ES2580957T3 - Composiciones que comprenden antígenos neumocócicos - Google Patents

Composiciones que comprenden antígenos neumocócicos Download PDF

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ES2580957T3 ES12197549.4T ES12197549T ES2580957T3 ES 2580957 T3 ES2580957 T3 ES 2580957T3 ES 12197549 T ES12197549 T ES 12197549T ES 2580957 T3 ES2580957 T3 ES 2580957T3
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Alessandro Muzzi
Vega Masignani
Fabio Bagnoli
Paolo Ruggiero
Michéle Barrochi
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Abstract

Una composición inmunogénica que comprende una combinación de antígenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinación un antígeno spr0096 y un antígeno spr2021, en la que: dicho antígeno spr0096 es un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 12; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoácidos consecutivos, que comprende un epítopo de la SEQ ID NO: 12; y dicho antígeno spr2021 es un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 11; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoácidos consecutivos, que comprende un epítopo de la SEQ ID NO: 11.

Description

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DESCRIPCION
Composiciones que comprenden antigenos neumococicos Campo tecnico
La presente invencion se refiere a antfgenos derivados de S. pneumoniae y su uso en inmunizacion, como se define en las reivindicaciones.
Antecedentes de la tecnica
Streptococcus pneumoniae, tambien conocido como neumococo, es una bacteria Gram-positiva esferica. Es la causa mas comun de meningitis bacteriana aguda en adultos y en ninos mayores de 5 anos de edad. Algunas vacunas neumococicas actuales se basan en sacaridos capsulares. La unica vacuna pediatrica es PREVNAR™, que es una mezcla de sacaridos conjugados a partir de 7 serotipos diferentes. Tambien esta disponible una vacuna para adultos basada en una mezcla de sacaridos conjugados de 23 serotipos diferentes. Ambas vacunas son diffciles de fabricar y, sin embargo, hay mas de 90 serotipos de neumococo en total. Por lo tanto sigue existiendo una necesidad de identificar mas y mejores antigenos para su uso en vacunas neumococicas.
La referencia 10 desvela la identificacion de antigenos reactivos a suero hiperinmune de S. pneumoniae utiles para vacunacion.
Divulgacion de la invencion
La invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antigenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion un antfgeno spr0096 y un antfgeno spr2021, en la que:
dicho antfgeno spr0096 es un polipeptido que comprende una secuencia de aminoacidos:
(a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 12; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 12; y
dicho antfgeno spr2021 es un polipeptido que comprende una secuencia de aminoacidos:
(a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 11; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 11.
La invencion tambien proporciona un polipeptido de formula NH2-A-{-X-L-}n-B-COOH, en el que:
X es una secuencia de aminoacidos de un antfgeno neumococico, seleccionado entre el grupo que consiste en:
(1) un antfgeno spr0057; (2) un antfgeno spr0096; (3) un antfgeno spr0565; y (4) un antfgeno spr2021; (5) un antfgeno RrgA; y (6) un antfgeno RrgB;
L es una secuencia de aminoacidos de engarce adicional;
A es una secuencia de aminoacidos N-terminal opcional; B es una secuencia de aminoacidos C-terminal opcional, n es un numero entero de 2 o mas; y
al menos un ejemplo de X es spr0096 y al menos un ejemplo de X es spr2021; en la que:
dicho antfgeno spr0057 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 1; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 1;
dicho antfgeno spr0096 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 12; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 12;
dicho antfgeno spr0565 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 3; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 3;
dicho antfgeno spr2021 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 11; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 11;
dicho antfgeno RrgA comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 172 o 179; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 172 o 179; y/o
dicho antfgeno RrgB comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 173, 174 o 175; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 173, 174, o 175.
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La invencion tambien proporciona un polipeptido que tiene una identidad de secuencia de un 75 % o superior con una secuencia de aminoacidos seleccionada entre el grupo que consiste en las SEQ ID NOs: 194 y 205.
Al igual que las referencias 1 y 2, los presentes inventores creen que una vacuna de S. pneumoniae eficaz puede requerir varios componentes antigenicos, y por lo tanto han identificado diversas combinaciones de polipeptidos neumococicos para uso en inmunizacion. Los inventores tambien han identificado algunas polipeptidos neumococicos que pueden ser utiles como antigenos individuales. Estos polipeptidos se pueden usar opcionalmente en combinacion con sacaridos neumococicos u otros polipeptidos neumococicos. Los antigenos se pueden usar en vacunas neumococicas, pero tambien se pueden usar como componentes en vacunas para inmunizacion con respecto a multiples patogenos.
Los inventores han identificado los siguientes 7 polipeptidos neumococicos: spr0057; spr0286; spr0565; spr1098; spr1345; spr1416; spr1418. En el presente documento este conjunto de antigenos se denomina 'el primer grupo de antfgenos’. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antfgenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es decir, 2, 3, 4, 5, 6 o los 7) antfgenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0057; (2) un antfgeno spr0286; (3) un antfgeno spr0565; (4) un antigeno spr1098; (5) un antigeno spr1345; (6) un antfgeno spr1416; y/o (7) un antfgeno spr1418.
Los inventores han identificado los siguientes 4 polipeptidos neumococicos: spr0867; spr1431; spr1739; spr2021. En el presente documento este conjunto de antfgenos se denomina 'el segundo grupo de antfgenos’. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antfgenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es decir, 2, 3 o los 4) antfgenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0867; (2) un antfgeno spr1431; (3) un antfgeno spr1739; y/o (4) un antfgeno spr2021
Los inventores han identificado los siguientes 3 polipeptidos neumococicos: spr0096; spr1433; spr1707. En el presente documento este conjunto de antfgenos se denomina 'el tercer grupo de antfgenos’. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antfgenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o tres antfgenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0096; (2) un antfgeno spr1433; y/o (3) un antfgeno spr1707.
La combinacion de 11 polipeptidos neumococicos en el primer y segundo grupos de antfgenos en el presente documento se denomina 'el cuarto grupo de antfgenos’. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antfgenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es decir, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o los 11) antfgenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0057; (2) un antfgeno spr0286; (3) un antfgeno spr0565; (4) un antfgeno spr1098; (5) un antfgeno spr1345; (6) un antfgeno spr1416; (7) un antfgeno spr1418; (8) un antfgeno spr0867; (9) un antfgeno spr1431; (10) un antfgeno spr1739; y/o (11) un antfgeno spr2021.
La combinacion de 10 polipeptidos neumococicos en el primer y tercer grupos de antfgenos en el presente documento se denomina 'el quinto grupo de antigenos'. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antfgenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es decir, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o los 10) antfgenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0057; (2) un antfgeno spr0286; (3) un antfgeno spr0565; (4) un antfgeno spr1098; (5) un antfgeno spr1345; (6) un antfgeno spr1416; (7) un antfgeno spr1418; (8) un antfgeno spr0096; (9) un antfgeno spr1433; y/o (10) un antfgeno spr1707.
La combinacion de 7 polipeptidos neumococicos en el segundo y tercer grupos de antfgenos en el presente documento se denomina 'el sexto grupo de antigenos'. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antfgenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es decir, 2, 3, 4, 5, 6, o los 7) antfgenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0867; (2) un antfgeno spr1431; (3) un antfgeno spr1739; (4) un antfgeno spr2021; (5) un antfgeno spr0096; (6) un antfgeno spr1433; y/o (7) un antfgeno spr1707.
La combinacion de 14 polipeptidos neumococicos en el primer, segundo y tercer grupos de antfgenos en el presente documento se denomina 'el septimo grupo de antigenos'. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antfgenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es decir, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, o los 14) antfgenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0057; (2) un antfgeno spr0286; (3) un antfgeno spr0565; (4) un antfgeno spr1098; (5) un antfgeno spr1345; (6) un antfgeno spr1416; (7) un antfgeno spr1418; (8) un antfgeno spr0867; (9) un antfgeno spr1431; (10) un antfgeno spr1739; (11) un antfgeno spr2021; (12) un antfgeno spr0096; (13) un antigeno spr1433; y/o (14) un antfgeno spr1707.
Dentro del septimo grupo de antfgenos, un subconjunto preferente de cuatro antfgenos es el 'octavo grupo de antigenos', que incluye un antfgeno de cada uno del primero, segundo y tercer grupos, en particular spr0057, spr0096, spr0565 y spr2021. Por lo tanto, la invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende
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una combinacion de antigenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es dedr, 2, 3 o los 4) antigenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antigeno spr0057; (2) un antigeno spr0096; (3) un antigeno spr0565; y/o (4) un antigeno spr2021, como se definen las reivindicaciones. Dentro de este octavo grupo, la composicion puede comprender: (1), (2) y (3); (1), (2) y (4); (1), (3) y (4); (2), (3) y (4); o (1), (2), (3) y (4). La expresion de estos cuatro antigenos se ha confirmado de forma inmunologica a traves de un panel de 32 cepas neumococicas con diversos serotipos.
El 'noveno grupo de antigenos’ es el octavo grupo de antigenos mas un antigeno de pilus de RrgB. Por lo tanto, la invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antigenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion uno o mas antigeno(s) de pilus de RrgB y dos o mas (es decir, 2, 3 o los 4) antigenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antigeno spr0057; (2) un antigeno spr0096; (3) un antigeno spr0565; y/o (4) un antigeno spr2021, como se define en las reivindicaciones.
El 'decimo grupo de antigenos’ es el octavo grupo de antigenos mas un polipeptido Pmp. Por lo tanto, la invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antigenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion dos o mas (es decir, 2, 3, 4 o los 5) antigenos seleccionados entre el grupo que consiste en: (1) un antigeno spr0057; (2) un antigeno spr0096; (3) un antigeno spr0565; (4) un antigeno spr2021; y/o (5) un polipeptido Pmp, como se define en las reivindicaciones.
Algunas combinaciones espedficas de interes comprenden: (i) un antigeno spr0057 y un antigeno spr0096; (ii) un antigeno spr0057 y un antigeno spr2021; (iii) un antigeno spr0057, un antigeno spr0096 y un antigeno spr2021; (iv) un antigeno spr0057 y un antigeno spr0565; (v) un antigeno spr0565 y un antigeno spr2021; (vi) un antigeno spr0057, un antigeno spr0565 y un antigeno spr2021; (vii) un antigeno spr0565, un antigeno spr2021 y un antigeno spr1739 por ejemplo detoxificado; y (viii) un antigeno spr0565, un antigeno spr2021 y un polipeptido Pmp, como se define en las reivindicaciones.
La invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica que comprende dos o mas exoglicosidasas neumococicas diferentes, como se define en las reivindicaciones.
La invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica que comprende al menos una exoglicosidasa neumococica y al menos una peptidoglicano hidrolasa neumococica, como se define en las reivindicaciones.
La invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica que comprende dos o mas peptidoglicano hidrolasas diferentes, como se define en las reivindicaciones.
Algunas combinaciones ventajosas de la invencion son aquellas en las que dos o mas antigenos actuan de forma sinergica. Por lo tanto, la proteccion frente a la enfermedad neumococica conseguida por su administracion combinada supera lo esperado por simple adicion de su eficacia protectora individual.
Antigenos de polipeptidos adicionales
Ademas de antigenos de los diversos grupos de antigenos de la invencion, algunas composiciones inmunogenicas, como se define en las reivindicaciones, pueden incluir uno o mas de los siguientes polipeptidos para aumentar la respuesta inmune anti-neumococica provocada por la composicion:
Una o mas subunidades de un pilus neumococico, tal como RrgA, RrgB y/o RrgC.
Un polipeptido ClpP.
Un polipeptido LytA.
Un polipeptido CPL1.
Un polipeptido PhtA.
Un polipeptido PhtB.
Un polipeptido PhtD.
Un polipeptido PhtE.
Un polipeptido CbpD
Un polipeptido CbpG
Un polipeptido PvaA.
Un polipeptido Hic.
Un polipeptido Pmp.
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Un polipeptido ZmpB.
Un polipeptido PspA Un polipeptido PsaA Un polipeptido PspC.
Un polipeptido PrtA.
Un polipeptido Sp91.
Un polipeptido Sp133.
Un polipeptido PiuA y/o un polipeptido PiaA.
Un polipeptido spr0222.
Un antfgeno seleccionado entre el grupo que consiste en: IC1; IC2; IC3; IC4; IC5; IC6; IC7; IC8; IC9; IC10; IC11
IC12
IC13; IC14; IC15 IC16 IC17 IC18 IC19; IC20; IC21; IC22; IC23; IC24; IC25; IC26; IC27; IC28 IC29;
IC30
IC31; IC32; IC33 IC34 IC35 IC36 IC37; IC38; IC39; IC40; IC41; IC42; IC43; IC44; IC45; IC46 IC47;
IC48
IC49; IC50; IC51 IC52 IC53 IC54 IC55; IC56; IC57; IC58; IC59; IC60; IC61; IC62; IC63; IC64 IC65;
IC66
IC67; IC68; IC69 IC70 IC71 IC72 IC73; IC74; IC75; IC76; IC77; IC78; IC79; IC80; IC81; IC82 IC83;
IC84
; IC85; IC86; IC88; o 00 (p IC90; IC91; C92; IC93; IC94; IC95; IC96; IC97; IC98; IC99; IC100; IC101; IC102
IC103; IC104; IC105; IC106; IC107; IC108; IC109; IC110; IC111; IC112; IC113; IC114; IC115; IC116; IC117; IC118; IC119; IC120; IC121; IC122; IC123; IC124; IC125; IC126; IC127; IC128; IC129; IC130; e IC131.
Un antigeno seleccionado entre el grupo que consiste en: ID-204, ID-212, ID-213, ID-214, ID-215, ID-ID-216, ID-217,
ID-219, ID-220, ID-225, ID-301, ID-302, ID-303, ID-304, ID-305, ID-306, como se desvela en la referencia 3.
• Un antfgeno seleccionado entre el grupo que consiste en: Sit1A, Sit1B, Sit1C, Sit2B, Sit2C, Sit2D, Sit3A, Sit3B, Sit3C, Sit3D, ORF1, ORF2, ORF3, ORF4, ORF5, ORF6, ORF6, ORF7, ORF8, ORF9, ORF10, ORF11, ORF12, ORF13, ORF14, MS1, MS2, MS3, MS4, MS5, MS6, MS7, MS8, MS9, MS10 o MS11, como se desvela en la referencia 4.
• Un antfgeno desvelado en la referencia 5.
• Un antfgeno desvelado en las Tablas 1-3 de la referencia 6, tal como CbiO.
• Un antfgeno desvelado en la referencia 7, tal como la protema S8 de la subunidad ribosomica 30S.
• un antigeno seleccionado entre el grupo que consiste en: una fosfoenolpiruvato protema fosfotransferasa; una
fosfomanomutasa; un factor de desencadenamiento; un factor G de elongacion; una protema de resistencia a tetraciclina (tetO); una cadena alfa de ARN polimerasa dirigida por ADN; una NADH oxidasa; una subunidad A de glutamil-ARNt amidotransferasa; un homologo de protema A de sustancia de uso de N; una Xaa-His dipeptidasa; una protema ftsz de division celular; una cinc metaloproteinasa; una L-lactato deshidrogenasa; una gliceraldefndo 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH); una fructosa-bifosfato aldolasa; una UDP-glucosa 4- epimerasa; una protema typA/BipA de union a GTP, una GMP sintasa; una glutamil-ARNt sintetasa; una glutamato deshidrogenasa espedfica de NADP; un factor TS de elongacion; una fosfoglicerato quinasa; una piridin nucleotido-disulfuro oxidorreductasa; una protema S1 de la subunidad ribosomica 40S; una 6- fosfogluconato deshidrogenasa; una aminopeptidasa C; una carbomil-fosfato sintasa (subunidad grande); un componente de IIAB espedfico de manosa del sistema PTS; una protema S2 ribosomica; una dihidroorotato deshidrogenasa; una aspartato carbamoiltransferasa; un factor Tu de elongacion; una protema A inmunogenica de la superficie neumococica (PsipA); una fosfoglicerato quinasa; una protema endopeptidasa O de union al sustrato transportador de ABC; una protema B inmunogenica de la superficie neumococica (PsipB); o una protema C inmunogenica de la superficie neumococica (PsipC) [8].
pm
Muchas cepas de S. pneumoniae poseen un pilus, codificado dentro de un islote de patogenicidad (rlrA). El islote codifica tres protemas de superficie (RrgA, RrgB, y RrgC) y tres enzimas sortasa. En algunas realizaciones de la invencion, una composicion, como se define en las reivindicaciones, incluira uno o mas de: RrgA; RrgB; RrgC; SrtB; SrtC; y/o SrtD. De estas seis protemas, incluyendo una o mas de RrgA, RrgB y/o RrgC es preferente. RrgB es la protema del pilus mas preferente a incluir.
Algunas cepas poseen un tipo de pilus diferente [9], 'PI-2'. El operon PI-2 codifica PitA, SipA, PitB, SrtG1, y SrtG2. En algunas realizaciones de la invencion, una composicion, como se define en las reivindicaciones, incluira uno o mas de: PitA, SipA, PitB, SrtG1, y/o SrtG2. IC1 a IC131
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Como se ha mencionado anteriormente, en algunas realizaciones de la invencion, una composicion, como se define en las reivindicaciones, incluira uno o mas antigenos seleccionados entre el grupo que consiste en IC1 a IC131. Estos 131 polipeptidos se desvelan en la referencia 10, siendo los 144 polipeptidos de la Tabla 3 en la misma excepto los enumerados como SP0117, SP0641, SP0664, SP1003, SP1004, SP1174, SP1175, SP1573, SP1687, SP1693, SP1937 y SP2190. Dentro de los 132 polipeptidos IC1 a IC131, un subconjunto preferente a partir del que se puede seleccionar uno o mas polipeptido(s) es: IC1; IC8; IC16; IC23; IC31; IC34; IC40; IC45; IC47; IC57; IC58; IC60; e IC69.
Combinaciones con conjugados neumococicos
Los antfgenos individuales identificados en los grupos de antigenos se pueden usar en combinacion con conjugados neumococicos. Por lo tanto la invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de:
(1) uno o mas antigeno(s) seleccionados entre el sexto, septimo, octavo, noveno y decimo grupos de antigenos (como se ha definido anteriormente) y como se define en las reivindicaciones; y
(2) uno o mas conjugados de un sacarido capsular neumococico y una protema vehmulo.
Un conjugado usado en el componente (2) de esta combinacion incluye un resto de sacarido y un resto de vehmulo. El resto de sacarido es del sacarido capsular de un neumococo. El sacarido puede ser un polisacarido que tenga el tamano que aparece durante la purificacion del sacarido a partir de bacterias, o puede ser un oligosacarido conseguido por fragmentacion de un polisacarido de este tipo. En el producto PREVNAR™ 7-valente, por ejemplo, 6 de los sacaridos estan presentes como polisacaridos intactos mientras que uno (el serotipo 18C) esta presente como un oligosacarido.
Una composicion puede incluir un sacarido capsular de uno o mas de los siguientes serotipos neumococicos: 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F y/o 33F. Una composicion puede incluir multiples serotipos, por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 o mas serotipos. En la tecnica ya se conocen combinaciones de conjugados 7-valentes, 9-valentes, 10-valentes, 11-valentes y 13-valentes, al igual que una combinacion sin conjugar 23-valente.
Por ejemplo, una combinacion 10-valente puede incluir sacarido de los serotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F y 23F. Una combinacion 11-valente puede incluir adicionalmente sacarido del serotipo 3. Una combinacion 12-valente puede anadir a la mezcla 10-valente: los serotipos 6A y 19A; 6A y 22F; 19A y 22f; 6A y 15B; 19A y 15B; r 22F y 15B; una combinacion 13-valente puede anadir a la mezcla 11-valente: los serotipos 19A y 22F; 8 y 12F; 8 y 15B; 8 y 19A; 8 y 22F; 12F y 15B; 12F y 19A; 12F y 22F; 15B y 19A; 15B y 22F. etc.
El resto de vehmulo normalmente sera una protema, pero preferentemente no uno de los antfgenos de (1). Algunas protemas de vetnculo habituales son toxinas bacterianas, tales como toxinas de difteria o tetanos, o toxoides o mutantes de las mismas. El mutante de la toxina de difteria, CRM197, [11] es util, y es el vetnculo en el producto PREVNAR™. Otras protemas vetnculo adecuadas incluyen el complejo de protema de la membrana externa de N. meningitidis [12], peptidos sinteticos [13,14], protemas de choque termico [15,16], protemas de pertussis [17,18], citoquinas [19], linfoquinas [19], hormonas [19], factores de crecimiento [19], protemas artificiales que comprenden epttopos de linfocitos T CD4+ humanos multiples de diversos antfgenos derivados de patogeno [20] tales como N19 [21], protema D de H. influenzae [22-24], neumolisina [25] o sus derivados no toxicos [26], protema PspA de superficie neumococica [27], protemas de absorcion de hierro [28], toxina A o B de C. difficile [29], exoprotema A de P. aeruginosa recombinante (rEPA) [30], etc.
Cuando una composicion incluye mas de un conjugado, cada conjugado puede usar la misma protema vehmulo o una protema vehmulo diferente. La referencia 31 describe ventajas potenciales cuando se usan diferentes protemas en vacunas de conjugados neumococicos multivalente.
En algunas realizaciones, un solo conjugado puede portar sacaridos de multiples serotipos [32]. Sin embargo, normalmente, cada conjugado incluira sacaridos de un solo serotipo.
Los conjugados pueden tener un exceso de vehmulo (p/p) o exceso de sacarido (p/p). En algunas realizaciones, un conjugado puede incluir esos iguales de cada uno.
La molecula de vehmulo puede estar conjugada de forma conveniente con el vehmulo directamente o a traves de un engarce. Las uniones directas a la protema se pueden conseguir, por ejemplo, mediante aminacion reductora entre el sacarido y el vehmulo, como se describe, por ejemplo, en las referencias 33 y 34. En primer lugar puede ser necesario activar el sacarido, por ejemplo, mediante oxidacion. Se pueden fabricar algunas uniones a traves de un grupo de engarce usando cualquier procedimiento conocido, por ejemplo, los procedimientos descritos en las referencias 35 y 36. Un tipo de union preferente es un engarce de acido adfpico, que se puede formar mediante acoplamiento de un grupo -NH2 libre (por ejemplo, introducido a un glucano mediante aminacion) con acido mtrico (usando, por ejemplo, activacion de diimida), y a continuacion mediante acoplamiento de una protema al compuesto intermedio resultante de sacarido-acido adfpico [37,38]. Otro tipo de union preferente es un engarce de carbonilo,
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que se puede formar por reaccion de un grupo hidroxilo libre de un sacarido CDI [39, 40] seguido de reaccion con una protema para formar una union de carbamato. Otros engarces incluyen p-propionamido [41], nitrofenil-etilamina [42], haluros de haloacilo [43], uniones glucos^dicas [44], acido 6-aminocaproico [45], ADH [46], restos de C4 a C12 [47], etc. Tambien se puede usar condensacion de carbodiimida [48].
Los antfgenos individuales identificados en los grupos de antfgenos se pueden usar como protemas portadoras para sacaridos capsulares neumococicos, para formar un conjugado covalente. Por lo tanto, la divulgacion proporciona una composicion inmunogenica que comprende un conjugado de (1) un antigeno seleccionado entre el primer, segundo, tercero, cuarto, quinto, sexto, septimo, octavo, noveno o decimo grupos de antigenos y (2) un sacarido capsular neumococico. Algunas caractensticas adicionales de un conjugado de este tipo se han descrito anteriormente. El uso de protemas neumococicas como vehnculos en conjugados se conoce bien en la tecnica [por ejemplo, refs. 25, 27 y 67]. Estos conjugados se pueden combinar con cualquiera de los antfgenos adicionales desvelados en el presente documento. Combinaciones con antfgenos no neumococicos
Los antfgenos individuales identificados en los grupos de antfgenos se pueden usar en combinacion con antfgenos no neumococicos. Por lo tanto, la invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de:
(1) uno o mas antfgeno(s) seleccionados entre el sexto, septimo, octavo, noveno o decimo grupos de antfgenos (como se ha definido anteriormente) y como se define en las reivindicaciones; y
(2) uno o mas antfgeno(s) seleccionados entre el grupo que consiste en: toxoide de difteria; toxoide del tetanos; antfgeno de superficie del virus de la hepatitis B; un antfgeno del virus de la polio inactivado; uno o mas antfgenos de pertussis acelulares; un conjugado del antfgeno de sacarido capsular de Haemophilus influenzae de tipo B; un conjugado del antfgeno de sacarido capsular del serogrupo C de Neisseria meningitidis; un conjugado del antfgeno de sacarido capsular del serogrupo Y de Neisseria meningitidis; un conjugado del antfgeno de sacarido capsular del serogrupo W135 de Neisseria meningitidis; y un conjugado del antfgeno de sacarido capsular del serogrupo A de Neisseria meningitidis.
El toxoide de difteria se puede obtener por tratamiento (por ejemplo, usando formaldehndo) de la toxina de difteria de Corynebacterium diphtheriae. Algunos toxoides de difteria se desvelan con mas detalle en el capftulo 13 de la referencia 49.
El toxoide del tetanos se puede obtener por tratamiento (por ejemplo, usando formaldetndo) de la toxina del tetanos de Clostridium tetani. Algunos toxoides del tetanos se desvelan con mas detalle en el capftulo 27 de la referencia 49.
El antfgeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg) es el componente principal de la capside del virus de la hepatitis B. Se produce de forma conveniente mediante expresion recombinante en una levadura, tal como una Saccharomyces cerevisiae.
Los antfgenos del virus de la polio inactivados se preparan a partir de virus que crecen en cultivo celular y a continuacion se inactivan (por ejemplo, usando formaldehndo). Dado que la poliomielitis puede estar causada por uno de los tres tipos de virus de la polio, como se explica en el capftulo 24 de la referencia 49, una composicion puede incluir tres antfgenos del virus de la polio: virus de la polio de Tipo 1 (por ejemplo, cepa Mahoney), virus de la polio de Tipo 2 (por ejemplo, cepa MEF-1), y virus de la polio de Tipo 3 (por ejemplo, cepa Saukett).
El antfgeno(s) acelular de pertussis comprende antfgenos de B. pertussis purificados espedficos, ya sea purificados a partir de la bacteria nativa o purificados despues de expresion en un hospedador recombinante. Es habitual el uso de mas de un antfgeno acelular, y de este modo, una composicion puede incluir uno, dos o tres de los siguientes antfgenos de B. pertussis bien conocidos y bien caracterizados: (1) toxina de pertussis detoxificada (toxoide de pertussis, o 'PT'); (2) hemaglutinina filamentosa ('FHA'); (3) pertactina (tambien conocida como ’protema de membrana externa de 69 kiloDalton’). La FHA y la pertactina se pueden tratar con formaldehndo antes de su uso de acuerdo con la invencion. El PT se puede detoxificar por tratamiento con formaldehndo y/o glutaraldehndo pero, como una alternativa a este procedimiento de detoxificacion qrnmica, puede ser un PT mutante en el que la actividad enzimatica se ha reducido por mutagenesis [50]. Algunos antfgenos de pertussis acelulares adicionales que se pueden usar incluyen fimbrias (por ejemplo, aglutinogenos 2 y 3).
Cuando una composicion incluye uno de toxoide de difteria, toxoide del tetanos o un antfgeno de pertussis acelular en el componente (2), entonces esta incluida normalmente los tres, es decir, el componente (2) incluira una combinacion de D-T-Pa.
Primer grupo de antigenos
(1) spr0057
La secuencia ’spr0057’ original se anoto en la referencia 84 como 'Precursor de beta-N-acetil-hexosaminidasa’ (vease el documento GI: 15902101). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr0057 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como la SEQ ID NO: 1 en el presente documento.
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Algunos polipeptidos spr0057 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 1; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 1, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr0057 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 1. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ iD NO: 1. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 1 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 1. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 180, que omite el peptido ftder natural y secuencias de reconocimiento de sortasa.
Se ha mostrado que algunas combinaciones de spr0057 con otros antigenos neumococicos tienen buenos efectos sinergicos.
(2) spr0286
La secuencia 'spr0286' original se anoto en la referencia 84 como 'Precursor de la hialuronato liasa' (vease el documento GI: 15902330). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr0286 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 2 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr0286 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 2; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 2, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr0286 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 2. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 2. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 2 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 2. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 181, que omite el peptido ftder natural y secuencias de reconocimiento de sortasa. Otros fragmentos adecuados son las sEq ID NOs: 182 y 183.
(3) spr0565
La secuencia 'spr0565' original se anoto en la referencia 84 como 'precursor de beta-galactosidasa' (vease el documento GI: 15902609). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr0565 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 3 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr0565 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 3; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 3, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr0565 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 3 (por ejemplo, SEQ ID NO: 66; vease a continuacion). Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 3. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4,
5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 3 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 3. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 184, que omite el peptido ftder natural y secuencias de reconocimiento de sortasa. Otros fragmentos adecuados son las SEQ ID NOs: 177 y 178.
Una forma variante de spr0565 es la SEQ ID NO: 66 en el presente documento. El uso de esta forma variante para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 178 en la misma). Algunos polipeptidos spr0565 utiles pueden comprender una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SEQ ID NO: 66; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 66, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estos polipeptidos incluyen variantes de la SEQ ID NO: 66. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 66. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 66 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 66. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
Algunos fragmentos inmunogenico de la SEQ ID NO: 66 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
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Dado que spr0565 en la naturaleza es un polipeptido largo (> 2000 aa), puede ser mas conveniente expresar fragmented. Por lo tanto como una forma adecuada de spr0565 para su uso con la invencion puede tener una longitud inferior a 1500 aminoacidos (por ejemplo, < 1400, < 1300, < 1200, < 1100, etc.). Tales formas cortas de spr0565 incluyen 'spr0565A' (SEQ ID NO: 177) y 'spr0565B' (SEQ ID NO: 178).
Se ha mostrado que algunas combinaciones de spr0565 con otros anftgenos neumococicos tienen buenos efectos sinergicos.
(4) spr1098
La secuencia 'spr1098' original se anoto en la referencia 84 como 'Sortasa' (vease el documento GI: 15903141). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1098 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 4 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr1098 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 4; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 4, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1098 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 4. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 4. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 4 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 4. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 187, que omite la secuencia peptfdica ftder natural.
(5) spr1345
La secuencia 'spr1345' original se anoto en la referencia 84 como ’protema hipotetica' (vease el documento GI: 15903388). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1345 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 5 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr1345 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 5; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 5, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1345 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 5. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 5. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 5 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 5. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 188, que omite el peptido ftder natural y secuencias de reconocimiento de sortasa.
(6) spr1416
La secuencia 'spr1416' original se anoto en la referencia 84 como 'protema hipotetica' (vease el documento GI: 15903459). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1416 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 6 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr1416 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 6; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 6, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1416 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 6. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 6. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 6 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 6. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
(7) spr1418
La secuencia 'spr1418' original se anoto en la referencia 84 como 'protema hipotetica' (vease el documento GI: 15903461). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1418 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 7 en el presente documento.
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Algunos polipeptidos spr1418 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 7; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 7, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1418 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 7. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ iD NO: 7. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 7 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 7. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
Segundo grupo de antigenos
(1) spr0867
La secuencia 'spr0867' original se anoto en la referencia 84 como 'Endo-beta-N-acetilglucosaminidasa' (vease el documento GI: 15902911). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr0867 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 8 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr0867 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 8; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 8, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr0867 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 8. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 8. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 8 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 8. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 185, que omite la secuencia peptfdica ftder natural.
(2) spr1431
La secuencia 'spr1431' original se anoto en la referencia 84 como '1,4-beta-N-acetilmuramidasa' (vease el documento GI: 15903474). Tambien se conoce como 'LytC', y su uso para inmunizacion se informa en la referencia 67. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1431 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 9 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr1431 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SeQ ID NO: 9; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la sEq ID NO: 9, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1431 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 9. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 9. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 9 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 9. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 189, que omite la secuencia peptfdica ftder natural.
(3) spr1739
El polipeptido 'spr1739' es la neumolisina (por ejemplo, vease el documento GI: 15903781). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1739 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 10 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr1739 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la SEQ iD NO: 10; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 10, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1739 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 10. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 10. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 10 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 10. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
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En la tecnica se conocen algunas formas mutantes de la neumolisina para uso en vacunacion [26, 51-56], y estas formas mutantes se pueden usar con la invencion. La detoxificacion se puede conseguir mediante truncamiento C- terminal (por ejemplo, vease la ref. 57) por ejemplo con delecion de 34 aminoacidos, 45 aminoacidos, 7 aminoacidos [58], etc. Algunas mutaciones adicionales, numeradas de acuerdo con la SEQ ID NO: 20, incluyen Pro325^-Leu (por ejemplo, SEQ ID NO: 169) y/o Trp433^-Phe (por ejemplo, SEQ ID NO: 171). Estas mutaciones se pueden combinar con truncamientos C-terminales por ejemplo para combinar una mutacion de Pro325^-Leu con un truncamiento de 7-mer (por ejemplo, SEQ ID NO: 170).
(4) spr2021
La secuencia 'spr2021' original se anoto en la referencia 84 como ’Protema GSP-781 de estres general' (vease el documento GI: 15904062). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr2021 de longitud completa como se encuentra en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 11 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr2021 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la SEQ iD NO: 11; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos ’n’ aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 11, en el que ’n’ es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr2021 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 11. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 11. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 11a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 11. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 190, que omite la secuencia peptidica ftder natural.
Se ha mostrado que algunas combinaciones de spr2021 con otros antigenos neumococicos tienen buenos efectos sinergicos.
La referencia 10 anota a spr2021 como una protema de 45 kDa secretada con homologfa con respecto a GbpB y desvela uso como un agente inmunogeno (SEQ ID NO: 243 en la misma; SP2216). Algunos fragmentos inmunogenicos de spr2021 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10 (pagina 73). Otro fragmento util de spr2021 se desvela como la SEQ ID NO: 1 de la referencia 59 (aminoacidos 28-278 de la SEQ ID NO: 11 en el presente documento).
Tercer grupo de antigenos
(1) spr0096
La secuencia ’spr0096’ original se anoto en la referencia 84 como ’protema hipotetica’ (vease el documento GI: 15902140). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr0096 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 12 en el presente documento.
Algunos polipeptidos spr0096 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la SEQ iD NO: 12; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos ’n’ aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 12, en el que ’n’ es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr0096 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 12 (por ejemplo, SEQ ID NO: 40; vease a continuacion). Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 12. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 12 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 12. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
Se ha mostrado que algunas combinaciones de spr0096 con otros antigenos neumococicos tienen buenos efectos sinergicos.
Una forma variante de spr0096, con una insercion cerca de su extremo C-terminal con respecto a la SEQ ID NO: 12, es la SEQ ID NO: 40 en el presente documento. El uso de esta variante para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 150 en la misma), en la que se anota como la protema del dominio de LysM. Por lo tanto, un spr0096 para su uso con la invencion puede comprender una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SEQ ID NO: 40; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos ’n’ aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 40, en el que ’n’ es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estos polipeptidos incluyen variantes de la SEQ ID NO: 40. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 40. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal
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de la SEQ ID NO: 40 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 40. Otros fragmented omiten uno o mas dominios de la protema. Algunos fragmentos inmunogenico de la SEQ ID NO: 40 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
Un polipeptido spr0096 se puede usar en forma de un dfmero, por ejemplo un homodfmero.
(2) spr1433
La secuencia 'spr1433' original se anoto en la referencia 84 como ’protema hipotetica’ (vease el documento GI: 15903476). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1433 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, en el presente documento se proporciona como la SEQ ID NO: 13.
Algunos polipeptidos spr1433 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos:
(a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la SEQ iD NO: 13; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos ’n’ aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 13, en el que ’n’ es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1433 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 13. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 13. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 13 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 13. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
(3) spr1707
La secuencia ’spr1707’ original se anoto en la referencia 84 como ’protema de union a sustrato transportadora de ABC - transporte de oligopeptidos’ (vease el documento GI: 15903749). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1707 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, se proporciona como SEQ ID NO: 14 en el presente documento. Algunos polipeptidos spr1707 preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SEQ ID NO: 14; y/o
(b) que comprende un fragmento de al menos ’n’ aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 14, en el que ’n’ es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas spr1707 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 14 (por ejemplo, SEQ ID NO: 100; vease a continuacion). Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 14. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C- terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N- terminal de la SEQ ID NO: 14 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 14. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
Una forma variante de spr1707, que se diferencia de la SEQ ID NO: 14 en 4 aminoacidos, es la SEQ ID NO: 100 en el presente documento. El uso de SEQ ID NO: 100 a la inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 220 en la misma). Por lo tanto, un polipeptido spr1707 para su uso con la invencion puede comprender una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la SEQ ID NO: 100; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos ’n’ aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 100, en el que ’n’ es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estos polipeptidos incluyen variantes de la SEQ ID NO: 100. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 100. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 100 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 100. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
Algunos fragmentos inmunogenico de la SEQ ID NO: 100 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
Otros antigenos neumococicos
ClpP
ClpP es la subunidad proteolftica de la proteasa Clp dependiente de ATP. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de ClpP de longitud completa es la SEQ Id NO: 16 en el presente documento. En el genoma de R6, ClpP es spr0656 [84].
El uso de ClpP para inmunizacion se informa en las referencias 60 y 61. Se puede usar de forma ventajosa en combinacion con PspA y PsaA y/o PspC [60].
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LytA
LytA es la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa (autolisina). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de LytA de longitud completa es la SEQ ID NO: 17 en el presente documento. En el genoma de R6, LytA es spr1754 [84].
El uso de LytA para inmunizacion se informa en la referencia 62, en particular en una forma que comprende el dominio de union de LytA fusionado con un epftopo auxiliarT promiscuo heterologo.
PhtA
PhtA es la protema A de la tnada de histidina neumococica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos del precursor de PhtA de longitud completa es la SEQ ID NO: 18 en el presente documento. En el genoma de R6, PhtA es spr1061 [84].
El uso de PhtA para inmunizacion se informa en la referencias 63 y 64. PhtB
PhtB es la protema B de la tnada de histidina neumococica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos del precursor de PhtB de longitud completa es la SEQ ID NO: 19 en el presente documento. Xaa en el resto 578 puede ser Lisina.
El uso de PhtB para inmunizacion se informa en la referencia 2, 63 y 64.
Ph tD
PhtD es la protema D de la tnada de histidina neumococica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos del precursor de PhtD de longitud completa es la SEQ ID NO: 20 en el presente documento. En el genoma de R6, PhtD es spr0907 [84].
El uso de PhtD para inmunizacion se informa en la referencias 63, 64 y 65.
PhtE
PhtE es la protema QUE de la tnada de histidina neumococica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos del precursor de PhtE de longitud completa es la SEQ ID NO: 21 en el presente documento. En el genoma de R6, PhtE es spr0908 [84].
El uso de PhtE para inmunizacion se informa en la referencias 63 y 64.
ZmpB
ZmpB es la metaloproteasa de cinc. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de de ZmpB longitud completa es la SEQ ID NO: 22 en el presente documento. En el genoma de R6, ZmpB es spr0581 [84].
CbpD
CbpD es la protema D de union a Colina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de CbpD de longitud completa es la SEQ ID NO: 23 en el presente documento. En el genoma de R6, CbpD es spr2006 [84].
El uso de CbpD para inmunizacion se informa en la referencia 67. Una variante de la SEQ ID NO: 23 es la SEQ ID NO: 119 en el presente documento. El uso de SEQ ID NO: 119 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 241 en la misma). Algunos fragmentos inmunogenicos de la SEQ ID NO: 119 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
CbpG
CbpG es la protema G de union a Colina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de CbpG de longitud completa es la SEQ ID NO: 24 en el presente documento. En el genoma de R6, CbpG es spr0350 [84].
El uso de CbpG para inmunizacion se informa en la referencia 67.
PvaA
PvaA (antfgeno A de la vacuna neumococica de Streptococcus pneumoniae) tambien se conoce como sp101. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de PvaA de longitud completa es la SEQ ID NO: 25 en el presente documento. En el genoma de R6, PvaA es spr0930 [84].
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CPL1 es la lisozima CP1 de fago neumococico. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de CPL1 de longitud completa es la SEQ ID NO: 26 en el presente documento.
El uso de CPL1 para inmunizacion se informa en la referencia 62, en particular en una forma que comprende el dominio de union a colina CPL1 fusionado con un epftopo auxiliar T promiscuo heterologo.
PspC
PspC es la protema C de superficie neumococica [66] Italia se conoce como protema A de union a colina (CbpA). Su uso para inmunizacion se informa en la referencias 1 y 67. En la cepa R6, es spr1995 y, para referencia, la secuencia de aminoacidos de spr1995 de longitud completa es la SEQ ID NO: 15 en el presente documento.
Una variante de PspC se conoce como 'Hic'. Es similar a PspC, como se muestra en la Figura 1 de la referencia 68, en la que se informa que se une al factor H (fH). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de Hic de longitud completa es la SEQ ID NO: 27 en el presente documento. Una protema Hic se puede usar un la invencion ademas de o en lugar de un polipeptido PspC.
PspC y/o Hic se pueden usar de forma ventajosa en combinacion con PspA y/o PsaA.
Pmp
Pmp es una peptidilprolil isomerasa, tambien conocida como protema de maduracion de proteasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de de Pmp longitud completa es la SEQ ID NO: 28 en el presente documento. En el genoma de R6, Pmp es spr0884 [84].
Algunos polipeptidos Pmp preferentes para uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SEQ ID NO: 28; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 28, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas Pmp incluyen variantes de la SEQ ID NO: 28. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 28. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 28 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 28. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 186, que omite la secuencia peptfdica ftder natural.
El uso de Pmp para inmunizacion se informa en la referencia 69.
PspA
PspA es la protema A de superficie neumococica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de PspA de longitud completa es la SEQ ID NO: 29 en el presente documento. En el genoma de R6, PspA es spr0121 [84]. El uso de PspA para inmunizacion se informa, entre otros, en la referencia 70. De forma ventajosa, se puede administrar en combinacion con PspC.
PsaA
PsaA es la adhesina de superficie neumococica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de PsaA de longitud completa es la SEQ ID NO: 30 en el presente documento.
Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento de PsaA util se desvela como la SEQ ID NO: 3 en la referencia 59 (que corresponde a los aminoacidos 21-309 de la SEQ ID NO: 30 en el presente documento).
El uso de PsaA para inmunizacion se informa en la referencia 71. Se puede usar en combinacion con PspA y/o PspC.
PrtA
PrtA es la serina proteinasa asociada con la pared celular. Tambien se ha conocido como sp128 y sp130, y se encuentra en una serina proteasa similar a la subtilisina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos del precursor de PrtA de longitud completa es la SEQ ID NO: 31 en el presente documento. En el genoma de R6, PrtA es spr0561 [84].
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Sp133
Sp133 es un antigeno neumococico conservado. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de de Sp133 longitud completa es la SEQ ID NO: 32 en el presente documento. En el genoma de R6, Sp133 es spr0931 [84].
El uso de Sp133 para inmunizacion se informa en la referencia 74.
PiaA
PiaA es la permeasa de membrana implicada en la adquisicion de hierro por los neumococos. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de PiaA de longitud completa es la SEQ ID NO: 33 en el presente documento. En el genoma de R6, PiaA es spr0935 [84].
El uso de PiaA para inmunizacion se informa en la referencias 75, 76 y 77, en particular en combinacion con PiuA. PiuA
PiuA es la protema de union al sustrato transportadora de ABC para transporte de hierro ferrico. Tambien se conoce como FatB. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de PiuA de longitud completa es la SEQ ID NO: 34 en el presente documento. En el genoma de R6, PiuA es spr1687 [84].
El uso de PiuA para inmunizacion se informa en las preferencias 75 to 77, en particular en combinacion con PiaA.
IC1
IC1 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC1 de longitud completa es la SEQ ID NO: 35 en el presente documento. En el genoma de R6, IC1 es spr0008 [84]. El uso de IC1 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 145 en la misma).
Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Los fragmentos inmunogenicos de IC1 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC2
IC2 es la polimerasa I del ADN de polA. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC2 de longitud completa es la SEQ ID NO: 36 en el presente documento. En el genoma de R6, IC2 es spr0032 [84]. El uso de IC2 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 146 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC2 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC3
IC3 es una protema de union a colina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC3 de longitud completa es la SEQ ID NO: 37 en el presente documento. En el genoma de R6, IC3 es spr1945 [84]. El uso de IC3 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 147 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC3 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC4
IC4 es una proteasa de IgA1. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC4 de longitud completa es la SEQ ID NO: 38 en el presente documento. En el genoma de R6, IC4 es spr1042 [84]. El uso de iC4 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 148 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC4 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC5
IC5 se anota como una protema hipotetica, pero quiza es un ancla de la superficie de la pared celular. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC5 de longitud completa es la SEQ ID NO: 39 en el presente documento. En el genoma de R6, IC5 es spr0075 [84]. El uso de IC5 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 149 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC5 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC6
IC6 es una forma variante de spr0096, como se ha informado anteriormente (SEQ ID NO: 40 en el presente documento).
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IC7 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC7 de longitud completa es la SEQ ID NO: 41 en el presente documento. En el genoma de R6, IC7 es spr0174 [84]. El uso de IC7 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 152 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC7 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC8
IC8 es una Dihidrofolato:folilpoliglutamato sintetasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC8 de longitud completa es la SEQ ID NO: 42 en el presente documento. En el genoma de R6, IC8 es spr0178 [84]. El uso de IC8 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 153 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC8 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC9
IC9 es una protema L2 de la subunidad ribosomica 50S. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC9 de longitud completa es la SEQ ID NO: 43 en el presente documento. En el genoma de R6, IC9 es spr0191 [84]. El uso de IC9 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 154 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC9 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC10
IC10 es una protema S14 de la subunidad ribosomica 30S. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC10 de longitud completa es la SEQ ID NO: 44 en el presente documento. En el genoma de R6, IC10 es spr0202 [84]. El uso de IC10 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 155 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC10 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC11
IC11 se anotan la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC11 de longitud completa es la SEQ ID NO: 45 en el presente documento. En el genoma de R6, IC11 es spr0218 [84]. El uso de IC11 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 156 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC11 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC12
IC12 es una Formiato acetiltransferasa 3. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de d IC12 e longitud completa es la SEQ ID NO: 46 en el presente documento. En el genoma de R6, IC12 es spr0232 [84]. El uso de IC12 a la inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 157 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC12 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC13
IC13 es una protema S9 de la subunidad ribosomica 30S. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC13 de longitud completa es la SEQ ID NO: 47 en el presente documento. En el genoma de R6, IC13 es spr0272 [84]. El uso de IC13 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 158 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 13 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC14
IC14 es un regulador de la transcripcion. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC14 de longitud completa es la SEQ ID NO: 48 en el presente documento. En el genoma de R6, IC14 es spr0298 [84]. El uso de IC14 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 159 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 14 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC15
IC15 se anota en la referencia 10 como una protema de la familia de anclaje de la superficie de la pared celular. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC15 de longitud completa es la SEQ ID NO: 49 en el presente documento. En el genoma de R6, IC15 es spr0328 [84]. El uso de IC15 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 160 en la misma), y se muestra que es protector en la referencia 78 (antfgeno SP0368).
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Los fragmented inmunogenicos de IC16 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC17
IC17 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC17 de longitud completa es la SEQ ID NO: 51 en el presente documento. En el genoma de R6, IC17 es spr0334 [84]. El uso de IC 17 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 162 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 17 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC18
IC18 se anota en la referencia 10 como una protema F de union a colina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC18 de longitud completa es la SEQ ID NO: 52 en el presente documento. En el genoma de R6, IC18 es spr0337 [84]. El uso de IC18 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 163 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC18 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC19
IC19 se anota en la referencia 10 como una protema J de union a colina (cbpJ). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC19 de longitud completa es la SEQ ID NO: 53 en el presente documento. El uso de IC19 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 164 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 19 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC20
IC20 es una protema G de union a colina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC20 de longitud completa es la SEQ ID NO: 54 en el presente documento. En el genoma de R6, IC20 es spr0349 [84]. El uso de IC20 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 165 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC20 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC21
IC21 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC21 de longitud completa es la SEQ ID NO: 55 en el presente documento. En el genoma de R6, IC21 es spr0410 [84]. El uso de IC21 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 166 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC21 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC22
IC22 se anota en la referencia 10 como protema de la familia de anclaje de la superficie de la pared celular. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC22 de longitud completa es la SEQ ID NO: 56 en el presente documento. En el genoma de R6, IC22 es spr0051 [84]. El uso de IC22 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 167 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC22 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC23
IC23 es una Sortasa (cf. spr1098). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC23 de longitud completa es la SEQ ID NO: 57 en el presente documento. El uso de IC23 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 168 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC23 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC24
IC24 es una Sortasa (cf spr1098). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC24 de longitud completa es la SEQ ID NO: 58 en el presente documento. El uso de IC24 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 169 en la misma).
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Los fragmentos inmunogenicos de IC24 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC25
IC25 se anota en la referencia 10 como una supuesta endo-p-N-acetilglucosaminidasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC25 de longitud completa es la SEQ ID NO: 59 en el presente documento. En el genoma de R6, IC25 es spr0440 [84]. El uso de IC25 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 170 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC25 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC26
IC26 es una enzima de modificacion de restriccion de tipo I de EcoE. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC26 de longitud completa es la SEQ ID NO: 60 en el presente documento. En el genoma de R6, IC26 es spr0449 [84]. El uso de IC26 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 171 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC26 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC27
IC27 se anota en la referencia 10 como una protema J de ADN. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC27 de longitud completa es la SEQ ID NO: 61 en el presente documento. En el genoma de R6, IC27 es spr0456 [84]. El uso de IC27 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 172 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC27 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC28
IC28 se anota en la referencia 10 como una transportadora de ABC de BlpC (blpB). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC28 de longitud completa es la SEQ ID NO: 62 en el presente documento. En el genoma de R6, IC28 es spr0466 [84]. El uso de IC28 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 173 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC28 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC29
IC29 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC29 de longitud completa es la SEQ ID NO: 63 en el presente documento. En el genoma de R6, IC29 es spr0488 [84]. El uso de IC29 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 174 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC29 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC30
IC30 es una protema de union a sustrato transportadora de ABC. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC30 de longitud completa es la SEQ ID NO: 64 en el presente documento. En el genoma de R6, IC30 es spr0534 [84]. El uso de IC30 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 175 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC30 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC31
IC31 se anota en la referencia 10 como una protema de la superfamilia de la metalo-p-lactamasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC31 de longitud completa es la SEQ ID NO: 65 en el presente documento. En el genoma de R6, IC31 es spr0538 [84]. El uso de IC31 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 176 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC31 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC32
IC32 es una forma variante de spr0565, como se ha mencionado anteriormente (SEQ ID NO: 66 en el presente documento). Algunos fragmentos inmunogenicos de SEQ ID NO: 66 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
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IC33 se anota en la referencia 10 como una supuesta protema de superficie neumococica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC33 de longitud completa es la SEQ ID NO: 67 en el presente documento. En el genoma de R6, IC33 es spr0583 [84]. El uso de IC33 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 180 en la misma) y en la referencia 78 (antfgeno SP0667) se muestra que es protectora. Los fragmentos inmunogenicos de IC33 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC34
IC34 es una UDP-N-acetilmuramoil-L-alanil-D-glutamato sintetasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC34 de longitud completa es la SEQ ID NO: 68 en el presente documento. En el genoma de R6, IC34 es spr0603 [84]. El uso de IC34 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 181 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC34 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC35
IC35 es una protema de union al sustrato transportadora de ABC. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC35 de longitud completa es la SEQ ID NO: 69 en el presente documento. En el genoma de R6, IC35 es spr0659 [84]. El uso de IC35 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 182 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC35 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC36
IC36 es una protema de union a ATP transportadora de ABC. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC36 de longitud completa es la SEQ ID NO: 70 en el presente documento. En el genoma de R6, IC36 es spr0678 [84]. El uso de IC36 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 183 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC36 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC37
IC37 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC37 de longitud completa es la SEQ ID NO: 71 en el presente documento. En el genoma de R6, IC37 es spr0693 [84]. El uso de IC37 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 184 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC37 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC38
IC38 se anota en la referencia 10 como una protema relacionada con nodulina con truncamiento. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC38 de longitud completa es la SEQ ID NO: 72 en el presente documento. En el genoma de R6, IC38 es spr0814 [84]. El uso de IC38 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 185 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC38 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC39
IC39 es una protema E de union a fosforilcolina esterasa de acido Teicoico/colina (cbpE). Tambien se puede conocer como 'LytD'. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC39 de longitud completa es la SEQ ID NO: 73 en el presente documento. En el genoma de R6, IC39 es spr0831 [84]. El uso de IC39 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 186 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC39 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC40
IC40 es una protema A de division inhibida por glucosa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC40 de longitud completa es la SEQ ID NO: 74 en el presente documento. En el genoma de R6, IC40 es spr0844 [84]. El uso de IC40 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 187 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC40 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
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Los fragmentos inmunogenicos de IC41 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC42
IC42 es una glucogeno sintasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC42 de longitud completa es la SEQ ID NO: 76 en el presente documento. En el genoma de R6, IC42 es spr1032 [84]. El uso de IC42 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 191 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC42 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC43
IC43 es una Inmunoglobulina A1 proteasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC43 de longitud completa es la SEQ ID NO: 77 en el presente documento. El uso de IC43 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 192 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC43 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC44
IC44 es una enzima de restriccion sin caracterizar. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC44 de longitud completa es la SEQ ID NO: 78 en el presente documento. En el genoma de R6, IC44 es spr1101 [84]. El uso de IC44 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 195 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC44 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC45
IC45 es un regulador de respuesta. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC45 de longitud completa es la SEQ ID NO: 79 en el presente documento. En el genoma de R6, IC45 es spr1107 [84]. El uso de IC45 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 196 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC45 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC46
IC46 es una permeasa transmembrana transportadora de ABC. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC46 de longitud completa es la SEQ ID NO: 80 en el presente documento. En el genoma de R6, IC46 es spr1120 [84]. El uso de IC46 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 197 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC46 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC47
IC47 es una partfcula de reconocimiento de senales. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC47 de longitud completa es la SEQ ID NO: 81 en el presente documento. En el genoma de R6, IC47 es spr1166 [84]. El uso de IC47 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 198 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC47 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC48
IC48 es una N-acetilmanosamina-6-fosfato 2-epimerasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC48 de longitud completa es la SEQ ID NO: 82 en el presente documento. En el genoma de R6, IC48 es spr1529 [84]. El uso de IC48 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 199 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC48 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC49
IC49 es una corismato sintasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC49 de longitud completa es la SEQ ID NO: 83 en el presente documento. En el genoma de R6, IC49 es spr1232 [84]. El uso de IC49 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 200 en la misma).
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IC50 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC50 de longitud completa es la SEQ ID NO: 84 en el presente documento. En el genoma de R6, IC50 es spr1236 [84]. El uso de IC50 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 201 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC50 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC51
IC51 es una Proteasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC51 de longitud completa es la SEQ ID NO: 85 en el presente documento. En el genoma de R6, IC51 es spr1284 [84]. El uso de IC51 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 202 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC51 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC52
IC52 se anota en la referencia 10 como una oxidorreductasa o aldo/ceto reductasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC52 de longitud completa es la SEQ ID NO: 86 en el presente documento. En el genoma de R6, IC52 es spr1332 [84]. El uso de IC52 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 203 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC52 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC53
IC53 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC53 de longitud completa es la SEQ ID NO: 87 en el presente documento. En el genoma de R6, IC53 es spr1370 [84]. El uso de IC53 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 204 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC53 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC54
IC54 se anota como una protema de dominio conservado. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC54 de longitud completa es la SEQ ID NO: 88 en el presente documento. En el genoma de R6, IC54 es spr1374 [84]. El uso de IC54 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 205 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC54 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC55
IC55 es una protema de union al sustrato transportadora de ABC. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC55 de longitud completa es la SEQ ID NO: 89 en el presente documento. En el genoma de R6, IC55 es spr1382 [84]. El uso de IC55 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 206 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC55 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC56
IC56 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC56 de longitud completa es la SEQ ID NO: 90 en el presente documento. En el genoma de R6, IC56 es spr1457 [84]. El uso de IC56 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 208 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC56 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC57
IC57 es una protema de inicio de la division celular. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC57 de longitud completa es la SEQ ID NO: 91 en el presente documento. En el genoma de R6, IC57 es spr1505 [84]. El uso de IC57 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 209 en la misma).
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Los fragmentos inmunogenicos de IC58 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC59
IC59 es una subunidad de N-acetilneuraminato liasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC59 de longitud completa es la SEQ ID NO: 93 en el presente documento. En el genoma de R6, IC59 es spr1186 [84]. El uso de IC59 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 211 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC59 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC60
IC60 es una serina/treonina quinasa de tipo eucariotico (StkP). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC60 de longitud completa es la SEQ ID NO: 94 en el presente documento. En el genoma de R6, IC60 es spr1577 [84]. El uso de IC60 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 214 en la misma), y se informa que es un candidato a vacuna lfder en la referencia 78.
Los fragmentos inmunogenicos de IC60 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. Un fragmento util adicional se desvela como la SEQ ID NO: 2 en la referencia 59 (que corresponde a los aminoacidos 345-659 de la SEQ ID NO: 94 en el presente documento).
IC61
IC61 es una metionil-ARNt formiltransferasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC61 de longitud completa es la SEQ ID NO: 95 en el presente documento. En el genoma de R6, IC61 es spr1580 [84]. El uso de IC61 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 215 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC61 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC62
IC62 es una translocasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC62 de longitud completa es la SEQ ID NO: 96 en el presente documento. En el genoma de R6, IC62 es spr1544 [84]. El uso de IC62 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 216 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC62 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC63
IC63 se anota en la referencia 10 como una protema de la familia de anclaje de la superficie de la pared celular. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC63 de longitud completa es la SEQ ID NO: 97 en el presente documento. En el genoma de R6, IC63 es spr1403 [84]. El uso de IC63 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 217 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC63 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC64
IC64 se anota en la referencia 10 como una supuesta protema de estres general 24. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC64 de longitud completa es la SEQ ID NO: 98 en el presente documento. En el genoma de R6, IC64 es spr1625 [84]. El uso de IC64 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 218 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC64 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC65
IC65 es una protema de union a ATP transportadora de ABC. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC65 de longitud completa es la SEQ ID NO: 99 en el presente documento. En el genoma de R6, IC65 es spr1704 [84]. El uso de IC65 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 219 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC65 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC66
IC66 es, como se ha mencionado anteriormente, una forma variante de spr1707. Algunos polipeptidos IC66 utiles para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o
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superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con la SEQ ID NO: 100; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 100, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas Ic66 incluyen variantes de la SEQ ID NO: 100. Algunos fragmented de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 100. Otros fragmented preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 100 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 100. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
IC67
IC67 es una serina proteasa similar a la subtilisina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC67 de longitud completa es la SEQ ID NO: 101 en el presente documento. En el genoma de R6, IC67 es spr1771 [84]. El uso de IC67 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 222 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC67 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC68
IC68 es un factor 1 de union a Cmp. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC68 de longitud completa es la SEQ ID NO: 102 en el presente documento. En el genoma de R6, IC68 es spr1794 [84]. El uso de IC68 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 223 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC68 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC69
IC69 se anota en la referencia 10 como protema de la familia de anclaje de la superficie de la pared celular. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC69 de longitud completa es la SEQ ID NO: 103 en el presente documento. En el genoma de R6, IC69 es spr1806 [84]. El uso de IC69 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 224 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC69 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC70
IC70 es una protema A de control de catabolito A. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC70 de longitud completa es la SEQ ID NO: 104 en el presente documento. En el genoma de R6, IC70 es spr1813 [84]. El uso de IC70 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 225 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC70 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC71
IC71 es una Beta-glucosidasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC71 de longitud completa es la SEQ ID NO: 105 en el presente documento. En el genoma de R6, IC71 es spr1833 [84]. El uso de IC71 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 226 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC71 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC72
IC72 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC72 de longitud completa es la SEQ ID NO: 106 en el presente documento. En el genoma de R6, IC72 es spr1838 [84]. El uso de IC72 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 227 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC72 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC73
IC73 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC73 de longitud completa es la SEQ ID NO: 107 en el presente documento. En el genoma de R6, IC73 es spr1850 [84]. El uso de IC73 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 228 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC73 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC74
IC74 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC74 de longitud completa es la SEQ ID NO: 108 en el presente documento. En el genoma de R6, IC74 es spr1859 [84]. El uso de IC74 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 229 en la
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misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC74 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC75
IC75 es una protema de competencia. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC75 de longitud completa es la SEQ ID NO: 109 en el presente documento. En el genoma de R6, IC75 es spr1862 [84]. El uso de IC75 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 230 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC75 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC76
IC76 es una UTP-glucosa-1-fosfato uridililtransferasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC76 de longitud completa es la SEQ ID NO: 110 en el presente documento. En el genoma de R6, IC76 es spr1903 [84]. El uso de IC76 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 231 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC76 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC77
IC77 es una protema 1b de union a penicilina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC77 de longitud completa es la SEQ ID NO: 111 en el presente documento. En el genoma de R6, IC77 es spr1909 [84]. El uso de IC77 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 232 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC77 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC78
IC78 es una protema de union al sustrato transportadora de ABC de maltosa/maltodextrina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC78 de longitud completa es la SEQ ID NO: 112 en el presente documento. En el genoma de R6, IC78 es spr1918 [84]. El uso de IC78 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 233 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC78 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC79
IC79 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC79 de longitud completa es la SEQ ID NO: 113 en el presente documento. En el genoma de R6, IC79 es spr2120 [84]. El uso de IC79 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 234 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC79 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC80
IC80 es una supuesta seccion n-terminal de transcetolasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC80 de longitud completa es la SEQ ID NO: 114 en el presente documento. En el genoma de R6, IC80 es spr1937 [84]. El uso de IC80 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 235 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC80 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC81
IC81 es una protema de union a Colina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC81 de longitud completa es la SEQ ID NO: 115 en el presente documento. Su extremo C-terminal esta relacionado con IC3. El uso de IC81 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 236 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC81 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC82
IC82 es una protema relacionada con la glicosil hidrolasa. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC82 de longitud completa es la SEQ ID NO: 116 en el presente documento. En el genoma de R6, IC82 es spr2141 [84]. El uso de IC82 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 237 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC82 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC83
IC83 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC83 de longitud completa es la SEQ ID NO: 117 en el presente documento. En el genoma de R6, IC83 es spr1983 [84]. El uso de IC83 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 238 en la misma).
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IC84 es una ATPasa relacionada con la respuesta al estres de Clase III. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC84 de longitud completa es la SEQ ID NO: 118 en el presente documento. En el genoma de R6, IC84 es spr2000 [84]. El uso de IC84 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 240 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC84 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC85
IC85 es una variante de la SEQ ID NO: 23, mencionada anteriormente (SEQ ID NO: 119). Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
IC86
IC86 es una protema L9 de la subunidad ribosomica 50S. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC86 de longitud completa es la SEQ ID NO: 120 en el presente documento. En el genoma de R6, IC86 es spr2009 [84]. El uso de IC86 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 242 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC86 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC87
IC87 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC87 de longitud completa es la SEQ ID NO: 166 en el presente documento. En el genoma de R6, IC87 es spr0987 [84]. El uso de IC87 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 288 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC87 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC88
IC88 es una protema de union a colina. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC88 de longitud completa es la SEQ ID NO: 122 en el presente documento. En el genoma de R6, IC88 es spr1274 [84]. El uso de IC88 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 244 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC88 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC89
IC89 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de
aminoacidos de IC89 de longitud completa es la SEQ ID NO: 123 en el presente documento. El uso de IC89 para
inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 245 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC89 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC90
IC90 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de
aminoacidos de IC90 de longitud completa es la SEQ ID NO: 124 en el presente documento. El uso de IC90 para
inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 246 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC90 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC91
IC91 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC91 de longitud completa es la SEQ ID NO: 125 en el presente documento. En el genoma de R6, IC91 es spr0415 [84]. El uso de IC91 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 247 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC91 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC92
IC92 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC92 de longitud completa es la SEQ ID NO: 126 en el presente documento. En el genoma de R6, IC92 es spr0695 [84]. El uso de IC92 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 248 en la misma).
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IC93 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC93 de longitud completa es la SEQ ID NO: 127 en el presente documento. En el genoma de R6, IC93 es spr1334 [84]. El uso de IC93 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 249 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC93 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC94
IC94 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC94 de longitud completa es la SEQ ID NO: 128 en el presente documento. En el genoma de R6, IC94 es spr0242 [84]. El uso de IC94 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 250 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC94 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC95
IC95 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC95 de longitud completa es la SEQ ID NO: 129 en el presente documento. En el genoma de R6, IC95 es spr1367 [84]. El uso de IC95 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 251 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC95 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC96
IC96 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC96 de longitud completa es la SEQ ID NO: 130 en el presente documento. El uso de IC96 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 252 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC96 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC97
IC97 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC97 de longitud completa es la SEQ ID NO: 131 en el presente documento. En el genoma de R6, IC97 es spr1502 [84]. El uso de IC97 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 253 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC97 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC98
IC98 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC98 de longitud completa es la SEQ ID NO: 132 en el presente documento. En el genoma de R6, IC98 es spr0730 [84]. El uso de IC98 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 254 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC98 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC99
IC99 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC99 de longitud completa es la SEQ ID NO: 133 en el presente documento. En el genoma de R6, IC99 es spr1961 [84]. El uso de IC99 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 255 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC99 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC100
IC100 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC100 de longitud completa es la SEQ ID NO: 134 en el presente documento. El uso de IC100 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 256 en la misma).
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IC101 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC101 de longitud completa es la SEQ ID NO: 135 en el presente documento. En el genoma de R6, IC101 es spr0516 [84]. El uso de IC101 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 257 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC101 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC102
IC102 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC102 de longitud completa es la SEQ ID NO: 136 en el presente documento. En el genoma de R6, IC102 es spr1785 [84]. El uso de IC102 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 258 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC102 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC103
IC103 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC103 de longitud completa es la SEQ ID NO: 137 en el presente documento. En el genoma de R6, IC103 es spr0215 [84]. El uso de IC103 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 259 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC103 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC104
IC104 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC104 de longitud completa es la SEQ ID NO: 138 en el presente documento. En el genoma de R6, IC104 es spr1815 [84]. El uso de IC104 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 260 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC104 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC105
IC105 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC105 de longitud completa es la SEQ ID NO: 139 en el presente documento. En el genoma de R6, IC105 es spr0102 [84]. El uso de IC105 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 261 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC105 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC106
IC106 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC106 de longitud completa es la SEQ ID NO: 140 en el presente documento. En el genoma de R6, IC106 es spr1994 [84]. El uso de IC106 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 262 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC106 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC107
IC107 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC107 de longitud completa es la SEQ ID NO: 141 en el presente documento. El uso de IC107 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 263 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC107 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC108
IC108 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC108 de longitud completa es la SEQ ID NO: 142 en el presente documento. El uso de IC108 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 264 en la misma).
5
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45
IC109 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC109 de longitud completa es la SEQ ID NO: 143 en el presente documento. En el genoma de R6, IC109 es spr0309 [84]. El uso de IC109 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 265 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC109 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC110
IC110 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC110 de longitud completa es la SEQ ID NO: 144 en el presente documento. En el genoma de R6, IC110 es spr1070 [84]. El uso de IC110 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 266 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC110 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC111
IC111 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC111 de longitud completa es la SEQ ID NO: 145 en el presente documento. En el genoma de R6, IC111 es spr0258 [84]. El uso de IC111 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 267 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC111 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10. IC112
IC112 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de
aminoacidos de IC112 de longitud completa es la SEQ ID NO: 146 en el presente documento. En el genoma de R6,
IC112 es spr0254 [84]. El uso de IC 112 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 268 en la
misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 112 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC113
IC113 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC113 de longitud completa es la SEQ ID NO: 147 en el presente documento. En el genoma de R6, IC113 es spr0171 [84]. El uso de IC113 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 269 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC113 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC114
IC114 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC114 de longitud completa es la SEQ ID NO: 148 en el presente documento. El uso de IC114 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 270 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC114 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC115
IC115 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC115 de longitud completa es la SEQ ID NO: 149 en el presente documento. En el genoma de R6, IC115 es spr0464 [84]. El uso de IC 115 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 271 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 115 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC116
IC116 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC116 de longitud completa es la SEQ ID NO: 150 en el presente documento. En el genoma de R6, IC116 es spr0026 [84]. El uso de IC116 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 272 en la misma).
5
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15
20
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45
IC117 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC117 de longitud completa es la SEQ ID NO: 151 en el presente documento. En el genoma de R6, IC117 es spr1652 [84]. El uso de IC 117 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 273 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 117 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC118
IC118 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC118 de longitud completa es la SEQ ID NO: 152 en el presente documento. En el genoma de R6, IC118 es spr1783 [84]. El uso de IC118 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 274 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC118 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC119
IC119 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC 119 de longitud completa es la SEQ ID NO: 153 en el presente documento. El uso de IC 119 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 275 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC 119 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC120
IC120 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC120 de longitud completa es la SEQ ID NO: 154 en el presente documento. En el genoma de R6, IC120 es spr1153 [84]. El uso de IC120 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 276 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC120 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC121
IC121 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC121 de longitud completa es la SEQ ID NO: 155 en el presente documento. En el genoma de R6, IC121 es spr1977 [84]. El uso de IC121 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 277 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC121 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC122
IC122 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC122 de longitud completa es la SEQ ID NO: 156 en el presente documento. El uso de IC122 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 278 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC 122 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC123
IC123 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC123 de longitud completa es la SEQ ID NO: 157 en el presente documento. En el genoma de R6, IC123 es spr1049 [84]. El uso de IC123 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 279 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC123 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC124
IC124 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC124 de longitud completa es la SEQ ID NO: 158 en el presente documento. En el genoma de R6, IC124 es spr1811 [84]. El uso de IC124 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 280 en la misma).
5
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45
IC125 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC125 de longitud completa es la SEQ ID NO: 159 en el presente documento. En el genoma de R6, IC125 es spr0381 [84]. El uso de IC125 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 281 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC125 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC126
IC126 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC126 de longitud completa es la SEQ ID NO: 160 en el presente documento. El uso de IC126 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 282 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC126 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC127
IC127 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC127 de longitud completa es la SEQ ID NO: 161 en el presente documento. En el genoma de R6, IC127 es spr0061 [84]. El uso de IC127 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 283 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC127 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC128
IC128 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC128 de longitud completa es la SEQ ID NO: 162 en el presente documento. En el genoma de R6, IC128 es spr0641 [84]. El uso de IC128 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 284 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC128 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC129
IC129 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC129 de longitud completa es la SEQ ID NO: 163 en el presente documento. En el genoma de R6, IC129 es spr1205 [84]. El uso de IC129 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 285 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC129 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC130
IC130 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC130 de longitud completa es la SEQ ID NO: 164 en el presente documento. En el genoma de R6, IC130 es spr1841 [84]. El uso de IC130 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 286 en la misma).
Los fragmentos inmunogenicos de IC130 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
IC131
IC131 se anota en la referencia 10 como una protema hipotetica. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de IC131 de longitud completa es la SEQ ID NO: 165 en el presente documento. En el genoma de R6, IC 131 es spr1777 [84]. El uso de IC 131 para inmunizacion se informa en la referencia 10 (SEQ ID NO: 287 en la misma). Los fragmentos inmunogenicos de IC 131 se identifican en la tabla 1 de la referencia 10.
spr0222
La secuencia original 'spr0222' se anoto en la referencia 228 como ’protema de union a ATP transportadora de ABC - transporte de hierro’ (vease el documento GI: 15457768). Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de spr0222 de longitud completa tal como se encontro en la cepa R6, en el presente documento se proporciona como SEQ ID NO: 121 en el presente documento. Uso en inmunizacion se sugiere en la referencia 5.
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CbiO
CbiO se anota como una subunidad de union a ATP transportadora de cobalto. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de CbiO de longitud completa es la SEQ ID NO: 167 en el presente documento. En el genoma de R6, CbiO es spr2025 [84]. El uso de CbiO para inmunizacion se informa en la referencia 6 ('ID2' en la misma).
Prote^na S8de la subunidad ribosomica 30S
Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de la protema S8 de la subunidad ribosomica 30S es la SEQ ID NO: 168 en el presente documento. En el genoma de R6, la subunidad S8 es spr0203 [84].
RrgA
RrgA es una de las subunidades de superficie del pilus neumococico [79,80] y es una adhesina importante [81].existen al menos dos formas alelicas de RrgA y, para fines de referencia, sus secuencias de aminoacidos son las SEQ ID NOs: 172 y 179 en el presente documento. Los dos alelos estan bien conservados en sus extremos N- y C-terminales pero se desvfan entre ellos.
Algunos polipeptidos RrgA preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la sEq ID NO: 172; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 172, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas RrgA incluyen variantes de la SEQ ID NO: 172. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 172. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 172 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 172. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 192, que omite el peptido ftder natural y secuencias de reconocimiento de sortasa.
Otros polipeptidos RrgA preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la sEq ID NO: 179; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 179, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas RrgA incluyen variantes de la SEQ ID NO: 179. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 179. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 179 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 179. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema. Un fragmento adecuado es la SEQ ID NO: 191, que omite el peptido ftder natural y secuencias de reconocimiento de sortasa.
RrgB
RrgB es una de las subunidades de superficie del pilus neumococico [79, 80]. Existen al menos tres formas alelicas de RrgB y, para fines de referencia, sus secuencias de aminoacidos son las SEQ ID NOs: 173, 174 y 175 en el presente documento. Los tres alelos estan bien conservados en sus extremos N- y C-terminales pero se desvfan entre ellos.
Algunos polipeptidos RrgB preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la sEq ID NO: 173; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 173, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas RrgB incluyen variantes de la SEQ ID NO: 173. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 173. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 173 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 173. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
Otros polipeptidos RrgB preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la sEq ID NO: 174; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 174, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas RrgB incluyen variantes de la SEQ ID NO: 174. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 174. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o
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mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 174 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 174. Otros fragmented omiten uno o mas dominios de la protema.
Otros polipeptidos RrgB preferentes para su uso con la invencion comprenden una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior (por ejemplo, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o superior) con la sEq ID NO: 175; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 'n' aminoacidos consecutivos de la SEQ ID NO: 175, en el que 'n' es 10 o mas (por ejemplo, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 o mas). Estas protemas RrgB incluyen variantes de la SEQ ID NO: 175. Algunos fragmentos de (b) preferentes comprenden un epftopo de la SEQ ID NO: 175. Otros fragmentos preferentes carecen de uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo C-terminal y/o uno o mas aminoacidos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o mas) desde el extremo N-terminal de la SEQ ID NO: 175 a la vez que retienen al menos un epftopo de la SEQ ID NO: 175. Otros fragmentos omiten uno o mas dominios de la protema.
RrgC
RrgC es una de las subunidades de superficie del pilus neumococico [79, 80]. Para fines de referencia, la secuencia de aminoacidos de RrgC es la SEQ ID NO: 176 en el presente documento.
Polipeptidos hbridos
Los antfgenos neumococicos usados en la invencion pueden estar presentes en la composicion como polipeptidos separados individuales. Cuando se usa mas de un antfgeno, sin embargo, no tienen que estar presentes como polipeptido separados. En su lugar, al menos dos (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, o mas) antfgenos se pueden expresar como una sola cadena de polipeptidos (un polipeptido 'hterido'). Algunos polipeptidos hteridos ofrecen dos ventajas principales: en primer lugar, un polipeptido que puede ser inestable o esta poco expresado por sf mismo puede ser asistido mediante adicion de un companero hterido adecuado que supera el problema; en segundo lugar, la fabricacion comercial esta simplificada como si fuera necesario usar solamente una expresion y purificacion para producir dos polipeptidos que ambos de los cuales son antigenicamente utiles.
El polipeptido hterido puede comprender dos o mas secuencias de polipeptidos del primer grupo de antfgenos. El polipeptido hterido puede comprender una o mas secuencias de polipeptidos del primer grupo de antfgenos y una o mas secuencias de polipeptidos del segundo grupo de antfgenos. El polipeptido hterido puede comprender una o mas secuencias de polipeptidos del primer grupo de antfgenos y una o mas secuencias de polipeptidos del tercer grupo de antfgenos. El polipeptido hterido puede comprender una o mas secuencias de polipeptidos del segundo grupo de antfgenos y una o mas secuencias de polipeptidos del tercer grupo de antfgenos. El polipeptido hterido
puede comprender dos o mas secuencias de polipeptidos del septimo grupo de antfgenos. El polipeptido hterido
puede comprender dos o mas secuencias de polipeptidos del octavo grupo de antfgenos. El polipeptido hterido
puede comprender dos o mas secuencias de polipeptidos del noveno grupo de antfgenos. El polipeptido hterido
puede comprender dos o mas secuencias de polipeptidos del decimo grupo de antfgenos. Ademas, el polipeptido hterido puede comprender dos o mas secuencias de polipeptidos de cada uno de los antfgenos enumerados anteriormente, o dos o mas variantes del mismo antfgeno en los casos en los que la secuencia tiene una variabilidad parcial entre cepas.
Los hteridos que consisten en secuencias de aminoacidos de dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o diez antfgenos neumococicos son utiles. En particular, los hteridos que consisten en secuencias de aminoacidos de dos, tres, cuatro, o cinco antfgenos neumococicos son preferentes, tales como dos o tres antfgenos neumococicos.
Algunos polipeptidos hteridos diferentes se pueden mezclar en conjunto en una sola formulacion. Los antfgenos hteridos se pueden combinar con antfgenos no hteridos seleccionados entre el primer, segundo o tercer grupos de antfgenos. Dentro de tales combinaciones, un antfgeno neumococicos puede estar presente en mas de un polipeptido hterido y/o como un polipeptido no hterido. Sin embargo, es preferente que un antfgeno este presente ya sea como un hterido o como un no hterido, pero no como ambos.
Los polipeptidos hteridos tambien se pueden combinar con antfgenos conjugados o no neumococicos como se ha descrito anteriormente.
Algunos polipeptidos hteridos se pueden representar con la formula NH2-A-{-X-L-}n,-B-COOH, en la que: X es una secuencia de aminoacidos de un antfgeno neumococico, como se ha descrito anteriormente; L es una secuencia de aminoacidos de engarce adicional; A es una secuencia de aminoacidos N-terminal opcional; B es una secuencia de aminoacidos C-terminal opcional; n es un numero entero de 2 o mas (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, etc.). Normalmente, n es 2 o 3.
Si un resto -X- tiene una secuencia de peptidos ftder en su forma de tipo silvestre, este se puede incluir u omitir en la protema hterida. En algunas realizaciones, se puede producir de delecion de los peptidos ftder excepto para el del resto -X- situado en el extremo N-terminal de la protema hterida, es decir, el peptido ftder de X1 sera retenido, pero los peptidos ftder de X2... Xn seran omitidos. Esto es equivalente a la delecion de todos los peptidos ftder y al uso del
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peptido Uder de X1 como resto -A-.
Para cada n casos de {-X-L-}, la secuencia de aminoacidos de engarce -L- puede estar presente o ausente. Por ejemplo, cuando n = 2, el hforido puede NH2-X1-L1-X2-L2-COOH, NH2-X1-X2-COOH, NH2-X1-L1-X2-COOH, NH2-X1-X2- L2-COOH, etc. La secuencias de aminoacidos de engarce -L- por lo general seran cortas (por ejemplo, 20 o menos aminoacidos, es decir, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Algunos ejemplos comprenden secuencias de peptidos cortas que facilitan la clonacion de, engarces de poli-glicina (es decir, que comprenden Glyn en la que n = 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o superior), y etiquetas de histidina (es decir, Hisn en la que n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o superior). Otras secuencias de aminoacidos de engarce adecuadas seran evidentes para los expertos en la materia. Un engarce util es GSGGGG (SEQ ID NO: 232) o GSGSGGGG (SEQ ID NO: 233), con el dipeptido Gly-Ser estando formado a partir de un sitio de restriccion BamHI, de este modo ayuda a la clonacion y la manipulacion, y siendo el tetrapeptido (Gly)4 un engarce de poli-glicina habitual. Otros engarces adecuados, en particular para uso como el Ln final son un dipeptido de Leu-Glu o la SEQ ID NO: 235.
-A- es una secuencia de aminoacidos N-terminal opcional. Por lo general, esta sera corta (por ejemplo, 40 o menos aminoacidos, es decir, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Algunos ejemplos incluyen secuencias lfder para dirigir el trafico de protemas, o secuencias peptfdicas cortas que facilitan la clonacion o la purificacion (por ejemplo, etiquetas de histidina, es decir, Hisn en la que n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o superior). Otras secuencias de aminoacidos N-terminales adecuadas seran evidentes para los expertos en la materia. Si X1 carece de su propio extremo de metionina N- terminal, -A- es preferentemente un oligopeptido (por ejemplo, con 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8 aminoacidos) que proporciona un extremo de metionina N-terminal, por ejemplo Met-Ala-Ser, o un solo resto de Met.
-B- es una secuencia de aminoacidos C-terminal opcional. Por lo general, esta sera corta (por ejemplo, 40 o menos aminoacidos, es decir, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Algunos ejemplos incluyen secuencias para dirigir el trafico de protemas, secuencias peptfdicas cortas que facilitan la clonacion o la purificacion (por ejemplo, que comprenden etiquetas de histidina, es decir, Hisn en la que n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o superior, tal como la SEQ ID NO: 234), o secuencia se aumentan la estabilidad de la protema. Otras secuencias de aminoacidos C-terminales adecuadas seran evidentes para los expertos en la materia.
Algunos ejemplos de hnbridos incluyen polipeptidos que comprenden una secuencia de aminoacidos seleccionada entre el grupo que consiste en: spr2021-spr0057 (por ejemplo, SEQ ID NO: 193); spr2021-spr0096 (por ejemplo, SEQ ID NO: 194); spr2021-spr0565 (por ejemplo, SEQ ID NO: 195 o SEQ ID NO: 196 o SEQ ID NO: 197); spr2021- RrgA (por ejemplo, SEQ ID NO: 198); spr0057-spr2021 (por ejemplo, SEQ ID NO: 199); spr0057-spr0096 (por ejemplo, SEQ iD NO: 200); spr0057-RrgA (por ejemplo, sEq ID NO: 201); spr0057-spr0565 (por ejemplo, SeQ ID NO: 202 o SEQ ID NO: 203 o SEQ ID NO: 204); spr0096-spr2021 (por ejemplo, SEQ ID NO: 205); spr0096-spr0057 (por ejemplo, SEQ ID NO: 206); spr0096-RrgA (por ejemplo, SEQ ID NO: 207); spr0096-spr0565 (por ejemplo, SEQ ID NO: 208 o SEQ ID NO: 209 o SEQ ID NO: 210); RrgA-spr2021 (por ejemplo, SEQ ID NO: 211); RrgA-spr0565 (por ejemplo, SEQ ID NO: 212 o SEQ ID NO: 213 o SEQ ID NO: 214); RrgA-spr0057 (por ejemplo, SEQ ID No: 215); RrgA-spr0096 (por ejemplo, SEQ ID NO: 216); spr0565-spr0057 (por ejemplo, SEQ ID nO: 217 o SEQ ID NO: 218 o SEQ ID NO: 219); spr0565-spr0096 (por ejemplo, SEQ ID NO: 220 o SEQ ID NO: 221 o SEQ ID NO: 222); spr0565-spr2021 (por ejemplo, SEQ ID NO: 223 o SEQ ID NO: 224 o SEQ ID NO: 225); o spr0565-RrgA (por ejemplo, SEQ ID NO: 226 o SEQ ID NO: 227 o SEQ ID NO: 228).
Polipeptido usado con la invencion
Los polipeptidos usados con la invencion pueden tomar diversas formas (por ejemplo, nativa, fusiones, glicosilado, no glicosilado, lipidado, no lipidado, fosforilado, no fosforilado, miristoilado, no miristoilado, monomerico, multimerico, en partmulas, desnaturalizado, etc.).
Los polipeptidos usados con la invencion se pueden preparar con diversos medios (por ejemplo, expresion recombinante, purificacion a partir de cultivo celular, smtesis qmmica, etc.). Las protemas expresadas en forma recombinante son preferentes, en particular de polipeptidos hnbridos.
Los polipeptidos usados con la invencion se proporcionan preferentemente en forma purificada o sustancialmente purificada, es decir, sustancialmente libres de otros polipeptidos (por ejemplo, libres de polipeptidos de origen natural), en particular de otros estreptococos u otros polipeptidos de celula hospedadora, y por lo general tienen una pureza de al menos aproximadamente un 50 % (en peso), y normalmente una pureza de al menos aproximadamente un 90 %, es decir, inferior a aproximadamente un 50 %, y mas preferentemente inferior a aproximadamente un 10 % (por ejemplo, 5 %) de una composicion esta compuesta por otros polipeptidos expresados. Por lo tanto, los antfgenos en las composiciones se separan del organismo completo con el que se expresa la molecula.
Los polipeptidos usados con la invencion son preferentemente polipeptidos neumococicos.
El termino "polipeptido" se refiere a polfmeros de aminoacido de cualquier longitud. El polfmero puede ser lineal o ramificado, puede comprender aminoacidos modificados, y puede estar interrumpido por no aminoacidos. Los terminos tambien incluyen un polfmero de aminoacido que se ha modificado por via natural o mediante intervencion;
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por ejemplo, formacion de enlace disulfuro, glicosilacion, lipidacion, acetilacion, fosforilacion, o cualquier otra manipulacion o modificacion, tal como conjugacion con un componente de etiquetado. Tambien estan incluidos, por ejemplo, polipeptidos que contienen uno o mas analogos de un aminoacido (incluyendo, por ejemplo, aminoacidos no naturales, etc.), asf como otras modificaciones conocidas en la tecnica. Los polipeptidos se pueden producir como cadenas individuales o como cadenas asociadas.
La invencion proporciona polipeptidos que comprenden una secuencia -P-Q- o -Q-P-, en la que: -P- es una secuencia de aminoacidos como se ha definido anteriormente y -Q- no es una secuencia como se ha definido anteriormente, es decir, la invencion proporciona protemas de fusion. Cuando el codon del extremo N-terminal de -P- no es ATG, pero este codon no esta presente en el extremo N-terminal de un polipeptido, este se traducira como el aminoacido convencional para ese codon en lugar de como una Met. Cuando este codon esta en el extremo N- terminal de un polipeptido, sin embargo, este se traducira como Met. Algunos ejemplos de restos -Q- incluyen, pero no se limitan a, etiquetas de histidina (es decir, Hisn en la que n = 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o superior), protema de union a maltosa, o glutation-S-transferasa (GST).
La divulgacion tambien proporciona un procedimiento para producir un polipeptido de la invencion, que comprende la etapa de cultivar una celula hospedadora transformada con acido nucleico de la invencion en condiciones que inducen la expresion del polipeptido.
Aunque la expresion de los polipeptidos de la invencion se puede producir en un Streptococcus, la invencion normalmente usara un hospedador heterologo para expresion (expresion recombinante). El hospedador heterologo puede ser procariota (por ejemplo, una bacteria) o eucariota. Puede ser E. coli, pero otros hospedadores adecuados incluyen Bacillus subtilis, Vibrio cholera, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Neisseria lactamaica, Neisseria cinerea, Mycobacteria (por ejemplo, M. tuberculosis), levaduras, etc. En comparacion con los genes neumococicos de tipo silvestre que codifican polipeptidos de la invencion, el cambio de los codones es util para optimizar la eficacia de la expresion en tales hospedadores sin afectar a los aminoacidos codificados.
La divulgacion proporciona un procedimiento para producir un polipeptido de la invencion, que comprende la etapa de sintetizar al menos parte del polipeptido por medios qmmicos. Acidos nucleicos,
La invencion tambien proporciona acidos nucleicos que codifican polipeptidos hforidos de la invencion. Tambien proporciona acidos nucleicos que comprenden una secuencia de nucleotidos que codifica uno o mas polipeptidos tnbridos de la invencion.
La invencion tambien proporciona acidos nucleicos que comprenden secuencias de nucleotidos que tienen identidad de secuencias con tales secuencias de nucleotidos. La identidad entre secuencias se determina preferentemente con el algoritmo de busqueda de homologfa de Smith-Waterman como se ha descrito anteriormente. Tales acidos nucleicos incluyen los que usan codones alternativos para codificar el mismo aminoacido.
La invencion tambien proporcionar a los nucleicos que se pueden hibridar con estos acidos nucleicos. Las reacciones de hibridacion se pueden realizar en condiciones de diferente "rigurosidad". Las condiciones que aumentan la rigurosidad de una reaccion de hibridacion son acremente conocidas y publicadas en la tecnica (por ejemplo, pagina 7.52 de la referencia 288). Algunos ejemplos de condiciones relevantes incluyen (con el fin de aumentar la rigurosidad): temperaturas de incubacion de 25 °C, 37 °C, 50 °C, 55 °C and 68 °C; concentraciones de tampon de 10 x SSC, 6 x SSC, 1 x SSC, 0,1 x SSC (las que SSC es NaCl 0,15 M y tampon citrato 15 mM) y sus equivalentes usando otros sistemas de tampon; concentraciones de formamida de un 0 %, 25 %, 50 %, y un 75 %; tiempos de incubacion de 5 minutos a 24 horas; 1, 2, o mas etapas de lavado; tiempos de incubacion de lavado de 1, 2, o 15 minutos; y soluciones de lavado de 6 x SSC, 1 x SSC, 0,1 x SSC, o agua desionizada. En la tecnica se conocen bien algunas tecnicas de hibridacion y su optimizacion (por ejemplo, veanse las refs 82, 83, 288, 290, etc.].
En algunas realizaciones, el acido nucleico de la invencion se hibridar con una diana en condiciones de baja rigurosidad; en otras realizaciones se hibrida en condiciones de rigurosidad intermedia; en realizaciones preferentes, se hibridar en condiciones de rigurosidad elevada. Un conjunto de condiciones de hibridacion de baja rigurosidad a modo de ejemplo es 50 °C y 10 x SSC. Un conjunto de condiciones de hibridacion de rigurosidad intermedia a modo de ejemplo es 55 °C y 1 x SSC. Un conjunto de condiciones de hibridacion de rigurosidad elevada a modo de ejemplo es 68 °C y 0,1 x SSC.
La invencion incluye secuencias de acidos nucleicos que comprenden secuencias complementarias con estas secuencias (por ejemplo, para anti-sentido o sondeo, o para uso como cebadores).
Los acidos nucleicos de la invencion se pueden usar en reacciones de hibridacion (por ejemplo, transferencias de Northern o Southern, o en micromatrices de acidos nucleicos o 'chips geneticos') y reacciones de amplificacion (por ejemplo, PCR, SDA, SSSR, LCR, TMA, NASBA, etc.) y otras tecnicas de acido nucleico.
El acido nucleico de acuerdo con la invencion puede tomar diversas formas (por ejemplo, una sola hebra, dos hebras, vectores, cebadores, sondas, etiquetado, etc.). Los acidos nucleicos de la invencion pueden ser circulares o ramificados, pero por lo general seran lineales. A menos que se especifique o se requiera de otro modo, cualquier realizacion de la invencion que use un acido nucleico puede usartanto la forma de doble hebra como cada una de las dos formas de una hebra complementarias que pueden componer la forma de una hebra. Por lo general, los
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cebadores y las sondas son de una hebra, al igual que lo son los acidos nucleicos antisentido. Los acidos nucleicos de la invencion se proporcionan preferentemente en forma purificada o sustancialmente purificada, es decir, sustancialmente libre de otros acidos nucleicos (por ejemplo, libre de acidos nucleicos de origen natural), en particular de otros acidos nucleicos de neumococos o celula hospedadora, que por lo general tienen una pureza de al menos aproximadamente un 50 % (en peso), y normalmente una pureza de al menos aproximadamente un 90 %. Los acidos nucleicos de la invencion son preferentemente acidos nucleicos neumococicos.
Los acidos nucleicos de la invencion se pueden preparar de muchas maneras, por ejemplo, mediante smtesis qmmica (por ejemplo, smtesis de ADN con fosforamidita) total o parcialmente, mediante digestion de acidos nucleicos mas largos usando nucleasas (por ejemplo, enzimas de restriccion), mediante la union de acidos nucleicos o nucleotidos mas cortos (por ejemplo, usando ligasas o polimerasas), a partir de bibliotecas genomicas o de ADNc, etc.
El acido nucleico de la invencion se puede unir a un soporte solido (por ejemplo, una perla, placa, filtro, pelmula, portaobjetos, soporte de micromatriz, resina, etc.). El acido nucleico de la invencion se puede etiquetar, por ejemplo, con una etiqueta radiactiva o fluorescente, o una etiqueta de biotina. Esto es particularmente util cuando el acido nucleico se va a usar en tecnicas de deteccion, por ejemplo, cuando el acido nucleico es un cebador o como una sonda.
El termino "acido nucleico" incluyen en terminos generales una forma polimerica de nucleotidos de cualquier longitud, que contienen desoxirribonucleotidos, ribonucleotidos, y/o sus analogos. Este incluye ADN, ARN, hnbridos de ADN/ARN. Tambien incluye analogos de ADN o ARN, tales como los que contienen estructuras principales modificadas (por ejemplo, acidos nucleicos peptfdicos (PNA) o fosforotioatos) o bases modificadas. Por lo tanto, la invencion incluye ARNm, ARNt, ARNr, ribozimas, ADN, ADNc, acidos nucleicos recombinantes, acidos nucleicos ramificados, plasmidos, vectores, sondas, cebadores, etc. Cuando el acido nucleico de la invencion adquiere la forma de ARN, puede tener o no una proteccion en la posicion 5'.
Los acidos nucleicos de la invencion pueden ser parte de un vector, es decir, parte de una construccion de acido nucleico disenada para transduccion/transfeccion de uno o mas tipos de celulas. Los vectores pueden ser, por ejemplo, "vectores de clonacion" que se disenan para aislamiento, propagacion y replicacion de nucleotidos insertados, "vectores de expresion" que se disenan para expresion de una secuencia de nucleotidos en una celula hospedadora, "vectores virales" que se disenan para dar como resultado la produccion de un virus recombinante o partmulas similar a un virus, o "vectores lanzadera", que comprenden los atributos de mas de un tipo de vector. Algunos vectores preferentes son plasmidos. Una "celula hospedadora" incluye una celula individual o cultivo celular que puede ser o que tiene un receptor de acido nucleico exogeno. Algunas celulas hospedadoras incluyen progenie de una sola celula hospedadora, y puede que no sea necesario que la progenie sea completamente identica (en morfologfa o en complemento de ADN total) con la celula precursora original debido a mutacion y/o cambio natural, accidental, o deliberado. Algunas celulas hospedadoras incluyen celulas transfectadas o infectadas in vivo o in vitro con el acido nucleico de la invencion.
Cuando un acido nucleico es ADN, se observara que "U" en una secuencia de ARN se sustituira por "T" en el ADN. De forma analoga, cuando un acido nucleico es ARN, se observara que "T" en una secuencia de ADN se sustituira por "U" en el ARN.
El termino "complemento" o "complementario" cuando se usa en relacion a acidos nucleicos se refiere a emparejamiento de bases de Watson-Crick. Por lo tanto con el complemento de C es G, el complemento de G es C, el complemento de A es T (o U), y el complemento de T (o U) es A. tambien es posible usar bases tales como I (la purina inosina) por ejemplo para complementar las pirimidinas (C o T).
Los acidos nucleicos de la invencion se pueden usar, por ejemplo: para producir polipeptidos; como sondas de hibridacion para la deteccion de acido nucleico en muestras biologicas; para generar copias adicionales de los acidos nucleicos; para generar ribozimas u oligonucleotidos antisentido; como cebadores o sondas de ADN de una sola hebra; o como oligonucleotidos que forman tres hebras.
La divulgacion proporciona un procedimiento para producir acido nucleico de la invencion, en el que el acido nucleico se sintetiza en parte o totalmente usando medios qmmicos.
La divulgacion proporciona vectores que comprenden en secuencias de nucleotidos de la invencion (por ejemplo, vectores de clonacion o expresion) y celulas hospedadoras transformadas con tales vectores.
La amplificacion acido nucleico puede ser cuantitativa y/o en tiempo real.
Para ciertas realizaciones de la invencion, los acidos nucleicos tienen una longitud preferentemente de al menos 7 nucleotidos (por ejemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 225, 250, 275, 300 nucleotidos o superior).
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Para ciertas realizaciones de la invencion, los acidos nucleicos tienen una longitud preferentemente como maximo de 500 nucleotidos (por ejemplo, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15 nucleotidos o superior).
Algunos cebadores y sondas y otros acidos nucleicos usados para hibridacion, tienen una longitud preferentemente entre 10 y 30 nucleotidos (por ejemplo, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, o 30 nucleotidos).
Cepas y variantes
Los antigenos se han definido anteriormente por referencia a nomenclature "spr". Esta nomenclature se refiere a la numeracion usada en la referencia 84 a la identificacion unica de marcos de lectura abiertos en la cepa R6 de S. pneumoniae. La secuencia de referencia basica para cualquier numero de "spr" se puede encontrar facilmente en bases de datos publicas de genes. Por ejemplo, el numero de referencia de GenBank NC_003098 (GI: 15902044) es la secuencia del genoma de R6 completo (2.038.615 pb), y las secuencias de spr individuales se dan como entradas de "locus_etiqueta" en la seccion "caractensticas" de la secuencia del genoma. Por lo tanto, la secuencia de aminoacidos para cualquier numero de spr dado, y su secuencia de codificacion natural, se puede establecer de forma inequvoca para la cepa R6. En las bases de datos tambien se dan algunas anotaciones funcionales.
La invencion no se limita a secuencias de la cepa R6. Las secuencias del genoma de otras varias cepas de S. pneumoniae estan disponibles, incluyendo las de 23F [85], 670 [86] y TIGR4 [87,88,89]. Se puede usar busqueda y tecnicas de alineamiento convencionales para identificar, en cualquiera de estas (u otras) secuencias de genoma adicionales, el homologo de cualquier secuencia de spr en particular de R6. Ademas, las secuencias de R6 (y otras) disponibles se pueden usar para disenar cebadores para amplificacion de secuencias homologas de otras cepas. Por lo tanto, la invencion no se limita a las secuencias de R6, sino que mas bien incluye tales variantes y homologos de otras cepas de S. pneumoniae, asf como variantes no naturales. En general, algunas variantes adecuadas de una SEQ ID NO en particular incluyen sus variantes alelicas, sus formas polimorficas, sus homologos, sus ortologos, sus parologos, sus mutantes, etc.
Por lo tanto, por ejemplo, los polipeptidos usados con la invencion pueden incluir, en comparacion con la secuencia de referencia de R6, una o mas (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, etc.) instituciones de aminoacidos, tales como sustituciones conservativas (es decir, sustituciones de un aminoacido con otro que tiene una cadena lateral relacionada). Los aminoacidos geneticamente codificados por lo general se dividen en cuatro familias: (1) acidos, es decir, aspartato, glutamato; (2) basicos, es decir, lisina, arginina, histidina; (3) no polares, es decir, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano; y (4) polares sin carga, es decir, glicina, asparagina, glutamina, cistema, serina, treonina, tirosina. En ocasiones, fenilalanina, triptofano y tirosina se clasifican de manera conjunta como aminoacidos aromaticos. En general, la sustitucion de aminoacidos individuales dentro de estas familias no tiene efecto principal en la actividad biologica. Los polipeptidos tambien pueden incluir una o mas (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, etc.) deleciones de un solo aminoacido con respecto a las secuencias de R6. Los polipeptidos tambien pueden incluir una o mas (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, etc.) inserciones (por ejemplo, cada una de 1, 2, 3, 4 o 5 aminoacidos) con respecto a las secuencias de R6.
De forma analoga, un polipeptido usado con la invencion puede comprender una secuencia de aminoacidos que:
(a) es identica (es decir, identica en un 100 %) a una secuencia desvelada en el listado de secuencias;
(b) comparte una identidad de secuencia (por ejemplo, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % o superior) con una secuencia desvelada en el listado de secuencias;
(c) tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 (o mas) alteraciones de aminoacido individual (deleciones, inserciones, sustituciones), que pueden estar en posiciones separadas o pueden ser contiguas, en comparacion con las secuencias de (a) o (b); y
(d) cuando se alinean con una secuencia en particular del listado de secuencias usando un algoritmo de alineamiento por pares, cada ventana movil de x aminoacidos del extremo N-terminal a C-terminal (tal como para un alineamiento que se extiende a p aminoacidos, en los que p > x, hay p-x+1 ventanas de este tipo) tiene al menos xy aminoacidos alineados identicos, en los que: x se selecciona entre 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200; y se selecciona entre 0,50, 0,60, 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,91, 0,92, 0,93, 0,94, 0,95, 0,96, 0,97, 0,98, 0,99; y si xy no es un numero entero, entonces se redondea al alza al numero entero mas cercano. El algoritmo de alineamiento por pares preferente es el algoritmo de alineamiento global de Needleman- Wunsch [90], usando parametros por defecto (por ejemplo, con una penalizacion de aperture de Hueco = 10.0, y con una penalizacion de extension de Hueco = 0,5, usando la matriz de puntuacion EBLOSUM62). Este algoritmo se pone en marcha de forma conveniente en la herramienta needle en el paquete EMBOSS [91].
En la que se usan polipeptidos tubridos, los antfgenos individuales dentro del tubrido (es decir, restos -X- individuales) pueden ser de una o mas cepas. Cuando n = 2, por ejemplo, X2 puede ser de la misma cepa que X1 o de una cepa diferente. Cuando n = 3, las cepas pueden ser (i) X1 =X2 = X3 (ii) X1 = X2*X3 (iii) X-i*X2 = X3 (iv) X1*X2* X3 o (v) X1 = X3 * X2, etc.
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Dentro del grupo (c), las deleciones o sustituciones se pueden producir en los extremos N-terminal y/o C-terminal, o pueden ser entre dos extremos. Por lo tanto, un truncamiento es un ejemplo de una delecion. Algunos truncamientos pueden implicar la delecion de hasta 40 (o mas) aminoacidos en los extremos N-terminal y/o C-terminal.
En general, cuando un polipeptido de la invencion comprende una secuencia que no es identica a una secuencia neumococica completa del listado de secuencias (por ejemplo, cuando comprende un listado de secuencias con una identidad de secuencias < 100% a la misma, o cuando comprende un fragmento de la misma) en cada caso individual es preferente que el polipeptido pueda hacer que un anticuerpo reconozca a la secuencia neumococica completa.
Bacterias mutantes
La divulgacion tambien proporciona un neumococo en el que uno o mas de los antigenos de los diversos grupos de antigenos de la invencion han experimentado una supresion genetica. Se conocen bien algunas tecnicas para producir bacterias con supresion genetica, y se ha informado de neumococos con supresion genetica. Una mutacion por supresion genetica se puede situar en la region de codificacion del gen o puede permanecer dentro de sus regiones de control de la transcripcion (por ejemplo, dentro de su promotor). Una mutacion por supresion genetica reducira el nivel de ARNm que codifica el antfgeno a < 1 % del producido por la bacteria de tipo silvestre, preferentemente < 0,5 %, mas preferentemente < 0,1 %, y lo mas preferentemente a un 0 %.
La divulgacion tambien proporciona un neumococo en el que uno o mas de los antfgenos de los diversos grupos de antfgenos de la invencion tienen una mutacion que inhibe su actividad. El gen que codifica el antfgeno tendra una mutacion que cambia la secuencia de aminoacidos codificada. La mutacion puede implicar de delecion, sustitucion, y/o insercion, cualquiera de las cuales puede implicar a uno o mas aminoacidos.
Composiciones y medicamentos inmunogenicos
Las composiciones inmunogenicas de la invencion pueden ser utiles como vacunas. Las vacunas de acuerdo con la invencion pueden ser profilacticas (es decir, para prevenir la infeccion) o terapeuticas (es decir, para tratar la infeccion), pero por lo general seran profilacticas.
Por lo tanto, las composiciones pueden ser farmaceuticamente aceptables. Normalmente incluiran componentes ademas de los antfgenos, por ejemplo, por lo general incluyen uno o mas vetnculo(s) y/o excipiente(s) farmaceuticos. Una discusion minuciosa de tales componentes esta disponible en la referencia 285.
Por lo general, las composiciones se administraran a un marnffero en forma acuosa. Antes de la administracion, sin embargo, la composicion puede haber estado en una forma no acusa. Por ejemplo, aunque algunas vacunas se fabrican en forma acuosa, a continuacion se llenan y se distribuyen y se administran tambien en forma acuosa, se liofilizan durante la fabricacion y se reconstituyen en una forma acusan el momento de su uso. Por lo tanto, una composicion puede estar seca, tal como una formulacion liofilizada. La composicion puede incluir conservantes tales como tiomersal o 2-fenoxietanol. Sin embargo, es preferente, que la vacuna se presentan en forma sustancialmente libre (es decir, menos de 5 pg/ml) material de mercurio, por ejemplo, tiomersal. Las vacunas que no contienen mercurio son mas preferentes. Las vacunas sin conservantes son particularmente preferentes.
Para aumentar la estabilidad termica, una composicion puede incluir un agente protector de la temperatura. Algunos detalles adicionales de agentes de este tipo se proporcionan a continuacion.
Para controlar la tonicidad, es preferente incluir una sal fisiologica, tal como una sal sodica. El cloruro sodico (NaCl) es preferente, el cual puede estar presente entre 1 y 20 mg/ml, por ejemplo, aproximadamente 10±2mg/ml de NaCl. Otras sales que pueden estar presentes incluyen cloruro potasico, dihidrogenofosfato potasico, fosfato disodico deshidratado, cloruro de magnesio, cloruro calcico, etc.
Por lo general, las composiciones tendran una osmolalidad entre 200 mOsm/kg y 400 mOsm/kg, preferentemente entre 240-360 mOsm/kg, y lo mas preferentemente entraran dentro del intervalo de 290-310 mOsm/kg.
Las composiciones pueden incluir uno o mas tampones. Algunos tampones habituales incluyen: un tampon de fosfato; un tampon de Tris; un tampon de borato; un tampon de succinato; un tampon de histidina (en particular con un adyuvante de hidroxido de aluminio); o un tampon de citrato. Por lo general, algunos tampones estaran incluidos en el intervalo de 5-20 mM. El pH de una composicion por lo general estara entre 5,0 y 8,1, y lo mas habitualmente entre 6,0 y 8,0, por ejemplo, entre 6,5 y 7,5, o entre 7,0 y 7,8.
La composicion es preferentemente esteril. La composicion es preferentemente no pirogena que contiene, por ejemplo, < 1 EU (unidad de endotoxina, como medida estandar) por dosis, y preferentemente <0,1 EU por dosis. La composicion esta preferentemente libre de gluten.
La composicion puede incluir material para una sola inmunizacion, o puede incluir material para multiples inmunizaciones (es decir, un kit de 'multiples dosis'). La inclusion de un conservan que es preferente en organizaciones de multiples dosis. Como una alternativa (o ademas) de incluir un conservan que en composiciones
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de multiples dosis, las composiciones pueden estar contenidas en un envase que tenga un adaptador aseptico para retirar el material.
Por lo general, las vacunas humanas se administran en un volumen de dosificacion de aproximadamente 0,5 ml, aunque una dosis media (es decir, aproximadamente 0,25 ml) se puede administrar a ninos.
Las composiciones inmunogenicas de la invencion tambien pueden comprender uno o mas agentes inmunorreguladores. Preferentemente, uno o mas de los agentes inmunorreguladores incluyen uno o mas adyuvantes. Los adyuvantes pueden incluir un adyuvante de TH1 y/o una adyuvante de TH2, que se discute adicionalmente a continuacion.
Los adyuvantes que se pueden usar en composiciones de la invencion incluyen, pero no se limitan a: A. Composiciones que contienen minerales.
Algunas composiciones que contienen minerales adecuadas para uso como adyuvantes en la invencion incluyen sales minerales, tales como sales de aluminio y sales de calcio (o mezclas de las mismas). Las sales de calcio incluyen fosfato calcico (por ejemplo, las partmulas "CAP" desveladas en la ref. 92). Las sales de aluminio incluyen hidroxidos, fosfatos, sulfatos, etc., con las sales adoptando cualquier forma adecuada (por ejemplo, gel, cristalina, amorfa, etc.). La adsorcion a estas sales es preferente. Las composiciones que contienen minerales tambien se pueden formular como una partmula de sal de metal [93].
Los adyuvantes conocidos como hidroxido de aluminio y fosfato de aluminio se pueden usar. Estos nombres son convencionales, pero se usan solamente por conveniencia, de que ninguno es una descripcion precisa del compuesto qmmico real que esta presente (por ejemplo, vease el capttulo 9 de la referencia 94)). La invencion puede usar cualquier adyuvante de "hidroxido" o "fosfato" que en general se usan como adyuvantes. Los adyuvantes conocidos como "hidroxido de aluminio" por lo general son sales de oxihidroxido de aluminio, que normalmente son al menos parcialmente cristalinas. Los adyuvantes conocidos como "fosfato de aluminio" por lo general son hidroxifosfatos de aluminio, que a menudo tambien contienen una pequena cantidad de sulfato (es decir, hidroxifosfato sulfato de aluminio). Estos se pueden obtener por precipitacion, y las condiciones de reaccion y las concentraciones durante la presentacion influyen en el grado de sustitucion de fosfato por hidroxilo en la sal.
Una morfologfa fibrosa (por ejemplo, como se observa en micrograffas electronicas de transmision) es habitual para algunos adyuvantes de hidroxido de aluminio. El pi de los adyuvantes de hidroxido de aluminio es por lo general aproximadamente 11 es decir, el adyuvante por sf mismo tiene una carga superficial positiva a pH fisiologico. Se ha informado de capacidades de adsorcion entre 1,8-2,6 mg de protema por mg de Al+++ a pH 7,4 para algunos adyuvantes de hidroxido de aluminio.
Por lo general, los adyuvantes de fosfato de aluminio tienen una proporcion molar de PO^Al entre 0,3 y 1,2, preferentemente entre 0,8 y 1,2, y mas preferentemente 0,95 ± 0,1. El fosfato de aluminio por lo general sera amorfo, en particular para las sales de hidroxifosfato. Un adyuvante habitual es hidroxifosfato de aluminio amorfo con una proporcion molar de PO^Al ratio entre 0,84 y 0,92, incluida a 0,6 mg de Al3+/ml. El fosfato de aluminio por lo general estara formado por partmulas (por ejemplo, morfologfa similar a una placa como se observa en micrograffas electronicas de transmision). Algunos diametros habituales de las partmulas estan en el intervalo de 0,5-20 pm (por ejemplo, aproximadamente 5-10 pm) despues de cualquier adsorcion de antfgeno. Se ha informado de capacidades de absorcion entre 0,7-1,5 mg de protema por mg de Al+++ a pH 7,4 para adyuvantes de fosfato de aluminio.
El punto de carga cero (PZC) del fosfato de aluminio esta relacionado inversamente con el grado de sustitucion de fosfato para hidroxilo, y este grado de sustitucion puede variar dependiendo de las condiciones de reaccion y concentracion de reactivos usados para preparar las mediante precipitacion. El PZC tambien se altera cambiando la concentracion de iones fosfato piden solucion (mas fosfato = mas PZC acido) o por adicion de un tampon tal como un tampon de histidina (hace el PZC mas basico). Algunos fosfatos de aluminio usados de acuerdo con la invencion por lo general tendran un PZC entre 4,0 y 7,0, mas preferentemente entre 5,0 y 6,5 por ejemplo aproximadamente 5,7. Algunas suspensiones de sales de aluminio usadas para preparar composiciones de la invencion pueden contener un tampon (por ejemplo, un tampon de fosfato o uno de histidina o uno de Tris), pero esto no siempre es necesario. Las suspensiones son preferentemente esteriles y sin pirogenos. Una suspension puede incluir iones fosfato acuoso libres por ejemplo presentes a una concentracion entre 1,0 y 20 mM, preferentemente entre 5 y 15 mM, y mas preferentemente de aproximadamente 10 mM. Las suspensiones tambien pueden comprender cloruro sodico.
La invencion puede usar una mezcla tanto de un hidroxido de aluminio como de un fosfato de aluminio. En este caso, puede haber mas fosfato que hidroxido de aluminio por ejemplo una proporcion de peso de al menos 2:1 por ejemplo >5:1, >6:1, >7:1, >8:1, >9:1, etc.
La concentracion de Al+++ en una composicion para administracion a un paciente es preferentemente inferior a 10 mg/ml por ejemplo < 5 mg/ml, < 4 mg/ml, < 3 mg/ml, < 2 mg/ml, < 1 mg/ml, etc. Un intervalo preferente es entre 0,3 y 1 mg/ml. Una dosis maxima de 0,85 mg/dosis es preferente.
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Los fosfatos de aluminio son particularmente preferentes, en particular en composiciones que incluyen un antigeno de sacarido de H. influenzae, y un adyuvante habitual es hidroxifosfato de aluminio amorfo con una proporcion molar de PO4/Al entre 0,84 y 0,92, incluida a 0,6 mg de Al3+/ml. La adsorcion con una dosis baja de fosfato de aluminio se puede usar por ejemplo 50 y 100 |jg de Al3+ por conjugado por dosis. Cuando en una composicion hay mas de un conjugado, no es necesario que todos los conjugados se adsorban.
B. Emulsiones oleosas
Algunas composiciones de emulsion oleosa adecuadas para uso como adyuvantes en la invencion incluyen emulsiones de escualeno-agua, tales como MF59 [Capftulo 10 de la ref. 94; vease tambien la ref. 95] (Escualeno al 5 %, Tween 80 al 0,5 %, y Span 85 al 0,5 %, formuladas en partfculas submicrometricas usando a microfluidizador). Tambien se puede usar adyuvante Completo de Freund (CFA) y adyuvante incompleto de Freund (IFA).
Se conocen diversos adyuvantes de emulsion de aceite en agua, y por lo general incluyen al menos un aceite y al menos un tensioactivo, con el aceite(s) y tensioactivo(s) siendo biodegradables (metabolizable) y biocompatibles. Las gotitas de aceite en la emulsion por lo general tienen un diametro inferior a 5 jm, y de forma ideal tienen un diametro submicrometrico, con estos tamanos pequenos consiguiendose con un microfluidizador para proporcionar emulsiones estables. Las gotitas con un tamano inferior a 220 nm son preferentes ya que se pueden someter a la esterilizacion con filtro.
La emulsion puede comprender aceites tales como los de una fuente animal (tal como pescado) o vegetal. Algunas fuentes de aceites vegetales incluyen nueces, semillas y granos. Algunos ejemplos, los mas comunmente disponibles, de frutos secos son aceite de cacahuete, aceite de semilla de soja, aceite de de coco y aceite de oliva. Por ejemplo, se puede usar el aceite de yoyoba se puede usar, obtenido de la semilla de yoyoba. Algunos aceites de semillas incluyen aceite de cartamo, aceite de semilla de algodon, aceite de semilla de girasol, aceite de semilla de sesamo y similares. En el grupo de los granos, el aceite de mafz es el mas facilmente disponible, tambien se puede usar el aceite de otros granos de cereales tales como trigo, avena, centeno, arroz, teff, tritical y similares. Algunos esteres de acidos grasos de 6-10 carbonos de glicerol y 1,2-propanodiol, aunque no son de origen natural en aceites de semillas, se pueden preparar por hidrolisis, separacion y esterificacion de los materiales apropiados partiendo de los aceites de frutos secos y de semillas. Algunas grasas y aceites de leche de mairnfero se pueden metabolizar y por lo tanto se pueden usar en la practica de la presente invencion. Los procedimientos para la separacion, purificacion, saponificacion y otros medios necesarios para obtener aceites puros de fuentes animales se conocen bien en la tecnica. La mayona de los pescados contienen aceites metabolizables que se puede recuperar facilmente. Por ejemplo, del aceite de hngado de bacalao, aceites de hngado de tiburon, y aceite de ballena tal como esperma de ballena son algunos ejemplos de varios de los aceites de pescado que se pueden usar en el presente documento. Una serie de aceites de cadena ramificada se sintetizan de forma bioqmmica en unidades de isopreno de 5 carbonos y por lo general se denominan terpenoides. El aceite de tngado de tiburon contiene terpenoides insaturados, ramificados, conocidos como escualeno, 2,6,10,15,19,23-hexametil-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaeno, que es particularmente preferente en el presente documento. El escualano, el analogo saturado del escualeno, tambien es un aceite preferente. Algunos aceites de pescado, incluyendo escualeno y escualano, estan disponibles facilmente a partir de fuentes comerciales o se pueden obtener con procedimientos conocidos en la tecnica. Otros aceites preferentes son los tocoferoles (vease a continuacion). Se pueden usar algunas mezclas de aceites.
Los tensioactivos se pueden clasificar por su "HLB" (equilibrio hidrofilo/lipofilo). Los tensioactivos preferentes de la invencion tienen un HLB de al menos 10, preferentemente al menos 15, y preferentemente al menos 16. La invencion se puede usar con tensioactivos que incluyan, pero no se limitan a: los tensioactivos de esteres de polioxietilen sorbitan (conocidos comunmente como los Tweens), en especial polisorbato 20 y polisorbato 80; copolfmeros de oxido de etileno (EO), oxido de propileno (PO), y/o oxido de butileno (BO), que se vende con el nombre comercial DOWFAX™, tales como copolfmeros de bloque de EO/PO lineales; octoxinoles, que pueden variar en el numero de grupos etoxi (oxi-1,2-etanodiilo) de repeticion, con octoxinol-9 (Triton X-100, o t- octilfenoxipolietoxietanol) siendo de interes en particular; (octilfenoxi)polietoxietanol (IGEPAL CA-630/NP-40); fosfolfpidos tales como fosfatidilcolina (lecitina); etoxilatos de nonilfenol, tales como la serie NP de Tergitol™; eteres grasos de poli-oxietileno derivados de alcoholes de laurilo, cetilo, estearilo y oleflo (conocidos como tensioactivos Brij), tal como monolauril trietilenglicol eter (Brij 30); esteres de sorbitan (conocidos comunmente como los SPAN), tales como trioleato de sorbitan (Span 85) y monolaurato de sorbitan. Los tensioactivos no ionicos son preferentes. Algunos tensioactivos preferentes para incluir en la emulsion son Tween 80 (monooleato de polioxietilen sorbitan), Span 85 (trioleato de sorbitan), lecitina y Triton X-100.
Se pueden usar algunas mezclas de agentes tensioactivos, por ejemplo, mezclas de Tween 80/Span 85. Tambien es adecuada una combinacion de un ester de polioxietilen sorbitan tales como monooleato de polioxietilen sorbitan (Tween 80) y un octoxinol tal como t-octilfenoxipolietoxietanol (Triton X-100). Otra combinacion util comprende laureth 9 mas un ester de polioxietilen sorbitan y/o un octoxinol.
Algunas cantidades de tensioactivos preferentes (% en peso) son: esteres de polioxietilen sorbitan (tales como Tween 80) de un 0,01 a un 1 %, en particular aproximadamente un 0,1 %; octil- o nonilfenoxi polioxietanoles (tales como Triton X-100, u otros detergentes en la serie Triton) de un 0,001 a un 0,1 %, en particular de un 0,005 a un 0,02 %; eteres de polioxietileno (tales como laureth 9) de un 0,1 a un 20 %, preferentemente de un 0,1 a un 10 % y
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en particular de un 0,1 a un 1 % o aproximadamente un 0,5 %. Algunos adyuvantes de emulsion preferentes tienen
un tamano medio de las gotitas < 1 pm por ejemplo < 750 nm, < 500 nm, < 400 nm, < 300 nm, < 250 nm, < 220 nm,
< 200 nm, o inferior. Estos tamanos de gotita se pueden conseguir de forma conveniente con tecnicas tales como
microfluidizacion.
Algunos adyuvantes de emulsion de aceite en agua espedficos utiles con la invencion incluyen, pero no se limitan a:
• Una emulsion submicrometrica de escualeno, Tween 80, y Span 85. La composicion de la emulsion en volumen puede ser de aproximadamente un 5 % de escualeno, aproximadamente un 0,5 % de polisorbato 80 y aproximadamente un 0,5 % de Span 85. En terminos de peso, estas proporciones se convierten en un 4,3 % de escualeno, un 0,5 % de polisorbato 80 y un 0,48 % de Span 85. Este adyuvante se conoce como 'MF59' [96-98], como se describe con mas detalle en el Capftulo 10 de la ref. 99 y en el capttulo 12 de la ref. 100. De forma ventajosa, la emulsion de MF59 incluye iones de citrato, por ejemplo, tampon de citrato sodico 10 mM.
• Una emulsion de escualeno, un tocoferol, y polisorbato 80 (Tween 80). La emulsion puede incluir solucion salina tamponada con fosfato. Tambien puede incluir Span 85 (por ejemplo, a 1 %) y/o lecitina. Estas emulsiones pueden tener de un 2 a un 10 % de escualeno, de un 2 a un 10 % de tocoferol y de un 0,3 a un 3 % de Tween 80, y la proporcion de peso de escualeno:tocoferol es preferentemente < 1 ya que esta proporciona una emulsion mas estable. El escualeno y el Tween 80 pueden estar presentes en una proporcion de volumen de aproximadamente 5:2 o en una proporcion de peso de aproximadamente 11:5. Una emulsion de este tipo se puede fabricar por disolucion de Tween 80 en PBS para dar una solucion al 2 %, y a continuacion mezclando 90 ml de esta solucion con una mezcla de (5 g de DL-a-tocoferol y 5 ml de escualeno), y a continuacion la mezcla se microfluidiza. La emulsion resultante puede tener gotitas de aceite submicrometricas por ejemplo con un diametro medio entre 100 y 250 nm, preferentemente aproximadamente 180 nm. La emulsion tambien puede incluir un monofosforil lfpido A 3-des-O-acilado (3d-MPL). Otra emulsion util de este tipo puede comprender, por dosis humana, 0,5-10 mg de escualeno, 0,5-11 mg de tocoferol, y 0,1-4 mg de polisorbato 80 [101].
• Una emulsion de escualeno, un tocoferol, y un detergente de Triton (por ejemplo, Triton X-100). La emulsion tambien puede incluir un 3d-MPL (vease a continuacion). La emulsion tambien puede contener un tampon fosfato.
• Una emulsion que comprende un polisorbato (por ejemplo, polisorbato 80), un detergente de Triton (por ejemplo, Triton X-100) y un tocoferol (por ejemplo, un succinato de a-tocoferol). La emulsion puede incluir estos tres componentes a una proporcion de masa de aproximadamente 75:11:10 (por ejemplo, 750 pg/ml de polisorbato 80, 110 pg/ml de Triton X-100 y 110 pg/ml de succinato de a-tocoferol), y estas concentraciones debenan incluir cualquier contribucion de estos componentes de los antfgenos. La emulsion tambien puede incluir escualeno. La emulsion tambien puede incluir un 3d-MPL (vease a continuacion). La fase acuosa puede contener un tampon de fosfato.
• Una emulsion de escualeno, polisorbato 80 y poloxamero 401 ("Pluronic™ L121"). La emulsion se puede formular en solucion salina tamponada con fosfato, pH 7,4. Esta emulsion es un vetuculo de administracion util para dipeptidos de muramilo, y se ha usado con treonil-MDP en el adyuvante "SAF-1" [102] (0,05-1 % de Thr- MDP, 5 % de escualeno, 2,5 % de Pluronic L121 y 0,2 % de polisorbato 80). Tambien se puede usar sin el Thr- MDP, como en el adyuvante "AF" [103] (5 % de escualeno, 1,25 % de Pluronic L121 y 0,2 % de polisorbato 80). La microfluidizacion es preferente.
• Una emulsion que comprende escualeno, un disolvente acuoso, un tensioactivo no ionico hidrofilo de polioxietilen alquil eter (por ejemplo, polioxietilen (12) cetostearil eter) y un tensioactivo no bionico hidrofobo (por ejemplo, un ester de sorbitan o ester de manida, tal como monoleato de sorbitan o 'Span 80'). La emulsion es preferentemente termorreversible y/o tiene al menos un 90 % de las gotitas de aceite (en volumen) con un tamano inferior a 200 nm [104]. La emulsion tambien puede incluir uno o mas de: alditol; un agente crioprotector (por ejemplo, un azucar, tal como dodecilmaltosido y/o sacarosa); y/o un alquilpoliglicosido. La emulsion puede incluir un agonista de TLR4 [105]. Las emulsiones de este tipo se pueden liofilizar.
• Una emulsion de escualeno, poloxamero 105 y Abil-Care [106]. La concentracion final (peso) de estos componentes en vacunas con adyuvante tienen un 5% de escualeno, un 4% de poloxamero 105 (poliol de Pluronic) y un 2% de Abil-Care 85 (Bis-PEG/PPG-16/16 PEG/PPG-16/16 dimeticona; triglicerido capnlico/caprico).
• Una emulsion que tiene un 0,5-50% de un aceite, un 0,1-10% de un fosfolfpido, y un 0,05-5% de un tensioactivo no ionico. Como se describe en la referencia 107, algunos componentes de fosfolfpido preferentes son fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, fosfatidilglicerol, acido fosfatfdico, y esfingomielina y cardiolipina. Son ventajosos los tamanos de gotita submicrometricos.
• Una emulsion de aceite en agua submicrometrica de un aceite no metabolizable (tal como aceite mineral ligero) y al menos un tensioactivo (tal como lecitina, Tween 80 o Span 80). Se pueden incluir algunos aditivos, tales como QuilA saponina, colesterol, un conjugado de saponina-lipofilo (tal como GPI-0100, que se describen la referencia 108, producido mediante la adicion de amina alifatica para desacilsaponina a traves del grupo
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carboxilo del acido glucuronico), bromuro de dimetildioctadecilamonio y/o N,N-dioctadecil-N,N-bis(2- hidroxietil)propanodiamina.
• Una emulsion en la que una saponina (por ejemplo, QuilA o QS21) y un esterol (por ejemplo, un colesterol) estan asociados como micelas helicoidales [109].
• Una emulsion que comprende un aceite mineral, un alcohol graso etoxilado lipofilo no ionico, y un tensioactivo hidrofilo no ionico (por ejemplo, un alcohol graso etoxilado y/o copolfmero de bloque de polioxietileno- polioxipropileno) [110].
• Una emulsion que comprende un aceite mineral, un alcohol graso etoxilado hidroxilo no ionico, y un tensioactivo lipofilo no ionico (por ejemplo, un alcohol graso etoxilado y/o copolfmero del bloque de polioxietileno- polioxipropileno) [110].
En algunas realizaciones, una emulsion se puede mezclar con un antfgeno de forma extemporanea, en el momento de la administracion, y por lo tanto el adyuvante y el antfgeno se pueden mantener por separado en una vacuna envasada o distribuida, lista para formulacion final en el momento de su uso. En otras realizaciones, una emulsion se mezcla con antigeno durante la fabricacion, y por lo tanto la composicion se basa en un lfquido con forma adyuvante. Por lo general, el antigeno estara en una forma acuosa, de modo que la vacuna se prepara por ultimo mediante mezcla de dos lfquidos. La proporcion de volumen de los dos lfquidos para mezclar puede variar (por ejemplo, entre 5:1 y 1:5) pero por lo general es aproximadamente 1:1. Cuando las concentraciones de los componentes se proporcionan en las descripciones de emulsiones espedficas mencionadas anteriormente, estas concentraciones son por lo general para una composicion sin diluir, y por lo tanto, la concentracion despues de mezclar con una solucion de antfgeno disminuira.
Cuando una composicion incluye un tocoferol, se puede usar cualquiera de los tocoferoles a, p, y, 6, £ o ^, pero los a-tocoferoles son preferentes. El tocoferol puede tomar varias formas, por ejemplo, sales y/o isomeros diferentes. Algunas sales incluyen sales organicas, tales como succinato, acetato, nicotinato, etc. Se puede usar tanto D-a- tocoferol como DL-a-tocoferol. Algunos tocoferoles estan incluidos en vacunas de forma ventajosa para uso en pacientes de mayor edad (por ejemplo, con edades de 60 anos o superiores) porque se ha informado que la vitamina E tiene un efecto positivo en la respuesta inmune en este grupo de pacientes [111]. Tambien tienen propiedades antioxidantes que pueden ayudar a estabilizar las emulsiones [112]. Un a-tocoferol preferente es el DL-a-tocoferol, y la sal preferente de este tocoferol es el succinato. Se ha encontrado que la sal de succinato cooperar con ligandos relacionados con el TNF in vivo.
C. Formulaciones de saponina [capftulo 22 de la ref. 94]
Algunas formulaciones de saponina tambien se pueden usar como adyuvantes en la invencion. Las saponinas son un grupo heterogeneo de glucosidos de esterol y glucosidos de triterpenoides que se encuentran en la corteza, hojas, brotes, rafces e incluso flores de una amplia gama de especies vegetales. La saponina de la corteza del arbol Quillaia saponaria Molina se ha estudiado ampliamente como adyuvante. La saponina tambien se puede tener en el mercado a partir de Smilax ornata (zarzaparrilla), Gypsophilla paniculata (velo de la novia), y Saponaria officianalis (rafz de jabon). Algunas formulaciones de adyuvante de saponina incluyen formulaciones purificadas, tales como QS21, asf como formulaciones de lfpido, tales como los ISCOM. QS21 se comercializa como Stimulon™.
Algunas composiciones de saponinas se han purificado usando HPLC y RP-HPLC. Se han identificado algunas fracciones polfticas espedficas usando estas tecnicas, incluyendo QS7, QS17, QS18, QS21, QH-A, QH-B y QH-C. Preferentemente, la saponina es QS21. Un procedimiento de produccion de QS21 se desvela en la ref. 113. Algunas formulaciones de saponina tambien pueden comprender un esterol, tal como colesterol [114].
Algunas combinaciones de saponinas y colesteroles se pueden usar para formar partmulas unicas denominadas complejos de inmunoestimulacion (ISCOM) [capttulo 23 de la ref. 94]. Por lo general, los ISCOM tambien incluyen un fosfolfpido tal como fosfatidiletanolamina o fosfatidilcolina. Cualquier saponina conocida se puede usar en los ISCOM. Preferentemente, el ISCOM incluye uno o mas de QuilA, QHA y QHC. Los IsCoM se describen adicionalmente en las refs. 114-116. Opcionalmente, los ISCOM pueden estar desprovistos de detergente adicional [117].
Una revision del desarrollo de adyuvantes basados en saponina se puede encontrar en las refs. 118 y 119. D. Virosomas y partmulas similares a virus
Los virosomas y partmulas similares al virus (VLP) tambien se pueden usar como adyuvantes en la invencion. Estas estructuras por lo general contienen una o mas protemas de un virus combinadas o formuladas opcionalmente con fosfolfpido. Por lo general no son patogenas, no se replican y por lo general no contienen ninguno del genoma viral nativo. Las protemas virales se pueden producir o a aislar de forma recombinante a partir de virus completos. Estas protemas virales adecuadas para uso en virosomas o VLP incluyen protemas derivadas del virus de la gripe (tal como HA o NA), virus de la Hepatitis B (tales como protemas del nucleo o capside), virus de la Hepatitis E, virus del sarampion, virus Sindbis, Rotavirus, virus de la Fiebre Aftosa, retrovirus, virus de Norwalk, virus del papiloma humano, VIH, fagos de ARN, fago QU (tales como protemas de cubierta), fago GA, fago fr, fago AP205 y Ty (tal
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como protema pi de retrotransposon Ty). Los VLP se discuten adicionalmente en las refs. 120-125. Los virosomas se discuten adicionalmente en, por ejemplo, la ref. 126.
E. Derivados bacterianos o microbianos
Algunos adyuvantes adecuados para su uso en la invencion incluyen derivados bacterianos o microbianos tales como derivados no toxicos de lipopolisacarido enterobacteriano (LPS), derivados del lfpido A, oligonucleotidos inmunoestimuladores y toxinas de ribosilacion de ADP y derivados detoxificados de los mismos.
Algunos derivados no toxicos de LPS incluyen monofosforil lfpido A (MPL) y MPL 3-O-desacilado (3dMPL). El 3dMPL es una mezcla de monofosforil lfpido A 3 des-O-acilado con 4, 5 o 6 cadenas aciladas. Una forma preferente de "partmula pequena" de monofosforil lfpido A 3 des-O-acilado se desvela en la ref. 127. Tales "partmulas pequenas" de 3dMPL son lo suficientemente pequenas para esterilizarse por filtracion a traves de una membrana de 0,22 pm [127]. Otros derivados de LPS no toxicos incluyen mimeticos de monofosforil lfpido A, tales como derivados de fosfato de aminoalquil glucosaminida por ejemplo, RC-529 [128, 129].
Algunos derivados del lfpido A incluyen derivados del lfpido A de Escherichia coli Etal como OM-174. OM-174 se describe por ejemplo en las refs. 130 y 131.
Algunos oligonucleotidos inmunoestimuladores adecuados para uso como adyuvantes en la invencion incluyen secuencias de nucleotidos que contienen un motivo CpG (una secuencia de dinucleotido que contiene una citosina no metilada unida por un enlace fosfato a una guanosina). Tambien se ha demostrado que los ARN de doble hebra y oligonucleotidos que contienen secuencias palindromicas o poli(dG) son inmunoestimuladores.
Los CpG pueden incluir modificaciones/analogos de nucleotidos tales como modificaciones de fosforotioato y pueden ser de doble hebra o de una sola hebra. Las referencias 132, 133 y 134 desvelan posibles sustituciones de analogo por ejemplo, solucion de guanosina con 2'-desoxi-7-desazaguanosina. El efecto adyuvante de oligonucleotidos de CpG se discute adicionalmente en las refs. 135-140.
La secuencia de CpG se puede dirigir a TLR9, tal como el motivo GTCGTT o TTCGTT [141]. La secuencia de CpG puede ser espedfica para inducir una respuesta inmune de Th1, tal como un ODN de CpG-A, o puede ser mas espedfica para inducir una respuesta de linfocitos B, al como ODN un de CpG-B. Los de ODN CpG-A y CpG-B se discuten en las refs. 142-144. Preferentemente, el CpG es un ODN de CpG-A. Preferentemente, el oligonucleotido CpG se construye de manera que el extremo en la posicion 5' sea accesible para el reconocimiento del receptor. Opcionalmente, dos secuencias de oligonucleotidos CpG se pueden unir en sus extremos en la posicion 3' para formar "inmunomeros". Veanse, por Ejemplo, las refs. 141 y 145-147.
Un adyuvante de CpG util es CpG7909, tambien conocido como ProMune™ (Coley Pharmaceutical Group, Inc.). Otro CpG1826. Como alternativa, o ademas, para usar secuencias de CpG, se pueden usar secuencias de TpG [148], y estos oligonucleotidos pueden estar libres de motivos de CpG no metilados. El oligonucleotido inmunoestimulador puede ser rico en pirimidina. Por ejemplo, puede comprender mas de un nucleotido de timidina consecutivo (por ejemplo, TTTT, como se desvela en la ref. 148), y/o puede tener una composicion de nucleotido con > 25 % de timidina (por ejemplo, > 35 %, > 40 %, > 50 %, > 60 %, > 80 %, etc.). Por ejemplo, puede comprender mas de un nucleotido de citosina consecutivo (por ejemplo, CCCC, como se desvela en la ref. 148), y/o puede tener una composicion de nucleotido con > 25 % de citosina (por ejemplo, > 35 %, > 40 %, > 50 %, > 60 %, > 80 %, etc.). Estos oligonucleotidos pueden estar libres de motivos de CpG no metilados. Por lo general, los oligonucleotidos inmunoestimuladores comprenden al menos 20 nucleotidos. Pueden comprender menos de 100 nucleotidos.
Un adyuvante particularmente util basado alrededor de oligonucleotidos inmunoestimuladores se conoce como IC- 31 ™ [149]. Por lo tanto,1 adyuvante usado con la invencion puede comprender una mezcla de (i) un oligonucleotido (por ejemplo, entre 15-40 nucleotidos) incluyendo al menos un (y preferentemente multiples) motivo de CpI (es decir, una citosina unida a una inosina para formar un dinucleotido), y (ii) un polfmero policationico, tal como un oligopeptido (por ejemplo, entre 5-20 aminoacidos) incluyendo al menos una (y preferentemente multiples) secuencia(s) de tripeptido Lys-Arg-Lys. El oligonucleotido puede ser un desoxinucleotido que comprende la secuencia 5'-(IC)13-3' de 26-mer (SEQ ID NO: 230). El polfmero policationico puede ser un peptido que comprende la secuencia de aminoacidos KLKLLLLLKLK de 11-mer (SEQ ID NO: 231). El oligonucleotido y el polfmero pueden formar complejos como se desvela, por ejemplo, en las referencias 150 y 151.
En la invencion se pueden usar toxinas bacterianas de ribosilacion de ADP y derivados detoxificados de las mismas como adyuvantes. Preferentemente, la protema se deriva de E. coli (enterotoxina labil al calor "LT" de E. coli), colera ("CT"), o pertussis ("PT"). El uso de toxinas de ribosilacion de ADP detoxificadas como adyuvantes mucosales se describe en la ref. 152 y como adyuvantes parenterales en la ref. 153. La toxina o toxoide se encuentra preferentemente en forma de una holotoxina, que comprende subunidades tanto A como B. Preferentemente, la subunidad A contiene una mutacion detoxificante; preferentemente la subunidad B no esta mutada. Preferentemente, el adyuvante es un mutante de LT detoxificado tal como LT-K63, LT-R72, y LT-G192. El uso de toxinas de ribosilacion de ADP y derivados detoxificados de las mismas, en particular LT-K63 y LT-R72, como adyuvantes se puede encontrar en las refs. 154-161. Un mutante de CT util es o CT-E29H [162]. La referencia numerica para sustituciones de aminoacidos se basa preferentemente en los alineamientos de las subunidades A y
B de las toxinas de ribosilacion de ADP establecidas en la ref. 163.
F. Inmunomoduladores Humanos
Algunos inmunomoduladores humanos adecuados para uso como adyuvantes en la invencion incluyen citoquinas, tales como interleuquinas (por ejemplo, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 [164], etc.) [165], interferones (por 5 ejemplo, interferon-Y), factor de estimulacion de colonias de macrofagos, y factor de necrosis tumoral. Un
inmunomodulador preferente es IL-12.
G. Bioadhesivos y Mucoadhesivos
Algunos bioadhesivos y mucoadhesivos tambien se pueden usar como adyuvantes en la invencion. Algunos bioadhesivos adecuados incluyen microesferas de acido hialuronico esterificadas [166] o mucoadhesivos tales como 10 derivados reticulados de poli(acido acnlico), alcohol polivimlico, polivinil pirrolidona, polisacaridos y
carboximetilcelulosa. El quitosano y derivados del mismo tambien se pueden usar como adyuvantes en la invencion [167].
H. Micropartculas
Algunas micropartfculas tambien se pueden usar como adyuvantes en la invencion. Las micropartfculas (es decir, 15 una partfcula de ~100 nm a ~150 pm de diametro, mas preferentemente de ~200 nm a ~30 pm de diametro, y lo mas preferentemente de ~500 nm a 10 pm de diametro) formadas a partir de materiales que son biodegradables y no toxicos (por ejemplo, un poli(a-hidroxiacido), un acido polihidroxibutmco, un poliortoester, un polianhndrido, una policaprolactona, etc.), con poli(lactida-co-glicolido) son preferentes, tratados opcionalmente para tener una superficie con carga negativa (por ejemplo, con SDS) o una superficie con carga positiva (por ejemplo, con un 20 detergente cationico, tal como CTAB).
I. Liposomas (Capftulos 13 y 14 de la ref. 94)
Algunos ejemplos de formulaciones de liposomas adecuadas para uso como adyuvantes se describen en las refs. 168-170.
J. Formulaciones de polioxietilen eter y ester de polioxietileno
25 Algunos adyuvantes adecuados para uso en la invencion incluyen polioxietilen eteres y esteres de polioxietileno [171]. Tales formulaciones incluyen adicionalmente tensioactivos de ester de polioxietileno y sorbitan en combinacion con un octoxinol [172] asf como tensioactivos de polioxietilen alquil eteres o ester en combinacion con al menos un tensioactivo no ionico adicional tal como un octoxinol [173]. Algunos polioxietilen eteres preferentes se seleccionan entre el siguiente grupo: polioxietilen-9-lauril eter (laureth 9), polioxietilen-9-esteoril eter, polioxietilen-8-esteoril eter, 30 polioxietilen-4-lauril eter, polioxietilen-35-lauril eter, y polioxietilen-23-lauril eter.
K. Fosfacenos
Se puede usar un fosfaceno, tal como poli[di(carboxilatofenoxi)fosfaceno] ("PCPP") como se describe, por ejemplo, en las referencias 174 y 175.
L. Peptidos de muramilo
35 Algunos ejemplos de peptidos muramilo adecuados para uso como adyuvantes en la invencion incluyen N-acetil- muramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil-normuramil-L-alanil-D-isoglutamina (nor-MDP), y N- acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1'-2'-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamina MTP-PE).
M. Compuestos de imidazoquinolona.
Algunos ejemplos de compuestos de imidazoquinolona adecuados para uso con adyuvantes en la invencion incluyen 40 Imiquimod ("R-837") [176,177], Resiquimod ("R-848") [178], y sus analogos; y sales de los mismos (por ejemplo, las sales de clorhidrato). Algunos detalles adicionales sobre imidazoquinolinas inmunoestimuladoras se pueden encontrar en las referencias 179 a 183.
N. Ureas sustituidas
Algunas ureas sustituidas utiles como adyuvantes incluyen compuestos de formula I, II o III, o sales de los mismos:
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como se definen la referencia 184, tales como 'ER 803058', 'ER 803732', 'ER 804053', ER 804058', 'ER 804059', 'ER 804442', 'ER 804680', 'ER 804764', ER 803022 o 'ER 804057', por ejemplo:
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O. Adyuvantes adicionales
Algunos adyuvantes adicionales que se pueden usar con la invencion incluyen:
• Un derivado de fosfato de aminoalquil glucosaminida, tal como RC-529 [185,186].
• Un compuesto de tiosemicarbazona, tal como los que se desvelan en la referencia 187. Algunos procedimientos para formular, fabricar e identificar sistematicamente compuestos activos tambien se describen en la referencia 187. Las tiosemicarbazonas son particularmente eficaces en la estimulacion de celulas mononucleares de sangre periferica humana para la produccion de citoquinas, tales como TNF-a.
• Un compuesto de triptantrina, tal como los que se desvelan en la referencia 188. Algunos procedimientos para formular, fabricar e identificar sistematicamente compuestos activos tambien se describen en la referencia 188.
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Las tiosemicarbazonas son particularmente eficaces en la estimulacion de celulas mononucleares de sangre periferica humana para la produccion de citoquinas, tales como TNF-a.
• Un analogo de nucleosido, tal como: (a) Isatorabina (ANA-245; 7-tia-8-oxoguanosina):
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y profarmacos de la misma; (b) ANA975; (c) ANA-025-1; (d) ANA380; (e) los compuestos desvelados en las referencias 189 a 191 Loxoribina (7-alil-8-oxoguanosina) [192].
• Compuestos desvelados en la referencia 193, incluyendo: compuestos de Acilpiperazina, compuestos de Indoldiona, compuestos de Tetrahidraisoquinolina (THIQ), compuestos de Benzociclodiona, compuestos de Aminoazavinilo, compuestos de Aminobenzoimidazol quinolinona (ABIQ) [194,195], compuestos de Hidraftalamida, compuestos de Benzofenona, compuestos de Isoxazol, compuestos de Esterol, compuestos de Quinazilinona, compuestos de Pirrol [196], compuestos de Antraquinona, compuestos de Quinoxalina, compuestos de Triazina, compuestos de Pirazalopirimidina, y compuestos de Benzazol [197].
• Compuestos que contienen lfpidos unidos a una estructura principal adclica que contiene fosfato, tal como el antagonista de TLR4, E5564 [198,199]:
• Un polfmero de polioxidonio [200,201] u otro derivado de polietilen-piperazina N-oxidado.
• 5'-Monofosfato de metil inosina ("MIMP") [202].
• Un compuesto de pirrolizidina polihidroxilada [203], tal como una que tiene la formula:
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en la que R se selecciona entre el grupo que comprende hidrogeno, grupos acilo, alquilo (por ejemplo, cicloalquilo), alquenilo, alquinilo y arilo lineales o ramificados, sin sustituir o sustituidos, saturados o insaturados, o una sal farmaceuticamente aceptable o derivado de los mismos. Algunos ejemplos incluyen, pero no se limitan a: casuarina, casuarina-6-a-D-glucopiranosa, 3-ep/-casuarina, 7-ep/-casuarina, 3,7-diep/-casuarina, etc.
• Un ligando de CD1d, tal como una a-glicosilceramida [204-211] (por ejemplo, a-galactosilceramida), a- glicosilceramidas que contienen fitoesfingosina, OCH, KRN7000 [(2S,3S,4R)-1-O-(a-D-galactopiranosil)-2-(N- hexacosanoilamino)-1,3, 4-octadecanotriol], CRONY-101, 3"-O-sulfo-galactosilceramida, etc.
• Una gamma inulina [212] o derivado de la misma, tal como algamulina.
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Comb/nac/ones de adyuvante
La invencion tambien puede comprender combinaciones de aspectos de uno o mas de los adyuvantes identificados anteriormente. Por ejemplo, en la invencion se pueden usar las siguientes composiciones de adyuvante: (1) una saponina y una emulsion de aceite en agua [213]; (2) una saponina (por ejemplo, QS21) + un derivado de LPS no
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toxico (por ejemplo, 3dMPL) [214]; (3) una saponina (por ejemplo, QS21) + un derivado de LPS no toxico (por ejemplo, 3dMPL) + un colesterol; (4) una saponina (por ejemplo, QS21) + 3dMPL + IL-12 (opcionalmente + un esterol) [215]; (5) combinaciones de 3dMPL con, por ejemplo, QS21 y/o emulsiones de aceite en agua [216]; (6) SAF, que contiene un 10 % de escualeno, un 0,4 % de Tween 80™, un 5 % de polfmero L121 Pluronic de bloque, y thr-MDP, ya sea microfluidizado en una emulsion submicrometrica o sometido a agitacion vorticial para generar una emulsion de tamano de partfcula mayor. (7) sistema de adyuvante Ribi™ (RAS), (Ribi Immunochem) que contiene un 2 % de escualeno, un 0,2 % de Tween 80, y uno o mas componentes de la pared celular bacteriana del grupo que consiste en monofosforilfpido A (MPL), dimicolato de trehalosa (TDM), y esqueleto de pared celular (CWS), preferentemente MPL + CWS (Detox™); y (8) una o mas sales minerales (tal como una sal de aluminio) + un derivado no toxico de LPS (tal como 3dMPL).
Otras sustancias que actuan como agentes inmunoestimuladores se desvelan en el capttulo 7 de la ref. 94.
El uso de un adyuvante de hidroxido de aluminio y/o fosfato de aluminio es particularmente preferente, y por lo general los antigenos se adsorben a estas sales. El fosfato calcico es otro adyuvante preferente. Otras combinaciones de adyuvante preferentes incluyen combinaciones de adyuvantes de Th 1 y Th2 tales como CpG y alum o resiquimod y alum. Se puede usar una combinacion de fosfato de aluminio y 3dMPL, ya que se ha informado que esta es eficaz en la inmunizacion neumococica [325]. Las composiciones de la invencion pueden provocar tanto una respuesta inmune mediada por celulas asf como una respuesta inmune humoral. Esta respuesta inmune inducira preferentemente anticuerpos de larga duracion (por ejemplo, neutralizacion) y una inmunidad mediada por celulas que puede responder rapidamente despues de exposicion a neumococos.
Por lo general, se cree que para iniciar y/o aumentar la inmunidad mediada por celulas y la inmunidad humoral son necesarios dos tipos de linfocitos T, linfocitos CD4 y CD8. Los linfocitos T CD8 pueden expresar un co-receptor CD8 y normalmente se denominan linfocitos T Citotoxicos (CTL). Los linfocitos T CD8 son capaces de reconocer o interactuar con antigenos presentados en moleculas de Clase I de MHC.
Los linfocitos T CD4 pueden expresar un co-receptor CD4 y normalmente se denominan linfocitos T auxiliares. Los linfocitos T CD4 son capaces de reconocer peptidos antigenicos unidos a moleculas de la clase II de MHC. Despues de la interaccion con una molecula de la clase II de MHC, los linfocitos CD4 pueden secretar factores tales como citoquinas. Estas citoquinas secretadas pueden activar los linfocitos B, linfocitos T citotoxicos, macrofagos, y otras celulas que participan en una respuesta inmune. Los linfocitos T auxiliares o linfocitos CD4+ se pueden dividir adicionalmente en dos subconjuntos funcionalmente distintos: fenotipo TH1 y fenotipos TH2 que se diferencian en su funcion de citoquina y efectora.
Los linfocitos TH1 activados aumentan la inmunidad celular (incluyendo un aumento de la produccion de CTL espedfico de antfgeno) y por lo tanto, tienen un valor en la respuesta a infecciones intracelulares. Los linfocitos TH1 activados pueden secretar uno o mas de IL-2, IFN-y, y TNF-p. Una respuesta inmune de TH1 puede dar como resultado reacciones inflamatorias locales por activacion de macrofagos, linfocitos NK (citolfticos naturales), y linfocitos T CD8 citotoxicos (CTL). Una respuesta inmune de TH1 tambien puede actuar para ampliar la respuesta inmune mediante estimulacion del crecimiento de los linfocitos B y T con IL-12. Los linfocitos B estimulados con TH1 pueden secretar IgG2a.
Los linfocitos TH2 activados aumentan la produccion de anticuerpos y por lo tanto tienen valor en la respuesta a infecciones extracelulares. Los linfocitos tH2 activados pueden secretar uno o mas de IL-4, IL-5, IL-6, e IL-10. Una respuesta inmune de TH2 puede dar como resultado la produccion de IgG1, IgE, IgA y linfocitos B de memoria para proteccion en el futuro.
Un aumento de la respuesta inmune puede incluir uno o mas de un aumento de la respuesta inmune de TH1 y una respuesta inmune de TH2.
Una respuesta inmune de TH1 puede incluir uno o mas de un aumento de los CTL, un aumento de una o mas citoquinas asociadas con una respuesta inmune de TH1 (tal como IL-2, IFN-y, y TNF-p), un aumento de los macrofagos activados, un aumento de la actividad de NK, o un aumento de la produccion de IgG2a. Preferentemente, el aumento de la respuesta inmune de TH1 incluira un aumento de la produccion de IgG2a.
Una respuesta inmune de TH1 se puede provocar usando un adyuvante de TH1. Por lo general, un adyuvante de TH1 provocara un aumento de los niveles de produccion de IgG2a con respecto a la inmunizacion del antfgeno sin adyuvante. Algunos adyuvantes de TH1 adecuados para uso en la invencion pueden incluir por ejemplo formulaciones de saponina, virosomas y partfculas similares a virus, derivados no toxicos de lipopolisacarido enterobacteriano (LPS), oligonucleotidos inmunoestimuladores. Algunos oligonucleotidos inmunoestimuladores, tales como oligonucleotidos que contienen un motivo de CpG, son adyuvantes de TH1 preferentes para uso en la invencion.
Una respuesta inmune de TH2 puede incluir uno o mas de un aumento de una o mas de las citoquinas asociadas con una respuesta inmune de TH2 (tal como IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10), o un aumento de la produccion de IgG1, IgE, IgA y linfocitos B de memoria. Preferentemente, el aumento de la respuesta inmune de TH2 incluira un aumento de la produccion de IgG1.
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Una respuesta inmune de TH2 se puede provocar usando una adyuvante de TH2. Por lo general, un adyuvante de TH2 provocara un aumento de los niveles de produccion de IgG1 con respecto a inmunizacion del antigeno sin adyuvante. Algunos adyuvantes de TH2 adecuados para uso en la invencion incluyen, por ejemplo, composiciones que contienen minerales, emulsiones oleosas, y toxinas de ribosilacion de ADP y derivados detoxificados de los mismos. Algunas composiciones que contienen minerales, tales como sales de aluminio, son adyuvantes de TH2 preferentes para uso en la invencion.
Preferentemente, la invencion incluye una composicion que comprende una combinacion de un adyuvante de TH1 y un adyuvante de TH2. Preferentemente, una composicion de este tipo provoca un aumento de TH1 y un aumento de la respuesta de TH2, es decir, un aumento de la produccion tanto de la produccion de IgG1 como de IgG2a con respecto a la inmunizacion sin un adyuvante. Aun mas preferentemente, la composicion que comprende una combinacion de un adyuvante de TH1 y de TH2 provoca un aumento de la respuesta inmune de TH1 y/o un aumento de la respuesta inmune de TH2 con respecto a la inmunizacion con un solo adyuvante (es decir, con respecto a la inmunizacion con un adyuvante de TH1 solo o una inmunizacion con un adyuvante de TH2 solo).
La respuesta inmune puede ser una o ambas de una respuesta inmune de TH1 y una respuesta de TH2. Preferentemente, la respuesta inmune proporciona uno o ambas de un aumento de la respuesta de TH1 y un aumento de la respuesta de TH2.
El aumento de la respuesta inmune puede ser una o ambos de una respuesta inmune sistemica o una mucosal. Preferentemente, la respuesta inmune proporciona una o ambas de un aumento de la respuesta inmune sistemica y un aumento de la respuesta inmune mucosal. Preferentemente, la respuesta inmune mucosal es una respuesta inmune de TH2. Preferentemente, la respuesta inmune mucosal incluye un aumento de la produccion de IgA.
Algunas infecciones neumococica as pueden afectar a diversas zonas del organismo y por lo tanto las composiciones de la invencion se pueden reparar en diversas formas. Por ejemplo, las composiciones se pueden preparar como inyectables, ya sea como soluciones o suspensiones lfquidas. Tambien se pueden preparar algunas formas solidas adecuadas para solucion en, o suspension en, vetnculos lfquidos antes de inyeccion (por ejemplo, una composicion liofilizada o una composicion liofilizada por pulverizacion). La composicion se puede preparar para administracion topica por ejemplo como una pomada, crema o polvo. La composicion se puede preparar para administracion oral por ejemplo como un comprimido o capsula, como una pulverizacion o como un jarabe (opcionalmente con sabor). La composicion se puede preparar para administracion por via pulmonar por ejemplo como un inhalador, usando un polvo fino o una pulverizacion. La composicion se puede preparar como un supositorio o supositorio vaginal. La composicion se puede preparar para administracion nasal, auricular u ocular por ejemplo en forma de gotas. La composicion puede estar en forma de kit, disenado de una forma tal que una composicion combinada se reconstituye justo antes de su administracion a un paciente. Tales kits pueden comprender uno o mas antfgenos en forma lfquida y uno o mas antfgenos liofilizados.
Cuando una composicion se va a preparar de forma extemporanea antes de su uso (por ejemplo, cuando un componente esta presente en forma liofilizada) y esta presente como un kit, el kit puede comprender dos viales, o puede comprender una jeringa de llenado rapido y un vial, con los contenidos de la jeringa siendo usados para reactivar los contenidos del vial antes de la inyeccion.
Algunas composiciones inmunogenicas usadas como vacunas comprenden una cantidad inmunologicamente eficaz de antfgeno(s), asf como cualquier otro componente, si fuera necesario. Por 'cantidad inmunologicamente eficaz', se hace referencia a que la administracion de esa cantidad a un individuo, ya sea de una sola dosis o como parte de una serie, es eficaz para tratamiento o prevencion. Esta cantidad vana dependiendo de la salud y condicion ffsica del individuo a tratar, edad, el grupo taxonomico del individuo a tratar (por ejemplo, primate no humano, primate, etc.), la capacidad del sistema inmune del individuo para sintetizar anticuerpos, el grado de proteccion deseado, la formulacion de la vacuna, la evaluacion del medico tratante de la situacion medica, y otros factores relevantes. Se espera que la cantidad entre en un intervalo relativamente amplio que se pueda determinar a traves de ensayos de rutina. Cuando en una composicion se incluye mas de un antfgeno, entonces los dos antfgenos pueden estar presentes en la misma dosis que entre sf o a diferentes dosis.
Como se ha mencionado anteriormente, una composicion puede incluir un agente protector de la temperatura, y este componente puede ser particularmente util en composiciones de adyuvante (en particular las que contienen un adyuvante mineral, tal como una sal de aluminio). Como se describe en la referencia 217, un agente protector de la temperatura lfquido se puede anadir a una composicion de vacuna acuosa para disminuir su punto de congelacion, por ejemplo, para reducir el punto de congelacion hasta por debajo de 0 °C. Por lo tanto, la composicion se puede almacenar a una temperatura inferior a 0 °C, pero superior a la de su punto de congelacion, para inhibir la descomposicion termica. El agente protector de la temperatura tambien permite la congelacion de la composicion, a la vez que protege a los adyuvantes de sal mineral frente a la aglomeracion o sedimentacion despues de congelacion y descongelacion, y tambien puede proteger a la composicion de temperaturas elevadas superiores a, por ejemplo, 40 °C. Una vacuna acuosa de partida y el agente de proteccion de la temperatura lfquido se pueden mezclar de un modo tal que el agente de proteccion de la temperatura del lfquido forme un 1-80 % en volumen de la mezcla final. Los agentes protectores de la temperatura adecuados debenan ser seguros para administracion humana, facilmente miscibles/solubles en agua, y no debenan danar a otros componentes (por ejemplo, antfgeno y
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adyuvante) en la composicion. Algunos ejemplos incluyen glicerina, propilenglicol, y/o polietilenglicol (PEG). Los PEG adecuados pueden tener un peso molecular medio que vana de 200-20.000 Da. En una realizacion preferente, el polietilenglicol puede tener un peso molecular medio de aproximadamente 300 Da ('PEG-300').
La invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende: (i) uno o mas antigeno(s) seleccionados entre el primer, segundo, tercer, cuarto, quinto, sexto, septimo, octavo, noveno o decimo grupos de antfgenos; y (ii) un agente de proteccion de la temperatura. Esta composicion se puede formar mezclando (i) una composicion acuosa que comprende uno o mas antigeno(s) seleccionados entre el primer, segundo, tercero, cuarto, quinto, sexto, septimo, octavo, noveno o decimo grupos de antfgenos, con (ii) un agente protector de la temperatura. A continuacion, la mezcla se puede almacenar a una temperatura inferior a, por ejemplo, 0 °C, de 0-20 °C, de 2035 °C, de 35-55 °C, o superior, se puede almacenar en forma lfquida o congelada. La mezcla se puede liofilizar. Como alternativa, la composicion se puede formar mezclando (i) una composicion seca que comprende uno o mas antfgeno(s) seleccionados entre el primer, segundo, tercer, cuarto, quinto, sexto, septimo, octavo, noveno o decimo grupos de antfgenos, con (ii) una composicion lfquida que comprende el agente de proteccion de la temperatura. Por lo tanto, el componente (ii) se puede usar para reconstituir el componente (i).
Procedimientos de tratamiento y administracion de la vacuna
La invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica de la invencion para su uso en un procedimiento para aumentar una respuesta inmune en un mairnfero. La respuesta inmune es preferentemente protectora preferentemente y preferentemente implica inmunidad mediada por anticuerpos y/o celulas. El procedimiento puede aumentar una respuesta de estimulacion.
La invencion tambien proporciona al menos dos antfgenos de la invencion para su uso combinado como un medicamento, por ejemplo, para uso para aumentar una respuesta inmune en un mamnfero.
La invencion tambien proporciona los al menos dos antfgenos de la invencion para su uso en la preparacion de un medicamento para aumentar una respuesta inmune en un mamffero.
Con el aumento de una respuesta inmune en el mamffero con estos usos y procedimientos, el mamffero se puede proteger frente a la infeccion neumococica. Mas particularmente, el mamffero se puede proteger frente a meningitis neumococica. La invencion es eficaz frente a neumococos de diversos serotipos diferentes, pero puede ser particularmente util para proteger frente a enfermedades que resultan de infeccion neumococica por cepas en los serotipos 1, 5, 6 y 19A.
La divulgacion tambien proporciona un kit que comprende un primer componente y un segundo componente en el que ninguno del primer componente ni del segundo componente es una composicion de la invencion como se ha descrito anteriormente, pero en el que el primer componente y el segundo componente se pueden combinar para proporcionar una composicion de la invencion como se ha descrito anteriormente. El kit puede incluir adicionalmente un tercer componente que comprende uno o mas de los siguientes: instrucciones, jeringa u otro dispositivo de administracion, adyuvante, o solucion de formulacion farmaceuticamente aceptable.
La divulgacion tambien proporciona un dispositivo de administracion cargado previamente con una composicion inmunogenica de la invencion.
El mamffero es preferentemente un ser humano. Cuando la vacuna es para uso profilactico, el ser humano es preferentemente un nino (por ejemplo, un bebe que gatea o nino pequeno) o un adolescente; cuando la vacuna es para uso terapeutico, el ser humano es preferentemente un adolescente o un adulto. Una vacuna destinada para ninos tambien se puede administrar a adultos para evaluar, por ejemplo, la seguridad, dosificacion, inmunogenicidad, etc.
Una manera de comprobar la eficacia del tratamiento terapeutico implica el control de la infeccion neumococica despues de administracion de las composiciones. Una manera de comprobar la eficacia del tratamiento profilactico implica el control de respuestas inmunes, por via sistemica (tal como controlando el nivel de produccion de IgG1 e IgG2a) y/o por via mucosal (tal como controlando el nivel de produccion de IgA), frente a los antfgenos en las composiciones de la invencion despues de administracion de la composicion. Por lo general, algunas respuestas de anticuerpos de suero espedfico de antfgeno se determinan despues de la inmunizacion pero antes de la estimulacion mientras que algunas respuestas mucosales espedficas de antfgeno se determinan despues de la inmunizacion y despues de la estimulacion.
Otra manera de evaluar la inmunogenicidad de las composiciones de la presente invencion es expresar las protemas de forma recombinante para identificacion sistematica de sueros de paciente o secreciones mucosales mediante inmunotransferencia y/o micromatrices. Una reaccion positiva ante la protema y la muestra del paciente indica que el paciente ha superado una respuesta inmune a la protema en cuestion. Este procedimiento tambien se puede usar para identificar antfgenos y/o epftopos inmunodominantes dentro de los antfgenos.
La eficacia de las composiciones de vacuna tambien se puede determinar in vivo mediante estimulacion de modelos animales de infeccion neumococica, por ejemplo, cobayas o ratones, con las composiciones de vacuna. Un modelo
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de este tipo se describe en la referencia 218.
Por lo general, las composiciones de la invencion se administraran directamente a un paciente. La administracion directa se puede conseguir mediante inyeccion (por ejemplo, por via subcutanea, por v^a intraperitoneal, por via intravenosa, por via intramuscular, o al espacio intersticial de un tejido), o por via mucosal, tal como mediante administracion rectal, oral (por ejemplo, comprimido, inhalacion), vaginal, topica, transdermica o transcutanea, intranasal, ocular, auricular, pulmonar u otra administracion mucosal.
Las composiciones de la invencion se pueden usar para provocar inmunidad sistemica y/o mucosal, preferentemente para provocar un aumento de la inmunidad sistemica y/o mucosal.
Preferentemente, el aumento de la inmunidad sistemica y/o mucosal se refleja en un aumento de la respuesta inmune de TH1 y/o TH2. Preferentemente, el aumento de las tres de incluye un aumento de la produccion de IgG1 y/o IgG2a y/o IgA.
La dosificacion se puede realizar mediante un programa de una sola dosis o un programa de multiples dosis. Las dosis multiples se pueden usar en un programa de inmunizacion primaria y/o en un programa de inmunizacion de refuerzo. En un programa de dosis multiple, las diversas dosis se pueden administrar con la misma ruta o con rutas diferentes, por ejemplo una sensibilizacion parenteral y un refuerzo mucosal, una sensibilizacion mucosal y con refuerzo parenteral, etc. Las dosis multiples por lo general se administraran con una separacion de al menos 1 semana (por ejemplo, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 12 semanas, aproximadamente 16 semanas, etc.).
Las vacunas de la invencion pueden ser para uso en el tratamiento tanto de ninos como de adultos. Por lo tanto un paciente humano puede tener menos de 1 anos de edad, 1-5 anos de edad, 5-15 anos de edad, 15-55 anos de edad, o al menos 55 anos de edad. Algunos pacientes preferentes para recibir las vacunas son las personas de mayor edad (por ejemplo, > 50 anos de edad, > 60 anos de edad, y preferentemente > 65 anos de edad), los jovenes (por ejemplo, < 5 anos de edad), pacientes hospitalizados, trabajadores sanitarios, servicio armado y personal militar, mujeres embarazadas, los pacientes enfermos cronicos o inmunodeficiencias. Las vacunas no son unicamente adecuadas para estos grupos y, sin embargo, se pueden usar de forma mas general en una poblacion.
Las vacunas producidas por la invencion se pueden administrar a pacientes sustancialmente al mismo tiempo que (por ejemplo, durante la misma consulta o visita medica a un profesional sanitario o centro de vacunacion) otras vacunas, por ejemplo sustancialmente al mismo tiempo que la vacuna para el sarampion, una vacuna para paperas, una vacuna para rubeola, una vacuna de MMR, una vacuna para varicela, una vacuna para MMRV, una vacuna para difteria, una vacuna para tetanos, una vacuna para pertussis, una vacuna para DTP, una vacuna de tipo b para H. influenzae conjugada, una vacuna inactivada para poliovirus, una vacuna para virus de la hepatitis B, una vacuna conjugada meningococica (tal como una vacuna AC-W135-Y tetravalente), una vacuna para virus respiratorio sincitial, etc.
Inmunizacion mucosal
La invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende (i) un antfgeno de polipeptido de la invencion. La invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica de la invencion para uso en un procedimiento para aumentar una respuesta inmune en un mairnfero. La composicion se administra preferentemente por via mucosal (a una superficie mucosal) por ejemplo, se puede administrar por via intranasal.
El antfgeno de polipeptido puede ser, por ejemplo, parte del septimo grupo de antfgenos. El antfgeno de polipeptido puede ser un antfgeno de pilus, tal como un polipeptido RrgA o RrgB.
La toxina del componente (i) se puede derivar, por ejemplo, de enterotoxina labil al calor de E. coli ("LT"). El derivado puede tener una mutacion detoxificante en sus subunidad A, por ejemplo, puede ser LT-K63 o LT-R72.
La administracion intranasal de un polipeptido RrgB y un adyuvante de LT-K63 es preferente. En ratones, se ha mostrado que esto disminuye la carga bacteriana de una cepa neumococica invasiva en la nasofaringe, pulmones y sangre y proporciona un aumento de 5 veces de la tasa de supervivencia.
Inmunizacion con acido nucleico
Las composiciones inmunogenicas descritas anteriormente incluyen antfgenos de polipeptidos de neumococos. En todos los casos, sin embargo, los antfgenos de polipeptido se pueden sustituir por acidos nucleicos (por lo general ADN) que codifican esos polipeptidos, para dar composiciones, procedimientos y usos basados en inmunizacion con acido nucleico. La inmunizacion con acido nucleico es en la actualidad un campo desarrollado (por ejemplo, veanse las referencias 219 a 226, etc.), y se ha aplicado vacunas neumococicas (por ejemplo, ref. 227).
El acido nucleico que codifica el inmunogeno se expresa in vivo despues de administracion a un paciente y a continuacion el inmunogeno expresado estimula el sistema inmune. El principio activo por lo general tomara la forma
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de un vector de acido nucleico que comprende: (i) un promotor; (ii) una secuencia que codifica el inmunogeno, unido de forma operativa al promotor; y opcionalmente (iii) un marcador seleccionable. Algunos vectores preferentes pueden comprender adicionalmente (iv) un origen de replicacion; y (v) un terminado de la transcripcion cadena abajo de y unido de forma operativa a (ii). En general, (i) y (v) seran eucariotas y (iii) y (iv) seran procariota as.
Algunos promotores preferentes son promotores virales por ejemplo de citomegalovirus (CMV). El vector tambien puede incluir secuencias de regulacion de la transcripcion (por ejemplo, potenciadores) ademas del promotor y que interaction de forma funcional con el promotor. Algunos vectores preferentes incluyen el potenciador/promotor de CMV inmediato-temprano, y algunos vectores mas preferentes tambien incluyen el intron A de CMV. El promotor se une de forma operativa a una secuencia cadena abajo que codifica un inmunogeno, de modo que la expresion de la secuencia que codifica al inmunogeno esta bajo el control del promotor.
Cuando se usa un marcador, este funciona preferentemente en un hospedador microbiano (por ejemplo, en un procariota, en una bacteria, en una levadura). El marcador es preferentemente un marcador seleccionable procariota (por ejemplo, transcrito bajo el control de un promotor procariota). Por conveniencia, algunos marcadores habituales son genes de resistencia a antibioticos.
El vector de la invencion es preferentemente un vector episomico o extracromosomico de replicacion de forma autonoma, tal como un plasmido.
El vector de la invencion comprende preferentemente un origen de replicacion. Es preferente que el origen de replicacion sea activo en procariotas pero no en eucariotas.
Por lo tanto, algunos vectores preferentes incluyen un marcador procariota para seleccion del vector, un origen de replicacion procariota, pero un promotor eucariota para conducir la transcripcion de la secuencia que codifica al inmunogeno. Por lo tanto, los vectores (a) estaran amplificados y seleccionados en hospedadores procariotas sin expresion de polipeptido, pero (b) estaran expresados en hospedadores eucariotas sin amplificacion. Esta disposicion es ideal para vectores de inmunizacion de acido nucleico.
El vector de la invencion puede comprender una secuencia determinacion de la transcripcion eucariota cadena abajo de la secuencia de codificacion. Esto puede aumentar los niveles de transcripcion. Cuando la secuencia de codificacion no tiene su propio, el vector de la invencion comprende preferentemente una secuencia de poliadenilacion. Una secuencia de poliadenilacion preferente es de la hormona de crecimiento bovina.
El vector de la invencion puede comprender un sitio de clonacion multiple.
Ademas de las secuencias que codifican el inmunogeno y un marcador, el vector puede comprender una segunda secuencia de codificacion eucariota. El vector cambio puede comprender IRES cadena arriba de dicha segunda secuencia para permitir la traduccion de un segundo polipeptido eucariota del mismo transcrito que el inmunogeno. Como alternativa, la secuencia que codifica el inmunogeno puede estar cadena abajo de un IRES.
El vector de la invencion puede comprender motivos de CpG sin metilar por ejemplo secuencias de ADN sin metilar que tienen en comun una citosina que precede a una guanosina, flanqueada por dos purinas en la posicion 5' y dos pirimidinas en la posicion 3'. En sus formas sin metilar, se ha demostrado que estos motivos de ADN son potentes estimuladores de varios tipos de celulas inmunes. Algunos vectores se pueden administrar de una manera dirigida. Algunas tecnicas de administracion de ADN mediadas por receptor se describen, por ejemplo, en las referencias 228 a 233. Las composiciones terapeuticas que contienen un acido nucleico se administran en un intervalo de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 200 mg de ADN para administracion local en un protocolo de terapia genetica. La concentracion vana de aproximadamente 500 ng a aproximadamente 50 mg, de aproximadamente 1 |jg a aproximadamente 2 jg, de aproximadamente 5 jg a aproximadamente 500 jg, y de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 100 jg de ADN tambien se pueden usar durante un protocolo de terapia genetica. Algunos factores tales como un procedimiento de accion (por ejemplo, para aumentar o inhibir los niveles del producto genetico codificado) y eficacia de transformacion y expresion son consideraciones que influiran en la dosificacion necesaria para una ultima eficacia. Cuando se desea una mayor expresion en una zona de tejido mas grande, a cantidades mas grandes de vector o las mismas cantidades se volveran a administrar en un protocolo de administraciones sucesivo, o pueden ser necesarias varias administraciones a diferentes partes del tejido adyacentes o cercanas para obtener resultados terapeuticos positivos. En todos los casos, la experimentacion de rutina en ensayos clrnicos determinara intervalos espedficos para efecto terapeutico optimo.
Los vectores se pueden administrar usando vehfculos de administracion genetica. El vehfculo de administracion genetica puede ser de un origen viral o no viral (por lo general, veanse las referencias 234 a 237).
En la tecnica se conocen bien algunos vectores basados en virus para la administracion y expresion de un acido nucleico deseado en una celula deseada. Algunos vehfculos basados en virus a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan, retrovirus recombinantes (por ejemplo, referencias 238 a 248), vectores basados en virus alfa (por ejemplo, vectores de virus Sindbis, virus del bosque Semliki (ATCC VR-67; ATCC VR-1247), virus del Rfo Ross (ATCC VR-373; ATCC VR-1246) y virus de la encefalitis equina venezolana (ATCC VR-923; ATCC VR-1250; ATCC VR 1249; ATCC VR-532); tambien se pueden usar tubridos o quimeras de estos virus), vectores de virus de la
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viruela (por ejemplo, vaccinia, viruela aviar, viruela del canario, vaccinia Ankara modificado, etc.), vectores de adenovirus, y virus adeno-asociados (AAV) (por ejemplo, veanse las refs. 249-254 ). Tambien se puede usar la administracion de ADN ligado a adenovirus muertos [255].
Tambien se pueden usar algunos vehmulos y procedimientos de administracion que incluyen, pero no se limitan a, ADN condensado policationico unido o no unido a adenovirus muerto solo [por ejemplo 255], ADN ligado a ligando [256], celulas de vehmulos de administracion de celulas eucariotas [por ejemplo, las refs. 257-261] y neutralizacion de carga nucleica o fusion con membranas celulares. Tambien se puede usar ADN desnudo. Algunos procedimientos de introduccion de ADN desnudo a modo de ejemplo se describen en las refs. 262 y 263. Los liposomas (por ejemplo, inmunoliposomas) que pueden actuar como vehmulos de administracion de genes se describen en las refs. 264 a 268. Otros enfoques se describen en las referencias 269 y 270.
La administracion no viral adicional adecuada para uso incluye sistemas de administracion mecanica tales como el enfoque que se describe en la ref. 270. Por otra parte, la secuencia de codificacion y el producto de expresion de este tipo se puede administrar a traves de deposicion de materiales de hidrogel fotopolimerizados o el uso de radiacion ionizante [por ejemplo, las refs 271 y 272]. Otros procedimientos convencionales para administracion genetica que se pueden usar para administrar la secuencia de codificacion incluyen, por ejemplo, el uso de la pistola de partmulas de transferencia genetica portatil [273] o el uso de radiacion ionizante para activar genes transferidos [271 y 272]. La administracion de ADN usando micropartmulas de PLG {poli (lactida-co-glicolido)} es un procedimiento particularmente preferente, por ejemplo, por adsorcion a las micropartmulas, que opcionalmente se tratan para que tengan una superficie con carga negativa (por ejemplo, tratadas con SDS) o una superficie con carga positiva (por ejemplo, tratadas con un detergente cationico, tal como CTAB).
Anticuerpos
Algunos anticuerpos frente a antfgenos neumococicos se pueden usar para inmunizacion pasiva [274]. Por lo tanto, la divulgacion proporciona un anticuerpo que es espedfico para un antfgeno en el primer, segundo o tercer grupos de antfgenos. La divulgacion tambien proporciona un anticuerpo que es espedfico para un antfgeno en el cuarto, quinto, sexto, septimo, octavo, noveno o decimo grupos de antfgenos. La divulgacion tambien proporciona el uso de tales anticuerpos en terapia. La divulgacion tambien proporciona el uso de tales anticuerpos en la fabricacion de un medicamento. La divulgacion tambien proporciona un procedimiento para tratar un mairnfero que comprende la etapa de administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo de la invencion. Como se ha descrito anteriormente para composiciones inmunogenicos, estos procedimientos y cursos permiten proteger a un mamffero frente a infeccion neumococica.
El termino "anticuerpo" incluye moleculas de inmunoglobulina intactas, asf como fragmentos de las mismas que son capaces de unirse a un antfgeno. Estas incluyen moleculas de anticuerpo dbridas (quimericas) [275, 276]; fragmentos de F(ab')2 y F(ab) y moleculas de Fv; heterodfmeros no covalentes [277, 278]; moleculas de Fv de una sola cadena (sFv) [279]; construcciones de fragmento de anticuerpo dimericas y trimericas; minicuerpos [280, 281]; moleculas de anticuerpo humanizado [282-284]; y cualquier fragmento funcional obtenido a partir de moleculas de este tipo, asf como anticuerpos obtenidos a traves de procedimientos no convencionales tales como presentacion de fagos. Preferentemente, los anticuerpos son anticuerpos monoclonales. Algunos procedimientos para obtener anticuerpos monoclonales se conocen bien en la tecnica. Los anticuerpos humanizados o totalmente humanos son preferentes.
General
La practica de la presente invencion usara, a menos que se indique de otro modo, procedimientos convencionales de qmmica, bioqmmica, biologfa molecular, inmunologfa y farmacologfa, dentro de la experiencia en la materia. Tales tecnicas se explican totalmente en la bibliograffa. Veanse, por ejemplo, las referencias 285-292, etc.
La numeracion "GI" se ha usado anteriormente. Un numero GI, o "Identificador de GenInfo", es una serie de dfgitos asignados de forma consecutiva a cada registro de secuencia procesado por el NCBI cuando se anaden secuencias a sus bases de datos. El numero GI no tiene ninguna semejanza con el numero de referencia del registro de la secuencia. Cuando una secuencia se actualiza (por ejemplo, para correccion, o para anadir mas anotacion o informacion) entonces, recibiendo el numero de GI. Por lo tanto, la secuencia asociada con un numero GI dado nunca se cambia.
Cuando la invencion se refiere a un "epftopo", este epftopo puede ser un epftopo de linfocitos B y/o un epftopo de linfocitos T. Tales epftopos se pueden identificar de forma empftica (por ejemplo, usando PEPSCAN [293,294] o procedimientos similares), o se pueden predecir (por ejemplo, usando el mdice antigenico de Jameson-Wolf [295], enfoques basados en matriz [296], MAPITOPE [297], TEPiToPE [298,299], redes neurales [300], OptiMer y EpiMer [301, 302], ADEPT [303], Tsites [304], hidrofilia [305], mdice antigenico [306] o los procedimientos desvelados en las preferencias 307-311, etc.). Los epftopos son las partes de un anftgeno que son reconocidos por y se unen a los sitios de union al anftgeno de anticuerpos o receptores de linfocitos T, y tambien se pueden denominar "determinantes antigenicos".
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Cuando se omite un "dominio" del antigeno, esto puede implicar la omision de un peptido senal, de un dominio citoplasmatico, de un dominio transmembrana, de un dominio extracelular, etc.
La expresion "que comprende" engloba "que incluye" as^ como "que consiste" por ejemplo una composicion "que comprende" X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional, por ejemplo X + Y.
El termino "aproximadamente" en relaciona un valor numerico, x, significa, por ejemplo, x± 10 %.
Las referencias a un porcentaje de identidad de secuencias entre dos secuencias de aminoacidos significan que, cuando se alinean, es el porcentaje de aminoacidos es el mismo al comparar las dos secuencias. Este alineamiento y el porcentaje de homologfa o identidad de secuencias se pueden determinar usando programas de software conocidos en la tecnica, por ejemplo los que se describen en la seccion 7.7.18 de la ref. 312. Un alineamiento preferente se determina con el algoritmo de busqueda de homologfa de Smith-Waterman usando una busqueda de huecos afines con una penalizacion abierta de hueco de 12 y una penalizacion de extension de hueco de 2, matriz BLOSUM de 62. El algoritmo de busqueda de homologfa de Smith-Waterman se desvela en la ref. 313.
Breve descripcion de las figuras
La Figura 1 muestra el curso de la mortalidad de ratones despues de estimulacion bacteriana, seguido durante hasta 10 dfas, despues de inmunizacion con spr0565 o spr1431, en comparacion con el curso de mortalidad de ratones en un grupo de control. La Figura 2 muestra datos similares para antigenos combinados.
La Figura 3 muestra indices bacterianos (CFU/ml) en la sangre de ratones, en comparacion con grupos de ensayo con grupos de control (ctrl). Los cticulos son animales individuales, y la barra es la media geometrica. Los datos son de los grupos de animales: (3A) 0; (3B) 1; (3C) 4; (3D) 6. La Figura 4 muestra datos de supervivencia (dfas) para los mismos grupos. Los diamantes son animales individuales y las barras muestran la media.
La Figura 5 muestra el curso de mortalidad en la Figura 2, pero con diferentes combinaciones de antigeno.
La Figura 6 muestra resultados de experimentos de bacteriemia. El eje Y muestra CFU/ml y los numeros por debajo del eje X muestran los valores de P calculados con el ensayo U.
La Figura 7 muestra resultados de experimentos de mortalidad. El eje Y muestra el tiempo de supervivencia (dfas) y los numeros por debajo del eje X muestran los valores de P calculados con el ensayo U.
La Figuras 8-25 y 28-31 y 33-36 muestran el mismo patron que el de las figuras 6 y 7.
La Figura 26 muestran los resultados de un ensayo de OPKA a dos diluciones de suero (1/12 o 1/36). Cada triplete muestra datos con un control de PBS (parte izquierda), combinacion 1 (parte media) o combinacion 2 (parte derecha). El eje Y muestra el % de mortalidad.
La Figura 27 muestra resultados de los experimentos de OPKA con suero diluido.
La Figura 32 muestra purificacion de genes para Itibridos de spr2021 y spr0096. Las bandas de la parte izquierda son las protemas Itibridas y las bandas en la parte derecha son un patron de BSA (64kDa). La Figura 32A muestra spr2021-spr0096 y la Figura 32B muestra spr0096-spr2021.
Modos para realizar la invencion
Identificacion del antigeno
Se seleccionaron doce polipeptidos neumococicos para investigacion inmunologica. Se enumeraron de acuerdo con el genoma de R6 [84], estos doce son: spr0057; spr0286; spr0565; spr0867; spr1098; spr1345; spr1416; spr1418; spr1431; spr1739; y spr2021.
El antigeno spr0057 se anota como p-N-acetilhexosaminidasa (strH), que escinde N-acetilglucosamina en glicoprotemas humanas [314]. Por lo tanto, la enzima podna facilitar la patogenesis/ colonizacion de seres humanos, y su bloqueo podria ser util para fines de vacunacion. Ademas, la protema se situa en la superficie, estando anclada a LPxTG, y se han observado sueros inmunorreactivos en pacientes convalecientes de neumoma y meningitis [315]. La secuencia de spr0057 esta conservada en un 98,6 % entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. Esta ausente en S. mitis y S. mutans. No hay estudios publicados sobre la eficacia protectora de spr0057 como un inmunogeno. El gen spr0057 de tipo silvestre tiene una longitud de 3939 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion, se uso un fragmento de 3741-mer (que codifica la SEQ ID NO: 180). Cuando se expresa como una protema recombinante etiquetada con His, la actividad enzimatica se observa in vitro cuando se usa un sustrato de 4-nitrofenil-N-acetil-p-D-glucosaminida, pero no cuando se usa un sustrato de 2- nitrofenil-p-D-galactopiranosido. La expresion de spr0057 in vivo por neumococos se controlo en lavados nasales y pulmonares, y estaba fuertemente regulada de forma positiva.
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El antfgeno spr0096 se anota como una protema hipotetica que contiene un motivo de LysM. La secuencia de spr0096 esta conservada en un 99 % entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. El gen de tipo silvestre spr0096 tiene una longitud de 504 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 423-mer (que codifica la SEQ ID NO: 229).
El antigeno spr0286 se anota como hialuronidasa (Hilo), que degrada el acido hialuronico, un componente de la matriz extracelular. La protema se situa en la superficie, estando anclada a LPxTG. The spr0286 La secuencia de 98.8 % esta conservada en un entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. Aunque la hialuronidasa es un factor de virulencia, la referencia 316 informo que la hialuronidasa ni inflrna en el curso clmico de la enfermedad ni tema ningun efecto en la propagacion bacteriana sistemica en el modelo de enfermedad de los autores. El gen spr0286 de tipo silvestre tiene una longitud de 3201 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 1884-mer (que codifica la SEQ ID NO: 182) o fragmento de 1356-mer (que codifica la SEQ ID NO: 183).
El antfgeno spr0565 se anota como p-galactosidasa (BgaA), que escinde la galactosa en glicoprotemas humanas [314]. Por lo tanto, la enzima podna facilitar la patogenesis/ colonizacion de seres humanos, y su bloqueo podna ser util para fines de vacunacion. Ademas, la protema se situa en la superficie, estando anclada a LPxTG, y se han observado sueros inmunorreactivos en pacientes convalecientes de neumoma y meningitis. May reiniciar la secuencia spr0565 esta conservada en un 97,9 % entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. No hay estudios publicados sobre la eficacia protectora de spr0565 como un inmunogeno. El gen spr0565 de tipo silvestre tiene una longitud de 6687 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 6444-mer (que codifica la SEQ ID NO: 184). Cuando se expresa como una protema recombinante etiquetada con His, la actividad enzimatica se observa in vitro cuando se usa un sustrato de 2-nitrofenil-p-D-galactopiranosido, pero no cuando se usa un sustrato de 4-nitrofenil-N-acetil-p-D-glucosaminida. La expresion de spr0565 in vivo por neumococos se controlo en lavados nasales y pulmonares, y estaba fuertemente regulada de forma positiva.
El antfgeno spr0867 se anota como endo-p-N-acetilglucosaminidasa (LytB), que media la separacion celular durante la replicacion bacteriana. La protema esta situada en la superficie, siendo una protema de union a colina [317], y se han observado sueros inmunorreactivos en pacientes convalecientes. La secuencia de spr0867 esta conservada en un 98,8 % entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. Se ha informado que es un inmunogeno protector cuando se usa sola [318]. Algunas variaciones alelicas se discuten en la referencias 319. El gen de tipo silvestre spr0867 tiene una longitud de 2109 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 2040-mer (que codifica la SEQ ID NO: 185).
El antfgeno spr1098 se anota como sortasa A (srtA), que ancla protemas del motivo LPXTG a la superficie neumococica. La protema esta situada en la membrana. La secuencia de spr1098 esta conservada en un 100% entre 22 diferentes cepas neumococicas, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. Algunos detalles adicionales sobre el polipeptido se proporcionan en las referencias 320 y 321. No hay estudios publicados sobre la eficacia protectora de spr1098 como un inmunogeno. El gen de tipo silvestre spr1098 tiene una longitud de 744 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 654-mer (que codifica la SEQ ID NO: 187).
El antfgeno spr1345 se anota como protema de la familia de anclaje de la superficie de la pared celular, una adhesina que se une a las mucinas. La protema se situa en la superficie, estando anclada a LPxTG. La secuencia de spr1345 esta conservada en un 100% entre 22 cepas neumococicas diferentes, aunque diferentes cepas tienen diferentes numeros de secuencias de repeticion, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. Algunos detalles adicionales sobre polipeptido se proporcionan en la referencia 322. No hay estudios publicados sobre la eficacia protectora de spr1345 como un inmunogeno. El gen de tipo silvestre spr1345 tiene una longitud de 609 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 495-mer (que codifica la SEQ ID NO: 188).
El antfgeno spr1416 se anota como una protema hipotetica, y parece que es citoplasmatico. Tiene una funcion desconocida, pero la secuencia de spr1416 esta conservada en un 100 % entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. No hay estudios publicados sobre spr1416. El gen de tipo silvestre spr1416 tiene una longitud de 387 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 381-mer.
El antfgeno spr1418 se anota como una protema hipotetica conservada. La protema esta situada en la superficie, basandose en la presencia de un peptido lfder. Tiene una funcion desconocida, pero se han observado sueros inmunorreactivos en pacientes convalecientes de neumoma y meningitis. La secuencia de spr1418 esta conservada en un 99,8 % entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. No hay estudios publicados sobre spr1418. El gen de tipo silvestre spr0481 tiene una longitud de 780 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 705-mer.
El antfgeno spr1431 se anota como lisozima (LytC), que media la autolisis. La protema se situa en la superficie, estando anclada a LPxTG, pero se han observado sueros inmunorreactivos en pacientes convalecientes de neumoma y meningitis. La secuencia de spr1431 esta conservada en un 98% entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. Algunos detalles adicionales sobre el polipeptido se
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proporcionan en las referencias 323 y 324. Algunos datos de proteccion con LytC se informan en la referencia 318. El gen de tipo silvestre spr1431 tiene una longitud de 1506 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 1407-mer (que codifica la SEQ ID NO: 189).
El antigeno spr1739 es la neumolisina, una toxina formadora de poros citoplasmaticos secretada. Se han observado sueros inmunorreactivos en pacientes convalecientes de neumoma y meningitis. La secuencia de spr1739 esta conservada en un 100% entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. La neumolisina se ha usado anteriormente en combinacion con CbpA (PspC) [325] u otros antigenos [2] para inmunizacion.
El antfgeno spr2021 se anota como una protema de 45 kDa secretada (PcsB). Es una hidrolasa esencial implicada en la separacion de celulas en division, e inicialmente se identifico porque se observaban sueros inmunoreactivos en pacientes convalecientes de neumoma y meningitis. La secuencia de spr2021 esta conservada en un 100% entre 22 cepas neumococicas diferentes, y por lo tanto puede ofrecer una amplia proteccion. Se ha confirmado como un candidato a vacuna lfder en la referencia 78. Algunos detalles adicionales sobre el polipeptido PcsB se proporcionan en las referencias 326 y 327. El gen spr2021 de tipo silvestre tiene una longitud de 1179 nucleotidos, pero para fines de inmunizacion se uso un fragmento de 1098-mer (que codifica la SEQ ID NO: 190).
Un criterio para seleccionar estos genes es su alto nivel de conservacion a traves de un panel de 22 cepas neumococica se incluyen cepas representativas de diferentes serogrupos patogenos. Hay varios genes neumococicos que estan presentes en todas las secuencias genomicas publicadas en la actualidad, con un nivel elevado de identidad de secuencias, pero que estan ausentes en al menos una cepa en el panel. Por lo tanto, los genomas actuales pueden dar una impresion equivocada de que un gen en particular esta conservado. Por ejemplo, una protema de la familia (DAACS) de cotransportador de dicarboxilato/aminoacido:cation (Na+ o H+) esta presente en los genomas de las cepas SP3-BS71, SP6-BS73, SP9-BS68, SP11-BS70, SP14-BS69, SP18-BS74, SP19-BS75, SP23-BS72, CGSP14, D39, R6 y TIGR4, pero no se observan las cepas JJA y P1031.
Tanto spr0057 como spr0565 son exoglicosidasas de superficie expuesta que desglicosilan protemas hospedadoras. Ambos antfgenos son enzimaticamente activos in vitro cuando se expresan en forma etiquetada con His, como se muestra usando un sustrato tal como 4-nitrofenil-N-acetil-p-D-glucosaminida.
Todos los antfgenos spr0096, spr0867, spr1431 y spr2021 pueden ser peptidoglicano hidrolasas.
Ensayo de eficacia
Se usaron diversos sistemas de modelo de enfermedad neumococica para someter a ensayo la eficacia de los inmunogenos. En un modelo de raton de infeccion intraperitoneal, los antfgenos se administraron por via intraperitoneal y la estimulacion fue intraperitoneal. Se inmunizaron ratones BALB/c hembra libres de patogenos espedficos, de seis semanas de edad por via intraperitoneal los dfas 0, 14, y 28. Las inmunizaciones se realizaron usando protemas recombinantes individuales (20 jg/raton) o con una combinacion de las mismas (10 |jg cada una/raton), junto con hidroxido de aluminio o adyuvante de Freund. Los controles recibieron cursos identicos de solucion salina mas adyuvante. A continuacion, los ratones se estimularon por via intraperitoneal con una dosis letal de una cepa homologa o heterologa (D39, TIGR4, SP-PD, PT131, Strep-5, 35Bsme15). Las dosificaciones bacterianas usadas fueron por lo general: 5 x 105 CFU/raton de D39, aproximadamente 102 CFU/raton de TIGR4, o aproximadamente 5,4 x104 CFU/raton de SP-PD. En algunos casos, se realizaron experimentos similares en ratones CD1, ajustando la dosis de estimulacion para conseguir infeccion y mortalidad. La eficacia de la inmunizacion se somete a ensayo mediante la evaluacion del efecto de la vacunacion en bacteriemia (a las 5 y/o 24 horas despues de la infeccion) y la mortalidad (controlada durante 10 dfas despues de estimulacion bacteriana o un periodo superior, dependiendo de la cepa de infeccion).
En un modelo de transferencia pasiva, se administraron sueros frente a las protemas recombinantes por via intraperitoneal y la estimulacion fue intraperitoneal. Se desarrollaron antisueros en ratones inmunizados por via intraperitoneal como se ha descrito anteriormente. Los ratones BALB/c de 10 semanas de edad recibieron 50 jl de suero inmune por via intraperitoneal 15 min antes de la estimulacion. Los controles recibieron cursos identicos de solucion salina mas adyuvante. Los ratones se estimularon a continuacion por via intraperitoneal.
En un modelo de infeccion intravenosa, los antfgenos se administraron por via intraperitoneal y la estimulacion fue intravenosa. Los ratones CD-1 de cinco semanas de edad se inmunizaron por via intraperitoneal los dfas 0, 14, y 28. Las inmunizaciones se realizaron usando protemas recombinantes de forma individual (20 jg/raton) o con una combinacion de las mismas (10 jg de cada una/raton), junto con adyuvante de Freund. Los controles recibieron cursos identicos de solucion salina mas adyuvante. A continuacion, los ratones se estimularon por via intravenosa con una dosis letal de una cepa homologa o heterologa (D39 o TIGR-4). Las dosificaciones bacterianas usadas fueron: aproximadamente 105 CFU/raton de D39, 2 x 106 cFu/raton de TIGR-4, aproximadamente 107 CFU/raton de PT131, aproximadamente 104 CFU/raton de Strep-5, aproximadamente 2 x 107 CFU/raton de 35Bsme15. La eficacia de los candidatos a vacuna se somete a ensayo mediante la evaluacion del efecto de la vacunacion en bacteriemia (a las 48 horas despues de la infeccion) y la mortalidad (controlada durante 10 dfas despues de estimulacion bacteriana o un periodo superior, dependiendo de la cepa de infeccion).
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En un modelo de infeccion intranasal, los antigenos se administraron por v^a intranasal, y la estimulacion fue intranasal. Los ratones C57BL/6 de seis semanas de edad se inmunizaron por via intranasal los dfas 0, 16 y 32. Las inmunizaciones se realizaron usando protemas recombinantes (20 pg/raton) junto con adyuvante LTK63. Los controles recibieron cursos identicos de LTK63 o PBS. Los ratones se estimularon con 106 CFU de TIGR4. La eficacia de los candidatos a vacuna se somete a ensayo mediante la evaluacion del efecto de la vacunacion en mortalidad (controlada durante 2-3 semanas despues de la estimulacion bacteriana) y en una colonizacion nasofarrngea en infeccion pulmonar. Otros experimentos se realizaron con diferentes cepas de raton y bacterianas y administrando los antigenos bien por via mucosal o por via sistemica.
Estudios de inmunogenicidad y proteccion con antigenos individuals
Los siguientes antigenos se sometieron a ensayo de forma individual en un modelo de raton: spr0057; spr0286; spr0565; spr0867; spr1098; spr1345; spr1416; spr1418; spr1431; y spr2021. El antigeno spr2086 se dividio en dos dominios y se sometio a ensayo como spr2086A y spr2086B. Los antigenos se trataron con adyuvante con adyuvante de Freund y se sometieron al ensayo en ratones CD1 y/o BALB/c. La estimulacion se realizo con cualquiera de la cepa D39 o TIGR4 de neumococos, mediante cualquiera de una via intravenosa (i.v.) o intraperitoneal (i.p.). Cada grupo inclrna al menos 8 ratones. Un grupo de control recibio adyuvante en solucion salina tamponada con fosfato. La cepa TIGR4 es muy virulenta, y por lo tanto una proteccion frente a la estimulacion con esta cepa indica un nivel de eficacia elevado.
En terminos de bacteriemia, los resultados se determinaron midiendo CFU/ml en la sangre de animales inmunizados y de control, 24 horas despues de la estimulacion. Ademas, los numeros de animales infectados en ambos grupos se compararon usando el ensayo U de Mann-Whitney de una cola. Los resultados fueron los que siguen a continuacion:
Ag
Ratones Cepa Via de Estimulacion CFU/ml (media geometrica) Numero de infectados
Ensayo
Control Proporcion Ensayo Control P
0057
CD1 D39 i.v. 6,15 E+03 9,22 E+04 15,0 11/9 5/15 0,064
0057
BALB/c D39 i.p. 1,77 E+05 5,76 E+06 32,5 2/8 0/9 0,056
0286A
CD1 D39 i.v. 1,25 E+02 1,70 E+04 135,2 19/1 10/10 0,005
0286B
BALB/c D39 i.p. 6,26 E+02 5,38 E+04 85,9 3/5 1/6 0,027
0565
CD1 D39 i.v. 2,44 E+02 8,0 E+04 327,6 15/5 5/15 0,000
0867
CD1 D39 i.v. 2,97 E+03 9,16 E+04 30,9 6/4 3/7 0,095
1098
CD1 D39 i.v. 2,49 E+03 3,47 E+05 139,6 6/4 3/7 0,062
1098
BALB/c D39 i.p. 9,91 E+03 4,18 E+06 421,3 3/4 0/8 0,007
1098
BALB/c TIGR4 i.p. 1,06 E+03 1,91 E+05 180,9 4/4 0/8 0,007
1345
CD1 D39 i.v. 4,24 E+02 1,77 E+05 417,7 7/3 4/6 0,038
1345
BALB/c D39 i.p. 5,87 E+03 7,99 E+05 136,1 1/7 0/16 0,011
1416
BALB/c TIGR4 i.p. 5,56 E+04 1,66 E+06 29,8 0/8 1/15 0,077
1418
BALB/c D39 i.p. 6,53 E+03 7,99 E+05 122,4 2/6 0/16 0,004
1431
CD1 D39 i.v. 4,68 E+02 2,74 E+05 585,5 13/7 6/14 0,002
2021
CD1 D39 i.v. 1,63 E+04 6,05 E+04 3,7 10/10 6/14 > 0,1
2021
BALB/c TIGR4 i.p. 1,69 E+05 1,19 E+06 7,1 0/8 1/15 0,040
En terminos de supervivencia, los resultados se determinaron midiendo la supervivencia media (en dfas) por grupo. Ademas, los numeros de animales que sobreviven en ambos grupos se compararon usando un ensayo U de Mann- Whitney de una cola. Los resultados se encuentran en la tabla que sigue a continuacion. Ademas, el numero de ratones que sobrevive se siguio en el tiempo, y un ejemplo de tales datos se muestra en la Figura 1.
Ag
Ratones Cepa Via Supervivencia (dias) Vivos/muertos
Ensayo
Control Ensayo Control P
0057
CD1 D39 i.v. > 10,5 5,5 11/9 5/15 0,064
0057
BALB/c D39 i.p. 4 2,5 3/7 0/9 0,067
0286A
CD1 D39 i.v. > 10,5 7,5 17/3 9/11 0,006
0286B
BALB/c D39 i.p. 8 5,5 4/4 2/5 > 0,1
0565
CD1 D39 i.v. > 10,5 5 14/6 6/14 0,002
0867
CD1 D39 i.v. > 11,5 6,5 6/4 3/7 > 0,1
1098
CD1 D39 i.v. > 10,5 6 6/4 3/7 > 0,1
1098
BALB/c D39 i.p. 5,5 4,5 3/4 1/7 > 0,1
1098
BALB/c TIGR4 i.p. 6,5 2,5 3/5 1/7 0,032
1345
CD1 D39 i.v. > 10,5 4,5 8/2 3/7 0,018
1345
BALB/c D39 i.p. 4,5 4 3/5 3/13 > 0,1
1416
BALB/c TIGR4 i.p. 3 1,5 2/6 1/15 0,086
1418
BALB/c D39 i.p. 5,5 4 3/5 3/13 > 0,1
1431
CD1 D39 i.v. > 10,5 4,5 15/5 6/14 0,002
2021
CD1 D39 i.v. > 10,5 4,5 11/9 4/17 0,061
2021
BALB/c TIGR4 i.p. 2 1,5 2/6 0/16 > 0,1
Por lo tanto, para todos los antigenos sometidos a ensayo, se produjo una reduccion sustancial de la bacteriemia y/o un aumento de la supervivencia.
En resumen, cuatro antigenos preferentes son eficaces frente a las cepas de serotipo 2, 3, 4 y 35B como sigue a 5 continuacion:
OPKA Tipo 2 Tipo 3 Tipo 4 Tipo 35
spr0057
+/- + + - + -
spr0096
+ + + + + + +
spr0565
+ + + + + + + -
spr2021
+ + +/- - +/- ?
Aunque el serotipo 4 esta cubierto con las vacunas de conjugado actuales, los serotipos 2, 3 y 35B no lo estan. Estudios de inmunogenicidad y proteccion con antigenos combinados
Las siguientes combinaciones de antigenos se sometieron a ensayo en el mismo modelo de razon que los antigenos 10 individuales: (1) spr0057 + spr0096 + spr2021; (2) spr0057 + spr0o96 + spr2021; (3) spr0057 + spr0096 + spr2021; (4) spr0057 + spr2021; (5) spr0057 + spr0565 + spr2021. Ademas, un grupo de control (0) se inmunizo un con una combinacion de PspC y una neumolisina detoxificada ('Ply-detox') [325], y un grupo (6) recibio una combinacion de spr0565 + spr2021 + Ply-detox. Los resultados fueron los que siguen a continuacion:
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CFU/ml (media geometrica) Numero de infectados Supervivencia Vivos/muertos
Ensayo
Control Proporcion Ensayo Ctrl P Ensayo Ctrl Ensayo Ctrl P
0
1,70 E+05 9,60 E+06 56,5 4/26 0/30 0,009 4,5 1 12/18 2/28 <0,001
1
4,21 E+03 1,19 E+06 283,4 0/8 1/15 0,001 > 10,5 4 6/2 0/16 <0,001
2
3,87 E+04 1,40 E+06 36,2 2/6 1/7 0,065 5 1,5 3/5 2/6 > 0,1
3
1,18 E+03 4,21 E+04 35,5 7/3 3/7 0,062 > 10,5 7 7/3 3/7 > 0,1
4
1,07 E+04 3,44 E+05 32,0 1/7 1/15 0,014 5,5 1,5 2/6 3/13 0,019
5
3,48 E+02 4,21 E+04 120,8 7/3 3/7 0,026 > 10,5 7 8/2 3/7 0,018
6
1,62 E+03 3,16 E+05 194,6 7/3 1/9 0,014 > 10,5 3,5 7/3 1/9 0,014
Los datos de bacteriemia para los grupos 0, 1,4 y 6 se muestran en la Figura 3. Los datos de supervivencia para los mismos grupos se muestran en la Figura 4. Los datos de supervivencia para los grupos 1 y 5 se muestran en la Figura 2.
En experimented adicionales, los ratones recibieron (7) spr0565 + spr2021 o (8) spr2021 + Ply-detox. Los datos de supervivencia para los grupos 6, 7 y 8 se encuentran en la Figura 5.
En experimented adicionales, los ratones recibieron una combinacion de spr0565, PmP y spr2021. Los sueros se sometieron a ensayo en el ensayo opsonofagocftico de muerte (OPKA). Los resultados se encuentran en la Figura 27. Se necesito una dilucion de 10.000 -veces antes de que la actividad suero inmune disminuyera a niveles de control.
Combinacion 1 a Combinacion 4
Se prepararon cuatro combinaciones de antfgenos diferentes:
Combinacion 1: spr0057 + spr0096 + spr2021.
Combinacion 2: spr0057 + spr0565 + spr2021.
Combinacion 3: spr0057 + spr0096 + spr0565.
Combinacion 4: spr0057 + spr0096 + spr0565 + spr2021.
Los conejos se inmunizaron y sus sueros inmunes se transfirieron en ratones BALB/c para someter a ensayo la proteccion pasiva frente a la cepa TIGR4.
Los ratones tambien se inmunizaron y a continuacion se sometieron a ensayo en modelos de estimulacion usando cepas que inclman TIGR4 (estimulacion i.p.) y D39, PT131 y TREP6A (estimulacion i.v.). La cepa TIGR4 es el serotipo 4, que esta cubierto con Prevnar™ (cepas 'VT'), pero las otras 3 cepas son los serotipos 2, 3 y 6A, que no estan cubiertos con Prevnar™ (cepas 'NVT'). Los serotipos 3, 4 y 6A estan cubiertos con las vacunas de de sacarido 13-valente propuestas [328], pero las cepas del serotipo 2 no estan.
Las Figuras 6 y 7 muestran los resultados obtenidos en el ensayo de transferencia pasiva. La combinacion 1 y la combinacion 2 proporcionaron al menos una reduccion log de la bacteriemia (Fig. 6) y dio como resultado un tiempo de supervivencia de al menos 10 dfas (Fig. 7). La eficacia no mejoro con el aumento de la dosificacion a 50 |jg de cada antfgeno.
Las Figuras 8 y 9 muestran resultados obtenidos en el modelo de estimulacion usando la cepa PT131. La combinacion 1 y la combinacion 2 fueron de nuevo eficaces, con la combinacion 2 siendo superior. Las Figuras 10 y 11 muestran resultados obtenidos en el modelo de estimulacion usando 1,1 x 104CFU de la cepa STREP-5 despues de inmunizacion con la combinacion 1.
La Figura 12 muestra la reduccion en CFU/ml 24 horas despues de la estimulacion con OREP-3. Tanto la combinacion 1 como la combinacion 2 son eficaces.
Las Figuras 13 y 14 muestran resultados obtenidos despues de estimulacion de ratones inmunizados con la combinacion 2 con TREP-6A.
Como se muestra en la Figura 17, la combinacion 1 disminuye la bacteriemia despues de una estimulacion intra nasal con una dosis elevada (1,1 x 107 cfu) con TIGR4, aunque la colonizacion nasal y la infeccion pulmonar no se
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vieron afectadas. Usando una estimulacion intranasal subletal en el ultimo estadio de la infeccion, las figuras 18-22 muestra que la combinacion 1 es eficaz.
La eficacia frente a la estimulacion intranasal con la cepa 14-Spain-15 se muestran en las Figuras 23 (lavado nasal, 48 horas) y 24 (lavado pulmonar, 48 horas).
La Figura 25 presume la mortalidad despues de la estimulacion con TIGR-4 (estimulacion i.p.; Fig. 25A) o con D39, PT131 o TREP6A (estimulacion i.v.; Fig. 25B) despues de inmunizacion con la combinacion 2.
Por lo tanto, la inmunizacion con la combinacion 1 o con la combinacion 2 es eficaz frente a la infeccion con una gran diversidad de cepas neumococicas.
La Figura 26 muestra resultados de OPKA obtenidos usando el suero de animales de control o de animales inmunizados con la combinacion 1 o con la combinacion 2. Se observan grandes aumentos de la actividad de OPKA usando la combinacion 2 a una dilucion tanto de 1/12 como de 1/36.
La combinacion 1 se modifico mediante la adicion de spr1416, spr1418 o spr1431. Como se muestra en las Figuras 15 y 16, la combinacion 1 mantiene su eficacia frente a la estimulacion con TIGR4 incluso cuando se anaden estos tres antigenos.
La combinacion 1, que incluye tres antigenos, tambien se comparo con una combinacion de dos de esos tres antfgenos (spr0057 + spr2021) usando inmunizacion intranasal y estimulacion intranasal. Aunque las dos combinaciones presentaban una pequena diferencia en terminos de mortalidad o bacteriemia (tanto despues de 24 horas como de 10 dfas) usando TIGR4 como una cepa de estimulacion, los lavados nasales y pulmonares despues de 10 dfas presentaban reducciones significativas (Figuras 33 y 34). Tambien se observan buenos resultados cuando se usa en 14-Spain15 como la cepa de estimulacion (Figuras 35 y 36).
La combinacion 1 tambien se comparo con spr0565 solo. Aunque spr0565 reducfa la bacteriemia despues de 24 horas, el efecto no se observaba despues de 48 horas. Por el contrario, la eficacia de la combinacion 1 llego a ser evidente solamente despues de 48 horas. No se observo eficacia frente a la colonizacion nasal por la infeccion pulmonar. En resumen, los resultados mas representativos con la combinacion 1 fueron los que siguen a continuacion:
Estimulacion
Bacteriemia Supervivencia
Media geom. CFU ensayo U media de dias ensayo U
Serotipo-cepa
via dosis Combinacion Control P Combinacion Control P
02-D39
ip 1,1 E+03 1,9 E+04 1,1 E+05 0,253 6,25 1,5 0,097
02-D39
iv 2,1 E+05 3,4 E+04 4,5 E+06 0,038 9 2,5 0,022
03-0REP3
ip 4,5 E+03 1,7 E+03 2,5 E+04 < 0,001 2,5 2,5 0,117
04-TIGR4
in 4,5 E+06 1,2 E+02 8,5 E+02 0,164 - - -
04-TIGR4
in 1,1 E+07 7,9 E+03 2,1 E+05 0,047 - - -
04-TIGR4
ip 1,1 E+02 4,2 E+03 1,2 E+06 0,001 10,5 1,5 < 0,001
04-TIGR4
ip 1,5 E+02 1,6 E+04 3,4 E+05 0,053 5,5 1,5 0,096
04-TIGR5
ip 7,0 E+01 1,5 E+02 2,6 E+05 < 0,001 10,5 1,5 0,025
04-TIGR4
iv 3,2 E+06 1,1 E+04 4,1 E+06 0,007 11,5 5 0,018
05-STREP5
iv 1,1 E+04 4,4 E+03 7,7 E+04 0,045 6,5 4,5 0,036
06B-Finland12
ip 5,0 E+04 6,6 E+03 5,2 E+06 0,001 5,5 1,5 0,164
19F-5167
iv 7,0 E+07 7,8 E+03 1,5 E+05 0,032 7,5 3,5 0,062
35B-SME15
iv 4,5 E+07 1,3 E+04 1,8 E+05 0,083 9 5,5 0,095
En resumen, los resultados mas representativos con la combinacion 2 fueron los que siguen a continuacion:
Estimulacion
Bacteriemia Supervivencia
Media geom. CFU ensayo U media de dias ensayo U
Serotipo-cepa
via dosis Combinacion Control P Combinacion Control P
02-D39
iv 1,6 E+05 3,5 E+02 4,2 E+04 0,026 10,5 7 0,018
03-0REP3
ip 4,5 E+03 2,0 E+03 2,5 E+04 0,019 3,5 2,5 0,005
03-PT131
iv 9,0 E+06 2,5 E+02 8,3 E+03 0,003 10,5 7 0,012
04-TIGR4
ip 1,5 E+02 6,3 E+02 6,5 E+04 0,007 10,5 2,5 0,005
04-TIGR5
ip 7,0 E+01 1,1 E+03 3,9 E+04 0,032 10,5 9 0,139
04-TIGR4
iv 2,8 E+06 2,3 E+03 1,8 E+04 0,176 9,5 5,5 0,158
05-STREP5
iv 9,0 E+03 1,7 E+04 1,1 E+05 0,083 6,5 5,5 0,072
06A-TREP-6A
iv 3,5 E+07 1,8 E+05 7,7 E+07 0,007 10,5 2,5 0,004
06B-Finland12
ip 5,0 E+04 5,7 E+05 5,2 E+06 0,014 1,5 1,5 0,191
35B-SME15
iv 6,8 E+07 2,7 E+04 1,1 E+06 0,045 6,5 5 0,095
En resumen, los resultados mas representativos con la combinacion 4 fueron los que siguen a continuacion:
Estimulacion
Bacteriemia Supervivencia
Media geom. CFU ensayo U media de dias ensayo U
Serotipo-cepa
via dosis Combinacion Control P Combinacion Control P
02-D39
iv 2,3 E+05 1,9 E+04 3,3 E+06 0,032 8,5 3,5 0,053
03-0REP3
ip 4,5 E+03 9,3 E+02 2,5 E+04 0,032 3,5 2,5 0,005
03-PT131
iv 9,0 E+06 5,8 E+02 5,1 E+03 0,045 10,5 6,5 0,176
04-TIGR4
ip 1,4 E+02 2,6 E+02 7,9 E+03 0,041 10,5 7 0,052
04-TIGR4
iv 3,5 E+06 4,8 E+03 1,7 E+05 0,072 10 6,5 0,095
05-STREP5
iv 8,5 E+03 2,2 E+03 3,7 E+04 0,083 9 6,5 0,109
Por lo tanto las combinaciones proporcionan una buena proteccion frente a la bacteremia y un aumento de la 5 supervivencia.
Inmunizacion intranasal de ratones con antigenos de pilus
Un modelo de raton se uso para caracterizar el potencial protector de las protemas RrgA, RrgB y RrgC de pilus neumococicos. La inmunizacion intranasal de protemas de pilus recombinantes combinadas con el mutante LTK63 de enterotoxina termolabil de E. coli no toxico como adyuvante provoco respuestas de IgA e IgG en suero. Ademas, 10 la inmunizacion con el componente principal del pilus (RrgB) condujo a la disminucion de la carga bacteriana de la cepa TIGR4 invasiva en nasofaringe, pulmones y sangre y proporciono un aumento de la supervivencia de 5 veces. No se produjo efecto en portadores nasofarmgeos asintomaticos de una cepa no invasiva, lo que apunta a la restriccion del efecto protector observado a una infeccion fulminante.
Los ratones C57BL/6 hembra de seis semanas de edad se inmunizaron por via intranasal 3 veces (intervalo de 2 15 semanas) con 10 jl de PBS conteniendo cualquiera de 20 |jg de RrgA, RrgB o RrgC recombinante o una mezcla de 10 jg de cada uno. Las protemas teman una etiqueta de afinidad y usaban la secuencia de la cepa TIGR4. Todas las soluciones de protema se administraron junto con 2 jg de LTK63. Los controles recibieron 2 jg de LTK63 en PBS, o solamente PBS. Una semana despues de la inmunizacion final, se tomaron muestras de suero para
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determinar los tttulos de anticuerpos por ELISA. Los ratones se estimularon por v^a intravenosa con 0,5-1 x107 cfu/raton de neumococos TIGR4 invasivos o la cepa 19F de serotipo colonizante. Los ratones se sacrificaron despues de superar una puntuacion clmica definida tal como lo aprueba el comite local para experimented con animales. De siete a nueve dfas despues de la infeccion, los ratones que sobreviven se sacrificaron. Se recuperaron las muestras de sangre, los pulmones y una muestra nasofarmgea-traqueal de lavado abundante. Las bacterias viables se cuantificaron mediante sembrado en serie de muestras de sangre. Los pulmones se pesaron, se homogeneizaron en PBS que contema coctel inhibidor de proteasa y se usaron para la cuantificacion de bacterias viables. Para determinar el numero de bacterias en el tracto respiratorio superior, la nasofaringe-traquea se lavaron post mortem con 30 pl de PBS insertando un cateter de calibre 20 en la traquea proximal y recogiendo el lavado de los orificios nasales y se realizo una siembra en serie. Para determinar la colonizacion se uso una camara de una manera no invasiva mediante la determinacion de la intensidad de la luminiscencia en la nasofaringe, pulmones, ofdos y torrente sangumeo de ratones anestesiados. Se considero que un umbral de 300 p/seg/cm2/sr en la zona nasal era suficiente para indicar una colonizacion satisfactoria.
La inmunizacion intranasal con protemas de pilus provoco una respuesta sistemica de IgA e IgG. Los tftulos de suero de IgA mostraban que los ratones inmunizados con protemas de pilus individuales aumentaban una respuesta de IgA a los antfgenos respectivos. No se observo respuesta a las otras dos protemas, lo que muestra que las protemas de pilus individual no provocan anticuerpos de reaccion cruzada. Los ratones inmunizados con las 3 protemas teman niveles de IgA en suero comparables con las inmunizaciones individuales, aunque los niveles de anticuerpos con respecto a RrgA eran mas bajos. Se obtuvieron resultados similares para niveles en suero de IgG. En resumen, una respuesta inmune, que comprende tanto IgA como IgG aumenta despues de la inmunizacion intranasal con cualquiera de las tres protemas de pilus, pero no con los controles.
Despues de la inmunizacion, los ratones se infectaron por via intranasal con una dosis elevada de la cepa TIGR4 invasiva. El analisis de las tasas de supervivencia mostraba diferencias significativas entre los diferentes grupos. Solamente un 10% de los ratones inmunizados con PBS y un 20% de los ratones inmunizados con LTK63 sobrevivieron a la estimulacion. Los ratones presentaban recuentos bacterianos de 1 x 105-109 bacterias por ml de sangre y la mayona de estos ratones sucumbieron a la enfermedad neumococica en 96 horas despues de la infeccion. La inmunizacion con RrgB mas LTK63 aumento la supervivencia de un 10 % (en el grupo de control de ratones inmunizados con PBS) a un 55% (p = 0,0001). Tambien aumento de forma significativa (p = 0,016) la supervivencia en comparacion con el grupo que recibfa solamente el adyuvante. Una mezcla de vacuna de RrgA, RrgB y RrgC presentaba la misma proteccion que la vacunacion con RrgB solo (p = 0,002, aumentaba la supervivencia de un 10 % a un 45 % en comparacion con ratones inmunizados con PBS). Ademas, los recuentos bacterianos en el torrente sangumeo, pulmones y nasofaringe se vefan reducidos de forma significativa en ratones inmunizados con RrgB en comparacion con los grupos de control. Comparado con ratones inmunizados con PBS, los recuentos bacterianos medios se redujeron de 1,5 x106 cfu/ml a 1,0 x 100cfu/ml (p = 0,067) en el torrente sangumeo, de 5x104 cfu/mg de tejido a 1,5 x101 cfu/mg de tejido (p = 0,001) en los pulmones y de 7x103 a 4,5 x 102 (p = 0,0002) en la nasofaringe. Por lo tanto, los ratones inmunizados con protemas RrgB basadas en TIGR4 junto con el adyuvante mucosal LTK63 presentaban un aumento significativo de la supervivencia despues de la estimulacion intranasal con TIGR4 en comparacion con los ratones de control no vacunados.
La inmunizacion no condujo a un aumento de la eliminacion de los neumococos colonizantes de la nasofaringe. A diferencia de TIGR4, anteriormente se mostro que una cepa 19F del serotipo de tipo 162 de secuencia no era invasiva incluso despues de una estimulacion intranasal con una dosis elevada. Esta cepa hipercolonizante expresa pili que pertenecen al mismo clado que TIGR4. Solamente 1 aminoacido (A645V) se diferencia en la protema RrgB entre las dos cepas. Los ratones inmunizados con RrgB se estimularon con esta cepa 19F, tambien modificada por ingeniena para expresar luciferasa. Los grupos de control recibieron LTK63 o PBS, solamente. Las IgG e IgA en suero frente a RrgB se determinaron por ELISA y los valores eran similares a los observados en los experimentos previos. Los ratones se llegaron a colonizar con aparicion intermitente principalmente de otitis media y neumoma subclmicas. La colonizacion se determino 24-216 horas despues de la infeccion. Para el grupo de control tratado con PBS, el porcentaje de ratones colonizados variaba entre un 25% (48 h p.i) un 70% (96 h p.i.). La tasa de colonizacion baja inicial aumento con el tiempo con un suceso de eliminacion final teniendo efecto despues de 96 horas. Las mismas observaciones se hicieron para los ratones inmunizados con LTK63 y RrgB, pero con un desplazamiento hacia una eliminacion mas temprana de ~24 horas. No se pudo observar diferencia significativa en los sucesos de colonizacion y/o eliminacion entre ratones de control e inmunizados con RrgB. La aparicion de otitis media y neumoma era generalmente baja, con un maximo de un 10% de aparicion en cada grupo. No se pudo establecer diferencia significativa entre los grupos. Por ultimo, los recuentos bacterianos en la nasofaringe se determinaron despues del sacrificio de los animales 9 dfas despues de la infeccion. Los ratones de los tres grupos presentaban cantidades similares de bacterias en la nasofaringe (2,8 - 4,4 x103 por lavado). Un maximo de colonizacion se observo aproximadamente 96 horas despues de la infeccion.
Polipeptidos hibridos
Se han fabricado hteridos con pares de spr0057, spr0096, spr0565 (opcionalmente en la forma spr0565A o La forma spr0565B), spr2021 y RrgA. Se han construido, expresado y purificado diversos emparejamientos. Por ejemplo, la Figura 32 incluye dos geles que muestran los pares spr2021-spr0096 y spr0096-spr2021 purificados (> 1 mg/ml, > 80 % puro), ambos con un peso molecular de ~61 kDa. Aunque ambos hteridos se pudieron expresar y purificar en
forma soluble, el hforido spr2021-spr0096 era mucho mas soluble que el hforido spr0096-spr2021.
Se han preparado las siguientes secuencias de hforidos (que tienen la formula NH2-A-{-X-L-}2-B-COOH):
A
Xi Li X2 L2 B SEQ ID
M
spr2021 SEQ ID 233 spr0057 LE Hisa 193
M
spr2021 SEQ ID 233 spr0096 LE Hisa 194
M
spr2021 SEQ ID 233 spr0565 SEQ ID 235 Hisa 195
M
spr2021 SEQ ID 233 spr0565A SEQ ID 235 Hisa 19a
M
spr2021 SEQ ID 233 spr0565B SEQ ID 235 Hisa 197
MAS
spr2021 SEQ ID 233 RrgA LE Hisa 198
M
spr0057 SEQ ID 233 spr2021 SEQ ID 235 Hisa 199
M
spr0057 SEQ ID 233 spr0096 LE Hisa 200
M
spr0057 SEQ ID 233 RrgA LE Hisa 201
M
spr0057 SEQ ID 233 spr0565 SEQ ID 235 Hisa 202
M
spr0057 SEQ ID 233 spr0565A SEQ ID 235 Hisa 203
M
spr0057 SEQ ID 233 spr0565B SEQ ID 235 Hisa 204
M
spr0096 SEQ ID 233 spr2021 SEQ ID 235 Hisa 205
M
spr0096 SEQ ID 233 spr0057 LE Hisa 20a
M
spr0096 SEQ ID 233 RrgA LE Hisa 207
M
spr0096 SEQ ID 233 spr0565 SEQ ID 235 Hisa 208
M
spr0096 SEQ ID 233 spr0565A SEQ ID 235 Hisa 209
M
spr0096 SEQ ID 233 spr0565B SEQ ID 235 Hisa 210
MAS
RrgA SEQ ID 233 spr2021 SEQ ID 235 Hisa 211
MAS
RrgA SEQ ID 233 spr0565 SEQ ID 235 Hisa 212
MAS
RrgA SEQ ID 233 spr0565A SEQ ID 235 Hisa 213
MAS
RrgA SEQ ID 233 spr0565B SEQ ID 235 Hisa 214
MAS
RrgA SEQ ID 233 spr0057 LE Hisa 215
MAS
RrgA SEQ ID 233 spr0096 LE Hisa 21a
MAS
spr0565 SEQ ID 233 spr0057 SEQ ID 235 Hisa 217
MAS
spr0565A SEQ ID 233 spr0057 SEQ ID 235 Hisa 218
MAS
spr0565B SEQ ID 233 spr0057 LE Hisa 219
MAS
spr0565 SEQ ID 233 spr0096 LE Hisa 220
MAS
spr0565A SEQ ID 233 spr0096 LE Hisa 221
MAS
spr0565B SEQ ID 233 spr0096 LE Hisa 222
MAS
spr0565 SEQ ID 233 spr2021 SEQ ID 235 Hisa 223
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A
Xi Li X2 L2 B SEQ ID
MAS
spr0565A SEQ ID 233 spr2021 SEQ ID 235 His6 224
MAS
spr0565B SEQ ID 233 spr2021 SEQ ID 235 His6 225
MAS
spr0565 SEQ ID 233 RrgA LE His6 226
MAS
spr0565A SEQ ID 233 RrgA LE His6 227
MAS
spr0565B SEQ ID 233 RrgA LE His6 228
Los restos Xi y X2 de estos hforidos se pueden usar en hforidos adicionales.
Como se ha mencionado anteriormente, el polipeptido spr0057 muestra actividad enzimatica usando un sustrato de 4-nitrofenil-N-acetil-p-D-glucosaminida. Esta actividad enzimatica se conservo en diversos polipeptidos hforidos (spr0096-spr0057; spr2021-spr0057; spr0057-spr2021; y spr0057-spr0096).
Una combinacion de spr0057 y spr0096 se comparo con un polipeptido spr0057-spr0096 hforido en ensayos inmunologicos. Como se muestra en las Figuras 28-31, el hforido presentaba una eficacia igual o superior a la de la combinacion. La diferencia mas elevada se observo en la mortalidad despues de inmunizacion i.p. y posterior estimulacion i.v. con TIGR4 usando 5,8 x 106 cfu (Figura 31).
Referencias
[1] WO 02/22168.
[2] Ogunniyi y col. (2007) Infect Immun. 75 (1): 350-7.
[3] WO 02/079241
[4] WO 02/34773.
[5] WO 00/06737.
[6] WO 00/06738.
[7] WO 00/58475.
[8] WO 2003/082183.
[9] Bagnoli y col. (2008) J Bacteriol. 190 (15): 5480-92.
[10] WO 2004/092209.
[11] Divulgacion de Investigacion, 453077 (Enero de 2002).
[12] EP-A-0372501.
[13] EP-A-0378881.
[14] EP-A-0427347.
[15] WO 93/17712.
[16] WO 94/03208.
[17] WO 98/58668.
[18] EP-A-0471177.
[19] WO 91/01146.
[20] Falugi y col. (2001) Eur J Immunol 31: 3816-3824.
[21] Baraldo y col. (2004) Infect Immun 72 (8): 4884-7.
[22] EP-A-0594610.
[23] Ruan y col. (1990) J Immunol 145: 3379-3384.
[24] WO 00/56360.
[25] Kuo y col. (1995) Infect Immun 63: 2706-13.
[26] Michon y col. (1998) Vaccine. 16: 1732-41.
[27] WO 02/091998.
[28] WO 01/72337.
[29] WO 00/61761.
[30] WO 00/33882
[31] WO 2007/071707
[32] WO 99/42130.
[33] patente de Estados Unidos n.° 4,761,283.
[34] patente de Estados Unidos n.° 4,356,170.
[35] patente de Estados Unidos n.° 4,882,317.
[36] patente de Estados Unidos n.° 4,695,624.
[37] Mol. Immunol., 1985, 22, 907-919
[38] EP-A-0208375.
[39] Bethell G.S. y col., J. Biol. Chem., 1979, 254, 2572-4
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
[40] Hearn M.T.W., J. Chromatogr., 1981, 218, 509-18
[41] WO 00/10599.
[42] Gever y col., Med. Microbiol. Immunol, 165 : 171-288 (1979).
[43] patente de Estados Unidos n.° 4,057,685.
[44] patente de Estados Unidos n.° 4.673.574; 4.761.283; 4.808.700.
[45] patente de Estados Unidos n.° 4.459.286.
[46] patente de Estados Unidos n.° 4.965.338.
[47] patente de Estados Unidos n.° 4.663.160.
[48] WO 2007/000343.
[49] Vaccines. (eds. Plotkin y Orenstein). 4a edicion, 2004, ISBN: 0-7216-9688-0.
[50] Rappuoli y col. (1991) TIBTECH 9: 232-238.
[51] Kirkham y col. (2006) Infect Immun. 74 (1): 586-93.
[52] WO 2005/108580.
[53] Berry y col. (1999) Infect Immun 67 (2): 981-5.
[54] US-6716432.
[55] WO 90/06951.
[56] WO 99/03884.
[57] Baba y col. (2002) Infect Immun 70: 107-113.
[58] US-7217791
[59] WO 2008/061953.
[60] Cao y col. (2007) Vaccine 25 (27): 4996-5005.
[61] WO 2005/063283.
[62] WO 2003/104272.
[63] WO 00/37105.
[64] Adamou y col. (2001) Infect Immun. 69 (2): 949-58.
[65] WO 98/18930.
[66] WO 99/53940.
[67] WO 02/22167.
[68] WO 02/08426.
[69] WO 01/12219.
[70] Briles y col. (2000) J Infect Dis 182: 1694-1701.
[71] Talkington y col. (1996) Microb Pathog. 21 (1): 17-22.
[72] WO 00/76540.
[73] Bethe y col. (2001) FEMS Microbiol Lett. 205 (1): 99-104.
[74] WO 01/81380.
[75] Brown y col. (2001) Infect Immun 69: 6702-6.
[76] Whalan y col. (2005) FEMS Immunol Med Microbiol 43: 73-80.
[77] Jomaa y col. (2006) Vaccine. 24 (24): 5133-9.
[78] Giefing y col. (2008) J Exp Med 205: 117-131.
[79] WO 2007/116322.
[80] LeMieux y col. (2006) Infect Immun 74: 2453-6.
[81] Nelson y col. (2007) Mol Microbiol 66: 329-40.
[82] patente de Estados Unidos n.° 5.707.829
[83] Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel y col. eds., 1987) Suplemento 30.
[84] Hoskins y col. (2001) J.Bacteriol. 183:5709-5717.
[85] GenBank NC_004512.
[86] GenBank NC_003440.
[87] GenBank NC_003028.
[88] Tettelin y col. (2001) Science 293: 498-506.
[89] WO 02/077021.
[90] Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48, 443-453.
[91] Rice y col. (2000) Trends Genet 16: 276-277.
[92] patente de Estados Unidos n.° 6355271.
[93] WO 00/23105.
[94] Vaccine Design... (1995) eds. Powell y Newman. ISBN: 030644867X. Plenum.
[95] WO 90/14837.
[96] WO 90/14837.
[97] Podda y Del Giudice (2003) Expert Rev Vaccines 2: 197-203.
[98] Podda (2001) Vaccine 19: 2673-2680.
[99] Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell y Newman) Plenum Press 1995 (ISBN 0- 306-44867-X).
[100] Vaccine Adjuvants: Preparation Methods and Research Protocols (Volumen 42 de Methods in Molecular Medicine series). ISBN: 1-59259-083-7. Ed. O'Hagan.
[101] WO 2008/043774.
[102] Allison y Byars (1992) Res Immunol 143: 519-25.
[103] Hariharan y col. (1995) Cancer Res 55: 3486-9.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
[104] US-2007/014805.
[105] US-2007/0191314.
[106] Suli y col. (2004) Vaccine 22 (25-26): 3464-9.
[107] WO 95/11700.
[108] patente de Estados Unidos n.° 6.080.725.
[109] WO 2005/097181.
[110] WO 2006/113373.
[111] Han y col. (2005) Impact of Vitamin E on Immune Function and Infectious Diseases in the Aged at Nutrition, Immune functions and Health EuroConference, Paris, 9-10 de junio de 2005.
[112] US- 6630161.
[113] patente de Estados Unidos n.° 5.057.540.
[114] WO 96/337
[115] EP-A-0109942.
[116] WO 96/11711.
[117] WO 00/07621.
[118] Barr y col. (1998) Advanced Drug Delivery Reviews 32: 247-271.
[119] Sjolanderet y col. (1998) Advanced Drug Delivery Reviews 32: 321-338.
[120] Niikura y col. (2002) Virology 293: 273-280.
[121] Lenz y col. (2001) J Immunol 166: 5346-5355.
[122] Pinto y col. (2003) J Infect Dis 188: 327-338.
[123] Gerber y col. (2001) J Virol 75: 4752-4760.
[124] WO 03/024480.
[125] WO 03/024481.
[126] Gluck y col. (2002) Vaccine 20: B10-B16.
[127] EP-A-0689454.
[128] Johnson y col. (1999) Bioorg Med Chem Lett 9: 2273-2278.
[129] Evans y col. (2003) Expert Rev Vaccines 2: 219-229.
[130] Meraldi y col. (2003) Vaccine 21: 2485-2491.
[131] Pajak y col. (2003) Vaccine 21: 836-842.
[132] Kandimalla y col. (2003) Nucleic Acids Research 31: 2393-2400.
[133] WO 02/26757.
[134] WO 99/62923.
[135] Krieg (2003) Nature Medicine 9: 831-835.
[136] McCluskie y col. (2002) FEMS Immunology and Medical Microbiology 32: 179-185.
[137] WO 98/40100.
[138] patente de Estados Unidos n.° 6.207.646.
[139] patente de Estados Unidos n.° 6.239.116.
[140] patente de Estados Unidos n.° 6.429.199.
[141] Kandimalla y col. (2003) Biochemical Society Transactions 31 (parte 3): 654-658.
[142] Blackwell y col. (2003) J Immunol 170: 4061-4068.
[143] Krieg (2002) Trends Immunol 23: 64-65.
[144] WO 01/9593
[145] Kandimalla y col. (2003) BBRC 306: 948-953.
[146] Bhagat y col. (2003) BBRC 300: 853-861.
[147] WO 03/035836.
[148] WO 01/2297
[149] Schellack y col. (2006) Vaccine 24: 5461-72.
[150] Kamath y col. (2008) Eur J Immunol 38: 1247-56.
[151] Riedl y col. (2008) Vaccine 26: 3461-8.
[152] WO 95/17211.
[153] WO 98/42375.
[154] Beignon y col. (2002) Infect Immun 70: 3012-3019.
[155] Pizza y col. (2001) Vaccine 19: 2534-2541.
[156] Pizza y col. (2000) Int J Med Microbiol 290: 455-461.
[157] Scharton-Kersten y col. (2000) Infect Immun 68: 5306-5313.
[158] Ryan y col. (1999) Infect Immun 67: 6270-6280.
[159] Partidos y col. (1999) Immunol Lett 67: 209-216.
[160] Peppoloni y col. (2003) Expert Rev Vaccines 2: 285-293.
[161] Pine y col. (2002) J Control Release 85: 263-270.
[162] Tebbey y col. (2000) Vaccine 18: 2723-34.
[163] Domenighini y col. (1995) Mol Microbiol 15: 1165-1167.
[164] WO 99/40936.
[165] WO 99/44636.
[166] Singh y col. (2001) J Cont Release 70: 267-276.
[167] WO 99/27960.
[168] patente de Estados Unidos n.° 6.090.406.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
[169] patente de Estados Unidos n.° 5.916.588.
[170] EP-A-0626169.
[171] WO 99/52549.
[172] WO 01/21207.
[173] WO 01/21152.
[174] Andrianov y col. (1998) Biomaterials 19: 109-115.
[175] Payne y col. (1998) Adv Drug Delivery Review 31: 185-196.
[176] patente de Estados Unidos n.° 4.680.338.
[177] patente de Estados Unidos n.° 4.988.815.
[178] WO 92/15582.
[179] Stanley (2002) Clin Exp Dermatol 27: 571-577.
[180] Wu y col. (2004) Antiviral Res. 64 (2): 79-83.
[181] Vasilakos y col. (2000) Cell Immunol. 204 (1): 64-74.
[182] patentes de Estados Unidos n.°s 4689338, 4929624, 5238944, 5266575, 5268376, 5346905, 5352784, 5389640, 5395937, 5482936, 5494916, 5525612, 6083505, 6440992, 6627640, 6656938, 6660735, 6660747, 6664260, 6664264, 6664265, 6667312, 6670372, 6677347, 6677348, 6677349, 6683088, 6703402, 6743920, 6800624, 6809203, 6888000 y 6924293.
[183] Jones (2003) Curr Opin Investig Drugs 4: 214-218.
[184] WO 03/011223.
[185] Johnson y col. (1999) Bioorg Med Chem Lett 9: 2273-2278.
[186] Evans y col. (2003) Expert Rev Vaccines 2: 219-229.
[187] WO 2004/060308.
[188] WO 2004/064759.
[189] patente de Estados Unidos n.° 6.924.271.
[190] US2005/0070556.
[191] patente de Estados Unidos n.° 5.658.731.
[192] patente de Estados Unidos n.° 5.011.828.
[193] WO 2004/87153.
[194] patente de Estados Unidos n.° 6.605.617.
[195] WO 02/18383.
[196] WO 2004/018455.
[197] WO 03/082272.
[198] Wong y col. (2003) J Clin Pharmacol 43 (7): 735-42.
[199] US2005/0215517.
[200] Dyakonova y col. (2004) Int Immunopharmacol 4 (13): 1615-23.
[201] FR-2859633.
[202] Signorelli y Hadden (2003) Int Immunopharmacol 3 (8): 1177-86.
[203] WO 2004/064715.
[204] De Libero y col. Nature Reviews Immunology, 2005, 5: 485-496
[205] patente de Estados Unidos n.° 5.936.076.
[206] Oki y col. J. Clin. Investig., 113: 1631-1640
[207] US2005/0192248
[208] Yang y col. Angew. Chem. Int. Ed., 2004, 43: 3818-3822
[209] WO 2005/102049
[210] Goff y col. J. Am. Chem., Soc., 2004, 126: 13602-13603
[211] WO 03/105769
[212] Cooper (1995) Pharm Biotechnol 6: 559-80.
[213] WO 99/11241.
[214] WO 94/00153.
[215] WO 98/57659.
[216] solicitudes de patentes de europea n.°s 0835318, 0735898 y 0761231.
[217] WO 2006/11060
[218] Zwijnenburg y col. (2001) J Infect Dis 183: 1143-6.
[219] Donnelly y col. (1997) Annu Rev Immunol 15: 617-648.
[220] Strugnell y col. (1997) Immunol Cell Biol 75 (4): 364-369.
[221] Cui (2005) Adv Genet 54: 257-89.
[222] Robinson y Torres (1997) Seminars in Immunol 9: 271-283.
[223] Brunham y col. (2000) J Infect Dis 181 Suppl 3: S538-43.
[224] Svanholm y col. (2000) Scy J Immunol 51 (4): 345-53.
[225] DNA Vaccination - Genetic Vaccination (1998) eds. Koprowski y col. (ISBN 3540633928).
[226] Gene Vaccination: Theory and Practice (1998) ed. Raz (ISBN 3540644288).
[227] Ferreira y col. (2006) J Med Microbiol. 55 (Pt 4): 375-8.
[228] Findeis y col., Trends Biotechnol. (1993) 11: 202
[229] Chiou y col. (1994) Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer. ed. Wolff
[230] Wu y col., J. Biol. Chem. (1988) 263: 621
[231] Wu y col., J. Biol. Chem. (1994) 269: 542
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
[232] Zenke y col., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) (1990) 87: 3655
[233] Wu y col., J. Biol. Chem. (1991) 266: 338
[234] Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1: 51
[235] Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5: 845
[236] Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1: 185
[237] Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6: 148
[238] WO 90/07936.
[239] WO 94/03622.
[240] WO 93/25698.
[241] WO 93/25234.
[242] patente de Estados Unidos n.° 5.219.740.
[243] WO 93/11230.
[244] WO 93/10218.
[245] patente de Estados Unidos n.° 4.777.127.
[246] Patente de GB n.° 2.200.651.
[247] EP-A-0345242.
[248] WO 91/02805.
[249] WO 94/12649.
[250] WO 93/03769.
[251] WO 93/19191.
[252] WO 94/28938.
[253] WO 95/11984.
[254] WO 95/00655.
[255] Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3: 147
[256] Wu, J. Biol. Chem. (1989) 264: 16985
[257] patente de Estados Unidos n.° 5.814.482.
[258] WO 95/07994.
[259] WO 96/17072.
[260] WO 95/30763.
[261] WO 97/42338.
[262] WO 90/11092.
[263] patente de Estados Unidos n.° 5.580.859
[264] patente de Estados Unidos n.° 5.422.120
[265] WO 95/13796.
[266] WO 94/23697.
[267] WO 91/14445.
[268] EP-0524968.
[269] Philip, Mol. Cell Biol. (1994) 14: 2411
[270] Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91: 11581
[271] patente de Estados Unidos n.° 5.206.152.
[272] WO 92/11033.
[273] patente de Estados Unidos n.° 5.149.655.
[274] Brandt y col. (2006) J Antimicrob Chemother. 58 (6): 1291-4. Epub 26 Oct 2006
[275] Winter y col., (1991) Nature 349: 293-99
[276] patente de Estados Unidos n.° 4.816.567.
[277] Inbar y col., (1972) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 69: 2659-62.
[278] Ehrlich y col., (1980) Biochem 19: 4091-96.
[279] Huston y col., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:5897-83.
[280] Pack y col., (1992) Biochem 31, 1579-84.
[281] Cumber y col., (1992) J. Immunology 149B, 120-26.
[282] Riechmann y col., (1988) Nature 332, 323-27.
[283] Verhoeyan y col., (1988) Science 239, 1534-36.
[284] documento de patente Gb 2.276.169.
[285] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practise of Pharmacy. 20a edicion, ISBN: 0683306472.
[286] Methods In Enzymology (S. Colowick y N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.)
[287] Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D.M. Weir y C.C. Blackwell, eds, 1986, Blackwell Scientific Publications)
[288] Sambrook y col. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3a edicion (Cold Spring Harbor Laboratory Press).
[289] Handbook of Surface and Colloidal Chemistry (Birdi, K.S. ed., CRC Press, 1997)
[290] Ausubel y col. (eds) (2002) Short protocols in molecular biology, 5a edicion (Current Protocols).
[291] Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, (Ream y col., eds., 1998, Academic Press)
[292] PCR (Introduction to Biotechniques Series), 2a ed. (Newton y Graham eds., 1997, Springer Verlag)
[293] Geysen y col. (1984) PNAS USA 81: 3998-4002.
[294] Carter (1994) Methods Mol Biol 36: 207-23.
[295] Jameson, BA y col. 1988, CABIOS 4 (1): 181-186.
5
10
15
20
25
30
[296] Raddrizzani y Hammer (2000) Brief Bioinform 1 (2): 179-89.
[297] Bublilo y col. (2007) Proteins 68 (1): 294-304.
[298] De Lalla y col. (1999) J. Immunol. 163: 1725-29.
[299] Kwok y col. (2001) Trends Immunol 22: 583-88.
[300] Brusic y col. (1998) Bioinformatics 14 (2): 121-30
[301] Meister y col. (1995) Vaccine 13 (6): 581-91.
[302] Roberts y col. (1996) AIDS Res Hum Retroviruses 12 (7): 593-610.
[303] Maksyutov y Zagrebelnaya (1993) Comput Appl Biosci 9 (3): 291-7.
[304] Feller y de la Cruz (1991) Nature 349 (6311): 720-1.
[305] Hopp (1993) Peptide Research 6: 183-190.
[306] Welling y col. (1985) FEBS Lett. 188: 215-218.
[307] Davenport y col. (1995) Immunogenetics 42: 392-297.
[308] Tsurui y Takahashi (2007) J Pharmacol Sci. 105 (4): 299-316.
[309] Tong y col. (2007) Brief Bioinform. 8 (2): 96-108.
[310] Schirle y col. (2001) J Immunol Methods. 257 (1-2): 1-16.
[311] Chen y col. (2007) Amino Acids 33 (3): 423-8.
[312] Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel y col., eds., 1987) Suplemento 30
[313] Smith y Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2: 482-489.
[314] King y col. (2006) Mol Microbiol 59 (3): 961-74.
[315] Zysk y col. (2000) Infect Immun 68: 3740-3.
[316] Wellmer y col. (2002) Infect Immun 70: 6504-8.
[317] Gosink y col. (2000) Infect Immun 68 (10): 5690-5.
[318] Wizemann y col. (2001) Infect Immun 69: 1593-8.
[319] Moscoso y col. (2005) Appl Environ Microbiol 71: 8706-13.
[320] Kharat y Tomasz (2003) Infect Immun 71: 2758-65.
[321] Chen y col. (2005) FEMS Microbiol Lett. 253 (1): 151-4.
[322] Bumbaca y col. (2007) Proteins. 66 (3): 547-58.
[323] Monterroso y col. (2005) Biochem J. 391: 41-9.
[324] Moscoso y col. (2005) J Bacteriology 187: 6238-41.
[325] Ogunniyi y col. (2001) Infect Immun 69: 5997-6003.
[326] Ng y col. (2005) J Bacteriol. 187(21): 7444-59.
[327] Mills y col. (2007) J Bacteriol. 189: 4544-6.
[328] WO 2008/079732.

Claims (12)

  1. 5
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    15
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    55
    1. Una composicion inmunogenica que comprende una combinacion de antigenos de S. pneumoniae, comprendiendo dicha combinacion un antigeno spr0096 y un antigeno spr2021, en la que:
    dicho antigeno spr0096 es un polipeptido que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 12; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 12; y
    dicho antigeno spr2021 es un polipeptido que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 11; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 11.
  2. 2. Una composicion inmunogenica de acuerdo con la reivindicacion 1 que comprende uno o mas antigenos seleccionados entre el grupo que consiste en:
    (1) un antfgeno spr1739 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 10; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 10;
    (2) un antfgeno spr0867 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 8; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 8;
    (3) un antfgeno spr1431 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 9; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 9;
    (4) un antigeno spr1433 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 13; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 13;
    (5) un antfgeno spr1707 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 14; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 14;
    (6) un antfgeno spr0057 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 1; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 1;
    (7) un antfgeno spr0565 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 3; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 3;
    (8) un antfgeno spr1345 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 5; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 5;
    (9) un antfgeno spr1416 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 6; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 6;
    (10) un antfgeno spr1418 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 7; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 8;
    (11) un antfgeno spr1098 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 4; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 4; y/o
    (12) un antfgeno spr0286 que comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 2; y/o (b) que comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 2;
    en la que preferentemente, el uno o mas antfgenos se selecciona(n) entre el grupo que consiste en: (1) antfgeno spr1739; (2) un antfgeno spr0867; (3) un antfgeno spr1431; (4) un antfgeno spr1433; y/o (5) un antfgeno spr1707.
  3. 3. Una composicion inmunogenica de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende un antfgeno spr0057 y/o un antfgeno spr0565.
  4. 4. La composicion de la reivindicacion 3, que comprende adicionalmente uno o mas de:
    (a) un antfgeno de pilus RrgA y/o RrgB de S. pneumoniae;
    (b) un antfgeno Pmp de S. pneumoniae; y/o
    (c) uno o mas conjugados de un sacarido capsular neumococico y una protema vehmulo, en los que (i) el sacarido capsular es de uno o mas de los siguientes serotipos neumococicos: 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F and 23F; y (ii) la protema vehmulo es una toxina o toxoide bacteriano, o es protema D de H. influenzae.
    en la que:
    5
    10
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    20
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    45
    50
    55
    dicho antigeno RrgA comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 172 o 179; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 172 o 179;
    dicho antigeno RrgB comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 173, 174 o 175; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 173, 174, o 175; y/o
    dicho antigeno Pmp comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 28; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 28.
  5. 5. Una composicion inmunogenica de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2 que comprende:
    (a) uno o mas conjugados de un sacarido capsular neumococico y una protema vetftculo;
    (b) uno o mas antigeno(s) seleccionados entre el grupo que consiste en: toxoide de difteria; toxoide del tetanos; antigeno de superficie del virus de la hepatitis B; un antigeno del virus de la polio inactivado; uno o mas antigenos de pertussis acelulares; un conjugado del antigeno de sacarido capsular del tipo B de H. influenzae; un conjugado del antigeno de sacarido capsular del serogrupo C de N. meningitidis; un conjugado del antigeno de sacarido capsular del serogrupo Y de N. meningitidis; un conjugado del antfgeno de sacarido capsular del serogrupo W135 de N. meningitidis; y un conjugado del antfgeno de sacarido capsular del serogrupo A de N. meningitidis; o
    (c) un agente protector de temperatura que mejora la estabilidad termica de la composicion.
  6. 6. Un polipeptido de formula NH2-A-{-X-L-}n-B-COOH, en la que:
    X es una secuencia de aminoacidos de un antfgeno neumococico, seleccionado entre el grupo que consiste en: (1) un antfgeno spr0057; (2) un antfgeno spr0096; (3) un antfgeno spr0565; y (4) un antfgeno spr2021; (5) un antfgeno RrgA; y (6) un antfgeno RrgB;
    L es una secuencia de aminoacidos de engarce opcional;
    A es una secuencia de aminoacidos N-terminal opcional;
    B es una secuencia de aminoacidos C-terminal opcional, n es un numero entero de 2 o mas; y
    al menos un ejemplo de X es spr0096 y al menos un ejemplo de X es spr2021; en el que:
    dicho antfgeno spr0057 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 1; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 1;
    dicho antfgeno spr0096 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 12; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 12;
    dicho antfgeno spr0565 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 3; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 3;
    dicho antfgeno spr2021 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 11; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 11;
    dicho antfgeno RrgA comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 172 or 179; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 172 or 179; y/o
    dicho antfgeno RrgB comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 173, 174 or 175; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 173, 174, o 175.
  7. 7. Un polipeptido de acuerdo con la reivindicacion 6, que tiene la formula NH2-A-X1-L1-X2-L2-B-COOH, en la que:
    (a) X1 es una secuencia de aminoacidos de un antfgeno spr0096 neumococico y X2 es una secuencia de aminoacidos de un antfgeno spr2021 neumococico; o
    (b) X1 es una secuencia de aminoacidos de un antfgeno spr2021 neumococico y X2 es una secuencia de aminoacidos de un antfgeno spr0096 neumococico;
    L es una secuencia de aminoacidos de engarce opcional;
    A es una secuencia de aminoacidos N-terminal opcional;
    B es una secuencia de aminoacidos C-terminal opcional; y en el que:
    dicho antfgeno spr0096 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 12; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que
    comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 12; y/o
    dicho antigeno spr2021 comprende una secuencia de aminoacidos: (a) que tiene una identidad de un 80 % o superior con la SEQ ID NO: 11; y/o (b) comprende un fragmento de al menos 10 aminoacidos consecutivos, que comprende un epftopo de la SEQ ID NO: 11.
    5 8. El polipeptido de la reivindicacion 6 o la reivindicacion 7, en el que al menos una secuencia L comprende Glyx, en
    la que x = 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.
  8. 9. El polipeptido de la reivindicacion 6 o la reivindicacion 7, que comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada entre el grupo que consiste en las SEQ ID NOs: 194 y 205.
  9. 10. Un polipeptido que tiene una identidad de secuencias de un 75 % o superior con una secuencia de aminoacidos 10 seleccionada entre el grupo que consiste en las SEQ ID NOs: 194 y 205.
  10. 11. Una composicion inmunogenica que comprende el polipeptido de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10.
  11. 12. Acido nucleico que codifica el polipeptido de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10.
  12. 13. La composicion inmunogenica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 u 11 para su uso en un procedimiento para aumentar una respuesta inmune en un mairnfero.
    15 14. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 13 para su uso en proteccion de dicho mai^ero frente a
    infeccion neumococica.
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Families Citing this family (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
US9486515B2 (en) 2005-06-27 2016-11-08 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
EP2265634A2 (en) * 2008-03-17 2010-12-29 Intercell AG Peptides protective against s. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto
ATE523204T1 (de) * 2009-02-16 2011-09-15 Karlsruher Inst Technologie Cd44v6-peptide als bakterielle infektionsinhibitoren
ES2531115T3 (es) 2009-06-01 2015-03-10 Novartis Ag Combinaciones de clados de RrgB neumocócicos
WO2011008548A1 (en) 2009-06-29 2011-01-20 Genocea Biosciences, Inc. Vaccines and compositions against streptococcus pneumoniae
CA2773637A1 (en) * 2009-09-10 2011-03-17 Novartis Ag Combination vaccines against respiratory tract diseases
US9649372B2 (en) 2009-12-22 2017-05-16 Sanofi Pasteur Limited Immunogenic compositions and related methods
EP2550289A4 (en) 2010-03-12 2013-11-27 Childrens Medical Center NEW IMMUNOGENES AND METHODS FOR IDENTIFICATION AND SCREENING THEREOF
GB201005625D0 (en) 2010-04-01 2010-05-19 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
DK2590676T3 (en) 2010-07-06 2016-10-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Virionlignende feed particles to self-replicating RNA molecules
JP5940064B2 (ja) 2010-07-06 2016-06-29 ノバルティス アーゲー 低用量のｒｎａを用いた大型哺乳動物の免疫化
RS54489B1 (sr) 2010-07-06 2016-06-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Lipozomi sa lipidima koji imaju poboljšanu pka vrednost za oslobađanje rnk
US9192661B2 (en) 2010-07-06 2015-11-24 Novartis Ag Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles
HUE047796T2 (hu) 2010-07-06 2020-05-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa RNS bevitele több immunútvonal bekapcsolására
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
PL3831406T3 (pl) 2010-08-23 2024-09-09 Wyeth Llc Stabilne preparaty antygenów rLP2086 Neisseria meningitidis
BR112013004865A2 (pt) 2010-08-31 2016-06-07 Novartis Ag lípidos adequados para entrega lipossomal de codificadores de proteínas rna
SMT202200311T1 (it) 2010-08-31 2022-09-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomi pegilati per somministrare rna codificante un immunogene
RU2546873C2 (ru) * 2010-09-10 2015-04-10 УАЙТ ЭлЭлСи Нелипидизированные варианты антигенов neisseria meningitidis orf2086
EP3520813B1 (en) 2010-10-11 2023-04-19 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Antigen delivery platforms
WO2012072769A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Novartis Ag Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations
MX344120B (es) 2011-01-20 2016-12-06 Genocea Biosciences Inc Vacunas y composiciones contra streptococcus pneumoniae.
US9987354B2 (en) * 2011-04-29 2018-06-05 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for antigen-specific deletion of T effector cells
AU2012253359B2 (en) 2011-05-11 2017-06-08 Children's Medical Center Corporation Multiple antigen presenting immunogenic composition, and methods and uses thereof
EP3854413A1 (en) 2011-07-06 2021-07-28 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
US20140141070A1 (en) 2011-07-06 2014-05-22 Andrew Geall Liposomes having useful n:p ratio for delivery of rna molecules
US20140255472A1 (en) 2011-08-31 2014-09-11 Andrew Geall Pegylated liposomes for delivery of immunogen-encoding rna
DK3369742T3 (da) * 2011-10-05 2020-10-19 Univ Rockefeller Dimere bakteriofaglysiner
US9493517B2 (en) * 2011-11-07 2016-11-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Conjugates comprising an antigen and a carrier molecule
EP2822586A1 (en) 2012-03-07 2015-01-14 Novartis AG Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens
MY167723A (en) 2012-03-09 2018-09-21 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
KR102057217B1 (ko) 2012-06-20 2020-01-22 에스케이바이오사이언스 주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
EP4056198A3 (en) 2012-09-18 2022-12-07 GlaxoSmithKline Biologicals SA Outer membrane vesicles
KR20140075196A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
CA2900008C (en) * 2013-02-07 2025-10-07 Children's Medical Center Corporation PROTEIN ANTIGENS THAT CONFER PROTECTION AGAINST COLONIZATION AND/OR PNEUMOCOCCAL DISEASE
US9802987B2 (en) 2013-03-08 2017-10-31 Pfizer Inc. Immunogenic fusion polypeptides
KR102255108B1 (ko) 2013-03-08 2021-05-24 노파르티스 아게 활성제의 전달을 위한 지질 및 지질 조성물
CN110251675A (zh) 2013-05-03 2019-09-20 西莱克塔生物科技公司 降低或预防响应于非变应原性抗原的过敏反应的致耐受性合成纳米载体
EP4098276A1 (en) 2013-09-08 2022-12-07 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
EP3623361B1 (en) 2013-12-19 2021-08-18 Novartis AG Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
ES2908827T3 (es) 2013-12-19 2022-05-04 Novartis Ag Lípidos y composiciones lipídicas para el suministro de agentes activos
WO2016010840A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Novartis Ag Method of encapsulating a nucleic acid in a lipid nanoparticle host
ES2969956T3 (es) 2014-09-05 2024-05-23 Novartis Ag Lípidos y composiciones lipídicas para el suministro de agentes activos
WO2016037161A2 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene editing anti-viral transfer vector immune responses
US9815886B2 (en) 2014-10-28 2017-11-14 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
US10888611B2 (en) 2015-02-19 2021-01-12 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
EP3061826A1 (en) 2015-02-27 2016-08-31 Novartis AG Flavivirus replicons
CN104844712B (zh) * 2015-04-03 2019-06-28 长春百克生物科技股份公司 肺炎链球菌蛋白抗原及其制备方法和应用
GB201509782D0 (en) * 2015-06-05 2015-07-22 Isis Innovation Methods and products for fusion protein synthesis
CA3008042A1 (en) * 2015-12-10 2017-06-15 National Research Council Of Canada Lipidated streptococcus pneumoniae antigen compositions, methods of preparation and use
US10738338B2 (en) 2016-10-18 2020-08-11 The Research Foundation for the State University Method and composition for biocatalytic protein-oligonucleotide conjugation and protein-oligonucleotide conjugate
PE20191107A1 (es) 2017-01-31 2019-08-26 Pfizer Composiciones de neisseria meningitidis y metodos respectivos
ES3036482T3 (en) 2017-03-11 2025-09-19 Cartesian Therapeutics Inc Methods and compositions related to combined treatment with anti-inflammatories and synthetic nanocarriers comprising an immunosuppressant
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
EP3600400A4 (en) 2017-03-28 2021-01-13 The Children's Medical Center Corporation MULTIPLE ANTIGEN PRESENTATION SYSTEM (MAPS) BASED STAPHYLOCOCCUS AUREUS VACCINE, IMMUNOGEN COMPOSITION AND THEIR USES
GB201705750D0 (en) 2017-04-10 2017-05-24 Univ Oxford Innovation Ltd Peptide ligase and use therof
EP3634481A4 (en) 2017-06-10 2021-07-21 Inventprise, LLC. MULTIVALENT CONJUGATE VACCINES WITH BIVALENT OR MULTIVALENT CONJUGATE POLYSACCHARIDES THAT CONFIRM ENHANCED IMMUNOGENICITY AND AVIDITY
US10729763B2 (en) 2017-06-10 2020-08-04 Inventprise, Llc Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds
CN111065417B (zh) 2017-06-23 2024-04-19 美商艾芬尼维克斯公司 免疫原性组合物
TW202019470A (zh) 2018-09-12 2020-06-01 美商艾芬尼維克斯公司 多價肺炎球菌疫苗
KR102922338B1 (ko) 2018-09-12 2026-02-05 더 칠드런스 메디칼 센터 코포레이션 폐렴구균 융합 단백질 백신
AU2020287627A1 (en) 2019-06-04 2021-11-18 Selecta Biosciences, Inc. Formulations and doses of PEGylated uricase
EP4010014A1 (en) * 2019-08-05 2022-06-15 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic composition
WO2021059181A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
WO2022035816A1 (en) 2020-08-10 2022-02-17 Inventprise, Llc Multivalent pneumococcal glycoconjugate vaccines containing emerging serotype 24f
EP4229208A4 (en) 2020-10-14 2024-10-30 George Mason Research Foundation, Inc. METHOD FOR THE PRODUCTION OF LIPID DNANOPARTICLES AND COMPOSITIONS THEREOF
WO2023021421A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Low-dose lyophilized rna vaccines and methods for preparing and using the same
US20240350410A1 (en) 2021-08-16 2024-10-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Freeze-drying of lipid nanoparticles (lnps) encapsulating rna and formulations thereof
WO2023039223A1 (en) 2021-09-09 2023-03-16 Affinivax, Inc. Multivalent pneumococcal vaccines
CN114507658B (zh) * 2022-04-02 2022-07-05 深圳瑞德林生物技术有限公司 酶共表达系统及其在合成唾液酸的应用
CA3256262A1 (en) * 2022-06-07 2025-03-18 Shanghai Alezyme Pharmaceuticals Ltd. Fusion proteins including truncated forms of immunoglobulin A (IGA) protease and their uses
WO2024006863A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Precision NanoSystems ULC Lipid nanoparticle formulations for vaccines
CN116063548B (zh) * 2022-07-08 2025-06-10 中国人民解放军陆军军医大学 一种融合蛋白KP-Ag1及其用作肺炎克雷伯菌疫苗抗原的应用
GB202303019D0 (en) 2023-03-01 2023-04-12 Glaxosmithkline Biologicals Sa Method of lyophilisation
CN117736279A (zh) * 2023-04-21 2024-03-22 华中农业大学 胸膜肺炎放线杆菌的三个候选抗原及其应用
WO2024259508A1 (pt) 2023-06-22 2024-12-26 Instituto Butantan Antígeno multiepítopo, composição imunogênica compreendendo o referido antígeno, kit de diagnóstico do pneumococo, e usos do referido antígeno
AU2023457883A1 (en) 2023-06-28 2025-12-18 Global Life Sciences Solutions Canada Ulc Lipid nanoparticle formulations for cell therapy and related methods
GB202311382D0 (en) 2023-07-25 2023-09-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Lyophilised compostion
WO2026033498A1 (en) 2024-08-09 2026-02-12 Genvax Technologies, Inc. Methods of self-amplifying rna-lipid nanoparticle manufacture and compositions derived therefrom
CN118702827B (zh) * 2024-08-27 2025-03-07 南京澄实生物医药科技有限公司 一种预防肺炎链球菌感染的融合蛋白及其应用

Family Cites Families (188)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4315919A (en) * 1980-10-06 1982-02-16 Edward Shanbrom Depyrogenation process
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4663160A (en) 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
IL73534A (en) 1983-11-18 1990-12-23 Riker Laboratories Inc 1h-imidazo(4,5-c)quinoline-4-amines,their preparation and pharmaceutical compositions containing certain such compounds
US5916588A (en) 1984-04-12 1999-06-29 The Liposome Company, Inc. Peptide-containing liposomes, immunogenic liposomes and methods of preparation and use
US6090406A (en) 1984-04-12 2000-07-18 The Liposome Company, Inc. Potentiation of immune responses with liposomal adjuvants
US4882317A (en) 1984-05-10 1989-11-21 Merck & Co., Inc. Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency
US4695624A (en) 1984-05-10 1987-09-22 Merck & Co., Inc. Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
IT1187753B (it) 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
US4777127A (en) 1985-09-30 1988-10-11 Labsystems Oy Human retrovirus-related products and methods of diagnosing and treating conditions associated with said retrovirus
US4680338A (en) 1985-10-17 1987-07-14 Immunomedics, Inc. Bifunctional linker
US5011828A (en) 1985-11-15 1991-04-30 Michael Goodman Immunostimulating guanine derivatives, compositions and methods
GB8702816D0 (en) 1987-02-07 1987-03-11 Al Sumidaie A M K Obtaining retrovirus-containing fraction
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US5206152A (en) 1988-04-08 1993-04-27 Arch Development Corporation Cloning and expression of early growth regulatory protein genes
US5422120A (en) 1988-05-30 1995-06-06 Depotech Corporation Heterovesicular liposomes
AP129A (en) 1988-06-03 1991-04-17 Smithkline Biologicals S A Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells
NL8802046A (nl) 1988-08-18 1990-03-16 Gen Electric Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen.
NZ230423A (en) 1988-08-25 1993-08-26 Liposome Co Inc A dosage form comprising an antigen and a multilamellar liposome comprising dimyristolyphosphatidylcholine (dmpc) and cholesterol
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5238944A (en) 1988-12-15 1993-08-24 Riker Laboratories, Inc. Topical formulations and transdermal delivery systems containing 1-isobutyl-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amine
US6716432B1 (en) 1988-12-16 2004-04-06 James Cleland Paton Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom
DE68929323T2 (de) 1988-12-16 2002-04-18 De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur Pneumolysin-mutanten und pneumokokken-impfstoffe daraus
EP0378881B1 (en) 1989-01-17 1993-06-09 ENIRICERCHE S.p.A. Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
WO1990007936A1 (en) 1989-01-23 1990-07-26 Chiron Corporation Recombinant therapies for infection and hyperproliferative disorders
ATE240401T1 (de) 1989-03-21 2003-05-15 Vical Inc Expression von exogenen polynukleotidsequenzen in wirbeltieren
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US4929624A (en) 1989-03-23 1990-05-29 Minnesota Mining And Manufacturing Company Olefinic 1H-imidazo(4,5-c)quinolin-4-amines
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
FI920131A0 (fi) 1989-07-14 1992-01-13 Praxis Biolog Inc Cytokin- och hormonbaerare foer konjugatvaccin.
EP0487587A1 (en) 1989-08-18 1992-06-03 Chiron Corporation Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
US4988815A (en) 1989-10-26 1991-01-29 Riker Laboratories, Inc. 3-Amino or 3-nitro quinoline compounds which are intermediates in preparing 1H-imidazo[4,5-c]quinolines
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
NZ237464A (en) 1990-03-21 1995-02-24 Depotech Corp Liposomes with at least two separate chambers encapsulating two separate biologically active substances
US5658731A (en) 1990-04-09 1997-08-19 Europaisches Laboratorium Fur Molekularbiologie 2'-O-alkylnucleotides as well as polymers which contain such nucleotides
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
US5149655A (en) 1990-06-21 1992-09-22 Agracetus, Inc. Apparatus for genetic transformation
GB2276169A (en) 1990-07-05 1994-09-21 Celltech Ltd Antibodies specific for carcinoembryonic antigen
DE69113564T2 (de) 1990-08-13 1996-05-30 American Cyanamid Co Faser-Hemagglutinin von Bordetella pertussis als Träger für konjugierten Impfstoff.
ES2144414T3 (es) 1990-12-20 2000-06-16 Arch Dev Corp The University O Control de la expresion de un gen por medio de una radiacion ionizante.
US5389640A (en) 1991-03-01 1995-02-14 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
EP0582581B1 (en) 1991-03-01 1999-05-06 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-SUBSTITUTED, 2-SUBSTITUTED 1H-IMIDAZO[4,5-c]QUINOLIN-4-AMINES
AU663725B2 (en) 1991-08-20 1995-10-19 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The Adenovirus mediated transfer of genes to the gastrointestinal tract
US5936076A (en) 1991-08-29 1999-08-10 Kirin Beer Kabushiki Kaisha αgalactosylceramide derivatives
US5268376A (en) 1991-09-04 1993-12-07 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
US5266575A (en) 1991-11-06 1993-11-30 Minnesota Mining And Manufacturing Company 2-ethyl 1H-imidazo[4,5-ciquinolin-4-amines
WO1993010218A1 (en) 1991-11-14 1993-05-27 The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Vectors including foreign genes and negative selective markers
GB9125623D0 (en) 1991-12-02 1992-01-29 Dynal As Cell modification
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
FR2688514A1 (fr) 1992-03-16 1993-09-17 Centre Nat Rech Scient Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant.
IL105325A (en) 1992-04-16 1996-11-14 Minnesota Mining & Mfg Immunogen/vaccine adjuvant composition
JPH07507689A (ja) 1992-06-08 1995-08-31 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 特定組織のターゲティング方法及び組成物
JPH09507741A (ja) 1992-06-10 1997-08-12 アメリカ合衆国 ヒト血清による不活性化に耐性のあるベクター粒子
NZ253137A (en) 1992-06-25 1996-08-27 Smithkline Beecham Biolog Vaccine comprising antigen and/or antigenic composition, qs21 (quillaja saponaria molina extract) and 3 de-o-acylated monophosphoryl lipid a.
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
GB2269175A (en) 1992-07-31 1994-02-02 Imperial College Retroviral vectors
JPH08503855A (ja) 1992-12-03 1996-04-30 ジェンザイム・コーポレイション 嚢胞性線維症に対する遺伝子治療
US5395937A (en) 1993-01-29 1995-03-07 Minnesota Mining And Manufacturing Company Process for preparing quinoline amines
EP0689454B2 (en) 1993-03-23 2005-02-23 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a
ATE227979T1 (de) 1993-04-22 2002-12-15 Skyepharma Inc Multivesikuläre liposomen mit verkapseltem cyclodextrin und pharmakologisch wirksamen verbindungen sowie verfahren zu deren verwendung
ES2249761T3 (es) 1993-06-24 2006-04-01 Advec Inc. Vectores de adenovirus para terapia genica.
US5352784A (en) 1993-07-15 1994-10-04 Minnesota Mining And Manufacturing Company Fused cycloalkylimidazopyridines
CZ288182B6 (en) 1993-07-15 2001-05-16 Minnesota Mining & Mfg Imidazo[4,5-c]pyridine-4-amines and pharmaceutical preparations based thereon
US6015686A (en) 1993-09-15 2000-01-18 Chiron Viagene, Inc. Eukaryotic layered vector initiation systems
EP0694070B1 (en) 1993-09-15 2002-04-10 Chiron Corporation Recombinant alphavirus vectors
SK283703B6 (sk) 1993-10-25 2003-12-02 Canji, Inc. Rekombinantný adenovírusový vektor a jeho použitie
AU5543294A (en) 1993-10-29 1995-05-22 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
DK0729351T3 (da) 1993-11-16 2000-10-16 Skyepharma Inc Vesikler med reguleret afgivelse af aktivstoffer
GB9326174D0 (en) 1993-12-22 1994-02-23 Biocine Sclavo Mucosal adjuvant
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
JP4303315B2 (ja) 1994-05-09 2009-07-29 オックスフォード バイオメディカ（ユーケー）リミテッド 非交差性レトロウイルスベクター
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6429199B1 (en) 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
AU4594996A (en) 1994-11-30 1996-06-19 Chiron Viagene, Inc. Recombinant alphavirus vectors
US5482936A (en) 1995-01-12 1996-01-09 Minnesota Mining And Manufacturing Company Imidazo[4,5-C]quinoline amines
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
GB9513261D0 (en) 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020028215A1 (en) * 1999-08-09 2002-03-07 Jagath L. Kadurugamuwa Novel vaccines and pharmaceutical compositions using membrane vesicles of microorganisms, and methods for preparing same
DE69739286D1 (de) 1996-05-06 2009-04-16 Oxford Biomedica Ltd Rekombinationsunfähige retrovirale vektoren
PT942983E (pt) 1996-10-31 2007-02-28 Human Genome Sciences Inc Antigénios e vacinas de streptococcus pneumoniae
AU753688B2 (en) 1997-03-10 2002-10-24 Ottawa Civic Loeb Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6818222B1 (en) 1997-03-21 2004-11-16 Chiron Corporation Detoxified mutants of bacterial ADP-ribosylating toxins as parenteral adjuvants
US6080725A (en) 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
GB9712347D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
EP0998557A2 (en) 1997-07-21 2000-05-10 North American Vaccine, Inc. Modified immunogenic pneumolysin, compositions and their use as vaccines
CA2302554C (en) 1997-09-05 2007-04-10 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Oil in water emulsions containing saponins
GB9725084D0 (en) 1997-11-28 1998-01-28 Medeva Europ Ltd Vaccine compositions
WO1999040936A2 (en) 1998-02-12 1999-08-19 American Cyanamid Company Pneumococcal and meningococcal vaccines formulated with interleukin-12
US7018637B2 (en) 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
US6303114B1 (en) 1998-03-05 2001-10-16 The Medical College Of Ohio IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens
HUP0101619A3 (en) 1998-04-09 2003-11-28 Smithkline Beecham Biolog Adjuvant compositions
JP2002516251A (ja) 1998-04-23 2002-06-04 ユーエイビー リサーチ ファンデーション 肺炎球菌表面プロテインＣ（ＰｓｐＣ）のエピトープ領域およびその菌株選択、ならびにそのための使用法
DK1075276T3 (da) 1998-05-07 2008-02-11 Corixa Corp Adjuvanssammensætning og fremgangsmåder til dens anvendelse
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
JP2002521058A (ja) * 1998-07-27 2002-07-16 マイクロビアル テクニクス リミティッド 肺炎連鎖球菌由来の核酸及びタンパク質
US20030134407A1 (en) * 1998-07-27 2003-07-17 Le Page Richard William Falla Nucleic acids and proteins from Streptococcus pneumoniae
EP2053126A1 (en) 1998-07-27 2009-04-29 Sanofi Pasteur Limited Streptococcus pneumoniae proteins and nucleic acid molecules
US6110929A (en) 1998-07-28 2000-08-29 3M Innovative Properties Company Oxazolo, thiazolo and selenazolo [4,5-c]-quinolin-4-amines and analogs thereof
GB9817052D0 (en) 1998-08-05 1998-09-30 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
NZ509986A (en) 1998-08-19 2003-10-31 Baxter Healthcare S Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide and oligosaccharide protein conjugates as vaccines
DE122007000087I1 (de) 1998-10-16 2008-03-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Adjuvanzsysteme und impfstoffe
AU1626199A (en) 1998-12-04 2000-06-26 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The A vi-repa conjugate vaccine for immunization against salmonella typhi
DK1140157T3 (da) 1998-12-21 2009-06-08 Medimmune Inc Streptococcus pneumoniae-proteiner og immunogene fragmenter til vacciner
US20030130212A1 (en) 1999-01-14 2003-07-10 Rossignol Daniel P. Administration of an anti-endotoxin drug by intravenous infusion
US6551600B2 (en) 1999-02-01 2003-04-22 Eisai Co., Ltd. Immunological adjuvant compounds compositions and methods of use thereof
DE60013773T2 (de) 1999-02-03 2005-11-10 Biosante Pharmaceuticals, Inc. Methoden zur Herstellung von therapeutischen Kalziumphosphat Partikeln
KR100642044B1 (ko) 1999-03-19 2006-11-10 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
EP1165795A2 (en) 1999-03-26 2002-01-02 Provalis UK Limited Streptococcus pneumoniae antigens
EP1165796A2 (en) 1999-04-09 2002-01-02 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
ATE325620T1 (de) 1999-06-10 2006-06-15 Medimmune Inc Streptococcus pneumoniae proteine und impfstoffe
US6331539B1 (en) 1999-06-10 2001-12-18 3M Innovative Properties Company Sulfonamide and sulfamide substituted imidazoquinolines
EP1075841A1 (en) 1999-08-13 2001-02-14 Erasmus Universiteit Rotterdam Pneumococcal vaccines
BR0014285A (pt) 1999-09-24 2002-05-21 Smithkline Beecham Biolog Adjuvantes compreendendo um éster ou éter de alquila de polioxietileno e pelo menos um tensoativo não-iÈnico
PL355163A1 (en) 1999-09-24 2004-04-05 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Use of combination of polyoxyethylene sorbitan ester and octoxynol as adjuvant and its use in vaccines
TR200200797T2 (tr) 1999-09-25 2002-10-21 University Of Iowa Research Foundation İmmünostimülatör nükleik asitler
WO2001095935A1 (en) 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
JP2003530872A (ja) 2000-04-27 2003-10-21 メディミューン，インコーポレイテッド 免疫原肺炎連鎖球菌タンパク質とそのワクチン組成物
US20040091495A1 (en) 2000-07-20 2004-05-13 Lars Bjorck Protein
ES2334641T3 (es) 2000-09-01 2010-03-15 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Derivados aza heterociclicos y su uso terapeutico.
PL211125B1 (pl) 2000-09-11 2012-04-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Pochodne chinolinonu jako inhibitory kinazy tyrozynowej, kompozycje je zawierające i ich zastosowanie
GB0022742D0 (en) 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
JP2004509970A (ja) 2000-09-26 2004-04-02 ハイブリドン・インコーポレイテッド 位置的化学変化による免疫刺激オリゴヌクレオチドアナログの免疫刺激活性の調節
EP1330473A2 (en) 2000-10-26 2003-07-30 Imperial College Innovations Limited Streptococcal genes
UA74852C2 (en) 2000-12-08 2006-02-15 3M Innovative Properties Co Urea-substituted imidazoquinoline ethers
US6664264B2 (en) 2000-12-08 2003-12-16 3M Innovative Properties Company Thioether substituted imidazoquinolines
US6660747B2 (en) 2000-12-08 2003-12-09 3M Innovative Properties Company Amido ether substituted imidazoquinolines
US6660735B2 (en) 2000-12-08 2003-12-09 3M Innovative Properties Company Urea substituted imidazoquinoline ethers
US6677347B2 (en) 2000-12-08 2004-01-13 3M Innovative Properties Company Sulfonamido ether substituted imidazoquinolines
US6664265B2 (en) 2000-12-08 2003-12-16 3M Innovative Properties Company Amido ether substituted imidazoquinolines
US6667312B2 (en) 2000-12-08 2003-12-23 3M Innovative Properties Company Thioether substituted imidazoquinolines
US6677348B2 (en) 2000-12-08 2004-01-13 3M Innovative Properties Company Aryl ether substituted imidazoquinolines
US6664260B2 (en) 2000-12-08 2003-12-16 3M Innovative Properties Company Heterocyclic ether substituted imidazoquinolines
GB0107658D0 (en) 2001-03-27 2001-05-16 Chiron Spa Streptococcus pneumoniae
GB0108079D0 (en) 2001-03-30 2001-05-23 Microbial Technics Ltd Protein
AU2002309706A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
DE60234375D1 (de) 2001-09-14 2009-12-24 Cytos Biotechnology Ag VERPACKUNG VON IMMUNSTIMULIERENDEM CpG IN VIRUSÄHNLICHEN PARTIKELN: HERSTELLUNGSVERFAHREN UND VERWENDUNG
AU2002347404A1 (en) 2001-09-14 2003-04-01 Cytos Biotechnology Ag In vivo activation of antigen presenting cells for enhancement of immune responses induced by virus like particles
WO2003035836A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Hybridon Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends
KR100718371B1 (ko) 2001-11-27 2007-05-14 애나디스 파마슈티칼스, 인코포레이티드 ３-β-Ｄ-리보푸라노실티아졸로[４,５-ｄ]피리디민누클레오시드 및 이의 용도
US7321033B2 (en) 2001-11-27 2008-01-22 Anadys Pharmaceuticals, Inc. 3-B-D-ribofuranosylthiazolo [4,5-d] pyrimidine nucleosides and uses thereof
US6677349B1 (en) 2001-12-21 2004-01-13 3M Innovative Properties Company Sulfonamide and sulfamide substituted imidazoquinolines
US7071216B2 (en) 2002-03-29 2006-07-04 Chiron Corporation Substituted benz-azoles and methods of their use as inhibitors of Raf kinase
EP2275120A3 (en) 2002-04-02 2011-06-08 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Protein-based streptococcus pneumoniae vaccines
US6743920B2 (en) 2002-05-29 2004-06-01 3M Innovative Properties Company Process for imidazo[4,5-c]pyridin-4-amines
CA2487831A1 (en) 2002-06-11 2003-12-18 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic compositions
AU2003251518B2 (en) 2002-06-13 2009-07-02 New York University Synthetic C-glycolipid and its use for treating cancer infectious diseases and autoimmune diseases
ATE477251T1 (de) 2002-08-23 2010-08-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Pyrrolverbindungen als glykogen synthase kinase 3 inhibitoren
AU2003268353A1 (en) * 2002-08-30 2004-03-19 Tufts University Streptococcus pneumoniae antigens for diagnosis, treatment and prevention of active infection
JP2006506989A (ja) 2002-11-07 2006-03-02 シナジー アメリカ，インコーポレイテッド 肺炎球菌感染を治療または予防するための組成物および方法
AU2003300021A1 (en) 2002-12-27 2004-07-29 Chiron Corporation Thiosemicarbazones as anti-virals and immunopotentiators
US8193185B2 (en) 2003-01-21 2012-06-05 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Use of tryptanthrin compounds for immune potentiation
GB0301554D0 (en) 2003-01-23 2003-02-26 Molecularnature Ltd Immunostimulatory compositions
ES2423800T3 (es) 2003-03-28 2013-09-24 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Uso de compuestos orgánicos para la inmunopotenciación
JP2007525157A (ja) * 2003-04-15 2007-09-06 インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト 肺炎連鎖球菌抗原
RU2236257C1 (ru) 2003-09-15 2004-09-20 Косяков Константин Сергеевич Синтетический иммуноген для терапии и профилактики злоупотреблений наркотическими и психоактивными веществами
US7771726B2 (en) 2003-10-08 2010-08-10 New York University Use of synthetic glycolipids as universal adjuvants for vaccines against cancer and infectious diseases
WO2005063283A1 (en) 2003-12-31 2005-07-14 Sungkyunkwan University Vaccine comprising recombinant clpp protein of streptococcus pneumoniae
AU2005235080A1 (en) 2004-03-31 2005-11-03 New York University Novel synthetic C-glycolipids, their synthesis and use to treat infections, cancer and autoimmune diseases
WO2005097181A1 (en) 2004-04-05 2005-10-20 Pfizer Products Inc. Microfluidized oil-in-water emulsions and vaccine compositions
GB0410220D0 (en) 2004-05-07 2004-06-09 Kirkham Lea Ann Mutant pneumolysin proteins
WO2006084466A2 (en) * 2005-02-11 2006-08-17 Ace Biosciences A/S Surface-located streptococcus pneumoniae polypeptides
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US20060228369A1 (en) 2005-04-11 2006-10-12 Program For Appropriate Technology In Health Stabilization and preservation of temperature-sensitive vaccines
US7691368B2 (en) 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
CA2610667A1 (en) * 2005-06-01 2006-12-07 Variation Biotechnologies Inc. Peptide-based influenza vaccine formulation
US9486515B2 (en) 2005-06-27 2016-11-08 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
US8703095B2 (en) 2005-07-07 2014-04-22 Sanofi Pasteur S.A. Immuno-adjuvant emulsion
CN103251940A (zh) 2005-12-22 2013-08-21 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
FR2896162B1 (fr) 2006-01-13 2008-02-15 Sanofi Pasteur Sa Emulsion huile dans eau thermoreversible
WO2007116322A2 (en) 2006-02-17 2007-10-18 Novartis Ag Purification of bacterial antigens
AU2007229449A1 (en) * 2006-03-22 2007-10-04 Novartis Ag Regimens for immunisation with meningococcal conjugates
PT2086582E (pt) 2006-10-12 2013-01-25 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina compreendendo uma emulsão adjuvante óleo em água
EP1923069A1 (en) 2006-11-20 2008-05-21 Intercell AG Peptides protective against S. pneumoniae and compositions, methods and uses relating thereto
US9493517B2 (en) * 2011-11-07 2016-11-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Conjugates comprising an antigen and a carrier molecule

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