ES2638871T3 - Polipéptidos clorotoxina y conjugados y usos de los mismos - Google Patents

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Abstract

Polipéptido clorotoxina que no presenta más de una lisina, en el que el polipéptido clorotoxina presenta una identidad de secuencia global de por lo menos 85% respecto a la SEC ID nº y en el que el polipéptido clorotoxina se une selectivamente a una célula tumoral.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
reducido de lisina presenta una identidad de secuencia global de por lo menos 86%, de por lo menos 87%, de por lo menos 88%, de por lo menos 89%, de por lo menos 90%, de por lo menos 91%, de por lo menos 92%, de por lo menos 93%, de por lo menos 94%, de por lo menos 95%, de por lo menos 96%, de por lo menos 97%, de por lo menos 98% o de por lo menos 99% respecto a la SEC ID nº 1.
5 En algunas realizaciones, un polipéptido clorotoxina presenta una identidad de secuencia global de por lo menos 91% respecto a la SEC ID nº 1. Por ejemplo, un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina puede presentar una secuencia de aminoácidos idéntica a la de la clorotoxina en 33 de 36 residuos aminoácidos (es decir, una identidad de secuencia de ~91,7%). En algunas realizaciones, un polipéptido clorotoxina presenta una identidad
10 de secuencia global de por lo menos 94% respecto a la SEC ID nº 1, por ejemplo un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina puede ser idéntico en secuencia de aminoácidos a la clorotoxina en 34 de 36 residuos aminoácidos (es decir, una identidad de secuencia de ~94,4%). En algunas realizaciones, un polipéptido clorotoxina presenta una identidad de secuencia global de por lo menos 97% respecto a la SEC ID nº 1. Por ejemplo, un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina puede presentar una secuencia de aminoácidos idéntica a la
15 de la clorotoxina en 35 de 36 residuos aminoácidos (es decir, una identidad de secuencia de ~97,2%). En algunas realizaciones, un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina es y/o contiene un tramo de 33, 34, 35, 36, 37 o 38 aminoácidos la secuencia del cual corresponde con o presenta
una identidad de secuencia global de por lo menos 85%, de por lo menos 86%, de por lo menos 87%, de por lo
20 menos 88%, de por lo menos 89%, de por lo menos 90%, de por lo menos 91%, de por lo menos 92%, de por lo menos 93%, de por lo menos 94%, de por lo menos 95%, de por lo menos 96%, de por lo menos 97%, de por lo menos 98%, o de por lo menos 99% respecto a la identidad de secuencia global respecto a la secuencia de la clorotoxina.
25 La Tabla 1 ilustra la secuencia de la clorotoxina y secuencias de polipéptidos ejemplares de clorotoxina de contenido reducido de lisina. La Tabla 1 no pretende ser limitativa sino que, por el contrario, se utiliza para ilustrar determinados polipéptidos ejemplares de clorotoxina de contenido reducido de lisina proporcionados por la presente invención.
30 Tabla 1: secuencias de clorotoxina y de polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina ejemplares
Clorotoxina
SEC ID nº
Observación Secuencia (extremo N-terminal a extremo C-terminal)
1
Clorotoxina de longitud completa imagen7
Polipéptidos de contenido reducido de lisina ejemplares
SEC ID nº
Observación Secuencia (extremo N-terminal a extremo C-terminal)
2
Ninguna lisina imagen8
3
Ninguna lisina en las posiciones 15, 23 o 27 de la SEC ID nº 1; lisina en el extremo N-terminal imagen9
4
Ninguna lisina en las posiciones 15, 23 o 27 de la SEC ID nº 1; lisina en el extremo C-terminal imagen10
5
Lisinas en las posiciones 15, 23 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por alaninas imagen11
6
Lisinas en las posiciones 15, 23 y 27 de SEC ID nº 1 sustituidas por argininas imagen12
7
Lisinas en las posiciones 15, 23 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por alaninas; lisina en el extremo Nterminal imagen13
8
Lisinas en las posiciones 15, 23 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por argininas; lisina en el extremo Nterminal imagen14
9
Lisinas en las posiciones 15, 23 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por alaninas; lisina en el extremo Cterminal imagen15
10
Lisinas en las posiciones 15, 23 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por argininas; lisina en el extremo Cterminal imagen16
11
Ninguna lisina en la posición 15 de la SEC ID nº 1 imagen17
12
Ninguna lisina en la posición 23 de la SEC ID nº 1 imagen18
13
Ninguna lisina en la posición 27 de la SEC ID nº 1 imagen19
14
Ninguna lisina en las posiciones 15 y 23 de la SEC ID nº 1 imagen20
15
Ninguna lisina en las posiciones 15 y 27 de la SEC ID nº 1 imagen21
16
Ninguna lisina en las posiciones 23 y 27 de la SEC ID nº 1 imagen22
17
Lisinas en las posiciones 15 y 23 de la SEC ID nº 1 sustituidas por alaninas imagen23
18
Lisinas en las posiciones 15 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por alaninas imagen24
19
Lisinas en las posiciones 23 y 27 de la SEC ID nº nº 1 sustituidas por alaninas imagen25
20
Lisinas en las posiciones 15 y 23 de la SEC ID nº 1 sustituidas por argininas imagen26
21
Lisinas en las posiciones 15 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por argininas imagen27
22
Lisinas en las posiciones 23 y 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por argininas imagen28
23
Lisina en la posición 15 de la SEC ID nº 1 sustituida por arginina; lisina en la posición 27 de la SEC ID nº 1 sustituidas por alaninas imagen29
imagen30
los polipéptidos clorotoxina que no presentan ninguna lisina en absoluto, los polipéptidos de clorotoxina monolisina pueden no presentar aminoácidos en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 15, 23 y 27 de la SEC ID nº 1 y/o pueden presentar una sustitución por un aminoácido o derivado de aminoácido en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 15, 23 y 27 de la SEC ID nº 1.
5 En algunas realizaciones, uno o más residuos de lisina en un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina proporcionado en la presente memoria se torna no disponible como sitio para la conjugación aunque se encuentran presentes en el polipéptido clorotoxina. Por ejemplo, puede modificarse uno o más residuos de lisina covalente o no covalentemente de manera que uno o más residuos de lisina resulten bloqueados de la participación en la reacción
10 química de conjugación, dejando no más de 1 residuo de lisina (es decir, un “contenido reducido” de lisina) disponible como sitio para la conjugación. Entre los ejemplos no limitativos de modificaciones covalentes de residuos de lisina que podrían utilizarse de esta manera se incluyen la pegilación (es decir, la modificación mediante la unión de un polímero polietilenglicol), la metilación (incluyendo la di-y tri-metilación) y la unión de otro u otros grupos alquilo. En determinadas realizaciones, se modifica uno o más residuos de lisina en el grupo NH2 epsilón. Por
15 ejemplo, en el caso de que se utilice un grupo R dado (por ejemplo un grupo butilo, propilo o etilo) para modificar covalentemente un residuo de lisina, el grupo NH2 epsilón puede modificarse por un grupo NR2 o NR3.
La Tabla 2 presenta algunos ejemplos no limitativos de esquemas de modificación que podrían utilizarse para producir polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina. 20 Tabla 2: Esquemas ejemplares de modificación
SEC ID nº
Secuencia nuclear (extremo N-terminal a extremo C-terminal) Posición(es) de el(los) residuo(s) de lisina
1
imagen31 15, 23 y 27
15 y 23
15 y 27
23 y 27
11
imagen32 22 y 26
22
26
12
imagen33 15 y 26
15
26
13
imagen34 15 y 23
15
23
27 (lisina añadida al extremo Nterm.)
imagen35 16,24 y 28
28 (lisina añadida al extremo Cterm.)
imagen36 15,23 y 27
En determinadas realizaciones, el bloqueo de un residuo particular de lisina se consigue mediante la incorporación de una lisina modificada (en la que ya se encuentran bloqueados sitios disponibles para la conjugación) durante la 25 etapa apropiada durante la síntesis del polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina. Las lisinas modificadas se encuentran fácilmente disponibles comercialmente y pueden sintetizarse mediante métodos rutinarios conocidos de la técnica. Entre los ejemplos no limitativos de lisinas modificadas que pueden utilizarse de esta manera se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, lisinas disustituidas o lisinas trisustituidas (por ejemplo N,N-R2lisina o N,N,N-R3-lisina, en las que R es el grupo de bloqueo) y lisinas con moléculas de PEG cortas unidas a ellas. 30 R puede ser cualquier grupo que unido covalentemente a la lisina servirá para bloquear la participación del residuo
imagen37
15
25
35
45
55
65
lisina no presenta ningún residuo de lisina disponible para la conjugación en ninguna de las posiciones “nativas” dentro de la clorotoxina (por ejemplo las posiciones correspondientes a las posiciones 15, 23 y 27).
El polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina está asociado covalentemente a la fracción/fracciones. Tal como apreciará el experto en la materia, un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina y una o más fracciones pueden unirse directa o indirectamente (por ejemplo mediante un conector).
Se conoce de la técnica una diversidad de reacciones químicas de conjugación y pueden utilizarse en la práctica de la presente invención. En determinadas realizaciones, la fracción/fracciones se unen al grupo amino epsilón de un residuo de lisina. En algunas realizaciones, la reacción de conjugación se basa en una reacción de NHS (Nhidroxisuccinimida)/EDC (hidrocloruro de 1-etil-3-[3-dimetilaminopropil]carbodiimida).. En algunas realizaciones, la reacción química de conjugación se basa en una reacción de tiolación, es decir, utilizando un agente de tiolación, tal como el reactivo de Traut y/o el 2-iminotiolano.
En determinadas realizaciones, un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina y una o más fracciones se unen directamente, de manera covalente, entre sí. Dicha unión covalente directa puede conseguirse de una diversidad de maneras, por ejemplo mediante enlaces amida, éster, carbono-carbono, disulfuro, carbamato, éter, tioéter, urea, amina o carbonato. Dicha unión covalente puede conseguirse, por ejemplo, aprovechando los grupos funcionales presentes en la fracción/fracciones y/o en el polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina. Entre los grupos funcionales adecuados que pueden utilizarse se incluyen, aunque sin limitación, aminas, anhídridos, grupos hidroxilo, grupos carboxilo, tioles y similares. En determinadas realizaciones, se activa un grupo funcional de una parte del futuro conjugado para el acoplamiento con la otra parte del futuro conjugado. Por ejemplo, puede utilizarse un agente activador, tal como una carbodiimida, para llevar a cabo dicho acoplamiento. Se conoce de la técnica una amplia diversidad de agentes activadores y resultan adecuados para formar un conjugado proporcionado.
En algunas realizaciones, un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina y una o más fracciones se unen indirectamente de modo covalente entre sí mediante un grupo conector. Dicho enlace covalente indirecto puede llevarse a cabo mediante la utilización de cualquiera de entre varios agentes bifuncionales estables bien conocidos de la técnica, incluyendo agentes homofuncionales y heterofuncionales. Ver ejemplos no limitativos de dichos agentes en, por ejemplo, el catálogo y manual de Pierce. La utilización de un agente bifuncional difiere de la utilización de un agente activador en que el primero resulta en la presencia de una fracción de unión en el conjugado resultante, mientras que en el segundo resulta en un acoplamiento directo entre las dos fracciones que participan en la reacción. Un papel del agente bifuncional podría ser el de permitir que se produzca una reacción entre dos fracciones que de otro modo serían inertes. Alternativamente o adicionalmente, el agente bifuncional, que se convierte en parte del producto de reacción, puede seleccionarse de manera que confiera cierto grado de flexibilidad conformacional al conjugado. Por ejemplo, el agente bifuncional puede comprender una cadena alquilo lineal que contiene varios átomos, por ejemplo entre 2 y 10 átomos de carbono. Alternativamente o adicionalmente, el agente bifuncional puede seleccionarse de manera que el enlace formado entre el polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina y la entidad/entidades o fracción/fracciones sea cortable, por ejemplo hidrolizable. (Ver ejemplos no limitativos de dichos conectores en, por ejemplo, las patentes US nº 5.773.001, nº 5.739.116 y nº 5.877.296). Dichos conectores pueden utilizarse, por ejemplo, en el caso de que la entidad o fracción que se conjuga con el polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina sea una fracción terapéutica que se observe que presenta una actividad más elevada tras la hidrólisis del polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina. Entre los mecanismos ejemplares para llevar a cabo el corte se incluyen la hidrólisis en el pH ácido de los lisosomas (hidrazonas, acetales y amidas de tipo cis-aconitato), el corte peptídico con enzimas lisosómicos (por ejemplo catepsinas y otros enzimas lisosómicos) y la reducción de los disulfuros. Entre los mecanismos de corte adicionales se incluyen la hidrólisis a pH fisiológico extra-o intra-celularmente. Este mecanismo puede aplicarse en el caso de que el entrecruzante utilizado para acoplar la entidad/entidades o fracción/fracciones con el polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina sea una entidad biodegradable/bioerosionable, tal como polidextrano y similares.
Por ejemplo, para conjugados que comprenden una o más fracciones terapéuticas, pueden prepararse conjugados que contienen hidrazona con grupos carbonilo introducidos que proporcionan las propiedades de liberación farmacológica deseadas. También pueden prepararse conjugados con un conector que comprende una cadena alquilo con un grupo disulfuro en un extremo y un derivado hidrazina en el otro extremo.
Los conectores que contienen grupos funcionales diferentes de las hidrazonas también presentan el potencial de ser cortados en el medio ácido de los lisosomas. Por ejemplo, pueden prepararse conjugados a partir de conectores reactivos con tiol que contienen un grupo diferente de una hidrazona que es cortable intracelularmente, tal como ésteres, amidas y acetales/cetales. También pueden utilizarse cetales construidos a partir de una cetona anular de 5 a 7 elementos que presenta uno de los átomos de oxígeno unido a la entidad o fracción y el otro a un conector para la unión a un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina.
Un ejemplo adicional de conectores sensibles a clase de pH son los cis-aconitatos, los cuales presentan un grupo ácido carboxílico contiguo a un grupo amida. El ácido carboxílico acelera la hidrólisis de las amidas en los lisosomas
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ácidos. También pueden utilizarse conectores que consiguen un tipo similar de aceleración de la velocidad de hidrólisis con otros tipos diferentes de estructuras.
También puede utilizarse la hidrólisis enzimática de péptidos por enzimas lisosómicos para liberar entidades o fracciones de los conjugados. Por ejemplo, un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina puede unirse mediante un enlace amida a alcohol para-aminobencílico y después puede construirse un carbamato o carbonato entre el alcohol bencílico y la entidad o fracción. El corte del polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina conduce al colapso del carbamato o carbonato de aminobencilo y a la liberación de la entidad o fracción. A título de ejemplo adicional, puede cortarse un fenol mediante el colapso del conector en lugar del carbamato. A título de todavía otro ejemplo, se utiliza la reacción del disufluro para iniciar el colapso de un carbamato o carbonato de paramercaptobencilo.
Muchas fracciones terapéuticas, en particular agentes anticáncer, presentan una solubilidad baja o nula en agua, lo que limita la carga de fármaco en un conjugado debido a la agregación de la fracción terapéutica. Un enfoque para superar lo anterior es añadir grupos solubilizadores a los conjugados de conector construidos con un conector que consiste de PEG (polietilenglicol) y puede utilizarse un dipéptido, incluyendo, por ejemplo, los que presentan un PEG, diácido, tiol-ácido o maleimida-ácido unido al conjugado de clorotoxina de contenido reducido de lisina, un espaciador dipéptido y una amida unida a la entidad o fracción. Los enfoques que incorporan grupos PEG pueden resultar beneficiosos para superar la agregación y los límites de carga de fármaco.
En realizaciones en las que la fracción dentro de un conjugado de clorotoxina es una proteína, polipéptido o péptido, el conjugado de clorotoxina puede ser una proteína de fusión. Una proteína de fusión es una molécula que comprende dos o más proteínas, polipéptidos o péptidos unidos mediante un enlace covalente mediante sus esqueletos peptídicos individuales. Las proteínas de fusión utilizadas en métodos de la presente invención pueden producirse mediante cualquier método adecuado conocido de la técnica. Por ejemplo, pueden producirse mediante métodos sintéticos de proteínas directos utilizando un sintetizador de polipéptidos. Alternativamente, la amplificación por PCR de fragmentos génicos puede llevarse a cabo utilizando cebadores de anclaje que dan lugar a extremos protuberantes complementarios entre dos fragmentos génicos consecutivos que posteriormente pueden hibridarse y re-amplificarse para generar una secuencia génica quimérica. Pueden obtenerse proteínas de fusión mediante métodos recombinantes estándares (ver, por ejemplo, Maniatis et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring, N.Y, 1989). Estos métodos comprenden generalmente: (1) la construcción de una molécula de ácidos nucleicos que codifica la proteína de fusión deseada, (2) la inserción de la molécula de ácidos nucleicos en un vector de expresión recombinante, (3) la transformación de una célula huésped adecuada con el vector de expresión, y (4) la expresión de la proteína de fusión en la célula huésped. Las proteínas de fusión producidas mediante dichos métodos pueden recuperarse y aislarse directamente a partir del medio de cultivo o mediante lisis de las células, tal como es conocido de la técnica. Son bien conocidos de la técnica muchos métodos de purificación de las proteínas producidas por las células huésped transformadas. Entre ellas se incluyen, aunque sin limitación, la precipitación, la centrifugación, la filtración en gel y la cromatografía de columna (por ejemplo de intercambio iónico, de fase inversa y de afinidad). Se han descrito otros métodos de purificación (ver, por ejemplo, Deutscher et al., "Guide to Protein Purification" in Methods in Enzymology, vol. 192, Academic Press, 1990).
En determinadas realizaciones, el polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina está asociado no covalentemente a la fracción/fracciones. Entre los ejemplos de asociaciones no covalentes se incluyen, aunque sin limitación, las interacciones hidrofóbicas, las interacciones electrostáticas, las interacciones de dipolo, las interacciones de van der Waals y los enlaces de hidrógeno.
Con independencia de la naturaleza de la asociación entre la fracción toxina y el agente terapéutico, la asociación típicamente es selectiva, específica y suficientemente fuerte para que el conjugado no se disocie antes o durante el transporte a las células y hasta el interior de las mismas. La asociación entre un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina y una o más fracciones puede llevarse a cabo utilizando cualquier acoplamiento químico, bioquímico, enzimático o genético conocido por el experto en la materia.
Tal como apreciará fácilmente el experto en la materia, un conjugado de la presente invención puede comprender cualquier número de polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina y cualquier número de fracciones, asociados entre sí mediante cualquier número de maneras diferentes. El diseño de un conjugado se ve influido por su propósito o propósitos pretendidos y las propiedades que resultan deseables en el contexto particular de su utilización. La selección de un método para asociar o unir un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina a una fracción para formar un conjugado se encuentra comprendida dentro de los conocimientos del experto en la materia y generalmente dependerá de la naturaleza de la asociación deseada (es decir, covalente vs. no covalente y/o cortable vs. no cortable), la naturaleza del polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina y la entidad/fracción, la presencia y naturaleza de los grupos químicos funcionales, y similares.
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B. Fracciones
Tal como se ha indicado anteriormente, en determinadas realizaciones, los conjugados de clorotoxina comprenden una o más fracciones no clorotoxina. Puede utilizarse cualquiera de entre una diversidad de dichas fracciones.
1. Fracciones terapéuticas
En el segundo aspecto de la invención, los conjugados proporcionados comprenden una o más fracciones terapéuticas, tal como se indica posteriormente y en la publicación de patente internacional nº WO 2009/021136.
a. Agentes anti-cáncer
En algunas realizaciones, la fracción o fracciones terapéuticas comprenden un agente anticáncer. Entre los agentes anticáncer adecuados se incluyen cualquiera de entre una gran diversidad de sustancias, moléculas, compuestos, agentes o factores que resultan directa o indirectamente tóxicos o perjudiciales para las células de cáncer, incluyendo, por ejemplo, agentes citotóxicos. Los agentes anticáncer adecuados para la utilización en la práctica de la invención pueden ser sintéticos o naturales. Los agentes anticáncer pueden comprender una única molécula o un complejo de diferentes moléculas.
Los agentes anticáncer adecuados pueden pertenecer a cualquiera de entre diversas clases de compuestos, incluyuendo, aunque sin limitación, moléculas pequeñas, péptidos, sacáridos, esteroides, anticuerpos, proteínas de fusión, polinucleótidos antisentido, ribozimas, los ARN interfirientes pequeños, peptidomiméticos y similares. De manera similar, pueden encontrarse agentes anticáncer adecuados entre cualquiera de entre una diversidad de clases de agentes anticáncer, incluyendo, aunque sin limitación, agentes alquilantes, fármacos antimetabolito, antibióticos antimitóticos, agentes antitumorales alcaloides, hormonas y antihormonas, interferones, fármacos antiinflamatorios no esteroideos y diversos otros agentes antitumorales.
Los agentes anticáncer particularmente adecuados son agentes que provocan efectos secundarios no deseables debido a una pobre selectividad/especificidad para las células de cáncer, agentes que experimentan una incorporación y/o retención celular pobre o nula, agentes que están asociados a resistencia farmacológica celular y agentes que no pueden formularse fácilmente para la administración en pacientes de cáncer debido a su pobre solubildiad en agua, agregación y similares.
Se describen en mayor detalle a continuación ejemplos de agentes anticáncer adecuados que pueden utilizarse en conjugados de la presente invención.
Fármacos anticáncer pobremente solubles en agua
En determinadas realizaciones, un agente anticáncer dentro de un conjugado de la invención es un compuesto de solubilidad pobre en agua. Tal como reconocerá el experto en la materia, una amplia diversidad de agentes anticáncer pobremente solubles en agua resultan adecuados para la utilización en la presente invención.
Por ejemplo, puede seleccionarse un agente anticáncer de entre los taxanos, los cuales han sido reconocidos como agentes eficaces en el tratamiento de muchos tumores sólidos que son refractarios a otros agentes antineoplásicos. Dos taxanos actualmente autorizados son el paclitaxel (TAXOLTM) y el docetaxel (TAXOTERETM). El paclitaxel, el docetaxel y otros taxanos actúan potenciando la polimerización de la tubulina, una proteína esencial en la formación de los microtúbulos del huso. La polimerización de la tubulina resulta en la formación de túbulos no funcionales muy estables, que inhiben la replicación celular y conducen a la muerte celular.
El paclitaxel es muy pobremente soluble en agua y, por lo tanto, no puede formularse en la práctica con agua para la administración intravenosa. Se han desarrollado algunas formulaciones de taxolTM para la inyección o infusión intravenosa utilizando CREMOPHOR ELTM (aceite de ricino polioxietilado) como portador farmacológico. Sin embargo, el CREMOPHOR ELTM por sí mismo es tóxico y se considera que es responsable, por lo menos en parte, de las reacciones de hipersensibilidad (erupciones severas en la piel, urticaria, rubefacción, disnea, taquicardia y otros) asociadas a la administración de dichas preparaciones. Para evitar dichos efectos secundarios, con frecuencia se prescribe premedicación conjuntamente con las formulaciones de paclitaxel que contienen CREMOPHOR ELTM. El docetaxel, que es un análogo del paclitaxel, es como el paclitaxel pobremente soluble en agua. El solvente actualmente más preferente utilizado para disolver el docetaxel para uso farmacéutico es el polisorbato 80 (TWEEN 80). Además de provocar reacciones de hipersensibildiad en los pacientes, TWEEN 80 no puede utilizarse con aparatos de administración de PVC debido a su tendencia a lixiviar ftalato de dietilhexilo, que es altamente tóxico.
Un conjugado según la presente invención que comprende un taxano y polipéptido clorotoxina puede utilizarse como método mejorado de administración que evita la utilización de solventes y portadores que inducen reacciones adversas en el paciente.
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2005; S.R. Frankel, Semin. Oncol. 30: 300-304, 2003). Entre otros oligonucleótidos antisentido adecuados se incluyen GEM-231 (HYB0165, Hybridon, Inc., Cambridge, MA), que es un oligonucleótido de esqueleto mixto dirigido contra la proteína quinasa A (PKA) dependiente de AMPc (S. Goel et al., Clin. Cancer Res. 203, 9:. 4069-4076); Affinitak (ISIS 3521 o aprinocarsen, ISIS Pharmaceuticals, Inc., Carlsbad, CA), un inhibidor antisentido de PKCalpha; OGX-011 (Isis 112989, Isis Pharmaceuticals, Inc.), un oligonucleótido antisentido modificado con 2'-metoxietilo contra la clusterina, una glucoproteína implicada en la regulación del ciclo celular, el remodelado de los tejidos, el transporte de lípidos y la muerte celular y que se sobreexpresa en los cánceres de mama, próstata y colon; ISIS 5132 (Isis 112989, Isis Pharmaceuticals, Inc.), un oligonucleótido fosforotioato complementario a la secuencia de la región 3’ no traducida del ARNm de c-raf-1 (S.P. Henry et al., Anticancer Drug Des. 12: 409-420; , 1997; B.P. Monia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 15481-15484, 1996; C.M. Rudin et al., Clin. Cancer Res. 7: 1214-1220, 2001); ISIS 2503 (Isis Pharmaceuticals, Inc.), un inhibidor antisentido de oligonucleótido fosforotioato de la expresión del ARNm de H-ras humano (J. Kurreck, Eur. J. Biochem. 270: 1628-1644, 2003); oligonucleótidos con diana en el inhibidor ligado a X de la proteína de apoptosis (XIAP), que bloquea una parte sustancial de la ruta de la apoptosis, tal como GEM 640 (AEG 35156, Aegera Therapeutics Inc. e Hybridon, Inc.) o con diana en la survivina, un inhibidor de la proteína de apoptosis (IPA), tal como ISIS 23722 (Isis Pharmaceuticals, Inc.), un oligonucleótido quimérico 2'O-metoxietilo; MG98, con diana en la ADN metil transferasa, y GTI-2040 (Lorus Therapeutics, Inc. Toronto, Canadá), un oligonucleótido 20-mero que es complementario a la región codificante en el ARNm del componente subunidad pequeña R2 de la ribonucleótido reductasa humana.
Entre otros oligonucleótidos antisentido adecuados se incluyen oligonucleótidos antisentido que están siendo desarrollados contra Her-2/neu, c-Myb, c-Myc, and c-Raf (ver, por ejemplo, A. Biroccio et al., Oncogene 22: 65796588, 2003; Y. Lee et al., Cancer Res. 63: 2802-2811, 2003; B. Lu et al., Cancer Res., 64: 2840-2845, 2004; K.F. Pirollo et al., Pharmacol. Ther. 99: 55-77, 2003, y A. Rait et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 1002: 78-89, 2003).
En determinadas realizaciones, los conjugados de clorotoxina de la presente invención comprenden un agente anticáncer de ácidos nucleicos que comprende o codifica una molécula de ARN interfiriente. Las expresiones “ARN interfiriente” y “molécula de ARN interfiriente” se utilizan en la presente memoria intercambiablemente y se refieren a una molécula de ARN que puede inhibir o regular negativamente la expresión génica o silenciar un gen de una manera específica de secuencia, por ejemplo mediando en la interferencia de ARN (ARNi). La interferencia de ARN (ARNi) es un mecanismo específico de secuencia evolutivamente conservado que resulta inducido por el ARN de doble cadena (ARNdc) que induce la degradación del ARNm de cadena sencilla diana complementario y el “silenciamiento’ de las secuencias traducidas correspondientes (McManus y Sharp, Nature Rev. Genet. 3: 737, 2002). El ARNi funciona mediante el corte enzimático de cadenas de ARNdc más largas en secuencias biológicamente activas de “ARN interfiriente corto” (ARNic) de aproximadamente 21 a 23 nucleótidos de longitud (Elbashir et al., Genes Dev. 15: 188, 2001). La interferencia de ARN ha emergido como un enfoque prometedor para la terapia del cáncer.
Un ARN interfiriente adecuado para la utilización en la práctica de la presente invención puede proporcionarse en varias formas. Por ejemplo, puede proporcionarse un ARN interfiriente como uno o más de entre ARN interfiriente corto (ARNic) aislado, ARN de doble cadena (ARNdc), micro-ARN (ARNmi) o ARN horquilla corto (ARNhc).
Entre los ejemplos de moléculas de ARN interfiriente adecuadas para la utilización en la presente invención se incluyen, por ejemplo, los ARNi citados en las revisiones siguientes: O. Milhavet et al., Pharmacol. Rev. 55: 629-648, 2003; F. Bi et al., Curr. Gene. Ther. 3: 411-417, 2003; P.Y. Lu et al., Curr. Opin. Mol. Ther. 5: 225-234, 2003; I. Friedrich et al., Semin. Cancer Biol. 14: 223-230, 2004; M. Izquierdo, Cancer Gene Ther. 12: 217-227, 2005; P.Y. Lu et al., Adv. Genet. 54: 117-142, 2005; G.R. Devi, Cancer Gene Ther. 13: 819-829, 2006: M.A. Behlke, Mol. Ther.13: 644-670, 2006, y L.N. Putral et al., Drug News Perspect.19: 317-324, 2006.
Entre otros ejemplos de moléculas de ARN interfiriente adecuadas se incluyen, aunque sin limitación, ARN interfirientes de p53 (por ejemplo, T.R. Brummelkamp et al., Science 296: 550-553, 2002; M.T. Hemman et al., Nat. Genet. 33: 396-400, 2003); ARN interfirientes con diana en la fusión ber-abl, que está asociada al desarrollo de la leucemia mieloide crónica y la leucemia linfoblástica aguda (por ejemplo, M. Scherr et aL, Blood 101: 1566-1569, 2003 M.J. Li et al., Oligonucleotides 13: 401-409, 2003), ARN interfirientes que inhiben la expresión de NPM-ALK, una proteína que se encuentra en el 75% de los linfomas de células grandes anaplásicos y conduce a la expresión de una quinasa constitutivamente activa asociada a la formación de tumores (U. Ritter et al., Oligonucleotides 13: 365-373, 2003); ARN interfirientes con diana en oncogenes, tales como Raf-1 (T.F. Lou et al., Oligonucleotides 13: 313-324, 2003), K-Ras (T.R. Brummelkamp et al., Cancer Cell 2: 243-247, 2002), erbB-2 (G. Yang et al., J. Biol. Chem. 279: 4339-4345, 2004); ARN interfirientes con diana en la proteína b-catenina la expresión de la cual conduce a la transactivación de los genes diana de factor de células T, que se cree que es el suceso transformante principal en el cáncer colorrectal (M. van de Wetering et al., EMBO Rep. 4: 609-615, 2003).
En determinadas realizaciones, los conjugados de clorotoxina comprenden un agente terapéutico ácido nucleico que es un ribozima. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término “ribozima” se refiere a una molécula de ARN catalítico que puede cortar otras moléculas de ARN de una manera específica de diana. Los ribozimas pueden ser utilizados para regular negativamente la expresión de cualesquiera productos no deseables de genes de interés. Entre los ejemplos de ribozimas que pueden utilizarse en la práctica de la presente invención se incluyen, aunque
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13:22-38, 1999; Safran et al., Cancer Invest., 19: 1-7, 2001; Dionet et al., Anticancer Res., 22: 721-725, 2002; Cividalli et al., Radiat. Oncol. Biol.: Phys. 52:1092-1098, 2002); gemcitabina (Gemzar®) (Choy, Oncology 14:7-14, 2000; Mornex y Girard, Annals of Oncology 17:1743-1747, 2006); etanidazol (Nitrolmidazole®) (Inanami et al., Int. J. Radiat. Biol.78:267-274, 2002); misonidazol (Tamulevicius et al., Br. J. Radiology 54: 318-324, 2002; Cividalli et al., Radiat. Res. 100:340-347, 1984), tirapazamina (Tamulevicius et al., Br. J. 79: 991-998, 2006; Rischin et al., J. Clin. Oncol. 19: 535-542, 2001; Shulman et al., Int. J. Radiat. Oncol. Biol.: Phys. 44: 349-353), 1999; y derivados de base de ácido nucleico, por ejemplo purinas o pirimidinas halogenadas, tales como 5-fluorodesoxiuridina (Buchholz et al., Int. J. Radiat. Oncol. Biol.: Phys. 32:1053-1058, 1995).
Radioisótopos
En determinadas realizaciones, los conjugados de clorotoxina comprenden un radioisótopo. Entre los ejemplos de radioisótopos adecuados se incluyen cualquier emisor α, β o γ que, al localizarse en un sitio tumoral, resulta en la destrucción celular (S.E. Order, "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin et al. (editores), Academic Press, Inc., 1995. Entre los ejemplos de dichos radioisótopos se incluyen, aunque sin limitación, yodo-131 (131I), yodo-125 (125I), bismuto-212 (212Bi), bismuto-213 (213Bi), astatina-211 (211At), renio-186 (186Re), renio188 (188Re), fósforo-32 (32P), itrio-90 (90yY), samario-153 (153Sm) y lutecio-177 (177Lu).
Superantígenos
En determinadas realizaciones, los conjugados de clorotoxina comprenden un superantígeno o parte biológicamente activa del mismo. Los superantígenos constituyen un grupo de proteínas bacterianas y víricas que son extremadamente eficientes en la activación de un gran fracción de la población de células T. Los superantígenos se unen directamente al complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) sin ser procesados. De hecho, los superantígenos se unen sin procesar en el exterior del surco de unión a antígeno en las moléculas de CMH de clase II, evitando de esta manera la mayor parte del polimorfismo en el sitio de unión a péptido convencional.
Se ha desarrollado un enfoque terapéutico tumoral basado en superantígenos para el tratamiento de los tumores sólidos. En este enfoque, una fracción de direccionamiento, por ejemplo un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, se conjuga con un superantígeno, proporcionando un superantígeno dirigido. En el caso de que el anticuerpo, o fragmento de anticuerpo, reconozca un antígeno asociado a tumor, el superantígeno dirigido, unido a células tumorales, puede inducir que las células T citotóxicas activadas por superantígeno eliminen las células tumorales directamente mediante citotoxicidad mediada por células dependiente de superantígeno. (ver, por ejemplo, Sogaard et al., "Antibody-targeted superantigens in cancer immunotherapy," Immunotechnology, 2(3): 151-162, 1996).
Los terapéuticos tumorales basados en superantígenos han tenido cierto éxito. Por ejemplo, las proteínas de fusión con enterotoxina A estafilocócica de tipo salvaje (EAE) han sido investigadas en ensayos clínicos de cáncer colorrectal y pancreático (Giantonio et al., J. Clin. Oncol. 15:1994-2007, 1997; Alpaugh et al., Clin. Cancer Res. 4: 1903-1914, 1998; Cheng et al., J. Clin. Oncol. 22:602-609, 2004; se han estudiado los superantígenos estafilocócicos del clúster génico de la enterotoxina (egc., por sus siglas en inglés) para el tratamiento del cáncer pulmonar de células no pequeñas (Terman at al., Clin. Chest Med. 27:321-324, 2006, y se ha evaluado la enteroxina B estafilocócica para la inmunoterapia intravesical del cáncer de vejiga superficial (Perabo et al., Int. J. Cancer, 2005, 115:591-598, 2004).
Un superantígeno, o una parte biológicamente activa del mismo, puede asociarse a un polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina para formar un conjugado de clorotoxina según la presente invención y utilizarse en una terapia, por ejemplo en una terapia anticáncer, tal como se indica en la presente memoria.
Entre los ejemplos de superantígenos adecuados para la utilización en la presente invención se incluyen, aunque sin limitación, enterotoxina estafilocócica (EE) (por ejemplo la enterotoxina A estafilocócica (EAE) o la enterotoxina E estafilocócica (EEE)), la exotoxina de Streptococcus pyogenes (ESP), la toxina del síndrome del choque tóxico de Staphylococcus aureus (TSCT-1), la exotoxina mitogénica estreptocócica (EME), el superantígeno estreptocócico (SAE) y los superantígenos estafilocócicos del clúster génico de la enterotoxina. Tal como es conocido de la técnica, las estructuras tridimensionales de los superantígenos anteriormente listados pueden obtenerse del Protein Data Bank. De manera similar, las secuencias de ácidos nucleicos y las secuencias de aminoácidos de los superantígenos anteriormente listados y otros superantígenos pueden obtenerse de GenBank.
Enzimas activadores de profármaco
En determinadas realizaciones, puede utilizarse un conjugado de clorotoxina de la presente invención en terapia de profármaco enzimático dirigida. En un enfoque dirigido de terapia de profármaco enzimático, se administran en el sujeto un enzima dirigido/con diana y un profármaco, en el que el enzima dirigido se localiza específicamente en una parte del cuerpo del sujeto, en donde convierte el profármaco en un fármaco activo. El profármaco puede convertirse en un fármaco activo en una etapa (por el enzima dirigido) o en más de una etapa. Por ejemplo, el profármaco puede ser convertido en un precursor de un fármaco activo por el enzima dirigido. A continuación, el precursor
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Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden formularse en forma de administración unitaria para facilitar la administración y la uniformidad de las dosis. La expresión "forma de administración unitaria", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una unidad físicamente discreta de conjugado de clorotoxina (con o sin uno o más agentes adicionales) para el paciente que debe tratarse. Sin embargo, se entenderá que el uso diario total de las composiciones de la presente invención será decisión del médico responsable dentro del alcance del juicio médico razonable.
Tras la formulación con uno o más portadores o excipientes fisiológicamente aceptables apropiados en una dosis deseada, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse en seres humanos u otros mamíferos mediante cualquier vía adecuada. Se conocen diversos sistemas de administración, que pueden utilizarse para administrar dichas composiciones, incluyendo tabletas, cápsulas, soluciones inyectables, etc. Entre los métodos de administración se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, las vías dérmica, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, pulmonar, epidural, ocular y oral. Puede administrarse una composición por cualquier vía conveniente o de otro modo apropiada, por ejemplo mediante infusión o inyección de bolo, mediante absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo oral, mucosa, mucosa rectal e intestinal, etc.) y puede administrarse conjuntamente con otros agentes biológicamente activos. La administración puede ser sistémica y/o local.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo las suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, pueden formularse según la técnica conocida utilizando agentes dispersantes o humectantes adecuados, y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, tal como una solución en 2,3-butanodiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden utilizarse se encuentran el agua, la solución de Ringer y la solución isotónica de cloruro sódico. Además, pueden utilizarse convencionalmente aceites fijos estériles como solvente o medio de suspensión. Con este fin puede utilizarse cualquier aceite fijo suave, incluyendo mono-o di-glicéridos sintéticos. Además, de manera similar pueden utilizarse ácidos grasos tales como ácido oleico en la preparación de inyectables. Los portadores líquidos estériles resultan útiles en líquidos estériles de composiciones para la administración parenteral.
Las formulaciones inyectables pueden esterilizarse, por ejemplo mediante filtración a través de un filtro retenedor de bacterias, o mediante la incorporación de agentes esterilizadores en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse o dispersarse en agua estéril o en otro medio inyectable estéril antes de la utilización. Las composiciones farmacéuticas líquidas que son soluciones o suspensiones estériles pueden administrarse mediante inyección, por ejemplo, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o subcutánea. La inyección puede llevarse a cabo en bolo único o mediante infusión directa (por ejemplo la infusión intravenosa durante 30 minutos). En caso necesario, la composición puede incluir un anestésico local para aliviar el dolor en el sitio de la inyección.
Con el fin de prolongar el efecto del fármaco, con frecuencia resulta deseable retrasar la absorción del fármaco a partir de la inyección subcutánea o intramuscular. Lo anterior puede llevarse a cabo mediante la utilización de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo de baja solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende en este caso de su tasa de disolución, que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. Alternativamente, el retraso de la absorción de una forma de fármaco administrada parenteralmente puede conseguirse disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo aceitoso. Las formas de depósito inyectable se preparan mediante la formación de matrices microencapsuladas del fármaco en polímeros biodegradables, tales como poliláctido-poliglicólido. Dependiendo de la proporción de fármaco a polímero y de la naturaleza del polímero particular utilizado, puede controlarse la tasa de liberación del fármaco. Entre los ejemplos de otros polímeros biodegradables se incluyen os poli(ortoésteres) y los poli(anhídridos). Las formulaciones de depósito inyectable también pueden prepararse atrapando el fármaco en liposomas (también conocidos como vesículas lipídicas) o microemulsiones que son compatibles con los tejidos corporales.
Entre las formas de administración líquidas para la administración oral se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, las emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes, elixires y composiciones presurizadas farmacéuticamente aceptables. Además del ingrediente activo (es decir, el conjugado), la forma de administración líquida puede contener diluyentes inertes utilizados comúnmente en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otro solvente, agentes solubilizadores y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites (en particular aceites de semilla de algodón, de cacahuete, de maíz, de germen, de oliva, de ricino y de sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácido graso de sorbitán, y mezclas de los mismos. Aparte de los diluyentes inertes, las composiciones orales pueden incluir además adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes de suspensión, conservantes, edulcorantes, saborizantes y perfumantes, agentes espesantes, colorantes, reguladores de la viscosidad, estabilizadores u osmorreguladores. Entre los ejemplos adecuados de portadores líquidos para la administración oral se incluyen agua (que contiene parcialmente aditivos tal como anteriormente, por ejemplo derivados de celulosa, tales como solución de carboximetilcelulosa sódica), alcoholes (incluyendo alcoholes monohídricos y alcoholes polihídricos, tales como glicoles) y derivados de los mismos, y aceites (por ejemplo aceite de coco fraccionado y aceite de araquis).
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Entre las formas de administración adecuadas para la administración oral se incluyen, por ejemplo, cápsulas, tabletas, píldoras, polvos y gránulos. En dichas formas de administración sólidas, los ingredientes activos se mezclan con por lo menos un excipiente o portador fisiológicamente aceptable inerte, tal como citrato sódico o fosfato dicálcico y uno o más de entre: (a) rellenos o extensores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico, (b) ligantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y acacia, (c) humectantes, tales como glicerol, (d) agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o de tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y carbonato sódico, (e) agentes retardantes de la solución, tales como parafina, (f) aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario, (g) agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, (h) absorbentes, tales como caolín y arcilla bentonita, e (i) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato sódico y mezclas de los mismos.
Entre los excipientes adicionales o alternativos adecuados para las formulaciones sólidas se incluyen los agentes modificadores de superficie, tales como los agentes modificadores de superficie no iónicos y aniónicos. Entre los ejemplos representativos de agentes modificadores de superficie se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, poloxámero 188, cloruro de benzalconio, estearato de calcio, alcohol cetoestearílico, cera emulsionante cetomacrogol, ésteres de sorbitán, dióxido de silicio coloidal, fosfatos, dodecilsulfato sódico, aluminosilicato de magnesio y trietanolamina. En el caso de cápsulas, tabletas y píldoras, la forma de administración puede comprender además agentes tamponadores. La cantidad de portador sólido por cada forma de administración sólida varía ampliamente. En algunas realizaciones, la cantidad de portador sólido por cada forma de administración es de entre aproximadamente 25 mg y aproximadamente 1 g.
También pueden utilizarse composiciones sólidas de un tipo similar como rellenos en cápsulas de gelatina rellena blandas y duras utilizando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Las formas de administración sólidas tabletas, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y cáscaras, tales como recubrimientos entéricos, recubrimientos de control de la liberación y otros recubrimientos bien conocidos de la técnica de la formulación farmacéutica. Opcionalmente pueden contener agentes opacificadores y también pueden presentar una composición que permite que liberen el ingrediente o ingredientes activos exclusivamente, o preferentemente, en una parte determinada del tracto intestinal, opcionalmente de manera retardada. Entre los ejemplos de composiciones de inclusión que pueden utilizarse se incluyen sustancias poliméricas y ceras.
En determinadas realizaciones, puede resultar deseable administrar una composición inventiva localmente en un área que requiera tratamiento. Lo anterior puede llevarse a cabo mediante, por ejemplo, infusión local durante la cirugía, mediante aplicación tópica, mediante inyección, mediante un catéter, mediante supositorio o mediante un parche en la piel o stent u otro implante, entre otras maneras.
Algunas composiciones para la administración tópica pueden formularse en forma de un gel, una pomada, una loción o una crema que puede incluir portadores tales como agua, glicerol, alcohol, propilenglicol, alcoholes grasos, triglicéridos, ésteres de ácido graso o aceite mineral. Entre otros portadores tópicos se incluyen petróleo líquido, palmitato de isopropilo, polietilenglicol, etanol (al 95%), monolaurato de polioxietileno (al 5%) en agua o laurilsulfato sódico (al 5%) en agua. Otros materiales, tales como antioxidantes, humectantes, estabilizadores de la viscosidad y agentes similares, pueden añadirse según se requiera. También pueden incluirse intensificadores de la penetración percutánea tales com azona.
Además, en determinados casos, las composiciones pueden disponerse dentro de dispositivos transdérmicos colocados sobre, en o dentro de la piel. Entre dichos dispositivos se incluyen parches, implantes e inyecciones que liberan el compuesto en la piel, mediante mecanismos de liberación pasiva o activa. Entre las administraciones transdérmicas se incluyen todas las administraciones a través de la superficie del cuerpo y los revestimientos internos de paso corporal, incluyendo los tejidos epitelial y mucosal. Dichas administraciones pueden llevarse a cabo utilizando las presentes composiciones en lociones, cremas, espumas, parches, suspensiones, soluciones y supositorios (rectales y vaginales).
La administración transdérmica puede llevarse a cabo mediante, por ejemplo, la utilización de un parche transdérmico que contiene uno o más ingredientes activos y un portador que no resulta tóxico para la piel y permite la administración de por lo menos parte del ingrediente o ingredientes activos para la absorción sistémica en el caudal sanguíneo a través de la piel. El portador puede adoptar cualquiera de entre varias formas, tales como cremas y pomadas, pastas, geles y dispositivos oclusivos. Las cremas y pomadas pueden ser emulsiones líquidas o semisólidas viscosas del tipo aceite-en-agua o del tipo agua-en-aceite. Las pastas que comprenden polvos absorbentes dispersados en petróleo o petróleo hidrofílico que contiene el ingrediente o ingredientes activos también pueden resultar adecuadas. Puede utilizarse una diversidad de dispositivos oclusivos para liberar el ingrediente o ingredientes activos en el caudal sanguíneo, tal como una membrana semipermeable que cubra un reservorio que contiene el ingrediente o ingredientes activos con o sin un portador o una matriz que contiene el ingrediente activo.
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administrarse en el ojo. La administración en el ojo puede llevarse a cabo, por ejemplo, utilizando vías intraocular y/o periocular, tal como la inyección intravítrea, la inyección subjuntival, etc. La aplicación tópica de agentes clorotoxina en el ojo también puede llevarse a cabo utilizando, por ejemplo, gotas oculares.
Las vías oculares de administración pueden resultar particularmente útiles para el tratamiento de enfermedades de neovascularización ocular, tales como la degeneración macular.
La administración puede ser una o múltiples veces al día, a la semana (o en algún otro intervalo múltiplo de un día) o en un programa intermitente. Por ejemplo, una composición puede administrarse una o más veces al día de manera semanal durante un periodo de semanas (por ejemplo 4 a 10 semanas). Alternativamente, una composición puede administrarse diariamente durante un periodo de días (por ejemplo 1 a 10 días) seguido de un periodo de días (por ejemplo 1 a 30 días) sin administración, repitiendo dicho ciclo un número dado de veces (por ejemplo 2 a 10 ciclos). En algunas realizaciones, se administran por lo menos dos, por lo menos tres, por lo menos cuatro, por lo menos cinco o por lo menos seis dosis. En algunas realizaciones, la composición se administra semanalmente durante por lo menos dos semanas, tres semanas, cuatro semanas, cinco semanas o seis semanas.
La administración puede llevarse a cabo de cualquier manera conveniente, o en cualquier combinación de maneras, tal como mediante inyección (subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o similar), la administración oral y/o la administración intracavitaria.
Dependiendo de la vía de administración, pueden calcularse las dosis eficaces según la función del órgano, el peso corporal o la superficie de cuerpo del sujeto que debe tratarse. La optimización de las dosis apropiadas puede ser fácilmente llevada a cabo por el experto en la materia a la luz de los datos farmacocinéticos observados en ensayos clínicos con seres humanos. El régimen final de administración podrá ser determinado por el médico responsable considerando diversos factores que modifican la acción de los fármacos, por ejemplo la actividad específica del fármaco, la gravedad de los daños y la capacidad de respuesta del paciente, la edad, la condición, el peso corporal, el sexo y la dieta del paciente, la gravedad de cualquier infección actual, el tiempo de administración, la utilización (o no) de terapias concomitantes y otros factores clínicos.
Los intervalos de dosis típicos son de entre aproximadamente 1,0 pg/kg de peso corporal y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal(las dosis se presentan en la presente memoria en términos del peso de la parte polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina del conjugado).
Por ejemplo, para la administración sistémica, las dosis típicas son de entre aproximadamente 100,0 ng/kg de peso corporal y aproximadamente 10,0 mg/kg de peso corporal. Por ejemplo, en determinadas realizaciones en las que se administra por vía intravenosa un conjugado de clorotoxina, la administración del agente puede comprender la administración de una o más dosis que comprenden entre aproximadamente 0,001 mg/kg y aproximadamente 5 mg/kg, por ejemplo entre aproximadamente 0,001 mg/kg y aproximadamente 5 mg/kg, entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 4 mg/kg, entre aproximadamente 0,02 mg/kg y aproximadamente 3 mg/kg, entre aproximadamente 0,03 mg/kg y aproximadamente 2 mg/kg o entre aproximadamente 0,03 mg/kg y aproximadamente 1,5 mg/kg de clorotoxina. Por ejemplo, en algunas realizaciones, puede administrarse una o más dosis de conjugado de clorotoxina, conteniendo cada una aproximadamente 0,002 mg/kg, aproximadamente 0,004 mg/kg, aproximadamente 0,006 mg/kg aproximadamente 0,008 mg/kg, aproximadamente 0,009 mg/kg, aproximadamente 0,01 mg/kg, aproximadamente 0,02 mg/kg o más de 0,02 mg/kg de clorotoxina. En algunas realizaciones, puede administrarse una o más dosis de conjugado de clorotoxina, conteniendo cada una aproximadamente 0,03 mg/kg, aproximadamente 0,04 mg/kg, aproximadamente 0,05 mg/kg, aproximadamente 0,06 mg/kg aproximadamente 0,07 mg/kg, aproximadamente 0,09 mg/kg, aproximadamente 1,0 mg/kg o más de 1,0 mg/kg de clorotoxina. En algunas realizaciones, puede administrarse una o más dosis de conjugado de clorotoxina, conteniendo cada una aproximadamente 0,05 mg/kg, aproximadamente 0,10 mg/kg, aproximadamente 0,15 mg/kg, aproximadamente 0,20 mg/kg, aproximadamente 0,25 mg/kg, aproximadamente 0,30 mg/kg, aproximadamente 0,35 mg/kg, aproximadamente0,40 mg/kg, aproximadamente 0,45 mg/kg, aproximadamente 0,50 mg/kg, aproximadamente 0,55 mg/kg, aproximadamente 0,60 mg/kg, aproximadamente 0,65 mg/kg, aproximadamente 0,70 mg/kg, aproximadamente 0,75 mg/kg, aproximadamente 0,80 mg/kg, aproximadamente 0,85 mg/kg, aproximadamente 0,90 mg/kg, aproximadamente 0,95 mg/kg, aproximadamente 1,0 mg/kg, o más de aproximadamente 1 mg/kg de clorotoxina. En otras realizaciones, puede administrarse una o más dosis de conjugado de clorotoxina, conteniendo cada una aproximadamente 1,0 mg/kg, aproximadamente 1,05 mg/kg, aproximadamente 1,10 mg/kg, aproximadamente 1,15 mg/kg, aproximadamente 1,20 mg/kg, aproximadamente 1,25 mg/kg, aproximadamente 1,3 mg/kg, aproximadamente 1,35 mg/kg, aproximadamente 1,40 mg/kg, aproximadamente 1,45 mg/kg, aproximadamente 1,50 mg/kg, o más de aproximadamente 1,50 mg/kg de clorotoxina. En dichas realizaciones, el tratamiento puede comprender la administración de una única dosis de conjugado de clorotoxina o la administración de 2 dosis, 3 dosis, 4 dosis, 5 dosis, 6 dosis o más de 6 dosis. Pueden administrarse dos dosis consecutivas a un intervalo de 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días o más de 7 días (por ejemplo 10 días, 2 semanas o más de 2 semanas).
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Para la administración directa en el sitio mediante microinfusión, las dosis típicas son de entre aproximadamente 1 ng/kg de peso corporal y aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal.
En determinadas realizaciones en las que el conjugado de clorotoxina se administra localmente, en particular en casos de administración intracavitaria en el cerebro, la administración del conjugado puede comprender la administración de una o más dosis que comprenden entre aproximadamente 0,01 mg y aproximadamente 100 mg de polipéptido clorotoxina, por ejemplo entre aproximadamente 0,05 y aproximadamente 50 mg, entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 25 mg, entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 10 mg, entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 5 mg, o entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 1,0 mg. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, puede administrarse una o más dosis de conjugado de clorotoxina, conteniendo cada una aproximadamente 1 mg, aproximadamente 1,5 mg, aproximadamente 2 mg, aproximadamente 2,5 mg, aproximadamente 3 mg, aproximadamente 3,5 mg, aproximadamente 4 mg, aproximadamente 4,5 mg o aproximadamente 5 mg de polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina. En algunas realizaciones, puede administrarse una o más dosis de conjugado de clorotoxina, conteniendo cada una aproximadamente 0,1 mg, aproximadamente 0,15 mg, aproximadamente 0,2 mg, aproximadamente 0,25 mg, aproximadamente 0,3 mg, aproximadamente 0,35 mg, aproximadamente 0,4 mg, aproximadamente 0,45 mg, aproximadamente 0,5 mg, aproximadamente 0,55 mg, aproximadamente 0,6 mg, aproximadamente 0,65 mg, aproximadamente 0,7 mg, aproximadamente 0,75 mg, aproximadamente 0,8 mg, aproximadamente 0,85 mg, aproximadamente 0,9 mg, aproximadamente 0,95 mg o aproximadamente 1 mg de polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina. En algunas realizaciones, un tratamiento pude comprender la administración de una única dosis de conjugado de clorotoxina o la administración de 2, 3, 4, 5, 6 o más de 6 dosis. Pueden administrarse dos dosis consecutivas a un intervalo de 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días o más de 7 días (por ejemplo 10 días, 2 semanas o más de 2 semanas).En algunas realizaciones, se administran múltiples dosis y la cantidad de polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina administrada no es la misma para cada dosis. Por ejemplo, en algunas realizaciones, las dosis pueden ajustarse (por ejemplo escalarse o reducirse) entre una dosis y otra según determine el médico responsable.
Se apreciará que las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden utilizarse en combinación con terapias adicionales (es decir, el tratamiento según la presente invención puede administrarse concurrentemente con, antes o después de uno o más procedimientos terapéuticos o médicos deseados). La combinación de terapias particular (terapéuticos y/o procedimientos) para la utilización en dicho régimen de combinación considerará la compatibilidad de los terapéuticos y/o procedimientos deseados y el efecto terapéutico deseado que debe alcanzarse.
Por ejemplo, las composiciones de la presente invención pueden utilizarse conjuntamente con otros procedimientos, incluyendo cirugía, radioterapia (por ejemplo radiación γ, radioterapia de haz de protones, radioterapia de haz de electrones, terapia de protones, braquiterapia e isótopos radioactivos sistémicos), terapia endocrina, hipertermia y crioterapia.
Alternativa o adicionalmente, las composiciones de la presente invención pueden utilizarse conjuntamente con otros agentes para atenuar cualesquiera efectos adversos (por ejemplo antieméticos) y/o con otros fármacos quimioterapéuticos autorizados, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, fármacos alquilantes (mecloretamina, clorambucilo, ciclofosfamida, melfalán e ifosfamida), antimetabolitos (metotrexato), antagonistas de purina y antagonistas de pirimidina (6-mercaptopurina, 5-fluorouracilo, citarabina y gemcitabina), venenos del huso (vinblastina, vincristina, vinorelbina y paclitaxel), podofilotoxinas (etopósido, irinotecán y topotecán), antibióticos (doxorrubicina, bleomicina y mitomicina), nitrosoureas (carmustina y lomustina), iones inorgánicos (cisplatino y carboplatino), enzimas (asparaginasa) y hormonas (tamoxifeno, leuprólido, flutamida y megestrol), entre otros. Para un comentario más completo de las terapias del cáncer actuales, ver http://www.cancer.gov/, una lista de los fármacos oncológicos autorizados por la FDA en http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm, y la obra The Merck Manual, edición décimoséptima, 1999.
Las composiciones de la presente invención también pueden utilizarse conjuntamente con una o más combinaciones adicionales de agentes citotóxicos como parte de un régimen de tratamiento. En algunas realizaciones, la combinación adicional de agentes citotóxicos se selecciona de entre: CHOPP (ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, prednisona y procarbazina), CHOP (ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisona), COP (ciclofosfamida, vincristina y prednisona), CAP-BOP (ciclofosfamida, doxorrubicina, procarbazina, bleomicina vincristina y prednisona), m-BACOD (metotrexato, bleomicina, doxorrubicina, ciclofosfamida, vincristina, dexametasona y leucovorina), ProMACE-MOPP (prednisona, metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, etopósido, leucovorina, mecloretamina, vincristina, prednisona y procarbazina), ProMACE-CytaBOM (prednisona, metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, etopósido, leucovorina, citarabina, bleomicina y vincristina), MACOP-B (metotrexato, doxorubicina,ciclofsfamida, vincristina, prednisona, bleomicina y leucovorina), MOPP (mecloretamina, vincristina, prednisona y procarbazina), ABVD (adriamicina/doxorubicina, bleomicina, vinblastina y dacarbazina), MOPP (mecloretamina, vincristina, prednisona y procarbazina) alternada con ABV (adriamicina/doxorubicina, bleomicina y vinblastina), MOPP (mecloetamina, vincristina, prednisona y procarbazina) alternada con ABVD (adriamicina/doxorubicina, bleomicina, vinblastina y dacarbazina), Ch1VPP (clorambucilo, vinblastina, procarbazina y prednisona); IMVP-16 (ifosfamida, metotrexato y etopósido); MIME (metil-gag, ifosfamida, metotrexato y etopósido);
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meningiomas y ependimomas. En algunas realizaciones, el tumor neuroectodérmico se selecciona de entre el grupo que consiste de meduloblastomas, neuroblastomas, feocromocitomas, melanomas, tumores neuroectodérmicos primitivos periféricos, carcinoma de células pequeñas del pulmón, sarcoma de Ewin y tumores metastásicos en el cerebro.
En determinadas realizaciones de la presente invención, se utilizan composiciones en el tratamiento y/o diagnóstico de los sarcomas. En algunas realizaciones, las composiciones y métodos de la presente invención se utilizan en el tratamiento y/o diagnóstico de cáncer de vejiga, cáncer de mama, linfoma crónico, leucemia, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de endometrio, linfoma no de Hodgkin, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer ovárico, cáncer pancreático y cáncer de próstata. En algunas realizaciones, el sarcoma se selecciona de entre el grupo que consiste de cáncer de próstata o cáncer de mama (ver, por ejemplo, las solicitudes publicadas de patente internacional nº WO03/101474A1, nº WO03/10475A2 y nº WO 2009/1405999)
En algunas realizaciones, el sarcoma es cáncer pancreático.
En determinadas realizaciones de la presente invención, las composiciones y métodos resultan útiles en el tratamiento y/o diagnóstico de los trastornos mieloproliferativos (por ejemplo tumores de origen mieloide) y/o trastornos linfoproliferativos (por ejemplo tumores de origen linfoide) (ver, por ejemplo, las solicitudes publicadas de patente internacional nº WO05/099774).
Entre los tipos de trastornos mieloproliferativos para los que las composiciones y métodos de la presente invención resultan útiles se incluyen, aunque sin limitación, policitemia vera (PV), trombocitemia esencial (TE), metaplasia mieloide agnogénica (MMA) (también denominada mielofibrosis idiopática (MFI)) y leucemia mielógena crónica (LMC).
En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención se utilizan para tratar y/o diagnosticar un trastornos linfoproliferativo. En algunas realizaciones, el trastorno linfoproliferativo es un linfoma no de Hodgkin. En algunas realizaciones, el trastorno linfoproliferativo es un neoplasma de células B, tal como, por ejemplo, una leucemia/linfoma linfoblástico de células B precursoras o un neoplasma de células B maduras. Entre los tipos no limitativos de neoplasmas de células B maduras se incluyen la leucemia linfocítica crónica de células B/linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de células B de la zona marginal esplénica, leucemia de células pilosas, linfoma de células B de la zona marginal extranodal, linfoma de las células del manto, linfoma folicular, linfoma de la zona marginal nodal, linfoma de células B grandes difuso, linfoma de Buritt, plasmacitoma y mieloma de células plasmáticas.
En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención se utilizan para tratar un neoplasma de células
T. Entre los tipos no limitativos de neoplasmas de células T se incluyen la leucemia prolinfocítica de células T, la leucemia linfocítica granular grande de células T, la leucemia de células NK, el linfoma de células NK/T, micosis fungoide, linfoma de células grandes anaplásicas cutáneo primario, linfoma de células T de tipo paniculitus subcutáneo, linfoma de células T intestinal de tipo enteropatía, linfoma de células T gamma-delta hepatoesplénico, linfoma de células T angioinmunoblástico, linfoma de células T periféricas, linfoma de células grandes anaplásico linfoma de células T adultas.
Los tumores que pueden tratarse utilizando composiciones de la presente invención pueden ser refractarios a tratamiento con otros quimioterapéuticos. El término "refractario", utilizado en la presente memoria en referencia a un tumor se refiere a que el tumor (y/o metástasis del mismo), tras el tratamiento con por lo menos un quimioterapéutico diferente de una composición de la invención, muestra una respuesta antiproliferativa nula o sólo débil (es decir, una inhibición nula o sólo débil del crecimiento tumoral) tras el tratamiento con dicho agente quimioterapéutico; es decir, un tumor que no puede ser tratado en absoluto o sólo con resultados insatisfactorios con otros quimioterapéuticos (preferentemente convencionales). La presente invención, en la que se menciona el tratamiento de tumores refractarios y similares, debe entenderse que comprende no sólo (i) tumores en los que uno o más quimioterapéuticos ya han fracasado durante el tratamiento del paciente sino también (ii) tumores que puede demostrarse que son refractarios a otros medios, por ejemplo la biopsia y el cultivo en presencia de quimioterapéuticos.
2. Contextos antiangiogénicos
Se ha demostrado que la clorotoxina posee propiedades antiangiogénicas. Ver, por ejemplo, la solicitud publicada de patente internacional WO2009/117018.
En determinadas realizaciones, se utilizan las composiciones y métodos de la presente invención para tratar, diagnosticar y/o aliviar una enfermedad o condición tal como, por ejemplo, cáncer (incluyendo cáncer metastásico, tal como se ha indicado anteriormente), neovascularización ocular (tal como degeneración macular), enfermedades inflamatorias (tal como artritis), etc. En algunas realizaciones, la condición o enfermedad se caracteriza por la neovascularización coroidal. Entre los ejemplos de dichas condiciones o enfermedades se incluyen, aunque sin
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limitarse a ellas, degeneración macular (incluyendo la degeneración macular húmeda, la degeneración macular asociada a la edad, etc.), miopía, traumatismos oculares, pseudoxantoma elástico y combinaciones de los mismos.
La degeneración macular es la causa principal de pérdida de la visión y ceguera en estadounidenses de 65 años o más de edad. La degeneración macular típicamente se produce en la forma relacionada con la edad (con frecuencia denominada DMAE), aunque también se produce la degeneración macular juvenil. En la DMAE, la mácula (la parte de la retina que es responsable de la visión central, más aguda) degenera. La degeneración macular típicamente se diagnostica como seca (no neovascular) y húmeda (neovascular).
En la degeneración macular seca, se empiezan a acumular puntos amarillentos conocidos como drusas a partir de depósitos o residuos procedentes de tejido en deterioro de principalmente el área de la mácula. La visión central se pierde habitualmente de manera gradual y no la pérdida no es tan severa como en la degeneración macular húmeda.
La degeneración macular húmeda, tal como sugiere la denominación "neovascular", se caracteriza por el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos de manera aberrante, por ejemplo sobre la mácula. Dichos nuevos vasos sanguíneos pueden crecer debajo de la retina, con fuga de sangre y líquido. Dichas fugas causan daños permanentes en las células retinianas fotosensibles, que mueren y crean puntos ciegos en la visión central. La degeneración macular húmeda puede clasificarse adicionalmente en dos categorías. En la forma oculta de la degeneración macular húmeda, el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos bajo la retina no es tan pronunciado y las fugas son menos evidentes, resultando típicamente en una pérdida menos severa de visión. En la forma clásica de degeneración macular húmeda, el crecimiento de vasos sanguíneos y la cicatrización presentan un contorno delineado muy claro que es observable bajo la retina. La degeneración macular húmeda clásica también se conoce como neovascularización coroidal clásica y habitualmente resulta en una pérdida de visión más severa.
Dado el papel de la angiogénesis en la degeneración macular húmeda, que comprende muchos casos de DMAE, las composiciones y métodos de la invención pueden resultar útiles en el tratamiento, diagnóstico y/o mejora de dichos trastornos. Las terapias actuales de la degeneración macular húmeda implican inhibidores de angiogénesis tales como LucentisTM, MacugenTM y/o VisudyneTM, opcionalmente combinados con terapia fotodinámica (TFD) para dirigir los fármacos a células específicas. La fotocoagulación, en la que se utiliza un haz láser de alta energía para crear pequeñas quemaduras en áreas de la retina con vasos sanguíneos anormales, también se utiliza para tratar la degeneración macular húmeda.
En algunas realizaciones, los conjugados de clorotoxina (o una composición farmacéutica de los mismos) se administran en el sujeto que sufre de degeneración macular húmeda y/o degeneración macular relacionada con la edad. Los sujetos que sufren de degeneración macular húmeda pueden sufrir de la forma oculta o la forma clásica. En algunas realizaciones, los conjugados de clorotoxina provocan la regresión de la neovasculatura existente. En algunas realizaciones, los conjugados de clorotoxina evitan el brote de nuevos vasos. En determinadas realizaciones, los conjugados de clorotoxina se combinan con otros tratamientos para la degeneración macular húmeda, tales como la fotocoagulación, el tratamiento con otros inhibidores de angiogénesis, la terapia fotodinámica, etc.
En algunas realizaciones, los agentes de clorotoxina indicados en la presente memoria se administran en combinación o como parte de un régimen terapéutico con uno o más regímenes terapéuticos recomendados para el tratamiento de una enfermedad, trastorno o condición asociado a la angiogénesis. A título de ejemplos, pueden encontrarse regímenes recomendados para el tratamiento del cáncer en el sitio de internet con URL www.cancer.gov, el sitio de internet del National Cancer Institute. Pueden encontrarse regímenes recomendados para el tratamiento de la degeneración macular en el sitio de internet con URL www.mayo clinic.org/maculardegeneration/treatment.html. Entre los regímenes de tratamiento se incluyen la quimioterapia, la cirugía y/o la terapia de radiación.
Ejemplos
Ejemplo 1: síntesis de polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina
Los polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina con las secuencias de aminoácidos SEC ID nº 1-28 tal como se muestran en las Tablas 1 y 2 pueden sintetizarse utilizando la síntesis peptídica en fase sólida (SPFS). Se tratan perlas sólidas pequeñas porosas con conectores a través de los cuales el polipéptido sintetizado se une covalentemente a las perlas durante la síntesis. En consecuencia, los polipéptidos nacientes son inmovilizados sobre la fase sólida y resultan retenidos durante las etapas de lavado.
La repetición de los ciclos de acoplamiento y desprotección se utiliza para generar polipéptidos con las secuencias SEC ID nº 1 a 28 en cada ciclo de acoplamiento y desprotección; la amina N-terminal libre del péptido o polipéptido unido a la fase sólida se acopla a un única unidad aminoácido que se encuentra protegida en el extremo N-terminal por un grupo protector Fmoc, (9H-(f)luorén-9-il(m)et(o)xi(c)arbonil. Dicha unidad el péptido/polipéptido en crecimiento seguidamente se desprotege bajo condiciones básicas, tal como piperidina al 20% en dimetilformamida para generar
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una nueva amina N-terminal que pueda unirse a un aminoácido adicional en la siguiente ronda de acoplamientodesprotección.
Tras completar todos los ciclos según se desea, el polipéptido se escinde de la perla utilizando ácido trifluoroacético.
Para generar polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina adicionales, los polipéptidos con las secuencias de aminoácidos SEC ID nº 1, 11, 12 y 13 son modificados mediante pegilación en la lisinas según la Tabla 2.
Ejemplo 2: ensayos para la actividad de unión de los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina
Se ha demostrado que la clorotoxina se une selectivamente a muchos tipos tumorales diferentes, incluyendo las células de glioma U251 y las células de cáncer de próstata PC3. En el presente Ejemplo, los polipéptidos cloroxina de contenido reducido de lisina generados tal como se indica en el Ejemplo 2 se marcan con biotina y se someten a ensayo para actividad de unión. Cada polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina biotinilado se incuba con células de glioma U251 y separadamente con células de cáncer de próstata PC3 obtenidas a partir de cultivos celulares subconfluyentes. Tras la incubación, las células se tiñen con avidina-HRP (por sus siglas en inglés, peroxidasa de rábano picante) utilizando un kit comercial siguiendo las instrucciones del fabricante. La clorotoxina se utiliza como control positivo de tinción y se utiliza una reacción de incubación sin polipéptido a modo de control negativo de tinción. También puede utilizarse como control negativo de tinción un péptido con una secuencia de aminoácidos que se encuentra mezclada en relación a la de la clorotoxina. La tinción positiva tal como se pone de manifiesto por la presencia de un producto de reacción de color de HRP se utiliza como indicación de la unión al polipéptido clorotoxina de contenido reducido de lisina biotinilado.
Los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina que muestran unión a células U251 o PC3 seguidamente se someten a ensayo (en forma marcada) en ensayos de unión competitiva en los que se utiliza clorotoxina no marcada como competidor. Se identifican los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina que muestran niveles en disminución de la unión en presencia de cantidades crecientes de clorotoxina.
Con el fin de cuantificar el porcentaje de células unidas, se utiliza avidina acoplada a un pigmento fluorescente, tal como FITC o rojo Texas en lugar de avidina-HRP para teñir las células tras la incubación con polipéptidos biotinilados y las células se analizan mediante FACS (por sus siglas en inglés, separación celular activada por fluorescencia).
Ejemplo 3: ensayos adicionales de la actividad de unión de los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina
Los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina identificados como de unión en competencia con la clorotoxina a U251 y/o PC3 en las células del Ejemplo 2 se sometieron a ensayos adicionales para la actividad de unión a un rango más amplio de tipos celulares con el fin de obtener un perfil de unión más completo.
La Tabla 3 lista las líneas celulares y células de cultivo primario, cualquiera de las cuales o cualquier combinación de las cuales puede someterse a ensayo en ensayos de unión con polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina. Entre las líneas celulares y células de cultivo primario listadas en la Tabla 3 se incluyen líneas celulares tanto de glioma como de no glioma procedentes de ser humano, rata y ratón.
Tabla 3: células primarias y líneas celulares tumorales la unión a las cuales puede someterse a ensayo
Líneas celulares de glioma humano
Otras líneas celulares de glioma
D54-MG
C6 rata
U251-MG
9L rata
CH235
GL2gl ratón
STTG1
Células primarias
U138-MG
Cultivos primarios de rata de astrocitos normales corticales y de médula espinal
U87-MG
Cultivos de glioma primario humano
U373-MG
Cultivos de astrocitos normales humanos
T98G
Cultivos de fibroblastos normales humanos
A172
Células endoteliales vasculares umbilicales humanas
G26
(HUVEC)
Líneas celulares no de glioma
Neuroblastoma humano SH-SY5Y
Cáncer de mama humano MDA-MB-453
Neuroblastoma humano SH-N-MC
Cáncer de mama humano DY3672
Neuronales humanas HCN-2
Carcinoma de cérvix humano HeLa
Neuroectodérmicas primitivas humanas PFSK-1
Cáncer de mama humano LCC6
Carcinoma de colon humano HT 29
Línea celular neuronal humana HCN-2
Línea celular renal de mono COS-2
Carcinoma de mama humano BT474
Línea celular de fibroblastos de ratón BALBc 3T3
Fibroblastos de piel humanos CCD986Sk
Renal epitelial humana HEK 293
Adenocarcinoma de mama humano SK-BR-3
Línea celular de fibroblastos de ratón NIH 3T3
Cáncer de mama humano MCSF-7
Fibroblastos de pulmón humanos CCD19lu
Adenocarcinoma de mama humano MDA-MB231
Fibroblastos de pulmón humanos H460
Adenocarcinoma de mama humano MDA-MB468
Pulmonares humanas A549
ováricas de hámster chino CHO
Carcinoma de pulmón humano A-427
Melanoma humano SKMEL-31
Cáncer de pulmón humano W-62
Melanoma humano SKMEL-28
Adenocarcinoma de pulmón humano NIH-H1466
Melanoma metastásico humano 3M Malme
Línea celular de pulmón de células no pequeñas humano 1299
Cáncer pancreático humano Panc-1
Carcinoma de colon humano Caco -2
Cáncer pancreático humano PaCa-2
Carcinoma de colon humano HCT116
Carcinoma hepático humano HepG2
Adenocarcinoma colorrectal humano SW948
Carcinoma renal de células claras humanas Caki-1
Cáncer de próstata humano DU 145
Adenocarcinoma de células renales humanas ACHN
Cáncer de próstata humano PC -3
Linfoma humano de Raji
Cáncer de próstata humano LNCaP
Linfoma humano Daudi
Cáncer de mama metastásico humano 2LMP
Leucemia humana MOLT4
Leucemia promielocítica aguda humana HL60
Ejemplo 4: conjugación de polipéptidos clorotoxina monolisina a paclitaxel
Uno o más polipéptidos clorotoxina monolisina sintetizados en el Ejemplo 1 y sometidos a ensayo opcionalmente en 5 los Ejemplos 2 y/o 3 se conjugaron con paclitaxel, que por sí mismo es un agente terapéutico anticáncer insoluble en agua. El paclitaxel es un inhibidor de la mitosis.
Los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina se hicieron reaccionar con una entidad éster de paclitaxel-conector carboxi (por ejemplo NHS/EEDQ) en PBS y se incubaron. Se analizaron muestras del producto
10 final purificado mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) y espectrometría de masas (EM) para confirmar que se generaban conjugados de una única especie. Los conjugados resultantes se sometieron a ensayo para solubilidad en agua mediante la determinación de la concentración de saturación y la tasa de solución. Se identificaron los conjugados que eran solubles en agua para el análisis adicional como candidatos a fármaco.
15 Ejemplo 5: conjugación de polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina a gemcitabina
Se sintetizaron polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina que no presentaban ningún residuo de lisina en absoluto (ver, por ejemplo, SEC ID nº 2, 5 y 6) tal como se indica en el Ejemplo 1 y se sometieron a ensayo opcionalmente para la unión en los Ejemplos 2 y/o 3. Los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina se
20 conjugaron con gemcitabina (GemzarTM), un análogo de nucleósido, mediante el extremo N-terminal.
Ejemplo 6: ensayo in vitro de unión de conjugados de clorotoxina
Los conjugados de clorotoxina de los Ejemplos 4 y 5 pueden someterse a ensayo individualmente para la unión a las
25 líneas celulares tumorales indicadas para los polipéptidos clorotoxina de contenido reducido de lisina, tal como se indica en los Ejemplos 2 y 3.
Ejemplo 7: ensayo in vitro de citotoxicidad de conjugados de clorotoxina
30 Los conjugados de clorotoxina obtenidos de los Ejemplos 4 y 5 y opcionalmente sometidos a ensayo para unión tal como se indica en el Ejemplo 6 se sometieron a ensayo para citotoxicidad en una o más de las líneas celulares listadas en la Tabla 3. Las células en cultivo se expusieron a conjugados de clorotoxina mediante la incubación en concentraciones diferentes de conjugados de clorotoxina. Tras 1,5 horas de exposición, se midió la viabilidad celular y se representó un gráfico del porcentaje de células viables frente a la concentración molar de conjugado de
35 clorotoxina. A título comparativo, las células se incubaron separadamente con agente citotóxico solo (por ejemplo paclitaxel del Ejemplo 4 o temozolomida del Ejemplo 5) y se representó una curva de dosis-respuesta similar para la viabilidad.

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Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2360519T3 (es) 2005-04-22 2011-06-06 University Of Washington Conjugado de cianina-clorotoxina y procedimiento para la visualización intraquirúrgica del cáncer.
US8227439B2 (en) 2008-05-15 2012-07-24 Morphotek, Inc. Treatment of metastatic tumors
EP2531206B1 (en) 2010-02-04 2017-05-31 Morphotek, Inc. Chlorotoxin polypeptides and conjugates and uses thereof
CN106957356B (zh) 2010-05-11 2021-05-25 弗雷德哈钦森癌症研究中心 氯毒素变体、缀合物及其使用方法
AU2013204119B2 (en) * 2010-05-11 2016-03-31 Fred Hutchinson Cancer Center Chlorotoxin variants, conjugates, and methods for their use
HUE030137T2 (en) 2011-08-04 2017-04-28 Toray Industries Pharmaceutical preparation for the treatment and / or prevention of cancer
JP2016505826A (ja) 2012-12-10 2016-02-25 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター スクリーニングの方法
US9784730B2 (en) 2013-03-21 2017-10-10 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Nanoparticle for targeting brain tumors and delivery of O6-benzylguanine
US11559580B1 (en) 2013-09-17 2023-01-24 Blaze Bioscience, Inc. Tissue-homing peptide conjugates and methods of use thereof
US11013814B2 (en) 2017-03-16 2021-05-25 Blaze Bioscience, Inc. Cartilage-homing peptide conjugates and methods of use thereof
JP6652923B2 (ja) 2013-09-17 2020-02-26 ブレイズ バイオサイエンス， インコーポレイテッド クロロトキシンコンジュゲート及びその使用方法
CN105801706B (zh) * 2014-12-31 2019-10-22 深圳先进技术研究院 蝎氯毒素多肽-铁蛋白重链融合蛋白、自组装蛋白质纳米笼及其制备方法和应用
CN104877016A (zh) * 2015-04-30 2015-09-02 温州生物材料与工程研究所 折叠氯代毒素、氯代毒素变异体与折叠氯代毒素变异体及其制备工艺
AU2016283391A1 (en) * 2015-06-26 2017-11-30 Fred Hutchinson Cancer Research Center Therapeutic peptides and methods of use thereof
JP6966424B2 (ja) 2015-09-09 2021-11-17 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 軟骨ホーミングペプチド
ES2902987T3 (es) * 2015-10-13 2022-03-30 Hope City Receptores de antígeno quiméricos que contienen un dominio de clorotoxina
WO2017136769A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Peptide drug conjugates
US12048732B2 (en) 2016-04-15 2024-07-30 Blaze Bioscience, Inc. Methods of treating breast cancer
EP3442555A4 (en) * 2016-04-15 2020-04-01 Blaze Bioscience, Inc. METHOD FOR TREATING BREAST CANCER
KR101678393B1 (ko) * 2016-08-25 2016-12-06 (주)넥스젠바이오텍 피부 세포 증식 효과가 증가한 전갈독 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선, 피부 탄력 증대 및 항노화 화장료 조성물
CA3044393A1 (en) * 2016-12-09 2018-06-14 The Uab Research Foundation Chimeric chlorotoxin receptors
JP7191025B2 (ja) 2017-01-18 2022-12-16 フレッド ハッチンソン キャンサー センター Ｔｅａｄ相互作用を妨害するためのペプチド組成物およびその使用方法
AU2018283161A1 (en) 2017-06-15 2020-01-02 Blaze Bioscience, Inc. Renal-homing peptide conjugates and methods of use thereof
EP3681540A4 (en) 2017-09-15 2021-05-19 Eisai, Inc. CHLOROTOXIN AGENT AND USES THEREOF
CA3086040A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Blaze Bioscience, Inc. Tumor homing and cell penetrating peptide-immuno-oncology agent complexes and methods of use thereof
WO2020243390A1 (en) * 2019-05-31 2020-12-03 The Cleveland Clinic Foundation Functionalized fullerene gel tumor treatment
WO2022144560A1 (en) * 2020-12-30 2022-07-07 Vascular Venture Korlátolt Felelősségű Társaság Chlorotoxin derivatives and use thereof
CN113092609B (zh) * 2021-03-31 2022-03-29 中国海洋大学 一种Gymnodimine毒素标准物质的制备方法
CN113527416A (zh) * 2021-08-11 2021-10-22 南开大学 一种硝基还原酶响应氨基酸及肿瘤乏氧荧光探针的制备方法
KR20240015030A (ko) * 2022-07-25 2024-02-02 충남대학교산학협력단 E5의 분비를 위한 재조합 발현 벡터 및 이로 형질전환된약독화 살모넬라 균주
CN118767156B (zh) * 2023-04-10 2025-11-21 湖南中晟全肽生物科技股份有限公司 一种氯毒素类似物的多肽偶联物及其用途

Family Cites Families (120)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444744A (en) 1980-03-03 1984-04-24 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibodies to cell surface antigens
DE3407582A1 (de) 1984-03-01 1985-09-05 Dornier System Gmbh, 7990 Friedrichshafen Schaltungsanordnung fuer einen regelkreis
WO1988002117A1 (en) 1986-09-19 1988-03-24 Scripps Clinic And Research Foundation Monoclonal paratopic molecule directed to human ganglioside gd2
US5171749A (en) 1987-01-20 1992-12-15 University Of British Columbia Wavelength-specific cytotoxic agents
US5591829A (en) 1987-05-29 1997-01-07 Matsushita; Shuzo Antibodies modified with toxic substance
US4904584A (en) 1987-12-23 1990-02-27 Genetics Institute, Inc. Site-specific homogeneous modification of polypeptides
US5051364A (en) 1989-02-16 1991-09-24 The Salk Institute For Biological Studies Anti-lipocortin-I and anti-lipocortin-II monoclonal antibodies
DE3909799A1 (de) 1989-03-24 1990-09-27 Behringwerke Ag Monoklonale antikoerper (mak) gegen tumorassoziierte antigene, ihre herstellung und verwendung
US5171741A (en) 1989-04-21 1992-12-15 Health Research, Inc. Bacteriochlorophyll-a derivatives useful in photodynamic therapy
US5173504A (en) 1989-04-21 1992-12-22 Health Research, Inc. Bacteriochlorophyll-a derivatives useful in photodynamic therapy
US5308608A (en) 1989-06-07 1994-05-03 University Of British Columbia Photosensitizing Diels-Alder porphyrin derivatives
AU639726B2 (en) 1989-09-08 1993-08-05 Duke University Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas
US5223253A (en) 1989-09-28 1993-06-29 American Home Products Corporation Bovine vaccine compositions and method for preventing trichomonas infections using same
GB2250993B (en) 1990-11-21 1995-02-15 Inst Nat Sante Rech Med Stromelysin-3 and its application in the diagnosis and treatment of malignant breast cancer
US5750376A (en) 1991-07-08 1998-05-12 Neurospheres Holdings Ltd. In vitro growth and proliferation of genetically modified multipotent neural stem cells and their progeny
CA2119463C (en) 1991-09-20 2003-09-16 Leu-Fen H. Lin Glial cell line-derived neutrophic factor
US5314992A (en) 1991-11-25 1994-05-24 Trustees Of Dartmouth College Lipocortin-1 receptor protein and its uses
WO1993023075A1 (en) 1992-05-14 1993-11-25 Oncologix, Inc. Treatment of vascular leakage syndrome and collagenase induced disease by administration of matrix metalloproteinase inhibitors
US5405957A (en) 1992-10-30 1995-04-11 The University Of British Columbia Wavelength-specific photosensitive compounds and expanded porphyrin-like compounds and methods of use
US5726304A (en) 1992-10-30 1998-03-10 The University Of British Columbia Porphocyanine and CNC-expanded porphyrins
CZ286550B6 (cs) 1993-01-14 2000-05-17 Cancer Research Campaign Technology Ltd. Kombinovaný farmaceutický prostředek pro léčbu lidských nádorových buněk, použití inhibitoru ATasy a temozolomidu pro jeho přípravu a souprava
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5626862A (en) 1994-08-02 1997-05-06 Massachusetts Institute Of Technology Controlled local delivery of chemotherapeutic agents for treating solid tumors
US5688773A (en) 1994-08-17 1997-11-18 The General Hospital Corporation Method of selectively destroying neoplastic cells
US5648485A (en) 1994-10-26 1997-07-15 University Of British Columbia β, β-dihydroxy meso-substituted chlorins, isobacteriochlorins, and bacteriochlorins
US5985822A (en) 1994-12-09 1999-11-16 The Scripps Research Institute Inhibition of glial cell proliferation with N-CAM homophilic peptides
US5756340A (en) 1995-05-08 1998-05-26 The Regents Of The University Of California Insect control with multiple toxins
JP3809502B2 (ja) 1995-05-30 2006-08-16 二郎 有川 ハンタウィルス抗原蛋白質およびモノクローナル抗体
JPH0971559A (ja) 1995-06-29 1997-03-18 Nippon Nohyaku Co Ltd ヒドロキシルアミン誘導体及び該化合物を含有する殺菌剤
JPH0971599A (ja) 1995-09-06 1997-03-18 Nippon Seibutsu Kagaku Kenkyusho 鶏貧血ウイルス（ｃａｖ）感染鶏血清と高い反応性を示すポリペプチド及びこのポリペプチドに対する抗体、鶏貧血ウイルス感染の診断法及びワクチン
US5905027A (en) 1995-12-27 1999-05-18 Uab Research Foundation Method of diagnosing and treating gliomas
US6667156B2 (en) 1995-12-27 2003-12-23 Uab Research Foundation Diagnosis and treatment of neuroectodermal tumors
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
US5880145A (en) 1997-05-07 1999-03-09 The University Of British Columbia Class of benzoporphyrin derivative photoactive compounds
AU741070B2 (en) 1997-05-07 2001-11-22 Qlt Inc. Ethylene glycol esters of monohydrobenzoporphyrin derivatives as photoactive agents
US6130101A (en) 1997-09-23 2000-10-10 Molecular Probes, Inc. Sulfonated xanthene derivatives
CN1284083A (zh) 1997-12-05 2001-02-14 伊东恭悟 肿瘤抗原肽衍生物
US6403625B1 (en) 1998-08-12 2002-06-11 Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. Fluorescent labeling reagents
US6703381B1 (en) * 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
US6214986B1 (en) 1998-10-07 2001-04-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of bcl-x expression
SE9901387D0 (sv) 1999-04-19 1999-04-19 Astra Ab New pharmaceutical foromaulations
US6849714B1 (en) 1999-05-17 2005-02-01 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
CN1379687A (zh) 1999-09-14 2002-11-13 生物医学阿佩则系统有限公司 具有生化活性的磁性毫微粒、其制备方法和应用
US6623936B1 (en) 1999-09-24 2003-09-23 Imgenex Compositions and methods for improved detection and classification of neoplasms
WO2001037721A2 (en) 1999-11-22 2001-05-31 The Research Foundation Of State University Of New York Magnetic nanoparticles for selective therapy
DE10020376A1 (de) 2000-04-26 2001-11-08 Inst Zelltechnologie E V Dynamische Marker
AU2002220265A1 (en) 2000-11-03 2002-05-15 University Of Vermont And State Agricultural College Compositions for inhibiting grb7
US20040180846A1 (en) 2001-03-01 2004-09-16 Ruo-Pan Huang Connexin enhances chemotherapy-induced apoptiosis in human cancer cells inhibiting tumor cell proliferation
WO2003008583A2 (en) 2001-03-02 2003-01-30 Sagres Discovery Novel compositions and methods for cancer
AU2002345959A1 (en) 2001-06-26 2003-01-08 Uab Research Foundation Chlorotoxin inhibition of cell invasion, cancer metastasis, angiogenesis and tissue remodeling
WO2003010475A1 (en) 2001-07-16 2003-02-06 Maytag Corporation Method and system for refrigerator with integrated presentation mode
WO2003029462A1 (en) 2001-09-27 2003-04-10 Pieris Proteolab Ag Muteins of human neutrophil gelatinase-associated lipocalin and related proteins
US6972326B2 (en) 2001-12-03 2005-12-06 Molecular Probes, Inc. Labeling of immobilized proteins using dipyrrometheneboron difluoride dyes
EP1480665A2 (en) 2002-02-04 2004-12-01 Auburn University Peptides for recognition and targeting of glial cell tumors
US20030232013A1 (en) 2002-02-22 2003-12-18 Gary Sieckman Therapeutic and diagnostic targeting of cancers cells with tumor homing peptides
US20060166892A1 (en) 2002-05-31 2006-07-27 Alvarez Vernon L Treatment of cell proliferative disorders with chlorotoxin
US20060088899A1 (en) * 2002-05-31 2006-04-27 Alvarez Vernon L Combination chemotherapy with chlorotoxin
US7560160B2 (en) 2002-11-25 2009-07-14 Materials Modification, Inc. Multifunctional particulate material, fluid, and composition
US20040101822A1 (en) 2002-11-26 2004-05-27 Ulrich Wiesner Fluorescent silica-based nanoparticles
EP2003196A3 (en) 2003-06-09 2009-01-07 The Regents of the University of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
DE10328251A1 (de) 2003-06-24 2005-01-13 Toximed Gmbh Pharmazeutischer Wirkstoff
WO2005053611A2 (en) 2003-11-26 2005-06-16 Transmolecular, Inc. Treatment of phosphatidylinositol phospholipid disorders
AU2005232616A1 (en) 2004-04-06 2005-10-27 Transmolecular, Inc. Diagnosis and treatment of myeloid and lymphoid cell cancers
US20080153746A1 (en) 2004-04-06 2008-06-26 Transmolecular, Inc. Diagnosis and Treatment of Myeloid and Lymphoid Cell Cancers
US7776824B2 (en) 2004-05-06 2010-08-17 The Trustees Of Columbia University NGAL for reduction and amelioration of ischemic and nephrotoxic injuries
US7638299B2 (en) 2004-07-21 2009-12-29 Ambrx, Inc. Biosynthetic polypeptides utilizing non-naturally encoded amino acids
GB0422901D0 (en) 2004-10-14 2004-11-17 Ares Trading Sa Lipocalin protein
KR100681763B1 (ko) 2005-02-28 2007-02-15 재단법인 목암생명공학연구소 인간 리포칼린 2를 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용약학적 조성물, 이를 이용한 암 전이 억제 방법
GB0504767D0 (en) 2005-03-08 2005-04-13 Ares Trading Sa Lipocalin protein
US7462446B2 (en) 2005-03-18 2008-12-09 University Of Washington Magnetic nanoparticle compositions and methods
US20070037232A1 (en) 2005-03-31 2007-02-15 Barasch Jonathan M Detection of NGAL in chronic renal disease
WO2006110585A2 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Cancer-related genes (prlr)
WO2006110582A1 (en) 2005-04-08 2006-10-19 Xcyte Therapies, Inc. Compositions and methods for the treatment of burns and sepsis
US7833979B2 (en) 2005-04-22 2010-11-16 Amgen Inc. Toxin peptide therapeutic agents
ES2360519T3 (es) 2005-04-22 2011-06-06 University Of Washington Conjugado de cianina-clorotoxina y procedimiento para la visualización intraquirúrgica del cáncer.
UA94226C2 (ru) * 2005-04-22 2011-04-26 Амген Инк. Пептидные токсины как терапевтические средства
WO2007021297A1 (en) 2005-08-18 2007-02-22 Ambrx, Inc. COMPOSITIONS OF tRNA AND USES THEREOF
US20070084929A1 (en) 2005-10-17 2007-04-19 Hitoshi Watanabe Barcode reader with a music player
EP2147927A3 (en) 2006-03-31 2010-09-01 Transmolecular, Inc. Use of 131i-tm-601 for the diagnosis and treatment of gliomas
WO2007137163A2 (en) 2006-05-19 2007-11-29 Georgia Tech Research Corporation Abc transporter ligand
CN101003788A (zh) 2006-09-21 2007-07-25 武汉大学 一种蝎抗肿瘤转移肽及其制备方法和应用
CN100564517C (zh) 2006-09-21 2009-12-02 武汉大学 一种蝎抗神经胶质瘤肽及其制备方法和应用
PE20081140A1 (es) * 2006-10-25 2008-09-22 Amgen Inc Agentes terapeuticos a base de peptidos derivados de toxinas
HRP20110368T1 (hr) 2007-06-21 2011-06-30 Technische Universitt Mnchen Biološki aktivni proteini s povećanom stabilnošću in vivo i/ili in vitro
US20090004105A1 (en) * 2007-06-27 2009-01-01 Zhen Cheng Molecular imaging of matrix metalloproteinase expression using labeled chlorotoxin
US20110091380A1 (en) 2007-08-07 2011-04-21 Transmolecular, Inc. Chlorotoxins as drug carriers
US20110283260A1 (en) 2007-08-31 2011-11-17 Iosemantics, Llc Quality assurance tools for use with source code and a semantic model
CN101918041A (zh) 2007-10-12 2010-12-15 超分子有限公司 用于肿瘤诊断和治疗的氯毒素剂的系统性给药
US7904868B2 (en) 2007-10-17 2011-03-08 International Business Machines Corporation Structures including means for lateral current carrying capability improvement in semiconductor devices
US20090176274A1 (en) 2007-10-19 2009-07-09 Abbott Laboratories Glycosylated mammalian ngal and use thereof
US20090124022A1 (en) 2007-10-19 2009-05-14 Abbott Laboratories Antibodies that bind to mammalian ngal and uses thereof
JP5848006B2 (ja) 2007-10-19 2016-01-27 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｎｇａｌの検出用イムノアッセイ及びキット
US8846036B2 (en) 2007-10-19 2014-09-30 Abbott Laboratories Antibodies that bind to mammalian NGAL and uses thereof
US20090123970A1 (en) 2007-10-19 2009-05-14 Abbott Laboratories Glycosylated mammalian ngal and use thereof
US20090269777A1 (en) 2007-10-19 2009-10-29 Abbott Laboratories Immunoassays and kits for the detection of ngal
US20090123946A1 (en) 2007-10-19 2009-05-14 Abbott Laboratories Immunoassays and kits for the detection of ngal
JP2011503587A (ja) 2007-11-15 2011-01-27 バイオポルト ディアグノスティックス エイ／エス 独特の分子形態を有するタンパク質バイオマーカーの診断における使用
ES2658852T3 (es) 2008-01-18 2018-03-12 Visen Medical, Inc. Agentes de imaginología fluorescentes
WO2009108762A2 (en) 2008-02-26 2009-09-03 The Penn State Research Foundation Methods and compositions for treatment of retinoid-responsive conditions
US8093060B2 (en) 2008-02-28 2012-01-10 Canon Kabushiki Kaisha Multisite phosphorylated peptide (protein) recognizing compound and detection method, imaging method, alzheimer's disease diagnosing method and reagent kit using the same
EP3673922A1 (en) 2008-03-14 2020-07-01 VisEn Medical, Inc. Integrin targeting agents and methods of using same
JP5586576B2 (ja) 2008-03-20 2014-09-10 トランスモレキュラー， インコーポレイテッド 血管新生の阻害
GB0807831D0 (en) 2008-04-29 2008-06-04 Cambridge Entpr Ltd Agents for imaging cell death
CN101270158B (zh) 2008-04-30 2010-12-22 武汉大学 一种靶向抗神经胶质瘤蛋白及制备方法和用途
US8227439B2 (en) * 2008-05-15 2012-07-24 Morphotek, Inc. Treatment of metastatic tumors
JP2009300110A (ja) 2008-06-10 2009-12-24 Olympus Corp 移植細胞の光学的検出方法又はイメージング方法
CA2729322C (en) 2008-06-24 2020-05-26 Technische Universitaet Muenchen Muteins of hngal and related proteins with affinity for a given target
AR073582A1 (es) 2008-09-12 2010-11-17 Nitto Denko Corp Agentes de produccion de imagenes de enfermedades fibroticas.conjugado. metodo
US20100098637A1 (en) 2008-09-23 2010-04-22 The Regents Of The University Of Michigan Dye-loaded nanoparticle
CN101381405B (zh) 2008-09-24 2011-07-27 武汉摩尔生物科技有限公司 基因工程肿瘤靶向kct-w1多肽及制备方法和用途
JP2010085108A (ja) 2008-09-29 2010-04-15 Nano Factory:Kk 生体光イメージング用プローブ
US20100105150A1 (en) 2008-10-24 2010-04-29 Abbott Laboratories Isolated human autoantibodies to neutrophil gelatinase-associated lipocalin (ngal) and methods and kits for the detection of human autoantibodies to ngal
CN106519588B (zh) 2009-11-09 2019-08-20 华盛顿大学商业化中心 官能化发色聚合物点及其生物共轭体
CN101921769B (zh) 2010-01-11 2012-07-25 山西大学 一种重组腺病毒及其制备方法和应用
WO2011094671A2 (en) 2010-01-29 2011-08-04 The Uab Research Foundation N-terminally conjugated polypeptides for targeted therapy and diagnosis
EP2531206B1 (en) 2010-02-04 2017-05-31 Morphotek, Inc. Chlorotoxin polypeptides and conjugates and uses thereof
CN101824084A (zh) 2010-04-08 2010-09-08 山西大学 靶向性抗胶质瘤蛋白质及其应用
CN106957356B (zh) 2010-05-11 2021-05-25 弗雷德哈钦森癌症研究中心 氯毒素变体、缀合物及其使用方法
CA2808392C (en) 2010-08-16 2020-03-10 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Binding proteins for hepcidin
CN104877016A (zh) * 2015-04-30 2015-09-02 温州生物材料与工程研究所 折叠氯代毒素、氯代毒素变异体与折叠氯代毒素变异体及其制备工艺

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