ES2567404T3

ES2567404T3 - Probióticos para influir en el metabolismo de las grasas y la obesidad

Info

Publication number: ES2567404T3
Application number: ES11191774.6T
Authority: ES
Inventors: Kajsa Ohlson; Margit Mahlapuu; Ulla Svensson
Original assignee: Arla Foods AMBA
Current assignee: Arla Foods AMBA
Priority date: 2005-10-07
Filing date: 2006-10-02
Publication date: 2016-04-22
Anticipated expiration: 2026-10-02
Also published as: CY1113704T1; EA200800913A1; WO2007043933A1; DK2431044T3; CN101287478B; CN101287478A; PL1945235T3; AU2006299956A1; JP2009511469A; EA015461B1; AU2006299956B2; EP2431044A1; EP1945235A1; SI1945235T1; CA2624890A1; US20080267933A1; EP1945235A4; ES2396865T3; SE529185C2; EP1945235B1

Abstract

Uso de al menos una bacteria probiótica para reducir la ganancia de peso, en el que la al menos una bacteria probiótica se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) con la condición de que el uso de dicha bacteria no sea para tratamiento terapéutico.

Description

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DESCRIPCION

Probioticos para influir en el metabolismo de las grasas y la obesidad Campo de la invencion

La invencion se refiere al uso de bacterias probioticas para la fabricacion de un producto alimentario, producto para pienso, complemento dietetico, producto nutricional y remedio natural para usar en la reduccion de la ganancia de peso, prevencion de la obesidad, incremento de la saciedad, prolongacion de la sensacion de saciedad, reduccion de la ingesta de alimentos, reduccion del deposito de grasas, o reduccion del almacenamiento de grasa abdominal con la condicion de que el uso de dichas bacterias no sea para tratamiento terapeutico.

Antecedentes de la invencion

El interes en el uso de alimentos para influir sobre la salud esta creciendo rapidamente entre investigadores, profesionales de la salud y en la industria alimentaria. El smdrome metabolico, incluidos la obesidad, el almacenamiento de grasa abdominal y la diabetes de tipo II es una de las principales amenazas para la salud y el bienestar humanos. Hoy en dfa mueren mas personas por comer demasiado que el numero de personas que muere por comer demasiado poco. Por tanto, la posibilidad de reducir el riesgo de obesidad y de almacenamiento de grasa corporal es de gran valor desde una perspectiva de salud mundial y la posibilidad de desarrollar productos alimentarios en esta area es de gran interes para la industria alimentaria.

La industria alimentaria ya ha respondido a esta demanda desarrollando productos con una densidad energetica baja, por ejemplo productos con bajos en grasas y carbohidratos. Las posibilidades de encontrar componentes bioactivos presentes de forma natural o que puedan anadirse a los alimentos, que influyan sobre el riesgo de obesidad, metabolismo de las grasas, metabolismo de la glucosa y la saciedad, abre nuevas posibilidades para que la industria desarrolle alimentos funcionales con efectos documentados sobre la salud. Recientemente, se han publicado estudios que muestran una correlacion entre el consumo de niveles elevados de calcio en leche y un mdice de masa corporal (IMC) bajo. Hoy en dfa, en una serie de artfculos de revision se ha llegado a la conclusion de que el calcio de la leche y los productos lacteos disminuye el riesgo de obesidad, el almacenamiento de grasas corporales y la resistencia a la insulina. El calcio por sf solo no parece tener esas propiedades y se ha especulado que ademas del calcio se necesiten componentes bioactivos presentes en la leche.

El ILSE (International life science institute) define los probioticos como “microorganismos anadidos con un efecto beneficioso sobre la salud”. Los probioticos se usan normalmente en alimentos, productos para pienso y complementos dieteticos por su influencia en la salud intestinal, infecciones y el sistema inmunitario. Tambien se ha demostrado que algunas cepas de probioticos, pero no todas las estudiadas, influyen sobre los niveles de colesterol en sangre y, recientemente se ha encontrado la posibilidad de disminuir la presion arterial mediante el uso de productos lacteos fermentados con bacterias acidolacticas proteoltticas. Por tanto, el interes en los probioticos es amplio y el papel crucial de la flora intestinal para la salud y bienestar del intestino y el sistema inmunitario se ha establecido con fuerza.

Durante los ultimos anos se han desarrollado tecnicas, a menudo denominadas genomicas y nutrigenomicas. Estas tecnicas permiten nuevas posibilidades unicas para estudiar la influencia de los alimentos, componentes nutricionales y probioticos sobre la salud y el bienestar. Las tecnicas permiten el estudio sobre la expresion genica de miles de genes al mismo tiempo. Por tanto, se pueden encontrar nuevas e inesperadas areas para los efectos sobre la salud y se puede sugerir el mecanismo detras de un efecto sobre la salud.

La base para esta solicitud la constituyen los estudios en seres humanos y ratones que, de forma interesante, muestran que un producto probiotico influye sobre la saciedad, disminuye el almacenamiento de grasas y el riesgo de obesidad. Los posibles mecanismos detras del efecto observado se explicaron a partir de estudios de expresion genica tras el consumo de productos probioticos.

Descripcion de la tecnica anterior

Se han descrito las funciones metabolicas que contribuyen al sobrepeso, al smdrome metabolico y al riesgo de diabetes de tipo II y el vinculo entre la nutricion general y dichas enfermedades tambien es bien conocido. No obstante, existe la necesidad de estudios de intervencion basados en dietas para establecer el papel de alimentos individuales y grupos de alimentos en la disminucion del riesgo para desarrollar dichas enfermedades. En estudios en esta area se han centrado en la densidad energetica, las grasas y los carbohidratos.

Un factor importante en el smdrome metabolico es el metabolismo de la glucosa, que incluye la sensibilidad a la insulina. Existe una relacion entre el deposito de grasas corporales, la insensibilidad a la insulina y el sobrepeso. Tambien existe una relacion entre la saciedad y la sensacion de satisfaccion. Las interacciones y relaciones entre todas estas funciones son complejas y es diffcil identificar la secuencia exacta de acontecimientos que conducen a salud o a enfermedad.

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Se ha descrito una serie de genes y sus correspondientes protemas que estan implicadas en la homeostasis energetica. El tejido adiposo sintetiza una serie de protemas con semejanza estructural a las citocinas y, por tanto, estas protemas se denominan adipocinas. Algunas de estas tambien se sintetizan en el intestino, o la smtesis esta regulada desde el intestino. El receptor nuclear PPAR-gamma esta implicado en la smtesis de, por ejemplo, la adiponectina, y la smtesis esta asociada con la ingesta de calonas y la senalizacion de la leptina. El incremento de la smtesis de adiponectina mejora la sensibilidad a la insulina incrementando el transporte, la oxidacion y disipacion de los acidos grasos en el musculo esqueletico e incrementando la sensibilidad de los hepatocitos a la insulina. Otro factor derivado de los adipocitos regulado nutricionalmente que influye sobre la sensibilidad a la insulina es la resistina. Los niveles circulantes de resistina aumentan en la obesidad, mientras que el tratamiento de ratones con resistina tuvo como resultado un incremento de la produccion de glucosa y una alteracion de la accion de la insulina. Por tanto, la resistina tiene una funcion en la homeostasis de la glucosa y actua como antagonista de la accion de la insulina, dando lugar a resistencia a la insulina. Las protemas de tipo resistina tambien se expresan en el tracto gastrointestinal (14). La protema apolipoprotema A-IV se secreta en el intestino delgado en seres humanos y en roedores. La smtesis se estimula por la ingesta de grasas y la protema probablemente este implicada en la inhibicion de la ingesta de alimentos tras la ingestion de grasas. Los estudios han demostrado que la apolipoprotema A-IV esta implicada probablemente en la regulacion de la ingesta de alimentos a corto y a largo plazo.

Hooper y col. (11) estudiaron la expresion genica en el intestino de ratones expuestos a Bacteroides thetraiotaomicron. Concluyeron que los experimentos muestran el papel esencial para la interaccion entre la microflora intestinal y el huesped. No se comunicaron efectos sobre el metabolismo energetico ni la obesidad. La influencia de los probioticos sobre la expresion genica en la mucosa del intestino delgado se ha estudiado para Lactobacillus rhamnosus GG (8). Su conclusion es que la administracion de Lactobacillus GG esta asociada con una respuesta genetica compleja. Las principales respuestas observadas son efectos sobre el sistema inmunitario, la inflamacion, la apoptosis, el crecimiento y diferenciacion celular, la adhesion celular y la transcripcion y transduccion de senales. No se comunicaron efectos sobre el metabolismo energetico, de las grasas de la glucosa o de la insulina. En una presentacion oral de W. de Vos, en la 4a Conferencia NIZO Dairy en 2005, se presento la influencia de los lactobacilos, por ejemplo, L. plantarum 299v, sobre la expresion genica en el intestino y la conclusion fue que el efecto sobre la expresion genica de diferentes cepas vana considerablemente. No se comunicaron efectos sobre el metabolismo energetico ni de las grasas. Se han publicado algunos artmulos que relacionan la flora intestinal con la ganancia de peso y el almacenamiento de grasas. Backhed y col. (7) estudiaron la importancia de la flora intestinal normal para la ganancia de peso y el almacenamiento de grasa corporal. Se demostro que en ratones gnotobioticos transformados en convencionales con una microbiota normal aumento su grasa corporal en un 60 % y aumento la resistencia a la insulina durante un periodo de alimentacion de 14 dfas a pesar de una menor ingesta de alimentos. Se presenta una sugerencia de como la microbiota puede influir sobre el almacenamiento de los trigliceridos. Por tanto, se sabe que la microbiota intestinal normal influye sobre el metabolismo de las grasas; no obstante, antes de esta investigacion no se sabfa si la flora normal podfa modificarse en relacion con el metabolismo de las grasas. Ali y col. (2, 3) han estudiado la influencia de las isoflavonas de soja con o sin probioticos sobre el metabolismo del colesterol y el deposito de grasas y encontraron que los probioticos usados no teman ninguna influencia sobre el colesterol y ni el deposito de grasas. Otras investigaciones han demostrado que algunas cepas de probioticos pueden influir sobre el nivel de colesterol en sangre (1, 13). Estos y otros estudios en los que se comparan cepas de probioticos demuestran que cepas de probioticos diferentes tienen caractensticas diferentes y es importante escoger las cepas correctas para efectos de salud espedficos.

En la solicitud de patente PCT WO 04/014403 (15), se describe el uso de probioticos para reducir la cantidad de monosacaridos y disacaridos en los alimentos y, de este modo, tratar o prevenir el riesgo de obesidad. En la patente de EE.UU. n° 6 696 057, Bojrab (4) ha patentado una composicion de bacterias de yogur, por ejemplo Lactobacillus bulgaricus y Streptococcus thermophilus, para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, hiperlipidemias y enfermedades autoinmunitarias, y en la patente de EE.UU. 6 641 808 Bojrab (5) describe el uso de la misma composicion tambien para el tratamiento de la obesidad. Esta invencion tambien se describe en la solicitud de patente europea 1 177 794/6. Las patentes/solicitudes tienen una larga descripcion sobre la influencia de los probioticos sobre la salud intestinal, la infeccion, y la inmunidad, pero el unico experimento presentado que confirma la influencia sobre la obesidad es un unico ensayo de alimentacion en una persona. El uso de te verde o de extractos de te verde en combinacion con una serie de componentes bioactivos y probioticos para la perdida de peso ha sido patentado por Gorsek en las patentes de EE.UU. 6 383 482 (9) y 6 565 847 (10). En ambas patentes, los principales componentes activos son el te verde y los componentes bioactivos, mientras que los probioticos se anaden como parte de la composicion basica. En la patente de EE.UU. 6 808 703 y la solicitud de patente japonesa 2001-292728 (16), se describe un modo de preparar un alimento para el tratamiento de la obesidad que contiene levaduras, enterobacterias, bacterias acidolacticas, oligosacaridos y fibra vegetal. No se presentan ejemplos ni reivindicaciones sobre el tratamiento de la obesidad.

Descripcion de la invencion

Un objeto de la Invencion es el uso de bacterias probioticas para la fabricacion de un producto alimentario, producto para pienso, complemento dietetico, producto nutricional y remedio natural para usar en la reduccion de la ganancia de peso, incremento de la saciedad, prolongacion de la sensacion de saciedad, reduccion de la ingesta de alimentos, reduccion del deposito de grasas, o reduccion del almacenamiento de grasa abdominal con la condicion de que el uso de dichas bacterias no sea para tratamiento terapeutico.

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Este objeto se consigue en cuanto a que las bacterias probioticas se seleccionan del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus NCFB 1748 y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) (las bacterias estan depositadas en la coleccion de cultivos LMG en Gent, disponible en la coleccion de cultivos NCFB y en Chr. Hansen Company DK, respectivamente). Las cepas se denominaran como LMG P-17806, NCFB 1748 y Bb12 (DSM 15954) mas adelante.

Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus NCFB 1748, y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) estan bien caracterizados y la cepa LMG P-17806 y su uso se han patentado anteriormente (documento WO 99/29833). Las tres cepas sobreviven bien en productos alimentarios y durante el paso a traves del intestino.

El impacto de la invencion es de considerable importancia, ya que el estilo de vida habitual de hoy en dfa a menudo implica exceso de ingesta de alimentos que conduce a un incremento del riesgo de smdrome metabolico, incluyendo obesidad, deposito de grasa abdominal y diabetes de tipo II. La diabetes de tipo II se debe a una sensibilidad baja a la insulina o a resistencia a la insulina. Esta amenaza para la salud humana aumenta continuamente en todos los grupos de edad en todo el mundo. Los lactobacilos como probioticos estan aceptados como productos alimentarios y productos para piensos, productos naturales, complementos dieteticos, y en remedios naturales, formulaciones farmaceuticas activas y productos medicinales. Son faciles de usar en dichos sistemas de dispensacion y se pueden consumir facilmente a diario. El consumo regular de dichas bacterias ayudara a controlar la ganancia de peso, prevenir la obesidad, incrementar la saciedad, prolongar la sensacion de satisfaccion, reducir la ingesta de alimentos, reducir el deposito de grasas, mejorar el metabolismo energetico, potenciar la sensibilidad a la insulina, tratar la obesidad y tratar la insensibilidad a la insulina y, de este modo, el riesgo de enfermedades incluidas en el smdrome metabolico.

En la invencion se incluyen los estudios siguientes:

Un estudio ha mostrado de un modo prometedor que un producto probiotico puede disminuir la ganancia de peso en seres humanos. Otros estudios han mostrado que un hombre que recibio probioticos notifico mayor saciedad y tuvo una sensacion de satisfaccion durante mas tiempo que individuos que recibieron la misma leche acidificada sin probioticos o placebo. Los ratones a que recibieron probioticos tuvieron una ingesta de energfa total menor, menos deposito de grasas en el tejido adiposo y menor ganancia de peso total que los individuos que no recibieron probioticos. Los estudios de expresion genica confirman que el mecanismo probable que reside tras los efectos observados es una influencia en un grupo de genes implicados en el metabolismo energetico, de las grasas, del azucar y de la insulina sobre la sensacion de satisfaccion.

Ejemplos

1) Regulacion del peso en seres humanos

En un estudio con ocultacion doble y controlado con placebo se administro a seres humanos una leche acidificada que contema probioticos (LMG P-17806 y NCFB 1748) o la misma leche acidificada sin probioticos o un comprimido de calcio. Los grupos consistfan en 15, 14 y 10 personas, respectivamente. Las bacterias probioticas se anadieron al producto en una concentracion final de 5x10E7 UFC/ml y el numero de bacterias fue estable en el producto durante el tiempo que duro el experimento. Los participates estuvieron comiendo 2 x 2,5 dl del producto todos los dfas. Las personas incluidas teman un ligero sobrepeso (IMC 25-30). El objetivo del ensayo era estudiar los efectos de los probioticos sobre el metabolismo del colesterol y la ganancia de peso se midio como medida de control. No se realizo ninguna recomendacion sobre el control de peso, pero a todos los participates se les ofrecio un tratamiento de reduccion de peso tras el ensayo. Las bacterias sobrevivieron al paso por el intestino e incrementaron el numero de lactobacilos encontrados en las heces de los participates en un factor de 5. Tras 4 semanas se observo una sorprendente aunque significativa diferencia en la ganancia de peso entre los tres grupos. La cifra media de ganancia de peso fue 0,25 kg en el grupo que recibio el producto probiotico, 0,75 kg en el grupo que recibio la leche acidificada sin probioticos y 1,4 kg en el grupo que recibio el comprimido.

Vease la figura 1.

2) Saciedad y sensacion de satisfaccion en seres humanos

En un estudio con ocultacion doble y controlado con placebo se administro a seres humanos bien una leche acidificada que contema probioticos en dos dosificaciones diferentes o bien un placebo n° 1 consistente en la misma leche acidificada sin probioticos o bien un placebo n° 2 consistente en leche acidificada sin ninguna bacteria acidolactica en absoluto. Los microorganismos probioticos LMG P 17806, NCFB 1748, y Bb12 se anadieron al producto en una concentracion final de 1x10E6 UFC/ml y 5x10E7 UFC/ml de cada cepa. Tras un desayuno convencional controlado, que inclrna 3 dl de cualquiera de los cuatro productos, se pidio a los participates que indicaran saciedad y hambre en una escapa EVA (Escala Visual Analogica) directamente tras la comida y de forma continua cada media hora durante 4 horas. En el estudio se incluyo a un total de 10 personas y cada participate recibio los cuatro productos pero en diferentes ocasiones y se calcularon las diferencias relativas. Directamente despues de la comida se produjo una ligera diferencia en las puntuaciones de saciedad entre los productos. La leche acidificada con probioticos a una concentracion de 5x 10E7 UFC/ml y 1x10E6 dio las puntuaciones mas altas (puntuacion EVA relativa 6,6 y 6,4 respectivamente) y el placebo n° 1 tuvo una puntuacion intermedia (puntuacion

EVA relativa 6,2) y el placebo n° 2 la mas baja (puntuacion EVA relativa 5.9). Las puntuaciones de saciedad disminuyeron tras las 3,5 horas a 3,1, 3,0, 2,5 y 2,2, respectivamente. La diferencia fue pequena pero la diferencia entre los productos persistio y se observo una influencia sobre la sensacion de satisfaccion para el producto probiotico con dos concentraciones diferentes de las bacterias. Con respecto al hambre, se pudo ver la situacion 5 opuesta, es decir los productos probioticos dieron una puntuacion de hambre menor que los dos productos placebo. Directamente despues de la comida, los dos productos probioticos dieron como resultado puntuaciones de hambre de 0,4 para ambos productos en la escala EVA, el placebo n° 1 una intermedia (puntuacion EVA 0,9) y el placebo n° 2 dio una puntuacion EVA de hambre de 1,1. Tras 4 horas, las cifras fueron de 6,0, 6,2, 7,0 y 6,9 respectivamente.

Tras el desayuno convencional anterior y las cuatro horas en las que se observaron los datos sobre saciedad y 10 hambre se ofrecio a los participates comer una comida convencional. Se pidio a los participates que comieran hasta que estuvieran agradablemente satisfechos y que intentaran conseguir el mismo nivel de plenitud tras cada desayuno diferente. Despues de comer los productos probioticos, la ingesta de energfa en la comida fue de 3690 kJ para el producto con un nivel alto de probioticos, de 3810 para el nivel bajo de probioticos. Para el placebo n° 1 fue 3850 y para el placebo n° 2 fue 3995. Esto muestra que los productos probioticos pueden reducir la ingesta de 15 energfa en una comida posprandial tras comer los productos probioticos como parte del desayuno.

Ingesta de alimentos en ratones

Ratones con flora normal de la cepa Swiss Webster recibieron leche acidificada que contema LMG P-17806 o NCFB 1748 o un producto de placebo con la misma composicion pero sin probioticos durante 10 dfas. Los ratones teman entre 6 y 8 semanas de edad cuando se comenzo la administracion. Los grupos a los que recibieron probioticos 20 conteman 7 ratones en cada grupo y el grupo de placebo consistio en 5 animales. Los microorganismos probioticos se anadieron a los productos en una concentracion final de 1x10E8 UFC/ml y el numero de bacterias fue estable en el producto durante el periodo de alimentacion. Los ratones recibieron dos dosis diarias convencionales de los productos, una de 1 ml mediante alimentacion por sonda oral y una mediante inyeccion sublingual. Ambas bacterias probioticas sobrevivieron al paso por el intestino y estuvieron presentes en una cifra significativa en el intestino 25 delgado y grueso de los ratones. Ademas de los productos probioticos y el producto placebo, los ratones teman acceso libre a la dieta de ingrediente purificado (D12450B de Research Diets Inc., New Jersey, EE.UU.). La ingesta diaria de alimentos se comparo entre los dos grupos de ratones que recibieron cepas de Lactobacillus frente al grupo de ratones con placebo. Los productos fueron bien tolerados por los ratones.

Durante la segunda parte del periodo de alimentacion, la ingesta de alimentos se redujo significativamente en los 30 grupos de animales a que recibieron probioticos en comparacion con el grupo que recibio el producto de placebo. Vease la figura 2.

3) Almacenamiento de grasa abdominal en ratones

Ratones con flora normal recibieron, bien un producto probiotico de leche acidificada que contema LMG P-17806 o bien un producto de placebo con la misma composicion pero sin probioticos, o se mantuvieron como un grupo 35 control que recibio el mismo pienso que los otros dos grupos pero sin la leche acidificada. La cepa de ratones escogida fue C57B16 (Charles River) que es sensible a la obesidad inducida por la dieta. El numero de animales incluidos en los diferentes grupos fue de 15 en cada uno de los grupos que recibieron leche acidificada y 3 en el grupo control. Los ratones se introdujeron en el estudio cuando teman 9 semanas de edad. El numero de bacterias probioticas en el producto fue 1x10E8 UFC/ml y se permitio a los ratones ingerir el producto libremente, 5 dfas a la 40 semana durante un numero total de 12 semanas. Para una rapida ganancia de peso, se alimento a los ratones con una dieta rica en grasas (D 12309 de Research Diets Inc. New Jersey, USA que contiene 36 % de grasas durante las primeras 5 semanas y, despues, D 12492 (35% de grasas) de la misma empresa durante las semanas restantes del ensayo). Tras 12 semanas se sacrifico a los ratones y se analizaron los datos sobre ganancia de peso, consumo de alimentos y cantidad de grasa abdominal. Los ratones que recibieron leche acidificada ganaron menos peso que 45 los ratones control que no recibieron ninguna leche acidificada. Los ratones que recibieron leche acidificada con probioticos tambien tuvieron un almacenamiento menor de grasa abdominal en comparacion con el grupo que recibio leche acidificada sin probioticos y el grupo control que no recibio ninguna leche acidificada en absoluto.

5) Expresion genica en ratones

Ratones con flora normal y sin germenes de la cepa Swiss Webster recibieron leche acidificada que contema, bien 50 LMG P-17806 o NCFB 1748, o bien un producto de placebo con la misma composicion pero sin probioticos durante 10 dfas. Los ratones teman entre 6 y 8 semanas de edad cuando se comenzo la administracion. Los grupos que recibieron probioticos conteman 6 ratones en cada grupo y el grupo de placebo consistio en 4 animales. Los microorganismos probioticos se anadieron a los productos en una concentracion final de 1x10E8 UFC/ml y el numero de bacterias fue estable en el producto durante el periodo de alimentacion. Los ratones recibieron el 55 producto a diario mediante alimentacion por sonda oral. Durante el estudio, los ratones tuvieron acceso libre a la dieta de ingrediente purificado (D12450B de Research Diets Inc., New Jersey, EE.UU.). Ambas bacterias probioticas sobrevivieron al paso por el intestino y estuvieron presentes en una cifra significativa en el intestino delgado y grueso de los ratones. Se sacrifico a los ratones y se analizo la expresion genica en el intestino delgado mediante tecnologfa de micromatriz con oligonucleotidos. Ademas de los efectos esperados sobre el sistema inmunitario, se

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encontro que los efectos imprevistos sobre la expresion de una serie de genes implicados en el metabolismo y la homeostasis energeticos fueron diferentes en el grupo de placebo comparado con los dos grupos con probioticos. Entre los genes que mostraron un cambio significativo en la expresion estuvieron Scd1, Acrp30, Adn, Thrsp, Car3, y Apoa-4, todos los cuales estuvieron regulados positivamente en los grupos que recibieron probioticos, y Retnlb que estuvo regulado negativamente en los grupos que recibieron probioticos, en comparacion con el grupo con placebo. El patron de expresion genica diferencial fue muy similar para las cepas de probioticos usadas. La expresion diferencial de los genes de adipsina (Adn), adiponectina (Acrp 30), anhidrasa carbonica 3 (Car3) y beta de tipo resistina (Retnlb) en ratones sin germenes se confirmo mediante PCR cuantitativa en tiempo real, vease la figura 3. La figura 4 muestra los niveles de expresion de apolipoprotema A-IV (Apoa4) en ratones colonizados por flora normal, verificada mediante un abordaje de PCR cuantitativa en tiempo real.

6) Dosificacion

La dosificacion total de las cepas individuales de las bacterias probioticas en los diferentes experimentos descritos anteriormente fue de 1x10E8-1x10E9 UFC (experimentos con ratones) y 2,5x10E8-2,5x10E10 (experimentos con seres humanos). Esta dosificacion tiene que administrarse en una porcion o como una dosis diaria, lo que significa que, por ejemplo, una bebida para uso humano que se consuma en cantidades de 200-500 ml tiene que contener 0,5x10E6-1,25x10E8 UFC/ml de la cepa individual para que sea eficaz y una capsula tiene que contener la cantidad total de bacterias en aproximadamente 1 g del contenido en la capsula, es decir 1x10E8-2,5x10E10. Para las concentraciones mayores de bacterias, las bacterias tienen que concentrarse mediante liofilizacion o deshidratacion por pulverizacion.

7) Preparacion del producto

Las bacterias probioticas tienen que anadirse a productos a base de leche, cereales o frutas. Las bacterias se anadieron como un concentrado, por ejemplo liofilizado, y la supervivencia se ha analizado en las tres matrices. La supervivencia fue muy buena en los productos a base de leche y a base de cereales. En los productos a base de frutas, la supervivencia se ve afectada por el tipo de fruta. Como polvo liofilizado se tienen que tomar precauciones con respecto a la actividad del agua y la exposicion al oxfgeno. Los resultados de la produccion del producto se pueden ver en la tabla 1.

Las bacterias probioticas tambien se pueden anadir a los productos a base de leche junto con otras bacterias acidolacticas para la produccion de diferentes tipos de productos cultivados. En este ambiente, las bacterias probioticas se pueden multiplicar y se ajustaran bien al ambiente acido, dando una buena supervivencia tambien en el bajo pH final de dichos productos. Los resultados de la produccion del producto se pueden ver en la tabla 1.

Tabla 1. Supervivencia de las bacterias probioticas en diferentes matrices de productos medida como millones de

UFC/g. Los productos se almacenaron a 8 °C.

Bacterias: Leche Granizado de leche/fruta Bebida de cereales Polvo liofilizado en mezcla de cereales Zumo de frutas de grosella Zumo de frutas de manzana Bebida de yogur Yogur Leche agria

LMG P-17806, dia 1: 53 56 50 45 46 53 67 70 74

LMG P-17806, dia 21: 55 51 52 39 13 35 55 75 63

NCFB 1748, dia 1: 50 53 56 43 50 55 57 56 60

NCFB 1748, dia 21: 42 43 43 37 3 30 32 42 44

Bb12, dia 1: 59 60 65 65 62 67 62 73 68

Bb 12, dia 21: 49 47 60 31 14 49 51 68 60

Referencias:

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7) Backhed F., H Ding, T. Wang, L. V. Hooper, G. Y. Koh, A. Nagy, C. F. Semenkovich yd J. I. Gordon. 2004. The gut microbiota as an environmental factor that regulates fat storage. PNAS 101:15718-15723.

8) Di Caro S., H. Tao, A. Grillo, C. Elia, G. Gasbarrini, A. R. Sepulveda, y A. Gasbarrini. 2005. Effects of Lactobacillus GG on genes expression pattern in small bowel mucosa. Digestive and Liver Disease 37:320-329.

11) Gorsek W. F. 2000. Weight loss composition containing green tea, hydroxycitric acid, 5-hydroxytryptophane, glucomannan, picolinate and Lactobacillus. Patente de EE. UU. 6 383 482. Hooper L. V., M Wong, A. Thelin, L. Hansson, P.G. Falk y J.I. Gordon. 2001. Molecular analysis of commensal host-microbial relationship in the intestine. Science 291 (5505):881-884.

10) Gorsek W. F. 2002. Thermogenic weight management composition. Patente de EE. UU. 6 565 847.

12) Park H. O., Y. B. Bang, H. J. Joung, B. C. Kim y H. R. Kim. 2004. Lactobacillus KTCK 0774BP and acetobacter KCTC 0773BP for treatment or prevention of obesity and diabetes mellitus. Patente de EE. UU. 6 808 703.

13) Pereira D. I. y G. R. Gibson. 2002. Effects of consumption of probiotics and prebiotics on serum lipid levels in humans. Crit. Rev. Biochem Mol Biol. 37:259-281.

14) Steppan C. M., S. T. Balley, S. Bath, E. J. Brown, R. R. Banerjee, C. M. Wright, H. R. Patel, R. S. Ahlma, y M. A. Lazar. 2001. The hormone resistine links obesity to diabetes. Nature 409:307.

15) Song S.H., S. K. Kang, j. H. Kim, y. H. Park, y H. O. Park 2002. Microorganisms for ihibiting obesity and diabetes mellitus. Solicitud de patente PCT WO 04/014403.

16) Yanagida F., y K. Sano. 2000. Obesity preventative food. Solicitud de patente japonesa 2001-292728.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

REIVINDICACIONES

1. Uso de al menos una bacteria probiotica para reducir la ganancia de peso, en el que la al menos una bacteria probiotica se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) con la condicion de que el uso de dicha bacteria no sea para tratamiento terapeutico.
2. Uso de al menos una bacteria probiotica para incrementar la saciedad, en el que la al menos una bacteria probiotica se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) con la condicion de que el uso de dicha bacteria no sea para tratamiento terapeutico.
3. Uso de al menos una bacteria probiotica para prolongar la saciedad, en el que la al menos una bacteria probiotica se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) con la condicion de que el uso de dicha bacteria no sea para tratamiento terapeutico.
4. Uso de al menos una bacteria probiotica para reducir la ingesta de alimentos, en el que la al menos una bacteria probiotica se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) con la condicion de que el uso de dicha bacteria no sea para tratamiento terapeutico.
5. Uso de al menos una bacteria probiotica para reducir la deposicion de grasa, en el que la al menos una bacteria probiotica se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) con la condicion de que el uso de dicha bacteria no sea para tratamiento terapeutico.
6. Uso de al menos una bacteria probiotica para reducir el almacenamiento de grasa abdominal, en el que la al menos una bacteria probiotica se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806), Lactobacillus acidophilus (NCFB 1748) y Bifidobacterium lactis Bb12 (DSM 15954) con la condicion de que el uso de dicha bacteria no sea para tratamiento terapeutico.
7. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque la bacteria probiotica se usa para fabricar un producto seleccionado del grupo que consiste en un producto a base de leche, un producto a base de cereal y un producto a base de fruta o composiciones derivados de los mismos.
8. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque la bacteria probiotica se usa como un concentrado, por ejemplo, liofilizado.
9. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque la bacteria probiotica esta comprendida en una capsula.
10. Uso de acuerdo con la reivindicacion 9, caracterizado porque la capsula contiene una dosificacion de bacterias probioticas entre 1x108 UFC y 2,5x108 UFC.
11. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el producto probiotico se selecciona del grupo que consiste en un producto alimentario, un producto para pienso, un suplmento dietetico, un remedio natural y una formulacion farmaceutica activa.

imagen1

Figura 1. Efecto de los probioticos sobre la ganancia de peso en seres humanos tras 4 semanas de tratamiento.

Producto

Ganancia de peso (kg) DE Significacion*

Leche acidificada probiotica

0,25 0,25 a

Leche acidificada

0,75 0,3 a, b

Placebo, comprimido de calcio

1,4 0,35 B

*Letras diferentes= diferencia significativa p<0,05

imagen2

Figura 2. Ingesta diaria de alimentos en dos grupos de ratones receptores de las bacterias probioticas Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806) o Lactobacillus acidophilus NCFB 1748, en leche acidificada en comparacion con el grupo de ratones con placebo receptores solo de leche acidificada. El consumo de alimentos se ha estimado para todo el periodo de administracion del producto (dfas 1-10) y tras el periodo de ajuste (dfas 5-10). Los resultados se expresan como el porcentaje comparado con el grupo de ratones con placebo. La significacion estadfstica se ha determinado mediante pruebas t de Student no pareadas bilaterales.

*representa p< 0,05.

imagen3

Figura 3. Expresion de los genes de adipsina (Adn), adiponectina (Acrp30), anhidrasa carbonica 3 (Car3) y beta de tipo resistina (Retnlb) cuantificada mediante RT-PCR en ratones sin germenes. Los dos grupos de ensayo de ratones recibieron las bacterias probioticas Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806) o Lactobacillus acidophilus NCFB 1748 en leche acidificada mientras que el grupo de ratones con placebo recibio solo leche acidificada. Cada barra representa la media + ETM. La significacion estadfstica se ha determinado mediante pruebas t de Student no pareadas y bilaterales. * representa p < 0,05. N = 6 para los dos grupos con probioticos y n = 4 para el grupo de placebo.

imagen4

Figura 4. Expresion del gen de apolipoprotema A-IV (Apoa4) cuantificada mediante RT-PCR en ratones colonizados con microflora normal. Los dos grupos de ensayo de ratones recibieron las bacterias probioticas Lactobacillus casei F19 (LMG P-17806) o Lactobacillus acidophilus NCFB 1748 en leche acidificada mientras que el grupo de ratones con placebo recibio solo leche acidificada. Cada barra representa la media + ETM. La significacion estadfstica ha determinado mediante pruebas t de Student no pareadas y bilaterales. * representa p < 0,05. N = 6 para los dos grupos probioticos y n = 4 para el grupo de placebo.