ES2374943T3 - Inhibidores de serina proteasas - Google Patents

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Arnaud Le Tiran
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Abstract

Un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en **Fórmula**

Description

Inhibidores de serina proteasas
Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos que inhiben la actividad serina proteasa, particularmente la actividad de la proteasa NS3-NS4A del virus de la hepatitis C. Como tal, actúan interfiriendo con el ciclo vital del virus de la hepatitis C y también son útiles como agentes antivirales. La invención se refiere adicionalmente a composiciones que comprenden estos compuestos tanto para su uso ex vivo como para la administración a un paciente que padece una infección por VHC. La invención también se refiere al uso de una composición que comprende un compuesto de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de infección por VHC en un paciente.
Antecedentes de la invención
La infección por el virus de la hepatitis C (“VHC”) es un problema médico humano apremiente. El VHC se reconoce como el agente causante de la mayoría de los casos de hepatitis no A y no B, calculándose globalmente una serofrecuencia en seres humanos del 3% [A. Alberti y col “Natural History of Hepatitis C”, J. Hepatology, 31., (Supl. 1), págs. 17-24 (1999)]. Solo en los Estados Unidos, casi cuatro millones de personas pueden estar infectadas.[M.J. Alter y col., “The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States, Gastroenterol. Clin. North Am., 23, págs. 437455 (1994); M. J. Alter “Hepatitis C Virus Infection in the United States”, J. Hepatology, 31., (Supl. 1), págs. 88-91 (1999)].
Después de la primera exposición al VHC solo aproximadamente el 20% de los individuos infectados desarrollan hepatitis clínica aguda mientras que otros parece que solucionan la infección de manera espontánea. sin embargo, casi en el 70% de los casos, el virus establece una infección crónica que persiste durante décadas [S. Iwarson, “The Natural Course of Chronic Hepatitis”, FEMS Microbiology Reviews, 14, págs. 201-204 (1994); D. Lavanchy, “Global Surveillance and Control of Hepatitis C”, J. Viral Hepatitis, 6, págs. 35-47 (1999)]. Normalmente esto produce una inflamación hepática recurrente que empeora progresivamente, que con frecuencia conduce a patologías más graves tales como cirrosis y carcinoma hepatocelular [M.C. Kew, “Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma”, FEMSMicrobiology Reviews, 14, págs. 211-220 (1994); I. Saito y col., “Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, págs. 6547-6549 (1990)]. Desgraciadamente, no existen tratamientos ampliamente eficaces para debilitar el avance del VHC crónico.
El genoma del VHC codifica una poliproteína de 3010-3033 aminoácidos [Q.L. Choo, y col., “Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus”. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, págs. 2451-2455 (1991); N. Kato y col., “Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, págs. 9524-9528 (1990); A. Takamizawa y col., “Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers”, J. Virol., 65, págs. 1105-1113 (1991)]. Se supone que las proteínas no estructurales (NS) del VHC proporcionan la maquinaria catalítica esencial para la replicación viral. Las proteínas NS derivan por escisión proteolítica de la poliproteína [R. Bartenschlager y col., “Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions”,
J. Virol., 67, págs. 3835-3844 (1993); A. Grakoui y col., “Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites”, J. Virol., 67, págs. 2832-2843 (1993); A. Grakoui y col., “Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products”, J. Virol., 67, págs. 1385-1395 (1993); L. Tomei y col., “NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein”, J. Virol., 67, págs. 4017-4026 (1993)].
La proteína 3 NS (NS3) del VHC contiene una actividad serina proteasa que ayuda a procesar la mayoría de las enzimas virales y por tanto se considera esencial para la replicación e infectividad viral. Se sabe que mutaciones en la proteasa NS3 del virus de la fiebre amarilla disminuye la infectividad Vidal [Chambers, T.J. y col., “Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein”, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 87, págs. 8898-8902 (1990)]. Se ha observado que los primeros 181 amino ácidos de la NS3 (restos 1027-1207 de la poliproteína viral) contienen el dominio serina proteasa de la NS3 que procesa los cuatro sitios aguas abajo de la poliproteína del VHC [C. Lin y col., “Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics”, J. Virol., 68, págs. 8147-8157 (1994)].
La serina proteasa NS3 del VHC y su cofactor asociado, NS4A, ayuda a procesar todas las enzimas virales y se considera por tanto esencial para la replicación viral. Este procesamiento parece ser análogo al realizado por la aspartil proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana, que también está implicado en el procesamiento enzimático viral. Los inhibidores proteasa del VIH, que inhiben el procesamiento de la proteína viral, son poderosos agentes antivirales en el hombre lo cual indica que la interrupción de esta etapa del ciclo de vida viral da como resultado agentes terapéuticamente activos. Por consiguiente, la serina proteasa NS3 del VHC también es una diana atractiva para el descubrimiento de fármacos.
Actualmente no existen tratamientos o agentes satisfactorios contra el VHC. Hasta ahora, la única terapia establecida para enfermedades por el VHC era el tratamiento con interferón. Sin embargo, los interferones tienen efectos secundarios significativos [M. A. Walker y col., “Hepatitis C Virus: An Overview of Current Approaches and Progress”, DDT, 4, págs. 518-29 (1999); D. Moradpour y col., “Current and Evolving Therapies for Hepatitis C”, Eur.
J. Gastroenterol. Hepatol., 11, págs. 1199-1242 (1999); H. L. A. Janssen y col. “Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis”, J. Hepatol., 21, págs. 241-243 (1994); P.F. Renault y col., “Side Effects of Alpha Interferon”, Seminars in Liver Disease, 9, págs. 273-277. (1989)] e inducen remisión a largo plazo sólo en un mínima parte (~ 25%) de casos [O. Weiland, “Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”, FEMS Microbiol. Rev., 14, págs. 279-288 (1994)]. Introducciones recientes de las formas pegiladas del interferón (PEG-INTRON£ y PEGASYS£) y la terapia de combinación de ribavirina e interferón pegilado (REBETROL£) han dado como resultado solo mejoras leves en cuanto a tasas de remisión y solo reducciones parciales en cuanto a efectos secundarios. Además, las expectativas para obtener vacunas eficaces contra el VHC siguen siendo inciertas.
Por tanto, existe una necesidad de terapias más eficaces contra el VHC. Dichos inhibidores tendrían potencial terapéutico como inhibidores de proteasa, particularmente como inhibidores de serina proteasa y más particularmente como inhibidores de proteasa NS3 del VHC. Específicamente, dichos compuestos pueden ser útiles como agentes antivirales, particularmente como agentes contra el VHC.
El documento WO 02/48172 A2 describe algunos compuestos diaril amida como inhibidores de serina proteasa NS3 del virus de la hepatitis C. El documento WO 00/09543 A2 describe tripéptidos inhibidores de la hepatitis C. El documento WO 00/59929 A se refiere a péptidos macrocíclicos activos contra el virus de la hepatitis C.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a compuestos como se describen específicamente a continuación.
En algunos aspectos, la invención se caracteriza por una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable en una cantidad eficaz para inhibir una serina proteasa; y un excipiente, adyuvante o vehículo aceptable. La composición puede incluir un agente adicional seleccionado de un agente inmunomodulador; un agente antiviral; un segundo inhibidor de proteasa del VHC; un inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC; y un inhibidor del citocromo P-450 o combinaciones de los mismos. Los agentes inmunomoduladores son D-, E-, o J-interferón o timosina; dicho agente antiviral es ribavirina, amantadina o telbivudina; o dicho inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC es un inhibidor de helicasa, de polimerasa o de metaloproteasa del VHC. El inhibidor del citocromo P-450 puede ser ritonavir.
En otros aspectos, un procedimiento para inhibir la actividad de una serina proteasa in vitro comprende la etapa de poner en contacto dicha serina proteasa con un compuesto de la presente invención. La serina proteasa puede ser una proteasa NS3 del VHC. Los compuestos pueden usarse para el tratamiento de una infección por VHC en un paciente. El procedimiento también puede incluir administrar a dicho paciente un agente adicional seleccionado de un agente inmunomodulador; un agente antiviral; un segundo inhibidor de proteasa del VHC; un inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC; o combinaciones de los mismos; en el que dicho agente adicional se administra a dicho paciente en la misma forma de dosificación como el inhibidor de serina proteasa o como una forma de dosificación por separado. El agente inmunomodulador es D-, E-, o J-interferón o timosina; dicho agente antiviral es ribavarina o amantadina; o dicho inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC es un inhibidor de helicasa, polimerasa o metaloproteasa del VHC.
En otros aspectos adicionales, un procedimiento para eliminar o reducir in vitro la contaminación por VHC de una muestra biológica o de instrumental médico o de laboratorio, incluye la etapa de poner en contacto dicha muestra biológica o instrumental médico o de laboratorio, con un compuesto de la presente invención. La muestra o instrumental puede seleccionarse entre sangre, otros fluidos corporales, tejido biológico, un instrumento quirúrgico, prendas quirúrgicas, un instrumento de laboratorio, prendas de laboratorio, un aparato para extraer sangre u otro fluido corporal; un material para la conservación de sangre u otros fluidos corporales.
Los compuestos de la presente invención, como se describe en el presente documento, también presentan propiedades PK (farmacocinéticas) ventajosas y/o fuerza aumentada.
La invención también se refiere a composiciones que comprenden los compuestos anteriores y al uso de los mismos; a procedimientos de preparación de los compuestos de la invención y a procedimientos para ensayar compuestos para determinar la actividad serina proteasa. Dichas composiciones pueden usarse en dispositivos de tratamiento previo que se insertan en un paciente, para el tratamiento de muestras biológicas y para la administración directa en un paciente. En cada caso, la composición se usará para reducir el riesgo o la gravedad de infección por VHC.
Definiciones
Para los fines de la presente invención, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periódica de los Elementos, versión CAS, Manual de Química y Física 75ª Ed. Adicionalmente, en “Organic Chemistry”, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, y en “March’s Advanced Organic Chemistry”, 5ª Ed., Ed.: Smith,
M.B. y March, J., John Wiley & Sons, Nueva York: 2001, se describen principios generales de química orgánica.
Como se describe en el presente documento, los compuestos de la presente invención pueden sustituirse opcionalmente por uno o más sustituyentes, tal y como se ilustra en líneas generales anteriormente o como se ilustra con un ejemplo mediante clases, subclases y especies particulares de la presente invención.
Como se usa en el presente documento, el término “alifático” incluye los términos alquilo, alquenilo, alquinilo, estando cada uno opcionalmente sustituido como se expone más adelante.
Como se usa en el presente documento, un grupo “alquilo” se refiere a un grupo de hidrocarburo alifático saturado que contiene 1-8 (por ejemplo, 1-6 ó 1-4) átomos de carbono. Un grupo alquilo puede ser lineal o ramificado. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, n-heptilo o 2-etilhexilo. Un grupo alquilo puede estar sustituido (es decir, opcionalmente sustituido) con uno o más sustituyentes tales como halo, fosfo, cicloalifático [por ejemplo, cicloalquilo o cicloalquenilo], heterocicloalifático [por ejemplo, heterocicloalquilo o heterocicloalquenilo], arilo, heteroarilo, alcoxi, aroílo, heteroaroílo, acilo [por ejemplo, (alifático)carbonilo, (cicloalifático)carbonilo o (heterocicloalifático)carbonilo], nitro, ciano, amido [por ejemplo, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino alquilaminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, heterocicloalquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo o heteroarilaminocarbonilo], amino [por ejemplo, alifáticoamino, cicloalifáticoamino o heterocicloalifáticoamino], sulfonilo [por ejemplo, alifático-SO2-], sulfinilo, sulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo, carboxi, carbamoílo, cicloalifaticoxi, heterocicloalifaticoxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroarilalcoxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi o hidroxi. Sin limitación, algunos ejemplos de alquilos sustituidos incluyen carboxialquilo (tal como HOOC-alquilo, alcoxicarbonilalquilo y alquilcarboniloxialquilo), cianoalquilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, acilalquilo, aralquilo, (alcoxiaril)alquilo, (sulfonilamino)alquilo (tal como (alquil-SO2amino)alquilo), aminoalquilo, amidoalquilo, (cicloalifático)alquilo o haloalquilo.
Como se usa en el presente documento, un grupo "alquenilo" se refiere a un grupo de carbono alifático que contiene 2-8 (por ejemplo, 2-6 o 2-4) átomos de carbono y al menos un doble enlace. Como un grupo alquilo, un grupo alquenilo puede ser lineal o ramificado. Los ejemplos de un grupo alquenilo incluyen, pero sin limitación, alilo, isoprenilo, 2-butenilo y 2-hexenilo. Un grupo alquenilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como halo, fosfo, cicloalifático [por ejemplo, cicloalquilo o cicloalquenilo], heterocicloalifático [por ejemplo, heterocicloalquilo o heterocicloalquenilo], arilo, heteroarilo, alcoxi, aroílo, heteroaroílo, acilo [por ejemplo, (alifático)carbonilo, (cicloalifático)carbonilo o (heterocicloalifático)carbonilo], nitro, ciano, amido [por ejemplo, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, alquilaminocarbonilo, cicloalquilaminocarbonilo, heterocicloalquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo o heteroarilaminocarbonilo], amino [por ejemplo, alifaticoamino, cicloalifáticoamino, heterocicloalifáticoamino o alifáticosulfonilamino], sulfonilo [por ejemplo, alquil-SO2-, cicloalifático-SO2- o aril-SO2-], sulfinilo, sulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo, carboxi, carbamoílo, cicloalifáticoxi, heterocicloalifáticoxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralcoxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi o hidroxi. Sin limitación, algunos ejemplos alquenilos sustituidos incluyen cianoalquenilo, alcoxialquenilo, acilalquenilo, hidroxialquenilo, aralquenilo, (alcoxiaril)alquenilo, (sulfonilamino)alquenilo (tal como, (alquil-SO2-amino)alquenilo), aminoalquenilo, amidoalquenilo, (cicloalifático)alquenilo o haloalquenilo.
Como se usa en el presente documento, un grupo "alquinilo" se refiere a un grupo de carbono alifático que contiene 2-8 (por ejemplo, 2-6 ó 2-4) átomos de carbono y tiene al menos un triple enlace. Un grupo alquinilo puede ser lineal
o ramificado. Los ejemplos de grupo alquinilo incluyen, pero sin limitación, propargilo y butinilo. Un grupo alquinilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como aroílo, heteroaroílo, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, nitro, carboxi, ciano, halo, hidroxi, sulfo, mercapto, sulfanilo [por ejemplo, alifáticosulfanilo o cicloalifáticosulfanilo], sulfinilo [por ejemplo, alifáticosulfinilo o cicloalifáticoulfinilo], sulfonilo [por ejemplo, alifático-SO2-, alofáticoamino-SO2- o cicloalifático-SO2-], amido [por ejemplo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilaminocarbonilo, heterocicloalquilaminocarbonilo, cicloalquilcarbonilamino, arilaminocarbonilo, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, heteroarilcarbonilamino o heteroarilaminocarbonilo), urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, cicloalifático, heteroalifático, arilo, heteroarilo, acilo [por ejemplo, (cicloalifático)carbonilo o (heterocicloalifático)carbonilo], amino [por ejemplo, alifáticoamino], sulfoxi, oxo, carboxi, carbamoílo, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi o (heteroaril)alcoxi.
Como se usa en el presente documento, un "amido" abarca tanto "aminocarbonilo" como "carbonilamino". Estos términos, cuando se usan solo o junto con otro grupo, se refieren a un grupo amido, tal como -N(Rx)-C(O)-Ry o C(O)-N(Rx)2, cuando se usa de manera terminal y -C(O)-N(Rx)- o -N(RX)-C(O)-, cuando se usa de forma interna, en el que Rx y Ry se definen más adelante. Los ejemplos de grupos amido incluyen alquilamido (tal como alquilcarbonilamino o alquilaminocarbonilo), (heterocicloalifático)amido, (heteroaralquil)amido, (heteroaril)amido, (heterocicloalquil)alquilamido, arilamido, aralquilamido, (cicloalquil)alquilamido o cicloalquilamido.
Como se usa en el presente documento, un grupo "amino" se refiere a -NRxRy, en el que cada uno de Rx y Ry es independientemente hidrógeno, alifático, cicloalifático, (cicloalifático)alifático, arilo, aralifático, heteroalifático, (heterocicloalifático)alifático, heteroarilo, carboxi, sulfanilo, sulfinilo, sulfonilo, (alifático)carbonilo, (cicloalifático)carbonilo, ((cicloalifático)alifático)carbonilo, arilcarbonilo, (aralifático)carbonilo, (heterocicloalifático)carbonilo, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo, (heteroaril)carbonilo, o (heteroaralifático)carbonilo, definiéndose cada uno de los mismos en el presente documento y estando opcionalmente sustituidos. Los ejemplos de grupo amino incluyen alquilamino, dialquilamino o arilamino. Cuando el término "amino" no es el grupo terminal (por ejemplo, alquilcarbonilamino), se representa por -NRx-. Rx tiene el mismo significado que se ha definido anteriormente.
Como se usa en el presente documento, Un grupo "arilo", usado solo o como parte de un resto más largo como en aralquilo, aralcoxi o ariloxialquilo, se refiere a un sistema de anillos monocíclico (por ejemplo, fenilo); bicíclico (por ejemplo, indenilo, naftalenilo, tetrahidronaftilo, tetrahidroindenilo); y tricíclico (por ejemplo, fluorenilo, tetrahidrofluorenilo o tetrahidroantracenilo, antracenilo), en el que el sistema de anillos monocíclico es aromático o al menos uno de los anillos en un sistema de anillos bicíclico o tricíclico es aromático. Los grupos bicíclicos y tricíclicos incluyen anillos carbocíclicos de 2-3 miembros benzocondensados. Por ejemplo, un grupo benzocondensado incluye fenilo condensados con dos o más restos carbocíclicos C4-8. Un arilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes que incluyen alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo]; cicloalifático; (cicloalifático)alifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático)alifático; arilo; heteroarilo; alcoxi; (cicloalifático)oxi; (heterocicloalifático)oxi; ariloxi; heteroariloxi; (aralifático)oxi; (heteroaralifático)oxi; aroílo; heteroaroílo; amino; oxo (en un anillo carbocíclico no aromático de un arilo bicíclico o tricíclico condensado con benzo); nitro; carboxi; amido; acilo [por ejemplo, alifaticocarbonilo; (cicloalifático)carbonilo; ((ciloalifaticocarbonilo)alifático)carbonilo; (aralifático)carbonilo; (heterocicloalifático)carbonilo; ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo; o (heteroaralifático)carbonilo]; sulfonilo [por ejemplo, alifático-SO2- o amino-SO2-]; sulfinilo [por ejemplo, alifático-S(O)- o cicloalifático-S(O)-]; sulfanilo [por ejemplo, alifático-S-]; ciano; halo; hidroxi; mercapto; sulfoxi; urea; tiourea; sulfamoílo; sulfamida; o carbamoílo. Como alternativa, un arilo puede estar sin sustituir.
Los ejemplos no limitantes de arilos sustituidos incluyen haloarilo [por ejemplo, mono-, di (tal como p,m-dihaloarilo) y (trihalo)arilo]; (carboxi)arilo [por ejemplo, (alcoxicarbonil)arilo, ((aralquil)carboniloxi)arilo y (alcoxicarbonil)arilo]; (amido)arilo [por ejemplo, (aminocarbonil)arilo, (((alquilamino)alquil)aminocarbonil)arilo, (alquilcarbonil)aminoarilo, (arilaminocarbonil)arilo y (((heteroaril)amino)carbonil)arilo]; aminoarilo [por ejemplo, ((alquilsulfonil)amino)arilo o ((dialquil)amino)arilo]; (cianoalquil)arilo; (alcoxi)arilo; (sulfamoil)arilo [por ejemplo, (aminosulfonil)arilo]; (alquilsulfonil)arilo; (ciano)arilo; (hidroxialquil)arilo; ((alcoxi)alquil)arilo; (hidroxi)arilo, ((carboxi)alquil)arilo; (((dialquil)amino)alquil)arilo; (nitroalquil)arilo; (((alquilsulfonil)amino)alquil)arilo; ((heterocicloalifático)carbonil)arilo; ((alquilsulfonil)alquil)arilo; (cianoalquil)arilo; (hidroxialquil)arilo; (alquilcarbonil)arilo; alquilarilo; (trihaloalquil)arilo; pamino-m-alcoxicarbonilarilo; p-amino-m-cianoarilo; p-halo-m-aminoarilo; o (m-(heterocicloalifático)-o-(alquil))arilo.
Como se usa en el presente documento, un "aralifático", tal como un grupo "aralquilo", se refiere a un grupo alifático (por ejemplo, un grupo alquilo-(C1-4)) que está sustituido con un grupo arilo. "Alifático", "alquilo" y "arilo" se definen en el presente documento. Un ejemplo de un aralifático, tal como un grupo aralquilo es bencilo.
Como se usa en el presente documento, un grupo "aralquilo" se refiere a un grupo alquilo (por ejemplo, un grupo alquilo-(C1-4)) que está sustituido con un grupo arilo. Tanto "alquilo" como "arilo" se han definido anteriormente en el presente documento. Un ejemplo de un grupo aralquilo es bencilo. Un aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo, incluyendo carboxialquilo, hidroxialquilo o haloalquilo, tal como trifluorometilo], cicloalifático [por ejemplo, cicloalquilo o cicloalquenilo], (cicloalquil)alquilo, heterocicloalquilo, (heterocicloalquil)alquilo, arilo, heteroarilo, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroílo, heteroaroílo, nitro, carboxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, amido [por ejemplo, aminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino o heteroaralquilcarbonilamino], ciano, halo, hidroxi, acilo, mercapto, alquilsulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.
Como se usa en el presente documento, un "sistema de anillos bicíclico" incluye estructuras de 8-12 (por ejemplo, 9, 10 u 11) miembros que forman dos anillos, en las que los dos anillos tienen al menos un átomo en común (por ejemplo, 2 átomos en común). Los sistemas de anillos bicíclicos incluyen bicicloalifáticos (por ejemplo, bicicloalquilo
o bicicloalquenilo), bicicloheteroalifáticos, arilos bicíclicos y heteroarilos bicíclicos.
Como se usa en el presente documento, un grupo "cicloalifático" abarca un grupo "cicloalquilo" y un grupo "cicloalquenilo", estando cada uno de los mismos opcionalmente sustituido como se expone más adelante. Como se usa en el presente documento, un grupo "cicloalquilo" se refiere a un anillo carbocíclico saturado mono o bicíclico (condensado o puenteado) de 3-10 (por ejemplo, 5-10) átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, adamantilo, norbornilo, cubilo, octahidroindenilo, decahidronaftilo, biciclo[3,2,1]octilo, biciclo[2,2,2]octilo, biciclo[3,3,1]nonilo, biciclo[3,3,2,]decilo, biciclo[2,2,2]octilo, adamantilo, azacicloalquilo o ((aminocarbonil)cicloalquil)cicloalquilo. Un grupo "cicloalquenilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un anillo carbocíclico no aromático de 3-10 (por ejemplo, 4-8) átomos de carbono que tiene uno o más dobles enlaces. Los ejemplos de grupos cicloalquenilo incluyen ciclopentenilo, 1,4-ciclohexadienilo, cicloheptenilo, ciclooctenilo, hexahidroindenilo, octahidronaftilo, ciclohexenilo, ciclopentenilo, biciclo[2,2,2]octenilo o biciclo[3,3,1]nonenilo. Un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como fósforo, alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo], cicloalifático, (cicloalifático)alifático, heteroalifático, (heterocicloalifático)alifático, arilo, heteroarilo, alcoxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi, ariloxi, heteroariloxi, (aralifático)oxi, (heteroaralifático)oxi, aroílo, heteroaroílo, amino, amido [por ejemplo, (alifático)carbonilamino, (cicloalifático)carbonilamino, ((cicloalifático)alifático)carbonilamino, (aril)carbonilamino, (aralifático)carbonilamino, (heterocicloalifático)carbonilamino, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilamino, (heteroaril)carbonilamino o (heteroaralifático)carbonilamino], nitro, carboxi [por ejemplo, HOOC-, alcoxicarbonilo o alquilcarboniloxi], acilo [por ejemplo, (cicloalifático)carbonilo, ((cicloalifático)alifático)carbonilo, (aralifático)carbonilo, (heterocicloalifático)carbonilo, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo o (heteroaralifático)carbonilo], ciano, halo, hidroxi, mercapto, sulfonilo [por ejemplo, alquil-SO2- y aril-SO2-], sulfinilo [por ejemplo, alquil-S(O)-], sulfanilo [por ejemplo, alquil- S-], sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.
Como se usa en el presente documento, "resto cíclico" incluye cicloalifático, heteroalifático, arilo o heteroarilo, cada uno de los mismos se ha definido anteriormente.
Como se usa en el presente documento, el término "heterocicloalifático" abarca un grupo heterocicloalquilo y un grupo heterocicloalquenilo, estando cada uno de los mismos opcionalmente sustituido como se expone más adelante.
Como se usa en el presente documento, un grupo "heterocicloalquilo" se refiere a una estructura de anillo mono o bicíclico de 3-10 miembros (condensado o puenteado) (por ejemplo, mono o bicíclico de 5 a 10 miembros), en la que uno o más de los átomos en el anillo es un heteroátomo (por ejemplo, N, O, S o combinaciones de los mismos). Los ejemplos de grupos heterocicloalquilo incluyen piperidilo, piperazilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofurilo, 1,4dioxolanilo, 1,4-ditianilo, 1,3-dioxolanilo, oxazolidilo, isoxazolidilo, morfolinilo, tiomorfolilo, octahidrobenzofurilo, octahidrocromenilo, octahidrotiocromenilo, octahidroindolilo, octahidropirindinilo, decahidroquinolinilo, octahidrobenzo[b]tiofenoílo, 2-oxa-biciclo[2,2,2]octilo, 1-aza-biciclo[2,2,2]octilo, 3-aza-biciclo[3,2,1]octilo y 2,6-dioxatriciclo[3,3,1,03,7]nonilo. Un grupo heterocicloalquilo monocíclico puede estar condensado con un resto fenilo, tal como tetrahidroisoquinolina. Un grupo "heterocicloalquenilo", como se usa en el presente documento, se refiere a una estructura de anillo no aromático mono o bicíclica (por ejemplo, mono o bicíclica de 5 a 10 miembros) que tiene uno o más dobles enlaces y en la que uno o más de los átomos en el anillo es un heteroátomo (por ejemplo, N, O o S). Los heteroalifáticos monocíclicos y bicíclicos se numeran de acuerdo con la nomenclatura química convencional.
Un grupo heterocicloalquilo o heterocicloalquenilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como fósforo, alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo], cicloalifático, (cicloalifático)alifático, heteroalifático, (heterocicloalifático)alifático, arilo, heteroarilo, alcoxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxi, ariloxi, heteroariloxi, (aralifático)oxi, (heteroaralifático)oxi, aroílo, heteroaroílo, amino, amido [por ejemplo, (alifático)carbonilamino, (cicloalifático)carbonilamino, ((cicloalifático)alifático)carbonilamino, (aril)carbonilamino, (aralifático)carbonilamino, (heterocicloalifático)carbonilamino, ((heterocicloalifático) alifático)carbonilamino, (heteroaril)carbonilamino o (heteroaralifático)carbonilamino], nitro, carboxi [por ejemplo, HOOC-, alcoxicarbonilo o alquilcarboniloxi], acilo [por ejemplo, (cicloalifático)carbonilo, ((cicloalifático)alifático)carbonilo, (aralifático)carbonilo, (heterocicloalifático)carbonilo, ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo o (heteroaralifático)carbonilo], nitro, ciano, halo, hidroxi, mercapto, sulfonilo [por ejemplo, alquilsulfonilo o arilsulfonilo], sulfinilo [por ejemplo, alquilsulfinilo], sulfanilo [por ejemplo, alquilsulfanilo], sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.
Un grupo "heteroarilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema de anillos monocíclico, bicíclico o tricíclico que tiene de 4 a 15 átomos en el anillo, en el que uno o más de los átomos en el anillo es un heteroátomo (por ejemplo, N, O, S o combinaciones de los mismos) y en el que el sistema de anillos monocíclico es aromático o al menos uno de los anillos en los sistemas bicíclicos o tricíclicos es aromático. Un grupo heteroarilo incluye un sistema de anillos benzocondensado que tiene de 2 a 3 anillos. Por ejemplo, un grupo benzocondensado incluye benzocondensado con uno o dos restos heterocicloalifáticos de 4 a 8 miembros (por ejemplo, indolizilo, indolilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolinilo, benzo[b]furilo, benzo[b]tiofenilo, quinolinilo o isoquinolinilo). Algunos ejemplos de heteroarilo son azetidinilo, piridilo, 1H-indazolilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, tetrazolilo, benzofurilo, isoquinolinilo, benzotiazolilo, xanteno, tioxanteno, fenotiazina, dihidroindol, benzo[1,3]dioxol, benzo[b]furilo, benzo[b]tiofenilo, indazolilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, purilo, cinolilo, quinolilo, quinazolilo, cinolilo, ftalazilo, quinazolilo, quinoxalilo, isoquinolilo, 4H-quinolizilo, benzo-1,2,5-tiadiazolilo o 1,8-naftiridilo.
Sin limitación, los heteroarilos monocíclicos incluyen furilo, tiofenilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 2H-piranilo,4-H-pranilo, piridilo, piridazilo, pirimidilo, pirazolilo, pirazilo o 1,3,5-triazilo. Se numeran heteroarilos monocíclicos de acuerdo con la nomenclatura química convencional.
Sin limitación, los heteroarilos bicíclicos incluyen indolizilo, indolilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolinilo, benzo[b]furilo, benzo[b]tiofenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolizilo, isoindolilo, indolilo, benzo[b]furilo, benzo[b]tiofenilo, indazolilo, bencimidazilo, benzotiazolilo, purinilo, 4H-quinolizilo, quinolilo, isoquinolilo, cinolilo, ftalazilo, quinazolilo, quinoxalilo, 1,8-naftiridilo o pteridilo. Los heteroarilos bicíclicos se numeran de acuerdo con la nomenclatura química convencional.
Un heteroarilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alifático [por ejemplo, alquilo, alquenilo o alquinilo]; cicloalifático; (cicloalifático)alifático; heterocicloalifático; (heterocicloalifático)alifático; arilo; heteroarilo; alcoxi; (cicloalifático)oxi; (heterocicloalifático)oxi; ariloxi; heteroariloxi; (aralifático)oxi; (heteroaralifático)oxi; aroílo; heteroaroílo; amino; oxo (en un anillo carbocíclico o heterocíclico no aromático de un heteroarilo bicíclico o tricíclico); carboxi; amido; azilo [por ejemplo, alifaticocarbonilo; (cicloalifático)carbonilo; ((cicloalifático)alifático)carbonilo; (aralifático)carbonilo; (heterocicloalifático)carbonilo; ((heterocicloalifático)alifático)carbonilo; o (heteroaralifático)carbonilo]; sulfonilo [por ejemplo, alifaticosulfonilo o aminosulfonilo]; sulfinilo [por ejemplo, alifaticosulfinilo]; sulfanilo [por ejemplo, alifáticosulfanilo]; nitro; ciano; halo; hidroxi; mercapto; sulfoxi; urea; tiourea; sulfamoílo; sulfamida; o carbamoílo. Como alternativa, un heteroarilo puede estar sin sustituir.
Los ejemplos no limitantes de heteroarilos sustituidos incluyen (halo)heteroarilo [por ejemplo, mono- y di(halo)heteroarilo]; (carboxi)heteroarilo [por ejemplo, (alcoxicarbonil)heteroarilo]; cianoheteroarilo; aminoheteroarilo [por ejemplo, ((alquilsulfonil)amino)heteroarilo y ((dialquil)amino)heteroarilo]; (amido)heteroarilo [por ejemplo, aminocarbonilheteroarilo, ((alquilcarbonil)amino)heteroarilo, ((((alquil)amino)alquil)aminocarbonil)heteroarilo, (((heteroaril)amino)carbonil)heteroarilo, ((heterocicloalifático)carbonil)heteroarilo y ((alquilcarbonil)amino)heteroaril]; (cianoalquil)heteroarilo; (alcoxi)heteroarilo; (sulfamoil)heteroarilo [por ejemplo, (aminosulfonil)heteroarilo]; (sulfonil)heteroarilo [por ejemplo, (alquilsulfonil)heteroarilo]; (hidroxialquil)heteroarilo; (alcoxialquil)heteroarilo; (hidroxi)heteroarilo; ((carboxi)alquil)heteroarilo; (((dialquil)amino)alquil]heteroarilo; (heterocicloalifático)heteroarilo; (cicloalifático)heteroarilo; (nitroalquil)heteroarilo; (((alquilsulfonil)amino)alquil)heteroarilo; ((alquilsulfonil)alquil)heteroarilo; (cianoalquil)heteroarilo; (acil)heteroarilo [por ejemplo, (alquilcarbonil)heteroarilo]; (alquil)heteroarilo y (haloalquil)heteroarilo [por ejemplo, trihaloalquilheteroarilo].
Un "heteroalifático" (tal como un grupo heteroaralquilo) como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alifático (por ejemplo, un grupo alquilo-(C1-4)) que está sustituido con un grupo heteroarilo. "Alifático", "arilo" y "heteroarilo" se han definido anteriormente.
Un grupo "heteroaralquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo (por ejemplo, un grupo alquilo-(C1-4)) que está sustituido con un grupo heteroarilo. Tanto "alquilo" como "heteroarilo" se han definido anteriormente en el presente documento. Un heteroaralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alquilo (incluyendo carboxialquilo, hidroxialquilo y haloalquilo, tal como trifluorometilo), alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, (cicloalquil)alquilo, heterocicloalquilo, (heterocicloalquil)azilo, arilo, heteroarilo, alcoxi, cicloalcoxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroílo, heteroaroílo, nitro, carboxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidroxi, acilo, mercapto, alquilsulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.
Como se usa en el presente documento, un grupo "acilo" se refiere a un grupo formilo o Rx-C(O)- (tal como alquil-C(O)-, también denominado como "alquilcarbonilo") en el que Rx y "alquilo" se han definido anteriormente. Acetilo y pivaloílo son ejemplos de grupos acilo.
Como se usa en el presente documento, un "aroílo" o "heteroaroílo" se refiere a un aril-C(O)- o un heteroaril-C(O)-. La porción de arilo y heteroarilo de los aroílo o heteroaroílo está opcionalmente sustituida como se ha definido previamente.
Como se usa en el presente documento, un grupo alcoxi "alcoxi" se refiere a un grupo alquil-O-, en el que "alquilo" se ha definido anteriormente.
Como se usa en el presente documento, un grupo "carbamoílo" se refiere a un grupo que tiene la estructura -O-CO-NRxRy o -NRx-CO-O-Rz, en las que Rx y Ry se han definido anteriormente y Rz puede ser alifático, arilo, aralifático, heteroalifático, heteroarilo o heteroalifático.
Como se usa en el presente documento, un grupo "carboxi" se refiere a -COOH, -COORx, -OC(O)H, -OC(O)Rx, cuando se usa como grupo terminal; o -OC(O)- o -C(O)O- cuando se usa como un grupo interno.
Como se usa en el presente documento, un grupo "haloalifático" se refiere a un grupo alifático sustituido con 1-3 halógenos. Por ejemplo, el término haloalquilo incluye el grupo -CF3.
Como se usa en el presente documento, un grupo "mercapto" se refiere a -SH.
Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfo" se refiere a -SO3H o -SO3Rx, cuando se usa de manera terminal o -S(O)3- cuando se usa de manera interna.
Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfamida" se refiere a la estructura -NRx-S(O)2-NRyRz cuando se usa de manera terminal y -NRx-S(O)2-NRy- cuando se usa de manera interna, en la que Rx, Ry y Rz se han definido anteriormente en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfonamida" se refiere a la estructura -S(O)2NRxRy o -NRx-S(O)2Rz cuando se usa de forma terminal, o -S(O)2-NRx- o -NRx -S(O)2- cuando se usa de manera interna, en las que RX, RY, y Rz se han definido anteriormente.
Como se usa en el presente documento un grupo "sulfanilo" se refiere a -S-Rx, cuando se usa de manera terminal y S- cuando se usa de manera interna, en el que Rx se ha definido anteriormente. Los ejemplos de sulfanilos incluyen alifático-S-, cicloalifático-S-, aril-S- o similar.
Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfinilo" se refiere a -S(O)-Rx, cuando se usa de manera terminal y -S(O)- cuando se usa de manera interna, en el que Rx se ha definido anteriormente. Los grupos sulfinilo ejemplares incluyen alifático-S(O)-, aril-S(O)-, (cicloalifático(alifático))-S(O)-, cicloalquil-S(O)-, heterocicloalifático-S(O)-, heteroaril-S(O)- o similares.
Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfonilo" se refiere a -S(O)2-Rx cuando se usa de manera terminal y -S(O)2- cuando se usa de manera interna, en el que Rx se ha definido anteriormente. Los grupos sulfonilo ejemplares incluyen alifático-S(O)2-, aril-S(O)2-, (cicloalifático(alifático))-S(O)2-, cicloalifático-S(O)2-, heterocicloalifático-S(O)2-, heteroaril-S(O)2-, (cicloalifático(amido(alifático)))-S(O)2- o similar.
Como se usa en el presente documento, un grupo "sulfoxi" se refiere a -O-SO-Rx o -SO-O-Rx, cuando se usa de manera terminal y -O-S(O)- o -S (O)-O- cuando se usa de manera interna, en el que Rx se ha definido anteriormente. Como se usa en el presente documento, un grupo "halógeno" o "halo" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo. Como se usa en el presente documento, un "alcoxicarbonilo", que está incluido en el término carboxi, usado solo o junto con otro grupo, se refiere a un grupo, tal como alquil-O-C(O)-. Como se usa en el presente documento, un "alcoxialquilo" se refiere a un grupo alquilo, tal como alquil-O-alquil-, en el que alquilo se ha definido anteriormente.
Como se usa en el presente documento, un "carbonilo" se refiere a -C(O)-.
Como se usa en el presente documento, un "oxo" se refiere a =O.
Como se usa en el presente documento, el término "fosfo" se refiere a fosfinatos y fosfonatos. Los ejemplos de fosfinatos y fosfonatos incluyen P(O)(Rp)2, en el que Rp es alifático, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, (cicloalifático)oxi, (heterocicloalifático)oxiarilo, heteroarilo, cicloalifático o amino.
Como se usa en el presente documento, un "aminoalquilo" se refiere a la estructura (Rx)2N-alquil-.
Como se usa en el presente documento, un "cianoalquilo" se refiere a la estructura (NC)-alquil-.
Como se usa en el presente documento, un grupo "urea" se refiere a la estructura -NRx-CO-NRYyRz y un grupo "tiourea" se refiere a la estructura -NRx-CS-NRyRz, cuando se usa de manera terminal, -NRx-CO-NRy- o -NRx-CS-NRy- cuando se usa de manera interna, en el que RX, Ry y Rz se han definido anteriormente en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, un grupo "guanidina" se refiere a la estructura -N=C(N(RxRy))N(RxRy) o NRX-C(=NRX)NRXRY donde Rx y Ry se han definido anteriormente en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, el término grupo "amidino" se refiere a la estructura -C=(NRx)N(RxRy), en la que Rx y Ry se han definido anteriormente en el presente documento.
En general, el término "vecinal" se refiere a la colocación de sustituyentes en un grupo que incluye dos o más átomos de carbono, en la que los sustituyentes están unidos a átomos de carbono adyacentes.
En general, el término "geminal" se refiere a la colocación de los sustituyentes en un grupo que incluye dos o más átomos de carbono, en la que los sustituyentes están unidos al mismo átomo de carbono.
Los términos "terminal" e "interna" se refieren a la situación de un grupo dentro de un sustituyente. Un grupo es terminal cuando el grupo está presente en el extremo del sustituyente sin estar enlazado adicionalmente al resto de la estructura química. Carboxialquilo, es decir, RXO(O)C-alquilo es un ejemplo de un carboxi usado de manera terminal. Un grupo es interno cuando el grupo está presente en el medio de un sustituyente de la estructura química. Alquilcarboxi (por ejemplo, alquil-C(O)O-o alquil-OC(O)-) y alquilcarboxiarilo (por ejemplo, alquil-C(O)O-aril- o alquilO(CO)-aril-) son ejemplos de grupos carboxi usados de manera interna.
Como se usa en el presente documento, "grupo cíclico" incluye sistemas de anillos mono-, bi- y tricíclicos, incluyendo cicloalifático, heteroalifático, arilo o heteroarilo, cada uno de los mismos se ha definido anteriormente.
Como se usa en el presente documento, un "sistema de anillos bicíclico puenteado" se refiere a un sistema de anillos bicíclico heterociclicoalifático en el que los anillos están puenteados. Los ejemplos de sistemas de anillos bicíclicos puenteados incluyen, pero sin limitación, adamantanilo, norbornanilo, biciclo[3,2,1]octilo, biciclo[2,2,2]octilo, biciclo[3,3,1]nonilo, biciclo[3,2,3]nonilo, 2-oxabiciclo[2,2,2]octilo, 1-azabiciclo[2,2,2]octilo, 3-azabiciclo[3,2,1]octilo, y 2,6-dioxa-triciclo[3,3,1,03,7]nonilo. Un sistema de anillos bicíclico puenteado puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alquilo (incluyendo carboxialquilo, hidroxialquilo y haloalquilo, tal como trifluorometilo), alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, (cicloalquil)alquilo, heterocicloalquilo, (heterocicloalquil)alquilo, arilo, heteroarilo, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloalquiloxi, ariloxi, heteroariloxi, aralquiloxi, heteroaralquiloxi, aroílo, heteroaroílo, nitro, carboxi, alcoxicarbonilo, alquilcarboniloxi, aminocarbonilo, alquilcarbonilamino, cicloalquilcarbonilamino, (cicloalquilalquil)carbonilamino, arilcarbonilamino, aralquilcarbonilamino, (heterocicloalquil)carbonilamino, (heterocicloalquilalquil)carbonilamino, heteroarilcarbonilamino, heteroaralquilcarbonilamino, ciano, halo, hidroxi, acilo, mercapto, alquilsulfanilo, sulfoxi, urea, tiourea, sulfamoílo, sulfamida, oxo o carbamoílo.
Como se usa en el presente documento, una "cadena alifática" se refiere a un grupo alifático lineal o ramificado (por ejemplo, grupos alquilo, grupos alquenilo o grupos alquinilo). Una cadena alifática lineal tiene la estructura [CH2]v-, en la que v es 1-6. Una cadena alifática ramificada es una cadena alifática lineal que está sustituida con uno o más grupos alifáticos. Una cadena alifática ramificada tiene la estructura -[CHQ]v-, en la que Q es hidrógeno o un grupo alifático; sin embargo, Q debe ser un grupo alifático en al menos un caso. El término cadena alifática incluye cadenas de alquilo, cadenas de alquenilo y cadenas de alquinilo, en las que alquilo, alquenilo y alquinilo se han definido anteriormente.
La expresión "opcionalmente sustituido" se usa de manera intercambiable con la frase "sustituido o sin sustituir". Como se describe en el presente documento, los compuestos de la invención pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tales como los que se han ilustrado de manera general anteriormente o como se ilustran mediante clases particulares, subclases y especies de la invención. Como se describe en el presente documento, las variables R1, R2 y R3, y otras variables contenidas en el presente documento abarcan grupos específicos, tales como alquilo y arilo. A menos que se indique otra cosa, cada uno de los grupos específicos para las variables R1, R2 y R3, y otras variables contenidas en el presente documento, puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes descritos en el presente documento. Cada sustituyente de un grupo específico está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno a tres halo, ciano, oxo, alcoxi, hidroxi, amino, nitro, arilo, cicloalifático, heteroalifático, heteroarilo, haloalquilo y alquilo. Por ejemplo, un grupo alquilo puede estar sustituido con alquilsulfanilo y el alquilsulfanilo puede estar opcionalmente sustituido con uno a tres halo, ciano, oxo, alcoxi, hidroxi, amino, nitro, arilo, haloalquilo y alquilo. Como un ejemplo adicional, la porción cicloalquilo de un (cicloalquil)carbonilamino puede estar opcionalmente sustituida con uno a tres halo, ciano, alcoxi, hidroxi, nitro, haloalquilo y alquilo. Cuando dos grupos alcoxi están enlazados al mismo átomo o a átomos adyacentes, los dos grupos alcoxi pueden formar un anillo junto con el átomo o átomos a los que están enlazados.
En general, el término "sustituido", tanto si va precedido por el término "opcionalmente" como si no, se refiere al remplazo de radicales hidrógeno en una estructura dada con el radical de un sustituyentes especificado. Se han descrito sustituyentes específicos anteriormente en las definiciones y se describen posteriormente en la descripción de compuestos y ejemplos de los mismos. A menos que se indique otra cosa, un grupo opcionalmente sustituido puede tener un sustituyente en cada posición sustituible del grupo, y cuando más de una posición en cualquier estructura dada puede estar sustituida con más de un sustituyente seleccionado entre un grupo específico, el sustituyente puede ser igual o diferente en cada posición. Un sustituyente de anillo, tal como un heterocicloalquilo, puede enlazarse a otro anillo, tal como un cicloalquilo, para formar un sistema de anillos espirobicíclico, por ejemplo, ambos anillos comparten un átomo en común. Como reconocerá un experto en la materia, las combinaciones de sustituyentes previstas por la presente invención son aquellas que dan como resultado la formación de compuestos químicamente factibles o estables.
La expresión "estable o químicamente factible", como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos que no se alteran sustancialmente cuando se someten a condiciones para permitir su producción, detección y preferentemente su recuperación, purificación y uso para uno o más de los propósitos desvelados para el presente documento. En algunas realizaciones, un compuesto estable o compuesto químicamente factible es uno que no se altera sustancialmente cuando se mantiene a una temperatura de 40 ºC o menos, en ausencia de humedad u otras condiciones químicamente reactivas, durante al menos una semana.
Como se usa en el presente documento, una cantidad eficaz se define como la cantidad que se necesita para conferir un efecto terapéutico en el paciente tratado, y se determina típicamente basándose en edad, área superficial, peso y afección del paciente. La interrelación de dosis para animales y seres humanos (basada en miligramos por metro cuadrado de superficie corporal) se describe por Freireich y col., CancerChemother. Rep., 50: 219 (1966). El área de superficie corporal puede determinarse de forma aproximada a partir de la altura y peso del paciente. Véase, por ejemplo, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, Nueva York, 537 (1970). Como se usa en el presente documento, "paciente" se refiere a un mamífero, incluyendo un ser humano.
A menos que se indique otra cosa, las estructuras representadas en el presente documento también pretenden incluir todas las formas isoméricas (por ejemplo, enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales)) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, isómeros de doble enlace (Z) y (E) e isómeros conformacionales (Z) y (E). Por tanto, los isómeros estereoquímicos sencillos así como mezclas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales) de los compuestos de la presente invención están dentro del alcance de la invención. A menos que se indique otra cosa, todas las formas tautoméricas de los compuestos de la invención están dentro del alcance de la invención. Además, a menos que se indique otra cosa, las estructuras representadas en el presente documento también pretenden incluir compuestos que se diferencian únicamente en la presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, compuestos que tienen las estructuras presentes excepto por la sustitución de hidrógeno por deuterio o tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono enriquecido 13C o 14C están dentro del alcance de la presente invención. Dichos compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas analíticas o sondas en ensayos biológicos, o como agentes terapéuticos.
En otros aspectos, la invención destaca ciertos compuestos como los descritos posteriormente genérica y específicamente. Dichas descripciones específicas son únicamente ilustrativas y no pretenden limitar el alcance de los compuestos o usos de los mismos. Los compuestos que tienen los elementos estructurales de un inhibidor de serina proteasa incluyen, pero sin limitación, los compuestos de las siguientes publicaciones: WO 97143310, US 20020016294, WO 01/81325, WO 01/58929, WO 01/32691, WO 02/08198, WO 01/77113, WO 02/08187, WO 02/08256, WO 02/08244, WO 03/006490, WO 01/74768, WO 99/50230, WO 98/17679, WO 02/48157, WO 02/08251, WO 02/07761, WO 02/48172, WO 02/08256, US 20020177725, WO 02/060926, US 20030008828, WO 02/48116, WO 01/64678, WO 01/07407, WO 98/46630, WO 00/59929, WO 99/07733, WO 00/09588, US 20020016442, WO 00/09543, WO 99/07734, US 6.018.020, US 6.265.380, US 6.608.027, US 20020032175, US 20050080017, WO 98/22496, WO 05/028502, US 5.866.684, WO 02/079234, WO 00131129, WO 99/38888, WO 99/64442, WO 2004072243, WO 02/18369, US 2006046956, US2005197301, WO 2005058821, WO 2005051980, WO 2005030796, WO 2005021584, WO 2005113581, WO 200587731, WO 2005087725, WO 2005087721, WO 2005085275, WO 2005085242, US 2003216325, WO 2003062265, WO 2003062228, WO 2002008256, WO 2002008198, WO 2002008187, WO 2002048172, WO 2001081325, WO 2001077113, US 6251583, US 5990276, US 20040224900, US 20040229818, WO 2004037855, WO 2004039833, WO 200489974, WO 2004103996, WO 2004030670, WO 2005028501, WO 2006007700, WO 2005070955, WO 2006007708, WO 2006000085, WO 2005073195, WO 2005073216, WO 2004026896, WO 2004072243, WO 2004113365, WO 2005010029, US 20050153877, WO 2004093798 WO 2004094452, WO 2005046712, WO 2005051410, WO 2005054430, WO 2004032827, WO 2005095403, WO 2005077969, WO 2005037860, WO 2004092161, WO 2005028502 WO 2003087092 y WO 2005037214.
Los compuestos de la invención se muestran a continuación en la Tabla A.
y se diluyó EtOAc. Las fases se separaron y los extractos orgánicas se secaron (MgSO4), se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía sobre gel de sílice, dando el compuesto X27 en forma de una mezclas de dos diastereómeros: isómero 1: RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 4,50 (s a), 2,27 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,65 (m, 4H), 1,39 (m,4H), 1,22 (s, 3H) ppm; isómero 2: RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 2,12 (m, 2H), 1,69 (m, 3H), 1,56 (m, 2H), 1,39 (m, 2H), 1,12 (s, 3H), 1,05 (m, 2H) ppm.
Preparación de ácido 2-(2,2-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)acético
A una solución del éster metílico (500 mg; 2,69 mmol) en THF (21,5 ml), MeOH (21,5 ml) y agua (10,75 ml) se le añadió LiOH (1 N; 10,75 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas. La reacción se acidificó con HCl (1 N,
10 pH = 5). El producto se extrajo con EtOAc (dos veces, cada una 20 ml). Después, las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y se concentraron al vacío, proporcionando 420 mg de ácido 2-(2,2-dimetiltetrahidro2H-piran-4-il)acético. RMN de 1H (CDCl3): G 3,76-3,67 (m, 2H), 2,56-2,19 (m, 3H), 1,63 (m, 2H), 1,26-1,10 (m, 8H). (M+1) 173.
15 A una solución del compuesto X30 (64 g, 237 mmol) y EDC (226 g, 1,19 mol) en EtOAc (1,5 l) se le añadió DMSO (400 ml) y la suspensión resultante se enfrió a 0 ºC. A esta mezcla se le añadió una solución de ácido dicloroacético en EtOAc (1:1 v/v, 130 ml), manteniendo la temperatura interna de la reacción por debajo de 25 ºC. La reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 15 minutos, se enfrió a 0 ºC y se detuvo con HCl 1 N (1 l). La fase orgánica se separó, se lavó con H2O (2 x 500 ml), se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida. El aceite
20 resultante se filtró a través de un lecho de sílice eluyendo con EtOAc/hexanos para proporcionar 48 g (76%) del compuesto X31 en forma de un sólido de color blanco.
A la resina X32 (preparada de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 00/23421) (100 g, 0,88 mmol/g) se le añadió una solución de X31 (48 g, 179 mmol) en THF (650 ml), seguido de AcOH (30 ml). La mezcla se agitó durante 16 horas y la resina se filtró, se lavó con THF (4 veces, cada una 400 ml) y CH2Cl2 (4 veces, cada
25 una 400 ml) y se secó al vacío. El filtrado y los lavados se combinaron y se concentraron, y se repitió el procedimiento anterior para proporcionar la X33 con una carga de aproximadamente 0,4 mmol/g.
Preparación de Compuestos Aldehído
Se preparó 5-cloronicotinaldehído de acuerdo con los procedimientos descritos por D.L. Comins y col. en Hetereocycles, 1987, 26 (8), pp. 2159-2164.
30 Algunos otros aldehídos, tales como 2-fluoro-5-clorobenzaldehído, 2-metoxi-3-metil benzaldehído, 2metoxinicotinaldehído, 2,3-dihidrobenofuran-7-carbaldehído, pueden fabricarse a partir del ácido correspondiente basándose en el siguiente procedimiento:
Preparación de 2,3-dihidrobenzofuran-7-carbaldehído
Se disolvió ácido 2,3-dihidrobenzofuran-7-carboxílico (820 mg, 5 mmol) en THF (10 ml). A la solución se le añadió TEA (0,7 ml, 5 mmol) y cloroformiato de metilo (0,43 ml, 5 mmol). La solución se agitó durante 0,5 horas. Los 5 precipitados de color blanco se retiraron por filtración, el filtrado se añadió a una solución de NaBH4 (437 mg, 12,5 mmol) en H2O (5 ml). La solución resultante se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se neutralizó con una solución acuosa 2 M de HCl y después se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío. El alcohol en bruto se disolvió en DCM. A la solución se le añadió PCC (1,83 g, 7,5 mmol). La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente y se diluyó con éter dietílico,
10 después las fases se decantaron. La fase orgánica combinada se filtró a través de una capa de Celite®. El filtrado se concentró, produciendo un producto en bruto. El producto en bruto se purificó a partir de una columna con EtOAc al 10%/hexano, proporcionando 450 mg de 2,3-dihidrobenzofuran-7-carbaldehído en forma de un sólido de color ligeramente amarillo. HPLC 4,3 min.
15 Preparación de 4-cloropicolinaldehído
Una suspensión de MnO2 (7,3 g, 84 mmol) y (4-cloro-pirindin-2-il)metanol (1 g, 7 mmol) en CHCl3 se calentó a reflujo durante 90 minutos. La mezcla se filtró a través de una capa de Celite® y se concentró al vacío, proporcionando 520 mg de 4-cloropicolinaldehído en forma de un sólido de color blanco. HPLC 1,8 minutos y EM 142 como pico M=1.
20 Preparación de 3-cloro-5-metoxibenzaldehído
Una mezcla de 3-cloro-5-metoxibencil alcohol (5,0 g, 28,9 mmol) y clorocromato de pirdinio (al 20% en alúmina, 40 g, 37,8 mmol) se dejó en agitación durante 1,25 h. Después, se añadió éter dietílico (200 ml), seguido de filtración del precipitado. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando diclorometano al 40%, éter de petróleo al 60% como eluyente, dando 3,8 g de 3-cloro-5
25 metoxibenzaldehído (78%). RMN 1H (CDCl3): 3,84 (s, 3H) 7,13 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 9,89 (s, 1H).
Preparación de 1-(bromometil)-3-cloro-5-metilbenceno
A una solución de m-cloroxileno (0,96 g, 6,8 mmol) en tetracloruro de carbono a reflujo, se le añadió Nbromosuccinimida (1,4 g, 7,5 mmol) seguido de peróxido de benzoílo (1,6 g, 6,8 mmol). La reacción se dejó en 30 agitación durante 20 minutos y se enfrió a temperatura ambiente, el precipitado se retiró por filtración, el filtrado se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, usando éter de
petróleo como eluyente para dar 0,89 g de 1-(bromometil)-3-cloro-5-metilbenceno (60%). RMN (CDCl3): 2,31 (s, 3H) 4,37 (s,2H) 7,09 (s,1H) 7,12 (s,1H) 7,20 (s,1H).
Preparación de 3-cloro-5-metilbenzaldehído
5 A una solución de metal sódico ( 52 mg, 2,3 mmol) en etanol se le añadió 2-nitropropano (0,23 g, 2,4 mmol) seguido de la adición de bromuro de 3-cloro-5-metilbencilo (0,5 g, 2,3 mmol). La reacción se dejó en agitación durante 3 horas y el precipitado formado se retiró por filtración. El filtrado se concentró a presión reducida, se redisolvió en éter dietílico, se lavó con hidróxido sódico 1 N (dos veces), agua y se secó sobre sulfato sódico, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando
10 diclorometano al 10% y éter de petróleo al 90%, para dar 0,15 g de 3-cloro-5-metilbenzaldehído (42%). RMN 1H (CDCl3): 2,46 (s, 3H) 7,43(s, 1H) 7,56 (s, 1H) 7,68(s, 1H), 9,92 (s, 1H).
Se calentó a reflujo 3-cloro-5-fluoro-4-hidroxibenzaldehído (1,0 gramo, 5,7 mmol) en THF (40 ml) durante 17 horas con KOH (534 mg, 9,5 mmol, 1,7 equiv.) en agua (5 ml) y yodoetano (1 ml, 2,2 equiv.). Después, la reacción se
15 transfirió a un embudo de decantación con agua y se extrajo con cloruro de metileno (tres veces, cada una 150 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con HCl acuoso al 10% (40 ml), se secaron (MgSO4) y se concentraron a un líquido viscoso de color naranja, produciendo 1,13 g de 3-cloro-4-etoxi-5-flurobenzaldehído (98%). RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 9,84 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,71 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 1,9, 10,7 Hz, 1H), 4,37-4,32 (m, 2H), 1,47-1,40 (m, 3H).
Se preparó 4-etoxi-3,5-dimetilbenzaldehído de una manera similar a la de 3-cloro-4-etoxi-5-flurobenzaldehído. RMN1H (300 MHz, CDCl3): 9,89 (s, 1H), 7,56 (s, 2H), 3,91 (c, 7 Hz, 1H), 2,34 (s, 6H), 1,44 (t, J = 7 Hz, 6H).
Se preparó 4-isopropoxi-3,5-dimetilbenzaldehído de una manera similar a la de 4-etoxi-3,5-dimetilbenzaldehído. 25 RMN 1H (300 MHz, CDCl3): 9,88 (s, 1H),7,55(s, 2H), 4,31 (c, J = 6 Hz, 1 H), 2,32 (s, 6H), 1,32 (d, J = 6 Hz, 6H).
Se preparó 4-(ciclopropilmetoxi)-3,5-dimetilbenzaldehído de una manera similar a la de 4-etoxi-3,5dimetilbenzaldehído. RMN 1H (300 MHz, CDCl3): 9,87 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 3,69 (d, J = 7 Hz, 2H), 2,35 (s, 6H), 1,351,23 (m, 1H), 0,67-.060 (m, 2H), 0,35-0,30 (m, 2H).
Preparación de ácido (S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-oxopirrolidin-2-carboxílico.
Una solución de ácido (2S,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico (1,0 equiv.) en acetato de isopropilo (5 vol) se enfrió a 0 ºC y se añadió TEMPO (0,05 equiv.). Después, se añadió lentamente durante una hora una solución de lejía (12,5% en peso, 1,2 equiv., 2,6 vol), mientras se mantenía la temperatura a 0-5 ºC. La 10 mezcla se agitó y se supervisó por HPLC su finalización, después, se añadió KHSO4 acuoso al 10% (2,5 vol), se agitó durante 10 minutos y después las fases se separaron. La fase orgánica se lavó con Na2SO3 acuoso al 5% (2 vol), después salmuera (1 vol), después se secó azeotrópicamente y se concentró, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido. El sólido se trituró con acetonitrilo (1,0 vol) para retirar las impurezas y el color residual. RMN 1H (400 MHz, DMSO): 8 4,54 (m, 1H), 3,82 (m, 1H), 3,67 (m, 1H); 3,15 (m, 1H); = 2,50 (m, 1H, coincide con
15 DMSO); 1,42 y 1,39 (rotámeros 2 s, 9H).
Preparación de ácido (S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-metilenopirrolidin-2-carboxílico
A una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (2,2 equiv.) en 2-metil tetrahidrofurano (3 vol) se le añadió rápidamente terc-butóxido potásico (2,3, equiv.), manteniendo la temperatura en torno a 0 ºC. La temperatura se 20 mantuvo a +20 ºC durante 2 horas (permanecía una suspensión) y se enfrió de nuevo a 0 ºC. Manteniendo la temperatura por debajo de 6 ºC, se añadió ácido (S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-oxopirrolidin-2-carboxílico (1 equiv.) durante 40 minutos. La reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 16 h y después se enfrió a 0 ºC. La reacción se interrumpió con NaHCO3 saturado (5 vol) y agua (2 vol) y la fase acuosa se separó. La fase orgánica se extrajo con NaHCO3 saturado/agua (1,8 vol/1,8 vol) y las fases acuosas combinadas se filtraron a través 25 de Celite®. La fase acuosa se acidificó con HCl 6 N (2,6 vol) a temperatura ambiente y se extrajo dos veces con acetato de isopropilo (16 vol, después 8 vol). La fase orgánica se secó (MgSO4) y el disolvente se retiró. El producto en bruto se disolvió en acetato de isopropilo (10 vol) y se extrajo con NaOH 0,5 M (10 vol, después 1 vol). Las fases acuosas combinadas se acidificaron a temperatura ambiente con HCl 6 N a pH = 3 y se extrajeron dos veces con acetato de etilo (10 vol, después 8 vol). Los extractos combinados se secaron (Na2SO4), el disolvente se retiró y el
30 producto en bruto se recristalizó en ciclohexano (5 vol), proporcionando el compuesto del título. RMN 1H (400 MHz, DMSO): 8 12,9, (ancho, 1H); 5,00 (m, 2H); 4,24 (df, J = 1,9 H, J = 7,3 Hz, 1H), 3,91 (m, 2H); 2,98 (m, 1H); = 2,50 (m, 1H, coincide con DMSO); 1,41 y 1,36 (rotámeros 2 s, 9H).
Preparación de (5S,8S)-terc-butil 3-(3-clorofenil)-1-oxa-2,7-diazaespiro[4,4]non-2-eno-8-carboxilato.
Una solución de cloruro de 3-cloro-N-hidroxibenzoimidoilo (175 g, 0,919 moles) en EtOAc (2,1 l) se añadió a una solución de 4-metilenopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (S)-di-terc-butilo (200 g, 0,707 moles) en EtOAc (2,0 l) a temperatura ambiente. La mezcla se enfrió por debajo de 10 ºC en un baño de hielo y después se añadió lentamente
5 trietilamina (128 ml, 0,919 moles). La mezcla resultante se agitó durante una noche y después se inactivó con agua (3 l). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con agua (2 x 1,0 l), se secó sobre MgSO4, y el disolvente se retiró, proporcionando una mezcla de las sin- y anti- espiroisoxazolinas en forma de un aceite.
La mezcla de isómeros se disolvió en THF (0,72 l) y se enfrió a 20 ºC. Se añadió lentamente ácido metanosulfónico (150 ml), manteniendo 20 a 30 ºC. La mezcla se agitó a 25 ºC y se inactivó después de 7 horas añadiendo 10 cuidadosamente una solución de K2CO3 (300 g) en agua (1 l). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de isopropilo(1 l). Las fases orgánicas se combinaron y aproximadamente la mitad del disolvente se retiró al vacío. La solución se lavó con una mezcla 1:1 de salmuera saturada (250 ml) y agua (250 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de isopropilo (200 ml) y después las fases orgánicas combinadas se secaron sobre K2CO3 y se filtraron, proporcionando una solución homogénea. El volumen de solución se aumentó a 3 l, añadiendo 15 acetato de isopropilo y después se añadió lentamente una solución de ácido oxálico (20 g) en acetato de isopropilo (400 ml). El sólido se aisló por filtración y se secó en un horno de vacío. El sólido se suspendió en acetato de isopropilo (1,5 l) y agua (1,0 l), después se añadió lentamente K2CO3 hasta que los sólidos se disolvieron por completo. La fase orgánica se aisló, se secó sobre K2CO3, se filtró y después se añadió lentamente una solución de ácido oxálico (12,5 g) en acetato de isopropilo (250 ml). El sólido se aisló por filtración y se secó en un horno de
20 vacío, dando las espiroisoxazolinas en forma de una mezcla anti-/sin-98:2 de diastereómeros. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): G 7,67-7,48 (m, 4H), 4,08 (dd, J = 7,9, 8,9 Hz, 1H), 3,55 (s, 2H), 3,27 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 2,46 (dd, J = 7,8, 13,8 Hz, 1H), 2,19 (dd, J = 9,1, 13,8 Hz, 1H), 1,46 (d, J = 7,5 Hz, 9H).
El Compuesto X36 (1,0 g, 1,0equiv.) se agitó en 20 ml benceno con benzoilnitrometano (583 mg, 1,0 equiv.) y
25 trietilamina catalítica. Se añadió lentamente isocianato de fenilo (880 ul) y se agitó durante 40 horas. El precipitado de color oscuro se retiró por filtración, al filtrado se le añadieron 2 ml de agua y la mezcla se agitó durante 2 horas. Los extractos orgánicos se separaron y se concentraron, se purificaron por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 10-90%/hexanos), dando 350 mg del CompoundX37 (25%). (M+H = 431,2,) RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 8,19 (d, 2H), 7,61 (t, 1H), 7,56-7,46 (m, 2H), 4,45-4,36 (m, 1H), 3,99-3,88 (m, 1H), 3,61 (d, 1H),
30 3,39-3,33 (m, 2H), 2,77 (m, 1H), 2,17-2,12 (m, 1H), 1,49 (s, 9H) 1,46 (s, 9H).
El Compuesto X37 (1,35 g. 1,0 equiv.) se agitó en 20 ml de TFA/DCM 1/1 durante 2 horas. La mezcla se concentró y se le añadieron 20 ml de acetona, 20 ml de una solución saturada de bicarbonato sódico y FMOC-Cl (1,22 g, 1,5 equiv.). La mezcla se agitó durante 3 horas y se diluyó con acetato de etilo y una solución 2 N de HCl hasta que el extracto acuoso se volvió ácido. La mezcla se agitó, el extracto acuoso se extrajo con acetato de etilo, los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El concentrado se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de DMC al 100%-MeOH al 10%/DCM), dando el Compuesto X38. (M+H = 497,1).
10 A una solución de 2,3-dihidrobenzofurano 5-carboxaldehído (1 g, 6,75 mmol) en etanol (5 ml) se le añadió una solución 2,4 M de NH2OH (3,3 ml, 8,1 mmol) y después una solución 1,2 M de Na2CO3 (3,3 ml, 4,05 mmol). La solución resultante se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente (el análisis HPLC mostró que no quedaba material de partida). La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. Esto proporcionó 1,0 g del producto en forma de un sólido de color blanco. EN-EM 164 como
15 pico M+1.
A una solución de aldoxima (426 mg, 2,6 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió NCS (697 mg, 5,2 mmol). La mezcla resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A la solución se le añadió 4-metilenopirrolidin-1,2dicarboxilato de (S)-di-terc-butilo, Compuesto 1, (600 mg, 2,1 mmol) y después se añadió una solución de TEA (0,37
20 ml, 2,6 mmol) en DMF (2 ml) durante 10 minutos. La mezcla de reacción se agitó durante 4 h a temperatura ambiente y después se calentó a 50-60 ºC durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (20 ml) y se lavó con H2O y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. Los productos en bruto se purificaron por cromatografía en columna ultrarrápida eluyendo con EtOAc 30%/Hexano, para proporcionar el isómero S (500-600 mg) (Fr = 0,3) y R (150 mg) (Fr = 0,2). EN-EM 479 como pico M+1.
25 B. S�?NTESIS DE COPUESTOS EJEMPLARES DE FORMULA I
Ciertos compuestos ejemplares de la Fórmula I pueden prepararse por el Procedimiento I como se ilustra a continuación.
PROCEDIMIENTO 1:
En referencia al Procedimiento 1, el compuesto de exometileno A1 se desprotege para dar A2, que se convierte en el derivado de Fmoc correspondiente A3. La reacción del aminoalcohol enlazado a resina A4 con A3 en presencia 5 de un reactivo de acoplamiento proporciona el producto enlazado a resina A5. Una reacción de adición dipolar de A5 con el óxido de nitrlilo 1f, generada in situ, proporciona la espiroisoxazolina enlazada a resina A6, que se desprotege para proporcionar la espiroisoxazolina enlazada a resina A7. La reacción de A7 con un R1-ácido carboxílico en presencia de un agente de acoplamiento proporciona A8, en el que R1 es R4C(O)-. La escisión de la espiroisoxazolina de la resina proporciona el alcohol A9. La oxidación de A9 con un reactivo de oxidación, tal como
10 peryodinano de Dess-Martin o hipoclorito sódico en presencia de TEMPO proporciona el compuesto final A10.
En algún caso, R4 puede contener una funcionalidad amina. Cuando R4 contiene una amina protegida, la desprotección de la amina protegida para dar una amina libre, seguido de una reacción con un ácido activado, proporciona un R4 elaborada adicionalmente. Como alternativa, una amina libre en R4 puede convertirse en el carbamato de p-nitrofenilo correspondiente, seguido de reacciones con una amina o alcohol para proporcionar
15 compuestos de R4 que contienen carbamato o funcionalidad urea.
Preparación de 1-(ciclopropilamino)-2-(6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-1-oxohexan-3-il-carbamato de alilo (M1B).
Etapa 1: 1-(Ciclopropilamino)-2-hidroxi-1-oxohexan-3-ilcarbamato de alilo (M1A).
5 A una solución de (3S)-3-amino-N-ciclopropil-2-hidroxihexanamida (10 g, 53,7 mmol), DIEA (28 ml, 161 mmol, 3 equiv.) en cloruro de metileno (250 ml) se le añadió gota a gota a 0 ºC una solución de cloroformiato de alilo (6,8 ml, 64,4 mmol, 1,2 equiv.) en DCM (50 ml). La solución de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. Después, se añadió lentamente agua (300 ml) seguido de HCl acuoso (1,0 N, 300 ml). Las fases se separaron y los extractos orgánicos se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (300 ml) y salmuera (300 ml), se
10 secaron con MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. EL sólido de color blanquecino resultante se recristalizó en hexanos al 30% en EtOAc (120 ml), produciendo el compuesto del título M1A en forma de un sólido de color blanco. Las aguas madre se concentraron al vacío y se recristalizaron en hexanos al 50% en EtOAc, produciendo 4,04 g más de M1A. Las aguas madre de la segunda recristalización se concentraron al vacío sobre Celite® y el lecho de Celite® resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (Isco Companion®, SiO2, DCM a EtOAc al 70%
15 en DCM), dando 1,46 g de M1A. La cantidad total del compuesto M1A fue 13,4 g (rendimiento 93%). (Fr ~ 0,40 en DCM:EtOAc 1:1, detección CAM).
Etapa 2: Resina enlazada a 1-(ciclopropilamino)-2-(6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-1-oxohexan-3
ilcarbamato de alilo (M1B).
20 Un matraz de fondo redondo, de tres bocas y 500 ml, equipado con un agitador mecánico en su parte superior y un condensador de reflujo se cargó con M1A (9,08 g, 33,6 mmol, 3 equiv.), p-toluenosulfonato de piridinio (5,6 g, 22,4 mmol, 2 equiv.), resina DHP (10,2 g, 11,2 mmol, Novabiochem, Nº Cat , carga: 1,1 mmol/g) y dicloroetano(84 ml, [0,4]I). La mezcla se agitó cuidadosamente a 80 ºC durante 3 días, antes de que se enfriara a 50 ºC y se filtrara. La resina se lavó con DCM (200 ml) y los filtrados combinados se concentraron al vacío, dando la
25 resina M1B, que se lavó adicionalmente con DCM (dos veces), DMF (tres veces), DCM-MeOH (tres veces en cadena), Et2O y se secó al vacío durante una noche, produciendo una resina de color pardo claro. La carga de la resina M1B se determinó mediante escisión de una alícuota (176 mg) de la resina con TFA ac. al 90%. Carga: 0,48 mmol/g.
Preparación de resina enlazada a 2-(1-(ciclopropilamino)-2-hidroxi-1-oxohexan-3-ilcarbamoil)-4metilenopirrolidin-1-carboxilato de (9H-fluoren-9-il)metilo (M1E)
Etapa 1: Resina enlazada a 3-amino-N-ciclopropil-2-hidroxihexanamida (M1D).
5 Se hinchó resina enlazada con 1-(ciclopropilamino)-2-hidroxi-1-oxohexan-3-ilcarbamato de alilo M1B (30 g, 1,0 equiv.) con DCM. Se añadieron ácido 1,3-dimetilbarbitúrico (24,17 g, 12 equiv.) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (1,49 g, 0,1 equiv.) y la mezcla se agitó durante una noche. La mezcla se filtró y se lavó con DMF y DCM produciendo la resina M1D.
Etapa 2: resina enlazada a 2-(1-(ciclopropilamino)-2-hidroxi-1-oxohexan-3-ilcarbamoil)-4-metilenpirrolidin-110 carboxilato de (9H-fluoren-9-il)metilo (M1E).
Se agitó resina M1D (1,0 g, 1,0 equiv.) se agitó en DMF con FMOC-4-exometilenoprolina del ácido carboxílico (248 mg, 1,1 equiv.), HBTU (4,8 ml de solución 0,5 M en DMF, 5,0 equiv.), HOBt (2,4 ml de solución 1,0 M en DMF, 5,0 equiv.), DIEA (836 ul, 10,0 equiv.) durante 3 horas. La mezcla resultante se purgó y se lavó con DMF (tres veces) y
15 DCM (tres veces), dando el compuesto del título M1E.
Preparación de resina enlazada a compuesto de isoxazolina protegida con Fmoc (M1F).
La resina M1E (2 g, 0,94 mmol) en THF se agitó con 3-clorobenzaldoxima (5 equiv.) y lejía (NaOCl al 5%) (15 equiv.) durante 18 horas. Después, la resina se filtró y se lavó con agua, DMF y DCM, produciendo el compuesto de resina 20 M1F. Una alícuota de la resina se escindió, proporcionando una muestra para análisis de masas de CL (M+1 = 671).
Preparación de resina enlazada a isixazolina protegida con Fmoc (M1G)
La resina M1F se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos, se filtró y se lavó con DMF y DCM. La espiroisoxazolin prolina enlazada a resina THP (0,14 mmol, 0,3 g) se mezcló con FMOC-L-3-benzotienil-ALA (0,56 mmol, 0,25 g), HOBT (0,56 mmol, 0,075 g), N,N-diisopropiletilamina (0,56 mmol, 0,072 g), HBTU (0,56 mmol, 0,21 g) en DMF 2,3 ml y se agitó durante 48 horas. La resina se filtró y se lavó con DMF, diclorometano y éter, produciendo la el compuesto de resina M1G.
Preparación de 7-((S)-3-(benzo[b]tiofen-3-il)-2-(2-ciclohexilacetamido)propanoil)-3-(3-clorofenil)-N-((3R)-1(ciclopropilamino)-2-hidroxi-1-oxohexan-3-il)-1-oxa-2,7-diazaespiro[4,4]non-2-eno-8-carboxamida (M1H)
ml). La mezcla se agitó durante 1 hora, se filtró, y se lavó con DMF y diclorometano. Después, la resina se mezcló con ácido ciclohexilacético (0,56 mmol, 80 mg), HOBT (0,56 mmol, 0,075 g), N,N-diisopropiletilamina. (0,56 mmol, 0,072 g), HBTU (0,56 mmol, 0,21 g) en DMF 2,3 ml y se agitó durante 48 h. La resina se filtró y se lavó con DMF,
15 diclorometano y éter. Después, la resina obtenida se mezcló con una solución de (50:45:5) ácido trifluoroacético, diclorometano y triisopropil silano (3 ml) y se agitó durante una noche. La reacción se filtró y se lavó con diclorometano. El filtrado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo al 40%/diclorometano al 60% a acetato de etilo al 100% para producir el alcohol M1H.
Ejemplo 1: Compuesto Nº 336
A una solución de la hidroxiamida M1H (14 mg, 0,018 mmol) en 0,38 ml de acetato de etilo se le añadió EDC (35 mg, 0,18 mmol) seguido de DMSO (0,070 ml). La mezcla se enfrió en un baño de hielo y se añadió ácido dicloroacético 5 (15 mg, 0,12 mmol) en acetato de etilo (0,15 ml). La reacción se calentó a temperatura ambiente, se dejó en agitación durante 15 minutos y después se enfrió en un baño de hielo y se inactivó con HCl 1,0 N (0,21 ml). La solución se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con agua y se secó sobre sulfato sódico y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo y hexanos (3:1) como eluyente para dar El Compuesto Nº 336 en forma de un sólido de color blanco.
10 Preparación de 8-((3S)-1-(ciclopropilamino)-2-hidroxi-1-oxohexan-3-ilcarbamoil)-3-fenil-1-oxa-2,7diazaespiro[4,4]non-2-eno-7-carboxilato de (9H-fluoren-9-il)metilo (M1N).
Etapa 1: Resina enlazada a isoxazolina sustituida con fenilo protegida con Fmoc (M1L).
La resina M1K (2 g, 0,94 mmol) en THF se agitó con la oxima (5 equiv.) y lejía (NaOCl al 5%) (15 equiv.) durante 18 15 horas. Después, la resina se filtró y se lavó con agua, DMF y DCM para dar la resina enlazada a isoxazolina sustituida con fenilo protegida con Fmoc M1L. Una alícuota de la resina para análisis CL-masas (M+1 = 637).
La resina M1L (0,47 mmol) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos y después se filtró y se lavó con DMF y DCM. La resina resultante se agitó durante una noche con una solución de Fmoc-tBG-OH (480 mg 3,0 equiv.), HOBT (2,82 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HBTU (2,82 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.) y DIEA (0,493 ml, 6,0 equiv.). Después, la resina se filtró y se lavó con DMF y DCM, dando el compuesto de resina M1M, que se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
Etapa 2: Compuesto M1N
La resina M1M (0,47 mmol) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos. La resina se filtró, se lavó con
10 DMF y DCM. La resina resultante (140 mg, 0,065 mmol) se agitó durante una noche con isocianato de bencilo (176 mg 20,0 equiv.), después se filtró y se lavó con DMF y DCM. La resina se agitó con TFA al 90% en agua durante 30 min. La solución resultante se concentró al vacío, dando el compuesto M1N (0,065 mmol), (M+1) 661, que se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
Ejemplo 2: Compuesto 107
Una solución del compuesto de amida M1N en DCM (3 ml) se agitó con peryodinano de Dess-Martin (54 mg, 2 equiv.) y t-BuOH (54 ul) durante 1 hora y después se añadió tiosulfato sódico a la mezcla. El producto se extrajo con
EtOAc, después las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, NaHCO3 y salmuera, se concentraron al vacío y se purificaron por HPLC Prep de Gilson, proporcionando el Compuesto 107. (M+1) 659.
Ejemplo 3: Compuesto Nº 283
5 Compuesto 283
La resina de THP M1M (0,065 mmol) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos y después se filtró y se lavó con DMF y DCM. La resina resultante se agitó durante una noche con una solución de ácido 2-(piridin-3il)acético (0,25 mmol 3,0 equiv.), HOBT (0,5 ml de 0,5 M en DMF, 3,85 equiv.), HBTU (0,5 ml de 0,5 M en DMF, 3,85 equiv.) y DIEA (0,5 mmol, 7,69 equiv.). Después, la resina se filtró y se lavó con DMF y DCM, y se agitó con TFA al
10 90% en agua durante 30 minutos. La solución resultante se concentró al vacío, dando el compuesto de hidroxilamida M1P (0,065 mmol) que se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional. (M+1) 647.
Una solución de la hidroxilamida M1P (0,065 mmol) en DCM (3 ml) se agitó con peryodinano de Dess-Martin (41 mg, 1,5 equiv.) y t-BuOH (41 Pl). Después de agita durante 1 hora, se añadió tiosulfato sódico a la mezcla anterior. El producto se extrajo con EtOAc. Después, las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, NaHCO3 y
15 salmuera, se concentraron al vacío y se purificaron por HPLC Prep de Gilson, proporcionando el Compuesto Nº 283 (4 mg). (M+1) 645.
Ejemplo 4: Compuesto Nº 61
El Compuesto M1K (750 mg, 1,0 equiv.) se agitó en benceno con 1-nitropropano (315 Pl, 10,0 equiv.) y isocianato de fenilo (385 Pl, 10,0 equiv.). Se añadió trietilamina (5 Pl) y la mezcla resultante se agitó durante una noche, se purgó y 5 se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió para producir el Compuesto M1Q. (M+H = 589,0)
Después, el Compuesto M1Q (750 mg, 1,0 equiv.) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos. La resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) seguido de DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió. La resina resultante se agitó durante una noche con una solución de ácido (S)-3,3-dimetil-2-(((S)-tetrahidrofurano-3
10 iloxi)carbonilamino)butanoico (216 mg, 2,5 equiv.), HBTU (1,76 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HOBt (0,88 ml de 1,0 M en DMF, 2,5 equiv.) y DIEA (307 Pl, 5,0 equiv.) en DMF. Después, la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), dando el Compuesto M1R. (M+H = 593,9).
El Compuesto M1R (750 mg, 1,0 equiv.) se agitó en TFA/DCM 1/1 durante 3 horas. La resina se purgó y se lavó con DCM (tres veces). Todos los extractos orgánicos se concentraron y se añadió DCM seguido de peryodinano Dess15 Martin (50 mg, 3,0 equiv.). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora, se añadió Na2S2O3 1 N y se agitó de nuevo. Una mezcla racémica del Compuesto Nº 61 se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 10-90%/hexanos), produciendo el Compuesto Nº 61 en forma de un solo diastereómero. (M+H = 591,8). RMN1H (500 MHz, CDCl3): 7,12 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 5,48 (d, 1H), 5,34 (td, 1H), 5,24 (s, 1H), 4,69 (t, 1H), 4,28 (d, 1H), 4,13 (s, 2H), 3,93-3,82 (m, 4H), 3,60 (d, 1 H), 3,06 (s, 0,5H), 3,03 (s, 0,5H), 2,95 (d, 1H), 2,90 (d, 1H), 2,78 (td, 1H),
20 2,51-2,47 (m, 1H), 2,44-2,34 (m, 3H), 2,14-2,10 (m, 1H), 1,94-1,88 (m, 1H), 1,63-1,57 (m, 1H), 1,46-1,36 (m, 2H), 1,17 (t, 3H), 0,98 (s, 9H), 0,95-0,83 (m, 5H), 0,59 (dd,2 H)
Ejemplo 5: Compuesto Nº 146
El Compuesto M1K (50 mg, 1,0 equiv.) se agitó en DCM con 2-cloro-2-(hidroxiimino)acetato de (Z)-etilo (7,1 mg, 2,0 equiv.). A esta mezcla se le añadió lentamente TEA (6,6 Pl, 2,0 equiv.) en DCM y la mezcla se agitó durante 3 horas, después se purgó y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió para dar el Compuesto M1S (M+H = 632,4).
El Compuesto M1S (1,0 g, 1,0 equiv.) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos. La resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) seguido de DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió. La resina resultante se agitó
10 durante una noche con una solución de ácido (S)-3,3-dimetil-2-(((S)tetrahidrofurano-3-iloxi)carbonilamino)butanoico (230 mg 2,0 equiv.), HBTU (1,88 ml de 0,5 M en DMF, 2,0 equiv.), HOBt (0,94 ml de 1,0 M en DMF, 2,0 equiv.) y DIEA (327 Pl, 4,0 equiv.) en 2 ml de DMF. Después, la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), dando el Compuesto M1T (M+H = 638,0).
15 El Compuesto M1T (750 mg, 1,0 equiv.) se agitó en THF con KOTMS (133 mg, 3,0 equiv.) durante 3 horas. Después, la mezcla se purgó y se lavó con THF/agua (1/1), THF, DMF y DCM (tres veces cada uno), dando el Compuesto M1U. (M+H =609,5).
El Compuesto M1U (250 mg, 1,0 equiv.) se agitó durante una noche con una solución de etilamina (22 mg 3,0 equiv.), HBTU (0,54 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HOBt (0,27 ml de 1,0 M en DMF, 3,0 equiv.) y DIEA (47 Pl, 3,0 equiv.) en DMF. Después, la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), dando el compuesto M1V. (M+H = 637,2).
El Compuesto M1V (0,4 g, 1,0 equiv.) se agitó en TFA/DCM 1/1 durante 2 horas y después se purgó y se lavó con DCM (tres veces). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron, y se les añadió DCM seguido de peryodinano de Dess-Martin (97 mg, 3,0 equiv.). La solución se agitó durante 1 hora, se le añadió 1 N Na2S2O3 y la mezcla se
10 agitó adicionalmente. La solución se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 10-90%/hexanos), produciendo 6,1 mg del compuesto Nº 146. (M+H = 635,0) RMN 1H (CDCl3): 5,5-5,2 (m, 2H), 5,15,0 (m, 1H), 4,9-4,7 (m, 2H), 4,5-4,2 (m, 3H), 4,1 (m, 1H), 3,9-3,7 (m, 3H), 3,6-3,5 (m, 2H), 3,5-3,2 (m, 2H), 2,8-2,4 (m, 2H),2,1 (m, 1H), 2,0-1,8 (m, 3H), 1,8-1,5 (m, 3H), 1,5-1,3 (m, 3H), 1,3-1,2 (m, 2H), 1,0 (s, 9H), 0,9 (t, 3H), 0,8 (m, 2H), 0,6 (m, 2H).
15 Los siguientes compuestos de Fórmula I también se produjeron de acuerdo con el Procedimiento 1 y las preparaciones descritas después del mismo.
Tabla 1: Compuestos Adicionales de Fórmula I Producidos por el Procedimiento 1.
Compuesto Nº
Material de Partida para P1 Material de Partida para C1 Material de Partida para R3
7
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 3-(4-fluorofenil)propanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
12
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
14
N-FMOC-L-terc-butilglicina ciclopentilmetanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
24
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Fluorobencenocarbaldehído oxima
27
N-FMOC-L-terc-butilglicina ciclobutilmetanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
29
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(1-metilciclohexil)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
30
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-5-oxo-1-(tiofen-2ilmetil)pirrolidin-2-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
33
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de ciclohexilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
34
N-FMOC-L-terc-butilglicina 5-hidroxipentan-2-ona 3-clorobencenocarbaldehído oxima
37
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
39
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de 2-clorobencilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
44
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 4-oxo-pentanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
53
N/E �?cido 2-(1-(2,6-diclorobencil) piperidin-4-il)acético Benzaldoxima
61
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E Nitropropano
71
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (R)-2,3dihidrobenzo[b][1,4]dioxino-2carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
72
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclopentilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
75
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(2,4-dimetiltiazol-5il)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
76
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de ciclopropilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
85
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de 2-fluoroetilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
92
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
93
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido ciclohexanocarboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
94
N-FMOC-L-terc-butilglicina 2-aminoacetamida 3-clorobencenocarbaldehído oxima
102
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(3-fluoro-4metilfenil)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
107
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de bencilo Benzaldoxima
108
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido cis-4metoxiciclohexanocarboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
110
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato bencilo 3-cloro-4,6-dimetoxibenzaldehído oxima
112
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 2-nitro-1-fenil etanona
118
N-FMOC-L-terc-butilglicina 2-(4-fluorofenil)etanol 3-Clorobencenocarbaldehído oxima
(Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa)
Compuesto Nº
Material de Partida para P1 Material de Partida para C1 Material de Partida para R3
119
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de terc-butilo 2-nitro-1-feniletanona
122
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de 3-fluorobencilo 3-Clorobenceno carbaldehído oxima
123
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de etilo 3-Clorobenceno carbaldehído oxima
124
N-FMOC-O-Metil-L-Treonina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenceno carbaldehído oxima
125
�?cido (2R,3S)-N-FMOC-2-amino3-fenil-butírico �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
128
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de 4-(1H-pirrol-2,5diona)fenilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
135
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 1-isopropil-4-oxo-1,4dihidroquinolin-3-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
139
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (R)-2-hidroxi-2fenilpropanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
146
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E éster etílico del ácido 2-cloro-2hidroximinoacético (clorooxima)
152
N-FMOC-L-terc-butilglicina (tetrahidrofurano-3-il)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
154
N-Alloc-L-terc-butilglicina N/E 4-Fluorobencenocarbaldehído oxima
155
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(5-fluoro-2metilfenil)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
156
N-FMOC-L-terc-butilglicina Isobutilamina 3-clorobencenocarbaldehído oxima
159
N-FMOC-L-terc-butilglicina 2-(tiofen-3-il)etanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
160
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 4-fluorobenceno carbaldehído oxima
161
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 5-acetamido-2acetiltiofeno-3-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
164
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 2-Clorobencenocarbaldehído oxima
167
N-FMOC-L-terc-butilglicina (2-metilpiridin-3-il)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
173
N-FMOC-L-terc-butilglicina 2,2-difluoroetilamina 3-clorobencenocarbaldehído oxima
174
N-FMOC-L-terc-butilglicina m-tolilmetanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
180
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido acético Nitroetano
183
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 3-Fluorobencenocarbaldehído oxima
185
N-FMOC-L-3-Tienil-Alanina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
193
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de Isopropilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
199
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 9-Anthraldehído oxima
201
N-FMOC-L-terc-butilglicina (3-metoxifenil)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
203
N-FMOC-L-terc-butilglicina (3,5-difluorofenil)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
205
N-FMOC-L-terc-butilglicina Isocianato de bencilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
207
N-FMOC-L-Glicina cloroformiato de etilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
208
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 2-Naftaldehído oxima
Compuesto Nº
Material de Partida para P1 Material de Partida para C1 Material de Partida para R3
209
N-FMOC-L-terc-butilglicina (3-fluorofenil)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
210
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de 2-clorobencilo 3-Cloro-4,6-dimetoxibenzaldehído oxima
213
N-FMOC-4-Metoxi-L-Fenilalanina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
216
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 5-oxo-1-(tiofen-2ilmetil)pirrolidin-3-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
235
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E nitrobutano
237
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 3-(2-metil-1H-imidazol-1il)propanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
241
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-1-isopropil-5oxopirrolidin-2-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
242
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-ciclohexilglicina seguido de ácido 2-pirazin carboxílico Piperonal oxima
243
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E nitrobutano
249
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de ciclohexanometilo Benzaldoxima
254
N-FMOC-L-terc-butilglicina 1-(tiofen-2-il)propan-2-ol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
259
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de 3,4,5trimetoxibencilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
260
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de 2-metoxietilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
261
N-FMOC-L-terc-butilglicina 4-isocianatopiperidin-1carboxilato de bencilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
262
N/E cloroformiato de 4-nitrofenilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
276
�?cido 2-((3S,4aS,8aS)-3-(tercbutilcarbamoil)octahidroisoquinolin2(1H)-il)acético N/E 3-clorobencenocarbaldehído oxima
278
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de bencilo 2-(4-Metoxifenoxi)bencenocarbaldehído oxima
283
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(piridin-3-il)acético Benzaldoxima
287
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(3-metoxifenil)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
288
N-FMOC-L-terc-butilglicina Isocianato de 1-naftilo Benzaldoxima
289
N-FMOC-2-Trifluorometil-L-Fenilalanina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
291
N-FMOC-L-terc-butilglicina espiro[inden-1,4'-piperidin]3(2H)-ona 3-clorobencenocarbaldehído oxima
294
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
308
N-FMOC-L-terc-butilglicina (tetrahidro-2H-piran-2il)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
311
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(pirrolidin-1carbonil)ciclohexanocarboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
313
N/E isocianato de bencilo 3-Cloro-4,6-dimetoxibenzaldehído oxima
Compuesto Nº
Material de Partida para P1 Material de Partida para C1 Material de Partida para R3
317
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(1-oxoisoindolin-2il)propanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
324
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (R)-3-(1cianoetil)benzoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
329
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido ciclohexilacético Nitropropano
331
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido acético 4-fluorobencenocarbaldehído oxima
333
N-FMOC-L-terc-butilglicina (S)-1-metilbencilamina 3-Clorobenceno carbaldehído oxima
334
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-2-metil-3fenilpropanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
336
N-FMOC-L-3-Benzotienil-Alanina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
338
N-FMOC-2-Fluoro-L-Fenilalanina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
340
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 4-Fenilbencenocarbaldehído oxima
341
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E éster etílico del ácido 2-cloro-2hidroximinoacético (clorooxima) seguido de hidrólisis del éster y acoplamiento de etilamina
342
N/E Piridin-3-metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
345
N-(5-metil-3-nitropiridinil)-L-tercbutilglicina N/E 3-clorobencenocarbaldehído oxima
349
N-FMOC-L-terc-butilglicina 2-(4-fluorofenil)etanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
352
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E Piridin-4-aldoxima
357
N-FMOC-L-terc-butilglicina piridin-4-ilmetanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
358
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E 4-Trifluorometoxibencenocarbaldehído oxima
365
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 4-trifluorometoxibencenocarbaldehído oxima
367
N/E isocianato de 3,4,5trimetoxibencilo Benzaldoxima
373
N-FMOC-L-terc-butilglicina 3-(piridin-2-il)propan-1-ol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
374
N-FMOC-L-terc-butilglicina tetrahidro-2H-piran-4-ol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
377
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-1-(3-clorobencil)-5oxopirrolidin-2-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
378
N-FMOC-L-terc-butilglicina piridin-2-ilmetanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
379
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de isopropilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
381
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 4-oxo-3,4-dihidroftalazin1-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
383
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E Nitropropano
387
N-FMOC-L-terc-butilglicina (3R,3aS,6aR)hexahidrofuro[2,3-b]furan-3-ol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
389
N-FMOC-L-terc-butilglicina 3-(piridin-3-il)propan-1-ol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
390
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido ciclohexilacético 2-nitro-1-feniletanona
Compuesto Nº
Material de Partida para P1 Material de Partida para C1 Material de Partida para R3
398
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E 4-Fluorobencenocarbaldehído oxima
400
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-ciclohexilglicina seguido de ácido 2pirazincarboxílico nitrobutano
402
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(5-oxo-2-(tiofen-2il)ciclopent-1-enil)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
407
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de etilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
417
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-terc-butilglicina seguido de ácido 2pirazincarboxílico 4-Fluorobencenocarbaldehído oxima
427
N-FMOC-L-Fenilalanina cloroformiato de etilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
431
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-o-tolilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
432
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-metiletilamina 3-clorobencenocarbaldehído oxima
437
N-FMOC-S-terc-Butil-L-Cisteína �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
450
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-terc-butilglicina seguido de ácido 2pirazincarboxílico Piperonal oxima
454
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(quinolin-8-iltio)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
459
N-FMOC-L-Norleucina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
462
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido ciclohexilacético Piperonal oxima
463
N-FMOC-L-terc-butilglicina 2-feniletanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
465
N-(Ciclopentilformoil)-L-tercbutilglicina N/E 4-Fluorobencenocarbaldehído oxima
467
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(biciclo[2,2,1]heptan-2il)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
471
N-FMOC-L-terc-butilglicina p-tolilmetanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
474
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-metil-3-(3-metil-1Hpirazol-1-il)propanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
477
N-FMOC-L-terc-butilglicina (S)-1-metoxi-3,3-dimetilbutan2-amina 3-clorobencenocarbaldehído oxima
484
N-FMOC-L-terc-butilglicina Anhidruro succínico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
487
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(6-metoxi-3-oxo-2,3dihidro-1H-inden-1-il)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
487
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(3-oxo-2,3-dihidro-1Hinden-1-il)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
492
N-FMOC-L-terc-butilglicina Isocianato de terc-butilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
497
N-FMOC-L-terc-butilglicina piridin-3-ilmetilamina 3-clorobencenocarbaldehído oxima
503
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido trans-4metoxiciclohexanocarboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
504
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 3-(piridin-3-il)propanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
505
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 3-(2,5-dioxoimidazolidin4-il)propanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
Compuesto Nº
Material de Partida para P1 Material de Partida para C1 Material de Partida para R3
512
N-FMOC-L-terc-butilglicina (2-fluorofenil)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
515
N-FMOC-L-terc-butilglicina tetrahidro-2H-piran-3-ol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
517
N-FMOC-L-terc-butilglicina N/E Nitroetano
518
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-1-(3-metilbencil)-5oxopirrolidin-2-carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
520
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de bencilo Benzaldoxima
523
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido tetrahidro-2H-piran-4carboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
526
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloroformiato de bencilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
528
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 3-(1H-indazol-1il)propanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
532
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 3-metilbutanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
533
N/E N/E 4-Fluorobencenocarbaldehído oxima
538
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciano-2-metil-3fenilpropanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
544
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 3-(1H-benzo[d]imidazol1-il)-2-metilpropanoico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
547
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-ciclohexilglicina seguido de ácido 2pirazincarboxílico Nitropropano
553
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(2,6-dioxo-1,2,3,6tetrahidropirimidin-4-il)acético 3-clorobencenocarbaldehído oxima
557
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido (1R,6S)-6(metoxicarbonil)ciclohex-3enecarboxílico 3-clorobencenocarbaldehído oxima
558
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de fenilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
559
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de terc-butilo Nitropropano
561
N-FMOC-L-terc-butilglicina (2,5-difluorofenil)metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
563
N-FMOC-L-terc-butilglicina Piridin-3-metanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
566
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético Nitropropano
576
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de 3-piridilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
580
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de etilo Benzaldoxima
582
N-FMOC-L-terc-butilglicina 2-(tiofen-2-il)etanol 3-clorobencenocarbaldehído oxima
583
N-FMOC-L-terc-butilglicina isocianato de bencilo 3-clorobencenocarbaldehído oxima
Todos los materiales de partida para R3 enumerados en la Tabla 1 y todas las otras variable en el presente documento, estaban disponibles en el mercado (nitro u oxima) o se prepararon fácilmente a partir del precursor de aldehído correspondiente.
Además, Los Compuestos Nº 20, 22, 53, 81, 103, 116, 166, 187, 189, 194, 197, 200, 220, 223, 226, 245, 252, 271, 204, 307, 319, 339, 354, 360, 361, 371, 392, 393, 435, 449, 506, 514, 531 y 585 también se produjeron usando el Procedimiento 1.
Ciertos otros compuestos de la invención pueden preparase como se ilustra por el Procedimiento 2.
PROCEDIMIENTO 2:
En referencia al Procedimiento 2, la espiroisoxazolina protegida B1 se desprotege para dar B2 que se convierte a su vez en el derivado de Fmoc B3. La reacción de B3 con la aminoalcohol enlazado a resina A4 proporciona la espiroisoxazolina enlazada a resina A6 que se convierte en A10 como se ha descrito en el Procedimiento 1.
Ejemplo 6: Compuesto Nº 281
El Compuesto M2A (5,0 g, 1,0 equiv.) se agitó en 100 ml de acetonitrilo y a esta mezcla se le añadieron dicarbonato
10 de di-terc-butilo (9,6 g, 2,0 equiv.), dimetilaminopiridina (537 mg, 0,2 equiv.) y trietilamina (6,13 ml, 2,0 equiv.), y se agitó durante una noche. La mezcla resultante se concentró, se añadió acetato de etilo y la mezcla se lavó con HCl 1,0 N, se secó sobre sulfato sódico, se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 10-30%/hexanos), produciendo el Compuesto M2B. (M+H = 284,0) RMN 1H (CDCl3): 5,0 (m, 2H), 4,3-4,5 (m, 1H), 4,0-4,1 (m, 2H), 2,9-3,0 (m, 1H), 2,5-2,6 (d, 1H), 1,5 (s, 3/9 de 18H), 1,4 (s, 6/9 de 18H).
El Compuesto M2B (2,0 g, 1,0 equiv.) se agitó en 35 ml de DCM con benzaldoxima (2,67 g, 2,0 equiv.). La solución se enfrió en un baño de hielo y a éste se le añadió lentamente lejía (NaOCl al 5%) (34,9 ml). Después, la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. La fase acuosa se separó y se extrajo con DCM dos veces. Los extractos orgánicos se combinaron y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 5-30%/hexanos) proporcionó el Compuesto M2C.
(M+H = 403,1) RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 7,64-7,63 (m, 2H), 7,41-7,40 (m, 3H), 4,43-4,37 (t, 1H), 3,94-3,85 (dd, 1H), 3,62 (t, 1H), 3,44-3,38 (m, 1H), 3,29-3,24 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,14-2,10 (m, 1H), 1,49 (s, 9H), 1,46 (s, 9H).
El Compuesto M2C se agitó en TFA/DCM 1/1 durante 3 horas. La mezcla se concentró. A la mezcla concentrada se le añadieron 17 ml de DMF, 5 ml de agua, carbonato sódico (713 mg, 2,5 equiv.), FMOC-OSu (951 mg, 1,05 equiv.) y se agitó durante 3 horas. Después, se añadió acetato de etilo y la mezcla resultante se lavó con HCl 1,0 N seguido de salmuera. Se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró, produciendo el Compuesto M2D. (M+H =
15 468,9).
El Compuesto M2D (1,26 g, 2,0 equiv.) se agitó en DMF con M1D (2,5 g, 1,0 equiv.), HBTU (12 ml de 0,5 M en DMF, 5,0 equiv.), HOBt (6 ml de 1,0 M en DMF, 5,0 equiv.) y base de Hünig (2,09 ml. 10,0 equiv.) durante una noche. La
mezcla se purgó y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), produciendo el Compuesto M1L. (M+H = 637,0).
El Compuesto M1L (0,4 g, 1,0 equiv.) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos antes de que se filtrara y se lavara con DMF (tres veces) seguido de DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió. La resina resultante se agitó durante una noche con una solución de FMOC-terc-butilglicina (200 mg 3,0 equiv.), HBTU (1,15 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HOBt (0,58 ml de 1,0 M en DMF, 3,0 equiv.) y DIEA (167 ul, 5,0 equiv.) en 2 ml de DMF. Después, la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), dando el Compuesto M1M. (M+H = 750,1).
El Compuesto M1M (0,4 g, 1,0 equiv.) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos y la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) seguido de DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió, dando el Compuesto M2H.
El Compuesto M2H (0,4 g, 1,0 equiv.) se agitó durante una noche con una solución de FMOC-ciclohexilglicina (218 15 mg 3,0 equiv.), HBTU (1,15 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HOBt (0,58 ml de 1,0 M en DMF, 3,0 equiv.) y DIEA (167 ul, 5,0 equiv.) en 2 ml de DMF. Después, la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces). Después, la resina se trató con piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos. La resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) seguido de DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió, dando el Compuesto M2I.
El Compuesto M2I (0,4 g, 1,0 equiv.) se agitó durante una noche con una solución de ácido pirazinacarboxílico (71 mg, 3,0 equiv.), HBTU (1,15 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HOBt (0,58 ml de 1,0 M en DMF, 3,0 equiv.) y DIEA (167 ul, 5,0 equiv.) en 2 ml de DMF. Después, la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), dando el Compuesto M2J. (M+H = 772,9).
10 El Compuesto M2J (0,4 g, 1,0 equiv.) se agitó en TFA/DCM 1/1 durante 2 horas. La resina se purgó y se lavó con DCM (tres veces). El resultado se concentró junto con todos los extractos orgánicos y se añadió DCM seguido de peryodinano de Dess-Martin (97 mg, 3,0 equiv.). Se agitó durante 1 hora, se añadió Na2S2O3 1 N y se agitó. La solución se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 10-90%/hexanos), produciendo 42 mg del Compuesto Nº 281.
15 (M+H = 771,0). RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 9,38 (d, 1H), 8,75 (d,1H), 8,56 (t, 1 H), 8,31 (d, 1H), 7,64-7,62 (m, 2H), 7,42-7,38 (m, 3H), 7,33 (d, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,89 (d, 1H), 5,45-5,41 (m, 1H), 4,85 (t, 1H), 4,69 (d, 1H), 4,57-4,54 (m, 1H), 4,26 (d, 1H), 3,76 (d, 1H), 3,46 - 3,35 (m,2H),2,82 (td, 1H), 2,56 (d, 2H), 1,96-1,87 (m,2H), 1,76 (m, 4H), 1,651,59 (m, 2H), 1,48-1,42 (m, 2H), 1,24 (m, 2H), 1,09 (m, 2H), 0,97 (s, 9H), 0,93 (t, 2H), 0,88-0,84 (m, 2H), 0,65 (t, 2H).
A continuación, se enumeran en la Tabla 2 compuestos adicionales de la Fórmula I preparados por el Procedimiento
20 2.
Tabla 2: Compuestos Adicionales de Fórmula I Producidos por el Procedimiento 2.
Compuesto Nº
Material de Partida para P1 Material de Partida para C1 Material de Partida para R3
40
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E 2,6-Diclorobenzaldoxima
51
N/E �?cido 1H-pirrol-2-carboxílico Piperonal oxima
80
N/E �?cido 1H-pirrol-2-carboxílico Benzaldoxima
101
N-FMOC-L-terc-butilglicina Cloruro de 1-naftilsulfonilo Benzaldoxima
147
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-ciclohexilglicina seguido de ácido 2-pirazin carboxílico 2,6-Diclorobenzaldoxima
151
N-Alloc-L-terc-butilglicina N/E Benzaldoxima
202
N-((S)-tetrahidrofurano-3-iloxi) carbonil)-L-terc-butilglicina N/E Benzaldoxima
228
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido acético Benzaldoxima
281
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-ciclohexilglicina seguido de ácido 2-pirazin carboxílico Benzaldoxima
325
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido acético Piperonal oxima
327
N-Alloc-L-terc-butilglicina N/E Piperonal oxima
343
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E Piperonal oxima
428
N-FMOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-ciclohexilglicina seguido de ácido 2-pirazin carboxílico Benzaldoxima
464
N/E �?cido 1H-pirrol-2-carboxílico Piperonal oxima
491
N-((S)-tetrahidrofurano-3-iloxi) carbonil)-L-terc-butilglicina N/E Benzaldoxima
527
N-((S)-tetrahidrofurano-3-iloxi) carbonil)-L-terc-butilglicina N/E Piperonal oxima
536
N-FMOC-L-terc-butilglicina cloruro de 1-naftilsulfonilo Piperonal oxima
570
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido acético Piperonal oxima
578
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido acético Benzaldoxima
584
N/E �?cido 1H-pirrol-2-carboxílico Benzaldoxima
Ciertos otros compuestos de Fórmula I pueden prepararse como se ilustra en el Procedimiento 3.
PROCEDIMIENTO 3:
En referencia al Procedimiento 3, el compuesto Fmoc exometileno enlazado a resina A5, preparado como en el Procedimiento 1, se desprotege para dar C1. La reacción de C1 con un ácido carboxílico R1 en presencia de un reactivo de acoplamiento proporciona C2, en el que R1 es R4C(O)-. La reacción de C2 con el óxido de nitrilo 1f conduce a A8, que se convierte en A10 como se ha ilustrado en el Procedimiento 1.
Ejemplo 7: Compuesto Nº 239
La resina M1K (0,47 mmol) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos y después se filtró y se lavó con DMF y DCM. La resina resultante se agitó de nuevo durante una noche con una solución de Cbz-tBG-OH (374 mg, 3,0 equiv.), HOBT (2,82 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HBTU (2,82 de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.) y DIEA (0,493 ml, 6,0 equiv.). Después, la resina se filtró y se lavó con DMF y DCM, dando la el Compuesto de M3A (0,47 g), que se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
La resina Cbz M3A (0,0611 mmol) en THF se agitó con 3-bromo-fenil oxima (10 equiv.) y lejía (NaOH al 5%) (20 equiv.) durante 12 horas. Después, la resina se filtró y se lavó con agua, DMF y DCM, dando la resina M3B.
Descripción detallada de la invención
II. S�?NTESIS DE LOS COMPUESTOS Los compuestos de Fórmula I
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la:
Cada A es -(CX1X2)a-; Cada B es -(CX1X2)b-; Cada X1 es independientemente hidrógeno, halo, amino, sulfanilo, opcionalmente sustituido alifático (C1-4), opcionalmente sustituido arilo o -O-X1A; Cada X2 es independientemente hidrógeno, halo, amino, sulfanilo, opcionalmente sustituido alifático (C1-4), opcionalmente sustituido arilo o -O-X1B; cada X1A y X1B es independientemente un alifático opcionalmente sustituido, un cicloalifático opcionalmente sustituido, un heterocicloalifático opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido; O, X1 y X2 forman juntos un grupo oxo; Cada R1 es -ZAR4, en el que cada ZA es independientemente un enlace o una cadena alifática C1-12 lineal o ramificada opcionalmente sustituida, en la que hasta tres unidades de carbono de ZA están opcional e independientemente remplazadas con -C(O)-, -C(S)-, -C(O)NRA-, -C(O)NRANRA-, -C(O)O-, -NRAC(O)O-, -O-, NRAC(O)NRA-, -NRANRA-, -S-, -SO-, -SO2-, -NRA-, -SO2Ne- o -NRASO2NRA-, con la condición de que -NRANRA-, NRAC(O)NRA- o -NRASO2NRA- no estén enlazados directamente con el átomo de anillo de nitrógeno de fórmula I; Cada R4 es independientemente RA, halo, -OH, -CN, -NO2 -NH2 o -OCF3; Cada RA es independientemente hidrógeno, un alifático opcionalmente sustituido, un cicloalifático opcionalmente sustituido, un hetercicloalifático opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido; Cada R2 es -ZBR5, en el que cada ZB es independientemente un enlace o una cadena alifática C1-12 lineal o ramificada, opcionalmente sustituida, en la que hasta tres unidades de carbono de ZB están opcional e independientemente remplazadas con -C(O)-, -C(S)-, -C(O)NO-, -C(O)NRBNRB-, -C(O)O-, -NRBC(O)O-, NRBC(O)NRH-, -NRBNRB-, -S-, -SO-, -SO2-, -NRB-, -SO2NRB- o -NRBSO2NRB-, con la condición de que SO, SO2 o -SO2NRB- no estén enlazados directamente con el carbonilo de fórmula I; Cada R5 es independientemente RB, halo, -OH, -CN, -NO2 -NH2 o -OCF3; Cada RB es independientemente hidrógeno, un alifático opcionalmente sustituido, un cicloalifático opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido; O R1 y R2, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo heterocicloalifático opcionalmente sustituido; Cada R3 es un alifático opcionalmente sustituido, amino, sulfonilo, sulfanilo, sulfinilo, sulfonamida, sulfamida, sulfo, -O- R3A, un cicloalifático opcionalmente sustituido, un heterocicloalifático opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido; Cada R3A es independientemente un alifático opcionalmente sustituido, un cicloalifático opcionalmente sustituido, un heterocicloalifático opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente sustituido; Cada Y e Y' es independientemente -ZDR7, en el que cada ZD es independientemente un enlace o una cadena de alifático C1-6 lineal o ramificada, opcionalmente sustituida, en la que hasta dos unidades de carbono de ZD están opcional e independientemente remplazadas con -C(O)-, -C(S)-, -C(O)NRD-, -C(O)NRDNRD-, -C(O)O-, NRDC(O)O-, -O-, -NRDC(O)NRD-, -NRDNRD-, -S-, -SO-, -SO2-, NRD-, -SO2NRD-, -NRDSO2- o -NRDSO2NRD- o Y e
Y' forman juntos =O o =S; Cada R7 es independientemente RD, halo, -OH, -CN, -NO2, -NH2 o -OCF3; Cada RD es independientemente hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido; y Cada uno de a y b es independientemente 0, 1, 2 ó 3; con la condición de que la suma de a y b sea 2 ó 3,
5 pueden sintetizarse fácilmente a partir de materiales de partida disponibles en el mercado usando las rutas sintéticas ejemplares que se proporcionan a continuación. Se proporcionan rutas sintéticas para producir los compuestos de la Fórmula I a continuación en las Preparaciones, Procedimientos, Ejemplos y Esquemas. Por ejemplo, el resto de espiroisoxazolina por adición 1,3-dipolar entre un óxido de nitrilo y una metilen prolina como indica por Kurth, M.J., y col., en J.Org.Chem., 2002, 67, pp. 5673-5677, y se ilustra a continuación en el Esquema 1. Los óxidos de nitrilo
10 oxides pueden generarse a partir de cloro oximas o nitroalcanos usando procedimientos conocidos.
El Esquema I proporciona una representación general de procedimientos para preparar compuestos de la Fórmula I. Su estrategia general es construir un compuesto de fórmula 1h, seguido de retirada selectiva del grupo protector PG1 en presencia de PG2 para proporcionar el intermedio 1j. Después, el sustituyente R1 puede acoplarse con 1j, lo que proporciona intermedios de fórmula 1k que contienen R1. En algunas realizaciones, R1 puede en sí mismo
15 contener un grupo protector que puede retirarse selectivamente en presencia de PG2, seguido de elaboración adicional. Después de la adición del resto R1, el grupo PG2 se retira para proporcionar el intermedio 1m. Después, el acoplamiento de 1m con un resto R2 proporciona los compuestos peptidomiméticos de Fórmula I.
Esquema 1
En referencia de nuevo al Esquema 1, en un ejemplo, la hidroxiprolina 1a se protege como el derivado de Boc (es decir, etapa ia) para proporcionar la prolina protegida 1b, en la que PG1 es t-butiloxicarbonato, usando procedimientos conocidos. Véase, por ejemplo, T.W. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª edición, John Wiley y Sons, Inc. (1999). La oxidación de 1b (es decir, etapa ib) proporciona el ácido de cetopirrolidina 1c. La oxidación se consigue con un reactivo adecuado, tal como, por ejemplo, hipoclorito sódico en presencia de TEMPO. Después, en la etapa ic, el ácido de cetopirrolidina 1c se hace reaccionar con un reactivo de Wittig, tal como, por ejemplo, un trifenilfosfonio ilid de la fórmula (Ph)3P=C(Y)(Y') y usando condiciones conocidas, para proporcionar un compuesto de exometileno de fórmula 1d. El uso del ácido libre 1c para proporcionar el ácido libre correspondiente 1d es ventajoso, puesto que el ácido 1d puede purificarse oportunamente a partir de subproductos neutros o básicos por extracción simple de 1d en solución acuosa básica. Posteriormente, el ácido 1d se protege (etapa id) con un grupo protector adecuado tal como, por ejemplo, un t-butil éster en condiciones conocidas (ibid) para proporcionar el intermedio 1e.
La reacción de 1e con un óxido de nitrilo 1f proporciona una mezcla de los isómeros sin y anti de las espiroisoxazolinas 1g y 1h. Como se indica en el presente documento, sin- significa que el resto 2-carboxilo del anillo prolina y el oxígeno del anillo isoxazolina están en el mismo lados de un plano como se ha descrito por el anillo prolina. El término anti- significa que el resto 2- carboxilo del anillo prolina y el oxígeno del anillo isoxazolina están en lados opuestos de un plano como se describe por el anillo prolina. Por lo tanto, 1g representa un compuesto sin- de la invención y 1h representa un compuesto anti- de la invención.
En algunas realizaciones, cuando PG1 es Boc y PG2 es t-butoxi, la retirada selectiva del grupo protector PG1 de 1g y 1h en presencia del grupo protector PG2 puede conseguirse con un ácido sulfónico, tal como, por ejemplo, ácido metanosulfónico en un disolvente orgánico adecuado a temperaturas de aproximadamente -40 ºC a aproximadamente 40 ºC, de aproximadamente -20 ºC a aproximadamente 20 ºC y de aproximadamente -5 ºC a aproximadamente 5 ºC. Los disolventes orgánicos adecuados incluyen, por ejemplo, cloruro de metileno y tetrahidrofurano.
Los isómeros 1i y 1j pueden separarse ventajosamente por cristalización de una mezcla de las sales de ácidos orgánicos correspondientes que evitan más procedimientos complicados, tales como, por ejemplo, cromatografía. Las sales orgánicas adecuadas incluyen aquellas de ácidos carboxílicos orgánicos, por ejemplo, ácido acético, ácidos benzoicos opcionalmente sustituidos, ácido tartárico, ácido malónico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido mandélico, ácido cítrico, ácido p-toluoiltartárico y ácido maleico; ácidos sulfónicos orgánicos, por ejemplo, ácido metanosulfónico, ácidos bencenosulfónicos opcionalmente sustituido, ácido triflurometanosulfónico y ácido canforsulfónico.
Un solo isómero de espiroisoxazolina, por ejemplo 1j, se acopla con un ácido R1COOH en presencia de un reactivo de acoplamiento, tal como, por ejemplo, EDCI para proporcionar el espiroisoxazolina intermedia 1k. La retirada selectiva del grupo protector PG2 de 1k para dar 1m con escisión o racemización mínima de la cadena lateral R1 se consigue mediante un ácido mineral adecuado en un disolvente orgánico adecuado, a temperaturas de aproximadamente -40 ºC a aproximadamente 40 ºC, de aproximadamente - 20' C a aproximadamente 20 ºC y de aproximadamente -5 ºC a aproximadamente 5 ºC. Los ácidos minerales adecuados incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico concentrado o ácido sulfúrico concentrado. Los disolventes orgánicos adecuados incluyen, por ejemplo, cloruro de metileno y tetrahidrofurano. Después, la espiroisoxazolina 1m se acopla con una resto amina R2 para proporcionar los compuestos de Fórmula I.
En referencia de nuevo al Esquema 1, PG1(CO)- puede ser un grupo protector de amina, en el que PG1 es, por ejemplo, metoxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo, 9-flourenilmetiloxicarbonilo o benciloxicarbonilo. PG2(CO)- puede ser un ácido o un grupo protector de ácido, en el que PG2 es, por ejemplo, -OH, metoxi, t-butiloxi o benciloxi.
Cada uno de los grupos PG1 y PG2 puede incorporarse en la estructura central de espiroisoxazolina, individualmente
o juntos, usando procedimientos conocidos y como se describe adicionalmente en el presente documento. Por ejemplo, si el R1 sustituido deseado es un grupo distinto de un grupo PG1 (por ejemplo, un grupo protector), el grupo PG1 puede retirarse para proporcionar un compuesto con un grupo de amina libre. Ese grupo de amina y un resto adecuado pueden acoplarse en condiciones de acoplamiento conocidas para proporcionar un compuesto en el que R1 es un resto de un inhibidor de proteasa. Por ejemplo, si el resto PG2 se desprotege, el grupo protector puede retirarse y puede incorporarse un resto R2.
Otro procedimiento para producir compuestos de la presente invención se ilustra a continuación en el Esquema 2.
Esquema 2
Con respecto al Esquema 2, el símbolo
representa una resina polimérica a la que los reactivos están unidos por una funcionalidad que permite modificación adicional y posterior retirada del producto de la resina. Una resina adecuada es una resina de dihidropirano enlazado a polímero (DHP) como se describe por Ellman y col. en
10 Tetrahedron Letters, 1994, 35, 9333.
En la etapa iia, la desprotección simultánea de la amina y el ácido puede conseguirse poniendo en contacto la prolina 1e con un ácido, por ejemplo, ácido trifluoroacético en cloruro de metileno para dar el aminoácido 2a. La reacción de 2a, etapa iib, con un derivado de Fmoc activado, por ejemplo, N-(9H-Fluoren-9ilmetoxicarboniloxi)succinimida (Fmoc-OSu), en presencia de una base orgánica débil, tal como carbonato sódico, da
15 el derivado de Fmoc 2b.
La preparación del péptido enlazado a resina 2d puede realizarse haciendo reaccionar el derivado de Fmoc 2b con el aminoalcohol enlazado a resina DHP 2c, etapa iiic, que reacciona con el ácido libre 2b, en presencia de un reactivo de acoplamiento, tal como, por ejemplo, N,N,N',N'-tetrametil-uronio-hexafluorofosfato de O-benzotriazol (HBTU), un inhibidor de racemización, tal como 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) y una amina terciaria, tal como di
5 isopropiletil amina (DIEA).
Como en el Esquema 1, un óxido de nitrilo sustituido de R3 1f puede someterse a una reacción de cicloadición dipolar con el péptido enlazado a resina 2d para proporcionar dos isómeros, sin- y anti-, del compuesto 2e. A continuación en la etapa iid, el grupo protector Fmoc se retira poniendo en contacto 2e con una amina secundaria, tal como, por ejemplo, piperidina en un disolvente polar, tal como dimetilformamida para dar 2f. La formación del
10 péptido 2g, mediante la etapa iie, puede conseguirse a través de la reacción de 2f con un ácido carboxílico en presencia de un reactivo de acoplamiento, tal como HBTU, un inhibidor de racemización, tal como HOBt y una amina terciaria, tal como DIEA. La escisión del péptido-resina 2g, etapa iif, para dar la alfa-hidroxi-amida 2h, puede conseguirse poniendo en contacto 2g con un ácido fuerte, tal como, por ejemplo, ácido trifluoroacético y agua.
En la etapa final, iig, la alfa-hidroxi-amida 2h se oxida para dar 2i, usando oxidación de un peryodinano de Dess15 Martin u oxidación de Pfitzner-Moffat.
Como alternativa, los compuestos de Fórmula I pueden prepararse usando reactivos enlazados a resina, tal como se ilustra a continuación en el Esquema 3.
Esquema 3
20 En el Esquema 3, la retirada selectiva del PG1 en presencia de PG2 (etapa if) proporciona isómero o isómeros de espiroisoxazolina 1i y/o 1j. La reacción de 1i y/o 1j, en la etapa iiia, con un derivado de Fmoc activado, por ejemplo, N-(9H-Fluoren-9-ilmetoxicarboniloxi)succinimida (Fmoc-OSu), en presencia de una base orgánica débil, tal como carbonato sódico, proporciona el derivado de Fmoc 3a.
La preparación del péptido enlazado a resina 2e puede conseguirse por reacción del derivado de Fmoc 3a con el aminoalcohol enlazado a resina DHP 2c, mediante la etapa iiib, que reacciona con un ácido libre 3b, en presencia de un reactivo de acoplamiento (por ejemplo, N,N,N',N'-tetrametil-hexafluorofosfato de O-benzotriazoluronio (HBTU)), un inhibidor de racemización (por ejemplo, 1-hidroxibenzotriazol (HOBT)) y una amina terciaria (por ejemplo, di
5 isopropiletil amina (DIEA)).
En la etapa iid, el grupo protector Fmoc se retira poniendo en contacto 2e con una amina secundaria, tal como, por ejemplo, piperidina, en un disolvente polar, tal como dimetilformamida, para dar 2f. La formación del péptido 2g puede conseguirse, por ejemplo, haciendo reaccionar 2f con un ácido carboxílico en presencia de un reactivo de acoplamiento (por ejemplo, HBTU), un inhibidor de racemización (por ejemplo, HOBt) y una amina terciaria (por
10 ejemplo, DIEA). La escisión del péptido-resina 2g para dar el péptido libre 2h puede conseguirse, por ejemplo, poniendo en contacto 2g con un ácido fuerte (por ejemplo, ácido trifluoroacético) y agua.
En la etapa final, iig, el alcohol de 2h puede oxidarse para dar 2i, por ejemplo, con peryodinano de Dess-Martin o hipoclorito sódico y TEMPO.
A continuación, el Esquema 4 ilustra una ruta sintética para compuestos de la Fórmula I, en la que R1 y R2, junto con 15 los átomos a los que están unidos, forman un heterocicloalifático macrocíclico opcionalmente sustituido.
Esquema 4
Con respecto al Esquema 4, el ácido de espiroisoxazolina E4 reacciona con el aminoéster H1 en presencia de un reactivo de acoplamiento para proporcionar el intermedio H2. La macrociclación de H2 da como resultado el
20 compuesto H3. La hidrólisis del éster H2 proporciona el ácido H4. La reacción del ácido H4 con una sulfonamida o sulfamida en presencia de un reactivo de acoplamiento proporciona el producto H5.
A continuación se muestras en los Esquemas 5, 6, 7, 8 y 9 ejemplos de síntesis total de los compuestos de Fórmula I de acuerdo con uno de los procedimientos descritos anteriormente.
Esquema 5
Con respecto al Esquema 5, el t-butildimetilsilil-hidroxibenzaldehído protegido 5b se convierte en el cloruro de
5 hidroxamoílo 5d como se ha descrito previamente. La reacción de 5d con la exometilen pirrolidina proporciona la espiroisoxazolina 5e. La desprotección de 5e para dar 5f seguido de reacción con anhídrido tríflico proporciona el triflato 5g. La reacción de 5f con una amina HNU1U2 proporciona la espiroisoxazolina intermedia 5h que se convierte en los compuestos de la invención como se ha descrito previamente.
Como alternativa, el intermedio de hidroxiespiroisoxazolina 5f puede alquilarse para proporcionar el intermedio 5k 10 que puede convertirse de manera similar en los compuestos de la invención.
Esquema 6:
Con respecto al Esquema 6, la reacción de la pirrolidinona desprotegida con difluorodibromometano en presencia de HMPT y cinc proporciona el intermedio de difluroexometileno 6b. La adición dipolar con el óxido de nitrilo 1f como se ha descrito previamente, proporciona la difluroespiroisoxazolina 6c. De una manera similar, los intermedios 6b y 6f se preparan a partir de 6a y 6e, respectivamente y se convierten en las isooxazolinas sustituidas correspondientes 6d y 6g. En otras variaciones, el intermedio 6h puede bromarse para dar 6j, alquilarse para proporcionar 6k u oxidarse para proporcionar 6m, usando los reactivos ilustrados.
Con respecto al Esquema 7, la adición dipolar de la exometilen pirrolidina mostrada con 1f, en la que R3 es -COOEt, conduce al éster 7a. La hidrólisis del éster etílico en 7a, la conversión en el cloruro de ácido (no mostrada) y la reacción con amoniaco proporciona la amida 7c. La reacción de 7c con anhídrido trifluroacético proporciona el nitrilo 7d, que se convierte en el intermedio peptídico 7e por los procedimientos descritos anteriormente. El intermedio 7e reacciona con una azida U4N3 para proporcionar el tetrazol 7f, que se oxida para dar un compuesto de la invención 7g. En una variación de este esquema, el éster 7a puede convertirse en el triazol 7h y posteriormente en los compuestos de la invención 7i.
Esquema 8:
Con respecto al Esquema 8, la adición dipolar, como se ha descrito previamente pero usando dibromuro hidroxicarbonimídico, proporciona la bromoisoxazolina 8a. La reacción de 8a con un ácido arilborónico en presencia de un catalizador de paladio (condiciones de Suzuki) proporciona el intermedio 8b, que se convierte en los compuestos de la invención por los procedimientos descritos anteriormente. La AR en las etapas 8a y 8b representa
15 arilo o heteroarilo.
Con respecto al Esquema 9, el producto de Wittig 9a se somete a adición dipolar para proporcionar la espiroisoxazolina 9b. La reducción de 9b con, por ejemplo, DIBAL, proporciona el alcohol 9c, que puede alquilarse para proporcionar el intermedio 9e, que posteriormente puede convertirse en los compuestos de la invención por los procedimientos descritos anteriormente. La hidrólisis del éster 9b con, por ejemplo, LiOH, proporcionará el ácido carboxílico 9d, que puede convertirse en los compuestos de fórmula I como se describe en el presente documento.
En referencia al Esquema 10, la piperidinona desprotegida 10b se somete a una reacción de tipo Wittig para formar el compuesto de exometileno 10c que se somete a adición dipolar como se ha descrito previamente para proporcionar una 4,5-espiroisoxazolina 10d que puede convertirse en los compuestos de la invención como se ha descrito previamente.
III. Formulaciones, administraciones y usos
Otra realización de la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención o sales o mezclas de sales del mismo farmacéuticamente aceptables. De acuerdo con otra realización, el compuesto de la invención está presente en una cantidad eficaz para disminuir la carga viral en una muestra o en un paciente, en el que dicho virus codifica una serina proteasa necesaria para el ciclo de vida viral, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Si en estas composiciones se utilizan sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención, estas sales derivan preferentemente de ácidos y bases inorgánicos u orgánicos. Entre dichas sales ácidas se incluyen las siguientes: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benceno sulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canfor sulfonato, ciclopentano-propionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodohidrato, 2 hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2 naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3 fenil propionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Las sales básicas incluyen sales de amonio, sales alcalino metálicas, tales como sales de sodio y potasio, sales metálicas alcalinotérreas, tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas, tales como sales de diciclohexilamina, N metil D glutamina y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y sucesivamente.
Además, los grupos que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferior, tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena alargada tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo, tales como bromuros de bencilo y fenetilo. De esta manera se obtienen productos solubles o dispersables en agua o en aceite.
Los compuestos utilizados en las composiciones y procedimientos de la presente invención también puede modificarse añadiendo funcionalidades apropiadas para potenciar propiedades biológicas selectivas. Dichas modificaciones se conocen en la materia e incluyen las que aumentan la penetración biológica en un sistema biológico determinado (por ejemplo, sangre, sistema linfático, sistema nervioso central), las que aumentan la biodisponibilidad oral, las que aumentan la solubilidad para permitir la administración por inyección, modificar el metabolismo y la tasa de excreción.
Los excipientes farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en estas composiciones incluyen, aunque sin limitación, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como albúmina de suero humano, sustancias tampón, tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato potásico, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrógeno fosfato disódico, hidrógeno fosfato potásico, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias basadas en celulosa, polietilenglicol, carboximetil celulosa sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanonina.
De acuerdo con otra realización, las composiciones de la presente invención se formulan para la administración farmacéutica a un mamífero. En una realización dicho mamífero es un ser humano.
Dichas composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse por vía oral, por vía parenteral, por pulverización mediante inhalación, por vía tópica, por vía rectal, por vía nasal, por vía bucal, por vía vaginal o mediante un depósito implantado. El término “parenteral”, como se usa en el presente documento, incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal. Preferentemente, las composiciones se administran por vía oral o por vía intravenosa.
Las formas inyectables estériles de las composiciones de la presente invención pueden ser suspensiones acuosas u oleaginosas. Estas suspensiones pueden formularse de acuerdo con técnicas conocidas en la materia usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación estéril de inyectables también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3 butanodiol. Entre los excipientes y disolventes que pueden emplearse se encuentran agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónico. Además, como un medio disolvente o de suspensión, se emplean, de manera convencional, aceites estériles, no volátiles. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite suave, no volátil, incluyendo mono-o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados glicéridos son útiles en la preparación de inyectables, como lo son los aceites naturales farmacéuticamente aceptables, tales como aceite de oliva o de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas. Estas soluciones o suspensiones oleaginosas también pueden contener un diluyente o dispersante alcohólico de cadena larga, tal como carboximetilcelulosa o agentes dispersantes similares que normalmente se usan en la formulación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptables que incluyen emulsiones y suspensiones. Con fines de formulación también pueden usarse otros tensioactivos normalmente usados, tales como Tweenes, extensores y otros agentes emulsionantes o potenciadores de biodisponibilidad que se usan normalmente en la fabricación de formas de dosificación sólidas, líquidas u otras.
En una realización, en una monoterapia para la prevención y tratamiento de enfermedades antivirales particularmente mediadas contra el VHC, son útiles niveles de dosificación de entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal al día de los compuestos inhibidores de proteasa, descritos en el presente documento. En otra realización, en una monoterapia para la prevención y tratamiento de enfermedades antivirales particularmente mediadas contra el VHC, son útiles niveles de dosificación de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 75 mg/kg de peso corporal al día de los compuestos inhibidores de proteasa descritos en el presente documento. Típicamente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se administrarán desde aproximadamente 1 a aproximadamente 5 veces al día o como alternativa, como una infusión continua. Dicha administración puede usarse como una terapia crónica o aguda. La cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales de transporte para producir una sola forma de dosificación variará dependiendo del huésped tratado y del modo de administración particular. Una preparación típica contendrá desde aproximadamente el 5% a aproximadamente el 95% de compuesto activo (p/p). En una realización, dichas preparaciones contienen desde aproximadamente el 20% a aproximadamente el 80% del compuesto activo.
Cuando las composiciones de la presente invención comprenden una combinación de un compuesto de la invención y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deben estar presentes a niveles de dosificación de entre aproximadamente el 10 al 100% de la dosificación normalmente administrada en un régimen de monoterapia. En otra realización, el agente adicional debe presentarse a niveles de dosificación de entre aproximadamente el 10 al 80% de la dosificación normalmente administrada en un régimen de monoterapia.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse por vía oral en cualquier forma de dosificación que sea oralmente aceptable incluyendo, aunque sin limitación, cápsulas, comprimidos, suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de comprimidos para el uso oral, los excipientes normalmente usados incluyen lactosa y almidón de maíz. Los agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, también se añaden típicamente. Para la administración oral en una forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando para el uso oral se requieren suspensiones acuosas, el principio activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, también pueden añadirse algunos agentes edulcorantes, saporíferos o colorantes.
Como alternativa, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse en forma desupositorios para administración rectal. Éstas pueden prepararse mezclando el agente con un excipiente adecuado no irritante, que es sólido a temperatura ambiente pero líquido a temperatura rectal y por lo tanto se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja y polietilenglicoles.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también pueden administrarse por vía tópica, especialmente cuando la diana del tratamiento incluye áreas u órganos fácilmente accesibles por aplicación tópica, incluyendo enfermedades oculares, cutáneas o del tracto intestinal inferior. Las formulaciones tópicas adecuadas se preparan fácilmente para cada una de estas áreas u órganos.
La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior puede efectuarse en una formulación de supositorio rectal (véase anteriormente) o en una formulación para enema adecuada. También pueden usarse parches transdérmicos por vía 5 tópica.
Para aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una pomada adecuada que contenga el componente activo suspendido o disuelto en uno o más excipientes. Los excipientes para la administración tópica de los compuestos de la presente invención incluyen, aunque sin limitación, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, compuestos de propilenglicol, polioxitileno, polioxipropileno, cera emulsionante y
10 agua. Como alternativa, las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una loción o crema adecuada que contenga los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Los excipientes adecuados incluyen, aunque sin limitación, aceite mineral, monoestearato de sorbitán, polisorbato 60, cera de ésteres cetílicos, alcohol cetearílico, 2 octildodecanol, alcohol bencílico y agua.
Para el uso oftálmico, las composiciones farmacéuticas pueden formularse como suspensiones micronizadas en
15 solución salina estéril isotónica con pH ajustado o, preferentemente, como soluciones en solución salina estéril isotónica con pH ajustado, bien con un conservante, tal como cloruro de benzalconio, o bien sin conservantes. Como alternativa, para usos oftálmicos; las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una pomada tal como vaselina.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también pueden administrarse por aerosol o inhalación
20 nasal. Dichas composiciones se preparan de acuerdo con técnicas bien conocidas en la materia de formulación farmacéutica y pueden prepararse como soluciones en soluciones salinas, empleando alcohol bencílico u otros conservantes, promotores de absorción adecuados para potenciar la biodisponibilidad, fluorocarbonos y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes convencionales.
En una realización, las composiciones farmacéuticas se formulan para administración oral.
25 En otra realización, las composiciones de la presente invención comprenden adicionalmente otro agente antiviral, preferentemente un agente contra el VHC. Dichos agentes antivirales incluyen, aunque sin limitación, agentes inmunomoduladores, tales como D-, E- y J-interferones, compuestos de interferón-D derivatizados pegilados y timosina; otros agentes antivirales, tales como ribavirina, amantadina y telbivudina; otros inhibidores de proteasas de la hepatitis C (inhibidores de NS2-NS3 e inhibidores de NS3-NS4A); inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida
30 del VHC, incluyendo inhibidores de helicasa y polimerasa; inhibidores de entrada de ribosomas internos; inhibidores virales de amplio espectro, tales como inhibidores de IMPDH (por ejemplo, los compuestos de las Patentes de Estados Unidos Nº 5.807.876, 6.498.178, 6.344.465 y 6.054.472, documentos WO 97/40028, WO 98/40381, WO 00/56331, y ácido micofenólico y sus derivados, e incluyendo, aunque sin limitación VX-497, VX-148 y/o VX-944); o combinaciones de cualquiera de los anteriores. Véase también, W. Markland y col., Antimicrobial & Antiviral
35 Chemotherapy, 44, pág. 859 (2000) y la Patente de Estados Unidos Nº 6.541.496.
En el presente documento su usan las siguientes definiciones (refiriéndose las marcas registradas a productos disponibles en la fecha de presentación de esta solicitud).
“Peg-Intron” significa PEG-INTRON£, peginteferón alfa-2b, disponible de Schering Corporation, Kenilworth, NJ;
40 “Intron”, significa INTRON-A£, interferón alfa-2b disponible de Schering Corporation, Kenilworth, NJ; “ribavirina” significa ribavirina (1-beta-D-ribofuranosil-1H-1,2,4-triazol-3-carboxamida), disponible de ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA; descrita en el �?ndice de Merck, entrada 8365, duodécima edición; también disponible como REBETROL£ de Schering Corporation, Kenilworth, NJ, o como COPEGASUS£ de Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ; “Pagasys” significa PEGASYS£, peginterferón alfa-2a disponible de Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ; “Roferon”
45 significa ROFERON£, interferón alfa-2a recombinante disponible de Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ; “Berefor” significa BEREFOR£, interferón alfa 2 disponible de Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT; SUMIFERON£, una combinación purificada de alfa interferones naturales tales como Sumiferon disponible de Sumitomo, Japón; WELLFERON£, interferón alfa n1 disponible de Glaxo_Wellcome LTd., Gran Bretaña; y ALFERON£, una mezcla de alfa interferones naturales fabricados por Interferon Sciences, y disponible de Purdue
50 Frederick Co., CT.
El término “interferón”, como se usa en el presente documento, significa un miembro de una familia de proteínas específicas de especies altamente homólogas que inhiben la replicación viral y la proliferación celular y modulan la respuesta inmunitaria, tales como interferón alfa, interferón beta o interferón gamma. Véase, índice de Merck, entrada 5015, duodécima edición.
5 De acuerdo con una realización de la presente invención, el interferón es el D interferón. De acuerdo con otra realización, una combinación terapéutica de la presente invención utiliza alfa interferón 2a natural. O, la combinación terapéutica de la presente invención utiliza alfa interferón 2b natural. En otra realización, la combinación terapéutica de la presente invención utiliza alfa interferón 2a o 2b recombinante. En otra realización adicional, el interferón es alfa interferón 2a o 2b pegilado. Los interferones adecuados para la presente invención incluyen:
10 (a) INTRON-A£ (interferón-alfa 2B, Schering Plough),
(b)
PEG-INTRON£,
(c)
PEGASUS£,
(d)
ROFERON£,
(e)
BEREFOR£,
15 (f) SUMIFERON£
(g)
WELLFERON£,
(h)
alfa interferón consenso disponible de Amgen, Inc., Newbury Park, CA,
(i)
ALFERON£;
(j)
VIRAFERON£;
20 (k) INFERGEN£;
(l) ALBUFERON™.
Como reconocen los facultativos expertos, un inhibidor de proteasa podría administrarse preferentemente por vía oral. El interferón no se administra típicamente por vía oral. Sin embargo, nada en el presente documento limita los procedimientos o combinaciones de la presente invención con respecto a ninguna forma o régimen de dosificación
25 específico. Por tanto, cada componente de una combinación de acuerdo con la presente invención puede administrarse por separado, conjuntamente o en cualquiera de sus combinaciones.
En una realización, el inhibidor de proteasa y el interferón se administran en formas de dosificación por separo. En una realización, cualquier agente adicional se administra como parte de una sola forma de dosificación con el inhibidor de proteasa o como una forma de dosificación por separado. Dado que la presente invención implica una
30 combinación de compuestos, las cantidades específicas de cada compuesto pueden depender de las cantidades específicas de cada otro compuesto en la combinación. Como reconocen los facultativos expertos, las dosificaciones de interferón se miden típicamente en UI (por ejemplo, de aproximadamente 4 millones de UI a aproximadamente 12 millones de UI).
Por consiguiente, los agentes (tanto los que actúan como un agente inmunomodulador o de otra manera) que
35 pueden usarse en combinación con un compuesto de la presente invención incluyen, aunque sin limitación, Alburefon™ (albúmina-interferón alfa) disponible de HumanGenomeSciences; PEG-INTRON£ (peginterferón alfa2b, disponible de Schering Corporation, Kenilworth, NJ); INTRON-A£, (interferón alfa-2b disponible de Schering Corporation, Kenilworth, NJ); ribavirina (1-beta-D-ribofuranosil-1H-1,2,4-triazol-3-carboxamida, disponible de ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA; descrita en el �?ndice de Merck, entrada 8365, duodécima edición);
40 REBETROL£ (Schering Corporation, Kenilworth, NJ), COPEGUS£ (Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ); PEGASYS£ (peginterferón alfa-2a disponible de Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ); ROFERON£ (interferón alfa-2a recombinante disponible de Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ); BEREFOR£ (interferón alfa 2 disponible de Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT); SUMIFERON£ (una combinación purificada de alfa interferones naturales tales como Sumiferon disponible de Sumitomo, Japón); WELLFERON£ (interferón alfa n1 disponible de Glaxo
45 Wellcome Ltd., Gran Bretaña); ALFERON£ (una mezcla de alfa interferones naturales fabricada por Interferon Sciences, y disponible de Purdue Frederick Co., CT); interferón-D, alfa interferón 2a natural; alfa interferón 2b natural; alfa interferón 2a o 2b pegilado; alfa interferón consenso (Amgen, Inc., Newbury Park, A); VIRAFERON£; INFERGEN£; REBETRON£ (Schering Plough, Interferón-alfa 2B + Ribavirina); interferón alfa pegilado (Reddy, K.R. y col. “Efficacy and Safety of Pegylated (40-kd) Interferon alpha-2a Compared with Interferón alfa-2a in Noncirrhotic
50 Patients with Chronic Hepatitis C (Hepatology, 33, págs. 433-438 (2001); interferón consenso (Kao, J.H., y col., “Efficacy of Consensus Interferon in the Treatment of Chronic Hepatitis” J. Gastroenterol. Hepatol. 15, págs. 14181423 (2000); interferón linfoblastoide o “natural”; tau interferón (Clayette, P. y col., “IFN-tau, A New Interferon Type I with Antiretroviral activity” Pathol. Biol. (Paris) 47, págs. 553-559 (1999); interleucina-2 (Davis, G.L. y col., “Future Options for the Management of Hepatitis C”. Seminars in Liver Disease, 19, págs. 103-112 (1999); Interleucina-6 (Davis y col. “Future Options for the Management of Hepatitis C”. Seminars in Liver Disease, 19, págs. 103-112 (1999); interleucina-12 (Davis, G.L. y col., “Future Options for the Management of Hepatitis C”. Seminars in Liver Disease, 19, págs. 103-112 (1999); y compuestos que potencian el desarrollo de la respuesta de linfocitos T auxiliares de tipo 1 (Davis y col., “Future Options for the Management of Hepatitis C”. Seminars in Liver Disease, 19, págs. 103-112 (1999)). También se incluyen compuestos que estimulan la síntesis del interferón en las células (Tazulakhova, E.B. y col., “Russian Experience in Screening, analysis, and Clinical Application of Novel Interferon Inducers” J. Interferon Cytokine Res., 21 págs. 65-73) incluyendo, aunque sin limitación, ARN bicatenario, en solitario o en combinación con tobramicina e Imiquimod (3M Pharmaceuticals; Sauder, D.N. “Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod” J. Am. Acad. Dermatol.; 43 págs. S6-11 (2000).
Los compuestos que estimulan la síntesis del interferón en las células (Tazulakhova, E.B. y col., “Russian Experience in Screening, analysis, and Clinical Application of Novel Interferon Inducers” J. Interferon Cytokine Res., 21 págs. 65-73) incluyen, aunque sin limitación, ARN bicatenario, en solitario o en combinación con tobramicina e Imiquimod (3M Pharmaceuticals; Sauder, D.N. “Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod” J. Am. Acad. Dermatol., 43 págs. S6-11 (2000).
Con un compuesto de la presente invención pueden usarse otros compuestos no inmunomoduladores o inmunomoduladores incluyendo, aunque sin limitación, los especificados en el documento WO 02/18369, el cual se incorpora en el presente documento por referencia (véase, por ejemplo, la página 273, líneas 9-22 y la página 274, línea 4 a la página 276, línea 11).
Además otros agentes incluyen los descritos en diversas solicitudes de Patentes de Estados Unidos publicadas. Estas publicaciones proporcionan enseñanzas adicionales de compuestos y procedimientos que podrían usarse en combinación con VX-950 en los procedimientos de la presente invención, particularmente para el tratamiento de la hepatitis. Se contempla que, en combinación con los procedimientos y composiciones de la presente invención, pueda usarse cualquiera de estos procedimientos y composiciones. Por abreviar, la divulgación de estas publicaciones se refiere a la referencia del número de publicación pero debe observarse que la divulgación de los compuestos en particular se incorpora específicamente en el presente documento por referencia. De manera ejemplar, dichas publicaciones incluyen la Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040058982; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050192212; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050080005; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050062522; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050020503; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040229818; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040229817; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040224900; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040186125; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040171626; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040110747; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040072788; U Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040067901; U Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030191067; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030187018; U Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030186895; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20030181363; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20020147160; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20040082574; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050192212; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050187192; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050187165; Publicación de Patente de Estados Unidos Nº 20050049220; y Publicación de Patente de Estados Unidos Nº US2005/0222236.
La presente invención también puede implicar administrar un inhibidor de monooxigenasa del citocromo P450. Los inhibidores de CYP pueden ser útiles aumentando las concentraciones hepáticas y/o aumentando los niveles en sangre de los compuestos que inhibe el CYP.
Si una realización de la presente invención implica un inhibidor de CYP, cualquier inhibidor de CYP que mejore la farmacocinética de la proteasa NS3/4A en cuestión, puede usarse en un procedimiento de la presente invención. Estos inhibidores de CYP incluyen, aunque sin limitación, ritonavir (documento WO 94/14436), quetoconazol, troleandomicina, 4-metil pirazol, ciclosporina, clometiazol, cimetidina, itraconazol, fluconazol, miconazol, fluvoxamina, fluoxetina, nefazodona, sertralina, indinavir, nelfinavir, amprenavir, fosamprenavir, saquinavir, lopinavir, delavirdina, eritromicina, VX-944 y VX-497. Los inhibidores de CYP preferidos incluyen ritonavir, quetoconazol, trolandomicina, 4metil pirazol, ciclosporina y clometiazol. Para formas de dosificación de ritonavir preferidas, véase la Patente de Estados Unidos Nº 6.037.157 y los documentos citados en su interior: Patente de Estados Unidos Nº 5.484.801, solicitud de Estados Unidos Nº de Serie 08/402,690 y los documentos WO 95/07696 y WO 95/09614.
Se conocen procedimientos para medir la capacidad de un compuesto para inhibir la actividad monooxigenasa del citocromo P450. Véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 6.037.157 y Yun y col. Drug Metabolism & Disposition, vol. 21, págs. 403-407 (1993).
Después de la mejora de una afección de un paciente, si es necesario, puede administrarse una dosis de mantenimiento de un compuesto, composición o combinación de la presente invención. Posteriormente, en función de los síntomas, la dosificación o frecuencia de la administración, o ambas, pueden reducirse a un nivel al cual la afección mejorada se mantiene, cuando los síntomas se han aliviado a un nivel deseado, el tratamiento debe suspenderse. Los pacientes pueden, sin embargo, necesitar tratamiento intermitente sobre una base a largo plazo después de cualquier recurrencia de los síntomas de la enfermedad.
También debe entenderse que una dosificación y un régimen de tratamiento específicos para cualquier paciente particular dependerá de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, velocidad de excreción, combinación farmacológica y del criterio del médico tratante y de la gravedad de la enfermedad particular que se está tratando. La cantidad de los principios activos también dependerá del compuesto particular descrito y de la presencia o ausencia y naturaleza del agente antiviral adicional en la composición.
De acuerdo con otra realización, la invención proporciona el uso de los compuestos de acuerdo con la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un paciente infectado por un virus caracterizado por una serina proteasa codificada viralmente que es necesaria para el ciclo de vida del virus, administrando a dicho paciente una composición farmacéuticamente aceptable de la presente invención. Los compuestos de la presente invención pueden usarse para tratar a un paciente que padece de una infección por el VHC. Dicho tratamiento puede erradicar completamente la infección viral o reducir su gravedad. En otra realización, el paciente es un ser humano.
En una realización alternativa, los procedimientos comprenden adicionalmente la etapa de administrar a dicho paciente un agente antiviral preferentemente un agente contra el VHC. Dichos agentes antivirales incluyen, aunque sin limitación, agentes inmunomoduladores, tales como D-, E- y J-interferones, compuestos de interferón-D derivatizados pegilados y timosina; otros agentes antivirales, tales como ribavirina, amantadina y telbivudina; otros inhibidores de proteasas de hepatitis C (inhibidores de NS2-NS3 e inhibidores NS3-NS4A); inhibidores de otras dianas en el ciclo de la vida del VHC, incluyendo aunque sin limitación, inhibidores de helicasa y polimerasa; inhibidores de entrada de ribosomas internos; inhibidores virales de amplio espectro, tales como inhibidores de IMPDH (por ejemplo, VX-497 y otros inhibidores de IMDP desvelados en las Patentes de Estados Unidos Nº 5.0807.876 y 6.498.178, ácido micofenólico y sus derivados); inhibidores del citocromo P-450, tales como ritonavir o combinaciones de cualquiera de los anteriores.
Dicho agente adicional puede administrarse a dicho paciente como parte de una sola forma de dosificación que comprende tanto un compuesto de la presente invención como un agente antiviral adicional. Como alternativa, el agente adicional puede administrarse por separado a partir del compuesto de la presente invención, como parte de una forma de dosificación múltiple, en el que dicho agente adicional se administra antes que, junto con o después de una composición que comprende un compuesto de la presente invención.
Las composiciones farmacéuticas también pueden prescribirse al paciente en “envases para el paciente” que contienen el ciclo de tratamiento completo en un solo embalaje, normalmente un envase de tipo blister. Los envases para el paciente poseen, sobre las prescripciones tradicionales, la ventaja de que el farmacéutico divide, a partir de un suministro a granel, un suministro a los pacientes de una forma farmacéutica y que los pacientes siempre tienen acceso al prospecto contenido en el envase para el paciente, normalmente ausente en las prescripciones tradicionales. Se ha observado que la inclusión de un prospecto, con las instrucciones del médico tratante, mejora el cumplimiento del paciente.
Se entenderá que, la administración de la combinación de cada formulación de la presente invención, mediante un solo envase (o envases) para el paciente, que contiene en el prospecto instrucciones para el paciente para el correcto uso de la presente invención, es una característica adicional deseable de la presente invención.
Por consiguiente, un aspecto adicional de la presente invención es un envase que comprende al menos un compuesto de la presente invención (en dosificaciones de acuerdo con la presente invención) y un prospecto con información que contiene instrucciones sobre el uso de la combinación de la presente invención. En un envase farmacéutico puede presentarse cualquier composición, forma de dosificación, régimen terapéutico u otra realización de la presente invención. En una realización alternativa de la presente invención, el envase farmacéutico comprende adicionalmente uno o más agentes adicionales como se describe en el presente documento. El agente o los agentes adicionales pueden proporcionarse en el mismo envase o envases separados.
Otros aspectos de esto implica un kit envasado para un paciente para su uso en el tratamiento de infección por VHC
o en la prevención de infección por VHC (o para su uso en otro procedimiento de la presente invención), que comprende: una sola o una pluralidad de formulaciones farmacéuticas de cada componente farmacéutico; un recipiente que contiene la formulación (o formulaciones) farmacéutica durante el almacenamiento y antes de la administración; e instrucciones para realizar la administración del fármaco de una manera eficaz para tratar o prevenir la infección por VHC.
Por consiguiente, la presente invención proporciona kits para la administración simultánea o secuencial de una dosis de al menos un compuesto de la presente invención (y opcionalmente un agente adicional). Típicamente, dicho kit comprenderá, por ejemplo, una composición de cada compuesto y un agente (o agentes) adicional opcional en un excipiente farmacéuticamente aceptable (y en una o en una pluralidad de formulaciones farmacéuticas) e instrucciones por escrito para la administración simultánea o secuencial.
En otra realización, se proporciona un kit envasado que contiene una o más formas de dosificación para la autoadministración; un medio contenedor, preferentemente precintado, para guardar las formas de dosificación durante el almacenamiento y antes de su uso; e instrucciones para el paciente para realizar la administración del fármaco. Las instrucciones serán típicamente instrucciones por escrito sobre un prospecto, una etiqueta y/o sobre 5 otros componentes del kit, y la forma o formas de dosificación son como se describe en el presente documento. Cada forma de dosificación puede guardarse individualmente, como en una hoja de un laminado de plástico - lámina metálica con cada forma de dosificación aislada de las otras en celdas o ampollas individuales, o las formas de dosificación pueden guardarse en un solo envase, como en un frasco de plástico. Los kits de la presente invención también incluirán típicamente medios para el envasado de los componentes individuales del kit, es decir, las formas
10 de dosificación, el medio contenedor y las instrucciones por escrito para su uso. Dicho medio de envasado puede adoptar la forma de una caja de cartón o de papel, una bolsita de plástico o metálica, etc.
Un kit de acuerdo con la presente invención podría contener cualquier aspecto de la presente invención tal como cualquier composición, forma de dosificación, régimen terapéutico o envase farmacéutico. Los envases y kits de acuerdo con la presente invención comprenden opcionalmente una pluralidad de composiciones o formas de
15 dosificación. Por consiguiente, dentro de la presente invención se incluirían envases y kits que contendrían una composición o más de una composición.
En otra realización adicional la presente invención proporciona un procedimiento de tratamiento previo de una sustancia biológica in vitro destinada para la administración a un paciente que comprende la etapa de poner en contacto dicha sustancia biológica con una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un
20 compuesto de la presente invención. Dichas sustancias biológicas incluyen, aunque sin limitación, sangre y componentes de la misma tales como plasma, plaquetas, subpoblaciones de células sanguíneas y similares; órganos tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, etc.; esperma y óvulos; médula ósea y sus componentes y otros líquidos para infundir en un paciente tales como solución salina, dextrosa, etc.
De acuerdo con otra realización, la invención proporciona procedimientos para el tratamiento de materiales que
25 pueden ponerse posiblemente en contacto con un virus caracterizado por una serina proteasa codificada viralmente necesaria para su ciclo vital. Este procedimiento comprende la etapa de poner en contacto dicho material con un compuesto de acuerdo con la presente invención. Dichos materiales incluyen, pero sin limitación, instrumental y prendas quirúrgicas (por ejemplo, ropa, guantes, delantales, batas, máscaras, gafas, calzado, etc.); instrumental y prendas de laboratorio (por ejemplo, ropa, guantes, delantales, delantales, batas, máscaras, gafas, calzado, etc.);
30 aparatos y materiales para la extracción de sangre; y dispositivos invasivos, tales, por ejemplo, derivaciones y endoprótesis vasculares.
En otra realización, los compuestos de la presente invención pueden usarse como herramientas de laboratorio para ayudar en el aislamiento de una serina proteasa codificada viralmente. Este procedimiento comprende las etapas de proporcionar un compuesto de la presente invención unido a un soporte sólido; poner en contacto dicho soporte
35 sólido con una muestra que contienen una serina proteasa viral en condiciones que ocasionen que dicha proteasa se una a dicho soporte sólido; y eluir dicha serina proteasa de dicho soporte sólido. En una realización, la serina proteasa viral aislada mediante este procedimiento es la proteasa NS3-NS4A del VHC.
IV. Procedimientos y Ejemplos
Para que la invención descrita en el presente documento pueda comprenderse totalmente, se proporcionan los
40 siguientes ejemplos y procedimiento. Debe entenderse que estos procedimientos y ejemplos son únicamente para propósitos ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes de la invención de ninguna manera.
A. PREPRACIÓN DE INTERMEDIOS PARA COMPUESTOS DE FÓRMULA I
A continuación se exponen diversos procedimientos para preparar intermedios que pueden usarse para sintetizar el compuesto de Fórmula I.
Preparación de ácido 3-(benciloxicarbonilamino)-4-ciclobutil-2-hidroxibutanoico.
Una solución de la cianohidrina preparada de acuerdo con los procedimientos descritos en el documento WO 04/113294 (1 g, 3,65 mmol) en HCl conc. (12 ml) se calentó a reflujo durante 18 horas. La reacción se concentró al vacío, proporcionando el aminoácido deseado en forma de una sal de HCl (1,7 g) que se usó en la siguiente etapa 50 sin purificación adicional. Una solución de la sal de HCl anterior en THF se trató con DIPEA (2,68 g) y Z-OSu (5,16
g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas. La mezcla de reacción se diluyó con tolueno y HCl (12 N, hasta pH = 1). Después de separación, La fase orgánica se extrajo con NaHCO3 sat. (50 ml, dos veces). La fase acuosa se hizo ácida con HCl (6 N) hasta pH = 1 y se extrajo con EtOAc (200 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron y se concentraron al vacío, proporcionando el compuesto del título (0,6 g). (M+1)
5 308.
Preparación de 1-ciclobutil-3-hidroxi-4-(metilamino)-4-oxobutan-2-ilcarbamato de bencilo.
A una solución de ácido 3-(benciloxicarbonilamino)-4-ciclobutil-2-hidroxibutanoico (250 mg, 0,81 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió HOSu (140 mg, 1,22 mmol), EDC (234 mg, 1,22 mmol). Después de agitar durante 1 hora, se
10 añadió metilamina en THF (2 N, 0,81 ml) a la mezcla anterior. La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas y después se concentró al vacío. El residuo se purificó por Gilson Prep, proporcionando el compuesto del título (135 mg). RMN 1H (CDCl3): G 7,54-7,28 (m, 5H), 6,67 (NH, 1H), 5,03 (dd, 2H), 3,68 (m, 1H), 2,73 (m, 3H), 2,26 (m, 1H), 1,97-1,31 (m, 9H). (M+1) 321.
15 Preparación de 1-ciclobutil-4-(ciclopropilamino)-3-hidroxi-4-oxobutan-2-ilcarbamato de bencilo.
A una solución de ácido 3-(benciloxicarbonilamino)-4-ciclobutil-2-hidroxibutanoico (600 mg, 1,95 mmol) en DCM (20 ml) se le añadieron HOSu (337 mg, 2,93 mmol), EDC (562 mg, 2,93 mmol). Después de agitar durante 1 hora, se añadió ciclopropilamina (223 mg, 3,9 mmol) a la mezcla anterior. El producto se extrajo con EtOAc. Después, las fases orgánicas combinadas se lavaron con HCl (1 N), agua, NaHCO3 y salmuera, y después se concentró al vacío,
20 proporcionando 1-ciclobutil-4-(ciclopropilamino)-3-hidroxi-4-oxobutan-2-ilcarbamato de bencilo (530 mg). (M+1) 347.
Preparación de 3-amino-4-ciclobutil-N-ciclopropil-2-hidroxibutanamida.
A una solución de la amida CBz (530 mg, 1,53 mmol) en MeOH (30 ml) se le añadió Pd(OH)2/C (106 mg). La mezcla se agitó en una atmósfera de H2 (1 atm) durante 18 horas. Después de la filtración, el filtrado se concentró al vacío,
25 proporcionando el compuesto del título (300 mg). RMN 1H (CDCl3): G 3,29 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,37-1,66 (m, 9H), 1,40 (m, 1H), 0,78 (m, 2H), 0,51 (m, 2H). (M+1) 213.
Los siguientes compuestos se prepararon de una manera similar a la preparación de 3-amino-4-ciclobutil-Nciclopropil-2-hidroxibutanamida usando la amina adecuada:
Preparación de 3-amino-N-ciclopropil-2-hidroxihept-6-inamida
Se preparó 3-amino-N-ciclopropil-2-hidroxihept-6-inamida como se describe por N. Kobayashi, y col. en el documento US 2003/153788, que se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6): 8,18 (s), 6,34 (s), 4,22 (s), 3,45 (s), 3,17 (s), 2,84 (s), 2,69 (d, J = 3,2 Hz), 2,30 (m), 2,24 (m), 1,70 (m), 1,59 (m), 0,62 (d, J = 5,0 Hz), 0,53 (s) ppm; FIA m/z 197,01 ES+.
Preparación de (3S)-3-amino-4-ciclopropil-2-hidroxi-N-metilbutanamida Cbz-protegida
Etapa 1: Preparación de (2S)-1-ciano-3-ciclopropil-1-hidroxipropan-2-ilcarbamato de bencilo.
A una solución del aldehído (7,9 g, 32 mmol) en MeOH (50 ml) a 10 ºC, se le añadió Na2S2O4 (6,13 g, 35,2 mmol) y la mezcla resultante se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 2 horas y después se enfrió a 10 ºC. A esta mezcla de reacción, se le añadió una solución de KCN en agua (50 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, la mezcla se extrajo con TBME (100 ml, dos veces). Las fases orgánicas combinadas se lavaron 15 con agua y salmuera, se secaron y se concentraron al vacío, proporcionando el compuesto del título (8 g). (M+1)
275.
Etapa 2: Preparación de 3-(benciloxicarbonilamino)-4-ciclopropil-2-hidroxibutanoato de (3S)-metilo.
A una solución de la cianohidrina (1 g, 3,65 mmol) en MeOH (15 ml) a -20 ºC se le burbujeó mediante una corriente
20 de gas, HCl seco durante 30 minutos. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se purgó con gas nitrógeno durante 30 minutos y después se concentró. El residuo a 0 ºC se inactivó con agua enfriada con hielo y después se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El producto se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3, agua y salmuera, y se concentraron al vacío, proporcionando el compuesto del título (0,5 g). RMN 1H (CDCl3) G: 7,31-7,30 (m, 5H), 5,09 (d, 2H), 4,44-4,14
25 (m, 2H), 3,78 (d, 3H), 1,58-1,42 (m, 2H), 0,70 (m, 1H), 0,47 (t, 2H), 0,11-0,01 (m, 2H). (M+1) 308.
Etapa 3: Preparación de ácido (3S)-3-(benciloxicarbonilamino)-4-ciclopropil-2-hidroxibutanoico
A una solución del éster metílico de la Etapa 2 (400 mg; 1,3 mmol) en THF (8 ml) y agua (6,63 ml) se le añadió LiOH (1 N; 1,37 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos y después se acidificó con HCl 1,0 N a pH = 3~4. La mezcla se extrajo con EtOAc (20 ml, dos veces). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y después se concentraron al vacío, proporcionando el compuesto del título (370 mg). (M+1) 294.
Etapa 4: Preparación de (2S)-1-ciclopropil-3-hidroxi-4-(metilamino)-4-oxobutan-2-ilcarbamato de bencilo.
A una solución de ácido (3S)-3-(benciloxicarbonilamino)-4-ciclopropil-2-hidroxibutanoico (180 mg, 0,26 mmol) en
10 DCM (20 ml) se le añadieron HOSu (105 mg, 0,92 mmol), EDC (175 mg, 0,92 mmol). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió metilamina en THF (2 N, 0,92 ml) a la mezcla anterior. La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas y después se concentró al vacío. El residuo se purificó por Gilson Prep, proporcionando el compuesto del título (50 mg). RMN 1H (CDCl3): G 7,53-7,26 (m, 5H), 6,83 (NH, 1H), 5,25 (NH, 1H), 5,05 (m, 2H), 4,25-3,89 (m, 3H), 2,70 (m, 3H), 1,4 (m, 1H), 0,86 (m, 1H), 0,61 (m, 1H), 0,38 (m, 2H), 0,33 (m, 2H). (M+1) 307.
15 Los siguientes compuestos pueden prepararse de una manera similar, usando las aminas adecuadas, seguido de hidrogenación.
Los siguientes compuestos pueden prepararse por los mismos procedimientos descritos por Perni, R. y col. en el documento WO 01/74768, que se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad.
Preparación de ácido (S)-2-(ciclopentiloxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanoico
saturado (11 vol). Se disolvió 2,5-dioxopirrolidin-1-ilcarbonato de ciclopentilo (126 g, 0,55 mol, 1 equiv.) en acetona (5,5 vol), y la solución se añadió lentamente mediante un embudo de adición a temperatura ambiente a la solución de la glicina. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que se completó (aproximadamente 4 horas). La acetona se retiró a presión reducida y la solución acuosa restante se extrajo con acetato de etilo al 30% 5 en hexanos (tres veces, 5,5 vol cada una). Las fases orgánicas se descartaron. El pH de la fase acuosa se ajustó a 2 con HCl 2 N y después se extrajo con acetato de etilo (tres veces, 5,5 vol). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida, proporcionando un aceite transparente que se cristalizó lentamente. El producto en bruto se cristalizó en hexanos/acetato de etilo, proporcionando ácido (S)-2(ciclopentiloxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanoico en forma de un sólido de color blanco (82 g). Las aguas madre se
10 destilaron y se obtuvo un segundo cultivo de cristales (rendimiento combinado 105,54 g, rendimiento del 79%).
Preparación de Compuestos de Sulfonilo
Los Compuestos S1, S2, S3 y S4, mostrado anteriormente, se prepararon de acuerdo con los procedimientos descritos en los documentos WO 2005/095403 y PCT/US2005/010494, incorporado en el presente documento por 15 referencia en su totalidad. Específicamente, a una solución de isocianato de clorosulfonilo (10 ml, 115 mmol) en CH2Cl2 (200 ml) a 0 ºC, se le añadió t-BuOH (11 ml, 1 equiv.). La mezcla se agitó durante 60 minutos, después se añadió mediante una cánula en una solución de ciclopropilamina (6,6 g) en CH2Cl2 (200 ml) con trietilamina (30 ml) a 0 ºC al mismo tiempo que una solución de trietilamina (50 ml) en CH2Cl2 (100 ml) mediante un embudo de adición. La temperatura interna se mantuvo por debajo de 8 ºC. Se agitó a temperatura ambiente después de que se
20 completara la adición durante 4 horas. Después. la reacción se diluyó con CH2Cl2 y se transfirió a un embudo de decantación, se lavó con HCl 1 N (dos veces, 400 ml cada una) y salmuera (300 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. El producto se recristalizó en acetato de etilo/hexanos, produciendo 16,8 g (71,3 mmol, 62%) de S3. El Compuesto S3 se desprotegió con ácido trifluoroacético en CH2Cl2, dando el Compuesto S4 con rendimiento cuantitativo.
Se burbujeó gas de amoniaco a través de un tubo de dispersión de gas en THF (40 ml) enfriado a 0 ºC durante 5 minutos. A esta solución a 0 ºC se le añadió cloruro de ciclopropilsulfonilo (1 gramo, 7,1 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche, después se filtró a través de un lecho de gel de sílice, seguido de elución con EtOAc, produciendo 750 mg (6,19 mmol, 87%) de ciclopropilsulfonamida. RMN 1H (500 MHz, Metanol
30 d4): 4,79 (s, 2H), 2,59-2,54 (m, 1H), 1,06-0,96 (m, 4H).
A una solución del compuesto XX5 (1,37 g, 6,41 mmol) en THF (30 ml) a 0 ºC, se le añadió gota a gota boranosulfuro de dimetilo (3,85 ml, 7,8 mmol, 2,0 M en tolueno). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h con calentamiento gradual a temperatura ambiente, se inactivó con H2O (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (tres 35 veces, 30 ml cada una). Los extractos orgánicos combinados se secaron y se concentraron a presión reducida, proporcionando 1,3 g de un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional. Al cloruro de oxalilo (2,24 ml, 25,6 mmol) en CH2Cl2 (15 ml, anhidro), a -78 ºC en una atmósfera inerte, se le añadió gota a gota una solución de DMSO (2,73 ml, 38,5 mmol) en CH2Cl2 (8 ml). Después de agitar durante 10 min, se añadió gota a gota una solución del alcohol (1,3 g, 6,41 mmol) en CH2Cl2 (6 ml). Después de 10 min más, se añadió trietilamina (7,15 ml, 51,3 mmol) en 40 CH2Cl2 y la reacción se agitó 30 min más con calentamiento gradual a 0 ºC. La mezcla de reacción se lavó con HCl 1 M (20 ml) seguido de salmuera (20 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida. El
aceite resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 748 mg (59% en 2 etapas) del aldehído XX6. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 9,75 (s, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,91-2,85 (m, 1H), 2,78-2,74 (m, 1H), 2,56-2,52 (m, 1H), 1,74-1,71 (m, 2H), 1,66-1,58 (m, 4H), 1,27-0,95 (m, 5H).
A una solución del compuesto XX6 (581 mg, 2,9 mmol) y K2CO3 (811 mg, 5,9 mmol) en MeOH (15 ml) se le añadió
5 1-diazo-2-oxopropilfosfonato de dimetilo (676 mg, 3,5 mmol, Synlett 1996, p. 521). La reacción se agitó 1 h a temperatura ambiente, se diluyó con Et2O (20 ml) y se lavó con una solución saturada de NaHCO3 (10 ml, acuosa). La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida, dando 600 mg (100%) al alquino XX7 que se usó sin purificación adicional. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 3,69 (s, 3H), 2,48-2,37 (m), 1,95 (s, H), 1,73-1,60 (m), 1,30-0,94 (m).
10 A una solución del compuesto XX7 (600 mg, 2,9 mmol) en una solución de THF/H2O/MeOH (25 ml, 2:1:2) se le añadió LiOH monohidrato (850 mg, 20,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó 2 h a temperatura ambiente, se acidificó usando HCl 1 N (25 ml) y se extrajo con EtOAc (tres veces, 15 ml cada una). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron, produciendo 533 mg (99%) del ácido carboxílico XX8, que se usó sin purificación adicional.
A una solución del compuesto XX5 (100 mg, 0,5 mmol) en CH2Cl2 (2,5 ml) se le añadieron EDC (107 mg, 0,6 mmol), HOBt (76 mg, 0,6 mmol) y trietilamina (195 Pl, 1,4 mmol). A la solución de ácido activado se le añadió clorhidrato de metilamina (38 mg, 0,6 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se lavó con H2O (2 ml), HCl 1 N (2 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (2 ml). La fase orgánica se secó sobre
20 MgSO4 y se concentró, dando 100 mg de la amida XX9, que se usó sin purificación adicional. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 3,61 (s, 3H), 2,75-2,70 (m, 4H), 2,48-2,42 (m, 1H), 2,28-2,24 (m, 1H), 1,66-1,48 (m, 6H), 1,35 - 0,90 (m, 5H).
A una solución del compuesto XX9 (100 mg, 0,5 mmol) en una solución de THF/ H2O/MeOH (3 ml, 2:1:2) se le añadió LiOH monohidrato (124 mg, 3 mmol). La mezcla de reacción se agitó 2 h a temperatura ambiente, se acidificó usando HCl 1 N (4 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre
25 MgSO4 y se concentraron, produciendo 87 mg del ácido carboxílico XX10, que se usó sin purificación adicional. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 11,32 (s, H), 2,75-2,64 (m, H), 2,52-2,46 (m, H), 2,37 -2,33 (m, H), 2,25 (td, J = 8,7, 2,9 Hz, H), 1,97 (s, H), 1,79 (s, H), 1,74 - 1,62 (m, H), 1,59- 1,49 (m, H), 1,23- 1,12 (m, H), 1,08- 0,81 (m, H).
El intermedio XX12 se preparó de acuerdo con el procedimiento para la preparación del intermedio XX10 descrito
30 anteriormente, excepto por el uso de pirrolidina como reactivo en lugar de clorhidrato de metilamina. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 11,47 (s, 1H), 3,45 - 3,32 (m, 4H), 2,76-2,72 (m, 1H), 2,64-2,59 (m, 1H), 2,37 -2,33 (m, 1H), 1,92- 1,76 (m, 4H), 1,71 - 1,57 (m), 1,22- 0,84 (m).
A una solución del compuesto XX5 (1 g, 4,7 mmol) y HgO amarillo (1,01 g, 4,7 mmol) en CCl4 (23 ml) a reflujo, se le 35 añadió gota a gota durante 30 min una solución de bromo (264 Pl, 5,1 mmol) en CCl4 (5 ml). La reacción se agitó a la
temperatura de reflujo durante 1 h, se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con CH2Cl2 (20 ml), se lavó con HCl 1 N (10 ml), H2O (10 ml) y salmuera (10 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida, produciendo 1,3 g del compuesto XX13 en forma de un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 3,67 (s, 3H), 3,52 - 3,44 (m, 2H), 2,63 - 2,58 (m, 1H), 1,70 - 1,64 (m, 3H), 1,60
5 - 1,54 (m, 3H), 1,24 - 0,92 (m, 5H).
A una solución del compuesto XX13 (578 mg, 2,3 mmol) en DMSO (12 ml) se añadió borohidruro sódico (177 mg, 4,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 90 ºC durante 1 h, se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con hexanos (3 x 15 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron a presión reducida. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con EtOAc/éter de petróleo, proporcionó 204 mg del
10 compuesto XX14. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 3,59 (s, 3H), 2,18 (m, 1H), 1,69- 1,43 (m, 6H), 1,21 - 0,83 (m, 8H).
El Intermedio XX15 se preparó de acuerdo con el procedimiento para la preparación del intermedio XX10, etapa b, excepto por el uso del sustrato XX14 en lugar de XX9.
A una solución de ácido (S)-2-amino-3,3-dimetilbutanoicacid (787 mg, 6,0 mmol), bromobenceno (632 Pl, 6,0 mmol),
15 K2CO3 (1,24 g, 9,0 mmol) y CuI (114 mg, 0,6 mmol) se le añadió N,N-dimetilacetamida (7,5 ml). Los contenidos se agitaron durante 16 h a 90 ºC en un recipiente a presión cerrado herméticamente. La mezcla de reacción se diluyó con H2O (15 ml), se enfrió a 0 ºC y se acidificó a pH ~ 5 usando HCl 1 N. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (1 x 15 ml), se secaron sobre MgSO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice,
20 proporcionando 150 mg (12%) del compuesto XX16. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 7,11-7,09 (m, 2H), 6,69 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,60- 6,59 (m, 2H), 3,69 (s, 1H), 1:02 (s, 9H).
El intermedio XX17 se preparó de acuerdo con el procedimiento para la preparación de XX16, excepto por el uso de 1-bromo-3-metoxibenceno como reactivo en lugar de bromobenceno. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 6,98 (t, J = 8,1 Hz, 25 1H), 6,24-6,18 (m, 2H), 6,14 (s, 1H), 3,69 (s, 1H), 3,66 (s, 3H), 1,00 (s, 9H).
A una solución de ácido (S)-3-(metoxicarbonil)-4-metilpentanoico (200 mg, 1,2 mmol) en CH2Cl2 (6 ml) se le añadió EDC (264 mg, 1,4 mmol), HOBt (186 mg, 1,4 mmol) y trietilamina (481 Pl, 3,5 mmol). A la solución de ácido activado, se añadió ciclohexilamina (158 Pl, 1,4 mmol) y la reacción se agitó 4 horas. La mezcla de reacción se lavó con H2O
30 (3 ml), HCl 1 N (3 ml) y solución saturada de NaHCO3 (3 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida, proporcionando 290 mg del compuesto XX18 que se usó sin purificación adicional. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 5,78 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 3,69-3,61 (m, 4H), 2,73-2,69 (m, 1H), 2,45-2,40 (m, 1H), 2,24-2,20 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 1,82-1,76 (m, 2H), 1,63-1,60 (m, 2H), 1,54-1,50 (m, 1H), 1,31-1,22 (m, 2H), 1,12-1,00 (m, 3H), 0,900,85 (m, 6H).
35 EL intermedio XX19 se preparó de acuerdo con el procedimiento para la preparación del compuesto XX10 descrito anteriormente, excepto por el uso del sustrato XX18 como reactivo en lugar del compuesto XX9. EN (+) EM: m/e 256 (M + H)+.
El intermedio XX20 se preparó de acuerdo con el procedimiento para la preparación del compuesto XX18 o XX19 descrito anteriormente, excepto por el uso de isopropilamina como reactivo en lugar de ciclohexilamina. EN (+) EM: m/e 216 (M + H)+.
El intermedio XX21 se preparó de acuerdo con el procedimiento para la preparación de XX18 o XX19 descrito anteriormente, excepto por el uso de bencilamina como reactivo en lugar de ciclohexilamina. EN (+) EM: m/e 264 (M
+ H)+.
10 se suspendió clorhidrato del éster metílico de glicina (50,0 g) en MTBE (300 ml) a TA. A éste se le añadió benzaldehído (40,5 ml) y Na2SO4 anhidro (33,9 g). La suspensión se enfrió en un baño de hielo-agua durante 20 minutos y después se añadió gota a gota trietilamina (80 ml) durante 15 minutos. Después de 5 minutos, la reacción se retiró del baño de hielo-agua y se agitó a TA durante 24 horas. La reacción se interrumpió con una mezcla de 200 ml de hielo-agua y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con MTBE (200 ml). Las fases orgánicas se
15 combinaron, se lavaron con una mezcla 1:1 de salmuera y NaHCO3 saturado (ac.), se secaron (MgSO4) y se concentraron, produciendo 62,83 de la N-bencilimina en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 8,30 (s, 1H), 7,78-7,77 (m, 2H), 7,45-7,40 (m, 3H), 4,42 (s, 2H), 3,78 (s, 3H).
Se suspendió terc-butóxido de litio (15,13 g) en tolueno seco (200 ml) a temperatura ambiente. A esto se le añadió
20 gota a gota una solución de la N-bencilimina de éster metílico de glicina (16,89 g) y 1,4-dibromo-2-buteno (19,28 g) en tolueno (100 ml) durante 40 minutos. La solución de color rojo se agitó durante 100 minutos y después se inactivó con H2O (200 ml). Los contenidos se transfirieron a un embudo de decantación y se diluyeron con MTBE (200 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con MTBE. Las fases orgánicas combinadas se agitaron con HCl 1 N (ac.) (500 ml) durante 3 horas. Las fases se separaron y la fase orgánica se extrajo con H2O (100 ml). Las fases
25 acusas se combinaron, se añadieron NaCl (250 g) y MTBE (700 ml), y el pH se llevó a ~13 con NaOH 10 N (ac.). La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con MTBE (dos veces, 300 ml cada una). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron (MgSO4) y se concentraron hasta un volumen de ~400 ml. A la solución se le añadió dicarbonato de di-terc-butilo (25,0 g) y la reacción se agitó durante 3 días. Se añadió más cantidad de dicarbonato de di-terc-butilo (5,6 g), seguido de calentamiento de la reacción en un baño a 60 ºC durante 1 hora. La reacción se
30 purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice con EtOAc/hexano (1:9) como eluyente, produciendo 10,89 g de éster metílico del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico racémico. Véase, por ejemplo, los documentos WO 00/09558 y Beaulieu, P. L. y col., J. Org. Chem., 70 (15), 5869 5879, 2005. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 5,78-5,71 (m, 1H), 5,29-5,26 (m, 1H), 5,11 (dd, J = 1,2, 10,3 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,14 (c, J = 8,8 Hz, 1H), 1,79 (s, 1H), 1,53-1,45 (m, 10H).
Se disolvió éster metílico del ácido N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico racémico (4,2 g) en acetona (80 ml) y después se diluyó con agua (160 ml). El pH se ajustó a 7,8 con NaOH 0,2N (ac.). Se añadió Subtilisina A (producto P-5380 de Sigma, St. Louis, MO, EEUU) (4,5 g) a la solución. Su pH se mantuvo entre 7,4 y 5 8,7 durante 3 días mediante la adición gota a gota de NaOH 0,1 N (ac.). Cuando el análisis HPLC (ChiralpakAD de Daicel Chemical Industries, Tokyo, 4,6 mm x 250 mm, 0,5 ml/min, 2-propanol al 10-85%/hexanos durante 10 minutos, supervisado a 215,4 nm) de la reacción indicó la presencia únicamente de (1R,2S)-enantiómero (tiempo de retención de (1R,2S) = 6,2 min, (1S,2R) = 5,9 min) el pH se llevó a 8,5 con NaOH 2 N (ac.). Los contenidos de la reacción se transfirieron a un embudo de decantación y se extrajeron con MTBE (3 x 400 ml). Los extractos se
10 lavaron con una solución saturada de NaHCO3 (ac.) (3 x 150 ml), agua (2 x 200 ml) y se secaron (MgSO4). La solución se filtró, se concentró, se diluyó con CH2Cl2, se secó (MgSO4), se filtró y se concentró, produciendo 1,95 g de éster metílico del ácido N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico.
Se agitó éster metílico del ácido N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico (125 mg, 0,52 mmol) en 15 CH2Cl2/TFA (1:1,2 ml) a TA durante 90 minutos. Los disolventes se retiraron al vacío, produciendo sal de ácido trifluoroacético del éster metílico del ácido (1R,2S)-1-amino-2-vinilciclopropanocarboxílico.
El Compuesto XX1 (2,34 g, 9,71 mmol) se agitó con LiOH·H2O (0,45 g, 10,7 mmol) en THF/H2O/THF (3:1:0,5, 22 ml) a temperatura ambiente durante una noche. Los disolventes se evaporaron y los sólidos restantes se recogieron en 20 CH2Cl2/EtOAc y HCl 1 N (ac.). La fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 y los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron. Este material se disolvió en CH2Cl2 (10 ml) a temperatura ambiente y se trató con ácido trifluoroacético (10 ml). El análisis HPLC a 70 minutos no mostró la presencia de material departida. Los disolventes se retiraron al vacío, produciendo un aceite viscoso de color claro. Éste se recogió en más cantidad de CH2Cl2 (30 ml) y se evaporó en evaporador rotatorio, produciendo un sólido de color castaño. Este
25 sólido se disolvió en NaHCO3 saturado (ac.) y acetona (1:1, 50 ml), y se trató con Fmoc-Cl (2,65 g, 10,2 mmol). Después de 4 horas, los contenidos del matraz se transfirieron a un embudo de decantación con CH2Cl2 y se acidificaron con HCl 2 N (ac.). La fase acuosa se extrajo con CH2Cl2, las fases orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron, produciendo 1,86 g (5,3 mmol) de XX2 en forma de un sólido de color amarillo claro. (M+1) = 350,1
Se hinchó PS-resina de Wang (2,0 g, 1,0equiv.) en DMF (suficiente para cubrir). Se agitó ácido (7R,2S)-1-(((9Hfluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-2-vinilciclopropanocarboxílico (XX3) (922 mg, 1,1 equiv.) en DCM. Se añadió diisopropilcarbodiimida (409 ul, 1,1equiv.) a la solución de DCM y se agitó a 4 ºC durante 2 horas, después se añadió a la resina y DMF. Se añadió Dimetilaminopiridina (29 mg, 0,1equiv.) en DMF a la solución de resina y se agitó durante 5 horas. Se purgó y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), produciendo el Compuesto XX4.
Preparación de ácido 2-(biciclo[4,1,0]heptan-1-il)acético X2:
El Compuesto X1 disponible en el mercado (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, EEUU) se convirtió en X2
10 de acuerdo con el procedimiento descrito por E. J. Kantorowski y col. en J. Org Chem., 1999, 64, 570-580. RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 9,2 (s a, 1H), 2,23 (m, 2H), 1,92 (m, 1H), 1,76 (m, 2H), 1,58 (m, 1H), 1,34 (m, 1H), 1,18 (m, 4H), 0,85 (m, 1H), 0,52 (dd, 1H), 0,31 (t, 1H) ppm.
Preparación de ácido 2-(1-hidroxiciclohexil)acético X5:
15 El Compuesto X4 se preparó esencialmente usando el procedimiento descrito en Bull. Chem. Soc. Jpn., 1971, 44, 1090. Específicamente, una solución de bromoacetato de etilo (8,3 ml) (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, EEUU) en tolueno se añadió gota a gota a 80 ºC durante 30 min. a una mezcla agitada vigorosamente de ciclohexanona X3 (4,9 g) y polvo de cinc (4,9 g) en tolueno. La adición se supervisó cuidadosamente y la temperatura se mantuvo a 80 ºC. Después de que se completara la adición, la mezcla se calentó a reflujo durante 90
20 min, se enfrió, se descompuso con HCl acuoso 1 N y se extrajo con Et2O. Los extractos orgánicos se lavaron con agua, NaHCO3 ac., se secaron (MgSO4) y se concentraron al vacío, produciendo X4 (5,9 g): RMN 1H (CDCl3, 500 MHz) 4,16 (t, 2H), 3,0 (s a, 1H), 2,46 (s, 2H), 1,40-1,69 (m, 10H), 1,27 (t, 3H) ppm; FTA m/z 187,1 ES+.
A una solución de X4 (510 mg) en MeOH se le añadió NaOH acuoso 1 N. La mezcla de reacción se agitó a 60 ºC durante 1 h y después se concentró al vacío. El residuo se diluyó con agua, se lavó con Et2O y la fase acuosa se
25 acidificó con ácido cítrico acuoso 1 N y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos se secaron (MgSO4) y se concentraron al vacío, produciendo, después de cristalización, el Compuesto X5 (220 mg): RMN 1H (CDCl3, 500 MHz) 3,63 (s, 1H), 2,45 (s, 2H), 1,22-1,64 (m, 10H) ppm; FIA m/z 157,2 ES-.
Preparación de ácido 2-(1-metilciclohexil)acético (X8)
El Compuesto X6 disponible en el mercado (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, EEUU) se convirtió en el Compuesto X7 de acuerdo con el procedimiento descrito por N. Asao y col. en Tetrahedron Lett., 2003, 44, 4265. RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 4,12 (c, 2H), 2,22 (s, 2H), 1,30-1,48 (m, 10H), 1,25 (t, 3H), 1,01 (s, 3H) ppm.
A una solución del compuesto X7 en EtOH se le añadió NaOH acuoso 1 N. La mezcla de reacción se agitó a 50 ºC durante 3 horas y después se concentró al vacío. El residuo se diluyó con agua, se lavó con Et2O y la fase acuosa se acidificó con ácido cítrico acuoso 1 N y se extrajo con CH2Cl2. Los extractos orgánicos se secaron (MgSO4) y se concentraron al vacío, produciendo el X8. RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 11,7 (s, 1H), 2,26 (s, 2H), 1,32-1,49 (m, 10H), 1,05 (s, 3H) ppm.
Preparación de ácido 2-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)acético (X12)
A una solución de dihidro-2H-piran-4(3H)-ona (X9) (3,13 g, de Aldrich) en tolueno se le añadió (carbetoximetilen)trifenilfosforano (12,0 g, Aldrich). La solución se agitó a 110 ºC durante 3 días. La solución oscura resultante se concentró al vacío y el residuo se purificó directamente por columna sobre gel de sílice, produciendo el Compuesto
15 X10 (4,54 g) en forma de un líquido transparente. RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 5,66 (s, 1H), 4,16 (c, 2H), 3,98 (s, 4H), 3,00 (t, 2H), 2,38 (m, 2H), 1,77 (m, 4H), 1,27 (t, 3H) ppm.
Los Compuestos X11 y X12 se obtuvieron de una manera similar a la que se ha descrito para los compuestos X7 y X8. RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 3,64-3,73 (m, 4H), 2,35 (s, 2H), 1,65 (ddd, 2H), 1,50 (ddt, 2H), 1,17 (s, 3H) ppm.
20 Preparación de ácido 2-(cis-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)acético (X16)
El intermedio X13 se preparó a partir de 2,6-dimetil-g-pirona disponible en el mercado (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, EEUU). Una solución de la g-pirona se disolvió en EtOH y se hidrogenó (2 atm. H2) con Pd al 10%/C durante 2 h. Posteriormente, el catalizador se retiró por filtración y la solución se concentró al vacío, produciendo X13 en bruto que se purificó por cromatografía en columna, produciendo el Compuesto X13 puro. RMN
25 1H (CDCl3, 500 MHz): 3,72 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,21 (dd, 2H), 1,32 (d, 6H) ppm.
Después, el Compuesto X14 se obtuvo a partir del Compuesto X13 de una manera similar a la que se ha descrito para el Compuesto X10. RMN de 1H(CDCl3, 500 MHz): 5,65 (s, 1H), 4,15 (c, 2H), 3,80 (dt, 1H), 3,49 (m, 2H), 2,17 (dt, 1H), 2,07 (dd, 1H), 1,79 (dt, 1H), 1,28 (m, 9H) ppm. CL-EM m/z 199,126 ES+.
Después, una solución del Compuesto X14 en EtOAc se hidrogenó (1 atm. H2) con Pd húmedo al 10%/C durante 1
30 hora. Posteriormente, el catalizador se retiró por filtración y la solución se concentró al vacío, produciendo el Compuesto X15 en bruto, que se usó sin purificación adicional para la siguiente etapa. Después, el Compuesto X16 se preparó a partir del Compuesto X15 de una manera similar a la que se ha descrito para el Compuesto X8. RMN 1H (CDCl3, 500 MHz) diastereómero principal: 3,50 (m, 2H), 2,27 (d, 2H), 2,07 (m, 1H), 1,71 (m, 2H), 1,19 (d, 6H) 0,92 (m, 2H) ppm; diastereómero principal: 3,64 (m, 2H), 2,56 (d, 2H), 2,47 (m, 1H), 1,49 (m, 2H), 1,15 (d, 6H), 0,86
35 (m, 2H) ppm.
Preparación de ácido 2-(1,4-dioxaespiro[4,5]decan-8-il)acético X20:
El Compuesto X20 se preparó a partir del Compuesto X17 (de Aldrich) de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente para la preparación del Compuesto X16.
Compuesto X18: RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 5,66 (s, 1H), 4,15 (c, 2H), 3,98 (s, 4H), 3,00 (m, 2H), 2,38 (m, 2H), 1,77 (m, 4H), 1,27 (t, 3H) ppm.
Compuesto X19: RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 4,12 (c, 2H), 3,93 (s, 4H), (d, 2H), 1,83 (m, 1H), 1,72 (m, 4H), 1,56 (dt, 2H), 1,33 (m, 2H), 1,30 (m, 3H) ppm.
Compuesto X20: RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 3,93 (s, 4H), 2,28 (d, 2H), 1,73-1,86 (m, 4H), 1,57 (dt, 2H), 1,35 (m, 2H) ppm.
10 Preparación de ácido 2-(trans-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)acético 25:
Los Compuestos X21 y X22 se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito por S. Danishefsky y col. en J. Org. Chem. 1982, 47, 1597-1598 y D. S. Reddy y col. en J. Org. Chem. 2004, 69,1716-1719, respectivamente. El Compuesto X25 se preparó a partir del Compuesto X22 de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente para la preparación del Compuesto X16.
15 El Compuesto X23. RMN 1H (CDCl3, 500 MHz): 5,72 (s, 1H), 4,16 (c, 2H), 4,08 (c, 2H), 3,06 (dd, 1H), 2,75 (dd, 1H), 2,39 (dd, 1H), 2,05 (dd, 1H), 1,28 (t, 3H), 1,19 (m, 6H) ppm.
X25: RMN 1H (CDCl3, 500 MHz) 4,24 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 2,25 (m, 3H), 1,71 (m, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,46 (m, 1H), 1,29 (d, 3H), 1,13 (d, 3H), 0,90 (m, 1H) ppm.
20 Preparación de ácido 2-(4-hidroxi-4-metilciclohexil)acético X27:
Una solución del Compuesto X20 en dioxano se trató con HCl 4 N en dioxano. La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y se concentró al vacío, dando el Compuesto X26 en bruto que se usó sin purificación adicional para la siguiente etapa. A una solución agitada del Compuesto X26 en THF se le añadió lentamente MeMgBr (3 N en THF). La mezcla resultante se agitó a 40 ºC durante 3 horas, se inactivó con ácido
25 cítrico acuoso 1 N
La resina M3B se agitó con TFA al 95% en agua durante 30 minutos y la solución resultante se concentró al vacío, dando el compuesto M3C (0,031 mmol), (M+1) 740, que se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional.
Una solución del Compuesto M3C (0,031 mmol) en DCM (3 ml) se agitó con peryodinano de Dess-Martin (26 mg, 2 equiv.) y t-BuOH (26 ull). Después de agitar durante 1 hora, se añadió tiosulfato sódico a la mezcla anterior. El
30 producto se extrajo con EtOAc y después la fase orgánica combinada se lavó con agua, NaHCO3 y salmuera, se concentró al vacío y se purificó por HPLC Gilson Prep, proporcionando el Compuesto Nº. 239. (M+1) 738.
Ejemplo 8: Compuesto Nº 535
El Compuesto M1E (10,0 g, 1,0 equiv.) se agitó en piperidina al 20%/DMF durante 10 minutos. La resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) seguido de DCM (tres veces). Este procedimiento se repitió. La resina resultante se agitó durante una noche con una solución de ácido (S)-2,3-dimetil-2-(((S)-tetrahidrofurano-3-iloxi)carbonilamino)butanoico (3,46 g, 3,0 equiv.), HBTU (28,2 ml de 0,5 M en DMF, 3,0 equiv.), HOBt (14,1 ml de 1,0M en DMF, 3,0 equiv.) y DIEA (4,91 ml, 6,0 equiv.) en DMF. Después, la resina se filtró y se lavó con DMF (tres veces) y DCM (tres veces), dando el Compuesto M3E. (M+H = 523,1)
10 El Compuesto M3E (300 mg, 1,0 equiv.) se agitó en THF y se añadió 2-vitro-1-feniletanona (272 mg, 10,0 equiv.) a la mezcla seguido de isocianato de fenilo (179 ul, 10,0 equiv.) y TEA catalítico (10 ul). La mezcla resultante se agitó durante una noche, se purgó y se lavó con DMF, THF y DCM (tres veces cada uno), dando el Compuesto M3F (M+H = 669,8).
15 El Compuesto M3F (0,4 g, 1,0 equiv.) se agitó en TFA/DCM 1/1 durante 2 horas. La resina se purgó y se lavó con DCM (tres veces), todos los extractos orgánicos se concentraron y se añadió DCM seguido de peryodinano de Dess-Martin (97 mg, 3,0 equiv.). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora, se añadió Na2S2O31 N y, de nuevo, se agitó. La mezcla de reacción se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 1090%/hexanos ), produciendo Compuesto Nº 535. M+H = 668,1. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 8,19 (d, 2H), 7,61 (t, 1H),
20 7,47 (t, 2H), 7,19 (d, 1H), 6,93 (d, 1H), 5,52 (d, 1H), 5,37-5,33 (m, 1H, 5,24 (s, 1H), 4,78 (t, 1H), 4,32-4,29 (m, 2H), 3,93-3,79 (m, 4H), 3,70 (d, 1H), 3,48-3,36 (m, 2H), 2,79 (td, 1 H), 2,68-2,63 (m, 1H), 2,55-2,50 (m, 1H), 2,12-2,04 (m, 1H), 1,96-1,89 (m, 1H), 1,66-1,59 (m, 1H), 1,47-1,37 (m, 2H), 1,00 (s, 9H), 0,94-0,81 (m, 6H), 0,63-0,57 (m, 2H).
A continuación en la Tabla 3 se enumeran compuestos adicionales de la Fórmula I preparados por el Procedimiento
3.
Tabla 3: Compuestos Adicionales de Fórmula I Producidos por el Procedimiento 3. (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa)
Nº Compuesto
Material e Partida para P1 Material de partida para C1 Material de Partida para R3
4
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Cloro-5-fluorobenzaldoxima
8
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-(Ciclopentiloxi)-4metoxibenzaldehído
9
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5Di(trifluorometil)benzaldoxima
11
N/E tetrahidrofurano-3-ilcarbonato de (S)-2,5-dioxopirrolidin-1-ilo 3-fluoro-4-metilbenzaldoxima
15
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc- butilglicina N/E 3-Cloro-4-metoxibenzaldoxima
16
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 4-Metoxibenzaldoxima
25
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Difluorobenzaldoxima
32
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,4-Diclorobenzaldoxima
36
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,4-Dimetilbenzaldoxima
47
N/E tetrahidrofurano-3-ilcarbonato de (S)-2,5-dioxopirrolidin-1-ilo 4-Etilbenzaldoxima
52
N-((S)-tetrahidrofuran-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-Trifluorometilbenzaldoxima
55
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 4-Clorobenzaldoxima
56
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3,5-Diclorobenzaldoxima
64
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-Trifluorometilbenzaldoxima
Nº Compuesto
Material e Partida para P1 Material de partida para C1 Material de Partida para R3
66
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-fluorobenzaldoxima
70
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E Ciclopentanocarboxaldehído
78
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3,4-Diclorobenzaldoxima
82
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético Piperonal oxima
83
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Clorobenzaldoxima
95
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-5-fluorobenzaldoxima
106
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Difluorobenzaldoxima
109
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Metil-4-clorobenzaldoxima
142
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E Ciclohexanocarboxaldehído
149
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Trifluorometoxibenzaldoxima
150
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 2,2-Dimetilcromano-6-carbaldehído
171
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3-Cianobenzaldoxima
177
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 4-Cianobenzaldoxima
191
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Dimetil-4-metoxibenzaldoxima
196
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,4-Dimetoxibenzaldoxima
198
N/E tetrahidrofurano-3ilcarbonato de (S)-2,5dioxopirrolidin-1-ilo 3,5-Dimetil-4-metoxibenzaldoxima
215
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,4,5-Trifluorobenzaldoxima
Nº Compuesto
Material e Partida para P1 Material de partida para C1 Material de Partida para R3
222
N/E tetrahidrofurano-3ilcarbonato de (S)-2,5dioxopirrolidin-1-ilo 2,2-Difluoro-1,3-benzodioxole-5carboxaldehído
224
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Dimetil-4-metoxibenzaldoxima
229
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-nitrobutirato de metilo
234
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3-Cloro-5-fluorobenzaldoxima
236
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Cloro-4-metoxibenzaldoxima
239
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 3-Bromobenzaldoxima
240
N/E carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-ilo 4-Trifluorometilbenzaldoxima
244
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Trifluorometoxibenzaldoxima
251
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E Fenilnitroetano
257
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Fenilbenzaldoxima
258
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-fluoro-5-trifluorometilbenzaldoxima
270
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3-Cloro-4-fluorobenzaldoxima
274
N/E Carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-ilo 3,5-Diclorobenzaldoxima
279
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3-Cloro-4-metoxibenzaldoxima
285
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3,5-Diclorobenzaldoxima
299
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 4-Clorobenzaldoxima
301
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Cloro-4-fluorobenzaldoxima
306
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Diclorobenzaldoxima
Nº Compuesto
Material e Partida para P1 Material de partida para C1 Material de Partida para R3
314
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-formilbenzoato de metilo
316
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 2,2-Difluoro-1,3-benzodioxole-5carboxaldehído
318
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-Clorobenzaldoxima
322
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Cloro-5-fluorobenzaldoxima
323
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3,4-Diclorobenzaldoxima
330
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Di(trifluorometil)benzaldoxima
348
N/E Carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-ilo 3-fluoro-5-trifluorometilbenzaldoxima
353
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-formilbenzoato de metilo
362
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3,5-Dimetil-4-metoxibenzaldoxima
363
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 2,2-Difluoro-1,3-benzodioxol-5carboxaldehído
364
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E Cloruro de 4clorofenilglicoxilohidroxamilo
385
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-Metilbenzaldoxima
391
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Diclorobenzaldoxima
403
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 2-Cloro-6-fluorobenzaldoxima
405
N/E carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-il 4-Isopropilbenzaldoxima
413
N/E carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-ilo 3-Metil-4-fluorobenzaldoxima
414
N/E carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-ilo 3,4,5-Trifluorobenzaldoxima
423
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-fluoro-4-metilbenzaldoxima
Nº Compuesto
Material e Partida para P1 Material de partida para C1 Material de Partida para R3
425
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-(4-Piridil)benzaldehído
434
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 2,3-Dimetoxibenzaldoxima
436
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Metil-4-clorobenzaldoxima
444
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Metilbenzaldoxima
448
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-(4-clorofenil(-2,1-benzoisoxazol-5carbaldehído oxima
451
N/E carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-ilo 3-Trifluorometil-4-fluorobenzaldoxima
455
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,4,5-Trifluorobenzaldoxima
456
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 1,4-benzodioxan-6-carboxaldehído
472
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 2-Furanaldoxima
480
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-formilbenzoato de metilo
481
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-(Carboxi)benzaldoxima
482
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 2-Cloro-6-fluorobenzaldoxima
486
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-metoxibenzaldoxima
490
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3-Metil-4-clorobenzaldoxima
498
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-fluoro-5-trifluorometilbenzaldoxima
509
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Trifluorometilbenzaldoxima
511
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-Nitrobenzaldoxima
519
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3,5-Dimetilbenzaldoxima
Nº Compuesto
Material e Partida para P1 Material de partida para C1 Material de Partida para R3
524
N/E carbonato de (S)tetrahidrofurano-3-ilo 4-Trifluorometoxibenzaldoxima
525
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3-Metoxibenzaldoxima
530
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-Hidroxibenzaldoxima
535
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 2-nitro-1-feniletanona
539
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3-Metil-4-fluorobenzaldoxima
543
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-(Carboxi)benzaldoxima
545
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Trifluorometil-4-fluorobenzaldoxima
548
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-fluorobenzaldoxima
550
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-fluoro-4-metilbenzaldoxima
551
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 4-formilbenzoato de metilo
555
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Metil-4-fluorobenzaldoxima
560
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina N/E 3-Trifluorometilbenzaldoxima
572
N-FMOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran4-il)acético 3,5-Dimetil-4-metoxibenzaldoxima
Ciertos otros compuestos de Fórmula I pueden prepararse como se ilustra mediante el Procedimiento 4.
PROCEDIMIENTO 4:
En referencial al Procedimiento 4, el derivado de Fmoc A3 se prepara como se ha descrito en el Procedimiento 1. La reacción de A3 con la iminoamida enlazada a resina D1 en presencia de un reactivo de acoplamiento, proporciona la
5 resina enlazada a compuesto D2 La iminoamida enlazada a resina D1 prepararse a partir del Compuesto diceto X31 por reacción con una resina de amino, tal como, por ejemplo, un poliestireno aminometilado derivatizado, por ejemplo, X32. La desprotección de D2 proporciona D3, que reacciona con ácido carboxílico R1 en presencia de un reactivo de acoplamiento para proporcionar D4, en el que R1 es R4C(O)-. La reacción de D4 con el óxido de nitrilo 1f proporciona D5 que por hidrólisis a partir de la resina proporciona A10.
Ejemplo 9: Compuesto Nº 303
A una suspensión la resina M4A, que tiene la misma estructura que X33, (20 g, 0,4 mmol/g, 8 mmol) en DCM (100 ml) se le añadieron PPh3 (21 g, 80 mmol), ácido dimetilbarbitúrico (12,5 g, 80 mmol) y Pd(PPh3)4 (920 mg, 0,8
5 mmol). La suspensión se agitó durante una noche, se purgó, se lavó con DMF (10 veces) y DCM (4 veces). Se disolvieron N-Fmoc-4-metileneprolina (3,0 g, 8,8 mmol), HBTU (3,3 g, 8,8 m ml) y HOBt (1,1 g, 8,8 mmol) y DIEA (1,6 ml, 8,8 mmol) en DMF (100 ml). La solución se añadió a la resina y se agitó durante una noche. Después, la resina se purgó, se lavó con DMF (10 veces), DCM (4 veces) y se secó, proporcionando la resina M4B.
A la resina M4B (20 g, 8 mmol) se le añadió piperdina al 20% en DMF (100 ml), se agitó durante 1 hora y después
10 se lavó con DMF (10 veces), DCM (4 veces). A la resina se le añadió una mezcla de Fmoc-terc-butilglicina (5,6 g, 16 mmol), HBTU(6,1 g, 16 mmol), HOBt(2,2 g, 16 mmol) y (iPr)2NEt (2,9 ml, 16 mmol) en DMF (100 ml).La suspensión se agitó durante una noche, se purgó, se lavó con DMF (10 veces), DCM (4 veces) y se secó, proporcionando la resina M4C.
A la resina M4C (20 g, 8 mmol) se le añadió piperdina al 20% en DMF (100 ml), se agitó durante 1 hora y después
15 se lavó con DMF (10 veces), DCM (4 veces). A la resina se le añadió una mezcla de ácido ciclohexilacético (1,42 g, 10 mmol), HBTU (3,8 g, 10 mmol), HOBt (1,35 g, 10 mmol) y (iPr)2NEt (1,8 ml, 10 mmol) en DMF (100 ml). La suspensión se agitó durante una noche, se purgó, se lavó con DMF (10 veces), DCM (4 veces) y se secó, proporcionando la resina M4D.
Una solución de 3-piridinaaldoxima (M4E) (122 mg, 1 mmol) en DMF (3 ml) se añadió a NCS (134 mg, 1 mmol). La mezcla se calentó a 50-60 ºC durante 30 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la solución de 3piridinacloroxima (M4F) se añadió a una resina M4D (300 mg, 0,12 mmol). A la mezcla se le añadió TEA (0,14 ml, 1 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50-60'C durante 4 horas. La mezcla de reacción se purgó y se lavó con DMF (6 veces) y DCM (6 veces). La resina se trató con TFA al 95% durante 5 horas. La mezcla se purgó y se lavó con DCM. El filtrado se concentró al vacío, se purificó por columna de EtOAc al 50-100%/Hex, proporcionando 7 mg de un sólido incoloro como producto, Compuesto Nº 303. HPLC 5,7-6,4 minutos; EM 651,5 y CL-EM 3,9 minutos.
A continuación en la Tabla 4 se enumeran compuestos adicionales producidos por el Procedimiento 4.
Tabla 4: Compuestos Adicionales de Fórmula I Producidos por el Procedimiento 4.
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
41
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Bromopridin-3-carbaldehído
179
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Bromo-2-Furaldehído
230
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2-metilbenzofuran-3-carbaldehído
303
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Piridin-carboxaldehído
495
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 4-Cloro-1-metil-1H-pirazol-3carbaldehído
552
N-FMOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2,3-Dihidrobenzo[b]furan-5carboxaldehído
Procedimiento 5a
En referencia al Procedimiento 5a, el compuesto ácido de exometileno A1 se protege para proporcionar el dicarboxilato de di-t-butilo E1. La reacción de E1 con óxido de nitrilo de fórmula 1f proporciona el intermedio B1 que se transforma en el derivado de aminoácido E2. La reacción de E2 con un aminoalcohol E5 proporciona A9. El Compuesto A9 se convierte en A10 como se ha descrito en el Procedimiento 1.
Procedimiento 5b
En referencia al Procedimiento 5b, el compuesto intermedio B1 se transforma en el éster de aminoácido E6. La reacción de E6 con un ácido carboxílico R1 en presencia de un reactivo de acoplamiento proporciona E7, en el que R1 es R4C(O)-. E7 se desprotege para proporcionar E2, que se convierte en A10 como se ha descrito en el Procedimiento 1.
El Compuesto 10A (5,0 g, 1,0equiv.) se agitó en 100 ml de acetonitrilo y a la solución se añadieron dicarbonato de
10 ditercbutilo (9,6 g, 2 equiv.), dimetilaminopiridina (537 mg, 0,2 equiv.) y trietilamina (6,13 ml, 2,0 equiv.). La mezcla se agitó durante una noche, se concentró, se añadió acetato de etilo, se lavó con HCl 1,0 N, se secó sobre sulfato sódico, se concentró y se purificó con cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 1030%/hexanos), dando el compuesto 10B (80%). (M+H = 284,0). RMN 1H (CDCl3): 5,0 (m,2H), 4,3-4,5 (m, 1H, 4,0-4,1 (m, 2H), 2,9-3,0 (m, 1H), 2,5-2,6 (d, 1H), 1,5(s, 3/9 de 18H), 1,4(s, 6/9 de 18H).
El Compuesto 10B (10,0 g, 1,0 equiv.) se agitó en 175 ml de DCM con piperonaloxima (11,5 g, 2,0 equiv.). La solución se enfrió en un baño de hielo y se le añadió lentamente lejía (175 ml). Después, la mezcla se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 2 horas, se separó y su fase acuosa se extrajo con DCM dos veces. Los
5 extractos orgánicos se combinaron y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó y se separaron diastereómeros por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 530%/hexanos), produciendo 4,1 g del Compuesto 10C (26%). (M+H = 446,9). RMN 1H (CDCl3): 7,25 (m, 1H), 7,0 (d, 1H), 6,8 (d, 1H), 6,0 (s, 2H), 4,6-4,4 (m, 1H), 4,0-3:8 (m, 1H), 3,7-3,6 (m, 1H) 3,4-3,3 (m, 1H), 3,3-3,2 (m, 1H), 2,8-2,7 (m, 1H), 2,3-2,2 (m, 1H), 1,5 (s, 9H), 1,4 (s, 9H).
10 Como alternativa, El Compuesto 10B se preparó mediante los siguientes procedimientos:
Preparación: 4-metilenopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (S)-di-terc-butilo. Procedimiento 1
Se añadió trietilamina (2 equiv.) a una solución de ácido (S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-metilenopirrolidin-2-carboxílico
15 (1,0 equiv.), dicarbonato de di-terc-butilo (2,0 equiv.) y DMAP (0,2 equiv.) en acetonitrilo (10 vol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 16 h, después se diluyó con acetato de isopropilo (25 vol). A un lavado con agua (20 vol., dos veces) le siguió la filtración sobre Na2SO4 y la restirada del disolvente. El producto en bruto se purificó por filtración a través de una capa de gel de sílice (sílice 37 vol, primer enjuague con heptano (80 vol), segundo enjuague con acetato de etilo al 10% en heptano (30 vol)). La retirada del disolvente del segundo
20 enjuague dio el Compuesto 10B.
Procedimiento 2
Una solución de dicarbonato de di-terc-butilo (1,1 equiv.) en MTBE (2 vol.) se añadió a una mezcla de ácido (S)-1(terc-butoxicarbonil)-4-metilenopirrolidin-2-carboxílico (1,0 equiv.), DMAP (0,2 equiv.) en MTBE (8 vol) y t-butanol
25 (1,75 vol.). La mezcla se agitó durante 1 hora, punto en el que cesó el desprendimiento de gas. La mezcla se lavó con HCl 1 N (3 vol.), después NaHCO3 acuoso saturado (3 vol.) y después salmuera (3 vol.). Después, el disolvente se retiró, proporcionando el Compuesto 10B.
El Compuesto 10C (4,0 g, 1,0 equiv.) se agitó en TFA/DCM 1/1 durante 3 horas y la solución se concentró. Al concentrado se le añadieron 100 ml de acetona, 100 ml de una solución saturada de bicarbonato sódico y dicarbonato de di-terc-butilo, la solución resultante se agitó durante una noche y después se acidificó con una solución 1,0 N de HCl y se extrajo con acetato de etilo (tres veces). Los extractos orgánicos se lavaron con solución de salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron, produciendo 4,0 g del Compuesto 10D (M+H = 391,1).
El Compuesto 10D (50 mg, 1,0 equiv.) se agitó en 0,5 ml de DMF con EDC (37 mg, 1,5 equiv.), PS-HOBt (137 mg,
10 1,5 equiv.) y NMM (56 Pl, 4,0 equiv.) y a la solución se le añadieron 0,5 l de DCM para ayudar en el hinchamiento de la resina. A la mezcla se le añadió 3-amino-2-hidroxihexanamida (30 mg, 1,3 equiv.) y la mezcla se agitó durante una noche, se filtró, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con HCl 1,0 N, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. La solución se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de DCM al 100%-MeOH al 5%/DCM), produciendo 21 mg del producto en bruto, que después se agitó en HCl 4,0 N/dioxano durante 2 horas y
15 se concentró, produciendo el Compuesto 10E en forma de una sal HCl (M+H = 419,0).
El Compuesto 10E (21 mg, 1,0equiv.) se agitó en DMF con NMM (13 Pl), 1,4equiv.) y a la solución se le añadió una solución de ácido (S)-3,3-dimetil-2-(((S)-tetrahidrofurano-3-iloxi)carbonilamino)butanoico (14 mg, 1,4 equiv.), EDC (11 mg, 1,4 equiv.) y PS-HOBt (40 mg, 1,4 equiv.) en DMF, con DCM suficiente para hinchar la resina. La mezcla se agitó durante una noche, se filtró, se lavó con HCl 1,0 N, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró, dando el Compuesto 10F, que se usó sin purificación adicional. (M+H = 646,4)
El Compuesto 10F se agitó en DCM y a la solución se añadió peryodinano de Dess-Martin (~3,0 equiv.). La solución se agitó durante 1 hora, se le añadió Na2S2O3 1,0 N y se agitó. La mezcla se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de acetato de etilo al 10-90%/hexanos), produciendo 9 mg del Compuesto Nº 422 (M+H = 644,3).
10 RMN 1H (CDCl3): 7,3 (m, 1H), 7,15(m, 1H), 6,95 (m, 1H), 6,8 (m, 1H), 6,75 (m, 1H), 6,0 (s, 2H), 5,5-5,4 (m, 2H), 5,45,3 (m, 2H), 4,8-4,7 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,0-3,8 (m, 3H), 3,7 (m, 1H), 3,4-3,2 (m, 2H), 2,6 (m, 1H,), 2,5 (m, 1H), 2,2-2,1 (m, 1H), 2,1-2,0 (m, 1H), 1,9 (m, 1H), 1,6 (m, 1H), 1,5-1,4 (m, 2H), 1,0-0,9 (m, 13H).
15 A 2,4-dimetoxibenzaldoxima (4,5 g, 24,8 mmol) en DMF (135 ml) se le añadió gota a gota durante 2 h a temperatura 5
ambiente, una solución de N-clorosuccinimida (6,6 g, 49,7 mmol) en DMF (135 ml). La reacción se agitó 14 horas y se añadió el Compuesto 11A (5,2 g, 18,4 mmol) seguido de adición gota a gota durante 1 h de una solución de trietilamina en DMF (2,6 ml, 18,4 mmol, en 15 ml). Después de agitar durante 3 h, la mezcla de reacción se lavó con H2O y se secó sobre MgSO4. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 5,8 g (63%) del Compuesto 11B en forma de un sólido de color castaño. EN (+) EM: m/e 497 (M+H)+.
Al Compuesto 11B (5,5 g, 11,1 mmol) en CH2Cl2 (30 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (30 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 90 minutos a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida, proporcionando un sólido de color castaño, que se disolvió en MeOH (60 ml) y se calentó a reflujo. Se añadió gota a gota ácido sulfúrico concentrado (~5 ml) y la reacción se calentó a reflujo durante 3 horas, después de lo cual el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en CH2Cl2 (75 ml) y se trató cuidadosamente con una solución saturada de NaHCO3 hasta pH = 9. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró, proporcionando el amino éster intermedio. A N-Boc-terc-butilglicina (3,1 g, 13,6 mmol) en CH2Cl2 (60 ml) se le añadió EDC (2,6 g, 13,6 mmol), HOBt (1,8 g, 13,6 mmol) y trietilamina (5,5 ml, 39,5 mmol). Después de agitar 5 minutos, el amino éster anterior se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente 14 horas. La mezcla de reacción se lavó con H2O, HCl 1 N y solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío, proporcionando 5,6 g del Compuesto 11C (87% en 3 etapas) en forma de un sólido de color pardo que se usó sin purificación adicional. EN (+) EM: m/e 568 (M + H)+.
Al Compuesto 11C (600 mg, 1,1 mmol) en CH2Cl2 (3 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (3 ml). La reacción se agitó durante 1 hora y se concentró a presión reducida, dando el producto de amina deseado en forma de la sal TFA. Al ácido ciclohexilacético (181 mg, 1,3 mmol) en CH2Cl2 (6 ml) se le añadió EDC (243 mg, 1,3 mmol), HOBt (171 mg, 1,3 mmol) y trietilamina (516 ml, 3,7 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, la amina anterior se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente 14 horas. La mezcla de reacción se lavó con H2O, HCl 1 N, y solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío, y el residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 460 mg del Compuesto 11D (74% en 2 etapas) en forma de un sólido de color blanquecino. EN (+) EM: m/e 592 (M + H)+.
Al Compuesto 11D (460 mg, 0,8 mmol) en una solución de THF/H2O (5 ml, 3:1 v/v) se le añadió LiOH monohidrato (82 mg, 1,9 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente 14 horas, se acidificó usando HCl 1 N y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida, proporcionando 405 mg del Compuesto 11E, que se usó sin purificación adicional. EN (+) EM: m/e 578 (M + H)+.
Al Compuesto 11E (80 mg, 0,14 mmol) en CH2Cl2 (1 ml) se le añadió EDC (38 mg, 0,2 mmol), HOBt (27 mg, 0,2 mmol) y trietilamina (68 Pl, 0,5 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió el Compuesto 11F se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente 14 horas. La mezcla de reacción se lavó con H2, HCl 0,1 N, y solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío, proporcionando 95 mg del Compuesto 11G (95%) en forma de un sólido de color pardo que se usó sin purificación adicional. EN (+) EM: m/e 718 (M + H)+.
Al Compuesto 11G (95 mg, 0,14 mmol) en CH2Cl2 (1 ml) se le añadió peryodinano de Dess-Martin (71 mg, 0,17 mmol). Después de agitar durante 30 minutos, la reacción se interrumpió con Na2S2O3 1 N. La fase orgánica se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, dando el Compuesto Nº 562, es decir, el Compuesto 11H mostrado anteriormente, en forma de un sólido de color blanco. EN (+) EM: m/e 716 (M + H)+.
Se disolvió 4-metoxi-3,5-dimetilbenzaldehído (1,86 g, 11,3 mmol) en etanol (30 ml) y se agitó con clorhidrato de hidroxilamina (solución 2,4 M ac., 5,65 ml, 1,2 equiv.) y Na2CO3 (solución 1,2 M, 5,65 ml, 0,6 equiv.) a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Después, la mezcla se calentó a 60 ºC y se añadió más cantidad de clorhidrato de hidroxilamina y Na2CO3. La mezcla se agitó de nuevo durante una noche a 60 ºC, se transfirió a un embudo de decantación y se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El producto se purificó por cromatografía ISCO con eluyente de EtOAc/hexanos, produciendo 1,55 g (8,56 mmol, 77%) de 4-metoxi-3,5- dimetilbenzaldehído oxima en forma de un sólido de color blanco. M+1 = 180,0.
A una solución de 4-metoxi-3,5-dimetilbenzaldehído oxima (1,34 g, 7,48 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió N
clorosuccinimida (1,76 g, 13,2 mmol). Esta solución se agitó hasta que el material de partida se consumió como se
indicó por HPLC. Después, a la solución se le añadió una solución de 4-metilenopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (S)-di
5 terc-butilo (2,1 g, 1,0 equiv.) en DMF (5 ml). A la solución se le añadió gota a gota trietilamina (1,2 equiv.) y la mezcla
de reacción se agitó durante 2 horas. Después, la reacción se diluyó con EtOAc y la fase orgánica se lavó con agua
y salmuera, se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. El producto se purificó sobre gel de sílice en una ISCO
Combiflash, usando EtOAc/hexanos como eluyente para producir 912 mg (1,98 mmol) del Compuesto 12A. M+1 =
461,4, RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 7,30 (s, 2H), 4,40-4,32 (m, 1H), 3,98-3,79 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,64-3,58 (m, 1H), 10 3,40-3,34 (m, 1H), 3,24-3,19 (m, 1H), 2,72 (dd, J = 8,7, 12,9 Hz, 1H), 2,29 (s, 6H), 2,11-2,07 (m, 1H), 1,54-1,45 (m,
18H).
El Compuesto 12A (910 mg, 1,98 mmol) se agitó en CH2Cl2/ácido trifluoroacético (1:1, 20 ml) hasta que el análisis por HPLC indicó la desprotección completa del material de partida. El aminoácido intermedio se concentró, después
15 se disolvió en metanol (30 ml) y se calentó reflujo con H2SO4 concentrado hasta que se consumió el material de partida según indicó el análisis por HPLC. El material se concentró al vacío, después se disolvió en EtOAc, se lavó con NaHCO3 y salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró, dando el Compuesto 12B. M+1 = 319,0
El compuesto 12B (727 mg, 2,28 mmol) se disolvió en DMF (3 ml) con Boc-t-butilglicina (686 mg, 3,0 mmol),
20 EDC·HCl (659 mg, 3,43 mmol), HOBt (460 mg, 3,4 mmol) y DIEA (1,2 ml, 6,89 mmol), y se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después, la reacción se transfirió a un embudo de decantación y se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con HCl 1 N (dos veces, 20 ml cada una), NaHCO3 ac. sat. (25 ml), agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secó sobre MgSO4 y se concentró. El producto en bruto 12C se purificó sobre gel de sílice en una ISCO Combiflash con EtOAc/Hexanos como eluyente, produciendo 231 mg (0,435 mmol) del Compuesto 12C
25 en forma de un aceite incoloro transparente. CLEM (M+1) = 532,45
El Compuesto 12C (231 mg, 0,435 mmol) se agitó en HCl 4 N en dioxano (15 ml) durante 90 minutos, punto en el que el análisis por TLC indicó que no había presente material de partida en la mezcla de reacción. El HCl y el dioxano se evaporaron, produciendo una espuma blanquecina. Una porción de este intermedio (0,35 mmol), 5 EDC·HCl (96 mg, 0,50 mmol.), HOBt (72 mg, 0,53 mmol) y ácido ciclohexanoacético (78 mg, 0,55 mmol) se agitaron en DMF (3,5 ml). A esto se le añadió DIEA (0,18 ml, 1,0 mmol) y la reacción se agitó durante una noche. Después, la reacción se diluyó con EtOAc y se transfirió a un embudo de decantación en el que las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con HCl 1,0 N, NaHCO3 ac. saturado y salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró. El producto se purificó sobre gel de sílice es una ISCO Combiflash con EtOAc/hexano como eluyente, produciendo 219 mg
10 (0,394 mmol) del Compuesto 12D en forma de un aceite transparente. M+1 = 556,4
El Compuesto 12D (219 mg, 0,394 mmol) en THF/H2O/MeOH (4:1:1, 6 ml) se agitó con LiOH·H2O (1,5 equiv.) a temperatura ambiente durante una noche. Después, la reacción se acidificó con HCl 1,0 N y se extrajo con CH2Cl2.La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró, produciendo 207 mg (0,382
15 mmol) del Compuesto 12E. M+1 = 548,4 (0,400 ml, 2,3 mmol). La reacción se agitó durante una noche, se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 1 N, NaHCO3 saturado y las fases acuosas combinadas se extrajeron de nuevo con EtOAc. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO4, se concentraron y se purificaron sobre gel de sílice en una ISCO combiflash con EtOAc/Hexanos como eluyente, produciendo 227 mg (0,320 mmol) del Compuesto 12F en forma de un sólido de color blanco. (M+TFA) M-1 = 822,6.
El Compuesto 12F (227 mg, 0,320 mmol) se disolvió a temperatura ambiente en CH2Cl2 (4 ml) y se trató con
peryodinano de Dess-Martin (142 mg, 1,0 equiv.). Después de 15 minutos, el análisis TLC mostró que la reacción se
había completado y la solución de reacción se inactivó mediante la adición de agua y se agitó vigorosamente. Se 10 añadió más cantidad de CH2Cl2, las fase orgánica se separó y se purificó sobre gel de sílice en una ISCO
Combiflash con EtOAc/Hexanos como eluyente, produciendo 159 mg (0,225 mmol) del Compuesto Nº 362. FIA EM
(M+1) = 708,42. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 7,30 (s, 2H), 7,17 (d, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,15 (d, 1H), 5,39-5,33 (m, 1H),
4,72 (t, 1H), 4,66 (d, 1H), 4,25 (d, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,74-3,69 (m, 1H), 3,42 (d, 1H), 3,30 (d, 1H), 2,81-2,75 (m, 1H),
2,58-2,46 (m, 2H), 2,29 (s, 6H), 2,16-2,10 (m, 1H), 2,08-2,00 (m, 1H), 1,97-1,88 (m, 1H), 1,85-1,57 (m, 8 H), 1,5115 1,35 (m, 2H), 1,33-1,22 (m, 2H), 1,20-1,07 (m, 1H), 1,02-0,96 (m, 10H), 0,92 (t, 3H), 0,88-0,80 (m, 2H), 0,66-0,56 (m,
2H).
A una solución del Compuesto 13A (222 mg, 0,5 mmol) se le añadió TEA (0,14 ml) e isocianato de t-butilo (0,6
20 mmol). La solución resultante se agitó durante una noche y después se diluyó con EtOAc (20 ml), se lavó con agua (10 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando el Compuesto 13B en forma de un sólido de color blanco (190 mg). HPLC 8,48 min; CL-EM m/z 507,2 EN+.
25 El Compuesto 13B se disolvió en THF y la solución se trató con LiOH acuoso 1,0 N y agua. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y se concentró al vacío. Después, el residuo se diluyó con agua, se lavó con Et2O y se acidificó con HCl acuoso 1 N. La mezcla resultante se extrajo dos veces con CH2Cl2 y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío, dando el Compuesto 13C en bruto que se usó sin purificación adicional para la siguiente etapa. CL-EM m/z 493,22 EN+, 491,21 EN-.
5 Una solución del Compuesto 13C (20,6 mg) en CH2Cl2 (800 ml) se trató con clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)3-etilcarbodiimida (10 mg) e hidroxibenzotriazol (7 mg) durante 1 hora. Después, se añadieron diisopropilamina (16 ml) y 3-amino-4-ciclobutil-2-hidroxibutanamida D (10,5 mg) en una porción y la solución acuosa resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas más. Después, la mezcla se lavó con HCl acuoso 1 N, solución 1:1 de K2CO3 acuoso 1 N: NaHCO3 acuoso 1 N y salmuera en sucesión. Después, los extractos orgánicos se secaron
10 (MgSO4), se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía sobre sílice (MeOH del 0% al 4% en CH2Cl2), produciendo 13D (11,6 mg). CL-EM m/z 647,25 ES+.
Una solución del Compuesto 13D (11,6 mg) en CH2Cl2 (1 ml) se cargó con peryodinano de Dess-Martin (8,4 mg) y la
mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después, la mezcla de color blanco resultante 15 se lavó con Na2S2O3 acuoso 1,0 N, las fases se separaron y después los extractos orgánicos se secaron sobre
MgSO4, se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía sobre sílice (EtOAc del 30% al 65% en
hexanos), produciendo 6,7 mg del Compuesto Nº 247 en forma de un sólido de color blanco: RMN 1H (500 MHz,
CDCl3): 7,61 (s), 7,52 (d, J = 6,1 Hz), 7,39 (d, J = 7,8 Hz), 7,34 (t, J = 7,8 Hz), 6,87 (s), 6,77 (s), 5,89 (s), 5,67 (s),
5,23-5,19 (m), 4,83-4,79 (m), 4,47 (s), 4,38 (d, J = 11,0 Hz), 3,72 (dd, J = 3,1, 11,2 Hz), 3,45 (m), 3,30 (d), 2,64 (m), 20 2,56 (m), 2,44-2,36 (m), 2,08-1,98 (m), 1,86-1,68 (m), 1,64-1,58 (m), 1,33-1,22 (m), 1,05-1,00 (m, H), 0,95-0,92 (m,
H) ppm. CL-EM m/z 647,25 ES+.
Una solución del Compuesto 14A (512 mg) en dioxano se trató con HCl 4 N en dioxano. La solución de reacción se
25 agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos y se concentró al vacío. El residuo resultante se disolvió en una pequeña cantidad de CH2Cl2 y se cristalizó en Et2O/Hexanos, dando el Compuesto 14B en forma de un sólido de color blanco (362 mg, 80%). CL-EM m/z 468,24 EN+.
Una solución de ácido cicloheptanoacético (83 mg, Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisc.) en CH2Cl2 (4 ml) se trató con clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (103 mg) e hidroxibenzotriazol (72 mg) durante 1 hora. Después, se añadieron diisopropilamina (160 ml) y el Intermedio 14B (179 mg) en una porción y la solución acuosa resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas más. Después, la mezcla se lavó con HCl acuoso 1 N, solución 1:1 de K2CO3 acuoso 1 N: NaHCO3 acuoso 1 N y salmuera en sucesión. Después, los extractos orgánicos se secaron (MgSO4), se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía sobre sílice (EtOAc del 15% al 60% en hexanos), produciendo el Compuesto 14C (188 mg, 88%). CL-EM m/z 606,25 ES+.
10 El Compuesto 14C (186 mg) se disolvió en THF (3 ml) y la solución se trató con LiOH acuoso 1 N (620 ml) y agua (1 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente y se concentró al vacío. Después, el residuo se diluyó con agua, se lavó con Et2O y se acidificó con HCl acuoso 1 N. La mezcla resultante se extrajo dos veces con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío, dando el Compuesto 14D en bruto, que se usó sin purificación adicional para la siguiente etapa. CL-EM m/z
15 592,25 EN+, 590,35 EN-.
Una solución del Compuesto 14D (89 mg) en CH2Cl2 (1 ml)/DMF (1 ml) se trató con clorhidrato de 1-(3dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (44 mg) e hidroxibenzotriazol (31 mg) durante 1 hora. Después, se añadieron diisopropilamina (70 ml) y (3S)-3-amino-4-ciclopropil-2-hidroxibutanamida (35 mg) en una porción y la solución
20 acuosa resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas más. Después, la mezcla se lavó con HCl 1 N, solución 1:1 de K2CO3 acuoso 1 N: NaHCO3 acuoso 1 N, y salmuera en sucesión. Después, los extractos orgánicos se secaron sobre MgSO4, se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía sobre sílice (MeOH del 0% al 5% en CH2Cl2), produciendo 96 mg del compuesto 14F (87%). CL-EM m/z 732,21 EN+.
Una solución del Compuesto 14F (96 mg) en CH2Cl2 (1,5 ml) se cargó con peryodinano de Dess-Martin (83 mg) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después, la mezcla de color blanco resultante se lavó con Na2S2O3 acuoso 1 N, las fases se separaron y después los extractos orgánicos se secaron MgSO4, se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía sobre sílice (EtOAc del 10% al 95% en hexanos), produciendo el Compuesto Nº 57 (44 mg) en forma de un sólido de color blanco. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 7,76 (s), 6,75 (s a), 6,48 (s), 6,07 (d), 5,40 (m), 4,67 (m), 4,22 (d), 3,95 (s), 3,87 (s), 3,75 (d), 3,43 (m), 2,51 (m), 2,10 (m), 1,30-1,87 (m), 1,12-1,28 (m), 0,97 (m), 0,79 (m), 0,15 (m), 0,03 (m) ppm. CL-EM m/z 730,35 EN+, 728,35 EN-.
El Compuesto 600 tiene la misma estructura que el Compuesto 266 en la Tabla A.
A una solución de ácido (R)-2-ciclohexilbut-3-inoico (430 mg, 2,4 mmol) en CH2Cl2 (10 ml) se le añadieron EDC (458 mg, 2,4 mmol), HOBt (324 mg, 2,4 mmol) y trietilamina (836 Pl, 6,0 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió el Compuesto 15A (800 mg, 2,0 mmol) se añadió y la reacción se agitó 16 horas. La mezcla se lavó con H2O
15 HCl 1 N y solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida, proporcionando 1,23 g del Compuesto 15B en bruto, que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice. EN (+) EM: m/e 570 (M+H)+.
A una solución del Compuesto 15B (220 mg, 0,4 mmol) en THF/H2O (2 ml, 3:1 v/v) se le añadió LiOH monohidrato (115 mg, 3 mmol). La mezcla se agitó durante 2 horas, se acidificó usando HCl 1 N (6 ml) y se extrajo con EtOAc 20 (tres veces, 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4 y se concentraron, proporcionando un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional. El aceite se disolvió en CH2Cl2 (2 ml), y después se añadieron EDC (90 mg, 0,5 mmol), HOBt (63 mg, 0,5 mmol) y trietilamina (163 ml, 1,2 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió (3S)-3-amino-N-ciclopropil-2-hidroxihexanamida (87 mg, 0,5 mmol). La reacción se agitó durante 12 horas, se lavó con H2O HCl 1 N y solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se
25 secó sobre MgSO4 y se concentró a presión reducida, proporcionando 215 mg del Compuesto 15C en forma de un aceite incoloro, que se usó sin purificación adicional. EN (+) EM: m/e 724 (M + H)+.
A una solución del Compuesto 15C (53 mg, 0,07 mmol) en CH2Cl2 (0,5 ml) se le añadió peryodinano de Dess-Martin (41 mg, 0,1 mmol). La mezcla se agitó durante 30 minutos, se inactivó con Na2S2O3 y se separó. LA fase orgánicas se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 20 mg del Compuesto Nº 600. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 7,53 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,31-7,25 (m, 2H), 6,83 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 6,24-6,21 (m, 1H), 5,30-5,26 (m, 1H), 4,70-4,58 (m, 2H), 4,23-4,21 (m, 1H), 3,64 (dd, 1H), 3,36-3,20 (m, 2H), 2,70-2,68 (m, 1H), 2,57-2,35 (m), 2,04-1,82 (m), 1,72-1,30 (m, 10H), 1,18-0,75 (m), 0,55-0,40 (m).
El Compuesto 602 tiene la misma estructura que el Compuesto 212 en la Tabla A.
A una solución del Compuesto 15C preparado anteriormente (20 mg, 0,03 mmol) y pivalato de azidometilo (4 mg,
10 0,03 mmol, preparado de acuerdo con Syn. Lett., 2005, 18, pp. 2847-2850) en terc-butanol / H2O (120 Pl, 1:1 v/v) se le añadió una solución acuosa de ascorbato sódico (10 Pl, 0,01 mmol, 1,0 M) seguido de una solución acuosa de sulfato de cobre (II) pentahidrato (5 Pl, 0,001 mmol, 0,3 M). La mezcla de reacción se agitó 12 horas a temperatura ambiente, se diluyó con H2O y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con hidróxido de amonio al 5% seguido de salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron a presión reducida,
15 proporcionando 25 mg del Compuesto 16B en bruto, que se usó sin purificación adicional. EN (+) EM: m/e 881 (M + H)+.
A una solución del Compuesto 16B en MeOH (120 ml) se le añadió NaOH acuoso (120 Pl, 1 M). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se trató con HCl 1 M (120 Pl) seguido de H2O (120 Pl). La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (tres veces, 200 Pl cada una). Los extractos combinados se lavaron con salmuera y se 20 concentraron hasta un volumen de aproximadamente 100 Pl. A esta solución se le añadió peryodinano de Dess-Martin (17 mg, 0,04 mmol) y la reacción se agitó 30 minutos. La mezcla se inactivó con Na2S2O3 1 M (150 Pl) yla fase orgánica se separó y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 3 mg del Compuesto Nº
602. EN (+) EM: m/e 765 (M + H)+.
A continuación se enumeran en la Tabla 5 compuestos adicionales de Fórmula I preparados por los Procedimientos 25 5a y 5b.
Tabla 5: Compuestos adicionales de Fórmula I Producidos por los Procedimientos 5a y 5b. (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa)
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
5
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(4-hidroxi-4metilciclohexil)acético 3-Clorobenzaldoxima
10
�?cido (S)-4-(bencilamino)-2isopropil-4-oxobutanoico N/E 3-clorobenzaldoxima
13
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-norbornaneacético 3-clorobenzaldoxima
19
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(biciclo[4,1,0]heptan-1il)acético 3-clorobenzaldoxima
21
�?cido (S)-4-(ciclohexilamino)-2isopropil-4-oxobutanoico N/E 3-clorobenzaldoxima
23
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
26
N-BOC-L-terc-butilglicina N-Benzoil-L-Prolina 3-Clorobenzaldoxima
27
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido ciclobutanoacético 3-Clorobenzaldoxima
43
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
48
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-norbornaneacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
50
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
59
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-cicloheptilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
63
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
67
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-Cloro-5-fluoro-4etoxibenzaldoxima
86
N-BOC-L-terc-butilglicina isocianato de isopropilo Piperonal oxima
90
N-BOC-L-terc-butilglicina N/E 3-Clorobenzaldoxima
104
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido terc-butilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
105
N-BOC-L-terc-butilglicina N/E 3-Clorobenzaldoxima
117
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 4-metiltetrahidro-2H-piran4-carboxílico 3-Clorobenzaldoxima
121
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(2,2-dimetiltetrahidro-2Hpiran-4-il)acético 3-Clorobenzaldoxima
126
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-5-fluoro-4etoxibenzaldoxima
129
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-cicloheptilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
131
N-BOC-L-terc-butilglicina N/E 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
136
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-5-fluoro-4etoxibenzaldoxima
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
145
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(tetrahidro-2H-piran4il)acético Piperonal oxima
153
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-((2R,5R)-2,5dimetiltetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-Clorobenzaldoxima
168
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido Ciclohexilacético Tiofen-3-carboxaldehído
172
N-Fenil-L-terc-butilglicina N/E 3-clorobenzaldoxima
178
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-Cloro-5-fluoro-4etoxibenzaldoxima
184
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 4-metiltetrahidro-2H-piran4-carboxílico 3-Clorobenzaldoxima
188
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-Ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
192
N-BOC-L-terc-butilglicina 2,5-dioxopirrolidin-1-il-carbonato de ciclopentilo 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
195
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-cloro-4-metoxi-5metilbenzaldoxima
211
�?cido 2-(tercbutoxicarbonilamino)-2-(1metoxiciclopropil)acético �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobenzaldoxima
212
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-2-ciclohexil-3-(1H-1,2,3triazol-4-il)propanoico 3-clorobenzaldoxima
214
N-(3-metoxifenil)-L-terc-butilglicina N/E 3-clorobenzaldoxima
217
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
219
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-cicloheptilacético 3-Clorobenzaldoxima
225
N-BOC-L-terc-butilglicina 2,5-dioxopirrolidin-1-il-carbonato de ciclopentilo 3-Clorobenzaldoxima
231
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-Ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
233
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(1hidroxiciclohexil)acético 3-Clorobenzaldoxima
247
N-BOC-L-terc-butilglicina isocianato de terc-butilo 3-Clorobenzaldoxima
256
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Etil-2-furaldoxima
263
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-5-fluoro-4etoxibenzaldoxima
264
N-BOC-L-terc-butilglicina N/E 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
266
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-2-ciclohexilpent-4-inoico 3-clorobenzaldoxima
268
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
273
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
280
�?cido (S)-2-isopropil-4(isopropilamino)-4-oxobutanoico N/E 3-clorobenzaldoxima
282
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 2,4-Dimetoxi-5Clorobenzaldoxima
284
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-2-ciclohexilpropanoico 3-clorobenzaldoxima
286
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(4-metiltetrahidro-2H- piran-4-il)acético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
290
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E Piperonal oxima
294
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-clorobenzaldoxima
295
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E Piperonal oxima
297
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido terc-butilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
307
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
310
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 3,5-Dimetil-4metoxibenzaldehído
326
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 2,4-Dimetoxi-5Clorobenzaldoxima
335
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E 2,4-Dimetoxibenzaldoxima
337
N-BOC-L-terc-butilglicina carbonato de ciclopentil-2,5dioxopirrolidin-1-ilo 3-Clorobenzaldoxima
344
N-BOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L- ciclohexilglicina seguido de ácido 2pirazincarboxílico 3-Clorobenzaldoxima
346
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-corbornaneacético 3-Clorobenzaldoxima
351
N/E �?cido terc-butilacético 3-clorobenzaldoxima
356
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(4-metiltetrahidro-2Hpiran-4-il)acético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
362
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3,5-Dimetil-4metoxibenzaldehído
369
N-BOC-L-terc-butilglicina carbonato de ciclopentil-2,5dioxopirrolidin-1-ilo 3-Clorobenzaldoxima
375
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético Piperonal oxima
382
N-BOC-L-terc-butilglicina Isocianato de isopropilo Piperonal oxima
388
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido ciclohexilacético 3-clorobenzaldoxima
411
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-Cloro-5-fluoro-4etoxibenzaldoxima
415
N-CBZ-L-terc-butilglicina N/E Piperonal oxima
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
418
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-((2S,SR)-2,5dimetiltetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-Clorobenzaldoxima
419
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(2,2-dimetiltetrahidro-2Hpiran-4-il)acético 3-Clorobenzaldoxima
440
N-BOC-L-terc-butilglicina carbonato de ciclopentil-2,5dioxopirrolidin-1-ilo 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
442
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-((2S,5R)-2,5dimetiltetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-Clorobenzaldoxima
445
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(1,4dioxaespiro[4,5]decan-8-il)acético 3-Clorobenzaldoxima
446
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-norbornaneacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
453
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
468
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-((2R,5R)-2,5dimetiltetrahidro-2H-piran-4il)acético 3-Clorobenzaldoxima
473
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido terc-butilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
485
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido trans-2-fenil-1ciclopropanocarboxílico 3-Clorobenzaldoxima
502
N-BOC-L-terc-butilglicina N-FMOC-L-ciclohexilglicina seguido de ácido 2pirazincarboxílico 3-Clorobenzaldoxima
510
N-BOC-L-terc-butilglicina ácido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 2,4-Dimetoxi-5Clorobenzaldoxima
516
N-((S)-tetrahidrofurano-3iloxi)carbonil)-L-terc-butilglicina N/E 2,4-Dimetoxibenzaldoxima
522
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
529
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(4-metiltetrahidro-2Hpiran-4-il)acético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
541
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(4-metiltetrahidro-2Hpiran-4-il)acético 3-clorobenzaldoxima
542
N-BOC-L-terc-butilglicina Isocianato de terc-butilo 3-clorobenzaldoxima
549
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-2-ciclohexil-4-oxo-4(pirrolidin-1-il)butanoico 3-clorobenzaldoxima
554
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(tetrahidro-2H-piran-4il)acético 5-Etil-2-furaldoxima
562
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
569
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido (S)-2-ciclohexil-4(metilamino)-4-oxobutanoico 3-clorobenzaldoxima
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
575
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-(4-hidroxi-4metilciclohexil)acético 3-clorobenzaldoxima
577
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
581
N-BOC-L-terc-butilglicina N/E 2,4-Dimetoxi-5clorobenzaldoxima
589
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-cloro-8quinolinacarbaldoxima
590
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2-Metoxi-3metilbenzaldoxima
Ciertos otros compuestos de Fórmula I pueden preparase por el Procedimiento 6 como se ilustra a continuación.
Procedimiento 6:
5 En referencia al Procedimiento 6, el Intermedio A1 se convierte en el Boc-metil éster F1. La retirada del grupo Boc de F1 proporciona el aminoéster F2 que se hace reaccionar con un ácido carboxílico R1 en presencia de un reactivo de acoplamiento para proporcionar F3, en el que R1 s R4C(O)-. F3 reacciona con un óxido de nitrilo 1f para proporcionar el ácido de espiroisoxazolina E4 después de hidrólisis del éster metílico correspondiente E3. La conversión de E4 en E7 se describe como se ha descrito en el Procedimiento 5a.
10 Se trató 4-hidroxi-3,5-dimetilbenzaldehído (2,5 g, 16,6 mmol) en THF (100 ml) con KOH (1,5 equiv. de solución ac. 1 N, 25 ml) y 2-yodopropano (2,0 equiv.), y se calentó a reflujo durante 5 días. Después, la reacción se enfrió, se transfirió a un embudo de decantación, se diluyó con MTBE, se lavó con H2, NaOH 0,1 N (dos veces), HCl 0,5 N (ac.) y salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró. El producto se purificó sobre gel de sílice en una ISCO Combiflash, produciendo 1,99 g (10,34 mmol) de 4-isopropoxi-3,5-dimetilbenzaldehído en forma de un líquido incoloro. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) 9,89 (s, 1H), 7,55 (s, 2H), 4,41-4,26 (m, 1 H), 2,32 (s, 6H), 1,32 (d, J = 6 Hz, 6H).
Se calentó 4-(isopropoxi)-3,5-dimetilbenzaldehído (1,98 g, 10,3 mmol) en EtOH (60 ml) a 60 ºC con clorhidrato de hidroxilamina (solución ac. 2,4 M, 5,2 ml, 1,2 equiv.) y Na2CO3 (solución 1,2 M, 5,2 ml, 0,6 equiv.) a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se transfirió a un embudo de decantación, se diluyó con EtOAc; La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó (MgSO4), se filtró y se concentró, produciendo 710 mg (3,24
15 mmol) de 4-(isopropoxi)- 3,5-dimetilbenzaldehído oxima en forma de un aceite de color amarillo claro. RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 8,10 (s, 1H), 7,23 (s, 2H), 4,29-4,18 (m, 1H), 2,29 (s, 6H), 1,29 (d, 6H).
Se agitó 4-(isopropoxi)-3,5-dimetilbenzaldehído oxima (166 mg, 0,801 mmol) en DMF (3 ml) a temperatura ambiente durante una noche con NCS (130 mg, 0,974 mmol). A esta reacción se le añadió el éster metílico (257 mg, 0,679 20 mmol) en DMF (1,5 ml) y trietilamina (1,2 equiv.). Esto se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La reacción después se diluyó con EtOAc/Hexanos (4:1) y se lavó con HCl 1 N (ac.). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc/Hexanos (4:1). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron. El compuesto se purificó sobre gel de sílice en una ISCO Combiflash con EtOAc/Hexanos como eluyente, produciendo 173 mg (0,296 mmol) del Compuesto 17A en forma de un sólido de
25 color blanco. CLEM (M + 1) = 584,3 El compuesto 17A (173 mg, 0,30 mmol) se agitó con LiOH·H2O (1,1 equiv.) en THF/MeOH/H2O (4:1:1, 3 ml) a TA durante una noche. La reacción se diluyó con EtOAc, se acidificó con HCl 1 N (ac.)y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc, las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron, produciendo 171 mg (0,30 mmol) del Compuesto 17B en forma de un sólido de color blanco. FIA EM (M+1) = 570,3.
Se agitaron el ácido carboxílico 17B (83 mg, 0,146 mmol), EDC·HCl (37 mg, 1,3 equiv.), HOBt (26 mg, 1,3 equiv.), clorhidrato de (3S)-3-amino-N-ciclopropil-2-hidroxihexanamida (64 mg, 2,0 equiv.) y DIEA (0,100 ml, 4,0 equiv.) en
10 DMF (0,9 ml) a temperatura ambiente durante una noche. Después, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl 1 N (ac.) (dos veces). La fase acuosa se separó y se extrajo de nuevo con EtOAc. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron. El producto se purificó sobre gel de sílice en una ISCO combiflash, produciendo 85 mg (0,115 mmol) del Compuesto 17C. CLEM (M + 1) = 738,3
15 El Compuesto 17C (85 mg, 0,115 mmol) en CH2Cl2 (1,0 ml) se trató con peryodinano de Dess-Martin (54 mg, 1,1 equiv.) durante 30 minutos. La reacción se interrumpió con volúmenes iguales (~1 ml) de NaHCO3 acuoso saturado y Na2S2O3 1 N (ac.). La fase orgánica se separó y se purificó directamente sobre gel de sílice es una ISCO Combiflash, produciendo 77 mg (0,105 mmol) del Compuesto Nº 267, FIA EM (M+1) = 736,2, RMN 1H (300 MHz, CDCl3): 7,33-7,26 (m, 2H), 7,12 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 6,12 (d, 1H), 5,45-5,32 (m, 1H), 4,78-4,63 (m, 2H), 4,29-4,17 (m, 2H), 3,71 (d, 1H), 3,43 (d, 1H), 3,30 (d, 1H), 2,86-2,74 (m, 1H), 2,63-2,42 (m, 2H), 2,29 (s, 6H), 2,19-1,85 (m, 3H), 1,84-0,82 (m, 34H), 0,65-0,58 (m, 2H).
5 Se disolvió 4-etoxibenzaldehído oxima (204 mg, 1,24 mmol) en DMF (a 0,2 M) y se trató con NCS (1 equiv.). La reacción se agitó hasta que se consumió el material de partida. La mitad del volumen de reacción se retiró, se trató con más cantidad de NCS (1,5 equiv.) y se agitó durante una noche. Después, a esta reacción se le añadió el éster metílico (200 mg, 0,85 equiv.) en DMF (0,3 ml) y trietilamina (0,10 ml, 1,1 equiv.). La reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente, después se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 1 N (ac.) y se lavó con salmuera. La
10 fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron, dando un aceite oscuro. El producto se purificó sobre gel de sílice en una ISCO Combiflash, produciendo 97 mg (0,168 mmol) del Compuesto 18A. CLEM (M+1) = 576,3
El Compuesto 18A (97 mg,0,168 mmol) se disolvió en THF/MeOH/H2O (8:1:1,5 ml) y se trató con LiOH·H2O (1,1
15 equiv.) a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se concentró, se diluyó en EtOAc y metanol y se lavó con HCl 1 N (ac.). La fase acuosa se separó y se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron, produciendo 76 mg (0,135 mmol) del Compuesto 18B. FIA EM (M-1) = 560,4
El Compuesto 18B (35 mg, 0,062 mmol), EDC·HCl (15 mg, 1,3 equiv.), HOBt (12 mg, 1,3 equiv.), un clorhidrato de aminoalcohol (55 mg, 2,0 equiv.) y DIEA (0,044 ml,4,0 equiv.) se agitaron en DMF (0,7 ml) a temperatura ambiente durante una noche. Después, la reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl 1 N (ac.) (dos veces). La fase acuosa se separó y se extrajo de nuevo con EtOAc. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron. El producto se purificó sobre gel de sílice en una ISCO Combiflash, produciendo 28 mg (0,038 mmol) de Compuesto 18C. CLEM (M+1) = 730,2
El Compuesto 18C (28 mg, 0,038 mmol) en CH2Cl2 (0,7 ml) se trató con peryodinano de Dess-Martin (18 mg,
10 1,1equiv.) durante 30 minutos. La reacción se interrumpió con volúmenes iguales (~1 ml) de NaHCO3 acuoso aturado y Na2S2O3 1 N (ac.). La fase orgánica se separó y se purificó directamente sobre gel de sílice en una ISCO Optix 10x, produciendo 24 mg (0,033 mmol) del Compuesto Nº 556. FIA EM (M+1) = 728,2. RMN 1H (300 MHz, CDCl3): 7,65 (d, 1H), 7,48 (dd, 1H), 7,11 (d, 1H), 6,95-6,88 (m,2H), 6,08 (d, 1H), 5,40-5,31 (m, 2H), 4,78-4,63 (m, 2H), 4,26 (d, 1H), 4,20-4,11 (m,2H), 3,71 (d, 1H), 3,42 (d, 1H), 3,27 (d, 1H), 2,84-2,73 (m, 1H), 2,63-2,46 (m, 2H),
15 2,20-1,86 (m, 3H), 1,62-0,85 (m, 30H), 0,66-0,58 (m, 2H)
A continuación se indican en la Tabla 6 compuestos adicionales de Fórmula I preparados por el Procedimiento 6.
Tabla 6. Compuestos Adicionales de Fórmula I Preparadas por el Procedimiento 6.
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
18
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 7-Cloro-2,3-dihidrobenzo[b]furan-5carboxaldoxima
19
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-metilbenzaldoxima
28
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2-Cianobenzaldoxima
31
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 8-Quinolin-carbaldoxima
38
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2,5-Dicloro-3-metoxibenzaldoxima
42
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 8-Quinolinacarboxaldoxima
62
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-cloro-3-Tiofenecarboxaldoxima
68
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 8-Quinolin-carbaldoxima
74
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 8-Cloro-2,2-dimetilcromano-6carbaldoxima
89
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-nitrobenzaldoxima
97
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-isopropoxibenzaldoxima
111
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-metoxi-5-metilbenzaldoxima
114
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-metoxi-5-metilbenzaldoxima
132
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-nicotinaldoxima
134
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-2,3-dihidrobenzo[b]furan-7carboxaldoxima
158
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-6-metoxibenzaldoxima
165
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-2-metoxinicotinaldoxima
168
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Tiofenecarboxaldoxima
169
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-2-fluorobenzaldoxima
170
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-2,2-dimetil-2,3dihidrobenzo[b]furan-7-carboxaldoxima
250
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-5-metoxibenzaldoxima
267
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 4-Isopropoxi-3,5-dimetilbenzaldoxima
292
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-nicotinaldoxima
305
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 6-Fluoro-1,3-benzodioxen-8carbaldoxima
312
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-6-metoxinicotinaldoxima
315
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-4-Metil-3,4-dihidro-2H-1,4benzoxazin-7-carbaldoxima
321
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-2,3-dimetoxi-benzaldoxima
366
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-4-metoxi-2-metilbenzaldoxima
370
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-piperonal oxima
(Continúa)
Compuesto Nº
Material de Partida Para P1 Material de Partida Para C1 Material de Partida Para R3
396
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-5-metilbenzaldoxima
406
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 4-Ciclopropilmetoxi-3,5dimetilbenzaldoxima
430
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 8-Cloro-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-carbaldoxima
469
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2-Metoxi-nicotinaldoxima
478
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 5-Cloro-2-tiofenocarboxaldoxima
494
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4,5-dimetoxibenzaldoxima
499
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 7-Cloro-2,3-dihidrobenzo[b]furan-5carboxaldoxima
500
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 4-Metoxi-3-metilbenzaldoxima
513
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 4-Etoxi-3,5-dimetilbenzaldoxima
556
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-4-etoxibenzaldoxima
591
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2-Piridincarboxaldoxima
592
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 2-Piridincarboxaldoxima
593
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 4-Cloro-2-piridinacarboxaldoxima
594
N-BOC-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Cloro-6-fluorobenzaldoxima
Ciertos otros compuestos de la invención pueden prepararse por el Procedimiento 7 como se ilustra a continuación.
PROCEDMIENTO 7:
En referencia al Procedimiento 7, el Cbz hidroxiácido G1 se convierte en el éster metílico G2 y se desprotege para proporcionar el aminoéster G3. La reacción de G3 con el ácido de espiroisoxazolina G4 en presencia de un reactivo de acoplamiento proporciona el intermedio G5. La hidrólisis del éster metílico de G5 proporciona el hidroxiácido G6 que se oxida con, por ejemplo, peryodinano de Dess-Martin para proporcionar el cetoácido G7. La reacción de G7 con una amina R13R10NH en presencia de un reactivo de acoplamiento proporciona el producto final G8.
Se disolvió 1,00 g del acido 19A en 14 ml de metanol y se calentó a reflujo. Se añadieron dos gotas de H2SO4
5 concentrado y la reacción se calentó a reflujo durante una noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se neutralizó con 50 ml de NaHCO3 (sat. ac.). La mezcla de reacción se extrajo tres veces con 50 ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron, produciendo 1,01 g del Compuesto 19B en forma de un polvo de color blanco. Diastereómero principal RMN 1H (300 MHz, CDCl3) G: 7,40-7,31 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 4,35 (s, 1H), 4,15-4,02 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,05 (s a, 1H),
10 1,67-1,17 (m, 4H), 0,91 (t, 3H, J = 6,8 Hz). Diastereómero menor RMN 1H (300 MHz, CDCl3) G: 7,40-7,31 (m, 5H), 5,07 (s, 2H), 4,90 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,19 (s, 1H), 4,15-4,02 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,03 (s a, 1H), 1,67-1,17 (m, 4H), 0,96 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Se disolvió 1,00 g de éster metílico protegido con CBz 19B en 11 ml de metanol. Se añadieron 150 mg de Pd(OH)2 (20% en peso sobre carbón), la mezcla se enjuagó con 1 atm de gas hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente
15 durante 3 horas. La solución metanólica se filtró a través de un lecho corto de Celite® y el lecho de filtro se enjuagó con más cantidad de metanol. Después de la evaporación, un aceite de color amarillo claro se recogió, se redisolvió en 5 ml de DCM y se trató con 1,5 ml de solución 4 M de HCl en dioxano. Después de agitar durante 1 minuto, la reacción se evaporó. Se recogieron 0,65 g del Compuesto 19C en forma de un polvo de color blanco y se caracterizó por CLEM (M+1 = 162,0).
20 Se agitaron 0,80 g del ácido de espiroisoxazolina del Compuesto 19D se agitó con 0,33 g de HOBt, 0,81 g de HBTU y 15 ml de DMF. A la solución en agitación se le añadieron 807 ml de DIPEA y se agitó durante 10 minutos. Se añadieron 0,33 g de la sal clorhidrato 19C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. A la mezcla de reacción se le añadieron 200 ml de EtOAc y la mezcla se lavó dos veces con 100 ml de NaHCO3 (sat. ac.) y después 100 ml de salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se evaporó. La mezcla de reacción en bruto
25 se purificó por elución a través de una columna de gel de sílice (columna de 40 g, elución de gradiente, EtOAc al 4055%:Hexanos), dando 1,02 g del Compuesto 19E en forma de un polvo de color blanco, que se identificó por CLEM (M+1 = 661,3).
Se agitaron 1,04 g del éster metílico 19E en 6 ml de THF y a esta solución se le añadieron 3 ml de LiOH 1 M (ac.). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, momento en el que se determinó por HPLC que estaba completa. La reacción se trató con 6 ml de HCl 1 M y se extrajo tres veces con 15 ml de acetato de etilo. Los extractos combinados se evaporaron, dando 1,00 g el Compuesto Q en forma de un sólido de color beige que se llevó a la siguiente etapa.
Etapa 2: Preparación del Compuesto R
A una solución del Compuesto Q (0,300 g, 0,46 mmol) en CH2Cl2 (15 ml) se le añadieron gota a gota 5,58 ml de una solución 0,16 M de peryodinano de Dess Martin en CH2Cl2. Después de agitar durante 4 horas a temperatura
10 ambiente, se añadieron 10 ml de una solución 1 M de Na2S2O3 y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. La fase orgánica se separó, se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. La mezcla en bruto se disolvió de nuevo en CH2Cl2, se precipitó con Hexanos y se filtró, dando 230 mg del Compuesto R. CL/EM: m/z 645,7 (M+H)+ a 1,99 minutos (CH3CN al 10-99% (TFA al 0,035%)/H2O (TFA al 0,05%))
15 Etapa 3: Preparación del Compuesto Nº 275
A una suspensión del Compuesto R (20 mg, 0,0,031 mmol) en acetonitrilo anhidro se le añadieron piridina (10 Pl, 0,124 mmol), yoduro de 2-cloro-1-metil-piridinio (15,3 mg, 0,06 mmol) y HOBt (6,8 mg, 0,05 mmol), seguido de la adición de 50 Pl de una solución de isopropilamina (3,7 mg, 0,062 mmol) en acetonitrilo anhidro. La reacción se dejó 20 en agitación a temperatura ambiente y se completó después de dos horas. La mezcla de reacción se inactivó con 1 ml de una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo tres veces con CH2Cl2. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se disolvió en 1,5 ml de CH2Cl2 y se purificó por HPLC de fase normal (EtOAc al 1099%/Hexanos), produciendo el Compuesto Nº 275. CL/EM: m/z 686,7 (M+H)+ a 2,01 minutos (CH3CN al 10-99%
25 (TFA al 0,035%)/H2O (TFA al 0,05%)) A una suspensión de R (20 mg, 0,031 mmol) en 1,4-dioxano anhidro se le añadió piridina (7,6 Pl, 0,093 mmol),
después trifluoroacetato de pentafluorofenilo (8,8 Pl, 0,05 mmol) y se dejó en agitación durante 1,5 horas a
5 temperatura ambiente, después de lo cual se añadió 7-amino-4-metil-1H-quinolin-2-ona (14 mg, 0,08 mmol). La
reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente y se completó después de una hora. La mezcla de reacción se
inactivó con 1 ml de una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, las fases se separaron y la fase acuosa se
extrajo tres veces con CH2Cl2. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se
concentraron a presión reducida. El residuo se disolvió en 1,5 ml de CH2Cl2 y se purificó por HPLC de fase normal 10 (EtOAc al 10-99%/Hexanos), produciendo el Compuesto Nº 181. CL/EM: m/z 801,7 (M+H)+ a 2,06 minutos (10-99%
CH3CN (TFA al 0,035%)/H2O (TFA al 0,05%)).
Una mezcla de ácido (3S)-3-((5S,8S)-3-(3-clorofenil)-7-((S)-2-(2-ciclohexilacetamido)-3,3-dimetilbutanoil)-1-oxa-2,7
15 diazaespiro[4,4]non-2-enecarboxamido)-2-hidroxihexanoico (0,02 g, 0,03 mmol), (3,5-dimetoxifenil)metanamina (5,68 mg, 0,033 mmol), HOBt (6,8 mg, 0,05 mmol), DIPEA (22 Pl, 0,124 mmol) y CH2Cl2 (70 Pl) se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después, a la mezcla se le añadió una solución de reactivo de Mukaiyama (hexafluorofosfato de 2-cloro-1-[4-(1H,1H,2H, 2H-perfluoro-9-metildecil)bencil]piridinio) en 200 Pl de acetonitrilo y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 5 horas, se añadieron 1,34 ml de peryodinano de Dess
20 Martin 0,3 M en CH2Cl2 y la mezcla se agitó. Después de 2 horas, el oxidante se inactivó con 1,0 ml de NaHCO3 saturado,1 ml de Na2S2O3 1 N y se agitó vigorosamente. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El residuo se disolvió en 1,5 ml de CH2Cl2 y se purificó por HPLC de fase normal (Acetato de etilo al 10%-99%/ Hexanos), produciendo el Compuesto Nº 605, (5S,8S)-3-(3-clorofenil)-7-((S)-2-(2-ciclohexilacetamido)3,3-dimetilbutanoil)-N-((S)-1-(3,5-dimetoxi-bencilamino)-1,2-dioxohexan-3-il)-1-oxa-2,7-diazaespiro[4,4]non-2-eno-8
25 carboxamida. CL/EM: m/z 794,7 (M+H)+ a 4,11 minutos (CH3CN al 10%-99% (TFA al 0,035%)/H2O (TFA al 0,05%)).
A continuación se enumeran en la Tabla 7 reactivos usados para preparar compuestos adicionales de la Fórmula I
por el Procedimiento 7. Tabla 7: Reactivos Usados para Preparar Compuestos adicionales de la Fórmula I por el Procedimiento 7.
Compuesto Nº
R2zR2wNH
2
terc-butilamina
6
2-aminoindano
17
benzo[d]tiazol-2-amina
49
3-((tetrahidrofurano-3-il)metoxi)azetidina
58
(R)-(+)-1-(3-metoxifenil)etilamina
69
6-Metoxitriptamina
73
4-1H-pirazol-1-il-bencilamina
77
bencilamina
79
azetidina
84
2,5-dimetoxianilina
91
(4-(4-metoxifenil)tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamina
96
3-ciano-4-metilanilina
99
ciclohexilamina
113
N,N-Dietilamina
120
Fenil-2-piridinmetilamina
127
3',5'-dimetoxibencilamina
133
3-Etoxiazetidina
138
1-(3-(2-aminopropil)-1H-indol-5-il)etanona
140
Etilamina
141
2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-2-ilmetilamina
143
Isobutilamina
148
N-(3-aminofenil)metanosulfonamida
176
(2-Fenil-1,3-tiazol-4-il)metilamina
181
7-amino-4-metilquinolin-2(1H)-ona
182
N-Metiletilamina
186
(3R)-(+)-3-acetamidopirrolidina
206
beta-alanin-4-metoxi-betanaftilamida
221
N-etil-3,4-metilenodioxiamphetamina
238
(R)-3-((tetrahidrofurano-2-il)metoxi)azetidina
253
Dimetilamina
255
(S)-(-)-1-(3-metoxifenil)etilamina
265
ciclopropilmetilamina
(Continúa) (Continúa)
Compuesto Nº
R2zR2wNH
275
Isopropilamina
277
(S)-(+)-tetrahidrofurfurilamina
293
3-aminoisoxazol
296
(S)-alfa-metilbencilamina
298
3-Pirazol-1-il-bencilamina
300
1-(Etil)propilamina
302
5-Metoxitriptamina
347
(R)-(-)-2-(metoximetil)pirrolidina
350
N-Metil-N-propilamina
355
3-Aminobenzamida
368
3-(tetrahidrofurano-3-iloxi)azetidina
372
Ciclopentilamina
399
Éster metílico del ácido 1-aminociclopropano-1-carboxílico
401
Ciclobutilamina
404
2-Metoxietilamina
408
3-(Aminoetil)piridina
410
Morfolina
426
3-Hidroxi-3-metilazetidina
429
1-Fenilciclopropilamina
433
[3-(4-clorofenil)-5-isoxazolil]metanamina
441
Furfurilamina
447
2-(3-Piridil)etilamina
452
(R)-2-Butilamina
458
3-(2-aminoetil)indolin-2-ona
461
4-(Aminometil)piridina
479
2-Fluoroetilamina
488
2-metoxifenoxietilamina
493
Metilamina
496
Pirrolidina
507
(S)-2-Amino-1,1-dihenil-1-propanol
508
(S)-(+)-2-(metoximetil)pirrolidina
521
3,3-difluoro-azetidina
Compuesto Nº
R2zR2wNH
537
Propilamina
540
2-(3-metoxifenil)etilamina
546
(R)-alfa-metilbencilamina
565
567
2-aminometil benzoimidazol
568
Pipecolina
573
3,4-Difluoroanilina
588
3-cianoanilina
Preparación de Azetidinas no disponibles en el mercado enumeradas en la Tabla 7
Se combinó N-benzihidril-3-metanosulfonilazetidina (104 mg) con etanol (1,0 ml) y se calentó en un vial cerrado
5 herméticamente a 95 ºC durante una noche. La reacción se controló por TLC (EtOAc al 30%:Hexano). Se realizó un tratamiento añadiendo 1 ml de solución saturada de carbonato potásico y extrayendo dos veces con 0,5 ml de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se purificaron sobre sílice (columna de 4 g, elución de gradiente, EtOAc al 0-30%:hexano). Produjo 49 mg de N-benzhidril-3-etoxiazetidina en forma de un aceite incoloro transparente. CLEM (M+1 = 268,2).
10 Se disolvió N-benzhidril-3-etoxiazetidina (49 mg) en 1 ml de metanol. Se añadieron 22 mg de Pd al 10%/C (Degussatype) y la reacción se realizó en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 64 h. La mezcla se filtró a través de Celite®, se lavó vigorosamente con metanol y se evaporó, dando un aceite de color amarillo (30 mg). El aceite consiste en una mezcla de difenilmetano y la base libre azetidina. La mezcla de aceite en bruto se llevó a transformaciones posteriores y se usó en exceso.
15 Las siguientes azetidinas se prepararon de una manera similar a la anterior, usando los alcoholes correspondientes.
Ciertos otros compuestos de Fórmula I pueden prepararse por el Procedimiento 8 como se ilustra a continuación.
PROCEDIMIENTO 8:
En referencia al Procedimiento 8, el ácido de espiroisoxazolina E4 reacciona con el amino éster H1 en presencia de un reactivo de acoplamiento para proporcionar el intermedio H2. La macrociclación de H2 da como resultado el Compuesto H3. La hidrólisis del éster H2 proporciona el ácido H4. La reacción del ácido H4 con una sulfonamida o sulfamida en presencia de un reactivo de acoplamiento proporciona el producto H5.
10 Se agitó ácido (S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)non-8-enoico, adquirido de RSpAminoAcid situado en Massachusetts, (179 mg, 1,0 equiv.) en DMF con HBTU (376 mg, 1,5 equiv.), HOBt (94 mg, 1,05 equiv.) y DIEA (345 Pl, 3,0 equiv.) durante 15 minutos. Se añadió el Compuesto 22A (194 mg, 1,0 equiv.) y se agitó durante una noche. A la solución se le añadió acetato de etilo. La solución se lavó con HCl 1 N (tres veces) seguido de salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía sobre sílice (gradiente de acetato de etilo al 10
15 30%/hexanos), produciendo el Compuesto 22B (253 mg, 70%). (M+H = 548,2).
El Compuesto 22B (253 mg, 1,0 equiv.) se agitó en THF (1 ml) y metanol (0,5 ml). A la solución se le añadió hidróxido de litio (97 mg, 5,0 equiv.) en agua (0,5 ml) y se agitó durante 2 horas más. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con HCl 1 N, después salmuera, y la solución se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró, produciendo el Compuesto 22C (235 mg, 95%) en forma de un sólido puro de color blanco (M+H = 534,2).
El Compuesto 22C (247 mg, 1,0 equiv.) se agitó en 1 ml de acetonitrilo. A la solución se añadió TBTU (297 mg, 2,0 equiv.), DIEA (241 Pl, 3,0 equiv.), después 1-amino-2-vinilciclopropanocarboxilato de (7R,2S)-metilo (86 mg, 1,2 equiv.) y se agitó durante una noche. La solución se diluyó con acetato de etilo y se lavó con HCl 1 N y después
10 salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía sobre sílice (gradiente de acetato de etilo al 10-70%/hexanos), produciendo el Compuesto 22D (230 mg, 76%). (M+H = 657,2).
El Compuesto 22D (230 mg, 1,0equiv.) se agitó a reflujo en 70 ml de CH2Cl2 con catalizador de Hoveyda-Grubbs (22 mg, 0,1 equiv.) durante 1 hora y la solución se enfrió a temperatura ambiente y se purificó por cromatografía sobre sílice (acetato de etilo al 10-70%/hexanos), produciendo el Compuesto 22E (172 mg, 77%)
El Compuesto 22E (172 mg, 1,0 equiv.) se agitó en THF (1 ml) y metanol (0,5 ml). A la solución se le añadió LiOH (46 mg, 4,0 equiv.) en 0,5 ml de agua, y la solución se agitó durante 2 horas más. A la solución se le añadió de nuevo acetato de etilo y se lavó con HCl 1 N y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró, produciendo el compuesto 22F (155 mg, 92%) en forma de un sólido puro de color blanco (M+H = 617,1).
El Compuesto 22F (155 mg, 1,0 equiv.) se agitó en 1 ml de DMF con carbonildiimidazol (49 mg, 1,2 equiv.) a 80 ºC durante 15 minutos. A la solución se le añadió ciclopropanosulfonamida (49 mg, 1,6 equiv.) seguido de DBU (36 Pl, 1,0equiv.) y se agitó durante 10 minutos más a 80 ºC. Después, a la solución se le añadió acetato de etilo y la solución se lavó con HCl 1 N y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El producto se purificó por cromatografía sobre sílice (gradiente de DCM al 100% a metanol al 5%/DCM), dando el Compuesto Nº 409 (64 mg, 35%). (M+H = 718,1).
A continuación se presentan en Tabla 8 compuestos adicionales de la Fórmula I preparados por el Procedimiento 8.
Tabla 8. Compuestos Adicionales de Fórmula I Preparados por el Procedimiento 8
Compuesto Nº
Material de Partida Para W Material de Partida Para R3
1
OH 7-Cloro-2,3-dihidrobenzo[b]furan-5-carboxaldoxima
137
OH 3-Clorobenzaldoxima
163
Ciclopropano sulfonamida Cloruro de fenilglioxilohidroxamilo
232
Ciclopropano sulfonamida 3-Clorobenzaldoxima
320
OH Cloruro de Fenilglioxilohidroxamilo
386
Ciclopropano sulfonamida 7-Cloro-2,3-dihidrobenzo[b]furan-5-carboxaldoxima
409
Ciclopropano sulfonamida 3-Clorobenzaldoxima
470
OH 3-Clorobenzaldoxima
Ciertos otros compuestos de Fórmula I pueden prepararse en el Procedimiento 9 como se ilustra a continuación.
PROCEDIMIENTO 9:
En referencia al Procedimiento 9, la espiroisoxazolina protegida B3 (preparada por el Procedimiento 2) reacciona con la imino-amina enlazada a resina D1 para proporcionar el intermedio I1. La desprotección de I1 proporciona la 5 amina I2 que reacciona con un ácido carboxílico R1 en presencia de un reactivo de acoplamiento para proporcionar I3, en el que R1 es R4C(O)-. La hidrólisis de I3 proporciona el compuesto final A10.
Un experto en la materia puede usar los ejemplo y procedimiento descritos en el presente documento, junto con metodologías sintéticas conocidas, para sintetizar compuestos de Fórmula I de acuerdo el Procedimiento 9 ilustrado anteriormente.
10 A continuación se enumeran en la Tabla CC compuestos adicionales de la Fórmula I preparados por el Procedimiento 9.
Tabla CC. Compuestos adicionales de Fórmula I Preparados por el Procedimiento 9
Compuesto Nº
P1
46
�?cido 5-bromoindolo-2-carboxílico
54
Acetil-D-etionina
60
Acido 2-(R)-[[(4-metilfenil)Sulfonil]amino]-2-fenilacético
65
�?cido 2-oxo-1-fenilpirrolidin-3-carboxílico
88
Acetil-D-Metiltirosina-OH
98
N-Acetil-L-leucina
100
�?cido 2-[[(4-fluorofenil)Sulfonil]amino]-3-metilbutanoico
157
�?cido 5,6-dimetoxiindolo-2-carboxílico
218
Pir-Val-OH
227
�?cido 1-carbamoilciclopropanocarboxílico
246
�?cido 5-(2,4-dimetilfenilamino)-5-oxopentanoico
248
�?cido 4-cloro-2-(6-metoxipiridin-3-ilamino)benzoico
309
�?cido 3-[[(4-acetamidofenil)sulfonil]amino]-3-propanoico
328
�?cido 3-(3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-ilsulfonil)benzoico
332
�?cido (S)-2-acetamido-3-(4-isopropoxifenil)propanoico
376
�?cido 3-(2-oxobenzo[d]oxazol-3(2H)-il)propanoico
380
�?cido 4-trifluorometoxifenilacético
395
�?cido 2-[[(4-metoxifenil)Sulfonil]amino]-3-metilbutanoico
397
�?cido 2-((S)-2-oxo-4-feniloxazolidin-3-il)acético
412
Acetil-D-tirosina-OH
416
�?cido 2-(R)-[[(4-clorofenil)Sulfonil]amino]-3-metilpentanoico
420
�?cido 3-(2-dietilamino)-2-oxoetil)1H-indolo-2-carboxílico
421
�?cido trans-2-fenil-1-ciclopropanocarboxílico
466
�?cido 2-[[(4-fluorofenil)Sulfonil]amino]-2-fenilacético
476
�?cido 2-(S)-[[(4-metilfenil)Sulfonil]amino]-2-fenilacético
483
�?cido 3-(N-fenilfenilsulfonamido)propanoico
489
�?cido 2-(R)-[[(4-metoxifenil)Sulfonil]amino]-3-metilbutanoico
501
�?cido 2-[(fenilsulfonil)amino]-2-fenilacético
534
�?cido 2-(R)-[[(4-metoxifenil)Sulfonil]amino]-3-metilpentanoico
574
�?cido 2-(1-oxoisoindolin-2-il)propanoico
586
�?cido 6-(2,5-dimetoxifenil)-2-oxo-1,2,3,6-tetrahidropirimidin-4-carboxílico
587
�?cido 2-(R)-[[(4-Metoxifenil)Sulfonil]amino]-4-metilpentanoico
PROCEDIMIENTO 10:
En referencia al Procedimiento 10, la espiroisoxazolina protegida B3 (por ejemplo, R1 es Fmoc) reacciona con M10A (R", por ejemplo, puede ser metilo o estar inmovilizado sobre resina PS-Wang) para proporcionar el intermedio 5 M10B. La hidrólisis de M10B produce el ácido carboxílico M10C, que posteriormente se acopla con la sulfonamida adecuada para proporcionar el compuesto final M10D. M10C también puede ser un compuesto final de la fórmula I.
De forma análoga, un experto en la materia puede usar los procedimientos descritos en el presente documento, junto con metodologías sintéticas conocidas, para sintetizar los compuestos de Fórmula I de acuerdo con el Procedimiento 10 ilustrado anteriormente.
10 A continuación se enumeran en la Tabla DD compuestos adicionales de Fórmula I preparados por el Procedimiento 10,
Tabla DD. Compuestos adicionales de Fórmula I Preparados por el Procedimiento 10
CompuestoNº
Material de Partida W Material de Partida P1 Material de Partida C1 Material de Partida R3
35
Ciclopropano sulfonamida N-Boc-L-terc-butilglicina NE 3-Clorobenzaldoxima
45
Ciclopropano sulfonamida N-((S)-tetrahidrofurano-3-iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina NE 3-Clorobenzaldoxima
57
Ciclopropano sulfonamida N-Boc-L-terc-butilglicina NE 7-Cloro-2,3-dihidrobenzo[b]furan-5carboxaldoxima
115
N-Boc-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
130
Ciclopropanosulfonamida N-Alloc-L-terc-butilglicina NE 3-Clorobenzaldoxima
144
OH N-Boc-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
162
Ciclopropano sulfonamida N-Boc-L-terc-butilglicina �?cido 2-ciclohexilacético 3-Clorobenzaldoxima
190
Ciclopropano sulfonamida N-Boc-L-terc-butilglicina 2,5-dioxopirrolidin-1-ilcarbonato de ciclopentilo 3-Clorobenzaldoxima
269
OH N-((S)-tetrahidrofurano-3-iloxi)carbonil)-L-tercbutilglicina NE 3-Clorobenzaldoxima
272
OH N-Boc-L-terc-butilglicina 2,5-dioxopirrolidin-1-ilcarbonato de ciclopentilo Nitropropano
359
Ciclopropano sulfonamida N-Boc-L-terc-butilglicina �?cido 2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acético 3-Clorobenzaldoxima
384
OH N-Boc-L-terc-butilglicina �?cido 2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acético 3-Clorobenzaldoxima
438
Ciclopropano sulfonamida N-Boc-L-terc-butilglicina 2,5-dioxopirrolidin-1-ilcarbonato de ciclopentilo Nitropropano
439
OH N-Boc-L-terc-butilglicina NE 3-Clorobenzaldoxima
443
OH N-Boc-L-terc-butilglicina 2,5-dioxopirrolidin-1-ilcarbonato de ciclopentilo 3-Clorobenzaldoxima
457
OH N-Boc-L-terc-butilglicina Isocianato de terc-butilo 3-Clorobenzaldoxima
460
OH N-Alloc-L-terc-butilglicina NE 3-Clorobenzaldoxima
EJEMPLOS ADICIONALES Ejemplo 23: Compuesto Nº 610
Se disolvió la oxima 23A (6,29 g, 40,4 mmol) en DMF (63 ml) y se añadió en porciones N-clorosuccinimida (5,39 g,
5 40,4 mmol) a la solución en agitación. Se continuó agitando durante 3 horas a temperatura ambiente, momento en el que se determinó que la conversión era 56% (por HPLC). La reacción se impulsó para que se completara calentando cuidadosamente a 70 ºC durante 45 minutos. Se añadió derivado de 4-metilenoprolina (8,81 g, 31,1 mmol) y se enjuagó en la solución usando DMF (5 ml). Se añadió cuidadosamente gota a gota trietilamina (5,7 ml) durante 30 minutos. Después, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, durante una noche. Una alícuota
10 se analizó por HPLC y se determinó que contenía una proporción 4:1 de diastereómeros de cicloadición. Se añadió acetato de etilo (200 ml) y la fase orgánica se lavó con agua (tres veces, 200 ml cada una) y salmuera (200 ml). Después, la fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó. El aceite en bruto se dividió en dos porciones y cada una se purificó usando un ISCO Combiflash equipado con una columna de 330 g de (EtOAc de 1020%: éter de pet., 72 minutos). El producto deseado del isómero principal que se eluyó de la columna por delante del
15 isómero menor y se obtuvieron 9,42 g de 23B en forma de un aceite de color naranja (69%).El isómero menor también se aisló, se sometió a recristalización en EtOAc:hexano y se obtuvo en forma de un polvo cristalino de color blanquecino (1,53 g, 12%).
El Compuesto 23B (9,42 g) se agitó en ácido trifluoroacético (12 ml) durante 2 horas. El disolvente se evaporó y se
20 remplazó por metanol (50 ml). La solución se calentó a reflujo y se añadió gota a gota H2SO4 (3,0 ml). La reacción se calentó a reflujo durante un total de 6 horas, momento en el que, por HPLC, se determinó que la conversión del éster metílico era superior al 95%. La reacción se enfrió y se evaporó para retirar el exceso de metanol. El aceite resultante se disolvió de nuevo en CH2Cl2 (200 ml) y se neutralizó con bicarbonato sódico saturado (200 ml). La fase orgánica se recogió y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (dos veces, 100 ml cada una). Los extractos orgánicos
25 se combinaron, se evaporaron sobre sulfato de magnesio, y se evaporaron, dando 5,09 g del Compuesto 23C en forma de un aceite (80%) que se llevó inmediatamente a la siguiente etapa.
El amino éster 23C (1,25 g, 4,24 mmol) se trató con LiOH·H2O (186 mg, 4,4 mmol) en THF/H2O (3:1, 10 ml) durante 45 minutos. Los disolventes se retiraron al vacío, obteniendo un sólido. Este sólido se suspendió en acetona (20 ml) y NaHCO3 saturado (ac.) (20 ml) a temperatura ambiente. Se añadió Fmoc-Cl (1,12 g, 4,33 mmol) y la reacción se controló por HPLC. Después de 20 minutos, los contenidos del matraz de reacción se transfirieron a un embudo de decantación con CH2Cl2 y se acidificaron con HCl 2 N (ac.). La fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 (dos veces, 100 ml cada una). La emulsión resultante se filtró y las fases orgánicas se combinaron se combinaron, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron, dando el Compuesto 23D.
El Compuesto XX4 se agitó en una solución de piperidina al 20% en DMF (20 ml) durante 60 minutos. La resina se
10 lavó con DMF (tres veces), CH2Cl2 (tres veces) y se repitió. Después, la resina resultante se agitó con el Compuesto 23D (437 mg, 0,87 mmol), HATU (392 mg, 1,03 mmol) y DIEA (0,300 ml, 1,72 mmol) en DMF (10 ml) durante una noche. Después, la resina enlazada a compuesto 23F resultante se lavó con DMF (tres veces), CH2Cl2 (tres veces) y se repitió. (M+1) = 612,26.
15 La resina enlazada a compuesto 23F se agitó en piperidina 20% en DMF (8 ml) durante 2 horas. Después, la resina se lavó con DMF (tres veces), CH2Cl2 (tres veces) y se repitió. (M+1) = 390,1. Después, esta resina se agitó durante una noche en DMF con ácido (S)-2-(ciclopentiloxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanoico (3 equiv.), HOBT (3 equiv.), HBTU (3 equiv.) y DIEA (6 equiv.). La resina se lavó con DMF (tres veces) y CH2Cl2 (tres veces) y se repitió, después se agitó durante 100 minutos en TFA (5 ml). La resina resultante se filtró y el filtrado se concentró y se
20 purificó por cromatografía de fase inversa, produciendo 9,4 mg del Compuesto 443 en forma de un sólido de color blanco. (M+1) = 615,6. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6): 8,63 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,63 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,55-7,49 (m, 2H), 6,90 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,77-5,69 (m, 1H), 5,20-5,17 (m, 1H), 5,06 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,93 (s a, 1H), 4,35 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,62-3,50 (m, 2H), 2,63-2,31 (m, 2H), 2,18-2,13 (m, 1H), 2,07-2,01 (m, 1H), 1,87-1,51 (m, 9H), 1,29-1,28 (m, 1H), 0,95-0,91 (s a, 9H).
El Compuesto 23G (6,6 mg, 0,011 mmol) se agitó en DMF (0,5 ml) con CDI (2,8 mg, 0,017 mmol) durante 1 hora a 80 ºC. Se añadieron ciclopropil sulfonamida (3,8 mg, 0,031 mmol) y DBU (0,01 ml), el calor se retiró y la reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La reacción se purificó por cromatografía de fase inversa,
5 produciendo 2,8 mg del Compuesto Nº 190 (0,0039 mmol). (M+1) = 718,1. RMN 1H (500 MHz, metanol-d4): 9,26 (s, 0,4H), 9,02 (s, 0,6H), 7,72 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 1,3, 7,3 Hz, 1H), 7,47-7,41 (m, 2H), 5,81 - 5,73 (m, 1H), 5,33-5,30 (m, 1H), 5,14-5,10 (m, 1H), 5,03 (s a, 1H), 4,45-4,41 (m, 1H), 4,31-4,25 (m, 2H), 3,94 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,62-3,53 (m, 2H), 2,99-2,92 (m, 1H), 2,55-2,49 (m, 1H), 2,29-2,23 (m, 2H), 1,89-1,53 (m, 10H), 1,44-1,40 (m, 1H), 1,32-1,24 (m, 1H), 1,19-1,02 (m, 2H), 0,90 (s, 9H).
10 Ejemplo:24: Compuesto Nº 618
El ácido carboxílico 24A (69 mg, 0,13 mmol), HATU (50 mg, 0,13 mmol), el Compuesto 24B (0,13 mmol) y DIEA (0,045 ml, 0,26 mmol) se agitaron en acetonitrilo (1,5 ml) durante 2 horas. Después, la reacción se diluyó en EtOAc, se lavó con NaHCO3 saturado (ac.) y salmuera, se secó (MgSO4) y se concentró. La purificación sobre gel de sílice
15 produjo 76 mg (0,12 mmol, 91%) del Compuesto 24C. CLEM (M+1) = 614,4.
El éster metílico 24C (76 mg, 0,12 mmol) se disolvió en THF/H2O (5:1,2 ml) y se agitó durante una noche con LiOH·H2O (1,5 equiv.). Se acidificó la reacción con HCl 1 N (ac.) y se concentró. El residuo se disolvió en CH2Cl2/MeOH (93:7) y se eluyó a través de un lecho de gel de sílice, produciendo 75 mg (0,1 1 mmol) del Compuesto Nº 144. CLEM (M+1 = 627,4). RMN 1H (500 MHz, Metanol-d4): 7,84 (d, J = 9,1 Hz, 0,5H), 7,71 (s, 1H), 7,60 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,45-7,40 (m, 2H), 5,90-5,83 (m, 1H), 5,23 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,52-4,49 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,59-3,48 (m, 2H), 2,58 (dd, J = 8,0, 12,6 Hz, 1H), 2,372,32 (m, 1H), 2,21-2,12 (m, 4H), 1,76-1,61 (m, 6H), 1,45-1,42 (m, 1H), 1,32-1,14 (m, 4H), 1,05-0,95 (m, 9H), 0,91 (m, 3H).
10 El ácido carboxílico 22D (18,5 mg, 0,029 mmol) se agitó con CDI (6,0 mg) en DMF (1,5 ml) a 80 ºC durante 10 minutos. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió el Compuesto 24E en DMF (0,15 ml) con DBU (4 equiv.) y la reacción se calentó en un baño a 80 ºC durante 20 minutos. La reacción se purificó directamente por cromatografía de fase inversa, produciendo 7,6 mg del Compuesto Nº 115. CLEM (M+1=745,2), RMN 1H (500 MHz, metanol-d4): 9,30 (s, 0,5H), 8,02 (m, 0,5H), 7,71 (m, 1H), 7,60 (dt, J = 7,2, 1,3 Hz, 1H), 7,46-7,41 (m, 2H), 5,86-5,79
15 (m, 1H), 5,35-5,28 (m, 1H), 5,12-5,10 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,42 (dd, J = 6,9, 10,6 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 3,62-3,47 (m, 2H), 2,51-2,47 (m, 1H), 2,35-2,31 (m, 1H), 2,25-2,12 (m, 4H), 1,89 (dd, J = 5,4, 8,1 I Hz, 1H), 1,80-1,64 (m, 6H), 1,45-1,39 (m, 1H), 1,33-1,15 (m, 3H), 1,04-0,97 (m, 11H), 0,73-0,57 (m, 4H).
A continuación se enumeran en la Tabla 9 algunos datos físicos de compuestos ejemplares de Fórmula I.
Se adquirieron datos de CL/EM usando lo que se indica a continuación:
20 Espectrómetros de masas: PESciex API-150-EX o Waters/Micromass ZQ o Waters/Micromass Quattro II o Waters/Micromass ZMD; Combas: Shimadzu LC-8A o Agilent 1100; Inyectores automáticos: Gilson 215 o Gilson 819.
Se usaron los siguientes procedimientos: caudal 3,0 ml/min, gradiente de CH3CN al 10-99% (TFA al 0,035%)/H2O
25 (TFA al 0,05%). Columna Phenomenex Luna 5m C18 (50 x 4,60 mm); caudal 1,5 ml/min, CH3CN al 10-90% (ácido fórmico al 2%)/H2O (ácido fórmico al 0,2%) en 3 minutos. Columna YMC-Pack Pro-C18 (50 x4,6 mm); caudal 1,0 ml/min, CH3CN al 10-90% (ácido fórmico al 0,2%)/H2O (ácido fórmico al 0,2%) en 5 minutos. Columna YMC-Pro-C18 (50 x 2,0 mm); caudal 1,5 ml/min, CH3CN al 10-90% (0,1% TFA))/H2O (0,1 de TFA) en 3 minutos, Columna YMC-Pack Pro-C18 (50 x 4,60 mm).
30 Tabla 9: Datos físicos para Compuestos Ejemplares de Fórmula I.
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
1
754,4 756,1
2
700,2 3,99
3
698,8 3,84
4
763 765
5
686,3 2,8
6
760,9 2,4
(Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa)
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
7
710,2 3,35
8
707,9
9
638 640
10
724 726,1
11
662,4 664,3
12
602 2,94
13
668,2 3,6
14
580,9
15
725,1 726,1
16
691,8
17
791,8 2,29
18
752,4 3,74
19
696,3 3,7 RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 7,61 (d, J = 1,7 Hz, H), 7,51 (d, J = 7,7 Hz, H), 7,38 (d, J = 8,2 Hz, H), 7,33 (t, J = 7,8 Hz, H), 7,26 (s, CDCl3), 7,16 (t, J = 6,5 Hz, H),6,91 (d, J = 3,3 Hz, H), 6,55 -6,50(m, H), 5,35 (dd, J = 4,1, 8,5 Hz, H),4,77 - 4,74 (m, H), 4,66(d, J = 9,4 Hz, H),4,29(d, J = 11,1 Hz, H), 3,71(d, J = 11,2 Hz, H), 3,47 (d, 1H),3,29 (d, 1H), 2,78 (td, J = 7,3, 3,7 Hz, H),2,63 - 2,59 (m, H), 2,52 - 2,49 (m, H),2,07-2,30 (m, 2H), 1,98 - 1,92 (m, H),1,77 - 1,61 (m, H), 1,47-1,40 (m, H),1,35 -1,25 (m, H), 1,21(dd, J = 6,6, 12,5 Hz, H),1,01 (s, 9H), 0,98 -0,83(m, H),0,61 0,51 (m, H), 0,39 (t, J = 4,8 Hz, H) ppm
20
672 3,24
21
697,9 699,8
22
713 3,9 CDCl3; 7,77 (d, 2H),7,58 (m, 4H),7,41 (t, 2H),7,32 (3H)
23
710 4,5
24
630,3 632,2
25
684,6 686,5
26
761,4 3,23
27
672,4 3,7
28
675,3 3,44
29
698,361 3,8
30
767,6 3,15
31
701,3 2,74
32
730,3 732,1
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
33
685 3,5
34
559
35
706,1 3,66
36
675,5 677,3
37
712 3,19
38
748,1 3,86
39
728 3,82
40
655,3 657,2
41
729 3,4
42
701,3 2,75
43
654,1 656,1
44
658 3
45
720,2 3,29
46
670 3,78
47
734,2 736,1
48
728,2 3,47
49
784,2 3,71
50
696,6 3,76
51
548,1 550
52
704
53
696 2,04
54
634 3,24
55
642,3 644,2
56
600,6 602,4
57
755
58
778,9 2,38
59
730,2 3,58
60
734,4 3,67
61
591,8 2,6
62
690,2 3,64
63
698 3,83
64
595
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
65
634,4 1,8
66
734,4 736,2
67
720,4 722,2
68
675,2 2,6
69
817,7 3,97
70
712,4 714,3
71
722,1 3,59
72
670 3,53
73
800,7 3,97
74
682 684
75
713,1 2,8
76
643 3,09
77
734,2 3,92
78
79
684,2 3,7
80
553,1 555
81
687 2,1
82
611 612,6
83
772, 774
84
780,9 4,39
85
650 3,26
86
676,5 678,3
87
712 3,2
88
666 3,31
89
695,2 3,53
90
758 759,9
91
848,7 2,3
92
686 3,05
93
670,4 3,56
94
660 2,69
95
583,9 585,7
96
759,3 4,02
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
97
670,1 672,1
98
602,6 1,63
99
726,7 2,4
100
704 3,64
101
666,1 668,3
102
710,2 3,6
103
657 3,2
104
690 3,24
105
682,1 684,2
106
690,1 691,9
107
659 3,22
108
700 3,32
109
706,4 708,4
110
754 3,6
111
652,1 654
112
684
113
700,7 2,3
114
712,4 714,3
115
745,2 3,73
116
716,3 718
117
653
118
726,4 3,6
119
691,8
120
811,5 3,95
121
714 3,27
122
711 3,42
123
631 3,09
124
686,2 3,4
125
732,2 3,7
126
680,55 682,4
127
794,7 4,11
128
774 3,28
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
129
758,2 3,78
130
690,2 3,48
131
720 3,53
132
711,4 3,5
133
728,6 3,8
134
726,2 3,7
135
773,1 3,5
136
666 668,1
137
708,2 710,1
138
843,9 2,2
139
708 3,35
140
672,7 2,13
141
792,7 4,13
142
676,2 677,9
143
700,7 2,32
144
627,4 3,43
145
707,8
146
635 2,47
147
690 691,9
148
813,9 2,15
149
606,8
150
713,5 715,2
151
706 707,8
152
688,4 3,2
153
714,3 3,2
154
700,1 701,9
155
709,6 3,59
156
658 3,35
157
650 3,32
158
714,3 3,72
159
688,3 690,3
160
613,5 615,4
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
161
769,1 3,5
162
730,2 3,7
163
708
164
630,1 632,1
165
715,2 3,73
166
710 3,46
167
709,4 2,2
168
656,3 3,46
169
702,2 3,71
170
754,2 3,96
171
613,1
172
717,1
173
667 3,17
174
642,3 644,3
175
701,2 2,76
176
817,7 4,1
177
787 789
178
576,1 578,1
179
718,2 3,55
180
770,1 772,1
181
801,7 2,06
182
686,7 2,19
183
714 715,9
184
672,2 2,96
185
724,2 3,6
186
755,3 3,41
187
708 3,53
188
698 3,76
189
722 3,5
190
718,1 3,68
191
710,4 712,4
192
683,3 685,3
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
193
646 3,44 702 703,7
194
672,1 674
195
700,2 3,59
196
672,1 674
197
722 3,39
198
723,8 725,7
199
766,2 768,2
200
746,2 748,1
201
567,1 568,8
202
638 640
203
730,3 3,7
204
734,2 3,85
205
637 3,35
206
871,9 3,96
207
576 2,87
208
718,2 719,95
209
716,3 718,1
210
675 3,5
211
698,2 3,47
212
692,6 694,5
213
748,2 3,6
214
769,3 770,9
215
733,3 735,3
216
767,1 3,1
217
670 3,6
218
657 3
219
670,2 3,65
220
504,1 506
221
792,9 4,1
222
593 594,9
223
678 3,42
224
707,9 710,1
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
225
795
226
698 3,89
227
558,5 2,91
228
670
229
649,7 2,55
230
704,3 3,7
231
684 3,73
232
718,1 3,82
233
700,34 3,3 RMN 1H (500 MHz, CDCl3): 7,61 (t, J =1,6 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 1,7, 6,9 Hz, 1H), 7,34 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,26 (s, CDC13), 7,16 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 4,1 Hz, 1H),4,76(t, J = 7,8 Hz, 1H),4,64 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,71 (d, J =11,2 Hz, 1H), 3,29-3,49 (dd, J =2H), 2,78 (m, 1H), 2,63-2,59 (m, 1H), 2,53 -2,51 (m, 1H), 2,37 (d, J = 2,2 Hz, H), 1,901,96 (m, 1H), 1,68 - 1,60 (m, H), 1,47 - 1,40 (m, H), 1,211,32 (m), 0,99 (s, 9H), 0,95-0,83 (m, H), 0,60 (dd, J = 3,4, 9,5 Hz, H) ppm
234
722 724
235
626,1 3,34
236
716,1 718,2
237
696,2 2,04
238
784,2 3,77
239
738 3,8
240
668,2 670,2
241
713,4 2,94
242
667,4 669,4
243
605,9 2,77
244
653,2
245
682 3,58
246
664,7 3,39
247
645,3 3,3
248
707,4 3,7
249
665 3,49
250
714,2 3,8
251
613,4 615,2
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
252
682 3,7
253
672,3 3,72
254
728,4 3,6
255
778,9 2,37
256
668,5 3,6
257
626 628
258
566,3 568,1
259
783 3,24
260
662 3,16
261
821 3,21
262
612 3,4
263
608,9 611
264
692 3,31
265
698,3 3,87
266
704,3 706,2
267
575,6 577,4
268
752 3,87
269
617,6 2,71
270
720
271
704 3,61
272
696 698,1
273
644 3,46
274
714,1 716,2
275
686,7 2,21
276
716,1 717,8
277
728,3 3,75
278
782 3,9
279
670,3 672,2
280
638,2 640
281
684,5 686,4
282
772,2 3,19
283
645 2,02
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
284
698 3,8
285
695,7 697,6
286
760 3,13
287
708 3,4
288
695 3,46
289
786,2 3,7
290
695,7 697,6
291
787 3,02
292
685,4 3,36
293
711,1 3,7
294
684 3,76
295
654,5 656,5
296
748,7 2,37
297
718 3,48
298
800,6 2,3
299
706,6 708,3
300
714,7 2,36
301
692,1 694,1
302
817,9 3,96
303
651,5 2,9
304
727 2,87
305
726,2 3,52
306
757,5 759,5
307
744 3,57
308
702,5 3,4
309
715,3 3,59
310
683 685
311
767,2 3,4
312
789,1 791
313
640 3,1
314
718 720
315
755,3 3,67
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
316
813 815
317
747,2 3,35
318
644,1 645,9
319
658 3,57
320
775,3 777,1
321
744,3 3,75
322
666
323
746,3
324
716,9 3,5
325
676,5
326
654,1 655,9
327
686,5 688,4
328
746,7 3,65
329
613,4 615,2
330
678
331
726,5 728,3
332
694,5 1,82
333
707 3,43
334
705,8 3,66
335
720 3,5
336
774,2 3,8
337
680,6 682,6
338
736,2 3,6
339
757 3,24
340
682 684
341
697,1 2,86
342
626 2,3
343
559
344
684,2
345
696 3,98
346
710,2 3,52
347
742,7 2,28
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
348
531,6 533,3
349
730,4 3,5
350
700,3 3,94
351
634,5 636,3
352
675,6 677,3
353
691,9
354
700,6 702,5
355
762,2 3,91
356
760 3,11
357
695 2,24
358
686,1 687,9
359
732,4 3,12
360
698 3,87
361
698 3,83
362
652 654
363
722 724,1
364
701,9 3,21
365
676,1
366
728,1 3,6
367
636 2,8
368
770,2 3,64
369
721,1 723,2
370
728,3 3,62
371
695 3,7
372
712,3 3,98
373
723,4 2,3
374
688,4 3,2
375
656 658
376
636,3 3,36
377
795,4 3,29
378
761,1 763
379
645 3,16
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
380
649,5 1,97
381
731,4 3,3
382
758,3 760,1
383
612,1 3,2
384
629,4 2,78
385
504,1 506
386
504,1 506
387
716 3,13
388
656 3,42
389
723,4 2,3
390
696,1 698
391
583 584,8
392
660 3,05
393
696 4,05
394
703,351 3,3
395
730 3,55
396
698,25 3,89
397
650,5 1,73
398
696,1 698
399
742,7 2,16
400
583 584,8
401
698,3 3,9
402
764,1 3,4
403
716,9 719
404
702,5 2,07
405
406
670,1 672,2
407
632 3,35
408
735,7 3,14
409
410
714,5 2,12
411
566,10 568
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
412
652 3
413
717,9 719,8
414
769,1 771
415
639,5 641,5
416
734,5 3,83
417
653,3
418
686,3 3,1
419
714 3,26
420
704 3,56
421
591,6 1,87
422
693,4 695,4
423
714,2 716,1
424
706 3,31
425
691,8 693,8
426
714,2 3,48
427
666 3,38
428
702,1 704
429
760,9 2,38
430
753,2 3,86
431
691,9 3,3
432
645 3,05
433
835,7 4,16
434
720 3,5
435
744 3,56
436
774 776,2
437
730,2 3,7
438
548,2 549,9
439
603,4 3,34
440
602,6 604,4
441
724,9 2,22
442
712,6 714,5
443
615,6 3,25
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
444
676,2 678,2
445
742,35 3,2 3,2
446
756,2 3,68
447
749,7 1,78
448
608,1 610
449
756 351
450
698,3 700,2
451
630
452
700,3 3,94
453
694,3 3,64
454
761,1 3,3
455
724,4
456
710,5 712,2
457
602,4 3,12
458
803,7 3,97
459
684,2 3,6
460
587,5 3,01
461
735,7 1,8
462
610,1 611,9
463
708,4 3,7
464
706,1 708,2
465
740,4 742,2
466
738,6 3,63
467
696,345 3,7
468
686,2 2,98
469
681,3 3,39
470
610,1 612,05
471
708,2 3,5
472
837 839,1
473
706 708,1
474
710,2 3,2
475
714 3,3
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
476
734,4 3,67
477
717,37 3,3
478
690,2 3,73
479
690,2 3,66
480
672 673,9
481
718 720
482
698,2 700,1
483
734,6 1,87
484
660 1,44
485
676 3,38
486
803,6 805,4
487
762 3,26
488
794,7 4,07
489
716,5 3,59
490
709,4 711,4
491
754
492
659 3,39 734,4 736,2
493
658,3 3,61
494
744,2 3,71
495
688,2 3,3
496
698,3 3,83
497
694 2,16
498
670,3 672,2
499
726,2 3,65
500
694,3 3,64
501
720,5 3,62
502
724,1 725,9
503
700 3,36
504
692,8 2,13
505
713,8 2,73
506
718 1,87
507
854,7 4,15
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
508
686,7 2,21
509
724,3
510
756,2 2,95
511
680,5 682,54
512
746,4 748,3
513
726,4 728,2
514
635 3,68
515
688,4 3,2
516
700 2,98
517
744,1 746,1
518
775,2 3,3
519
636
520
660 3,5
521
720,1 3,84
522
670 3,59
523
672 3,1
524
525
735,2 737
526
694 3,64
527
746,1 748,1
528
731,9 3,38
529
732 2,89
530
722
531
650 3,46
532
644 3,39
533
694 696
534
730,5 3,67
535
668,2 3
536
705,8 707,9
537
742,7 2,25
538
731,2 3,7
539
743,2 744,2
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
540
778,9 4,15
541
700,34 3,2
542
685,34 3,5
543
695,7 697,7
544
746,2 2,3
545
696,1 697,9
546
748,7 2,38
547
726,4 728,25
548
682 684
549
696 697,9
550
653,3 654
551
609,3
552
692,3 3,51
553
712,2 2,6
554
670,5 2,9
555
556
557
725,8 3,4
558
679 3,46
559
702 704
560
696,2 698
561
730,4 3,7
562
716 3,41
563
695 2,46
564
707,9
565
762,2 3,55
566
628 630
567
774,7 3,19
568
712,7 2,3
569
671,9
570
656,1 658,2
571
730,2 3,4
Compuesto Nº
CLEM (M+1) TR de CLEM FIAEM (M1) FIAEM(M+1) RMN
572
639,1 641,2
573
694,1
574
634,5 1,7
575
714,4 3,1
576
680 2,2
577
718 3,51
578
680,5 682,4
579
698 3,72
580
597 2,87
581
720 3,51
582
714,4 3,6
583
693 3,35
584
744
585
762 3,68
586
707 3,2
587
730,5 3,68
588
745,7 4,09
589
735,20 3,70
590
694,30 3,65
591
651,30 3,26
592
651,30 3,24
593
685,20 3,53
594
700,20 3,72
VI.
Ensayos para detectar e medir las propiedades de inhibición de los compuestos
A.
Ensayos Enzimáticos del VHC
1. Construcción y expresión del dominio de la serina proteasa NS3 del VHC
5 Mediante PCR se obtuvo un fragmento de ADN que codificada restos de Ala1-Ser181 de la proteasa NS3 del VHC (GenBank CAB46913) a partir del plásmido replicón Con1 del VHC, I377neo/NS3-3’/wt (renombrado en este estudio pBR322-HCV-Neo) [V. Lohmannet y col., Science, 285, págs. 110-113 (1999)] y se insertó en pBEV11(S. Chamber, y col., personal communication) para la expresión de las proteínas del VHC con una etiqueta hexa-histidina en el extremo C en E. coli. Todas las construcciones se confirmaron por secuenciación.
10 Las construcciones de expresión para el dominio serina proteasa NS3 del VHC se transformaron en células BL21/DE3 pLysS de E. coli (Stratagene). Las células recién transformadas se cultivaron a 37 ºC en un medio BHI (Difco Laboratories) complementado con carbenicilina 100 Pg/ml y cloranfenicol 35 Pg/ml hasta una densidad óptica de 0,75 a 600 nm. Se realizó la inducción con IPTG 1 mM durante cuatro horas a 24 ºC. El concentrado celular se
recogió por centrifugación y se ultracongeló a -80ºC antes de la purificación de la proteína. Todas las etapas de purificación se realizaron a 4 ºC. A continuación, se realizó la lisis de 100 g de concentrado celular en 1,5 l de tampón A (HEPES 50 mM (pH 8,0), NaCl 300 mM, n-octil-E-D-glucopiranósido al 0,1%, E-mercaptoetanol 5 mM, glicerol al 10% (v/v) y se agitó durante 30 minutos. El lisado se homogeneizó usando un Microfluidizador (Microfluidicis, Newton, Mass.), seguido por ultra-centrifugación a 54.000 x g durante 45 minutos. Al sobrenadante se le añadió imidazol hasta una concentración final de 5 mM junto con 2 ml de resina Ni-NTA previamente equilibrada con tampón A que contenía imidazol 5 mM. La mezcla se meció durante tres horas y se lavó con volúmenes de tampón de A de 20 columnas más imidazol 5 mM. La proteína NS3 del VHC se eluyó en tampón A que contenía imidazol 300 mM. El eluado se concentró y se cargó sobre una columna Hi-Load 16/60 Superdex 200, previamente equilibrada con tampón A. Las fracciones apropiadas de la proteína del VHC purificada se agruparon y se conservaron a -80ºC.
2. Ensayo de escisión peptídica del dominio de la proteasa NS3 del VHC
Este ensayo es una modificación del descrito por Landro, y col. (Landro JA, Raybuck SA, Luong YC, O’Malley ET, Harbeson SL, Morgenstern KA, Rao G y Livingston DL. Biochemistry 1997, 36, 9340-9348) y usa un sustrato peptídico (NS5AB), basado en el sitio de escisión NS5A/NS5B para el genotipo 1a del VHC. La solución madre del sustrato (25 mM) se preparó en DMSO que contenía DTT 0,2 M y se conservó a -20 ºC. Se usó cofactor peptídico sintético (KK4A) como sustituto para la región del núcleo central de NS4A. Las secuencias peptídicas se muestran en la siguiente tabla. La reacción se realizó en un formato de placa de microtitulación de 96 pocillos usando de 25 KM a 50 KM del dominio proteasa NS3 del VHC en tampón que contenía HEPES 50 mM pH 7,8, NaCl 100 mM, glicerol al 20%, DTT 5 mM y KK4A 25 PM. La concentración final de DMSO no fue superior a 2% v/v. Las reacciones se inactivaron por adición de ácido trifluoroacético (TFA) para producir una concentración final del 2,5%.
Secuencias peptídicas usadas con el dominio proteasa NS3 del VHC
Péptido
Secuencia
NS5AB
NH2-EDVV-(alfa)Abu-CSMSY-COOH [SEC ID Nº: 2]
KK4A
NH2-KKGSWIVGRIVLSGK-COOH [SEC ID Nº: 3]
El producto SMSY se separó del sustrato y de KK4A usando un procedimiento de separación por microperforación. El instrumento usado fue un Agilent 1100 con un desgasificador G1322A, bien una bomba binaria G1312A o una bomba cuaternaria G1311A, un automuestreador G1313A, una cámara de columna con termostato G1316A y un sensor matricial diódico G1315A. La columna era una Phenomenex Jupiter, 5 Pm C18, 300 Å, 150x2 mm, P/O 00F4053-B0, con un caudal de 0,2 ml/min. El termostato de la columna estaba a 40 ºC. Las fases móviles eran H2O/TFA al 0,1% (disolvente A) de calidad HPLC y CH3CH/TFA al 0,1% (disolvente B) de calidad HPLC. El pico del producto SMSY se cuantificó usando los datos recogidos a 210 KM.
3. Construcción y expresión de lD3URWHDVD16
Usando técnicas convencionales de ADN recombinante, se clonó un fragmento de ADN que codificaba la secuencia de NS3 y NS4A, restos de Ala1027 a Cys1711 de la cepa 1a subtipo del VHC, que contenía una secuencia hexahistidina en el extremo N, en el vector de transferencia baculoviral pVL1391 (Webb NR y Summers MD (1990) Expression of proteins using recombinant baculoviruses, Techniques 2: 173-188). El baculovirus recombinante que FRQWHQtD16VHSURGXMRSRUFR-transfección de pVL1392-His-16‡FRQ1GHOYLUXVGHODSROLKHGURVLV nuclear de Autographa californica (AcMNPV) linealizado en células de insecto de Spodoptera frugiperda (Sf9). Las células de insecto transfectadas, que contenían los clones de baculovirus recombinante, se aislaron posteriormente por purificación en placa. De manera rutinaria, su usó baculovirus clonal de alta titulación para infectar las células de insecto Sf9 para la producción de la proteína. En la producción, se cultivaron células Sf9 a 27 ºC hasta alcanzar una densidad de 2,0-x106 células/ml. En este momento, las células de insecto se infectaron con el virus. Después de 72 horas, o cuando la viabilidad celular era entre un 70-80%, se recogió el cultivo y las células estaban preparadas para la purificación.
4. PXULILFDFLyQGHODSURWHtQD16
/DSURWHtQD166(&,'1VHSXULILFyGHODVLJXLHQWHPDQHUD(OFRQFHQWUDGRFHOXODUVHGHVFRQJHOyHQDO
menos cinco volúmenes de Tampón de Lisis (Na2HPO4 50 mM, pH 8,0, glicerol al 10%, NaCl 300 mM, Emercaptoetanol 5 mM, PMSF 0,2 mM, leupeptina 2,5 Pg/ml, E64 1,0 Pg/ml, pepstatina 2,0 Pg/ml) por gramo de concentrado celular. El concentrado celular después se homogeneizó sobre hielo usando un homogeneizador de tipo Dounce. A continuación las células se deterioraron mecánicamente haciéndolas pasar una vez a través de un microfluidizador (Microfluidics Corporation, Newton, MA) y el lisado celular se recogió en hielo. Los lisados celulares se centrifugaron a 100.000 x g durante 30 minutos a 4 ºC y los sobrenadantes se decantaron. Opcionalmente, los sedimentos volvieron a suspenderse en tampón de lavado (Tampón de Lisis + E-octal glucopiranósido al 0,1%), se
homogeneizaron usando un homogeneizador de tipo Dounce y se centrifugaron a 100.000 x g durante 30 minutos a 4 ºC. 6HH[WUDMROD16LQVROXEOHGHORVVHGLPHQWRVUHVXVSHQGLHQGRHQWDPSyQGHH[WUDFFLyQ7DPSyQGH/LVLV; lauril maltósido al 0,5%) usando concentrado celular 2,5 ml/g. La mezcla se homogeneizó usando un homogeneizador de tipo Dounce y se mezcló a 4 ºC durante tres horas o más. La mezcla se centrifugó a 100.000 x g durante 30 minutos a 4 ºC. Los sobrenadantes se decantaron y se agruparon.
3RVWHULRUPHQWHODSURWHtQD16VHSXULILFyXVDQGRFURPDWRJUDItDGHDILQLGDGPHWiOLFDFRQ1tTXHO-NTA. A los sobrenadantes agrupados se les añadió una solución madre de imidazol 2 M, pH 8,0, de manera que la concentración final de imidazol fuera de 10 mM. Los sobrenadantes se incubaron de manera discontinua durante una noche a 4ºC con resina de afinidad Níquel-NTA que previamente se había equilibrado con Tampón de Lisis + imidazol 10 mM. Se usó 1 ml de resina por 5 Pg de la NS3-4A esperada. Después la resina se estableció por gravedad o por centrifugación a 500 x g durante cinco minutos. La resina después se vertió en una columna de flujo gravitorio y se lavó con 10 volúmenes o más de columna de Tampón de Lavado con Níquel (Tampón de Lisis + lauril maltósido al 0,1% + imidazol 10 mM). Después la columna se eluyó con volúmenes de tres a cuatro columnas de Tampón de Elución con Níquel (Tampón de Lavado con Níquel + imidazol 300 mM). Se recogieron las fracciones de elución sobre hielo y se evaluaron usando SDS-PAGE. Para impedir la proteólisis de la NS3-4A, se añadió inhibidor de DFP proteasa 100 PM a las muestras en gel antes de añadir tampón de muestra SDS y someter a ebullición. Las fracciones máximas se agruparon y se determinó la concentración de proteína midiendo la absorbancia a 280 Km y
GLYLGLHQGRHQWUHHOFRHILFLHQWHGHH[WLQFLyQHTXHSDUDOD16HVGH
La 16VHSXULILFyGHVSXpVXVDQGRFURPDWRJUDItDGHILOWUDFLyQHQJHO6HHTXLOLEUyXQDFROXPQD6XSHUGH[ 200 con Tampón Superdex (HEPES 20 mM pH 8,0, glicerol al 10%, NaCl 300 mM, E-mercaptoetanol 100 mM, lauril maltósido al 0,05%) a una velocidad de POPLQ/D16SXULILFDGDVREUHQtTXHOVHFRQFHQWUyHQXQ&HQWULSUHS; 30 a más de 2 mg/ml, si fuera necesario, y se filtró a través de un filtro de jeringa de 0,2 Pm y se cargaron hasta 10 ml sobre la columna Superdex 200. Después de hacer pasar 0,3 volúmenes de columna, se recogieron fracciones de 4-5 ml. Las fracciones se evaluaron por SDS-3$*(/DSURWHtQD16VHHOX\HHQGRVSLFRV(OSLFRFRQWLHQH16DJUHJDGD\HOSLFRFRQWLHQHODSURWHtQDDFWLYD/DVUDFFLRQHVGHOSLFRVHDJUXSDURQ se dividieron en alícuotas y se congelaron a -70ºC.
$QiOLVLVGHODSURWHtQD16
AN�?LISIS
PROTE�?NA ENTERA
Longitud
695 aminoácidos
Peso molecular
74,347.78
1 microgramo
13,450 pico moles
Coeficiente de Extinción Molar
73430
1 A280 corresponde a
1,01 mg/ml
Punto isoeléctrico
6,50
Carga a pH 7
-3,58
5. Ensayo de escisión del péptido NS3 del VHC
(VWHHQVD\RVHUHDOL]yGHVSXpVGHODHVFLVLyQGHXQVXVWUDWRSHSWtGLFRSRUODSURWHtQD16YLUDOGHODKHSDWLWLV&
de longitud completa. Para medir la actividad enzimática se usó uno de los tres sustratos peptídicos basados en el sitio de escisión NS5A/NS5B para el genotipo 1a del VHC. Todas las soluciones madre sustrato (25 mM) se prepararon en DMSO que contenía DTT 0,2 M y se conservaron a -20ºC. Para complementar el NS4A se usó un cofactor peptídico sintético (Péptido NS4A). Más adelante se muestran las secuencias peptídicas. La reacción de hidrólisis se realizó en un formato de placa de microtitulación de 96 pocillos usando de 100 KM a 125 K0GH16 del VHC en tampón que contenía HEPES 50 mM pH 7,8, NaCl 100 mM, glicerol al 20%, DTT 5 mM y péptido NS4A 25 PM. La concentración final de DMSO no fue superior al 2% v/v. Las reacciones se inactivaron usando NS5AB o NS5AB-EDANS como sustrato por la adición de ácido trifluoroacético (TFA) al 10% para producir una concentración final de TFA del 2,5%. Las reacciones se inactivaron usando FITC-NS5AB-1 como sustrato por la adición de ácido fórmico 0,4 M para producir una concentración final de ácido 0,08 M.
La actividad enzimática se evaluó por separación del sustrato y de los productos por HPLC de fase inversa. El instrumento usado fue un Agilent 1100 con un desgasificador G1322A, bien una bomba binaria G1312A o una bomba cuaternaria G1311A, un automuestreador G1313A, una cámara de columna con termostato G1316A y un sensor matricial diódico G1315A. El termostato de la columna estaba a 40 ºC. Para el sustrato NS5AB la columna era una Phenomenex Jupiter, C18 5 Pm, 300 Å, 150x 2 mm, P/O 00F-4053-B0, con un caudal de 0,2 ml/min usando
H2O/TFA al 0,1% (disolvente A) de calidad HPLC y CH3CN/TFA al 0,1% (disolvente B) de calidad HPLC como fases móviles. El pico de producto C-terminal (NH2-SMSY-COOH) se cuantificó usando los datos de absorbancia recogidos a 210 Km. Para el sustrato NS5AB-EDANS la columna era una Phenomenex Aqua, C18 5 Pm, 125 Å, 50x4,6 mm, P/O 00B-4299-E0, con una caudal de 1,0 ml/min usando H2O/TFA al 0,1% (disolvente A) de calidad HPLC y CH3CN/TFA al 0,1% (disolvente B) de calidad HPLC como fases móviles. El pico del producto C terminal (NH2-SMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH) se cuantificó usando los datos de fluorescencia recogidos a 350 Km de excitación / 490 Km de emisión. Para el sustrato FITC-NS5AB-1 la columna era una Phenomenex Prodigy, ODS 5 Pm (2), 125 Å, 50x4,5 mm, P/O 00B-3300-E0, con un caudal de 1,0 ml/min usando, como fases móviles, fosfato de sodio 10 mM pH 7,0 en H2O (disolvente A) de calidad HPLC y CH3CH al 65% de calidad HPLC/fosfato de sodio 10 mM al 35% pH 7,0 en H2O de calidad HPLC (disolvente B). El pico de producto N-terminal (FITC-Ahx-EDVV(alpha)Abu-C-COOH) se cuantificó usando los datos de fluorescencia recogidos a 440 nm de excitación / 520 nm de emisión. Como alternativa, la proporción del producto N-terminal con respecto al sustrato FITC-NS5AB-1 no reactivo se determinó usando un Calibrador LabChip 3000 con detección a 488 nm de excitación / 530 nm de emisión, usando un microchip de Tris 100 mM pH 7,0, EDTA 10 mM, Brj-35 al 0,01% (v/v) y CR-3 al 0,1% (v/v).
Secuencias peptídicas usadas con NS3 del VHC
Péptido
Secuencia
Péptido NS4A
NH2-KKGSVVIVGRIVLSGKPAIIPKK-COOH [SEC ID Nº: 4]
NS5AB
NH2-EDVV-(alfa)Abu-CSMSY-COOH [SEC ID Nº: 2]
NS5AB-EDANS
NH2-EDVV-(alfa)Abu-CSMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH [SEC ID Nº:5]
FITC-NS5AB-1
FITC-Ahx-EDVV-(alfa)Abu-CSMSYTKK-NH2 [SEC ID Nº: 6]
6. Determinación de Km y Vmáx
3DUDGHWHUPLQDURVSDUiPHWURVFLQpWLFRV.P9Pi[HOGRPLQLRSURWHDVD16GHO9+&R16GHO9+&VHKL]R
reaccionar con sustrato peptídico en las condiciones del ensayo descritas anteriormente. La concentración del sustrato peptídico varió entre 3 PM y 200 PM, con un porcentaje de conversión menor del 20 por ciento para todas las concentraciones del sustrato. La proporción del área máxima del producto (determinada por HPLC de fase inversa) con respecto al tiempo de reacción produjo una velocidad de hidrólisis catalizada por enzimas. Estos puntos de datos de concentración de velocidad frente al sustrato se ajustaron a la ecuación de Michaelis-Menten usando regresión no lineal. El valor de kcat se determinó a partir de la Vmáx usando la concentración proteasa nominal y un péptido de sustrato totalmente escindido como un instrumento de calibración patrón.
Parámetros cinéticos para sustratos peptídicos con NS3 del VHC o dominio proteasa de NS3
Enzima
Sustrato Km ( M) kcat/Km (M-1s -1)
Dominio proteasa de NS3
NS5AB 25 3,0 u 104
16
NS5AB 30 7,9 u 103
16
NS5AB-EDANS 56 1,4 u 103
16
FITC-NS5AB-1 15 1,2 u 103
7. Determinación de la fuerza del compuesto
Para evaluar los valores Ki aparentes, todos los componentes excepto el compuesto de ensayo y el sustrato se incubaron previamente durante 5-10 minutos a temperatura ambiente. Después, el compuesto de ensayo se disolvió en DMSO, se añadió la mezcla y se incubó durante 15 minutos o 60 minutos a 30 ºC. Se incluyó DMSO limpio como un control no inhibidor. La reacción de escisión se inició por la adición de sustrato peptídico a una concentración igual a la Km o igual a una mitad de veces la Km y se dejó proseguir a 30 ºC durante veinte minutos. Al final de la reacción la mezcla se inactivó y el grado de reacción se determinó como se ha descrito anteriormente. Se usaron once concentraciones del compuesto para valorar la actividad enzimática para la inhibición. Los puntos de datos de concentración de actividad frente a inhibidor se ajustaron a la ecuación de Morrison que describe la inhibición enzimática de estrecha unión competitiva usando regresión no lineal (Sculley MJ y Morrison JF. Biochim. Biophys. Acta. 1986, 874, 44-53).
Los compuestos de fórmula I ensayados mostraron generalmente valores ki de aproximadamente 0,008 a aproximadamente 20 PM. En algunas realizaciones, los compuestos de fórmula I mostraron valores Ki de aproximadamente 0,008 a aproximadamente 0,100 PM. En algunas otras realizaciones, los compuestos de fórmula I mostraron valores Ki de aproximadamente 0,100 a aproximadamente 0,500 PM. En otras realizaciones adicionales,
5 los compuestos de fórmula I mostraron valores Ki de 0,500 a aproximadamente 5,000 PM.
En la siguiente Tabla 10 se muestran ejemplos de actividades de los compuestos de fórmulas (1, Ia y Ib) sobre la inhibición de receptores de serina proteasa. Para las actividades de los compuestos de serina proteasa medidas usando Ensayos Enzimáticos del VHC, la actividad serina proteasa se ilustra con “+++” si la actividad medida era menor que 0,1 PM, “++” si la actividad medida era de 0,1 PM a 0,5 PM, “+” si la actividad medida era mayor de 0,5
10 PM, y “-“ si no existían datos disponibles. Deberá apreciarse que la eficacia al 0% es la respuesta mínima obtenida con el control solo con DMSO. El Ensayo Enzimático 1 se refiere al Ensayo de Escisión Peptídica del Dominio Proteasa NS3 del VHC y el Ensayo Enzimático 2 se refiere al Ensayo de Escisión Peptídica del péptido NS3 del VHC.
Tabla 10: Actividades del Ensayo Enzimático del VHC y eficacias de compuestos ejemplares de acuerdo con 15 la Fórmula I
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
1
- -
2
- -
3
++ +++
4
++
5
+++ +++
6
+ +
7
+ -
8
+ -
9
+ -
10
+ +
11
+ -
12
++ +++
13
+++ +++
14
+ -
15
++ -
16
+ -
17
+ ++
18
+++ +++
19
++ +++
20
+ -
21
+ +
22
- -
23
+++ ++
(Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa) (Continúa)
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
24
++ -
25
+ -
26
++ +++
27
++ -
28
+ ++
29
++ ++
30
++ +++
31
- ++
32
++ -
33
+++ -
34
+ -
35
- -
36
++ -
37
+ -
38
- ++
39
++ -
40
+ -
41
+++ -
42
++ +++
43
++ +++
44
++ -
45
+ ++
46
+ +
47
+ -
48
- -
49
- +++
50
- +++
51
+ -
52
++ -
53
+ -
54
+ ++
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
55
++ -
56
++ -
57
- -
58
+ +
59
- +++
60
++ ++
61
+ -
62
++ ++
63
+ +
64
+ -
65
+ +
66
++ -
67
+++ +++
68
- +++
69
+ ++
70
+ -
71
+ -
72
++ -
73
+ ++
74
++ +++
75
++ -
76
++ -
77
++ +++
78
++ -
79
++ +++
80
+ -
81
+ -
82
++ -
83
++ -
84
+ +
85
++ -
86
++ -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
87
++ ++
88
+ ++
89
- ++
90
- +++
91
+ +
92
++ -
93
++ +++
94
+++ -
95
++ -
96
+ ++
97
- +++
98
+ ++
99
+ +
100
+ +
101
+ -
102
++ -
103
++ -
104
- +++
105
- +++
106
+ -
107
++ -
108
++ -
109
+++ -
110
++ -
111
++ ++
112
++ +++
113
+ +
114
+++ +++
115
+ ++
116
+ -
117
- ++
118
+ -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
119
++ ++
120
+ +
121
++ +++
122
++ -
123
+++ -
124
+ ++
125
++ ++
126
++ ++
127
++ ++
128
++ -
129
- +++
130
++ +++
131
- +++
132
++ ++
133
++ ++
134
++ +++
135
+ -
136
++ ++
137
- -
138
+ +
139
+ -
140
++ +++
141
+ ++
142
+ -
143
++ ++
144
+ +
145
++ -
146
+ -
147
+++ -
148
+ +
149
+ -
150
++ -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
151
++ -
152
++ -
153
++ ++
154
++ -
155
+ -
156
+++ -
157
+ +
158
+++ +++
159
++ -
160
+ -
161
+ -
162
++ +++
163
+++ +++
164
+ -
165
++ +++
166
++ -
167
++ -
168
++ ++
169
- ++
170
- +++
171
+ +
172
+ ++
173
+++ -
174
++ -
175
- -
176
++ ++
177
+ ++
178
++ ++
179
++ -
180
+ -
181
+ +
182
+ +
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
183
++ -
184
- +++
185
+ ++
186
+ +
187
+ -
188
+ +
189
+ -
190
++ +++
191
+ -
192
- -
193
++ -
194
+ -
195
- +++
196
++ -
197
++ -
198
+ -
199
+ -
200
+ -
201
++ -
202
+ -
203
++ -
204
++ ++
205
+ -
206
++
207
+ -
208
++ -
209
++ -
210
+ -
211
- +++
212
++ +++
213
+ +
214
+ -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
215
++ -
216
+ -
217
+++ -
218
+ +
219
- +++
220
+ -
221
++ ++
222
+ -
223
++ -
224
++ -
225
- +++
226
++ -
227
+ +
228
+ -
229
+ -
230
++ -
231
++ -
232
- -
233
++ +++
234
++ -
235
+ -
236
+ -
237
++ -
238
- +
239
++ -
240
+ -
241
+ ++
242
+++ -
243
+ -
244
++ -
245
++ -
246
+ +
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
247
+++ -
248
+ +
249
++ -
250
- +++
251
+ -
252
++ +++
253
+ +
254
++ -
255
++ ++
256
++ -
257
++ -
258
+ -
259
++ -
260
++ -
261
++ -
262
+ -
263
++ +++
264
- +++
265
+ ++
266
++ ++
267
- -
268
++ +
269
+ +
270
++ -
271
++ +++
272
+ +
273
++ -
274
+ -
275
++ ++
276
+ -
277
+ ++
278
+ -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
279
++ -
280
+ +
281
+++ -
282
+ ++
283
+ -
284
++ ++
285
++ -
286
- +++
287
++ -
288
++ -
289
+ ++
290
++ -
291
+ -
292
++ +++
293
+ +
294
++ -
295
++ -
296
+ +
297
- +++
298
++ ++
299
+ -
300
++ ++
301
++ -
302
++ ++
303
+ -
304
++ +++
305
- ++
306
+ -
307
++ +++
308
++ -
309
+ +
310
+ +
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
311
+ -
312
+++ +++
313
+ -
314
++ -
315
+++ +++
316
++ -
317
+ -
318
++ -
319
++ -
320
+ +
321
++ +++
322
+ -
323
++ -
324
+ -
325
+ -
326
++ ++
327
+ -
328
+ +
329
+ +
330
++ -
331
+ -
332
+ ++
333
++ -
334
+ -
335
+ -
336
+ +
337
- +++
338
+ ++
339
++ +++
340
++ -
341
+ -
342
+ -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
343
+ -
344
- -
345
+ -
346
- +++
347
+ +
348
+ -
349
++ -
350
+ +
351
+ +
352
+ -
353
+ -
354
+ -
355
+ +
356
- +++
357
++ -
358
++ -
359
++ +++
360
+ -
361
++ +++
362
++ +++
363
+ -
364
+ -
365
++ -
366
++ +++
367
+ -
368
- ++
369
- +++
370
++ +++
371
++ -
372
++ ++
373
++ -
374
++ -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
375
+ -
376
+ +
377
++ +++
378
++ -
379
+++ -
380
- +
381
++ -
382
+++ -
383
+ -
384
+ +
385
+ -
386
- -
387
++ -
388
+++ +++
389
+ -
390
++ +++
391
++ -
392
++ -
393
++ -
394
+++ -
395
+ +
396
- +++
397
+ +
398
+ -
399
+ +
400
+++ -
401
++ ++
402
++ -
403
+ -
404
+ ++
405
+ -
406
- +++
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
407
++ -
408
+ ++
409
- -
410
+ +
411
++ +++
412
++ ++
413
+ ' -
414
+ -
415
++ -
416
+ ++
417
+++ -
418
++ +++
419
++ ++
420
+ +
421
- +
422
++ -
423
+ -
424
++ -
425
+ -
426
+ ++
427
+ -
428
++ -
429
+ +
430
++ +++
431
++ -
432
+ -
433
+ +
434
++ -
435
++ -
436
++ -
437
+ +
438
+ ++
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
439
+ +
440
- -
441
+ ++
442
++ +++
443
+ +
444
++ -
445
++ +++
446
- +++
447
+ ++
448
++ -
449
++ -
450
+++ -
451
+ -
452
+ ++
453
++ -
454
++ -
455
+ -
456
++ -
457
+ +
458
+ +
459
+ ++
460
+ +
461
+ ++
462
++ -
463
+ -
464
+ -
465
++ -
466
+ +
467
++ +++
468
- +++
469
+ ++
470
- -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
471
++ -
472
+ -
473
- -
474
+ -
475
++ -
476
++ ++
477
+++ -
478
++ -
479
- -
480
+ -
481
+ -
482
+ -
483
+ +
484
++ -
485
- +++
486
++ -
487
++ -
488
+ ++
489
+ ++
490
++ -
491
+ -
492
+++ -
493
++ +++
494
+++ -
495
+ -
496
+ +
497
++ -
498
++ -
499
+++ +++
500
++ +++
501
+ +
502
- -
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
503
++ -
504
++ -
505
++ -
506
+ -
507
+ +
508
++ ++
509
+ -
510
++ +++
511
++ -
512
++ -
513
- +++
514
+ -
515
++ -
516
+ -
517
+ -
518
+++ -
519
++ -
520
+ -
521
++ +++
522
- +++
523
++ -
524
+ -
525
+ -
526
++ -
527
++ -
528
-
529
- +++
530
+ -
531
++ ++
532
+ -
533
+ -
534
+ +
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
535
++ -
536
+ -
537
+ +
538
+ -
539
++ -
540
++ ++
541
++ +++
542
+++ -
543
+ -
544
++ -
545
++ -
546
++ ++
547
+++ -
548
++ -
549
+++ -
550
++ -
551
++ -
552
++ -
553
++ -
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+ -
555
++ -
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- +++
557
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++ -
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+ +
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++ -
561
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562
- +++
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++ -
564
+ -
565
+ +
566
+ +
Compuesto Nº
Ensayo Enzimático 1 Ensayo Enzimático 2
567
+ ++
568
+ +
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+++ -
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584
+ -
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++ -
586
+ +
587
+ ++
588
+ +
B. Ensayos de Células en el VHC
Se propagaron células Huh-7 en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, JRH Biosciences, Lenexa, Kansas) complementado con FBS (suero bovino fetal) termoinactivado al 10%, L-glutamina 2 mM y aminoácidos no 5 esenciales (JRH). Las células se transfectaron con un ARN replicón del VHC trascrito in vitro idéntico al replicón I377neo/NS3-3’/wt como describen Lohmann y col. (1999). Se seleccionaron clones de células estables y se mantuvieron en presencia G418 250 Pg/ml de G418 (Invitrogen, Carlsbad, California). Uno de los clones, 24-2, se usó en los siguientes ensayos de replicón del VHC. Las células de replicón se propagaron en DMEM complementado con FBS al 10%, L-glutamina 2 mM, aminoácidos no esenciales y G418 250 Pg/ml. Las células se
10 dividieron dos veces por semana en medio reciente hasta alcanzar la confluencia. Había aproximadamente 200-300 copias de ARN del VHC por célula replicón.
El ARN del replicón del VHC de las células se midió usando el kit Quantigene Discover XL (Panomics Inc., Fremont California) según las instrucciones del fabricante. En resumen, las células de replicón tratadas con compuesto se lisaron y se inmovilizaron sobre placas de captura usando oligonucleótidos específicos del VHC durante una noche y
15 las cantidades relativas del ARN capturado se midieron usando conjuntos de sondas de oligonucleótidos según las instrucciones del fabricante.
1.
Ensayo de 2 días de la CI50 del replicón del VHC
El día antes del ensayo, se sembraron en placa 104 células de replicón por pocillo de una placa de 96 pocillos y se dejó que se unieran y se cultivaran durante una noche en DMEM (Invitrogen, Carlsbad, California) complementado con FBS termoinactivado al 10% (JRH Biosciences, Lenexa, Kansas), L-glutamina 2 mM (Invitrogen), aminoácidos no esenciales (Invitrogen) y G418 250 Pg/ml (Invitrogen). Los compuestos se diluyeron en serie en DMEM más FBS al 2% y DMSO al 0,5% (Sigma Chemical CO., St. Louis, MO) sin G418. El ARN del replicón del VHC de las células se midió usando el kit Quantigene Discover XL (Panomics Inc., Fremont California) según las instrucciones del fabricante. En resumen, las células de replicón tratadas con compuesto se lisaron y se inmovilizaron sobre placas de captura usando oligonucleótidos específicos del VHC durante una noche y las cantidades relativas del ARN capturado se midieron usando conjuntos de sondas de oligonucleótidos según las instrucciones del fabricante. Salvo que se indique de otra manera, cada punto de dato representa el promedio de tres replicados. El valor CI50 es la concentración del compuesto a la cual el nivel de ARN del replicón del VHC se reduce al 50% en comparación con los controles de células de replicón no tratadas. Para controlar el efecto de los compuestos sobre la proliferación celular o viabilidad celular, se trataron células de replicón con compuestos diluidos en serie durante 48 h, después de lo cual se determinó viabilidad celular usando un ensayo CellTiter Glo (Promega, Madison, Wisconsin). Cada CC50 derivó de tres replicados y es la concentración del compuesto a la cual el número de células viables se reduce al 50% en comparación con los controles no tratados. Los valores de CI50 y CC50 se determinaron usando un ajuste de curva de 4 parámetros en el programa SofiMax Pro (Molecular Devices, Sunnyvale, California).
2.
Ensayo de 5 días de la CI99 del replicón del VHC
El día antes del ensayo, se sembraron en placa células de replicón del VHC a una baja densidad de 2500 células por pocillo en una placa de 96 pocillos de manera que las células no podían alcanzar la confluencia durante 5 días en el cultivo. Los compuestos se diluyeron en serie en DMEM que contenía FBS al 10% y DMSO al 0,5% en ausencia de G418. Se añadió medio reciente y los compuestos a las células los días 1 y 3. Después las células se trataron con compuestos antivirales durante 5 días, el ARN del replicón del VHC de las células usando el kit Quantigene Discover XL (Panomics Inc., Fremont California) según las instrucciones del fabricante. En resumen, las células de replicón tratadas con compuesto se lisaron y se inmovilizaron sobre placas de captura usando oligonucleótidos específicos del VHC durante una noche y las cantidades relativas del ARN del replicón se midieron usando conjuntos de sondas de oligonucleótidos (Panomics) según las instrucciones del fabricante. Cada punto de dato representa el promedio de dos replicados. El valor CI99 es la concentración del compuesto a la cual el nivel de ARN del replicón del VHC en las células se reduce en 2 logaritmos en comparación con los controles de células no tratadas. Para controlar el efecto de los compuestos sobre la proliferación celular o viabilidad celular, se trataron células de replicón con compuestos diluidos en serie durante 5 días, después de lo cual se determinó la viabilidad usando un ensayo CellTiter Glo (Promega, Madison, Wisconsin). Cada CC50 derivó de dos replicados y es la concentración del compuesto a la cual el número de células viables se reduce al 50% en comparación con los controles no tratados. Los valores de CI99 y CC50 se determinaron mediante un procedimiento de ajuste de curva de 4 parámetros usando el programa informático Prism (programa informático GraphPad Inc., San Diego, California) y el programa Excel (Microsoft Corporation, Redmond, Washington).
Usando los ensayos anteriores, se determina que los compuestos de la presente invención son inhibidores útiles de serina proteasa.

Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en
  2. 2.
    Un procedimiento para inhibir in vitro la actividad de la proteasa NS3 del VHC que comprende la etapa de poner en contacto dicha serina proteasa con un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
  3. 3. El uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para tratar a un 5 paciente de una infección causada por el VHC.
  4. 4. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, que adicionalmente comprende administrar a dicho paciente un agente adicional seleccionado de un agente inmunomodulador; un agente antiviral; un segundo inhibidor de proteasa del VHC; un inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC; o combinaciones de los mismos; administrándose dicho agente adicional a dicho paciente en la misma forma de dosificación que el inhibidor de serina proteasa o en una
    10 forma de dosificación separada.
  5. 5.
    El uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el dicho agente inmunomodulador es D-, E- o J-interferón o timosina; dicho agente antiviral es ribavirina o amantadina; o dicho inhibidor de otra diana en el ciclo de vida del VHC es un inhibidor de helicasa, de polimerasa o de metaloproteasa del VHC.
  6. 6.
    Un procedimiento para eliminar o reducir in vitro, de una muestra biológica o de instrumental médico o de
    15 laboratorio, una contaminación por el VHC que comprende la etapa de poner en contacto dicha muestra biológica o dicho instrumental médico o de laboratorio, con un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
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