CN108349911B - 可释放一氧化氮的前药分子 - Google Patents

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Abstract

一类可用于治疗心血管疾病的化合物和含有该化合物的组合物。该化合物和组合物在人体内可通过增加血液中的高密度脂蛋白胆固醇，改善脂质代谢紊乱；另一方面，该化合物和组合物还可释放出一氧化氮，通过舒张血管、降低血压、抑制血小板黏附和聚集、维持血管张力，降低心血管疾病发病风险，在防治心血管疾病的发生发展方面发挥重要作用。

Description

可释放一氧化氮的前药分子
本申请要求于2015年9月7日提交中国专利局、申请号为 201510563200.2发明名称为“可释放一氧化氮的前药分子”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明属于药物化学研发领域，具体涉及一类可释放一氧化氮的前药分子及其医药用途。
背景技术
一氧化氮供体(NO Provider)是一类能在体内释放出NO的前体药物，是指不需经一氧化氮酶(NOS)催化自行或与其它物质作用产生NO的药物，它既可作为一种NO体内运输形式，又可作为一种贮存形式，延长NO 的半衰期，克服吸入NO所引起的诸多不便及NO的吸入量难以控制的缺点。NO供体型药物主要是以已知药物或活性化合物的结构为母核，与NO供体通过各种连接基团结合而成的前药，它可在体内经相关酶或非酶作用释放原药和NO。研究表明，由于释放NO的作用，NO供体型药物的疗效一般优于原药，且不良反应显著小于原药。
目前，NO供体药物研究的趋势是利用前药原理将NO供体与生效药物结合起来形成一种更有效的结合型新药物。这种药物设计方式的优点在于提高药物的生物利用度、增加药物稳定性、减小毒副作用、促使药物长效化等。同时，它具有NO供体的特征，提供一种依赖于NO的生物活性， NO供体的研究已成为近年来生物医学和药学领域研究的热点和前沿之一。
心血管类疾病一直是全球范围内的公共卫生问题，据统计每年约350 万人死于心血管病——每10秒钟有1人死于心血管病，人体内脂肪代谢或运转异常导致高血脂，高血脂可直接引起一些严重危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化。高血脂能造成人体组织器官供血不足，由此诱发冠心病、脑卒中、高血压、肾衰竭等心脑血管疾病。人体内的胆固醇逆向转运(RCT) 机制可改善高血脂症，RCT是一种正常的生理过程，其能将动脉粥样硬化斑块运输到动脉之外，并通过肝脏将其从体内消除。
载脂蛋白A-I(ApoA-I)是功能性高密度脂蛋白(HDL)微粒的重要组成部分，其能促进RCT，有效消除动脉粥样硬化斑块，防治高血脂症；另一方面，ApoA-I还能通过激活AMPK信号通路，激活磷酸化乙酰辅酶羧化酶，提高葡萄糖在肌肉细胞中的吸收，改善体内的血糖代谢；随着研究的深入，人们发现ApoA-I不仅与调控体内脂质代谢及血糖代谢有关系，其还和免疫功能、神经功能有密切关系，临床实验数据表明，体内低水平的 ApoA-I，可导致心血管疾病的发病率增加。因此，增加人体内ApoA-I的含量，将对心血管疾病的防治发挥积极作用。
开发能提高体内ApoA-I水平的小分子化合物已成为心血管疾病治疗药物研发的重要方向，在WO 2006/045096、WO2008/092231、WO2010/123975 等专利中均公开了这一类小分子化合物。
发明内容
本发明的化合物进入体内能迅速释放出NO和提高体内ApoA-I水平的小分子化合物，不仅能改善心脑血管功能，还对血脂异常及糖尿病并发症具有一定的防治作用。
本发明所提供的化合物为通式(II)表示的化合物及其药学上可接受的盐或立体异构体：
A-B (II)
其中A为可防治心血管疾病的小分子化合物残基，选自下列基团：
Figure GDA0002898004200000031
其中R1为-O-；R0选自下列基团：
Figure GDA0002898004200000032
Figure GDA0002898004200000041
Figure GDA0002898004200000051
除以上所罗列的结构，B还可以用以下通式所表示：
-C(O)-CH2-NH-C(O)-Y0；
-C(O)-CH2-NH-C(O)-Y；
-C(O)-CH2-CH2-NH-C(O)-Y0；
-C(O)-CH2-CH2-NH-C(O)-Y；
除以上通式，B还具体指代：
Figure GDA0002898004200000052
其中，R2为H、直链C1-4烷基或支链的C3-4烷基；
R3为-CH-或氮原子；
X为氟原子或氯原子；
R4为C1-3烷基；
R5为-O-、-S-、-NH-或是被C1-3烷基取代的氮原子；
Figure GDA0002898004200000053
R8和R9分别独立地是C1-6烷基、烷基取代的C1-6烷基、羟基取代的 C1-6烷基、氟取代的C1-6烷基、氘取代的C1-6烷基、-CH2-R10或-CH2-CH2-R10；
其中R10是-OH、-O-C1-6烷基、-OCD3、-C(O)-T2、-C(O)-R5-T2、-OC(O)-T2、 -R5-C(O)R5-T2、-NH2、-C6H5，
或是未被取代的具有1、2或3个氮原子的5或6元杂芳基环；或是具有1、2或3个氮原子的被取代的5或6元杂芳基环，其中所述被取代的5 或6元杂芳基环在任何碳原子上被选自下列取代基的基团单取代或二取代：
-OH、-O-C1-6烷基、-OCD3、-C(O)-T2、-C(O)-R5-T2、-OC(O)-T2、 -R5-C(O)R5-T2、-NH2、-C1-6烷基、羟基取代的C1-6烷基、氟取代的C1-6烷基或氘取代的C1-6烷基；
R11是氢、C1-8烷基，有取代基的C1-8烷基，苯基、芳基、有取代基的苯基或芳基，或是具有4-7个碳原子的环烷基；或是有取代基的具有4-7个碳原子的环烷基，其中所述的取代基以T2或R10所限定；
R12为R11、-C(O)-R5-R11或为-C(O)-R11，优选-C(O)-OCH2CH3；
R13为H、C1-4烷基、腈基、苄基、硝基、对硝基苯基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基羰基或环烷基；
R14为H、
Figure GDA0002898004200000061
或R8；
Figure GDA0002898004200000062
除以上通式，Y0还具体代表：
Figure GDA0002898004200000063
Y为
Ya)
-T-ONO2、-T-SNO、-(CH2-CH2)r-R5-CH2-CH2-ONO2、
Figure GDA0002898004200000071
Figure GDA0002898004200000072
Yb)
Figure GDA0002898004200000081
除以上通式，Y还进一步代表：
Figure GDA0002898004200000082
T为直链的C1-20亚烷基，支链的C3-20亚烷基，或是具有3-7个碳原子的亚环烷基，所述亚环烷基任选地被一个或多个直链的C1-10烷基链或支链的C3-10烷基链取代；
或是被一种或多种取代基取代的C1-20亚烷基，其中所述取代基为羟基、硝酸酯基(-ONO2)或T1；
U为任选被-ONO2基团取代的直链C1-20亚烷基或支链C3-20亚烷基；
Y1为直链的C1-20亚烷基，支链的C3-20亚烷基，直链的C2-20亚烯基，支链的C3-20亚烯基；
或是被一种或多种取代基取代的C1-20亚烷基，或是被一种或多种取代基取代的C2-20亚烯基，其中所述取代基为T2；
或是具有4-7个碳原子的亚环烷基，所述环任选地被一个或多个直链的 C1-10烷基链或支链的C3-10烷基链取代；具体还可用以下通式表示：
-(CH2)r-、-(CH2)n-Z-(CH2)r-、-CH2-CH(CH3)-(CH2)r-、 -CH2-CH(CH3)-(CH2)r-Z-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-Z-(CH2)r-、 -CH2CH＝CHCH2-、-CH2CH＝CHCH2-Z-(CH2)r-、
Figure GDA0002898004200000091
其中Z为R5、
Figure GDA0002898004200000092
A为O、N、S、C；
T1为未取代或取代的C1-12直链烷基，未取代或取代的C3-12支链烷基，未取代或取代的C2-12直链烯基，未取代或取代的C3-12支链烯基，未取代或取代的苄基，未取代或取代的苯基，未取代或取代的芳基取代的C1-4烷基，未取代或取代的杂芳基，-OC(O)-(C1-10烷基)-ONO2或-O-(C1-10烷基)-ONO2；
T2为未取代或取代的C1-12直链烷基，未取代或取代的C3-12支链烷基，未取代或取代的C2-12直链烯基，未取代或取代的C3-12支链烯基，未取代或取代的苄基，未取代或取代的苯基，未取代或取代的芳基取代的C1-4烷基，未取代或取代的杂芳基；
Y2为C1-8烷基、苯基、苯磺酰基、腈基、三氟甲基、C1-8烷氧基或者为C1-8烷基硝酸酯基；
Y3为H、F、Cl、Br、I、OH、C1-6烷基、-OC1-6烷基；
Y4为氢、卤素、三氟甲基、C1-8烷氧基、C1-8烷基、硝基、磺酰胺基、氨基或腈基；
Y5为-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH2-或-CH＝CH-；
Y6是饱和的5或6元芳杂环、不饱和的5或6元芳杂环，其中杂环包含一个或多个选自氮、氧、硫的杂原子，具体选自：
Figure GDA0002898004200000093
Figure GDA0002898004200000101
Y7、Y8、Y9及Y10相同或不相同，它们代表H、直链的C1-4烷基或支链的C3-5烷基；
Figure GDA0002898004200000102
n为0-10的整数；n’为1-10的整数；m是0-3的整数；m’是1或2；r 为1-6的整数；r’为0-6的整数。
术语“烷基”包括饱和的脂肪族基团，包括直链烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等)、支链烷基(异丙基、叔丁基、异丁基等)、环烷基基团(环丙基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基)、烷基取代的环烷基、和环烷基取代的烷基。
在某些实施方案中，直链或支链的烷基的骨架上具有6个或更少的碳原子(例如，直链为C1-6，支链为C3-6)，且更优选4个或更少的碳原子。同样，优选的环烷基在其环结构上具有3-8个碳原子，更优选在其环结构上具有5或6个碳。
术语“C1-6烷基”包括包含1至6个碳原子的烷基。
此外，术语“烷基”还包括“未被取代的烷基”和“取代的烷基”，后者是指烃骨架中一个或多个碳上的氢被取代基替换的烷基基团。所述取代基可以包括：烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羟基羰基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸酯、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、羟基硫代羰基、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族基团或杂芳族基团。
术语“芳基”包括5和6元的单环芳族基团，其可以包含0-4个杂原子，例如苯、苯基、吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、唑、异唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等；此外，术语“芳基”还包括多环芳基，例如三环、二环，例如萘、苯并唑、苯并二唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亚甲二氧基苯基、喹啉、异喹啉、萘啶、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、脱氮嘌呤或中氮茚。这些具有杂原子的芳基也称为“芳基杂环”、“杂环”、“杂芳基”或“杂芳族基团”。
典型的杂芳基包括2-或3-噻吩基；2-或3-呋喃基；2-或3-吡咯基；2-、 4-或5-咪唑基；3-、4-或5-吡唑基；2-、4-或5-噻唑基；3-、4-或5-异噻唑基；2-、4-或5-唑基；3-、4-或5-异唑基；3-或5-1，2，4-三唑基；4-或5-1， 2，3-三唑基；四唑基；2-、3-或4-吡啶基；3-或4-哒嗪基；3-、4-或5-吡嗪基；2-吡嗪基；2-、4-或5-嘧啶基。
术语“杂芳基”还指其中杂芳族环与一个或多个芳基、环脂族或杂环基的环稠合的基团，其中其连接基团或连接点位于杂芳族环上。其实例包括但不限于1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-中氮茚基；1-、3-、4-、5-、6-或7- 异吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基； 2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹嗪基； 2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基； 1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基；2-、3-、4-、5-或6-萘啶基；2-、3-、5-、 6-、7-或8-喹唑啉基；3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基；2-、4-、6-或7-蝶啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4aH咔唑基；1-、2-、3-、4-、5-、 6-、7-或8-咔唑基；1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-咔啉基；1-、2-、3-、 4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基；1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-啶基；2-、3-、4-、5-、6-、8-、9- 或10-菲咯啉基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-吩嗪基；1-、2-、3-、4-、 6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩嗪基；2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯并异喹啉基；2-、3-、4-或噻吩并[2，3-b]呋喃基；2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10- 或11-7H-吡嗪并[2，3-c]咔唑基；2-、3-、5-、6-或7-2H-呋喃并[3，2-b]- 吡喃基；2-、3-、4-、5-、7-或8-5H-吡啶并[2，3-d]-o-嗪基；1-、3-或5-1H- 吡唑并[4，3-d]-唑基；2-、4-或5-4H-咪唑并[4，5-d]噻唑基；3-、5-或8- 吡嗪并[2，3-d]哒嗪基；2-、3-、5-或6-咪唑并[2，1-b]噻唑基；1-、3-、6-、 7-、8-或9-呋喃并[3，4-c]噌啉基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或 11-4H-吡啶并[2，3-c]咔唑基；2-、3-、6-或7-咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪基；7-苯并[b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基；2-、4-、5-、6-或 7-苯并咪唑基；2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基；1-、2-、4-、5-、6-、 7-、8-或9-苯并氧杂基；2-、4-、5-、6-、7-或8-苯并嗪基；1-、2-、3-、5-、 6-、7-、8-、9-、10-或11-1H-吡咯并[1，2-b][2]苯并氮杂基。典型的稠合杂芳基包括2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或 8-异喹啉基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并 [b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基； 2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基。
“芳基”或“杂芳基”的芳环可以在一个或多个环位置上被上文所述的取代基取代，例如卤素、羟基、烷氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羟基羰基、烷基羰基、烷基氨基羰基、芳基烷基氨基羰基、烯基氨基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳基烷基羰基、烯基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷硫基羰基、磷酸酯、膦酸酯、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、羟基硫代羰基、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸酯基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基，或芳族基团或杂芳族基团，其中芳基基团也可以与非芳族的脂环或杂环稠合或桥连，以形成多环(例如四氢萘)。
术语“烯基”包括在长度和可能的取代上类似于上述的烷基的不饱和脂肪族基团，但是其包含至少一个双键。
例如，术语“烯基”包括直链的烯基(例如：乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等)、支链的烯基、环烯基(例如：环丙烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基)、烷基或烯基取代的环烯基以及环烷基或环烯基取代的烯基。术语“烯基”还包括含有替换烃骨架的一个或多个碳的氧、氮、硫或磷原子的烯基。在某些实施方案中，直链或支链烯基在其骨架中具有6个或更少的碳原子(例如： C2-6的直链烯基，C3-6的支链烯基)。术语C2-6烯烃基包括含有2-6个碳原子的烯基。
此外，术语“烯基”包括“未被取代的烯基”和“被取代的烯基”，后者是指烃骨架中一个或多个碳上的氢被取代基替换的烯基。所述的取代基可以包括例如烷基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羟基羰基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸酯、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、羟基硫代羰基、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基，或芳族基团。
术语“烷氧基”包括与氧原子共价连接的被取代的和未被取代的烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、异丙基氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基。被取代的烷氧基的实例包括卤代烷氧基。烷氧基可被以下基团取代：烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羟基羰基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、磷酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、羟基硫代羰基、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族基团。
本发明所提供化合物的合成流程：
本发明的通式表示的化合物可以按照多种反应流程加以合成，本领域技术人员可以很容易的通过本文在实施例中所提供的一些制备方法设计其他化合物的反应流程。
一般的合成路线中，首先合成A-H化合物，该化合物的制备方法可参考专利WO2009158404，得到A-H化合物后，再将化合物与含有NO供体的片段进行反应，反应一般在缩合剂中，如DCC、EDCI、CDI或HOBt的存在条件下，在碱例如DMAP存在或不存在的条件下进行，在有机无水溶剂中，如DMF、THF、甲苯、二氧己环或多卤化的脂肪族烃存在的条件下，在-20℃至50℃的温度下进行，反应在30分钟至36小时的时间内完成。
制备得A-H化合物后，一般将其先和酸酐反应成酯，反应在有机无水溶剂中，如DMF、THF、DCM存在的条件下，在100℃至120℃的温度条件下搅拌，反应在2小时至4小时的时间内完成；所得产物纯化后再与酰氯类化合物反应，反应在有机碱例如DMAP、三乙胺或吡啶存在的条件下，在惰性有机溶剂中，如DMF、THF、苯、甲苯、二氧己环或多卤化的脂肪族烃存在的条件下，在-20℃至40℃的温度下进行，反应在30分钟至36小时的时间内完成；所得产物纯化后再与含有NO供体的化学片段进行缩合反应。
本发明所提供的NO供体化合物由Y或Y0表示，其合成方法可参考专利WO2014113700、WO2015109210、EP0984012、EP1336602。
本发明化合物通式中的B选自
Figure GDA0002898004200000141
Figure GDA0002898004200000142
时，合成方法可参考本发明中的实施例2；
当B选自
Figure GDA0002898004200000143
合成方法可参考本发明中的实施例3；
当B选自
Figure GDA0002898004200000144
Figure GDA0002898004200000145
时，合成方法可参考本发明中的实施例6；
当B选自
Figure GDA0002898004200000151
时，合成方法可参考本发明中的实施例18；
当B选自
Figure GDA0002898004200000152
合成方法可参考本发明中的实施例24；
当B选自
Figure GDA0002898004200000153
合成方法可参考本发明中的实施例25；
当B选自
Figure GDA0002898004200000154
Figure GDA0002898004200000155
时，合成方法可参考本发明中的实施例23和实施例25；
当B选自-C(O)-CH2-NH-C(O)-Y0；-C(O)-CH2-NH-C(O)-Y；-C(O)-CH2-CH2-NH-C(O)-Y0；-C(O)-CH2-CH2-NH-C(O)-Y时，合成方法可参考本发明中的实施例9。
下列缩写可以用在实施例和说明书全文中：
g(克)； mg(毫克)；
L(升)； mL(毫升)；
M(摩尔的)； mM(毫摩尔/升)；
i.v.(静脉内)； Hz(赫兹)；
MHz(兆赫兹)； mol(摩尔)；
mmol(毫摩尔)； TLC(薄层色谱)；
min(分钟)； h(小时)；
MeOH(甲醇)； THF(四氢呋喃)；
TEA(三乙胺)； TFA(三氟乙酸)；
DIPEA(N，N-二异丙基乙胺) DMAP(4-二甲氨基吡啶)；
DMSO(二甲基亚砜)； EtOAc(乙酸乙酯)；
DCM(二氯甲烷)； BOC(叔丁氧羰基)；
DMF(N，N-二甲基甲酰胺)； CDI(1，1-羰基二咪唑)；
IBCF(氯甲酸异丁酯)； HOAc(乙酸)；
HOBt(1-羟基苯并三唑)； DCC(二环己基碳二亚氨基)；
Et2O(二乙醚)； Ac2O(乙酸酐)
EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)；
NMP(N-甲基吡咯烷酮) Me(甲基)；
P-TSA(对甲基苯磺酸)； Ac(乙酰基)；
OMe(甲氧基)； Et(乙基)；
EtOH(乙醇)； RP(反相)；
BOP(苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐)。
本发明的通式A-B中具有代表性的化合物如下：
2-(4-(2-硝氧基-乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)- 酮；
3-硝氧甲基-苯甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2- 基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
N-((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基苯氧基)乙氧基)羰基氧基)-5-甲基噻吩-2-磺酰胺；
N-((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基苯氧基)乙氧基)羰基氧基)-5-甲基呋喃-2-磺酰胺；
3-(3-硝氧基-丙酰基)-苯甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
琥珀酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯3-(硝氧基)-2，2-二((硝氧基)甲基)丙酯；
3-(2，3-二硝基氧-丙氧基)-苯甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
4，5-二硝基氧基-戊酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2- 基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
(4-硝氧基-丁酰胺基)-乙酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
2-氨基-3-(4-{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2， 6-二甲基-苯氧基]-乙氧基羰基氧基}-苯基)-丙酸2-硝氧基-乙酯的盐酸盐；
4-(2-氧代-3-硝氧基甲基-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000171
二唑-3-甲基)氧基-4-氧代-丁酸 2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]- 乙酯；
3-(6-硝氧基-己酰胺基)-丙酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
2-羟基琥珀酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2， 6-二甲基-苯氧基]-乙酯(2-氧代-4-苯基-呋咱-3-基)-甲酯；
4-(2-(((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基)乙氧基)羰基)氧基)乙氧基)-3-(苯磺酰基)-2-氧代-呋咱；
(E)-4-((呋喃-2-磺酰氨基)氧基)-4-氧代-2-丁烯酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4- 氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
4-(((3-(甲磺酰基))苯基)磺酰胺基)氧基)-4-氧代丁酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
4-[4-(2-(硝氧基)乙基)-哌嗪-1基]-4-氧代-丁酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4- 氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
2-氨基-琥珀酸1-(2，3-二硝氧基-丙基)酯4-{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙基}酯的盐酸盐；
(6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3-基)-碳酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4- 氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
(6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3-基)-氨甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基 -4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
4-(((5-氯代噻吩)-2-磺酰氨基)氧基)-4-氧代丁酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4- 氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯；
2-(N-(((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙氧基)羰基)氧基)氨磺酰基)-1-甲基-1H-吡啶l-2-鎓盐；
2-乙酰氨基-3-(4-(((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2- 基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸3，4-(二硝氧基)丁基酯；
4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基- 苯氧基]丁基)-4-氧代-2-乙酰氨基-丁酸3-(硝氧基)-2，2-二(硝氧基甲基)丙酯；
4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基- 苯氧基]丁氧基)-4-氧代-2-(2-(硝氧基)乙酰氨基)-丁酸2-硝氧基乙酯。
如上所述，本发明还包括式(II)的化合物的药用可接受的盐和其立体异构体。
所述的药用可接受的盐的是指无机碱盐，如钠盐、钾盐、钙盐或铝盐；有机碱盐，如赖氨酸盐、精氨酸盐、三乙胺盐、二苄胺盐、哌啶盐及其他药学上可接受的有机胺盐。
在本发明的化合物分子中包含至少一个可成盐的氮原子时，可以通过在有机溶剂如乙腈、四氢呋喃中与相应的有机酸或无机酸反应，从而转化为相应的盐。典型的有机酸有草酸、酒石酸、马来酸、琥珀酸、柠檬酸，典型的无机酸有硝酸、盐酸、硫酸、磷酸，优选硝酸。
本发明的化合物中具有一个或多个不对称碳原子时，它们能够以如下形式存在：光学纯的对映异构体、纯的非对应异构体、对映异构体混合物、非对应异构体混合物、对映异构体外消旋混合物、外消旋物或外消旋物混合物。式(II)的化合物的全部可能的异构体、立体异构体和其混合物也在本发明的范围内。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含上述至少一个化合物以及任选一种或多种医药上可接受的载剂和/或稀释剂。
本发明所提供的药物组合物可以制备为任何形式，例如颗粒、粉末、片剂、包衣片剂、胶囊、药丸、糖浆、滴剂、溶液、混悬剂和乳剂，或者活性成分的缓释制剂，其中胶囊剂的实例包括硬或软明胶胶囊剂，颗粒剂和粉剂可以是非泡腾或泡腾形式。
本发明的药物组合物可进一步包括一种或多种医药或生理上可接受的载体，这些载体将适当配制以便于给药。例如，医药或生理上可接受的载体可以是盐水、热压水、林格氏液、缓冲盐水、葡萄糖、麦芽糖糊精、甘油、乙醇及其混合物。本发明的药物组成物还可以包括医药或生理上可接受的添加剂，例如稀释剂、润滑剂、粘合剂、助流剂、崩解剂、甜味剂、矫味剂、湿润剂、分散剂、表面活性剂、溶剂、涂层剂、发泡剂、或芳香剂。
可以使用的稀释剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、高岭土、盐、甘露糖醇和磷酸二钙；润滑剂的实例包括但不限于滑石、淀粉、镁或钙的硬脂酸盐、石松子和硬脂酸；粘合剂的实例包括但不限于微晶纤维素、黄蓍胶、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊；助流剂的实例包括但不限于胶体二氧化硅；崩解剂的实例包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、膨润土、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素；甜味剂的实例包括但不限于蔗糖、乳糖、甘露糖醇和人工甜味剂，例如环磺酸钠和糖精，和任意数量的喷雾干燥矫味剂；矫味剂的实例包括但不限于从植物提取的天然矫味剂，例如果实，和味道较好的化合物，例如但不限于薄荷和水杨酸甲酯；湿润剂的实例包括但不限于丙二醇一硬脂酸酯、脱水山梨醇一油酸酯、二甘醇一月桂酸酯和聚氧乙烯月桂基醚。
本发明的药物组合物可以根据传统方法来通过各种途径给药，包括口服、静脉内、动脉内、腹腔内、胸腔内、透皮、鼻腔、吸入、直肠、眼部和皮下导入。
任选地添加到本发明的药物组合物中的医药上可接受的载体是：水、醇、蜂蜜、甘露醇、山梨醇、糊精、乳糖、焦糖、明胶、硫酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、高岭土、甘油、吐温、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、环糊精及其衍生物、磷脂类、磷酸盐类、淀粉类及其衍生物、硅衍生物、纤维素类及其衍生物、吡咯烷酮类、聚乙二醇类、丙烯酸树脂类、酞酸酯类、丙烯酸共聚物、苯三酸酯类中的一种或几种。
经药理实验验证，本发明所提供的化合物或者药物组合物可通过抑制白介素-66、血管细胞粘附分子-1和单核细胞趋化蛋白-1发挥抗炎作用；通过抑制炎性细胞因子释放发挥免疫抑制作用；通过促进高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)增多、抑制胆固醇、脂肪酸和甘油三酯的合成、减少葡萄糖吸收和生成来调控体内葡萄糖代谢紊乱和脂代谢紊乱。
另一方面，本发明的化合物或者药物组合物还具有神经保护作用，可对抗神经凋亡、抑制神经坏死，促进神经再生。
本发明提供了上述化合物或者药物组合物在制备用于预防、治疗心脑血管疾病、炎性疾病、神经退行性疾病、代谢紊乱疾病及其继发症的药物中的应用。
本发明提供一种用于预防和/或治疗心脑血管疾病、炎性疾病、神经退行性疾病、代谢紊乱疾病及其继发症的方法，所述方法包括对有需要的对象施用治疗有效量的根据本发明的化合物或者药物组合物。
另一方面，根据本发明的化合物或者药物组合物用于预防和/或治疗心脑血管疾病、炎性疾病、神经退行性疾病、代谢紊乱疾病及其继发症。
进一步地，所述心脑血管疾病包括动脉粥样硬化、脑动脉粥样硬化、脑血栓、脑梗死、高血脂、缺血性心肌损伤、中风、冠心病、心脏肥厚、心衰、心脏梗塞、风湿性心脏病、先天性心脏病、左心室功能不全、内皮功能障碍、内皮功能障碍后的纤维变性和结构重塑、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律失常、房颤、心脏纤维化、心房扑动、有害的血管重塑、心肌梗塞及其后遗症、心绞痛、高血压、原发性和继发性肺性高血压、肾血管性高血压、高血压性视网膜病变或视网膜血管病变。
所述炎性疾病包括：慢性肾病、慢性肾炎、关节炎、类风湿性关节炎、银屑病、肠炎性疾病、自身免疫性疾病、溃疡性结肠炎、胃溃疡、慢性胃炎、宫颈炎、乙肝、丙肝、非酒精性脂肪性肝炎、皮肤慢性溃疡、器官移植排斥；用于神经炎性疾病，如糖尿病神经病变、肌肉萎缩性侧索硬化症、朊毒体病、脊髓性肌萎缩症、多发性硬化、神经性疼痛、原发性侧索硬化病、脑膜炎或病毒性脑炎。
所述神经退行性疾病包括阿兹海默症、帕金森、多发性硬化、亨廷顿舞蹈病。
代谢紊乱疾病及其继发症包括：2型糖尿病、糖尿病性脂血异常、糖尿病黄斑水肿、糖尿病视网膜病变、黄斑变性、白内障、糖尿病肾病、肾小球硬化、糖尿病神经病变、代谢性酸中毒、月经前期综合症、食欲调节及肥胖。
本发明所提供的化合物一般的剂量范围为约每天0.001mg/Kg至 1000mg/kg，优选为约0.01mg/kg至100mg/kg，更优选为约0.1至20mg/kg，药物组合物的剂量范围为以其含有的上述化合物的量来计算。
本发明所提供的NO前药分子结构新颖，具有以下特点及优势：
①NO供体型前药在体内裂解成可调控ApoA-I表达或分泌的小分子治疗药物及NO分子，从而在ApoA-I调控剂本身的药理作用基础上额外提供了外源性的NO，对心脑血管疾病的治疗具有重要的意义；
②发明人所选择的一些ApoA-I调控剂的化学结构中带有游离的醇羟基，这类药物在体内易与葡萄糖醛酸直接轭合发生第II相生物转化与而被代谢，另外，在体内醇脱氢酶的催化下经过第I相生物转化被氧化成游离羧酸而直接排除体外，或进一步与甘氨酸轭合发生第II相生物转化而被代谢。发明人将这些形成ApoA-I调控剂偶联上NO供体，形成NO前药后，在很大程度上减缓了这些代谢途径，从而提高药物的生物利用度、增加药物稳定性，达到药物长效的效果；
③临床上应用的很多心脑血管疾病药物，具有相对较高的亲脂性，比如他汀类、沙坦酯类的醇-水分配系数(log P)值都在5左右，而发明人在ApoA-I调控剂上偶联了NO供体，形成NO前药后，亲脂性水平提高， log P值从3升到了5，从而提高了药物体内吸收分数，进一步增加生物利用度。
附图说明
图1为受试化合物对C57小鼠血清NO水平的影响。
具体实施方式
实施例1：2-(4-(2-硝氧基-乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)-酮(H101)的制备
Figure GDA0002898004200000221
步骤1
将起始物H30-2(19.7g，0.1mol)，HOBt(20.3g，0.15mol)，碳化二亚胺 EDCI(28.8g，0.15mol)，DIPEA(32.3g，0.25mol)和THF(1L)加入到三颈圆底烧瓶中搅拌3h，再加入40ml氨水，室温搅拌过夜，TLC检测反应完全后，混合物用DCM(2X200ml)萃取，分离出有机层，有机层再用水清洗两次后，减压蒸馏，残余物中加入乙醚(50ml)，搅拌混匀后，过滤，弃去滤液，得中间体H30-3(13.4g，得率68％)。
步骤2
将起始物H30-4(36g，0.24mol)，2-溴乙醇(60g，0.48mol)，碳酸钾(130g，0.94mol)和EtOH(600ml)加入烧杯，混合物在79℃条件下回流8h，TLC 检测反应完全后，将混合物过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，再加入水 (300ml)，将混合物用EtOAc(3×100ml)萃取，分离出有机层，再用饱和NaCl 水溶液(3×100ml)清洗有机层，再加入硫酸钠进行干燥，过滤后，所得滤液进行减压蒸馏，所得粗产物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝4:1) 纯化，制得中间体H30-5(37.5g，得率80％)。
步骤3
在氮气条件下，将中间体H30-3(15.2g，77.5mol)，H30-5(15.06g， 77.5mmol)，NaHSO3(8.9g，85.3mmol)，P-TSA(1.34g，7.75mmol)和 NMP(140ml)加入到烧瓶中，在130℃条件下搅拌3h，TLC检测反应完全后，再加入水(450ml)and DCM(500ml)对混合物进行萃取，分离出的水层再用的DCM(4×400ml)萃取，合并所得有机层，将有机层用水(3×400ml)清洗，加入硫酸钠进行干燥，过滤后，所得滤液进行减压蒸馏，所得粗产物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝80:1)纯化，得到中间产物H130：2-(4-(2- 羟基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)-酮(18g，得率62.7％)。
步骤4
将中间体H130(370.4mg，1mmol)和浓硝酸(35ml)在0℃条件下混合，将混合物静置2h，TLC检测反应完全后，缓慢升温至室温，加入水(100ml) 和DCM(100ml)使混合物分层，分离出水层，将水层用DCM(3×100ml)萃取，合并所得有机层，加入硫酸钠进行干燥，过滤后，所得滤液进行减压蒸馏，粗产物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝100:1)纯化，得到120mg目标化合物2-(4-(2-硝氧基-乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)-酮，得率29％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。1H NMR (400MHz，CDCl3)δ:9.87(s，1H)，7.75(s，2H)，6.83(d，J＝2.2Hz，1H)， 6.46(d，J＝2.2Hz，1H)，4.90–4.81(m，2H)，4.15–4.09(m，2H)，3.95(d， 6H)，2.38(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，415[M+1]+。
实施例2：3-硝氧甲基-苯甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢- 喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H102)的制备
将间溴甲基苯甲酸(258mg，1.2mmol)，AgNO3(245mg，1.44mmol)和乙腈(5ml)加入25ml的烧瓶，混合物在70℃条件下搅拌48h，TLC检测反应完全后，过滤，对所得滤液进行减压蒸馏后得3-硝氧基甲基-苯甲酸(211mg，得率89％)。
将H130(370mg，1mmol)，3-硝氧基甲基-苯甲酸(211mg，1mmol)，DCC (309mg，1.5mmol)，HOBt(202.5mg，1.5mmol)，DMAP(183mg，1.5mmol) 和THF(40ml)加入100ml烧瓶，混合物在室温下搅拌3h，TLC检测反应完全后，加入水(30ml)和DCM(30ml)使混合物分层，分离出水层，水层再用 DCM(3x100ml)萃取，合并所得有机层，加入硫酸钠进行干燥，过滤后，所得滤液进行减压蒸馏，粗产物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝100:1) 纯化，得到180mg目标化合物3-硝氧甲基-苯甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4- 氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H102)，得率32.7％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ: 11.86(s，1H)，8.09–8.00(m，2H)，7.91(s，2H)，7.78(d，J＝7.5Hz，1H)， 7.62(t，J＝7.7Hz，1H)，6.74(d，J＝2.2Hz，1H)，6.51(d，J＝1.7Hz，1H)，5.67(s，2H)，4.64(m，2H)，4.19(m，2H)，3.86(d，6H)，2.31(s， 6H)。LC-MS:m/z(ES+)，549[M+1]+。
实施例3：N-((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉-2-基)-2， 6-二甲基苯氧基)乙氧基)羰基氧基)-5-甲基噻吩-2-磺酰胺(H103)的制备步骤1
在0℃条件下将2-甲基噻吩(4.4m.L，51mmol)加入到含有ClSO3OH (10mL，155mmol)的CH2Cl2(100mL)溶液中，加入过程持续30min，在此温度条件下，混合物再搅拌3h，然后将混合物倒入冰水(100ml)中，再用 CH2Cl2(2×50mL)萃取混合物，收集有机层，将有机层用饱和NaCl水溶液 (100ml)洗后，再用硫酸钠干燥，抽滤后，所得滤液进行减压蒸馏，得1.5g 中间体5-甲基噻吩-2-磺酰氯，得率15％。
步骤2
将羟胺水溶液(1.6g，22.8mmol)溶解于THF(50mL)和水(20mL)中，溶液冷却至-5℃，缓慢加入溶解于THF(10mL)的5-甲基噻吩-2-磺酰氯(1.5 g，7.6mmol)，加入过程中维持温度不高于10℃，用薄层色谱法TLC监测磺酰氯消耗完全后，加入DCM(50mL)，将有机层分离出，有机层用水(2 ×50mL)清洗，加入硫酸钠干燥有机层，再进行减压抽滤，所得滤液进行减压蒸馏，所得产物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-1:1) 纯化，得到中间体N-羟基-5-甲基噻吩-2-磺酰胺(0.5g，得率33％)。
步骤3
将中间体H130(420mg，1.1mmol)，BOP(673mg，2.3mmol)和THF (100ml)加入到250mL烧瓶中，搅拌48h，TLC检测反应完全后，混合物经减压蒸馏，加入乙醚(60ml)并搅拌，过滤后，弃去滤液，所得产物为中间体 2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]- 乙基碳酰氯(450mg，得率94.5％)。
步骤4
将步骤2所得产物(193mg，1mmol)，三乙胺(202mg，2mmol)和DCM (20ml)加入到50mL烧瓶中，再加入步骤3所得产物(216mg，0.5mmol)，混合物在室温条件下搅拌3h，TLC检测反应完全后，过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，所得初产物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝100:1)纯化得130mg目标化合物N-((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉-2- 基)-2，6-二甲基苯氧基)乙氧基)羰基氧基)-5-甲基噻吩-2-磺酰胺(H103)，得率44％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ:11.88(s，1H)，11.59(s，1H)，7.91(s，2H)，7.58(d，J＝3.7Hz， 1H)，7.05–7.01(m，1H)，6.74(d，J＝2.1Hz，1H)，6.52(d，J＝1.9Hz， 1H)，4.56–4.51(m，2H)，4.09–4.05(m，2H)，3.86(d，6H)，2.55(s，3H)， 2.28(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，589[M+1]+。
实施例4：N-((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉-2-基)-2， 6-二甲基苯氧基)乙氧基)羰基氧基)-5-甲基呋喃-2-磺酰胺(H104)的制备步骤1
将2-甲基-呋喃(4.1g，50mmol)溶解于DME(20mL)，再加入三氧化硫吡啶(9.5g，60mmol)，混合物在氩气条件下搅拌3天后，反应物用EtOAc (60mL)稀释，继续在5℃条件下搅拌2h，过滤，弃去滤液得中间体5-甲基呋喃-2-磺酸(9g，得率75％)。
步骤2
将上步产物(9g，37mmol，吡啶盐)溶解于DME(60mL)，在氩气和 0℃条件下，依次加入草酰氯(15mL，172mmol)和DMF(1mL)，再将混合物在室温条件下搅拌12h，接着用冰水(60ml)将混合物进行淬灭，再用甲苯 (3×40ml)萃取混合物，分离出有机层，将有机层依次用NaHCO3水溶液 (40ml)、水(40ml)、饱和NaCl水溶液(40ml)清洗，再加入硫酸钠进行干燥，过滤后，所得滤液进行减压蒸馏，得中间体5-甲基呋喃-2-磺酰氯(2g，得率30％)。
步骤3
将羟胺50％水溶液(3mL，45mmol)、THF(15mL)、水(5mL)混合后冷却至0℃，逐滴加入溶解于THF(10mL)的5-甲基呋喃-2-磺酰氯(2g，11 mmol)，加入过程中维持反应温度不高于10℃，反应物搅拌5min，用薄层色谱法TLC监测磺酰氯消耗完全后，用DCM(2×50mL)稀释反应物，然后分离出有机层，用水(10mL)清洗，加入硫酸钠干燥后，再进行减压抽滤，对所得滤液进行减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化，得到中间体N-羟基-5-甲基呋喃-2-磺酰胺(0.6g，得率31％)。
步骤4
将实施例1所制备的中间体H130(185mg，0.5mmol)，吡啶(130mg， 1.65mmol)和DCM(5ml)加入到25mL的烧瓶中，将溶解于DCM(2ml)的对硝基氯甲酸苯酯(110mg，0.55mmol)在0℃条件下逐滴加入上述混合物中。混合物自然升温至室温，并搅拌过夜，TLC检测反应完全后，将反应物用水洗后，分离出有机层，减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝95:5)纯化得中间体H04-7(130mg，得率48.6％)。
Figure GDA0002898004200000261
步骤5
将中间体H04-7(160mg，0.3mmol)，N-羟基-5-甲基呋喃-2-磺酰胺(89mg，0.5mmol)，DMAP(122mg，1mmol)和DCM(20ml)加入50mL烧瓶中，在室温条件下将混合物搅拌过夜，TLC检测反应完全后，然后用水清洗，分离出有机层，减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝95:5)纯化得 10mg目标化合物N-((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢喹唑啉-2-基)-2， 6-二甲基苯氧基)乙氧基)羰基氧基)-5-甲基呋喃-2-磺酰胺(H104)，得率5.8％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ: 11.86(s，2H)，7.90(s，2H)，7.26(d，J＝3.5Hz，1H)，6.74(d，J＝2.3Hz， 1H)，6.52(d，J＝2.2Hz，1H)，6.44(d，J＝3.4Hz，1H)，4.55–4.49(m， 2H)，4.08–4.03(m，2H)，3.86(d，6H)，2.40(s，3H)，2.27(s，6H)。LC-MS: m/z(ES+)，573[M+1]+。
实施例5：3-(3-硝氧基-丙酰基)-苯甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3， 4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H105)的制备
制备方法同实施例2，但起始原料由对间溴甲基苯甲酸换为3-(3-溴-丙酰基)-苯甲酸。终产物结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.65(s，1H)，8.11–8.06(m，2H)， 7.88(s，1H)，7.72(d，J＝6.2Hz，2H)，7.54(m，1H)，6.71(d，J＝2.8Hz， 1H)，6.48(d，J＝2.5Hz，1H)，4.65(m，2H)，4.38(m，2H)，3.81(d，6H)， 2.69(m，2H)，2.33(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，592[M+1]+。
实施例6：琥珀酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2， 6-二甲基-苯氧基]-乙酯3-(硝氧基)-2，2-二((硝氧基)甲基)丙酯(H106)的制备
Figure GDA0002898004200000271
步骤1
将实施例1所制备的中间体H130(1.5g，4.05mmol)，丁二酸酐(810mg， 8.1mmol)和DMF(15ml)加入25ml烧瓶中，混合物在110℃条件下搅拌 2h，TLC检测反应完全后，减压蒸馏，再加入乙酸乙酯(30ml)得悬浮液，将悬浮液过滤后，弃去滤液，所得产物为中间体琥珀酸单-{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙基}酯(1g，得率 52.5％)。
步骤2
将上步所制备产物(400mg)and DCM(20ml)加入50mL烧瓶中，混匀后加入草酰氯(6ml)，室温搅拌1h，TLC检测反应完全后，减压蒸馏，得产物 4-氯-4氧代丁酸{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6- 二甲基-苯氧基]-乙基}酯。
Figure GDA0002898004200000272
步骤3
将2，2-二(硝氧基甲基)-3-硝氧基-丙醇(285mg，1.05mmol)，三乙胺(239mg，2.35mmol)和DCM(30ml)加入到100mL烧瓶中，再将步骤2所得产物(512mg，1.05mmol)溶解于DCM(20ml)，然后在0℃条件下滴加到混合物中，反应物升到室温后，搅拌1h，TLC检测反应完全后，反应物用水清洗，分离出有机层，用硫酸钠干燥，过滤，对所得滤液减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝95:5)纯化得251mg目标化合物(H106)，得率33％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.80(s，1H)，7.85(s，2H)，6.71(d， J＝2.9Hz，1H)，6.50(d，J＝2.6Hz，1H)，4.49–4.38(m，2H)，4.08–4.18 (m，2H)，3.98(m，1H)，3.85(d，6H)，3.45(s，6H)，2.79–2.81(m，4H)， 2.33(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，724[M+1]+。
实施例7：3-(2，3-二硝基氧-丙氧基)-苯甲酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H107)的制备
制备方法同实施例2，但起始原料由对间溴甲基苯甲酸换为3-烯丙氧基 -苯甲酰氯(制备方法参考专利US 20150307650)，终产物结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.78(s，1H)，7.96–7.85(m，4H)， 7.60(m，1H)，7.34(m，1H)，6.71(d，J＝2.8Hz，1H)，6.54(d，J＝3.2Hz， 1H)，4.60(m，2H)，4.32(m，2H)，3.98–3.91(m，3H)，3.81(d，6H)，3.77 –3.61(m，2H)，2.35(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，655[M+1]+。
Figure GDA0002898004200000281
实施例8：4，5-二硝基氧基-戊酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H108)的制备
步骤1 4-戊烯酸(2g，20mmol)溶解于甲酸(5mL)中，在15min内滴加到50℃的含35％双氧水(28mmol)的甲酸溶液(20mL)中，在此温度下，混合物继续搅拌2h后，减压蒸馏，所得产物为2-酮基-5-羟甲基-四氢呋喃(2g，得率 97％)。
步骤2
将上步反应所得产物(2g，17.2mmol)加入到HCl(6M，20mL)，加热回流2h，TLC检测反应完全后，对反应物进行减压蒸馏，所得产物为4，5- 二羟基-戊酸(2g，得率95％)。
步骤3
将上步所得产物(2g，15mmol)溶解于乙酸乙酯中(10mL)，再加入到冰浴冷却的硝酸(90％，15mL，300mmol)和无水醋酸(20mL)中，混合物在冰浴条件下搅拌10min，再在室温条件下搅拌2h，在40℃条件下，对混合物进行减压蒸馏，产物经硅胶柱层析(洗脱液梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-1:1)纯化得中间体4，5-二硝氧基-戊酸(1g，45％得率)。
步骤4
将上步所得产物(448mg，2mmol)，实施例1所制备的中间体 H130(370.4mg，1mmol)，DCC(618mg，3mmol)，HOBt(405mg，3mmol)， DMAP(366mg，3mmol)和THF(30ml)加入到50ml的烧瓶中，室温搅拌过夜，TLC检测反应完全后，再加入水(10ml)和DCM(10ml)，分离出的水层再用DCM(3×10ml)萃取，收集有机层，将有机层用硫酸钠干燥，抽滤后，滤液减压蒸馏，所得初产物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝100:1) 纯化得115mg目标化合物4，5-二硝基氧基-戊酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H108)，得率20％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.85(s，1H)，7.90(s，2H)，6.73(d， J＝2.6Hz，1H)，6.51(d，J＝2.5Hz，1H)，5.56–5.45(m，1H)，4.95(d， J＝2.0Hz，1H)，4.74(d，J＝5.8Hz，1H)，4.42–4.31(m，2H)，4.07–3.99 (m，2H)，3.86(d，6H)，2.57(m，2H)，2.29(s，6H)，2.09–1.97(m，2H)。 LC-MS:m/z(ES+)，576[M+1]+。
实施例9：制备(4-硝氧基-丁酰胺基)-乙酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代 -3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H109)
Figure GDA0002898004200000301
步骤1
用35mL的丙酮溶解540mg的2-(4-(2-羟基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)-酮，在其中添加N-Boc-甘氨酸(0.334g) 和4-二甲氨基吡啶(DMAP，20mg)，将上述混合溶液在0℃冷却，并且添加EDC(0.365g)，混合物在室温下搅拌，反应2小时后，真空条件下蒸发溶剂，所得残渣依次用水(50mL)和二氯甲烷(3×50mL)洗涤，所得有机层用硫酸钠干燥，再减压蒸馏，浓缩物通过柱层析色谱法纯化(洗脱液：正己烷与乙酸乙酯比例为6:4)，获得中间体(d)，即(叔丁氧基羰基氨基)- 乙酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯。
步骤2
将中间体(d)加入70mL二氯甲烷，溶解充分后向其中通HCl气体1 小时，减压真空条件下蒸发溶剂，制得中间体(e)，即甘氨酸2-[4-(5，7- 二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯的盐酸盐，将中间体(e)用40mL的二氯甲烷溶解，再向其添加4-硝氧基丁酸五氟苯酚酯(0.41g)，DMAP(20mg)和三乙胺(0.3mL)，在室温下搅拌，反应24小时后，用5％的H3PO4(50mL)溶液洗涤，所得有机层用硫酸钠干燥，再减压蒸馏，通过柱层析色谱法纯化浓缩物(洗脱液：梯度正己烷/ 乙酸乙酯1:1-100，洗脱液中乙酸乙酯的量梯度增加，至洗脱液为130mL的乙酸乙酯为止)，获得目标化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:9.92(s，1H)，8.91(s，1H)，7.73(s，2H)， 6.80(d，J＝2.9Hz，1H)，6.51(d，J＝3.1Hz，1H)，4.81–4.75(m，2H)， 4.26–4.15(m，4H)，4.08(s，2H)，3.90(d，6H)，2.36(m，8H)，2.09(m， 2H)；LC-MS:m/z(ES+)，559[M+1]+。
实施例10：制备2-氨基-3-(4-{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢- 喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙氧基羰基氧基}-苯基)-丙酸2-硝氧基- 乙酯的盐酸盐(H110)
Figure GDA0002898004200000311
步骤1
向Boc-(L)-酪氨酸(5.0g)的N，N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液中添加碳酸铯(5.79g)，溶解后，溶液冷却至0℃，并且滴加用20mL二氯甲烷溶解的硝酸2-溴乙基酯(3，48g)溶液，在0℃条件下搅拌，反应20分钟后，继续在室温条件下搅拌22小时，反应结束后，将混合物倒入5％的 NaH2PO4水溶液并且用二乙醚(40mL×4)萃取，所得有机层用硫酸钠干燥，再减压蒸馏，通过柱层析色谱法纯化浓缩物(洗脱液：梯度正己烷/乙酸乙酯9:1，至正己烷/乙酸乙酯为1:1，共用4000mL洗脱液)，获得中间体(f)，即2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-羟苯基)丙酸2-(硝氧基)乙基酯。
步骤2
用24mL的二氯甲烷溶解上一步产物中间体(f)，在所得溶液中添加吡啶(0.5mL)，溶液冷却至0℃，再添加氯甲酸对-硝基苯酚酯(980mg)，在 0℃条件下搅拌，反应10分钟后，继续在室温条件下搅拌21小时，反应结束后，用25mL二氯甲烷稀释反应物，用1M的HCl水溶液洗涤，再用饱和碳酸钠水溶液洗涤，所得有机层用硫酸钠干燥，再减压蒸馏，通过柱层析色谱法纯化浓缩物(洗脱液：梯度正己烷/乙酸乙酯98:2，至正己烷/乙酸乙酯为6:4，共用1600mL洗脱液)，获得中间体(i)，即2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[4-(4-硝基苯氧基羰基氧基)-苯基]-丙酸2-(硝氧基)乙酯。
步骤3
向中间体(i)的二氯甲烷(40mL)溶液中，添加三氟甲基磺酸钪(0，11g)和0.57g的DMAP，将混合溶液冷却至0℃，再添加2-(4-(2-羟基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-5，7-二甲氧基喹唑啉-4(3H)-酮(1.07g)，室温搅拌反应70小时，再减压蒸馏，通过柱层析色谱法纯化浓缩物(洗脱液：梯度正己烷/乙酸乙酯9:1，至正己烷/乙酸乙酯为3:7，共用1600mL洗脱液)，得产物2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢- 喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙氧基羰基氧基}-苯基)-丙酸2-硝氧基- 乙酯。
步骤4
在室温条件下用30mL二氯甲烷溶解上步产物，溶解充分后向其中通HCl 气体15分钟，反应液再用二氯甲烷(35mL)稀释，用饱和碳酸钠水溶液洗涤，所得有机层用硫酸钠干燥，再减压蒸馏，通过反相快速色谱法纯化浓缩物(洗脱液：梯度水/乙腈9:1，至水/乙腈为2:8，共用1400mL洗脱液)，得产物2-氨基-3-(4-{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2， 6-二甲基-苯氧基]-乙氧基羰基氧基}-苯基)-丙酸2-硝氧基-乙酯，产物用盐酸 /二乙醚溶液处理，过滤并且在真空条件下干燥，制得目标化合物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.80(s，1H)，8.89(d，2H)，7.85(s， 2H)，7.54–6.78(m，4H)，6.71(d，J＝2.4Hz，1H)，6.55(d，J＝2.5Hz， 1H)，4.59–4.54(m，2H)，4.，，50(m，2H)，4.39(m，4H)，4.21(t，1H)，3.91 (d，6H)，3.61–3.32(m，2H)，2.27(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，667[M+1]+。
实施例11：4-(2-氧代-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000321
二唑-3-甲基)氧基-4-氧代-丁酸2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H111) 的制备
步骤1
(E)-2-丁烯醛(30g，0.43mol)和HOAc(60ml)加入1L的圆底烧瓶，再将溶解于水(200ml)的NaNO2(107g，1.55mol)在0℃条件下逐滴加到混合物中，室温下搅拌70min，TLC检测反应完全后，加入100m水，用DCM(3 ×100ml)萃取混合物，所得有机层用硫酸钠干燥，过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化得 2-氧代-3-甲基-4-甲酸基-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000322
二唑(14.8g，得率26.9％)。
步骤2
将上步产物(4.2g，33mmol)，NaBH4(2.5g，66mmol)和THF(12ml)加入 50mL的烧瓶，室温搅拌1.5h，TLC检测反应完全后，反应液用饱和氯化铵水溶液(20ml)进行淬灭，再加入水(10ml)和乙酸乙酯(10ml)，分离出有机层，有机层减压蒸馏后得2-氧代-4-羟甲基-3-甲基-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000331
二唑(3.3g，得率76.9％)。
步骤3
将上步产物(10.1g，77.7mmol)，Ac2O(28g，274mmol)，DIPEA(55g， 426mmol)和DCM(200ml)加入到1L的烧瓶中，混合物在室温条件下搅拌过夜，TLC检测反应完全后，反应物用水(4X150ml)清洗，分离所得水层再用DCM(4×100ml)萃取，合并所得有机层，用硫酸钠干燥，过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得2-氧代-3-甲基-4-((甲基过氧基)甲基)-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000332
二唑(16g，得率100％)。
步骤4
将上步产物(4g，23mmol)，N-溴代丁二酰亚胺NBS(10.4g，58mmol)，过氧化苯甲酰(催化量)和CCl4(40ml)加入100mL烧瓶中，混合物在90℃条件下回流48h，TLC检测反应完全后，再将反应液过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，粗产物经硅胶柱层析纯化(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得 2-氧代-3-溴甲基-4-((甲基过氧基)甲基)-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000333
二唑(2.14g，得率37％)。
步骤5
将上步产物(2.14g，8.52mmol)，AgNO3(3.66g，21.5mmol)和CH3CN (20ml)加入到100mL烧瓶中，混合物在60℃条件下过夜搅拌，TLC检测反应完全后，再将混合物过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，粗产物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得2-氧代-3-硝氧基甲基-4-((甲基过氧基)甲基)-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000334
二唑(1.95g，得率98％)。
步骤6
将上步产物(1.95g，8.37mmol)，HCl(2mol/L，3.3ml)和1，4-二氧六环(16.7ml)加入到100mL烧瓶中，混合物在60℃条件下搅拌过夜，TLC检测反应完全后，减压蒸馏，再在混残余物中加水(100ml)，接着用乙酸乙酯 (3×50ml)萃取混合物，有机层用硫酸钠干燥，过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化得2-氧代 -3-硝氧基甲基-4-羟基甲基-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000341
二唑(1.4g，得率87％)。
步骤7
将上步所得产物(245mg，1.28mmol)，三乙胺(260mg，2.56mmol)和DCM(30ml)加入到100mL烧瓶中，再将实施例6中步骤2所得产物(624mg， 1.28mmol)溶解于DCM(20ml)，然后在0℃条件下滴加到混合物中，反应物升到室温后，搅拌1h，TLC检测反应完全后，反应物用水清洗，分离出有机层，用硫酸钠干燥，过滤，对所得滤液减压蒸馏，残余物经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝9:1)纯化得50mg目标化合物4-(2-氧代-1，2，5-
Figure GDA0002898004200000342
二唑-3- 甲基)氧基-4-氧代-丁酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2- 基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H111)，得率6.1％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.86(s，1H)，7.91(s， 2H)，6.74(d，J＝2.3Hz，1H)，6.52(d，J＝2.3Hz，1H)，5.60(s，1H)，5.32(d，J＝5.5Hz，2H)，4.80(s，1H)，4.39–4.31(m，2H)，4.05–3.98(m， 2H)，3.87(d，6H)，2.76–2.63(m，4H)，2.30(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)， 643[M+1]+。
实施例12：制备3-(6-硝氧基-己酰胺基)-丙酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4- 氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H112)
制备方法同实施例9，起始原料由N-Boc-甘氨酸换为Boc-β-丙氨酸，制备步骤2中的4-硝氧基丁酸五氟苯酚酯换为3-硝氧基丙酸五氟苯酚酯，结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:9.96(s，1H)，8.95(s，1H)，7.75(s，2H)， 6.77(d，J＝2.9Hz，1H)，6.55(d，J＝3.1Hz，1H)，4.78(t，2H)，4.28–4.22 (m，4H)，3.86(d，6H)，2.52(t，2H)，2.33(t，2H)，2.12(s，6H)；LC-MS: m/z(ES+)，559[M+1]+。
实施例13：制备2-羟基琥珀酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢- 喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(2-氧代-4-苯基-呋咱-3-基)-甲酯 (H113)
制备方法同实施例6，将实施例6步骤1中的丁二酸酐换为2-羟基丁二酸，实施例6步骤3中的换为(2-氧代-4-苯基-呋咱-3-基)-甲醇，所得结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.81(s，1H)，7.89(m，2H)，7.78–7.62 (m，6H)，6.73(s，1H)，6.59(d，J＝3.1Hz，1H)，5.56(s，1H)，4.80(s， 1H)，4.42–4.35(m，2H)，4.01–3.93(m，2H)，3.91(d，6H)，2.87–2.70 (m，2H)，2.35(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，661[M+1]+。
实施例14：制备4-(2-(((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基)乙氧基)羰基)氧基)乙氧基)-3-(苯磺酰基)-2-氧代-呋咱(H114)
Figure GDA0002898004200000351
将3-[(4-苯磺酰基-5-氧代-呋咱-3-基)-氧基]-丙醇(143mg，0.5mmol)，三乙胺(101mg，1mmol)和DCM(20ml)加入到50mL烧瓶中，再加入实施例3中步骤3所得产物(216mg，0.5mmol)，混合物在室温条件下搅拌3h，TLC 检测反应完全后，过滤，对所得滤液进行减压蒸馏，所得初产物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝9:1)纯化得88mg目标化合物(H114)，得率26％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.82(s，1H)，8.21(d，2H)，7.88(m， 1H)，7.79(m，2H)，6.85(s，1H)，6.62(s，1H)，4.62–4.49(m，8H)，3.87 (d，6H)，2.32(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，683[M+1]+。
实施例15：制备(E)-4-((呋喃-2-磺酰氨基)氧基)-4-氧代-2-丁烯酸2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H115) 丁烯二酸
制备方法同实施例6，将实施例6步骤1中的丁二酸酐换为丁烯二酸，实施例6步骤3中的换为N-羟基噻吩-2-磺酰胺(N-羟基噻吩-2-磺酰胺制备方法参考专利WO2014113700)，所得结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.81(s，1H)，7.91(d，1H)，7.69(m， 2H)，7.69(m，4H)，7.4(s，1H)，6.78(d，J＝3.6Hz，1H)，6.54(d，J＝2.9 Hz，1H)，6.36(s，2H)，4.48–4.37(m，2H)，3.91(d，6H)，2.35(s，6H)。 LC-MS:m/z(ES+)，614[M+1]+。
实施例16：制备4-(((3-(甲磺酰基))苯基)磺酰胺基)氧基)-4-氧代丁酸 2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]- 乙酯(H116)
步骤1
将甲基磺酰基苯(5g，32mmol)放于氯磺酸(37g，320mmol)中，在90℃条件下加热18h，冷却至室温，再将混合物缓慢倒入碎冰中，所得悬浮液用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，分离出有机层，合并后用饱和NaCl水溶液(50 mL)清洗，再用硫酸钠干燥，抽滤后，对所得滤液进行减压蒸馏，残余物为中间体3-甲基磺酰苯基-1-磺酰氯(50mg，得率6.1％)。
步骤2
将羟胺水溶液(50mmol)溶解于THF(60mL)和水(10mL)中，降温至-5° C，再缓慢加入3-甲基磺酰苯基-1-磺酰氯(5.1g，20mmol)，同时保持反应温度不高于10℃，低温条件下，待反应完成后加入DCM(100mL)，收集出有机层，用水(2X50 mL)清洗，分离得到的有机层用硫酸钠干燥，抽滤后，滤液减压蒸馏，得中间体N-羟基-3-(甲基磺酰基)苯磺酰胺(3g，60％得率)。
Figure GDA0002898004200000361
步骤3
将上步所得产物(427mg，1.7mmol，三乙胺(172mg，1.7mmol)和DCM (20ml)加入到50ml烧瓶中，将实施例4中步骤8所制得中间体(416mg，0.85mmol)溶解于DCM(20ml)后，在0℃条件下，逐滴加入反应混合物中，然后搅拌1h，TLC检测反应完全后，用水清洗后，硫酸钠干燥，抽滤后，滤液减压蒸馏，所得粗产物经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝80:1)纯化得120mg目标化合物4-(((3-(甲磺酰基))苯基)磺酰胺基)氧基)-4-氧代丁酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]- 乙酯(H116)，得率20％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.86(s，1H)，11.52(s，1H)，8.38– 8.23(m，3H)，8.00–7.89(m，3H)，6.74(d，J＝2.3Hz，1H)，6.52(d，J＝ 2.3Hz，1H)，4.38–4.31(m，2H)，4.05–3.99(m，2H)，3.87(d，6H)，3.35 (s，3H)，2.66(m，4H)，2.29(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，703[M+1]+。
实施例17：制备4-[4-(2-(硝氧基)乙基)-哌嗪-1基]-4-氧代-丁酸2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H117) 制备方法同实施例16中的步骤3，起始原料由N-羟基-3-(甲基磺酰基)苯磺酰胺换为1-(2-(硝氧基)乙基)-哌嗪，终产物结构经MS谱图验证，1H NMR (400MHz，DMSO-d6)δ:11.83(s，1H)，7.88(s，2H)，6.70(d，J＝2.9Hz， 1H)，6.54(d，J＝2.8Hz，1H)，4.36–4.30(m，2H)，4.11–4.05(m，2H)，3.84(d，6H)，3.67(m，2H)，3.44(m，4H)，2.68–2.54(m，10H)，2.35(s， 6H)。LC-MS:m/z(ES+)，703[M+1]+。
实施例18：制备2-氨基-琥珀酸1-(2，3-二硝氧基-丙基)酯4-{2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙基}酯的盐酸盐(H118)
步骤1
将2，3-二溴-1-丙醇(2g，9.2mmol)，硝酸银(15.6g，91.8mmol)和CH3CN (100mL)混合，室温搅拌2天，TLC检测反应完全后，混合物加入水(50ml) 稀释，再用乙酸乙酯(3×50mL)萃取混合物，分离出有机层，将有机层合并后用硫酸钠干燥，减压抽滤后，所得滤液进行减压蒸馏，初产物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化得2，3-二硝氧基-1-丙醇(0.5g，得率30％)。
步骤2
将中间体H130(2.22g，59.9mmol)，H18-7(1.94g，59.9mmol)，DCC(1.86g，90mmol)，DMAP(1.1g，1.1mmol)和THF(60ml)加入100mL烧瓶中，室温条件下搅拌过夜，TLC检测反应完全后，加入DCM(50ml)，得悬浮液，将其过滤，滤液用水洗后，硫酸钠干燥，减压抽滤后，所得滤液进行减压蒸馏，初产物为经硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝100:1)纯化得 H18-8(4.1g，6.07mmol，得率100％)。
步骤3
将H18-8(4g，5.9mmol)，钯碳Pd/C(200mg)和甲醇(200ml)加入到500mL 烧瓶中，真空条件下置换氢气，混合物在氢气条件下搅拌过夜，TLC检测反应完全后，过滤，所得滤液进行真空干燥后得中间体H18-9(2.5g，得率 72.4％)。
Figure GDA0002898004200000381
步骤4
将H18-9(585.6mg，1mmol)，步骤1所制备产物(182.09mg，1mmol)， DCC(309mg，1.5mmol)，HOBt(202.5mg，1.5mmol)，DMAP(183mg，1.5mmol) 和THF(20ml)加入100mL烧瓶中，将所得混合物在室温条件下搅拌过夜， TLC检测反应完全后，过滤后，将水(20ml)和DCM(20ml)加入到滤液中，分离出有机层，减压蒸馏后，所得初产物经硅胶柱层析纯化(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝100:1)得中间体H18-11(300mg，得率40％)。
Figure GDA0002898004200000391
步骤5
将上步所的产物(280mg，0.37mmol)溶解于乙酸乙酯(30ml)中，再将 HCl/EtOAc(100ml)滴加到该溶液中，混合物室温搅拌2h，过滤，弃去滤液，所得残余物进行真空干燥后得150mg目标化合物(H118)2-氨基-琥珀酸 1-(2，3-二硝氧基-丙基)酯4-{2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙基}酯，得率59％。其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:8.73(s，3H)，7.90(s，2H)， 6.83(s，1H)，6.57(s，1H)，5.75–5.62(m，1H)，5.03–4.95(m，1H)，4.87 (d，J＝6.2Hz，1H)，4.65–4.40(m，5H)，4.07(s，2H)，3.88(d，6H)，3.11 (m，2H)，2.31(s，6H)；LC-MS:m/z(ES+)，649[M+1]+。
实施例19：制备(6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3-基)-碳酸2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H119)
将中间体H04-7(53.6mg，0.1mmol)，单硝酸异山梨醇酯(38mg，0.2mmol)， DMAP(18.4mg，0.15mmol)和DCM(5ml)加入到10mL烧瓶中，室温搅拌过夜，TLC检测反应完全后，反应物用水洗后，硫酸钠干燥，减压抽滤后，所得滤液进行减压蒸馏，所得初产物经硅胶柱层(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝ 100:1)析纯化得35mg目标化合物H119:(6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3-基)-碳酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯，得率60％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.85(s，1H)，7.90(s，2H)，6.74(d， J＝2.0Hz，1H)，6.52(d，J＝2.1Hz，1H)，5.52(td，J＝5.3，1.6Hz，1H)， 5.06–4.99(m，2H)，4.52–4.42(m，3H)，4.08–3.98(m，4H)，3.90–3.80 (m，8H)，2.28(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，587[M+1]+。
实施例20：制备(6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3-基)-氨甲酸 2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]- 乙酯(H120)
制备方法同实施例19，起始原料单硝酸异山梨醇酯换为6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3-基-氨基，结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.72(s，1H)，8.04(s，1H)，7.81(s， 2H)，6.，，71(m，2H)，6.59(d，J＝3.4Hz，1H)，5.48(td，J＝4.3，1.9Hz， 1H)，5.12–4.92(m，2H)，4.47–4.38(m，3H)，4.13–3.92(m，4H)，3.85 –3.73(m，8H)，2.31(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，586[M+1]+。
6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3-基-氨基的制备方法如下：
步骤1
将28.0g的NaN3溶解于160ml三氯甲烷，搅拌下冷却至0℃，再缓慢滴加10mL浓硫酸，接着反应2.5h，过滤后，用硫酸钠干燥滤液制得叠氮酸。
步骤2
将12.6g的三苯基磷和8.4g的单硝酸异山梨醇酯溶解于100mL的无水四氢呋喃(THF)，搅拌并冷却至0℃，分次滴加上步所得产物的三氯甲烷溶液(100mL)，每次滴加20mL，滴加完毕再继续反应30min，再将8.6mL 的偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)的THF(20mL)溶液，分次滴加入反应液，再继续反应5h后，反应恢复室温，再于油浴中升温至60℃，再反应 28h后，加8mL蒸馏水，用2M的HCl调整反应液pH为1-2，再用无水二氯甲烷萃取3次，每次30mL，合并二氯甲烷层，用蒸馏水(3×15mL)清洗，用硫酸钠干燥，滤液旋干，制得6-硝氧基-六氢化呋喃并[3，2-b]呋喃-3- 基-氨基。
实施例21：制备4-(((5-氯代噻吩)-2-磺酰氨基)氧基)-4-氧代丁酸2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙酯(H121)
将N-羟基-5-氯代噻吩-2-磺酰胺(362mg，1.7mmol，制备方法参考专利WO2014113700)，三乙胺(172mg，1.7mmol)和DCM(20ml)加入到50ml烧瓶中，将实施例6中步骤2所制得中间体(416mg，0.85mmol)溶解于DCM(20ml) 后，在0℃条件下，逐滴加入反应混合物中，然后搅拌1h，TLC检测反应完全后，用水清洗后，硫酸钠干燥，抽滤后，滤液减压蒸馏，所得粗产物经硅胶柱层析纯化得147mg目标化合物4-(((5-氯代噻吩)-2-磺酰氨基)氧基)-4-氧代丁酸2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6- 二甲基-苯氧基]-乙酯(H116)，得率26％，其结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.86(s，1H)，7.97(s，1H)，7.64(m， 2H)，6.71(d，J＝2.5Hz，1H)，6.55(d，J＝3.1Hz，1H)，4.45–4.36(m， 2H)，4.05–3.99(m，2H)，3.87(d，3H)，2.69(m，4H)，2.28(s，6H)。LC-MS: m/z(ES+)，666[M+1]+。
实施例22：制备2-(N-(((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉 -2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙氧基)羰基)氧基)氨磺酰基)-1-甲基-1H-吡啶 l-2-鎓盐(H122)
制备方法同实施例21，起始原料由N-羟基-5-氯噻吩-2-磺酰胺换为 2-(N-羟基胺磺酰)-1-甲基-1H-吡唑-2-鎓盐(制备方法参考专利 WO2014113700)，所得目标化合物结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.83(s，2H)，11.56(s，1H)，7.93(s， 1H)，7.82(d，2H)，7.67(d，J＝3.2Hz，2H)，6.76(d，J＝2.5Hz，1H)， 6.53(d，J＝2.3Hz，1H)，4.55–4.52(m，2H)，4.08–4.02(m，2H)，3.89(d， 6H)，2.48(s，3H)，2.25(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)，575[M+1]+。
实施例23：制备2-乙酰氨基-3-(4-(((2-(4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4- 二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]-乙氧基)羰基)氧基)苯基)丙酸3， 4-(二硝氧基)丁基酯(H123)
Figure GDA0002898004200000411
步骤1
将Boc-(L)-酪氨酸(380mg，1.35mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(10ml) 溶液中，加入碳酸铯(440g，1.35mmol)，在0℃条件下，向混合物中滴加溶解于二氯甲烷(20ml)的3，4-二硝氧基-1-溴丁烷(350mg，1.35mmol，制备方法参考WO 2001049275)溶液。在0℃条件下，搅拌20min，缓慢升温至室温后，再搅拌22小时，加入5％的磷酸二氢钠(20ml)水溶液，然后用二乙醚(4×20mL)萃取，所得有机层用硫酸钠干燥，再进行减压蒸馏，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得中间体2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-羟苯基)丙酸3，4-(二硝氧基)丁基酯(267mg，得率 43％)。
步骤2
将上步产物(0.97g，2.12mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)溶液中，在溶液中通入HCl气体3小时，再加入二氯甲烷(25mL)，用饱和碳酸钠水溶液洗涤，分离出有机层用硫酸钠干燥，在减压下蒸馏，得中间体2-氨基-3-(4-羟苯基) 丙酸3，4-(二硝氧基)丁基酯。
步骤3
将上步产物(0.66g，1.85mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)溶液中，再加入三乙胺(0.25mL，1.85mmol)，将反应物冷却至0℃，滴加乙酰氯(0.14mL， 1.98mmol)，在0℃条件下，搅拌反应物10min，再在室温下搅拌16小时，加入二氯甲烷(25mL)，用水洗涤，所得有机层用硫酸钠干燥，减压蒸馏，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得中间体 2-乙酰氨基-3-(4-羟苯基)丙酸3，4-(二硝氧基)丁基酯(341mg，得率46％)。
步骤4
将上步产物(0.46g，1.15mmol)溶解于二氯甲烷(8ml)中，再加入吡啶 (0.11mL，1.15mmol)，将反应物冷却至0℃，再加入氯甲酸对硝基-苯基酯 (233mg，1.15mmol)，在0℃条件下，搅拌反应物15min，再在室温下搅拌 48小时，加入二氯甲烷(20mL)，用HCl水溶液(1M，20mL)洗涤，再用饱和碳酸钠水溶液洗涤。有机层用硫酸钠干燥，减压蒸馏后，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得中间体2-乙酰氨基 -3-(4-((4-硝基苯氧基)羰氧基)苯基)丙酸3，4-(二硝氧基)-丁基酯(228mg，得率35％)。
步骤5
将上步产物(453mg，0.8mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)溶液中，再加入三氟甲基磺酸钪(0.04g，0.09mmol)和DMAP(0.21g，1.8mmol)，将反应物冷却至0℃，再加入中间体H130(296mg，0.8mmol)，在室温下搅拌反应物18h，加入二氯甲烷(24mL)，用5％的磷酸二氢钠洗涤，再用饱和碳酸钠水溶液洗涤，有机层用硫酸钠干燥，减压蒸馏后，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得目标化合物(204mg，得率32％)，所得目标化合物结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.81(s，1H)，7.89(s，2H)，7.52–6.74 (m，4H)，6.73(d，J＝2.8Hz，1H)，6.57(d，J＝2.7Hz，1H)，4.58–4.53(m， 3H)，4.11–4.05(m，2H)，3.98(m，2H)，3.91(s，3H)，3.88–3.82(t，5H)， 3.58–3.52(m，1H)，3.49–3.40(m，2H)，2.29(s，6H)，1.95(m，3H)。LC-MS: m/z(ES+)，798[M+1]+。
实施例24：制备4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2- 基)-2，6-二甲基-苯氧基]丁基)-4-氧代-2-乙酰氨基-丁酸3-(硝氧基)-2，2- 二(硝氧基甲基)丙酯(H124)
步骤1
将中间体H130(1.3g，3.5mmol)溶解于丙酮(100ml)溶液中，再加入N- 乙酰天门冬氨酸(1.09g，6.25mmol)和DMAP(催化量)，将反应物冷却至0℃，再加入EDAC(1.19g，6.25mmol)，反应物在室温条件下搅拌24h，减压蒸馏，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：二氯甲烷/甲醇梯度洗脱)纯化得4-(2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]丁基)-4-氧代-2-乙酰氨基-丁酸(0.83g，得率45％)。
步骤2
将上步产物(0.66g，1.25mmol)溶解于二氯甲烷(30ml)中，再加入3-氯-2， 2-二(氯甲基)丙烷-1-醇(0.24g，1.25mmol)和DMAP(催化量)，将反应物冷却至0℃，再加入EDAC(0.24g，1.25mmol)，反应物在室温条件下搅拌24h，减压蒸馏，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基- 苯氧基]丁基)-4-氧代-2-乙酰氨基-丁酸3-氯-2，2-二(氯甲基)丙酯(0.57g，得率65％)。
步骤3
将上步产物(525mg，0.75mmol)溶解于乙腈(20mL)中，再加入碘化钠 (0.45g，3.06mmol)，在微波辐射下，将反应物加热至120℃，放置60分钟，冷却所得的混合物，过滤，所得有机层经减压蒸馏后，得中间体4-(2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]丁基)-4- 氧代-2-乙酰氨基-丁酸3-碘-2，2-二(碘甲基)丙酯(417mg，得率57％)。
步骤4
将上步产物(0.6g，0.62mmol)溶解于乙腈(20mL)溶液中，添加硝酸银 (405mg，2.43mmol)，在微波辐射下，将反应物加热至120℃，放置5分钟，冷却所得的混合物，过滤，所得有机层经减压蒸馏后，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得目标化合物(232mg，得率 48％)，所得目标化合物结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.86(s，1H)，8.58(s，1H)，7.94(s， 2H)，6.81(s，1H)，6.55(s，1H)，5.93–5.85(m，1H)，4.42–4.36(m，2H)， 4.03(m，2H)，3.87–3.81(m，8H)，3.39(s，6H)，3.09–3.01(m，2H)，2.34 (s，6H)，1.89(s，3H)。LC-MS:m/z(ES+)781[M+1]+。
实施例25：制备4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2- 基)-2，6-二甲基-苯氧基]丁氧基)-4-氧代-2-(2-(硝氧基)乙酰氨基)-丁酸2- 硝氧基乙酯(H125)
Figure GDA0002898004200000441
步骤1
将中间体H130(2.11g，5.7mmol)溶解于二氯甲烷(100ml)溶液中，加入 4-(烯丙氧基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氧代丁酸(1.55g，5.7mmol)和 DMAP(催化量)，将反应物冷却至0℃，再加入EDAC(1.49g，7.85mmol)，反应物在室温下搅拌12h，减压蒸馏，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得中间体4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4- 二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]丁基氧基)-4-氧代-2-(叔丁氧基羰基氨基)琥珀酸2-烯丙基酯(1.92g，得率54％)。
步骤2
将上步产物(1.53g，2.45mmol)溶解于二氯甲烷(40mL)溶液中，加入HCl 气体15min，减压蒸馏得中间体4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢- 喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]丁基氧基)-4-氧代-2-氨基丁酸2-烯丙基酯的盐酸盐(0.66g，得率48％)。
步骤3
将上步产物(702mg，1.25mmol)溶解于二氯甲烷(80ml)溶液中，加入 DMAP(143mg，1.2mmol)和2-硝氧基乙酸五氟苯酚酯(359mg，1.25mmol，制备方法参考WO 2005011646)，在室温条件下，将反应物搅拌12h，减压蒸发溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得中间体4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6- 二甲基-苯氧基]丁基氧基)-4-氧代-2-(2-(硝氧基)乙酰氨基)-丁酸2-烯丙基酯(495mg，得率63％)。
步骤4
将上步产物(440mg，0.70mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)溶液中，加入5， 5-二甲基-1，3-环己烷二酮(0.13g，0.97mmol)，三苯膦(0.30g，1.16mmol)和四(三苯膦)钯(0.045g，0.039mmol)，在室温条件下，将反应物搅拌12h，减压蒸发溶剂，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/丙酮/乙酸4/6/0.1％) 纯化得中间体4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6- 二甲基-苯氧基]丁基氧基)-4-氧代-2-(2-(硝氧基)乙酰氨基)-丁酸(239mg，得率58％)。
步骤5
将上步产物(265mg，0.45mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)溶液中，加入2- 氯乙醇(0.04mL，0.5mmol)和DMAP(催化量)，将反应物冷却至0℃，再加入EDAC(0.12g，0.62mmol)，在室温条件下，将反应物搅拌12h，减压蒸发溶剂，残余物用硅胶柱层析(正己烷/乙酸乙酯梯度洗脱)纯化得中间体 4-(2-[4-(5，7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基] 丁基氧基)-4-氧代-2-(2-(硝氧基)乙酰氨基)-丁酸2-氯乙酯(186mg，得率65％)。
步骤6
将上步产物(191mg，0.3mmol)溶解于乙腈(10ml)溶液中，加入碘化钠 (0.18g，1.25mmol)，在微波辐射下，将反应物加热至120℃，放置60分钟，冷却所得的混合物，过滤，所得有机层经减压蒸馏后，得中间体4-(2-[4-(5， 7-二甲氧基-4-氧代-3，4-二氢-喹唑啉-2-基)-2，6-二甲基-苯氧基]丁基氧基)-4-氧代-2-(2-(硝氧基)乙酰氨基)-丁酸2-碘乙酯(95.5mg，得率46％)。
步骤7
将上步产物(203mg，0.3mmol)溶解于乙腈(10ml)溶液中，加入硝酸银 (0.21g，1.24mmol)，在微波辐射下，将反应物加热至120℃，放置5分钟，冷却所得的混合物，过滤，所得有机层经减压蒸馏后，残余物用硅胶柱层析(洗脱液：正己烷/丙酮梯度洗脱)纯化得目标化合物(115mg，得率58％)，所得目标化合物结构经核磁共振氢谱图和质谱确证。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:11.81(s，1H)，8.55(s，1H)，7.91(s，2H)，6.83(s，1H)，6.52(s，1H)，5.89–5.82(m，1H)，5.48(s，2H)，4.81 (t，2H)，4.46–4.37(m，4H)，4.05(m，2H)，3.91(d，6H)，3.11–3.04(m， 2H)，2.34(s，6H)。LC-MS:m/z(ES+)678[M+1]+。
生物学实验
实验一、受试化合物在体外释放一氧化氮的实验研究
实验步骤：
(1)配置Griess试剂：取氨苯磺胺4g，N-萘乙烯二胺盐酸盐0.2g，85％的磷酸溶液10ml，用蒸馏水稀释至100ml。
(2)绘制标准曲线：配置0.01、0.03、0.05、0.07、0.09、0.2、0.4μg/ml 的亚硝酸盐氮的系列标准溶液，各取10ml与2.5ml的Griess试剂充分混匀，室温放置10min后，于540nm波长处测定其吸收值。根据所得数据绘制标准曲线。
(3)受试药物NO释放量的测定：所有受试物均先溶于二甲亚砜中 (1ml)，再用磷酸缓冲液(pH7.4)缓慢滴加、振荡，将药物溶液稀释至50ml，缓冲液中含有过量的半胱氨酸(5mmol/l)，受试物终浓度为10-4mol/l；将溶液置于37℃环境下孵化，分别于1h取反应液2ml与500μl的Griess试剂混合，室温放置10分钟，在540nm处测吸收值，以单硝酸异山梨酯为阳性对照，H130作为阴性对照，NO的释放量以其氧化产物亚硝酸盐(NO2 -) 的量表示。
实验结果：受试物NO体外释放结果参见表一 。
实验结论：从实验结果中可看出除了化合物H102和H130在1h之内没检测到NO的释放，其余化合物在1h之内均能检测到不同水平的NO释放，但是不同结构的NO供体的NO释放速率存在差距，释放速率可能与 NO供体的分子量以及NO供体与原药的偶联方式有关，表一中仅示出了在 1h的时间点检测到的NO释放，其中化合物H102虽然在1h内没有NO产生，但是2h或更长时间之后均有NO产生。
表一
Figure GDA0002898004200000471
Figure GDA0002898004200000481
实验二、受试化合物释放HNO的实验研究
HNO在水溶液中会迅速二聚化和脱水产生一氧化二氮，在检测HNO的实验中一般采用气相色谱顶空分析法测定一氧化二氮的释放量从而间接检测化合物释放HNO的水平。
实验步骤：将各受试化合物用DMF配置成20mg/mL的母液，实验开始前，取50μL药物母液放置于20mL的顶空进样瓶中，再加入5mL的pH7.4 的PBS缓冲液稀释受试化合物，所得样品在37℃的氩气条件下保温90分钟后，抽取顶部气体进行一氧化二氮的气相色谱分析，实验中采用Angeli's Salt作为阳性化合物。
实验结果：各受试物HNO释放结果参见表二。
实验结论：由于此实验中所选取的化合物结构中含有HNO供体，这类化合物体外无法检测到NO的释放，只能通过气相色谱顶空分析法测定一氧化二氮的释放量从而间接检测化合物释放HNO的水平。从实验结果中可看出除了原型化合物H130(阴性对照)没检测到HNO的释放，其余化合物在1.5h之类均能检测到不同水平的HNO释放
实验讨论：硝酰基或亚硝酰氢(HNO)是一氧化氮(NO)的单电子还原产物，研究显示其对活体心脏能发挥正性肌力作用，可显著改善心力衰竭患者的心肌收缩功能，机制研究揭示了HNO供体可能通过氧化还原依赖性的方式调节心肌收缩。目前，对HNO供体的研究预示含有HNO供体的药物可用于治疗心力衰竭、例如急性充血性心衰、早期慢性心力衰竭，HNO供体药物还可与正性肌力药物一起给予正在接受β-拮抗剂治疗的心力衰竭患者；HNO供体药物还可治疗或预防局部缺血/再灌注损伤，减少风险组织的组织梗塞面积，可用于器官移植手术，通过在移植受体器官再灌注之前使器官与HNO供体接触而完成。
表二
Figure GDA0002898004200000491
实验三、受试化合物在体外的血浆稳定性实验
实验方法：将受试化合物(2μM)加入到小鼠血浆或是人血浆中，在37℃下孵育，分别于0，10，30，60，120分钟采样，加停止剂终止反应，振摇充分，在4℃，4000rpm条件下离心10分钟，取上清液，用LC-MS/MS方法测定上清液中受试化合物以及其代谢物(H130)的浓度。
实验结果：受试化合物在体外的血浆浓度变化见表三。
实验结论：由体外的实验结果可看出化合物H101在小鼠及人血浆中的稳定性较好，2h内该化合物浓度变化不大。化合物H102、H103、H104、 H108和H116在人血浆中的稳定性也较好。
表三
Figure GDA0002898004200000492
Figure GDA0002898004200000501
Figure GDA0002898004200000511
Figure GDA0002898004200000521
Figure GDA0002898004200000531
Figure GDA0002898004200000541
实验四、受试化合物的药代动力学及生物利用度研究
实验方法：制备受试化合物的静脉注射溶液(受试化合物给药浓度 1mg/kg)以及口服灌胃液(受试化合物给药浓度5mg/kg)，将其分别静脉注射以及口服给予3只SD大鼠，LC-MS/MS法分别测定给药后0.083h、0.25h、 0.5h、1h、2h、4h、8h、24h时H130的全血血药浓度，通过药-时曲线，比较药代动力学参数。
样品预处理：精确吸取待测全血150μL，加入600μL内标溶液(甲醇稀释至0.5μg/mL)、涡旋充分，在4℃条件下，以13000r/min离心20min，取上清液3μL于进样小瓶。
色谱条件：C18反相色谱柱；流动相A：在水/乙腈(v:v＝95:5)中加入0.025％的甲酸和1mM的乙酸铵，流动相B：在乙腈/水(v:v＝95:5)中加入0.025％的甲酸和1mM的乙酸铵，梯度洗脱。
实验结果见表四和表五，其中表四为大鼠静脉注射各受试化合物后， H130的药代动力学参数；表五为大鼠口服原药以及各受试化合物后，H130 的药代动力学参数。
实验结论：从实验结果可看出，H101、H111、H116、H118和H119给药后很快能释放出原型化合物H130。该原型化合物H130已被临床试验证实为可用于降低心脏不良事件发生率的新型药物，且安全性高。
表四
Figure GDA0002898004200000551
表五
Figure GDA0002898004200000552
Figure GDA0002898004200000561
实验五、受试化合物对ApoA-I mRNA的调节
在24孔板中用400μl的含0.5％(v/v)胎牛血清的MEM培养基培养 HepG2细胞24小时，然后加入各受试化合物(100μM)、阳性对照RVX-208 (100μM)，再培养细胞48h，吸出培养基，200μl PBS冲洗后，将85μl细胞裂解液加入到各孔的细胞中，室温孵育5-10分钟以使细胞完全溶解和脱离，试剂盒提取细胞中的mRNA，然后采用RNA荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒和爱普拜斯公司的ApoA-I mRNA引物-探针混合物将提取出的 mRNA用于实时荧光定量PCR检测；
得到Ct值后，计算每个受试化合物相对于DMSO对照组的诱导倍数，诱导倍数用于反映受试化合物调控ApoA-I mRNA能力的强弱，当100μM 的受试化合物使HepG2细胞中的ApoA-I mRNA增加15％以上，则被称为 ApoA活性化合物。
各受试物对HepG2细胞ApoA-I mRNA的调节活性的实验结果参见表六。由表六可看出，所合成的受试物均能上调肝细胞中的ApoA-I mRNA。由于载脂蛋白A-I(ApoA-I)是功能性高密度脂蛋白(HDL)微粒的重要组成部分，其能有效消除动脉粥样硬化斑块，防治高血脂症，改善体内的血糖代谢；因此本发明所公开化合物可增加细胞内的ApoA-I含量说明这些化合物将对心血管疾病的防治发挥积极作用。
表六
Figure GDA0002898004200000562
Figure GDA0002898004200000571
实验六、受试化合物对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的作用研究
实验方法：选取8周龄的雄性apoE-/-小鼠36只，随机分为空白给药组、 H101给药组、H111给药组、H116给药组、H119给药组、H130给药组，每组6只，各组小鼠给予高脂饲料饲养10周，在高脂饲养开始时，就对各组小鼠进行给药处理，各受试化合物按150mg/kg的剂量，一天两次，灌胃给药，空白给药组给予相当剂量的生理盐水。小鼠处死前禁食12h以上，20％乌拉坦溶液麻醉小鼠，取血后，分离出血清、心脏及主动脉。利用全自动生化分析仪测定各组小鼠血清中的总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)；利用ApoA1试剂盒检测ApoA1 表达水平；利用总NO测试试剂盒(碧云天)测定小鼠血清的NO含量；利用 NOS测试试剂盒(碧云天)测定心脏、主动脉及血清的NOS活力，通过与加入eNOS抑制剂L-NAME(碧云天)后测定值的差值计算eNOS的含量。
实验结果见表七和表八，其中表七为高脂喂养10周后各组小鼠血脂水平，与模型组相比，*p<0.05，**p<0.01；表八为高脂喂养10周后各组小鼠体内NO及eNOS活力变化。
表七
Figure GDA0002898004200000581
表八
Figure GDA0002898004200000582
Figure GDA0002898004200000591
实验结论：apoE-/-小鼠高脂饲养10周后，与空白给药组小鼠比较，各受试化合物给药后，小鼠血清中TC、LDL-C值均显著降低，HDL-C及ApoA1 显著升高，心脏、血清及主动脉中的eNOS活力增加、血清中NO释放增加。
实验讨论：内皮功能障碍是动脉粥样硬化的始动环节，机体内皮功能障碍会导致不正常的血管收缩、内皮通透性增加、血小板黏附聚集以及白细胞黏附，低密度脂蛋白(LDL)转移至内膜，进而形成血栓、炎症反应、平滑肌细胞异常增殖及迁移，从而促进动脉粥样硬化的形成。由内皮型一氧化氮合酶(eNOS)合成的一氧化氮(NO)能调节血管张力、抗氧化、防止氧化型低密度脂蛋白(o x-L D L)的产生，抑制激活的内皮细胞表达黏附分子，减少炎症细胞的黏附和活化；抑制血小板黏附、聚集；有效抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质的合成，最终阻止动脉粥样硬化发生和发展。研究证实，外源性NO供体药物能通过抑制血管平滑肌细胞的增殖及细胞外基质和胶原蛋白的产生来对动脉粥样硬化发挥防治作用，激活eNOS所产生的NO能够通过调节血管张力、脂质浸润、炎性反应、血栓形成和血管重塑等多种作用抵抗动脉粥样硬化。
本实验中各受试化合物能改善ApoE基因消除小鼠的血脂异常，说明受试化合物对动脉粥样硬化的发生和发展具有抑制作用，其作用机制可能与受试化合物促进体内ApoA1表达，增加体内eNOS活力、促进血管细胞释放NO有关。
实验七、受试化合物对C57小鼠和db/db小鼠的作用研究
实验1：受试化合物对C57小鼠的作用研究
实验方法：选用60只8周龄的C57BL/6小鼠(级别：SPF；性别：雄性；来源：上海斯莱克实验动物有限责任公司)，其中选取2只作空白对照， 12只作阳性药对照(单硝酸异山梨酯)，12只作H101给药组，剩余32只小鼠，随机分成四组，每组8只，分别为H111给药组、H116给药组、H119 给药组、H130给药组，阳性药对照组和各给药组的受试化合物溶解于DMSO，然后加入PEG400，震荡混匀，最后加入10％HP-β-CD，震荡混匀，各溶剂比例为DMSO:PEG400:10％HP-β-CD＝5:67.5:27.5；给药组以150mg/kg的剂量口服灌胃给药，阳性药对照组给药剂量为5mg/kg，各组小鼠分别在给药后10min、30min、60min、120min、180min、240min，吸入过量CO2的方法处死小鼠，采集血液于1.5ml离心管中，室温放置30min以上后离心(3000rpm，10min)吸取上清血清，-80℃保存待检；血液采集后，剪取心脏至胸主动脉，其中心脏称取三份于冻存管中，液氮速冻后冻存于-80℃待检；主动脉及主动脉弓称重，液氮速冻后冻存于-80℃待检。用总NO测试试剂盒(碧云天)测定C57BL/6小鼠血清的NO含量。
实验结果见图1 。
实验结论：由实验结果可看出，C57小鼠经各组受试化合物给药后，与空白对照小鼠相比，除了H130给药组，其余给药组小鼠血清中NO水平均有一定程度的提高，H111及H119化合物给药后1h后，C57小鼠血清中 NO水平增加，随后NO释放量减少，阳性药及H101化合物给药后2h后， C57小鼠血清中NO释放至最大水平，随后NO释放量逐渐减少。
实验2：受试化合物对db/db小鼠的作用研究
实验方法：选用25只8周龄的db/db小鼠(品系： BKS.Cg-+Leprdb/+leprdb/JclSlac；级别：SPF；性别：雄性；来源：上海斯莱克实验动物有限责任公司)，其中选取3只作空白给药对照，2只作阳性药对照(单硝酸异山梨酯)，剩余20只小鼠，随机分成五组，每组4只，分别为H101给药组、H111给药组、H116给药组、H119给药组、H130给药组，阳性药对照组和各给药组的受试化合物溶解于DMSO，然后加入 PEG400，震荡混匀，最后加入10％HP-β-CD，震荡混匀，各溶剂比例为 DMSO:PEG400:10％HP-β-CD＝5:67.5:27.5；给药组以150mg/kg的剂量口服灌胃给药，阳性药对照组给药剂量为5mg/kg，H101给药组小鼠在给药2h 后处死，其余给药组小鼠在给药后1h处死，分别采集血液于1.5ml离心管中，室温放置30min以上后离心(3000rpm，10min)吸取上清血清，-80℃保存待检；血液采集后，剪取心脏至胸主动脉，其中心脏称取三份于冻存管中，液氮速冻后冻存于-80℃待检；主动脉及主动脉弓称重，液氮速冻后冻存于-80℃待检。分别用总NO测试试剂盒(碧云天)测定C57BL/6小鼠血清的NO含量；NOS测试试剂盒(碧云天)测定小鼠心脏的NOS含量，通过与加入eNOS抑制剂L-NAME(碧云天)后测定值的差值计算eNOS的含量。
实验结果：db/db小鼠给药后血清NO及心脏eNOS活力变化见表九。
实验结论：对db/db小鼠进行的实验中，受试化合物给药后，与空白对照小鼠相比，除了H130给药组，其余受试化合物给药组小鼠心脏eNOS及血清中NO均有不同程度增加。
以上实验结果说明发明人所提供的NO供体化合物进入体内可促进血管释放NO，提高eNOS活力。
表九
Figure GDA0002898004200000611
实验八、受试化合物对Balb/c小鼠的急性毒性实验
化合物：将H101、H111、H118分别溶于DMSO制成500μM药物母液，然后取适量各受试药缓慢稀释于PBS中，对照组注射PBS(含相同浓度的DMSO)。
动物：Balb/c小鼠，每组10只。
方法：腹腔注射给药，高剂量组：300mg/kg/day；低剂量组：150mg/kg/day，每天给药1次，共3天，观察14天内的动物变化。
结果：与对照组小鼠比较，给药组小鼠自给药日起14天内未见体重及行为异常，这说明上述浓度的本发明受试化合物对小鼠基本上没有毒性。

Claims (7)

1.通式(II)的化合物及其药学上可接受的盐：
A-B (II)
其中A为
Figure FDA0003479997390000011
其中R1为-O-；R0为
Figure FDA0003479997390000012
B选自：
-NO2、
Figure FDA0003479997390000013
-C(O)-CH2-NH-C(O)-Y0；-C(O)-CH2-NH-C(O)-Y；-C(O)-CH2-CH2-NH-C(O)-Y0；-C(O)-CH2-CH2-NH-C(O)-Y；
其中，Y0为-R5-Y、
Figure FDA0003479997390000014
Figure FDA0003479997390000015
Y为-T-ONO2、
Figure FDA0003479997390000021
其中，R5为-O-；
T为直链的C1-5亚烷基；
Y1为直链的C1-5亚烷基；
Y2为苯基或者为C1-4烷基硝酸酯基；
Y4为氢；
Y11为
Figure FDA0003479997390000022
Figure FDA0003479997390000023
R2为H、直链C1-4烷基；
m是0-3的整数；r为1-2的整数。
2.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于：Y0为-R5-Y、
Figure FDA0003479997390000024
Y为-T-ONO2、
Figure FDA0003479997390000025
T为直链的C1-4亚烷基；
Y1为直链的C1-5亚烷基；
Y2为苯基或者为C1-4烷基硝酸酯基。
3.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物的结构式为：
Figure FDA0003479997390000031
4.一种药物组合物，其特征在于，包括治疗有效量的权利要求1-3任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，以及任选一种或多种医药上可接受的载剂。
5.根据权利要求1-3任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐或者根据权利要求4所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗心脑血管疾病、代谢性疾病的药物中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述心脑血管疾病是动脉粥样硬化、脑梗死、高血脂、缺血性心肌损伤、中风、冠心病、心脏肥厚、心衰、心脏梗塞、糖尿病性心肌病、心绞痛、高血压、高血压性视网膜病变或视网膜血管病变。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述代谢性疾病是2型糖尿病、糖尿病性脂血异常、糖尿病黄斑水肿、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病神经病变。
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