ES2581557T3 - Derivado de dibencilamina ópticamente activo y procedimiento de fabricación para el mismo - Google Patents
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Abstract
Ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)-fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluoro metil)fenil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético sustancialmente ópticamente puro, o una sal del mismo, o un solvato del mismo, que tiene una pureza óptica de un 90 % de ee o mayor.
Description
ejemplo, CHIRALCEL OD-H, CHIRALCEL OJ-H, y similares), los tipos de un disolvente usado como fase móvil (por ejemplo, mezcla de MeOH/TFA, mezcla de EtOH/TFA, y similares), y el caudal de la fase móvil. Sin embargo, en casi todas las condiciones aplicadas la resolución no fue satisfactoria. En estas circunstancias, se descubrió que cada enantiómero se separó de forma satisfactoria en las condiciones descritas en el ejemplo 1-1, que se mencionarán
5 más adelante. Sin embargo, también se descubrió que se produjo un producto de descomposición (compuesto de éster etílico) en las condiciones mencionadas anteriormente.
El documento de patente 2 también divulga que el compuesto racémico (I) se puede preparar por un procedimiento que comprende las etapas de acoplar un compuesto intermedio (a) y un compuesto de bromuro de bencilo racémico
(b) en presencia de una base, hidrolizar el grupo éster del compuesto resultante (c) preparar un compuesto (d), y 10 finalmente oxidar el átomo de azufre del compuesto (d) de acuerdo con el esquema 1 mostrado a continuación.
Esquema 1
[Fórmula 4]
NaOH ac. 2 N TaCl5, H2O2 al 30 %
Con referencia al esquema 1, los inventores de la presente invención intentaron obtener el compuesto isómero (S)
15 (III) o el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro usando 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]-1-metanosulfoniloxietano ópticamente activo en lugar del compuesto de bromuro de bencilo racémico (b). Sin embargo, se produjo preferencialmente la reacción de eliminación de 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]-1-metanosulfoniloxietano, y no se obtuvo de forma satisfactoria el compuesto objetivo.
Además, se intentó adicionalmente la preparación usando un agente de bencilación ópticamente activo que tenía un
20 grupo saliente tal como un grupo toluenosulfonilo, un grupo clorometanosulfonilo, o un grupo 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo en lugar del grupo metanosulfonilo. Sin embargo, no se obtuvo de forma
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satisfactoria el compuesto isómero (S) (III) o el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro como en el caso del uso de 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]-1-metanosulfoniloxietano.
Cuando se usó el compuesto bromuro de bencilo (b), ya se logró de forma satisfactoria la introducción del grupo [3,5-bis(trifluorometil)fenil]-1-etilo en el átomo de nitrógeno del compuesto intermedio (a). En consecuencia, se puede contemplar obtener el compuesto isómero (S) (III) o compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro usando un compuesto de bromuro de bencilo ópticamente activo en lugar del compuesto de bromuro de bencilo racémico (b).
Sin embargo, se sabe en general que, en una reacción de sustitución nucleófila en la que se elimina el ion bromuro, el ion bromuro producido por la reacción reacciona con bromuro de bencilo en el sistema de reacción, y la racemización avanza. Además, también se conoce en general que, en una reacción de sustitución nucleófila en la posición de bencilo, también se produce de forma competitiva una reacción de sustitución tipo SN1 debido a la estabilización del catión bencilo, y por lo tanto se produce parcialmente la racemización.
En cuanto al compuesto que tiene una pureza óptica moderada obtenido como resultado de la disminución en la pureza óptica debido a una racemización parcial (en la memoria descriptiva, "compuesto que tiene una pureza óptica moderada" quiere decir un compuesto que tiene una pureza óptica no inferior a aproximadamente un 10 % de ee e inferior a aproximadamente un 90 % de ee, preferentemente de aproximadamente un 20 a un 80 % de ee, y más preferentemente de aproximadamente un 40 a un 70 % de ee, y el compuesto que tiene la pureza óptica moderada también se puede denominar de ahora en adelante "compuesto semiquiral". Además, en cuanto al compuesto semiquiral, cuando un compuesto, en el que el átomo de carbono asimétrico indicado con * en la estructura parcial mostrada a continuación está en la configuración S, está presente en una cantidad mayor en comparación con un compuesto en la configuración R, el compuesto se denomina específicamente "compuesto semiquiral con isómero (S) dominante". Mientras que, en cuanto al compuesto semiquiral, cuando el compuesto en el que el átomo de carbono asimétrico indicado con * está en la configuración R, está presente en una cantidad mayor en comparación con el compuesto en la configuración S, el compuesto se denomina específicamente "compuesto semiquiral con isómero (R) dominante"),
[Fórmula 5]
se sabe que la pureza óptica del mismo se puede incrementar cristalizando preferencialmente uno de los enantiómeros.
Sin embargo, de acuerdo con el estudio de los inventores de la presente invención, la cristalización no avanzó en el caso del compuesto racémico (I) o un derivado de éster etílico del mismo, y la pureza óptica del mismo no se incrementó de forma satisfactoria por la cristalización preferencial.
En las circunstancias como se describe anteriormente, los inventores de la presente invención convirtieron el ácido carboxílico del compuesto racémico (I) en un éster bencílico, y descubrieron que el compuesto de éster bencílico resultante se aisló de forma satisfactoria como un cristal que comprende el racemato como componente principal.
A continuación, preparando un compuesto semiquiral (IV) de un compuesto de éster de arilalquilo o heteroarilalquilo, y a continuación cristalizando los cristales de una pureza óptica baja que contenían predominantemente el racemato como componente (de ahora en adelante también denominados "cristales con racemato dominante") y retirando los cristales para obtener un compuesto de éster de arilalquilo o heteroarilalquilo (V) o (V') con una pureza óptica alta y, a continuación, usando el compuesto (V) o (V') como material de partida como se muestra en el esquema 2 mencionado a continuación, los inventores prepararon de forma satisfactoria un enantiómero deseado del compuesto racémico (I) (compuesto isómero (S) (III) o compuesto isómero (R) (II)) en una forma sustancialmente ópticamente pura.
Esquema 2
[Fórmula 6]
(En el esquema, R representa un grupo arilo C6-10 que puede tener un sustituyente, o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente, y n representa un número entero de 1 a 6).
Por tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro o compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro, o una sal del mismo, o un solvato del mismo, que comprende la etapa de retirar los cristales con racemato dominante de un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (IV):
[Fórmula 7]
(en la fórmula, R representa un grupo arilo C6-10 que puede tener un sustituyente, o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente, y n representa un número entero de 1 a 6) por cristalización preferencial en un disolvente para obtener un compuesto sustancialmente ópticamente puro representado por la siguiente fórmula general (V) o (V'):
[Fórmula 8]
(en las fórmulas, R y n tienen los mismos significados que los definidos para la fórmula general (IV)).
10 Por el procedimiento mencionado anteriormente, cuando el compuesto representado por la fórmula general (IV) es un compuesto semiquiral con isómero (S) dominante, se puede preparar el compuesto isómero (S) (III), y cuando el compuesto representado por la fórmula general (IV) es un compuesto semiquiral con isómero (R) dominante, se puede preparar el compuesto isómero (R) (II).
La presente invención proporciona además el procedimiento mencionado anteriormente, que comprende además la 15 etapa de retirar el grupo representado como -(CH2)n-R a partir del compuesto representado por la fórmula general (V)
- o (V').
La presente invención proporciona además:
- (A)
- el procedimiento mencionado anteriormente, que comprende además la etapa de hacer reaccionar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (VI):
20 [Fórmula 9]
(en la fórmula, R y n tienen los mismos significados que los definidos para la fórmula general (IV)) con un agente oxidante en un disolvente para preparar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la fórmula general (IV);
(B) el procedimiento mencionado anteriormente (A), que comprende además la etapa de hacer reaccionar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula (VII):
[Fórmula 10]
con un compuesto representado por la siguiente fórmula general (VIII) 10 [Fórmula 11] R-(CH2)n-OH (VIII) (en la fórmula, R y n tienen los mismos significados que los definidos para la fórmula general (IV)) en un disolvente en presencia de un catalizador para preparar el compuesto semiquiral de un compuesto representado por la fórmula general (VI);
15 (C) el procedimiento mencionado anteriormente (B), que comprende además la etapa de hidrolizar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (IX): [Fórmula 12]
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La presente invención proporciona además un compuesto sustancialmente ópticamente puro representado por la fórmula general (V) o (V'), o una sal del mismo, o un solvato del mismo. Un compuesto en el que R es fenilo, y n es 1, una sal del mismo, o un solvato del mismo es un modo de realización preferente de la presente invención.
Efecto de la invención
El compuesto isómero (S) (III) tiene una acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 y acción de incremento de la cantidad de receptor de LDL superior, y tiene una acción de reducción de la colesterolemia-LDL superior. Por lo tanto, el compuesto es útil como, por ejemplo, un ingrediente activo de un medicamento para reducir la colesterolemia-LDL, y similares.
Además, el compuesto isómero (S) (III) también es útil como ingrediente activo de un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad en la que están implicadas las PC, más específicamente, cáncer, obesidad, diabetes, enfermedad de Alzheimer o enfermedades infecciosas víricas.
Además, de acuerdo con el procedimiento de preparación de la presente invención, se puede preparar convenientemente un enantiómero deseado del compuesto racémico (I) (compuesto isómero (S) (III) o compuesto isómero (R) (II)) en una forma sustancialmente ópticamente pura. Por ejemplo, el procedimiento se puede usar preferentemente como un procedimiento para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro, que es útil como ingrediente activo de un medicamento, o similares.
Modos para llevar a cabo la invención
En la memoria descriptiva, el término "sustancialmente ópticamente puro" quiere decir que la pureza óptica de un compuesto es de un 90 % de ee o mayor, preferentemente de un 95 a un 100 % de ee, lo más preferentemente de un 97 a un 100% de ee.
Por lo tanto, por ejemplo, "ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)f enil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético sustancialmente ópticamente puro", "enantiómero levógiro sustancialmente ópticamente puro del ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)fenil} (etil)amino)metil]ciclohexil}acético" y "compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro" quiere decir que el compuesto isómero (S) (III) tiene una pureza óptica de un 90 % de ee o mayor, preferentemente de un 95 a un 100 % de ee, lo más preferentemente de un 97 a un 100 % de ee.
En la presente invención, la pureza óptica del compuesto isómero (S) (III) es preferentemente de un 98 % de ee o mayor, lo más preferentemente de un 99 % de ee o mayor, como se determina en las condiciones analíticas de HPLC quirales descritas en el ejemplo 1-1 mencionado más adelante, desde un punto de vista de la obtención de una acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 y/o acción de incremento de la cantidad de receptor de LDL favorables. Si se logra la pureza óptica mencionada anteriormente, el compuesto isómero (S) (III) pasa a no contener sustancialmente el otro enantiómero (compuesto isómero (R) (II)).
En la memoria descriptiva, el término "grupo alquilo C1-6" quiere decir un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, y los ejemplos incluyen, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo terc-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo neopentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo, y similares.
En la memoria descriptiva, el resto "arilo C6-10" del "grupo arilo C6-10 que puede tener un sustituyente" quiere decir un grupo hidrocarburo aromático que tiene de 6 a 10 átomos de carbono, y los ejemplos incluyen, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo, grupo azulenilo, y similares.
En la memoria descriptiva, el resto "heteroarilo de 5 a 10 miembros" del "resto del grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente" quiere decir un grupo heterocíclico aromático de tipo anillo monocíclico, policíclico o condensado de 5 a 10 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de átomo de oxígeno, átomo de azufre y átomo de nitrógeno como átomos constituyentes del anillo. Los ejemplos incluyen, por ejemplo, grupo furilo, grupo tienilo, grupo pirrolilo, grupo oxazolilo, grupo isoxazolilo, grupo tiazolilo, grupo isotiazolilo, grupo imidazolilo, grupo pirazolilo, grupo oxadiazolilo, grupo tiadiazolilo, grupo triazolilo, grupo tetrazolilo, grupo piridilo, grupo pirimidilo, grupo pirazinilo, grupo piridazinilo, grupo benzofuranilo, grupo isobenzofuranilo, grupo benzotienilo, grupo indolilo, grupo isoindolilo, grupo indazolilo, bencimidazolilo grupo, grupo benzoxazolilo, grupo bencisoxazolilo, grupo benzotiazolilo, grupo bencisotiazolilo, grupo benzoxadiazolilo, grupo benzotiadiazolilo, grupo benzotriazolilo, grupo quinolilo, grupo isoquinolilo, grupo cinolinilo, grupo quinazolinilo, grupo quinoxalinilo, grupo ftalazinilo, grupo naftiridinilo, grupo purinilo, grupo pteridinilo, grupo furopiridilo, grupo tienopiridilo, grupo pirrolopiridilo, grupo oxazolopiridilo, grupo tiazolopiridilo, grupo imidazopiridilo, y similares.
En la memoria descriptiva, los ejemplos del sustituyente del "grupo arilo C 6-10 que puede tener sustituyente", y "grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente" incluyen, por ejemplo, un átomo de halógeno, grupo carboxilo, grupo carbamoílo, grupo sulfonilo, grupo sulfamoílo, grupo nitro, y similares. El número de sustituyentes es
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de 1 al número sustituible máximo, y los grupos pueden tener en general de 1 a 5 sustituyentes. Como átomo de halógeno, se puede usar cualquiera de átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo y átomo de yodo.
En las fórmulas generales, el grupo arilo C6-10 que puede tener un sustituyente como R es preferentemente grupo fenilo.
En las fórmulas generales, el número entero n es preferentemente 1.
En las fórmulas generales, el grupo alquilo C1-6 como R1 es preferentemente un grupo alquilo C1-4, más preferentemente grupo etilo.
En las fórmulas generales, el átomo de halógeno como X es preferentemente átomo de cloro o átomo de bromo, más preferentemente átomo de bromo.
En la presente invención, los ejemplos de sal de cada compuesto (por ejemplo, el compuesto isómero (S) (III), un compuesto representado por la fórmula general (IV), un compuesto representado por la fórmula general (V), un compuesto representado por la fórmula general (V'), y similares) incluyen, por ejemplo, sales de adición de ácido, sales de adición de base, y similares, y la sal no está particularmente limitada siempre que se use una sal farmacéuticamente aceptable. Específicamente, los ejemplos de las sales de adición de ácido incluyen sales de adición de ácido con un ácido inorgánico tales como clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, nitrato y fosfato; y sal de adición de ácido con un ácido orgánico tales como benzoato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, maleato, fumarato, tartrato, citrato y acetato. Ejemplos de las sales de adición de base incluyen sales de adición de base con un metal tales como sal de sodio, sal de potasio, sal de litio, sal de calcio y sal de magnesio; sales con una amina tales como amoníaco, trimetilamina, trietilamina, piridina, colidina, y lutidina; sales de adición de base con una base orgánica tal como lisina y arginina, y similares.
En la presente invención, los ejemplos del disolvente que forma un solvato de cada compuesto (por ejemplo, el compuesto isómero (S) (III), un compuesto representado por la fórmula general (IV), un compuesto representado por la fórmula general (V), un compuesto representado por la fórmula general (V'), y similares) o una sal del mismo incluyen agua y disolventes orgánicos fisiológicamente aceptables, por ejemplo, etanol, hexano, acetato de etilo, y similares, pero no se limitan a estos ejemplos. Ejemplos del ingrediente activo del medicamento de la presente invención incluyen, por ejemplo, hidratos y similares, pero no se limitan a estos ejemplos.
Un ejemplo del procedimiento para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro de la presente invención se muestra en el esquema 3 mencionado a continuación, y un ejemplo del procedimiento para preparar el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro de la presente invención se muestra en el esquema 4 mencionado a continuación (en los siguientes esquemas, R, R1, X y n tienen los mismos significados que los definidos anteriormente).
Esquema 3
[Fórmula 15]
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intravenosas e inyecciones intramusculares, infusiones por gotero, supositorios, inhalados, colirios, gotas nasales, preparaciones transdérmicas, preparaciones transmucosas y similares, sin embargo, la composición farmacéutica no está limitada a estos ejemplos.
La composición farmacéutica mencionada anteriormente se puede preparar añadiendo aditivos farmacológica y farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de los aditivos farmacológica y farmacéuticamente aceptables incluyen, por ejemplo, excipientes, aglutinantes, cargas, agentes disgregantes, tensioactivos, lubricantes, agentes dispersantes, agentes tamponadores, conservantes, correctores, perfumes, agentes de recubrimiento, diluyentes, y similares, pero no están limitados a estos ejemplos.
La dosis del medicamento de la presente invención no está particularmente limitada, y la dosis se puede escoger adecuadamente dependiendo de un tipo de enfermedad, propósito de administración, es decir, uso profiláctico o uso terapéutico, un tipo de ingrediente activo, y similares, y la dosis también se puede incrementar o disminuir adecuadamente dependiendo de varios factores que, en general, se deben tomar en consideración, tales como peso y edad de un paciente, síntomas y vías de administración. Por ejemplo, para administración oral, el medicamento se puede usar en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 0,1 a 500 mg en términos de peso del ingrediente activo como dosis diaria para un adulto. La dosis se puede escoger adecuadamente por los expertos en la técnica, y no está limitada dentro del intervalo mencionado anteriormente.
Ejemplos
La presente invención se explicará adicionalmente con referencia a los ejemplos. Sin embargo, la presente invención no está limitada a estos ejemplos. Las abreviaturas usadas en los siguientes ejemplos tienen los siguientes significados.
s: singlete
d: doblete
t: triplete
q: cuartete
m: multiplete
a: ancho
J: constante de acoplamiento Hz: hercio CDCl3: cloroformo deuterado RMN de 1H: resonancia magnética nuclear de protones IR: espectro de absorción infrarroja Ejemplo 1: Establecimiento del procedimiento para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente
ópticamente puro Ejemplo 1-1: Resolución óptica usando una columna quiral Se ha revelado que, cuando se aplicaron las siguientes condiciones, cada enantiómero se puede separar del
compuesto racémico (I) preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento de patente 2 (publicación de patente internacional WO2008/129951), ejemplo 45, y que las condiciones eran usables para la medida de las purezas ópticas del compuesto isómero (S) (III) y del compuesto isómero (R) (II) por análisis de HPLC quiral. Por tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para medir la pureza óptica del compuesto racémico (I), del compuesto isómero (S) (III) o del compuesto isómero (R) (II), o una sal del mismo, o un solvato del mismo, usando las siguientes condiciones de análisis de HPLC quiral (en especial la combinación de la columna y la fase móvil mencionadas a continuación).
Columna: CHIRALCEL OD-H Fase móvil: hexano/etanol/TFA = 90/10/0,1 Caudal: 1,0 ml/min Temperatura de columna: 40 ºC Longitud de onda de detección: 242 nm
(En el esquema, Et representa grupo etilo, y Bn representa grupo bencilo).
Etapa 1: Preparación de (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano
Se preparó (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano por el procedimiento descrito en 1-(a) mencionado a
5 continuación, y se confirmó la configuración absoluta del mismo como sigue. Específicamente, se llevó a cabo la confirmación convirtiendo el (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano resultante en (S)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilamina, y comparando la señal de rotación específica medida realmente de la misma con la de un producto estándar disponible comercialmente de (S)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilamina de configuración absoluta conocida.
10 Además, también se preparó (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano por el procedimiento descrito en 1-(b) mencionado a continuación.
1-(a): Preparación de (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano (1)
En una atmósfera de argón, se disolvió 1,2-dibromo-1,1,2,2-tetracloroetano (7,57 g, 23,2 mmol) en tolueno (12,5 ml), a la solución se le añadió trifenilfosfina (6,1 g, 23,2 mmol) a 0 ºC, y se agitó la mezcla durante 30 minutos. A esta 15 mezcla de reacción se le añadió gota a gota una solución de (S)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol (1) (5,0 g, 19,4 mmol, >99,5 % de ee) en tolueno (12,5 ml) a 0 ºC durante 10 minutos o más, y a continuación se calentó la mezcla a temperatura ambiente, y se agitó durante 1 hora a la misma temperatura. A la mezcla de reacción se le añadió gota a gota n-hexano (25 ml), y se filtró la mezcla a través de Celite. Se lavó sucesivamente el filtrado con
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agua, hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio, y a continuación se evaporó a presión reducida. Se destiló el residuo resultante a presión reducida (56 ºC, 0,7 mmHg) para obtener 5,52 g de (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano (2) como un aceite incoloro (rendimiento: 88,6 %).
Análisis por HPLC quiral: pureza óptica > 99,5 % de ee (pico principal: primer pico), tasa de conversión ≥99 %
[α]D25 +59,1 (c = 1,03, CHCl3)
RMN de 1H (CDCI3) δ: 2,08 (3H, d, J=7,1Hz), 5,21 (1H, q, J=7,1Hz), 7,81 (1H, s), 7,87 (2H, s)
Confirmación de la configuración absoluta de (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano
A una solución de (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano (2) (106 mg, 0,336 mmol, 99 % de ee) obtenido en 1-(a) mencionado anteriormente en N,N-dimetilformamida (1 ml), se le añadió azida de sodio (64,4 mg, 0,990 mmol), y se agitó la mezcla a de -18 a -15 ºC durante 4 horas. Se extrajo la solución de reacción con acetato de etilo/n-hexano (1: 1) y agua, se lavó la capa orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y a continuación se concentró a presión reducida para obtener 111,5 mg de 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilazida (producto en bruto: 111,5 mg).
RMN de 1H (CDCI3) δ: 1,61 (3H, d, J=6,8Hz), 4,79 (1H, q, J=6,8Hz), 7,78 (2H, s), 7,84 (1H, s)
Se disolvió la 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilazida resultante (producto bruto: 111,5 mg) en metanol (6 ml) y a la solución se le añadió paladio-fibroína (18 mg) para la sustitución de hidrógeno, y a continuación se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, se concentró el filtrado a presión reducida, y se purificó el residuo resultante por cromatografía en columna de gel de sílice (cloroformo:metanol = 50:1 a 5:1) para obtener 77,6 mg de 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilamina como un aceite incoloro (rendimiento: 91 %, para 2 etapas).
RMN de 1H (CDCI3) δ: 1,42 (3H, d, J=6,8Hz), 1,58 (2H, s.a.), 4,30 (1H, q, J=6,8Hz), 7,75 (1H, s), 7,85 (2H, s)
La rotación específica de la 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilamina resultante fue como sigue.
[α]D25-15,9 (c = 1,31, CHCI3)
La rotación específica de un producto estándar comercialmente disponible ((S)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilamina (Central Glass Co., Ltd., Lot. 0102000, pureza óptica: 99 % de ee)) fue como sigue.
[α]D25-15,9 (c= 1,15, CHCI3)
Se descubrió que el signo de la rotación específica medida realmente era conforme con la del producto estándar disponibles comercialmente y, en consecuencia, se confirmó que la 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilamina resultante era el isómero (S). Además, dado que esta amina se obtuvo a partir de 1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]]etano a través de una reacción de sustitución nucleófila de ion azida, se confirmó que el 1-bromo-1-[3,5 bis(trifluorometil)fenil]etano obtenido en 1-(a) mencionado anteriormente fue el isómero (R).
1-(b): Preparación de (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano (2)
En atmósfera de argón, a (S)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol (1) (300 g 1,16 mol, 96 % de ee) se le añadió gota a gota tribromuro de fósforo (157,3 g, 0,58 mol) a una temperatura inferior a 20 ºC en un baño de agua, y se agitó la mezcla a 19-22 ºC durante 30 minutos. Se enfrió la mezcla de reacción, y se le añadió gota a gota bromuro de hidrógeno (solución al 30 % en ácido acético, 228 ml, 1,16 mol) a una temperatura inferior a 0 ºC, y se agitó la mezcla a 13-15 ºC durante 16 horas. Se vertió la mezcla de reacción en agua con hielo, y se extrajo la mezcla con n-hexano (3 l x 2). Se combinaron las capas orgánicas, se lavaron sucesivamente con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (3 l) y salmuera saturada (3 l), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y a continuación se concentró a presión reducida (90 a 100 mmHg) para obtener 389,2 g de un producto bruto. Se purificó el producto bruto resultante por cromatografía en columna (gel de sílice: 900 g, disolvente de desarrollo: n-hexano) para obtener 349,8 g de (R)-1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano (2) como un aceite incoloro (rendimiento: 93,8 %).
Se observó el primer pico como el pico principal en el análisis de HPLC quiral como se describe a continuación, y en consecuencia, se confirmó que el 1-bromo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano preparado en 1-(b) también era el isómero (R), como el obtenido en 1-(a).
Análisis por HPLC quiral: pureza óptica: > 93,9 % de ee (pico principal: primer pico), tasa de conversión: 97,8 %
RMN de 1H (CDCl3) δ: 2,08 (3H, d, J=7,1Hz), 5,21 (1H, q, J=7,1Hz), 7,81 (1H, s), 7,87 (2H, s)
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pentacloruro de tántalo (31,3 g, 87,3 mmol) y peróxido de hidrógeno acuoso al 30 % (496 ml, 4,38 mol), y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 horas. Se desactivó la mezcla de reacción con hidrogenosulfito de sodio acuoso saturado (3,1 l), y se le añadió agua (15 l), y se extrajo la mezcla con cloroformo (14 l, 12 l). Se lavó la capa orgánica con salmuera saturada (20 l), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y después se concentró a presión reducida, y se purificó el residuo resultante por cromatografía en columna (gel de sílice: 26 kg, disolvente de desarrollo: heptano/acetato de etilo = 3/1 → 2/1) para obtener un compuesto semiquiral (6) de éster bencílico del ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)fenil} (etil)amino)metil]ciclohexil}acético (amorfo amarillo, 619,5 g, rendimiento: 79 %).
El compuesto semiquiral resultante (6) fue un compuesto con isómero (S) dominante de la misma manera que el compuesto semiquiral (4) y el compuesto semiquiral (5).
Análisis por HPLC quiral: pureza óptica: 67,7 % de ee (pico principal: segundo pico)
RMN de 1H (CDCl3) δ: 0,87-0,96 (7H, m), 1,38 (1H, m), 1,45 (3H, d, J=7,1Hz), 1,65-1,80 (5H, m), 2,21 (2H, d, J=6,6Hz), 2,69 (1H, m), 2,81-2,91 (3H, m), 3,08 (3H, s), 3,44 (2H, t, J=5,4Hz), 4,44 (2H, t, J=5,4Hz), 4,64 (1H, d, J=17,1Hz), 4,86 (1H, d, J=17,3Hz), 5,10 (2H, s), 6,19 (1H, q, J=6,9Hz), 7,12 (1H, d, J=8,3Hz), 7,19 (1H, s), 7,30-7,39 (6H, m), 7,71 (1H, s), 7,72 (2H, s), 8,16 (2H, s)
Etapa 5: Preparación de éster bencílico del ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometi])f enil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético sustancialmente ópticamente puro
El compuesto semiquiral con isómero (S) dominante (6) de éster bencílico del ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)fenil} (etil)amino)metil]ciclohexil}acético (111,7 g, 123,7 mmol, 67,7 % de ee) obtenido en la etapa 4 se disolvió en etanol (825 ml) y se le añadieron cristales de siembra preparados por separado (los cristales del racemato preparado en la etapa 7 descrita a continuación, 2,0 mg) a una temperatura de 15 a 20 ºC, y se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 21 horas, y a 0 ºC durante 3 horas.
Se separaron los precipitados por filtración, y se lavaron con etanol enfriado (165 ml), y a continuación se concentró la solución madre a presión reducida para obtener éster bencílico del ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)fenil} (etil)amino)metil]ciclohexil}acético sustancialmente ópticamente puro (7) (amorfo amarillo, 66,38 g, rendimiento: 59 %).
El éster bencílico del ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)fenil} (etil)amino)metil]ciclohexil}acético resultante (7) se obtuvo separando los cristales con racemato dominante del compuesto semiquiral con isómero (S) dominante (6) por filtración, y por lo tanto, el resultado fue el isómero (S).
Análisis por HPLC quiral: pureza óptica > 99 % de ee (pico principal: segundo pico)
[α]D20 -42,36 (c = 1,0 % p/v, CHCl3)
La pureza óptica de los cristales con racemato dominante separados por filtración fue de un 22 % de ee como se determinó por análisis de HPLC quiral (43,39 g, rendimiento: 39 %).
Etapa 6: Preparación de ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfony])etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil) fenil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético sustancialmente ópticamente puro
En atmósfera de nitrógeno, a una solución de éster bencílico del ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometi])fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)f enil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético (7) (34,2 g, 37,88 mmol,> 99 % de ee) obtenido en la etapa 5 en etanol (340 ml) se le añadió Pd-C al 10 % (húmedo, 3,4 g) para la sustitución de hidrógeno, y a continuación se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Se filtró la suspensión de reacción a través de Celite, y se lavó con etanol (50 ml), y la se concentró solución de lavado a presión reducida para obtener ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometiDfenil }(etil)amino)metil]ciclohexil}acético sustancialmente ópticamente puro (III) (amorfo blanco, 31,78 g, rendimiento: 100 %).
El compuesto resultante era un compuesto levógiro como se muestra por la rotación específica mencionada a continuación. Además, debido a que se obtuvo el compuesto resultante por desprotección del resto éster del isómero
(S) del éster bencílico (7), el resultado también fue el isómero (S).
Análisis por HPLC quiral: pureza óptica: > 99 % de ee (pico principal: segundo pico)
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solo con DMSO) usando las cantidades de la proteína β-actina como índice. La cantidad de proteína PCSK9 y la cantidad de receptor de LDL corregidas de la muestra de adición del compuesto de prueba se representaron por valores relativos basados en la cantidad de proteína PCSK9 y la cantidad de receptor de LDL de la muestra de control, respectivamente, que se tomaron como 1.
Los resultados se muestran en la tabla 1.
Como compuesto de prueba, se usaron los siguientes compuestos.
1: ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4(trifluorometil)fenil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético (compuesto isómero (S) (III))
El compuesto isómero (S) (III) (pureza óptica: > 99 % de ee) se añadió al medio de cultivo en una concentración final de 10 µM.
2: ácido (R)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4(trifluorometil)fenil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético (compuesto isómero (R) (II))
El compuesto isómero (R) (II) (pureza óptica: ≥ 98 % de ee) se añadió al medio de cultivo en una concentración final de 10 µM.
3: ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4(trifluorometil)fenil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético (compuesto racémico (I))
Se añadió el compuesto racémico (I) al medio de cultivo en una concentración final de 10 µM. [Tabla 1]
- Compuesto de prueba
- Dosis (µM, concentración en medio de cultivo) Cantidad de proteína PCSK9 (valor relativo basado en el valor de control tomado como 1) Cantidad de receptor de LDL (valor relativo basado en el valor de control tomado como 1)
- Compuesto isómero (S) (III)
- 10 0,28 1,73
- Compuesto isómero (R) (II)
- 10 1,05 0,93
- Compuesto racémico (I)
- 10 0,68 0,73
Como se entiende claramente de los resultados mostrados en la tabla 1, el compuesto isómero (S) (III) redujo notablemente la cantidad de proteína PCSK9 e incrementó la cantidad de receptor de LDL en comparación con el control, mientras que el (R) compuesto isómero (II) y el compuesto racémico (I) casi no tuvieron dichas acciones. En particular, la cantidad de receptor de LDL se incrementó notablemente solo por el compuesto isómero (S) (III) en comparación con el control.
A partir de los resultados de prueba anteriores, se reveló que el compuesto isómero (S) (III) tenía la acción de reducción sobre la cantidad de proteína PCSK9 y la acción de incremento sobre la cantidad de receptor de LDL.
Además, aunque la presente invención no está limitada por la siguiente estimación, se estimó que, debido a que el compuesto racémico (I) casi no tenía ninguna acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 y no tenía absolutamente ninguna acción de incremento de la cantidad de receptor de LDL a pesar del hecho de que contenía aproximadamente un 50 % del compuesto isómero (S) (III), el compuesto isómero (R) (II) como componente constituyente del compuesto racémico (I) inhibió la expresión de las acciones del compuesto isómero (S) (III) en el compuesto racémico (I). Se estima además que es preferente incrementar la pureza óptica del compuesto isómero
(S) (III) para reducir el contenido del compuesto isómero (R) (II), en especial para potenciar la acción de incremento de la cantidad de receptor de LDL.
Ejemplo 3: Estudio de la influencia del compuesto isómero (S) (III) sobre la expresión de ARNm de PCSK9
Para estudiar el mecanismo de la acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 revelada en el ejemplo 2 mencionado anteriormente, se añadió un compuesto de prueba a las células HepG2, y se midió la cantidad de expresión de ARNm de PCSK9 por el procedimiento de PCR cuantitativa en tiempo real después del cultivo durante 24 horas.
Específicamente, se inocularon las células HepG2 en una placa de 24 pocillos a una densidad de 2 x 105 células/pocillo y se cultivaron durante la noche, y a continuación se añadió un compuesto de prueba disuelto en dimetilsulfóxido (DMSO), o solo DMSO al medio de cultivo en una cantidad de 1/1000 veces. Se cultivaron las células a 37 ºC durante 24 horas en una incubadora de CO2, y a continuación se le añadieron 500 µl de ISOGEN (NIPPON GENE, n.º de catálogo 31-02501), y se extrajo el ARN total. Se sintetizó ADNc a partir del ARN total extraído usando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Applied Biosystems, n.º de catálogo 4368813). Se midió la cantidad de expresión de ARNm de PCSK9 humana por PCR cuantitativa en tiempo real usando cebadores
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específicos de PCSK9 humano (Kourimate S. et al., J. Biol. Chem., Vol. 283, p. 9666), y la mezcla Fast SYBR Green Master (Applied Biosystems, n.º de catálogo 4385614). Como aparato de medida, se usó el sistema 7900HT Fast Realtime PCR.
Los valores medidos resultantes de la cantidad de expresión de ARNm de PCSK9 se corrigieron entre los obtenidos para las muestras de adición de compuesto de prueba (3 muestras) y las muestras de control (muestra añadida sólo con DMSO, 3 muestras) usando las cantidades de expresión de ARNm de β-actina como índice. La cantidad de expresión de ARNm de PCSK9 corregida de las muestras de adición de compuesto de prueba se representó con un valor relativo (promedio ± error estándar) basado en el promedio de las cantidades de expresión de ARNm de PCSK9 de las muestras de control, que se tomó como 1.
Los resultados se muestran en la tabla 2.
Como compuesto de prueba, se usó el siguiente compuesto.
1: ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)f enil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético (compuesto isómero (S) (III))
El compuesto isómero (S) (III) (pureza óptica: > 99 % de ee) se añadió al medio de cultivo en una concentración final de 10 µM.
[Tabla 2]
- Compuesto de prueba
- Dosis (µM, concentración en medio de cultivo) Cantidad de expresión de ARNm de PCSK9 (valor relativo basado en el valor promedio de control tomado como 1)
- Compuesto isómero (S) (III)
- 10 0,18±0,13
A partir de los resultados mostrados en la tabla 2, se reveló que el compuesto isómero (S) (III) redujo notablemente la cantidad de expresión de ARNm de PCSK9 en comparación con el control.
Por lo tanto, se consideró que al menos una parte de la acción reducción de la cantidad de proteína PCSK9 del compuesto isómero (S) (III) revelado en el ejemplo 2 se basó en la acción de supresión de la expresión del gen PCSK9, y el compuesto isómero (S) (III) tenía una acción de supresión de la producción de proteína PCSK9.
Ejemplo 4: Estudio de la acción de reducción de la colesterolemia-LDL del compuesto isómero (S) (III)
Se suspendió ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)f enil}(etil)amino)metil]ciclohexil}acético (compuesto isómero (S) (III), pureza óptica: > 99 % de ee) en una solución de metilcelulosa al 0,5 %, y se administró por vía oral repetidamente a hámsteres normales (hámsteres sirios machos) una vez al día durante 14 días usando una sonda metálica. Cuatro horas después de la administración final, se extrajo sangre, y se obtuvo plasma. Se analizaron las lipoproteínas en el plasma por medida automática usando un sistema de HPLC basado en el procedimiento de posmarcado de acuerdo con el procedimiento descrito en J. Lipid. Res., 43, p. 805-814. Específicamente, se diluyeron 15 µl de una muestra de plasma 10 veces con PBS que contenía EDTA 1 mM, y se inyectaron 80 µl de la muestra diluida en una columna de filtración en gel (columna Superese 6 (tamaño de columna: 10 x 300 mm), GE Healthcare Bioscience) conectada a un sistema de HPLC (unidad de alimentación de líquido: sistema Shimadzu LC-20A, Shimadzu). Se realizó la separación a un caudal de 0,5 ml/minuto y una temperatura de columna de 40 ºC usando PBS que contenía EDTA 1 mM como tampón de desplazamiento. Se mezcló un reactivo para la medida de colesterol (Cholesterol E-Test Wako, Wako Pure Chemical Industries) con el eluido de la columna a un caudal de 0,25 ml/minuto, y se realizó la reacción a 40 ºC en una bobina de reacción (0,5 mm x 15 m) con alimentación del eluido. Se detectaron los colesteroles en el eluido obtenido a partir de la bobina de reacción a una longitud de onda de 600 nm. Se calculó la proporción del área de la fracción de LDL basada en el área de pico total resultante de los colesteroles, y se multiplicó la cantidad de colesterol total medida con antelación usando Cholesterol E-Test Wako por la proporción del área de la fracción de LDL para calcular la cantidad de colesterol-LDL.
Se usaron seis hámsteres normales para cada uno de, el grupo de control (grupo de administración de solución de metilcelulosa al 0,5 %) y los grupos de administración del compuesto de prueba (grupos de administración de 10 mg/kg de peso corporal y 30 mg/kg de peso corporal del compuesto isómero (S) (III)). Se dividieron los hámsteres en los grupos con antelación en base al valor de colesterol en plasma total.
Las cantidades de colesterol-LDL en el plasma de los grupos (LDL-C, mg/dl) se muestran en la tabla 3. Los símbolos * y *** en la tabla 3 quiere decir que hubo diferencias significativas a un nivel de significación de un 5 % o menos (p <0,05) y un nivel de significación de un 0,1 % o menos (p <0,001), respectivamente, como se determina por una prueba de comparación de múltiples grupos (prueba de comparación múltiple de Dunnett) realizada entre el grupo de control y cada uno de los grupos de administración del compuesto de prueba. Además, se calculó la tasa de
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reducción de la cantidad de colesterol-LDL del grupo de administración del compuesto de prueba basada en el grupo de control, de acuerdo con la siguiente ecuación 1 como una tasa de reducción de colesterol, y se indicó en términos de porcentaje.
Tasa de reducción de colesterol-LDL (%) = [(promedio de la cantidad de colesterol-LDL de grupo de control promedio de la cantidad de colesterol-LDL de grupo de administración del compuesto)/promedio de la cantidad de colesterol-LDL de grupo de control] x 100 (ecuación 1)
[Tabla 3]
- Compuesto
- Dosis (mg/kg) Promedio de la cantidad de colesterol LDL ± desviación estándar (mg/dl) Tasa de reducción de colesterol LDL (%)
- Control
- - 50±3,0 -
- Compuesto isómero (S) (III)
- 10 40 ± 2,6* 20,0
- 30
- 31 ±2,6*** 38,0
A partir de los resultados mostrados en la tabla 3, se reveló que el compuesto isómero (S) (III) tenía una acción de reducción de la colesterolemia-LDL superior.
A partir de los resultados de prueba mencionados anteriormente, también se reveló que el compuesto isómero (S) (III) es útil como ingrediente activo de un medicamento que tiene una acción de reducción de LDL en sangre, y similares.
Ejemplo 5: Estudio de la influencia del compuesto racémico (I) y similares en la expresión de ARNm de HMG-CoA reductasa
Se añadió un compuesto de prueba a las células HepG2 y se cultivaron las células durante 8 horas, y a continuación se midió la cantidad de la expresión de ARNm de HMG-CoA reductasa por PCR cuantitativa en tiempo real.
Específicamente, se inocularon las células HepG2 en una placa de 24 pocillos a una densidad de 2 x 105 células/pocillo y se cultivaron durante la noche, y a continuación se añadió un compuesto de prueba disuelto en dimetilsulfóxido (DMSO), o solo DMSO al medio de cultivo en una cantidad de 1/1000 veces. Se cultivaron las células a 37 ºC durante 8 horas en una incubadora de CO2, y a continuación se les añadieron 500 µl de ISOGEN (NIPPON GENE, n.º de catálogo 31-02501), y se extrajo el ARN total. Se sintetizó ADNc a partir del ARN total extraído usando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Applied Biosystems, n.º de catálogo 4368813). Se midió la cantidad de expresión del ARNm de la HMG-CoA reductasa humana por PCR cuantitativa en tiempo real usando un conjunto de los siguientes cebadores: 5'--3' y 5'
-3' específicos para la HMG-CoA reductasa humana, y la mezcla Fast SYBR Green Master (Applied Biosystems, n.º de catálogo 4385614). Como aparato de medida, se usó el sistema 7900HT Fast Realtime PCR.
Se corrigieron los valores medidos resultantes de la cantidad de expresión de ARNm de la HMG-CoA reductasa entre los obtenidos para las muestras de adición del compuesto de prueba (3 muestras para cada compuesto) y muestras de control (muestra añadida solo con DMSO, 3 muestras) usando las cantidades de expresión de ARNm de β-actina como índice. Se representó la cantidad de expresión de ARNm de la HMG-CoA reductasa corregida de la muestra de adición del compuesto de prueba con un valor relativo (promedio ± error estándar) basado en el promedio de las cantidades de expresión de ARNm de HMG-CoA reductasa de las muestras de control, que se tomó como 1.
Los resultados se muestran en la tabla 4.
Como compuesto de prueba, se usaron los siguientes compuestos. 1: ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)fenil} (etil)amino)metil]ciclohexil}acético (compuesto racémico (I))
Se añadió el compuesto racémico (I) al medio de cultivo en una concentración final de 10 µM.
2: ácido trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5-[2-(metiltio)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(trifluorometil)fenil}(etil) amino)metil]ciclohexil}acético (compuesto descrito en el documento de patente 2, ejemplo 44)
El compuesto descrito en el documento de patente 2, ejemplo 44, se añadió al medio de cultivo en una concentración final de 10 µM.
[Tabla 4]
- Compuesto de prueba
- Dosis (µM, concentración en medio de cultivo) Cantidad de expresión de ARNm de HMG-CoA reductasa (valor relativo basado en el valor promedio de control tomado como 1)
- Compuesto racémico (I)
- 10 0,37 ± 0,02
- Compuesto descrito en el documento de patente 2, ejemplo 44
- 10 0,25±0,03
A partir de los resultados mostrados en la tabla 4, se reveló que tanto el compuesto racémico (I) como el compuesto descrito en el documento de patente 2, ejemplo 44, redujeron notablemente la cantidad de expresión del ARNm de HMG-CoA reductasa en comparación con el control.
5 Aplicabilidad industrial
El compuesto isómero (S) (III) tiene una acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 y una acción de incremento de la cantidad de receptor de LDL, y tiene una acción de reducción de la colesterolemia de LDL superior. Por lo tanto, el compuesto se puede utilizar, por ejemplo, como ingrediente activo de un medicamento para reducir el colesterolemia-LDL, y similares, y por tanto se puede utilizar en la industria farmacéutica.
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