KR102445708B1

KR102445708B1 - 비피도박테리움 락티스 idcc 4301을 포함하는 체지방감소용 조성물

Info

Publication number: KR102445708B1
Application number: KR1020210171209A
Authority: KR
Inventors: 이민지; 방원영; 양수연; 채승아; 반오현; 양정우
Original assignee: 일동바이오사이언스(주)
Priority date: 2021-12-02
Filing date: 2021-12-02
Publication date: 2022-09-23
Anticipated expiration: 2041-12-02

Abstract

본 발명은 체지방 감소 기능을 가지는 조성물에 관한 것으로, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301[기탁번호: ATCC BAA-2848]를 포함한다.

Description

비피도박테리움 락티스 IDCC 4301을 포함하는 체지방감소용 조성물{Composition for reducing body fat comprising Bifidobacterium lactis IDCC 4301}

본 발명은 유산균을 포함하는 체지방감소용 조성물에 관한 것이다.

2018 국민건강통계에 따르면 우리나라 성인의 비만 유병률은 17.3%로 2015년부터 지속적으로 증가하는 양상을 보인다.

비만은 지방간, 골관절염, 당뇨병 등 다양한 건강상의 합병증을 일으키는 만성질환으로, 에너지 섭취와 소비의 불균형에 의해 지방조직이 과도하게 축적됨으로써 유발된다. 지방조직은 에너지 항상성을 담당하는 내분비 기관으로써 잉여 에너지를 지방 대사물 형태로 저장한다.

이러한 항상성은 지방조직을 구성하는 지방 세포의 분화, 축적, 분해의 기전에 의해 제어된다. 비만을 예방 및 치료하기 위해서는 지방 세포의 분화와 축적을 억제하거나 지방 세포의 이용을 늘려 분해를 촉진함으로써 균형을 유지해야 한다.

현재 개발된 비만 치료제는 뇌의 중추신경으로부터 식욕 억제를 돕는 '리덕틸', '슬리머', '푸링' 등과 지방 흡수를 억제하는 '제니칼'이 알려져 있다. 치료제는 효과가 빠르고 강력하기 때문에 널리 사용되어 왔지만, 장기간 복용 시 부작용과 내성이 발생한다는 점에서 위험성이 크다. '푸링'의 '펜디메트라진' 성분은 마약으로 분류할 정도로 의존성이 높고, '리덕틸', '슬리머'의 '시부트라민'은 심장발작과 뇌졸중 등의 위험이 있어 판매 중지되어 새로운 비만치료제 내지 체지방감소용 조성물의 개발이 필요하다.

미국특허공개 제2008-0267933호 (2008년 10월 30일 공개)

본 발명은 유산균을 포함하는 체지방감소용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 본 발명의 목적은 체지방 감소 기능을 가지는 조성물에 있어서, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301[기탁번호: ATCC BAA-2848]를 포함하는 것에 의해 달성된다.

상기 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301는, 모유를 먹인 유아의 대변에서 분리되었으며, 지방세포 내에서 PPARγ, CEBP/α, A-FABP 및 FAS의 발현을 감소시킬 수 있다.

상기 본 발명의 목적은 상기 조성물을 0.1 내지 50중량% 포함하는 식품에 의해 달성된다.

상기 본 발명의 목적은 상기 조성물을 0.1 내지 50중량% 포함하며 체지방 감소 기능이 있는 건강기능식품에 의해 달성된다.

상기 본 발명의 목적은 비만을 치료하기 위한 약학적 조성물에 있어서, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301을 포함하는 것에 의해 달성된다.

본 발명에 따르면 유산균을 포함하는 체지방감소용 조성물이 제공된다.

도 1은 3T3-L1 세포를 이용하여 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 처리에 따른 세포독성을 확인한 그래프이고,
도 2는 3T3-L1 세포를 이용하여 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 처리에 따른 지방 축적량을 Oil red O 염색을 통해 확인한 그래프이고,
도 3은 western blot 방법을 이용하여 3T3-L1 세포 내 비만 관련 바이오마커의 단백질 발현양을 측정한 그래프이고,
도 4는 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 처리에 따른 C57BL/6J 쥐의 12주간 체중 변화를 나타낸 그래프이고,
도 5는 C57BL/6J 쥐의 지방(부고환 주위 지방, 신장 주위 지방, 서혜부 지방, 장간막 주위 지방) 무게를 측정하여 군 별로 비교한 그래프이고,
도 6은 C57BL/6J 쥐의 혈청에서 간 독성(AST, ALT) 및 혈중 지질 마커(TG, TC, LDL-C)를 분석한 그래프이고,
도 7은 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 처리에 따른 부고환 주위 지방 세포 크기 변화를 hematoxylin&eosin(H&E 염색)을 통해 조직병리학적으로 확인한 그래프이다.

이하 도면을 참조하여 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

첨부된 도면은 본 발명의 기술적 사상을 더욱 구체적으로 설명하기 위하여 도시한 일 예에 불과하므로 본 발명의 사상이 첨부된 도면에 한정되는 것은 아니다. 또한 첨부된 도면은 각 구성요소 간의 관계를 설명하기 위해 크기와 간격 등이 실제와 달리 과장되어 있을 수 있다.

본 발명은 유산균을 포함하는 체지방감소용, 체지방분해용, 체지방조절용, 비만예방 내지 비만치료용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 유효성분은 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 [기탁번호: ATCC BAA-2848]이며, 이는 모유를 먹인 유아의 대변에서 분리한 것이다.

비피도박테리움 락티스 IDCC 4301은 생균 혹은 유효성분이 포함된 발효산물(supernatants) 형태일 수 있다.

본 발명의 조성물은 약학적 조성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여 방식으로 적용된다. 본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 일반적인 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 또는 0.001-1000 ㎎/kg 범위내이다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61(tween 61), 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

한편, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여, 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물은 성인 1인당 약 0.1 ng 내지 약 1000 mg/kg, 구체적으로 1 ng 내지 약 100 mg/kg 또는 1 ng 내지 약 10 mg/kg로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.

다른 예시로, 숙취해소용 및/또는 간장보호용 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 달라질 수 있으므로, 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한 본 발명은 숙취해소용 및/또는 간장보호용 식품 또는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태의 식품에 대한 조성물을 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 예를 들면, 건강식품으로는 유산균이 함유된 껌, 비타민 복합체, 차, 주스 및 드링크 형태로 제조할 수 있으며, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301을 유효성분으로 하는 식품 조성물을 과립화, 캡슐화 또는 분말화하여 섭취할 수 있다.

본 발명의 기능성 식품 조성물은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함할 수 있다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

상기 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 추출물을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

다른 예로, 식품 조성물의 제형은 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태뿐만 아니라 일반 식품 또는 음료의 형태 어느 것이나 가능하다.

식품의 종류에는 특별히 제한은 없고, 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있다.

일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 사용량은 0.1 내지 50중량%, 0.1 내지 20중량% 또는 0.1 내지 10중량% 포함될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.

일 구체예에 따른 식품 조성물 중 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.

상기 외에 일 구체예에 따른 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제를 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

이하 실험예를 통해 본 발명을 상세히 설명한다.

[실험예 1] 프로바이오틱스 발효산물의 제조

모유를 먹인 유아의 대변에서 분리한 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301은 MRS배지(BD Difco, Franklin Lakes, NJ, USA)에서 혐기 조건으로 37℃, 18시간 배양하였다. 10⁹ CFU/mL의 균이 포함된 배양액은 원심분리(1,500g, 10분)하여 1X phosphate buffered saline(PBS, Gibco-BRL, Gaithersburg, MD)로 세척하였고 이 과정을 2번 반복하였다. 이후 sonicator를 이용하여 약 2분간 균을 파쇄하였고, 다시 원심분리(1,100g, 15분)하여 0.22 μm syringe filter로 필터 후 샘플을 준비하였다.

[실험예 2] 지방세포의 지방 축적 억제 확인

1) 세포 배양 및 세포 독성 확인

3T3-L1 지방전구세포는 American Type Culture Collection(ATCC, Manassas, Virginia)에서 분양받아 사용하였다. 3T3-L1 세포는 10% bovine calf serum(BCS, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA), 1% penicillin-streptomycin(P/S, Welgene, Daegu, Korea)이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM, Welgene, Daegu)을 이용하여 37℃, 5% CO₂ 환경에서 100% confluence가 될 때까지 배양하였다. Confluence 상태로 이틀을 더 배양한 후(day 0), 0.5mM 3-isobutyl-1-methylxanthin, 1μM dexamethasone, 10μg/mL insulin, 10% fetal bovine serum(FBS, Carpricorn Scientific Gmbh, Ebsdorfergrund, Germany), 1% P/S이 포함된 high glucose-DMEM으로 분화를 유도하였다. 분화 유도 2일 째(day 2)에는 10μg/mL insulin과 10% FBS, 1% P/S이 포함된 high glucose-DMEM으로 교체하였고, 4일 째(day 4)부터는 10% FBS, 1% P/S만 포함된 high glucose-DMEM을 이틀에 한 번씩 교체하며 8일까지 배양하였다(day 8).

세포 독성은 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT, Duchefa, Haarlem, Netherlands) 방법으로 확인하였다. 3T3-L1 세포를 24-well plate에 2.5×10⁴ cells/mL로 분주하고 24시간 동안 배양시킨 다음, 0~10% 농도의 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301을 24시간 처리하였다. 배지를 제거하고 각 well에 5mg/mL MTT 용액 200μl를 첨가하여 1시간 30분 동안 37℃에서 배양하였다. MTT 용액을 제거하고 dimethyl sulfoxide(DMSO)를 400μl씩 넣어 30분 동안 shaker에서 배양한 후, microplate reader(BioTek, Winooski, VT)를 사용하여 570nm-630nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 실험은 3회 반복하여 평균값을 계산하였으며, 상기 측정 결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타난 바와 같이, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301은 3T3-L1 지방전구세포에서 세포 독성을 나타내지 않았지만, 5% 이상의 농도 처리 시 분화 마지막 단계에서 세포 탈착 현상을 보여 분화 0~8일 동안 3T3-L1 세포에 2, 4% 농도로 투여하였다.

2) 지방세포 염색

비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 처리에 따른 지방구 형성 정도는 Oil red O 염색을 통해 확인하였다. 3T3-L1 세포를 6-well plate에 8×10⁴cells/mL로 분주하고 8일 동안 분화시켰다. 4% paraformaldehyde로 30분 간 상온에서 고정한 후, 1X PBS로 세척하고 Oil red O 용액을 넣어 1시간 동안 상온에서 염색하였다. 염색된 지방구는 1X PBS로 다시 세척하여 현미경으로 관찰하였다. 이후 염색된 지방구를 100% iso-propanol로 추출하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정 결과는 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301을 처리한 군은 지방구의 수와 크기가 무처리군에 비하여 상당히 감소하였다. 염색된 지방구를 iso-propanol로 추출하여 정량화한 결과, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 처리군에서 농도 의존적으로 지방구 함량이 감소하였으며 2, 4% 처리군에서 모두 유의적이었다.

[실험예 3] 지방세포 내 비만 관련 바이오마커 측정

지방세포 내 비만 관련 바이오마커는 western blot을 통해 측정하였다. 분화된 3T3-L1 세포는 1% protease 및 phosphatase inhibitor가 포함된 1X lysis buffer(Abcam, Cambridge, MA)를 첨가하여 4℃에서 vortexing하였다. 이후 12,000rpm에서 10분간 원심분리 하여 상층액에 있는 총 단백질을 분리하였다. 단백질 농도는 bradford 방법으로 정량한 다음, 4X Laemmli sample buffer(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)와 2-mercaptoethanol(Sigma-Aldrich, St Louis, MO)을 섞어 sample을 완성하였다. 단백질 샘플은 12% sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)로 분리한 후, wet transfer system(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)을 사용하여 nitrocellulose(NC) membrane으로 이동시켰다. Membrane은 1X Tris-buffered saline with 0.1% Tween-20(TBST)에 녹인 3% bovine serum albumin(BSA)에서 blocking하고, 1차 항체인 β-actin, PPARγ(peroxisome proliferator activated receptor gamma), C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein-alpha), FAS(fatty acid synthase), A-FABP(adipocyte fatty acid binding protein) (1:1,000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)를 각각 첨가하여 4℃에서 overnight 하였다. 그 후 2차 항체인 anti-mouse IgG(1:5,000)를 넣어 1시간 반응시켰다. 단백질 발현은 ECL solution A, B(GE Healthcare, Chicago, IL)에 반응시킨 다음, UVP ChemStudio system (Analytik Jena, Jena)을 이용하여 분석하였고, 측정결과는 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 처리군에서는 지방 분화의 주요 전사인자인 PPARγ, CEBP/α, A-FABP와 지방 축적에 관여하는 FAS의 발현이 농도 의존적으로 감소하여 체지방 감소에 효과를 보였다.

[실험예 4] C57BL/6J 쥐의 체중 감소 효능 확인

1) 시험 설계

실험동물은 6주령의 C57BL/6J 쥐를 (주)중앙실험동물(Central Lab Animal Inc., Seoul, Korea)에서 구입하여 온도 21 ± 2℃, 항습 50 ± 20%, 조명 12시간으로 설정된 환경에서 사육하였다.

모든 실험동물은 1주간의 순화 기간을 거친 후, 5개 군으로 분류하였다. 정상대조군은 총칼로리의 5.57%가 지방인 식이를 공급하였고, 정상대조군을 제외한 군은 45% 지방 식이를 공급하여 비만을 유도하였다. Orlistat를 양성대조군으로 사용하였고 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301은 10⁸, 5 ×10⁸ CFU/mL를 투여 농도로 설정하였으며, 실험 그룹은 표 1에 나타내었다. 각 실험물질은 0.5% carboxymethyl cellulose(CMC)에 용해하여 12주간 경구 투여하였다.

Group	Treatment
Normal control diet (ND)	ND (5.57 kcal % fat)
High fat diet (HFD)	HFD (45 kcal % fat)
HFD+Orlistat (Orlistat)	HFD+Orlistat 50 mg/kg B.W.
HFD+Bifidobacterium lactis IDCC 4301 (LA 10⁸)	HFD+Bifidobacterium lactis IDCC 4301 10⁸ CFU/mL
HFD+Bifidobacterium lactis IDCC 4301 (LA 5×10⁸)	HFD+Bifidobacterium lactis IDCC 4301 5×10⁸ CFU/mL

2) 체중 측정

비피도박테리움 락티스 IDCC 4301이 실험동물의 체중 변화에 미치는 영향을 확인하기 위해 시험기간 중 매주 2회 일정 시각에 체중을 측정하였고, 12주 동안의 군별 체중 변화는 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타난 바와 같이, 고지방식이를 섭취한 동물 중 LA 투여군은 35일차부터 비만으로 인한 체중증가를 유의적으로 억제하였으며, 42일차부터 유의적으로 체중을 억제한 Orlistat 투여군에 비하여 시험기간 전반에 걸쳐 비교 우위하게 고지방 식이 섭취에 의한 체중 증가를 억제하였다.

3) 지방 조직 무게 변화

실험동물의 지방 조직(부고환 주위 지방, 신장 주위 지방, 서혜부 지방, 장간막 주위 지방)을 적출하여 생리식염수로 세척하고 여과지로 수분을 제거한 후 전자저울로 각 조직의 무게를 측정하였다. 총 지방 무게는 부고환 주위 지방, 신장 주위 지방, 서혜부 지방, 장간막 주위 지방 무게를 합산하여 산출하였고, 측정 결과는 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타난 바와 같이, LA 10⁸ 투여군 및 LA 5×10⁸ 투여군은 HFD군과 비교하였을 때 지방 무게가 유의적으로 감소하였다.

[실험예 5] C57BL/6J 쥐의 간 독성 및 혈중 지질 마커 측정

비피도박테리움 락티스 IDCC 4301에 의해 간 독성 및 혈중 지질 축적이 유발되었는지 확인하기 위해 C57BL/6J의 혈액을 채취하여 혈청을 분리한 후, AST(aspartate transaminase), ALT(alanine transaminase), TG(triglyceride), TC(total cholesterol), LDL-C(low-density lipoprotein cholesterol)을 자동혈액생화학분석기(Beckman Coulter, Krefeld, Deutschland)를 이용하여 측정하였으며, 측정 결과는 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타난 바와 같이, AST와 ALT 모두 NC군과 비교하였을 때 HFD군에서 유의적으로 증가하였다. 반면, LA 10⁸ 투여군 및 LA 5×10⁸ 투여군은 HFD군과 비교 시 AST와 ALT 혈중 농도를 유의적으로 감소시켜 간 손상을 억제하였다. 고지방식이 섭취에 따른 혈중 TG 함량은 LA 10⁸ 투여군과 LA 5×10⁸ 투여군 모두 HFD 군에 비해 유의적으로 감소하였으며, TC와 LDL-C는 LA 투여군 중 LA 10⁸ 투여군에서만 유의적인 감소 효과를 보였다.

[실험예 6] 백색 지방 조직의 조직병리학적 검사

비피도박테리움 락티스 IDCC 4301 투여가 고지방식이 섭취로 인한 지방세포크기 증가에 미치는 영향을 알아보기 위해 부고환 주위 지방의 H&E 염색을 진행하였다. 10% neutral buffered formalin에 보관한 부고환 주위 지방 조직은 5mm 두께로 트리밍(trimming)한 후 각 개체별로 카세트에 담아 조직처리기기(Sakura Finetek VIP-5 Jr., Sakura, Tokyo, Japan)를 이용하여 단계별로 알코올, 자일렌, 파라핀 과정을 거쳐 조직처리를 실시하였다. 각 개체별로 paraffin block을 제작하였고 회전식 조직박절기(Leica microsystem, Wetzlar)를 이용하여 4 um 두께로 조직절편을 제작하였다. 조직절편은 탈파라핀, 함수 과정을 거쳐 hematoxylin과 eosin으로 염색을 진행한 후 탈수 및 청명화 과정을 거쳐 봉입하였다. 염색한 slide는 광학현미경(Carl Zeiss, Oberkochen)을 이용하여 관찰하였고. 200배의 배율에서 각 slide 당 4곳의 시야에서 관찰되는 모든 지방세포의 크기를 Image analysis system(Axiovision, Gottingen)로 측정하여 그룹별 평균 지방세포의 크기를 산출하였다. 측정 결과는 도 7에 나타내었다.

도 7에 나타난 바와 같이, NC군에 비해 고지방 사료를 섭취한 모든 군에서 지방 세포 크기가 유의적으로 증가하였으나, HFD군과 비교 시 Orlistat 투여군 및 LA 투여군은 지방 세포 크기가 유의적으로 감소하였다.

결과적으로, 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301은 3T3-L1 지방 세포 및 고지방 식이 섭취 동물 모델에서 체중 및 지방량, 지방 세포 크기 감소 등에 효과가 있으므로 체지방 감소 혹은 항비만 기능성을 가지는 것으로 판단된다.

Claims

체지방 감소 기능을 가지는 조성물에 있어서,
비피도박테리움 락티스 IDCC 4301[기탁번호: ATCC BAA-2848]를 포함하며,
상기 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301은 모유를 먹인 유아의 대변에서 분리된 조성물.
제1항에서,
상기 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301는,
지방세포 내에서 PPARγ, CEBP/α, A-FABP 및 FAS의 발현을 감소시키는 조성물.
제1항 및 제2항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 0.1 내지 50중량% 포함하는 식품.
제1항 및 제2항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 0.1 내지 50중량% 포함하며 체지방 감소 기능이 있는 건강기능식품.
비만을 치료하기 위한 약학적 조성물에 있어서,
비피도박테리움 락티스 IDCC 4301을 포함하며,
상기 비피도박테리움 락티스 IDCC 4301은 모유를 먹인 유아의 대변에서 분리된 약학적 조성물.