MX2012014149A

MX2012014149A - Derivado de dibencilamina opticamente activa y metodo para prepararla.

Info

Publication number: MX2012014149A
Application number: MX2012014149A
Authority: MX
Inventors: Tadaaki Ohgiya; Koichi Yamazaki; Katsutoshi Miyosawa; Takeshi Murakami; Kimiyuki Shibuya; Taichi Kusakabe
Original assignee: Kowa Co
Priority date: 2010-06-04
Filing date: 2011-06-03
Publication date: 2013-02-27
Also published as: IL223377A0; TW201208688A; US8906895B2; PT2578574E; JP5555320B2; EP2578574A1; KR20170078865A; MX338024B; EP2578574A4; HK1179959A1; BR112012030787A2; US20130225814A1; CN102933559B; JPWO2011152508A1; AU2011259929A1; ZA201209372B; IN2012CN10925A; EA024241B1; CN102933559A; CN104529910A

Abstract

El ácido (S)-trans-{4-[({2-[({1-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etil}{5-[2-(metilsulfonil)etoxi]pirimidin-2-il}amino)metil]-4-(tr ifluorometil)fenil} (etil)amino)metil]ciclohexil}acético sustancialmente ópticamente puro, o una sal de él o un solvato de él, que tiene acciones de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 y aumento de la cantidad del receptor de LDL.

Description

DERIVADO DE DIBENCILAMINA ÓPTICAMENTE ACTIVA Y MÉTODO PARA PREPARARLA Campo técnico La presente invención se relaciona con un derivado de dibencilamina ópticamente activa útil como un ingrediente activo de un medicamento o similar y con un método para prepararla.

Arte Previo En los últimos años, los pacientes que sufren de dislipidemia (hiperlipidemia) y enfermedades arterioscleróticas inducidas de ese modo se han incrementado rápidamente debido a los cambios en los hábitos dietarios para ingerir alimentos con alto contenido de calorías y con alto colesterol con una mejora del nivel de vida, la obesidad, la falta de ejercicio, el envejecimiento y similares. Se ha revelado a partir de numerosas investigaciones etiológicas que incluyen el estudio de Framingham que el nivel de colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL) se relaciona positivamente con un índice de inicio de enfermedades cardíacas. En consecuencia, en las terapias farmacológicas para la dislipidemia y la arteriesclerosis, se ha enfocado fundamentalmente en la reducción del valor del colesterol de LDL (Documento no patente 1) Para la hipercolesterolemia de LDL, que es uno de los factores de riesgo potentes de enfermedades cardiovasculares, los métodos terapéuticos han avanzado notablemente por el lanzamiento de inhibidores de HMG-CoA reductasa (estatinas) . Sin embargo, si bien las estatinas reducen potentemente el colesterol de LDL, se reducen en los accidentes cardíacos y la mortalidad por enfermedades cardiovasculares se mantiene tan alta como el 30%. Se considera que se puede lograr un menor riesgo de muerte de enfermedades cardiovasculares reduciendo adicionalmente el colesterol de LDL. Sin embargo, no se puede aplicar una administración de dosis elevadas de estatinas debido al riesgo elevado ampliado de rabdomiolisis.

En consecuencia, se ha deseado un medicamento que tiene una acción reductora potente sobre el colesterol de LDL en la sangre y está basada en el modo de acción diferente de aquella de las estatinas .

Las proproteínas convertasas (PC) son miembros de la familia de la serina proteasa de mamífero, cuya homología a subtilisina en las bacterias y kexin en levadura se ha observado. Una de las PC, PCSK9 (proproteína convertasa subtilisina/kexin 9) , se expresa principalmente en el hígado y se segrega extracelularmente, luego se une con el receptor de LDL sobre las superficies de la membrana de hepatocitos para promover la migración del receptor de LDL en las células. El receptor de LDL que migra a las células se descompone por los orgánulos celulares. Dado que el receptor de LDL cumple la función de transportar lipoproteínas que contienen colesterol LDL al hígado desde la sangre en circulación, la producción de la proteína PCSK9 inhibe la captación de colesterol de LDL en sangre en el hígado, que deriva en un aumento del nivel de colesterol de LDL en sangre. De hecho, se sabe que el nivel de colesterol de LDL en sangre es elevado en los humanos con una mutación de tipo de adquisición de funciones en el gen de PCSK9, que se relaciona con la hipercolesterolemia dominante autosómica (Documento no patente 2) . Mientras tanto, se mantiene un nivel bajo de colesterol de LDL en sangre en los humanos con una mutación de tipo de eliminación de función en el gen de PCSK9 (Documento no patente 3) . Además, se ha demostrado en un animal que el nivel colesterol de LDL es bajo en ratones con deficiencia del gen de PCSK9 del hígado (Documento no patente 4) .

Se considera a partir de los motivos expuestos anteriormente que la reducción de la cantidad de la proteína PCSK9 por la supresión de su producción o la inhibición contra la función de la proteína PCSK9 deriva en el aumento en la cantidad del receptor de LDL y por lo tanto proporciona una acción reductora potente del colesterol de LDL.

Bajo estas circunstancias, recientemente se han realizado investigaciones activas sobre la inhibición funcional de la proteína PCSK9 o la supresión de su producción. Por ejemplo, como aquellas que usan un anticuerpo o un oligonucleótido antisentido, se han informado la inhibición funcional de proteína PCSK9 usando un anticuerpo monoclonal dirigido a PCSK9, la supresión de la producción de proteína PCSK9 basada en la interferencia de ARN y similares (Documentos no patente 5 a 7) . Además, como aquellas que usan un compuesto de bajo peso molecular, se ha informado que la berberina reduce el nivel de mAR y de proteína de PCSK9 en células HepG2 (documento no patente 8) y 5-azacitidina, que es un activador de anexina A2, promueve la unión de la proteína PCSK9 con anexina A2 y suprime la descomposición del receptor de LDL (documento de patente 1) . Sin embargo, no se ha informado casi ningún compuesto con un bajo peso molecular como inhibidor contra la función de la proteína PCSK9 o supresor contra la producción de proteína PCSK9 excepto aquellos informados anteriormente.

El documento de patente 2 revela compuestos pirimidina que tienen una estructura de dibencilamina, que tienen una actividad inhibidora potente contra la proteína de transferencia del éster de colesterilo (CETP) y también tienen una acción potente de incremento del colesterol HDL en sangre. El documento revela el compuesto de la siguiente fórmula (I) como un racemato del Ejemplo 45: [Fórmula 1] ácido (trans-{4- [ ( {2- [ ( {l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il }amino) metil] -4- (trifluorometil ) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil }acético, de aquí en adelante también denominado "compuesto racemato (I) " en la memoria descriptiva) . Sin embargo, no se ha descrito ni sugerido ninguna relación entre el compuesto racemato (I) y la proteína PCSK9.

Dado que las PC tienen influencia sobre la proliferación, la motilidad, la adhesión y la invasión de las células del cáncer, se las ha enfocado como un blanco del tratamiento del cáncer (Documento no patente 9) . También existen relaciones conocidas de PC con la obesidad, la diabetes y la enfermedad de Alzheimer y participaciones de las PC en enfermedades tales como enfermedades infecciosas virales que incluyen el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y el síndrome respiratorio agudo grave (SARS) (Documentos no patentes 10 y 11) .

En consecuencia, también se espera el uso de un compuesto que tiene una acción reductora sobre la cantidad de la proteína PCSK9 o una acción inhibidora contra la función de la proteína " PCSK9 como un ingrediente activo de un medicamento para las enfermedades mencionadas anteriormente.

Referencias del arte previo Documentos de patentes Documento de patente 1: Publicación de Patente Internacional WO2009/143633 Documento de patente 2: Publicación de Patente Internacional WO2008/129951 Documentos no patentes Documento no patente 1: Nippon Rinsho, Vol . 59, Edición adicional 3, Hiperlipidemia (volumen 2), 381-386 (2001) Documento no patente 2: Nat . Genet . , 34, 154-156 (2003) Documento no patente 3: N. Engl . J. Med., 354, 1264-1272 (2006) Documento no patente 4: Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 102, 5374-5379 (2005) Documento no patente 5:: Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 106, 9820-9825 (2009) Documento no patente 6: J. Lipid Res., 48, 763-767 (2007) Documento no patente 7: Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 105, 11915-11920 (2008) Documento no patente 8: Aterosclerosis , 201 (2), 266-73 (2008) Documento no patente 9: Mol. Carcinogen. , 44 (3), 151-161 (2005) Documento no patente 10: J. Mol. Med., 83, 842-843 (2005) Documento no patente 11: J. Mol. Med., 83, 844-855 (2005) Extracto de la invención Objeto que debe alcanzar la invención Un objeto de la presente invención es proporcionar un compuesto de bajo peso molecular que tiene acciones de reducción de la cantidad de la proteína PCSK9 y aumento de la cantidad del receptor de LDL y un medicamento que comprende dicho compuesto de bajo peso molecular como un ingrediente activo.

Medios para Alcanzar el objetivo Los inventores de la presente invención realizaron diferentes investigaciones para. alcanzar el objetivo mencionado anteriormente. Como resultado, hallaron que el compuesto racemato (I) y uno de sus enantiómeros , ácido (R) -trans- {4 - [ ( {2 - [ ( { 1 - [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil}acético representado por la siguiente fórmula (II) (en adelante también denominado "compuesto isómero (R) (II) " en la memoria descriptiva .

[Fórmula 2] no tuvo casi ninguna acción de reducción de la cantidad de la proteína PCSK9 y aumentar la cantidad del receptor de LDL, mientras que hallaron que el ácido (S) -trans- {4- [ ( {2- [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] irimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil } acético levógiro representado por la siguiente fórmula (III) (en adelante también denominado "compuesto isómero (S) (III) " en la memoria descriptiva) [Fórmula 3] ( III ) o una sal de él, o un solvato de él tuvo acciones de reducción potente de la cantidad de la proteína PCSK9 y aumento de la cantidad del receptor de LDL. La presente invención se logró basada en los hallazgos precedentes.

La presente invención entonces proporciona ácido (S) -trans- {4 - [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil } acético , o una sal de él, o un solvato de él (preferentemente, ácido (S) -trans- {4-[({2-[({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5 - [2-(metilsulfonil) etoxi] irimidin-2-il }amino) metil] -4-(trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil Jacético sustancialmente ópticamente puro, o una sal de él o un solvato de él) .

Como otro aspecto, la presente invención proporciona un enantiómero levógiro del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2-(metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4-(trifluorometil ) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil } acético, o una sal de él, o un solvato de él (preferentemente, un enantiómero levógiro sustancialmente ópticamente puro del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil }{ 5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil ) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil }acético, o una sal de él o un solvato de él) .

La presente invención también proporciona un medicamento que comprende el compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él como un ingrediente activo.

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que contiene el compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él como un ingrediente activo y un portador farmacéuticamente aceptable.

El medicamento y la composición farmacéutica reducen el colesterol de LDL en la sangre y en consecuencia se pueden usar como un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad que surge de un estado de colesterol de LDL elevado en sangre (por ejemplo, hipercolesterolemia de LDL, dislipidemia (hiperlipidemia) , arteriesclerosis, aterosclerosis , enfermedades vasculares periféricas, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar, trastornos funcionales cardiovascular, angina de pecho, isquemia, isquemia cardíaca, trombosis, infarto de miocardio, trastornos de reperfusión, reestenosis después de angioplastia, hipertensión y similares .

La presente invención también proporciona el uso del compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él para la fabricación de un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada de un estado de colesterol de LDL elevado en sangre y el compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él, o un solvato de él para su uso en el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada del estado de colesterol de LDL elevado en sangre.

La presente invención también proporciona un agente de supresión de la expresión de mARN de PCSK9 que comprende el compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él como un ingrediente activo; un agente que reduce la cantidad de proteína PCSK9 que comprende el compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él, o un solvato de él como un ingrediente activo; un agente de supresión de la producción de la proteína PCSK9 que comprende el compuesto isómero (S) (III) o una sal de él , o un solvato de él como un ingrediente activo y un agente que aumenta la cantidad del receptor de LDL que comprende el compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él o un solvato de él como un ingrediente activo.

La presente invención además proporciona el uso del compuesto isómero (S) (III) o una sal de él, o un solvato de él para la fabricación de un agente de supresión de la expresión del mARN de PCSK9, un agente reductor de la cantidad de proteína PCSK9, un agente de supresión de la producción de proteína PCSK9, o un agente de aumento de la cantidad del receptor de LDL y el compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él para el uso como un ingrediente activo de un agente de supresión de la expresión del mARN de PCSK9, un agente que reduce la cantidad de la proteína PCSK9 , un agente supresor de la proteína PCSK9 o un agente de aumento de la cantidad del receptor de LDL.

La presente invención también proporciona un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad en la cual las PC están involucradas (cáncer, obesidad, diabetes, enfermedad de Alzheimer, enfermedades infecciosas virales y similares) que comprende el compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él, o un solvato de él como un ingrediente activo.

La presente invención también proporciona el uso del compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él para la fabricación de un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad en la cual las PC están involucradas y el compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él para su uso en el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad en la cual las PC están involucradas .

Como aún otros aspectos, la presente invención proporciona un agente supresor de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa que comprende el compuesto racemato (I) , el compuesto descrito en el documento de patente 2, Ejemplo 44 (ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( {.1- [3 , 5 -bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil }ac tico) , o un enantiómero de él, o una sal de él, o un solvato de él como un ingrediente activo; un agente supresor de la producción de HMG-CoA reductasa que comprende el compuesto racemato (I) , el compuesto descrito en el documento de Patente, Ejemplo 44, o un enantiómero de él , o una sal de él o un solvato de él como un ingrediente activo; y un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa (por ejemplo, inflamación, cáncer, enfermedad de Alzheimer, osteoporosis , hipertrofia prostática, enfermedades glomerulares, verminación, infección con virus, psoriasis, degeneración macular y similares) que contiene el compuesto racemato (I) , el compuesto descrito en el documento de patente 2, Ejemplo 44, o un enantiómero de él o una sal de él o un solvato de él como un ingrediente activo.

La presente invención también proporciona el uso del compuesto racemato (I), el compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44, o un enantiómero de él, o una sal de él o un solvato de él, para la fabricación de un agente de supresión de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa, un agente de supresión de la producción de HMG-CoA reductasa, o un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa; y el compuesto racemato (I) , el compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44, o un enantiómero de él , o una sal de él o un solvato de él para su uso como ingrediente activo de un agente de supresión de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa, un agente de supresión de la expresión de la producción de HMG-CoA reductasa, o un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa.

La presente invención también proporciona un método para suprimir la expresión del mARN de PCSK9 en un mamífero que incluye humanos in vivo, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él al mamífero que incluye humanos; un método para reducir la cantidad de la proteína PCSK9 en un mamífero que incluye humanos in vivo, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él a un mamífero que incluye humanos; un método para suprimir la producción de la proteína PCSK9 en un mamífero que incluye humanos in vivo, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él al mamífero que incluye humanos; un método para aumentar la cantidad del receptor de LDL en un mamífero que incluye humanos in vivo, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él o un solvato de él al mamífero que incluye humanos; y un método para reducir LDL en sangre en un mamífero que incluye humanos in vivo, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él o un solvato de él al mamífero que incluye humanos.

La presente invención también proporciona un método para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada de un estado de colesterol LDL elevado en un mamífero que incluye humanos, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto isómero (S) (III) o una sal de él, o un solvato de él al mamífero que incluye humanos.

La presente invención también proporciona un método para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad en la cual están involucradas las PC en un mamífero que incluye humanos, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él o un solvato de él al mamífero que incluye humanos.

La presente invención también proporciona un método para suprimir la expresión del mAR de H G-CoA reductasa en un mamífero que incluye humanos in vivo, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto racemato (I) , el compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44, o un enantiómero de él, o una sal de él o un solvato de él al mamífero que incluye humanos; un método APRA suprimir la producción de HMG-CoA reductasa en un mamífero que incluye humanos in vivo, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto racemato (I) , el compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44, o un enantiómero de él o una sal de él o un solvato de él al mamífero que incluye humanos; y un método para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa, que comprende el paso de administrar una cantidad eficaz del compuesto racemato (I) , el compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44, o un enantiómero de él, o una sal de él; o un solvato de él al mamífero que incluye humanos.

La presente invención también proporciona un método para preparar el compuesto isómero (S) (III) y/o el compuesto isómero (R) (II) en una forma sustancialmente ópticamente pura.

Si bien el documento de patente 2 describe un método para preparar el compuesto racemato (I) , ha sido muy difícil preparar el compuesto isómero (S) (III) o el compuesto isómero (R) (II) en una forma sustancialmente ópticamente pura como se describe a continuación.

Específicamente, como un punto de vista general, se sabe que un compuesto sustancialmente ópticamente puro se puede preparar sintetizando el racemato y luego sometiendo al racemato a la resolución óptica usando una columna quiral.

Sin embargo, en la resolución óptica usando una columna quiral, algunas veces puede ser muy difícil establecer las condiciones de la resolución para cierto tipo de compuesto y el proceso es inadecuado para la producción en escala industrial . Desde el punto de vista práctico, se halló que el grupo de condiciones de la resolución óptica usando una columna quiral para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro o el compuesto isómero (R) (II) fue muy difícil. Más específicamente, se intentó fraccionar cada enantiómero desde el compuesto racemato (I) preparado de acuerdo con el método descrito en el documento de patente 2, Ejemplo 45 mientras se cambiaba en 'forma diversa las condiciones tales como los tipos de una columna quiral (por ejemplo, CHIRALCEL OD-H, CHIRALCEL OJ-H y similares) , los tipos de un solvente usado como una fase móvil (por ejemplo, mezcla de MeOH/TBA, mezcla de EtOH/TFA y similares) y la velocidad de flujo de la fase móvil. En estas circunstancias, se halló que cada enantiómero se separó exitosamente en las condiciones descritas en el Ejemplo 1-1 que se mencionará más adelante. Sin embargo, también se halló que se produjo un producto de la descomposición (compuesto éster de etilo) en las condiciones mencionadas anteriormente.

El documento de Patente 2 también revela que el compuesto racemato (I) se puede preparar mediante un método que comprende los pasos de acoplar un compuesto intermedio (a) y un compuesto bromuro de bencilo de racemato (b) en la presencia de una base, hidrolizar el grupo éster del compuesto resultante (c) para preparar un compuesto (d) y finalmente oxidar el átomo de azufre del compuesto (d) de acuerdo con el Esquema 1 que se muestra a continuación.

Esquema 1 [Fórmula 4] Con referencia al Esquema 1, los inventores de la presente invención intentaron obtener el compuesto isómero (S) (III) o el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro usando un 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] -1- metanosulfoniloxietano ópticamente activo en lugar del compuesto bromuro de bencilo de racemato (b) . Sin embargo, la reacción de eliminación del 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] -1-metanosulfoniloxietano ocurrió en forma preferencial y el compuesto objetivo no se obtuvo exitosamente.

Además, también se intentó la preparación usando un agente de bencilación ópticamente activo que tiene un grupo saliente tal como un grupo toluenosulfonilo, un grupo clorometanosulfonilo, o un grupo 2 , 4 , 6-triisopropilbencenosulfonilo en lugar del grupo metanosulfonilo . Sin embargo, el compuesto isómero (S) (III) o el grupo isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro no se obtuvo exitosamente usando 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] -1-metanosulfoniloxietano .

Cuando se usó el compuesto bromuro de bencilo (b) , la introducción del grupo bis (trifluorometil) fenil] -1-etilo en el átomo de nitrógeno del compuesto intermedio (a) ya se había logrado exitosamente. Por consiguiente, se puede contemplar para obtener el compuesto isómero (S) (III) o el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro usando un compuesto bromuro de bencilo ópticamente activo en lugar del compuesto bromuro de bencilo de racemato (b) .

Sin embargo, se sabe generalmente que, en una reacción de sustitución nucleófila en la cual se puede eliminar el bromuro, el ion bromuro producido mediante la reacción, reacciona con bromuro de bencilo en el sistema de reacción y avanza la racemización. Además, también se sabe generalmente que, en una reacción de sustitución nucleófila en la posición de bencilo, una reacción de sustitución de tipo de SN1 también ocurre competitivamente debido a la sustitución del catión de bencilo y en consecuencia la racemización ocurre parcialmente.

Como para el compuesto que tiene una pureza óptica moderada obtenido como resultado de la reducción en la pureza óptica debido a la racemización parcial en la memoria descriptiva, por "compuesto que tiene una pureza óptica moderada" se entiende un compuesto que tiene unei pureza óptica no menor del 10%ee y no menor del 90%ee, preferentemente del 20% al 80%ee y más preferentemente del 40% al 70%ee y el compuesto que tiene la pureza óptica moderada también puede denominarse en adelante "compuesto semiquiral" . Además, en cuanto al compuesto semiquiral, cuando un compuesto, en el cual el átomo de carbón asimétrico indicado con * en la estructura parcial que se muestra a continuación está en la configuración de S, está presente en una cantidad mayor comparado con un compuesto en la configuración de R, el compuesto se denomina específicamente "compuesto semiquiral de isómero (S) predominante". Mientras que, en cuanto al compuesto semiquiral, cuando el compuesto en el cual el átomo de carbono asimétrico indicado con * está en la configuración de R está presente en una cantidad mayor comparado con el compuesto en la configuración de S, el compuesto se denomina específicamente "compuesto semiquiral de isómero (R) predominante" , [Fórmula 5] se sabe que su pureza óptica se puede aumentar cristalizando en forma preferencial uno de los enantiómeros .

Sin embargo, de acuerdo con el estudio de los inventores de la presente invención, la cristalización no avanzó en el caso del compuesto racemato (I) o un derivado de éster de etilo de él y su pureza óptica no se incrementó exitosamente por la cristalización preferencial .

En las circunstancias descritas anteriormente, los inventores de la presente invención convirtieron el ácido carboxílico del compuesto racemato (I) en el éster de bencilo y hallaron que el compuesto éster de bencilo resultante se aisló exitosamente como un cristal que comprende el racemato como el compuesto principal .

Por lo tanto, preparando un compuesto semiquiral (IV) del compuesto arilalquilo o heteroarilalquilo, y luego cristalizando los cristales de una pureza óptica baja que contiene predominantemente el racemato como un componente (en adelante también denominados "cristales de racemato predominante") y eliminando los cristales para obtener un compuesto éster de arilalquilo o de heteroarilalquilo (V) o (V ) con una pureza óptica alta y luego usando el compuesto (V) o (V ) como un material de partida como se muestra en el Esquema 2 mencionado a continuación, los inventores prepararon exitosamente un enantiómero deseado del compuesto racemato (I) (compuesto isómero (S) (III) o compuesto isómero (R) (II)) en una forma sustancialmente ópticamente pura.

Esquema [Fórmula Cristalización preferencial de racemato Compuesto semiquiral (IV) Enanti omero alta pureza óptica (solución madre) + Cristales de racemato predominante En el esquema, R representa un grupo arilo de C6-io que puede tener un sustituyente , o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente y n representa un número entero de 1 a 6) .

La presente invención entonces proporciona un método para preparar el compuesto isómero (S) (III) o el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro, o un solvato de él, que comprende el paso de eliminar los cristales de racemato predominante del compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (IV) : [Fórmula 7] ( IV ) (en la fórmula, R representa un grupo arilo de C6_i0 que puede tener un sustituyente, o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente, y n representa un número entero de 1 a 6) mediante cristalización preferencial en un solvente para obtener un compuesto sustancialmente ópticamente puro representado por la siguiente fórmula general (V) o (V ) : [Fórmula 8] (en las fórmulas, R y n tienen las mismas definiciones que aquellas definidas para la fórmula general (IV) ) .

Mediante el método mencionado anteriormente, cuando el compuesto representado por la fórmula general (IV) es un compuesto semiquiral isómero (S) predominante, se puede preparar el compuesto isómero (S) (III) y cuando el compuesto representado por la fórmula general (IV) es un compuesto semiquiral isómero (R) predominante, se puede preparar el compuesto isómero (R) (II) .

La presente invención también proporciona el método mencionado anteriormente, que además comprende el paso de eliminar el grupo representado como -(CH2)n-R a partir del compuesto representado por la fórmula general (V) o (V ) .

La presente invención también proporciona: (A) el método mencionado anteriormente que además comprende el paso de hacer reaccionar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (VI) : [Fórmula 9] (en la fórmula, R y n tienen las mismas definiciones que aquellos definidos para la fórmula general (IV) ) con un agente de oxidación en un solvente para preparar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la fórmula general (IV) ; (B) el método mencionado anteriormente (A) , que además comprende el paso de hacer reaccionar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula (VII) : [Fórmula 10] ( VII ) con un compuesto representado por la siguiente fórmula general (VIII) [Fórmula 11] R-(CH2)n-OH (VIII) (en la fórmula, R y n tienen las mismas definiciones que aquellos definidos para la fórmula general (IV) ) en un solvente en la presencia de un catalizador para preparar el compuesto semiquiral de un compuesto representado por la fórmula general (VI) ; el método mencionado anteriormente (B) , que además comprende el paso de hidrolizar un compuesto semiquiral de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (IX) : [Fórmula 12] ( IX ) (en la fórmula, R1 representa un grupo alquilo de Ci-6) en un solvente en la presencia de una base para preparar el compuesto semiquiral de un compuesto representado por la fórmula (VII) ; (D) el método mencionado anteriormente (C) , que además comprende el paso de hacer reaccionar un compuesto representado por la siguiente fórmula general (X) o (?') : [Fórmula 13] ( X ) ( ? ' ) o (en la fórmula, X representa un átomo de halógeno) y un compue representado por la siguiente fórmula general (XI) : [Fórmula 14] ( XI ) (en la fórmula, R1 tiene la misma definición que se definió en para la fórmula general (IX) ) en un solvente en la presencia de una base para preparar el compuesto semiquiral de un compuesto representado por la fórmula general (IX) .

La presente invención también proporciona el método mencionado anteriormente (D) que además comprende el paso de halogenar el 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etanol ópticamente activo e la presencia de un agente de halogenacion para preparar el compuesto representado por la fórmula general (X) o (?') .

Como otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula general (IV) mencionada anteriormente, o una sal de él, o un solvato de él. El compuesto en donde R es fenilo, y n es 1, una sal de él, o un solvato de él como una realización preferida de esta invención.

La presente invención además proporciona un compuesto sustancialmente ópticamente puro representado por la fórmula (V) o (V) general mencionada anteriormente, o una sal de él, o un solvato de él. Un compuesto en donde R es fenilo, y n es 1, o una sal de él, o un solvato de él es una realización preferida de esta invención.

Efectos de la invención El compuesto isómero (S) (III) tiene una acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 y una acción de aumento de la cantidad de receptor de LDL y tiene una acción superior de reducción de colesterol LDL en sangre. En consecuencia, el compuesto es útil, por ejemplo, como un ingrediente activo de un medicamento para reducir el colesterol LDL en sangre y similares.

Además, el compuesto isómero (S) (III) también es útil como un ingrediente activo de un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad en la cual están involucradas las PC, más específicamente cáncer, obesidad, diabetes, enfermedad de Alzheimer o enfermedades infecciosas virales .

Además, de acuerdo con el método de preparación de la presente invención, un enantiómero deseado del compuesto racemato (I) (compuesto isómero (S) (III) o compuesto isómero (R) (II) ) se pueden preparar convenientemente en una forma sustancialmente ópticamente pura. Por ejemplo, el método preferentemente se puede usar como un método para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro, que es útil como un ingrediente activo de un medicamento o similar.

Formas de Realizar la invención En la memoria descriptiva, por el término "sustancialmente ópticamente pura" se entiende que la pureza óptica de un compuesto es el 90%ee o más, preferentemente el 95% al 100%ee, más preferentemente el 97% al 100%ee.

En consecuencia, por "ácido (S) -trans- { 4 - [ ( {2 - [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil}{5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorome il ) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil } acético sustancialmente ópticamente puro" , "enantiómero levógiro sustancialmente ópticamente puro del ácido trans- { 4 - [ ( { 2 - [ ( { 1 - [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil }{ 5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil } acético" y "compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro" se entiende el compuesto isómero (S) (III) que tiene una pureza óptica del 90%ee o más, preferentemente del 95 al 100%ee, más preferentemente del 97 al 100%ee.

En la presente invención, la pureza óptica del compuesto isómero (S) (III) es preferentemente del 98%ee o más, más preferentemente del 99%ee o más, como se menciona en las condiciones analíticas de HPLC quiral que se describen en el Ejemplo 1-1 mencionado más adelante, desde un punto de vista de obtener una acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 favorable y/o una acción de aumento de la cantidad de receptor de LDL. Si se logra la pureza óptica mencionada anteriormente, el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente no contiene el otro enantiómero (compuesto isómero (R) (II) ) .

En la memoria descriptiva, por el término "grupo alquilo de Ci-e" se entiende un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, y ejemplos de él incluyen, por ejemplo, grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo sec-butilo, grupo tere-butilo, grupo n-pentilo, grupo isopentilo, grupo neopentilo, grupo n-hexilo, grupo isohexilo y similares.

En la memoria descriptiva, por el grupo "arilo de C6.10" del "grupo arilo de C6-io que puede tener un sustituyente" se entiende un grupo hidrocarburo aromático que tiene de 6 a 10 átomos de carbono y ejemplos incluyen, por ejemplo, grupo fenilo, grupo naftilo, grupo azulenilo y similares.

En la memoria descriptiva, por el grupo "heteroarilo de 5 a 10 miembros del "grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente" se entiende un grupo heterocíclico aromático de tipo de anillo monocíclico, policíclico o condensado de 5 a 10 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de átomo de oxígeno, átomo de azufre y átomo de nitrógeno como los átomos que constituyen el anillo. Ejemplos incluyen, por ejemplo,, grupo furilo, grupo tienilo, grupo pirrolilo, grupo oxazolilo, grupo isoxazolilo, grupo tiazolilo, grupo isotiazolilo, grupo imidazolilo, grupo pirazolilo, grupo oxadiazolilo, grupo tiadiazolilo, grupo triazolilo, grupo tetrazolilo, grupo piridilo, grupo pirimidilo, grupo pirazinilo, grupo piridazinilo , grupo benzofuranilo, grupo isobenzofuranilo, grupo benzotienilo, grupo indolilo, grupo isoindolilo, grupo indazolilo, grupo bencimidazolilo, grupo benzoxazolilo, grupo bencisoxazolilo, grupo benzotiazolilo, grupo bencisotiazolilo, grupo benzoxadiazolilo , grupo benzotiadiazolilo , grupo benzotriazolilo, grupo quinolilo, grupo isoquinolilo, grupo cinolinilo, grupo quinazolinilo, grupo quinoxalinilo, grupo ftalazinilo, grupo naftiridinilo, grupo purinilo, grupo pteridinilo, grupo furopiridilo, grupo tienopiridilo, grupo pirrolopiridilo, grupo oxazolopiridilo, grupo tiazolopiridilo, grupo imidazopiridilo y similares.

En la memoria descriptiva, ejemplos del sustituyente del "grupo arilo de C6-10 que puede tener un sustituyente" y del "grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente" incluyen, por ejemplo, un átomo de halógeno, un grupo carboxilo, un grupo carbamoilo, un grupo sulfonilo, un grupo sulfamoilo, un grupo nitro y similares. El número del sustituyente es desde 1 hasta el número sustituible máximo y los grupos pueden generalmente tener de 1 a 5 sustituyentes . Como el átomo de halógeno, se puede usar cualquiera del átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo y átomo de yodo.

En las fórmulas generales, el grupo arilo de C6-io que pueden tener un sustituyente como R es preferentemente un grupo fenilo.

En las fórmulas generales, el número entero como n es preferentemente 1.

En las fórmulas generales, el grupo alquilo de Ci-6 como R1 es preferentemente un grupo alquilo de Ci-4, más preferentemente el grupo etilo.

En las fórmulas generales, el átomo de halógeno como X es preferentemente un átomo de cloro o un átomo de bromo, más preferentemente un átomo de bromo.

En la presente invención, ejemplos de la sal de cada compuesto (por ejemplo, el compuesto isómero (S) (III) , un compuesto representado por la fórmula general (IV) , un compuesto representado por la fórmula general (V) , un compuesto representado por la fórmula general (V ) y similares) incluyen, por ejemplo, sales de adición de ácidos, sales de adición de base y similares y la sal no se limita particularmente siempre que se use una sal farmacéuticamente aceptable de él. Específicamente, ejemplos de las sales de adición de ácidos incluyen sales de adición de ácidos con un ácido inorgánico tal como clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, nitrato y fosfato y sales de adición de ácidos con un ácido orgánico tal como benzoato, metanosulfonato, etamosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, maleato, fumarato, tartrato, citrato y acetato. Ejemplos de las sales de adición de base incluyen sales de adición base con un metal tal como sal de sodio, sal de potasio, sal de litio, sal de calcio y sal de magnesio; sales con una amina tal como amoníaco, trimetilamina, trietilamina, piridina, colidina y lutidina; sales de adición de base con una base orgánica tal como lisina y arginina y similares.

En la presente invención, ejemplos del solvente que forma un solvato de cada compuesto (por ejemplo, el compuesto isómero (S) (III), un compuesto representado por la fórmula general (IV), un compuesto representado por la fórmula general (V) , un compuesto representado por la fórmula general (V ) y similares) o una sal de ellos incluyen agua y solventes orgánicos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol, hexano, acetato de etilo y similares, pero no se limitan a estos ejemplos. Ejemplos del ingrediente activo del medicamento de la presente invención incluyen, por ejemplo, hidratos y similares, pero no se limitan a estos ejemplos.

Un ejemplo del método para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro de la presente invención se muestra en el Esquema 3 mencionado a continuación y un ejemplo del método para preparar el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro de la presente invención se muestra en el Esquema 4 mencionado a continuación (en los siguientes esquemas, R, R1, X y n tienen las mismas definiciones que aquellas definidas anteriormente) .

Esquema 3 [Fórmula 15] ^ compuesto semiquiral isómero (S) predominante (IX) compuesto semiquiral Isómero (S) predominante (VII) compuesto semiquiral isómero (S) predominante (VI) compuesto semiquiral isómero (5) predominante (IV) (solución madre) Esquema 4 [Fórmula 16] compuesto semiquiral isómero (R) predominante (VI) compuesto semiquiral isómero (R) predominante 0V> (solución madre) <Paso A> El paso es hacer reaccionar una amina (XI) con un haluro de bencilo ópticamente activo (X) o (X' ) en la presencia de una base para preparar un compuesto semiquiral (IX) . El compuesto (X) o (?') se puede usar en una cantidad de 1,0 a 3,0 equivalentes molares, preferentemente de 1,5 a 2,5 equivalentes molares, basado en el compuesto (XI) .

La amina (XI) es un compuesto conocido y el método de preparación de ellos se describe, por ejemplo, en el documento de Patente 2.

Esta reacción se puede realizar en un solvente en la presencia de una base. El solvente no se limita particularmente. Por ejemplo, ?,?-dimetilformamida, N-metilpirrolidona, sulfóxido de dimetilo, dioxano, tetrahidrofurano, acetonitrilo, propionitrilo y similares se pueden usar solos o en combinación. Los ejemplos preferidos del solvente incluyen tetrahidrofurano, N,N-dimetilformamida y solventes mezclados de ellos. El volumen del solvente no se limita particularmente. El solvente se puede usar en una cantidad de 2 a 20 veces (V/P) , preferentemente una cantidad de 5 a 12 veces (V/P) , más preferentemente de 7 a 10 veces (V/P) , basado en el compuesto (XI) .

La base no se limita particularmente. Por ejemplo, se pueden usar hidruros de metales alcalinos como hidruro de litio, hidruro de sodio e hidruro de potasio; metales alcalinos tales como metal litio, metal sodio y metal potasio; hidróxidos de metales alcalinos tales como hidróxido de litio, hidróxido de sodio e hidróxido de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales'- como carbonato de litio, carbonato de sodio, carbonato de potasio y carbonato de cesio; amidas de metales alcalinos tales como diisopropilamida de litio, diisopropilamida de sodio. diisopropilamida de potasio, hexametildisilazida de litio, hexametildisilazida de sodio y hexametildisilazida de potasio; metales alcoxialcalinos tales como t-butoxisodio y t-butoxipotasio; y compuestos de litio orgánico tales como n-butillitio, s-butillitio y t-butillitio. Los ejemplos preferidos de la base incluyen hidruros de metales alcalinos y un ejemplo más preferido es hidruro de sodio. La base se puede usar en una cantidad de 1,0 a 5,0 equivalentes molares, preferentemente de 2,0 a 4,0 equivalentes molares, basado en el compuesto (XI).

La temperatura máxima está generalmente en la gama de -80°C a 100 °C, preferentemente de -30°C a 50°C, más preferentemente de -20°C a 5°C. El tiempo de la reacción es generalmente de 5 minutos a 48 horas, preferentemente de 30 minutos a 24 horas, más preferentemente de 3 a 8 horas. En esta reacción, es preferible usar haluro de bencilo sustancialmente ópticamente puro (X) o (X' ) . Mediante esta reacción, la racemizacion avanza parcialmente y se obtiene el compuesto semiquiral (IX) . El compuesto semiquiral (IX) se puede usar para el paso siguiente sin nuevo tratamiento. La pureza óptica se mantiene sustancialmente desde los Pasos B a D y se puede obtener el compuesto semiquiral (IX) que tiene una pureza óptica comparable a aquella del compuesto semiquiral (IX) . De acuerdo con el estudio de los inventores de la presente invención, aún cuando la reacción con el haluro de bencilo ópticamente activo (X) o (?' ) se realice en este paso usando la amina (XI) en donde R1 es un grupo bencilo, el compuesto semiquiral (IX) como el compuesto objetivo no se puede obtener con un rendimiento satisfactorio, pero si se usa un grupo alquilo de Ci-6 como R1, el compuesto semiquiral (IX) deseado se puede obtener con un rendimiento suficiente. <Paso B> Este paso es hidrolizar el compuesto semiquiral (IX) para preparar un compuesto semiqural (VII) .

Esta reacción se puede realizar en un solvente en la presencia de una base. Si bien el solvente no se limita particularmente, por ejemplo, los alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol y terc-butanol , acetonitrilo, tetrahidrofurano, sulfóxido de dimetilo, ?,?-dimetilformamida, N-metilpirrolidona, dioxano, agua y similares se pueden usar solos o en combinación. Los ejemplos preferidos del solvente incluyen una combinación de un alcohol y agua y ejemplos más preferidos del solvente incluyen una combinación de etanol y agua. Si bien el volumen del solvente no se limita particularmente, el solvente se puede usar en una cantidad de 10 a 100 veces (V/P) , preferentemente una cantidad de 20 a 50 veces (V/P) , más preferentemente de 30 a 40 veces (V/P) , basado en el compuesto La base no se limita particularmente. Por ejemplo, se pueden usar hidróxidos de metales alcalinos tales como hidróxido de litio, hidróxido de sodio e hidróxido de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio, carbonato de potasio y carbonato de cesio; hidróxidos de amonio cuaternario tales como hidróxido de tetrameti1amonio, hidróxido de tetraetilamonio, hidróxido de tetrapropilamonio, hidróxido de tetrabutilamonio e hidróxido de benciltrimetilamonio (Tritón B) y similares. Ejemplos preferidos de la base incluyen hidróxidos de metales alcalinos y ejemplos más preferidos incluyen hidróxido de sodio. La base se puede usar preferentemente en una cantidad de 1,0 a 5,0 equivalentes molares, más preferentemente de 2,0 a 3,0 equivalentes molares, basado en el compuesto (IX) .

La temperatura de la reacción está generalmente en la gama de 0°C a 100 °C, preferentemente de 30 °C a 80 °C, más preferentemente de 40 °C a 60 °C. El tiempo de la reacción en general es preferentemente de 5 minutos a 48 horas, más preferentemente de 30 minutos a 12 horas, más preferentemente de 2 a 5 horas. <Paso C> Este paso es condensar el compuesto semiquiral (VII) y un alcohol (VIII) para preparar un compuesto semiquiral (VI) . El alcohol (VIII) se puede usar en una cantidad de 0,8 a 2,0 equivalentes molares, preferentemente de 1,0 a 1,2 equivalentes molares, basado en el compuesto (VII) .

Esta reacción se puede realizar usando un agente de condensación en un solvente en la presencia o ausencia de una base. La reacción se puede realizar en la presencia de un acelerador de la condensación. Si bien el solvente no se limita particularmente, por ejemplo, se pueden usar hidrocarburos halogenados tales como 1 , 2 -dicloroetano, cloroformo y diclorometano; ésteres de ácido acético tales como acetato de etilo y acetato de isopropilo; hidrocarburos aromáticos tales como tolueno y benceno; tetrahidrofurano, dioxano, acetonitrilo, propionitrilo y similares. Los ejemplos preferidos del solvente incluyen hidrocarburos halogenados y ejemplos más preferidos incluyen dicloroetano. Si bien el volumen del solvente no se limita particularmente, el solvente se puede usar en una cantidad de 5 a 100 veces (V/P) , preferentemente de 10 a 20 veces (V/P) , basado en el compuesto (VII) .

La base no se limita particularmente. Por ejemplo, se pueden usar bases orgánicas tales como piridina, 4-dimetilaminopiridina (DMAP) , colidina, lutidina, 1 , 8-diazabiciclo [5. .0] undec-7-eno (DBU) , l,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN) , 1,4-diazabiciclo [2.2.2] octano (DABCO) , trietilamina, diisopropiletilamina, diisopropilpentilamina y trimetilamina; hidruros de metales alcalinos tales como hidruro de litio, hidruro de sodio e hidruro de potasio; hidróxidos de metales alcalinos tales como hidróxido de litio, hidróxido de sodio e hidróxido de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio, carbonato de potasio y carbonato de cesio; bicarbonatos de metales alcalinos tales como hidrogencarbonato de sodio e hidrogencarbonato de potasio y similares .

Si bien el acelerador de condensación no se limita particularmente, se pueden usar DMAP, l-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt) , 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) , 3 , 4 -dihidro-3 -hidroxi-4 -oxo-1, 2 , 3-benzotriazina (HODhbt) , N-hidroxi-5-norborneno-2 , 3-dicarboxiimida (HONB) , pentafluorofenol (HOPfp) , ¦ N-hidroxiftalimida (HOPht) , N-hidroxisuccinimida (HOSu) y similares. Como el acelerador de la condensación, se prefiere DMAP. El acelerador de la condensación se puede usar en una cantidad de 0,001 a 1,0 equivalente molar, preferentemente de 0,05 a 0,5 equivalente molar, basado en el compuesto (VII).

Si bien el agente de condensación no se limita particularmente, se pueden usar diciclohexilcarbodiimida (DCC) , diisopropilcarbodiimida (DIPCI) , N- (3-dimetilaminopropil) -N' -etil-carbodiimida (comúnmente denominada carbodiimida soluble en agua (WSCI)), WSC-HCl y similares. Como el agente de condensación, WSC-HCl es preferido. El agente de condensación se puede usar en una cantidad de 1,0 a 3,0 equivalentes molares, preferentemente de 1,0 a 1,2 equivalentes molares, basado en el compuesto (VII) .

La temperatura de la reacción es generalmente de 0°C a 100°C, preferentemente de 1°C a 80°C, más preferentemente de 10 °C a 30 °C. El tiempo de la reacción en general es preferentemente de 5 minutos a 48 horas, más preferentemente de 30 minutos a 24 horas, más preferentemente de 8 a 16 horas. cPaso D> Este paso es oxidar el átomo de azufre del compuesto semiquiral (VI) para preparar el compuesto semiquiral (IV) .

Como el método de oxidación, se pueden usar los métodos ordinarios para convertir el átomo de azufre en el grupo 4 sulfonilo. Como el agente de oxidación, por ejemplo, se pueden usar peróxido de hidrógeno acuoso como se usa en la reacción de oxidación usando una cantidad catalítica de tungstato de sodio, dicloruro de dióxido de molibdeno, o pentacloruro de tantalio, perborato de sodio, Oxone (marca registrada) , peryodato de sodio, peryodato de potasio, ácido meta-cloroperbenzoico (mCPBA) , clorobromato de piridinio (PCC) , dicromato de piridinio (PDC) , N-clorosuccinimida (NCS) , N-bromosuccinimide (NBS) , N-yodosuccinimida (NIS) , yodo, bromo y similares. Un agente de oxidación preferido es una combinación de pentacloruro de tantalio y peróxido de hidrógeno acuoso. El pentacloruro de tantalio se puede usar en una cantidad de 0,001 a 1,0 equivalente molar, preferentemente de 0,05 a 0,5 equivalente molar, basado en el compuesto (VI). El peróxido de hidrógeno acuoso se puede usar en una cantidad de 1,0 a. 10 equivalentes molares, preferentemente de 4,0 a 6,0 equivalentes molares, basado en el compuesto (VI) .

El solvente no se limita particularmente. Ejemplos incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes tales como metanol, etanol, isopropanol y terc-butanol , acetonitrilo, acetona, tetrahidrofurano, diclorometano, cloroformo, 1, 2-dicloroetano, tetracloruro de carbono, ?,?-dimetilformamida, ácido acético y similares. Ejemplos preferidos del solvente incluyen alcoholes y ejemplos más preferidos incluyen 2 -propanol. Si bien el volumen del solvente no se limita particularmente, el solvente puede usarse en una cantidad de 5 a 100 veces (V/P) , preferentemente una cantidad de 10 a 30 veces (V/P) , basado en el compuesto (VI) .

La temperatura de la reacción puede ser generalmente de 0°C a 100 °C, preferentemente de 10 °C a 60 °C, más preferentemente de 10°C a 30°C. El tiempo de la reacción en general es preferentemente de 5 minutos a 48 horas, más preferentemente de 30 minutos a 24 horas, más preferentemente de 8 a 16 horas. <Paso E> Este paso es cristalizar en forma preferencial los cristales de racemato predominante de baja pureza óptica desde el compuesto semiquiral (IV) para preparar el isómero óptico (V) o (V) con una elevada pureza óptica.

Este paso es cristalizar los cristales de racemato predominante en un solvente que contiene el compuesto semiquiral (IV) y luego eliminar los cristales de racemato predominantes resultantes para obtener el isómero óptico (V) o (V ) con elevada pureza óptica que queda en la solución madre.

Ejemplos del solvente incluyen alcoholes tales como metanol, etanol, n-propanol e isopropanol. Los alcoholes que tienen una cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 6 átomos de carbono son preferidos y etanol e isopropanol son particularmente preferidos. La cantidad del solvente es una cantidad de 2 a 20 veces (V/P) , preferentemente una cantidad de 4 a 10 veces (V/P) , más preferentemente una cantidad de 5 a 8 veces (V/P) , basado en el compuesto (IV) .

La cristalización se puede realizar disolviendo el compuesto semiquiral (IV) en el solvente y agitar la solución a una temperatura de 10 °C a 40 °C, preferentemente de 10 °C a 20°C, durante 30 minutos a dos días, preferentemente de 15 a 20 horas. Si se desea aumentar el rendimiento de los cristales, la agitación se puede realizar entonces durante 30 minutos a 24 horas, preferentemente de 2 a 5 horas, refrigerando la solución a una temperatura de -10°C a 10°C, preferentemente de -5°C a 5°C. Los cristales de racemato predominante pueden ser cristales que comprenden absolutamente racemato o pueden ser generalmente los cristales de baja pureza óptica (del 0% al 40%ee) que contiene del 60% al 100% de los componentes de racemato.

Este paso se puede realizar en la presencia de cristales de semillas preparados por separado del racemato. Los cristales de semillas del racemato usado en este proceso son cristales del racemato del compuesto representado por la fórmula general (IV) . Ejemplos incluyen, por ejemplo, cristales de racemato de éster de bencilo del ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] irimidin-2 -il } amino) metil] -4 - (trifluorometil ) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil}acético .

Además, los cristales de racemato predominantes obtenidos en el paso E se pueden usar como los cristales de semillas de racemato sin ningún tratamiento. El cristal obtenido por separado mediante la preparación de racemato del compuesto representado por la fórmula general (IV) y la cristalización sucesiva también se puede usar como los cristales de semillas del racemato. Dicho racemato del compuesto representado por la fórmula general (IV) se puede preparar, por ejemplo, mediante el método que se describe a continuación.

En esta reacción, el compuesto racemato (I) y un alcohol (VIII) se condensan para preparar el racemato (IV) . El alcohol (VIII) se puede usar en una cantidad de 0,8 a 2,0 equivalentes molares, preferentemente de 1,0 a 1,2 equivalentes molares, basado en el compuesto racemato (I) .

Esta reacción se puede realizar en un solvente usando un agente de condensación en la presencia o ausencia de una base. La reacción se puede realizar en la presencia de un acelerador de la condensación. El solvente no se limita particularmente. Por ejemplo, se pueden usar hidrocarburos halogenados tales como 1,2-dicloroetano, cloroformo y diclorometano; ésteres del ácido acético tales como acetato de etilo y acetato de isopropilo; hidrocarburos aromáticos tales como tolueno y benceno; tetrahidrofurano, dioxano, acetonitrilo, propionitrilo y similares. Los ejemplos preferidos del solvente incluyen hidrocarburos halogenados y ejemplos más preferidos incluyen diclorometano . Si bien el volumen del solvente no se limita particularmente, el solvente se puede usar en una cantidad de 5 a 100 veces (V/P) , preferentemente en una cantidad de 10 a 20 veces (V/P) , basado en el compuesto racemato (I) .

La base no se limita particularmente. Por ejemplo, se puede usar bases orgánicas tales como piridina, 4-dimetilaminopiridina (DMAP) , colidina, lutidina, 1 , 8 -diazabiciclo [5.4.0] undec-7 -eno (DBU) , l,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN) , 1,4-diazabiciclo [2.2.2] octano (DABCO) , trietilamina, diisopropiletilamina, diisopropilpentilamina y trimetilamina; hidruros de metales alcalinos tales como hidruro de litio, hidruro de sodio e hidruro de potasio; hidróxidos de metales alcalinos tales como hidróxido de litio, hidróxido de sodio e hidróxido de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio, carbonato de potasio y carbonato de cesio; bicarbonatos de metales alcalinos tales como hidrogencarbonato de sodio e hidrogencarbonato de potasio y similares .

Si bien el acelerador de la condensación no se limita particularmente, se pueden usar DMAP, l-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt) , 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) , 3 , 4 -dihidro-3 -hidroxi -4 -???-1 , 2 , 3 -benzotriazina (HODhbt) , N-hidroxi-5-norborneno-2 , 3-dicarboxiimida (????) , pentafluorofenol (HOPfp) , N-hidroxiftalimida (HOPht) , N-hidroxisuccinimida (HOSu) y similares. Como el acelerador de la condensación, se prefiere D AP. El acelerador de la condensación se puede usar en una cantidad de 0,001 a 1,0 equivalente molar, preferentemente de 0,05 a 0,5 equivalente molar, basado en el compuesto racemato (I) .

Si bien el agente de la condensación no se limita particularmente, se pueden usar diciclohexilcarbodiimida (DCC) , diisopropilcarbodiimida (DIPCI) , N- (3-dimetilaminopropil) -N' -etil -carbodiimida (comúnmente denominadas carbodiimida soluble en agua (WSCI)), WSC-HCl y similares. Como el agente de condensación, se prefiere WSC-HCl. El agente de condensación se puede usar en una cantidad de 1,0 a 3,0 equivalentes molares, preferentemente de 1,0 a 1,2 equivalentes molares, basado en el compuesto racemato (I) .

La temperatura de la reacción es generalmente de 0°C a 100 °C, preferentemente de 0°C a 80°C, más preferentemente de 10 °C a 30 °C. El tiempo de la reacción es en general preferentemente de 5 minutos a 48 horas, más preferentemente de 30 minutos a 24 horas, más preferentemente de 8 a 16 horas.

Las cristalizaciones de racemato del compuesto representado por la fórmula general (IV) (preparación de cristales de semillas del racemato) se pueden realizar en condiciones similares a aquellas aplicadas a la cristalización preferencial de los cristales de racemato predominantes del compuesto semiquiral (IV) .

Más específicamente, el compuesto racemato (IV) se puede disolver en un solvente y la solución se puede agitar a una temperatura de 10°C a 40CC, preferentemente de 15°C a 20°C, durante 30 minutos a dos días, preferentemente de 15 a 24 horas. Si se desea aumentar el rendimiento de los cristales, se puede realizar la agitación también durante 30 minutos a 24 horas, preferentemente de 2 a 5 horas, enfriando la solución a una temperatura de -10°C a 10°C, preferentemente de -5°C a 5°C. Ejemplos del solvente incluyen alcoholes tales como metanol, etanol, n-propanol e isopropanol. Se prefieren los alcoholes que tienen una cadena lineal o ramificada que contienen de 1 a 6 átomos de carbono y se prefieren especialmente etanol e isopropanol . La cantidad del solvente es una cantidad de 2 a 20 veces (V/P) , preferentemente una cantidad de 4 a 10 veces (V/P) , más preferentemente una cantidad de 5 a 8 veces (V/P) , basada en el compuesto racemato (IV) . <Paso F> Este paso es realizar la desprotección del compuesto (V) o (V ) de elevada pureza óptica para preparar el compuesto isómero (S) (III) o el compuesto isómero (R) (II) sustancialmente ópticamente puro .

La reacción se puede realizar mediante reducción catalítica usando un catalizador de metal y una fuente de hidrógeno en un solvente, o una reacción de hidrólisis usando una base en un solvente. Cuando la desprotección se realiza mediante la reducción catalítica, los alcoholes tales como metanol, etanol, isopropanol y terc-butanol ; éteres tales como éter dietílico, tetrahidrofurano y dioxanos; esteres de ácido acético tales como acetato de etilo y acetato de isopropilo; ácido acético; agua y similares se pueden usar como solventes. Como el solvente se prefieren los alcoholes y se prefiere más el etanol. El solvente se puede usar como en una cantidad de 5 a 30 veces (V/P) , preferentemente una cantidad de 5 a 15 veces (V/P) , basada en el compuesto (V) o (V ) .

Como la fuente de hidrógeno se pueden usar, por ejemplo, hidrógeno, ciclohexadieno, ácido fórmico, formato de amonio y similares. Como la fuente de hidrógeno, se prefiere el hidrógeno.

Como el catalizador de metal, se pueden usar paladío/carbono, negro de paladio, níquel Raney, dióxido de platino, negro de platino y similares. Como el catalizador de metal, se prefiere paladio/carbono. Paladio/carbono se puede usar en una cantidad de 0,001 a 0,5 veces (P/P) , preferentemente en una cantidad de 0,05 a 0,2 veces (P/P), basada el compuesto (V) o (V) en términos de la cantidad de 10% Pd-C (húmedo) .

La reducción catalítica generalmente se puede realizar a una temperatura en la gama de 0°C a 100 °C, preferentemente de 10 °C a 60 °C, más preferentemente de 10 °C a 30°C. El tiempo de la reacción es en general preferentemente de 5 minutos a 24 horas, más preferentemente de 30 minutos a 1S horas, más preferentemente de 1 a 6 horas .

Cuando la desprotección se realiza mediante la reacción de hidrólisis, se pueden usar, por ejemplo, alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, 2 -propanol y t-butanol, acetonitrilo, propionitrilo, tetrahidrofurano, sulfóxido de dimetilo, N,N-dimetilformamida, N-metilpirrolidona, dioxanos, agua y similares solos o en combinación, aunque el solvente no se limita particularmente. Como la base, se pueden usar, por ejemplo, hidróxidos de metales alcalinos tales como hidróxido de litio, hidróxido de sodio e hidróxido de potasio; carbonatos de metales alcalinos tales como carbonato de litio, carbonato de sodio, carbonato de potasio y carbonato de cesio; hidróxidos de amonio cuaternario tales como hidróxido de tetrametilamonio, hidróxido de tetraetilamonio, hidróxido de tetrapropilamonio, hidróxido de tetrabutilamonio e hidróxido de benciltrimetilamonio (Tritón B) y similares, aunque la base no se limita particularmente.

El haluro de bencilo ópticamente activo (X) o (X' ) se puede sintetizar, por ejemplo, mediante el método que se describe a continuación.

[Fórmula 18] Esta reacción consiste en el paso de halogenar l-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etanol (XII) o (XII1) ópticamente activo en la presencia de un agente de halogenación para preparar en forma eficiente 1-halo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano (X) o (?') ópticamente activo sin reducir sustancialmente la pureza óptica .

Ejemplos del agente de halogenación usado para esta reacción incluyen agentes de cloración tales como cloruro de tionilo, tricloruro de fósforo, pentacloruro de fósforo y oxicloruro de fósforo; agentes de brotación tales como tribromuro de fósforo, tribromuro de fósforo y bromuro de hidrógeno (solución al 30% en ácido acético) , tribromuro de fósforo y piridina, N-bromosuccinimida y sulfuro de metilo, N-bromosuccinimida y trifenilfosfina, 1 , 2 -dibromo-1 , 1 , 2 , 2 -tetracloroetano y trifenilfosfina, bromuro de bromodimetilsulfonio, perbromuro de bromuro de piridinio y hexametildisilana, bromo y trifenilfosfina, bromo y tributilfosfina, bromo y sulfuro de metilo, bromuro de zinc y trifenilfosfina y azodicarboxilato de dimetilo, bromuro de litio y clorotrimetilsilano, bromuro de litio y anhídrido trifluoroacético, bromotrimetilsilano, tetrabromuro de carbono y trifenilfosfina y bromuro de tionilo; y agentes de yodación tales como yoduro de hidrógeno y yoduro de potasio y ácido fosfórico. Cuando el agente halogenación es un agente de brotación, se prefieren tribromuro de fósforo y bromuro de hidrógeno (solución al 30% en ácido acético), 1,2-dibromo-1 , 1 , 2 , 2 -tetracloroetano y trifenilfosfina y N-bromosuccinimida y sulfuro de metilo.

La reacción usando tribromuro de fósforo y bromuro de hidrógeno como el agente de halogenación y la reacción usando 1,2-dibromo-1 , 1 , 2 , 2 -tetracloroetano y trifenilfosfina como el agente de halogenación se explican en particular, específicamente a continuación. <Reacción usando tribromuro de fósforo y bromuro de hidrógeno (solución al 30% en ácido acético) como agente de halogenación> Cuando se usan tribromuro de fósforo y bromuro de hidrógeno (solución al 30% en ácido acético) como el agente de halogenación, se usa tribromuro de fósforo en una cantidad de 0,3 a 2,0 equivalentes molares, preferentemente de 0,4 a 0,6 equivalente molar, basada en el feniletanol (XII) o (XII1). Se usa bromuro de hidrógeno en una cantidad de 0,7 a 3,0 equivalentes molares, preferentemente de 0,8 a 1,2 equivalentes molares, basada en el feniletanol (XII) o (XII1).

Esta reacción se puede realizar en la presencia o ausencia de un solvente. Cuando la reacción se realiza en la presencia de un solvente, el solvente que se ha de usar no se limita particularmente siempre que no participe en la reacción. Ejemplos incluyen, por ejemplo, hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno, xileno, mesitileno, clorobenceno, 1,2-diclorobenceno y nitrobenceno; hidrocarburos alifáticos tales como n-pentano, n-hexano, ciclohexano, n-heptano, n-octano y n-decano; hidrocarburos halogenados tales como cloruro de metileno, 1 , 2 -dicloroetano , cloroformo y tetracloruro de carbono y similares. Entre ellos, se prefieren benceno, tolueno, xileno, cloruro de metileno, 1, 2 -dicloroetano, n-pentano, n-hexano y n-heptano y especialmente, se prefieren más tolueno, cloruro de metileno y n-heptano. Estos solventes se pueden usar solos o en combinación y la cantidad del solvente que se ha de usar no se limita particularmente.

La temperatura de la reacción puede estar generalmente en la gama de -50°C a 150CC, más preferentemente de -20°C a 80°C, más preferentemente de 0°C a 15 °C. Generalmente, el tiempo de la reacción es preferentemente de 5 minutos a 48 horas, más preferentemente de 30 minutos a 36 horas, más preferentemente de 12 a 24 horas. <Reacción usando 1 , 2 -dibromo-1 , 1 , 2 , 2 -tetracloroetano y trifenilfosfina como agente de halogenación> Cuando se usan 1 , 2 -dibromo-1 , 1 , 2 , 2 -tetracloroetano y trifenilfosfina como el agente de halogenación, el 1,2-dibromo-1 , 1 , 2 , 2 -tetracloroetano se usa en una cantidad de 1,0 a 3,0 equivalentes molares, preferentemente de 1,0 a 1,2 equivalentes molares, basada en el feniletanol (XII) o (XII1) . Trifenilfosfina se usa en una cantidad de 1,0 a 3,0 equivalentes molares, preferentemente de 1,0 a 1,2 equivalente molar, basado en el feniletanol (XII) o (???').

Esta reacción se puede realizar en la presencia de un solvente. El solvente que se ha de usar no se limita particularmente siempre que el solvente no participe en la reacción. Ejemplos incluyen, por ejemplo, hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno, xileno, mesitileno, clorobenceno, 1,2-diclorobenceno y nitrobenceno; hidrocarburos alifáticos tales como n-pentano, n-hexano, ciclohexano, n-heptano, n-octano y n-decano; hidrocarburos halogenados tales como cloruro de metileno, 1 , 2 -dicloroetano , cloroformo y tetracloruro de carbono y similares. Los ejemplos preferidos del solvente incluyen hidrocarburos aromáticos o hidrocarburos halogenados, ejemplos más preferidos incluyen benceno, tolueno, xileno, cloruro de metileno y 1, 2 -dicloroetano y ejemplos particularmente preferidos incluyen tolueno, cloruro de metileno y 1, 2 -dicloroetano. Estos solventes se pueden usar solos o en combinación. Si bien el volumen del solvente no se limita particularmente, el solvente se puede usar en una cantidad de 1 a 10 veces (V/P) , preferentemente en una cantidad de 2 a 4 veces (V/P) , basada en el feniletanol (XII) o (XII ' ) .

La temperatura de la reacción puede estar generalmente en la gama de -50°C a 150°C, más preferentemente de -20°C a 80°C, más preferentemente de 0°C a 30°C. Generalmente, el tiempo de la reacción es preferentemente de 5 minutos a 48 horas, más preferentemente de 30 minutos a 36 horas, más preferentemente de 1 a 2 horas .

El compuesto isómero (S) (III), o una sal de él, o un solvato de él tiene acción de supresión contra la expresión del mARN de PCSK9 como se demuestra específicamente en los ejemplos que se describen a continuación. La sustancia también tiene acción de reducción sobre la cantidad de proteína PCSK9 y acción de aumento sobre la cantidad del receptor de LDL y tiene una acción del colesterol LDL en la sangre in vivo.

Si bien la presente invención no está limitada por la siguiente estimación, se estima que el compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él, o un solvato de él suprime la producción de la proteína PCSK9, y de ese modo suprime la descomposición del receptor de LDL y aumenta la cantidad del receptor de LDL y como resultado, la sustancia promueve la incorporación de LDL en la sangre en el receptor de LDL. También se estima que dicha promoción de la incorporación de LDL en la sangre en el receptor de LDL constituye uno de los factores para presentar la acción de reducción en el valor del colesterol LDL en la sangre.

En consecuencia, un medicamento y una composición farmacéutica que contiene el compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él, o un solvato de él, como un ingrediente activo se puede usar como un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la hipercolesterolemia de LDL así como enfermedades tales como dislipidemia (hiperlipidemia) , arteriosclerosis , aterosclerosis , enfermedades vasculares periféricas, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar, trastornos funcionales cardiovasculares, angina de pecho, isquemia, isquemia cardíaca, trombosis, infarto de miocardio, trastornos de reperfusión, reestenosis después de angioplastia e hipertensión.

Además, dado que se sabe que las proproteína convertasas (PC) que incluyen PCSK9 son enzimas involucradas en el inicio, avance, agravamiento y similares de cáncer, obesidad, diabetes, enfermedad de Alzheimer y enfermedades infecciosas virales, se puede esperar el uso de un medicamento y una composición farmacéutica que comprende el compuesto isómero (S) (III) , o una sal de él, o un solvato de él como un ingrediente activo, como un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de las enfermedades mencionadas anteriormente en las cuales están involucradas las PC.

El compuesto racemato (I) y el compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44 (ácido trans- { 4 - [ ( { 2 - [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2-il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil }acético) tiene acción de supresión contra la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa, como se demuestra específicamente en los ejemplos que se describen a continuación. En consecuencia, el uso del compuesto racemato (I), el compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44, o un enantiómero de él, o una sal de él, o un solvato de él se puede esperar como un medicamento para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad derivada de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa (por ejemplo, enfermedades que acompañan la producción de isoprenoides (ácido farnesilpirofosfórico, ácido geranilgeranilpirofosfórico y similares) que realizan la producción posterior a la transduccion de diferentes proteínas tales como Ras, Rho y Rae con lípidos, específicamente, inflamación, cáncer, enfermedad de Alzheimer, osteoporosis, hipertrofia prostática, enfermedades glomerulares , verminación, infección por virus, psoriasis, degeneración macular y similares) .

Como el medicamento de la presente invención, el ingrediente activo mencionado anteriormente se puede administrar solo. Preferentemente, el ingrediente activo se puede administrar como una composición farmacéutica para la administración oral o parenteral producible mediante métodos conocidos para los expertos en el arte. Ejemplos de la composición farmacéutica adecuados para la administración oral incluyen, por ejemplo, tabletas, cápsulas, polvos, gránulos sutilizados, gránulos, soluciones, jarabes y similares y ejemplos de la composición farmacéutica adecuados para la administración parenteral incluyen, por ejemplo, inyecciones tales como inyecciones intravenosas e inyecciones intramusculares, infusiones por goteo, supositorios, inhaladores, gotas oculares, gotas nasales, preparaciones transdérmicas , preparaciones transmucosales y similares, aunque, la composición farmacéutica no se limita a estos ejemplos.

La composición farmacéutica mencionada anteriormente se puede preparar agregando aditivos farmacológica y farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de los aditivos farmacológica y farmacéuticamente aceptables incluyen, por ejemplo, excipientes, gigantes, rellenos, agentes de desintegración, surfactantes , lubricantes, agentes de dispersión, agentes tampones, conservantes, correctores, perfumes, agentes de recubrimiento, diluyentes y similares, pero no se limitan a estos ejemplos.

La dosis del medicamento de la presente invención no se limita particularmente y la dosis se puede elegir adecuadamente según el tipo de una enfermedad, el propósito de la administración, es decir el uso profiláctico o el uso terapéutico, un tipo del ingrediente activo y similares, y la dosis también se puede aumentar o disminuir adecuadamente según diferentes factores que se deben tomar en consideración generalmente, tales como el peso y la edad del paciente, los síntomas y la vía de administración. Por ejemplo, para la administración, el medicamento se puede usar en una cantidad en la gama de 0,1 a 500 mg en términos del peso del ingrediente activo como una dosis diaria para un adulto. Los expertos en el arte pueden elegir adecuadamente la dosis y la misma no está limitada dentro de la gama mencionada anteriormente .

Ejemplos La presente invención se explicará también con referencia a ejemplos. Sin embargo, la presente invención no se limita a estos ejemplos. Las abreviaturas que se usan en los siguientes ejemplos tienen las siguientes definiciones: s: Singlete d: Doblete t: Triplete q: Cuarteto m: Multiplete br : Ancho J: Constante acoplamiento Hz: Hertz CDCl3 : Cloroformo deuterado ^"H-NMR: Resonancia magnética nuclear de protón IR: Espectro de absorción de infrarrojo Ejemplo : Establecimiento del método para preparar el compuesto isómero (S) (III) sustancialmente ópticamente puro Ejemplo 1-1: Resolución óptica usando la columna quiral Se ha revelado que, cuando se aplicaron las siguientes condiciones, cada enantiómero se puede separar del compuesto racemato (I) preparado de acuerdo con el método que se describe en el documento de Patente 2 (Publicación de Patente Internacional WO2008/129951) , Ejemplo 45, y que las condiciones fueron utilizables para la medición de las purezas ópticas del compuesto isómero (S) (III) y el compuesto isómero (R) (II) mediante el análisis de HPLC quiral. La presente invención por lo tanto proporciona un método para medir la pureza óptica del compuesto racemato (I), el compuesto isómero (S) (III) o el compuesto isómero (R) (II) , o una sal de él, o un solvato de él usando las siguientes condiciones de análisis de HPLC quiral (especialmente la combinación de la columna y la fase móvil que se menciona a continuación) .

Columna: CHIRALCEL OD-H Fase móvil: hexano/etanol/TFA = 90/10/0.1 Velocidad de flujo: 1,0 mL/min Temperatura de la columna: 40°C Longitud de onda de detección: 242 nm Tiempo de retención: primer pico: 21,3 minutos (isómero (R) ) , segundo pico: 23,7 minutos (isómero (S) ) Sin embargo, también se halló que, como el solvente de la fase móvil incluido en las condiciones mencionadas anteriormente contenía EtOH y TFA, reaccionaron con ácido carboxílico del compuesto racemato (I) y/o cada enantiómero para generar un producto de la descomposición (compuesto éster de etilo) .

En consecuencia, si bien la resolución óptica usando la columna quiral en las condiciones mencionadas anteriormente fue utilizable para la medición de la pureza óptica (análisis de HPLC quiral) , fue inadecuada para la preparación de cada uno de los enantiómeros ópticamente puros, especialmente para la preparación a gran escala.

Ejemplo 1-2. Método para preparar el compuesto isómero (S) sustancialmente ópticamente puro (III) mediante cristalización preferencial La descripción del método para preparar el compuesto isómero (S) sustancialmente ópticamente puro (III) mediante cristalización preferencial realizada por los inventores de la presente invención se muestra a continuación como el Esquema 5.

La configuración absoluta de cada compuesto se determinó a partir de la configuración absoluta de (R) -1-bromo- 1- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etano confirmada en el Paso 1.

Además, la configuración absoluta de cada compuesto (III) (ácido (S) -trans- {4- [ ( {2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil ) fenil] etil} {5- [2-(metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil ) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil } acético) obtenida en el Paso 6 se determinó mediante análisis de HPLC quiral en las condiciones que se describen en la sección 1-1 precedente .

Además, las purezas ópticas de 1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil ) fenil] etano obtenido en el Paso 1, y del éster de bencilo del ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexiljacético obtenido en los Pasos 4 y 5 se determinaron mediante el análisis de HPLC quiral en las siguientes condiciones. La presente invención por lo tanto proporciona un método para medir la pureza óptica de cada compuesto, o una sal de él, o un solvato de él, que usa las siguientes condiciones de análisis de HPLC quiral (especialmente la combinación de la siguiente columna quiral y la siguiente fase móvil) .

Condiciones de análisis de HPLC quiral para 1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano Columna: CHIRALPAK AS-RH Fase móvil: etanol/agua = 60/40 Velocidad de flujo: 0,5 mL/minuto Temperatura de la columna: 25°C Longitud de onda de detección: 220 nm Tiempo de retención: primer pico: 21,8 minutos (isómero (R) ) segundo pico: 26,0 minutos (isómero (S) ) Condiciones de análisis de HPLC quiral para el éster de benc del ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( {l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil }acético Columna: CHIRALCEL OD-H Fase móvil: hexano/etanol = 80/20 Velocidad de flujo: 1,0 mL/min Temperatura de la columna: 40°C Longitud de onda de detección: 242 nm Tiempo de retención: primer pico: 11,3 minutos (isómero (R) ) , segundo pico: 13,0 minutos (isómero (S) ) Esquema 5 [Fórmula 19] predominante compuesto (5) semiquiral de Isómero (S) predominarte compuesto (6) semiquiral de isómero (5) predominante predominante Compuesto ópticamente activo (7) (Solución madre) (En el esquema, Et representa el grupo etilo y Bn representa grupo bencilo) .

Paso 1: Preparación de (R) -1-bromo-l- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etano Se preparó (R) - 1 -Bromo- 1- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etano mediante el método descrito en 1- (a) mencionado a continuación y la configuración absoluta de él confirmó de la siguiente manera. Específicamente, la configuración se realizó convirtiendo el (R) -1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano resultante, en (S) -1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etilamina y comparando el signo de su rotación específica medida realmente con aquella de un producto estándar comercialmente disponible de (S)-l-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etilamina de la configuración absoluta conocida .

Además, también se preparó (R) -1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano mediante el método descrito en 1- (b) mencionado a continuación. 1- (a) : Preparación de (R) -1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano (1) Bajo una atmósfera de argón, 1, 2 -dibromo- 1, 1, 2, 2 -tetracloroetano (7,57 g, 23,2 mmol) se disolvió en tolueno (12,5 mL) , a la solución se agregó trifenilfosfina (6,1 g, 23,2 mmol) a 0°C y la mezcla se agitó durante 30 minutos. A esta mezcla de la reacción se agregó gota a gota, se agregó (S)-l-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etanol (1) (5,0 g, 19,4 mmol, >99,5%ee) en tolueno (12,5 mL) a 0°C durante 10 minutos o más y luego la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora a la misma temperatura. A la mezcla de la reacción se agregó n-hexano (25 mL) y la mezcla se filtró a través de Celita. El filtrado se lavó sucesivamente con agua, carbonato de hidrógeno de sodio acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio y luego se evaporó bajo presión reducida. El residuo resultante se destiló bajo presión reducida (56°C, 0,7 mmHg) para obtener 5,52 g de (R) - 1-bromo- 1- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etano (2) como un aceite incoloro (rendimiento: 88,6%).

Análisis de HPLC quiral : pureza óptica >99,5%ee (pico principal: primer pico), índice de conversión =99% [ ]D25 +59, 1 (c = 1,03, CHC13) XH-N R (CDCI3) d: 2,08 (3H, d, J=7,lHz), 5,21 (1H, q, J=7,lHz), 7,81 (1H, s) , 7,87 (2H, s) .

Confirmación de la configuración absoluta de (R) -1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano A una solución de (R) -1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano (2) (106 mg, 0,336 mmol, 99%ee) obtenida en 1- (a) mencionado anteriormente en N,N-dimetilformamida (1 mL) se agregó azida de sodio (64,4 mg, 0,990 mmol) y la mezcla se agitó a una temperatura de -18 a -15°C durante 4 horas. La solución de la reacción se extrajo con acetato de etilo/n-hexano (1:1) y agua, la capa orgánica se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y luego se concentró bajo presión reducida y se obtuvieron 111,5 mg de 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil azida (producto crudo: 111,5 mg) .

^-NMR (CDC13) d: 1,61 (3H, d, J=6,8Hz), 4,79 (1H, q, J=6,8Hz), 7, 78 (2H, s) , 7, 84 (1H, s) .

La 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil azida (producto crudo: 111,5 mg) resultante se disolvió en metanol (6 mL) y a la solución se agregó paladio- fibroina (18 mg) para la sustitución de hidrógeno y luego la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de la reacción se filtró a través de Celita, el filtrado se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice (cloroformo : metanol = 50:1 a 5:1) y se obtuvieron 77,6 mg de 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etilamina como un aceite incoloro (rendimiento: 91%, para 2 pasos) .

^-NMR (CDC13) d: 1,42 (3H, d, J=6,8Hz), 1,58 (2H, br-s) , 4,30 (1H, q, J=6,8Hz), 7,75 (1H, s) , 7,85 (2H, s) .

La rotación específica de la l-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etilamina resultante fue la siguiente. [a]D25 -15,9 (c = 1,31, CHCI3) La rotación específica de un producto estándar comercialmente disponible ( (S) -1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etilamina (Central Glass Co., Ltd., Lot. 0102000, pureza óptica: 99%ee) ) fue la siguiente. [cx]D25 -15,9 (c = 1,15, CHCI3) El signo de la rotación específica medida realmente se halló que estaba de acuerdo con aquella del producto estándar disponible comercialmente y por consiguiente, se confirmó que la l-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etilamina era el isómero (S) . Además, como esta amina se obtuvo a partir de 1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano a través de una reacción de sustitución nucleófila del ion azida, se confirmó que 1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano obtenido en 1- (a) mencionado anteriormente era el isómero (R) . l-(b): Preparación de (R) -1 -bromo- 1- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etano (2) Bajo una atmósfera de argón, a (S)-l-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etanol (1) (300 g, 1,16 mol, 96%ee) se agregó gota a gota tribromuro de fósforo (157,3 g, 0,58 mol) a una temperatura inferior a 20°C sobre un baño de agua y la mezcla se agitó a una temperatura de 19°C a 22°C durante 30 minutos. La mezcla de la reacción se enfrió y se le agregó gota a gota bromuro de hidrógeno (solución al 30% en ácido acético, 228 mL, 1,16 mol) a una temperatura menor de 0°C y la mezcla se agitó a una temperatura de 13 °C a 15°C durante 16 horas. La mezcla de la reacción se vertió en agua helada y la mezcla se extrajo con n-hexano (3 L x 2) . Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron sucesivamente con carbonato de hidrógeno de sodio acuoso saturado (3 L) y salmuera saturada (3 L) , es secó sobre sulfato de magnesio anhidro y luego se concentró bajo presión reducida (90 a 100 mmHg) para obtener 389,2 g de un producto crudo. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice: 900 g, solvente de desarrollo: n-hexano) para obtener 349,8 g de (R) - 1-bromo- 1- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etano (2) como un aceite incoloro (rendimiento: 93,8%).

El primer pico se observó como el pico principal en el análisis de HPLC quiral como se describe a continuación y por consiguiente, se confirmó que 1-bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano preparado en l-(b) también era el isómero (R) , como el obtenido en 1- (a) .

Análisis de HPLC quiral: pureza óptica: >93,9%ee (pico principal: primer pico), índice de conversión: 97,8% Hí-NMR (CDC13) d: 2,08 (3H, d, J=7,lHz), 5,21 (1H, q, J=7,lHz), 7,81 (1H, s) , 7,87 (2H, s) Paso 2 : Preparación del compuesto semiquiral de isómero (S) predominante del ácido trans- {4 - [ ( { 2 - [ ( { 1 - [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2-il }amino) metil] -4- (trifluorometil ) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil }acético Bajo una atmósfera de argón, a una solución de trans- [4- ( [ (etil) {2- [ ({5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2 -il Jamino) metil] -4- (trifluorometil) fenil }amino] metil) ciclohexil] acetato de etilo (3) (565,4 g, 0,99 mol) sintetizado mediante el método que se describe en el documento de Patente 2 (Publicación de Patente Internacional WO2008/129951) en tetrahidrofurano anhidro (THF, 2,26 L) se agregó NaH (60% en aceite, 119 g, 2,98 mol) bajo refrigeración con hielo y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de la reacción se enfrió a -30°C y se le agregó gota a gota una solución de (R) -1-bromo-l-[3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano (2) (682 g, 1,99 mol, 93,9%ee) obtenido en el Paso 1 en N, -dimetilformamida anhidra (4,53 L) de manera tal que la temperatura del interior del sistema de la reacción se mantuviera y fuera -15°C o menor y la mezcla se agitó a una temperatura de -15°C a -1°C durante 5 horas. La mezcla de la reacción se preparó dentro de una solución mezclada de agua helada (35 L) y tolueno (30 L) , la mezcla se agregó con ácido cítrico hasta que el pH fue 6,9 y la capa orgánica se separó.

La capa acuosa se extrajo dos veces con tolueno (20 L) , las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y luego se concentraron bajo presión reducida y se obtuvo un producto crudo. El producto crudo se disolvió en etanol (8 L) , a la solución se agregó 2 M NaOH acuoso (1,24 L, 2,48 mol) bajo enfriamiento con hielo y la mezcla es agitó a 50 °C durante 3,5 horas. A la mezcla de la reacción se agregó 1 M HCl acuoso bajo enfriamiento con hielo hasta que el pH de la mezcla fue 5,4, la mezcla se vertió en agua (25 L) y la mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo (22 L) . La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (12 L) , se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y luego se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice: 21 g, solvente de desarrollo: heptano/acetona = 7/1 ? 3/1) para obtener un compuesto semiquiral (4) del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil }{ 5 - [2-(metiltio) etoxi] irimidin-2 -il }amino) metil] -4 -(trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil }acético (aceite amarillo, 744.1 g, rendimiento: 96%).

(R) -1-Bromo-l- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etano (2) cuya configuración absoluta se confirmó como se describe en el Paso 1 mencionado anteriormente se usó como el material de partida y la reacción de sustitución nucleófila con la amina (3) avanzó. Por consiguiente, el compuesto semiquiral (4) era un compuesto de isómero (S) predominante.

""¦H-NMR (CDC13) d: 0, 85-0,96 (7H, m) , 1,35-1,45 (4H, m) , 1,60-1,78 (5H, m) , 2,18-2,21 (5H, m) , 2,69 (1H, m) , 2,81-2,91 (5H, m) , 4,16 (2H, q, J=6,8Hz), 4,61 (1H, d, J=17,lHz), 4,85 (1H, d, J=17,lHz), 6,22 (1H, q, J=6,8Hz), 7,11 (1H, d, J=8,6Hz), 7,23 (1H, s) , 7,37 (1H, d, J=8,3Hz), 7,70 (1H, s) , 7,73 (2H, s) , 8,14 (2H, s) Paso 3: Preparación del compuesto semiquiral del isómero (S) predominante del éster de bencilo del ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( {l- [3, 5-bis (trifluorometil.) fenil] etil} {5- [2-(metiltio) etoxi] irimidin-2 -il }amino) metil] -4 - (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil}acético Bajo una atmósfera de argón, a una solución del compuesto semiquiral del isómero de (S) del ácido (4) de trans- {4- [( {2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2 - il } amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil}acético (744 , 1 g, 0,95 mol) obtenido en el Paso 2 en dicloroetano anhidro (11,6 L) se agregó alcohol bencílico (113,1 g, 1,05 mol), WSC-HC1 (200,5 g, 1,05 mol) y D AP (11,9 g, 98 mmol) bajo enfriamiento con hielo y la mezcla se agitó toda la noche a temperatura ambiente. A la mezcla de la reacción se agregó agua (10 L) y la mezcla se extrajo con cloroformo (19 L, 14 L) . La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (12 L) , se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y luego se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice: 28 g, solvente de desarrollo: heptano/acetato de etilo = 6/1) para obtener el compuesto semiquiral (5) del éster de bencilo del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2-il } amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil}acético (aceite amarillo, 745,8 g, rendimiento: 90%).

El compuesto semiquiral resultante (5) era un compuesto de isómero (S) predominante en la misma forma que el compuesto semiquiral (4) .

¦""H-N R (CDC13) d: 0,87-0,95 (7H, m) , 1,37 (lH.m) , 1,43 (3H, d, J=7,lHz), 1,65-1,77 (5H, m) , 2,20 (2H, d, J=6,8Hz), 2,22 (3H, s) , 2,66-2,71 (2H, m) , 2,82-2,91 (4H, m) , 4,15 (2H, t, J=6,6Hz), 4,62 (1H, d, J=17,lHz), 4,85 (1H, d, J=17,lHz), 5,10 (2H, s) , 6,21 (1H, q, J=7,lHz), 7,10 (1H, d, J=8,3Hz), 7,22 (1H, s) , 7,28-7,38 (6H, m) , 7,70 (1H, S) , 7,73 (2H, s) , 8,14 (2H, s) Paso 4: Preparación del compuesto semiquiral de isómero (S) predominante del éster de bencilo del ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( {l- [3 , 5 -bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2-(metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2 - il } amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil } acé ico Bajo una atmósfera de argón, a una solución del compuesto semiquiral del isómero (S) predominante (5) del éster de bencilo del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2 -i1 } amino) meti1] -4 - (trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil } acético (745, 8 g, 0,87 mol) obtenido en el Paso 3 en 2 -propanol (15,2 L) se agregó pentacloruro de tantalio (31,3 g, 87,3 mmol) y 30% peróxido de hidrógeno acuoso (496 mL, 4,38 mol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de la reacción se enfrió con sulfito de hidrógeno de sodio acuoso saturado (3,1 L) se le agregó agua (15 L) y la mezcla se extrajo con cloroformo (14 L, 12 L) . La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 L) , se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y luego se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice: 26 kg, solvente de desarrollo: heptano/acetato de etilo = 3/1 ? 2/1) y se obtuvo un compuesto semiquiral (6) del éster de bencilo del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenol] etil}{5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2 - il } amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil }acético (amorfo, amarillo, 619,5 g, rendimiento: 79%).

El compuesto semiquiral resultante (6) fue un compuesto de isómero (S) predominante en la misma forma que el compuesto semiquiral (4) y el compuesto semiquiral (5) .

Análisis de HPLC quiral : pureza óptica: 67,7%ee (pico principal: segundo pico) ^-NMR (CDCI3) d: 0,87-0,96 (7H, m) , 1,38 (1H, m) , 1,45 (3H, d, J=7,lHz), 1,65-1,80 (5H, m) , 2,21 (2H, d, J=6,6Hz), 2,69 (1H, m) , 2,81-2,91 (3H, m) , 3,08 (3H, s) , 3,44 (2H, t, J=5,4Hz), 4,44 (2H, t, J=5,4Hz), 4,64 (1H, d, J=17,lHz), 4,86 (1H, d, J=17,3Hz), 5,10 (2H, s) , 6,19 (1H, q, J=6,9Hz), 7,12 (1H, d, J=8,3Hz), 7,19 (1H, s) , 7,30-7,39 (6H, m) , 7,71 (1H, s) , 7,72 (2H, s) , 8,16 (2H, s) Paso 5: Preparación del éster de bencilo del ácido (S) -trans- {4- [({2- [({1- [3,5-bis(trifluorometil)fenil]etil}{5- [2- (metilsulfonil) etoxi] irimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil } acético sustancialmente ópticamente puro El compuesto semiquiral de isómero (S) predominante (6) del éster de bencilo del ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil]etil} {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] irimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil}acético (111, 7 g, 123,7 mmol , 67,7%ee) obtenido en el Paso 4 se disolvió en etanol (825 mL) y se le agregaron cristales de semillas preparados por separado (los cristales de racemato preparados en el Paso 7 que se describe a continuación, 2,0 mg) a una temperatura de 15°C a 20°C y la mezcla se agitó a la misma temperatura durante 21 horas y a 0°C durante 3 horas. Los precipitados se separaron mediante filtración y se lavaron con etanol refrigerado (165 mL) y luego la solución madre se concentró bajo presión reducida y se obtuvo el éster de bencilo del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2-(metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil }acético (7) sustancialmente ópticamente puro (amarillo amorfo, 66,38 g, rendimiento: 59%) .

El éster de bencilo del ácido trans- {4 - [ ( { 2 - [ ( { 1 - [3 , 5 -bis (trifluorometil) fenil] etil } { 5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil }acético resultante (7) se obtuvo separando los cristales de racemato predominante del compuesto semiquiral de isómero (S) predominante (6) mediante filtración y en consecuencia, el resultado fue el isómero (S) .

Análisis de HPLC quiral : pureza óptica >99%ee (pico principal: segundo pico) [a]D20 -42,36 (c = 1,0 p/v%, CHC13) La pureza óptica de los cristales de racemato predominante separados mediante filtración fue del 22%ee como se determinó mediante el análisis de HPLC quiral (43,39 g, rendimiento: 39%).

Paso 6: Preparación del ácido (S) -trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4-(trifluorometil ) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil }acético sustancialmente ópticamente puro Bajo una atmósfera de argón, a una solución del éster de bencilo del ácido (S) -trans-{4- [ ({2- [({l- [3,5-bis (trifluorometil ) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] irimidin-2 - il } amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil}acético (7) (34,2 g, 37,88 mmol , >99%ee) obtenido en el Paso 5 en etanol (340 mL) se agregó 10% Pd-C (húmedo, 3,4 g) para la sustitución del hidrógeno y luego la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La suspensión de la reacción se filtró a través de Celita y se lavó con etanol (50 mL) y la solución de lavado se concentró bajo presión reducida y se obtuvo el ácido trans-{4- [({2-[({l-[3 , 5 -bis (trifluorometil) fenil] etil }{ 5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4-(trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil }acético sustancialmente ópticamente puro (III) (blanco amorfo, 31,78 g, rendimiento: 100%) .

El compuesto resultante fue un compuesto levógiro como lo demuestra la rotación específica que se menciona a continuación. Además, debido a que el compuesto resultante se obtuvo mediante la desprotección del grupo éster del éster de bencilo del isómero (S) (7) , el resultado fue también el isómero (S) .

Análisis de HPLC quiral : pureza óptica: >99%ee (pico principal: segundo pico) [a]D20 -45,68 (c = 1,0, CHCl3) IR (ATR) crrf1: 2921, 1706, 1479, 1279, 1134 """H- R (CDC13) d: 0,80-0,96 (7H, m) , 1,38 (1H, m) , 1,47 (3H, d, J=7,lHz), 1,65-1,77 (5H, m) , 2,19 (2H, d, J=6,8Hz), 2,72 (1H, m) , 2,81-2,91 (3H, m) , 3,08 (3H, s) , 3,45 (2H, t, J=5,2Hz), 4,44 (2H, q, J=5,4Hz), 4,62 (1H, d, J=17,lHz), 4,86 (1H, d, J=17,4Hz), 6,21 (1H, q, J=7,lHz), 7,13 (1H, d, J=8,3Hz), 7,19 (1H, s) , 7,38 (1H, d, J=6,6Hz), 7,71 (1H, s), 7,73 (2H, s) , 8,15 (2H, s) Paso 7: Preparación de los cristales de semillas de racemato del éster de bencilo del ácido trans- {4- [ ( {2- [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil}{5- [2-(metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4-(trifluorometil) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil} acético A una solución del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil } acético (compuesto racemato (I), 20 g, 24,61 mmol) sintetizado mediante el método que se describió en el Documento de Patente 2 (Publicación de Patente Internacional WO2008/129951) , Ejemplo 45 en diclorometano anhidro (200 mL) se agregó alcohol bencílico (2,93 g, 27,07 mmol), DMAP (300 mg, 2,46 mmol) y WSC-HC1(5,19 g, 27,07 mmol) bajo refrigeración con hielo y la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. A la mezcla de la reacción se agregó agua (100 mL) y la mezcla se extrajo con cloroformo (500 mL) . La capa orgánica se lavó con 2 ácido clorhídrico acuoso (100 mL) y salmuera saturada (100 mL) , se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y luego se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice: 350 g, solvente de desarrollo: N-hexano/acetato de etilo = 3/1 ? 1/1) y se obtuvo el éster de bencilo del ácido trans- {4 - [ ( {2 - [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2 -il} amino) metil] -4-(trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil } acético (21, 15 g, rendimiento: 95,2%) como amorfo blanco.

El éster de bencilo del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil }acético como amorfo blanco (7,9 g) se disolvió en etanol (40 mL) , la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas y el precipitado resultante se recogió mediante filtración, se lavó con etanol refrigerado (20 mL) y se secó a 60°C durante 4 horas bajo presión reducida y se obtuvieron los cristales de racemato del éster de bencilo del ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil }acético (polvo cristalino blanco, 6,98 g, rendimiento de recuperación: 88,4%) .

Ejemplo 2: Estudio de la influencia del compuesto isómero (S) (III) sobre la cantidad de pro eína PCSK9 y la cantidad del receptor de LDL La influencia de un compuesto del ensayo sobre la cantidad de proteína PCSK9 y sobre la cantidad del receptor de LDL se estudió agregando el compuesto del ensayo a la cepa de células de hematoma humano, células HepG2 y midiendo la cantidad de proteína PCSK9 y la cantidad del receptor de LDL (LDLR) mediante análisis Western blotting después del cultivo durante 48 horas.

Específicamente, las células HepG2 se inocularon sobre una placa de 6 receptáculos a una densidad de 5 x 105 células/receptáculo y se cultivaron toda la noche y un compuesto del ensayo disuelto en sulfóxido de dimetilo (DMSO) , o solamente DMSO se agregó al medio de cultivo en una cantidad de 1/1000 veces. Las células se cultivaron a 37°C durante 48 horas en un incubador de C02, al cultivo se agregaron 100 del tampón RIPA (50 mM Tris-HCl, pH 7,8, 150 mM NaCl , 1% NP-40, 0,5% desoxicolato de sodio, 0,1% SDS, inhibidor de proteinasa) para romper las células y se extrajeron las proteínas. Las proteínas extraídas se centrifugaron a 10000 x g, el sobrenadante se recogió y se le agregó un tampón de muestra de SDS (60 mM Tris-HCl, pH 6,8, 2% SDS, 10% glicerol, 3% mercaptoetanol) y la mezcla se sometió a la separación mediante SDS-PAGE (SDS-electroforesis de gel de poliacrilamida gel) usando 8% gel de acrilamida. Después de la finalización de la separación, las proteínas se fijaron sobre una membrana de nitrocelulosa usando el Sistema de Transferencia de Gel iBlot (Invitrogen) y se bloquearon usando Block Ace (DS Pharma Biomedical, Catálogo N° UK-B 80) .

La detección de la proteína PCSK9, LDLR y proteína ß-actina y la medición de sus cantidades se realizó marcando las proteínas sobre la membrana usando Anti-PCSK9 (Cayman, Catálogo N° 1000718) , Anti-LDLR (BioVision, Catálogo N° 3839-100) y Anti-ß-Actina (Sigma, Catálogo N° A5316) , respectivamente, como el anticuerpo principal, e IgG-HRP Anti-Conejo (Sigma, Catálogo N° A0545) o IgG-HRP Anti-Ratón (Sigma, Catálogo N° A4416) como el anticuerpo secundario, haciendo reaccionar un reactivo de quimioluminescencia (sustrato de HRP) con el anticuerpo secundario sobre la membrana y luego midiendo la intensidad de la señal usando Analizador Lumino Image Analyzer LAS-3000 (Fuji Photo Film) . La intensidad de la señal resultante se evaluó numéricamente mediante un software de análisis de imágenes, Science Lab 2002 Muíti Gauge (Fuji Photo Film) .

Los valores de la cantidad de proteína PCSK9 y la cantidad del receptor de LDL se corrigió entre aquellos obtenidos para la muestra a la que se agregó un compuesto de ensayo y la muestra control (muestra a la que se agregó solamente DMSO) usando las cantidades de proteína ß-actina como índice. La cantidad de proteína PCSK9 corregida y la cantidad del receptor de LDL de la muestra de agregado del compuesto del ensayo estuvieron representadas por valores relativos basados en la cantidad de 4 proteína PCSK9 y la cantidad del receptor de LDL de la muestra control, respectivamente, que se tomaron como 1.

Los resultados se muestran en la Tabla 1.

Como el compuesto del ensayo, se usaron los siguientes compuestos . 1: Ácido (S) -trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5- Bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino)metil] ciclohexil }acético (compuesto isómero (S) (III) ) El compuesto isómero (S) (III) (pureza óptica: >99%ee) se agregó al medio de cultivo a una concentración final de 10 µ?. 2: Ácido (R) -trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5-bis (trifluorometil) fenil] etil}{5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il} amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil }acético (compuesto isómero (R) (II)) El compuesto isómero (R) (II) (pureza óptica: G98%ee) se agregó al medio de cultivo a una concentración final de 10 µ . 3: Ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5- bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] irimidin-2 -il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil }acético (compuesto racemato (I)) El compuesto racemato (I) se agregó al medio de cultivo a una concentración final de 10 µ?.

[Tabla 1] Como se entiende claramente a partir de los resultados que se muestran en la Tabla 1, el compuesto isómero (S) (III) redujo notablemente la cantidad de proteína PCSK9 y aumentó la cantidad del receptor de LDL comparada con el control, mientras que el compuesto isómero (R) (II) y el compuesto racemato (I) no tuvieron ninguna de dichas acciones. En particular, la cantidad del receptor de LDL se incrementó notablemente solamente con el compuesto isómero (S) (III) comparado con el control.

A partir de los resultados precedentes, se reveló que el compuesto isómero (S) (III) tenía la acción de reducción sobre la cantidad de proteína PCSK9 y la acción de aumento de la cantidad del receptor de LDL.

Además, si bien la presente invención no está obligada por la siguiente estimación, se estimó que, debido a que el compuesto racemato (I) no tuvo casi ninguna acción de reducción de la cantidad de proteína de PCSK9 y no tuvo ninguna acción de aumento de la cantidad del receptor de LDL a pesar del hecho de que contenía un 50% del compuesto isómero (S) (III) , del compuesto isómero (R) (II) como un compuesto constituyente del compuesto racemato (I) inhibió la expresión de las acciones del compuesto isómero (S) (III) en el compuesto racemato (I) . También se estimó que es preferible aumentar la pureza óptica del compuesto isómero (S) (III) para reducir el contenido del compuesto isómero (R) (II) especialmente para aumentar la acción de aumento de la cantidad del receptor de LDL.

Ejemplo 3: Estudio de la influencia del compuesto isómero (S) (III) sobre la expresión del mARN de PCSK9 Para estudiar el mecanismo de la acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 que se reveló en el Ejemplo 2 mencionado anteriormente, el compuesto de ensayo se agregó a las células HepG2 y se midió la cantidad de expresión del mARN de PCSK9 mediante el método de PCR de tiempo real cuantitativo después del cultivo durante 24 horas.

Específicamente, las células HepG2 se inocularon en una placa de 24 receptáculos a una densidad de 2 x 105 células/receptáculo y se cultivaron toda la noche y se agregó luego el compuesto del ensayo disuelto en sulfóxido de dimetilo (DMSO) o solamente DMSO al medio de cultivo en una cantidad de 1/1000 veces. Las células se cultivaron a 37°C durante 24 horas en un incubador de C02 y luego se les agregaron 500 µ?? de ISOGEN (NIPPON GENE, Catálogo N° 31-02501) y se extrajo el ARN total. El cADN se sintetizó desde el ARN total extraído usando el Estuche de Transcripción Inversa de cADN de Alta Capacidad (Applied Biosystems, Catálogo N° 4368813) . Se midió la cantidad de expresión del mARN de PCSK9 mediante PCR de tiempo real cuantitativa usando cebadores específicos para PCSK9 humana (Kourimate S. et al., J. Biol . Chem. , Volumen 283, p9666) y Mezcla Maestra de Verde SYBR Rápida (Applied Biosystems, Catálogo N° 4385614) . Como el aparato de medición se usó, el Sistema de Tiempo Real Rápido 7900HT.

Los valores medidos resultantes de la cantidad de expresión del mARN de PCSK9 se corrigieron entre aquellos obtenidos para las muestras de agregado del compuesto de ensayo (3 muestras) y las muestras control (muestra a la que se agregó solamente DMSO, 3 muestras) usando las cantidades de expresión del mARN de ß-actina como índice. La cantidad de expresión del mARN de PCSK9 corregida de las muestras de agregado del compuesto del ensayo se representó con un valor relativo (promedio ± error estándar) basado en las cantidades de expresión del mARN de PCSK9 de las muestras control, que se tomaron como 1.

Los resultados se muestran en la Tabla 2.

Como el compuesto de ensayo, se usó el siguiente compuesto. 1: Ácido (S) -trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5- Bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2- (metilsulfonil ) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil} (etil) amino) metil] ciclohexil} acético (compuesto isómero (S) (III) ) El compuesto isómero (S) (III) (pureza óptica: >99%ee) se agregó al medio de cultivo a una concentración final de 10 µ .

[Tabla 2] A partir de los resultados que se muestran en la Tabla 2, se reveló que el compuesto isómero (S) (III) redujo notablemente la cantidad de expresión del mARN de PCSK9 comparado con el control.

En consecuencia, se consideró que por lo menos una parte de la acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 del compuesto isómero (S) (III) que se reveló en el Ejemplo 2 estuvo basada en la acción de supresión de la expresión de genes de PCSK9 y el compuesto isómero (S) (III) tuvo una acción de supresión de la producción de proteína PCSK9.

Ejemplo 4: Estudio de la acción de reducción del colesterol LDL en sangre del compuesto isómero (S) (III) El ácido (S) -trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5- Bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] irimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil } acético (compuesto isómero (S) (III), pureza óptica: >99%ee) se suspendió en una solución de 0,5% metilcelulosa y se administró por vía oral en forma reiterada a hámsters normales (hámsters machos de la especie Syrian) una vez por día durante 14 días usando una sonda metálica. Cuatro horas después de la administración final, se extrajo sangre y se obtuvo el plasma. Se analizaron las lipoproteínas en el plasma mediante medición automática usando un sistema de HPLC basado en el método posterior al marcado de acuerdo con el método que se describe en J. Lipid. Res.,- 43, p805-814. Específicamente, 15 L de una muestra de plasma se diluyó 10 veces sobre PBS que contenía 1 mM EDTA y 80 µ?. de la muestra diluida se inyectó en una columna de filtración de gel (columna de Superóse 6 (tamaño de la columna: 10 x 300 mm) , GE Healthcare Bioscience) conectada a un sistema de HPLC (unidad de carga de líquido: Sistema Shimadzu LC-20A, Shimadzu) . La separación se realizó a una velocidad de flujo de 0,5 mL/minuto y una temperatura de la columna de 40°C usando PBS que contenía 1 mM EDTA como un tampón corriente. Un reactivo de medición de colesterol (E-Ensayo de Colesterol Wako, Wako Puré Chemical Industries) se mezcló con el eluato de la columna a una velocidad de flujo de 0,25 mL/minuto y la reacción se realizó a 40°C en un arrollamiento de reacción (0,5 mm x 15 m) con carga del eluato. Los colesteroles del eluato obtenido del arrollamiento de reacción se detectaron a una longitud de onda de 600 nm. Se calculó la relación de superficie de la fracción de LDL basada en la superficie pico total resultante de los colesteroles y la cantidad de colesterol total medido de antemano usando él E-Ensayo de Colesterol Wako se multiplicó por la relación de superficie de la fracción de LDL para calcular la cantidad de colesterol LDL.

Se usaron 6 hámsters normales para cada uno del grupo control (grupo de administración de 0,5% de solución de metilcelulosa) y el grupo de administración del compuesto de ensayo (grupos de administración de 10 mg/kg de peso corporal y 30 mg/kg de peso corporal del compuesto isómero (S) (III) . Se dividió a los hámsters en los grupos de antemano basado en el valor de colesterol en plasma total .

Las cantidades del colesterol LDL en el plasma de los grupos (LDL-C, mg/dl) se muestran en la Tabla 3. Los símbolos * y *** en la Tabla 3 significan hubo diferencias significativas a un nivel de significación del 5% o menos (p < 0,05) y un nivel de significación del 0,1% o menos (p < 0,001), respectivamente, como se determinó mediante un ensayo comparativo de varios grupos (ensayo de comparativo múltiple de Dunnett) realizado entre el grupo control y cada uno de los grupos de administración del compuesto de ensayo. Además, el índice de reducción de la cantidad de colesterol LDL del grupo de administración del compuesto de ensayo basado en el grupo control se calculó de acuerdo con la siguiente ecuación 1 como índice de reducción del colesterol LDL y se indicó en términos de porcentaje. índice de reducción del colesterol LDL (%) = [(Promedio de la cantidad de colesterol LDL del grupo control - Promedio de la cantidad de colesterol LDL del grupo de administración de compuesto) /Promedio de la cantidad de colesterol LDL del grupo control] x 100 (Ecuación 1) [Tabla 3] A partir de los resultados que se muestran en la Tabla 3, se reveló que el compuesto isómero (S) (III) tuvo una acción superior de reducción del colesterol LDL en la sangre.

A partir de los resultaidos mencionados anteriormente, también se reveló que el compuesto isómero (S) (III) es útil como un ingrediente activo de un medicamento que tiene acción de reducción de LDL en sangre y similares.

Ejemplo 5: Estudio de la influencia del compuesto racemato (I) y similares sobre la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa Un compuesto del ensayo se agregó a las células HepG2 y las células se cultivaron durante 8 horas y luego se midió la cantidad de expresión del mARN de HMG-CoA reductasa mediante PCR de tiempo real cuantitativa.

Específicamente, las células HepG2 se inocularon sobre una placa L0 de 24 receptáculos a una densidad de 2 x 105 células/receptáculo y se cultivaron toda la noche y luego un compuesto disuelto en sulfóxido de dimetilo (DMSO) o solamente DMSO se agregó al medio de cultivo en una cantidad de 1/1000 veces. Las células se cultivaron a 37 °C durante 8 horas en un incubador de C02 y luego L5 se les agregaron 500 µL· de ISOGEN (NIPPON GENE, Catálogo N° 31- 02501) se extrajo el ARN total. El cADN se sintetizó desde el ARN total usando el Estuche de Transcripción Inversa de cADN de Alta Capacidad (Applied Biosystems, Catálogo N° 4368813) . La cantidad de expresión del mARN de HMG-CoA reductasa humana se 20 midió mediante PCR de tiempo real cuantitativa usando un grupo de los siguientes cebadores: 5 ' -GGTGTTCAAGGAGCATGCAAAG-3 ' y 5'- TGACAAGATGTCCTGCTGCCA-3 ' específicos de HMG-CoA reductasa humana y la Mezcla Maestra de Verde SYBR Rápida (Applied Biosystems, Catálogo N° 4385614) . Como el aparato de medición, se usó el Sistema de PCR de Tiempo Real Rápido 7900HT.

Los valores medidos resultantes de la cantidad de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa se corrigieron entre aquellos obtenidos para las muestras de agregado del compuesto de ensayo (3 muestras para cada compuesto) y las muestras control (muestra a la que se agregó solamente DMSO, 3 muestras) usando las cantidades de expresión del mARN de ß-actina como índice. La cantidad de la expresión del mARN de HMG-CoA reductasa corregida de la muestra de agregado del compuesto de ensayo se representó con un valor relativo (promedio ± error estándar) basado en el promedio de las cantidades de expresión del mARN de HMG-CoA reductasa de las muestras control, que se tomó como 1.

Los resultados se muestran en la Tabla 4.

Como el compuesto de ensayo, se usaron los siguientes compuestos: 1: Ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5- Bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2 - il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil } acético (compuesto racemato (I)) El compuesto racemato (I) se agregó al medio de cultivo a concentración de 10 µ?.. 2: Ácido trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3,5- Bis (trifluorometil) fenil] etil } {5- [2- (metiltio) etoxi] pirimidin-2 il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil }acético (compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44) El compuesto descrito en el documento de Patente 2, Ejemplo 44 agregó al medio de cultivo a una concentración fija de 10 µ?.

[Tabla 4] A partir de los resultados que se muestran en la Tabla 4, se reveló que tanto el compuesto racemato (I) como el compuesto que se describió en el documento de Patente 2, Ejemplo 44, redujo la cantidad de expresión del mARN de HMG-CoA reductasa comparada con el control.

Aplicabilidad industrial El compuesto isómero (S) (III) tiene una acción de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 y una acción de aumento de la cantidad del receptor de LDL y tiene una acción de reducción superior del colesterol LDL en sangre. En consecuencia, el compuesto se puede utilizar, por ejemplo, como un ingrediente activo de un medicamento para reducir el colesterol LDL en sangre y similares y por lo tanto se puede utilizar en la industria farmacéutica .

Claims

REIVINDICACIONES

1. Ácido (S) -trans-{4- [ ({2- [ ({l- [3, 5-bis (trifluorometil) -fenil] etil}{5- [2- (metilsulfonil) etoxi] irimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexil } acético, o una sal de él o un solvato de él .

2. Un enantiómero levógiro sustancialmente ópticamente activo del ácido trans- { 4 - [ ( {2 - [ ( { 1- [3 , 5-bis (trifluorometil) fenil] etil} {5- [2- (metilsulfonil) etoxi] pirimidin-2-il}amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil ) amino) metil] ciclohexyl } acético o una sal de él o un solvato de él .

3. El compuesto o una sal de él o un solvato de él de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que tiene una pureza óptica del 99%ee o más.

4. Un medicamento que comprende el compuesto, o una sal de él o un solvato de él de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, como ingrediente activo.

5. El medicamento de acuerdo con la reivindicación 4, que es para uso en el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de una enfermedad seleccionada de hipercolesterolemia LDL, dislipidemia, arteriesclerosis, aterosclerosis, enfermedades vasculares periféricas, hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar, trastornos funcionales cardiovasculares, angina de pecho, isquemia, isquemia cardíaca, trombosis, infarto de miocardio, trastornos de reperfusión, restenosis después de una angioplastia e hipertensión.

6. Un agente de supresión de la expresión del mARN de PCSK9 que comprende el compuesto o una sal de él o un solvato de él de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 como ingrediente activo.

7. Un agente de reducción de la cantidad de proteína PCSK9 que comprende el compuesto, o una sal de él o un solvato de él de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 como ingrediente activo.

8. Un agente de supresión de la producción de proteína PCSK9 que comprende el compuesto o una sal de él o un solvato de él de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 como ingrediente activo.

9. Un agente que aumenta la cantidad del receptor de LDL que comprende el compuesto o una sal de él o un solvato de él de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 como ingrediente activo.

10. Un método para preparar el ácido (S) -trans- {4- [ ( {2- [ ( { 1-[3 , 5 -bis (trifluorometil) fenil] etil}{5- [2- (metilsulfonil) etoxi] irimidin-2 -il }amino) metil] -4- (trifluorometil) fenil } (etil) amino) metil] ciclohexil} acético o una sal de él o un solvato de él, que comprende el paso de eliminar los cristales de racemato predominante de un compuesto semiquiral de isómero (S) predominante de un compuesto representado por la fórmula general (IV) : [Formula 1] ( iv ) (en la fórmula, R representa un grupo arilo de C6-io que puede tener un sustituyente o un grupo heteroarilo de 5 a 10 miembros que puede tener un sustituyente y n representa un número entero de 1 a 6) mediante la cristalización preferencial en un solvente para obtener un compuesto sustancialmente ópticamente puro mediante la siguiente fórmula general (V) : [Fórmula 2] (V) (en la fórmula, R y n tienen las mismas definiciones que aquellas definidas anteriormente) .

11. El método de acuerdo con la reivindicación 10, que además comprende el paso de eliminar un grupo representado como -(CH2)n-R del compuesto representado por la fórmula general (V) .

12. El método de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, que además comprende el paso de hacer reaccionar un compuesto semiquiral de isómero (S) predominante de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (VI) : [Fórmula 3] (VI) (en la fórmula, R y n tienen las mismas definiciones que aquellas definidas anteriormente) con un agente de oxidación en un solvente para preparar el compuesto semiquiral de isómero (S) predominante de un compuesto representado por la fórmula general (IV) .

13. El método de acuerdo con la reivindicación 12, que además comprende el paso de hacer reaccionar el compuesto semiquiral de isómero (S) predominante de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (VII) : [Fórmula 4] (VII) con un compuesto representado por la siguiente fórmula general (VIII) [Fórmula 5] R-(CH2)n-OH (VIII) (en la fórmula, R y n tienen las mismas definiciones que aquellas definidas anteriormente) en un solvente en la presencia de un catalizador para preparar el compuesto semiquiral del isómero (S) predominante de un compuesto representado por la fórmula general (VI) .

14. El método de acuerdo con la reivindicación 13, que además comprende el paso de hidrolizar un compuesto semiquiral de isómero (S) predominante de un compuesto representado por la siguiente fórmula general (IX) : (IX) (en la fórmula, R1 representa un grupo alquilo de Ci_6) en un solvente en la presencia de una base para preparar el compuesto semiquiral de isómero (S) predominante de un compuesto representado por la fórmula (VII) .

15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, que además comprende el paso de hacer reaccionar un compuesto representado por la siguiente fórmula general (X) : [Fórmula 7] (X) (en la fórmula, X representa un átomo de halógeno) y un compuesto representado por la fórmula general (XI) : [Fórmula 8] (XI) (en la fórmula, R1 tiene la misma definición que se definió anteriormente) en un solvente en la presencia de una base para preparar el compuesto semiquiral de isómero (S) predominante de un compuesto representado por la fórmula general (IX) .

16. El método de acuerdo con la reivindicación 15, que además comprende el paso de halogenar (S)-l-[3,5-bis (trifluorometil) fenil] etanol en la presencia de un agente de halogenación para preparar el compuesto representado por la fórmula general (X) .

17. Un compuesto representado por la fórmula general (IV) mencionado en la reivindicación 10, o una sal de él o un solvato de él .

18. Un compuesto representado por la fórmula general (V) mencionado en la reivindicación 10, o una sal de él o un solvato de él .

19. El compuesto, o una sal de él o un solvato de él de acuerdo con la reivindicación 17 o 18, en donde R es un grupo fenilo y n