JPS61271223A - 血中脂質改善剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は血中脂質改善剤に関する。

〔従来の技術〕

血中脂質は健康に重要な関係があり、たとえば動脈疾患
の患者においては血しょう中のＶＬＤＬ（主にトリグリ
セライド）とＬＤＬ（主にコレステロール）のいずれか
または両方の濃度が高いことが知られている。

従来、コレステロールの腸管からの吸収を防ぐ目的でニ
コチン酸エステル、イオン交換樹脂などが用いられ、あ
るいはコレステロールの体内における合成を防ぐ目的で
クロフィブレートやニコチン酸系統などの化合物が用い
られているが効果や副作用の面で充分満足できるもので
はない。また、コレステロール低下剤としてストレプト
コツカス属微生物の培養物の抽出物や菌体を用いること
も提案されている（特開昭５９−８０６０９および８０
６１０、同５９−１０９１８０、１０９１８１および１
０９１８２、同５９−１５１８９０および１５１８９１
、および同５９−８４８２５号）。しかしながら、その
効果は充分とは言い難い。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は効果においてより優れかつ安全性の高い脂質改
善剤を提供しようとするものである。

〔発明の構成〕

本発明者らは乳酸菌類を中心に各種のコレステロール分
解能力を調べるため次の試験を行った。

腸内細菌によるコレステロールの分解試験。

材料と方法 （１）使用菌株 ビフィドバクテリウム属の５種（Ｂ、ｂｉｆｉｄｕｍ、
　Ｂ、ｌｏｎｇｕｍ　、　Ｂ、ｂｒｅｖｅ　、　Ｂ、１
ｎｆａｎｔｉｓ　およびＢ、ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ
　　）を含む乳酸菌を主とする２３菌株を用いた。

（２）　　コレステロールの定量 市販の試験材Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　　Ｃ１−Ｔｅｓ
ｔ　Ｗａｋ。

（和光紬薬製）を用いて行った。

培地中のコレステロールはクロロホルム−メタノール混
液（２：１ｖ／ｖ）で抽出し、生理食塩水で洗浄後、減
圧濃縮し、濃縮物について定量した０ （３）培地と培養 培地はトッド・ヘライツト・プロス（ＴｏｄｄＨｅｗｉ
ｔｔ　　ｂｒｏｔｈ　、Ｄｉｆｃｏ　　社製）を用い、
ラクトバチルスについてはこれに０．１％のツウィーン
８０を添加した。コレステロールはＮ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミドに溶解して４μｇ／−になるように培地に添
加し、ろ過滅菌した。培養は３７°Ｃ，５日間好気静置
培養した。ただし、ビフィドバクテリ　・ラムについて
はスクリューキャップ付試験管を用い嫌気培養した。

結果は第１表のとおりである。

第１表 以上のとおり、ビフィドバクテリウム属の菌は他の菌に
比べ格段に高いコレステロール分解率を示すことが判っ
た。ビワイドバクテリ６ム属菌についてのさらに詳しい
データを参考例１に示す。

また、ビフィドバクテリウム属菌の死菌体には単核細胞
のコレステロール生合成を抑制することも判った（参考
例２参照）。

本発明はこれらの知見に基づくもので、ビフィドバクテ
リウムに属する菌株の菌体を含有してなる血中脂質改善
剤である。

ビフィドバクテリウム属菌としては、たとえば、ビフィ
ドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　ｂｉｆｉｄｕｍ）　、同・アドレスセンティ
ス（Ｂ。

ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ　）、同・ブレーベ（Ｂ、ｂ
ｒｅｖｅ　）　、同・インフ１ンティス（Ｂ、　１ｎｆ
ａｎｔｉｓ　）　、同・ロンカム（Ｂ−１ｏｎｇｕｍ　
）などが挙ケラレル。

菌体は生菌体でも死菌体でもよく、経口または非経口的
に投与されうるが、非経口的には死菌体のけん濁液を、
たとえば皮下注射により投与するのが望ましい。

生菌体はビフィズス菌を公知の方法により培養すること
により容易に得られる。また死菌体は生菌体を加熱殺菌
し、あるいは凍結破砕して得ることができる。望ましい
加熱殺菌の条件は、たとえば約１２０’０１０分間であ
るが、これより低い温度で長時間あるいは高い温度で短
時間加熱してもよい。

菌体は通常無害の担体または溶媒で希釈した製剤として
用いられる。生菌体の希釈にはたとえば、でん粉、デキ
ストリン、乳糖のような菌の生存に差支えないような担
体が好んで用いられ、死菌体はたとえば生理食塩水にけ
ん濁してもよい。

生菌体は経口投与するのが望ましく、その好ましい投与
量は菌数１０４〜１ｏ１２、望ましくは１０８〜１０”
／　（／の製剤の場合、１日３回、１回１〜１０ｙであ
る。

死菌体は経口または非経口的に投与され、経口の場合の
投与量は生菌体の場合に準するが、非経口、たとえば皮
下注射による投与の場合は０．１〜１．０００η、望ま
しくは０．１〜１００■（生菌数にして１ｇは約１０１
２前後に相当）が用いられる。

ビフィドバクテリウム属菌は参考例２からも明かなよう
に実際上ヒトの生活細胞に毒作用を示さない。

〔作用〕

本発明において、ビフィズス菌の菌体は、体内でコレス
テロールを分解し、またフレステロー−ルやトリグリセ
ライドの合成を抑制する。

実施例１　生菌体および死菌体試料の調製。

中で、３７℃で１８時間、嫌気条件下に培養した。

培地組成（Ｂｒ１ｇｇｌ５　Ｌｉｖｅｒ　ｂｒｏｔｈ　
）　ニドマドジュース浸出液　　　　　　　　４００ｍ
／Ｉネオペプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）　　　　　１５ｆ
酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）　　　　　　　　６７肝
臓抽出液≠　　　　　　　　　　　　７５−ブドウ糖　
　　　　　　　　　　　　２ｏダ可溶性澱粉　　　　　
　　　　　　　　　０．５　ｙ塩化ナトリウム　　　　
　　　　　　　　　５ｇツウィーン８０　　　　　　　
　　　　　１ｇＬ−シスｆイ＞　−ＨＣＩ　−Ｈ２Ｏ０
，２ｆ精製水　　　　　　　　　　　　　　５２５−ｐ
Ｈ５・８ 黄　肝臓抽出液は肝臓末（極東社製）１ｏｇを１７０艷
の精製水で５０−６０°Ｃの温浴槽中で約１時間浸出し
た後、１００°Ｃ数分間加熱しＳ　ＰＨ７，２に修正し
て濾紙で濾過して調製した。

焙茶終了後、゛培養液を３００Ｏｒｐｍで１ｏ分間遠心
分離して菌体を集め、生理食塩水で数回洗浄し、次いで
生理食塩水または０．５％グルタミン酸ナトリウム水溶
液にけん濁して生菌体試料とした。

また、上記の生菌体試料を１２０°Ｃで１０分間加熱し
、次いで凍結乾燥して粉末状にして死菌体試料とした。

参考例１　ビフィドバクテリウム属菌による培地中のコ
レステ四−ルの分解。

４μｇ／ｙｎｌ　　のコレステロールを添加したトッド
・ヘライツト・ブロス（Ｔｏｄｄ　Ｈｅｗｉｔｔａｂｒ
ｏｔｈ　）培地（Ｄｉｆｃｏ社製）■１９．８−に、ビ
フィドバクテリウム属菌を同培地中で３７°Ｃ−夜前培
養した培養液０．２−を加えて本培養した。３７°Ｃで
２日および５日間培養したのち、培養液５−に対しクロ
ロホルム−メタノール混液（２：　Ｉ　Ｖ／’１）６０
−を加えてよく振とうし、未分解のコレステロールを抽
出した。

抽出液は４０１ｎｌの生理食塩水で洗浄したのち、減圧
乾固してコレステロール含量を測定した。測定には市販
のキット（酵素法：コレステロールＣ１−テストワコー
、和光紬薬製）を用いた。結果を第２表に示す。

矢トッド・ヘライツト培地（ｐｉｆｃｏ社製）の組成中
心臓浸出液　　　　　　　　　　　５００ｆネオペプト
ン（Ｄｉｆｃｏ）　　　　　　　　２０ｇバクトデキス
トロース　　　　　　　　　　２ｇ塩化ナトリウム　　
　　　　　　　　　　　２ｇリン醗水素二ナトリウム　
　　　　　　　国、４９炭酸ナトリウム　　　　　　　
　　　　　２．５ｇｐＨ７，８ 第２表 芳　次式により計算したコレステロールの分解率（％）
を示す。

分解率Ｃ９Ω＝ｌ加コレステロール−回収コレステロー
ル）Ｘ１００／添加コレステロール＋−Ｘ　　菌の生育
度を６６０ｎｍにおける吸光度で示す。

上記のように、試験に用いたビフィドバクテリウム属菌
はいずれも菌の生育と共に培地中のコレステロールを６
１．１〜８６．４％分解した。そして分解率／生育度で
菌のコレステロール分解能を算出すると、培養５日目で
は第３表のようになり、Ｂ、ｂｉｆｉｄｕｍ　Ｃ９１の
分解能が最も大きいことが判る。

第３表 コレステロール分解能 （分解率／生育度） Ｂ、ｂｉｆｉｄｕｍ　Ｇ９−１　　　　　９０．６Ｂ　
、　ｂｒｅｖｅ　　　　　　　　　　４３．ＱＢ　、ａ
ｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ　　　　　　　４１．９Ｂ、　
ｌｏｎｇｕｍ　　　　　　　　　　３９．４Ｂ　、　１
ｎｆａｎｔｉｓ　　　　　　　　　３６．９参考例２　
ヒト末梢単核球のコレステロール生合成に対するビフィ
ドバクテリウム属菌の抑制作用。

ヘパリン加静脈血からＦｉｃｏ−Ｈｙｐａｑｕｅ比重遠
心法により分離した単核球を脱脂牛胎児血清５％と非必
須アミノ醗（Ｘｌ　００　、ＧＩＢＣＯ）０．１％添加
ＲＰＭ１１６４０培地（二、ツスイ社製）に約ｌＸｌ０
’／ｍ／の濃度になるように浮遊させた。

この細胞浮遊液１−と実施例１の方法で得たＢ。

ｂｉｆｉｄｕｍ　Ｇ９−１　（Ｄ死菌試料を試験管ニ入
し、５％ＣＯ□インキュベーター内で４８時間培養した
。

培養終了２時間前に、２−マイクロキュリーの１４ｃｍ
酢酸（二ニー・イングランド、ニュクレア脅カンパニー
製）を添加した。

培養終了時に培養液を冷Ｐ　Ｂ　Ｓ　（Ｄｕｌｂｅｃｃ
ｏリン酸緩衝塩類溶液）１ｔｎ！で洗浄し、ＰＢＳ　１
−に浮遊させたのち、２０％ＫＯＨエタ、ノール溶液１
−を加えて攪拌し、７５℃で１時間加熱した。反応終了
後、直ちに氷冷下にヘキサン２−を加えて抽出し、これ
に１％ジキ）＝ン液１−を加えてステロール部分を沈澱
させる。このようにして得られた沈澱物をガラスフィル
ターで回収し、沈殿物内の放射能活性を液体シンチレー
シッンカウンターで測定し、ｄｍｐ　（壊変毎分）で表
示してコレステロール生合成量とした。また、培養系中
の単核球の生細胞数の測定にはトリバンプルー色素排泄
試験を用いた。結果を第４表に示す。

以上から明かなように、ビフィドバクテリウム属菌死菌
体濃度１０〜１００μｆ／−の範囲で単核球のコレステ
ロール合成の抑制作用が見られた。

死菌体濃度１００μｇ／−のときに８５．５％の合成が
抑制されたが、単核球の生細胞数は無添加の場合とほぼ
同数であり、死菌体による単核球のコレステロール生合
成抑制作用は単核球の細胞数の減少や死滅によるもので
はない。また、事実はビフィドバクテリウム属菌死菌体
はヒト単核球に対して毒性をほとんど有せず、安全性に
すぐれていることを示している。

実施例２　ビフィドバクテリウム属菌の血中コレステロ
ール低下作用。

実施例１の方法によって得たＢ、ｂｉｆｉｄｕｍ　Ｇ９
−１の生菌体試料（菌数：約３　Ｘ　１０”、４ｍｊ　
）を６週令のラット雄（Ｊｃｌ：Ｓｎ２匹）に１．０ｍ
７／匹／日の量でゾンデを用いて強制的に経口投与した
。

対照群（７匹）には１．０ｍ／／匹／日の生理食塩水ま
たは０．５Ｍグルタミン酸ナトリウムを同様に投与した
。

飼料としては、ＣＬ−２粉末飼料（日本タレア製）にコ
レステロール１％、コール酸ナトリウム０．２５％およ
びオリーブ油５％を混ぜた高コレステロール食をラッ）
１匹当り１日１５ｇ与えた。

水は水道水を自由に摂取させた。

２週間Ｍ育後、ネンプンクール（アボット・ラボラトリ
ーズ製）麻酔下にて腹部大動脈からヘパリン入真空採血
管で採血１５℃で３．０００　ｒｐｍ１０分間遠心分離
し、得られた血しょう中の脂質成分を下記の市販キット
を用いて測定した。

総コレステロール：コレステロールＣ１−テストヮコー
遊離コレステロール：遊離コレステロールＣ−テストワ
ＨＤＬ−コレステロール：　ＨＤＬ−コレステロールー
テストワコー トリグリセライド：トリグリセライドＣ１−テストヮコ
（いずれも和光紬薬製） 結果を第５表に示す。

第５表 ３）　ラット１匹当り約３Ｘ１０”（生菌数）７日投与
　　　′苦　ｐ　＜　０；Ｏｓで有意差あり 苦矢　Ｐ＜０．００２５で有意差あり 第５表に示されるように、ビフィドバクテリウム属菌投
与区の血しょう中経コレステロール値は対照区に比べて
Ｐ＜０．００２５で有意に低かった。

また、一般に血中脂質改善の指標とされるＨＤＬ比およ
びトリグリ七ライド値は対照区に比べてビフィズス菌投
与区の方が高く、改善の傾向が見られ、同様にエステル
比においてもＰ＜０．０５で菌投与区の方が有意に高く
、改善の傾向が認められた。

さらに、高コレステロール食の給餌により脂肪肝の発生
と肝重量の増大が認められるが、菌投与Ｘでは対照区に
比べて脂肪肝の程度も軽く、またラット体重に対する肝
重量の比もｐ＜ｏ、ｏｓで有数に低く維持されることが
判明した。

〔効果〕

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ビフィドバクテリウム属に属する菌株の菌体を含有
   してなる血中脂質改善剤。 ２、菌体が生菌体である特許請求の範囲第１項記載の血
   中脂質改善剤。 ３、菌体が死菌体である特許請求の範囲第１項記載の改
   善剤。 ４、菌株がビフィドバクテリウム・ビフィダム、同・ア
   ドレスセンティス、同・プレーベ、同・インファンティ
   スおよび同・ロンガムから選ばれる特許請求の範囲第１
   項記載の血中脂質改善剤。 ５、菌体が生菌体であり、菌数が１０＾４〜１０＾１＾
   ２、望ましくは１０＾８〜１０＾１＾１／ｇになるよう
   に調製された特許請求の範囲第１項記載の血中脂質改善
   剤。 ６、菌体が死菌体であり、その０．１〜１０００ｍｇ、
   望ましくは０．１〜１００ｍｇが１回に投与できるよう
   に調製された特許請求の範囲第１項記載の血中脂質改善
   剤。