BE1000016B1

BE1000016B1 - COMPOSITION COMPRISING BIFIDOBACTERIUM ANIMALIS SSP. LACTIS.

Info

Publication number: BE1000016B1
Application number: BE2014/0292A
Authority: BE
Inventors: Johan Quintens; Lidth De Jeude Johan Lienart-Van; Corinne Grangette; Bruno Pot; Kassem Makki; Isabelle Wolowczuk; Jeanne Alard; Véronique Lehrter-Valenti
Original assignee: Vesale Pharma Nv; Vesale Pharma Sa.; Institut Pasteur De Lille
Priority date: 2014-04-25
Filing date: 2014-04-25
Publication date: 2016-02-01

Abstract

Composition à base de Bifidobacterium animalis ssp. lactis LMG n° LMG P-28149 pour usage dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids et/ou pour le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l'être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète.Composition based on Bifidobacterium animalis ssp. lactis LMG n ° LMG P-28149 for use in the curative treatment of body weight gain in overweight humans and / or for the preventive treatment of body weight gain in overweight or overweight, preferably during and / or after diet.

Description

Composition comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactisComposition comprising Bifidobacterium animalis ssp. lactis

La présente invention concerne une composition à base d’au moins un élément de probiotique pour une utilisation dans le traitement curatif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids et/ou pour le traitement préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète.The present invention relates to a composition based on at least one probiotic element for use in the curative treatment of body weight gain in overweight humans and / or for the preventive treatment of body weight gain in overweight or overweight human, preferably during and / or after diet.

Par les termes « élément de probiotique », on entend au sens de la présente invention une substance issue du probiotique ou un constituant de probiotique, ou l’entité bactérienne, entière ou partielle, de probiotique.For the purposes of the present invention, the term "probiotic element" is intended to mean a substance derived from the probiotic or a probiotic constituent, or the bacterial entity, whole or partial, of probiotic.

Par les termes « en surpoids », on entend, au sens de la présente invention, que l’être humain présente une accumulation anormale et/ou excessive de graisse corporelle, principalement abdominale, ce qui présente un risque pour sa santé. Dans le cadre de la présente invention, le terme « surpoids » comprend aussi le cas particulier, et extrême, de l’état d’obésité chez l’être humain.For the purposes of the present invention, the term "overweight" means that the human has an abnormal and / or excessive accumulation of body fat, mainly abdominal, which presents a risk to his health. In the context of the present invention, the term "overweight" also includes the particular and extreme case of the state of obesity in humans.

Par les termes « ayant été en surpoids », il faut entendre au sens de la présente invention que l'être humain a subi une perte de poids et présente un poids considéré comme normal (basé sur BMI ou tour de taille/hanche) depuis une période comprise entre 3 et 5 ans.By the term "having been overweight" is meant within the meaning of the present invention that the human has undergone weight loss and has a weight considered normal (based on BMI or waist / hip) since a period between 3 and 5 years.

Il est difficile d’élaborer un indice simple qui permette de mesurer le surpoids et l’obésité au niveau d’un panel d’une population donnée. Par exemple, l’échelle utilisée pour mesurer l’indice de surpoids et d’obésité chez les enfants et les adolescents, de par le fait que leur organisme subit un certain nombre de changements physiologiques liés à leur croissance, diffère de celui utilisé chez l’adulte. Dès lors, en fonction de l’âge, l’OMS (Organisation Mondiale de la Santé) met à la disposition du public, différentes méthodes de mesure du poids corporel en fonction de l’âge de l’individu ou de l’âge moyen de l’échantillon d’individus. A titre illustratif, le surpoids peut s’évaluer chez l’adulte sur base de l’Indice de Masse Corporelle (IMC ou BMI pour Body Mass Index), qui représente une mesure simple du poids par rapport à la taille couramment utilisée pour estimer le surpoids et l’obésité chez l’adulte. Il correspond au poids divisé par le carré de la taille, exprimé en kg/m2. L’IMC présente l’avantage de s’appliquer aux deux sexes et à toutes les tranches d’âge adultes. Il doit toutefois être considéré comme une indication approximative car il ne correspond pas nécessairement au même pourcentage de masse graisseuse selon les individus.It is difficult to develop a simple index that measures overweight and obesity at the panel level of a given population. For example, the scale used to measure the index of overweight and obesity in children and adolescents, because their body experiences a number of physiological changes related to their growth, differs from the one used in 'adult. Therefore, depending on the age, the WHO (World Health Organization) makes available to the public, different methods of measuring body weight according to the age of the individual or the average age of the sample of individuals. As an illustration, overweight can be evaluated in adults on the basis of Body Mass Index (BMI), which is a simple measure of weight compared to the size commonly used to estimate body weight. overweight and obesity in adults. It corresponds to the weight divided by the square of the size, expressed in kg / m2. BMI has the advantage of being applicable to both sexes and all adult age groups. However, it should be considered as an approximate indication because it does not necessarily correspond to the same percentage of fat mass according to individuals.

Dans ce contexte, l’OMS définit, sur base de l’IMC, les valeurs seuils suivantes pour déterminer si un adulte présente un surpoids ou une obésité : - un état normal de poids correspond à un IMC compris entre 20 et 25; - un état de surpoids correspond à un IMC compris entre 25 et 30; et - un état d’obésité correspond à un IMC égal ou supérieur à 30.In this context, the WHO defines, on the basis of BMI, the following threshold values for determining whether an adult is overweight or obese: - a normal state of weight corresponds to a BMI between 20 and 25; a state of overweight corresponds to a BMI between 25 and 30; and - a state of obesity corresponds to a BMI equal to or greater than 30.

Toutefois, il est à noter que l’IMC ne donne aucune indication quant à la répartition de la graisse abdominale vs la graisse sous-cutanée.However, it should be noted that BMI gives no indication as to the distribution of abdominal fat vs. subcutaneous fat.

Cet indice, même s’il présente l’avantage d’uniformiser la classification aux deux sexes et à toutes les tranches d’âge des individus adultes, peut de préférence être interprété de manière complémentaire avec un autre indicateur qui peut être, par exemple, la mesure du tour de taille de l’individu.This index, although it has the advantage of standardizing the classification for both sexes and all age groups of adult individuals, can preferably be interpreted in a complementary manner with another indicator which may be, for example, the measurement of the waist of the individual.

Ainsi, un individu masculin adulte présentant un tour de taille supérieur à 100 cm est considéré comme étant en surpoids. Ce seuil est de 88 cm chez la femme adulte.Thus, an adult male individual with a waist circumference greater than 100 cm is considered to be overweight. This threshold is 88 cm in the adult woman.

Ce paramètre peut être généralisé à toutes les tranches d’âge en mesurant le rapport tour de taille (A) / tour de hanches (H).This parameter can be generalized to all age groups by measuring the waist circumference (A) / hip circumference (H).

Le surpoids est observé pour un rapport supérieur à 1 chez l’individu masculin et supérieur à 0,85 chez l’individu de sexe féminin.Overweight is observed for a ratio greater than 1 in the male individual and greater than 0.85 in the female individual.

Le terme « traitement »s’applique dans le cadre de cette invention dès lors que le surpoids chez l’être humain et en particulier l'obésité humaine, a été reconnu comme une maladie par l’OMS.The term "treatment" applies in the context of this invention since overweight in humans and in particular human obesity, has been recognized as a disease by the WHO.

Par le terme « curatif », il faut entendre, au sens de la présente invention, l’action qui vise à réduire le poids corporel d’un être humain en surpoids et/ou à réduire la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids.For the purposes of the present invention, the term "curative" is intended to mean the action which aims to reduce the body weight of an overweight human and / or to reduce body weight gain in humans. Overweight.

Le traitement curatif implique donc l’action qui vise à atteindre, de préférence pendant et/ou après diète, un poids corporel considéré comme normal chez l’être humain, c’est-à-dire avec un risque moindre pour la santé, dans une plage de valeurs prédéterminée, basée, par exemple sur l’IMC, qui est compris entre 20 et 25, de préférence égal à 22.The curative treatment therefore involves the action that aims to achieve, preferably during and / or after diet, a body weight considered normal in humans, that is to say with a lower risk to health, in a predetermined range of values, based for example on the BMI, which is between 20 and 25, preferably equal to 22.

Par les termes « risque moindre pour la santé », il y a lieu d’interpréter dans le cadre de la présente invention que, à un poids corporel considéré normal, le risque de développer un syndrome métabolique est négligeable.By the term "lesser risk to health", it is to be understood in the context of the present invention that, at a body weight considered normal, the risk of developing a metabolic syndrome is negligible.

En particulier, l’action curative vise principalement la diminution de la graisse abdominale chez l’individu ou au moins une diminution de l’accumulation de la graisse abdominale.In particular, the curative action is primarily aimed at decreasing the abdominal fat in the individual or at least a decrease in the accumulation of abdominal fat.

Par le terme« préventif», il faut entendre, au sens de la présente invention, l’action qui vise à stabiliser le poids corporel d’un être humain en surpoids ou qui a été en surpoids (c’est-à-dire qui a perdu du poids) et donc à empêcher ou limiter la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou qui a été en surpoids, de préférence pendant et/ou après diète.For the purposes of the present invention, the term "preventive" is intended to mean the action which aims at stabilizing the body weight of an overweight or overweight human being (i.e. has lost weight) and thus to prevent or limit body weight gain in overweight or overweight humans, preferably during and / or after diet.

Le traitement préventif implique aussi l’action qui vise à maintenir, de préférence pendant et/ou après diète, un poids corporel stable, de préférence considéré comme normal chez l’être humain, dans une plage constante de valeurs prédéterminée, basée, par exemple, sur l’IMC (pour rappel, entre 20-25), mais le poids corporel normal peut aussi être interprété à la lumière du rapport A/H inférieur à 0,85 chez l’individu de sexe féminin, et inférieur à 1,00 chez l’individu de sexe masculin.Preventive treatment also involves the action which aims to maintain, preferably during and / or after diet, a stable body weight, preferably considered normal in humans, within a predetermined constant range of values, based, for example , on BMI (as a reminder, between 20-25), but normal body weight can also be interpreted in light of the A / H ratio of less than 0.85 in the female individual, and less than 1, 00 in the male individual.

Actuellement, à l’échelle mondiale, le surpoids et l’obésité sont responsables (du fait des maladies associées, comme le diabète de type 2 ou les maladies cardiovasculaires) de plus décès que l’insuffisance pondérale.Currently, overweight and obesity worldwide are responsible (because of associated diseases, such as type 2 diabetes or cardiovascular disease) of more deaths than underweight.

En particulier, le surpoids et l’obésité ont atteint les proportions d’une épidémie mondiale (compte tenu que près de 3 millions de personnes au moins décèdent chaque année de pathologies liées à leur surpoids ou leur obésité) et ne sont plus limités aux pays dits riches mais touchent désormais également les pays à revenu faible ou intermédiaire.In particular, overweight and obesity have reached the proportions of a global epidemic (given that at least 3 million people die each year from overweight or obesity-related diseases) and are no longer limited to rich but now also reach low- and middle-income countries.

Il est en outre démontré qu’un IMC élevé, parfois conjointement à un rapport A/H élevé, constitue un facteur favorisant, d’une part, le syndrome métabolique qui est définit dans le cadre de la présente invention comme une association de facteurs de risques pour la santé: une hypertension artérielle, une hypertriglycéridémie, un taux bas en cholestérol HDL, un état d’obésité androïde (par exemple, une accumulation de graisse abdominale), et une élévation de la glycémie. Ces indicateurs constituent de fait une base de définition qui est commune aux actuelles trois définitions principales connues : celle de l’OMS (publiée en 1998 puis amendée en 1999), celle du National Cholesterol Education Program (NCEP-ATPIII) publiée en 2001, et celle de la Fédération Internationale du Diabète publiée en 2005.It has further been demonstrated that a high BMI, sometimes together with a high A / H ratio, is a factor that promotes, on the one hand, the metabolic syndrome that is defined in the context of the present invention as a combination of health risks: high blood pressure, hypertriglyceridemia, low HDL cholesterol, android obesity (eg, abdominal fat accumulation), and elevated blood glucose. These indicators are in fact a basis for definition that is common to the current three main definitions: that of WHO (published in 1998 and amended in 1999), that of the National Cholesterol Education Program (NCEP-ATPIII) published in 2001, and that of the International Diabetes Federation published in 2005.

En pratique, le syndrome métabolique se traduit par les indicateurs suivants, de manière non exhaustive : - un taux d’insuline anormalement élevé ; - un diabète de type 2 ; - une hypercholestérolémie (associée à un taux bas de « bon » cholestérol HDL) ; - une hypertension ; - une augmentation significative de la prise de poids corporel au cours du temps, surtout s'il s'agit d'une obésité abdominale ; - une hypertriglycéridémie ; - une stéatose hépatique ; - le développement d’un état inflammatoire systémique; et - une hypertrophie des adipocytes, et, d’autre part, le risque de maladies chroniques comme: - les troubles musculo-squelettiques, en particulier l’arthrose; ou - certains types de cancers.In practice, the metabolic syndrome is reflected in the following indicators, in a non-exhaustive way: - an abnormally high insulin level; - type 2 diabetes; - hypercholesterolemia (associated with a low level of "good" HDL cholesterol); - hypertension; - a significant increase in body weight gain over time, especially if it is abdominal obesity; hypertriglyceridemia; - hepatic steatosis; - the development of a systemic inflammatory state; and - hypertrophy of the adipocytes, and, on the other hand, the risk of chronic diseases such as: - musculoskeletal disorders, in particular osteoarthritis; or - certain types of cancer.

La problématique de prise de poids corporel incontrôlée amenant au surpoids chez l’être humain est donc un problème sociétal avéré ayant un impact non négligeable sur la santé, au niveau mondial. C’est dans cette perspective que l’OMS a établi, dans sa stratégie mondiale de prévention de la prise de poids excessive, des recommandations concernant l’alimentation et l’exercice physique. Adoptée par l’Assemblée Mondiale de la Santé (AMS) en 2004, cette stratégie définit les mesures nécessaires pour encourager les gens à suivre une alimentation saine et à faire régulièrement de l’exercice.The problem of uncontrolled body weight gain leading to overweight in humans is therefore a recognized societal problem with a significant impact on health worldwide. It is in this perspective that WHO has established recommendations on diet and exercise in its global strategy to prevent excessive weight gain. Adopted by the World Health Assembly (WHA) in 2004, this strategy sets out the measures necessary to encourage people to follow a healthy diet and exercise regularly.

Toutefois, si cette stratégie repose sur des recommandations prévenant la prise de poids, elle ne propose pas d’indications quant aux traitements curatif et préventif de la prise de poids chez les individus en surpoids ou ayant été en surpoids et qui présentent un risque de reprise de poids. En effet, actuellement, la problématique de prise de poids incontrôlée ne cible plus seulement les individus normopondéraux (c’est-à-dire qui présentent un IMC normal et/ou un tour de taille normal) susceptibles de prendre du poids, mais surtout les individus déjà en surpoids dès lors que l’OMS indique que près de 1,4 milliard de personnes âgées de 20 ans et plus présentent d’ores et déjà un surpoids. Parmi elles, plus de 200 millions d’hommes et près de 300 millions de femmes sont obèses, et globalement, plus d’un adulte sur dix dans le monde est obèse.However, while this strategy is based on recommendations to prevent weight gain, it does not offer any guidance on the curative and preventive treatment of weight gain in overweight or overweight individuals at risk of recovery. weight. Indeed, at present, the issue of uncontrolled weight gain no longer targets only the normoponderal individuals (that is to say those who have a normal BMI and / or a normal waist circumference) likely to gain weight, but especially the individuals already overweight when the WHO indicates that nearly 1.4 billion people aged 20 years and over are already overweight. Among them, more than 200 million men and nearly 300 million women are obese, and globally, more than one in ten adults in the world is obese.

Il existe donc un besoin de disposer d’un traitement qui permette la réduction ou la prévention du surpoids et de l’obésité chez l’être humain en surpoids. De préférence, ce traitement doit être peu contraignant dès lors que l’on sait qu’une raison principale liée au surpoids et à l’obésité est le manque d’assiduité à suivre un régime précis associé à un traitement qui peut être parfois lourd.There is therefore a need for treatment that can reduce or prevent overweight and obesity in overweight humans. Preferably, this treatment should be low-binding when it is known that a main reason related to overweight and obesity is the lack of attendance to follow a specific diet associated with a treatment that can sometimes be heavy.

En particulier, la présente invention s’inscrit dans le cadre d’une relation de cause à effet connue qui associe des modifications du microbiote intestinal au développement de l’obésité (Ley et co., 2006. Nature, 444: 1022-1023; Nadal et co., 2008. Int J. Obes., 33(7): 758-67).In particular, the present invention is part of a known cause-effect relationship that associates changes in intestinal microbiota with development of obesity (Ley et al., 2006. Nature, 444: 1022-1023; Nadal et al., 2008. Int J. Obes., 33 (7): 758-67).

De nombreuses études ont été menées dans ce contexte et ont alimentées l’état de l’art actuel incluant un large panel de documents mentionnant l’utilisation de traitements à base de probiotiques dans le cadre du surpoids et de l’obésité.Numerous studies have been conducted in this context and have fed the current state of the art including a wide range of documents mentioning the use of probiotic-based treatments in the context of overweight and obesity.

En particulier, il a été montré que le microbiote contribue à maintenir l’hôte en bonne santé : l’état équilibré du microbiote contribue à la régulation de l’homéostasie intestinale, et immunitaire, de sorte que, tout déséquilibre du microbiote est interprété comme participant au développement du syndrome métabolique, en particulier chez les individus présentant une prédisposition génétique à développer ce syndrome (Parks et co., Cell Metab, 2012).In particular, it has been shown that the microbiota contributes to keeping the host healthy: the balanced state of the microbiota contributes to the regulation of intestinal and immune homeostasis, so that any imbalance of the microbiota is interpreted as participating in the development of the metabolic syndrome, particularly in individuals with a genetic predisposition to develop this syndrome (Parks et al., Cell Metab, 2012).

La mise en évidence de la relation microbiote - prise de poids a été le moteur pour un large panel d’études qui ont fait l’objet de différentes demandes de brevet, dont les plus pertinentes sont commentées ci-dessous.The highlighting of the microbiotic relationship - weight gain has been the driving force for a wide range of studies that have been the subject of various patent applications, the most relevant of which are discussed below.

Il y a tout d’abord lieu de mentionner la demande de brevet internationale W02007043933 qui propose l’utilisation des souches de Lactobacillus casei F19 et L. acidophilus NCFB 1748, et le Bifidobacterium lactis Bb12, sous la forme de laits fermentés, pour réduire l’appétit et le dépôt des graisses dans certains tissus, et ainsi, contrôler le poids corporel, chez l’être humain. Cependant, il semble que ce soit plutôt l’action conjointe du calcium et des protéines laitières qui soient à l’origine de l’effet revendiqué dans cette demande plutôt que la présence des souches de bactéries susmentionnées. En outre, cet effet ne cible que l’expression des gènes liés au métabolisme de l’intestin grêle et ne porte donc pas sur les autres organes et tissus impliqués dans la prise de poids.It is first necessary to mention the international patent application WO2007043933 which proposes the use of the strains of Lactobacillus casei F19 and L. acidophilus NCFB 1748, and Bifidobacterium lactis Bb12, in the form of fermented milks, to reduce the appetite and deposition of fat in certain tissues, and thus, control body weight, in humans. However, it seems that it is rather the joint action of calcium and milk proteins which is at the origin of the effect claimed in this application rather than the presence of the strains of bacteria mentioned above. In addition, this effect only targets the expression of genes related to the metabolism of the small intestine and therefore does not relate to other organs and tissues involved in weight gain.

Ensuite, le document US20100061967A1 propose également l’utilisation d’une composition de bactéries pour moduler l’expression des peptides régulant le mécanisme de satiété, cette modulation prenant place de manière exclusive dans le tractus gastrointestinal.Next, the document US20100061967A1 also proposes the use of a composition of bacteria for modulating the expression of the peptides regulating the satiety mechanism, this modulation taking place exclusively in the gastrointestinal tract.

La demande de brevet internationale W02009153662 divulgue quant à elle l’utilisation d’une composition à base de Bifidobacteriesa et de Lactobacilles dans le traitement du diabète, une maladie reprise dans la liste des indicateurs associés au syndrome métabolique induit par le surpoids ou l’obésité, et ce, en se basant exclusivement sur la capacité que présentent ces microorganismes à réduire l’inflammation des tissus périphériques mais sans pour autant agir sur le système nerveux central, et donc par exemple sur le mécanisme de la régulation centrale de la satiété.The international patent application WO2009153662 discloses the use of a composition based on Bifidobacteriesa and Lactobacilli in the treatment of diabetes, a disease listed in the list of indicators associated with the metabolic syndrome induced by overweight or obesity. and this, based exclusively on the ability of these microorganisms to reduce inflammation of peripheral tissues but without acting on the central nervous system, and therefore for example on the mechanism of central regulation of satiety.

En outre, le document US20100150890 renseigne l’utilisation de probiotiques bactériens dans une composition pour stimuler la fonction du système nerveux sympathique de sorte que le métabolisme, et donc la dépense énergétique, soit stimulée. Toutefois, il a été montré que le tonus sympathique est également actif chez certains individus obèses et, ainsi, son activation ne constitue pas une alternative fiable dans le cadre du traitement du surpoids et de l’obésité.In addition, the document US20100150890 informs the use of bacterial probiotics in a composition for stimulating the function of the sympathetic nervous system so that the metabolism, and therefore the energy expenditure, is stimulated. However, it has been shown that sympathetic tone is also active in some obese individuals and thus its activation is not a reliable alternative in the treatment of overweight and obesity.

La demande de brevet US20100111915 présente l’utilisation générique d’une composition de probiotiques bactériens comme une alternative dans le cadre de la prévention de l’obésité chez l’enfant. Selon US20100111915, cette utilisation se base sur les effets bifidogènes des probiotiques, bien que ce document ne renseigne sur un quelconque fondement tangible qui permette d’établir que l’augmentation du nombre de bifidobactéries dans l’intestin puisse être à l’origine de cette action préventive de l’apparition de l’obésité chez l’enfant.The patent application US20100111915 presents the generic use of a composition of bacterial probiotics as an alternative in the context of the prevention of obesity in children. According to US20100111915, this use is based on the bifidogenic effects of probiotics, although this document does not provide any tangible basis for establishing that the increase in the number of bifidobacteria in the intestine may be the cause of this effect. preventive action of the appearance of the obesity at the child.

Le document US20050112112 propose l’utilisation d’une composition de microorganismes générant des polymères de sucre, non-digestibles par l’être humain, à partir de monosaccharides et de disaccharides présents dans le tractus gastro-intestinal, réduisant ainsi de facto l’absorption de sucres dans le corps.The document US20050112112 proposes the use of a composition of microorganisms generating sugar polymers, which are not digestible by humans, from monosaccharides and disaccharides present in the gastrointestinal tract, thus reducing de facto absorption. of sugars in the body.

Enfin, le document JP10306028 renseigne par ailleurs une action inhibitrice de l’absorption par l’organisme du cholestérol, et ce, par l’utilisation de bifidobactéries combinées au chitosan.Finally, the document JP10306028 also provides an inhibitory action of the absorption by the body of cholesterol, and this, by the use of bifidobacteria combined with chitosan.

Malheureusement, l’utilisation des compositions de l’état de la technique, si elle permet une réduction du surpoids ou de l’obésité et des symptômes associés au syndrome métabolique (on parle par exemple de rémission), elle ne permet pas un maintien à long terme (on parle par exemple de guérison) (plus de 3 à 5 ans) du poids corporel au niveau de normalité souhaité (c’est-à-dire correspondant par exemple à un IMC entre 20 et 25).Unfortunately, the use of the compositions of the state of the art, if it allows a reduction of overweight or obesity and symptoms associated with the metabolic syndrome (we speak for example of remission), it does not allow a maintenance at long-term (eg cure) (more than 3 to 5 years) of body weight at the desired level of normalcy (ie, corresponding, for example, to a BMI between 20 and 25).

Dans le cadre de la présente invention, il y a lieu de distinguer la rémission de la guérison. Un individu est dit en rémission si, lors des examens médicaux (mesure du poids, du tour de taille, etc.), on ne décèle plus de surpoids. Mais on ne parle de guérison qu'après un certain délai supplémentaire, qui varie en fonction du type de surpoids. En général, quand la rémission dure depuis 3 ou 5 ans, il y a guérison.In the context of the present invention, it is necessary to distinguish the remission of healing. An individual is said to be in remission if, during medical examinations (measurement of weight, waist circumference, etc.), no more overweight is detected. But we only talk about healing after a certain amount of time, which varies depending on the type of overweight. In general, when the remission lasts for 3 or 5 years, there is healing.

La présente invention a pour but de pallier le manquement de l’état de la technique en fournissant une composition telle que décrite au début caractérisée en ce que ledit au moins un élément de probiotique provient du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, et est de préférence du Bifidobacterium animalis ssp. lactis entier, par exemple à l’état vivant, éventuellement en combinaison avec d’autres microorganismes.The present invention aims to overcome the lack of the state of the art by providing a composition as described at the beginning characterized in that said at least one probiotic element comes from Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, and is preferably Bifidobacterium animalis ssp. lactis whole, for example in the living state, optionally in combination with other microorganisms.

La souche selon l’invention a été déposée par le BCCM (Belgian Coordinated Collections of Micro-organisms) et le LMG (Laboratorium voor Microbiologie - Bacteriënverzameling) le 27 janvier 2014 selon le traité de Budapest, sous le numéro LMG P-28149.The strain according to the invention was deposited by the BCCM (Belgian Coordinated Collections of Micro-organisms) and the LMG (Laboratorium for Microbiology - Bacteriënverzameling) on January 27, 2014 according to the Budapest Treaty, under the number LMG P-28149.

Dans le cadre de la présente invention, par les termes « à l’état vivant », on entend une concentration en bactéries dans la composition comprise entre 108 et 1013 cfu par gramme de composition.In the context of the present invention, the term "in the living state" means a concentration of bacteria in the composition of between 108 and 1013 cfu per gram of composition.

Dans le cadre de la présente invention, il a en effet été observé que cette souche de probiotique particulière présente une action positive sur la satiété et également une restauration du microbiote intestinal associé à la limitation de prise de poids corporel.In the context of the present invention, it has indeed been observed that this particular probiotic strain has a positive action on satiety and also a restoration of the intestinal microbiota associated with the limitation of body weight gain.

Il a été notamment observé le rôle de la présence du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 dans la recolonisation du tractus intestinal par Akkermansia muciniphila, une bactérie réputée pour son rôle dans la prévention de l’obésité chez l’être humain dont le niveau est fortement réduit chez l’individu en surpoids ou obèse.In particular, the role of the presence of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 in the recolonization of the intestinal tract by Akkermansia muciniphila, a bacterium known for its role in the prevention of obesity in humans whose level is greatly reduced in the overweight or obese individual.

En outre, il a été par ailleurs observé de manière surprenante l’action anti-inflammatoire et immuno-régulatrice de la souche selon l’invention qui est associée à la restauration de l’expression du facteur de transcription PPARy, impliqué dans la fonction des lymphocytes T régulateurs du tissu adipeux blanc.In addition, the anti-inflammatory and immunoregulatory action of the strain according to the invention which is associated with the restoration of the expression of the transcription factor PPARy, which is involved in the function of the proteins, has surprisingly been observed. regulatory T cells of white adipose tissue.

Ainsi, la composition selon l’invention permet notamment le traitement curatif ou préventif du dérèglement du microbiote intestinal et des maladies inflammatoires associées à ce dérèglement chez l’être humain en surpoids.Thus, the composition according to the invention allows in particular the curative or preventive treatment of the disturbance of the intestinal microbiota and the inflammatory diseases associated with this disorder in overweight humans.

La présente composition vise donc de manière avantageuse le traitement curatif ou préventif du syndrome métabolique lié au surpoids chez l’être humain.The present composition therefore advantageously targets the curative or preventive treatment of the metabolic syndrome related to overweight in humans.

Il a donc été démontré, selon la présente invention, que la composition à base du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P28149 présente notamment les effets suivants sur l’organisme, lesquels s’accompagnent d’une réduction du gain de poids corporel sous régime riche en graisses, de préférence pendant et/ou après une diète, ou d’une stabilisation du poids corporel : - une amélioration de la sensibilité à l’insuline ; - une réduction du développement de la masse graisseuse abdominale et sous-cutanée ; - une réduction de la taille des adipocytes ; - une réduction de l’infiltration cellulaire des tissus adipeux blancs, en particulier par les macrophages proinflammatoires ; - une réduction des marqueurs inflammatoires ; - une limitation de la stéatose du foie ; et - une limitation ou une réduction du taux de « mauvais » cholestérol.It has thus been demonstrated, according to the present invention, that the composition based on Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P28149 has the following effects on the body, which are accompanied by a reduction in body weight gain under a high fat diet, preferably during and / or after a diet, or a stabilization of the body weight. body weight: - an improvement in insulin sensitivity; - a reduction in the development of the abdominal and subcutaneous fat mass; a reduction in the size of the adipocytes; a reduction in the cellular infiltration of white adipose tissues, in particular by proinflammatory macrophages; - a reduction of inflammatory markers; - limitation of steatosis of the liver; and - a limitation or reduction in the rate of "bad" cholesterol.

Comme on peut le constater, la composition suivant l’invention comprenant au moins le probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 agit sur divers facteurs liés au surpoids.As can be seen, the composition according to the invention comprising at least the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis no. LMG P-28149 affects various factors related to overweight.

Dans le cadre de la présente invention, il a été aussi démontré l’action préventive et curative sur la prise de poids ainsi que l’action sur le syndrome métabolique chez l’être humain en surpoids, non seulement de la souche spécifique Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, à l’état vivant ou non, mais aussi des composés issus de cette souche.In the context of the present invention, it has also been demonstrated the preventive and curative action on weight gain and the action on the metabolic syndrome in overweight humans, not only the specific strain Bifidobacterium animalis ssp . lactis no. LMG P-28149, whether alive or not, but also compounds derived from this strain.

Dans ce contexte, la composition selon l’invention peut comprendre en outre au moins un ou une combinaison d’au moins deux éléments de probiotique, chaque élément étant issu du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et choisi parmi le groupe constitué de constituants de la paroi cellulaire, des organites cellulaires, des acides nucléiques, des constituants de la membrane cellulaire, et des métabolites cellulaires. A titre illustratif et non-limitatif, les constituants de la paroi cellulaire sont choisis dans le groupe constitué de peptidoglycanes, de protéines, de polysaccharides, de l’acide téichoïque, ou d’une combinaison de ces derniers. A titre illustratif et non-limitatif, les métabolites sont choisis dans le groupe constitué des acides organiques, des acides inorganiques, des protéines, des peptides, des acides aminés, des enzymes, des lipides, des carbohydrates, des glycolipides, des glycoprotéines, des vitamines, des sels, des métaux, ou une combinaison de ceux-ci.In this context, the composition according to the invention may further comprise at least one or a combination of at least two probiotic elements, each element being derived from Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and selected from the group consisting of cell wall components, cellular organelles, nucleic acids, cell membrane constituents, and cell metabolites. By way of illustration and not limitation, the constituents of the cell wall are selected from the group consisting of peptidoglycans, proteins, polysaccharides, teichoic acid, or a combination thereof. By way of illustration and not limitation, the metabolites are chosen from the group consisting of organic acids, inorganic acids, proteins, peptides, amino acids, enzymes, lipids, carbohydrates, glycolipids, glycoproteins, vitamins, salts, metals, or a combination thereof.

Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l’invention comprend du butyrate, ou au moins un de ses dérivés, et/ou du propionate, ou au moins un de ses dérivés, l’induction dudit butyrate et/ou dudit propionate étant favorisée par dudit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149.In a particular embodiment, the composition according to the invention comprises butyrate, or at least one of its derivatives, and / or propionate, or at least one of its derivatives, the induction of said butyrate and / or said propionate being favored by said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149.

Eventuellement, la composition selon l’invention comprend au moins un second probiotique, ledit second probiotique étant choisi dans le groupe constitué des probiotiques suivants : Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacters, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus,Optionally, the composition according to the invention comprises at least one second probiotic, said second probiotic being selected from the group consisting of the following probiotics: Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacter, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria, Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus,

Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogène), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, et Clostridium, ou une combinaison de ceux-ci.Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogenic), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio , and Clostridium, or a combination thereof.

De préférence, la composition selon l’invention peut comprendre en outre au moins une souche de champignon et/ou de levure, ladite souche étant choisie dans le groupe suivant : Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, et Pénicillium.Preferably, the composition according to the invention may furthermore comprise at least one fungus and / or yeast strain, said strain being chosen from the following group: Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, and Penicillium.

De préférence, la composition selon l’invention comprend un véhicule d’encapsulation de probiotique dans laquelle ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel sont encapsulés.Preferably, the composition according to the invention comprises a probiotic encapsulation vehicle in which said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic are encapsulated.

De manière avantageuse, ledit champignon et/ou ladite levure sont également encapsulés dans ledit véhicule.Advantageously, said fungus and / or said yeast are also encapsulated in said vehicle.

Alternativement, le véhicule d’encapsulation comprend au moins une substance choisie dans le groupe constitué de l’alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar ou une combinaison de ceux-ci.Alternatively, the encapsulating vehicle comprises at least one substance selected from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pullulan, gelatin, carrageenan, agar gel or a combination thereof.

De manière préférentielle, ladite au moins une substance est un hydrocolloïde.Preferably, said at least one substance is a hydrocolloid.

De manière avantageuse, la composition selon l’invention comprend au moins une source nutritive choisie dans le groupe constitué d’un monosaccaride, d’un polysaccharide, d’un aminoacide, d’un peptide, d’une protéine, d’une vitamine, d’un extrait de levure, un sel d’halogénure, d’un métal alcalin ou alcalinoterreux, d’un antioxydant, de glycérol, d’acétate de zinc, de chlorure de zinc, de lactate de zinc, d’acide ascorbique, d’acide citrique, d’une huile végétale, de graisse de lait, ou une combinaison de ceux-ci.Advantageously, the composition according to the invention comprises at least one nutritive source selected from the group consisting of a monosaccharide, a polysaccharide, an amino acid, a peptide, a protein, a vitamin , a yeast extract, a halide salt, an alkali metal or alkaline earth metal, an antioxidant, glycerol, zinc acetate, zinc chloride, zinc lactate, ascorbic acid , citric acid, vegetable oil, milk fat, or a combination thereof.

Dans un mode particulier de réalisation, la composition selon l’invention est une composition symbiotique comprenant au moins un prébiotique.In a particular embodiment, the composition according to the invention is a symbiotic composition comprising at least one prebiotic.

De préférence, ledit au moins un prébiotique est choisi, de manière non limitative, dans le groupe constitué des oligosaccharides, des fructo-oligosaccharides, des galacto-oligosaccharides, des xylooligosaccharides, de l’inuline ou de ses dérivés, du lactulose ou de ses dérivés, des mannane-oligosaccharides, ou une combinaison de ces derniers.Preferably, said at least one prebiotic is chosen, in a non-limiting manner, from the group consisting of oligosaccharides, fructo-oligosaccharides, galacto-oligosaccharides, xylooligosaccharides, inulin or its derivatives, lactulose or its derivatives, mannan-oligosaccharides, or a combination thereof.

De manière préférentielle, la composition selon l’invention comprend un premier revêtement entérique recouvrant ledit Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 et éventuellement ledit au moins un probiotique additionnel. En particulier, le premier revêtement entérique est choisi dans le groupe constitué de l’éthyle cellulose, de l’hydroxypropyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, de polymères (comme par exemple l’Eudragit®), ou une combinaison de ceux-ci.Preferably, the composition according to the invention comprises a first enteric coating covering said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic. In particular, the first enteric coating is selected from the group consisting of ethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, polymers (such as Eudragit®), or a combination thereof.

Alternativement, la composition comprend en outre un deuxième revêtement externe choisi dans le groupe constitué de l’alginate, du chitosan, de la pectine, du pullulan, de la gélatine, du carraghénane, du gel agar, de la cellulose, de l’hémicellulose, de l’éthyle cellulose, de la carboxyméthyle cellulose, ou une combinaison de ceux-ci.Alternatively, the composition further comprises a second outer coating selected from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pullulan, gelatin, carrageenan, agar gel, cellulose, hemicellulose , ethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, or a combination thereof.

Dans un autre mode de réalisation éventuel, la composition selon l’invention comprend un ou plusieurs excipients biocompatibles.In another possible embodiment, the composition according to the invention comprises one or more biocompatible excipients.

La composition selon l’invention peut être destinée au traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel excessive (c’est-à-dire dépassant largement la prise de poids accompagnant la grossesse) chez la femme enceinte ou la femme qui a accouché ou chez l’homme en couvade ou ayant été en couvade. D’autres formes de la composition selon l’invention sont indiquées dans les revendications annexées.The composition according to the invention may be intended for the curative or preventive treatment of excessive body weight gain (that is to say considerably more than the weight gain that accompanies pregnancy) in the pregnant woman or the woman who has given birth or in the man in couvade or having been in couvade. Other forms of the composition according to the invention are indicated in the appended claims.

La présente invention concerne aussi une composition alimentaire ou un aliment à base de la composition comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, de préférence à l’état vivant.The present invention also relates to a food composition or a food based on the composition comprising Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, preferably in the living state.

Par les termes « composition alimentaire », il faut entendre au sens de la présente invention une composition que l’on retrouve communément sur le marché de l’alimentaire (par exemple, les en-cas, les plats préparés, des boissons, etc.). D’autres formes de réalisation de la composition alimentaire suivant l’invention sont indiquées dans les revendications annexées.For the purposes of the present invention, the term "food composition" is intended to mean a composition commonly found on the food market (for example, snacks, prepared meals, beverages, etc.). ). Other embodiments of the food composition according to the invention are indicated in the appended claims.

La présente invention concerne aussi la composition selon l’invention pour une utilisation comme complément alimentaire.The present invention also relates to the composition according to the invention for use as a dietary supplement.

Par les termes « complément alimentaire », il faut entendre au sens de la présente invention une denrée alimentaire dont le but est de fournir un complément de nutriments ou de substances ayant un effet nutritionnel et/ou physiologique.For the purposes of the present invention, the term "food supplement" is intended to mean a foodstuff whose purpose is to provide an addition of nutrients or substances having a nutritional and / or physiological effect.

La présente invention porte en outre sur une composition thérapeutique comprenant du Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, pour le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids.The present invention further relates to a therapeutic composition comprising Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, for the curative or preventive treatment of body weight gain in overweight or overweight humans.

De préférence, la composition thérapeutique vise une utilisation par voie orale, ou sublinguale, mais également respiratoire, de préférence nasale ou bronchique, ou encore rectale.Preferably, the therapeutic composition is intended for use orally, or sublingually, but also respiratory, preferably nasal or bronchial, or rectal.

La composition peut être aussi une composition liquide injectable à base d’au moins un élément issu du probiotique et destinée à être injectée par sous-cutanée.The composition may also be a liquid injectable composition based on at least one element derived from the probiotic and intended to be injected subcutaneously.

Eventuellement, la composition thérapeutique selon l’invention comprend au moins un excipient biocompatible.Optionally, the therapeutic composition according to the invention comprises at least one biocompatible excipient.

De manière préférentielle, la composition thérapeutique est conditionnée préférentiellement sous forme de comprimés, de globules, de gélules, de granules, de poudres, de fluides, de liquides, de crèmes ou de sprays. D’autres formes de réalisation de la composition thérapeutique suivant l’invention sont indiquées dans les revendications annexées. L’invention porte ensuite sur une composition, de préférence alimentaire ou thérapeutique, à base d’au moins un élément de Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149, de préférence entier, par exemple à l’état vivant, pour le traitement curatif ou préventif du syndrome métabolique lié au surpoids chez l’être humain. L’invention concerne aussi une utilisation de la composition selon l’invention pour le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids ou ayant été en surpoids.Preferably, the therapeutic composition is preferentially packaged in the form of tablets, globules, capsules, granules, powders, fluids, liquids, creams or sprays. Other embodiments of the therapeutic composition according to the invention are indicated in the appended claims. The invention then relates to a composition, preferably a food or a therapeutic composition, based on at least one element of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, preferably whole, for example in the living state, for the curative or preventive treatment of the metabolic syndrome related to overweight in humans. The invention also relates to a use of the composition according to the invention for the curative or preventive treatment of body weight gain in an overweight or overweight human being.

En particulier, l’utilisation de la composition selon l’invention concerne le traitement curatif ou préventif de la prise de poids corporel excessive (c’est-à-dire dépassant largement la prise de poids accompagnant la grossesse) chez la femme enceinte ou qui a accouché ou chez l’homme en couvade ou ayant été en couvade. D’autres formes d’utilisation de la composition selon l’invention sont indiquées dans les revendications annexées. L’invention porte par ailleurs sur la composition selon l’invention pour une utilisation comme complément alimentaire.In particular, the use of the composition according to the invention relates to the curative or preventive treatment of excessive body weight gain (that is to say considerably exceeding the weight gain that accompanies pregnancy) in the pregnant woman or who has given birth or to the man in couvade or having been in couvade. Other forms of use of the composition according to the invention are indicated in the appended claims. The invention also relates to the composition according to the invention for use as a dietary supplement.

La présente invention porte également sur un procédé de fabrication par fermentation de la souche particulière n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis faisant l’objet de la composition selon l’invention.The present invention also relates to a process for the manufacture by fermentation of the particular strain LMG P-28149 of the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis being the subject of the composition according to the invention.

Ce procédé comprend au moins une étape de mise en culture dudit probiotique mentionné ci-dessus dans un milieu de culture comprenant au moins une protéine de lait (par exemple une protéine de lait entier, de lait demi-écrémé ou écrémé, une peptone de lactosérum, une peptone de caséine ou une autre protéine de lait), au moins un sucre ou un mélange de sucres, lesquels sont choisis par exemple parmi le lactose, le glucose, le galactose, le fructose, la maltodextrine, l’amidon, le tréhalose et le maltotriose, au moins un sucre aminé (par exemple la glucosamine et la galactosamine), au moins un extrait de levure et au moins un extrait d’œuf.This method comprises at least one step of culturing said probiotic mentioned above in a culture medium comprising at least one milk protein (for example a whole milk, semi-skimmed or skimmed milk protein, a whey peptone). , a peptone of casein or another milk protein), at least one sugar or a mixture of sugars, which are chosen for example from lactose, glucose, galactose, fructose, maltodextrin, starch, trehalose and maltotriose, at least one amino sugar (e.g. glucosamine and galactosamine), at least one yeast extract and at least one egg extract.

De façon surprenante, il a été montré, dans le cadre de la présente invention, qu’un tel milieu de culture optimise l’efficacité de la souche n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. lactis, pour laquelle il a été observé une action curative ou préventive sur la prise de poids corporel chez l’être humain en surpoids. D’autres caractéristiques et avantages de l’invention ressortiront de la description donnée ci-après, à titre non-limitatif et en faisant référence aux exemples décrits ci-dessous.Surprisingly, it has been shown, in the context of the present invention, that such a culture medium optimizes the efficacy of the strain LMG P-28149 of the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. lactis, for which a curative or preventive action has been observed on body weight gain in overweight humans. Other features and advantages of the invention will emerge from the description given below, by way of non-limiting example and with reference to the examples described below.

Ces exemples reprennent des résultats obtenus chez la souris qui ont été complétés par des résultats obtenus in vitro à partir de cellules immunes isolées de sang humain.These examples show results obtained in mice which have been supplemented by results obtained in vitro from immune cells isolated from human blood.

Bien que les résultats des tests repris dans les exemples 1 à 4 ci-dessous aient été obtenus chez la souris, il est entendu que des résultats similaires attendus chez l’être humain.Although the results of the tests given in Examples 1 to 4 below were obtained in the mouse, it is understood that similar results expected in humans.

En particulier, il a été démontré dans le cadre de la présente invention, un effet spécifique à la souche sur la prise de poids corporel chez le mammifère, en particulier chez le rongeur.In particular, it has been demonstrated in the context of the present invention, a strain-specific effect on body weight gain in the mammal, in particular in rodents.

En effet, la prise de la souche LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. Lactis, seule ou en combinaison avec au moins un autre probiotique, induit une diminution du gain de poids corporel conjointement à une amélioration des paramètres inflammatoires et métaboliques chez le mammifère, en particulier le rongeur, en surpoids, y compris la résistance à l’insuline.Indeed, taking the LMG P-28149 strain of probiotic Bifidobacterium animalis ssp. Lactis, alone or in combination with at least one other probiotic, induces a decrease in body weight gain together with an improvement in inflammatory and metabolic parameters in the mammal, especially the overweight rodent, including insulin resistance. .

En particulier, il a été démontré, dans le cadre de la présente invention, les effets protecteurs métaboliques de la composition à base de la souche de probiotique selon l’invention qui sont par ailleurs associés à une restauration, au sein des tissus adipeux, de l’expression du PPARy et du remodelage cellulaire, et d’un effet protecteur contre la stéatose hépatique.In particular, it has been demonstrated, in the context of the present invention, the metabolic protective effects of the composition based on the probiotic strain according to the invention which are moreover associated with a restoration, within the adipose tissues, of the expression of PPARy and cellular remodeling, and a protective effect against hepatic steatosis.

La composition à base de la souche selon l’invention permet aussi une modulation de l’expression des récepteurs liés au transport des acides gras, et en particulier une restauration des récepteurs couplés à la protéine G (GPR41 et GPR43) impliqués dans le transport des acides gras à chaînes courtes (AGCC) qui sont les acteurs importants du mécanisme de satiété induit par la prise de nutriments.The composition based on the strain according to the invention also allows a modulation of the expression of the receptors bound to the transport of fatty acids, and in particular a restoration of the G protein-coupled receptors (GPR41 and GPR43) involved in the transport of short-chain fatty acids (SCFA), which are important players in the satiety mechanism induced by nutrient uptake.

En outre, il est démontré l’action positive de la souche selon l’invention sur la taille des adipocytes et sur la production de cytokines et chimiokines pro-inflammatoires (MCP-1, IL-6, TNF-alpha, etc.), certaines d’entre elles étant directement à l’origine de la résistance à l’insuline.In addition, the positive action of the strain according to the invention on the size of the adipocytes and on the production of pro-inflammatory cytokines and chemokines (MCP-1, IL-6, TNF-alpha, etc.) is demonstrated. some of them are directly responsible for insulin resistance.

Il a été observé que la souche selon l’invention permet par ailleurs un rétablissement du profil lipidique et du métabolisme du glucose chez le mammifère, prévenant le risque de développer des maladies directement liées au syndrome métabolique comme la dyslipidémie (et donc le diabète de type 2) et l’hyperglycémie.It has been observed that the strain according to the invention also makes it possible to restore the lipid profile and the glucose metabolism in the mammal, preventing the risk of developing diseases directly linked to the metabolic syndrome, such as dyslipidemia (and therefore type diabetes). 2) and hyperglycemia.

Enfin, il a été démontré le lien entre la prise de la souche de probiotique selon l’invention et la recolonisation du tractus intestinal par VAkkermansia, une bactérie réputée pour son rôle dans la prévention de l’obésité chez l’être humain et fortement diminuée chez l’individu en surpoids ou obèse.Finally, the link between taking the probiotic strain according to the invention and the recolonization of the intestinal tract by Akkermansia, a bacterium known for its role in the prevention of obesity in humans and greatly diminished, has been demonstrated. in the overweight or obese individual.

La figure 1 illustre, chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Ls33 sur (A) l’évolution du gain de poids corporel (en %), (B) la tolérance au glucose (GT), (C) le poids (masse) du tissu adipeux épididymaire (EWAT), et (D) le poids (masse) du tissu adipeux sous-cutané (SCWAT). Les données sont exprimées en moyenne (de 10 à 15 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). ** p<0,01 ; *** p<0,001. * correspond à la comparaison entre le régime enrichi en lipides (HFD) vs le régime contrôle (LFD) à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime).Figure 1 illustrates, in the mouse developing overweight and then obesity, the action of Ls33 on (A) the evolution of body weight gain (in%), (B) glucose tolerance (GT) ), (C) the weight (mass) of the epididymal adipose tissue (EWAT), and (D) the weight (mass) of the subcutaneous adipose tissue (SCWAT). The data are expressed on average (from 10 to 15 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p <0.01; *** p <0.001. * corresponds to the comparison between the lipid-enriched diet (HFD) and the control diet (LFD) with identical interventional treatment (measurement of the effect of the diet).

La figure 2 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) l’évolution du gain de poids corporel (en %), (B) la prise cumulée de nourriture (en gramme/jour/souris), (C) la tolérance à l’insuline (IT), et (D) la GT. Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; *p<0,05 ; m p>0,01 ; ###p<0,001. * correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). # correspond à la comparaison entre le Mix vs le tampon phosphate salin (PBS) à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques selon l’invention).Figure 2 illustrates in the developing mouse overweight and then obesity, the action of the Mix on (A) the change in body weight gain (in%), (B) the cumulative intake of food (in gram / day / mouse), (C) insulin tolerance (IT), and (D) GT. The data are expressed on average (from 5 to 14 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p <0.01; *** p <0.001; * p <0.05; mp> 0.01; ### p <0.001. * corresponds to the comparison between the HFD system and the LFD system with identical interventional treatment (measure of the effect of the plan). # corresponds to the comparison between the Mix vs the phosphate buffered saline (PBS) with identical regime (measurement of the effect of the probiotic or mixture of probiotics according to the invention).

La figure 3 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) le poids (masse) du EWAT, (B) le poids (masse) du SCWAT, (C) la quantité de leptine dans le sang (ng/ml), (D) la quantité d’adiponectine dans le sang (pg/ml), (E) l’histologie du EWAT (coupes représentatives de chacun des groupes expérimentaux), et (F) la distribution de la taille des adipocytes dans les EWAT. Les données sont exprimées en moyenne (10 à 15 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; #p<0,05 ; ##p<0,01 ; #mp<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques selon l’invention).Figure 3 illustrates in the developing mouse overweight and then obesity, the action of the Mix on (A) the weight (mass) of EWAT, (B) the weight (mass) of SCWAT, (C) the amount of leptin in the blood (ng / ml), (D) the amount of adiponectin in the blood (μg / ml), (E) the histology of EWAT (sections representative of each of the experimental groups), and (F) ) the size distribution of adipocytes in EWATs. The data are expressed on average (10 to 15 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p <0.01; *** p <0.001; #p <0.05; ## p <0.01; #mp <0.001. Refers to the comparison between the HFD and LFD regimens with identical interventional treatment (measure of the effect of the plan). Corresponds to the comparison between the Mix vs the PBS with identical regime (measurement of the effect of the probiotic or mixture of probiotics according to the invention).

La figure 4 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) la composition cellulaire des EWAT (analyse d’expression de gènes spécifiques des monocytes/macrophages (F4/80, CD68, CD11b, CD11c), des lymphocytes T régulateurs (FoxP3) et de la chimiokine MCP-1), (B) la présence de macrophages dans les EWAT (marquage immunofluorescent spécifique de F4/80 et quantification en terme de densité intégrée [IntDen]), (C) l’inflammation des EWAT (analyse d’expression de gènes des cytokines pro-inflammatoires Tnfa, IL-1a, IL-6 et IL-17), et (D) l’expression de PPAR gamma (PPARy), au niveau de l’ARN messager (gauche, expression génique) et de la protéine (centre et droit, western-blot et quantification [en unité arbitraire : A.U.]). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; Mp<0,01 ; ###p<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques.FIG. 4 illustrates in the mouse during the development of overweight then obesity, the action of the Mix on (A) the cellular composition of the EWATs (expression analysis of monocyte / macrophage specific genes (F4 / 80, CD68 , CD11b, CD11c), regulatory T cells (FoxP3) and chemokine MCP-1), (B) the presence of macrophages in EWATs (F4 / 80 specific immunofluorescent staining and quantification in terms of integrated density [IntDen] ), (C) inflammation of the EWATs (gene expression analysis of pro-inflammatory cytokines Tnfa, IL-1a, IL-6 and IL-17), and (D) expression of PPAR gamma (PPARy) at the level of messenger RNA (left, gene expression) and protein (center and right, western-blot and quantification [arbitrary unit: AU]). The data are expressed on average (from 5 to 14 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p <0.01; *** p <0.001; Mp <0.01; ### p <0.001. Refers to the comparison between the HFD and LFD regimens with identical interventional treatment (measure of the effect of the plan). Corresponds to the comparison between the Mix vs the PBS with identical regimen (measurement of the effect of the probiotic or mixture of probiotics.

La figure 5 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) des facteurs impliqués dans le métabolisme des lipides (analyse d’expression des gènes FABP1, APO Cil, et CD36), (B) des récepteurs aux acides gras à chaîne courte (AGCC ou SCFA, en anglais), par analyse d’expression des gènes GPR41 et GPR43). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; ^<0,01 ; ###p<0,001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou mélange de probiotiques).FIG. 5 illustrates in the mouse during the development of overweight then obesity, the action of the Mix on (A) factors involved in lipid metabolism (expression analysis of the FABP1, APO Cil, and CD36 genes) (B) short-chain fatty acid (SCCC or SCFA) receptors, by expression analysis of the GPR41 and GPR43 genes). The data are expressed on average (from 5 to 14 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p <0.01; *** p <0.001; <0.01; ### p <0.001. Refers to the comparison between the HFD and LFD regimens with identical interventional treatment (measure of the effect of the plan). Corresponds to the comparison between the Mix vs the PBS at identical speed (measurement of the effect of the probiotic or mixture of probiotics).

La figure 5(C) illustre le niveau de production des AGCC (SCFA) totaux (gauche) et des niveaux proportionnels d’acétate, de butyrate et de propionate (droite) après 24 et 48h d’incubation avec le mélange probiotique Mix dans le modèle simulant l’écosystème intestinal (SHIME), in vitro. *** comparé au temps 0.Figure 5 (C) illustrates the level of production of total SCFA (SCFA) (left) and proportional levels of acetate, butyrate and propionate (right) after 24 and 48h incubation with the probiotic mix mix in the Model simulating the intestinal ecosystem (SHIME), in vitro. *** compared to time 0.

La figure 6 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’effet du Mix sur (A) la composition du microbiote intestinal et en particulier sur la population de Bifidobacteria et d’Akkermansia muciniphila. (B) L’espèce de Bifidobacterium détectée chez les souris HFD traitées ou non par le mix a été déterminée par analyse TGGE pour 5 souris représentatives des groupes HFD-PBS et HFD-Mix. Les marqueurs M1 ou M2 correspondent aux mélanges des souches indiquées.*p<0,05 ; **p<0,01 ; *p<0,05; mp<0,01. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). Correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou du mélange de probiotiques selon l’invention).FIG. 6 illustrates, in the mouse during the development of overweight then obesity, the effect of the Mix on (A) the composition of the intestinal microbiota and in particular on the population of Bifidobacteria and Akkermansia muciniphila. (B) The Bifidobacterium species detected in HFD mice treated or not with the mix was determined by TGGE analysis for 5 mice representative of the HFD-PBS and HFD-Mix groups. The markers M1 or M2 correspond to the mixtures of the indicated strains. * P <0.05; ** p <0.01; * P <0.05; mp <0.01. Refers to the comparison between the HFD and LFD regimens with identical interventional treatment (measure of the effect of the plan). Corresponds to the comparison between the Mix vs the PBS with identical regime (measurement of the effect of the probiotic or the mixture of probiotics according to the invention).

La figure 7 illustre chez la souris en cours de développement de surpoids puis d’obésité, l’action du Mix sur (A) le poids (masse) du pancréas, du foie et de la rate, (B) l’accumulation des gouttelettes lipidiques (stéatose, voir les coupes histologiques représentatives de chacun des groupes expérimentaux), et (C) différents marqueurs de l’inflammation ou impliqués dans le métabolisme lipidique ou la réponse à l’insuline (analyse d’expression des gènes mcp-1, IL-6, TNFa, IL-10, IL-17, srebp-1c, APOCII Fabpl et IRS2). Les données sont exprimées en moyenne (de 5 à 14 souris par groupe) + écart-type à la moyenne (SEM). **p<0,01 ; ***p<0,001 ; mp<0,01 ; ^<0,001 ; ^pX),0001. Correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). # correspond à la comparaison entre le Mix vs le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou du mélange de probiotiques selon l’invention).Figure 7 illustrates in the developing mouse overweight and then obesity, the action of the Mix on (A) the weight (mass) of the pancreas, liver and spleen, (B) the accumulation of droplets lipid (steatosis, see histological sections representative of each of the experimental groups), and (C) different markers of inflammation or involved in lipid metabolism or insulin response (mcp-1 expression analysis, IL-6, TNFα, IL-10, IL-17, srebp-1c, APOCII Fabp1 and IRS2). The data are expressed on average (from 5 to 14 mice per group) + standard deviation to the mean (SEM). ** p <0.01; *** p <0.001; mp <0.01; ^ <0.001; ^ PX), 0001. Refers to the comparison between the HFD and LFD regimens with identical interventional treatment (measure of the effect of the plan). # corresponds to the comparison between the Mix vs the PBS at identical speed (measurement of the effect of the probiotic or mixture of probiotics according to the invention).

Le protocole suivant a été observé pour récolter les résultats in vivo discutés dans les exemples 1 à 4 qui suivent.The following protocol was observed to harvest the in vivo results discussed in Examples 1 to 4 which follow.

Protocoles in vivoIn vivo protocols

Souris, souches de bactéries, et régimesMice, bacteria strains, and diets

Les tests ont été réalisés sur des souris mâles C57BL/6J, âgées de 5 semaines au début de l’expérimentation.The tests were performed on male C57BL / 6J mice, 5 weeks old at the beginning of the experiment.

La souche Ls33 de Lactobacillus L. salivarius a été fournie par Danisco (Madison, Wl, Etats-Unis).The Ls33 strain of Lactobacillus L. salivarius was provided by Danisco (Madison, WI, USA).

Le mélange de probiotiques (référencé comme Mix dans les exemples qui suivent) comprend deux souches différentes : une souche de L. rhamnosus LMG S-28148 et une souche de Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 dans un rapport en cfu (coiony-forming units) de 1 :1 (109 cfu total). Les régimes imposés aux souris se déclinent en un premier régime à bas taux de graisses (LFD : D12450B ; 10% kcal provenant de graisses) et en un second régime à haut taux de graisses (HFD : D12492, 60% kcal provenant de graisses). Les régimes ont été fournis par la Société Research Diet.The mixture of probiotics (referenced as Mix in the examples which follow) comprises two different strains: a strain of L. rhamnosus LMG S-28148 and a strain of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 in a cfu ratio (coiony-forming units) of 1: 1 (109 total cfu). The diets imposed on the mice come in a first low-fat diet (LFD: D12450B, 10% kcal from fat) and a second high-fat diet (HFD: D12492, 60% kcal from fat) . The diets were provided by the Society Research Diet.

Protocole de traitement des animaux 5 jours consécutifs par semaine, chaque souris a reçu une administration orale de 30 pL de Ls33 - 109cfu (coiony-forming units ou, le nombre d’unités formatrices de colonie présentes dans la composition orale) dans de l’eau stérilisée (H20) (groupe Ls33-H20), d’eau stérilisée (groupe H20), ou du mélange de probiotiques (groupe Mix ; 5 108cfu pour chaque souche) dans le tampon phosphate salin (PBS) (groupe Mix-PBS ou groupe PBS).Treatment protocol of animals 5 consecutive days per week, each mouse was given an oral administration of 30 μl of Ls33 - 109cfu (coiony-forming units or, the number of colony forming units present in the oral composition) in the sterilized water (H20) (Ls33-H20 group), sterilized water (H20 group), or probiotic mixture (Mix group, 108cfu for each strain) in phosphate buffered saline (PBS) (Mix-PBS group or PBS group).

Après une semaine de traitement, les souris traitées au Ls33, à l’eau, au Mix, ou au PBS ont été assignées de façon aléatoire à un régime LFD (n=5 par groupe) ou HFD (n=15 par groupe). Le poids corporel et la prise de nourriture ont été enregistrés de manière hebdomadaire.After one week of treatment, mice treated with Ls33, water, Mix, or PBS were randomly assigned to LFD (n = 5 per group) or HFD (n = 15 per group). Body weight and food intake were recorded weekly.

Lors du sacrifice, le sang, les tissus adipeux blancs épididymaires (EWAT) et sous-cutanés (SCWAT), le foie, la rate, l’intestin grêle, et le pancréas ont été collectés.At sacrifice, blood, epididymal white (EWAT) and subcutaneous adipose tissue (SCWAT), liver, spleen, small intestine, and pancreas were collected.

Tests de tolérance à l’insuline et au glucoseInsulin and glucose tolerance tests

Les tests de tolérance au glucose (GTT) et à l’insuline (ITT) ont été réalisés après, respectivement 12 et 14 semaines de régime. Les animaux ont été mis à jeun pendant une période de 6 heures avant de recevoir une administration intra-péritonéale (IP) de glucose (D-glucose, 1 g/kg de poids corporel) (GTT) ou d’insuline (0.75 IU/kg de poids corporel) (ITT). Les taux de glucose dans le sang ont été mesurés par un glucomètre automatique disponible dans le commerce (par exemple, un ACCU-CHEK® performa) sur un échantillon de sang prélevé au niveau de la queue avant l’injection de glucose (GTT) ou d’insuline (ITT) et à différents temps après injection de glucose (GTT) ou d’insuline (ITT).Glucose tolerance (GTT) and insulin (ITT) tests were performed after 12 and 14 weeks of diet, respectively. The animals were fasted for 6 hours before administration of intraperitoneal (IP) glucose (D-glucose, 1 g / kg body weight) (GTT) or insulin (0.75 IU / kg of body weight) (ITT). Glucose levels in the blood were measured by a commercially available automatic glucose meter (eg, a ACCU-CHEK® performa) on a blood sample taken from the tail before glucose injection (GTT) or insulin (ITT) and at different times after glucose injection (GTT) or insulin (ITT).

Analyses sanguinesBlood tests

Les taux plasmatiques de leptine, adiponectine, MCP-1, et insuline ont été mesurés en utilisant des trousses ELISA commercialisées. Les taux en acide gras non-estérifiés (NEFA), en triglycérides, en glycérol, en cholestérol HDL, et en cholestérol LDL ont été déterminés en utilisant des trousses d’analyse disponibles sur le marché (par exemple, le kit Abcam développé par Cambridge, GB).Plasma levels of leptin, adiponectin, MCP-1, and insulin were measured using commercially available ELISA kits. Levels of non-esterified fatty acids (NEFA), triglycerides, glycerol, HDL cholesterol, and LDL cholesterol were determined using commercially available assay kits (for example, the Abcam kit developed by Cambridge , GB).

Analyses histologiques et immuno-histochimiquesHistological and immunohistochemical analyzes

Les échantillons de foie et de tissus adipeux blancs (EWAT) ont été fixés dans une solution de paraformaldéhyde à 4% , inclus ensuite en paraffine et enfin coupés, déposés sur lame puis colorés à l’hématoxyline éosine (H&E). L’analyse morphométrique des tissus adipeux blancs (EWAT), au moins 10 champs (ce qui représente environs 100 adipocytes) par section a été réalisée en utilisant le programme d’imagerie Image J (NIH image, National Center for Biotechnology Information).The liver and white adipose tissue samples (EWAT) were fixed in a solution of 4% paraformaldehyde, then included in paraffin and finally cut, deposited on a slide and then stained with hematoxylin eosin (H & E). Morphometric analysis of white adipose tissue (EWAT), at least 10 fields (representing about 100 adipocytes) per section was performed using the Image J imaging program (NIH image, National Center for Biotechnology Information).

Analyses de l’expression des gènes L’ARN total des fragments de tissus adipeux blancs, de foie et d’intestin a été extrait (selon la méthode connue de l’homme de l’art) pour être ensuite rétro-transcrit (une quantité de 1 pg a été retranscrite pour chacune des catégories de tissus susmentionnées). La technique de PCR (Polymerase Chain Reaction) quantitative en temps réel (RT-qPCR) a été réalisée selon un protocole connu de l’homme de l’art.Gene expression analyzes The total RNA of white adipose tissue fragments, liver and intestine was extracted (according to the method known to those skilled in the art) and then back-transcribed (a quantity 1 μg was retranscribed for each of the above-mentioned tissue categories). The quantitative real-time PCR (Polymerase Chain Reaction) technique (RT-qPCR) was carried out according to a protocol known to those skilled in the art.

Analyses statistiquesStatistical analyzes

Les données sont exprimées en moyenne + écart-type à la moyenne (SEM). Les analyses statistiques ont été réalisées en utilisant le test de Kruskal Wallis suivi du test de Mann-Whitney U. Les différences entre les groupes expérimentaux sont considérées comme étant statistiquement significatives lorsque la valeur p est inférieure à 0,05.The data are expressed as mean ± standard deviation (SEM). Statistical analyzes were performed using the Kruskal Wallis test followed by the Mann-Whitney U test. Differences between the experimental groups are considered to be statistically significant when the p value is less than 0.05.

Le protocole suivant a été observé pour récolter les résultats in vitro discutés dans les exemples 5 et 6.The following protocol was observed to harvest the in vitro results discussed in Examples 5 and 6.

Protocole in vitroIn vitro protocol

Simulateur de l’écosystème microbien humain - modèle SHIMEHuman microbial ecosystem simulator - SHIME model

Le réacteur SHIME qui simule le tractus gastro-intestinal humain a été mis en place selon une procédure bien connue de l’homme de l’art.The SHIME reactor which simulates the human gastrointestinal tract was set up according to a procedure well known to those skilled in the art.

Le Mix a été ajouté dans le réacteur et les productions d’acides gras à chaîne courte (AGCC ou SCFA, en anglais) ont été mesurés aux temps t=0, t=24 h, et t=48h d’incubation à 37°C sous atmosphère anaérobie.The Mix was added to the reactor and short chain fatty acid (SCCC or SCFA) productions were measured at time t = 0, t = 24 h, and t = 48h incubation at 37 ° C. C under anaerobic atmosphere.

Evaluation de l’effet anti-inflammatoire de la souche Bifidobacterium animalis ssp. lactis n° LMG P-28149 sur des cellules sanguines humainesEvaluation of the anti-inflammatory effect of the strain Bifidobacterium animalis ssp. lactis no. LMG P-28149 on human blood cells

Du sang humain frais, obtenu à partir de quatre donneurs sains, a été dilué dans un rapport 1 :1 avec du PBS-Ca (GIBCO), déposé sur une couche de Ficoll (GIBCO) et centrifugé à 400 xg pendant 30 minutes à 20°C.Fresh human blood, obtained from four healthy donors, was diluted 1: 1 with PBS-Ca (GIBCO), coated on a layer of Ficoll (GIBCO) and centrifuged at 400 xg for 30 minutes at room temperature. ° C.

Les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) ont été isolées du sang après centrifugation et suspendues dans un volume final de 50 ml en utilisant du PBS-Ca, pour ensuite être lavées trois fois à 750 xg pendant 10 minutes à 20°C. Les PBMC ont ensuite été resuspendues dans un milieu RPMI (GIBCO), complété par 10% (v/v) de sérum de veau décomplémenté (sérum porté à 56°C pendant 30 minutes), 1% (p/v) de L-glutamine (GIBCO), et de la gentamycine (30pg/ml) (GIBCO). Les PBMC ont été comptées et leur nombre ajusté à 2 x 106 cellules par ml. La préparation est distribuée (1ml) dans des plaques de culture à 24 puits.Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from the blood after centrifugation and suspended in a final volume of 50 ml using PBS-Ca, and then washed three times at 750 xg for 10 minutes at 20 ° C. The PBMCs were then resuspended in RPMI medium (GIBCO), supplemented with 10% (v / v) decomplemented calf serum (serum heated at 56 ° C for 30 minutes), 1% (w / v) L- glutamine (GIBCO), and gentamycin (30pg / ml) (GIBCO). PBMCs were counted and their number adjusted to 2 x 106 cells per ml. The preparation is distributed (1ml) in 24-well culture plates.

Exemple 1 : Ls33 vs MixExample 1: Ls33 vs Mix

Cet exemple illustre l’impact du Ls33 sur le développement du surpoids et de l’obésité chez la souris.This example illustrates the impact of Ls33 on the development of overweight and obesity in mice.

La figure 1 illustre, pour une cure de 15 semaines en Ls33 ou en eau et un régime en nourriture à bas taux de graisses (LFD) ou à haut taux de graisses (HFD), les indicateurs suivants : - (A) révolution du gain de poids corporel, exprimé en pourcentage par rapport au poids mesuré au jour j=0 ; - (B) le test de tolérance au glucose (GTT) réalisé après 12 semaines de régime. Les taux de glucose (en mg/dl) ont été mesurés chez les souris, directement après une période de mise à jeun de 6 heures, aux temps t (en min) indiqués sur le graphe, après injection intrapéritonéale (IP) de glucose (qui correspond au temps t=0). - (C) le poids (masse) du tissu adipeux épididymaire (EWAT) (en g) après 15 semaines de régime (pesé lors du sacrifice) ; - (D) le poids (masse) du tissu adipeux sous-cutané (SCWAT) (en g) après 15 semaines de régime (pesé lors du sacrifice).Figure 1 illustrates, for a course of 15 weeks in Ls33 or water and a low fat diet (LFD) or high fat diet (HFD) diet, the following indicators: - (A) gain revolution body weight, expressed as a percentage of the weight measured at day d = 0; - (B) glucose tolerance test (GTT) performed after 12 weeks of diet. Glucose levels (in mg / dl) were measured in mice, directly after a fasting period of 6 hours, at the times t (in min) indicated on the graph, after intraperitoneal injection (IP) of glucose ( which corresponds to the time t = 0). - (C) the weight (mass) of epididymal adipose tissue (EWAT) (in g) after 15 weeks of diet (weighed during sacrifice); - (D) the weight (mass) of subcutaneous adipose tissue (SCWAT) (in g) after 15 weeks of diet (weighed during sacrifice).

Comme le montrent les résultats présentés sur cette figure, la souche Ls33, malgré son activité anti-inflammatoire démontrée in vitro et dans d’autres modèles pathologiques (i.e. inflammations intestinales), ne montre aucun effet (positif ou négatif) sur les différents indicateurs A à D. A l’inverse, l’administration du mélange Mix montre des effets de protection significatifs. Ces résultats sont illustrés à la figure 2.As the results presented in this figure show, the Ls33 strain, despite its anti-inflammatory activity demonstrated in vitro and in other pathological models (ie intestinal inflammations), shows no effect (positive or negative) on the various indicators A In contrast, the administration of the Mix mixture shows significant protective effects. These results are illustrated in Figure 2.

Cette figure illustre, après 17 semaines de traitement par le mélange de probiotiques (Mix) ou le PBS et pour un régime à bas taux de graisses (LFD) ou à haut taux de graisses (HFD), les résultats correspondants : - (A) à l’évolution du gain de poids corporel (exprimé en pourcentage par rapport au poids mesuré au jour j=0) ; - (B) à la prise cumulée de nourriture par souris et par jour (g/jour/souris) ; - (C) au test de tolérance à l’insuline (ITT) réalisé 14 semaines après le démarrage du régime : les taux de glucose dans le sang ont été mesurés après injection intrapéritonéale (IP) d’insuline. Les résultats montrent les taux normalisés (en % par rapport aux taux de glucose mesurés avant injection) + SEM et les moyennes + SEM des valeurs de l’aire sous la courbe (AUC) pour chaque courbe de glucose normalisée après injection de l’insuline ; - (D) au test de tolérance au glucose (GTT) réalisé après 12 semaines de régime. Les taux de glucose (en mg/dl) ont été mesurés chez la souris après injection IP de glucose et les valeurs d’AUC ont été calculées.This figure illustrates, after 17 weeks of treatment with the mixture of probiotics (Mix) or PBS and for a low-fat diet (LFD) or high-fat diet (HFD), the corresponding results: - (A) the change in body weight gain (expressed as a percentage of the weight measured at day j = 0); - (B) cumulative intake of food per mouse per day (g / day / mouse); - (C) insulin tolerance test (ITT) performed 14 weeks after starting the diet: blood glucose levels were measured after intraperitoneal injection (IP) insulin. The results show normalized levels (as a% of glucose levels measured before injection) + SEM and averages + SEM of AUC values for each normalized glucose curve after insulin injection ; - (D) glucose tolerance test (GTT) performed after 12 weeks of regimen. Glucose levels (in mg / dl) were measured in mice after IP glucose injection and AUC values were calculated.

Pour le groupe de souris HFD-Mix, il a été observé un gain de poids corporel moins important (gain de 80,97% + 4,96%) que celui obtenu dans le groupe HFD-PBS (gain de 113,51% + 4,89%) (voir figure 2A).For the group of HFD-Mix mice, a lower body weight gain (gain of 80.97% + 4.96%) was observed than that obtained in the HFD-PBS group (gain of 113.51% + 4.89%) (see Figure 2A).

Comme le montre la figure 2B, les souris du groupe HFD traitées par le mélange de probiotiques Mix présentent une diminution de la prise de nourriture cumulée (Food intake, Fl). De manière intéressante, les effets bénéfiques observés sur la prise de poids corporel et l’indice Fl sont apparus rapidement après le début du traitement (à partir de la quatrième semaine). L’administration du mélange Mix améliore l’homéostasie du glucose pour le groupe HFD comme le montrent les taux moindres en glucose et en insuline de la table 1 ci-dessous :As shown in FIG. 2B, the mice of the HFD group treated with the Mix probiotic mixture show a decrease in the cumulative food intake (Food intake, F1). Interestingly, the beneficial effects observed on body weight gain and the Fl index appeared rapidly after the start of treatment (from the fourth week). Mix administration improves glucose homeostasis for the HFD group as shown by the lower glucose and insulin levels in Table 1 below:

Table 1Table 1

Groupes / lfd-pbs lfd-mîx hfd-pbs hfd-mîxGroups / lfd-pbs lfd-mîx hfd-pbs hfd-mîx

Indicateursindicators

Glucose (mg/dl) |180,4±30,88 160,3±28,96 231,67±21,7* 198,43±15##Glucose (mg / dl) | 180.4 ± 30.88 160.3 ± 28.96 231.67 ± 21.7 * 198.43 ± 15 ##

Insuline (ng/ml) 0,72 ±0,37 0,98 ±0,24 2,96 ±0,57* 1,57 ±0,23* NEFA (mmol/l) 0,85 ±0,06 1,07 ±0,07 1,06 ±0,03 0,9 ±0,08Insulin (ng / ml) 0.72 ± 0.37 0.98 ± 0.24 2.96 ± 0.57 * 1.57 ± 0.23 * NEFA (mmol / l) 0.85 ± 0.06 1 , 07 ± 0.07 1.06 ± 0.03 0.9 ± 0.08

Glycérol (mmol/l) 0,13 ±0,06 0,24 ±0,05 0,38 ±0,1 0,34 ± 0,05Glycerol (mmol / l) 0.13 ± 0.06 0.24 ± 0.05 0.38 ± 0.1 0.34 ± 0.05

Triglycéride (mmol/l) 0,4 ±0,009 0,46 ±0,02 0,41 ±0,03 0,41 ±0,03Triglyceride (mmol / l) 0.4 ± 0.009 0.46 ± 0.02 0.41 ± 0.03 0.41 ± 0.03

Cholestérol (mmol/l) 1,35 ±0,05 1,33 ±0,05 1,94 ±0,04*** 1,72 ±0,3*** HDL (mmol/l) 1,09 ±0,04 1,07 ±0,04 1,5 ±0,01*** 1,35 ±0,02*** LDL (mmol/l) 0,25 ±0,01 0,26 ± 0,01 0,45 ± 0,04*** 0,36 ± 0,02***Cholesterol (mmol / l) 1.35 ± 0.05 1.33 ± 0.05 1.94 ± 0.04 *** 1.72 ± 0.3 *** HDL (mmol / l) 1.09 ± 0.04 1.07 ± 0.04 1.5 ± 0.01 *** 1.35 ± 0.02 *** LDL (mmol / l) 0.25 ± 0.01 0.26 ± 0.01 0.45 ± 0.04 *** 0.36 ± 0.02 ***

Les données de cette table sont exprimées en moyenne + écart-type à la moyenne (SEM) (correspondant à 5 et 14 souris par groupe).* p<0,05 ; *** p<0,001 ; *p<0,05 ; **p<0,01 ; “ρΟ,ΟΟΙ * correspond à la comparaison entre le régime HFD vs le régime LFD à traitement interventionnel identique (mesure de l’effet du régime). * correspond à la comparaison entre le Mix ys le PBS à régime identique (mesure de l’effet du probiotique ou du mélange de probiotiques).The data in this table are expressed as mean ± SEM (corresponding to 5 and 14 mice per group). * P <0.05; *** p <0.001; * p <0.05; ** p <0.01; "ΡΟ, ΟΟΙ * corresponds to the comparison between the HFD diet and the identical interventional LFD diet (measure of the effect of the diet). * corresponds to the comparison between the Mix ys PBS with identical diet (measurement of the effect of the probiotic or mixture of probiotics).

Par ailleurs, comme le montre la table 1, si les effets du Mix restent limités aux taux de NEFA, de glycérol et de triglycérides, il démontre une action hypocholestérolémiante puisqu’il est associé à une diminution du taux de cholestérol total et de HDL cholestérol.Moreover, as shown in Table 1, if the effects of Mix remain limited to NEFA, glycerol and triglyceride levels, it demonstrates a cholesterol lowering action since it is associated with a decrease in total cholesterol and HDL cholesterol levels. .

En outre, l’indice HOMA-IR ((taux d’insuline à jeun/ taux de glucose à jeun)/22,5) est significativement réduit chez les souris du groupe HDF-Mix, comparé au groupe contrôle (32,04 + 5,86 vs 81,57 + 19,63 ; p<0,01), ce qui indique une sensibilité améliorée à l’insuline, confirmée par les résultats du test de tolérance à l’insuline (voir figure 2C).In addition, the HOMA-IR index (fasting insulin level / fasting glucose level) / 22.5) was significantly reduced in mice of the HDF-Mix group, compared to the control group (32.04 + 5.86 vs 81.57 + 19.63, p <0.01), indicating improved insulin sensitivity, confirmed by the results of the insulin tolerance test (see Figure 2C).

De même, les souris traitées par le Mix sont moins intolérantes aux injections de glucose (voir figure 2D).Similarly, the mice treated with the Mix are less intolerant to glucose injections (see FIG. 2D).

Exemple 2 : action du Mix sur l’inflammation des tissus adipeux blancsExample 2: Action of the Mix on the inflammation of white adipose tissues

La figure 3 illustre les effets du Mix sur : - (A) le poids (masse) de l’EWAT (en g) ; - (B) le poids (masse) du SCWAT (en g) ; - (C) les quantités de leptine dans le sang (en ng/ml) mesurés par la méthode ELISA (méthode de dosage immunoenzymatique) dans le sérum de souris préalablement mises à jeun pendant 6 heures ; - (D) les quantités d’adiponectine dans le sang (en pg/ml) mesurés par la méthode ELISA dans le sérum de souris préalablement mises à jeun pendant 6 heures ; - (E) l’histologie des tissus adipeux épididymaires (présentation de coupes colorées à l’hématoxyline et à l’éosine représentatives de chacun des groupes expérimentaux). L’échelle est de 100 pm. Les flèches noires indique la présence d’infiltration cellulaire; et - (F) la distribution de la taille des adipocytes du EWAT. Les résultats sont présentés en % d’adipocytes par classe de tailles (0-20 pm, 20-40, etc.), tandis que la figure 7 illustre l’action du Mix sur : - (A) le poids (masse) du pancréas, du foie, et de la rate (en g); - (B) l’accumulation de gouttelettes lipidiques (i.e. stéatose) dans le foie (présentation de coupes, colorées par H&E, représentatives de chacun des groupes expérimentaux). L’échelle est de 100 pm ; et - (C) l’expression de gènes codant des cytokines pro-et anti-inflammatoires et des récepteurs impliqués dans le transport et le métabolisme des lipides, dans le foie.Figure 3 illustrates the effects of the Mix on: - (A) the weight (mass) of the EWAT (in g); - (B) the weight (mass) of the SCWAT (in g); (C) the amounts of leptin in the blood (in ng / ml) measured by ELISA (enzyme immunoassay method) in the serum of mice previously fasted for 6 hours; (D) the amounts of adiponectin in the blood (in μg / ml) measured by the ELISA method in the serum of mice previously fasted for 6 hours; - (E) the histology of epididymal adipose tissue (presentation of hematoxylin and eosin stained sections representative of each of the experimental groups). The scale is 100 pm. Black arrows indicate the presence of cellular infiltration; and (F) the size distribution of the EWAT adipocytes. The results are presented in% of adipocytes by size class (0-20 μm, 20-40, etc.), while Figure 7 illustrates the action of the Mix on: - (A) the weight (mass) of the pancreas, liver, and spleen (in g); - (B) the accumulation of lipid droplets (i.e. steatosis) in the liver (presentation of sections, stained by H & E, representative of each of the experimental groups). The scale is 100 μm; and (C) the expression of genes encoding pro-and anti-inflammatory cytokines and receptors involved in the transport and metabolism of lipids, in the liver.

En comparaison avec les groupes contrôle HFD, le groupe HFD-Mix présente une diminution marquée des masses adipeuses EWAT et SCWAT (voir figures 3A et 3B).In comparison with the HFD control groups, the HFD-Mix group shows a marked decrease in EWAT and SCWAT fat masses (see Figures 3A and 3B).

Une diminution marquée des poids (masses) du pancréas, du foie, et de la rate est également observée chez les individus du groupe HFD-Mix (voir figure 7A).A marked decrease in the weights (masses) of the pancreas, liver, and spleen is also observed in individuals in the HFD-Mix group (see Figure 7A).

En outre, alors que les souris du groupe de contrôle HFD ont développé une stéatose hépatique, l’administration du mélange de probiotiques Mix permet de limiter la présence de gouttelettes de lipides dans les tissus (voir figure 7B).In addition, while the mice of the HFD control group developed hepatic steatosis, the administration of the mixture of probiotics Mix makes it possible to limit the presence of lipid droplets in the tissues (see Figure 7B).

En concordance avec la diminution de la masse de tissus adipeux blancs, les taux sanguins de leptine s’avèrent être significativement plus bas dans le groupe HFD-Mix (voir figure 3C), alors que les taux d’adiponectine ont tendance à être plus élevés (voir figure 3D). L’histologie des tissus adipeux épididymaires a montré une densité plus élevée en petits adipocytes chez les souris du groupe HFD-Mix (voir figure 3E et 3F).Consistent with decreasing white adipose tissue mass, leptin blood levels appear to be significantly lower in the HFD-Mix group (see Figure 3C), while adiponectin levels tend to be higher (see figure 3D). The histology of epididymal adipose tissue showed a higher density in small adipocytes in mice of the HFD-Mix group (see Figure 3E and 3F).

Il est à noter que, si chez les souris du groupe contrôle, les tissus adipeux sont infiltrés de manière marquée par des cellules qui entourent les adipocytes (marquées par une flèche sur la figure 3E), les échantillons de tissus prélevés chez les souris du groupe ayant reçu le Mix de probiotiques sont moins marqués par cette infiltration.It should be noted that, in the mice in the control group, the adipose tissues are markedly infiltrated by cells surrounding the adipocytes (marked by an arrow in FIG. 3E), the tissue samples taken from the mice of the group having received the probiotic mix are less marked by this infiltration.

Lors du développement de l’obésité, les macrophages sont recrutés dans les tissus adipeux blancs alors que les cellules-T régulatrices FoxP3+CD4+ quittent ces tissus.In the development of obesity, macrophages are recruited into white adipose tissue while FoxP3 + CD4 + regulatory T cells leave these tissues.

La figure 4 illustre chez la souris en surpoids l’action du Mix sur l’inflammation des tissus adipeux.Figure 4 illustrates in overweight mice the action of the Mix on inflammation of adipose tissue.

Comme le montre la figure 4A, en comparaison avec les tissus LFD contrôles, les niveaux d’expression de plusieurs marqueurs spécifiques de monocytes/macrophages (F4/80 ; Cd68 ; Cd11b; et Cd11c) sont augmentés chez les souris du groupe HFD alors que les taux relatifs au marqueur Foxp3 sont diminués. L’administration du mélange de probiotiques Mix diminue de manière significative l’expression induite par le régime HFD des marqueurs de monocytes/macrophages et augmente les niveaux d’expression du marqueur Foxp3. L’impact du mélange Mix, et donc de la souche de probiotique selon l’invention, sur le recrutement des macrophages dans les tissus adipeux est appuyé par les résultats illustrés à la figure 4B.As shown in Figure 4A, in comparison with the control LFD tissues, the expression levels of several specific monocyte / macrophage markers (F4 / 80, Cd68, Cd11b, and Cd11c) are increased in mice of the HFD group whereas the rates relative to the Foxp3 marker are decreased. Administration of the mix probiotic mixture significantly decreases HFD-induced expression of monocyte / macrophage markers and increases expression levels of the Foxp3 marker. The impact of the Mix mixture, and therefore of the probiotic strain according to the invention, on the recruitment of macrophages in adipose tissue is supported by the results illustrated in FIG. 4B.

Conformément à la diminution du recrutement des macrophages conjointement à une augmentation de l’accumulation en lymphocytes Treg anti-inflammatoires, il est montré dans cet exemple que les tissus adipeux épididymaires chez la souris traitée par le mélange Mix présentent un niveau d’inflammation moindre que les tissus contrôles, comme le démontrent les niveaux d’expression réduits pour les ARN messagers spécifiques de I’ II6, du Tnfa, de ΓΙΙ-1 a, et de ΓΙΙ-17 (voir figure 4C).In accordance with the decrease in the recruitment of macrophages together with an increase in the accumulation of anti-inflammatory Treg cells, it is shown in this example that the epididymal adipose tissues in the mice treated with the Mix mixture have a lower level of inflammation than the control tissues, as demonstrated by the reduced levels of expression for the specific messenger RNAs of II6, Tnfa, ΓΙΙ-1a, and ΓΙΙ-17 (see Figure 4C).

En outre, il est montré que le traitement à base du mélange Mix limite la diminution en PPARy (à la fois au niveau de l’ARN messager et de la protéine) induite par le régime HFD (voir figure 4D).In addition, it is shown that the Mix-based treatment limits the decrease in PPARy (both at the level of the messenger RNA and the protein) induced by the HFD diet (see FIG. 4D).

Exemple 3 : action du Mix sur le métabolisme des lipides de l’intestin grêle et la production d’acides gras à chaîne courte (AGCC/SCFA)Example 3: Action of the Mix on Lipid Metabolism of the Small Intestine and the Production of Short Chain Fatty Acids (AGCC / SCFA)

Il est démontré dans cet exemple que les niveaux d’expression des gènes (GPR41 et GPR43) qui sont responsables du transport des acides gras à chaîne courte (SCFAs, pour Short-Chain Fatty Acids) sont diminués dans l’intestin grêle des souris soumises au régime HFD, ce qui indique que dans le groupe HFD, les AGCC sont en moindrer mesure d’agir positivement puisque ces derniers sont moins détectés, tandis qu’ils sont significativement augmentés chez les animaux traités avec le mélange Mix sous régime HFD (voir figure 5B). Réciproquement, l’administration du Mix a pour effet de limiter l’augmentation des gènes impliqués dans le métabolisme lipidique induits par un régime alimentaire gras (voir figure 5A).It is demonstrated in this example that gene expression levels (GPR41 and GPR43) that are responsible for short chain fatty acid (SCFAs) transport are decreased in the small intestine of mice subjected to to the HFD diet, which indicates that in the HFD group, the AGCCs are in a better position to act positively since the latter are less detected, whereas they are significantly increased in the animals treated with the Mix mixture under the HFD diet (see Figure 5B). Conversely, the administration of the Mix has the effect of limiting the increase of genes involved in lipid metabolism induced by a fatty diet (see Figure 5A).

Exemple 4 : action du Mix sur le microbiote et le niveau de colonisation par Akkermansia muciniphilaExample 4: Mix action on the microbiota and level of colonization by Akkermansia muciniphila

Une analyse de certaines bactéries du microbiote a été réalisée par PCR quantitative (qPCR) à partir du contenu caecal des souris qui ont été soumises au régime HFD conjointement ou non à une prise du Mix, et d’autre part, des souris soumises au régime LFD conjointement ou non à une prise du Mix.An analysis of certain bacteria of the microbiota was carried out by quantitative PCR (qPCR) from the caecal content of the mice that were subjected to the HFD diet, with or without a Mix intake, and secondly, mice subjected to the diet. LFD jointly or not to take a Mix.

Les résultats illustrés à la figure 6 montrent un changement de la composition du microbiote des souris HFD-Mix, avec en particulier une restauration du niveau de colonisation par Akkermansia muciniphila chez les souris soumises au régime HFD et traitées avec la souche de probiotique ou le mélange de probiotiques selon l’invention.The results illustrated in FIG. 6 show a change in the composition of the microbiota of the HFD-Mix mice, with in particular a restoration of the level of colonization by Akkermansia muciniphila in the mice subjected to the HFD diet and treated with the probiotic strain or the mixture probiotics according to the invention.

Exemple 5 : action du Mix sur la production d’AGCC ; utilisation du modèle SHIMEExample 5: Mix action on AGCC production; using the SHIME template

Dans cet exemple, un modèle dynamique in vitro de simulation de l’intestin, qui est destiné à reproduire l’écosystème microbien de l’intestin humain, a été employé.In this example, a dynamic in vitro model of gut simulation, which is intended to replicate the microbial ecosystem of the human gut, has been employed.

Comme le montrent les résultats issus de cette simulation (voir la figure 5C), l’utilisation de la souche n° LMG P-28149 du probiotique Bifidobacterium animalis ssp. Lactis permet une augmentation, dans un délai de 48h après inoculation, de la production des AGCCs totaux (total SCFAs), favorisant la production dans l’intestin de butyrate et de propionate, deux métabolites qui favorisent la satiété induite par la prise de nutriments chez l’être humain. Les taux en butyrate et propionate produits dans le colon ascendant associé au réacteur SHIME avant (TO) et après (T24h et T48h) incubation du mélange Mix selon l’invention sont repris en table 2. Ces données sont exprimées en mmol/L + SED.As shown by the results obtained from this simulation (see FIG. 5C), the use of the strain LMG P-28149 of the probiotic Bifidobacterium animalis ssp. Lactis allows an increase, within 48 hours after inoculation, in the production of total SCFAs (total SCFAs), favoring the production in the intestine of butyrate and propionate, two metabolites that promote satiety induced by nutrient uptake. human being. The levels of butyrate and propionate produced in the ascending colon associated with the SHIME reactor before (TO) and after (T24h and T48h) incubation of the Mix mixture according to the invention are shown in Table 2. These data are expressed in mmol / L + SED .

Table 2 Période / TO T24h T48hTable 2 Period / TO T24h T48h

Produitsproducts

Acétate 3,53 ± 0,38 10,96 ±0,91 3,10±0,16Acetate 3.53 ± 0.38 10.96 ± 0.91 3.10 ± 0.16

Propionate 1,10 ±0,03 3,87 ±0,51 7,07 ±0,16Propionate 1.10 ± 0.03 3.87 ± 0.51 7.07 ± 0.16

Isobutyrate 0,00 ± 0,00 0,24 ± 0,05 1,30 ± 0,05Isobutyrate 0.00 ± 0.00 0.24 ± 0.05 1.30 ± 0.05

Butyrate 0,69 ±0,07 3,25 ±0,27 12,27 ±0,22Butyrate 0.69 ± 0.07 3.25 ± 0.27 12.27 ± 0.22

Isovalérate 0,11 ± 0,00 0,50 ± 0,05 2,44 ± 0,04Isovalerate 0.11 ± 0.00 0.50 ± 0.05 2.44 ± 0.04

Isocaproate 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00Isocaproate 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00

Caproate 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00Caproate 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00

Total 5,44 ±0,33 18,84 ±1,46 26,19 ±0,36Total 5.44 ± 0.33 18.84 ± 1.46 26.19 ± 0.36

Il est bien entendu que la présente invention n’est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.It is understood that the present invention is in no way limited to the embodiments described above and that many modifications can be made without departing from the scope of the appended claims.

Liste des abréviations AGCC (SCFA) : Acide gras à chaîne courte EWAT : Tissus adipeux blancs épididymaires GT(T) : (Test) de tolérance au glucose HDL : Lipides à haute densité H&E : Hématoxyline et éosine HFD : Régime riche en graisses IMC : Indice de Masse Corporelle (HOMA)-IR : (Modèle homéostatique) pour apprécier la résistance à l’insuline IT(T) : (Test) de tolérance à l’insuline (V)LDL : Lipide à (très) faible densité LFD : Régime pauvre en graisses NEFA : Acide gras non-estérifié PBS : Tampon phosphate salin PBMC : Cellules mononuclées du sang périphérique SCWAT : Tissus adipeux blancs sous-cutanés SEM : Ecart-type à la moyenne SH IME : Simulator of the Human Intestinal Microbial Ecosystem WAT : Tissus adipeux blancsList of abbreviations AGCC (SCFA): EWAT Short-Chain Fatty Acid: Epididymal White Fatty Tissue GT (T): Glucose Tolerance Test (HDL): High-Density Lipids H & E: Hematoxylin and Eosin HFD: Fat-Rich Diet BMI: Body Mass Index (HOMA) -IR: (homeostatic model) to assess insulin resistance IT (T): (Test) insulin tolerance (V) LDL: Lipid at (very) low density LFD: Low Fat Diet NEFA: Non-Esterified Fatty Acid PBS: Saline Phosphate Buffer PBMC: Peripheral Blood Mononuclear Cells SCWAT: White Subcutaneous Fatty Tissues SEM: Mean Standard Deviation SH IME: Simulator of the Human Intestinal Microbial Ecosystem WAT: White adipose tissue

Claims

1. Composition based on at least one probiotic element for use in the curative treatment of body weight gain in overweight humans and / or for the preventive treatment of body weight gain in humans human overweight or having been overweight, preferably during and / or after diet, characterized in that said probiotic element is derived from Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, and is preferably Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 whole, for example in the living state.

2. Composition according to claim 1, comprising at least one additional probiotic chosen from the group consisting of the following probiotics: Archaea, Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Fusobacteria, Metanobacteria, Spirochaetes, Fibrobacter, Deferribacteres, Deinococcus, Thermus, Cyanobacteria , Methanobrevibacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Catenibacterium, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionibacterium, Enterobacteriaceae (non-pathogenic), Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Akkermansia, Bacillus, Butyrivibrio, and Clostridium, or a combination thereof.

A composition according to claim 1 or 2, comprising a fungus and / or yeast strain selected from the group consisting of Saccharomyces, Candida, Pichia, Debaryomyces, Torulopsis, Aspergillus, Rhizopus, Mucor, and Penicillium.

The composition of claim 1 or 3, wherein said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic are encapsulated in an encapsulation vehicle.

The composition of claim 4, wherein said vehicle comprises at least one substance selected from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pullulan, gelatin, carrageenan, agar gel or a combination thereof. of these.

The composition of claim 5, wherein said at least one substance is a hydrocolloid.

A composition according to any one of the preceding claims, comprising at least one nutrient source selected from the group consisting of a monosaccharide, a polysaccharide, an amino acid, a peptide, a protein, a vitamin, a yeast extract, an alkali metal or alkaline earth metal halide salt, an antioxidant, glycerol, zinc acetate, zinc chloride, zinc lactate, ascorbic acid, citric acid, vegetable oil, milk fat, or a combination thereof.

The composition of any of the preceding claims, further comprising at least one prebiotic, thereby forming a symbiotic composition.

9. Composition according to any one of claims 1 to 8, comprising a first enteric coating covering said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and optionally said at least one additional probiotic.

The composition of claim 9, wherein said first enteric coating is selected from the group consisting of ethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, Eudragit®, or a combination thereof .

A composition according to any one of the preceding claims comprising a second outer coating selected from the group consisting of alginate, chitosan, pectin, pullulan, gelatin, carrageenan, agar gel, cellulose, hemicellulose, ethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, or a combination thereof.

12. A composition according to any one of the preceding claims, further comprising one or more biocompatible excipients.

A composition according to any of the preceding claims for the curative treatment of body weight gain in overweight humans or for the preventive treatment of body weight gain in overweight or obese humans. overweight during and / or after diet.

14. Composition according to any one of the preceding claims, for the curative or preventive treatment of body weight gain in pregnant women or who gave birth or in humans in couvade.

15. Composition according to any one of the preceding claims, for use as a dietary supplement.

16. Food or food composition based on the composition comprising Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 according to any one of the preceding claims.

17. Therapeutic composition based on the composition according to any one of claims 1 to 15.

18. Therapeutic composition according to claim 17, for use orally, or sublingually or by the respiratory route, preferably nasal or bronchial, or rectally.

19. Therapeutic composition according to claim 17 or claim 18, comprising at least one biocompatible excipient.

20. Therapeutic composition according to any one of claims 17 to 19, preferably packaged in the form of tablets, globules, capsules, granules, powders, fluids, liquids, creams or sprays.

21. Composition, preferably food or therapeutic, based on at least one element of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, preferably whole, for example in the living state, for the curative or preventive treatment of the metabolic syndrome related to overweight in humans.

22. A composition according to any one of the preceding claims, wherein said element of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149 and selected from the group consisting of the constituents of the cell wall of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, cell organelles of Bifidobacterium animalis ssp. lactis no. LMG P-28149, nucleic acids of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, constituents of the cell membrane of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149, and cellular metabolites of Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149.

23. Composition according to any one of the preceding claims, comprising butyrate and / or propionate, or at least one of their derivatives induced by said Bifidobacterium animalis ssp. lactis No. LMG P-28149.