BR112012030787A2 - derivado opticamente de dibenzilamina para preparar o mesmo - Google Patents

Abstract

  DERIVADO OPTICAMENTE ATIVO DE DIBENZILAMINA, E MÉTODO PARA PREPARAR O MESMO Substancialmente opticamente puro (S)-trans-4{4-[({2-[({1-[3,5-bis(trifluormetil)fenil]etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amina)metil-4-(trifluormeil)fenil}(etil)amina)metil]ciclohexil} ácido acético, ou um sal deste, ou um solvato deste, que possuem ações de reduzir a quantidade de proteína PCSK9 e aumentar a quantidade de receptor LDL.

Description

DERIVADO OPTICAMENTE ATIVO DE DIBENZILAMINA, E MÉTODO PARA PREPARAR O MESMO

CAMPO TÉCNICO A presente invenção relata para um derivado opticamente ativo de dibenzilamina útil como um ingrediente ativo de medicamento ou semelhantes, e um método para preparação do mesmo.

ANTECEDENTES DA MATÉRIA Nos últimos anos, pacientes sofrendo de dislipidemia (hiperlipidemia) e induzindo doenças ateroscleróticas assim foi aumentado rapidamente devido a troca em hábitos alimentares por escolha de alimentos de calorias altas e colesterol alto com progresso de um padrão de vida, obesidade, falta de exercício, envelhecimento, e semelhantes. Foi revelado de muitas pesquisas etiológicas, incluindo o estudo de Framingham, que O nível de colesterol de lipoproteína de baixa densidade (Low-Density Lipoprotein - LDL) positivamente correlato para uma taxa de começo de doenças do — coração. Portanto, em terapias de droga para dislipidemia e arteriosclerose, redução de um valor de colesterol LDL foi importantemente focalizado (documento 1 não Patente). Para colesterolemia de hiper-LDL, que é um dos fatores potentes de risco de doenças cardiovasculares, métodos terapêuticos foram notados progressos com o lançamento de Inibidores de HMG-CoA redutase (estatinas). Embora, estatinas potencialmente reduzam o colesterol LDL, reduzam acidentes cardíacos e mortalidade por doenças cardiovasculares permaneçam tão alto quanto aproximadamente 30%. É considerado que um risco baixo de morte de doenças cardiovasculares pode ser melhorado por adicional redução de colesterol LDL. Embora, uma administração de alta dose de estatinas não pode ser aplicada devido ao aumento crescante de risco de rabdomiólise.

Portanto, deseja-se um medicamento que tenha potencial ação reduzida sobre colesterol LDL do sangue e é baseado sobre modos diferentes de ação daquelas de estatinas.

Pró proteína convertase (PCs) são membros da família de protease serina mamífera, da qual homologia para subtilisina em bactéria e kexin em levedura foi observada. Uma das PCs, PCSK9 (pró proteína convertase subtilisina/kexin 9), é principalmente expressa no fígado e segregado extracelularmente, e então liga com receptor LDL sobre uma superfície de membrana de hepatócitos para promover migração do receptor LDL dentro das células. O receptor LDL migrado dentro das células são decompostos por organelas da célula. Como o receptor LDL tem uma função de transportar lipoproteínas contendo colesterol LDL da circulação do sangue para o fígado, a produção da proteína PCSK9 inibe a captação de colesterol LDL do sangue dentro do fígado, que resulta em um aumento de nível de colesterol LDL do sangue. De fato, é conhecido que o nível de colesterol LDL do sangue é alto em humanos com uma função de mutação tipo aquisição no gene PCSK9, que relata para hipercolesterolemia autosomal dominante (documento não patente 2). Ainda, um baixo nível de colesterol LDL do sangue é mantido em humanos com uma função deleção tipo mutação no gene PCSK9 (documento não patente 3). Adicionalmente, foi demonstrado em um animal que níveis de colesterol LDL é baixo nos ratos deficientes no gene PCSK9 do fígado (documento não patente 4). É considerado das razões do conjunto logo acima que a redução da quantidade de proteína PCSK9 por supressão da produção destes ou inibição contra a função da proteína PCSK9 conduz para aumento na quantidade do Receptor LDL, e assim provém uma potente ação de redução do colesterol LDL.

Dada as circunstâncias, pesquisas ativas foram conduzidas — recentemente sobre inibição funcional da proteína PCSK9 ou supressão da produção destas.

Por exemplo, como estes usando um anticorpo ou antisense oligonucleotide, inibição funcional da proteína PCSK9 usando um anticorpo monoclonal dirigido para PCSK9, supressão da proteína PCSK9 produção baseada na interferência RNA, e semelhantes foram reportados (documentos não patentes 5 a 7). Adicionalmente, como estes usando um composto de baixo peso molecular, foi reportado que berberina reduz mRNA e nível de proteína de PCSK9 em células HepG2 (documento não patente 8), e 5- azacitidina, que é uma anexina ativadora de A2, promotores de ligação da proteína PCSK9 com anexina A2 e suprime decomposição de Receptor LDL (documento 1 patente). Embora nenhum composto com um peso molecular baixo como inibidores contra função de proteína PCSK9 ou supressores contra produção de proteína PCSK9 tenha sido reportado, exceto para estes acima mencionados.

Documento Patente 2 descreve compostos de pirimidina tendo uma estrutura de dibenzilamina, que tem potente atividade inibidora contra proteína de transferência de éster de colesterol (proteína "de transferência de éster de colesterol - CETP), e também tem uma potente ação no aumento do colesterol HDL no sangue. O documente descreve o composto da seguinte fórmula (1) como um racemato no Exemplo 45: Ss [Fórmula 1) Dia dA, do LU F3C.

E O, pCOH (1) (trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il )amiíno)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil ácido acético, daqui em diante também chamado "composto racemato (1)" nesta especificação). Embora qualquer relação entre o composto racemato (I) e a proteína PCSK9 não foi descrita ou sugerida.

Como PCs têm influências sobre proliferação, motilidade, adesão, e invasão de células de câncer, eles foram focalizados como um alvo de tratamento de câncer (documento não patente 9). Existe também conhecida relação de PCs com obesidade, diabetes, e doença de Alzheimer, e envolvimento de PCs em doenças, tais como: viral e doenças infecciosas, incluindo síndrome de imune deficiência adquirida (Acquired Immuno Deficiency Syndrome - AIDS) e severa síndrome respiratória aguda (Severe Acute Respiratory Syndrome - SARS) (documentos não patentes 10 e 21).

Portanto, o uso de um composto tendo uma reduzida ação na quantidade de proteína PCSK9 ou uma ação inibidora contra função de proteína PCSK9 como um ingrediente ativo de um medicamento para as doenças acima i mencionadas é também esperada.

REFERÊNCIA DE MATÉRIA ANTERIOR Documentos Patentes Documento Patente 1: Publicação de Patente Internacional WO2009/143633 Documento Patente 2: Publicação de Patente Internacional WoO2008/129951 Documentos Não Patente Documento Não Patente 1: "Nippon Rinsho, Vol. 59, Extra issue 3, Hyperlipidemia (vol. 2), 381-386 (2001)" Documento Não “Patente 2: Nat. Genet., 34, 154-156 (2003) Documento Não —* Patente 3: "N. Engl. J. Med., 354, 1264-1272 (2006)Documento Não Patente 4: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102, 5374-5379 (2005)" Documento Não Patente 5: "Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106, 9820-9825 (2009)" Documento Não “Patente 6: "J. Lipid Res., 48, 763- 767 (2007)" Documento Não Patente 7: "Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105, 11915-11920 (2008)" Documento Não —* Patente 8: Aterosclerose, 201 (2), 266-73 (2008) Documento Não Patente 9: "Mol. Carcinogen., 44 (3), 151-161 (2005)" Documento Não —* Patente 10: J. Mol. Med., 83, 842- 843 (2005)"

Documento Não "Patente 11: "J, Mol. Med., 83, 844- 855 (2005)"

RESUMO DA INVENÇÃO Objetivo a ser Alcançado pela Invenção.

Um objeto da presente invenção é para prover um composto de baixo peso molecular tendo ações de redução da quantidade de proteína PCSK9 e aumento da quantidade de Receptor LDL, e um medicamento compreendendo o dito composto de baixo peso molecular como um ingrediente ativo.

Meios por Alcançar o Objetivo.

Os inventores da presente invenção conduziram várias pesquisas para alcançar os objetivos acima mencionados. Como resultado, eles encontraram que O as composto racemato (I) e um dos enantiômeros destes, (R)- trans-(4-[((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5- [2- (met ilsulfonil)etoxi]lpirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) met il] ciclohexil ácido acético representado pela fórmula seguinte (II) (daqui em diante também referido como "composto (R)-isômero (II)" na especificação): [Fórmula 2] Em Ha da F 20 SS Fz3C. eo CF;3 O, —COH (11) não tendo quase nenhuma ação para redução da quantidade da proteína PCSK9 e aumento da quantidade de

YÁ Receptor LDL, ainda eles também encontraram que o levógiro (S) -trans-(4- [((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil]ciclohexiljácido acético representado pela fórmula seguinte (III) (daqui em diante também referido como " composto (S)-isômero (IIT)" na especificação): [Fórmula 3]

SIX L do TOS” F;3C.

AO

AE (1) ou um sal destes, ou um solvato destes tendo ações de potencialmente reduzir a quantidade da proteína PCSK9 e aumentar a quantidade de Receptor LDL. A presente invenção foi alcançada com base nos resultados anteriores.

A presente invenção assim provém (S)-trans-(4-[((2- [((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- * (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil] ciclohexil] ácido acético, ou um sal destes, Ou um solvato destes (preferivelmente, substancialmente opticamente puro (S)- trans-(4- [((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5s- [2- (met ilsulfonil)etoxil]pirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil] ciclohexil ácido acético, ou um sal destes, ou um solvato destes).

Como outro aspecto, a presente invenção provém um enantiômero levógiro de trans-fa4-[((2-[((1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil]ciclohexil )ácido acético, ou um sal destes, ou um solvato destes (preferivelmente, um substancialmente opticamente puro enantiômero levógiro de trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil ácido acético, ou um sal destes, ou um solvato destes).

A presente invenção também provém um medicamento compreendendo o composto (S)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo.

A presente invenção também provém uma composição farmacêutica contendo o composto (S)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo, e um transportador farmacêutico aceito.

O medicamento e a composição farmacêutica reduzem o colesterol LDL do sangue, e consequentemente eles podem ser usados como um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante de um estado de colesterol LDL alto do sangue (por exemplo, colesterolemia de hiper LDL, dislipidemia (hiperlipidemia), arteriosclerose, aterosclerose, doença vascular periferal, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia famuliar, cardiovasculares desordens funcionais, angina pectoris, esquemia, esquemia — cardíaca, trombose, infarto do miocárdio, desordens de reperfusão, restenose de angioplastia, hipertensão e semelhantes).

so A presente invenção adicionalmente prover o uso do composto (S)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para fabricação de um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante de um estado de colesterol LDL do sangue alto; e o composto (S)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para uso em tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante de estado de colesterol LDL do sangue alto.

A presente invenção também provém um agente de supressão de expressão de PCSK9 mRNA compreendendo o composto (S)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo; um agente de redução da quantidade de proteína PCSK9 compreendendo o composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo; a agente de supressão de produção da proteína PCSK9 compreendendo o composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo; e um agente de aumento da quantidade de Receptor LDL compreendendo o composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes cómo um ingrediente ativo.

A presente invenção adicionalmente prover o uso do composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para fabricação de um agente de supressão da expressão PCSK9 mMRNA, um agente de redução da quantidade de proteína PDSK9, um agente de supressão de produção da proteína PCSK9, ou um agente de aumento da quantidade de Receptor LDL; e o composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para uso como um ingrediente ativo de um agente de supressão de expressão de PCSK9 mRNA, um agente de redução da quantidade de proteína PCSK9, um agente de supressão de produção da proteína PCSK9, ou um agente de aumento da quantidade de Receptor LDL.

5. A presente invenção também provém um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença na qual PCs estão envolvidos (câncer, obesidade, diabetes, Doença de Alzheimer , doenças de infecções virais, e semelhantes) compreendendo o composto de (s) - isômero 10 (III), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo. À A presente invenção adicionalmente prover o uso do composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para fabricação de um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença na qual PCs são envolvidos; e o composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para uso em tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença na qual PCs são envolvidos.

Como ainda outros aspectos, a presente invenção provém um agente de supressão de expressão HMG-COA redutase mRNA compreendendo o composto racemato (IT), O composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44 (trans-(4- [((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5s- [2- (met iltio) etoxi] pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil ácido acético), ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo; um agente de supressão de produção HMG-COA redutase compreendendo oO composto racemato (1), o composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo; e um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante da expressão de HMG- CoA redutase mRNA (por exemplo, inflamação, câncer, doença de Alzheimer, osteoporosis, hipertrofia "prostática, doenças “glomerulares, verminação, infecção de vírus, psoríase, degeneração macular, e semelhantes) contendo o composto racemato (1), o composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo.

A presente invenção também provém o uso do composto racemato (I), o composto. descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes para fabricação de um agente de 45 supressão de expressão HMG-CoA redutase mRNA, um agente de supressão de produção HMG-CoA redutase, ou um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante da expressão de HMG-COA redutase mRNA; e O composto racemato (1), o composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes para uso como um ingrediente ativo de um agente de supressão de expressão HMG-CoA redutase mRNA, um agente de supressão de produção HMG-CoA redutase, ou um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante de expressão de HMG-CoA redutase mRNA.

A presente invenção também provém um método para supressão de expressão de PCSK9 mRNA em um mamífero incluindo humano in vivo, que compreende O passo de administrar uma quantidade efetiva do composto de (s)- isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano; um método para redução da quantidade de proteína PCSK9 em um mamífero incluindo humano in vivo, que compreende o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano; um método para supressão de produção de proteína PCSK9 em um mamífero incluindo humano in vivo, que compreende o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano; um método para aumentar a quantidade de Receptor LDI. em um mamífero incluindo humano in vivo, que compreende o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto de (s)- isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano; e um método para reduzir LDl do sangue em um mamífero incluindo humano in vivo, que compreende o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano.

A presente invenção também provém um método para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante de um estado de alto colesterol LDL do sangue em um mamífero incluindo humano, que compreende o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto de (s)- isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano.

A presente invenção adicionalmente prover um método para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença em que PCs estão envolvidos em um mamífero incluindo humano, que compreente o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano.

A presente invenção adicionalmente provém um método para supressão de expressão de HMG-CoA redutase mRNA em um mamífero incluindo humano in vivo, que compreende O passo de administrar uma quantidade efetiva do composto racemato (1), O composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, Ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano; um método para supressão de produção de HMG-COA redutase em um mamífero incluindo humano in vivo, que compreende o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto racemato (1), o composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, Ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano; e um método para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante de expressão de HMG-CoA redutase mRNA, que compreende o passo de administrar uma quantidade efetiva do composto racemato (IT), o composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes para o mamífero incluindo humano.

A presente invenção também provém um método para preparação do composto de (s)-isômero (III) e/ou o composto (R)-isômero (II) em uma forma substancialmente opticamente pura.

Embora o Documento Patente 2 descreva um método para preparação do composto racemato (I), foi extremamente difícil preparar o composto de (s)-isômero (III) ou o 3o composto (R)-isômero (II) em uma forma substancialmente opticamente pura como descrito acima.

Especificamente, como um ponto de vista geral, é conhecido que um composto substancialmente opticamente puro pode ser preparado por sintetização de racemato, e então submetendo o racemato para resolução ótica usando uma coluna quiral.

Porém, na resolução ótica usando uma coluna quiral, pode algumas vezes ser muito difícil para o conjunto da resolução para um certo tipo de composto, e O processo é inadequado para produção em escala industrial.

Praticamente, foi encontrado que o conjunto de condições da resolução ótica usando uma coluna quiral para preparação substancialmente opticamente pura do composto de (s)-isômero (III) ou (R)-isômero composto (II) foi extremamente difícil. Mais especificamente, foi tentado 145 para fracionar cada enantiômero do composto racemato (1) preparado de acordo com o método descrito no Documento Patente 2, Exemplo 45 em que trocando de várias maneiras as condições tais como tipos de uma coluna quiral (por exemplo, "QUIRALCEL OD-H, QUIRALCEL OJ-H", e semelhantes), tipos de um solvente usado como uma fase móvel (por exemplo, mistura de MeOH/TFA, mistura de EtOH/TFA, e semelhantes), e razão de fluxo da fase móvel. Porém, a resolução não teve êxito sob quase todas as condições aplicadas. Sob estas circunstâncias, foi encontrado que cada enantiômero foi separado prosperamente sob as condições descritas no Exemplo 1-1 que será mencionado adiante. Contudo, foi também encontrado que um produto de decomposição (composto de éster etil) foi produzido sob as condições acima mencionadas.

O Documento Patente 2 também mostra que oO composto racemato (1) pode ser preparado por um método compreendendo os passos de unir um composto intermediário (a) e um composto de brometo de benzilo racemato (b) na presença de uma base, hidrólise do grupo éster do composto resultante (c) para preparar um composto (d), e finalmente oxidando o átomo do enxofre do composto (d) de acordo com o esquema 1 mostrado abaixo. Esquema 1 [Fórmula 4] Br. Me O A A Ea NONH F3C CF; NN CF; F3C. Lo do E O ——————— vn NaH, DMF-THF No oa (a) tea: TO ucogs í (e) Ss. O.

SG NEN e CF 2N NaOH aq. o qe TaCls, 30% H2O, EtoH no CFs iProH ELeSN (d) Ss. 8 O RN S [A foxo) e, CF3 io no CF3 (1) Com referência ao Esquema 1, OS inventores da presente invenção tentado obter o composto substancialmente opticamente puro de (s)-isômero (III) ou o composto (R)-isômero (11) usando opticamente ativo 1- [3,5-bis (trifluorometil)fenil] - 1-metanosulfoniloxietano no lugar do composto racemato brometo de benzilo (b). Porém, a reação de eliminação de 1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil] - 1l-metanosulfoniloxietano preferencialmente ocorre, e o composto objeto não foi obtido com sucesso.

Adicionalmente, a preparação foi também tentada ao usando um agente de benzilação opticamente ativo tendo um grupo de partida, tal como o grupo toluenosulfonil, grupo clorometanosulfonil, ou grupo 2,4,6- triisopropilbenzenosulfonil no lugar de grupo metanosulfonil.

Porém, o composto substancialmente opticamente puro de (s)-isômero (III) ou o composto de (R) -isômero (II) não foi obtido com sucesso, como no caso usando 1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]-1- metanosulfoniloxietano.

Quando o composto de brometo de benzilo (b) foi usado, a introdução de grupo [3,5- bis(trifluorometil)fenil]-1-etil dentro do átomo de nitrogênio do composto intermediário (a) já foi alcançado prosperamente.

Consequentemente, pode ser contemplado para obter composto substancialmente opticamente puro de composto (s)-isômero (III) ou (R)-isômero (II) usando um composto de brometo de benzilo opticamente ativo no lugar de composto de racemato brometo de benzilo (b). Embora, geralmente seja conhecido que, em uma reação de substituição nucleofílica em que íon de brometo é eliminado, o íon de brometo produzido pela reação reage com brometo de benzilo no sistema de reação, e a racemização avança. Adicionalmente, geralmente seja também conhecido que, em uma reação de substituição nucleofílica na posição do benzil, uma reação de substituição tipo SNI também competitivamente ocorre devido a estabilização do cátion do benzil, e consequentemente ocorre racemização parcial.

Como para o composto tendo uma moderada pureza óptica obtida como um resultado de redução na pureza óptica devido a racemização parcial (na especificação, "composto tendo uma moderada pureza óptica" significa um composto tendo uma pureza óptica não menor que cerca de 10%ee (ee - excesso de enantiômero) e menor que cerca de 90%ee, preferivelmente cerca de 20 a 80%ee, e mais preferivelmente cerca de 40 a 70%ee, e o composto tendo a pureza óptica moderada também pode ser daqui em diante referido como "composto semi-quiral". Adicionalmente, como para o composto semi quiral. Quando um composto, em que o átomo de carbono assimétrico indicado com * na estrutura parcial mostrada abaixo está na configuração &S, está presente em uma quantidade maior, quando comparado com um composto na configuração R, o composto é especificamente referido como "composto semi quiral (S)- isômero-dominante ". Ainda, como para o composto semi quiral, quando o composto em que o átomo de carbono assimétrico indicado com * está na configuração R está presente em uma maior quantidade, quando comparado com o composto na configuração S, o composto é especificamente referido " composto semi quiral (R)-isômero-dominante".), [Fórmula 5)

VS”

E CF; É conhecido que pureza óptica destes pode ser aumentada por preferencialmente cristalização de um dos enantiômeros.

Embora, de acordo com os estudos dos inventores da presente invenção,a cristalização não avance no caso do composto racemato (1) ou um etil éster derivado destes, a pureza óptica destes não foi aumentada com êxito pela preferencial cristalização.

Sob as circunstâncias como descritas acima, OS inventores da presente invenção converteram Oo ácido carboxílico do composto racemato (1) dentro do éster benzil, e encontraram que o resultante composto de éster benzil foi isolado com sucesso como um cristal, compreendendo o racemato como componente principal.

Então, pela preparação de um composto semi quiral (IV) de um composto de éster de arilalcil Ou heteroarilalcil, e então cristalizando cristais de uma pureza óptica baixa dominantemente contendo o racemato como um componente (daqui em diante também referido como “cristais racemato dominante") e removendo os cristais para obter um composto de éster arilalcil ou heteroarilalcil (V) ou (V') com uma pureza óptica alta, e então usando o composto (V) ou (V') como um material de partida como mostra no Esquema 2 mencionado abaixo, os inventores com sucesso preparam um desejado composto de enantiômero do racemato (I) (composto de (s)-isômero (III) ou (R)-isômero (II)) em uma forma substancialmente opticamente pura.

Esquema 2 [Fórmula 6] O.

Gr EN ÕdOo Te, CF; DA Cristalização preferencial de racemato no CFa o O cnuigizaR Composto semi quiral (IV) so Sar > S Ah S Tn Remoção de cristais do Los do Los EEE O ego no CFa or Õno CF Ear Oucostatar — TO contorna v Oz-(CHa)' vo) 2X CO(CHoN-R Enantiômero de pureza óptica alta (solução mãe) + Cristais racemato dominante SST go.

N j Ú * * ( is õo No CF; oo 1, CFa ENS “o — WO CRo ST no CF3 (No esquema, R representa um grupo aril Cs.16 que pode ter um substituto, ou um grupo heteroaril 5 ao 10 membros que pode ter um substituto, e n representa um inteiro de 1 a 6.) A presente invenção assim provêm um método para preparação de substancialmente opticamente puro composto de (s)-isômero (III) ou substancialmente opticamente puro

(R) -isômero composto (II), ou um sal destes, ou um solvato destes, que compreende o passo de remover cristais de racemato- ominante de um composto semi quiral de um composto representado pela fórmula geral seguinte (IV): [Fórmula 7] FO A a NON 3 FzC. LON CF3 a —-CO-(CHo)I-R (1) (na fórmula, R representa um grupo aril Cç.10 que pode ter um substituto, ou um heterogrupo aril 5- a 10- membros que pode ter um substituto, e n representa um inteiro de 1 a 6) para cristalização preferencial em um solvente para obter um substancialmente opticamente puro composto representado pela fórmula geral seguinte (V) ou (V'): [Fórmula 8)

SNL A nN o nó Oo” FsC, FsC. Ie CF3 or LO CF3 O "2 CO(CH2),-R O "7 COCHo)I-R as (V) (V) (nas fórmulas, R e n têm o mesmo significado como aqueles definidos para a fórmula geral (IV)). Pelo método acima mencionado, quando o composto representado pela fórmula geral (IV) é um composto semi quiral (S)-isômero dominante, o composto de (s)-isômero (III) pode ser preparado, e quando o composto representado pela fórmula geral (IV) é um composto semi quiral (R)- isômero dominante, o composto (R)-isômero (II) pode ser Ss preparado.

A presente invenção adicionalmente provém o método acima mencionado, que adicionalmente compreende o passo de remover o grupo representado como -(CH;y)A9-R do composto representado pela fórmula geral (V) ou (V').

A presente invenção adicionalmente provém: (A) o método acima mencionado, que adicionalmente compreende o passo de reagir um composto semi quiral de um composto representado pela fórmula geral seguinte (VI): [Fórmula 9]

AAA O” FzC.

É “O, 2COACH2),-R (V) (na fórmula, R e n têm o mesmo significado como aqueles definidos pela fórmula geral (IV)) com um agente de oxidação em um solvente para preparar um composto semi quiral de um composto representado pela fórmula geral (IV); (B) o método acima mencionado (A), que adicionalmente compreende o passo de reagir um composto semi quiral de um composto representado pela fórmula seguinte (VII): [Fórmula 10)

Eh

NDA FzC. a CFa a. 7 CO2H (VI) com um composto representado pela fórmula geral seguinte (VIII) [Fórmula 11) R- (CH3)n-OH (VIII) (na fórmula, R e n têm o mesmo significado como aqueles definidos para fórmula geral (IV)) em um solvente na presença de um catalisador para preparar o composto semi quiral de um composto representado pela fórmula geral (VI); (C) o método acima mencionado (B), que adicionalmente compreende o passo de hidrolisar um composto semi quiral de um composto representado pela fórmula geral seguinte (IX): [Fórmula 12) gm ÃO: *N Fesca FzC.

O E NO cose (1X) (na fórmula, R' representa um grupo alcil C1.) em um solvente na presença de uma base para preparar O composto semi quiral de um composto representado pela fórmula (VII); e (D) o método acima mencionado (O), que adicionalmente compreende o passo de reagir um composto representado pela fórmula geral seguinte (X) ou (X'): [Fórmula 13] KE > Ee F3C CF3 F3C CF; (X) (A) (na fórmula, X representa a átomo halógeno), e um composto representado pela fórmula geral seguinte (XI): [Fórmula 14] Pe

NA F3C. e O Co,2R' (XI) (na fórmula, Rº tem o mesmo significado como aquele definido para a fórmula geral (1X)) em um solvente na presença de uma base para preparar O composto semi quiral de um composto representado pela fórmula geral (IX).

A presente invenção também provém O método acima mencionado (D), que adicionalmente compreende o passo de halogenar o opticamente ativo 1-13,5- bis (trifluorometil)fenil]etanol na presença de um agente halogenado para preparar oO composto representado pela fórmula geral (X) ou (X').

Como outro aspecto, a presente invenção provém um composto representado pela fórmula geral acima mencionada (IV), ou um sal destes, ou um solvato destes. O composto caracterizado por: R ser fenil, e n ser 1, um sal destes, ou um solvato destes é uma concretização preferida desta invenção.

A presente invenção adicionalmente provém um composto substancialmente opticamente puro representado pela fórmula geral acima mencionada (V) ou (V'), ou um sal destes, ou um solvato destes. Um composto caracterizado por: R ser fenil, e n ser 1, ou um sal destes, ou um solvato destes é uma concretização preferida desta invenção.

Efeitos da Invenção O composto de (s)-isômero (III) tem ação superior de reduzir a quantidade de proteína PCSK9 e ação de aumentar a quantidade Receptor LDL, e tem superior ação de redução de colesterol LDL do sangue. Portanto, o composto é útil como, por exemplo, um ingrediente ativo de um medicamento para redução de colesterol LDL do sangue, e semelhantes.

Adicionalmente, o composto de (s)-isômero (111) é também útil como um ingrediente ativo de um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença em que PCs são envolvidos, mais especificamente, câncer, obesidade, diabetes, Doença de Alzheimer , ou doenças de infecções virais.

Adicionalmente, de acordo com o método de preparação da presente invenção, um desejado enantiômero do composto racemato (1) (composto de (s)-isômero (III) ou (R) -isômero composto (II)) pode ser convenientemente preparado em uma forma de substancialmente oOpticamente pura. Por exemplo, o método pode ser preferivelmente usado como um método para preparação de substancialmente opticamente puro composto de (s)-isômero (III), que é útil Ss como um ingrediente ativo de um medicamento, ou semelhantes.

Modo para conduzir a Invenção Na especificação, o termo "substancialmente opticamente puro" significa que a pureza óptica de um composto é 90%ee ou mais alta, preferivelmente 95 a 100%ee, mais preferivelmente 97 a 100%ee.

Portanto, por exemplo, "substancialmente opticamente puro (S) -trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il jamino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil] ciclohexil ácido acético”, “substancialmente opticamente puro enantiômero levógiro de trans-f(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil] ciclohexil ácido acético" e "substancialmente opticamente puro composto de (s) -isômero (III)” significa o composto de (s)-isômero (III) tendo uma pureza óptica de 90%ee ou mais alta, preferivelmente 95 a 100%ee, mais preferivelmente 97 a 100%ee.

Na presente invenção, pureza óptica do composto de (s)-isômero (III) é preferivelmente 98%ee Ou mais alta, mais preferivelmente 99%ee ou mais alta, como determinado sob as condições analíticas do quiral HPLC descrito no Exemplo 1-1 mencionada depois, de um ponto de vista de obtenção de um favorável ação de redução da quantidade de proteína PCSK9 e/ou ação de aumentar a quantidade de Receptor LDL.

Se a pureza óptica acima mencionada é alcançada, o composto de (s)-isômero (III) se torna a não S conter substancialmente o outro composto enantiômero ((R)- isômero (I11)). Na especificação, O termo "grupo alcil Cus * significa grupo alcil linear ou ramificado tendo 1 a 6 átomos de carbono, e exemplos incluem, por exemplo, grupo metil, grupo etil, grupo n-propil, grupo isopropil, grupo n-butil, grupo isobutil, grupo sec-butil,grupo tert-butil, grupo n-pentil, grupo isopentil, grupo neopentil, grupo n- hexil, grupo isohexil, e semelhantes.

Na especificação, O "aril Cçs.1w" porção do "grupo aril Cç1 que pode ter um substituto" significa um prupo de hidrocarbono aromático tendo 6 a 10 átomos de carbono, e exemplos incluemyá por exemplo, grupo fenil, grupo naftil, grupo azulenil, e semelhantes.

Na especificação, o "heteroaril 5 a 10 membros" porção do " heterogrupo aril 5 a 10 membros que podem ter um substituto" significa um anel monocíclico, policíclico ou condensado 5 a 10 membros, tipo grupo heterocíclico aromático contendo de 1 a 4 hétero átomos selecionados de átomo de oxigênio, átomo de enxofre e átomo de nitrogênio como átomos constituintes do anel.

Exemplos incluem, por exemplo, grupo furil, grupo tienil, grupo pirrolil, grupo oxazolil, grupo —isoxazolil, grupo “tiazolil, grupo isotiazolil, grupo imidazolil, grupo pirazolil, grupo oxadiazolil, grupo tiadiazolil, grupo triazolil, grupo tetrazolil, grupo —piridil, grupo —pirimidil, grupo pirazinil, grupo piridazinil, grupo benzofuranil, grupo isobenzofuranil, grupo benzotienil, grupo indolil, grupo isoindolil, grupo indazolil, grupo benzimidazolil, grupo benzoxazolil, grupo benzisoxazolil, benzogrupo tiazolil, benzisogrupo —*tiazolil, grupo —benzoxadiazolil, grupo benzotiadiazolil, grupo benzotriazolil, grupo quinolil, grupo isoquinolil, grupo cinolinil, grupo quinazolinil, grupo quinoxalinil, grupo ftalazinil, grupo naftiridinil, grupo purinil, grupo pteridinil, grupo furopiridil, grupo tienopiridil, grupo pirrolopiridil, grupo oxazolopiridil, grupo tiazolopiridil, grupo imidazopiridil, e semelhantes.

Na especificação, exemplos do substituto do "grupo aril Cs.19 Que pode ter substituto", e " heterogrupo aril 5 a 10 membros que pode ter um substituto" incluem, por exemplo, um átomo halógeno, grupo carboxil, grupo carbamoil, grupo sulfonil, grupo sulfamoil, grupo nitro, e semelhantes. Números do substituto é de 1 ao número máximo de substituíveis, e os grupos podem geralmente ter de 1 a 5 substitutos. Como o átomo halógeno, qualquer dos átomos de flúor, átomo de clorina, átomo de bromina, e átomo de iodina podem ser usados.

Nas fórmulas gerais, oO grupo aril Cs-1%º que pode ter um substituto como R é preferivelmente grupo fenil .

Nas fórmulas gerais, O inteiro. como n é preferivelmente 1.

Nas fórmulas gerais, o grupo alcil C;1; como Rº é preferivelmente um grupo alcil C;ra., mais preferivelmente grupo etil.

* Nas fórmulas gerais, o átomo halógeno como X é preferivelmente átomo de clorina ou átomo de bromina, mais preferivelmente átomo de bromina.

Na presente invenção, exemplos de sal de cada composto (por exemplo, o composto de (s)-isômero (III), um composto representado pela fórmula geral (IV), um composto representado — pela fórmula geral (VV), um composto representado pela fórmula geral (V'), e semelhantes) incluem, por exemplo, sais de ácido, sais de base, e semelhantes, e o sal não é particularmente tão limitado quando um sal farmaceuticamente aceitável é usado. Especificamente, exemplos dos sais de ácido incluem sais de ácido com um ácido inorgânico, tal como hidrocloreto, hidrobrometo, hidroiodeto, sulfato, nitrato, e fosfato; e sal de ácido com um ácido orgânico, tal como bensoato, metanosulfato, etanosulfato, benzenosulfato, p- toluenosulfato, maleato, fumarato, tartarato, citrato, e acetato. Exemplos dos sais de base incluem sais de base com um metal, tais como sal de sódio, sal de potássio, sal de lítio, sal de cálcio e sal de magnésio; sais com uma amina, tal como amônia, trimetilamina, trietilamina, piridina, colidina, e lutidina; sais de base com uma base orgânica, tal como lisina e arginina, e semelhantes.

Na presente invenção, exemplos dos solventes formando um solvato de cada composto (por exemplo, oO composto de (s) -isômero (III), um composto representado pela fórmula geral (IV), um composto representado pela fórmula geral (V), um composto representado pela fórmula geral (V'), e semelhantes) ou um sal destes incluem água e solventes "orgânicos fisiologicamente aceitáveis, por exemplo, etanol, hexano, etil acetato, e semelhantes, mas não são limitados para estes exemplos. Exemplos dos ingrediente ativos do medicamento da presente invenção incluem, por exemplo, hidratos e semelhantes, mas não estão limitados para estes exemplos.

Um exemplo do método para preparação de composto substancialmente opticamente puro de (s)-isômero (III) da presente invenção é mostrado no Esquema 3 mencionado abaixo, e um exemplo do método para preparação do composto S (R) -isômnero “substancialmente opticamente puro (II) da presente invenção é mostrado no Esquema 4 mencionado abaixo (nos esquemas seguintes, R, R', X, e n tên o mesmo significado como aqueles definidos acima). Esquema 3 [Fórmula 15) ”

DEDE DEDO NENE Cy o. Cos Qu A x) A a NO PassoA ANTAS, Passo B wo A ar die loira o” (8) - Composto isômero semi quiral dominante (DX) > (s)- to isbinero Semi! e quiral dominante (DO) seA > " UA oiro A, er, && LX cr, — Cristalização preferencial de om Mo "o im— dt Passo D ao Sa Passo E Passo C AA Sb cotas (8) - Composto isômero semi quiral dominante (V1) (S) - Composto isômero semi quiral dominante (IV) SS se FA ie FE AA Ao EA + Cristais de — Ee aa ao Renan Passo P aos A ie Ora iv a) Solução Mão

Esquema 4 [Fórmula 16) (R)- Composto isômero semi quiral dominante (DO) xs çs 2 AAA ENA E, 1a, E dra a Fe. x) x Do

7. aos qo Passo A k i PassoB O ae 1 2/00aR a CAM o (R) - Composto isômero semi quiral dominante (DX) — (R) - Composto isômero semi quint dominane (VI) se " " Dm o Ala SO NA euasmínos om A te nes =— ao Es E nO E RsoE Paso C Passo D “Ouerena Owens (R)- Composto Isômero semi quiai dominante (VI) (R)- Composto isômero semi quial dominante (IV) SEPN > " & dm WS LEA ad + Cristais de —— SAR Facêmato dominante no E RsoF o Aa eo es [5 a) Solução Mão <Passo A> Este passo é para reagir uma amina (XI) com um benzil halide (X) ou (X') opticamente ativo na presença de uma base para preparar um composto semi. quiral (IX). O composto (X) ou (X') pode ser usado em uma quantidade de 1,0 a 3,0 molar equivalentes, preferivelmente 1,5 a 2,5 molar equivalentes, baseado no composto (XI).

A amina (XI) é um composto conhecido, e o método de preparação destes é descrito em, por exemplo, Documento Patente 2.

Esta reação pode ser realizada em um solvente na presença de uma base. O solvente não é particularmente limitado. Por exemplo, N,N-dimetilformamida, N- metilpirrolidona, dimetil sulfóxido, dioxano, tetrahidrofuran, acetonitrila, propionitrila, e semelhantes pode ser usado só ou em combinação. Preferidos exemplos do solvente incluem tetrahidrofuran, N,N-dimetilformamida, e misturas destes solventes. O volume do solvente não é particularmente limitado. O solvente pode ser usado na quantidade de 2 a 20 vezes (V/P), preferivelmente na quantidade de 5 a 12 vezes (V/P), mais preferivelmente na quantidade de 7 a 10 vezes (V/P), baseado no composto (XI).

Uma base não é particularmente limitada. Por exemplo, hidrato de metal alcalino tal como hidrato de lítio, hidrato de sódio, e hidrato de potássio; metal alcalino, tais como metal lítio, metal sódio, e metal potássio; hidróxidos de metal alcalino, tal como hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, e hidróxido de potássio; carbonato de metal alcalino, tal como carbonato de lítio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, e carbonato de césio; amidas de metal alcalino, tais como lítio diisopropilamida 2 de sódio, diisopropilamida, diisopropilanida de potássio, hexametildisilazida de lítio, hexametildisilazida de sódio, e hexametildisilazida de potássio; metais alcoxialcali, tais como t-butoxisódio, e t-butoxipotássio; e compostos de lítio orgânico, tais ã como n-butil lítio, s-butil lítio, e t-butil lítio podem ser usados. Preferidos exemplos das bases incluem hidrato de metal alcalino, e um exemplo mais preferido é hidrato de sódio. Uma base pode ser usada em uma quantidade de 1,0 a 5,0 molar equivalente, preferivelmente 2,0 a 4,0 molar equivalentes, baseado no composto (XI).

A temperatura da reação é geralmente no intervalo de -80 a 100ºC, preferivelmente -30 a 50ºC, mais preferivelmente -20 a 5ºC. O tempo de reação é geralmente de 5 minutos a 48 horas, preferivelmente de 30 minutos a 24 horas, mais preferivelmente de 3 a 8 horas. Nesta reação, é preferível para o uso de benzil halide (X) ou (X') substancialmente opticamente puro. Por esta reação, racemização parcialmente avançada, e oO composto semi quiral (IX) são obtidos. Este composto semi quiral (IX) pode ser usado para O próximo passo sem qualquer tratamento. Pureza óptica é substancialmente mantida por meio dos Passos B a D, e o composto semi quiral (IV) tendo uma pureza óptica comparável com aquela do composto semi quiral (IX) pode ser obtida. De acordo com o estudo dos inventores da presente invenção, até mesmo se a reação com o benzil halide (X) ou (X') opticamente ativo é realizada neste passo por uso da amina (XI) caracterizado por: KR ser grupo benzil, o composto semi quiral (IX) como oO composto objetivo não pode ser obtido com um rendimento gatisfatório, mas se um grupo alcil C1; é usado como R', o composto semi quiral (IX) desejado pode ser obtido com um rendimento suficiente.

<Passo B> Este passo é para hidrólise do composto semi quiral (IX) para preparar um composto semi quiral (VII).

Esta reação pode ser realizada em um solvente na presença de uma base. Embora, o solvente não seja particularmente limitado, por exemplo, alcoóis, tais como metanol, etanol, propanol, isopropanol, e tert-butanol, acetonitrila, tetrahidrofuran, dimetil sulfóxido, N,N- dimetilformamida, N-metilpirrolidona, dioxano, água, e semelhantes podem ser usados só ou em combinação. Preferidos exemplos do solvente inclui uma combinação de um álcool e água, e mais preferidos exemplos do solvente incluem uma combinação de etanol e água. Embora o volume do solvente não seja particularmente limitado, o solvente pode ser usado em uma quantidade de 10 a 100 vezes (V/P), preferivelmente quantidade de 20 a 50 vezes (V/P), mais preferivelmente quantidade de 30 a 40 vezes (V/P), baseado no composto (IX).

Uma base não é particularmente limitada. Por exemplo, hidróxidos de metal alcalino, tais como hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, e hidróxido de potássio; carbonatos de metal alcalino tais como carbonato de lítio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, e carbonato de césio; hidróxidos de amônia quaternária, tais como hidróxido de tetrametilamônia, hidróxido de tetraetilamônia, hidróxido de tetrapropilamônia, hidróxido de tetrabutilamônia, e hidróxido de benziltrimetilamônia (Triton B), e semelhantes podem ser usados. Preferidos exemplos de uma base incluem hidróxidos metal alcalino, e mais preferidos exemplos incluem hidróxido de sódio. Uma base pode preferivelmente ser usada em uma quantidade de 1,0 a 5,0 molares equivalentes, mais preferivelmente de 2,0 a 3,0 molares equivalentes, baseado no composto (IX).

A temperatura da reação é geralmente no intervalo de O a 100ºC, preferivelmente de 30 a 80ºC, mais preferivelmente de 40 a 60ºC. O tempo de reação é geralmente preferivelmente de 5 minutos a 48 horas, mais preferivelmente de 30 minutos a 12 horas, mais preferivelmente de 2 à 5 horas.

<Passo C>

Este passo é para condensar o composto semi quiral (VII) e um álcool (VIII) para preparar um composto semi quiral (VI). O álcool (VIII) pode ser usado na quantidade de 0,8 a 2,.0 molares equivalentes, preferivelmente de 1,0

Ss a 1,2 molares equivalentes, baseado no composto (VII). Esta reação pode ser realizada pelo uso de um agente de condensação em um solvente na presença OU ausência de uma base.

A reação pode ser realizada na presença de um acelerador de condensação.

Embora O To solvente não seja particularmente limitado, por exemplo, hidrocarbonos halogenados, tais como 1,2-dicloroetano, clorofórmio, e diclorometano; ésteres de ácido acético, tais como etil acetato, e isopropil acetato; hidrocarbonos aromáticos, tais como tolueno, e benzeno; tetrahidrofuran, dioxano, acetonitrila, propionitrila, e semelhantes podem ser usados.

Preferidos exemplos do solvente incluem hidrocarbonos halogenados, e mais preferidos exemplos incluem dicloroetano.

Embora o volume do solvente não seja particularmente limitado, o solvente pode ser usado em uma quantidade de 5 a 100 vezes (V/P), preferivelmente quantidade de 10 a 20 (V/P), baseado no composto (VII). A base não é particularmente limitada.

Por exemplo, bases orgânicas, tais como piridina, 4- dimetilaminopiridina (DMAP), colidina, lutidina, 1,8- diazabiciclo[S5.4.0]undec-7-ene (DBU), 1,5- diazabiciclo([4.3.0]non-5-ene (DBN), 1,4- diazabiciclo([2.2.2]octano (DABCO), trietilamina, diisopropiletilamina, diisopropilpentilamina, e trimetilamina; hidrato de metal alcalino, tais como hidrato de lítio, hidrato de sódio, e hidrato de potássio; hidróxidos de metal alcalino, tais como hidróxido de as lítio, hidróxido de sódio, e hidróxido de potássio; carbonatos de metal alcalino, tais como carbonato de lítio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, e carbonato de césio; bicarbonatos de metal alcalino, tais S como hidrogenocarbonato de sódio, e sódio de potássio, e semelhantes podem ser usados.

Embora o acelerador de condensação não seja particularmente limitado, DMAP, 1-hidroxi-7- azabenzotriazol (HOAt), l1-hidroxibenzotriazol (HOBt), 3,4- dihidro-3-hidroxi-4-0x0-1,2,3-benzotriazine (HODhbt), N- hidroxi-5-norbornene-2,3-dicarboxiimida (HONB), pentafluorophenol (HOPfp), N-hidroxiftalimida (HOPht), N- hidroxisucinimida (HOSu), e semelhantes podem ser usados. Enquanto o acelerador de condensação DMAP é preferido. O acelerador de condensação pode ser usado em uma quantidade de 0,001 a 1,0 molar equivalente, preferivelmente 0,05 à 0,5 molar equivalente, baseado no composto (VII). ' Embora o agente de condensação não seja particularmente limitado, Diciclohexilcarbodi-imida (DCC), diisopropilcarbodi-imida (DIPCI), N-(3- dimetilaminopropil)-N'-etil-carbodi-imida (geralmente chamada de carbodi-imida solúvel em água "water soluble carbodi-imida - WSCI"), WSC-HCl, e semelhantes podem ser usados. Enquanto o agente de condensação WSC-HCl é preferido. O agente de condensação pode ser usado em uma quantidade de 1,0 a 3,0 molares equivalentes, preferivelmente de 1,0 a 1,2 molares equivalentes, baseado no composto (VII).

A temperatura da reação é geralmente 0 a 100ºC, preferivelmente de O a 80ºC, mais preferivelmente de 10 a 30ºC. O tempo de reação é geralmente preferivelmente de 5 minutos a 48 horas, mais preferivelmente de 30 minutos a 24 horas, mais preferivelmente de 8 a 16 horas. <Passo D> Este passo é para oxidar o átomo de enxofre do composto semi quiral (VI) para preparar o composto semi quiral (IV).

Como o método de oxidação, métodos usuais para converter átomo de enxofre dentro do grupo sulfonil podem ser usados. Como oO agente de oxidação, por exemplo, peróxido de hidrogênio aquoso como usado na reação de oxidação usando uma quantidade catalítica de tungstato de sódio, dicloreto dióxido de molibdênio, ou pentacloreto de tântalo, perborato de sódio, Oxona (marca registrada), periodato de sódio, periodato de potássio, ácido meta- cloroperbenzóico (mCPBA), clorocromato de piridínio (PCC), dicromato piridínio (PDC), N-clorosucinimida (NCS), N- bromosucinimida (NBS), N-iodosucinimida (NIS), iodina, bromina, e semelhantes podem ser usados. Um preferido agente de oxidação é uma combinação de pentacloreto de tântalo e peróxido de hidrogênio aquoso. Pentacloreto de Tântalo pode ser usado em uma quantidade de 0,001 a 1,0 molar equivalente, preferivelmente de 0,05 a 0,5 molar equivalente, baseado no composto (VI). Peróxido de hidrogênio aquoso pode ser usado em uma quantidade de 1,0 a 10 molar equivalentes, preferivelmente de 4,0 a 6,0 molar equivalentes, baseado no composto (VI).

o solvente "não é particularmente limitado. Exemplos incluem, por exemplo, água, alcoói, tais como metanol, etanol, isopropanol e tert-butanol, acetonitrila, acetona, tetrahidrofuran, diclorometano, clorofórmioe, 1,2-dicloroetano, tetracloreto de carbono, N,N-

dimetilformamida, ácido acético e semelhantes.

Preferidos exemplos do solvente incluem alcoóis, e o exemplo mais preferido inclui 2-propanol.

Embora o volume do solvente não seja particularmente limitado, o solvente pode ser usado em uma quantidade de 5 a 100 vezes (V/P), preferivelmente quantidade de 10 a 30 vezes (V/P), baseado no composto (VI). A temperatura da reação pode ser geralmente de 0 a 100ºC, preferivelmente de 10 a 60ºC, mais preferivelmente de 10 a 30º.

O tempo de reação é geralmente preferivelmente de 5 minutos a 48 horas, mais preferivelmente de 30 minutos a 24 horas, mais preferivelmente de 8 a 16 horas. <Passo E> Este passo é para preferencialmente cristalizar cristais de racemato dominante de pureza óptica baixa do composto semi quiral (IV) para preparar o isômero óptico(V) ou (V') com pureza óptica alta.

Este passo é para cristalizar cristais de racemato dominante em um solvente contendo o composto semi quiral (IV), e então para remover os resultantes cristais de racemato dominante para ter o isômero óptico (V) ou (V') com pureza óptica alta partindo da solução mãe.

Exemplos do solvente incluem alcoóis, tais como metanol, etanol, n-propanol, e isopropanol.

Alcoóis tendo uma cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a 6 átomos de carbono são preferidos, e etanol e isopropanol são particularmente preferidos.

A quantidade do solvente é uma quantidade de 2 a 20 vezes (V/P), preferivelmente quantidade de 4 a 10 vezes (V/P), mais preferivelmente quantidade de 5 a 8 vezes (V/P), baseado no composto (IV).

A cristalização pode ser realizada por dissolução do composto semi quiral (IV) no solvente, e agitar a solução a 10 a 40ºC, preferivelmente de 15 a 20ºC, por 30 minutos por dois dias, preferivelmente de 15 a 24 horas.

Se for desejado aumentar o rendimento dos cristais, a agitação pode ser então realizada por 30 minutos a 24 horas, preferivelmente de 2 a 5 horas, sendo resfriada a solução para 10 a 10ºC, preferivelmente de -5 a 5ºC.

Os cristais racemato "dominante podem ser cristais consistindo absolutamente de racemato, ou eles podem geralmente ser cristais de pureza óptica baixa (cerca de O a 40%ee) contendo cerca de 60 a 100% de componentes de racemato.

Este passo pode ser realizado separadamente na presença de sementes de cristais preparados do racemato.

As sementes de cristais do racemato usadas neste processo são cristais do racemato do composto representado pela fórmula geral (IV). Exemplos incluemy por exemplo, cristais de racemato de trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxil]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil]ciclohexil ácido de éster acético benzil.

Adicionalmente, os cristais de racemato dominante obtidos neste passo E podem ser usados como as sementes de cristais de racemato sen qualquer tratamento.

O cristal separadamente obtido por preparação de racemato do composto "representado pela fórmula geral (IV) e cristalização sucessiva também pode ser usada com as sementes de cristais do racemato.

Tal racemato do composto representado pela fórmula geral (IV) pode ser preparado por, por exemplo, o método descrito abaixo. [Fórmula 17] “ s DNA A AA SE RACH2)rOH o So 2 om) Re a qua Pa FA us Ea O ras Das -CO-CHoh-R ww Racemato (IV) Nesta reação, o composto racemato (1) e um álcool (VIII) são condensados para preparar Oo racemato (IV). O álcool (VIII) pode ser usado em uma quantidade de 0,8 a 2,0 molar equivalentes, preferivelmente de 1,0 a 1,2 molar equivalentes, baseado no composto do racemato (1). Esta reação pode ser realizada em um solvente usando um agente de condensação na presença ou ausência de uma base.

A reação pode ser realizada na presença de um acelerador de condensação. o solvente não é particularmente limitado.

Por exemplo, hidrocarbonos halogenados, tais como 1,2-dicloroetano, clorofórmio, e diclorometano; ésteres de ácido acético, tais como etil acetato, e isopropil acetato; hidrocarbonos aromáticos, tais como tolueno, e benzeno; tetrahidrofuran, dioxano, acetonitrila, propionitrilay e semelhantes podem ser usados.

Preferidos exemplos do solvente incluem halogenados, hidrocarbonos halogenados, e o mais preferido exemplo inclui diclorometano.

Embora o volume do solvente não seja particularmente limitado, o solvente pode ser usado em uma quantidade de 5 a 100 vezes (V/P), preferivelmente quantidade de 10 à 20 vezes (V/P), baseado no composto racemato (1). A base não é particularmente limitada.

Por exemplo,

bases orgânicas, tais como piridina, 4- dimetilaminopiridina (DMAP), colidine, lutidina, 1,68- diazabiciclo[5.4.0]undec-7-ene (DBU), 1,5" diazabiciclo[4.3.0]non-5-ene (DBN), 2,4- Ss diazabiciclo[2.2.2]octano (DABCO), trietilamina, diisopropiletilamina, diisopropilpentilamina, e trimetilamina; hidrato de metal alcalino, tais como lítio hidreto, hidrato de sódio, e hidrato de potássio; hidróxidos de metal alcalino, tais como hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, e hidróxido de potássio; carbonatos de metal alcalino, tais como carbonato de lítio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, e carbonato de césio; bicarbonatos de metal alcalino, tais como hidrogeno carbonato de sódio, e hidrogeno carbonato de potássio, e semelhantes podem ser usados.

Embora o acelerador de condensação não seja particularmente limitado, DMAP, 1-hidroxi-7- azabenzotriazol (HOAt), l-hidroxibenzotriazol (HOBt), 3,4- dihidro-3-hidroxi-4-0x0-1,2,3-benzotriazine (HODhbt), N- hidroxi-5-norbornene-2,3-dicarboxiimida (HONB), pentafluorophenol (HOPfp), N-hidroxiftalimida (HOPht), N- hidroxisucinimida (HOSu), e semelhantes podem ser usados. Enquanto o acelerador de condensação DMAP é preferido. O acelerador de condensação pode ser usado em uma quantidade de 0,001 a 1,0 molar equivalente, preferivelmente de 0,05 a 0,5 molar equivalente, baseado no composto racemato (1).

Embora o agente de condensação não seja particularmente limitado, diciclohexilcarbodi-imida (DCC), diisopropilcarbodi-imida (DIPCI), N-(3- dimetilaminopropil)-N'-etil-carbodi-imida (comumente chamado de carbodi-imida solúvel em água "water soluble carbodi-imida - WSCI), WSC-HCl, e semelhantes podem ser usados. Porquanto o agente de condensação WSC-HCl é preferido. O agente de condensação pode ser usado em uma quantidade de 1,0 a So molar equivalentes, preferivelmente de 1,0 a 1,2 molar equivalentes, baseado no composto racemato (1).

A temperatura da reação é geralmente de O a 100ºC, preferivelmente de O a 80ºC, mais preferivelmente 10 a 30ºC. O tempo de reação é geralmente preferivelmente de 5 minutos a 48 horas, mais preferivelmente 30 minutos a 24 horas, o mais preferivelmente de 8 a 16 horas.

A cristalização de racemato do composto representado pela fórmula geral (IV) (preparação das sementes de cristais do racemato) pode ser realizada nas 25 condições similares para estes aplicados como cristalização preferencial dos cristais de racemato dominante do composto semi quiral (IV). Mais especificamente, o composto racemato (IV) pode ser dissolvido em um solvente, e a solução pode ser agitada a 10 à 40ºC, preferivelmente de 15 à 20ºC, por sO minutos a dois dias, preferivelmente 15 a 24 horas. se for desejado para aumentar o rendimento dos cristais, a agitação pode ser realizada por mais 30 minutos a 24 horas, preferivelmente de 2 a 5 horas, com a solução resfriada a -10 a 10ºC, preferivelmente de -5 a 5ºC. Exemplos do solvente inclui alcoóis, tais como metanol, etanol, n-propanol, e isopropanol. Alcoóis tendo uma cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a 6 átomos de carbono são preferidos, e etanol e isopropanol são particularmente preferidos. A quantidade do solvente é uma quantidade de 2 a 20 vezes (V/P), preferivelmente quantidade de 4 a 10 vezes (V/P), mais preferivelmente quantidade de 5 a 8 vezes (V/P), baseado no composto racemato (IV). <Passo F> Este passo é para realizar a desproteção do composto (V) ou (V') de pureza óptica alta para preparar composto de (s)-isômero (III) ou composto (R)-isômero (II) substancialmente opticamente puro.

Esta reação pode ser realizada por redução catalítica usando um metal catalisador e uma fonte de hidrogênio em um solvente, ou uma reação de hidrólise usando uma base em um solvente.

Quando a desproteção é realizada pela redução catalítica, alcoóis, tais como metanol, etanol, isopropanol e tert-butanol; éteres, tais como éter dietil, tetrahidrofuran e dioxano; ácido acético ésteres tais como etil acetato, e isopropil acetato; ácido acético; água, e semelhantes podem ser usados como um solvente.

Como solvente, alcoóis são preferidos, e etanol é o mais preferido.

O solvente pode ser usado em uma quantidade de 5 a 30 vezes (V/P), preferivelmente quantidade de 5 a 15 vezes (V/P), baseado no composto (V) ou (V'). = Como fonte de hidrogênio, por exemplo, hidrogênio, ciclohexadieno, ácido fórmico, formato de amônia, e semelhantes podem ser usados.

Como fonte de hidrogênio, hidrogênio é preferido.

Como o metal catalisador, paládio/carbono, negro de paládio, níquel Raney, dióxido de platina, negro de platina, e semelhantes podem ser usados.

Como metal catalisador, paládio/carbono são preferido.

Paládio/carbono pode ser usado em uma quantidade de 0,001 a 0.5 vezes (W/W), preferivelmente na quantidade de 0,05 a 0,2 vezes (W/W), baseado no composto (V) ou (V') em termos da quantidade de 10% Pd-C (molhado).

A redução catalítica pode geralmente ser realizada no intervalo de O a 100ºC, preferivelmente de 10 a 60ºC, mais preferivelmente de 10 a 30ºC. O tempo de reação é geralmente preferivelmente de 5 minutos a 24 horas, mais preferivelmente de 30 minutos a 16 horas, e mais preferivelmente de 1 a 6 horas.

Quando a desproteção é realizada pela reação de hidrólise, por exemplo, alcoóis, tais como metanol, etanol, propanol, 2-propanol, e t-butanol, acetonitrila, propionitrila, tetrahidrofuran, dimetil sulfóxido, N,N- dimetilformamida, N-metilpirrolidona, dioxano, água, e semelhantes podem ser usados só ou em combinação, embora o solvente não seja particularmente limitado. Como a base, por exemplo, hidróxidos de metal alcalino, tais como hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, e hidróxido de potássio; carbonatos de metal alcalino tais como carbonato de lítio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, e carbonato de césio; hidróxidos de amônia quaternária, tais como hidróxido de tetrametilamônia, hidróxido de tetraetilamônia, hidróxido de tetrapropilamônia, hidróxido de tetrabutilamônia, e hidróxido de benziltrimetilamônia (Triton B), e semelhantes podem ser usados, embora a base não seja particularmente limitada.

O benzil halide opticamente ativo (X) ou (X') podem ser sintetizados por, por exemplo, o método descrito abaixo.

4a [Fórmula 18) HO Xe Halogenação — Led LO, (XI) (x) ou HO. x à Halogenação FC 'CF3 FaC Fa (XI) (X') Esta reação consiste do passo de halogenação opticamente ativa de 1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil] etanol (XII) ou (XIT') na presença de um agente de halogenação para altamente eficaz preparar l-halo-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etano (X) ou (X') opticamente ativo sem substancialmente reduzir a pureza óptica.

Exemplos dos agentes de halogenação usados para esta reação incluem agentes de cloração, tais como tionil cloreto, tricloreto de fósforo, pentacloreto de fósforo e oxicloreto de fósforo; agentes de bromação, tais como tribrometo de fósforo, tribrometo de fósforo e brometo de hidrogênio (30% solução em ácido acético), tribrometo de fósforo e piridina, N-bromosucinimida e sulfeto de metil, N-bromosucinimida e trifenilfosfina, 1,2-dibromo-1,1,2,2- tetracloroetano e trifenilfosfina, brometo de bromodimetilsulfônio, perbrometo de brometopiridínio e hexametildisilane, bromina e trifenilfosfina, bromina e tributilfosfina, bromina e metil sulfeto, brometo de zinco e trifenilfosfina e dimetil azodicarboxilate, brometo de lítio e clorotrimetilsilane, brometo 1ítio e trifluoroacético anidreto, bromotrimetilsilane, carbono s tetrabrometo e trifeniltostina, e brometo de tionil; e agentes de ionização, tais como iodeto de hidrogênio, e iodeto de potássio e ácido fosfórico. Quando o agente de halogenação é um agente de bromação, tribrometo de fósforo e brometo de hidrogênio (30% solução em ácido acético), 1,2-dibromo-1,1,2,2-tetracloroetano e trifenilfosfina, e N-bromosucinimida e metil sulfeto são preferidos.

A reação usando tribrometo de fósforo e brometo de hidrogênio como o agente de halogenação, e a reação usando 1,2-dibromo-1,1,2,2-tetracloroetano e trifenilfosfina como o agente de halogenação serão, em particular, especificamente explicados abaixo. <Reação usando tribrometo de fósforo e brometo de hidrogênio (30% solução em ácido acético) como agente de halogenação> Quando tribrometo de fósforo e brometo de hidrogênio (30% solução em ácido acético) são usados como o agente de halogenação, tribrometo de fósforo é usado em uma quantidade de 0,3 a 2,0 molar equivalentes, preferivelmente de 0,4 a 0,6 molar equivalente, baseado no feniletanol (XII) ou (XII'). Brometo de hidrogênio é usado em uma quantidade de 0,7 a 3,0 molar equivalentes, preferivelmente de 0,8 a 1,2 molar equivalentes, baseado no feniletanol (XII) ou (XIT').

Esta reação pode ser realizada na presença ou ausência de um solvente. Quando a reação é realizada na presença de um solvente, o solvente a ser usado não é particularmente limitado tanto quanto o solvente que não participa na reação.

Exemplos incluem, por exemplo, hidrocarbonos aromáticos, tais como benzeno, tolueno, xileno, mesitileno, clorobenzeno, 1,2-diclorobenzeno, e Ss nitrobenzeno; hidrocarbonos alifáticos halogenados, tais como n-pentano, n-hexano, ciclohexano, n-heptano, n- octano, e n-decano; halogenados de hidrocarbonos halogenados, tais como cloreto de metileno, 1,2- dicloroetano, clorofórmio, e tetracloreto de carbono, e semelhantes.

Dentre estes, benzeno, tolueno, xileno, metileno cloreto, 1,2-dicloroetano, n-pentano, n-hexano, e n-heptano são preferidos, e especialmente, tolueno, cloreto de metileno, e n-heptano são mais preferidos.

Estes solventes podem ser usados só ou em combinação, e a quantidade do solvente a ser usado não é particularmente limitada.

A temperatura da reação pode ser geralmente no intervalo de -50 a 150ºC, mais preferivelmente de -20 a 80ºC, mais preferivelmente de O a 15ºC.

Geralmente, o tempo de reação é preferivelmente de 5 minutos a 48 horas, mais preferivelmente de 30 minutos a 36 horas, mais preferivelmente de 12 a 24 horas. <Reação usando 1,2-dibromo-l,1,2,2-tetracloroetano e trifenilfosfina como agente de halogenação> Quando 1,2-dibromo-1,1,2,2-tetracloroetano e trifenilfosfina são usados como o agente de halogenação, 1,2-dibromo-1,1,2,2-tetracloroetano é usado em uma quantidade de 1,0 a 3.0 molar equivalentes, preferivelmente de 1,0 a 1,2 molar equivalentes, baseado no feniletanol (XII) ou (XII'). Trifenilfosfina é usado em uma quantidade de 1,0 a 3,0 molar equivalentes,

preferivelmente de 1,0 a 1,2 molar equivalentes, baseado no feniletanol (XII) ou (XII'). Esta reação pode ser realizada na presença de um solvente.

O solvente a ser usado não é particularmente limitado tanto quanto o solvente que não participa na reação.

Exemplos incluemy por exemplo, hidrocarbonos aromáticos, tais como benzeno, tolueno, xileno, mesitileno, clorobenzeno, 1,2-diclorobenzeno, e nitrobenzeno; hidrocarbonos alifáticos halogenados tais como n-pentano, n-hexano, ciclohexano, n-heptano, n- octano, e n-decano; hidrocarbonos halogenados, tais como metileno cloreto, 1,2-dicloroetano, clorofórmio, e carbono tetracloreto, e semelhantes.

Preferidos “exemplos do solvente incluem hidrocarbonos aromáticos ou hidrocarbonos 45 halogenados, mais preferidos exemplos incluem benzeno, tolueno, xileno, metileno cloreto, e 1,2-dicloroetano, e particularmente "preferidos exemplos incluem tolueno, metileno cloreto, e 1,2-dicloroetano.

Estes solventes podem ser usados só ou em combinação.

Embora o volume do solvente não seja particularmente limitado, o solvente pode ser usado em uma quantidade de 1 a 10 vezes (V/P), preferivelmente a quantidade de 2 a 4 vezes (V/P), baseado no feniletanol (XII) ou (XII'). A temperatura da reação pode ser geralmente no intervalo de -50 a 150ºC, mais preferivelmente de -20 a 80ºC, mais preferivelmente de O a 30ºC.

Geralmente, o tempo de reação é preferivelmente 5 minutos a 48 horas, mais preferivelmente de 30 minutos a 36 horas, mais preferivelmente de 1 a 2 horas.

O composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes têm ação de supressão contra expressão PCSK9 mRNA como especificamente demonstrado nos exemplos descritos abaixo. A substância também tem ação de redução em quantidade de proteína PCSK9 e ação de aumentar na quantidade de Receptor LDL, e tem uma ação de Ss redução de colesterol LDL do sangue in vivo.

Embora a presente invenção não seja limitada para a estimação seguinte, é estimado que o composto de (s)- isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes suprime produção da proteína PCSK9, assim suprimindo decomposição de Receptor LDL e aumento da quantidade de Receptor LDL, e como um resultado, a substância promove incorporação de LDLs do sangue dentro do Receptor LDL. É adicionalmente estimado que tal promoção da incorporação de LDLs do sangue dentro do Receptor LDL constitui um dos fatores para exibir a ação de redução no valor do colesterol LDL do sangue.

Portanto, um medicamento e uma composição farmacêutica contendo o composto de (s)-isômero (III), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo pode ser usado como um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de LDLemia de hiper- colesterol como também tais doenças como dislipidemia (hiperlipidemia), arteriosclerose, aterosclerose, doença vascular periférica, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar, desordens funcionais cardiovasculares, angina pectoris, esquemia, esquemia cardíaca, trombose, infarto do miocárdio, desordens de reperfusão, restenose de angioplastia, e hipertensão.

Adicionalmente, desde que é conhecido que proteínas convertases (PCs) incluindo PCSK9 são enzimas envolvidas no começo, progresso, agravamento e semelhantes de câncer,

Ao obesidade, diabetes, Doença de Alzheimer, e doenças de infecções virais, o uso de um medicamento e uma composição farmacêutica compreendendo o composto de (s)-isômero (IIT), ou um sal destes, ou um solvato destes como um ingrediente ativo pode ser esperado como um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico das doenças acima mencionadas em que PCs são envolvidos.

O composto racemato (I) e o composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44 (trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio)etoxi] pirimidin-2-1il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil )ácido acético) tem ação de supressão contra expressão HMG-CoA redutase mRNA, como especificamente demonstrado nos exemplos descritos abaixo.

Portanto, o uso do composto racemato (1), o composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, ou um enantiômero destes, ou um sal destes, ou um solvato destes também pode ser esperado como um medicamento para tratamento profilático e/ou terapêutico de uma doença resultante de expressão HMG-CoA redutase mRNA (por exemplo, doenças acompanhadas de produção de isoprenóides (ácido pirofosfórico de farnesilo, ácido geranilgeranilpirofosfórico, e semelhantes) que realiza modificação de pós translacional de várias proteínas, tais como Ras, Rho e Rac com lipídico, especificamente, inflamação, câncer, Doença de Alzheimer , oOsteoporosis, hipertrofia prostática, doenças glomerulares, verminação, infecção de vírus, psoríases, degeneração macular, e semelhantes). Como o medicamento da presente invenção, o ingrediente ativo acima mencionado, por si só, pode ser administrado. Preferivelmente, o ingrediente ativo pode ser administrado como uma composição farmacêutica por administração oral ou parenteral produzido por métodos bem conhecidos para os experientes na matéria. Exemplos de composição farmacêutica adequada para administração oral incluem, por exemplo, tabletes, cápsulas, pó, grânulo subutilizados, grânulo, soluções, xarope, e semelhantes, e exemplos de composições farmacêuticas adequadas para administração parenteral incluem, por exemplo, injeções, tais como injeções intravenosas e intravenoso intramuscular, infusão por goteamento, supositórios, inalantes, colírios, gotas nasais, preparações transdermais, preparações transmucosais e semelhantes, embora, a composição farmacêutica não seja limitada para estes exemplos.

A composição farmacêutica acima mencionada pode ser preparada por adição de aditivos farmacologicamente e farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos dos aditivos farmacologicamente e farmaceuticamente aceitáveis incluem, por exemplo, excipientes, adesivos, enchedores, agentes desintegrantes, surfactantes, lubrificantes, agentes dispersantes, agentes tampão, preservativos, corrigentes, perfumes, agentes de cobertura, diluentes, e semelhantes, mas não são limitados para estes exemplos.

A dose do medicamento da presente invenção não é particularmente limitada, e a dose pode ser adequadamente escolhida dependendo do tipo de uma doença, propósito da administração, ásto é, o uso profilático ou uso terapêutico, um tipo do ingrediente ativo, e semelhantes, e a dose também pode ser adequadamente aumentada Ou diminuída dependendo de vários fatores que geralmente s1 poderia ser levado em consideração, tais como peso e idade de um paciente, sintomas, e modo de administração.

Por exemplo, para administração oral, o medicamento pode ser usado em uma quantidade no intervalo de cerca de 0,1 a 500 mg em termos de peso do ingrediente ativo como uma dose diária para um adulto.

A dose pode ser adequadamente escolhida por experientes na matéria, e não é limitada dentro do intervalo acima mencionado.

Exemplos A presente invenção será adicionalmente explicada com referência para exemplos.

Porém, a presente invenção não é limitada para estes exemplos.

As abreviações usadas nos exemplos seguintes têm os significados seguintes. s: Simples d: dobro t; Tripio q: Quarto m: Múltiplo br: Completo J: Ligação constante Hz: Hertz CDCl;3;: Clorofórmio deuterado H-NMR: Ressonância magnética de nuclear de próton IR: Espectro de absorção infravermelho Exemplo 1: Estabelecimento de método para preparação de composto de (s) - isômero (III) substancialmente opticamente puro Exemplo 1-1: Resolução Óptica usando coluna quiral Foi revelado que, quando as condições seguintes foram aplicadas, cada enantiômero pode ser separado do composto racemato (I) preparado de acordo com o método descrito no Documento Patente 2 (Publicação de Patente Internacional WO2008/129951), Exemplo 45, e que as condições foram usadas para medida da pureza óptica do composto de (s)-isômero (III) e o composto (R)-isômero Ss (II) por análise quiral HPLC.

A presente invenção assim provém um método para medida de pureza óptica do composto racemato (1), o composto de (s)-isômero (III), ou oO composto de (R)-isômero (II), ou um sal destes, ou um solvato destes usando as condições de análise quiral HPLC seguinte (especialmente a combinação da coluna e fase móvel mencionadas abaixo). Coluna: QUIRALCEL OD-H Fase móvel: hexano/etanol/TFA = 90/10/0,1 Razão de fluxo: 1,0 mL/min Temperatura da coluna: 40ºC Comprimento de onda detectado: 242 nm Tempo de retenção: primeiro pico: 21,3 minutos ((R) - isômero), segundo pico: 23,7 minutos ((S)-isômero) Porém, foi encontrado também que, porque o solvente da fase móvel incluído nas condições acima mencionadas continha EtOH e TFA, eles reagiram com ácido carboxílico do composto racemato (I) e/ou cada enantiômero para gerar uma decomposição do produto (composto de éster etil). Então, embora as condições de resolução ótica usada da coluna quiral sob a acima mencionada tenha sido utilizada para medida de pureza óptica (análise quiral HPLC), não foi adequada para preparação de cada um dos enant iômeros substancialmente opticamente puro, especialmente para preparação em uma larga escala.

Exemplo 1-2: Método para preparação do composto de (s) -isômero substancialmente opticamente puro (III) por

5º cristalização preferencial.

O esboço do método para preparação de composto de (s) -isômero (III) substancialmente opticamente puro por cristalização preferencial realizada pelos inventores da presente invenção é mostrada abaixo como Esquema 5.

A configuração absoluta de cada composto foi determinada da configuração absoluta de (R)-l-bromo-l- [3,5-bis (trifluorometil)fenil]etano confirmada no passo 1.

Adicionalmente, pureza óptica do composto de (s)- isômero (111) ((S) -tcrans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil ácido acético) obtida no passo 6 foi determinada por análise quiral HPLC nas condições descritas na seção 1-1 acima.

Adicionalmente, pureza óptica de 1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil] etano obtido no passo 1, e trans-(4-[((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5s- [2- (met il sulfonil)etoxi]pirimidin-2-il]jamino)metil] -4- (trifluorometil) fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil )ácido acético de éster benzil obtido nos Passos 4 e 5 foram determinados por análise quiral HPLC nas condições seguintes. A presente invenção assim também provém um método para medida da pureza óptica de cada composto, ou um sal destes, ou um solvato destes, que usam as condições de análise quiral HPLC seguintes (especialmente a combinação da coluna seguinte e a fase móvel seguinte).

Condições de Análise Quiral HPLC para 1-bromo-1- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etano Coluna: QUIRALPAK AS-RH Fase móvel: etanol/água = 60/40

Razão de fluxo: 0,5 mL/minuto Temperatura da coluna: 25ºC Comprimento de onda detectado: 220 nm Tempo de retenção: primeiro pico: 21,8 minuto ((R)- > isômero), segundo pico: 26,0 minuto ((S)-isômero) Condições de análise de Quiral HPLC para trans-(4- [((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]lpirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil] ciclohexil ácido acético éster benzil Coluna: QUIRALCEL OD-H Fase móvel: hexano/etanol = 80/20 Razão de fluxo: 1,0 mL/min Temperatura da coluna: 40ºC Comprimento de onda detectado: 242 nm Tempo de retenção: primeiro pico: 11,3 minutos ((R) -isômero), segundo pico: 13,0 minutos ((S)-isômero) Esquema 5 [Fórmula 19)

“EN |, Gm A, ato PS PN <T ATO . .. 1 COZEt Ma Ts Br nº CF; fa laio ain id, SA cos D) e: (9 - Composta istrero semi quinl dominante sro AN:

Ú Ne CF, do o, CcFs Er AOS mt SA, Passo 3 no Fa Passo 4 os PPA “O, “Oucoso (6) - Composto isômero serei quisal dominante (5) (8) - Composto istmero semi não Pa quiral dominante (6) 09 Loto OFs + Sementes de cristais (preparadas no passo 7) O + Cristais de racemato dominante — nO CF Passo 5 O “, CO2Bn Composto opticamente ativo (7) (Solução Mão)

SEEN

CAL de LA bro —— & Ea Passo6 no CFa (1) (No esquema, Et representa grupo etil, e Bn representa grupo benzil .) Passo 1: Preparação de (R) - 1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano (R) -1-Bromo-1- [3,5-bis (trifluorometil)fenil]etano foi preparado pelo método descrito em 1-(a) mencionado abaixo, e a configuração absoluta destes foi confirmada como segue. Especificamente, a confirmação foi conduzida por converter o resultante (R) -1-bromo-1- [3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano em (8) -1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etilamina, e comparando o específica sinal de rotação realmente medida destes com aquele de um produto padrão comercialmente disponível (S)- 1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etilamina de configuração absoluta conhecida.

Adicionalmente, (R) -1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano foi também preparado pelo método descrito em 1- (b) mencionado abaixo. 1-(a): Preparação de (R) -1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano (1) Debaixo de uma atmosfera de argônio, 1,2-dibromo- 1,1,2,2-tetracloroetano (7,57 g, 23,2 mmol) foi dissolvido em tolueno (12,5 mL), à solução foi acrescentado trifenilfosfina (6,1 g, 23,2 mmol) a 0ºC, e a mistura foi agitada por 30 minutos.

Esta mistura da reação foi acrescentada a conta gota com uma solução de (S)-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etanol (1) (5,0 g, 19,4 mmol, >99,5%ee) em tolueno (12m5 mL) a 0ºC por mais de 10 minutos ou mais, e então a mistura foi aquecida para a temperatura ambiente, e agitada por 1 hora na mesma temperatura.

A mistura da reação foi acrescentada com n- hexano (25 mL), e a mistura foi filtrada através de celite.

O filtrado foi sucessivamente lavado com água, hidrogenocarbonato de sódio saturado aquoso, e salmoura saturada, secada em cima de sulfato de sódio, e então evaporada sob pressão reduzida.

O resíduo resultante foi destilado sob pressão reduzida (56ºC, 0,7 mmHg) para obter 5,52 g de (R) -1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano (2) como óleo incolor (rendimento: 88,6%). Análise Quiral HPLC: pureza óptica >99,5%ee (pico principal: primeiro pico), razão de conversão 299% fon” +59.1 (Cc = 1,03, CHCL) H-NMR (CDCl;) 5: 2,08 (3H, d, J=7.1Hz2), 5,21 (1H, q, J=7,1Hz2), 7,81 (1H, s), 7,87 (2H, s) Confirmação de configuração absoluta de (R)-l- bromo-1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etano Uma solução de (R) -1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano (2) (106 mg, 0,336 mmol, 99%ee) obtido em 1-(a) mencionada acima em N,N- dimetilformamida (1 mL) foi acrescentada com azida de sódio (64,4 mg, 0,990 mmol), e a mistura foi agitada a -18 a -15ºC por 4 horas.

A solução da reação foi extraída com etil acetato/n-hexano (1:1) e água, a camada orgânica foi lavada com salmoura saturada, secada em cima de sódio sulfato anidro, e então concentrada sob pressão reduzida para obter 111,5 mg de 1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil azida (produto bruto: 111,5 mg). 1H-NMR (CDCl;) 5: 1,61 (3H, d, J=6,8H2), 4,79 (1H, q, J=6,8H4), 7,78 (2H; &), 7,84 (1H, s) O resultante 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil azida (produto bruto: 111,5 mg) foi dissolvido em metanol (6 mL) e a solução foi acrescentada com fibroína de paládio (18 mg) por substituição de hidrogênio, e então a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora.

A mistura da reação foi filtrada através de Celite, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel (clorofórmio:metanol = 50:1 a 5:1) para obter

77,6 mg de 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etilamina como óleo incolor (rendimento: 91%, para 2 passos).

H-NMR (CDCl;) 5: 1.42 (3H, d, J=6.8H2z), 1.58 (2H, br-s), 4.30 (1H, q, J=6.8H2), 7.75 (1H, s), 7.85 (2H, s) Ss Rotação Específica da resultante 1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etilamina foi como segue.

[oln* -15.9 (o = 1.31, CHCL)

[0118] Rotação Específica de um produto padrão comercialmente disponível (1(8) -1-[3, 5- bis(trifluorometil)fenil]etilamina (Central Glass Co., Ltd., Lot. 0102000, pureza óptica: 99%ee)) foi como segue.

[alr? -15.9 (c = 1.15, CHCl;) A medida específica do sinal de rotação foi encontrado para estar conforme com aquele do produto padrão comercialmente disponível, e adequadamente, foi confirmado que o resultante 1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etilamina foi o (S) - isômero. Adicionalmente, porque esta amina foi obtida de 1-bromo-1- [3,5-bis (trifluorometil)fenil]etano através de uma reação de substituição nucleofílica de íon de azida, foi confirmado que 1-bromo-1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etano obtido em 1-(a) mencionado acima foi o (R)-isômero.

1-(b): Preparação de (R) -1-bromo-1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etano (2) Debaixo de atmosfera de argônio, (8) -1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etanol (1) (300 g, 1,16 mol, 96%ee) foi acrescentado à conta gota com tribrometo de fósforo (157,3 9, 0,58 mMO1) à uma temperatura menor que 20ºC em um banho de água, e a mistura foi agitada a 19 a 22ºC por 30 minutos. A mistura da reação foi resfriada, e acrescentada a conta gota com brometo de hidrogênio (30% solução em ácido acético, 228 mL, 1,16 mol) a uma temperatura menor que 0ºC, e a mistura foi agitada a 13 à 15ºC por 16 horas. A mistura da reação foi derramada dentro de água gelada, e a mistura foi extraída com n- hexano (3 L x 2). As camadas orgânicas foram combinadas, sucessivamente lavadas com hidrogenocarbonato de sódio saturado aquoso (3 L), e salmoura saturada (3 L), secada em cima de sulfato de magnésio anidro, e então concentrada sob pressão reduzida (90 a 100 mmHg) para obter 389,2 g de um produto bruto. O produto bruto resultante foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel: 900 g, solvente desenvolvido: n-hexano) para obter 349,8 gq de (R) -1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano (2) como óleo incolor (rendimento: 93,8%).

O primeiro pico foi observado como o pico principal na análise quiral HPLC como descrito abaixo, e adequadamente, foi confirmado que 1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano preparado em 1-(b) foi também o (R)-isômero, como aquele obtido em 1-(a).

Análise Quiral HPLC: pureza óptica: >93,9%ee (pico principal: primeiro pico), razão de conversão: 97,8% H-NMR (CDCl;) 3: 2,08 (3H, d, J=7,1Hz2), 5,21 (1H, q, J=7,1H2), 7.81 (1H, s), 7,87 (2H, s) Passo 2: Preparação de composto (S)-isômero- dominante semi quiral de trans-(4- [((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil] ciclohexil ácido acético

Debaixo de atmosfera de argônio, uma solução de etil trans-[4- ([(etil) (2-[((5-[2- (metiltio)etoxil]lpirimidin-2-il )amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil amino] metil)ciclohexil]acetato (3) (565,4 g, 0,99 mol) sintetizados pelo método descrito no Documento Patente 2 (Publicação de Patente Internacional WO2008/129951) em tetrahidrofuran anidro (THF, 2,26 L) foi acrescentado com NaH (60% em óleo, 119 g, 2,98 mol) sob resfriamento de gelo, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora.

A mistura da reação foi resfriada a -30ºC, e acrescentada à conta gota com uma solução de (R) -1-bromo-1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etano (2) (682 g, 1,99 mol, 93,9%ee) obtido no passo 1 em N,N-dimetilformamida anidro (4,53 L) de forma que a temperatura dentro do sistema da reação foi mantida para ser -15ºC ou menor, e a mistura foi agitada a -15 a -1ºC por 5 horas.

A mistura da reação foi derramada em uma solução misturada de água gelada (35 L) e tolueno (30 L), à mistura foi acrescentado ácido cítrico para elevar o pH para 6,9, e a camada orgânica foi separada.

A camada aquosa foi extraída duas vezes com tolueno (20 L), a camada orgânica foi combinada, secada em cima de sulfato de magnésio anidro , e então concentrada sob pressão reduzida para obter um produto bruto.

O produto bruto foi dissolvido em etanol (8 L), à solução foi acrescentado com 2 M NaOH aquoso (1,24 L, 2,48 mol) sob resfriamento a gelo, e a mistura foi agitada a 50ºC por 3,5 horas.

A mistura da reação foi acrescentada com 1 M HCl aquoso sob resfriamento a gelo elevado o pH da mistura para 5,4, a mistura foi derramada em água (25 L), e a mistura foi extraída duas vezes com etil acetato (22 L). A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (12 L), secada em cima de sulfato de magnésio anidro, e então concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel: 21 g, solvente desenvolvido: heptano/acetona = 7/1 — 3/1) para obter um composto semi quiral (4) de trans-f(4-[((2- [((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil) fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil )ácido acético (óleo amarelo, 744,1 gq, rendimento: 96%).

R) - 1-Bromo-1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etano (2) de qual configuração absoluta foi confirmada como descrito no passo 1 mencionada acima foi usado como O material de partida, e a reação de substituição nucleofílica com a amina (3) avançou. Consequentemente, a composto resultante semi quiral (4) foi um composto (S)- isômero dominante.

H-NMR (CDCl;) 5: 0,85-0,96 (7H, m), 1,35-1,45 (4H, mM), 1,60-1,78 (5H, m), 2,18-2,21 (5H, m), 2,69 (1H, mM), 2,81-2,91 (5H, m), 4,16 (2H, q, J=ó,8Hz), 4,61 (1H, d, J=17,1Hz2), 4,85 (1H, d, J=17,1Hz), 6,22 (1H, q, J=6,868Hz), 7,11 (1H, dy, JU=8,6H2), 7,23 (1H, &s), 7,357 (MH, dd, U=S8,3Ha), 7,70 (1H, Ss), 7,73 (2H, 8), 8,14 (2H, S) Passo 3: Preparação de composto (8) - isômero dominante semi quiral de trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil )jácido acético éster benzil Debaixo de atmosfera de argônio, uma solução do composto (S)-isômero dominante semi quiral (4) de trans- f4-[((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-([2- (metiltio)etoxi]pirimidin-2-il )amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil] ciclohexil)ácido acético (744,1 gg, 0,95 mol) obtido no passo 2 em dicloroetano anidro (11,6 L) foi acrescentado com álcool benzil (113,1 g, 1,05 mol), WSC-HCl (200,5 g, 1,05 mol) e DMAP (11,9 g, 98 mmol) sob resfriamento a gelo, e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura da reação foi acrescentada com água (10 L), e a mistura foi extraída com clorofórmio (19 L, 14 L). A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (12 L), secada em cima de sulfato de magnésio anidro, e então concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel: 28 g, solvente desenvolvido: heptano/etil acetato = 6/1) para obter um composto semi quiral (5) de trans-(4-[((2-[((1- [3, 5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil] ciclohexil )ácido acético éster benzil (óleo amarelo, 745,8 g, rendimento: 90%). " O composto semi quiral resultante (5) foi um composto (S)-isômero-dominante da mesma maneira como O composto semi quiral (4).

H-NMR (CDCl;) 5: 0,87-0,95 (7H, m), 1,37 (1H,m), 1,43 (3H, dA, U=s7,1HzZ), 1,65-1,77 (SH, m), 2,20 (24, dO, J=6,8Hz), 2,22 (3H, s), 2,66-2,71 (2H, m), 2,82-2,91 (4H, mM), 4,15 (2H, t, U=b,6H2), 4,62 (1H, Ad, O=el7,1H2), 4,65 (1H, d, Jel17,1HZ), 5,10 (2H, SS), 6,21 (1H) q, O=/,1H02), 7,10 (1H, d, Jes,3Hz), 7,22 (1H, SS), 7,28-7,38 (6H, m),

7,70 (1H, Ss), 7,73 (2H, 8), 8,14 (2H, s)

Passo dà4: Preparação de composto (S) - isômero- dominante semi quiral de trans-(4- [((2-[((1-[3,5- bis(trifluorometil)fenilJetil)(5-[2-

(metilsulfonil)etoxilpirimidin-2- il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil ácido acético éster benzil

Debaixo de atmosfera de argônio, uma solução do composto (S)-isômero-dominante semi quiral (5) de trans-

(4-[((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil]ciclohexiljácido acético éster benzil (745,8 g, 0,87 mol) obtido no passo 3 em 2-propanol (15,2 L) foi acrescentado com pentacloreto de tântaio (31,3 Q, B8/;3 MMOL) & 30% peróxido de hidrogênio aquoso (496 mL, 4,38 mol), e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 5 horas.

A mistura da reação foi extinta com hidrogensulfeto de sódio saturado aquoso (3,1 L), e acrescentado com água (15 LD) e à mistura foi extraída com clorofórmio (14 L, 12 L). A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (20 L), secada em cima de sulfato de magnésio anidro, e então concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia coluna (sílica gel: 26 kg, solvente desenvolvido: heptano/etil acetato = 3/1 —

2/1) para obter um composto semi quiral (6) de trans-(4- [((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il )amino)metil)] -4- (trifluorometil) fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil ácido acético éster benzil (amarelo amorfo), 619,5 gq, rendimento: 79%).

O composto semi quiral resultante (6) foi um composto (S)-isômero dominante na mesma maneira como O composto semi quiral (4) e o composto semi quiral (5). Análise Quiral HPLC: pureza óptica: 67,7%ee (pico principal: segundo pico) H-NMR (CDCl;) 5: 0,87-0,96 (7H, m), 1,38 (1H, m), 1,45 (3H, d, J=7,1H2), 1,65-1,80 (5H, m), 2,21 (2H, O, J=6,6Hz), 2,69 (1H, m), 2,81-2,91 (3H, m), 3,08 (3H, s), 3,44 (2H, t, J=5,4Hz), 4,44 (2H, t, J=5,4H2), 4,64 (1H, d, J=17,1H2), 4,86 (1H, d, J=17,3Hz2), 5,10 (2H, s), 6,19 (1H, q, J=6,9Hz), 7,12 (1H, d, J=8,3Hz), 7,19 (1H, s), 7,30- 7,39 (6H, m), 7,71 (1H, 5), 7,72 (2H, SS), 8,16 (2H, S) Passo 5: Preparação de substancialmente opticamente puro (S) -trans-(4- [((2-[((1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil )ácido acético éster benzil O composto semi quiral (S)-isômero-dominante (6) de trans-f4-[((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5- [2- (met ilsulfonil)etoxi] pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil) fenil) (etil) amino) metil] ciclohexil ácido acético éster benzil (111,7 gq, 123,7 mmol, 67,7%ee) obtido no passo 4 foi dissolvido em etanol (825 mL), e acrescentado com sementes de cristais separadamente preparados (os cristais racemato preparados no passo 7 descrito abaixo, 2,0 mg) a uma temperatura de 15 a 20ºC, e a mistura foi agitada na mesma temperatura por 21 horas, e a 0ºC por 3 horas.

Os precipitados foram separados por filtração, e lavados com etanol resfriado (165 mL), e então a solução mãe foi concentrada sob pressão reduzida para obter substancialmente opticamente puro trans-f(4- [((2-[((1-[3,5-bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil] ciclohexil )ácido Ss acético éster benzil (7) (amarelo amorfo, 66,38 q, rendimento: 59%).

o resultante trans-f4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil] ciclohexil )ácido acético éster benzil (7) foi obtido por separação de cristais de racemato dominante do composto semi quiral (8) - isônero-dominante (6) por filtração, e consequentemente, o resultado foi o (S)-isômero.

Análise Quiral HPLC: pureza óptica >99%ee (pico principal: segundo pico) [alp?º -42.36 (cc = 1.0 w/v%, CHCl;) A Pureza óptica dos cristais racemato dominante separados por filtração foi 22%ee como determinado por análise quiral HPLC (43,39 g, rendimento: 39%).

Passo 6: Preparação de substancialmente opticamente puro (8) -trans-(4- [((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil] ciclohexil )ácido acético Debaixo de atmosfera de nitrogênio, uma solução de (8) -trans-(4- [((2-1((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- so (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il )amino)metil] -4- (trifluoromet il) fenil) (etil) amino) metil]ciclohexil ácido acético éster benzil (7) (34,2 g, 37,88 mmol, >99%ee) obtido no passo 5 em etanol (340 mL) foi acrescentado com 10% Pd-C (molhado, 3,4 g) por substituição de hidrogênio, e então a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 Ss horas.

A suspensão da reação foi filtrada através de Celite, e lavada com etanol (50 mL), e a solução lavada foi concentrada sob pressão reduzida para obter substancialmente opticamente puro trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- ao (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluoromet il) fenil) (etil) amino) metil]ciclohexil ácido acético (III) (amorfo branco, 31,78 g, rendimento: 100%). O composto resultante foi um composto levógiro como mostrado pela Rotação Específica mencionada abaixo.

Adicionalmente, porque o composto resultante foi obtido por desproteção da porção de éster do (S)-isômero éster benzil (7), o resultado foi também o (S)-isômero.

Análise Quiral HPLC: pureza óptica: >99%ee (pico principal: segundo pico) [aln”º -46.68 (c = 1.0, CHCl,) SR (ATR) Om : 2921, 1706, 1479, 1279, 1134 IH-NMR (CDCl;) 5: 0,80-0,96 (7H, m), 1,38 (1H,m), 1,47 (9H, dy U=7,1H2), 1,65-1,/77 (58, mm), 2,19 (2H, OQ, U=6,8Hz), 2,72 (1H, m), 2,81-2,91 (3H, mM), 3,08 (3H, Ss), 3,45 (2H, t, J=5,2H2), 4,44 (2H, q, J=5,4H2), 4,62 (1H, d, J=17,1Hz2), 4,86 (1H, d, J=17,4Hz), 6,21 (1H, q, 3=7,1H2), 7,13 (1H, Qd, VJ=9/,3H2), 7,19 (1H, Ss), 7,%8 (1H, d, U=6,6Hz), 7,71 (1H, 8), 7,73 (2H, 5), B,15 (2H, es) Passo 7: Preparação de sementes de cristais racemato de trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- VR AEOS Caaas o

(metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil] ciclonexil ácido acético éster benzil Uma solução de trans-(4-[((2-[((1-[3,5- —bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-([2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-1il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil] ciclohexil ácido acético (composto racemato (1), 20 g, 24,61 mmol) sintetizados pelo método descrito no Documento Patente 2 (Publicação de Patente Internacional WO2008/129951), Exemplo 45 em dicloronetano anidro (200 mL) foi acrescentado com álcool benzil (2,93 g, 27,07 mmol), DMAP (300 mag, 2,46 mmol) e WSC-HCl(5,19 g, 27,07 mmol) sob resfriamento a gelo, e a mistura foi aquecida para a temperatura ambiente, e agitada por 16 horas. A mistura da reação foi acrescentada com água (100 mL), e a mistura foi extraída com clorofórmio (500 mL). A camada orgânica foi lavada com 2 M ácido hidroclórico aquoso (100 mL) e salmoura saturada (100 mL), secada em cima de sulfato de magnésio anidro, e então concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel: 350 g, solvente desenvolvido: N- hexano/etil acetato = 3/1 -— 1/1) para obter trans-f(4-[((2- [((1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil ácido acético áster benzil (21,15 o, rendimento: 95,2%) Como amorfo branco.

o resultante trans-(4-[((2-[((1-[3,5- —bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil] -4-

(trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil )ácido acético éster benzil como amorfo branco (7,9 g) foi dissolvido em etanol (40 mL), a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 15 horas, e os precipitados resultantes foram coletados por filtração, lavados com etanol resfriado (20 mL), e secados a 60ºC por 4 horas sob pressão reduzida para obter cristais de racemato de trans- (4-[((2-[((1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil] ciclohexil ]ácido acético éster benzil (pó cristalino branco, 6,98 gg, rendimento recuperado: 88.4%).

Exemplo 2: Estudo da influência do composto de (s)- isômero (III) na quantidade de proteína PCSK9 e quantidade

15. de Receptor LDL Influência de um composto de teste na quantidade de proteína PCSK9 e quantidade de Receptor LDL foi estudada por adição do composto de teste para tensão de célula de hepatoma humano, células HepG2, e quantidade medida de proteína PCSK9 e quantidade de Receptor LDL (LDLR) por "Western blotting" depois de cultura por 48 horas.

Especificamente, as células HepG2 foram inoculados sobre 6 pratos de cultura a uma densidade de 5 x 10º células/cultura e deixada em cultura durante a noite, e um composto de resto dissolvido em sulfóxido de dimetil (DMSO), ou só DMSO foi acrescentado para o meio de cultura em uma quantidade de 1/1000 vezes. As células foram mantidas em cultura a 37ºC por 48 horas em uma incubadora de CO;, a cultura foi acrescentada com 100 1uL do tampão RIPA (50 mM Tris-HCl, pH 7,8;150 mM NaCl, 1% NP-40, O,5 deoxicolato de sódio, 0,1% inibidor de proteinase) para VEEEEEEEE EI aaa o romper as células, e proteínas foram extraídas.

As proteínas extraídas foram centrifugadas a 10000 x g, O supernadante foi coletado, e acrescentado com uma amostra tampão de SDS (60 mM Tris-HCl, pH 6,8, 2% SDS, 10% glicerol, 3% mercaptoetanol), e a mistura foi submetida a separação por SDS-PAGE (SDS-poliacrilamida gel eletroforese) usando 8% gel de acrilamida. Depois de completada a separação, as proteínas foram fixadas sobre uma membrana de nitrocelulose usando "iBlot Gel Transfer System (Invitrogen)" e bloqueado usando "Block Ace (DS Pharma Biomedical, Catalog No. UK-B 80)".

A detecção da proteína PCSK9, LDLR, e proteína é- actina, e medida das quantidades destas foram realizadas por etiquetagem das proteínas sobre a membrana usando Anti-PCSK9 (Cayman, Catalog No. 1000718), Anti-LDLR (Biovision, Catalog No. 3839-100), e Anti-gB-Actin (Sigma, Catalog No. AS5316), respectivamente, como oO anticorpo primário, e Anti-Rabbit IgG-HRP (Sigma, Catalog No. AO545) ou Anti-Mouse IgG-HRP (Sigma, Catalog No. A4416) como O anticorpo secundário, reagindo um reagente de quimioluminescência (substrato de HRP) com o anticorpo secundário sobre a membrana, e então medindo a intensidade do sinal usando Lumino Image Analyzer LAS-3000 (Fuji Photo Film). A intensidade do sinal resultante foi avaliado numericamente usando software de análise de imagem, "Science Lab 2002 Multi Gauge (Fuji Photo Film)".

O valor da medida resultante da quantidade de proteína PCSK9 e a quantidade de Receptor LDL foram corrigidos entre estes obtidos para a amostra acrescentado com um composto de teste e a amostra de controle (amostra acrescentada só com DMSO) usando a quantidade de proteína B-actin como índice. A quantidade corrigida de proteína PCSK9 e a quantidade de Receptor LDL da amostra adicionando composto de teste foram representados por valores relativos baseados na quantidade de proteína PCSK9 e quantidade de Receptor LDL da amostra de controle, respectivamente, que foram colocadas como 1.

Os resultados são mostrados na Tabela 1.

Como o composto de teste, foram usados os seguintes compostos.

1: (S) -trans-(4-[((2-[((1-[3,5- Bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil]) (etil)amino)metil] ciclohexil ácido acético (composto de (s)-isômero (I11T)) O composto de (s)-isômero (III) (pureza óptica: >99%ee) foi acrescentado para o meio de cultura em uma concentração de 10 UM.

2: (R) -trans-(4-[((2-[((1-[3,5- Bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil) fenil) (etil) amino)metil]ciclohexil ácido acético ((R)-isômero composto (IT)) O composto (R)-isômero (II) (pureza óptica: 29B%ee) foi acrescentado para oO meio de cultura em uma concentração de 10 JM.

3: trans-(4-[((2-[((1-[3,5- Bis(trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxilpirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil ácido acético (composto racemato (T1)) O composto racemato (I) foi acrescentado para O meio de cultura em uma concentração de 10 pM. [Tabela 1] Quantida Quantidad de de receptor e de proteína

LDL Dose PCSK9 Co (valor (concentração (Valor mposto del relativa no meio de relativa baseado teste baseado no cultura, pM) |no valor de valor de controle tomado controle tomado como 1) como 1) Co mposto (Ss) - 10 0,28 1,73 Isômero (111) co mposto (R) - 10 1,05 0,93 Isômero (11) Co mposto 10 0,68 0,73 Racemato (1) Para clareza de entendimento dos valores mostrados na Tabela 1, o composto de (s)-isômero (III) notadamente reduzida a quantidade de proteína PCSK9 e aumentada a quantidade de Receptor LDL em comparação com o controle, ainda o composto (R)-isômero (II) e O composto racemato (1) quase não teve nenhuma de tais ações. Em particular,

a quantidade de Receptor LDL foi notadamente aumentada só para o composto de (s)-isômero (III) em comparação com o controle.

Dos resultados do teste acima, foi revelado que o composto de (s)-isômero (III) tem ação reduzida sobre a quantidade de proteína PCSK9 e a ação de aumentar a quantidade de Receptor LDL.

Em adição, embora a presente invenção não seja limitada para seguinte estimação, foi estimado que, porque o composto racemato (1) não teve quase nenhuma ação de redução da quantidade de proteína PCSK9 e não teve absolutamente ação de aumentar a quantidade de Receptor LDL apesar do fato que conteve cerca de 50% do composto de (s)-isômero (III), o composto (R)-isômero (II) como um componente constituinte do composto racemato (1) inibiu a expressão das ações do composto de (s)-isômero (III) no composto racemato (I). Foi adicionalmente estimado que é preferível aumentar a pureza óptica do composto de (s)- isômero (III) para reduzir o conteúdo do composto (R)- isômero (II) especialmente para elevar a ação de aumentar a quantidade do Receptor LDL.

Exemplo 3: Estuda a influência do composto de (s)- isômero (III) na expressão de PCSK9 mRNA De modo a estudar o mecanismo da ação de reduzir a quantidade de proteína PCSK9 revelada no Exemplo 2 mencionado acima, um composto de teste foi acrescentado para as células HepG2, e a quantidade da expressão de PCSK9 mRNA foi medida pelo método quantitativo de tempo real PCR depois de cultura por 24 horas. 20 Especificamente, as células HepG2 foram inoculadas sobre um placa de cultura 24 a uma densidade de 2 x ao?

células/cultura e deixada em cultura durante a noite, e então um composto de teste dissolvido em sulfóxido de dimetil (DMSO), ou só DMSO foi acrescentado para o meio de cultura em uma quantidade 1/1000 vezes. As células ficaram Ss em cultura a 37ºC por 24 horas em uma incubadora de CO;, e então acrescentada com 500 pL de ISOGEN (NIPPON GENE, Catalog No. 31-02501), e o RNA total foi extraído. O cDNA foi sintetizado do RNA total foi extraído usando "High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Catalog No. 4368813)". A quantidade de Expressão de PCSK9 mRNA humano foi medido pelo quantitativo tempo real PCR usando específicos primers para PCSK9 humano ("Kourimate S. et al., J. Biol. Chem., Vol. 283, p9666"), e "Fast SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems, Catalog No. 4385614"). Como dispositivo de medida, 7900HT Fast Realtime PCR System" foi usado.

Os valores resultantes medidos da quantidade de expressão PCSK9 mRNA foram corrigidos entre estas obtidas para a amostra adicionando o composto de teste (amostra 3) e amostra de controle(amostra acrescentada só com DMSO, amostra 3) usando a quantidade de expressão B-actin mRNA como índice. A corrigida quantidade de expressão PCSK9 MRNA da amostra adicionando o composto de teste foi representada com um valor relativo (média + erro padrão) baseado na quantidade média de expressão de PCSK9 mRNA da amostra de controle, que foi tomada como 1.

Os resultados são mostrados na Tabela 2.

Como o composto de teste, o composto seguinte foi usado.

a: (S) -trans-(4-[((2-[((1-[3,5- Bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2-

(metilsulfonil)etoxil]pirimidin-2-il )amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino) metil]ciclohexil ácido acético (composto de (s)-isômero (III))

O composto de (s)-isômero (III) (pureza óptica: >99%ee) foi acrescentado para o meio de cultura a uma concentração final de 10 UM. [Tabela 2) Quantidade de Dose Comp expressão PCSK9 mRNA (concentra osto de (Valor relativo ção no meio de teste baseado no valor médio de cultura, pM) controle tomado como 1) Comp osto (8) -| 0,18 + 0,13 Isômero (131) Dos resultados mostrados na Tabela 2, foi revelado 10 que o composto de (s)-isômero (III) notadamente reduziu a quantidade de expressão de PCSK9 mRNA em comparação com o controle.

Portanto, foi considerado que pelo menos uma parte da ação de redução da quantidade de proteína PCSK9 do composto de (s)-isômero (III) revelada no Exemplo 2 foi baseada na ação de supressão da expressão do gene PCSK9, e o composto de (s)-isômero (III) teve uma ação de supressão da produção da proteína PCSK9. Exemplo 4: Estudo de ação de redução de colesterol LDL do sangue do composto de (s)-isômero (III) (8) -trans-(4-[((2-[((1-[3,5- Bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2-

(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil] ciclohexil jácido acético (composto de (s)-isômero (III), pureza óptica: >99%ee) foi suspensa em uma solução 0,5% metilcelulose, e

Ss oralmente administrada repetidamente para hamster normal (hamsters sírio macho) uma vez ao dia por mais de 14 dias usando uma sonda de metal.

Quatro horas depois da administração final, o sangue foi coletado, e plasma foi obtido.

Foram analisados lipoproteínas no plasma por medida automática usando um sistema HPLC baseado no método postlabeling, de acordo com o método descrito em "J.

Lipid.

Res., 43, p805-814". Especificamente, 15 pL de uma amostra de plasma foi diluído 10 vezes com PBS contendo 1 mM EDTA, e 80 ul da amostra diluída foi injetada dentro de uma coluna de filtração de gel (Superose 6 coluna (tamanho da coluna: 10 x 300 mm), "GE Healthcare Bioscience") conectada para um sistema HPLC (unidade de alimentação líquida: "Shimadzu LC-20A System, Shimadzu). A separação foi realizada a uma razão de fluxo de 0,5 mL/minuto e uma temperatura da coluna de 40ºC usando PBS contendo 1 mM EDTA como um tampão de corrida.

Um reagente medindo colesterol ("Cholesterol E-Test Wako, Wako Pure Chemical Industries") foi misturado com o eluato da coluna a uma razão de fluxo de 0,25 mL/minuto, e à reação foi realizada a 40ºC em uma bobina de reação (0,5 mm x 15 m) com alimentação do eluato.

Forma detectados colesteróis no eluato obtido da bobina de reação à um comprimento de onda de 600 nm.

Razão de área da fração de LDL baseado na área total de pico resultante de colesteróis foi calculada, e o quantidade de colesterol total medido anteriormente usando "Cholesterol E-Test Wako" foi multiplicada pela razão da área da fração de LDL para calcular quantidade de colesterol LDL. Seis hamsters normais foram usados para cada grupo de controle (0,5% solução —“metilcelulose grupo de administração) e o composto de testes grupos de administração (10 mg/kg de peso do corpo e 30 mg/kg de peso do corpo de composto de (s)-isômero (III) grupos de administração). Os hamsters foram divididos em grupos anteriormente sobre base do valor total do colesterol do plasma.

A quantidade de colesterol LDL no plasma dos grupos (LDL-C, mg/dl) são mostrados na Tabela 3. Os símbolos * e *t** na Tabela 3 significa que havia diferença significante a um nível de significância de 5% ou menos (p < 0,05) e um nível de significância de 0,1% ou menos (p < 0,001), respectivamente, como determinado por um teste de comparação de multi grupo ("Dunnett's multiple comparison test") realizado entre o grupo de controle e cada um dos grupos de teste de administração de composto.

Adicionalmente, a razão de redução da quantidade de colesterol LDL do composto de teste administrado ao grupo baseado no grupo de controle foi calculado de acordo com a equação seguinte 1 como uma razão de redução de colesterol LDL, e indicado em termos de percentagem.

Razão de redução de colesterol LDL (%) = [ (quantidade média de colesterol LDL do grupo de controle - quantidade média de colesterol LDL do grupo de administração do composto)/ quantidade média de colesterol LDL do grupo de controle] x 100 (Equação 1) [Tabela 3]

Quantidade média | Razão de Dose de colesterol LDL | redução de Composto (mg/kg) + desvio padrão colesterol LDL o fia [EEE Contr 50 + 3,0 Le re sto(s)- Isômero 30 31 + 2,694*+ 38,0 (191) Dos resultados mostrados na Tabela 3, foi revelado que o composto de (s)-isômero (III) teve superior ação de redução de colesterol LDL do sangue.

Dos resultados dos testes mencionados acima, foi também revelado que o composto de (s)-isômero (III) é útil como um ingrediente ativo de um medicamento tendo uma ação de redução de LDL do sangue, e semelhantes.

Exemplo 5: Estudo da influência de composto racemato (I) e semelhantes na expressão HMG-CoA redutase mRNA Um composto de teste foi acrescentado para as células de HepG2 e as células foram levadas para cultura por 8 horas, e então a quantidade de expressão HMG-CoOA redutase mRNA foi medida por PCR quantitativo de tempo real.

Especificamente, as células de HepG2 foram inoculadas sobre um 24 prato de cultura a uma densidade de 2 x 10º células/cultura e deixada em cultura durante a noite, e então um composto de teste dissolvido em sulfóxido de dimetil (DMSO), ou só DMSO foi acrescentado para o meio de cultura em uma quantidade de 1/1000 vezes. As células ficaram em cultura a 37ºC por 8 horas em uma incubadora de CO;, e então acrescentado com 500 pL de ISOGEN ("NIPPON GENE, Catalog No. 31-02501"), e o RNA 1 total foi extraído. O cDNA foi sintetizado do total RNA extraída usando "High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Catalog No. 4368813"). A quantidade de expressão de HMG-CoA redutase mRNA humano foi medida por quantitativo PCR de tempo real usando um conjunto dos seguintes primers: 5'-GGTGTTCAAGGAGCATGCAAAG- 3' e 5'-TGACAAGATGTCCTGCTGCCA-3' específico para HMG-CoA redutase humano, e "Fast SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems, Catalog No. 4385614"). Como o dispositivo de medida, "7900HT Fast Realtime PCR System" foi usado.

Os valores dos resultados medidos da quantidade de expressão HMG-CoA redutase mRNA foram corrigidos entre estes obtidos para amostra de teste de adição de composto (3 para cada composto) e amostra de controle (amostra acrescentada só com DMSO, 3 amostras) usando a quantidade de expressão B-actin mRNA como índice. A quantidade de expressão corrigida HMG-CoA redutase mRNA do composto de teste adicionado à amostra foi representado com um valor relativo (média + erro padrão) baseado na quantidade média de expressão de HMG-COA redutase mRNA da amostra de controle, que foi colocada como 1.

Os resultados são mostrado na Tabela 4.

Como o composto de teste, os seguinte compostos foram usados.

1: trans-(4-[((2-[((1-[3,5- Bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4-

(trifluorometil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexil )ácido acético (composto racemato (1)) O composto racemato (1) foi acrescentado para o meio de cultura a uma concentração final de 10 pM. 2: trans-(4-[((2-[((1-[3,5- Bis (trifluorometil)fenil]etil)(5-[2- (metiltio) etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil] -4- (trifluorometil)fenil) (etil) amino)metil] ciclohexil ácido acético (composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44) O composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44 foi acrescentado para o meio de cultura à uma concentração final de 10 pM. [Tabela 4] Quantidade de expressão HMG-CoA Dose redutase mRNA Composto de (concentração em| (Valor relativo teste meio de cultura, baseado no valor pM) ; médio de controle colocado como 1) Composto É 10 0,37 + 0.02 Racemato (1) Composto descrito no Documento 10 0,25 + 0.03 Patente 2, Exemplo 44

Dos resultados mostrados na Tabela 4, foi revelado que ambos os compostos racemato (I) e Oo composto descrito no Documento Patente 2, Exemplo 44, notadamente reduziram a quantidade de expressão HMG-CoA redutase mRNA em comparação com o controle.

Aplicabilidade Industrial O composto de (s)-isômero (III) possui uma ação de redução da quantidade de proteína PCSK9, e uma ação de aumentar a quantidade de Receptor LDL, e possui superior ação de reduzir colesterol LDL do sangue.

Portanto, o composto pode ser utilizado, por exemplo, como um ingrediente ativo de um medicamento para redução de colesterol LDL do sangue, e semelhantes, e assim pode ser utilizado em indústria farmacêutica.

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES 1 - Substancialmente e oticamente puro (S)-trans-(4-[((2- [(11-[3, 5-bis(trifluormetil)feniljetil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-ilJ]amino)metilj]-4- (trifluormetil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexiljácido acético, ou um sal destes, ou um solvato destes. 2 - Um substancialmente opticamente puro enantiômero levógiro de trans-(4-[((2-[((1-[3,5- bis (trifluormetil)fenil]etil)(5-[2-

   (metilsulfonil)etoxi]piíirimidin-2-il)amino)metil)-d- (trifluormetil)fenil) (etil)amino)metiíl]ciclohexiljácido acético, ou um sal destes, ou um solvato destes. 3 - O composto, ou um sal destes, ou um solvato destes de acordo com a reivindicação 1 ou 2, que possui uma optical pureza de 99%ee ou maior. 4 - Um medicamento que inclui o composto, ou um sal destes ou um solvato destes de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 como um ingrediente ativo. 5 - O medicamento de acordo com a reivindicação 4, que é para uso em profilático e/ou tratamento terapêutico de uma j doença selecionada de hiper colesteterolemia LDL, | dislipidemia, arterioscleroses, ateroscieroses, doença periférica vasculares, hipercolesteterolemia, hipercolesteterolemia familiar, desordens de funções cardiovasculares, angina pectoris, isquemia, isquemia | cardíaca, tromboses, infarto do miocárdio, desordens de [ reperfusão, restenose de angioplastia, e hipertensão. | 6 - Um agente de supressão da expressão de PCSK9 mRNA compreendendo o composto, ou um sal destes, ou um solvato destes de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 como um ingrediente ativo.

   | : 2 7 - Um agente de redução da quantidade de proteína PCSK9 compreendendo o composto, ou um sal destes, ou um solvato | destes de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a3 como um ingrediente ativo. : 8 - Um agente supressor da produção de proteína PCSK9 compreendendo o composto, ou um sal destes, ou um solvato destes de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 como um ingrediente ativo.

   9 - Um agente de aumento da quantidade de receptor LDL compreendendo o composto, ou um sal destes, ou um solvato destes de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 como um ingrediente ativo.

   10 - Um método para preparação de substancialmente opticamente puro (S) -trans-(4-[(12-[((11-[3,5- bis(trifluormetil)feniljetil)(5-[2- (metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il)amino)metil]-4- (trifluormetil)fenil) (etil)amino)metil]ciclohexiljácido acético, ou um sal destes, ou um solvato destes, que inclui o passo de remover cristais racemato dominante de um composto (S)-isômero dominante semi-quiral de um composto representado pela seguinte fórmula geral (IV): [Fórmula 1]

   FOTO oo SOS” F3C. es CT CF; O. conteora (IV) (na fórmula, R representa um grupo aril Cg61 que pode ter um substituinte, ou um grupo hetercoaril de 5- a l0-membros

   : 3 que pode ter um substituinte, e n representa um inteiro de 1 a 6) para cristalização preferencial em um solvente para obter um composto substancialmente opticamente puro representado pela seguinte fórmula geral (V): [Fórmula 2)

   NEMO VN do CX NW CF3

   NON FzC. ( J CW CF3 O cores (V) (na fórmla, R e n têm os mesmos significados como definidos acima). 11 - O método de acordo com reivindicação 10, que também inclui o passo de remover um grupo representado como - (CH2)n-R do composto representado pela fórmula geral (V). 12 - O método de acordo com reivindicação 10 ou 11, que também inclui o passo de reagir um composto (S)-isômero- dominante semi-quiral de um composto representado pela seguinte fórmula geral (VI): [Fórmula 3)

   OA SOS” F3C. me CFz NO cores (VV) (na fórmula, R e n têm o mesmo significado como definido acima) com um agente oxidante em uma solvente para preparar o composto (S)-isômero dominante semi-quiral de um composto representado pela fórmula geral (IV). 13 - O método de acordo com reivindicação 12, que também inclui o passo de reagir um composto (S)-isômero-dominante semi-quiral de um composto representado pela seguinte fórmula (VIT): [Fórmula 4) . OO)

   SS F3C SO CF3 . NO eos (VI) com um composto representado pela seguinte fórmula geral (VIII) [Fórmula 5) R-(CH>),-OH (VIII) (na fórmula, R e n têm o mesmo significado como definido acima) em um solvente na presença de um catalisador para preparar o composto (S)-isômero-dominante semi-quiral de um composto representado pela fórmula geral (VT). 14 - O método de acordo com reivindicação 13, que também inclui o passo de hidrolisar um composto de (S)-isômero- dominante semi-quiral de um composto representado pela seguinte fórmula geral (IX): [Fórmula 6]

   [| MASSo NON e NOS CFz3 O, COR! (1X) | (na fórmula, Rº representa. um grupo alcil Cr) em um | solvente na presença de uma base para preparar o composto | (S) -i sômero-dominante semi-quiral de um composto 5 representado pela fórmula (VII). 15 - O método de acordo com reivindicação 14, que também : inclui o passo de reagir um composto representado pela seguinte fórmula geral (XX): [Fórmula 7] ' Xe F3CÓ o “CF; (XX) (na fórmula, X representa um átomo de halogênio), e um composto representado pela seguinte fórmula geral (XI): [Fórmula 8) MAO:

   NÓ NH o

   NO NO cow CX) (na fórmula, R' tem o mesmo significado como definido acima) em um solvente na presença de uma base para preparar o composto (8S)-isômero-dominante semi-quiral de um composto representado pela fórmula geral (IX). 16 - O método de acordo com reivindicação 15, que também inclui o passo de halogenização de (S)-1-[3,5- bis (trifluormetil)fenil]etanol na presença de um agente de halogenização para preparar o composto representado pela fórmula geral (X). 17 - Um composto representado pela fórmula geral (TV) mencionado na reivindicação 10, ou um sal destes, ou um solvato destes. 18 - Um composto representado pela fórmula geral (V) mencionado na reivindicação 10, ou um sal destes, ou um solvato destes. 19- O composto, ou um sal destes, ou um solvato destes de acordo com reivindicação 17 ou 18, caracterizado por: R ser grupo fenil, en ser 1