ES2331842T3 - Compuestos de pirrolotriazina como inhibidores de quinasas. - Google Patents

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Wen-Ching Han
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Abstract

Un compuesto de fórmula **(Ver fórmula)** en la que X es un enlace directo, -NR3- o -O-; **(Ver fórmula)** Z es o -NR7; R2 es arilo o arilo sustituido, R3, R4 y R5 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo y alquilo sustituido; R6, R6a se seleccionan independientemente del grupo que consiste en uno o más de hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, ariloxi, -CN, -NH2, -OH, -COOH, -CH2OR5, -CONHSO2R5, -CONR4R5, -NHalquilo, -NHCOalquilo, NR4SO2alquilo, -NR4SONR4R5, -OCONR4R5, -CF3 y -OCF3, dos de los cuales pueden estar unidos al mismo átomo de carbono del anillo; R7 es hidrógeno, alquilo o -NH2, y n es 0, 1, 2 ó 3; en los que "alquilo" se refiere a grupos hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, no sustituidos, de 1 a 20 átomos de carbono; "alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados de halógeno, hidroxi, alcoxi, oxo, alcanol, ariloxi, alcanoiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, aminas disustituidas en las que los 2 sustituyentes amino se seleccionan de alquilo, arilo o aralquilo; alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquisulfonilo, sulfonamido, sulfonamido sustituido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo sustituido, alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino, heterociclilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, homopiperazinilo y heterociclilo sustituido, en los que en los casos en los que el sustituyente está además sustituido, se seleccionará de alquilo, alcoxi, arilo o aralquilo. "arilo" se refiere a grupos hidrocarburo aromáticos monocíclicos o bicíclicos, que tienen de 6 a 12 átomos de carbono en la parte del anillo. "ariloxi" se refiere a un grupo arilo o un arilo sustituido unido directamente por un grupo alcoxi; "arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados de alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, aralquilo, halógeno, trifluorometoxi, trifluorometilo, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, ariloxi, araquiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, ureido, nitro, ciano, carboxi, carboxialquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, arilsulfonilamina, ácido sulfónico, alquisulfonilo, sulfonamido, ariloxi, en el que el sustituyente puede estar además sustituido con hidroxi, halógeno, alquilo, alcoxi, alquenilo, alquinilo, arilo o arilquilo; o su sal o estereoisómero farmacéuticamente aceptable.

Description

Compuestos de pirrolotriazina como inhibidores de quinasas.
La presente solicitud reivindica prioridad de la solicitud provisional de EE.UU. nº 60/533.335 presentada el 29 de diciembre, 2003, cuya descripción se incorpora en el presente documento por referencia en su totalidad.
La presente invención se refiere a compuestos que inhiben la actividad de tirosina quinasa de receptores de factores de crecimiento tales como HER1, HER2 y HER4, haciendo que sean útiles como agentes anticancerígenos. Los compuestos también son útiles en el tratamiento de enfermedades, distintas del cáncer, que están asociadas con las rutas de transducción de señales que operan a través de los receptores de los factores de crecimiento tales como HER1, HER2 y HER4.
Los receptores tirosina quinasas (RTK) son importantes en la transmisión de señales bioquímicas a través de la membrana plasmática de las células. Estas moléculas transmembrana consisten de forma característica en un dominio de unión de ligando extracelular conectado a través de un segmento en la membrana plasmática a una dominio de tirosina quinasa intracelular.
La familia de receptores del factor de crecimiento epidérmico humano (HER) consiste en 4 tipos distintos de receptores tirosina quinasa denominados HER1, He2, HER3 y HER4. Estas quinasas también se denominan erbB1, erbB2, etc. HER1 también se denomina normalmente el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF). Con excepción de HER3, estos receptores tienen actividad de proteína quinasa intrínseca que es específica para los restos tirosina de las proteínas fosfoaceptoras. Las quinasas HER son expresadas en la mayoría de las células epiteliales así como las células tumorales de origen epitelial. También son expresadas a menudo en células tumorales de origen mesenquimal tales como sarcomas o rabdomiosarcomas. Los RTK tales como HER1 y HER 2 están implicados en la proliferación celular y están asociados con enfermedades tales como la psoriasis y el cáncer. La alteración de la transducción de señales por inhibición de estas quinasa tendría un efecto antiproliferativo y terapéutico.
La actividad enzimática del receptor tirosina quinasa se puede estimular por sobreexpresión o por dimerización mediada por ligando. Se ha demostrado la formación de homodímeros así como de heterodímeros para la familia de receptores HER. Un ejemplo de homodimerización es la dimerización de HER1 (receptor del EGF) por uno de la familia de ligandos de EGF (que incluye EGF, factor de crecimiento transformante alfa, betacelulina, EGF de unión a heparina y epiregulina). La heterodimerización entre los cuatro receptores quinasas HER se puede promover por unión a membranas de la familia de ligandos de heregulina (llamada también neuregulina). Dicha heterodimerización que implica HER2 y HER3 o una combinación de HER3/HER4, da como resultado una estimulación significativa de la actividad de tirosina quinasa de los dímeros receptores incluso aunque uno de los receptores (HER3) es enzimáticamente inerte. Se ha mostrado que la actividad de quinasa de HER2 se activa también en virtud de la sobreexpresión del receptor solo en una variedad de tipos celulares. La activación de los homodímeros y heterodímeros receptores da como resultado la fosforilación de restos tirosina en los receptores y en otras proteínas intracelulares. A esto le sigue la activación de las rutas de señalización intracelulares tales como las que implican la proteína quinasa asociada a microtúbulos (quinasa MAP) y la fosfatidilinositol 3-quinasa (quinasa PI3). Se ha mostrado que la activación de estas rutas conduce a la proliferación celular y a la inhibición de la apoptosis. Se ha mostrado que la inhibición de la señalización de la quinasa HER inhibe la proliferación y supervivencia celulares.
Todas las proteínas quinasas contienen un dominio catalítico estructuralmente conservado de aproximadamente 250-300 restos aminoácidos^{1}. La figura 1 muestra una estructura de rayos X de HER1^{2} que engloba las propiedades altamente conservadas de todos los miembros de la familia de proteína quinasas. El plegamiento de la proteína quinasa está separado en 2 subdominios o bucles. El bucle N-terminal menor o bucle N, está compuesto de una lámina \beta de 5 cadenas y una hélice \alpha prominente, llamada hélice \alphaC. El bucle C es mayor y es predominantemente helicoidal. Los dos bucles están conectados por una sola cadena peptídica (la región conectora/bisagra que actúa como una bisagra sobre la que pueden rotar los dos dominios uno con respecto al otro tras la unión de ATP y/o sustrato. El ATP se une a la hendidura profunda entre los dos bucles y se asienta debajo de un bucle altamente conservado que conecta las cadenas \beta1 y \beta2. Este bucle de unión de fosfato, o bucle P, contiene un patrón de secuencia conservado rico en glicina (GXGX\varphiG) en el que \varphi normalmente es tirosina o fenilalanina. Los restos de glicina dejan que el bucle se acerque mucho a los fosfatos del ATP y que se coordinen por interacciones de la cadena principal. La cadena lateral aromática conservada remata el sitio de transferencia de fosfato. El ATP se ancla a la enzima por enlaces de hidrógeno entre su resto adenina y los átomos de la cadena principal de la región conectora, y el anillo de ribosa a los restos al comienzo del dominio C-terminal.
La fosfotransferencia óptima requiere la disposición espacial precisa de varios restos catalíticos que están totalmente conservados entre todas las quinasas conocidas. Las Asp813 y Asn818 (numeración de HER1 como se da en la referencia 2 o numeradas como Asp837 y Asn842 como se encuentra en REFSEQ: nº de acceso NM_005228) provienen de una estructura de bucle altamente conservada en la base del sitio activo, llamado bucle catalítico. Las Asp813 interacciona con la cadena lateral de hidroxilo atacante del sustrato, mientras que la Asp818 está implicada en interacciones de enlaces de hidrógeno que orientan la Asp813. El Asn818 y otro resto catalítico totalmente conservado, Asn831 (numerado como Asp855 encontrado en REFSEQ: nº de acceso NM_005228), también son necesarios para la unión de 2 cationes metálicos divalentes implicados en la coordinación del grupo trifosfato.
Numerosas estructuras de complejos con ATP, sus análogos o moléculas pequeñas inhibidoras unidos a diferentes proteína quinasas, han proporcionado una descripción clara de la organización del dominio catalítico y de la hendidura de unión del ATP y de las similitudes y diferencias que existen dentro de la región de unión^{3}. Ahora está claro que hay regiones dentro de la hendidura de unión que no son ocupadas por el ATP, y esto demuestra diversidad estructural entre los miembros de la familia de quinasas. La figura 2 muestra las interacciones del ATP con la región bisagra de la quinasa 2 dependiente de ciclina humana (CDK2)^{4}. Las regiones genéricas de todos los sitios de unión de quinasa-ATP conocidas están definidas en la figura como: (1) la región de unión de adenina; (2) el bolsillo de ribosa; (3) el bolsillo de unión de fosfato; (4) una región 1 mayoritariamente hidrófoba detrás del anillo de adenina, y (5) una región 2, una hendidura o un túnel adyacente al bolsillo de ribosa y el nitrógeno N3 de la adenina que señala hacia una zona expuesta de la superficie del dominio quinasa. Las estructuras disponibles de los complejos de quinasa/inhibidor indican que se pueden aprovechar las regiones no ocupadas por el ATP, p. ej., las regiones 1 y 2, para aumentar las interacciones de unión y por lo tanto la potencia de unión y potencialmente porque las diferencias de secuencia entre quinasas en estas regiones también modulan la selectividad.
Una combinación de esfuerzos en cristalografía, modelado, selección y química médica han conducido a la comprensión del modo de unión del quimiotipo de pirrolotriazina en el sitio de unión del ATP. Basándose en la estructura cristalina de rayos X del inhibidor quimiotipo de pirrolotriazina en VEGFR-2, se ha mostrado que el anillo de pirrolotriazina se une en el bolsillo de adenina y produce varias interacciones clave con la región bisagra de forma similar al ATP. En este modo de unión, el grupo C5 se dirige a los bolsillos de ribosa-fosfato altamente conservados. El grupo C4, dependiendo de sus constituyentes químicos puede dirigirse a la región 1 de especificidad y el grupo C6 se dirige a la región 2 de especificidad. El modelado de los ejemplos enumerados de este quimiotipo en HER1 muestra que el grupo C5 reivindicado en esta invención puede ocupar al menos el bolsillo de ribosa-fosfato e interacciona con al menos uno o más de los restos totalmente conservados implicados en la unión de fosfato, p. ej., Asn818 y Asp831 (numeración de HER1).
La naturaleza conservada de la estructura central catalítica de quinasa hace que sea un objetivo excelente para el patrón de inhibidor de quinasa genérico proporcionado por el anillo de pirrolotriazina y el grupo C5. Este patrón se puede obtener satisfactoriamente para hacer inhibidores de quinasa competitivos con ATP potentes y específicos dirigiéndose a las zonas poco conservadas del sitio de unión del ATP.
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Sorprendentemente se ha encontrado que los compuestos de la invención y otros compuestos tales como los descritos en las patentes de EE.UU. 5.457.105, 5.616.582 y 5.770.599, que contienen un derivado de anilina pequeño como sustituyente de la posición C4 del anillo bicíclico, presentan actividad tanto de HER1 como de HER2.
(1) S.K. Hanks y T. Hunter, Protein kinases 6. The eukaryotic protein kinase superfamily: kinase (catalytic) domain structure and classification. FASEB J. 9 (1995), pp. 576-596.
(2) PDB ID: 1M14
Stamos, J., Sliwkowski, M. X., Eigenbrot, C.: Structure of the Epidermal Growth Factor Receptor Kinase Domain Alone and in Complex with a 4-Anilinoquinazoline Inhibitor. J. Biol. Chem. 277 pp. 46265 (2002).
(3) H.M. Berman, J. Westbrook, Z. Feng, G. Gilliland, T.N. Bhat, H. Weissig, I.N. Shindyalov, P.E. Bourne. The Protein Data Bank. Nucleic Acids Research, 28 pp. 235-242 (2000): página web: http://www.pdb.org/.
(4) PDB ID:1HCK
Schulze-Gahmen, U., De Bondt, H. L., Kim, S. H.: High-resolution crystal structures of human cyclin-dependent kinase 2 with and without ATP: bound waters and natural ligand as guides for inhibitor design. J. Med. Chem. 39 pp. 4540(1996).
(5) documento WO 03/042172
la fig. 1 representa la estructura de rayos X de HER1, codificada con colores para los elementos clave de una quinasa típica;
la fig. 2 representa una estructura de rayos X de CDK2 formando complejo con ATP. Se indican las diferentes regiones de un sitio de unión típico a ATP.
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La presente invención proporciona compuestos de fórmula II, composiciones farmacéuticas que usan dichos compuestos y procedimientos de uso de dichos compuestos.
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De acuerdo con la presente invención, se describen compuestos de fórmula II
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1 
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en la que
X es un enlace directo, -NR^{3}- o -O-;
Z es
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2 
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o -NR^{7}-;
R^{2} es arilo o arilo sustituido;
R^{3}, R^{4} y R^{5} se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo y alquilo sustituido;
R^{6}, R^{6a} y R^{6b} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en uno o más de hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, ariloxi, -CN, -NH_{2}, -OH, -COOH, -CH_{2}OR^{5}, -CONHSO_{2}R^{5}, -CONR^{4}R^{5}, -NHalquilo, -NHCOalquilo, -NR^{4}SO_{2}alquilo, NR^{4}SO_{2}NR^{4}R^{5}, -OCONR^{4}, -C_{3}, y -OCF_{3}, dos de los cuales pueden estar unidos al mismo átomo de carbono del anillo;
R^{7} es hidrógeno, alquilo o -NH_{2}, y
n es 0, 1, 2 ó 3;
o una sal o estereoisómero de los mismos farmacéuticamente aceptable.
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Estos compuestos inhiben la actividad de tirosina quinasa de receptores de factores de crecimiento tales como HER2.
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En otra realización, la invención comprende un compuesto de fórmula II, en la que
R^{2} es arilo o arilo sustituido;
R^{3} es hidrógeno;
o una sal o estereoisómero de los mismos farmacéuticamente aceptable.
\vskip1.000000\baselineskip
Un sustituyente R^{2} preferido incluye fenilo, que puede estar adecuadamente sustituido con uno o más sustituyentes.
\newpage
En otra realización, la invención comprende un compuesto de fórmula III,
3
en la que
X es un enlace directo, -NR^{3}- o -O-;
R^{2} es arilo o arilo sustituido;
R^{3}, R^{4} y R^{5} se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo y alquilo sustituido;
R^{6}, R^{6a} y R^{6b} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en uno o más de hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, ariloxi, -CN, -NH_{2}, -OH, -COOH, -CH_{2}OR^{5}, -CONHSO_{2}R^{5}, -CONR^{4}R^{5}, -NHalquilo, -NHCOalquilo, -NR^{4}SO_{2}alquilo, -NR^{4}SO_{2}NR^{4}R^{5}, -OCONR^{4}R^{5}, -CF_{3} y -OCF_{3}, dos de los cuales pueden estar unidos al mismo átomo de carbono del anillo; y
n es 0, 1, 2 ó 3;
o una sal o estereoisómero de los mismos farmacéuticamente aceptable.
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En otra realización, la invención comprende un compuesto de fórmula III, en la que
R^{2} es fenilo o fenilo sustituido;
R^{6}, R^{6a} y R^{6b} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en uno o más de hidrógeno, -NH_{2}, OH, alcoxi, -CONR^{4}R^{5}, -NR^{4}SO_{2}alquilo, -NR^{4}SO_{2}NR^{4}R^{5}, -OCONR^{4}R^{5}, -NHalquilo y -NHCOalquilo;
X es -NH-;y
n es 1 ó 2.
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Los compuestos preferidos de la invención incluyen los siguientes
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-cloro-4-fluorofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-2-naftalenilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-fenilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-etinilfenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-aminopiperidin-1-il)metil]-N-(4-fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
(3R,4R)-4-amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3S,4S)-4-amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3R,4R)-amino-1-[[4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3S,4S)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxi-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]-triazin-5-il}-metil)piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol
(3R,4R)-4-amino-1-{[4-(2-naftilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil}piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxi-4-metilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-bromofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-fluoro-5-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-clorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]-triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-cloro-4-fluoro-fenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-tienilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-clorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]-triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
carbamato de (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo,
carbamato de (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)-amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo,
carbamato de (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-cloro-4-fluoro-fenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo,
carbamato de (3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-cloro-4-fluoro-fenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo,
carbamato de (3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-3-metilpiperidin-3-ol,
(3R/S,5R/S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol,
(3S,5S)-4-amino-1-({4-[(4-fluoro-3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol,
(3R,5R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol,
5-{[(3R,4R)-4-amino-3-metoxipiperidin-1-il]metil}-N-(3-metoxifenil)-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]-triazin-5-il}metil)-N-(metilsulfonil)piperidina-3-carboxamida,
(3R,4R}-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida,
(3R,4R)-4-amino-1-({(4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-5-il}metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3-carboxamida,
((3R,4R)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]-triazin-5-il)metil)-4-((R)-1-feniletilamino)pipendin-3-il)metanol,
N-[(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]urea,
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N-[(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida, y
N-[(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida
o una sal de los mismos farmacéuticamente aceptable.
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A continuación se dan definiciones de términos y expresiones que se pueden usar en la presente memoria descriptiva. La definición inicial provista para un grupo o término en el presente documento se aplica a ese grupo o término a lo largo de toda la memoria descriptiva individualmente o como parte de otro grupo, salvo que se indique lo contrario.
El término "alquilo" se refiere a grupos hidrocarburo no sustituidos de cadena lineal o ramificada, de 1 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 7 átomos de carbono. La expresión "alquilo inferior" se refiere a grupos alquilo no sustituidos de 1 a 4 átomos de carbono.
La expresión "alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con 1 a 4 sustituyentes, seleccionados de halógeno, hidroxi, alcoxi, oxo, alcanoilo, ariloxi, alcanoiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, aminas disustituidas en las que los 2 sustituyentes del amino se seleccionan de alquilo, arilo o aralquilo; alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo, sulfonamido, p. ej. SO_{2}NH_{2}, sulfonamido sustituido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, p. ej. CONH_{2}, carbamilo sustituido p. ej. CONHalquilo, CONHarilo, CONHaralquilo o casos en los que hay 2 sustituyentes en el nitrógeno seleccionados de alquilo, arilo o aralquilo; alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino, heterociclilo, p. ej., indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, homopiperazinilo y heterociclilo sustituido. Cuando se ha indicado antes que el sustituyente está además sustituido, se seleccionará de alcoxi, arilo o aralquilo.
El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo.
El término "arilo" se refiere a grupos hidrocarburo aromáticos monocíclicos o bicíclicos que tienen de 6 a 12 átomos de carbono en la parte de anillo, tal como grupos fenilo, naftilo, bifenilo y difenilo, cada uno de los cuales puede estar sustituido.
El término "aralquilo" se refiere a un grupo arilo o un arilo sustituido unido directamente por un grupo alquilo, tal como un bencilo.
El término "ariloxi" se refiere a un grupo arilo o un arilo sustituido unido directamente por un grupo alcoxi, tal como metoxi o etoxi.
La expresión "arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados de alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, aralquilo, halógeno, trifluorometoxi, trifluorometilo, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, ariloxi, aralquiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, ureido, nitro, ciano, carboxi, carboxialquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, arilsulfonilamina, ácido sulfónico, alquilsulfonilo, sulfonamido, ariloxi y similares. El sustituyente puede estar además sustituido con hidroxi, halógeno, alquilo, alcoxi, alquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo.
El término "heteroarilo" se refiere a un grupo aromático opcionalmente sustituido, por ejemplo que es un sistema de anillos monocíclico de 4 a 7 miembros, bicíclico de 7 a 11 miembros, o tricíclico de 10 a 15 miembros, que tiene al menos un heteroátomo en al menos un anillo que contiene átomos de carbono, por ejemplo piridina, tetrazol, indazol.
El término "alquenilo" se refiere a grupos hidrocarburo de cadena lineal o ramificada de 2 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 2 a 15 átomos de carbono, y lo más preferiblemente de 2 a 8 átomos de carbono, que tienen de 1 a 4 dobles enlaces.
La expresión "alquenilo sustituido" se refiere a un grupo alquenilo sustituido, por ejemplo con 1 a 2 sustituyentes tales como halógeno, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, alquiltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo sustituido, guanidino, indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo y similares.
El término "alquinilo" se refiere a grupos hidrocarburo de cadena lineal o ramificada de 2 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 2 a 15 átomos de carbono, y lo más preferiblemente de 2 a 8 átomos de carbono, que tienen de 1 a 4 triples enlaces.
La expresión "alquinilo sustituido" se refiere a un grupo alquinilo sustituido, por ejemplo con un sustituyente tal como halógeno, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, alquiltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo sustituido, guanidino y heterociclilo, p. ej. imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo y similares.
El término "cicloalquilo" se refiere a sistema de anillos de hidrocarburos cíclicos saturados y opcionalmente sustituidos, que contienen preferiblemente de 1 a 3 anillos y de 3 a 7 carbonos por anillo, que pueden estar además condensados con un anillo carbocíclico C_{3}-C_{7} insaturado. Los grupos de ejemplo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, cicloctilo, ciclodecilo, ciclododecilo y adamantilo. Los sustituyentes de ejemplo incluyen uno o más grupos alquilo como se han descrito antes o uno o más grupos descritos antes como sustituyentes de alquilo.
Los términos "heterociclo", "heterocíclico" y "heterociclilo" se refieren a un grupo cíclico aromático o no aromático, totalmente saturado o insaturado, opcionalmente sustituido, que es, por ejemplo, un sistema de anillos monocíclico de 4 a 7 miembros, bicíclico de 7 a 11 miembros, o tricíclico de 10 a 15 miembros, que tiene al menos un heteroátomo en al menos un anillo que contiene átomos de carbono. Cada anillo del grupo heterocíclico que contiene un heteroátomo puede tener 1, 2 ó 3 heteroátomos seleccionados de átomos de nitrógeno, átomos de oxígeno y átomos de azufre, donde los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden estar también opcionalmente oxidados y los heteroátomos nitrógeno pueden estar también opcionalmente cuaternizados. El grupo heterocíclico puede estar unido a cualquier heteroátomo o átomo de carbono.
Los ejemplos de grupos heterocíclicos monocíclicos incluyen pirrolidinilo, pirrolilo, indolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, homopiperazinilo, 2-oxohomopiperazinilo, 2-oxopirrolidinilo, 2-oxazepinilo, azepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, N-oxopiridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, tiamorfolinilo, sulfóxido de tiamorfolinilo, tiamorfolinilsulfona, 1,3-dioxolana y tetrahidro-1,1-dioxotienilo, dioxanilo, isotiazolidinilo, tietanilo, tiiranilo, triazinilo y triazolilo, y similares.
Los ejemplos de grupos heterocíclicos bicíclicos incluyen 2,3-dihidro-2-oxo-1H-indolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzotienilo, quinuclidinilo, quinolinilo, N-óxido de quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, cromonilo, cumarinilo, cinnolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3-c]piridinilo, furo[3,1-b]piridinilo o furo[2,3-b]piridinilo), dihidroisoindolilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4-oxo-quinazolinilo), benzoisotiazolilo, benzoisoxazolilo, benzodiazinilo, benzofurazanilo, benzotiopiranilo, benzotriazolilo, benzopirazolilo, dihidrobenzofurilo, dihidrobenzotienilo, dihidrobenzotiopiranilo, dihidrobenzotiopiranilsulfona, dihidrobenzopiranilo, indolinilo, indazolilo, isocromanilo, isoindolinilo, naftiridinilo, ftalazinilo, piperonilo, purinilo, piridopiridilo, quinazolinilo, tetrahidroquinolinilo, tienofurilo, tienopiridilo, tienotienilo y similares.
Los ejemplos de sustituyentes incluyen uno o más grupos alquilo o aralquilo como se han descrito antes, o uno o más grupos descritos antes como sustituyentes de alquilo. También se incluyen heterociclilos más pequeños, tales como, epóxidos y aziridinas.
La expresión "anillo carbocíclico" se refiere a anillo de hidrocarburo monocíclico, saturado o parcialmente insaturado, estable, de 3 a 7 átomos de carbono tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. La expresión "opcionalmente sustituido" cuando se refiere a "anillo carbocíclico" en el presente documento, indica que el anillo carbocíclico puede estar sustituido en una o más posiciones del anillo sustituibles, con uno o más grupos independientemente seleccionados de alquilo (preferiblemente alquilo inferior), alcoxi (preferiblemente alcoxi inferior), nitro, monoalquilamino (preferiblemente un (alquil inferior)amino), dialquilamino (preferiblemente un di[alquil inferior]amino), ciano, halógeno, halógenoalquilo (preferiblemente trifluorometilo), alcanoilo, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alquilamido (preferiblemente (alquil inferior)-amido), alcoxialquilo (preferiblemente un alcoxi[alquilo inferior]), alcoxicarbonilo (preferiblemente un (alcoxi inferior)carbonilo), alquilcarboniloxi (preferiblemente un (alquil inferior)carboniloxi) y arilo (preferiblemente fenilo), estando dicho arilo opcionalmente sustituido con halógeno, grupos alquilo inferior y alcoxi infe-
rior.
El término "heteroátomos" incluirá oxígeno, azufre y nitrógeno.
Los compuestos de fórmula II y III pueden formar sales que también están dentro del alcance de esta invención. Se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables (es decir, fisiológicamente aceptables y no tóxicas), aunque otras sales también pueden ser útiles, p. ej., para aislar o purificar los compuestos de esta invención.
Los compuestos de fórmula II y III pueden formar sales con metales alcalinos tales como sodio, potasio y litio, con metales alcalinotérreos tales como calcio y magnesio, con bases orgánicas tales como diciclohexilamina, tributilamina, piridina y aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Dichas sales se pueden formar como conocen los expertos en la materia.
Los compuestos de fórmula II y III pueden formar sales con una variedad de ácidos orgánicos e inorgánicos. Dichas sales incluyen las formadas con cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno, ácido metanosulfónico, ácido sulfúrico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido bencenosulfónico, ácido toluenosulfónico y otros diferentes (p. ej., nitratos, fosfatos, boratos, tartratos, citratos, succinatos, benzoatos, ascorbatos, salicilatos y similares). Dichas sales pueden formarse como conocen los expertos en la materia.
Además, se pueden formar iones híbridos ("sales internas").
Están contemplados todos los estereoisómeros de los compuestos de la presente invención, sea en mezclas o en forma pura o sustancialmente pura. La definición de los compuestos de acuerdo con la invención abarca todos los posibles estereoisómeros y sus mezclas. Abarca muy en particular las formas racémicas y los isómeros ópticos aislados que tienen actividad específica. Las formas racémicas se pueden resolver por procedimientos físicos, tales como por ejemplo, cristalización fraccionada, separación o cristalización de derivados diastereoisómericos o separación por cromatografía en columna quiral. Los isómeros ópticos individuales se pueden obtener a partir de racematos por procedimientos convencionales, tales como por ejemplo, la formación de sales con un ácido ópticamente activo, seguido de cristalización.
Debe entenderse además que los solvatos (p. ej., hidratos) de los compuestos de fórmula II y III también están dentro del alcance de la presente invención. En la materia se conocen en general los procedimientos de solvatación.
La presente invención se basa en el descubrimiento de que determinadas pirrolotriazinas son inhibidores de proteínas quinasas. Más específicamente, las pirrolotriazinas tales como las que se describen en esta invención, inhiben la actividad de proteína tirosina quinasas de los miembros de la familia HER de receptores. Estos inhibidores serán útiles en el tratamiento de enfermedades proliferativas que dependen de la señalización por uno o más de estos receptores. Dichas enfermedades incluyen psoriasis, artritis reumatoide y tumores sólidos de pulmón, cabeza y cuello, mama, colon, ovario y próstata. La invención se refiere a una composición farmacéutica del compuesto de fórmula II y III o sal o hidrato del mismo farmacéuticamente aceptable y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el tratamiento del trastorno hiperproliferativo en un mamífero. En particular, se espera que dicha composición farmacéutica inhiba el crecimiento de estos tumores sólidos primarios y recurrentes que están asociados con HER1 (receptor del EGF) y HER2, en especial, los tumores que dependen significativamente de HER1 o HER2 para el crecimiento y la propagación, incluyendo por ejemplo, cánceres de vejiga, células escamosas, cabeza, colorrectal, esofágico, ginecológico (tal como ovario), páncreas, mama, próstata, vulva, piel, cerebro, tracto genitourinario, sistema linfático (tal como tiroides), estómago, laringe y pulmón. En otra realización, los compuestos de la presente invención también son útiles en el tratamiento de trastornos no cancerosos tales como la psoriasis y la artritis reumatoide.
Por lo tanto, de acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula II y III, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para usar en la producción de un efecto antiproliferativo en un animal de sangre caliente tal como un ser humano.
En virtud de su capacidad para inhibir las quinasas HER1, HER2 y HER4, los compuestos de la presente invención se pueden usar para el tratamiento de enfermedades proliferativas, incluyendo la psoriasis y el cáncer. Se ha mostrado que el receptor de quinasa HER1 es expresado y activado en muchos tumores sólidos incluyendo cáncer de cabeza y cuello, próstata, pulmón de células no pequeñas, colorrectar y de mama. Igualmente, se ha mostrado que el receptor de quinasa HER2 es sobreexpresado en el cáncer de mama, ovario, pulmón y gástrico. Los anticuerpos monoclonales que reducen la abundancia del receptor HER2 o inhiben la señalización por el receptor HER1, han mostrado eficacia antitumoral en estudios preclínicos y clínicos. Por lo tanto, se espera que los inhibidores de las quinasas HER1 y HER2 sean eficaces en el tratamiento de tumores que dependen de la señalización de cualquiera de los dos receptores. Además, estos compuestos serán eficaces para inhibir tumores que se basan en la señalización del heterodímero del receptor HER. Se espera que estos compuestos sean eficaces como agente individual o en combinación (simultánea o secuencial) con otros agentes quimioterapéuticos tales como Taxol®, adriamicina y cisplatino. Puesto que se ha mostrado que la señalización de HER1 y HER2 regula la expresión de factores angiogénicos tales como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la interleuquina 8 (IL8), se espera que estos compuestos tengan eficacia antitumoral que resulte de la inhibición de la angiogénesis además de la inhibición de la proliferación y supervivencia de células tumorales. Se ha mostrado que el receptor HER2 está implicado en la hiperproliferación de células sinoviales en la artritis reumatoide, y puede contribuir al componente angiogénico de este estado patológico inflamatorio. Se espera, por lo tanto, que los inhibidores descritos en esta invención sean eficaces en el tratamiento de la artritis reumatoide. La capacidad de estos compuestos para inhibir HER1 les añade además el uso como agentes antiangiogénicos. Véanse los siguientes documentos y las referencias citadas en los mismos: Schlessinger J., "Cell signaling by receptor tyrosine kinases", Cell 103(2), p. 211-225 (2000); Cobleigh, M. A., Vogel, C. L., Tripathy, D., Robert, N. J., Scholl, S., Fehrenbacher, L., Wolter, J. M., Paton, V., Shak, S., Lieberman, G., y Slamon, D. J., "Multinational study of the efficacy and safety of humanized anti-HER2 monoclonal antibody in women who have HER2-overexpressing metastatic breast cancer that has progressed after chemotherapy for metastatic disease", J. of Clin. Oncol. 17(9), p. 2639-2648 (1999); Baselga, J., Pfister, D., Cooper, M. R., Cohen, R., Burtness, B., Bos, M., D'Andrea, G., Seidman, A., Norton, L., Gunnett, K., Falcey, J., Anderson, V., Waksal, H., y Mendelsohn, J., "Phase I studies of anti-epidermal growth factor receptor chimeric antibody C225 alone and in combination with cisplatin", J. Clin. Oncol. 18(4), p. 904-914(2000); Satoh, K., Kikuchi, S., Sekimata, M., Kabuyama, Y., Homma, M. K., y Homma Y., "Involvement of ErbB-2 in rheumatoid synovial cell growth", Arthritis Rheum. 44(2), p. 260-265 (2001).
El tratamiento antiproliferativo definido antes en el presente documento, se puede aplicar como una terapia sola o puede implicar, además de un compuesto de la invención, una o más de otras sustancias y/o tratamientos. Dichos tratamientos conjuntos se pueden realizar mediante la administración simultánea, secuencial o separada de los componentes individuales del tratamiento. Los compuestos de esta invención también pueden ser útiles en combinación con agentes anticancerígenos y citotóxicos conocidos, y tratamientos incluyendo la radiación. Si se formula como una dosis fija, dichos productos de combinación usan los compuestos de esta invención dentro del intervalo de dosificación descrito a continuación, y los otros agentes farmacéuticamente activos dentro de su intervalo de dosificación aprobado. Los compuestos de fórmula II y III se pueden usar de forma secuencial con agentes anticancerígenos o citotóxicos conocidos y tratamientos, incluyendo la radiación, cuando no es adecuada una formulación de combinación.
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En el campo de la oncología médica es una práctica habitual usar una combinación de formas diferentes de tratamiento para tratar a cada paciente con cáncer. En la oncología médica el otro o los otros componentes de dicho tratamiento conjunto además del tratamiento antiproliferativo definido antes en el presente documento puede ser: cirugía, radioterapia o quimioterapia. Dicha quimioterapia puede cubrir 3 categorías principales de agente terapéutico:
(i) agentes angiogénicos que funcionan por mecanismos diferentes a los definidos en lo que antecede (por ejemplo, inhibidores de linomida de la función de la integrina \alpha\nu\beta3, angiostatina, razoxano);
(ii) agentes citostáticos tales como antiestrógenos (por ejemplo tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno), progestágenos (por ejemplo, acetato de megestrol), inhibidores de aromatasa (por ejemplo, anastrozol, letrozol, borazol, exemestano), antihormonas, antiprogestágenos, antiandrógenos (por ejemplo, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas y antagonistas de LHRH (por ejemplo, acetato de goserelina, leuprolida), inhibidores de of testosterona 5\alpha-dihidroreductasa (por ejemplo, finasteride), inhibidores de farnesil transferas, agentes anti-invasión (por ejemplo, inhibidores de metaloproteasas tales como marimastat e inhibidores de la función del receptor del activador de plasminógeno uroquinasa) e inhibidores de la función del factor de crecimiento, (dichos factores de crecimiento incluyen por ejemplo, EGF, FGF, factor de crecimiento derivado de plaquetas, y factor de crecimiento de hepatocitos, dichos inhibidores incluyen anticuerpos del factor de crecimiento, anticuerpos del receptor del factor de crecimiento tales como Avastin® (bevacizumab) y Erbitux® (cetuximab); inhibidores de tirosina quinasa e inhibidores de serina/ treonina quinasa); y
(iii) fármacos antiproliferativos/antineoplásicos y combinaciones de los mismos, como se usan en oncología médica, tales como antimetabolitos (por ejemplo, antifolatos tales como metotrexato, fluoropirimidinas tales como 5-fluorouracilo, purina y análogos de adenosina, citosina arabinósido); antibióticos antitumorales intercalantes (por ejemplo, antraciclinas tales como doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina e idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina); derivados de platino (por ejemplo, cisplatino, carboplatino); agentes alquilantes (por ejemplo, mostazas nitrogenadas, melfalán, clorambucilo, busulfán, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureas, tiotepa; agentes antimitóticos (por ejemplo, alcaloides de la vinca como vincristina, vinorelbina, vinblastina y vinflunina, y taxoides tales como Taxol® (paclitaxel), Taxotere® (docetaxel) y agentes de microtúbulos más nuevos tales como análogos de epotilona, análogos de discodermolida y análogos de eleuterobina, inhibidores de topoisomeras (por ejemplo, epipodopfilotoxinas tales como etopósido y tenipósido, amsacrina, topotecán, irinotecán); inhibidores del ciclo celular (por ejemplo, flavopiridoles); modificadores de la respuesta biológica e inhibidores de proteasoma tales como Velcade® (bortezomib).
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Como se ha expuesto antes, los compuestos de fórmula II y III de la presente invención tienen interés por sus efectos antiproliferativos. Se espera que dichos compuestos de la invención sean útiles en una amplia variedad de estados patológicos incluyendo cáncer, psoriasis y artritis reumatoide.
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Más específicamente, los compuestos de fórmula II y III son útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres, incluyendo (pero sin limitar) los siguientes:
- carcinoma, incluyendo el de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células no pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello de útero, tiroides, próstata y piel, incluyendo carcinoma de células escamosas;
- tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma;
- tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y shwannomas; y
- otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma y osteosarcoma.
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Debido a la función principal de las quinasas en la regulación de la proliferación celular en general, los inhibidores podrían actuar como agentes citostáticos reversibles que podrían ser útiles en el tratamiento de cualquier proceso patológico que tenga características de proliferación celular anómala, p. ej., hiperplasia de próstata benigna, adenomatosis familiar, poliposis, neurofibromatosis, fibrosis pulmonar, artritis, psoriasis, glomerulonefritis, reestenosis después de angioplastia o cirugía vascular, formación de cicatriz hipertrófica y enfermedad inflamatoria del intestino.
Los compuestos de fórmula II y III son especialmente útiles en el tratamiento de tumores que tienen una alta incidencia de actividad de tirosina quinasa, tales como tumores de colon, pulmón y pancreático. Mediante la administración de una composición (o una combinación) de los compuestos de esta invención, se reduce el desarrollo de tumores en un huésped mamífero.
Los compuestos de fórmula II y III pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades distintas del cáncer que pueden estar asociadas con rutas de transducción de señales que operan a través de los receptores de los factores de crecimiento tales como HER1 (receptor de EGF), HER2 o HER4.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención que contienen el principio activo pueden estar en una forma adecuada para el uso oral, por ejemplo, en forma de comprimidos, trociscos, pastillas, suspensiones acuosas o aceitosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras y blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones destinadas al uso oral, se pueden preparar de acuerdo con cualquier procedimiento conocido en la materia para la fabricación de composiciones farmacéuticas, y dichas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes de sabor, agentes colorantes y agentes conservantes, con el fin de proporcionar preparaciones agradables y farmacéuticamente elegantes. Los comprimidos contienen el principio activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos, que son adecuados para usar en la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y disgregación, por ejemplo celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica, almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidón, gelatina, polivinilpirrolidona o goma arábiga, y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato magnésico, ácido esteárico o talco. El comprimido puede no estar recubierto o puede recubrirse mediante técnicas conocidas para enmascarar el sabor desagradable del fármaco o retrasar la disgregación y absorción en el tracto gastrointestinal y proporcionar así una acción sostenida a lo largo de un periodo más largo. Por ejemplo, se puede usar un material de enmascaramiento del sabor soluble en agua, tal como hidroxipropilmetilcelulosa o hidroxipropilcelulosa o un material retardante tal como etilcelulosa, acetato-butirato de celulosa.
Las formulaciones para uso oral también se pueden presentar como cápsulas de gelatina dura, en las que el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en la que el principio activo se mezcla con vehículo soluble en agua tal como polietilenglicol o un medio de aceite, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas contienen el material activo mezclado con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arábiga; agentes dispersantes o humectantes que pueden ser un fosfátido natural, por ejemplo lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo estearato polioxietilenado, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilen-oxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol tales como monooleato de sorbitol polioxietiénico, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitán polietilénico. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes de sabor, y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa, sacarina o aspartamo.
Las suspensiones en aceite se pueden formular suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, por ejemplo aceite de arachis, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones en aceite pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abeja, parafina dura o alcohol cetílico. Se pueden añadir agentes edulcorantes tales como los expuestos antes y agentes de sabor para proporcionar una preparación oral agradable. Estas composiciones se pueden conservar por adición de un antioxidante tal como hidroxianisol butilado o alfa-tocoferol.
Los polvos o gránulos dispersables adecuados para preparar una suspensión acuosa por adición de agua, proporcionan el principio activo mezclado con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservantes, Los agentes de dispersión o humectantes y los agentes de suspensión adecuados se ilustran con los ya mencionados antes. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo agentes edulcorantes, de sabor y colorantes. Estas composiciones se pueden conservar por adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.
Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase de aceite puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de arachis, o un aceite mineral, por ejemplo parafina líquida o mezclas de estos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser fosfátidos naturales, por ejemplo lecitina de soja y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de sorbitán polioxietiénico. Las emulsiones también pueden contener edulcorantes, agentes de sabor, conservantes y antioxidantes.
Los jarabes y elixires se pueden formular con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Dichas formulaciones también pueden contener un emoliente, un conservante, agentes de sabor y colorantes y antioxidantes.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una disolución acuosa inyectable estéril. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden usar están el agua, disolución de Ringer y disolución isotónica de cloruro sódico.
La preparación inyectable estéril también puede ser una microemulsión de aceite en agua inyectable estéril, en la que el principio activo se disuelve en la fase de aceite. Por ejemplo, el principio activo se puede disolver primero en una mezcla de aceite de soja y lecitina. Después la disolución de aceite se introduce en una mezcla de agua y glicerol, y se procesa para formar una inyección de microemulsión.
Las disoluciones o microemulsiones inyectables se pueden introducir en el torrente sanguíneo de un paciente mediante inyección local de bolo. Alternativamente, puede ser ventajoso administrar la disolución o microemulsión de forma que se mantenga una concentración constante del presente compuesto en la circulación. Con el fin de mantener dicha concentración constante, se puede usar un dispositivo de administración intravenosa continua. Un ejemplo de dicho dispositivo es la bomba intravenosa Deltec CADD-PLUS.TM. modelo 5400.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable para la administración intramuscular y subcutánea. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con lo que se conoce en la materia, usando aquellos agentes de dispersión o humectantes y agentes de suspensión adecuados, mencionados antes. La preparación inyectable estéril también puede ser una disolución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente aceptable por vía parenteral y no tóxico, por ejemplo, en forma de una disolución en 1,3-butanodiol. Además, se usan de forma convencional aceites fijos, estériles, como disolvente o medio de suspensión. Para este propósito se puede usar cualquier aceite fijo blando incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, son útiles los ácidos grasos tales como el ácido oleico para la preparación de productos inyectables.
Los compuestos de fórmula II y III también se pueden administrar en forma de supositorios para la administración rectal del fármaco. Estas composiciones se pueden preparar mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal, y por lo tanto se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Dichos materiales incluyen manteca de cacao, gelatina glicerinada, aceites vegetales hidrogenados, mezclas de polietilenglicoles de diferentes pesos moleculares y ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol.
Para uso tópico, se usan cremas, pomadas, gelatinas, disoluciones o suspensiones, etc., que contienen el compuesto de fórmula II y III. (Para los propósitos de esta solicitud, la aplicación tópica incluirá lavados bucales y enjuagues).
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar de forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados y dispositivos de suministro, o por vías transdérmicas, usando las formas de parches transdérmicos para la piel conocidos para los expertos en la materia. Para administrar en forma de un sistema de suministro transdérmico, la administración de la dosificación será, por supuesto, continua más que intermitente a lo largo del régimen de dosificación. Los compuestos de la presente invención también se pueden suministrar en forma de un supositorio usando bases tales como manteca de cacao, gelatina glicerinada, aceites vegetales hidrogenados, mezclas de polietilenglicoles de diferentes pesos moleculares y ésteres de ácidos grasos y polietilenglicol.
Cuando un compuesto de acuerdo con esta invención se administra a un sujeto humano, la dosificación diaria normalmente la determinará el médico que la prescribe, variando en general la dosificación de acuerdo con la edad, peso, sexo y respuesta del paciente individual, así como con la gravedad de los síntomas del paciente.
Si se formula como una dosis fija, dichos productos de combinación usan los compuestos de esta invención dentro del intervalo de dosificación descrito antes y el otro agente farmacéuticamente activo o tratamiento dentro de su intervalo de dosificación aprobado. Los compuestos de fórmula II y III también se pueden administrar de forma secuencial con otro agente anticancerígeno o citotóxico conocido, cuando no es adecuada una formulación de combinación. La invención no está limitada por la secuencia de administración; los compuestos de fórmula II y III se pueden administrar antes o después de la administración del o de los agentes anticancerígenos o citotóxicos conocidos.
Los compuestos se pueden administrar en un intervalo de dosificación de aproximadamente 0,05 a 200 mg/kg/día, preferiblemente menos de 100 mg/kg/día, en una sola dosis o en 2 a 4 dosis divididas.
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Ensayos biológicos Ensayos de las quinasas HER1, HER2 o HER4
Los compuestos de interés se ensayaron en un tampón de quinasa que contiene Tris.HCl 20 mM, pH 7,5, MnCl_{2} 10 mM, ditiotreitol 0,5 mM, albúmina de suero bovino 0,1 mg/ml, poly(glu/tyr, 4:1) 0,1 mg/ml, ATP 1 \muM y [\gamma-^{33}P] ATP 4 mCi/ml. Poly(glu/tyr, 4: 1) es un polímero sintético que sire como un aceptor de fosforilo y se adquiere en Sigma Chemicals. La reacción de quinas se inicia por adición de la enzima y las mezclas de reacción se incuban a 26ºC durante 1 h. La reacción se termina por adición de EDTA hasta 50 mM, y las proteínas se hacen precipitar por adición de ácido tricloroacético hasta 5%. Las proteínas precipitadas se recuperan por filtración en placas Packard Unifilter, y se mide la cantidad de radiactividad incorporada en un contador de centelleo Topcount.
Para la preparación de HER1 y HER4 recombinantes, las secuencias citoplasmáticas de los receptores se expresaron en células de insecto como proteínas de fusión con GST, que se purificaron por cromatografía de afinidad. La secuencia citoplasmática de HER2 se subclonó en el vector de expresión de baculovirus pBlueBac4 (Invitrogen) y se expresó como una proteína no marcada en las células de insecto. La proteína recombinante se purificó parcialmente por cromatografía de intercambio iónico.
Los presentes compuestos inhiben las quinasas HER1, HER2 y HER4 con valores de CI50 entre 0,001 y 25 \muM. Los compuestos preferidos tienen valores de CI_{50} entre 0,001-5,0 \muM. Los compuestos más preferidos tienen valores de CI_{50} entre 0,001-1,0 \muM. Los compuestos los más preferidos tienen valores de CI_{50} entre 0,001-0,1 \muM.
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Procedimientos de preparación
Algunos compuestos de fórmula II y III se pueden preparar en general de acuerdo con los siguientes esquemas y el conocimiento del experto en la materia. También se puede encontrar información complementaria de la preparación en la solicitud de patente de EE.UU. en tramitación con la presente de número de serie 09/573.829 presentada el 18 de mayo de 2000 y el número de publicación internacional WO 00/71129, ambos incorporados en el presente documento por referencia.
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Esquema 1
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Etapa 1
La primera etapa del esquema 1 se lleva a cabo tratando el compuesto i (Ref. WO 03/042172 A2) con un tiol tal como metanotiol o butanotiol o sus sales de sodio, en un disolvente anhidro tal como THF, en atmósfera inerte tal como N_{2} para dar el compuesto ii.
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Etapa 2
La halogenación del grupo 5-metilo del compuesto ii se lleva a cabo por tratamiento con un reactivo de halogenación, tal como N-bromosuccinimida. La reacción se lleva a cabo en una atmósfera inerte tal como Ar, en presencia de un catalizador tal como peróxido de dibenzoilo o 2,2'-azobisisobutironitrilo y da el compuesto iii 5-halogenometil-pirrolotriazina.
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Etapa 3
El tratamiento del compuesto iii con una amina primaria o secundaria o un alcohol en presencia de una base tal como NaHCO_{3} o trietilamina o diisopropiletilamina, en un disolvente tal como acetonitrilo o N,N-dimetilformamida da el compuesto intermedio iv.
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Etapa 4
El tratamiento del compuesto intermedio iv con una anilina en presencia de HgCl_{2} en un disolvente tal como tolueno, da el compuesto v pirrolotriazina 4-sustituida.
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Etapa 5
Alternativamente, los compuestos de fórmula iv se pueden tratar con un agente oxidante adecuado, tal como ácido m-cloroperbenzoico, en un disolvente tal como CH_{2}Cl_{2} para dar las sulfonas vi.
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Etapa 6
Las sulfonas vi se pueden convertir en el compuesto v por tratamiento con una amina primaria o secundaria o alcohol, en un disolvente inerte tal como CH_{2}Cl_{2}.
Alternativamente, los compuestos de fórmula general II y III se pueden preparar como se muestra en el esquema 2,
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Esquema 2
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Etapa 1
La primera etapa del esquema 2 se lleva a cabo tratando el compuesto i (Ref. WO 03/042172 A2) con un reactivo de halogenación tal como N-bromosuccinimida en una atmósfera inerte tal como Ar. La reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado tal como CCl_{4} en presencia de un catalizador tal como peróxido de dibenzoilo o 2,2'-azobisisobutironitrilo para dar el compuesto vii dihalogenopirrolotriazina.
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Etapa 2
El compuesto vii se puede convertir en el compuesto viii sal de amonio por tratamiento con una base terciaria tal como una trietilamina en un disolvente anhidro tal como THF.
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Etapa 3
El tratamiento del compuesto viii con una amina o su anión en un disolvente anhidro tal como acetonitrilo, cloroformo o THF, da el compuesto ix sal de amonio.
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Etapa 4
La conversión del compuesto ix en el compuesto v pirrolotriazina se puede llevar a cabo por tratamiento del compuesto ix con una amina primaria o secundaria o alcohol en presencia de una base tal como diisopropiletilamina en un disolvente tal como acetonitrilo.
Los compuestos preparados por los procedimientos anteriores que tienen la fórmula general x en el esquema 3 en el que el sustituyente 5-metilo contiene un grupo protector tal como t-butoxicarbonilo, se pueden modificar más por eliminación del grupo protector en la etapa 1 por tratamiento con HCl anhidro en éter dietílico o 1,4-dioxano, o por tratamiento de una disolución del compuesto en CH_{2}Cl_{2} con ácido trifluoroacético para preparar las aminas libres xi. Se puede llevar a cabo una modificación adicional en la etapa 2 tratando el compuesto xi con un compuesto carbonílico tal como propanal, en presencia de un agente reductor tal como triacetoxiborohidruro sódico, en un disolvente tal como CH_{2}Cl_{2} para dar las aminas sustituidas xii.
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Esquema 3
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Se pueden preparar compuestos adicionales como se muestra en el esquema 4. En la etapa 1, el compuesto ix se puede tratar con una amina secundaria tal como bis-(2-cloroetil)amina en un disolvente adecuado tal como acetonitrilo en presencia de una base tal como diisopropiletilamina, para dar el compuesto xii. El compuesto xii se puede tratar además con un nucleófilo tal como hidrazina en la etapa 2 para dar el compuesto xiii.
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Esquema 4
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Se pueden preparar pirrolotriazinas 5-sustituidas adicionales de acuerdo con el esquema 5.
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Esquema 5
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Etapa 1
El compuesto i se puede tratar con 2 equivalentes de un reactivo de bromación, tal como N-bromosuccinimida, en un disolvente tal como CCl_{4} a temperatura elevada. La 5-dibromopirrolotriazina resultante se puede convertir en el correspondiente dimetilacetal usando metanol en presencia de una base tal como NaHCO_{3} y después en el compuesto xiv aldehídico, tratando el acetal intermedio con un ácido tal como ácido trifluoroacético en presencia de agua.
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Etapa 2
El tratamiento del compuesto xiv aldehídico con un reactivo organometálico tal como un reactivo de Grignard en un disolvente anhidro, tal como THF, da el alcohol xv.
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Etapa 3
El alcohol xv se puede tratar con una amina primaria o secundaria o alcohol en presencia de una base tal como NaHCO_{3} en un disolvente adecuado, tal como acetonitrilo, para dar los compuestos de fórmula xvi.
Además, se puede preparar otro compuesto de fórmula I usando procedimientos conocidos en general para los expertos en la materia. En particular, los siguientes ejemplos proporcionan procedimientos adicionales para preparar los compuestos de esta invención.
La invención ahora se describirá mejor mediante los siguientes ejemplo(s) de trabajo, que son realizaciones preferidas de la invención. Todas las temperaturas están en grados Celsius (ºC) salvo que se indique lo contrario. "Tiempo ret. HPLC" es el tiempo de retención en HPLC que se obtuvo en las siguiente condiciones; tipo de columna y longitud, tiempo de gradiente [salvo que se indique lo contrario, todos los gradientes empezaron con disolvente A al 100% (MeOH 10%, H_{2}O 90%, TFA 0,1%) y terminaron con el disolvente B al 100% (MeOH 90%, H_{2}O 10%, TFA 0,1%)], caudal (ml/min). La detección por UV se llevó a cabo siempre a 220 nm.
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Ejemplo 1
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-cloro-4-fluorofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
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1A. Preparación de 5-metil-4-metilsulfanil-pirrolo[2,1f][1,2,4]triazina 
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A una disolución de 4-cloro-5-metil-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina (4,02 g, 24,0 mmol) (Ref. WO 03/042172 A2) en THF seco (200 ml) burbujeada con N_{2} a 0ºC, se añadió NaSMe (1,85 g, 26,3 mmol). El burbujeo se continuó durante 5 min. La mezcla de reacción después se agitó a t.a. durante una noche, se concentró a vacío hasta quedar un volumen de aproximadamente 50 ml. Se diluyó con H_{2}O (280 ml) y se agitó a 0ºC. El sólido se filtró, se lavó con agua fría, y se secó para dar el compuesto 1A (3,91 g, 91%). Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 3,38 min. (Columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene ácido fosfórico al 0,2%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 180.
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1B. Preparación de éster de terc-butilo del ácido [1-(4-metilsulfanil-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil)piperidin-4-il]-carbámico 
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Una mezcla del compuesto 1A (1,94 g, 10,8 mmol), peróxido de benzoilo (0,262 g, 1,08 mmol), NBS (2,12 g, 11,90 mmol) en CCl_{4} (100 ml) se burbujeó con N_{2}, y después se calentó inmediatamente a 85ºC durante 1,5 h. La mezcla se enfrió a t.a. y el precipitado se separó por filtración. El filtrado se concentró a vacío, se diluyó con dicloroetano (35 ml), y se añadieron DIEA (2,24 ml, 12,96 mmol) y éster de terc-butilo del ácido piperidin-4-il-carbámico (2,38 g, 11,90 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 1 h. La mezcla se diluyó con disolución saturada de NaHCO_{3} (70 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera (1 x 100 ml), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por columna ultrarrápida en gel de sílice para dar el compuesto 1B (2,87 g, 70%) (MeOH-CH_{2}Cl_{2} 0,1%-2%). Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,12 min. (Columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene ácido fosfórico al 0,2%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y a CL/EM M^{+}+1 = 378.
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1C. Preparación de 5-bromometil-4-cloro-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina 
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Una mezcla de 4-cloro-5-metil-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina (2,0 g, 11,93 mmol) (Ref. WO 03/042172 A2) y AIBN (195 mg, 1,19 mmol) en CCl_{4} (80 ml) en atmósfera de N_{2} se calentó a 100ºC durante 5 min, y se añadió NBS (2,55 g, 14,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 10 min, después se enfrió a t.a. y se filtró. La capa de CCl_{4} se lavó con disolución acuosa diluida de NaHCO_{3}, se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró para dar el compuesto 1C (2,70 g, 92%).
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1D. Preparación de bromuro de (4-cloro-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil)trietilamonio
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Una mezcla del compuesto 1C (2,7 g, 11 mmol), Et_{3}N (5 ml, 36 mmol) en THF (20 ml) se agitó a t.a. durante 12 h. El sólido se filtró y se aclaró con THF y Et_{2}O, y se secó para dar el compuesto 1D (3,38 g, 89%). Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 0,776 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 267.
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1E. Preparación de hidrocloruro del bromuro de [4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]trietilamonio
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Una mezcla del compuesto 1C (1,0 g, 2,2 mmol) y 3-cloro-4-fluoro-fenilamina (418 mg, 2,87 mmol) en CHCl_{3} (10 ml) se calentó a 50ºC durante 2 h. El sólido se filtró y se aclaró con CHCl_{3}, y se secó para dar el compuesto 1E (1,24 g, 87,4%). Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,19 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 376.
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1F. Preparación del éster de terc-butilo del ácido {1-[4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]piperidin-4-il}carbámico
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Procedimiento uno:
Una mezcla del compuesto 1B (30 mg, 0,08 mmol), 3-cloro-4-fluoro-fenilamina (11 mg, 0,08 mmol) y HgCl_{2} (24 mg, 0,088 mmol) en tolueno (2 ml) se calentó a reflujo durante 8 h. Se enfrió a t.a., se diluyó con EtOAc (5 ml) y se filtró. El filtrado se concentró y el residuo se purificó por HPLC preparativa para dar el compuesto 1F en forma de un aceite.
Procedimiento dos:
A una suspensión del éster de terc-butilo del ácido piperidin-4-il-carbámico (4,1 g, 20,3 mmol) en CH_{3}CN (55 ml) a 70ºC se añadió una mezcla del compuesto 1E (9,1 g, 18,4 mmol) y DIPEA (3,2 ml, 18,4 mmol) en CH_{3}CN (40 ml) gota a gota en un periodo de 40 min. La mezcla de reacción se agitó a 70ºC durante 1 h y después se enfrió a t.a., tras lo cual se añadió lentamente H_{2}O (155 ml). El sólido se filtró y se aclaró con CH_{3}CN/ H_{2}O al 15%, después con H_{2}O, y se secó a vacío para dar el compuesto 1F (7,84 g, 90%). Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,73 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 475.
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1G. Preparación de 5-[(4-amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-cloro-4-fluorofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
El compuesto 1F (del Procedimiento uno) se trató con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 20% (3 ml) a 0ºC, y después se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por HPLC para dar el producto en forma de la sal de TFA, que se trató con disolución saturada de NaHCO_{3} para dar la base libre del compuesto 1G (4 mg, 13% para las 2 etapas). Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,49 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 375.
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Ejemplo 2
(No se reivindica)
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-4-piridinilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina 
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A una mezcla de piridin-4-ilamina (34 mg, 0,361 mmol) en THF (500 \mul) se añadió NaHMDS 1 N en THF (722 ml, 0,722 mmol). La mezcla se enfrió a 0ºC y se añadió una suspensión del compuesto 1D (125 mg, 0,27 mmol) en DMF (800 \mul). La mezcla se agitó a esta temperatura durante 0,5 h y se añadió éster de terc-butilo del ácido piperidin-4-il-carbámico (144 mg, 0,72 mmol) a la mezcla fría. La mezcla de reacción se calentó a 50ºC durante 10 min y se concentró para separar el THF. Se añadió TFA (1 ml), la mezcla se agitó hasta eliminar el grupo protector (2 h) (el progreso se siguió por HPLC). Se separó el TFA a vacío y se añadió disolución saturada de NaHCO_{3}. La mezcla se extrajo con EtOAc y los extractos combinados se secaron, se concentraron y se trituraron primero con Et_{2}O para dar el compuesto del título (46 mg, 53%). Tiempo de retención en HPLC analítica = 0,51 min (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 324.
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Ejemplos 3-37
(Los ejemplos 3-6, 10 a 37 no se reivindican)
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17 
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Los compuestos 3-37 se prepararon usando un procedimiento similar al del compuesto del ejemplo 2, usando las correspondientes aminas.
18
19
20
21
22 
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Ejemplos 38-121
(Los ejemplos 69, 76, 77 y 102 no se reivindican)
23 
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Procedimiento uno:
Los compuestos (con condiciones de HPLC de la nota (a)) se prepararon por el siguiente procedimiento estándar.
En un vial de 3,7 ml se añadieron el compuesto 1D (55,0 mg, 0,16 mmol), anilina (0,16 mmol, 1,0 eq) y CH_{3}CN (1 ml). La mezcla se agitó a 65ºC durante la noche. A esta mezcla se añadió éster de terc-butilo del ácido piperidin-4-il-carbámico (34,9 mg, 0,17 mmol) seguido de la adición de DIEA (28 \mul, 0,16 mmol). La reacción se continuó a 65ºC durante 3 h. La mezcla se concentró; el residuo se purificó por HPLC preparativa, y se recogió la fracción deseada y se concentró. El residuo obtenido se secó con alto vacío durante la noche.
Al residuo anterior se añadieron CH_{2}Cl_{2} (1,5 ml) y TFA (0,2 ml), y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró y se secó a vacío con Speed-Vac durante la noche para dar el producto sólido. Se usó HPLC adicional solo cuando el sólido estaba impuro.
Procedimientos dos:
Los compuestos (con condiciones de HPLC de la nota (a)) se prepararon por el siguiente procedimiento estándar.
Una mezcla del compuesto 1D (75 mg, 0,216 mmol) y anilinas (1,0 eq, 0,216 mmol) en N,N-dimetilacetamida (0,5 ml) en un vial pequeño, se calentó a 70ºC durante 3-5 h hasta obtenerse una disolución transparente. Se usó HPLC para seguir el progreso de la reacción. La mezcla de reacción se enfrió a t.a. y se añadió éster de terc-butilo del ácido piperidin-4-il-carbámico (43 mg, 0,216 mmol) seguido de N,N-diisopropiletilamina (75 \mul). La mezcla de reacción se calentó otra vez a 70ºC durante la noche. Tras enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (0,5 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadió TFA (1,0 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se separó el disolvente a presión reducida (Speed-Vac) y el residuo se recogió en metanol y se purificó por HPLC preparativa para dar el producto deseado.
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24
25
26
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28
29
30
31
32
33
34 
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Condiciones de HPLC:
(a): (Columna YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, durante 4 minutos, 3 ml/min, seguimiento a 220 nm)
(b): (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) Nota: Los ejemplos 97-99, 101 y 104 se han suprimido de la tabla como duplicados.
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Ejemplos 122-132
(El ejemplo 125 no se reivindica)
35 
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Los compuestos 122-132 se prepararon a partir del compuesto 1D, 3-cloro-4-fluorofenilamina y las aminas correspondientes o aminas protegidas con Boc por una vía análoga a la usada para preparar los compuestos 38-121.
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36
37 
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Ejemplo 133
5-[(4-Amino-1-piperazinil)metil]-N-(3-cloro-4-fluorofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina 
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38 
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133A Preparación de (5-{[bis-(2-cloroetil)amino]metil}pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-il)-(3-cloro-4-fluorofenil)amina 
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39 
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Una mezcla del compuesto 1E (50 mg, 0,1 mmol), hidrocloruro de bis-(2-cloroetil)amina (18 mg, 0,1 mmol), DIEA (36 \mul, 0,2 mmol) en CH_{3}CN (0,5 ml) se calentó a 60ºC durante 3 h. La mezcla se enfrió a t.a. y se concentró para dar el compuesto 133A que se usó directamente en la siguiente etapa. El compuesto 133A tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,986 min (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 416.
El compuesto 133A bruto de la última etapa se recogió en N_{2}H_{4} anhidra sola (0,5 ml) y se calentó a 100ºC durante varias horas. La mezcla se enfrió a t.a., se diluyó H_{2}O con y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre_{ }Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por HPLC para dar, después de neutralización y extracción (con CH_{2}Cl_{2}), el compuesto 133 (38,8 mg, 100% para las 2 etapas). Tiempo de retención en HPLC analítico =1,709 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+ 1 = 376.
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Ejemplo 134
(No se reivindica)
(3-Cloro-4-fluorofenil)-[5-(morfolin-2-ilmetoximetil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-il]amina 
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40
134A Preparación de éster de terc-butilo del ácido 2-(4-metilsulfanil-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetoximetil)morfolina-4-carboxílico 
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41 
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Una disolución del compuesto 1A (1,0 g, 5,6 mmol) en CCl_{4} (50 ml) se purgó con nitrógeno durante 1 h. Se añadió peróxido de benzoilo (270 mg, 1,12 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 86ºC. Se añadió N-bromosuccinimida (1,04 g, 5,88 mmol) en una porción. Después de 30 minutos, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró, se volvió a disolver en tolueno (10 ml) y se trató con éster de terc-butilo del ácido 2-hidroximetil-morfolina-4-carboxílico (1,5 g, 6,9 mmol). La disolución se calentó a 110ºC durante 8 h, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró. La cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc/Hexanos al 20%) proporcionó el producto en forma de un aceite amarillo claro que cristalizó al reposar (770 mg, 32%). HPLC t_{R}= 3,783 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm). CL/EM (M+H) =
178.
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134B Preparación de éster de terc-butilo del ácido 2-[4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetoximetil]morfolina-4-carboxílico 
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42 
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Una disolución de éster de terc-butilo del ácido 2-(4-metilsulfanil-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetoximetil)morfolina-4-carboxílico (60 mg, 0,15 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) se enfrió a 0ºC y se trató con una disolución de mCPBA (56 mg, 0,32 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml). La reacción se agitó durante 15 minutos a 0ºC y después se calentó a temperatura ambiente. A esta disolución se añadió 3-cloro-4-fluoroanilina y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La disolución naranja resultante se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}, y después disolución acuosa saturada de NaCl. La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. La HPLC de fase inversa preparativa dio el compuesto deseado (30 mg, 41%). HPLC t_{R}= 4,383 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm). CL/EM (M+H) = 492.
Una disolución del compuesto 134B (30 mg, 0,06 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) a 0ºC se trató gota a gota con ácido trifluoroacético (0,3 ml). La reacción se agitó durante 2 h y después se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}. La capa orgánica se separó, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró. El compuesto bruto se purificó por cromatografía radial (placa de 1 mm, de MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 15% a MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 30%) para dar el compuesto 134 (17 mg, 67%). HPLC t_{R}= 2,83 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm). CL/EM (M+H) = 392.
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Ejemplo 135
4-Amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]-(3R,4R)-rel-3-piperidinol
43 
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Compuesto 135A
44
A una disolución de 1,2,3,6-tetrahidropiridina (1,66 g, 20,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (10 ml) se añadió trietilamina (3,35 ml, 24,0 mmol), seguido de una disolución de N-(benciloxicarboniloxi)succinimida (5,23 g, 21,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (50 ml) y se lavó con ácido cítrico al 10%, disolución saturada de NaHCO_{3}, salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a presión reducida proporcionó 4,34 g del compuesto 135A: (100%) en forma de un aceite. Tiempo de retención en HPLC analítica = 2,996 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,20-7,35 (m, 5H), 5,88 (s ancho, 1H), 5,60-5,78 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 3,99 (t, J = 2,64, 2H), 3,59 (t, J = 5,69, 2H), 2,18 (m, 2H).
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Compuesto 135B
45
A una disolución del compuesto 135A (1,1 g, 5,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (10 ml) enfriada a 0ºC se añadió una disolución de m-CPBA al 75% (1,38 g, 6,0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 15 min, y después a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (20 ml) y se lavó con Na_{2}S2O_{3} sat., NaHCO_{3} sat., salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhido. La concentración a presión reducida dio 1,14 g (98%) del compuesto 135B en forma de un aceite. Tiempo de retención en HPLC analítica = 2,279 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,20-7,36 (m, 5H), 5,05 (s, 2H), 3,80-3,96 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,47 (m, 1H), 3,22 (s ancho, 1H), 3,07-3,20 (m, 2H)2,00 (m, 1H), 1,87 (m, 1H).
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Compuestos 135C y 135D 
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46 
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A una disolución del Compuesto 135B (233 mg, 1,0 mmol) en DMF seca (2 ml) se añadió una disolución de azida sódica (100 mg, 1,5 mmol) en una mezcla de acetona-agua 2:1 (2 ml). La mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante la noche. Los disolventes se separaron a presión reducida y el residuo se recogió en EtOAc (20 ml), se lavó con agua, LiCl al 10% y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a presión reducida dio un aceite. La cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo: 8:2 a 7:3) en gel de sílice, dio 180 mg del compuesto 135C (eluye primero, el isómero mayoritario) en forma de un aceite y 98 mg del compuesto 135D (eluye más tarde) en forma de un aceite.
Compuesto 135C: RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,28-7,40 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 4,14 (dd, J1 = 4,03, J2 = 13,44, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,38 (m, 1H), 3,00 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 2,70 y 2,40 (m parcial, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,50 (m, 1H).
Compuesto 135D: RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,20-7,35 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,25 y 4,10 (m parcial, 1H), 3,99 (d, J = 13,44, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 2,85 (t, J = 2,69, 1H), 2,73 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,45 (m, 1H).
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Compuesto 135E 
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47 
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A una disolución del compuesto 135C (180 mg, 0,65 mmol) en THF (5 ml) se añadió agua (0,05 ml) y trifenilfosfina (340 mg, 1,3 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 6 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió EtOAc (20 ml) a la mezcla de reacción. Las capas orgánicas se extrajeron con HCl 1,0 N (10 ml x 2) y las capas acuosas combinadas se lavaron una vez con EtOAc (5 ml). Se añadió NaOH 1,0 N a la capa acuosa para llegar a pH 10,0 y la mezcla se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a presión reducida dio 165 mg de la amina intermedia en forma de un aceite
incoloro.
A una disolución de 165 mg de la amina intermedia en CH_{2}Cl_{2} seco (4 ml) se añadió trietilamina (0,11 ml, 0,78 mmol), seguido de Boc_{2}O (156 mg, 0,72 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con NaHCO_{3} sat. y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La purificación por cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 9:1 a 8:2) en gel de sílice proporcionó 170 mg del compuesto 135E en forma de un sólido blanco. Tiempo de retención en HPLC analítica = 2,859 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 351^{+}. RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,29-7,40 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 4,61 (s ancho, 1H), 4,32 (s ancho, 1H), 3,90-4,30 (m, 1H), 3,30-3,60 (m, 2H), 2,80 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,40
(m, 1H).
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Compuesto 135F
48
Una disolución del compuesto 135E (170 mg) en 5 ml de MeOH que contiene 10 mg de Pd(OH)_{2} se agitó en atmósfera de hidrógeno (balón) durante la noche. El catalizador se separó por filtración y se aclaró con MeOH. Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para dar 138 mg del compuesto 135F en forma de un aceite. Tiempo de retención en HPLC analítica = 1,270 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+ 1 = 217^{+}.
Compuesto 135G
49
El compuesto 135G se preparó a partir del compuesto 135D en un procedimiento similar al compuesto 135E. Tiempo de retención en HPLC analítica = 2,849 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,40-7,52 (m, 5H), 5,20 (s, 2H), 4,30 (m, 2H), 3,40 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,67 (m, 2H), 2,08 (m, 1H), 1,45-1,96 (m, 3H), 1,45 (s, 9H).
Compuesto 135H
50
El compuesto 135H se preparó a partir del compuesto 135G en un procedimiento similar al compuesto 135F. Tiempo de retención en HPLC analítica = 1,380 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm).
El compuesto 135 se preparó de una forma similar al ejemplo 1 usando el compuesto 135F y 1E. El compuesto 135 es un sólido con un tiempo de retención en HPLC analítica =1,666 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 391^{+}. RMNH (CDCl_{3}): 11,62 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,89 (dd, J_{1} = 2,60, J_{2} = 6,61, 1H), 7,48 (d, J = 2,60, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,15 (t, J = 8,72, 1H), 6,51 (d, J = 2,60, 1H), 3,82 (AB, J = 13,60, \Deltav= 26,94, 2H), 3,33 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,08 (d, J = 12,09, 1H), 2,57 (m, 1H), 2,22 (t, J = 12,03, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,97 (m, 1H), 1,43 (m, 1H).
Alternativamente, El compuesto 135 se puede preparar como se muestra a continuación.
Preparación del compuesto 135J
51
El compuesto 135J se preparó de acuerdo con un procedimiento publicado en la bibliografía: Jacob Szmuszkovicz y col., Heterocycles, 1994, 39 (1), 163-170.
Preparación del compuesto 135K
52
El compuesto 135JK se preparó de acuerdo con un procedimiento publicado en la bibliografía: Jacob Szmuszkovicz y col., Heterocycles, 1994, 39 (1), 163-170.
Preparación del compuesto 135L
53
El compuesto 135L se preparó a partir del compuesto 135K de un modo similar al compuesto 1C. Tiempo de retención en HPLC analítica = 2,323 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm). RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 4,11 (dd, J1 = 3,09, J2 = 13,29, 1 H), 3,95 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,38 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,79 (dd, J1= 9,27, J2 = 13,29, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,46 (s, 9H).
Preparación del compuesto 135M
54
A una disolución del compuesto 135L (0,6 g, 2,48 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco, enfriada a 0ºC, se añadió ácido trifluoroacético (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 15 min, después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. El disolvente y el TFA se separaron a presión reducida y el residuo se recogió en CH_{2}Cl_{2} (20 ml). La capa orgánica se lavo con NaHCO_{3} sat. y la capa acuosa se sobresaturó con NaCl sólido, y se volvió a extraer con EtOAc (15 ml x 10). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio 350 mg del compuesto 135M en forma de un aceite. RMN ^{1}H (CDCl_{3} + CD_{3}OD): 3,55 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,18 (dd, J1 = 3,95, 5 J2 =12,63, 1H), 3,07 (d de t, J1 = 12,90, J2 = 4,78, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,63 (dd, J1 = 8,28, J2 = 12,58, 1H), 2,10 (m, 1H), 1,57 (m, 1H).
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Preparación del compuesto 135N 
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55 
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El compuesto 135N se preparó de una forma similar al compuesto 1F (usando el Procedimiento dos) en el ejemplo 1, partiendo del compuesto 135M y 1E del ejemplo 1. El compuesto 135N es un sólido y tiene un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,099 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 417^{+}.
A una disolución del compuesto 135N preparado antes (0,5 mmol) en una mezcla de THF (5 ml) y agua (0,05 ml) se añadió trifenilfosfina (262 mg, 1,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 8 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se evaporó el disolvente a presión reducida y el residuo se purificó directamente por cromatografía ultrarrápida (CH_{2}Cl_{2}-MeOH-NH_{4}OH: 95:5:0,5) en gel de sílice para dar 166 mg del compuesto 135 en forma de un sólido.
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Ejemplo 136
3-Amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]-(3R,4R)-rel-4-piperidinol 
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56 
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El compuesto 136 se preparó de una forma similar al Ejemplo 1 usando el compuesto 135H y 1E. El compuesto 136 es un sólido con un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,953 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+}+ 1 =391^{+}.
\newpage
Ejemplo 137
4-Amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]-(3R,4R)-(+)-rel-3-piperidinol
57
y
Ejemplo 138
4-Amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]-(3R,4R)-(-)-rel-3-piperidinol 
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58 
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El compuesto 135 racémico se resolvió usando una HPLC preparativa quiral de fase normal (Chiralpak AD) usando hexano-alcohol isopropílico-dietilamina (80:20:0,05) como fase móvil. El compuesto 137 (enantiómero A) y el compuesto 138 (enantiómero B) se obtuvieron en forma de enantiómeros individuales con ee >99%.
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Ejemplo 139
N-(3-Cloro-4-fluorofenil)-5-[[4-[(2,2-dimetilpropil)amino]-1-piperidinil]metil]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina 
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59 
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A una disolución del compuesto del ejemplo 1 (19 mg, 0,05 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (1 ml) se añadió ácido acético glacial (0,05 ml), seguido de 3,3-dimetilbutiraldehído (0,008 ml, 0,073 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (25 mg, 0,12 mol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2}, se lavó con agua, NaHCO_{3} sat., salmuera y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (CH_{2}Cl_{2}-MeOH-NH_{4}OH: de 98:2:0,2 a 98:5:0,5) en gel de sílice, dio el compuesto 139 en forma de un aceite. Tiempo de retención en HPLC analítica = 1,976 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1= 445^{+}.
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Ejemplo 140
N-(3-Cloro-4-fluorofenil)-5-[[4-(propilamino)-1-piperidinil]metil]-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
60
El compuesto 140 se preparó de una forma similar al compuesto 139 a partir del compuesto 1. El compuesto 140 es un sólido y tiene un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,689 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 417^{+}.
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Ejemplo 141
1-[[4-[(3-Cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]-4-piperidinol
61
El compuesto 141 se preparó de una forma similar al compuesto 1 a partir del compuesto 1E del ejemplo 1. El compuesto 141 es un sólido y tiene un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,803 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+}+ 1 =376^{+}.
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Ejemplo 142
(No se reivindica)
trans-4-[4-(3-Cloro-4-fluorofenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]ciclohexanol
62
A. Preparación de 4-cloro-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-5-carbaldehído
63
Una disolución de 4-cloro-5-metil-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina (1,68 g, 10 mmol) en CCl_{4} se burbujeó con N_{2} durante 20 min y después se añadieron NBS (3,74 g, 21 mmol) seguido de peróxido de benzoilo (242 mg, 1 mmol). La mezcla de reacción se puso en un baño de aceite a 100ºC y se calentó a reflujo durante 3 h. Después de enfriar a t.a., esta se filtró y se separó el disolvente. El residuo se suspendió en CH_{3}OH (100 ml) y se añadió NaHCO_{3} sólido (5 g). La mezcla de reacción se agitó enérgicamente durante 1 h, se filtró y se separó el disolvente. El aceite residual se volvió a suspender en DCM, se filtró y se concentró para dar el dimetilacetal bruto que se trató con DCM (20 ml) / H_{2}O (20 ml) / TFA (1 ml). Después de agitar enérgicamente durante 1,5 h, se neutralizó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} y se extrajo con DCM. Los extractos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se concentraron y se cromatografiaron (columna de gel de sílice de (3 x 15 cm eluida con DCM) para dar el compuesto del título (1,02 g, 56%) en forma de un sólido. EM: 182 (M+H)^{+}; HPLC Tiempo ret.: 0,79 min (Columna Xterra 3,0 x 50 mm S7, gradiente 2 min, 5 ml/min);
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B. Preparación de [4-(terc-butildimetilsilaniloxi)ciclohexil]-(4-cloro-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)metanol
64
Una disolución de bromuro de trans-4-terc-butildimetilsilioxi-ciclohexilmagnesio (Bioorg. and Med. Chem., 1996, 6, 201) en THF (4 equiv) se añadió lentamente a una disolución enfriada con hielo de 4-cloro-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-5-carbaldehído (1,05 g, 5,8 mmol) en THF (15 ml). Después de 1 h, se añadió una disolución acuosa saturada de NH_{4}Cl (15 ml) y la capa acuosa se extrajo con EtOAc/hexano (1:1) (50 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. El material bruto se purificó por cromatografía radial (placa de gel de sílice de 4 mm, elución en gradiente con EtOAc en DCM de 0 a 15%) para dar el compuesto del título: 189 mg del isómero cis, 496 mg del isómero trans y 415 mg de mezcla (rendimiento total 48%, la relación cis_{:}trans es aproximadamente 1:4). isómero cis: EM: 396 (M+H)+; Tiempo ret. HPLC: 2,10 min (Columna Xterra 3,0 x 50 mm S7, gradiente 2 min, 5 ml/min); isómero trans: EM: 396 (M+H)+; Tiempo ret. HPLC 2,08 min (Columna Xterra 3,0 x 50 mm S7, gradiente 2 min, 5 ml/min).
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C. Preparación de [4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-[4-(1-metil-1-trimetilsilaniletoxi)ciclohexil]metanol
65
Una mezcla de trans-[4-(terc-butildimetilsilaniloxi)ciclohexil]-(4-cloro-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)-metanol (840 mg, 2,13 mmol), 3-cloro-4-fluoro-fenilamina (309 mg, 2,13 mmol) y NaHCO_{3} (536 mg, 6,39 mmol) en CH_{3}CN (10 ml) se calentó a 70ºC durante la noche. Se separó el disolvente y el residuo se suspendió en DCM, se lavó con agua y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. La separación del disolvente seguido de cromatografía radial (placa de gel de sílice de 4 mm, gradiente de elución con NH_{3} en MeOH (2 N) en DCM de 0 a 2%) proporcionaron el compuesto del título (612 mg, 57%) en forma de un sólido. EM: 506 (M+H)^{+}; Tiempo ret. HPLC: 2,29 min (Columna Xterra 3,0 x 50 mm S7, gradiente 2 min, 5 ml/min).
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D. Preparación de trans-4-[4-(3-Cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]ciclohexanol
Una mezcla de [4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]-[4-(1-metil-1-trimetilsilaniletoxi)ciclohexil]metanol (448 mg, 0,887 mmol), trietilsilano (1,03 g, 8,87 mmol) en TFA (8 ml) en atmósfera de N_{2} en un matraz de presión se calentó a 75ºC durante la noche. Se separaron los disolventes y el residuo se disolvió en CH_{3}OH (10 ml) y se añadió Na_{2}CO_{3} sólido (2,0 g). Después de agitar enérgicamente durante 1 h, se separó el disolvente y el residuo se repartió entre DCM (200 ml) y H_{2}O (50 ml). Se separó la fase orgánica, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se separó el disolvente. La purificación por cromatografía radial (placa de gel de sílice de 2 mm, gradiente de elución con NH_{3} en MeOH (2N) en DCM de 0 a 4%) dio el compuesto del título (209 mg, 63%) en forma de un sólido: EM: 375
(M+H)^{+}; Tiempo ret. HPLC: 1,49 min (Columna Xterra 3,0 x 50 mm S7, gradiente 2 min, 5 ml/min).
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Ejemplo 143
cis-4-[4-(3-Cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]-ciclohexanol
66
De forma similar, se preparó el compuesto del título a partir de cis-[4-(terc-butildimetilsilaniloxi)ciclohexil]-(4-cloropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)-metanol: 375 (M+H)^{+}; Tiempo ret. HPLC: 1,56 min (columna Xterra 3,0 x 50 mm S7, gradiente 2 min, 5 ml/min).
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Ejemplo 144
(No se reivindica)
4-[4-(3-Cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]-ciclohexanona
67
Una disolución de cis-[4-(terc-butildimetilsilaniloxi)ciclohexil]-(4-cloro-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)-metanol (53 mg, 0,14 mmol), N-óxido de 4-metilmorfolina (25 mg, 0,21 mmol), TPAP (5 mg, 0,1 eq) y tamices moleculares 4A en polvo (100 mg) en DCM (3 ml) en atmósfera de N_{2} se agitó a t.a. Después de 5 h, esta se filtró y se separó el disolvente. La cromatografía radial (placa de gel de sílice de 1 mm, elución en gradiente con NH_{3} en MeOH (2N) en DCM de 0 a 5%) dio el compuesto del título (25 mg, 47%) en forma de un sólido: EM: 373 (M+H)+; Tiempo ret. HPLC: 1,50 min (Xterra 3,0 x 50 mm S7 columna, gradiente 2 min, 5 ml/min).
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Ejemplo 145
(No se reivindica)
4-Amino-1-[4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]ciclohexanol
68
A una disolución de 4-[4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-ilmetil]-4-hidroxiciclohexanona (24 mg, 0,06 mmol) en MeOH seco (0,5 ml) se añadieron tamices moleculares 3A en polvo (24 mg) (10 eq), NH_{4}OAc (48 mg, 0,06 mmol), y NaCNBH_{3} (4 mg, 0,06 mmol); la reacción se agitó en atmósfera de nitrógeno durante 12 h. La mezcla de reacción se filtró y se añadió una disolución de NaOH al 15%. Después de 10 min, la mezcla se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con agua. La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se separó el disolvente. El material se purificó y se separó por HPLC preparativa para dar el compuesto del título (3,5 mg, 15%) y el isómero cis (7,9 mg, 32%). El compuesto del título: EM: 390 (M+H)^{+}; Tiempo ret. HPLC: 2,070 min (columna XTERRA 4,6 x 50 mm S5, gradiente 3 min, 4 ml/min). El isómero cis: EM: 390 (M+H)^{+}; Tiempo ret. HPLC: 2,190 min (columna XTERRA 4,6 x 50 mm S5, gradiente 3 min, 4 ml/min).
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Ejemplo 146
(3R,4R)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol
69
Preparación de los compuestos 146A y 146B
Éster de terc-butilo del ácido (3R,4R)-4-azido-3-hidroxipiperidina-1-carboxílico (146A):
70
Éster de terc-butilo del ácido (3S,4S)-4-azido-3-hidroxipiperidina-1-carboxílico (146B):
71
Los compuestos 146A y 146B se obtuvieron a partir del compuesto 135L por resolución óptica usando una HPLC preparativa quiral de fase normal (Chiralpak AD) usando MeOH-EtOH (50:50) como fase móvil. El compuesto 146A (eluye primero) y el compuesto 146B (eluye segundo) se obtuvieron como enantiómeros individuales con ee >99%. La estereoquímica absoluta del compuesto 146A (3R,4R) se determinó por un análisis cristalográfico de rayos X único.
Preparación del compuesto 146C
72
A una disolución del compuesto 146A (1,76 g, 7,26 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (15 ml) enfriada a 0ºC, se añadió ácido trifluoroacético (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 15 min, después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. El disolvente y el TFA se separaron a presión reducida y el residuo se evaporó formando el azeótropo varias veces con CH_{2}Cl_{2} para dar el compuesto 146C en forma de la sal de TFA.
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Preparación del compuesto 146D 
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73
El compuesto 146D se preparó, en forma de una sal de TFA, de una forma similar al compuesto 146C usando el compuesto 146B.
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Preparación del compuesto 146E 
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74
El compuesto 146E se preparó de una forma similar al ejemplo 105 (usando el procedimiento uno) sustituyendo el compuesto 146C por el éster de terc-butilo del ácido piperidin-4-il-carbámico. El compuesto 146E es un sólido y tiene un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,019 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 395^{+}.
75
El compuesto 146 se preparó a partir del compuesto 146E de una forma similar al compuesto 135. El compuesto 146 es un sólido, con un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,213 min (columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 369^{+}. El exceso enantiomérico (ee) del compuesto 146 es >99% (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros, EtOH-MeOH-Et_{2}NH: 50:50:0,1).
Preparación alternativa del compuesto 146 Preparación del compuesto 146F
76
A una disolución de la sal de HCl de 1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiperidina (227 g) en 570 ml de agua, se añadió K_{2}CO_{3} sólido (235 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se extrajo con tolueno (50 ml x 3) y los extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4}. Se filtraron para separar el MgSO_{4} y el filtrado se puso en un matraz RB de 3 bocas, de 3 litros. Se añadió K_{2}CO_{3} (22,7 g) al filtrado y la mezcla se calentó a reflujo suave (temperatura del baño 110ºC). Se añadió lentamente cloroformiato de etilo (318 ml) a lo largo de 2,5 h por un embudo de adición (la reacción es extremadamente exotérmica, por lo que se recomienda encarecidamente la adición lenta con agitación magnética). Tras completarse la adición, la mezcla se calentó a reflujo durante 2,0 h adicionales y se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con agua, salmuera y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración y concentración a vacío dieron 188,6 g (72%) del compuesto 146F en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}):
Preparación del compuesto 146G (racémico)
77
A una disolución del compuesto 146F (178,2 g, 1,15 mol) en 2 litros de CH_{2}Cl_{2} seco a 0ºC se añadió m-CPBA sólido (386 g, 1,72 mol, 77% max) en pequeñas porciones. La mezcla de reacción se agitó durante 1,0 h a 0ºC y después durante una noche a temperatura ambiente. El precipitado se separó por filtración y la torta de filtración se aclaró con CH_{2}Cl_{2}. El filtrado y los líquidos de lavado combinados se lavaron con Na_{2}S_{2}O_{3} al 20% (3 litros x 3), disolución saturada de NaHCO_{3} (3 litros x 3) y se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La filtración seguida de concentración a vacío dieron 170 g del compuesto 146G en forma de un aceite. Este material se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.
Preparación del compuesto 146H (quiral)
78
La mezcla del compuesto 146G (140 g, 0,818 mol), NaN_{3} (68,9 g, 1,06 mol) y NH_{4}Cl (56,7 g, 1,06 mol) en etanol (600 ml) y agua (150 ml) se calentó a 70ºC durante la noche. Tras enfriar a temperatura ambiente, el sólido se separó por filtración y se aclaró con etanol. Los filtrados combinados se concentraron a vacío hasta un pequeño volumen (aproximadamente 80 ml), después se diluyeron con agua (500 ml) y se extrajeron con EtOAc (500 ml x 4). Los extractos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La filtración seguida de concentración a vacío y purificación por cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc de 7:3 a 6:4) en gel de sílice dieron el compuesto 146G en las siguientes fracciones: 80,7 g de la primera fracción (AP: >98%), 22,7 g de la segunda fracción (AP: 92-95%) y 15,8 g de la tercera fracción (AP: <60%) en forma de un aceite. Este material se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. La primera y segunda fracciones se combinaron y se sometieron a resolución óptica usando HPLC preparativa quiral con las siguientes condiciones: columna Chiralpak AD, eluida con MeOH-EtOH (1:1). Se recogió el primer pico que eluía (Rt = 5,605 min) para dar 47,52 g del compuesto 146H, con ee >99%.
Preparación del compuesto 146I (quiral)
79
A una disolución del compuesto 146H (36,42 g, 0,17 mol) en 480 ml de EtOH se añadió una disolución de KOH (112 g, 1,7 mol, 85%) en 240 ml de agua. La mezcla se calentó a reflujo durante 9,0 h y después el progreso de la reacción se siguió por TLC. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a vacío para dar una pasta. Se añadió NaCl sólido y la mezcla se extrajo con EtOAc (500 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La filtración seguida de separación del disolvente a presión reducida dio 23 g (77%) del compuesto 146I bruto en forma de un sólido. La trituración con éter dietílico (250 ml) dio 18,53 g del compuesto 146I en forma de un sólido (AP: 99%). Las aguas madre se concentraron a vacío, se añadió NaCl sólido y se volvieron a extraer con más EtOAc (250 ml x 4) para proporcionar 4,2 g adicionales del compuesto 146I bruto (AP: <85%).
El compuesto 146 se preparó a partir del compuesto 146I siguiendo el procedimiento usado para la preparación del compuesto 146E.
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Ejemplo 147
(3S,4S)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]-3-piperidin-3-ol
80
Preparación del compuesto 147A
81
El compuesto 147A se preparó de una forma similar al ejemplo 105 (usando el procedimiento uno) sustituyendo el compuesto 130D por el éster de terc-butilo del ácido piperidin-4-il-carbámico. El compuesto 147A es un sólido y tiene un tiempo de retención en HPLC analítica = ? min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 =
395^{+}.
El compuesto 147 se preparó a partir del compuesto 147A de una forma similar al compuesto 135. El compuesto 147 es un sólido, con un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,213 min (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 369^{+}. El exceso enantiomérico (ee) del compuesto 147 es >99% (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros, EtOH-MeOH-Et_{2}NH: 50: 50:0,1).
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Ejemplo 148
(3R,4R)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxi-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol 
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82 
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El compuesto 148 se preparó a partir del compuesto 146C de una forma similar al compuesto 135. El compuesto 148 es un sólido con un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,187 min (columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 387^{+}. El exceso enantiomérico (ee) del compuesto 148 es >99% (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros, EtOH-MeOH-Et_{2}NH: 50: 50:0,1).
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Ejemplo 149
(3S,4S)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxi-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]-piperidin-3-ol 
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83 
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El compuesto 149 se preparó a partir del compuesto 146D de una forma similar al compuesto 135. El compuesto 149 es un sólido, con un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,187 min (columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 387^{+}. El exceso enantiomérico (ee) del compuesto 149 es >99% (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros, EtOH-MeOH-Et_{2}NH: 50: 50:0,1).
\newpage
Ejemplos 150-200
Los compuestos 150-200 (con condiciones de HPLC de la nota (b)) se prepararon de forma similar a partir del compuesto 146I como el compuesto 146. (Los ejemplos 195, 198 y 200 no están en las reivindicaciones)
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84 
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Ejemplo 201
rac-(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol 
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92 
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201A. Preparación de (\pm)-4-azido-3-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butilo 
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93 
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Se añadió DMSO anhidro (0,28 ml, 3,79 mmol) a una disolución agitada de cloruro de oxalilo (0,172 ml, 1,96 mmol) en 6 ml de CH_{2}Cl_{2} seco a -78ºC en atmósfera de argón. Después de 10 min, se añadió gota a gota una disolución del compuesto 135L (396 mg, 1,63 mmol) en 4,5 ml de CH_{2}Cl_{2} seco y la mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 30 min. Se añadió trietilamina (1,38 ml, 10,0 mmol) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Se añadieron 2,0 ml de disolución tampón a pH 7,0 y la mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (x3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio el compuesto 201A bruto, en forma de un aceite que se usó inmediatamente en la siguiente etapa de reacción. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,30 (d, J = 17,84, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,90-4,00 (m 1H), 3,45 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 1,47 (s, 9H).
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201B. Preparación de (\pm)-4-azido-3-hidroxipiperidina-1-carboxilato de terc-butilo 
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94 
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A una disolución del compuesto 201A preparado antes en THF seco (2 ml) enfriada a -78ºC se añadió L-Selectride (1,0 M en THF, 0,98 ml, 0,98 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 2,0 h. Se añadió disolución saturada de NH_{4}Cl (2 ml) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron una vez con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc 4:1) en gel de sílice dio 44 mg del compuesto 201B en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 mHz, CDCl_{3}): 3,84 (m, 1H), 3,69 (m, 1H), 3,58 (m, 2H), 3,40 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 1,96 (m, 1H), 1,73 (m, 1H), 1,46 (s, 9H).
201C. Preparación de (\pm)-4-azidopiperidin-3-ol
95
El compuesto 201B (44 mg, 0,18 mmol) se trató con una mezcla de CH_{2}Cl_{2} y TFA (1:1,2 ml) durante 30 min. Los productos volátiles se separaron a presión reducida y el residuo se evaporó formando el azeótropo con heptano-CH_{2}Cl_{2} 3 veces, para dar una sal de TFA del compuesto 201C, que se usó inmediatamente en la siguiente reacción sin etapa de purificación adicional.
Preparación del compuesto 201D
96
El compuesto 201D se preparó en forma de un sólido a partir del compuesto 201C de una forma similar al compuesto 146E. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,795 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90%, durante 4 minutos que contiene TFA al 0,1%, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 395.
El compuesto 201 se preparó a partir del compuesto 201D de una forma similar al compuesto 146. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,169 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 369.
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Ejemplo 202A y 202B
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol (Enantiómero A, quiral)
97
y
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol (Enantiómero B, quiral) 
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98 
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El compuesto 202A (15 mg) y el compuesto 202B (15 mg) se obtuvieron por resolución óptica del compuesto 201 (30 mg) usando el siguiente procedimiento: columna preparativa quiral Chiralpak AD eluida con hexano-alcohol isopropílico-dietilamina (50:50:0,1) usando el gradiente con un caudal de 6,0 ml/min y detección a 220 nm. El primero pico eluido corresponde al compuesto 202A (tiempo de retención = 4,337 min) con ee% \geq 98%; el segundo pico eluido corresponde al compuesto 202B (tiempo de retención = 6,050 min) con ee% \geq 98%.
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Ejemplo 203
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-y} metil)piperidin-3-ol (quiral) 
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99 
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Preparación del compuesto 203A y 203B (Quiral) 
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100
101 
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A una disolución del compuesto 146G (100 g, 0,585 mol) en 2 litros de cloroformo, enfriada a -60ºC, se añadió gota a gota con un embudo de adición 196,5 ml de HBr al 48% mientras se mantenía la temperatura por debajo de -60ºC. Tras completarse la adición, la mezcla de reacción se agitó durante otra 1,0 h a -60ºC. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se lavó con agua (1 litro x 2) y se secó sobre MgSO_{4}. La filtración seguida de concentración a vacío dieron 134,2 g (91%) del compuesto bruto (mezcla racémica de 203A y 203B) en forma de un aceite. RMNH (400 MHz, CDCl_{3}): 4,25 (m, 1H), 4,15 (q, J = 7,10, 2H), 4,00 (m, 1H), 3,90 (s ancho, 1H), 3,75 (m, 1H), 2,85-3,15 (m, 2H), 2,32 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,28 (t, J = 7,10, 3H).
Los compuestos 203A y 203B se obtuvieron por resolución óptica de la mezcla racémica anterior por HPLC preparativa quiral de fase normal (Chirlapak AD) usando CH_{3}CN como fase móvil. Se obtuvieron 54,77 g del compuesto 203B (eluye primero, Rt = 5,861 min) y 53,71 g del compuesto 203A (eluye segundo, Rt = 8,719 min) como enantiómeros individuales con ee >99%. La estereoquímica absoluta del compuesto 203B (3R,4S) se asignó basándose en un análisis cristalográfico de rayos X único del compuesto 203.
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Preparación del compuesto 203C (Quiral)
102 
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A una disolución del compuesto 203A (53,7 g, 0,213 mol) en 250 ml de DMF, se añadió imidazol (21,8 g, 0,32 mol), seguido de cloruro de t-butildimetilsililo (38,5 g, 0,258 mol) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió éter dietílico (1 litro) a la mezcla de reacción, seguido de agua (1 litro) a 0ºC. Se separó la capa orgánica. La capa acuosa se extrajo con éter dietílico (1 litro x 2) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con LiCl al 10% (750 mL x 3), y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración seguida de concentración a vacío dieron el compuesto 203C bruto, en forma de un aceite que se usó inmediatamente sin purificación adicional.
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Preparación del compuesto 203D (Quiral)
103 
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El compuesto 203D se preparó a partir del compuesto 203B de una forma similar al compuesto 203C.
Preparación del compuesto 203E (Quiral) 
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104 
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A una disolución del compuesto 203C (0,213 mol) en 300 ml de DMSO se añadió NaN_{3} (15,3 g, 0,234 mol) y la mezcla se calentó a 85ºC durante 12 h. Se añadió NaN_{3} (15,0 g, 0,230 mol) adicional y la mezcla de reacción se calentó durante la noche. Tras enfriar a temperatura ambiente, se añadió agua helada a la mezcla de reacción y se extrajo con éter dietílico (1 litro x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron una vez con salmuera (1 litro) y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La filtración seguida de concentración a vacío dieron el compuesto 203E bruto, en forma de un aceite que se usó inmediatamente sin purificación adicional.
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Preparación del compuesto 203F (Quiral) 
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105 
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El compuesto 203F se preparó a partir del compuesto 203D de una forma similar al compuesto 203E.
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Preparación del compuesto 203G (Quiral) 
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106 
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La mezcla del compuesto 203E (0,213 mol) preparado antes y TBAFxH_{2}O (67 g, 0,255 mol) en 200 ml de THF se agitó a temperatura ambiente durante 3,0 h. Se añadió éter dietílico (1 litro) y la mezcla se lavó con agua (1 litro). La fase acuosa se extrajo con éter dietílico (1 litro x 2). Las capas orgánicas combinadas se lavaron una vez con agua (1 litro) y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (CH_{2}Cl_{2}-EtOAc: 4:1) en gel de sílice, dio 29,8 g del compuesto 203G en forma de un aceite. La segunda cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: 6,5:3,5) en gel de sílice dio 20 g (44%) del compuesto 203G en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,15 (q, J = 7,10, 2H), 3,86 (s ancho, 1H), 3,70 (s ancho,1H), 3,65 (m, 1H), 3,47(dd, J = 3,20, J = 13,62,1 H), 3,35 (m, 1H), 2,02 (m, 1H), 1,79 (s ancho,1H), 1,28 (t, J = 7,10, 3H).
Preparación del compuesto 203H (Quiral) 
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107 
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El compuesto 203H se preparó a partir del compuesto 203F de una forma similar al compuesto 203G.
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Preparación del compuesto 203I (Quiral) 
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108 
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El compuesto 203I se preparó a partir del compuesto 203G de una forma similar al compuesto 146I. El compuesto 203I es un sólido con ee \geq 99%. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 3,80 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,04 (m, 2H), 2,72 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,75 (m, 1H).
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Preparación del compuesto 203J (Quiral) 
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109 
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El compuesto 203J se preparó a partir del compuesto 203H de una forma similar al compuesto 146I. El compuesto 203J es un sólido con ee \geq 99%.
El compuesto 203 se preparó a partir del compuesto 1B, meta-metilanilina y el compuesto 203I de una forma similar al compuesto 146. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítico = 1,278 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 353.
\newpage
Ejemplos 204-211
Los compuestos 204-211 (con las condiciones de HPLC de la nota (b)) se prepararon de forma similar, a partir del compuesto 1B, las correspondientes anilinas y el compuesto 203I, como se usó para el compuesto 146.
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110 
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111
112 
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Ejemplos 212-219
Los compuestos 212-219 (con las condiciones de HPLC de la nota (b)) se prepararon de forma similar, a partir del compuesto 1B, las correspondientes anilinas y el compuesto 203J, como se usó para el compuesto 146.
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113 
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114
115 
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Ejemplo 220
Carbamato de (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo
116
Preparación del compuesto 220A (Quiral)
117 
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A una disolución del compuesto 146A (121 mg, 0,5 mmol) en 1 ml de CH_{2}Cl_{2} seco, enfriada a 0ºC, se añadió isocianato de tricloroacetilo (0,075 ml, 0,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h. Se añadió MeOH (0,5 ml) y la mezcla de reacción se concentró a vacío para dar el compuesto 220A bruto en forma de una espuma. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 8,35 (s ancho, 1H), 4,67 (s ancho, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,25 (m, 2H), 2,02 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).
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Preparación del compuesto 220B (Quiral)
118 
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A una disolución del compuesto 220A (0,5 mmol) en 3 ml de MeOH seco se añadió una disolución acuosa de K_{2}CO_{3} al 20% (2 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió agua (15 ml) y el MeOH se separó por evaporación en rotavapor. La mezcla se extrajo con EtOAc (x2) y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio el compuesto 220B bruto en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,70 (s ancho, 2H), 4,50 (m, 1H), 3,90 (s ancho, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,03 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 1,50 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).
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Preparación del compuesto 220C (Quiral)
119 
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Una mezcla del compuesto 220B (0,5 mmol) en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} seco y 5 ml de TFA se agitó a 0ºC durante 1 h. La mezcla se concentró a vacío, se evaporó formando el azeótropo varias veces con CH_{2}Cl_{2}-MeOH-hexano y se secó a vacío para dar el compuesto 220C bruto en forma de un aceite.
Preparación del compuesto 220D (Quiral) 
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120 
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El compuesto 220D se preparó a partir del compuesto 220C de una forma similar al compuesto 146E. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítico = 1,793 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 438.
El compuesto 220 se preparó a partir del compuesto 220D de una forma similar al compuesto 146. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítico = 1,310 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 412.
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Ejemplos 221-227
Los compuestos 221-227 (con las condiciones de HPLC de la nota (b)) se prepararon de forma similar al compuesto 1B, las correspondientes anilinas y el compuesto 220C, como el compuesto 146.
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121
122 
\newpage
Ejemplo 229
Carbamato de (3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo
124
229A. Preparación del compuesto 229A (Quiral)
125
El compuesto 229A se preparó a partir del compuesto 203I de una forma similar al compuesto 135E, etapa 2.
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229B. Preparación del compuesto 229B (Quiral)
126
El compuesto 229B se preparó a partir del compuesto 229A de una forma similar al compuesto 220A.
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229C. Preparación del compuesto 229C (Quiral)
127
El compuesto 229C se preparó a partir del compuesto 229B de una forma similar al compuesto 220B.
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229D. Preparación del compuesto 229D 
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128 
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El compuesto 229D se preparó a partir del compuesto 229C de una forma similar al compuesto 220C.
El compuesto 229 se preparó a partir del compuesto 229D de una forma similar al compuesto 146. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,229 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 412.
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Ejemplos 230-236
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129 
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Los compuestos 230-236 (condiciones de HPLC de la nota (b)) se prepararon de forma similar al compuesto 1B, las correspondientes anilinas y el compuesto 229D, como el compuesto 146.
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(Tabla pasa a página siguiente)
130 
\newpage
Ejemplo 237
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-3-metilpiperidin-3-ol (Quiral, enantiómero A)
131 
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Preparación del compuesto 237A (racémico)
132
A una disolución of N-benciltetrahidropiridina (100 mmol) en 150 ml de benceno, se añadió NaHCO_{3} sólido (4,2 g, 49 mmol), seguido de cloroformiato de metilo (9,3 ml, 120 mmol) gota a gota con una jeringuilla a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se separaron los productos volátiles por evaporación a presión reducida y el residuo se disolvió en EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (20 ml x 2), HCl 0,5 M (20 ml) y salmuera (20 ml), y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La mezcla de reacción se concentró a vacío y el cloruro de bencilo residual se separó mejor con alto vacío (p.e. 42-50ºC/2 mm de Hg, temperatura del baño: 75-80ºC) para dar el compuesto 237A en forma de un jarabe viscoso. La cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 9,5:0,5 a 9:1) en gel de sílice, dio 11,77 g (Rendimiento: 76%) del compuesto 237A en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 5,52 (s ancho, 1H), 3,78 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,46 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,68 (s, 3H).
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Preparación del compuesto 237B (racémico)
133
La mezcla del compuesto 237A (775 mg, 5,0 mmol) y m-CPBA (1,21 g, 7,0 mmol, 77% max) en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} seco se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El precipitado se separó por filtración y el filtrado se lavó con Na_{2}S_{2}O_{3} al 10%, NaHCO_{3} sat. y salmuera, y se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La concentración a vacío proporcionó el compuesto 237B bruto en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 3,65-3,75 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,60 (m, 1H), 3,33 (m, 2H),3,12(m, 1H),2,07(m, 1H), 1,92 (m, 1H), 1,35 (s,3H).
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Preparación del compuesto 237C (racémico)
134 
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A una disolución del compuesto 237B (5,0 mmol) en 10 ml de DMF se añadió NaN_{3} (810 mg, 12,4 mmol) en una mezcla 2:1 de 10 ml de acetona-H_{2}O y la mezcla se calentó a 80ºC durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió EtOAc y la mezcla se lavó con agua, solución acuosa de LiCl al 10% y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio 1,09 g del compuesto 237C en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 3,70 (s, 3H), 3,72 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,35 (m, 1H), 3,20 (s ancho, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,63 (m, 1H), 1,20 (s, 3H).
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Preparación del compuesto 237D (racémico)
135 
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La mezcla del compuesto 237C (428 mg, 2,0 mmol) y 150 mg de Pd(OH)_{2} en 10 ml de MeOH se agitó en atmósfera de hidrógeno (balón) durante 4,0 h. El catalizador se separó por filtración y el filtrado se concentró a vacío para dar un residuo bruto.
El residuo se recogió en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} seco y a este se añadió Boc_{2}O (460 mg, 2,10 mmol) y trietilamina (0,334 ml, 2,40 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, la mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con ácido cítrico al 10%, NaHCO_{3} sat. y se secó (Na_{2}SO_{4}). La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 7:3 a 1:1) en gel de sílice, dio 330 mg del compuesto 237D en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,78 (m, 1H), 3,90-4,40 (m, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,60 (m, 1H), 2,70-3,00 (m, 2H), 1,80 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,40 (m, 1H), 1,10 (s, 3H).
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Preparación del compuesto 237E (racémico)
136 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto 237E se preparó a partir del compuesto 237D de una forma similar al compuesto 146I.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación del compuesto 237F (racémico)
137
El compuesto 237F se preparó a partir del compuesto 237E de una forma similar al compuesto 1D.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación del compuesto 237G (racémico)
138
El compuesto 237G se preparó a partir del compuesto 237F de una forma similar al compuesto 1E. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,262 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 383.
El compuesto 237 se obtuvo a partir del compuesto 237G por separación por HPLC preparativa quiral (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros, eluida con EtOH/MeOH/DEA 50:50:0,1) en el primer pico (Rt = 5,390 min) con ee% \geq 99%. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,51 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm columna, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 383.
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Ejemplo 238
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-3-metilpiperidin-3-ol (Quiral, Enantiómero B)
139
El compuesto 238 se obtuvo a partir del compuesto 237G por separación por HPLC preparativa quiral (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros, eluida con EtOH/MeOH/DEA 50:50:0,1) en el segundo pico (Rt = 8,523 min) con ee% \geq99%. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítico = 1,51 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm columna, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 383.
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Ejemplo 239
(3R,4r,5S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol 
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140 
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239A. Preparación de (\pm)-3-acetoxi-4-bromopiperidina-1-carboxilato de etilo 
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141 
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Una mezcla del compuesto 203A/B (mezcla racémica) (107 g, 371 mmol) y anhídrido acético (101 ml) en 165 ml de piridina seca, se agitó a temperatura ambiente durante 2,0 h. El disolvente se separó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se hizo básico con K_{2}CO_{3}. La mezcla se extrajo con cloroformo (250 ml x 3) y los extractos combinados se lavaron con agua y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio el compuesto 239A bruto en forma de un aceite.
RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,90 (s ancho, 1H), 4,13 (q, J = 7,08, 2H), 4,10 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 2,34 (m, 1H), 2,08 (s 3H), 1,93 (m, 1H), 1,27 (t, J = 7,80, 3H).
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239B. Preparación de (\pm)-5-acetoxi-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato de etilo 
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142 
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Una mezcla del compuesto 239A (371 mmol) y DBU (92 g, 604 mmol) se calentó a 90-110ºC durante 30 min. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con tolueno y se agitó durante 30 min adicionales. El precipitado se separó por filtración y se aclaró con tolueno. Los filtrados combinados se lavaron con HCl 1,0 N, agua y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio 67,56 g (rendimiento: 85,4%) de compuesto 239B en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 6,00 (s ancho, 1H), 5,90 (s ancho, 1H), 5,20 (m, 1H), 4,20 (q, J = 7,08, 2H), 4,19 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,80 (m, 1H),3,55(m, 1H),2,08(s, 3H), 1,28 (t, J = 7,08, 3H).
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239C. Preparación de (\pm)-5-hidroxi-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato de etilo
143
A una disolución del compuesto 239B (10,5 g, 49,2 mmol) en 30 ml de EtOH se añadió una disolución de NaOH 0,2 N en EtOH (65 ml) y la mezcla se agitó a 0ºC durante 30 min. Después de calentar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se neutralizó con ácido acético glacial. La concentración a vacío dio 8,5 g del compuesto 239C en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 5,90 (m, 1H), 5,82 (s ancho, 1H), 4,20 (s ancho, 1H), 4,18 (q, J = 7,08, 2H), 4,04 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,55 (m, 2H), 1,28 20 (t, J = 7,08, 3H).
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239D. Preparación de (\pm)-5-(terc-butildimetilsililoxi)-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato de etilo
144
A una disolución del compuesto 239C (16 g, 93,5 mmol) en 150 ml de CH_{2}Cl_{2} seco a 0ºC se añadió imidazol (9,5 g, 140,0 mmol) y cloruro de t-butildimetilsililo (15,5 g, 102,8 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con éter dietílico (500 ml) y agua (1 litro) a 0ºC. La fase orgánica se separó y se lavó con LiCl al 10% (150 ml x 3), se secó sobre MgSO_{4} anhidro. La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 15:1 a 10:1) dio 25,2 g (Rendimiento: 94,4%) del compuesto 239D en forma de un aceite.
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239E. Preparación de (\pm)-5-hidroxi-7-oxa-3-aza-biciclo[4.1.0]heptano-3-carboxilato de etilo
145
A una disolución del compuesto 239D (25,2 g, 88,3 mmol) en 250 ml de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC se añadió m-CPBA sólido (39,6 g, 176,6 mmol, 77% máx) en pequeñas porciones, mientras se mantenía la temperatura interior por debajo de 0ºC durante la adición. La mezcla se agitó a 0ºC durante 30 min y después a temperatura ambiente durante 4,0 h. Se añadió más m-CPBA sólido (39,6 g, 176,6 mmol, 77% máx) en pequeñas porciones y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. El precipitado se separó por filtración y el filtrado se lavó con Na_{2}S_{2}O_{3} al 20% (500 ml x 3), NaHCO_{3} sat. (500 ml x 3) y salmuera (250 ml), se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La purificación por cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 9,5:0,5 a 9:1) en gel de sílice dio 4,33 g del compuesto 239E (Rf inferior) en forma de un aceite.
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239F. Preparación de (\pm)-5-(terc-butildimetilsililoxi)-7-oxa-3-aza-biciclo[4.1.0]heptano-3-carboxilato de etilo
146
El compuesto 239F se preparó en forma de un aceite a partir del compuesto 239D en una reacción igual a la del compuesto 239E.
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239G. Preparación de (\pm)-5-hidroxi-7-oxa-3-aza-biciclo[4.1.0]heptano-3-carboxilato de etilo
147
A una disolución del compuesto 239E (4,33 g, 14,4 mmol) en 10 ml de THF seco se añadió una disolución de TBAF (17,2 ml, 17,2 mmol) en THF. La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió agua y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (100 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 1:1 a 1:2) en gel de sílice dio 2,01 g (Rendimiento: 74,5%) del compuesto 239G en forma de un aceite.
RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,13 (q, J = 7,08, 2H), 4,05 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,70 (d, J =10,15, 1H), 3,62 (m, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,13 (dd, J = 10,15, J = 7,63, 1H), 2,40 y 2,25 (parcial, 1H), 1,27 (t, J = 7,08, 3H).
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239H. Preparación de (\pm)-5-hidroxi-7-oxa-3-aza-biciclo [4.1.0]heptano-3-carboxilato de etilo
148
A una disolución del compuesto 239F (13,6 g, 45,1 mmol) en 10 ml de THF seco se añadió una disolución de TBAF (67,6 ml, 67,6 mmol) en THF. La mezcla se agitó a temperatura ambiente. Se añadió agua y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (250 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 1:1 a 1:2) en gel de sílice, dieron 6,03 g (Rendimiento: 75%) del compuesto 239H en forma de un aceite. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,15 (m, 1H), 4,13 (q, J = 7,08, 2H), 3,95 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,52 (m, 1H), 3,32 (m, 1H), 3,25 (m, 2H), 3,10 y 2,55 (parcial, 1H), 1,27 (t, J = 7,08, 3H).
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239I. Preparación de (\pm)-4-azido-3,5-dihidroxipiperidina-1-carboxilato de etilo 
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149
A una disolución del compuesto 239G (2,0 g, 10,7 mmol) en 2-metoxietanol (40 ml) se añadió NaN_{3} (3,5 g, 53,4 mmol) y NH_{4}Cl (2,3 g, 42,72 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 125ºC durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, el disolvente se separó a presión reducida y el residuo se recogió en EtOAc (50 ml), se lavó con agua (10 ml x 2) y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío seguido de cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc: de 1:1 a 1:2) en gel de sílice, dio 0,64 g del compuesto 239I (Rf superior) en forma de un material cristalino. La estereoquímica se confirmó por una determinación cristalográfica de rayos X única.
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239J. Preparación de (\pm)-4-azido-3,5-dihidroxipiperidina-1-carboxilato de etilo 
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150
El compuesto 239J se preparó a partir del 239H en una reacción similar a la del compuesto 239I en forma de un material cristalino.
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239K. Preparación de (meso)-4-azido-3,5-bis(metoximetoxi)piperidina
151
A una disolución del compuesto 239I (640 mg, 2,78 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (5 ml) se añadió i-Pr_{2}NEt (5,9 ml, 33,4 mmol), seguido de MOMCI (1,69 ml, 22,2 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 60ºC durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2}, se lavó con ácido cítrico al 10%, NaHCO_{3} sat. y salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio el compuesto intermedio bruto en forma de un aceite, que se usó inmediatamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.
La mezcla del compuesto intermedio preparado antes y KOH (1,84 g, 85%) en 8 ml de EtOH y 4 ml de agua, se calentó a reflujo durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, el disolvente se separó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (x2). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio 662 mg del compuesto 239K en forma de un aceite. Este material se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.
RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): 4,73 (q, J = 6,82 Hz, 4H), 3,41 (s, 6H), 3,20-3,40 (m 5H), 2,46 (m, 2H).
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239L. Preparación de (\pm)-(3R,5R)-rel-4-azido-3,5-bis(metoximetoxi)-piperidina
152
El compuesto 239L se preparó a partir del compuesto 239J en reacción similar al compuesto 239K en forma de un material cristalino. RMNH (400 MHz, CDCl_{3}): 4,72 (q, J = 6,82 Hz, 4H), 3,92 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 3,49 (m, 1H), 3,42 (s, 3H), 3,41 (s, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,03 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,53 (m, 1H).
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239M. Preparación de (\pm)-(3S,4r,5R)-rel-4-azido-1-((4-(3-metoxifenilamino)-pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-3,5-bis(metoximetoxi)-piperidina
153
El compuesto 239M se preparó en forma de una espuma a partir del compuesto 239K en una reacción igual a la del compuesto 146E. El compuesto 239M tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,582 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 502^{+}.
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239N. Preparación de (3S,4r,5R)-rel-4-azido-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3,5-diol 
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154 
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La mezcla del compuesto 239M (0,65 mmol) y HCl 6 N (2 ml) en 3 ml de THF se calentó a 50ºC durante 2 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se hizo básica con NaOH, se extrajo con EtOAc y se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío dio 260 mg del compuesto 239N en forma de un sólido. El compuesto 239N tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,063 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 411^{+}.
La mezcla del compuesto 239N (260 mg, 0,633 mmol) y Ph_{3}P (332 mg, 1,27 mmol) en THF (3 ml) y agua (0,3 ml) se calentó a 70ºC durante la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua, se acidificó con HCl 2 N y se lavó con EtOAc (2x). La capa acuosa se hizo básica con NaOH 2 N y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas se lavaron una vez con agua y se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro. La concentración a vacío seguido de trituración con éter dietílico dio 180 mg del compuesto 239 en forma de un sólido. El compuesto 239 tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,211 min (columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 385^{+}.
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Ejemplo 240
(3R/S,5R/S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol 
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155 
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El compuesto 240 se preparó a partir del compuesto 239L de una forma similar al compuesto 239.
El compuesto 240 es un sólido y tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,045 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 384^{+}.
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Ejemplo 241A
(3S,5S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol (Enantiómero A, quiral)
156 
\newpage
El compuesto 241A (Enantiómero A) se preparó a partir del compuesto 240 por separación por HPLC preparativa quiral (usando Chiralpak AD, eluida con EtOH/DEA: 100/0,1), como primer pico (Rt = 5,827 min) con ee > 99%.
El compuesto 241A es un sólido tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,044 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 254 nm) y CL/EM M^{+} + 1 = 384^{+}.
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Ejemplo 241B
(3R,5R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol (Enantiómero B, quiral)
157
El compuesto 241B (Enantiómero B) se obtuvo a partir del compuesto 240 por separación por HPLC preparativa quiral (usando Chiralpak AD, eluida con EtOH/DEA: 100/0,1), en el segundo pico (Rt = 8,430 min) con ee \geq 96%.
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Ejemplos 242-246
Los compuestos 242-246 (con las condiciones de HPLC de la nota (b)) se prepararon a partir del compuesto 239L en un procedimiento similar al compuesto 239.
158 
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159
160
Ejemplo 247
rac-5-{[(3R,4R)-4-amino-3-metoxipiperidin-1-il]metil}-N-(3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
161
247A. Preparación de (3R,4R)-rel-4-azido-3-metoxipiperidina-1-carboxilato de terc-butilo
162
A una mezcla agitada del compuesto 146A (320 mg, 1,32 mmol) y yodometano (0,25 ml, 3,96 mmol) en 4 ml de THF seco a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno, se añadió NaH al 95% (40,0 mg, 1,58 mmol). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 h y después se inactivó por adición de 30 ml de agua. La disolución acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 40 ml). Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera (30 ml), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar 310 mg (rendimiento: 92%) del compuesto 247A. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,86 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene 0,1%TFA, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+ Na = 279.
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247B. Preparación de 5-(((3R,4R)-rel-4-azido-3-metoxipiperidin-1-il)metil)-N-(3-metoxifenil)pirrolo[1,2-f] [1,2,4]triazin-4-amina 
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163 
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A una disolución agitada del compuesto 247A (310 mg, 1,21 mmol) en 2 ml de CH_{2}Cl_{2} a temperatura ambiente se añadió TFA (2,00 ml, 26,0 mmol). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 min y se concentró a vacío para dar 390 mg de (3R,4R)-rel-4-azido-3-metoxipiperidina en forma de la sal de TFA. El compuesto 247B se preparó a partir de esta sal de TFA (52,0 mg, 0,19 mmol) en un procedimiento similar al descrito para el compuesto 146E. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítico = 1,97 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 409.
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247C. Preparación de 5-(((3R,4R)-4-amino-3-metoxipiperidin-1-il)metil)-N-(3-metoxifenil)pirrolo[1,2-f][1,2,4]tri-azin-4-amina (racémico)
El compuesto 247C (racémico) se preparó a partir del compuesto 247B en un procedimiento similar al descrito para el compuesto 146. El compuesto 247C se purificó pasándolo por un cartucho de 1 g SCX, eluido con MeOH (16 ml), seguido de elución con NH_{3} 2 M en MeOH (16 ml). El eluido se concentró a vacío y se purificó más por HPLC prep. para dar 26 mg del compuesto 247C (rendimiento: 42%) en forma de un sólido. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítico = 1,51 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 383.
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247D. Preparación de 5-(((3R,4R)-4-amino-3-metoxipiperidin-1-il)metil)-N-(3-metoxifenil)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina (Enantiómero A) 
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164 
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El compuesto 247D se obtuvo a partir del compuesto 247C mediante una separación por HPLC preparativa quiral (columna Chiralpak AD, 10 micrómetros, 2 x 5 cm, 220 nm, 20 ml/min, EtOH/MeOH/DEA, 50/50/0,1). El compuesto 247D es un sólido y tiene un ee >99% con un tiempo de retención en HPLC = 6,5 min (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros; EtOH/MeOH/DEA: 50/50/0,1, 0,8 ml/min, 220 nm).
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247E. Preparación de 5-(((3S,4S)-4-amino-3-metoxipiperidin-1-il)metil)-N-(3-metoxifenil)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina (Enantiómero B)
165
El compuesto 247E se obtuvo a partir del compuesto 247C mediante una separación por HPLC preparativa quiral (columna Chiralpak AD, 10 micrómetros, 2 x 5 cm, 220 nm, 20 ml/min, EtOH/MeOH/DEA, 50/50/0,1). El compuesto 247E es un sólido y tiene un ee >99% con un tiempo de retención en HPLC = 8,9 min (Chiralpak AD, 250 x 4,6 mm, 10 micrómetros; EtOH/MeOH/DEA: 50/50/0,1, 0,8 ml/min, 220 nm).
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Ejemplo 248
rac-5-{[(3R,4R)-4-amino-3-metoxipiperidin-1-il]metil}-N-(4-fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina
166
El compuesto 248 se preparó a partir del 247A en un procedimiento similar al del compuesto 247 y tenía un tiempo de retención en HPLC analítica =1,18 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 401.
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Ejemplo 249
(4aR,8aR)-rel-6-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-hexahidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-2(3H)-ona
167
249A. Preparación de (3R,4R)-rel-4-amino-3-hidroxipiperidina-1-carboxilato de terc-butilo
168
A una disolución agitada del compuesto 15A (540 mg, 2,23 mmol) en 10 ml de MeOH en atmósfera de N_{2} se añadió Pd(OH)_{2}/C al 20% (108 mg). El matraz de reacción se purgó con H_{2} varias veces y se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 18 h. El catalizador se separó por filtración a través de una película de policarbonato de 4 \mum y se aclaró con MeOH (6x30 ml). El filtrado se concentró a vacío para dar 453 mg (Rendimiento: 94%) del compuesto 249A. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 0,73 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene ácido fosfórico al 0,2%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1= 217.
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249B. Preparación de (3R,4R)-rel-4-(2-cloroacetamido)-3-hidroxipiperidina-1-carboxilato de terc-butilo
169
A una mezcla agitada del compuesto 249A (428 mg, 1,98 mmol) y NaOAc (325 mg, 3,96 mmol) en 2,5 ml de acetona y 0,8 ml de agua en atmósfera de N_{2} a 0ºC, se añadió gota a gota cloruro de cloroacetilo (0,17 ml, 2,08 mmol) a lo largo de 5 min. La mezcla se agitó a 0ºC durante 10 min y a temperatura ambiente durante 25 min. La mezcla se diluyó con 160 ml de EtOAc y se lavó con agua (2 x 40 ml), disolución saturada de NaHCO_{3} (1 x 30 ml) y salmuera (1 x 30 ml). La capa de EtOAc se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 415 mg (Rendimiento: 72%) del compuesto 249B. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,96 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene ácido fosfórico al 0,2%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y por inyección en EM M = 291.
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249C. Preparación de (4aR,8aR)-rel-2-oxo-hexahidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazina-6(7H)-carboxilato de terc-butilo
170
A una mezcla agitada del compuesto 249B (410 mg, 14,0 mmol) en 10 ml de THF seco en atmósfera de N_{2} a temperatura ambiente, se añadió NaH al 60% (84,0 mg, 2,10 mmol). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 min y se inactivó con 3 ml de disolución saturada de NH_{4}Cl. La mezcla se concentró a vacío y se diluyó con 40 ml de disolución saturada de NaHCO_{3}. La disolución acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 60 ml). Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera (1 x 30 ml). La capa de EtOAc se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 344 mg (Rendimiento: 96%) del compuesto 249C. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,01 min. (Chromolith SpeedROD 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene ácido fosfórico al 0,2%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} = 257.
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249D. Preparación de (4aR,8aR)-rel-hexahidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-2(3H)-ona
171
A una mezcla agitada del compuesto 249C (70,0 mg, 0,027 mmol) en 1 ml de CH_{2}Cl_{2} a temperatura ambiente se añadió TFA (2,00 ml, 25,9 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró a vacío para dar el compuesto 249D bruto. Este material se mezcló con DMA para hacer una disolución madre de 2 ml y se usó en la siguiente etapa de reacción.
El compuesto 249 se preparó a partir del 249D en un procedimiento similar al del compuesto 146. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,85 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 409.
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Ejemplo 250
(No se reivindica)
5-(((4aR,8aR)-rel-hexahidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-6(7H)-il)metil)-N-(3-metoxifenil)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina
172
A una mezcla agitada del compuesto 249 (100 mg, 0,24 mmol) a temperatura ambiente en 4 ml de THF seco se añadió gota a gota disolución de LiAlH_{4}/éter dietílico 1 M (0,70 ml, 0,70 mmol). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 70 min y se inactivó por adición de 200 mg de Celite y 200 mg de sulfato sódico decahidrato. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 min. El material insoluble se separó por filtración y se aclaró con MeOH (3x 15 ml). El filtrado se concentró a vacío y se purificó por HPLC preparativa para dar 78 mg (Rendimiento: 81%) del compuesto 250. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,68 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 395.
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Ejemplo 251
(No se reivindica)
N-(4-fluoro-3-metoxifenil)-5-(((4aR,8aR)-rel-hexahidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-6(7H)-il)metil)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina 
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173
El compuesto 251 se preparó a partir del 249D en un procedimiento similar al del compuesto 250. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,64 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 413.
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Ejemplo 252
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-(metilsulfonil)piperidina-3-carboxamida
174
252A. Preparación de 4-oxopiperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo
175
Una disolución de 4-oxopiperidina-3-carboxilato de etilo (16,2 g, 95 mmol) en CHCl_{3} (160 ml) se trató con una disolución de NaHCO_{3} (9,6 g, 114 mmol) en agua (170 ml). Esta reacción bifásica se trató con una disolución de de Boc_{2}O (20,7 g, 95 mmol) en CHCl_{3} (60 ml). La reacción resultante se calentó a reflujo durante 18 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con CHCl_{3} (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar 22 g (Rendimiento: 86%) del compuesto 252A en forma de un aceite.
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252B. Preparación de (R)-4-(1-feniletilamino)-5,6-dihidropiridina-1,3(2H)-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo 
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176
Una disolución del compuesto 252A (22 g, 81 mmol) y tolueno (400 ml) se trató con (R)-1-feniletanamina (12,5 ml, 97 mmol) y p-TsOH (1,5 g). La mezcla de reacción se calentó a reflujo con una trampa Dean-Stark durante 23 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2 x 200 ml) y salmuera (2 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron. El material bruto se filtró a través de una almohadilla de sílice (CH_{2}Cl_{2} al 100%) y se concentró para proporcionar 14,7 g (Rendimiento: 49%) del compuesto 252B en forma de un aceite.
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252C. Preparación de (3S,4R)-4-((R)-1-feniletilamino)-piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo 
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177 
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Un matraz de fondo redondo de 3 bocas, de 1 litro, equipado con un agitador mecánico y un embudo de adición, se cargó con el compuesto 252B (14,7 g, 39 mmol) y acetonitrilo (200 ml) y ácido acético (100 ml). La disolución se enfrió a 0ºC y se añadió Na(OAc)_{3}BH (33,3 g, 157 mmol) en 3 porciones a lo largo de 2 horas. La reacción se agitó durante 2 h a esta temperatura después de la adición final. Después, la mezcla se enfrió a -10ºC y se inactivó lentamente por adición de NaOH 1 N (100 ml), NaOH 4 N (100 ml), NaOH 6 N (100 ml) seguido de NaOH al 50% (50 ml). La reacción se calentó a temperatura ambiente y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 250 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía ultrarrápida (EtOAc/hexano gradiente de 10% a 30%) en gel de sílice para dar 6,0 g (Rendimiento: 41%) del compuesto 252C.
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252D. Preparación de (3R,4R)-4-((R)-1-feniletilamino)-piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo 
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178 
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Una disolución del compuesto 252C (2,90 g, 7,71 mmol) en etanol (70 ml) se trató con NaOEt al 21% en etanol (7,5 ml). La mezcla de reacción se calentó a 50ºC durante 3 h, se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró. El aceite resultante se recogió en diclorometano (150 ml), se lavó con NH_{4}Cl al 20% (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró hasta un aceite. La purificación por cromatografía ultrarrápida (EtOAc/Hexano gradiente de 10 a 25%) en gel de sílice proporcionó 1,20 g (Rendimiento: 41%) del compuesto 252D en forma de un aceite.
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252E. Preparación de (3R,4R)-4-aminopiperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo 
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179
Una disolución del compuesto 252D (1,18 g, 3,13 mmol) en MeOH (31 ml) se trató con formiato amónico (1,58 g, 25,1 mmol) y Pd/C al 10%. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 14 h y después se enfrió a temperatura ambiente. El sólido resultante se separó por filtración y se lavó con MeOH. El filtrado se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida para dar 0,82 g (Rendimiento: 96%) del compuesto 252E en forma de un aceite.
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252F. Preparación de (3R,4R)-4-aminopiperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo 
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180
Una disolución del compuesto 252E (0,80 g, 2,94 mmol) en diclorometano (29 ml) a 0ºC se trató con diisopropiletilamina (0,41 g, 3,23 mmol). Se añadió lentamente una disolución de cloroformiato de alilo (0,46 g, 3,83 mmol) en diclorometano (29 ml) a lo largo de 30 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 16 h, y después se calentó lentamente a temperatura ambiente. La disolución resultante se diluyó con diclorometano y se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3} (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión reducida. El aceite resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc/Hexano de 20 a 25%) en gel de sílice para dar 0,88 g (Rendimiento: 84%) del compuesto 252F en forma de un aceite.
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252G. Preparación de (3R,4R)-4-(aliloxicarbonil)piperidina-3-carboxilato de metilo 
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181
Una disolución del compuesto 252F (0,87 g, 2,44 mmol) en diclorometano (12 ml) se trató con TFA (2,4 ml) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h y después se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente. Se continuó la agitación a esta temperatura durante 5 h, se concentró y se evaporó formando el azeótropo con MeOH y tolueno. El aceite resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (MeOH/CH_{2}Cl_{2} de 0 a 2%) en gel de sílice para dar 0,47 g (rendimiento: 79%) del compuesto 252G en forma de un aceite.
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252H. Preparación de (3R,4R)-4-(aliloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxilato de metilo 
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182 
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Una suspensión del compuesto 252G (0,21 g, 0,87 mmol), bromuro de (4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2,4]trizin-5-ilmetil)trietilamonio (0,40 g, 0,87 mmol) y diisopropiletilamina (0,11 g, 0,87 mmol) en MeCN (15 ml) se calentó a 60ºC durante 1 h y después se concentró a vacío. El aceite resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida (MeOH/CH_{2}Cl_{2} de 2 a 5%) en gel de sílice para dar 0,33 g (Rendimiento: 77%) del compuesto 252H en forma de un sólido.
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252I. Preparación de ácido (3R,4R)-4-(aliloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)-pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxílico 
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183 
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Una disolución del compuesto 252H (0,33 g, 0,67 mmol) en MeOH/THF/agua (3/3/1/ ml) se trató con LiOH monohidrato (0,25 g, 6,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 14 h, se neutralizó a pH = 7 con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}, y después se concentró hasta un volumen de 1 ml. La suspensión resultante se disolvió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa (YMC ODS-A 5 \mum, 20 x 100 mm, disolvente A MeOH 10%-H_{2}O 90%-TFA 0,1%, disolvente B MeOH 90%-H_{2}O 10%-TFA 0,1%, gradiente B 0-100%, 12 minutos). Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron a presión reducida para separar la mayor parte del MeOH, se neutralizaron con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} a pH = 7, y se extrajeron con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para dar 0,30 g (Rendimiento: 94%) del compuesto 252I en forma de un sólido.
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252J. Preparación de (3R,4R)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]-triazin-5-il)metil)-3-(metilsulfo- nilcarbamoil)piperidin-4-il-carbamato de alilo 
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184 
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Una disolución del compuesto 252I (0,30 g, 0,63 mmol) en MeCN (6,2 ml) se trató con dimetilaminopiperidina (77 mg, 0,63 mmol), DECI (0,18 g, 0,94 mmol), seguido de metanosulfonamida (0,18 g, 1,88 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h, se inactivo con agua y se concentró. La suspensión resultante se disolvió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa (YMC ODS-A 5 \mum, 20 x 100 mm, disolvente A MeOH 10%-H_{2}O 90%-TFA 0,1%, disolvente B MeOH 90%-H_{2}O 10%-TFA 0,1%, gradiente B 0-100%, 12 minutos). Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron a vacío, se neutralizaron con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} a pH =10, y se extrajeron con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para dar 0,22 g (Rendimiento: 62%) del compuesto 252J en forma de un sólido.
Una disolución del compuesto 252J (100 mg, 0,18 mmol) en THF (4 mL, desgasificada con argón) se trató con Pd(PPh_{3})_{4} (21 mg, 0,018 mmol) y Et_{2}NH (33 mg, 0,45 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 90 min y se concentró. El sólido resultante se disolvió en MeOH, se purificó por HPLC preparativa (YMC ODS-A 5 \mum, 20 x 100 mm, disolvente A MeOH 10%-H_{2}O 90%-TFA 0,1%, disolvente B MeOH 90%-H_{2}O 10%-TFA 0,1%, gradiente B 0-100%, 12 minutos). Las fracciones deseadas se concentraron, se neutralizaron con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} a pH =10, y se extrajeron con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para dar 36 mg (Rendimiento: 42%) del compuesto 252 en forma de un sólido. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,62 min (Columna Phenomenex Su C18 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente de 4 min, seguimiento a 220 nm), [M+H]^{+} = 474.
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Ejemplo 253
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida 
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185
253A. Preparación de (3R,4R)-4-(aliloxicarbonil)-1-((4-(3-etinilfenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxilato de metilo
186
Una suspensión del compuesto 252G (0,24 g, 1,0 mmol), bromuro de (4-(3-etilnilfenilamino)pirrolo[1,2,4]trizin-5-ilmetil)trietilamonio (0,43 g, 1,0 mmol) y diisopropiletilamina (0,13 g, 1,0 mmol) en MeCN (15 ml) se calentó a 60ºC durante 1 h y después se concentró a vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (MeOH/CH_{2}Cl_{2} de 2 a 5%) en gel de sílice, para dar 0,24 g (Rendimiento: 50%) del compuesto 253A en forma de un sólido.
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253B. Preparación de ácido (3R,4R)-4-(aliloxicarbonil)-1-((4-(3-etinilfenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxílico
187
Una disolución del compuesto 253A (0,24 g, 0,50 mmol) en MeOH/THF/agua (3/3/1/ ml) se trató con LiOH monohidrato (0,21 g, 5,0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 14 h, se neutralizó a pH = 7 con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} y después se concentró. La suspensión resultante se disolvió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa (YMC ODS-A 5 \mum, 20 x 100 mm, disolvente A MeOH 10%-H_{2}O 90%-TFA 0,1%, disolvente B MeOH 90%-H_{2}O 10%-TFA 0,1%, gradiente B 0-100%, 12 minutos). Las fracciones deseadas se concentraron, se neutralizaron con disolución saturada de NaHCO_{3} a pH =7 y se extrajeron con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío para dar 0,22 g (Rendimiento: 93%) del compuesto 253B en forma de un sólido.
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253C. Preparación de (3R,4R)-1-((4-(3-etinilfenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]-triazin-5-il)metil)-3-(metilcarba- moil)piperidin-4-ilcarbamato de alilo 
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188
Una disolución del compuesto 253B (0,22 g, 0,46 mmol) en MeCN (4,6 ml) se trató con diisopropiletilamina (59 mg, 0,46 mmol), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)fosfonio (en lo sucesivo denominado "reactivo Bop") (0,36 g, 0,69 mmol) y metilamina 2 N en THF (0,70 ml, 1,38 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h, se inactivó con agua y se concentró. La suspensión resultante se disolvió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa (YMC ODS-A 5 \mum, 20 x 100 mm, disolvente A MeOH 10%-H_{2}O 90%-TFA 0,1%, disolvente B MeOH 90%-H_{2}O 10%-TFA 0,1%, gradiente B 0-100%, 12 minutos). Las fracciones deseadas se concentraron, se neutralizaron con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} a pH =10, y se extrajeron con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío para dar 0,21 g (rendimiento: 92%) del compuesto 253C en forma de un sólido.
Una disolución del compuesto 253C (100mg, 0,20 mmol) en THF (5 ml, desgasificada con argón) se trató con Pd(PPh_{3})_{4} (23 mg, 0,020 mmol) y Et_{2}NH (37 mg, 0,51 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 90 min y después se concentró. El sólido resultante se disolvió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa (YMC ODS-A 5 \mum, 20 3 100 mm, disolvente A MeOH 10%-H_{2}O 90%-TFA 0,1%, disolvente B MeOH 90%-H_{2}O 10%-TFA 0,1%, gradiente B 0-100%, 12 minutos). Las fracciones deseadas se concentraron, se neutralizaron con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} a pH =10, y se extrajeron con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío para dar 36 mg (rendimiento: 42%) del compuesto 253 en forma de un sólido. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,96 min (Columna Phenomenex Su C18 4,6 x 50 mm metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm), [M+H]^{+} = 404.
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Ejemplo 254
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida
189 
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254A. Preparación de (3R,4R)-4-(benciloxicarbonil)piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo
190
Una disolución del compuesto 252E (180 mg, 0,66 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) se trató con cloroformiato de benciloxi (0,1 ml, 0,73 mmol) y trietilamina (0,12 ml, 0,86 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h, se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se lavó con agua (2 x 10 ml), HCl 0,1 N (2 310 ml), disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2 x 10 ml) y salmuera (1 x 10 ml). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró para dar 243 mg (rendimiento: 91%) del compuesto 254A en forma de un aceite.
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254B. Preparación de (3R,4R)-4-(benciloxicarbonil)piperidina-3-carboxilato de etilo
191
Una disolución del compuesto 254A (243 mg, 0,60 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 ml) a 0ºC se trató con ácido trifluoroacético (0,3 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y después se concentró hasta un aceite. La amina bruta se disolvió en EtOAc (10 ml), se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} y se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El producto se purificó por cromatografía ultrarrápida (MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 10%) en gel de sílice para dar 95 mg (rendimiento: 52%) del compuesto 254B.
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254C. Preparación de (3R,4R)-4-(benciloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenil-amino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxilato de metilo
192
Una suspensión de bromuro N,N-dietil-N-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)etanaminio (1,7 g, 3,62 mmol) y el compuesto 254B (1,06 g, 3,6 mmol) en acetonitrilo (75 ml) se trató con DIEA (0,63 ml, 3,6 mmol) y se calentó a 55ºC durante 12 h. La reacción se concentró, se disolvió en EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (2 x 100 ml). El material bruto se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró para dar 1,7 g (Rendimiento: 89%) del compuesto 254C.
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254D. Preparación de ácido (3R,4R)-4-(benciloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxílico
193
El compuesto 254D (1,67 g, rendimiento: 100%) se preparó a partir del compuesto 254C (1,7 g, 3,13 mmol) en un procedimiento similar al usado para el compuesto 252I.
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254E. Preparación de (3R,4R)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-3-(metilcarba- moil)piperidin-4-ilcarbamato de bencilo 
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194 
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El compuesto 254E (790 mg, rendimiento: 54%) se preparó a partir del compuesto 254D (1,44 g, 2,71 mmol) en un procedimiento similar al usado para el compuesto 253C.
Una disolución del compuesto 254E (1,66 g, 3,13 mmol) en MeOH (50 ml) se purgó con argón durante 30 minutos. Se añadió Pd/C al 5% (300 mg). La mezcla de reacción se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 3 h y después se filtró a través de una almohadilla de celita. El filtrado se concentró in vitro para proporcionar 1,21 g (rendimiento: 94%) del compuesto 254 en forma de un sólido. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,57 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm), [M+H]^{+} = 410.
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Ejemplo 255
Ácido (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3-carboxílico 
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195 
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El compuesto 255 (33 mg, rendimiento: 89%) se preparó a partir del compuesto 254D (50 mg, 0,094 mmol) en un procedimiento similar al usado para el compuesto 254. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,54 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm). [M+H]^{+} = 397.
\newpage
Ejemplo 256
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3-carboxamida 
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196 
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256A. Preparación de (3R,4R)-3-((3,4-dimetoxibencil)carbamoil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidin-4-ilcarbamato de bencilo 
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197 
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Una disolución del compuesto 254D (150 mg, 0,23 mmol) en DMF (5 ml) se trató con 3,4-dimetoxibencilamina (77 mg, 0,46 mmol), DIEA (80 \mul, 0,46 mmol) y reactivo Bop (132 mg, 0,25 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, y después se vertió en EtOAc (25 ml). La mezcla se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (3 x 25 ml) y se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 3%) en gel de sílice para dar 174 mg (rendimiento: 95%) del compuesto 256A.
Una disolución del compuesto 256A (50 mg, 0,06 mmol) en TFA (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 5 días. La reacción se concentró y se purificó por HPLC preparativa para dar 7 mg (rendimiento: 30%) del compuesto 256 en forma de un sólido. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,62 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm), [M+H]^{+}= 396.
\newpage
Ejemplo 257
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-(metilsulfonil)piperidina-3-carboxamida
198
257A. Preparación de (3S,4R)-4-aminopiperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo
199
El compuesto 257A (447 mg, 63%) se preparó en un procedimiento similar al usado para el compuesto 252E.
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257B. Preparación de (3S,4R)-4-(benciloxicarbonil)piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo
200
Una disolución del compuesto 257A (447 mg, 1,7 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se trató con trietilamina (0,3 ml, 2,2 mmol) seguido de cloroformiato de bencilo (0,27 ml, 1,9 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h y después se lavó con agua (25 ml). La capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (25 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}, HCl 0,1 N y salmuera. La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío hasta un aceite. El material bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc/hexanos al 30%) en gel de sílice para dar 411 mg (rendimiento: 75%) del compuesto 257B en forma de un aceite.
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257C. Preparación de (3S,4R)-4-(benciloxicarbonil)piperidina-3-carboxilato de metilo
201
Una disolución del compuesto 257B (411 mg, 1,04 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) se trató con TFA (0,5 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 5,0 h y después se concentró a vacío. El residuo se disolvió en EtOAc (10 ml) y se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}. La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 365 mg del compuesto 257C en forma de un sólido.
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257D. Preparación de (3S,4R)-4-(benciloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxilato de metilo
202
Una suspensión del compuesto 257C (292 mg, 0,62 mmol) y bromuro de N,N-dietil-N-((4-(3-metoxifenilarmino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)etanaminio (292 mg, 0,62 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se trató con DIEA (0,2 mL, 1,24 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 55ºC durante 3,0 h, y después se concentró a vacío hasta sequedad. El residuo bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc/hexanos al 30%) en gel de sílice para dar 269 mg (rendimiento: 80%) del compuesto 257D.
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257E. Preparación de ácido (3S,4R)-4-(benciloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxílico 
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203
Una disolución del compuesto 257D (200 mg, 0,37 mmol) en THF/MeOH (1:1,4 ml) se trató con LiOH monohidrato (30 mg, 0,74 mmol) en agua (1 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 8 h y después se concentró hasta 1 ml. El residuo se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 200 mg (Rendimiento: 100%) del compuesto 257E en forma de un sólido.
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257F. Preparación de (3S,4R)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-3-(metilsulfonil- carbamoil)piperidin-4-ilcarbamato 
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204 
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Una disolución del compuesto 257E (30 mg, 0,06 mmol) en DMF (2 ml) se trató con metanosulfonamida (11 mg, 0,11 mmol), DMAP (7 mg, 0,06 mmol) y EDAC (13 mg, 0,07 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. La suspensión resultante se diluyó con EtOAc (10 ml), se lavó con salmuera (3 x 10 ml), disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2 x 10 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 35 mg del compuesto 257E que se usó sin purificación adicional.
Una disolución del compuesto 257F (35 mg) en MeOH (3 ml) se trató con Pd/C al 10% (15 mg) y se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 3 h a temperatura ambiente. La suspensión se filtró a través de un filtro de nailon y el filtrado se concentró. El material bruto se purificó por HPLC preparativa para dar 12 mg del compuesto 257 en forma de un sólido. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica =1,77 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm) [M+H]^{+} = 474.
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Ejemplo 258
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-(metilsulfonil)piperidina-3-carboxamida 
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205
258A. Preparación de (3R,4S)-4-((S)-1-feniletilamino)-piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo
206
El compuesto 258A se preparó de la misma forma que el compuesto 252C usando los materiales de partida adecuados.
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258B. Preparación de (3R,4S)-4-aminopiperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo
207
El compuesto 258B se preparó de acuerdo con los procedimientos descritos en el ejemplo 257 usando los materiales de partida adecuados.
El compuesto 258 se preparó a partir del 258B de la misma forma descrita para el compuesto 257. El compuesto 258 tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,77 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm) [M+H]^{+} = 474.
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Ejemplo 259
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida
208
259A. Preparación de (3S,4R)-4-aminopiperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo
209
Una disolución del compuesto 252C (2,6 g, 6,9 mmol) en EtOH (100 ml) se trató con formiato amónico (3,5 g, 55,3 mmol) y Pd/C al 10% (390 mg). La mezcla de reacción se calentó a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante 3 h. La suspensión resultante se filtró a través de una almohadilla de celita y se concentró a vacío para dar 1,8 g (rendimiento: 96%) del compuesto 259A en forma de un sólido.
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259B. Preparación de ((3S,4R)-4-(aliloxicarbonil)piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-etilo
210
Una disolución del compuesto 259A (900 mg, 3,3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) se trató con trietilamina (0,64 ml, 4,62 mmol) y cloroformiato de alilo (0,35 ml, 3,96 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 4 h y después se lavó con HCl 0,1 N (2 x 10 ml), NaOH 1 N (2 x 10 ml) y salmuera (10 ml). La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 680 mg (Rendimiento: 58%) del compuesto 259B en forma de un aceite.
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259C. Preparación de (3S,4R)-4-(aliloxicarbonil)piperidina-3-carboxilato de etilo
211
Una disolución del compuesto 259B (680 mg, 1,9 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) se trató con TFA (1 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 16 h y después se concentró. El residuo se disolvió en EtOAc (20 ml) y se lavó con disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2 x 20 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 170 mg del compuesto 259C.
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259D. Preparación de (3S,4R)-4-(aliloxicarbonil)-1-((4-(3-etinilfenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxilato de metilo
212
Una suspensión del compuesto 259C (50 mg, 0,2 mmol) y bromuro de N,N-dietil-N-((4-(3-etinilfenil-amino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)etanaminio (82 mg, 0,18 mmol) en acetonitrilo (2 ml) se trató con DIEA (31 \mul, 0,18 mmol). La mezcla se calentó a 65ºC durante 6,0 h, se enfrío a temperatura ambiente y se concentró. El material bruto se purificó por cromatografía radial (SiO_{2}, placa de 2 mm, gradiente de CH_{2}Cl_{2} al 100% a MeOH/CH_{2}Cl_{2} al 1%) para dar 63 mg (rendimiento: 70%) del compuesto 259D.
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259E. Preparación de ácido (3S,4R)-4-(aliloxicarbonil)-1-((4-(3-etinilfenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxílico
213
Una disolución del compuesto 259D (63 mg, 0,13 mmol) en THF/MeOH (1:1,4 ml) se trató con una disolución de LiOH monohidrato (17 mg, 0,39 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h y después se concentró hasta un volumen de 0,5 ml. El residuo se diluyó con agua (5 ml) y se llevó a pH 6 con disolución acuosa saturada de NH_{4}Cl. La mezcla se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml), las capas orgánicas se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar 56 mg (rendimiento: 92%) del compuesto 259E.
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259F. Preparación de (3S,4R)-1-((4-(3-etinilfenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]-triazin-5-il)metil)-3-(metilcarba- moil)piperidin-4-ilcarbamato de alilo
214
Una disolución del compuesto 259E (56 mg, 0,12 mmol) en DMF (3 ml) se trató secuencialmente con metilamina (2 M en THF, 0,12 ml, 0,24 mmol), DIEA (0,02 ml, 0,12 mmol) y reactivo Bop (68 mg, 0,13 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a temperatura ambiente. La mezcla resultante se diluyó con EtOAc (25 ml), se lavó con salmuera (3 x 15 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. El compuesto 259E (71 mg) bruto se usó sin purificación adicional.
Una disolución del compuesto 259F (71 mg, 0,15 mmol) en THF (3 ml) se desgasificó con argón y se trató con dietilamina (28 mg, 0,38 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (17 mg, 0,02 mmol)). La reacción se agitó en atmósfera de argón durante 2,0 h y después se concentró a vacío y se purificó por HPLC preparativa para dar 14 mg del compuesto 259. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,10 min (YMC S5 ODS 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm) [M+H]^{+} = 404.
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Ejemplo 260
(3S,4S)-4-amino-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida 
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215 
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260A. Preparación de (3S,4S)-4-((S)-1-feniletilamino)-piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo 
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216 
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Una disolución del compuesto 258A (4,50 g, 12,4 mmol) en metanol (124 ml) a temperatura ambiente se trató con NaOMe al 25% en metanol (8,04 ml). Esta mezcla de reacción se calentó a 50ºC durante 3,0 h, se enfrió a temperatura ambiente, y después se concentró a vacío. El residuo aceitoso se disolvió en diclorometano (200 ml), y se lavó con NH_{4}Cl al 20% (2 x 75 ml). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró a vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc/hexanos de 10 a 25%) en gel de sílice para dar 1,50 g (rendimiento: 30%) del compuesto 260A en forma de un aceite.
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260B. Preparación de (3S,4S)-4-aminopiperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo
217
Una disolución del compuesto 260A (1,10 g, 3,03 mmol) en MeOH (31 ml) a temperatura ambiente se trató con formiato amónico (1,51 g, 24,3 mmol) y Pd/C al 10% (110 mg). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 14 h y después se enfrió a temperatura ambiente. El material sólido se separó por filtración y se lavó con MeOH. El filtrado se concentró a vacío para dar 0,75 g (rendimiento: 96%) del compuesto 260B en forma de un aceite.
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260C. Preparación de (3S,4S)-4-(benciloxicarbonil)piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo
218
Una disolución del compuesto 260B (0,75 g, 2,90 mmol) en diclorometano (30 ml) a 0ºC se trató con trietilamina (0,35 g, 3,48 mmol) y N-(benciloxicarboniloxi)succinimida (0,72 g, 2,90 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano, se lavó con ácido cítrico al 10% (2 x 50 ml) y después disolución saturada de NaHCO_{3} (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró a vacío para dar 1,01 g (rendimiento: 89%) del compuesto 260C en forma de un aceite. Se usó en la siguiente etapa sin más purificación.
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260D. Preparación de (3S,4S)-4-(benciloxicarbonil)piperidina-3-carboxilato de metilo
219
Una disolución del compuesto 260C (1,01 g, 2,58 mmol) en diclorometano (50 ml) a 0ºC se trató con TFA (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1,0 h, después se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 2,0 h adicionales. La mezcla se concentró, y después se evaporó formando el azeótropo con MeOH y tolueno. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3} (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró a vacío para dar 0,61 g (rendimiento: 81%) del compuesto 260D en forma de un aceite. Se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
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260E. Preparación de (3S,4S)-4-(benciloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxilato de metilo 
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220 
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Una mezcla de reacción del compuesto 260D (0,18 g, 0,61 mmol), bromuro de (4-(3-metoxifenilamino)-pirrolo[1,2,4]trizin-5-ilmetil)trietilamonio (0,29 g, 0,61 mmol) y diisopropiletilamina (79 mg, 0,61 mmol) en MeCN (6 ml) se calentó a 55ºC durante 12 h y se concentró a vacío. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con agua (2 x 50 ml). La porción de diclorometano se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró a vacío para dar 0,33 g (rendimiento: 99%) del compuesto 260E en forma de un aceite. Se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. (M+H)^{+} = 545.
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260F. Preparación de ácido (3S,4S)-4-(benciloxicarbonil)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidina-3-carboxílico 
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221 
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Una disolución del compuesto 260E (95 mg, 0,18 mmol) en MeOH/THF/agua (1/1/0,5 ml) a temperatura ambiente se trató con LiOH monohidrato (75 mg, 1,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 18 h, se inactió con disolución saturada de NH_{4}Cl (5 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). La capa de EtOAc se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró a vacío para dar 80 mg (rendimiento: 89%) del compuesto 260F en forma de una película. Se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Masa (M+H)^{+} = 531.
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260G. Preparación de (3S,4S)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-3-(metilcarba- moil)piperidin-4-ilcarbamato de bencilo
222
Una disolución del compuesto 260F (40 mg, 0,075 mmol) en DMF (0,8 ml) a temperatura ambiente se trató con diisopropiletilamina (10 mg, 0,075 mmol), reactivo Bop (59 mg, 0,11 mmol) y después metilamina 2 N en THF (0,12 ml, 0,23 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 16 h, se inactivó con agua y se concentró. La suspensión resultante se disolvió en MeOH y se purificó por HPLC preparativa (YMC ODS-A 5 \mum, 20 x 100 mm, disolvente A MeOH 10%-H_{2}O 90%-TFA 0,1%, disolvente B MeOH 90%-H_{2}O 10%-TFA 0,1%, gradiente B 0-100%, 12 minutos). Las fracciones deseadas se concentraron para separar la mayor parte del MeOH, se neutralizaron con disolución saturada de NaHCO_{3} a pH 10 y se extrajeron con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío para dar 38 mg (rendimiento: 93%) del compuesto 260G en forma de un sólido. Masa (M+H)^{+} = 544.
Una disolución del compuesto 260G (38 mg, 0,070 mmol) en MeOH (2 ml) a temperatura ambiente se trató con Pd/C al 5% (10 mg). La mezcla de reacción se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 16 h. El catalizador se separó por filtración. El filtrado se concentró a vacío para dar 25 mg (rendimiento: 87%) del compuesto 260 en forma de un sólido. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica =1,71 min (columna Phenomenex Su C18 4,6 x 50 mm metanol acuoso al 10-90% que contiene H_{3}PO_{4} al 0,2%, gradiente 4 min, seguimiento a 220 nm). Masa [M+H]^{+} = 410.
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Ejemplo 261
((3R,4R)-4-amino-1-((4-((3-metoxifenil)amino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-3-piperidinil)metanol
223 
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261A. Preparación de ácido (3R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-1-feniletilamino)piperidina-3-carboxílico
224
Una mezcla del compuesto 252D (460 mg, 1,22 mmol) y NaOEt (1,25 ml, 21% en peso en EtOH) en EtOH (10 ml) se agitó a 50ºC durante 3 h, después a t.a. durante aproximadamente 48 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío, seguido de la adición de agua. La mezcla se acidificó con HCl 1 N a pH 4-5 y el sólido se recogió por filtración, se lavó con agua y se secó para dar 300 mg (rendimiento: 71%) del compuesto 252A. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,065 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,5 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1% durante 4 min, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm). Masa (M+1)^{+}= 349.
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261B. Preparación de (3R,4R)-4-((R)-1-feniletilamino)-piperidina-1,3-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 3-metilo 
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225 
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A una disolución del compuesto 261A (280 mg, 0,80 mmol) en 6 ml de CH_{2}Cl_{2}/MeOH 1:1 se añadió una disolución del compuesto TMSCHN_{2} (0,82 ml, 1,64 mmol, 2 N en hexano). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, y después se concentró a vacío y se purificó por cromatografía ultrarrápida (hexano/EtOAc: 80:20) en gel de sílice para dar el compuesto 261B en forma de un aceite. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,187 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,5 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 min, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm). Masa (M+1)^{+} = 363.
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261C. Preparación de ((3R,4R)-4-((R)-1-feniletilamino)piperidin-3-il)metanol 
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226 
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A una disolución del compuesto 261B (270 mg, 0,75 mmol) se añadió LiBH_{4} (15,5 mg, 0,71 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 1,0 h. La HPLC mostraba todavía algo de material de partida. Se añadió más LiBH_{4} (15,5 mg, 0,71 mmol) y la mezcla se calentó durante otras 2,0 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió agua helada y la mezcla se concentró a vacío para separar el THF. El residuo acuoso se extrajo con EtOAc (x3) y los extractos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío. El residuo se recogió en 2 ml de CH_{2}Cl_{2} y se añadieron 2 ml de TFA. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se concentró a vacío, seguido de secado con alto vacío durante la noche para proporcionar el compuesto 261C en forma de un aceite. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 0,590 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,5 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 min, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 235. Este material se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.
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261D. Preparación de ((3R,4R)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]-triazin-5-il)metil)-4-((R)-1-feniletilamino)piperidin-3-il)metanol
227
El compuesto 261D se preparó a partir del compuesto 261C en un procedimiento similar al usado para el compuesto 146E. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,761 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,5 x50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 min, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 487.
Una mezcla del compuesto 261D (160 mg, 0,33 mmol), Pd/C al 10% (39 mg) y formiato amónico (166 mg, 2,63 mmol) en MeOH (15 ml) se calentó a reflujo durante 1,0 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, el catalizador se separó por filtración y el filtrado se concentró a vacío. El residuo se disolvió en agua, se hizo básico con disolución acuosa de NaHCO_{3} y se extrajo con EtOAc (3x). Los extractos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío para dar 64 mg (rendimiento: 51%) del compuesto 261 en forma de un sólido (64 mg, 51%). Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,137 min. (Columna Chromolith SpeedROD 4,5 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1% durante 4 min, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 383.
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Ejemplo 262
rac-(3R,4R)-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,4-diamina
228
262A. Preparación de (3R,4R)-4-(benciloxicarbonil)-3-hidroxipiperidina-1-carboxilato de terc-butilo
229
A una mezcla agitada del compuesto 249A (1,40 g, 6,47 mmol) en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadió Et_{3}N (1,08 ml, 7,76 mmol), seguido de Cbz-OSu (1,69 g, 6,80 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h y después se diluyó con 300 ml de EtOAc. La capa orgánica se lavó con disolución de ácido cítrico al 5% (2 x 40 ml), disolución de K_{2}CO_{3} al 5% (2 x 40 ml) y salmuera (40 ml) y se secó (MgSO_{4}). El residuo se filtró y se concentró a vacío para dar 2,25 g (rendimiento: 99%) del compuesto 262A. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 3,02 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 351.
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262B/C. Preparación de (3R,4R)-3-azido-4-(benciloxicarbonil)-piperidina-1-carboxilato de terc-butilo
230
A una disolución agitada del compuesto 262A (2,23 g, 6,36 mmol) y Et_{3}N (1,20 ml, 0,83 mmol) en 30 ml de CH_{2}Cl_{2} en atmósfera de nitrógeno a 0ºC se añadió cloruro de metanosulfonilo (0,49 ml, 6,36 mmol) a lo largo de 5 min. La mezcla se agitó a 0ºC durante 35 min y después se diluyó con 40 ml de CH_{2}Cl_{2}. La mezcla se lavó con agua (2 x 25 ml), salmuera (20 ml) y se secó (MgSO_{4}). La mezcla se filtró y se concentró a vacío para dar el mesilato bruto. Al mesilato en 20 ml de DMSO se añadió NaN_{3} (1,65 g, 25,5 mmol). La mezcla se calentó a 90ºC durante 17 h y se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con 200 ml de EtOAc y se lavó con agua (4 x 200 ml), disolución saturada de NaHCO_{3} (40 ml), salmuera (40 ml), y se secó (MgSO_{4}). La filtración, concentración a vacío, seguido de cromatografía ultrarrápida (EtOAc en hexano al 15-50%) en gel de sílice dieron 696 mg (29%) del compuesto 262B (Diastereoisómero A, Rf = 0,65) y 262C (Diastereoisómero B, Rf = 0,70). El compuesto 262B tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 3,51 min. (Columna PhenomenoxS5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1=376. El compuesto 262C tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 3,51 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 376.
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262D. Preparación de (3R,4R)-3-azido-1-((4-(3-metoxifenilamino) pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidin-4-ilcarbamato de bencilo
231
El compuesto 262D se preparó a partir del compuesto 262B en un procedimiento similar al descrito para el compuesto 247A. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,96 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 528.
El compuesto 262 se preparó a partir del compuesto 262D en un procedimiento similar al descrito para el compuesto 249A. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,27 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 368.
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Ejemplo 263
(No está comprendido en las reivindicaciones)
rac-N-[(3R,4R)-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]urea 
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232 
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263A. Preparación de (3R,4R)-3-amino-1-((4-(3-metoxifenilamino)-pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)piperidin-4-ilcarbamato de bencilo (Quiral, Diastereoisómero A) 
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233 
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El compuesto 263A se preparó a partir del compuesto 262C en un procedimiento similar descrito usado para el compuesto 146E. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,71 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 502.
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263B. Preparación de (3R,4R)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-3-ureidopiperidin-4-ilcarbamato de bencilo 
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234 
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A una mezcla agitada del compuesto 263A (77,0 mg, 0,15 mmol) en 2 ml de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC se añadió isocianato de tricloroacetilo (28,9 mg, 0,18 mmol). La mezcla se agitó a 0ºC durante 30 min y se añadió 1 ml de metanol. Después esta mezcla se concentró a vacío para dar un aceite bruto. Este material bruto se disolvió en 3 ml de metanol y se añadieron 2 ml de disolución de K_{2}CO_{3} al 20%. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y después se diluyó con 10 ml de agua. Se concentró a vacío para separar el metanol y después se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera (10 ml) y se secaron (MgSO_{4}). La filtración seguida de concentración a vacío dio 70 mg (rendimiento: 84%) del compuesto 263B. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,51 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90%, que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 545.
El compuesto 263 se preparó a partir del compuesto 263B de una forma similar a la descrita para el compuesto 249A. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,32 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90%, que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 =411.
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Ejemplo 264
rac-N-[(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida 
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235
264A. Preparación de 7-(metilsulfonil)-3,7-diaza-biciclo[4.1.0]heptano-3-carboxilato de bencilo (racémico)
236
A una mezcla agitada de 3,7-diaza-biciclo[4.1.0]heptano-3-carboxilato de bencilo (410 mg, 1,77 mmol, preparado como se muestra en Tetrahedron Letters, 43(23), 4289-4293, 2002) en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadió trietilamina (0,74 ml, 5,31 mmol), seguido de cloruro de metanosulfonilo (0,18 ml, 2,30 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h y después se diluyó con 120 ml de EtOAc. Esta mezcla se lavó con disolución de ácido cítrico al 5% (3 x 30 ml), disolución saturada de NaHCO_{3} (30 ml) y salmuera (30 ml). La capa orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar el compuesto 264A con rendimiento cuantitativo. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,56 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+} + Na = 333.
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264B. Preparación de (3R,4R)-rel-4-azido-3-(metilsulfonamido)piperidina-1-carboxilato de bencilo
237
A una mezcla agitada del compuesto 264A (549 mg, 1,77 mmol) en 4 ml de DMSO se añadió NaN_{3} (458 mg, 7,08 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se diluyó con 80 ml de EtOAc. La mezcla se lavó con agua (3x 100 ml), disolución saturada de NaHCO_{3} (40 ml) y salmuera (40 ml). La capa de EtOAc se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 530 mg (Rendimiento: 85%) del compuesto 264B. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,90 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 354.
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264C. Preparación de (3R,4R)-rel-4-amino-3-(metilsulfonamido)piperidina-1-carboxilato de bencilo
238
A una mezcla agitada del compuesto 264B (530 mg, 1,50 mmol) en 6 ml de THF y 1 ml de agua se añadió Ph_{3}P (900 mg, 3,43 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 70ºC durante 15 h y se enfrió a temperatura ambiente. Esta mezcla se concentró a vacío, se diluyó con 15 ml de disolución de HCl 2 N y después se lavó con CHCl_{3} (3x 20 ml). La fase acuosa se hizo básica a pH 12 por adición de disolución de NaOH al 50%, se saturó con NaCl, y después se extrajo con EtOAc (3x 25 ml). Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera (15 ml), se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar 490 mg (rendimiento: 100%) del compuesto 264C. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,67 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1
= 328.
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264D. Preparación de (3R,4R)-rel-1-((4-(3-metoxifenilamino) pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-3-(metilsul- fonamido)piperidin-4-ilcarbamato de terc-butilo 
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239 
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A una disolución agitada del compuesto 264C (490 mg, 1,50 mmol) en 6 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadió Et_{3}N (0,63 ml, 4,50 mmoL), seguido de dicarbonato de di-t-butilo (390 mg, 1,80 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con 60 ml de EtOAc, se lavó disolución saturada de NaHCO_{3} (2 x 15 ml) y salmuera (15 ml). La fase orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar un compuesto intermedio bruto. El compuesto intermedio bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (hexano-EtOAc) en gel de sílice para dar 131 mg de material puro. A este compuesto intermedio en 6 ml de metanol en atmósfera de nitrógeno, se añadió Pd(OH)_{2}/C al 20% (30 mg). La mezcla de reacción se purgó varias veces con hidrógeno y se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 18 h. El catalizador se separó por filtración usando una película de policarbonato 4 \mum y se aclaró con MeOH (4x 10 ml). Los filtrados combinados se concentraron a vacío para dar 89 mg de la amina intermedia
bruta.
El compuesto 264D se preparó a partir de este compuesto intermedio en un procedimiento similar al descrito para el compuesto 146E. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,72 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 546.
A una disolución agitada del compuesto 264D (120 mg, 0,22 mmol) en 3 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadió TFA (2,5 ml, 32,4 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 min, se concentró a vacío, y se purificó por HPLC prep. para dar 71 mg (rendimiento: 73%) del compuesto 264. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,54 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 446.
\newpage
Ejemplo 265
N-[(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida
240
Preparación del compuesto 265A
241
El compuesto 265A se preparó a partir del compuesto 262C (quiral, regioisómero B) de una forma similar a la descrita para el compuesto 262D. Tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,73 min. (Columna Phenomenox S5 C 18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 502.
Preparación de compuesto 265B
242
A una mezcla agitada del compuesto 265A (60,0 mg, 0,12 mmol) y Et_{3}N (0,05 ml, 0,36 mmol) en 4 ml de DCM se añadió cloruro de metanosulfonilo (15,0 mg, 0,13 mmol). Esta mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y después se diluyó con 100 ml de EtOAc. La mezcla se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3} (20 ml) y salmuera (20 ml). La capa de EtOAc se secó (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a vacío para dar 70 mg del compuesto 265B con un rendimiento cuantitativo.
El compuesto 265B tiene un tiempo de retención en HPLC analítica = 2,61 min. (Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm columna, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 580.
El compuesto 265 se preparó a partir del compuesto 265B (quiral, regioisómero B) de una forma similar a la descrita para el compuesto 249A. La estructura del compuesto 265 se asignó basándose en la comparación de la RMN de ^{1}H con el del compuesto 264. El compuesto tenía un tiempo de retención en HPLC analítica = 1,50 min. (Columna Phenomenox S5 C18-HC 4,6 x 50 mm, metanol acuoso al 10-90% que contiene TFA al 0,1%, durante 4 minutos, 4 ml/min, seguimiento a 220 nm) y CL/EM M^{+}+1 = 446.
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Ejemplo 266
N-[(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida (Enantiómero A)
243
El compuesto 266 se obtuvo a partir del compuesto 264 por una separación por HPLC preparativa quiral en el primer pico que eluye, con ee > 99%. El compuesto 127A tiene un tiempo de retención en HPLC = 6,3 min (ChiralPak, AD 250 x 4,6 mm columna, 10 \mum, 220 nm, 0,8 ml/min, EtOH como eluyente). CL/EM M^{+}+1 = 446.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 267
N-[(3S,4S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida (Enantiómero B)
244
El compuesto 267 se obtuvo a partir del compuesto 264 por una separación por HPLC preparativa quiral en el segundo pico que eluye, con un ee >99%. El compuesto 267 tiene un tiempo de retención en HPLC = 7,9 min (columna ChiralPak, AD 250 x 4,6 mm, 10 \mum, 220 nm, 0,8 ml/min, EtOH como eluyente). CL/EM M^{+}+1 = 446.

Claims (20)

1. Un compuesto de fórmula
245
en la que
X es un enlace directo, -NR^{3}- o -O-;
Z es
\vskip1.000000\baselineskip
246 
\vskip1.000000\baselineskip
o -NR^{7};
R^{2} es arilo o arilo sustituido,
R^{3}, R^{4} y R^{5} se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo y alquilo sustituido;
R^{6}, R^{6a} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en uno o más de hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, ariloxi, -CN, -NH_{2}, -OH, -COOH, -CH_{2}OR^{5}, -CONHSO_{2}R^{5}, -CONR^{4}R^{5}, -NHalquilo, -NHCOalquilo, NR^{4}SO_{2}alquilo, -NR^{4}SONR^{4}R^{5}, -OCONR^{4}R^{5}, -CF_{3} y -OCF_{3}, dos de los cuales pueden estar unidos al mismo átomo de carbono del anillo;
R^{7} es hidrógeno, alquilo o -NH_{2}, y
n es 0, 1, 2 ó 3; en los que "alquilo" se refiere a grupos hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, no sustituidos, de 1 a 20 átomos de carbono;
"alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados de halógeno, hidroxi, alcoxi, oxo, alcanol, ariloxi, alcanoiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, aminas disustituidas en las que los 2 sustituyentes amino se seleccionan de alquilo, arilo o aralquilo; alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquisulfonilo, sulfonamido, sulfonamido sustituido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo sustituido, alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino, heterociclilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, homopiperazinilo y heterociclilo sustituido, en los que en los casos en los que el sustituyente está además sustituido, se seleccionará de alquilo, alcoxi, arilo o aralquilo.
"arilo" se refiere a grupos hidrocarburo aromáticos monocíclicos o bicíclicos, que tienen de 6 a 12 átomos de carbono en la parte del anillo.
"ariloxi" se refiere a un grupo arilo o un arilo sustituido unido directamente por un grupo alcoxi;
"arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo sustituido con 1 a 4 sustituyentes seleccionados de alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, aralquilo, halógeno, trifluorometoxi, trifluorometilo, hidroxi, alcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, ariloxi, araquiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, ureido, nitro, ciano, carboxi, carboxialquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, arilsulfonilamina, ácido sulfónico, alquisulfonilo, sulfonamido, ariloxi, en el que el sustituyente puede estar además sustituido con hidroxi, halógeno, alquilo, alcoxi, alquenilo, alquinilo, arilo o arilquilo; o su sal o estereoisómero farmacéuticamente aceptable.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la fórmula (III)
247
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en el que
R^{2} es fenilo, fenilo sustituido;
R^{6}, R^{6a} y R^{6b} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en uno o más de hidrógeno, -NH_{2}, OH, alcoxi, -CONR^{4}R^{5}, -NR^{4}SO_{2}alquilo, -NR^{4}SO_{2}NR^{4}R^{5}, -OCONR^{4}R^{5}, NHalquilo y -NHCOalquilo;
X es -NH-; y
n es 1 ó 2.
4. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, seleccionado del grupo que consiste en
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-cloro-4-fluorofenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-2-naftalenilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-fenilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-Amino-1-piperidinil)metil]-N-(3-etinilfenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
5-[(4-aminopiperidin-1-il)metil]-N-(4-fluoro-3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
(3R,4R)-4-amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3S,4S)-4-amino-1-[[4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3S,4S)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-[[4-[(3-metoxi-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il]metil]piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etoxifenil)amino]-pirrolo[2,1-f]-[1,2,4]triazin-5-il}-metil)piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-{[4-(2-naftilamino)pirrolo[2,1-f][1,2,4]-triazin-5-il]metil}pipendin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxi-4-metilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-metil)piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-bromofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-fluoro-5-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-clorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)-amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ol,
(3R,4S)-4-amino-1-({4-[(3-clorofenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]-triazin-5-il}metil)-piperidin-3-ol,
carbamato de (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo,
carbamato de (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)-amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-metil)piperidin-3-ilo,
carbamato de (3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-metil)piperin-3-ilo,
carbamato de (3S,4R)-4-amino-1-{4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}-metil)piperidin-3-ilo,
carbamato de (3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)-amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-ilo,
(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-3-metilpiperidin-3-ol,
(3R/S,5R/S)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol,
(3S,5S)-4-amino-1-({4-[(4-fluoro-3-metoxi-fenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol,
(3R,5R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)-amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3,5-diol,
5-{[(3R,4R)-4-amino-3-metoxipiperidin-1-il]metil}-N-(3-metoxifenil)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-(metilsulfonil)piperi-dine-3-carboxamida,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-etinilfenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)-N-metilpiperidina-3-carboxamida,
(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidina-3-carboxamida,
((3R,4R)-1-((4-(3-metoxifenilamino)pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-5-il)metil)-4-((R)-1-feniletilamino)piperidin-3-il)metanol,
N-[(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]urea
N-[(3R,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida, y
N-[(3S,4R)-4-amino-1-({4-[(3-metoxifenil)amino]pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-il}metil)piperidin-3-il]metanosulfonamida, o su sal farmacéuticamente aceptable.
5. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
248 
\vskip1.000000\baselineskip
o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
6. Una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la reivindicación 1, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. Una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la reivindicación 2, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
8. Una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la reivindicación 4, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
9. Una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o más agentes anticancerígenos o citotóxicos adicionales.
10. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, en la que dicho agente anticancerígeno o citotóxico se selecciona del grupo que consiste en tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno, acetato de megestrol, anastrozol, letrozol, borazol, exemestano, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona, acetato de goserelina, leuprolida, finasterida, inhibidores de metaloproteasas, inhibidores de la función del receptor del activador de plasminógeno uroquinasa, anticuerpos del factor de crecimiento, anticuerpos del receptor del factor de crecimiento, bevacizumab, cetuximab, trastuzumab, erlotinib, inhibidores de tirosina quinasa, inhibidores de serina/treonina quinasa, metotrexato, 5-fluorouracilo, análogos de purina y adenosina, arabinósido de citosina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina, cisplatino, carboplatino, mostaza nitrogenada, melfalán, clorambucilo, busulfán, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureas, tiotepa, vincristina, vinorrelbina, vinblastina, vinflunina, paclitaxel, docetaxel, análogos de epotilona, análogos de discodermolida, análogos de eleuterobina, etopósido, tenipósido, amsacrina, tapotecán, flavopiridol, bortezomib y modificadores de la respuesta biológica.
11. Uno o más compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para usar en el tratamiento de una enfermedad proliferativa en una especie mamífera que lo necesite.
12. El uno o más compuestos de la reivindicación 11, en el que la enfermedad proliferativa se selecciona del grupo que consiste en cáncer, psoriasis y artritis reumatoide.
13. El uno o más compuestos de la reivindicación 12, en el que la enfermedad proliferativa es cáncer.
14. El uno o más compuestos de la reivindicación 13, en el que se va a administrar además una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes anticancerígenos o citotóxicos distintos en combinación con uno o más compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, a una especie de sangre caliente que lo necesite.
15. El uno o más compuestos de la reivindicación 14, en el que dicho agente anticancerígeno o citotóxico se selecciona del grupo que consiste en tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno, acetato de megestrol, anastrozol, letrozol, borazol, exemestano, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona, acetato de goserelina, leuprolida, finasterida, inhibidores de metaloproteasas, inhibidores de la función del receptor del activador de plasminógeno uroquinasa, anticuerpos del factor de crecimiento, anticuerpos del receptor del factor de crecimiento, bevacizumab, cetuximab, trastuzumab, erlotinib, inhibidores de tirosina quinasa, inhibidores de serina/treonina quinasa, metotrexato, 5-fluorouracilo, análogos de purina y adenosina, arabinósido de citosina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina, cisplatino, carboplatino, mostaza nitrogenada, melfalán, clorambucilo, busulfán, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureas, tiotepa, vincristina, vinorrelbina, vinblastina, vinflunina, paclitaxel, docetaxel, análogos de epotilona, análogos de discodermolida, análogos de eleuterobina, etopósido, tenipósido, amsacrina, tapotecán, flavopiridoles, inhibidores de proteosoma incluyendo bortezomib y modificadores de la respuesta biológica.
16. Uno o más compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para usar en la modulación de la actividad del receptor de tirosina quinasa en una especie mamífera que lo necesite.
17. Uno o más compuestos de la reivindicación 16, en el que dicho receptor de tirosina quinasa se selecciona del grupo que consiste en HER1, HER2 y HER4.
18. Uno o más compuestos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para usar en el tratamiento de enfermedades asociadas con las rutas de transducción de señales que operan a través de los receptores de factores de crecimiento, en una especie mamífera que lo necesite.
19. Un procedimiento para identificar inhibidores competitivos de quinasa ATP, que comprende seleccionar un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que se une en el bolsillo de adenina, el bolsillo de ribosa, el bolsillo de unión de fosfato, región 1 de especificidad y región 2 de especificidad de la quinasa 2 dependiente de ciclina humana (CDK2), en el que el grupo que ocupa el bolsillo de unión de ribosa y/o de fosfato, puede interaccionar con uno o más de los restos totalmente conservados implicados en la unión de
fosfato.
20. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 19, en el que el grupo interacciona con los restos Asn818 y/o Asp831 (numeración de HER1) o los restos correspondiente en una quinasa diferente de los bolsillos de unión de ribosa/fosfato.
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