包括一小瓶冻干的抗IL12/23p40抗体，该抗体用第二小瓶进行复溶，该第二小瓶在水性稀释剂中含有水、防腐剂和/或赋形剂，优选地为磷酸盐缓冲剂和/或盐水和选择的盐。单个溶液小瓶或需要重构的双小瓶都可以多次再使用，并且可以满足受试者治疗的单个或多个周期，并且因此可以提供比目前可用的治疗方案更方便的治疗方案。
本发明制品可用于从立即到二十四小时或更长的时间里进行施用。因此，本发明受权利要求书保护的制品提供了对于受试者而言明显的优点。本发明的制剂可以任选地安全地储存于约2℃至约40℃的温度下，并且在长的时间内保持蛋白质的生物活性，从而允许包装标签标明溶液可在6小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时、72小时或96小时或更长的时间段内保持和/或使用。如果使用防腐稀释剂，则此类标签可包括长达1-12个月、半年、一年半和/或两年的使用期。
抗IL12/23p40抗体的溶液可以通过包括将至少一种抗体在水性稀释剂中混合的方法来制备。混合是使用常规溶解和混合程序来进行。为了制备合适的稀释液，例如，将水或缓冲液中的测定量的至少一种抗体以一定量合并，所述量足以提供蛋白质和任选的防腐剂或缓冲剂成所需的浓度。该方法的变型形式会是本领域普通技术人员认识到的。例如，成分添加的顺序、是否使用附加添加剂、制剂制备时的温度和pH都是可以为所用的施用浓度和方式进行最优化的因素。
受权利要求书保护的产品可以作为澄清溶液或作为双小瓶提供给受试者，这些双小瓶包括一小瓶冻干的抗IL12/23p40抗体，该抗体用装有水性稀释剂的第二小瓶进行复溶。单个溶液小瓶或需要重构的双小瓶都可以多次再使用，并且可以满足受试者治疗的单个或多个周期，并且因此提供比目前可用的治疗方案更方便的治疗方案。
受权利要求书保护的产品可以通过向药房、门诊或其它此类机构和单位提供澄清溶液或双小瓶来间接地提供给受试者，这些双小瓶包括一小瓶冻干的抗IL12/23p40抗体，该抗体用装有水性稀释剂的第二小瓶进行复溶。在这种情况下澄清溶液剂的容积尺寸可以最多为一升或甚至更大，从而提供大的贮存库，从中可以一次或多次取出较小部分的至少一种抗体溶液用于转移到较小的小瓶中，且通过药房或门诊提供给它们的顾客和/或受试者。
公认的包括单小瓶系统的装置包括用于递送溶液的笔式注射器装置，诸如BD笔、BD
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B-
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笔、
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和
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、Genotronorm
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、Humatro
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、Reco-
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、Roferon
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、
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、J-tip Needle-Free
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Medi-
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、
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，例如由以下公司制造或开发：BectonDickensen(Franklin Lakes，NJ，www.bectondickenson.com)；Disetronic(Burgdorf，Switzerland，www.disetronic.com)；Bioject，Portland，Oregon(www.bioject.com)；National Medical Products，Weston Medical(Peterborough，UK，www.weston-medical.com)；Medi-Ject Corp(Minneapolis，MN，www.mediject.com)以及类似的合适装置。公认的包括双小瓶系统的装置包括那些用于在筒中将经冻干的药物进行重构的笔式注射器系统，而该筒用于递送该重构溶液，诸如
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。其它合适的装置的示例包括预填充注射器、自动注射器、无针注射器和无针IV输注器。
产品可包括包装材料。包装材料除了提供管理机构要求的信息之外，还提供本产品可得以使用的条件。对于双小瓶、湿润/干燥产品，本发明的包装材料提供指导受试者，视情况而定，在水性稀释剂中重构至少一种抗IL12/23p40抗体以形成溶液，以及在2-24小时或更长时间段内使用溶液的说明书。对于单个小瓶、溶液产品、预填充注射器或自动注射器，标签表明这种溶液可以在2小时至24小时或更长时间内使用。产品可用于人药物产品用途。
本发明的方法中使用的制剂可通过这样一种方法制备，该方法包括将抗IL12/23p40和所选的缓冲剂混合，所述缓冲剂优选为含有盐水或所选盐的磷酸缓冲液。用常规溶解和混合方法将抗IL12/23p40抗体和缓冲液在水性稀释剂中混合。例如，为了制备合适的制剂，将水或缓冲液中的测定量的至少一种抗体与所需缓冲剂在一定量的水中混合，所述量足以提供所述蛋白质和缓冲剂成所需浓度。该方法的变型形式会是本领域普通技术人员认识到的。例如，成分添加的顺序、是否使用附加添加剂、制剂制备时的温度和pH都是可以为所用的施用浓度和方式进行最优化的因素。
本发明的方法提供了药物组合物，该药物组合物包含对人或动物受试者施用有用和可接受的各种制剂。使用″标准状态″的水作为稀释剂和本领域普通技术人员熟知的常规方法制备这样的药物组合物。例如，可首先提供缓冲组分如组氨酸和组氨酸单盐酸盐水合物，然后在″标准状态″下加入适当的非最终体积的水稀释剂、蔗糖和聚山梨酸酯80。然后可添加分离的抗体。最后，使用水作为稀释剂，在″标准状态″条件下将药物组合物的体积调节至所需的最终体积。本领域技术人员将认识到许多适用于制备药物组合物的其它方法。
药物组合物可以为水溶液或悬浮液，其包含每单位水体积的指定质量的每种成分或具有″标准状态″的指定pH。如本文所用，术语″标准状态″是指25℃+/-2℃的温度和1大气压的压力。术语″标准状态″在本领域中不是用于表示单个本领域公认的温度或压力，但是相反是参考状态，其指定用于描述在参考″标准状态″条件下具有特定组成的溶液或悬浮液的温度和压力。这是因为溶液的体积部分为温度和压力的函数。本领域技术人员将认识到，与本文公开的那些相当的药物组合物可以在其它温度和压力下生产。这些药物组合物是否与这里公开的那些相同，应该在上面定义的″标准状态″条件下测定(例如25℃+/-2℃和1大气压的压力)。
重要的是，这样的药物组合物可以含有每单位体积药物组合物″约″一定值(例如″约0.53mg L-组氨酸″)的组分质量或具有约一定值的pH值。如果药物组合物中存在的分离的抗体能够结合肽链，而分离的抗体存在于药物组合物中或在从药物组合物中除去分离的抗体之后(例如，通过稀释)，则药物组合物中存在的组分质量或pH值为″约″给定的数值。换句话说，当将分离的抗体置于药物组合物中之后分离的抗体的结合活性维持并且可检测时，诸如组分质量值或pH值的值为″约″给定的数值。
执行竞争结合分析以确定IL12/23p40 mAb是否与相似的或不同的表位结合和/或彼此竞争。将Abs单独涂覆在ELISA板上。添加竞争mAb，然后加入生物素化的hrIL-12或IL-23。对于阳性对照，可以使用相同mAb来涂布作为竞争性mAb(″自我竞争″)。使用链霉抗生物素蛋白检测IL12/IL23p40或IL-23结合。这些结果证明mAb是否识别IL12/23p40或IL-23上相似或部分重叠的表位。
在药物组合物的一个实施方案中，分离的抗体浓度为每毫升药物组合物约77mg至约104mg。在药物组合物的另一实施方案中，pH为约5.5至约6.5。
可以将稳定或防腐的制剂以澄清溶液或双小瓶的形式提供给受试者，所述双小瓶包括一小瓶冻干的至少一种抗IL12/23p40抗体，其用装有在水性稀释剂中的防腐剂或缓冲剂和赋形剂的第二小瓶重构。单个溶液小瓶或需要重构的双小瓶都可以多次再使用，并且可以满足受试者治疗的单个或多个周期，并且因此提供比目前可用的治疗方案更方便的治疗方案。
其它使抗IL12/23p40稳定的制剂或方法可导致产生包含该抗体的冻干粉末的非澄清溶液。这种非澄清溶液包括包含颗粒悬浮液的制剂，所述颗粒为在尺寸不同的各称为微球体、微粒、纳米颗粒、纳米球体或脂质体的结构中含有抗IL12/23p40抗体的组合物。通过使包含活性剂和聚合物的水相与非水相接触，然后蒸发非水相以使颗粒从水相中聚结，可形成此类包含活性剂的相对均匀、基本上球形的颗粒制剂，如美国专利4,589,330教导的。多孔微粒可使用包含分散于连续溶剂中的活性剂和聚合物的第一相，并通过冷冻干燥或稀释-提取-沉淀从悬浮液中移除所述溶剂来制备，如美国专利4,818,542教导的。用于此类制备的优选聚合物为天然或合成的共聚物或聚合物，所述天然或合成的共聚物或聚合物选自由以下项组成的组：明胶琼脂、淀粉、阿拉伯半乳聚糖、白蛋白、胶原、聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)丙交酯、聚(ε-己内酯)、聚(ε-己内酯-CO-乳酸)、聚(ε-己内酯-CO-乙醇酸)、聚(β-羟基丁酸)、聚环氧乙烷、聚乙烯、聚(2-氰基丙烯酸烷基酯)、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、聚酰胺、聚(氨基酸)、聚(2-羟乙基DL-天冬酰胺)、聚(酯脲)、聚(L-苯丙氨酸/乙二醇/1，6-二异氰酸根合己烷)和聚(甲基丙烯酸甲酯)。特别优选的聚合物为聚酯，诸如聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)丙交酯、聚(ε-己内酯)、聚(ε-己内酯-CO-乳酸)和聚(ε-己内酯-CO-乙醇酸)。可用于溶解聚合物和/或活性物的溶剂包括：水、六氟异丙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、己烷、苯或六氟丙酮倍半水合物。将含有活性物的相与第二相分散的方法可包括施加压力迫使所述第一相通过喷嘴中的孔口而实现小滴形成。
干粉制剂可由除冻干之外的方法产生，诸如通过喷雾干燥或通过蒸发的溶剂提取，或通过结晶组合物的沉淀，然后进行一个或多个步骤以除去水性或非水性溶剂。喷雾干燥的抗体制品的制备在美国专利6,019,968中有所教导。可通过将抗体和任选的赋形剂于溶剂中(所成)的溶液或浆液在能提供可呼吸的干粉的条件下进行喷雾干燥，来生产基于抗体的干粉组合物。溶剂可包括易于干燥的极性化合物，诸如水和乙醇。可以通过在不存在氧的情况下执行喷雾干燥操作，例如在氮气氛下或通过使用氮作为干燥气体执行喷雾干燥操作，而使抗体的稳定性得到增强。另一种相对干燥的制剂为分散在悬浮介质中的多个穿孔微结构的分散体，所述悬浮介质通常包含氢氟烷推进剂，如WO9916419教导的。可使用定量吸入器将稳定化分散体施用于受试者的肺。可用于喷雾干燥药物的商业制备中的设备由Buchi Ltd.或Niro Corp制造。
在本文所述的稳定或保存制剂或溶液中的抗IL12/23p40抗体可根据本发明经由多种递送方法施用于受试者，所述递送方法包SC或IM注射；经皮、肺部、经粘膜、植入物、渗透泵、药液筒、微型泵或其它技术人员知道的工具，如本领域众中熟知的。
治疗应用
本发明还提供了使用本发明的抗IL12/23p40抗体来调节或治疗细胞、组织、器官、动物或受试者中的本领域公知或本文所述的溃疡性结肠炎的方法，例如用治疗有效量的抗IL12/23p40抗体施用于或接触该细胞、组织、器官、动物或受试者。
本发明的任何方法都可包括将有效量的包含抗IL12/23p40抗体的组合物或药物组合物施用于需要此类调节、治疗或疗法的细胞、组织、器官、动物或受试者。这种方法可任选地还包括用于治疗这类疾病或病症的共同施用或联合疗法，其中施用抗IL12/23p40抗体、其指定部分或变体还包括在这之前、与此同时和/或在这之后施用至少一种选自以下的药剂：至少一种TNF拮抗剂(例如但不限于TNF化学拮抗剂或蛋白质拮抗剂、TNF单克隆或多克隆抗体或片段、可溶性TNF受体(例如p55、p70或p85)或其片段、融合多肽、或者小分子TNF拮抗剂、例如TNF结合蛋白I或II(TBP-1或TBP-II)、奈瑞莫单抗、英夫利昔单抗、依那西普(EnbrelTM)、adalimulab(HumiraTM)、CDP-571、CDP-870、阿非莫单抗、来那西普等)、抗风湿药物(例如甲氨蝶呤、金诺芬、硫代葡萄糖金、硫唑嘌呤、硫代苹果酸金钠、硫酸羟氯喹、来氟米特、柳氮磺吡啶)、肌肉放松剂、麻醉剂(narcotic)、非甾类抗炎药物(NSAID)(例如5-氨基水杨酸盐)、止痛药、麻醉剂(anesthetic)、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻断剂、抗微生物剂(例如氨基糖苷、抗真菌剂、抗寄生虫剂、抗病毒、碳青霉烯类、头孢菌素、氟喹诺酮、大环内酯、青霉素、磺胺药物、四环素、别的抗微生物剂)、抗银屑病剂、皮质类固醇、合成代谢类固醇、糖尿病相关药剂、矿物质、营养剂、甲状腺剂、维生素、钙相关激素、止泻剂、镇咳剂、止吐剂、抗溃疡剂、轻泻剂、抗凝剂、促红细胞生成素(例如红细胞生成素α)、非格司亭(例如G-CSF、Neupogen)、沙格司亭(GM-CSF、Leukine)、免疫接种剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂(例如巴利昔单抗、环孢霉素、达克珠单抗)、生长激素、激素替代药物、雌激素受体调节剂、散瞳剂、睫状肌麻痹剂、烷基化剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、放射性药物、抗抑郁药、抗躁狂剂、抗精神病药物、抗焦虑药物、催眠剂、拟交感神经药物、兴奋剂、多奈哌齐、他克林、哮喘药物、β激动剂、吸入类固醇、白三烯抑制剂、甲基黄嘌呤、色甘酸、肾上腺素或类似物、阿法链道酶(Pulmozyme)、细胞因子或细胞因子拮抗剂。合适的剂量是本领域中熟知的。参见例如Wells等人编辑，Pharmacotherapy Handbook，第2版，Appleton and Lange，Stamford，CT(2000)；″PDR Pharmacopoeia，Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000″，豪华版，TarasconPublishing，Loma Linda，CA(2000)；″Nursing 2001Handbook of Drugs，第21版″，Springhouse Corp.，Springhouse，PA，2001；″Health Professional’s Drug Guide2001″，Shannon，Wilson，Stang编辑，Prentice-Hall，Inc，Upper Saddle River，NJ，这些参考文献中的每一篇参考文献均以引用方式全文并入本文。
医疗性治疗
通过在对其有需要的受试者中施用有效量或有效剂量的抗IL12/23p40抗体组合物来影响溃疡性结肠炎的治疗。施用的剂量可根据公知的因素而变化，诸如特定药剂的药效特征及其施用方式和途径；接受者的年龄、健康和体重；症状的性质和程度、同时治疗的种类、治疗的频率以及期望的效果。在一些情况下，为了实现所需治疗量，可能有必要提供重复施用，即重复单独施用特定的监控剂量或计量剂量，其中单独施用可以重复直至实现所需日剂量或效果。
在为对其有需要的受试者提供治疗克罗恩病的安全和有效的一个示例性方案中，每次施用向受试者静脉内施用约130mg的总剂量的抗IL12/23p40抗体。例如，适当地调节所施用的组合物的总体积以在每次施用向受试者提供80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg或180mg抗体的目标剂量。
在为对其有需要的受试者提供治疗重度活动性UC的安全和有效的另一个示例性方案中，每次施用向受试者静脉内施用约6.0mg/kg±1.5mg/kg的总剂量的抗IL12/23p40抗体。例如，适当地调节所施用的组合物的总体积以向受试者提供每次施用3.0mg/kg、3.5mg/kg、4.0mg/kg、4.5mg/kg、5.0mg/kg、5.5mg/kg、6.0mg/kg、6.5mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、8.5mg/kg或9.0mg/kg受试者体重的抗体目标剂量。
每次施用待施用于受试者的抗IL12/23p40受体的总剂量可在约30分钟至180分钟(优选地60分钟至120分钟，诸如30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、150分钟或180分钟)的时间内通过静脉内输注进行。
在为对其有需要的受试者提供治疗重度活动性UC的安全和有效的另一个示例性方案中，每次施用向受试者皮下施用约90mg的总剂量的抗IL12/23p40抗体。例如，适当地调节所施用的组合物的总体积以向受试者提供每次施用40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg或140mg的抗体的目标剂量。每次施用的目标剂量可在单次皮下注射中施用或在多次皮下注射中施用，诸如1次、2次、3次、4次、5次或更多次皮下注射。
抗IL12/23p40抗体的总剂量的施用可每天一次、每周一次、每月一次、每六个月一次等，持续一天、一周、一个月、六个月、1年、2年或更长的时间段。可将抗IL12/23p40抗体的多次施用(每次以本文所述的总剂量)施用给对其有需要的受试者。
适合于内部施用的剂型(组合物)通常每单位或容器包含约0.001毫克至约500毫克的活性成分。
对于肠胃外施用，抗体可以配制成溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、粉剂或冻干粉剂，它们与药学上可接受的肠胃外用的介质联合或分开提供。此类介质的示例是水、盐水、林格溶液、葡萄糖溶液和1％至10％的人血清白蛋白。也可以使用脂质体和非水性介质，诸如固定油。介质或冻干粉剂可含有维持等渗性(例如氯化钠、甘露糖醇)和化学稳定性(例如缓冲剂和防腐剂)的添加剂。可通过已知的或合适的技术对制剂进行灭菌。
合适的药用载体在Remington′s Pharmaceutical Sciences，A.Osol的最近版本(该领域的标准参考文本)中有描述。
许多公知和开发的模式根据本发明可用于施用药物有效量的IL12/23p40抗体。本发明的抗IL12/23p40抗体可使用适用于通过吸入方式或本文所述或本领域已知的其它方式施用的多种装置和方法中的任一种，在载体中作为溶液剂、乳剂、胶体或混悬剂递送或作为干粉剂递送。
用于肠胃外施用的制剂可含有作为普通赋形剂的无菌水或盐水、聚亚烷基二醇诸如聚乙二醇、植物来源的油、氢化萘等。注射用水性或油性混悬剂可通过使用适当的乳化剂或湿润剂和悬浮剂根据已知方法来制备。注射用药剂可以为无毒的、非经口施用的稀释剂，诸如溶于溶剂的水溶液剂、无菌注射液或混悬剂。作为可用的介质或溶剂，允许使用水、林格氏溶液、等渗盐水等；作为普通溶剂或悬浮溶剂，可以使用无菌不挥发油。为了这些目的，可以使用任何种类的不挥发性油和脂肪酸，包括天然的或合成的或半合成的脂肪油或脂肪酸；天然的或合成的或半合成的甘油单酯或甘油二酯或甘油三酯。胃肠外施用是本领域中已知的，包括但不限于常规形式的注射、如美国专利5,851,198中所述的气压式无针注射装置和如美国专利5,839,446中所述的激光穿孔器装置，这些文献以引用方式全文并入本文。
另选的递送
本发明还涉及通过下列方式施用抗IL12/23p40抗体：肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、快速浓注、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或透皮方式。可以制备抗IL12/23p40抗体组合物用于肠胃外(皮下、肌肉内或静脉内)或任何其它施用，特别是以液体溶液或悬浮液的形式；用于阴道或直肠施用，特别是半固体形态，诸如但不限于乳膏和栓剂；用于口腔或舌下施用，诸如但不限于片剂或胶囊剂形式；或鼻内，诸如但不限于粉末、滴鼻剂或气溶胶或某些药剂的形式；或透皮，诸如不限于凝胶、软膏、乳液、悬浮液或贴剂递送系统，该贴剂递送系统含有化学增强剂如二甲基亚砜以改变皮肤结构或增加透皮贴剂中的药物浓度(Junginger等人，″Drug Permeation Enhancement″，Hsieh，D.S.编辑，第59-90页，(Marcel Dekker，Inc.New York 1994，以引用方式全文并入本文中)，或含有氧化剂，其使得包含蛋白质和肽的制剂能够应用于皮肤上(WO 98/53847)，或应用电场以产生瞬间转运途径，例如电穿孔，或增加带电药物通过皮肤的运动性，例如离子电渗疗法，或应用超声，例如透皮吸收超声波(美国专利4,309,989和4,767,402)(上述出版物和专利以引用方式全文并入本文)。
实施方案
本发明还提供了以下非限制性实施方案。
1.一种治疗对其有需要的受试者的克罗恩病的方法，所述方法包括：
在治疗之前对受试者执行内窥镜检查，以测量基线克罗恩病简单内窥镜评分(SES-CD)和基线CDAI；
向所述受试者施用包含临床证实安全并且临床证实有效量的抗IL-12/IL-23p40抗体的药物组合物，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQID NO：1的互补决定区重链1(CDRH1)氨基酸序列、SEQ ID NO：2的CDRH2氨基酸序列以及SEQID NO：3的CDRH3氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4的互补决定区轻链1(CDRL1)氨基酸序列、SEQ ID NO：5的CDRL2氨基酸序列以及SEQ ID NO：6的CDRL3氨基酸序列；基于重量的初始IV剂量为按每kg受试者重量6mg抗体，并且在施用所述初始剂量后8周的皮下施用剂量为90mg抗体；
在施用初始剂量后16周，测量受试者的(i)选自C-反应性蛋白(CRP)和/或粪便钙卫蛋白(FCal)水平的克罗恩病相关联的生物标志物和(ii)选自CDAI和SES-CD的临床症状；以及
(iii)对于测量出CDAI＜220、相对基线CDAI改善小于70分、CRP≤10mg/L和/或FCal≤250ug/g的受试者，在施用初始剂量后16周皮下施用90mg抗体，并且在第16周时皮下施用后每4周皮下施用90mg抗体；或(iv)对于测量出SES-CD评分相对于基线SES-CD评分改善小于25％的受试者，在施用初始剂量后16周皮下施用90mg抗体，并且在第16周时皮下施用后每8周皮下施用90mg抗体。
2.根据实施方案1所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的重链可变区和SEQ ID NO：8的氨基酸序列的轻链可变区。
3.根据实施方案1所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链和SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链。
4.根据实施方案1至3中任一项所述的方法，其中优选地在所述治疗的第0周时以约6.0mg/kg所述受试者体重或每次施用130mg的剂量将所述抗体静脉内施用于所述受试者。
5.根据实施方案1至4中任一项所述的方法，其中根据测量的临床参数所确定的，优选地在所述治疗的第8周和第16周时并且优选地在其后每4周或8周以每次施用约90mg的剂量将所述抗体进一步皮下施用于所述受试者。
6.根据实施方案1至5中任一项所述的方法，其中所述受试者先前对选自由以下项组成的组的至少一种疗法治疗失败或耐受不良：抗TNF、维多珠单抗、皮质类固醇、硫唑嘌呤(AZA)和6巯嘌呤(6MP)，或者所述受试者已表现出皮质类固醇依赖性。
7.根据实施方案1至6中任一项所述的方法，其中用于静脉内施用的所述药物组合物还包含在pH 6.0下含有10mM的L-组氨酸、8.5％(w/v)的蔗糖、0.04％(w/v)的聚山梨酸酯80、0.4mg/mL的L-甲硫氨酸和20μg/mL的EDTA二钠盐脱水物的溶液。
8.根据实施方案1至6中任一项所述的方法，其中用于皮下施用的所述药物组合物还包含在pH 6.0下含有6.7mM的L-组氨酸、7.6％(w/v)的蔗糖、0.004％(w/v)的聚山梨酸酯80的溶液。
已总体地描述了本发明，通过参考下面的实施例将更容易理解本发明，这些实施例仅以示例的方式给出并且无意于作为限制。通过以下非限制性实施例说明本发明的进一步细节。说明书中所有引文的公开内容以引用方式明确地并入本文。
示例
实施例：将治疗与目标策略(T2T)与护理标准(SoC)进行比较的用于治疗克罗恩病 患者的优特克单抗的3b期研究
方法概要
加入具有中度至重度活性克罗恩氏病(CD)(CD活动系数[CDAI]220-450)和克罗恩病简单内窥镜评分([SES-CD]≥3)，并且对常规疗法和/或一种生物制剂失败的成年患者。患者在第0周接受约6mg/kg的IV、基于体重的优特克单抗(UST)剂量(基线[BL])；在第8周皮下施用(SC)90mg UST。在第16周，在对患者执行内窥镜检查之后，将CDAI 70应答者随机分配(1∶1)到T2T治疗组或SoC治疗组。基于SES-CD评分相对于BL的25％的改善，将T2T组中的患者分配到SC UST q12w或q8w。从第16周至第48周起，如果不满足以下目标，则将UST剂量进一步调节至q4w：CDAI＜220并且相对于BL改善≥70分，并且C反应性蛋白(CRP)≤10mg/L或粪便钙卫蛋白(FCal)≤250μg/g。尽管进行了UST q4w但未能达到治疗目标的患者将中止研究。在SoC组中，UST剂量由研究人员基于EU SmPC(q12w或q8w)分配。主要终点：第48周的内窥镜应答(SES-CD评分相对于集中读取的内窥镜上的BL降低≥50％)。无应答者归因(NRI)和末次观察前推(LOCF)分别用于分析缺失的二分变量和连续变量。LOCF分析也是预先计划的主要终点的敏感性分析。所有报告的p值均为名义值。
结果概要
总共500名患者入组。在第16周，441名患者实现了CDAI 70应答并且被随机分配到T2T(n＝220)或SoC(n＝221)；T2T和SoC中分别有75％和86％完成了48周的治疗。在第48周，T2T组中达到主要终点的患者的比例与SoC组相比为：37.7％对29.9％(p＝0.0933)。在预先指定的敏感性分析(LOCF)中，各组间有显著差异：40.0％(T2T)对30.8％(SoC)(p＝0.0494(LOCF])；在第48周，T2T组和SoC组均获得较高的临床应答率：68.2％对77.8％(p＝0.0212)(NRI)/89.5％对89.6％(LOCF；NS)；临床缓解为61.4％对69.7％(NRI)/76.8％对78.3％(LOCF；NS)；FCal的改善≥50％，39.4％对46.5％(NRI)/63.1％对60.6％(LOCF；NS)和CRP水平41.7％对53.3％，p＝0.032(NRI)/53.2％对57.2％(LOCF，NS)。其它端点参见表。在T2T组和SoC组中，59.2％(122/206)和53.2％(116/218)的患者开始进行UST q12w；59.8％(73/122)和63.8％(74/116)的患者在第48周仍然进行q12w。在开始进行q8w的患者中，T2T和SoC组中40.5(34/84)和78.4％(80/102)在第48周保持该方案。在第48周，T2T组中17％(35/206)的患者进行q4w给药。没有报告新的安全信号。
长期延长(LTE；从第48周到第104周)旨在探索临床症状、内窥镜检查和生物标志物驱动的剂量调整(包括降阶梯治疗)算法的有效性。从第48周开始直至第104周，患者在LTE期间继续接受皮下优特克单抗治疗。在q12w/q8w/q4w之间基于以下目标增减优特克单抗给药的次数：在第48周时的克罗恩病简单内窥镜评分[SES-CD]评分≤2)和无皮质类固醇的(CS)临床缓解(≥16周的时间段的[CDAI评分＜150分])；以及随后在间隔8周的2次连续访问时的无CS临床缓解和生物标志物缓解(C-反应性蛋白≤10mg/L和粪便钙卫蛋白≤250μg/g)。进行q4w给药中未能达到目标的患者中止研究。提供的结果为无应答者归因(NRI)分析，仅显示进入LTE的患者(修改后的RAS[mRAS])。
在第16周随机分配到T2T组或SoC组的440名患者中，有74名在第48周前退出。在完成第48周研究的剩余366名患者中，43名中止研究并且没有进入LTE；在这些患者中，15名进行q4w给药的患者因未达到目标而中止研究。在第48周，323名患者进入LTE(mRAS)：7.7％的患者进行q4w给药，48.6％的患者进行q8w给药，并且43.6％的患者进行q12w给药。在排除8名未经治疗的患者后，在第104周/早期退出时，这些比例分别为14.3％、39.4％和46.3％。总共20.1％的患者在完成第104周之前中止了研究。总体上，38.4％的患者接受的剂量在LTE期间增加/减少至少一次，类似比例的患者接受的剂量增加(22.9％)或减少(19.2％)。在第48周，进入LTE的患者中观察到较高比例的患者出现临床应答和缓解(分别为92.6％和83.9％)，并且在第104周保持较高比例(分别为70.9％和68.4％)。在LTE的过程中，患者在进入LTE时的内窥镜应答和缓解的比例分别为43.7％和17.0％，而在第104周时为39.3％和14.6％(表4)。在LTE期间没有观察到新的安全信号。
结论概要
STARDUST是第一个在第16周使用内窥镜检查指导CD患者剂量增加的随机T2T试验。在用UST进行维持治疗48周后，与SoC组相比，T2T组达到内窥镜应答的患者比例更高。T2T可以作为医师指导UST给药方案决策的另一个工具。总体而言，在第48周，使用UST的两组患者都实现了较高的临床缓解和生物标志物应答。类似比例的患者(20％)在LTE期间按照设定目标进行剂量增加/减少；不过，大多数患者在第104周完成了标记的优特克单抗给药。大多数进入LTE的患者在第104周时出现临床应答和缓解。灵活的优特克单抗给药使得能够保持在LTE期间出现临床和内窥镜应答和缓解的患者的比例。优特克单抗在第104周具有有利的风险收益比。
目的
验证基于以下条件的UST维持策略的假设：
·早期内窥镜检查；
·定期评估生物标志物(fCal，CRP)和临床症状(CDAI)；
·在用UST治疗48周后分析发现，后续调整治疗以达到目标
在获得内窥镜结果改善方面比实际维持策略更成功。
图2示出了基于CDAI、CRP和FCal测量结果的研究设计和剂量调整标准。对于在存在活动性疾病的情况下BL处CRP没有升高的(即，在第0周CRP≤2.87mg/L)的患者，CRP不被视为是用于剂量调整的生物标志物目标，因此这些患者的治疗目标将是实现以下内容：
CDAI＜220并且CDAI评分相对于BL(第0周)的改善≥70分，并且FCal≤250μg/g。
试验包括：
·对常规疗法和/或一种生物试剂失败的中度至重度活性克罗恩病(CDAI 220-450和SES-CD≥3)患者(年龄≥18岁)有资格参加该试验。
·符合条件的患者按重量分级接受单次IV剂量(约6mg/kg的UST)，随后在第8周皮下施用(SC)90mg UST。
·在第16周，将CDAI 70应答者随机分配到T2T或SoC治疗组(1∶1比例)。
·在第8周、第16周和第48周分析的关键终点(NRI和LOCF归因)
-主要终点
·内窥镜应答(SES-CD评分相对于基线下降≥50％)
-关键次要终点
·总体内窥镜缓解(SES-CD评分≤2)
·粘膜愈合(在任何回肠结肠段中完全不存在粘膜溃疡)
·CDAI 70应答(CDAI总分相对于基线的改善≥70分)
·临床应答(相对于基线CDAI总评分降低≥100分，或CDAI总评分＜150)
·临床缓解(CDAI总分＜150分)
·生物标志物(fCal和CRP)相对于基线的变化
如下执行统计分析。
·FAS包括所有接受至少一剂UST的入组患者。
·RAS包括第16周随机分组的所有患者(CDAI 70应答者)。
·无应答者归因(NRI)和末次观察前推(LOCF)分别用于分析缺失的二分变量和连续变量。LOCF分析也是预先计划的主要终点的敏感性分析。
·对于二分终点，使用CMH卡方检验在处理组之间进行检验。p值(名义值)基于CMH检验，两侧α水平为0.05，通过基线SES-CD评分(≤16，＞16)和先前暴露于生物制剂(无或1)分层
·采用方差分析(ANOVA)或协方差分析(ANCOVA)将连续终点与作为协变量的基线值和分层因子进行比较。如果考虑正态假设，则将使用关于van der Waerden正态评分的ANOVA或ANCOVA。
·除非另外指明，否则将使用分层对数秩检验比较治疗组之间的事件发生时间终点，其中先前暴露于生物制剂和基线SES-CD评分(≤16或＞16)作为分层因素。
对于T2T组中的剂量分布，在第16周59％进行q12w，并且在第16周41％进行q8w(n＝206)。在第48周，T2T组中36％进行q12w，27％进行q8w，并且17％进行q4w(20％中止)。在开始进行q12w的患者中，59.8％(73/122)在第48周仍然进行q12w。在开始进行q8w的患者中，40.5(34/84)在第48周继续保持q8w。
对于SoC组中的剂量分布，在第16周53％进行q12w，并且在第16周47％进行q8w(n＝218)。在第48周，SoC组中35％进行q12w，并且52％进行q8w(13％中止)。在开始进行q12w的患者中，63.8％(74/116)在第48周仍然进行q12w。在开始进行q8w的患者中，78.4％(80/102)在第48周继续保持该方案。
图5A、图5B、图6A、图6B和图7示出了用不同变量测量的内窥镜应答。主要终点为48周时的内窥镜应答(SES-CD改善≥50％)。T2T和SoC组(NRI归因)中的数值较高，分别为37.7％和29.9％，p＝0.09。仅包括因无效而中止研究的患者的LOCF或NRI：T2T组与SoC组的显著性为40.0％和30.8％，LOCF的p＜0.05，NRI为43.0％和32.3％，p＝0.036(仅包括无效D/C)。次要终点(LOCF)是在w48相对于BL的平均SES-CD变化，在T2T和SoC组中，SES-CD具有≥25％的改善％pts，内镜缓解和粘膜愈合相似。在第16周，T2T的SES-CD相对于BL值达到有实际意义的变化，一直持续到第48周。
图8和图9示出了临床终点。次要终点在第48周时的平均CDAI相对于基线的变化在T2T和SoC中相似；在第8周达到相对于BL的有实际意义的变化，一直持续到第48周。两个研究组的临床应答(CHANGE≥100或CDAI评分＜150)、临床缓解(CDAI评分＜150)和CDAI 70应答相似。
图10A和图10B示出了在第48周RAS NRI和RAS LOCF的生物标志物结果。次要终点是：T2T和SoC在所有时间点的fCal和CRP相对于基线的平均变化是类似的。在第8周达到相对于BL的有实际意义的变化，一直持续到第48周。在两个研究组中，fCal和CRP在48周时改善≥50％，fCal和CRP水平正常化和完全生物标志物应答相似。
表1-第48周的患者处置(RAS)
Figure BDA0004164661630000541
Figure BDA0004164661630000551
完成者包括具有在第48周访视窗口内的提前中止访视的受试者。T2T和SoC分别为75％和86％，完成了48W的治疗。
表2-人口统计特征和基线特征的汇总
Figure BDA0004164661630000552
Figure BDA0004164661630000561
表3：第48周的安全性总结
AE，n(％) T2T(n＝220) SoC(n＝221) RAS(N＝441)
任何AE 189(85.9) 179(81.0) 368(83.4)
与研究药物相关的AE 48(21.8) 54(24.4) 102(23.1)
任何SAE 27(12.3) 29(13.1) 56(12.7)
与研究药物相关的SAE 4(1.8) 4(1.8) 8(1.8)
导致中止的AE 12(5.5) 20(9.0) 32(7.3)
致死的AE 2(0.9) 0 2(0.5)
共同的AEc
感染和侵染 102(46.4) 95(43.0) 197(44.7)
鼻咽炎 29(13.2) 29(13.1) 58(13.2)
胃肠道疾病 88(40.0) 88(39.8) 176(39.9)
腹痛 23(10.5) 19(8.6) 42(9.5)
肌肉骨骼和结缔组织疾病 48(21.8) 40(18.1) 88(20.0)
关节痛 24(10.9) 19(8.6) 43(9.8)
神经系统疾病 35(15.9) 31(14.0) 66(15.0)
头痛 24(10.9) 21(9.5) 45(10.2)
一般疾病和施用部位病症 49(22.3) 38(17.2) 87(19.7)
皮肤及皮下组织异常 33(15.0) 28(12.7) 61(13.8)
严重AE 27(12.3) 29(13.1) 56(12.7)
感染和侵染 4(1.8％) 12(5.4％) 16(3.6％)
与输注相关联的AE 4(1.8％) 5(2.3％) 9(2.0％)
注射部位反应 2(0.9％) 2(0.9％) 4(0.9％)
如果被研究人员评估为可能、很可能或极可能与研究药剂相关，则AE被分类为相关。致死的AE基于AE致命结果。根据研究人员的判断，一例死亡原因未知，一例死于心血管原因(未经尸体剖检证实)——两例死亡均与研究药物无关。至少5％的患者报告发生了AE。与输注相关联的AE是指在输注后1小时内发生的事件。
表4：到第104周的临庆结果
Figure BDA0004164661630000571
Figure BDA0004164661630000572
Figure BDA0004164661630000581
Figure BDA0004164661630000591
Figure BDA0004164661630000601
Figure BDA0004164661630000611
Figure BDA0004164661630000621
Figure BDA0004164661630000631
Figure BDA0004164661630000641
Figure BDA0004164661630000651
Figure BDA0004164661630000661
序列表
<110> JANSSEN BIOTECH, INC.
LAVIE, FREDERIC
LE BARS, MANUELA
PLOTNICK, MICHAEL
SLOAN, SHELDON
<120> 用抗IL12/IL23抗体治疗克罗恩病的方法
<130> JBI6409WOPCT1
<140> 待转让
<141> 2021-10-07
<150> 63/089786
<151> 2020-10-09
<150> 63/235188
<151> 2021-08-20
<160> 11
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/Il-23p40抗体互补决定区重链2
<400> 1
Thr Tyr Trp Leu Gly
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/Il-23p40抗体互补决定区重链2
<400> 2
Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/IL23p40抗体互补决定区轻链2
<400> 3
Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/IL23p40抗体互补决定区轻链1
<400> 4
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/IL23p40抗体互补决定区轻链2
<400> 5
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/IL-23p40抗体互补决定区轻链3
<400> 6
Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL12-IL23p40抗体可变重链区
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/IL23p40抗体可变轻链区
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 9
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有α和β亚基的人IL-12
<400> 9
Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu
1 5 10 15
His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys
20 25 30
Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp
35 40 45
His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu
50 55 60
Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr
65 70 75 80
Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe
85 90 95
Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr
100 105 110
Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys
115 120 125
Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu
130 135 140
Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser
145 150 155 160
Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu
165 170 175
Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser
180 185 190
Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val
195 200 205
Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr
210 215 220
Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser
225 230 235 240
Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu
245 250 255
Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu
260 265 270
Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser
275 280 285
Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu
290 295 300
Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu
305 310 315 320
Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly
325 330 335
Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala
340 345 350
Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys
355 360 365
Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu
370 375 380
Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser
385 390 395 400
Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu
405 410 415
Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu
420 425 430
Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe
435 440 445
Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val
450 455 460
Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser
465 470 475 480
Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu
485 490 495
Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser
500
<210> 10
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/IL23p40抗体重链
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Leu Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Met Ser Pro Val Asp Ser Asp Ile Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Pro Gly Gln Gly Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 11
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗IL-12/IL-23p40抗体轻链
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

Claims (14)

1.一种治疗对其有需要的受试者的克罗恩病的方法，所述方法包括：
在治疗之前对受试者执行内窥镜检查，以测量基线克罗恩病简单内窥镜评分(SES-CD)和基线CDAI；
向所述受试者施用包含临床证实安全并且临床证实有效量的抗IL-12/IL-23p40抗体的药物组合物，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：1的互补决定区重链1(CDRH1)氨基酸序列、SEQ ID NO：2的CDRH2氨基酸序列以及SEQ IDNO：3的CDRH3氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4的互补决定区轻链1(CDRL1)氨基酸序列、SEQ ID NO：5的CDRL2氨基酸序列以及SEQ ID NO：6的CDRL3氨基酸序列；基于重量的初始IV剂量为按每kg受试者重量6mg抗体，并且在施用所述初始剂量后8周的皮下施用剂量为90mg抗体；
在施用所述初始剂量后16周，测量受试者的(i)选自C-反应性蛋白(CRP)和/或粪便钙卫蛋白(FCal)水平的克罗恩病相关联的生物标志物和/或(ii)选自CDAI和SES-CD的临床症状；
(iii)对于测量出CDAI＜220、相对基线CDAI改善小于70分、CRP≤10mg/L和/或FCal≤250ug/g的受试者，在施用初始剂量后16周皮下施用90mg抗体，并且在第16周时皮下施用后每4周皮下施用90mg抗体；或(iv)对于测量出SES-CD评分相对于基线SES-CD评分改善小于25％的受试者，在施用初始剂量后16周皮下施用90mg抗体，并且在第16周时皮下施用后每8周皮下施用90mg抗体；以及
在施用初始剂量后48周和/或104周，测量受试者的(i)选自C-反应性蛋白(CRP)和/或粪便钙卫蛋白(FCal)水平的克罗恩病相关联的生物标志物和/或(ii)选自CDAI和SES-CD的临床症状。
2.根据权利要求1所述的方法，其中在初始施用所述初始剂量后16周时的所述测量用内窥镜检查完成。
3.根据权利要求1所述的方法，其中在初始施用后16周时的所述测量通过肠道超声执行。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述受治疗的受试者在所述初始剂量后48周和/或所述初始剂量后104周实现了内窥镜改善以及SES-CD相对于基线SES-CD降低至少50％。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述受治疗的受试者实现了总体内窥镜缓解(SES-CD评分≤2)、粘膜愈合、CDAI相对于基线CDAI改善≥70、临床应答相对于基线CDAI评分降低≥100、CDAI总评分＜150和/或相对于基线fCal和CRP变化。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO：7的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO：8的轻链可变区氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO：10的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：11的轻链氨基酸序列。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者患有中度至重度活动性克罗恩病，如通过CDAI介于220-450或简单内窥镜评分SES-CD≥3所测量的。
9.根据权利要求1所述的方法，其中在初始施用后48周时的所述测量通过内窥镜检查执行。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述受试者在初始施用后48周时处于临床缓解。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述受试者在初始施用后104周时处于临床缓解。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者先前对选自由以下项组成的组的至少一种疗法治疗失败或耐受不良：抗TNF、维多珠单抗、皮质类固醇、硫唑嘌呤(AZA)和6巯嘌呤(6MP)，或者所述受试者已表现出皮质类固醇依赖性。
13.根据权利要求1所述的方法，其中用于静脉内施用的所述药物组合物还包含在pH6.0下含有10mM的L-组氨酸、8.5％(w/v)的蔗糖、0.04％(w/v)的聚山梨醇酯80、0.4mg/mL的L-甲硫氨酸和20μg/mL的EDTA二钠盐脱水物的溶液。
14.根据权利要求1所述的方法，其中用于皮下施用的所述药物组合物还包含在pH 6.0下含有6.7mM的L-组氨酸、7.6％(w/v)的蔗糖、0.004％(w/v)的聚山梨酸酯80的溶液。
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