CN101316852A - 丝氨酸蛋白酶的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)各化合物或其药物可接受的盐或混合物，它们能抑制丝氨酸蛋白酶活性，特别是丙型肝炎病毒NS3－NS4A蛋白酶的活性。

Description

丝氨酸蛋白酶的抑制剂
交叉引用
[0001]本申请要求2005年8月26日提交的美国临时申请系列号60/711,530的优先权，该临时申请的全部内容通过引用结合到本文中。
发明领域
[0002]本发明涉及抑制丝氨酸蛋白酶活性、具体的说丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶的活性的化合物，这些化合物本身是通过干扰丙型肝炎病毒的生活周期来起作用，故也可用作抗病毒药物。本发明还涉及包含这些化合物的组合物，所述组合物可作先体外后体内(ex vivo)用途，或者给予遭HCV(丙型肝炎病毒)感染的患者。本发明也涉及通过给予包含本发明化合物的组合物来治疗患者的HCV感染的方法。
发明背景
[0003]丙型肝炎病毒的感染是一个急迫的人类医疗问题。HCV被认为是大多数非甲型肝炎、非乙型肝炎病例的病原体，估计全球人类血清阳性率达3％[A.Alberti等，“Natural History of Hepatitis C(丙型肝炎的自然史)，”J.Hepatology，31.，(Suppl.1)，第17-24页(1999)]。单美国就有近四百万人可能被感染[MJ.Alter等，“The Epidemiology ofViral Hepatitis in the United States(美国病毒性肝炎的流行病学)”，Gastroenterol.Clin.North Am.，23，第437-455页(1994)；M.J.Alter“Hepatitis C Virus Infection in the United States(美国的丙型肝炎病毒感染情况)，”J.Hepatology，31.，(Suppl.1)，第88-91页(1999)]。
[0004]初次HCV暴露后只有约20％的受感染人发展临床急性肝炎，而其它人显得自发消除感染。但是，在几乎70％的病例中，病毒会建立持续达几十年的慢性感染[S.Iwarson，“The Natural Course ofChronic Hepatitis(慢性肝炎的自然进程)，”FEMS MicrobiologyReviews，14，第201-204页(1994)；D.Lavanchy，“Global Surveillanceand Control of Hepatitis C(丙型肝炎的全球监测和防控)，”J.ViralHepatitis，6，第35-47页(1999)]。这通常导致复发性和渐进恶化性肝脏炎症，后者又导致更为严重的疾病状态如肝硬化和肝细胞癌[M.C.Kew，“Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma(丙型肝炎和肝细胞癌)”，FEMS Microbiology Reviews，14，第21l-220页(1994)；I.Saito等，“Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development ofHepatocellular Carcinoma(丙型肝炎病毒感染与肝细胞癌的发展有关联)，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，第6547-6549页(1990)]。遗憾的是，没有广泛有效的治疗法来削弱慢性HCV的进展。
[0005]HCV基因组编码3010-3033个氨基酸的聚蛋白[Q.L.Choo等，“Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus(丙型肝炎病毒的遗传组织和多样化).”Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88，第2451-2455页(1991)；N.Kato等，“Molecular Cloning of the HumanHepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A，Non-BHepatitis(从日本非甲型、非乙型肝炎患者中分子克隆出人丙型肝炎病毒基因组)，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，第9524-9528页(1990)；A.Takamizawa等，“Structure and Organization of the Hepatitis C VirusGenome Isolated From Human Carriers(从人载体分离的丙型肝炎病毒基因组的结构和组织)，”J.Virol.，65，第1105-1113页(1991)]。HCV非结构(nonstructural，NS)蛋白质据推测能给病毒复制提供必要的催化机制。NS蛋白质通过聚蛋白的蛋白水解切割衍生而来[R.Bartenschlager等，“Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes aSerine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5Junctions(丙型肝炎病毒的非结构蛋白质3编码NS3/4和NS4/5接点处的切割所需的丝氨酸类型蛋白酶)，”J.Virol，67，第3835-3844页(1993)；A.Grakoui等，“Characterization of the Hepatitis CVirus-Encoded Serine Proteinase：Determination of Proteinase-DependentPolyprotein Cleavage Sites(丙型肝炎病毒编码的丝氨酸蛋白酶的表征：蛋白酶依赖性聚蛋白切割位点的测定)，”J.Virol.，67，第2832-2843页(1993)；A.Grakoui等，“Expression and Identification of Hepatitis C VirusPolyprotein Cleavage Products(丙型肝炎病毒聚蛋白切割产物的表达和鉴定)，”J.Virol.，67，第1385-1395页(1993)；L.Tomei等，“NS3 is aserine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein(NS3是丙型肝炎病毒聚蛋白的加工所需的丝氨酸蛋白酶)”，J.Virol.，67，第4017-4026页(1993)]。
[0006]HCV NS蛋白质3(NS3)含有能帮助加工大多数病毒酶的丝氨酸蛋白酶活性，因此被认为对病毒复制和传染性来说是必需的。已知黄热病病毒NS3蛋白酶的突变会降低病毒传染性[Chambers，T.J.等，“Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible forSite-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein(关于黄热病病毒的非结构蛋白质NS3的N末端结构域是负责病毒聚蛋白中的位点特异性切割的丝氨酸蛋白酶的证据)”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，第8898-8902页(1990)]。已证实NS3的前181个氨基酸(病毒聚蛋白的残基1027-1207)含有能加工HCV聚蛋白所有四个下游位点的NS3丝氨酸蛋白酶结构域(C.Lin等，“Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase：Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics(丙型肝炎病毒NS3丝氨酸蛋白酶：反式切割需要和加工动力学)”，J.Virol.，68，pp，8147-8157(1994))。
[0007]HCV NS3丝氨酸蛋白酶及其相关辅因子NS4A能帮助加工所有的病毒酶，因此被认为对病毒复制来说是必需的。这个加工显得类似于同样参与病毒酶加工的人免疫缺陷病毒天冬氨酰蛋白酶所执行的加工。能抑制病毒蛋白加工的HIV蛋白酶抑制剂是人体中的强效抗病毒剂，这表明中断病毒生活周期的这个阶段可得到治疗活性剂。因此，HCV NS3丝氨酸蛋白酶也是吸引人的药物发现靶标。
[0008]目前还没有任何令人满意的抗HCV药物或治疗法。直到最近，HCV疾病唯一确立的疗法是干扰素治疗法。但是，干扰素具有明显的副作用[M.A.Walker等，“Hepatitis C Virus：An Overview ofCurrent Approaches and Progress(丙型肝炎病毒：当前方法和进展的评述)，”DDT，4，第518-29页(1999)；D.Moradpour等，“Current andEvolving Therapies for Hepatitis C(当前的和发展中的丙型肝炎疗法)，”Eur.J.Gastroenterol.Hepatol.，11，第1199-1202页(1999)；H.L.A.Janssen等，“Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for ChronicViral Hepatitis(与慢性病毒性肝炎的α-干扰素治疗有关的自杀)，”J.Hepatol.，21，第241-243页(1994)；P.F.Renault等，“Side Effects ofAlpha Interferon(α-干扰素的副作用)，”Seminars in Liver Disease，9，第273-277页(1989)]，且只在一部分(～25％)病例中引起长期好转[O.Weiland，“Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection(慢性丙型肝炎病毒感染的干扰素疗法)”，FEMS Microbiol.Rev.，14，第279-288页(1994)]。最近引入的PEG化形式的干扰素(PEG-INTRON
Figure A20068003905900481
和PEGASYS)以及利巴韦林和PEG化干扰素(REBETROL
Figure A20068003905900483
)组合疗法，只导致好转率稍有提高，副作用部分减低。此外，有效抗HCV疫苗的前景仍不确定。
[0009]因此，需要更为有效的抗HCV疗法。这种抑制剂作为蛋白酶抑制剂、具体的说作为丝氨酸蛋白酶抑制剂、更具体的说作为HCV NS3蛋白酶抑制剂，会具有治疗潜力。明确的说，这种化合物可用作抗病毒药物，特别是用作抗HCV药物。
发明概述
[0010]本发明涉及式I化合物：
Figure A20068003905900491
或其药物可接受盐，其中，
每个A为-(CX1X2)a-；
每个B为-(CX1X2)b-；
每个X1独立为氢、卤素、氨基、硫烷基、任选被取代的(C1-4)-脂族基、任选被取代的芳基或-O-X1A；
每个X2独立为氢、卤素、氨基、硫烷基、任选被取代的(C1-4)-脂族基、任选被取代的芳基或-O-X1B；
X1A和X1B各自独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
或者，X1和X2一起形成氧代基；
每个R1为-ZAR4，其中每个ZA独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZA碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRA-、-C(O)NRANRA-、-C(O)O-、-NRAC(O)O-、-O-、-NRAC(O)NRA-、-NRANRA-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRA-、-SO2NRA-或-NRASO2NRA-置换，条件是-NRANRA-、-NRAC(O)NRA-或-NRASO2NRA-不直接结合式I的氮环原子；
每个R4独立为RA、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RA独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R2为-ZBR5，其中每个ZB独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZB碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRB-、-C(O)NRBNRB-、-C(O)O-、-NRBC(O)O-、-NRBC(O)NRB-、-NRBNRB-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRB-、-SO2NRB-或-NRBSO2NRB-置换，条件是SO、SO2或-SO2NRB-不直接结合式I的羰基；
每个R5独立为RB、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RB独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
或者R1和R2与它们所连接的原子一起形成任选被取代的杂环脂族环；
每个R3为任选被取代的脂族基、氨基、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、磺酰胺基(sulfonamide)、硫酰胺基(sulfamide)、磺基、-O-R3A、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R3A独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个Y和Y′独立为-ZDR7，其中每个ZD独立为键或任选被取代的直链或支链C1-6脂族链，其中最多两个ZD碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRD-、-C(O)NRDNRD-、-C(O)O-、-NRDC(O)O-、-O-、-NRDC(O)NRD-、-NRDNRD-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRD-、-SO2NRD-、-NRDSO2-或-NRDSO2NRD-取代，或者Y和Y′一起形成＝O或＝S；
每个R7独立为RD、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RD独立为氢或任选被取代的芳基；
a和b各独立为0、1、2或3；条件是a和b之和为2或3。
[0011]在一些方面，本发明涉及包含式I化合物或其药物可接受的盐以及可接受的载体、佐剂或介质的药物组合物，其中所述化合物或其盐的数量能有效抑制丝氨酸蛋白酶。所述组合物可包含选自以下的另外的物质：免疫调节剂、抗病毒剂、HCV蛋白酶的第二种抑制剂、HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂和细胞色素P-450抑制剂或者它们的组合。免疫调节剂为干扰素-α、-β或-γ或者胸腺素；所述抗病毒剂为利巴韦林、金刚烷胺或替比夫定；或者所述HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂为HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。细胞色素P-450抑制剂可以是利托那韦。
[0012]在其它方面，本发明提供抑制丝氨酸蛋白酶的活性的方法，所述方法包括使所述丝氨酸蛋白酶与式I化合物接触的步骤。丝氨酸蛋白酶可以是HCV NS3蛋白酶。本发明方法还包括通过给予式I化合物来治疗患者的HCV感染。本发明方法还包括给予所述患者选自以下的另外的物质：免疫调节剂、抗病毒剂、HCV蛋白酶的第二种抑制剂、HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂或者它们的组合；其中所述另外的物质在与丝氨酸蛋白酶抑制剂相同的剂型中或者作为单独的剂型给予所述患者。免疫调节剂为干扰素-α、-β或-γ或者胸腺素；所述抗病毒剂为利巴韦林或金刚烷胺；或者所述HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂为HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。
[0013]在还其它方面，本发明提供消除或减少生物样品或者医疗或实验室仪器的HCV污染的方法，所述方法包括使所述生物样品或者医疗或实验室仪器与式I化合物接触的步骤。所述样品或设备可选自血液、其它体液、生物组织、手术器具、手术服装、实验室仪器、实验室服装、血液或其它体液收集器械、血液或其它体液储存材料。
[0014]本文所述的本发明化合物还显示有利的PK特性和/或提高的功效。
[0015]本发明还涉及包含上述化合物的组合物及其用途；制备式I化合物的方法和测定化合物针对丝氨酸蛋白酶的活性的方法。这种组合物可用来预处理待植入患者体内的装置，用来处理生物样品和用来直接给予患者。在每种情况下，都是要用组合物来减轻HCV感染的风险或严重程度。
定义
[0016]出于本发明的目的，各化学元素按Periodic Table ofElements(元素周期表)，CAS version，Handbook of Chemistry andPhysics(化学和物理手册)，75th版来确定。另外，有机化学的一般原则在以下文献中有描述：“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，UniversityScience Books，Sausalito：1999和“March′s Advanced OrganicChemistry”，第5版，Smith，M.B.和March(编辑)，J.，John Wiley & Sons，New York：2001，这两个文献的全部内容通过引用结合到本文中。
[0017]如本文所描述，本发明化合物可任选被一个或多个取代基取代，这在上文作了一般说明，在本发明的具体类别(class)、亚类(subclass)和种类(species)中有例证。
[0018]本文所用的术语“脂族基”涵括术语烷基、烯基、炔基，它们每一个任选如下所述进行取代。
[0019]本文所用的“烷基”基团指含有1-8(例如1-6或1-4)个碳原子的饱和脂族烃基。烷基基团可以是直链或支链。烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正庚基或2-乙基己基。烷基基团可以(即任选)被一个或多个取代基取代，如卤素、磷基(phospho)、环脂族基[例如环烷基或环烯基]、杂环脂族基[例如杂环烷基或杂环烯基]、芳基、杂芳基、烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、酰基[例如(脂族基)羰基、(环脂族基)羰基或(杂环脂族基)羰基]、硝基、氰基、酰胺基[例如(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基烷基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳基氨基羰基或杂芳基氨基羰基]、氨基[例如脂族基氨基、环脂族基氨基或杂环脂族基氨基]、磺酰基[例如脂族基-SO2-]、亚磺酰基、硫烷基、硫氧基(sulfoxy)、脲、硫脲、氨磺酰基(sulfamoyl)、硫酰胺基、氧代基、羧基、氨基甲酰基、环脂族基氧基、杂环脂族基氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、芳烷基氧基、杂芳基烷氧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基或羟基。取代的烷基的一些实例包括但不限于羧基烷基(如HOOC-烷基、烷氧基羰基烷基和烷基羰基氧基烷基)、氰基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰基烷基、芳烷基、(烷氧基芳基)烷基、(磺酰基氨基)烷基(如(烷基-SO2-氨基)烷基)、氨基烷基、酰胺基烷基、(环脂族基)烷基或卤代烷基。
[0020]本文所用的“烯基”基团指含有2-8(例如2-6或2-4)个碳原子和至少一个双键的脂族烃基。和烷基基团一样，烯基基团可以是直链或支链。烯基基团的实例包括但不限于烯丙基、异戊二烯基、2-丁烯基和2-己烯基。烯基基团可任选被一个或多个取代基取代，如卤素、磷基、环脂族基[例如环烷基或环烯基]、杂环脂族基[例如杂环烷基或杂环烯基]、芳基、杂芳基、烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、酰基[例如(脂族基)羰基、(环脂族基)羰基或(杂环脂族基)羰基]、硝基、氰基、酰胺基[例如(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基烷基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳基氨基羰基或杂芳基氨基羰基]、氨基[例如脂族基氨基、环脂族基氨基、杂环脂族基氨基或脂族基磺酰基氨基]、磺酰基[例如烷基-SO2-、环脂族基-SO2-或芳基-SO2-]、亚磺酰基、硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、硫酰胺基、氧代基、羧基、氨基甲酰基、环脂族基氧基、杂环脂族基氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、芳烷基氧基、杂芳烷氧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基或羟基。被取代的烯基的一些实例包括但不限于氰基烯基、烷氧基烯基、酰基烯基、羟基烯基、芳烯基、(烷氧基芳基)烯基、(磺酰基氨基)烯基(如(烷基-SO2-氨基)烯基)、氨基烯基、酰胺基烯基、(环脂族基)烯基或卤代烯基。
[0021]本文所用的“炔基”基团指含有2-8(例如2-6或2-4)个碳原子和具有至少一个三键的脂族烃基。炔基基团可以是直链或支链。炔基基团的实例包括但不限于炔丙基和丁炔基。炔基基团可任选被一个或多个取代基取代，如芳酰基、杂芳酰基、烷氧基、环烷基氧基、杂环烷基氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、芳烷基氧基、硝基、羧基、氰基、卤素、羟基、磺基、巯基、硫烷基[例如脂族基硫烷基或环脂族基硫烷基]、亚磺酰基[例如脂族基亚磺酰基或环脂族基亚磺酰基]、磺酰基[例如脂族基-SO2-、脂族基氨基-SO2-或环脂族基-SO2-]、酰胺基[例如氨基羰基、烷基氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、环烷基羰基氨基、芳基氨基羰基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、杂芳基羰基氨基或杂芳基氨基羰基]、脲、硫脲、氨磺酰基、硫酰胺基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、环脂族基、杂环脂族基、芳基、杂芳基、酰基[例如(环脂族基)羰基或(杂环脂族基)羰基]、氨基[例如脂族基氨基]、硫氧基、氧代基、羧基、氨基甲酰基、(环脂族基)氧基、(杂环脂族基)氧基或(杂芳基)烷氧基。
[0022]本文所用的“酰胺基”涵括“氨基羰基”和“羰基氨基”。这些术语当单独使用或与另一基团结合使用时，当在末端使用时指-N(RX)-C(O)-RY或-C(O)-N(RX)2，当在内部使用时指-C(O)-N(RX)-或-N(RX)-C(O)-，其中RX和RY在下文定义。酰胺基基团的实例包括烷基酰胺基(如烷基羰基氨基或烷基氨基羰基)、(杂环脂族基)酰胺基、(杂芳烷基)酰胺基、(杂芳基)酰胺基、(杂环烷基)烷基酰胺基、芳基酰胺基、芳烷基酰胺基、(环烷基)烷基酰胺基或环烷基酰胺基。
[0023]本文所用的“氨基”基团指-NRXRY，其中每个RX和RY独立为氢、脂族基、环脂族基、(环脂族基)脂族基、芳基、芳脂族基、杂环脂族基、(杂环脂族基)脂族基、杂芳基、羧基、硫烷基、亚磺酰基、磺酰基、(脂族基)羰基、(环脂族基)羰基、((环脂族基)脂族基)羰基、芳基羰基、(芳脂族基)羰基、(杂环脂族基)羰基、((杂环脂族基)脂族基)羰基、(杂芳基)羰基或(杂芳脂族基)羰基，它们每一个在本文中有定义，且任选被取代。氨基基团的实例包括烷基氨基、二烷基氨基或芳基氨基。当术语“氨基”不为末端基团(例如烷基羰基氨基)时，它用-NRX-表示。RX的含义同上文的定义。
[0024]本文所用的“芳基”单独使用，或者作为更大部分(moiety)的一部分使用，如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中，是指单环(例如苯基)、双环(例如茚基、萘基(naphthalenyl)、四氢萘基(tetrahydronaphthyl)、四氢茚基)和三环(例如芴基、四氢芴基或四氢蒽基、蒽基)环状体系，其中单环环状体系为芳族或者双环或三环环状体系中的至少一个环为芳族。双环基团和三环基团包括苯并稠合的2-3元碳环。例如，苯并稠合基团包括与两个或多个C4-8碳环部分稠合的苯基。芳基任选被一个或多个取代基取代，包括脂族基[例如烷基、烯基或炔基]；环脂族基；(环脂族基)脂族基；杂环脂族基；(杂环脂族基)脂族基；芳基；杂芳基；烷氧基；(环脂族基)氧基；(杂环脂族基)氧基；芳基氧基；杂芳基氧基；(芳脂族基)氧基；(杂芳脂族基)氧基；芳酰基；杂芳酰基；氨基；氧代基(在苯并稠合的双环或三环芳基的非芳族碳环上)；硝基；羧基；酰胺基；酰基[例如脂族基羰基；(环脂族基)羰基；((环脂族基)脂族基)羰基；(芳脂族基)羰基；(杂环脂族基)羰基；((杂环脂族基)脂族基)羰基；或(杂芳脂族基)羰基]；磺酰基[例如脂族基-SO2-或氨基-SO2-]；亚磺酰基[例如脂族基-S(O)-或环脂族基-S(O)-]；硫烷基[例如脂族基-S-]；氰基；卤素；羟基；巯基；硫氧基；脲；硫脲；氨磺酰基；硫酰胺基或氨基甲酰基。或者，芳基可以不被取代。
[0025]取代的芳基的非限制性实例包括卤代芳基[例如一、二(如p，m-二卤代芳基)和(三卤代)芳基]；(羧基)芳基[例如(烷氧基羰基)芳基、((芳烷基)羰基氧基)芳基和(烷氧基羰基)芳基]；(酰胺基)芳基[例如(氨基羰基)芳基、(((烷基氨基)烷基)氨基羰基)芳基、(烷基羰基)氨基芳基、(芳基氨基羰基)芳基和(((杂芳基)氨基)羰基)芳基]；氨基芳基[例如((烷基磺酰基)氨基)芳基或((二烷基)氨基)芳基]；(氰基烷基)芳基；(烷氧基)芳基；(氨磺酰基)芳基[例如(氨基磺酰基)芳基]；(烷基磺酰基)芳基；(氰基)芳基；(羟基烷基)芳基；((烷氧基)烷基)芳基；(羟基)芳基、((羧基)烷基)芳基；(((二烷基)氨基)烷基)芳基；(硝基烷基)芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)芳基；((杂环脂族基)羰基)芳基；((烷基磺酰基)烷基)芳基；(氰基烷基)芳基；(羟基烷基)芳基；(烷基羰基)芳基；烷基芳基；(三卤代烷基)芳基；p-氨基-m-烷氧基羰基芳基；p-氨基-m-氰基芳基；p-卤代-m-氨基芳基；或(m-(杂环脂族基)-o-(烷基))芳基。
[0026]本文所用的“芳脂族基”如“芳烷基”基团指被芳基基团取代的脂族基团(例如(C1-4)-烷基基团)。“脂族基”、“烷基”和“芳基”在本文作了定义。芳脂族基如芳烷基基团一个实例为苄基。
[0027]本文所用的“芳烷基”基团指被芳基基团取代的烷基基团(例如(C1-4)-烷基基团)。“烷基”和“芳基”在上文已作定义。芳烷基基团的一个实例为苄基。芳烷基任选被一个或多个取代基取代，如脂族基[例如烷基、烯基或炔基，包括羧基烷基、羟基烷基或卤代烷基如三氟甲基]、环脂族基[例如环烷基或环烯基]、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷基氧基、杂环烷基氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、芳烷基氧基、杂芳烷基氧基、芳酰基、杂芳酰基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、酰胺基[例如氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基或杂芳烷基羰基氨基]、氰基、卤素、羟基、酰基、巯基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、硫酰胺基、氧代基或氨基甲酰基。
[0028]本文所用的“双环环状体系”包括形成两个环的8-12(例如9、10或11)元结构，其中该两个环具有至少一个共有原子(例如2个共有原子)。双环环状体系包括二环脂族基(例如二环烷基或二环烯基)、二环杂脂族基、双环芳基和双环杂芳基。
[0029]本文所用的“环脂族基”基团涵括“环烷基”基团和“环烯基”基团，它们中每一个任选如下所述进行取代。本文所用的“环烷基”基团指3-10(例如5-10)个碳原子的饱和碳环单环或双环(稠环或桥环)。环烷基基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、降冰片基、cubyl、八氢茚基、十氢萘基、二环[3.2.1]辛基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.3.1]壬基、二环[3.3.2.]癸基、二环[2.2.2]辛基、金刚烷基、氮杂环烷基或((氨基羰基)环烷基)环烷基。本文所用的“环烯基”基团指3-10(例如4-8)个碳原子的、具有一个或多个双键的非芳族碳环。环烯基基团的实例包括环戊烯基、1，4-环己二烯基、环庚烯基、环辛烯基、六氢茚基、八氢萘基、环己烯基、环戊烯基、二环[2.2.2]辛烯基或二环[3.3.1]壬烯基。环烷基或环烯基基团可任选被一个或多个取代基取代，如磷基(phosphor)、脂族基[例如烷基、烯基或炔基]、环脂族基、(环脂族基)脂族基、杂环脂族基、(杂环脂族基)脂族基、芳基、杂芳基、烷氧基、(环脂族基)氧基、(杂环脂族基)氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、(芳脂族基)氧基、(杂芳脂族基)氧基，芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰胺基[例如(脂族基)羰基氨基、(环脂族基)羰基氨基、((环脂族基)脂族基)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳脂族基)羰基氨基、(杂环脂族基)羰基氨基、((杂环脂族基)脂族基)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基或(杂芳脂族基)羰基氨基]、硝基、羧基[例如HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰基氧基]、酰基[例如(环脂族基)羰基、((环脂族基)脂族基)羰基、(芳脂族基)羰基、(杂环脂族基)羰基、((杂环脂族基)脂族基)羰基或(杂芳脂族基)羰基]、氰基、卤素、羟基、巯基、磺酰基[例如烷基-SO2-和芳基-SO2-]、亚磺酰基[例如烷基-S(O)-]、硫烷基[例如烷基-S-]、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、硫酰胺基、氧代基或氨基甲酰基。
[0030]本文所用的“环状部分”包括环脂族基、杂环脂族基、芳基或杂芳基，它们中每一个前文已作定义。
[0031]本文所用的术语“杂环脂族基”涵括杂环烷基基团和杂环烯基基团，它们中每一个任选如下所述进行取代。
[0032]本文所用的“杂环烷基”基团指3-10元单环或双环(稠环或桥环)(例如5-至10-元单环或双环)饱和环结构，其中一个或多个环原子为杂原子(例如N、O、S或它们的组合)。杂环烷基基团的实例包括哌啶基、哌嗪基(piperazyl)、四氢吡喃基、四氢呋喃基、1，4-二氧戊环基、1，4-二噻烷基、1，3-二氧戊环基、噁唑烷基(oxazolidyl)、异噁唑烷基(isoxazolidyl)、吗啉基、硫代吗啉基(thiomorpholyl)、八氢苯并呋喃基、八氢色烯基、八氢硫代色烯基、八氢吲哚基、八氢吡啶基(pyrindinyl)、十氢喹啉基、八氢苯并[b]噻吩基(thiopheneyl)、2-氧杂-二环[2.2.2]辛基、1-氮杂-二环[2.2.2]辛基、3-氮杂-二环[3.2.1]辛基和2，6-二氧杂-三环[3.3.1.03，7]壬基。单环杂环烷基基团可与苯基部分如四氢异喹啉稠合。本文所用的“杂环烯基”基团指具有一个或多个双键的单环或双环(例如5-至10-元单环或双环)非芳族环结构，其中一个或多个环原子为杂原子(例如N、O或S)。单环和二环杂脂族基按标准的化学命名法编号。
[0033]杂环烷基或杂环烯基基团可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基如磷基(phosphor)、脂族基[例如烷基、烯基或炔基]、环脂族基、(环脂族基)脂族基、杂环脂族基、(杂环脂族基)脂族基、芳基、杂芳基、烷氧基、(环脂族基)氧基、(杂环脂族基)氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、(芳脂族基)氧基、(杂芳脂族基)氧基、芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰胺基[例如(脂族基)羰基氨基、(环脂族基)羰基氨基、((环脂族基)脂族基)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳脂族基)羰基氨基、(杂环脂族基)羰基氨基、((杂环脂族基)脂族基)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基或(杂芳脂族基)羰基氨基]、硝基、羧基[例如HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰基氧基]、酰基[例如(环脂族基)羰基、((环脂族基)脂族基)羰基、(芳脂族基)羰基、(杂环脂族基)羰基、((杂环脂族基)脂族基)羰基，或(杂芳脂族基)羰基]、硝基、氰基、卤素、羟基、巯基、磺酰基[例如烷基磺酰基或芳基磺酰基]、亚磺酰基[例如烷基亚磺酰基]、硫烷基[例如烷基硫烷基]、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、硫酰胺基、氧代基或氨基甲酰基。
[0034]本文所用的“杂芳基”基团指具有4-15个环原子的单环、双环或三环环状体系，其中一个或多个环原子为杂原子(例如N、O、S或它们的组合)，且其中单环环状体系为芳族或者双环或三环环状体系中的至少一个环为芳族。杂芳基基团包括具有2-3个环的苯并稠合环状体系。例如，苯并稠合的基团包括与一个或两个4-8元杂环脂族部分的苯并稠合基团(例如吲嗪基(indolizyl)、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基或异喹啉基)。杂芳基的一些实例是氮杂环丁烷基、吡啶基、1H-吲唑基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、异喹啉基、苯并噻唑基、呫吨、噻吨、吩噻嗪、二氢吲哚、苯并[1，3]二氧杂环戊烯、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基(puryl)、噌啉基、喹啉基、喹唑啉基(quinazolyl)、噌啉基、酞嗪基(phthalazyl)、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、4H-喹嗪基(quinolizyl)、苯并-1，2，5-噻二唑基或1，8-萘啶基(naphthyridyl)。
[0035]单环杂芳基包括但不限于呋喃基、噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、1，3，4-噻二唑基、2H-吡喃基、4-H-吡喃基(4-H-pranyl)、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡唑基、吡嗪基或1，3，5-三唑基。单环杂芳基按标准的化学命名法编号。
[0036]双环杂芳基包括但不限于吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基、异喹啉基、吲嗪基、异吲哚基、吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基(benzimidazyl)、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-萘啶基或蝶啶基。双环杂芳基按标准的化学命名法编号。
[0037]杂芳基任选被一个或多个取代基取代，所述取代基如脂族基[例如烷基、烯基或炔基]；环脂族基；(环脂族基)脂族基；杂环脂族基；(杂环脂族基)脂族基；芳基；杂芳基；烷氧基；(环脂族基)氧基；(杂环脂族基)氧基；芳基氧基；杂芳基氧基；(芳脂族基)氧基；(杂芳脂族基)氧基；芳酰基；杂芳酰基；氨基；氧代基(在双环或三环杂芳基的非芳族碳环或杂环上)；羧基；酰胺基；酰基[例如脂族基羰基；(环脂族基)羰基；((环脂族基)脂族基)羰基；(芳脂族基)羰基；(杂环脂族基)羰基；((杂环脂族基)脂族基)羰基；或(杂芳脂族基)羰基]；磺酰基[例如脂族基磺酰基或氨基磺酰基]；亚磺酰基[例如脂族基亚磺酰基]；硫烷基[例如脂族基硫烷基]；硝基；氰基；卤素；羟基；巯基；硫氧基；脲；硫脲；氨磺酰基；硫酰胺基或氨基甲酰基。或者，杂芳基可以未被取代
[0038]取代的杂芳基的非限制性实例包括(卤代)杂芳基[例如一和二-(卤代)杂芳基]；(羧基)杂芳基[例如(烷氧基羰基)杂芳基]；氰基杂芳基；氨基杂芳基[例如((烷基磺酰基)氨基)杂芳基和((二烷基)氨基)杂芳基]；(酰胺基)杂芳基[例如氨基羰基杂芳基、((烷基羰基)氨基)杂芳基、((((烷基)氨基)烷基)氨基羰基)杂芳基、(((杂芳基)氨基)羰基)杂芳基、((杂环脂族基)羰基)杂芳基和((烷基羰基)氨基)杂芳基]；(氰基烷基)杂芳基；(烷氧基)杂芳基；(氨磺酰基)杂芳基[例如(氨基磺酰基)杂芳基]；(磺酰基)杂芳基[例如(烷基磺酰基)杂芳基]；(羟基烷基)杂芳基；(烷氧基烷基)杂芳基；(羟基)杂芳基；((羧基)烷基)杂芳基；(((二烷基)氨基)烷基]杂芳基；(杂环脂族基)杂芳基；(环脂族基)杂芳基；(硝基烷基)杂芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)杂芳基；((烷基磺酰基)烷基)杂芳基；(氰基烷基)杂芳基；(酰基)杂芳基[例如(烷基羰基)杂芳基]；(烷基)杂芳基和(卤代烷基)杂芳基[例如三卤代烷基杂芳基]。
[0039]本文所用的“杂芳脂族基”(如杂芳烷基基团)指被杂芳基基团取代的脂族基团(例如(C1-4)-烷基基团)。“脂族基”、“烷基”和“杂芳基”在上文已作定义。
[0040]本文所用的“杂芳烷基”基团指被杂芳基基团取代的烷基基团(例如(C1-4)-烷基基团)。“烷基”和“杂芳基”在上文已作定义。杂芳烷基任选被一个或多个取代基取代，所述取代基如烷基(包括羧基烷基、羟基烷基和卤代烷基如三氟甲基)、烯基、炔基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷基氧基、杂环烷基氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、芳烷基氧基、杂芳烷基氧基、芳酰基、杂芳酰基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、氰基、卤素、羟基、酰基、巯基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、硫酰胺基、氧代基或氨基甲酰基。
[0041]本文所用的“酰基”基团指甲酰基基团或RX-C(O)-(如烷基-C(O)-，也称“烷基羰基”)，其中RX和“烷基”在上文已作定义。乙酰基和新戊酰基是酰基基团的实例。
[0042]本文所用的“芳酰基”或“杂芳酰基”指芳基-C(O)-或杂芳基-C(O)-。芳酰基或杂芳酰基的芳基和杂芳基部分(portion)任选如上文所定义被取代。
[0043]本文所用的“烷氧基”基团指烷基-O-基团，其中“烷基”在上文已作定义。
[0044]本文所用的“氨基甲酰基”基团指具有结构-O-CO-NRXRY或-NRX-CO-O-RZ的基团，其中RX和RY在上文已作定义，RZ可以是脂族基、芳基、芳脂族基、杂环脂族基、杂芳基或杂芳脂族基。
[0045]本文所用的“羧基”基团，当用作末端基团时指-COOH、-COORX、-OC(O)H、-OC(O)RX；或者当用作内部基团时指-OC(O)-或-C(O)O-。
[0046]本文所用的“卤代脂族基”基团指被1-3个卤素取代的脂族基团。例如，术语卤代烷基包括基团-CF3。
[0047]本文所用的“巯基”基团指-SH。
[0048]本文所用的“磺基”基团，当在末端使用时指-SO3H或-SO3RX，或者当在内部使用时指-S(O)3-。
[0049]本文所用的“硫酰胺基”基团，当在末端使用时指结构-NRX-S(O)2-NRYRZ，当在内部使用时指-NRX-S(O)2-NRY-，其中RX、RY和RZ在上文已作定义。
[0050]本文所用的“磺酰胺基”基团，当在末端使用时指结构-S(O)2-NRXRY或-NRX-S(O)2-RZ；或者当在内部使用时指-S(O)2-NRX-或-NRX-S(O)2-，其中RX、RY和RZ在上文已作定义。
[0051]本文所用的“硫烷基”基团，当在末端使用时指-S-RX，当在内部使用时指-S-，其中RX在上文已作定义。硫烷基的实例包括脂族基-S-、环脂族基-S-、芳基-S-等。
[0052]本文所用的“亚磺酰基”基团，当在末端使用时指-S(O)-RX，当在内部使用时指-S(O)-，其中RX在上文已作定义。示例性的亚磺酰基基团包括脂族基-S(O)-、芳基-S(O)-、(环脂族基(脂族基))-S(O)-、环烷基-S(O)-、杂环脂族基-S(O)-、杂芳基-S(O)-等。
[0053]本文所用的“磺酰基”基团，当在末端使用时指-S(O)2-RX，当在内部使用时指-S(O)2-，其中RX在上文已作定义。示例性的磺酰基基团包括脂族基-S(O)2-、芳基-S(O)2-、(环脂族基(脂族基))-S(O)2-、环脂族基-S(O)2-、杂环脂族基-S(O)2-、杂芳基-S(O)2-、(环脂族基(酰胺基(脂族基)))-S(O)2-等。
[0054]本文所用的“硫氧基”基团，当在末端使用时指-O-SO-RX或-SO-O-RX，当在内部使用时指-O-S(O)-或-S(O)-O-，其中RX在上文已作定义。本文所用的“卤素”或“卤素”基团指氟、氯、溴或碘。本文所用的“烷氧基羰基”被术语羧基所涵括，其单独使用或与另一基团结合使用，指诸如烷基-O-C(O)-的基团。本文所用的“烷氧基烷基”指诸如烷基-O-烷基-的烷基基团，其中烷基在上文已作定义。
[0055]本文所用的“羰基”指-C(O)-。
[0056]本文所用的“氧代基”指＝O。
[0057]本文所用的术语“磷基”指亚膦酸基(phosphinate)和膦酸基(phosphonate)。亚膦酸基和膦酸基的实例包括-P(O)(RP)2，其中RP为脂族基、烷氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、(环脂族基)氧基、(杂环脂族基)氧基芳基、杂芳基、环脂族基或氨基。
[0058]本文所用的“氨基烷基”指结构(RX)2N-烷基-。
[0059]本文所用的“氰基烷基”指结构(NC)-烷基-。
[0060]本文所用的“脲”基团指结构-NRX-CO-NRYRZ，“硫脲”基团当在末端使用时指结构-NRX-CS-NRYRZ，当在内部使用时指-NRX-CO-NRY-或-NRX-CS-NRY-，其中RX、RY和RX在上文已作定义。
[0061]本文所用的“胍”基团指结构-N＝C(N(RXRY))N(RXRY)或-NRX-C(＝NRX)NRXRY，其中RX和RY在上文已作定义。
[0062]本文所用的术语“脒基”基团指结构-C＝(NRX)N(RXRY)，其中RX和RY在上文已作定义。
[0063]一般来说，术语“邻(vicinal)”指各取代基在包含两个或多个碳原子的基团上的安排，其中该各取代基连接到各相邻(adjacent)碳原子上。
[0064]一般来说，术语“偕(geminal)”指各取代基在包含两个或多个碳原子的基团上的安排，其中该各取代基连接到同一碳原子上。
[0065]术语“在末端(terminally)”和“在内部(internally)”指基团在取代基当中的位置。当基团存在于取代基的端头(end)而不进一步与化学结构的其余部分键合时，该基团在末端。羧基烷基即RXO(O)C-烷基是羧基基团在末端使用的一个实例。当基团存在于化学结构的取代基的中间时，该基团在内部。烷基羧基(例如烷基-C(O)O-或烷基-OC(O)-)和烷基羧基芳基(例如烷基-C(O)O-芳基-或烷基-O(CO)-芳基-)是羧基基团在内部使用的实例。
[0066]本文所用的“环状基团”包括单环、双环和三环环状体系，这些体系包括环脂族基、杂环脂族基、芳基或杂芳基，它们中每一个在上文已作定义。
[0067]本文所用的“桥接双环环状体系”指其中的环被桥接的双环杂环脂族环状体系或双环环脂族环状体系。桥接双环环状体系的实例包括但不限于金刚烷基、降莰烷基(norbornanyl)、二环[3.2.1]辛基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.3.1]壬基、二环[3.2.3]壬基、2-氧杂二环[2.2.2]辛基、1-氮杂二环[2.2.2]辛基、3-氮杂二环[3.2.1]辛基和2，6-二氧杂-三环[3.3.1.03，7]壬基。桥接双环环状体系可任选被一个或多个取代基取代，所述取代基如烷基(包括羧基烷基、羟基烷基和卤代烷基，如三氟甲基)、烯基、炔基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷基氧基、杂环烷基氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、芳烷基氧基、杂芳烷基氧基、芳酰基、杂芳酰基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基、氨基羰基、烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、氰基、卤素、羟基、酰基、巯基、烷基硫烷基、硫氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、硫酰胺基、氧代基或氨基甲酰基。
[0068]本文所用的“脂族链”指支链或直链脂族基团(例如烷基基团、烯基基团或炔基基团)。直链脂族链具有结构-[CH2]v-，其中v为1-6。支链脂族链是被一个或多个脂族基团取代的直链脂族链。支链脂族链具有结构-[CHQ]v-，其中Q为氢或脂族基团；但是，Q应在至少一个位置为脂族基团。术语脂族链包括烷基链、烯基链和炔基链，其中烷基、烯基和炔基在上文已作定义。
[0069]词语“任选被取代”可与词语“被取代或不被取代”互换使用。如本文所述，本发明化合物可任选被一个或多个取代基取代，这在上文作了一般说明，在本发明的具体类别(class)、亚类(subclass)和种类(species)中有例证。如本文所述，本文所述的各式中所含的变量R1、R2和R3及其它变量涵括具体的基团，如烷基和芳基。除非另有指明，否则各式中所含的变量R1、R2和R3及其它变量的每个具体基团可任选被一个或多个本文所述的取代基取代。具体基团的每个取代基进一步任选被一至三个卤素、氰基、氧代基、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、环脂族基、杂环脂族基、杂芳基、卤代烷基和烷基取代。例如，烷基可被烷基硫烷基取代，而烷基硫烷基可任选被一至三个卤素、氰基、氧代基、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、卤代烷基和烷基取代。另一个实例是，(环烷基)羰基氨基的环烷基部分(portion)可任选被一至三个卤素、氰基、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基和烷基取代。当两个烷氧基基团结合同一原子或相邻的原子时，该两个烷氧基基团可与它们所结合的原子一起形成环。
[0070]一般来说，术语“被取代”不管前面是否有术语“任选”，都指用指定取代基的原子团(radical)代替给定结构中的氢。具体的取代基在上文的定义中和在下文对各化合物及其实例的描述中进行了描述。除非另有指明，否则任选被取代的基团可在其每个可取代位置具有取代基，且当任何给定结构中有不止一个位置可被不止一个选自指定的基团的取代基取代时，该取代基在每个位置上可相同或不同。环取代基如杂环烷基可结合另一个环如环烷基以形成螺双环环状体系，例如两个环共享一个共同的原子。本领域普通技术人员会认识到，本发明所预想的各取代基组合，是能导致形成稳定的或化学上可行的化合物的那些组合。
[0071]本文所用的词语“稳定的或化学上可行的”指化合物当经受到让它们得以出于本文所公开的一个或多个目的进行生产、检测及优选进行回收、纯化和使用的条件时，不会发生实质上的改变。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是这样的化合物，其当在40℃或40℃以下的温度下、在水分和其它化学上反应性条件不存在下保持至少一个星期时，不会发生实质上的改变。
[0072]本文所用的有效量定义为给受治疗患者赋予治疗作用所需的数量，通常根据患者的年龄、体表面积、体重和病情来决定。Freireich等，Cancer Chemother.Rep.，50：219(1966)描述了动物和人类的剂量的相互关系(基于每平方米体表面积的毫克数)。体表面积可从患者的身高和体重约略确定。参见例如Scientific Tables，GeigyPharmaceuticals，Ardsley，New York，537(1970)。本文所用的“患者”指哺乳动物，包括人。
本文所描绘的结构还意指包括该结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)形式，除非另有规定；例如每个非对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体和(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物，都落入本发明的范围内。本发明化合物的所有互变异构形式都落入本发明的范围内，除非另有规定。另外，本文所描绘的结构也意指包括只在一种或多种同位素富集原子的存在方面有差别的化合物，除非另有规定。例如，具有本发明的结构、但例外是氘或氚代替了氢或者13C-或14C-富集碳代替了碳的化合物，也在本发明的范围内。这种化合物可例如在生物测定中用作分析工具或探针，或者作为治疗药物。
[0073]在其它方面，本发明涉及某些在下文中作全面和具体描述的化合物。这种具体描述只是出于说明目的，并不意在限制这些化合物及其用途的范围。
I.化合物
A.类(generic)化合物
[0074]在一些方面，本发明提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式I化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式I化合物包括：
或其药物可接受的盐，其中，
每个A为-(CX1X2)a-；
每个B为-(CX1X2)b-；
每个X1独立为氢、卤素、氨基、硫烷基、任选被取代的(C1-4)-脂族基、任选被取代的芳基或-O-X1A；
每个X2独立为氢、卤素、氨基、硫烷基、任选被取代的(C1-4)-脂族基、任选被取代的芳基或-O-X1B；
X1A和X1B各自独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
或者，X1和X2一起形成氧代基；
每个R1为-ZAR4，其中每个ZA独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZA碳单位任选和独立地被-C(O)--C(S)-、-C(O)NRA-、-C(O)NRANRA-、-C(O)O-、-NRAC(O)O-、-O-、-NRAC(O)NRA-、-NRANRA-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRA-、-SO2NRA-或-NRASO2NRA-置换，条件是-NRANRA-、-NRAC(O)NRA-或-NRASO2NRA-不直接结合式I的氮环原子；
每个R4独立为RA、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RA独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R2为-ZBR5，其中每个ZB独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZB碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRB-、-C(O)NRBNRB-、-C(O)O-、-NRBC(O)O-、-NRBC(O)NRB-、-NRBNRB-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRB-、-SO2NRB-或-NRBSO2NRB-置换，条件是SO、SO2或-SO2NRB-不直接结合式I的羰基；
每个R5独立为RB、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RB独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
或者R1和R2与它们所连接的原子一起形成任选被取代的杂环脂族环；
每个R3为任选被取代的脂族基、氨基、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、磺酰胺基、硫酰胺基、磺基、-O-R3A、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R3A独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个Y和Y′独立为-ZDR7，其中每个ZD独立为键或任选被取代的直链或支链C1-6脂族链，其中最多两个ZD碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRD-、-C(O)NRDNRD-、-C(O)O-、-NRDC(O)O-、-O-、-NRDC(O)NRD-、-NRDNRD-、-S-、-SO-、-8O2-、-NRD-、-SO2NRD-、-NRDSO2-或-NRDSO2NRD-取代，或者Y和Y′一起形成＝O或＝S；
每个R7独立为RD、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RD独立为氢或任选被取代的芳基；且
a和b各独立为0、1、2或3；条件是a和b之和为2或3。
B.具体化合物
1.取代基R 1 ：
[0075]每个R1为-ZAR4，其中每个ZA独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZA碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRA-、-C(O)NRANRA-、-C(O)O-、-NRAC(O)O-、-O-、-NRAC(O)NRA-、-NRANRA-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRA-、-SO2NRA-或-NRASO2NRA-置换，条件是-NRANRA-、-NRAC(O)NRA-或-NRASO2NRA-不直接结合式I的氮环原子。
[0076]每个R4独立为RA、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3。
[0077]每个RA独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
[0078]在几个实施方案中，R1为任选被1-4个取代基取代。
[0079]在某些实施方案中，R1为-Q4-W4-Q3-W3-Q2-W2-Q1；其中W2、W3和W4各独立为键、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)N(Q5)-、-C(O)O-、-O-、-N(Q5)C(O)N(Q5)-、-SO2-、-N(Q5)SO2-、-S-、-N(Q5)-、-SO-、-OC(O)-、-N(Q5)C(O)O-或-SO2N(Q5)-；Q1、Q2、Q3和Q4各独立为键、任选被取代的C1-4脂族基，、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基，或者当Q1、Q2、Q3或Q4为R1的末端基团时Q1、Q2、Q3和Q4各独立为氢；每个Q5独立为氢或任选被取代的脂族基。在一些具体的实施方案中，Q4为键。
[0080]在几个实施方案中，R1为任选被取代的酰基基团。在几个实例中，R1为任选被取代的烷基羰基。R1另外的实例包括(氨基)烷基羰基、(卤代)烷基羰基、(芳基)烷基羰基、(环脂族基)烷基羰基或(杂环脂族基)烷基羰基。包括在这些实例中的有其中R1为以下基团的实施方案：(杂环烷基(氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基)))))烷基羰基、(二环芳基(磺酰基(氨基)))烷基羰基、(芳基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(烷基(羰基(氨基)))烷基羰基、(烯基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(环脂族基(烷基(氨基(羰基(氨基)))))烷基羰基、(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基))))))烷基羰基、(烷基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基或(二环芳基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，它们中每一个任选被1-3个取代基取代。
[0081]在几个实施方案中，R1为任选被取代的羧基基团。在一个实例中，R1为任选被取代的烷氧基羰基。R1的另一个实例包括(C1-4)-烷氧基羰基或(三环芳基)烷氧基羰基，它们中每一个任选被1-3个取代基取代。其它羧基基团包括(脂族基(氧基))羰基、(杂芳烷基(氧基))羰基、(杂环脂族基(氧基)羰基、(芳烷基(氧基))羰基，它们中每一个任选被1-3个以下取代基取代：卤素、烷氧基、脂族基、环脂族基、杂环脂族基、芳基、杂芳基或这些取代基的组合。
[0082]在几个实施方案中，R1为任选被取代的氨基羰基。R1的实例包括(烷氧基(芳基(烷基)))氨基羰基、(烷基)氨基羰基或(芳基(烷氧基(羰基(烷基(氨基(羰基(烷基)))))))氨基羰基，它们中每一个任选被1-3个取代基取代。
[0083]在几个实施方案中，R1为任选被取代的杂芳基。在一个实例中，R1为任选被取代的噁唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、三嗪基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基或哒嗪基。
[0084]在几个实施方案中，R1为烷基磺酰基、氨基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、环脂族基磺酰基或杂环脂族基磺酰基，它们中每一个任选被1-4个取代基取代。
[0085]在几个实施方案中，R1为任选被取代的烷基磺酰基。R1的实例包括(芳基)烷基磺酰基或(烷基(氨基))烷基磺酰基，它们中每一个任选被1-3个取代基取代。烷基磺酰基、氨基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、环脂族基磺酰基或杂环脂族基磺酰基，它们中每一个任选被取代。在某些实施方案中，R1为任选被取代的烷基磺酰基。
[0086]权利要求11的化合物，其中R1为(芳基)烷基磺酰基或(烷基(氨基))烷基磺酰基，它们中每一个任选被取代。
[0087]在一些具体的实施方案中，R1为(氨基)烷基羰基、(卤代)烷基羰基、(芳基)烷基羰基、(环脂族基)烷基羰基或(杂环脂族基)烷基羰基、(杂环烷基(氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基)))))烷基羰基、(二环芳基(磺酰基(氨基)))烷基羰基、(芳基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(烷基(羰基(氨基)))烷基羰基、(烯基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(环脂族基(烷基(氨基(羰基(氨基)))))烷基羰基、(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基))))))烷基羰基、(烷基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基或(二环芳基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，它们中每一个任选被取代。
[0088]在其它具体的实施方案中，R1为杂芳基羰基、(环脂族基(烷基(酰胺基(烷基))))羰基、(杂环脂族基(氧基(酰胺基(烷基))))羰基、(芳基(磺酰基(氨基(烷基))))羰基、(芳烷基(氧基(酰胺基(烷基))))羰基、(脂族基(氧基(酰胺基(烷基))))羰基、(环脂族基(烷基(酰胺基(烷基))))羰基、(杂环脂族基)羰基或(杂芳基(酰胺基(烷基(酰胺基(烷基))))羰基，它们中每一个任选被1-4个以下取代基取代：卤素、脂族基、环脂族基、酰基、烷氧基或这些取代基的组合。
[0089]在还其它实施方案中，R1为酰胺基。例如，R1为(烷氧基(芳基(烷基)))氨基羰基、(烷基)氨基羰基或(芳基(烷氧基(羰基(烷基(氨基(羰基(烷基)))))))氨基羰基，它们中每一个任选被取代。
[0090]在几个实施方案中，R1为
Figure A20068003905900711
其中T为键、-C(O)-、-OC(O)-、-NHC(O)-、-S(O)2N(H)-、-C(O)C(O)-或-SO2-；每个R独立为氢、氨基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R8和R′8独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基，或者结合在相邻原子上的R8和R9与它们所连接的原子一起形成5-7元任选被取代的单环杂环脂族基或6-12元任选被取代的双环杂环脂族基；或者R8和R′8与它们所连接的原子一起形成任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基。为清楚起见，当R1为QVI时，每个亚单位中的每个R8、R′8和R9可独立地如上所述进行选择。一个亚单位中的R8、R′8和R9变量组不一定需要与另一个亚单位中的同一R8、R′8和R9变量组相同。
[0091]在其它实施方案中，R1为QI或QII。
[0092]在一些实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为：
Figure A20068003905900721
[0093]在其它实施方案中，R1为QVI，R为：
Figure A20068003905900722
[0094]在其它实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为：
Figure A20068003905900731
其中每个R10和R′10独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基，或者R10和R′10与它们所同时连接的原子一起形成任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基；每个K独立为键、(C1-12)-脂族基、-O-、-S-、-S(O)2-、-NR14-、-C(O)-或-C(O)NR14-，其中R14为氢或任选被取代的(C1-12)-脂族基；n为1-3。为清楚起见，当QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中存在不止一个R10时，每个R10可相同或不同。在几个实施方案中，R10或R′10为[(C3-10)-环烷基或环烯基]-(C1-12)-脂族基、(3-10元)-杂环脂族基、(3-10元)-杂环脂族基-(C1-12)-脂族基-、(5-10元)-杂芳基或(5-10元)-杂芳基-(C1-12)-脂族基-。
[0095]在还其它实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为
Figure A20068003905900741
[0096]在另外的实施方案中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为
Figure A20068003905900751
其中每个Z独立为-O-、-S-、-NR50-或-C(R50)2-，
Figure A20068003905900752
独立为单键或双键，每个R50独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基；n为1或2。
[0097]在几个实施方案中，R1为
Figure A20068003905900753
其中T为键、-C(O)-、-OC(O)-、-NHC(O)-、-S(O)2N(H)-、-C(O)C(O)-或-SO2-；每个R独立为氢、氨基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R8和R′8独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基，或者结合在相邻原子上的R8和R9与它们所连接的原子一起形成5-7元任选被取代的单环杂环脂族基或6-12元任选被取代的双环杂环脂族基，其中每个杂环脂族环；或者R8和R′8与它们所连接的原子一起形成任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基；每个R11和R′11独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基；或者R11和R′11与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环；每个R12独立为氢或保护基。
[0098]在一些实施方案中，R11和R′11与它们所连接的原子一起形成3-7元环。非限制性实例包括：
Figure A20068003905900761
[0099]R8和R11的非限制性实例包括：
Figure A20068003905900762
或者，R8和R11与它们所连接的原子一起可形成任选被取代的5-7元单环杂环脂族基或任选被取代的6-12元双环杂环脂族基，其中每个杂环脂族环或芳环任选含有选自O、S和N的另外的杂原子。
[00100]同样，R8和R9与它们所连接的原子一起可形成环，R7与R8和R9所形成的环形成任选被取代的8-14元双环稠环体系，其中该双环稠环体系任选进一步与任选被取代的苯基稠合形成任选被取代的10-16元三环稠合环体系。
[00101]在几个实施方案中，R1为其中T为-C(O)-，R为
Figure A20068003905900771
[00102]在几个实施方案中，R1为选自以下的基团：
Figure A20068003905900781
Figure A20068003905900791
Figure A20068003905900801
Figure A20068003905900811
Figure A20068003905900821
Figure A20068003905900841
[00103]在一些实施方案中，R1为
Figure A20068003905900851
X99＝OR，OC(NH)R，或
Figure A20068003905900852
                   X100＝NH，CH2
，其中R如上定义。
[00104]R1另外的实例在以下专利中有说明：PCT公布说明书WO2004/103996 A1、WO 2004/72243 A2、WO 03/064456 A1、WO 03/64455A2、WO 03/064416 A1和美国专利公布说明书US 2005/0090450以及其中所引用的其它公布说明书，这些专利的每一个通过引用结合到本文中。
2.取代基R 2 ：
[00105]每个R2为-ZBR5，其中每个ZB独立为键或任选被取代的支链或直链(C1-12)脂族链，其中最多三个ZB碳单位任选和独立地被-C(O)-、-CS-、-C(O)NRB-、-C(O)NRBNRB-、-C(O)O-、-NRBC(O)O-、-O-、-NRBC(O)NRB-、-NRBNRB-、-NRBC(O)-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRB-、-SO2NRB-或-NRBSO2NRB-置换。每个R5独立为RB、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3。每个RB独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
[00106]在几个实施方案中，R2为-ZBR5，其中每个ZB独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZB碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRB-、-C(O)NRBNRB-、-C(O)O-、-NRBC(O)O-、-NRBC(O)NRB-、-NRBNRB-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRB-、-SO2NRB-或-NRBSO2NRB-置换，条件是SO、SO2或-SO2NRB-不直接结合式I的羰基。每个R5独立为RB、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3。每个RB独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
[00107]在还另外的实施方案中，R2为-Z1-V1-Z2-V2-Z3-V3，当V1、V2或V3为R2的末端基团时，V1、V2和V3每个独立为键、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基或氢；Z1、Z2和Z3每个独立为键、-C(O)-、-C(O)C(O)-、-C(S)-、-C(O)N(Q6)-、-N(Q6)C(O)-、-C(O)C(O)N(Q6)-、-O-、-SO-、-SO2-、-N(Q6)SO2-、-N(Q6)C(O)N(Q6)-、-N(Q6)C(S)N(Q6)-、-N(Q6)-、-N(Q6)SO2-、-SO2N(Q6)-、-C(O)N(Q6)SO2-、-SO2N(Q6)C(O)-，或者当Z1、Z2或Z3为R2的末端基团时Z1、Z2和Z3每个独立为氢；每个Q6独立为氢或任选被取代的脂族基。
[00108]在其它的实施方案中，R2为任选被取代的(脂族基)氨基，其中R2的脂族部分(portion)为-Z2-V2-Z3-V3或-Z3-V3，其中Z2和Z3每个独立为键、-C(O)-、-N(Q5)-、-CH(OH)-、-C(O)N(Q6)-或-C(O)C(O)N(Q6)-；V2独立为键、任选被取代的脂族基或任选被取代的环脂族基；V3为氢、任选被取代的脂族基或任选被取代的环脂族基。
[00109]在还另外的实施方案中，Z2为-CH(OH)-，V2为键，Z3为-C(O)N(Q6)-，使得R2为-N(Q6)-CH(OH)-C(O)-N(V3)(Q6)。
[00110]在某些实施方案中，R2为任选被取代的(脂族基)氨基、任选被取代的(环脂族基)氨基、任选被取代的烷氧基或羟基。
[00111]在另一个的实施方案中，R2为任选被1-3个以下取代基取代的烷氧基：卤素、羟基、脂族基、环脂族基或杂环脂族基。
[00112]在几个实施方案中，R2为氨基。R2的实例包括单取代的氨基。R2另外的实例包括(环脂族基(羰基(羰基(烷基))))氨基(氨基(羰基(羰基(脂族基))))氨基、(脂族基(羰基(羰基(脂族基))))氨基或(芳基(氨基(羰基(羰基(脂族基)))))氨基，它们中每一个任选被1-3个取代基取代。
[00113]在几个实施方案中，R2为-NR2ZR′2Z、-SR2Y或-NR2Y-CR2XR′2X-L1-NR2Z-R2W，其中R2Y独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R2W独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基；每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基；或R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环；每个L1为-CH2-、-C(O)-、-CF2-、-C(O)C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-或-SO2-；每个R2Z或R′2Z为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或R2Z和R′2Z与它们所共同连接的氮一起可形成任选被取代的3-7元杂环脂族环。
[00114]在几个实施方案中，每个R2X和R′2X独立为氢或任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的(环脂族基)脂族基。
[00115]在几个实施方案中，L1为-C(O)C(O)-或-SO2-。
[00116]在几个其它实施方案中，每个R2W为氢或任选被取代的环脂族基。
[00117]在几个实施方案中，R2为-NH-CHR2X-C(O)-C(O)-N(R2Z)R2W。
[00118]在几个实施方案中，R2为-NH-CHR2X-CH(OH)-C(O)-N(R2Z)R2W。
[00119]在几个实施方案中，R2为-NH-CHR2X-C(O)-C(O)-NHR2Z，其中-NHR2Z为NH-环丙基、-NH-Me、-NH-Et、-NH-iPr、-NH-nPr。
[00120]在几个实施方案中，R2为-NR2ZR′2Z、-SR2Z，其中每个R2Z和R′2Z独立为氢、烷基、环烷基或芳烷基。R2Z的非限制性实例包括甲基、乙基、t-丁基、环戊基、环己基和苄基。
[00121]在其它实施方案中，R2为(-NH-CR2XR′2X-L1-C(O))i-M；其中每个M独立为-OH、R2X、-NR2ZR′2Z或-OR2X、每个i为1或2，L1、R2Z、R2X和R′2Z在上文已作定义。
[00122]在几个实施方案中，R2为(-NH-CR2ZR′2Z-L1-C(O))i-M，其中L1为-C(O)-，i为1，M独立为R2X、-N(R2XR′2X)、-OR2X、-NHSO2R2X或-SR2X。
[00123]在一些实施方案中，R′2Z为H，R2Z为脂族基、(芳基)脂族基或环脂族基。R2X的非限制性实例包括氢、
Figure A20068003905900881
[00124]在一些实施方案中，R′2X为H，R2X为任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳烷基、任选被取代的杂脂族基或任选被取代的杂芳烷基。R2X的一些非限制性实例包括：
Figure A20068003905900882
其中c为0-3。
[00125]在几个实施方案中，R2为
其中R2X为
Figure A20068003905900891
R2W为
Figure A20068003905900892
或氢。
[00126]在一些实施方案中，R2为
Figure A20068003905900893
其中每个R56独立为任选被取代的C1-6脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基；每个R57独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的氨基；m为1或2；每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环。
[00127]在一些其它的实施方案中，R2为
Figure A20068003905900894
其中R58和R59各自独立选自任选被取代的脂族基、任选被取代的烷氧基、任选被取代的芳基氧基、任选被取代的杂芳基氧基、任选被取代的(环脂族基)氧基、任选被取代的(杂环脂族基)氧基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的氨基；每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环。
[00128]在几个实施方案中，R1的一部分可与R2的一部分形成环状结构。一个非限制性实例包括：
Figure A20068003905900901
[00129]在几个实施方案中，R2选自以下；
Figure A20068003905900902
Figure A20068003905900911
Figure A20068003905900921
Figure A20068003905900931
Figure A20068003905900941
Figure A20068003905900951
Figure A20068003905900971
[00130]在一些具体的实施方案中，R2为
Figure A20068003905900981
，或，
其中X200为-OX202或-X202，X202为脂族基、环脂族基、杂环脂族基、芳基或杂芳基。
[00131]在其它的实施方案中，R2为
[00132]R2另外的实例在以下专利中有说明：PCT公布说明书WO2004/103996 A1、WO 2004/72243 A2、WO 03/064456 A1、WO 03/64455A2、WO 03/064416 A1和美国专利公布说明书US 2005/0090450以及其中所引用的其它公布说明书，这些专利的每一个通过引用结合到本文中。
3.取代基R3：
[00133]每个R3为脂族基、环脂族基、杂环脂族基、芳基或杂芳基，它们中每一个任选被取代。
[00134]在几个实施方案中，每个R3独立为-ZCR6，其中每个ZC独立为键或任选被取代的支链或直链C1-6脂族链，其中最多两个ZC碳单位任选和独立地被-C(O)-、-CS-、-C(O)NRC-、-C(O)NRCNRC-、-C(O)O-、-NRCC(O)O-、-O-、-NRCC(O)NRC-、-NRCNRC-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRC-、-SO2NRC-或-NRCSO2NRC-置换。每个R6独立为RC、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3。每个RC独立为氢、任选被取代的脂族基基团、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。但是，在许多实施方案中，当ZC为键并且R6为RC时，则RC独立为任选被取代的脂族基基团、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
[00135]在其它实施方案中，每个R3为任选被取代的脂族基、氨基、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、磺酰胺基、硫酰胺基、磺基、-O-R3A、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R3A独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
[00136]在几个实施方案中，R3为任选被取代的芳基。在一些实施方案中，R3为单环、双环或三环芳基，它们中每一个任选被取代。例如，R3为任选被取代的苯基、任选被取代的萘基或任选被取代的蒽基。在其它实施方案中，R3为单环、双环或三环芳基，它们中每一个任选被1-4个以下取代基取代：卤素、羟基、氰基、硝基、脂族基、卤代脂族基、(脂族基)氧基、(卤代(脂族基))氧基、(脂族基(氧基(芳基)))氧基、芳基、杂芳基、卤代芳基、环脂族基、杂环脂族基或这些取代基的组合。在几个实例中，R3为任选被取代的稠合双环芳基。在几个实例中，R3为任选被取代的稠合三环芳基。
[00137]在几个实施方案中，R3为任选被取代的杂芳基。在几个实例中，R3为单环或双环杂芳基，它们中每一个任选被1-4个以下取代基取代：卤素、羟基、氰基、硝基、脂族基、卤代脂族基、(脂族基)氧基、(卤代(脂族基))氧基、(脂族基(氧基(芳基)))氧基、芳基、杂芳基、卤代芳基、环脂族基、杂环脂族基或这些取代基的组合。
[00138]在一些实施方案中，R3为任选被取代的脂族基如甲基、乙基或丙基，它们中每一个任选被取代。
[00139]根据其它实施方案，R3为任选被取代的脂族基。
[00140]根据其它实施方案，R3为任选被取代的(C1-5)-脂族基。
[00141]在几个实例中，R3为
Figure A20068003905901001
[00142]在几个实施方案中，R3选自以下：
Figure A20068003905901011
Figure A20068003905901021
Figure A20068003905901041
、CH3-、CH3CH2-和CH3CH2CH2-。
4.基团A：
[00143]每个A为-(CX1X2)a-，其中每个X1和X2独立为氢、任选被取代的(C1-4)-脂族基或任选被取代的芳基；或者X1和X2一起形成氧代基基团；每个a为0-3。
[00144]在几个实施方案中，X1或X2为氢。
[00145]在几个实施方案中，X1或X2为任选被取代的(C1-4)-脂族基。
X1或X2的实例包括三氟甲基或者任选被取代的乙基、丙基、丁基或它们的异构体。
[00146]在几个实施方案中，X1或X2为任选被取代的芳基。X1或X2的实例包括任选被取代的苯基、萘基或薁基。
5.基团B：
[00147]每个B为-(CX1X2)b，其中每个X1和X2独立为氢、任选被取代的(C1-4)-脂族基或任选被取代的芳基；或X1和X2一起形成氧代基基团；每个b为0-3。
[00148]在几个实施方案中，X1或X2为氢。
[00149]在几个实施方案中，X1或X2为任选被取代的(C1-4)-脂族基。X1或X2的实例包括三氟甲基或者任选被取代的乙基、丙基、丁基或它们的异构体。在几个另外的实例中，X1或X2为任选被取代的单或双取代的(氨基)-(C1-4)-脂族基。
[00150]在几个实施方案中，X1或X2为任选被取代的芳基。X1或X2的实例包括任选被取代的苯基、萘基、茚基或薁基。
6.取代基Y和Y′
[00151]在几个实施方案中，每个Y和Y′独立为氢、任选被取代的脂族基或任选被取代的芳基。
[00152]每个Y和Y′独立为-ZDR7，其中每个ZD独立为键或任选被取代的直链或支链(C1-6)-脂族链，其中最多两个ZD碳单位任选和独立地被-C(O)-、-CS-、-C(O)NRD-、-C(O)NRDNRD-、-C(O)O-、-OC(O)-、-NRDC(O)O-、-O-、-NRDC(O)NRD-、-OC(O)NRD-、-NRDNRD-、-NRDC(O)-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRD-、-SO2NRD-、-NRDSO2-或-NRDSO2NRD-置换。每个R7独立为RD、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3。每个RD独立为氢或任选被取代的芳基。
[00153]在几个实施方案中，Y和Y′中的一个为氢。
[00154]在几个实施方案中，Y和Y′中的一个为任选被取代的脂族基。
[00155]在几个实施方案中，Y和Y′中的一个为任选被取代的芳基。
[00156]在几个实施方案中，Y和Y′均为氢。
[00157]在几个实施方案中，Y或Y′中的一个为氢，另一个为氟。
[00158]在几个实施方案中，Y和Y′均为氟。
[00159]在另外的实例中，Y或Y′中的一个为氢，另一个为甲氧基羰基；Y或Y′中的一个为氢，另一个为羟基；或者Y和Y′一起形成氧代基基团或形成＝S。
7.例外：
[00160]在式(I)化合物中，a+b等于2或3。例如，a为0且b为3；a为1且b为2；a为2且b为1；或a为3且b为0。
C.亚类(sub-generic)化合物：
[00161]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式Ia化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式Ia化合物包括：
Figure A20068003905901061
或其药物可接受的盐，其中R3、A、B、Y和Y′在上文式I中定义。
[00162]每个R1a为-Q4-W4-Q3-W3-Q2-W2-Q1；其中W2、W3和W4各独立为键、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)N(Q5)-、-C(O)O-、-O-、-N(Q5)C(O)N(Q5)-、-SO2-、-N(Q5)SO2-、-S-、-N(Q5)-、-SO-、-N(Q5)C(O)-、-OC(O)-、-N(Q5)C(O)O-或-SO2N(Q5)-；Q1、Q2、Q3和Q4各独立为键、任选被取代的C1-4脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基，或者当Q1、Q2、Q3或Q4为R1的末端基团时Q1、Q2、Q3和Q4各独立为氢；每个Q5独立为氢或任选被取代的脂族基。
[00163]每个R2a为-Z1-V1-Z2-V2-Z3-V3，V1、V2和V3每个独立为键、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基，或者当V1、V2或V3为R2的末端基团时V1、V2和V3每个独立为氢；Z1、Z2和Z3每个独立为键、-C(O)-、-C(O)C(O)-、-C(S)-、-C(O)N(Q5)-、-N(Q5)C(O)-、-C(O)C(O)N(Q5)-、-O-、-SO-、-SO2-、-N(Q5)SO2-、-N(Q5)C(O)N(Q5)-、-N(Q5)C(S)N(Q5)-、-N(Q5)-、-N(Q5)SO2-、-SO2N(Q5)-、-C(O)N(Q5)SO2-、-SO2N(Q5)C(O)-，或者当Z1、Z2或Z3为R2的末端基团时Z1、Z2和Z3每个独立为氢；每个Q5独立为氢或任选被取代的脂族基。
[00164]在几个实例中，R2a为任选被取代的(脂族基)氨基、任选被取代的烷氧基或羟基。
[00165]在几个实例中，R2a为(脂族基)氨基，其中氮原子任选被-Z2-V2-Z3-V3或-Z3-V3取代，其中Z2和Z3每个独立为键、-C(O)-、-N(Q5)-或-C(O)C(O)N(Q5)-；V2和V3每个独立为键、任选被取代的脂族基或任选被取代的环脂族基。
[00166]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式Ib化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式Ib化合物包括：
或其药物可接受的盐，其中R3、R8、R、T、A、B、Y和Y′在上文式I中定义。
[00169]每个G为2-15个原子的任选被取代的脂族链，其任选含有1-3个选自O、S和N的杂原子。
[00168]式Ib化合物的实例包括：
Figure A20068003905901081
其中T、R和R3在上文式I中定义。
[00169]式Ib的其它实例是：
Figure A20068003905901082
其中每个R2W独立为
Figure A20068003905901083
或氢；每个T独立为键、-C(O)-、-OC(O)-、-NHC(O)-、-S(O)2N(H)-、-C(O)C(O)-或-SO2-；每个R独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基。
[00170]式Ib化合物的更多具体实例是：
Figure A20068003905901091
[00171]式Ib化合物的其它实例包括：
Figure A20068003905901092
Figure A20068003905901101
[00172]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式II化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式II化合物包括：
Figure A20068003905901102
或其药物可接受的盐，其中
每个R3为任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R2Y独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基；
每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基；或R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环，或R2X和R2Y与它们所连接的原子一起形成任选被取代的5-7元杂环脂族环；
每个R1b为-ZER21，其中ZE为-CH2-、-NH-、-CH(R1Z)-或-O-，R21为任选被取代的6-7元环脂族基或任选被取代的叔丁基；
每个R1Z为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R2Z为氢、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的脂族基；
每个R2W为氢、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的脂族基，或者R2Z和R2W与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的杂环脂族基。
[00173]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式III化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式III化合物包括：
Figure A20068003905901111
或其药物可接受的盐，其中R1e为
Figure A20068003905901121
或氢；R3e为任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
[00174]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式IV化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式IV化合物包括：
Figure A20068003905901122
或其药物可接受的盐，其中
R1e为
Figure A20068003905901131
R′2e为
Figure A20068003905901132
或氢；
R3f和R′3f各独立为氢、磺酰胺基、磺酰基、亚磺酰基、任选被取代的酰基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基，或者R3f和R′3f与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的饱和、部分不饱和或完全不饱和的5-8元杂环脂族基或杂芳基。
[00175]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式V化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式V化合物包括：
Figure A20068003905901141
或其药物可接受的盐，其中R1e、R2e和R′2e在上文式III中定义。
[00176]每个D独立为-CR8-、N、S或O，条件是不超过两个D独立为S或O，R8在上文式I中定义。
[00177]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式VI化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式VI化合物包括：
或其药物可接受的盐，其中R1e、R2e和R′2e在上文式III中定义。
[00178]每个R3g为被取代的芳基或被取代的杂芳基。在一些实施方案中，R3g为
[00179]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式VII化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式VII化合物包括：
Figure A20068003905901152
或其药物可接受的盐，其中R1e、R2e和R′2e在上文式III中定义，R3g在式VI中定义。
[00180]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式VIII化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式VIII化合物包括：
Figure A20068003905901161
或其药物可接受的盐，其中R1e、R2e和R′2e在上文式III中定义，R3g在式VI中定义。
[00181]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式IX化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式IX化合物包括：
Figure A20068003905901162
或其药物可接受的盐，其中R1e、R2e和R′2e在上文式III中定义，R3g在式VI中定义。
[00182]本发明另一个方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式X化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式X化合物包括：
Figure A20068003905901171
或其药物可接受的盐，其中R1e、R2e和R′2e在上文式III中定义，R3g在式VI中定义。
D.各实施方案的组合
[00183]其它实施方案包括上述取代基R1、R2、R3、A、B、Y和Y′的任何组合。
E.示例性的化合物
[00184]本发明意在包括其中R1和R2含有丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构元件的化合物。具有丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构元件的化合物包括但不限于以下公布说明书中的化合物：WO 97/43310、US20020016294、WO 01/81325、WO 01/58929、WO 01/32691、WO02/08198、WO 01/77113、WO 02/08187、WO 02/08256、WO 02/08244、WO 03/006490、WO 01/74768、WO 99/50230、WO 98/17679、WO02/48157、WO 02/08251、WO 02/07761、WO 02/48172、WO 02/08256、US 20020177725、WO 02/060926、US 20030008828、WO 02/48116、WO 01/64678、WO 01/07407、WO 98/46630、WO 00/59929、WO99/07733、WO 00/09588、US 20020016442、WO 00/09543、WO99/07734、US 6,018,020、US 6,265,380、US 6,608,027、US 20020032175、US 20050080017、WO 98/22496、WO 05/028502、US 5,866,684、WO02/079234、WO 00/31129、WO 99/38888、WO 99/64442、WO2004072243、WO 02/18369、US2006046956、US2005197301、WO2005058821、WO2005051980、WO2005030796、WO2005021584、WO2005113581、WO2005087731、WO2005087725、WO2005087721、WO2005085275、WO2005085242、US2003216325、WO2003062265、WO2003062228、WO2002008256、WO 2002008198、WO2002008187、WO 2002048172、WO 2001081325、WO 2001077113、US 6251583、US 5990276、US20040224900、US20040229818、WO2004037855、WO2004039833、WO200489974、WO2004103996、WO2004030670、WO2005028501、WO2006007700、WO2005070955、WO2006007708、WO2006000085、WO2005073195、WO2005073216、WO2004026896、WO2004072243、WO2004113365、WO2005010029、US20050153877、WO2004093798、WO2004094452、WO2005046712、WO2005051410、WO2005054430、WO2004032827、WO2005095403、WO2005077969、WO2005037860、WO2004092161、WO2005028502、WO2003087092和WO2005037214、每个公布说明书通过引用结合到本文中。
[00185]本发明的具体的示例性化合物在下表A中显示。
表A：式I的示例性化合物。
Figure A20068003905901191
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Figure A20068003905903141
Figure A20068003905903161
发明详述
II.化合物的合成
[00186]式I化合物可用下文提供的示例性合成途径从市售原料容易地合成得到。生产式I化合物的示例性合成途径在下文的制备、方法、实施例和方案章节中提供。例如，螺异噁唑啉部分可如Kurth，M.J.等，J.Org.Chem.，2002，67，第5673-5677页所报道和如以下方案1所示，通过氧化腈和亚甲基脯氨酸之间的1，3-偶极加成来制备。氧化腈可用公知的方法从氯肟或硝基烷烃产生。
[00187]方案1概示了制备式I化合物的方法。其总体策略是构建出式1h化合物，然后通过在PG2存在下选择性除去保护基PG1产生中间体1j。然后可使取代基R1偶联到1j，产生含R1的式1k中间体。在一些实施方案中，R1本身可含有保护基，该保护基可在PG2存在下选择性除去，下文会进一步详述。加入R1部分后，将PG2基团除去，产生中间体1m。然后使1m与P2部分偶联，产生式I的模拟肽(peptidomimetic)化合物。
方案1
Figure A20068003905903181
[00188]再参见方案1，在一个实施例中，用已知方法将羟基脯氨酸1a作为Boc衍生物加以保护(即步骤ia)，以提供受保护的脯氨酸1b，其中PG1是叔丁氧基碳酸酯。参见例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley andSons，Inc.(1999)。1b的氧化(即步ib)产生酮-吡咯烷酸1c。氧化是用合适的试剂如次氯酸钠在TEMPO的存在下实现的。接着，在步骤ic，采用已知的条件，使酮-吡咯烷酸1c与Wittig试剂如式(Ph)3P＝C(Y)(Y′)的三苯基鏻内鎓盐(triphenylphosphonium ylid)反应，产生式1d的环外亚甲基(exomethylene)化合物。用游离酸1c来提供相应的游离酸1d是有利的，因为可通过简单地将1d萃取到碱性水溶液中，来方便地将酸1d从中性或碱性副产物中纯化出来。随后将酸1d用合适的保护基如叔丁酯在已知的条件(同上)下保护(步骤id)，产生中间体1e。
[00189]1e与氧化腈1f的反应产生螺异噁唑啉的顺式和反式异构体1g和1h的混合物。本文所指的顺式意思是脯氨酸环的2-羧基部分与异噁唑啉环的氧在脯氨酸环所表示的平面的同侧。术语反式意思是脯氨酸环的2-羧基部分与异噁唑啉环的氧在脯氨酸环所表示的平面的对侧。因此，1g代表本发明的顺式化合物，1h代表本发明的反式化合物。
[00190]在一些实施方案中，当PG1是Boc且PG2是叔丁氧基时，可用磺酸如甲磺酸，在合适的有机溶剂中，在约-40℃至约40℃、约-20℃至约20℃、约-5℃至约5℃的温度下，实现在保护基PG2的存在下从1g和1h选择性除去保护基PG1。合适的有机溶剂包括例如二氯甲烷和四氢呋喃。
[00191]异构体1i和1j可通过相应的有机酸盐的混合物的结晶便利地进行分离，这可避免更为复杂的方法如色谱法。合适的有机盐包括有机羧酸如乙酸、任选取代的苯甲酸、酒石酸、丙二酸、富马酸、草酸、扁桃酸、柠檬酸、对甲苯酰酒石酸和马来酸的盐；有机磺酸如甲磺酸、任选取代的苯磺酸、三氟甲磺酸和樟脑磺酸的盐。
[00192]将单一的螺异噁唑啉异构体如1j与酸R1COOH在偶联试剂如EDCI的存在下进行偶联，产生中间体螺异噁唑啉1k。可用合适的无机酸，在合适的有机溶剂中，在约-40℃至约40℃、约-20℃至约20℃、约-5℃至约5℃的温度下，实现1k的保护基PG2的选择性除去以产生1m，同时R1侧链的外消旋或断裂最少。合适的无机酸包括例如浓盐酸或浓硫酸。合适的有机溶剂包括例如二氯甲烷和四氢呋喃。然后将螺异噁唑啉1m与胺部分R2偶联，产生式I化合物。
[00193]再参见方案1，PG1(CO)-可以是胺保护基，其中PG1是例如甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基或苄氧基羰基。PG2(CO)-可以是酸或酸保护基，其中PG2是例如-OH、甲氧基、叔丁氧基或苄氧基。
[00194]每个PG1和PG2基团可用已知的方法单独或一起并入核心螺异噁唑啉结构中，这在本文中有进一步的描述。例如，如果所需的R1取代基是PG1基团之外的基团(例如保护基)，可将PG1基团除去而产生出带游离胺基团的化合物。可将该胺基团和适当的部分在已知的偶联条件下进行偶联，产生其中R1是蛋白酶抑制剂的部分的化合物。例如，如果PG2部分受保护，可将保护基除去而将R2部分并入。
[00195]另一种产生本发明化合物的方法在以下方案2中概示。
方案2
Figure A20068003905903211
[00196]参见方案2，符号
Figure A20068003905903212
表示聚合物树脂，反应物通过官能团与其结合，该官能团允许进一步的修饰并能让产物随后从树脂去除。合适的树脂是Ellman等，Tetrahedron.Letters，1994，35，9333所述的聚合物结合的二氢吡喃(DHP)树脂。
[00197]在步骤iia，通过使脯氨酸1e与酸例如三氟乙酸的二氯甲烷溶液接触，实现胺和酸的同时脱保护，产生氨基酸2a。在步骤iib，2a与活化的Fmoc衍生物例如N-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(Fmoc-OSu)在温和的无机碱如碳酸钠的存在下反应，产生Fmoc衍生物2b。
[00198]可通过使Fmoc衍生物2b与DHP树脂结合的氨基醇2c反应，实现树脂结合的肽2d的制备(即在步骤iic)，2c与游离酸2b在偶联试剂如O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(HBTU)、外消旋抑制剂如1-羟基苯并三唑(HOBT)和叔胺如二异丙基乙胺(DIEA)的存在下反应。
[00199]如同在方案1，R3取代的氧化腈1f可与树脂结合的肽2d进行偶极环加成反应，产生两种异构体，即化合物2e的顺式和反式异构体。接着在步骤iid，通过使2e与仲胺如哌啶在极性溶剂如二甲基甲酰胺中接触，将Fmoc保护基除去而产生2f。通过步骤iie，即通过使2f与羧酸在偶联试剂如HBTU、外消旋抑制剂如HOBt和叔胺如DIEA的存在下反应，可实现肽2g的形成。在步骤iif，通过使2g与强酸如三氟乙酸和水接触，可实现肽树脂2g的断裂从而产生α-羟基-酰胺2h。
[00200]在最后的步骤iig，采用Dess-Martin periodinane氧化或Pfitzner-Moffat氧化将α-羟基-酰胺2h氧化成2i。
[00201]或者，可按以下方案3所示用树脂结合的试剂制备式I化合物。
方案3
Figure A20068003905903221
Figure A20068003905903231
[00202]在方案3，PG1在PG2的存在下进行选择性去除(步骤if)产生螺异噁唑啉异构体1i和/或1j。在步骤iiia，1i和/或1j与活化的Fmoc衍生物例如N-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(Fmoc-OSu)在温和的无机碱如碳酸钠的存在下反应，产生Fmoc衍生物3a。
[00203]可通过使Fmoc衍生物3a与DHP树脂结合的氨基醇2c反应，实现树脂结合的肽2e的制备，即在步骤iiib，2c与游离酸3b在偶联试剂(如O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(HBTU))、外消旋抑制剂(如1-羟基苯并三唑(HOBT))和叔胺(如二异丙基乙胺(DIEA))的存在下反应。
[00204]在步骤iid，通过使2e与仲胺如哌啶在极性溶剂如二甲基甲酰胺中接触，将Fmoc保护基除去而产生2f。通过使2f与羧酸在偶联试剂(如HBTU)、外消旋抑制剂(如HOBt)和叔胺(如DIEA)的存在下反应，可实现肽2g的形成。可例如通过使2g与强酸(如三氟乙酸)和水接触，实现肽树脂2g的断裂从而产生游离肽2h。
[00205]在最后一个步骤iig，可例如用Dess-Martin periodinane或次氯酸钠和TEMPO，将醇2h氧化成2i。
[00206]以下方案4示意说明了式I化合物的合成途径，该式I化合物中的R1和R2与连接它们的原子一起形成任选取代的大环杂环脂族基(heterocycloaliphatic)。
方案4
[00207]参见方案4，螺异噁唑啉酸E4与氨基酯H1在偶联试剂的存在下反应产生中间体H2。H2的大环环化产生化合物H3。酯H2的水解产生酸H4。酸H4与磺酰胺在偶联试剂的存在下反应得产物H5。
[00208]以下方案5、6、7、8和9显示的是根据上述方法之一进行的式I化合物的总合成的实例。
方案5
Figure A20068003905903242
Figure A20068003905903251
[00209]参见方案5，如前所述将受保护的叔丁基二甲基甲硅烷基羟基苯甲醛5b转化成hydroxamoyl chloride 5d。5d与环外亚甲基吡咯烷反应产生螺异噁唑啉5e。将5e脱保护成5f，然后与三氟甲磺酸酐反应，产生三氟甲磺酸酯5g。5f与胺HNU1U2反应产生中间体螺异噁唑啉5h，后者如前所述转化成本发明的化合物。
[00210]或者，可将羟基螺异噁唑啉中间体5f烷基化产生中间体5k，后者可类似地转化成本发明化合物。
Figure A20068003905903252
Figure A20068003905903261
[00211]参见方案6，二保护的吡咯烷酮与二氟二溴甲烷在HMPT和锌的存在下反应产生二氟环外亚甲基中间体6b。如前所述与氧化腈1f进行偶极加成产生二氟螺异噁唑啉6c。按类似方式，分别从6a和6e制备中间体6b和6f，然后转化成相应的取代异噁唑啉6d和6g。在其它变化方案中，可用所示的试剂，将中间体6h溴化产生6j，烷基化产生6k或氧化产生6m。
方案7：
[00212]参见方案7，所示的环外亚甲基吡咯烷与其中R3为-COOEt的1f进行偶极加成产生酯7a。使7a中的乙酯水解，接着转化成酰基氯(未显示)，然后与氨反应，产生酰胺7c。7c与三氟乙酸酐反应产生腈7d，后者通过前述方法转化成肽中间体7e。中间体7e与叠氮化物U4N3反应产生四唑7f，后者氧化成本发明化合物7g。在这个方案的变化方案中，可将酯7a转化成三唑7h，后者再转化成本发明化合物7i。
方案8：
Figure A20068003905903272
[00213]参见方案8，如前所述但使用二溴羟基碳亚胺(hydroxycarbonimidic dibromide)进行偶极加成，产生溴异噁唑啉8a。8a与芳基硼酸在钯催化剂的存在下(Suzuki条件)反应产生中间体8b，后者通过前述方法转化成本发明化合物。步骤8a和8b中的AR代表芳基或杂芳基。
方案9：
Figure A20068003905903281
[00214]参见方案9，Wittig产物9a进行偶极加成产生螺异噁唑啉9b。用例如DIBAL将9b还原产生醇9c，后者可烷基化产生中间体9e，然后可用前述方法将9e转化成本发明化合物。用例如LiOH将酯9b水解可产生羧酸9d，后者可按本文所述转化成式I化合物。
方案10：
Figure A20068003905903291
[00215]参见方案10，二保护的哌啶酮10b进行Wittig类型反应形成环外亚甲基化合物10c，后者如前所述进行偶极加成产生4.5螺异噁唑啉10d，然后10d可如前所述转化成本发明化合物。
III.制剂、给药和应用
[00216]本发明的另一个实施方案提供包含式I化合物或其药物可接受盐或盐混合物，以及药物可接受载体的药物组合物。根据另一个实施方案，式I化合物以能有效降低样品或患者中的病毒负荷的量存在，其中所述病毒编码病毒生活周期所必需的丝氨酸蛋白酶。
[00217]如果将本发明化合物的药物可接受盐用于这些组合物，所述盐优选衍自无机或有机酸和碱。所述酸盐包括以下：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷-丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱盐包括铵盐，碱金属盐如钠盐和钾盐，碱土金属盐如钙盐和镁盐，有机碱盐如二环己胺盐、N-甲基-D-葡糖胺盐和氨基酸盐如精氨酸盐、赖氨酸盐等。
[00218]而且，含碱性氮的基团可用以下物质进行季铵化：低级烷基卤，如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘；二烷基硫酸酯，如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；长链卤化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯、溴和碘；芳烷基卤，如苄基和苯乙基溴及其它。因此得到水或油可溶性或可分散性产物。
[00219]用于本发明组合物和方法的化合物也可通过添加适当的官能度进行修饰以增强选择性生物性质。这种修饰是本领域公知的，包括能提高向特定生物系统(例如血液、淋巴系统、中枢神经系统)中的生物渗透、提高口服利用度、增加溶解性以便注射给药、改变代谢和改变排泄速度的修饰。
[00220]可用于这些组合物的药物可接受载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白质如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
[00221]根据另一个实施方案，本发明的组合物配制供给药于哺乳动物。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人类。
[00222]这种本发明药物组合物可以通过口服、胃肠外、吸入喷雾、局部、直肠内、鼻内、口腔、阴道内途径或通过植入储器进行给药。本文所用术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、伤口内(intralesional)和颅内注射或输注技术。优选地，组合物口服或静脉内给予。
[00223]本发明组合物的无菌可注射形式可以是水混悬剂或油混悬剂。这些悬浮剂可用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂按本领域公知的技术进行配制。无菌可注射制剂也可以是在无毒胃肠外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如在1，3-丁二醇中的溶液剂。可以采用的可接受载体和溶剂有水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。另外，通常用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可采用任何柔和的固定油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物可用于注射剂的制备，天然的药物可接受油如橄榄油或蓖麻油也一样，特别是它们的聚氧乙烯化形式。这些油溶液剂或混悬剂还可含有常用于包括乳剂和混悬剂在内的药物可接受剂型的配制的长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或类似的分散剂。其它常用的表面活性剂如吐温(Tween)、司班(Span)和其它常用于制备药物可接受的固体剂型、液体剂型或其它剂型的乳化剂或生物利用度增强剂，也可为配制目的加以使用。
[00224]在一个实施方案中，在单药治疗中可使用本文所述蛋白酶抑制剂化合物约0.01至约100mg/kg体重/天的剂量水平，来预防和治疗抗病毒特别是抗HCV介导的疾病。在另一个实施方案中，在单药治疗中可使用本文所述蛋白酶抑制剂化合物约0.5至约75mg/kg体重/天的剂量水平，来预防和治疗抗病毒特别是抗HCV介导的疾病。通常，本发明的药物组合物要每天给予约1次至约5次，或者作为连续输注进行给予。这种给药可用作慢性或急性疗法。可与载体材料组合以产生单剂型的活性成分的数量，要根据受治疗宿主和具体的给药方式加以改变。典型的制剂要含有约5％至约95％活性化合物(w/w)。在一个实施方案中，这种制剂含有约20％至约80％活性化合物。
[00225]当本发明组合物包含式I化合物和一种或多种另外的治疗或预防药物的组合时，该化合物和该另外的药物两者都应以占单药治疗方案中通常给予的剂量的约10-100％的剂量水平存在。在另一个实施方案中，该另外的药物应以占单药治疗方案中通常给予的剂量的约10-80％的剂量水平存在。
[00226]本发明药用组合物可以以任何口服可接受的剂型进行口服给药，所述剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、水混悬剂或溶液剂。在口服用片剂的情况中，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常也加入润滑剂如硬脂酸镁。对于胶囊剂形式的口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当口服用药要求用水混悬剂时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂进行组合。如果需要，也可加入一些甜味剂、矫味剂或着色剂。
[00227]或者，本发明的药物组合物也可以以直肠内给药用栓剂的形式给予。这些栓剂可通过将活性成分与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此会在直肠中熔化释放出药物。这种材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
[00228]本发明的药物组合物也可进行局部给药，特别是当治疗靶标包括局部应用容易达到的部位或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。可容易地为每个这些部位或器官制备出合适的局部制剂。
[00229]对下肠道的局部应用可以以直肠内栓剂(见上)或以合适的灌肠剂来实现。也可使用局部透皮贴剂。
[00230]对于局部应用，可将药物组合物配制成合适的软膏剂，该软膏剂是所含的活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。本发明化合物局部给药用载体包括但不限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将药物组合物配制成合适的洗剂或乳膏剂，该洗剂或乳膏剂是所含的活性成分悬浮或溶解于一种或多种药物可接受载体中。合适的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、十六/十八醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
[00231]对于眼科用药，可将药物组合物在等渗的pH调节过的无菌盐水中配制成微粉化混悬剂(micronized suspension)，或者优选在等渗的pH调节过的无菌盐水中配制成溶液剂，同时加有或不加防腐剂如benzylalkonium chloride。或者，对于眼科用药，可将药物组合物在例如矿脂中配制成软膏剂。
[00232]本发明药物组合物也可通过气溶胶或吸入给药。这种组合物按药物制剂领域公知的技术制备，可制备成盐水溶液剂，其中使用苯甲醇或其它合适的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、氟碳和/或其它常规增溶剂或分散剂。
[00233]在一个实施方案中，将药物组合物配制成口服给药用。
[00234]在另一个实施方案中，本发明的组合物另外包含另一种抗病毒药物，优选抗HCV药物。这种抗病毒药物包括但不限于免疫调节剂如干扰素-α、-β和-γ、PEG化衍生化的干扰素-α化合物和胸腺素；其它抗病毒药物如利巴韦林、金刚烷胺和替比夫定；丙型肝炎蛋白酶的其它抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；HCV生活周期中其它靶标的抑制剂，包括解旋酶和聚合酶抑制剂；内部核糖体进入的抑制剂；广谱病毒抑制剂，如IMPDH抑制剂(例如美国专利5,807,876、6,498,178、6,344,465和6,054,472、WO 97/40028、WO98/40381、WO 00/56331中的化合物，和霉酚酸及其衍生物，包括但不限于VX-497、VX-148和/或VX-944)；或者任何上述药物的组合。另参见W.Markland等，Antimicrobial&Antiviral Chemotherapy，44，第859页(2000)和美国专利6,541,496。
Figure A20068003905903331
[00235]本文使用了以下定义(商标指本申请的提交日时可获得的产品)。
“Peg-Intron”指PEG-
Figure A20068003905903332
PEG化干扰素-α-2b，获自ScheringCorporation，Kenilworth，NJ；
“Intron”指INTRON-
Figure A20068003905903333
干扰素-α-2b，获自Schering Corporation，Kenilworth，NJ；
“ribavirin”指利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，获自Pharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA；在Merck Index(第12版)第8365条中有描述；也可获自Schering Corporation，Kenilworth，NJ，商标为或者获自Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ，商标为
Figure A20068003905903342
“Pagasys”指
Figure A20068003905903343
PEG化干扰素-α-2a，获自Hoffmann-LaRoche，Nutley，NJ；
“Roferon”指重组干扰素-α-2a，获自Hoffmann-LaRoche，Nutley，NJ；
“Berefor”指
Figure A20068003905903345
干扰素-α-2，获自Boehringer IngelheimPharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT；
Figure A20068003905903346
天然干扰素-α的纯化掺合物，如获自日本Sumitomo的Sumiferon。
Figure A20068003905903347
干扰素-α-n1，获自英国Glaxo_Wellcome LTd.；
Figure A20068003905903348
天然干扰素-α的混合物，Interferon Sciences制造，获自Purdue Frederick Co.，CT。
[00236]本文所用术语“干扰素”指能抑制病毒复制和细胞增殖及调节免疫反应的高度同种特异性蛋白质(homologous species-specificprotein)家族的成员，如干扰素-α、干扰素-β或干扰素-γ。Merck Index(第12版)第5015条。
[00237]根据本发明的一个实施方案，干扰素是干扰素-α。根据另一个实施方案，本发明的治疗组合采用天然干扰素-α2a。或者，本发明的治疗组合采用天然干扰素-α2b。在另一个实施方案中，本发明的治疗组合采用重组干扰素-α2a或2b。在又一个实施方案中，干扰素是PEG化的干扰素-α-2a或2b。适合于本发明的干扰素包括：
(a)
Figure A20068003905903349
(干扰素-α2B，Schering Plough)，
(b)
Figure A200680039059033410
(c)
(d)
Figure A20068003905903352
(e)
Figure A20068003905903353
(f)
(g)
(h)共有(consensus)干扰素-α，获自Amgen，Inc.，Newbury Park，CA，
(i)
Figure A20068003905903356
(j)
Figure A20068003905903357
(k)
(l)ALBUFERONTM。
[00238]熟练的从业人员会认识到，蛋白酶抑制剂优选进行口服给予。干扰素并不通常口服给予。尽管如此，本文的内容决不将本发明的方法或组合限制于任何具体的剂型或给药方案。因此，本发明的组合中的每种成分可单独给予、一起给予或以其任何组合来给予。
[00239]在一个实施方案中，蛋白酶抑制剂和干扰素在单独的剂型中给予。在一个实施方案中，任何另外的药物作为与蛋白酶抑制剂所成的单剂型的一部分来给予，或者作为单独剂型来给予。由于本发明涉及各化合物的组合，每种化合物的具体数量可能由组合中的每种其它化合物的具体数量来决定。熟练的从业人员会认识到，干扰素的剂量通常以IU为单位测量(例如约四百万IU至约一千两百万IU)。
[00240]因此，可与本发明化合物组合使用的药物(不管是充当免疫调节剂还是其它物剂)包括但不限于AlbuferonTM(白蛋白-干扰素-α)，获自Human Genome Sciences；PEG-(PEG化干扰素-α-2b，获自Schering Corporation，Kenil worth，NJ)；
Figure A200680039059033510
(干扰素-α-2b，获自Schering Corporation，Kenilworth，NJ)；利巴韦林(1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，获自ICN Pharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA；在Merck Index(第12版)第8365条中有描述)；
Figure A20068003905903361
(Schering Corporation，Kenilworth，NJ)；
Figure A20068003905903362
(Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)；
Figure A20068003905903363
(PEG化干扰素-α-2a，获自Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)；
Figure A20068003905903364
(重组干扰素-α-2a，获自Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)；
Figure A20068003905903365
(干扰素-α-2，获自Boehringer Ingelheim Pharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT)；(天然干扰素-α的纯化掺合物，如Sumiferon，获自日本Sumitomo)；
Figure A20068003905903367
(干扰素-α-n1，获自英国GlaxoWellcome Ltd.)；(天然干扰素-α的混合物，InterferonSciences制造，获自Purdue Frederick Co.，CT)；干扰素-α；天然干扰素-α-2a；天然干扰素-α-2b；PEG化干扰素-α-2a或2b；共有干扰素-α(Amgen，Inc.，Newbury Park，CA)；
Figure A20068003905903369
Figure A200680039059033610
(Schering Plough，干扰素-α2B+利巴韦林)；PEG化干扰素-α(Reddy，K.R.等，“Efficacy and Safety of Pegylated(40-kd)Interferon alpha-2a Compared with Interferon alpha-2a in NoncirrhoticPatients with Chronic Hepatitis C(PEG化(40-kd)干扰素-α2a与干扰素-α2a相比在慢性丙型肝炎非肝硬化患者中的有效性和安全性)”(Hepatology，33，第433-438页(2001)；共有干扰素(Kao，J.H.等，“Efficacy of Consensus Interferon in the Treatment of ChronicHepatitis(共有干扰素在慢性肝炎治疗中的效果)”J.Gastroenterol.Hepatol 15，第1418-1423页(2000)；类淋巴母细胞或“天然”干扰素；干扰素-τ(Clayette，P.等，“IFN-tau，A New Interferon Type I withAntiretroviral activity(干扰素-tau，一种新的具有抗逆转录酶病毒活性的I型干扰素)”Pathol.Biol.(巴黎)47，第553-559页(1999)；白细胞介素-2(Davis，GX.等，“Future Options for the Management of Hepatitis C.(应对丙型肝炎的未来选择)”Seminars in Liver Disease，19，第103-112页(1999)；白细胞介素-6(Davis等，“Future Options for the Management ofHepatitis C(应对丙型肝炎的未来选择).”Seminars in Liver Disease，19，第103-112页(1999)；白细胞介素-12(Davis，GX.等，“Future Options forthe Management of Hepatitis C(应对丙型肝炎的未来选择).”Seminars inLiver Disease，19，第103-112页(1999)；和能增强I型辅助T细胞应答的发展的化合物(Davis等，“Future Options for the Management ofHepatitis C.(应对丙型肝炎的未来选择)”Seminars in Liver Disease，19，第103-112页(1999))。还包括能刺激干扰素在细胞中的合成的化合物(Tazulakhova，E.B.等，“Russian Experience in Screening，analysis，andClinical Application of Novel Interferon Inducers(俄罗斯在新干扰素诱生剂的筛查、分析和临床应用方面的经验)”J.Interferon Cytokine Res.，21，第65-73页)，所述化合物包括但不限于单独用或与托普霉素组合用的双链RNA，和咪喹莫特(3M Pharmaceuticals；Sauder，D.N.“Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod(咪喹莫特的免疫调节和药理性质)”J.Am.Acad.Dermatol.，43，第S6-11页(2000)。
[00241]能刺激干扰素在细胞中的合成的化合物(Tazulakhova，E.B.等，“Russian Experience in Screening，analysis，and ClinicalApplication of Novel Interferon Inducers(俄罗斯在新干扰素诱生剂的筛查、分析和临床应用方面的经验)”J.Interferon Cytokine Res.，21，第65-73页)包括但不限于单独用或与托普霉素组合用的双链RNA，和咪喹莫特(3M Pharmaceuticals；Sauder，D.N.“Immunomodulatory andPharmacologic Properties of Imiquimod(咪喹莫特的免疫调节和药理性质)”J.Am.Acad.Dermatol.，43，第S6-11页(2000)。
[00242]其它可与本发明化合物组合使用的非免疫调节性化合物或免疫调节性化合物包括但不限于WO 02/18369中所指定的化合物(参见例如第273页第9-22行和第274页第4行至第276页第11行)，该专利通过引用结合到本文中。
[00243]其它的药物包括各个已公布的美国专利申请中描述的那些药物。这些公布说明书提供了关于可与VX-950在本发明方法中组合使用、特别是用以治疗肝炎的化合物和方法的另外教导。任何这种方法和组合物都认为可与本发明的方法和组合物进行组合使用。为简便起见，这些公布说明书的公开内容以提及公布号的方式进行提及，但应注意的是，有关具体化合物的公开内容通过引用特地结合到本文中。示例性的这种公布说明书包美国专利公布号20040058982；美国专利公布号20050192212；美国专利公布号20050080005；美国专利公布号20050062522；美国专利公布号20050020503；美国专利公布号20040229818；美国专利公布号20040229817；美国专利公布号20040224900；美国专利公布号20040186125；美国专利公布号20040171626；美国专利公布号20040110747；美国专利公布号20040072788；美国专利公布号20040067901；美国专利公布号20030191067；美国专利公布号20030187018；美国专利公布号20030186895；美国专利公布号20030181363；美国专利公布号20020147160；美国专利公布号20040082574；美国专利公布号20050192212；美国专利公布号20050187192；美国专利公布号20050187165；美国专利公布号20050049220和美国专利公布号US2005/0222236。
[00244]本发明可还涉及到给予细胞色素P450单加氧酶抑制剂。CYP抑制剂可用于增加被CYP所抑制的化合物的肝脏浓度和/或增加血液水平。
[00245]如果本发明的某个实施方案涉及CYP抑制剂，任何能改善相关NS3/4A蛋白酶的药代动力学的CYP抑制剂都可用于本发明的方法中。这些CYP抑制剂包括但不限于利托那韦(WO 94/14436)、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环胞菌素、氯美噻唑、西咪替丁、伊曲康唑、氟康唑、咪康唑、氟伏沙明、氟西汀、奈法唑酮、舍曲林、茚地那韦、奈非那韦、氨普那韦、呋山那韦、沙奎那韦、洛匹那韦、地位韦啶、红霉素、VX-944和VX-497。优选的CYP抑制剂包括利托那韦、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环胞菌素和氯美噻唑。有关利托那韦的优选剂型参见美国专利号6,037,157及其中引述的文献：美国专利号5,484,801、美国申请系列号08/402,690、WO 95/07696和WO 95/09614。
[00246]测量某化合物抑制细胞色素P450单加氧酶活性的能力的方法是公知的。参见例如美国专利号6,037,157和Yun等，DrugMetabolism&Disposition，第21卷，第4003-407页(1993)。
[00247]患者的体况改善时，如有必要可给予维持剂量的本发明化合物、组合物或组合。之后随着症状变化可将给药剂量或频率或两者减少到能使改善的体况得以保持的水平。当症状减轻到所需的水平时，治疗应停止。但是，患者可能需要长期进行断续治疗，即在疾病症状有任何复发时进行治疗。
[00248]还应认识到，针对任何特定患者的具体剂量和治疗方案要根据多种因素而定，包括所采用的具体化合物的活性、患者年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速度、药物组合及主治医师的判断和所治疗的具体疾病的严重程度。活性成分的数量也要根据具体描述的化合物以及组合物中另外的抗病毒药物的存在与否和特性而定。
[00249]根据另一个实施方案，本发明提供通过将本发明的药物可接受组合物给予感染病毒的患者来治疗所述患者的方法，该病毒以其生活周期所必需的病毒编码丝氨酸蛋白酶为特征。在一个实施方案中，本发明的方法用来治疗遭受HCV感染的患者。这种治疗可完全根除病毒感染或减少其严重程度。在另一个实施方案中，患者是人类。
[00250]在一个另选的实施方案中，本发明的方法另外包括将抗病毒药物、优选抗HCV药物给予所述患者的步骤。这种抗病毒药物包括但不限于免疫调节剂如干扰素-α、-β和-γ、PEG化衍生化的干扰素-α化合物和胸腺素；其它抗病毒药物如利巴韦林、金刚烷胺和替比夫定；丙型肝炎蛋白酶的其它抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；HCV生活周期中其它靶标的抑制剂，包括但不限于解旋酶和聚合酶抑制剂；内部核糖体进入的抑制剂；广谱病毒抑制剂，如IMPDH抑制剂(例如美国专利5,807,876和6,498,178中所公开的VX-497和其它IMPDH抑制剂，以及霉酚酸及其衍生物)；细胞色素P-450的抑制剂如利托那韦，或者任何上述药物的组合。
[00251]这种另外的药物可作为包含本发明化合物和另外的抗病毒药物的单剂型的一部分给予所述患者。或者，另外的药物可作为多剂型的一部分与本发明化合物分开给予，其中所述另外的药物在包含本发明化合物的组合物的给予之前、同时或之后给予。
[00252]还可将药物组合物开在“患者包(patient pack)”中给予患者，该患者包是在单一包装中装着整个疗程药物，通常为水泡眼包装(blister pack)。患者包具有优于传统处方的优点，传统处方是药剂师从药库(bulk supply)分派患者所要的药物，而患者包的优点是患者通常能接触到装在患者包中的包装插页，该包装插页往往是传统处方没有的。已证实附上包装插页能增进患者服从医师的指示。
[00253]应认识到，通过单一的患者包或每种制剂的患者包的方式来给予本发明的组合，且包装中附有指导患者正确使用本发明的包装插页(package insert)，这一点是本发明的合乎需要的附加特征。
[00254]本发明的又一个方面是包含至少一种式I化合物(其剂量根据本发明而定)和信息插页(information insert)的包装，所述信息插页载有关于本发明的组合的使用的说明。本发明的任何组合物、剂型、治疗方案或其它实施方案都可在药物包(pharmaceutical pack)中提供。在本发明的一个另选实施方案中，药物包还包含一种或多种本文所述的另外药物。所述一种或多种另外药物可以在同一个药物包中提供，或者在分开的药物包中提供。
[00255]本发明的另一个方面涉及供患者用于治疗HCV感染或用于预防HCV感染(或者用于本发明的另一个方法中)的包装药盒，该包装药盒包含：每种药物成分的单个或多个药物制剂；用以在储存过程中和给药前装着药物制剂的容器；和关于如何以能有效治疗或预防HCV感染的方式进行给药的说明。
[00256]因此，本发明提供用以同时或序贯给予一定剂量的至少一种式I化合物(任选还有另外的药物)的药盒。通常，这种药盒会包含每种化合物和任选的另外药物在药物可接受载体中(和在一种或多种药物制剂中)的组合物，以及关于如何同时或序贯给药的书面说明。
[00257]在另一个实施方案中，提供这样的包装药盒，其包含一种或多种供自我给药的剂型；用以在储存过程中和使用前装着所述剂型的容器(优选密封容器)；和关于患者如何进行用药的说明。该说明通常会是在包装插页、标签上和/或在药盒的其它组件上的书面说明，而剂型如本文所述。每个剂型可单独装着，如在一张金属箔-塑料薄片中，每个剂型与其它剂型分开装在独立的单元(cell)或泡眼(bubble)中，或者各剂型可装在单个容器中，如在塑料瓶中。本发明的药盒通常还会包括用以包装药盒各成分即剂型的用具、容器具和书面使用说明。这种包装用具可采取纸板或纸盒、塑料或金属箔袋等形式。
[00258]本发明的药盒可体现本发明的任何方面，如任何组合物、剂型、治疗方案或药物包。本发明的药物包和药盒任选包含多个组合物或剂型。因此，本发明当中所包括的会有含一种组合物或超过一种组合物的药物包和药盒。
[00259]在又一个实施方案中，本发明提供对预定给予患者的生物物质进行预处理的方法，所述方法包括使所述生物物质与包含本发明化合物的药物可接受组合物接触的步骤。这种生物物质包括但不限于血液及其成分如血浆、血小板、血细胞亚群等；器官如肾脏、肝脏、心脏、肺等；精子和卵子；骨髓及其成分；以及要输注到患者中的其它流体如盐水、右旋糖等。
[00260]根据另一个实施方案，本发明提供处理可能会接触到以其生活周期所必需的病毒编码丝氨酸蛋白酶为特征的病毒的材料的方法。该方法包括使所述材料与本发明的化合物接触的步骤。这种材料包括但不限于手术仪器和手术服装(例如衣服、手套、围裙、长袍、口罩、眼睛、鞋靴等)；实验室仪器和服装(例如衣服、手套、围裙、长袍、口罩、眼睛、鞋靴等)；血液收集装置和材料；及侵入性装置如分流器(shunt)和固定模(stent)。
[00261]在另一个实施方案中，本发明化合物可用作实验室用具来帮助分离病毒编码的丝氨酸蛋白酶。这个方法包括以下步骤：提供附到固相载体上的本发明化合物；使所述固相载体与含有病毒丝氨酸蛋白酶的样品在能引起所述蛋白酶结合到所述固相载体的条件下接触；将所述丝氨酸蛋白酶从所述固相载体洗脱下来。在一个实施方案中，通过这个方法分离的病毒丝氨酸蛋白酶是HCV NS3-NS4A蛋白酶。
[00262]本文件中引述的所有参考文献通过引用结合到本文中。
IV.方法和实施例
[00263]为能更完全地理解本文描述的本发明，提供了以下方法和实施例。应认识到，这些方法和实施例只是出于说明目的，并不能解释为以任何方式限制本发明。
A.式I化合物的中间体的制备
[00264]下文给出各种制备可用于合成式I化合物的中间体的方法。
Figure A20068003905903421
3-(苄基氧基羰基氨基)-4-环丁基-2-羟基丁酸的制备
[00265]将按WO 04/113294中所述方法制备的羟腈(1g，3.65mmol)于浓HCl(12mL)中的溶液加热回流18小时。将反应物真空浓缩，得到所需的氨基酸，为HCl盐(1.7g)，其不经进一步纯化用于下一步骤。用DIPEA(2.68g)和Z-OSu(5.16g)处理以上HCl盐在THF中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌8小时。用甲苯和HCl(12N，直到pH＝1)稀释反应混合物。进行分离后，有机层用饱和NaHCO3(50mL，两次)进行萃取。水层用HCl(6N)调成酸性，直到pH＝1，用EtOAc(200mL)进行萃取。将合并的有机层干燥，真空浓缩，得到标题化合物(0.6g)。(M+1)308。
Figure A20068003905903431
1-环丁基-3-羟基-4-(甲基氨基)-4-氧代丁-2-基氨基甲酸苄酯的制备
[00266]向3-(苄基氧基羰基氨基)-4-环丁基-2-羟基丁酸(250mg，0.81mmol)的DCM(20mL)溶液加入HOSu(140mg，1.22mmol)，EDC(234mg，1.22mmol)。搅拌1小时后，向以上混合物加入甲胺的THF溶液(2N，0.81mL)。将反应混合物搅拌18小时，然后真空浓缩。残余物通过Gilson Prep纯化，得到标题化合物(135mg)。
1H-NMR(CDCl3)：δ7.54-7.28(m，5H)，6.67(NH，1H)，5.03(dd，2H)，3.68(m，1H)，2.73(m，3H)，2.26(m，1H)，1.97-1.31(m，9H).(M+1)321.
Figure A20068003905903432
1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸苄酯的制备
[00267]向3-(苄基氧基羰基氨基)-4-环丁基-2-羟基丁酸(600mg，1.95mmol)的DCM(20mL)溶液加入HOSu(337mg，2.93mmol)、EDC(562mg，2.93mmol)。搅拌1小时后，向以上混合物加入环丙胺(223mg，3.9mmol)。产物用EtOAc进行萃取。接着将合并的有机层用HCl(IN)、水、NaHCO3和盐水洗涤，然后真空浓缩，得到1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基氨基甲酸苄酯(530mg)。(M+1)347。
Figure A20068003905903441
3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基丁酰胺的制备
[00268]向CBz酰胺(530mg，1.53mmol)的MeOH(30mL)溶液加入Pd(OH)2/C(106mg)。所得混合物在H2(1atm)下搅拌18小时。过滤后，将滤液真空浓缩，得到标题化合物(300mg)。
1H-NMR(CDCl3)：δ3.29(m，1H)，2.74(m，1H)，2.37-1.66(m，9H)，1.40(m，1H)，0.78(m，2H)，0.51(m，2H).(M+1)213.
[00269]以下化合物按与制备3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基丁酰胺相似的方式用适当的胺进行制备：
Figure A20068003905903442
3-氨基-N-环丙基-2-羟基庚-6-炔酰胺的制备
Figure A20068003905903443
[00270]3-氨基-N-环丙基-2-羟基庚-6-炔酰胺按N.Kobayashi等在US 2003/153788中的描述进行制备，该专利通过引用整体结合到本文中。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：8.18(s)，6.34(s)，4.22(s)，3.45(s)，3.17(s)，2.84(s)，2.69(d，J＝3.2Hz)，2.30(m)，2.24(m)，1.70(m)，1.59(m)，0.62(d，J＝5.0Hz)，0.53(s)ppm；FIA m/z 197.01 ES+.
Cbz-保护的(3S)-3-氨基-4-环丙基-2-羟基-N-甲基丁酰胺的制备
Figure A20068003905903451
步骤1：(2S)-1-氰基-3-环丙基-1-羟基丙-2-基氨基甲酸苄酯的制备
Figure A20068003905903452
[00271]向10℃下的醛(7.9g，32mmol)的MeOH(50mL)溶液加入Na2S2O4(6.13g，35.2mmol)，将所得混合物升温至室温，搅拌2小时，然后冷却至10℃。向此反应混合物加入KCN的水(50mL)溶液。在室温下搅拌18小时后，将混合物用TBME(100mL，两次)进行萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，干燥，真空浓缩，得到标题化合物(8g)。(M+1)275。
步骤2：3-(苄基氧基羰基氨基)-4-环丙基-2-羟基丁酸-(3S)-甲酯的制备
Figure A20068003905903453
[00272]向-20℃下的羟腈(1g，3.65mmol)的MeOH(15mL)溶液鼓泡通入干HCl气体流30分钟。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用氮气吹洗30分钟，然后浓缩。将0℃下的残余物用冰水猝灭，然后在室温下搅拌1小时。产物用EtOAc进行萃取。将合并的有机层用NaHCO3、水、盐水洗涤，真空浓缩，得到标题化合物(0.5g)。
1H-NMR(CDCl3)δ：7.31-7.30(m，5H)，5.09(d，2H)，4.44-4.14(m，2H)，3.78(d，3H)，1.58-1.42(m，2H)，0.70(m，1H)，0.47(t，2H)，0.11-0.01(m，2H).(M+1)308.
步骤3：(3S)-3-(苄基氧基羰基氨基)-4-环丙基-2-羟基丁酸的制备
Figure A20068003905903461
[00273]向步骤2的甲酯(400mg；1.3mmol)于THF(8mL)和水(6.63mL)中的溶液加入LiOH(1N；1.37mL)。将反应混合物搅拌30分钟，然后用1.0N HCl酸化至pH＝3～4。将混合物用EtOAc(20mL，两次)进行萃取。将合并的有机层用水、盐水洗涤，然后真空浓缩，得到标题化合物(370mg)。(M+1)294。
步骤4：(2S)-1-环丙基-3-羟基-4-(甲基氨基)-4-氧代丁-2-基氨基甲酸苄酯的制备。
Figure A20068003905903462
[00274]向(3S)-3-(苄基氧基羰基氨基)-4-环丙基-2-羟基丁酸(180mg，0.26mmol)的DCM(20mL)溶液加入HOSu(105mg，0.92mmol)、EDC(175mg，0.92mmol)。搅拌30分钟后，向以上混合物加入甲胺的THF溶液(2N，0.92mL)。将反应混合物搅拌18小时，然后真空浓缩。残余物通过Gilson Prep纯化，得到标题化合物(50mg)。
1H-NMR(CDCl3)：δ7.53-7.26(m，5H)，6.83(NH，1H)，5.25(NH，1H)，5.05(m，2H)，4.25-3.89(m，3H)，2.70(m，3H)，1.4(m，1H)，0.86(m，1H)，0.61(m，1H)，0.38(m，2H)，0.33(m，2H).(M+1)307.
[00275]以下化合物可按类似的方式用适当的胺进行反应后加以氢化来制备。
Figure A20068003905903471
[00276]以下化合物按Perni，R.等在WO 01/74768中所述的方法来制备，该专利通过引用整体结合到本文中。
Figure A20068003905903472
(S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸的制备
[00277]在5L RB烧瓶中将叔丁基甘氨酸(74g，0.56mol，1.02当量)溶于饱和碳酸氢钠溶液(11vol)中。将环戊基2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸酯(126g，0.55mol，1当量)溶于丙酮(5.5体积)，所得溶液在室温下通过加料漏斗慢慢加入到该甘氨酸溶液中。将反应混合物在室温下搅拌至反应结束(大约4小时)。减压除去丙酮，剩余的水溶液用30％乙酸乙酯的己烷溶液萃取(三次，每次5.5体积)。弃去有机层。用2NHCl将水层的pH调至2，然后用乙酸乙酯萃取(三次，5.5体积)。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，减压除去溶剂，得到透明的油，该油慢慢发生结晶。将粗产物从己烷/乙酸乙酯结晶出来，得到(S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸，为白色固体(82g)。将母液进行气提，再获得结晶(合并产量105.54g，79％产率)。
磺酰基化合物的制备
Figure A20068003905903474
[00278]以上所示的化合物S1、S2、S3和S4按WO 2005/095403和PCT/US2005/010494中所述的程序来制备，这两个专利通过引用整体结合到本文中。具体的说，向0℃下的氯磺酰异氰酸酯(10mL，115mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液加入t-BuOH(11mL，1当量)。将所得混合物搅拌60分钟，然后通过套管加入到0℃下的环丙胺(6.6g)于CH2Cl2(200mL)和三乙胺(30mL)中的溶液，同时通过加料漏斗加入三乙胺(50mL)的CH2Cl2(100mL)溶液。内部温度保持在8℃以下。加入完毕后，在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用CH2Cl2稀释，转移到分液漏斗，用1N HCl(两次，每次400mL)、盐水(300mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。将所得产物从乙酸乙酯/己烷重结晶，产生16.8g(71.3mmol，62％)S3。用三氟乙酸的CH2Cl2溶液将化合物S3脱保护，得到定量产率的化合物S4。
[00279]将氨气通过气体分散管鼓泡通入冷却至0℃保持5分钟的THF(40mL)中。向0℃下的此溶液加入环丙基磺酰氯(1克，7.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后滤过硅胶塞，接着用EtOAC洗脱，得到750mg(6.19mmol，87％)环丙基磺酰胺。
1H-NMR(500MHz，甲醇-d4)：4.79(s，2H)，2.59-2.54(m，1H)，1.06-0.96(m，4H).
[00280]向0℃下的化合物XX5(1.37g，6.41mmol)的THF(30mL)溶液滴加硼烷-二甲硫(3.85mL，7.8mmol，2.0M(于甲苯中))。将反应混合物搅拌1小时，期间逐渐升温至室温，用H2O(20mL)猝灭，用乙酸乙酯(三次，每次30mL)进行萃取。将合并的有机层干燥，减压浓缩，得到1.3g无色油，其不经进一步纯化加以使用。在惰性气氛下向-78℃下的草酰氯(2.24mL，25.6mmol)的CH2Cl2(15mL，无水)溶液滴加DMSO(2.73mL，38.5mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液。搅拌10分钟后，滴加醇(1.3g，6.41mmol)的CH2Cl2(6mL)溶液。再过10分钟后，加入三乙胺(7.15mL，51.3mmol)的CH2Cl2溶液，再搅拌反应30分钟，期间逐渐升温到0℃。将反应混合物用1M HCl(20mL)洗涤，然后用盐水(20mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，减压浓缩。所得的油通过硅胶层析法进行纯化，得到748mg(2个步骤59％)醛XX6。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：9.75(s，1H)，3.67(s，3H)，2.91-2.85(m，1H)，2.78-2.74(m，1H)，2.56-2.52(m，1H)，1.74-1.71(m，2H)，1.66-1.58(m，4H)，1.27-0.95(m，5H).
[00281]向化合物XX6(581mg，2.9mmol)和K2CO3(811mg，5.9mmol)的MeOH(15mL)溶液加入1-二氮杂-2-氧代丙基膦酸二甲酯(676mg，3.5mmol，Synlett 1996，第521页)。在室温下搅拌反应1小时，用Et2O(20mL)稀释，用饱和NaHCO3溶液(10mL，水溶液)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，减压浓缩，得到600mg(100％)炔XX7，其不经进一步纯化加以使用。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：3.69(s，3H)，2.48-2.37(m)，1.95(s，H)，1.73-1.60(m)，1.30-0.94(m).
[00282]向化合物XX7(600mg，2.9mmol)于THF/H2O/MeOH溶液(25mL，2∶1∶2)中的溶液加入一水合LiOH(850mg，20.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，用1N HCl(25mL)酸化，用EtOAc(三次，每次15mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，浓缩，得到533mg(99％)羧酸XX8，其不经进一步纯化加以使用。
Figure A20068003905903491
[00283]向化合物XX5(100mg，0.5mmol)的CH2Cl2(2.5mL)溶液加入EDC(107mg，0.6mmol)、HOBt(76mg，0.6mmol)和三乙胺(195μL，1.4mmol)。向该被活化的酸溶液加入甲胺盐酸盐(38mg，0.6mmol)，在室温下搅拌反应12小时。将反应混合物用H2O(2mL)、1NHCl(2mL)和饱和NaHCO3溶液(2mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，浓缩，得到100mg酰胺XX9，其不经进一步纯化加以使用。1H-NMR(500MHz，CDCl3)3.61(s，3H)，2.75-2.70(m，4H)，2.48-2.42(m，1H)，2.28-2.24(m，1H)，1.66-1.48(m，6H)，1.35-0.90(m，5H)。
[00284]向化合物XX9(100mg，0.5mmol)于THF/H2O/MeOH溶液(3mL，2∶1∶2)中的溶液加入一水合LiOH(124mg，3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，用1N HCl(4mL)酸化，用EtOAc(3x5mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，浓缩，得到87mg羧酸XX10，其不经进一步纯化加以使用。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)11.32(s，H)，2.75-2.64(m，H)，2.52-2.46(m，H)，2.37-2.33(m，H)，2.25(td，J＝8.7，2.9Hz，H)，1.97(s，H)，1.79(s，H)，1.74-1.62(m，H)，1.59-1.49(m，H)，1.23-1.12(m，H)，1.08-0.81(m，H).
[00285]中间体XX12按上述制备中间体XX10的程序进行制备，例外的是用吡咯烷代替甲胺盐酸盐作为试剂。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)11.47(s，1H)，3.45-3.32(m，4H)，2.76-2.72(m，1H)，2.64-2.59(m，1H)，2.37-2.33(m，1H)，1.92-1.76(m，4H)，1.71-1.57(m)，1.22-0.84(m).
Figure A20068003905903502
[00286]在30分钟内，向回流状态下的化合物XX5(1g，4.7mmol)和黄色HgO(1.01g，4.7mmol)于CCl4(23mL)中的溶液滴加溴(264μL，5.1mmol)的CCl4(5mL)溶液。在回流下搅拌反应1小时，冷却至室温，用CH2Cl2(20mL)稀释，用1N HCl(10mL)、H2O(10mL)和盐水(10mL)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，减压浓缩，得到1.3g化合物XX13，为无色油，其不经进一步纯化加以使用。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：3.67(s，3H)，3.52-3.44(m，2H)，2.63-2.58(m，1H)，1.70-1.64(m，3H)，1.60-1.54(m，3H)，1.24-0.92(m，5H).
[00287]向化合物XX13(578mg，2.3mmol)的DMSO(12mL)溶液加入硼氢化钠(177mg，4.7mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌1小时，用H2O(10mL)稀释，用己烷(3x15mL)萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，减压浓缩。通过硅胶层析法进行纯化，以EtOAc/石油醚洗脱得到204mg化合物XX14。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：3.59(s，3H)，2.18(m，1H)，1.69-1.43(m，6H)，1.21-0.83(m，8H).
[00288]中间体XX15按制备中间体XX10的程序进行制备，步骤b，例外的是用底物XX14代替XX9。
Figure A20068003905903511
[00289]向(S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酸(787mg，6.0mmol)、溴苯(632μL，6.0mmol)、K2CO3(1.24g，9.0mmol)和CuI(114mg，0.6mmol)的溶液中加入N，N-二甲基乙酰胺(7.5mL)。将该内容物在密封压力容器中90℃下搅拌16小时。将反应混合物用H2O(15mL)稀释，冷却至0℃，用1N HCl酸化至pH～5。用EtOAc(3x20mL)萃取混合物，合并的有机层用盐水(1x15mL)洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩。所得的残余物通过硅胶层析法进行纯化，得到150mg(12％)化合物XX16。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.11-7.09(m，2H)，6.69(t，J＝7.3Hz，1H)，6.60-6.59(m，2H)，3.69(s，1H)，1.02(s，9H).
Figure A20068003905903521
[00290]中间体XX17按制备XX16的程序进行制备，例外的是用1-溴-3-甲氧基苯代替溴苯作为试剂。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：6.98(t，J＝8.1Hz，1H)，6.24-6.18(m，2H)，6.14(s，1H)，3.69(s，1H)，3.66(s，3H)，1.00(s，9H).
[00291]向(S)-3-(甲氧基羰基)-4-甲基戊酸(200mg，1.2mmol)的CH2Cl2(6mL)溶液加入EDC(264mg，1.4mmol)、HOBt(186mg，1.4mmol)和三乙胺(481μL，3.5mmol)。向该被活化的酸溶液加入环己胺(158μL，1.4mmol)，搅拌反应4小时。将反应混合物用H2O(3mL)、1N HCl(3mL)和饱和NaHCO3溶液(3mL)洗涤。有机层用MgSO4干燥，减压浓缩，得到290mg化合物XX18，其不经进一步纯化加以使用。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：5.78(d，J＝7.5Hz，1H)，3.69-3.61(m，4H)，2.73-2.69(m，1H)，2.45-2.40(m，1H)，2.24-2.20(m，1H)，1.85(m，1H)，1.82-1.76(m，2H)，1.63-1.60(m，2H)，1.54-1.50(m，1H)，1.31-1.22(m，2H)，1.12-1.00(m，3H)，0.90-0.85(m，6H).
[00292]中间体XX19按上述制备化合物XX10的程序进行制备，例外的是用底物XX18代替XX9。ES(+)MS：m/e 256(M+H)+。
Figure A20068003905903531
[00293]中间体XX20按上述制备化合物XX18或XX19的程序进行制备，例外的是用异丙胺代替环己胺作为试剂。ES(+)MS：m/e216(M+H)+。
Figure A20068003905903532
[00294]中间体XX21按上述制备化合物XX18或XX19的程序进行制备，例外的是用苄胺代替环己胺作为试剂。ES(+)MS：m/e 264(M+H)+。
[00295]将甘氨酸甲酯盐酸盐(50.0g)悬浮于室温下的MTBE(300mL)中。向其中加入苯甲醛(40.5mL)和无水Na2SO4(33.9g)。将该悬浮液在冰-水浴中冷却20分钟，然后在15分钟内滴加三乙胺(80mL)。5分钟后，将反应从冰-水浴中移开，在室温下搅拌24小时。用200mL冰-水混合物猝灭反应，分离有机层。水层用MTBE(200mL)萃取。将有机层合并，用盐水和饱和NaHCO3(水溶液)的1∶1混合物洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩，得到62.83克N-苄基亚胺，为黄色油。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：8.30(s，1H)，7.78-7.77(m，2H)，7.45-7.40(m，3H)，4.42(s，2H)，3.78(s，3H).
[00296]将叔丁醇锂(15.13g)悬浮于室温下的无水甲苯(200mL)中。在40分钟内，向其中滴加甘氨酸甲酯的N-苄基亚胺(16.89g)和1，4-二溴-2-丁烯(19.28g)于甲苯(100mL)中的溶液。将红色溶液搅拌100分钟，然后用H2O(200mL)猝灭。将内容物转移到分液漏斗，用MTBE(200mL)稀释。进行分层，水层用MTBE萃取。将合并的有机层与1N HCl(水溶液)(500mL)搅拌3小时。进行分层，有机层用H2O(100mL)萃取。将水层合并，加入NaCl(250g)和MTBE(700mL)，用10N NaOH(水溶液)将pH调至～13。分离有机层，水层用MTBE萃取(两次，每次300mL)。将有机层合并，干燥(MgSO4)浓缩至体积～400mL。向此溶液中加入二碳酸二叔丁酯(25.0g)，搅拌反应3天。再加入二碳酸二叔丁酯(5.6g)，然后在60℃水浴中加热反应1小时。反应物以EtOAc/己烷(1∶9)为洗脱剂进行快速硅胶柱层析纯化，得到10.89g外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸甲酯。参见例如WO00/09558和Beaulieu，P.L.等，J Org.Chem.，70(15)，5869-5879，2005。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：5.78-5.71(m，1H)，5.29-5.26(m，1H)，5.11(dd，J＝1.2，10.3Hz，1H)，3.71(s，3H)，2.14(q，J＝8.8Hz，1H)，1.79(s，1H)，1.53-1.45(m，10H).
[00297]将外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸甲酯(4.2g)溶于丙酮(80mL)中，然后用水(160mL)稀释。用0.2NNaOH(水溶液)调pH至7.8向此溶液中加入枯草杆菌蛋白酶A(产品P-5380，Sigma，St.Louis，MO，USA)(4.5g)。通过滴加0.1N NaOH(水溶液)使溶液的pH保持在7.4-8.7之间3天。当对反应进行的HPLC分析(Chiralpak AD，Daicel Chemical Industries，Tokyo，4.6mmx250mm，0.5mL/分钟，10-85％2-丙醇/己烷10分钟，检测器215.4nm)表明只存在(1R，2S)-对映异构体(保留时间：(1R，2S)＝6.2分钟，(1S，2R)＝5.9分钟)时，用2N NaOH(水溶液)调pH至8.5。将反应的内容物转移到分液漏斗，用MTBE(3X400mL)萃取。将萃取物用饱和NaHCO3溶液(水溶液)(3X150mL)、水(2X200mL)洗涤，干燥(MgSO4)。将溶液过滤、浓缩，用CH2Cl2稀释，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到1.95g N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸甲酯。
Figure A20068003905903551
[00298]在室温下将N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸甲酯(125mg，0.52mmol)在CH2Cl2/TFA(1∶1，2mL)中搅拌90分钟。真空除去溶剂，得到(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸甲酯三氟乙酸盐。
Figure A20068003905903552
[00299]将化合物XX1(2.34g，9.71mmol)与LiOH·H2O(0.45g，10.7mmol)在THF/H2O/THF(3∶1∶0.5，22mL)中室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，剩余固形物吸收到CH2Cl2/EtOAc和1N HCl(水溶液)中。用CH2Cl2萃取水层，将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。将所得物质在室温下溶于CH2Cl2(10mL)，用三氟乙酸(10mL)处理。在70分钟时刻的HPLC分析表明没有原料存在。真空除去溶剂，得到粘稠浅色油。将此油吸收到另外的CH2Cl2(30mL)中，在旋转蒸发仪上蒸发，得到棕褐色固体。将此固体溶于饱和NaHCO3(水溶液)和丙酮(1∶1，50mL)中，用Fmoc-Cl(2.65g，10.2mmol)处理。4小时后，将烧瓶内容物与CH2Cl2一起转移到分液漏斗中，用2N HCl(水溶液)酸化。用CH2Cl2萃取水层，将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到1.86g(5.3mmol)XX2，为浅黄色固体。(M+1)＝350.1。
Figure A20068003905903561
[00300]使PS-Wang树脂(2.0g，1.0当量)在DMF(足够覆盖)中溶胀。将(1R，2S)-1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-乙烯基环丙烷甲酸(XX3)(922mg，1.1当量)在DCM中搅拌。向DCM溶液中加入二异丙基碳二亚胺(409uL，1.1当量)，在4℃下搅拌2小时，然后加入到树脂和DMF中。向树脂溶液加入二甲基氨基吡啶(29mg，0.1当量)的DMF溶液，振摇5小时。排液，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物XX4。
Figure A20068003905903562
2-(二环[4.1.0]庚-1-基)乙酸X2的制备：
[00301]将市售的化合物X1(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)按E.J.Kantorowski等，J Org Chem.，1999，64，570-580描述的方法转化成X2。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：9.2(br s，1H)，2.23(m，2H)，1.92(m，1H)，1.76(m，2H)，1.58(m，1H)，1.34(m，1H)，1.18(m，4H)，0.85(m，1H)，0.52(dd，1H)，0.31(t，1H)ppm.
Figure A20068003905903563
2-(1-羟基环己基)乙酸X5的制备：
[00302]化合物X4基本上按Bull.Chem.Soc.Jpn.，1971，44，1090中所描述的程序进行制备。具体的说，将溴乙酸乙酯(8.3mL)(AldrichChemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)的甲苯溶液在80℃下30分钟内滴加到充分搅拌下的环己酮X3(4.9g)和锌粉(4.9g)于甲苯中的混合物。对加入过程进行仔细监测，温度保持在80℃。加入完毕后，使混合物回流90分钟，冷却，用1N HCl水溶液分解(decompose)，用Et2O萃取。将有机层用水、NaHCO3水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到X4(5.9g)：
1H-NMR(CDCl3，500MHz)4.16(t，2H)，3.0(br s，1H)，2.46(s，2H)，1.40-1.69(m，10H)，1.27(t，3H)ppm；FIA m/z 187.1ES+.
向X4(510mg)的MeOH溶液加入1N NaOH水溶液。将反应混合物在60℃下搅拌1小时，然后真空浓缩。将残余物用水稀释，用Et2O洗涤，将水层用1N柠檬酸水溶液酸化，用EtOAc萃取。将有机层干燥(MgSO4)，真空浓缩，重结晶后得到化合物X5(220mg)：
1H-NMR(CDCl3，500MHz)3.63(s，1H)，2.45(s，2H)，1.22-1.64(m，10H)ppm；FIA m/z 157.2ES-.
Figure A20068003905903571
2-(1-甲基环己基)乙酸(X8)的制备
[00303]将市售的化合物X6(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)按N.Asao等，Tetrahedron Lett，2003，44，4265描述的方法转化成化合物X7。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：4.12(q，2H)，2.22(s，2H)，1.30-1.48(m，10H)，1.25(t，3H)，1.01(s，3H)ppm.
[00304]向化合物X7的EtOH溶液加入1N NaOH水溶液。将反应混合物在50℃下搅拌3小时，然后真空浓缩。将残余物用水稀释，用Et2O洗涤，将水层用1N柠檬酸水溶液酸化，用CH2Cl2萃取。将有机层干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到化合物X8。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：11.7(s，1H)，2.26(s，2H)，1.32-1.49(m，10H)，1.05(s，3H)ppm.
Figure A20068003905903581
2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(X12)的制备
[00305]向二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(X9)(3.13g，Aldrich)的甲苯溶液加入(乙酯基亚甲基)-三苯基正膦(12.0g，Aldrich)。将所得溶液在110℃下搅拌3天。将所得的暗色溶液真空浓缩，残余物直接进行硅胶柱纯化，得到化合物X10(4.54g)，为透明液体。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：5.66(s，1H)，4.16(q，2H)，3.98(s，4H)，3.00(t，2H)，2.38(m，2H)，1.77(m，4H)，1.27(t，3H)ppm.
[00306]化合物X11和X12按类似于对化合物X7和X8所述的方式获得：
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：3.64-3.73(m，4H)，2.35(s，2H)，1.65(ddd，2H)，1.50(ddt，2H)，1.17(s，3H)ppm.
2-(顺式-2，6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(X16)的制备
[00307]中间体X13是从市售的2，6-二甲基-g-吡喃酮(AldrichChemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)制备得到。将g-吡喃酮的溶液溶于EtOH，用10％Pd/C氢化(2atm.H2)2小时。随后滤去催化剂，将溶液真空浓缩，得到粗X13，经柱层析纯化得到纯化合物X13。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：3.72(m，2H)，2.35(m，2H)，2.21(dd，2H)，1.32(d，6H)ppm.
[00308]然后按类似于对化合物X10所述的方式从化合物X13获得化合物X14。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：5.65(s，1H)，4.15(q，2H)，3.80(dt，1H)，3.49(m，2H)，2.17(dt，1H)，2.07(dd，1H)，1.79(dt，1H)，1.28(m，9H)ppm.LC-MSm/z 199.126ES+.
[00309]然后将化合物X14的EtOAc溶液用10％湿Pd/C氢化(1atm.H2)1小时。随后滤去催化剂，将溶液真空浓缩，得到粗化合物X15，其不经进一步纯化用于下一步。然后按类似于对化合物X8所述的方式从化合物X15获得化合物X16。1H-NMR(CDCl3，500MHz)主要非对映异构体：3.50(m，2H)，2.27(d，2H)，2.07(m，1H)，1.71(m，2H)，1.19(d，6H)0.92(m，2H)ppm；主要非对映异构体：3.64(m，2H)，2.56(d，2H)，2.47(m，1H)，1.49(m，2H)，1.15(d，6H)，0.86(m，2H)ppm。
Figure A20068003905903591
2-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙酸X20的制备：
[00310]化合物X20按以上对制备化合物X16所述的程序从化合物X17(Aldrich)制备得到。
[00311]化合物X18：
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：5.66(s，1H)，4.15(q，2H)，3.98(s，4H)，3.00(m，2H)，2.38(m，2H)，1.77(m，4H)，1.27(t，3H)ppm.
[00312]化合物X19：
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：4.12(q，2H)，3.93(s，4H)，(d，2H)，1.83(m，1H)，1.72(m，4H)，1.56(dt，2H)，1.33(m，2H)，1.30(m，3H)ppm.
[00313]化合物X20：
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：3.93(s，4H)，2.28(d，2H)，1.73-1.86(m，4H)，1.57(dt，2H)，1.35(m，2H)ppm.
Figure A20068003905903601
2-(反式-2，6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸25的制备：
[00314]化合物X21和X22分别按S.Danishefsky等，J.Org.Chem.1982，47，1597-1598和D.S.Reddy等，J.Org.Chem.2004，69，1716-1719描述的方法制备。化合物X25按以上对制备化合物X16所述的方法从化合物X22制备得到。
[00315]化合物X23。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)：5.72(s，1H)，4.16(q，2H)，4.08(q，2H)，3.06(dd，1H)，2.75(dd，1H)，2.39(dd，1H)，2.05(dd，1H)，1.28(t，3H)，1.19(m，6H)ppm.
[00316]X25：
1H-NMR(CDCl3，500MHz)4.24(m，1H)，3.78(m，1H)，2.25(m，3H)，1.71(m，1H)，1.53(m，1H)，1.46(m，1H)，1.29(d，3H)，1.13(d，3H)，0.90(m，1H)ppm.
Figure A20068003905903602
2-(4-羟基-4-甲基环己基)乙酸X27的制备：
[00317]将化合物X20的二氧杂环己烷溶液用4N HCl的二氧杂环己烷溶液进行处理。将反应溶液在室温下搅拌4小时，真空浓缩，得到粗化合物X26，其不经进一步纯化用于下一步。向搅拌下的化合物X26的THF溶液慢慢加入MeMgBr(3N THF溶液)。将所得混合物在40℃下搅拌3小时，用1N柠檬酸水溶液猝灭，用EtOAc稀释。进行相分离，将有机相干燥(MgSO4)，真空浓缩，经硅胶层析纯化得到化合物X27，为两种非对映异构体的混合物：异构体1：1H-NMR(CDCl3，500MHz)：4.50(br s)，2.27(m，2H)，1.75(m，1H)，1.65(m，4H)，1.39(m，4H)，1.22(s，3H)ppm；异构体2：1H-NMR(CDCl3，500MHz)：2.12(m，2H)，1.69(m，3H)，1.56(m，2H)，1.39(m，2H)，1.12(s，3H)，1.05(m，2H)ppm。
Figure A20068003905903611
2-(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸的制备
[00318]向该甲酯(500mg；2.69mmol)于THF(21.5ml)、MeOH(21.5ml)和水(10.75ml)中的溶液加入LiOH(1N；10.75ml)。将反应混合物搅拌3小时。用HCl(1N，pH＝5)酸化反应。产物用EtOAc萃取(两次，每次20mL)。然后将合并的有机层用水、盐水洗涤，真空浓缩，得到420mg 2-(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸。
1H-NMR(CDCl3)：δ3.76-3.67(m，2H)，2.56-2.19(m，3H)，1.63(m，2H)，1.26-1.10(m，8H).(M+1)173.
Figure A20068003905903612
[00319]向化合物X30(64g，237mmol)和EDC(226g，1.19mol)的EtOAc(1.5L)溶液加入DMSO(400mL)，将所得的悬浮液冷却至0℃。向此混合物加入二氯乙酸的EtOAc溶液(1∶1v/v，130mL)，保持内部反应温度在25℃以下。将反应升温至室温，搅拌15小时，冷却至0℃，用1N HCl(1L)猝灭。将有机层分离，用H2O(2x500mL)洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩。将所得的油滤过硅胶，用EtOAc/己烷洗脱，得到48g(76％)化合物X31，为白色固体。
[00320]向树脂X32(按WO 00/23421中描述的程序制备)(100g，0.88mmol/g)加入X31(48g，179mmol)的THF(650mL)溶液，然后加入AcOH(30mL)。将混合物振摇16小时，滤出树脂，用THF(4次，每次400mL)和CH2Cl2(4次，每次400mL)洗涤，真空干燥。将滤液和洗涤液合并，浓缩，重复以上程序，得到树脂X33，其载样量(loading)大约为0.4mmol/g。
醛化合物的制备
[00321]5-氯烟碱醛按D.L.Comins等，Hetereocycles，1987，26(8)，第2159-2164页描述的方法制备。
[00322]一些其它的醛如2-氟-5-氯苯甲醛、2-甲氧基-3-甲基苯甲醛、2-甲氧基烟碱醛、2，3-二氢苯并呋喃-7-甲醛可按以下程序从相应的酸制备得到：
Figure A20068003905903621
2，3-二氢苯并呋喃-7-甲醛的制备
[00323]将2，3-二氢苯并呋喃-7-甲酸(820mg，5mmol)溶于THF(10mL)。向所得溶液加入TEA(0.7mL，5mmol)和氯甲酸甲酯(0.43mL，5mmol)。将溶液搅拌0.5小时。过滤除去白色沉淀，将滤液加入到NaBH4(437mg，12.5mmol)的H2O(5mL)溶液中。将所得溶液搅拌过夜。将反应混合物用2M HCl水溶液中和，然后用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，真空浓缩。将所得粗醇溶于DCM。向此溶液加入PCC(1.83g，7.5mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时，用二乙醚稀释，然后将醚层倾析。将合并的有机层滤过
Figure A20068003905903631
层。滤液浓缩，得到粗产物。粗产物用10％EtOAc/己烷进行柱纯化，得到450mg 2，3-二氢苯并呋喃-7-甲醛，为稍微黄色的固体。HPLC 4.3分钟。
4-氯吡啶醛的制备
[00324]将MnO2(7.3g，84mmol)和(4-氯-吡啶-2-基)甲醇(1g，7mmol)于CHCl3中的悬浮液加热回流90分钟。将混合物滤过
Figure A20068003905903633
层，真空浓缩，得到520mg 4-氯吡啶醛，为白色固体。HPLC 1.8分钟，MS 142为M＝1峰。
Figure A20068003905903634
3-氯-5-甲氧基苯甲醛的制备
[00325]让3-氯-5-甲氧基苄醇(5.0g，28.9mmol)和氯铬酸吡啶鎓盐(20％，氧化铝上，40g，37.8mmol)的混合物进行搅拌1.25小时。然后加入二乙醚(200ml)，接着将沉淀过滤。将滤液减压浓缩，所得的残余物用40％二氯甲烷、60％石油醚作为洗脱剂进行硅胶层析纯化，得到3.8g 3-氯-5-甲氧基苯甲醛(78％)。
1H-NMR(CDCl3)：3.84(s，3H)7.13(s，1H)，7.28(s，1H)，7.41(s，1H)，9.89(s，1H).
Figure A20068003905903635
1-(溴代甲基)-3-氯-5-甲基苯的制备
[00326]向回流下的m-氯二甲苯(0.96g，6.8mmol)的四氯化碳溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(1.4g，7.5mmol)，然后加入过氧化苯甲酰(1.6g，6.8mmol)。让反应搅拌进行20分钟，冷却至室温，滤去沉淀，滤液减压浓缩，所得的残余物用石油醚作为洗脱剂进行硅胶层析纯化，得到0.89g 1-(溴代甲基)-3-氯-5-甲基苯(60％)。
NMR(CDCl3)：2.31(s，3H)4.37(s，2H)7.09(s，1H)7.12(s，1H)7.20(s，1H).
Figure A20068003905903641
3-氯-5-甲基苯甲醛的制备
[00327]向钠金属(52mg，2.3mmol)的乙醇溶液加入2-硝基丙烷(0.23g，2.4mmole)，然后加入3-氯-5-甲基苄基溴(0.5g，2.3mmol)。让反应搅拌进行3小时，将形成的沉淀滤去。将滤液减压浓缩，重新溶于二乙醚中，用1N氢氧化钠(两次)、水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得的残余物用10％二氯甲烷和90％石油醚进行硅胶层析纯化，得到0.15g 3-氯-5-甲基苯甲醛(42％)。
1H-NMR(CDCl3)：2.46(s，3H)7.43(s，1H)7.56(s，1H)7.68(s，1H)，9.92(s，1H).
Figure A20068003905903642
[00328]将3-氯-5-氟-4-羟基苯甲醛(1.0克，5.7mmol)的THF(40mL)溶液与KOH(534mg，9.5mmol，1.7当量)于水(5mL)和碘乙烷(1mL，2.2当量)中的溶液一起加热回流17小时。然后将反应混合物用水转移到分液漏斗，用二氯甲烷萃取(三次，每次150mL)。将合并的有机层用10％HCl水溶液(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩成粘稠橙色液体，得到1.13g 3-氯-4-乙氧基-5-氟苯甲醛(98％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：9.84(d，J＝1.9Hz，1H)，7.71(t，J＝1.6Hz，1H)，7.53(dd，J＝1.9，10.7Hz，1H)，4.37-4.32(m，2H)，1.47-1.40(m，3H).
Figure A20068003905903651
[00329]4-乙氧基-3，5-二甲基苯甲醛按类似于制备3-氯-4-乙氧基-5-氟苯甲醛的方式制备。
1H-MR(300MHz，CDCl3)：9.89(s，1H)，7.56(s，2H)，3.91(q，7Hz，1H)，2.34(s，6H)，1.44(t，J＝7Hz，6H).
Figure A20068003905903652
[00330]4-异丙氧基-3，5-二甲基苯甲醛按类似于制备4-乙氧基-3，5-二甲基苯甲醛的方式制备。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：9.88(s，1H)，7.55(s，2H)，4.31(q，J＝6Hz，1H)，2.32(s，6H)，1.32(d，J＝6Hz，6H).
Figure A20068003905903653
[00331]4-(环丙基甲氧基)-3，5-二甲基苯甲醛按类似于制备4-乙氧基-3，5-二甲基苯甲醛的方式制备。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：9.87(s，1H)，7.55(s，2H)，3.69(d，J＝7Hz，2H)，2.35(s，6H)，1.35-1.23(m，1H)，0.67-.060(m，2H)，0.35-0.30(m，2H).
(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代吡咯烷-2-甲酸的制备
[00332]将(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸(1.0当量)的乙酸异丙酯(5体积)溶液冷却至0℃，加入TEMPO(0.05当量)。然后在1小时时间里慢慢加入漂白剂(bleach)(12.5wt％，1.2当量，2.6体积)的溶液，同时保持温度在0-5℃。将混合物搅拌，通过HPLC监测反应的完成，然后加入10％KHSO4水溶液(2.5体积)，搅拌10分钟，接着进行相分离。将有机相用5％Na2SO3水溶液(2体积)洗涤，接着用盐水(1体积)洗涤，然后共沸干燥和浓缩得到标题化合物，为固体。用乙腈(1.0体积)研磨该固体，以除去残余颜色和杂质。
1H-NMR(400MHz，DMSO)：δ4.54(m，1H)，3.82(m，1H)，3.67(m，1H)；3.15(m，1H)；≈2.50(m，1H，符合DMSO)；1.42和1.39(2s旋转异构体，9H).
(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸的制备
[00333]向甲基三苯基溴化鏻(2.2当量)于2-甲基四氢呋喃(3体积)中的悬浮液快速加入固体叔丁醇钾(2.3当量)，同时保持温度在0℃左右。将温度保持在+20℃2小时(仍为悬浮液)，再次冷却至0℃。保持温度在6℃以下，在40分钟时间里加入(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代吡咯烷-2-甲酸(1当量)。将反应升温至室温，搅拌16小时，然后冷却至0℃。用饱和NaHCO3(5体积)和水(2体积)猝灭反应，分离水层。将有机层用饱和NaHCO3/水(1.8体积/1.8体积)萃取，合并的水层滤过
Figure A20068003905903671
将水层用6N HCl(2.6体积)在环境温度下酸化，用乙酸异丙酯(16体积，然后8体积)萃取两次。将有机相干燥(MgSO4)，除去溶剂。将粗产物溶于乙酸异丙酯(10体积)，用0.5M NaOH(10体积，然后1体积)萃取。将合并的水层在环境温度下用6N HCl酸化至pH＝3，用乙酸乙酯(10体积，然后8体积)萃取两次。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，除去溶剂，粗产物从环己烷(5体积)重结晶，得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO)：δ12.9，(broad，1H)；5.00(m，2H)；4.24(dt，J＝1.9H，J＝7.3Hz，1H)，3.91(m，2H)；2.98(m，1H)；≈2.50(m，1H，符合DMSO)；1.41和1.36(2s旋转异构体，9H).
3-(3-氯苯基)-1-氧杂-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-烯-8-甲酸(5S，8S)-叔丁酯的制备
Figure A20068003905903672
[00334]在室温下，将3-氯-N-羟基亚氨苄基氯(175g，0.919摩尔)的EtOAc(2.1L)溶液加入到4-亚甲基吡咯烷-1，2-二甲酸-(S)-二叔丁酯(200g，0.707摩尔)的EtOAc(2.0L)溶液中。将所得混合物在冰浴中冷却至10℃以下，然后慢慢加入三乙胺(128mL，0.919摩尔)。将所得的混合物搅拌过夜，然后用水(3L)猝灭。进行相分离，有机相用水(2x1.0L)洗涤，用MgSO4干燥，除去溶剂，得到顺式和反式螺异噁唑啉的混合物，为油。
[00335]将两种异构体的混合物溶于THF(0.72L)，冷却至20℃。慢慢加入甲磺酸(150mL)，同时保持在20-30℃。将混合物在25℃下搅拌，7小时后通过小心加入K2CO3(300g)的水(1L)溶液进行猝灭。进行相分离，水相用乙酸异丙酯(1L)萃取。将有机相合并，真空除去大约一半的溶剂。将所得溶液用饱和盐水(250mL)和水(250mL)的1∶1混合物进行洗涤。用乙酸异丙酯(200mL)萃取水相，合并有机相，用K2CO3干燥，过滤，得到均匀的溶液。通过加入乙酸异丙酯使溶液体积达3L，然后慢慢加入草酸(20g)的乙酸异丙酯(400mL)溶液。过滤分离出固体，在真空炉中干燥。将固体悬浮于乙酸异丙酯(1.5L)和水(1.0L)中，然后慢慢加入K2CO3，直到固体完全溶解。分离有机相，用K2CO3干燥，过滤，然后慢慢加入草酸(12.5g)的乙酸异丙酯(250mL)溶液。过滤分离出固体，在真空炉中干燥，得到螺异噁唑啉，为98∶2的反式∶顺式对映异构体混合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.67-7.48(m，4H)，4.08(dd，J＝7.9，8.9Hz，1H)，3.55(s，2H)，3.27(d，J＝4.0Hz，2H)，2.46(dd，J＝7.8，13.8Hz，1H)，2.19(dd，J＝9.1，13.8Hz，1H)，1.46(d，J＝7.5Hz，9H).
Figure A20068003905903681
[00336]将化合物X36(1.0g，1.0当量)与苯甲酰硝基甲烷(583mg，1.0当量)和催化性三乙胺在20mL苯中搅拌。慢慢加入异氰酸苯酯(880μL)，搅拌40小时。滤出暗色沉淀物，向滤液中加入2mL水，将所得混合物搅拌2小时。分离有机相并浓缩，经硅胶层析纯化(10-90％乙酸乙酯/己烷梯度)得到350mg化合物X37(25％)。
(M+H＝431.2.)1H-NMR(500MHz，CDCl3)：8.19(d，2H)，7.61(t，1H)，7.56-7.46(m，2H)，4.45-4.36(m，1H)，3.99-3.88(m，1H)，3.61(d，1H)，3.39-3.33(m，2H)，2.77(m，1H)，2.17-2.12(m，1H)，1.49(s，9H)1.46(s，9H).
Figure A20068003905903691
[00337]将化合物X37(1.35g.1.0当量)在20mL 1/1 TFA/DCM中搅拌2小时。将混合物浓缩，向其中加入20mL丙酮、20mL饱和碳酸氢钠溶液和FMOC-Cl(1.22g，1.5当量)。将所得混合物搅拌3小时，用乙酸乙酯和2N HCl溶液稀释，直到水溶液变酸性。将混合物搅拌，用乙酸乙酯萃取水相，合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。浓缩物经硅胶层析纯化(100％DCM-10％MeOH/DCM梯度)，得到化合物X38。(M+H＝497.1)。
Figure A20068003905903692
[00338]向2，3-二氢苯并呋喃5-甲醛(1g，6.75mmol)的乙醇(5mL)溶液加入2.4M的NH2OH(3.3mL，8.1mmol)溶液，然后加入1.2M的Na2CO3(3.3mL，4.05mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2小时(HPLC显示没有原料残留)。将反应混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，真空浓缩。这样得到1.0g产物，为白色固体。ES-MS 164为M+1峰。
[00339]向醛肟(426mg，2.6mmol)的DMF(5mL)溶液加入NCS(697mg，5.2mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。向该溶液加入4-亚甲基吡咯烷-1，2-二甲酸-(S)-二叔丁基酯化合物1(600mg，2.1mmol)，然后在10分钟时间里加入TEA(0.37mL，2.6mmol)的DMF(2mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后加热至50-60℃保持2小时。将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释，用H2O、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，真空浓缩。粗产物经快速柱层析纯化，用30％EtOAc/己烷洗脱得到S(500-600mg)(Rf＝0.3)和R异构体(150mg)(Rf＝0.2)。ES-MS 479为M+1峰。
B.示例性的式I化合物的合成
[00340]某些示例性的式I化合物可用以下所示的方法1进行制备。
方法1：
Figure A20068003905903711
[00341]参见方法1，将环外亚甲基化合物A1脱保护成A2，后者转化成相应的Fmoc衍生物A3。树脂结合的氨基醇A4与A3在偶联试剂的存在下反应产生树脂结合的产物A5。A5与原位产生的氧化腈1f的偶极加成反应产生树脂结合的螺异噁唑啉A6，后者脱保护得到树脂结合的螺异噁唑啉A7。A7与R1-羧酸在偶联试剂的存在下反应产生A8，其中R1为R4C(O)-。螺异噁唑啉从树脂的断裂产生醇A9。用氧化试剂如Dess-Martin periodinane或次氯酸钠在TEMPO的存在下氧化A9，产生最终化合物A10。
[00342]在一些情况下，R4可含有胺官能团。在R4含有受保护的胺的情况下，受保护的胺脱保护产生游离胺，接着与活化的酸反应产生进一步修饰过的(elaborated)R4。或者，可将R4中的游离胺转化成相应的p-硝基苯基氨基甲酸酯，然后与胺或醇反应产生含有氨基甲酸酯或尿素官能度的R4化合物。
1-(环丙基氨基)-2-(6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-1-氧代己-3-基氨基甲酸烯丙酯(M1B)的制备
步骤1：1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酸烯丙酯(M1A)
Figure A20068003905903721
[00343]在0℃下，向(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(10g，53.7mmol)、DIEA(28mL，161mmol，3当量)的二氯甲烷(250mL)溶液滴加氯甲酸烯丙酯(6.8mL，64.4mmol，1.2当量)的DCM(50mL)溶液。将反应溶液升温至室温，搅拌4小时。然后慢慢加入水(300mL)，接着加入HCl水溶液(1.0N，300mL)。进行相分离，有机相用饱和NaHCO3水溶液(300mL)、盐水(300mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。所得的灰白色固体从30％己烷的EtOAc(120mL)溶液重结晶，得到标题化合物M1A，为白色固体。将母液真空浓缩，从50％己烷的EtOAc溶液重结晶，再得到4.04g M1A。将来自第二次重结晶的母液在
Figure A20068003905903722
上真空浓缩，所得的
Figure A20068003905903723
塞(
Figure A20068003905903724
plug)经快速层析纯化(Isco
Figure A20068003905903725
SiO2，从DCM到70％EtOAc的DCM溶液)，得到1.46g M1A。化合物M1A的总量为13.4g(产率93％)。(Rf～0.40，于1∶1DCM∶EtOAc中，CAM检测)。
步骤2：1-(环丙基氨基)-2-(6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-1-氧代己-3-基氨基甲酸烯丙酯结合的树脂(M1B)
Figure A20068003905903731
[00344]向装配有顶置机械搅拌器和回流冷凝器的500mL两颈圆底烧瓶中装入M1A(9.08g，33.6mmol，3当量)、对甲苯磺酸吡啶鎓(5.6g，22.4mmol，2当量)、DHP-树脂(10.2g，11.2mmol，Novabiochem，目录号01-64-0192，装载量：1.1mmol/g)和二氯乙烷(84mL，[0.4]I)。将所得混合物在80℃下轻轻搅拌3天，然后冷却至50℃，过滤。用DCM(200mL)洗涤树脂，合并的滤液真空浓缩，得到树脂M1B，后者另外用DCM(两次)、DMF(三次)、DCM-MeOH(连续三次)、Et2O洗涤，真空干燥过夜，得到浅棕色树脂。树脂M1B的装载量通过用90％TFA水溶液对其等分试样(176mg)进行裂解来测定。装载量：0.48mmol/g。
2-(1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸-(9H-芴-9-基)-甲酯结合的树脂(M1E)的制备
步骤1：3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺结合的树脂(M1D)
Figure A20068003905903732
[00345]将1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酸烯丙酯结合的树脂M1B(30g，1.0当量)用DCM溶胀。加入1，3-二甲基巴比妥酸(24.17g，12当量)和四(三苯基膦)合钯(1.49g，0.1当量)，将所得混合物振摇过夜。将混合物过滤，用DMF和DCM洗涤，得到树脂M1D。
步骤2：2-(1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸-(9H-芴-9-基)-甲酯结合的树脂(M1E)
Figure A20068003905903741
[00346]将树脂M1D(1.0g，1.0当量)与FMOC-4-环外亚甲基脯氨酸甲酸(248mg，1.1当量)、HBTU(4.8mL的0.5M DMF溶液，5.0当量)、HOBt(2.4mL的1.0M DMF溶液，5.0当量)、DIEA(836μL，10.0当量)在DMF中搅拌3小时。将所得混合物排液，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到标题化合物M1E。
Fmoc-保护异噁唑啉化合物结合的树脂(M1F)的制备
Figure A20068003905903742
[00347]将树脂M1E(2g，0.94mmol)于THF中与3-氯苯甲醛肟(5当量)和漂白剂(5％NaOCl)(15当量)振摇18小时。然后滤出树脂，用水、DMF和DCM洗涤，得到树脂化合物M1F。取树脂的等分试样进行裂解，得到LC-质谱分析用样品(M+1＝671)。
Fmoc保护异噁唑啉结合的树脂化合物(M1G)的制备
Figure A20068003905903751
[00348]将树脂M1F在20％哌啶/DMF中振摇10分钟，过滤，用DMF和DCM洗涤。将THP树脂结合的螺异噁唑啉脯氨酸(0.14mmol，0.3g)与DMF 2.3mL中的FMOC-1-3-苯并噻吩基-ALA(0.56mmol，0.25g)、HOBT(0.56mmol，0.075g)、N，N-二异丙基乙胺(0.56mmol，0.072g)、HBTU(0.56mmol，0.21g)混合，搅动48小时。将树脂滤出，用DMF、二氯甲烷和醚洗涤，得到树脂化合物M1G。
7-((S)-3-(苯并[b]噻吩-3-基)-2-(2-环己基乙酰胺基)丙酰基)-3-(3-氯苯基)-N-((3R)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基)-1-氧杂-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-烯-8-甲酰胺(M1H)的制备
Figure A20068003905903752
[00349]向THP-树脂结合的FMOC保护螺异噁唑啉M1G加入20％哌啶的DMF(3mL)溶液。将所得混合物搅动1小时。过滤，用DMF和二氯甲烷洗涤。然后将树脂与DMF 2.3mL中的环己基乙酸(0.56mmol，80mg)、HOBT(0.56mmol，0.075g)、N，N-二异丙基乙胺(0.56mmol，0.072g)、HBTU(0.56mmol，0.21g)混合，搅动48小时。滤出树脂，用DMF、二氯甲烷和醚洗涤。然后将所获得的树脂与(50∶45∶5)三氟乙酸、二氯甲烷和三异丙基硅烷(3mL)的溶液混合，搅动过夜。将反应混合物过滤，用二氯甲烷洗涤。将滤液真空浓缩，用40％乙酸乙酯/60％二氯甲烷至100％乙酸乙酯的梯度进行硅胶层析纯化，产生醇M1H。
实施例1：化合物编号336
Figure A20068003905903761
[00350]向羟基酰胺M1H(14mg，0.018mmol)于0.38mL乙酸乙酯中的溶液加入EDC(35mg，0.18mmol)，然后加入DMSO(0.070mL)。将所得混合物在冰浴中冷却，加入二氯乙酸(15mg，0.12mmol)的乙酸乙酯(0.15mL)溶液。将反应升温至室温，让其搅拌15分钟，然后在冰浴中冷却，用1.0N HCl(0.21mL)猝灭。将溶液在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相用水洗涤，用硫酸钠干燥，真空蒸发溶剂。所得的残余物用乙酸乙酯和己烷(3∶1)作为洗脱剂进行硅胶层析纯化，得到化合物编号336，为白色固体。
8-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己-3-基氨基甲酰基)-3-苯基-1-氧杂-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-烯-7-甲酸-(9H-芴-9-基)甲酯(M1N)的制备
步骤1：Fmoc保护苯基取代异噁唑啉结合的树脂(M1L)
[00351]将树脂M1K(2g，0.94mmol)于THF中与肟(5当量)和漂白剂(5％NaOCl)(15当量)搅动18小时。然后滤出树脂，用水、DMF和DCM洗涤，得到Fmoc保护苯基取代异噁唑啉结合的树脂M1L。取树脂的等分试样进行裂解以作LC-质谱分析(M+1＝637)。
Figure A20068003905903772
[00352]将树脂M1L(0.47mmol)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟，然后滤出，用DMF和DCM洗涤。将所得的树脂与Fmoc-tBG-OH(480mg 3.0当量)、HOBT(2.82mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)，HBTU(2.82mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)和DIEA(0.493mL，6.0当量)的溶液振荡过夜。然后将树脂滤出，用DMF和DCM洗涤，得到树脂化合物M1M，其不经进一步纯化用于下一反应。
步骤2：化合物M1N
[00353]将树脂M1M(0.47mmol)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟。将树脂滤出，用DMF和DCM洗涤。将所得的树脂(140mg，0.065mmol)与异氰酸苄酯(176mg 20.0当量)振荡过夜，然后过滤，用DMF和DCM洗涤。将树脂与90％TFA的水溶液振荡30分钟。所得的溶液真空浓缩，得到化合物M1N(0.065mmol)，(M+1)661，其不经进一步纯化用于下一反应。
实施例2：化合物编号107
Figure A20068003905903782
[00354]将酰胺化合物M1N的DCM(3mL)溶液与Dess-Martinperiodinane(54mg，2当量)和t-BuOH(54μL)搅拌1小时，然后将硫代硫酸钠加入到所得混合物中。用EtOAc萃取产物，然后将合并的有机层用水、NaHCO3、盐水洗涤，真空浓缩和经Gilson Prep HPLC纯化，得到化合物编号107。(M+1)659。
实施例3：化合物编号283
Figure A20068003905903791
化合物283
[00355]将THP树脂M1M(0.065mmol)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟，然后滤出，用DMF和DCM洗涤。将所得树脂与2-(吡啶-3-基)乙酸(0.25mmol 3.0当量)、HOBT(0.5mL，0.5M，于DMF中，3.85当量)、HBTU(0.5mL，0.5M，于DMF中，3.85当量)和DIEA(0.5mmol，7.69当量)的溶液振荡过夜。然后将树脂滤出，用DMF和DCM洗涤，与90％TFA的水溶液振荡30分钟。将所得溶液真空浓缩，得到羟基酰胺化合物M1P(0.065mmol)，其不经进一步纯化用于下一反应。(M+1)647。
[00356]将羟基酰胺M1P(0.065mmol)的DCM(3mL)溶液与Dess-Martin periodinane(41mg，1.5当量)和t-BuOH(41μL)进行搅拌。搅拌1小时后，向以上混合物加入硫代硫酸钠。产物用EtOAc进行萃取。然后将合并的有机层用水、NaHCO3、盐水洗涤，真空浓缩，经Gilson Prep HPLC纯化，得到化合物编号283(4mg)。(M+1)645。
实施例4：化合物编号61
Figure A20068003905903801
[00357]将化合物M1K(750mg，1.0当量)与1-硝基丙烷(315μL，10.0当量)和异氰酸苯酯(385μL，10.0当量)在苯中进行搅拌。加入三乙胺(5μL)，将所得混合物振荡过夜，排液，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤。重复这个过程，得到化合物M1Q。(M+H＝589.0)。
[00358]然后将化合物M1Q(750mg，1.0当量)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟。将树脂滤出，用DMF(三次)洗涤，然后用DCM(三次)洗涤。重复这个过程。将所得树脂与(S)-3，3-二甲基-2-(((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基氨基)丁酸(216mg，2.5当量)、HBTU(1.76mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)、HOBt(0.88mL，1.0M，于DMF中，2.5当量)和DIEA(307μL，5.0当量)的DMF溶液振荡过夜。然后将树脂滤出，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物M1R。(M+H＝593.9)。
[00359]将化合物M1R(750mg，1.0当量)在1/1 TFA/DCM中搅拌3小时。将树脂排液，用DCM(三次)洗涤。将所有的有机相浓缩，加入DCM，然后加入Dess-Martin periodinane(50mg，.3.0当量)。将所得混合物搅拌1小时，加入1N Na2S2O3，再次搅拌。将化合物编号61的外消旋混合物经硅胶层析纯化(10-90％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到化合物编号61，为一个非对映异构体。
(M+H＝591.8)1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.12(d，1H)，6.91(d，1H)，5.48(d，1H)，5.34(td，1H)，5.24(s，1H)，4.69(t，1H)，4.28(d，1H)，4.13(s，2H)，3.93-3.82(m，4H)，3.60(d，1H)，3.06(s，0.5H)，3.03(s，0.5H)，2.95(d，1H)，2.90(d，1H)，2.78(td，1H)，2.51-2.47(m，1H)，2.44-2.34(m，3H)，2.14-2.10(m，1H)，1.94-1.88(m，1H)，1.63-1.57(m，1H)，1.46-1.36(m，2H)，1.17(t，3H)，0.98(s，9H)，0.95-0.83(m，5H)，0.59(dd，2H)
Figure A20068003905903811
实施例5：化合物编号146
[00360]将化合物M1K(50mg，1.0当量)与2-氯-2-(羟基亚氨基)乙酸-(Z)-乙酯(7.1mg，2.0当量)在DCM中进行搅拌。向此混合物慢慢加入TEA(6.6μL，2.0当量)的DCM溶液，所得混合物振荡3小时，然后排液，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤。重复这个过程，得到化合物M1S(M+H＝632.4)。
Figure A20068003905903812
[00361]将化合物M1S(1.0g，1.0当量)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟。将树脂滤出，用DMF(三次)洗涤，然后用DCM(三次)洗涤。重复这个过程。将所得树脂与(S)-3，3-二甲基-2-(((S)四氢呋喃-3-基氧基)羰基氨基)丁酸(230mg 2.0当量)、HBTU(1.88mL，0.5M，于DMF中，2.0当量)、HOBt(0.94mL，1.0M，于DMF中，2.0当量)和DIEA(327μL，4.0当量)于2mL DMF中的溶液振荡过夜。然后将树脂滤出，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物M1T。(M+H＝638.0)。
Figure A20068003905903821
[00362]将化合物M1T(750mg，1.0当量)与KOTMS(133mg，3.0当量)在THF中振荡3小时。然后将所得混合物排液，用THF/水(1/1)、THF、DMF和DCM洗涤(各三次)，得到化合物M1U。(M+H＝609.5)。
[00363]将化合物M1U(250mg，1.0当量)与乙胺(22mg 3.0当量)、HBTU(0.54mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)、HOBt(0.27mL，1.0M，于DMF中，3.0当量)和DIEA(47μL，3.0当量)的DMF溶液振荡过夜。然后将树脂滤出，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物M1V。(M+H＝637.2)。
Figure A20068003905903831
[00364]将化合物M1V(0.4g，1.0当量)在1/1TFA/DCM中搅拌2小时，然后排液，用DCM(三次)洗涤。将有机相合并，干燥，向其中加入DCM，然后加入Dess-Martin periodinane(97mg，3.0当量)。将溶液搅拌1小时，向其中加入1N Na2S2O3，将所得混合物进一步搅拌。溶液经硅胶层析纯化(10-90％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到6.1mg化合物编号146。
(M+H＝635.0)1H-NMR(CDCl3)：5.5-5.2(m，2H)，5.1-5.0(m，1H)，4.9-4.7(m，2H)，4.5-4.2(m，3H)，4.1(m，1H)，3.9-3.7(m，3H)，3.6-3.5(m，2H)，3.5-3.2(m，2H)，2.8-2.4(m，2H)，2.1(m，1H)，2.0-1.8(m，3H)，1.8-1.5(m，3H)，1.5-1.3(m，3H)，1.3-1.2(m，2H)，1.0(s，9H)，0.9(t，3H)，0，8(m，2H)，0.6(m，2H).
[00365]以下式I化合物也按方法1和下文所述的制备法产生。
Figure A20068003905903832
表1：通过方法1产生的另外的式I化合物
  化合物编号   P1的原料   C1的原料   R3的原料
  7   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(4-氟苯基)丙酸   3-氯苯甲醛肟
  12   N-FMOC-L-叔丁基   乙酸   3-氯苯甲醛肟
  甘氨酸
  14   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   环戊基甲醇   3-氯苯甲醛肟
  24   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氟苯甲醛肟
  27   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   环丁基甲醇   3-氯苯甲醛肟
  29   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(1-甲基环己基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  30   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-5-氧代-1-(噻吩-2-基甲基)吡咯烷-2-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  33   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸环己酯   3-氯苯甲醛肟
  34   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   5-羟基戊-2-酮   3-氯苯甲醛肟
  37   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  39   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸-2-氯苄酯   3-氯苯甲醛肟
  44   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   4-氧代-戊酸   3-氯苯甲醛肟
  53   N/A   2-(1-(2，6-二氯苄基)哌啶-4-基)乙酸   苯甲醛肟
  61   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁   N/A   硝基丙烷
  基甘氨酸
  71   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (R)-2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-2-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  72   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环戊基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  75   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(2，4-二甲基噻唑-5-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  76   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸环丙酯   3-氯苯甲醛肟
  85   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸-2-氟乙酯   3-氯苯甲醛肟
  92   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  93   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   环己烷甲酸   3-氯苯甲醛肟
  94   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-氨基乙酰胺   3-氯苯甲醛肟
  102   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(3-氟-4-甲基苯基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  107   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸苄酯   苯甲醛肟
  108   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   顺式-4-甲氧基环己烷甲酸   3-氯苯甲醛肟
  110   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸苄酯   3-氯-4，6-二甲氧基苯甲醛肟
  112   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   2-硝基-1-苯基乙酮
  118   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(4-氟苯基)乙醇   3-氯苯甲醛肟
  119   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸叔丁酯   2-硝基-1-苯基乙酮
  122   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸-3-氟苄酯   3-氯苯甲醛肟
  123   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸乙酯   3-氯苯甲醛肟
  124   N-FMOC-O-甲基-L-苏氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  125   (2R，3S)-N-FMOC-2-氨基-3-苯基丁酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  128   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸-4-(1H-吡咯-2，5-二酮)苯酯   3-氯苯甲醛肟
  135   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   1-异丙基-4-氧代-1，4-二氢喹啉-3-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  139   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (R)-2-羟基-2-苯基丙酸   3-氯苯甲醛肟
  146   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2-氯-2-羟亚氨基乙酸乙酯(氯肟)
  152   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (四氢呋喃-3-基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  154   N-Alloc-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-氟苯甲醛肟
  155   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(5-氟-2-甲基苯基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  156   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异丁胺   3-氯苯甲醛肟
  159   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(噻吩-3-基)乙醇   3-氯苯甲醛肟
  160   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-氟苯甲醛肟
  161   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   5-乙酰胺基-2-乙酰噻吩-3-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  164   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2-氯苯甲醛肟
  167   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (2-甲基吡啶-3-基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  173   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2，2-二氟乙胺   3-氯苯甲醛肟
  174   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   m-甲苯基甲醇   3-氯苯甲醛肟
  180   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   乙酸   硝基乙烷
  183   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氟苯甲醛肟
  185   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  193   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸异丙酯   3-氯苯甲醛肟
  199   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   9-蒽醛肟
  201   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (3-甲氧基苯基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  203   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (3，5-二氟苯基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  205   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸苄酯   3-氯苯甲醛肟
  207   N-FMOC-L-甘氨酸   氯甲酸乙酯   3-氯苯甲醛肟
  208   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2-萘醛肟
  209   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (3-氟苯基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  210   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸-2-氯苄酯   3-氯-4，6-二甲氧基苯甲醛肟
  213   N-FMOC-4-甲氧基-L-苯丙氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  216   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   5-氧代-1-(噻吩-2-基甲基)吡咯烷-3-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  235   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   硝基丁烷
  237   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)丙酸   3-氯苯甲醛肟
  241   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-1-异丙基-5-氧代吡咯烷-2-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  242   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   胡椒醛肟
  243   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   硝基丁烷
  249   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸环己烷甲酯   苯甲醛肟
  254   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   1-(噻吩-2-基)丙-2-醇   3-氯苯甲醛肟
  259   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸-3，4，5-三甲氧基苄酯   3-氯苯甲醛肟
  260   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸-2-甲氧基乙酯   3-氯苯甲醛肟
  261   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   4-异氰酸哌啶-1-甲酸苄酯   3-氯苯甲醛肟
  262   N/A   氯甲酸-4-硝基苯酯   3-氯苯甲醛肟
  276   2-((3S，4aS，8aS)-3-(叔丁基氨基甲酰基)八氢异喹啉-2(1H)-基)乙酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  278   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸苄酯   2-(4-甲氧基苯氧基)苯甲醛肟
  283   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(吡啶-3-基)乙酸   苯甲醛肟
  287   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(3-甲氧基苯基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  288   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸-1-萘酯   苯甲醛肟
  289   N-FMOC-2-三氟甲基-L-苯丙氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  291   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   螺[茚-1，4’-哌啶]-3(2H)-酮   3-氯苯甲醛肟
  294   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  308   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (四氢-2H-吡喃-2-基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  311   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(吡咯烷-1-羰基)环己烷甲酸   3-氯苯甲醛肟
  313   N/A   异氰酸苄酯   3-氯-4，6-二甲氧基苯甲醛肟
  317   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)丙酸   3-氯苯甲醛肟
  324   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (R)-3-(1-氰基乙基)苯甲酸   3-氯苯甲醛肟
  329   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   环己基乙酸   硝基丙烷
  331   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   乙酸   4-氟苯甲醛肟
  333   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-1-甲基苄胺   3-氯苯甲醛肟
  334   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-2-甲基-3-苯基丙酸   3-氯苯甲醛肟
  336   N-FMOC-L-3-苯并噻吩基丙氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  338   N-FMOC-2-氟-L-苯丙氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  340   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-苯基苯甲醛肟
  341   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁   N/A   2-氯-2-羟亚氨基乙酸乙酯(氯肟)，
  基甘氨酸   然后酯水解和乙胺的偶联
  342   N/A   吡啶3-甲醇   3-氯苯甲醛肟
  345   N-(5-甲基-3-硝基吡啶基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  349   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(4-氟苯基)乙醇   3-氯苯甲醛肟
  352   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   吡啶-4-醛肟
  357   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   吡啶-4-基甲醇   3-氯苯甲醛肟
  358   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-三氟甲氧基苯甲醛肟
  365   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-三氟甲氧基苯甲醛肟
  367   N/A   异氰酸-3，4，5-三甲氧基苄酯   苯甲醛肟
  373   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(吡啶-2-基)丙-1-醇   3-氯苯甲醛肟
  374   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   四氢-2H-吡喃-4-醇   3-氯苯甲醛肟
  377   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-1-(3-氯苄基)-5-氧代吡咯烷-2-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  378   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   吡啶-2-基甲醇   3-氯苯甲醛肟
  379   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸异丙酯   3-氯苯甲醛肟
  381   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   4-氧代-3，4-二氢二氮杂萘-1-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  383   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   硝基丙烷
  387   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (3R，3aS，6aR)-六氢呋喃并[2，3-b]呋喃-3-醇   3-氯苯甲醛肟
  389   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(吡啶-3-基)丙-1-醇   3-氯苯甲醛肟
  390   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   环己基乙酸   2-硝基-1-苯基乙酮
  398   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-氟苯甲醛肟
  400   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   硝基丁烷
  402   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(5-氧代-2-(噻吩-2-基)环戊-1-烯基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  407   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸乙酯   3-氯苯甲醛肟
  417   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸，然后2-   4-氟苯甲醛肟
  吡嗪甲酸
  427   N-FMOC-L-苯丙氨酸   氯甲酸乙酯   3-氯苯甲醛肟
  431   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-o-甲苯基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  432   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-甲基乙胺   3-氯苯甲醛肟
  437   N-FMOC-S-叔丁基-L-半胱氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  450   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   胡椒醛肟
  454   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(喹啉-8-基硫代)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  459   N-FMOC-L-正亮氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  462   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   环己基乙酸   胡椒醛肟
  463   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-苯基乙醇   3-氯苯甲醛肟
  465   N-(环戊基甲酰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-氟苯甲醛肟
  467   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(二环[2.2.1]庚烷-2-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  471   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   p-甲苯基甲醇   3-氯苯甲醛肟
  474   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-甲基-3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)丙   3-氯苯甲醛肟
  酸
  477   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-1-甲氧基-3，3-二甲基丁-2-胺   3-氯苯甲醛肟
  484   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   琥珀酸酐   3-氯苯甲醛肟
  487   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(6-甲氧基-3-氧代-2，3-二氢-1H-茚-1-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  487   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(3-氧代-2，3-二氢-1H-茚-1-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  492   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸叔丁酯   3-氯苯甲醛肟
  497   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   吡啶-3-基甲胺   3-氯苯甲醛肟
  503   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   反式-4-甲氧基环己烷甲酸   3-氯苯甲醛肟
  504   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(吡啶-3-基)丙酸   3-氯苯甲醛肟
  505   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(2，5-二氧代咪唑烷-4-基)丙酸   3-氯苯甲醛肟
  512   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (2-氟苯基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  515   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   四氢-2H-吡喃-3-醇   3-氯苯甲醛肟
  517   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N/A   硝基乙烷
  518   N-FMOC-L-叔丁基   (S)-1-(3-甲基苄   3-氯苯甲醛肟
  甘氨酸   基)-5-氧代吡咯烷-2-甲酸
  520   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸卞酯   苯甲醛肟
  523   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   四氢-2H-吡喃-4-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  526   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   氯甲酸卞酯   3-氯苯甲醛肟
  528   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(1H-吲唑-1-基)丙酸   3-氯苯甲醛肟
  532   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-甲基丁酸   3-氯苯甲醛肟
  533   N/A   N/A   4-氟苯甲醛肟
  538   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-氰基-2-甲基-3-苯基丙酸   3-氯苯甲醛肟
  544   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   3-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-2-甲基丙酸   3-氯苯甲醛肟
  547   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   硝基丙烷
  553   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(2，6-二氧代-1，2，3，6-四氢嘧啶-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  557   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (1R，6S)-6-(甲氧基羰基)环己-3-烯甲酸   3-氯苯甲醛肟
  558   N-FMOC-L-叔丁基   异氰酸苯酯   3-氯苯甲醛肟
  甘氨酸
  559   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸叔丁酯   硝基丙烷
  561   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   (2，5-二氟苯基)甲醇   3-氯苯甲醛肟
  563   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   吡啶3-甲醇   3-氯苯甲醛肟
  566   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   硝基丙烷
  576   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸-3-吡啶酯   3-氯苯甲醛肟
  580   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸乙酯   苯甲醛肟
  582   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(噻吩-2-基)乙醇   3-氯苯甲醛肟
  583   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸苄酯   3-氯苯甲醛肟
[00366]表1和本文所有其它表格中所列的所有R3的原料可市售获得(硝基或肟)，或者容易地从相应的醛前体制备得到。
[00367]另外，化合物编号20、22、53、81、103、116、166、187、189、194、197、200、220、223、226、245、252、271、204、307、319、339、354、360、361、371、392、393、435、449、506、514、531和585也是用方法1产生。
[00368] 本发明的某些其它化合物可按方法2所示来制备。
方法2：
Figure A20068003905903971
[00369]参见方法2，受保护的螺异噁唑啉B1脱保护成B2，后者又转化成Fmoc衍生物B3。B3与树脂结合的氨基醇A4反应产生树脂结合的螺异噁唑啉A6，后者按方法1所述转化成A10。
实施例6：化合物编号281
Figure A20068003905903972
[00370]将化合物M2A(5.0g，1.0当量)在100mL乙腈中搅拌，向此混合物加入二碳酸二叔丁酯(9.6g，2.0当量)、二甲基氨基吡啶(537mg，0.2当量)和三乙胺(6.13mL，2.0当量)并搅拌过夜。将所得混合物浓缩，加入乙酸乙酯，所得混合物用1.0N HCl洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，经硅胶层析纯化(10-30％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到化合物M2B。
(M+H＝284.0)1H-NMR(CDCl3)：5.0(m，2H)，4.3-4.5(m，1H)，4.0-4.1(m，2H)，2.9-3.0(m，1H)，2.5-2.6(d，1H)，1.5(s，3/9 of18H)，1.4(s，6/9 of 18H).
Figure A20068003905903981
[00371]将化合物M2B(2.0g，1.0当量)与苯甲醛肟(2.67g，2.0当量)在35mL DCM中搅拌。将溶液在冰浴上冷却，向其中慢慢加入漂白剂(5％NaOCl)(34.9mL)。然后将混合物升温至室温，搅拌2小时。分离水层，用DCM萃取两次。将有机层合并，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。经硅胶层析纯化(5-30％乙酸乙酯/己烷梯度)产生化合物M2C。
(M+H＝403.1)1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.64-7.63(m，2H)，7.41-7.40(m，3H)，4.43-4.37(t，1H)，3.94-3.85(dd，1H)，3.62(t，1H)，3.44-3.38(m，1H)，3.29-3.24(m，1H)，2.74(m，1H)，2.14-2.10(m，1H)，1.49(s，9H)，1.46(s，9H).
Figure A20068003905903982
[00372]将化合物M2C在1/1 TFA/DCM中搅拌3小时。将所得混合物浓缩。向浓缩的混合物加入17mL DMF、5mL水、碳酸钠(713mg，2.5当量)、FMOC-OSu(951mg，1.05当量)，搅拌3小时。然后，加入乙酸乙酯，所得混合物用1.0N HCl洗涤，然后用盐水洗涤。将它用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到化合物M2D。(M+H＝468.9)。
Figure A20068003905903991
[00373]将化合物M2D(1.26g，2.0当量)与M1D(2.5g，1.0当量)、HBTU(12mL，0.5M，于DMF中，5.0当量)、HOBt(6mL，1.0M，于DMF中，5.0当量)和Hünig′s碱(2.09mL.10.0当量)在DMF中搅拌过夜。将所得混合物排液，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物M1L。(M+H＝637.0)。
Figure A20068003905903992
[00374]将化合物M1L(0.4g，1.0当量)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟，然后过滤，用DMF(三次)洗涤，接着用DCM(三次)洗涤。重复这个过程。将所得树脂与FMOC-叔丁基甘氨酸(200mg 3.0当量)、HBTU(1.15mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)、HOBt(0.58mL，1.0M，于DMF中，3.0当量)和DIEA(167μL，5.0当量)于2mL DMF中的溶液振荡过夜。然后将树脂过滤，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物M1M。(M+H＝750.1)。
Figure A20068003905904001
[00375]将化合物M1M(0.4g，1.0当量)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟，将树脂滤出，用DMF(三次)洗涤，然后用DCM(三次)洗涤。重复这个过程，得到化合物M2H。
Figure A20068003905904002
[00376]将化合物M2H(0.4g，1.0当量)与FMOC-环己基甘氨酸(218mg 3.0当量)、HBTU(1.15mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)、HOBt(0.58mL，1.0M，于DMF中，3.0当量)和DIEA(167μL，5.0当量)于2mL DMF中的溶液振荡过夜。然后将树脂过滤，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤。然后用20％哌啶/DMF处理树脂10分钟。将树脂滤出，用DMF(三次)洗涤，然后用DCM(三次)洗涤。重复这个过程，得到化合物M2I。
Figure A20068003905904011
[00377]将化合物M2I(0.4g，1.0当量)与吡嗪甲酸(71mg，3.0当量)、HBTU(1.15mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)、HOBt(0.58mL，1.0M，于DMF中，3.0当量)和DIEA(167μL，5.0当量)于2mL DMF中的溶液振荡过夜。然后将树脂过滤，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物M2J。(M+H＝772.9)
Figure A20068003905904012
[00378]将化合物M2J(0.4g，1.0当量)在1/1TFA/DCM中搅拌2小时。将树脂排液，用DCM(三次)洗涤。将所有得到的有机相浓缩，加入DCM，然后加入Dess Martin periodinane(97mg，3.0当量)。搅拌1小时，加入1N Na2S2O3，再搅拌。溶液经硅胶层析纯化(10-90％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到42mg化合物编号281。
(M+H＝771.0).1H-NMR(500MHz，CDCl3)：9.38(d，1H)，8.75(d，1H)，8.56(t，1H)，8.31(d，1H)，7.64-7.62(m，2H)，7.42-7.38(m，3H)，7.33(d，1H)，7.15(s，1H)，6.89(d，1H)，5.45-5.41(m，1H)，4.85(t，1H)，4.69(d，1H)，4.57-4.54(m，1H)，4.26(d，1H)，3.76(d，1H)，3.46-3.35(m，2H)，2.82(td，1H)，2.56(d，2H)，1.96-1.87(m，2H)，1.76(m，4H)，1.65-1.59(m，2H)，1.48-1.42(m，2H)，1.24(m，2H)，1.09(m，2H)，0.97(s，9H)，0.93(t，2H)，0.88-0.84(m，2H)，0.65(t，2H).
[00379]下表2所列的是通过方法2制备的另外的式I化合物。
表2：通过方法2制备的另外的式I化合物
  化合物编号   P1的原料   C1的原料   R3的原料
  40   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，6-二氯苯甲醛肟
  51   N/A   1H-吡咯-2-甲酸   胡椒醛肟
  80   N/A   1H-吡咯-2-甲酸   苯甲醛肟
  101   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   1-萘基磺酰氯   苯甲醛肟
  147   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   2，6-二氯苯甲醛肟
  151   N-Alloc-L-叔丁基甘氨酸   N/A   苯甲醛肟
  202   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   苯甲醛肟
  228   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   乙酸   苯甲醛肟
  281   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   苯甲醛肟
  325   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   乙酸   胡椒醛肟
  327   N-Alloc-L-叔丁基甘氨酸   N/A   胡椒醛肟
  343   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   胡椒醛肟
  428   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   苯甲醛肟
  464   N/A   1H-吡咯-2-甲酸   胡椒醛肟
  491   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   苯甲醛肟
  527   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   胡椒醛肟
  536   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   1-萘基磺酰氯   胡椒醛肟
  570   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   乙酸   胡椒醛肟
  578   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   乙酸   苯甲醛肟
  584   N/A   1H-吡咯-2-甲酸   苯甲醛肟
[00380]某些其它式I化合物可按方法3所示来制备。
方法3：
Figure A20068003905904041
[00381]参见方法3，将按方法1制备的树脂结合的Fmoc环外亚甲基化合物A5脱保护，产生C1。C1与R1羧酸在偶联试剂的存在下反应，产生C2，其中R1为R4C(O)-。C2与氧化腈1f反应产生A8，后者按方法1所示转化成A10。
实施例7：化合物编号239
Figure A20068003905904051
化合物239
[00382]将树脂M1K(0.47mmol)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟，然后过滤，用DMF和DCM洗涤。将所得树脂再与Cbz-tBG-OH(374mg，3.0当量)、HOBt(2.82mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)、HBTU(2.82，0.5M，于DMF中，3.0当量)和DIEA(0.493mL，6.0当量)的溶液振荡过夜。然后将树脂过滤，用DMF和DCM洗涤，得到树脂化合物M3A(0.47g)，其不经进一步纯化用于下一反应。
[00383]将Cbz树脂M3A(0.0611mmol)于THF中与3-溴-苯肟(10当量)和漂白剂(5％NaOH)(20当量)振荡12小时。然后将树脂过滤，用水、DMF、DCM洗涤，得到树脂M3B。
[00384]将树脂M3B与95％TFA的水溶液振荡30分钟，所得溶液真空浓缩，得到化合物M3C(0.031mmol)，(M+1)740，其不经进一步纯化用于下一反应。
[00385]将化合物M3C(0.031mmol)的DCM(3mL)溶液与Dess-Martin periodinane(26mg，2当量)和t-BuOH(26μL)一起搅拌。搅拌1小时后，向以上混合物加入硫代硫酸钠。产物用EtOAc萃取，然后将合并的有机层用水、NaHCO3、盐水洗涤，真空浓缩，经Gilson PrepHPLC纯化，得到化合物编号239。(M+1)738。
实施例8：化合物编号535
[00386]将化合物M1E(10.0g，1.0当量)在20％哌啶/DMF中振荡10分钟。将树脂滤出，用DMF(三次)洗涤，然后用DCM(三次)洗涤。重复这个过程。将所得树脂与(S)-2，3-二甲基-2-(((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基氨基)丁酸(3.46g，3.0当量)、HBTU(28.2mL，0.5M，于DMF中，3.0当量)、HOBt(14.1mL 1.0M，于DMF中，3.0当量)和DIEA(4.91mL，6.0当量)于DMF中的溶液振荡过夜。然后将树脂过滤，用DMF(三次)和DCM(三次)洗涤，得到化合物M3E。(M+H＝523.1)。
[00387]将化合物M3E(300mg，1.0当量)在THF中搅拌，向所得混合物加入2-硝基-1-苯乙酮(272mg，10.0当量)，然后加入异氰酸苯酯(179μL，10.0当量)和催化性TEA(10μL)。将所得混合物振荡过夜，排液，用DMF，THF和DCM(各三次)洗涤，得到化合物M3F(M+H＝669.8)。
[00388]化合物M3F(0.4g，1.0当量)在1/1TFA/DCM中搅拌2小时。将树脂排液，用DCM(三次)洗涤，将所有的有机相浓缩，加入DCM，然后加入Dess-Martin periodinane(97mg，3.0当量)。将所得混合物搅拌1小时，加入1N Na2S2O3，再次搅拌。反应混合物经硅胶层析纯化(10-90％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到化合物编号535。M+H＝668.1。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：8.19(d，2H)，7.61(t，1H)，7.47(t，2H)，7.19(d，1H)，6.93(d，1H)，5.52(d，1H)，5.37-5.33(m，1H，5.24(s，1H)，4.78(t，1H)，4.32-4.29(m，2H)，3.93-3.79(m，4H)，3.70(d，1H)，3.48-3.36(m，2H)，2.79(td，1H)，2.68-2.63(m，1H)，2.55-2.50(m，1H)，2.12-2.04(m，1H)，1.96-1.89(m，1H)，1.66-1.59(m，1H)，1.47-1.37(m，2H)，1.00(s，9H)，0.94-0.81(m，6H)，0.63-0.57(m，2H).
[00389]下表3所列的是通过方法3制备的另外的式I化合物。
Figure A20068003905904072
表3：通过方法3制备的另外的式I化合物
  化合物   P1的原料   C1的原料   R3的原料
  编号
  4   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯-5-氟苯甲醛肟
  8   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯甲醛
  9   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，5-二(三氟甲基)苯甲醛肟
  11   N/A   四氢呋喃-3-基碳酸-(S)-2，5-二氧代吡咯烷-1-酯   3-氟-4-甲基苯甲醛肟
  15   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯-4-甲氧基苯甲醛肟
  16   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   4-甲氧基苯甲醛肟
  25   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，5-二氟苯甲醛肟
  32   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，4-二氯苯甲醛肟
  36   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，4-二甲基苯甲醛肟
  47   N/A   四氢呋喃-3-基碳酸   4-乙基苯甲醛肟
  -(S)-2，5-二氧代吡咯烷-1-酯
  52   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-三氟甲基苯甲醛肟
  55   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   4-氯苯甲醛肟
  56   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3，5-二氯苯甲醛肟
  64   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-三氟甲基苯甲醛肟
  66   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-氟苯甲醛肟
  70   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   环戊烷甲醛
  78   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3，4-二氯苯甲醛肟
  82   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   胡椒醛肟
  83   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  95   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-5-氟苯甲醛肟
  106   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔   N/A   3，5-二氟苯甲醛肟
  丁基甘氨酸
  109   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-甲基-4-氯苯甲醛肟
  142   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   环己烷甲醛
  149   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-三氟甲氧基苯甲醛肟
  150   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，2-二甲基色烷-6-甲醛
  171   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氰基苯甲醛肟
  177   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   4-氰基苯甲醛肟
  191   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛肟
  196   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，4-二甲氧基苯甲醛肟
  198   N/A   四氢呋喃-3-基碳酸-(S)-2，5-二氧代吡咯烷-1-酯   3，5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛肟
  215   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔   N/A   3，4，5-三氟苯甲醛肟
  丁基甘氨酸
  222   N/A   四氢呋喃-3-基碳酸-(S)-2，5-二氧代吡咯烷-1-酯   2，2-二氟-1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-甲醛
  224   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛肟
  229   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-硝基丁酸甲酯
  234   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯-5-氟苯甲醛肟
  236   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯-4-甲氧基苯甲醛肟
  239   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-溴苯甲醛肟
  240   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   4-三氟甲基苯甲醛肟
  244   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-三氟甲氧基苯甲醛肟
  251   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   苯基硝基乙烷
  257   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-苯基苯甲醛肟
  258   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氟-5-三氟甲基苯甲醛肟
  270   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯-4-氟苯甲醛肟
  274   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   3，5-二氯苯甲醛肟
  279   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯-4-甲氧基苯甲醛肟
  285   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3，5-二氯苯甲醛肟
  299   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   4-氯苯甲醛肟
  301   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯-4-氟苯甲醛肟
  306   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，5-二氯苯甲醛肟
  314   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-甲酰苯甲酸甲酯
  316   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，2-二氟-1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-甲醛
  318   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-氯苯甲醛肟
  322   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯-5-氟苯甲醛肟
  323   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3，4-二氯苯甲醛肟
  330   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，5-二(三氟甲基)苯甲醛肟
  348   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   3-氟-5-三氟甲基苯甲醛肟
  353   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-甲酰苯甲酸甲酯
  362   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3，5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛肟
  363   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，2-二氟-1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-甲醛
  364   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-氯苯基乙醛酰羟基戊基氯(4-chlorophenylglyoxylohydroxamylchloride)
  385   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-甲基苯甲醛肟
  391   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔   N/A   3，5-二氯苯甲醛肟
  丁基甘氨酸
  403   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2-氯-6-氟苯甲醛肟
  405   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   4-异丙基苯甲醛肟
  413   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   3-甲基-4-氟苯甲醛肟
  414   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   3，4，5-三氟苯甲醛肟
  423   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氟-4-甲基苯甲醛肟
  425   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-(4-吡啶基)苯甲醛
  434   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，3-二甲氧基苯甲醛肟
  436   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-甲基-4-氯苯甲醛肟
  444   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-甲基苯甲醛肟
  448   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-(4-氯苯基(-2，1-苯并异噁唑-5-苯甲醛肟
  451   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   3-三氟甲基-4-氟苯甲醛肟
  455   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，4，5-三氟苯甲醛肟
  456   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   1，4-苯并二氧杂环己烷-6-甲醛
  472   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2-呋喃醛肟
  480   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-甲酰苯甲酸甲酯
  481   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-(羧基)苯甲醛肟
  482   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2-氯-6-氟苯甲醛肟
  486   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-甲氧基苯甲醛肟
  490   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-甲基-4-氯苯甲醛肟
  498   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氟-5-三氟甲基苯甲醛肟
  509   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-三氟甲基苯甲醛肟
  511   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-硝基苯甲醛肟
  519   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3，5-二甲基苯甲醛肟
  524   N/A   碳酸-(S)-四氢呋喃-3-酯   4-三氟甲氧基苯甲醛肟
  525   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-甲氧基苯甲醛肟
  530   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-羟基苯甲醛肟
  535   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2-硝基-1-苯基乙酮
  539   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-甲基-4-氟苯甲醛肟
  543   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-(羧基)苯甲醛肟
  545   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-三氟甲基-4-氟苯甲醛肟
  548   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-氟苯甲醛肟
  550   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔   N/A   3-氟-4-甲基苯甲醛肟
  丁基甘氨酸
  551   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   4-甲酰苯甲酸甲酯
  555   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-甲基-4-氟苯甲醛肟
  560   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-三氟甲基苯甲醛肟
  572   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3，5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛肟
[00390]某些其它式I化合物可按方法4所示来制备。
方法4：
Figure A20068003905904171
Figure A20068003905904181
[00391]参见方法4，按方法1所述制备Fmoc衍生物A3。A3与树脂结合的亚氨基酰胺D1在偶联试剂的存在下反应产生化合物结合的树脂D2。树脂结合的亚氨基酰胺D1可由二酮基化合物X31与氨基树脂如衍生化的氨基甲基化聚苯乙烯(例如X32)反应制备得到。D2脱保护产生D3，后者与R1羧酸在偶联试剂的存在下反应产生D4，其中R1为R4C(O)-。D4与氧化腈1f反应产生D5，后者从树脂水解下来产生A10。
实施例9：化合物编号303
Figure A20068003905904182
[00392]向树脂M4A(其结构同X33)(20g，0.4mmol/g，8mmol)于DCM(100mL)中的悬浮液加入PPh3(21g，80mmol)、二甲基巴比妥酸(12.5g，80mmol)和Pd(PPh3)4(920mg，0.8mmol)。将悬浮液振荡过夜，排液，用DMF(10次)和DCM(4次)洗涤。将N-Fmoc-4-亚甲基脯氨酸(3.0g，8.8mmol)、HBTU(3.3g，8.8mml)和HOBt(1.1g，8.8mmol)和DIEA(1.6mL，8.8mmol)溶于DMF(100mL)中。将所得溶液加入到树脂中，振荡过夜。然后将树脂排液，用DMF(10次)、DCM(4次)洗涤，干燥，得到树脂M4B。
[00393]向树脂M4B(20g，8mmol)加入20％哌啶的DMF(100mL)溶液，振荡1小时，然后用DMF(10次)、DCM(4次)洗涤。向树脂加入Fmoc-叔丁基甘氨酸(5.6g，16mmol)、HBTU(6.1g，16mmol)、HOBt(2.2g，16mmol)和(iPr)2NEt(2.9mL，16mmol)于DMF(100mL)中的混合物。将悬浮液振荡过夜，排液，用DMF(10次)、DCM(4次)洗涤，干燥，得到树脂M4C。
[00394]向树脂M4C(20g，8mmol)加入20％哌啶的DMF(100mL)溶液，振荡1小时，和然后用DMF(10次)、DCM(4次)洗涤。向树脂加入环己基乙酸(1.42g，10mmol)、HBTU(3.8g，10mmol)、HOBt(1.35g，10mmol)和(iPr)2NEt(1.8mL，10mmol)于DMF(100mL)中的混合物。将悬浮液振荡过夜，排液，用DMF(10次)、DCM(4次)洗涤，干燥，得到树脂M4D。
Figure A20068003905904201
[00395]向3-吡啶醛肟(M4E)(122mg，1mmol)的DMF(3mL)溶液加入NCS(134mg，1mmol)。将所得混合物加热至50-60℃，保持30分钟。冷却至室温后，将3-吡啶氯肟(M4F)溶液加入到树脂M4D(300mg，0.12mmol)。向所得混合物加入TEA(0.14mL，1mmol)，将反应混合物加热至50-60℃，保持4小时。将反应混合物排液，用DMF(6次)和DCM(6次)洗涤。用95％TFA处理树脂5小时。将混合物排液，用DCM洗涤。将滤液真空浓缩，进行柱纯化(50-100％EtOAc/Hex)，得到7mg无色固体，为产物化合物编号303。HPLC 5.7-6.4分钟；MS 651.5和LC-MS 3.9分钟。
[00396]下表4所列的是通过方法4产生的另外的式I化合物。
Figure A20068003905904202
表4：通过方法4产生的另外的式I化合物
  化合物   P1的原料   C1的原料   R3的原料
  编号
  41   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-溴吡啶-3-甲醛
  179   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-溴-2-糠醛
  230   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2-甲基苯并呋喃-3-甲醛
  303   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-吡啶-甲醛
  495   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   4-氯-1-甲基-1H-吡唑-3-甲醛
  552   N-FMOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-甲醛
[00397]本发明的某些其它化合物可按方法5a和5b所示来制备。
方法5a
Figure A20068003905904221
[00398]参见方法5a，环外亚甲基酸化合物A1经保护得到二甲酸二叔丁酯E1。E1与式1f的氧化腈反应产生中间体B1，后者转化成氨基酸衍生物E2。E2与氨基醇E5反应产生A9。化合物A9按方法1所述转化成A10。
方法5b
Figure A20068003905904231
[00399]参见方法5b，中间体化合物B1转化成氨基酸酯E6。E6与R1羧酸在偶联试剂的存在下反应产生E7，其中R1为R4C(O)-。E7脱保护得到E2，后者按方法1所述转化成A10。
实施例10：化合物编号422
Figure A20068003905904232
[00400]将化合物10A(5.0g，1.0当量)在100mL乙腈中搅拌，向所得溶液加入二碳酸二叔丁酯(9.6g，2当量)、二甲基氨基吡啶(537mg，0.2当量)和三乙胺(6.13mL，2.0当量)。将所得混合物搅拌过夜，浓缩，加入乙酸乙酯，用1.0N HCl洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，经硅胶层析纯化(10-30％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到化合物10B(80％)。
(M+H＝284.0).1H-NMR(CDCl3)：5.0(m，2H)，4.3-4.5(m，1H)，4.0-4.1(m，2H)，2.9-3.0(m，1H)，2.5-2.6(d，1H)，1.5(s，3/9 of 18H)，1.4(s，6/9 of 18H).
Figure A20068003905904241
[00401]将化合物10B(10.0g，1.0当量)与胡椒醛肟(11.5g，2.0当量)在175mL DCM中一起搅拌。将溶液在冰浴上冷却，向其中慢慢加入漂白剂(175mL)。然后将混合物升温至室温，搅拌2小时，进行层分离，其水层用DCM萃取两次。将有机层合并，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。通过硅胶层析(5-30％乙酸乙酯/己烷梯度)将残余物纯化和分离非对映异构体，得到4.1g化合物10C(26％)。
(M+H＝446.9.)1H-NMR(CDCl3)：7.25(m，1H)，7.0(d，1H)，6.8(d，1H)，6.0(s，2H)，4.6-4.4(m，1H)，4.0-3.8(m，1H)，3.7-3.6(m，1H)3.4-3.3(m，1H)，3.3-3.2(m，1H)，2.8-2.7(m，1H)，2.3-2.2(m，1H)，1.5(s，9H)，1.4(s，9H).
[00402]或者，化合物10B按以下程序进行制备：
制备：4-亚甲基吡咯烷-1，2-二甲酸-(S)-二叔丁酯
程序1
[00403]在环境温度下，将三乙胺(2当量)加入到(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸(1.0当量)、二碳酸二叔丁酯(2.0当量)和DMAP(0.2当量)于乙腈(10体积)中的溶液中。将反应混合物搅拌16小时，然后用乙酸异丙酯(25体积)稀释。用水(20体积，两次)洗涤后，经Na2SO4过滤，除去溶剂。粗产物通过滤过硅胶垫层(pad)(37体积二氧化硅，第一次用庚烷(80体积)冲洗，第二次用10％乙酸乙酯的庚烷(30体积)溶液冲洗)进行纯化。从第二次冲洗物除去溶剂，得到化合物10B。
程序2
[00404]将二碳酸二叔丁酯(1.1当量)的MTBE(2体积)溶液加入到(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸(1.0当量)和DMAP(0.2当量)于MTBE(8体积)和叔丁醇(1.75体积)中的混合物中。将所得混合物搅拌1小时，到1小时时释气停止。将混合物用1N HCl(3体积)洗涤，接着用饱和NaHCO3水溶液(3体积)洗涤，然后用盐水(3体积)洗涤。然后除去溶剂，得到化合物10B。
Figure A20068003905904252
[00405]将化合物10C(4.0g，1.0当量)在1/1TFA/DCM中搅拌3小时，将所得溶液浓缩。向浓缩物加入100mL丙酮、100mL饱和碳酸氢钠溶液和二碳酸二叔丁酯，将所得溶液搅拌过夜，然后用1.0NHCl溶液酸化，用乙酸乙酯(三次)萃取。将有机相用盐水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到4.0g化合物10D(M+H＝391.1)。
Figure A20068003905904261
[00406]将化合物10D(50mg，1.0当量)与EDC(37mg，1.5当量)、PS-HOBt(137mg，1.5当量)和NMM(56μL，4.0当量)一起在0.5mLDMF中搅拌，向所得溶液加入0.5mL DCM，帮助使树脂溶胀。向所得混合物加入3-氨基-2-羟基己酰胺(30mg，1.3当量)，将混合物搅拌过夜，过滤，用乙酸乙酯稀释，用1.0N HCl洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。溶液经硅胶层析纯化(100％DCM-5％MeOH/DCM梯度)，得到21mg粗产物，其然后在4.0N HCl/二氧杂环己烷中搅拌2小时，浓缩，得到化合物10E，为HCl盐。(M+H＝419.0)。
Figure A20068003905904262
[00407]将化合物10E(21mg，1.0当量)与NMM(13μL，1.4当量)一起在DMF中搅拌，向所得溶液加入(S)-3，3-二甲基-2-(((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基氨基)丁酸(14mg，1.4当量)、EDC(11mg，1.4当量)和PS-HOBt(40mg，1.4当量)于DMF中的溶液，同时有足够的DCM使树脂溶胀。将混合物搅拌过夜，过滤，用1.0N HCl洗涤，用硫酸钠干燥，过滤后浓缩，得到化合物10F，其不经进一步纯化加以使用。(M+H＝646.4)。
Figure A20068003905904271
[00408]将化合物10F在DCM中搅拌，向所得的溶液加入Dess-Martin periodinane(～3.0当量)。将溶液搅拌1小时，向其中加入1.0N Na2S2O3，搅拌。混合物经硅胶层析纯化(10-90％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到9mg化合物编号422。
422(M+H＝644.3).1H-NMR(CDCl3)：7.3(m，1H)，7.15(m，1H)，6.95(m，1H)，6.8(m，1H)，6.75(m，1H)，6.0(s，2H)，5.5-5.4(m，2H)，5.4-5.3(m，2H)，4.8-4.7(m，1H)，4.3(m，1H)，4.2(m，1H)，4.0-3.8(m，3H)，3.7(m，1H)，3.4-3.2(m，2H)，2.6(m，1H，)，2.5(m，1H)，2.2-2.1(m，1H)，2.1-2.0(m，1H)，1.9(m，1H)，1.6(m，1H)，1.5-1.4(m，2H)，1.0-0.9(m，13H).
实施例11：化合物编号562
Figure A20068003905904281
[00409]在室温下，2小时时间里，向2，4-二甲氧基苯甲醛肟(4.5g，24.8mmol)的DMF(135mL)溶液滴加N-氯琥珀酰亚胺(6.6g，49.7mmol)的DMF(135mL)溶液。搅拌反应14小时，加入化合物11A(5.2g，18.4mmol)，然后在1小时时间里滴加三乙胺的DMF(2.6mL，18.4mmol，于15mL中)溶液。搅拌3小时后，将反应混合物用H2O洗涤，用MgSO4干燥。所得残余物经硅胶层析纯化，得到5.8g(63％)化合物11B，为棕褐色固体。ES(+)MS：m/e 497(M+H)+。
[00410]向化合物11B(5.5g，11.1mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液加入三氟乙酸(30mL)。将反应混合物在室温下搅拌90分钟，减压浓缩，得到棕褐色固体，将其溶于MeOH(60mL)并加热回流。滴加浓硫酸(～5mL)，回流反应3小时，然后减压除去溶剂。将所得残余物溶于CH2Cl2(75mL)，用饱和NaHCO3溶液小心处理，直到pH～9。将有机层用MgSO4干燥，浓缩，得到中间体氨基酯。向N-Boc-叔丁基甘氨酸(3.1g，13.6mmol)的CH2Cl2(60mL)溶液加入EDC(2.6g，13.6mmol)、HOBt(1.8g，13.6mmol)和三乙胺(5.5mL，39.5mmol)。搅拌5分钟后，加入以上的氨基酯，在室温下搅拌反应14小时。将反应混合物用H2O、1N HCl和饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥，真空浓缩，得到5.6g化合物11C(3个步骤得87％)，为棕色固体，其不经进一步纯化加以使用。ES(+)MS：m/e 568(M+H)+。
[00411]向化合物11C(600mg，1.1mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液加入三氟乙酸(3mL)。搅拌反应1小时，减压浓缩，得到所需的胺产物，为TFA盐。向环己基乙酸(181mg，1.3mmol)的CH2Cl2(6mL)溶液加入EDC(243mg，1.3mmol)、HOBt(171mg，1.3mmol)和三乙胺(516μL，3.7mmol)。搅拌5分钟后，加入以上的胺，在室温下搅拌反应14小时。将反应混合物用H2O、1N HCl和饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥，真空浓缩，所得残余物经硅胶层析纯化，得到460mg化合物11D(2个步骤得74％)，为灰白色。ES(+)MS：m/e 592(M+H)+。
[00412]向化合物11D(460mg，0.8mmol)于THF/H2O溶液(5mL，3∶1v/v)中的溶液加入一水合LiOH(82mg，1.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌14小时，用1N HCl酸化，用EtOAc萃取。将有机层用MgSO4干燥，减压浓缩，得到405mg化合物11E，其不经进一步纯化加以使用。ES(+)MS：m/e 578(M+H)+。
[00413]向化合物11E(80mg，0.14mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液加入EDC(38mg，0.2mmol)、HOBt(27mg，0.2mmol)和三乙胺(68μL，0.5mmol)。搅拌5分钟后，加入化合物11F，在室温下搅拌反应14小时。将反应混合物用H2O、1N HCl和饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥，真空浓缩，得到95mg化合物11G(95％)，为棕色固体，其不经进一步纯化加以使用。ES(+)MS：m/e 718(M+H)+。
[00414]向化合物11G(95mg，0.14mmol)的CH2Cl2(1mL)溶液加入Dess-Martin periodinane(71mg，0.17mmol)。搅拌30分钟后，用1N Na2S2O3猝灭反应。有机层经硅胶层析纯化，得到化合物编号562，即以上所述的化合物11H，为白色固体。ES(+)MS：m/e 716(M+H)+。
实施例12：化合物编号362
Figure A20068003905904301
[00415]将4-甲氧基-3，5-二甲基苯甲醛(1.86g，11.3mmol)溶于乙醇(30mL)，与羟胺盐酸盐(2.4M水溶液，5.65mL，1.2当量)和Na2CO3(1.2M溶液，5.65mL，0.6当量)一起在室温下搅拌2.5小时。然后将混合物加热至60℃，再加入羟胺盐酸盐和Na2CO3。将混合物再在60℃下搅拌过夜，转移到分液漏斗，用EtOAc稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。产物以EtOAc/己烷为洗脱剂经ISCO层析纯化，得到1.55g(8.56mmol，77％)4-甲氧基-3，5-二甲基苯甲醛肟，为白色固体。M+1＝180.0。
[00416]向4-甲氧基-3，5-二甲基苯甲醛肟(1.34g，7.48mmol)的DMF(10mL)溶液加入N-氯琥珀酰亚胺(1.76g，13.2mmol)。搅拌此溶液，直到HPLC显示原料已被消耗。然后向此溶液加入4-亚甲基吡咯烷-1，2-二甲酸-(S)-二叔丁酯(2.1g，1.0当量)的DMF(5mL)溶液。向所得溶液滴加三乙胺(1.2当量)，将反应混合物搅拌2小时。然后用EtOAc稀释反应混合物，将有机相用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。产物以EtOAc/己烷作为洗脱剂在ISCO Combiflash上进行硅胶层析纯化，得到912mg(1.98mmol)化合物12A。
M+1＝461.4.1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.30(s，2H)，4.40-4.32(m，1H)，3.98-3.79(m，1H)，3.74(s，3H)，3.64-3.58(m，1H)，3.40-3.34(m，1H)，3.24-3.19(m，1H)，2.72(dd，J＝8.7，12.9Hz，1H)，2.29(s，6H)，2.11-2.07(m，1H)，1.54-1.45(m，18H).
[00417]将化合物12A(910mg，1.98mmol)在CH2Cl2/三氟乙酸(1∶1，20mL)中搅拌，直到HPLC表明原料完全脱保护。将中间体氨基酸浓缩，然后溶于甲醇(30mL)中，与浓H2SO4加热回流，直到HPLC显示原料已被消耗。将物料真空浓缩，然后溶于EtOAc，用NaHCO3、盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，得到化合物12B。M+1＝319.0。
Figure A20068003905904312
[00418]将化合物12B(727mg，2.28mmol)与Boc-叔丁基甘氨酸(686mg，3.0mmol)，EDC·HCl(659mg，3.43mmol)、HOBt(460mg，3.4mmol)和DIEA(1.2mL，6.89mmol)一起溶于DMF(3mL)，在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物转移到分液漏斗，用EtOAc稀释。将有机层用1N HCl(两次，每次20mL)、饱和NaHCO3(25mL)、水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。粗产物12C以EtOAc/己烷作为洗脱剂在ISCO Combiflash上进行硅胶层析纯化，得到231mg(0.435mmol)化合物12C，为无色油。LCMS(M+1)＝532.45。
Figure A20068003905904321
[00419]将化合物12C(231mg，0.435mmol)在4N HCl的二氧杂环己烷(15mL)溶液中搅拌90分钟，到90分钟时TLC分析显示反应混合物中无原料存在。将HCl和二氧杂环己烷蒸发，得到灰白色泡沫。将一部分的此中间体中间体(0.35mmol)、EDC·HCl(96mg，0.50mmol)、HOBt(72mg，0.53mmol)和环己烷乙酸(78mg，0.55mmol)在DMF(3.5mL)中搅拌。向其中加入DIEA(0.18mL，1.0mmol)，搅拌反应过夜。然后将反应混合物用EtOAc稀释，转移到分液漏斗中进行层分离，将有机相用1.0N HCl、饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。产物以EtOAc/己烷作为洗脱剂在ISCO Combiflash上进行硅胶层析纯化，得到219mg(0.394mmol)化合物12D，为透明油。M+1＝556.4。
[00420]将化合物12D(219mg，0.394mmol)的THF/H2O/MeOH(4∶1∶1，6mL)溶液与LiOH·H2O(1.5当量)一起在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用1.0N HCl酸化，用CH2Cl2萃取。将有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，得到207mg(0.382mmol)化合物12E。M+1＝548.4。
Figure A20068003905904331
[00421]将化合物12E(207mg，0.382mmol)与HOBt(107mg，0.792mmol)、EDC·HCl(144mg，0.764mmol)和羟胺盐酸盐(168mg，0.75mmol)于DMF(2.0mL)中的溶液一起在室温下搅拌，用DIEA(0.400mL，2.3mmol)处理。将反应混合物搅拌过夜，用EtOAc稀释，用1N HCl、饱和NaHCO3洗涤，合并的水层用EtOAc进行反萃取。将有机层合并，用MgSO4干燥，浓缩，以EtOAc/己烷作为洗脱剂在ISCO combiflash上进行硅胶层析纯化，得到227mg(0.320mmol)化合物12F，为白色固体。(M+TFA)M-1＝822.6。
Figure A20068003905904332
[00422]将化合物12F(227mg，0.320mmol)在室温下溶于CH2Cl2(4mL)中，用Dess-Martin periodinane(142mg，1.0当量)处理。15分钟后，TLC显示反应完成，加水将反应溶液猝灭，剧烈搅拌。再加入CH2Cl2，将有机层分离，以EtOAc/己烷作为洗脱剂在ISCO combiflash上进行硅胶层析纯化，得到159mg(0.225mmol)化合物编号362。
FIA MS(M+1)＝708.42.1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.30(s，2H)，7.17(d，1H)，6.93(d，1H)，6.15(d，1H)，5.39-5.33(m，1H)，4.72(t，1H)，4.66(d，1H)，4.25(d，1H)，3.74(s，3H)，3.74-3.69(m，1H)，3.42(d，1H)，3.30(d，1H)，2.81-2.75(m，1H)，2.58-2.46(m，2H)，2.29(s，6H)，2.16-2.10(m，1H)，2.08-2.00(m，1H)，1.97-1.88(m，1H)，1.85-1.57(m，8H)，1.51-1.35(m，2H)，1.33-1.22(m，2H)，1.20-1.07(m，1H)，1.02-0.96(m，10H)，0.92(t，3H)，0.88-0.80(m，2H)，0.66-0.56(m，2H).
实施例13：化合物编号247
Figure A20068003905904341
[00423]向化合物13A(222mg，0.5mmol)溶液加入TEA(0.14mL)和异氰酸叔丁酯(0.6mmol)。将所得溶液搅拌过夜，然后用EtOAc(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，真空浓缩。粗产物经硅胶层析纯化，得到化合物13B，为白色固体(190mg)。HPLC 8.48分钟；LC-MS m/z 507.2ES+。
Figure A20068003905904342
[00424]将化合物13B溶于THF，所得溶液用1.0N LiOH水溶液和水处理。将反应混合物搅拌1小时，真空浓缩。然后将残余物用水稀释，用Et2O洗涤，用1N HCl水溶液酸化。将所得混合物用CH2Cl2萃取两次，合并的有机相用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗化合物13C，其不经进一步纯化用于下一步。LC-MS m/z 493.22ES+，491.21ES-。
[00425]将化合物13C(20.6mg)的CH2Cl2(800μL)溶液用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(10mg)和羟基苯并三唑(7mg)处理1小时。然后一次加入二异丙胺(16μL)和3-氨基-4-环丁基-2-羟基丁酰胺D(10.5mg)，将所得的反应溶液在室温下再搅拌16小时。然后将混合物依次用1N HCl水溶液、1N K2CO3水溶液∶1N NaHCO3水溶液的1∶1溶液和盐水进行洗涤。然后将有机相干燥(MgSO4)，真空浓缩，经硅胶层析纯化(0％-4％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到化合物13D(11.6mg)。LC-MS m/z 647.25ES+。
Figure A20068003905904352
[00426]向化合物13D(11.6mg)的CH2Cl2(1mL)溶液加入Dess-Martin periodinane(8.4mg)，将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。然后将所得的白色混合物用1.0N Na2S2O3水溶液洗涤，进行相分离，有机相用MgSO4干燥，真空浓缩，经硅胶层析纯化(30％-65％EtOAc的己烷溶液)，得到6.7mg化合物编号247，为白色固体：
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.61(s)，7.52(d，J＝6.1Hz)，7.39(d，J＝7.8Hz)，7.34(t，J＝7.8Hz)，6.87(s)，6.77(s)，5.89(s)，5.67(s)，5.23-5.19(m)，4.83-4.79(m)，4.47(s)，4.38(d，J＝11.0Hz)，3.72(dd，J＝3.1，11.2Hz)，3.45(m)，3.30(d)，2.64(m)，2.56(m)，2.44-2.36(m)，2.08-1.98(m)，1.86-1.68(m)，1.64-1.58(m)，1.33-1.22(m)，1.05-1.00(m，H)，0.95-0.92(m，H)ppm.LC-MS m/z 647.25ES+.
实施例14：化合物编号57
[00427]将化合物14A(512mg)的二氧杂环己烷溶液用4N HCl的二氧杂环己烷溶液进行处理。反应溶液在室温下搅拌45分钟，真空浓缩。将所得残余物溶于少量的CH2Cl2中，从Et2O/己烷中结晶，得到化合物14B，为白色固体(362mg，80％)。LC-MS m/z 468.24ES+。
Figure A20068003905904362
[00428]将环庚烷乙酸(83mg，Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wise.)的CH2Cl2(4mL)溶液用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(103mg)和羟基苯并三唑(72mg)处理1小时。然后一次加入二异丙胺(160μL)和中间体14B(179mg)，将所得反应溶液在室温下再搅拌2小时。然后将混合物依次用1N HCl水溶液、1N K2CO3水溶液∶1NNaHCO3水溶液的1∶1溶液和盐水进行洗涤。然后将有机相干燥(MgSO4)，真空浓缩，经硅胶层析纯化(15％-60％EtOAc的己烷溶液)，得到化合物14C(188mg，88％)。LC-MS m/z 606.25ES+。
Figure A20068003905904371
[00429]将化合物14C(186mg)溶于THF(3mL)中，所得溶液用1N LiOH水溶液(620μL)和水(1mL)处理。将反应混合物在室温下搅拌45分钟，真空浓缩。然后将残余物用水稀释，用Et2O洗涤，用1NHCl水溶液酸化。将所得混合物用EtOAc萃取两次，合并的有机相用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗化合物14D，其不经进一步纯化用于下一步。LC-MS m/z 592.25ES+，590.35ES-。
Figure A20068003905904372
[00430]将化合物14D(89mg)的CH2Cl2(1mL)/DMF(1mL)溶液用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(44mg)和羟基苯并三唑(31mg)处理1小时。然后一次加入二异丙胺(70μL)和(3S)-3-氨基-4-环丙基-2-羟基丁酰胺(35mg)，将所得反应溶液在室温下再搅拌16小时。然后将混合物依次用1N HCl、1N K2CO3水溶液∶1N NaHCO3水溶液的1∶1溶液和盐水进行洗涤。然后将有机相用MgSO4干燥，真空浓缩，经硅胶层析纯化(0％-5％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到96mg化合物14F(87％)。LC-MS m/z 732.21ES+。
Figure A20068003905904381
[00431]向化合物14F(96mg)的CH2Cl2(1.5mL)溶液加入Dess-Martin periodinane(83mg)，将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。然后将所得白色混合物用1N Na2S2O3水溶液洗涤，进行相分离，有机相用MgSO4干燥，真空浓缩，经硅胶层析纯化(10％-95％EtOAc的己烷溶液)，得到化合物编号57(44mg)，为白色固体。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.76(s)，6.75(br s)，6.48(s)，6.07(d)，5.40(m)，4.67(m)，4.22(d)，3.95(s)，3.87(s)，3.75(d)，3.43(m)，2.51(m)，2.10(m)，1.30-1.87(m)，1.12-1.28(m)，0.97(m)，0.79(m)，0.15(m)，0.03(m)ppm.LC-MS m/z730.35ES+，728.35ES-.
[00432]实施例15：化合物编号600
Figure A20068003905904382
[00433]化合物600的结构同表A中的化合物266。
[00434]向(R)-2-环己基丁-3-炔酸(430mg，2.4mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液加入EDC(458mg，2.4mmol)、HOBt(324mg，2.4mmol)和三乙胺(836μL，6.0mmol)。搅拌5分钟后，加入化合物15A(800mg，2.0mmol)，将反应溶液搅拌16小时。将混合物用H2O、1N HCl和饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥，减压浓缩，得到1.23g粗化合物15B，其通过硅胶层析进行纯化。ES(+)MS：m/e 570(M+H)+。
[00435]向化合物15B(220mg，0.4mmol)的THF/H2O(2mL，3∶1v/v)溶液加入一水合LiOH(115mg，3mmol)。将所得混合物搅拌2小时，用1N HCl(6mL)酸化，用EtOAc(三次，10mL)萃取。将合并的有机相用MgSO4干燥，浓缩，得到无色油，其不经进一步纯化加以使用。将该油溶于CH2Cl2(2mL)，然后加入EDC(90mg，0.5mmol)、HOBt(63mg，0.5mmol)和三乙胺(163μL，1.2mmol)。搅拌5分钟后，加入(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(87mg，0.5mmol)。反应溶液搅拌12小时，用H2O、1N HCl和饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥，减压浓缩，得到215mg化合物15C，为无色油，其不经进一步纯化加以使用。ES(+)MS：m/e 724(M+H)+。
[00436]化合物15C(53mg，0.07mmol)的CH2Cl2(0.5mL)溶液加入Dess-Martin periodinane(41mg，0.1mmol)。将所得混合物搅拌30分钟，用1Na2S2O3猝灭，进行层分离。有机层经硅胶层析纯化，得到20mg化合物编号600。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：7.53(d，J＝1.6Hz，1H)，7.43(d，J＝7.6Hz，1H)，7.31-7.25(m，2H)，6.83(d，J＝3.3Hz，1H)，6.24-6.21(m，1H)，5.30-5.26(m，1H)，4.70-4.58(m，2H)，4.23-4.21(m，1H)，3.64(dd，1H)，3.36-3.20(m，2H)，2.70-2.68(m，1H)，2.57-2.35(m)，2.04-1.82(m)，1.72-1.30(m，10H)，1.18-0.75(m)，0.55-0.40(m).
[00437]实施例16：化合物编号602
Figure A20068003905904401
[00438]化合物602的结构同表A中的化合物212。
[00439]向以上制备的化合物15C(20mg，0.03mmol)和新戊酸叠氮甲酯(azidomethyl pivalate)(4mg，0.03mmol，按Syn.Lett.，2005，18，第2847-2850页制备)的叔丁醇/H2O(120μL，1∶1v/v)溶液加入抗坏血酸钠的水溶液(10μL，0.01mmol，1.0M)，然后加入五水硫酸铜(II)的水溶液(5μL，0.001mmol，0.3M)。反应混合物在室温下搅拌12小时，用水稀释，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用5％氢氧化铵洗涤，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩，得到25mg粗化合物16B，其不经进一步纯化加以使用。ES(+)MS：m/e 881(M+H)+。
[00440]向化合物16B的MeOH(120μL)溶液加入NaOH水溶液(120μL，1M)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用1M HCl(120μL)处理，接着用H2O(120μL)处理。将混合物用CH2Cl2(三次，每次200μL)萃取。将合并的萃取物用盐水洗涤，浓缩至大约100μL的体积。向此溶液加入Dess-Martin periodinane(17mg，0.04mmol)，搅拌反应30分钟。将混合物用1M Na2S2O3(150μL)猝灭，将有机层分离，经硅胶层析纯化，得到3mg化合物编号602。ES(+)MS：m/e 765(M+H)+。
[00441]下表5所列的是通过方法5a和5b制备的另外的式I化合物。
Figure A20068003905904411
表5：通过方法5a和5b产生的另外的式I化合物
  化合物编号   P1的原料   C1的原料   R3的原料
  5   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(4-羟基-4-甲基环己基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  10   (S)-4-(苄基氨基)-2-异丙基-4-氧代丁酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  13   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-降冰片烷乙酸   3-氯苯甲醛肟
  19   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(二环[4.1.0]庚-1-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  21   (S)-4-(环己基氨基)-2-异丙基-4-氧代丁酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  23   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  26   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   N-苄酰-L-脯氨酸   3-氯苯甲醛肟
  27   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   环丁烷乙酸   3-氯苯甲醛肟
  43   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  48   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-降冰片烷乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  50   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  59   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  63   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  67   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟
  86   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸异丙酯   胡椒醛肟
  90   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  104   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   叔丁基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  105   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  117   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   4-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  121   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  126   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟
  129   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环庚基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  131   N-BOC-L-叔丁基甘   N/A   2，4-二甲氧基-5-
  氨酸   氯苯甲醛肟
  136   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟
  145   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   胡椒醛肟
  153   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-((2R，5R)-2，5-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  168   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   噻吩-3-甲醛
  172   N-苯基-L叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  178   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟
  184   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   4-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酸   3-氯苯甲醛肟
  188   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  192   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸环戊酯   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  195   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-甲氧基-5-甲基苯甲醛肟
  211   2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(1-甲氧基环丙基)乙酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  212   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-2-环己基-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸   3-氯苯甲醛肟
  214   N-(3-甲氧基苯基)-L叔丁基甘氨酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  217   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  219   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  225   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸环戊酯   3-氯苯甲醛肟
  231   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  233   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(1-羟基环己基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  247   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸叔丁酯   3-氯苯甲醛肟
  256   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-乙基-2-糠醛肟
  263   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟
  264   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  266   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-2-环己基戊-4-炔酸   3-氯苯甲醛肟
  268   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  273   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  280   (S)-2-异丙基-4-(异丙基氨基)-4-氧代丁酸   N/A   3-氯苯甲醛肟
  282   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  284   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-2-环己基丙酸   3-氯苯甲醛肟
  286   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  290   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   胡椒醛肟
  294   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  295   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   胡椒醛肟
  297   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   叔丁基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  307   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  310   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3，5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛
  326   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  335   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，4-二甲氧基苯甲醛肟
  337   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸环戊酯   3-氯苯甲醛肟
  344   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-   3-氯苯甲醛肟
  吡嗪甲酸
  346   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-降冰片烷乙酸   3-氯苯甲醛肟
  351   N/A   叔丁基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  356   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  362   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3，5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛
  369   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2，5-二氧代吡咯烷-1-基碳酸环戊酯   3-氯苯甲醛肟
  375   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   胡椒醛肟
  382   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸异丙酯   胡椒醛肟
  388   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  411   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟
  415   N-CBZ-L-叔丁基甘氨酸   N/A   胡椒醛肟
  418   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-((2R，5R)-2，5-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  419   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  440   N-BOC-L-叔丁基甘   2，5-二氧代吡咯烷   2，4-二甲氧基-5-
  氨酸   -1-基碳酸环戊酯   氯苯甲醛肟
  442   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-((2R，5R)-2，5-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  445   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  446   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-降冰片烷乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  453   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  468   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-((2R，5R)-2，5-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  473   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   叔丁基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  485   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   反式-2-苯基-1-环丙烷甲酸   3-氯苯甲醛肟
  502   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   N-FMOC-L-环己基甘氨酸，然后2-吡嗪甲酸   3-氯苯甲醛肟
  510   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  516   N-((S)-四氢呋喃-3-基氧基)羰基)-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，4-二甲氧基苯甲醛肟
  522   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯苯甲醛肟
  529   N-BOC-L-叔丁基甘   2-(4-甲基四氢   2，4-二甲氧基-5-
  氨酸   -2H-吡喃-4-基)乙酸   氯苯甲醛肟
  541   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  542   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   异氰酸叔丁酯   3-氯苯甲醛肟
  549   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-2-环己基-4-氧代-4-(吡咯烷-1-基)丁酸   3-氯苯甲醛肟
  554   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸   5-乙基-2-糠醛肟
  562   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  569   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   (S)-2-环己基-4-(甲基氨基)-4-氧代丁酸   3-氯苯甲醛肟
  575   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-(4-羟基-4-甲基环己基)乙酸   3-氯苯甲醛肟
  577   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  581   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   N/A   2，4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟
  589   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-8-喹啉甲醛肟
  590   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2-甲氧基-3-甲基苯甲醛肟
[00442]某些其它式I化合物可按下示方法6来制备。
方法6：
Figure A20068003905904491
[00443]参见方法6，将中间体A1转化成Boc-甲酯F1。从F1除去Boc基团，得到胺-酯F2，后者与R1羧酸在偶联试剂的存在下反应，得到F3，其中R1为R4C(O)-。F3与氧化腈1f反应得甲酯E3，后者水解后得到螺异噁唑啉酸E4。E4向E7的转化按方法5a所述来实现。
实施例17：化合物编号267
Figure A20068003905904492
[00444]将4-羟基-3，5-二甲基苯甲醛(2.5g，16.6mmol)的THF(100mL)溶液用KOH(1.5当量的1N水溶液，25mL)和2-碘丙烷(2.0当量)处理，加热回流5天。然后将反应混合物冷却，转移到分液漏斗，用MTBE稀释，用H2O、1N NaOH(两次)、0.5N HCl(水溶液)、盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。产物在ISCO combiflash上进行硅胶层析纯化，得到1.99g(10.34mmol)4-异丙氧基-3，5-二甲基苯甲醛，为无色液体。
H1NMR(300MHz，CDCl3)9.89(s，1H)，7.55(s，2H)，4.41-4.26(m，1H)，2.32(s，6H)，1.32(d，J＝6Hz，6H).
Figure A20068003905904501
[00445]将4-(异丙氧基)-3，5-二甲基苯甲醛(1.98g，10.3mmol)的EtOH(60mL)溶液与羟胺盐酸盐(2.4M水溶液，5.2mL，1.2当量)和Na2CO3(1.2M溶液，5.2mL，0.6当量)在室温下加热至60℃，保持2小时。将反应混合物转移到分液漏斗，用EtOAc稀释；将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到710mg(3.24mmol)4-(异丙氧基)-3，5-二甲基苯甲醛肟，为浅黄色油。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)：8.10(s，1H)，7.23(s，2H)，4.29-4.18(m，1H)，2.29(s，6H)，1.29(d，6H).
[00446]将4-(异丙氧基)-3，5-二甲基苯甲醛肟(166mg，0.801mmol)的DMF(3mL)溶液与NCS(130mg，0.974mmol)在室温下搅拌过夜。向此反应混合物加入该甲酯(257mg，0.679mmol)于DMF(1.5mL)和三乙胺(1.2当量)中的溶液。在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用EtOAc/己烷(4∶1)稀释，用1N HCl(水溶液)洗涤。进行层分离，水层用EtOAc/己烷(4∶1)反萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。将化合物以EtOAc/己烷作为洗脱剂在ISCO combiflash上进行硅胶层析纯化，得到173mg(0.296mmol)化合物17A，为白色固体。LCMS(M+1)＝584.3。
Figure A20068003905904511
[00447]将化合物17A(173mg，0.30mmol)与LiOH·H2O(1.1当量)的THF/MeOH/H2O(4∶1∶1，3mL)溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释，用1N HCl(水溶液)酸化，进行层分离。水层用EtOAc反萃取，将有机层合并，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩，得到171mg(0.30mmol)化合物17B，为白色固体。FIA MS(M+1)＝570.3。
Figure A20068003905904512
[00448]羧酸17B(83mg，0.146mmol)、EDC·HCl(37mg，1.3当量)、HOBt(26mg，1.3当量)、(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺盐酸盐(64mg，2.0当量)和DIEA(0.100mL，4.0当量)在DMF(0.9mL)中室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用EtOAc稀释，用1N HCl(水溶液)(两次)洗涤。将水层分离，用EtOAc反萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。产物在ISCO combiflash上进行硅胶层析纯化，得到85mg(0.115mmol)化合物17C。LCMS(M+1)＝738.3。
Figure A20068003905904521
[00449]将化合物17C(85mg，0.115mmol)的CH2Cl2(1.0mL)溶液用Dess-Martin periodinane(54mg，1.1当量)处理30分钟。用等体积(～1mL)的饱和NaHCO3水溶液和1N Na2S2O3(水溶液)猝灭反应。将有机层分离，直接在ISCO combiflash上进行硅胶层析纯化，得到77mg(0.105mmol)化合物编号267。
FIA MS(M+1)＝736.2.1H-NMR(300MHz，CDCl3)：7.33-7.26(m，2H)，7.12(d，1H)，6.91(d，1H)，6.12(d，1H)，5.45-5.32(m，1H)，4.78-4.63(m，2H)，4.29-4.17(m，2H)，3.71(d，1H)，3.43(d，1H)，3.30(d，1H)，2.86-2.74(m，1H)，2.63-2.42(m，2H)，2.29(s，6H)，2.19-1.85(m，3H)，1.84-0.82(m，34H)，0.65-0.58(m，2H).
实施例18：化合物编号556
Figure A20068003905904522
[00450]将4-乙氧基苯甲醛肟(204mg，1.24mmol)溶于DMF(至0.2M)，用NCS(1当量)处理。搅拌反应至原料被消耗掉。移出一半体积的反应混合物，再用NCS(1.5当量)处理，搅拌过夜。然后向溶液加入该甲酯(200mg，0.85当量)于DMF(0.3mL)和三乙胺(0.10mL，1.1当量)中的溶液。在室温下反应搅拌过夜，然后用EtOAc稀释，用1N HCl(水溶液)洗涤和用盐水洗涤。水层用EtOAc反萃取，合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩成深色油。产物在ISCOcombiflash上进行硅胶层析纯化，得到97mg(0.168mmol)化合物18A。LCMS(M+1)＝576.3。
Figure A20068003905904531
[00451]将化合物18A(97mg，0.168mmol)溶于THF/MeOH/H2O(8∶1∶1，5mL)，用LiOH·H2O(1.1当量)在室温下处理过夜。将反应混合物浓缩，用EtOAc和甲醇稀释，用1N HCl(水溶液)洗涤。将水层分离，用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，得到76mg(0.135mmol)化合物18B。FIA MS(M-1)＝560.4。
Figure A20068003905904532
[00452]将化合物18B(35mg，0.062mmol)、EDC-HCl(15mg，1.3当量)、HOBt(12mg，1.3当量)、氨基醇盐酸盐(55mg，2.0当量)和DIEA(0.044mL，4.0当量)在DMF(0.7mL)中室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用EtOAc稀释，用1N HCl(水溶液)(两次)洗涤。将水层分离，用EtOAc反萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。产物在ISCO combiflash上进行硅胶层析纯化，得到28mg(0.038mmol)化合物18C。LCMS(M+1)＝730.2。
Figure A20068003905904541
[00453]将化合物18C(28mg，0.038mmol)的CH2Cl2(0.7mL)溶液用Dess-Martin periodinane(18mg，1.1当量)处理30分钟。用等体积(～1mL)的饱和NaHCO3水溶液和1N Na2S2O3(水溶液)猝灭反应。将有机层分离，直接在ISCO Optix 10x上进行硅胶层析纯化，得到24mg(0.033mmol)化合物编号556。
FIA MS(M+1)＝728.2.1H-NMR(300MHz，CDCl3)：7.65(d，1H)，7.48(dd，1H)，7.11(d，1H)，6.95-6.88(m，2H)，6.08(d，1H)，5.40-5.31(m，2H)，4.78-4.63(m，2H)，4.26(d，1H)，4.20-4.11(m，2H)，3.71(d，1H)，3.42(d，1H)，3.27(d，1H)，2.84-2.73(m，1H)，2.63-2.46(m，2H)，2.20-1.86(m，3H)，1.62-0.85(m，30H)，0.66-0.58(m，2H)
[00454]下表6所列的是通过方法6制备的另外的式I化合物。
Figure A20068003905904542
表6.通过方法6制备的另外的式I化合物
  化合物编号   P1的原料   C1的原料   R3的原料
  18   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   7-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-甲醛肟
  19   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-甲基苯甲醛肟
  28   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2-氰基苯甲醛肟
  31   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   8-喹啉甲醛肟
  38   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2，5-二氯-3-甲氧基苯甲醛肟
  42   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   8-喹啉甲醛肟
  62   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-3-噻吩甲醛肟
  68   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   8-喹啉甲醛肟
  74   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   8-氯-2，2-二甲基色烷-6-甲醛肟
  89   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-硝基苯甲醛肟
  97   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-异丙氧基苯甲醛肟
  111   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-甲氧基-5-甲基苯甲醛肟
  114   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-甲氧基-5-甲基苯甲醛肟
  132   N-BOC-L-叔丁基甘   2-环己基乙酸   5-氯-4-烟醛肟
  氨酸
  134   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-7-甲醛肟
  158   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-6-甲氧基苯甲醛肟
  165   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-2-甲氧基烟醛肟
  168   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-噻吩甲醛肟
  169   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-2-氟苯甲醛肟
  170   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-2，2-二甲基-2，3-二氢苯并[b]呋喃-7-甲醛肟
  250   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-5-甲氧基苯甲醛肟
  267   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   4-异丙氧基-3，5-二甲基苯甲醛肟
  292   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯烟醛肟
  305   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   6-氟-1，3-苯并二氧杂环己烯(dioxene)-8-甲醛肟
  312   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-6-甲氧基烟醛肟
  315   N-BOC-L-叔丁基甘   2-环己基乙酸   5-氯-4-甲基-3，4-
  氨酸   二氢-2H-1，4-苯并噁嗪-7-甲醛肟
  321   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-2，3-二甲氧基苯甲醛肟
  366   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-4-甲氧基-2-甲基苯甲醛肟
  370   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯胡椒醛肟
  396   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-5-甲基苯甲醛肟
  406   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   4-环丙基甲氧基-3，5-二甲基苯甲醛肟
  430   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   8-氯-1-甲基-1，2，3，4-四氢喹啉-6-甲醛肟
  469   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2-甲氧基烟醛肟
  478   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   5-氯-2-噻吩甲醛肟
  494   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4，5-二甲氧基苯甲醛肟
  499   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   7-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-甲醛肟
  500   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   4-甲氧基-3-甲基苯甲醛肟
  513   N-BOC-L-叔丁基甘   2-环己基乙酸   4-乙氧基-3，5-二
  氨酸   甲基苯甲醛肟
  556   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-4-乙氧基苯甲醛肟
  591   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2-吡啶甲醛肟
  592   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   2-吡啶甲醛肟
  593   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   4-氯-2-吡啶甲醛肟
  594   N-BOC-L-叔丁基甘氨酸   2-环己基乙酸   3-氯-6-氟苯甲醛肟
[00455]某些其它本发明化合物可按下示方法7来制备。
方法7：
Figure A20068003905904581
Figure A20068003905904591
[00456]参见方法7，Cbz羟酸G1转化成甲酯G2，后者脱保护得到氨基-酯G3。G3与螺异噁唑啉酸G4在偶联试剂的存在下反应，得到中间体G5。G5的甲酯水解产生羟酸G6，后者用例如Dess-Martinperiodinane氧化得到酮酸G7。G7与胺R13R10NH在偶联试剂的存在下反应，得到最终产物G8。
实施例19：化合物编号275
步骤1：化合物Q的制备
Figure A20068003905904601
[00457]将1.00g酸19A溶于14mL甲醇中，加热回流。加入两滴浓H2SO4，回流反应过夜。将混合物冷却至室温，用50mL NaHCO3(饱和水溶液)中和。将反应混合物用50mL乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，蒸发，得到1.01g化合物19B，为白色粉末。主要非对映异构体1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ：7.40-7.31(m，5H)，5.12(s，2H)，4.99(d，1H，J＝8.7Hz)，4.35(s，1H)，4.15-4.02(m，1H)，3.81(s，3H)，3.05(br s，1H)，1.67-1.17(m，4H)，0.91(t，3H，J＝6.8Hz)。次要非对映异构体1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ：7.40-7.31(m，5H)，5.07(s，2H)，4.90(d，1H，J＝9.8Hz)，4.19(s，1H)，4.15-4.02(m，1H)，3.76(s，3H)，3.03(br s，1H)，1.67-1.17(m，4H)，0.96(t，3H，J＝7.1Hz)。
[00458]将1.00g CBz保护的甲酯19B溶于11mL甲醇中。加入150mg Pd(OH)2(20wt％/碳)，将所得混合物用1atm氢气冲洗，在室温下搅拌3小时。将该甲醇溶液滤过
Figure A20068003905904611
塞，滤垫用另外的甲醇进行漂洗。蒸发后收集到浅黄色油，将其重新溶于5mL DCM中，用1.5mL 4M HCl的二氧杂环己烷溶液处理。搅拌1分钟后，将反应混合物蒸发。收集到0.65g化合物19C，为白色粉末，进行LCMS鉴定(M+1＝162.0)。
[00459]将0.80g螺异噁唑啉酸化合物19D与0.33g HOBt、0.81g HBTU和15mL DMF一起搅拌。向搅拌溶液加入807μL DIPEA，搅拌10分钟。加入0.33g盐酸盐19C。在室温下搅拌反应3小时。向反应混合物加入200mL EtOAc，所得混合物用100mL NaHCO3(饱和水溶液)洗涤两次，然后用100mL盐水洗涤。将有机相用MgSO4干燥，蒸发。粗反应混合物经硅胶柱洗脱纯化(40g柱，梯度洗脱，40-55％EtOAc∶己烷)，得到1.02g化合物19E，为白色粉末，进行LCMS鉴定(M+1＝661.3)。
[00460]将1.04g甲酯19E在6mL THF中搅拌，向此溶液加入3mL 1M LiOH(水溶液)。在室温下搅拌反应2小时，经HPLC测定反应完成。将反应混合物用6mL 1M HCl处理，用15mL乙酸乙酯萃取三次。将合并的萃取物蒸发，得到1.00g化合物Q，为米黄色固体，将其用于下一步骤。
步骤2：化合物R的制备
Figure A20068003905904612
[00461]向化合物Q(0.300g，0.46mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液滴加5.58mL 0.16M Dess Martin periodinane的CH2Cl2溶液。在室温下搅拌4小时后，加入10mL 1M Na2S2O3溶液，将反应混合物在环境温度下搅拌30分钟。将有机层分离，用水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。将粗混合物重新溶于CH2Cl2中，用己烷沉淀，过滤，得到230mg化合物R。LC/MS：m/z 645.7(M+H)+1.99分钟处(10-99％CH3CN(0.035％TFA)/H2O(0.05％TFA))。
步骤3：化合物编号275的制备
[00462]向化合物R(20mg，0.0.031mmol)于无水乙腈中的悬浮液加入吡啶(10μL，0.124mmol)、2-氯-1-甲基-碘化吡啶鎓(15.3mg，0.06mmol)、HOBt(6.8mg，0.05mmol)，然后加入50μL异丙胺(3.7mg，0.062mmol)的无水乙腈溶液。在室温下进行搅拌反应，2小时后反应完成。将反应混合物用1mL饱和碳酸氢钠水溶液溶液猝灭，进行层分离，水层用CH2Cl2萃取三次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。将残余物溶于1.5mL CH2Cl2中，经正相HPLC纯化(10-99％EtOAc/己烷)，得到化合物编号275。LC/MS：m/z 686.7(M+H)+2.01分钟处(10-99％CH3CN(0.035％TFA)/H2O(0.05％TFA))。
实施例20：化合物编号181
Figure A20068003905904631
[00463]向R(20mg，0.031mmol)于无水1，4-二氧杂环己烷中的悬浮液加入吡啶(7.6μL，0.093mmol)，然后加入三氟乙酸五氟苯基酯(8.8μL，0.05mmol)，在室温下搅拌反应1.5小时，到时间时加入7-氨基-4-甲基-1H-喹啉-2-酮(14mg，0.08mmol)。在室温下进行搅拌反应，1小时后反应完成。将反应混合物用1mL饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，进行层分离，水层用CH2Cl2萃取三次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。将残余物溶于1.5mL CH2Cl2中，经正相HPLC纯化(10-99％EtOAc/己烷)，得到化合物编号181。LCMS：m/z 801.7(M+H)+2.06分钟处(10-99％CH3CN(0.035％TFA)/H2O(0.05％TFA))。
实施例21：化合物编号605
Figure A20068003905904632
[00464]将(3S)-3-((5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-1-氧杂-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-烯甲酰胺基)-2-羟基己酸(0.02g，0.03mmol)、(3，5-二甲氧基苯基)甲胺(5.68mg，0.033mmol)、HOBt(6.8mg，0.05mmol)、DIPEA(22μL，0.124mmol)和CH2Cl2(70μL)的混合物在室温下搅拌10分钟。然后向混合物加入Mukaiyama′s试剂(2-氯-1-[4-(1H，1H，2H，2H-全氟-9-甲基癸基)苄基]六氟磷酸吡啶鎓)于200μL乙腈中的溶液，在室温下进行搅拌反应。5小时后，加入1.34mL 0.3M Dess-Martin periodinane的CH2Cl2溶液，将所得混合物搅拌。2小时后，将氧化用1.0mL饱和NaHCO3、1mL1N Na2S2O3猝灭，剧烈搅拌。将有机层分离，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。将残余物溶于1.5mL CH2Cl2中，经正相HPLC纯化(10％-99％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物编号605，(5S，8S)-3-(3-氯苯基)-7-((S)-2-(2-环己基乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(3，5-二甲氧基苄基氨基)-1，2-二氧代己-3-基)-1-氧杂-2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-烯-8-甲酰胺。LC/MS：m/z 794.7(M+H)+4.11分钟处(10％-99％CH3CN(0.035％TFA)/H2O(0.05％TFA))。
[00465]下表7所列的是用以通过方法7制备另外的式I化合物的试剂。
表7.用以通过方法7制备另外的式I化合物的试剂
Figure A20068003905904641
Figure A20068003905904651
Figure A20068003905904661
表7中所列的非市售氮杂环丁烷的制备
Figure A20068003905904672
[00466]将N-二苯基甲基(benzyhydryl)-3-甲磺酰基氮杂环丁烷(104mg)与乙醇(1.0mL)混合，在密封小瓶中95℃下加热过夜。通过TLC(30％EtOAc∶己烷)对反应进行监测。加入1mL饱和碳酸钾溶液进行处理(workup)，用0.5mL乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物进行硅胶柱纯化(4g柱，梯度洗脱，0-30％EtOAc∶己烷)。产生49mgN-二苯基甲基-3-乙氧基氮杂环丁烷，为透明无色油。LCMS(M+1＝268.2)。
[00467]将N-二苯基甲基-3-乙氧基氮杂环丁烷(49mg)溶于1mL甲醇中，加入22mg 10％Pd/C(Degussa类型)，在氢气氛下进行反应。在室温下搅拌反应64小时。将混合物滤过
Figure A20068003905904673
用甲醇充分洗涤，蒸发，得到黄色油(30mg)。该油包含二苯基甲烷和游离氮杂环丁烷的混合物。将该粗油混合物继续进行随后的各种转化，过量使用。
[00468]以下氮杂环丁烷用相应的醇按与上述方式类似的方式来制备。
Figure A20068003905904681
[00469]氮杂环丁烷按Frigola，J.等，J.Med.Chem.，36(1993)，801-810描述的方法来制备。
[00470]某些其它式I化合物可按下示方法8来制备。
方法8：
Figure A20068003905904683
[00471]参见方法8，螺异噁唑啉酸E4与氨基酯H1在偶联试剂的存在下反应，得到中间体H2。H2大环化产生化合物H3。酯H2水解产生酸H4。酸H4与磺酰胺或硫酰胺在偶联试剂的存在下反应得到产物H5。
实施例22：化合物编号409
Figure A20068003905904691
[00472]将(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)壬-8-烯酸(购自美国马萨诸塞州的RSp Amino Acid，179mg，1.0当量)与HBTU(376mg，1.5当量)、HOBt(94mg，1.05当量)和DIEA(345μL，3.0当量)在DMF中搅拌15分钟。加入化合物22A(194mg，1.0当量)，搅拌过夜。向所得溶液加入乙酸乙酯。将溶液用1N HCl(三次)洗涤，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经硅胶层析纯化(10-30％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到化合物22B(253mg，70％)。(M+H＝548.2)。
Figure A20068003905904692
[00473]将化合物22B(253mg，1.0当量)在THF(1mL)和甲醇(0.5mL)中搅拌。向所得溶液加入氢氧化锂(97mg，5.0当量)的水(0.5mL)溶液，再搅拌2小时。将所得混合物用乙酸乙酯稀释，用1N HCl洗涤，然后用盐水洗涤，将所得溶液用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到化合物22C(235mg，95％)，为纯白色固体。(M+H＝534.2)。
Figure A20068003905904701
[00474]将化合物22C(247mg，1.0当量)在1mL乙腈中搅拌。向所得溶液加入TBTU(297mg，2.0当量)、DIEA(241μL，3.0当量)，然后加入(1R，2S)-甲基-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸酯(86mg，1.2当量)，搅拌过夜。将所得溶液用乙酸乙酯稀释，用1N HCl然后是盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经硅胶层析纯化(10-70％乙酸乙酯/己烷梯度)，得到化合物22D(230mg，76％)。(M+H＝657.2)。
[00475]将化合物22D(230mg，1.0当量)与Hoveyda-Grubbs催化剂(22mg，0.1当量)在70mL CH2Cl2中回流搅拌1小时，所得溶液冷却至室温，经硅胶层析纯化(10-70％乙酸乙酯/己烷)，得到化合物22E。(172mg，77％)。
Figure A20068003905904711
[00476]将化合物22E(172mg，1.0当量)在THF(1mL)和甲醇(0.5mL)中搅拌。向所得溶液加入LiOH(46mg，4.0当量)于0.5mL水中的溶液，将所得溶液再搅拌2小时。向溶液再加入乙酸乙酯，用1N HCl和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到化合物22F(155mg，92％)，为纯白色固体。(M+H＝617.1)。
Figure A20068003905904712
[00477]将化合物22F(155mg，1.0当量)与羰基二咪唑(49mg，1.2当量)在1mL DMF中80℃下搅拌15分钟。向所得溶液加入环丙磺酰胺(49mg，1.6当量)，然后加入DBU(36μL，1.0当量)，再在80℃下搅拌10分钟。然后向溶液加入乙酸乙酯，用1N HCl和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。产物经硅胶层析纯化(100％DCM至5％甲醇/DCM梯度)，得到化合物编号409(64mg，35％)。(M+H＝718.1)。
[00478]下表8所列的是通过方法8制备的另外的式I化合物。
Figure A20068003905904721
表8.通过方法8制备的另外的式I化合物
  化合物编号   W的原料   R3的原料
  1   OH   7-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-甲醛肟
  137   OH   3-氯苯甲醛肟
  163   环丙烷磺酰胺   苯基乙醛酰羟基戊基氯
  232   环丙烷磺酰胺   3-氯苯甲醛肟
  320   OH   苯基乙醛酰羟基戊基氯
  386   环丙烷磺酰胺   7-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-甲醛肟
  409   环丙烷磺酰胺   3-氯苯甲醛肟
  470   OH   3-氯苯甲醛肟
[00479]某些其它式I化合物可按下示方法9来制备。
方法9：
Figure A20068003905904731
[00480]参见方法9，受保护的螺异噁唑啉B3(按方法2制备)与树脂结合的亚氨基-胺D1反应，得到中间体I1。I1脱保护产生胺I2，后者与R1羧酸在偶联试剂的存在下反应，得到I3，其中R1为R4C(O)-。I3水解产生最终化合物A10。
[00481]本领域技术人员可采用本文描述的实施例和方法以及公知的合成方法，来合成根据上述方法9的式I化合物。
[00482]下表CC所列的是通过方法9制备的另外的式I化合物。
Figure A20068003905904741
表CC.通过方法9制备的另外的式I化合物
  化合物编号   P1
  46   5-溴吲哚-2-甲酸
  54   乙酰-D-乙硫氨酸
  60   2-(R)-[[(4-甲基苯基)磺酰基]氨基]-2-苯基乙酸
  65   2-氧代-1-苯基吡咯烷-3-甲酸
  88   乙酰-D-甲基酪氨酸-OH
  98   N-乙酰-L-亮氨酸
  100   2-[[(4-氟苯基)磺酰基]氨基]-3-甲基丁酸
  157   5，6-二甲氧基吲哚-2-甲酸
  218   Pyr-Val-OH
  227   1-氨基甲酰基环丙烷甲酸
  246   5-(2，4-二甲基苯基氨基)-5-氧代戊酸
  248   4-氯-2-(6-甲氧基吡啶-3-基氨基)苯甲酸
  309   3-[[(4-乙酰胺基苯基)磺酰基]氨基]-3-丙酸
  328   3-(3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基磺酰基)苯甲酸
  332   (S)-2-乙酰胺基-3-(4-异丙氧基苯基)丙酸
  376   3-(2-氧代苯并[d]噁唑-3(2H)-基)丙酸
  380   4-三氟甲氧基苯基乙酸
  395   2-[[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基]-3-甲基丁酸
  397   2-((S)-2-氧代-4-苯基噁唑烷-3-基)乙酸
  412   乙酰-D-酪氨酸-OH
  416   2-(R)-[[(4-氯苯基)磺酰基]氨基]-3-甲基戊酸
  420   3-(2-二乙基氨基)-2-氧代乙基)1H-吲哚-2-甲酸
  421   反式-2-苯基-1-环丙烷甲酸
  466   2-[[(4-氟苯基)磺酰基]氨基]-2-苯基乙酸
  476   2-(S)-[[(4-甲基苯基)磺酰基]氨基]-2-苯基乙酸
  483   3-(N-苯基苯基磺酰胺基)丙酸
  489   2-(R)-[[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基]-3-甲基丁酸
  501   2-[(苯基磺酰基)氨基]-2-苯基乙酸
  534   2-(R)-[[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基]-3-甲基戊酸
  574   2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)丙酸
  586   6-(2，5-二甲氧基苯基)-2-氧代-1，2，3，6-四氢嘧啶-4-甲酸
  587   2-(R)-[[(4-甲氧基苯基)磺酰基]氨基]-4-甲基戊酸
[00483]某些其它式I化合物可按下示方法10来制备。
方法10：
Figure A20068003905904761
[00484]参见方法10，受保护的螺异噁唑啉B3(例如R1为Fmoc)与M10A(R″例如可为甲基或固定化在PS-Wang树脂上)，得到中间体M10B。M10B水解产生羧酸M10C，后者随后与适当的磺酰胺偶联得到最终化合物M10D。M10C也可作为最终的式I化合物。
[00485]类似地，本领域技术人员可采用本文描述的实施例和方法以及公知的合成方法，来合成根据上述方法10的式I化合物。
[00486]下表DD所列的是通过方法10制备的另外的式I化合物。
表DD.通过方法10制备的另外的式I化合物
Figure A20068003905904763
Figure A20068003905904771
Figure A20068003905904781
另外的实施例
实施例23：化合物编号610
Figure A20068003905904782
[00487]将肟23A(6.29g，40.4mmol)溶于DMF(63mL)中，向搅拌下的溶液分批加入N-氯琥珀酰亚胺(5.39g，40.4mmol)。在室温下继续搅拌3小时，到时间时经测定(HPLC)转化率为56％。通过在70C下温和加热45分钟促使反应完成。将4-亚甲基脯氨酸衍生物(8.81g，31.1mmol)加入并用DMF(5mL)冲洗到溶液中。在30分钟时间里小心滴加三乙胺(5.7mL)。然后在室温下搅拌过夜反应16小时。取等分试样进行HPLC分析，测定出含4∶1比例的环加成非对映异构体。加入乙酸乙酯(200mL)，将有机相用水(三次，200mL每次)和盐水(200mL)洗涤。然后将有机相用硫酸镁干燥，蒸发。将所得粗油分成两份，每份用装备有330g硅胶柱的ISCO combiflash进行纯化(10-20％EtOAc∶石油醚，72分钟)。所需的产物为主要异构体，其比次要异构体先从柱中洗脱出来，获得了9.42g 23B，为橙色油(69％)。次要异构体也从EtOAc∶己烷重结晶进行分离，为灰白色结晶粉末(1.53g，12％)。
Figure A20068003905904791
[00488]将化合物23B(9.42g)在三氟乙酸(12mL)中搅拌2小时。将溶剂蒸发，用甲醇(50mL)代替。将所得溶液加热回流，滴加H2SO4(3.0mL)。回流反应共6小时，到时间时经HPLC测定向甲酯的转化率大于95％。将反应混合物冷却，蒸发除去过量的甲醇。将所得的油重新溶于CH2Cl2(200mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)中和。收集有机相，水相用CH2Cl2(两次，每次100mL)萃取。将有机萃取物合并，用硫酸镁干燥，蒸发，得到5.09g化合物23C，为油(80％)，立即用到下一步。
Figure A20068003905904801
[00489]将氨基酯23C(1.25g，4.24mmol)用LiOH·H2O(186mg，4.4mmol)的THF/H2O(3∶1，10mL)溶液处理45分钟。真空除去溶剂，获得固体。在室温下将此固体在丙酮(20mL)和饱和NaHCO3(水溶液)(20mL)中调成浆液。加入Fmoc-Cl(1.12g，4.33mmol)，用HPLC监测反应。20分钟后，将反应烧瓶的内容物用CH2Cl2转移到分液漏斗，用2N HCl(水溶液)酸化。水相用CH2Cl2(两次，每次100mL)萃取。将所得的乳状液过滤，将有机层合并，用MgSO4干燥，浓缩，得到化合物23D。
Figure A20068003905904802
[00490]将化合物XX4在20％哌啶的DMF(20mL)溶液中振荡60分钟。将树脂用DMF(三次)、CH2Cl2(三次)重复洗涤。然后将所得树脂与化合物23D(437mg，0.87mmol)、HATU(392mg，1.03mmol)和DIEA(0.300mL，1.72mmol)在DMF(10mL)中振摇过夜。然后将所得的化合物结合树脂23F用DMF(三次)、CH2Cl2(三次)重复洗涤。(M+1)＝612.26。
[00491]将化合物结合的树脂23F在20％哌啶的DMF(8mL)溶液中振荡2小时。然后将树脂用DMF(三次)、CH2Cl2(三次)重复洗涤。(M+1)＝390.1。此树脂然后与(S)-2-(环戊氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(3当量)、HOBt(3当量)、HBTU(3当量)和DIEA(6当量)在DMF中振摇过夜。将树脂用DMF(三次)和CH2Cl2(三次)重复洗涤，然后在TFA(5mL)中振摇100分钟。将所得树脂滤出，滤液浓缩，经反相层析纯化，得到9.4mg化合物443，为白色固体。
(M+1)＝615.6，1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：8.63(s，1H)，7.67(s，1H)，7.63(d，J＝6.7Hz，1H)，7.55-7.49(m，2H)，6.90(d，J＝8.4Hz，1H)，5.77-5.69(m，1H)，5.20-5.17(m，1H)，5.06(d，J＝10.5Hz，1H)，4.93(brs，1H)，4.35(t，J＝7.7Hz，1H)，4.11(d，J＝8.8Hz，1H)，4.06(d，J＝10.9Hz，1H)，3.80(d，J＝11.6Hz，1H)，3.62-3.50(m，2H)，2.63-2.31(m，2H)，2.18-2.13(m，1H)，2.07-2.01(m，1H)，1.87-1.51(m，9H)，1.29-1.28(m，1H)，0.95-0.91(brs，9H).
Figure A20068003905904812
[00492]将化合物23G(6.6mg，0.011mmol)与CDI(2.8mg，0.017mmol)在DMF(0.5mL)中80℃下搅拌1小时。加入环丙基磺酰胺(3.8mg，0.031mmol)和DBU(0.01mL)，移去热源，在室温下搅拌反应过夜。所得反应混合物经反相层析纯化，得到2.8mg化合物编号190(0.0039mmol)。
(M+1)＝718.1.1H-NMR(500MHz，甲醇-d4)：9.26(s，0.4H)，9.02(s，0.6H)，7.72(d，J＝1.7Hz，1H)，7.61(dd，J＝1.3，7.3Hz，1H)，7.47-7.41(m，2H)，5.81-5.73(m，1H)，5.33-5.30(m，1H)，5.14-5.10(m，1H)，5.03(brs，1H)，4.45-4.41(m，1H)，4.31-4.25(m，2H)，3.94(d，J＝11.0Hz，1H)，3.62-3.53(m，2H)，2.99-2.92(m，1H)，2.55-2.49(m，1H)，2.29-2.23(m，2H)，1.89-1.53(m，10H)，1.44-1.40(m，1H)，1.32-1.24(m，1H)，1.19-1.02(m，2H)，0.90(s，9H).
实施例24：化合物编号618
Figure A20068003905904821
[00493]将羧酸24A(69mg，0.13mmol)、HATU(50mg，0.13mmol)、化合物24B(0.13mmol)和DIEA(0.045mL，0.26mmol)在乙腈(1.5mL)中搅拌2小时。然后将反应混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3(水溶液)、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。经硅胶层析纯化得到76mg(0.12mmol，91％)化合物24C。LCMS(M+1)＝614.4。
Figure A20068003905904831
[00494]将甲酯24C(76mg，0.12mmol)溶于THF/H2O(5∶1，2mL)中，与LiOH·H2O(1.5当量)搅拌过夜。将反应混合物用1N HCl(水溶液)酸化，浓缩。将残余物溶于CH2Cl2/MeOH(93∶7)，洗脱通过硅胶塞(plug)，得到75mg(0.11mmol)化合物编号144。
LCMS(M+1＝627.4).1H-NMR(500MHz，甲醇-d4)：7.84(d，J＝9.1Hz，0.5H)，7.71(s，1H)，7.60(d，J＝7.2Hz，1H)，7.45-7.40(m，2H)，5.90-5.83(m，1H)，5.23(d，J＝1.4Hz，1H)，5.07(d，J＝10.3Hz，1H)，4.60(m，1H)，4.52-4.49(m，1H)，4.27(m，1H)，3.90(m，1H)，3.59-3.48(m，2H)，2.58(dd，J＝8.0，12.6Hz，1H)，2.37-2.32(m，1H)，2.21-2.12(m，4H)，1.76-1.61(m，6H)，1.45-1.42(m，1H)，1.32-1.14(m，4H)，1.05-0.95(m，9H)，0.91(m，3H).
Figure A20068003905904832
[00495]将羧酸22D(18.5mg，0.029mmol)与CDI(6.0mg)在DMF(1.5mL)中80℃下搅拌10分钟。使反应冷却至室温，加入化合物24E的DMF(0.15mL)溶液与DBU(4当量)，在80℃水浴中加热反应20分钟。所得反应混合物直接进行反相层析纯化，得到7.6mg化合物编号115。
LCMS(M+1＝745.2)，1H-NMR(500MHz，甲醇-d4)：9.30(s，0.5H)，8.02(m，0.5H)，7.71(m，1H)，7.60(dt，J＝7.2，1.3Hz，1H)，7.46-7.41(m，2H)，5.86-5.79(m，1H)，5.35-5.28(m，1H)，5.12-5.10(m，1H)，4.65(m，1H)，4.42(dd，J＝6.9，10.6Hz，1H)，4.28(d，J＝11.3Hz，1H)，3.95(d，J＝11.4Hz，1H)，3.62-3.47(m，2H)，2.51-2.47(m，1H)，2.35-2.31(m，1H)，2.25-2.12(m，4H)，1.89(dd，J＝5.4，8.1Hz，1H)，1.80-1.64(m，6H)，1.45-1.39(m，1H)，1.33-1.15(m，3H)，1.04-0.97(m，11H)，0.73-0.57(m，4H).
[00496]下表9所列的是示例性的式I化合物的一些物理数据。
[00497]LC/MS数据用以下仪器获得：
质谱仪：PESciex API-150-EX或Waters/Micromass ZQ或Waters/Micromass Quattro II或Waters/Micromass ZMD；泵：ShimadzuLC-8A或Agilent 1100；自动进样器：Gilson 215或Gilson 819。
[00498]采用了以下方法：3.0mL/分钟流速，10-99％CH3CN(0.035％TFA)/H2O(0.05％TFA)梯度，Phenomenex Luna 5m C18柱(50x4.60mm)；1.5mL/分钟流速，10-90％CH3CN(0.2％甲酸)/H2O(0.2％甲酸)，3分钟，YMC-Pack Pro-C 18柱(50x4.6mm)；1.0mL/分钟流速，10-90％CH3CN(0.2％甲酸)/H2O(0.2％甲酸)，5分钟，YMC-Pro-C18柱(50x2.0mm)；1.5mL/分钟流速，10-90％CH3CN(0.1％TFA))/H2O(0.1TFA)，3分钟，YMC-Pack Pro-C18柱(50x4.60mm)。
表9：示例性的式I化合物的物理数据
  化合物编号   LCMS(M+1)   LCMSRT   FIA-MS(M-1)   FIA-MS(M+1)   NMR
  1   754.4   756.1
  2   700.2   3.99
  3   698.8   3.84
  4   763   765
  5   686.3   2.8
  6   760.9   2.4
  7   710.2   3.35
  8   707.9
  9   638   640
  10   724   726.1
  11   662.4   664.3
  12   602   2.94
  13   668.2   3.6
化合物编号   LCMS(M+1)   LCMSRT   FIA-MS(M-1)   FIA-MS(M+1)   NMR
  14   580.9
  15   725.1   726.1
  16   691.8
  17   791.8   2.29
  18   752.4   3.74
  19   696.3   3.7   H-NMR(500MHz，CDCl3)7.61(d，J＝1.7Hz，H)，7.51(d，J＝7.7Hz，H)，7.38(d，J＝8.2Hz，H)，7.33(t，J＝7.8Hz，H)，7.26(s，CDCl3)，7.16(t，J＝6.5Hz，H)，6.91(d，J＝3.3Hz，H)，6.55-6.50(m，H)，5.35(dd，J＝4.1，8.5Hz，H)，4.77-4.74(m，H)，4.66(d，J＝9.4Hz，H)，4.29(d，J＝11.1Hz，H)，3.71(d，J＝11.2Hz，H)，3.47(d，1H)，3.29(d，1H)，2.78(td，J＝7.3，3.7Hz，H)，2.63-2.59(m，H)，2.52-2.49(m，H)，2.07-2.30(m，2H)，1.98-1.92(m，H)，1.77-1.61(m，H)，1.47-1.40(m，H)，1.35-1.25(m，H)，1.21(dd，J＝6.6，12.5Hz，H)，1.01(s，9H)，0.98-0.83(m，H)，0.61-0.51(m，H)，0.39(t，J＝4.8Hz，H)ppm
  20   672   3.24
  21   697.9   699.8
  22   713   3.9   CDCl3；7.77(d，2H)，7.58(m，4H)，7.41(t，2H)，7.32(3H)
  23   710   4.5
  24   630.3   632.2
  25   684.6   686.5
  26   761.4   3.23
  27   672.4   3.7
  28   675.3   3.44
  29   698.361   3.8
  30   767.6   3.15
  31   701.3   2.74
  32   730.3   732.1
  33   685   3.5
  34   559
  35   706.1   3.66
  36   675.5   677.3
  37   712   3.19
化合物编号   LCMS(M+1)   LCMSRT   FIA-MS(M-1)   FIA-MS(M+1)   NMR
  38   748.1   3.86
  39   728   3.82
  40   655.3   657.2
  41   729   3.4
  42   701.3   2.75
  43   654.1   656.1
  44   658   3
  45   720.2   3.29
  46   670   3.78
  47   734.2   736.1
  48   728.2   3.47
  49   784.2   3.71
  50   696.6   3.76
  51   548.1   550
  52   704
  53   696   2.04
  54   634   3.24
  55   642.3   644.2
  56   600.6   602.4
  57   755
  58   778.9   2.38
  59   730.2   3.58
  60   734.4   3.67
  61   591.8   2.6
  62   690.2   3.64
  63   698   3.83
  64   595
  65   634.4   1.8
  66   734.4   736.2
  67   720.4   722.2
  68   675.2   2.6
  69   817.7   3.97
  70   712.4   714.3
  71   722.1   3.59
  72   670   3.53
  73   800.7   3.97
  74   682   684
  75   713.1   2.8
  76   643   3.09
化合物编号   LCMS(M+1)   LCMSRT   FIA-MS(M-1)   FIA-MS(M+1)   NMR
  77   734.2   3.92
  78
  79   684.2   3.7
  80   553.1   555
  81   687   2.1
  82   611   612.6
  83   772.1   774
  84   780.9   4.39
  85   650   3.26
  86   676.5   678.3
  87   712   3.2
  88   666   3.31
  89   695.2   3.53
  90   758   759.9
  91   848.7   2.3
  92   686   3.05
  93   670.4   3.56
  94   660   2.69
  95   583.9   585.7
  96   759.3   4.02
  97   670.1   672.1
  98   602.6   1.63
  99   726.7   2.4
  100   704   3.64
  101   666.1   668.3
  102   710.2   3.6
  103   657   3.2
  104   690   3.24
  105   682.1   684.2
  106   690.1   691.9
  107   659   3.22
  108   700   3.32
  109   706.4   708.4
  110   754   3.6
  111   652.1   654
  112   684
  113   700.7   2.3
  114   712.4   714.3
化合物编号   LCMS(M+1)   LCMSRT   FIA-MS(M-1)   FIA-MS(M+1)   NMR
  115   745.2   3.73
  116   716.3   718
  117   653
  118   726.4   3.6
  119   691.8
  120   811.5   3.95
  121   714   3.27
  122   711   3.42
  123   631   3.09
  124   686.2   3.4
  125   732.2   3.7
  126   680.55   682.4
  127   794.7   4.11
  128   774   3.28
  129   758.2   3.78
  130   690.2   3.48
  131   720   3.53
  132   711.4   3.5
  133   728.6   3.8
  134   726.2   3.7
  135   773.1   3.5
  136   666   668.1
  137   708.2   710.1
  138   843.9   2.2
  139   708   3.35
  140   672.7   2.13
  141   792.7   4.13
  142   676.2   677.9
  143   700.7   2.32
  144   627.4   3.43
  145   707.8
  146   635   2.47
  147   690   691.9
  148   813.9   2.15
  149   606.8
  150   713.5   715.2
  151   706   707.8
  152   688.4   3.2
  153   714.3   3.2
化合物编号   LCMS(M+1)   LCMSRT   FIA-MS(M-1)   FIA-MS(M+1)   NMR
  154   700.1   701.9
  155   709.6   3.59
  156   658   3.35
  157   650   3.32
  158   714.3   3.72
  159   688.3   690.3
  160   613.5   615.4
  161   769.1   3.5
  162   730.2   3.7
  163   708
  164   630.1   632.1
  165   715.2   3.73
  166   710   3.46
  167   709.4   2.2
  168   656.3   3.46
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  552   692.3   3.51
  553   712.2   2.6
  554   670.5   2.9
  555
  556
  557   725.8   3.4
  558   679   3.46
  559   702   704
化合物编号   LCMS(M+1)   LCMSRT   FIA-MS(M-1)   FIA-MS(M+1)   NMR
  560   696.2   698
  561   730.4   3.7
  562   716   3.41
  563   695   2.46
  564   707.9
  565   762.2   3.55
  566   628   630
  567   774.7   3.19
  568   712.7   2.3
  569   671.9
  570   656.1   658.2
  571   730.2   3.4
  572   639.1   641.2
  573   694.1
  574   634.5   1.7
  575   714.4   3.1
  576   680   2.2
  577   718   3.51
  578   680.5   682.4
  579   698   3.72
  580   597   2.87
  581   720   3.51
  582   714.4   3.6
  583   693   3.35
  584   744
  585   762   3.68
  586   707   3.2
  587   730.5   3.68
  588   745.7   4.09
  589   735.20   3.70
  590   694.30   3.65
  591   651.30   3.26
  592   651.30   3.24
  593   685.20   3.53
  594   700.20   3.72
VI.用以检测和测量化合物的抑制性能的测定
A.HCV酶测定
1.HCV NS3丝氨酸蛋白酶结构域的构建和表达
[00499]通过PCR从HCV Conl复制子质粒I377neo/NS3-3′/wt(在本研究中重命名为pBR322-HCV-Neo)[V.Lohmann等，Science，285，第110-113页(1999)]获得编码HCV NS3蛋白酶(GenBank CAB46913)的残基Ala1-Ser181的DNA片断，将其插入到pBEV11(S.Chamber，等，个人通讯)中，以在大肠杆菌中表达带C末端六组氨酸标记的HCV蛋白质。所有构建物都通过测序进行确认。
[00500]将HCV NS3丝氨酸蛋白酶结构域的表达构建物转化到BL21/DE3 pLysS大肠杆菌细胞(Stratagene)中。使刚转化的细胞在补加100μg/ml羧苄西林和35μg/ml氯霉素的BHI培养基(DifcoLaboratories)中37℃下生长至600nm处光密度达0.75。用1mM IPTG在24℃下进行诱导4小时。离心收获细胞团(cell paste)，在-80℃下快速冷冻以待进行蛋白质纯化。所有纯化步骤均在4℃下进行。接着，使100g细胞团在1.5L缓冲液A(50mM HEPES(pH 8.0)，300mMNaCl，0.1％n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷，5mM β-巯基乙醇，10％(v/v)甘油)中裂解，搅拌30分钟。将裂解液用微流化器(Microfluidizer)(Microfluidics，Newton，Mass.)均质，然后在54,000x g下超离心45分钟。将咪唑连同2mL的用含5mM咪唑的缓冲液A预平衡的Ni-NTA树脂加入到上清液中至终浓度为5mM。将所得混合物振摇3小时，用20柱体积的缓冲液A加5mM咪唑进行洗涤。使HCV NS3蛋白质在含300mM咪唑的缓冲液A中洗脱。将洗脱液浓缩，上Hi-Load 16/60Superdex 200柱，该柱用缓冲液A预平衡。将适当的纯化HCV蛋白质级分集中，-80℃保藏。
2.HCV NS3蛋白酶结构域肽切割测定
[00501]本测定是Landro等(Landro JA，Raybuck SA，Luong YC，O′Malley ET，Harbeson SL，Morgenstern KA，Rao G和Livingston DL.Biochemistry 1997，36，9340-9348)所描述的测定的修改，基于基因型1a HCV的NS5A/NS5B切割位点采用肽底物(NS5AB)。在含0.2M DTT的DMSO中制备底物储备溶液(25mM)，-20℃下保藏。用合成的肽辅因子(KK4A)作为NS4A的中部核心区的替代。肽序列在下表中显示。以96孔微量滴定板方式(format)，使用25ηM-50ηM HCV NS3蛋白酶结构域，在含50mM HEPES pH 7.8，100mM NaCl，20％甘油，5mM DTT和25μM KK4A的缓冲液中进行反应。最终DMSO浓度不超过2％v/v。加入三氟乙酸(TFA)至2.5％的终浓度猝灭反应。
随HCV NS3蛋白酶结构域使用的肽序列
  肽   序列
  NS5AB   NH2-EDVV-(alpha)Abu-CSMSY-COOH[SEQ ID NO：2]
  KK4A   NH2-KKGSVVIVGRIVLSGK-COOH[SEQ ID NO：3]
[00502]用microbore分离方法从底物和KK4A分离SMSY产物。所用仪器为Agilent 1100，带G1322A脱气装置、G1312A二元泵或G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1316A柱恒温箱和G1315A二极管阵列检测器。柱为Phenomenex Jupiter柱，5μm C18，300
Figure A20068003905905031
150x2mm，P/O 00F-4053-B0，流速0.2mL/分钟。柱恒温器在40℃。流动相为HPLC级H2O/0.1％TFA(溶剂A)和HPLC级CH3CN/0.1％TFA(溶剂B)。SMSY产物峰用210ηM收集的数据进行定量。
3.NS3·4A蛋白酶的构建和表达
[00503]使用标准的重组DNA技术，将编码NS3和NS4A序列(HCV亚型株1a的残基Ala1027-CyS1711、含N末端六组氨酸序列)的cDNA片断克隆到杆状病毒转移载体pVL1392(Webb NR和SummersMD(1990)Expression of proteins using recombinant baculoviruses(用重组杆状病毒表达蛋白质)，Techniques 2：173-188)。含NS3·4A的重组杆状病毒通过将pVL1392-His-NS3·4A和线性化苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcMNPV)DNA共转染到草地贪夜蛾(Spodoptera frugoperda，Sf9)昆虫细胞中来产生。然后通过噬斑纯化来分离含重组杆状病毒克隆的转染昆虫细胞。例行地用高滴度克隆杆状病毒感染Sf9昆虫细胞，进行蛋白质生产。在生产中，使Sf9细胞在27℃下生长至达到2.0-x106个细胞/ml的密度。此时昆虫细胞感染上病毒。72小时后或者当细胞存活力在70-80％之间时，收获培养物，细胞准备好可进行纯化。
4.NS3·4A蛋白质的纯化
[00504]如下进行NS3·4A蛋白(SEQ ID NO：1)的纯化。将细胞团在裂解缓冲液(50mM Na2HPO4 pH 8.0，10％甘油，300mM NaCl，5mMβ-巯基乙醇，0.2mM PMSF，2.5μg/ml亮抑蛋白酶肽，1.0μg/ml E64，2.0μg/ml抑胃酶肽)中解冻，每克细胞团至少用5体积的裂解缓冲液。然后用Dounce均质机在冰上将细胞团均质。接着使细胞一次通过微流化器(microfluidizer)(Microfluidics Corporation，Newton，MA)进行机械破碎，将细胞裂解液收集在冰上。将细胞裂解液在100,000xg、4℃下离心30分钟，倾析上清液。任选地，将沉淀物重悬于洗涤缓冲液(裂解缓冲液+0.1％β-辛基吡喃葡萄糖苷)，用Dounce均质机均质，在100,000xg、4℃下离心30分钟。将沉淀物以2.5ml/g细胞团重悬于提取缓冲液(裂解缓冲液+0.5％月桂基麦芽糖苷)，以从中提取不溶性NS3·4A。将混合物用Dounce均质机均质，在4℃下混合3小时或更长时间。将混合物在100,000xg、4℃下离心30分钟。将上清液倾析并集中。
[00505]用镍-NTA金属亲和层析对NS3·4A蛋白作进一步纯化。从2M储备溶液(pH 8.0)将咪唑加入到集中的上清液，使得咪唑终浓度为10mM。将各上清液分批与已用裂解缓冲液+10mM咪唑预平衡的镍-NTA亲和树脂在4℃下温育过夜。每5μg预期的NS3·4A用1ml树脂。接着通过重力或通过500xg离心5分钟使树脂沉淀。接着将树脂倒入重力流柱，用10柱体积或10柱体积以上的镍洗涤缓冲液(裂解缓冲液+0.1％月桂基麦芽糖苷+10mM咪唑)洗涤。接着用3-4柱体积的镍洗脱缓冲液(镍洗涤缓冲液+300mM咪唑)将柱洗脱。将洗脱级分在冰上收集，用SDS-PAGE进行评估。为防止NS3·4A发生蛋白酶解，在加入SDS样品缓冲液和煮沸前，向凝胶样品加入100μM DFP蛋白酶抑制剂。将峰级分集中，在280nm处测量吸光度，吸光度除以消光系数(e)(对于NS3·4A为1.01)得出蛋白质浓度。
[00506]用凝胶过滤层析对NS3·4A作进一步纯化。用Superdex缓冲液(20mM HEPES pH 8.0，10％甘油，300mM NaCl，10mM β-巯基乙醇，0.05％月桂基麦芽糖苷)以3ml/分钟的速度对Superdex 200 26/60柱进行平衡。将镍纯化的NS3·4A必要时在Centriprep 30中浓缩至大于2mg/ml，并滤过0.2μm针头过滤器，取最多10ml上Superdex 200柱。在通过0.3柱体积后，收集4-5ml级分。将各级分进行SDS-PAGE评估。NS3·4A蛋白在两个峰中洗脱出。峰1含聚集的NS3·4A，峰2含活性蛋白。将峰2的级分集中，制成等分试样，-70℃下冻藏。
NS3·4A蛋白的分析
  分析   整个蛋白
  长度   695个氨基酸
  分子量   74,347.78
  1微克   13.450皮摩尔
  摩尔消光系数   73430
  1A280相当于   1.01mg/ml
  等电点   6.50
  pH 7下的电荷   -3.58
5.HCV NS3肽切割测定
[00507]本测定在通过全长丙型肝炎病毒蛋白NS3·4A的肽底物的切割后进行。用三种基于基因型1a HCV的NS5A/NS5B切割位点的肽底物中的一种来测量酶活性。所有底物储备溶液(25mM)均在含0.2M DTT的DMSO中制备，-20℃下保藏。用合成的肽辅因子(NS4A肽)来补充NS4A。肽序列在下文显示。以96孔微量滴定板方式，使用100ηM-125ηM HCV NS3·4A，在含50mM HEPES pH 7.8，100mMNaCl，20％甘油，5mM DTT和25μM NS4A肽的缓冲液中进行水解反应。最终DMSO浓度不超过2％v/v。加入10％三氟乙酸(TFA)至2.5％的最终TFA浓度，将用NS5AB或NS5AB-EDANS作为底物的反应猝灭。加入0.4M甲酸至终浓度为0.08M酸，将用FITC-NS5AB-1作为底物的反应猝灭。
[00508]通过反相HPLC分离底物和产物，以对酶活性进行评估。所用仪器为Agilent 1100，带G1322A脱气装置、G1312A二元泵或G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1316A柱恒温箱、G1321A荧光检测器和G1315A二极管阵列检测器。柱恒温器在40℃下。对于底物NS5AB，柱为Phenomenex Jupiter柱，5μm C18，300
Figure A20068003905905061
150x2mm，P/O 00F-4053-B0，流速0.2mL/分钟，使用HPLC级H2O/0.1％TFA(溶剂A)和HPLC级CH3CN/0.1％TFA(溶剂B)作为流动相。C末端产物峰(NH2-SMSY-COOH)用210ηM处收集的吸光度数据进行定量。对于底物NS5AB-EDANS，柱为Phenomenex Aqua柱，5μm C18，125
Figure A20068003905905062
50x4.6mm，P/O 00B-4299-E0，流速1.0mL/分钟，使用HPLC级H2O/0.1％TFA(溶剂A)和HPLC级CH3CN/0.1％TFA(溶剂B)作为流动相。C末端产物峰(NH2-SMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH)用350ηm激发/490ηm发射下收集的荧光数据进行定量。对于底物FITC-NS5AB-1，柱为Phenomenex Prodigy柱，5μm ODS(2)，125
Figure A20068003905905063
50x4.6mm，P/O 00B-3300-E0，流速1.0mL/分钟，使用10mM磷酸钠pH 7.0(于HPLC级H2O)(溶剂A)和65％HPLC级CH3CN/35％10mM磷酸钠pH 7.0(于HPLC级H2O)(溶剂B)作为流动相。N末端产物峰(FITC-Ahx-EDVV-(alpha)Abu-C-COOH)用440nm激发/520nm发射下收集的荧光数据进行定量。或者，采用Caliper LabChip 3000，用芯片缓冲液(100mM Tris pH 7.0，10mM EDTA，0.01％(v/v)Brij-35和0.1％(v/v)CR-3)，在488nm激发/530nm发射下检测，测定N末端产物与未反应的FITC-NS5AB-1底物的比例。
随HCV NS3使用的肽序列。
  肽   序列
  NS4A肽   NH2-KKGSVVIVGRIVLSGKPAIIPKK-COOH[SEQ ID NO：4]
  NS5AB   NH2-EDVV-(alpha)Abu-CSMSY-COOH[SEQ ID NO：2]
  NS5AB-EDANS   NH2-EDVV-(alpha)Abu-CSMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH[SEQ ID NO：5]
  FITC-NS5AB-1   FITC-Ahx-EDVV-(alpha)Abu-CSMSYTKK-NH2[SEQ ID NO：6]
6.Km和Vmax的测定
[00509]为测定动力学参数Km和Vmax，使HCV NS3蛋白酶结构域或HCV NS3·4A与肽底物在上述测定条件下反应。肽底物浓度在3μM至200μM之间变动，在所有底物浓度下转化率均低于20％。产物峰面积(由反相HPLC测定)与反应时间之比得酶催化水解的速度。将这些速度-底物浓度数据点用非线性回归法拟合Michaelis-Menten方程。用标称(nominal)蛋白酶浓度和完全切割底物肽作为仪器校准标准，从Vmax确定出kcat的数值。
肽底物与HCV NS3或NS3蛋白酶结构域的动力学参数。
 酶   底物  Km(μM)   kcat/Km(M-1sec-1)
 NS3蛋白酶结构域   NS5AB  25   3.0×104
 NS3·4A   NS5AB  30   7.9×103
 NS3·4A   NS5AB-EDANS  56   1.4×103
 NS3·4A   FITC-NS5AB-1  15   1.2×103
7.化合物功效的测定
[00510]为评估表观Ki值，将除试验化合物和底物之外的所有成分在室温下预温育5-10分钟。然后向混合物加入溶于DMSO的试验化合物，在30℃下温育15分钟或60分钟。纯DMSO包括在内作为无抑制剂对照。将肽底物以等于Km或等于一半Km的浓度加入，引发切割反应，并让反应在30℃下进行20分钟。反应结束时如上所述猝灭混合物并测定反应的程度。用11个化合物浓度滴定酶活性以分析抑制情况。用非线性回归法将活性-抑制剂浓度数据点拟合到描述竞争性紧密结合酶抑制的Morrison方程(Sculley MJ和Morrison JF.Biochim.Biophys.Acta.1986，874，44-53)。
[00511]受试的式I化合物通常显示约0.008至约20μM的Ki值。在一些实施方案中，式I化合物显示约0.008至约0.100μM的Ki值。在一些其它实施方案中，式I化合物显示约0.100至约0.500μM的Ki值。在还一些其它实施方案中，式I化合物显示约0.500至约5.000μM的Ki值。
[00512]各式(I、Ia和Ib)化合物对丝氨酸蛋白酶受体的抑制活性的实例在下表10中显示。对于用HCV酶测定进行测量的化合物对丝氨酸蛋白酶的活性，如果测出丝氨酸蛋白酶活性小于0.1μM，以“+++”表示，如果测出为0.1μM-0.5μM，以“++”表示，如果测出大于0.5μM，以“+”表示，如果没有数据获得，则以“-”表示。应指出的是，0％功效是以单独DMSO对照所获得的最小响应。酶测定1指HCV NS3蛋白酶结构域肽切割测定，酶测定2指HCV NS3肽切割测定。
表10：式I的示例性化合物的HCV酶测定活性和功效。
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  1   -   -
  2   -   -
  3   ++   +++
  4   ++   -
  5   +++   +++
  6   +   +
  7   +   -
  8   +   -
  9   +   -
  10   +   +
  11   +   -
  12   ++   +++
  13   +++   +++
  14   +   -
  15   ++   -
  16   +   -
  17   +   ++
  18   +++   +++
  19   ++   +++
  20   +   -
  21   +   +
  22   -   -
  23   +++   ++
  24   ++   -
  25   +   -
  26   ++   +++
  27   ++   -
  28   +   ++
  29   ++   ++
  30   ++   +++
  31   -   ++
  32   ++   -
  33   +++   -
  34   +   -
  35   -   -
  36   ++   -
  37   +   -
  38   -   ++
  39   ++   -
  40   +   -
  41   +++   -
  42   ++   +++
  43   ++   +++
  44   ++   -
  45   +   ++
  46   +   +
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  47   +   -
  48   -   -
  49   -   +++
  50   -   +++
  51   +   -
  52   ++   -
  53   +   -
  54   +   ++
  55   ++   -
  56   ++   -
  57   -   -
  58   +   +
  59   -   +++
  60   ++   ++
  61   +   -
  62   ++   ++
  63   +   +
  64   +   -
  65   +   +
  66   ++   -
  67   +++   +++
  68   -   +++
  69   +   ++
  70   +   -
  71   +   -
  72   ++   -
  73   +   ++
  74   ++   +++
  75   ++   -
  76   ++   -
  77   ++   +++
  78   ++   -
  79   ++   +++
  80   +   -
  81   +   -
  82   ++   -
  83   ++   -
  84   +   +
  85   ++   -
  86   ++   -
  87   ++   ++
  88   +   ++
  89   -   ++
  90   -   +++
  91   +   +
  92   ++   -
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  94   +++   -
  95   ++   -
  96   +   ++
  97   -   +++
  98   +   ++
  99   +   +
  100   +   +
  101   +   -
  102   ++   -
  103   ++   -
  104   -   +++
  105   -   +++
  106   +   -
  107   ++   -
  108   ++   -
  109   +++   -
  110   ++   -
  111   ++   ++
  112   ++   +++
  113   +   +
  114   +++   +++
  115   +   ++
  116   +   -
  117   -   ++
  118   +   -
  119   ++   ++
  120   +   +
  121   ++   +++
  122   ++   -
  123   +++   -
  124   +   ++
  125   ++   ++
  126   ++   ++
  127   ++   ++
  128   ++   -
  129   -   +++
  130   ++   +++
  131   -   +++
  132   ++   ++
  133   ++   ++
  134   ++   +++
  135   +   -
  136   ++   ++
  137   -   -
  138   +   +
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  139   +   -
  140   ++   +++
  141   +   ++
  142   +   -
  143   ++   ++
  144   +   +
  145   ++   -
  146   +   -
  147   +++   -
  148   +   +
  149   +   -
  150   ++   -
  151   ++   -
  152   ++   -
  153   ++   ++
  154   ++   -
  155   +   -
  156   +++   -
  157   +   +
  158   +++   +++
  159   ++   -
160 + -
  161   +   -
  162   ++   +++
  163   +++   +++
  164   +   -
  165   ++   +++
  166   ++   -
  167   ++   -
  168   ++   ++
  169   -   ++
  170   -   +++
  171   +   +
  172   +   ++
  173   +++   -
  174   ++   -
  175   -   -
  176   ++   ++
  177   +   ++
  178   ++   ++
  179   ++   -
  180   +   -
  181   +   +
  182   +   +
  183   ++   -
  184   -   +++
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  185   +   ++
  186   +   +
  187   +   -
  188   +   +
  189   +   -
  190   ++   +++
  191   +   -
  192   -   -
  193   ++   -
  194   +   -
  195   -   +++
  196   ++   -
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  199   +   -
  200   +   -
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  230   ++   -
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
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  化合物编号   酶测定1   酶测定2
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  368   -   ++
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
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  372   ++   ++
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  375   +   -
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  456   ++   -
  457   +   +
  458   +   +
  459   +   ++
  460   +   +
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  461   +   ++
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  463   +   -
  464   +   -
  465   ++   -
  466   +   +
  467   ++   +++
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  471   ++   -
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  477   +++   -
  478   ++   -
  479   -   -
  480   +   -
  481   +   -
  482   +   -
  483   +   +
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  485   -   +++
  486   ++   -
  487   ++   -
  488   +   ++
  489   +   ++
  490   ++   -
  491   +   -
  492   +++   -
  493   ++   +++
  494   +++   -
  495   +   -
  496   +   +
  497   ++   -
  498   ++   -
  499   +++   +++
  500   ++   +++
  501   +   +
  502   -   -
  503   ++   -
  504   ++   -
  505   ++   -
  506   +   -
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  507   +   +
  508   ++   ++
  509   +   -
  510   ++   +++
  511   ++   -
  512   ++   -
  513   -   +++
  514   +   -
  515   ++   -
  516   +   -
  517   +   -
  518   +++   -
  519   ++   -
  520   +   -
  521   ++   +++
  522   -   +++
  523   ++   -
  524   +   -
  525   +   -
  526   ++   -
  527   ++   -
  528   ++   -
  529   -   +++
  530   +   -
  531   ++   ++
  532   +   -
  533   +   -
  534   +   +
  535   ++   -
  536   +   -
  537   +   +
  538   +   -
  539   ++   -
  540   ++   ++
  541   ++   +++
  542   +++   -
  543   +   -
  544   ++   -
  545   ++   -
  546   ++   ++
  547   +++   -
  548   ++   -
  549   +++   -
  550   ++   -
  551   ++   -
  552   ++   -
  化合物编号   酶测定1   酶测定2
  553   ++   -
  554   +   -
  555   ++   -
  556   -   +++
  557   ++   -
  558   ++   -
  559   +   +
  560   ++   -
  561   ++   -
  562   -   +++
  563   ++   -
  564   +   -
  565   +   +
  566   +   +
  567   +   ++
  568   +   +
  569   +++   -
  570   ++   -
  571   ++   -
  572   ++   -
  573   +   +
  574   +   +
  575   +++   +++
  576   ++   -
  577   -   +++
  578   +   -
  579   ++   -
  580   ++   -
  581   -   +++
  582   ++   -
  583   ++   -
  584   +   -
  585   ++   -
  586   +   +
  587   +   ++
  588   +   +
B.HCV细胞测定
[00513]将Huh-7细胞在补加10％热失活FBS(胎牛血清)、2mML-谷氨酰胺和非必需氨基酸(JRH)的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM，JRH Biosciences，Lenexa，Kansas)中增殖。用与Lohmann等(1999)所述的复制子I377neo/NS3-3’/wt相同的体外转录HCV复制子RNA转染所述细胞。选出稳定的细胞克隆并在250μg/mL G418(Invitrogen，Carlsbad，California)存在下保持。这些克隆中的一个即24-2用于随后的HCV复制子测定。将复制子细胞在补加10％FBS、2mML-谷氨酰胺、非必需氨基酸和250μg/mL G418的DMEM中增殖。每周两次在细胞达到铺满时将细胞在新鲜培养基中分裂(split)。每个复制子细胞有大约200-300个拷贝的HCV RNA。
[00514]用Quantigene Discover XL kit(Panomics Inc.，FremontCalifornia)按厂商说明书测量细胞的HCV复制子RNA。简单的说，将化合物处理过的复制子细胞裂解，用HCV特异性寡核苷酸固定化到捕捉板上过夜，用寡核苷酸探针组按厂商说明书测量被捕捉RNA的相对数量。
1.两天HCV复制子IC50测定
[00515]在测定前一天，将96孔板的每孔接种上104个复制子细胞，让其在补加10％热失活FBS(JRH Biosciences，Lenexa，Kansas)、2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen)、非必需氨基酸(Invitrogen)和250μg/mlG418(Invitrogen)的DMEM(Invitrogen，Carlsbad，California)中附着和生长过夜。将化合物在加2％FBS和0.5％DMSO(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)、无G418的DMEM中进行系列稀释。用QuantigeneDiscover XL kit(Panomics Inc.，Fremont California)按厂商说明书测量细胞的HCV复制子RNA。简单的说，将化合物处理过的复制子细胞裂解，用HCV特异性寡核苷酸固定化到捕捉板上过夜，用寡核苷酸探针组按厂商说明书测量被捕捉RNA的相对数量。每个数据点代表三个重复测定的平均值，除非另有指明。IC50是使细胞中的HCV复制子RNA水平与未处理复制子细胞对照相比降低50％的化合物浓度。为监测化合物对细胞增殖或细胞存活力的作用，用系列稀释的化合物处理复制子细胞48小时，然后用CellTiter Glo测定法(Promega，Madison，Wisconsin)对细胞存活力进行测量。每个CC50得自三个重复测定，它是使活细胞的数量与未处理细胞对照相比降低50％的化合物浓度。IC50和CC50是在SoftMax Pro程序(Molecular Devices，Sunnyvale，California)中用4参数曲线拟合进行确定。
2.五天HCV复制子IC99测定
[00516]在测定前一天，将HCV复制子细胞以2500个细胞/孔的低密度接种在96孔板中，使得细胞在5天培养中不会达到铺满。将化合物在含10％FBS和0.5％DMSO、不含G418的DMEM中进行系列稀释。在第1天和第3天向细胞加入新鲜培养基和化合物。细胞受抗病毒化合物处理5天后，用Quantigene Discover XL kit(PanomicsInc.，Fremont California)按厂商说明书测量细胞的HCV复制子RNA。简单的说，将化合物处理过的复制子细胞裂解，用HCV特异性寡核苷酸固定化到捕捉板上过夜，用寡核苷酸探针组(Panomics)按厂商说明书测量被捕捉复制子RNA的相对数量。每个数据点代表两个重复测定的平均值。IC99是使细胞中的HCV复制子RNA水平与未处理细胞对照相比降低2log的化合物浓度。为监测化合物对细胞增殖或细胞存活力的作用，用系列稀释的化合物处理复制子细胞5天，然后用CellTiter Glo测定(Promega，Madison，Wisconsin)对细胞存活力进行测量。每个CC50得自两个重复测定，它是使活细胞的数量与未处理细胞对照相比降低50％的化合物浓度。IC99和CC50是用Prism软件(GraphPad Software Inc.，San Diego，California)和Excel程序(MicrosoftCorporation，Redmond，Washington)通过4参数曲线拟合方法进行确定。
[00517]采用上述测定确定出，本发明化合物是有用的丝氨酸蛋白酶抑制剂。
其它实施方案
[00518]应认识到，尽管已结合发明详述对本发明进行了描述，但前面的描述意在说明而不是限制由所附权利要求书的范围所限定的本发明范围。其它的方面、优点和修改都落入所附权利要求书的范围内。
序列表
<110>Vertex Pharmaceuticals，Inc.
<120>丝氨酸蛋白酶抑制剂
<130>VPI/05-115；125805/00175
<160>6
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>695
<212>PRT
<213>丙型肝炎病毒
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(10)
<223>组氨酸标记
<400>1
Met Ser His His His His His His Ala Met Ala Pro Ile Thr Ala Tyr
1         5            10           15
Ala Gln Gln Thr Arg Gly Leu Leu Gly Cys Ile Ile Thr Ser Leu Thr
      20           25               30
Gly Arg Asp Lys Asn Gln Val Glu Gly Glu Val Gln Ile Val Ser Thr
     35          40          45
Ala Thr Gln Thr Phe Leu Ala Thr Cys Ile Asn Gly Val Cys Trp Thr
  50           55           60
Val Tyr His Gly Ala Gly Thr Arg Thr Ile Ala Ser Pro Lys Gly Pro
65           70           75           80
Val Ile Gln Met Tyr Thr Asn Val Asp Gln Asp Leu Val Gly Trp Pro
          85          90          95
Ala Pro Gln Gly Ser Arg Ser Leu Thr Pro Cys Thr Cys Gly Ser Ser
       100          105           110
Asp Leu Tyr Leu Val Thr Arg His Ala Asp Val Ile Pro Val Arg Arg
    115          120          125
Arg Gly Asp Ser Arg Gly Ser Leu Leu Ser Pro Arg Pro Ile Ser Tyr
  130          135           140
Leu Lys Gly Ser Ser Gly Gly Pro Leu Leu Cys Pro Ala Gly His Ala
145          150          155           160
Val Gly Leu Phe Arg Ala Ala Val Cys Thr Arg Gly Val Thr Lys Ala
         165          170          175
Val Asp Phe Ile Pro Val Glu Asn Leu Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro
      180            185          190
Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro Pro Ala Val Pro Gln Ser Phe Gln
     195         200           205
Val Ala His Leu His Ala Pro Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val
 210            215          220
Pro Ala Ala Tyr Ala Ala Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro
225          230          235           240
Ser Val Ala Ala Thr Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Met Ser Lys Ala His
         245          250           255
Gly Val Asp Pro Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly
      260           265           270
Ser Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly
    275           280            285
Cys Ser Gly Gly Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ser
 290            295          300
Thr Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala
305          310           315           320
Glu Thr Ala Gly Ala Arg Leu Val Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro Pro
         325          330           335
Gly Ser Val Thr Val Ser His Pro Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser
      340            345          350
Thr Thr Gly Glu Ile Pro Phe Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Glu Val
     355          360           365
Ile Lys Gly Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys
  370           375           380
Asp Glu Leu Ala Ala Lys Leu Val Ala Leu Gly Ile Asn Ala Val Ala
385         390          395           400
Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile Pro Thr Asn Gly Asp Val
         405          410           415
Val Val Val Ser Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Phe Thr Gly Asp Phe
      420           425          430
Asp Ser Val Ile Asp Cys Asn Thr Cys Val Thr Gln Thr Val Asp Phe
     435          440          445
Ser Leu Asp Pro Thr Phe Thr Ile Glu Thr Thr Thr Leu Pro Gln Asp
  450           455           460
Ala Val Ser Arg Thr Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Lys Pro
465          470          475           480
Gly Ile Tyr Arg Phe Val Ala Pro Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe
          485          490           495
Asp Ser Ser Val Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Cys Ala Trp Tyr
      500           505          510
Glu Leu Met Pro Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Met Asn
    515          520          525
Thr Pro Gly Leu Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Gly
  530           535          540
Val Phe Thr Gly Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr
545          550          555           560
Lys Gln Ser Gly Glu Asn Phe Pro Tyr Leu Val Ala Tyr Gln Ala Thr
         565          570           575
Val Cys Ala Arg Ala Gln Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Gln Met Trp
      580           585          590
Lys Cys Leu Ile Arg Leu Lys Pro Thr Leu His Gly Pro Thr Pro Leu
    595           600           605
Leu Tyr Arg Leu Gly Ala Val Gln Asn Glu Val Thr Leu Thr His Pro
  610         615           620
Ile Thr Lys Tyr Ile Met Thr Cys Met Ser Ala Asp Leu Glu Val Val
625           630           635          640
Thr Ser Thr Trp Val Leu Val Gly Gly Val Leu Ala Ala Leu Ala Ala
         645          650           655
Tyr Cys Leu Ser Thr Gly Cys Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu
      660           665          670
Ser Gly Lys Pro Ala Ile Ile Pro Asp Arg Glu Val Leu Tyr Gln Glu
     675          680            685
Phe Asp Glu Met Glu Glu Cys
 690          695
<210>2
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成产生的肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(5)..(5)
<223>(α)氨基丁酸
<400>2
Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr
1        5           10
<210>3
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成产生的肽
<400>3
Lys Lys Gly Ser Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu Ser Gly Lys
1         5           10            15
<210>4
<211>23
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成产生的肽
<400>4
Lys Lys Gly Ser Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu Ser Gly Lys
1         5          10             15
Pro Ala Ile Ile Pro Lys Lys
      20
<210>5
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成产生的肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(5)..(5)
<223>(α)氨基丁酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(12)..(12)
<223>Asp(EDANS)
<400>5
Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr Thr Asp Lys Lys Lys
1        5           10           15
<210>6
<212>14
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成产生的肽
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>FITC-2-氨基己酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(6)..(6)
<223>(α)氨基丁酸
<400>6
Xaa Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr Thr Lys Lys
1        5           10

Claims (88)

1.式(I)化合物
Figure A2006800390590002C1
或其药物可接受的盐，其中：
每个A为-(CX1X2)a-；
每个B为-(CX1X2)b-；
每个X1独立为氢、卤素、氨基、硫烷基、任选被取代的(C1-4)-脂族基、任选被取代的芳基或-O-X1A；
每个X2独立为氢、卤素、氨基、硫烷基、任选被取代的(C1-4)-脂族基、任选被取代的芳基或-O-X1B；
X1A和X1B各自独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
或者，X1和X2一起形成氧代基；
每个R1为-ZAR4，其中每个ZA独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZA碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRA-、-C(O)NRANRA-、-C(O)O-、-NRAC(O)O-、-O-、-NRAC(O)NRA-、-NRANRA-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRA-、-SO2NRA-或-NRASO2NRA-置换，条件是-NRANRA-、-NRAC(O)NRA-或-NRASO2NRA-不直接结合式I的氮环原子；
每个R4独立为RA、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RA独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R2为-ZBR5，其中每个ZB独立为键或任选被取代的支链或直链C1-12脂族链，其中最多三个ZB碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRB-、-C(O)NRBNRB-、-C(O)O-、-NRBC(O)O-、-NRBC(O)NRB-、-NRBNRB-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRB-、-SO2NRB-或-NRBSO2NRB-置换，条件是SO、SO2或-SO2NRB-不直接结合式I的羰基；
每个R5独立为RB、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RB独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
或者R1和R2与它们所连接的原子一起形成任选被取代的杂环脂族环；
每个R3为任选被取代的脂族基、氨基、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、磺酰胺基、硫酰胺基、磺基、-O-R3A、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R3A独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个Y和Y′独立为-ZDR7，其中每个ZD独立为键或任选被取代的直链或支链C1-6脂族链，其中最多两个ZD碳单位任选和独立地被-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NRD-、-C(O)NRDNRD-、-C(O)O-、-NRDC(O)O-、-O-、-NRDC(O)NRD-、-NRDNRD-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRD-、-SO2NRD-、-NRDSO2-或-NRDSO2NRD-置换，或者Y和Y′一起形成＝O或＝S；
每个R7独立为RD、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RD独立为氢或任选被取代的芳基；且
a和b各独立为0、1、2或3；条件是a和b之和为2或3。
2.权利要求1的化合物，其中R1为-Q4-W4-Q3-W3-Q2-W2-Q1；其中W2、W3和W4各独立为键、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)N(Q5)-、-C(O)O-、-O-、-N(Q5)C(O)N(Q5)-、-SO2-、-N(Q5)SO2-、-S-、-N(Q5)-、-SO-、-OC(O)-、-N(Q5)C(O)O-或-SO2N(Q5)-；Q1、Q2、Q3和Q4各独立为键、任选被取代的C1-4脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基，或者当Q1、Q2、Q3或Q4为R1的末端基团时Q1、Q2、Q3和Q4各独立为氢；每个Q5独立为氢或任选被取代的脂族基。
3.权利要求2的化合物，其中Q4为键。
4.权利要求1的化合物，其中R1为任选被取代的酰基基团。
5.权利要求4的化合物，其中R1为(氨基)烷基羰基、(卤代)烷基羰基、(芳基)烷基羰基、(环脂族基)烷基羰基或(杂环脂族基)烷基羰基、(杂环烷基(氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基)))))烷基羰基、(二环芳基(磺酰基(氨基)))烷基羰基、(芳基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(烷基(羰基(氨基)))烷基羰基、(烯基(烷氧基(羰基(氨基))))烷基羰基、(环脂族基(烷基(氨基(羰基(氨基)))))烷基羰基、(杂芳基(羰基(氨基(烷基(羰基(氨基))))))烷基羰基、(烷基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基或(二环芳基(氨基(羰基(氨基))))烷基羰基，它们中每一个任选被取代。
6.权利要求4的化合物，其中R1为杂芳基羰基、(环脂族基(烷基(酰胺基(烷基))))羰基、(杂环脂族基(氧基(酰胺基(烷基))))羰基、(芳基(磺酰基(氨基(烷基))))羰基、(芳烷基(氧基(酰胺基(烷基))))羰基、(脂族基(氧基(酰胺基(烷基))))羰基、(环脂族基(烷基(酰胺基(烷基))))羰基、(杂环脂族基)羰基或(杂芳基(酰胺基(烷基(酰胺基(烷基))))羰基，它们中每一个任选被1-4个以下取代基取代：卤素、脂族基、环脂族基、酰基、烷氧基或这些取代基的组合。
7.权利要求1的化合物，其中R1为任选被取代的羧基基团。
8.权利要求7的化合物，其中R1为(脂族基(氧基))羰基、(杂芳烷基(氧基))羰基、(杂环脂族基(氧基)羰基、(芳烷基(氧基))羰基，它们中每一个任选被1-3个以下取代基取代：卤素、烷氧基、脂族基、环脂族基、杂环脂族基、芳基、杂芳基或这些取代基的组合。
9.权利要求1的化合物，其中R1为酰胺基。
10.权利要求9的化合物，其中R1为(烷氧基(芳基(烷基)))氨基羰基、(烷基)氨基羰基或(芳基(烷氧基(羰基(烷基(氨基(羰基(烷基)))))))氨基羰基，它们中每一个任选被取代。
11.权利要求1的化合物，其中R1为烷基磺酰基、氨基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、环脂族基磺酰基或杂环脂族基磺酰基，它们中每一个任选被取代。
12.权利要求10的化合物，其中R1为任选被取代的烷基磺酰基。
13.权利要求11的化合物，其中R1为(芳基)烷基磺酰基或(烷基(氨基))烷基磺酰基，它们中每一个任选被取代。
14.权利要求1的化合物，其中R1为
Figure A2006800390590005C1
其中T为键、-C(O)-、-OC(O)-、-NHC(O)-、-S(O)2N(H)-、-C(O)C(O)-或-SO2-；每个R独立为氢、氨基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R8和R′8独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基，或者结合在相邻原子上的R8和R9与它们所连接的原子一起形成5-7元任选被取代的单环杂环脂族基或6-12元任选被取代的双环杂环脂族基；或者R8和R′8与它们所连接的原子一起形成任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基。
15.权利要求14的化合物，其中QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为
Figure A2006800390590006C1
16.权利要求14的化合物，其中R1为QVI，且R为
17.权利要求14的化合物，其中QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为
Figure A2006800390590007C1
其中每个R10和R′10独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基，或者R10和R′10与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基；每个K独立为键、(C1-12)-脂族基、-O-、-S-、-S(O)2-、-NR14-、-C(O)-或-C(O)NR14-，其中R14为氢或任选被取代的(C1-12)-脂族基；n为1-3。
18.权利要求17的化合物，其中R10为[(C3-10)-环烷基或环烯基]-(C1-12)-脂族基、(3-10元)-杂环脂族基、(3-10元)-杂环脂族基-(C1-12)-脂族基-、(5-10元)-杂芳基或(5-10元)-杂芳基-(C1-12)-脂族基-。
19.权利要求14的化合物，其中QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为
20.权利要求13的化合物，其中QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中的取代基中的R为
其中每个Z独立为-O-、-S-、-NR50-或-C(R50)2-，独立为单键或双键，每个R50独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基；n为1或2。
21.权利要求1的化合物，其中R1为
Figure A2006800390590009C3
其中T为键、-C(O)-、-OC(O)-、-NHC(O)-、-S(O)2N(H)-、-C(O)C(O)-或-SO2-；每个R独立为氢、氨基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R8和R′8独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基，或者结合在相邻原子上的R8和R9与它们所连接的原子一起形成5-7元任选被取代的单环杂环脂族基或6-12元任选被取代的双环杂环脂族基，其中每个杂环脂族环；或者R8和R′8与它们所连接的原子一起形成任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基；每个R11和R′11独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基；或者R11和R′11与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环；每个R12独立为氢或保护基。
22.权利要求21的化合物，其中R11和R′11与它们所连接的原子一起形成3-7元环。
23.权利要求22的化合物，其中R11和R′11与它们所连接的原子一起形成
24.权利要求21的化合物，其中R8和R11每个独立为氢、
Figure A2006800390590011C1
25.权利要求21的化合物，其中R8和R11与它们所连接的原子一起可形成任选被取代的5-7元单环杂环脂族基或任选被取代的6-12元双环杂环脂族基。
26.权利要求1的化合物，其中R1为其中T为-C(O)-，R为
Figure A2006800390590011C3
27.权利要求1的化合物，其中R1为
Figure A2006800390590011C4
其中R8为
Figure A2006800390590012C1
T为-C(O)-，R为
Figure A2006800390590012C2
28.权利要求1的化合物，其中R1选自以下：
Figure A2006800390590012C3
Figure A2006800390590013C1
Figure A2006800390590014C1
Figure A2006800390590015C1
Figure A2006800390590016C1
Figure A2006800390590017C1
Figure A2006800390590018C1
X99＝OR，OC(NH)R，或
Figure A2006800390590019C2
X100＝NH，CH2
                                                 ，
其中每个R独立为氢、氨基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
29.权利要求1的化合物，其中每个R2为-Z1-V1-Z2-V2-Z3-V3，V1、V2和V3每个独立为键、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基，或者当V1、V2或V3为R2的末端基团时V1、V2和V3每个独立为氢；Z1、Z2和Z3每个独立为键、-C(O)-、-C(O)C(O)-、-C(S)-、-C(O)N(Q6)-、-N(Q6)C(O)-、-C(O)C(O)N(Q6)-、-O-、、SO-、-SO2-、-N(Q6)SO2-、-N(Q6)C(O)N(Q6)-、-N(Q6)C(S)N(Q6)-、-N(Q6)-、-N(Q6)SO2-、-SO2N(Q6)-、-C(O)N(Q6)SO2-、-SO2N(Q6)C(O)-，或者当Z1、Z2或Z3为R2的末端基团时Z1、Z2和Z3每个独立为氢；每个Q6独立为氢或任选被取代的脂族基。
30.权利要求1的化合物，其中R2为任选被取代的(脂族基)氨基、任选被取代的(环脂族基)氨基、任选被取代的烷氧基或羟基。
31.权利要求30的化合物，其中R2为任选被取代的(脂族基)氨基，其中R2的脂族部分为-Z2-V2-Z3-V3或-Z3-V3，其中Z2和Z3每个独立为键、-C(O)-、-N(Q5)-、-CH(OH)-、-C(O)N(Q6)-或-C(O)C(O)N(Q6)-；V2独立为键、任选被取代的脂族基或任选被取代的环脂族基；V3为氢、任选被取代的脂族基或任选被取代的环脂族基。
32.权利要求29的化合物，其中Z2为-CH(OH)-，V2为键且Z3为-C(O)N(Q6)-，使得R2为-N(Q6)-CH(OH)-C(O)-N(V3)(Q6)。
33.权利要求30的化合物，其中R2为任选被1-3个以下取代基取代的烷氧基：卤素、羟基、脂族基、环脂族基或杂环脂族基。
34.权利要求1的化合物，其中R2为氨基。
35.权利要求31的化合物，其中R2为(环脂族基(羰基(羰基(烷基))))氨基、(氨基(羰基(羰基(脂族基))))氨基、(脂族基(羰基(羰基(脂族基))))氨基或(芳基(氨基(羰基(羰基(脂族基)))))氨基，它们中每一个任选被取代。
36.权利要求1的化合物，其中R2为-NR2ZR′2Z、-SR2Y或-NR2Y-CR2X R′2X-L1-NR2Z-R2W，其中R2Y独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R2W独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基；每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基；或者R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环；每个L1为-CH2-、-C(O)-、-CF2-、-C(O)C(O)-、-C(O)O-、-S(O)-或-SO2-；每个R2Z或R′2Z为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或者R2Z和R′2Z与它们所共同连接的氮一起可形成任选被取代的3-7元杂环脂族环。
37.权利要求36的化合物，其中每个R2X和R′2X独立为氢或任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的(环脂族基)脂族基。
38.权利要求36的化合物，其中L1为-C(O)C(O)-或-SO2-。
39.权利要求38的化合物，其中每个R2W为氢或任选被取代的环脂族基。
40.权利要求36的化合物，其中R2为-NH-CHR2X-C(O)-C(O)-N(R2Z)R2W。
41.权利要求36的化合物，其中R2为-NH-CHR2X-CH(OH)-C(O)-N(R2Z)R2W。
42.权利要求36的化合物，其中R2为-NH-CHR2X-C(O)-C(O)-NH-环丙基。
43.权利要求1的化合物，其中R2为：
Figure A2006800390590021C1
其中R2X为
Figure A2006800390590021C2
R2W为
Figure A2006800390590021C3
或氢。
44.权利要求1的化合物，其中R2为
其中每个R56独立为任选被取代的C1-6脂族基；任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的杂环脂族基；每个R57独立为任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的氨基；m为1或2；每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或者R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环。
45.权利要求1的化合物，其中R2为
Figure A2006800390590022C2
其中R58和R59各自独立选自任选被取代的脂族基、任选被取代的烷氧基、任选被取代的芳基氧基、任选被取代的杂芳基氧基、任选被取代的(环脂族基)氧基、任选被取代的(杂环脂族基)氧基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的环脂族基或任选被取代的氨基；每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或者R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环。
46.权利要求1的化合物，其中R2为选自以下：
Figure A2006800390590023C1
Figure A2006800390590024C1
Figure A2006800390590025C1
Figure A2006800390590026C1
Figure A2006800390590028C1
Figure A2006800390590029C1
Figure A2006800390590030C1
Figure A2006800390590031C1
其中X200为-OX202或-X202，X202为脂族基、环脂族基、杂环脂族基、芳基或杂芳基。
47.权利要求1的化合物，其中R2为
Figure A2006800390590031C2
48.权利要求47的化合物，其中R2为
Figure A2006800390590032C1
49.权利要求1的化合物，其中R1和R2与它们所连接的原子一起形成任选被取代的杂环脂族环，该环具有1-3个选自N、O和S的杂原子。
50.权利要求48的化合物，所述化合物具有以下结构：
其中每个R2W独立为
Figure A2006800390590032C3
或氢；每个T独立为键、-C(O)-、-OC(O)-、-NHC(O)-、-S(O)2N(H)-、-C(O)C(O)-或-SO2-；每个R独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基。
51.权利要求49的化合物，所述化合物具有以下结构：
Figure A2006800390590033C1
52.权利要求1的化合物，其中
每个R3独立为-ZCR6，其中每个ZC独立为键或任选被取代的支链或直链C1-6脂族链，其中最多两个ZC碳单位任选和独立地被-C(O)-、-CS-、-C(O)NRC-、-C(O)NRCNRC-、-C(O)O-、-NRCC(O)O-、-O-、-NRCC(O)NRC-、-NRCNRC-、-S-、-SO-、-SO2-、-NRC-、-SO2NRC-或-NRCSO2NRC-置换；
每个R6独立为RC、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NH2或-OCF3；
每个RC独立为氢、任选被取代的脂族基基团、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基，
条件是当ZC为键且R6为RC时，则RC独立为任选被取代的脂族基基团、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
53.权利要求51的化合物，其中R3为任选被取代的单环、双环或三环芳基，它们中每一个任选被1-3个以下取代基取代：卤素、羟基、氰基、硝基、脂族基、卤代脂族基、(脂族基)氧基、(卤代(脂族基))氧基、(脂族基(氧基(芳基)))氧基、芳基、杂芳基、卤代芳基、环脂族基、杂环脂族基或这些取代基的组合。
54.权利要求51的化合物，其中R3为单环或双环杂芳基，它们中每一个任选被1-3个以下取代基取代：卤素、羟基、氰基、硝基、脂族基、卤代脂族基、(脂族基)氧基、(卤代(脂族基))氧基、(脂族基(氧基(芳基)))氧基、芳基、杂芳基、卤代芳基、环脂族基、杂环脂族基或这些取代基的组合。
55.权利要求51的化合物，其中R3为稠合双环芳基。
56.权利要求51的化合物，其中R3为稠合三环芳基。
57.权利要求1的化合物，其中R3为
Figure A2006800390590034C1
58.权利要求1的化合物，其中R3为：
Figure A2006800390590035C1
Figure A2006800390590036C1
Figure A2006800390590037C1
Figure A2006800390590038C1
、CH3-、CH3CH2-或CH3CH2CH2-。
59.权利要求1的化合物，其中X1为氢。
60.权利要求1的化合物，其中X2为氢。
61.权利要求1的化合物，其中Y和Y′为氢。
62.权利要求1的化合物，其中Y或Y′至少一个为卤素。
63.权利要求1的化合物，其中a为1，且b为1。
64.式II化合物：
Figure A2006800390590038C2
或其药物可接受的盐，其中
每个R3为任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R2Y独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R9独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的环脂族基；
每个R2X和R′2X独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的苯基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基；或者R2X和R′2X与它们所共同连接的原子一起形成任选被取代的3-7元环脂族环或杂环脂族环，或者R2X和R2Y与它们所连接的原子一起形成任选被取代的5-7元杂环脂族环；
每个R1b为-ZER21，其中ZE为-CH2-、-NH-、-CH(R1Z)-或-O-，R21为任选被取代的6-7元环脂族基或任选被取代的叔丁基；
每个R1Z为任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；
每个R2Z为氢、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的脂族基；
每个R2W为氢、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基或任选被取代的脂族基，或者R2Z和R2W与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的杂环脂族基。
65.式III化合物：
Figure A2006800390590039C1
或其药物可接受的盐，其中
R1e为
Figure A2006800390590040C1
R2e为
Figure A2006800390590040C2
R′2e为
Figure A2006800390590040C3
或氢；且
R3e为任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
66.式IV化合物：
Figure A2006800390590040C4
或其药物可接受的盐，其中
R1e为
Figure A2006800390590041C1
R2e为
Figure A2006800390590041C2
R′2e为或氢；且
R3f和R′3f每个独立为氢、磺酰胺基、磺酰基、亚磺酰基、任选被取代的酰基、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基，或者R3f和R′3f与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的饱和、部分不饱和或完全不饱和的5-8元杂环脂族基或杂芳基。
67.权利要求65的化合物，其中R3f和R′3f一起形成：
Figure A2006800390590041C4
其中每个D独立为-CR100-、N、S或O，条件是不超过两个D独立为S或O，每个R100独立为氢、任选被取代的脂族基、任选被取代的环脂族基、任选被取代的杂环脂族基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。
68.一种化合物，所述化合物具有选自编号1至594的化合物群组的化合物的结构。
69.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1的化合物或其药物可接受的盐以及可接受的载体、佐剂或介质，其中所述化合物或其盐的数量能有效抑制丝氨酸蛋白酶。
70.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求67的化合物或其药物可接受的盐以及可接受的载体、佐剂或介质，其中所述化合物或其盐的数量能有效抑制丝氨酸蛋白酶。
71.权利要求68的组合物，其中所述组合物包含选自以下的另外的物质：免疫调节剂、抗病毒剂、HCV蛋白酶的第二种抑制剂、HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂和细胞色素P-450抑制剂或者它们的组合。
72.权利要求69的组合物，其中所述组合物包含选自以下的另外的物质：免疫调节剂、抗病毒剂、HCV蛋白酶的第二种抑制剂、HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂和细胞色素P-450抑制剂或者它们的组合。
73.权利要求70的组合物，其中所述免疫调节剂为干扰素-α、-β或-γ或者胸腺素；所述抗病毒剂为利巴韦林、金刚烷胺或替比夫定；或者所述HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂为HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。
74.权利要求71的组合物，其中所述免疫调节剂为干扰素-α、-β或-γ或者胸腺素；所述抗病毒剂为利巴韦林、金刚烷胺或替比夫定；或者所述HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂为HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。
75.权利要求70的组合物，其中所述细胞色素P-450抑制剂为利托那韦。
76.权利要求71的组合物，其中所述细胞色素P-450抑制剂为利托那韦。
77.一种抑制丝氨酸蛋白酶的活性的方法，所述方法包括使所述丝氨酸蛋白酶与权利要求1的化合物接触的步骤。
78.一种抑制丝氨酸蛋白酶的活性的方法，所述方法包括使所述丝氨酸蛋白酶与权利要求67的化合物接触的步骤。
79.权利要求76的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶为HCV NS3蛋白酶。
80.权利要求77的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶为HCV NS3蛋白酶。
81.一种治疗患者中的HCV感染的方法，所述方法包括将权利要求1的化合物给予所述患者的步骤。
82.一种治疗患者中的HCV感染的方法，所述方法包括将权利要求67的化合物给予所述患者的步骤。
83.权利要求80的方法，所述方法进一步包括给予所述患者选自以下的另外的物质：免疫调节剂、抗病毒剂、HCV蛋白酶的第二种抑制剂、HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂或者它们的组合；其中所述另外的物质在与丝氨酸蛋白酶抑制剂相同的剂型中或者作为单独的剂型给予所述患者。
84.权利要求81的方法，所述方法进一步包括给予所述患者选自以下的另外的物质：免疫调节剂、抗病毒剂、HCV蛋白酶的第二种抑制剂、HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂或者它们的组合；其中所述另外的物质在与丝氨酸蛋白酶抑制剂相同的剂型中或者作为单独的剂型给予所述患者。
85.权利要求82的方法，其中所述免疫调节剂为干扰素-α、-β或-γ或者胸腺素；所述抗病毒剂为利巴韦林或金刚烷胺；或者所述HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂为HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。
86.权利要求83的方法，其中所述免疫调节剂为干扰素-α、-β或-γ或者胸腺素；所述抗病毒剂为利巴韦林或金刚烷胺；或者所述HCV生活周期中的另一靶标的抑制剂为HCV解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。
87.一种消除或减少生物样品或者医疗或实验室仪器的HCV污染的方法，所述方法包括使所述生物样品或者医疗或实验室仪器与权利要求1的化合物接触的步骤。
88.一种消除或减少生物样品或者医疗或实验室仪器的HCV污染的方法，所述方法包括使所述生物样品或者医疗或实验室仪器与权利要求67的化合物接触的步骤。
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