BE1000016B1

BE1000016B1 - Composition comprenant du bifidobacterium animalis ssp. lactis.

Info

Publication number: BE1000016B1
Application number: BE2014/0292A
Authority: BE
Inventors: Johan Quintens; Lidth De Jeude Johan Lienart-Van; Corinne Grangette; Bruno Pot; Kassem Makki; Isabelle Wolowczuk; Jeanne Alard; Véronique Lehrter-Valenti
Original assignee: Vesale Pharma Nv; Vesale Pharma Sa.; Institut Pasteur De Lille
Priority date: 2014-04-25
Filing date: 2014-04-25
Publication date: 2016-02-01

Abstract

Composition à base de Bifidobacterium animalis ssp. lactis LMG n° LMG P-28149 pour usage dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids et/ou pour le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète.

Description

Composition comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactis

La présente invention concerne une composition à base d’au moins un élément de probiotique pour une utilisation dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids et/ou pour le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète.

Par les termes « élément de probiotique », on entend au sens de la présente invention une substance issue du probiotique ou un constituant de probiotique, ou l’entité bactérienne, entière ou partielle, de probiotique.

Par les termes « en surpoids », on entend, au sens de la présente invention, que l’être humain présente une accumulation anormale et/ou excessive de graisse corporelle, principalement abdominale, ce qui présente un risque pour sa santé. Dans le cadre de la présente invention, le terme « surpoids » comprend aussi le cas particulier, et extrême, de l’état d’obésité chez l’être humain.

Par les termes « ayant été en surpoids », il faut entendre au sens de la présente invention que l'être humain a subi une perte de poids et présente un poids considéré comme normal (basé sur BMI ou tour de taille/hanche) depuis une période comprise entre 3 et 5 ans.

Il est difficile d’élaborer un indice simple qui permette de mesurer le surpoids et l’obésité au niveau d’un panel d’une population donnée. Par exemple, l’échelle utilisée pour mesurer l’indice de surpoids et d’obésité chez les enfants et les adolescents, de par le fait que leur organisme subit un certain nombre de changements physiologiques liés à leur croissance, diffère de celui utilisé chez l’adulte. Dès lors, en fonction de l’âge, l’OMS (Organisation Mondiale de la Santé) met à la disposition du public, différentes méthodes de mesure du poids corporel en fonction de l’âge de l’individu ou de l’âge moyen de l’échantillon d’individus. A titre illustratif, le surpoids peut s’évaluer chez l’adulte sur base de l’Indice de Masse Corporelle (IMC ou BMI pour Body Mass Index), qui représente une mesure simple du poids par rapport à la taille couramment utilisée pour estimer le surpoids et l’obésité chez l’adulte. Il correspond au poids divisé par le carré de la taille, exprimé en kg/m2. L’IMC présente l’avantage de s’appliquer aux deux sexes et à toutes les tranches d’âge adultes. Il doit toutefois être considéré comme une indication approximative car il ne correspond pas nécessairement au même pourcentage de masse graisseuse selon les individus.

Dans ce contexte, l’OMS définit, sur base de l’IMC, les valeurs seuils suivantes pour déterminer si un adulte présente un surpoids ou une obésité : - un état normal de poids correspond à un IMC compris entre 20 et 25; - un état de surpoids correspond à un IMC compris entre 25 et 30; et - un état d’obésité correspond à un IMC égal ou supérieur à 30.

Toutefois, il est à noter que l’IMC ne donne aucune indication quant à la répartition de la graisse abdominale vs la graisse sous-cutanée.

Cet indice, même s’il présente l’avantage d’uniformiser la classification aux deux sexes et à toutes les tranches d’âge des individus adultes, peut de préférence être interprété de manière complémentaire avec un autre indicateur qui peut être, par exemple, la mesure du tour de taille de l’individu.

Ainsi, un individu masculin adulte présentant un tour de taille supérieur à 100 cm est considéré comme étant en surpoids. Ce seuil est de 88 cm chez la femme adulte.

Ce paramètre peut être généralisé à toutes les tranches d’âge en mesurant le rapport tour de taille (A) / tour de hanches (H).

Le surpoids est observé pour un rapport supérieur à 1 chez l’individu masculin et supérieur à 0,85 chez l’individu de sexe féminin.

Le terme « traitement »s’applique dans le cadre de cette invention dès lors que le surpoids chez l’être humain et en particulier l'obésité humaine, a été reconnu comme une maladie par l’OMS.

Par le terme « curatif », il faut entendre, au sens de la présente invention, l’action qui vise à réduire le poids corporel d’un être humain en surpoids et/ou à réduire la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids.

Le traitement curatif implique donc l’action qui vise à atteindre, de préférence pendant et/ou après diète, un poids corporel considéré comme normal chez l’être humain, c’est-à-dire avec un risque moindre pour la santé, dans une plage de valeurs prédéterminée, basée, par exemple sur l’IMC, qui est compris entre 20 et 25, de préférence égal à 22.

Par les termes « risque moindre pour la santé », il y a lieu d’interpréter dans le cadre de la présente invention que, à un poids corporel considéré normal, le risque de développer un syndrome métabolique est négligeable.

En particulier, l’action curative vise principalement la diminution de la graisse abdominale chez l’individu ou au moins une diminution de l’accumulation de la graisse abdominale.

Par le terme« préventif», il faut entendre, au sens de la présente invention, l’action qui vise à stabiliser le poids corporel d’un être humain en surpoids ou qui a été en surpoids (c’est-à-dire qui a perdu du poids) et donc à empêcher ou limiter la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou qui a été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète.

Le traitement préventif implique aussi l’action qui vise à maintenir, de préférence pendant et/ou après diète, un poids corporel stable, de préférence considéré comme normal chez l’être humain, dans une plage constante de valeurs prédéterminée, basée, par exemple, sur l’IMC (pour rappel, entre 20-25), mais le poids corporel normal peut aussi être interprété à la lumière du rapport A/H inférieur à 0,85 chez l’individu de sexe féminin, et inférieur à 1,00 chez l’individu de sexe masculin.

Actuellement, à l’échelle mondiale, le surpoids et l’obésité sont responsables (du fait des maladies associées, comme le diabète de type 2 ou les maladies cardiovasculaires) de plus décès que l’insuffisance pondérale.

En particulier, le surpoids et l’obésité ont atteint les proportions d’une épidémie mondiale (compte tenu que près de 3 millions de personnes au moins décèdent chaque année de pathologies liées à leur surpoids ou leur obésité) et ne sont plus limités aux pays dits riches mais touchent désormais également les pays à revenu faible ou intermédiaire.

Il est en outre démontré qu’un IMC élevé, parfois conjointement à un rapport A/H élevé, constitue un facteur favorisant, d’une part, le syndrome métabolique qui est définit dans le cadre de la présente invention comme une association de facteurs de risques pour la santé: une hypertension artérielle, une hypertriglycéridémie, un taux bas en cholestérol HDL, un état d’obésité androïde (par exemple, une accumulation de graisse abdominale), et une élévation de la glycémie. Ces indicateurs constituent de fait une base de définition qui est commune aux actuelles trois définitions principales connues : celle de l’OMS (publiée en 1998 puis amendée en 1999), celle du National Cholesterol Education Program (NCEP-ATPIII) publiée en 2001, et celle de la Fédération Internationale du Diabète publiée en 2005.

En pratique, le syndrome métabolique se traduit par les indicateurs suivants, de manière non exhaustive : - un taux d’insuline anormalement élevé ; - un diabète de type 2 ; - une hypercholestérolémie (associée à un taux bas de « bon » cholestérol HDL) ; - une hypertension ; - une augmentation significative de la prise de poids corporel au cours du temps, surtout s'il s'agit d'une obésité abdominale ; - une hypertriglycéridémie ; - une stéatose hépatique ; - le développement d’un état inflammatoire systémique; et - une hypertrophie des adipocytes, et, d’autre part, le risque de maladies chroniques comme: - les troubles musculo-squelettiques, en particulier l’arthrose; ou - certains types de cancers.

La problématique de prise de poids corporel incontrôlée amenant au surpoids chez l’être humain est donc un problème sociétal avéré ayant un impact non négligeable sur la santé, au niveau mondial. C’est dans cette perspective que l’OMS a établi, dans sa stratégie mondiale de prévention de la prise de poids excessive, des recommandations concernant l’alimentation et l’exercice physique. Adoptée par l’Assemblée Mondiale de la Santé (AMS) en 2004, cette stratégie définit les mesures nécessaires pour encourager les gens à suivre une alimentation saine et à faire régulièrement de l’exercice.

Toutefois, si cette stratégie repose sur des recommandations prévenant la prise de poids, elle ne propose pas d’indications quant aux traitements curatif et préventif de la prise de poids chez les individus en surpoids ou ayant été en surpoids et qui présentent un risque de reprise de poids. En effet, actuellement, la problématique de prise de poids incontrôlée ne cible plus seulement les individus normopondéraux (c’est-à-dire qui présentent un IMC normal et/ou un tour de taille normal) susceptibles de prendre du poids, mais surtout les individus déjà en surpoids dès lors que l’OMS indique que près de 1,4 milliard de personnes âgées de 20 ans et plus présentent d’ores et déjà un surpoids. Parmi elles, plus de 200 millions d’hommes et près de 300 millions de femmes sont obèses, et globalement, plus d’un adulte sur dix dans le monde est obèse.

Il existe donc un besoin de disposer d’un traitement qui permette la réduction ou la prévention du surpoids et de l’obésité chez l’être humain en surpoids. De préférence, ce traitement doit être peu contraignant dès lors que l’on sait qu’une raison principale liée au surpoids et à l’obésité est le manque d’assiduité à suivre un régime précis associé à un traitement qui peut être parfois lourd.

En particulier, la présente invention s’inscrit dans le cadre d’une relation de cause à effet connue qui associe des modifications du microbiote intestinal au développement de l’obésité (Ley et co., 2006. Nature, 444: 1022-1023; Nadal et co., 2008. Int J. Obes., 33(7): 758-67).

De nombreuses études ont été menées dans ce contexte et ont alimentées l’état de l’art actuel incluant un large panel de documents mentionnant l’utilisation de traitements à base de probiotiques dans le cadre du surpoids et de l’obésité.

En particulier, il a été montré que le microbiote contribue à maintenir l’hôte en bonne santé : l’état équilibré du microbiote contribue à la régulation de l’homéostasie intestinale, et immunitaire, de sorte que, tout déséquilibre du microbiote est interprété comme participant au développement du syndrome métabolique, en particulier chez les individus présentant une prédisposition génétique à développer ce syndrome (Parks et co., Cell Metab, 2012).

La mise en évidence de la relation microbiote - prise de poids a été le moteur pour un large panel d’études qui ont fait l’objet de différentes demandes de brevet, dont les plus pertinentes sont commentées ci-dessous.

Il y a tout d’abord lieu de mentionner la demande de brevet internationale W02007043933 qui propose l’utilisation des souches de Lactobacillus casei F19 et L. acidophilus NCFB 1748, et le Bifidobacterium lactis Bb12, sous la forme de laits fermentés, pour réduire l’appétit et le dépôt des graisses dans certains tissus, et ainsi, contrôler le poids corporel, chez l’être humain. Cependant, il semble que ce soit plutôt l’action conjointe du calcium et des protéines laitières qui soient à l’origine de l’effet revendiqué dans cette demande plutôt que la présence des souches de bactéries susmentionnées. En outre, cet effet ne cible que l’expression des gènes liés au métabolisme de l’intestin grêle et ne porte donc pas sur les autres organes et tissus impliqués dans la prise de poids.

Ensuite, le document US20100061967A1 propose également l’utilisation d’une composition de bactéries pour moduler l’expression des peptides régulant le mécanisme de satiété, cette modulation prenant place de manière exclusive dans le tractus gastrointestinal.

La demande de brevet internationale W02009153662 divulgue quant à elle l’utilisation d’une composition à base de Bifidobacteriesa et de Lactobacilles dans le traitement du diabète, une maladie reprise dans la liste des indicateurs associés au syndrome métabolique induit par le surpoids ou l’obésité, et ce, en se basant exclusivement sur la capacité que présentent ces microorganismes à réduire l’inflammation des tissus périphériques mais sans pour autant agir sur le système nerveux central, et donc par exemple sur le mécanisme de la régulation centrale de la satiété.

En outre, le document US20100150890 renseigne l’utilisation de probiotiques bactériens dans une composition pour stimuler la fonction du système nerveux sympathique de sorte que le métabolisme, et donc la dépense énergétique, soit stimulée. Toutefois, il a été montré que le tonus sympathique est également actif chez certains individus obèses et, ainsi, son activation ne constitue pas une alternative fiable dans le cadre du traitement du surpoids et de l’obésité.

La demande de brevet US20100111915 présente l’utilisation générique d’une composition de probiotiques bactériens comme une alternative dans le cadre de la prévention de l’obésité chez l’enfant. Selon US20100111915, cette utilisation se base sur les effets bifidogènes des probiotiques, bien que ce document ne renseigne sur un quelconque fondement tangible qui permette d’établir que l’augmentation du nombre de bifidobactéries dans l’intestin puisse être à l’origine de cette action préventive de l’apparition de l’obésité chez l’enfant.

Le document US20050112112 propose l’utilisation d’une composition de microorganismes générant des polymères de sucre, non-digestibles par l’être humain, à partir de monosaccharides et de disaccharides présents dans le tractus gastro-intestinal, réduisant ainsi de facto l’absorption de sucres dans le corps.

Enfin, le document JP10306028 renseigne par ailleurs une action inhibitrice de l’absorption par l’organisme du cholestérol, et ce, par l’utilisation de bifidobactéries combinées au chitosan.

Malheureusement, l’utilisation des compositions de l’état de la technique, si elle permet une réduction du surpoids ou de l’obésité et des symptômes associés au syndrome métabolique (on parle par exemple de rémission), elle ne permet pas un maintien à long terme (on parle par exemple de guérison) (plus de 3 à 5 ans) du poids corporel au niveau de normalité souhaité (c’est-à-dire correspondant par exemple à un IMC entre 20 et 25).

Dans le cadre de la présente invention, il y a lieu de distinguer la rémission de la guérison. Un individu est dit en rémission si, lors des examens médicaux (mesure du poids, du tour de taille, etc.), on ne décèle plus de surpoids. Mais on ne parle de guérison qu'après un certain délai supplémentaire, qui varie en fonction du type de surpoids. En général, quand la rémission dure depuis 3 ou 5 ans, il y a guérison.

La présente invention a pour but de pallier le manquement de l’état de la technique en fournissant une composition telle que décrite au début caractérisée en ce que ledit au moins un élément de probiotique provient du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, et est de préférence du Bifidobacterium animalis ssp. lactis entier, par exemple à l’état vivant, éventuellement en combinaison avec d’autres microorganismes.

La souche selon l’invention a été déposée par le BCCM (Belgian Coordinated Collections of Micro-organisms) et le LMG (Laboratorium voor Microbiologie - Bacteriënverzameling) le 27 janvier 2014 selon le traité de Budapest, sous le numéro LMG P-28149.

Dans le cadre de la présente invention, par les termes « à l’état vivant », on entend une concentration en bactéries dans la composition comprise entre 108 et 1013 cfu par gramme de composition.

Dans le cadre de la présente invention, il a en effet été observé que cette souche de probiotique particulière présente une action positive sur la satiété et également une restauration du microbiote intestinal associé à la limitation de prise de poids corporel.

Il a été notamment observé le rôle de la présence du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 dans la recolonisation du tractus intestinal par Akkermansia muciniphila, une bactérie réputée pour son rôle dans la prévention de l’obésité chez l’être humain dont le niveau est fortement réduit chez l’individu en surpoids ou obèse.

En outre, il a été par ailleurs observé de manière surprenante l’action anti-inflammatoire et immuno-régulatrice de la souche selon l’invention qui est associée à la restauration de l’expression du facteur de transcription PPARy, impliqué dans la fonction des lymphocytes T régulateurs du tissu adipeux blanc.

Ainsi, la composition selon l’invention permet notamment le traitement curatif ou préventif du dérèglement du microbiote intestinal et des maladies inflammatoires associées à ce dérèglement chez l’être humain en surpoids.

La présente composition vise donc de manière avantageuse le traitement curatif ou préventif du syndrome métabolique lié au surpoids chez l’être humain.

Il a donc été démontré, selon la présente invention, que la composition à base du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P28149 présente notamment les effets suivants sur l’organisme, lesquels s’accompagnent d’une réduction du gain de poids corporel sous régime riche en graisses, de préférence pendant et/ou après une diète, ou d’une stabilisation du poids corporel : - une amélioration de la sensibilité à l’insuline ; - une réduction du développement de la masse graisseuse abdominale et sous-cutanée ; - une réduction de la taille des adipocytes ; - une réduction de l’infiltration cellulaire des tissus adipeux blancs, en particulier par les macrophages proinflammatoires ; - une réduction des marqueurs inflammatoires ; - une limitation de la stéatose du foie ; et - une limitation ou une réduction du taux de « mauvais » cholestérol.

Comme on peut le constater, la composition suivant l’invention comprenant au moins le probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 agit sur divers facteurs liés au surpoids.

Dans le cadre de la présente invention, il a été aussi démontré l’action préventive et curative sur la prise de poids ainsi que l’action sur le syndrome métabolique chez l’être humain en surpoids, non seulement de la souche spécifique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, à l’état vivant ou non, mais aussi des composés issus de cette souche.

Dans ce contexte, la composition selon l’invention peut comprendre en outre au moins un ou une combinaison d’au moins deux éléments de probiotique, chaque élément étant issu du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et choisi parmi le groupe constitué de constituants de la paroi cellulaire, des organites cellulaires, des acides nucléiques, des constituants de la membrane cellulaire, et des métabolites cellulaires. A titre illustratif et non-limitatif, les constituants de la paroi cellulaire sont choisis dans le groupe constitué de peptidoglycanes, de protéines, de polysaccharides, de l’acide téichoïque, ou d’une combinaison de ces derniers. A titre illustratif et non-limitatif, les métabolites sont choisis dans le groupe constitué des acides organiques, des acides inorganiques, des protéines, des peptides, des acides aminés, des enzymes, des lipides, des carbohydrates, des glycolipides, des glycoprotéines, des vitamines, des sels, des métaux, ou une combinaison de ceux-ci.

Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l’invention comprend du butyrate, ou au moins un de ses dérivés, et/ou du propionate, ou au moins un de ses dérivés, l’induction dudit butyrate et/ou dudit propionate étant favorisée par dudit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.

Eventuellement, la composition selon l’invention comprend au moins un second probiotique, ledit second probiotique étant choisi dans le groupe constitué des probiotiques suivants : Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacters, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus,

Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogène), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, et Clostridium, ou une combinaison de ceux-ci.

De préférence, la composition selon l’invention peut comprendre en outre au moins une souche de champignon et/ou de levure, ladite souche étant choisie dans le groupe suivant : Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, et Pénicillium.

De préférence, la composition selon l’invention comprend un véhicule d’encapsulation de probiotique dans laquelle ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel sont encapsulés.

De manière avantageuse, ledit champignon et/ou ladite levure sont également encapsulés dans ledit véhicule.

Alternativement, le véhicule d’encapsulation comprend au moins une substance choisie dans le groupe constitué de l’alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar ou une combinaison de ceux-ci.

De manière préférentielle, ladite au moins une substance est un hydrocolloïde.

De manière avantageuse, la composition selon l’invention comprend au moins une source nutritive choisie dans le groupe constitué d’un monosaccaride, d’un polysaccharide, d’un aminoacide, d’un peptide, d’une protéine, d’une vitamine, d’un extrait de levure, un sel d’halogénure, d’un métal alcalin ou alcalinoterreux, d’un antioxydant, de glycérol, d’acétate de zinc, de chlorure de zinc, de lactate de zinc, d’acide ascorbique, d’acide citrique, d’une huile végétale, de graisse de lait, ou une combinaison de ceux-ci.

Dans un mode particulier de réalisation, la composition selon l’invention est une composition symbiotique comprenant au moins un prébiotique.

De préférence, ledit au moins un prébiotique est choisi, de manière non limitative, dans le groupe constitué des oligosaccharides, des fructo-oligosaccharides, des galacto-oligosaccharides, des xylooligosaccharides, de l’inuline ou de ses dérivés, du lactulose ou de ses dérivés, des mannane-oligosaccharides, ou une combinaison de ces derniers.

De manière préférentielle, la composition selon l’invention comprend un premier revêtement entérique recouvrant ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel. En particulier, le premier revêtement entérique est choisi dans le groupe constitué de l’éthyle cellulose, de l’hydroxypropyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, de polymères (comme par exemple l’Eudragit®), ou une combinaison de ceux-ci.

Alternativement, la composition comprend en outre un deuxième revêtement externe choisi dans le groupe constitué de l’alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar, de la cellulose, de l’hémicellulose, de l’éthyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, ou une combinaison de ceux-ci.

Dans un autre mode de réalisation éventuel, la composition selon l’invention comprend un ou plusieurs excipients biocompatibles.

La composition selon l’invention peut être destinée au traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel excessive (c’est-à-dire dépassant largement la prise de poids accompagnant la grossesse) chez la femme enceinte ou la femme qui a accouché ou chez l’homme en couvade ou ayant été en couvade. D’autres formes de la composition selon l’invention sont indiquées dans les revendications annexées.

La présente invention concerne aussi une composition alimentaire ou un aliment à base de la composition comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, de préférence à l’état vivant.

Par les termes « composition alimentaire », il faut entendre au sens de la présente invention une composition que l’on retrouve communément sur le marché de l’alimentaire (par exemple, les en-cas, les plats préparés, des boissons, etc.). D’autres formes de réalisation de la composition alimentaire suivant l’invention sont indiquées dans les revendications annexées.

La présente invention concerne aussi la composition selon l’invention pour une utilisation comme complément alimentaire.

Par les termes « complément alimentaire », il faut entendre au sens de la présente invention une denrée alimentaire dont le but est de fournir un complément de nutriments ou de substances ayant un effet nutritionnel et/ou physiologique.

La présente invention porte en outre sur une composition thérapeutique comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, pour le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids.

De préférence, la composition thérapeutique vise une utilisation par voie orale, ou sublinguale, mais également respiratoire, de préférence nasale ou bronchique, ou encore rectale.

La composition peut être aussi une composition liquide injectable à base d’au moins un élément issu du probiotique et destinée à être injectée par sous-cutanée.

Eventuellement, la composition thérapeutique selon l’invention comprend au moins un excipient biocompatible.

De manière préférentielle, la composition thérapeutique est conditionnée préférentiellement sous forme de comprimés, de globules, de gélules, de granules, de poudres, de fluides, de liquides, de crèmes ou de sprays. D’autres formes de réalisation de la composition thérapeutique suivant l’invention sont indiquées dans les revendications annexées. L’invention porte ensuite sur une composition, de préférence alimentaire ou thérapeutique, à base d’au moins un élément de Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, de préférence entier, par exemple à l’état vivant, pour le traitement curatif ou préventif du syndrome métabolique lié au surpoids chez l’être humain. L’invention concerne aussi une utilisation de la composition selon l’invention pour le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids.

En particulier, l’utilisation de la composition selon l’invention concerne le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel excessive (c’est-à-dire dépassant largement la prise de poids accompagnant la grossesse) chez la femme enceinte ou qui a accouché ou chez l’homme en couvade ou ayant été en couvade. D’autres formes d’utilisation de la composition selon l’invention sont indiquées dans les revendications annexées. L’invention porte par ailleurs sur la composition selon l’invention pour une utilisation comme complément alimentaire.

La présente invention porte également sur un procédé de fabrication par fermentation de la souche particulière n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis faisant l’objet de la composition selon l’invention.

Ce procédé comprend au moins une étape de mise en culture dudit probiotique mentionné ci-dessus dans un milieu de culture comprenant au moins une protéine de lait (par exemple une protéine de lait entier, de lait demi-écrémé ou écrémé, une peptone de lactosérum, une peptone de caséine ou une autre protéine de lait), au moins un sucre ou un mélange de sucres, lesquels sont choisis par exemple parmi le lactose, le glucose, le galactose, le fructose, la maltodextrine, l’amidon, le tréhalose et le maltotriose, au moins un sucre aminé (par exemple la glucosamine et la galactosamine), au moins un extrait de levure et au moins un extrait d’œuf.

De façon surprenante, il a été montré, dans le cadre de la présente invention, qu’un tel milieu de culture optimise l’efficacité de la souche n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis, pour laquelle il a été observé une action curative ou préventive sur la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids. D’autres caractéristiques et avantages de l’invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre non-limitatif et en faisant référence aux exemples décrits ci-dessous.

Ces exemples reprennent des résultats obtenus chez la souris qui ont été complétés par des résultats obtenus in vitro à partir de cellules immunes isolées de sang humain.

Bien que les résultats des tests repris dans les exemples 1 à 4 ci-dessous aient été obtenus chez la souris, il est entendu que des résultats similaires attendus chez l’être humain.

En particulier, il a été démontré dans le cadre de la présente invention, un effet spécifique à la souche sur la prise de poids corporel chez le mammifère, en particulier chez le rongeur.

En effet, la prise de la souche LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. Lactis, seule ou en combinaison avec au moins un autre probiotique, induit une diminution du gain de poids corporel conjointement à une amélioration des paramètres inflammatoires et métaboliques chez le mammifère, en particulier le rongeur, en surpoids, y compris la résistance à l’insuline.

En particulier, il a été démontré, dans le cadre de la présente invention, les effets protecteurs métaboliques de la composition à base de la souche de probiotique selon l’invention qui sont par ailleurs associés à une restauration, au sein des tissus adipeux, de l’expression du PPARy et du remodelage cellulaire, et d’un effet protecteur contre la stéatose hépatique.

La composition à base de la souche selon l’invention permet aussi une modulation de l’expression des récepteurs liés au transport des acides gras, et en particulier une restauration des récepteurs couplés à la protéine G (GPR41 et GPR43) impliqués dans le transport des acides gras à chaînes courtes (AGCC) qui sont les acteurs importants du mécanisme de satiété induit par la prise de nutriments.

En outre, il est démontré l’action positive de la souche selon l’invention sur la taille des adipocytes et sur la production de cytokines et chimiokines pro-inflammatoires (MCP-1, IL-6, TNF-alpha, etc.), certaines d’entre elles étant directement à l’origine de la résistance à l’insuline.

Il a été observé que la souche selon l’invention permet par ailleurs un rétablissement du profil lipidique et du métabolisme du glucose chez le mammifère, prévenant le risque de développer des maladies directement liées au syndrome métabolique comme la dyslipidémie (et donc le diabète de type 2) et l’hyperglycémie.

Enfin, il a été démontré le lien entre la prise de la souche de probiotique selon l’invention et la recolonisation du tractus intestinal par VAkkermansia, une bactérie réputée pour son rôle dans la prévention de l’obésité chez l’être humain et fortement diminuée chez l’individu en surpoids ou obèse.

La figure 1 illustre, chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Ls33 sur (A) l’évolution du gain de poids corporel (en %), (B) la tolérance au glucose (GT), (C) le poids (masse) du tissu adipeux épididymaire (EWAT), et (D) le poids (masse) du tissu adipeux sous-cutané (SCWAT). Les données sont exprimées en moyenne (de 10 à 15 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). ** p<0,01 ; *** p<0,001. * correspond à la comparaison entre le régime enrichi en lipides (HFD) vs le régime contrôle (LFD) à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime).

La figure 2 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) l’évolution du gain de poids corporel (en %), (B) la prise cumulée de nourriture (en gramme/jour/souris), (C) la tolérance à l’insuline (IT), et (D) la GT. Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; *p<0,05 ; m p>0,01 ; ###p<0,001. * correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). # correspond à la comparaison entre le Mix vs le tampon phosphate salin (PBS) à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques selon l’invention).

La figure 3 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) le poids (masse) du EWAT, (B) le poids (masse) du SCWAT, (C) la quantité de leptine dans le sang (ng/ml), (D) la quantité d’adiponectine dans le sang (pg/ml), (E) l’histologie du EWAT (coupes représentatives de chacun des groupes expérimentaux), et (F) la distribution de la taille des adipocytes dans les EWAT. Les données sont exprimées en moyenne (10 à 15 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; #p<0,05 ; ##p<0,01 ; #mp<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques selon l’invention).

La figure 4 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) la composition cellulaire des EWAT (analyse d’expression de gènes spécifiques des monocytes/macrophages (F4/80, CD68, CD11b, CD11c), des lymphocytes T régulateurs (FoxP3) et de la chimiokine MCP-1), (B) la présence de macrophages dans les EWAT (marquage immunofluorescent spécifique de F4/80 et quantification en terme de densité intégrée [IntDen]), (C) l’inflammation des EWAT (analyse d’expression de gènes des cytokines pro-inflammatoires Tnfa, IL-1a, IL-6 et IL-17), et (D) l’expression de PPAR gamma (PPARy), au niveau de l’ARN messager (gauche, expression génique) et de la protéine (centre et droit, western-blot et quantification [en unité arbitraire : A.U.]). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; Mp<0,01 ; ###p<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques.

La figure 5 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) des facteurs impliqués dans le métabolisme des lipides (analyse d’expression des gènes FABP1, APO Cil, et CD36), (B) des récepteurs aux acides gras à chaîne courte (AGCC ou SCFA, en anglais), par analyse d’expression des gènes GPR41 et GPR43). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; ^<0,01 ; ###p<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques).

La figure 5(C) illustre le niveau de production des AGCC (SCFA) totaux (gauche) et des niveaux proportionnels d’acétate, de butyrate et de propionate (droite) après 24 et 48h d’incubation avec le mélange probiotique Mix dans le modèle simulant l’écosystème intestinal (SHIME), in vitro. *** comparé au temps 0.

La figure 6 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’effet du Mix sur (A) la composition du microbiote intestinal et en particulier sur la population de Bifidobacteria et d’Akkermansia muciniphila. (B) L’espèce de Bifidobacterium détectée chez les souris HFD traitées ou non par le mix a été déterminée par analyse TGGE pour 5 souris représentatives des groupes HFD-PBS et HFD-Mix. Les marqueurs M1 ou M2 correspondent aux mélanges des souches indiquées.*p<0,05 ; **p<0,01 ; *p<0,05; mp<0,01. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou du mélange de probiotiques selon l’invention).

La figure 7 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) le poids (masse) du pancréas, du foie et de la rate, (B) l’accumulation des gouttelettes lipidiques (stéatose, voir les coupes histologiques représentatives de chacun des groupes expérimentaux), et (C) différents marqueurs de l’inflammation ou impliqués dans le métabolisme lipidique ou la réponse à l’insuline (analyse d’expression des gènes mcp-1, IL-6, TNFa, IL-10, IL-17, srebp-1c, APOCII Fabpl et IRS2). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; mp<0,01 ; ^<0,001 ; ^pX),0001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). # correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou du mélange de probiotiques selon l’invention).

Le protocole suivant a été observé pour récolter les résultats in vivo discutés dans les exemples 1 à 4 qui suivent.

Protocoles in vivo

Souris, souches de bactéries, et régimes

Les tests ont été réalisés sur des souris mâles C57BL/6J, âgées de 5 semaines au début de l’expérimentation.

La souche Ls33 de Lactobacillus L. salivarius a été fournie par Danisco (Madison, Wl, Etats-Unis).

Le mélange de probiotiques (référencé comme Mix dans les exemples qui suivent) comprend deux souches différentes : une souche de L. rhamnosus LMG S-28148 et une souche de Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 dans un rapport en cfu (coiony-forming units) de 1 :1 (109 cfu total). Les régimes imposés aux souris se déclinent en un premier régime à bas taux de graisses (LFD : D12450B ; 10% kcal provenant de graisses) et en un second régime à haut taux de graisses (HFD : D12492, 60% kcal provenant de graisses). Les régimes ont été fournis par la Société Research Diet.

Protocole de traitement des animaux 5 jours consécutifs par semaine, chaque souris a reçu une administration orale de 30 pL de Ls33 - 109cfu (coiony-forming units ou, le nombre d’unités formatrices de colonie présentes dans la composition orale) dans de l’eau stérilisée (H20) (groupe Ls33-H20), d’eau stérilisée (groupe H20), ou du mélange de probiotiques (groupe Mix ; 5 108cfu pour chaque souche) dans le tampon phosphate salin (PBS) (groupe Mix-PBS ou groupe PBS).

Après une semaine de traitement, les souris traitées au Ls33, à l’eau, au Mix, ou au PBS ont été assignées de façon aléatoire à un régime LFD (n=5 par groupe) ou HFD (n=15 par groupe). Le poids corporel et la prise de nourriture ont été enregistrés de manière hebdomadaire.

Lors du sacrifice, le sang, les tissus adipeux blancs épididymaires (EWAT) et sous-cutanés (SCWAT), le foie, la rate, l’intestin grêle, et le pancréas ont été collectés.

Tests de tolérance à l’insuline et au glucose

Les tests de tolérance au glucose (GTT) et à l’insuline (ITT) ont été réalisés après, respectivement 12 et 14 semaines de régime. Les animaux ont été mis à jeun pendant une période de 6 heures avant de recevoir une administration intra-péritonéale (IP) de glucose (D-glucose, 1 g/kg de poids corporel) (GTT) ou d’insuline (0.75 IU/kg de poids corporel) (ITT). Les taux de glucose dans le sang ont été mesurés par un glucomètre automatique disponible dans le commerce (par exemple, un ACCU-CHEK® performa) sur un échantillon de sang prélevé au niveau de la queue avant l’injection de glucose (GTT) ou d’insuline (ITT) et à différents temps après injection de glucose (GTT) ou d’insuline (ITT).

Analyses sanguines

Les taux plasmatiques de leptine, adiponectine, MCP-1, et insuline ont été mesurés en utilisant des trousses ELISA commercialisées. Les taux en acide gras non-estérifiés (NEFA), en triglycérides, en glycérol, en cholestérol HDL, et en cholestérol LDL ont été déterminés en utilisant des trousses d’analyse disponibles sur le marché (par exemple, le kit Abcam développé par Cambridge, GB).

Analyses histologiques et immuno-histochimiques

Les échantillons de foie et de tissus adipeux blancs (EWAT) ont été fixés dans une solution de paraformaldéhyde à 4% , inclus ensuite en paraffine et enfin coupés, déposés sur lame puis colorés à l’hématoxyline éosine (H&E). L’analyse morphométrique des tissus adipeux blancs (EWAT), au moins 10 champs (ce qui représente environs 100 adipocytes) par section a été réalisée en utilisant le programme d’imagerie Image J (NIH image, National Center for Biotechnology Information).

Analyses de l’expression des gènes L’ARN total des fragments de tissus adipeux blancs, de foie et d’intestin a été extrait (selon la méthode connue de l’homme de l’art) pour être ensuite rétro-transcrit (une quantité de 1 pg a été retranscrite pour chacune des catégories de tissus susmentionnées). La technique de PCR (Polymerase Chain Reaction) quantitative en temps réel (RT-qPCR) a été réalisée selon un protocole connu de l’homme de l’art.

Analyses statistiques

Les données sont exprimées en moyenne + écart-type à la moyenne (SEM). Les analyses statistiques ont été réalisées en utilisant le test de Kruskal Wallis suivi du test de Mann-Whitney U. Les différences entre les groupes expérimentaux sont considérées comme étant statistiquement significatives lorsque la valeur p est inférieure à 0,05.

Le protocole suivant a été observé pour récolter les résultats in vitro discutés dans les exemples 5 et 6.

Protocole in vitro

Simulateur de l’écosystème microbien humain - modèle SHIME

Le réacteur SHIME qui simule le tractus gastro-intestinal humain a été mis en place selon une procédure bien connue de l’homme de l’art.

Le Mix a été ajouté dans le réacteur et les productions d’acides gras à chaîne courte (AGCC ou SCFA, en anglais) ont été mesurés aux temps t=0, t=24 h, et t=48h d’incubation à 37°C sous atmosphère anaérobie.

Evaluation de l’effet anti-inflammatoire de la souche Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 sur des cellules sanguines humaines

Du sang humain frais, obtenu à partir de quatre donneurs sains, a été dilué dans un rapport 1 :1 avec du PBS-Ca (GIBCO), déposé sur une couche de Ficoll (GIBCO) et centrifugé à 400 xg pendant 30 minutes à 20°C.

Les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) ont été isolées du sang après centrifugation et suspendues dans un volume final de 50 ml en utilisant du PBS-Ca, pour ensuite être lavées trois fois à 750 xg pendant 10 minutes à 20°C. Les PBMC ont ensuite été resuspendues dans un milieu RPMI (GIBCO), complété par 10% (v/v) de sérum de veau décomplémenté (sérum porté à 56°C pendant 30 minutes), 1% (p/v) de L-glutamine (GIBCO), et de la gentamycine (30pg/ml) (GIBCO). Les PBMC ont été comptées et leur nombre ajusté à 2 x 106 cellules par ml. La préparation est distribuée (1ml) dans des plaques de culture à 24 puits.

Exemple 1 : Ls33 vs Mix

Cet exemple illustre l’impact du Ls33 sur le développement du surpoids et de l’obésité chez la souris.

La figure 1 illustre, pour une cure de 15 semaines en Ls33 ou en eau et un régime en nourriture à bas taux de graisses (LFD) ou à haut taux de graisses (HFD), les indicateurs suivants : - (A) révolution du gain de poids corporel, exprimé en pourcentage par rapport au poids mesuré au jour j=0 ; - (B) le test de tolérance au glucose (GTT) réalisé après 12 semaines de régime. Les taux de glucose (en mg/dl) ont été mesurés chez les souris, directement après une période de mise à jeun de 6 heures, aux temps t (en min) indiqués sur le graphe, après injection intrapéritonéale (IP) de glucose (qui correspond au temps t=0). - (C) le poids (masse) du tissu adipeux épididymaire (EWAT) (en g) après 15 semaines de régime (pesé lors du sacrifice) ; - (D) le poids (masse) du tissu adipeux sous-cutané (SCWAT) (en g) après 15 semaines de régime (pesé lors du sacrifice).

Comme le montrent les résultats présentés sur cette figure, la souche Ls33, malgré son activité anti-inflammatoire démontrée in vitro et dans d’autres modèles pathologiques (i.e. inflammations intestinales), ne montre aucun effet (positif ou négatif) sur les différents indicateurs A à D. A l’inverse, l’administration du mélange Mix montre des effets de protection significatifs. Ces résultats sont illustrés à la figure 2.

Cette figure illustre, après 17 semaines de traitement par le mélange de probiotiques (Mix) ou le PBS et pour un régime à bas taux de graisses (LFD) ou à haut taux de graisses (HFD), les résultats correspondants : - (A) à l’évolution du gain de poids corporel (exprimé en pourcentage par rapport au poids mesuré au jour j=0) ; - (B) à la prise cumulée de nourriture par souris et par jour (g/jour/souris) ; - (C) au test de tolérance à l’insuline (ITT) réalisé 14 semaines après le démarrage du régime : les taux de glucose dans le sang ont été mesurés après injection intrapéritonéale (IP) d’insuline. Les résultats montrent les taux normalisés (en % par rapport aux taux de glucose mesurés avant injection) + SEM et les moyennes + SEM des valeurs de l’aire sous la courbe (AUC) pour chaque courbe de glucose normalisée après injection de l’insuline ; - (D) au test de tolérance au glucose (GTT) réalisé après 12 semaines de régime. Les taux de glucose (en mg/dl) ont été mesurés chez la souris après injection IP de glucose et les valeurs d’AUC ont été calculées.

Pour le groupe de souris HFD-Mix, il a été observé un gain de poids corporel moins important (gain de 80,97% + 4,96%) que celui obtenu dans le groupe HFD-PBS (gain de 113,51% + 4,89%) (voir figure 2A).

Comme le montre la figure 2B, les souris du groupe HFD traitées par le mélange de probiotiques Mix présentent une diminution de la prise de nourriture cumulée (Food intake, Fl). De manière intéressante, les effets bénéfiques observés sur la prise de poids corporel et l’indice Fl sont apparus rapidement après le début du traitement (à partir de la quatrième semaine). L’administration du mélange Mix améliore l’homéostasie du glucose pour le groupe HFD comme le montrent les taux moindres en glucose et en insuline de la table 1 ci-dessous :

Table 1

Groupes / lfd-pbs lfd-mîx hfd-pbs hfd-mîx

Indicateurs

Glucose (mg/dl) |180,4±30,88 160,3±28,96 231,67±21,7* 198,43±15##

Insuline (ng/ml) 0,72 ±0,37 0,98 ±0,24 2,96 ±0,57* 1,57 ±0,23* NEFA (mmol/l) 0,85 ±0,06 1,07 ±0,07 1,06 ±0,03 0,9 ±0,08

Glycérol (mmol/l) 0,13 ±0,06 0,24 ±0,05 0,38 ±0,1 0,34 ± 0,05

Triglycéride (mmol/l) 0,4 ±0,009 0,46 ±0,02 0,41 ±0,03 0,41 ±0,03

Cholestérol (mmol/l) 1,35 ±0,05 1,33 ±0,05 1,94 ±0,04*** 1,72 ±0,3*** HDL (mmol/l) 1,09 ±0,04 1,07 ±0,04 1,5 ±0,01*** 1,35 ±0,02*** LDL (mmol/l) 0,25 ±0,01 0,26 ± 0,01 0,45 ± 0,04*** 0,36 ± 0,02***

Les données de cette table sont exprimées en moyenne + écart-type à la moyenne (SEM) (correspondant à 5 et 14 souris par groupe).* p<0,05 ; *** p<0,001 ; *p<0,05 ; **p<0,01 ; “ρΟ,ΟΟΙ * correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). * correspond à la comparaison entre le Mix ys le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou du mélange de probiotiques).

Par ailleurs, comme le montre la table 1, si les effets du Mix restent limités aux taux de NEFA, de glycérol et de triglycérides, il démontre une action hypocholestérolémiante puisqu’il est associé à une diminution du taux de cholestérol total et de HDL cholestérol.

En outre, l’indice HOMA-IR ((taux d’insuline à jeun/ taux de glucose à jeun)/22,5) est significativement réduit chez les souris du groupe HDF-Mix, comparé au groupe contrôle (32,04 + 5,86 vs 81,57 + 19,63 ; p<0,01), ce qui indique une sensibilité améliorée à l’insuline, confirmée par les résultats du test de tolérance à l’insuline (voir figure 2C).

De même, les souris traitées par le Mix sont moins intolérantes aux injections de glucose (voir figure 2D).

Exemple 2 : action du Mix sur l’inflammation des tissus adipeux blancs

La figure 3 illustre les effets du Mix sur : - (A) le poids (masse) de l’EWAT (en g) ; - (B) le poids (masse) du SCWAT (en g) ; - (C) les quantités de leptine dans le sang (en ng/ml) mesurés par la méthode ELISA (méthode de dosage immunoenzymatique) dans le sérum de souris préalablement mises à jeun pendant 6 heures ; - (D) les quantités d’adiponectine dans le sang (en pg/ml) mesurés par la méthode ELISA dans le sérum de souris préalablement mises à jeun pendant 6 heures ; - (E) l’histologie des tissus adipeux épididymaires (présentation de coupes colorées à l’hématoxyline et à l’éosine représentatives de chacun des groupes expérimentaux). L’échelle est de 100 pm. Les flèches noires indique la présence d’infiltration cellulaire; et - (F) la distribution de la taille des adipocytes du EWAT. Les résultats sont présentés en % d’adipocytes par classe de tailles (0-20 pm, 20-40, etc.), tandis que la figure 7 illustre l’action du Mix sur : - (A) le poids (masse) du pancréas, du foie, et de la rate (en g); - (B) l’accumulation de gouttelettes lipidiques (i.e. stéatose) dans le foie (présentation de coupes, colorées par H&E, représentatives de chacun des groupes expérimentaux). L’échelle est de 100 pm ; et - (C) l’expression de gènes codant des cytokines pro-et anti-inflammatoires et des récepteurs impliqués dans le transport et le métabolisme des lipides, dans le foie.

En comparaison avec les groupes contrôle HFD, le groupe HFD-Mix présente une diminution marquée des masses adipeuses EWAT et SCWAT (voir figures 3A et 3B).

Une diminution marquée des poids (masses) du pancréas, du foie, et de la rate est également observée chez les individus du groupe HFD-Mix (voir figure 7A).

En outre, alors que les souris du groupe de contrôle HFD ont développé une stéatose hépatique, l’administration du mélange de probiotiques Mix permet de limiter la présence de gouttelettes de lipides dans les tissus (voir figure 7B).

En concordance avec la diminution de la masse de tissus adipeux blancs, les taux sanguins de leptine s’avèrent être significativement plus bas dans le groupe HFD-Mix (voir figure 3C), alors que les taux d’adiponectine ont tendance à être plus élevés (voir figure 3D). L’histologie des tissus adipeux épididymaires a montré une densité plus élevée en petits adipocytes chez les souris du groupe HFD-Mix (voir figure 3E et 3F).

Il est à noter que, si chez les souris du groupe contrôle, les tissus adipeux sont infiltrés de manière marquée par des cellules qui entourent les adipocytes (marquées par une flèche sur la figure 3E), les échantillons de tissus prélevés chez les souris du groupe ayant reçu le Mix de probiotiques sont moins marqués par cette infiltration.

Lors du développement de l’obésité, les macrophages sont recrutés dans les tissus adipeux blancs alors que les cellules-T régulatrices FoxP3+CD4+ quittent ces tissus.

La figure 4 illustre chez la souris en surpoids l’action du Mix sur l’inflammation des tissus adipeux.

Comme le montre la figure 4A, en comparaison avec les tissus LFD contrôles, les niveaux d’expression de plusieurs marqueurs spécifiques de monocytes/macrophages (F4/80 ; Cd68 ; Cd11b; et Cd11c) sont augmentés chez les souris du groupe HFD alors que les taux relatifs au marqueur Foxp3 sont diminués. L’administration du mélange de probiotiques Mix diminue de manière significative l’expression induite par le régime HFD des marqueurs de monocytes/macrophages et augmente les niveaux d’expression du marqueur Foxp3. L’impact du mélange Mix, et donc de la souche de probiotique selon l’invention, sur le recrutement des macrophages dans les tissus adipeux est appuyé par les résultats illustrés à la figure 4B.

Conformément à la diminution du recrutement des macrophages conjointement à une augmentation de l’accumulation en lymphocytes Treg anti-inflammatoires, il est montré dans cet exemple que les tissus adipeux épididymaires chez la souris traitée par le mélange Mix présentent un niveau d’inflammation moindre que les tissus contrôles, comme le démontrent les niveaux d’expression réduits pour les ARN messagers spécifiques de I’ II6, du Tnfa, de ΓΙΙ-1 a, et de ΓΙΙ-17 (voir figure 4C).

En outre, il est montré que le traitement à base du mélange Mix limite la diminution en PPARy (à la fois au niveau de l’ARN messager et de la protéine) induite par le régime HFD (voir figure 4D).

Exemple 3 : action du Mix sur le métabolisme des lipides de l’intestin grêle et la production d’acides gras à chaîne courte (AGCC/SCFA)

Il est démontré dans cet exemple que les niveaux d’expression des gènes (GPR41 et GPR43) qui sont responsables du transport des acides gras à chaîne courte (SCFAs, pour Short-Chain Fatty Acids) sont diminués dans l’intestin grêle des souris soumises au régime HFD, ce qui indique que dans le groupe HFD, les AGCC sont en moindrer mesure d’agir positivement puisque ces derniers sont moins détectés, tandis qu’ils sont significativement augmentés chez les animaux traités avec le mélange Mix sous régime HFD (voir figure 5B). Réciproquement, l’administration du Mix a pour effet de limiter l’augmentation des gènes impliqués dans le métabolisme lipidique induits par un régime alimentaire gras (voir figure 5A).

Exemple 4 : action du Mix sur le microbiote et le niveau de colonisation par Akkermansia muciniphila

Une analyse de certaines bactéries du microbiote a été réalisée par PCR quantitative (qPCR) à partir du contenu caecal des souris qui ont été soumises au régime HFD conjointement ou non à une prise du Mix, et d’autre part, des souris soumises au régime LFD conjointement ou non à une prise du Mix.

Les résultats illustrés à la figure 6 montrent un changement de la composition du microbiote des souris HFD-Mix, avec en particulier une restauration du niveau de colonisation par Akkermansia muciniphila chez les souris soumises au régime HFD et traitées avec la souche de probiotique ou le mélange de probiotiques selon l’invention.

Exemple 5 : action du Mix sur la production d’AGCC ; utilisation du modèle SHIME

Dans cet exemple, un modèle dynamique in vitro de simulation de l’intestin, qui est destiné à reproduire l’écosystème microbien de l’intestin humain, a été employé.

Comme le montrent les résultats issus de cette simulation (voir la figure 5C), l’utilisation de la souche n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. Lactis permet une augmentation, dans un délai de 48h après inoculation, de la production des AGCCs totaux (total SCFAs), favorisant la production dans l’intestin de butyrate et de propionate, deux métabolites qui favorisent la satiété induite par la prise de nutriments chez l’être humain. Les taux en butyrate et propionate produits dans le colon ascendant associé au réacteur SHIME avant (TO) et après (T24h et T48h) incubation du mélange Mix selon l’invention sont repris en table 2. Ces données sont exprimées en mmol/L + SED.

Table 2 Période / TO T24h T48h

Produits

Acétate 3,53 ± 0,38 10,96 ±0,91 3,10±0,16

Propionate 1,10 ±0,03 3,87 ±0,51 7,07 ±0,16

Isobutyrate 0,00 ± 0,00 0,24 ± 0,05 1,30 ± 0,05

Butyrate 0,69 ±0,07 3,25 ±0,27 12,27 ±0,22

Isovalérate 0,11 ± 0,00 0,50 ± 0,05 2,44 ± 0,04

Isocaproate 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00

Caproate 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00

Total 5,44 ±0,33 18,84 ±1,46 26,19 ±0,36

Il est bien entendu que la présente invention n’est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.

Liste des abréviations AGCC (SCFA) : Acide gras à chaîne courte EWAT : Tissus adipeux blancs épididymaires GT(T) : (Test) de tolérance au glucose HDL : Lipides à haute densité H&E : Hématoxyline et éosine HFD : Régime riche en graisses IMC : Indice de Masse Corporelle (HOMA)-IR : (Modèle homéostatique) pour apprécier la résistance à l’insuline IT(T) : (Test) de tolérance à l’insuline (V)LDL : Lipide à (très) faible densité LFD : Régime pauvre en graisses NEFA : Acide gras non-estérifié PBS : Tampon phosphate salin PBMC : Cellules mononuclées du sang périphérique SCWAT : Tissus adipeux blancs sous-cutanés SEM : Ecart-type à la moyenne SH IME : Simulator of the Human Intestinal Microbial Ecosystem WAT : Tissus adipeux blancs

Claims

REVENDICATIONS

1. Composition à base d’au moins un élément de probiotique pour une utilisation dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids et/ou pour le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète, caractérisée en ce que ledit élément de probiotique provient du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, et est de préférence du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 entier, par exemple à l’état vivant.
2. Composition selon la revendication 1, comprenant au moins un probiotique additionnel choisi dans le groupe constitué des probiotiques suivants : Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacters, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogène), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, et Clostridium, ou une combinaison de ceux-ci.
3. Composition selon la revendication 1 ou 2, comprenant une souche de champignon et/ou de levure choisie dans le groupe constitué de Saccharomyces, de Candida, de Pichia, de Debaryomyces, de Torulopsis, d’Aspergillus, de Rhizopus, de Mucor, et de Pénicillium.
4. Composition selon la revendication 1 ou 3, dans laquelle ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel sont encapsulés dans un véhicule d’encapsulation.
5. Composition selon la revendication 4, dans laquelle ledit véhicule comprend au moins une substance choisie dans le groupe constitué de l’alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar ou une combinaison de ceux-ci.
6. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ladite au moins une substance est un hydrocolloïde.
7. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant au moins une source nutritive choisie dans le groupe constitué d’un monosaccaride, d’un polysaccharide, d’un aminoacide, d’un peptide, d’une protéine, d’une vitamine, d’un extrait de levure, un sel d’halogénure d’un métal alcalin ou alcalinoterreux, un antioxydant, de glycérol, d’acétate de zinc, de chlorure de zinc, de lactate de zinc, d’acide ascorbique, d’acide citrique, d’une huile végétale, de graisse de lait, ou une combinaison de ceux-ci.
8. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant en outre au moins un prébiotique, formant ainsi une composition symbiotique.
9. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, comprenant un premier revêtement entérique recouvrant ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel.
10. Composition selon la revendication 9, dans laquelle ledit premier revêtement entérique est choisi dans le groupe constitué de l’éthyle cellulose, de l’hydroxypropyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, de l’Eudragit®, ou une combinaison de ceux-ci.
11. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant un deuxième revêtement externe choisi dans le groupe constitué de l’alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar, de la cellulose, de l’hémicellulose, de l’éthyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, ou une combinaison de ceux-ci.
12. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant en outre un ou plusieurs excipients biocompatibles.
13. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou pour le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids pendant et/ou après diète.
14. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel chez la femme enceinte ou qui a accouché ou chez l’homme en couvade.
15. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour une utilisation comme complément alimentaire.
16. Aliment ou composition alimentaire à base de la composition comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 selon l’une quelconque des revendications précédentes.
17. Composition thérapeutique à base de la composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 15.
18. Composition thérapeutique selon la revendication 17, pour une utilisation par voie orale, ou sublinguale ou par voie respiratoire, de préférence nasale ou bronchique, ou encore par voie rectale.
19. Composition thérapeutique selon la revendication 17 ou la revendication 18, comprenant au moins un excipient biocompatible.
20. Composition thérapeutique selon l’une quelconque des revendications 17 à 19, conditionnée préférentiellement sous forme de comprimés, de globules, de gélules, de granules, de poudres, de fluides, de liquides, de crèmes ou de sprays.
21. Composition, de préférence alimentaire ou thérapeutique, à base d’au moins un élément de Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, de préférence entier, par exemple à l’état vivant, pour le traitement curatif ou préventif du syndrome métabolique lié au surpoids chez l’être humain.
22. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit élément de Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et choisi parmi le groupe constitué des constituants de la paroi cellulaire du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, des organelles cellulaires du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, des acides nucléiques du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, des constituants de la membrane cellulaire du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, et des métabolites cellulaires du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.
23. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant du butyrate et/ou du propionate, ou au moins un de leurs dérivés induit par ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.