ES2624643T3 - Agentes de unión a esclerostina - Google Patents

Abstract

Un método para producir un polipéptido que es una parte inmunogénica de esclerostina humana, que comprende las etapas de: a) tratar esclerostina para conseguir digestión tríptica completa; b) recoger la muestra de digestión tríptica que tiene el peso molecular promedio de 7122,0 Dalton (masa teórica de 7121,5 Dalton) como se determina por espectrometría de masas de cristal líquido de ionización de electropulverización o tiempo de retención de aproximadamente 20,6 minutos como se determina por elución de una columna de HPLC de fase inversa con gradiente lineal de ácido trifluoroacético (TFA) 0,05 % a acetonitrilo 90 % en TFA 0,05 % a un caudal de 0,2 ml/min; y c) purificar la parte inmunogénica.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

DESCRIPCION

Agentes de union a esclerostina Campo tecnico

La presente invencion se refiere en general a epftopos de protema esclerostina humana y agentes de union (tales como anticuerpos) capaces de unirse a esclerostina o fragmentos de la misma.

Antecedentes de la invencion

Durante la vida de un individuo suceden dos o tres fases de cambios distintas en la masa osea (vease Riggs, West J. Med. 154: 63-77 (1991)). La primera fase se produce tanto en hombres como en mujeres y continua hasta la consecucion de una masa de hueso maxima. Esta primera fase se consigue mediante crecimiento lineal de las placas de crecimiento endocondriales y crecimiento radial debido a una tasa de aposicion periostea. La segunda fase comienza aproximadamente a los 30 anos para el hueso trabecular (huesos planos tales como las vertebras y la pelvis) y aproximadamente a los 40 anos para hueso cortical (por ejemplo, huesos largos hallados en las extremidades) y continua hasta la vejez. Esta fase se caracteriza por perdida de hueso lenta y se produce tanto en hombres como en mujeres. En mujeres, tambien se produce una tercera fase de perdida de hueso, mas probablemente debido a deficiencias de estrogenos posmenopausicas. Durante esta fase solamente, las mujeres pueden perder una masa de hueso adicional del hueso cortical y del compartimento trabecular (vease, Riggs, mencionado anteriormente).

La perdida de contenido mineral oseo puede estar provocada por una amplia diversidad de afecciones y puede dar como resultado problemas medicos significativos. Por ejemplo, la osteoporosis es una enfermedad debilitante en seres humanos y esta caracterizada por reducciones notables de la masa osea esqueletica y densidad mineral, deterioro estructural del hueso, incluyendo degradacion de la microarquitectura del hueso y aumentos correspondientes de la fragilidad osea (es decir, reducciones de la fuerza osea), y susceptibilidad a fractura en individuos aquejados. La osteoporosis en seres humanos esta generalmente precedida de osteopenia clmica (densidad mineral osea que es mayor de una desviacion tfpica pero menor de 2,5 desviaciones tfpicas por debajo del valor medio para hueso adulto joven), una afeccion hallada en aproximadamente 25 millones de personas en los Estados Unidos. Se ha diagnosticado a otros 7-8 millones de pacientes en Estados Unidos con osteoporosis clmica (definida como contenido mineral oseo mayor de 2,5 desviaciones tfpicas por debajo de la del hueso de adulto joven maduro). La frecuencia de osteoporosis en la poblacion humana aumenta con la edad. Entre los caucasicos, la osteoporosis es predominante en mujeres quienes, en los Estados Unidos, comprenden el 80% del grupo de pacientes con osteoporosis. La fragilidad aumentada y susceptibilidad a fractura del hueso esqueletico en los ancianos esta agravada por el mayor riesgo de cafdas accidentales en esta poblacion. Las fracturas de caderas, munecas y vertebras estan entre las lesiones mas habituales asociadas con la osteoporosis. Las fracturas de cadera en particular son extremadamente incomodas y caras para el paciente, y para las mujeres se correlacionan con altas tasas de mortalidad y morbilidad.

Aunque la osteoporosis se ha considerado como un aumento en el riesgo de fractura debido a la reduccion de la masa osea, pocos de los tratamientos actualmente disponibles para trastornos esqueleticos pueden aumentar la densidad osea de los adultos, y la mayona de los tratamientos disponibles en la actualidad actua principalmente inhibiendo adicionalmente la resorcion del hueso en lugar de estimular nueva formacion de hueso. El estrogeno se esta prescribiendo ahora para retardar la perdida de hueso. Sin embargo, existe cierta controversia sobre si los pacientes obtienen algun beneficio a largo plazo y si el estrogeno tiene algun efecto en pacientes de mas 75 anos de edad. Ademas, se cree que el uso de estrogenos aumenta el riesgo de cancer de mama y endometrio. Tambien se ha sugerido calcitonina, osteocalcina con vitamina K o altas dosis de calcio dietetico, con o sin vitamina D, para mujeres posmenopausicas. Las altas dosis de calcio, sin embargo, tienen con frecuencia efectos secundarios gastrointestinales no deseados, y los niveles de calcio en suero y orina deben supervisarse continuamente (por ejemplo, Khosla y Riggs, Mayo Clin. Proc. 70: 978982, 1995).

Otros enfoques terapeuticos actuales para la osteoporosis incluyen bifosfonatos (por ejemplo, Fosamax™, Actonel™, Bonviva™, Zometa™, olpadronato, neridronato, skelid, bonefos), hormona paratiroidea, calciltticos, calcimimeticos (por ejemplo, cinacalcet), estatinas, esteroides anabolicos, sales de lantano y estroncio y fluoruro sodico. Dichos compuestos terapeuticos, sin embargo, se asocian con frecuencia con efectos secundarios indeseables (vease Khosla y Riggs, mencionado anteriormente).

La esclerostina, el producto del gen SOST, esta ausente en esclerosteosis, una enfermedad esqueletica caracterizada por sobrecrecimiento del hueso y huesos densos fuertes (Brunkow et al., Am. J. Hum. Genet., 68: 577589, 2001; Balemans et al., Hum. Mol. Genet., 10: 537-543, 2001). La secuencia de aminoacidos de la esclerostina humana se ha presentado en Brunkow et al. en la referencia anterior y se divulga en el presente documento como SEQ ID NO: 1.

Los documentos WO 2005/003158 y WO 2005/014650 desvelan anticuerpos para esclerostina.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Breve sumario

Se divulgan en el presente documento composiciones y metodos que pueden usarse para aumentar al menos uno de formacion de hueso, densidad mineral osea, contenido mineral oseo, masa osea, calidad osea y fuerza osea, y que puede por lo tanto usarse para tratar una amplia diversidad de afecciones en las que sea deseable un aumento de al menos uno de formacion del hueso, densidad mineral osea, contenido mineral oseo, masa osea, calidad osea y fuerza osea. La presente invencion tambien ofrece otras ventajas relacionadas descritas en el presente documento.

La divulgacion se refiere a regiones (epftopos) de esclerostina humana reconocida por los agentes de union desvelados en el presente documento, metodos de uso de estos epftopos y metodos de preparacion de dichos epftopos.

La divulgacion tambien se refiere a epftopos espedficos de la region de esclerostina identificada como Bucle 2, y agentes de union que se unen espedficamente con esa region.

La invencion se refiere a epftopos espedficos de la region de nudo de cistina de esclerostina, y anticuerpos que se unen espedficamente con esa region.

La divulgacion se refiere a agentes de union, tales como anticuerpos, que se unen espedficamente con esclerostina. Los agentes de union pueden caracterizarse por su capacidad para bloquear de forma cruzada la union de al menos un anticuerpo divulgado en el presente documento con esclerostina y/o para bloquearse de forma cruzada de la union con esclerostina por al menos un anticuerpo divulgado en el presente documento. Los anticuerpos y otros agentes de union tambien pueden caracterizarse por su patron de union con peptidos de esclerostina humana en un “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdico de esclerostina humana” como se divulga en el presente documento.

La divulgacion se refiere a agentes de union, tales como anticuerpos, que pueden aumentar al menos uno de formacion del hueso, densidad mineral osea, contenido mineral oseo, masa osea, calidad osea y fuerza osea en un mairftfero.

La divulgacion se refiere a agentes de union, tales como anticuerpos que pueden bloquear el efecto inhibidor de esclerostina en un ensayo de mineralizacion basado en celulas.

La divulgacion se refiere ademas a construcciones polipeptfdicas que comprenden cuatro fragmentos polipeptfdicos unidos por al menos un enlace disulfuro, que representan una region central del nudo de cistina de esclerostina y anticuerpos capaces de unirse espedficamente con el mismo.

La divulgacion se refiere a metodos para obtener epftopos adecuados para su uso como inmunogenos para generar, en mairftferos, agentes de union, tales como anticuerpos capaces de unirse espedficamente con esclerostina; en ciertas realizaciones los agentes de union generados son capaces de neutralizar la actividad de esclerostina in vivo.

La divulgacion se refiere a una composicion para inducir un anticuerpo espedfico para esclerostina cuando la composicion se administra a un animal, comprendiendo la composicion un polipeptido que tiene la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68 o SEQ ID NO:69.

La divulgacion tambien se refiere a una composicion para inducir un anticuerpo espedfico para esclerostina cuando la composicion se administra a un animal, comprendiendo la composicion al menos un polipeptido que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID No:4 o SEQ ID NO:5; la composicion puede comprender al menos dos o al menos tres de las secuencias de aminoacidos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 y SEQ ID NO:5, y la composicion puede comprender las cuatro de las secuencias de aminoacidos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 y SEQ ID NO:5.

La divulgacion tambien se refiere a una composicion para inducir un anticuerpo espedfico para esclerostina cuando la composicion se administra a un animal, comprendiendo la composicion al menos un polipeptido que tiene las secuencias de aminoacidos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO:5, en las que SEQ ID NO:2 y 4 se unen por un enlace disulfuro en las posiciones de aminoacidos 57 y 111 en referencia a SEQ ID NO:1, y SEQ ID NO:3 y 5 se unen por al menos uno de (a) un enlace disulfuro en las posiciones de aminoacidos 82 y 142 en referencia a SEQ ID NO:1, y (b) un enlace disulfuro en las las posiciones de aminoacidos 86 y 144 en referencia a SEQ ID NO:1; el polipeptido puede conservar la estructura terciaria de la region polipeptfdica correspondiente de esclerostina humana de SEQ ID NO:1.

La divulgacion tambien se refiere al polipeptido T20,6 que consiste esencialmente en una protema esclerostina humana truncada en multiples puntos de SEQ ID NO:1, en la que los aminoacidos 1-50, 65-72, 91-100, 118-137 y

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

150-190 de SEQ ID NO:1 estan ausentes del polipeptido; este polipeptido puede obtenerse por digestion tnptica de esclerostina humana, y la protema puede aislarse por fraccionamiento de HPLC.

La divulgacion se refiere ademas a la parte inmunogenica T20,6 de esclerostina humana que comprende los aminoacidos 51-64, 73-90, 101-117 y 138-149 de SEQ ID NO:1, en la que la parte inmunogenica comprende al menos uno de:

(a) un enlace disulfuro entre los aminoacidos 57 y 111;

(b) un enlace disulfuro entre los aminoacidos 82 y 142; y

(c) un enlace disulfuro entre los aminoacidos 86 y 144;

la parte inmunogenica puede tener al menos dos de estos enlaces disulfuro; y la parte inmunogenica puede tener los tres enlaces disulfuro.

La divulgacion se refiere ademas a una parte inmunogenica T20,6 de esclerostina humana que comprende los aminoacidos 57-64, 73-86, 111-117 y 138-144 de SEQ ID NO:1, en la que la parte inmunogenica comprende al menos uno de:

(a) un enlace disulfuro entre los aminoacidos 57 y 111;

(b) un enlace disulfuro entre los aminoacidos 82 y 142; y

(c) un enlace disulfuro entre los aminoacidos 86 y 144;

la parte inmunogenica puede tener al menos dos de estos enlaces disulfuro; y la parte inmunogenica puede tener los tres enlaces disulfuro.

La divulgacion se refiere ademas a un polipeptido que consiste esencialmente en una protema esclerostina humana de SEQ ID NO: truncada en los extremos C terminal y N terminal, en el que los aminoacidos 1-85 y 112-190 de SEQ ID NO:1 estan ausentes del polipeptido.

La divulgacion tambien se refiere a una parte inmunogenica de esclerostina humana, que comprende los aminoacidos 86-111 de SEQ ID NO: 1; la parte inmunogenica puede consistir esencialmente en los aminoacidos contiguos CGPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC (SEQ ID NO: 6).

La divulgacion se refiere ademas a una parte inmunogenica de esclerostina de rata, que comprende los aminoacidos 92-109 de SEQ ID NO: 98; la parte inmunogenica puede consistir esencialmente en los aminoacidos contiguos PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO: 96). La divulgacion se refiere ademas a una parte inmunogenica de esclerostina de rata, que comprende los aminoacidos 99-120 de SEQ ID NO: 98; la parte inmunogenica puede consistir esencialmente en los aminoacidos contiguos KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO: 97).

La invencion se refiere a:

(1) un metodo para producir un polipeptido que es una parte inmunogenica de esclerostina humana que comprende las etapas:

(a) tratar esclerostina humana para conseguir digestion tnptica completa;

(b) recoger la muestra de digestion tnptica que tiene peso molecular promedio de 7122,0 Dalton (masa teorica 7121,5 Dalton) o tiempo de retencion de aproximadamente 20,6 minutos como se determina por elucion de una columna de HPLC de fase inversa con gradiente lineal de acido trifluoroacetico 0,05 % a acetonitrilo 90 % en TFA 0,05 % a un caudal de 0,2 ml/min; y

(c) purificar la parte inmunogenica.

La divulgacion se refiere a un metodo para generar un anticuerpo capaz de unirse espedficamente con esclerostina, que comprende:

(a) inmunizar un animal con una composicion que comprende un polipeptido de SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:96 o SEQ ID NO:97;

(b) recoger sueros del animal; y

(c) aislar de los sueros un anticuerpo capaz de unirse espedficamente con esclerostina.

La invencion se tambien se refiere a un metodo no terapeutico para generar un anticuerpo capaz de unirse espedficamente con esclerostina, comprendiendo el metodo:

(a) inmunizar un animal con una composicion que comprende polipeptido T20,6 o un derivado de T20,6;

(b) recoger sueros del animal; y

(c) aislar de los sueros un anticuerpo capaz de unirse espedficamente con esclerostina.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

La divulgacion se refiere ademas a un metodo de detectar un anticuerpo antiesclerostina en una muestra biologica, que comprende las etapas de

(a) poner en contacto la muestra biologica con un polipeptido que consiste esencialmente en SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:96 o SEQ ID NO:97 en condiciones que permiten que se forme un complejo entre el anticuerpo y el polipeptido;

(b) detectar la presencia o ausencia del complejo,

en el que la presencia del complejo indica que la muestra biologica contiene un anticuerpo antiesclerostina.

La divulgacion tambien se refiere a un metodo para detectar un anticuerpo antiesclerostina en una muestra biologica, que comprende las etapas de

(a) poner en contacto la muestra biologica con polipeptido T20,6 o un derivado de T20,6 en condiciones que permiten que se forme un complejo entre el anticuerpo y el polipeptido; y

(b) detectar la presencia o ausencia del complejo,

en el que la presencia del complejo indica que la muestra biologica contiene un anticuerpo antiesclerostina.

La divulgacion se refiere ademas a un agente de union a esclerostina, tal como un anticuerpo que bloquea de forma cruzada la union de al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C o Ab-D con una protema esclerostina. Tambien puede bloquearse de forma cruzada la union del agente de union a esclerostina con al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C o Ab-D. El anticuerpo aislado o un fragmento de union a antfgeno del mismo, puede ser un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano, un anticuerpo quimerico o similares.

La divulgacion se refiere ademas a un agente de union a esclerostina, tal como un anticuerpo, cuya union con esclerostna se bloquea de forma cruzada por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C o Ab-D. El anticuerpo aislado, o un fragmento de union a antfgeno, puede ser un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano, un anticuerpo quimerico o similares.

La divulgacion se refiere ademas a un agente de union a esclerostina, tal como un anticuerpo aislado, que bloquea de forma cruzada la union de al menos uno de los anticuerpos 1-24 (Ab-1 a Ab-24) con una protema de esclerostina. El agente de union a esclerostina tambien puede bloquearse de forma cruzada de la union con esclerostina por al menos uno de los anticuerpos 1-24 (Ab-1 a Ab-24). El anticuerpo aislado, o fragmento de union a antfgeno del mismo, puede ser un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano o un anticuerpo quimerico.

La divulgacion tambien se refiere a un agente de union a esclerostina, tal como un anticuerpo aislado que esta bloqueado de forma cruzada de la union con esclerostina por al menos uno de los anticuerpos 1-24 (Ab-1 a Ab-24); el anticuerpo aislado o un fragmento de union a antfgeno del mismo, puede ser un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano o un anticuerpo quimerico.

La divulgacion se refiere ademas a un agente de union, tal como un anticuerpo aislado que muestra un patron de union similar con peptidos de esclerostina humana en un “ensayo de union competitiva de epttopos peptfdicos de esclerostina humana” al que se muestra por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C o Ab-D; el anticuerpo aislado, o un fragmento de union a antfgeno del mismo, puede ser un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano, o un anticuerpo quimerico.

La invencion se refiere ademas adicionalmente a un anticuerpo monoclonal de la invencion reivindicado para su uso en un metodo para tratar un trastorno oseo asociado con al menos uno de baja formacion de hueso, baja densidad mineral osea, bajo contenido mineral oseo, baja masa osea, baja calidad osea y baja fuerza osea en un sujeto mairnfero comprendiendo dicho metodo proporcionar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una cantidad de dicho anticuerpo suficiente para aumentar al menos uno de formacion del hueso, densidad mineral osea, contenido mineral oseo, masa osea, calidad osea y fuerza osea.

La divulgacion tambien se refiere a un polipeptido de esclerostina aislado o fragmentos del mismo, en el que el polipeptido contiene 6 restos de cistema conservados y los fragmentos del mismo comprenden de 7 a 14 aminoacidos de SEQ ID NO: 2; de 8 a 17 aminoacidos de SEQ ID NO: 3; de 8 a 18 restos de sEq ID NO: 4; y de 6 a 12 restos de SEQ ID NO: 5; y el polipeptido o fragmentos del mismo se estabilizan por enlaces disulfuro entre SEQ ID NO: 2 y 4, y entre SEQ ID NO: 3 y 5; el polipeptido o fragmentos puede comprender 10-14 aminoacidos de SEQ ID NO: 2; de 14 a 17 aminoacidos de SEQ ID NO: 3; de 13 a 18 aminoacidos de SEQ ID NO: 4; y de 8 a 12 aminoacidos de SEQ ID NO: 5; y el polipeptido o fragmentos puede comprender SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 y SEQ ID NO:5.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Se proporcionan en el presente documento anticuerpos que se unen espedficamente a esclerostina humana. Los anticuerpos se caracterizan por su capacidad de bloquear de forma cruzada la union de al menos un anticuerpo divulgado en el presente documento con esclerostina humana y/o de bloquearse de forma cruzada de la union con esclerostina humana por al menos un anticuerpo divulgado en el presente documento.

Tambien se proporciona un anticuerpo aislado, o un fragmento de union a antigeno del mismo que puede aumentar al menos uno de formacion del hueso, densidad mineral osea, contenido de mineral del hueso, masa osea, calidad osea y fuerza osea en un mairnfero.

Tambien se proporciona un anticuerpo aislado, o un fragmento de union a antfgeno del mismo, que puede bloquear el efecto inhibidor de esclerostina en un ensayo de mineralizacion basado en celulas.

Tambien se proporciona un agente de union, tal como un anticuerpo que se une espedficamente a esclerostina humana y tiene al menos una secuencia de CDR seleccionada de SEQ iD NO: 39, 40, 4l, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 78, 79, 80, 81, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 351, 352, 353, 358, 359 y 360, y variantes de las mismas, donde el anticuerpo o fragmento de union a antigeno del mismo neutraliza la esclerostina.

Tambien se proporciona un agente de union, tal como un anticuerpo, que se une espedficamente a esclerostina humana y tiene al menos una secuencia de CDR seleccionada de sEq iD NO: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 78, 79, 80, 81, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261,262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271,272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 351, 352, 353, 358, 359 y 360 y variantes de las mismas.

Tambien se proporcionan regiones de esclerostina humana que son importantes para la actividad in vivo de la protema.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 representa las secuencias de aminoacidos de la forma madura (peptidos senal escindidos) de la cadena ligera (Figura 1A) (SEQ ID NO: 23) y cadena pesada (Figura 1B) (SEQ ID NO: 27) para el anticuerpo AbA antiesclerostina humana y antiesclerostina de raton.

La Figura 2 representa las secuencias de aminoacidos de la forma madura (peptidos senal escindidos) de la cadena ligera (Figura 2A) (SEQ ID NO: 31) y cadena pesada (Figura 2B) (SEQ ID NO: 35) para el anticuerpo AbB antiesclerostina.

La Figura 3 representa las secuencias de aminoacidos de la forma madura (peptidos senal escindidos) de la cadena ligera (Figura 3A) (SEQ ID NO: 15) y la cadena pesada (Figura 3B) (sEq ID NO: 19) para el anticuerpo Ab-C antiesclerostina humana y antiesclerostina de raton.

La Figura 4 representa las secuencias de aminoacidos de la forma madura (peptidos senal escindidos) de la cadena ligera (Figura 4A) (SEQ ID NO: 7) y la cadena pesada (Figura 4B) (sEq ID NO: 11) para el anticuerpo Ab-D antiesclerostina humana y antiesclerostina de raton.

La Figura 5 representa la densidad mineral osea en ratones medida en dos sitios esqueleticos (vertebras lumbares y metafisis tibial) despues de 3 semanas de tratamiento con vedculo, PTH (1-34), Ab-A o Ab-B.

La Figura 6 muestra la densidad mineral osea en ratones medida en dos sitios esqueleticos (vertebras lumbares y metafisis tibial) despues de 2 semanas de tratamiento con vedculo, PTH (1-34) o Ab-C.

La Figura 7 representa la densidad mineral osea en ratones medida en dos sitios esqueleticos (vertebras lumbares y metafisis tibial) despues de 3 semanas de tratamiento con vedculo o Ab-D.

La Figura 8 representa la secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal escindido) de esclerostina humana (SEQ ID NO: 1). Tambien se representa la secuencia de nucleotidos de la region codificante de esclerostina humana que codifica la forma madura de esclerostina humana. Las ocho cistinas estan numeradas C1 a C8. El nudo de cistina esta formado por tres enlaces disulfuro (C1-C5; C3-C7; C4-C8). C2 y C6 tambien forman un enlace disulfuro, sin embargo este disulfuro no es parte del nudo de cistina.

La Figura 9 representa un esquema de la estructura basica de la esclerostina humana. Hay una rama N-terminal (del primer Q a C1) y una rama C-terminal (de C8 al Y terminal). Entre estas ramas esta la estructura de nudo de cistina (formada por tres disulfuros: C1-C5; C3-C7; C4-C8) y tres bucles que estan designados Bucle 1, Bucle 2 y Bucle 3. Las regiones distales del Bucle 1 y Bucle 3 estan unidas por el disulfuro C2-C6. Se indican sitios de escision de tripsina potenciales (arginina=R y lisina=K). Algunos de los sitios de escision de AspN potenciales estan indicados (solamente se muestran restos de acido aspartico (D)).

La Figura 10 representa los mapas peptfdicos de HPLC de esclerostina humana despues de digestion con tripsina o AspN. Los peptidos de esclerostina humana generados por digestion con tripsina estan indicados (T19,2, T20, T20,6 y T21-22) como lo estan los peptidos de esclerostina humana generados por digestion con

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

AspN (AspN14,6, AspN18,6 y AspN22,7-23,5).

La Figura 11 representa informacion de secuencia y masa para los peptidos con enlaces disulfuro de esclerostina humana aislados generados por digestion con tripsina. Pos. sec. = posicion de secuencia. Obs. = observado. La masa observada se determino por analisis de ESI-LC-MS.

La Figura 12 representa la informacion de secuencia y masa para los peptidos de esclerostina humana aislados generados por digestion con AspN. El peptido AspN22,7-23,5 contiene los 4 enlaces disulfuro. Pos. sec. = posicion de secuencia. Obs. = observado. La masa observada se determino mediante analisis de ESI-LC-MS.

La Figura 13 representa un esquema lineal de cuatro peptidos de esclerostina humana (T19,2, T20, T20,6 y T21- 22) generados por digestion con tripsina.

La Figura 14 muestra un esquema lineal de cinco peptidos de esclerostina humana (AspN14,6, AspN18,6 y AspN22,7-23,5) generados por digestion con AspN. El pico de HPLC de AspN14,6 esta compuesto de tres peptidos no unidos por ningun enlace disulfuro.

La Figura 15 muestra la senal en unidades de resonancia (UR) del “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore. Se evaluo la union de Mab relativa con diversos peptidos de esclerostina humana (en solucion) frente a la union de Mab con esclerostina humana de forma madura intacta (inmovilizada en microplaca de Biacore). Los datos mostrados son para Ab-A. Los peptidos de esclerostina humana fueron T19,2, T20, T20,6, T21-22, AspN14,6, AspN18,6 y AspN22,7-23,5.

La Figura 16 muestra la senal en unidades de resonancia (UR) del “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore. Se evaluo la union de Mab relativa con diversos peptidos de esclerostina humana (en solucion) frente a union de Mab con esclerostina humana de forma madura intacta (inmovilizada en microplaca de Biacore). Los datos mostrados son para Ab-B. Los peptidos de esclerostina humana fueron T19,2, T20, T20,6, T21-22, AspN14,6, AspN18,6 y AspN22,7-23,5.

La Figura 17 muestra la senal en unidades de resonancia (UR) del “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore. Se evaluo la union de Mab relativa con diversos peptidos de esclerostina humana (en solucion) frente a union de Mab con esclerostina humana de forma madura intacta (inmovilizada en microplaca de Biacore). Los datos mostrados son para Ab-C. Los peptidos de esclerostina humana fueron T19,2, T20, T20,6, T21-22, AspN14,6, AspN18,6 y AspN22,7-23,5.

La Figura 18 muestra la senal en unidades de resonancia (UR) del “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore. Se evaluo la union de Mab relativa con diversos peptidos de esclerostina humana (en solucion) frente a union de Mab con esclerostina humana de forma madura intacta (inmovilizada en microplaca de Biacore). Los datos mostrados son para Ab-D. Los peptidos de esclerostina humana fueron T19,2, T20, T20,6, T21-22, AspN14,6, AspN18,6 y AspN22,7-23,5.

La Figura 19 muestra dos epftopos de union a Mab de esclerostina humana. La Figura 19A muestra la secuencia del epftopo del Bucle 2 para union de Ab-A y Ab-B con esclerostina humana (SEQ ID NO: 6). La Figura 19B muestra la secuencia, enlaces disulfuro y esquema del epftopo T20,6 para union de Ab-C y Ab-D con esclerostina humana (SEQ ID NO: 2-5).

La Figura 20 representa los mapas peptfdicos de HPLC de esclerostina humana despues de digestion con tripsina. La Figura 20A muestra la digestion del complejo de Ab-D de esclerostina humana. La Figura 20B muestra la digestion de la esclerostina humana sola. Se indican los picos de los peptidos T19,2, T20, T20,6 y T21-22.

La Figura 21 muestra la secuencia, enlace disulfuro y esquema del epftopo “derivado de T20,6 1 (nudo de cistina + 4 ramas)” para union de Ab-D con esclerostina humana (SEQ ID NO: 70-73).

La Figura 22 muestra resultados del ensayo de mineralizacion de la lrnea celular de osteoblastos MC3T3-E1-BF usado para identificar Mab neutralizantes anti-esclerostina. La esclerostina (Scl) de raton se uso a 1 |ig/ml. Se usaron anticuerpos monoclonales a 10 y 5 |ig/ml. Se cuantifico el alcance de la mineralizacion (diversos tipos de fosfato calcico insoluble) midiendo el calcio.

La Figura 23 representa resultados del ensayo de mineralizacion de la lrnea celular de osteoblastos MC3T3-E1- BF usado para identificar Mab neutralizantes anti-esclerostina. La esclerostina humana (Scl) se uso a 1 |ig/ml. Se usaron anticuerpos monoclonales a 8 y 4 |ig/ml. Se cuantifico el alcance de la mineralizacion (diversos tipos de fosfato calcico insoluble) midiendo el calcio.

La Figura 24 muestra resultados del ensayo de mineralizacion de la lrnea celular de osteoblastos MC3T3-E1-BF usado para identificar Mab neutralizantes anti-esclerostina. La esclerostina (Scl) humana se uso a 1 |ig/ml. Se usaron anticuerpos monoclonales a 10 |ig/ml. Se cuantifico el alcance de la mineralizacion (diversos tipos de fosfato calcico insoluble) midiendo el calcio.

La Figura 25 representa resultados de un modelo de raton SCID de perdida de hueso inducida por inflamacion. El tratamiento con Ab-A protegio a los ratones de perdida de hueso relacionada con inflamacion asociada con colitis cuando se midio como densidad mineral osea total (Figura 25A), densidad de hueso vertebral (Figura 25B) y densidad de hueso femur (Figura 25C).

Descripcion detallada

La presente invencion se refiere a regiones de la protema esclerostina humana que contienen epftopos reconocidos por anticuerpos que tambien se unen a esclerostina de longitud completa, y metodos para preparar y usar estos epftopos. La divulgacion tambien proporciona agentes de union (tal como anticuerpos) que se unen espedficamente a esclerostina o parte de esclerostina, y metodos para usar dichos agentes de union. Los agentes de union son

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

utiles para bloquear o afectar a la union de esclerostina humana con uno o mas ligandos.

La esclerostina humana recombinante/SOST esta disponible en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, MN, Estados Unidos; 2006 cat. n° 1406-ST-025). Adicionalmente, la esclerostina de raton recombinante/SOST esta disponible en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, MN, Estados Unidos; 2006 cat. n° 1589-ST-025). Anticuerpos monoclonales de union a esclerostina de uso en investigacion estan disponibles en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, MN, Estados Unidos; monoclonal de raton 2006 cat. n° MAB1406; monoclonal de rata: 2006 cat. n° MAB1589). Las Patentes de Estados Unidos N° 6.395.511 y 6.803.453 y Publicaciones de Patente de Estados Unidos 20040009535 y 20050106683 se refieren a anticuerpos anti-esclerostina en general.

Como se usa en el presente documento, se pretende que la expresion esclerostina humana incluya la protema de SEQ ID NO: 1 y variantes alelicas de la misma. La esclerostina puede purificarse a partir de celulas hospedadoras 293T que se hayan transfectado por un gen codificante de esclerostina mediante elucion de sobrenadante filtrado de fluido de cultivo de celulas hospedadoras usando una columna de Heparina HP, usando un gradiente salino. La preparacion y purificacion adicional usando cromatograffa de intercambio cationico se describen en los Ejemplos 1 y 2.

Los agentes de union son preferentemente anticuerpos, como se define en el presente documento. El termino “anticuerpo” se refiere a un anticuerpo intacto, o un fragmento de union del mismo. Un anticuerpo puede comprender una molecula de anticuerpo completa (incluyendo versiones policlonal, monoclonal, quimerica, humanizada o humana que tienen cadenas de longitud completa pesadas y/o ligeras) o comprende un fragmento de union a antigeno del mismo. Los fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos F(ab')2, Fab, Fab', Fv, Fc y Fd, y pueden incorporarse en anticuerpos de dominio sencillo, anticuerpos de cadena sencilla, maxicuerpos, minicuerpos, intracuerpos, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, v-NAR y bis-scFv (Vease por ejemplo, Hollinger y Hudson, 2005, Nature Biotechonology, 23, 9, 1126-1136). Tambien se desvelan polipeptidos de anticuerpo en la Patente de Estados Unidos N° 6.703.199, incluyendo monocuerpos de polipeptidos de fibronectina. Otros polipeptidos de anticuerpos se desvelan en la Publicacion de Patente de Estados Unidos 2005/0238646, que son polipeptidos de cadena sencilla.

Pueden obtenerse fragmentos de union a antfgeno derivados de un anticuerpo, por ejemplo, mediante hidrolisis proteolftica del anticuerpo, por ejemplo, digestion con pepsina o papama de anticuerpos completos de acuerdo con metodos convencionales. Como ejemplo, los fragmentos de anticuerpo puede producirse por escision enzimatica de anticuerpos con pepsina para proporcionar un fragmento 5S denominado F(ab')2. Este fragmento puede escindirse adicionalmente usando un agente reductor de tiol para producir fragmentos monovalentes Fab' 3,5S. Opcionalmente, la reaccion de escision puede realizarse usando un grupo de bloqueo para los grupos sulfhidrilo que resultan de escision de enlaces disulfuro. Como alternativa, una escision enzimatica usando papama produce dos fragmentos Fab monovalentes y un fragmento Fc directamente. Estos metodos se describen, por ejemplo, en Goldenberg, Patente de Estados Unidos N° 4.331.647, Nisonoff et al., Arch. Biochem. Biophys. 89; 230, 1960; Porter, Biochem. J. 73; 119, 1959 Edelman et al., en Methods in Enzymology 1; 422 (Academic Press 1967); y en Andrews, S.M. y Titus, J.A. en Current Protocols in Immunology (Coligan J.E., et al., eds), John Wiley & Sons, Nueva York (2003), paginas 2.8.1-2.8.10 y 2.10A. 1-2.10A.5. Tambien pueden usarse otros metodos para escindir anticuerpos, tales como separar cadenas pesadas para formar fragmentos de cadena ligera-pesada monovalentes (Fd), escindir ademas fragmentos, u otras tecnicas enzimaticas, qmmicas o geneticas, siempre que los fragmentos se unan al antfgeno que reconoce el anticuerpo intacto.

Un fragmento de anticuerpo tambien puede ser cualquier protema modificada por ingeniena genetica o sintetica. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos aislados que consisten en la region variable de cadena ligera, los fragmentos “Fv” que consisten en las regiones variables de las cadenas pesada y ligera, moleculas polipeptfdicas de cadena sencilla recombinantes en las que las regiones variables ligera y pesada estan conectadas por un enlazador peptfdico (protemas scFv).

Otra forma de un fragmento de anticuerpo es un peptido que comprende una o mas regiones determinantes de complementariedad (CDR) de un anticuerpo. Pueden obtenerse CDR (tambien denominadas “unidades de reconocimiento mmimas” o “region hipervariable”) construyendo polinucleotidos que codifiquen la CDR de interes. Dichos polinucleotidos se preparan, por ejemplo, usando la reaccion en cadena de la polimerasa para sintetizar la region variable usando ARNm de celulas productoras de anticuerpo como un molde (vease, por ejemplo, Larrick et al., Methods; A Companion to Methods in Enzymology 2; 106, 1991; Courtenay-Luck “Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies,” en Monoclonal Antibodies; Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), pagina 166 (Cambridge University Press 1995); y Ward et al., “Genetic Manipulation and Expression of Antibodies,” en Monoclonal Antibodies; Principles and Applications, Birch et al., (eds.), pagina 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995)).

Por lo tanto, el agente de union puede comprender al menos una CDR como se describe en el presente documento. El agente de union puede comprender al menos dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR como se describe en el presente documento. El agente de union puede comprender ademas al menos un dominio de region variable de un anticuerpo descrito en el presente documento. El dominio de region variable puede ser de cualquier tamano o composicion de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

aminoacidos y comprenderan en general al menos una secuencia de CDR responsable de la union con esclerostina humana, por ejemplo CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 y/o las CDR de cadena ligera descritas espedficamente en el presente documento y que esta adyacente a o en fase con una o mas secuencias marco conservadas. En general, el dominio de region variable (V) puede ser cualquier disposicion adecuada de dominios variables de cadena pesada (Vh) y/o ligera (Vl) de inmunoglobulina. Por lo tanto, por ejemplo, el dominio de region V puede ser monomerico y ser un dominio Vh o Vl, que es capaz de unirse de forma independiente con esclerostina humana con una afinidad al menos igual a 1 x 10"7 M o menos como se describe posteriormente. Como alternativa, el dominio de region V puede ser dimerico y contiene dfmeros Vh-Vh, Vh-Vl o Vl-VL. El dfmero de region V comprende al menos una cadena Vh y al menos una Vl que pueden no estar asociadas covalentemente (denominado en lo sucesivo en el presente documento Fv). Si se desea, las cadenas pueden estar acopladas covalentemente bien directamente, por ejemplo mediante un enlace disulfuro entre los dos dominios variables, o a traves de un enlazador, por ejemplo, un peptido enlazador para formar un Fv de cadena sencilla (scFv).

El dominio de region variable puede ser cualquier dominio variable de origen natural o una version modificada por ingeniena genetica del mismo. Por version modificada por ingeniena genetica se entiende un dominio de region variable que se ha creado usando tecnicas de ingeniena de ADN recombinante. Dichas versiones modificadas por ingeniena genetica incluyen las creadas, por ejemplo, a partir de una region variable de anticuerpo espedfico por inserciones, deleciones o cambios en o a las secuencias de aminoacidos del anticuerpo espedfico. Los ejemplos particulares incluyen dominios de region variable modificados por ingeniena genetica que contienen al menos una CDR y opcionalmente uno o mas aminoacidos marco de un primer anticuerpo y el resto del dominio de region variable de un segundo anticuerpo.

El dominio de region variable puede estar unido covalentemente en un aminoacido C-terminal con al menos otro dominio de anticuerpo o un fragmento del mismo. Por lo tanto, por ejemplo, un dominio VH que esta presente en el dominio de region variable puede estar unido a un dominio CH1 de inmunoglobulina, o un fragmento del mismo. De forma similar un dominio Vl puede estar unido a un dominio Ck o un fragmento del mismo. De este modo, por ejemplo, el anticuerpo puede ser un fragmento Fab donde el dominio de union a antfgeno contiene dominios Vh y Vl asociados unidos covalentemente en sus extremos C con un dominio CH1 y Ck, respectivamente. El dominio CH1 puede extenderse con aminoacidos adicionales, por ejemplo para proporcionar una region bisagra o una parte de un dominio de region bisagra como se encuentra en un fragmento Fab', o para proporcionar dominios adicionales, tales como dominios CH2 y CH3 de anticuerpo.

Como se describe en el presente documento, los agentes de union comprenden al menos una de estas CDR. Por ejemplo, una o mas CDR pueden incorporarse en regiones marco conservadas de anticuerpos conocidas (IgG1, IgG2, etc.) o conjugarse con un veldculo adecuado para potenciar la semivida del mismo. Los veldculos adecuados incluyen, pero sin limitacion, Fc, polietilenglicol (PEG), albumina, transferrina y similares. Estos y otros veldculos adecuados se conocen en la tecnica. Dichos peptidos de CDR conjugados pueden estar en forma monomerica, dimerica, tetramerica u otra. Uno o mas polfmeros solubles en agua estan enlazados en una o mas posiciones espedficas, por ejemplo, en el extremo amino, de un agente de union.

Un agente de union puede comprender una o mas uniones de polfmero soluble en agua, incluyendo, pero sin limitacion, polietilenglicol, polioxietilenglicol o polipropilenglicol. Vease, por ejemplo, Patentes de Estados Unidos N° 4.640.835, 4.496.689, 4.301.144, 4.670.417, 4.791.192 y 4.179.337. Un agente de union derivado puede comprender uno o mas de monometoxi-polietilenglicol, dextrano, celulosa u otros polfmeros basados en carbohidratos, poli-(N-vinil pirrolidona)-polietilenglicol, homopolfmeros de propilenglicol, un copolfmero de oxido de polipropileno/oxido de etileno, polioles polioxietilados (por ejemplo, glicerol) y alcohol polivimlico, asf como mezclas de dichos polfmeros. Uno o mas polfmeros solubles en agua pueden estar unidos aleatoriamente a una o mas cadenas laterales. PEG puede actuar para mejorar la capacidad terapeutica para un agente de union, tal como un anticuerpo. Algunos de dichos procedimientos se analizan, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos N° 6.133.426.

Se apreciara que un agente de union descrito en el presente documento puede tener al menos una sustitucion de aminoacidos, siempre que el agente de union conserve especificidad de union. Por lo tanto, estan abarcadas dentro del alcance de la divulgacion modificaciones de las estructuras de agentes de union. Estas pueden incluir sustituciones de aminoacidos, que pueden ser conservativas o no conservativas, que no destruyen la capacidad de union a esclerostina de un agente de union. Las sustituciones de aminoacidos conservativas pueden abarcar restos de aminoacidos de origen no natural, que se incorporan dpicamente por smtesis pepddica qrnmica en lugar de por smtesis en sistemas biologicos. Estos incluyen peptidomimeticos y otras formas invertidas o revertidas de restos de aminoacidos. Una sustitucion de aminoacidos conservativa tambien puede implicar una sustitucion de un resto de aminoacido nativo con un resto normativo de modo que haya poco o ningun efecto en la polaridad o carga del resto de aminoacido en esa posicion.

Las sustituciones no conservativas pueden implicar el intercambio de un miembro de una clase de aminoacidos o mimeticos de aminoacidos por un miembro de otra clase con diferentes propiedades ffsicas (por ejemplo, tamano, polaridad, hidrofobicidad, carga). Dichos restos sustituidos pueden introducirse en regiones del anticuerpo humano que son homologas de anticuerpos no humanos, o en las regiones no homologas de la molecula.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Ademas, un experto en la materia puede generar variantes de ensayo que contengan una sustitucion de aminoacidos sencilla en cada resto de aminoacido deseado. Las variantes pueden despues explorarse usando ensayos de actividad conocidos por los expertos en la materia. Dichas variantes podnan usarse para recopilar informacion acerca de variantes adecuadas. Por ejemplo, si se descubriera que un cambio en un resto de aminoacido particular diera como resultado actividad destruida, reducida de forma indeseable o inadecuada, podnan evitarse variantes con dicho cambio. En otras palabras, basandose en informacion recopilada de dichos experimentos rutinarios, un experto en la materia puede determinar facilmente los aminoacidos donde debenan evitarse sustituciones adicionales solas o en combinacion con otras mutaciones.

Un experto en la materia sera capaz de determinar variantes adecuadas del polipeptido como se expone en el presente documento usando tecnicas bien conocidas. Un experto en la materia puede identificar areas adecuadas de la molecula que pueden cambiarse sin destruir la actividad dirigiendose a regiones que no se cree que sean importantes para la actividad. Se pueden identificar restos y partes de las moleculas que estan conservados entre polipeptidos similares. Incluso areas que pueden ser importantes para la actividad biologica o para la estructura pueden someterse a sustituciones de aminoacidos conservativas sin destruir la actividad biologica o sin afectar de forma adversa a la estructura polipeptfdica.

Adicionalmente, un experto en la materia puede revisar estudios de funcion estructural que identifican restos en polipeptidos similares que son importantes para la actividad o estructura. A la vista de dicha comparacion, se puede predecir la importancia de los restos de aminoacidos en una protema que corresponden a restos de aminoacidos que son importantes para la actividad o estructura en protemas similares. Un experto en la materia puede optar por sustituciones de aminoacidos qmmicamente similares para dichos restos de aminoacidos importantes predichos.

Un experto en la materia puede analizar tambien la estructura tridimensional y secuencia de aminoacidos en relacion con esa estructura en polipeptidos similares. A la vista de dicha informacion, un experto en la materia puede predecir el alineamiento de restos de aminoacidos de un anticuerpo con respecto a su estructura tridimensional. Un experto en la materia puede elegir no hacer cambios radicales a los aminoacidos que se ha predicho que estan en la superficie de la protema, puesto que dichos restos pueden estar implicados en interacciones importantes con otras moleculas.

Se han dedicado varias publicaciones cientfficas a la prediccion de la estructura secundaria. Vease Moult J., Curr. Op. in Biotech., 7(4); 422-427 (1996), Chou et al., Biochemistry, 13(2); 222-245 (1974); Chou et al., Biochemistry 113(2); 211-222 (1974); Chou et al., Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47; 45-148 (1978); Chou et al., Ann. Rev. Biochem., 47; 251-276 y Chou et al., Biophys. J., 26; 367-384 (1979). Ademas, estan disponibles en la actualidad programas informaticos para ayudar a la prediccion de la estructura secundaria. Un metodo para predecir la estructura secundaria se basa en la realizacion de modelos de homologfa. Por ejemplo, dos polipeptidos o protemas que tengan una identidad de secuencia mayor del 30% o similitud mayor del 40% tienen con frecuencia topologfas estructurales similares. El reciente crecimiento de la base de datos estructural proteica (PDB) ha proporcionado predictabilidad potenciada de la estructura secundaria, incluyendo el numero potencial de plegamientos dentro de la estructura de un polipeptido o una protema. Vease Holm et al., Nucl. Acid. Res., 27(1); 244-247 (1999). Se ha sugerido (Brenner et al., Curr. Op. Struct. Biol., 7(3); 369-376 (1997)) que hay un numero limitado de pliegues en un polipeptido o protema dado y que una vez que se ha resuelto un numero de estructuras cntico, la prediccion estructural se hara drasticamente mas precisa.

Los metodos adicionales para predecir la estructura secundaria incluyen “reconocimiento de pliegues” (Jones, D., Curr., Opin. Struct. Biol., 7(3); 377-87 (1997); Sippl et al., Structure, 4(1); 15-19 (1996)), “analisis de perfil” (Bowie et al., Science, 253; 164-170 (1991); Gribskov et al., Meth. Enzym., 183; 146-159 (1990); Gribskov et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 84(13); 4355-4358 (1987)) y “enlace evolutivo” (Vease Holm, mencionado anteriormente (1999) y Brenner, mencionado anteriormente (1997)).

Las variantes de agentes de union incluyen variantes de glicosilacion donde el numero y/o tipo de sitio de glicosilacion se ha alterado en comparacion con las secuencias de aminoacidos de un polipeptido parental. Las variantes comprenden un numero mayor o menor de sitios de glicosilacion ligados a N que la protema nativa. Un sitio de glicosilacion ligado a N esta caracterizado por la secuencia; Asn-X-Ser o Asn-X-Thr, donde el resto de aminoacido designado como X puede ser cualquier resto de aminoacido excepto prolina. La sustitucion de restos de aminoacidos para crear esta secuencia proporciona un nuevo sitio potencial para la adicion de una cadena de carbohidratos ligada a N. Como alternativa, las sustituciones que eliminen esta secuencia retiraran una cadena de carbohidratos ligada a N existente. Tambien se proporciona un reordenamiento de cadenas de carbohidratos ligadas a N donde se eliminan uno o mas sitios de glicosilacion ligados a N (tfpicamente los que son de origen natural) y se crean uno o mas nuevos sitios ligados a N. Las variantes de anticuerpo preferidas adicionales incluyen variantes de cistema donde uno o mas restos de cistema se suprimen de o se sustituyen por otro aminoacido (por ejemplo, serina) en comparacion con la secuencia de aminoacidos parental. Las variantes de cistema pueden ser utiles cuando los anticuerpos deben replegarse en una conformacion biologicamente activa tal como despues del aislamiento de cuerpos de inclusion insolubles. Las variantes de cistema generalmente tienen menos restos de cistema que la protema nativa, y tfpicamente tienen un numero par para minimizar las interacciones resultantes de cistemas no emparejadas.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Las sustituciones de aminoacidos deseadas (conservativas o no conservativas) pueden determinarse por los expertos en la materia en el momento en que se deseen dichas sustituciones. Las sustituciones de aminoacidos pueden usarse para identificar restos importantes de anticuerpos para esclerostina, o por aumentar o reducir la afinidad de los anticuerpos para esclerostina descritos en el presente documento.

Las sustituciones de aminoacidos preferidas son las que; (1) reducen la susceptibilidad a proteolisis, (2) reduce la susceptibilidad a oxidacion, (3) alteran la afinidad de union para formar complejos proteicos, (4) alteran las afinidades de union, y/o (4) confieren o modifican otras propiedades fisioqmmicas o funcionales en dichos polipeptidos. Pueden realizarse sustituciones de aminoacidos individuales o multiples (por ejemplo, sustituciones de aminoacidos conservativas) en la secuencia de origen natural (por ejemplo, en la parte del polipeptido fuera del dominio o los dominios que forman contactos intermoleculares). Una sustitucion de aminoacidos conservativa puede tipicamente no cambiar sustancialmente las caractensticas estructurales de la secuencia parental (por ejemplo, un aminoacido de reemplazo no debena tender a romper una helice que aparezca en la secuencia parental, o alterar otros tipos de estructura secundaria que caracteriza la secuencia parental). Se describen ejemplos de estructuras secundarias y terciarias de polipeptidos reconocidas en la tecnica en Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman y Company, Nueva York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden y J. Tooze, eds., Garland Publishing, Nueva York, N.Y. (1991)); y Thornton et al. Nature 354; 105 (1991).

Los agentes de union pueden enlazarse qmmicamente con polfmeros, lfpidos u otros restos.

Los agentes de union pueden comprender al menos una de las CDR descritas en el presente documento incorporadas en una estructura marco biocompatible. En un ejemplo, la estructura marco biocompatible comprende un polipeptido o parte del mismo que es suficiente para formar un soporte estructural conformacionalmente estable, o marco, o armazon, que es capaz de presentar uno o mas secuencias de aminoacidos que se unen con un antigeno (por ejemplo, CDR, una region variable, etc.) en una region de superficie localizada. Dichas estructuras pueden ser un polipeptido de origen natural o “pliegue” polipeptfdico (un motivo estructural) o pueden tener una o mas modificaciones, tales como adiciones, deleciones o sustituciones de aminoacidos, en relacion con un polipeptido o pliegue de origen natural. Estos armazones pueden derivar de un polipeptido de cualquier especie (o de mas de una especie), tal como un ser humano, otro mairnfero, otro vertebrado, invertebrado, planta, bacteria o virus.

Tfpicamente las estructuras marco biocompatibles se basan en armazones proteicos o esqueletos distintos de dominios de inmunoglobulina. Por ejemplo, se conocen las basadas en fibronectina, anquirina, lipocalina, neocarzinostama, citocromo b, dedo de cinc CP1, Post1, superenrollamiento, LACI-D1, dominio Z y dominios tendramisat (Vease por ejemplo, Nygren y Uhlen, 1997, Current Opinion in Structural Biology, 7, 463-469).

Los agentes de union incluyen los anticuerpos humanizados descritos en el presente documento. Pueden producirse anticuerpos humanizados tales como los descritos en el presente documento usando tecnicas conocidas por los expertos en la materia (Zhang, W., et al., Molecular Immunology. 42(12); 1445-1451, 2005; Hwang W. et al., Methods. 36(1); 35-42, 2005; Dall'Acqua WF, et al., Methods 36(1); 43-60, 2005; y Clark, M., Immunology Today. 21 (8); 397-402, 2000).

Adicionalmente, un experto en la materia reconocera que los agentes de union adecuados incluyen partes de estos anticuerpos, tales como uno o mas de CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 como se desvela espedficamente en el presente documento. Al menos una de las regiones de CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 puede tener al menos una sustitucion de aminoacidos, siempre que el agente de union conserve la especificidad de union de la CDR no sustituida. La parte no CDR del agente de union puede ser una molecula no proteica, en la que el agente de union bloquea de forma cruzada la union de un anticuerpo desvelado en el presente documento con esclerostina y/o neutraliza la esclerostina. La parte no CDR del agente de union puede ser una molecula no proteica en la que el agente de union bloquea de forma cruzada la union de un anticuerpo desvelado en el presente documento con esclerostina y/o neutraliza esclerostina. La parte no CDR del agente de union puede ser una molecula no proteica en la que el agente de union muestra un patron similar de union a peptidos de esclerostina humana en un “ensayo de union de competicion de epftopo peptfdico de esclerostina humana” al mostrado por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24, y/o neutraliza esclerostina. La parte no CDR del agente de union puede estar compuesta de aminoacidos, donde el agente de union es una protema de union recombinante o un peptido sintetico, y la protema de union recombinante bloquea de forma cruzada la union de un anticuerpo desvelado en el presente documento con esclerostina y/o neutraliza esclerostina. La parte no CDR del agente de union puede estar compuesta de aminoacidos, donde el agente de union es una protema de union recombinante y la protema de union recombinante muestra un patron similar de union a peptidos de esclerostina humana en el ensayo de union de competicion de epttopos peptfdicos de esclerostina humana (descrito posteriormente en el presente documento) al mostrado por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab- 13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24, y/o neutraliza esclerostina.

Cuando un anticuerpo comprende una o mas de CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 como se

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

ha descrito anteriormente, puede obtenerse por expresion de una celula hospedadora que contiene ADN que codifica estas secuencias. Un ADN que codifica cada secuencia de CDR puede determinate basandose en la secuencia de aminoacidos de la CDR y sintetizarse junto con cualquier secuencia de ADN de region constante y marco de region variable de anticuerpo deseada usando tecnicas de smtesis de oligonucleotidos, mutagenesis dirigida y tecnicas de reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) segun sea apropiado. Esta ampliamente disponible para los expertos en la materia ADN que codifica las regiones constantes y marcos de region variable a partir de bases de datos de secuencias geneticas tales como GenBank®. Cada una de las CDR anteriormente mencionadas se localizara tfpicamente en un marco de region variable en las posiciones 31-35 (CDR-H1), 50-65 (CDR-H2) y 95-102 (CDR-H3) de la cadena pesada y las posiciones 24-34 (CDR-L1), 50-56 (CDR-L2) y 89-97 (CDR-L3) de la cadena ligera de acuerdo con el sistema de numeracion de Kabat (Kabat et al., 1987 en Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, NIH, Estados Unidos).

Una vez sintetizado, el ADN que codifica un anticuerpo o fragmento del mismo puede propagarse y expresarse de acuerdo con cualquiera de una diversidad de procedimientos bien conocidos para escision, ligacion, transformacion y transfeccion de acido nucleico usando cualquier variedad de vectores de expresion conocidos. Por lo tanto, puede preferirse la expresion de un fragmento de anticuerpo en un hospedador procariota, tal como Escherichia coli (vease, por ejemplo, Pluckthun et al., 1989 Methods Enzymol. 178; 497-515). Puede preferirse la expresion del anticuerpo o un fragmento del mismo en una celula hospedadora eucariota, incluyendo levadura (por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe y Pichia pastoris), celulas animales (incluyendo celulas de mairnfero) o celulas vegetales. Los ejemplos de celulas animales adecuadas incluyen, pero sin limitacion, mieloma (tal como una lmea NSO de raton), COS, CHO o celulas de hibridoma. Los ejemplos de celulas vegetales incluyen tabaco, mafz, soja y celulas de arroz.

Pueden prepararse uno o mas vectores de expresion replicables que contienen ADN que codifica una region variable y/o constante de anticuerpo y usarse para transformar una lmea celular apropiada, por ejemplo, una lmea celular de mieloma no productora, tal como una lmea NSO de raton o una bacteria, tal como E. coli, en la que se producira produccion del anticuerpo. Para obtener transcripcion y traduccion eficaz, la secuencia de ADN en cada vector debena incluir secuencias reguladoras apropiadas, particularmente un promotor y secuencia lfder unidos operativamente con la secuencia de dominio variable. Los metodos particulares para producir anticuerpos de este modo se conocen generalmente bien y se usan de forma rutinaria. Por ejemplo, se describen procedimientos de biologfa molecular basica en Maniatis et al. (Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, 1989; vease tambien Maniatis et al, 3a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, (2001)). Puede realizarse secuenciacion de ADN como se describe en Sanger et al. (PNAS 74; 5463, (1977)) y el manual de secuenciacion de plc de Amersham International, y puede llevarse a cabo mutagenesis dirigida de acuerdo con metodos conocidos en la tecnica (Kramer et al., Nucleic Acids Res. 12; 9441, (1984); Kunkel Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82; 488-92 (1985); Kunkel et al., Methods in Enzymol. 154; 367-82 (1987); el manual de Anglian Biotechnology Ltd). Adicionalmente, numerosas publicaciones describen tecnicas adecuadas para la preparacion de anticuerpos mediante manipulacion de ADN, creacion de vectores de expresion y transformacion y cultivo de celulas apropiadas (Mountain A y Adair, J R en Biotechnology and Genetic Engineering Reviews (ed. Tombs, M P, 10, Capftulo 1, 1992, Intercept, Andover, Reino Unido); “Current Protocols in Molecular Biology”, 1999, F.M. Ausubel (ed.), Wiley Interscience, Nueva York).

Cuando se desee mejorar la afinidad de anticuerpos de acuerdo con la invencion que contienen una o mas de las CDR anteriormente mencionadas, pueden obtenerse por varios protocolos de maduracion de afinidad, incluyendo mantener las CDR (Yang et al., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), combinacion de cadenas (Marks et al., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), uso de cepas de mutacion de E. coli (Low et al., J. Mol. Biol., 250, 350-368, 1996), barajado de ADN (Patten et al., Curr. Opin. Biotechnol, 8, 724-733, 1997), presentacion de fagos (Thompson et al, J. Mol. Biol., 256, 7-88, 1996) y PCR sexual (Crameri, et al., Nature, 391, 288-291, 1998). Todos estos metodos de maduracion de afinidad se analizan en Vaughan et al., (Nature Biotechnology, 16, 535-539, 1998).

Pueden obtenerse otros anticuerpos mediante inmunizacion convencional y procedimientos de fusion de celulas como se describen en el presente documento y se conocen en la tecnica. Pueden generarse anticuerpos monoclonales usando una diversidad de tecnicas conocidas. En general, pueden obtenerse anticuerpos monoclonales que se unen a antfgenos espedficos mediante metodos conocidos por los expertos en la materia (vease, por ejemplo, Kohler et al., Nature 256; 495, 1975; Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, 1; 2.5.12.6.7 (John Wiley & Sons 1991); Patentes de Estados Unidos N° RE 32.011, 4.902.614, 4.543.439 y 4.411.993; Monoclonal Antibodies, Hybridomas; A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, Kennett, McKearn y Bechtol (eds.) (1980); y Antibodies; A Laboratory Manual, Harlow y Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988); Picksley et al., “Production of monoclonal antibodies against proteins expressed in E. coli," en DNA Cloning 2; Expression Systems, 2a Edicion, Glover et al. (eds.), pagina 93 (Oxford University Press 1995)). Pueden derivarse fragmentos de anticuerpo de los mismos usando cualquier tecnica convencional adecuada tal como digestion proteolftica u, opcionalmente, mediante digestion proteolftica (por ejemplo, usando papama o pepsina) seguido de reduccion suave de enlaces disulfuro y alquilacion. Como alternativa, dichos fragmentos tambien pueden generarse mediante tecnicas de ingeniena genetica recombinante como se describe en el presente documento.

Pueden obtenerse anticuerpos monoclonales inyectando a un animal, por ejemplo, una rata, hamster, un conejo o

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

preferentemente un raton, incluyendo por ejemplo un transgenico o un knock-out, como se conoce en la tecnica, con un inmunogeno que comprende esclerostina humana de SEQ ID NO; 1, o un fragmento de la misma, de acuerdo con metodos conocidos en la tecnica y descritos en el presente documento. La presencia de produccion de anticuerpos espedfica puede supervisarse despues de la inyeccion inicial y/o despues de una inyeccion de refuerzo obteniendo una muestra de suero y detectando la presencia de un anticuerpo que se une a esclerostina humana o peptido usando uno cualquiera de varios metodos de inmunodeteccion conocidos en la tecnica y descritos en el presente documento. De animales que producen los anticuerpos deseados, se retiran celulas linfoides, mas habitualmente celulas del bazo o ganglio linfatico, para obtener linfocitos B. Los linfocitos B se fusionan despues con un companero de fusion de celula de mieloma sensibilizado a farmaco, preferentemente uno que sea singenico con el animal inmunizado y que tenga opcionalmente otras propiedades deseables (por ejemplo, incapacidad para expresar productos genicos de Ig endogenos, por ejemplo, P3X63 - Ag 8.653 (AtCc N° CRL 1580); NSO, SP20) para producir hibridomas, que son lmeas celulares eucariotas inmortales. Las celulas linfoides (por ejemplo, bazo) y las celulas de mieloma pueden combinarse durante varios minutos con un agente promotor de fusion de membrana, tal como polietilenglicol o un detergente no ionico, y despues sembrarse a baja densidad en un medio selectivo que apoye el crecimiento de celulas de hibridoma pero no celulas de mieloma no fusionadas. Un medio de seleccion preferido es HAT (hipoxantina, aminopterina, timidina). Despues de un tiempo suficiente, habitualmente de aproximadamente una a dos semanas, se observan colonias de celulas. Se afslan colonias individuales, y pueden ensayarse anticuerpos producidos por las celulas con respecto a actividad de union con esclerostina humana, usando una cualquiera de una diversidad de inmunensayos conocidos en la tecnica y descritos en el presente documento. Los hibridomas se clonan (por ejemplo, mediante clonacion de dilucion limitada o mediante aislamiento en placa de agar suave) y se seleccionan y cultivan clones positivos que producen un anticuerpo espedfico para esclerostina. Los anticuerpos monoclonales de los cultivos de hibridoma pueden aislarse de los sobrenadantes de cultivos de hibridoma. Un metodo alternativo para produccion de un anticuerpo monoclonal murino es inyectar las celulas de hibridoma en la cavidad peritoneal de un raton singenico, por ejemplo, un raton que se ha tratado (por ejemplo, sensibilizado con pristano) para prolongar la formacion de lfquido asdtico que contiene el anticuerpo monoclonal. Los anticuerpos monoclonales pueden aislarse y purificarse por una diversidad de tecnicas bien establecidas. Dichas tecnicas de aislamiento incluyen cromatograffa de afinidad con Protema-A Sepharose, cromatograffa de exclusion por tamanos y cromatograffa de intercambio ionico (vease, por ejemplo, Coligan en las paginas 2.7.1-2.7.12 y las paginas 2.9.1-2.9.3; Baines et al., “Purification of Immunoglobulin G (IgG),” en Methods in Molecular Biology, Vol. 10, paginas 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992)). Pueden purificarse anticuerpos monoclonales mediante cromatograffa de afinidad usando un ligando apropiado seleccionado basandose en propiedades particulares del anticuerpo (por ejemplo, isotipo de cadena pesada o ligera, especificidad de union, etc.). Los ejemplos de un ligando adecuado, inmovilizado en un soporte solido, incluyen Protema A, Protema G, una anticuerpo anti-region constante (cadena ligera o cadena pesada), un anticuerpo anti-idiotipo y una protema de union a TGF-beta, o fragmento o variante de los mismos.

Un anticuerpo de la presente invencion tambien puede ser un anticuerpo monoclonal humano. Los anticuerpos monoclonales humanos pueden generarse por cualquier variedad de tecnicas que resultaran familiares para los expertos habituales en la materia. Dichos metodos incluyen, pero sin limitacion, transformacion por Virus de Epstein Barr (VEB) de celulas de sangre periferica humana (por ejemplo, que contienen linfocitos B), inmunizacion in vitro de linfocitos B humanos, fusion de celulas de bazo de ratones transgenicos inmunizados que portan genes de inmunoglobulina humana insertados, aislamiento de bibliotecas de fago de region V de inmunoglobulina humana, u otros procedimientos como se conocen en la tecnica y basados en la divulgacion del presente documento. Por ejemplo, pueden obtenerse anticuerpos monoclonales humanos de ratones transgenicos que se han modificado por ingeniena genetica para producir anticuerpos humanos espedficos en respuesta a presentacion antigenica. Se describen metodos para obtener anticuerpos humanos de ratones transgenicos, por ejemplo, por Green et al., Nature Genet. 7: 13, 1994; Lonberg et al., Nature 368: 856, 1994; Taylor et al., Int. Immun. 6: 579, 1994; Patente de Estados Unidos N° 5.877.397; Bruggemann et al., 1997 Curr. Opin. Biotechnol. 8: 455-58; Jakobovits et al., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764: 525-35. En esta tecnica, se introducen elementos del locus de cadena pesada y ligera humana en cepas de ratones derivados de lmeas de celulas madre embrionarias que contienen alteraciones dirigidas de los loci de cadena pesada y cadena ligera endogenos (vease tambien Bruggemann et al., Curr. Opin. Biotechnol. 8: 455-58 (1997)). Por ejemplo, los transgenes de inmunoglobulina humana pueden ser construcciones de minigenes, o transloci en cromosomas artificiales de levadura, que experimentan reordenacion del ADN espedfica de linfocitos B e hipermutacion en el tejido linfoide de raton. Pueden obtenerse anticuerpos monoclonales humanos inmunizando los ratones transgenicos, que pueden despues producir anticuerpos humanos espedficos para esclerostina. Las celulas linfoides de los ratones transgenicos inmunizados pueden usarse para producir hibridomas que secreten anticuerpos humanos de acuerdo con los metodos descritos en el presente documento. Tambien pueden obtenerse sueros policlonales que contienen anticuerpos humanos de la sangre de los animales inmunizados.

Otro metodo para generar anticuerpos humanos incluye inmortalizar celulas de sangre periferica humana por transformacion con VEB. Vease, por ejemplo, Patente de Estados Unidos N° 4.646.456. Dicha lmea de linfocitos B inmortalizada (o lmea celular linfoblastoide) que produce un anticuerpo monoclonal que se une espedficamente a esclerostina puede identificarse por metodos de inmunodeteccion como se proporcionan en el presente documento, por ejemplo, un ELISA, y despues aislarse por tecnicas de clonacion convencionales. La estabilidad de la lmea celular linfoblastoide que produce un anticuerpo antiesclerostina puede mejorarse fusionando la lmea celular

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

transformada con un mieloma murino para producir una lmea celular dbrida de raton-humano de acuerdo con metodos conocidos en la tecnica (vease, por ejemplo, Glasky et al., Hybridoma 8: 377-89 (1989)). Otro metodo mas para generar anticuerpos monoclonales humanos es la inmunizacion in vitro, que incluye sensibilizar linfocitos B esplenicos humanos con esclerostina humana, seguido de fusion de los linfocitos B sensibilizados con un companero de fusion heterodbrido. Vease, por ejemplo, Boerner et al., 1991 J. Immunol. 147: 86-95.

En ciertas realizaciones, se selecciona un linfocito B que produce un anticuerpo antiesclerostina humana y se clonan las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada a partir del linfocito B de acuerdo con tecnicas de biologfa molecular conocidas en este campo (documento WO 92/02551; Patente de Estados Unidos 5.627.052; Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 7843-48 (1996)) y descritas en el presente documento. Pueden aislarse linfocitos B de un animal inmunizado del bazo, ganglio linfatico o muestra de sangre periferica seleccionando una celula que produce un anticuerpo que se une espedficamente a esclerostina. Los linfocitos B tambien pueden aislarse de seres humanos, por ejemplo, de una muestra de sangre periferica. Se conocen bien en la tecnica metodos para detectar linfocitos B individuales que producen un anticuerpo con la especificidad deseada, por ejemplo, mediante formacion de placas, separacion de celulas activadas por fluorescencia, estimulacion in vitro seguida de deteccion de anticuerpo espedfico y similares. Los metodos para seleccion de linfocitos B productores de anticuerpos espedficos incluyen, por ejemplo, preparar una unica suspension celular de linfocitos B en agar blando que contiene esclerostina humana. La union del anticuerpo espedfico producido por el linfocito B con el antfgeno da como resultado la formacion de un complejo, que puede ser visible como un inmunoprecipitado. Despues de que se seleccionen los linfocitos B que producen el anticuerpo deseado, los genes de anticuerpos espedficos pueden clonarse aislando y amplificando ADN o ARNm de acuerdo con metodos conocidos en la tecnica y descritos en el presente documento.

Un metodo adicional para obtener anticuerpos es por presentacion de fagos. Vease, por ejemplo, Winter et al., 1994 Annu. Rev. Immunol. 12: 433-55; Burton et al., 1994 Adv. Immunol. 57: 191-280. Pueden crearse bibliotecas combinatorias de region variable de inmunoglobulina humanas o murinas en vectores de fagos que pueden explorarse para seleccionar fragmentos Ig (Fab, Fv, sFv, o multfmeros de los mismos) que se unen espedficamente a protema de union a TGF-beta o variante o fragmento de la misma. Vease, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos N° 5.223.409; Huse et al., 1989 Science 246: 1275-81; Sastry et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5728-32 (1989); Alting-Mees et al., Strategies in Molecular Biology 3: 1-9 (1990); Kang et al., 1991 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 4363-66; Hoogenboom et al., 1992 J. Molec. Biol. 227: 381-388; Schlebusch et al., 1997 Hybridoma 16: 47-52 y referencias citadas en las mismas. Por ejemplo, puede insertarse una biblioteca que contiene una pluralidad de secuencias polinucleotfdicas que codifican fragmentos de region variable de Ig en el genoma de un bacteriofago filamentoso, tal como M13 o una variante del mismo, en fase con la secuencia que codifica una protema de cubierta de fago. Una protema de fusion puede ser una fusion de la protema de cubierta con el dominio de region variable de cadena ligera y/o con el dominio de region variable de cadena pesada. Tambien pueden presentarse fragmentos Fab de inmunoglobulina en una partmula de fago (vease, por ejemplo, Patente de Estados Unidos N°: 5.698.426).

Tambien pueden prepararse bibliotecas de expresion de ADNc de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera en fago lambda, por ejemplo, usando vectores XImmunoZap™ (H) y XImmunoZap™ (L) (Stratagene, La Jolla, California). Brevemente, se afsla ARNm de una poblacion de linfocitos B y se usa para crear bibliotecas de expresion de ADNc de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera en los vectores XImmunoZap(H) y MmmunoZap (L). Estos vectores pueden explorarse individualmente o pueden expresarse para formar fragmentos Fab o anticuerpos (vease Huse et al., mencionado anteriormente; vease tambien Sastry et al., mencionado anteriormente). Pueden convertirse posteriormente placas positivas en un plasmido no lttico que permita expresion de alto nivel de fragmentos de anticuerpo monoclonales de E. coli.

En una realizacion, en un hibridoma, las regiones variables de un gen que expresa un anticuerpo monoclonal se amplifican usando cebadores nucleotfdicos. Estos cebadores pueden sintetizarse por un experto en la materia, o pueden obtenerse de fuentes disponibles en el mercado. (Vease, por ejemplo, Stratagene (La Jolla, California), que vende cebadores para regiones variables humanas y de raton, incluyendo, entre otros, cebadores para las regiones VHa, VHb, Vhc, VHd, Cm, Vl y Cl). Estos cebadores pueden usarse para amplificar regiones variables de cadena pesada o ligera, que pueden despues insertarse en vectores tales como ImmunoZAP™H o ImmunoZAP™L (Stratagene), respectivamente. Estos vectores pueden introducirse despues en sistemas de expresion basados en E. coli, levadura o mairnfero. Pueden producirse grandes cantidades de una protema de cadena sencilla que contiene una fusion de los dominios Vh y Vl usando estos metodos (vease Bird et al., Science 242: 423-426, 1988).

Una vez que se han obtenido celulas que producen anticuerpos usando cualquiera de las tecnicas de inmunizacion y otras descritas anteriormente, los genes de anticuerpos espedficos pueden clonarse aislando y amplificando ADN o ARNm del mismo de acuerdo con procedimientos convencionales como se describe en el presente documento. Los anticuerpos producidos de los mismos pueden secuenciarse y las CDR identificadas y el ADN que codifica las CDR pueden manipularse como se ha descrito previamente para generar otros anticuerpos.

Preferentemente los agentes de union se unen espedficamente a esclerostina. Como con todos los agentes de union y ensayos de union, un experto en la materia reconoce que los diversos restos con los que un agente de union no debena unirse de forma detectable para ser terapeuticamente eficaz y adecuado senan extensos y diffciles de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

numerar. Por lo tanto, para un agente de union divulgado en el presente documento, la expresion “se une espedficamente” se refiere a la capacidad de un agente de union para unirse a esclerostina, preferentemente esclerostina humana, con mayor afinidad que se une a una protema de control no relacionada. Preferentemente la protema de control es lisozima de clara de huevo de gallina. Preferentemente el agente de union se une a esclerostina con una afinidad que es al menos 50, 100, 250, 500, 1000 o 10.000 veces mayor que la afinidad por una protema de control. Un agente de union puede tener una afinidad de union por esclerostina humana de menos de o igual a 1 x 10-7 M, menor de o igual a 1 x 10-8 M, menor de o igual a 1 x 10-9 M, menor de o igual a 1 x 10-10 M, menor de o igual a 1 x 10-11 M o menor de o igual a 1 x 10-12 M.

La afinidad puede determinarse por un ensayo de ELIA de afinidad. En ciertas realizaciones, la afinidad puede determinarse por un ensayo de BIAcore. En ciertas realizaciones, la afinidad puede determinarse por un metodo cinetico. En ciertas realizaciones, la afinidad puede determinarse por un metodo de equilibrio/solucion. Dichos metodos se describen en mas detalle en el presente documento o se conocen en la tecnica.

Los agentes de union de esclerostina preferentemente modulan la funcion de esclerostina en el ensayo basado en celulas descrito en el presente documento y/o el ensayo in vivo descrito en el presente documento y/o se unen a uno o mas de los eprtopos descritos en el presente documento y/o bloquean de forma cruzada la union de uno de los anticuerpos descritos en la presente solicitud y/o se bloquean de forma cruzada de la union con esclerostina por uno de los anticuerpos descritos en la presente solicitud. En consecuencia, dichos agentes de union pueden identificarse usando los ensayos descritos en el presente documento.

Pueden generarse agentes de union identificando en primer lugar anticuerpos que se unan a uno o mas de los eprtopos proporcionados en el presente documento y/o se neutralizan en los ensayos basados en celulas y/o in vivo descritos en el presente documento y/o bloquean de forma cruzada los anticuerpos descritos en la presente solicitud y/o se bloquean de forma cruzada de la union con esclerostina por uno de los anticuerpos descritos en la presente solicitud. Las regiones CDR de estos anticuerpos se usan despues para insertar en marcos biocompatibles apropiados para generar agentes de union a esclerostina. La parte no CDR del agente de union puede estar compuesta de aminoacidos, o puede ser una molecula no proteica. Los ensayos descritos en el presente documento permiten la caracterizacion de agentes de union. Preferentemente los agentes de union son anticuerpos como se definen en el presente documento.

Se entendera por un experto en la materia que algunas protemas, tales como anticuerpos, pueden experimentar una diversidad de modificaciones postraduccionales. El tipo y alcance de estas modificaciones depende con frecuencia de la lmea celular hospedadora usada para expresar la protema asi como las condiciones de cultivo. Dichas modificaciones pueden incluir variaciones en glicosilacion, oxidacion de metionina, formacion de dicetopiperizina, isomerizacion de aspartato y desamidacion de asparagina. Una modification frecuente es la perdida de un resto basico carboxilo-terminal (tal como lisina o arginina) debido a la action de carboxipeptidasas (como se describe en Harris, RJ. Journal of Chromatography 705: 129-134, 1995).

Se describen posteriormente anticuerpos denominados Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D y Ab-1. “HC” se refiere a la cadena pesada y “LC” se refiere a la cadena ligera. Para algunos anticuerpos posteriores, las CDR estan sombreadas en cajas y las regiones constantes (C) se muestran en negrita y cursiva.

Ab-D

El anticuerpo D (tambien denominado en el presente documento Ab-D y Mab-D) es un anticuerpo de raton que muestra union de alta afinidad con esclerostina. El patron de union de BIAcore de Ab-D se muestra en la Figura 18.

La secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la cadena ligera de Ab-D:

imagen1

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de LC de Ab-D es la siguiente:

1 GATGTCCAGA TGATTCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTTTGGGAGA 51 CATAGTCACC ATGACTTGCC AGGCAAGTCA GGGCACTAGC ATTAATTTAA 101 ACTGGTTTCA GCAAAAACCA GGGAAGGCTC CTAAGCTCCT GATCTATGGT 151 TCAAGCAACT TGGAAGATGG GGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTAGATA 201 TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTGGAGGAT GAAGATCTGG 251 CAACTTATTT CTGTCTACAA CATAGTTATC TCCCGTACAC GTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 8)

La secuencia de aminoacidos de LC de Ab-D incluyendo el peptido senal es la siguiente:

1 MNTRAPAEFL GFLLLWFLGA RCDVQMIQSP SSLSASLGDIVTMTCQASQG 51 TSINLNWFQQ KPGKAPKLLIYGSSNLEDGV PSRFSGSRYG TDFTLTISSL 101 EDEDLATYFC LQHSYLPYTF GGGTKLEIKR ADAAPTVSIF PPSSEQLTSG 151 GASWCFLNN FYPKDINVKW KIDGSERQNG VLNSWTDQDS KDSTYSMSST 201 LTLTKDEYER HNSYTCEATH KTSTSPIVKS FNRNEC (SEQ ID NO:9)

Secuencia de acido nucleico de LC de Ab-D incluyendo la secuencia que codifica el peptido senal:

1 ATGAACACGA GGGCCCCTGC TGAGTTCCTT GGGTTCCTGT TGCTCTGGTT 51 TTTAGGTGCC AGATGTGATG TCCAGATGAT TCAGTCTCCA TCCTCCCTGT 101 CTGCATCTTT GGGAGACATA GTCACCATGA CTTGCCAGGC AAGTCAGGGC

10

151 ACTAGCATTA ATTTAAACTG GTTTCAGCAA AAACCAGGGA AGGCTCCTAA 201 GCTCCTGATC TATGGTTCAA GCAACTTGGA AGATGGGGTC CCATCAAGGT 251 TCAGTGGCAG TAGATATGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG 301 GAGGATGAAG ATCTGGCAAC TTATTTCTGT CTACAACATA GTTATCTCCC 351 GTACACGTTC GGAGGGGGGA CCAAGCTGGA AATAAAACGG GCTGATGCTG 401 CACCAACTGT ATCCATCTTC CCACCATCCA GTGAGCAGTT AACATCTGGA 451 GGTGCCTCAG TCGTGTGCTT CTTGAACAAC TTCTACCCCA AAGACATCAA 501 TGTCAAGTGG AAGATTGATG GCAGTGAACG ACAAAATGGC GTCCTGAACA 551 GTTGGACTGA TCAGGACAGC AAAGACAGCA CCTACAGCAT GAGCAGCACC 601 CTCACGTTGA CCAAGGACGA GTATGAACGA CATAACAGCT ATACCTGTGA 651 GGCCACTCAC AAGACATCAA CTTCACCCAT TGTCAAGAGC TTCAACAGGA 701 ATGAGTGTTA G (SEQ ID NO: 10)

La secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la cadena pesada HC de Ab-D es la siguiente:

1 EVQLQQSGPE LVTPGASVKISCKASGYTFT foHYMSWVKQS HGKSLEWGQ 51 I|PyjSGEIp:^QOTG(TATL TVDKSSSIAY MEIRGLTSED SAVYYCARDD 101 iYDASPEA|WG QGTLVTVSA4 KTTPPSVYPL APGSAA QTNS MVTLGCLVKG 151 YFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDL YTLSSSVTVPSSTWPSETVT 201 CNVAHPASSTKVDKK1VPRD CGCKPCICTVPEVSSVFIFP PKPKDVLTIT 251LTPKVTCVWDISKDDPEVQ FSWFVDDVEVHTAQTQPREE QFNSTFRSVS 301ELPIMHQDWL NGKEFKCR VN SPAFPAPIEK TISKTKGRPKAPQVYTIPPP 351KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY 401FIYSKLNVQK SNWEA GNTFT CSVLHEGLHNHHTEKSLSHS PGK (SEQ ID NO: 11)

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de HC de Ab-D es:

1 GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTGGTGACGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATA TCTTGTAAGG CTTCTGGATA CACAITCACT GACCACTACA 101 TGAGCTGGGT GAAGCAGAGT CATGGAAAAA GCCTTGAGTG GATTGGAGAT 151 ATTAATCCCT ATTCTGGTGA AACTACCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAC 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCTTCCAG TATAGCCTAC ATGGAGATCC 251 GCGGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGAGATGAT 301 TACGACGCCT CTCCGTTTGC TTACTGGGGC CAAGGGACTC TGGTCACTGT 351 CTCTGCAGCC AAAACGACAC CCCCATCTGT CTATCCACTG GCCCCTGGAT 401 CTGCTGCCCA AACTAACTCC ATGGTGACCC TGGGATGCCT GGTCAAGGGC 451 TATTTCCCTG AGCCAGTGAC AGTGACCTGG AACTCTGGAT CCCTGTCCAG 1 501 CGGTGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTGCA GTCTGACCTC TACACTCTGA 551 GCAGCTCAGT GACTGTCCCC TCCAGCACCT GGCCCAGCGA GACCGTCACC 601 TGCAACGTTG CCCACCCGGC CAGCAGCACC AAGGTGGACA AGAAAATTGT 651 GCCCAGGGAT TGTGGTTGTA AGCCTTGCAT ATGTACAGTC CCAGAAGTAT 701 CATCTGTCTT CATCTTCCCC CCAAAGCCCA AGGATGTGCT CACCATTACT 751 CTGACTCCTA AGGTCACGTG TGTTGTGGTA GACATCAGCA AGGATGATCC 801 CGAGGTCCAG TTCAGCTGGT TTGTAGATGA TGTGGAGGTG CACACAGCTC 851 AGACGCAACC CCGGGAGGAG CAGTTCAACA GCACTTTCCG CTCAGTCAGT 901 GAACTTCCCA TCATGCACCA GGACTGGCTC AATGGCAAGG AGTTCAAATG 951 CAGGGTCAAC AGTCCAGCTT TCCCTGCCCG CATCGAGAAA ACCATCTCCA 1001 AAACCAAAGG CAGACCGAAG GCTCCACAGG TGTACACCAT TCCACCTCCC 5 1051AAGGAGCAGA TGGCCAAGGA TAAAGTCAGT CTGACCTGCA TGATAACAGA

1101 CTTCTTCCCT GAAGACATTA CTGTGGAGTG GCAGTGQAAT GGGCAGCCAG 1151 CGGAGAACTA CAAGAACACT CAGCCCATCA TGGACACAGA TGGCTCTTAC 1201 TTCATCTACA GCAAGCTCAA TGTGCAGAAG AGCAACTGGG AGGCAGGAAA 1251 TACTTTCACC TGCTCTGTGT TACATGAGGG CCTGCACAAC CACCATACTG 1301 AGAAGAGCCT CTCCCACTCT CCTGGTAAAT GA (SEQ ID NO: 12)

La secuencia de aminoacidos de HC de Ab-D incluyendo el peptido senal es:

5

1MRCRWIFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL VTPGASVKIS CKASGYTFTD 51 HYMSWVKQSH GKSLEWIGDINPYSGETTYN QKFKGTATLT VDKSSSIAYM 101EIRGLTSEDS AVYYCARDDY DASPFAYWGQ GTLVTVSAAK TTPPSVYPLA 151 PGSAAQTNSM VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY 201 TLSSSVTVPS STWPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP 251EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVWDISKDDPEVQF SWFVDDVEVH 301 TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS PAFPAPIEKT 351ISKTKGRPKA PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG 401 QPAENYKNTQ PIMDTDGSYFIYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH 451 HTEKSLSHSP GK (SEQ ID NO: 13)

La secuencia de acido nucleico de HC de Ab-D incluyendo la secuencia codificante del peptido senal es:

1ATGAGATGCA GGTGGATCTT TCTCTTTCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTG GTGACGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATATCT TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 CACTACATGA GCTGGGTGAA GCAGAGTCAT GGAAAAAGCC TTGAGTGGAT 201 TGGAGATATT AATCCCTATT CTGGTGAAAC TACCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCACGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CTTCCAGTAT AGCCTACATG 301 GAGATCCGCG GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351AGATGATTAC GACGCCTCTC CGTTTGCTTA CTGGGGCCAA GGGACTCTGG 401 TCACTGTCTC TGCAGCCAAA ACGACACCCC CATCTGTCTA TCCACTGGCC 451 CCTGGATCTG CTGCCCAAAC TAACTCCATG GTGACCCTGG GATGCCTGGT 501 CAAGGGCTAT TTCCCTGAGC CAGTGACAGT GACCTGGAAC TCTGGATCCC 551 TGTCCAGCGG TGTGCACACC TTCCCAGCTG TCCTGCAGTC TGACCTCTAC 601ACTCTGAGCA GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC AGCACCTGGC CCAGCGAGAC 651 CGTCACCTGC AACGTTGCCC ACCCGGCCAG CAGCACCAAG GTGGACAAGA 701AAATTGTGCC CAGGGATTGT GGTTGTAAGC CTTGCATATG TACAGTCCCA 751 GAAGTATCAT CTGTCTTCAT CTTCCCCCCA AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC 801 CATTACTCTG ACTCCTAAGG TCACGTGTGT TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG 851 ATGATCCCGA GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG TAGATGATGT GGAGGTGCAC 901 ACAGCTCAGA CGCAACCCCG GGAGGAGCAG TTCAACAGCA CTTTCCGCTC 951 AGTCAGTGAA CTTCCCATCA TGCACCAGGA CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT 1001 TCAAATGCAG GGTCAACAGT CCAGCTTTCC CTGCCCCCAT CGAGAAAACC 1051 ATCTCCAAAA CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT CCACAGGTGT ACACCATTCC 1101 ACCTCCCAAG GAGCAGATGG CCAAGGATAA AGTCAGTCTG ACCTGCATGA 1151 TAACAGACTT CTTCCCTGAA GACATTACTG TGGAGTGGCA GTGGAATGGG 1201 CAGCCAGCGG AGAACTACAA GAACACTCAG CCCATCATGG ACACAGATGG 1251 CTCTTACTTC ATCTACAGCA AGCTCAATGT GCAGAAGAGC AACTGGGAGG 1301 CAGGAAATAC TTTCACCTGC TCTGTGTTAC ATGAGGGCCT GCACAACCAC 1351 CATACTGAGA AGAGCCTCTC CCACTCTCCT GGTAAATGA (SEQ ID NO: 14)

l

Las secuencias de CDR (region determinante de complementariedad) en la region variable de la cadena pesada de Ab-D son las siguientes:

CRD-H1: DHYMS (SEQ ID NO: 39)

CDR-H2: DINPYSGETTYNQKFKG (SEQ ID NO: 40)

10

15

20

CDR-H3: DDYDASPFAY (SEQ ID NO: 41)

Las secuencias de CDR de region variable de cadena ligera de Ab-D son:

CDR-L1: QASQGTSINLN (SEQ ID NO: 42)

CDR-L2: GSSNLED (SEQ ID NO: 43)

CDR-L3: LQHSYLPYT (SEQ ID NO: 44)

Ab-C

El anticuerpo C (tambien denominado en el presente documento Ab-C y Mab-C) es un anticuerpo de raton que muestra union de alta afinidad con esclerostina. El patron de union de BIAcore de Ab-C se muestra en la Figura 17. La secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la Cadena Ligera de Ab-C es la siguiente:

1 DIVLTQSPAS LTVSLGLRAT ISCimQSVD'TOGBSYMNWY QQKPGQPPKL 51 LIY^S^LES GIPARFSGNG SGTOFTLNIH PVEEEDAVTY YCQgSMEfiP^ 101 TFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLT SGGASWCFL NNFYPKDINV 151KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS STLTLTKDEY ERHNSYTCEA 201 THKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 15)

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de LC de Ab-C es:

1 GACATTGTGC TGACCCAATC TCCAGCTTCT TTGACTGTGT CTCTAGGCCT 51 GAGGGCCACC ATCTCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT TATGATGGTG 101 ATAGTTATAT GAACTGGTAC CAGCAGAAAC CAGGACAGCC ACCCAAACTC 151 CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GGGATCCCAG CCAGGTTTAG 201 TGGCAATGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT CCTGTGGAGG 251 AGGAGGATGC TGTAACCTAT TACTGTCAAC AAAGTAATGA GGATCCGTGG 301 ACGTTCGGTG GAGGCACCAA GCTGGAAATC AAACGGGCTG ATGCTGCACC 351 AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA TCTGGAGGTG 401 CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA CATCAATGTC 451 AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC TGAACAGTTG 501 GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC AGCACCCTCA 551 CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC CTGTGAGGCC 601 ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA ACAGGAATGA 651 GTGTTAG (SEQ ID NO:16)

La secuencia de aminoacidos de LC de Ab-C incluyendo el peptido senal es:

1METDTILLWV LLLWVPGSTG DIVLTQSPAS LTVSLGLRAT ISCKASQSVD 51 YDGDSYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES GIPARFSGNG SGTDFTLNIH 101 PVEEEDAVTY YCQQSNEDPW TFGGGTKLEI KRADAAPTVS IFPPSSEQLT 151 SGGASWCFL NNFYPKDINV KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS 201 STLTLTKDEY ERHNSYTCEA THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NO: 17)

La secuencia de acido nucleico de LC de Ab-C incluyendo la secuencia codificante del peptido senal es:

1 ATGGAGACAG ACACAATCCT GCTATGGGTG CTGCTGCTCT GGGTTCCAGG 51 CTCCACTGGT GACATTGTGC TGACCCAATC TCCAGCTTCT TTGACTGTGT 101 CTCTAGGCCT GAGGGCCACC ATCTCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT 151 TATGATGGTG ATAGTTATAT GAACTGGTAC CAGCAGAAAC CAGGACAGCC 201 ACCCAAACTC CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GGGATCCCAG 251 CCAGGTTTAG TGGCAATGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT 301 CCTGTGGAGG AGGAGGATGC TGTAACCTAT TACTGTCAAC AAAGTAATGA 351 GGATCCGTGG ACGTTCGGTG GAGGCACCAA GCTGGAAATC AAACGGGCTG 401ATGCTGCACC AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA 451 TCTGGAGGTG CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA 501 CATCAATGTC AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC 551 TGAACAGTTG GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC 601AGCACCCTCA CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC 651 CTGTGAGGCC ACTCACAAGA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA 701 ACAGGAATGA GTGTTAG (SEQ ID NO: 18)

Cadena pesada de Ab-C

5 La secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de HC de Ab-C es:

imagen2

151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGS LSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW 201PSETVTCNVAIIPASSTKVDK K1VPRDCGCK PCICTVPEVS SVFIFPPKPK 251DVLTITLTPK VTCVWDISKDDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRSVSELPIMHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV 351 YTIPPPKEQM AKDEVSLTCMITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401DTDGSYFIYS KLNVQKSNWE A GNTFTCSVL HEGLHNHHTE ESLSHSPGK (SEQ ID NO: 19)

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de HC de Ab-C es la siguiente:

1 GAGGTCCAGC TGCAACAATC TGGACCTGAG CTGGTGAAGC CTGGGACTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGTAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTGCTACA 101 TGAACTGGGT GAAGCAGAGC CATGGGAAGA GCCTTGAATG GATTGGAGAT 151ATTAATCCTT TCAACGGTGG TACTACCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AATCCTCCAG CACAGCCTAC ATGCAGCTCA 251ACAGCCTGAC ATCTGACGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATCCCAT 301 TATTACTTCG ATGGTAGAGT CCCTTGGGAT GCTATGGACT ACTGGGGTCA 351 AGGAACCTCA GTCACCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT 401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG 451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA

501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT 551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG 601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA 651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT 701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG 751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA 801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG 851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901 ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA 951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG 1051 TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT 1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC 1151AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG 1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CATCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG 1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC 1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQ ID NO:20)

La secuencia de aminoacidos de HC de Ab-C incluyendo el peptido senal es:

1 MGWNWIFLFL LSGTAGVYSE YQLQQSGPEL VKPGTSVKMS CKASGYTFTD 51 CYMNTWVKQSH GKSLEWIGDINPFNGGTTYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM 101 QLNSLTSDDS AVYYCARSHY YFDGRVPWDA MDYWGQGTSV TVSSAKTTPP 151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV 201 LQSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKKIVPRDCGCKP 251 CICTYPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCVWDISKD DPEVQFSWFV 301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP 351 APIEKTISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMITDFFPEDITV 401 EWQWNGQPAE NYKNTQPIMD TDGSYFIYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH 5 451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ ID NO:21)

La secuencia de acido nucleico de HC de Ab-C incluyendo la secuencia codificante del peptido senal es:

1 ATGGGATGGA ACTGGATCTT TCTCTTCCTC TTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CTACTCTGAG GTCCAGCTGC AACAATCTGG ACCTGAGCTG GTGAAGCCTG 101 GGACTTCAGT GAAGATGTCC TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151TGCTACATGA ACTGGGTGAA GCAGAGCCAT GGGAAGAGCC TTGAATGGAT 201 TGGAGATATT AATCCTTTCA ACGGTGGTAC TACCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAAT CCTCCAGCAC AGCCTACATG 301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGACGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATCCCATTAT TACTTCGATG GTAGAGTCCC TTGGGATGCT ATGGACTACT 401 GGGGTCAAGG AACCTCAGTC ACCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA 451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT 501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA 551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTGCAGTCTG ACCTCTACAC TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG 651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA 701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT 751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT TCCCCCCAAA 801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG

851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA 901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT 1001 GGCTCAATGG CAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC 1101 ACAGGTGTAC ACCATTCCAC CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG 1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG 1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC 1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCAT CTACAGCAAG CTCAATGTGC 1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT 1351 GAGGGCCTGC ACAACCACCA TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG 1401 TAAATGA (SEQ ID NO:22) '

5 Las secuencias de CDR (region determinante de complementariedad) en la region variable de la cadena pesada de Ab-C son como sigue:

CDR-H1: DCYMN (SEQ ID NO: 45)

CDR-H2: DINPFNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 46)

10 CDR-H3: SHYYFDGRVPWDAMDY (SEQ ID NO: 47)

Las secuencias de CDR de region variable de la cadena ligera de Ab-C son:

CDR-L1: KASQSVDYDGDSYN (SEQ ID NO: 48)

15 CDR-L2: AASNLES (SEQ ID NO: 49)

CDR-L3: QQSNEDPWT (SEQ ID NO: 50)

Ab-A

20 El anticuerpo A (tambien denominado en el presente documento Ab-A y Mab-A) es un anticuerpo quimerico de raton-conejo que muestra union de alta afinidad con esclerostina. El patron de union de BIAcore de Ab-A se muestra en la Figura 15.

Cadena Ligera de Ab-A

La secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de LC de Ab-A:

5

1 AQVLTQTPAS VSAAVGGTVTINCQSSQSVY DW^AWFQQ KPGQPPKLLI 51 YDASDtASGV PSRFSGSGSG TQFTLTISGV QCADAATYYC QGAYNDYTYA 101 FGGGTEWVK RTDAAPTVSIFPPSSEQLTS GGASVVCFLN NFYPKDINVK 151 WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT 201HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO:23)

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de LC de Ab-A:

1 GCGCAAGTGC TGACCCAGAC TCCAGCCTCC GTGTCTGCAG CTGTGGGAGG 51 CACAGTCACC ATCAATTGCC AGTCCAGTCA GAGTGTTTAT GATAACAACT 101 GGTTAGCCTG GTTTCAGCAG AAACCAGGGC AGCCTCCCAA GCTCCTGATT 151 TATGATGCAT CCGATCTGGC ATCTGGGGTC CCATCGCGGT TCAGTGGCAG 201 TGGATCTGGG ACACAGTTCA CTCTCACCAT CAGCGGCGTG CAGTGTGCCG 251 ATGCTGCCAC TTACTACTGT CAAGGCGCTT ATAATGATGT TATTTATGCT 301 TTCGGCGGAG GGACCGAGGT GGTGGTCAAA CGTACGGATG CTGCACCAAC 351 TGTATCCATC TTCCCACCAT CCAGTGAGCA GTTAACATCT GGAGGTGCCT 401 CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC AACTTCTACC CCAAAGACAT CAATGTCAAG 451 TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA ACAGTTGGAC 501 TGATCAGGAC AQCAAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC ACCCTCACGT 551 TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG TGAGGCCACT 601 CACAAGACAT CAACTTCACC CATTGTCAAG AGCTTCAACA GGAATGAGTG 651TTAG (SEQ ID NO:24)

La secuencia de aminoacidos de LC de Ab-A incluyendo el peptido senal es:

1 MDTRAPTQLL GLLLLWLPGA TFAQVLTQTP ASVSAAVGGT VUNCQSSQS 51 VYDNNWLAWF QQKPGQPPKL LIYDASDLAS GVPSRFSGSG SGTQFTLTIS 101 GVQCADAATY YCQGAYNDVIYAFGGGTEW VKRTDAAPTV SIFPPSSEQL 151 TSGGASYVCF LNNFYPKDIN VKWKIDGSER QNGYLNSWTD QDSKDSTYSM 201 SSTLTLTKDE YERHNSYTCE ATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO:25)

15

La secuencia de acido nucleico de LC de Ab-A incluyendo la secuencia codificante del peptido senal es:

1ATGGACACGA GGGCCCCCAC TCAGCTGCTG GGGCTCCTGC TGCTCTGGCT 51 CCCAGGTGCC ACATTTGCGC AAGTGCTGAC CCAGACTCCA GCCTCCGTGT 101 CTGCAGCTGT GGGAGGCACA GTCACCATCA ATTGCCAGTC CAGTCAGAGT 151 GTTTATGATA ACAACTGGTT AGCCTGGTTT CAGCAGAAAC CAGGGCAGCC 201 TCCCAAGCTC CTGATTTATG ATGCATCCGA TCTGGCATCT GGGGTCCCAT 251 CGCGGTTCAG TGGCAGTGGA TCTGGGACAC AGTTCACTCT CACCATCAGC 301 GGCGTGCAGT GTGCCGATGC TGCCACTTAC TACTGTCAAG GCGCTTATAA 351 TGATGTTATT TATGCTTTCG GCGGAGGGAC CGAGGTGGTG GTCAAACGTA 401 CGGATGCTGC ACCAACTGTA TCCATCTTCC CACCATCCAG TGAGCAGTTA 451 ACATCTGGAG GTGCCTCAGT CGTGTGCTTC TTGAACAACT TCTACCCCAA 501 AGACATCAAT GTCAAGTGGA AGATTGATGG CAGTGAACGA CAAAATGGCG 551 TCCTGAACAG TTGGACTGAT CAGGACAGCA AAGACAGCAC CTACAGCATG 601 AGCAGCACCC TCACGTTGAC CAAGGACGAG TATGAACGAC ATAACAGCTA 651 TACCTGTGAG GCCACTCACA AGACATCAAC TTCACCCATT GTCAAGAGCT 701 TCAACAGGAA TGAGTGTTAG (SEQ ID NO:26)

La secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de HC de Ab-A es:

5

1 QSLEESGGRL VTPGTPLTLT CTASGFSLSSY%IN|WVRQAP GEGLEWIGT1 51 fiSGGp!)YASWAKGRFTTSR TSTTMDLKMT SLTTGDTARY FCAR^pIjWG 101 QGTLVTVSSA STKGPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW 151NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASST 201KVDKKWPRD CGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCWV 251DISKDDPEVQ FSWFVDDVEVHTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL 301NGKEFKCR VN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS 351LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMNTNGSY FVYSKLNVOK 401SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSHS PGK (SEQ ID NO:27)

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de HC de Ab-A:

1 CAGTCGCTGG AGGAGTCCGG GGGTCGCCTG GTCACGCCTG GGACACCCCT 51 GACACTCACC TGCACAGCCT CTGGATTCTC CCTCAGTAGT TATTGGATGA 101ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA GGGGAGGGGC TGGAATGGAT CGGAACCATT 151 GATTCTGGTG GTAGGACGGA CTACGCGAGC TGGGCAAAAG GCCGATTCAC 201 CATCTCCAGA ACCTCGACTA CGATGGATCT GAAAATGACC AGTCTGACGA 251 CCGGGGACAC GGCCCGTTAT TTCTGTGCCA GAAATTGGAA CTTGTGGGGC 301 CAAGGCACCC TCGTCACCGT CTCGAGCGCT TCTACAAAGG GCCCATCTGT 351 CTATCCACTG GCCCCTGGAT CTGCTGCCCA AACTAACTCC ATGGTGACCC 401 TGGGATGCCT GGTCAAGGGC TATTTCCCTG AGCCAGTGAC AGTGACCTGG 451 AACTCTGGAT CCCTGTCCAG CGGTGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTGCA 501 GTCTGACCTC TACACTCTGA GCAGCTCAGT GACTGTCCCC TCCAGCACCT 551 GGCCCAGCGA GACCGTCACC TGCAACGTTG CCCACCCGGC CAGCAGCACC 601 AAGGTGGACA AGAAAATTGT GCCCAGGGAT TGTGGTTGTA AGCCTTGCAT 651 ATGTACAGTC CCAGAAGTAT CATCTGTCTT CATCTTCCCC CCAAAGCCCA 701 AGGATGTGCT CACCATTACT CTGACTCCTA AGGTCACGTG TGTTGTGGTA 751 GACATCAGCA AGGATGATCC CGAGGTCCAG TTCAGCTGGT TTGTAGATGA 801 TGTGGAGGTG CACACAGCTC AGACGCAACC CCGGGAGGAG CAGTTCAACA 851 GCACTTTCCG CTCAGTCAGT GAACTTCCCA TCATGCACCA GGACTGGCTC 901AATGGCAAGG AGTTCAAATG CAGGGTCAAC AGTGCAGCTT TCCCTGCCCC 951 CATCGAGAAA ACCATCTCCA AAACCAAAGG CAGACCGAAG GCTCCACAGG 1001 TGTACACCAT TCCACCTCCC AAGGAGCAGA TGGCCAAGGA TAAAGTCAGT 1051 CTGACCTGCA TGATAACAGA CTTCTTCCCT GAAGACATTA CTGTGGAGTG 1101 GCAGTGGAAT GGGCAGCCAG CGGAGAACTA CAAGAACACT CAGCCCATCA 1151 TGGACACAGA TGGCTCTTAC TTCGTCTACA GCAAGCTCAA TGTGCAGAAG 1201 AGCAACTGGG AGGCAGGAAA TACTTTCACC TGCTCTGTGT TACATGAGGG 1251 CCTGCACAAC CACCATACTG AGAAGAGCCT CTCCCACTCT CCTGGTAAAT 1301 GA (SEQ ID NO:28)

La secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-A incluyendo el peptido senal es:

1 METGLRWLLL VAVLKGVHCQ SLEESGGRLV TPGTPLTLTC TASGFSLSSY 51 WMNWVRQAPG EGLEWIGTID SGGRTDYASW AKGRFTISRT STTMDLKMTS 101 LTTGDTARYF CARNWNLWGQ GTLVTVSSAS TKGPSVYPLA PGSAAQTNSM 151 VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY TLSSSVTVPS 201 STWPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP EVSSVFIFPP 251 KPKDVLTITL TPKVTCWVDISKDDPEVQF SWFVDDVEVH TAQTQPREEQ 301 FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKTISKTKGRPKA 351 PQVYTIPPPK EQMAKDKV SL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ 401 PIMNTNGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP 451 GK (SEQ ID NO:29)

La secuencia de acido nucleico de HC de Ab-A incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGAGACTG GGCTGCGCTG GCTTCTCCTG GTCGCTGTGC TCAAAGGTGT 51 CCACTGTCAG TCGCTGGAGG AGTCCGGGGG TCGCCTGGTC ACGCCTGGGA 101 CACCCCTGAC ACTCACCTGC ACAGCCTCTG GATTCTCCCT CAGTAGTTAT

151 TGGATGAACT GGGTCCGCCA GGCTCCAGGG GAGGGGCTGG AATGGATCGG 201 AACCATTGAT TCTGGTGGTA GGACGGACTA CGCGAGCTGG GCAAAAGGCC 251 GATTCACCAT CTCCAGAACC TCGACTACGA TGGATCTGAA AATGACCAGT 301 CTGACGACCG GGGACACGGC CCGTTATTTC TGTGCCAGAA ATTGGAACTT 351 GTGGGGCCAA GGCACCCTCG TCACCGTCTC GAGCGCTTCT ACAAAGGGCC 401 CATCTGTCTA TCCACTGGCC CCTGGATCTG CTGCCCAAAC TAACTCCATG 451 GTGACCCTGG GATGCCTGGT CAAGGGCTAT TTCCCTGAGC CAGTGACAGT 501 GACCTGGAAC TCTGGATCCC TGTCCAGCGG TGTGCACACC TTCCCAGCTG 551 TCCTGCAGTC TGACCTCTAC ACTCTGAGCA GCTCAGTGAC TGTCCCCTCC 601 AGCACCTGGC CCAGCGAGAC CGTCACCTGC AACGTTGCCC ACCCGGCCAG 651 CAGCACCAAG GTGGACAAGA AAATTGTGCC CAGGGATTGT GGTTGTAAGC 701 CTTGCATATG TACAGTCCCA GAAGTATCAT CTGTCTTCAT CTTCCCCCCA 751 AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC CATTACTCTG ACTCCTAAGG TCACGTGTGT 801 TGTGGTAGAC ATCAGCAAGG ATGATCCCGA GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG 851 TAGATGATGT GGAGGTGCAC ACAGCTCAGA CGCAACCCCG GGAGGAGCAG 901 TTCAACAGCA CTTTCCGCTC AGTCAGTGAA CTTCCCATCA TGCACCAGGA 951 CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT TCAAATGCAG GGTCAACAGT GCAGCTTTCC 1001 CTGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAA CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT 1051 CCACAGGTGT ACACCATTCC ACCTCCCAAG GAGCAGATGG CCAAGGATAA 1101 AGTCAGTCTG ACCTGCATGA TAACAGACTT CTTCCCTGAA GACATTACTG 1151 TGGAGTGGCA GTGGAATGGG CAGCCAGCGG AGAACTACAA GAACACTCAG 1201 CCCATCATGG ACACAGATGG CTCTTACTTC GTCTACAGCA AGCTCAATGT 1251 GCAGAAGAGC AACTGGGAGG CAGGAAATAC TTTCACCTGC TCTGTGTTAC 1301 ATGAGGGCCT GCACAACCAC CATACTGAGA AGAGCCTCTC CCACTCTCCT 1351 GGTAAATGA (SEQ ID NO:30)

Las secuencias de CDR (region determinate de complementariedad) en la region variable de la cadena pesada de Ab-A son las siguientes:

5

CDR-H1: SYWMN (SEQ ID NO: 51)

CDR-H2: TIDSGGRTDYASWAKG (SEQ ID NO: 52)

CDR-H3: NWNL (SEQ ID NO: 53)

10 Las secuencias de CDR de region variable de la cadena ligera de Ab-A son:

CDR-L1: QSSQSVYDNNWLA (SEQ ID NO: 54)

CDR-L2: DASDLAS (SEQ ID NO: 55)

CDR-L3: QGAYNDVIYA (SEQ ID NO: 56)

15

Ab-A se humanizo y se denomina Anticuerpo 1 (tambien denominado en el presente documento Ab-1), que tiene las siguientes secuencias:

La secuencia de acido nucleico de la region variable de LC de Ab-1 incluyendo la secuencia codificante del peptido 20 senal es:

ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGT

GCCACATTTGCTCAAGTTCTGACCCAGAGTCCAAGCAGTCTCTCCGCCAGCGTAGGC

5

10

15

20

25

30

35

GATCGTGTGACTATTACCTGTCAATCTAGTCAGAGCGTGTATGATAACAATTGGCTG

GCGTGGTACCAGCAAAAACCGGGCAAAGCCCCGAAGCTGCTCATCTATGACGCGTC

CGATCTGGCTAGCGGTGTGCCAAGCCGTTTCAGTGGCAGTGGCAGCGGTACTGACT

TTACCCTCACAATTTCGTCTCTCCAGCCGGAAGATTTCGCCACTTACTATTGTCAAG

GTGCTTACAACGATGTGATTTATGCCTTCGGTCAGGGCACTAAAGTAGAAATCAAA

CGT (SEQ ID NO:74)

La secuencia de aminoacidos de la region variable de LC de Ab-1 incluyendo el peptido senal es:

imagen3

La secuencia de acido nucleico de la region variable de HC de Ab-1 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal es:

ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCACTGT

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGAGGCGGGCTTGTCCAGCCTGGAGGGAGCCTGCG

TCTCTCTTGTGCAGCAAGCGGCTTCAGCTTATCCTCTTACTGGATGAATTGGGTGCG

GCAGGCACCTGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTGGGCACCATTGATTCCGGAGGCCGTA

CAGACTACGCGTCTTGGGCAAAGGGCCGTTTCACCATTTCCCGCGACAACTCCAAA

AATACCATGTACCTCCAGATGAACTCTCTCCGCGCAGAGGACACAGCACGTTATTA

CTGTGCACGCAACTGGAATCTGTGGGGTCAAGGTACTCTTGTAACAGTCTCGAGC

(SEQ ID NO:76 )

La secuencia de aminoacidos de la region variable de HC de Ab-1 incluyendo el peptido senal es:

imagen4

Las secuencias de CDR (region determinante de complementariedad) en la region variable de la cadena pesada de Ab-1 son las siguientes:

CDR-H1: SYWMN (SEQ ID NO: 51)

CDR-H2: TIDSGGRTDYASWAKG (SEQ ID NO: 52)

CDR-H3: NWNL (SEQ ID NO: 53)

Las secuencias de CDR de region variable de cadena ligera de Ab-1 son:

CDR-L1: QSSQSVYDNNWLA (SEQ ID NO: 54)

CDR-L2: DASDLAS (SEQ ID NO: 55)

CDR-L3: QGAYNDVTYA (SEQ ID NO: 56)

Ab-B

El anticuerpo B (tambien denominado en el presente documento Ab-B y Mab-B) es un anticuerpo de raton que muestra union de alta afinidad con esclerostina. El patron de union de BIAcore de Ab-B se muestra en la Figura 16.

Cadena Ligera de Ab-B

1 QIVLTQSPTI VSASPGEKVT LIc£AS’SSv'S;; FVDWFQQKPG TSPKRWIYRT 51 SNL^GVPAR FSGGGSGTSH SLTISRMEAE DAATYYC^Q^|S’TtPPTFGAG 101 TKLELKRADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYP KDINVKWKID 151 GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC(SEQ IDNO:31)

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de LC de Ab-B es:

1 CAAATTGTTC TCACCCAGTC TCCAACAATC GTGTCTGCAT CTCCAGGGGA 51 GAAGGTCACC CTAATCTGCA GTGCCAGTTC AAGTGTAAGT TTCGTGGACT 101 GGTTCCAGCA GAAGCCAGGC ACTTCTCCCA AACGCTGGAT TTACAGAACA 151 TCCAACCTGG GTTTTGGAGT CCCTGCTCGC TTCAGTGGCG GTGGATCTGG 201 GACCTCTCAC TCTCTCACAA TCAGCCGAAT GGAGGCTGAA GATGCTGCCA 251 CTTATTACTG CCAGCAAAGG AGTACTTACC CACCCACGTT CGGTGCTGGG 301 ACCAAGCTGG AACTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT 351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT 401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT 451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG 501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG 551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA '

5 601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ ID NO:32)

La secuencia de aminoacidos de LC de Ab-B incluyendo el peptido senal es:

1 MHFQVQIFSF LLISASVIVS RGQIVLTQSP TIVSASPGEK VTLICSASSS 51 VSFVDWFQQK PGTSPKRWIY RTSNLGFGVP ARFSGGGSGT SHSLTISRME 101 AEDAATYYCQ QRSTYPPTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG 151 ASWCFLNNF YPKDINVKWK IDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL 201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:33)

10

La secuencia de acido nucleico de LC de Ab-B incluyendo la secuencia codificante del peptido senal es:

1 ATGCATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCCTCAGT 51 CATAGTGTCC AGAGGGCAAA TTGTTCTCAC CCAGTCTCCA ACAATCGTGT 101 CTGCATCTCC AGGGGAGAAG GTCACCCTAA TCTGCAGTGC CAGTTCAAGT 151 GTAAGTTTCG TGGACTGGTT CCAGCAGAAG CCAGGCACTT CTCCCAAACG 201 CTGGATTTAC AGAACATCCA ACCTGGGTTT TGGAGTCCCT GCTCGCTTCA 251 GTGGCGGTGG ATCTGGGACC TCTCACTCTC TCACAATCAG CCGAATGGAG 301 GCTGAAGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAAAGGAGTA CTTACCCACC

351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAACT GAAACGGGCT GATGCTGCAC 401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT 451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT 501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT 551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC 601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC 651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG 701 AGTGTTAG (SEQ ID NO:34)

Cadena Pesada de Ab-B

5 La secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de HC de Ab-B:

1 QVTLKESGPG ILQPSQTLSL TCSFSGFSLS !^GMGVGWIR HPSGKNLEWL 51 AHfWW'DDVKR YNPVlMSRLT ISKDTSNSQV FLKIANVDTA DTATYYCARI 101 pD.FDYiiE%Y^A&p|w'GQGTS VIVSSAKTTP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGS LSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW 201 PSETVTCNVA HPASSTKVDK KIVPPDCGCK PCICTVPEVS SVFIFPPKPK 251 DVLTITLTPK VTCVWDISK DDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPBEEQFNS 301 TFRSVSELPI MHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV 351 YTIPPPKEQM AKDKVSLTCM ITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401 DTDGSYFVYS KLNVQKSNWE AGNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK (SEQ IDNO:35)

La secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de HC de Ab-B:

10

1 CAGGTTACTC TGAAAGAGTC TGGCCCTGGG ATATTGCAGC CCTCCCAGAC 51 CCTCAGTCTG ACTTGTTCTT TCTCTGGGTT TTCACTGAGC ACTTCTGGTA 101 TGGGTGTAGG CTGGATTCGT CACCCATCAG GGAAGAATCT GGAGTGGCTG 151 GCACACATTT GGTGGGATGA TGTCAAGCGC TATAACCCAG TCCTGAAGAG 201 CCGACTGACT ATCTCCAAGG ATACCTCCAA CAGCCAGGTA TTCCTCAAGA 251 TGGCCAATGT GGACACTGCA GATACTGCCA CATACTACTG TGCTCGAATA 301 GAGGACTTTG ATTACGACGA GGAGTATTAT GCTATGGACT ACTGGGGTCA 351 AGGAACCTCA GTCATCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT 401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG 451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA 501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT 551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG 601 CCCAGCGAGA CCGTCACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA 651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT 701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG 751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA 801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG 851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901 ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA 951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG 1051 TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT 1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC 1151 AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG 1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CGTCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG 1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC 1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQ IDNO:36)

La secuencia de aminoacidos de HC de Ab-B incluyendo el peptido senal:

5

1 MGRLTSSFLL LIVPAYVLSQ VTLKESGPGI LQPSQTLSLT CSFSGFSLST 51 SGMGVGWIRH PSGKNLEWLA HIWWDDVKRY NPVLKSRLTI SKDTSNSQVF 101 LKIANVDTAD TATYYCARIE DFDYDEEYYA MDYWGQGTSV IVSSAKTTPP 151 SVYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV 201 LQSDLYTLSS SVTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKK IVPRDCGCKP 251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TCWVDISKD DPEVQFSWFV 301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP 351 APIEKTISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMI TDFFPEDITV 401 EWQWNGQPAE NYKNTQPIMD TDGSYFVYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH 451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ IDNO:37)

1 ATGGGCAGGC TTACTTCTTC ATTCCTGCTA CTGATTGTCC CTGCATATGT 51 CCTGTCCCAG GTTACTCTGA AAGAGTCTGG CCCTGGGATA TTGCAGCCCT 101 CCCAGACCCT CAGTCTGACT TGTTCTTTCT CTGGGTTTTC ACTGAGCACT 151 TCTGGTATGG GTGTAGGCTG GATTCGTCAC CCATCAGGGA AGAATCTGGA 201 GTGGCTGGCA CACATTTGGT GGGATGATGT CAAGCGCTAT AACCCAGTCC 251 TGAAGAGCCG ACTGACTATC TCCAAGGATA CCTCCAACAG CCAGGTATTC 301 CTCAAGATCG CCAATGTGGA CACTGCAGAT ACTGCCACAT ACTACTGTGC 351 TCGAATAGAG GACTTTGATT ACGACGAGGA GTATTATGCT ATGGACTACT 401 GGGGTCAAGG AACCTCAGTC ATCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA 451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT 501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA 551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTGCAGTCTG ACCTCTACAC TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG 651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA 701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT 751 TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT TCCCCCCAAA 801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG 851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA 901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT 1001 GGCTCAATGG CAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC 1101 ACAGGTGTAC ACCATTCCAC CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG 1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG 1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC 1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCGT CTACAGCAAG CTCAATGTGC 1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT 1351 GAGGGCCTGC ACAACCACCA TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG 1401 TAAATGA (SEQ ID NO:38)

Las secuencias de CDR (region determinate de complementariedad) en la region variable de la cadena pesada de Ab-B son las siguientes:

5

CDR-H1: TSGMGVG (SEQ ID NO: 57)

CDR-H2: HIWWDDVKRYNPVLKS (SEQ ID NO: 58)

CDR-H3: EDFDYDEEYYAMDY (SEQ ID NO: 59)

10 Las secuencias de CDR de region variable de cadena ligera de Ab-B son:

CDR-L1: SASSSVSFVD (SEQ ID NO: 60)

CDR-L2: RTSNLGF (SEQ ID NO: 61)

CDR-L3: QQRSTYPPT (SEQ ID NO: 62)

15

Los anticuerpos divulgados en el presente documento se unen a regiones de esclerostina humana que son importantes para la actividad in vivo de la protema. La union de un anticuerpo con esclerostina puede correlacionarse con aumentos de, por ejemplo, la densidad mineral osea conseguida mediante el uso del anticuerpo in vivo tal como se describe en los Ejemplos 5 y 9 (ratones) y en el Ejemplo 12 (mono). Los aumentos de al menos 20 uno de formacion de hueso, contenido mineral oseo, masa osea, calidad osea y fuerza osea pueden tambien conseguirse mediante el uso del anticuerpo in vivo tal como se describe en los Ejemplos 5 y 9 (ratones) y Ejemplo 12 (mono). Puesto que la union de un anticuerpo con esclerostina se determina principalmente por sus secuencias

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

de CDR, puede generarse un anticuerpo con todas o algunas de las secuencias de CDR divulgadas en un marco apropiado, donde el anticuerpo conserva la capacidad para unirse espedficamente con esclerostina, y puede esperarse conseguir aumentos de, por ejemplo, la densidad mineral osea. Dichos anticuerpos son utiles en el tratamiento de afecciones humanas o animales que estan provocadas por, asociadas con, o dan como resultado al menos uno de baja formacion de hueso, baja densidad mineral osea, bajo contenido mineral oseo, baja masa osea, baja calidad osea y baja fuerza osea. Se conocen por los expertos en la materia metodos para construir y expresar anticuerpos y fragmentos de los mismos que comprenden CDR de la presente invencion.

La presente divulgacion se refiere por lo tanto en una realizacion a un anticuerpo aislado, incluyendo Ab-A, o un fragmento de union a antigeno del mismo, que se une espedficamente con esclerostina y donde el dominio variable de la cadena pesada comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:51 para CDR-H1, SEQ ID NO:52 para CDRH2 y SEQ ID NO:53 para CDR-H3. El anticuerpo o fragmento de union a antigeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena pesada en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:51 para CDR-H1, SEQ ID No:52 para CDRH2 y SEQ ID NO:53 para CDR-H3.

Cuando en anticuerpos esta presente una cadena ligera, la cadena ligera puede ser cualquier cadena complementaria adecuada y puede seleccionarse en particular de una cadena ligera donde el dominio variable comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:54 para CDR-L1, SEQ ID NO:55 para CDR-L2 y SEQ ID nO:56 para CDR-L3. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena ligera en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:54 para CDR-L1, SEQ ID NO:55 para CDR-L2 y SEQ ID NO:56 para CDR-L3.

La presente divulgacion se refiere ademas a un anticuerpo aislado, incluyendo Ab-B, o un fragmento de union a antfgeno del mismo, que se une espedficamente con esclerostina y donde el dominio variable de la cadena pesada comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:57 para CDR-H1, SEQ ID NO:58 para CDRH2 y SEQ ID nO:59 para CDR-H3. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena pesada en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:57 para CDR-H1, SEQ ID NO:58 para CDRH2 y SEQ ID NO:59 para CDR-H3.

Cuando en anticuerpos esta presente una cadena ligera, la cadena ligera puede ser cualquier cadena complementaria adecuada y puede seleccionarse en particular de una cadena ligera donde el dominio variable comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:6 para CDR-L1, SEQ ID NO:61 para CDR-L2 y SEQ ID NO:62 para CDR-L3. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena ligera en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:60 para CDR-L1, SEQ ID NO:61 para CDR-L2 y SEQ ID NO:62 para CDR-L3.

La presente invencion se refiere ademas a un anticuerpo aislado, incluyendo Ab-C, o un fragmento de union a antfgeno del mismo, que se une espedficamente con esclerostina y donde el dominio variable de la cadena pesada comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:45 para CDR-H1, SEQ ID NO:46 para CDRH2 y SEQ ID nO:47 para CDR-H3. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena pesada en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:45 para CDR-H1, SEQ ID NO:46 para CDRH2 y SEQ ID NO:47 para CDR-H3.

Cuando en anticuerpos esta presente una cadena ligera, la cadena ligera puede ser cualquier cadena complementaria adecuada y puede seleccionarse en particular de una cadena ligera donde el dominio variable comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:48 para CDR-L1, SEQ ID NO:49 para CDR-L2 y SEQ ID nO:50 para CDR-L3. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena ligera en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:48 para CDR-L1, SEQ ID NO:49 para CDR-L2 y SEQ ID NO:50 para CDR-L3.

La presente invencion tambien se refiere a un anticuerpo aislado, incluyendo Ab-D, o un fragmento de union a antfgeno del mismo, que se une espedficamente con esclerostina y donde el dominio variable de la cadena pesada comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:39 para CDR-H1, SEQ ID NO:4o para CDRH2 y SEQ ID nO:41 para CDR-H3. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena pesada en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:39 para CDR-H1, SEQ ID NO:40 para CDRH2 y SEQ ID NO:41 para CDR-H3.

Cuando en anticuerpos esta presente una cadena ligera, la cadena ligera puede ser cualquier cadena complementaria adecuada y puede seleccionarse en particular de una cadena ligera donde el dominio variable comprende al menos una CDR que tiene las secuencias proporcionadas en SEQ ID NO:42 para CDR-L1, SEQ ID NO:43 para CDR-L2 y SEQ ID nO:44 para CDR-L3. El anticuerpo o fragmento de union a antfgeno del mismo puede comprender un dominio variable de cadena ligera en el que las CDR consisten en al menos uno de los peptidos de SEQ ID NO:42 para CDR-L1, SEQ ID NO:43 para CDR-L2 y SEQ ID NO:44 para CDR-L3.

Se describen posteriormente anticuerpos anti-esclerostina adicionales. Para algunas de las secuencias de

aminoacidos las regiones determinates de complementariedad (CDR) estan sombreadas en cajas y las regiones constantes estan en negrita y cursiva.

Ab-2 Las secuencias de la LC y HC del Anticuerpo 2 (tambien denominado Ab-2) son las siguientes:

5

Cadena Ligera de Ab-2:

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-2:

10

1 QIVLSQSPAILSTSPGEKVT MTCgpSSVY YMQWYQQKPG SSPKPWT7AT 51 SNLASGVPVR FSGSGSGTSY SLTitRVEAE D AATYY CQQW SSDPtTFGAG 101 TKLELKRADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYP KDINVKWKID 151 GSERQNGVLNSWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC (SEQ ID NO: 117)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-2:

15

1 CAAATTGTTC TCTCCCAGTC TCCAGCAATC CTGTCTACAT CTCCAGGGGA 51 GAAGGTCACA ATGACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTGTATAT T AC AT GC ACT 101 GGTACCAGCA GAAGCCAGGA TCCTCCCCCA AACCCTGGAT TTATGCCACA 151 TCCAACCTGG CTTCTGGAGT CCCTGTTCGC TTCAGTGGCA GTGGGTCTGG 201 GACCTCTTAC TCTCTCACAA TCACCAGAGT GGAGGCTGAA GATGCTGCCA 251 CTTATTACTG CCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGTGCTGGG 301 ACCAAGCTGG AGCTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT 351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT 401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGAC ATC A ATGTC AAGTG GAAGATTGAT 451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG 501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAGGACG 551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA 601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ ID NO: 118) '

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-2 incluyendo el peptido senal:

1 MDFQVQIFSF LLISASYIMS RGQIVLSQSP AILSTSPGEK VTMTCRASSS 51 VYYMHWYQQK PGSSPKPWIY ATSNLASGVP VRFSGSGSGT SYSLTITRVE 101AEDAATYYCQ QWSSDPLTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG 151ASWCFLNNF YPKDINVKWKIDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL 201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:l 19)

20

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-2 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCTTCAGT 51 CATTATGTCC AGGGGACAAA TTGTTCTCTC CCAGTCTCCA GCAATCCTGT 101 CTACATCTCC AGGGGAGAAG GTCACAATGA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151 GTATATTACA TGCACTGGTA CCAGCAGAAG CCAGGATCCT CCCCCAAACC 201 CTGGATTTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GTTCGCTTCA 251 GTGGCAGTGG GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAC CAGAGTGGAG 301 GCTGAAGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT 351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAAACGGGCT GATGCTGCAC 401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT 451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT 501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT 551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC 601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC 651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG 701 AGTGTTAG (SEQ ID NO: 120)

Cadena Pesada de Ab-2

5 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-2:

imagen5

151KGYFPEPVTV TWNSGSLSSG VHTFPA VLQS DLYTLSSSVT VPSSTWPSET 201 VTCNVAHPAS STKVDKKTVP RJDCGCKPCIC TVPEVSSVFIFPPKPKD VL T 251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDDVEVHTAQTQPR EEQFNSTFRS 301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP 351PPKEQMAKDK VSLTCMITDF FPEDITVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG 401SYFIYSKLNV QKSNWEAGNT FTCSVLHEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQ ID NO:121)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-2:

10

1 GAGGTTCAGG TGCAGCAGTC TGGGCCAGAA CTTGTGAAGC CAGGGGCCTC 51 AGTCAAGTTG TCCTGCACAG CTTCTGGCTT CAACATTAAA GACTACTTTA 101 TACACTGGGT GAAGCAGAGG CCTGAACAGG GCCTGGAGTG GATTGGAAGG 151 CTTGATCCTG AGGATGGTGA AAGTGATTAT GCCCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGCCATTATG ACAGCAGACA CATCATCCAA CACAGCCTAT CTTCAGCTCA 251 GAAGCCTGAC ATCTGAGGAC ACTGCCATCT ATTATTGTGA GAGAGAGGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTT nTTCCTTAC TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACTGTCTCT GCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC 401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC 451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC 601 GTCACCTGCA ACGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTGTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701 AAGTATCATC TGTCTTCATC TTCCCCCCAA AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC 1301ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAATGA (SEQ IDNO:122)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-2 incluyendo el peptido senal:

1 MKCSWVIFFL MAWTGVNSE VQVQQSGPEL VKPGASVKLS CTASGFNIKD 51 YFTHWVKQRP EQGLEWIGRL DPEDGESDYA PKFQDKAIMT ADTSSNTAYL 101 QLRSLTSEDT AIYYCEREDY DGTYTFFPYW GQGTLVTVSA AKTTPPSVYP 151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPYTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD 201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKTVPR DCGCKPCICT 251 VPEVSSVFEF PPKPKDVLTITLTPKVTCW VDISKDDPEV QFSWFVDDVE 301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE 351 KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401 NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH 451 NHHTEKSLSH SPGK (SEQ ID NO: 123)

1 ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAG GTTCAGGTGC AGCAGTCTGG GCCAGAACTT GTGAAGCCAG 101 GGGCCTCAGT CAAGTTGTCC TGCACAGCTT CTGGCTTCAA CATTAAAGAC 151 TACTTTATAC ACTGGGTGAA GCAGAGGCCT GAACAGGGCC TGGAGTGGAT 201TGGAAGGCTT GATCCTGAGG ATGGTGAAAG TGATTATGCC CCGAAGTTCC 251AGGACAAGGC CATTATGACA GCAGACACAT CATCCAACAC AGCCTATCTT 301 CAGCTCAGAA GCCTGACATC TGAGGACACT GCCATCTATT ATTGTGAGAG 351 AGAGGACTAC GATGGTACCT ACACCTTTTT TCCTTACTGG GGCCAAGGGA 401 CTCTGGTCAC TGTCTCTGCA GCCAAAACGA CACCCCCATC TGTCTATCCA 451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC CCAAACTAAC TCCATGGTGA CCCTGGGATG

501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG 551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC 601 CTCTACACTC TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG 651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG 701ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA 751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT CTTCATCTTC CCCCCAAAGC CCAAGGATGT 801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA 851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG 901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT 951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA 1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG 1051 AAAACCATCT CCAAAACCAA AGGCAGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC 1101 CATTCCACCT CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT 1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG 1201AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC 1251 AGATGGCTCT TACTTCATCT ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT 1301 GGGAGGCAGG AAATACTTTC ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC 1351AACCACCATA CTGAGAAGAG CCTCTCCCAC TCTCCTGGTA AATGA (SEQ ED NO: 124)

5 Ab-3

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 3 (tambien denominado en el presente documento Ab-3) son las siguientes:

10 Cadena Ligera de Ab-3

Secuencias de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-3:

1- EIVLTQSPAL MAASPGEKVTITCSVSSWSNHEHWFQQK SDTSPKPWIY 51 GTSMASGVP VRFSGSGSGT SYSLTISSME*AEDAATYYCQlQWSS^LfFG 101 AGTKLELEiM DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG ASWCFLNNF YPKDINVKWK 151IDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTL TLTKDEYERHNSYTCEATHE 201 TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:125)

1 GAAATTGTGC TCACCCAGTC TCCAGCACTC ATGGCTGCAT CTCCGGGGGA 51 GAAGGTCACC ATCACCTGCA GTGTCAGTTC AACTATAAGT TCCAACCACT 101 TGCACTGGTT CCAGCAGAAG TCAGACACCT CCCCCAAACC CTGGATTTAT 151 GGCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GTTCGCTTCA GTGGCAGTGG 201 ATCTGGGACC TCTTATTCTC TCACAATCAG CAGCATGGAG GCTGAGGATG 251 CTGCCACTTA TTACTGTCAA CAGTGGAGTA GTTACCCACT CACGTTCGGC 301 GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAGACGGGCT GATGCTGCAC CAACTGTATC 351 CATCTTCCCA CC ATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT GCCTCAGTCG 401 TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT CAAGTGGAAG 451 ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT GGACTGATCA 501 GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC ACGTTGACCA 551 AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC CACTCACAAG 601 ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG AGTGTTAG (SEQ ED NO: 126)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-3 incluyendo el peptido senal:

1 MDFHVQIFSF MLISVTVILS SGEIVLTQSP ALMAASPGEK VTITCSVSST 51ISSNHLHWFQ QKSDTSPKPWIYGTSNLASG VPVRFSGSGS GTSYSLTISS 101 MEAEDAATYY CQQWSSYPLT FGAGTKLELR RADAAPTVSIFPPSSEQLTS 151 GGASWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS 201 TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPIVK SFNRNEC (SEQ ID NO: 127)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-3 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGATTTTC ATGTGCAGAT TTTCAGCTTC ATGCTAATCA GTGTCACAGT 51 CATTTTGTCC AGTGGAGAAA TTGTGCTCAC CCAGTCTCCA GCACTCATGG 101 CTGCATCTCC GGGGGAGAAG GTCACCATCA CCTGCAGTGT CAGTTCAACT 151 ATAAGTTCCA ACCACTTGCA CTGGTTCCAG CAGAAGTCAG ACACCTCCCC 201 CAAACCCTGG ATTTATGGCA CATCCAACCT GGCTTCTGGA GTCCCTGTTC 251 GCTTCAGTGG CAGTGGATCT GGGACCTCTT ATTCTCTCAC AATCAGCAGC 301 ATGGAGGCTG AGGATGCTGC CACTTATTAC TGTCAACAGT GGAGTAGTTA 351 CCCACTCACG TTCGGCGCTG GGACCAAGCT GGAGCTGAGA CGGGCTGATG 401 CTGCACCAAC TGTATCCATC TTCCCACCAT CCAGTGAGCA GTTAACATCT 451 GGAGGTGCCT CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC AACTTCTACC CCAAAGACAT 501 CAATGTCAAG TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA 551 ACAGTTGGAC TGATCAGGAC AGCAAAGACA GCACCTACAG CATGAGCAGC 601 ACCCTCACGT TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG 651 TGAGGCCACT CACAAGACAT CAACTTCACC CATTGTCAAG AGCTTCAACA 701 GGAATGAGTG HAG (SEQ ED NO: 128)

10

Cadena pesada de Ab-3

5

1 EVQLQQSGAE LVRPGALVKL SCTASDFNIK DraHWMRQR PEQGLDWIGR 51 JDPElSl^TLf DEK^^DKATL TTDTSSNTAY LQLSGLTSET TAVYYCSRfc^

101WWGAGTT ITVSSAJrTTP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGSLSSGVHTFPA VLQSDLYTLSSSVTVPSSTW 201PSETVTCNVA HPASSTKVDKEJVPRDCGCKPCICTVPEVS SVFIFPPKPK 251DVLT1TLTPK VTCVWDISKDDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRSVSELPIMHOD WLNGKE FKCR VNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV 351 YTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401DTDGSYFIYS ELNVQKSNWE AGNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK (SEQ ID NO: 129)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-3:

1 GAGGTTCAGC TGCAGCAGTC TGGGGCTGAA CTTGTGAGGC CAGGGGCCTT 51 AGTCAAGTTG TCCTGCACAG CTTCTGACTT CAACATTAAA GACTTCTATC 101 TACACTGGAT GAGGCAGCGG CCTGAACAGG GCCTGGACTG GATTGGAAGG 151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA TACTTTATAT GACCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGCCACTCTT ACAACAGACA CATCCTCCAA CACAGCCTAC CTGCAGCTCA 251 GCGGCCTGAC ATCTGAGACC ACTGCCGTCT ATTACTGTTC TAGAGAGGCG 301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCGC 351 AGGGACCACA ATCACCGTCT CCTCAGCCAA AACGACACCC CCATCTGTCT 401 ATCCACTGGC CCCTGGATCT GCTGCCCAAA CTAACTCCAT GGTGACCCTG 451 GGATGCCTGG TCAAGGGCTA TTTCCCTGAG CCAGTGACAG TGACCTGGAA 501 CTCTGGATCC CTGTCCAGCG GTGTGCACAC CTTCCCAGCT GTCCTGCAGT 551 CTGACCTCTA CACTCTGAGC AGCTCAGTGA CTGTCCCCTC CAGCACCTGG

601 CCCAGCGAGA CCGTcACCTG CAACGTTGCC CACCCGGCCA GCAGCACCAA 651 GGTGGACAAG AAAATTGTGC CCAGGGATTG TGGTTGTAAG CCTTGCATAT 701 GTACAGTCCC AGAAGTATCA TCTGTCTTCA TCTTCCCCCC AAAGCCCAAG 751 GATGTGCTCA CCATTACTCT GACTCCTAAG GTCACGTGTG TTGTGGTAGA 801 CATCAGCAAG GATGATCCCG AGGTCCAGTT CAGCTGGTTT GTAGATGATG 851 TGGAGGTGCA CACAGCTCAG ACGCAACCCC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901ACTTTCCGCT CAGTCAGTGA ACTTCCCATC ATGCACCAGG ACTGGCTCAA 951 TGGCAAGGAG TTCAAATGCA GGGTCAACAG TGCAGCTTTC CCTGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGCA GACCGAAGGC TCCACAGGTG 1051TACACCATTC CACCTCCCAA GGAGCAGATG GCCAAGGATA AAGTCAGTCT 1101 GACCTGCATG ATAACAGACT TCTTCCCTGA AGACATTACT GTGGAGTGGC 1151AGTGGAATGG GCAGCCAGCG GAGAACTACA AGAACACTCA GCCCATCATG 1201 GACACAGATG GCTCTTACTT CATCTACAGC AAGCTCAATG TGCAGAAGAG 1251 CAACTGGGAG GCAGGAAATA CTTTCACCTG CTCTGTGTTA CATGAGGGCC 1301 TGCACAACCA CCATACTGAG AAGAGCCTCT CCCACTCTCC TGGTAAATGA (SEQ ED NO: 130)

1 MKCSWVIFFL MAWTGVNSE VQLQQSGAEL VRPGALVKLS CTASDFNIKD 51 FYLHWMRQRP EQGLDWIGRIDPENGDTLYD PKFQDKATLT TDTSSNTAYL 101 QLSGLTSETT AVYYCSREAD YFHDGTSYWY FDVWGAGTTITVSSAKTTPP 151 SYYPLAPGSA AQTNSMVTLG CLVKGYFPEP VTVTWNSGSL SSGVHTFPAV 201 LQSDLYTLSS SYTVPSSTWP SETVTCNVAH PASSTKVDKKIVPRDCGCKP 251 CICTVPEVSS VFIFPPKPKD VLTITLTPKV TGWVDISKD DPEVQFSWFV 301 DDVEVHTAQT QPREEQFNST FRSVSELPIM HQDWLNGKEF KCRVNSAAFP 351 APIEKTISKT KGRPKAPQVY TIPPPKEQMA KDKVSLTCMITDFFPEDITV 401 EWQWNGQPAE NYKNTQPMD TDGSYFIYSK LNVQKSNWEA GNTFTCSVLH 451 EGLHNHHTEK SLSHSPGK (SEQ ID NO: 131)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-3 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCITCCTG ATGGC AGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAG GTTCAGCTGC AGCAGTCTGG GGCTGAACTT GTGAGGCCAG 101 GGGCCTTAGT CAAGTTGTCC TGCACAGCTT CTGACTTCAA CATTAAAGAC 151 TTCTATCTAC ACTGGATGAG GCAGCGGCCT GAACAGGGCC TGGACTGGAT 201 TGGAAGGATT GATCCTGAGA ATGGTGATAC TTTATATGAC CCGAAGTTCC 251 AGGACAAGGC CACTCTTACA ACAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTG 301 CAGCTCAGCG GCCTGACATC TGAGACCACT GCCGTCTATT ACTGTTCTAG 351 AGAGGCGGAT TATTTCCACG ATGGTACCTC CTACTGGTAC TTCGATGTCT 401 GGGGCGCAGG GACCACAATC ACCGTCTCCT CAGCCAAAAC GACACCCCCA 451 TCTGTCTATC CACTGGCCCC TGGATCTGCT GCCCAAACTA ACTCCATGGT 501 GACCCTGGGA TGCCTGGTCA AGGGCTATTT CCCTGAGCCA GTGACAGTGA 551 CCTGGAACTC TGGATCCCTG TCCAGCGGTG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTGCAGTCTG ACCTCTACAC TCTGAGCAGC TCAGTGACTG TCCCCTCCAG 651 CACCTGGCCC AGCGAGACCG TCACCTGCAA CGTTGCCCAC CCGGCCAGCA 701 GCACCAAGGT GGACAAGAAA ATTGTGCCCA GGGATTGTGG TTGTAAGCCT 751TGCATATGTA CAGTCCCAGA AGTATCATCT GTCTTCATCT TCCCCCCAAA 801 GCCCAAGGAT GTGCTCACCA TTACTCTGAC TCCTAAGGTC ACGTGTGTTG 851 TGGTAGACAT CAGCAAGGAT GATCCCGAGG TCCAGTTCAG CTGGTTTGTA 901 GATGATGTGG AGGTGCACAC AGCTCAGACG CAACCCCGGG AGGAGCAGTT 5 951 CAACAGCACT TTCCGCTCAG TCAGTGAACT TCCCATCATG CACCAGGACT

1001 GGCTCAATGG CAAGGAGTTC AAATGCAGGG TCAACAGTGC AGCTTTCCCT 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGCAGAC CGAAGGCTCC 1101 ACAGGTGTAC ACCATTCCAC CTCCCAAGGA GCAGATGGCC AAGGATAAAG 1151 TCAGTCTGAC CTGCATGATA ACAGACTTCT TCCCTGAAGA CATTACTGTG 1201 GAGTGGCAGT GGAATGGGCA GCCAGCGGAG AACTACAAGA ACACTCAGCC 1251 CATCATGGAC ACAGATGGCT CTTACTTCAT CTACAGCAAG CTCAATGTGC 1301 AGAAGAGCAA CTGGGAGGCA GGAAATACTT TCACCTGCTC TGTGTTACAT 1351 GAGGGCCTGC ACAACCACCA TACTGAGAAG AGCCTCTCCC ACTCTCCTGG 1401 TAAATGA (SEQ ID NO: 132)

Ab-4

10

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 4 (tambien denominado en el presente documento Ab-4) son las

5

10

15

siguientes:

Cadena Ligera de Ab-4

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-4:

1 DIQMTQITSS LSASLGDRVS ISC^SQDlpTO^WYQQKP DGTFKLLIFp 51 TSRfLSGVPS RFSGSGSGTD Y SLTIYNLEQEDFATWCQQ GDTLPYTFGG 101GTKLESKRADAAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEA THKT 201STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO:133)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-4:

1 GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGC AAGTCA AGAC ATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 134)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-4 incluyendo el peptido senal:

1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQUSS LSASLGDRVS ISCRASQDIS 51NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 135)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-4 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT

101 CTCTGGGAUA (JAUU^rCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQ ID NO: 136)

Cadena Pesada de Ab-4

5 Secuencias de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-4:

1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYMfflWVKQN QGKTLEWIGE 51 |Cf}PiS^(^.NQjp^ATL TVDKSSTTAY MEIJRSLTSED SAVYYCARfcp “ 101 TOfeOD^^pyWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVJITFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPIMH ODWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTOPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ED NO: 137)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-4:

1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGAGTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC

T6 XfT Cib'XCCT C"CC AAGGAGC A GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO: 138) .

5 Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-4 incluyendo el peptido senal:

1MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYILSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKTV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO:139) .

10

1ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGAGTGGAT 201AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca CCTTCCCAGC tgtcctgcag 601TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT gtgcagaaga 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACITTCACCT GCTCTGTQTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG

IM!X(SfiQTtTR(J:RO)

Ab-4 se humanizo para generar Ab-5. 5

Ab-5

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 5 (tambien denominado en el presente documento Ab-5) son las siguientes:

10

Cadena Ligera de Ab-5

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-5:

1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCI^SQDIS^HWYQQKP GKAPKLLIYY. 51TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC^GDtLPYWGG 101 GTKVEIOTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SWCLLNNFYPREAKVQ WKV 151DNALQSGNSQ ESVWQDSKD STYSLSSTL T LSKAD YEKHK VYACEVTHQG 201LSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 141)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-5:

1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCCGCAT CCGTAGGCGA 51 CCGCGTAACC ATAACATGTA GAGCATCTCA AGATATTTCC AACTATTTGA 101 ATTGGTACCA ACAAAAACCC GGCAAAGCAC CTAAACTCCT CATTTACTAT 151ACATCAAGAC TCCTCTCCGG CGTTCCATCA CGATTCTCAG GCTCCGGCTC 201 CGGCACAGAT TTCACACTCA CTATTTCCTC CCTCCAACCA GAAGATTTTG 251 CAACCTATTA CTGTCAACAA GGCGATACAC TCCCATACAC ATTCGGCGGC 301 GGCACAAAAG TTGAAATTAA ACGTACGGTG GCTGCACCAT CTGTCTTCAT 351 CTTCCCGCCA TCTGATGAGC AGTTGAAATC TGGAACTGCC TCTGTTGTGT 401 GCCTGCTGAA TAACTTCTAT CCCAGAGAGG CCAAAGTACA GTGGAAGGTG 451 GATAACGCCC TCCAATCGGG TAACTCCCAG GAGAGTGTCA CAGAGCAGGA 501 CAGCAAGGAC AGCACCTACA GCCTCAGCAG CACCCTGACG CTGAGCAAAG 551 CAGACTACGA GAAACACAAA GTCTACGCCT GCGAAGTCAC CCATCAGGGC 601 CTGAGCTCGC CCGTCACAAA GAGCTTCAAC AGGGGAGAGT GT (SEQ ID NO: 142) •

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-5 incluyendo el peptido senal:

1 MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VHTCRASQD 51ISNYLNWYQQ KPGKAPKLLIYYTSRLLSGV PSRFSGSGSG TDFTLHSSL 101 QPEDFATYYC QQGDTLPYTF GGGTKVEIKR TVAAPSYFIF PPSDEQLKSG 151 TASWCLLNN FYPREAKV QW KVDNALQSGN SQESVTEQDS KDSTYSLSST 201 LTLSKADYEK HKVYACEVTH QGLSSPVTKS FNRGEC (SEQ ID NO:143)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-5 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

10

1 ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTCT 101 CCGCATCCGT AGGCGACCGC GTAACCATAA CATGTAGAGC ATCTCAAGAT 151 ATTTCCAACT ATTTGAATTG GTACCAACAA AAACCCGGCA AAGCACCTAA 201 ACTCCTCATT TACTATACAT CAAGACTCCT CTCCGGCGTT CCATCACGAT 251 TCTCAGGCTC CGGCTCCGGC ACAGATTTCA CACTCACTAT TTCCTCCCTC 301 CAACCAGAAG ATTTTGCAAC CTATTACTGT CAACAAGGCG ATACACTCCC 351 ATACACATTC GGCGGCGGCA CAAAAGTTGA AATTAAACGT ACGGTGGCTG 401 CACCATCTGT CTTCATCTTC CCGCCATCTG ATGAGCAGTT GAAATCTGGA 451 ACTGCCTCTG TTGTGTGCCT GCTGAATAAC TTCTATCCCA GAGAGGCCAA

50 lAGTA^GfGG XAGGTGGATA ACGCCCTCCA ATCGGGTAAC TCCCAGGAGA 551 GTGTCACAGA GCAGGACAGC AAGGACAGCA CCTACAGCCT CAGCAGCACC 601 CTGACGCTGA GCAAAGCAGA CTACGAGAAA CACAAAGTCT ACGCCTGCGA 651 AGTCACCCAT CAGGGCCTGA GCTCGCCCGT CACAAAGAGC TTCAACAGGG 701 GAGAGTGT (SEQ ED NO: 144)

Cadena Pesada de Ab-5

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-5: 15

imagen6

151LVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSS WTVPSSNFG 201 TQTYTCNVDH KPSNTKVDKT VERKCCVECP PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK 251DTLMISRTPE VTCVWDVSHEDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS 301 TFRWSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PAPJEKTISKTKGQPREPQV 351 YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPML 401DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTO KSLSLSPGK (SEQ IDNO:145)

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-5 sin lisina carboxi-terminal:

imagen7

101 ¥DDp®DWYF,DWGQGTTVT VSSASTKGPS VFPLAPCSRS TSESTAALGC 151LVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPA VL QSSGLYSLSS WTVPSSNFG 201 TQTYTCNVDH KPSNTKVDKT VERKCCVECP PCPAPPVAGP SVFLFPPKPK 251 DTLMISRTPE VTCVWDVSH EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS 301 TFRWSVLTV VHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PAPIEKTISK TKGQPREPQV 351 YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPML 401 DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ 5 IDNO:392)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-5:

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTAAAAAAAC CAGGAGCAAG 51 CGTTAAAGTT TCTTGTAAAG CAAGCGGATA TACATTTACA GATTACAACA 101 TGCATTGGGT AAGACAAGCG CCAGGACAAG GATTGGAATG GATGGGCGAA 151 ATTAACCCTA ATAGTGGAGG AGCAGGCTAC AATCAAAAAT TCAAAGGGAG 201AGTTACAATG ACAACAGACA CAAGCACTTC AACAGCATAT ATGGAACTGC 251 GATCACTTAG AAGCGACGAT ACAGCTGTAT ACTATTGCGC ACGACTTGGG 301TATGATGATA TATATGATGA CTGGTATTTC GATGTTTGGG GCCAGGGAAC 351AACAGTTACC GTCTCTAGTG CCTCCACCAA GGGCCCATCG GTCTTCCCCC 401 TGGCGCCCTG CTCCAGGAGC ACCTCCGAGA GCACAGCGGC CCTGGGCTGC 451 CTGGTCAAGG ACTACTTCCC CGAACCGGTG ACGGTGTCGT GGAACTCAGG 501 CGCTCTGACC AGCGGCGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTA CAGTCCTCAG 551 GACTCTACTC CCTCAGCAGC GTGGTGACCG TGCCCTCCAG CAACTTCGGC 601ACCCAGACCT ACACCTGCAA CGTAGATCAC AAGCCCAGCA ACACCAAGGT 651 GGACAAGACA GTTGAGCGCA AATGTTGTGT CGAGTGCCCA CCGTGCCCAG 701CACCACCTGT GGCAGGACCG TCAGTCTTCC TCTTCCCCCC AAAACCCAAG

751 GACACCCTCATGATCTCCCG GACCCCTGAG GTCACGTGCG TGGTGGTGGA 801 CGTGAGCCAC GAAGACCCCG AGGTCCAGTT CAACTGGTAC GTGGACGGCG 851 TGGAGGTGCA TAATGCCAAG ACAAAGCCAC GGGAGGAGCA GTTCAACAGC 901 ACGTTCCGTG TGGTCAGCGT CCTCACCGTT GTGCACCAGG ACTGGCTGAA 951 CGGCAAGGAG TACAAGTGCA AGGTCTCCAA CAAAGGCCTC CCAGCCCCCA 1001 TCGAGAAAAC CATCTCCAAA ACCAAAGGGC AGCCCCGAGA ACCACAGGTG 1051 TACACCCTGC CCCCATCCCG GGAGGAGATG ACCAAGAACC AGGTCAGCCT 1101 GACCTGCCTG GTCAAAGGCT TCTACCCCAG CGACATCGCC GTGGAGTGGG 1151 AGAGCAATGG GCAGCCGGAG AACAACTACA AGACCACACC TCCCATGCTG 1201 GACTCCGACG GCTCCTTCTT CCTCTACAGC AAGCTCACCG TGGACAAGAG 1251 CAGGTGGCAG CAGGGGAACG TCTTCTCATG CTCCGTGATG CATGAGGCTC 1301 TGCACAACCA CTACACGCAG AAGAGCCTCT CCCTGTCTCC GGGTAAA (SEQ ID NO: 146)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-5 incluyendo el peptido senal:

1MDWTWRELFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEY KKPGASVKVS CKASGYTFTD 51 YNMHWVRQAP GQGLEWMGEINPNSGGAGYN QKFKGRVTMT TDTSTSTAYM 101 ELRSLRSDDT AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGQGTTVTV SSASTKGPSV 151 FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ 201 SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYT CNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP 251 CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVWDVSHE DPEVQFNWYV 301 DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRWSYLTW HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP 351 APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV 401 EWESNGQPEN NYKTTPPMLD SDGSFFLY SK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH 451 EALHNHYTQK SLSLSPGK (SEQ ID NO: 147)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-5 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGAGCGG CGCCGAGGTA AAAAAACCAG 101 GAGCAAGCGT TAAAGTTTCT TGTAAAGCAA GCGGATATAC ATTTACAGAT 151 TACAACATGC ATTGGGTAAG ACAAGCGCCA GGACAAGGAT TGGAATGGAT 201 GGGCGAAATT AACCCTAATA GTGGAGGAGC AGGCTACAAT CAAAAATTCA 251 AAGGGAGAGT TACAATGACA ACAGACACAA GCACTTCAAC AGCATATATG 301 GAACTGCGAT CACTTAGAAG CGACGATACA GCTGTATACT ATTGCGCACG 351 ACTTGGGTAT GATGATATAT ATGATGACTG GTATTTCGAT GTTTGGGGCC 401 AGGGAACAAC AGTTACCGTC TCTAGTGCCT CCACCAAGGG CCCATCGGTC 451TTCCCCCTGG CGCCCTGCTC CAGGAGCACC TCCGAGAGCA CAGCGGCCCT 501 GGGCTGCCTG GTCAAGGACT ACTTCCCCGA ACCGGTGACG GTGTCGTGGA 551ACTCAGGCGC TCTGACCAGC GGCGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTACAG 601TCCTCAGGAC TCTACTCCCT CAGCAGCGTG GTGACCGTGC CCTCCAGCAA 651 CTTCGGCACC CAGACCTACA CCTGCAACGT AGATCACAAG CCCAGCAACA 701 CCAAGGTGGA CAAGACAGTT GAGCGCAAAT GTTGTGTCGA GTGCCCACCG 751 TGCCCAGCAC CACCTGTGGC AGGACCGTCA GTCTTCCTCT TCCCCCCAAA 801 ACCCAAGGAC ACCCTCATGA TCTCCCGGAC CCCTGAGGTC ACGTGCGTGG 851 TGGTGGACGT GAGCCACGAA GACCCCGAGG TCCAGTTCAA CTGGTACGTG 901 GACGGCGTGG AGGTGCATAA TGCCAAGACA AAGCCACGGG AGGAGCAGTT 951 CAACAGCACG TTCCGTGTGG TCAGCGTCCT CACCGTTGTG CACCAGGACT 1001 GGCTGAACGG CAAGGAGTAC AAGTGCAAGG TCTCCAACAA AGGCCTCCCA 1051 GCCCCCATCG AGAAAACCAT CTCCAAAACC AAAGGGCAGC CCCGAGAACC

1101 ACAGGTGTAC ACCCTGCCCC CATCCCGGGA GGAGATGACC AAGAACCAGG 1151 TCAGCCTGAC CTGCCTGGTC AAAGGCTTCT ACCCCAGCGA CATCGCCGTG 1201 GAGTGGGAGA GCAATGGGCA GCCGGAGAAC AACTACAAGA CCACACCTCC 1251 CATGCTGGAC TCCGACGGCT CCTTCTTCCT CTACAGCAAG CTCACCGTGG 1301 ACAAGAGCAG GTGGCAGCAG GGGAACGTCT TCTCATGCTC CGTGATGCAT 1351 GAGGCTCTGC ACAACCACTA CACGCAGAAG AGCCTCTCCC TGTCTCCGGG 1401 TAAA (SEQ ID NO: 148)

5 Dominios variables de Ab-5:

Secuencia de aminoacidos del dominio variable de cadena ligera de Ab-5 (sin secuencia senal):

1DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQI)isSYI2fWYQQKP GKAPKLLIYY 51 TSRBLfSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC|QQ^ GDlUPVTFGG 10rGTKVEIK(SEQIDNO:376) . ...................

10

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena ligera de Ab-5 (sin secuencia senal):

1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCCGCAT CCGTAGGCGA 51 CCGCGTAACC ATAACATGTA GAGCATCTCA AGATATTTCC AACTATTTGA 101ATTGGTACCA ACAAAAACCC GGCAAAGCAC CTAAACTCCT CATTTACTAT 151 ACATCAAGAC TCCTCTCCGG CGTTCCATCA CGATTCTCAG GCTCCGGCTC 201 CGGCACAGAT TTCACACTCA CTATTTCCTC CCTCCAACCA GAAGATTTTG 251 CAACCTATTA CTGTCAACAA GGCGATACAC TCCCATACAC ATTCGGCGGC 301 GGCACAAAAG TTGAAATTAA A (SEQ ID NO:377)

5

10

15

20

25

30

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de la cadena pesada de Ab-5 (sin secuencia senal):

imagen8

imagen9

La secuencia de ADN de dominio variable de cadena pesada de Ab-5 (sin secuencia senal):

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTAAAAAAAC CAGGAGCAAG 51 CGTTAAAGTT TCTTGTAAAG CAAGCGGATA TACATTTACA GATTACAACA 101 TGCATTGGGT AAGACAAGCG CCAGGACAAG GATTGGAATG GATGGGCGAA 151ATTAACCCTA ATAGTGGAGG AGCAGGCTAC AATCAAAAAT TCAAAGGGAG 201AGTTACAATG ACAACAGACA CAAGCACTTC AACAGCATAT ATGGAACTGC 251 GATCACTTAG AAGCGACGAT ACAGCTGTAT ACTATTGCGC ACGACTTGGG 301 TATGATGATA TATATGATGA CTGGTATTTC GATGTTTGGG GCCAGGGAAC 351AACAGTTACC GTCTCTAGT (SEQ ID NO:379)

Las secuencias de CDR (region determinante de complementariedad) en la region variable de la cadena pesada de Ab-5 son las siguientes:

CDR-H1: DYNMH (SEQ ID NO: 245)

CDR-H2: EINPNSGGAGYNQKFKG (SEQ ID NO: 246)

CDR-H3: LGYDDIYDDWYFDV (SEQ ID NO: 247)

Las secuencias de CDR de region variable de la cadena ligera de Ab-5 son:

CDR-L1: RASQDISNYLN (SEQ ID NO: 78)

CDR-L2: YTSRLLS (SEQ ID NO: 79)

CDR-L3: QQGDTLPYT (SEQ ID NO: 80)

Ab-6

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 6 (tambien denominado en el presente documento Ab-6) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-6

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-6:

1 DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISClASQDIS^JgWFQQKP DGTLKLLIFpl 51 piSRpiSGVPS RFSGSGSGTP YSLTISNLEQ EDIATYFCQ^GDttfYXFGG 101 GTKLEIR/L4D AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFYPIWINVKWKl 151DGSERONGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEA THKT 201STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 149)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-6:

5

1 GATATCCAGA TGACACAGAC TAC ATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTTTCA GCAGAAACCA GATGGAACTC TTAAACTCCT GATCTTCTAC 151ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTTCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAGCAA GAAGATATTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGGGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAG ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 150)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-6 incluyendo el peptido senal:

1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVTISCRASQDIS 51NYLNWFQQKP DGTLKLLIFY TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ 101EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIRRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWRIDGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 151)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-6 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTTTCA GCAGAAACCA GATGGAACTC TTAAACTCCT 201 GATCTTCTAC ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTTCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATATTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC 351 GTTCGGGGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAG ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQ ID NO: 152)

Cadena Pesada de Ab-6

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-6:

1 ^ ^ ^ .

51 ]^ns¥gsgy;nqkfkg1kaix tvdkssstay melrsltsed savyycar£^

101 ^jSSYEft’^TODYWGAG'l’TVT YSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPV TVTWNSGSLS SGVHTFPA VL QSDLTTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPEAPQVYT 351TPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID NO: 153)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-6:

1 GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAACAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAGTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TAGTGGCTAC AACCAAAAGT TCAAAGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCTTCCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGTC 301 TACGATGGCA GCTACGAGGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC

’'■'9(Ti ^(jfcTCMtC'A GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAQTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO: 154)

10

5

1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKSLEWIGEINPNSQGSGYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLVY DGSYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO:155)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-6 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

5

1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA ACAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAGTGGAT 201AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTAG TGGCTACAAC CAAAAGTTCA 251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CTTCCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGTCTAC GATGGCAGCT ACGAGGACTG GTACTTCGAT QTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT

n’i25'i "G(jrXcX'cX'GAf GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT gtgcagaaga

1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ ID NO: 156)

Ab-7

10 Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 7 (tambien denominado en el presente documento Ab-7) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-7

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-7:

5

imagen10

101 GTKLEIKZWD AAPTVSIFPP SSEOLTSGGA SWCFLNNFYPKDINVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTEDEYERHN SYTCEA THKT 201STSPTVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 157)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-7:

1 GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCTGTTGCA GGGCAAGTCA GGTCATTACC AATTATTTAT 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT GATCTACTAC 151 ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAACAG GAAGATATTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACQACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GT (SEQ ID NO:158)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-7 incluyendo el peptido senal:

1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVTICCRASQVIT 51NYLYWYQQKP DGTFKLLIYY TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ 101 EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO:159)

15 Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-7 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCTGTTGCA GGGCAAGTCA GGTCATTACC 151 AATTATTTAT ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 GATCTACTAC ACATCAAGAT TACACTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTAGCAA CCTGGAACAG 301 GAAGATATTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC

351 GTTCGGAGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA QAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GT (SEQ ED NO: 160)

Cadena Pesada de Ab-7

5 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-7:

1 EyQLQQSGPELlvpCPGASVKM SCKASGYTFT DY^MHWMKQN QGKSLEWIGE

51INPNSGGAGY NQQFKGKATl TVDKSSRTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG 10 rYyGNYEDMnG7 DVWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC

151LVKGYFPEPV TVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEOFNSTF 301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTKGRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID NO:161)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-7:

10

1 GAGGTCCAGC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGAT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAATG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGCAGT TCAAAGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAG GACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGTTGGTA ATTACGAGGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TQAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTQTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA

imagen11

5 Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-7 incluyendo el peptido senal:

1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWMKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGAGYN QQFKGKATLT VDKSSRTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY VGNYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRPCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 163)

10

1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGCTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGATGAA GCAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAATGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGCAGTTCA 251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCAGGAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC GTTGGTAATT ACGAGGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG AGTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001 ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAA

(SEQ IDNO:164)

Ab-8

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 8 (tambien denominado en el presente documento Ab-8) son las 5 siguientes:

Cadena Ligera de Ab-8

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido serial retirado) de la LC de Ab-8:

10 __ __

1 DIQMTQTTSS LSASLGDRVSISCRASQDIS NYLNWYQQP DGTFKLLIFYj

51 ITSRIXSJ3VPS RFSGSGSGTD YSLTIYNLEQ EDFATYFCQQGDTLPYfFGG

101 GTKLEIK/MD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFY PKDINVKWKI

151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLTL TKDEYERHN SYTCEA THKT

201STSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO: 165)

5

1 GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC AATTATTTAA 101ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 166)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-8 incluyendo el peptido senal:

1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS LSASLGDRVSISCRASQDIS 51 NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLUYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWKIDGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 167)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-8 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQ ID NO:168)

Cadena Pesada de Ab-8

1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKTLDWIGE 51INPNSGGAGY NQKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSED SAVYYCARLG " 101YDDIYDDWYF DYWGAGTTVT YSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 291ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEA G NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID

NO: 169)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-8:

1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGACTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT gtgcccaggg attgtggttg TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID 5 NO: 170)

1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQNQ GKTLDWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSY 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKQYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ

' 201 SDWtLsSW tvpsstwpse tvtcnvahpa sstkvdkkiv prdcgckpci

251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL UTLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVY1IPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 171)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-8 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

5

1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTQAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGACTGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAQA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ ID NO: 172)

Ab-9

10 Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 9 (tambien denominado en el presente documento Ab-9) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-9

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-9:

5

imagen12

101 GTKVEIK&4D AAPTVSIFPP SSEOLTSGGA SVVCFLNNFY PKDINVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDE YERHN SYTCEA THKT 201STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 173)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-9:

1 GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA gggcaagtca AGACATTAGC AATTATTTAA 101 ATTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151 ACATCAAGAT TATTTTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGG TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GT (SEQ ID NO: 174)

10

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-9 incluyendo el peptido senal:

1MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQITSS LSASLGDRVSISCRASQDIS 51NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLFSGVPS RFSGSGSGTD YSLTTYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKVEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SVVCFLNNFY PKDINVKWKI DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 175)

15 Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-9 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAT TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ATTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TATTTTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAQGG GGGACCAAGG TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GT (SEQEDNQ:176)

Cadena Pesada de Ab-9

5 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-9:

1 EVQLQQSGPE LMKPGTSVKM SCKASGYTFT DYNIvfiiWVKQT QGKTLEWIGE 51 teNS^GAMNQKPKGlKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSED SAVYYCAKLp" 101 YDDIYDD^YF DWGAGTTVT vssakttaps vyplapvcgd ttgssvtlgc 151L VKGYFPEPV TLTWNSGSLS SB VHTFPALL QSGLYTLSSS VTVTTWPSQT 201ITCNVAHPAS STKVDKKIEP R GSPTHKPCP PCPAPNLLGG PSVFIFPPKI 251KDVLM1SLSPMVTCVWDVS EDDPDVHVSWFVNNVEVHTA QTQTHREDYN

SfiKWsMflQHQPWMSGKEFKCKVNNKA LPAPIERTIS KPKGPVRAPO VYVLP LDSDG

(SEQ ID NO:

VYVLPPPEEE MTKKQ VTL TC MITD FMPEDIYVEWTNNGQT ELNYKNTEPV 401LDSDGSYFMY SKLR VEKKNW VERNSYSCSV VHEGLHNHHT TKSFSRTPGK

10

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-9:

1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGACTTC 51AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGACC CAAGGAAAGA CCCTAGAQTG GATAGGAGAA 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAAATTGGGC 301 TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTATTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACAAC AGCCCCATCG GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGT GTGTGGAGAT ACAACTGGCT CCTCGGTGAC TCTAGGATGC 451 CTGGTCAAGG GTTATTTCCC TGAGCCAGTG ACCTTGACCT GGAACTCTGG 501ATCCCTGTCC AGTGATGTGC ACACCTTCCC AGCTCTCCTG CAGTCTGGCC 551 TCTACACCCT CAGCAGCTCA GTGACTGTAA CCACCTGGCC CAGCCAGACC 601 ATCACCTGCA ATGTGGCCCA CCCGGCAAGC AGCACCAAAG TGGACAAGAA 651 AATTGAGCCC AGAGGGTCCC CAACACATAA ACCCTGTCCT CCATGCCCAG 701 CTCCTAACCT CTTGGGTGGA CCATCCGTCT TCATCTTCCC TCCAAAGATC 751 AAGGATGTAC TCATGATCTC CCTGAGCCCC ATGGTCACGT GTGTGGTGGT 801 GGATGTGAGC GAGGATGACC CAGATGTCCA TGTCAGCTGG TTCGTGAACA 851ACGTGGAAGT ACACACAGCT CAGACACAAA CCCATAGAGA GGATTACAAC 901 AGTACTATCC GGGTGGTCAG TGCCCTCCCC ATCCAGCACC AGGACTGGAT 951 GAGTGGCAAG GAGTTCAAAT GCAAGGTCAA CAACAAAGCC CTCCCAGCGC 1001 CCATCGAGAG AACCATCTCA AAACCCAAAG GGCCAGTAAG AGCTCCACAG 1051 GTATATGTCT TGCCTCCACC AGAAGAAGAG ATGACTAAGA AACAGGTCAC 1101 TCTGACCTGC ATGATCACAG ACTTCATGCC TGAAGACATT TACGTGGAGT f 1151 GGACCAACAA CGGGCAAACA GAGCTAAACT ACAAGAACAC TGAACCAGTC 1201 CTGGACTCTG ATGGTTCTTA CTTCATGTAC AGCAAGCTGA GAGTGGAAAA 1251 GAAGAACTGG GTGGAAAGAA ATAGCTACTC CTGTTCAGTG GTCCACGAGG 1301 GTCTGCACAA TCACCACACG ACTAAGAGCT TCTCCCGGAC TCCGGGTAAA (SEQIDNO:178)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-9 incluyendo el peptido senal:

1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGTSVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWVKQTQ GKTLEWIGEINPNSGQAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCAKLGY DDIYDDWYFD YWGAGTTVTV SSAKTTAPSV 151 YPLAPVCGDT TGSSVTLGCL VKGYFPEPVT LTWNSGSLSS DVHTFPALLQ 201 SGLYTLSSSV TVTTWPSQTITCNVAHPASS TKVDKfGEPR GSPTHKPCPP 251 CPAPNLLGGP SVFIFPPKIK DVLMISLSPM VTCVWDVSE DDPDVHVSWF 301 VNNVEVHTAQ TQTHREDYNS TTRVYSALPIQHQDWMSGKE FKCKVNNKAL 3 51 PAPIERTISK PKGPVRAPQV YVLPPPEEEM TKKQVTLTCMITDFMPEPIY 401 VEWTNNGQTE LNYKNTEPVL DSDGSYFMYS KLRVEKKNWV ERNSYSCSW 5 451 HEGLHNHHTT KSFSRTPGK (SEQ ID NO: 179)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-9 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG

101 GGACTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGACCCAA GGAAAGACCC TAGAGTGGAT 201AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAA 351 ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTATTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACAACAGC CCCATCGGTC 451TATCCACTGG CCCCTGTGTG TGGAGATACA ACTGGCTCCT CGGTGACTCT 501AGGATGCCTG GTCAAGGGTT ATTTCCCTGA GCCAGTGACC TTGACCTGGA 551ACTCTGGATC CCTGTCCAGT GATGTGCACA CCTTCCCAGC TCTCCTGCAG 601 TCTGGCCTCT ACACCCTCAG CAGCTCAGTG ACTGTAACCA CCTGGCCCAG 651 CCAGACCATC ACCTGCAATG TGGCCCACCC GGCAAGCAGC ACCAAAGTGG 701ACAAGAAAAT TGAGCCCAGA GGGTCCCCAA CACATAAACC CTGTCCTCCA 751 TGCCCAGCTC CTAACCTCTT GGGTGGACCA TCCGTCTTCA TCTTCCCTCC 801AAAGATCAAG GATGTACTCA TGATCTCCCT GAGCCCCATG GTCACGTGTG 851 TGGTGGTGGA TGTGAGCGAG GATGACCCAG ATGTCCATGT CAGCTGGTTC 901GTGAACAACG TGGAAGTACA CACAGCTCAG ACACAAACCC ATAGAGAGGA 951 TTACAACAGT ACTATCCGGG TGGTCAGTGC CCTCCCCATC CAGCACCAGG 1001ACTGGATGAG TGGCAAGGAG TTCAAATGCA AGGTCAACAA CAAAGCCCTC 1051 CCAGCGCCCA TCGAGAGAAC CATCTCAAAA CCCAAAGGGC CAGTAAGAGC 1101 TCCACAGGTA TATGTCTTGC CTCCACCAGA AGAAGAGATG ACTAAGAAAC 1151AGGTCACTCT GACCTGCATG ATCACAGACT TCATGCCTGA AGACATTTAC 1201 GTGGAGTGGA CCAACAACGG GCAAACAGAG CTAAACTACA AGAACACTGA 1251ACCAGTCCTG GACTCTGATG GTTCTTACTT CATGTACAGC AAGCTGAGAG 1301TGGAAAAGAA GAACTGGGTG GAAAGAAATA GCTACTCCTG TTCAGTGGTC 1351 CACGAGGGTC TGCACAATCA CCACACGACT AAGAGCTTCT CCCGGACTCC 1401 GGGTAAA (SEQ ED NO: 180)

Ab-10

5

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 10 (tambien denominado en el presente documento Ab-10) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-10

10 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-10:

imagen13

15

1 GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT TATCTTCTAC 151ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA GAAGATTTTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC TTTCGGAGGG 301 GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACTA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT

451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 182)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-10 incluyendo el peptido senal:

5

1 MMSSAQFLGL LLLCFQGTRC DIQMTQTTSS ESASLGDRVSISCRASQDIS 51NYLNWYQQKP DGTFKLLIFY TSRLLSGVPS RFSGSGSGTD YSLTTYNLEQ 101 EDFATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPL SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWKIDGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 183)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-10 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TACCAGATGT GATATCCAGA TGACACAGAC TACATCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGGGTCTCC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA AGACATTAGC 151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTT TTAAACTCCT 201 TATCTTCTAC ACATCAAGAT TACTCTCAGG AGTCCCATCA AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAGAT TATTCTCTCA CCATTTACAA CCTGGAGCAA 301 GAAGATTTTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGAGATACGC TTCCGTACAC 351 TTTCGGAGGG GGGACCAAAC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACTA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 0 701 GTTAG (SEQ ID NO: 184)

Cadena Pesada de Ab-10

15

5

10

1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNptWVKQN QGKTLEWIGE 51 p^fG(|AG|: NgKFKGKATL TVDKSSTTAY MELRSLTSED SAVYYCARiJ

101 YDDIY^DWYF DVjWGAGTTVT VSSAKTTPPS VYPLAPGSAA QTNSMVTLGC 151LVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVVVDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEQFNSTF 301RSVSELPMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPQVYT 351IPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTOPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEAG NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ID NO: 185)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-10:

1 GAGGTCCAAC TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA TACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGGT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA CCCTAGAATG GATAGGAGAA

illATTAATCCTAACAGTGGTGG TGCTGGCTAC AACCAGAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAC CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301TACGATGATA TCTACGACGA CTGGTACTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCAG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATQGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT GATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA GTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG 1101 CATGATAACA GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151 ATGGGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO: 186)

1 MGWSWTFLFL LSGTAGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51YNMHWVKQNQ GKTLEWIGEINPNSGGAGYN QKFKGKATLT VDKSSTTAYM 101 EERSLTSEDS AVYYCARLGY DDIYDDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151 YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRJDCGCKPCI 251 CTVPEVSSVFIFPPKPKDVL TITLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITP FFPEPITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN VQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO: 187)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-10 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTC AGGAA CTGCAGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAACTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATATAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGGTGAA GCAGAACCAA GGAAAGACCC TAGAATGGAT 201 AGGAGAAATT AATCCTAACA GTGGTGGTGC TGGCTACAAC CAGAAGTTCA 251AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCACCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351ATTGGGCTAC GATGATATCT ACGACGACTG GTACTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCAGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TGGTGACCCT 5 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA

m«i ****** MiUtr H«NI* tun*1 u Mtiw* ___

551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 GCCCAGCGAG ACCGTCACCT GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA ggtcacgtgt gttgtggtag 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151 TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG QGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ ID NO: 188)

Ab-11

10

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 11 (tambien denominado en el presente documento Ab-11) son las siguientes:

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-11:

1 QIVLSQSPAF LSVSPGDKVT MTC^SSSIS^iHWFQQKPG SSPRSWIYAE 51 SNEA^GVPGR FSGSGSGTSY SLTISRVEAE DAATYYC^#T^MLlFGAG 101 TKLELKM04 APTVSIFPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYP KDINVKWKID 151 GSERQNGVLNSWTDODSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC (SEQ ID NO: 189)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-11:

1 CAAATTGTTC TCTCCCAGTC TCCAGCATTC CTQTCTGTAT CTCCAQGGGA 51 TAAGGTCACA ATGACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT TACATACACT 101 GGTTTCAGCA GAAGCCAGGA TCCTCCCCCA GATCCTGGAT TTATGCCACA 151 TCCAACCTGG CTTCTGGAGT CCCTGGTCGC TTCAGTGGCA GTGGGTCTGG 201 GACCTCTTAC TCTCTCACAA TCAGCAGAGT GGAGGCTGAG GATGCTGCCA 251 CTTATTACTG CCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGTGCTGGG 301 ACCAAGCTGG AGCTGAAACG GGCTGATGCT GCACCAACTG TATCCATCTT 351 CCCACCATCC AGTGAGCAGT TAACATCTGG AGGTGCCTCA GTCGTGTGCT 401 TCTTGAACAA CTTCTACCCC AAAGACATCA ATGTCAAGTG GAAGATTGAT 451 GGCAGTGAAC GACAAAATGG CGTCCTGAAC AGTTGGACTG ATCAGGACAG 501 CAAAGACAGC ACCTACAGCA TGAGCAGCAC CCTCACGTTG ACCAAQGACG 551 AGTATGAACG ACATAACAGC TATACCTGTG AGGCCACTCA CAAGACATCA 601 ACTTCACCCA TTGTCAAGAG CTTCAACAGG AATGAGTGTT AG (SEQ ID NO: 190)

10

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-11 incluyendo el peptido senal:

1 MDFQVQIFSF LLISASVIMS RGQIVLSQSP AFLSVSPGDK VTMTCRASSS

Sm.I* i|int» 4 .i.H« tj lM~t>

51ISYIHWFQQK PGSSPRSWIY ATSNLASGVP GRFSGSGSGT SYSLTISRVE 101 AEDAATYYCQ QWSSDPLTFG AGTKLELKRA DAAPTVSIFP PSSEQLTSGG 151 ASWCFLNNF YPKDINVKWKIDGSERQNGV LNSWTDQDSK DSTYSMSSTL 201 TLTKDEYERH NSYTCEATHK TSTSPIVKSF NRNEC (SEQIDNO:191)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-11 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

15

1 ATGGATTTTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTGCTAATCA GTGCTTCAGT 51 CATAATGTCC AGAGGACAAA TTGTTCTCTC CCAGTCTCCA GCATTCCTGT 101 CTGTATCTCC AGGGGATAAG GTCACAATGA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151 ATAAGTTACA TACACTGGTT TCAGCAGAAG CCAGGATCCT CCCCCAGATC 201 CTGGATTTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGAGTCCCT GGTCGCTTCA 251 GTGGCAGTGG GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAG CAGAGTGGAG 301 GCTGAGGATG CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT 351 CACGTTCGGT GCTGGGACCA AGCTGGAGCT GAAACGGGCT GATGCTGCAC 401 CAACTGTATC CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT 451 GCCTCAGTCG TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT 501 CAAGTGGAAG ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT 551 GGACTGATCA GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC 601 ACGTTGACCA AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC 651 CACTCACAAG ACATCAACTT CACCCATTGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG 701AGTGTTAG (SEQ ID NO: 192)

Cadena Pesada de Ab-11

5 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-11:

imagen14

151KGYFPEPVTV TWNSGSLSSG VHTFPA VLQS DLYTLSSSVT VPSSTWPSET 201 VTCNVAIJPAS STKVDKKIVP RDCGCKPCIC TVPEVSSVFIFPPKPEDVLT 251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDDVEVHTAQTQPR EEQFNSTFRS 301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP 351PPKEQMAKDK VSITCMITDF FPEDITVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG 401SYFHSKLNV QKSNWEAGNT FTCSVLHEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQ ID NO: 193)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-11:

10

1 GAAGTTCAGC TGCAACAGTC TGGGGCAGAC CTTGTGCAGC CAGGGGCCTC 51 AGTCAAGGTG TCCTGCACAG CTTCTGGCTT CGACATTAAG GACTACTATA 101 TACACTGGAT GAAACAGAGG CCTGACCAGG GCCTGGAGTG GATTGGAAGG 151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA 201 GGCCACTTTT ACAACAGACA CATCCTCCAA CACAGCCTAC CTACAACTCA 251 GAGGCCTGAC ATCTGAGGAC ACTGCCATCT ATTACTGTGG GAGAGAAGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACTGTCTCT GCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC 401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC 451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC

601 GTCACCTGCA ACGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTGTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701AAGTATCATC TGTCTTCATC TTCCCCCCAA AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC 1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAATGA (SEQ ID NO:194)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-11 incluyendo el peptido senal:

1 MKCSWVIFFL MAWTGVNSE VQLQQSGADL VQPGASVKVS CTASGFDIKD 51YYIHWMKQRP DQGLEWIGRV DPDNGETEFA PKFPGKATFT TDTSSNTAYL 101 QLRGLTSEDT AIYYCGREDY DGTYTWFPYW GQGTLVTVSA AKTTPPSVYP 151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD 201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT 251 VPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCW VDISKDDPEV QFSWFVDDVE 301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSY SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE 351 KT1SKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH 5 451NHHTEKSLSH SPGK (SEQ ID NO: 195)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-1

incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGAAATGCA GCTGGGTCAT CTTCTTCCTG ATGGCAGTGG TTACAGGGGT 51 CAATTCAGAA GTTCAGCTGC AACAGTCTGG GGCAGACCTT GTGCAGCCAG 101 GGGCCTCAGT CAAGGTGTCC TGCACAGCTT CTGGCTTCGA CATTAAGGAC 151TACTATATAC ACTGGATGAA ACAGAGGCCT GACCAGGGCC TGGAGTGGAT 201 TGGAAGGGTT GATCCTGACA ATGGTGAGAC TGAATTTGCC CCGAAGTTCC 251 CGGGCAAGGC CACTTTTACA ACAGACACAT CCTCCAACAC AGCCTACCTA 301 CAACTCAGAG GCCTGACATC TGAGGACACT GCCATCTATT ACTGTGGGAG 351 AGAAGACTAC GATGGTACCT ACACCTGGTT TCCTTATTGG GGCCAAGGGA 401 CTCTGGTCAC TGTCTCTGCA GCCAAAACGA CACCCCCATC TGTCTATCCA 451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC CCAAACTAAC TCCATGGTGA CCCTGGGATQ 501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG 551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC 601 CTCTACACTC TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAQ 651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAGGTGG 701 ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA 751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT CTTCATCTTC CCCCCAAAGC CCAAGGATGT 801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA 851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG 901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT 951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA 1001 AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG 165i'aaaacc"Atct CCAAAACCAA AGGCAGACCG aaggctccac aggtgtacac 1101 CATTCCACCT CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT 1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG 1201AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC 1251AGATGGCTCT TACTTCATCT ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT 1301 GGGAGGCAGG AAATACTTTC ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC 1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG CCTCTCCCAC TCTCCTGGTA AATGA (SEQ ID NO: 196)

Ab-12

5

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 12 (tambien denominado en el presente documento Ab-12) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-12

10

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-12:

1 DLQMTQTTSS LSASLGDRVT ISC^QDlSl^NWYQQKP DGTVKLLIFY.

51 piSTL^GVPS RFSGSGSGTN YSLTITNLEQ DDAATYFC^QGfllEPYTFGG 101 GTKLEIK/MZ) AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SVVCFLNNFYPKDINVKWKI 151DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT 201STSPTVKSFN RNEC (SEQ ID NO: 197)

5

10

1 GATCTCCAGA TGACACAGAC TACTTCCTCC CTGTCTGCCT CTCTGGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC AATTATTTAA 101 ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTG TTAAGCTCCT GATCTTCTAC 151 ACATCAACAT TACAGTCAGG AGTCCCATCG AGjGTTCAGTG GCAGTGGGTC 201 TGGAACAAAT TATTCTCTCA CCATTACCAA CCTGGAGCAA GATGATGCTG 251 CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC GTTCGGAGGG 301 GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA CTGTATCCAT 351 CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC TCAGTCGTGT 401 GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA GTGGAAGATT 451 GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA CTGATCAGGA 501 CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACG TTGACCAAGG 551 ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC TCACAAGACA 601 TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT GTTAG (SEQ ID NO: 198)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-12 incluyendo el peptido senal:

1 MMSSAQFLGL LLLCFQGSRC DLQMTQTTSS LSASLGDRVTISCRASQDIS 51NYLNWYQQKP DGTVKLLIFY TSTLQSGVPS RFSGSGSGTN. YSLTITNLEQ 101 DDAATYFCQQ GDTEPYTFGG GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA 151 SWCFLNNFY PKDINVKWKIDGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT 201 LTKDEYERHN SYTCEATHKT STSPIVKSFN RNEC (SEQ ID NO:199)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-12 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGATGTCCT CTGCTCAGTT CCTTGGTCTC CTGTTGCTCT GTTTTCAAGG 51 TTCCAGATGT GATCTCCAGA TGACACAGAC TACTTCCTCC CTGTCTGCCT 101 CTCTGGGAGA CAGAGTCACC ATCAGTTGCA GGGCAAGTCA GGACATTAGC

I"*!* 'wiM *lml* >Unl> >• i»m> -uw am.- — ___

151 AATTATTTAA ACTGGTATCA GCAGAAACCA GATGGAACTG TTAAGCTCCT 201 GATCTTCTAC ACATCAACAT TACAGTCAGG AGTCCCATCG AGGTTCAGTG 251 GCAGTGGGTC TGGAACAAAT TATTCTCTCA CCATTACCAA CCTGGAGCAA 301 GATGATGCTG CCACTTACTT TTGCCAACAG GGTGATACGC TTCCGTACAC 351 GTTCGGAGGG GGGACCAAGC TGGAAATAAA ACGGGCTGAT GCTGCACCAA 401 CTGTATCCAT CTTCCCACCA TCCAGTGAGC AGTTAACATC TGGAGGTGCC 451 TCAGTCGTGT GCTTCTTGAA CAACTTCTAC CCCAAAGACA TCAATGTCAA 501 GTGGAAGATT GATGGCAGTG AACGACAAAA TGGCGTCCTG AACAGTTGGA 551 CTGATCAGGA CAGCAAAGAC AGCACCTACA GCATGAGCAG CACCCTCACQ 601 TTGACCAAGG ACGAGTATGA ACGACATAAC AGCTATACCT GTGAGGCCAC 651 TCACAAGACA TCAACTTCAC CCATTGTCAA GAGCTTCAAC AGGAATGAGT 701 GTTAG (SEQ ID N0:200)

Cadena Pesada de Ab-12

1 EVQLQQSGPE LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYpiHWMKQN QGKSLEWIGE

51 ^Fs^sgF^qi^kg^tltvdkssstaymelrsltsed savyycarLQ i oi tcgnyedwyf dvwgagttvt vssakttpps vyplapgsaa qtnsmvtzgc

151LVKGYFPEPV TVTWNSGSLS SGVHTFPAVL QSDLYTLSSS VTVPSSTWPS 201ETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDV 251LTITLTPKVT CVWDISKDD PEVQFSWFVD DVEVHTAQTQ PREEOFNSTF 301RSVSELPIMH QDWLNGKEFK CRVNSAAFPA PIEKTISKTK GRPKAPOVYT 351FPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAEN YKNTQPIMDT 401DGSYFIYSKL NVQKSNWEA G NTFTCSVLHE GLHNHHTEKS LSHSPGK (SEQ ED NO-.201)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-12:

1 GAGGTCCAGT TGCAACAGTC TGGACCTGAA CTAATGAAGC CTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGCAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACAACA 101 TGCACTGGAT GAAGCAGAAC CAAGGAAAGA GCCTAGAGTG GATAGGAGAG 151 ATTAATCCTA ACAGTGGTGG TTCTGGTTAC AACCAGAAGT TCAAAGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AGTCCTCCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTCC 251 GCAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGATTGGGC 301 TACTATGGTA ACTACGAGGA CTGGTATTTC GATGTCTGGG GCGCAGGGAC 351 CACGGTCACC GTCTCCTCTG CCAAAACGAC ACCCCCATCT GTCTATCCAC 401 TGGCCCCTGG ATCTGCTGCC CAAACTAACT CCATGGTGAC CCTGGGATGC 451 CTGGTCAAGG GCTATTTCCC TGAGCCAGTG ACAGTGACCT GGAACTCTGG 501 ATCCCTGTCC AGCGGTGTGC ACACCTTCCC AGCTGTCCTG CAGTCTGACC 551 TCTACACTCT GAGCAGCTCA GTGACTGTCC CCTCCAGCAC CTGGCCCAGC 601 GAGACCGTCA CCTGCAACGT TGCCCACCCG GCCAGCAGCA CCAAGGTGGA 651 CAAGAAAATT GTGCCCAGGG ATTGTGGTTG TAAGCCTTGC ATATGTACAG 701 TCCCAGAAGT ATCATCTGTC TTCATCTTCC CCCCAAAGCC CAAGGATGTG 751 CTCACCATTA CTCTGACTCC TAAGGTCACG TGTGTTGTGG TAGACATCAG 801 CAAGGATGAT CCCGAGGTCC AGTTCAGCTG GTTTGTAGAT QATGTGGAGG 851 TGCACACAGC TCAGACGCAA CCCCGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACTTTC 901 CGCTCAGTCA QTGAACTTCC CATCATGCAC CAGGACTGGC TCAATGGCAA 951 GGAGTTCAAA TGCAGGGTCA ACAGTGCAGC TTTCCCTGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGCAGACCGA AGGCTCCACA GGTGTACACC 5 1051 ATTCCACCTC CCAAGGAGCA GATGGCCAAG GATAAAGTCA GTCTGACCTG

1101 C ATGATAAC A GACTTCTTCC CTGAAGACAT TACTGTGGAG TGGCAGTGGA 1151ATGQGCAGCC AGCGGAGAAC TACAAGAACA CTCAGCCCAT CATGGACACA 1201 GATGGCTCTT ACTTCATCTA CAGCAAGCTC AATGTGCAGA AGAGCAACTG 1251 GGAGGCAGGA AATACTTTCA CCTGCTCTGT GTTACATGAG GGCCTGCACA 1301 ACCACCATAC TGAGAAGAGC CTCTCCCACT CTCCTGGTAA ATGA (SEQ ID NO:202)

5

1 MGWSWTFLFL LSGTSGVLSE VQLQQSGPEL MKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YNMHWMKQNQ GKSLEWIGEINPNSGGSGYN QKFKGKATLT VDKSSSTAYM 101 ELRSLTSEDS AVYYCARLGY YGNYEDWYFD VWGAGTTVTV SSAKTTPPSV 151YPLAPGSAAQ TNSMVTLGCL VKGYFPEPVT VTWNSGSLSS GVHTFPAVLQ 201 SDLYTLSSSV TVPSSTWPSE TVTCNVAHPA SSTKVDKKIV PRQCGCKPCI 251 CTVPEYSSVF EFPPKPKDVL UTLTPKVTC VWDISKDDP EVQFSWFVDD 301 VEVHTAQTQP REEQFNSTFR SVSELPIMHQ DWLNGKEFKC RVNSAAFPAP 351IEKTISKTKG RPKAPQVYTIPPPKEQMAKD KVSLTCMITD FFPEDITVEW 401 QWNGQPAENY KNTQPIMDTD GSYFIYSKLN YQKSNWEAGN TFTCSVLHEG 451 LHNHHTEKSL SHSPGK (SEQ ID NO:203)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-12 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1ATGGGATGGA GCTGGACCTT TCTCTTCCTC CTGTCAGGAA CTTCGGGTGT 51 CCTCTCTGAG GTCCAGTTGC AACAGTCTGG ACCTGAACTA ATGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGCAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACAACATGC ACTGGATGAA GCAGAACCAA GGAAAGAGCC TAGAGTGGAT 201 AGGAGAGATT AATCCTAACA GTGGTGGTTC TGGTTACAAC CAGAAGTTCA 251 AAGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAGT CCTCCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTCCGCA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATTGGGCTAC TATGGTAACT ACGAGGACTG GTATTTCGAT GTCTGGGGCG 401 CAGGGACCAC GGTCACCGTC TCCTCTGCCA AAACGACACC CCCATCTGTC 451 TATCCACTGG CCCCTGGATC TGCTGCCCAA ACTAACTCCA TQGTGACCCT 501 GGGATGCCTG GTCAAGGGCT ATTTCCCTGA GCCAGTGACA GTGACCTGGA 551 ACTCTGGATC CCTGTCCAGC GGTGTGCACA CCTTCCCAGC TGTCCTGCAG 601 TCTGACCTCT ACACTCTGAG CAGCTCAGTG ACTGTCCCCT CCAGCACCTG 651 gcccagcgag accgtcacct GCAACGTTGC CCACCCGGCC AGCAGCACCA 701 AGGTGGACAA GAAAATTGTG CCCAGGGATT GTGGTTGTAA GCCTTGCATA 751 TGTACAGTCC CAGAAGTATC ATCTGTCTTC ATCTTCCCCC CAAAGCCCAA 801 GGATGTGCTC ACCATTACTC TGACTCCTAA GGTCACGTGT GTTGTGGTAG 851 ACATCAGCAA GGATGATCCC GAGGTCCAGT TCAGCTGGTT TGTAGATGAT 901 GTGGAGGTGC ACACAGCTCA GACGCAACCC CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACTTTCCGC TCAGTCAGTG AACTTCCCAT CATGCACCAG GACTGGCTCA 1001ATGGCAAGGA GTTCAAATGC AGGGTCAACA GTGCAGCTTT CCCTGCCCCC 1051ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGC AGACCGAAGG CTCCACAGGT 1101 GTACACCATT CCACCTCCCA AGGAGCAGAT GGCCAAGGAT AAAGTCAGTC 1151TGACCTGCAT GATAACAGAC TTCTTCCCTG AAGACATTAC TGTGGAGTGG 1201 CAGTGGAATG GGCAGCCAGC GGAGAACTAC AAGAACACTC AGCCCATCAT 1251 GGACACAGAT GGCTCTTACT TCATCTACAG CAAGCTCAAT GTGCAGAAGA 1301 GCAACTGGGA GGCAGGAAAT ACTTTCACCT GCTCTGTGTT ACATGAGGGC 1351 CTGCACAACC ACCATACTGA GAAGAGCCTC TCCCACTCTC CTGGTAAATG 1401 A (SEQ ID NO:204)

Ab-13

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 13 (tambien denominado en el presente documento Ab-13) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-13

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-13:

1 QIVLTQSPAIMSASPGEKVT MTCRASSSVT SSYLNWYQQK PGSSPKLWIY 51 StsnLasgvp ARFSGSGSGT SYSLTISSVE AED AATYY CQ QWFFPSTFG

101 GGTKLEDGL4 DAAPTVSIFP PSSEQLTSGQASWCFLNNF YPKDINVKWK 151LDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTL TLTKDEYERH NSYTCpA THE 201 TSTSPIVKSF NRNEC (SEQ ID NO:205)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-13:

1 CAGATTGTTC TCACCCAGTC TCCAGCAATC ATGTCTGCAT CTCCAGGGGA 51 GAAGGTCACC ATGACCTGCA GGGCCAGCTC AAGTGTAACT TCCAGTTACT 101 TGAACTGGTA CCAGCAGAAG CCAGGATCTT CCCCCAAACT CTGGATTTAT 151 AGCACATCCA ACCTGGCTTC AGGAGTCCCA GCTCGCTTCA GTGGCAGTGG 201 GTCTGGGACC TCTTACTCTC TCACAATCAG CAGTGTGGAG GCTGAGGATG 251 CTGCCACTTA TTACTGCCAG CAGTATGATT TTTTCCCATC GACGTTCGGT 301 GGAGGCACCA AGCTGGAAAT CAAGCGGGCT GATGCTGCAC CAACTGTATC 351 CATCTTCCCA CCATCCAGTG AGCAGTTAAC ATCTGGAGGT GCCTCAGTCG 401 TGTGCTTCTT GAACAACTTC TACCCCAAAG ACATCAATGT CAAGTGGAAG 451 ATTGATGGCA GTGAACGACA AAATGGCGTC CTGAACAGTT GGACTGATCA 501 GGACAGCAAA GACAGCACCT ACAGCATGAG CAGCACCCTC ACGTTGACCA 551AGGACGAGTA TGAACGACAT AACAGCTATA CCTGTGAGGC CACTCACAAG 601ACATCAACTT CACCCATCGT CAAGAGCTTC AACAGGAATG AGTGT (SEQ ID NO:206)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-13 incluyendo el peptido senal:

1 MDSQVQIFSF LLISALVKMS RGQIVLTQSP AIMSASPGEK VTMTCRASSS 51 VTSSYLNWYQ QKPGSSPRLWIYSTSNLASG VPARFSGSGS GTSYSLTISS 101 VEAED AATYY CQQYDFFPST FGGGTKLEIK RADAAPTV SI FPPSSEQLTS 151 GGASWCFLN NFYPKDINVK WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS 201 TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPTVK SFNRNEC (SEQ ID NO:207)

15 Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-13 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGATTCTC AAGTGCAGAT TTTCAGCTTC CTTCTAATCA GTGCCTTAGT 51 CAAAATGTCC AGAGGACAGA TTGTTCTCAC CCAGTCTCCA GCAATCATGT 101 CTGCATCTCC AGGGGAGAAG GTCACCATGA CCTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151 GTAACTTCCA GTTACTTGAA CTGGTACCAG CAGAAGCCAG GATCTTCCCC 201 CAAACTCTGG ATTTATAGCA CATCCAACCT GGCTTCAGGA GTCCCAGCTC 251 GCTTCAGTGG CAGTGGGTCT GGGACCTCTT ACTCTCTCAC AATCAGCAGT 301 GTGGAGGCTG AGGATGCTGC CACTTATTAC TGCCAGCAGT ATGATTTTTT 351 CCCATCGACG TTCGGTGGAG GCACCAAGCT GGAAATCAAG CGGGCTGATG 401 CTGCACCAAC TGTATCCATC TTCCCACCAT CCAGTGAGCA GTTAACATCT 451 GGAGGTGCCT CAGTCGTGTG CTTCTTGAAC AACTTCTACC CCAAAGACAT 501 CAATGTCAAG TGGAAGATTG ATGGCAGTGA ACGACAAAAT GGCGTCCTGA

551 ■•X^^^AC'TGA'TCAGGAC AGCAAAGACA GCACCTAC AG CATGAGC AGC

601ACCCTCACGT TGACCAAGGA CGAGTATGAA CGACATAACA GCTATACCTG 651 TGAGGCCACT CACAAQACAT CAACTTCACC CATCGTCAAG AGCTTCAACA 701 GGAATGAGTG T (SEQ ID NO:208)

Cadena Pesada de Ab-13

5 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-13:

1 EVQLQQSGPE LYKPGASVKM SCKASGYTFT ;DYYMNWVKQS HGESLEWIGpj 51INPYNDPTTY NI®KC^KATL TVDKSSNTAY MQLNSLTSED SAVYYCARET 101 AVITOIAMDY WGQGTSVTVS SAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLV 151KGYFPEPVTVTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVT VPSSTWPSET 201 VTCNVAHPAS STKVDKIQVP RDCGCKPCIC TVPEVSSVFIFPPKPKDVLT 251ITLTPKVTCV WDISKDDPE VQFSWFVDDVEVHTAQTQPR EEQFNSTFRS 301 VSELPIMHQD WLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGR PKAPQVYTIP 351PPKEQMAKDK VSLTCMITDF FPEDITVEWQ WNGQPAENYKNTQPIMDTDG 401SYFIYSKLNV QKSNWEA GNT FTCSVLHEGL HNHHTEKSLS HSPGK (SEQ ID NO:209)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-13:

10

1 GAGGTCCAGC TGCAACAATC TGGACCTGAG CTGGTGAAGC OTGGGGCTTC 51 AGTGAAGATG TCCTGTAAGG CTTCTGGATA CACATTCACT GACTACTACA 101 TGAACTGGGT GAAGCAGAGC CATGGAGAGA GCCTTGAGTG GATTGGAGAT 151 ATTAATCCTT ACAACGATGA TACTACCTAC AACCACAAGT TCAAGGGCAA 201 GGCCACATTG ACTGTAGACA AATCCTCCAA CACAGCCTAC ATGCAGCTCA 251 ACAGCCTGAC ATCTGAGGAC TCTGCAGTCT ATTACTGTGC AAGAGAGACG 301 GCCGTTATTA CTACGAATGC TATGGACTAC TGGGGTCAAG GAACCTCAGT 351 CACCGTCTCC TCAGCCAAAA CGACACCCCC ATCTGTCTAT CCACTGGCCC 401 CTGGATCTGC TGCCCAAACT AACTCCATGG TGACCCTGGG ATGCCTGGTC 451 AAGGGCTATT TCCCTGAGCC AGTGACAGTG ACCTGGAACT CTGGATCCCT 501 GTCCAGCGGT GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTGCAGTCT GACCTCTACA 551 CTCTGAGCAG CTCAGTGACT GTCCCCTCCA GCACCTGGCC CAGCGAGACC 601 GTCACCTGCA ACGTTGCCCA CCCGGCCAGC AGCACCAAGG TGGACAAGAA 651 AATTGTGCCC AGGGATTQTG GTTGTAAGCC TTGCATATGT ACAGTCCCAG 701 AAGTATCATC TGTCTTCATC TTCCCCCCAA AGCCCAAGGA TGTGCTCACC 751ATTACTCTGA CTCCTAAGGT CACGTGTGTT GTGGTAGACA TCAGCAAGGA 801 TGATCCCGAG GTCCAGTTCA GCTGGTTTGT AGATGATGTG GAGGTGCACA 851 CAGCTCAGAC GCAACCCCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC TTTCCGCTCA 901 GTCAGTGAAC TTCCCATCAT GCACCAGGAC TGGCTCAATG GCAAGGAGTT 951 CAAATGCAGG GTCAACAGTG CAGCTTTCCC TGCCCCCATC GAGAAAACCA 1001 TCTCCAAAAC CAAAGGCAGA CCGAAGGCTC CACAGGTGTA CACCATTCCA 1051 CCTCCCAAGG AGCAGATGGC CAAGGATAAA GTCAGTCTGA CCTGCATGAT 1101 AACAGACTTC TTCCCTGAAG ACATTACTGT GGAGTGGCAG TGGAATGGGC 1151 AGCCAGCGGA GAACTACAAG AACACTCAGC CCATCATGGA CACAGATGGC 1201 TCTTACTTCA TCTACAGCAA GCTCAATGTG CAGAAGAGCA ACTGGGAGGC ’ 1251 AGGAAATACT TTCACCTGCT CTGTGTTACA TGAGGGCCTG CACAACCACC 1301 ATACTGAGAA GAGCCTCTCC CACTCTCCTG GTAAA (SEQ ID NO:210)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-13 incluyendo el peptido senal:

1 MGWNWIFLFL LSGTAGVYSE VQLQQSGPEL VKPGASVKMS CKASGYTFTD 51 YYMNWVKQSH GESLEWIGPINPYNDDTTYN HKFKGKATLT VDKSSNTAYM 101 QLNSLTSEDS AVYYCARETA VITTNAMDYW GQQTSVTVSS AKTTPPSVYP 151 LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPYTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD 201 LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT 251 VPEVSSVFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCW YDISKDDPEV QFSWFVDDVE 301 VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE 351KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW 401NGQPAENYKN TQPMDTDGS YFIYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSYLHEGLH 451NHHTEKSLSH SPGK (SEQ ID NO:211)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-13 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGGATGGA ACTGGATCTT TCTCTTCCTC TTGTCAGGAA CTGCAGGTGT 51 CTACTCTGAG GTCCAGCTGC AACAATCTGG ACCTGAGCTG GTGAAGCCTG 101 GGGCTTCAGT GAAGATGTCC TGTAAGGCTT CTGGATACAC ATTCACTGAC 151 TACTACATGA ACTGGGTGAA GCAQAGCCAT GGAGAGAGCC TTGAGTGGAT 201 TGGAGATATT AATCCTTACA ACGATGATAC TACCTACAAC CACAAGTTCA 251 AGGGCAAGGC CACATTGACT GTAGACAAAT CCTCCAACAC AGCCTACATG 301 CAGCTCAACA GCCTGACATC TGAGGACTCT GCAGTCTATT ACTGTGCAAG 351AGAGACGGCC GTTATTACTA CGAATGCTAT GGACTACTGG GGTCAAGGAA 401 CCTCAGTCAC CGTCTCCTCA GCCAAAACGA CACCCCCATC TGTCTATCCA 451 CTGGCCCCTG GATCTGCTGC CCAAACTAAC TCCATGGTGA CCCTGGGATG 501 CCTGGTCAAG GGCTATTTCC CTGAGCCAGT GACAGTGACC TGGAACTCTG 551 GATCCCTGTC CAGCGGTGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT GCAGTCTGAC 601 CTCTACACTC TGAGCAGCTC AGTGACTGTC CCCTCCAGCA CCTGGCCCAG 651 CGAGACCGTC ACCTGCAACG TTGCCCACCC GGCCAGCAGC ACCAAQGTGG 701ACAAGAAAAT TGTGCCCAGG GATTGTGGTT GTAAGCCTTG CATATGTACA 751 GTCCCAGAAG TATCATCTGT CTTCATCTTC CCCCCAAAGC CCAAGGATGT 801 GCTCACCATT ACTCTGACTC CTAAGGTCAC GTGTGTTGTG GTAGACATCA 851 GCAAGGATGA TCCCGAGGTC CAGTTCAGCT GGTTTGTAGA TGATGTGGAG 901 GTGCACACAG CTCAGACGCA ACCCCGGGAG GAGCAGTTCA ACAGCACTTT' 951 CCGCTCAGTC AGTGAACTTC CCATCATGCA CCAGGACTGG CTCAATGGCA 1001AGGAGTTCAA ATGCAGGGTC AACAGTGCAG CTTTCCCTGC CCCCATCGAG 1051AAAACCATCT CCAAAACCAA AGGCAGACCG AAGGCTCCAC AGGTGTACAC 1101 CATTCCACCT CCCAAGGAGC AGATGGCCAA GGATAAAGTC AGTCTGACCT 1151 GCATGATAAC AGACTTCTTC CCTGAAGACA TTACTGTGGA GTGGCAGTGG 1201AATGGGCAGC CAGCGGAGAA CTACAAGAAC ACTCAGCCCA TCATGGACAC 1251 AGATGGCTCT TACTTCATCT ACAGCAAGCT CAATGTGCAG AAGAGCAACT 1301 GGGAGGCAGG AAATACTTTC ACCTGCTCTG TGTTACATGA GGGCCTGCAC 1351 AACCACCATA CTGAGAAGAG CCTCTCCCAC TCTCCTGGTA AA (SEQ ID

NO:212)

Ab-13 se humanizo para generar Ab-14.

5 Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 14 (tambien denominado en el presente documento Ab-14) son las

siguientes:

Cadena Ligera de Ab-14

10 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-14:

1 DIQLTQSPSF LSASVGDRVT PGKAPKLLIY

51 SfSNLAS'GVP SRFSGSGSGT EFTLTISSLQ PEDFATYYCQQYDFFPSTFG 101 GGTKVEDGRr VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT ASWCLLNNF YPREAKVQ WK 151 VDNALOSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQ 201 GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:213)

1 GACATCCAGC TGACCCAGAG CCCCAGCTTC CTTTCCGCAT CCGTTGGTGA 51 CCGAGTAACA ATCACATGCC GCGCCTCATC TTCAGTTACA TCTTCTTATC 101 TTAATTGGTA TCAACAAAAA CCAGGAAAAG CACCTAAACT TCTTATATAC 151 TCTACATCTA ATCTCGCATC AGGAGTTCCC TCTCGATTTT CAGGATCTGG 201 ATCAGGCACA GAATTTACAC TTACTATATC ATCACTCCAA CCAGAAGACT 251 TCGCCACTTA TTACTGCCAA CAATACGATT TTTTTCCAAG CACATTCGGA 301 GGAGGTACAA AAGTAGAAAT CAAGCGTACG GTGGCTGCAC CATCTGTCTT 351 CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT GCCTCTGTTG 401 TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT ACAGTGGAAG 451 GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAGAGTG TCACAGAGCA 501 GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG ACGCTGAGCA 551 AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT CACCCATCAG 601 GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG AGTGT (SEQ ID NO:214)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-14 incluyendo el peptido senal:

1MDMRVPAQLL GLLLLWLPGA RCDIQLTQSP SFLSASVGDR VHTCRASSS 51 VTSSYLNWYQ QKPGKAPKLLIYSTSNLASG VPSRFSGSGS GTEFTLTISS 101 LQPEDFATYY CQQYDFFPST FGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKS 151 GTASWCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS 201 TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQ ID NO:215)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-14 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCCAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGCTGAC CCAGAGCCCC AGCTTCCTTT 101 CCGCATCCGT TGGTGACCGA GTAACAATCA CATGCCGCGC CTCATCTTCA 151 GTTACATCTT CTTATCTTAA TTGGTATCAA CAAAAACCAG GAAAAGCACC 201 TAAACTTCTT ATATACTCTA CATCTAATCT CGCATCAGGA GTTCCCTCTC 251 GATTTTCAGG ATCTGGATCA GGCACAGAAT TTACACTTAC TATATCATCA 301 CTCCAACCAG AAGACTTCGC CACTTATTAC TGCCAACAAT ACGATTTTTT 351 TCCAAGCACA TTCGGAGGAG GTACAAAAGT AGAAATCAAG CGTACGGTGG 401 CTGCACCATC TGTCTTCATC TTCCCGCCAT CTGATGAGCA GTTGAAATCT 451 GGAACTGCCT CTGTTGTGTG CCTGCTGAAT AACTTCTATC CCAGAGAGGC 501 CAAAGTACAG TGGAAGGTGG ATAACGCCCT CCAATCGGGT AACTCCCAGG 551 AGAGTGTCAC AGAGCAGGAC AGCAAGGACA GCACCTACAG CCTCAGCAGC 601 ACCCTGACGC TGAGCAAAGC AGACTACGAG AAACACAAAG TCTACGCCTG 651 CGAAGTCACC CATCAGGGCC TGAGCTCGCC CGTCACAAAG AGCTTCAACA 701 GGGGAGAGTQ T (SEQ ID NO:216)

10

Cadena Pesada de Ab-14

imagen15

101AVTTTNAMDY WGQGTTVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCL V 151KDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSW TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251LMISRTPEVT CWVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF 301RWSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA P1EKTISKTK GQPREPQVYT 351LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENNYKTTPPMLDS 401DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:217)

5

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-14 sin lisina carboxilo- terminal:

1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT pYYMNWVRQA PGQRLEWMGDj 51 fi^^WDtf|tN^KGRVTI TRDTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARET " lOl AYliT^AM^Y WGQGrrVTVS SASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV

151 KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPA VLQS SGLYSLSSW TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251 LMISRTPEVT CWVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF 301 RWSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT 351 LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS 401 DGSFFLYSKL TVDKSR WQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG (SEQ ID NO:393)

Secuencia de acido de nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-14:

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAQ CGGCGCCGAG GTCAAGAAAC CTGGAGCAAG 51 CGTAAAGGTT AGTTGC AAAG CATCTGGATA C AC ATTTACC GACTACTAC A 101 TGAATTGGGT ACGACAAGCC CCTGGACAAA GACTTGAATG GATGGGAGAC 151 ATTAACCCTT ATAACGACGA CACTACATAC AATCATAAAT TTAAAGGAAG 201 AGTTACAATT ACAAGAGATA CATCCGCATC AACCGCCTAT ATGGAACTTT 251 CCTCATTGAG ATCTGAAGAC ACTGCTGTTT ATTACTGTGC AAGAGAAACT 301 GCCGTTATTA CTACTAACGC TATGGATTAC TGGGQTCAAG GAACCACTGT 3 51 TACCGTCTCT AGTGCCTCC A CCAAGGGCCC ATCGGTCTTC CCCCTGGCGC 401 CCTGCTCCAG GAGCACCTCC GAGAGCACAG CGGCCCTGGG CTGCCTGGTC 451 AAGGACTACT TCCCCGAACC GGTGACGGTG TCGTGGAACT CAGGCGCTCT 501 GACCAGCGGC GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTACAGTCC TCAGGACTCT 551 ACTCCCTCAG CAGCGTGGTG ACCGTGCCCT CCAGCAACTT CGGCACCCAG 601 ACCTACACCT GCAACGTAGA TCACAAGCCC AGCAACACCA AGGTGGACAA 651 GACAGTTGAG CGCAAATGTT GTGTCGAGTG CCCACCGTGC CCAGCACCAC 701 CTGTGGCAGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC 751 CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACG TGCGTGGTGG TGGACGTGAG 801 CCACGAAGAC CCCGAGGTCC AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG 851 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCACGGGAGG AGCAGTTCAA CAGCACGTTC 901 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTTGTGCAC CAGGACTGGC TGAACGGCAA 951 GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGG CCTCCCAGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC

1051 CTGCCCCCAT CCCGGGAGGA GATGACCAAG AACCAGGTCA GCCTGACCTG 1101 CCTGGTCAAA GGCTTCTACC QCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGC A 1151 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA CACCTCCCAT GCTGGACTCC 1201 GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG 1251 GCAGCAGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA 1301 ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA A (SEQ ID NO:218)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-14 incluyendo el peptido senal:

5

1 MDWTWIULFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTFTD 51YYMNWVRQAP GQRLEWMGDINPYNDDTTYN HKFKGRVTIT RDTSASTAYM 101 ELSSLRSEDT AVYYCARETA VUTNAMDYW GQGTTVTVSS ASTKGPSVFP 151 LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYEPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 201 GLYSLSSWT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP 251 APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VWDVSHEDP EVQFNWYVDQ 301 VEVHNAKTKP REEQFNSTFR WSVLTWHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP 351IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAYEW 401 ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA 451 LHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO:219)

1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAQC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGAGCGG CGCCGAGGTC AAGAAACCTG 101 GAGCAAGCGT AAAGGTTAGT TGCAAAGCAT CTGGATACAC ATTTACCGAC 151 TACTACATGA ATTGGGTACG ACAAGCCCCT GGACAAAGAC TTGAATGGAT 201 GGGAGACATT AACCCTTATA ACGACGACAC TACATACAAT CATAAATTTA 251 AAGGAAGAGT TACAATTACA AGAGATACAT CCGCATCAAC CGCCTATATG 3 01 GAACTTTCCT CATTQAGATC TGAAGACACT GCTGTTTATT ACTGTGC AAG 3 51 AGAAACTGCC gttattacta CTAACGCTAT GGATTACTGG GGTC AAGGAA 401 CCACTGTTAC CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC 451 CTGGCGCCCT GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG 501 CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG 551 GCGCTCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA 601 GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG 651 CACCCAGACC TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG 701 TGGACAAGAC AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCGAGTGCCC ACCGTGCCCA 751 GCACCACCTG TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC QAAAACCCAA 801 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG 851 ACGTGAGCCA CGAAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC 901 GTGGAGGTGC ATAATGCCAA GAC AAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAAC AG 951 CACGTTCCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA 1001 ACGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC 1051 ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCQAG AACCACAGGT 1101 GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC 1151 TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGG 1201 GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACAC CTCCCATGCT 1251 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA 1301 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT QCTCCGTGAT GCATGAGGCT 1351 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTQTCTC CGGGTAAA

(SEQ ID NO:220)

Las secuencias de CDR en la region variable de la cadena pesada de Ab-14 son:

5

CDR-H1: DYYNIN (SEQ ID NO: 296)

CDR-H2: DINPYNDDTTYNHKFKG (SEQ ID NO: 297)

CDR-H3: ETAVTTINAMD (SEQ ID NO: 298)

10 Las secuencias de CDR de region variable de la cadena ligera de Ab-14 son:

CDR-L1: RASSSVTSSYLN (SEQ ID NO: 284)

CDR-L2: STSNLAS (SEQ ID NO: 285)

CDR-L3: QQYDFFPST (SEQ ID NO: 286)

15

Dominios variables de Ab-14

Secuencia de aminoacidos del dominio variable de cadena ligera de Ab-14 (sin secuencia senal):

imagen16

101 GGTKVEIK (SEQ ID NO:380)

Secuencia de ADN del dominio variable de cadena ligera de Ab-14 (sin secuencia senal):

1 GACATCCAGC TGACCCAGAG CCCCAGCTTC CTTTCCGCAT CCGTTGGTGA 51 CCGAGTAACA ATCACATGCC GCGCCTCATC TTCAGTTACA TCTTCTTATC 101 TTAATTGGTA TCAACAAAAA CCAGGAAAAG CACCTAAACT TCTTATATAC 151 TCTACATCTA ATCTCGCATC AGGAGTTCCC TCTCGATTTT CAGGATCTGG 201 ATCAGGCACA GAATTTACAC TTACTATATC ATCACTCCAA CCAGAAGACT 251 TCGCCACTTA TTACTGCCAA CAATACGATT TTTTTCCAAG CACATTCGGA 301 GGAGGTACAA AAGTAGAAAT CAAG (SEQ ID NO:381)

Secuencia de aminoacidos del dominio variable de cadena pesada de Ab-14 (sin secuencia senal):

5 101 ^YITTNAMDY WGQGTTVTVS S (SEQ ID NO:382)

Secuencia de ADN del dominio variable de cadena pesada de Ab-14 (sin secuencia senal):

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG QTCAAGAAAC CTGGAGCAAG 51 CGTAAAGGTT AGTTGCAAAG CATCTGGATA CACATTTACC GACTACTACA 101 TGAATTGGGT ACGACAAGCC CCTGGACAAA GACTTGAATG GATGGGAGAC 151 ATTAACCCTT ATAACGACGA CACTACATAC AATCATAAAT TTAAAGGAAG 201 AGTTACAATT ACAAGAGATA CATCCGCATC AACCGCCTAT ATGGAACTTT 251 cctcattgag ATCTGAAGAC ACTGCTGTTT ATTACTGTGC AAGAGAAACT 301 GCCGTTATTA CTACTAACGC TATGGATTAC TGGGGTCAAG GAACCACTGT 10 351 TACCGTCTCT AGT (SEQ ID NO:383)

Ab-3 se humanizo para generar Ab-15.

Ab-15

15

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 15 (tambien denominado en el presente documento Ab-15) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-15:

20 Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-15:

1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCSYSSTO SMLHWFQQK PGKAPKSLIY 51 jGTSNLASGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYC^iQWSSYPLTFG 101 GGTKVEIOr VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT ASWCLLNNF YPREAKVQWK 151 VDNALQSGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHO 201 GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:221)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-15: 25

5

10

1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCAGCAT CCGTAGGCGA 51 TAGAGTTACA ATAACATGCA GCGTATCATC AACTATATCA TCAAATCATC 101 TTCATTGGTT CCAACAGAAA CCCGGCAAAG CACCTAAATC ACTTATATAC 151 GGCACATCAA ATCTCGCATC AGGCQTTCCT TCAAGATTTT CAGGCTCTGG 201 CTCAGGCACC GACTTTACTC TTACAATATC CTCCCTCCAA CCCGAAGACT 251 TCGCAACCTA TTACTGTCAA CAATQGTCCT CATATCCACT CACATTTGGC 301 GGCGGCACAA AAGTAGAAAT TAAACGTACG GTGGCTGCAC CATCTGTCTT 351 CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT GCCTCTGTTG 401 TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAG AGGCCAAAGT ACAGTGGAAG 451 GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAGAGTG TCACAGAGCA 501 ggacagcaag gacagcacct acagcctcag CAGCACCCTQ acgctgagca 551 AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT CACCCATCAG 601 GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAQCTTC AACAGGGGAG AGTGT (SEQ ID NO:222)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-15 incluyendo el peptido senal:

1 MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR VITTCSVSST 51ISSNHLHWFQ QKPGKAPKSLIYGTSNLASG VPSRFSGSGS GTDFTLTISS 101 LQPEDFATYY CQQWSSYPLT FGGGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKS 151 GTASWCLLN NFYPREAKVQ WKVDNAEQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS 201 TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQ ID NO:223)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-15 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TACTCTGGCT 51 CCGAGGTGCC AGATGTGACA TCCAQATGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTCT

1 01 C AGC ATCCGT AGGCGATAGA GTTACAATAA CATGCAGCGT ATCATCAACT 151ATATCATCAA ATCATCTTCA TTGGTTCCAA CAGAAACCCG GCAAAGCACC 201 TAAATCACTT ATATACGGCA CATCAAATCT CGCATCAGGC GTTCCTTCAA 251 GATTTTCAGG CTCTGGCTCA GGCACCGACT TTACTCTTAC AATATCCTCC 301 CTCCAACCCG AAGACTTCGC AACCTATTAC TGTCAACAAT GGTCCTCATA 351TCCACTCACA TTTGGCGGCG GCACAAAAGT AGAAATTAAA CGTACGGTGG 401 CTGCACCATC TGTCTTCATC TTCCCGCCAT CTGATGAGCA GTTGAAATCT 451 GGAACTGCCT CTGTTGTGTG CCTGCTGAAT AACTTCTATC CCAGAGAGGC 501 caaagtacag TGGAAGGTGG ATAACGCCCT CCAATCGGGT AACTCCCAGG 551 AGAGTGTCAC AGAGCAGGAC AGCAAGGACA QCACCTACAG CCTCAGCAGC 601 ACCCTGACGC TGAGCAAAGC AGACTACQAQ AAACACAAAG TCTACGCCTG 651 CGAAGTCACC CATCAGGGCC TGAGCTCGCC CGTCACAAAG AGCTTCAACA 701 GGGGAGAGTG T (SEQ ID NO:224)

Cadena Pesada de A-15

1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASDFNIK pi®TWVRQA PGQGLEWIGRl 51 IDPEN(fpfL/§PWQDKVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCARfeA1 101 DYEHDdtrSY^ YFD VWGRGTL VV/SSASTKG PSVFPLAPCS RSTSESTAAL 151 GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSWTVPSSN 201 FGTQTYTCNVDHKPSNTKVD KTVERKCCVE CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK 251PKDTLMISRT PEVTCVWDV SHEDPEVQFN WYVDGVE VHN AKTKPREEQF 301NSTFRWSVL TWHODWLNGKEYKCKVSNK GLPAPIEKTISKTKGQPREP 351 QVYTLPPSRE EMTKNOVSLT CL VKGFYPSDIA VEWESNGQ PENNYKTTPP 401 MLDSDGSFFl YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG 451K (SEQ ID NO:225) .

5

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-15 sin lisina carboxilo- terminal:

imagen17

151 GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSWTVPSSN 201 FGTQTYTCNVDHKPSNTKVD KTVERKCCVE CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK 251 PKDTLMISRT PEVTCVWDV SHEDPEVQFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQF 301NSTFRVVSVL TWHQDWLNG KEYKCKVSNK GLPAPIEKTI SKTKGQPREP 351 QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPP 401 MLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG 451 (SEQ ID NO:394)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-15:

10 1 GAGQTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC

51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGACTT CAACATTAAA GACTTCTATC 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTQ GATTGGAAGG 151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA TACTTTATAT GACCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCACCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GGAGCCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAGGCG 301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTQG TACTTCGATG TCTGGGGCCG 351 TGGCACCCTG GTCACCGTCT CTAGTGCCTC CACCAAGGGC CCATCGGTCT 401 TCCCCCTGGC GCCCTGCTCC AGGAGCACCT CCGAGAGCAC AGCGGCCCTG 451 GGCTGCCTGG TCAAGGACTA CTTCCCCGAA CCGGTGACGG TGTCGTGGAA 501 CTCAGGCGCT CTGACCAGCG GCGTQCACAC CTTCCCAGCT GTCCTACAGT 551 CCTCAGGACT CTACTCCCTC AGCAGCGTGG TGACCGTGCC CTCCAGCAAC 601 TTCGGCACCC AGACCTACAC CTGCAACGTA GATCACAAGC CCAGCAACAC 651 CAAGGTGGAC AAGACAGTTG AGCGCAAATG TTGTGTCGAG TGCCCACCGT 701 GCCCAGCACC ACCTGTGGCA GGACCGTCAG TCTTCCTCTT CCCCCCAAAA 751 CCCAAGGACA CCCTCATGAT CTCCCGGACC CCTGAGQTCA CGTGCGTGGT 801 GGTGGACGTG AGCCACGAAG ACCCCGAGGT CCAGTTCAAC TGGTACGTGG 851 ACGGCGTGGA GGTGCATAAT GCCAAGACAA AGCCACGGGA GGAGCAGTTC 901 AACAGCACGT TCCGTGTGGT CAGCGTCCTC ACCGTTGTGC ACCAGGACTG 951 GCTGAACGGC AAGGAGTACA AGTGCAAGGT CTCCAACAAA GGCCTCCCAG 1001 CCCCCATCGA GAAAACCATC TCCAAAACCA AAGGGCAGCC CCGAGAACCA 1051 CAGGTGTACA CCCTGCCCCC ATCCCGGGAG GAGATQACQA AGAACCAGGT 1101 CAGCCTGACC TGCCTGGTCA AAGGCTTCTA CCCCAGCGAC ATCGCCGTGG 1151 AGTGGGAGAG CAATGGGCAG CCGGAGAACA ACTACAAGAC CACACCTCCC 1201 ATGCTGGACT CCGACGGCTC CTTCTTCCTC TACAGCAAGC TCACCGTGGA 1251 CAAGAGCAGG TGGCAGCAGG GGAACGTCTT CTCATGCTCC GTGATGCATG 1301 AGGCTCTGCA CAACCACTAC ACGCAGAAGA GCCTCTCCCT GTCTCCGGGT 1351 AAA (SEQ ID NO:226)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-15 incluyendo el peptido senal:

1 MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSQAEV KKPGASVKVS CKASDF3SHKD 51 FYLHWVRQAP GQGLEWIGRIDPENGDTLYD PKFQDKVTMT TDTSTSTAYM 101ELRSLRSDDT AVYYCAREAD YFEODGTSYWY FDVWGRGTLV TVSSASTKGP 151 SVFPLAPCSR STSESTAALG CLVKDYFPEP VTVSWNSGAE TSGVHTFPAV 201 LQSSGLYSLS SWTVPSSNF GTQTYTCNVP HKPSNTKVPK TVERKCCVEC 251 PPCPAPPVAQ PSVFLFPPKP KPTLMSRTP EVTCWVDVS HEDPEVQFNW 301YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STFRWSVLT WHQDWLNGK EYKCKVSNKG 351 LPAPIEKTIS KTKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI 401 AVEWESNGQP ENNYKTTPPM LDSPGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV 451 MHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ ID NQ:227)

1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGQ TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGACTTCAA CATTAAAGAC 151 TTCTATCTAC ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT 201 tggaaggatt GATCCTGAGA atggtgatac tttatatgac ccgaagttcc 251 AGGACAAGGT CACCATGACC ACAGACACGT CCACCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGGA GCCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGAG

351 AGAGGCGGAT TATTTCCACG ATGGTACCTC CTACTGGTAC TTCGATGTCT 401 GGGGCCGTGG CACCCTGGTC ACCGTCTCTA GTGCCTCCAC CAAGGGCCCA 451 TCGGTCTTCC CCCTGGCGCC CTGCTCCAGG AGCACCTCCG AGAGCACAGC 501 GGCCCTGGGC TGCCTGGTCA AGGACTACTT CCCCGAACCG GTGACGGTGT 551 CGTGGAACTC AGGCGCTCTG ACCAGCGGCG TGCACACCTT CCCAGCTGTC 601 CTACAGTCCT CAGGACTCTA CTCCCTCAGC AGCGTGGTGA CCGTGCCCTC 651 CAGCAACTTC GGCACCCAGA CCTACACCTG CAACGTAGAT CACAAGCCCA 701 GCAACACCAA GGTGGACAAG ACAGTTGAGC GCAAATGTTG TGTCGAGTGC 751 CCACCGTGCC CAGCACCACC TGTGGCAGGA CCGTCAGTCT TCCTCTTCCC 801 CCCAAAACCC AAGGACACCC TCATGATCTC CCGGACCCCT GAGGTCACGT 851 GCGTGGTGGT GGACGTGAGC CACGAAGACC CCGAGGTCCA GTTCAACTGG 901 TACGTGGACG GCGTGGAGGT GCATAATGCC AAGACAAAGC CACGGGAGGA 951 GCAGTTCAAC AGCACGTTCC GTGTGGTCAG CGTCCTCACC GTTGTGCACC 1001 AGGACTGGCT GAACGGCAAG GAGTACMGT GCAAGGTCTC CAACAAAGGC 1051 CTCCCAGCCC CCATQGAGAA AACCATCTCC AAAACCAAAG GGCAGCCCCG 1101 AGAACCACAG GTGTACACCC TGCCCCCATC CCGGGAGGAG ATGACCAAGA 1151ACCAGGTCAG CCTGACCTGC CTGGTCAAAG GCTTCTACCC CAGCGACATC 1201 GCCGTGGAGT GGGAGAGCAA TGGGCAGCCG GAGAACAACT ACAAGACCAC 1251 ACCTCCCATG CTGGACTCCG ACGGCTCCTT CTTCCTCTAC AGCAAGCTCA 1301 CCGTGGACAA GAGCAGGTGG CAGCAGGGGA ACGTCTTCTC ATGCTCCGTG 1351 ATGCATGAGG CTCTGCACAA CCACTACACG CAGAAGAGCC TCTCCCTGTC 1401 TCCGGGTAAA (SEQ ID NO:228)

5 Las secuencias de CDR en la region variable de la cadena pesada de Ab-15 son:

CDR-H1: DFYLH (SEQ ID NO: 290)

CDR-H2: RIDPENGDTLYDPKFQD (SEQ ID NO: 291)

CDR-H3: EADYEHDGTSYWYPDV (SEQ ID NO: 292)

10

Las secuencias de CDR de region variable de la cadena ligera de Ab-15 son:

CDR-L1: SVSSTTSSNHLH (SEQ ID NO: 278)

CDR-L2: GTSNLAS (SEQ ID NO: 279)

15 CDR-L3: QQWSSYPLT (SEQ ID NO: 280)

Dominios variables de Ab-15

Secuencia de aminoacidos del dominio variable de cadena ligera de Ab-15 (sin secuencia senal):

1DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC3ySSJIS SiNffit|WFQQK PGKAPKSLIY 51 :GTSNLASGVP SRFSGSGSGT DFlif ISSLQ PEDFATYYGQpWSS^BTFG 101 GGTKVEIK (SEQ ID NQ:384) ”

10

15

20

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena ligera de Ab-15 (sin secuencia senal):

1 QACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTCTCAGCAT CCGTAQGCGA 51 TAGAGTTACA ATAACATGCA GCGTATCATC AACTATATCA TCAAATCATC ToT TTCATTGGTT CCAACAGAAA CCCGGCAAAG CACCTAAATC ACTTATATAC 151 GGCACATCAA ATCTCGCATC AGGCGTTCCT TCAAGATTTT CAGGCTCTGG 201 CTCAGGCACC GACTTTACTC TTACAATATC CTCCCTCCAA CCCGAAGACT 251 TCGCAACCTA TTACTGTCAA CAATGGTCCT CATATCCACT CACATTTGGC 301 GGCGGCACAA MGTAGAAAT TAAA (SEQ IP NO:385)

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena pesada de Ab-15 (sin secuencia senal):

1 EVQLVQSGAE VKRPGASVKV SCKASDFNIKbFYPHWVRQA PGQGLEWIG®

51 pPENGDTtY bf^QPKVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSPD TAVYYCARfeA: 101 PYFHDGTSW WDYWGRGTL VTVSS (SEQ ID NQ:386) ‘

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena pesada de Ab-15 (sin secuencia senal):

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGACTT CAACATTAAA GACTTCTATC 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATTQGAAGG 151 ATTGATCCTG AGAATGGTGA TACTTTATAT GACCCGAAGT TCCAGGACAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCACCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GGAGCCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTQT ATTACTGTGC GAGAGAGGCG 301 GATTATTTCC ACGATGGTAC CTCCTACTGG TACTTCGATG TCTGGGGCCG 351 TGGCACCCTG GTCACCGTCT CTAGT (SEQ ID NOG87)

Ab-11 se humanizo para generar Ab-16.

Ab-16

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 16 (tambien denominado en el presente documento Ab-16) son las siguientes:

Cadena Ligera de Ab-16

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-16:

1 QIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCgASSSISlTHWYQQKPG KAPKLLIYAT 51 SMLAgGVPSR FSGSGSGTEF TLnSSLQPEDFATYYCiQS^S^P^TFGGG 101TKVEiorK4 APSVFIFPPS DEQLKSGTAS WCLLNNFYP REAKVQWKVD 151NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL 201SSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:229)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-16:

1 GACATCCAGT TGACCCAGTC TCCATCCTTC CTGTCTGCAT CTGTAGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT TACATACACT 101 GGTATCAGCA AAAACCAGGG AAAQCCCCTA AGCTCCTGAT ctatgccaca 151 TCCAACCTGG CTTCTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGQATCTQG 201 GACAGAATTC ACTCTCACAA TCAGCAGCCT gcagcctgaa gattttgcaa 251 CTTATTACTG TCAGCAGTGG AQTAGTGACC CACTCACGTT CGGCGGAGGG 301ACCAAGQTGG AGATCAAACG TACGGTGGCT GCACCATCTQ TCTTCATCTT 351CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT GTTGTGTGCC 401 TGCTGAATAA CTTCTATCCC AGAGAGGCCA AAGTACAGTG GAAGGTGGAT 451 AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG AGCAGGACAG 501 CAAQGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC CCTGACGCTG AGCAAAGCAG 551 ACTACGAGAA ACACAAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA TCAGGGCCTG 601 AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGT (SEQ ID NO:230)

\

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-16 incluyendo el peptido senal:

5

1 MDMRVPAQLL GLLLLWLPGA RCDIQLTQSP SFLSASVGDR VTITCRASSS 51ISYIHWYQQK PGKAPKLLIY ATSNLASGVP SRFSGSGSGT EFTLTISSLQ 101 PEDFATYYCQ QWSSDPLTFG GGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLICSGT 151 ASWCLLNNF YPREAKVQWK VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL 201 TLSKADYEKH KVYACEVTHQ GLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:231)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-16 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

10

1 ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TGCTCTGGCT 51 CCCAGGTGCC AGATGTGACA TCCAGTTGAC CCAGTCTCCA TCCTTCCTGT 101 CTGCATCTGT AGGAGACAGA GTCACCATCA CTTGCAGGGC CAGCTCAAGT 151ATAAGTTACA TACACTGGTA TCAGCAAAAA CCAGGGAAAG CCCCTAAGCT 201 CCTGATCTAT GCCACATCCA ACCTGGCTTC TGGGGTCCCA TCAAGGTTCA 251 GCGGCAGTGG ATCTGGGACA GAATTCACTC TCACAATCAG CAGCCTGCAG 301 CCTGAAGATT TTGCAACTTA TTACTGTCAG CAGTGGAGTA GTGACCCACT 351 CACGTTCGGC GGAGGGACCA AGGTGGAGAT CAAACGTACG GTGGCTGCAC 401 CATCTQTCTT CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT 451 GCCTCTGTTG TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAQAG AGGCCAAAGT 501ACAGTGGAAG GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAQAGTG 551 TCACAGAGCA GGAQAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG 601ACGCTGAGCA AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT 651 CACCCATCAG GGCCTGAGCT CGCCCQTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG 701AGTGT (SEQ ID NO:232)

Cadena Pesada de Ab-16

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-16: 15

1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKpYYIHWVRQA PGQGLEWIGR:

51 lwppkgeeefapkfpgkvtm TTDTSISTAY melsrlrsdd TAVYYCAREP 101 ^GTYTWFPY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAAL GCLV 151KDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPA VLQS SGLYSLSSW TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251LMISRTPEVT CVWDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF 301RWSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT 351LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS

401DGSFFL YSKLTVDKSR WQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK (SEQ ID NO:233)

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-16 sin lisina carboxilo- 5 terminal:

1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDIKDYYIHWVRQA PGQGLEWIGR 51VDPMGETEF APKFPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARED lOlYDGTYTWFPY: WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV 151 KDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSW TVPSSNFGTQ 201 TYTCNVDHKP SNTKVDKTVE RKCCVECPPC PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT 251 LMISRTPEVTCWVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTKPREEQFNSTF 301 RWSVLTWH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT 351 LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS 401DGSFFLYSKL TVDKSR WQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG (SEQ ID NO:395) •

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-16:

10

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGATT CGACATTAAG GACTACTATA 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATCGGAAGG 151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCGAAGT TCCCGGGCAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCATCAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GCAGGCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAAGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACCGTCTCT AGTGCCTCCA CCAAGGGCCC ATCGQTCTTC CCCCTGGCGC 401 CCTGCTCCAG GAGCACCTCC GAGAGCACAG CGGCCCTGGG CTGCCTGGTC 451 AAGGACTACT TCCCCGAACC GGTGACGGTG TCGTGGAACT CAGGCGCTCT 501 GACCAGCGGC GTGCACACCT TCCCAGCTGT CCTACAGTCC TCAGGACTCT 551ACTCCCTCAG CAGCGTGGTG ACCGTGCCCT CCAGCAACTT CGGCACCCAG 601 ACCTACACCT GCAACGTAGA TCACAAGCCC AGCAACACCA AGGTGGACAA 651 GACAGTTGAG CGCAAATGTT GTGTCGAGTG CCCACCGTGC CCAGCACCAC 701 CTGTGGCAGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC 751 CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACG TGCGTGGTGG TGGACGTGAG 801 CCACGAAGAC CCCGAGGTCC AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG 851 TGCATAATGC CAAGACAAAG CCACGGQAGG AGCAGTTCAA CAGCACGTTC 901 CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTTGTGCAC CAGGACTGGC TGAACGGCAA 951 GGAGTACAAG TQCAAGGTCT CCAACAAAGG CCTCCCAGCC CCCATCGAGA 1001 AAACCATCTC CAAAACCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC 1051 CTGCCCCCAT CCCGGGAGGA GATGACCAAG AACCAGGTCA GCCTGACCTG 1101 CCTGGTCAAA GGCTTCTACC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA 1151 ATGGGCAGCC GGAGAACAAC TACAAGACCA CACCTCCCAT GCTGGACTCC 1201 GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG 1251 GCAGCAGGGG AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA 1301 ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA A (SEQ ID NO:234)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-16 incluyendo el peptido senal:

1MDWTWRILFR VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGFDIKD 51 YYIHWVRQAP GQGLEWIGRV DPDNGETEFA PKFPGKVTMT TDTSISTAYM 101 ELSRLRSDDT AVYYCAREDY DGTYTWFPYW GQGILVTVSS ASTKGPSVFP 151 LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 201 GLYSLSSWT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP 251 APPVAGPSVF LFPPKPKjDTL MISRTPEVTC VWDVSHEDP EVQFNWYVDG 301 VEVHNAKTKP REEQFNSTFR WSVLTWHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP 351IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW 401 ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDK$RWQQGN VFSCSVMHEA 451 LHNHYTQKSL SLSPGIC (SEQ ID NO:235)

1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTQ GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCAQTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGGCCTCAGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGGATTCGA CATTAAGGAC 151 TACTATATAC ACTGGGTGCG ACAGGCCCCT GGACAAGGGC TTGAGTGGAT 201 CGGAAGGGTT GATCCTGACA ATGGTGAGAC TGAATTTGCC CCGAAGTTCC 251 CGGGCAAGGT CACCATGACC ACAGACACGT CCATCAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGCA GGCTGAGATC TGACGACACG GCCGTGTATT AQTGTGCGAG 351 AGAAGACTAC GATGGTACCT ACACCTGGTT TCCTTATTGG GGCCAAGGGA 401 CTCTGGTCAC CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC 451 CTGGCGCCCT GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG 501 CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG 551 GCGCTCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA 601 GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG 651 CACCCAGACC TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG 701 TGGACAAGAC AGTTGAGCGC AAATQTTGTG TCQAGTGCCC ACCGTGCCCA 751 GCACCACCTG TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA 801 GGACACCCTC ATGATCTCCC GGACCCCTGA GGTCACQTGC GTGGTGQTGG 851 ACGTGAGCCA CQAAGACCCQ GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC 901 GTGGAGGTGC ATAATQCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAGC AGTTCAACAG 951 CACGTTCCGT GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA 1001 ACGGCAAGGA GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC 1051ATCGAGAAAA CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT 1101 GTACACCCTG CCCCQATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC

1151 tgacctgcctggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1201 gagagcaatg ggcagccgga qaacaactac aagaccacac ctcccatgct

1251 GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA 1301 GCAGGTGGCA GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT 1351 CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ

IDNO:236)

Las secuencias de CDR en la region variable de la cadena pesada de Ab-16 son:

5 CDR-H1: DYYMH (SEQ ID NO: 293)

CDR-H2: RVDPDNGETEFAPKFPG (SEQ ID NO: 294)

CDR-H3: EDYDGTYTWFPY (SEQ ID NO: 295)

Las secuencias de CDR de region variable de la cadena ligera de Ab-16 son:

10

CDR-L1: RASSSISYIH (SEQ ID NO: 281)

CDR-L2: ATSNLAS (SEQ ID NO: 282)

CDR-L3: QQWSSDPLT (SEQ ID NO: 283)

15 Dominios variables de Ab-16

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena ligera de Ab-16 (sin secuencia senal):

imagen18

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena ligera de Ab-16 (sin secuencia senal):

5

10

15

20

25

1 GACATCCAGT TGACCCAGTC TCCATCCTTC CTGTCTGCAT CTGTAGGAGA 51 CAGAGTCACC ATCACTTGCA GGGCCAGCTC AAGTATAAGT TAC ATACACT 101 GGTATCAGCA AAAACCAQGG AAAGCCCCTA AGCTCCTGAT CTATGCCACA 151 TCCAACCTGG CTTCTGGGGT CCCATCAAGG TTCAGCGGCA GTGGATCTGG 201 GACAGAATTC ACTCTCACAA TCAGCAGCCT GCAGCCTGAA GATTTTGCAA 251 CTTATTACTG TCAGCAGTGG AGTAGTGACC CACTCACGTT CGGCGGAGGG 301 ACCAAGGTGG AGATCAAA (SEQ ID NO:389)

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena pesada de Ab-16 (sin secuencia senal):

1 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFDrKPY^HWVRQA PGQGLEWIGIl 51 WJPDNGETEF APKFPGKVTM TTDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARED lOl'anpGTYfWEPY! WGQGTLVTVS S (SEQ ID NO:390)

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena pesada de Ab-16 (sin secuencia senal):

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGQCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGGCCTC 51 AGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGATT CGACATTAAG GACTACTATA 101 TACACTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATCGGAAGG 151 GTTGATCCTG ACAATGGTGA GACTGAATTT GCCCCQAAGT TCCCGGGCAA 201 GGTCACCATG ACCACAGACA CGTCCATCAG CACAQCCTAC ATGGAGCTGA 251 GCAGGCTGAG ATCTGACGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAGAAGAC 301 TACGATGGTA CCTACACCTG GTTTCCTTAT TGGGGCCAAG GGACTCTGGT 351 CACCGTCTCT AGT (SEQ ID NO:391)

Los anticuerpos adicionales se denominan en el presente documento Anticuerpos 17-22 (tambien denominados en el presente documento Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21 y Ab-22). La region constante Kappa para todas las regiones VK de Ab-17, Ab-19 y Ab-21 es la siguiente:

TDAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASWCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQD SKDSTY SMSSTLTLTKPEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (SEQ ID NO:323)

La Region Constante Pesada para todas las regiones VH de los anticuerpos, 17, 19 y 21 es la siguiente:

AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQS DLYTLSS S VTVPS STWPSETVTCNVAHP ASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEV SS VFIF PPKPKDVLTITLTPKVTCWVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRS Y SELPIMHQD WLNGKEFKCRVNS AAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQ VYTEPPPKEQMAKD KVSLTCMTDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEA GNTFTC S VLHEGLHNHHTEKSESHSPGK (SEQ ID NO:324)

En las siguientes secuencias de aminoacidos de anticuerpos, los aminoacidos sombreados en cajas representan regiones determinantes de complementariedad (CDR) y los aminoacidos subrayados representan peptidos senal.

Ab-17

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-17 incluyendo el peptido senal:

imagen19

SGTKLELKR (SEQ ID NO:299)

5

10

15

20

25

atggattttcaggtgcagattttcagcttcatgctaatcagtgtcacagtcatattg

TCCAGTGGAGAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAGCACTCATGGCTGCATCTCCAGGG

GAGAAGGTCACCATCACCTGCAGTGTCAGCTCGAGTATAAGTTCCAGCAACTTACA

CTGGTCCCAGCAGAAGTCAGGAACCTCCCCCAAACTCTGGATTTATGGCACATCCA

ACCTTGCTTCTGGAGTCCCTGTTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACCTCTTATTC

TCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGTCAACAGT

GGACTACTACGTATACGTTCGGATCGGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGT (SEQ ID

NOG 00) .

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-17 incluyendo el peptido senal:

imagen20

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-17 incluyendo el peptido senal:

ATGGGATGGAACTGGATCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGGGTCAATTCA

GAGGTGCAGTTGCGGCAGTCTGGGGCAGACCTTGTQAAGCCAGGGGCCTCAGTCAA

gttgtcctgcacagcttctggcttcaacattaaagactactatatacactgggtgaa

GCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTQGAAGGATTGATCCTGATAATGGTG AAAGTACATATGTCCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCA TCCAACACAGCCTACCTACAACTCAGAAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCATCTA TTATTGTGGGAGAGAGGGGCTCGACTATGGTGACTACTATGCTGTGGACTACTGGG GTCAAGGAACCTCGGTCACAGTCTCGAGC (SEQ ID NO:302)

Ab-17 se humanizo para generar Ab-18.

Ab-18

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-18 incluyendo el peptido senal:

imagen21

GQGTKLEIKR (SEQ ID NQ:303)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-18 incluyendo el peptido senal:

ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCCQGG

CGCGCGCTGCGATATTCAGCTGACCCAGAGCCCGAGCTTTCTGAGCGCGAGCGTGG

gcgatcgcgtgaccattacctgcagcgtgagcagcagcattagcagcagcaacctg

cattggtatcagcagaaaccgggcaaagcgccgaaactgctgatttatggcaccag

caacctggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgaat

ttaccctgaccattagcagcctgcagccggaagattttgcgacctattattgccagc

AGTGGACCACCACCTATACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT(SEQ

IDNO:304)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-18 incluyendo el peptido senal:

5

10

15

20

25

imagen22

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-18 incluyendo el peptido senal:

ATOGATTGGACCTOGAGCATTCTGTTTCTGGTGGCGGCGCCGACCGGCGCOqATAG

cgaagtgcagctggtgcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgcgagcgtg

AAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGT

GCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCCGCATTGATCCGGATAACG

gcgaaagcacctatgtgccgaaatttcagggccgcgtgaccatgaccaccgatacc

AGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGT GTATTATTGCGCGCGCGAAGGCCTGGATTATGGCGATTATTATGCGGTGGATTATTG GGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ IDNO:306)

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena ligera de Ab-18 (sin secuencia senal):

imagen23

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena ligera de Ab-18 (sin secuencia senal):

GATATTCAGCTGACCCAGAGCCCGAGCTTTCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGT

GACCATTACCTGCAGCGTGAGCAGCAGCATTAGCAGCAGCAACCTGCATTGGTATC

AGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATGGCACCAGCAACCTGGCG

AGCGGCGTGCCGAGCCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAATTTACCCTGAC

cattagcagcctgcagccggaagattttgcgacctattattgccagcagtggacca

CCACCTATACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NOG69)

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena pesada de Ab-18 (sin secuencia senal):

imagen24

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena pesada de Ab-18 (sin secuencia senal):

GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGA

AAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATTCATTGGGTG

cgccaggcgccgggccagggcctggaatggatgggccgcattgatccggataacgg

CGAAAGCACCTATGTGCCGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATGACCACCGATACCA

GCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTG

tattattgcgcgcgcgaaggcctggattatggcgattattatgcggtggattattgg

GGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO:371)

Ab-19

5

10

15

20

25

imagen25

TKUELKR (SEQ ID N0GQ7)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-19 incluyendo el peptido senal:

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGAT

Gtgatatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagag

TCAACATCAGCTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAGTTATTTAAACTGGTATCAG CAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTCCACATCAAGATTAAACTC AGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTATTCTCTCACTAT TAGCAACCTGGCACAAGAAGAIATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGATATTAAGC ATCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGTTGGAGCTGAAACGT (SEQ ID NQ:308)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-19 incluyendo el peptido senal:

MEWIWIFLFLLSGTAGVHSEyOLOQSGPELYKPGASVKMSCKASGFTETDYEVIHWVKO KPGQGLEWIGiY^Y^DTE^KFKGKAUTSDKSSSTAYMDLSSLTSEGSAVYYCA RSnTraAPFAYjWGQGTLVWSS (SEQ ID NO:309)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-19 incluyendo el peptido senal:

atggaatggatctggatatttctcttcctcctgtcaggaactgcaggtgtccactct

gaggtccagctgcagcagtctggacctgagctggtaaagcctggggcttcagtgaa

GATGTCCTGCAAGGCTTCTGGGTTCACATTCACTGACTACATTATGCACTGGGTGAA

GCAGAAGCCTGGGCAGGGCCTTGAGTGGATTGGATATATTAATCCTTACAATGATQ

ATACTGAATACAATGAGAAGTTCAAAGGCAAGGCCACACTGACTTCAGACAAATCC

TCCAGCACAGCCTACATGGATCTCAGCAGTCTGACCTCTGAGGGCTCTGCGGTCTAT

TACTGTGCAAGATCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGG

ACTCTGGTCACAGTCTCGAGC (SEQ ID NOG 10)

Ab-19 se humanizo para generar el Anticuerpo 20 (tambien denominado en el presente documento Ab-20) y el Anticuerpo 23 (tambien denominado en el presente documento Ab-23).

Ab-20

Version de IgG4

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-20 incluyendo el peptido senal:

imagen26

TKVEIKR (SEQ ID NOG 11)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-20 incluyendo el peptido senal:

5

10

15

20

ATOATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGAT

gtgatatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggtgaccgtg

tcaccatcacttgccgcgcaagtcaggatattagcagctatttaaattggtatcagc

AGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTCTACTTCCCGTTTGAATAGTG GQGTCCCATCACGCTTCAGTGGCAGTGGCTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCA GCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGGATATTAAACACC CTACGTTCGGTCAAGGCACCAAGGTGGAGATCAAACGT (SEQ ID NOG 12)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-20 incluyendo el peptido senal:

MEWIWIFLFLLSGTAGWSEVOLVOSGAEVKKPGSSVICVSCKASGFTFTbYMlWVRO APGQGLEM^gYINPYNDDllyNEI^KGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA RSlYY^AIfA^^ (SEQ ID NOG 13)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-20 incluyendo el peptido senal:

ATGGAATGGATCTGGATATTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCT

GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA

ggtctcctqcaaggcttctggttttaccttcaccgactatattatqcactgggtgcg

TCAGGCCCCTGGTCAAGGGCTTGAGTGGATGGGCTATATCAACCCTTATAATGATG

ACACCGAATACAACGAGAAGTTCAAGGGCCGTGTCACGATTACCGCGGACAAATCC

acgagcacagcctacatggagctgagcagcctgcgctctgaggacacggccgtgta

TTACTGTGCGCGTTCGATTTATTACTACGATGCCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGG GACTCTGGTCACAGTCTCGAGC (SEQ ID NOG49)

Ab-23

Version de IgG2 Cadena Ligera:

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-23:

imagen27

101 TKVEmRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTAS WCLLNNFYP REAKVQWKVD 151NALQSGNSQE SVTEODSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL 201SSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:341)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-23:

5

10

1 GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTGTAGGTGA 51 CCGTGTCACC ATCACTTGCC GCGCAAGTCA GGATATTAGC AGCTATTTAA 101 ATTGGTATCA GCAGAAACCA GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATTCT 151 ACTTCCCGTT TGAATAGTGG GGTCCCATCA CGCTTCAGTG GCAGTGGCTC 201 TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG TCTGCAACCT GAAGATTTTG 251 CAACTTACTA CTGTCAACAG GATATTAAAC ACCCTACGTT CGGTCAAGGC 301 ACCAAGGTGG AGATCAAACG TACGGTGGCT GCACCATCTG TCTTCATCTT 351 CCCGCCATCT GATGAGCAGT TGAAATCTGG AACTGCCTCT GTTGTGTGCC 401 TGCTGAATAA CTTCTATCCC AQAGAGGCCA AAGTACAGTG GAAGGTGGAT 451 AACGCCCTCC AATCGGGTAA CTCCCAGGAG AGTGTCACAG AGCAGGACAG 501 CAAGGACAGC ACCTACAGCC TCAGCAGCAC cctgacgctg AGCAAAGCAG 551 ACTACGAGAA ACACAAAGTC TACGCCTGCG AAGTCACCCA TCAGQGCCTG 601 AGCTCGCCCG TCACAAAGAG CTTCAACAGG GGAGAGTGT (SEQ ID NO:342)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-23 incluyendo el peptido senal:

1 MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RCDIQMTQSP SSLSASVGDR YTITCRASQD 51ISSYLNWYQQ KPGKAPKLLIYSTSRLNSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL 101 QPEDFATYYC QQDIKHPTFG QGTKVEIKRT VAAPSVFIFP PSDEQLKSGT 151ASWCLLNNF YPREAKVQWK VDNALQSGNS QESVTEQDSK DSTYSLSSTL 201 TLSKADYEKH KVYACEVTHQ QLSSPVTKSF NRGEC (SEQ ID NO:343)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-23 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGACATGA gggtgcccgc TCAGCTCCTG gggctcctgc tgctgtggct 51 gagaggtgcc agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt 101 ctgcatctgt aggtgaccgt gtcaccatca cttgccgcgc aagtcaggat

151 ATTAGCAGCT ATTTAAATTG GTATCAGCAG AAACCAQGGA AAGCCCCTAA 201 GCTCCTGATC TATTCTACTT CCCGTTTGAA TAGTGGGGTC CCATCACGCT 251 TCAGTGGCAG TGGCTCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGTCTG 301 caacctgaag ATITTGCAAC TTACTACTGT CAACAGGATA TTAAACACCC 351 TACGTTCGGT CAAGGCACCA AGGTGGAGAT CAAACGTACG GTGGCTGCAC 401 CATCTGTCTT CATCTTCCCG CCATCTGATG AGCAGTTGAA ATCTGGAACT 451 GCCTCTGTTG TGTGCCTGCT GAATAACTTC TATCCCAGAQ AGGCCAAAGT 501 ACAGTGGAAG GTGGATAACG CCCTCCAATC GGGTAACTCC CAGGAGAGTG 551 TCACAGAGCA GGACAGCAAG GACAGCACCT ACAGCCTCAG CAGCACCCTG 6Q1 ACGCTGAGCA AAGCAGACTA CGAGAAACAC AAAGTCTACG CCTGCGAAGT 651 CACCCATCAG GGCCTGAGCT CGCCCGTCAC AAAGAGCTTC AACAGGGGAG 701 AGTGT (SEQ Ip NQ:344)

Cadena Pesada:

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-23:

imagen28

101YY)^APFAYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK 151DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSWT VPSSNFGTQT 201 YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL 251MISRTPEVTC VWDVSHEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEOFNSTFR

301 WSVLTWHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAPIEKTISKTKG QPREPQVYTL 351PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIA VEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD 401 GSFFLYSKLT VDKSRWOQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO:345)

Secuencia de aminoacidos de forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-23 sin lisina carboxilo-terminal:

1 EVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DiYM|WVRQA PGQGLEWMG^ 51 pPWDDTE^NE^KG’RVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSl '

GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK 151 DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPA VLQSS GLYSLSSWT VPSSNFGTQT 201 YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL 251 MISRTPEVTC VWD VSHEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR

301 WSVLTWHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP IEKTISKTKG QPREPQVYTL 351 PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIA VE W ESNGQPENNY KTTPPMLDSD 401 GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPG (SEQ ID N0.396)

5 •

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-23:

1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGTCCTC

51 ggtgaaggtc tcctgcaaggcttctggttttaccttcacc GAQTATATTA

101 TGCACTGGGT GCGTCAGGCC CCTGGTCAAG GGCTTGAGTG GATGGGCTAT 151ATCAACCCTT ATAATGATGA CACCGAATAC AACGAGAAGT TCAAGGGCCG

201 TGTCACGATT ACCGCGGACA AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA 251 GCAGCCTGCGCTCTGAGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GCGTTCGATT 301 TATTACTACG ATGCCCCGTT TGCTTACTGG GGCCAAGGGA CTCTGGTCAC 351 CGTCTCTAGT GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC CTGGCGCCCT 401 GCTCCAGGAG CACCTCCGAG AGCACAGCGG CCCTGGGCTG CCTGGTCAAG 451 GACTACTTCC CCQAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG GCGCTCTGAC 501 CAGCGGCGTG CACACCTTCC CAGCTGTCCT ACAGTCCTCA GGACTCTACT 551 CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAACTTCGG CACCCAGACC 601 TACACCTGCA ACGTAGATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG TGGACAAGAC 651 AGTTGAGCGC AAATGTTGTG TCQAGTGCCC ACCGTGCCCA GCACCACCTG 701 TGGCAGGACC GTCAGTCTTC CTCTTCCCCC CAAAACCCAA GGACACCCTC 751 ATGATCTCCC GQACCCCTGA GGTCACGTGC GTGGTGGTGG ACGTGAGCCA 801 CGAAGACCCC GAGGTCCAGT TCAACTGGTA CGTGGACGGC GTGGAGGTGC 851ATAATGCCAA GACAAAGCCA CGGGAGGAQC AGTTCAACAG CACGTTCCGT 9Q1 GTGGTCAGCG TCCTCACCGT TGTGCACCAG GACTGGCTGA ACGGCAAGGA 951 GTACAAGTGC AAGGTCTCCA ACAAAGGCCT CCCAGCCCCC ATCGAGAAAA 1001 CCATCTCCAA AACCAAAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG 1051 CCCCCATCCC GGGAGGAGAT GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT 1101 GGTCAAAGGC TTCTACCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGQ GAQAGCAATG 1151 GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACAC CTCCCATGCT GGACTCCGAC 1201 GGCTCCTTCT TCCTCTACAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA 1251 GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT CTGCACAACC 1301 ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCTC CGGGTAAA (SEQ ID NO:346)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-23 incluyendo el peptido senal:

1 MDWTWRILFL VAAATGAHSE VQLVQSGAEV KKPGSSVKVS CKASGFTFTD 51 YIMHWVRQAP GQGLEWMGYINPYNDDTEYN EKFKGRVTIT ADKSTSTAYM 101 ELSSLRSEDT AVYYCARSIY YYDAPFAYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL 151 APCSRSTSES TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG 201 LYSLSSVYTV PSSNFGTQTY TCNVDHKPSN TKVDKTVERK CCYECPPCPA 251 PPVAGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCV WDVSHEDPE VQFNWYVDGV 301 EYHNAKTKPR EEQFNSTFRV VSVLTWHQD WLNGKEYKCK VSNKGLPAPI 351 EKTISKTKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAYEWE 401 SNGQPENNYK TTPPMLDSDO SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL 451 HNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO:347)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-23 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTCTTG GTGGCAGCAG CCACAGGAGC 51 CCACTCCGAG GTGCAGCTGG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG 101 GGTCCTCGGT GAAGGTCTCC TGCAAGGCTT CTGGTTTTAC CTTCACCGAC 151 TATATTATGC ACTGGGTGCG TCAGGCCCCT GGTCAAGGGC TTGAGTGGAT 201 GGGCTATATC AACCCTTATA ATGATGACAC CGAATACAAC GAGAAGTTCA 251 AGGGCCGTGT CACQATTACC GCGGACAAAT CCACGAGCAC AGCCTACATG 301 GAGCTGAGCA GCCTGCGCTC TGAGGACACG GCCGTGTATT ACTGTGCGCG 351 TTCGATTTAT TACTACGATG CCCCGTTTGC TTACTGGGGC CAAGGGACTC 401 TGGTCACCGT CTCTAGTGCC TCCACCAAGG GCCCATCGGT CTTCCCCCTG 451 GCGCCCTGCT CCAGGAGCAC CTCCGAGAGC ACAGCGGCCC TGGGCTGCCT 501 GGTCAAGGAC TACTTCCCCG AACCGGTGAC GGTGTCGTGG AACTCAGGCG 551 CTCTGACCAG CGGCGTGCAC ACCTTCCCAG CTGTCCTACA GTCCTCAGGA 60 lCTCTACTCCC TCAGCAGCGT GGTGACCGTG CCCTCCAGCA ACTTCGGCAC 651 CCAGACCTAC ACCTGCAACG TAGATCACAA GCCCAGCAAC ACCAAGQTGG 701 ACAAGACAGT TGAGQGCAAA TGTTGTGTCG AGTGCCCACC GTGCCCAGCA 751 CCACCTGTGG CAGGACCGTQ AGTCTTCCTC TTCCCCCCAA AACCC AAGGA 801 CACCCTCATG ATCTCCCGGA CCCCTGAGGT CACGTGCGTG GTGGTGGACG 851 TGAGCCACGA AGACCCCGAG GTCCAGTTCA ACTGGTACGT GGACGGCGTG 901 GAGGTGCATA ATGCCAAGAC AAAGCCACGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC 951 GTTCCGTGTG GTCAGCGTCC TCACCGTTGT GCACCAGGAC TGGCTGAACG 1001 GCAAGGAGTA CAAGTGCAAG GTCTCCAACA AAGGCCTCCC AGCCCCCATC 1051 GAGAAAACCA TCTCCAAAAC CAAAGGGCAG CCCCGAGAAC CACAGGTGTA 1101 CACCCTGCCC CCATCCCGGG AGGAGATGAC CAAGAACCAG GTCAGCCTGA 1151 CCTGCCTGGT CAAAGGCTTC TACCCCAGCG ACATCGCCGT GGAGTGGGAG 1201 AGCAATQGGC AGCCQGAGAA CAACTACAAG ACCACACCTC CCATGCTGGA 1251 CTCCGACGGC TCCTTCTTCC TCTACAGCAA GCTCACCGTG GACAAGAGCA 1301 GGTGGCAGCA GGGGAACGTC TTCTCATGCT CCGTGATGCA TGAGGCTCTG 1351 CACAACCACT ACACGCAGAA GAGCCTCTCC CTGTCTCCGG GTAAA (SEQ ID NO.-348)

Las secuencias de CDR (region determinate de complementariedad) en la region variable de la cadena pesada de 5 Ab-23 son las siguientes:

CDR-H1: DYIMH (SEQ ID NO: 269)

CDR-H2: YINPYNDDTEYNEKFKG (SEQ ID NO: 270)

CDR-H3: SIYYYDAPFAY (SEQ ID NO: 271)

10

Las secuencias de CDR de region variable de la cadena ligera de Ab-23 son:

CDR-L1: RASQDISSYLN (SEQ ID NO: 239)

CDR-L2: STSRLNS (SEQ ID NO: 240)

15 CDR-L3: QQDIKHPT (SEQ ID NO: 241)

Dominios variables de Ab-23:

Secuencia de aminoacidos del dominio variable de cadena ligera de Ab-23 (sin secuencia senal):

DIQMTQSPSS LSASVGPRVTITCRASQDIS SYLNWYQQKP GKAPKLLIYS TSRLNSGVPS RPSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ DIKHPTFGQG TKVFIK (SEQ IQ NO:364)

5

10

15

20

25

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena ligera de Ab-23 (sin secuencia senal):

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGTGACCGTGTC ACC ATCACTTGCC GCGCAAGTCA GGATATTAGC AGCTATTTAAATTGGTATCA GCAGAAACCA GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATTCTACTTCCCGTT tgaatagtgg GGTCCCATCA CGCTTCAGTG GCAGTGGCTCTGGGACAGAT ' TTCACTCTCA CCATCAGCAG TCTGCAACCT QAAGATTTTGCAACTTACTA CTGTCAACAG GATATTAAAC ACCCTACGTT QGQTCAAGGCACCAAGGTGG AGATCAAA (SEQ ED NO:365)

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena pesada de Ab-23 (sin secuencia senal):

EVQEVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGFTFT DYIMHWVRQA PGQGLEWMGYINFYNDPTEY NEKFKGRVTITADKSTSTAY MELSSLRSED TAYYYCARSIYYYPAPFAYW GQGTLVTYSS (SEQ ID NO:366)

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena pesada de Ab-23 (sin secuencia senal):

GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAA GGTC TCCTGCAAGG CTTCTGQTTT TACCTTCACC GACTATATTATGCACTGGGT GCGTCAGGCC CCTGGTCAAG GGCTTGAGTG GATGGGCTATATCAACCCTT ATAATGATGA CACCGAATAC AACGAGAAGT TCAAGGGCCGTGTCACGATT ACCGCGGACA AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGAGCAGCCTGCG CTCTGAGGAC ACOGCCGTGT ATTACTGTGC GCGTTCGATTTATTACTACG ATGCCCCGTT TGQTTACTGG GGCCAAGGGACTCTGGTCACCGTCTCTAGT (SEQ ID NQ:367)

Ab-21

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-21 incluyendo el peptido senal:

imagen29

FGAGTKLELKR (SEQ IP NO:315)

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-21 incluyendo el peptido senal:

ATGAAGTCACAGACCCAGGTCTTTGTATACATGTTGCTGTGGTTGTCTGGTGTTGAA

GGAGACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACGTCAGTAGGAGACAG

GGTCACCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTCTTTACTGCTGTAGCCTGGTATCA

ACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTGGGCATCCACCCGGCACA

CTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCA

TTAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGATTATTTCTGTCAACAATATAGCAGCT

ATCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGTTGGAGCTGAAACGT (SEQ IDNO:316)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-21 incluyendo el peptido senal:

imagen30

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-21 incluyendo el peptido senal:

ATOGQATGGAACTGGATCATCTTCTTCCTGATGGCAGTGGTTACAGGOGTCAATTCA

GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAGGCCAGGGGCCTTAGTCAA

gttgtcctgcaaagcttctggcttcaatattaaagactactatatgcactgggtgaa

gcagaggcctgaacagggcctggagtggattggaaggattgatcctgagaatggtg

atattatatatgacccgaagttccagggcaaggccagtataacaacagacacatcc

tccaacacagcctacctgcagctcagcagcctgacqtctgaqgacactgccgtctat

tactgtgcttacgatgctggtgaccccgcctggtttacttactggggccaagggact

CTGGTCACCGTCTCQAGC (SEQ ID NO:318)

Ab-21 se humanizo para producir Ab-22.

5 Ab-22

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-22 incluyendo el peptido senal:

MDMRWAOLLGLLLLWLRGARCDIQMTOSPSSLSASYGDRVTlTCKASODYFfAVAW YQQKPGKAPKLLIYWASTpTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYP; jLTFGGGTKVEIKR (SEQ~ ID NO:319) ............

10 ”’J

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-22 incluyendo el peptido senal:

ATGGATATGCGCGTGCCGGCGCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCGCGG

CGCGCGCTGCGATATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTGG

GCGATCGCGTGACCATTACCTGCAAAGCGAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCG

TGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCAC

CCGCCATACCGGCGTGCCGAGTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTA

CCCTGACCATTAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGT

ATAGCAGCTATCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT(SEQ

IDNO.-320)

15 Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-22 incluyendo el peptido senal:

imagen31

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-22 incluyendo el peptido senal:

20

ATGGATTGGACCTGGAGCATTCTGTTTCTGGTGGCGGCGCCGACCGGCGCGCATAG

CGAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCQCGAGCGTG

aaagtgagctgcaaagcgagcggctttaacattaaagattattatatgcattgggt

GCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCCGCATTGATCCGGAAAAC

ggcgatattatttatgatccgaaatttcagggccqcgtgaccatgaccaccgatacc

AGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGT GTATTATTGCGCGTATGATGCGGGCGATCCGGCGTGGTTTACCTATTGGGGCCAGGG CACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ IDNO:322)

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena ligera de Ab-22 (sin secuencia senal):

5

10

15

20

25

30

PIQMTQSPSS LSASVGDRVTITCKASQDVF TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW ASTRHTGVPS RFSGSQSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSSYPLTFGG GTKVEKR (SEQ ID NO:336)

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena ligera de Ab-22 (sin secuencia senal):

GATATCCAGATGACCCAGAGCCCGAGCAGCCTGAGCGCGAGCGTGGGCGATCGCGT

GACCATTACCTGCAAAGCOAGCCAGGATGTGTTTACCGCGGTGGCGTGGTATCAGC

AGAAACCGGGCAAAGCGCCGAAACTGCTGATTTATTGGGCGAGCACCCGCCATACC

GGCGTGCCGAGTCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCAT

TAGCAGCCTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACCTATTATTGCCAGCAGTATAGCAGCT

ATCCGCTGACCTTTGGCGGCGGCACCAAAGTGGAAATTAAACGT (SEQ ID NO:337)

Secuencia de aminoacidos de dominio variable de cadena pesada de Ab-22 (sin secuencia senal):

EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFNIK DYYMHWVRQA PGQGLEWIGRIDPENGDnY DPKFQGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYY CAYD AGDPAWFTYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO:338)

Secuencia de ADN de dominio variable de cadena pesada de Ab-22 (sin secuencia senal):

GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCGCGAGCGTGA

AAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCTTTAACATTAAAGATTATTATATGCATTGGGTG

cgccaggcgccgggccagggcctggaatggatcggccgcattgatccggaaaacg

gcgatattatttatgatccgaaatttcagggccgcgtgaccatgaccaccgatacca

GCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGCGCAGCCTGCGCAGCGATGATACCGCGGTG

tattattgcgcgtatgatgcgggcgatccggcgtggtttacctattqgggccagggc

ACCCTGGTGACCGTCTCGAGC (SEQ ID NOG39).

Para Ab-18, Ab-20 y Ab-22, la region constante kappa humana de cadena ligera es la siguiente:

TVAAP S VFEFPPSDEQLKS GTAS WCLLNNF YPREAKYQWKVDNALQSGNSQES VTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKYYACEyTHQGLSSPVTKSFNRGEC* (SEQ ID NO:325)

y la region constante gamma-4 humana de cadena pesada es la siguiente:

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS

GLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSV

flfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfns

tyrwsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqee

mtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksr

WQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQICSLSLSLGK* (SEQ ID NO:326)

La region bisagra contiene la mutacion Ser-241-Pro para mejorar la estabilidad de la bisagra (Angal S et al., (1993), Mol Immunol, 30 (1), 105-108).

Ab-24

Las secuencias de las LC y HC del Anticuerpo 24 (tambien denominado en el presente documento Ab-24) son las siguientes:

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-24:

imagen32

161 Wgggtklei kradaaptvs ifppsseqlt sggaswcfl nnfypkdinv

151 KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS STL TL TKDEY ERHNSYTCEA 201 THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NO:3 50)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la LC de Ab-24:

10

1 GACATTQTGT TGACCCAGTC TCCAGCTTCT TTGGCTGTGT CTCTAGGGCA 51 GAGGGCCACC ATCGCCTGCA AGGCCAGCCA AAGTGTTGAT TATGATGGTA 101 CTAGTTATAT GAATTGGTAC CAACAGAAAC CAGGACAGCC ACCCAAACTC 151 CTCATCTATG CTGCATCCAA TCTAGAATCT GAGATCCCAG CCAGGTTTAG 201 TGGCACTGGG TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT CCTGTGGAGG 251 AGGAGGATAT CACAACCTAT TACTGTCAGC AAAGTAATGA GGATCCGTTC 301 ACGTTCGGAG GGGGGACCAA GTTGGAAATA AAACGGGCTG ATGCTGCACC 351 AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA TGTQGAGGTG 401 CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA CATCAATGTC 451 AAGTGGAAGA TTGATGGCAG TGAACGACAA AATGGCGTCC TGAACAGTTG 501 GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC AGCACCCTCA 551 CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACQACATA ACAGCTATAC CTGTGAGGCC 601 ACTCACAAQA CATCAACTTC ACCCATTGTC AAGAGCTTCA ACAGQAATGA 651 GTGTTAG (SEQ ID NOG 54)

Secuencia de aminoacidos de la LC de Ab-24 incluyendo el peptido senal:

1 METDTILLWV LLLWVPGSTG DIVLTQSPAS LAVSLGQRATIACKASQSVD 51 YDGTSYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES EIPARFSGTG SGTDFTLNIH 101 PVEEEDITTY YCQQSNEDPF TFGGGTKLEI KRADAAPTVS IFPPSSEQLT 1 151 SGGASWCFL NNFYPKDINV KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS 201 STLTLTKDEY ERHNSYTCEA THKTSTSPIV KSFNRNEC (SEQ ID NQ:355)

15

Secuencia de acido nucleico de la LC de Ab-24 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

5

10

1 ATGGAGACAG ACACAATCCT GCTATGGGTG CTGCTGCTCT GGGTTCCAGQ 51 CTCCACTGGT GACATTGTGT TGACCCAGTC TCCAGCTTCT TTGGCTGTGT 101 CTCTAGGGCA GAGGGCCACC ATCQCCTGCA AGGCCAQCCA AAGTGTTGAT 151 TATGATGGTA CTAGTTATAT QAATTQGTAC CAACAQAAAC CAGGACAGCC 201 ACCCAAACTC CTCATCTATG CTQCATCCAA TCTAGAATCT QAGATCCCAG 251 CCAGGTTTAG TGGCACTGGQ TCTGGGACAG ACTTCACCCT CAACATCCAT 3 01 CCTGTGGAGG AGGAGGATAT CACAACCTAT TACTGTCAGC aaagtaatga 351 GGATCCGTTC ACGTTCGGAQ GGGGGACCAA GTTGGAAATA AAACGGGCTG 401 ATGCTGCACC AACTGTATCC ATCTTCCCAC CATCCAGTGA GCAGTTAACA 451 tctggaggtg CCTCAGTCGT GTGCTTCTTG AACAACTTCT ACCCCAAAGA 501 CATCAATGTC AAGTQGAAGA TTGATGGCAG TGAACQACAA AATGGCGTCC 551 TGAACAGTTG GACTGATCAG GACAGCAAAG ACAGCACCTA CAGCATGAGC 601 AGCACCCTCA CGTTGACCAA GGACGAGTAT GAACGACATA ACAGCTATAC

651 ctgtgaggcc actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca

701 ACAGGAATGA GTGTTAG (SEQ ID NOG 56)

Cadena Pesada de Ab-24:

Secuencia de aminoacidos de la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-24:

1 QVQLQQPGTE LVRPGTSVKL SCKASGYIFT jmVMNWVKQR PGQGLEWIGM 51 feSASEI^DQKFKDKATL TLDKSSSTAY MHLSGPTSVD SAWYCAR^SQ1"

101EWGSMDYWGQ GTS VWSSAZ TTPPSVYPLA PGSAAQTNSM VTLGCLVKGY 151 FPEPVfVTWN SGSLSSGVHT FPA VLQSDLY TLSSSVTVPS STWPSETVTC 201 NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP EVSSVFIFPP KPKDVITITL 251 TPKVTCVWDISKDDPEVQF SWFVDD VEVH TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE 301 LPIMHQDWLNGKEFKCR VNSAAFPAPIEKTISKTKGRPEA PQVYTIPPPK 351 EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PIMDTDGSYF 401 IYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNHHTEKSLSHSP GK (SEQ ID NOG57)

Secuencia de acido nucleico que codifica la forma madura (peptido senal retirado) de la HC de Ab-24:

1 CAGGTCCAAC TACAGCAGCC TGGGACTGAG CTGGTGAGGC CTGGAACTTC 51 AGTGAAGTTG TCCTGTAAGG CTTCTGGCTA CATCTTCACC ACCTACTGGA 101 TGAACTGGGT GAAACAGAGG CCTGQACAAG GCCTTGAGTG GATTGGCATG 151 ATTCATCCTT CCGCAAGTGA AATTAGGTTG GATCAGAAAT TCAAGGACAA 201 GGCCACATTG ACTCTTGACA AATCCTCCAG CACAGCCTAT ATQCACCTCA 251 GCGGCCCGAC ATCTGTGGAT TCTGCGGTCT ATTACTGTGC AAGATCAGGG 301 GAATGGGGGT CTATGGACTA CTGQGGTCAA GGAACCTCAG TCACCGTCTC 351 CTCAGCCAAA ACGACACCCC CATCTGTCTA TCCACTGGCC CCTGGATCTG 401 CTGCCCAAAC TAACTCCATG GTGACCCTGG GATGCCTGGT CAAGGGCTAT 451 TTCCCTGAGC CAGTGACAGT GACCTGGAAC TCTGGATCCC TGTCCAGCGG 501 TGTGCACACC TTCCCAGCTG TCCTGCAGTC TGACCTCTAC ACTCTGAGCA 551 QCTCAGTGAC TGTCCCCTCC AGCACCTGGC CCAGCQAGAC CGTCACCTGC 601 AACGTTGCCC ACCCGGCCAG CAGCACCAAG GTGGACAAGA AAATTGTGCC 651 cagggattgt GGTTGTAAGC CTTGCATATG TACAGTCCCA GAAGTATCAT 701 CTGTCTTCAT CTTCCCCCCA AAGCCCAAGG ATGTGCTCAC CATTACTCTG 751 ACTCCTAAGG TCACGTGTGT TQTGGTAGAC ATCAGCAAGG ATGATCCCGA 801 GGTCCAGTTC AGCTGGTTTG TAGATGATGT GGAGGTGCAC ACAGCTCAQA 851 CGCAACCCCG GGAGQAGCAG TTCAACAQCA CTTTCCGCTC AGTCAGTGAA 901 CTTCCCATCA TGCACCAGGA CTGGCTCAAT GGCAAGGAGT TCAAATGCAG 951 GGTCAACAGT GCAGCTTTCC CTGCCCCCAT CGAGAAAACC ATCTCCAAAA 1001 CCAAAGGCAG ACCGAAGGCT CCACAGGTGT ACACCATTCC ACCTCCCAAG 1051 GAGCAGATGG CCAAGGATAA AGTCAGTCTG ACCTGCATGA TAACAGACTT 1101 CTTCCCTGAA GACATTACTG TGGAGTGGCA GTGGAATGGG CAGCCAGCGG 1151 AGAACTACAA GAACACTCAG CCCATCATGG ACACAQATGG CTCTTACTTC 1201 ATCTACAGCA AGCTCAATGT GCAGAAGAGC AACTGGGAGG CAGGAAATAC 1251 TTTCACCTGC TCTGTGTTAC ATGAGGGCCT GCAGAACCAC CATACTGAGA 1301 AGAGCCTCTC CCACTCTCCT GGTAAATGA (SEQ ID NO:361)

Secuencia de aminoacidos de la HC de Ab-24 incluyendo el peptido senal:

1 MGWSSIILFL VATATGVHSQ VQLQQPGTEL VRPGTSVKLS CKASGYIFTT 51 YWMNWVKQRP GQGLEWIGMIHPSASEIREP QKFKDKATLT EDKSSSTAYM 101 HLSGPTSVDS AVYYCARSGE WGSMDYWGQG TSVTVSSAKT TPPSVYPLAP 151 GSAAQTNSMV TLGCLVKGYF PEPVTVTWNS GSLSSGVHTF PAVLQSDLYT 201 LSSSVTVPSS TWPSETVTCN VAHPASSTKV DKKIVPRDCG CKPCICTVPE 251 VSSVFIFPPK PKDVLTITET PKVTCVWDISKDPPEVQFS WFVDDVEVHT 301 AQTQPREEQF NSTFRSVSEE PIMHQDWLNG KJsFKCRVNSA AFPAPIEKTI 3 51 SKTKGRPKAP QVYTIPPPKE QMAKDKVSLT CMITDFFPEDITVEWQWNGQ 401 PAENYKNTQPIMDTDGSYFIYSKLNVQKSN WEAGNTFTCS VLHEGLHNHH 451 TEKSLSHSPG K (SEQ ID NO:362)

Secuencia de acido nucleico de la HC de Ab-24 incluyendo la secuencia codificante del peptido senal:

1 ATGGGATGGA GCTCTATCAT CCTCTTCTTG GTAGCAACAG CTACAGGTGT 51 CCACTCCCAG GTCCAACTAC AGCAGCCTGG GACTGAGCTG GTGAGGCCTG 101 GAACTTCAGT GAAQTTGTCC TGTAAGGCTT CTGGCTACAT CTTCACCACC 151 TACTGGATGA ACTGGGTGAA ACAGAGGCCT GGACAAGGCC TTGAQTGGAT 201 TGGCATGATT CATCCTTCCG CAAGTGAAAT TAGGTTGGAT CAGAAATTCA

251 aggacaaggc cacattgact cttgacaaat cctccagcac AGCCTATATG 301 CACCTCAGCG GCCCGACATC TGTGGATTCT GCGGTCTATT ACTGTGCAAG 351 ATCAGGGGAA TGGGGGTCTA TGGACTACTG GGGTCAAGGA ACCTCAGTCA 401 CCGTCTCCTC AGCCAAAACG ACACCCCCAT CTGTCTATCC ACTGGCCCCT 451 GGATCTGCTG CCCAAACTAA CTCCATGGTG ACCCTGGGAT GCCTGGTCAA 501 GGGCTATTTC CCTGAGCCAG TGACAGTGAC CTGGAACTCT GGATCCCTGT 551 CCAGCGGTGT GCACACCTTC CCAGCTGTCC TGCAGTCTGA CCTCTACACT 601 CTGAGCAGCT CAGTGACTGT CCCCTCCAGC ACCTGGCCCA GCGAGACCGT 651 CACCTGCAAC GTTGCCCACC CGGCCAGCAG CACCAAQGTG GACAAGAAAA 701 TTGTGCCCAG GGATTGTGGT TGTAAGCCTT GCATATGTAC AGTCCCAGAA 751 GTATCATCTG TCTTCATCTT CCCCCCAAAG CCCAAGGATG TGCTCACCAT 801 TACTCTGACT CCTAAGGTCA CGTGTGTTGT GGTAGACATC AGCAAGGATG 851 ATCCCGAGGT CCAGTTCAGC TGGTTTGTAG ATGATGTGGA GGTGCACACA 901 GCTCAGACGC AACCCCGGGA GGAGCAGTTC AACAGCACTT TCCGCTCAGT 951 CAGTGAACTT CCCATCATGC ACCAGGACTG GCTCAATGGC AAGGAGTTCA 1001 AATGCAGGGT CAACAGTGCA GCTTTCCCTG CCCCCATCGA GAAAACCATC 1051 TCCAAAACCA AAGGCAGACC GAAGGCTCCA CAGGTGTACA CCATTCCACC 1101 TCCCAAGGAG CAGATGGCCA AGGATAAAGT CAGTCTGACC TGCATGATAA 1151 C AGACTTCTT CCCTGAAGAC ATTACTGTGG AQTGQC AGTG QAATGGGC AG 1201 CCAGCGGAGA ACTACAAGAA CACTCAGCCC ATCATGGACA CAGATGGCTC 1251 TTACTTCATC TACAGCAAGC TCAATGTGCA GAAGAGCAAC TGGQAGGCAG 1301 GAAATACTTT CACCTGCTCT GTGTTACATG AGGGCCTGCA CAACCACCAT 1351 ACTQAGAAGA GCCTCTCCCA CTCTCCTGQT AAATGA (SEQ ID NO:363)

Las secuencias de CDR en la region variable de la cadena ligera de Ab-24 son las siguientes:

5

CDR-L1: KASQSVDYDGTSYMN (SEQ ID NO: 351)

CDR-L2: AASNLES (SEQ ID NO: 352)

CDR-L3: QQSNEDPFT (SEQ ID NO: 353)

10 Las secuencias de CDR en la region variable de la cadena pesada de Ab-24 son las siguientes:

CDR-H1: TYWMN (SEQ ID NO: 358)

CDR-H2: MIHPSASEIRLDQKFKD (SEQ ID NO: 359)

CDR-H3: SGEWGSMDY (SEQ ID NO: 360)

15

La Tabla 1 a continuation proporciona la SEQ ID NO y secuencias de aminoacidos de las CDR de Ab-A, Ab-B, AbC, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24. L1, L2 y L3 se refieren a las CDR de cadena ligera 1,2 y 3 y H1, H2 y H3 se refieren a las CDR de cadena pesada 1,2 y 3 de acuerdo con el sistema de numeration Kabat 20 (Kabat et al., 1987 en Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, NIH, Estados Unidos).

Tabla 1

SEQ ID NO

DESCRICIPCION SECUENCIA DE AMINOACIDOS

54

CDR-L1 de Ab-A y Ab-1 QSSQSVYDNNWLA

55

CDR-L2 de Ab-A y Ab-1 DASDLAS

Tabla 1

SEQ ID NO

DESCRICIPCION SECUENCIA DE AMINOACIDOS

56

CDR-L3 de Ab-A y Ab-1 QGAYNDVIYA

51

CDR-H1 de Ab-ky Ab-1 SYWMN

52

CDR-H2 de Ab-A y Ab-1 TIDSGGRTDYASWAKG

53

CDR-H3 de Ab-A y Ab-1 NWNL

60

CDR-L1 de Ab-B SASSSVSFVD

61

CDR-L2 de Ab-B RTSNLGF

62

CDR-L3 de Ab-B QQRSTYPPT

57

CDR-H1 de Ab-B TSGMGVG

58

CDR-H2 de Ab-B HIWWDDVKRYNPVLKS

59

CDR-H3 de Ab-B EDFDYDEEYYAMDY

48

CDR-L1 de Ab-C KASQSVDYDGDSYMN

49

CDR-L2 de Ab-C AASNLES

50

CDR-L3 de Ab-C QQSNEDPWT

45

CDR-H1 de Ab-C DCYMN

46

CDR-H2 de Ab-C DINPFNGGTTYNQKFKG

47

CDR-H3 de Ab-C SHYYFDGRVPWDAMDY

42

CDR-L1 de Ab-D QASQGTSINLN

43

CDR-L2 de Ab-D GSSNLED

44

CDR-L3 de Ab-D LQHSYLPYT

39

CDR-H1 de Ab-D DHYMS

40

CDR-H2 de Ab-D DINPYSGETTYNQKFKG

41

CDR-H3 de Ab-D DDYDASPFAY

275

CDR-L1 de Ab-2 RASSSVYYYMH

276

CDR-L2 de Ab-2 ATSNLAS

277

CDR-L3 de Ab-2 QQWSSDPLT

287

CDR-H1 de Ab-2 DYFIH

288

CDR-H2 de Ab-2 RLDPEDGESDYAPKFQD

289

CDR-H3 de Ab-2 EDYDGTYTFFPY

278

CDR-L1 de Ab-3 y Ab-15 SVSSTISSNHLH

279

CDR-L2 de Ab-3 y Ab-15 GTSNLAS

280

CDR-L3 de Ab-3 y Ab-15 QQWSSYPLT

290

CDR-H1 de Ab-3 y Ab-15 DFYLH

291

CDR-H2 de Ab-3 y Ab-15 RIDPENGDTLYPPKFQD

292

CDR-H3 de Ab-3 y Ab-15 EADYFHDOTSYWYFDV

78

CDR-L1 de Ab-4 y Ab-5 RASQDISNYLN

79

CDR-L2 de Ab-4 y Ab-5 YTSRLLS

80

CDR-L3 de Ab-4 y Ab-5 QQGDTLPYT

245

CDR-H1 de Ab-4 y Ab-5 DYNMH

246

CDR-H2 de Ab-4 y Ab-5 EINPNSGGAGYNQKFKG

247

CDR-H3 de Ab-4 y Ab-5 LGYDDIYDDWYFDV

81

CDR-L1 de Ab-6 RASQDISNYLN

99

CDR-L2 de Ab-6 YTSRLHS

100

CDR-L3 de Ab-6 QQGDTLPYT

248

CDR-H1 de Ab-6 DYNMH

249

CDR-H2 de Ab-6 EINPNSGGSGYNQKFKG

250

CDR-H3 de Ab-6 LVYDGSYEDWYFDV

101

CDR-L1 de Ab-7 RASQVITNYLY

102

CDR-L2 de Ab-7 YTSRLHS

103

CDR-L3 de Ab-7 QQGPTLPYT

251

CDR-H1 de Ab-7 DYNMH

252

CDR-H2 de Ab-7 EINPNSGGAGYNQQFKG

253

CDR-H3 de Ab-7 LGYVGNYEDWYFDV

Tabla 1

SEQ ID NO

DESCRICIPCION SECUENCIA DE AMINOACIDOS

104

CDR-L1 de Ab-8 RASQDISNYLN

105

CDR-L2 de Ab-8 YTSRLLS

106

CDR-L3 de Ab-8 QQGDTLPYT

254

CDR-H1 de Ab-8 DYNMH

255

CDR-H2 de Ab-8 EINPNSGGAGYNQKFKG

256

CDR-H3 de Ab-8 LGYDDIYDDWYFDV

107

CDR-L1 de Ab-9 RASQDISNYLN

108

CDR-L2 de Ab-9 YTSRLFS

109

CDR-L3 de Ab-9 QQGDTLPYT

257

CDR-H1 de Ab-9 DYNMH

258

CDR-H2 de Ab-9 EINPNSGGAGYNQKFKG

259

CDR-H3 de Ab-9 LGYDDIYDDWYFDV

110

CDR-L1 de Ab-10 RASQDISNYLN

111

CDR-L2 de Ab-10 YTSRLLS

112

CDR-L3 de Ab-10 QQGDTLPYT

260

CDR-H1 de Ab-10 DYNMH

261

CDR-H2 de Ab-10 EINPNSGGAGYNQKFKG

262

CDR-H3 de Ab-10 LGYDDIYDDWYFDV

281

CDR-L1 de Ab-11 y Ab-16 RASSSISYIH

282

CDR-L2 de Ab-11 y Ab-16 ATSNLAS

283

CDR-L3 de Ab-11 y Ab-16 QQWSSDPLT

293

CDR-H1 de Ab-11 y Ab-16 DYYIH

294

CDR-H2 de Ab-11 y Ab-16 RVDPPNGETEFAPKFPG

295

CDR-H3 de Ab-11 y Ab-16 EDYDGTYTWFPY

113

CDR-L1 de Ab-12 RASQDISNYLN

114

CDR-L2 de Ab-12 YTSTLQS

115

CDR-L3 de Ab-12 QQGDTLPYT

263

CDR-H1 de Ab-12 DYNMH

264

CDR-H2 de Ab-12 EINPNSGGSGYNQKFKG

265

CDR-H3 de Ab-12 LGYYGNYEDWYFDV

284

CDR-L1 de Ab-13 y Ab-14 RASSSVTSSYLN

285

CDR-L2 de Ab-13 y Ab-14 QQYDFFPST

286

CDR-L3 de Ab-13 y Ab-14 DYYMN

296

CDR-H1 de Ab-13 y Ab-14 DYYMN

297

CDR-H2 de Ab-13 y Ab-14 DINPYNDDTTYNHKFKG

298

CDR-H3 de Ab-13 y Ab-14 ETAVITTNAMD

116

CDR-L1 de Ab-17 y Ab-18 SVSSSISSNLH

237

CDR-L2 de Ab-17 y Ab-18 GTSNLAS

238

CDR-L3 de Ab-17 y Ab-18 QQWTTTYT

266

CDR-H1de Ab-17 y Ab-18 CDR-H1 DYYIH

267

CDR-H2 de Ab-17 y Ab-18 RIDPDNGESTYVPKFQG

268

CDR-H3 de Ab-17 y Ab-18 EGLDYGDYYAVDY

239

CDR-L1 de Ab-19, Ab-20 y Ab-23 RASQDISSYLN

240

CDR-L2 de Ab-19, Ab-20 y Ab-23 STSRLNS

241

CDR-L3 de Ab-19, Ab-20 y Ab-23 QQDIKHPT

269

CDR-H1 de Ab-19, Ab-20 y Ab-23 DYIMH

270

CDR-H2 de Ab-19, Ab-20 y Ab-23 YINPYNDDTEYNEKFKG

271

CDR-H3 de Ab-19, Ab-20 y Ab-23 SIYYYDAPFAY

242

CDR-L1 de Ab-21 y Ab-22 KASQDVFTAVA

243

CDR-L2 de Ab-21 y Ab-22 WASTRHT

244

CDR-L3 de Ab-21 y Ab-22 QQYSSYPLT

272

CDR-H1 de Ab-21 y Ab-22 DYYMH

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Tabla 1

SEQ ID NO

DESCRICIPCION SECUENCIA DE AMINOACIDOS

273

CDR-H2 de Ab-21 y Ab-22 RIDPENGDIIYDPKFQG

274

CDR-H3 de Ab-21 y Ab-22 DAGDPAWFTY

351

CDR-L1 de Ab-24 KASQSVDYDGTSYMN

352

CDR-L2 de Ab-24 AASNLES

353

CDR-L3 de Ab-24 QQSNEDPFT

358

CDR-H1 de Ab-24 TYWMN

359

CDR-H2 de Ab-24 MIHPSASEIRLDQKFKD

360

CDR-H3 de Ab-24 SGEWGSMDY

Un oligopeptido o polipeptido puede tener una secuencia de aminoacidos que es al menos 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% identica a al menos una de las CDR de la Tabla 1 anterior; y/o a una CDR de un agente de union a esclerostina que bloquea de forma cruzada la union de al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab- 3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab- 20, Ab-21, Ab-22, Ab-23, y Ab-24 con esclerostina, y/o esta bloqueada de forma cruzada de la union con esclerostina por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23, y Ab-24; y/o con una CDR de un agente de union a esclerostina donde el agente de union puede bloquear el efecto inhibidor de esclerostina en un ensayo de mineralizacion basado en celulas (es decir, un agente de union neutralizante de esclerostina); y/o a una CDR de un agente de union a esclerostina que se une a un epftopo de Bucle 2; y/o a una CDR de un agente de union a esclerostina que se une a un epftopo T20,6; y/o a una CDR de un agente de union a esclerostina que se une a un epftopo “derivado de T20,6 (nudo de cistina + 4 ramas)”.

Los polipeptidos y anticuerpos del agente de union a esclerostina pueden tener secuencias de aminoacidos que son al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% identicas a una region variable de al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab- 7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24, y bloquean de forma cruzada la union de al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab- 2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24 con esclerostina, y/o estan bloqueados de forma cruzada de la union con esclerostina por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24; y/o pueden bloquear el efecto inhibidor de esclerostina en un ensayo de mineralizacion basado en celulas (es decir, un agente de union neutralizante de esclerostina); y/o unirse a un epftopo de bucle 2; y/o unirse a un epftopo T20,6; y/o unirse a un epftopo “derivado de T20,6 (nudo de cistina + 4 ramas)”.

Los polinucleotidos que codifican agentes de union a esclerostina pueden tener secuencias polinucleotidicas que son al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% identicas a un polinucleotido que codifica una region variable de al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab- 19, Ab-20, Ab-21; Ab-22, Ab-23 y Ab-24 y donde los agentes de union a esclerostina codificados bloquean de forma cruzada la union de al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab-12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab- 23, y Ab-24 con esclerostina, y/o estan bloqueados de forma cruzada de la union con esclerostina por al menos uno de los anticuerpos Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D, Ab-1, Ab-2, Ab-3, Ab-4, Ab-5, Ab-6, Ab-7, Ab-8, Ab-9, Ab-10, Ab-11, Ab- 12, Ab-13, Ab-14, Ab-15, Ab-16, Ab-17, Ab-18, Ab-19, Ab-20, Ab-21, Ab-22, Ab-23 y Ab-24; y/o pueden bloquear el efecto de esclerostina en un ensayo de mineralizacion basado en celulas (es decir, un agente de union neutralizante de esclerostina); y/o se unen a un epftopo de bucle 2; y/o se unen a un epftopo T20,6; y/o se unen a un epftopo “derivado de T20,6 (nudo de cistina + 4 ramas)”.

Los anticuerpos de acuerdo con la invencion pueden tener una afinidad de union por esclerostina humana de menos

1 9 1 10 *11 12

de o igual a 1 x 10 M, menor de o igual a 1 x 10 M, menor de o igual a 1 x 10 M o menor de o igual a 1 x 10' M.

La afinidad de un agente de union tal como un anticuerpo o companero de union, asf como el grado en el que un agente de union (tal como un anticuerpo) inhibe la union, puede determinarse por un experto habitual en la materia usando tecnicas convencionales, por ejemplo las descritas en Scatchard et al. (Ann. N.Y. Acad. Sci. 51: 660-672 (1949)) o por resonancia de plasmon superficial (SPR; BIAcore, Biosensor, Piscataway, NJ). Para resonancia de plasmon superficial, las moleculas diana se inmovilizan en una fase solida y se exponen a ligandos en una fase movil que se desplaza a lo largo de una celda de flujo. Si se produce union de ligando con la diana inmovilizada, el mdice refractario local cambia, lo que conduce a un cambio en el angulo de SPR, que puede supervisarse en tiempo real detectando cambios en la intensidad de la luz reflejada. Las tasas de cambio de la senal de SPR pueden

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

analizarse para producir constantes de velocidad aparente para las fases de asociacion y disociacion de la reaccion de union. La relacion de estos valores proporciona la constante en equilibrio aparente (afinidad) (vease, por ejemplo, Wolff et al, Cancer Res. 53: 2560-65 (1993)).

Un anticuerpo de acuerdo con la presente invencion puede pertenecer a cualquier clase de inmunoglobulina, por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD o IgA. Puede obtenerse o derivar de un animal, por ejemplo, ave de corral (por ejemplo, pollo) y mairnferos, que incluye pero sin limitacion un raton, rata, hamster, conejo u otro roedor, vaca, caballo, oveja, cabra, camello, ser humano u otro primate. El anticuerpo puede ser un anticuerpo de internalizacion. La produccion de anticuerpos se divulga en general en la Publicacion de Patente de Estados Unidos N° 2004/0146888 A1.

Ensayos de caracterizacion

En los metodos descritos anteriormente para generar anticuerpos, incluyendo la manipulacion de las CDR de Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D y Anticuerpo 1-24 (Ab-1 a Ab-24) espedficas en nuevas regiones marco conservadas y/o constantes, estan disponibles ensayos apropiados para seleccionar los anticuerpos o agentes de union deseados (es decir, ensayos para determinar la afinidad de union con esclerostina; ensayos de bloqueo cruzado; “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore; ensayo basado en celulas MC3T3-E1; ensayos in vivo).

Ensayos de union de epftopos

La esclerostina humana de forma madura es una glicoprotema de 190 aminoacidos con una estructura de nudo de cistina (Figuras 8 y 9). Ademas de la estructura en nudo de cistina, la protema se caracteriza porque tiene tres bucles designados como Bucle 1, Bucle 2 y Bucle 3. La esclerostina humana se sometio a digestion proteolftica para producir fragmentos. Brevemente, usando diferentes proteasas, incluyendo tripsina, aspN y lysC, se generaron fragmentos con diversos sitios de escision y tamanos. Se determinaron las secuencias y la masa para diversos peptidos de esclerostina humana. Se evaluo la proteccion de anticuerpos para determinar el efecto sobre la accesibilidad para proteolisis, incluyendo el enmascaramiento de sitio cortado y desplazamiento peptfdico. Finalmente, se realizo un “ensayo de competicion de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en BIAcore.

La exposicion de esclerostina a escision por tripsina dio como resultado un patron de fragmentos peptfdicos como se resumen en la Figura 13. Los fragmentos se denominan T19,2, T20, T20,6 y T21-22. Como se muestra de forma esquematica en la Figura 19B, el epftopo T20,6 es un complejo de cuatro secuencias peptfdicas separadas que se unen por los tres enlaces disulfuro de la region del nudo de cistina. Dos de los peptidos estan unidos por dos enlaces disulfuro. Los otros dos peptidos estan unidos por un enlace disulfuro que, esquematicamente, divide en dos los primeros dos polipeptidos.

El epftopo T20,6 que se genero por digestion con tripsina conserva la estructura de nudo de cistina del polipeptido nativo y esta reconocido por los anticuerpos Ab-C y Ab-D. Un derivado del epftopo T20,6 consiste en la region del nudo de cistina y los aminoacidos 58-64, 73-81, 112-117 y 138-141 en posicion de secuencia con referencia a SEQ ID NO: 1. Este epftopo derivado se muestra en la Figura 21. Un epftopo que comprende la region de nudo de cistina puede tener uno o mas aminoacidos que estan presentes en el epftopo T20,6 (Figura 19B) pero no presentes en el epftopo derivado de T20,6 (Figura 21).

Otra region que contiene epftopos se identifico en la region de Bucle 2 de esclerostina humana (Figura 19A) y se reconoce por los anticuerpos Ab-A y Ab-B. Un epftopo de Bucle 2 comprende los aminoacidos 86-111 de SEQ ID NO: 1 (C4GPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC5, SEQ ID NO: 6). De forma esterica, con referencia a esclerostina de longitud completa de SEQ ID NO: 1, la estructura que contiene el Bucle 2 se define en un extremo por un enlace disulfuro entre cistema en la posicion 86 (C4) y cistema en la posicion 144 (C8) y en el otro extremo por un enlace disulfuro entre cistema en la posicion 111 (C5) y cistema en la posicion 57 (C1).

Los peptidos generados por escision de aspN de esclerostina humana se muestran en la Figura 12. En la Figura, estos peptidos se designan AspN14,6, AspN18,6 y AspN22,7-23,5 y tambien se denominan en el presente documento N14,6, N18,6y N22,7-23,5, respectivamente.

Un grupo de anticuerpos muestra un patron espedfico de union con ciertos epftopos como se demuestra por un “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore. Brevemente, el anticuerpo se preincuba con el epftopo para ensayar, a concentraciones que saturaran los sitios de union a epftopo en el anticuerpo. El anticuerpo se expone despues a esclerostina unida a una superficie de microplaca. Despues de los procedimientos de incubacion y lavado apropiados, se establece un patron de union competitiva. Como se muestra en la Figura 18, el anticuerpo ejemplar Ab-D se unio a moleculas de esclerostina unidas a la superficie de la microplaca. La preincubacion del anticuerpo Ab-D con esclerostina redujo la union del anticuerpo con la esclerostina en la microplaca hasta casi cero. La preincubacion con un peptido que consistfa en el epftopo T19,2 mostro que T19,2 no competfa con la esclerostina por la union con el anticuerpo. Sin embargo, la preincubacion con uno cualquiera de los epftopos designados t20, T20,6, T21-22 o N22,7-23,5 suprimio una gran proporcion de la union

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

del anticuerpo con la esclerostina en la microplaca. Por el contrario, la preincubacion del anticuerpo con uno cualquiera de los epftopos designados T19,2, Nl4,6 o N18,6 no suprimio la capacidad del anticuerpo para unirse a esclerostina. Un segundo anticuerpo ejemplar con este perfil de union (Fig. 17) es Ab-C.

El anticuerpo Ab-D es por lo tanto ejemplar y representativo de un grupo de anticuerpos que se unen a los epftopos T20, T20,6, T21-22 y N22,7-23,5 y tienen union detectable minima con los epftopos T19,2, N14,6 y N18,6, como se mide por la capacidad para bloquear la union del anticuerpo con esclerostina. Los anticuerpos que tienen este patron de union caractenstico pueden compartir o no secuencia de aminoacidos en una o mas regiones de la molecula de anticuerpo. La similitud del anticuerpo se determina funcionalmente tal como mediante la capacidad para unirse con esclerostina despues de la preincubacion con cada uno de los epftopos descritos anteriormente. Se incluyen en la invencion anticuerpos que muestran un patron de union similar o identico al del anticuerpo Ab-D. Por “similar a” se entiende, por ejemplo, que el anticuerpo mostrara union con cada uno de los polipeptidos T20, T20,6, T21-22 y N22,7-23,5 por lo que esta union superara en competicion al menos el 50% de la union del anticuerpo con esclerostina que se producina de otro modo en ausencia de preincubacion con esclerostina o un peptido de esclerostina. El anticuerpo tambien mostrara poca o ninguna union detectable con los polipeptidos T19,2, N14,6 y N18,6, dando como resultado una reduccion del 30% o menos de la union que se producina en ausencia de preincubacion con esclerostina o un peptido de esclerostina.

Por ejemplo, sin quedar ligado a un mecanismo particular, el patron de union del anticuerpo de la Figura 18 sugiere que el espacio epitopico con el que el anticuerpo Ab-D y otros anticuerpos que tienen el patron de union a epftopos de Ab-D se unen consiste en un polipeptido que comprende la region de nudo de cistina de esclerostina.

Por lo tanto, como se divulga en el presente documento y con referencia a la Figura 19B, un epftopo T20,6 ejemplar comprende cuatro cadenas peptfdicas unidas mediante tres enlaces disulfuro separados. La cadena peptfdica SAKPVTELVC3SGQC4GPAR (SEQ ID NO: 3) esta unida a la cadena peptfdica LVASC7KC8KRLTR (SEQ ID NO: 5) por enlaces disulfuro de C3 a C7 y de C4 a C8. La cadena peptfdica DvSEYSCIRELHFTR (SEQ ID NO: 2) esta unida a la cadena peptfdica WWRPSGPDFRC5IPDRYR (SEQ Id NO: 4) por un enlace disulfuro de C1 a C5. Los polipeptidos de SEQ ID NO: 3 y 5 permanecen asociados con los polipeptidos de SEQ ID NO: 2 a 4 mediante una construccion esterica por la que el enlace C1-C5 cruza el plano de los enlaces C4-C8 y C3-C7 y se localiza entre ellos, como se ilustra en la Figura 19B.

Como se desvela en el presente documento y con referencia a la Figura 21, un epftopo derivado ejemplar de T20,6 comprende cuatro cadenas peptfdicas unidas mediante tres enlaces disulfuro separados. La cadena peptfdica SAKPVTELVC3SGQC4 (SEQ ID NO: 70) esta unida a la cadena peptfdica LVASC7KC8 (SEQ ID NO: 71) por enlaces disulfuro de C3 a C7 y de C4 a C8. La cadena peptfdica C1RELHFTR (SEQ ID nO: 72) esta unida a la cadena peptfdica C5IPDRYR (SeQ ID NO: 73) por un enlace disulfuro de C1 a C5. Los polipeptidos de SEQ ID NO: 70 y 71 permanecen asociados con los polipeptidos de SEQ ID NO: 72 y 73 mediante una construccion esterica por la que el enlace C1-C5 cruza el plano de los enlaces C4-C8 y C3-C7 y se localiza entre ellos, como se ilustra en la Figura 21.

El anticuerpo Ab-A es ejemplar y representativo de un segundo grupo de anticuerpos que tienen un patron de union caractenstico con peptidos de esclerostina humana que es distinto del obtenido para los anticuerpos Ab-C y Ab-D. Ab-A y el grupo de anticuerpos que representa se unen al epftopo N22,7-23,5 y tienen union detectable minima con los epftopos T19,2, T20, T20,6, T21-22, N14,6 o N18,6, como se mide mediante la capacidad para bloquear la union de anticuerpo con esclerostina (Fig. 15). Un segundo anticuerpo ejemplar con este perfil de union (Fig. 16) es Ab-B. Los anticuerpos que tienen este patron de union caractenstico pueden compartir o no secuencias de aminoacidos en una o mas regiones de la molecula de anticuerpo. La similitud de anticuerpo se determina funcionalmente tal como por la capacidad de unirse con esclerostina despues de preincubacion con cada uno de los epftopos descritos anteriormente. Los anticuerpos pueden mostrar un patron de union similar o identico al del anticuerpo Ab-A. Por “similar a” se entiende, por ejemplo, que el anticuerpo mostrara union con el polipeptido N22,7-23,5 por la que esta union superara por competicion al menos el 50% de la union del anticuerpo con esclerostina que se producina de otro modo en ausencia de preincubacion con esclerostina o un peptido de esclerostina. El anticuerpo tambien mostrara poca o ninguna union detectable con los polipeptidos T19,2, T20, T20,6, T21-22, N14,6 y N18,6 dando como resultado una reduccion del 30% o menos de la union que se producina en la ausencia de preincubacion con esclerostina o un peptido de esclerostina.

Por ejemplo, sin quedar ligado a un mecanismo particular, el patron de union de anticuerpo de la Figura 15 sugiere que el espacio epitopico con el que el anticuerpo Ab-A y otros anticuerpos que tienen el patron de union de epftopo de Ab-A se unen consiste en un polipeptido que comprende la region de Bucle 2 de la esclerostina. Por lo tanto, como se divulga en el presente documento y con referencia a la Figura 19A, la region de Bucle 2 puede describirse como un peptido lineal, pero adquiere una estructura terciaria cuando esta presente en una esclerostina nativa o una parte que contiene nudo de cistina de esclerostina en la que la estructura de enlace disulfuro nativo se mantiene. La estructura lineal o terciaria del epftopo de Bucle 2 puede afectar a la union del anticuerpo con el mismo, como se analiza en los Ejemplos. Una region de Bucle 2 puede comprender la siguiente secuencia de aminoacidos: C4GPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC5 (SEQ ID No: 6). “C4” se refiere a un resto de cistema localizado en la posicion 86 con referencia a SEQ ID NO: 1. “C5” se refiere a un resto de cistema localizado en la posicion 111 con

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

referencia a SEQ ID NO: 1. En la protema de esclerostina nativa, C4 esta unido a una cistema en la posicion 144 (C8) por un enlace disulfuro y C5 esta ligado a una cistema en la posicion 57 (C1) por un enlace disulfuro. Los epttopos derivados de la region de Bucle 2 incluyen CGPaRlLPNAIGrGkWwRPS (SEQ ID NO: 63); GPARLLPNAIGRG KWWRPSG (SEQ ID NO: 64); PARLLPNAIGRGKWWRPSGP (SEQ ID NO: 65); ARLLPNAIGRGKWWRPSGPD (SEQ ID NO: 66); RLLPNAIGRGKWWRPSGPDF (SEQ ID NO: 67); LLPNAIGRGKWWRPSGPDFR (SEQ ID NO: 68); y LP NAIGRGKWWRPSGPDFRC (SEQ ID NO: 69).

ENSAYOS DE BLOQUEO CRUZADO

Las expresiones “bloqueo cruzado”, “bloqueado de forma cruzada” y “bloquear de forma cruzada” se usan de forma intercambiable en el presente documento para indicar la capacidad de un anticuerpo u otro agente de union para interferir con la union de otros anticuerpos o agentes de union con esclerostina.

El alcance en el que un anticuerpo u otro agente de union es capaz de interferir con la union de otro con esclerostina y por lo tanto si puede decirse que bloquea de forma cruzada, puede determinarse usando ensayos de union competitiva. Un ensayo cuantitativo particularmente adecuado usa una maquina de Biacore que puede medir el alcance de las interacciones usando tecnologfa de resonancia de plasmon superficial. Otro ensayo de bloqueo cruzado cuantitativo adecuado usa un enfoque basado en ELISA para medir la competicion entre anticuerpos u otros agentes de union con respecto a su union con esclerostina.

ENSAYO DE BLOQUEO CRUZADO DE BIACORE

A continuacion se describe en general un ensayo de Biacore adecuado para determinar si un anticuerpo u otro agente de union bloquea de forma cruzada o es capaz de bloquear de forma cruzada de acuerdo con la invencion. Por conveniencia se hace referencia a dos anticuerpos, pero se apreciara que el ensayo puede usarse con cualquiera de los agentes de union a esclerostina descritos en el presente documento. La maquina de Biacore (por ejemplo el Biacore 3000) se maneja en lmea con las recomendaciones del fabricante.

Por lo tanto en un ensayo de bloqueo cruzado, la esclerostina se acopla a una microplaca CM5 Biacore usando qmmica de acoplamiento de aminas convencional para generar una superficie recubierta con esclerostina. Tfpicamente se acoplanan 200-800 unidades de resonancia de esclerostina a la microplaca (una cantidad que proporciona niveles facilmente medibles de union pero que puede saturarse facilmente por las concentraciones de reactivo de ensayo usadas).

Los anticuerpos (denominados A* y B*) para ensayar con respecto a su capacidad para bloquearse de forma cruzada entre sf se mezclan a una relacion molar de uno a uno de sitios de union en un tampon adecuado para crear la mezcla de ensayo. Cuando se calculan las concentraciones basandose en el sitio de union, se asume que el peso molecular de un anticuerpo es el peso molecular total del anticuerpo dividido por el numero de sitios de union de esclerostina en ese anticuerpo.

La concentracion de cada anticuerpo en la mezcla de ensayo debena ser suficientemente alta para saturar facilmente los sitios de union para ese anticuerpo en las moleculas de esclerostina capturadas en la microplaca de Biacore. Los anticuerpos en la mezcla estan a la misma concentracion molar (basandose en la union) y esa concentracion tfpicamente sena entre 1,00 y 1,5 micromolar (basandose en un sitio de union).

Tambien se preparan soluciones separadas que contienen anticuerpo A* solamente y anticuerpo B* solamente. El anticuerpo A* y anticuerpo B* en estas soluciones debenan estar en el mismo tampon y a la misma concentracion que en la mezcla de ensayo.

La mezcla de ensayo se pasa sobre la microplaca de Biacore recubierta de esclerostina y se registra la cantidad total de union. La microplaca se trata despues de tal modo que se retiren los anticuerpos unidos sin danar a la esclerostina unida a la microplaca. Tfpicamente esto se realiza tratando a la microplaca con HCl 30 mM durante 60 segundos.

La solucion de anticuerpo A* solamente se pasa despues sobre la superficie recubierta con esclerostina y se registra la cantidad de union. La microplaca se trata de nuevo para retirar todo el anticuerpo unido sin danar a la esclerostina unida a la microplaca.

La solucion de anticuerpo B* solamente se pasa despues sobre la superficie recubierta con esclerostina y se registra la cantidad de union.

A continuacion se calcula la union teorica maxima de la mezcla de anticuerpo A* y anticuerpo B*, y es la suma de la union de cada anticuerpo sobre la superficie de esclerostina solo. Si la union registrada real de la mezcla es menor que este maximo teorico entonces los dos anticuerpos estan bloqueandose de forma cruzada entre sf

Por lo tanto, en general, un anticuerpo de bloqueo cruzado u otro agente de union es uno que se unira a esclerostina

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

en el ensayo de bloqueo cruzado de Biacore anterior de modo que durante el ensayo y en presencia de un segundo anticuerpo u otro agente de union la union registrada sea entre 80% y 0,1% (por ejemplo, 80% a 4%) de la union teorica maxima, espedficamente entre 75% y 0,1% (por ejemplo, 75% a 4%) de la union teorica maxima y mas espedficamente entre el 70% y 0,1% (por ejemplo 70% a 4%) de la union teorica maxima (como se acaba de definir anteriormente) de los dos anticuerpos o agentes de union en combinacion.

El ensayo de Biacore descrito anteriormente es un ensayo primario usado para determinar si los anticuerpos u otros agentes de union se bloquean de forma cruzada entre sf de acuerdo con la invencion. En pocas ocasiones los anticuerpos particulares u otros agentes de union pueden no unirse con esclerostina acoplada mediante qmmica de amina a una microplaca de Biacore CM5 (esto sucede habitualmente cuando el sitio de union relevante en la esclerostina se enmascara o se destruye por el acoplamiento a la microplaca). En dichos casos el bloqueo cruzado puede determinarse usando una version marcada de Esclerostina, por ejemplo Esclerostina marcada con His N terminal (R & D Systems, Minneapolis, MN, Estados Unidos; 2005 cat. n° 1406-ST-025). En este formato particular, un anticuerpo anti-His se acoplana a la microplaca de Biacore y despues la Esclerostina marcada con His se pasana sobre la superficie de la microplaca y se capturana por el anticuerpo anti-His. El analisis de bloqueo cruzado se llevana a cabo esencialmente como se ha descrito anteriormente, excepto que despues de cada ciclo de regeneracion de microplaca, se cargana nueva esclerostina marcada con His de nuevo en la superficie recubierta con anticuerpo anti-His. Ademas del ejemplo proporcionado usando Esclerostina marcada con His N terminal, podna usarse como alternativa Esclerostina marcada con His C terminal. Ademas, podnan usarse diversos otros marcadores y combinaciones de protemas de union a marcador que se conocen en la tecnica para dicho analisis de bloqueo cruzado (por ejemplo marcador HA con anticuerpos anti-HA; marcador FLAG con anticuerpos anti-FLAG; marcador de biotina con estreptavidina).

ENSAYO DE BLOQUEO CRUZADO BASADO EN ELISA

Lo siguiente describe en general un ensayo de ELISA para determinar si un anticuerpo u otro agente de union anti- esclerostina bloquea de forma cruzada o es capaz de bloquear de formar cruzada. Por conveniencia, se hace referencia a dos anticuerpos (Ab-X y Ab-Y), pero se apreciara que el ensayo puede usarse con cualquiera de los agentes de union a esclerostina descritos en el presente documento.

El principio general de del ensayo es tener un anticuerpo anti-esclerostina recubriendo los pocillos de una placa de ELISA. Se anade una cantidad en exceso de un segundo anticuerpo anti-esclerostina que potencialmente bloquea de forma cruzada en la solucion (es decir, no unido a la placa de ELISA). Se anade despues una cantidad limitada de esclerostina a los pocillos. El anticuerpo recubierto y el anticuerpo en solucion compiten por la union del numero limitado de moleculas de esclerostina. La placa se lava para retirar esclerostina que no se haya unido al anticuerpo de recubrimiento y tambien para retirar el segundo anticuerpo en fase de solucion asf como cualquier complejo formado entre el segundo anticuerpo en fase de solucion y la esclerostina. La cantidad de esclerostina unida se mide despues usando un reactivo de deteccion de esclerostina apropiado. Un anticuerpo en solucion que sea capaz de bloquear de forma cruzada el anticuerpo de recubrimiento sera capaz de provocar una reduccion del numero de moleculas de esclerostina a las que se puede unir el anticuerpo de recubrimiento en relacion con el numero de moleculas de esclerostina con las que se puede unir el anticuerpo de recubrimiento en ausencia del segundo anticuerpo en fase de solucion.

Este ensayo se describe en mas detalle adicionalmente posteriormente con respecto a Ab-X y Ab-Y. En el caso en el que Ab-X se selecciona para ser el anticuerpo inmovilizado, este se usa para recubrir los pocillos de la placa de ELISA, despues de lo cual las placas se bloquean con una solucion de bloqueo adecuada para minimizar la union no espedfica de reactivos que es anaden posteriormente. Se anade despues una cantidad en exceso de Ab-Y a la placa de ELISA de modo que los moles de sitios de union de esclerostina Ab-Y por pocillo sean al menos 10 veces mayores que los moles de sitios de union de esclerostina Ab-X que se usaron, por pocillo, durante el recubrimiento de la placa de ELISA. Despues se anade esclerostina de modo que los moles de esclerostina anadidos por pocillo sean al menos 25 veces menores que los moles de sitios de union de esclerostina de Ab-X que se usaron para recubrir cada pocillo. Despues de un periodo de incubacion adecuado la placa de ELISA se lava y se anade un reactivo de deteccion de esclerostina para medir la cantidad de esclerostina unida espedficamente por el anticuerpo anti-esclerostina de recubrimiento (en este caso Ab-X). La senal de fondo para el ensayo se define como la senal obtenida en pocillos con el anticuerpo de recubrimiento (en este caso Ab-X), segundo anticuerpo en fase de solucion (en este caso Ab-Y), solamente tampon de esclerostina (es decir, sin esclerostina) y reactivos de deteccion de esclerostina. El ensayo de control positivo para el ensayo se define como la senal obtenida en pocillos con el anticuerpo de recubrimiento (en este caso Ab-X), solamente tampon del segundo anticuerpo en fase de solucion (es decir, sin segundo anticuerpo en fase de solucion), esclerostina y reactivos de deteccion de esclerostina. Es necesario procesar el ensayo de ELISA de tal manera que la senal de control positivo sea al menos 6 veces la senal de fondo.

Para evitar cualquier artefacto (por ejemplo, afinidades significativamente diferentes entre Ab-X y Ab-Y para esclerostina) resultante de la eleccion de que anticuerpo usar como el anticuerpo de recubrimiento y cual usar como el segundo anticuerpo (competidor), es necesario que el ensayo de bloqueo cruzado se procese en dos formatos:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

1) formato 1 es donde Ab-X es el anticuerpo que se usa para recubrir la placa de ELISA y Ab-Y es el anticuerpo competidor que esta en solucion y

2) el formato 2 es donde Ab-Y es el anticuerpo que se usa para recubrir la placa de ELISA y Ab-X es el anticuerpo competidor que esta en solucion.

Ab-X y Ab-Y se definen como bloqueadores cruzados si, en el formato 1 o en el formato 2, el anticuerpo anti- esclerostina en fase de solucion es capaz de provocar una reduccion de entre el 60% y el 100%, espedficamente entre el 70% y el 100% y mas espedficamente entre el 80% y el 100%, de la senal de deteccion de esclerostina (es decir, la cantidad de esclerostina unida por el anticuerpo de recubrimiento) en comparacion con la senal de deteccion de esclerostina obtenida en ausencia del anticuerpo anti-esclerostina en fase de solucion (es decir, los pocillos de control de positivo).

Un ejemplo de dicho ensayo de bloqueo cruzado basado en ELISA puede hallarse en el Ejemplo 7 (“ensayo de bloqueo cruzado basado en ELISA”).

ENSAYO DE NEUTRALIZACION BASADO EN CELULAS

Se usa mineralizacion por celulas de linaje de osteoblastos en cultivo, bien celulas primarias o bien lmeas celulares, como un modelo in vitro de formacion de hueso. La mineralizacion tarda de aproximadamente una a seis semanas en producirse comenzando con la induccion de diferenciacion de celulas de linaje de osteoblastos por uno o mas agentes de diferenciacion. La secuencia global de acontecimientos implica proliferacion celular, diferenciacion, produccion de matriz extracelular, maduracion de la matriz y finalmente deposicion de mineral, que se refiere a cristalizacion y/o deposicion de fosfato calcico. Esta secuencia de acontecimientos que comienza con la proliferacion y diferenciacion celular, y que termina con la deposicion mineral se denomina en el presente documento mineralizacion. La medicion de calcio (mineral) es el resultado del ensayo.

Las celulas MC3T3-E1 (Sudo H, Kodama H-A, Amagai Y, Yamamoto S, Kasai S. 1983. In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria. J. Cell Biol. 96:191-198) y subclones de la lmea celular original pueden formar mineral en cultivo tras el crecimiento en presencia de agentes de diferenciacion. Dichos subclones incluyen MC3T3-E1-BF (Smith E, Redman R, Logg C, Coetzee G, Kasahara N, Frenkel B. 2000. Glucocorticoids inhibit developmental stage-specific osteoblast cell cycle. J. Biol. Chem. 275: 19992-20001). Tanto para el subclon MC3T3-E1-BF asf como para las celulas originales MC3T3-E1, la esclerostina puede inhibir uno o mas de la secuencia de acontecimientos que conducen a e incluyendo la deposicion mineral (es decir, la esclerostina inhibe la mineralizacion). Los anticuerpos anti-esclerostina que son capaces de neutralizar la actividad inhibidora de esclerostina posibilitan la mineralizacion del cultivo en presencia de esclerostina de modo que hay un aumento estadfsticamente significativo de la deposicion de fosfato calcico (medido como calcio) en comparacion con la cantidad de calcio medido en el grupo de tratamiento solamente con esclerostina (es decir sin anticuerpo). Los anticuerpos usados en los experimentos de ensayo de mineralizacion basado en celulas mostrados en las Figuras 22, 23 y 24 tienen pesos moleculares de aproximadamente 145 Kd y tienen 2 sitios de union a esclerostina por molecula de anticuerpo.

Cuando se ejecuta el ensayo con el objetivo de determinar si un anticuerpo anti-esclerostina o agente de union a esclerostina particular puede neutralizar la esclerostina (es decir, es un anticuerpo neutralizante de esclerostina o derivado del mismo, o es un agente de union neutralizante de esclerostina), es necesario que la cantidad de esclerostina usada en el ensayo sea la cantidad minima de esclerostina que provoca al menos una reduccion del 70%, estadfsticamente significativa, en la deposicion de fosfato calcico (medida como calcio) en el grupo de solamente esclerostina, en comparacion con la cantidad de calcio medido en el grupo sin esclerostina. Un anticuerpo neutralizante anti-esclerostina o un agente de union neutralizante antiesclerostina se define como uno que provoca un aumento estadfsticamente significativo de la deposicion de fosfato calcico (medido como calcio) en comparacion con la cantidad de calcio medido en el grupo de tratamiento solamente con esclerostina (es decir sin anticuerpo, sin agente de union). Para determinar si un anticuerpo anti-esclerostina o un agente de union antiesclerostina es neutralizante o no, la cantidad de anticuerpo anti-esclerostina o agente de union antiesclerostina usado en el ensayo debe ser tal que haya un exceso de moles de sitios de union de esclerostina por pocillo en comparacion con el numero de moles de esclerostina por pocillo. Dependiendo de la potencia del anticuerpo, el exceso en veces que puede requerirse puede ser de 24, 18, 12, 6, 3 o 1,5, y un experto en la materia esta familiarizado con la practica rutinaria de ensayos de mas de una concentracion de agente de union. Por ejemplo, un anticuerpo neutralizante anti-esclerostina o agente de union neutralizante antiesclerostina muy potente sera capaz de neutralizar la esclerostina incluso cuando haya un exceso menor de 6 veces de moles de sitios de union de esclerostina por pocillo en comparacion con el numero de moles de esclerostina por pocillo. Un anticuerpo neutralizante antiesclerostina o agente de union neutralizante antiesclerostina menos potente sera capaz de neutralizar la esclerostina solamente en un exceso de 12, 18 o 24 veces. Los agentes de union a esclerostina con este intervalo completo de potencias son adecuados como agentes de union a esclerostina neutralizantes. Se describen en detalle en el Ejemplo 8 ensayos de mineralizacion basados en celulas ejemplares.

Los anticuerpos anti-esclerostina y derivados de los mismos que pueden neutralizar esclerostina humana y agentes de union a esclerostina que pueden neutralizar esclerostina humana pueden ser utiles en el tratamiento de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

afecciones/trastornos humanos que estan provocados por, asociados con, o dan como resultado al menos uno de formacion de hueso baja, densidad mineral osea baja, contenido mineral oseo bajo, masa osea baja, calidad osea bajo y fuerza osea baja.

ENSAYO DE NEUTRALIZACION IN VIVO

Pueden medirse los aumentos de diversos parametros asociados con, o que resultan de, la estimulacion de nueva formacion de hueso como un resultado de ensayos in vivo de agentes de union a esclerostina para identificar los agentes de union que son capaces de neutralizar esclerostina y por lo tanto son capaces de provocar estimulacion de nueva formacion de hueso. Dichos parametros incluyen diversos marcadores anabolicos del suero [por ejemplo osteocalcina, P1NP (propeptido n-terminal de procolageno de tipo 1)], marcadores histomorfometricos de formacion del hueso (por ejemplo, superficie de osteoblasto/superficie de hueso; tasa de formacion de hueso/superficie de hueso; grosor trabecular), densidad mineral osea, contenido mineral oseo, masa osea, calidad osea y fuerza osea. Un agente de union neutralizante de esclerostina se define como uno capaz de provocar un aumento estadfsticamente significativo en comparacion con animales tratados con vetnculo, en cualquier parametro asociado con, o que resulta de, la estimulacion de nueva formacion de hueso. Dicho ensayo in vivo puede realizarse en cualquier mairnfero adecuado (por ejemplo raton, rata, mono). Un ejemplo de dichos ensayos in vivo puede encontrarse en el Ejemplo 5 (“ensayos in vivo de anticuerpos monoclonales anti-esclerostina”).

Aunque la secuencia de aminoacidos de esclerostina no es 100% identica en todas las especies de marnffero (por ejemplo la esclerostina de raton no es 100% identica a esclerostina humana), se apreciara por un experto en la materia que un agente de union a esclerostina que puede neutralizar, in vivo, la esclerostina de una cierta especie (por ejemplo, raton) y que tambien puede unirse a esclerostina humana in vitro es muy probable que sea capaz de neutralizar la esclerostina humana in vivo. Por lo tanto, dicho agente de union a esclerostina humana (por ejemplo, anticuerpo anti-esclerostina humana) puede ser util en el tratamiento de afecciones/trastornos humanos que estan provocados por, asociados con, o dan como resultado al menos uno de formacion de hueso baja, densidad mineral osea baja, contenido mineral oseo bajo, masa osea baja, calidad osea baja y fuerza osea baja. Los ratones en los que se ha usado recombinacion homologa para suprimir el gen de esclerostina de raton e insertar el gen de esclerostina humana en su lugar (es decir, ratones knock-in para el gen de esclerostina humana o ratones knock-in para SOST humana) senan un ejemplo de un sistema in vivo adicional.

Se proporcionan composiciones farmaceuticas, que comprenden uno de los agentes de union anteriormente descritos tales como al menos uno del anticuerpo Ab-A, Ab-B, Ab-C, Ab-D y Ab-1 a Ab-24 para esclerostina humana, junto con un vetnculo, excipiente o diluyente farmaceutica o fisiologicamente aceptable. Se divulgan composiciones farmaceuticas y metodos de tratamiento en la Solicitud relacionada N° Serie N° 10/868.497, presentada el 16 de junio de 2004, que reivindica el beneficio de prioridad de N° de Serie 60/478.977.

Se conoce bien en la tecnica, el desarrollo de regfmenes de dosificacion y tratamiento adecuados para usar las composiciones particulares descritas en el presente documento en una diversidad de regfmenes de tratamiento, incluyendo, por ejemplo, administracion subcutanea, oral, parenteral, intravenosa, intranasal e intramuscular y formulacion, algunos de los cuales se analizan brevemente posteriormente para fines generales de ilustracion.

En ciertas aplicaciones, las composiciones farmaceuticas divulgadas en el presente documento pueden suministrarse mediante administracion oral a un animal. Como tales, estas composiciones pueden formularse con un diluyente inerte o con un vetnculo comestible asimilable, o pueden incluirse en capsulas de gelatina de cubierta dura o blanda, o pueden comprimirse en comprimidos, o pueden incorporarse directamente con el alimento de la dieta.

En ciertas circunstancias sera deseable suministrar las composiciones farmaceuticas divulgadas en el presente documento por via subcutanea, por via parenteral, por via intravenosa, por via intramuscular o incluso por via intraperitoneal. Dichos enfoques se conocen bien por los expertos en la materia, algunos de los cuales se describen adicionalmente, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos N° 5.543.158; Patente de Estados Unidos N° 5.641.515 y Patente de Estados Unidos N° 5.399.363. Pueden prepararse soluciones de los compuestos activos como sales farmacologicamente aceptables o de base libre en agua mezclada adecuadamente con un tensioactivo, tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones tambien pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles lfquidos y mezclas de los mismos y en aceites. En condiciones habituales de almacenamiento y uso, estas preparaciones generalmente contendran un conservante para evitar el crecimiento de microorganismos.

Las formas farmaceuticas ilustrativas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas esteriles y polvos esteriles para la preparacion extemporanea de soluciones o dispersiones inyectables esteriles (por ejemplo, vease Patente de Estados Unidos N° 5.466.468). En todos los casos la forma debe ser esteril y debe ser fluida hasta el grado en que exista facil inyectabilidad. Debe ser estable en las condiciones de fabricacion y almacenamiento y debe conservarse contra la accion contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. El vetnculo puede ser un disolvente o medio de dispersion que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol lfquido y similares), mezclas adecuadas de los mismos y/o aceites vegetales. Puede mantenerse fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfcula requerido en el caso de dispersion y/o mediante el uso

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

de tensioactivos. La prevencion de la accion de microorganismos puede facilitarse por diversos agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, acido sorbico, timerosal y similares. En muchos casos, sera preferible incluir agentes isotonicos, por ejemplo, azucares o cloruro sodico. La absorcion prolongada de las composiciones inyectables puede proporcionarse mediante el uso en las composiciones de agentes que retarden la absorcion, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Para administracion parenteral en una solucion acuosa, la solucion debe tamponarse de forma adecuada si es necesario y el diluyente lfquido en primer lugar se hace isotonico con suficiente solucion salina o glucosa. Estas soluciones acuosas particulares son especialmente adecuadas para administracion intravenosa, intramuscular, subcutanea e intraperitoneal. A este respecto, los expertos en la materia conoceran un medio acuoso esteril que puede emplearse a la luz de la presente divulgacion. Por ejemplo, una dosificacion puede disolverse en 1 ml de solucion de NaCl isotonica y anadirse a 1000 ml de fluido de hipodermoclisis o inyectarse en el sitio propuesto de infusion, (vease por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a ed., pags. 1035-1038 y 1570-1580). Se producira cierta variacion en la dosificacion necesariamente dependiendo de la afeccion del sujeto que se trate. Ademas, para administracion humana, las preparaciones por supuesto preferentemente cumpliran los patrones de esterilidad, pirogenicidad y seguridad y pureza generales como se requiere por la Oficina de Patrones Biologicos de la FDA.

En otra realizacion de la invencion, las composiciones divulgadas en el presente documento pueden formularse en una forma neutra o salina. Las sales farmaceuticamente aceptables ilustrativas incluyen las sales de adicion de acidos (formadas con los grupos amino libres de la protema) y que se forman con acidos inorganicos tales como, por ejemplo, acidos clortudrico o fosforico, o acidos organicos tales como acetico, oxalico, tartarico, mandelico y similares. Tambien pueden derivarse sales formadas por los grupos carboxilo libres de bases inorganicas tales como, por ejemplo, sodio, potasio, amonio, calcio o hidroxidos ferricos, y bases organicas tales como isopropilamina, trimetilamina, histidina, procama y similares. Tras la formulacion, las soluciones se administraran de una manera compatible con la formulacion de dosificacion y en la cantidad que sea terapeuticamente eficaz.

Los vetuculos pueden comprender ademas todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersion, vetuculos, recubrimientos, diluyentes, agentes antibacterianos y antifungicos, agentes retardantes de la absorcion e isotonicos, tampones, soluciones transportadoras, suspensiones, coloides y similares. El uso de dichos medios y agentes para sustancias farmaceuticas activas se conocen bien en la tecnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional es incompatible con el principio activo, se contempla su uso en las composiciones terapeuticas. Tambien pueden incorporarse principios activos complementarios en las composiciones. La frase “farmaceuticamente aceptable” se refiere a entidades moleculares y composiciones que no producen una reaccion alergica o desafortunada similar cuando se administra a un ser humano.

Se pueden usar liposomas, nanocapsulas, micropartfculas, partfculas lipfdicas, vesfculas y similares para la introduccion de las composiciones desveladas en el presente documento en celulas/organismos hospedadores adecuados. En particular, las composiciones pueden formularse para el suministro encapsulado en una partfcula lipfdica, un liposoma, una vesfcula, una nanoesfera o una nanopartfcula o similar.

Como alternativa, las composiciones pueden unirse, covalente o no covalentemente, con la superficie de dichos vetuculos transportadores.

La formacion y uso de liposoma y preparaciones de tipo liposomal como vehfculos farmaceuticos potenciales generalmente se conoce por los expertos en la materia (vease por ejemplo, Lasic, Trends Biotechnol. 16(7): 307-21, 1998; Takakura, Nippon Rinsho 56 (3):691-95, 1998; Chandran et al., Indian J. Exp. Biol. 35(8): 801-09, 1997; Margalit, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 12(2-3): 233-61, 1995; Patente de Estados Unidos N° 5.567.434; Patente de Estados Unidos N° 5.552.157; Patente de Estados Unidos N° 5.565.213; Patente de Estados Unidos N° 5.738.868 y Patente de Estados Unidos N° 5.795.587, cada uno incorporado espedficamente en el presente documento por referencia en su totalidad). El uso de liposomas no parece estar asociado con respuestas autoinmunes o toxicidad inaceptable despues del suministro sistemico. Se forman liposomas a partir de fosfolfpidos que se dispersan en un medio acuoso y forman espontaneamente vesfculas de bicapas concentricas multilamelares (tambien denominadas vesfculas multilamelares (MLV)).

Como alternativa, se proporcionan formulaciones de nanocapsulas farmaceuticamente aceptables de las composiciones desveladas en el presente documento. Las nanocapsulas pueden generalmente atrapar compuestos de un modo estable y reproducible (vease por ejemplo, Quintanar-Guerrero et al., Drug Dev. Ind. Pharm. 24(12): 1113-28, 1998). Para evitar efectos secundarios debido a la sobrecarga polimerica intracelular, dichas partfculas ultrafinas (de tamanos de aproximadamente 0,1 |im) pueden disenarse usando polfmeros capaces de degradarse in vivo. Dichas partfculas pueden prepararse como se describe, por ejemplo, por Couvreur et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 5(1): 1-20, 1988; zur Muhlen et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 45(2): 149-55, 1998; Zambaux et al., J. Controlled Release 50(1-3): 31-40, 1998; y Patente de Estados Unidos N° 5.145.684.

Ademas, las composiciones farmaceuticas pueden situarse dentro de recipientes, junto con material de envasado que proporciona instrucciones con respecto al uso de dichas composiciones farmaceuticas. Generalmente, dichas

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

instrucciones incluiran una expresion tangible que describe la concentracion de reactivo, asf como dentro de ciertas realizaciones, cantidades relativas de ingredientes excipientes o diluyentes (por ejemplo, agua, solucion salina o PBS) que pueden ser necesarios para reconstituir la composicion farmaceutica.

La dosis administrada puede variar de 0,01 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal. Como resultara evidente para un experto en la materia, la cantidad y frecuencia de administracion dependera, por supuesto, de factores tales como la naturaleza y gravedad de la indicacion que se trate, la respuesta deseada, la afeccion del paciente y asf sucesivamente. Tfpicamente, las composiciones pueden administrarse por una diversidad de tecnicas, como se ha observado anteriormente.

Los aumentos del contenido mineral oseo y/o densidad mineral osea pueden determinarse directamente mediante el uso de rayos X (por ejemplo, Absorciometna de rayos X de Energfa Dual o “DEXA”) o por interferencia mediante la medicion de 1) marcadores de formacion de hueso y/o actividad de osteoblastos, tales como, pero sin limitacion, fosfatasa alcalina espedfica de osteoblastos, osteocalcina, propeptido C' de procolageno de tipo 1 (PICP), fosfatasa alcalina total (vease Comier, Curr. Opin. in Rheu. 7: 243(1995)) y propeptido N terminal de procolageno 1 de suero (P1NP) y/o 2) marcadores de reabsorcion de hueso y/o actividad de osteoclastos incluyendo, pero sin limitacion, piridinolina, desoxipiridinolina, N-telopeptido, hidroxiprolina urinaria, fosfatasas acidas resistentes a tartrato de plasma y galactosil hidroxilisina; (vease Comier, misma referencia), TRAP 5b de suero (fosfatasa acida resistente a tartrato isoforma 5b) y telopeptido C reticulado en suero (sCTXI). La cantidad de masa osea tambien puede calcularse a partir de los pesos corporales o mediante el uso de otros metodos (vease Guinness-Hey, Metab. Bone Dis. Relat. Res. 5: 177-181, 1984). Se usan animales y modelos animales particulares en la tecnica para ensayar el efecto de las composiciones y metodos de la invencion en, por ejemplo, parametros de perdida de hueso, reabsorcion del hueso, formacion de hueso, fuerza osea o mineralizacion del hueso que imitan las condiciones de enfermedad humana tales como osteoporosis y osteopenias. Los ejemplos de dichos modelos incluyen el modelo de rata ovariectomizada (Kalu, D.N., The ovariectomized rat model of postmenopausal bone loss. Bone and Mineral 15: 175-192 (1991); Frost, H.M. y Jee, W.S.S. On the rat model of human osteopenias and osteoponosis. Bone and Mineral 18: 227-236 (1992); y Jee, W.S.S. y Yao, W., Overview: animal models of osteopenia and osteoporosis. J. Musculoskel. Neuron. Interact. 1: 193-207 (2001)).

Las afecciones particulares que pueden tratarse por los anticuerpos de la presente invencion incluyen displasias, donde el crecimiento o desarrollo de hueso es anomalo y una amplia diversidad de causas de osteopenia, osteoporosis y perdida de hueso. Los ejemplos representativos de dichas afecciones incluyen acondroplasia, disostosis cleidocraneal, encondromatosis, displasia fibrosa, Enfermedad de Gaucher, raquitismo hipofosfatemico, smdrome de Marfan, exostosis hereditarias multiples, neurofibromatosis, osteogenesis imperfecta, osteopetrosis, osteopoiquilosis, lesiones escleroticas, pseudoartrosis y osteomielitis piogena, enfermedad periodontal, perdida de huesa inducida por farmaco anti-epileptico, hiperparatiroidismo primario y secundario, smdromes de hiperparatiroidismo familiar, perdida de peso inducida por ingravidez, osteoporosis en hombres, perdida de hueso posmenopausica, osteoartritis, osteodistrofia renal, trastornos infiltrantes del hueso, perdida osea oral, osteonecrosis de la mandfbula, enfermedad de Paget juvenil, melorreostosis, enfermedades osea metabolicas, mastocitosis, enfermedad/anemia falciforme, perdida de hueso relacionada con trasplante de organos, perdida de hueso relacionada con trasplante de rinon, lupus eritematoso sistemico, espondilitis anquilosante, epilepsia, artritis juvenil, talasemia, mucopolisacaridosis, enfermedad de Fabry, smdrome de Turner, Smdrome de Down, Smdrome de Klinefelter, lepra, Enfermedad de Perthes, escoliosis idiopatica adolescente, enfermedad inflamatoria multisistemica de aparicion infantil, Smdrome de Winchester, Enfermedad de Menkes, Enfermedad de Wilson, enfermedad de hueso isquemico (tal como enfermedad de Legg-Calve-Perthes, osteoporosis migratoria regional), estados anemicos, afecciones provocadas por esteroides, perdida de hueso inducida por glucocorticoides, perdida de hueso inducida por heparina, trastornos de la medula osea, escorbuto, malnutricion, deficiencia de calcio, osteopenia u osteoporosis idiopatica, osteopenia u osteoporosis congenita, alcoholismo, enfermedad hepatica cronica, estado posmenopausico, afecciones inflamatorias cronicas, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, colitis inflamatoria, enfermedad de Crohn, oligomenorrea, amenorrea, embarazo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, trastornos tiroideos, trastornos paratiroideos, enfermedad de Cushing, acromegalia, hipogonadismo, inmovilizacion o inactividad, smdrome de distrofia simpatica refleja, osteoporosis regional, osteomalacia, perdida de hueso asociada con reemplazo de articulaciones, perdida de hueso asociada con VIH, perdida de hueso asociada con perdida de hormona del crecimiento, perdida de hueso asociada con fibrosis qrnstica, displasia fibrosa, perdida de hueso asociada con quimioterapia, perdida de hueso inducida por tumor, perdida de hueso relacionada con cancer, perdida de hueso ablativa hormonal, mieloma multiple, perdida de hueso inducida por farmaco, anorexia nerviosa, perdida de hueso facial asociada con enfermedad, perdida de hueso craneal asociada con enfermedad, perdida de hueso de la mandfbula asociada con enfermedad, perdida de hueso del craneo asociada con enfermedad, y perdida de hueso asociada con viaje espacial. Mas afecciones se relacionan con perdida de hueso asociada con el envejecimiento, incluyendo perdida de hueso facial asociada con el envejecimiento, perdida de hueso craneal asociada con el envejecimiento, perdida de hueso de la mandfbula asociada con el envejecimiento y perdida de hueso del craneo asociada con el envejecimiento.

Los anticuerpos de la presente invencion tambien pueden ser utiles para mejorar resultados en procedimientos ortopedicos, procedimientos dentales, cirugfa de implante, reemplazo de articulaciones, injerto oseo, cirugfa cosmetica osea y reparacion del hueso tal como curacion de fracturas, curacion sin union, curacion de union

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

retardada y reconstruccion facial. Puede administrate uno o mas anticuerpos antes, durante y/o despues del procedimiento, reemplazo, injerto, cirug^a o reparacion.

Tambien se proporciona un kit de diagnostico que comprende al menos un agente de union anti-esclerostina. El agente de union puede ser un anticuerpo.

Ademas, dicho kit puede comprender opcionalmente uno o mas de los siguientes:

(1) instrucciones para usar el o los agentes de union para exploracion, diagnostico, pronostico, supervision terapeutica o cualquier combinacion de estas aplicaciones;

(2) un companero de union marcado para el agente o los agentes de union anti-esclerostina;

(3) una fase solida (tal como una tira de reactivo) sobre la que se inmovilizan el agente o agentes de union anti- esclerostina; y

(4) un marcador o inserto que indica la aprobacion reguladora para uso de exploracion, diagnostico, pronostico o terapeutico o cualquier combinacion de los mismos.

Si no se proporciona companero de union marcado para el agente o los agentes de union, el agente o los agentes de union en sf mismos pueden marcarse con uno o mas de un marcador o marcadores detectables, por ejemplo un resto quimioluminiscente, enzimatico, fluorescente o radiactivo.

Los siguientes ejemplos se ofrecen como ilustracion y no como limitacion.

Ejemplos

EJEMPLO 1

Expresion recombinante de esclerostina

La esclerostina recombinante humana/SOST esta disponible en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, MN, Estados Unidos; 2006 cat. n° 1406-ST-025). Adicionalmente, la esclerostina de raton recombinante/SOST esta disponible en el mercado de R&D Systems (Minneapolis, MN, Estados Unidos; 2006 cat. n° 1589-ST-025).

Como alternativa, las diferentes especies de esclerostina pueden expresarse de forma transitoria en celulas 293T o 293EBNA adaptadas para suspension sin suero. Pueden realizarse transfecciones como cultivos de 500 ml o 1 l. Los siguientes reactivos y materiales estan disponibles de Gibco BRL (ahora Invitrogen, Carlsbad, CA). Los numeros de catalogo se enumeran entre parentesis: DMEM sin suero (21068-028); DMEM/F12 (3:1) (21068/11765); Complemento de Selenio-Transferrina-Insulina 1X (51500-056); Pen Strep Glut 1X (10378-016); I-Glutamina 2 mM (25030-081); HEPES 20 mM (15630-080); Pluronic F68 al 0,01% (24040-032). Brevemente, el inoculo celular (5,010,0 X 105 celulas/ml por volumen de cultivo) se centrifuga a 2.500 RPM durante 10 minutos a 4 °C para retirar el medio acondicionado.

Las celulas se resuspenden en DMEM sin suero y se centrifugan de nuevo a 2.500 RPM durante 10 minutos a 4 °C. Despues de aspirar la solucion de lavado, las celulas se resuspenden en medio de crecimiento [DMEM/F12 (3:1) + Complemento de Insulina-Transferrina-Selenio 1X + Pen Strep Glut 1X + L-Glutamina 2 mM + HEPES 20 mM + Pluronic F68 al 0,01%] en un cultivo de matraz en agitacion de 1 l o 3 l. El cultivo del matraz en agitacion se mantiene en una placa de agitacion magnetica a 125 RPM que se situa en un incubador humidificado mantenido a 37 °C y CO2 al 5%. El ADN plasmfdico de expresion de mairnfero (por ejemplo, cDNA3.1, pCEP4, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA), que contiene la region codificante completa (y codon de parada) de esclerostina con una secuencia consenso de Kozak (por ejemplo, CCACC) directamente 5' del sitio de inicio ATG, esta en complejo con el reactivo de transfeccion en un tubo conico de 50 ml.

El complejo de reactivo de transfeccion de ADN puede prepararse en 5-10% del volumen de cultivo final en DMEM u OPTI-MEM sin suero. Los reactivos de transfeccion que pueden usarse para este fin incluyen X-tremeGene RO- 1539 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN), FuGene6 (Roche Applied Science, Indianapolis, IN), Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) y 293fectin (Invitrogen, Carlsbad, CA). Se anade en primer lugar 1,5 |ig de ADN plasmidico/ml de cultivo a DMEM sin suero, seguido de 1-5 |il de reactivo de transfeccion/ml de cultivo. Los complejos pueden incubarse a temperatura ambiente durante aproximadamente 10-30 minutos y despues anadirse a las celulas en el matraz de agitacion. La transfeccion/expresion puede realizarse durante 4-7 dfas, despues de lo cual el medio acondicionado (CM) se recoge por centrifugacion a 4.000 RPM durante 60 minutos a 4 °C.

EJEMPLO 2

PURIFICACION DE ESCLEROSTINA RECOMBINANTE

La esclerostina recombinante se purifico de celulas hospedadoras de mamffero como sigue. Todos los procesos de purificacion se llevaron a cabo a temperatura ambiente. Se uso un esquema de purificacion para purificar diversas

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

especies de esclerostina, incluyendo esclerostina murina y humana. El esquema de purificacion uso cromatograffa de afinidad seguido de cromatograffa de intercambio cationico.

Cromatograffa de heparina

El medio acondicionado de celula hospedadora de mairnfero (CM) se centrifugo en una centnfuga Beckman J6-M1 a 4000 rpm durante 1 hora a 4 °C para retirar residuos celulares. El sobrenadante de CM se filtro despues a traves de un filtro de 0,2 |im esteril. (En este punto el CM filtrado esteril puede almacenarse opcionalmente congelado hasta su purificacion). Si el CM se congelo, este se descongelo a las siguientes temperaturas, o combinacion de las mismas: 4 °C, temperatura ambiente o agua templada. Despues de la congelacion el CM se filtro a traves de un filtro de 0,2 |im esteril y se concentro opcionalmente por ultrafiltracion de flujo tangencial (TFF) usando una membrana de punto de corte de 10 kD de peso molecular. El concentrado de CM se filtro a traves de un filtro de 0,2 |im esteril y despues se cargo en una columna de Alto Rendimiento de Heparina (Heparina HP) (GE Healthcare, anteriormente Amersham Biosciences) equilibrada en PBS. Como alternativa, el sobrenadante de CM filtrado puede cargarse directamente en la columna de Heparina HP equilibrada en PBS.

Despues de cargar, la columna de Heparina HP se lavo con PBS hasta que la absorbancia a 280 nm del flujo continuo volvio a la lmea basal (es decir, absorbancia medida antes de cargar el sobrenadante de CM). La esclerostina se eluyo despues de la columna usando un gradiente lineal de cloruro sodico de 150 mM a 2 M en PBS. La absorbancia a 280 nm del eluato se superviso y se recogieron las fracciones que conteman protema. Las fracciones se ensayaron despues mediante SDS-PAGE tenido con Coomassie para identificar fracciones que conteman un polipeptido que migra al tamano de esclerostina glicosilada. Las fracciones apropiadas de la columna se combinaron para realizar el grupo de Heparina HP.

Cromatografia de Intercambio Cationico

La esclerostina eluida de la columna de Heparina HP se purifico adicionalmente por cromatograffa de intercambio cationico usando medio de cromatograffa de Alto Rendimiento SP (SPHP) (GE Healthcare, anteriormente Amersham Biosciences). Se cambio el tampon del grupo de heparina HP a PBS por dialisis usando membranas de 10.000 de PCPM (Pierce-Slide-A-Lyzer). El grupo de Heparina HP dializado se cargo despues en una columna de SPHP equilibrada en PBS. Despues de cargar, la columna se lavo con PBS hasta que la absorbancia a 280 nm del flujo continuo volvio a la lmea basal. La esclerostina se eluyo despues de la columna SPHP usando un gradiente lineal de cloruro sodico de 150 mM a 1 M en PBS. La absorbancia a 280 nm de eluato se superviso y se recogio la esclerostina eluida en fracciones. Las fracciones se ensayaron despues mediante SDS-PAGE tenido con Coomassie para identificar fracciones que conteman un polipeptido que migra al tamano de esclerostina glicosilada. Las fracciones apropiadas de la columna se combinaron para realizar el grupo de SPHP.

Formulacion

Despues de la purificacion, el grupo de SPHP se formulo en PBS mediante dialisis usando membranas de 10.000 de PCPM (Pierce-Slide-A-Lyzer). Si fue necesaria la concentracion de esclerostina, se uso un dispositivo de centnfuga (Amicon Centricon o Centriprep) con una membrana de 10.000 de PCPM. Despues de la formulacion la esclerostina se filtro a traves de un filtro de 0,2 |im esteril y se almaceno a 4 °C o se congelo.

EJEMPLO 3

Se sintetizo una serie de peptidos solapantes (siendo cada peptido de aproximadamente 20-25 aminoacidos de longitud) basandose en la secuencia de aminoacidos conocida de la esclerostina de rata (SEQ ID NO: 98). Los peptidos se disenaron de modo que todos contuvieran un resto de cistema reducido; se incluyo una cistema adicional en el extremo C terminal de cada peptido que no contema ya una en su secuencia. Esto permitio a los peptidos unirse a las placas de ensayo mediante acoplamiento covalente, usando placas de union de sulfhidrilo disponibles en el mercado (Costar), a una concentracion de 1 |ig/ml, en solucion salina tamponada con fosfato (PBS: pH 6,5) que conteman EDTA 1 mM. Despues de la incubacion durante 1 hora a temperatura ambiente, las placas se lavaron tres veces con PBS que contema Tween 20 0,5%. Las placas se bloquearon mediante incubacion con una solucion de PBS que contema gelatina de piel de pescado 0,5% (Sigma) durante 30 minutos a temperatura ambiente y despues se lavaron tres veces en PBS que contema Tween 20 0,5%.

Los anticuerpos para ensayar se diluyeron a 1 |ig/ml en PBS que contema gelatina de piel de pescado al 0,5% y se incubaron con las placas recubiertas de peptido durante 1 hora a temperatura ambiente. Se retiro el anticuerpo en exceso mediante tres lavados con PBS, Tween 20 0,5%. Las placas se incubaron despues con un anticuerpo secundario apropiado conjugado con peroxidasa de rabano rusticano (diluido de forma apropiada en PBS que contema Tween 20 0,5%) y capaz de unirse al anticuerpo de interes. Las placas se lavaron despues tres veces: una vez con PBS que contema Tween 20 0,5% y dos veces con PBS. Finalmente las placas se incubaron con un sustrato cromogenico de peroxidasa de rabano rusticano (TMB-Stable Stop, RDI) durante 5 minutos a temperatura ambiente, el desarrollo del color se detuvo con acido y se midio la densidad optica de las placas a 450 nm.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Placas de Union de Sulfhidrilo de Costar (VWR n° 29442-278)

Tampon de recubrimiento: PBS 1X pH 6,5 + EDTA 1 mM

Tampon de bloqueo: PBS 1X + Gelatina de Piel de Pescado 0,5% (PBS de CS; FSG de Sigma n° G 7765) Tampon de lavado: PBS 1X + Tween 20 0,5%

Peptidos de Esclerostina de Rata

Muestras de anticuerpo: Ab transitorio, Ab recombinante Purificado, Suero de conejo, etc.

Ab secundario apropiado: de Cabra-anti-HRP de Raton/Conejo (Jackson Immuno Research, 115-036-072)

TMB-Stable Stop (RDI n° RDI-TMBSX-1L)

HCl 0,5 M

Los metodos fueron los siguientes:

1. Recubrir placas con 100 |il/pocillo de peptido de esclerostina de rata diluido en PBS 1x pH 6,5 + EDTA 1 mM a 1 |ig/ml. Incubar las placas durante 1 hora a temperatura ambiente. (Las placas debenan usarse en un periodo de 30 minutos desde la apertura).

2. Lavar placas 3X con tampon de lavado.

3. Bloquear las placas con 200 |il/pocillo de tampon de bloqueo. Incubar las placas durante 30 minutos a temperatura ambiente.

4. Repetir el lavado como se ha descrito en (2).

5. Incubar las placas con 50 |il/pocillo de muestras diluidas en tampon de bloqueo - los tttulos de suero comienzan a 1:100; uso de Ab Recombinante Transitorio puro; uso de Ab recombinante Purificado a 1 |ig/ml (todas las muestras se procesan por duplicado). Incubar las placas durante 1 h a temperatura ambiente.

6. Lavar las placas como se ha descrito en (2).

7. Incubar las placas con 50 |il/pocillo de Anticuerpo Secundario apropiado (marcado con HPR) diluido 1:1600 en Tampon de bloqueo. Incubar las placas durante 1 hora a temperatura ambiente.

8. Lavar las placas con tampon de lavado 1X, PBS 2X.

9. Incubar las placas con 50 |il/pocillo de TMB, 5 minutos a temperatura ambiente.

10. Detener la reaccion con 50 ^l/pocillo de HCl 0,5 M.

11. Leer placas a 450 nm de longitud de onda.

Las siguientes secuencias peptfdicas se exploraron como se ha descrito anteriormente:

QGWQAFKNDATEIIPGLREYPEPP (SEQ ID NO: 82)

TEIIPGLREYPEPPQELENN (SEQ ID NO: 83)

PEPPQELENNQTMNRAENGG (SEQ ID NO: 84)

ENGGRPPHHPYDTKDVSEYS (SEQ ID NO: 85)

CRELHYTRFVTDGP (SEQ ID NO: 86)

CRELHYTRFVTDQPSRSAKPVTELV (SEQ ID NO: 87)

CRSAKPVTELVSSGQSGPRARLL (SEQ ID NO: 88)

CGPARLLPNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO: 89)

RAQRVQLLCPGGAAPRSRKV (SEQ ID NO: 90)

PGGAAPRSRKVRLVAS (SEQ ID NO: 91)

KRLTRFHNQSELKDFQPETARPQ (SEQ ID NO: 92)

IPDRYAQRVQLLSPGG (SEQ ID NO: 93)

SELKDFGPETARPQKGRKPRPRAR (SEQ ID NO: 94)

KGRKPRPRARGAKANQAELENAY (SEQ ID NO: 95)

PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO: 96)

KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO: 97).

Un anticuerpo neutralizante de alta afinidad (Ab-19) se unio a dos secuencias peptfdicas solapantes: PNAIGRVKWWRPNGPDFR (SEQ ID NO: 96) y KWWRPNGPDFRCIPDRYRAQRV (SEQ ID NO: 97).

Este procedimiento permite el reconocimiento de epftopos por anticuerpos que reaccionan con epftopos aparentemente lineales. Los peptidos que contienen todo o parte del sitio de union a anticuerpo se uniran al anticuerpo y de este modo se detectaran.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

IDENTIFICACION DE EPfTOPOS DE ESCLEROSTINA HUMANA Estructura de esclerostina

La esclerostina humana de forma madura (peptido senal retirado) es una protema de 190 aminoacidos (Figura 8). La Figura 9 muestra un esquema de la estructura general de la esclerostina con una rama N terminal (de la Q N terminal a Cistema 1) y una rama C terminal (de Cistema 8 a la Y terminal). Intercalada entre estas dos ramas hay una estructura de nudo de cistina y tres bucles que se designan Bucle 1, Bucle 2 y Bucle 3. Los cuatro enlaces disulfuro en esclerostina son Cys1 en la posicion de secuencia 57 unida a Cys5 en la posicion de secuencia 111

(denominado C1-C5), Cys2 en la posicion de secuencia 71 unida a Cys6 en la posicion de secuencia 126

(denominado C2-C6), Cys3 en la posicion de secuencia 82 unida a Cys7 en la posicion de secuencia 142

(denominado C3-C7), Cys4 en la posicion de secuencia 86 unida a Cys8 en la posicion de secuencia 144

(denominado C4-C8). La estructura en anillo de ocho miembros se forma mediante enlaces disulfuro C3-C7 y C4- C8. Esa estructura en anillo, junto con el enlace disulfuro C1-C5 que penetra a traves del anillo, forma un nudo de cistina tipico. C2-C6, que no es parte del nudo de cistina, pone dos estructuras en bucle grandes, bucle 1 (restos 57 a 82) y bucle 3 (restos 111 a 142) juntos entre sr El bucle 2 va de C4 (resto 86) a C5 (resto 111).

Experimental

El enfoque general para caracterizar los epftopos unidos por anticuerpos monoclonales anti-esclerostina implico fragmentar la Esclerostina humana en peptidos con diferentes proteasas, determinar la secuencia de los diversos peptidos de esclerostina humana, aislar estos peptidos y ensayar cada uno de ellos con respecto a su capacidad para unirse a un anticuerpo monoclonal particular usando un “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore. Los datos resultantes permitieron que se determinara la localizacion del epftopo de union.

Las digestiones peptfdicas se sometieron a mapeo de peptidos por HPLC; los picos individuales se recogieron y los peptidos se identificaron y se mapearon mediante espectrometna de masas por desorcion de laser asistida por matriz (MALDI-MS) y analisis de LC-MS de ionizacion por electronebulizacion (ESI-LC-MS) y/o mediante secuenciacion N terminal. Todos los analisis de HPLC para estos estudios se realizaron usando una columna C8 de fase inversa (2,1 mm i.d. x 15 cm de longitud). El mapeo de peptidos por HPLC se realizo con un gradiente lineal de acido tricloroacetico 0,05% (fase movil A) a acetonitrilo al 90% en acido trifluoroacetico al 0,05%. Las columnas se desarrollaron durante 50 minutos a un caudal de 0,2 ml/min.

Digestiones con tripsina y AspN Endoproteinasa

La esclerostina humana en forma madura se digirio con tripsina, que escinde despues de arginina y lisina, o con AspN. Se incubaron aproximadamente 200 |ig de esclerostina a 0,5-10 mg/ml en PBS (pH 7,2) durante 20 h a 37 °C con 8 |ig de tripsina o AspN.

Digestion de tripsina

La cromatograffa de HPLC de las digestiones de tripsina produjo varios picos importantes (Fig. 10A). Se realizo analisis de secuencia en los picos peptfdicos recuperados de HPLc despues de digestion con tripsina. El analisis de ESI LC-MS en lmea del producto de digestion peptfdica tambien se realizo para determinar la masa precisa de los peptidos que se separaron por HPLC. Se determino de este modo la identidad de los peptidos presentes en los picos peptfdicos (Fig. 11). La Figura 13 muestra el alineamiento de diversas secuencias peptfdicas (T19,2, T20, T20,6, T21-22) junto con la secuencia de esclerostina. El numero despues de cada T (por ejemplo, T19,2) refleja el tiempo de retencion. T19,2 contiene dos peptidos (uno del bucle 1 y uno del bucle 3) unidos por el enlace disulfuro C2-C6. T20 contiene dos peptidos mantenidos juntos por la estructura de nudo de cistina, con los bucles intactos 1 y 3 mantenidos juntos por el disulfuro C2-C6 y con la mayor parte del bucle 2 ausente. T20,6 contiene cuatro secuencias mantenidas juntas por la estructura de nudo de cistina, pero carece de parte del bucle 1 y bucle 3 (la parte T19,2) y carece de la mayona del bucle 2. T21-22 es casi identico a T20 pero tiene 3 aminoacidos adicionales en la region del bucle 2.

Digestion con AspN

La cromatograffa de HPLC de los productos de digestion de AspN produjo varios picos principales (Fig. 10B). Se realizo analisis de secuencia de los picos peptfdicos recuperados de HPLC. Tambien se realizo analisis de ESI LC- MS en lmea del producto de digestion peptfdico para determinar la masa precisa de los peptidos que se separaron por HPLC. La identidad de los peptidos presentes en los picos peptfdicos del producto de digestion de AspN se determino de este modo (Fig. 12). La Figura 14 muestra el alineamiento de diversas secuencias peptfdicas (AspN14,6, AspN18,6, AspN22,7-23,5) junto con la secuencia de esclerostina. El numero despues de cada AspN (por ejemplo AspN 18,6) refleja el tiempo de retencion. AspN14,6 contiene tres peptidos cortos de las ramas tanto N

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

como C terminales de esclerostina, mientras que AspN 18,6 es un peptido mayor de la rama N terminal de esclerostina. AspN22,7-23,5 contiene un unico fragmento peptidico de 104 aminoacidos que abarca las ocho cistemas (los cuatro enlaces disulfuro), el nudo de cistina y todos los bucles 1, 2 y 3.

La estrategia para caracterizar los epftopos fue usar estos diversos peptidos de esclerostina humana generados por tripsina y AspN y determinar que peptidos podfan aun unirse a los diversos anticuerpos (Ab-A, Ab-B, Ab-C y Ab-D). Espedficamente esto se ensayo en un “ensayo de union competitiva de epftopos peptfdicos de esclerostina humana” basado en Biacore donde la union de un anticuerpo monoclonal particular con esclerostina humana inmovilizada en la microplaca de Biacore se determino en presencia o ausencia de cada una de las diversas fracciones peptfdicas de HPLC de tripsina y AspN aisladas. En ausencia de cualquier peptido competidor, el anticuerpo monoclonal particular fue capaz de unirse a la esclerostina humana en la microplaca y producir una respuesta en unidades de resonancia, UR. La preincubacion del anticuerpo monoclonal particular con esclerostina humana intacta en solucion, seguida de ensayo de la union con la microplaca, demostro que la union del Mab con esclerostina humana en solucion evito la union del Mab con la esclerostina humana en la microplaca, validando de este modo el principio general de este ensayo de competicion.

Este procedimiento general se repitio individualmente para cada peptido. Se interpreto que una respuesta de UR robusta indicaba que el peptido particular ensayado no podfa unirse al Mab en solucion (por lo tanto el Mab era libre para unirse a la esclerostina humana que se habfa inmovilizado en la microplaca). Por el contrario, la ausencia de una respuesta de UR robusta indico que el Mab era capaz de unirse al peptido de esclerostina en solucion. Estos patrones de union, acoplados con la identidad conocida de los diversos peptidos de esclerostina, se usaron para determinar los epftopos de esclerostina que se uman a anticuerpos anti-esclerostina Ab-A, Ab-B, Ab-C y Ab-D.

ENSAYO DE UNION COMPETITIVA DE EPfTOPOS PEP^DICOS DE ESCLEROSTINA HUMANA BASADO EN BIACORE

Reparacion de superficie de esclerostina humana:

Se realizo inmovilizacion de esclerostina humana en forma madura en una superficie de microplaca sensora BIAcore (CM5) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, se activaron grupos carboxilo en las superficies de la microplaca sensora inyectando 60 |il de una mezcla de contema N-etil-N'-(dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) 0,2 M y N-hidroxisuccinimida (NHS) 0,05 M. La esclerostina humana se diluyo en acetato sodico 10 mM, pH 4,0 a una concentracion de 20 |ig/ml seguido de inyeccion sobre la superficie de CM5 activada. Los grupos reactivos en exceso en la superficie se desactivaron inyectando 60 |il de etanolamina 1 M. Los niveles inmovilizados finales fueron de ~ 5000 unidades de resonancia (UR) para la superficie de esclerostina humana. Tambien se preparo una superficie de referencia acoplada a simulacion blanca en las microplacas sensoras.

Analisis de especificidad de union:

La solucion salina tamponada con fosfato 1X sin cloruro calcico o cloruro de magnesio fue de Gibco/Invitrogen, Carlsbad, CA. La albumina de suero bovino, fraccion V, sin IgG fue de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. Cada Mab (2 nM) se incubo por separado con esclerostina humana 20 nM o un peptido de esclerostina humana particular (nota: hay 3 peptidos no unidos en AspN14,6) en el tampon de muestra (PBS 1X + P-20 0,005% + BSA 0,1 mg/ml) antes de inyeccion sobre la superficie de esclerostina humana inmovilizada. El caudal para la inyeccion de muestra fue de 5 |il/min seguido de regeneracion de superficie usando NaCl 1 M en Glicina 8 mM, pH 2,0 a 30 |il/min durante 30 segundos. Los datos se analizaron usando BIAevaluacion 3.2 y se presentan en la Figura 15 (Ab-A), Figura 16 (AbB), Figura 17 (Ab-C) y Figura 18 (Ab-D).

Epftopos T20,6 y Bucle 2:

Los patrones de union del peptido de esclerostina para dos anticuerpos representativos (Ab-A y Ab-B) fueron practicamente identicos (Fig. 15 y Fig. 16) y mostraron que ambos de estos Anticuerpos podfan unirse solamente al peptido AspN22,7-23,5. La unica diferencia entre AspN22,7-23,5 y todos los demas peptidos de esclerostina es que AspN22,7-23,5 contiene un bucle 2 intacto. Esto muestra que Ab-A y Ab-B se unen a la region de bucle 2 de esclerostina definiendo de este modo el epftopo de bucle 2 (Fig. 19A). Los patrones de union del peptido de esclerostina para Ab-C y Ab-D fueron practicamente identicos entre sf (Fig. 17 y Fig. 18) pero completamente distintos del hallado para Ab-A y Ab-B. De los peptidos ensayados en este Ejemplo, el peptido mas pequeno al que pudieron unirse Ab-C y Ab-D fue el peptido T20,6. Este resultado define el epftopo T20,6 (Fig. 19B).

Ensayo de proteccion de proteasa:

El principio general de este ensayo es que la union de un Mab con esclerostina puede dar como resultado la proteccion de ciertos sitios de escision de proteasa espedficos y esta informacion puede usarse para determinar la region de esclerostina con la que se une el Mab.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

La Figura 20 muestra los mapas peptidicos de HPLC para un complejo de Ab-D de esclerostina humana (Fig. 20A: la esclerostina humana se preincubo a una relacion molar de 1:1 con Ab-D antes de digestion con tripsina como se ha descrito anteriormente) y esclerostina humana solamente (Fig. 20B: la esclerostina humana se digirio con tripsina como se ha descrito anteriormente). Los picos peptidicos de T19,2 y T20,6 en la Figura 20A mostraron una clara reduccion de su altura de pico respectiva, en comparacion con la Figura 20B. Esta reduccion en las alturas de los picos se vio acompanada de un aumento de la altura de los picos para los peptidos T20 y T21-22. Esto datos indican que los restos de aminoacidos basicos en el bucle 1 y bucle 3, que en ausencia de Ab-D se escindieron mediante tripsina para generar los peptidos T19,2 y T20,6, fueron resistentes a escision por tripsina cuando Ab-D se preunio a esclerostina. La presencia de T20, T20,6 y T21-22 indica que el bucle 2 aun se escindfa eficazmente cuando Ab-D estaba preunido a esclerostina. Estos datos indican que Ab-D se unio al lado del bucle 1 y bucle 3 del epttopo T20,6 definiendo de este modo el epftopo mas pequeno “derivado 1 de T20,6 (nudo de cistina + 4 ramas)” mostrado en la Figura 21.

EJEMPLO 5

ENSAYOS IN VIVO DE ANTICUERPOS MONOCLONALES ANTI-ESCLEROSTINA EN RATONES

Se obtuvieron ratones macho BDF1 de cuatro semanas de edad de Charles River Laboratories (Raleigh, NC) y se alojaron en jaulas limpias, con cinco animales por jaula. La temperatura ambiente se mantuvo entre 20 y 22,22 °C, y la humedad relativa se mantuvo entre 34 y 73%. El laboratorio que alojaba las jaulas tuvo un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas y cumplfa todas las especificaciones de AAALAC. Se realizaron observaciones clmicas en todos los ratones en el estudio una vez al dfa.

Los anticuerpos monoclonales anti-esclerostina purificados (Ab-A Fig.1; Ab-B Fig.2; Ab-C Fig.3; Ab-D Fig.4) se diluyeron en solucion salina tamponada con fosfato de Dulbecco esteril. Se inyectaron anticuerpos anti-esclerostina o vehnculo PBS a los ratones por via subcutanea a 21 |il por gramo de peso corporal, dos veces por semana (lunes y martes) a 25 mg/kg. Se diluyo PTH humano (1-34) en tampon de PTH (HCl 0,001, NaCl 0,15, bSa 2%) y se dosifico por via subcutanea a 21 |il por gramo de peso corporal cinco veces a la semana (lunes, martes, miercoles, jueves, viernes) a 100 |ig/kg como un control positivo (Figuras 5 y 6). El numero de ratones por grupo fue de N=5 en las Figs. 5 y 6, y N=6 en la Figura 7.

Densitometria de hueso in vivo PIXImus

La densidad mineral osea (DMO) se determino semanalmente en la metafisis tibial proximal y vertebras lumbares mediante Absorciometna de rayos X de Energfa Dual periferica (pDEXA) con el sistema PIXImus2 de GE/Lunar Medical Systems, Madison, WI. Se situo una region de interes (ROI) de 25 mm2 para incluir la superficie articular proximal, la epffisis y el extremo proximal en la metafisis de la tibia. Se situo una region de interes (ROI) para incluir las vertebras lumbares (L1-L5). Las regiones lumbar y tibial proximales se analizaron para determinar la densidad mineral osea total. Se presentaron las medidas de los grupos + Desviacion Tfpica y se compararon con el grupo de tratamiento con vehnculo para analisis estadfstico.

Analisis estadistico

Se realizo analisis estadistico con un Dunnett y Tukey-Kramer (usando MS Excel y JMP v. 5.0 para los datos de DMO). Las medidas de los grupos para cada conjunto de datos se consideraron significativamente diferentes cuando el P valor fue menor de 0,05 (P < 0,05).

Actividad neutralizante de esclerostina de anticuerpos

Los aumentos estadfsticamente significativos de DMO en comparacion con el vehnculo vistos para cada uno de Ab-A (Figura 5), Ab-B (Figura 5), Ab-C (Figura 6) y Ab-D (Figura 7) demuestran que estos cuatro anticuerpos son anticuerpos neutralizantes de esclerostina. Ademas estos datos muestran que, para anticuerpos anti-esclerostina que se unen a esclerostina de raton, puede usarse tratamiento y analisis de ratones como se ha descrito anteriormente para identificar anticuerpos neutralizantes de esclerostina.

EJEMPLO 6

ENSAYO DE EXPLORACION PARA ANTICUERPOS QUE BLOQUEAN LA UNION DE UN ANTICUERPO CON ESCLEROSTINA HUMANA

La esclerostina humana se acoplo a una microplaca de Biacore CM5 usando qmmica de acoplamiento de amina convencional para generar una superficie recubierta de esclerostina. Se acoplaron 300 unidades de resonancia de esclerostina a la superficie.

5

10

15

20

25

30

35

40

Los anticuerpos para ensayar se diluyeron a una concentracion de 200 |ig/ml en tampon HBS-EP (que es HEPES 10 mM pH 7,4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, Tensioactivo P20 0,005% (v/v)) y despues se mezclo en una relacion molar de uno a uno (basandose en el sitio de union) para generar la mezcla de ensayo. Esta mezcla de ensayo contema por lo tanto cada anticuerpo a una concentracion de 100 |ig/ml (1,3 |im basandose en un sitio de union). Tambien se prepararon soluciones separadas que conteman cada uno de los anticuerpos en la mezcla de ensayo solamente. Estas soluciones conteman los anticuerpos individuales en tampon HBS-EP a una concentracion de 100 |ig/ml (1,3 |im basandose en un sitio de union).

Se pasaron 20 |il de la mezcla de ensayo sobre la microplaca recubierta con esclerostina a un caudal de 10 |il/min y se registro la cantidad de union. La microplaca se trato despues con dos pulsos de 60 segundos de HCl 30 mM para retirar todo el anticuerpo unido. Despues se paso una solucion que contema solamente uno de los anticuerpos de la mezcla de ensayo (a 1,3 |iM en el mismo tampon que la mezcla de ensayo basandose en un sitio de union) sobre la microplaca del mismo modo que la mezcla de ensayo y se registro la cantidad de union. La microplaca se trato de nuevo para retirar todo el anticuerpo unido y finalmente se paso una solucion que contema el otro anticuerpo de la mezcla de ensayo solamente (a 1,3 |iM en el mismo tampon que la mezcla de ensayo basandose en un sitio de union) sobre la microplaca y se registro la cantidad de union.

La tabla posterior muestra los resultados de ensayos de bloqueo cruzado en una serie de anticuerpos diferentes. Los valores en cada celda de la tabla representan la cantidad de union (en UR) vista cuando los anticuerpos (a 1,3 |iM basandose en un sitio de union) o tampon indicados en la fila superior de la tabla se mezclaron con los anticuerpos (a 1,3 |iM basandose en un sitio de union) o tampon indicados en la primera columna de la tabla.

Tampon Ab-4 Ab-13 Ab-A Ab-3 Ab-19

Tampon

-0,5 693 428,5 707,3 316,1 649,9

Ab-4

687,7 795,1 1018,2 860,5 869,3 822,5

Ab-13

425,6 1011,3 442,7 1108,4 431,9 1042,4

Ab-A

692,4 833,1 1080,4 738,5 946,2 868,1

Ab-3

305,5 845,1 428,2 952,2 344,4 895,7

Ab-19

618,1 788,6 1022,5 863,3 891,5 658,7

Usando el valor de union medio (en UR) para cada combinacion de anticuerpos de la tabla anterior (puesto que cada combinacion aparece dos veces) es posible calcular el porcentaje de la union teorica mostrado por cada combinacion de anticuerpos. La union teorica se calcula como la suma de los valores medios para los componentes de cada mezcla de ensayo cuando se ensayan solos (es decir, anticuerpo y tampon).

Tampon Ab-4 Ab-13 Ab-A Ab-3 Ab-19

Tampon

Ab-4

90,75 60,45 85,4 60,75

Ab-13

96,9 58,0 97,0

Ab-A

93,5 65,0

Ab-3

94,4

Ab-19

A partir de los datos anteriores resulta evidente que Ab-4, Ab-A y Ab-19 se bloquean de forma cruzada entre sf. De forma similar Ab-13 y Ab-3 se bloquean de forma cruzada entre sf.

EJEMPLO 7

ENSAYO DE BLOQUEO CRUZADO BASADO EN ELISA

Los volumenes lfquidos usados en este ejemplo senan los usados tfpicamente en ELISA de placa de 96 pocillos (por ejemplo 50-200 ^l/pocillo). En este ejemplo se supone que Ab-X y Ab-Y tienen pesos moleculares de aproximadamente 145 kD y tienen 2 sitios de union de esclerostina por molecula de anticuerpo. Un anticuerpo anti- esclerostina (Ab-X) se usa para recubrir (por ejemplo 50 |i de 1 |ig/ml) una placa de ELISA de 96 pocillos [por ejemplo, Microplaca de Fondo Plano EIA/RIA de 96 Pocillos de Corning (Producto n° 3590), Corning Inc., Acton, MA] durante al menos una hora. Despues de esta etapa de recubrimiento se retira la solucion de anticuerpo, la placa se lava una vez o dos veces con solucion de lavado (por ejemplo, PBS y Tween 20 0,05%) y despues se bloquea usando una solucion de bloqueo apropiada (por ejemplo, PBS, BSA 1%, suero de cabra 1% y Tween 20 0,5%) y

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

procedimientos conocidos en la tecnica. La solucion de bloqueo se retira despues de la placa de ELISA y se anade un segundo anticuerpo anti-esclerostina (Ab-Y) que se ensaya con respecto a su capacidad para bloquear de forma cruzada el anticuerpo de recubrimiento, en exceso (por ejemplo 50 |il de 10 |ig/ml) en solucion de bloqueo a los pocillos apropiados de la placa de ELISA. A continuacion, se anade despues una cantidad limitada (por ejemplo 50 |il de 10 ng/m) de esclerostina en solucion de bloqueo a los pocillos apropiados y la placa se incuba durante al menos una hora a temperatura ambiente en agitacion. La placa se lava despues 2-4 veces con solucion de lavado. Se anade una cantidad apropiada de un reactivo de deteccion de esclerostina [por ejemplo, anticuerpo policlonal anti-esclerostina biotinilado que se ha unido en complejo previamente con una cantidad apropiada de un conjugado de peroxidasa de rabano rusticano-esclerostina (hPr)] en solucion de bloqueo a la placa de ELISA y se incuba durante al menos una hora a temperatura ambiente. La placa se lava despues al menos cuatro veces con solucion de lavado y se desarrolla con un reactivo apropiado [por ejemplo, sustratos de HRP tales como TMB (colorimetrico) o diversos sustratos luminiscentes de HRP]. La senal de fondo para el ensayo se define como la senal obtenida en pocillos con el anticuerpo de recubrimiento (en este caso Ab-X), segundo anticuerpo en fase de solucion (en este caso Ab-Y), solamente tampon de esclerostina (es decir sin esclerostina) y reactivos de deteccion de esclerostina. La senal de control positivo para el ensayo se define como la senal obtenida en pocillos con el anticuerpo de recubrimiento (en este caso Ab-X), solamente tampon del segundo anticuerpo en fase de solucion (es decir, sin segundo anticuerpo en fase de solucion), esclerostina y reactivos de deteccion de esclerostina. Es necesario que el ensayo de ELISA se procese de tal modo que la senal de control de positivo sea al menos 6 veces la senal de fondo.

Para evitar cualquier artefacto (por ejemplo, afinidades significativamente diferentes entre Ab-X y Ab-Y para esclerostina) resultantes de la eleccion de que anticuerpo usar como el anticuerpo de recubrimiento y cual usar como el segundo anticuerpo (competidor), es necesario que el ensayo de bloqueo cruzado se procese en dos formatos:

1) el formato 1 es donde Ab-X es el anticuerpo que se usa para recubrir la placa de ELISA y Ab-Y es el anticuerpo competidor que esta en solucion y

2) el formato 2 es donde Ab-Y es el anticuerpo que se usa para recubrir la placa de ELISA y Ab-X es el anticuerpo competidor que esta en solucion.

Ab-X y Ab-Y se definen como de bloqueo cruzado si, en el formato 1 o en el formato 2, el anticuerpo anti- esclerostina en fase de solucion es capaz de provocar una reduccion de entre el 60% y el 100%, espedficamente entre el 70% y el 100%, y mas espedficamente entre el 80% y 100%, de la senal de deteccion de esclerostina (es decir la cantidad de esclerostina unida por el anticuerpo de recubrimiento) en comparacion con la senal de deteccion de esclerostina obtenida en ausencia del anticuerpo anti-esclerostina en fase de solucion (es decir los pocillos de control positivos).

En el caso de que se use una version marcada de esclerostina en el ELISA, tal como una Esclerostina marcada con His N terminal (R&D Systems, Minneapolis, MN, Estados Unidos; 2005 cat n° 1406-ST-025) entonces un tipo apropiado de reactivo de deteccion de esclerostina incluina un anticuerpo anti-His marcado con HROP. Ademas de usar Esclerostina marcada con His N terminal, tambien podna usarse Esclerostina marcada con His C terminal. Ademas, podnan usarse diversos otros marcadores y combinaciones de protemas de union a marcador conocidos en la tecnica en este ensayo de bloqueo cruzado basado en ELISA (por ejemplo, marcador HA con anticuerpos antiHA; marcador FLAG con anticuerpos anti-FLAG, marcador de biotina con estreptavidina).

EJEMPLO 8

ENSAYO DE MINERALIZACION BASADO EN CELULAS PARA IDENTIFICAR AGENTES CAPACES DE ANTAGONIZAR LA ACTIVIDAD DE ESCLEROSTINA

Introduccion

Se usa mineralizacion por celulas de linaje de osteoblastos en cultivo, bien celulas primarias o bien lmeas celulares, como un modelo in vitro de formacion de hueso. La mineralizacion tarda de aproximadamente una a seis semanas en producirse comenzando con la induccion de la diferenciacion de celulas de linaje de osteoblastos mediante uno o mas agentes de diferenciacion. La secuencia global de acontecimientos implica proliferacion celular, diferenciacion, produccion de matriz extracelular, maduracion de matriz y finalmente deposicion de minerales, que se refiere a la cristalizacion y/o deposicion de fosfato calcico. Esta secuencia de acontecimientos que comienza con la proliferacion y diferenciacion celular, y que termina con la deposicion de mineral se denomina en el presente documento mineralizacion. La medicion de calcio (mineral) es el resultado del ensayo.

La deposicion de mineral tiene una fuerte caractenstica bioffsica, porque una vez que las “semillas” minerales comienzan a formarse, la cantidad total de mineral que se depositara en el cultivo completo puede en ocasiones depositarse con bastante rapidez, tal como en un periodo de unos pocos dfas despues. El momento y alcance de la deposicion mineral en cultivo estan influidos, en parte, por las celulas/lmea celular de linaje de osteoblastos particular que se use, las condiciones de crecimiento, la eleccion de agentes de diferenciacion y el numero de lote particular del suero usado en el medio de cultivo celular. Para cultivos de mineralizacion de lmea celular/celula de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

linaje de osteoblastos, debenan ensayarse al menos de ocho a quince lotes de suero de mas de un proveedor para identificar un lote de suero particular que permita que se produzca la mineralizacion.

Las celulas MC3T3-E1 (Sudo H et al., In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria. J. Cell Biol. 96: 191-198) y subclones de la lmea cellular original pueden formar mineral en cultivo tras su crecimiento en presencia de agentes de diferenciacion. Dichos subclones incluyen MC3T3-E1-BF (Smith E, Redman R, Logg C, Coetzee Q, Kasahara N, Frenkel B. 2000. Glucocorticoids inhibit developmental stage-specific osteoblast cell cycle. J Biol Chem 275: 19992-20001).

Identificacion de Anticuerpos Neutralizantes de Esclerostina

Se usaron celulas MC3T3-E1-BF para el ensayo de mineralizacion. Se usaron acido ascorbico y B-glicerofosfato para inducir diferenciacion de celulas MC3T3-E1-BF que conduzca a deposicion mineral. El protocolo de exploracion espedfico, en formato de 96 pocillos, implico sembrar celulas en placas un miercoles, seguido de siete cambios de medio (como se describe adicionalmente posteriormente) durante un periodo de 12 dfas, teniendo lugar la mayor parte de la deposicion mineral aproximadamente en las dieciocho horas finales (por ejemplo, del domingo por la noche al lunes). Para cualquier tratamiento dado, se usaron 3 pocillos (N=3). El momento y alcance espedficos de la deposicion mineral pueden variar dependiendo, en parte, del numero de lote de suero particular que se use. Los experimentos de control permitiran explicar dichas variables, como se conoce bien en la tecnica de la experimentacion de cultivo celular en general.

En este sistema de ensayo la esclerostina inhibio uno o mas de la secuencia de acontecimientos que condudan a e incluyendo la deposicion mineral (es decir, la esclerostina inhibio la mineralizacion). Los anticuerpos anti-esclerostina que fueron capaces de neutralizar la actividad inhibidora de esclerostina posibilitaron la mineralizacion del cultivo en presencia de esclerostina de modo que hubo un aumento estadfsticamente significativo de la deposicion de fosfato calcico (medido como calcio) en comparacion con la cantidad de calcio medida en el grupo de tratamiento solamente con esclerostina (es decir, sin anticuerpo). Para analisis estadfstico (usando MS Excel y JMP) se uso un ANOVA de 1 via seguido de comparacion de Dunnett para determinar diferencias entre grupos. Las medias de grupo para cada conjunto de datos se consideraron significativamente diferentes cuando el P valor fue menor de 0,05 (P < 0,05). Se muestra un resultado representativo del procesamiento de este ensayo en la Figura 22. En ausencia de esclerostina de raton recombinante, la secuencia de acontecimientos que conducen a e incluyendo la deposicion mineral sucedieron con normalidad. Se muestran los niveles de calcio en cada grupo de tratamiento como medias + Error Tfpico de la Media (ETM). En este experimento ejemplar los niveles de calcio del ensayo de calcio fueron ~31 |ig/ml. Sin embargo, la adicion de esclerostina de raton recombinante provoco inhibicion de la mineralizacion y el calcio se redujo en ~85%. La adicion de anticuerpo monoclonal anti-esclerostina Ab-19 o Ab-4 junto con la esclerostina recombinante dio como resultado un aumento estadfsticamente significativo en la deposicion mineral, en comparacion con el grupo solamente de esclerostina, debido a que la actividad inhibidora de esclerostina se neutralizo por uno de los anticuerpos. Los resultados de este experimento indican que Ab-19 y Ab-4 son anticuerpos monoclonales neutralizantes de esclerostina (Mab).

La Figura 23 muestra un resultado muy similar usando esclerostina humana recombinante y dos Mab anti- esclerostina humanizados. La Figura 24 tambien muestra un resultado muy similar usando esclerostina humana recombinante y Mab anti-esclerostina de raton y humanizados segun se indica.

Los anticuerpos usados para los experimentos mostrados en la Fig. 22, 23 y 24 tienen pesos moleculares de aproximadamente 145 kD y tienen 2 sitios de union a esclerostina por molecula de anticuerpo.

Se describe a continuacion un protocolo de cultivo de celulas MC3T3-E1-BF.

Reactivos

Alfa-MEM Acido ascorbico Beta-glicerofosfato PenStrepGlutamina 100X Dimetilsulfoxido (DMSO) Suero fetal bovino (FBS) o suero fetal bovino (FBS)

Reactivos y Medios Compama Gibco-Invitrogen Sigma Sigma

Gibco-Invitrogen Sigma Cansera TerraCell Int.

Alfa-MEM se fabrica habitualmente con una fecha de caducidad de que no tenia mas de 6 meses despues de la fecha de fabricacion.

N° de catalogo

12571-048 A4544 G6376 10378-016 D5879 o D2650

CS-C08-500 (n° de lote SF50310) CS-C08-1000A (n° de lote SF-20308)

1 ano. Para el cultivo celular se uso Alfa-MEM

Medio de Expansion (Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu) se preparo como sigue:

Se descongelo un frasco de 500 ml de FBS y se esterilizo por filtracion a traves de un filtro de 0,22 micrometres.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Se anadieron 100 ml de este FBS a 1 litro de Alfa-MEM seguido de la adicion de 10 ml de PenStrepGIutamina 100x. El FBS no usado se separo en alfcuotas y se volvio a congelar para uso posterior.

El Medio de Diferenciacion (Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu + acido ascorbico 50 |ig/ml + beta-glicerofosfato 10 mM) se preparo como sigue:

Se prepararon 100 ml de Medio de Diferenciacion complementando 100 ml de Medio de Expansion con acido ascorbico y beta-glicerofosfato como sigue:

Conc. de reserva (vease posteriormente) Volumen Conc. Final Acido ascorbico 10 mg/ml 0,5 ml 100 |ig/ml (50 |ig/ml + 50 |ig/ml)

P-glicerofosfato 1 M 1,0 ml 10 nM

Se preparo Medio de Diferenciacion complementando Medio de Expansion solamente el dfa en que el Medio de Diferenciacion iba a usarse para cultivo celular. La concentracion final de acido ascorbico en el Medio de Diferenciacion es de 100 |ig/ml debido a que Alfa-MEM ya contiene acido ascorbico 50 |ig/ml. Se preparo solucion madre de acido ascorbico (10 mg/ml) y se separo en alfcuotas para congelar a -80 °C. Cada alfcuota se uso solamente una vez (es decir no se volvio a congelar). Se preparo solucion madre de betaglicerofosfato (1 M) y se separo en alfcuotas para congelar a -20 °C. Cada alfcuota se congelo y se descongelo un maximo de 5 veces antes de descartarse.

Cultivo Celular para expansion de celulas MC3T3-E1-BF.

Se realizo cultivo celular a 37 °C y CO2 5%. Se genero un banco de celulas para los fines de explorar con respecto a anticuerpos neutralizantes de esclerostina. El banco de celulas se creo como sigue:

Se descongelo un recipiente de celulas MC3T3-E1-BF congeladas mediante agitacion en un bano de agua a 37 °C. Las celulas descongeladas se pusieron en 10 ml de Medio de Expansion (Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu) en un tubo de 50 ml y se sedimentaron por centrifugacion suavemente durante 5 minutos. Las celulas se resuspendieron despues en 4 ml de Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu. Despues de determinar el numero de celulas usando azul de tripano y un hemacitometro, se sembraron 1 x 106 celulas en 50 ml de medio Alfa- MEM/FBS 10%/PenStrepGlu en un matraz T175.

Cuando este pase fue confluyente (aproximadamente a los 7 dfas), las celulas se tripsinizaron con tripsina/EDTA (Tripsina 0,05%; EDTA 0,53 mM), se sedimentaron por centrifugacion suavemente durante 5 minutos y despues se resuspendieron en 5 ml de Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu. Despues de determinar el numero de celulas usando azul de tripano y un hemacitometro, las celulas se sembraron a 1 x 106 celulas en placas con 50 ml de medio Alfa- MEM/FBS 10%/PenStrepGlu por cada matraz T175. El numero de matraces de T175 usados para sembrar en este punto dependio del numero de celulas totales disponible y el numero deseado de matraces que debfan llevarse al siguiente pase. Las celulas extra se congelaron a 1-2x106 celulas vivas/ml en FBS 90%/DMSO 10%.

Cuando este pase fue confluyente (aproximadamente 3-4 dfas), las celulas se tripsinizaron con tripsina/EDTA (Tripsina 0,05%; EDTA 0,53 mM), se sedimentaron por centrifugacion suavemente durante 5 minutos y despues se resuspendieron en 5 ml de Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu. Despues de determinar el numero de celulas usando azul de tripano y un hemacitometro, las celulas se sembraron a 1 x 106 en 50 ml de medio Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu por cada matraz T175. El numero de matraces T175 usados para sembrar en este punto dependio del numero total de celulas disponibles y el numero deseado de matraces que debfan llevarse al siguiente pase. Las celulas extra se congelaron a 1-2x106 celulas vivas/ml en FBS 90%/DMSO 10%.

Cuando este pase fue confluyente (aproximadamente 3-4 dfas), las celulas se tripsinizaron con tripsina/EDTA (Tripsina 0,05%; EDTA 0,53 mM), se sedimentaron por centrifugacion suavemente durante 5 minutos y despues se resuspendieron en 5 ml de Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu. Despues de determinar el numero de celulas usando azul de tripano y un hemacitometro, las celulas se sembraron a 1 x 106 en 50 ml de medio Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu por cada matraz T175. El numero de matraces T175 usados para sembrar en este punto dependio del numero total de celulas disponibles y el numero deseado de matraces que debfan llevarse al siguiente pase. Las celulas extra se congelaron a 1-2x106 celulas vivas/ml en FBS 90%/DMSO 10%.

Cuando este pase fue confluyente (aproximadamente 3-4 dfas), las celulas se tripsinizaron con tripsina/EDTA (Tripsina 0,05%; EDTA 0,53 mM), se sedimentaron por centrifugacion suavemente durante 5 minutos y despues se resuspendieron en 5 ml de Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu. Despues de determinar el numero de celulas usando azul de tripano y un hemacitometro, las celulas se congelaron a 1-2x106 celulas vivas/ml en FBS 90%/DMSO 10%. Este “pase final” de celulas congeladas fue el pase que se uso para el ensayo de exploracion.

Cultivo celular para mineralizar celulas MC3T3-E1-BF.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Se realizo cultivo celular a 37 °C y CO2 5%. Es deseable minimizar las fluctuaciones de temperatura y % de CO2 durante el procedimiento de cultivo celular de mineralizacion. Esto puede conseguirse minimizando el tiempo que las placas pasan fuera del incubador durante la alimentacion y tambien minimizando el numero de veces que se abre y se cierra la puerta del incubador durante el procedimiento de cultivo celular de mineralizacion. A este respecto puede ser util tener un incubador de cultivo tisular que este dedicado exclusivamente al cultivo celular de mineralizacion (y por lo tanto no se abra o cierre mas de lo que es necesario).

Se descongelo un numero apropiado de recientes de “pase final” preparados como se ha descrito anteriormente mediante agitacion en un bano de agua a 37 °C. Las celulas descongeladas se pusieron en 10 ml de Medio de Expansion (Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu) en un tubo de 50 ml y se sedimentaron por centrifugacion suavemente durante 5 minutos. Las celulas se resuspendieron despues en 4 ml de Alfa-MEM/FBS 10%/PenStrepGlu. Despues de determinar el numero de celulas por azul de tripano y hemacitometro, se sembraron 2500 celulas en placas en 200 microlitros de medio de Expansion por pocillo en placas de 96 pocillos recubiertas con colageno I (Becton Dickinson Labware, cat. n° 354407).

Para evitar un efecto de mineralizacion de borde de placa, las celulas no se sembraron en las placas en la columna/fila mas externa en todo el borde de la placa. En su lugar se anadieron 200 microlitros de PBS a estos pocillos.

Procedimiento de cultivo celular ejemplar

En el siguiente procedimiento, se indica que el dfa de partida para la siembra de las celulas en placas es un miercoles. Si se usa un dfa de la semana diferente como el dfa de partida para la siembra de las celulas en placas, ese dfa dara inicio al programa diario de retirada y adicion de medio durante el proceso completo como se indica posteriormente. Por ejemplo, si las celulas se siembran un martes, el medio no debena retirarse y anadirse el primer viernes y sabado, ni el segundo viernes y sabado. Con un comienzo en martes, las placas se preparanan para el ensayo de calcio el domingo final.

Las celulas se sembraron un miercoles a 2500 celulas en 200 |il de medio de Expansion.

El jueves se retiro todo el medio de Expansion y se anadieron 200 |il de Medio de Diferenciacion.

El viernes se retiraron 100 |il de medio y se anadieron 100 |il de Medio de Diferenciacion nuevo. El lunes se retiraron 100 |il de medio y se anadieron 100 |il de Medio de Diferenciacion nuevo. El martes se retiraron 100 |il de medio y se anadieron 100 |il de Medio de Diferenciacion nuevo. El miercoles se retiraron 100 |il de medio y se anadieron 100 |il de Medio de Diferenciacion nuevo.

El jueves se retiraron 100 |il de medio y se anadieron 100 |il de Medio de Diferenciacion nuevo.

El viernes se retiraron 100 |il de medio y se anadieron 100 |il de Medio de Diferenciacion nuevo.

El lunes siguiente se prepararon placas para el ensayo de calcio como sigue:

Las placas se lavaron una vez con Tris 10 mM, HCl pH 7-8.

Trabajando bajo una campana de humos, se anadieron 200 |il de NHC 0,5 N por pocillo. Las placas se congelaron despues a -80 °C.

Justo antes de medir el calcio, las placas se congelaron-descongelaron dos veces y despues se uso trituracion con una pipeta multicanal para dispersar los contenidos de la placa. Despues se permitio que los contenidos de la placa reposaran a 4 °C durante 30 minutos momento en el cual se retiro una cantidad apropiada de sobrenadante para medir el calcio usando un kit de calcio disponible en el mercado. Un kit ejemplar y no limitante es Calcium (CPC) Liquicolor, Cat. N° 0150-250, Stanbio Laboratory, Boerne, TX.

En este ensayo basado en celulas, la esclerostina inhibe uno o mas de la secuencia de acontecimientos que conducen a e incluyendo la deposicion mineral (es decir, la esclerostina inhibe la mineralizacion). Por lo tanto, en experimentos en los que se indujo esclerostina en el experimento de cultivo celular particular, se anadio la esclerostina recombinante al medio comenzando el primer jueves y cada dfa de alimentacion a continuacion. En los casos en los que se ensaya un anticuerpo monoclonal anti-esclerostina (Mab) con respecto a la capacidad para neutralizar esclerostina, es decir, permitir la mineralizacion neutralizando la capacidad de la esclerostina para inhibir la mineralizacion, el Mab se anadio al medio comenzando el primer jueves y cada dfa de alimentacion a continuacion. De acuerdo con el protocolo, eso se consiguio como sigue: el Mab se preincubo con la esclerostina recombinante en medio de Diferenciacion durante 45-60 minutos a 37 °C y despues este medio se uso para alimentar a las celulas.

Se ha descrito anteriormente un protocolo de mineralizacion de 12 dfas para las celulas MC3T3-E1-BF. Usando los mismos reactivos y protocolo de alimentacion, las celulas originales MC3T3-E1 (Sudo H, Kodama H-A, Amagai Y, Yamamoto S, Kasai S. 1983. In vitro differentiation and calcification in a new clonal osteogenic cell line derived from newborn mouse calvaria. J Cell Biol 96: 191-198) que los inventores obtuvieron del Banco de Celulas RIKEN (RCB

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

1126, RIKEN BioResource Center 3-1-1 Koyadai, Tsukubashi, Ibaraki 305-0074, Japon) tardaron mas en mineralizarse (20 dfas totales para la mineralizacion) que las celulas MC3T3-E1-BF. La mineralizacion de las celulas MC3T3-E1 originales se inhibio mediante esclerostina recombinante y esta inhibicion se bloqueo usando un anticuerpo neutralizante de esclerostina.

EJEMPLO 9

EL ANTICUERPO ANTI-ESCLEROSTINA PROTEGE DE LA PERDIDA DE HUESO INDUCIDA POR INFLAMACION EN EL MODELO DE TRANSFERENCIA DE CD4 CD45RBHI DE COLITIS EN RATONES SCID

Sumario del modelo

La inyeccion del subconjunto CD45RBalto de linfocitos T CD4+ en ratones scid C.B-17 da como resultado la inflamacion intestinal cronica con caractensticas similares a las de enfermedad inflamatoria del intestino humana (IBD). Se observa diarrea y enfermedad de debilitamiento 3-5 semanas despues de la transferencia celular con infiltracion de leucocitos grave en el colon acompanado de hiperplasia de celulas epiteliales y formacion de granuloma. Los ratones scid C.B-17 que reciben el subconjunto redproco de celulas CD4+, las que expresan CD45RBbajo, no muestran colitis y tienen un aumento de peso indistinguible de ratones scid no inyectados. Ademas de los smtomas de colitis, el modelo de transferencia de linfocitos T CD4+ CD45RBalto de colitis esta acompanado de una reduccion de la densidad mineral osea (DMO), que se cree que es principalmente mediante mecanismos inflamatorios en lugar de malabsorcion dietetica (Byrne, F. R. et al, Gut 54: 78-86, 2005).

Induccion de colitis y perdida de hueso inducida por inflamacion

Se tomaron bazos de ratones balb/c hembra y se rompieron mediante un tamiz celular de 70 |im. La poblacion de CD4+ se enriquecio despues mediante seleccion negativa con Dynabeads usando anticuerpos contra B220, MAC-1, CD8 e I-Ad. La poblacion enriquecida se tino despues con anti-CD4 conjugado con FITC y anti-CD45RB conjugado con PE y se fracciono en poblaciones CD4+CD45RBalto y CD4+CD45RBbajo por separacion de dos colores en un Moflo (Dakocytomation). Las poblaciones de CD45RBalto y CD45RBbajo se definieron como el 40% de tincion mas brillante y el 20% de tincion mas palida de celulas CD4+ respectivamente. Se inyectaron despues 5x105 celulas i.p. en ratones scid C.B-17 el dfa 0 y se superviso el desarrollo de colitis mediante la aparicion de heces blandas o diarrea y perdida de peso. Se tomaron mediciones de densidad mineral osea al final del estudio (dfa 88).

Efecto del tratamiento anti-Esclerostina en smtomas de colitis y DMO

Se dosifico IgG Ab-A a 10 mg/kg s.c. desde el dfa antes de la transferencia de celulas CD4+CD45RBalto y se comparo con ratones que recibieron el anticuerpo de control negativo 101.4 tambien dosificado a 10 mg/kg s.c. Los anticuerpos se dosificaron semanalmente a continuacion. Un grupo de ratones que recibio celulas CD4+CD45RBbajo no patogenas y se dosificaron con 10 mg/kg de 101.4 se estudio como un control. Al final del estudio (dfa 88) se midio la densidad mineral osea y se tomaron secciones del colon para analisis de infiltracion celular y evaluacion de dano histologico.

a) Sin efecto en smtomas de colitis

Los smtomas de colitis tfpicos tales como perdida de peso e infiltracion de celulas inflamatorias en el colon no se vieron afectados por el tratamiento con Ab-A. De forma similar no hubo mejora de dano histologico al colon despues del tratamiento con Ab-A.

b) Inhibicion de perdida inducida por inflamacion de densidad mineral osea.

El dfa 88 despues de la transferencia de celulas en ratones scid C.B-17, se midio la densidad mineral osea (DMO total, DMO de vertebras y ^ DMO del femur). En comparacion con ratones de control que recibieron celulas no patogenas CD4+CD45RBbajo, los ratones que recibieron linfocitos T CD4+ CD45RBalto y el anticuerpo de control negativo 101.4 tuvieron densidad mineral osea reducida, como se muestra en la Figura 25. Por el contrario, no se observo reduccion de DMO despues de tratamiento con Ab-A. Las mediciones total, de vertebras y de femur de DMO fueron significativamente mayores en ratones que recibieron linfocitos T CD4+ CD45RBalto y se trataron con Ab-A que los ratones que recibieron linfocitos T CDR4+ CD45RBalto y se trataron con 101.4 (P<0,001 por ensayo de comparacion multiple de Bonferroni).

EJEMPLO 10

DETERMINACION BASADA EN KINEXA DE AFINIDAD (Kd) DE ANTICUERPOS ANTI-ESCLEROSTINA POR ESCLEROSTINA HUMANA

La afinidad de varios anticuerpos anti-esclerostina por esclerostina humana se evaluo mediante un analisis de union en equilibrio en solucion usando KinExA® 3000 (Sapidyne Instruments Inc., Boise, ID). Para estas mediciones, se

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

pre-recubrieron perlas Reacti-Gel 6x (Pierce, Rockford, IL) con esclerostina humana 40 |ig/ml en Na2CO3 50 mM, pH 9,6 a 4 °C durante una noche. Las perlas se bloquearon despues con BSA 1 mg/ml en Tris-HCl 1 M, pH 7,5 a 4 °C durante dos horas. Se mezclaron 10 pM, 30 pM o 100 pM del anticuerpo con diversas concentraciones de esclerostina humana, que vario en concentracion de 0,1 pM a 1 nM, y se equilibro a temperatura ambiente durante mas de 8 horas en pBs con BSA 0,1 mg/ml y P20 0,005%. Las mezclas se pasaron despues sobre las perlas recubiertas con esclerostina humana. La cantidad de anticuerpo anti esclerostina unido a perlas se cuantifico usando anticuerpos anti-IgG de raton de cabra marcados con Cy5 fluorescente o anti-IgG humana de cabra marcados con Cy5 fluorescente (Jackson Immuno Research, West Grove, PA) para las muestras de anticuerpo de raton o humano, respectivamente. La cantidad de senal fluorescente medida fue proporcional a la concentracion de anticuerpo anti- esclerostina libre en cada mezcla de reaccion en equilibrio. La constante de disociacion en equilibrio (Kd) se obtuvo a partir de regresion no lineal de las curvas de competicion usando un modelo de union homogenea de un sitio de curva n proporcionado en el software KinExA Pro. Los resultados de los ensayos de KinExA para los anticuerpos seleccionados se resumen en la siguiente tabla.

Anticuerpos

Antigeno Ko (pM) intervalo de confianza al 95%

Ab-13

Esclerostina Humana 0,6 0,4 ~ 0,8 pM

Ab-4

Esclerostina Humana 3 1,8 ~ 4 pM

Ab-19

Esclerostina Humana 3 1,7 ~ 4 pM

Ab-14

Esclerostina Humana 1 0,5 ~ 2 pM

Ab-5

Esclerostina Humana 6 4,3 ~ 8 pM

Ab-23

Esclerostina Humana 4 2,1 ~ 8 pM

EJEMPLO 11

METODO DE BIACORE PARA DETERMINAR LA AFINIDAD DE ANTICUERPOS ANTI-ESCLEROSTINA HUMANIZADOS POR ESCLEROSTINA HUMANA.

La tecnologfa BIAcore supervisa la union entre biomoleculas en tiempo real y sin la necesidad de marcaje. Uno de los que interaccionan, denominado el ligando, se inmoviliza directamente o se captura en la superficie inmovilizada mientras que el otro, denominado el analito, fluye en solucion sobre la superficie capturada. El sensor detecta el cambio de masa en la superficie sensora a medida que el analito se une al ligando para formar un complejo en la superficie. Esto corresponde al proceso de asociacion. El proceso de disociacion se supervisa cuando el analito se reemplaza por tampon. En el ensayo de BIAcore de afinidad, el ligando es el anticuerpo anti-esclerostina y el analito es esclerostina.

Instrumento

Biacore® 3000, Biacore AB, Uppsala, Suecia Microplaca sensora

CM5 (uso de investigacion) Numero de Catalogo: BR-1001-14, Biacore AB, Uppsala, Suecia. Las microplacas se almacenaron a 4 °C.

Solucion de BIAnormalizacion

Glicerol al 70% (p/p). Parte del Kit de BIAmantenimiento Numero de Catalogo: BR-1002-51, Biacore AB, Uppsala, Suecia. El kit de BIAmantenimiento se almaceno a 4 °C.

Kit de Acoplamiento de Amina

Numero de Catalogo: BR-1000-50, Biacore AB, Uppsala, Suecia.

Clorhidrato de etil-3-(e-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC). Compuesto hasta 75 mg/ml en agua destilada y almacenado en alfcuotas de 200 |il a -70 °C.

N-hidroxisuccinimida (NHS). Compuesto hasta 11,5 mg/ml en agua destilada y almacenado en alfcuotas de 200 |il a -70 °C.

Clorhidrato de etanolamina 1 M - NaOH pH 8,5. Almacenado en alfcuotas de 200 |il a -70 °C. Tampones

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Tampon de ejecucion para inmovilizar el anticuerpo de captura: HBS-EP (que es HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCI 0,15 M, EDTA 3 mM, Tensioactivo P20 0,005%). Numero de Catalogo: BR-1001-88, Biacore AB, Uppsala, Suecia. Tampon almacenado a 4 °C. Tampon de inmovilizacion: Acetato 5.0 (que es acetato sodico 10 mM pH 5,0). Numero de Catalogo: BR-1003-51, Biacore AB, Uppsala, Suecia. Tampon almacenado a 4 °C.

Tampon de ejecucion para ensayo de union: HBS-EP (que es HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, Tensioactivo P20 0,005%, Numero de Catalogo: BR-1001-88, Biacore AB, Uppsala, Suecia) con CM-Dextrano anadido a 1 mg/ml (Numero de Catalogo 27560, Fluka BioChemika, Buchs, Suiza). Tampon almacenado a 4 °C.

Captura de ligando

IgG anti-humano de cabra fragmento F(ab')2 Affinipure, espedfico de fragmento Fc. Jackson ImmunoResearch Inc (Pennsylvania, Estados Unidos) numero de Catalogo: 109-006-098. Reactivo almacenado a 4 °C.

Ligando

Anticuerpos anti-esclerostina humana humanizados Ab5, Ab14 y Ab20. Analito

Esclerostina humana recombinante. Alfcuotas almacenadas a -70 °C y descongeladas una vez para cada ensayo. Solucion de regeneracion

HCl 40 mM preparado por dilucion con agua destilada a partir de una solucion madre 11,6 M (BDH, Poole, Inglaterra.

Numero de catalogo: 101254H).

NaOH 5 mM preparado mediante dilucion con agua destilada a partir de una solucion madre 50 mM. Numero de

catalogo: BR-1003-58, Biacore AB, Uppsala, Suecia.

Metodo de Ensayo

El formato de ensayo fue captura del anticuerpo anti-esclerostina mediante Fc anti-IgG humano inmovilizado,

despues valoracion de la esclerostina sobre la superficie capturada.

Se proporciona a continuacion un ejemplo del procedimiento:

Se realizo BIA (Analisis de Interaccion Biamolecular) usando un BIAcore 3000 (BIAcore AB). Se inmovilizo IgG anti-humano de cabra Fragmento F(ab')2 Affinipure, espedfico de fragmento Fc (Jackson ImmunoResearch) en una microplaca sensora CM5 mediante qrnmica de acoplamiento de amina hasta un nivel de captura de ~4000 unidades de respuesta (UR). Se uso tampon HBS-EP (HEPES 10 mM, pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, Tensioactivo P20 0,005%, BIAcore AB) que contema CM-Dextrano 1 mg/ml como el tampon de ejecucion con un caudal de 10 |il/min. Se uso una inyeccion de 10 |il del anticuerpo anti-esclerostina a ~5 |ig/ml para captura por el Fc anti-IgG humano inmovilizado. Los niveles de captura de anticuerpo fueron tfpicamente 100-200 UR. La esclerostina se valoro sobre el anticuerpo anti-esclerostina capturado a diversas concentraciones a un caudal de 30 |il/min. La superficie se regenero por dos inyecciones de 10 |il de HCl 40 mM, seguido de una inyeccion de 5 |il de NaOH 5 mM a un caudal de 10 |il/min.

Se analizaron curvas de union con resta de fondo usando el software BIAevaluation (version 3.2) siguiendo

procedimientos convencionales. Se determinaron los parametros cineticos a partir del algoritmo de ajuste.

Los datos cineticos y las constantes de disociacion calculadas se proporcionan en la Tabla 2.

TABLA 2: Afinidad de anticuerpos anti-esclerostina para esclerostina

Anticuerpo

ka (1/Ms) k-d (1/s) Kd (pM)

Ab-5

1,78E+06 1,74E-04 97,8

Ab-14

3,30E+06 4,87E-06 1,48

Ab-20

2,62E+06 4,16E-05 15,8

EJEMPLO 12

ENSAYOS IN VIVO DE ANTICUERPOS MONOCLONALES ANTI-ESCLEROSTINA EN MONOS CYNOMOLGUS

Se usaron treinta y tres monos cynomolgus hembra de aproximadamente 3-5 anos de edad (Macaca fascicularis) en este estudio de 2 meses. El estudio contema 11 grupos:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Grupo 1: vehmulo (N=4)

Grupo 2: Ab-23 (N=2, dosis 3 mg/kg)

Grupo 3: Ab-23 (n=3, dosis 10 mg/kg)

Grupo 4: Ab-23 (n=3, dosis 30 mg/kg)

Grupo 5: Ab-5 (N=3, dosis 3 mg/kg)

Grupo 6: Ab-5 (n=3, dosis 10 mg/kg)

Grupo 7: Ab-5 (n=3, dosis 30 mg/kg)

Grupo 8: Ab-14 (N=3, dosis 3 mg/kg)

Grupo 9: Ab-14 (n=3, dosis 10 mg/kg)

Grupo 10: Ab-14 (N=3, dosis 30 mg/kg)

Grupo 11: Hormona paratiroidea (1-34) [PTH (1-34)] (N=3, dosis 10 |ig/kg)

Toda la dosificacion fue subcutanea. Se dosifico PTH (1-34) cada dfa, los anticuerpos monoclonales (Mab) se dosificaron dos veces (primera dosis al comienzo del estudio y segunda dosis en el punto temporal de un mes). Para evaluacion de parametros de hueso (por ejemplo densidad mineral osea) se realizaron exploraciones pQCT (tomograffa computarizada cuantitativa periferica) y DXA (absorciometna de rayos X de energfa dual) antes del comienzo del estudio (para obtener los valores de lmea basal) y despues de un mes (antes de la segunda dosis de Mab) y finalmente al final del estudio (punto temporal de 2 meses) momento en el cual se realizaron necropsias de los monos para analisis adicional (por ejemplo analisis histomorfometrico). Los animales se marcaron con fluorocromo (dfas 14, 24, 47 y 57) para histomorfometna dinamica. Se recogio suero en diversos puntos temporales durante el estudio [dfa 1 antes de la dosis (el dfa de la primera dosis de Mab), dfa 1 doce horas despues de la dosis, dfa 2, dfa 3, dfa 5, dfa 7, dfa 14, dfa 21, dfa 28, dfa 29 doce horas despues de la dosis (el dfa 29 fue el dfa de la segunda y ultima dosis de Mab), dfa 30, dfa 31, dfa 33, dfa 35, d^a 42, dfa 49 y d^a 56].

Se midieron tres biomarcadores de suero relacionados con hueso usando kits disponibles en el mercado:

Osteocalcina (OC) (Kit de Radioinmunoensayo de Osteocalcina DSL; Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster, TX, Estados Unidos).

Propeptido N-terminal de Procolageno de Tipo I (P1NP) (Kit de Radioinmunoensayo de P1NP; Orion Diagnostica, Espoo, Finlandia).

Fragmentos de C-telopeptido de cadenas a1 de colageno de tipo I (sCTXI) (Serum CrossLaps® ELISA; Nordic Bioscience Diagnostics A/S, Herlev, Dinamarca).

Las exploraciones de pQCT y DXA produjeron datos sobre diversos parametros del hueso (incluyendo densidad mineral osea (DMO) y contenido mineral oseo) a lo largo de numerosos sitios esqueleticos (incluyendo metafisis y diafisis tibial, metafisis y diafisis radial, cuello femoral, vertebras lumbares). El analisis de estos datos de hueso (porcentaje de cambio de lmea basal para cada animal) y los datos de biomarcadores de suero anabolicos (OC, P1NP) (porcentaje de cambio desde la lmea basal para cada animal) revelaron aumentos estadfsticamente significativos, frente al grupo de vehmulo, en algunos parametros en algunos de los puntos temporales y dosis para cada Mab. Estos datos de parametros de hueso, datos de biomarcadores de suero, asf como los datos histomorfometricos, indicaron que cada uno de los 3 Mab (Ab-23, Ab-5 y Ab-14) fue capaz de neutralizar la esclerostina en monos cynomolgus. Esta actividad fue mas robusta para Ab-23 y Ab-5, particularmente a la dosis mas alta (30 mg/kg), con un claro aumento en la formacion del hueso (efecto anabolico) asf como aumentos netos de hueso (por ejemplo, DMO). Tambien se encontraron aumentos estadfsticamente significativos en parametros del hueso y parametros histomorfometricos anabolicos para el grupo de control positivo (PTH (1-34)).

Se aumentaron los marcadores de formacion de hueso en suero (P1NP, osteocalcina) (p<0,05 frente a vehmulo (VEH)) en diversos puntos temporales y dosis, pero particularmente en los grupos de 30 mg/kg para Ab-23 y Ab-5. Los analisis histomorfometricos revelaron aumentos drasticos (p<0,05 frente a VEH) en las tasas de formacion de hueso en hueso esponjoso en vertebras lumbares y tibia proximal (aumento de hasta 5 veces), asf como en la superficie endocortical de la mitad del femur (aumento de hasta 10 veces) a las dosis mas altas de Ab-23 y Ab-5. El grosor trabecular se aumento con dosis alta de Ab-23 y Ab-5 en vertebras lumbares (>60%, p<0,05 frente a VEH). Al final del estudio (2 meses), la DMO de area, como porcentaje de cambio desde la lmea basal, aumento (p<0,05 frente a VEH) en el cuello femoral, radio ultra-distal (Ab-23, 30 mg/kg) y vertebras lumbares (Ab-5, 30 mg/kg). Los aumentos de DMO de area en las vertebras lumbares estuvieron acompanados de aumentos en la fuerza vertebral (97% de aumento en la carga maxima vertebral para Ab-23, 30 mg/kg; p<0,05 frente VEH); los valores de lmea basal para DMO de area lumbar antes de la dosificacion de Mab fueron estadfsticamente similares entre todos los grupos. En resumen, la administracion a corto plazo de Mab neutralizantes de esclerostina en monos cynomolgus dio como resultado, en parte, aumentos de la formacion de hueso, DMO y fuerza osea vertebral.

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> UCB S.A. Amgen, Inc.

5

10

15

20

25

30

35

40

<150>

<151> <150>

<151>

<150> 60/782.244 <151>

<150> 60/776.847 <151>

<150> 60/667.583 <151>

<160> 396

<170> FastSEQ para windows Version 4.0

<210> 1 <211> 190 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 1

Gin

Gly Trp Gin Ala c Phe Lys Asn Asp Ala 10 Glu Thr Glu He He pro Glu 15 Lys Thr

X Leu

Gly Glu Tyr 20 Ala 3 Pro Glu pro pro Pro 25 Arg Leu Glu Asn Asn 30 His Pro 45 His Phe

Met

Asn Arg 35 Lys Asp 50 Val Thr Glu Asn Gly Gly 40 Ser pro Pro His phe Glu

Thr

val Ser Glu Tyr 55 Cys Cys Arg Glu Leu 60 Pro Thr Arg

Tyr 65

Asp Gly Pro 70 Arg Ser Ala Lys 75 val Thr Glu Leu 80

val

cys ser Gly Gin 85 Trp Cys Gly pro Ala Arg 90 Gly Leu Leu Pro Asn Ala lie 95 Cys He

Gly

Arg Gly Lys 100 Trp Arg Pro ser 105 pro Asp Phe Arg 110

Pro

Asp Arg 115 Ala Pro 130 Arg Leu Tyr Arg Ala Gin Arg 120 val Val Gin Leu Leu Cys pro 125 Ser Cys Gly Gly

Glu

Arg Ala Arg Lys 135 His Arg Leu val Ala 140 Leu Lys Cys

Lys 145

Thr Arg Phe 150 Asn Gin Ser Glu 155 Lys Asp Phe Gly 160

Thr

Glu Ala Ala Arg 165 Pro Gin Lys Gly Arg 170 Lys Pro Arg Pro Arg Ala 175

Arg

Ser Ala Lys 180 Ala Asn Gin Ala Glu 185 Leu Glu Asn Ala Tyr 190

<210>2 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400>2

Asp val Ser Glu Tyr Ser Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg 15 10

5

10

15

20

25

30

35

40

<211> 18

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

ser Ala Lys pro val Thr Glu Leu val cys ser Gly Gin cys Gly pro 15 10 15

Ala Arg

<210>4 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400>4

Trp Trp Arg Pro ser Gly Pro Asp Phe Arg cys lie pro Asp Arg Tyr 15 10 15 ^

<210>5 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400>5

Leu val Ala ser Cys Lys cys Lys Arg Leu Thr Arg 1 5 . 10

<210>6 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400>6

Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp 15 10 15

Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys 20 25

<210>7 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 7

ASp

val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser ser Leu ser Ala Ser Leu Gly

1

5 10 15

ASp

lie Val Thr 20 Phe Met Thr cys Gin Ala 25 Gly ser Gin Gly Thr ser 30 Leu lie Asn

Leu

Asn Trp Gin Gin Lys Pro Lys Ala Pro Lys Leu lie

35 40 45

Tyr

Gly Ser ser Asn Leu Glu Asp Gly val Pro ser Arg Phe ser Gly

50

55 60

ser 65 Glu

Arg Tyr Gly Thr Asp 70 Tyr Phe Thr Leu Thr lie 75 His ser Ser Leu Glu Asp 80 Tyr

ASp

Leu Ala Thr phe Cys Leu Gin ser Tyr Leu pro

85 90 95

Thr

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala

100 105 110

Pro

Thr val ser lie Phe pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr ser Gly

115 120 125

Gly

Ala 130 val Ser val val Cys Phe 135 ASp Leu Asn Asn phe Tyr 140 Gin Pro Lys Asp lie

Asn

Lys Trp Lys He Gly Ser Glu Arg Asn Gly val Leu

145

150 155 160

Asn

ser Trp Thr Asp Gin ASp Ser Lys Asp ser Thr Tyr ser Met Ser

165 170 175

Ser

Thr Leu Thr 180 Ala Leu Thr Lys Asp Glu 185 ser Tyr Glu Arg His Asn 190 val Ser Tyr

Thr

cys Glu 195 Arg Thr His Lys Thr 200 Thr ser Pro lie 205 Lys ser

Phe

Asn Asn Glu cys

210

<210>8 <211> 645 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 8

gatgtccaga tgattcagtc tccatcctcc atgacttgcc aggcaagtca gggcactagc gggaaggctc ctaagctcct gatctatggt aggttcagtg gcagtagata tgggacagat gaagatctgg caacttattt ctgtctacaa gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac

ctgtctgcat ctttgggaga catagtcacc 60 attaatttaa actggtttca gcaaaaacca 120 tcaagcaact tggaagatgg ggtcccatca 180 ttcactctca ccatcagcag cctggaggat 240 catagttatc tcccgtacac gttcggaggg 300 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 aggaatgagt gttag 645

<210>9 <211> 236 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

Met

Asn Thr Arg Ala Pro Ala Glu Phe Leu Gly Phe Leu Leu Leu Trp

1

5 10 15

Phe

Leu Gly Ala Arg Cys Asp val Gin Met lie Gin Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Leu

ser Ala Ser Leu Gly Asp lie val Thr Met Thr cys Gin Ala Ser

35 40 45

Gin

Gly Thr Ser lie Asn Leu Asn Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys

50 55 60

Ala

pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly ser Ser Asn Leu Glu Asp Gly Val

65

70 75 80

Pro

ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

85 90 95

lie

ser ser Leu Glu Asp Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Phe cys Leu Gin

100 105 110

His

ser Tyr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie

115 120 125

Lys

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro ser ser

130

135 140

Glu

Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala ser Val Val cys Phe Leu Asn Asn

145

150 155 160

Phe

Tyr pro Lys Asp lie Asn val Lys Trp 170 Lys lie Asp Gly Ser 175 Glu

Arg

Gin Asn Gly Xu J Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys ASp

180 185 190

Ser

Thr Tyr Ser Met Ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys ASp GlU Tyr

195 200 Glu 205

Glu

Arg His Asn Ser Tyr Thr cys Ala Thr His Lys Thr Ser Thr

210 215 220

Ser Pro lie Val Lys ser Phe Asn Arg Asn Glu cys

225 230 235

<210> 10 5 <211> 711

<212> ADN <213> Mus musculus

<400> 10

10

atgaacacga gggcccctgc tgagttcctt agatgtgatg tccagatgat tcagtctcca gtcaccatga cttgccaggc aagtcagggc aaaccaggga aggctcctaa gctcctgatc ccatcaaggt tcagtggcag tagatatggg gaggatgaag atctggcaac ttatttctgt ggagggggga ccaagctgga aataaaacgg ccaccatcca gtgagcagtt aacatctgga ttctacccca aagacatcaa tgtcaagtgg gtcctgaaca gttggactga tcaggacagc ctcacgttga ccaaggacga gtatgaacga aagacatcaa cttcacccat tgtcaagagc

gggttcctgt tgctctggtt tttaggtgcc 60 tcctccctgt ctgcatcttt gggagacata 120 actagcatta atttaaactg gtttcagcaa 180 tatggttcaa gcaacttgga agatggggtc 240 acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 ctacaacata gttatctccc gtacacgttc 360 gctgatgctg caccaactgt atccatcttc 420 ggtgcctcag tcgtgtgctt cttgaacaac 480 aagattgatg gcagtgaacg acaaaatggc 540 aaagacagca cctacagcat gagcagcacc 600 cataacagct atacctgtga ggccactcac 660 ttcaacagga atgagtgtta g 711

<210> 11 <211> 443 15 <212> PRT

<213> Mus musculus

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Thr Pro Gly Ala

15 10 15

Ser Val Lys lie ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie

35 40 45

Gly Asp lie Asn Pro Tyr Ser Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys ser ser Ser lie Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu lie Arg Gly Leu Thr ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Ala ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly

100 105 110

Thr Leu val Thr Val ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met Val Thr Leu

130 135 140

Gly Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser ser Ser Val Thr Val Pro ser ser

. 180 185 190

Thr Trp Pro ser Glu Thr Val Thr cys Asn Val Ala His Pro Ala ser

195 200 205

ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie val Pro Arg Asp cys Gly cys Lys

210 215 220

Pro Cys lie Cys Thr val Pro Glu val Ser ser Val Phe lie Phe Pro

225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr

245 250 255

Cys Val Val val Asp lie Ser Lys Asp Asp pro Glu val Gin Phe ser

260 265 270

Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg

275 280 285

Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu pro lie . 290 295 BOO

Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys cys Arg val Asn

305 310 315 320

ser pro Ala phe Pro Ala pro lie Glu Lys Thr lie ser Lys Thr Lys

325 330 335

Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu

340 345 350

Gin Met Ala Lys Asp Lys val ser Leu Thr cys Met lie Thr Asp Phe

355 360 365

Phe Pro Glu Asp He Thr val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala

370 375 380

Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro lie Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr

385 390 395 400

Phe lie Tyr ser Lys Leu Asn Val Gin Lys ser Asn Trp Glu Ala Gly

405 410 415

Asn Thr Phe Thr Cys ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His

420 425 430

Thr Glu Lys Ser Leu Ser His ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 12 5 <211> 1332

<212> ADN <213> Mus musculus

gaggtccagc

tcttgtaagg

catggaaaaa

aaccagaagt

atggagatcc

tacgacgcct

aaaacgacac

atggtgaccc

aactctggat

tacactctga

tgcaacgttg

tgtggttgta

ccaaagccca

gacatcagca

cacacagctc

gaacttccca

agtccagctt

gctccacagg

ctgacctgca

gggcagccag

ttcatctaca

tgctctgtgt

cctggtaaat

tgcaacagtc tggacctgaa ctggtgacgc ctggggcttc agtgaagata 60 cttctggata cacattcact gaccactaca tgagctgggt gaagcagagt 120 gccttgagtg gattggagat attaatccct attctggtga aactacctac 180 tcaagggcac ggccacattg actgtagaca agtcttccag tatagcctac 240 gcggcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagatgat 300 ctccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagcc 360 ccccatctgt ctatccactg gcccctggat ctgctgccca aactaactcc 420 tgggatgcct ggtcaagggc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg 480 ccctgtccag cggtgtgcac accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc 540 gcagctcagt gactgtcccc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc 600 cccacccggc cagcagcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat 660 agccttgcat atgtacagtc ccagaagtat catctgtctt catcttcccc 720 aggatgtgct caccattact ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta 780 aggatgatcc cgaggtccag ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg 840 agacgcaacc ccgggaggag cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt 900 tcatgcacca ggactggctc aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac 960 tccctgcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag 1020 tgtacaccat tccacctccc aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt 1080 tgataacaga cttcttccct gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat 1140 cggagaacta caagaacact cagcccatca tggacacaga tggctcttac 1200 gcaagctcaa tgtgcagaag agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc 1260 tacatgaggg cctgcacaac caccatactg agaagagcct ctcccactct 1320 ga 1332

<210> 13 <211> 462 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 13

Met

Arg cys Arg

val

Leu Ser Glu 20

Pro

Gly Ala 35 Ser

Thr

Asp 50 Trp His Tyr

Glu 6S Gin

He Gly

Lys

Phe

Lys

lie

Ala Tyr Met 100

Tyr

Tyr

cys 115 Gly Ala

Gly

Gin 130 Thr

Ser 145

val Tyr pro

Val

Thr Leu Gly

val

Thr Trp Asn 180

Ala

val Leu 195 Gin

Pro

Ser 210 Ser Thr

Pro 225

Ala ser ser

Gly

Cys Lys Pro

He

Phe Pro pro 260

Lys

Val Thr 275 cys

Gin

Phe 290 ser Trp

Gin 305

Pro Arg Glu

Leu

Pro He Met

Arg

val Asn Ser 340

Lys

Thr Lys 355 Gly

Pro

Lys 370 Glu Gin

Thr 385 Gin

Asp Phe Phe

Pro

Ala Glu

Gly

Ser Tyr Phe 420 Asn

Glu

Ala Gly 435

Asn

His 450 His Thr

<210> 14 <211> 1389 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

Trp

lie Phe Leu Phe Leu 10 ser

val

Gin Leu Gin Gin 25

val

Lys lie Ser 40 val Cys Lys

Met

ser Trp 55 Lys Gin

ASp

lie Asn 70 Thr Ala pro Tyr ser

Gly 85

Thr Leu Thr 90

Glu

lie Arg Gly Leu 105 Asp Thr

Arg

Asp Asp Tyr 120 val Ala

Leu

val Thr 135 Ser Ala

Leu

Ala Pro 150 Gly Ser Ala

cys 165

Leu Val Lys Gly Tyr 170

ser

Gly ser Leu Ser 185 Thr Ser

ser

Asp Leu Tyr 200 Glu Leu

Trp

Pro Ser 215 Lys val 230 lie.Cys Thr Val

Thr

Asp Lys Lys

cys 245

Thr val Pro 250

Lys

Pro Lys Asp Val 265 He Leu

val

val val Asp 280 Asp ser

Phe

val Asp 295 Gin Phe 310 val Glu

Glu

Asn Ser Thr

His 325

Gin Asp Trp Leu Asn 330

Pro

Ala Phe Pro Ala 345

Pro

Arg

Pro Lys Ala 360 ASp Pro Gin

Met

Ala Lys 375 Glu Asp 390 Tyr Lys Lys val

Pro

He Thr val

Asn 405

Asn Thr Gin 410

He

Tyr Ser Lys Leu 425 Ser Asn

Thr

Phe Thr cys 440 val

Glu

Lys Ser 455 Leu Ser His

Leu

ser Gly Thr Ala 15 Gly

Gly

Pro Glu Leu 30 Tyr Val Thr

Ala

Ser Gly 45 Thr Phe

ser

His 60 Glu Gly Lys Ser Leu

Gly 75

Thr Thr Tyr Asn 80

val

Asp Lys Ser Ser 95 ser

Ser

Glu Asp Ser 110 Ala val

ser

Pro Phe 125 Ala Tyr Trp

Ala

Lys 140 Thr Thr Pro Pro

Ala 155

Gin Thr Asn Ser Met 160

Phe

pro Glu Pro val 175 Thr

Gly

val His Thr 190 Val Phe Pro

ser

Ser Ser 205 Thr Val

Thr

cys 220 Asn val Ala His

He 235

Val Pro Arg Asp Cys 240

Glu

Val Ser ser Val 255 Phe

Thr

He Thr Leu 270 Thr pro

Lys

ASp Asp 285 Thr Pro Glu val

val

His 300 Ala Gin Thr

Phe 315

Arg Ser Val Ser Glu 320

Gly

Lys Glu Phe Lys 335 lie cys

He

Glu Lys Thr 350 lie ser

val

Tyr Thr 365 Thr Pro Pro

Ser

Leu 380 Trp Cys Met He

Glu 395

Gin Trp Asn Gly 400

Pro

lie Met Asp Thr 415 Asp

Val

Gin Lys Ser 430 Asn Trp

Leu Ser

His Pro 460 Glu 445 Gly Gly Lys Leu His

5

atgagatgca ggtggatctt tctctttctc gtccagctgc aacagtctgg acctgaactg tgtaaggctt ctggatacac attcactgac ggaaaaagcc ttgagtggat tggagatatt cagaagttca agggcacggc cacattgact gagatccgcg gcctgacatc tgaggactct gacgcctctc cgtttgctta ctggggccaa acgacacccc catctgtcta tccactggcc gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc aacgttgccc acccggccag cagcaccaag ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca aagcccaagg atgtgctcac cattactctg

ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtgacgcctg gggcttcagt gaagatatct 120 cactacatga gctgggtgaa gcagagtcat ISO aatccctatt ctggtgaaac tacctacaac 240 gtagacaagt cttccagtat agcctacatg 300 gcagtctatt actgtgcaag agatgattac 360 gggactctgg tcactgtctc tgcagccaaa 420 cctggatctg ctgcccaaac taactccatg 480 ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac 540 ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac 600 agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc 660 gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt 720 gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca 780 actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac 840

atcagcaagg atgatcccga. ggtccagttc agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac 900

acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa 960

cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt 1020

ccagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct 1080

ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg 1140

acctgcatga taacagactt cttccctgaa gacattactg tggagtggca gtggaatggg 1200 •

cagccagcgg agaactacaa gaacactcag cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc 1260

atctacagca agctcaatgt gcagaagagc aactgggagg caggaaatac tttcacctgc 1320

tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac catactgaga agagcctctc ccactctcct 1380

ggtaaatga 1389

<210> 15 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 15

ASp

lie val Leu Thr Gin ser Pro Ala ser Leu Thr val Ser Leu Gly

1

5 10 15

Leu

Arg Ala Thr 20 Tyr He ser cys Lys Ala 25 Gin ser Gin ser val Asp 30 Gin Tyr Asp

Gly

Asp ser Met Asn Trp Tyr Gin Lys Pro Gly pro Pro

35

40 45

Lys

Leu Leu He Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lie Pro Ala

50

55 60

Arg

Phe Ser Gly Asn Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn He His

65

70 75 80

Pro

Val Glu Glu Glu 85 Thr ASp Ala val Thr Tyr Tyr 90 Thr Lys Cys Gin Gin Ser 95 Lys Asn

Glu

Asp Pro Trp Phe Gly Gly Gly Leu Glu lie Arg

100 105 110

Ala

Asp Ala Ala Pro Thr val Ser lie Phe Pro Pro Ser ser Glu Gin

115 120 125

Leu

Thr 130 Lys Ser Gly Gly Ala Ser 135 Lys Val Val Cys Phe Leu 140 Gly Asn Asn Phe Tyr

Pro

Asp lie Asn val Trp Lys lie Asp Ser Gl u Arg Gin

145

150 155 160

Asn

Gly val Leu Asn 165 Ser ser Trp Thr ASp Gin Asp 170 Thr Lys Ser Lys ASp Ser 175 Glu Thr

Tyr

Ser Met Ser 180 Tyr Thr Leu Thr Leu 185 Thr ASp Glu Tyr 190 Thr Arg

His

Asn Ser Thr cys Glu Ala His Lys Thr ser Ser Pro

195 200 205

He

val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu cys

210 215

<210> 16 <211> 657 <212> ADN

<400> 16

5

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttgactgtgt ctctaggcct gagggccacc 60 atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttatat gaactggtac 120 cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 180 gggatcccag ccaggtttag tggcaatggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatgc tgtaacctat tactgtcaac aaagtaatga ggatccgtgg 300 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 360 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 420 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 480 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 540 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 600 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 657

<210> 17 <211> 238 <212> PRT

10 <213> Mus musculus

<400> 17

Met

Glu Thr Asp Thr lie Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1

5 10 15

Gly

ser Thr Gly 20 Gly ASp lie val Leu Thr 25 lie Gin Ser Pro Ala Ser 30 Ser Leu Thr

Val

Ser Leu Leu Arg Ala Thr Ser cys Lys Ala Gin Ser

35 40 45

val

Asp 50 Gin Tyr Asp Gly Asp Ser 55 Leu Tyr Met Asn Trp Tyr 60 ser Gin Gin Lys Pro

Gly

Pro Pro Lys Leu lie Tyr Ala Ala Asn Leu Glu ser

65

70 75 80

Gly

lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly Asn Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr

85 90 95

Leu

Asn He His 100 Asn Pro val Glu Glu Glu 105 Thr Asp Ala val Thr Tyr 110 Thr Tyr Cys

Gin

Gin

Ser 115 Lys Glu Asp Pro Trp 120 Ala Phe Gly Gly Gly 125 lie Lys Leu

Glu

lie Arg Ala ASp Ala Pro Thr val Ser Phe Pro Pro

130 135 140

Ser

Ser

Glu Gin Leu Thr ser Gly Gly Ala Ser val val cys Phe Leu

145

150 155 160

Asn

Asn

Phe Tyr Pro Lys ASp He Asn Val Lys Trp Lys He Asp Gly

165 170 175

Ser

Glu Arg Gin 180 Thr Asn Gly Val Leu Asn 185 Ser Ser Trp Thr Asp Gin 190 Thr Asp

Ser

Lys

Asp ser 195 Glu Tyr ser Met Ser 200 Tyr Thr Leu Thr Leu 205 Thr Lys Asp

Glu

Tyr 210 Thr Arg His Asn ser 215 Lys Thr cys Glu Ala 220 Asn His Lys Thr

Ser

ser Pro lie val Ser Phe Asn Arg Glu Cys

225

230 235

15

<210> 18 <211> 717 <212> ADN <213> Mus musculus

5

10

atggagacag acacaatcct gctatgggtg gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct atctcctgca aggccagcca aagtgttgat cagcagaaac caggacagcc acccaaactc gggatcccag ccaggtttag tggcaatggg cctgtggagg aggaggatgc tgtaacctat acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc atcttcccac catccagtga gcagttaaca aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat actcacaaga catcaacttc acccattgtc

ctgctgctct gggttccagg ctccactggt 60 ttgactgtgt ctctaggcct gagggccacc 120 tatgatggtg atagttatat gaactggtac 180 ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 240 tctgggacag acttcaccct caacatccat 300 tactgtcaac aaagtaatga ggatccgtgg 360 aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420 tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 480 aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 540 gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 600 gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 660 aagagcttca acaggaatga gtgttag 717

<210> 19 <211> 449 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 19

Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu val Lys Pro Gly Thr 15 10 15

Ser val Lys Met Ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp cys 20 25 30

Tyr Met Asn Trp val Lys Gin Ser His Gly Lys ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Asp He Asn Pro Phe Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys 65 Met

Gly Lys Ala

Gin

Leu Asn

Ala

Arg Ser His 100

Asp

Tyr Trp 115 Pro Gly

Thr

Pro 130 ser

Asn 145

ser Met Val

Pro

val Thr Val

Thr

Phe Pro Ala 180

val

Thr val 195 Pro

Val

Ala 210 His Pro

Arg 225 Ser

Asp Cys Gly

Val

Phe lie

Leu

Thr Pro Lys 260

Pro

Glu val 275 Gin

Ala

Gin 290 Thr Gin

Val 305

ser Glu Leu

Phe

Lys Cys Arg

Thr

lie Ser Lys 340

lie

Pro Pro 355 Pro

cys

Met 370 Asn lie Thr

Trp 385 Asp

Gly Gin

Thr

ASp Gly

ser

Asn Trp Glu 420

Gly Lys

Leu His 435 Asn

<210> 20 <211> 1350 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 20

Thr

Leu 70 Leu Thr Val ASp Lys

ser 85

Thr Ser Asp Asp 90

Tyr

Tyr

Phe ASp Gly 105 val Arg

Gin

Gly Thr Ser 120 Leu Thr

Val

Tyr Pro 135 Ala Pro

Thr

Leu 150 Trp Gly cys Leu val

Thr 165

Asn ser Gly Ser 170

val

Leu Gin Ser Asp 185 Leu

Ser

ser Thr Trp 200 Pro ser

Ala

Ser ser 215 Thr Lys val

Cys

Lys 230 Pro Pro cys lie cys

Phe 245

pro Lys Pro Lys 250

val

Thr Cys Val val 265

val

Phe

Ser Trp Phe 280 Glu Val Asp

Pro

Arg Glu 295 Gin Phe

Pro

He 310 Met His Gin Asp

val 325

Asn Ser Ala Ala Phe 330

Thr

Lys Gly Arg Pro 345 Lys

Lys

Glu Gin Met 360 Ala

Lys

Asp

Phe Phe 375 Glu Pro Glu

Asp

Pro

Ala 390 Tyr Asn Tyr Lys

Ser 405

Phe He Tyr ser 410

Ala

Gly Asn Thr Phe 425 Lys Thr

His

His

Thr Glu 440 ser

Ser 75

Ser ser Thr Ala Tyr 80

Ser

Ala val Tyr Tyr 95 Ala cys

Val

pro Trp Asp 110 Met

Val

Ser Ser 125 Ala Ala Lys Thr

Gly

ser 140 Ala Gin Thr

Lys 155

Gly Tyr Phe pro Glu 160

Leu

Ser Ser Gly val 175 His

Tyr

Thr Leu Ser 190 ser Ser

Glu

Thr val 205 Thr Cys Asn

ASp

Lys 220 val Lys He val Pro

Thr 235

Pro Glu val ser 240

Asp

val Leu Thr He 255 Asp Thr

ASp

He Ser Lys 270 val Asp

ASp

Val Glu 285 His Thr

Asn

Ser 300 Leu Thr Phe Arg Ser

Trp 315

Asn Gly Lys Glu 320

pro

Ala Pro lie Glu 335 Tyr Lys

Ala

Pro Gin val 350 Ser Thr

ASp

Lys Val 365 Val Leu Thr

lie

Thr 380 Thr Glu Trp Gin

Asn 395

Gin pro He Met 400

Lys

Leu Asn val Gin 415

Lys

Cys

Ser Val Leu 430 His Glu

Leu

Ser His 445 Ser Pro Gly

gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctgggacttc agtgaagatg 60 tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactgctaca tgaactgggt gaagcagagc 120 catgggaaga gccttgaatg gattggagat attaatcctt tcaacggtgg tactacctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca acagcctgac atctgacgac tctgcagtct attactgtgc aagatcccat 300 tattacttcg atggtagagt cccttgggat gctatggact actggggtca aggaacctca 360 gtcaccgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccactggc ccctggatct 420 gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag 480 ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct 540 gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg 600

cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag 660

aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca 720

tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag 780

gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt 840

gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc 900

actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag 960

ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020

accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg 1080

gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact 1140

gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg 1200

gacacagatg gctcttactt catctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag 1260

gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 1320

aagagcctct cccactctcc tggtaaatga 1350

<210> 21 <211> 468 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 21

Met 1

Gly Trp Asn Trp lie Phe

val

Tyr ser Glu 20 Val Gin Leu

Pro

Gly Thr 35 Cys Ser Val Lys Met

Thr

ASp 50 Trp Tyr Met Asn Trp 55 Asn

Glu 65 Gin

He Gly Asp lie 70 Lys

Lys

Phe Lys Gly 85 Ala

Thr

Ala Tyr Met 100 Ala Gin Leu Asn

Tyr

Tyr

Cys 115 Met Arg Ser His

Asp

Ala 130 ASP Tyr Trp Gly 135

Ala 145

Lys Thr Thr Pro Pro 150 ser

Ala

Gin Thr Asn Ser 165 Met val

Phe

Pro Glu Pro 180 val Thr val

Gly

val His 195 Ser Thr Phe Pro Ala

Ser

ser 210 val Thr val Pro 215

Thr 225

cys Asn val Ala His 230 Pro

He

val Pro Arg Asp 245 val cys Gly

Glu

val ser Ser 260 Phe He

Thr

lie Thr 275 Leu Thr Pro Lys

Lys

Asp 290 Asp Pro Glu val Gin 295

Val 305

His Thr Ala Gin Thr 310 Gin

Phe

Arg Ser val Ser 325 Lys Glu Leu

Gly

Lys Glu Phe 340 Thr cys Arg

He

Glu Lys 355 lie Ser Lys

Val

Tyr 370 Thr lie pro pro Pro 375

ser 385

Leu Thr cys Met He 390 Thr

Glu

Trp Gin Trp Asn 405 Thr Gly Gin

Pro

lie Met Asp 420 ser Asp Gly

Val

Gin Lys 435 Glu Gly Asn Trp Glu

Leu Ser 465

His 450 Pro Gly Lys Leu His Asn 455

<210> 22 <211> 1407 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

Leu

Phe Leu 10 Ser Leu Ser Gly Thr Ala 15 Val Gly

Gin

Gin 25 Gly Pro Glu Leu 30 Lys

ser 40 val

Cys Lys Ala Ser Gly 45 Gly Tyr Thr Phe

Lys

Gin Ser His 60 Gly Lys ser Leu

Pro

Phe Asn Gly 75 val Thr Thr Tyr Asn 80 Ser

Thr

Leu Thr 90 Thr Asp Lys Ser ser 95 Ala

Ser

Leu 105 Tyr Ser Asp Asp Ser 110 val Val

Tyr 120

Phe Asp Gly Arg 125 Pro Trp

Gin

Gly Thr Ser Val 140 Thr val ser Ser

val

Tyr pro Leu 155 cys Ala pro Gly ser Ala 160 Tyr

Thr

Leu Gly 170 Asn Leu val Lys Gly 175 Ser

Thr

Trp 185 Ser Gly Ser Leu 190 Ser

val 200

Leu Gin Ser Asp Leu 205 Tyr Thr Leu

ser

ser

Thr Trp Pro 220 Lys ser Glu Thr val

Ala

Ser ser Thr 235 cys val Asp Lys Lys 240 Pro

Cys

Lys pro 250 pro He Cys Thr Val 255 val

Phe

Pro 265 Thr Lys Pro Lys Asp 270 Asp Leu

val 280

cys val val val 285 He Ser

Phe

ser Trp Phe val 300 Gin Asp Asp Val Glu

Pro

Arg Glu Glu 315 Phe Asn Ser Thr 320

Pro

He Met 330 His Gin Asp Trp Leu 335 Asn

val

Asn 345 ser Ala Ala phe pro 350 Ala Pro

Thr 360

Lys Gly Arg Pro Lys 365 Ala pro Gin

Lys

Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys val

380

Asp

Phe Phe Pro Glu Asp He Thr val

Ala

395 400

pro

Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin

410 415

Ser

Tyr Phe lie Tyr ser Lys Leu Asn

425 430

Ala

Gly Asn Thr phe Thr cys ser val

440

445

His

His

Thr Glu Ly§ Ser Leu ser

His

460

atgggatgga

gtccagctgc

tgtaaggctt

gggaagagcc

cagaagttca

cagctcaaca

tacttcgatg

accgtctcct

gcccaaacta

gtgacagtga

ctgcagtctg

agcgagaccg

attgtgccca

gtcttcatct

acgtgtgttg

gatgatgtgg

ttccgctcag

aaatgcaggg

aaaggcagac

aaggataaag

gagtggcagt

acagatggct

ggaaatactt

agcctctccc

actggatctt

aacaatctgg

ctggatacac

ttgaatggat

agqgcaaggc

gcctgacatc

gtagagtccc

cagccaaaac

actccatggt

cctggaactc

acctctacac

tcacctgcaa

gggattgtgg

tccccccaaa

tggtagacat

aggtgcacac

tcagtgaact

tcaacagtgc

cgaaggctcc

tcagtctgac

ggaatgggca

cttacttcat

tcacctgctc

actctcctgg

tctcttcctc

acctgagctg

attcactgac

tggagatatt

cacattgact

tgacgactct

ttgggatgct

gacaccccca

gaccctggga

tggatccctg

tctgagcagc

cgttgcccac

ttgtaagcct

gcccaaggat

cagcaaggat

agctcagacg

tcccatcatg

agctttccct

acaggtgtac

ctgcatgata

gccagcggag

ctacagcaag

tgtgttacat

taaatga

ttgtcaggaa ctgcaggtgt ctactctgag gtgaagcctg ggacttcagt gaagatgtcc tgctacatga actgggtgaa gcagagccat aatcctttca acggtggtac tacctacaac gtagacaaat cctccagcac agcctacatg gcagtctatt actgtgcaag atcccattat atggactact ggggtcaagg aacctcagtc tctgtctatc cactggcccc tggatctgct tgcctggtca agggctattt ccctgagcca tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc tcagtgactg tcccctccag cacctggccc ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta caaccccggg aggagcagtt caacagcact caccaggact ggctcaatgg caaggagttc gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc accattccac ctcccaagga gcagatggcc acagacttct tccctgaaga cattactgtg aactacaaga acactcagcc catcatggac ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca gagggcctgc acaaccacca tactgagaag

60

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1407

5 <210> 23

<211> 217 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton 10 <400> 23

Ala

Gin val Leu Thr Gin Thr Pro Ala ser val Ser Ala Ala Val Gly

1

5 10 15

Gly

Thr val Thr lie Asn Cys Gin Ser Ser Gin ser val Tyr ASP Asn

20 25 30

Asn

Trp Leu 35 Tyr Ala Trp Phe Gin Gin 40 Leu Lys Pro Gly Gin Pro 45 Pro pro Lys Leu

Leu

He Asp Ala Ser ASp Ala Ser Gly Val ser Arg Phe

50 55 60

Ser

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin Phe Thr Leu Thr He Ser Gly Val

65

70 75 80

Gin

cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gly Ala Tyr Asn Asp

He 85 90 95

val

Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val val Lys Arg Thr

100 105 110

Asp

Ala Ala Pro Thr val Ser lie Phe pro pro Ser Ser Glu Gin Leu

Thr

115 120 125

ser

Gly Gly Ala Ser val val cys Phe Leu Asn Asn phe Tyr Pro

130 135 140 Gin

Lys

Asp lie Asn val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Asn

145

150 155 160

Gly

val Leu Asn Ser 165 Thr Trp Thr ASP Gin Asp 170 Lys Ser Lys Asp Ser Thr 175 Arg Tyr

ser

Met Ser ser 180 Thr Leu Thr Leu Thr 185 His Asp Glu Tyr Glu 190 Ser His

Asn

Ser Tyr Cys Glu Ala Thr Lys Thr ser Thr Pro lie

195 200 205

Val

Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

210 215

<210> 24 <211> 654 <212>ADN

<213> Quimera de conejo-raton 5

<400> 24

gcgcaagtgc tgacccagac tccagcctcc atcaattgcc agtccagtca gagtgtttat aaaccagggc agcctcccaa gctcctgatt ccatcgcggt tcagtggcag tggatctggg cagtgtgccg atgctgccac ttactactgt ttcggcggag ggaccgaggt ggtggtcaaa ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cacaagacat caacttcacc cattgtcaag

gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 gataacaact ggttagcctg gtttcagcag 120 tatgatgcat ccgatctggc atctggggtc 180 acacagttca ctctcaccat cagcggcgtg 240 caaggcgctt ataatgatgt tatttatgct 300 cgtacggatg ctgcaccaac tgtatccatc 360 ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 420 tggaagattg atggcagtga acgacaaaat 480 agcaaagaca gcacctacag catgagcagc 540 cgacataaca gctatacctg tgaggccact 600 agcttcaaca ggaatgagtg ttag 654

10 <210> 25

<211> 239 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton 15 <400> 25

Met 1

Asp Thr Arg Ala 5 pro Thr Gin Leu Leu 10 Gly Leu Leu Leu Leu IS Trp

Leu

Pro Gly Ala 20 Thr Phe Ala Gin val 25 Leu Thr Gin Thr Pro 30 Ala Ser

val

ser Ala 35 Ala val Gly Gly Thr 40 val Thr lie Asn r Gin ser Ser

Gin

ser 50 val Tyr Asp Asn Asn 55 Trp Leu Ala Trp Phe 60 Gin Gin Lys pro

Gly 65 Gly

Gin pro Pro Lys Leu 70 Phe Leu lie Tyr Asp Ala 75 Ser Ser Asp Leu Ala ser 80 Thr

val

Pro Ser Arg 85 Gly Ser Gly Ser Gly 90 ASp Gly Thr Gin Phe 95 Tyr

Leu

Thr lie Ser 100 Tyr val Gin Cys Ala 105 Tyr Ala Ala Thr Tyr 110 Gly cys

Gin

Gly Ala 115 Asn ASp val lie 120 Ala Phe Gly Gly 125 Thr Glu

val

val 130 Val Lys Arg Thr Asp 135 Ala Ala pro Thr Val 140 Ser He Phe pro

Pro 145

Ser ser Glu Gin Leu 150 Thr ser Gly Gly Ala 155 Ser val val cys Phe 160

Leu

Asn Asn Phe Tyr 165 Gin Pro Lys Asp lie Asn 170 Asn val Lys Trp Lys lie 175 Gin Asp

Gly

ser Glu Arg 180 ser Asn Gly val Leu 185 Ser ser Trp Thr Asp 190 Leu ASp

Ser

Lys Asp 195 Thr Tyr Ser Met 200 Ser Thr Leu Thr 205 Thr Lys

Asp

Glu 210 Tyr Glu Arg His Asn 215 Ser Tyr Thr Cys Glu 220 Ala Thr His Lys

Thr 225

Ser Thr Ser Pro lie 230 Val Lys Ser Phe Asn 235 Arg Asn Glu Cys

<210> 26 20 <211> 720

<212> ADN

<213> Quimera de conejo-raton

<400> 26 25

atggacacga gggcccccac tcagctgctg acatttgcgc aagtgctgac ccagactcca gtcaccatca attgccagtc cagtcagagt cagcagaaac cagggcagcc tcccaagctc ggggtcccat cgcggttcag tggcagtgga ggcgtgcagt gtgccgatgc tgccacttac tatgctttcg gcggagggac cgaggtggtg tccatcttcc caccatccag tgagcagtta ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag gccactcaca agacatcaac ttcacccatt

<210> 27 <211> 433 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Anticuerpo humanizado

10

<400> 27

gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 gcctccgtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120 gtttatgata acaactggtt agcctggttt 180 ctgatttatg atgcatccga tctggcatct 240 tctgggacac agttcactct caccatcagc 300 tactgtcaag gcgcttataa tgatgttatt 360 gtcaaacgta cggatgctgc accaactgta 420 acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 480 gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 540 caggacagca aagacagcac ctacagcatg 600 tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 660 gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgttag 720

Gin 1

Ser Leu Glu Glu 5 ser Gly Gly Arg Leu 10 val Thr Pro Gly Thr 15 Pro

Leu

Thr Leu Thr 20 cys Thr Ala Ser Gly 25 Phe Ser Leu Ser ser 30 Tyr Trp

Met

Asn Trp 35 ASp val Arg Gin Ala pro 40 Thr Gly Glu Gly Leu Glu 45 Trp Trp lie Gly

Thr

lie 50 Phe ser Gly Gly Arg 55 Thr Asp Tyr Ala Ser 60 ASp Ala Lys Gly

Arg 65 Ser

Thr lie Ser Arg 70 Asp ser Thr Thr Met 75 Phe Leu Lys Met Thr 80 Trp

Leu

Thr Thr Gly 85 Thr Ala Arg Tyr 90 cys Ala Arg Asn 95

Asn

Leu Trp Gly 100 Ser Gin Gly Thr Leu val 105 Ala Thr val Ser Ser Ala 110 Ala Ser Thr

Lys

Gly pro 115 Met Val Tyr Pro Leu 120 Cys pro Gly Ser Ala 125 Tyr Gin Thr

Asn

Ser 130 Val Thr Leu Gly 135 Leu val Lys Gly 140 phe pro Glu

Pro 145

val Thr val Thr Trp 150 Asn Ser Gly Ser Leu 155 Ser Ser Gly val His 160

Thr

Phe pro Ala val 165 Leu Gin ser Asp Leu 170 Tyr Thr Leu ser Ser 175 ser

Val

Thr Val Pro 180 ser ser Thr Trp Pro 185 Ser Glu Thr val Thr 190 cys Asn

val

Ala His 195 Pro Ala ser ser Thr 200 Lys val Asp Lys Lys 205 He val Pro

Arg

Asp 210 cys Gly Cys Lys Pro 215 cys lie cys Thr val 220 Pro Glu Val Ser

Ser 225

val Phe He Phe pro 230 pro Lys Pro Lys ASp 235 val Leu Thr He Thr 240

Leu

Thr Pro Lys val 245 Phe Thr cys val val val 250 ASp ASp He Ser Lys ASp 255 His ASp

Pro

Glu val Gin 260 ser Trp Phe Val 265 ASp val Glu val 270 Thr

Ala

Gin Thr 275 Gin Pro Arg Glu Glu 280 Gin phe Asn Ser Thr 285 Phe Arg ser

Val

ser 290 Glu Leu Pro lie Met 295 His Gin Asp Trp Leu 300 Asn Gly Lys Glu

Phe Lys cys Arg val Asn ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys

305 310 315 320

Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr

325 330 335

lie Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val ser Leu Thr 340 345 350

Cys Met lie Thr Asp Phe Phe pro Glu Asp lie Thr val Glu Trp Gin 355 360 365

Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met 370 375 380

Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin Lys

385 390 395 400

ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser val Leu His Glu

405 410 415

Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys ser Leu ser His Ser Pro Gly 420 425 430

Lys

<210> 28 <211> 1302 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Anticuerpo humanizado

10

<400> 28

cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg tgcacagcct ctggattctc cctcagtagt ggggaggggc tggaatggat cggaaccatt tgggcaaaag gccgattcac catctccaga agtctgacga ccggggacac ggcccgttat caaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgct gcccctggat ctgctgccca aactaactcc tatttccctg agccagtgac agtgacctgg accttcccag ctgtcctgca gtctgacctc tccagcacct ggcccagcga gaccgtcacc aaggtggaca agaaaattgt gcccagggat ccagaagtat catctgtctt catcttcccc ctgactccta aggtcacgtg tgttgtggta ttcagctggt ttgtagatga tgtggaggtg cagttcaaca gcactttccg ctcagtcagt aatggcaagg agttcaaatg cagggtcaac accatctcca aaaccaaagg cagaccgaag aaggagcaga tggccaagga taaagtcagt gaagacatta ctgtggagtg gcagtggaat cagcccatca tggacacaga tggctcttac agcaactggg aggcaggaaa tactttcacc caccatactg agaagagcct ctcccactct

gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tattggatga actgggtccg ccaggctcca 120 gattctggtg gtaggacgga ctacgcgagc 180 acctcgacta cgatggatct gaaaatgacc 240 ttctgtgcca gaaattggaa cttgtggggc 300 tctacaaagg gcccatctgt ctatccactg 360 atggtgaccc tgggatgcct ggtcaagggc 420 aactctggat ccctgtccag cggtgtgcac 480 tacactctga gcagctcagt gactgtcccc 540 tgcaacgttg cccacccggc cagcagcacc 600 tgtggttgta agccttgcat atgtacagtc 660 ccaaagccca aggatgtgct caccattact 720 gacatcagca aggatgatcc cgaggtccag 780 cacacagctc agacgcaacc ccgggaggag 840 gaacttccca tcatgcacca ggactggctc 900 agtgcagctt tccctgcccc catcgagaaa 960 gctccacagg tgtacaccat tccacctccc 1020 ctgacctgca tgataacaga cttcttccct 1080 gggcagccag cggagaacta caagaacact 1140 ttcgtctaca gcaagctcaa tgtgcagaag 1200 tgctctgtgt tacatgaggg cctgcacaac 1260 cctggtaaat ga 1302

15 <210> 29

<211> 452 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

20 <220>

<223> Anticuerpo humanizado

<400> 29

Met

Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala val Leu Lys Gly

1

5 10 15

Val

His Cys Gin Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu val Thr Pro

20 25 30

Gly

Thr Pro Leu Thr Leu Thr cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu ser

35 40 45

ser

Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu

50 55 60

Trp 65 Ala

lie Gly Thr He Asp 70 Thr Ser Gly Gly Arg Thr 75 Ser Asp Tyr Ala Ser Trp 80 Leu

Lys

Gly Arg Phe 85 Leu He Ser Arg Thr 90 Thr Thr Thr Met Asp 95 Cys

uys

Met Thr Ser 100 Asn Thr Thr Gly Asp 105 Gly Ala Arg Tyr Phe 110 Val Ala

Arg

Asn Trp Leu Trp Gly Gin Thr Leu val Thr ser Ser

115 120 125

Ala

Ser Thr Lys Gly pro Ser Val Tyr pro Leu Ala Pro Gly Ser

Ala

130 135 140

Ala 145 Phe

Gin Thr Asn Ser Met 150 Thr val Thr Leu Gly cys 155 Ser Leu val Lys Gly Tyr 160 Ser

pro

Glu Pro val val Thr Trp Asn Gly ser Leu Ser

165 170 175

Gly

val His Thr phe Pro Ala Val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu

180 185 190

ser

Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro ser Glu Thr val

195 200 205

Thr

Cys 210 val Asn val Ala His pro 215 Gly Ala Ser ser Thr Lys Val ASp Lys Lys

lie

pro Arg Asp Cys cys Lys Pro Cys CL U He Cys Thr val Pro

225

230 235 240

Glu

val ser Ser val Phe He Phe Pro pro Lys pro Lys Asp Val Leu

245 250 255

Thr

lie Thr Leu 260 Pro Thr Pro Lys val Thr 265 ser cys val val Val Asp 270 Asp lie ser

Lys

Asp Asp 275 Thr Glu val Gin Phe 280 Pro Trp phe val Asp 285 Phe Val Glu

Val

HIS Ala Gin Thr Gin Arg Glu Glu Gin Asn Ser Thr

290 295 300

Phe

Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin ASp Trp Leu Asn

305

310 315 320

Gly

Lys Glu Phe Lys 325 He cys Arg val Asn ser 330 Gly Ala Ala Phe pro Ala 335 Pro Pro

lie

Glu Lys Thr 340 lie ser Lys Thr Lys 345 Glu Arg pro Lys Ala 350 Asp Gin

val

Tyr Thr 355 Thr Pro Pro Pro Lys 360 ASP Gin Met Ala Lys 365 ASp Lys

val

ser

Leu Cys Met He Thr Phe phe pro GlU He Thr val

370 375 380

Glu

Trp Gin Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin

385

390 395 400

Pro

He Met Asn Thr Asn Gly ser Tyr Phe val Tyr Ser Lys Leu Asn

405 410 415

Val

Gin Lys Ser 420 Gly Asn Trp Glu Ala Gly 425 His Asn Thr Phe Thr Cys 430 Leu Ser

Val

Leu

His Glu Leu His Asn His Thr Glu Lys Ser ser His

435 440 445

Ser

Pro Gly Lys

450

<210> 30 <211> 1359 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<223> Anticuerpo humanizado <400> 30

atggagactg ggctgcgctg tcgctggagg agtccggggg acagcctctg gattctccct gaggggctgg aatggatcgg gcaaaaggcc gattcaccat ctgacgaccg gggacacggc

ggcaccctcg tcaccgtctc cctggatctg ctgcccaaac ttccctgagc cagtgacagt ttcccagctg tcctgcagtc agcacctggc ccagcgagac gtggacaaga aaattgtgcc gaagtatcat ctgtcttcat actcctaagg tcacgtgtgt agctggtttg tagatgatgt ttcaacagca ctttccgctc ggcaaggagt tcaaatgcag atctccaaaa ccaaaggcag gagcagatgg ccaaggataa gacattactg tggagtggca cccatcatgg acacagatgg aactgggagg caggaaatac catactgaga agagcctctc 5

gcttctcctg gtcgctgtgc tcgcctggtc acgcctggga cagtagttat tggatgaact aaccattgat tctggtggta ctccagaacc tcgactacga ccgttatttc tgtgccagaa

gagcgcttct acaaagggcc taactccatg gtgaccctgg gacctggaac tctggatccc tgacctctac actctgagca cgtcacctgc aacgttgccc cagggattgt ggttgtaagc cttcccccca aagcccaagg tgtggtagac atcagcaagg ggaggtgcac acagctcaga agtcagtgaa cttcccatca ggtcaacagt gcagctttcc accgaaggct ccacaggtgt agtcagtctg acctgcatga gtggaatggg cagccagcgg ctcttacttc gtctacagca tttcacctgc tctgtgttac ccactctcct ggtaaatga

tcaaaggtgt ccactgtcag 60 cacccctgac actcacctgc 120 gggtccgcca ggctccaggg 180 ggacggacta cgcgagctgg 240 tggatctgaa aatgaccagt 800 attggaactt gtggggccaa 360

catctgtcta tccactggcc 420 gatgcctggt caagggctat 480 tgtccagcgg tgtgcacacc 540 gctcagtgac tgtcccctcc 600 acccggccag cagcaccaag 660 cttgcatatg tacagtccca 720 atgtgctcac cattactctg 780 atgatcccga ggtccagttc 840 cgcaaccccg ggaggagcag 900 tgcaccagga ctggctcaat 960 ctgcccccat cgagaaaacc 1020 acaccattcc acctcccaag 1080 taacagactt cttccctgaa 1140 agaactacaa gaacactcag 1200 agctcaatgt gcagaagagc 1260 atgagggcct gcacaaccac 1320

1359

<210> 31 <211> 213 <212> PRT

10 <213> Mus musculus

<400> 31

Gin

lie val Leu Thr Gin ser Pro Thr lie val ser Ala ser Pro Gly

1

5 10 15

Glu

Lys val Thr Leu lie cys Ser Ala Ser Ser Ser val Ser Phe Val

20 25 30

ASP

Trp phe 35 ser Gin Gin Lys Pro Gly 40 Gly Thr Ser Pro Lys Arg 45 phe Trp He Tyr

Arg

Thr 50 Ser Asn Leu Gly Phe 55 Ser Val pro Ala Arg 60 Arg Ser Gly Gly

Gly 65 Asp

Gly Thr ser His 70 Tyr Leu Thr lie Ser 75 Arg Ser Met Glu Ala Glu 80 Thr

Ala

Ala

Thr Tyr Cys Gin Gin Thr Tyr Pro Pro

85 90 95

Phe

Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro

100 105 110

Thr

val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly

115 120 125

Ala

ser 130 Lys val val cys Phe Leu 135 Gly Asn Asn Phe Tyr Pro 140 Asn Lys ASp lie Asn

val

Trp Lys lie Asp ser Glu Arg Gin Gly val Leu Asn

145

150 155 160

Ser

Trp Thr ASp Gin 165 Thr Asp Ser Lys Asp Ser Thr 170 Glu Arg Tyr ser Met Ser 175 Tyr

Ser

Thr

Leu Thr Leu Lys Asp Glu Tyr His Asn Ser

Thr

180 185 190

cys

Glu Ala Thr His Lys Thr ser Thr Ser Pro lie Val Lys ser Phe

195 200 205

Asn

Arg Asn Glu Cys

210

<210> 32 <211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus 5

<400> 32

caaattgttc tcacccagtc ctaatctgca gtgccagttc acttctccca aacgctggat ttcagtggcg gtggatctgg gatgctgcca cttattactg accaagctgg aactgaaacg agtgagcagt taacatctgg aaagacatca atgtcaagtg

tccaacaatc

aagtgtaagt

ttacagaaca

gacctctcac

ccagcaaagg

ggctgatgct

aggtgcctca

gaagattgat

gtgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60 ttcgtggact ggttccagca gaagccaggc 120 tccaacctgg gttttggagt ccctgctcgc 180 tctctcacaa tcagccgaat ggaggctgaa 240 agtacttacc cacccacgtt cggtgctggg 300 gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc 360 gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc 420 ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac 480

agttggactg atcaggacag accaaggacg agtatgaacg acttcaccca ttgtcaagag

caaagacagc

acataacagc

cttcaacagg

acctacagca tgagcagcac cctcacgttg tatacctgtg aggccactca caagacatca aatgagtgtt ag

540

600

642

10 <210> 33

<211> 235 <212> PRT <213> Mus musculus

15 <400> 33

Met

His phe Gin val Gin lie Phe Ser Phe Leu Leu lie Ser Ala ser

1

5 10 15

val

He val ser Arg Gly Gin He Val Leu Thr Gin Ser Pro Thr lie

20 25 30

val

Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys val Thr Leu He Cys Ser Ala Ser

35 40 45

Ser

Ser 50 Lys val Ser Phe val ASp 55 Arg Trp Phe Gin Gin Lys 60 Gly Pro Gly Thr

Ser

Pro

Arg Trp He Tyr Thr Ser Asn Leu Phe Gly val

Pro

65

70 75 80

Ala

Arg phe Ser Gly 85 Ala Gly Gly Ser Gly Thr 90 Thr Ser His Ser Leu Thr 95 Gin lie

ser

Arg Met Glu 100 Pro Glu Asp Ala Ala 105 Ala Tyr Tyr Cys Gin 110 Glu Arg

Ser

Thr Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Thr Lys Leu Leu Lys

115 120 125

Arg

Ala ASp Ala Ala Pro Thr Val Ser He Phe Pro Pro Ser ser Glu

130

135 140

Gin

Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser val val Cys Phe Leu Asn Asn Phe

145

150 155 160

Tyr

Pro Lys Asp He Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg

165 170 175

Gin

Asn Gly val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp ser

180 185 190

Thr

Tyr ser Met Ser ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu

195 200 205

Arg

His 210 lie Asn Ser Tyr Thr cys 215 Asn Glu Ala Thr His Lys 220 Thr Ser Thr Ser

Pro

val Lys Ser Phe Arg Asn Glu Cys

225

230 235

<210> 34 20 <211> 708

<212> ADN <213> Mus musculus

ctgctaatca gtgcctcagt catagtgtcc 60 acaatcgtgt ctgcatctcc aggggagaag 120 gtaagtttcg tggactggtt ccagcagaag 180 agaacatcca acctgggttt tggagtccct 240 tctcactctc tcacaatcag ccgaatggag 300 caaaggagta cttacccacc cacgttcggt 360 gatgctgcac caactgtatc catcttccca 420 gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 480 attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 540 gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 600 aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 660 aacaggaatg agtgttag 708

<210> 35 <211> 449 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 35

atgcattttc aagtgcagat tttcagcttc agagggcaaa ttgttctcac ccagtctcca gtcaccctaa tctgcagtgc cagttcaagt ccaggcactt ctcccaaacg ctggatttac gctcgcttca gtggcggtgg atctgggacc gctgaagatg ctgccactta ttactgccag gctgggacca agctggaact gaaacgggct ccatccagtg agcagttaac atctggaggt taccccaaag acatcaatgt caagtggaag ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa acgttgacca aggacgagta tgaacgacat acatcaactt cacccattgt caagagcttc

10

imagen33

1

5 10 15

Thr

Leu Ser Leu Thr cys Ser Phe Ser Gly Phe ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly

Met Gly 35 Ala val Gly Trp lie Arg 40 Asp His Pro Ser Gly Lys 45 Arg Tyr Asn Leu Glu

Trp

Leu 50 Lys His lie Trp Trp 55 lie Asp val Lys Asn Pro val

Leu

ser Arg Leu Thr Ser Lys Asp Thr ser Asn Ser Gin val

65

70 75 80

Phe

Leu Lys He Ala Asn Val Asp Thr Ala ASp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

cys

Ala Arg lie Glu Asp Phe Asp Tyr Asp Glu Glu Tyr Tyr Ala Met

100 105 110

Asp

Tyr Trp 115 pro Gly Gin Gly Thr Ser 120 Leu Val He val ser Ser 125 Ala Ala Lys Thr

Thr

Pro ser val Tyr Pro Ala Pro Gly ser Ala Gin

Thr

130 135 140

Asn

Ser Met val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu

145

150 155 160

Pro

Val Thr val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His

165 170 175

Thr

Phe Pro Ala 180 val Leu Gin ser 11? Leu Tyr Thr Leu Ser 190 Ser Ser

Val

Thr val pro ser ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn

195 200 205

Val

Ala His pro Ala ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys He Val Pro

210 215 220

Arg

ASp cys Gly Cys Lys pro cys lie cys Thr Val Pro Glu Val Ser

225

230 235 240

Ser

val Phe lie Phe Pro Pro Lys pro Lys Asp val Leu Thr He Thr

245 250 255

Leu

Thr Pro Lys val Thr cys val val val Asp lie Ser Lys Asp Asp

260 265 Glu 270

Pro

Glu val Gin Phe Ser Trp Phe val Asp Asp val Val His Thr

275 280 285

Ala

Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg Ser

290 295 300

val

ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305

310 315 320

Phe

Lys cys Arg val 325 Thr Asn ser Ala Ala Phe 330 Lys Pro Ala Pro He Glu 335 Tyr Lys

Thr

He Ser Lys Lys Gly Arg Pro Ala Pro Gin Val

Thr

340 345 350

lie

Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr

355 360 365

cys

Met 370 Asn lie Thr Asp Phe Phe 375 Glu Pro Glu Asp lie Thr 380 Thr Val Glu Trp Gin

Trp

Gly Gin Pro Ala Asn Tyr Lys Asn Gin Pro He Met

385

390 395 400

ASp

Thr Asp Gly Ser Tyr Phe val Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin Lys

•- 405 410 415

ser

Asn Trp GlU Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys ser Val Leu His Glu

420 Thr 425 430

Gly

Leu His Asn His His Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro

Gly

435 440 445

Lys

#•••

<210> 36 <211> 1350 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 36

caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtagg ctggattcgt 120 cacccatcag ggaagaatct ggagtggctg gcacacattt ggtgggatga tgtcaagcgc 180

tataacccag tcctgaagag ccgactgact atctccaagg atacctccaa cagccaggta 240

ttcctcaaga tcgccaatgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaata 300

gaggactttg attacgacga ggagtattat gctatggact actggggtca aggaacctca 360

gtcatcgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccactggc ccctggatct 420

gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag 480

ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct 540

gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg 600

cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag 660

aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca 720

tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag 780

gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt 840

gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc 900

actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag 960

ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020

accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg 1080

gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact 1140

gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg 1200

gacacagatg gctcttactt cgtctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag 1260

gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 1320

aagagcctct cccactctcc tggtaaatga 1350

<210> 37 <211> 468 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 37

Met

Gly Arg Leu Thr ser Ser Phe Leu Leu Leu He val pro Ala Tyr

1

5 10 15

val

Leu ser Gin val Thr Leu Lys Glu ser Gly Pro Gly lie Leu Gin

20 25 30

Pro

ser Gin Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe ser Leu

35 40 45

Ser

Thr 50 Leu Ser Gly Met Gly val 55 His Gly Trp He Arg His 60 ASp Pro Ser Gly Lys

Asn

Glu Trp Leu Ala lie Trp Trp ASp Val Lys Arg Tyr

65

70 75 80

Asn

Pro Val Leu Lys 85 Leu ser Arg Leu Thr lie Ser 90 val Asp Lys Asp Thr ser 95 Thr

Asn

Ser

Gin Val Phe Lys He Ala Asn Thr Ala Asp Ala

100 105 110

Thr

Tyr Tyr cys Ala Arg lie Glu Asp Phe Asp Tyr Asp Glu Glu Tyr

115 120 125

Tyr

Ala 130 Lys Met Asp Tyr Trp Gly 135 Ser Gin Gly Thr Ser val 140 Ala He val Ser Ser

Ala

Thr Thr Pro Pro val Tyr Pro Leu Pro Gly ser

Ala

145

150 155 160

Ala

Gin Thr Asn ser 165 val Met Val Thr Leu Gly Cys 170 Asn Ser Leu val Lys Gly 175 Ser Tyr

Phe

Pro Glu Pro Thr Val Thr Trp Gly ser Leu Ser

180 185 190

Gly

val His Thr phe Pro Ala val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu

195 200 205

Ser

Ser

ser Val Thr Val pro Ser ser Thr Trp Pro ser Glu Thr Val

210 215 Ala 220

Thr

Cys Asn Val Ala His Pro ser Ser Thr Lys val ASp Lys Lys

225

230 235 240

lie

Val pro Arg Asp cys Gly Cys Lys Pro Cys He cys Thr val pro

245 Phe 250 255

Glu

val Ser ser Val lie Phe Pro Pro Lys pro Lys Asp val Leu

260 265 270

Thr

lie Thr Leu Thr Pro Lys val Thr Cys val Val val Asp He Ser

275 280 285

Lys

Asp Asp Pro Glu val Gin Phe ser Trp Phe Val Asp Asp val Glu

290 295 300

val

His Thr Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr

305

310 315 320

Phe

Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn

325 330 335

Gly

Lys Glu Phe 340 Lys Cys Arg val Asn 345 ser Ala Ala Phe Pro 350 Ala pro

lie

Glu Lys 355 Thr lie Ser Lys Thr 360 Lys Gly Arg Pro Lys 365 Ala pro Gin

val

Tyr 370 Leu Thr lie Pro Pro Pro 375 Thr Lys Glu Gin Met Ala 380 Glu Lys Asp Lys

val

Ser 385

Thr Cys Met He 390 ASp Phe Phe Pro 395 ASp lie Thr Val 400

Glu

Trp Gin Trp Asn 405 Gly Gin Pro Ala Glu Asn 410 Tyr Lys Asn Thr 415 Gin

Pro

He Met Asp 420 Ser Thr Asp Gly Ser Tyr 425 Gly Phe Val Tyr Ser Lys 430 Cys Leu Asn

val

Gin Lys 435 Glu Gly Asn Trp Glu Ala 440 His Asn Thr Phe Thr 445 Ser ser

val

Leu Ser 465

His 450 Pro Gly Lys Leu His Asn 455 His Thr Glu Lys 460 Leu ser His

<210> 38 <211> 1407 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

atgggcaggc ttacttcttc attcctgcta gttactctga aagagtctgg ccctgggata tgttctttct ctgggttttc actgagcact ccatcaggga agaatctgga gtggctggca aacccagtcc tgaagagccg actgactatc ctcaagatcg ccaatgtgga cactgcagat gactttgatt acgacgagga gtattatgct atcgtctcct cagccaaaac gacaccccca gcccaaacta actccatggt gaccctggga gtgacagtga cctggaactc tggatccctg ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg ttccgctcag tcagtgaact tcccatcatg aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac aaggataaag tcagtctgac ctgcatgata gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag acagatggct cttacttcgt ctacagcaag ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat agcctctccc actctcctgg taaatga

ctgattgtcc ctgcatatgt cctgtcccag 60 ttgcagccct cccagaccct cagtctgact 120 tctggtatgg gtgtaggctg gattcgtcac 180 cacatttggt gggatgatgt caagcgctat 240 tccaaggata cctccaacag ccaggtattc 300 actgccacat actactgtgc tcgaatagag 360 atggactact ggggtcaagg aacctcagtc 420 tctgtctatc cactggcccc tggatctgct 480 tgcctggtca agggctattt ccctgagcca 540 tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc 600 tcagtgactg tcccctccag cacctggccc 660 ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa 720 tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct 780 gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc 840 gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta 900 caaccccggg aggagcagtt caacagcact 960 caccaggact ggctcaatgg caaggagttc 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080 accattccac ctcccaagga gcagatggcc 1140 acagacttct tccctgaaga cattactgtg 1200 aactacaaga acactcagcc catcatggac 1260 ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca 1320 gagggcctgc acaaccacca tactgagaag 1380

1407

<210> 39 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 39

imagen34

<210> 40 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 40

Asp lie Asp Pro Tyr Ser Gly 61 u Thr Thr Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 1 5 10 15

Gly

<210> 41 <211> 10 <212>. PRT <213> Mus musculus

<400> 41

Asp Asp Tyr Asp Ala ser pro Phe Ala Tyr 15 10

<210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 43 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 43

Gly ser ser Asn Leu Glu Asp 1 5

<210> 44 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 44

<210> 45 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 45

imagen35

<210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 46

imagen36

Asp lie Asn Pro Phe Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gin Lys phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 47 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 47

ser His Tyr Tyr Phe Asp Gly Arg val Pro Trp Asp Ala Met Asp Tyr 15 10 15

<210> 48 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 49 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 49

Ala Ala Ser Asn Leu Glu ser 1 5

<210> 50 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 50

Gin Gin Ser Asn Glu Asp pro Trp Thr 1 5

<210> 51 <211>5 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton <400> 51

Ser Tyr Trp Met Asn 1 5

<210> 52 <211> 16 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton <400> 52

Thr lie Asp ser Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala ser Trp Ala Lys Gly 15 10 15

<210> 53 <211>4 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton <400> 53

Asn Trp Asn Leu 1

<210> 54 <211> 13 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton <400> 54

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 55 <211>7 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton <400> 55

Asp Ala ser Asp Leu Ala ser

<210> 56 <211> 10 <212> PRT

<213> Quimera de conejo-raton <400> 56

Gin Gly Ala Tyr Asn Asp val lie Tyr Ala 15 10

<210> 57 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 57

Thr Ser Gly Met Gly val Gly 1 5

<210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 58

imagen37

<210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 59

Glu Asp Phe Asp Tyr Asp Glu Glu Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 15 10

<210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 61 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 61

Arg Thr Ser Asn Leu Gly phe 1 5

<210> 62 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 62

Gin Gin Arg ser Thr Tyr pro Pro Thr 1 5

<210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 63

Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp 15 10 15

Trp Arg pro Ser 20

<210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 64

Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp 15 10 15

Arg Pro ser Gly 20

<210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 65

Pro Ala Arg Leu Leu pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg 15 10 15

Pro ser Gly Pro 20

<210> 66 <211> 20 <212> PRT

5

10

15

20

25

30

35

40

45

<213> Homo sapiens <400> 66

Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arq Gly Lys Trp Trp Arg Pro 1 5 10 15

Ser Gly Pro Asp 20

<210> 67 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 67

Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg pro ser 15 10 15

Gly Pro Asp Phe 20

<210> 68 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 68

Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro ser Gly 15 10 15

pro Asp Phe Arg 20

<210> 69 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 69

Leu Pro Asn Ala He Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro

1 5 10 . 15

Asp Phe Arg Cys

<210> 70 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 70

Ser Ala Lys Pro val Thr Glu Leu val Cys ser Gly Gin cys 15 10

<210> 71 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

Leu val Ala Ser Cys Lys cys 1 5

<210> 72 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 72

Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg X 5

<210> 73 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 73

Cys lie Pro Asp Arg Tyr Arg 1 5

<210> 74 <211> 399 <212>ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 74

atggacacga gggcccccac acatttgctc aagttctgac gtgactatta cctgtcaatc cagcaaaaac cgggcaaagc ggtgtgccaa gccgtttcag tctctccagc cggaagattt tatgccttcg gtcagggcac

tcagctgctg gggctcctgc ccagagtcca agcagtctct tagtcagagc gtgtatgata cccgaagctg ctcatctatg tggcagtggc agcggtactg cgccacttac tattgtcaag taaagtagaa atcaaacgt

tgctctggct cccaggtgcc 60 ccgccagcgt aggcgatcgt 120 acaattggct ggcgtggtac 180 acgcgtccga tctggctagc 240 actttaccct cacaatttcg 300 gtgcttacaa cgatgtgatt 360

399

<210> 75 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 75

Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15

Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gin val Leu Thr Gin Ser pro Ser Ser 20 25 30

Leu Ser Ala ser val Gly Asp Arg val Thr lie Thr Cys Gin ser ser 35 40 45

Gin Ser val Tyr Asp Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 50 55 60

Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Asp Ala ser Asp Leu Ala ser

65 70 75 80

Gly val Pro Ser Arg Phe ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

85 90 95

Leu Thr lie Ser ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110

Gin Gly Ala Tyr Asn Asp val lie Tyr Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125

Val Glu lie Lys Arg 130

<210> 76

<211> 393 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10

<400> 76

atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccactgtgag 60

gtgcagctgt tggagtctgg aggcgggctt gtccagcctg gagggagcct gcgtctctct 120 tgtgcagcaa gcggcttcag cttatcctct tactggatga attgggtgcg gcaggcacct 180 gggaagggcc tggagtgggt gggcaccatt gattccggag gccgtacaga ctacgcgtct 240 tgggcaaagg gccgtttcac catttcccgc gacaactcca aaaataccat gtacctccag 300 atgaactctc tccgcgcaga ggacacagca cgttattact gtgcacgcaa ctggaatctg 360 tggggtcaag gtactcttgt aacagtctcg age 393

15 <210> 77

<211> 131 <212> PRT

<213> Secuencia artificial 20 <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 77

5

10

15

20

25

30

35

40

Met Glti Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu val Ala val Leu Lys Gly 15 10 15

val His cys Glu val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin 20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe ser Leu 35 40 45

Ser ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60

Glu Trp val Gly Thr lie Asp ser Gly Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Ser

65 70 75 80

Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys ash Thr

85 90 95

Met Tyr Leu Gin Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Arg Tyr 100 105 110

Tyr Cys Ala Arg Asn Trp Asn Leu Trp Gly Gin Gly Thr Leu val Thr 115 120 125

val ser ser 130

<210> 78 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 78

Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 15 10

<210> 79 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 79

Tyr Thr ser Arg Leu Leu ser 1 5

<210> 80 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 80

Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5

<210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 81

Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 15 10

<210> 82 <211> 24 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Gin Gly Trp Gin Ala Phe Lys Asn Asp Ala Thr Glu lie lie pro Gly 15 10 15

Leu Arg Glu Tyr Pro Glu Pro Pro 20

<210> 83 <211> 20 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 83

Thr Glu lie lie Pro Gly Leu Arg Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Gin Glu 15 10 15

Leu Glu Asn Asn 20

<210> 84 <211> 20 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 84

Pro Glu Pro Pro Gin Glu Leu Glu Asn Asn Gin Thr Met Asn Arg Ala 15 10 15

Glu Asn Gly Gly 20

<210> 85 <211> 20 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 85

Glu Asn Gly Gly Arg Pro Pro His His Pro Tyr Asp Thr Lys Asp val 15 10 15

ser Glu Tyr ser 20

<210> 86 <211> 14 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 86

Cys Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg Phe val Thr Asp Gly Pro 1 5 10

<210> 87 <211> 25 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 87

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Cys Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg Phe val Thr Asp Gly Pro Ser Arg 15 10 15

Ser Ala Lys Pro val Thr Glu Leu val 20 25

<210> 88 <211> 23 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 88

Cys Arg ser Ala Lys Pro val Thr Glu Leu val Ser ser Gly Gin ser 15 10 15

Gly Pro Arg Ala Arg Leu Leu 20

<210> 89 <211> 25 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 89

Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg val Lys Trp 15 10 15

Trp Arg pro Asn Gly Pro Asp Phe Arg 20 25

<210> 90 <211> 20 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 90

Arg Ala Gin Arg val Gin Leu Leu Cys Pro Gly Gly Ala Ala Pro Arg 15 10 15

ser Arg Lys val 20

<210> 91 <211> 16 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 91

pro Gly Gly Ala Ala Pro Arg Ser Arg Lys val Arg Leu val Ala Ser 15 10 15

<210> 92 <211> 23 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 92

Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gin Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly 1 5 10 15

Pro Glu Thr Ala Arg Pro Gin 20

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 93 <211> 16 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 93

lie Pro Asp Arg Tyr Ala Gin Arg Val Gin Leu Leu Ser Pro Gly Gly 15 10 15

<210> 94 <211> 24 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 94

imagen38

<210> 95 <211> 23 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 95

Lys Gly Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala Arg Gly Ala Lys Ala Asn Gin

Ala Glu Leu Glu Asn Ala Tyr 20

10

15

<210> 96 <211> 18 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 96

Pro Asn Ala lie Gly Arg val Lys Trp Trp Arg Pro Asn Gly Pro Asp 15 10 15

Phe Arg

<210> 97 <211> 22 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 98

Lys Trp Trp Arg Pro Asn Gly Pro Asp Phe Arg cys lie Pro Asp Arg 15 10 15

Tyr Arg Ala Gin Arg val 20

<210> 98 <211> 213 <212> PRT

<213> Rattus norvegicus <400> 98

5

10

15

20

25

30

Met Gin Leu ser Leu Ala Pro Cys Leu Ala Cys Leu Leu val His Ala

10

15

Ala Phe val Ala val Glu Ser Gin Gly Trp Gin Ala Phe Lys Asn Asp

20

25

30

Ala Thr Glu lie lie Pro Gly Leu Arg Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Gin

35

40

45

Glu Leu Glu Asn Asn Gin Thr Met Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg

50

55

60

pro Pro His His Pro Tyr Asp Thr Lys Asp Val Ser Glu Tyr Ser cys

65

70

75

80

Arg Glu Leu His Tyr Thr Arg Phe Val Thr Asp Gly Pro Cys Arg ser

85

90

95

Ala Lys pro Val Thr Glu Leu val cys ser Gly Gin cys Gly pro Ala

100

105

110

Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Val Lys Trp Trp Arg pro Asn

115

120

125

Gly Pro Asp Phe Arg Cys lie Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gin Arg val

130

135

140

Gin Leu Leu cys Pro Gly Gly Ala Ala pro Arcj ser Arg Lys val Arg

145

150

15

160

Leu Val Ala ser Cys Lys cys Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gin

165

170

175

ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly Pro Glu Thr Ala Arg Pro Gin Lys Gly

180

185

190

Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala Arg Gly Ala Lys Ala Asn Gin Ala Glu

195

Leu Glu Asn Ala Tyr 210

200

205

<210> 99 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 99

<210> 100 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 100

<210> 101 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

Tyr Thr ser Arg Leu His Ser 1 5

Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5

<400> 101

Arg Ala Ser Gin Val lie Thr Asn Tyr Leu Tyr 15 10

<210> 102 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

<210> 103 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 103

Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr

<210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 104

Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 15 10

<210> 105 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 105

Tyr Thr ser Arg Leu Leu ser 1 5

<210> 106 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 106

Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr

<210> 107 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 107

Arg Ala Ser Gin Asp lie ser Asn Tyr Leu Asn 15 10

<210> 108 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 109 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 109

imagen39

<210> 110 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 110

Arg Ala ser Gin Asp lie ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 io

<210> 111 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 111

imagen40

<210> 112 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 112

imagen41

<210> 113 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 113

Arg Ala ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10

<210> 114 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

<210> 115 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 115

imagen42

<210> 116 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 116

Ser Val Ser Ser Ser lie Ser Ser Ser Asn Leu His 1 5 10

<210> 117 <211> 213 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 117

Gin 1

He val Leu ser 5 Gin Ser Pro Ala He 10 Leu Ser Thr Ser

Glu

Lys val Thr 20 Gin Met Thr Cys Arg Ala 25 Ser Ser ser Ser val Tyr 30 Trp

His

Trp Tyr 35 Gin Lys Pro Gly 40 Ser pro Lys Pro 45

Ala

Thr 50 Ser Asn Leu Ala Ser 55 Gly Val Pro val Arg 60 Phe ser

Gly 65 Asp

ser Gly Thr Ser Tyr 70 Tyr Ser Leu Thr lie Thr 75 Ser Arg Val Glu

Ala

Ala

Thr Tyr 85 Thr Cys Gin Gin Trp 90 Lys ser Asp pro

Phe

Gly Ala Gly 100 lie Lys Leu Glu Leu 105 ser Arg Ala Asp Ala 110 Ser

Thr

Val Ser 1X5 Phe Pro Pro ser 120 Glu Gin Leu Thr 125

Ala

ser 130 t-ys val Val cys Phe Leu 135 Gly Asn Asn Phe Tyr Pro 140 Asn Lys Asp

val 145

Trp Lys He Asp 150 Ser Glu Arg Gin 155 Gly val

Ser

Trp Thr Asp Gin 165 Thr Asp Ser Lys Asp ser 170 Glu Thr Tyr Ser Met

Thr

Leu Thr Leu 180 Thr Glu Lys Asp Glu Tyr 185 Thr Arg His Asn ser 190 Lys

Cys Asn

Glu Arg 210 Ala 195 Asn His Cys Lys Thr Ser 200 Ser Pro He val 205

<210> 118 <211>642 <212> ADN

pro Gly 15

Tyr Met

lie Tyr

Gly Ser

Ala Glu 80

Leu Thr 95

Ala Pro

Gly Gly

lie Asn

Leu Asn 160 ser ser 175

Tyr Thr Ser Phe

5

10

15

<400> 118

caaattgttc tctcccagtc tccagcaatc ctgtctacat ctccagggga gaaggtcaca 60

atgacttgca gggccagctc aagtgtatat tacatgcact ggtaccagca gaagccagga 120

tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgttcgc 180

ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcaccagagt ggaggctgaa 240

gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggtgctggg 300

accaagctgg agctgaaacg ggctgatgct gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc 360

agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc 420

aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac 480

agttggactg atcaggacag caaagacagc acctacagca tgagcagcac cctcacgttg 540

accaaggacg agtatgaacg acataacagc tatacctgtg aggccactca caagacatca 600

acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg aatgagtgtt ag 642

<210> 119 <211> 235 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 119

Met

Asp Phe Gin Val Gin He Phe Ser Phe Leu Leu lie Ser Ala ser

1

5 10 15

Val

lie Met ser Arg Gly Gin He val Leu Ser Gin Ser Pro Ala He

20 Gly Glu 25 30

Leu

ser Thr Ser Pro Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser

35 40 45

ser

ser

Val Tyr Tyr Met His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly

ser

ser

50 55 60

Pro

Lys Pro Trp lie Tyr Ala Thr ser Asn Leu Ala Ser Gly val pro

65

70 75 80

val

Arg Phe Ser Gly 85 Ala Ser Gly ser Gly Thr 90 Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 95 Gin He

Thr

Arg val Glu Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr cys Gin Trp

100 105 110

ser

Ser Asp 115 ASp pro Leu Thr Phe Gly 120 Val Ala Gly Thr Lys Leu Glu 125 . Pro ser Leu Lys

Arg

Ala Ala Ala Pro Thr ser He Phe Pro Ser Glu

130

135 140

Gin

Leu Thr ser Gly Gly Ala ser val val cys Phe Leu Asn Asn phe

145

150 155 160

Tyr

Pro Lys Asp lie 165 Leu Asn val Lys Trp Lys 170 Asp He Asp Gly ser Glu 175 ASp Arg

Gin

Asn Gly Val 180 Met Asn ser Trp Thr 185 Thr Gin Asp Ser Lys 190 ASP Glu 205 Thr ser ser

Thr

Tyr ser 195 Asn Ser Ser Thr Leu 200 Glu Leu Thr Lys Tyr Glu

Arg

His 210 lie Ser Tyr Thr cys 215 Asn Ala Thr His Lys 220 Thr Ser

Pro

val Lys Ser Phe Arg Asn GlU cys

225

230 235

<210> 120 <211> 708 <212> ADN <213> Mus musculus

atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca aggggacaaa ttgttctctc ccagtctcca gcaatcctgt gtcacaatga cttgcagggc cagctcaagt gtatattaca ccaggatcct cccccaaacc ctggatttat gccacatcca gttcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gctgggacca agctggagct gaaacgggct gatgctgcac ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg

gtgcttcagt cattatgtcc 60 ctacatctcc aggggagaag 120 tgcactggta ccagcagaag 180 acctggcttc tggagtccct 240 tcacaatcac cagagtggag 300 gtgacccact cacgttcggt 360 caactgtatc catcttccca 420 tgtgcttctt gaacaacttc 480 gtgaacgaca aaatggcgtc 540 acagcatgag cagcaccctc 600 cctgtgaggc cactcacaag 660 agtgttag 708

<210> 121 <211> 445 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 121

Glu

val Gin val Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1

5 10 15

Ser

val Lys Leu 20 Trp Ser Cys Thr Ala Ser 25 Pro Gly phe Asn He Lys 30 Glu ASp Tyr

Phe

He His 35 Leu Val Lys Gin Arg 40 Gly Glu Gin Gly Leu 45 Ala Trp He

Gly

Arg Asp Pro Glu Asp Glu ser Asp Tyr Pro Lys Phe

50 55 60

Gin

ASp Lys Ala He Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Leu

Gin Leu Arg Ser 85 Tyr Leu Thr Ser Glu ASp 90 Thr Thr Ala lie Tyr sr Trp cys

Glu

Arg Glu Asp Asp Gly Thr Tyr Phe Phe Pro Tyr Gly

100 105 110

Gin

Gly Thr Leu Val Thr Val ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser

115 120 125

val

Tyr Pro Leu Ala pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn ser Met

val

130 Gly 135 140

Thr

Leu Cys Leu Val Lys Gly Tyr phe pro Glu Pro Val Thr Val

145

150 155 160

Thr

Trp Asn Ser Gly ser Leu ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

Gin 165 170 175

val

Leu ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser ser ser val Thr Val Pro

Thr 180 185 190

ser

Ser Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn val Ala His Pro

195 200 205

Ala

Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie val pro Arg Asp cys Gly

210 215 220

Cys

Lys Pro Cys He cys Thr val Pro Glu val Ser ser Val phe He

225

230 235 240

Phe

Pro Pro Lys Pro 245 val Lys Asp Val Leu Thr 250 Lys He Thr Leu Thr pro 255 Val Lys

Val

Thr Cys val val Asp He Ser Asp Asp Pro Glu Gin

260 265 270

Phe

Ser Trp Phe Val Asp Asp val Glu val His Thr Ala Gin Thr Gin

275 280 285

Pro

Arg Glu Glu Gin phe Asn ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu

290 295 300

Pro

lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg

305

310 315 320

val

Asn ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys

325 330 335

Thr

Lys Gly Arg 340 Met Pro Lys Ala Pro Gin 345 Val Val Tyr Thr He pro 350 Met pro Pro

Lys

Glu Gin Ala Lys ASp Lys ser Leu Thr cys He Thr

355 360 365

Asp

Phe Phe Pro Glu ASp He Thr val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin

370

375 380

Pro

Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro lie Met Asp Thr ASp Gly

385

390 395 400

Ser Tyr

Phe He Tyr 405 Phe ser Lys Leu Asn val 410 Leu Gin Lys Ser Asn Trp 415 His Glu

Ala Gly

Asn Thr Thr cys ser val His Glu Gly Leu Asn

420 425 430

His

His

Thr Glu Lys Ser Leu ser His ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 122 <211> 1338 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

gaggttcagg tgcagcagtc tgggccagaa cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg 60

tcctgcacag cttctggctt caacattaaa gactacttta tacactgggt gaagcagagg 120

cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg cttgatcctg aggatggtga aagtgattat 180

gccccgaagt tccaggacaa ggccattatg acagcagaca catcatccaa cacagcctat 240

cttcagctca gaagcctgac atctgaggac actgccatct attattgtga gagagaggac 300

tacgatggta cctacacctt ttttccttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360

gcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 420

aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 480

acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 540

gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 600

gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 660

agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 720

ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 780

gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 840

gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 900

gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 960

gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 1020

ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 1080

gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 1140

tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 1200

tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 1260

ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 1320 cactctcctg gtaaatga 1338

<210> 123 <211> 464 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 123

Met i

Lys cys Ser Trp val lie Phe Phe Leu 10 Ser Met Ala val Val Thr 15 val Gly

val

Asn ser Glu 20 Ser val Gin val Gin Gin 25 Cys Gly Pro Glu Leu 30 Phe Lys

Pro

Gly Ala 35 Tyr val Lys Leu Ser 40 Val Thr Ala ser Gly 45 gIu Asn He

Lys

Asp 50 Trp Phe lie His Trp 55 ASp Lys Gin Arg Pro 60 Gl u Gin Gly Leu

Glu 65 Pro

He Gly Arg Leu 70 Lys pro Glu Asp Gly 75 Ala ser Asp Tyr Ala 80 Asn

Lys

Phe Gin Asp 85 Gin Ala lie Met Thr 90 Thr Asp Thr Ser ser 95 Ala

Thr

Ala Tyr Leu Leu Arg Ser Leu Ser Glu Asp Thr He

100 105 110

Tyr

Tyr

Cys 115 Gly Glu Arg Glu Asp Tyr 120 Val ASp Gly Thr Tyr Thr 125 Ala Phe Phe Pro

Tyr

Trp 130 Pro Gin Gly Thr Leu 135 Leu Thr val Ser Ala 140 Ala Lys Thr Thr

Pro

Ser Val Tyr pro Ala Pro Gly Ser Ala Gin Thr Asn

145

150 155 160

ser

Met Val Thr Leu 165 Trp Gly cys Leu Val Lys 170 Leu Gly Tyr Phe Pro Glu 175 His pro

Val

Thr val Thr Asn ser Gly Ser Ser Ser Gly val Thr

180 185 190

Phe

Pro Ala Val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser ser Val

195 200 205

Thr

val Pro Ser Ser Thr Trp Pro ser Glu Thr val Thr cys Asn val

210 215 220

Ala

His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys He val Pro Arg

225

230 235 240

Asp

cys Gly cys Lys pro Cys He Cys Thr Val Pro Glu val ser Ser

245 250 255

val

Phe lie Phe 260 Val Pro pro Lys Pro Lys 265 val ASp Val Leu Thr He 270 Asp Thr Leu

Thr

Pro Lys Thr cys val val ASp He Ser Lys ASp pro

275 280 285

Glu

Val 290 Thr Gin Phe ser Trp Phe 295 Glu Val Asp ASp val Glu 300 Thr val His Thr Ala

Gin

Gin

Pro Arg Glu Gin Phe Asn Ser Phe Arg ser val

305

310 315 320

Ser

Glu Leu Pro lie 325 Asn Met His Gin Asp Trp 330 Pro Leu Asn Gly Lys Glu 335 Lys Phe

Lys

cys Arg val ser Ala Ala Phe Ala Pro He Glu Thr

340

345 350

He

ser Lys 355 Pro Thr Lys Gly Arg Pro 360 Ala Lys Ala Pro Gin val 365 Ser Tyr Thr

He

Pro

Pro 370 He Lys Glu Gin Met 375 Pro Lys Asp Lys val 380 val Leu Thr Cys

Met

Thr ASp Phe phe Glu Asp lie Thr Glu Trp Gin Trp

385

390 395 400

Asn

Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp

Thr

405 410 415

Asp

Gly Ser 420 Ala Tyr Phe lie Tyr Ser 425 Thr Lys Leu Asn Val Gin 430 His Lys Ser

Asn

Trp Glu Gly Asn Thr Phe cys ser Val Leu Glu Gly

435 440 445

Leu

His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 124 <211> 1395 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60

gttcaggtgc agcagtctgg gccagaactt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120

tgcacagctt ctggcttcaa cattaaagac tactttatac actgggtgaa gcagaggcct 180

gaacagggcc tggagtggat tggaaggctt gatcctgagg atggtgaaag tgattatgcc 240

ccgaagttcc aggacaaggc cattatgaca gcagacacat catccaacac agcctatctt 300

cagctcagaa gcctgacatc tgaggacact gccatctatt attgtgagag agaggactac 360

gatggtacct acaccttttt tccttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 420

gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 480

tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 540

tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 600

ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 660

acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 720

gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 780

cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 840

gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 900

gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 960

agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 1020

aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 1080

aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 1140

agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1200

aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct 1260

tacttcatct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1320

acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1380

tctcctggta aatga 1395

<210> 125 <211> 215 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 125

10

Glu

lie val Leu Thr Gin ser Pro Ala Leu Met Ala Ala ser pro Gly

1

5 10 15

Glu

Lys val Thr 20 Trp lie Thr cys Ser Val 25 ser ser ser Thr lie ser 30 Lys Ser Asn

Hi s

Leu His Phe Gin Gin Lys Asp Thr ser Pro pro Trp

35 40 45

lie

Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala ser Gly val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60

Gly 65 Ala

ser Gly Ser Gly Thr 70 Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 75 Gin He Ser ser Met Glu 80 Pro

Glu

Asp Ala Ala 85 Ala Tyr Tyr Cys Gin 90 Glu Trp Ser Ser Tyr 95 ASP

Leu

Thr Phe Gly 100 val Gly Thr Lys Leu 105 Pro Leu Arg Arg Ala 110 Leu Ala

Ala

Pro Thr Ser He Phe Pro ser ser Glu Gin Thr Ser

115 120 125

Gly

Gly 130 Asn Ala Ser Val val cys 135 He Phe Leu Asn Asn Phe 140 Arg Tyr Pro Lys Asp

lie

val Lys Trp Lys Asp Gly ser Glu Gin Asn Gly val

145

150 155 160

Leu

Asn Ser Trp Thr 165 Thr Asp Gin Asp ser Lys 170 Glu Asp Ser Thr Tyr ser 175 Asn Met

ser

Ser Thr Leu 180 Glu Leu Thr Lys Asp 185 Thr Tyr Glu Arg His 190 He Ser

Tyr

Thr cys Ala Thr His Lys ser Thr ser Pro Val Lys

Phe 195 200 205

Ser

Asn Arg Asn Glu Cys

210 215

<210> 126 <211> 648 <212>ADN

15 <213> Mus musculus

gaaattgtgc tcacccagtc tccagcactc atcacctgca gtgtcagttc aactataagt tcagacacct cccccaaacc ctggatttat gttcgcttca gtggcagtgg atctgggacc gctgaggatg ctgccactta ttactgtcaa gctgggacca agctggagct gagacgggct ccatccagtg agcagttaac atctggaggt taccccaaag acatcaatgt caagtggaag ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa acgttgacca aggacgagta tgaacgacat acatcaactt cacccattgt caagagcttc

5 <210> 127

<211> 237 <212> PRT <213> Mus musculus

atggctgcat ctccggggga gaaggtcacc 60 tccaaccact tgcactggtt ccagcagaag 120 ggcacatcca acctggcttc tggagtccct 180 tcttattctc tcacaatcag cagcatggag 240 cagtggagta gttacccact cacgttcggc 300 gatgctgcac caactgtatc catcttccca 360 gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 420 attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 480 gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 540 aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 600 aacaggaatg agtgttag 648

10 <400> 127

Met

Asp Phe His Val Gin lie Phe Ser Phe Met Leu lie ser val Thr

1

5 10 15

val

He Leu Ser Ser Gly Glu lie val Leu Thr Gin Ser pro Ala Leu

20 25 30

Met

Ala Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr He Thr cys Ser Val Ser

35 40 45

Ser

Thr lie Ser ser Asn His Leu His Trp Phe Gin Gin Lys ser Asp

50 55 60

Thr 65 Val

Ser pro Lys Pro Trp 70 Ser lie Tyr Gly Thr ser 75 Gly Asn Leu Ala ser Gly 80 Leu

Pro

val Arg Phe 85 Met Gly Ser Gly Ser 90 Ala Thr ser Tyr Ser 95 cys

Thr

lie Ser Ser 100 Ser Glu Ala Glu ASp 105 Phe Ala Thr Tyr Tyr 110 Lys Gin

Gin

Trp Ser Tyr Pro Leu Thr Gly Ala Gly Thr Leu Glu

115 120 125

Leu

Arg Arg Ala Asp Ala Ala pro Thr val Ser lie Phe Pro Pro ser

130 135 140

Ser

Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala ser Val val cys Phe Leu Asn

145

150 155 160

Asn

Phe Tyr Pro Lys 165 Gly Asp He Asn val Lys 170 Trp Trp Lys lie Asp Gly 175 Ser Ser

Glu

Arg Gin Asn 180 Tyr val Leu Asn ser 185 Thr Thr ASp Gin Asp 190 Lys Lys

Asp

ser Thr ser Met Ser ser Leu Thr Leu Thr ASp Glu

195 200 205

Tyr

Glu Arg His Asn ser Tyr Thr cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser

210

215 220

Thr

Ser Pro lie val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu cys

225

230 235

<210> 128 15 <211> 714

<212> ADN <213> Mus musculus

<400> 128

atggattttc atgtgcagat agtggagaaa ttgtgctcac gtcaccatca cctgcagtgt cagaagtcag acacctcccc gtccctgttc gcttcagtgg atggaggctg aggatgctgc

tttcagcttc atgctaatca gtgtcacagt cattttgtcc ccagtctcca gcactcatgg ctgcatctcc gggggagaag cagttcaact ataagttcca accacttgca ctggttccag caaaccctgg atttatggca catccaacct ggcttctgga cagtggatct gggacctctt attctctcac aatcagcagc cacttattac tgtcaacagt ggagtagtta cccactcacg

60

120

180

240

300

360

ttcggcgctg ggaccaagct ggagctgaga cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc 420 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 480 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat 540 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc 600 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact 660 cacaagacat caacttcacc cattgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg ttag 714

<210> 129 <211> 449 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 129

61 u

val Gin Leu Gin Gin ser Gly Ala Glu Leu val Arg Pro Gly Ala

1

5 10 15

Leu

Val Lys Leu 20 Trp Ser Cys Thr Ala Ser 25 Pro ASp Phe Asn He Lys 30 Asp Asp Phe

Tyr

Leu His 35 lie Met Arg Gin Arg 40 Gly GlU Gin Gly Leu 45 ASp Trp He

Gly

Arg 50 Asp Asp Pro Glu Asn 55 Thr Asp Thr Leu Tyr 60 Ser Pro Lys Phe

Gin 65 Leu

Lys Ala Thr Leu 70 Leu Thr Asp Thr ser 75 Thr Asn Thr Ala Tyr 80 Cys

Gin

Leu ser Gly Thr ser Glu Thr Ala val Tyr Tyr

85 90 95

Ser

Arg Glu Ala 100 Gly Asp Tyr Phe His Asp 105 He Gly Thr Ser Tyr Trp 110 Ala Tyr phe

Asp

Val Trp Ala Gly Thr Thr Thr val Ser Ser Lys Thr

115 120 125

Thr

pro Pro Ser val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin

Thr

130 135 140

Asn 145 Pro

Ser Met Val Thr Leu 150 Trp Gly Cys Leu Val Lys 155 Leu Gly Tyr Phe Pro Glu 160 His

val

Thr val Thr Asn ser Gly ser Ser Ser Gly

val

165 170 175

Thr

Phe Pro Ala val Leu Gin Ser ASp Leu Tyr Thr Leu Ser ser Ser

180 185 190

Val

Thr val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr Cys Asn

195 200 205

val

Ala His Pro Ala Ser ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie Val Pro

210 215 220 Glu

Arg

Asp cys Gly cys Lys Pro cys lie cys Thr val Pro Val Ser

225

230 235 240

Ser

val Phe lie Phe pro Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr lie Thr

245 250 255

Leu

Thr pro Lys 260 Gin val Thr Cys val val 265 Val val Asp He Ser Lys 270 val ASp Asp

pro

Glu Val Phe ser Trp Phe Asp ASp Val Glu His Thr

275 280 285

Ala

Gin Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg Ser

290 295 300 Glu

val

Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305

310 315 320

Phe

Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe pro Ala Pro He Glu Lys

325 330 335

Thr

He Ser Lys 340 Pro Thr Lys Gly Arg Pro 345 Ala Lys Ala Pro Gin val 350 Ser Tyr

Thr

He

pro Pro 355 lie Lys Glu Gin Met 360 Pro Lys Asp Lys Val 365 val Leu Thr

cys

Met Thr Asp Phe Phe Glu ASp He Thr Glu Trp Gin

370

375 380

Trp

Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro He Met

385

Thr 390 395 400

Asp

Asp

Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys

405 410 415

Ser

Asn Trp Glu 420 Asn Ala Gly Asn Thr Phe 425 Lys Thr cys Ser Val Leu 430 Ser His Glu

Gly

Leu His His His Thr Glu Ser Leu Ser His Pro

Gly

435 440 445

Lys

<210> 130 <211> 1350 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

gaggttcagc tgcagcagtc tggggctgaa cttgtgaggc caggggcctt agtcaagttg 60

tcctgcacag cttctgactt caacattaaa gacttctatc tacactggat gaggcagcgg 120

cctgaacagg gcctggactg gattggaagg attgatcctg agaatggtga tactttatat 180

gacccgaagt tccaggacaa ggccactctt acaacagaca catcctccaa cacagcctac 240

ctgcagctca gcggcctgac atctgagacc actgccgtct attactgttc tagagaggcg 300

gattatttcc acgatggtac ctcctactgg tacttcgatg tctggggcgc agggaccaca 360

atcaccgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccactggc ccctggatct 420

gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag 480

ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct 540

gtcctgcagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagcacctgg 600

cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag 660

aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatat gtacagtccc agaagtatca 720

tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag 780

gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt 840

gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc 900

actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag 960

ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020

accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg 1080

gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact 1140

gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg 1200

gacacagatg gctcttactt catctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag 1260

gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 1320

aagagcctct cccactctcc tggtaaatga 1350

<210> 131 <211> 468 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 131

Met

Lys cys Ser Trp val He Phe Phe Leu Met Ala val val Thr Gly

1

5 10 15

val

Asn ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu val Arg

20 25 30

Pro

Gly Ala Leu val Lys Leu ser Cys Thr Ala Ser Asp Phe Asn lie

35 40 45

Lys

Asp 50 Phe Tyr Leu His Trp 55 ASP Met Arg Gin Arg Pro 60 Asp Glu Gin Gly Leu

Asp

J V/ Trp He Gly Arg lie Pro Glu Asn Gly Thr Leu Tyr ASp

65

70 75 80

Pro

Lys Phe Gin Asp 85 Gin Lys Ala Thr Leu Thr 90 Thr Thr Asp Thr Ser Ser 95 Ala Asn

Thr

Ala Tyr Leu Leu ser Gly Leu Ser Glu Thr Thr val

100 105 110

Tyr

Tyr

cys 115 Phe Ser Arg Glu Ala Asp 120 Ala Tyr phe His ASP Gly 125 Thr Thr Ser

Tyr

Trp

Tyr 130 Asp val Trp 28 Gly Thr Thr He 140 Val Ser Ser

Ala

Lys Thr Thr Pro pro ser val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly ser

Ala

145

Gin 150 155 160

Ala

Thr Asn Ser 165 Val Met Val Thr Leu Gly cys -1 *7 A Leu Val Lys Gly 175 Ser Tyr

Phe

Pro Glu Pro Thr val Thr Trp JLI V Asn Ser Gly Ser Leu ser

Gly

Val 180 185 190

His

Thr Phe pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu

195 200 205

ser

Ser Ser val Thr val pro Ser Ser Thr Trp Pro ser Glu Thr Val

Thr

210 cys Asn Val Ala His 215 Pro

225 He

val Pro Arg Asp 245 val 230 Cys Gly

Glu

Val Ser Ser Phe lie

Thr

He Thr 260 Leu Thr pro Lys

Lys

ASp 275 Asp pro Glu Val Gin

val

290 His Thr Ala Gin Thr 295 Gin

305 Phe

Arg ser val Ser 325 Lys 310 Glu Leu

Gly

Lys Glu Phe 340 Thr cys Arg

He

Glu Lys 355 Thr He ser Lys

val

Tyr lie Pro Pro Pro

ser

370 Leu Thr cys Met He 375 Thr

385 Glu

Trp Gin Trp Asn 390 Gly Gin

Pro

lie Met ASp 420 Ser 405 Thr Asp Gly

val

Gin Lys Asn Trp Glu

Leu

His 435 Glu Gly Leu His Asn

Ser 465

450 pro Gly Lys 455

<210> 132 <211> 1407 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 132

220 val

Ala

Ser Ser Thr 235 Lys Asp Lys Lys 240

cys

Lys Pro 250 Pro Cys He Cys Thr Val 255 val Pro

phe

Pro 265 Thr Lys Pro Lys Asp 270 Asp Leu

val 280 Phe

cys Val val val 285 Asp He Ser

ser

Trp Phe Val 300 Gin ASp val Glu

Pro

Arg Glu Glu 315 Phe Asn Ser Thr 320

pro

He Met 330 His Gin Asp Trp Leu 335 Asn

Val

Asn 345 ser Ala Ala Phe Pro 350 Ala Pro

Thr 360 Lys

Lys Gly Arg Pro Lys 365 Lys Ala Pro Gin

Glu

Gin Met Ala 380 Asp Lys val

Asp

Phe Phe Pro 395 Asn Glu Asp lie Thr val 400 Gin

pro

Ala Glu 410 Tyr Lys Asn Thr 415

Ser

Tyr 425 Gly Phe lie Tyr ser Lys 430 Cys Leu Asn

Ala 440

Asn Thr Phe Thr 445 Ser val

His

His

Thr Glu Lys 460 ser Leu Ser

His

atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg gttcagctgc agcagtctgg ggctgaactt tgcacagctt ctgacttcaa cattaaagac gaacagggcc tggactggat tggaaggatt ccgaagttcc aggacaaggc cactcttaca cagctcagcg gcctgacatc tgagaccact tatttccacg atggtacctc ctactggtac accgtctcct cagccaaaac gacaccccca gcccaaacta actccatggt gaccctggga gtgacagtga cctggaactc tggatccctg ctgcagtctg acctctacac tctgagcagc agcgagaccg tcacctgcaa cgttgcccac attgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatgatgtgg aggtgcacac agctcagacg ttccgctcag tcagtgaact tcccatcatg aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac aaggataaag tcagtctgac ctgcatgata gagtggcagt ggaatgggca gccagcggag acagatggct cttacttcat ctacagcaag ggaaatactt tcacctgctc tgtgttacat agcctctccc actctcctgg taaatga

atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60 gtgaggccag gggccttagt caagttgtcc 120 ttctatctac actggatgag gcagcggcct 180 gatcctgaga atggtgatac tttatatgac 240 acagacacat cctccaacac agcctacctg 300 gccgtctatt actgttctag agaggcggat 360 ttcgatgtct ggggcgcagg gaccacaatc 420 tctgtctatc cactggcccc tggatctgct 480 tgcctggtca agggctattt ccctgagcca 540 tccagcggtg tgcacacctt cccagctgtc 600 tcagtgactg tcccctccag cacctggccc 660 ccggccagca gcaccaaggt ggacaagaaa 720 tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct 780 gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc 840 gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta 900 caaccccggg aggagcagtt caacagcact 960 caccaggact ggctcaatgg caaggagttc 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080 accattccac ctcccaagga gcagatggcc 1140 acagacttct tccctgaaga cattactgtg 1200 aactacaaga acactcagcc catcatggac 1260 ctcaatgtgc agaagagcaa ctgggaggca 1320 gagggcctgc acaaccacca tactgagaag 1380

1407

<211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus

5 <400> 133

ASP 1

lie Gl n Met Thr 5 Gin lie Thr Ser Ser 10 Leu Ser Ala ser Leu 15 Gly

ASP

Arg val Ser 20 lie Ser Cys Arg Ala 25 Ser Gin Asp lie ser 30 Asn Tyr

Leu

Asn Trp 35 Tyr Gin Gin Lys Pro 40 Asp Gly Thr Phe Lys 45 Leu Leu lie

Phe

Tyr 50 Gly Thr ser Arg Leu Leu 55 Tyr ser Gly val Pro Ser 60 Tyr Arg Phe Ser Gly

Ser 65 Glu

ser Gly Thr Asp 70 Tyr ser Leu Thr He 75 Gly Asn Leu Glu Gin 80 Tyr

Asp

Phe Ala Thr 85 Gly Phe cys Gin Gin 90 lie Asp Thr Leu Pro 95 Ala

Thr

Phe Gly Gly 100 Thr Lys Leu Glu 105 Lys Arg Ala Asp 110 Ala

Pro

Thr Val 115 Ser lie Phe Pro Pro 120 ser Ser Glu Gin Leu 125 Thr Ser Gly

Gly

Ala 130 ser val Val Cys Phe 135 Leu Asn Asn Phe Tyr 140 Pro Lys Asp lie

Asn 145 Asn

Val Lys Trp Lys He 150 Gin Asp Gly ser Glu Arg 155 Ser Gin Asn Gly val Leu 160 Ser

ser

Trp Thr Asp 165 Leu ASp Ser Lys Asp 170 Tyr Thr Tyr Ser Met 175

Ser

Thr Leu Thr 180 Ala Asn Thr Lys Asp Glu 185 ser Glu Arg His Asn 190 val ser Tyr

Thr Phe

cys Asn 210 Gl u 195 Arg Thr Glu His Cys Lys Thr 200 Thr ser Pro lie 205 Lys Ser

<210> 134 10 <211> 645

<212> ADN <213> Mus musculus

15

<400> 134

gatatccaga

atcagttgca

gatggaactt

aggttcagtg

gaagattttg

gggaccaagc

tccagtgagc

cccaaagaca

aacagttgga

ttgaccaagg

tcaacttcac

tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct gggcaagtca agacattagc aattatttaa ttaaactcct tatcttctac acatcaagat gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca acgagtatga acgacataac agctatacct ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt

ctctgggaga

actggtatca

tactctcagg

ccatttacaa

ttccgtacac

ctgtatccat

gcttcttgaa

aacgacaaaa

gcatgagcag

gtgaggccac

gttag

cagggtctcc 60 gcagaaacca 120 agtcccatca 180 cctggagcaa 240 tttcggaggg 300 cttcccacca 360 caacttctac 420 tggcgtcctg 480 caccctcacg 540 tcacaagaca 600 645

<210> 135 <211> 234 20 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 135

Met

Met

ser ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gin

1

Thr 5 10 15

Gly

Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin lie Thr ser Ser Leu Ser

Ala

20 25 30

Ser

Leu 35 Asn Gly Asp Arg Val Ser 40 Tyr He Ser Cys Arg Ala 45 Asp Ser Gin Asp

lie

Ser Tyr Leu Asn Trp Gin Gin Lys Pro Gly Thr Phe

50 55 60

Lys 65

Leu Leu lie Phe Tyr 70 Thr Ser Arg Leu Leu 75 Ser Gly val Pro Ser 80

Arg

Phe ser Gly Ser 85 Glu Gly ser Gly Thr Asp 90 Tyr Tyr Ser Leu Thr lie 95 Gly Tyr

Asn

Leu Glu Gin Asp Phe Ala Thr Phe Cys Gin Gin Asp

100 105 110

Thr

Leu Pro 115 Ala Tyr Thr Phe Gly Gly 120 ser Gly Thr Lys Leu Glu 125 ser lie Lys Arg

Ala

Asp Ala Pro Thr val lie Phe Pro Pro Ser Glu Gin

130 135 140

Leu

Thr Ser Gly Gly Ala Ser val val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

145

ISO 155 160

Pro

Lys ASp lie Asn val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin

165 170 175

iAsn

Gly val Leu 180 ser Asn Ser Trp Thr Asp 185 Leu Gin Asp Ser Lys ASp 190 Tyr ser Thr

Tyr

Ser Met 195 ser ser Thr Leu Thr 200 Ala Thr Lys Asp Glu 205 Ser Glu Arg

His

Asn Tyr Thr cys Glu Thr His Lys Thr Thr Ser Pro

210 215 220

lie

val Lys ser Phe Asn Arg Asn Glu cys

225

230

<210> 136 <211> 705 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 136

10

atgatgtcct ctgctcagtt gatatccaga tgacacagat atcagttgca gggcaagtca gatggaactt ttaaactcct aggttcagtg gcagtgggtc gaagattttg ccacttactt gggaccaagc tggaaataaa tccagtgagc agttaacatc cccaaagaca tcaatgtcaa aacagttgga ctgatcagga ttgaccaagg acgagtatga tcaacttcac ccattgtcaa

ccttggtctc ctgttgctct tacatcctcc ctgtctgcct agacattagc aattatttaa tatcttctac acatcaagat tggaacagat tattctctca ttgccaacag ggagatacgc acgggctgat gctgcaccaa tggaggtgcc tcagtcgtgt gtggaagatt gatggcagtg cagcaaagac agcacctaca acgacataac agctatacct gagcttcaac aggaatgagt

gttttcaagg taccagatgt 60 ctctgggaga cagggtctcc 120 actggtatca gcagaaacca 180 tactctcagg agtcccatca 240 ccatttacaa cctggagcaa 300 ttccgtacac tttcggaggg 360 ctgtatccat cttcccacca 420 gcttcttgaa caacttctac 480 aacgacaaaa tggcgtcctg 540 gcatgagcag caccctcacg 600 gtgaggccac tcacaagaca 660 gttag 705

<210> 137 <211> 447 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 137

Glu

val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys pro Gly Ala

1

5 10 15

ser

val Lys Met 20 Trp Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gin Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Glu ASP Tyr

Asn

Met His Val Lys Gin Asn Gly Lys Thr Leu Trp lie

35 40 45

Gly

Glu 50 Gly lie Asn Pro Asn Ser 55 Thr Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 60 ser Thr Gin Lys phe

Lys

Lys

Ala Thr Leu val Asp Lys Ser Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Met

Glu Leu Arg Ser 85 Tyr Leu Thr Ser Glu Asp 90 ASp Ser Ala Val Tyr Tyr 95 ASP Cys

Ala

Arg Leu Gly 100 Gly Asp Asp lie Tyr 105 val ASp Trp Tyr phe 110 Thr Val

Trp

Gly Ala 115 val Thr Thr val Thr 120 Pro Ser Ser Ala Lys 125 Ala Gin Thr Pro

Pro

ser Tyr Pro Leu Ala Gly ser Ala Thr Asn Ser

130 135 140

Met

Val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro val

145

150 155 160

Thr

val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe

val 165 170 175

Pro

Ala Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser val Thr

180 185 190

Val

Pro Ser Ser Thr Trp pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala

195 200 205

His

Pro 210 Gly Ala ser ser Thr Lys 215 lie Val Asp Lys Lys lie val 220 Glu Val Pro Arg Asp

cys

cys

Lys Pro Cys cys Thr val Pro Ser Ser val

225

230 235 240

Phe

lie Phe pro Pro Lys pro Lys Asp val Leu Thr lie Thr Leu Thr

245 250 255

Pro

Lys val Thr Cys Val val Val Asp lie Ser Lys Asp Asp pro Glu

260 265 270

val

Gin Phe 275 Pro Ser Trp Phe Val Asp 280 Phe ASp val Glu Val His 285 Phe Arg Thr Ala Gin

Thr

Gin Arg Glu Glu Gin Asn ser Thr Ser val Ser

290 295 300

Glu

Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys

305

310 315 320

cys

Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala pro lie Glu Lys Thr lie

325 330 335

ser

Lys Thr Lys 340 Glu Gly Arg pro Lys Ala 345 Asp Pro Gin Val Tyr Thr 350 Thr lie Pro

Pro

Pro

Lys 355 Asp Gin Met Ala Lys 360 ASP Lys val ser Leu 365 Glu Trp cys Met

lie

Thr Phe Phe Pro Glu lie Thr Val Gin Trp Asn

370 375 380

Gly

Gin pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp Thr

385

390 395 400

Asp

Gly Ser Tyr Phe 405 Asn lie Tyr Ser Lys Leu 410 ser Asn Val Gin Lys Ser 415 Gly Asn

Trp

Glu Ala Gly Thr phe Thr Cys val Leu His Glu Leu

420 425 His 430

His

Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu ser Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 138 <211> 1344 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60

tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac 120

caaggaaaga ccctagagtg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac 240

atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc BOO

tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360

gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420

caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480

acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540

cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600

gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660

gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720

ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780

tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840

gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900

cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960

tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020

ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080

gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140

tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200

gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260

aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320

ctctcccact ctcctggtaa atga 1344

<210> 139 <211> 466 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 139

Met

Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1

5 10 15

val

Leu ser Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys

20 25 30

Pro

Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr phe

35 40 45

Thr

Asp 50 Trp Tyr Asn Met His Trp 55 Asn val Lys Gin Asn Gin 60 Gly Gly Lys Thr Leu

<31 u 65 Gin

lie Gly Glu He 70 Lys pro Asn Ser Gly 75 val Ala Gly Tyr Asn 80 Thr

Lys

Phe Lys Gly 85 Glu Ala Thr Leu Thr 90 Thr Asp Lys ser ser 95 Ala

Thr

Ala Tyr Met Leu Arg Ser Leu Ser Glu Asp ser Val

100 105 110

Tyr

Tyr

cys 115 Val Ala Arg Leu Gly Tyr 120 Thr Asp Asp He Tyr Asp 125 Ser Asp Trp

Tyr

Phe

Asp Trp Gly Ala Gly Thr val Thr Val Ser Ala Lys

130 135 140

Thr

Thr

Pro Pro ser val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly ser Ala Ala Gin

145

150 15 S 160

Thr

Asn Ser Met Val 165 val Thr Leu Gly Cys Leu 170 Gl y Val Lys Gly Tyr Phe 175 Gly Pro

Glu

Pro Val Thr 180 Pro Thr Trp Asn Ser 185 Ser Ser Leu Ser ser 190 Leu val

His

Thr Phe Ala val Leu Gin Asp Leu Tyr Thr ser Ser

195 200 205

ser

val Thr Val Pro Ser ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr cys

210 215 220

Asn

Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie Val

225

230 235 240

Pro

Arg Asp cys Gly 245 He Cys Lys Pro Cys lie 250 Pro Cys Thr val Pro Glu 255 Thr val

ser

ser

Val Phe 260 Pro Phe Pro Pro Lys 265 val Lys Asp Val Leu 270 Ser lie

Thr

Leu Thr Lys val Thr Cys val val Asp He Lys ASp

275 280 285

Asp

Pro Glu val Gin Phe Ser Trp Phe val Asp Asp Val Glu Val His

290

295 300

Thr 305

Ala Gin Thr Gin Pro 310 Arg Glu Glu Gin Phe 315 Asn ser Thr Phe Arg 326

Ser

val Ser Glu Leu Pro He Met His Gin ASp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu

Phe Lys Cys 340 Ser Arg val Asn Ser Ala 345 Arg Ala Phe Pro Ala Pro 350 Gin lie

Glu

Lys

Thr lie Lys Thr Lys Gly Pro Lys Ala Pro val Tyr

355 360 365

Thr

He pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys val ser Leu

370 375 380

Thr

cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp He Thr val Glu Trp

385

390 395 400

Gin

Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro He

405 410 415

Met

Asp Thr ASp 420 Trp Gly Ser Tyr Phe He 425 Thr Tyr Ser Lys Leu Asn 430 val val Gin

Lys

ser Asn Glu Ala Gly Asn Phe Thr Cys Ser Leu His

435 440 445

Glu

Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu ser His ser Pro

450 455 460

Gly

Lys

465

<210> 140 <211> 1401 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

atgggatgga gctggacctt tctcttcctc gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta tgcaaggctt ctggatatac attcactgac ggaaagaccc tagagtggat aggagaaatt cagaagttca agggcaaggc cacattgact gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gatgatatct acgacgactg gtacttcgat tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtgacctgga actctggatc cctgtccagc tctgacctct acactctgag cagctcagtg accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac ggctcttact tcatctacag caagctcaat actttcacct gctctgtgtt acatgagggc tcccactctc ctggtaaatg a

<210> 141

<211> 214 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tacaacatgc actgggtgaa gcagaaccaa 180 aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240 gtagacaagt cctccaccac agcctacatg 300 gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360 gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780 accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840 gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900 cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960 gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080 ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140 ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200 aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260 gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320 ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380

1401

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10

<400> 141

ASp

lie Gin Met Thr Gin ser Pro Ser ser Leu Ser Ala Ser val Gly

1

5 10 15

Asp

Arg Val Thr lie Thr cys Arg Ala ser Gin Asp He ser Asn Tyr

20 25 30

Leu

Asn Trp 35 Thr Tyr Gin Gin Lys Pro 40 Ser Gly Lys Ala Pro Lys 45 Arg Leu Leu He

Tyr

Tyr 50 Gly Ser Arg Leu Leu 55 phe Gly val Pro Ser 60 ser Phe ser Gly

ser

Ser Gly Thr Asp Thr Leu Thr He Ser Leu Gin Pro

65

70 75 80

Glu

Asp Phe Ala Thr 85 Gly Tyr Tyr Cys Gin Gin 90 lie Gly Asp Thr Leu Pro 95 Ala Tyr

Thr

Phe Gly Gly Thr Lys Val Glu Lys Arg Thr val Ala

100 105 110

Pro

Ser Val Phe He Phe pro Pro Ser ASp Glu Gin Leu Lys Ser Gly

Thr

115 120 125

Ala

Ser Val val cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

Ala

130 135 140

Lys

val Gin Trp Lys val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin

145

150 155 160

Glu

Ser val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

ser

Thr Leu Thr 180 val Leu Ser Lys Ala Asp 185 Leu Tyr Glu Lys His Lys 190 Thr Val Tyr

Ala

cys Glu Thr His Gin Gly Ser ser Pro val Lys Ser

195 200 205

Phe

Asn Arg Gly Glu Cys

210

15 <210> 142

<211> 642 <212>ADN

10

15

20

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 142

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcat ccgtaggcga ccgcgtaacc 60

ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc 120

ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca 180

cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca 240

gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc 300

ggcacaaaag ttgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642

<210> 143 <211> 236 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 143

Met

Asp Met Arg val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1

5 10 15

Leu

Arg Gly Ala 20 Ser Arg cys ASp lie Gin 25 val Met Thr Gin ser Pro 30 Arg ser ser

Leu

ser Ala val Gly ASp Arg Thr He Thr Cys Ala ser

35 40 45

Gin

Asp 50 Pro lie Ser Asn Tyr Leu 55 Tyr Asn Trp Tyr Gin Gin 60 Leu Lys Pro Gly Lys

Ala

Lys Leu Leu lie Tyr Thr ser Arg Leu Ser Gly val

65

70 75 80

Pro

ser Arg Phe ser 85 Gin Gly Ser Gly Ser Gly 90 Ala Thr Asp Phe Thr Leu 95 Gin Thr

He

Ser Ser Leu pro Glu Asp Phe Thr Tyr Tyr cys Gin

100 105 110

Gly

Asp Thr 115 Thr Leu Pro Tyr Thr Phe 120 ser Gly Gly Gly Thr Lys iSe val Glu lie

Lys

Arg Val Ala Ala Pro Val Phe He Phe Pro pro ser Asp

130

135 140

Glu

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val val Cys Leu Leu Asn Asn

145

150 155 160

Phe

Tyr Pro Arg Glu 165 Ser Ala Lys val Gin Trp 170 Thr Lys val Asp Asn Ala 175 Lys Leu

Gin

Ser Gly Asn 180 Ser Gin Glu Ser val 185 Leu GlU Gin Asp ser 190 Ala ASp

ser

Thr Tyr 195 His Leu ser ser Thr 200 Cys Thr Leu ser Lys 205 Gin Asp Tyr

Glu

Lys Lys val Tyr Ala Glu Val Thr His Gly Leu Ser

210 215 220

Ser

Pro Val Thr Lys ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225

230 235

<210> 144 <211> 708 <212>ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 144

5

atggacatga gggtccccgc agatgtgaca tccagatgac gtaaccataa catgtagagc aaacccggca aagcacctaa ccatcacgat tctcaggctc caaccagaag attttgcaac ggcggcggca caaaagttga ccgccatctg atgagcagtt ttctatccca gagaggccaa tcccaggaga gtgtcacaga ctgacgctga gcaaagcaga cagggcctga gctcgcccgt

tcagctcctg gggctcctgc ccagtctcca tcctccctct atctcaagat atttccaact actcctcatt tactatacat cggctccggc acagatttca ctattactgt caacaaggcg aattaaacgt acggtggctg gaaatctgga actgcctctg agtacagtgg aaggtggata gcaggacagc aaggacagca ctacgagaaa cacaaagtct cacaaagagc ttcaacaggg

tactctggct ccgaggtgcc ccgcatccgt aggcgaccgc atttgaattg gtaccaacaa caagactcct ctccggcgtt cactcactat ttcctccctc atacactccc atacacattc caccatctgt cttcatcttc ttgtgtgcct gctgaataac acgccctcca atcgggtaac cctacagcct cagcagcacc acgcctgcga agtcacccat gagagtgt

60

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

708

<210> 145 <211> 449 <212> PRT

10 <213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado 15 <400> 145

Glu 1

val Gin Leu val 5 Gin Ser

ser

val Lys Val 20 Trp ser Cys Lys

Asn

Met His 35 He Val Arg Gin

Gly

Glu 50 Asn Pro Asn ser 55

Lys 65 Met

Gly Arg Val Thr Met 70 Leu Thr

Glu

Leu Arg Ser 85 Tyr Arg

AT a

Arg Leu Gly 100 Gly Asp Asp

Trp

Gly Gin 115 val Thr Thr val

Pro

Ser 130 Phe Pro Leu Ala 135

Thr 145

Ala Ala Leu Gly cys ISO Leu

Thr

val ser Trp Asn 165 Gin Ser Gly

Pro

Ala val Leu 180 Ser Ser

Thr

val pro 195 Ser ser Asn Phe

Asp

His 210 Lys Pro Ser Asn Thr 215

Si

cys Val Glu Cys pro 230 Pro

Ser

val Phe Leu phe 245 Pro Pro

Arg

Thr Pro Glu 260 Gin val Thr Cys

Pro

Glu Val 275 phe Asn Trp

Ala

Lys 290 Thr Lys pro Arg Glu 295

val 305

Ser Val Leu Thr val 310 Val

Tyr

Lys Cys Lys val 325 Ser Asn

Thr

He ser Lys 340 Thr Lys Gly

Leu

Pro Pro 355 val Ser Arg Glu Glu

cys

Leu 370 Lys Gly Phe Tyr 375

ser 385

Asn Gly Gin Pro Glu 390 Asn

ASp

ser Asp Gly Ser 405 Gin Phe Phe

Ser

Arg Trp Gin 420 Asn Gly Asn

Ala Lys

Leu His 435 His Tyr Thr

<210> 146 <211> 1347 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

Gly

Ala Glu 10 Gly val Lys Lys Pro Gly 15 ASp Ala

Ala

ser 25 Pro Tyr Thr Phe Thr 30 Glu Tyr

Ala 40 Gly

Gly Gin Gly Leu 45 Asn Trp Met

Gly

Ala Gly Tyr 60 Thr Gin Lys Phe

Thr

Asp Thr ser 75 Thr ser Thr Ala Tyr 80 cys

Ser

Asp Asp 90 Asp Ala val Tyr

lie

Tyr 105 Asp Trp Tyr Phe 110 Asp Val

Thr 120

val Ser Ser Ala Ser 125 Thr Lys Gly

Pro

cys ser Arg Ser 140 Phe Thr ser GlU Ser

val

Lys Asp Tyr 155 Ser Pro Glu Pro Val 160 Phe

Ala

Leu Thr 170 Gly val His Thr 175

Gly

Leu 185 Tyr Ser Leu Ser Ser 190 val val

Gly 200

Thr Gin Thr Tyr Thr 205 cys Asn val

Lys

val Asp Lys Thr 220 Pro val Glu Arg

Lys

Cys

Pro Ala pro 235 val Ala Gly Pro 240

Lys

Pro Lys 250 Val Asp Thr Leu Met He 255 Glu Ser

Val

val 265 Asp val ser Hi s 270 Asp

Tyr 280

val Asp Gly Val Glu 285 val His Asn

Glu

Gin Phe Asn Ser 300 Leu Thr Phe Arg val

His

Gin Asp Trp 315 Pro Asn Gly Lys Glu 320 Lys

Lys

Gly Leu 330 Ala Pro He Glu 335

Gin

pro 345 Thr Arg Glu Pro Gin Val 350 ser Tyr Thr

Met 360

Lys Asn Gin val 365 Leu Thr

pro

Ser Asp lie Ala 380 Val Glu Trp Glu

Asn

Tyr Lys Thr 395 Thr pro Pro Met Leu 400

Leu

Tyr ser 410 Lys Leu Thr val ASp 415 Lys

val

Phe 425 Ser cys Ser Val Met 430 His Glu

Gin 440

Lys Ser Leu ser Leu 445 Ser pro Gly

<400> 146

5

10

15

gaggtgcagc

tcttgtaaag

ccaggacaag

aatcaaaaat

atggaactgc

tatgatgata

gtctctagtg

acctccgaga

acggtgtcgt

cagtcctcag

acccagacct

gttgagcgca

tcagtcttcc

gtcacgtgcg

gtggacggcg

acgttccgtg

tacaagtgca

accaaagggc

accaagaacc

gtggagtggg

gactccgacg

caggggaacg

aagagcctct

tggtgcagag caagcggata gattggaatg tcaaagggag gatcacttag tat atgatga cctccaccaa gcacagcggc ggaactcagg gactctactc acacctgcaa aatgttgtgt tcttcccccc tggtggtgga tggaggtgca tggtcagcgt aggtctccaa agccccgaga aggtcagcct agagcaatgg gctccttctt tcttctcatg ccctgtctcc

cggcgccgag

tacatttaca

gatgggcgaa

agttacaatg

aagcgacgat

ctggtatttc

gggcccatcg

cctgggctgc

cgctctgacc

cctcagcagc

cgtagatcac

cgagtgccca

aaaacccaag

cgtgagccac

taatgccaag

cctcaccgtt

caaaggcctc

accacaggtg

gacctgcctg

gcagccggag

cctctacagc

ctccgtgatg

gggtaaa

gtaaaaaaac caggagcaag gattacaaca tgcattgggt attaacccta atagtggagg acaacagaca caagcacttc acagctgtat actattgcgc gatgtttggg gccagggaac gtcttccccc tggcgccctg ctggtcaagg actacttccc agcggcgtgc acaccttccc gtggtgaccg tgccctccag aagcccagca acaccaaggt ccgtgcccag caccacctgt gacaccctca tgatctcccg gaagaccccg aggtccagtt acaaagccac gggaggagca gtgcaccagg actggctgaa ccagccccca tcgagaaaac tacaccctgc ccccatcccg gtcaaaggct tctaccccag aacaactaca agaccacacc aagctcaccg tggacaagag catgaggctc tgcacaacca

cgttaaagtt 60 aagacaagcg 120 agcaggctac 180 aacagcatat 240 acgacttggg 300 aacagttacc 360 ctccaggagc 420 cgaaccggtg 480 agctgtccta 540 caacttcggc 600 ggacaagaca 660 ggcaggaccg 720 gacccctgag 780 caactggtac 840 gttcaacagc 900 cggcaaggag 960 catctccaaa 1020 ggaggagatg 1080 cgacatcgcc 1140 tcccatgctg 1200 caggtggcag 1260 ctacacgcag 1320 1347

<210> 147 <211> 468 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 147

Met Asp Trp Thr Trp Arg lie Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 1

Ala His ser Glu val Gin Leu val Gin ser Gly Ala Glu val Lys Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser val Lys val Ser cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Met His Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60

Glu 65

Trp Met Gly GlU lie 70 Asn pro Asn Ser Gly 75 Gly Ala Gly Tyr Asn 80

Gin

Lys Phe Lys Gly 85 GlU Arg val Thr Met Thr 90 Arg Thr ASp Thr Ser Thr 95 Ala Ser

Thr

Ala Tyr Met 100 Ala Leu Arg ser Leu 105 Asp Ser Asp Asp Thr 110 Asp Val

Tyr

Tyr

cys 115 val Arg Leu Gly Tyr 120 Thr Asp lie Tyr Asp 125 Ser Trp

Tyr

Phe

Asp 130 Trp Gly Gin Gly 135 Thr Val Thr Val 140 ser Ala Ser

Thr 145

Lys Gly Pro Ser val 150 phe Pro Leu Ala Pro 155 cys Ser Arg ser Thr 160

Ser

Glu Ser Thr Ala 165 val Ala Leu Gly cys Leu 170 Gly Val Lys Asp Tyr phe 175 Gly Pro

Glu

pro Val Thr 180 ser Trp Asn Ser 185 Ala Leu Thr ser 190 val

His

Thr Phe 195 Pro Ala val Leu Gin 200 Ser Ser Gly Leu Tyr 205 ser Leu Ser

Ser

val 210 val Thr val Pro ser 215 Ser Asn Phe Gly Thr 220 Gin Thr Tyr Thr

cys 225

Asn Val Asp His 230 Pro Ser Asn Thr Lys 235 val Asp Lys Thr val 240

Glu

Arg Lys Cys cys 245 Val val Glu Cys Pro Pro 250 pro cys Pro Ala Pro pro 255 Thr Val

Ala

Gly Pro Ser 260 Arg Phe Leu Phe Pro 265 Thr Lys Pro Lys Asp 270 ASp Leu

Met

lie Ser 275 Thr Pro Glu val 280 Cys val Val val 285 val Ser

His

Glu 290 Asp Pro Glu val Gin 295 Phe Asn Trp Tyr val 300 Asp Gly val Glu

val 305

His Asn Ala Lys Thr 310 Lys Pro Arg Glu Glu 315 Gin Phe Asn ser Thr 320

Phe

Arg val val Ser 325 val Leu Thr val Val 330 His Gin Asp Trp Leu 335 Asn

Gly

Lys Glu Tyr 340 Thr Lys cys Lys val Ser 345 Lys Asn Lys Gly Leu Pro 350 Glu Ala Pro

He

Glu Lys 355 Thr lie ser Lys Thr 360 Arg Gly Gin Pro Arg 365 Lys pro Gin

val

Tyr 370 Leu Pro Pro ser 375 Glu Glu Met Thr 380 Asn Gin

val

Ser 385 Glu

Leu Thr cys Leu val 390 Gly Lys Gly Phe Tyr Pro 395 Asn Ser Asp lie Ala val 400 Pro

Trp

Glu ser Asn 405 Gin Pro Glu Asn 410 Tyr Lys Thr Thr 415

Pro

Met Leu Asp 420 ser Asp Gly Ser Phe 425 Phe Leu Tyr ser Lys 430 Leu Thr

Val

Asp Lys 435 Glu Gly Ser Arg Trp Gin Gin 440 His Gly Asn val Phe ser 445 Ser Cys Ser val

Met Ser 465

His 450 Pro Ala Lys Leu His Asn 455 Tyr Thr Gin Lys 460 Leu Ser Leu

<210> 148 <211> 1404 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60

gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggta aaaaaaccag gagcaagcgt taaagtttct 120

tgtaaagcaa gcggatatac atttacagat tacaacatgc attgggtaag acaagcgcca 180

ggacaaggat tggaatggat gggcgaaatt aaccctaata gtggaggagc aggctacaat 240

caaaaattca aagggagagt tacaatgaca acagacacaa gcacttcaac agcatatatg 300

gaactgcgat cacttagaag cgacgataca getgtatact attgcgcacg acttgggtat 360

gatgatatat atgatgactg gtatttcgat gtttggggcc agggaacaac agttaccgtc 420

tctagtgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 480

reegagagea cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540

gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 600

tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 660

cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 720

gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 780

gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840

acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 900

gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggageagtt caacagcacg 960

ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 1020

aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1080

aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc eatcccggga ggagatgacc 1140

aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggettet accccagcga catcgccgtg 1200

gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1260

tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320

gggaaegtet tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380

agcctctccc tgtctccggg taaa 1404

<210> 149 5 <211> 214

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 149

10

ASp

He Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1

5 10 15

Asp

Arg val Thr 20 Phe He Ser Cys Arg Ala 25 Asp ser Gin ASp He Ser 30 Leu Asn Tyr

Leu

Asn Trp 35 Thr Gin Gin Lys pro 40 ser Gly Thr Leu Lys 45 Arg Leu He

Phe

Tyr 50 Gly Ser Arg Leu His 55 Tyr Gly Val Pro Ser 60 Ser Phe Ser Gly

Ser 65 Glu

Ser Gly Thr Asp 70 Tyr ser Leu Thr lie 75 Gin Gly Asn Leu Glu Gin 80 Tyr

Asp

lie Ala Thr Phe cys Gin Asp Thr Leu Pro

85 90 95

Thr

Phe Gly Gly 100 ser Gly Thr Lys Leu Glu 105 Ser lie Arg Arg Ala Asp 110 Thr Ala Ala

Pro

Thr val lie Phe Pro pro Ser Glu Gin Leu Ser Gly

115 120 125

Gly

Ala 130 val ser val Val Cys Phe 135 ASp Leu Asn Asn Phe Tyr 140 Gin Pro Lys Asp lie

Asn

Lys Trp Lys lie Gly ser Glu Arg Asn Gly Val Leu

145

150 155 160

Asn

Ser Trp Thr ASp Gin ASp ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met ser

165 170 175

Ser

Thr Leu Thr 180 Ala Leu Thr Lys Asp Glu 185 Ser Tyr Glu Arg His Asn 190 val Ser Tyr

Thr

cys Glu Thr His Lys Thr Thr Ser Pro lie Lys Ser

195 200 205

Phe

Asn Arg Asn Glu cys

210

<210> 150 <211>645 15 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 150

gatatccaga tgacacagac tacatcctcc atcagttgca gggcaagtca ggacattagc gatggaactc ttaaactcct gatcttctac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat gaagatattg ccacttactt ttgccaacag gggaccaagc tggaaataag acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac

5

<210> 151 <211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus

10

<400> 151

ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 aattatttaa actggtttca gcagaaacca 120 acatcaagat tacactcagg agttccatca 180 tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240 ggtgatacgc ttccgtacac gttcgggggg 300 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540

agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 aggaatgagt gttag 645

Met

Met

ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys phe Gin

1

5 10 15

Gly

Thr Arg Cys 20 Gly ASp lie Gin Met Thr 25 lie Gin Thr Thr Ser ser 30 ser Leu ser

Ala

Ser Leu 35 Asn Asp Arg Val Thr 40 phe Ser Cys Arg Ala 45 Asp Gin Asp

He

ser 50 Leu Tyr Leu Asn Trp 55 Thr Gin Gin Lys Pro 60 ser Gly Thr Leu

Lys 65 Arg

Leu He Phe Tyr 70 Gly ser Arg Leu His 75 Tyr Gly val pro Ser 80 Ser

Phe

Ser Gly ser 85 Glu Ser Gly Thr Asp 90 Tyr ser Leu Thr He 95 Gly

Asn

Leu Glu Gin 100 Tyr Asp lie Ala Thr 105 Gly Phe Cys Gin Gin 110 He Asp

Thr

Leu Pro 115 Ala Thr Phe Gly Gly 120 Ser Thr Lys Leu Glu 125 Ser Arg Arg

Ala

Asp Ala Pro Thr val He Phe pro Pro ser Glu Gin

130 135 140

Leu

Thr Ser Gly Gly Ala ser Val val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

145

150 155 160

Pro

Lys Asp lie Asn val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin

165 170 175

Asn

Gly Val Leu 180 Ser Asn ser Trp Thr ASP 185 Leu Gin Asp Ser Lys ASp 190 Tyr ser Thr

Tyr

Ser Met Ser Thr Leu Thr Thr Lys Asp Glu Glu Arg

195 200 205

His

Asn 210 val Ser Tyr Thr cys Glu 215 Arg Ala Thr His Lys Thr 220 ser Thr Ser Pro

He

Lys ser Phe Asn Asn Glu Cys

225

230

15 <210> 152

<211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus

atgatgtcct ctgctcagtt gatatccaga tgacacagac atcagttgca gggcaagtca gatggaactc ttaaactcct aggttcagtg gcagtgggtc gaagatattg ccacttactt gggaccaagc tggaaataag tccagtgagc agttaacatc cccaaagaca tcaatgtcaa aacagttgga ctgatcagga ttgaccaagg acgagtatga tcaacttcac ccattgtcaa

<210> 153 <211> 447 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 153

Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Met Lys pro Gly Ala 15 10 15

10

ccttggtctc ctgttgctct tacatcctcc ctgtctgcct ggacattagc aattatttaa gatcttctac acatcaagat tggaacagat tattctctca ttgccaacag ggtgatacgc acgggctgat gctgcaccaa tggaggtgcc tcagtcgtgt gtggaagatt gatggcagtg cagcaaagac agcacctaca acgacataac agctatacct gagcttcaac aggaatgagt

gttttcaagg taccagatgt 60 ctctgggaga cagagtcacc 120 actggtttca gcagaaacca 180 tacactcagg agttccatca 240 ccattagcaa cctggagcaa 300 ttccgtacac gttcgggggg 360 ctgtatccat cttcccacca 420 gcttcttgaa caacttctac 480 aacgacaaaa tggcgtcctg 540 gcatgagcag caccctcacg 600 gtgaggccac tcacaagaca 660 gttag 705

Ser

val Lys Met 90 ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

Asn

Met His Trp val Lys Gin Asn c. J Gin Gly Lys Ser Leu Jv GlU Trp He

35 40 45

Gly

Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly ser Gly Tyr Asn Gin Lys Phe

50

55 60 Thr

Lys

Gly Lys Ala Thr Leu Thr val ASp Lys Ser ser ser Ala Tyr

65

70 75 val 80

Met

Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu ASp Ser Ala Tyr Tyr cys

85 90 95

Ala

Arg Leu Val Tyr Asp Gly Ser Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe ASp val

100 105 110

Trp

Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro

115

120 125

Pro

ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser

130 135 140

Met

val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro val

145

150 155 160

Thr

val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu ser 170 Ser Gly val His Thr 1 7K Phe

Pro

Ala val Leu IOj Gin Ser Asp Leu Tyr lr U Thr Leu ser ser Ser A/ j val Thr

180 185 190

Val

Pro ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr Cys Asn val Ala

195 200 205

His

Pro Ala Ser Ser Thr Lys val ASp Lys Lys lie val Pro Arg Asp

210 215 220

Cys

Gly cys Lys Pro cys lie cys Thr val Pro Glu val Ser ser val

225

230 235 240

Phe

lie Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr He Thr Leu Thr

245 250 255

pro

Lys val Thr Cys val val val Asp He Ser Lys ASp Asp Pro Glu

260 265 270

val

Gin Phe Ser Trp Phe val Asp Asp val Glu Val His Thr Ala Gin

275 280 285

Thr

Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg ser val Ser

290 295 300 Glu Phe

Glu

Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Lys

305

310 315 320

cys

Arg val Asn Ser Ala Alai Phe Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie

325 330 335

Ser

Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr 3 SO lie Pro

Pro

pro Lys Glu Gin Met Ala Lys j Asp Lys val Ser Leu Thr Cys Met

355 360 365

lie

Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp He Thr val Glu Trp Gin Trp Asn

370 375 380 Thr

Gly

Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp

385

390 395 400

Asp

Gly ser Tyr Phe He Tyr ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn

405 410 415

Trp

Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys ser val Leu His Glu Gly Leu

420 425 430

His

Asn His His Thr Glu Lys ser Leu Ser Hi s ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 154 <211> 1344 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tgcactgggt gaaacagaac 120 caaggaaaga gcctagagtg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tagtggctac 180 aaccaaaagt tcaaaggcaa ggccacattg actgtagaca agtcttccag cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattggtc 300 tacgatggca gctacgagga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360

gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420

caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480

acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540

cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600

gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660

gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720

ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780

tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840

gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900

cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960

tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020

ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080

gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140

tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200

gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260

aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320

ctctcccact ctcctggtaa atga 1344

<210> 155 <211> 466 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 155

Met

Gly Trp ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1

5 10 15

val

Leu ser Glu 20 Ser Val Gin Leu Gin Gin 25 Cys ser Gly Pro Glu Leu 30 Tyr Met Lys

pro

Gly Ala 35 Tyr Val Lys Met Ser 40 val Lys Ala ser Gly 45 Gly Thr Phe

Thr

Asp Asn Met His Trp Lys Gin Asn Gin Lys Ser Leu

50 55 60

Glu

Trp He Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn

65

70 75 80

Gin

Lys Phe Lys Gly Lys 85 Glu Leu Ala Thr Leu rhr 90 Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 95 Ala val

Thr

Ala Tyr Met 100 Ala Arg Ser Leu 105 ASp Ser Glu ASp Ser 110 ASp

Tyr

Tyr

Cys 115 val Arg Leu Val Tyr 120 Thr Gly Ser Tyr Glu 125 Ser Trp Tyr

Phe

Asp 130 Thr Trp Gly Ala Gly 135 Tyr Thr val Thr val 140 Gly Ser Ala Lys

Thr

Pro pro ser val Pro Leu Ala Pro Ser Ala Ala Gin

145

150 155 160

Thr

Asn Ser Met val Thr 165 Val Thr Leu Gly cys Leu 170 Gly Val Lys Gly Tyr phe Pro 175 Gly Val

Gill

Pro val Thr Trp Asn ser ser Leu Ser Ser

180 185 190

His

Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser ser

Val 195 200 205

Ser

Thr val Pro ser ser Thr Trp pro Ser Glu Thr val Thr Cys

210 215 220

Asn

Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie val

225

230 235 240

Pro

Arg Asp cys Gly cys 245 He Phe Lys pro cys He 250 Pro cys Thr val Pro Glu val 255 Thr He

Ser

ser Val Phe pro Pro Lys Lys ASp val Leu

Thr

260 265 270

Leu

Thr Pro Lys val Thr Cys val val val Asp He Ser Lys Asp

275 280 285

Asp

Pro Glu Val Gin Phe Ser Trp Phe val Asp ASp Val Glu val His

Thr

290 295 300

Ala

Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg

305

val 310 315 320

Ser

Ser

Glu Leu Pro 325 Arg val He Met His Gin 330 Ala Asp Trp Leu Asn Gly Lys 335 lie Glu

Glu

Phe Lys cys Asn Ser Ala Phe Pro Ala pro

340 345 350

Lys

Thr He 355 pro Ser Lys Thr Lys Gly 360 Gin Arg Pro Lys Ala Pro 365 Lys Gin val Tyr

Thr

lie 370 Cys pro Pro Lys Glu 375 Phe Met Ala Lys Asp 380 He Val Ser Leu

Thr

Met He Thr Asp Phe Pro Glu Asp Thr val Glu Trp

385

390 395 400

Gin

Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro lie

Thr 405 410 415

Met

Asp Asp 420 Trp Gly Ser Tyr Phe He 425 Thr Tyr Ser Lys Leu Asn 430 val val Gin

Lys

ser Asn Glu Ala Gly Asn Phe Thr cys Ser Leu His

435 440 445

Glu

Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys ser Leu ser His Ser pro

450 455 460

<H y Lys 465

<210> 156 <211> 1401 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 156

5

10

atgggatgga gctggacctt tctcttcctc gtccagctgc aacagtctgg acctgaacta tgcaaggctt ctggatacac attcactgac ggaaagagcc tagagtggat aggagaaatt caaaagttca aaggcaaggc cacattgact gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gatggcagct acgaggactg gtacttcgat tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtgacctgga actctggatc cctgtccagc tctgacctct acactctgag cagctcagtg accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac ggctcttact tcatctacag caagctcaat actttcacct gctctgtgtt acatgagggc tcccactctc ctggtaaatg a

ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tacaacatgc actgggtgaa acagaaccaa 180 aatcctaaca gtggtggtag tggctacaac 240 gtagacaagt cttccagcac agcctacatg 300 gcagtctatt actgtgcaag attggtctac 360 gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780 accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840 gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900 cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960 gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080 ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140 ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200 aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260 gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320 ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380

1401

<210> 157 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 157

Asp

lie Gin Met

1

Asp

Arg val Thr

20

Leu

Tyr Trp 35 Thr Tyr

Tyr

Tyr

ser

50

Ser 65 g1 u

Gly ser Gly

Asp

lie Ala

Thr

Phe Gly Gly

100

Pro

Thr val Ser

115

Gly

Ala ser Val

130

Asn

val Lys Trp

145

Asn

ser Trp Thr

ser

Thr Leu Thr

180

Thr

cys Glu Ala

195

Phe

Asn Arg Asn

210

Thr 5

Gin Thr Thr Ser Ser 10

lie

cys Cys Arg Ala 25 Asp Ser

Gin

Gin

Lys Pro 40 Ser Gly

Arg

Leu His 55 Tyr Gly val

Thr

ASp 70 Tyr Ser Leu

Thr

Thr 85

Phe Cys Gin Gin 90

Gly

Thr Lys Leu Glu 105 lie

He

Phe pro pro 120 Ser Ser

Val

Cys Phe 135 Asp Leu Asn Asn

Lys

He 150 Gly Ser Glu

Asp 165

Gin ASp ser Lys Asp 170

Leu

Thr Lys ASp Glu 185 Ser Tyr

Thr Glu

His Cys Lys Thr 200 Thr

Leu

Ser Ala ser Leu Gly

15

Gin

val lie Thr Asn Tyr

Thr

Phe Lys JU Leu Leu He

45 Gly

pro

Ser Arg Phe Ser

60 Glu Gin

He

Ser Asn Leu

75

80

Gly

Asp Thr Leu Pro qc Tyr

Lys

Arg Ala Asp Ala Ala

110

Glu

Gin Leu Thr ser Gly

Phe

Tyr JLi J pro Lys Asp He

140 val

Arg

Gin Asn Gly Leu

155

160

Ser

Thr Tyr Ser Met ser

175

Glu

Arg His Asn 1QO Ser Tyr

Ser

Pro lie val Lys ser

205

<211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus

5 <400> 158

gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60

atctgttgca gggcaagtca ggtcattacc aattatttat actggtatca gcagaaacca 120

gatggaactt ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180

aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggaacag 240

gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300

gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 642

<210> 159 10 <211> 234

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 159 15

Met 1

Met ser Ser Ala 5 Gin Phe Leu Gly Leu 10 Leu Leu Leu cys phe 15 Gin

Gly

Thr Arg cys 20 Gly Asp lie Gin Met Thr 25 lie Gin Thr Thr Ser ser 30 ser Leu Ser

Ala

Ser Leu 35 Asn Asp Arg val Thr 40 Tyr cys cys Arg Ala 45 Asp Gin val

He

Thr 50 Tyr Leu Tyr Trp 55 Gin Gin Lys Pro 60 Gly Thr Phe

Lys 65 Arg

Leu Leu lie Tyr Tyr 70 Gly Thr Ser Arg Leu His 75 Tyr ser Gly Val pro ser 80 Ser

Phe

ser Gly Ser 85 ser Gly Thr Asp 90 Ser Leu Thr lie 95

Asn

Leu Glu Gin 100 Tyr Glu Asp He Ala Thr 105 Gly Tyr Phe cys Gin Gin 110 lie Gly Asp

Thr

Leu pro 115 Ala Thr Phe Gly Gly 120 ser Thr Lys Leu Glu 125 Ser Lys Arg

Ala

Asp 130 Ala Pro Thr val 135 He phe Pro Pro 140 Ser Glu Gin

Leu 145

Thr ser Gly Gly Ala 150 Ser Val Val cys Phe 155 Leu Asn Asn Phe Tyr 160

Pro

Lys Asp lie Asn 165 val Lys Trp Lys He 170 Asp Gly Ser Glu Arg 175 Gin

Asn

Gly val Leu 180 Asn Ser Trp Thr Asp 185 Gin ASp Ser Lys ASp 190 Ser Thr

Tyr

ser Met 195 Ser Ser Ser Thr Leu Thr 200 Ala Leu Thr Lys Asp Glu 205 Ser Tyr Glu Arg

His

Asn Tyr Thr Cys Glu Thr His Lys Thr Thr Ser Pro

210 215 220

lie val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230

<210> 160 <211> 702 20 <212> ADN

<213> Mus musculus

atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc gatatccaga tgacacagac tacatcctcc atctgttgca gggcaagtca ggtcattacc gatggaactt ttaaactcct gatctactac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat gaagatattg ccacttactt ttgccaacag gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac

<210> 161 <211> 447 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 161

ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60 ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 120 aattatttat actggtatca gcagaaacca 180 acatcaagat tacactcagg agtcccatca 240 tattctctca ccattagcaa cctggaacag 300 ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg 360 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 aggaatgagt gt 702

Glu

val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala

1

5 10 15

Ser

val Lys Met 20 Trp ser cys Lys Ala Ser 25 Gin Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Glu ASp Tyr

Asn

Met His 35 lie Met Lys Gin Asn 40 Gly Gly Lys Ser Leu 45 Asn Trp He

Gly

Glu Asn Pro Asn Ser Gly Ala Gly Tyr Gin Gin Phe

50

55 60

Lys 65 Met

Gly Lys Ala Thr Leu 70 Leu Thr val Asp Lys ser 75 Ser Ser Arg Thr Ala Tyr 80 cys

Glu

Leu Arg ser 85 Tyr Thr Ser Glu ASp 90 Glu Ala Val Tyr w

Ala

Arg Leu Gly 100 Gly val Gly Asn Tyr 105 val Asp Trp Tyr Phe 110 Thr Asp val

Trp

Gly Ala Thr Thr val Thr Ser ser Ala Lys Thr Pro

115 120 125

pro

ser val Tyr pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser

130 135 140

Met 145 Thr

val Thr Leu Gly Cys 150 Ser Leu Val Lys Gly Tyr 155 Ser Phe Pro Glu Pro Val 160 Phe

val

Thr Trp Asn Gly ser Leu Ser Gly val His Thr

165 170 175

Pro

Ala Val Leu Gin Ser ASp Leu Tyr Thr Leu ser Ser Ser Val Thr

val

180 185 190

Pro

ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr cys Asn Val Ala

195 200 205

His

Pro 210 Gly Ala Ser Ser Thr Lys 215 lie val Asp Lys Lys lie 220 Glu val Pro Arg Asp

cys

Cys Lys pro Cys Cys Thr Val Pro val Ser Ser val

225

230 235 240

Phe

lie Phe Pro pro Lys pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu Thr

245 250 255

pro

Lys Val Thr 260 Ser Cys val val Val Asp 265 ASp lie Ser Lys Asp Asp 270 Thr Pro Glu

val

Gin Phe Trp Phe val Asp val Glu Val His Ala Gin

275 280 285

Thr

Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser val Ser

290 295 300

Glu

Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu phe Lys

305

310 315 320

Cys

Arg val Asn ser Ala Ala Phe pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie

Thr

325 330 335

ser

Lys Lys Gly Arg pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr He Pro

340 345 350

Pro

Pro

Lys Glu Gin Met Ala Lys ASp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met

355 360 365

He

Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn

370 375 380

ill

Gin Pro Ala Glu Asn 390 Tyr Lys Asn Thr Gin 395 Pro lie Met Asp Thr 400

ASp

Gly Ser Tyr Phe He Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin Lys Ser Asn

405 410 415

Trp

Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser val Leu His Glu Gly Leu

420 425 430

His

Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 162 <211> 1341 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 162

10

gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60

tcctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tgcactggat gaagcagaac 120

caaggaaaga gcctagaatg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180

aaccagcagt tcaaaggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag gacagcctac 240

atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300

tacgttggta attacgagga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360

gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420

caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480

acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540

cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600

gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660

gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720

ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780

tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840

gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900

cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960

tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020

ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080

gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140

tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200

gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260

aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320

ctctcccact ctcctggtaa a 1341

<210> 163 <211> 466 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 163

Met

Gly Trp ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1

5 10 15

val

Leu Ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys

Gly 20 25 30

Pro

Ala 35 Tyr ser val i-ys Met ser 40 Met cys Lys Ala Ser Gly 45 Gly Tyr Thr Phe

Thr

ASp 50 Trp Asn Met His Trp 55 Asn Lys Gin Asn Gin 60 Gly Lys ser Leu

Glu 65 Gin

lie Gly Glu lie 70 Lys Pro Asn Ser Gly 75 val Ala Gly Tyr Asn 80 Arg

Gin

Phe Lys Gly Ala Thr Leu Thr ASp Lys ser Ser

85 90 95

Thr

Ala Tyr Met Glu Leu Arg ser Leu Thr ser Glu Asp ser Ala val

100 105 110

Tyr

Tyr

cys 115 val Ala Arg Leu Gly Tyr 120 Thr val Gly Asn Tyr Glu 125 Ser Asp Trp

Tyr

Phe

Asp Trp Gly Ala Gly Thr val Thr val ser Ala Lys

130 135 140

Thr

Thr

pro Pro Ser val Tyr pro Leu Ala pro Gly Ser Ala Ala Gin

145

150 155 160

Thr

Asn ser Met val 165 Val Thr Leu Gly Cys Leu 170 Gly val Lys Gly Tyr Phe 175 Gly Pro

Glu

Pro val Thr Thr Trp Asn Ser ser Leu Ser ser Val

180 185 190

His

Thr phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser ser

195 200 205

Ser

Val Thr Val Pro Ser ser Thr Trp pro Ser Glu Thr val Thr cys

210 Ala 215 220

Asn

val His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie Val

225

230 235 240

Pro

Arg ASp Cys Gly cys Lys Pro Cys He cys Thr Val pro Glu val

245 250 255

ser

ser

val Phe He Phe Pro Pro Lys pro Lys Asp Val Leu Thr He

260 265 270

Thr

Leu Thr Pro Lys val Thr cys val Val val ASp He Ser Lys Asp

275 280 285

ASp

Pro 290 Ala Glu val Gin Phe Ser 295 Arg Trp Phe val Asp Asp 300 Asn val Glu Val His

Thr

Gin Thr Gin pro Glu Glu Gin Phe Ser Thr Phe Arg

305

310 315 320

Ser

val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu

Phe Lys Cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala pro lie GlU

340 345 350

Lys

Thr lie ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr

355 360 365

Thr

lie pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys val ser Leu

370 375 380

Thr

cys Met He Thr ASp Phe Phe Pro Glu ASp He Thr val Glu Trp

385

390 395 400

Gin

Trp Asn Gly Gin 405 Gly pro Ala Glu Asn Tyr 410 Tyr Lys Asn Thr Gin pro 415 Val lie

Met

Asp Thr Asp 420 Trp ser Tyr Phe lie 425 Thr Ser Lys Leu Asn 430 Val Gin

Lys

Ser Asn 435 Leu Glu Ala Gly Asn 440 Thr Phe Thr Cys ser 445 Ser Leu His

Glu

Gly His Asn His His Glu Lys Ser Leu HIS Ser Pro

450 455 460

Gly

i-ys

465

<210> 164 <211> 1398 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 164

atgggatgga gctggacctt tctcttcctc gtccagctgc aacagtctgg acctgaacta tgcaaggctt ctggatacac attcactgac ggaaagagcc tagaatggat aggagaaatt cagcagttca aaggcaaggc cacattgact gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gttggtaatt acgaggactg gtacttcgat tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtgacctgga actctggatc cctgtccagc tctgacctct acactctgag cagctcagtg accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc

cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac ggctcttact tcatctacag caagctcaat actttcacct gctctgtgtt acatgagggc tcccactctc ctggtaaa

ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tacaacatgc actggatgaa gcagaaccaa 180 aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240 gtagacaagt cctccaggac agcctacatg 300 gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360 gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720

tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780 accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840 gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900 cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960 gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080 ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140 ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200 aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260 gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320 ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380

1398

5 <210> 165

<211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus

10 <400> 165

Asp

lie Gin Met Thr Gin Thr Thr ser ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1

5 10 15

ASp

Arg val ser 20 Tyr lie Ser cys Arg Ala 25 Asp Ser Gin ASp lie ser 30 Leu Asn Tyr

Leu

Asn Trp 35 Thr Gin Gin Lys pro 40 Ser Gly Thr Phe if Leu He

Phe

Tyr Ser Arg Leu Leu Gly Val Pro ser Arg Phe ser Gly

50 55 60 Glu

Ser

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr He Tyr Asn Leu Gin

65

70 75 80

Glu

Asp Phe Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu pro Tyr

85 90 95

Thr

Phe Gly Gly 100 Ser Gly Thr Lys Leu Glu 105 Ser He Lys Arg Ala ASp 110 Thr Ala Ala

pro

Thr val lie Phe pro pro Ser Glu Gin Leu Ser Gly

115 120 125

Gly

Ala Ser Val val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp He

130

135 140

Asn 145 Asn

val Lys Trp Lys lie 150 Gin ASp Gly Ser Glu Arg 155 ser Gin Asn Gly val Leu 160 Ser

Ser

Trp Thr Asp 165 Leu ASp ser Lys Asp 170 Tyr Thr Tyr Ser Met 175 ser

Ser

Thr Leu Thr Thr Lys Asp Glu Glu Arg His Asn Tyr

180 185 190

Thr

cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro He Val Lys Ser

Phe

195 200 205

Asn

Arg Asn Glu Cys

210

<211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus

5 <400> 166

gatatccaga tgacacagac tacatcctcc atcagttgca gggcaagtca agacattagc gatggaactt ttaaactcct tatcttctac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat gaagattttg ccacttactt ttgccaacag gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac

<210> 167 10 <211> 234

<212> PRT <213> Mus musculus

ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 60 aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 acatcaagat tactctcagg agtcccatca 180 tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 240 ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 300 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 aggaatgagt gttag 645

<400> 167 15

Met

Met

Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gin

1

5 10 15

Gly

Thr Arg Cys 20 Gly Asp lie Gin Met Thr 25 lie Gin Thr Thr Ser ser 30 ser Leu Ser

Ala

ser Leu 35 Asn Asp Arg Val Ser 40 Tyr Ser Cys Arg Ala 45 Asp Gin ASp

He

ser 50 Leu Tyr Leu Asn Trp 55 Thr Gin Gin Lys Pro 60 Ser Gly Thr Phe

Lys 65 Arg

Leu He Phe Tyr 70 Gly ser Arg Leu Leu 75 Tyr Gly val Pro ser 80 Tyr

Phe

ser Gly ser 85 Glu Ser Gly Thr Asp 90 Tyr Ser Leu Thr lie 95 Gly

Asn

Leu Glu Gin 100 Tyr Asp Phe Ala Thr 105 Gly Phe cys Gin Gin 110 He Asp

Thr

Leu pro 115 Ala Thr Phe Gly Gly 120 ser Thr Lys Leu Glu 125 Ser Lys Arg

Ala

Asp Ala Pro Thr val He Phe pro Pro ser GlU Gin

130 135 140

Leu

Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

145

150 155 160

Pro

Lys ASp He Asn val Lys Trp Lys lie ASp Gly Ser Glu Arg Gin

165 170 175

Asn

Gly val Leu 180 Ser Asn ser Trp Thr ASp 185 Leu Gin ASp ser Lys Asp 190 Tyr Ser Thr

Tyr

ser Met 195 ser Ser Thr Leu Thr 200 Ala Thr Lys Asp Glu 205 Ser Glu Arg

His

Asn 210 val Tyr Thr Cys Glu 215 Arg Thr His Lys Thr 220 Thr ser Pro

lie

Lys Ser Phe Asn Asn Glu Cys

225

230

<210> 168 <211> 705 20 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 168

60

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

705

<210> 169 <211> 447 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 169

61 u val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser val Lys Met ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met His Trp val Lys Gin Asn Gin Gly Lys Thr Leu Asp Trp lie 35 40 45

10

atgatgtcct ctgctcagtt gatatccaga tgacacagac atcagttgca gggcaagtca gatggaactt ttaaactcct aggttcagtg gcagtgggtc gaagattttg ccacttactt gggaccaaac tggaaataaa tccagtgagc agttaacatc cccaaagaca tcaatgtcaa aacagttgga ctgatcagga ttgaccaagg acgagtatga tcaacttcac ccattgtcaa

ccttggtctc ctgttgctct tacatcctcc ctgtctgcct agacattagc aattatttaa tatcttctac acatcaagat tggaacagat tattctctca ttgccaacag ggagatacgc acgggctgat gctgcaccaa tggaggtgcc tcagtcgtgt gtggaagatt gatggcagtg cagcaaagac agcacctaca acgacataac agctatacct gagcttcaac aggaatgagt

gttttcaagg taccagatgt ctctgggaga cagggtctcc actggtatca gcagaaacca tactctcagg agtcccatca ccatttacaa cctggagcaa ttccgtacac tttcggaggg ctgtatccat cttcccacca gcttcttgaa caacttctac aacgacaaaa tggcgtcctg gcatgagcag caccctcacg gtgaggccac tcacaagaca gttag

Gly

Glu 50 Gly lie Asn Pro Asn ser 55 Thr Gly Gly Ala Gly Tyr 60 ser Asn Gin Lys Phe

Lys Ala Thr Leu 70 Leu Val Asp Lys ser 75 ser Thr Thr Ala Tyr 80 Cys

Met

Glu Leu Arg Ser 85 Tyr Thr Ser Glu Asp 90 Asp Ala val Tyr Tyr 95 ASp

Ala

Arg Leu Gly 100 Gly Asp Asp He Tyr 105 val Asp Trp Tyr Phe 110 Thr Val

Trp

Gly Ala 115 val Thr Thr val Thr 120 Pro Ser Ser Ala Lys 125 Gin Thr Pro

Pro

Ser Tyr Pro Leu Ala Gly Ser Ala Ala Thr Asn Ser

130 135 140

Met

val Thr Leu Gly Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145

150 155 160

Thr

val Thr Trp Asn ser Gly ser Leu Ser Ser Gly val His Thr Phe

165 170 175

Pro

Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser val Thr

180 185 190

val

Pro ser ser Thr Trp Pro ser Glu Thr Val Thr cys Asn val Ala

195 200 205

His

pro 210 Gly Ala ser Ser Thr Lys 215 lie Val ASp Lys Lys lie 220 Glu Val Pro Arg ASp

cys

Cys Lys Pro cys cys Thr val Pro val ser Ser val

225

230 235 240

Phe

He Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp val Leu Thr lie Thr Leu Thr

245 250 255

Pro

Lys val Thr 260 Ser Cys val val Val ASp 265 Asp lie ser Lys ASp Asp 270 Thr pro Glu

val

Gin Phe 275 pro Trp Phe val Asp 280 Phe val Glu Val His 285 Arg Ala Gin

Thr

Gin Arg Glu Glu Gin Asn Ser Thr Phe Ser val ser

290 295 300

Glu 305

Leu Pro lie Met His 310 Gin Asp Trp Leu Asn 315 Gly Lys Glu Phe ill

cys

Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie

325 330 335

Ser

Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr He Pro

340 345 350

Pro

Pro

Lys 355 ASp Glu Gin Met Ala Lys 360 Asp ASp Lys val ser Leu 365 Trp Thr cys Met

He

Thr phe Phe Pro Glu lie Thr val Glu Gin Trp Asn

370 375 380

Gly

Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp Thr

385

390 395 400

Asp

Gly ser Tyr Phe 405 Asn lie Tyr Ser Lys Leu 410 Ser Asn val Gin Lys Ser 415 Gly Asn

Trp

Glu Ala Gly Thr Phe Thr 42I val Leu His Glu Leu

420 430

His

Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 170 <211> 1344 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 170

gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac 120 caaggaaaga ccctagactg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300 tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420 caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480 acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540 cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600

gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660

gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720

ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780

tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840

gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900

cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960

tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020

ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080

gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140

tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200

gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260

aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320

ctctcccact ctcctggtaa atga 1344

<210> 171 <211> 466 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 171

Met

Gly Trp ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1

5 10 15

val

Leu Ser Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly pro Glu Leu Met Lys

20 25 30

Pro

Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr phe

35 40 45

Thr

Asp Tyr Asn Met His Trp val Lys Gin Asn Gin Gly Lys Thr Leu

50 55 60

Asp

Trp lie Gly Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn

65

70 75 80

Gin

Lys Phe Lys Gly 85 Glu Lys Ala Thr Leu Thr 90 Thr val Asp Lys Ser ser 95 Ala Thr

Thr

Ala Tyr Met Leu Arg Ser Leu Ser Glu Asp Ser Val

100 105 110

Tyr

Tyr

cys 115 val Ala Arg Leu Gly Tyr 120 Thr ASp Asp He Tyr Asp 125 Ser Asp Trp

Tyr

Phe

Asp 130 Thr Trp Gly Ala Gly 135 Tyr Thr val Thr Val 140 Gly Ser Ala Lys

Thr

Pro Pro Ser val Pro Leu Ala Pro ser Ala Ala Gin

145

150 155 160

Thr

Asn Ser Met val Thr Leu Gly Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro

165 170 175

Glu

Pro val Thr val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu ser Ser Gly val

180 185 190

His

Thr Phe Pro Ala val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser Ser

195 200 205

Ser

Val Thr val Pro Ser Ser Thr Trp pro ser Glu Thr val Thr Cys

210 215 220

Asn

val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val ASp Lys Lys lie val

225

230 235 240

Pro

Arg Asp Cys Gly 245 lie Cys Lys Pro cys lie 250 pro cys Thr Val Pro Glu 255 Thr val

ser

ser

val Phe Phe pro Pro Lys Lys Asp val Leu lie

260 265 270

Thr

Leu Thr 275 Glu Pro Lys Val Thr Cys 280 Trp val val Val Asp He 285 Val Ser Lys Asp

Asp

pro val Gin Phe ser Phe Val Asp Asp Glu val His

Thr 305

290 295 300

Ala

Gin Thr Gin Pro 310 Arg Glu Glu Gin Phe 315 Asn Ser Thr phe Arg 320

Ser

Val Ser Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys

Glu

Phe 325 330 335

Lys

Cys 340 Ser Arg val Asn Ser Ala 345 Arg Ala Phe Pro Ala Pro 350 Gin He Glu

Lys

Thr He 355 Pro Lys Thr Lys Gly 360 Gin Pro Lys Ala Pro 365 Lys val Tyr

Thr

He Pro Pro Lys Glu Met Ala Lys Asp val ser Leu

370 375 380

Thr

Cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro GlU Asp lie Thr val Glu Trp

385

390 395 400

Gin

Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin pro He

Thr 405 410 415

Met

Asp Asp 420 Trp Gly Ser Tyr Phe He 425 Thr Tyr Ser Lys Leu Asn 430 Val val Gin

Lys

Ser Asn 435 Leu Glu Ala Gly Asn 440 Thr Phe Thr cys Ser 445 Ser Leu His

Glu

Gly His Asn His His Glu Lys Ser Leu His ser pro

450 455 460

Gly

Lys

465

<210> 172 <211> 1401 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 172

5

10

atgggatgga gctggacctt tctcttcctc gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta tgcaaggctt ctggatatac attcactgac ggaaagaccc tagactggat aggagaaatt cagaagttca agggcaaggc cacattgact gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gatgatatct acgacgactg gtacttcgat tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtgacctgga actctggatc cctgtccagc tctgacctct acactctgag cagctcagtg accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac ggctcttact tcatctacag caagctcaat actttcacct gctctgtgtt acatgagggc tcccactctc ctggtaaatg a

ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120 tacaacatgc actgggtgaa gcagaaccaa 180 aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240 gtagacaagt cctccaccac agcctacatg 300 gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360 gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480 gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540 ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600 actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660 agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720 tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780 accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840 gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900 cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960 gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080 ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140 ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200 aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260 gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320 ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380

1401

<210> 173 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 173

ASp

lie Gin Met

1

Asp

Arg val Ser 20 Tyr

Leu

Asn Trp 35

Phe

Tyr 50 Thr ser

Ser 65 Glu

Gly Ser Gly

ASp

Phe Ala

Thr

phe Gly Gly 100

Pro

Thr val 115 Ser

Gly

Ala 130 Ser val

Asn

val Lys Trp

145

Asn

Ser Trp Thr

ser

Thr Leu Thr 180

Thr

cys Glu 195 Ala

Phe

Asn 210 Arg Asn

<210> 174

Thr 5

Gin lie Thr Ser ser 10

lie

ser cys Arg Ala 25 Asp Ser

Gin

Gin

Lys Pro 40 Gly

Arg

Leu Phe 55 Tyr Ser Gly Val

Thr

Asp 70 Tyr Ser Leu

Thr

Thr 85 Gly

Phe Cys Gin Gin 90 lie

Thr

Lys Val Glu 105

He

Phe Pro Pro 120 Ser Ser

val

Cys Phe Leu Asn Asn

135

Lys

lie 1 ^0 ASp Gly ser GlU

Asp

J.JV Gin ASP ser Lys

Asp

165

170

Leu

Thr Lys Asp Glu 1 ftC Tyr

Thr

His Lys Thr xoj Ser

Thr

200

Glu

Cys

Leu

Ser Ala Ser Leu Gly

Gin

15

Asp

lie Ser 30 Leu Asn Tyr

Thr

Phe Lys 45 Arg Leu lie

Pro

Ser 60 Tyr Phe Ser Gly

He

Asn Leu Glu Gin

75

80

Gly

Asp Thr Leu Pro 95 Ala Tyr

Lys

Arg Ala Asp Ala

110

Glu

Gin Leu Thr ser Gly

Phe

125 He

Tyr

Pro Lys ASp

140

Arg

Gin Asn Gly Val Leu

155

Thr 160

Ser

Tyr Ser Met

Ser

Glu

175

Arg

His Asn Ser Tyr

190

Ser

Pro lie Val Lys

Ser

205

<211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus

5 <400> 174

gatatccaga tgacacagat tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 60

atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tattttcagg agtcccatca 180

aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 240

gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 300

gggaccaagg tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540

ttgaccaagg acgaatatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gt 642

<210> 175 10 <211> 234

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 175 15

Met

Met

Ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys Phe Gin

1

5 10 15

Gly

Thr Arg Cys 20 Gly Asp lie Gin Met Thr 25 lie Gin lie Thr ser ser 30 Ser Leu Ser

Ala

Ser Leu 3S Asn ASp Arg val Ser 40 Tyr Ser Cys Arg Ala 45 Asp Gin Asp

He

ser 50 Leu Tyr Leu Asn Trp 55 Thr Gin Gin Lys Pro 60 Ser Gly Thr Phe

Lys 65 Arg

Leu He Phe Tyr 70 Gly ser Arg Leu Phe 75 Tyr Gly val Pro Ser 80 Tyr

Phe

ser Gly ser 85 Glu ser Gly Thr Asp 90 Tyr Ser Leu Thr lie 95 Gly

Asn

Leu Glu Gin 100 Tyr Asp Phe Ala Thr 105 Gly Phe Cys Gin Gin 110 lie Asp

Thr

Leu pro Thr Phe Gly Gly Thr Lys val Glu Lys Arg

115 120 125

Ala

Asp Ala Ala Pro Thr val ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gin

130 135 140

Leu 145 Pro

Thr ser Gly Gly Ala 150 val Ser val Val Cys Phe 155 ASp Leu Asn Asn Phe Tyr 160 Gin

Lys

Asp He Asn 165 Asn Lys Trp Lys He 170 Gin Gly Ser Glu Arg 175 Ser

Asn

Gly val Leu 180 ser ser Trp Thr Asp 185 Leu ASp Ser Lys Asp 190 Tyr Thr

Tyr

Ser Met Ser Thr Leu Thr Thr Lys Asp Glu Glu Arg

195 200 205 Thr

His

Asn Ser Tyr Thr cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Ser Pro

210 215 220

lie

val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu cys

225

230

<210> 176 <211> 702 20 <212> ADN

<213> Mus musculus

atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc gatatccaga tgacacagat tacatcctcc atcagttgca gggcaagtca agacattagc gatggaactt ttaaactcct tatcttctac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat gaagattttg ccacttactt ttgccaacag gggaccaagg tggaaataaa acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac

<210> 177 <211> 450 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 177

ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60 ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 120 aattatttaa attggtatca gcagaaacca 180 acatcaagat tattttcagg agtcccatca 240 tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 300 ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 360 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 aggaatgagt gt 702

Glu

Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro GlU Leu Met Lys Pro Gly Thr

1

5 10 15

Ser

val Lys Met 20 Trp Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gin Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Glu ASp Tyr

Asn

Met His val Lys Gin Thr Gly Lys Thr Leu Trp lie

35 40 45

Gly

Glu 50 Gly He Asn Pro Asn Ser 55 Thr Gly Gly Ala Gly Tyr 60 Ser Asn Gin Lys Phe

Lys 65 Met

Lys Ala Thr Leu 70 Leu val Asp Lys ser 75 Ser Thr Thr Ala Tyr 80 Cys

Glu

Leu Arg ser 85 Tyr Thr Ser Glu Asp 90 ASp Ala Val Tyr Tyr 95 ASp

Ala

Lys Leu Gly 100 Gly ASp Asp lie Tyr 105 val Asp Trp Tyr Phe 110 Thr val

Trp

Gly Ala Thr Thr val Thr ser ser Ala 3! Thr Ala

115

120

Pro

ser val Tyr Pro Leu Ala Pro val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser

130 135 140

Ser

val Thr Leu Gly Cys Leu val Lys Gly Phe pro Glu Pro val

145

150 160

Thr

Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu ser ser Asp val His Thr Phe

165 170 175

Pro

Ala Leu Leu Gin ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser val Thr

180 185 190

val

Thr Thr Trp Pro Ser Gin Thr lie Thr cys Asn val Ala His Pro

195 200 205

Ala

ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie Glu Pro Arg Gly Ser Pro

210 215 220

Thr

His Lys Pro Cys Pro Pro cys Pro Ala pro Asn Leu Leu Gly Gly

225

230 235 240

Pro

Ser val Phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp val Leu Met He

245 250 255

Ser

Leu Ser pro Met val Thr Cys val val Val Asp val Ser Glu Asp

260 265 270

Asp

pro Asp val His val Ser Trp phe val Asn Asn val Glu Val His

275 Gin 280 285

Thr

Ala Gin Thr Thr His Arg Glu ASp Tyr Asn Ser Thr He Arg

290 295 300

Val

val Ser Ala Leu Pro He Gin His Gin ASp Trp Met ser Gly Lys

305

310 315 320

Glu

phe Lys Cys Lys val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala pro lie

Glu

325 330 335

Arg

Thr lie Ser Lys Pro Lys

val

Leu Pro Pro Pro Glu Glu

355

Thr

cys Met lie Thr ASp Phe

370 375

Thr

Asn Asn Gly Gin Thr Glu

385

390

Leu

Asp Ser Asp Gly An*; Ser Tyr

Lys

Lys

Asn Trp 420 val Glu Arg

Glu

Gly Leu His Asn His His

435

Gly

Lys

450

<210> 178 <211> 1350 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 178

Gly

Pro 3d1? Val Arg Ala Pro Gin ■a ca val Tyr

Glu

J'rJ Met Thr Lys Lys Gin val Thr Leu

360

Glu 365

Met

Pro Asp lie 3 on Tyr Val Glu Trp

Leu

Asn Tyr Lys 3 Ov Asn Thr Glu Pro val

395 400

Phe

Met Tyr Ser Lys Leu Arg val Glu

410 415

Asn

Ser Tyr Ser cys Ser Val val His

425 430

Thr

Thr

Lys Ser Phe ser Arg Thr Pro

440

445

10

gaggtccaac

tcctgcaagg

caaggaaaga

aaccagaagt

atggagctcc

tacgatgata

gtctcctcag

acaactggct

accttgacct

cagtctggcc

atcacctgca

agagggtccc

ccatccgtct

atggtcacgt

ttcgtgaaca

agtactatcc

gagttcaaat

aaacccaaag

atgactaaga

tacgtggagt

ctggactctg

gtggaaagaa

actaagagct

tgcaacagtc

cttctggata

ccctagagtg

tcaagggcaa

gcagcctgac

tctacgacga

ccaaaacaac

cctcggtgac

ggaactctgg

tctacaccct

atgtggccca

caacacataa

tcatcttccc

gtgtggtggt

acgtggaagt

gggtggtcag

gcaaggtcaa

ggccagtaag

aacaggtcac

ggaccaacaa

atggttctta

atagctactc

tctcccggac

tggacctgaa

tacattcact

gataggagaa

ggccacattg

atctgaggac

ctggtatttc

agccccatcg

tctaggatgc

atccctgtcc

cagcagctca

cccggcaagc

accctgtcct

tccaaagatc

ggatgtgagc

acacacagct

tgccctcccc

caacaaagcc

agctccacag

tctgacctgc

cgggcaaaca

cttcatgtac

ctgttcagtg

tccgggtaaa

ctaatgaagc

gactacaaca

attaatccta

actgtagaca

tctgcagtct

gatgtctggg

gtctatccac

ctggtcaagg

agtgatgtgc

gtgactgtaa

agcaccaaag

ccatgcccag

aaggatgtac

gaggatgacc

cagacacaaa

atccagcacc

ctcccagcgc

gtatatgtct

atgatcacag

gagctaaact

agcaagctga

gtccacgagg

ctgggacttc

tgcactgggt

acagtggtgg

agtcctccac

attactgtgc

gcgcagggac

tggcccctgt

gttatttccc

acaccttccc

ccacctggcc

tggacaagaa

ctcctaacct

tcatgatctc

cagatgtcca

cccatagaga

aggactggat

ccatcgagag

tgcctccacc

acttcatgcc

acaagaacac

gagtggaaaa

gtctgcacaa

agtgaagatg 60 gaagcagacc 120 tgctggctac 180 cacagcctac 240 aaaattgggc 300 cacggtcacc 360 gtgtggagat 420 tgagccagtg 480 agctctcctg 540 cagccagacc 600 aattgagccc 660 cttgggtgga 720 cctgagcccc 780 tgtcagctgg 840 ggattacaac 900 gagtggcaag 960 aaccatctca 1020 agaagaagag 1080 tgaagacatt 1140 tgaaccagtc 1200 gaagaactgg 1260 tcaccacacg 1320 1350

<210> 179 <211> 469 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 179

Met

Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu 10 Ser Leu Ser Gly Thr Ala 15 Met Gly

val

Leu Ser Glu 20 Ser val Gin Leu Gin Gin 25 cys Gly Pro Glu Leu 30 Tyr Lys

Pro

Gly Thr 35 val Lys Met Ser 40 Lys Ala Ser Gly 45 Thr Phe

Thr

Asp 50 Trp Tyr Asn Met HIS Trp 55 Asn Val Lys Gin Thr Gin 60 Gly Gly Lys Thr Leu

Glu 65 Gin

lie Gly Glu lie 70 Lys Pro Asn Ser Gly 75 Val Ala Gly Tyr Asn 80 Thr

Lys

Phe Lys Gly 85 Glu Ala Thr Leu Thr 90 Thr Asp Lys Ser Ser 9S Ala

Thr

Ala Tyr Met 100 Leu Arg Ser Leu 105 Ser Glu Asp Ser 110 val

Tyr

Tyr

Cys 115 Val Ala Lys Leu Gly Tyr 120 Thr Asp Asp lie Tyr Asp 125 Ser Asp Trp

Tyr

Phe

Asp Trp Gly Ala Gly Thr Val Thr val Ser Ala Lys

130 135 140

Thr

Thr

Ala pro Ser val Tyr pro Leu Ala pro Val Cys Gly Asp

Thr

145

150 155 160

Thr

Gly ser Ser Val Thr Leu Gly cys Leu val Lys Gly Tyr Phe Pro

val Thr 165 Thr 170 175

Glu

Pro Leu Trp Asn Ser Gly ser Leu Ser Ser ASp Val

Phe 180 185 190

His

Thr pro Ala Leu Leu Gin Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser

195 200 205

Ser

val Thr Val Thr Thr Trp pro ser Gin Thr lie Thr cys Asn Val

210 Ala 215 220

Ala

His Pro ser Ser Thr Lys Val Asp Lys 235 Lys He Glu pro Arg

225

230 240

Gly

Ser pro Thr His 245 Ser Lys Pro cys Pro Pro 2 SO pro Cys Pro Ala pro Asn 255 ASp Leu

Leu

Gly Gly pro 260 ser val Phe lie Phe 265 Val pro Lys lie Lys 270 val val

Leu

Met lie Leu Ser pro Met Thr cys val val Asp val

275 280 285

Ser

Glu Asp Asp Pro Asp val His Val Ser Trp Phe val Asn Asn val

290 295 300

Glu

val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser

305

310 315 320

Thr

He Arg Val val 325 Phe Ser Ala Leu Pro lie 330 Asn Gin His Gin Asp Trp 335 Pro Met

Ser

Gly Lys Glu 340 Arg Lys cys Lys Val 345 Pro Asn Lys Ala Leu 350 Arg Ala

Pro

He Glu 355 Tyr Thr lie Ser Lys 360 pro Lys Gly Pro val 365 Thr Ala pro

Gin

val val Leu pro pro Glu Glu Glu Met Lys Lys

Gin

370 375 380

val

Thr Leu Thr Cys Met lie Thr ASp Phe Met pro Gl u ASp lie Tyr

385

390 395 400

val

Glu Trp Thr Asn Asn Gly Gin Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr

405 410 415

Glu

Pro val Leu 420 Lys Asp ser Asp Gly Ser 425 Glu Tyr Phe Met Tyr Ser 430 ser Lys Leu

Arg

val Glu Lys Asn Trp val Arg Asn Ser Tyr Cys ser

435 440 445

val

val

His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys ser Phe Ser

450 455 460

Arg

Thr pro Gly Lys

465

<210> 180 <211> 1407 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 180

atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60 gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg ggacttcagt gaagatgtcc 120 tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagacccaa ISO ggaaagaccc tagagtggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240 cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg 300 gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaaa attgggctac 360 gatgatatct acgacgactg gtatttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420 tcctcagcca aaacaacagc cccatcggtc tatccactgg cccctgtgtg tggagataca 480 actggctcct cggtgactct aggatgcctg gtcaagggtt atttccctga gccagtgacc 540 ttgacctgga actctggatc cctgtccagt gatgtgcaca ccttcccagc tctcctgcag 600 tctggcctct acaccctcag cagctcagtg actgtaacca cctggcccag ccagaccatc 660 acctgcaatg tggcccaccc ggcaagcagc accaaagtgg acaagaaaat tgagcccaga 720 gggtccccaa cacataaacc ctgtcctcca tgcccagctc ctaacctctt gggtggacca 780 tccgtcttca tcttccctcc aaagatcaag gatgtactca tgatctccct gagccccatg 840

gtcacgtgtg tggtggtgga tgtgagcgag gatgacccag atgtccatgt cagctggttc 900

gtgaacaacg tggaagtaca cacagctcag acacaaaccc atagagagga ttacaacagt 960

actatccggg tggtcagtgc cctccccatc cagcaccagg actggatgag tggcaaggag 1020

ttcaaatgca aggtcaacaa caaagccctc ccagcgccca tcgagagaac catctcaaaa 1080

cccaaagggc cagtaagagc tccacaggta tatgtcttgc ctccaccaga agaagagatg 1140

actaagaaac aggtcactct gacctgcatg atcacagact tcatgcctga agacatttac 1200

gtggagtgga ccaacaacgg gcaaacagag ctaaactaca agaacactga accagtcctg 1260

gactctgatg gttcttactt catgtacagc aagctgagag tggaaaagaa gaactgggtg 1320

gaaagaaata gctactcctg ttcagtggtc cacgagggtc tgcacaatca ccacacgact 1380

aagagcttct cccggactcc gggtaaa 1407

5

<210> 181 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus

10

<400> 181

Asp lie Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser ser Leu Ser Ala ser Leu Gly 15 10 15

Asp Arg val ser lie ser cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu lie 35 40 45

Phe Tyr Thr ser Arg Leu Leu ser Gly val Pro Ser Arg Phe ser Gly 50 55 60

ser Gly ser Gly Thr Asp Tyr ser Leu Thr lie Tyr Asn Leu Glu Gin

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr phe Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110

Pro Thr Val Ser lie phe pro Leu Ser ser Glu Gin Leu Thr ser Gly 115 120 125

Gly Ala Ser Val Val Cys phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp lie 130 135 140

Asn val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly val Leu

145 150 155 160

Asn ser Trp Thr Asp Gin Asp ser Lys Asp ser Thr Tyr ser Met Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr 180 185 190

Thr cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr ser Pro lie val Lys ser 195 200 205

Phe Asn Arg Asn Glu cys 210

15 <210> 182

<211> 645 <212> ADN

<400> 182

5

gatatccaga

atcagttgca

gatggaactt

aggttcagtg

gaagattttg

gggaccaaac

tccagtgagc

cccaaagaca

aacagttgga

ttgaccaagg

tcaacttcac

tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 60 gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca 180 gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 240 ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 300 tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacta 360 agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 645

<210> 183 <211> 234 <212> PRT

10 <213> Mus musculus

<400> 183

Met

Met

ser Ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gin

1

5 10 15

Gly

Thr Arg cys Asp lie Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala

ser Leu 35 Asn Gly Asp Arg val ser 40 Tyr lie Ser Cys Arg Ala 45 Asp Ser Gin Asp

lie

ser 50 Leu Tyr Leu Asn Trp 55 Thr Gin Gin Lys Pro 60 Ser Gly Thr Phe

Lys 65 Arg

Leu lie Phe Tyr 70 Gly ser Arg Leu Leu 75 Tyr Gly val Pro Ser 80 Tyr

phe

Ser Gly Ser 85 Glu Ser Gly Thr Asp 90 Tyr Ser Leu Thr lie 95 Gly

Asn

Leu Glu Gin Asp Phe Ala Thr Phe Cys Gin Gin Asp

100 105 110

Thr

Leu pro 115 Ala Tyr Thr Phe Gly Gly 120 Ser Gly Thr Lys Leu Glu 125 ser lie Lys Arg

Ala

Asp Ala Pro Thr Val He Phe Pro Leu Ser Glu Gin

130 135 140

Leu

Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

145

150 155 Glu 160

Pro

Lys ASp lie Asn 165 Asn Val Lys Trp Lys He 170 Gin Asp Gly Ser Arg Gin

Asn

Gly val Leu 180 Ser Ser Trp Thr ASp 185 Leu Asp Ser Lys ASp 190 Tyr X/ J ser Thr

Tyr

Ser Met 195 Ser Ser Thr Leu Thr 200 Ala Thr Lys Asp Glu 205 Ser Glu Arg

His

Asn Tyr Thr Cys Glu Thr His Lys Thr Thr Ser Pro

210 215 220

lie

val Lys ser Phe Asn Arg Asn Glu cys

225

230

15

<210> 184 <211> 705 <212> ADN <213> Mus musculus

atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60

gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagggtctcc 120

atcagttgca gggcaagtca agacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 180

gatggaactt ttaaactcct tatcttctac acatcaagat tactctcagg agtcccatca 240

aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccatttacaa cctggagcaa 300

gaagattttg ccacttactt ttgccaacag ggagatacgc ttccgtacac tttcggaggg 360

gggaccaaac tggaaataaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacta 420

tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480

cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540

aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600

ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660

tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac aggaatgagt gttag 705

<210> 185 <211> 447 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 185

Glu

val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys pro Gly Ala

1

5 10 15

Ser

val Lys Met 20 Trp Ser Cys Lys Ala ser 25 Gin Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Glu ASp Tyr

Asn

Met His 35 He Val Lys Gin Asn 40 Gly Gly Lys Thr Leu 45 Asn Trp lie

Gly

Glu 50 Asn Pro Asn Ser 55 Gly Ala Gly Tyr 60 Gin Lys Phe

8*

Gly Lys Ala Thr Leu 70 Thr val Asp Lys Ser 75 Ser Thr Thr Ala Tyr 80

Met

Glu Leu Arg Ser 85 Tyr Leu Thr Ser Glu Asp 90 Asp Ser Ala val Tyr Tyr 95 Asp Cys

Ala

Arg Leu Gly 100 Gly Asp ASp lie Tyr 105 val Asp Trp Tyr Phe 110 Thr val

Trp

Gly Ala 115 val Thr Thr val Thr 120 Pro Ser Ser Ala Lys 125 Gin Thr pro

Pro

ser Tyr Pro Leu Ala Gly Ser Ala Ala Thr Asn Ser

130 135 140

Met

val Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr phe Pro Glu Pro val

145

val Thr 150 155 160

Thr

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser ser Gly val His Thr Phe

165 170 175

Pro

Ala val Leu Gin Ser ASp Leu Tyr Thr Leu ser ser Ser val Thr

180 185 190

val

Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr cys Asn val Ala

195 200 205

His

Pro 210 Gly Ala Ser Ser Thr Lys 215 He Val Asp Lys Lys lie 220 Glu val Pro Arg ASp

Cys

cys Lys Pro cys Cys Thr Val Pro Val Ser Ser val

225

230 235 240

Phe

lie Phe Pro Pro 245 cys Lys Pro Lys Asp Val 250 He Leu Thr He Thr Leu 255 pro Thr

Pro

Lys Val Thr 260 Ser val Val Val Asp 265 Asp Ser Lys Asp Asp 270 Thr Glu

val

Gin Phe Trp Phe Val Asp val Glu val His Ala Gin

275 280 285

Thr

Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg Ser val Ser

290 295 300 Glu Phe

Glu

Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Lys

305

310 315 320

Cys

Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie

325 330 335

Ser

Lys Thr Lys Gly Arg pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr He Pro

340 345 350

Pro

Pro

Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr cys Met

355 360 365

lie

Thr ASp Phe Phe Pro Glu ASp lie Thr val Glu Trp Gin Trp Asn

370 375 380

Gly

Gin pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro He Met Asp Thr

385

390 395 400

Asp

Gly Ser Tyr Phe 405 Asn lie Tyr Ser Lys Leu 410 ser Asn Val Gin Lys ser 415 Gly Asn

Trp

Glu Ala Gly 420 His Thr Phe Thr Cys Val Leu His Glu 430 Gly Leu

His

Asn His Thr Glu Lys Ser Leu ser His Ser Pro Lys

435 440 445

<210> 186 <211> 1344 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

gaggtccaac tgcaacagtc tggacctgaa ctaatgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60

tcctgcaagg cttctggata tacattcact gactacaaca tgcactgggt gaagcagaac 120

caaggaaaga ccctagaatg gataggagaa attaatccta acagtggtgg tgctggctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccac cacagcctac 240

atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagattgggc 300

tacgatgata tctacgacga ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360

gtctcctcag ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420

caaactaact ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480

acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540

cagtctgacc tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600

gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660

gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720

ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780

tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840

gatgtggagg tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900

cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960

tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020

ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080

gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140

tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200

gatggctctt acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260

aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 1320

ctctcccact ctcctggtaa atga 1344

<210> 187 5 <211>466

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 187

10

Met

Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1

S 10 15

val

Leu ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys

20 25 30

Pro

Gly Ala 35 Tyr Ser val Lys Met ser 40 val Cys Lys Ala Ser Gly 45 Gly Tyr Thr Phe

Thr

Asp 50 Trp Asn Met His Trp 55 Asn Lys Gin Asn Gin 60 Gly Lys Thr Leu

Glu

He Gly Glu He pro Asn Ser Gly Ala Gly Tyr Asn

65

70 75 80

Gin

Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr val Asp Lys Ser ser Thr

85 90 95

Thr

Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr

Tyr

Cys 115 val Ala Arg Leu Gly Tyr 120 Thr ASp Asp He Tyr ASP 125 Ser Asp Trp

Tyr

Phe

Asp 130 Thr Trp Gly Ala Gly 135 Tyr Thr val Thr Val 140 Gly Ser Ala Lys

Thr

Pro Pro ser val pro Leu Ala Pro Ser Ala Ala Gin

145

150 155 160

Thr

Asn Ser Met val 165 val Thr Leu Gly cys Leu 170 Gly val Lys Gly Tyr phe 175 Gly Pro

Glu

Pro val Thr 180 pro Thr Trp Asn Ser 185 Ser ser Leu Ser ser 190 Leu Val

His

Thr Phe Ala val Leu Gin Asp Leu Tyr Thr ser Ser

195 200 205

Ser

val Thr val Pro Ser Ser Thr Trp pro Ser Glu Thr val Thr Cys

210 215 220

Asn

val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys lie Val

225

230 235 240

Pro

Arg Asp Cys Gly 245 He Cys Lys pro Cys lie 250 Pro Cys Thr val pro Glu 255 Thr val

Ser

ser val Phe Phe pro Pro Lys Lys Asp val Leu lie

260 265 270

Thr

Leu Thr Pro Lys val Thr Cys val val val Asp He Ser Lys Asp

275 280 285

Asp

Pro 290 Ala Glu val Gin Phe ser 295 Arg Trp Phe val Asp ASP 300 Asn val Glu val His

Thr

Gin Thr Gin Pro Glu Glu Gin Phe Ser Thr phe Arg

305

310 315 320

Ser

val Ser Glu Leu 325 Arg Pro He Met His Gin 330 Ala ASp Trp Leu Asn Gly 335 lie Lys

Glu

phe Lys Cys val Asn ser Ala Phe Pro Ala pro

Glu

340 345 350

Lys

Thr He Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin val Tyr

355 Glu 360 365

Thr

lie Pro Pro Pro Lys Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu

370 375 380

Thr

cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp He Thr Val Glu Trp

385

390 395 400

Gin

Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie

405 410 415

Met

Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe lie Tyr Ser Lys Leu Asn val Gin

420 425 430

Lys

Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser val Leu His

435 440 445

Glu

Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His ser pro

450 455 460

Gly 465

Lys

<210> 188 <211> 1401 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 188

atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60

gtccaactgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120

tgcaaggctt ctggatatac attcactgac tacaacatgc actgggtgaa gcagaaccaa 180

ggaaagaccc tagaatggat aggagaaatt aatcctaaca gtggtggtgc tggctacaac 240

cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccaccac agcctacatg 300

gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360

gatgatatct acgacgactg gtacttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420

tcctcagcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480

actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540

gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600

tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660

accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720

cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780

atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840

gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900

gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960

tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020

agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080

agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140

aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200

cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260

ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320

actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380

tcccactctc ctggtaaatg a 1401

<210> 189 5 <211> 213

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 189

10

Gin

lie Val Leu Ser Gin Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val ser Pro Gly

1

5 10 15

ASp

Lys val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser He ser Tyr He

20 25 30

His

Trp Phe 35 ser Gin Gin Lys Pro Gly 40 Gly Ser Ser Pro Arg Ser 45 Phe Trp He Tyr

Ala

Thr 50 ser Asn Leu Ala Ser 55 ser val Pro Gly Arg 60 Arg Ser Gly ser

Gly 65 Asp

Gly Thr Ser Tyr 70 Tyr Leu Thr lie Ser 75 Ser val Glu Ala Glu 80 Thr

Ala

Ala

Thr Tyr 85 Thr cys Gin Gin Trp 90 Lys Ser Asp pro Leu 95 Ala

Phe

Gly Ala Gly 100 He Lys Leu Glu Leu 105 ser Arg Ala Asp Ala 110 Ser Pro

Thr

val ser Phe pro Pro Ser Glu Gin Leu Thr Gly Gly

115 120 125

Ala

Ser val val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys ASp He Asn

130 135 140

val

Lys Trp Lys lie ASp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly val Leu Asn

145

Thr 150 155 160

ser

Trp Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met ser Ser

165 170 175

Thr

Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

Thr

Ala 180 185 190

Cys

Glu Thr His Lys Thr ser Thr Ser Pro lie val Lys Ser Phe

195 200 205

Asn

Arg Asn Glu cys

210

<210> 190

<211> 642 <212> ADN <213> Mus musculus

5 <400> 190

caaattgttc tctcccagtc tccagcattc ctgtctgtat ctccagggga taaggtcaca 60

atgacttgca gggccagctc aagtataagt tacatacact ggtttcagca gaagccagga 120

tcctccccca gatcctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctggtcgc 180

ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgag 240

gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtgacc cactcacgtt cggtgctggg 300

accaagctgg agctgaaacg ggctgatgct gcaccaactg tatccatctt cccaccatcc 360

agtgagcagt taacatctgg aggtgcctca gtcgtgtgct tcttgaacaa cttctacccc 420

aaagacatca atgtcaagtg gaagattgat ggcagtgaac gacaaaatgg cgtcctgaac 480

agttggactg atcaggacag caaagacagc acctacagca tgagcagcac cctcacgttg 340

accaaggacg agtatgaacg acataacagc tatacctgtg aggccactca caagacatca 600

acttcaccca ttgtcaagag cttcaacagg aatgagtgtt ag 642

<210> 191 10 <211> 235

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 191 15

Met

Asp Phe Gin Val Gin He Phe Ser Phe Leu Leu lie Ser Ala Ser

1

5 10 15

val

lie Met ser 20 Ser Arg Gly Gin lie val 25 val Leu Ser Gin ser Pro 30 Cys Arg Ala Phe

Leu

Ser val Pro Gly Asp Lys Thr Met Thr Ala ser

35 40 Gin 45

Ser

ser 50 Arg He ser Tyr lie His 55 Ala Trp Phe Gin Lys 60 Ala Pro Gly ser ser

Pro 65 Gly

Ser Trp lie Tyr 70 Gly Ser 85 Ala Glu Thr ser Asn Leu 75 Ser ser Gly val Pro 80 He

Arg

Phe Ser Gly Ser Gly Thr 90 Thr Tyr Ser Leu Thr 95 Gin

ser

Arg val Glu 100 Pro Asp Ala Ala 105 Ala Tyr Tyr Cys Gin 110 Leu Glu 125 Pro ser Trp

Ser

ser Asp 115 Asp Leu Thr Phe Gly 120 val Gly Thr Lys Leu Lys

Arg

Ala Ala Ala Pro Thr Ser lie Phe Pro ser Glu

130

135 140

Gin

Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser val val cys Phe Leu Asn Asn Phe

145

150 155 160

Tyr

Pro Lys Asp lie Asn val Lys Trp Lys lie Asp Gly ser Glu Arg

val 180 Met 165 Thr 185 Thr 170 Gin 175

Gin

Asn Gly Leu Asn Ser Trp Asp Asp Ser Lys 190 ASP Glu 205 Thr ser Asp Ser

Thr

Tyr ser 195 Asn Ser ser Thr Leu 200 Glu Leu Thr Lys Tyr Glu

Arg

His Ser Tyr'Thr Cys Ala Thr His Lys Thr ser

210

215 220

pro

lie val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

225

230 235

<210> 192 <211> 708 20 <212> ADN

<213> Mus musculus

atggattttc aagtgcagat tttcagcttc agaggacaaa ttgttctctc ccagtctcca gtcacaatga cttgcagggc cagctcaagt ccaggatcct cccccagatc ctggatttat ggtcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc gctgaggatg ctgccactta ttactgccag gctgggacca agctggagct gaaacgggct ccatccagtg agcagttaac atctggaggt taccccaaag acatcaatgt caagtggaag ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa acgttgacca aggacgagta tgaacgacat acatcaactt cacccattgt caagagcttc

<210> 193 <211> 445 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 193

ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcc 60 gcattcctgt ctgtatctcc aggggataag 120 ataagttaca tacactggtt tcagcagaag 180 gccacatcca acctggcttc tggagtccct 240 tcttactctc tcacaatcag cagagtggag 300 cagtggagta gtgacccact cacgttcggt 360 gatgctgcac caactgtatc catcttccca 420 gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 480 attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 540 gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 600 aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 660 aacaggaatg agtgttag 708

Gill 1

Val Gin Leu Gin 5 Gin Ser Gly Ala Asp 10 Leu Val Gin Pro Gly 15 Ala

ser

val Lys val 20 Trp Ser cys Thr Ala Ser 25 Pro Gly Phe Asp He Lys 30 Glu ASp Tyr

Tyr

He His 35 val Met Lys Gin Arg 40 Gly ASp Gin Gly Leu 45 Ala Trp He

Gly

Arg 50 Gly Asp Pro Asp Asn 55 Thr Glu Thr Glu Phe 60 Ser pro Lys Phe

pro 65 Leu

Lys Ala Thr Phe 70 Leu Thr Asp Thr Ser 75 Thr Asn Thr Ala Tyr 80 cys

Gin

Leu Arg Gly 85 Tyr Thr ser Glu ASp 90 Thr Ala He Tyr 9?P

Gly

Arg Glu ASp 100 Asp Gly Thr Tyr 105 Trp Phe Pro Tyr 110 Trp

Gly

Gin

Gly Thr 115 Leu val Thr Val ser 120 Ala Ala Lys Thr Thr 125 pro pro Ser

Val

Tyr 130 Pro Leu Ala Pro Gly 135 ser Ala Ala Gin Thr 140 Asn ser Met val

Thr 145

Leu Gly Cys Leu Val 150 Lys Gly Tyr Phe pro 155 Glu Pro val Thr val 160

Thr

Trp Asn Ser Gly 165 ASp Ser Leu ser Ser Gly 170 Ser Val His Thr Phe pro 175 val Ala

Val

Leu Gin ser 180 Leu Tyr Thr Leu 185 ser ser val Thr 190 Pro

Ser

Ser

Thr 195 Trp Pro ser Glu Thr 200 Val Thr cys Asn val 205 Ala His pro

Ala

ser 210 Lys Ser Thr Lys val Asp 215 Thr Lys Lys. He val Pro 220 ser Arg ASp cys Gly

Cys 225

Pro cys He cys 230 val Pro Glu val 235 Ser Val Phe He 240

Phe

Pro Pro Lys Pro 245 Lys Asp val Leu Thr 250 lie Thr Leu Thr Pro 255 Lys

Val

Thr Cys val 260 val val Asp He Ser 265 Lys Asp Asp Pro Glu 270 Val Gin

Phe

ser Trp 275 Phe val ASp ASp val 280 Glu val His Thr Ala 285 Gin Thr Gin

Pro

Arg 290 Glu Glu Gin Phe Asn 295 ser Thr Phe Arg Ser 300 Val ser Glu Leu

Pro 305

lie Met His Gin Asp 310 Trp Leu Asn Gly Lys 315 Glu Phe Lys Cys Arg 320

Val

Asn ser Ala Ala 325 Phe pro Ala Pro He 330 Glu Lys Thr He Ser 335 Lys

Thr

Lys Gly Arg 340 pro Lys Ala pro Gin 345 val Tyr Thr He pro 350 pro Pro

Lys

Glu Gin 355 phe Met Ala Lys Asp Lys 360 Thr Val Ser Leu Thr Cys Met 365 Trp Asn lie Thr

Asp

Phe 370 Ala pro Glu Asp lie 375 Asn Val Glu Trp Gin 38Q Met Gly Gin

Pro

Glu Asn Tyr Lys Thr Gin Pro He Asp Thr Asp Gly

385

lie 390 395 400

Ser

Tyr phe Tyr ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser Asn Trp Glu

405 410 415

Ala

Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn

420 425 430

His

His

Thr Glu Lys Ser Leu ser His Ser pro Gly Lys

435 440 445

<210> 194 <211> 1338 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 194

10

gaagttcagc tgcaacagtc tggggcagac cttgtgcagc caggggcctc agtcaaggtg 60

tcctgcacag cttctggctt cgacattaag gactactata tacactggat gaaacagagg 120

cctgaccagg gcctggagtg gattggaagg gttgatcctg acaatggtga gactgaattt 180

gccccgaagt tcccgggcaa ggccactttt acaacagaca catcctccaa cacagcctac 240

ctacaactca gaggcctgac atctgaggac actgccatct attactgtgg gagagaagac 300

tacgatggta cctacacctg gtttccttat tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360

gcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 420

aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 480

acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 540

gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 600

gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 660

agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 720

ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 780

gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 840

gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 900

gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 960

gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 1020

ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 1080

gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 1140

tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 1200

tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 1260

ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 1320

cactctcctg gtaaatga 1338

<210> 195 <211> 464 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 195

Met

Lys cys ser Trp val lie Phe Phe Leu Met Ala val val Thr Gly

1

5 10 15

val

Asn ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Asp Leu val Gin

Gly 20 25 30

pro

Ala 35 Tyr ser Val Lys val ser 40 Met Cys Thr Ala Ser Gly 45 Asp Phe Asp He

Lys

Asp 50 Tyr lie His Trp 55 Asp Lys Gin Arg Pro 60 Glu Gin Gly Leu

Glu 65

Trp lie Gly Arg val 70 Lys Pro Asp Asn Gly 75 Thr Thr Glu Phe Ala 80 Asn

Pro

Lys Phe Pro Gly 85 Gin Ala Thr Phe Thr 90 Thr Asp Thr Ser Ser 95 Ala

Thr

Ala Tyr Leu Leu Arg Gly Leu Ser Glu Asp Thr He

100 105 110

Tyr

Tyr

cys 115 Gly Gly Arg Glu Asp Tyr 120 Val Asp Gly Thr Tyr Thr 125 Ala Trp Phe Pro

Tyr

Trp 130 Gin Gly Thr Leu 135 Thr val Ser Ala 140 Lys Thr Thr

Pro

Pro

ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly ser Ala Ala Gin Thr Asn

145

val 150 155 160

Ser

Met Thr Leu Gly cys Leu Val Lys Gly Tyr phe Pro Glu pro

165 170 175

val

Thr val Thr Trp Asn ser Gly ser Leu Ser Ser Gly val His Thr

Ala 180 185 190

Phe

pro Val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser ser Ser Val

195 200 205

rhr

val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val

210 215 220

Ala

His pro Ala ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys He val Pro Arg

225

Gly 230 235 240

Asp

cys cys Lys 245 Pro Pro cys He Cys Thr 250 Asp Val Pro Glu val Ser 255 Thr ser

val

Phe lie Phe Pro Lys pro Lys val Leu Thr lie Leu

260 265 270

Thr

Pro Lys 275 Gin val Thr cys val Val 280 Val val ASP lie ser !M val Asp Asp pro

Glu

Val 290 Thr Phe Ser Trp Phe 295 Glu Asp Asp val Glu 300 Thr His Thr Ala

Gin

Gin

Pro Arg Glu Gin Phe Asn Ser Phe Arg Ser Val

305

310 315 320

Ser

Glu Leu Pro lie Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe

325 330 335

Lys

cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr

340

345 350

He

Ser Lys 355 Thr Lys Gly Arg Pro 360 Ala Lys Ala Pro Gin val 365 ser Tyr Thr lie

Pro

Pro

jjj pro Lys Glu Gin Met Lys Asp Lys val Leu Thr cys

370 375 380

Met

lie Thr Asp Phe phe pro Glu Asp lie Thr val Glu Trp Gin Trp

385

390 395 400

Asn

Gly Gin Pro Ala 405 Tyr Glu Asn Tyr Lys Asn 410 Lys Thr Gin Pro lie Met 415 Lys ASp

Thr

Asp Gly ser 420 Ala phe lie Tyr Ser 425 Thr Leu Asn val Gin 430 His Ser

Asn

Trp Glu 435 Asn Gly Asn Thr Phe 440 Lys cys Ser Val Leu 445 ser Glu Gly

Leu

His His His Thr Glu ser Leu ser His Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 196 <211> 1395 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 196

5

10

atgaaatgca gctgggtcat cttcttcctg gttcagctgc aacagtctgg ggcagacctt tgcacagctt ctggcttcga cattaaggac gaccagggcc tggagtggat tggaagggtt ccgaagttcc cgggcaaggc cacttttaca caactcagag gcctgacatc tgaggacact gatggtacct acacctggtt tccttattgg gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc gtgcacacag ctcagacgca accccgggag agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaggctccac aggtgtacac cattccacct agtctgacct gcatgataac agacttcttc

aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac tacttcatct acagcaagct caatgtgcag acctgctctg tgttacatga gggcctgcac tctcctggta aatga

<210> 197 <211> 214 <212> PRT <213> Mus musculus

atggcagtgg ttacaggggt caattcagaa 60 gtgcagccag gggcctcagt caaggtgtcc 120 tactatatac actggatgaa acagaggcct 180 gatcctgaca atggtgagac tgaatttgcc 240 acagacacat cctccaacac agcctaccta 300 gccatctatt actgtgggag agaagactac 360 ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 420 ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 480 ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 540 cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 600 ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 660 accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 720 gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 780 actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 840 cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 900 gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 960 ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 1020 aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 1080 cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 1140 cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 1200

actcagccca tcatggacac agatggctct 1260 aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 1320 aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 1380

1395

<400> 197

ASp

Leu Gin Met Thr Gin Thr Thr Ser Ser Leu ser Ala Ser Leu Gly

1

5 10 15

Asp

Arg val Thr 20 Tyr lie Ser cys Arg Ala 25 Asp Ser Gin Asp He Ser 30 Leu Asn Tyr

Leu

Asn Trp 35 Thr Gin Gin Lys Pro 40 Ser Gly Thr Val Lys 45 Arg Leu lie

Phe

Tyr 50 Gly ser Thr Leu Gin 55 Tyr Gly val Pro ser 60 Thr Phe Ser Gly

ser

ser

Gly Thr Asn Ser Leu Thr lie Asn Leu Glu Gin

65

Ala Thr 85 Gly 70 75 80

Asp

Asp

Ala Tyr Phe Cys Gin Gin 90 lie Gly ASp Thr Leu pro 95 Ala Tyr

Thr

Phe Gly Gly 100 Ser Thr Lys Leu Glu 105 Ser Lys Arg Ala Asp 110 Thr Ala

Pro

Thr val lie Phe Pro pro Ser Glu Gin Leu Ser Gly

115 120 125

Gly

Ala 130 val ser Val val Cys Phe 135 Asp Leu Asn Asn Phe Tyr 140 Gin Pro Lys Asp lie

Asn

Lys Trp Lys lie Gly ser Glu Arg Asn Gly val Leu

145

150 155 160

Asn

ser Trp Thr Asp 165 Leu Gin Asp Ser Lys Asp 170 Tyr Ser Thr Tyr Ser Met 175 Ser Ser

Ser

Thr Leu Thr Thr Lys ASp Glu Glu Arg His Asn Tyr

180 185 190

Thr

Cys Glu Ala Thr His Lys Thr ser Thr Ser Pro He val Lys Ser

195 200 205

Phe

Asn Arg Asn Glu cys

210

<210> 198 <211> 645 <212>ADN <213> Mus musculus

<400> 198

gatctccaga tgacacagac tacttcctcc atcagttgca gggcaagtca ggacattagc gatggaactg ttaagctcct gatcttctac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacaaat gatgatgctg ccacttactt ttgccaacag gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac

5 <210> 199

<211> 234 <212> PRT <213> Mus musculus

10 <400> 199

ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 acatcaacat tacagtcagg agtcccatcg 180 tattctctca ccattaccaa cctggagcaa 240 ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 360 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 420 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 540 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 600 aggaatgagt gttag 645

Met 1

Met Ser Ser Ala 5 Gin Phe

Gly

Ser Arg Cys Asp Leu Gin

20

Ala

Ser Leu Gly Asp Arg Val

lie

Ser J -J Asn Tyr Leu Asn Trp

50 55

Lys

Leu Leu He Phe Tyr Thr

65

70

Arg

Phe Ser Gly Ser R5 Gly Ser

Asn

Leu Glu Gin OJ ASp Asp Ala

100

Thr

Leu Pro Tyr Thr Phe Gly

115

Ala

Asp Ala Ala Pro Thr Val

130 135

Leu

Thr ser Gly Gly Ala Ser

145

150

Pro

Lys ASp lie Asn val Lys

Asn

Gly val Leu i Rn iUJ Asn ser Trp

Tyr

ser Met xou Ser Ser Thr Leu

195

His

Asn Ser Tyr Thr cys Glu

210 215

He

val Lys Ser Phe Asn Arg

225

230

<210> 200 15 <211> 705

<212> ADN <213> Mus musculus

Leu

Gly Leu 10 Gin Leu Leu Leu cys Phe 15 Leu Gin

Met

Thr Thr Thr ser ser Ser

Thr

25 - 30

lie

ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp

40

45

Tyr

Gin Gin Lys Pro 60 ser Asp Gly Thr Val

ser

Thr Leu Gin Gly Val pro Ser

75 80

Gly

Thr Asn Tyr ser Leu Thr lie Thr

90 95

Ala

Thr 105 Gly Tyr Phe Cys Gin Gin 110 He Gly Asp

Gly 120 ser

Thr Lys Leu Glu 125 ser Lys Arg

He

Phe Pro Pro Ser Glu Gin

140

val

val

cys Phe 155 Asp Leu Asn Asn Phe Tyr 160 Gin

Trp

Lys He 170 Gin Gly ser Glu Arg 175 Ser

Thr

Asp 185 Leu Asp ser Lys Asp 190 Tyr

Thr

Thr

Thr

Lys Asp Glu Glu Arg

200

205

Ala

Thr His Lys Thr ser Thr Ser Pro

220

Asn

Glu cys

atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc gatctccaga tgacacagac tacttcctcc atcagttgca gggcaagtca ggacattagc gatggaactg ttaagctcct gatcttctac aggttcagtg gcagtgggtc tggaacaaat gatgatgctg ccacttactt ttgccaacag gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc cccaaagaca tcaatgtcaa gtggaagatt aacagttgga ctgatcagga cagcaaagac ttgaccaagg acgagtatga acgacataac tcaacttcac ccattgtcaa gagcttcaac

ctgttgctct gttttcaagg ttccagatgt 60 ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 120 aattatttaa actggtatca gcagaaacca 180 acatcaacat tacagtcagg agtcccatcg 240 tattctctca ccattaccaa cctggagcaa 300 ggtgatacgc ttccgtacac gttcggaggg 360 gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac 480 gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 540 agcacctaca gcatgagcag caccctcacg 600 agctatacct gtgaggccac tcacaagaca 660 aggaatgagt gttag 705

<210> 201 <211> 447 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 201

10

Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro 15 10

Ser val Lys Met ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30

Asn Met His Trp Met Lys Gin Asn Gin Gly Lys Ser Leu Glu 35 40 45

Gly Glu lie Asn Pro Asn ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gin 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr val Asp Lys ser ser ser Thr 65 70 75

Met Glu Leu Arg ser Leu Thr ser Glu Asp ser Ala val Tyr 85 90

Ala Arg Leu Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe 100 105 110

Gly

Ala

15

Asp

Tyr

Trp

He

Lys

Phe

Ala

Tyr

80

Tyr

Cys

95

Asp

val

Trp

Gly Ala 115 Gly Thr Thr val Thr 120

pro

ser 130 Val Tyr Pro Leu Ala 135

pro

Met 145

val Thr Leu Gly Cys 150 Leu val

Thr

val Thr Trp Asn 165 Gin ser Gly ser

Pro

Ala val Leu 180 Ser Ser Asp Leu

Val

Pro ser 195 Thr Trp Pro Ser 200

His

Pro 210 Ala Ser Ser Thr Lys 215 val

cys 225

Gly Cys Lys Pro cys 230 lie cys

Phe

lie Phe Pro Pro 245 Cys Lys Pro Lys

pro

Lys val Thr 260 Val Val val

val

Gin Phe 275 Ser Trp Phe val ASp 280

Thr

Gin 290 Pro Arg Glu Glu Gin 295 phe

Glu 305

Leu Pro He Met His 310 Gin ASp

Cys

Arg val Asn ser 325 Gly Ala Ala Phe

ser

Lys Thr Lys 340 Glu Arg Pro Lys

pro

Pro Lys 355 Gin Met Ala Lys 360

He

Thr 370 Asp Phe Phe Pro Glu 375 Asp

Gly 385

Gin pro Ala Glu Asn 390 Tyr Lys

ASp

Gly ser Tyr Phe 405 Asn lie Tyr ser

Trp

Glu Ala Gly 420 His Thr Phe Thr

His

Asn His 435 Thr Glu Lys Ser 440

Val Ser ser Ala Lys 125

Gly ser Ala Ala Gin 140

Lys Gly Tyr Phe Pro 155

Leu Ser Ser Gly Val 170

Tyr Tbr Leu ser ser 185

Glu Thr val Thr cys 205

Asp Lys Lys lie Val 220

Thr val Pro Glu val 235

Asp Val Leu Thr lie 250

Asp lie ser Lys Asp 265

Asp val Glu Val His 285

Asn ser Thr Phe Arg 300

Trp Leu Asn Gly Lys

Pro Ala Pro lie Glu 330

Ala Pro Gin val Tyr 345

Asp Lys val ser Leu 365

He Thr val Glu Trp 380

Asn Thr Gin Pro He 395

Lys Leu Asn Val Gin 410

cys ser val Leu His 425

Leu ser His ser Pro 445

Thr

Thr

pro

Thr

Asn ser

Glu

Pro val

160

His

Thr Phe

175

ser

val Thr

190

Asn

val Ala

Pro

Arg ASP

ser

ser

val

240

Thr

Leu

Thr

255

ASp

pro Glu

270

Thr

Ala Gin

ser

val Ser

Glu

phe 33

Lys

Thr lie

335

Thr

lie Pro

350

Thr

cys Met

Gin

Trp Asn

Met

Asp Thr

400

Lys

ser Asn

415

Glu

Gly Leu

430

Gly

Lys

<210> 202 <211> 1344 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 202

gaggtccagt tcctgcaagg caaggaaaga aaccagaagt atggagctcc tactatggta gtctcctctg caaactaact acagtgacct cagtctgacc gagaccgtea gtgcccaggg ttcatcttcc tgtgttgtgg gatgtggagg cgetcagtca tgcagggtca ggcagaccga

tgcaacagtc tggacctgaa etaatgaage ctggggcttc agtgaagatg 60 cttctggata cacattcact gactacaaca tgcactggat gaagcagaac 120 gcctagagtg gataggagag attaatecta acagtggtgg ttctggttac 180 tcaaaggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcctac 240 gcagcctgac atetgaggae tetgeagtet attactgtgc aagattgggc 300 actacgagga ctggtatttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360 ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc 420 ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg 480 ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg 540 tctacactct gageagetea gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc 600 cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt 660 attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc 720 ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 780 tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 840 tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 900 gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 960 acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag 1080

gataaagtea gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 1140 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 1200 gatggetett acttcatcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 1260 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagage 1320 ctctcccact ctcctggtaa atga 1344

<210> 203 <211> 466 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 203

Met i

Gly Trp Ser Trp Thr Phe Leu Phe Leu 10 Ser Leu Ser Gly Thr Ser 15 Met Gly

val

Leu Ser Glu Val Gin Leu Gin Gin Gly Pro Glu Leu Lys

20 25 30

Pro

Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

Thr

35 40 45

Asp 50 Trp

Tyr Asn Met His Trp 55 Asn Met Lys Gin Asn Gin 60 Gly Gly Lys Ser Leu

Glu 65 Gin

lie Gly Glu lie 70 Lys Pro Asn Ser Gly 75 Val Ser Gly Tyr Asn 80 ser

Lys

Phe Lys Gly 85 Glu Ala Thr Leu Thr 90 Thr Asp Lys ser Ser 95 Ala

Thr

Ala Tyr Met Leu Arg Ser Leu Ser Glu Asp ser val

100 105 110

Tyr

Tyr

Cys 115 val Ala Arg Leu Gly Tyr i?n Tyr Gly Asn Tyr Glu 125 Ser Asp Trp

Tyr

phe

Asp 130 Thr Trp Gly Ala Gly 135 Tyr j.£v Thr Thr Val Thr val 140 Gly Ser Ala Lys

Thr

Pro pro ser val pro Leu Ala pro Ser Ala Ala Gin

145

150 155 160

Thr

Asn Ser Met val Thr Leu Gly Cys Leu val Lys Gly Tyr Phe pro

165 170 175

Glu

Pro val Thr val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser ser Gly Val

180 185 190

His

Thr Phe pro Ala val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser

195 200 205

Ser

val Thr val pro ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr cys

210 215 220

Asn

val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val ASp Lys Lys lie val

225

230 235 240

Pro

Arg Asp Cys Gly 245 lie Cys Lys pro cys He 250 Pro Cys Thr val pro Glu 255 Thr val

ser

Ser val Phe Phe Pro Pro Lys Lys Asp Val Leu lie

260 265 270

Thr

Leu Thr pro Lys val Thr Cys val Val val Asp lie Ser Lys Asp

275 280 285

Asp

pro Glu val Gin Phe ser Trp Phe val Asp Asp val Glu val His

290

295 300

Thr

Ala Gin Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg

305

310 315 320

Ser

val Ser Glu Leu 325 Arg Pro He Met His Gin 330 Ala ASp Trp Leu Asn Gly 335 He Lys

Glu

Phe Lys Cys val Asn Ser Ala Phe Pro Ala pro

Glu

340 345 350

Lys

Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala pro Gin Val Tyr

355 360 365

Thr

lie Pro Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys val Ser Leu

370 375 380

Thr

Cys Met lie Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr val Glu Trp

385

390 395 400

Gin

Trp Asn Gly Gin 405 Gly Pro Ala Glu Asn Tyr 410 Tyr Lys Asn Thr Gin Pro 415 val lie

Met

Asp Thr Asp Ser Tyr Phe lie Ser Lys Leu Asn Gin

420 425 430

Lys

Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr cys Ser Val Leu His

435 440 445

Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys ser Leu Ser His ser Pro 450 455 460

Gly Lys 465

<210> 204 <211> 1401 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 204

atgggatgga gctggacctt tctcttcctc ctgtcaggaa cttcgggtgt cctctctgag 60

gtccagttgc aacagtctgg acctgaacta atgaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc 120

tgcaaggctt ctggatacac attcactgac tacaacatgc actggatgaa gcagaaccaa 180

ggaaagagcc tagagtggat aggagagatt aatcctaaca gtggtggttc tggttacaac 240

cagaagttca aaggcaaggc cacattgact gtagacaagt cctccagcac agcctacatg 300

gagctccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag attgggctac 360

tatggtaact acgaggactg gtatttcgat gtctggggcg cagggaccac ggtcaccgtc 420

tcctctgcca aaacgacacc cccatctgtc tatccactgg cccctggatc tgctgcccaa 480

actaactcca tggtgaccct gggatgcctg gtcaagggct atttccctga gccagtgaca 540

gtgacctgga actctggatc cctgtccagc ggtgtgcaca ccttcccagc tgtcctgcag 600

tctgacctct acactctgag cagctcagtg actgtcccct ccagcacctg gcccagcgag 660

accgtcacct gcaacgttgc ccacccggcc agcagcacca aggtggacaa gaaaattgtg 720

cccagggatt gtggttgtaa gccttgcata tgtacagtcc cagaagtatc atctgtcttc 780

atcttccccc caaagcccaa ggatgtgctc accattactc tgactcctaa ggtcacgtgt 840

gttgtggtag acatcagcaa ggatgatccc gaggtccagt tcagctggtt tgtagatgat 900

gtggaggtgc acacagctca gacgcaaccc cgggaggagc agttcaacag cactttccgc 960

tcagtcagtg aacttcccat catgcaccag gactggctca atggcaagga gttcaaatgc 1020

agggtcaaca gtgcagcttt ccctgccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggc 1080

agaccgaagg ctccacaggt gtacaccatt ccacctccca aggagcagat ggccaaggat 1140

aaagtcagtc tgacctgcat gataacagac ttcttccctg aagacattac tgtggagtgg 1200

cagtggaatg ggcagccagc ggagaactac aagaacactc agcccatcat ggacacagat 1260

ggctcttact tcatctacag caagctcaat gtgcagaaga gcaactggga ggcaggaaat 1320

actttcacct gctctgtgtt acatgagggc ctgcacaacc accatactga gaagagcctc 1380

tcccactctc ctggtaaatg a 1401

5 <210> 205

<211> 215 <212> PRT <213> Mus musculus

10 <400> 205

Gin

He val Leu Thr Gin ser Pro Ala He Met Ser Ala Ser pro Gly

1

5 10 15

Glu

Lys val Thr 20 Trp Met Thr cys Arg Ala 25 Pro ser Ser Ser val Thr 30 Lys ser Ser

Tyr

Leu Asn 35 Ser Tyr Gin Gin Lys 40 Ala Gly Ser ser Pro 45 Ala Leu Trp

lie

Tyr 50 ser Thr ser Asn Leu 55 ser Ser Gly val Pro 60 lie Arg Phe Ser

Gly

Gly

Ser Gly Thr Tyr ser Leu Thr ser Ser val Glu

65

70 75 80

Ala

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asp phe phe Pro

85 90 95

ser

Thr Phe Gly 100 val Gly Gly Thr Lys Leu 105 Pro Glu lie Lys Arg Ala 110 Leu Asp Ala

Ala

Pro Thr ser lie Phe Pro Ser ser Glu Gin Thr ser

Gly

Gly

115 120 125

Ala

Ser val val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr pro Lys Asp

lie

130 135 140

Asn

val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin Asn Gly val

145

150 155 160

Leu

Asn ser Trp Thr 165 Thr Asp Gin Asp Ser Lys 17A Asp Ser Thr Tyr ser 175 Asn Met

Ser

Ser

Thr Leu 180 Glu Leu Thr Lys Asp 185 Thr J-t u Glu Tyr Glu Arg His 190 lie

Ser

Tyr

Thr Cys Ala Thr His Lys Ser Thr ser Pro Val Lys

195 200 205

ser Phe Asn Arg Asn Glu cys 210 215

<211> 645 <212> ADN <213> Mus musculus

5 <400> 206

cagattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgacctgca gggccagctc aagtgtaact ccaggatctt cccccaaact ctggatttat gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc gctgaggatg ctgccactta ttactgccag ggaggcacca agctggaaat caagcgggct ccatccagtg agcagttaac atctggaggt taccccaaag acatcaatgt caagtggaag ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa acgttgacca aggacgagta tgaacgacat acatcaactt cacccatcgt caagagcttc

<210> 207 10 <211> 237

<212> PRT <213> Mus musculus

atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60 tccagttact tgaactggta ccagcagaag 120 agcacatcca acctggcttc aggagtccca 180 tcttactctc tcacaatcag cagtgtggag 240 cagtatgatt ttttcccatc gacgttcggt 300 gatgctgcac caactgtatc catcttccca 360 gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 420 attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 480 gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 540 aacagctata cctgtgaggc cactcacaag 600 aacaggaatg agtgt 645

<400> 207 15

Met 1

Asp ser Gin val 5 Gin He

val

Lys Met Ser 20 Arg Gly Gin

Met

Ser Ala 35 Ser Pro Gly Glu

ser

ser 50 Val Thr Ser Ser Tyr 55

ser 65

Ser pro Lys Leu Trp 70 lie

Val

Pro Ala Arg Phe 85 Val Ser Gly

Thr

lie ser ser 100 Glu Ala

Gin

Tyr Asp 115 Arg Phe Phe Pro Ser

He

Lys 130 Ala Asp Ala Ala 135

ser 145

Glu Gin Leu Thr Ser 150 Gly

Asn

Phe Tyr Pro Lys 165 Gly Asp lie

Glu

Arg Gin Asn 180 Tyr val Leu

Asp

ser Thr 195 Arg Ser Met Ser

Tyr

Glu 210 His Asn ser Tyr 215

Thr 225

ser Pro lie Val Lys 230 Ser

<210> 208 <211> 711 20 <212> ADN

<213> Mus musculus

Phe

Ser Phe Leu Leu He Ser Ala Leu

10 15

lie

val Leu Thr Gin Ser Pro Ala

lie

25 30

Lys 40 Leu

val Thr Met Thr Cys 45 Gin Arg Ala Ser

Asn

Trp Tyr Gin 60 Asn Lys Pro Gly

Tyr

Ser Thr Ser 75 Gly Leu Ala Ser Gly 80 Leu

ser

Gly ser 90 Ala Thr Ser Tyr Ser 95 cys

Glu

Asp Ala Thr Tyr Tyr Gin

105 110

Thr 120 Pro

Phe Gly Gly Gly Thr 125 Phe Lys Leu Glu

Thr

val Ser lie Pro Pro ser

140

Gly

Ala Ser val 155 Trp Val Cys Phe Leu Asn 160 Ser

Asn

val Lys Lys lie Asp Gly

170 175

Asn

Ser 185 Thr Trp Thr Asp Gin Asp 190 Lys Ser Lys

Ser 200 Thr

Leu Thr Leu Thr 205 His Asp Glu

cys

Glu Ala Thr Lys Thr ser

220

Phe

Asn Arg Asn Glu Cys

235

<400> 208

atggattctc aagtgcagat tttcagcttc cttctaatca gtgccttagt caaaatgtcc 60

agaggacaga ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctcc aggggagaag 120 gtcaccatga cctgcagggc cagctcaagt gtaacttcca gttacttgaa ctggtaccag 180 cagaagccag gatcttcccc caaactctgg atttatagca catccaacct ggcttcagga 240 gtcccagctc gcttcagtgg cagtgggtct gggacctctt actctctcac aatcagcagt 300 gtggaggctg aggatgctgc cacttattac tgccagcagt atgatttttt cccatcgacg 360 ttcggtggag gcaccaagct ggaaatcaag cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc 420 ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac 480 aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag tggaagattg atggcagtga acgacaaaat 540 ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac agcaaagaca gcacctacag catgagcagc 600 accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa cgacataaca gctatacctg tgaggccact 660 cacaagacat caacttcacc catcgtcaag agcttcaaca ggaatgagtg t 711

<210> 209 <211> 445 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 209

Glu 1

Val Gin Leu Gin 5 Gin Ser

Ser

Val Lys Met 20 Trp ser cys Lys

Tyr

Met Asn 35 lie val Lys Gin

Gly

Asp 50 Asn Pro Tyr Asn 55

Lys 65

Gly Lys Ala Thr Leu 70 Thr

Met

Gin Leu Asn Ser 85 Leu Thr

Ala

Arg Glu Thr 100 Ala val He

Gin

Gly Thr 115 Pro Ser Val Thr val

val

Tyr 130 Leu Ala pro Gly 135

Thr 145

Leu Gly Cys Leu val 150 Lys

Thr

Trp Asn Ser Gly 165 ASp Ser Leu

val

Leu Gin Ser 180 Trp Leu Tyr

Ser

Ser

Thr 195 Pro ser Glu

Ala

Ser 210 Ser Thr Lys val Asp 215

cys 225

Lys Pro cys lie Cys 230 Thr

Phe

Pro Pro Lys pro 245 val Lys Asp

val

Thr Cys val 260 Phe val Asp

Phe

Ser Trp 275 Glu val Asp Asp

Pro

Arg 29Q Glu Gin Phe Asn 295

pro 305

He Met His Gin Asp 310 Trp

val

Asn Ser Ala Ala 325 phe Pro

Thr

Lys Gly Arg 340 Met Pro Lys Ala

Lys

Glu Gin 355 Ala Lys Asp

Asp

Phe 370 Phe Pro Glu ASP lie 375

Pro 385

Ala Glu Asn Tyr Lys 390 Asn

Ser

Tyr Phe He Tyr 405 phe Ser Lys

Ala

Gly Asn Thr 420 Glu Thr cys

His

His

Thr 435 Lys Ser Leu

<210> 210 <211>1335 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 210

Gly

Pro Glu 10 Gly Leu val Lys Pro Gly 15 Asp Ala

Ala

ser 25 His Tyr Thr Phe Thr 30 Glu Tyr

Ser 40 Asp

Gly Glu Ser Leu 45 Asn Trp lie

Asp

Thr Thr Tyr 60 His Lys Phe

val

ASp Lys Ser 75 Ser Asn Thr Ala Tyr 80

ser

Glu Asp 90 Ser Ala val Tyr Tyr 95 Cys

Thr

Thr 105 Asn Ala Met ASp Tyr 110 Trp Gly

ser 120

Ser Ala Lys Thr Thr 125 Pro Pro Ser

Ser

Ala Ala Gin Thr 140 Asn Ser Met Val

Gly

Tyr Phe pro 155 Glu Pro val Thr val 160

Ser

Ser

Gly 170 val His Thr Phe Pro 175 Ala

Thr

Leu 185 Ser Ser Ser val Thr 190 Val pro

Thr 200

val Thr Cys Asn val 205 Ala His Pro

Lys

Lys

lie val Pro 220 ser Arg Asp Cys Gly

val

Pro Glu Val 235 Ser val Phe lie 240

val

Leu Thr 250 lie Thr Leu Thr pro 255 Lys

lie

ser 265 Lys Asp Asp pro Glu 270 val Gin

val 280

Glu val His Thr Ala 285 Gin Thr Gin

Ser

Thr Phe Arg Ser 300 Glu Val Ser Glu Leu

Leu

Asn Gly Lys 315 Glu Phe Lys Cys Arg 320 Lys

Ala

Pro He 330 val Lys Thr He Ser 335 Pro

Pro

Gin 345 Tyr Thr lie Pro 350

Pro

Lys 360 Thr

Val Ser Leu Thr Cys 365 Trp Met He Thr

val

Glu Trp Gin 380 Met Asn Gly Gin

Thr

Gin pro lie 395 Asp Thr Asp Gly 400

Leu

Asn val 410 Gin Lys Ser Asn Trp 415 Glu

Ser Ser 440

Val 425 His Leu Ser His Pro GlU Gly Gly Lys 445 Leu 430 His Asn

gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60

tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagc 120

catggagaga gccttgagtg gattggagat attaatcctt acaacgatga tactacctac 180

aaccacaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccaa cacagcctac 240

atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagagacg 300

gccgttatta ctacgaatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360

tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 420

aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 480

acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 540

gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 600

gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 660

agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 720

ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 780

gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 840

gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 900

gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 960

gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 1020

ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 1080

gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 1140

tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 1200

tcttacttca tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 1260

ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 1320

cactctcctg gtaaa 1335

<210> 211 <211> 464 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 211

Met 1

Gly Trp Asn Trp 5 lie Phe Leu Phe Leu 10 Leu Ser Gly Thr Ala 15 Gly

val

Tyr Ser Glu 20 val Gin Leu Gin Gin 25 Ser Gly Pro Glu Leu 30 val Lys

Pro

Gly Ala 35 Tyr Ser Val Lys Met Ser 40 val Cys Lys Ala Ser Gly 45 Gly Tyr Thr Phe

Thr

Asp 50 Tyr Met Asn Trp 55 Lys Gin Ser His 60 Glu ser Leu

Glu 65

Trp He Gly Asp lie 70 Asn Pro Tyr Asn Asp 75 ASP Thr Thr Tyr Asn 80

His

Lys Phe Lys Gly 85 Lys Ala Thr Leu Thr 90 val ASp Lys ser ser 95 Asn val

Thr

Ala Tyr Met 100 Gin Leu Asn Ser Leu 105 Thr Ser Glu Asp ser 110 Ala

Tyr

Tyr

Cys 115 Ala Arg Glu Thr Ala 120 val He Thr Thr Asn 125 Ala Met Asp

Tyr

Trp 130 Gly Gin Gly Thr ser 135 val Thr val ser Ser 140 Ala Lys Thr Thr

Pro 145

Pro Ser Val Tyr Pro 150 Leu Ala Pro Gly Ser 155 Ala Ala Gin Thr Asn 160

Ser

Met Val Thr Leu 165 Trp Gly cys Leu Val Lys 170 Leu Gly Tyr Phe pro Glu 175 His Pro

val

Thr val Thr 180 Asn ser Gly Ser 185 ser Ser Gly Val 190 Thr

Phe

Pro Ala val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu ser ser ser val

195 200 205

Thr

val Pro Ser Ser Thr Trp pro ser Glu Thr val Thr cys Asn val

210 215 220 lie

Ala

His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys val Pro Arg

225

230 235 240

Asp

cys Gly cys Lys 245 Pro Pro Cys lie Cys Thr 250 Asp val Pro Glu val Ser 255 Thr Ser

val

Phe lie Phe 260 val Pro Lys Pro Lys 265 Val val Leu Thr He 270 Asp Leu

Thr

Pro Lys Thr Cys val Val ASP lie Ser Lys ASp pro

275 280 285

Glu

val Gin Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp val Glu val HIS Thr Ala

290 295 300

Gin

Thr Gin Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser val

305

310 315 320

ser

Glu Leu Pro He Met His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe

325 330 335

Lys

Cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr

340

345 350

lie

ser Lys 355 Pro Thr Lys Gly Arg pro 360 Ala Lys Ala pro Gin val 365 Ser Tyr Thr

lie

Pro

pro 370 lie Lys Glu Gin Met 375 pro Lys Asp Lys Val 380 Val Leu Thr cys

Met

Thr ASp Phe Phe Glu Asp lie Thr Glu Trp Gin Trp

385

390 395 400

Asn

Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp

405 410 415

Thr

Asp Gly Ser Tyr Phe He Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gin Lys ser

420 425 430

Asn

Trp Glu 435 Asn Ala Gly Asn Thr Phe 440 Lys Thr cys ser Val Leu 445 ser His Glu Gly

Leu

His HlS His Thr Glu ser Leu Ser His Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 212 <211> 1392 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 212

10

atgggatgga

gtccagctgc

tgtaaggctt

ggagagagcc

cacaagttca

cagctcaaca

gttattacta

gccaaaacga

tccatggtga

tggaactctg

ctctacactc

acctgcaacg

gattgtggtt

cccccaaagc

gtagacatca

gtgcacacag

agtgaacttc

aacagtgcag

aaggctccac

agtctgacct

aatgggcagc

tacttcatct

acctgctctg

tctcctggta

actggatctt

aacaatctgg

ctggatacac

ttgagtggat

agggcaaggc

gcctgacatc

cgaatgctat

cacccccatc

ccctgggatg

gatccctgtc

tgagcagctc

ttgcccaccc

gtaagccttg

ccaaggatgt

gcaaggatga

ctcagacgca

ccatcatgca

ctttccctgc

aggtgtacac

gcatgataac

cagcggagaa

acagcaagct

tgttacatga

aa

tctcttcctc

acctgagctg

attcactgac

tggagatatt

cacattgact

tgaggactct

ggactactgg

tgtctatcca

cctggtcaag

cagcggtgtg

agtgactgtc

ggccagcagc

catatgtaca

gctcaccatt

tcccgaggtc

accccgggag

ccaggactgg

ccccatcgag

cattccacct

agacttcttc

ctacaagaac

caatgtgcag

gggcctgcac

ttgtcaggaa

gtgaagcctg

tactacatga

aatccttaca

gtagacaaat

gcagtctatt

ggtcaaggaa

ctggcccctg

ggctatttcc

cacaccttcc

ccctccagca

accaaggtgg

gtcccagaag

actctgactc

cagttcagct

gagcagttca

ctcaatggca

aaaaccatct

cccaaggagc

cctgaagaca

actcagccca

aagagcaact

aaccaccata

ctgcaggtgt ctactctgag 60 gggcttcagt gaagatgtcc 120 actgggtgaa gcagagccat 180 acgatgatac tacctacaac 240 cctccaacac agcctacatg 300 actgtgcaag agagacggcc 360 cctcagtcac cgtctcctca 420 gatctgctgc ccaaactaac 480 ctgagccagt gacagtgacc 540 cagctgtcct gcagtctgac 600 cctggcccag cgagaccgtc 660 acaagaaaat tgtgcccagg 720 tatcatctgt cttcatcttc 780 ctaaggtcac gtgtgttgtg 840 ggtttgtaga tgatgtggag 900 acagcacttt ccgctcagtc 960 aggagttcaa atgcagggtc 1020 ccaaaaccaa aggcagaccg 1080 agatggccaa ggataaagtc 1140 ttactgtgga gtggcagtgg 1200 tcatggacac agatggctct 1260 gggaggcagg aaatactttc 1320 ctgagaagag cctctcccac 1380

<210> 213 <211> 215 <212> PRT

<213> Secuencia artificial 5

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 213

10

ASp 1

lie Gin Leu Thr 5 Gin Ser

ASp

Arg Val Thr .20 Trp He Thr Cys

Tyr

Leu Asn 35 ser Tyr Gin Gin

lie

Tyr 50 Thr Ser Asn Leu 55

Gly 65 Pro

ser Gly Ser Gly Thr 70 Thr Glu

Glu

Asp Phe Ala 85* Tyr

ser

Thr Phe Gly 100 Val Gly Gly Thr

Ala

Pro ser 115 Phe lie Phe

Gly

Thr 130 Ala ser val val cys 135

Ala 145

Lys val Gin Trp Lys 150 val

Gin

Glu ser val Thr 165 Glu

Gin

ser

Ser Thr Leu 180 Thr Leu Ser

Tyr

Ala Gys 195 Asn Glu Val Thr HIS

Ser

Phe 210 Arg Gly Glu cys 215

Pro

Ser Phe 10 Leu Ser Ala Ser Val 15 Gly

Arg

Ala 25 ser Ser Ser val Thr 30 Ser Ser

Lys 40 Ala

Pro Gly Lys Ala Pro 45 ser Lys Leu Leu

Ser

Gly Val Pro 60 lie Arg Phe ser

Phe

Thr Leu Thr 75 Ser ser Leu Gin 80

Tyr

cys Gin 90 Glu Gin Tyr Asp Phe Phe 95 val Pro

Lys

Val 105 Pro lie Lys Arg Thr 110 Leu Ala

pro 120

Ser ASp GlU Gin 125 Lys Ser

Leu

Leu

Asn Asn Phe 140 Gin Tyr pro Arg Glu

Asp

Asn Ala Leu 155 ser Gly Asn Ser 160

Asp

ser Lys 170 Asp Asp Ser Thr Tyr Ser 175 Lys Leu

Lys

Ala 185 Tyr Glu Lys His 190 val

Gin 200

Gly Leu Ser Ser Pro 205 val Thr Lys

<210> 214 <211> 645 15 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

20

<400> 214

gacatccagc tgacccagag ccccagcttc atcacatgcc gcgcctcatc ttcagttaca ccaggaaaag cacctaaact tcttatatac tctcgatttt caggatctgg atcaggcaca ccagaagact tcgccactta ttactgccaa ggaggtacaa aagtagaaat caagcgtacg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact tatcccagag aggccaaagt acagtggaag caggagagtg tcacagagca ggacagcaag acgctgagca aagcagacta cgagaaacac ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc

ctttccgcat ccgttggtga ccgagtaaca 60 tcttcttatc ttaattggta tcaacaaaaa 120 tctacatcta atctcgcatc aggagttccc 180 gaatttacac ttactatatc atcactccaa 240 caatacgatt tttttccaag cacattcgga 300 gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360 gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420 gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480 gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540 aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600 aacaggggag agtgt 645

25 <210> 215

<211> 237 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

5

10

15

20

25

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 215

Met

Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1

5 10 15

Leu

Pro Gly Ala 20 Ser Arg Cys Asp He Gin 25 val Leu Thr Gin Ser Pro 30 Arg ser phe

Leu

Ser Ala Val Gly Asp Arg Thr He Thr cys Ala Ser

35 40 45

Ser

ser 50 Ala Val Thr ser Ser If Leu Asn Trp Tyr Gin 60 Asn Gin Lys pro Gly

Lys

Pro Lys Leu Leu He Tyr Ser Thr Ser Leu Ala ser Gly

65

70 75 80

val

pro Ser Arg Phe 85 Leu ser Gly Ser Gly Ser 90 Phe Gly Thr Glu Phe Thr 95 cys Leu

Thr

lie ser Ser 100 Phe Gin Pro Glu Asp 105 Phe Ala Thr Tyr Tyr 110 Lys Gin

Gin

Tyr Asp 115 Arg Phe Pro ser Thr 120 Pro Gly Gly Gly Thr 125 Phe val Glu

He

Lys Thr val Ala Ala ser val Phe lie Pro pro Ser

130 135 140

Asp

Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala ser Val Val Cys Leu Leu Asn

145

150 155 160

Asn

Phe Tyr pro Arg 165 Asn Glu Ala Lys val Gin 170 val Trp Lys Val ASp Asn 175 Ser Ala

Leu

Gin ser Gly Ser Gin Glu Ser Thr Glu Gin Asp Lys

180 185 190 Ala

Asp

ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys

Asp

195 200 205

Tyr

Glu 210 Ser Lys His Lys Val Tyr 215 Ser Ala cys Glu val Thr 220 Glu His Gin Gly Leu

Ser

Pro val Thr Lys Phe Asn Arg Gly cys

225

230 235

<210> 216 <211> 711 <212>ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 216

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct cccaggtgcc 60

agatgtgaca tccagctgac ccagagcccc agcttccttt ccgcatccgt tggtgaccga 120

gtaacaatca catgccgcgc ctcatcttca gttacatctt cttatcttaa ttggtatcaa 180

caaaaaccag gaaaagcacc taaacttctt atatactcta catctaatct cgcatcagga 240

gttccctctc gattttcagg atctggatca ggcacagaat ttacacttac tatatcatca 300

ctccaaccag aagacttcgc cacttattac tgccaacaat acgatttttt tccaagcaca 360

ttcggaggag gtacaaaagt agaaatcaag cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420

ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480

aacttctatc ccagagaggc caaagtacag tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540

aactcccagg agagtgtcac agagcaggac agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600

accctgacgc tgagcaaagc agactacgag aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660

catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag agcttcaaca ggggagagtg t 711

<210> 217 <211> 447 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

Glu val Gin Leu val Gin ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser val Lys val ser cys Lys Ala ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly

Asp 50 Gly lie Asn Pro Tyr Asn 55 Thr Asp ASP Thr Thr Tyr 60 Ala Asn His Lys Phe

Lys

Arg val Thr He Arg Asp Thr ser Ser Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Met

Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys

85 90 95

Ala

Arg Glu Thr Ala val lie Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gin

Gly Thr Thr Val Thr val Ser ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

val

Phe Pro Leu Ala Pro cys ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala

130 135 140

Ala

Leu Gly cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr val

145

150 155 160

Ser

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

Val

Gin 165 170 175

Leu

Ser Ser Gly Leu Tyr ser Leu ser Ser val val Thr val

180 185 190

Pro

Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn val Asp His

195 Val 200 205

Lys

Pro Ser Asn Thr Lys Asp Lys Thr val Glu Arg Lys Cys cys

210 215 220

Val

Glu cys pro Pro cys pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro Ser val

225

230 235 240

Phe

Leu Phe pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr

245 250 255

pro

Glu val Thr cys val val val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

val

Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr

Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg val Val Ser

290 295 300

val

Leu Thr val val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305

310 315 320

cys

Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala pro He Glu Lys Thr He

325 330 335

Ser

Lys Thr Lys Gly Gin pro Arg Glu Pro Gin val Tyr Thr Leu pro

340 345 350

Pro

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val ser Leu Thr cys Leu

355 360 365

Val

Lys 370 Gin Gly Phe Tyr Pro Ser 375 Tyr Asp lie Ala val Glu 380 Pro Trp Glu Ser Asn

Gly 385 Asp

pro Glu Asn Asn 390 Leu Lys Thr Thr Pro 395 Thr Met Leu Asp Ser 400 Arg

Gly

Ser Phe Phe 405 Asn Tyr Ser Lys Leu 410 ser Val ASp Lys Ser 415 Ala

Trp

Gin Gin Gly Val Phe ser cys val Met His Glu Leu

His

420 425 430

Asn

His Tyr Thr Gin Lys ser Leu ser Leu ser pro Gly Lys

435 440 445

5

<210> 218 <211> 1341 <212>ADN

<213> Secuencia artificial

10

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 218

gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtcaagaaac ctggagcaag cgtaaaggtt 60

agttgcaaag catctggata cacatttacc gactactaca tgaattgggt acgacaagcc 120

cctggacaaa gacttgaatg gatgggagac attaaccctt ataacgacga cactacatac 180

aatcataaat ttaaaggaag agttacaatt acaagagata catccgcatc aaccgcctat 240

atggaacttt cctcattgag atctgaagac actgctgttt attactgtgc aagagaaact 300

gccgttatta ctactaacgc tatggattac tggggtcaag gaaccactgt taccgtctct 360

5

agtgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420

gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480

tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600

acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660

cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900

cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960

tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320

ctctccctgt ctccgggtaa a 1341

<210> 219 <211> 466 <212> PRT

10 <213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado 15 <400> 219

Met 1

Asp Trp Thr Trp 5 Arg He

Ala

His Ser Glu 20 val Gin Leu

Pro

Gly Ala 35 Tyr ser val Lys val

Thr

Asp 50 Trp Tyr Met Asn Trp 55 Asn

Glu 65 His

Met Gly Asp lie 70 Arg

Lys

Phe Lys Gly 85 Glu val

Thr

Ala Tyr Met 100 Leu ser

Tyr

Tyr

cys 115 Gly Ala Arg Glu Thr

Tyr

Trp 130 Gin Gly Thr Thr 135

Gly 145

Pro Ser val Phe Pro 150 Leu

Ser

Thr Ala Ala Leu 165 Trp Gly Cys

Val

Thr val Ser 180 val Asn Ser

Phe

Pro Ala 195 Leu Gin Ser

val

Thr 210 val Pro ser Ser Asn 215

val 225

Asp His Lys Pro Ser 230 Asn

Lys

cys cys val Glu 245 Cys Pro

Pro

Ser val Phe 260 Leu Phe

Pro

Ser

Arg Thr 275 Pro Glu val Thr

Asp

Pro 290 Glu Val Gin Phe Asn 295

Asn 305

Ala Lys Thr Lys pro 310 Arg

val

val

ser val Leu 325 Thr

val

Glu

Tyr Lys Cys 340 Ser Lys Val Ser

Lys

Thr He 355 Pro Lys Thr

Lys

Thr

Leu 370 Pro ser Arg Glu 375

Thr 385

Cys Leu val Lys Gly 390 Phe

Glu

ser Asn Gly Gin 405 pro

Glu

Leu

Asp Ser Asp 420 Trp Gly Ser Phe

Lys

ser Arg 435 Leu Gin Gin Gly

Glu Gly 465

Ala 450 Lys His Asn His Tyr 455

<210> 220 <211> 1398 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

Leu

Phe Leu val Ala Ala Ala Thr Gly

10 15

val

Gin 25 cys Ser Gly Ala Glu val 30 Tyr Lys Lys

Ser

Lys Ala ser Gly Thr Phe

40

45

val

Arg Gin Ala Pro 60 ASp Gly Gin Arg Leu

pro

Tyr Asn ASp 75 Arg Thr Thr Tyr Asn 80 ser

Thr

lie Thr ASp Thr Ser Ala

90 95

Ser

Leu 105 Val Arg Ser Glu Asp Thr 110 Ala Ala val

Ala

lie Thr Thr Asn Met ASp

120

125

val

Thr val Ser ser 140 Arg Ala ser Thr Lys

Ala

Pro Cys Ser 155 Asp Ser Thr Ser Glu 160 pro

Leu

val Lys 170 Leu Tyr Phe pro Glu 175 His

Gly

Ala 185 Gly Thr Ser Gly val 190 Ser Thr

Ser

Leu Tyr Ser Leu Ser val

200

205

Phe

Gly Thr Gin Thr 220 Lys Tyr Thr Cys Asn

Thr

Lys val Asp 235 Ala Thr Val Glu Arg 240 Gly

Pro

Cys Pro 250 Pro Pro Pro val Ala 255 Met

Pro

Lys 265 Val Lys ASp Thr Leu 270 Ser lie

Cys

val val Asp val His Glu

280

285

Trp

Tyr val Asp Gly 300 Asn Val Glu val His

Glu

Glu

Gin Phe Ser Thr Phe Arg

315 320

val

His Gin ASp Trp Leu Asn Gly Lys

330 - 335

Asn

Lys 345 Gin Gly Leu pro Ala Pro 350 Gin lie Glu

Gly

pro Arg Glu Pro val Tyr

360

365

Glu

Met Thr Lys Asn Gin val ser Leu

380

Tyr

Pro ser ASp lie Ala Val Glu Trp

395 400

Asn

Asn

Tyr Lys Thr Thr Pro pro Met

410 415

Phe

Leu 425 val Tyr Ser Lys Leu Thr 430 val val Asp

Asn

Phe ser cys Ser Met His

440

445

Thr

Gin Lys Ser Leu ser Leu Ser Pro

460

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 220 5

atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggtc tgcaaagcat ctggatacac atttaccgac ggacaaagac ttgaatggat gggagacatt cataaattta aaggaagagt tacaattaca gaactttcct cattgagatc tgaagacact gttattacta ctaacgctat ggattactgg gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc tacacctgca acgtagatca caagcccagc aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct tccctgtctc cgggtaaa

<210> 221

<211> 215 10 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 aagaaacctg gagcaagcgt aaaggttagt 120 tactacatga attgggtacg acaagcccct 180 aacccttata acgacgacac tacatacaat 240 agagatacat ccgcatcaac cgcctatatg 300 gctgtttatt actgtgcaag agaaactgcc 360 ggtcaaggaa ccactgttac cgtctctagt 420 ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 480 gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540 cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 600 gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 660 aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 720 gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 780 atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 840 gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 900 cgggaggagc.agttcaacag cacgttccgt 960 gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1080 cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1140 ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200 aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 1260 gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320 ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380

1398

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado 15

<400> 221

Asp lie Gin Met Thr Gin ser Pro ser Ser Leu ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg val Thr lie Thr Cys Ser val ser Ser Thr He Ser Ser Asn 20 25 30

His

Leu His Trp phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu

35 40 45

lie

Tyr 50 ser Gly Thr ser Asn Leu 55 ASP Ala ser Gly Val Pro 60 He Ser Arg Phe Ser

Gly

Gly

Ser Gly Thr Phe Thr Leu Thr Ser ser Leu Gin

65

70 75 80

pro

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser Ser Tyr Pro

85 90 95

Leu

Thr Phe Gly 100 val Gly Gly Thr Lys val 105 Pro Glu lie Lys Arg Thr 110 Leu val Ala

Ala

Pro Ser Phe He Phe pro Ser ASp Glu Gin Lys ser

115 120 125

Gly

Thr Ala Ser val val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130

135 140

Ala

Lys val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin ser Gly Asn Ser

145

150 155 160

Gin

GlU ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys ASp ser Thr Tyr ser Leu

165 170 175

Ser

Ser

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala ASp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr

Ala cys Glu val Thr His Gin Gly Leu ser ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 222 <211> 645 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10

<400> 222

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctcagcat ataacatgca gcgtatcatc aactatatca tcaaatcatc cccggcaaag cacctaaatc acttatatac ggcacatcaa tcaagatttt caggctctgg ctcaggcacc gactttactc cccgaagact tcgcaaccta ttactgtcaa caatggtcct ggcggcacaa aagtagaaat taaacgtacg gtggctgcac ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag

ccgtaggcga

ttcattggtt

atctcgcatc

ttacaatatc

catatccact

catctgtctt

tgtgcctgct

ccctccaatc

acagcctcag

cctgcgaagt

agtgt

tagagttaca

ccaacagaaa

aggcgttcct

ctccctccaa

cacatttggc

catcttcccg

gaataacttc

gggtaactcc

cagcaccctg

cacccatcag

60

120

180

240

300

360

420

480

540

600

645

15 <210> 223

<211> 237 <212> PRT

<213> Secuencia artificial 20 <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 223

Met

Q. W < Met Arg val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1

5 10 15

Leu

Arg Gly Ala. Arg Cys Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Leu

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg val Thr He Thr Cys Ser val Ser

35 40 45

Ser

Thr He Ser ser Asn His Leu His Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly

50 55 60

Lys

Ala Pro Lys Ser Leu lie Tyr Gly Thr ser Asn Leu Ala Ser Gly

65

70 75 80

Val

pro Ser Arg Phe 85 Ser Gly Ser Gly Ser 90 Gly Thr Asp Phe Thr 95 Leu

Thr

lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu ASp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin

100 105 110

Gin

Trp ser ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu

115 120 125

lie

Lys Arg Thr Val Ala Ala pro ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser

130 135 140

ASp

GlU Gin Leu Lys ser Gly Thr Ala ser val val cys Leu Leu Asn

145

150 155 160

Asn

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys val Gin Trp Lys val Asp Asn Ala

165 170 175

Leu

Gin ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys

Thr 180 185 190

Asp

Ser Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala ASp

195 200 205

Tyr

GlU n Lys HIS Lys val Tyr OIC Ala Cys Glu Val Thr 77Cl His Gin Gly Leu

Ser

ser Pro val Thr Lys ser phe Asn Arg Gly Glu Cys

225

230 235

<210> 224 <211> 711 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10

<400> 224

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca gttacaataa catgcagcgt atcatcaact cagaaacccg gcaaagcacc taaatcactt gttccttcaa gattttcagg ctctggctca ctccaacccg aagacttcgc aacctattac tttggcggcg gcacaaaagt agaaattaaa ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct aacttctatc ccagagaggc caaagtacag aactcccagg agagtgtcac agagcaggac accctgacgc tgagcaaagc agactacgag catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag

gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc 60 tcctccctct cagcatccgt aggcgataga 120 atatcatcaa atcatcttca ttggttccaa 180 atatacggca catcaaatct cgcatcaggc 240 ggcaccgact ttactcttac aatatcctcc 300 tgtcaacaat ggtcctcata tccactcaca 360 cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc 420 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat 480 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt 540 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc 600 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc 660 agcttcaaca ggggagagtg t 71i

15 <210> 225

<211> 451 <212> PRT

<213> Secuencia artificial 20 <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 225

Glu 1

val Gin Leu Val 5 Gin Ser

Ser

val Lys val 20 Trp Ser cys Lys

Tyr

Leu His 35 val Arg Gin

Gly

Arg 50 ASp He Asp Pro Glu Asn 55 Thr

Gin 65 Met

Lys Val Thr Met 70 Leu

Glu

Leu Arg Ser 85 Asp Arg

Ala

Arg Glu Ala 100 Gly Tyr phe

Asp

val Trp 115 Pro Arg Gly Thr

Lys

Gly 130 ser Val Phe Pro 135

Glu 145

Ser Thr Ala Ala Leu 150 Gly

Pro

val Thr Val Ser 165 val Trp Asn

Thr

Phe pro Ala 180 Leu Gl n

val

val

Thr 195 Val Pro Ser Ser

Asn

val 210 Asp His Lys Pro Ser 215

Arg 225

Lys cys Cys val Glu 230 cys

Gly

Pro ser val Phe 245 Pro Leu phe

lie

ser Arg Thr 260 Glu Glu val

GlU

Asp Pro 275 Val Gin Phe

His

Asn 290 Ala Lys Thr Lys pro 295

Arg 305

val Val ser Val Leu 310 Thr

Lys

Glu Tyr Lys Cys 325 Ser Lys Val

Glu

Lys Thr He 340 Pro Lys Thr

Tyr

Thr Leu 355 Pro Ser Arg

Leu

Thr 370 cys Leu Val Lys Gly 375

Trp 385

Glu ser Asn Gly Gin 390 Pro

Met

Leu Asp ser Asp 405 Trp Gly Ser

Asp

Lys Ser Arg 420 Leu Gin Gin

His Pro

Glu Gly 450 Ala 435 Lys His Asn His

<210> 226 <211> 1353 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

Gly

Ala Glu 10 Asp val Lys Lys Pro Gly 15 ASp Ala

Ala

ser 25 Phe Asn He Lys 30 Phe

Ala 40 Gly

Pro Gly Gin Gly Leu 45 A5P Glu Trp He

Asp

Thr Leu Tyr 60 Pro Lys phe

Thr

Asp Thr Ser 75 Thr Ser Thr Ala Tyr 80

Ser

Asp Asp 90 Gly Thr Ala val Tyr Tyr 95 Tyr Cys

His

ASp 105 Thr Ser Tyr Trp 110 Phe

Leu 120

Val Thr Val Ser ser 125 Ala Ser Thr

Leu

Ala Pro cys Ser 140 Arg Ser Thr ser

cys

Leu val Lys 155 Asp Tyr Phe pro Glu 160

Ser

Gly Ala 170 Leu Thr Ser Gly Val 175 His

Ser

ser 185 Gly Leu Tyr Ser Leu 190 ser

Ser

Asn 200

Phe Gly Thr Gin Thr 205 Tyr Thr cys

Asn

Thr Lys val Asp 220 Ala Lys Thr Val Glu

Pro

pro cys Pro 235 Pro Pro val Ala 240

Pro

Pro

Lys 250 Pro Lys Asp Thr Leu 255 Met

Thr

cys 265 Trp Val Val val Asp val 270 val ser His

Asn 280 Arg

Tyr val Asp Gly 285 Asn Glu val

Glu

Glu

Gin Phe 300 Ser Thr Phe

Val

val His Gin 315 ASp Trp Leu Asn Gly 320

ser

Asn Lys 330 Gin Gly Leu Pro Ala pro 335 Gin He

Lys

Gly 345 Glu Pro Arg Glu pro 350 Gin Val

Glu 360

Met Thr Lys Asn 365 val ser

Phe

Tyr Pro Ser Asp 380 Lys lie Ala val Glu

Glu

Asn Asn Tyr 395 Tyr Thr Thr pro Pro 400 val

Phe

Phe

Leu 410 Ser Lys Leu Thr 415

Gly

Asn 425 val Phe Ser Cys Ser 430 val Met

Tyr 440

Thr Gin Lys Ser Leu 445 ser Leu Ser

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctgactt caacattaaa gacttctatc tacactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gattggaagg attgatcctg agaatggtga tactttatat 180

gacccgaagt tccaggacaa ggtcaccatg accacagaca cgtccaccag cacagcctac 240

atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaggcg 300

gattatttcc acgatggtac ctcctactgg tacttcgatg tctggggccg tggcaccctg 360

gtcaccgtct ctagtgcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc 420

aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480

ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct 540

gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac 600

ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660

aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca 720

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780

cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 840

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 900

aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 960

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020 tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc 1200 atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353

5 <210> 227

<211> 470 <212> PRT

<213> Secuencia artificial 10 <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 227

Met

Asp Trp Thr Trp Arg He Leu Phe Leu val Ala Ala Ala Thr Gly

1

5 10 15

Ala

His Ser Glu Val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro

Gly Ala Ser val Lys val ser Cys Lys Ala ser Asp phe Asn lie

35 40 45

Lys

Asp 50 Trp Phe Tyr Leu His Trp 55 Asp val Arg Gin Ala Pro 60 Asp Gly Gin Gly Leu

Glu 65 Pro

lie Gly Arg lie 70 Lys pro Glu Asn Gly 75 Thr Thr Leu Tyr Asp 80 Ser

Lys

Phe Gin Asp 85 Glu val Thr Met Thr 90 Arg Asp Thr Ser Thr 95 Ala

Thr

Ala Tyr Met 100 Ala Leu Arg ser Leu 105 Tyr ser Asp Asp Thr 110 Thr Val

Tyr

Tyr Cys 11C Arg Glu Ala Asp 120 Arg Phe His ASp Gly 125 Thr ser

Tyr

Trp

35 Phe Asp Val Trp Gly Gly Thr Leu Val val Ser Ser

135 140

Ala

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala pro cys Ser Arg

145

150 155 160

Ser

Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr

165 170 175

Phe

Pro Glu Pro val Thr val ser Trp Asn ser Gly Ala Leu Thr ser

180 185 190

Gly

val His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr ser

195 200 205

Leu

Ser Ser Val Val Thr Val Pro ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr

210 215 220

Tyr 225

Thr Cys Asn val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys

230 235 240

Thr

val Glu Arg Lys 245 Pro cys cys val Glu Cys 250 Phe Pro Pro cys Pro Ala 255 Lys pro

Pro

val Ala Gly Ser val Phe Leu Pro Pro Lys Pro ASp

260 265 270

Thr

Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu val Thr Cys val Val val Asp

275 280 285

val

ser His Glu ASp Pro Glu val Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly

290 295 300

val

Glu val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn

305

310 315 320

Ser

Thr Phe Arg val val Ser val Leu Thr val Val His Gin Asp Trp

325 330 335

Leu

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys cys Lys Val ser Asn Lys Gly Leu Pro

Ala

340 345 350

Pro

He Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin pro Arg Glu

Gin 355 360 365

Pro

val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

Gin

370 375 380

val

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr pro Ser Asp He

385

Val 390 395 400

Ala

Glu Trp Glu ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

405 410 415

Thr

Pro Pro Met 420 Asp Leu Asp Ser Asp Gly 425 Gin Ser Phe Phe Leu Tyr 430 phe Ser Lys

Leu

Thr val Lys Ser Arg Trp Gin Gly Asn Val Ser cys

435 440 His 445

Ser

val Met His Glu Ala Leu His Asn Tyr Thr Gin Lys ser Leu

450 455 460

ser 465

Leu Ser Pro Gly &

<210> 228 <211> 1410 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10

15

<400> 228

atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg tgcaaggctt ctgacttcaa cattaaagac ggacaagggc ttgagtggat tggaaggatt ccgaagttcc aggacaaggt caccatgacc gagctgagga gcctgagatc tgacgacacg tatttccacg atggtacctc ctactggtac accgtctcta gtgcctccac caagggccca agcacctccg agagcacagc ggccctgggc gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg ctacagtcct caggactcta ctccctcagc ggcacccaga cctacacctg caacgtagat acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg ctggactccg acggctcctt cttcctctac cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa

<210> 229

<211> 213

<212> PRT

<213> Secuencia artificial

gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 ttctatctac actgggtgcg acaggcccct 180 gatcctgaga atggtgatac tttatatgac 240 acagacacgt ccaccagcac agcctacatg 300 gccgtgtatt actgtgcgag agaggcggat 360 ttcgatgtct ggggccgtgg caccctggtc 420 tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 480 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 600 agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 660 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720 ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 780 aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 900 aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 960 gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 1020 ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140 ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1200 gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1260 agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320 atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 229

ASp 1

He Gin Leu Thr C Gin ser pro Ser Phe 10 ser Leu Ser Ala Ser Val 15 Tyr Gly

ASp

Arg Val Thr 20 Gin lie Thr Cys Arg Ala 25 Lys Ser ser He Ser 30 Leu He

His

Trp Tyr 35 Gin Lys pro Gly 40 Ala pro Lys Leu 45 He Tyr

Ala

Thr 50 Ser ser Asn Leu Ala Ser Gly 55 Thr Leu val pro ser Arg 60 Ser Phe Ser Gly Ser

Gly 65

Gly Thr Glu Phe 70 Thr lie ser 75 Leu Gin Pro Glu 80

Asp

Phe Ala Thr Tyr 85 Thr Tyr Cys Gin Gin Trp 90 Lys Ser Ser Asp Pro Leu 95 Ala Thr

Phe

Gly Gly Gly 100 Lys val Glu lie 105 Arg Thr val Ala 110 Pro

Ser

val Phe lie Phe pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala

ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

val

Girt Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn ser Gin Glu

145

150 155 160

Ser

val Thr Glu Gin 165 Ser Asp ser Lys ASp Ser 170 Glu Thr Tyr Ser Leu ser 175 Tyr

Ser

Thr

Leu Thr Leu Lys Ala Asp Tyr Lys His Lys val Ala

180 18 S 190

cys

Gill val Thr His Gin Gly Leu Ser ser Pro val Thr Lys ser Phe

195 200 205

Asn

Arg Gly Glu cys

210

<210> 230 <211> 639 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10

<400> 230

gacatccagt tgacccagtc tccatccttc atcacttgca gggccagctc aagtataagt aaagccccta agctcctgat ctatgccaca ttcagcggca gtggatctgg gacagaattc gattttgcaa cttattactg tcagcagtgg accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat agtgtcacag agcaggacag caaggacagc agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg

ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 tacatacact ggtatcagca aaaaccaggg 120 tccaacctgg cttctggggt cccatcaagg 180 actctcacaa tcagcagcct gcagcctgaa 240 agtagtgacc cactcacgtt cggcggaggg 300 gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360 gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420 aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480 acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540 tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600 ggagagtgt 639

15 <210> 231

<211> 235 <212> PRT

<213> Secuencia artificial 20 <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 231

Met

Asp Met Arg val e Pro Ala Gin Leu Leu 10 Gin Leu 25 Val Thr Gly Leu Leu Leu Leu 15 Ser Trp

X Leu

Pro Gly Ala 20 Ser j Arg Cys ASp lie Thr Gin Ser pro 30 Arg Phe

Leu

Ser Ala 35 Val Gly Asp Arg 40 He Thr cys 45 Ala Ser

ser

ser 50 Lys He Ser Tyr lie His 55 Ala Trp Tyr Gin Gin Lys 60 Ala pro Gly Lys Ala

Pro 65

Leu Leu He Tyr 70 Thr Ser Asn Leu 75 Ser Gly Val Pro 80

Ser

Arg Phe ser Gly 85 Pro ser Gly ser Gly Thr 90 Ala Thr 105 Gly Gly Glu Phe Thr Leu Thr 95 Gin lie

Ser

ser Leu Gin 100 Pro Glu Asp Phe Tyr Tyr Cys Gin 110 Glu Trp

Ser

Ser

Asp 115 val Leu Thr Phe Gly 120 val Thr Lys val 125 Pro He Lys

Arg

Thr 130 Ala Ala Pro ser 135 Phe lie Phe Pro 140 ser ASp Glu

Gin 145

Leu Lys ser Gly Thr 150 Ala Ser val val cys 155 Leu Leu Asn Asn Phe 160

Tyr

Pro Arg Glu Ala 165 Lys val Gin Trp Lys 170 Val Asp Asn Ala Leu 175 Gin

Ser

Gly Asn Ser 180 Leu Gin Glu ser Val Thr 185 Thr Glu Gin Asp Ser Lys 190 Asp Asp

Ser

Thr

Tyr ser 195 Lys Ser Ser Thr Leu 200 Glu Leu ser Lys Ala 205 Gly Tyr Glu

Lys

His 210 Val val Tyr Ala cys 215 Asn Val Thr His Gin 220 Leu Ser Ser

Pro 225

Thr Lys Ser Phe 230 Arg Gly Glu cys 235

<210> 232 <211> 705 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

10

<400> 232

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60

agatgtgaca tccagttgac ccagtctcca tccttcctgt ctgcatctgt aggagacaga 120

gtcaccatca cttgcagggc cagctcaagt ataagttaca tacactggta tcagcaaaaa 180

ccagggaaag cccctaagct cctgatctat gccacatcca acctggcttc tggggtccca 240

tcaaggttca gcggcagtgg atctgggaca gaattcactc tcacaatcag cagcctgcag 300

cctgaagatt ttgcaactta ttactgtcag cagtggagta gtgacccact cacgttcggc 360

ggagggacca aggtggagat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 420

ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 480

tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 540

caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 600

acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 660

ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 705

15 <210> 233

<211> 447 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

20 <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 233

Gill

val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala

1

5 10 15

Ser

val Lys Val 20 Trp Ser Cys Lys Ala ser 25 Pro Gly Phe Asp lie Lys 30 Glu Asp Tyr

Tyr

He His val Arg Gin Ala Gly Gin Gly Leu Trp lie

35 40 45

Gly

Arg 50 Gly val Asp Pro Asp Asn 55 Thr Gly Glu Thr Glu Phe 60 He Ala Pro Lys Phe

Pro

Lys Val Thr Met Thr Asp Thr Ser Ser Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Met

Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala

Arg Glu Asp 100 Leu Tyr Asp Gly Thr Tyr 105 Ser Thr Trp Phe pro Tyr 110 Gly Trp Gly

Gin

Gly Thr val Thr val Ser Ala ser Thr Lys pro Ser

115 120 125

val

Phe pro Leu Ala pro Cys ser Arg Ser Thr Ser Glu ser Thr Ala

130 135 140

Ala

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr phe Pro Glu pro val Thr val

145

150 155 160

ser

Trp Asn ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly val His Thr Phe pro Ala

165 170 175

val

Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr ser Leu Ser ser Val Val Thr

val

180 185 190

Pro

Ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn val Asp His

195 200 205

Lys

pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr val Glu Arg Lys Cys cys

210 215 220

val

Glu Cys Pro Pro cys pro Ala pro Pro val Ala Gly Pro Ser

val

225

Phe 230 235 240

Phe

Leu Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie ser Arg Thr

245 250 255

Pro

Glu Val Thr 260 Asn Cys val val val Asp 265 Gly val Ser His Glu ASp 270 Asn Pro Glu

Val

Gin Phe 275 Pro Trp Tyr val Asp 280 Phe val Glu val His 285 Arg Ala Lys

Thr

Lys 290 Leu Arg Glu Glu Gin 295 Gin Asn Ser Thr phe 300 Gly Val val ser

val

Thr val Val His Asp Trp Leu Asn Lys GlU Tyr Lys

305

310 315 320

Cys

Lys val Ser Asn 325 Gly Lys Gly Leu pro Ala 330 Pro Pro lie Glu Lys Thr 335 Leu lie

Ser

Lys Thr Lys 340 Glu Gin Pro Arg Glu 345 Asn Gin val Tyr Thr 350 Thr Pro

Pro

Ser Arg Glu Met Thr Lys Gin Val ser Leu Cys Leu

355 360 365

val

Lys 370 Gin Gly Phe Tyr Pro Ser 375 Tyr Asp He Ala val Glu 380 pro Trp Glu Ser Asn

Gly

Pro Glu Asn Asn Lys Thr Thr Pro Met Leu Asp Ser

385

390 395 400

Asp

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr val Asp Lys Ser Arg

405 410 - 415

Trp

Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys ser val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His

Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 234 <211> 1341 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggatt cgacattaag gactactata tacactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatcggaagg gttgatcctg acaatggtga gactgaattt 180

gccccgaagt tcccgggcaa ggtcaccatg accacagaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaagac BOO

tacgatggta cctacacctg gtttccttat tggggccaag ggactctggt caccgtctct 360

agtgcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420

gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480

tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540

tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600

acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660

cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840

99cgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900

cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960

tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320

ctctccctgt ctccgggtaa a 1341

5 <210> 235

<211> 466 <212> PRT

<213> Secuencia artificial 10 <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 235

Met 1

ASP Trp Thr Trp 5 Arg lie Leu Phe Leu 10 val Ala Ala Ala Thr 15 Gly

Ala

His ser Glu 20 ser val Gin Leu Val Gin 25 cys ser Gly Ala Glu val 30 Phe Lys Lys

Pro

Gly Ala 35 val Lys Val ser 40 Lys Ala Ser Gly 45 Asp lie

Lys

Asp 50 Trp Tyr Tyr lie His Trp 55 ASp val Arg Gin Ala Pro 60 Glu Gly Gin Gly Leu

Glu 65

lie Gly Arg val 70 Pro Asp Asn Gly 75 Thr Glu Phe Ala 80

Pro

Lys Phe Pro Gly 85 Glu Lys val Thr Met Thr 90 Arg Thr Asp Thr ser He 95 Ala Ser

Thr

Ala Tyr Met 100 Leu ser Arg Leu 105 Ser Asp Asp Thr 110 Val

Tyr

Tyr

Cys 115 Gly Ala Arg Glu ASp Tyr 120 Val Asp Gly Thr Tyr Thr 125 Ala Trp Phe Pro

Tyr

Trp 130 Gin Gly Thr Leu 135 Thr Val ser Ser 140 Ser Thr Lys

Gly 145

pro Ser val Phe Pro 150 Leu Ala Pro cys Ser 155 Arg Ser Thr Ser Glu 160

Ser

Thr Ala Ala Leu 165 Trp Gly cys Leu Val Lys 170 Leu Asp Tyr Phe Pro Glu 175 His Pro

Val

Thr val Ser 180 val Asn Ser Gly Ala 185 Gly Thr ser Gly Val 190 Ser Thr

Phe

pro Ala 195 Leu Gin Ser ser 200 Leu Tyr ser Leu 205 ser val

val

Thr 210 Val Pro ser Ser Asn 215 Phe Gly Thr Gin Thr 220 Tyr Thr Cys Asn

val 225

Asp His Lys Pro ser 230 Asn Thr Lys val Asp 235 Lys Thr val Glu Arg 240

Lys

Cys Cys val Glu 245 Leu cys Pro Pro Cys Pro 250 Pro Ala Pro Pro val Ala 255 Met Gly

Pro

Ser val Phe 260 Phe pro pro Lys 265 Lys Asp Thr Leu 270 He

ser

Arg Thr 275 Glu Pro Glu val Thr cys 280 Trp val val val ASp val 285 val ser His Glu

Asp

Pro 290 Ala val Gin Phe Asn 295 Arg Tyr val Asp Gly 300 Asn Glu val His

Asn 305 val

Lys Thr Lys Pro 310 Thr Glu Glu Gin Phe 315 ASp ser Thr Phe 328 Lys

val

Ser val Leu 325 Val val His Gin 330 Trp Leu Asn Gly 335

Glu

Tyr Lys Cys 340 Ser Lys val Ser Asn Lys 345 Gin Gly Leu pro Ala Pro 350 Gin lie

Glu

Lys

Thr lie 355 Pro Lys Thr Lys Gly 360 Glu Pro Arg Glu Pro 365 Gin val Tyr

Thr

Leu 370 pro Ser Arg Glu 375 Met Thr Lys Asn 380 Val ser Leu

Thr 385

Cys Leu val Lys Gly 390 Phe Tyr pro Ser Asp 395 He Ala Val Glu Trp 400

Glu

Ser Asn Gly Gin 405 Gly Pro Glu Asn Asn Tyr 410 Tyr Lys Thr Thr Pro pro 415 val Met

Leu

Asp ser Asp 420 Ser Phe Phe Leu 425 Ser Lys Leu Thr 430 Asp

Lys

Ser Arg 435 Trp Gin Gin Gly Asn 440 Val Phe Ser Cys Ser 445 val Met His

Glu Gly 465

Ala 450 Lys Leu His Asn His Tyr 455 Thr Gin Lys Ser Leu 460 Ser Leu Ser Pro

<210> 236 <211> 1398 5 <212> ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

5

10

15

20

25

30

35

atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg tgcaaggctt ctggattcga cattaaggac ggacaagggc ttgagtggat cggaagggtt ccgaagttcc cgggcaaggt caccatgacc gagctgagca ggctgagatc tgacgacacg gatggtacct acacctggtt tccttattgg gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc tacacctgca acgtagatca caagcccagc aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct tccctgtctc cgggtaaa

gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120 tactatatac actgggtgcg acaggcccct 180 gatcctgaca atggtgagac tgaatttgcc 240 acagacacgt ccatcagcac agcctacatg 300 gccgtgtatt actgtgcgag agaagactac 360 ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt 420 ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 480 gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540 cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 600 gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 660 aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 720 gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 780 atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 840 gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 900 cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 960 gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 1020 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1080 cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1140 ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200 aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 1260 gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320 ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380

1398

<210> 237 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 237

Gly Thr Ser Asn Leu Ala ser 1 5

<210> 238 <211>8 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 238

imagen43

<210> 239 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 239

Arg Ala ser Gin Asp lie ser Ser Tyr Leu Asn 15 10

<210> 240 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Ser Thr ser Arg Leu Asn Ser 1 5

<210> 241 <211>8 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 241

Gin Gin Asp lie Lys His Pro Thr 1 5

<210> 242 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 242

Lys Ala ser Gin Asp Val Phe Thr Ala val Ala 15 10

<210> 243 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 243

Trp Ala ser Thr Arg His Thr 1 5

<210> 244 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 244

Gin Gin Tyr ser Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5

<210> 245 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 245

Asp Tyr Asn Met His 1 5

<210> 246 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 247 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 247

Leu Gly Tyr Asp Asp He Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp val 15 10

<210> 248 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 248

Asp Tyr Asn Met His 1 5

<210> 249 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 249

Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 250 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 250

Leu val Tyr Asp Gly Ser Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10

<210> 251 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 251

Asp Tyr Asn Met His

<210> 252 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 253 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 253

Leu Gly Tyr val Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr phe Asp val 15 10

<210> 254 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 254

Asp Tyr Asn Met His 1 5

<210> 255 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 255

Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 256 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 256

Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp val 15 10

<210> 257 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 257

Asp Tyr Asn Met His 1 5

<210> 258 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 259 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 259

Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp val .1 5 10

<210> 260 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 260

Asp Tyr Asn Met His 1 5

<210> 261 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 261

Glu lie Asn pro Asn ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 262 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 262

Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp val 15 10

<210> 263 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 263

Asp Tyr Asn Met His 1 5

<210> 264 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 265 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 265

Leu Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Glu Asp Trp Tyr Phe Asp val 15 10

<210> 266 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 266

imagen44

<210> 267 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 267

Arg lie Asp Pro Asp Asn Gly Glu Ser Thr Tyr val Pro Lys Phe Gin 1 5 10 15

Gly

<210> 268 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 268

Glu Gly Leu Asp Tyr Gly Asp Tyr Tyr Ala val Asp Tyr 15 10

<210> 269 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 269

Asp Tyr lie Met His 1 5

<210> 270 <211> 17 <212> PRT

<400> 270

Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Gig Tyr Asn Glu Lys phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 271 <211> 11 <212> PRT

10 <213> Mus musculus

<400> 271

ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr 15 10

15

<210> 272 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

20

<400> 272

Asp Tyr Tyr Met His

1 5

25 <210> 273

<211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

30

<400> 273

Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp lie lie Tyr Asp Pro Lys Phe Gin 1 5 - 10 15

Gly

35 <210> 274

<211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus

40 <400> 274

Asp Ala Gly Asp Pro Ala Trp Phe Thr Tyr 15 10

<210> 275 45 <211> 10

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 275 50

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Arg Ala Ser ser Ser val Tyr Tyr Met His 15 10

<210> 276 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 276

Ala Thr ser Asn Leu Ala Ser 1 5

<210> 277 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 277

<210> 278 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 278

ser val ser ser Thr lie Ser Ser Asn His Leu His 15 10

<210> 279 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 279

Gly Thr ser Asn Leu Ala ser 1 5

<210> 280 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

imagen45

<400> 280

Gin Gin Trp ser Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5

<210> 281 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

imagen46

<210> 282 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 282

Ala Thr ser Asn Leu Ala ser 1 5

<210> 283 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 283

Gin Gin Trp ser ser Asp Pro Leu Thr 1 5

<210> 284 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 284

Arg Ala ser Ser Ser val Thr ser ser Tyr Leu Asn 15 10

<210> 285 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 285

Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5

<210> 286 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 286

Gin Gin Tyr Asp Phe Phe Pro Ser Thr 1 5

<210> 287 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

Asp Tyr Phe lie His 1 5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 288 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 288

Arg Leu Asp Pro Glu Asp Gly Glu ser Asp Tyr Ala Pro Lys phe Gin 15 10 15

ASp

<210> 289 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 289

Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Phe Phe Pro Tyr 15 10

<210> 290 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 290

Asp Phe Tyr Leu His 1 5

<210> 291 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 291

Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Leu Tyr Asp Pro Lys Phe Gin 15 10 15

Asp

<210> 292 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 292

Glu Ala Asp Tyr phe His Asp Gly Thr Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp val 15 10 15

<210> 293 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

ASp

1

Tyr Tyr lie

His

5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 294 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 294

Arg val Asp Pro Asp Asn Gly Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe Pro 15 10 15

Gly

<210> 295 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 295

Glu Asp Tyr Asp Gly Thr Tyr Thr Trp Phe Pro Tyr 15 10

<210> 296 <211>5 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 296

Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5

<210> 297 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 297

Asp lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Thr Tyr Asn His Lys Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 298 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 298

Glu Thr Ala val lie Thr Thr Asn Ala Met Asp 15 10

<210> 299 <211> 130 <212> PRT <213> Mus musculus

Met 1

Asp Phe Gin Val 5 Gin lie

val

lie Leu ser 20 Ser Ser Gly Glu

Met

Ala Ala 35 Pro Gly Glu

ser

ser SO lie Ser Ser ser Asn 55

Thr 65 Val

Ser Pro Lys Leu Trp 70 Ser He

pro

val Arg Phe 85 Met Gly

Thr

He Ser ser 100 Glu Ala

Gin Lys

Trp Arg 130 Thr 115 Thr Thr Tyr Thr

<210> 300 <211> 390 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 300

Phe

Ser Phe 10 Met Leu He ser val 15 Thr

He

Val 25 Leu Thr Gin Ser Pro 30 Ala Leu

Lys 40

val Thr lie Thr Cys 45 Ser Val ser

Leu

His Trp Ser Gin 60 Asn Gin Lys ser Gly

Tyr

Gly Thr Ser 75 Gly Leu Ala Ser Gly 80 Leu

ser

Gly Ser 90 Ala Thr ser Tyr ser 95 cys

Glu

Asp 105 Ala Thr Tyr Tyr 110 Gin

Phe 120

Gly Ser Gly Thr Lys 125 Leu Glu Leu

I

10

atggattttc aggtgcagat tttcagcttc atgctaatca gtgtcacagt catattgtcc 60

agtggagaaa ttgtgctcac ccagtctcca gcactcatgg ctgcatctcc aggggagaag 120

gtcaccatca cctgcagtgt cagctcgagt ataagttcca gcaacttaca ctggtcccag 180

cagaagtcag gaacctcccc caaactctgg atttatggca catccaacct tgcttctgga 240

gtccctgttc gcttcagtgg cagtggatct gggacctctt attctctcac aatcagcagc 300

atggaggctg aagatgctgc cacttattac tgtcaacagt ggactactac gtatacgttc 360

ggatcgggga ccaagctgga gctgaaacgt 390

<210> 301 <211> 141 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 301

Met

Gly Trp Asn Trp He lie Phe Phe Leu Met Ala Val val Thr Gly

1

5 10 15

val

Asn ser Glu val Gin Leu Arg Gin Ser Gly Ala Asp Leu val Lys

20 25 30

Pro

Gly Ala 35 Tyr Ser val Lys Leu Ser 40 val Cys Thr Ala Ser Gly 45 Glu phe Asn He

Lys

Asp 50 Trp Tyr He His Trp 55 Asp Lys Gin Arg pro 60 Glu Gin Gly Leu

Glu 65 Pro

lie Gly Arg lie 70 Lys Pro Asp Asn Gly 75 Ala Ser Thr Tyr val 80 Asn

Lys

Phe Gin Gly Ala Thr lie Thr Asp Thr Ser ser

Thr

Ala 85 90 95

Tyr

Leu Gin Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala lie

100 105 110

Tyr

Tyr

Cys 115 Trp Gly Arg Glu Gly Leu 120 Ser Asp Tyr Gly Asp Tyr 125 Ser Tyr Ala Val

Asp

Tyr 130 Gly Gin Gly Thr val Thr val Ser

135 140

20

<210> 302 <211> 423 <212> ADN <213> Mus musculus 25

5

10

15

20

25

30

atgggatgga actggatcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60 gtgcagttgc ggcagtctgg ggcagacctt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120 tgcacagctt ctggcttcaa cattaaagac tactatatac actgggtgaa gcagaggcct 180 gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgata atggtgaaag tacatatgtc 240 ccgaagttcc agggcaaggc cactataaca gcagacacat catccaacac agcctaccta 300 caactcagaa gcctgacatc tgaggacact gccatctatt attgtgggag agaggggctc 360 gactatggtg actactatgc tgtggactac tggggtcaag gaacctcggt cacagtctcg 420 age 423

<210> 303 <211> 130 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 303

Met

Asp Met Arg val c pro Ala Gin Leu Leu 10 Leu Gly Leu Leu Leu Leu 15 ser Trp

X Leu

pro Gly Ala 20 J Arg cys Asp lie Gin 25 Thr Gin Ser pro 30 Phe

Leu

ser Ala 35 Ser Val Gly ASp Arg 40 val Thr lie Thr cys 45 Ser val ser

ser

ser 50 Ala lie ser Ser ser Asn 55 lie Leu His Trp Tyr Gin 60 Ser Asn 75 Gly Thr Gin Lys Pro Gly

Lys 65 val

Pro Lys Leu Leu 70 Ser Tyr Gly Thr Leu Ala Ser Gly 80 Leu

pro

ser Arg Phe 85 Leu Gly ser Gly Ser 90 Phe Glu Phe Thr 95 cys

Thr

lie ser ser 100 Gin Pro Glu Asp 105 Ala Thr Tyr Tyr 110 Gin

Gin Lys

Trp Arg 130 Thr 115 Thr Thr Tyr Thr Phe 120 Gly Gin Gly Thr Lys 125 Leu Glu lie

<210> 304 <211> 390 <212>ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 304

atggatatgc gcgtgccggc gcagctgctg egetgegata ttcagctgac ccagagcccg gtgaccatta cctgcagcgt gageageage cagaaaccgg gcaaagcgcc gaaactgctg gtgccgagcc getttagegg cagcggcagc ctgcagccgg aagattttgc gacctattat ggccagggca ccaaactgga aattaaacgt

ggcctgctgc tgctgtggct gccgggcgcg 60 agctttctga gegegagegt gggegatege 120 attageagea gcaacctgca ttggtatcag 180 atttatggca ccagcaacct ggegagegge 240 ggcaccgaat ttaccctgac cattagcagc 300 tgccagcagt ggaccaccac ctataccttt 360

390

<210> 305 <211> 141 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

5

10

15

20

25

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

<400> 305

Met

Asp Trp Thr Trp Ser lie Leu Phe Leu val Ala Ala Pro Thr Gly

1

5 10 15

Ala

His Ser Glu 20 ser Val Gin Leu val Gin 25 cys Ser Gly Ala Glu val 30 Phe Lys Lys

Pro Gly

Ala 35 Tyr val Lys val ser 40 val Lys Ala Ser Gly 45 Gly Asn He

Lys

Asp Tyr lie Hi s Trp Arg Gin Ala Pro Gin Gly Leu

50 55 60

Glu

Trp Met Gly Arg lie Asp pro Asp Asn Gly Glu Ser Thr Tyr val

65

70 75 80

Pro

Lys Phe Gin Gly 85 Glu Arg Val Thr Met Thr Thr 90 Arg ser Asp Thr Ser Thr 95 Ala Ser

Thr Ala

Tyr Met Leu Arg ser Leu Asp Asp Thr val

100 105 110

Tyr

Tyr

Cys 115 Trp Ala Arg Glu Gly Leu 120 Leu Asp Tyr Gly ASp Tyr 125 ser Tyr Ala val

Asp

Tyr Gly Gin Gly Thr val Thr val Ser

130

135 140

<210> 306 <211> 423 <212>ADN

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 306

atggattgga cctggagcat tctgtttctg gtggcggcgc cgaccggcgc gcatagcgaa 60

gtgcagctgg tgcagagcgg cgcggaagtg aaaaaaccgg gcgcgagcgt gaaagtgagc 120

tgcaaagcga gcggctttaa cattaaagat tattatattc attgggtgcg ccaggcgccg 180

ggccagggcc tggaatggat gggccgcatt gatccggata acggcgaaag cacctatgtg 240

ccgaaatttc agggccgcgt gaccatgacc accgatacca gcaccagcac cgcgtatatg 300

gaactgcgca gcctgcgcag cgatgatacc gcggtgtatt attgcgcgcg cgaaggcctg 360

gattatggcg attattatgc ggtggattat tggggccagg gcaccctggt gaccgtctcg 420

age 423

<210> 307 <211> 127 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 307

Met Met ser ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys Phe Gin 15 10 15

Gly Thr Arg cys Asp lie Gin Met Thr Gin Thr Thr ser ser Leu Ser 20 25 30

Ala ser Leu Gly Asp Arg val Asn lie ser cys Arg Ala ser Gin Asp 35 40 45

lie ser ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr val 50 55 60

Lys Leu Leu lie Tyr ser Thr ser Arg Leu Asn ser Gly val Pro ser

65 70 75 80

Arg Phe ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie ser

85 90 95

Asn Leu Ala Gin Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin Asp lie 100 105 110

Lys His pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 115 120 125

5

10

15

20

25

30

35

<210> 308 <211> 381 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 308

atgatgtcct

gatatccaga

atcagctgca

gatggaactg

aggttcagtg

gaagatattg

accaagttgg

ctgctcagtt

tgacacagac

gggcaagtca

ttaaactcct

gcagtgggtc

ccacttactt

agctgaaacg

ccttggtctc

tacatcctcc

ggacattagc

gatctactcc

tgggacagat

ttgccaacag

t

ctgttgctct

ctgtctgcct

agttatttaa

acatcaagat

tattctctca

gatattaagc

gttttcaagg

ctctgggaga

actggtatca

taaactcagg

ctattagcaa

atccgacgtt

taccagatgt 60 cagagtcaac 120 gcagaaacca 180 agtcccatca 240 cctggcacaa 300 cggtggaggc 360

<210> 309 <211> 139 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 309

Met Glu Trp lie Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu ser Gly Thr Ala Gly

10

15

val His ser Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu Val Lys

20

25

30

Pro Gly Ala ser val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35

40

45

Thr Asp Tyr lie Met His Trp val Lys Gin Lys pro Gly Gin Gly Leu

50

55

60

Glu Trp lie Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn

65

70

75

80

Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr ser Asp Lys Ser Ser Ser

85

90

95

Thr Ala Tyr Met Asp Leu Ser ser Leu Thr Ser Glu Gly ser Ala val

100

105

110

Tyr Tyr Cys Ala Arg ser lie T^r Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr

115

Trp Gly Gin Gly Thr Leu val Thr val ser ser

125

130

135

<210> 310 <211> 417 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 310

atggaatgga tctggatatt gtccagctgc agcagtctgg tgcaaggctt ctgggttcac gggcagggcc ttgagtggat gagaagttca aaggcaaggc gatctcagca gtctgacctc tactacgatg ccccgtttgc

tctcttcctc ctgtcaggaa acctgagctg gtaaagcctg attcactgac tacattatgc tggatatatt aatccttaca cacactgact tcagacaaat tgagggctct gcggtctatt ttactggggc caagggactc

ctgcaggtgt ccactctgag 60 gggcttcagt gaagatgtcc 120 actgggtgaa gcagaagcct 180 atgatgatac tgaatacaat 240 cctccagcac agcctacatg 300 actgtgcaag atcgatttat 360 tggtcacagt ctcgagc 417

<210> 311 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

5

10

15

20

25

Met

Met

ser ser Ala Gin Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu cys Phe Gin

1

Thr 5 10 15

01 y

Arg cys Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser

Ala

20 25 30

Ser

Val Gly ASp Arg val Thr lie Thr cys Arg Ala ser Gin Asp

He

35 40 45

ser

ser

Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys

Leu Leu He Tyr ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly val Pro Ser

65

70 75 80

Arg

Phe Ser Gly Ser ec Gly Ser Gly Thr Asp on Phe Thr Leu Thr He QC Ser

Ser

Leu Gin Pro O J Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin y ^ ASp He

100 105 110

Lys

His Pro Thr phe Gly Gin Gly Thr Lys val Glu lie Lys Arg

115 120 125

<210> 312 <211> 381 <212>ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 312

atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60

gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc 120

atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 180

gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca 240

cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 300

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc 360

accaaggtgg agatcaaacg t 381

<210> 313 <211> 139 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 313

Met

Glu Trp He Trp C lie Phe

val

His Ser Glu val Gin Leu

20

Pro

Gly ser Ser val Lys val

35

Thr

Asp Tyr lie Met His Trp

50 55

Glu

Trp Met Gly Tyr lie Asn

65

70

Glu

Lys Phe Lys Gl y DC Arg val

Thr

Ala Tyr Met i nn Glu Leu Ser

Tyr

Tyr

Cys JAJ\J Ala Arg Ser He

115

Trp

Gly Gin Gly Thr Leu Val

130 135

<210> 314 <211> 107 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

Leu

Phe Leu Leu ser Gly Thr Ala Gly

10 15

val

Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys

25 30

ser A(\

Cys Lys Ala Ser Gly AS Phe Thr Phe

*rU val

Arg Gin Ala Pro fin Gly Gin Gly Leu

Pro

Tyr Asn Asp 7c w Asp Thr Glu Tyr Asn fin

Thr

lie Thr i j Ala Asp Lys ser Thr Ser

90 95

ser

Leu Arg Ser GlU Asp Thr Ala val

105 110

Tyr

Tyr

Tyr

Asp Ala Pro Phe Ala

Tyr

120

125

Thr

Val Ser Ser

<400> 314

10

Asp

lie Gin Met Thr c Gin Thr Thr Ser ser 10 Ala ser 25 Asp Gly Leu Ser Ala ser Leu 15 Ser Gly

ASp

Arg val Asn 20 Tyr lie Ser cys Arg Gin Asp lie ser 30 Leu Tyr

Leu

Asn Trp Gin Gin Lys Pro Thr val Lys Leu lie

35 40 45 Phe

Tyr

Ser 50 Thr Ser Arg Leu Asn 55 ser Gly val Pro Ser 60 Arg Ser Gly

Ser

Gly ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser Asn Leu Ala Gin

65

70 75 80

Glu

Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Asp lie Lys His Pro Thr

85 90 95

Phe

Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

100 105

<210> 315 <211> 128 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 315

Met

Lys Ser Gin Thr Gin val Phe val Tyr Met Leu Leu Trp Leu ser

1

5 10 15

Gly

val Glu Gly 20 Gly Asp He val Met Thr 25 lie Gin ser His Lys Phe 30 ser Met ser

Thr

ser Val 35 Phe Thr Asp Arg val Thr 40 Tyr Thr cys Lys Ala 45 Gly Gin ASp

Val

Ala val Ala Trp Gin Gin Lys Pro Gin ser Pro

50 55 60

Lys

Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly val Pro Asp

65

70 75 80

Arg

Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie ser

85 90 Gin 95

Asn

val Gin Ser Glu ASp Leu Ala Asp Tyr Phe cys Gin Tyr ser

100 105 110

Ser

Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

115 120 125

5

10

15

20

25

30

<210> 316 <211> 381 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 316

atgaagtcac agacccaggt ctttgtatac atgttgctgt ggttgtctgg tgttgaagga 60

gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacgt cagtaggaga cagggtcacc 120

atcacctgca aggccagtca ggatgtcttt actgctgtag cctggtatca acagaaacca 180

ggacaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat 240

cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcagtct BOO

gaagacttgg cagattattt ctgtcaacaa tatagcagct atcctctcac gttcggtgct 360

gggaccaagt tggagctgaa a 381

<210> 317 <211> 138 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 317

Met

Gly Trp Asn Trp lie lie Phe phe Leu Met Ala Val val Thr Gly

1

5 10 15

val

Asn Ser Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu val Arg

20 25 30

Pro

Gly Ala 35 Asp Tyr Leu val Lys Leu ser 40 val Cys Lys Ala ser Gly 45 Glu Phe Asn lie

Lys

Tyr Met His Trp Lys Gin Arg Pro Gin Gly Leu

50

55 60 He

Glu 65 pro

Trp lie Gly Arg lie 70 Gly Lys Asp Pro Glu Asn Gly Asp 75 Thr Thr Asp He Tyr Asp 80 Asn

Lys Phe

Gin Ala ser lie Thr ser ser

85 90 95 val

Thr

Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Thr ser Glu ASp Thr Ala

100 105 Pro Ala Trp Phe 110

Tyr

Tyr cys Ala Tyr Asp Ala Gly ASP Thr Tyr Trp

115 120 125

Gly Gin Gly Thr Leu val Thr val ser Ser

130 135

<210> 318 <211> 411 <212>ADN <213> Mus musculus

<400> 318

atgggatgga actggatcat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60

gttcagctgc agcagtctgg ggctgagctt gtgaggccag gggccttagt caagttgtcc 120

tgcaaagctt ctggcttcaa tattaaagac tactatatgc actgggtgaa gcagaggcct 180

gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgaga atggtgatat tatatatgac 240

ccgaagttcc agggcaaggc cagtataaca acagacacat cctccaacac agcctacctg 300

cagctcagca gcctgacgtc tgaggacact gccgtctatt actgtgctta cgatgctggt 360

gaccccgcct ggtttactta ctggggccaa gggactctgg tcaccgtctc g 411

<210> 319 <211> 130 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado

5

10

15

20

25

Met Asp Met

Arg Val c Pro Ala Gin Leu Leu 10 Met Gly Leu Leu Leu Leu 15 ser Trp

X Leu Arg Gly

Ala 20 Ser 3 Arg cys Asp He Gin 25 val Thr Gin Ser pro 30 Lys Ser

Leu ser Ala 35

val Gly Asp Arg 40 Thr lie Thr Cys 45 Ala Ser

Gin Asp Val 50 Ala Pro Lys 65 Pro Ser Arg

Phe Thr Ala val 55 Tyr Ala Trp Tyr Gin Gin 60 Arg Lys pro Gly Lys

Leu

Leu

lie 70 Gly Trp Ala Ser Thr 75 Thr His Thr Gly val 80 Thr

Phe

Ser 85 Gin ser Gly Ser Gly 90 Ala Asp Phe Thr Leu 95 Gin

lie Ser ser

Leu 100 pro Glu Asp Phe 105 Thr Tyr Tyr cys 110 Gin

Tyr Ser Ser 115

Tyr Pro Leu Thr Phe 120 Gly Gly Gly Thr Lys 125 val Glu lie

Lys Arg -nn

<210> 320 <211> 390 <212>ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 320

atggatatgc gcgtgccggc gcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gcgcggcgcg 60 cgctgcgata tccagatgac ccagagcccg agcagcctga gcgcgagcgt gggcgatcgc 120 gtgaccatta cctgcaaagc gagccaggat gtgtttaccg cggtggcgtg gtatcagcag 180 aaaccgggca aagcgccgaa actgctgatt tattgggcga gcacccgcca taccggcgtg 240 ccgagtcgct ttagcggcag cggcagcggc accgatttta ccctgaccat tagcagcctg 300 cagccggaag attttgcgac ctattattgc cagcagtata gcagctatcc gctgaccttt 360 ggcggcggca ccaaagtgga aattaaacgt 390

<210> 321 <211> 138 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 321

5

10

15

20

25

Met

Asp Trp Thr Trp Ser lie Leu Phe Leu val Ala Ala Pro Thr Gly

1

5 10 15

Ala

His Ser Glu val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys

Ala 20 25 30

Pro

Gly Ser val Lys val Ser 40 Val cys Lys Ala ser Gly Phe 45 Gly Gin Asn lie

Lys

Asp 50 Trp Tyr Tyr Met His Trp 55 Asp Arg Gin Ala pro 60 ASp Gly Leu

Glu 65 Pro

lie Gly Arg He 70 Arg pro Glu Asn Gly 75 Thr Thr 90 Arg ser lie lie Tyr Asp 80 Ser

Lys

Phe Gin Gly 85 Glu val Thr Met ASp Thr ser Thr 95 Ala

Thr

Ala Tyr Met Leu Arg Ser Leu ASP Asp Thr Val

100 105 110

Tyr

Tyr

Cys 115 Gly Ala Tyr Asp Ala Gly 120 Val ASp pro Ala Trp Phe Thr 125 Tyr Trp

Gly

Gin Thr Leu Val Thr Ser ser

130

135

<210> 322 <211> 414 <212>ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado <400> 322

atggattgga cctggagcat tctgtttctg gtggcggcgc cgaccggcgc gcatagcgaa 60

gtgcagctgg tgcagagcgg cgcggaagtg aaaaaaccgg gcgcgagcgt gaaagtgagc 120

tgcaaagcga gcggctttaa cattaaagat tattatatgc attgggtgcg ccaggcgccg 180

ggccagggcc tggaatggat cggccgcatt gatccggaaa acggcgatat tatttatgat 240

ccgaaatttc agggccgcgt gaccatgacc accgatacca gcaccagcac cgcgtatatg 300

gaactgcgca gcctgcgcag cgatgatacc gcggtgtatt attgcgcgta tgatgcgggc 360

gatccggcgt ggtttaccta ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtctc gage 414

<210> 323 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 323

Thr

ASp Ala Ala Pro Thr val Ser lie Phe Pro Pro Ser ser Glu Gin

1

5 10 15

Leu

Thr Ser Gly Gly Ala ser val Val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

20 25 30

Pro

Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg Gin

35 40 45

Asn

Gly 50 ser Val Leu Asn ser Trp 55 Leu Thr Asp Gin Asp ser 60 ASp Lys ASp ser Thr

Tyr 65 His

Met Ser Ser Thr 70 cys Thr Leu Thr Lys 75 Lys Glu Tyr Glu Arg 80 Pro

Asn

ser Tyr Thr 85 Phe Glu Ala Thr His 90 Cys Thr Ser Thr Ser 95

lie

val Lys ser Asn Arg Asn Glu

100 105

<210> 324 <211> 324 <212> PRT <213> Mus musculus

Ala 1

Lys Thr Thr Pro c Pro Ser val Tyr Pro 10 Gly Leu Ala Pro Gly Ser 15 Gly Ala

X Ala

Gin Thr Asn 20 Pro 3 Ser Met val Thr Leu 25 Trp cys Leu val Lys 30 Leu Tyr

Phe

Pro Glu Val Thr val Thr Asn ser Gly ser Ser ser

35 40 45

Gly

Val His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin ser Asp Leu Tyr Thr Leu

SO

55 60

Ser

Ser

Ser

val Thr val pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val

65

70 75 80

Thr

Cys Asn val Ala 85 Asp His Pro Ala ser ser 90 Pro Thr Lys val Asp Lys 95 val Lys

lie

Val Pro Arg ion Cys Gly Cys Lys 105 Pro Cys lie cys Thr 110 Asp pro

Glu

val Ser IvV Ser val Phe lie phe Pro Lys pro Lys val Leu

115 120 125

Thr

He 130 Asp Thr Leu Thr Pro Lys 135 Gin val Thr cys Val Val 140 Val val ASp lie Ser

Lys

Asp Pro Glu val phe Ser Trp Phe Asp ASp val Glu

145

150 155 160

val

His Thr Ala Gin Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr

165 170 175

Phe

Arg Ser Val 180 Phe Ser Glu Leu pro He 185 Asn Met His Gin Asp Trp 190 Pro Leu Asn

Gly

Lys Glu 195 Lys Lys cys Arg val 200 Thr ser Ala Ala Phe 205 Lys Ala Pro

He

Glu 210 Tyr Thr lie Ser Lys 215 pro Lys Gly Arg Pro 220 Ala Ala pro Gin

Val

Thr lie Pro Pro Lys Glu Gin Met Lys Asp Lys val

225

230 235 240

ser

Leu Thr cys Met 245 Asn lie Thr Asp Phe Phe 2S0 Glu Pro Glu Asp He Thr 255 Thr Val

Glu

Trp Gin Trp 260 ASp Gly Gin Pro Ala 265 Tyr Asn Tyr Lys Asn 270 Lys Gin

pro

lie Met 275 Lys Thr Asp Gly ser 280 Ala Phe val Tyr ser 285 Thr Leu Asn

val

Gin 290 His ser Asn Trp Glu 295 Asn Gly Asn Thr Phe 300 Lys Cys Ser

val

Leu

Glu Gly Leu His His His Thr Glu Ser Leu Ser His

305

310 315 320

ser

Pro Glv LVS

<210> 325 <211> 106 5 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 325

10

Thr

val Ala Ala Pro Ser val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin

1

5 10 15

Leu

Lys Ser Gly 20 Ala Thr Ala ser Val val 25 Lys cys Leu Leu Asn Asn 30 Leu Phe Tyr

Pro

Arg Glu Lys val Gin Trp val Asp Asn Ala Gin Ser

35 40 45

Gly

Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp ser Lys Asp ser Thr

50

Thr 55 60

Tyr

Ser Leu Ser Ser Leu Thr Leu ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

65

70 75 80

His

Lys val Tyr Ala 85 Phe Cys Glu val Thr His 90 cys Gin Gly Leu Ser ser 95 Pro

Val

Thr Lys ser- Asn Arg Gly Glu

100 105

<210> 326 <211> 327 <212> PRT

5

10

<213> Homo sapiens <400> 326

Ala

Ser Thr Lys Gly c Pro Ser val Phe Pro 10 Gly Leu Ala Pro cys ser 15 Asp Arg

X ser

Thr Ser Glu 20 pro J Ser Thr Ala Ala Leu 25 Trp cys Leu val Lys 30 Leu Tyr

Phe

Pro Glu Val Thr Val Ser Asn Ser Gly Ala Thr Ser

35 40 45

Gly

val His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50

55 60

Leu

Ser ser val Val Thr val Pro ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65

70 75 80

Tyr

Thr cys Asn val 85 Lys Asp His Lys Pro ser 90 Cys Asn Thr Lys val ASp 95 Ala Lys

Arg

val Glu Ser Tyr Gly Pro pro Pro Pro cys pro Pro

100 105 110

Glu

Phe Leu 115 Leu Gly Gly Pro ser Val 120 Thr phe Leu Phe Pro Pro 125 Cys Lys Pro Lys

Asp

Thr Met lie ser Arg pro Glu val Thr val Val val

130

135 140

Asp

val Ser Gin Glu Asp Pro Glu val Gin Phe Asn Trp Tyr val

Asp

145

150 155 160

Gly

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe

165 170 175

Asn

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr val Leu His Gin Asp

180 185 190

Trp

Leu Asn 195 ser Gly Lys Glu Tyr Lys 200 He cys Lys val Ser Asn 205 Gly Lys Gly Leu

Pro

Ser lie Glu Lys Thr ser Lys Ala Lys Gin Pro Arg

210 215 220

Glu

Pro Gin val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys

225

230 235 240

Asn

Gin Val Ser Leu 245 Trp Thr cys Leu val Lys 250 Gin Gly Phe Tyr pro ser 255 Tyr Asp

lie

Ala val Glu Glu Ser Asn Gly Pro Glu Asn Asn Lys

260 265 270

Thr

Thr

pro 275 Thr pro Val Leu Asp Ser 280 Arg Asp Gly Ser Phe Phe 285 Asn Leu Tyr Ser

Arg

Leu 290 Ser Val Asp Lys Ser 295 Ala Trp Gin Glu Gly 300 Tyr Val Phe Ser

Cys

Val Met His Glu Leu His Asn His Thr Gin Lys Ser

305

310 315 320

Leu

ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 327 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 327

Glu val Girt Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys pro Gly Ala 15 10 15

Ser val Lys Met ser cys Lys Ala ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

lie Met His Trp val Lys Gin Lys Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp He 35 40 45

Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys ser ser ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu ser ser Leu Thr ser Glu Gly ser Ala val Tyr Tyr cys

85 90 95

5

10

15

20

25

Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gl 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr val ser Ser

115

120

<210> 328 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 328

Glu val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu val Lys Pro Gly Ala

10

15

Ser val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr

20

25

30

lie Met His Trp val Lys Gin Lys Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie

35

40

45

Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe

50

55

60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr ser Asp Lys Ser Ser ser Thr Ala Tyr

65

70

75

80

Met Asp Leu ser Ser Leu Thr Ser Glu Gly Ser Ala val Tyr Tyr cys

85

90

95

Ala Arg ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin

100 105

Gly Thr Leu val Thr Val Ser Ser

110

115

120

<210> 329 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 329

Glu val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly ser

10

15

Ser val Lys val Ser cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr

20

25

30

lie Met His Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met

35

40

45

Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe

50

55

60

Lys Gly Arg val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr ser Thr Ala Tyr

65

70

75

80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys

85

90

95

Ala Arg ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu val Thr val ser Ser

115

120

<210> 330 <211> 226 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 330

Glu val Gin Leu Gin Gin ser Gly Pro Glu Leu val Lys pro Gly Ala 1 5 10 15

ser val Lys Met ser cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

lie Met His Trp Val Lys Gin Lys Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr ser Asp Lys Ser ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Gly Ser Ala val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu val Thr val ser ser Thr val Ala Ala Pro Ser Val Phe 115 120 125

lie Phe Pro Pro ser Asp Glu Gin Leu Lys ser Gly Thr Ala ser val 130 135 140

val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys val Gin Trp

145 150 155 160

Lys val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu ser val Thr

165 170 175

Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu ser Ser Thr Leu Thr 180 185 190

Leu ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys val Tyr Ala cys Glu val 195 200 205

Thr His Gin Gly Leu ser ser Pro Val Thr Lys ser Phe Asn Arg Gly 210 215 220

Glu Cys 225

<210> 331 <211> 447 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 331

Glu

val Gin Leu val c Gin Ser Gly Ala Glu 10 Gly Val Lys Lys Pro Gly 15 Asp ser

X Ser

Val Lys val 20 Trp J ser cys Lys Ala ser 25 Pro Phe Thr Phe Thr 30 Glu Tyr

He

Met His 35 val Arg Gin Ala 40 Gly Gin Gly Leu 45 Trp Met

Gly

Tyr 50 Gly lie Asn Pro Tyr Asn 55 Thr ASp Asp Thr Glu Tyr 60 Thr Asn Glu Lys Phe

Lys 65 Met

Arg val Thr He 70 Leu Ala Asp Lys Ser 75 Thr ser Thr Ala Tyr 80 cys

Glu

Leu ser Ser 85 Tyr Arg Ser Glu ASp 90 pro Ala val Tyr Tyr 95 Gly

Ala

Arg Ser lie 100 val Tyr Tyr Asp Ala 105 Ala Phe Ala Tyr Trp 110 Pro Gin

Gly

Thr Leu 115 Thr val Ser Ser 120 ser Thr Lys Gly 125 ser Val

Phe

Pro 130 Leu Ala Pro Cys ser 135 Arg Ser Thr ser Glu 140 ser Thr Ala Ala

Leu 145

Gly Cys Leu val Lys 150 Asp Tyr Phe Pro Glu 155 pro Val Thr Val ser 160

Trp

Asn ser Gly Ala 165 Leu Thr Ser Gly val 170 His Thr Phe Pro Ala 175 val

Leu

Gin ser ser 180 Gly Leu Tyr Ser Leu 185 Ser ser Val val Thr 190 val Pro

Ser

ser Ser 195 Leu Gly Thr Lys Thr 200 Tyr Thr Cys Asn Val 205 Asp His Lys

Pro

ser 210 Asn Thr Lys val Asp 215 Lys Arg val Glu ser 220 Lys Tyr Gly

Pro

pro 225

cys Pro Pro cys pro 230 Ala Pro Glu phe Leu 235 Gly Gly pro Ser Val 240

Phe

Leu Phe Pro pro 245 Cys Lys Pro Lys Asp Thr 250 Val Leu Met He ser Arg 255 pro Thr

Pro l

Glu val Thr 260 val Val val Asp 265 ser Gin Glu ASp 270 Glu

val

Gin Phe 275 Asn Trp Tyr val Asp 280 Gly Val Glu val His 285 Asn Ala Lys

Thr

Lys 290 Pro Arg Glu Glu Gin 295 Phe Asn ser Thr Tyr 300 Arg val Val ser

val 305

Leu Thr Val Leu His 310 Gin Asp Trp Leu Asn 315 Gly Lys Glu Tyr 3S

cys

Lys val Ser Asn 325 Lys Gly Leu Pro Ser 330 ser lie Glu Lys Thr 335 lie

ser

Lys Ala Lys 340 Glu Gly Gin pro Arg Glu 345 Asn Pro Gin val Tyr Thr 350 Thr Leu pro

Pro

Ser Gin 355 Glu Met Thr Lys 360 Gin val Ser Leu 365 cys Leu

Val

Lys 370 Gin Gly Phe Tyr Pro Ser 375 Tyr ASp lie Ala val Glu 380 Pro Trp Glu Ser Asn

Gly 385 ASp

Pro Glu Asn Asn 390 Leu Lys Thr Thr Pro 395 Thr val Leu Asp Ser 400

Gly

ser Phe Phe 405 Tyr Ser Arg Leu 410 val Asp Lys Ser 415 ~V V Arg

Trp

Gin Glu Gly 420 Asn Val Phe Ser Cys 425 ser Val Met His Glu 430 Ala Leu

His

Asn His 435 Tyr Thr Gin Lys Ser 440 Leu ser Leu ser Leu 445 Gly Lys

<210> 332 <211> 107 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

5

10

Asp lie Gin Met Thr Gin lie Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Arg val ser lie Ser cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Phe Lys Leu Leu lie 35 40 45

Phe Tyr Thr ser Arg Leu Leu ser Gly val Pro ser Arg Phe ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Tyr Asn Leu Glu Gin

65 70 75 80

Glu Asp phe Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105

<210> 333 <211> 324 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 333

Ala

Lys Thr Thr Pro Pro Ser val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser

Ala

1

5 10 15

Ala

Gin Thr Asn 20 Pro Ser Met Val Thr Leu 25 Trp Gly Cys Leu Val Lys 30 Leu Gly Tyr

Phe

pro Glu val Thr val Thr Asn Ser Gly ser Ser Ser

35 40 45

Gly

Val 50 Ser His Thr Phe Pro Ala 55 pro val Leu Gin ser Asp Leu 60 pro Ser Tyr Thr Leu

Ser

ser val Thr val ser Ser Thr Trp Glu Thr val

65

70 75 80

Thr

cys Asn val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys val Asp Lys Lys

85 90 95

lie

val Pro Arg 100 ASp Cys Gly cys Lys 105 Pro cys lie Cys Thr 110 val pro

Glu

val Ser ser Val Phe lie Phe Pro pro Lys Pro Lys Asp val Leu

115 120 125

Thr

lie Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys val Val val Asp He ser

130 135 140

Lys

Asp Asp Pro Glu val Gin Phe ser Trp Phe val Asp ASp val Glu

145

150 155 160

Val

His Thr Ala Gin Thr Gin pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr

val 165 170 His Gin Asp 175

Phe

Arg Ser Ser Glu Leu Pro He Met Trp Leu Asn

180 185 190

Gly

Lys Glu Phe Lys Cys Arg val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro

195

200 205

He

Glu 210 Tyr Lys Thr lie ser Lys 215 pro Thr Lys Gly Arg Pro Lys 220 Ala Lys Ala Pro Gin

val

Thr He Pro Pro Lys Glu Gin Met Asp Lys

val

225

230 235 240

Ser

Leu Thr Cys Met lie Thr Asp Phe phe Pro Glu Asp lie Thr val

245 250 255

Glu

Trp Gin Trp 260 Asp Asn Gly Gin Pro Ala 265 Tyr Glu Asn Tyr Lys Asn 270 Lys Thr Gin

pro

lie Met Thr Asp Gly Ser Phe He Tyr Ser Leu Asn

275 280 285

val

Gin 290 His Lys Ser Asn Trp Glu 295 Asn Ala Gly Asn Thr Phe Thr 300 Lys Ser cys Ser

val

Leu

GlU Gly Leu His His His Thr Glu Leu Ser His

305

310 315 320

ser

pro Gly Lys

<211> 213 <212> PRT <213> Mus musculus

5 <400> 334

Asp lie Gin Met Thr Gin Thr Thr ser ser Leu ser Ala ser Leu Gly 15 10 15

Asp Arg Val Asn lie Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr ser Thr Ser Arg Leu Asn ser Gly val Pro Ser Arg Phe ser Gly 50 55 60

Ser Gly ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser Asn Leu Ala Gin

65 70 75 80

Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe cys Gin Gin Asp lie Lys His pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Asp Ala Ala pro 100 105 110

Thr val ser lie Phe Pro Pro ser Ser Glu Gin Leu Thr ser Gly Gly 115 120 125

Ala Ser val Val cys Phe Leu Asn Asn phe Tyr Pro Lys Asp lie Asn 130 135 140

Val Lys Trp Lys lie Asp Gly ser Glu Arg Gin Asn Gly val Leu Asn

145 150 155 160

Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met ser ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr Thr 180 185 190

cys Glu Ala Thr His Lys Thr ser Thr ser Pro lie val Lys ser Phe 195 200 205

Asn Arg Asn Glu Cys 210

<210> 335 10 <211> 444

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 335 15

Glu 1

Val Gin Leu Gin 5 Gin ser

ser

Val Lys Met 20 Trp ser Cys Lys

He

Met His 35 lie Val Lys Gin

Gly

Tyr 50 Asn Pro Tyr Asn 55

Lys 65 Met

Gly Lys Ala Thr Leu 70 Leu Thr

Asp

Leu Ser Ser 85 Tyr Thr

Ala

Arg Ser lie 100 val Tyr Tyr

Gly

Thr Leu 115 Leu Thr val Ser

Tyr

Pro 130 Ala Pro Gly Ser 135

Leu 145

Gly cys Leu val Lys 150 Gly

Trp

Asn Ser Gly Ser 165 Leu Leu Ser

Leu

Gin Ser Asp 180 Tyr Thr

ser

Thr Trp 195 Thr Pro Ser Glu Thr

ser

ser 210 Lys val Asp Lys 215

Lys 225

pro cys lie Cys Thr 230 val

Pro

Pro

Lys pro Lys 245 Val Asp val

Thr

Cys val Val 260 Asp He

ser

Trp Phe 275 Glu Val Asp Asp val

Arg

Glu 290 Gin Phe Asn ser 295

He 305

Met His Gin Asp Trp 310 Leu

Asn

Ser Ala Ala Phe 325 Pro Ala

Lys

Gly Arg pro 340 Ala Lys Ala pro

Glu

Gin Met 355 pro Lys Asp Lys

Phe

phe 370 Glu Asp He Thr 375

Ala 385

Glu Asn Tyr Lys Asn 390 Thr

Tyr

Phe val Tyr ser 405 Thr Lys Leu

Gly

Asn Thr Phe 420 Cys Ser

His

Thr Glu 435 Lys Ser Leu ser

<210> 336 <211> 108 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

Gly

pro Glu 10 Leu Val Lys Pro Gly 15 Ala

Ala

Ser 25 Gly Phe Thr Phe Thr 30 Asp Tyr

Lys 40 Asp

Pro Gly Gin Gly Leu 45 Asn Glu Trp lie

Asp

Thr Glu Tyr 60 Ser Glu Lys phe

Ser

Asp Lys ser 75 Ser Ser Thr Ala Tyr 80 cys

Ser

Glu Gly 90 Pro Ala val Tyr Tyr 95 Gly

Asp

Ala 105 Ala phe Ala Tyr Trp 110 Pro Gin

ser 120

Lys Thr Thr Pro 125 ser val

Ala

Ala

Gin Thr Asn 140 Ser Met Val Thr

Tyr

Phe Pro Glu 155 Pro Val Thr val Thr 160

Ser

Gly Val 170 His Thr Phe Pro Ala 175 val

Leu

ser 185 ser Ser val Thr val 190 Pro Ser

Val 200

Thr cys Asn val Ala 205 His Pro Ala

Lys

lie val pro 33 ser Asp Cys Gly Cys

Pro

Glu val ser 235 Val Phe lie Phe 240

Leu

Thr lie 250 Thr Leu Thr Pro Lys 255 Val

Ser

Lys 265 Asp Asp Pro Glu Val 270 Gin Phe

Glu 280

Val His Thr Ala Gin 285 Thr Gin Pro

Thr

Phe Arg Ser Val 300 Phe Ser Glu Leu Pro

Asn

Gly Lys Glu 315 Lys Cys Arg val 320

Pro

lie Glu 330 Lys Thr He Ser Lys 335 Thr

Gin

val 345 Tyr Thr He Pro Pro 350 Pro Lys

Val 360 Val

Ser Leu Thr Cys Met 365 Asn lie Thr Asp

Glu

Trp Gin Trp 380 ASp Gly Gin Pro

Gin

Pro He Met 395 Lys Thr ASp Gly Ser 400 Ala

Asn

val Gin 410 Ser Asn Trp Glu 415

val His 440

Leu 425 Ser His pro Glu Gly Gly Lys Leu His 430 Asn His

Asp lie Gin Met Thr Gin ser pro ser ser Leu ser Ala ser val Gly 15 10 15

Asp Arg val Thr lie Thr cys Lys Ala Ser Gin Asp val Phe Thr Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 50 55

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys 85

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys val 100

Gly val Pro ser Arg Phe ser Gly 60

Leu Thr lie ser ser Leu Gin Pro 75 80

Gin Gin Tyr Ser ser Tyr Pro Leu 90 95

Glu lie Lys Arg 105

<210> 337 <211> 324 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 337

10

gatatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcga attacctgca aagcgagcca ggatgtgttt accgcggtgg ggcaaagcgc cgaaactgct gatttattgg gcgagcaccc cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga gaagattttg cgacctatta ttgccagcag tatagcagct ggcaccaaag tggaaattaa acgt

gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 cgtggtatca gcagaaaccg 120 gccataccgg cgtgccgagt 180 ccattagcag cctgcagccg 240 atccgctgac ctttggcggc 300

324

<210> 338 <211> 119 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 338

20

Glu val Gin Leu val Gin 1 5

ser val Lys val ser cys 20

Tyr Met His Trp Val Arg

Gly Arg lie Asp Pro Glu 50

Gin Gly Arg Val Thr Met 65 70

Met Glu Leu Arg Ser Leu 85

Ala Tyr Asp Ala Gly Asp 100

Thr Leu val Thr Val Ser 115

ser

Gly Ala Glu 10 Gly val Lys Lys Pro Gly 15 Asp Ala

Lys

Ala ser 25 Pro Phe Asn lie ms 30 Glu Tyr

Gin

Ala 40 Gly Gly Gin Gly Leu 45 Asp Trp He

Asn 55 Thr

Asp lie He Tyr 60 Thr Pro Lys Phe

Thr

Asp Thr ser 75 Thr Ser Thr Ala Tyr 80 cys

Arg

Ser Asp Asp 90 Phe Ala val Tyr Tyr 95 Gin

Pro Ser

Ala Trp 105 Thr Tyr Trp Gly 110 Gly

<210> 339 <211> 357 <212> ADN <213> Mus musculus

gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac agctgcaaag cgagcggctt taacattaaa gattattata ccgggccagg gcctggaatg gatcggccgc attgatccgg gatccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg accaccgata atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat accgcggtgt ggcgatccgg cgtggtttac ctattggggc cagggcaccc

cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 tgcattgggt gcgccaggcg 120 aaaacggcga tattatttat 180 ccagcaccag caccgcgtat 240 attattgcgc gtatgatgcg 300 tggtgaccgt ctcgagc 357

<210> 340 <211> 1395 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 340

atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc ccactccgag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaaqcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120

10

tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ttccccccaa aacccaagga caccctcatg gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc agcaatgggc agccggagaa caactacaag tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg ctgtctccgg gtaaa

tatattatgc actgggtgcg tcaggcccct 180 aacccttata atgatgacac cgaatacaac 240 gcggacaaat ccacgagcac agcctacatg 300 gccgtgtatt actgtgcgcg ttcgatttat 360 caagggactc tggtcaccgt ctctagtgcc 420 gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 480 tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga 600 ccctccagca acttcggcac ccagacctac 660 accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa 720 ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 780 atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 840 gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 900 gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 960 tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 1020 gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 1080 ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1140 taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200 accacacctc ccatgctgga ctccgacggc 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1320 cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1380

1395

<210> 341 <211> 213 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 341

A5D

lie Gin Met Thr Gin ser pro ser Ser Leu ser Ala Ser val Gly

1

5 10 15

Asp

Arg val Thr 20 Tyr He Thr Cys Arg Ala 25 Gly ser Gin Asp lie ser 30 Leu Ser Tyr

Leu

Asn Trp 35 Thr Gin Gin Lys Pro 40 Ser Lys Ala pro Lys 45 Arg Leu lie

Tyr

ser 50 Gly ser Arg Leu Asn 55 Phe Gly Val pro ser 60 ser Phe Ser Gly

ser

Ser Gly Thr Asp Thr Leu Thr lie Ser Leu Gin Pro

65

70 75 80

Glu

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Asp lie Lys His Pro Thr

85 90 95

Phe

Gly Gin Gly 100 He Thr Lys val Glu He 105 Asp Lys Arg Thr Val Ala 110 ser Ala pro

Ser

val Phe Phe pro Pro ser Glu Gin Leu Lys Gly Thr

115 120 125

Ala

ser 130 Gin Val val cys Leu Leu 135 Asn Asn Asn Phe Tyr Pro 140 Gly Arg Glu Ala Lys

val

Trp Lys val Asp Ala Leu Gin Ser Asn Ser Gin Glu

145

150 155 160

Ser

Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

Ser

Ser

165 170 175

Thr

Leu Thr Leu 180 Thr ser Lys Ala ASp Tyr 185 Ser Glu Lys His Lys Val 190 Lys Tyr Ala

cys

Glu val His Gin Gly Leu Ser pro val Thr Ser Phe

195 200 205

Asn

Arg Gly Glu Cys

210

<210> 342 <211> 639 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 342

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca 180

cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc 300

accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360

gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420

agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480

agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540

agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600

agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639

10

<210> 343 <211> 235 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 343

Met 1

Asp Met Arg val 5 Pro Ala Gin Leu Leu Gly 10 Leu Leu Leu Leu 15 Trp

Leu

Arg Gly Ala 20 Ser Arg cys Asp lie Gin 25 Val Met Thr Gin Ser Pro 30 cys Arg 45 Lys Pro Ser ser

Leu

Ser Ala 35 lie Val Gly Asp Arg 40 Asn Thr He Thr Ala Ser

Gin

Asp 50 pro ser ser Tyr Leu 55 Tyr Trp Tyr Gin Gin 60 Leu Gly Lys

Ala 65 Pro

Lys Leu Leu He 70 Gly Ser Thr Ser Arg 75 Gly Thr 90 Ala Thr Asn Ser Gly val 80 Thr

ser

Arg Phe ser 85 Gin ser Gly ser Asp Phe Thr Leu 95 Gin

lie

ser ser Leu 100 Pro Glu Asp Phe 105 Tyr Tyr Cys 110 Gin

Asp

lie Lys 11S val His Pro Thr Phe Gly 120 val Gin Gly Thr Lys val Glu 125 Pro Ser lie Lys

Arg

Thr 130 Ala Ala Pro Ser 135 Phe lie Phe Pro 140 Asp Glu

Gin 145

Leu Lys Ser Gly Thr 150 Ala Ser val val Cys 155 Leu Leu Asn Asn Phe 160

Tyr

Pro Arg Glu Ala 165 Gin Lys val Gin Trp Lys val 170 Glu Gin Asp Asn Ala Leu 175 ASp Gin

ser

Gly Asn ser 180 Glu ser Val Thr 185 Asp ser Lys 190 Ser

Thr

Tyr ser 195 Lys Thr Leu Ser Ser Thr Leu 200 Glu Arg Thr Leu Ser Lys Ala Asp 205 Gly Leu Tyr Glu

Lys pro 225

His 210 val val Lys Tyr Ser Ala Phe 230 cys 215 Asn Val Gly Thr His Glu cys 235 Gin 220 Ser Ser

<210> 344 <211> 705 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 344

10

atggacatga gggtgcccgc agatgtgaca tccagatgac gtcaccatca cttgccgcgc aaaccaggga aagcccctaa ccatcacgct tcagtggcag caacctgaag attttgcaac caaggcacca aggtggagat ccatctgatg agcagttgaa tatcccagag aggccaaagt caggagagtg tcacagagca acgctgagca aagcagacta ggcctgagct cgcccgtcac

tcagctcctg gggctcctgc ccagtctcca tcctccctgt aagtcaggat attagcagct gctcctgatc tattctactt tggctctggg acagatttca ttactactgt caacaggata caaacgtacg gtggctgcac atctggaact gcctctgttg acagtggaag gtggataacg ggacagcaag gacagcacct cgagaaacac aaagtctacg aaagagcttc aacaggggag

tgctgtggct gagaggtgcc ctgcatctgt aggtgaccgt atttaaattg gtatcagcag cccgtttgaa tagtggggtc ctctcaccat cagcagtctg ttaaacaccc tacgttcggt catctgtctt catcttcccg tgtgcctgct gaataacttc ccctccaatc gggtaactcc acagcctcag cagcaccctg cctgcgaagt cacccatcag agtgt

60

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

705

<210> 345 <211> 446 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 345

GlU *1

Val Gin Leu val c Gin Ser Gly Ala Glu 10 Gly val Lys Lys Pro Gly 15 Asp ser

1 Ser

val Lys val 20 Trp Ser cys Lys Ala ser 25 Pro Phe Thr Phe Thr 30 Gl U Tyr

He

Met His 35 He val Arg Gin Ala 40 ASp Gly Gin Gly Leu 45 Asn Trp Met

Gly

Tyr 50 Gly Asn Pro Tyr Asn 55 Thr Asp Thr Glu Tyr 60 Thr’ Glu Lys Phe

Lys

Arg val Thr He Ala Asp Lys ser Ser Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Met

Glu Leu Ser Ser 85 Tyr Leu Arg Ser Glu Asp 90 Pro Thr Ala val Tyr ST Gly cys

Ala

Arg Ser lie 100 val Tyr Tyr Asp Ala 105 Ala Phe Ala Tyr Trp 110 Pro Gin

Gly

Thr Leu Thr val Ser Ser Ser Thr Lys Gly Ser val

115 120 125

Phe

Pro Leu Ala Pro Cys ser Arg Ser Thr ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu

Gly cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe pro Glu pro val Thr val Ser

145

150 155 160

Trp

Asn Ser Gly Ala 165 Gly Leu Thr Ser Gly val 170 Ser His Thr Phe Pro Ala 175 val val

Leu

Gin ser ser Leu Tyr Ser Leu Ser val val Thr pro

180 185 190

Ser

Ser

Asn 195 Asn Phe Gly Thr Gin Thr 200 Lys Tyr Thr Cys Asn val 205 Lys Asp His Lys

Pro

Ser Thr Lys val ASp Thr Val Glu Arg Cys cys val

210 215 220

Glu

Cys pro Pro cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro Ser val Phe

225

230 235 240

Leu

Phe Pro Pro Lys Pro Lys ASp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr pro

245 250 255

Glu

Val Thr cys Val Val val ASp val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gin

Phe Asn 275 Arg Trp Tyr Val Asp Gly 280 Asn Val Glu Val His Asn 285 val Ala Lys Thr

Lys

Pro Glu Glu Gin Phe Ser Thr Phe Arg Val Ser Val

290

295 300

Leu 305 Lys

Thr Val val His Gin 310 Gly Asp Trp Leu Asn Gly 315 He Lys Glu Tyr Lys cys

val

Ser Asn Lys Leu Pro Ala Pro Glu Lys Thr He ser

325 330 335

Lys

Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr Thr Leu pro pro

340 345 350

ser

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr cys Leu Val

355 360 365

Lys

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu ser Asn Gly

370

375 380

Gin

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr pro pro Met Leu Asp Ser ASp

385

390 Thr 395 400

Gly

Ser Phe phe Leu Tyr Ser Lys Leu val Asp Lys ser Arg Trp

405 410 415

Gin

Gin

Gly Asn val Phe Ser Cys Ser val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 346 <211> 1338 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 346

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggttt taccttcacc gactatatta tgcactgggt gcgtcaggcc 120

cctggtcaag ggcttgagtg gatgggctat atcaaccctt ataatgatga caccgaatac 180

aacgagaagt tcaagggccg tgtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgcg ctctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgttcgatt 300

tattactacg atgccccgtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt 360

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420

agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480

tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 540

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 600

tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 660

aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 720

ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780

gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 840

gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 900

gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960

aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1020

cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080

caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140

gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgaq 1200

ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260

gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320

tccctgtctc cgggtaaa 1338

<210> 347 <211> 465 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 347

Met •j

Asp Trp Thr Trp 5 Arg lie Leu Phe Leu 10 Ser val Ala Ala Ala Thr 15 Lys Gly

Ala

His Ser Glu val Gin Leu val Gin Gly Ala Glu val Lys

20 25 30

Pro

Gly Ser Ser val Lys val Ser cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Thr

Asp 50 Trp Tyr lie Met His Trp 55 Asn val Arg Gin Ala Pro 60 A5p Gly Gin Gly Leu

Glu

Met Gly Tyr He Pro Tyr Asn Asp Thr Glu Tyr Asn

65

70 75 80

Glu

Lys Phe Lys Gly 85 Glu Arg val Thr He Thr 90 Arg Ala Asp Lys ser Thr 95 Ala Ser

Thr

Ala Tyr Met Leu Ser Ser Leu Ser Glu ASp Thr Val

1O0 105 110

Tyr

Tyr

cys 115 Gin Ala Arg Ser lie Tyr 120 Thr Tyr Tyr Asp Ala Pro 125 Ser Phe Ala

Tyr

Trp

Gly Gly Thr Leu val val Ser Ser Ala Thr Lys Gly

130 135 140

Pro

ser val Phe Pro Leu Ala pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

145

150 155 160

Thr

Ala Ala Leu Gly cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly val His Thr Phe

180 185 190

Pro

Ala val Leu Gin ser ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser val Val

Val 195 200 205

Thr

Pro Ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn val

210 215 220

Asp

His Lys pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr val Glu Arg Lys

225

230 235 240

Cys

Cys

val Glu cys Pro Pro cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro

val 245 250 255

Ser

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie

Ser

Thr 260 265 270

Arg

Pro Glu val Thr cys Val val val Asp val ser His Glu Asp

275 280 285

Pro

Glu val Gin phe Asn Trp Tyr val Asp Gly val gIu val His Asn

290 295 300

Ala

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg val

305

310 315 320

Val

ser Val Leu Thr val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

325 330 335

Tyr

Lys Cys Lys 340 Lys Val Ser Asn Lys Gly 345 Pro Leu Pro Ala Pro He 350 Val Glu Lys

Thr

lie Ser 355 Pro Thr Lys Gly Gin 360 Met Arg Glu pro Gin 365 val Tyr

Thr

Leu

pro Ser Arg Glu Glu Thr Lys Asn Gin Ser Leu Thr

370 375 380

cys

Leu val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser ASp He Ala val Glu Trp Glu

385

Gly Gin 390 395 400

Ser

Asn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu

405 410 415

ASp

Ser Asp Gly 420 Gin Ser Phe phe Leu Tyr 425 Phe Ser Lys Leu Thr Val 430 Met ASp Lys

Ser

Arg Trp Gin Gly Asn val ser Cys ser val His Glu

435 440 445

Ala

Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu ser Leu Ser Pro Gly

450 455 460

Lys

465

<210> 348 <211> 1395 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

atggactgga cctggaggat cctcttcttg gtggcagcag ccacaggagc gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac tatattatgc actgggtgcg ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc aacccttata atgatgacac gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gcggacaaat ccacgagcac gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgcg tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa ctgtctccgg gtaaa

ccactccgag

gaaggtctcc

tcaggcccct

cgaatacaac

agcctacatg

ttcgatttat

ctctagtgcc

ctccgagagc

ggtgtcgtgg

gtcctcagga

ccagacctac

tgagcgcaaa

agtcttcctc

cacgtgcgtg

ggacggcgtg

gttccgtgtg

caagtgcaag

caaagggcag

caagaaccag

ggagtgggag

ctccgacggc

ggggaacgtc

gagcctctcc

60

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1395

5 <210> 349

<211> 417 <212> ADN <213> Mus musculus

10 <400> 349

atggaatgga tctggatatt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactctgag 60

gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120

tgcaaggctt ctggttttac cttcaccgac tatattatgc actgggtgcg tcaggcccct 180

ggtcaagggc ttgagtggat gggctatatc aacccttata atgatgacac cgaatacaac 240

gagaagttca agggccgtgt cacgattacc gcggacaaat ccacgagcac agcctacatg 300

gagctgagca gcctgcgctc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgcg ttcgatttat 360

tactacgatg ccccgtttgc ttactggggc caagggactc tggtcacagt ctcgagc 417

<210> 350 15 <211> 218

<212> PRT <213> Mus musculus

<400> 350

20

5

10

15

20

25

30

35

Asp

lie val Leu Thr Gin Ser Pro Ala ser Leu Ala val ser Leu Gly

1

5 10 15

Gin

Arg Ala Thr 20 Tyr lie Ala cys Lys Ala 25 Gin Ser Gin ser Val Asp 30 Gin Tyr Asp

Gly

Thr ser Met Asn Trp Tyr Gin Lys Pro Gly Pro pro

35 40 45

Lys

Leu Leu He Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu ser GlU He pro Ala

50

55 60

Arg

Phe ser Gly Thr Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn lie His

65

70 75 80

Pro

val Glu Glu Glu Asp lie Thr Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Ser Asn

85 90 95

Glu

Asp Pro Phe 100 Ala Thr Phe Gly Gly Gly 105 He Thr Lys Leu Glu He 110 ser Lys Arg

Ala

Asp Ala Pro Thr val Ser Phe pro Pro ser Glu Gin

115 120 125

Leu

Thr Ser Gly Gly Ala ser Val val cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140 Glu Gin

Pro

Lys Asp lie Asn val Lys Trp Lys He Asp Gly Ser Arg

145

150 155 160

Asn

Gly val Leu Asn 165 Ser ser Trp Thr Asp Gin 170 Thr ASp Ser Lys Asp ser 175 Glu Thr

Tyr

ser Met ser 180 Tyr Thr Leu Thr Leu 185 Thr Lys ASp Glu Tyr 190 Thr Arg

His

Asn ser Thr cys Glu Ala His Lys Thr Ser Ser pro

195 200 205

He

val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

210 215

<210> 351 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 351

Lys Ala ser Gin ser val Asp Tyr Asp Gly Thr Ser Tyr Met Asn 15 10 15

<210> 352 <211>7 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 352

Ala Ala ser Asn Leu Glu ser 1 5

<210> 353 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 353

Gin Gin Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr 1 5

<210> 354 <211> 657 <212>ADN <213> Mus musculus

<400> 354

gacattgtgt tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60 atcgcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggta ctagttatat gaattggtac 120 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 180 gagatcccag ccaggtttag tggcactggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatat cacaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgttc 300 acgttcggag gggggaccaa gttggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 360 atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 420 aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 480 aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 540 agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 600 actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgttag 657

<210> 355 <211> 238 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 355

Met

Glu Thr Asp Thr He Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1

5 10 15

Gly

Ser Thr Gly 20 Gly Asp He Val Leu Thr 25 He Gin Ser pro Ala Ser 30 ser Leu Ala

Val

Ser Leu Gin Arg Ala Thr Ala Cys Lys Ala Gin Ser

35 40 45

val

Asp Tyr Asp Gly Thr Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro

50 55 60

Gly

Gin pro pro Lys Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser

65

70 75 80

Glu

lie Pro Ala Arg 85 Pro Phe Ser Gly Thr Gly 90 Asp Ser Gly Thr Asp Phe 95 Tyr Thr

Leu

Asn lie His 100 Asn val Glu Glu Glu 105 Thr He Thr Thr Tyr 110 Thr Cys

Gin

Gin

Ser 115 Glu Asp Pro Phe 120 Phe Gly Gly III Lys Leu

Glu

lie Lys Arg Ala ASp Ala Ala pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro

130 135 140

Ser

Ser

Glu Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val val Cys Phe Leu

145

150 155 160

Asn

Asn

Phe Tyr Pro 165 Asn Lys Asp lie Asn val 170 Ser Lys Trp Lys lie Asp 175 Asp Gly

Ser

Glu Arg Gin Gly val Leu Asn Trp Thr Asp Gin

Ser

180 185 190

Lys

Asp ser Thr Tyr ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp

195

200 205

Glu

Tyr Glu Arg His Asn ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr

210 215 220

Ser

Thr Ser Pro lie val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu cys

225

230 235

10

<210> 356 <211> 717 <212> ADN

15 <213> Mus musculus

<400> 356

atggagacag

gacattgtgt

atcgcctgca

caacagaaac

gagatcccag

cctgtggagg

acgttcggag

acacaatcct

tgacccagtc

aggccagcca

caggacagcc

ccaggtttag

aggaggatat

gggggaccaa

gctatgggtg

tccagcttct

aagtgttgat

acccaaactc

tggcactggg

cacaacctat

gttggaaata

ctgctgctct

ttggctgtgt

tatgatggta

ctcatctatg

tetgggacag

tactgtcagc

aaacgggctg

gggttccagg

ctctagggca

ctagttatat

ctgcatccaa

acttcaccct

aaagtaatga

atgctgcacc

ctccactggt 60 gagggccacc 120 gaattggtac 180 tctagaatct 240 caacatccat 300 ggatccgttc 360 aactgtatcc 420

atcttcccac

aacaacttct

aatggcgtcc

agcaccctca

actcacaaga

catccagtga

accccaaaga

tgaacagttg

cgttgaccaa

catcaacttc

gcagttaaca

catcaatgtc

gactgatcag

ggacgagtat

acccattgtc

tctggaggtg

aagtggaaga

gacagcaaag

gaacgacata

aagagcttca

cctcagtcgt

ttgatggcag

acagcaccta

acagctatac

acaggaatga

gtgcttcttg 480 tgaacgacaa 540 cagcatgagc 600 ctgtgaggcc 660 gtgttag 717

<210> 357 <211> 442 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 357

5

Gin

Val Gin Leu Gin Gin pro Gly Thr Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1

5 10 15

Ser

val Lys Leu 20 Trp Ser Cys Lys Ala Ser 25 pro Gly Tyr lie Phe Thr 30 Glu Thr Tyr

Trp

Met Asn 35 He val Lys Gin Arg 40 Ser Gly Gin Gly Leu 45 Asp Trp lie

Gly

Met 50 Asp His Pro Ser Ala 55 Thr Glu He Arg Leu 60 Ser Gin Lys Phe

Lys 65 Met

Lys Ala Thr Leu 70 Pro Leu Asp Lys Ser 75 Ser Ser Thr Ala Tyr 80 Cys

His

Leu ser Gly Thr ser val Asp Ala val Tyr Tyr

85 90 95

Ala

Arg ser Gly 100 Val Glu Trp Gly ser Met 105 Thr ASp Tyr Trp Gly Gin 110 val Gly Thr

Ser

val Thr Ser Ser Ala Lys Thr Pro Pro Ser Tyr pro

115 120 125

Leu

Ala pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn ser Met val Thr Leu Gly

130 135 140

Cys 145

Leu val Lys Gly Tyr 150 Phe pro Glu Pro val 155 Thr Val Thr Trp Asn 160

Ser

Gly ser Leu Ser Ser Gly val His Thr Phe Pro Ala val Leu Gin

165 170 175

Ser

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser ser val Thr val Pro ser ser Thr

180 185 190

Trp

Pro Ser Glu Thr val Thr Cys Asn val Ala His Pro Ala ser Ser

195 200 205

Thr

Lys 210 lie val Asp Lys Lys lie 215 Glu val pro Arg ASp Cys 220 Phe Gly cys Lys Pro

cys

Cys Thr val Pro Val Ser Ser val lie Phe pro Pro

225

230 235 240

Lys

Pro Lys Asp val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr cys

245 250 255

Val

Val

val Asp lie Ser Lys ASp ASp Pro Glu val Gin phe Ser Trp

260 265 270

Phe

val Asp 275 ASP Val Glu val His 280 Thr Ala Gin Thr Gin 285 pro Arg Glu

Glu

Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser val Ser Glu Leu pro lie Met

290 295 300

His

Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys cys Arg Val Asn Ser

305

310 315 320

Ala

Ala

Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly

325 330 335

Arg

pro Lys Ala Pro Gin val Tyr Thr lie Pro Pro Pro Lys Glu Gin

Ala 340 345 350

Met

Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met He Thr ASp phe Phe

Glu 360 365

Pro

Asp lie Thr Val Glu Trp Gin Trp Asn Gly Gin pro Ala Glu

370 375 380

Asn

Tyr Lys Asn Thr Gin 390 Asn Pro lie Met Asp Thr 395 Asn Asp Gly ser Tyr Phe 400 Asn

JO J He

Tyr Ser Lys Leu 405 ser val Gin Lys Ser 410 Gly Trp Glu Ala Gly 415 His

Thr

phe Thr Cys val Leu His Glu Leu His Asn His

Thr

Glu

420 425 430

Lys

ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 358 <211>5 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 358

Thr Tyr Trp Met Asn 1 5

5

10

15

20

25

30

<210> 359 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 359

Met lie His Pro ser Ala ser Glu lie Arg Leu Asp Gin Lys Phe Lys 1 5 10 15

ASp

<210> 360 <211>9 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 360

Ser Gly Glu Trp Gly Ser Met Asp Tyr

1

<210> 361 <211> 1329 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 361

caggtccaac tacagcagcc tgggactgag tcctgtaagg cttctggcta catcttcacc cctggacaag gccttgagtg gattggcatg gatcagaaat tcaaggacaa ggccacattg atgcacctca gcggcccgac atctgtggat gaatgggggt ctatggacta ctggggtcaa acgacacccc catctgtcta tccactggcc gtgaccctgg gatgcctggt caagggctat tctggatccc tgtccagcgg tgtgcacacc actctgagca gctcagtgac tgtcccctcc aacgttgccc acccggccag cagcaccaag ggttgtaagc cttgcatatg tacagtccca aagcccaagg atgtgctcac cattactctg atcagcaagg atgatcccga ggtccagttc acagctcaga cgcaaccccg ggaggagcag cttcccatca tgcaccagga ctggctcaat gcagctttcc ctgcccccat cgagaaaacc ccacaggtgt acaccattcc acctcccaag acctgcatga taacagactt cttccctgaa cagccagcgg agaactacaa gaacactcag atctacagca agctcaatgt gcagaagagc tctgtgttac atgagggcct gcacaaccac ggtaaatga

5

ctggtgaggc ctggaacttc agtgaagttg 60 acctactgga tgaactgggt gaaacagagg 120 attcatcctt ccgcaagtga aattaggttg 180 actcttgaca aatcctccag cacagcctat 240 tctgcggtct attactgtgc aagatcaggg 300 ggaacctcag tcaccgtctc ctcagccaaa 360 cctggatctg ctgcccaaac taactccatg 420 ttccctgagc cagtgacagt gacctggaac 480 ttcccagctg tcctgcagtc tgacctctac 540 agcacctggc ccagcgagac cgtcacctgc 600 gtggacaaga aaattgtgcc cagggattgt 660 gaagtatcat ctgtcttcat cttcccccca 720 actcctaagg tcacgtgtgt tgtggtagac 780 agctggtttg tagatgatgt ggaggtgcac 840 ttcaacagca ctttccgctc agtcagtgaa 900 ggcaaggagt tcaaatgcag ggtcaacagt 960 atctccaaaa ccaaaggcag accgaaggct 1020 gagcagatgg ccaaggataa agtcagtctg 1080 gacattactg tggagtggca gtggaatggg 1140 cccatcatgg acacagatgg ctcttacttc 1200 aactgggagg caggaaatac tttcacctgc 1260 catactgaga agagcctctc ccactctcct 1320

<210> 362 <211> 461 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 362

Met

Gly Trp Ser Ser c He lie Leu Phe Leu 10 Pro Val Ala Thr Ala Thr 15 val Gly

val

His Ser Gin val Gin Leu Gin Gin Gly Thr Glu Leu Arg

20 25 30

Pro

Gly Thr 35 Tyr ser val Lys Leu ser 40 Val Cys Lys Ala ser Gly 45 Gly Tyr He Phe

Thr

Thr 50 Trp Trp Met Asn Trp 55 His Lys Gin Arg pro 60 Glu Gin Gly Leu

Glu 65 Gin

lie Gly Met lie 70 Lys pro Ser Ala ser 75 Leu He Arg Leu Asp 80 Ser

Lys

Phe Lys Asp Ala Thr Leu Thr ASp Lys ser Ser

85 90 95

Thr

Ala Tyr Met His Leg ser Gly Pro Thr Ser val Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr

Tyr

Cys 115 Thr Ala Arg Ser Gly Glu 120 Ser Trp Gly ser Met Asp 125 Thr Tyr Trp Gly

Gin

Gly ser Val Thr val Ser Ala Lys Thr Pro Pro Ser

130 135 140

val

Tyr Pro Leu Ala pro Gly Ser Ala Ala Gin Thr Asn Ser Met Val

145

150 155 160

Thr

Leu Gly cys Leu 165 Gly val Lys Gly Tyr Phe 170 Gly Pro Glu Pro Val Thr 175 pro val

Thr

Trp Asn ser 180 Ser Ser Leu Ser ser 185 Leu val His Thr Phe 190 Thr Ala

val

Leu Gin Asp Leu Tyr Thr Ser Ser Ser val val pro

195 200 205

ser

ser

Thr Trp Pro Ser Glu Thr val Thr cys Asn val Ala His Pro

210 215 220

Ala 225 Cys

Ser Ser Thr Lys val 230 Cys Asp Lys Lys He val 235 val Pro Arg Asp cys Gly 240 He

Lys

pro Cys lie 245 Pro Thr val Pro Glu 250 Thr Ser Ser Val Phe 255 Pro

Phe

Pro Pro Lys 260 Val Lys Asp Val Leu 265 ser He Thr Leu Thr 270 Glu Lys

val

Thr cys 275 Val val Asp lie 280 Lys Asp ASp Pro 285 Val Gin

Phe

Ser 290 Arg Trp Phe Val Asp Asp 295 Asn Val Glu val His Thr 300 Ser Ala Gin Thr Gin

Pro

Glu Glu Gin Phe Ser Thr Phe Arg val ser Glu Leu

305

310 315 320

Pro

He Met His Gin 325 Ala Asp Trp Leu Asn Gly 330 lie Lys Glu Phe Lys Cys 335 ser Arg

val

Asn ser Ala phe pro Ala Pro Gl u Lys Thr He Lys

340 345 350

Thr

Lys Gly 355 Gin Arg Pro Lys Ala pro 360 Lys Gin val Tyr Thr He 365 Cys Pro pro Pro

Lys

Glu 370 Phe Met Ala Lys Asp 375 lie val Ser Leu Thr 380 Gin Met He Thr

Asp

Phe Pro Glu ASp Thr Val Glu Trp Trp Asn Gly Gin

385

390 395 400

Pro

Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gin Pro lie Met Asp Thr Asp Gly

405 410 415 Glu

Ser

Tyr Phe lie Tyr ser Lys Leu Asn Val Gin Lys Ser Asn Trp

420 425 430

Ala

Gly Asn Thr Phe Thr cys ser val Leu His Glu Gly Leu His Asn

His

435 440 445

His

Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 363 <211> 1386 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 363

atgggatgga gctctatcat cctcttcttg gtccaactac agcagcctgg gactgagctg tgtaaggctt ctggctacat cttcaccacc ggacaaggcc ttgagtggat tggcatgatt cagaaattca aggacaaggc cacattgact cacctcagcg gcccgacatc tgtggattct tgggggtcta tggactactg gggtcaagga acacccccat ctgtctatcc actggcccct accctgggat gcctggtcaa gggctatttc ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa cccaaggatg tgctcaccat tactctgact agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc cccatcatgc accaggactg gctcaatggc gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac ccagcggaga actacaagaa cactcagccc tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac gtgttacatg agggcctgca caaccaccat aaatga

<210> 364 <211> 106 5 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 364

gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60 gtgaggcctg gaacttcagt gaagttgtcc 120 tactggatga actgggtgaa acagaggcct 180 catccttccg caagtgaaat taggttggat 240 cttgacaaat cctccagcac agcctatatg 300 gcggtctatt actgtgcaag atcaggggaa 360 acctcagtca ccgtctcctc agccaaaacg 420 ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg 480 cctgagccag tgacagtgac ctggaactct 540 ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact 600 acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac 660 gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt 720 gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag 780 cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc 840 tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca 900 aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt 960 aaggagttca aatgcagggt caacagtgca 1020 tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca 1080 cagatggcca aggataaagt cagtctgacc 1140 attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag 1200 atcatggaca cagatggctc ttacttcatc 1260 tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct 1320 actgagaaga gcctctccca ctctcctggt 1380

1386

10

ASp

lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser val Gly

1

5 10 15

ASp

Arg val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu

Asn Trp Tyr Gin Gin Lys pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He

35 40 45

Tyr

ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50

55 60

Ser

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser ser Leu Gin Pro

65

70 75 80

Glu

Asp Phe Ala Thr QC Tyr Tyr cys Gin Gin on ASp He Lys His pro QC Thr

Phe

Gly Gin Gly O J Thr Lys val Glu He Lys

100 105

<210> 365 <211> 318 <212>ADN

15 <213> Mus musculus

<400> 365

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc 60

atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca 180

cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc 300

accaaggtgg agatcaaa 318

<210> 366 <211> 120 <212> PRT

5

10

15

20

25

<400> 366

Glu val Gin Leu val Gin Ser Gly Ala Glu val Lys Lys pro Gly ser 15 10 15

ser val Lys val ser cys.Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

lie Met His Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg val Thr lie Thr Ala Asp Lys ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser ser Leu Arg ser Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu val Thr Val Ser ser 115 120

<210> 367 <211> 360 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 367

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggttt taccttcacc gactatatta tgcactgggt gcgtcaggcc 120

cctggtcaag ggcttgagtg gatgggctat atcaaccctt ataatgatga caccgaatac 180

aacgagaagt tcaagggccg tgtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgcg ctctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgttcgatt 300

tattactacg atgccccgtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt 360

<210> 368 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 368

Asp lie Gin

<T> rt Thr Gin Ser Pro Ser ser Leu ser Ala ser val Gly

1

5 10 15

Asp Arg val

Thr 20 Tyr lie Thr Cys Lys Ala 25 Gly Ser Gin Asp val phe 30 Leu Thr Ala

val Ala Trp 35 Tyr Trp Ala 50 Ser Gly ser

Gin Gin Lys Pro 40 His Thr 55 Phe Thr Lys Ala Pro Lys 45 Arg Leu lie

Ser

Thr Arg Gly val Pro Ser 60 Ser Phe ser Gly

Gly

Thr Asp Leu Thr lie ser Leu Gin Pro

65

70 75 80

Glu Asp phe

Ala Thr 85 Gly Tyr Tyr Cys Gin Gin 90 lie Tyr ser Ser Tyr pro 95 Leu

Thr Phe Gly

Gly Thr Lys val Glu Lys Arg

100

105

<210> 369 <211> 324 <212> ADN <213> Mus musculus

gatatccaga tgacccagag cccgagcagc attacctgca aagcgagcca ggatgtgttt ggcaaagcgc cgaaactgct gatttattgg cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat gaagattttg cgacctatta ttgccagcag ggcaccaaag tggaaattaa acgt

5 <210> 370

<211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus

10 <400> 370

ctgagcgcga gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 accgcggtgg cgtggtatca gcagaaaccg 120 gcgagcaccc gccataccgg cgtgccgagt 180 tttaccctga ccattagcag cctgcagccg 240 tatagcagct atccgctgac ctttggcggc 300

324

Gill

Val Gin Leu Val Gin ser Gly Ala Glu val Lys Lys Pro Gly Ala

1

val 5 10 15

Ser

Lys val 20 Trp Ser Cys Lys Ala Ser 25 Pro Gly Phe Asn lie Lys 30 Glu Asp Tyr

Tyr

Met His Val Arg Gin Ala Gly Gin Gly Leu Trp lie

35 40 45

Gly

Arg lie Asp Pro Glu Asn Gly Asp lie lie Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gin

Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Met

Glu Leu Arg ser 85 Gly Leu Arg ser Asp Asp Thr 90 Phe Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Gin Cys

Ala

Tyr Asp Ala Asp Pro Ala Trp Tyr Trp Gly Gly

100 105 110

Thr

Leu Val Thr val Ser Ser

115

<210> 371 15 <211> 357

<212> ADN <213> Mus musculus

<400> 371

20

gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60

agctgcaaag cgagcggctt taacattaaa gattattata tgcattgggt gcgccaggcg 120

ccgggccagg gcctggaatg gatcggccgc attgatccgg aaaacggcga tattatttat 180

gatccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg accaccgata ccagcaccag caccgcgtat 240

atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat accgcggtgt attattgcgc gtatgatgcg 300

ggcgatccgg cgtggtttac ctattggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagc 357

<210> 372 <211> 108 25 <212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 372

ASp *1

lie Gin Leu Thr C Gin Ser

1 ASP

Arg val Thr ->n He Thr Cys

Asn

Leu His Trp Tyr Gin Gin

35

lie

Tyr Gly Thr ser Asn Leu

50 55

Gly

Ser Gly ser Gly Thr Glu

65

70

Pro

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr

Thr

Phe Gly Gin 03 Gly Thr Lys

100

<210> 373 <211> 324 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 373

Pro

Ser Phe Leu ser Ala ser val Gly

10 15

Ser

val ser Ser Ser He

Ser

Ser

Ser

25 30

Lys

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu

40

45

Ala

ser Gly val Pro fin Ser Arg Phe ser

Phe

Thr Leu Thr ou lie Ser Ser Leu Gin

75 80

Tyr

Cys Gin on Gin Trp Thr Thr Thr OR

Tyr

Leu

Glu lie Lys Arg

105

gatattcagc tgacccagag cccgagcttt ctgagcgcga gcgtgggcga tcgcgtgacc 60

attacctgca gcgtgagcag cagcattagc agcagcaacc tgcattggta tcagcagaaa 120

ccgggcaaag cgccgaaact gctgatttat ggcaccagca acctggcgag cggcgtgccg 180

agccgcttta gcggcagcgg cagcggcacc gaatttaccc tgaccattag cagcctgcag 240

ccggaagatt ttgcgaccta ttattgccag cagtggacca ccacctatac ctttggccag 300

10 ggcaccaaac tggaaattaa acgt 324

<210> 374 <211> 122 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 374

Glu

Val Gin Leu Val Gin c Ser Gly Ala Glu 10 Gly val Lys Lys Pro Gly 15 ASp Ala

j. Ser

val Lys Val 20 Trp J Ser cys Lys Ala Ser 25 Pro Phe Asn lie Lys 30 Glu Tyr

Tyr

He His val Arg Gin Ala Gly Gin Gly Leu Trp Met

35 40 45

Gly

Arg lie Asp Pro Asp Asn Gly Glu Ser Thr Tyr val Pro Lys Phe

50 55 60

Gin 65 Met

Gly Arg Val Thr Met 70 Ser Leu 85 Leu Asp Thr Thr Asp Thr ser 75 Thr Thr Ser Thr Ala Tyr 80 cys

Glu

Leu Arg Arg Ser Asp Asp 90 Tyr Ala val Tyr Tyr 95 Tyr

Ala

Arg Glu Gly 100 Thr Tyr Gly Asp 105 Ser Tyr Ala val Asp 110 Trp

Gly

Gin Gly Leu val Thr val ser

115 120

20

<210> 375 <211> 366 <212> ADN <213> Mus musculus 25

<400> 375

5

10

15

20

25

gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60

agctgcaaag cgagcggctt taacattaaa gattattata ttcattgggt gcgccaggcg 120

ccgggccagg gcctggaatg gatgggccgc attgatccgg ataacggcga aagcacctat 180

gtgccgaaat ttcagggccg cgtgaccatg accaccgata ccagcaccag caccgcgtat 240

atggaactgc gcagcctgcg cagcgatgat accgcggtgt attattgcgc gcgcgaaggc 300

ctggattatg gcgattatta tgcggtggat tattggggcc agggcaccct ggtgaccgtc 360

tcgagc 366

<210> 376 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 376

Asp lie Gin

Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1

5 10 15

Asp Arg val

Thr lie Thr Cys Arg Ala ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr

20

25 30

Leu Asn Trp

Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie

35

40 45

Tyr Tyr Thr 50 Ser Gly ser 65 Glu Asp phe

Ser Arg Leu Leu 55 Phe Ser Gly val Pro Ser 60 Ser Arg phe Ser Gly

Gly

Thr Asp 70 Thr Tyr 85 Gly Thr Thr Leu Thr lie 75 Gly ser Leu Gin Pro 80 Tyr

Ala

Tyr Cys Gin Gin 90 He Asp Thr Leu pro 95

Thr Phe Gly

Gly Lys Val Glu Lys

100

105

<210> 377 <211> 321 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 377

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcat ccgtaggcga ccgcgtaacc 60

ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc 120 ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca 180 cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca 240 gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc 300 ggcacaaaag ttgaaattaa a 321

<210> 378 <211> 123 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 378

5

10

15

20

25

Glu val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys pro Gly Ala 15 10 15

Ser val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met His Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg val Thr Met Thr Thr Asp Thr ser Hir Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg ser Asp Asp Thr Ala val Tyr Tyr cys

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr phe Asp val 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Thr val Thr val ser Ser 115 120

<210> 379 <211> 369 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 379

gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtaaaaaaac tcttgtaaag caagcggata tacatttaca gattacaaca ccaggacaag gattggaatg gatgggcgaa attaacccta aatcaaaaat tcaaagggag agttacaatg acaacagaca atggaactgc gatcacttag aagcgacgat acagctgtat tatgatgata tatatgatga ctggtatttc gatgtttggg gtctctagt

caggagcaag

tgcattgggt

atagtggagg

caagcacttc

actattgcgc

gccagggaac

cgttaaagtt 60 aagacaagcg 120 agcaggctac 180 aacagcatat 240 acgacttggg 300 aacagttacc 360 369

<210> 380 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 380

Asp lie

Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala ser val Gly

1

5 10 15

Asp Arg

Val Thr 20 Trp lie Thr Cys Arg Ala 25 Pro Ser Ser Ser val Thr 30 Lys Ser Ser

Tyr Leu

Asn 35 ser Tyr Gin Gin Lys 40 Ala Gly Lys Ala Pro 45 Ser Leu Leu

lie Tyr

Thr ser Asn Leu Ser Gly val Pro Arg Phe Ser

50

55 60

Gly Ser

Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie ser ser Leu Gin

65

70 75 80

Pro Glu

Asp Phe Ala 85 Gly Thr Tyr Tyr Cys Gin 90 Glu Gin Tyr Asp phe Phe 95 Pro

ser Thr

Phe Gly Gly Thr Lys val lie Lys

100 105

<210> 381 <211> 324 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 381

5

10

15

20

25

gacatccagc

atcacatgcc

ccaggaaaag

tctcgatttt

ccagaagact

ggaggtacaa

tgacccagag

gcgcctcatc

cacctaaact

caggatctgg

tcgccactta

aagtagaaat

ccccagcttc

ttcagttaca

tcttatatac

atcaggcaca

ttactgccaa

caag

ctttccgcat

tcttcttatc

tctacatcta

gaatttacac

caatacgatt

ccgttggtga

ttaattggta

atctcgcatc

ttactatatc

tttttccaag

ccgagtaaca 60 tcaacaaaaa 120 aggagttccc 180 atcactccaa 240 cacattcgga BOO 324

<210> 382 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 382

Glu 1

Val Gin Leu Val c Gin Ser Gly Ala Glu 10 Gly Val Lys Lys Pro Gly 15 Asp Ala

X Ser

val Lys val 20 Trp j Ser Cys Lys Ala ser 25 Pro Tyr Thr Phe Thr 30 Glu Tyr

Tyr

Met Asn 35 lie val Arg Gin Ala 40 Asp Gly Gin Arg Leu 45 Asn Trp Met

Gly

ASp Asn Pro Tyr Asn ASp Thr Thr Tyr His Lys Phe

50

55 60

Lys 65 Met

Gly Arg val Thr He 70 Leu Thr Arg Asp Thr ser 75 Thr Ala Ser Thr Ala Tyr 80 Cys

GlU

Leu Ser Ser Arg ser Glu Asp Ala val Tyr Tyr

85 90 95

Ala

Arg Glu Thr Ala val lie Thr Thr Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gin

Gly Thr Thr val Thr val ser Ser

115 120

<210> 383 <211> 363 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 383

gaggtgcagc

agttgcaaag

cctggacaaa

aatcataaat

atggaacttt

gccgttatta

agt

tggtgcagag

catctggata

gacttgaatg

ttaaaggaag

cctcattgag

ctactaacgc

cggcgccgag

cacatttacc

gatgggagac

agttacaatt

atctgaagac

tatggattac

gtcaagaaac

gactactaca

attaaccctt

acaagagata

actgctgttt

tggggtcaag

ctggagcaag

tgaattgggt

ataacgacga

catccgcatc

attactgtgc

gaaccactgt

cgtaaaggtt 60 acgacaagcc 120 cactacatac 180 aaccgcctat 240 aagagaaact 300 taccgtctct 360 363

<210> 384 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 384

Asp

He Gin Met Thr Gin Ser pro ser ser Leu Ser Ala ser val Gly

1

5 10 15

Asp

Arg val Thr lie Thr cys ser val Ser ser Thr He ser Ser Asn

20 25 30

HIS

Leu HIS Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu

35 40 45

He

Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro ser Arg phe Ser

50 55 60

Gly

ser 01 y Ser Gly Thr ASp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin

65

Glu 70 75 80

Pro

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr cys Gin Gin Trp ser ser Tyr

Pro

85 90 95

Leu

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys

100 105

<210> 385 <211> 324 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 385

10

gacatccaga

ataacatgca

cccggcaaag

tcaagatttt

cccgaagact

ggcggcacaa

tgacccagtc tccatcctcc ctctcagcat ccgtaggcga tagagttaca 60

gcgtatcatc aactatatca tcaaatcatc ttcattggtt ccaacagaaa 120

cacctaaatc acttatatac ggcacatcaa atctcgcatc aggcgttcct 180

caggctctgg ctcaggcacc gactttactc ttacaatatc ctccctccaa 240

tcgcaaccta ttactgtcaa caatggtcct catatccact cacatttggc 300

aagtagaaat taaa 324

<210> 386 <211> 125 <212> PRT

15 <213> Mus musculus

<400> 386

Glu

val Gin Leu Val c Gin ser Gly Ala Glu 10 ASp val Lys Lys Pro Gly IS ASp Ala

Ser

val Lys Val 20 Trp D ser Cys Lys Ala Ser 25 Pro Phe Asn He Lys 30 Glu Phe

Tyr

Leu His 35 lie val Arg Gin Ala 40 Gly Gly Gin Gly Leu 45 Asp Trp He

Gly

Arg 50 Asp Asp Pro Glu Asn 55 Met Thr Asp Thr Leu Tyr 60 Thr Pro Lys Phe

Gin

Lys val Thr Thr Asp Thr Ser ser Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Met

Glu Leu Arg ser 85 ASP Leu Arg ser ASP Asp 90 Gly Thr Ala val Tyr ir Cys

Ala

Arg Glu Ala Tyr Phe His ASp Thr Ser Tyr Trp 33 Tyr Phe

100 105 110

Asp

val Trp Gly Arg Gly Thr Leu val Thr val ser Ser

115 120 125

20

<210> 387 <211> 375 <212> ADN <213> Mus musculus 25

<400> 387

5

10

15

20

25

gaggtgcagc

tcctgcaagg

cctggacaag

gacccgaagt

atggagctga

gattatttcc

gtcaccgtct

tggtgcagtc

cttctgactt

ggcttgagtg

tccaggacaa

ggagcctgag

acgatggtac

ctagt

tggggctgag

caacattaaa

gattggaagg

ggtcaccatg

atctgacgac

ctcctactgg

gtgaagaagc

gacttctatc

attgatcctg

accacagaca

acggccgtgt

tacttcgatg

ctggggcctc

tacactgggt

agaatggtga

cgtccaccag

attactgtgc

tctggggccg

agtgaaggtc 60 gcgacaggcc 120 tactttatat 180 cacagcctac 240 gagagaggcg 300 tggcaccctg 360 375

<210> 388 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 388

Asp lie Gin Leu Thr Gin ser Pro Ser phe Leu Ser Ala Ser val Gly

10

15

Asp Arg val Thr lie Thr Cys Arg Ala ser Ser Ser He ser Tyr lie

20

25

30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr

35

40

45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala ser Gly val pro Ser Arg Phe Ser Gly ser

50

55

60

Gly ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr He ser ser Leu Gin Pro Glu

65

70

75

80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser Ser Asp Pro Leu Thr

85

90

Phe Gly Gly Gly Thr Lys val Glu lie Lys

95

100

105

<210> 389 <211> 318 <212> ADN <213> Mus musculus

<400> 389

gacatccagt

atcacttgca

aaagccccta

ttcagcggca

gattttgcaa

accaaggtgg

tgacccagtc

gggccagctc

agctcctgat

gtggatctgg

cttattactg

agatcaaa

tccatccttc

aagtataagt

ctatgccaca

gacagaattc

tcagcagtgg

ctgtctgcat

tacatacact

tccaacctgg

actctcacaa

agtagtgacc

ctgtaggaga

ggtatcagca

cttctggggt

tcagcagcct

cactcacgtt

cagagtcacc 60 aaaaccaggg 120 cccatcaagg 180 gcagcctgaa 240 cggcggaggg 300 318

<210> 390 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus

<400> 390

Glu val Gin Leu val Gin ser Gly 1 5

Ser val Lys Val Ser cys Lys Ala 20

Tyr lie His Trp val Arg Gin Ala 35 40

Gly Arg val Asp Pro Asp Asn Gly 50 55

Pro Gly Lys val Thr Met Thr Thr 65 70

Met Glu Leu ser Arg Leu Arg ser 85

Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Thr 100

Gin Gly Thr Leu val Thr val Ser 115 120

Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 15

Ser Gly Phe Asp He Lys Asp Tyr 25 30

Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 45

Glu Thr Glu Phe Ala Pro Lys Phe 60

Asp Thr ser lie Ser Thr Ala Tyr 75 80

Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95

Tyr Thr Trp Phe Pro Tyr Trp Gly 105 110

ser

<210> 391 <211> 363 5 <212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 391

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggatt cgacattaag gactactata tacactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatcggaagg gttgatcctg acaatggtga gactgaattt 180

gccccgaagt tcccgggcaa ggtcaccatg accacagaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagaagac 300

tacgatggta cctacacctg gtttccttat tggggccaag ggactctggt caccgtctct 360

10 agt 363

<210> 392 <211> 448 <212> PRT

15 <213> Secuencia artificial

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo humanizado 20 <400> 392

Glu 1

Val Gin Leu Val c Gin ser Gly Ala Glu 10 Gly val Lys Lys Pro Gly 15 ASp Ala

X ser

Val Lys val 20 Trp J ser cys Lys Ala Ser 25 pro Tyr Thr Phe Thr 30 Glu Tyr

Asn

Met His 35 lie val Arg Gin Ala 40 Gly Gly Gin Gly Leu 45 Asn Trp Met

Gly

Glu 50 Gly Asn pro Asn Ser 55 Thr Gly Ala Gly Tyr 60 Thr Gin Lys Phe

Lys 65 Met

Arg Val Thr Met 70 Leu Thr Asp Thr ser 75 Thr ser Thr Ala Tyr 80 cys

Glu

Leu Arg ser 85 Tyr Arg ser Asp ASp 90 Asp Ala Val Tyr Tyr 95 ASp

Ala

Arg Leu Gly 100 Gly ASp Asp lie Tyr 105 val Asp Trp Tyr Phe 110 Thr val

Trp

Gly Gin 115 Val Thr Thr Val Thr 120 Pro Ser Ser Ala ser 125 Thr Lys Gly

pro

ser 130 Phe Pro Leu Ala 135 cys ser Arg Ser 140 Ser Glu Ser

Thr 145 Thr

Ala Ala Leu Gly cys 150 Ser Leu Val Lys Asp Tyr 155 Ser Phe Pro Glu Pro val 160 Phe

val

Ser Trp Asn 165 Gly Ala Leu Thr 170 Gly val His Thr 175

Pro

Ala Val Leu 180 Gin Ser ser Gly Leu 185 Tyr Ser Leu Ser ser 190 val val

Thr

val Pro 195 ser ser Asn Phe Gly 200 Thr Gin Thr Tyr Thr 205 Cys Asn val

Asp

His 210 Lys Pro ser Asn Thr 215 Lys Val Asp Lys Thr 220 val Glu Arg Lys

Cys 225 Ser

Cys val Glu cys Pro 230 pro Pro Cys Pro Ala Pro 235 Asp Pro val Ala Gly Pro 240 ser

val

Phe Leu phe 245 Pro Lys Pro Lys 250 Thr Leu Met He 255

Arg

Thr Pro Glu 260 Gin val Thr cys Val val 265 val val Asp val ser His 270 val Glu Asp

Pro

Glu Val 275 Thr Phe Asn Trp Tyr 280 Glu Asp Gly Val Glu 285 Thr His Asn

Ala

Lys 290 Lys Pro Arg Glu 295 Gin phe Asn Ser 300 Phe Arg val

Val 305

Ser Val Leu Thr val 310 Val His Gin ASp Trp 315 Leu Asn Gly Lys Glu 320

Tyr

Lys cys Lys val 325 Thr Ser Asn Lys Gly Leu 330 Arg Pro Ala pro lie Gig 335 Tyr Lys

Thr

lie ser Lys 340 ser Lys Gly Gin Pro 345 Thr Glu Pro Gin val 350 Ser

Thr

Leu

pro Pro 355 Arg Glu Glu Met 360 Lys Asn Gin val 365 Leu Thr

Cys

Leu 370 Val Lys Gly Phe Tyr 375 Pro Ser ASp lie Ala 380 val Glu Trp Glu

Ser 385

Asn Gly Gin pro Glu 390 Asn Asn Tyr Lys Thr 395 Thr Pro Pro Met Leu 400

ASp

Ser Asp Gly ser 405 Gin Phe Phe Leu Tyr ser 410 Ser Lys Leu Thr val SIS His Lys

ser

Arg Trp Glri 420 Asn Gly Asn val Phe 425 Lys cys Ser val Met 430 Ser Glu

Ala

Leu His 435 His Tyr Thr Gin 440 Ser Leu ser Leu 445 Pro Gly

<210> 393 <211> 446 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

Glu 1

Val Gin Leu Val 5 Gin Ser Gly Ala Glu 10 val Lys Lys pro Gly 15 Ala

ser

val Lys val 20 Trp Ser Cys Lys Ala Ser 25 Pro Gly Tyr Thr Phe Thr 30 Glu ASp Tyr

Tyr

Met Asn 35 He val Arg Gin Ala 40 Asp Gly Gin Arg Leu 45 Asn Trp Met

Gly

Asp 50 Gly Asn Pro Tyr Asn 55 Thr Asp Thr Thr Tyr 60 Ser Ala 75 Thr Ala His Lys Phe

Lys 65 Met

Arg val Thr He 70 Leu Arg Asp Thr Ser Thr Ala Tyr 80 cys

Glu

Leu Ser Ser 85 Ala Arg Ser Glu Asp 90 Asn Val Tyr Tyr 95 Trp

Ala

Arg Glu Thr 100 Thr Val lie Thr Thr 105 Ser Ala Met Asp Tyr 110 Gly Gly

Gin

Gly Thr 115 val Thr Val ser 120 Ala ser Thr Lys 125 pro Ser

val

Phe 130 pro Leu Ala Pro cys 135 Ser Arg ser Thr ser 140 Glu Ser Thr Ala

Ala 145

Leu Gly cys Leu Val 150 Lys ASp Tyr Phe pro Glu 155 pro val Thr val 160

Ser

Trp Asn ser Gly 165 Ala Leu Thr Ser Gly 170 Val His Thr phe pro 175 Ala

Val

Leu Gin ser 180 Ser Gly Leu Tyr Ser 185 Leu ser ser Val Val 190 Thr val

Pro

Ser Ser 195 Ser Asn Phe Gly Thr Gin 200 Asp Thr Tyr Thr Cys Asn 205 Arg val ASp His

Lys

Pro 210 Asn Thr Lys Val 215 Lys Thr Val Glu 220 Lys cys Cys

val 225

Glu cys Pro Pro Cys 230 pro Ala Pro pro Val Ala 235 Gly Pro Ser val 240

Phe

Leu phe Pro Pro 245 cys Lys Pro Lys Asp Thr 250 val Leu Met He ser Arg 255 pro Thr

Pro

Glu val Thr 260 Asn Val val val Asp 265 Gly ser His Glu Asp 270 Asn Glu

val

Gin phe 275 Trp Tyr val Asp 280 val Glu val His 285 Ala Lys

Thr

Lys 290 Leu Pro Arg Glu Glu Gin 295 Gin Phe Asn ser Thr Phe 300 Asn Gly 315 Arg val val Ser

val 305

Thr val val His 310 Asp Trp Leu Lys Gl u Tyr Lys 320

Cys

Lys val Ser Asn 325 Gly Lys Gly Leu Pro Ala 330 Pro Pro lie Glu Lys Thr 335 Leu lie

Ser

Lys Thr Lys 340 Glu Gin Pro Arg Glu 345 Asn Gin Val Tyr Thr 350 Thr Pro

Pro

Ser Arg 355 Glu Met Thr Lys 360 Gin Val Ser Leu 365 cys Leu

val

Lys 370 Gly Phe Tyr pro Ser 375 Asp lie Ala val Glu 380 Trp Glu Ser Asn

Gly 385

Gin pro Glu Asn Asn 390 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 395 Met Leu Asp ser 400

Asp

Gly Ser Phe Phe 405 Leu Tyr Ser Lys Leu 410 Thr val Asp Lys Ser 415 Arg

Trp His

Gin Asn Gin His 435 Gly 420 Tyr Asn Thr val Gin Phe Lys ser Ser 440 cys 425 Leu Ser Ser val Met Leu Ser His Pro 445 Glu 430 Gly Ala Leu

<210> 394 <211> 450 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

Gig 1

Val Gin Leu val 5 Gin Ser Gly Ala Glu 10 Val Lys Lys Pro Gly 15 Ala

ser

val Lys Val ser 20 Trp Val cys Lys Ala Ser 25 Ala Pro 40 Gly Asp Asp Phe Asn lie Lys 30 Glu Asp Phe

Tyr

Leu His 35 lie Arg Gin Gly Gin Gly Leu 45 Asp Trp He

Gly

Arg 50 ASp Asp Pro Glu Asn 55 Thr Thr Leu Tyr 60 Thr pro Lys Phe

Gin 65

Lys Val Thr Met 70 Thr Asp Thr Ser 75 ser Thr Ala Tyr 80

Met

GlU Leu Arg ser 85 Ala Asp 100 Gly Arg Leu Arg Ser Asp Asp 90 Gly Thr Ala Val Tyr Tyr cys

Ala

Arg Glu Tyr phe His ASp 105 Leu val 120 Leu Ala Thr Ser Tyr Trp 110 Ala Phe

Asp

Val Trp 115 pro Gly Thr Thr val Ser Ser 125 Arg ser Thr

Lys

Gly 130 Ser Ser Val Phe pro 135 Gly pro cys Ser 140 ASp Ser Thr Ser

GlU 145

Thr Ala Ala Leu 150 cys Leu val Lys 155 Tyr Phe pro Glu 160

Pro

val Thr val Ser 165 Ala Val 180 Trp Asn Ser Gly Ala 170 Gly Leu Thr ser Gly val 175 Ser His

Thr

Phe pro Leu Gin Ser Ser 185 Leu Tyr Ser Leu 190 ser

Val

val Thr 195 Val Pro ser ser Asn Phe 200 Gly Thr Gin Thr 205 Tyr Thr cys

Asn

val 210 Asp His Lys Pro ser 215 Asn Thr Lys Val Asp 220 Lys Thr Val Glu

Arg 225

Lys cys Cys val Glu 230 cys Pro Pro cys Pro 235 Ala Pro Pro Val Ala 240

Gly

Pro ser val Phe 245 Leu Phe Pro Pro Lys 250 Pro Lys Asp Thr Leu 255 Met

lie

Ser Arg Thr Pro 260 Glu val Thr Cys 265 val val val Asp val 270 Ser His

GlU

Asp Pro 275 Ala Glu Val Gin Phe Asn Trp 280 Arg Glu Tyr Val Asp Gly 285 Asn val Glu val

His

Asn 290 val Lys Thr Lys Pro 295 Thr Glu Gin Phe 300 ASp Ser Thr Phe

Arg 305

val ser val Leu 310 val val His Gin 315 Trp Leu Asn Gly 320

Lys

Glu Tyr Lys cys 325 lie Ser 340 Lys Val Ser Asn Lys 330 Gin Gly Leu Pro Ala Pro 335 Gin lie

GlU

Lys Thr Lys Thr Lys Gly 345 Pro Arg Glu pro 350 val

Tyr

Thr Leu 355 pro Pro Ser Arg Glu Glu 360 Met Thr Lys Asn 365 Gin val ser

Leu

Thr 370 Glu cys Leu val Lys Gly 375 pro Phe Tyr pro Ser Asp 380 Lys He Ala val Glu

Trp 385

Ser Asn Gly Gin 390 Glu Asn Asn Tyr 395 Thr Thr pro Pro 400

Met

Leu Asp Ser Asp 405 Gly Ser Phe Phe Leu 410 Tyr Ser Lys Leu Thr 415 val

Asp

Lys ser Arg Trp 420 Gin Gin Gly Asn 425 val Phe ser cys Ser 430 Val Met

His Pro

Glu Gly atn Ala 435 Leu His Asn His Tyr Thr 440 Gin Lys Ser Leu 445 Ser Leu ser

<210> 395 <211> 446 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

Glu 1

val Gin Leu val c Gin Ser Gly Ala Glu 10 Gly val Lys Lys pro Gly 15 ASp Ala

X ser

val Lys val 20 Trp Ser Cys Lys Ala ser 25 Pro Phe Asp lie Lys 30 Glu Tyr

Tyr

lie His val Arg Gin Ala Gly Gin Gly Leu Trp He

35 40 45

Gly

Arg 50 Gly val Asp pro Asp Asn 55 Thr Gly Glu Thr Glu Phe 60 He Ala pro Lys Phe

Pro

Lys Val Thr Met Thr Asp Thr Ser Ser Thr Ala Tyr

65

70 75 80

Met

Glu Leu ser Arg 85 Tyr Leu Arg Ser Asp Asp 90 Thr Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Trp Cys

Ala

Arg Glu Asp 100 Leu Asp Gly Thr Tyr 105 Ser Trp Phe Pro Tyr 110 Gly Gly

Gin

Gly Thr val Thr val ser Ala ser Thr Lys Pro Ser

115 120 125

val

Phe pro Leu Ala Pro Cys ser Arg ser Thr Ser Glu ser Thr Ala

130 135 140

Ala 145 Ser

Leu Gly Cys Leu Val 150 Ala Lys Asp Tyr Phe Pro 155 Val Glu Pro val Thr val 160 Ala

Trp

Asn Ser Gly 165 Ser Leu Thr Ser Gly 170 Leu His Thr phe Pro 175 Thr

Val

Leu Gin Ser Gly Leu Tyr Ser Ser Ser val Val val

180 185 190

Pro

Ser ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn val Asp His

195 200 205

Lys

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr val Glu Arg Lys cys Cys

210 215 220

val

Glu Cys Pro Pro cys pro Ala Pro Pro val Ala Gly pro ser

val

225

230 235 240

Phe

Leu Phe Pro Pro Lys pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr

245 250 255

Pro

Glu val Thr Cys val val val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

val

Gin Phe 275 pro Asn Trp Tyr val Asp 280 Phe Gly val Glu val His 285 Arg Asn Ala Lys

Thr

Lys Arg Gl u Glu Gin Asn Ser Thr Phe Val Val ser

290 295 300

val

Leu Thr val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305

310 315 320

cys

Lys Val Ser Asn 325 Gly Lys Gly Leu Pro Ala 330 pro pro lie Glu Lys Thr 335 Leu lie

Ser

Lys Thr Lys 340 Glu Gin pro Arg Glu 345 Asn Gin val Tyr Thr 350 Thr Pro

Pro

ser Arg Glu Met Thr Lys Gin val Ser Leu cys Leu

355 360 val 365

val

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser ASp He Ala Glu Trp Glu ser Asn

370 375 380

Gly

Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr pro Pro Met Leu Asp ser

385

390 395 val 400

Asp

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Asp Lys ser Arg

405 410 415

Trp

Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His

Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 396 <211> 445 5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

Claims (13)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   65

   1. Un metodo para producir un polipeptido que es una parte inmunogenica de esclerostina humana, que comprende las etapas de:

   a) tratar esclerostina para conseguir digestion tnptica completa;

   b) recoger la muestra de digestion tnptica que tiene el peso molecular promedio de 7122,0 Dalton (masa teorica de 7121,5 Dalton) como se determina por espectrometna de masas de cristal Kquido de ionizacion de electropulverizacion o tiempo de retencion de aproximadamente 20,6 minutos como se determina por elucion de una columna de HPLC de fase inversa con gradiente lineal de acido trifluoroacetico (TFA) 0,05 % a acetonitrilo 90 % en TFA 0,05 % a un caudal de 0,2 ml/min; y

   c) purificar la parte inmunogenica.
2. 2. Un polipeptido que puede obtenerse por el metodo de la reivindicacion 1.
3. 3. Un metodo no terapeutico para generar un anticuerpo, que comprende administrar a un animal que es una rata, un hamster, un conejo o un raton un polipeptido de acuerdo con la reivindicacion 2.
4. 4. Un anticuerpo monoclonal que se une al polipeptido de la reivindicacion 2; se une con esclerostina humana con una constante de disociacion de menos de o igual a 1 x 10-9 M determinada por resonancia de plasmon superficial; y aumenta al menos uno de formacion de hueso, densidad mineral osea, contenido mineral oseo, masa osea, calidad osea y fuerza osea en un mairnfero.
5. 5. El anticuerpo monoclonal de la reivindicacion 4 que se une con polipeptidos T20, T20,6, T21-22 y N22,7-23,5 y tiene union detectable minima con polipeptidos T19,2, N14,6 y N18,6,

   en el que el polipeptido T20 tiene las secuencias DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR y PSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLT R;

   en el que el polipeptido T20,6 tiene las secuencias DVSEYSCREL HFTR, WWRPSGPPFR CIPDRYR, SAKPVTELVC SGQCGPAR y LVASCKCKRL TR;

   en el que el polipeptido T21-22 tiene las secuencias DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR y WWRPSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLTR;

   en el que el polipeptido T22,7-23,5 tiene la secuencia DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR LLPNAIGRGK WWRPSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLTRF HNQS;

   en el que el polipeptido T19,2 tiene las secuencias YVTDGP CR y VQLLCPGGEA PR;

   en el que el polipeptido T14,6 tiene las secuencias ENGgRpPHHPF, EIIPELGFYP EPPP y DFGTEAARPQ KGRKPRPRAR SAKANQA; y

   en el que el polipeptido N18,6 tiene la secuencia DATEIIPELG EYPEPPPELE NNKTMNRAEN GGRPPHHPFE TK.
6. 6. El anticuerpo monoclonal de la reivindicacion 4 o 5 que es un fragmento F(ab')2, Fab, Fab' o Fv.
7. 7. El anticuerpo monoclonal de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, que es un anticuerpo humanizado o un anticuerpo humano.
8. 8. El anticuerpo monoclonal de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, que se une con esclerostina humana con una constante de disociacion de menos de o igual a 1 x 10-10 M, menos de o igual a 1 x 10-11 M o menos de o igual a 1 x 10-12 M.
9. 9. El anticuerpo monoclonal de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, que se une con esclerostina humana con una afinidad, como se determina por resonancia de plasmon superficial, que es al menos 50, 100, 250, 500, 1000 o 10.000 veces mayor que la afinidad por lisozima de clara de huevo de gallina.
10. 10. El anticuerpo monoclonal de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9 para uso en el tratamiento de la osteoporosis o la osteopenia.
11. 11. El anticuerpo monoclonal de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9 para uso en un metodo de tratamiento de osteopenia, osteoporosis o perdida de hueso provocada por acondroplasia, disostosis cleidocraneal, encondromatosis, displasia fibrosa, Enfermedad de Gaucher, raquitismo hipofosfatemico, smdrome de Marfan, exotosis hereditarias multiples, neurofibromatosis, osteogenesis imperfecta, osteopoiquilosis, lesiones escleroticas, pseudoartrosis, osteomielitis piogena, enfermedad periodontal, perdida de hueso inducida por farmaco anti- epileptico, hiperparatiroidismo primario y secundario, smdromes de hiperparatiroidismo familiar, perdida de hueso inducida por ingravidez, osteoporosis en hombres, perdida de hueso posmenopausica, osteoartritis, osteodistrofia renal, trastornos infiltrativos del hueso, perdida de hueso oral, osteonecrosis de la mandfbula, enfermedad de Paget juvenil, melorreostosis, enfermedades oseas metabolicas, mastocitosis, enfermedad/anemia falciforme, perdida de hueso relacionada con trasplante de organos, perdida de hueso relacionada con trasplante de rinon, lupus eritematoso sistemico, espondilitis anquilosante, epilepsia, artritis juveniles, talasemia, mucopolisacaridosis,

    enfermedad de Fabry, smdrome de Turner, Smdrome de Down, Smdrome de Klinefelter, lepra, Enfermedad de Perthes, escoliosis idiopatica adolescente, enfermedad inflamatoria multisistemica de aparicion infantil, Smdrome de Winchester, Enfermedad de Menkes, Enfermedad de Wilson, enfermedad de hueso isquemica (tal como enfermedad de Legg-Calve-Perthes, osteoporosis migratoria regional), estados anemicos, afecciones provocadas por esteroides, 5 perdida de hueso inducida por glucocorticoides, perdida de hueso inducida por heparina, trastornos de la medula osea, escorbuto, malnutricion, deficiencia de calcio, osteopenia u osteoporosis idiopatica, osteopenia u osteoporosis congenita, alcoholismo, enfermedad hepatica cronica, estado posmenopausico, afecciones inflamatorias cronicas, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, colitis inflamatoria, enfermedad de Crohn, oligomenorrea, amenorrea, embarazo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, trastornos tiroideos, trastornos 10 paratiroideos, enfermedad de Cushing, acromegalia, hipogonadismo, inmovilizacion o inactividad, smdrome de distrofia simpatica refleja, osteoporosis regional, osteomalacia, perdida de hueso asociada con reemplazo de articulaciones, perdida de hueso asociada con VIH, perdida de hueso asociada con perdida de hormona del crecimiento, perdida de hueso asociada con fibrosis qrnstica, displasia fibrosa, perdida de hueso asociada con quimioterapia, perdida de hueso inducida por tumor, perdida de hueso relacionada con cancer, perdida de hueso 15 ablativa hormonal, mieloma multiple, perdida de hueso inducida por farmaco, anorexia nerviosa, perdida de hueso facial asociada con enfermedad, perdida de hueso craneal asociada con enfermedad, perdida de hueso de la mandfbula asociada con enfermedad, perdida de hueso del craneo asociada con enfermedad o perdida de hueso asociada con viaje espacial.

    20 12. El anticuerpo monoclonal de una cualquiera de las reivindicaciones 4-9 para uso en la mejora del resultado de

    procedimientos ortopedicos, procedimientos dentales, cirugfa de implante, reemplazo de articulaciones, injerto de hueso, cirugfa cosmetica de hueso y reparacion de hueso tal como curacion de fracturas, curacion sin union, curacion de union retardada o reconstruccion facial.

    316

    i AQVLTQTPAS VSAAVGGTVT INCQSSQSVY DNNWLAWFQQ KPGQPPKLLI 51 YDASDLASGV PSRFSGSGSG TQFTLTISGV QCADAATYYC QGAYNDVIYA 101 FGGGTEWVK RTDAAPTVSI FPPSSEQLTS GGASWCFLN NFYPKDINVK 151 WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT 201 HKTSTSPIVK SFMRNEC

    B. 1 QSLEESGGRL VTPGTPliTLT CTASGFSLSS YWMNWVRQAP GEGLEWIGTI

    51 DSGGRTDYAS WAKGRFTISR TSTTMDLKMT SLTTGDTARY FCARNWNLWG 101 QGTLVTVSSA STKGPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW 151 NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST 201 KVDKKIVPRD CGCKPCICTV PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT LTPKVTCWV 251 DISKDDPEVQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL 301 NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS 351 LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMNTNGSY FVYSKLNVQK 401 SNWEAGNTFT CSV1HEGLHM HHTEKSLSHS PGK

    1 QIVLTQSPTI VSASPGEKVT LICSASSSVS FVDWFQQKPG TSPKRWIYRT 51 SNLGFGVPAR FSGGGSGTSH SLTISRMEAE DAATYYCQQR STYPPTFGAG 101 TK1ELKRADA APTVS1FPPS SEQLTSGGAS WCFLNNFYP KDINVKWKID 151 GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS 201 TSPIVKSFNR NEC

    1 QVTLKESGPG ILQPSQTLSL TCSFSGFSLS TSGMGVGWIR HPSGKNLEWL 51 AHIWWDDVKR YNPVLKSRLT ISKDTSNSQV FLKIANVDTA DTATYYCARI 101 EDFDYDEEYY AMDYWGQGTS VIVSSAKTTP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGS LSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW 201 PSETVTCNVA HPASSTKVDK KIVPRDCGCK PCICTVPEVS SVFIFPPKPK 251 DVLTITLTPK VTCWVDISK DDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRSVSELPI MHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV 351 YTIPPPKEQM AKDKVSLTCM ITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401 DTDGSYFVYS KLNVQKSNWE AGNTFTCSVI. HEGLHNHHTE KSLSHSPGK

    318

    A

    1 DIVLTQSPAS LTVSLGLRAT ISCKASQSVD YDGDSYMNWY QQKPGQPPRL 51 LIYAASNLES GIPARFSGNG SGTDFT1NIH PVEEEDAVTY YCQQSNEDPW 101 TFGGGTKLEI KRADAAPTVS IFPPSSEQLT SGGASWCFL NNFYPKDINV 151 KWKIDGSERQ NGVLNSWTDQ DSKDSTYSMS STLTLTKDEY ERHNSYTCEA 201 THKTSTSPIV KSFNRNEC

    B.

    1 EVQLQQSGPE LVKPGTSVKM SCKASGYTFT DCYMNWVKQS HGKSLEWIGD 51 INPFNGGTTY NQKFKGKATL TVDKSSSTAY MQLNSLTSDD SAVYYCARSH 101 YYFDGRVPWD AMDYWGQGTS VTVSSAKTTP PSVYPLAPGS AAQTNSMVTL 151 GCLVKGYFPE PVTVTWNSGS LSSGVHTFPA VLQSDLYTLS SSVTVPSSTW 201 PSETVTCNVA HPASSTKVDK KXVPRDCGCK PCICTVPEVS SVFXFPPKPK 251 DVLTITLTPK VTCVWDISK DDPEVQFSWF VDDVEVHTAQ TQPREEQFNS 301 TFRSVSELPI MHQDWLNGKE FKCRVNSAAF PAPIEKTISK TKGRPKAPQV 351 YTIPPPKEQM AKDKVSLTCM ITDFFPEDIT VEWQWNGQPA ENYKNTQPIM 401 DTDGSYFIYS KLNVQKSNWE AGNTFTCSVL HEGLHNHHTE KSLSHSPGK

    319

    1 DVQMIQSPSS LSASLGDIVT MTCQASQGTS INLNWFQQKP GKAPKLLIYG 51 SSNLEDGVPS RFSGSRYGTD FTLTISSLED EDLATYFCLQ HSYLPYTFGG 101 GTKLEIKRAD AAPTVSIFPP SSEQLTSGGA SWCFLNNFY PKDINVKWKI 151 DGSERQNGVL NSWTDQDSKD STYSMSSTLT LTKDEYERHN SYTCEATHKT 201 STSPIVKSFN RNEC

    B.

    1 EVQLQQSGPE 51 INPYSGETTY 101 YDASPFAYWG 151 YFPEPVTVTW 201 CNVAHPASST 251 LTPKVTCVW 301 ELPIMHQDWL 351 KEQMAKDKVS 401 FIYSKLNVQK

    LVTPGASVKI SCKASGYTFT NQKFKGTATL TVDKSSSIAY QGTLVTVSAA KTTPPSVYPL NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL KVDKKIVPRD CGCKPCICTV DISKDDPEVQ FSWFVDDVEV NGKEFKCRVN SPAFPAPIEK LTCMITDFFP EDITVEWQWN SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN

    DHYMSWVKQS HGKSLEWIGD MEIRGLTSED SAVYYCARDD APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YTLSSSVTVP SSTWPSETVT PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT HTAQTQPREE QFNSTFRSVS TISKTKGRPK APQVYTIPPP GQPAENYKNT QPIMDTDGSY HHTEKSLSHS PGK

    DMO (g/cm2)

    imagen1

    Vertebras lumbares

    imagen2

    Metafisis tibial

    CO

    bJ

    O

    0,075 0,050 0,025 ■

    0,000

    1

    1

    I

    »° &

    s>^>

    4*

    $>

    sr

    A*

    V

    1

    *

    S>

    imagen3

    Y////////////Z*

    imagen4

    Vertebras lumbares

    imagen5

    Metafisis tibial

    (Nl

    E

    o

    O

    S

    Q

    CO

    ro

    0,00

    imagen6

    E

    o

    3

    o

    s

    Q

    0,075 ■

    0,050 ■

    r

    0,025 ■

    0,000 -1

    imagen7

    CO

    ro

    NJ

    imagen8

    Vertebras lumbares

    imagen9

    Metafisis tibial

    imagen10

    O

    s

    Q

    imagen11

    imagen12

    O

    2

    Q

    0,100 ■ 0,075 • 0,050 ’ 0,025 ■ 0,000 ■

    imagen13

    imagen14

    imagen15

    *

    imagen16

    323

    1 QGWQAFKNDA TEIIPELGEY PEPPPELENN KTMNRAENGG RPPHHPFETK

    51 DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR-LLPNAIGRGK

    Cl C2 C3 C4

    101 WWRPSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLTRF

    C5 C6 C7 C8

    151 HNQSELKDFG TEAARPQKGR KPRPRARSAK ANQAELENAY

    1 CAGGGGTGGC AGGCGTTCAA GAATGATGCC ACGGAAATCA TCCCCGAGCT 51 CGGAGAGTAC CCCGAGCCTC CACCGGAGCT GGAGAACAAC AAGACCATGA 101 ACCGGGCGGA GAACGGAGGG CGGCCTCCCC ACCACCCCTT TGAGACCAAA 151 GACGTGTCCG AGTACAGCTG CCGCGAGCTG CACTTCACCC GCTACGTGAC 201 CGATGGGCCG TGCCGCAGCG CCAAGCCGGT CACCGAGCTG GTGTGCTCCG 251 GCCAGTGCGG CCCGGCGCGC CTGCTGCCCA ACGCCATCGG CCGCGGCAAG 301 TGGTGGCGAC CTAGTGGGCC CGACTTCCGC TGCATCCCCG ACCGCTACCG 351 CGCGCAGCGC GTGCAGCTGC TGTGTCCCGG TGGTGAGGCG CCGCGCGCGC 401 GCAAGGTGCG CCTGGTGGCC TCGTGCAAGT GCAAGCGCCT CACCCGCTTC 451 CACAACCAGT CGGAGCTCAA GGACTTCGGG ACCGAGGCCG CTCGGCCGCA 501 GAAGGGCCGG AAGCCGCGGC CCCGCGCCCG GAGCGCCAAA GCCAACCAGG 551 CCGAGCTGGA GAACGCCTAC

    imagen17

    Figura 9

    325

    imagen18

    326

    Peptidos

    Pos. sec Masa obs. Secuencia

    T19,2

    65-72 121-132 2146,34 1. (2145,8) 2. YVTDGP CR (910) C2 VQLLCPGGEA PR (1239) C6

    T20

    9620,8 (MALDI); 9638,41 (ESI-MS)

    T20,6

    51-90 104-149 (4419.1) 1. (5226.2) 2. 7105,7 (MALDI); DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR PSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLT R 7122,0 (ESI-MS)

    51-64 101-117 73-90 138-149 3944,5 1. 2. 3177,0 3. 4. DVSEYSCREL HFTR (1740,9) Cl WWRPSGPFFR CIPDRYR (2206,6) C5 SAKPVTELVC SGQCGPAR (1802,2) C3,C4 LVASCKCKRL TR (1378,5) C7,C8

    T21-22

    10.147 (MALDI); 10170,3 (ESI-MS)

    51-90 101-149 (4419,1) 1. (5754,8) 2. DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR WWRPSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA

    PRARKVRLVA SCKCKRLTR

    327

    Peptidos

    Pos. sec

    Masa obs.

    AspNl4,6

    AspNl8,6

    34-47

    12-25

    158-184

    9-50

    1245,5
12. 1585.4
13. 2964.5

    Secuencia

    ENGGRPPHHPF

    EIIPELGFYP EPPP

    DFGTEAARPQ KGRKPRPRAR SAKANQA

    DATEIIPELG EYPEPPPELE NNKTMNRAEN GGRPPHHPFE TK (Glicopeptido)

    DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR LLPNAIGRGK WWRPSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLTRF HNQS

    Figura 12

    328

    1 QGWQAFKNDA TEIIPELGEY PEPPPELENN KTMNRAENGG RPPHHPFETK

    I-

    Cl

    Bucle 1 -

    C2

    Bucle 2

    C3 C4

    51 DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR LLPNAIGRGK

    * \ 11

    imagen19

    -----Bucle 2------\|

    c P1'21

    Bucle 3 -

    J5 \6 V\C8

    101 WWRPSGPDFR CIPDRYRAQR VQLLCPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLTRF

    IMIIIIIIIIIIII1IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII1III T19,2 T20

    imagen20

    151 HNQSELKDFG TEAARPQKGR KPRPRARSAK ANQAELENAY

    329

    1 QGWQAFKNDA TEIIPELGEY PEPPPELENN KTMNRAENGG RPPHHPFETK

    AspN18,6

    AspN14,6 M

    AspNi4,6

    Cl C2 C3 C4

    51 DVSEYSCREL HFTRYVTDGP CRSAKPVTEL VCSGQCGPAR LLPNAIGRGK

    AspN22,7-23,5

    cXcs

    101 WWRPSGPDFR fclPDRYRAQR VQLLifcPGGEA PRARKVRLVA SCKCKRLTRF

    AspN22,7-23,5

    151 HNQSELKDFG TEAARPQKGR KPRPRARSAK ANQAELENAY

    HI

    V///M

    AspN14,6

    330

    imagen21

    Wlab-A + 2 nM

    331

    imagen22

    332

    imagen23

    333

    imagen24

    334

    A. Ep/topo de bade 2 para Mab-A y Mab-B

    C4GPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC5

    \

    B. Ep/topo T20,6 para Mab-C y Mab-0

    DVSEYSC1RELHFTR SAKPVTELVC3SGQC4GPAR

    imagen25

    WWRPSGPDFRC5IPDRYR LVASC7KC8KRLTR

    73

    imagen26

    imagen27

    336

    Epftopo "derivado de T20,6 1 (nudo de cistina + 4 ramas)" para Mab-O

    Cl RELHFTR^

    CSIPDRYR^ LVASC7KC8

    "derivado de T20.6 1 fnudo de cistina + 4 ramas)"

    73

    imagen28

    CO

    CO

    £

    U)

    3

    O

    a

    ro

    o

    imagen29

    Con esderostina de raton ( 1 ug/ml)

    * = estadisticamente significativamente diferente del grupo Scl de raton

    338

    imagen30

    Con esclerostina humana (1 ug/ml)

    * = estadisticamente significativamente diferente del grupo Scl humana

    CO

    CO

    CD

    £

    05

    3

    O

    o

    ro

    O

    40

    35

    30

    25

    20

    15

    10

    5

    0

    imagen31

    *

    imagen32

    imagen33

    *

    imagen34

    *

    imagen35

    *

    imagen36

    *

    1

    a

    in

    5&J&2&2

    imagen37

    imagen38

    Con esclerostina humana (1 ug/ml)

    * -estadisticamente significativamente diferente del grupo Scl humana

    340

    Densidad mineral osea total (mgfcin2)

    imagen39

    DMO total Vdrtebras