ES2564401T3 - Métodos para procesar dispersiones multifásicas - Google Patents

Abstract

Método para procesar dispersiones multifásicas, que comprende: proporcionar una dispersión multifásica que incluye fases dispersas y continuas, comprendiendo la dispersión micropartículas sólidas y conteniendo al menos la fase continua un primer material no volátil; y proporcionar un no-disolvente; combinar la dispersión multifásica y el no-disolvente; y llevar a cabo una migración selectiva de las micropartículas dentro del no-disolvente o a través del mismo de modo que la mayoría de las micropartículas se separa de la dispersión, donde la fase continua es acuosa o miscible con líquidos acuosos, comprendiendo el primer material no volátil un polímero no iónico soluble en líquidos acuosos o un polímero no iónico miscible con líquidos acuosos, siendo las micropartículas esencialmente insolubles en el no-disolvente y teniendo el no-disolvente una densidad mayor que la de la fase continua o una viscosidad mayor que la de la fase continua, donde proporcionar el no-disolvente comprende introducirel no-disolvente en un aparato de centrifugación para formar así una capa de no-disolvente dentro de éste, donde combinar la dispersión multifásica y el no-disolvente comprende la disposición de una capa de la dispersión multifásica sobre una superficie superior de la capa de no-disolvente, formando así una composición en capas; y donde la migración selectiva de las micropartículas dentro del no-disolvente o a través del mismo comprende una centrifugación de la composición en capas.

Description

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DESCRIPCION

Metodos para procesar dispersiones multifasicas.

Campo Tecnico

La presente descripcion se refiere a dispersiones multifasicas y mas particularmente a metodos para procesar dichas dispersiones.

Descripcion de Tecnologfa Relacionada

Las micropartfculas, microesferas y microcapsulas, denominadas aquf en conjunto como "micropartfculas", son partfculas solidas o semisolidas con un diametro inferior a un milfmetro, preferentemente inferior a 100 micras, que se pueden formar con diversos materiales, incluyendo, de forma no exclusiva, diversos polfmeros y protefnas. Las microesferas se utilizan en muchas aplicaciones diferentes, principalmente separaciones, diagnostico y administracion de farmacos.

Los ejemplos mas conocidos de micropartfculas utilizadas en tecnicas de separacion son aquellas formadas por polfmeros de origen sintetico o protefnico, como poliacrilamida, hidroxiapatita o agarosa. Estas micropartfculas polimericas se utilizan habitualmente para separar moleculas, como protefnas,en base al peso molecular y/o a la carga ionica, o mediante interaccion con moleculas acopladas qufmicamente a las micropartfculas.

En el campo diagnostico, hace anos que se dispone comercialmente de perlas esfericas o partfculas como herramientas para los bioqufmicos. Por ejemplo, se han derivado micropartfculas con una enzima, un sustrato para una enzima o un anticuerpo marcado, que despues interactuandirecta o indirectamente con una molecula a detectar. Existen diversas perlas derivadas comerciales con diferentes constituyentes y tamanos.

En el campo del suministro controlado de farmacos se encapsulan moleculas dentro de microesferas o se incorporan en una matriz para proporcionar una liberacion controlada de estas. Para producir estas micropartfculas a partir de diversos polfmeros se utilizan diversas tecnicas diferentes, incluyendo separacion de fases, evaporacion de disolvente, emulsion y secado por pulverizacion. En general, los polfmeros definen la estructura soporte de las micropartfculas y el farmaco o la molecula de interes se incorpora dentro de esta estructura soporte. Ejemplos de polfmeros utilizados para formarmicropartfculas incluyen homopolfmeros y copolfmeros de acido lactico y acido glicolico (PLGA), copolfmerosen bloque y polifosfacenos.

La Publicacion de Patente US n° 2005/0142205 (publicacion '205) describe metodos de separacion de fases para formar micropartfculas, que incluyen la disolucion de un principio activo en uno o mas disolventes acuosos y/o miscibles con lfquidos acuosos,en los que se han disuelto uno o mas agentes que aumentan la separacion de fases, para formar una solucion en una sola fase lfquida. La solucion se somete despues a una separacion de fases lfquido-solido para que el principio activo forme pequenas partfculas esfericas solidas (esto es, la fase solida), mientras que el o los agentes que aumenta la separacion de fases y el o los disolventes constituyen la fase lfquida. La publicacion '205 describe metodos para recoger micropartfculas con medios lfquidos donde el principio activo es insoluble y el agente de separacion de fases (no deseado) es soluble, incluyendo soluciones de lavado y/o polvos secos que comprenden micropartfculas. Los medios lfquidos descritos incluyen disolventes organicos y fluidos supercrfticos. Metodos de lavado ilustrativos incluyen diafiltracion y centrifugacion. Despues, las fases lfquidas residuales se retiran tfpicamente por liofilizacion o evaporacion.

La Patente US n° 4.486.315 describe un aparato de lavado de partfculas que incluye un tubo interior dentro de un tubo exterior.

Sumario de la invencion

La presente invencion proporciona metodos para procesar dispersiones multifasicas que comprenden proporcionar una dispersion multifasica que incluye fases dispersas y continuas, comprendiendo la dispersion micropartfculas solidas y conteniendo al menos la fase continua un primer material no volatil, y prorporcionar un no-disolvente, combinar la dispersion multifasica y el no-disolvente, y llevar a cabo la migracion selectiva de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo de modo que la mayorfa de las micropartfculas se separe de la dispersion, siendo la fase continua acuosa o miscible con lfquidos acuosos, comprendiendo el primer material no volatil un polfmero no ionico soluble en lfquidos acuosos o un polfmero no ionico miscible con lfquidos acuosos, siendo las micropartfculas esencialmente insolubles en el no-disolvente y teniendo el no- disolvente una densidad mayor que la de la fase continua o una viscosidad mayor que la de la fase continua, consistiendo la preparacion del no-disolvente en la introduccion del no-disolvente en un aparato de centrifugacion para asf formar una capa de no- disolvente en su interior, consistiendo la combinacion de la dispersion multifasica y el no-disolvente en la disposicion de una capa de la dispersion multifasica sobre una superficie superior de la capa de no-disolvente, formando asf una composicion en capas, y consistiendo la realizacion selectiva de una migracion de las micropartfculas dentro del no- disolvente o a su traves en una centrifugacion de la composicion en capas.

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Los metodos para procesar dispersiones multifasicas pueden comprender proporcionar una dispersion multifasica que incluye fases dispersas y continuas, comprendiendo la dispersion micropartfculas solidas y un primer material no volatil en una primera concentracion, proporcionarun no-disolvente que comprende un segundo material no volatil en una segunda concentracion que es mayor que la primera concentracion, siendo las micropartfculas esencialmente insolubles en el no-disolvente, combinar la dispersion multifasica y el no-disolvente, y llevar a cabo una migracion selectiva de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo de modo que la mayorfa de las micropartfculas se separe de la dispersion.

Descripcion detallada de la invencion

La presente descripcion se refiere a dispersiones multifasicas y, mas particularmente, a metodos para procesar dichas dispersiones. Especfficamente, la descripcion se refiere a procesos para separar una fase dispersa que comprende micropartfculas de un medio de reaccion/incubacion, de modo que las micropartfculas se pueden recoger y/o incorporar en composiciones y formulaciones adecuadas para la administracion de farmacos, el diagnostico, separaciones y otras aplicaciones.

Los metodos descritos son ventajosos por diversas razones, incluyendo, de forma no exclusiva: (1) la posibilidad de lograr una reduccion de la agregacion de micropartfculas (en comparacion con metodos conocidos para el procesamiento de micropartfculas); (2) la posibilidad de formular las micropartfculas con/dentro de un diluyente farmaceuticamente aceptable para obtener una composicion que puede ser administrada a un sujeto sin necesidad de realizar un paso de secado costoso y de larga duracion, como liofilizacion o evaporacion; y (3) la posibilidad de lograr una purificacion y aislamiento de las micropartfculas con relativa facilidad (en comparacion con metodos conocidos para el procesamiento de micropartfculas).

Los metodos para procesar dispersiones multifasicas de la presente invencion comprenden proporcionar una dispersion multifasica que incluye fases dispersas y continuas, comprendiendo la dispersion micropartfculas solidas y conteniendo al menos la fase continua un primer material no volatil; y proporcionar un no-disolvente, combinar la dispersion multifasica y el no-disolvente, y la realizacion selectiva de una migracion de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo de modo que la mayorfa de las micropartfculas se separa de la dispersion, siendo la fase continua acuosa o miscible con lfquidos acuosos, comprendiendo el primer material no volatil un polfmero no ionico soluble en lfquidos acuosos o un polfmero no ionico miscible con lfquidos acuosos, siendo las micropartfculas esencialmente insolubles en el no-disolvente y teniendo el no-disolvente una densidad mayor que la de la fase continua o una viscosidad mayor que la de la fase continua, consistiendo la preparacion del no-disolvente en la introduccion del no-disolvente en un aparato de centrifugacion para formar asf una capa de no-disolvente en su interior, consistiendo la combinacion de la dispersion multifasica y el no-disolvente en la disposicion de una capa de la dispersion multifasica sobre una superficie superior de la capa de no-disolvente, formando asf una composicion en capas; y consistiendo la realizacion selectiva de una migracion de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo en una centrifugacion de la composicion en capas.

Los metodos para procesar dispersiones multifasicas pueden comprender proporcionar una dispersion multifasica que incluye fases dispersas y continuas, comprendiendo la dispersion micropartfculas solidas y un primer material no volatil en una primera concentracion, proporcionar un no-disolvente que comprende un segundo material no volatil en una segunda concentracion que es mayor que la primera concentracion, siendo las micropartfculas esencialmente insolubles en el no-disolvente, combinar la dispersion multifasica y el no-disolvente, y realizar una migracion selectiva de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo de modo que la mayorfa de las micropartfculas se separa de la dispersion.

A no ser que se defina aquf de otro modo, las terminologfas cientfficas y tecnicas empleadas en la presente descripcion tienen los significados habitualmente entendidos y utilizados por el experto tecnicoen la materia. A no ser que el contexto lo requiera de otro modo, se ha de entender que los terminos en singular incluyen las formas en plural de los mismos y que los terminos en plural incluyen el singular. Especfficamente, tal como se utilizan aquf y en las reivindicaciones, las formas singulares "un" y "una" incluyen la referencia en plural a no ser que el contexto indique claramente otra cosa. Por tanto, por ejemplo, la referencia a una micropartfcula es una referencia a una micropartfcula o a multiples micropartfculas, incluyendo equivalentes de la misma conocidos por los expertos en la tecnica. Ademas, tal como se utilizan aquf y en las reivindicaciones, los conceptos "al menos uno" y "uno o mas" tienen el mismo significado e incluyen uno, dos, tres o mas. Los siguientes terminos, a no ser que se indique otra cosa, se han de entender con los significados especificados a continuacion cuando se utilizan en el contexto de la presente descripcion.

"Dispersion" se refiere a una mezcla de materias que tienen al menos una fase dispersa o discontinua (opcionalmente finamente dividida, como en forma de micropartfculas solidas) presente en una fase continua solida o no solida (por ejemplo fluida, lfquida, acuosa, organica, gaseosa). Ejemplos representativos de dispersiones de acuerdo con la descripcion incluyen solido en solido, solido en lfquido, solido en gas y similares. Una dispersion puede ser esencialmente homogenea o no homogenea. Una suspension es una dispersion particular donde la fase solida discontinua (como micropartfculas) puede permanecer suspendida establemente (esencialmente libre de sedimentacion) en la fase continua durante perfodos de tiempo prolongados (por ejemplo, al menos 5 segundos, 10

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segundos, o 30 segundos; por ejemplo, minutos, horas, dfas, semanas, meses o incluso un ano o mas). Las "dispersiones multifasicas son dispersiones que tienen al menos dos fases, por ejemplo tres o incluso mas fases. En un ejemplo, estas dispersiones pueden comprender dos disolventes o sistemas de disolventes inmiscibles ademas de una fase dispersa.

El termino "micropartfcula" se refiere a un material solido particulado (incluyendo partfculas esencialmente solidas o semisolidas, pero excluyendo gel, lfquido y gas) con un tamano de partfcula geometrico medio (a veces referido como diametro) inferior a aproximadamente 1 mm, por ejemplo inferior a aproximadamente 200 micras, inferior a aproximadamente 100 micras, inferior a aproximadamente 10 micras, inferior a aproximadamente Imicra, inferior a aproximadamente 100 nm, inferior a 10 nm, superior a aproximadamente 0,1 nm, superior a aproximadamente 1 nm, e intervalos entre estos valores. Por tanto, intervalos adecuados para el tamano de partfcula geometrico medio incluyen entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 1 nm y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 10 nm y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 100 nm y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 1 micra y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 10 micras y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 100 micras y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 200 micras y aproximadamente 1 mm, entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 200 micras, entre aproximadamente 1 nm y aproximadamente 200 micras, entre aproximadamente 10 nm y

aproximadamente 200 micras, entre aproximadamente 100 nm y aproximadamente 200 micras, entre

aproximadamente 1 micra y aproximadamente 200 micras, entre aproximadamente 10 micras y aproximadamente 200 micras, entre aproximadamente 100 micras y aproximadamente 200 micras, entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 100 micras, entre aproximadamente 1 nm y aproximadamente 100 micras, entre

aproximadamente 10 nm y aproximadamente 100 micras, entre aproximadamente 100 nm y aproximadamente 100 micras, entre aproximadamente 1 micra y aproximadamente 100 micras, entre aproximadamente 10 micras y aproximadamente 100 micras, entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 10 micras, entre

aproximadamente 1 nm y aproximadamente 10 micras, entre aproximadamente 10 nm y aproximadamente 10 micras, entre aproximadamente 100 nm y aproximadamente 10 micras, entre aproximadamente 1 micra y aproximadamente 10 micras, entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 1 micra, entre aproximadamente 1 nm y aproximadamente 1 micra, entre aproximadamente 10 nm y aproximadamente 1 micra, entre aproximadamente 100 nm y aproximadamente 1 micra, entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 100 nm, entre aproximadamente 1 nm y aproximadamente 100 nm, entre aproximadamente 10 nm y aproximadamente 100 nm, entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 10 nm, entre aproximadamente 1 nm y aproximadamente 10 nm, y/o entre aproximadamente 0,1 nm y aproximadamente 1 nm. El tamano de partfcula geometrico medio se puede medir por metodos de dispersion dinamica de luz (por ejemplo espectroscopfa de fotocorrelacion, difraccion laser, dispersion de luz laser de angulo pequeno (low-angle laser light scattering - LALLS), dispersion de luz laser de angulo medio (medium-angle laser light scattering - MALLS), metodos de ocultacion de luz (como el metodo de analisis Coulter), u otros metodos (como reologfa, o microscopfa optica o electronica). Las micropartfculas para la administracion pulmonar tienen un tamano de partfcula aerodinamico determinado por medida del tiempo de vuelo o con Impactador de Cascada Andersen. Las micropartfculas que tienen forma esferica se denominan a veces microesferas y nanoesferas. Las micropartfculas que tienen una estructura encapsulada se denominan a veces microcapsulas y nanocapsulas. Las micropartfculas pueden ser porosas, por ejemplo con uno o mas huecos internos y/o cavidades. Otras micropartfculas no son porosas y/o estan libres de dichos huecos o cavidades. Las micropartfculas estan formadas, en parte o totalmente, a partir de uno o mas materiales, incluyendo, de forma no exclusiva, principios activos, vehfculos, polfmeros, agentes complejantes, agentes estabilizadores, excipientes, iones, humedad, disolventes residuales, impurezas, productos secundarios y/o compuestos relacionados con la produccion. Las micropartfculas pueden ser cristalinas, amorfas, microcristalinas, nanocristalinas o una combinacion de las mismas.

El concepto "agente activo" se refiere a materiales naturales, recombinantes, sinteticos o semisinteticos (por ejemplo compuestos, productos de fermentacion, extractos, estructuras celulares) que pueden provocar, directa o indirectamente, uno o mas efectos ffsicos, qufmicos y/o biologicos, in vitro y/o in vivo. El agente activo puede prevenir, aliviar, tratar y/o endurecer condiciones anomalas y/o patologicas de un cuerpo vivo, por ejemplo destruyendo un organismo parasito, o limitando el efecto de una enfermedad o anomalfa mediante la alteracion material de la fisiologfa del huesped o parasito. El agente activo puede mantener, aumentar, disminuir, limitar o destruir una funcion corporal fisiologica. El agente activo puede permitir diagnosticar una condicion o estado fisiologico mediante un ensayo in vitro y/o in vivo. El agente activo puede controlar o proteger un entorno o un cuerpo vivo mediante la atraccion, incapacitacion, inhibicion, eliminacion, modificacion, rechazo y/o retraso de un animal o microorganismo. El agente activo puede tratar de otro modo (por ejemplo desodorizar, proteger, adornar, acicalar) un cuerpo. Dependiendo de su efecto y/o aplicacion, el agente activo tambien se puede denominar un agente bioactivo, agente farmaceutico (como un agente profilactico un agente terapeutico), agente diagnostico, suplemento nutricional y/o agente cosmetico, e incluye, de forma no exclusiva, ejemplos tales como profarmacos, moleculas de afinidad, moleculas organicas sinteticas, polfmeros, moleculas con un peso molecular de 2 kDa o menos (como aquellas que tienen un peso molecular inferior a aproximadamente 1,5 kDa, o inferior a aproximadamente 1 kDa), macromoleculas (como aquellas con un peso molecular superior a aproximadamente 2 kDa, por ejemplo superior a aproximadamente 5 kDa o entre aproximadamente 2 kDa y 5 kDa), compuestos proteinaceos, peptidos, vitaminas, esteroides, analogos de esteroides, lfpidos, acidos nucleicos, carbohidratos, precursores y derivados de los mismos. Los agentes activos pueden ser ionicos o no ionicos, pueden ser neutros,

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presentar carga positiva, presentar carga negativa o ser dipolares, y se pueden utilizar de forma individual o en una combinacion de dos o mas de los mismos. Los agentes activos pueden ser insolubles o solubles en agua. Los agentes activos pueden tener un punto isoelectrico de 7,0 o mas, o de menos de 7,0.

El concepto "compuestos proteinaceos" se refiere a compuestos naturales, sinteticos, semisinteticos o recombinantes de protefnas o relacionados estructural y/o funcionalmente con estas, como aquellos que contienen o consisten esencialmente en a-aminoacidos asociados de forma covalente por un enlace peptfdico. Los compuestos proteinaceos incluyen, de forma no limitativa, protefnas globulares (por ejemplo albuminas, globulinas, histonas), protefnas fibrosas (por ejemplo colagenos, elastinas, queratinas), protefnas de enlace (incluyendo aquellas que contienen uno o mas componentes no peptfdicos, por ejemplo glicoprotefnas, nucleoprotefnas, mucoprotefnas, lipoprotefnas, metaloprotefnas), protefnas terapeuticas, protefnas de fusion, receptores, antfgenos (como antfgenos sinteticos o recombinantes), protefnas de superficie virales, hormonas y analogos de hormonas, anticuerpos (como anticuerpos monoclonales o policlonales), enzimas, fragmentos Fab, peptidos cfclicos, peptidos lineales y similares. Las protefnas terapeuticas incluyen, de forma no exclusiva, protefnas morfogeneticas oseas, protefnas de resistencia a farmacos, toxoides, eritropoyetinas, protefnas de la cascada de coagulacion sangufnea (por ejemplo Factor VII, Factor VIII, Factor IX, entre otros), subtilisina, ovoalbumina, alfa-1-antitripsina (AAT), DNasa, superoxido dismutasa (SOD), lisozimas, ribonucleasas, hialuronidasa, colagenasa, hormona del crecimiento humano (hGH), eritropoyetina, insulina, factores de crecimiento de tipo insulfnico, interferones, glatiramer, factor estimulador de colonias de granulocitos-macrofagos, factor estimulador de colonias de granulocitos, desmopresina, agonistas de hormona de liberacion de hormona luteinizante (LHRH) (por ejemplo leuprolide, goserelina, buserelina, gonadorelina, histrelina, nafarelina, deslorelina, fertirelina, triptorelina), antagonistas de LHRH, vasopresina, ciclosporina, calcitonina, hormona paratiroidea, peptidos de hormona paratiroidea, peptidos de tipo glucogeno y analogos de los mismos. Los compuestos proteinaceos pueden ser neutros, presentar carga positiva, presentar carga negativa o ser dipolares, y se pueden utilizar de forma individual o en una combinacion de dos o mas de los mismos.

El concepto "acidos nucleicos" se refiere a compuestos naturales, sinteticos, semisinteticos o recombinantes formados, al menos en parte, por dos o mas nucleotidos iguales o diferentes, y pueden ser de cadena sencilla o de cadena doble. Ejemplos de acidos nucleicos incluyen, de forma no exclusiva, oligonucleotidos (como aquellos con 20 o menos pares de bases, por ejemplo sentido, antisentido o sin sentido), aptameros, polinucleotidos (por ejemplo sentido, antisentido o sin sentido), ADN (por ejemplo sentido, antisentido o sin sentido), ARN (por ejemplo sentido, antisentido o sin sentido), ARNsi, constructos de acido de nucleotidos, segmentos de cadena sencilla o de cadena doble de los mismos, asf como precursores y derivados de los mismos (por ejemplo glicosilados, hiperglicosilados, PEGilados, marcados con FITC, nucleosidos, sales de los mismos). Los acidos nucleicos pueden ser neutros, presentar carga positiva, presentar carga negativa o ser dipolares, y se pueden utilizar de forma individual o en una combinacion de dos o mas de los mismos.

El termino "macromolecula" se refiere a un material que puede proporcionar una estructura tridimensional (por ejemplo terciaria y/o cuaternaria), e incluye vehfculos y determinados agentes activos de la presente descripcion. Las macromoleculas tienen normalmente un peso molecular de 2 kD o mas, por ejemplo mas de 5 kD o entre 2 kD y 5 kD. Ciertas macromoleculas, no exclusivas, utilizadas para formar las micropartfculas incluyen, entre otras, polfmeros, copolfmeros, protefnas (por ejemplo enzimas, protefnas recombinantes, albuminas como seroalbumina humana, anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, compuestos proteinaceos), peptidos, lfpidos, carbohidratos (por ejemplo monosacaridos, disacaridos, polisacaridos), acidos nucleicos, vectores (por ejemplo virus, partfculas virales), y complejos y conjugados de los mismos (por ejemplo asociaciones covalentes y/o no covalentes entre dos macromoleculas tales como complejos o conjugados carbohidrato-protefna, o entre un agente activo y una macromolecula, como complejos o conjugados hapteno-protefna). Las macromoleculas pueden ser neutras, presentar carga positiva, presentar carga negativa o ser dipolares, y se pueden utilizar de forma individual o en una combinacion de dos o mas de las mismas.

El termino "vehfculo" se refiere a un compuesto, normalmente una macromolecula, que tiene la funcion principal de proporcionar una estructura tridimensional (incluyendo una estructura terciaria y/o cuaternaria) a las microesferas. El vehfculo puede no estar asociado o estar asociado al principio activo (como conjugados o complejos de los mismos) en la formacion de micropartfculas tal como se describe mas arriba. El vehfculo tambien puede proporcionar otras funciones, como ser un agente activo, modificar un perfil de liberacion del agente activo de la micropartfcula y/u otorgar una o mas propiedades particulares a la micropartfcula (como contribuir al menos en parte a la carga de superficie neta). En un ejemplo, el vehfculo es una protefna (por ejemplo una albumina, como seroalbumina humana) con un peso molecular de 1.500 Dalton o superior.

Los terminos "polfmero" o "polimerico" se refieren a una molecula natural, recombinante, sintetica o semisintetica que tiene dos o mas unidades monomericas repetidas al menos en una cadena principal, ramificacion o estructura de anillo. En lfneas generales, los polfmeros incluyen dfmeros, trfmeros, tetrameros, oligomeros, polfmeros de alto peso molecular, aductos, homopolfmeros, copolfmeros aleatorios, pseudocopolfmeros, copolfmeros estadfsticos, copolfmeros alternos, copolfmeros periodicos, bipolfmeros, terpolfmeros, cuaterpolfmeros, otras formas de copolfmeros, derivados sustituidos de los mismos y mezclas de los mismos. En un aspecto, los terminos polfmero y polimerico se refieren a moleculas que tienen 10 o mas unidades monomericas repetidas. Los polfmeros pueden ser lineales, ramificados, en bloque, de injerto, monodispersos, polidispersos, regulares, irregulares, tacticos, isotacticos,

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sindiotacticos, estereorregulares, atacticos, estereobloques, de cadena sencilla, de cadena doble, en estrella, en peine, dendrfticos, y/o ionomericos, pueden ser ionicos o no ionicos, pueden ser neutros, presentar carga positiva, presentar carga negativa o ser dipolares, y se pueden utilizar de forma individual o en una combinacion de dos o mas de los mismos.

El termino "esferico" se refiere a una forma geometrica que es al menos "esencialmente esferica". El concepto "esencialmente esferico" significa que la relacion entre la dimension mas larga (es decir, una dimension entre dos puntos del perfmetro y que pasa por el centro geometrico de la forma) y la dimension mas corta en cualquier seccion transversal que pase a traves del centro geometrico es menor de aproximadamente 1,5, por ejemplo menos de aproximadamente 1,33 o menos de aproximadamente 1,25. Por consiguiente, el termino "esferico" no requiere la presencia de una lfnea de simetrfa. Ademas, las micropartfculas pueden tener una textura superficial, como lfneas continuas o discretas, islas, celosfa, muescas, aberturas en canal, protuberancias pequenas en escala en comparacion con el tamano global de las micropartfculas), y seguir siendo consideradas esfericas. El contacto superficial entre micropartfculas se reduce al mfnimo cuando las micropartfculas son esfericas y, por tanto, normalmente tambien se reduce al mfnimo la aglomeracion no deseable de las micropartfculas. En comparacion, las micropartfculas consistentes en cristales asfericos o escamas normalmente generan una aglomeracion observable a traves de interacciones ionicas y/o no ionicas en superficies planas relativamente grandes.

El termino "solido" se refiere a un estado que incluye al menos esencialmente los estados solido y/o semisolido, pero que excluye lfquidos y gases.

El concepto "temperatura ambiente" se refiere a una temperatura que corresponde aproximadamente a la temperatura ambiente, en general un intervalo entre aproximadamente 20°C y aproximadamente 40°C, por ejemplo entre aproximadamente 20°C y aproximadamente 25°C.

Los conceptos "formado a partir de" y "formado por" indica un lenguaje abierto. Como tales, se considera que una composicion formada a partir de o formada por una lista de componentes enumerados es una composicion que comprende al menos dichos componentes enumerados y que ademas incluye otros componentes no enumerados durante la formulacion de la composicion y/o en el producto final obtenido.

A no ser que se especifique expresamente algo distinto, todos los intervalos numericos, cantidades, valores y porcentajes, por ejemplo para cantidades de materiales, tiempos, temperaturas, condiciones de reaccion, proporciones de cantidades, valores de peso molecular (de peso molecular promedio en numero Mn o de peso molecular promedio en peso Mw), y otros valores dados a conocer aquf, se han de entender como si estuvieran modificados en todos los casos por el termino "aproximadamente", si es que no se utiliza expresamente el termino "aproximadamente" en combinacion con dichos intervalos, cantidades, valores y porcentajes aquf indicados. Por consiguiente, a no ser que se indique lo contrario, los parametros numericos establecidos en la presente descripcion y las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar. Como mfnimo, cada parametro numerico ha de ser interpretado en vista del numero de dfgitos significativos indicados y aplicando tecnicas de redondeo ordinarias.

Aunque los intervalos numericos y parametros que establecen el amplio alcance de la descripcion son aproximaciones, los valores numericos expuestos en los ejemplos especfficos estan indicados con la mayor precision posible. No obstante, cualquier valor numerico es inherentemente algo incierto debido a la desviacion estandar hallada en su medicion de analisis respectiva. Ademas, cuando aquf se exponen intervalos numericos de alcance variable, se considera que se puede utilizar cualquier combinacion de estos valores, incluyendo los valores enumerados, de acuerdo con las ensenanzas de la divulgacion.

Los ejemplos que aquf se proporcionan, incluyendo aquellos que siguen a las expresiones "tal como" y "por ejemplo", se consideran unicamente como ilustrativos de diversos aspectos y caracterfsticas de la presente divulgacion y realizaciones de la misma, y en consecuencia no modifican el alcance de ninguno de los terminos o frases mencionados. Cualquier equivalente, alternativa y modificacion de los mismos (incluyendo materiales, sustancias, construcciones, composiciones, formulaciones, medios, metodos, condiciones, etc.) conocidos y/o disponibles por los especialistas en la tecnica puede ser utilizado en lugar de los aquf descritos o en combinacion con los mismos, y se considera que entra dentro del alcance de la presente divulgacion. A lo largo de toda la presente descripcion, todos y cada uno de los uno, dos o mas aspectos y caracterfsticas dados a conocer aquf, explfcita o implfcitamente, despues de las expresiones "ejemplo", "ejemplos", "tal como", "por ejemplo" y similares se pueden poner en practica en cualquier combinacion de dos, tres o mas de los mismos (incluyendo sus equivalentes, alternativas y modificaciones) cuando y donde sea apropiado en opinion de los especialistas en la tecnica. Por tanto, los detalles especfficos dados a conocer aquf no han de ser interpretados como limitativos, sino simplemente como una base para las reivindicaciones y como una base representativa para ensenar a los especialistas en la tecnica a emplear de diversos modos aspectos y caracterfsticas de la presente divulgacion practicamente de cualquier modo adecuado en opinion de los especialistas en la tecnica.

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Las micropartfculas, los materiales y metodos para producir micropartfculas, las composiciones y formulaciones que contienen micropartfculas y la utilidad de dichas micropartfculas, composiciones y formulaciones incluyen, de forma no exclusiva, los dados a conocer en las Patentes US n° 5.525.519, 5.554.730, 5.578.709, 5.599.719, 5.981.719, 6.090.925, 6.268.053, y 6.458.387, las Publicaciones US n° 20030059474, 20030064033, 20040043077, 20050048127, 20050142201, 20050142205, 20050142206, 20050147687, 20050170005, 20050233945,

20060018971, 20060024240, 20060024379, 20060260777, 20070092452, 20070207210, y 20070281031, cuyas divulgaciones se incorporan aquf por referencia en su totalidad. Las micropartfculas pueden tener una distribucion de tamano generalmente uniforme, como una distribucion de tamano monodispersa, o una distribucion de tamanos polidispersa, y una forma generalmente uniforme, por ejemplo esencialmente esferica. Una o mas caracterfsticas de las micropartfculas se pueden ajustar durante la produccion mediante la manipulacion de una o mas variables, tales como, de forma no exclusiva, la seleccion de ingredientes o la combinacion de estos, las concentraciones de los diferentes ingredientes, la temperatura de reaccion, el tiempo de reaccion y/o el pH si la reaccion tiene lugar en solucion acuosa.

Las micropartfculas son adecuadas para administrar, in vivo, ex vivo y/o in vitro, un agente activo o una combinacion de dos o mas agentes activos con perfiles de liberacion rapida y/o controlada, y son utiles para una gran variedad de aplicaciones terapeuticas, farmaceuticas, diagnosticas, medicas, medicinales, cosmeticas, nutricionales, biocidas, separativas, industriales, comerciales y de investigacion, tales como administracion de farmacos, vacunacion, terapia genica y formacion de imagenes histopatologica o in vivo de tejidos o tumores. Las micropartfculas pueden estar formuladas para ser administradas a un sujeto via oral, parenteral, mucosal, oftalmica, intravenosa, subcutanea, subdermica, intradermica, intraarticular, intramuscular, pulmonar (incluyendo inhalaciones orales y nasales) y/o topica. La administracion intravenosa incluye el cateterismo y la angioplastia.

Las micropartfculas contienen normalmente una o mas macromoleculas. La o las macromoleculas (normalmente una o mas macromoleculas bioactivas y/o una o mas macromoleculas portadoras) pueden corresponder al menos al 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, o 98%, y hasta el 100%, o menos del 100%, en peso y/o volumen de la micropartfcula, o pueden estar presentes en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores. Los especialistas en la tecnica entenderan que la macromolecula puede ser una parte (por ejemplo fragmento, segmento, subunidad) de otra macromolecula mayor. Tambien se entendera que las macromoleculas incluyen moleculas de afinidad, que pueden ser, por ejemplo, partes de receptor o de ligando de una interaccion receptor- ligando. Ejemplos no exclusivos de ligandos incluyen virus, bacterias, polisacaridos o toxinas que actuan como antfgenos para generar respuestas inmunitarias cuando son administrados a un animal y provocan la produccion de anticuerpos.

La micropartfcula puede comprender uno o mas ingredientes ademas de las macromoleculas descritas mas arriba y los principios activos descritos mas abajo, incluyendo, de forma no exclusiva, polfmeros, agentes complejantes, agentes estabilizadores, excipientes, iones, humedad, disolventes residuales, impurezas, productos secundarios, en una cantidad del 50% o menos, el 30% o menos, el 20% o menos, el 10% o menos, el 5% o menos, o el 2% o menos, o mas del 0%, en peso y/o volumen de la micropartfcula, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores. Adicionalmente, cualquier ingrediente presente en el medio de reaccion/incubacion (por ejemplo materiales no volatiles) durante la formacion de las micropartfculas se puede retirar despues y por ello no estar presente en las micropartfculas resultantes. Inmediatamente despues de su formacion (que puede ser o no in situ) o en una etapa posterior, las micropartfculas se pueden dispersar (por ejemplo como coloides o suspensiones) en una fase solida continua (por ejemplo un solido congelado que incluye la dispersion) o en una fase no solida (por ejemplo un medio fluido, como el medio de reaccion/incubacion en el que se forman las micropartfculas, o un medio de lavado).

Las micropartfculas pueden tener una densidad esencialmente igual o diferente (por ejemplo mayor o menor) a la de la fase continua (medida a la misma temperatura, por ejemplo temperatura ambiente). Las densidades de las micropartfculas y la fase continua son iguales a su peso respectivo dividido entre su volumen respectivo. Las micropartfculas pueden tener una densidad menor, igual o mayor que valores tales como 0,8 g/cm3, 0,95 g/cm3, 1,0 g/cm3, 1,05 g/cm3, 1,1 g/cm3, 1,3 g/cm3, 1,35 g/cm3, 1,5 g/cm3 y 1,9 g/cm3, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores, por ejemplo entre 1,0 g/cm3 y 1,5 g/cm3 o entre 1,2 g/cm3 y 1,5 g/cm3. La densidad de las micropartfculas se puede medir porpicnometrfa de helio a temperatura ambiente, mediante tecnicas de gradiente de densidad (por ejemplo utilizando centrifugacion o ultracentrifugacion) empleando un medio de gradiente adecuado (por ejemplo sales de metales alcalinos, como NaCl, NaBr, Nal, KBr, CsF, CsCl, CsBr, sulfato de cesio, acetato de cesio, trifluoroacetato de cesio, RbCl y tartrato de potasio; moleculas solubles en agua, como sacarosa, con adicion opcional de glucosa, glicerol o aceite mineral; macromoleculas hidrofilas como dextrano, copolfmero de sacarosa- epiclorohidrina y seroalbumina bovina; otras moleculas sinteticas como sales sodicas o metil glucamfnicas de acido triyodobenzoico y de acido metrizoico, y metrizamida), y otros metodos conocidos. Los metodos normalizados que implican tecnicas de gradiente de densidad incluyen AsTm D1505-03, ASTM D1505-98, e ISO 1183-2.

Agentes activos

Uno o mas agentes activos estan normalmente asociados y/o atrapados de forma covalente y/o no covalente con al menos una parte (por ejemplo el centro o nucleo, uno o mas compartimentos distribuidos de forma especffica o aleatoria, superficies interiores y/o exteriores) de la micropartfcula. Por ejemplo, el o los agentes activos pueden

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estar asociados y/o atrapados de forma covalente y/o no covalente con al menos una parte o esencialmente la totalidad de una o mas macromoleculas (por ejemplo, macromoleculas bioactivas y/o macromoleculas portadoras) y/o uno o mas ingredientes adicionales (por ejemplo con uno o mas polfmeros, como complejos o conjugados de los mismos).

El agente activo puede ser un agente farmaceutico. Dependiendo de su efecto y/o aplicacion, el agente farmaceutico incluye, de forma no exclusiva, adyuvantes, agentes adrenergicos, bloqueantes adrenergicos, adrenocorticoides, adrenolfticos, adrenomimeticos, alcaloides, agentes alquilantes, inhibidores alostericos, esteroides anabolicos, analepticos, analgesicos, anestesicos, anorexigenicos, antiacidos, antialergicos, agentes antiangiogenesis, antiarrftmicos, antibacterianos, antibioticos, agentes anticancer tales como paclitaxel y compuestos derivados, anticolinergicos, anticolesterinasas, anticoagulantes, anticonvulsivos, agentes antidemencia, antidepresivos, agentes antidiabeticos, antidiarreicos, antfdotos, antiepilepticos, antifolatos, antifungicos, antfgenos, antihelmfnticos, antihistaminas, hipolipemiantes, antihipertensores, antiinfecciosos, antiinflamatorios, antipaludicos, antimetabolitos, antimuscarfnicos, antimicobacterianos, agentes antineoplasicos, agentes antiosteoporosis, antipatogenos, antiprotozoicos, moleculas de adhesion, antipireticos, antirreumaticos, antisepticos, antitiroideos, agentes antiulcera, antivirales, sedantes ansiolfticos, astringentes, betabloqueantes, biocidas, factores de coagulacion sangufnea, calcitonina, cardiotonicos, quimioterapeuticos, agentes reductores del colesterol, cofactores, corticosteroides, antitusivos, citoquinas, diureticos, dopaminergicos, moduladores de receptores de estrogenos, enzimas y cofactores de las mismas, inhibidores enzimaticos, factores de diferenciacion de crecimiento, factores de crecimiento, agentes hematologicos, hematopoyeticos, modificadores de hemoglobina, hemostaticos, hormonas y analogos de hormonas, hipnoticos, diureticos hipotensores, agentes inmunologicos, inmunoestimuladores, inmunosupresores, inhibidores, ligandos, agentes reguladores de lfpidos, linfoquinas, muscarfnicos, relajantes musculares, agentes bloqueadores neuronales, agentes neurotropicos, parasimpaticomimeticos, hormona paratiroidea, promotores, prostaglandinas, agentes psicoterapeuticos, agentes psicotropicos, radiofarmacos, receptores, sedantes, hormonas sexuales, esterilizantes, estimulantes, trombopoyeticos, factores troficos, simpaticomimeticos, agentes tiroideos, vacunas, vasodilatadores, vitaminas, xantinas, asf como conjugados, complejos, precursores y metabolitos de los mismos. El agente activo se puede utilizar de forma individual o en combinaciones de dos o mas de los mismos. En un ejemplo, el agente activo es un agente profilactico y/o terapeutico que incluye, de forma no exclusiva, peptidos, carbohidratos, acidos nucleicos, otros compuestos, precursores y derivados de los mismos, y combinaciones de dos o mas de ellos. En un aspecto, el agente activo es un agente farmaceutico denominado convencionalmente como una molecula pequena.

El agente activo puede ser un agente activo bioactivo, por ejemplo una macromolecula bioactiva, tal como una protefna (incluyendo los compuestos proteinaceos arriba descritos), un polipeptido, un carbohidrato, un polinucleotido, un vector (por ejemplo un virus o una partfcula viral), o un acido nucleico, o una combinacion de dos o mas de los mismos. La macromolecula puede ser natural o sintetica. Ejemplos de protefnas incluyen anticuerpos monoclonales y anticuerpos policlonales. La protefna tambien puede ser cualquier protefna terapeutica conocida aislada de fuentes naturales o producida mediante metodos sinteticos o recombinantes. Ejemplos de protefnas terapeuticas incluyen, de forma no exclusiva, protefnas de la cascada de coagulacion sangufnea (por ejemplo Factor VII, Factor VIII, Factor IX, entre otros), subtilisina, ovoalbumina, alfa-1-antitripsina (AAT), DNasa, superoxido dismutasa (SOD), lisozima, ribonucleasa, hialuronidasa, colagenasa, hormona del crecimiento, eritropoyetina, factores de crecimiento de tipo insulfnico o sus analogos, interferones, glatiramer, factor estimulador de colonias de granulocitos-macrofagos, factor estimulador de colonias de granulocitos, anticuerpos, protefnas PEGiladas, protefnas glicosiladas o hiperglicosiladas, desmopresina, agonistas de LHRH tales como: leuprolide, goserelina, nafarelina, buserelina; antagonistas de LHRH, vasopresina, ciclosporina, calcitonina, hormona paratiroidea, peptidos de hormona paratiroidea e insulina.

El agente activo puede ser un agente cosmetico. Ejemplos no limitativos de agentes cosmeticos incluyen emolientes, humectantes, inhibidores de radicales libres, agentes antiinflamatorios, vitaminas, despigmentantes, agentes antiacne, antiseborreicos, queratolfticos, adelgazantes, colorantes para la piel y agentes antisolares. Compuestos utiles como agentes cosmeticos incluyen, de forma no exclusiva, acido linoleico, retinol, acido retinoico, alquilesteres de acido ascorbico, acidos grasos poliinsaturados, esteres nicotfnicos, nicotinato de tocoferol, insaponificables de arroz, semillas de soja o karite, ceramidas, hidroxiacidos tales como acido glicolico, derivados de selenio, antioxidantes, beta-caroteno, gamma-orizanol y glicerato de estearilo. Los agentes cosmeticos pueden ser comerciales y/o se pueden preparar mediante tecnicas conocidas. Al igual que mas arriba, los diversos agentes activos se pueden utilizar de forma individual o en combinaciones de dos o mas de los mismos.

El agente activo puede ser un suplemento nutricional. Ejemplos no limitativos de suplementos nutricionales incluyen protefnas, carbohidratos, vitaminas solubles en agua (por ejemplo vitamina C, vitaminas del complejo B y similares), vitaminas liposolubles (por ejemplo vitaminas A, D, E, K y similares), y extractos de hierbas. Los suplementos nutricionales pueden ser comerciales y/o se pueden preparar mediante tecnicas conocidas. Al igual que mas arriba, los diversos agentes activos se pueden utilizar de forma individual o en combinaciones de dos o mas de los mismos.

El agente activo puede ser un compuesto con un peso molecular de 2 kDa o menos. Ejemplos no limitativos de estos compuestos incluyen esteroides, agonistas p, antimicrobianos, antifungicos, taxanos (agentes antimitoticos y antimicrotubulares), aminoacidos, compuestos alifaticos, compuestos aromaticos y compuestos de urea. Los

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agentes activos conocidos convencionalmente como moleculas pequenas (o moleculas organicas pequenas) son agentes activos representativos,con un peso molecular de 2 kDa o menos.

El agente activo tambien puede ser un agente diagnostico. Los agentes diagnosticos incluyen, de forma no exclusiva, agentes de formacion de imagenes y medios de contraste. Ejemplos no limitativos de agentes de formacion de imagenes por rayos X incluyen 3,5-diacetamido-2,4,6-triyodobenzoato de etilo (WIN-8883, etilester de acido diatrazoico); 6-etoxi-6-oxohexil-3,5-bis(acetamido)-2,4,6-triyodobenzoato (WIN 67722); 2-(3,5-bis(acetamido)-

2.4.6- triyodobenzoiloxi)-butirato de etilo (WIN 16318); diatrizoxiacetato de etilo (WIN 12901); 2-(3,5-bis(acetamido)-

2.4.6- triyodobenzoiloxi)propionato de etilo (WIN 16923); N-etil 2-(3,5-bis(acetamido)-2,4,6-triyodobenzoiloxi-

acetamida (WIN 65312); isopropil2-(3,5-bis(acetamido)-2,4,6-triyodobenzoiloxi)acetamida (WIN 12855); 2-(3,5- bis(acetamido)-2,4,6-triyodobenzoiloximalonato de dietilo (WIN 67721); 2-(3,5-bis(acetamido)-2,4,6-

triyodobenzoiloxi)fenil-acetato de etilo (WIN 67585); [[3,5-bis(acetilamino)-2,4,5-triyodobenzoil]oxi]bis(1-metil) ester de acido propanodioico, (WIN 68165); y 3,5-bis(acetilamino)-2,4,6-triyodo-4-(etil-3-etoxi-2-butenoato) ester de acido benzoico (WIN 68209). Los agentes de contraste preferentes se desintegran deseablemente de forma relativamente rapida bajo condiciones fisiologicas, minimizando asf cualquier respuesta inflamatoria asociada a las partfculas. La desintegracion puede ser el resultado de hidrolisis enzimatica, solubilizacion de acidos carboxflicos bajo pH fisiologico u otros mecanismos. Por consiguiente, pueden ser preferibles los acidos carboxflicos yodados poco solubles tales como la yodipamida, el acido diatrizoico y el acido metrizoico, junto con especies yodadas hidrolfticamente labiles tales como WIN 67721, WIN 12901, WIN 68165 y WIN 68209 u otros.

En una realizacion especffica, el agente activo puede ser un agente terapeutico para la prevencion y/o el tratamiento de afecciones pulmonares. Ejemplos no limitativos de estos agentes incluyen esteroides, agonistas p, antifungicos, antimicrobianos, broncodilatadores, agentes antiasmaticos, antiinflamatorios no esteroideos (NSAIDS), AAT y agentes para tratar la fibrosis qufstica. Ejemplos no limitativos de esteroides para la prevencion y/o el tratamiento de afecciones pulmonares incluyen, de forma no exclusiva, beclometasona (como dipropionato de beclometasona), fluticasona (como propionato de fluticasona), budesonida, estradiol, fludrocortisona, flucinonida, triamcinolona (como acetonido de triamcinolona), flunisolida y sales de los mismos. Ejemplos no limitativos de agonistas p para la prevencion y/o el tratamiento de afecciones pulmonares incluyen sinafoato de salmeterol, fumarato de formoterol, levalbuterol, bambuterol, tulobuterol y sales de los mismos. Ejemplos no limitativos de agentes antifungicos para la prevencion y/o el tratamiento de afecciones pulmonares incluyen itraconazol, fluconazol, anfotericina B y sales de los mismos.

Los agentes activos se pueden utilizar en una combinacion de dos o mas de ellos. Ejemplos de combinaciones no limitativos incluyen un esteroide y un agonista p, por ejemplo propionato de fluticasona y salmeterol, budesonida y formoterol, etc. Los especialistas en la tecnica conocen bien muchas otras combinaciones de agentes terapeuticamente activos viables.

Fase continua

La fase continua de la dispersion multifasica puede ser no solida, por ejemplo una fase lfquida que contiene un disolvente o una mezcla homogenea de dos o mas disolventes (siendo al menos un primer disolvente soluble en al menos un segundo disolvente o miscible con el mismo), o un sistema de fase multiple que incluye al menos dos disolventes inmiscibles. Ejemplos no limitativos de disolventes incluyen fluidos acuosos (por ejemplo agua H2O, D2O, tampones acuosos y otras soluciones acuosas), fluidos no acuosos (por ejemplo disolventes organicos, tampones organicos), y combinaciones de dos o mas de los anteriores. En un aspecto, la fase continua no solida puede ser esencialmente acuosa, por ejemplo puede contener mas de un 10% en volumen, como un 25% o mas, un 50% o mas, o un 75% o mas de agua. La fase continua es acuosa o miscible con lfquidos acuosos.

La fase continua o la(s) fase(s) lfquida(s) de la misma pueden tener una densidad a temperatura ambiente inferior o igual a valores tales como 1,10 g/cm3, 1,05 g/cm3, 1,0 g/cm3, 0,95 g/cm3, 0,9 g/cm3, 0,8 g/cm3, 0,7 g/cm3, 0,6 g/cm3, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores. Cuando se miden a la misma temperatura ambiente, por ejemplo 20°C o 25°C, la fase continua o la(s) fase(s) lfquida(s) tienen normalmente una densidad similar o igual o inferiora la de la fase dispersa o las micropartfculas dentro de la misma. Mas normalmente, la fase continua o la(s) fase(s) lfquida(s) tienen una densidad inferior a la de las micropartfculas.

La fase continua puede contener ademas uno o mas ingredientes disueltos y/o dispersos dentro de la misma, incluyendo, de forma no exclusiva, polfmeros ionicos y/o no ionicos, sales, iones, reactivos en exceso, excipientes (por ejemplo azucares, polioles, agentes tensioactivos) y/o compuestos relacionados con la produccion. Ejemplos no limitativos de sales incluyen acetato de amonio, bicarbonato de amonio y otras sales tampon conocidas por los especialistas en la tecnica. Ejemplos no limitativos de azucares incluyen trehalosa, sacarosa, lactosa y otros carbohidratos conocidos por los especialistas en la tecnica. Ejemplos no limitativos de polioles incluyen manitol y otros alcoholes de azucar conocidos por los especialistas en la tecnica. El o los fluidos y/o solutos de la fase continua pueden ser, independientemente, parcial o totalmente miscibles con lfquidos acuosos, inmiscibles con lfquidos acuosos, solubles en agua y/o insolubles en agua.

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La fase continua contiene al menos un material no volatil solubilizado dentro de la misma. La fase continua, por ejemplo el disolvente de la misma y/o el material no volatil incluido en ella, puede ser soluble en un no-disolvente y/o miscible con el mismo, por ejemplo con una solubilidad en dicho no-disolvente a temperature ambiente de un 10% en peso o mas, por ejemplo igual o mayor que valores tales como 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores. Adicionalmente, la fase continua, el disolvente de la misma y/o el material no volatil incluido en ella pueden ser totalmente miscibles con el no-disolvente. En general son preferibles valores de solubilidad mayores de la fase continua y/o de componentes de la misma en el no-disolvente, ya que dichas solubilidades superiores facilitan la retirada de la fase continua de las dispersiones de acuerdo con los metodos descritos.

Material no volatil

Tal como se ha indicado anteriormente, al menos la fase continua contiene normalmente al menos un material no volatil, siendo las estructuras qufmicas y/o composiciones del o de los materiales no volatiles diferentes a las de la o las macromoleculas que forman las micropartfculas. Se ha de senalar que el material no volatil tambien puede estar presente sobre/dentro de la fase dispersa, por ejemplo, el material no volatil puede estar atrapado dentro de poros de las micropartfculas y/o asociado de otro modo con las micropartfculas.

En general, los materiales no volatiles tienen un punto de ebullicion y/o un punto de inflamacion superior a aproximadamente 100°C, superior aaproximadamente 150°C y/o superior aaproximadamente 200°C. Los materiales no volatiles pueden ser naturales, sinteticos, semisinteticos o recombinantes. El o los materiales no volatiles son normalmente polfmeros no ionicos, que pueden ser independientemente hidrofilos, anfifflicos, solubles en lfquidos acuosos (por ejemplo solubles en agua) y/o miscibles con lfquidos acuosos (por ejemplo miscibles con agua), pero evidentemente tambien se pueden utilizar otros materiales no volatiles, incluyendo polfmeros ionicos y sales de materiales no ionicos. El o los materiales no volatiles pueden reducir ventajosamente, de forma independiente o colectiva, la solubilidad de una o mas macromoleculas en la fase continua (y por tanto de las micropartfculas formadas a partir de estas), o en el o los disolventes de la misma. Cuando estan presentes en la fase continua, el o los materiales no volatiles normalmente no desnaturalizan ni interaction de forma covalente y/o ionica con la o las macromoleculas de las micropartfculas. Adicionalmente, cuando estan presentes en la fase continua, el o los materiales no volatiles normalmente no forman complejos, conjugados, agregados y/o aglomerados entre sf, ni se unen de otro modo, por ejemplo via covalente, ionica y/u otras interacciones. Ademas, el o los materiales no volatiles en la fase continua normalmente no experimentan gelificacion (por ejemplo formando un hidrogel), ni por sf mismos ni con otros ingredientes presentes en la fase continua. En general, el o los materiales no volatiles tienen independientemente pesos moleculares iguales o superiores a valores tales como 200 dalton, 300 dalton, 400 dalton, 600 dalton, 800 dalton, 1.000 dalton, 1.500 dalton, 2.000 dalton, 2.500 dalton, 3.000 dalton, 3.500 dalton,

4.000 dalton, 5.000 dalton, 8.000 dalton, y 10.000 dalton, o hasta aproximadamente 3.000 kilodalton (kd), o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores, por ejemplo entre 200 dalton y 10.000 dalton, entre 200 dalton y 800 dalton, entre 1.000 dalton y 1.500 dalton, entre 1.000 dalton y 2.000 dalton, entre 1.000 dalton y 2.500 dalton, entre 1.000 dalton y 3.000 dalton, entre 1.000 dalton y 3.500 dalton, entre 1.000 dalton y 4.000 dalton, entre 1.000 dalton y 5.000 dalton, entre 1.000 dalton y 8.000 dalton, entre 1.000 dalton y 10.000 dalton, entre 1.500 dalton y

2.000 dalton, entre 1.500 dalton y 2.500 dalton, entre 1.500 dalton y 3.000 dalton, entre 1.500 dalton y 3.500 dalton, entre 1.500 dalton y 4.000 dalton, entre 1.500 dalton y 5.000 dalton, entre 1.500 dalton y 8.000 dalton, entre 1.500 dalton y 10.000 dalton, entre 2.000 dalton y 2.500 dalton, entre 2.000 dalton y 3.000 dalton, entre 2.000 dalton y 3.500 dalton, entre 2.000 dalton y 4.000 dalton; entre 2.000 dalton y 5.000 dalton, entre 2.000 dalton y 8.000 dalton, entre 2.000 dalton y 10.000 dalton, etc.

Ejemplos no limitativos de materiales no volatiles para la fase continua incluyen los polfmeros no ionicos solubles en agua y/o miscibles con agua dados a conocer en las Patentes US n° 5.525.519, 5.554.730, 5.578.709, 5.599.719, 5.981.719, 6.090.925, 6.268.053 y 6.458.387, las Publicaciones US n° 20030059474, 20030064033, 20040043077, 20050048127, 20050142201, 20050142205, 20050142206, 20050147687, 20050170005, 20050233945,

20060018971, 20060024240, 20060024379, 20060260777, 20070092452, 200702072I0, y 20070281031, cuyas divulgaciones se incorporan aquf por referencia en su totalidad. Normalmente, el o los materiales no volatiles son no ionicos y pueden ser hidrofilos, anfifflicos, solubles en lfquidos acuosos, miscibles con lfquidos acuosos, y/o solubles o miscibles en un fluido soluble en lfquidos acuosos o miscible con lfquidos acuosos a una temperatura de 40°C o inferior. Ejemplos no limitativos de materiales no volatiles adecuados pueden ser lineales, ramificados o cfclicos y pueden incluir polieteres no ionicos, copolieteres no ionicos, poliesteres no ionicos, copoliesteres no ionicos, copolfmeros polieter-poliester no ionicos, polfmeros vinflicos no ionicos, polfmeros que contienen pirrolidona no ionicos, carbohidratos polimericos no ionicos, derivados y sales de los mismos, y combinaciones de dos o mas de ellos. Ejemplos no limitativos de polieteres no ionicos y copolieteres no ionicos (incluyendo copolfmeros y terpolfmeros) incluyen, de forma no exclusiva, polieteres con grupos terminales hidroxflicos (por ejemplo, polieter alcoholes, polieter polioles, polieteres con extremos terminados en oxido de etileno diferentes a los polietilenglicoles) y derivados de los mismos con extremos terminados con alquilo (por ejemplo metilo, etilo, propilo, butilo, etc.), como polialquilenglicoles (por ejemplo polioxi-1,2-alquilenglicoles como polietilenglicoles y polipropilenglicoles, asf como politrimetilenglicol eter y politetrametilenoglicol eter), copolieteres con grupos terminales hidroxflicos (por ejemplo copolieter alcoholes, copolieter polioles, copolieteres con extremos terminados con oxido de etileno) y derivados de los mismos con extremos terminados con alquilo (por ejemplo metilo, etilo, propilo, butilo, etc.), tales como

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copolieteres en bloques de dos o mas oxidos de 1,2-alquileno diferentes (por ejemplo copolfmeros de polioxietileno- polioxipropileno como poloxameros) y copolieteres de uno o mas oxidos de 1,2-alquileno y uno o mas de los compuestos tetrahidrofurano, tetrahidropirano y 1,3-propanodiol (por ejemplo copolfmeros de (polietilenglicol)- (politrimetilen glicol eter), copolfmeros de (polietilenglicol)-(politetrametilen glicol eter). Ejemplos no limitativos de poliesteres no ionicos y copoliesteres no ionicos (incluyendo copolfmeros y terpolfmeros) incluyen poliesteres con grupos terminales hidroxflicos, por ejemplo poliesterpolioles, copoliesterpolioles, poliesteres con extremos terminados con oxido de etileno o con grupos terminales polioxietilenicos, y determinados poliesteres de silicona, tales como esteres de acido polioxietileno glicerina dicarboxflico, esteres de acido polioxietilensorbitol dicarboxflico, esteres de acido polioxietilenglicol dicarboxflico, y esteres de polioxietilenalquilo. Ejemplos no limitativos de copolfmeros de polieter-poliester no ionicos (incluyendo terpolfmeros) incluyen, de forma no exclusiva, copolfmeros en bloque de una o mas lactonas y/o acidos dicarboxflicos y uno o mas oxidos de 1,2-alquileno, derivados de la esterificacion de los polieteres no ionicos y copolieteres no ionicos aquf descritos, y derivados de eterificacion de los poliesteres no ionicos y copoliesteres no ionicos aquf descritos, como copolfmeros en bloque (polietilenglicol)- policaprolactona. Ejemplos no limitativos de polfmeros vinflicos no ionicos (incluyendo copolfmeros y terpolfmeros) y polfmeros no ionicos que contienen pirrolidona(incluyendo copolfmeros y terpolfmeros)incluyen, de forma no exclusiva, alcoholes polivinflicos, homopolfmeros y copolfmeros (incluyendo terpolfmeros) de (alquil)acrilatos de hidroxialquilo (por ejemplo acrilato de hidroxietilo, acrilato de hidroxipropilo, metacrilato de hidroxietilo, metacrilato de hidroxipropilo), (alquil)acrilatos de oligo-oxialquileno (por ejemplo acrilatos de oligo-oxietileno, metacrilatos de oligo- oxietileno) y/o (alquil)acrilatos de oligo-oxialquileno con extremos terminados con alquilo (por ejemplo con metilo), polivinilpirrolinas, y homopolfmeros y copolfmeros que contienen alquenilpirrolidona.

Ejemplos no limitativos de carbohidratos polimericos (incluyendo oligomericos) (con un peso molecular de 200 dalton a 5.000.000 dalton, por ejemplo 500 dalton, 1.000 dalton, 3.000 dalton, 5.000 dalton, 10.000 dalton, 30.000 dalton,

50.000 dalton, 100.000 dalton, 300.000 dalton, 500.000 dalton, 1.000.000 dalton o 3.000.000 dalton, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores) y derivados de los mismos incluyen, de forma no exclusiva, almidon, amilopectina (polisacaridos ramificados), amilosa (polisacaridos lineales), celulosa, goma guar, polisacaridos guar, goma xantana, dextrinas (por ejemplo ciclodextrinas, maltodextrinas), dextranos, polidextrosas, goma gellano, pululano, celodextrinas, beta-glucanos, y derivados de los mismos, por ejemplo esteres no ionicos formados por esterificacion, incluyendo, de forma no exclusiva, benzoatos y alcanoatos tales como acetatos, propionatos, butiratos y hexanoatos; o eteres no ionicos formados por eterificacion, tales como eteres de almidon no ionicos, eteres de amilopectina no ionicos, eteres de amilosa no ionicos, eteres de celulosa no ionicos, eteres guar no ionicos, esteres de almidon no ionicos, esteres de amilopectina no ionicos, esteres de amilosa no ionicos, esteres de celulosa no ionicos, eter esteres de almidon no ionicos, ester eteres de almidon no ionicos, eter esteres de celulosa no ionicos y ester eteres de celulosa no ionicos. Ejemplos no limitativos de eteres de almidon no ionicos incluyen alquilalmidones tales como metilalmidones, etilalmidones, propilalmidones y butilalmidones; hidroxialquilalmidones tales como hidroxietilalmidones (por ejemplo tetraalmidon, pentaalmidon, hetaalmidon), hidroxipropilalmidones, hidroxibutilalmidones e hidroxipentilalmidones; asf como alquilhidroxilalquilalmidones tales como metilhidroxietilalmidones, metilhidroxipropilalmidones y etilhidroxipropilalmidones. Ejemplos no limitativos de eteres de amilopectina no ionicos y eteres de amilosa no ionicos incluyen hidroxietilamilopectinas, hidroxipropilamilopectinas, hidroxietilamilosas e hidroxipropilamilosas. Ejemplos no limitativos de eteres de celulosa no ionicos incluyen alquilcelulosas tales como metilcelulosas, etilcelulosas, propilcelulosas, isopropilcelulosasy butilcelulosas; hidroxialquilcelulosas tales como hidroxietilcelulosas, hidroxipropilcelulosas, hidroxiisopropilcelulosas, hidroxibutilcelulosas e hidroxipentilcelulosas; asf como alquilhidroxilalquilcelulosas tales como metilhidroxietilcelulosas, metilhidroxipropilcelulosas, metilhidroxibutil-celulosas, etilhidroxietilcelulosas, etilhidroxipropilcelulosas, propilhidroxietil-celulosas, propilhidroxipropilcelulosas, isopropilhidroxipropilcelulosas,

butilhidroxipropilcelulosas, pentilhidroxipropilcelulosas y hexilhidroxipropil-celulosas. Ejemplos no limitativos de eteres guar no ionicos incluyen alquilguar polisacaridos tales como metilguar polisacaridos, etilguar polisacaridos, propilguar polisacaridos y butilguar polisacaridos; hidroxialquilguar polisacaridos tales como hidroxietilguar polisacaridos e hidroxipropilguar polisacaridos; asf como alquilhidroxilalquilguar polisacaridos tales como metilhidroxietilguar polisacaridos, metilhidroxipropilguar polisacaridos, etilhidroxipropilguar polisacaridos. Otros carbohidratos polimericos no ionicos incluyen metilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxietilmetilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, etilhidroxietilcelulosa, metiletilhidroxietilcelulosa, butilglicidil eter hidroxietilcelulosa, lauril glicidil eter hidroxietilcelulosa, hidroximetilhidroxietilcelulosa, hidroxietilcelulosa modificada con butilglicidil eter, metilhidroxietilcelulosa, metilhidroxipropilcelulosa, esteres de almidon (por ejemplo almidon modificado con anhfdrido alquilsuccfnico, acetatos de almidon y alquenilsuccinatos de almidon), esteres de celulosa (monobutiratos y monopropionatos de celulosa), eter esteres de celulosa (esteres de acido hidroxialquilcelulosa-2-hidroxicarboxflico), poli(3-hidroxioxetanos). Ejemplos no limitativos de esteres de carbohidrato polimericos no ionicos incluyen aquellos que tienen un grado de sustitucion entre 0,5 y 1,0, por ejemplo entre 0,7 y 0,9, y son solubles en agua. Tambien se pueden utilizar sales ionicas de los materiales no ionicos arriba mencionados, si pueden prepararse. Por ejemplo, tambien se pueden utilizar sales de polisacaridos tales como sulfato de dextrano, sulfato de dextrina y alginato de sodio.

Fase dispersa

La fase dispersa de la dispersion multifasica puede incluir micropartfculas solidas. Normalmente es preferible que las micropartfculas sean esencialmente insolubles en el no-disolvente y/o esencialmente inmiscibles en el no-disolvente,

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por ejemplo con una solubilidad en este a temperatura ambiente inferior al 10% en peso, por ejemplo del 5% en peso o menos, del 3% en peso o menos, del 1% en peso o menos, del 0,5% en peso o menos, del 0,1% en peso o menos, del 0,05% en peso o menos, del 0,01% en peso o menos, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores.

La fase dispersa puede incluir ademas otros materiales en asociacion con las micropartfculas solidas, por ejemplo un material, sal o excipiente no volatil anadido durante la formacion de las micropartfculas. En general no se desea la presencia de estos materiales en las micropartfculas aisladas y, en consecuencia, de forma deseable se retiran de la dispersion. Por consiguiente, es deseable que estos materiales tengan alta solubilidad en el no-disolvente.

No-disolvente

En general, el no-disolvente no esta sometido a ninguna limitacion, siempre que solo se puedan disolver en el mismo cantidades relativamente insignificantes de las micropartfculas. Por tanto, la fase dispersa o al menos las micropartfculas de la misma preferiblemente son esencialmente insolubles en el no-disolvente. En consecuencia, el no-disolvente solo disuelve pequenas cantidades de micropartfculas cuando las micropartfculas migran dentro del no-disolvente o a traves del mismo (y por tanto estan dispersadas al menos de modo transitorio). Mas especfficamente, las micropartfculas tienen normalmente una solubilidad tal en el no-disolvente que no mas de un 5 por ciento en peso (por ejemplo un 3% en peso o menos, un 1% en peso o menos, un 0,5% en peso o menos, un 0,1% en peso o menos, un 0,05% en peso o menos y/o un 0,01% en peso o menos, o en un intervalo entre dos de estos valores) se disuelve cuando las micropartfculas estan dispersas en el no-disolvente. Se ha comprobado que la solubilidad relativamente baja de las micropartfculas en el no-disolvente reduce ventajosamente la formacion de agregados de micropartfculas observada en las micropartfculas recogidas en relacion con metodos anteriores para el procesamiento de micropartfculas donde las micropartfculas se procesaban o recogfan directamente en/de la fase continua de la dispersion original.

El no-disolvente puede incluir un unico componente no-disolvente solo o una combinacion de dos o mas de los mismos. En general, al menos un componente o una parte (por ejemplo una capa) del no-disolvente tiene una densidad (Dn) mayor o esencialmente igual que la de la fase continua (Dc). Normalmente, los componentes del no- disolvente tienen una densidad Dn menor que la de las micropartfculas (Dp). Cuando la densidad de las micropartfculas Dp es mayor que la de la fase continua Dc y mayor o aproximadamente igual que la del no-disolvente Dn, es posible utilizar la centrifugacion para realizar selectivamente una migracion de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo, tal como se describe con mayor detalle mas abajo. Los metodos que utilizan electroforesis no estan similarmente limitados, ya que es posible controlar la direccion del campo electrico aplicado para realizar selectivamente la migracion de las micropartfculas independientemente de los valores de densidad de las micropartfculas, la fase continua y el no-disolvente, tal como se describe con mayor detalle mas abajo.

En algunas realizaciones, el no-disolvente puede comprender un gradiente de densidad formado, por ejemplo, disponiendo cuidadosamente capas de concentraciones menores de un material no volatil sobre capas de concentraciones mayores del material no volatil.

Ademas, en realizaciones alternativas, al menos un componente del no-disolvente puede tener una viscosidad mayor que la de la fase continua de la dispersion original (ademas o en lugar de tener una densidad mayor que la de la fase continua).

El no-disolvente puede contener uno o mas materiales no volatiles solubilizados dentro del mismo. Materiales no volatiles representativos incluyen los dados a conocer mas arriba para ser utilizados en la fase continua. Los materiales no volatiles del no-disolvente pueden ser independientes (por ejemplo iguales o diferentes, por ejemplo en la estructura qufmica y/o el peso molecular) de los contenidos dentro de la dispersion original. En general, los materiales no volatiles de menor peso molecular (al menos en relacion con los materiales no volatiles presentes en la fase continua) son preferibles para su uso en el no-disolvente o como no-disolvente, ya que estos materiales son mas faciles de retirar, por ejemplo estos materiales se pueden retirar utilizando una extraccion con fluidos supercrfticos con dioxido de carbono solo o en combinacion con un codisolvente como etanol. A este respecto, los PEG de menor peso molecular, con pesos moleculares inferiores a 1.000 dalton, como PEG 300, son particularmente utiles. En una realizacion particular, el no-disolvente se puede elegir entre polietilenglicoles lfquidos o poloxameros lfquidos, o combinaciones de dos o mas de los mismos. Tambien es posible utilizar como no- disolvente soluciones acuosas que contienen uno o mas polfmeros no ionicos solubles en agua solubilizados en las mismas.

El no-disolvente puede comprender uno o mas lfquidos acuosos, lfquidos no acuosos, o combinaciones de dos o mas de los mismos (alternativa o adicionalmente al material o los materiales no volatiles). El no-disolvente puede contener ademas estabilizadores, sales, antioxidantes y combinaciones de dos o mas de estos.

Los lfquidos acuosos utiles para el no-disolvente incluyen H2O, D2O, tampones acuosos y cualquier otra solucion acuosa. Las soluciones acuosas adecuadas pueden contener solutos solubilizados, incluyendo, de forma no exclusiva, sales tampon que tienen amonio, Na+ y K+ como cationes y/o acetato y bicarbonato como aniones, otras

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sales, incluyendo, de forma no exclusiva, NaCI, estabilizadores (por ejemplo histidina y sales de la misma), antioxidantes (por ejemplo EDTA), azucares (por ejemplo sacarosa, trehalosa, lactosa, maltosa), materiales de gradiente de densidad (por ejemplo sales de metales alcalinos tales como NaCl, NaBr, Nal, KBr, CsF, CsCl, CsBr, sulfato de cesio, acetato de cesio, trifluoroacetato de cesio, RbCl, y tartrato de potasio; moleculas neutras, solubles en agua, tales como sacarosa con adicion opcional de glucosa; glicerol; aceite mineral; macromoleculas hidrofilas tales como dextrano, copolfmero de sacarosa-epiclorohidrina y seroalbumina bovina; otras molecula sinteticas tales como sales sodicas o metil glucamfnicas de acido triyodobenzoico y acido metrizoico; y metrizamidas), polioles, agentes tensioactivos, excipientes, y combinaciones de dos o mas de los mismos. En "Centrifugation in Density Gradients," C. A. Price, Academic Press, Nueva York, 1982 se describen materiales y tecnicas para la centrifugacion de gradiente de densidad. Los metodos normalizados que implican tecnicas de gradiente de densidad incluyen ASTM D1505-03, ASTM D1505-98, e ISO 1183-2.

Los lfquidos no acuosos utiles para el no-disolvente incluyen lfquidos organicos aproticos polares (o aproticos dipolares) tales como cetonas, nitrilos, esteres, aldehfdos, N,N-dimetilformamida; lfquidos organicos aproticos no polares tales como eteres (por ejemplo eteres metoxilados, eteres alquilados, dieteres, trieteres, eteres cfclicos, eteres corona); y lfquidos organicos terciarios tales como alcoholes terciarios, acidos terciarios, amidas terciarias. Lfquidos organicos representativos especfficos para su uso en el no-disolvente incluyen 2-metil-2-propanol, 2- dimetil-2-butanol, 3-metil-3-heptanol, alcohol t-amflico, glicerina, N,N-dimetilformamida (DMF), dimetilsulfoxido (DMSO), acetona, acetonitrilo, acetato de etilo, acetato de isopropilo, acetato de butilo, acetato de propilo, carbonatos (por ejemplo carbonato de dimetilo, carbonato de etilmetilo, carbonato de dietilo, carbonato de etilpropilo, carbonato de dipropilo, e isomeros de los mismos), carbonatos cfclicos (por ejemplo carbonato de etileno, carbonato de propileno, carbonato de butileno, carbonato de pentileno, e isomeros de los mismos), triamida hexametilfosforica (HMPA), tetrahidrofurano (THF), N,N-dimetilacetamida, N-metil-2-pirrolidona, tetrametilurea, dioxano, diclorometano, 1,2-dicloroetano, dimetoxietano, dietilenglicoldimetil eter, diisopropil eter, glicofurol, hidrocarburos (lineales, ramificados o cfclicos) tales como pentano, hexano, heptano, ciclohexano, tolueno o xileno, metil etil cetona, isobutil metil cetona, mentol, timol, alcanfor, imidazol, cumarina, dimetilsulfona, urea, vainillina, canfeno, salicilamida, piridina, 2-aminopiridina, pirimidina, piperidina, y combinaciones de dos o mas de los mismos.

Otros lfquidos no acuosos utiles para el no-disolvente incluyen lfquidos organicos miscibles con lfquidos acuosos tales como citrato de acetiltributilo, citrato de acetiltrietilo, alcohol bencflico, butirolactona, caprolactama, decilmetilsulfoxido, diacetina, ftalato de dietilo, tartrato de dietilo, dietilenglicoldimetil eter, dimetoxietano, dimetiletilamida, dimetilformamida, dimetilsulfoxido, 1-dodecilazacicloheptan-2-ona, etanol, acetato de etilo, lactato de etilo, carbonato de etileno, etilenglicol, oxido de etileno, glicerina, glicerina formal, glicofurol (tambien denominado "tetraglicol" o " eter polietilenoglicolico de alcohol tetrahidrofurfurflico"), isopropanol, metanol, acetato de metilo, metil etil cetona, 2-metil-2-propanol, N-metil-2-pirrolidona, octanol, polisorbatos (por ejemplo 20, 40, 60, 65, 80), carbonato de propileno, propilenglicol, oxido de propileno, 2-pirrolidona, fluido silicona, tetraetilenglicol, tetrahidrofurano, triacetina, citrato de tributilo, tributirina, citrato de trietilo, fosfato de trietilo, y combinaciones de dos o mas de los mismos. En un ejemplo particular, el no-disolvente puede contener uno o mas de los compuestos PEG, poloxameros lfquidos, glicofurol, tetraetilenglicol, agua y/o tampon acuoso, y un alcohol.

Otros ejemplos de lfquidos no acuosos utiles para el no-disolvente incluyen lfquidos halogenados. Ejemplos no limitativos de lfquidos halogenados incluyen derivados parcialmente halogenados (fluorados, clorados, bromados y/o yodados) y perhalogenados (perfluorados, perclorados, perbromados y/o peryodados) de los lfquidos organicos dados a conocer aquf (como tricloro-t-butanol, perfluoro-t-butanol), clorocarbonos, clorohidrocarburos, perclorocarbonos, percloroalcanos, hidrocloroeteres, fluorocarbonos, fluorohidrocarburos, perfluorocarbonos, perfluoroalcanos, hidrofluoreteres, bromocarbonos, bromohidrocarburos, clorofluorocarbonos, hidroclorofluorocarbonos, cloroperfluorocarbonos, hidroclorofluoroeteres, y mezclas de dos o mas de los mismos.

Cuando se utiliza en metodos de centrifugacion, el no-disolvente preferentemente tiene una volatilidad similar o mayor que la del agua y una densidad mayor que la del agua. Por tanto, el no-disolvente o al menos un lfquido no acuoso incluido en este puede tener un punto de ebullicion inferior o igual a 100°C y una densidad superior a 1 g/cm3. Ejemplos no limitativos de lfquidos no acuosos que tienen una volatilidad similar o mayor que la del agua y una densidad mayor que la del agua incluyen disulfuro de carbono, acido lactico, determinados clorofluorocarbonos (por ejemplo 1,1,2-triclorotrifluoroetano, triclorofluorometano), determinados hidroclorofluorocarbonos (como diclorofluorometano), determinados perfluorocarbonos (por ejemplo perfluoropentano, perfluorohexano, perfluoroheptano, perfluoro-N-metilmorfolina), determinados perfluor eteres (como perfluoro-2-butiltetrahidrofurano), y determinados hidrofluoreteres.

La siguiente Tabla 1 muestra determinados lfquidos no limitativos adecuados para el no-disolvente y sus caracterfsticas.

Tabla 1

mr b

Lfquido

Densidad a PE b O CL Sol. d LD50e PV f

Acido acetico

1,05 118 16,6 M 3,3 2,11

Tetracloruro de carbono

1,59 76,7 -22,4 0,05 2,3 15

Cloroformo

1,50 61,2 -63,5 0,8 0,7 25,9

Dietilenglicol

1,12 245 -10 M 13 <0,01

DMSO

1,09 189 18,4 M 18 0,08

Etilenglicol

1,12 197 -13 M 4,7 <0,01

Glicerol

1,26 290 17,8 M 13 <0,01

Cloruro de metileno

1,32 39,8 -96,7 1,32 1,6 46,7

Agua pesada, D2O

1,11 101,3 4 M NT 2,19

Perfluorohexano

1,68 59 -4 10 ppm 5 23,6

1,1,1 -trifluorotolueno

1,189 103 -29 15 42,8

CFCl3

1,49 24 -111 0,11 0,45 0,013

Disulfuro de carbono

1,27 46 -112 <1% 3,2

Nitrometano

1,138 101 -29

Carbonato de etileno

1,321 243 35 M 10 0,02

Sulfolano

1,262 287 28,5 M 1,94

Carbonato de propileno

1,189 240 -55 23% 29

Acido trifluoroacetico (TFA)

1,489 72 -15 M 0,5

2,2,2-trifluoroetanol

1,393 79 -44 0,24

Acido formico

1,22 101 8,3 M 1,21

Formamida

1,133 211 2,6 5,5

Propilenglicol

1,04 188,2 -60 M 22

Trimetilenglicol

1,05 214,4 -26,7 M 4,77

Propilenglicolmonofenil eter

1,063 242,7 12,78 1,1 2,83

Difenflic eter

1,066 258 26,87 3,37

Etilenglicol monobencil eter

1,07 265 4 1,19

Oxalato de dietilo

1,08 185,4 -40,6 0,4

Acido lactico, metilester

1,09 145 descomp. 2

Trietilenglicol

1,119 287,4 -7,2 M 17

Gamma-butirolactona

1,125 204 -44 M 1,54

Alcohol furfurflico

1,1285 171 -29 M 0,275

Tetraetilenglicol

1,13 327,3 -4 M 29

Furfural

1,1545 161,8 -36,5 0,05

Trioxano

1,17 114,5 64 soluble 3,2 1,73

Acido lactico

1,206 83,5 18 M 3,7, 3,5 2,53

1,1,1-tricloroetano

1,32 74,1 -30,4 0,15 9,6

Diclorofluorometano

1,366 8,9 -135 NT 181

1,2-diclorotetrafluoroetano

1,455 4,1 -94 0,13 2,25

T riclorofluorometano

1,476 23,63 -110,5 0,11 NT

Acido metanosulfonico

1,48 167 20 0,2

1,1,2-tricloroetileno

1,5, 1,44 86,7 -84,8 0,11 2,4

Alcohol pentafluoropropflico

1,51 80 soluble 1

1,1,2-triclorotrifluoroetano

1,564 47,63 -36,4 0,017 43

Ftalato de dibutilo

N-metilpirrolidona

1,03 202 -25 100% 4,15

Acido lactico, etilester

Tetrahidropirano-2-metanol

1,4-dioxano

Dietilenglicolmetil eter

1,02 194 100%

Acetato de etilenglicol metil eter

Acetato de dietilenglicolmonoetil eter

1,3-butanodiol

1 -metoxi-2-propanol

Perfluoropentano, C5F12

1,65 30

Perfluoro-N-metilmorfolina

1,71 50

Perfluorohexano

1,67 56 0,03 5

Perfluoroheptano, C7F16

1,73 77-87

Perfluorooctano, CaF1e

1,76 101 l

Perfluorotripropilamina, perfluamina, C9F21N

1,82 128

Lfquido

Densidad a PE b O CL Sol. d LD50e PV f

Perfluoro-N,N,N',N'- tetrapropilhexanodiamina

1,9 254

gFluorinert® FC-40, mezcla de perfluorotributilamina y perfluorodibutilmetilamina

1,85 155 -57 7 ppm NTO 0,43

Fluorinert® FC-43, C12F27N, perfluorotributilamina

1,86 174 -50 7 ppm 10 0,19

Fluorinert® FC-70, C15F33N, perfluorotriamilamina,

1,94 215 -25 8 ppm NTO 0,015

Fluorinert® FC-71

2 253 0,027

Fluorinert® FC-72

1,68 56 -90 10 ppm NTO 30,9

Fluorinert® FC-75, compuestos C8 perfluoro como C8F16O, perfluoro-2- butiltetrahidrofurano

1,8 102 -88 4,13

Fluorinert™ FC-77

1,78 97 -110 13 ppm 5,62

Fluorinert™ FC-84

1,73 80 -95 11 ppm 10,6

Fluorinert™ FC-87

1,65 30 -115 7 ppm 81,1

Fluorinert™ FC-104

1,76 101 -65 11 ppm 3,87

Fluorad™ FC-722

1,7 56 30,9

Fluorinert™ FC-3255

1,77 103 -30 11 ppm 4,15

Fluorinert™ FC-3283

1,82 128 -50 7 ppm NTO 1,44

Fluorinert™ FC-3284

1,71 50 -73 14 ppm NTO 35,7

Fluorinert™ FC-5311, tetracosafluorotetrafenantreno

2 215 0,015

Fluorinert™ FC-5312, compuestos C15 perfluoro

1,94 215 -25 8 ppm 0,015

gPF-5050

1,63 30 -115 14 ppm

PF-5052

1,7 50 -80 14 ppm 81,1

PF-5056

1,8 25-80 <15 ppm

PF-5058

1,75 80-100 <15 ppm

PF-5060 y PF-5060DL, C6F14

1,68 56 -90 10 ppm >5

PF-5070, C7F16

1,73 80 -95 11 ppm

PF-5080, C8F18

1,77 101 -30 11 ppm >5

PFG-3480, C4F8O, octafl uorotetrahid rofu rano

1,52 0,8 -83

gNovec™ HFE-7000, 3M fluidos tecnologicos, hidrofluoroeteres, 1-metoxiheptafluoropropano

1,4 34 -122,5 60 ppm >2 64,6

Novec™ HFE-7100, metoxinonafluorobutano

1,51 60 -135 95 ppm >5 26,8

Novec™ HFE-71DE, 50% C4F9OCH3 y 50% t-DCE

1,37 41 -24 324 ppm 21 51,1

Novec™ HFE-71DA, 52,7% C4F9OCH3, 44,6% t- DCE, y 2,7% etanol

1,33 40 -29

Novec™ HFE-71IPA, 95,5% C4F9OCH3 y 4,5% isopropanol

1,48 55 -42

Novec™ HFE-7200, etoxinonafluorobutano

1,42 76 -138 92 ppm >5 15,7

Novec™ HFE-72DE, mezcla de 10% C4F9OCH3, 20% C4F9OC2H5, y 70% t- DCE

1,28 43 360 ppm >100, >92, 24

Novec™ HFE-72DA, mezcla de 10% C4F9OCH3, 20% C4F9OC2H5, 68% t- DCE, y 2% isopropanol

1,27 44 -138 48,0

Novec™ HFE-7500, 2-trifluorometil-3- etoxidodecafluorohexano

1,61 130 -110 45 ppm >2 2,1

Novec™ HFE-8200

1,43 76 -138 92 ppm >5

Novec™ 1230 dodecafluoro-2- metilpentan-3-ona

1,6 49,2 -108 >100 l

gHFC-4310, C5H2F10

1,73 80 -95 490 ppm

HFC-4310mee, C5H2F10

1,58 54 400 ppm 11 l

Lfquido

Densidad a PE b O CL Sol. d LD50e PV f

HFC-4310 mezcla azeotropica, 62% C5H2F10, 38% t-DCE

1,41 39 61,9

HFC-4310SMT, 52.9% C5H2F10, 43% t- DCE, 4% metanol, 0,1% estabilizador

1,37 37 -10 62,8

HCFC-225, C3Cl2F5H

1,55 54 -131 310 ppm 37 l 38,7

hAK-225 AES, mezcla azeotropica de 95,5% C3Cl2HF5 y 4,5% etanol

1,49 52 -138 55,2

Bromuro de n-propilo, CsHyBr

1,35 71 -110 500 ppm

1,1,1-TCA, CH3CCl3

1,32 74 -39 170 ppm 16

Pentafluorobenzeno, C6F5H

1,51 85 -48 2

C7F15OC2H5

1,61 128 -100 >2

1Galden HT -135

1,73 135 -100

JGenetron® HFC-134a, CF3CH2F

1,21 -26,2 -92,5 0,11% 62 l

JGenesolv® 2000 HFC-141b, CCl2FCHa

1,24 32 -103 420 ppm >5 75,9

Genesolv® 2004, mezcla azeotropica de 95,8% CChFCHa, 3,9% metanol y 0,3% nitrometano

1,22 29,4 70,3

Genesolv® S-F, 1,1,1,3,3- pentafluoropropano, HFC-245fa

1,32 15 -142 1600 ppm >200 l

Genesolv® S-T, mezcla azeotropica de 65% SF y 35% t-DCE

1,32 15,7 -103 >200 l

Genesolv® S-TZ, mezcla azeotropica de 87% SF y 13% t- DCE

1,34 15 -103 >200 l

Genesolv® D series DSTD y DEG, CFC-113, CCl2FCClF2

1,56 48 -35 110 ppm 55 l 44,1

gFreon® TE, mezcla azeotropica de 96% C2ClaFa y 4% etanol

1,5 45 -42 48,3

PEG 200

1,11 250 -65-50 M 28,0 <0,01

PEG 300

1,12 250 -15-10 M 27,5 <0,01

PEG 400

1,125 250 -6-8 M 30,2 <0,01

PEG 500

1,13 250 M <0,01

PEG 540

1,13 250 M <0,01

PEG 600

1,14 250 15-25 M 38,1 <0,01

Pluronic® L-10 (MW 3200)

1,04 -5 >10% >2 <0,01

Pluronic® L-24

>2

Pluronic® L-31 (MW 1100)

1,02 -32 >10% >2

Pluronic® L-35 (MW 1900)

1,06 7 >10% >2

Pluronic® L-42 (MW 1630)

1,03 -26 >2

Pluronic® L-43 (MW 1850)

1,04 -1 >10% >5

Pluronic® L-44 (MW 2200)

1,05 16 >10% >5

Pluronic® L-44NF (MW 2200)

1,05 16 >10% >5

Pluronic® L-61 (MW 2000)

1,01 -29 <0,1% >5

Pluronic® L-62 (MW 2500)

1,03 -4 >10% >2

Pluronic® L-62D (MW 2360)

1,04 -1 <10% >5

Pluronic® L-62LF (MW 2450)

1,03 -10 >10% 5

Pluronic® L-63 (MW 2650)

1,04 10 >2

Pluronic® L-64 (MW 2900)

1,05 16 >10% >2

Pluronic® L-68

>2

Pluronic® L-72 (MW 2850)

1,03 -7 >2

Pluronic® L-81 (MW 2750)

1,02 -37 <0,1% >2

Pluronic® L-92 (MW 3650)

1,03 7 <10% >2

Pluronic® L-101 (MW 3800)

1,02 -23 <0,1% >5

Pluronic® L-121 (MW 4400)

1,01 5 <1% >2

Pluronic® L-122 (MW 5000)

1,03 20 <1& >2

Pluronic® L-123 (MW 5750)

>2

Pluronic® N-3

1,04 -7 >5

Pluronic® 10R5 (MW 1950)

1,06 15 >10% >2

Pluronic® 17R2 (MW 2150)

1,03 -25 >10% >2

Pluronic® 17R4 (MW 2650)

1,05 18 >10% >5

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Liquido

Densidad a PE b PC c Sol. d LD50e PV f

Pluronic® 25R2 (MW 3100)

1,04 -5 >10% >2

Pluronic® 25R4 (MW 3600)

1,05 25 >10% >2

Tetronic® 304 (MW 1650)

1,06 -11 >10% >2

Tetronic® 701 (MW 3600)

1,02 -21 <1% >2

Tetronic® 704 (MW 5500)

>2

Tetronic® 901 (MW 4700)

1,02 -23 <0,1% >2

Tetronic® 904 (MW 6700)

1,04 29 >10% >2

Tetronic® 1301 (MW 6800)

1,02 -9 <1% >2

Tetronic® 90R4 (MW 6900)

1,05 12 >10% >5

Tetronic® 150R1 (MW 8000)

1,01 -17 <0,1% >2

Glicofurol

1,07 >50% 7,8

Tetraetilenglicol

1,12 -5,6 >2

aDensidad en estado liquido, medida a temperatura ambiente, como 25°C.

bPunto de ebullicion (PE),°C.

cPunto de congelacion/fusion (PC),°C.

dSolubilidad (Sol) del agua en el liquido, en g/100 g o ppm (partes por millon en peso), a temperatura ambiente, como 20-25°C.

eLD50, en g/kg de peso corporal, cantidad minima de liquido indicada en la literatura que, al ser administrada a ratas via oral en una sola toma (toxicidad aguda), provoca la muerte del 50% de las ratas analizadas. fPresion de vapor (PV) en kPa a temperatura ambiente, como 20-25°C.

gTodos los productos Fluorinet™, Fluorad™, Novec™, Performance Fluids (PF), Secondary Fluid (SF) estan disponibles en 3M, St. Paul, MN.

hLas series AK-225 de materiales lfquidos estan disponibles en AGC Chemicals Americas, Inc., Bayonne, NJ. iLas series de lfquidos Galden® y Perfluorosolv® estan disponibles en Solvay Solexis, Inc., Thorofare, NJ.

'Las series de lfquidos Genetron® y Genesolv® estan disponibles en Honeywell, Morristown, NJ. kLas series de lfquidos Freon® disponibles en DuPont-Mitsui Fluorochemicals Co. Ltd., Tokio, Japon.

'Miscible (M) con agua._____________________________________________________________________

Realization selectiva de una migration de las microparticulas

Los metodos facilitan la realizacion selectiva de una migracion de las microparticulas dentro del no-disolvente o a traves del mismo para permitir la recogida de las microparticulas. Los metodos facilitan la separacion de una mayorfa de las microparticulas de la dispersion, por ejemplo al menos un 50%, al menos un 60%, al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90% de las microparticulas. Algunos metodos no limitativos para lograr la migracion de las microparticulas incluyen, al menos en parte, centrifugacion, electroforesis y otros medios mecanicos.

Ventajosamente se puede llevar a cabo una migracion de las microparticulas dentro de un no-disolvente que es un diluyente farmaceuticamente aceptable, de modo que las microparticulas se pueden administrar a un sujeto sin necesidad de ningun procesamiento adicional, por ejemplo sin necesidad de realizar un paso de secado (por ejemplo liofilizacion o evaporacion bajo presion reducida y/o temperatura elevada) o un paso de reconstitucion subsiguiente. Resulta ventajoso evitar estos pasos de procesamiento porque requieren mucha energfa, consumen tiempo y no se convierten facilmente en una operacion de flujo continuo. Ademas, la liofilizacion puede inducir una desnaturalizacion y agregacion de muchas macromoleculas, como protefnas.

Mediante el empleo de tecnicas no limitativas, como la centrifugacion, se puede realizar una migracion de las microparticulas dentro del no-disolvente o a traves del mismo hasta un lugar (por ejemplo dentro del no-disolvente, en una zona interfacial entre el no-disolvente y su recipiente, o mas alla del no-disolvente) al que no puede llegar la mayor parte de la fase continua de la dispersion original o al menos el material no volatil incluido en esta, logrando asf la separacion de las microparticulas de la dispersion original. Las microparticulas se pueden concentrar como resultado del proceso de separacion, por ejemplo formando una banda de las mismas en el no-disolvente o formando una pella de las mismas en el fondo y/o en la pared del recipiente.

Utilizando centrifugadorasde angulo fijo o rotores de cubo pivotante, el no-disolvente se puede disponer primero en el tubo de la centrifugadora mediante una sola adicion o multiples adiciones, dependiendo de si se emplea un no- disolvente de un solo componente o multicomponente. Despues, la dispersion se puede disponer en el mismo tubo de la centrifugadora, encima del no-disolvente, sin mezclarlos. Para evitar una mezcla involuntaria no deseada, el no-disolvente que se encuentra dentro del tubo se puede congelar antes de la adicion de la dispersion y luego se puede descongelar despues de la adicion de la dispersion utilizando un ciclo de calentamiento-enfriamiento. La congelacion y/o descongelacion se pueden llevar a cabo antes o despues de cargar el tubo en el rotor de la centrifugadora.

Para la realizacion selectiva de una migracion de las microparticulas, la centrifugadora se puede acelerar a velocidad de operacion (por ejemplo 3.000 x g a 20.000 x g), esta puede funcionar durante un perfodo de tiempo

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predeterminado (por ejemplo de 5 minutos a 1 hora), y despues se puede desacelerar hasta detenerla. El sobrenadante en el tubo, que contiene al menos la mayor parte de la fase continua de la dispersion original, se puede retirar por aspiracion o decantar de otro modo. Tambien es posible aspirar la mayor parte del no-disolvente. Despues se pueden recoger facilmente las micropartfculas en forma de una pella en el fondo del tubo o una banda (por ejemplo una banda isopfcnica) en el no-disolvente.

Cuando se utilizan centrifugadorasde rotores de flujo continuo (por ejemplo Sorvall® Contifuge®, Beckman Coulter's JCF-Z y CF-32 Ti), el no-disolvente se puede bombear primero con un caudal de 100 ml/min a 500 ml/min al interior del rotor con una baja velocidad de rotor. Una vez alcanzada la velocidad de operacion del rotor (por ejemplo de 3.000 x g a 20.000 x g, como de 7.000 x g a 10.000 x g), la dispersion se puede bombear al interior del rotor con un caudal de 100 ml/min a 500 ml/min (por ejemplo de 200 ml/min a 300 ml/min). Las micropartfculas se pueden sedimentar separandose del flujo de corriente de la dispersion como un efluente agotado de micropartfculas que contiene la mayor parte de la fase continua que emerge del rotor. Una vez que la dispersion ha sido bombeada por completo al interior del rotor, se puede bombear un "perseguidor" adecuado (por ejemplo un tampon o agua) al interior del rotor para limpiar las lfneas. Si las micropartfculas forman una pella sobre la pared del rotor, el rotor se puede desacelerar hasta una posicion de parada, el sobrenadante que queda en el rotor se puede decantar, y las micropartfculas se pueden recoger desprendiendo la pella de la pared del rotor por raspado. Si las micropartfculas forman una banda (por ejemplo una banda isopfcnica) en la parte restante del no-disolvente, el rotor se puede desacelerar a baja velocidad. Una solucion densa (por ejemplo el mismo no-disolvente o una parte del mismo, o un no-disolvente diferente) se puede bombear al interior del rotor para desplazar el no-disolvente cargado de micropartfculas, facilitando asf su recogida.

El proceso para separar la fase dispersa o las micropartfculas que se encuentran dentro de esta de la fase continua o del polfmero no ionico que se encuentra dentro de esta se puede llevar a cabo a una temperatura superior a las temperaturas de congelacion de la fase continua y el no-disolvente, e inferior a la temperatura de degradacion de las micropartfculas o de la macromolecula bioactiva que se encuentra dentro de estas, por ejemplo a temperatura ambiente o por debajo de esta, o a temperaturas como 40°C, 37°C, 30°C, 25°C, 20°C, 15°C, 10°C, 5°C, 2°C, 0°C, - 5°C, -10°C, -15°C, -20°C, o por encima o por debajo de estas, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estas temperaturas.

La recogida de micropartfculas puede ser adecuada para el almacenamiento (por ejemplo a temperatura ambiente o a una temperatura menor durante 1 semana a 2 anos o mas) y/o para administracion a un sujeto humano (por ejemplo inyectable o administrable de otro modo con o sin dilucion adicional utilizando el mismo no-disolvente u otros no-disolventes) sin secado ni reconstitucion. La concentracion de la o las macromoleculas bioactivas en la recogida de micropartfculas despues del proceso de separacion se puede aumentar a 50 g/l o mas, por ejemplo a una concentracion mayor o igual a 100 g/l, 150 g/l, 200 g/l, 250 g/l, 280 g/l, 300 g/l, 350 g/l, 400 g/l, 450 g/l, 500 g/l, 550 g/l, 600 g/l, o en un intervalo entre dos cualesquiera de estos valores.

Antes del proceso de separacion, la dispersion se puede concentrar utilizando tecnicas no limitativas, tales como centrifugacion y/o diafiltracion. La diafiltracion se puede llevar a cabo a temperatura ambiente o a una temperatura inferior a esta (por ejemplo 2-8°C). Tambien se puede utilizar un medio de diafiltracion para intercambiar y/o sustituir al menos una parte de la fase continua de la dispersion original. El medio de diafiltracion puede ser un no-disolvente para las micropartfculas, por ejemplo como los aquf descritos. Para el proceso de concentracion se puede utilizar un aparato de diafiltracion conocido por los especialistas en la tecnica, que incluye una bomba peristaltica, un recipiente de deposito, un cartucho de fibras huecas y tubos. Mediante el proceso de concentracion se puede formar una dispersion intermedia que contiene las micropartfculas y el no-disolvente, pudiendo elevarse en gran medida (por ejemplo multiplicar por 2 o mas, multiplicar por 5 o mas, multiplicar por 10 o mas, multiplicar por 20 o mas, o multiplicar por 40 o mas) la concentracion de la o las macromoleculas bioactivas incluidas en la misma en comparacion con la dispersion original, a 1 mg/ml o mas, por ejemplo 10 mg/ml o mas. El o los materiales no volatiles de la fase continua original se pueden retirar parcial o esencialmente durante este proceso de concentracion, o tambien se pueden concentrar simultaneamente en la dispersion intermedia hasta un grado similar al de las macromoleculas bioactivas y/o las micropartfculas.

Ejemplo 1

En primer lugar, se prepararon microesferas de anticuerpo utilizando aproximadamente 10 ml de una solucion de reaccion acuosa (tamponada con acetato de amonio 0,1m, pH 5,8) de aproximadamente 1 mg/ml de anticuerpo (antifactor monoclonal murino VIII, Baxter Healthcare, Hayward, CA) y aproximadamente 150 mg/ml de un ejemplo de material no volatil (un polfmero no ionico, PEG 8000) en un recipiente de reaccion, a una temperatura elevada de aproximadamente 50°C. Despues, la solucion de reaccion se enfrfo a una velocidad controlada sumergiendo el recipiente de reaccion que contenfa la solucion de reaccion en un bano de hielo (aproximadamente 4°C) durante aproximadamente 30 minutos. En el recipiente de reaccion se desarrollo una turbidez, lo que indicaba la formacion de una fase dispersa que contenfa microesferas de anticuerpo en una fase continua que inclufa la solucion acuosa en la que estaba disuelto el PEG 1000. Un volumen (aproximadamente 3 ml) de un no-disolvente (PEG 300) con una densidad mayor que la de la fase continua se dispuso en un tubo de centrffuga conico de polipropileno de 15 ml y se enfrio sobre hielo (aproximadamente 4°C). Utilizando una pipeta, una muestra de aproximadamente 1 ml de la

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suspension de microesferas de anticuerpo se dispuso con cuidado en el tubo de centrffuga, sobre el no-disolvente, sin mezclar esencialmente los dos sistemas. El tubo de centrffuga se centrifugo a 3.000 x g a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 30 minutos para realizar una migracion selectiva de las micropartfculas de la fase continua dentro del no-disolvente y a traves del mismo. En el fondo del tubo de centrffuga se observo una pella de las microesferas de anticuerpo, algunas microesferas se mantenfan en suspension en el no-disolvente y la mayor parte de la fase continua permanecfa sobre el no-disolvente. El sobrenadante (que contenfa la mayor parte de la fase continua y el no-disolvente) se extrajo del tubo de centrffuga por aspiracion y despues se anadieron al tubo de centrffuga aproximadamente 0,2 ml de no-disolvente fresco (PEG 300) para resuspender las microesferas de anticuerpo. Despues se tomo una parte alfcuota de aproximadamente 20 pl de la resuspension para realizar un examen microscopico, que mostro que las microesferas contenidas en la misma aparecfan como partfculas esfericas no aglomeradas con un diametro de aproximadamente 2-3 micras.

Despues de mezclar con aproximadamente un volumen de 1 ml de una solucion fisiologica (PBS), la resuspension restante (aproximadamente 180 pl) se volvio visiblemente clara en un plazo de unos segundos, lo que indicaba que las microesferas de anticuerpo eran solubles en la solucion fisiologica. La mezcla se dializo contra la solucion fisiologica para retirar por completo el no-disolvente (PEG 300) y despues se analizo mediante cromatograffa de exclusion por tamano para evaluar la integridad molecular del anticuerpo resolubilizado. El porcentaje de monomeros del anticuerpo resolubilizado era de aproximadamente el 98%, mientras que el material inicial tenia un contenido de monomeros de aproximadamente un 98,4%. Por consiguiente, estos resultados indican que las moleculas de anticuerpo estaban intactas y que estas no habfan resultado afectadas negativamente por la formacion de microesferas ni por los procesos de separacion del no-disolvente.

Ejemplo 2

En primer lugar, se prepararon microesferas de anticuerpo utilizando aproximadamente 5 ml de una solucion de reaccion acuosa que contenfa aproximadamente 4,75 ml de una solucion de 1 mg/ml de anticuerpo (antifactor monoclonal murino VIII de Baxter Healthcare, Hayward, CA) en tampon PBS (pH 6) y aproximadamente 500 mg de un ejemplo de material no volatil (un polfmero no ionico, poloxamero 188) en un recipiente de reaccion, a una temperatura elevada de aproximadamente 50°C. Despues, la solucion de reaccion se enfrfo a una velocidad controlada sumergiendo el recipiente de reaccion que contenfa la solucion de reaccion en un bano de hielo (aproximadamente 4°C) durante aproximadamente 30 minutos. En el recipiente de reaccion se desarrollo una turbidez, lo que indicaba la formacion de una fase dispersa que contenfa microesferas de anticuerpo en una fase continua que inclufa la solucion acuosa en la que estaba disuelto el poloxamero 188. Un volumen (1 ml) de un no- disolvente (PEG 300) con una densidad mayor que la de la fase continua se dispuso en un tubo de centrffuga conico de polipropileno de 15 ml y se enfrio sobre hielo (aproximadamente 4°C). Utilizando una pipeta, la suspension de microesferas de anticuerpo se dispuso con cuidado en el tubo de centrffuga, sobre el no-disolvente, sin mezclar esencialmente los dos sistemas. El tubo de centrffuga se centrifugo a 3.000 x g a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 30 minutos para realizar una migracion selectiva de las micropartfculas de la fase continua dentro del no-disolvente y a traves del mismo. En el fondo del tubo de centrffuga se observo una pella de las microesferas de anticuerpo, algunas microesferas se mantenfan en suspension en el no-disolvente y la mayor parte de la fase continua permanecfa sobre el no-disolvente. La mayorfa (correspondiente a aproximadamente los 4 ml superiores) del sobrenadante (que contenfa la mayor parte de la fase continua) se extrajo del tubo de centrffuga por aspiracion, y la parte restante (correspondiente a aproximadamente 2 ml del sobrenadante y la pella) en el tubo de centrffuga se lavo repetidamente por centrifugacion con un medio de lavado frfo en el que las microesferas eran esencialmente insolubles (acetonitrilo a -20°C, 2 ml cada vez, centrifugado a 3.000 x g a -9°C durante 5 minutos) para retirar el no- disolvente y agua. Despues del ultimo lavado, el tubo de centrffuga se sometio a vortice durante 10 segundos para soltar la pella, y el medio de lavado residual se retiro por evaporacion de disolvente (primero bajo una corriente de nitrogeno y despues bajo vacfo durante 10 minutos) para formar un polvo seco de las microesferas de anticuerpo.

El polvo seco se froto suavemente entre dos portaobjetos de vidrio de microscopio y se examino bajo un microscopio optico con un aumento 500x. Algunas de las microesferas aparecieron segregadas (es decir, no aglomeradas) y tenfan un diametro de aproximadamente 2-3 micras. Estas microesferas eran parcialmente solubles en PBS.

Ejemplo 3

En primer lugar, se prepararon microesferas de anticuerpo utilizando aproximadamente 5 ml de una solucion de reaccion acuosa que contenfa aproximadamente 4,75 ml de una solucion de 1 mg/ml de anticuerpo (antifactor monoclonal murino VIII de Baxter Healthcare, Hayward, CA) en tampon PBS (pH 6), aproximadamente 500 mg de un ejemplo de material no volatil (un polfmero no ionico, poloxamero 188) y estabilizadores (histidina 0,1M y acido glutamico 0,05M) en un recipiente de reaccion, a una temperatura elevada de aproximadamente 50°C. Despues, la solucion de reaccion se enfrfo a una velocidad controlada sumergiendo el recipiente de reaccion que contenfa la solucion de reaccion en un bano de hielo (aproximadamente 4°C) durante aproximadamente 30 minutos. En el recipiente de reaccion se desarrollo una turbidez, lo que indicaba la formacion de una fase dispersa que contenfa microesferas de anticuerpo en una fase continua que inclufa la solucion acuosa en la que estaba disuelto el poloxamero 188. Un volumen (1 ml) de un no-disolvente (PEG 300) con una densidad mayor que la de la fase continua se dispuso en un tubo de centrffuga conico de polipropileno de 15 ml y se congelo a -20°C. Utilizando una

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pipeta, los 5 ml de la suspension de microesferas de anticuerpo se dispuso con cuidado en el tubo de centrffuga, sobre el no-disolvente congelado para asegurar que no se producfa esencialmente ninguna mezcla de los dos sistemas. El no-disolvente se descongelo y se enfrio disponiendo el tubo de centrffuga en un bano de agua a aproximadamente 37°C durante aproximadamente 15 minutos, despues en otro bano de agua a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 30 minutos, y despues sobre hielo durante aproximadamente 10 minutos. El tubo de centrffuga se centrifugo a 3.000 x g a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 30 minutos para realizar una migracion selectiva de las micropartfculas de la fase continua dentro del no-disolvente y a traves del mismo. En el fondo del tubo de centrffuga se observo una pella de las microesferas de anticuerpo, algunas microesferas se mantenfan en suspension en el no-disolvente y la mayor parte de la fase continua permanecfa sobre el no- disolvente. La mayorfa (correspondiente a aproximadamente los 4 ml superiores) del sobrenadante (que contenfa la mayor parte de la fase continua) se extrajo del tubo de centrffuga por aspiracion, y la parte restante (correspondiente a aproximadamente 2 ml del sobrenadante y la pella) en el tubo de centrffuga se lavo repetidamente por centrifugacion con un medio de lavado frfo (acetonitrilo a -20°C, utilizando aproximadamente 2 ml cada vez, centrifugado a 3.000 x g a aproximadamente -9°C durante aproximadamente 5 minutos) en el que las microesferas eran esencialmente insolubles, para retirar el no-disolvente y agua. Despues del ultimo lavado, el tubo de centrffuga se agito (por vortice) durante aproximadamente 10 segundos para soltar la pella, y el medio de lavado residual se retiro por evaporacion de disolvente (primero bajo una corriente de nitrogeno y despues bajo vacfo durante aproximadamente 10 minutos) para formar un polvo seco de las microesferas de anticuerpo.

El polvo seco se froto suavemente entre dos portaobjetos de vidrio de microscopio y se examino bajo un microscopio optico con un aumento 500x. La mayor parte de las microesferas aparecieron segregadas (es decir, no aglomeradas) y tenfan un diametro de aproximadamente 2-3 micras. Estas microesferas eran facilmente solubles en PBS.

Ejemplo 4

En primer lugar se preparo aproximadamente 1 ml de una solucion de reaccion acuosa disolviendo un concentrado liofilizado de anticuerpo monoclonal terapeutico humanizado Infliximab (Centocor, Malvern, PA) en un medio de reconstitucion en una concentracion de aproximadamente 100 mg/ml, dializando la reconstitucion contra un tampon de acetato de amonio aproximadamente 0,1M (pH 5,9, que contenfa poloxamero 188 en una proporcion del 10% p/v) para obtener una concentracion de anticuerpo de 1 mg/ml. La solucion de reaccion se dispuso en un recipiente de reaccion a una temperatura elevada de aproximadamente 45°C. Despues, la solucion de reaccion se enfrio a aproximadamente 22°C a una primera velocidad controlada durante un perfodo de tiempo de aproximadamente 30 minutos, y despues a aproximadamente 4°C a una segunda velocidad controlada durante un perfodo de tiempo de aproximadamente 15 minutos. En el recipiente de reaccion se desarrollo una turbidez, lo que indicaba la formacion de una fase dispersa que contenfa microesferas de anticuerpo en una fase continua que inclufa la solucion acuosa en la que estaba disuelto el poloxamero 188. Un volumen (1 ml) de un no-disolvente que inclufa aproximadamente un 60% p/v de agua, aproximadamente un 25% p/v de PEG 300, aproximadamente un 10% p/v de etanol t aproximadamente un 5% p/v de poloxamero 188 y que tenia una densidad mayor que la de la fase continua se dispuso en un tubo de centrffuga conico de polipropileno de 15 ml y se congelo a -20°C. Utilizando una pipeta, la suspension de microesferas de anticuerpo se dispuso con cuidado en el tubo de centrffuga, sobre el no-disolvente congelado para asegurar que no se producfa esencialmente ninguna mezcla de los dos sistemas. El no-disolvente se descongelo y se enfrio disponiendo el tubo de centrffuga en un bano de agua a aproximadamente 37°C durante aproximadamente 15 minutos, despues en otro bano de agua a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 30 minutos, y despues sobre hielo durante aproximadamente 10 minutos. El tubo de centrffuga se centrifugo a 3.000 x g a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 10 minutos para realizar una migracion selectiva de las micropartfculas de la fase continua dentro del no-disolvente y a traves del mismo. En el fondo del tubo de centrffuga se observo una pella de las microesferas de anticuerpo, algunas microesferas se mantenfan en suspension en el no- disolvente y la mayor parte de la fase continua permanecfa sobre el no-disolvente. La mayorfa (mas de aproximadamente 1 ml) del sobrenadante se extrajo del tubo de centrffuga por aspiracion, y la parte restante (menos de aproximadamente 1 ml del no-disolvente y la pella) en el tubo de centrffuga era adecuada para el uso final (por ejemplo inyeccion, inhalacion) despues de una resuspension con agitacion, ya que el no-disolvente empleado en este ejemplo era un vehfculo fluido farmaceuticamente aceptable (por ejemplo un diluyente).

Ejemplo 5

En primer lugar se prepararon aproximadamente 20 l de una solucion de reaccion acuosa disolviendo inmunoglobulina humana (Bayer Corp., Elkhart, IN) en una concentracion de aproximadamente 1 mg/ml en un tampon de acetato de amonio (pH 5,8) que contenfa aproximadamente un 12% p/v de un material no volatil representativo (un polfmero no ionico, poloxamero 188). La solucion de reaccion se calento a aproximadamente 50°C y despues se enfrio de forma gradual a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 2 horas para formar una fase dispersa que contenfa microesferas de IVIG en una fase continua que contenfa la solucion acuosa en la que estaba disuelto el poloxamero 188. Aproximadamente a 4°C, un volumen (aproximadamente 200 ml) de un no- disolvente (PEG 300 anhidro) con una densidad mayor que la de la fase continua de la dispersion de microesferas de anticuerpo se bombeo al interior del rotor de una centrffuga de flujo continuo (Sorvall® Contifuge®, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) mientras se realizaba una rotacion a 20.000 x g a aproximadamente 4°C. La

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suspension de microesferas de anticuerpo se bombeo al interior del rotor con un caudal de aproximadamente 120 ml/minuto, seguida de un primer volumen (aproximadamente 1 l) de un primer "perseguidor" (agua desionizada) y un segundo volumen (aproximadamente 1 l) de un segundo "perseguidor" (PEG 300 anhidro), todo ello con el mismo caudal. Los "perseguidores" se utilizaron para eliminar por lavado el exceso de poloxamero 188 y el agua residual. El rotor se detuvo y se vacio de todos los fluidos. Las microesferas de IVIG acumuladas sobre la pared interior del rotor en forma de una pasta viscosa se recogieron con medios mecanicos (por ejemplo se desprendieron por raspado).

Una parte alfcuota de las microesferas de anticuerpo recogidas se examino mediante microscopfa optica (aumento 500x) despues de suspenderla en un volumen de PEG 300 anhidro. Se comprobo que las microesferas de IVIG consistfan principalmente en microesferas discretas con un diametro de aproximadamente 2-3 micras, con poca aglomeracion. La adicion de PBS produjo una solucion visiblemente clara en un plazo de unos segundos, lo que indicaba que las microesferas de IVIG recogidas eran solubles en PBS y no inclufan ningun agregado de IVIG visiblemente insoluble.

Ejemplo 6

En primer lugar se prepararon aproximadamente 20 l de una solucion de reaccion acuosa disolviendo inmunoglobulina humana G (IgG) en una concentracion de aproximadamente 1 mg/ml en un tampon de acetato de amonio (pH 5,8) que contenfa aproximadamente un 12% p/v de poloxamero 188. La solucion de reaccion se calento a aproximadamente 50°C y despues se enfrio de forma gradual a aproximadamente 4°C durante aproximadamente 2 horas para formar una fase dispersa que contenfa microesferas de IgG en una fase continua que contenfa la solucion acuosa en la que estaba disuelto el poloxamero 188. Aproximadamente a 4°C, un volumen (aproximadamente 200 ml) de un no-disolvente que comprendfa aproximadamente un 75% p/v de agua desionizada, un 25% p/v de PEG-3350, histidina 10 mM, NaCl 100 mM, y que tenia un pH de aproximadamente 7,4 y una densidad mayor que la de la fase continua se bombeo al interior del rotor de una centrffuga de flujo continuo (Sorvall® Contifuge®, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) mientras se realizaba una rotacion a 20.000 x g a aproximadamente 4°C. La suspension de microesferas de anticuerpo se bombeo al interior del rotor con un caudal de aproximadamente 120 ml/minuto, seguida de un primer volumen fresco (aproximadamente 1 l) del no-disolvente como "perseguidor" para eliminar por lavado el exceso de poloxamero 188 de las microesferas recogidas. El rotor se detuvo y se vacio de todos los fluidos. Las microesferas de IgG acumuladas sobre la pared interior del rotor en forma de una pasta viscosa se recogieron con medios mecanicos (por ejemplo se desprendieron por raspado).

Una parte alfcuota de las microesferas de anticuerpo recogidas se examino mediante microscopfa optica (aumento 500x) despues de suspenderla en un volumen fresco del no-disolvente. Se comprobo que las microesferas de IgG consistfan principalmente en microesferas discretas con un diametro de aproximadamente 2-3 micras, con poca aglomeracion. La concentracion de IgG humana en las microesferas de anticuerpo recogidas se determino diluyendo una parte alfcuota de las microesferas recogidas en 1000 partes en volumen de PBS (microesferas de IgG disueltas por completo), y midiendo la densidad optica de la dilucion a 280 nm. Sobre la base de un coeficiente de extincion de aproximadamente 1,38, se determino que la concentracion de IgG en la solucion de reaccion era de aproximadamente 298 mg/ml. Comparando esta concentracion con la concentracion de 1 mg/ml de IgG en la solucion de reaccion, el proceso arriba descrito concentro las moleculas de IgG en un factor de aproximadamente 300.

Claims (11)

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Metodo para procesar dispersiones multifasicas, que comprende:

proporcionar una dispersion multifasica que incluye fases dispersas y continuas, comprendiendo la dispersion micropartfculas solidas y conteniendo al menos la fase continua un primer material no volatil; y

proporcionar un no-disolvente;

combinar la dispersion multifasica y el no-disolvente; y

llevar a cabo una migracion selectiva de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo de modo que la mayorfa de las micropartfculas se separa de la dispersion,

donde la fase continua es acuosa o miscible con lfquidos acuosos, comprendiendo el primer material no volatil un polfmero no ionico soluble en lfquidos acuosos o un polfmero no ionico miscible con lfquidos acuosos, siendo las micropartfculas esencialmente insolubles en el no-disolvente y teniendo el no- disolvente una densidad mayor que la de la fase continua o una viscosidad mayor que la de la fase continua,

donde proporcionar el no-disolvente comprende introducirel no-disolvente en un aparato de centrifugacion para formar asf una capa de no-disolvente dentro de este,

donde combinar la dispersion multifasica y el no-disolvente comprende la disposicion de una capa de la dispersion multifasica sobre una superficie superior de la capa de no-disolvente, formando asf una composicion en capas; y

donde la migracion selectiva de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo comprende una centrifugacion de la composicion en capas.

Metodo segun la reivindicacion 1, que adicionalmente comprende proporcionar del no-disolvente en un tubo de centrffuga, congelarel no-disolvente en el tubo de centrffuga antes de combinar la dispersion multifasica y el no-disolvente, y despues descongelarel no-disolvente antes de la realizacion selectiva de una migracion de las micropartfculas dentro del no-disolvente o a traves del mismo.

Metodo segun la reivindicacion 1, caracterizado porque el aparato de centrifugacion comprende una centrffuga de flujo continuo.

Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el no-disolvente comprende un segundo material no volatil.

Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque el no-disolvente es un diluyente farmaceuticamente aceptable.

Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque las micropartfculas tienen una densidad Dp, la fase continua tiene una densidad Dc y el no-disolvente es homogeneo con una densidad Dn tal que Dp> Dn> Dc.

Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque el no-disolvente comprende un gradiente de densidad.

Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque el no-disolvente comprende uno o mas componentes seleccionados de entre el grupo consistente en lfquidos acuosos, lfquidos organicos, lfquidos halogenados, materiales no volatiles y combinaciones de los mismos.

Metodo segun la reivindicacion 4, caracterizado porque la concentracion del segundo material no volatil en el no-disolvente es mayor que la concentracion del primer material no volatil en la dispersion.

Metodo segun la reivindicacion 9, caracterizado porque el segundo material no volatil es diferente del primer material no volatil y tiene un menor peso molecular que este.

Metodo segun la reivindicacion 4, caracterizado porque el primer y el segundo material no volatil comprenden polfmeros no ionicos seleccionados independientemente de entre el grupo consistente en polieteres no ionicos, copolieteres no ionicos, poliesteres no ionicos, copoliesteres no ionicos, copolfmeros de polieter-poliester no ionicos, polfmeros vinflicos no ionicos, polfmeros que contienen pirrolidona no

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ionicos, carbohidratos polimericos no ionicos, derivados y sales de dichos materiales, y combinaciones de los mismos.

12. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-11, caracterizado porque el no-disolvente es soluble en la fase continua o es miscible con esta.

13. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-12, caracterizado porque las micropartfculas comprenden al menos un agente activo.

14. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque el agente activo se selecciona de entre el grupo consistente en agentes bioactivos, agentes farmaceuticos, agentes diagnosticos, suplementos nutricionales y agentes cosmeticos.

15. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-14, caracterizado porque el agente activo es un agente bioactivo que comprende al menos una macromolecula bioactiva seleccionada de entre el grupo consistente en carbohidratos, peptidos, protefnas, vectores, acidos nucleicos y complejos, conjugados y combinaciones de los mismos.