CN102482281A

CN102482281A - 吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物

Info

Publication number: CN102482281A
Application number: CN2010800334905A
Authority: CN
Inventors: 坪池一成; 水野玄; 西田洋; 河野繁行; 丰田晃子; 丹泽文惠; 藤原康策
Original assignee: Ube Industries Ltd
Current assignee: Daiichi Sankyo Co Ltd; Ube Corp
Priority date: 2009-07-28
Filing date: 2010-07-27
Publication date: 2012-05-30
Also published as: IN2012DN01251A; US20120149902A1; CA2768821A1; TW201107328A; WO2011013656A1; JPWO2011013656A1; AU2010279188A1; KR20120065321A; EP2511276A4; EP2511276A1

Abstract

本发明提供了一种式(I)所表示的具有HER2抑制作用的化合物或者其药用盐，其中T¹是苯基、吲唑基或者苯并呋喃基，n是0-3的整数，R¹是氢原子、卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，m是0-3的整数，R²是羟基或者任选被一个或者两个C_1-4烷氧基取代的C_1-4烷基，且R³是氢原子、C_1-4烷基或者C_2-6炔基。

Description

吡咯并[2,3-D]嘧啶衍生物

技术领域

本发明涉及一种对HER2激酶活性具有抑制作用的新型化合物，其药用盐，或者包含它们作为活性成分的药物组合物。

背景技术

HER2基因，即人EGF相关受体-2基因，是一种跨膜受体蛋白的基因，其与表皮生长因子(EGF)受体(EGFR)具有同源性，并且这些受体具有酪氨酸激酶活性。已经观察到HER2蛋白(下文称作HER2)在人乳腺癌细胞中过表达，并且它的表达水平与预后有关(非专利文献1)。此外，还观察到HER2在不同的癌如胃癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、卵巢癌等中是过表达的(非专利文献2)。在HER2的下游存在着细胞内信号转换路径如Akt和MAPK，其与细胞生长密切相关，并且公认的是通过HER2过表达造成的这些信号激活导致了癌生长促进。实际上，已经观察到HER2在小鼠纤维原细胞中的过表达导致了细胞生长潜力的提高(非专利文献3)。

同样，在临床试验中已经证实，称作曲妥珠单抗(trastuzumab)(商标名Herceptin)的抗HER2的人单克隆抗体和称作拉帕替尼(lapatinib)(商标名Tykerb)的直接抑制HER2的酪氨酸激酶活性的小分子，对于存在HER2过表达的晚期乳腺癌患者是有效的。所以，两种试剂都被用作存在HER2过表达的晚期乳腺癌患者的治疗剂，并且在临床事件中已经证实了以HER2作为抗癌剂靶标的有效性。但是，还发现所述的HER2信号抑制剂对于存在HER2过表达的许多乳腺癌患者不表现出药物疗效，迫切需要开发一种具有更有效的HER2激酶抑制活性(下文也称作“HER2抑制活性”)的试剂(非专利文献4)。

在专利文献1和专利文献2中公开了吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物作为具有HER2激酶抑制活性的化合物(下文也称作“HER2抑制剂”)，但是没有公开本发明的化合物。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO1997/02266小册子(US专利No.6140332)

专利文献2：WO1998/07726小册子(US专利No.6180636)

非专利文献

非专利文献1：干细胞(Stem Cells)，第16卷第6期，413-428，1998

非专利文献2：肿瘤学年鉴(Annals Of Oncology)，第12卷第S1期，S81-S87，2001

非专利文献3：Proc Natl Acad Sci U.S.A.，第84卷第20期，7159-7163，1987

非专利文献4：癌症治疗评论(Cancer Treatment Reviews)，第35卷第2期，121-136，2009。

发明内容

本发明要解决的技术问题

本发明人已经深入研究了具有HER2抑制活性的化合物，结果发现本发明的式(I)化合物，可有效地抑制HER2激酶活性且表现出优异的细胞生长抑制作用，从而完成了本发明。换句话说，本发明的目的是提供一种具有优异的HER2抑制活性的化合物，或者其药用盐。本发明的另一目的是提供一种包含所述的化合物或者其药用盐作为活性成分的药物组合物或者HER2抑制剂，特别是抗肿瘤剂。

尽管本发明的化合物具有优异的HER2抑制活性，但是所述的化合物也可以具有不同的激酶抑制活性，如对血管新生相关的蛋白激酶活性的抑制作用。

解决问题的手段

本发明的化合物的特征在于，在吡咯并[2，3-d]嘧啶骨架的5-位上具有哌啶-1-基甲基，和在所述哌啶基的4-位上具有任选取代的氨基。

换句话说，本发明涉及，

(1)一种式(I)的化合物或者其药用盐：

其中，

T¹是苯基、吲唑基或者苯并呋喃基，

-(R¹)n表示T¹是被相同的或者不同的n个R¹基团取代，

n是0-3的整数，

R¹是氢原子、卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，

T²是哌啶基，

-(R²)m表示T²是被相同的或者不同的m个R²基团取代，

m是0-3的整数，

R²是氢原子、羟基或者C_1-4烷基，其中所述的C_1-4烷基可被一个或者两个C_1-4烷氧基取代，

R³是氢原子、C_1-4烷基或者C_2-6炔基，

(2)根据上述(1)的化合物，其中R¹是氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、甲氧基或者乙氧基，

(3)根据上述(1)或者(2)的化合物，其中R²是氢原子、羟基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基或者2-甲氧基乙基，

(4)根据上述(1)-(3)任一项所述的化合物，其中R³是氢原子、甲基、乙基或者2-丙炔基，

(5)根据上述(1)-(3)任一项所述的化合物，其中R³是氢原子，

(6)根据上述(1)的化合物，其中式(I)中的下式(II)的基团，

是下式(IIa)的基团，

其中R^1a、R^1b和R^1c各自是相同或者不同的，并且各自是氢原子、卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，

或者是苯并呋喃基，

(7)根据上述(6)的化合物，其中R^1a是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，且R^1b和R^1c各自是氢原子，

(8)根据上述(6)的化合物，其中R^1a和R^1c各自是氢原子，且R^1b是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，

(9)根据上述(6)的化合物，其中R^1a和R^1b各自是相同或者不同的且各自是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，和R^1c是氢原子，

(10)根据上述(1)的化合物，其中式(I)中的下式(III)的基团，

是下式(IIIa)的基团，

其中R^2a和R^2b各自相同或者不同且各自是氢原子、羟基或者C_1-4烷基，其中所述的C_1-4烷基可被一个或者两个C_1-4烷氧基取代，

(11)根据上述(10)的化合物，其中R^2a和R^2b各自相同或者不同且各自是氢原子或者甲基，

(12)根据上述(10)或者(11)的化合物，其中R³是氢原子，

(13)根据上述(10)的化合物，其中式(III)的基团是选自下述(IIIb)基团中的任何一种基团：

(14)根据上述(1)的化合物，其中式(I)的化合物是下述(IV)基团中的任何一种化合物：

(15)根据上述(2)-(14)任一项所述的化合物的药用盐，

(16)一种药物组合物，其包含根据上述(1)-(14)任一项所述的化合物或者其药用盐作为活性成分，

(17)一种HER2抑制剂，其包含根据上述(1)-(14)任一项所述的化合物或者其药用盐作为活性成分，

(18)一种抗肿瘤剂，其包含根据上述(1)-(14)任一项所述的化合物或者其药用盐作为活性成分，

(19)根据上述(18)的抗肿瘤剂，其中该肿瘤是血癌如白血病、淋巴瘤，或者多发性骨髓瘤、脑肿瘤、头颈癌、食道癌、胃癌、阑尾癌、结肠癌、肛门癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺癌、胃肠间质肿瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、间皮瘤、甲状腺癌、肾癌、前列腺癌、神经内分泌肿瘤、黑素瘤、乳腺癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、骨肉瘤、软组织肉瘤、卡波西(Kaposi’s)肉瘤、肌肉瘤、肾癌、膀胱癌、唾腺癌和/或睾丸癌。

同样，本发明提供一种预防、治疗或者预防肿瘤复发的方法，其包括对温血动物(优选人)施用根据上述(1)-(15)任一项所述的化合物或者其药用盐，根据上述(16)的药物组合物，根据上述(17)的HER2抑制剂，或者根据上述(18)或者(19)的抗肿瘤剂。

本发明效果

本发明式(I)的化合物或者其药用盐具有有效的HER2抑制活性，并且通过抑制HER2的细胞内磷酸化和抑制细胞生长而表现出优异的抗肿瘤效果。所以，本发明的化合物或者其药用盐，或者包含本发明的化合物或者其药用盐作为活性成分的药物组合物可用作抗肿瘤剂，特别是用作肿瘤治疗剂，其中所述的肿瘤例如是血癌如白血病、淋巴瘤，或者多发性骨髓瘤、脑肿瘤、头颈癌、食道癌、胃癌、阑尾癌、结肠癌、肛门癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺癌、胃肠间质肿瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、间皮瘤、甲状腺癌、肾癌、前列腺癌、神经内分泌肿瘤、黑素瘤、乳腺癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、骨肉瘤、软组织肉瘤、卡波西肉瘤、肌肉瘤、肾癌、膀胱癌、唾腺癌和/或睾丸癌。在上述肿瘤中，本发明的化合物或者其药用盐，或者包含本发明的化合物或者其药用盐作为活性成分的药物组合物作为存在HER2过表达的肿瘤的治疗剂是有效的。

具体实施方式

如本文所用，术语“C_1-4烷基”表示具有1-4个碳原子的直链或者支链的烷基，并且可以示例为如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。术语“C_2-6烯基”表示通过从具有2-6个碳原子的直链或者支链的烯烃的任何一个碳原子上除去一个氢原子而衍生的单价基团，并且可以示例为如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、1-甲基乙烯基、3-丁烯基、3-戊烯基、4-己烯基等。术语“C_2-6炔基”表示通过从具有2-6个碳原子的直链或者支链的炔烃的任何一个碳原子上除去一个氢原子而衍生的单价基团，并且可以示例为如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基等。术语“卤素原子”可以示例为如氟原子，氯原子，溴原子，碘原子等。

如本文所用，术语“C_1-4烷氧基”表示由所述的“C_1-4烷基”和氧原子组成的基团，并且可以示例为如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等。

在式(I)中，T¹是苯基、吲唑基或者苯并呋喃基。更优选T¹是苯基、1H-吲唑-4-基、1H-吲唑-5-基、1H-吲唑-6-基、1H-吲唑-7-基、苯并呋喃-4-基、苯并呋喃-5-基、苯并呋喃-6-基或者苯并呋喃-7-基，特别优选苯基、1H-吲唑-5-基或者苯并呋喃-5-基。

-(R¹)n表示T¹被相同或者不同的n个基团R¹取代。

n是0-3的整数。

R¹是氢原子、卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，优选氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、甲氧基或者乙氧基，更优选氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙烯基、乙炔基或者甲氧基。

在式(I)中优选的下式(II)的基团，

是下式(IIa)的基团，

其中R^1a，R^1b和R^1c各自相同或者不同，并且各自是氢原子、卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，

或者是苯并呋喃基。

在R^1a，R^1b和R^1c的优选组合中，R^1a是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，且R^1b和R^1c各自是氢原子。更优选R^1a是氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、甲氧基或者乙氧基，且R^1b和R^1c各自是氢原子。特别优选R^1a是溴原子、乙烯基、乙炔基或者甲氧基，且R^1b和R^1c各自是氢原子。

在R^1a，R^1b和R^1c的其它优选组合中，R^1a和R^1c各自是氢原子，且R^1b是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基。更优选R^1a和R^1c各自是氢原子，且R^1b是氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、甲氧基或者乙氧基。特别优选R^1a和R^1c各自是氢原子，且R^1b是氯原子或者甲氧基。

在R^1a，R^1b和R^1c的其它优选组合中，R^1a和R^1b各自是相同或者不同的且各自是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，和R^1c是氢原子。更优选R^1a和R^1b各自是相同或者不同的且各自是氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、甲氧基或者乙氧基，和R^1c是氢原子。特别优选R^1a和R^1b各自相同或者不同且各自是氟原子或者氯原子，和R^1c是氢原子。

更优选式(II)的基团是4-氯苯基、4-甲氧基苯基、3-乙炔基苯基、3-乙烯基苯基、3-氯-4-氟苯基或者苯并呋喃-5-基。

-(R²)m表示T²是被相同或者不同的m个R²基团取代。

m是0-3的整数，优选0-2的整数。

R²是氢原子、羟基或者C_1-4烷基，其中所述的C_1-4烷基可被一种或者两种，优选一种C_1-4烷氧基取代。优选R²是氢原子、羟基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基或者甲氧基乙基，特别优选氢原子、羟基、甲基或者甲氧基甲基。

R³是氢原子、C_1-4烷基或者C_2-6炔基，优选氢原子、甲基、乙基或者2-丙炔基，更优选氢原子。

在式(I)中优选的下式(III)的基团，

是下式(IIIa)的基团，

其中R^2a和R^2b各自是相同或者不同的且各自是氢原子、羟基或者C_1-4烷基，其中所述的C_1-4烷基可被一种或者两种，优选一种C_1-4烷氧基取代。优选R^2a和R^2b各自是相同或者不同的且各自是氢原子或者甲基。

R³定义如上。

更优选的式(III)的基团是选自下述(IIIb)基团中的任何一种基团，

在式(II)和式(III)基团的优选组合中，当式(II)的基团是式(IIa)的基团或者苯并呋喃基时，则式(III)的基团是式(IIIa)的基团。在式(II)和式(III)基团更优选的组合中，当式(II)的基团是4-氯苯基、4-甲氧基苯基、3-乙炔基苯基、3-乙烯基苯基、3-氯-4-氟苯基或者苯并呋喃-5-基时，则式(III)的基团是选自(IIIb)基团的任何一种基团。

此外，优选式(I)的化合物是实施例中所述的任何一种化合物。

更优选式(I)的化合物是下述(IV)基团中的任何一种化合物，

在本发明中，如需要，式(I)的化合物可以根据常规方法转化成药用盐。

这样的“药用盐”例如可以是无机酸的盐如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；羧酸的盐如乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐等；磺酸的盐如甲磺酸盐、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐等；和氨基酸的盐如谷氨酸盐、天冬氨酸盐等。

本发明的式(I)化合物或者其药用盐在置于大气中或者重结晶时，可吸附有水或者转化成水合物，且这样的水合物也包括在本发明中。

本发明的式(I)化合物或者其药用盐在置于溶剂中或者重结晶时，可转化成溶剂化物，且这样的溶剂化物也包括在本发明中。

本发明的式(I)的化合物可以具有多种异构体，例如几何异构体如顺式异构体、反式异构体等，互变异构体，或者光学异构体如d-异构体、l-异构体等，这取决于取代基的类型或者其组合，并且除非另有说明，否则本发明的化合物还包括全部的这些异构体和这些异构体任意比例的混合物。

本发明的式(I)的化合物可以包含一种或多种构成原子的非自然比例的同位素。同位素例如可以是氘(2H)、氚(3H)、碘-125(125I)、碳-14(14C)等。这些化合物可用作治疗或者预防试剂、研究试剂如检测试剂，和诊断剂如用于活体内成象的诊断剂。本发明式(I)化合物中全部的同位素变体，无论它们是否是放射性同位素变体，都包括在本发明中。

此外，本发明还包括“药用前药化合物”，其通过在活体生理条件下与酶、胃酸等反应而转化成本发明药物组合物的活性成分，式(I)的化合物，即，通过酶氧化、还原、水解等转化成化合物(I)，或者通过与胃酸等水解等转化成化合物(I)。

当氨基存在于化合物(I)中时，该前药可为通过如下方式获得的化合物：将所述的氨基进行酰化、烷基化、磷酸化(例如，通过所述的氨基进行二十酰化、丙氨酰化、戊基氨基羰化、(5-甲基-2-氧杂-1，3-二氧杂戊烯-4-基)甲氧基羰化、四氢呋喃化、吡咯烷基甲基化、新戊酰氧基甲基化或者叔丁基化等而获得的化合物)等，或者当羟基存在于化合物(I)中时，该前药可为通过如下方式获得的化合物：将所述的羟基进行酰化、烷基化、磷酸化、硼化(例如，通过将所述的羟基乙酰化、棕榈酰化、丙酰化、新戊酰基化、琥珀酰化、富马酰化、丙氨酰化或者二甲基氨基甲基羰化等而获得的化合物)等。

本发明化合物的前药可以由化合物(I)根据已知的方法来制备。同样，本发明化合物的前药还包括在生理条件下转化成化合物(1)的前药，如“IYAKUHIN no KAIHAT SU(药物研发(Development ofPharmaceuticals))”，第7卷，分子设计(Design ofMolecules)，第163-198页，HIROKAWA SHOTEN出版(1990)中所述。

通式(I)的化合物是根据例如下述方法来制备的。同样，在下述的实施例中详细阐明了制备本发明单个化合物的具体方法。此外，除非另有说明，否则在化学式中，Et表示乙基和Boc表示叔丁氧基羰基。

[方法1]

“方法1”是一种通常用于制备本发明吡咯并嘧啶化合物的合成中间体(6)的方法，

其中R¹、R²、R³、T¹、T²、m和n如上所述。

在步骤1中，将4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酸乙酯(1)与苯胺化合物(2)在有机溶剂中反应来制备化合物(3)。

苯胺化合物(2)是一种已知的化合物，或者可以由已知的化合物根据已知的方法来制备。

苯胺化合物(2)的用量通常是化合物(1)用量的1-10倍摩尔，优选1-3倍摩尔。

所用的溶剂是不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，醇如甲醇、乙醇、异丙醇或者丁醇；卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，优选醇，特别优选异丙醇。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，并且通常是0℃-150℃，优选50℃-100℃。

反应时间可以根据反应温度来变化，通常是1-24小时，优选1-3小时。

在步骤2中，化合物(3)在有机溶剂中还原来制备化合物(4)。

所用的还原剂可以根据原料化合物而变化，并且可以是例如氢化铝如氢化铝锂，或者三叔丁氧基氢化铝，硼氢化物如四氢硼化钠，或者三仲丁基硼氢化钠或者其金属络合物，优选氢化铝锂。

还原剂的用量可以根据所用的还原剂等而变化，通常是化合物(3)用量的1-10倍摩尔，优选1-3倍摩尔。

所用溶剂可以根据原料化合物、试剂等而变化，为不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可为但不限于，醇如甲醇或乙醇；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，优选醚，特别优选四氢呋喃。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，通常是0℃-150℃，优选20℃-100℃。

反应时间可以根据反应温度而变化，通常是1-24小时，优选1-6小时。

在步骤3中，将化合物(4)的5-位上的羟甲基进行卤代，然后将化合物(4)与哌啶化合物(5)在有机溶剂中、在碱存在下反应来制备化合物(6)。

卤化剂例如可以是氯化剂如亚硫酰氯或者草酰氯，或者溴化剂如亚硫酰溴或者草酰溴，优选亚硫酰氯。

卤化剂的用量可以根据所用的原料化合物、卤化剂等而变化，通常是化合物(4)量的1-1000倍摩尔，优选1-30倍摩尔。

卤化所用溶剂不干扰所述反应且能够一定程度溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳族烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪族烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，或者卤化可以在无溶剂条件下进行。优选该溶剂是芳烃，特别优选甲苯。

卤化的反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等来变化，通常是0℃-100℃，优选0℃-50℃。

反应时间可以根据反应温度而变化，通常是1-48小时，优选2-24小时。

哌啶化合物(5)是一种已知的化合物，或者可以由已知的化合物根据已知的方法来制备。

哌啶化合物(5)的用量通常是化合物(4)量的1-10倍摩尔，优选1-3倍摩尔。

所用的碱例如可以是有机碱如三乙胺、吡啶、1，8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯，或者二异丙基乙胺；无机碱如碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾或者氢氧化钠，优选三乙胺。

碱的用量通常是化合物(4)量的1-30倍摩尔，优选2-10倍摩尔。

所用溶剂是不干扰所述反应且能够一定程度溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，腈如乙腈或者丙腈；卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，优选腈，特别优选乙腈。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，通常是0℃-150℃，优选50℃-100℃。

反应时间可以根据反应温度而变化，通常是1-24小时，优选1-3小时。

[方法2]

“方法2”是一种可选择的方法，通常用于制备本发明吡咯并嘧啶化合物的合成中间体(6)，

其中R¹、R²、R³、T¹、T²、m和n定义如上。

在步骤4中，将4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲醛(7)在有机溶剂中还原来制备化合物(8)。

化合物(7)可以根据例如WO09/016132小册子所述的方法来制备。

所用的还原剂可以例如是氢化铝如氢化铝锂，或者三叔丁氧基氢化铝，硼氢化物如四氢硼化钠，或者三仲丁基硼氢化钠或者其金属络合物，优选四氢硼化钠。

还原剂的用量可以根据所用还原剂等而变化，通常是化合物(7)量的0.5-10倍摩尔，优选0.5-3倍。

所用溶剂可以根据试剂等而变化，其为不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，醇如甲醇或者乙醇；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，优选醇，特别优选乙醇。

反应温度可以根据试剂、溶剂等而变化，通常是0℃-100℃，优选0℃-30℃。

反应时间可以根据反应温度而变化，通常是30分钟-24小时，优选30分钟-1小时。

在步骤5中，将化合物(8)的5-位上的羟甲基进行卤代，然后将该卤化的化合物与哌啶化合物(5)在有机溶剂中、在碱存在下反应来制备化合物(9)。

卤化剂可以例如是氯化剂如亚硫酰氯或者草酰氯，或者溴化剂如亚硫酰溴或者草酰溴，优选亚硫酰氯。

卤化剂的用量可以根据所用的原料化合物、卤化剂等而变化，通常是化合物(8)量的1-1000倍摩尔，优选1-30倍摩尔。

卤化所用溶剂是不干扰所述反应且能够一定程度溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳族烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪族烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，或者卤化可以在无溶剂条件下进行。优选该溶剂是醚，特别优选四氢呋喃。

卤化的反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等来变化，通常是0℃-100℃，优选20℃-70℃。

哌啶化合物(5)的用量通常是化合物(8)量的1-10倍摩尔，优选1-2倍摩尔。

所用的碱例如可以是有机碱如三乙胺、吡啶、1，8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯或者二异丙基乙胺；无机碱如碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾或者氢氧化钠，优选三乙胺。

碱的用量通常是化合物(8)量的1-30倍摩尔，优选2-10倍摩尔。

所用溶剂是不干扰所述反应且能够一定程度溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，腈如乙腈或者丙腈；卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，优选氯仿和四氢呋喃的混合溶剂。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，通常是0℃-100℃，优选0℃-50℃。

反应时间可以根据反应温度而变化，通常是5分钟-24小时，优选5分钟-3小时。

在步骤6中，化合物(9)与苯胺化合物(2)在酸存在下、在无溶剂条件或者在有机溶剂中反应来制备化合物(6)。

苯胺化合物(2)的用量通常是化合物(9)量的1-100倍摩尔，优选2-10倍摩尔。

所用的酸例如可以是无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸或者硝酸；或者磺酸如甲烷磺酸、苯磺酸、萘磺酸或者樟脑磺酸，优选磺酸，特别优选甲烷磺酸。

酸的用量通常是化合物(9)量的1-3倍摩尔，优选1倍摩尔。

所用的溶剂是不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，醇如甲醇或者乙醇；卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，优选醚，特别优选1，4-二噁烷。

[方法3]

“方法3”是一种通常用于制备本发明通式(I)的吡咯并嘧啶化合物的方法，

其中R¹、R²、R³、T¹、T²、m和n如上所述。

在步骤7中，使用酸在无溶剂条件中，在有机溶剂或者在水中将叔丁氧基羰基所保护的化合物(6)脱保护，来制备本发明的吡咯并嘧啶化合物(I)。

所用的酸例如可以是无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸或者硝酸；或者有机酸例如三氟乙酸、甲烷磺酸或者甲苯磺酸，优选三氟乙酸。

酸的用量通常是化合物(6)量的1-1000倍摩尔，优选10-200倍摩尔。

所用的溶剂是不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，水；醇如甲醇或者乙醇；卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪烃如戊烷、己烷或者环己烷；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；或者这些溶剂的混合物，优选卤代烃，特别优选二氯甲烷。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，通常是-15℃到100℃，优选0℃-50℃。

[方法4]

“方法4”是一种替代方法，通常用于制备本发明的吡咯并嘧啶化合物(Ia)，其中在通式(I)中R₃是氢，

其中R¹、R²、T¹、T²、m和n如上所述。

在步骤8中，叠氮化合物(10)是使用三苯基膦和水在有机溶剂中被还原，来制备本发明的吡咯并嘧啶化合物(Ia)。

三苯基膦的用量通常是化合物(10)量的1-10倍摩尔，优选1-3倍摩尔。

水的用量通常是化合物(10)量的1-100倍摩尔，优选3-10倍摩尔。

所用的溶剂是不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚，优选四氢呋喃。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，通常是0℃-100℃，优选20℃-70℃。

[方法5]

“方法5”是一种替代方法，通常用于制备本发明的吡咯并嘧啶化合物(I)，

其中R¹、R²、R³、T¹、T²、m和n如上所述。

在步骤9中，将1，3-二噁烷化合物(11)在有机溶剂或者水中使用酸脱保护，来制备酮化合物(12)。

1，3-二噁烷化合物(11)可以根据“方法2”，使用已知的化合物代替哌啶化合物(5)来制备。

所用的酸例如可以是无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸或者硝酸；或者有机酸如三氟乙酸、甲烷磺酸或者甲苯磺酸，优选盐酸。

酸的用量通常是化合物(11)量的1-1000倍摩尔，优选3-30倍摩尔。

所用的溶剂是不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，水；醇如甲醇或者乙醇；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；酮如丙酮或者甲乙酮；卤代烃如二氯甲烷或者氯仿；芳烃如苯、甲苯、二甲苯或者三甲苯；脂肪族烃如戊烷、己烷或者环己烷；或者这些溶剂的混合物，优选水、四氢呋喃和丙酮的混合溶剂。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，通常是0℃-150℃，优选20℃-80℃。

反应时间可以根据反应温度而变化，通常是1-48小时，优选1-24小时。

在步骤10中，将酮化合物(12)与氨基化合物(13)在水或者有机溶剂中反应，并且用三乙酰氧基硼氢化钠还原，来制备本发明的吡咯并嘧啶化合物(I)。

氨基化合物(13)是一种已知的化合物，或者可以由已知的化合物根据已知方法来制备。

氨基化合物(13)的用量通常是化合物(12)量的1-10倍摩尔，优选1-3倍摩尔。

三乙酰氧基硼氢化钠的用量通常是化合物(12)量的1-10倍摩尔，优选1-3倍摩尔。

所用的溶剂是不干扰所述反应且能够在一定程度上溶解原料的溶剂，例如可以是但不限于，水；醚如四氢呋喃、乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、1，4-二噁烷或者二甘醇二甲醚；醇例如甲醇、乙醇或者丙醇；或者这些溶剂的混合物，优选四氢呋喃。

反应温度可以根据原料化合物、试剂、溶剂等而变化，通常是-20℃到100℃，优选0℃-50℃。

在完成上述每个反应之后，根据常规方法从反应混合物中收集目标化合物。例如，该目标化合物可以如下来获得：适当中和该反应混合物，并且当存在不溶物时，过滤除去该物质，然后加入水不混溶性有机溶剂如乙酸乙酯，水洗，然后分离包含目标化合物的有机层，在干燥剂如无水硫酸镁上干燥，然后蒸馏掉溶剂。

如需要，所获得的目标化合物可通过常规方法的适当组合来分离和纯化，例如重结晶、重沉淀，或者通常用于分离和纯化有机化合物的普通方法(例如，使用载体如硅胶或者氧化铝的吸附柱色谱法、离子交换色谱法，或者在硅胶或者烷基化硅胶上的正相或者反相柱色谱法(优选高性能液体色谱法))，或者通过光学活性载体的手性柱色谱法，并且用适当的洗提剂来洗提所述化合物。

当用作上述治疗剂或者预防剂时，本发明的式(I)化合物或者其药用盐可以单独给药，或者以与药用赋形剂、稀释剂等适当的混合物的形式来给药，例如片剂、胶囊、颗粒、粉末、糖浆等形式的口服，或者注射、栓剂等的胃肠外给药。

这些制剂可以根据已知的方法制备，并使用添加剂如赋形剂(其可以例如是有机赋形剂，例如糖衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇或者山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、马铃薯淀粉、α淀粉或者糊精；纤维素衍生物如结晶纤维素；阿拉伯树胶；右旋糖苷；或者支链淀粉(pullulan)；和无机赋形剂，例如硅酸盐衍生物如轻质无水硅酸、合成硅酸铝、硅酸钙或者硅酸铝镁(magnesium aluminometasilicate)；磷酸盐如磷酸氢钙；碳酸盐如碳酸钙；硫酸盐如硫酸钙)，润滑剂(其可以例如是硬脂酸，或者金属硬脂酸盐例如硬脂酸钙，或者硬脂酸镁；滑石；胶体二氧化硅；蜡如维格姆(Veegum)，或者鲸油；硼酸；己二酸；硫酸盐如硫酸钠；二醇；富马酸；苯甲酸钠；DL亮氨酸；脂肪酸钠盐；月桂基硫酸盐如月桂基硫酸钠，或者月桂基硫酸镁；硅酸衍生物如无水硅酸，或者硅酸水合物；和上述淀粉衍生物)，粘合剂(其可以例如是羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇，以及上述在所述的赋形剂中所述的相同的化合物)，分解质(其可以例如是纤维素衍生物如低取代的羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙，或者内交联的羧甲基纤维素钠；化学改性的淀粉或者纤维素如羧甲基淀粉、羧基甲基淀粉钠，或者交联的聚乙烯基吡咯烷酮)，稳定剂(其可以例如是对羟基苯甲酸酯如对羟基苯甲酸甲酯或者对羟基苯甲酸丙酯；醇如氯丁醇、苄基醇或者苯乙醇；苯扎氯铵(benzalkonium chloride)；酚如苯酚或者甲酚；硫汞撒(thimerosal)；脱水乙酸；和山梨酸)，调味剂(其可以例如是常规使用的甜味剂、酸化剂、香味剂等)，稀释剂等。

本发明化合物的剂量可以根据不同的条件而大范围变化，如试剂活性、患者(温血动物，特别是人)的病情、年龄和体重等，令人期望的是根据病情每日一到数次对患者用药，每次给药的剂量在口服给药时是从下限0.01mg/kg体重到上限5000mg/kg体重，或者在静脉给药时从下限0.001mg/kg体重到上限5000mg/kg体重。优选的剂量是每日0.1mg/kg体重到100mg/kg体重。

本发明的化合物可以与其它抗肿瘤剂组合使用。例如，该抗肿瘤剂可以是烷基化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、抗肿瘤植物成分、BRM(生物响应改变剂)、激素、维生素、抗肿瘤抗体、分子靶药物、其它抗肿瘤剂等。

更具体地，该烷基化剂可以例如是烷基化剂如氮芥、氮芥N-氧化物或者苯丁酸氮芥，氮丙啶烷基化剂如卡波醌(carboquone)或者噻替派(thiotepa)，环氧化物烷基化剂如二溴甘露醇或者二溴己六醇，亚硝基脲烷基化剂如卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、盐酸尼莫司汀(nimustine)、链脲菌素(streptozocin)、氯脲霉素或者雷莫司汀(ranimustine)、白消安(busulfan)、甲磺丙胺(improsulfan tosilate)、达卡巴嗪(dacarbazine)等。

抗代谢物可以例如是嘌呤抗代谢物如6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤或者次黄苷，嘧啶抗代谢物如氟尿嘧啶、喃氟啶(tegafur)、喃氟啶-尿嘧啶、卡莫氟(carmofur)、去氧氟尿苷、溴尿苷、阿糖胞苷或者依诺他滨(enocitabine)，叶酸抗代谢物如氨甲叶酸或者三甲曲沙(trimetrexate)等。

抗肿瘤抗生素可以例如是蒽环类抗生素抗肿瘤剂如丝裂霉素C、博来霉素、灰色霉素、道诺霉素、阿克拉霉素(aclarubicin)、阿霉素、吡喃阿霉素(pirarubicin)、THP-阿霉素、4’-阿霉素或者表阿霉素(epirubicin)、色霉素A3、放射霉素D等。

抗肿瘤植物成分可以例如是长春生物碱如长春地辛、长春新碱或者长春碱，紫杉烷如紫杉醇(paclitaxel)或者多烯紫杉醇(docetaxel)，表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)如依托泊苷(etoposide)或者替尼泊苷(teniposide)，等等。

BRM可以例如是肿瘤坏疽因子，消炎痛等。

激素可以例如是氢化可的松、地塞米松、甲基氢化波尼松、氢化波尼松、普拉雄酮(prasterone)、倍他米松、去炎松、羟甲烯龙(oxymetholone)、诺龙(nandrolone)、美替诺龙(methenolone)、磷雌酚、乙炔基雌二醇、氯化孕酮、甲孕酮等。

维生素可以例如是维生素C、维生素A等。

抗肿瘤抗体或者分子靶药物可以是曲妥珠单抗(trastuzumab)、利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、地诺单抗(denosumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、英利昔单抗(infliximab)、甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)、吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、舒尼替尼(sunitinib)、拉帕替尼(lapatinib)、索拉非尼(sorafenib)等。

其它抗肿瘤剂可以例如是顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、它莫西芬、喜树碱衍生物、乐果、环磷酰胺、美法仑、左旋天冬酰胺、醋葡醛内酯(aceglatone)、西索菲兰(sizofiran)、Picibanil、甲苄肼、哌泊溴烷(pipobroman)、新制癌菌素、羟基脲、乌苯美司(ubenimex)、克癌星(Krestin)等。

本发明还包括一种预防和/或治疗癌症的方法，特征在于该方法包括施用本发明的化合物或者其药用盐。

此外，本发明还包括本发明的化合物或者其药用盐在用于制造所述药品中的应用。

实施例

下文描述了本发明化合物的实施例、合成中间体的实施例、配制实施例和药理学测试结果。应当注意，这些示例是用于更好理解本发明的目的，而非旨在限制本发明的范围。同样，在实施例和参考例中，紧邻化学名称之后所述的每个[对映体1]和[对映体2]表示将在参考例14-1和参考例14-2每个中所获得的单个对映体分别用作中间体。即使实施例或者参考例中所述的化学式被表示为平面结构，由单个对映体所制备的标题化合物也表示其作为单个对映体而存在。同样，除非另有说明，否则在化学式中，Bz表示苯甲酰基，Bn表示苄基，和MsOH表示甲烷磺酸。

[参考例]

(参考例1-1)

4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酸乙酯盐酸盐

向4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酸乙酯(0.383g，1.70mmol)在异丙醇(15ml)中的溶液中加入5-氨基苯并[b]呋喃(0.250g，1.88mmol)，将该混合物在回流下加热1小时。

在反应完成后，将该反应混合物冷却到0℃，然后过滤收集沉淀的固体，用乙醚清洗，并减压干燥以制备参考例1-1的化合物(0.528g，1.47mmol，产率87％)。

质谱(EI，m/z)：322[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：12.95(1H，br s)，11.06(1H，s)，8.39(1H，s)，8.24(1H，d，J＝1.7Hz)，8.15(1H，s)，8.02(1H，d，J＝2.0Hz)，7.65(1H，d，J＝8.8Hz)，7.56(1H，dd，J＝8.8，2.0Hz)，7.02(1H，d，J＝1.7Hz)，4.40(2H，q，J＝7.1Hz)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz)。

下文中，参考例1-2到1-4的化合物是根据参考例1-1所述的制备方法来制备的。

(参考例1-2)

4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酸乙酯盐酸盐

质谱(EI，m/z)：334[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：12.87(1H，br s)，11.02(1H，s)，8.45(1H，s)，8.31(1H，dd，J＝6.8，2.7Hz)，8.14(1H，s)，7.58(1H，ddd，J＝9.0，4.2，2.7Hz)，7.43(1H，t，J＝9.0Hz)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，1.36(3H，t，J＝7.1Hz)。

(参考例1-3)

4-(3-乙烯基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酸乙酯盐酸盐

质谱(EI，m/z)：308[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：12.87(1H，br s)，10.98(1H，s)，8.42(1H，s)，8.13(1H，s)，7.88(1H，t，J＝1.7Hz)，7.76(1H，ddd，J＝8.1，2.0Hz，1.0Hz)，7.38(1H，t，J＝7.8Hz)，7.24(1H，dt，J＝7.7，1.2Hz)，6.78(1H，dd，J＝17.7，10.9Hz)，5.85(1H，dd，J＝17.7，0.9Hz)，5.31(1H，dd，J＝11.0，1.0Hz)，4.40(2H，q，J＝7.1Hz)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz)。

(参考例1-4)

4-(3-氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酸乙酯盐酸盐

质谱(EI，m/z)：316[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.82(1H，s)，8.54(1H，s)，8.01(1H，t，J＝2.1Hz)，7.94(1H，s)，7.68(1H，ddd，J＝8.1，1.0，2.1Hz)，7.35(1H，t，J＝8.1Hz)，7.20(1H，ddd，J＝8.0，1.0，2.1Hz)，4.46(2H，q，J＝7.2Hz)，1.45(3H，t，J＝7.2Hz)。

(参考例2-1)

[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]甲醇

向4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酸乙酯盐酸盐(参考例1-1)(0.520g，1.45mmol)在四氢呋喃(10ml)中的溶液中加入0℃的1M氢化铝锂/四氢呋喃溶液(3.2ml，3.2mmol)。然后，将该混合物室温搅拌2.5小时，随后60℃搅拌1小时。

在反应完成后，将该反应混合物用四氢呋喃稀释，冷却到0℃，然后依次加入1.3ml水和0.8ml的2N氢氧化钠水溶液。将该混合物室温搅拌20分钟，然后用氯仿和甲醇稀释，加入硫酸镁。将固体使用Celite(商标名)过滤器滤出，并将滤出液在减压浓缩。将所获得的残留物悬浮于氯仿和乙醚(1∶1(V/V))混合溶液中，过滤收集，减压下干燥以制备参考例2-1的化合物(0.384g，1.37mmol，产率94％)。

质谱(EI，m/z)：280[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.59(1H，br s)，10.03(1H，s)，8.29(1H，s)，8.24(1H，d，J＝1.7Hz)，7.96(1H，d，J＝2.0Hz)，7.57(1H，d，J＝9.0Hz)，7.48(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz)，7.16(1H，s)，6.98(1H，d，J＝1.7Hz)，6.43(1H，t，J＝3.9Hz)，4.77(2H，d，J＝3.9Hz)。

下文中，参考例2-2到2-4的化合物是根据参考例2-1所述的制备方法来制备的。

(参考例2-2)

[4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]甲醇

质谱(EI，m/z)：292[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.69(1H，br s)，10.18(1H，s)，8.34(1H，s)，8.25(1H，dd，J＝6.8，2.7Hz)，7.56(1H，ddd，J＝9.0，4.4，2.7Hz)，7.40(1H，t，J＝9.0Hz)，7.20(1H，s)，6.48(1H，br s)，4.76(2H，s)。

(参考例2-3)

[4-(3-乙烯基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]甲醇

质谱(EI，m/z)：266[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.62(1H，br s)，10.05(1H，s)，8.30(1H，s)，7.81(1H，t，J＝2.0Hz)，7.77(1H，ddd，J＝8.1，2.0，1.0Hz)，7.32(1H，t，J＝7.8Hz)，7.18(1H，s)，7.13(1H，d，J＝7.6Hz)，6.74(1H，dd，J＝17.7，10.9Hz)，6.43(1H，s)，5.81(1H，dd，J＝17.7，1.1Hz)，5.29(1H，dd，J＝11.0，1.0Hz)，4.76(2H，s)。

(参考例2-4)

[4-(3-氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]甲醇

质谱(EI，m/z)：274[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：9.31(1H，s)，8.43(1H，s)，7.93(1H，t，J＝2.0Hz)，7.61(1H，ddd，J＝8.1，1.0，2.0Hz)，7.27(1H，t，J＝8.1Hz)，7.03(1H，ddd，J＝8.1，1.0，2.0Hz)，7.00(1H，s)，4.91(2H，s)。

(参考例3-1)

{1-[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

在氮气氛下向[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]甲醇(参考例2-1)(0.182g，0.650mmol)在甲苯(6ml)中的悬浮液中加入亚硫酰氯(0.60ml，8.2mmol)，并将该混合物室温搅拌15.5小时。

在反应完成后，过滤收集固体，用乙醚清洗，并减压干燥。

在氮气氛下向所获得的固体在乙腈(6ml)中的悬浮液中加入三乙胺(0.50ml，3.6mmol)和4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶(0.171g，0.854mmol)，并将该混合物回流下加热1.5小时。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，然后进行硅胶柱色谱法(洗提溶剂：氯仿∶甲醇＝60∶1-50∶1(V/V))，将包含目标化合物的流分减压浓缩以制备参考例3-1的化合物(0.219g，0.473mmol，产率73％)。

质谱(EI，m/z)：462[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.56(1H，br s)，10.96(1H，s)，8.24(1H，d，J＝2.0Hz)，8.23(1H，s)，7.96(1H，d，J＝2.0Hz)，7.57(1H，d，J＝8.9Hz)，7.50(1H，dd，J＝8.9，2.0Hz)，7.14(1H，s)，6.98-6.96(2H，m)，3.66(2H，s)，3.52-3.31(1H，m)，3.02(2H，br d，J＝11.4Hz)，2.11(2H，br t，J＝11.4Hz)，1.80(2H，br d，J＝10.7Hz)，1.53(2H，br q，J＝10.7Hz)，1.38(9H，s)。

下文中，参考例3-2到3-6的化合物是根据参考例3-1所述的制备方法来制备的。

(参考例3-2)

{1-[4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：474[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.67(1H，br s)，11.20(1H，s)，8.32(1H，dd，J＝7.0，2.6Hz)，8.29(1H，s)，7.50(1H，ddd，J＝9.0，4.2，2.6Hz)，7.40(1H，t，J＝9.0Hz)，7.19(1H，d，J＝1.2Hz)，6.94(1H，d，J＝7.6Hz)，3.66(2H，s)，3.38-3.24(1H，m)，3.00(2H，br d，J＝11.2Hz)，2.09(2H，br t，J＝11.2Hz)，1.78(2H，br d，J＝11.6Hz)，1.45(2H，br q，J＝11.6Hz)，1.37(9H，s)。

(参考例3-3)

{1-[4-(3-乙烯基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：448[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.60(1H，br s)，10.94(1H，s)，8.26(1H，s)，7.83(1H，t，J＝1.7Hz)，7.74(1H，dd，J＝7.9，1.8Hz)，7.34(1H，t，J＝7.9Hz)，7.17-7.14(2H，m)，6.99(1H，d，J＝6.8Hz)，6.77(1H，dd，J＝17.8，11.0Hz)，5.81(1H，dd，J＝17.7，0.9Hz)，5.29(1H，dd，J＝11.0，0.7Hz)，3.65(2H，s)，3.39-3.34(1H，m)，3.01(2H，d，J＝11.0Hz)，2.11(2H，t，J＝11.7Hz)，1.81(2H，d，J＝11.0Hz)，1.59-1.44(2H，m)，1.37(9H，s)。

(参考例3-4)

{1-[4-(3-氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：456[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.02-10.99(1H，brm)，9.57(1H，br s)，8.44(1H，s)，7.94(1H，t，J＝2.0Hz)，7.60(1H，ddd，J＝8.1，1.0，2.0Hz)，7.29(1H，t，J＝8.1Hz)，7.03(1H，ddd，J＝8.1，1.0，2.0Hz)，6.96(1H，d，J＝2.0Hz)，4.46(1H，d，J＝8.3Hz)，3.69(2H，s)，3.58(1H，br s)，3.05(2H，d，J＝9.8Hz)，2.23(2H，t，J＝11.1Hz)，2.04(2H，d，J＝11.2Hz)，1.57-1.43(11H，m)。

(参考例3-5)

反式-4-叠氮-1-[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-3-醇

质谱(EI，m/z)：404[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.60(1H，br s)，10.74(1H，s)，8.24(1H，s)，8.22(1H，d，J＝1.7Hz)，7.98(1H，d，J＝2.0Hz)，7.58(1H，d，J＝8.8Hz)，7.43(1H，dd，J＝8.8，2.0Hz)，7.17(1H，s)，6.96(1H，d，J＝1.7Hz)，5.45(1H，d，J＝4.9Hz)，3.81(1H，d，J＝13.2Hz)，3.65(1H，d，J＝13.2Hz)，3.55-3.40(2H，m)，3.13-2.97(2H，m)，2.16(1H，br t，J＝11.4Hz)，2.04-1.87(2H，m)，1.45(1H，qd，J＝12.0，3.0Hz)。

(参考例3-6)

反式-4-叠氮-1-[4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-3-醇

质谱(EI，m/z)：416[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.71(1H，br s)，10.90(1H，s)，8.30(1H，s)，8.24(1H，dd，J＝6.7，2.4Hz)，7.54(1H，ddd，J＝9.0，4.1，2.4Hz)，7.42(1H，t，J＝9.0Hz)，7.22(1H，s)，5.43(1H，d，J＝4.2Hz)，3.81(1H，d，J＝13.2Hz)，3.63(1H，d，J＝13.2Hz)，3.48-3.33(2H，m)，3.11-2.93(2H，m)，2.18(1H，br t，J＝11.2Hz)，2.05-1.88(2H，m)，1.41(1H，br q，J＝11.2Hz)。

(参考例4)

(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲醇

向4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲醛(参见WO09/016132小册子)(6.75g，37.2mmol)在乙醇(100ml)中的溶液中加入四氢硼酸钠(0.704g，18.6mmol)，并将该混合物室温搅拌20分钟。然后，向该混合物中加入四氢硼酸钠(0.352g，9.30mmol)，并室温搅拌20分钟。

在反应完成后，将反应混合物减压浓缩，将所获得的粗体溶解在乙酸乙酯/四氢呋喃的混合溶液中，用饱和氯化铵水溶液清洗。将所获得的有机层用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所得的固体悬浮在二异丙醚中，过滤收集，并减压下干燥以制备参考例4的化合物(4.93g，26.9mmol，产率72％)。

质谱(EI，m/z)：183[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：12.37(1H，br s)，8.55(1H，s)，7.55(1H，s)，5.03(1H，t，J＝5.1Hz)，4.75(2H，dd，J＝5.1，1.0Hz)。

(参考例5-1)

[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐

向(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)甲醇(参考例4)(5.51g，30mmol)和四氢呋喃(90ml)的悬浮液中加入亚硫酰氯(15ml，207mmol)，将该混合物回流条件下加热2小时。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，并且进一步减压下干燥。向所获得的残留物中加入四氢呋喃(90ml)、氯仿(40ml)和4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶(6.07g，30mmol)，将该混合物室温搅拌5分钟。然后，向该混合物中加入三乙胺(20.9ml，150mmol)，室温搅拌10分钟。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯(200ml)。将有机层用饱和氯化铵水溶液清洗，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所获得的残留物进行硅胶柱层析(洗提溶剂∶氯仿∶甲醇＝19∶1(V/V))，并且将包含目标化合物的流分减压浓缩以制备粗产物(9.71g，26.5mmol)。将所获得的粗产物溶解在丙酮(130ml)中，并向该溶液中加入甲烷磺酸(1.72ml，26.5mmol)，然后加入二异丙醚(100ml)来沉淀所述盐。将该沉淀的产物过滤收集，并减压下干燥以制备参考例5-1的化合物(3.51g，13.5mmol，产率37％)。

质谱(EI，m/z)：365[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.64(1H，s)，7.90(1H，s)，4.67(2H，s)，3.68-3.31(3H，m)，3.22(2H，td，J＝13.2，2.6Hz)，2.70(3H，s)，2.15(2H，d，J＝14.4Hz)，1.68(2H，dq，J＝4.0，13.0Hz)，1.44(9H，s)。

下文中，参考例5-2到5-6的化合物是根据参考例5-1所述的制备方法来制备的。

要注意用于制备参考例5-5的化合物的4-叠氮哌啶-3-醇是参照WO05/066176小册子来制备的。同样，在参考例5-5和5-6的化合物的制备中，该化合物不是盐的形式，而是游离形式，因为所述的化合物没有进行反应来转化成为甲磺酸盐。

(参考例5-2)

[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐

质谱(EI，m/z)：379[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.64(1H，s)，7.89(1H，s)，4.69(2H，s)，3.49(2H，d，J＝12.7Hz)，3.25(2H，t，J＝13.1Hz)，2.69(3H，s)，2.46(2H，d，J＝13.9Hz)，1.67(2H，dt，J＝4.6，14.2Hz)，1.44(9H，s)，1.32(3H，s)。

(参考例5-3)

[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)-4-甲氧基甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐

质谱(EI，m/z)：409[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.64(1H，s)，7.89(1H，s)，4.69(2H，s)，3.52(2H，d，J＝12.0Hz)，3.43(2H，s)，3.33(3H，s)，3.26(2H，t，J＝10.6Hz)，2.70(3H，s)，2.40(2H，d，J＝14.2Hz)，1.85(2H，td，J＝14.3，3.8Hz)，1.44(9H，s)。

(参考例5-4)

[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)哌啶-4-基]甲基氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐

质谱(EI，m/z)：379[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.50(1H，s)，10.38(1H，br s)，8.43(1H，s)，8.32(1H，br s)，4.60(2H，d，J＝5.4Hz)，4.36(1H，br s)，3.80(2H，d，J＝11.5Hz)，3.08-2.96(5H，m)，2.79(3H，s)，2.37(2H，dq，J＝3.0，12.8Hz)，1.90(2H，d，J＝12.0Hz)，1.46(9H，s)。

(参考例5-5)

反式-4-叠氮-1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)哌啶-3-醇

质谱(EI，m/z)：307[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.50(1H，s)，7.48(1H，s)，3.89(1H，dd，J＝13.7，0.6Hz)，3.83(1H，dd，J＝13.7，0.6Hz)，3.50(1H，td，J＝9.5，4.5Hz)，3.21-3.07(2H，m)，2.99-2.93(1H，brm)，2.16(1H，td，J＝11.8，2.6Hz)，2.02(1H，dd，J＝10.9，10.1Hz)，1.93(1H，ddt，J＝12.5，4.6，2.6Hz)，1.49(1H，tdd，J＝12.5，12.0，4.6Hz)。

(参考例5-6)

8-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)-1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷

质谱(EI，m/z)：308[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：10.19(1H，br s)，8.63(1H，s)，7.32(1H，s)，3.96(4H，s)，3.88(2H，d，J＝0.7Hz)，2.66(4H，t，J＝5.5Hz)，1.76(4H，t，J＝5.6Hz)。

(参考例5-7)

反式-[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)-3-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐

参考例5-7的化合物是根据参考例5-1所述的制备方法，使用参考例15-1的化合物来制备的。

质谱(EI，m/z)：380[M+1]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.63(1H，s)，7.91(1H，s)，4.67(2H，s)，3.72-3.53(2H，m)，3.38-3.26(1H，m)，3.20(1H，td，J＝13.2，2.4Hz)，2.96(1H，t，J＝12.6Hz)，2.69(3H，s)，2.18-2.04(1H，m)，1.96-1.79(1H，m)，1.70(1H，qd，J＝13.2，3.9Hz)，1.43(9H，s)，1.00(3H，d，J＝6.3Hz)。

(参考例5-8[对映体1])

反式-[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)-3-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐[对映体1]

参考例5-8的化合物[对映体1]是根据参考例5-1所述的制备方法，使用参考例15-2的化合物[对映体1]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与参考例5-7的结果相同。

(参考例5-9[对映体2])

反式-[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)-3-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐[对映体2]

参考例5-9的化合物[对映体2]是根据参考例5-1所述的制备方法，使用参考例15-3的化合物[对映体2]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与参考例5-7的结果相同。

(参考例6-1)

{1-[4-(3-乙炔基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

向[1-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯甲磺酸盐(参考例5-1)(1.50g，3.24mmol)在1，4-二噁烷(6ml)中的悬浮液中加入3-乙炔基苯胺(1.5ml，13.3mmol)，并将该混合物在100℃搅拌1小时。

在反应完成后，向该反应混合物中加入乙酸乙酯(50ml)，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液清洗，在无水硫酸钠上干燥，然后减压浓缩。将所获得的残留物悬浮在乙酸乙酯中，过滤收集，并且减压下干燥以制备参考例6-1的化合物(653mg，1.46mmol，产率45％)。

质谱(EI，m/z)：446[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.00(1H，s)，9.98(1H，s)，8.44(1H，s)，7.90(1H，t，J＝1.7Hz)，7.83(1H，d，J＝8.3Hz)，7.34(1H，t，J＝7.9Hz)，7.20(1H，dt，J＝7.6，1.2Hz)，6.97(1H，d，J＝2.0Hz)，4.48(1H，d，J＝7.8Hz)，3.69(2H，s)，3.59(1H，br s)，3.11-3.03(3H，m)，2.23(2H，br s)，2.04(2H，d，J＝10.7Hz)，1.59-1.43(11H，m)。

下文中，参考例6-2到6-18的化合物是根据参考例6-1所述的制备方法来制备的。

要注意的是，制备参考例6-7的化合物所用的3-溴-5-氟苯胺是参照“Tehrani，Lida R.等人生物有机和医药化学快报(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters)，15，5061(2005)”来制备的。同样，在制备参考例6-15和6-16的化合物中，每个制备是在每个相应的游离形式吡咯并嘧啶化合物被用等量甲烷磺酸转化成盐形式之后进行的。

(参考例6-2)

{1-[4-(3-溴-4-甲基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：514，516[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：10.96(1H，s)，9.14(1H，br s)，8.41(1H，s)，7.99(1H，d，J＝2.2Hz)，7.62(1H，dd，J＝8.2，2.2Hz)，7.22(1H，d，J＝8.2Hz)，6.93(1H，d，J＝2.2Hz)，4.46(1H，d，J＝7.6Hz)，3.68(2H，s)，3.59(1H，br s)，3.05(2H，d，J＝9.3Hz)，2.39(3H，s)，2.22(2H，t，J＝12.3Hz)，2.04(2H，d，J＝10.3Hz)，1.54-1.41(11H，m)。

(参考例6-3)

{1-[4-(3，4，5-三氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：476[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.06(1H，s)，9.10(1H，s)，8.44(1H，s)，7.52(2H，dd，J＝10.1，6.2Hz)，6.97(1H，d，J＝2.2Hz)，4.45(1H，br s)，3.68(2H，s)，3.55(1H，br s)，3.05(2H，br s)，2.22(2H，br s)，2.05(2H，d，J＝11.2Hz)，1.49-1.45(11H，m)。

(参考例6-4)

{1-[4-(3-溴苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：500，502[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.02(1H，s)，9.86(1H，br s)，8.45(1H，s)，8.06(1H，t，J＝2.0Hz)，7.69(1H，d，J＝7.8Hz)，7.24(1H，t，J＝7.8Hz)，7.18(1H，dt，J＝8.0，1.5Hz)，6.97(1H，d，J＝2.0Hz)，4.47(1H，d，J＝7.8Hz)，3.69(2H，s)，3.58(1H，br s)，3.06(2H，d，J＝12.2Hz)，2.24(2H，t，J＝11.8Hz)，2.04(2H，d，J＝10.7Hz)，1.57-1.44(11H，m)。

(参考例6-5)

{1-[4-(1H-吲唑-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：462[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：12.95(1H，s)，11.53(1H，d，J＝1.5Hz)，10.93(1H，s)，8.34(1H，s)，8.22(1H，s)，8.05(1H，s)，7.53(2H，s)，7.13(1H，d，J＝2.0Hz)，6.98(1H，br d，J＝7.6Hz)，3.66(2H，s)，3.36-3.28(1H，m)，3.02(2H，br d，J＝11.7Hz)，2.11(2H，br t，J＝11.4Hz)，1.80(2H，br d，J＝10.7Hz)，1.53(2H，br dd，J＝21.1，9.6Hz)，1.38(9H，s)。

(参考例6-6)

{1-[4-(3，4-二氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：490[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.09(1H，br s)，9.40(1H，br s)，8.44(1H，s)，8.06(1H，d，J＝2.4Hz)，7.60(1H，dd，J＝8.5，2.4Hz)，7.41(1H，d，J＝8.8Hz)，6.97(1H，d，J＝2.2Hz)，4.46(1H，br d，J＝8.5Hz)，3.69(2H，s)，3.65-3.50(1H，m)，3.12-2.99(2H，m)，2.30-2.17(2H，m)，2.09-1.99(2H，m)，1.51-1.43(11H，m)。

(参考例6-7)

{1-[4-(3-溴-5-氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：518，520[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.15(1H，br s)，9.17(1H，br s)，8.47(1H，s)，7.82(1H，dt，J＝11.2，2.1Hz)，7.65-7.62(1H，m)，6.99-6.97(1H，m)，6.92(1H，dt，J＝8.1，2.0Hz)，4.51-4.44(1H，m)，3.69(2H，s)，3.65-3.52(1H，m)，3.14-2.99(2H，m)，2.30-2.16(2H，m)，2.06(2H，d，J＝12.0Hz)，1.49-1.44(11H，m)。

(参考例6-8)

{1-[4-(3-溴苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：514，516[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.14(1H，s)，10.24(1H，s)，8.44(1H，s)，8.00(1H，t，J＝1.8Hz)，7.74(1H，ddd，J＝7.9，1.8，1.4Hz)，7.23(1H，t，J＝7.9Hz)，7.17(1H，ddd，J＝7.9，1.8，1.4Hz)，6.98(1H，d，J＝1.7Hz)，4.37(1H，s)，3.71(2H，s)，2.78(2H，br s)，2.43(2H，br s)，2.11(2H，d，J＝12.9Hz)，1.72(2H，t，J＝11.5Hz)，1.45(9H，s)，1.39(3H，s)。

(参考例6-9)

{1-[4-(3-甲氧基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：466[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：10.95(1H，s)，9.94(1H，s)，8.43(1H，s)，7.52(1H，d，J＝2.2Hz)，7.31-7.22(2H，m)，6.95(1H，d，J＝2.0Hz)，6.63(1H，dt，J＝7.1，2.1Hz)，4.36(1H，s)，3.85(3H，s)，3.71(2H，s)，2.78(2H，br s)，2.44(2H，br s)，2.09(2H，d，J＝13.7Hz)，1.74(2H，t，J＝10.9Hz)，1.45(9H，s)，1.37(3H，s)。

(参考例6-10)

{1-[4-(3-乙炔基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：460[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.10(1H，s)，10.44(1H，s)，8.43(1H，s)，7.87-7.83(2H，m)，7.33(1H，dd，J＝8.5，7.6Hz)，7.19(1H，dt，J＝7.6，1.2Hz)，6.98(1H，d，J＝2.0Hz)，4.38(1H，s)，3.71(2H，s)，3.07(1H，s)，2.78(2H，br s)，2.44(2H，br s)，2.11(2H，d，J＝12.9Hz)，1.73(2H，t，J＝10.6Hz)，1.45(9H，s)，1.38(3H，s)。

(参考例6-11)

{1-[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：476[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.03(1H，s)，9.73(1H，br s)，8.39(1H，s)，8.08(1H，d，J＝2.2Hz)，7.62(1H，d，J＝2.0Hz)，7.50(1H，d，J＝8.8Hz)，7.44(1H，dd，J＝8.8，2.1Hz)，6.94(1H，d，J＝2.2Hz)，6.78(1H，dd，J＝2.1，0.7Hz)，4.36(1H，s)，3.73(2H，s)，2.78(2H，br s)，2.46(2H，br s)，2.12(2H，d，J＝13.2Hz)，1.70(2H，t，J＝12.2Hz)，1.45(9H，s)，1.35(3H，s)。

(参考例6-12)

{1-[4-(3-溴苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-4-甲氧基甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：544，546[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.13(1H，s)，9.06(1H，br s)，8.43(1H，s)，8.01(1H，t，J＝1.6Hz)，7.72(1H，dt，J＝7.8，1.6Hz)，7.23(1H，t，J＝7.8Hz)，7.17(1H，dt，J＝8.0，1.6Hz)，6.94(1H，d，J＝2.0Hz)，4.35(1H，brs)，3.70(2H，s)，3.51(2H，s)，3.37(3H，s)，2.85(2H，br s)，2.39(2H，br s)，2.15(2H，d，J＝14.9Hz)，1.87-1.78(2H，m)，1.45(9H，s)。

(参考例6-13)

{1-[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-4-甲氧基甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：506[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.05(1H，s)，9.90(1H，s)，8.39(1H，s)，8.07(1H，t，J＝1.2Hz)，7.62(1H，d，J＝2.1Hz)，7.49(2H，d，J＝1.2Hz)，6.94(1H，d，J＝2.1Hz)，6.78(1H，d，J＝2.2Hz)，4.39(1H，br s)，3.72(2H，s)，3.49(2H，s)，3.36(3H，s)，2.87(2H，d，J＝10.3Hz)，2.41(2H，t，J＝10.1Hz)，2.14(2H，d，J＝14.2Hz)，1.90-1.80(2H，m)，1.45(9H，s)。

(参考例6-14)

{1-[4-(3-溴苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}甲基氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：514，516[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.18(1H，br s)，9.69(1H，br s)，8.44(1H，s)，7.94(1H，t，J＝1.5Hz)，7.88(1H，d，J＝8.1Hz)，7.24(1H，t，J＝8.1Hz)，7.18(1H，dt，J＝8.1，1.5Hz)，6.98(1H，d，J＝1.7Hz)，4.15(1H，br s)，3.70(2H，s)，3.19(2H，d，J＝12.0Hz)，2.70(3H，s)，2.17(2H，t，J＝10.5Hz)，1.90-1.69(4H，m)，1.46(9H，s)。

(参考例6-15)

反式-4-叠氮-1-[4-(3-溴苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-3-醇

质谱(EI，m/z)：442，444[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：10.89(1H，br s)，10.55(1H，s)，8.36(1H，s)，8.03(1H，t，J＝2.0Hz)，7.51(1H，dt，J＝6.8，2.0Hz)，7.22-7.19(2H，m)，6.98(1H，s)，3.79(1H，d，J＝13.7Hz)，3.70-3.61(2H，m)，3.41-3.32(1H，m)，3.16-3.05(2H，m)，2.28(1H，t，J＝11.1Hz)，2.18-2.06(2H，m)，1.73(1H，dq，J＝4.0，12.2Hz)。

(参考例6-16)

[5-(1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-乙炔基苯基)胺

质谱(EI，m/z)：389[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.05(1H，s)，10.26(1H，br s)，8.44(1H，s)，7.98(1H，t，J＝1.7Hz)，7.68(1H，ddd，J＝8.1，2.0，1.1Hz)，7.31(1H，t，J＝7.8Hz)，7.19(1H，dt，J＝7.6，1.2Hz)，6.98(1H，d，J＝2.0Hz)，3.97(4H，s)，3.73(2H，s)，3.08(1H，s)，2.75(4H，br s)，1.84(4H，t，J＝5.6Hz)。

(参考例6-17)

{1-[4-(4-甲氧基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：452[M]⁺。

1H-NMR(CDCl₃)δ：10.80(1H，br s)，10.10(1H，s)，8.37(1H，s)，7.62-7.55(2H，m)，6.99-6.91(3H，m)，4.45(1H，d，J＝8.1Hz)，3.83(3H，s)，3.67(2H，s)，3.56(1H，br s)，3.14-2.94(2H，m)，2.29-2.13(2H，m)，2.01(2H，d，J＝12.7Hz)，1.57-1.35(11H，m)。

(参考例6-18)

{1-[4-(4-氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-4-甲基哌啶-4-基]}氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：470[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.04(1H，s)，9.51(1H，s)，8.41(1H，s)，7.74-7.68(2H，m)，7.36-7.30(2H，m)，6.95(1H，d，J＝2.0Hz)，4.34(1H，s)，3.71(2H，s)，2.75(2H，br s)，2.46(2H，br s)，2.12(2H，d，J＝12.7Hz)，1.68(2H，d，J＝11.0Hz)，1.45(9H，s)，1.36(3H，s)。

(参考例6-19)

反式-{1-[4-(4-氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-3-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯

参考例6-19的化合物是根据参考例6-1所述的制备方法，使用参考例5-7的化合物来制备的。

质谱(EI，m/z)：470[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：10.95(1H，s)，9.10(1H，s)，8.41(1H，s)，7.72-7.65(2H，m)，7.36-7.30(2H，m)，6.94(1H，d，J＝2.1Hz)，4.32(1H，d，J＝9.3Hz)，3.71(1H，d，J＝13.2Hz)，3.63(1H，d，J＝13.2Hz)，3.31-3.17(1H，m)，3.17-3.09(1H，m)，3.09-3.00(1H，m)，2.16(1H，td，J＝12.3，2.7Hz)，2.06(1H，ddt，J＝13.2，3.9，2.7Hz)，1.84(1H，t，J＝11.5Hz)，1.63-1.39(11H，m)，0.93(3H，d，J＝6.3Hz)。

(参考例6-20[对映体1])

反式-{1-[4-(4-氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-3-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯[对映体1]

参考例6-20的化合物[对映体1]是根据参考例6-1所述的制备方法，使用参考例5-8的化合物[对映体1]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与参考例6-19的结果相同。

(参考例6-21[对映体2])

反式-{1-[4-(4-氯苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]-3-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯[对映体2]

参考例6-21的化合物[对映体2]是根据参考例6-1所述的制备方法，使用参考例5-9的化合物[对映体2]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与参考例6-19的结果相同。

(参考例7)

1-[4-(3-乙炔基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-酮

向[5-(1，4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-乙炔基苯基)胺(参考例6-16)(5.11g，13.1mmol)在四氢呋喃(70ml)中的溶液中加入20ml的6N盐酸水溶液(120mmol)，将该混合物添加丙酮在回流条件下加热，直到消耗了全部的原料为止。

在反应完成后，将该反应混合物用6N的氢氧化钠水溶液中和，并且向该混合物中加入饱和的碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取两次。将有机层在无水硫酸钠上干燥，然后减压浓缩。将所获得的残留物悬浮在二异丙醚中，过滤收集固体，用二异丙醚和己烷清洗，并且减压下干燥以制备参考例7的化合物(4.37g，12.7mmol，产率96％)。

质谱(EI，m/z)：345[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：10.77(1H，s)，10.06(1H，s)，8.47(1H，s)，7.85(1H，t，J＝1.7Hz)，7.78(1H，ddd，J＝8.1，2.0，1.1Hz)，7.33(1H，t，J＝7.8Hz)，7.21(1H，dt，J＝7.7，1.3Hz)，7.03(1H，d，J＝2.0Hz)，3.87(2H，s)，3.08(1H，s)，2.99(4H，br s)，2.58(4H，t，J＝6.1Hz)。

(参考例8)

1-苯甲酰哌啶-4-甲酸乙酯

向哌啶-4-甲酸乙酯(7.71g，50mmol)在二氯甲烷(200ml)中的溶液中加入三乙胺(21ml，150mmol)，并且在冰冷条件下，向该混合物中搅拌逐滴加入苯甲酰氯(5.92ml，51mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，并且加入乙酸乙酯(50ml)。将有机层依次用饱和氯化铵水溶液、蒸馏水和饱和盐水清洗，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所获得的残留物悬浮在乙酸乙酯和二异丙醚混合溶剂中，过滤收集，并且减压下干燥以制备参考例8的化合物(11.3g，43mmol，产率86％)。

质谱(CI，m/z)：262[M+1]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.43-7.37(5H，m)，4.54(1H，br s)，4.16(2H，q，J＝7.2Hz)，3.75(1H，s)，3.05(2H，t，J＝11.2Hz)，2.57(1H，tt，J＝10.7，4.0Hz)，2.04-1.73(4H，m)，1.27(3H，t，J＝7.2Hz)。

(参考例9-1)

1-苯甲酰-4-甲基哌啶-4-甲酸乙酯

将二异丙基胺(1.83ml，13mmol)在四氢呋喃(30ml)中的溶液冷却到-78℃，并且逐滴加入1.6M的丁基锂/己烷溶液(7.6ml，12mmol)。将该反应溶液升温到0℃，搅拌10分钟，然后再次冷却到-78℃，逐滴加入1-苯甲酰哌啶-4-甲酸乙酯(参考例8)(2.61g，10mmol)在四氢呋喃(10ml)中的溶液。将该反应溶液在同样的温度搅拌1小时，然后逐滴加入甲基碘(0.81ml，13mmol)，并且升温到室温。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯(50ml)。将有机层用饱和氯化铵水溶液清洗，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所获得的油进行硅胶柱色谱法(洗提溶剂∶己烷∶乙酸乙酯＝4∶1-2∶1(V/V))，并且将包含目标化合物的流分减压浓缩以制备参考例9-1的化合物(1.86g，6.8mmol，产率68％)。

质谱(EI，m/z)：275[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.42-7.35(5H，m)，4.32(1H，br s)，4.19(2H，q，J＝7.1Hz)，3.54(1H，s)，3.13(2H，br s)，2.19-2.08(2H，brm)，1.57-1.29(2H，m)，1.27(3H，t，J＝7.2Hz)，1.24(3H，s)。

下文中，参考例9-2的化合物是根据参考例9-1所述的制备方法来制备的。

(参考例9-2)

1-苯甲酰基-4-甲氧基甲基哌啶-4-甲酸乙酯

质谱(EI，m/z)：305[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.42-7.34(5H，m)，4.44(1H，br s)，4.22(2H，q，J＝7.1Hz)，3.62(1H，br s)，3.41(2H，br d，J＝12.0Hz)，3.31(3H，s)，3.23(1H，br s)，3.03(1H，br s)，2.15(2H，br s)，1.59(1H，br s)，1.44(1H，br s)，1.28(3H，t，J＝7.1Hz)。

(参考例10-1)

1-苯甲酰-4-甲基哌啶-4-甲酸

向1-苯甲酰基-4-甲基哌啶-4-甲酸乙酯(参考例9-1)(1.86g，6.8mmol)在乙醇(20ml)中的溶液中加入6N氢氧化钠水溶液(1.69ml，10.1mmol)，将该混合物在50℃搅拌5小时。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯(30ml)，和然后将有机层用蒸馏水(50ml和20ml)萃取两次。向合并的含水层中加入浓盐酸，直到pH变得低于1，用乙酸乙酯萃取两次。将有机层用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所获得的残留物悬浮在乙酸乙酯和二异丙醚混合溶剂中，过滤收集，并且减压下干燥以制备参考例10-1的化合物(1.26g，5.1mmol，产率75％)。

质谱(CI，m/z)：248[M+1]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.43-7.37(5H，m)，4.34(1H，br s)，3.57(1H，br s)，3.21(2H，br s)，2.23-2.05(2H，m)，1.55-1.34(2H，m)，1.29(3H，s)。

下文中，参考例10-2的化合物是根据参考例10-1所述的制备方法来制备的。

(参考例10-2)

1-苯甲酰基-4-甲氧基甲基哌啶-4-甲酸

质谱(EI，m/z)：277[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.43-7.37(5H，m)，4.43(1H，br s)，3.60(1H，br s)，3.45(2H，br d，J＝12.9Hz)，3.35(3H，s)，3.29(1H，br s)，3.13(1H，br s)，2.15(2H，br s)，1.61(1H，br s)，1.45(1H，br s)。

(参考例11-1)

(1-苯甲酰基-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯

向1-苯甲酰基-4-甲基哌啶-4-甲酸(参考例10-1)(1.26g，5.1mmol)在甲苯(10ml)中的悬浮液中加入三乙胺(2.13ml，15.2mmol)和二苯基磷酰基叠氮(1.32ml，6.1mmol)，并且将该混合物在回流条件下加热3小时。

在反应完成后，向该反应混合物中加入乙酸乙酯(30ml)。将该有机层依次用蒸馏水、饱和碳酸钠水溶液和饱和盐水清洗，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。

向所获得的残留物在四氢呋喃(10ml)中的溶液中加入叔丁氧化钠(1.12g，10.2mmol)，将该混合物室温搅拌20分钟。

在反应完成后，向该反应混合物中加入乙酸乙酯(30ml)。将该有机层用饱和氯化铵水溶液清洗，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所获得的残留物悬浮在二异丙醚中，过滤收集，减压下干燥以制备参考例11-1的化合物(1.02g，3.2mmol，产率63％)。

质谱(EI，m/z)：318[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.43-7.36(5H，m)，4.38(1H，br s)，4.16(1H，br s)，3.45(1H，br s)，3.33(2H，br t，J＝11.5Hz)，2.03(2H，br s)，1.59(2H，br s)，1.43(9H，s)，1.38(3H，s)。

下文中，参考例11-2的化合物是根据参考例11-1所述的制备方法来制备的。

(参考例11-2)

(1-苯甲酰基-4-甲氧基甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯

质谱(EI，m/z)：348[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.43-7.36(5H，m)，4.42(1H，s)，4.38(1H，br s)，3.52(1H，br s)，3.48(2H，s)，3.36(3H，s)，3.24(2H，br s)，2.10(2H，br d，J＝13.4Hz)，1.70(1H，br s)，1.55(1H，br s)，1.43(9H，s)。

(参考例12-1)

(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯

向(1-苯甲酰基-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(参考例11-1)(318mg，1.0mmol)在乙醇(3ml)中的溶液中加入6N氢氧化钠水溶液(1.0ml，6.0mmol)，并将该混合物在回流条件下加热8小时。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯(30ml)。将有机层用蒸馏水清洗两次，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩，并且减压下干燥以制备参考例12-1的化合物(145mg，0.67mmol，产率67％)。

质谱(EI，m/z)：214[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：4.37(1H，br s)，2.84-2.80(4H，m)，1.91(2H，dt，J＝13.3，3.9Hz)，1.51(2H，td，J＝12.9，6.2Hz)，1.44(9H，s)，1.34(3H，s)。

下文中，参考例12-2的化合物是根据参考例12-1所述的制备方法来制备的。

(参考例12-2)

(4-甲氧基甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯

质谱(CI，m/z)：245[M+1]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：4.40(1H，br s)，3.49(2H，s)，3.36(3H，s)，2.88-2.84(4H，m)，2.03-1.93(4H，m)，1.44(9H，s)。

(参考例13)

反式-1-苄基-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(参考例13-1)，顺式-1-苄基-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(参考例13-2)

在氮气氛下向1-苄基-3-甲基-4-哌啶酮(20.1g，98.7mmol)中依次加入2M的氨的乙醇溶液(250ml，500mmol)和四异丙氧基钛(57.8ml，197mmol)，将该混合物室温搅拌16小时。然后，将该反应溶液冷却到0℃，并且分几个小流分向该溶液中加入硼氢化钠(5.77g，152mmol)。在添加完成后，将该混合物室温搅拌3小时。

在反应完成后，在室温向该反应溶液中缓慢加入水(250ml)，在相同条件下搅拌30分钟。随后，向该反应溶液中加入过量的硅藻土(Celite)，然后使用Celite过滤器滤掉固体，将过滤的固体用乙酸乙酯(700ml)清洗两次。在合并滤出液和清洗溶液后，将该合并的溶液分离成有机相和含水相，将含水相用乙酸乙酯(300ml)萃取两次。合并全部的有机相，用1N盐酸(250ml)萃取两次。向萃取物中加入碳酸钾水溶液，直到pH变成9，然后将该溶液用乙酸乙酯(600ml)萃取三次。将所获得的有机层用硫酸镁干燥，然后减压浓缩。

在氮气氛下向所获得的残留物(20.1g)在二氯甲烷(200ml)中的溶液中依次加入三乙胺(16.5ml，118mmol)和二叔丁基二碳酸酯(26.1ml，114mmol)，并将该混合物室温搅拌3.5小时。

在反应完成后，向该混合物中加入二氯甲烷，用碳酸氢钠水溶液清洗1次，将所获得的含水相用乙酸乙酯萃取两次。将所获得的有机层用硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将所获得的残留物进行硅胶柱色谱法(洗提溶剂：二氯甲烷-四氢呋喃)，并且将包含目标化合物的流分减压浓缩以制备每个参考例13-1的化合物[反式异构体](14.3g，46.8mmol，产率47％)和参考例13-2的化合物[顺式异构体](12.0g，39.3mmol，产率40％)。

(参考例13-1[反式异构体])

Rf值：0.45(氯仿∶四氢呋喃＝4∶1(V/V))。

质谱(EI，m/z)：304[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.37-7.19(5H，m)，4.28(1H，d，J＝8.5Hz)，3.46(2H，s)，3.22-3.05(1H，m)，2.91-2.77(2H，m)，2.01(1H，td，J＝11.7，2.4Hz)，1.92(1H，ddt，J＝12.6，4.5，2.4Hz)，1.73(1H，t，J＝11.1Hz)，1.55-1.33(11H，m)，0.89(3H，d，J＝6.6Hz)。

(参考例13-2[顺式异构体])

Rf值：0.62(氯仿∶四氢呋喃＝4∶1(V/V))。

质谱(EI，m/z)：304[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：7.35-7.20(5H，m)，4.56(1H，d，J＝7.2Hz)，3.72(1H，br s)，3.49(1H，d，J＝13.2Hz)，3.42(1H，d，J＝13.2Hz)，2.50-2.27(3H，m)，2.14(1H，br s)，2.08-1.94(1H，m)，1.79-1.65(2H，m)，1.44(9H，s)，0.92(3H，d，J＝6.8Hz)。

(参考例14)

反式-1-苄基-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯[对映体1](参考例14-1[对映体1])，反式-1-苄基-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯[对映体2](参考例14-2[对映体2])

反式-1-苄基-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(参考例13-1)(38.0g，124mmol)是使用手性柱来分馏的，并且获得了下面实施例的光学活性化合物：参考例14-1[对映体1](17.9g，58.8mmol，产率47％)和参考例14-2[对映体2](17.9g，58.8mmol，产率47％)。

(参考例14-1[对映体1])

质谱和¹H-NMR结果与参考例13-1的结果相同。

光学纯度：＞99％ee

(大赛璐手性色谱柱(Daicel CHIRALCEL OJ-H)(商标名)，己烷/EtOH/Et₂NH＝97/3/0.1[v/v/v]，1.0ml/min，40℃，258nm，保留时间：6.16min)。

(参考例14-2[对映体2])

质谱和¹H-NMR结果与参考例13-1的结果相同。

光学纯度：＞99％ee

(大赛璐手性色谱柱(Daicel CHIRALCEL OJ-H)，己烷/EtOH/Et₂NH＝97/3/0.1[v/v/v]，1.0ml/min，40℃，258nm，保留时间：5.15min)。

(参考例15)

反式-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯

(参考例15-1)

在氮气氛下向反式-1-苄基-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(参考例13-1)(8.24g，27.1mmol)在甲醇(100ml)中的溶液中依次加入20％的氢氧化钯/碳[50wt％含水量](0.85g)和甲酸铵(3.09g，49.0mmol)，并且将该混合物在回流条件下加热70分钟。

在反应完成后，将该反应溶液冷却到室温，并且使用Celite过滤器除去不溶性成分，然后将滤出液减压浓缩以制备参考例15-1的化合物(粗产物：6.56g)。所获得的产物不经纯化用于后续步骤。

质谱(EI，m/z)：214[M]⁺。

1H-NMR(CDCl₃)δ：4.33(1H，d，J＝6.6Hz)，3.26-3.16(1H，m)，3.06(1H，dddd，J＝12.5，4.4，2.3，1.5Hz)，3.02(1H，ddd，J＝11.6，4.0，1.5Hz)，2.64(1H，td，J＝12.5，2.3Hz)，2.32(1H，t，J＝11.6Hz)，1.96(1H，ddt，J＝12.5，4.4，2.3Hz)，1.38-1.28(1H，m)，1.25(1H，qd，J＝12.5，4.4Hz)，0.92(3H，d，J＝6.6Hz)。

(参考例15-2[对映体1])

反式-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯[对映体1]

参考例15-2的化合物[对映体1]是根据参考例15-1所述的制备方法，使用参考例14-1的化合物[对映体1]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与参考化合物15-1的结果相同。

(参考例15-3[对映体2])

反式-3-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯[对映体2]

参考例15-3的化合物[对映体2]是根据参考例15-1所述的制备方法，使用参考例14-2的化合物[对映体2]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与参考例15-1的结果相同。

[实施例]

(实施例1-1)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]苯并呋喃-5-基胺

向{1-[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯(参考例3-1)(0.209g，0.452mmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中加入三氟乙酸(1.5ml，20mmol)，并将该混合物室温搅拌2小时。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，并且与甲苯进一步进行共沸。将所获得的残留物溶解在甲醇中，向该溶液中加入水，然后加入2N氢氧化钠水溶液，直到pH变成10-11。过滤收集沉淀的固体，水洗。将所获得的固体再次溶解在甲醇(2ml)中，并且向该溶液中加入水，然后室温搅拌30分钟。过滤收集沉淀的固体，水洗，并且减压下干燥以制备实施例1-1的化合物(0.110g，0.303mmol，产率67％)。

质谱(EI，m/z)：362[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.12(1H，s)，7.96(1H，d，J＝2.0Hz)，7.75(1H，d，J＝2.0Hz)，7.51(1H，d，J＝8.8Hz)，7.44(1H，dd，J＝8.8，2.0Hz)，7.04(1H，s)，6.86(1H，d，J＝2.0Hz)，3.71(2H，s)，3.08(2H，br d，J＝11.7Hz)，2.73(1H，tt，J＝10.7，3.9Hz)，2.18(2H，br t，J＝11.7Hz)，1.88(2H，br d，J＝12.0Hz)，1.48(2H，qd，J＝12.0，3.0Hz)。

下文中，实施例1-2到1-20的化合物是根据实施例1-1所述的制备方法来制备的。

(实施例1-2)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-氯-4-氟苯基)胺

质谱(EI，m/z)：374[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.23(1H，s)，8.10(1H，dd，J＝6.8，2.7Hz)，7.50(1H，ddd，J＝9.0，4.2，2.7Hz)，7.23(1H，t，J＝9.0Hz)，7.07(1H，s)，3.70(2H，d，J＝1.0Hz)，3.07(2H，br d，J＝12.2Hz)，2.74(1H，tt，J＝10.6，4.0Hz)，2.18(2H，br t，J＝12.2Hz)，1.89(2H，br d，J＝12.3Hz)，1.45(2H，qd，J＝12.3，4.0Hz)。

(实施例1-3)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-乙烯基苯基)胺

质谱(EI，m/z)：348[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.58(1H，br s)，11.13(1H，s)，8.26(1H，s)，7.85-7.78(2H，m)，7.76-7.73(1H，m)，7.34(1H，t，J＝7.8Hz)，7.17-7.11(2H，m)，6.74(1H，dd，J＝17.8，10.9Hz)，5.83(1H，dd，J＝17.6，1.0Hz)，5.29(1H，dd，J＝10.9，0.9Hz)，3.66(2H，s)，2.99(2H，d，J＝11.5Hz)，2.75-2.65(1H，m)，2.11(2H，t，J＝10.7Hz)，1.78(2H，d，J＝10.5Hz)，1.44-1.29(2H，m)。

(实施例1-4)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-氯苯基)胺

质谱(EI，m/z)：356[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.24(1H，s)，7.84(1H，s)，7.49-7.47(2H，m)，7.31-7.27(2H，m)，3.92(2H，s)，3.34-3.24(3H，m)，2.41(2H，br s)，2.10(2H，d，J＝12.7Hz)，1.67(2H，dq，J＝4.0，11.8Hz)。

(实施例1-5)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-乙炔基苯基)胺

质谱(EI，m/z)：346[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.22(1H，s)，7.96(1H，t，J＝1.9Hz)，7.68(1H，ddd，J＝8.1，1.2，1.9Hz)，7.35(1H，t，J＝8.1Hz)，7.17(1H，dt，J＝8.1，1.2Hz)，7.07(1H，s)，3.71(2H，d，J＝0.5Hz)，3.49(1H，s)，3.08(2H，d，J＝12.0Hz)，2.73(1H，tt，J＝10.6，4.2Hz)，2.19(2H，t，J＝10.7Hz)，1.90(2H，d，J＝10.3Hz)，1.49(2H，dq，J＝4.5，11.9Hz)。

(实施例1-6)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-溴-4-甲基苯基)胺

质谱(EI，m/z)：414，416[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.22(1H，s)，8.12(1H，d，J＝2.2Hz)，7.50(1H，dd，J＝8.3，2.2Hz)，7.27(1H，d，J＝8.3Hz)，7.06(1H，s)，3.71(2H，d，J＝0.5Hz)，3.09(2H，d，J＝12.7Hz)，2.79(1H，tt，J＝11.0，4.0Hz)，2.37(3H，s)，2.19(2H，t，J＝11.4Hz)，1.92(2H，d，J＝12.5Hz)，1.50(2H，dq，J＝4.0，12.0Hz)。

(实施例1-7)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3，4，5-三氟苯基)胺

质谱(EI，m/z)：376[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.29(1H，s)，7.67-7.57(2H，m)，7.10(1H，s)，3.72(2H，s)，3.08(2H，d，J＝11.5Hz)，2.75(1H，tt，J＝10.5，4.2Hz)，2.19(2H，t，J＝11.2Hz)，1.90(2H，d，J＝12.2Hz)，1.44(2H，dq，J＝4.0，12.0Hz)。

(实施例1-8)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-溴苯基)胺

质谱(EI，m/z)：400，402[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.25(1H，s)，8.17(1H，t，J＝2.0Hz)，7.59(1H，ddd，J＝8.0，1.0，2.0Hz)，7.27(1H，t，J＝7.9Hz)，7.19(1H，ddd，J＝7.9，1.0，2.0Hz)，7.08(1H，s)，3.71(2H，s)，3.08(2H，d，J＝12.2Hz)，2.74(1H，tt，J＝10.5，4.2Hz)，2.19(2H，t，J＝11.2Hz)，1.91(2H，d，J＝11.5Hz)，1.49(2H，dq，J＝4.0，12.0Hz)。

(实施例1-9)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](1H-吲唑-5-基)胺

质谱(EI，m/z)：362[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：12.97(1H，br s)，11.52(1H，br s)，11.12(1H，s)，8.35(1H，s)，8.22(1H，s)，8.04(1H，s)，7.56-7.49(2H，m)，7.12(1H，s)，3.67(2H，s)，2.98(2H，br d，J＝11.2Hz)，2.71-2.60(1H，brm)，2.12(2H，br t，J＝10.7Hz)，1.77(2H，br d，J＝10.3Hz)，1.54(2H，br s)，1.34(2H，br q，J＝12.0Hz)。

(实施例1-10)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3，4-二氯苯基)胺

质谱(EI，m/z)：390[M]⁺。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：11.70(1H，br s)，11.48(1H，s)，8.34(1H，d，J＝2.2Hz)，8.33(1H，s)，7.66(1H，dd，J＝8.9，2.3Hz)，7.61(1H，d，J＝8.8Hz)，7.20(1H，s)，3.67(2H，s)，2.97(2H，d，J＝10.5Hz)，2.70-2.60(1H，m)，2.11(2H，t，J＝10.0Hz)，1.76(2H，d，J＝13.4Hz)，1.35-1.20(2H，m)。

(实施例1-11)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-溴-5-氟苯基)胺

质谱(EI，m/z)：418，420[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.31(1H，s)，7.80(1H，dt，J＝11.2，2.1Hz)，7.76(1H，td，J＝1.8，0.8Hz)，7.11(1H，s)，6.97(1H，ddd，J＝8.2，2.3，1.7Hz)，3.73(2H，s)，3.09(2H，d，J＝11.2Hz)，2.80-2.70(1H，m)，2.21(2H，t，J＝11.5Hz)，1.93(2H，d，J＝12.0Hz)，1.55-1.40(2H，m)。

(实施例1-12)

[5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-溴苯基)胺

质谱(EI，m/z)：414，416[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.24(1H，s)，8.07(1H，t，J＝2.0Hz)，7.65(1H，ddd，J＝7.9，2.0，1.0Hz)，7.27(1H，t，J＝8.1Hz)，7.20(1H，ddd，J＝8.0，2.0，1.0Hz)，7.09(1H，s)，3.76(2H，d，J＝0.5Hz)，2.65(4H，br s)，1.70-1.64(4H，m)，1.18(3H，s)。

(实施例1-13)

[5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-甲氧基苯基)胺

质谱(EI，m/z)：366[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.18(1H，s)，7.40(1H，dd，J＝2.2，2.0Hz)，7.27(1H，t，J＝8.1Hz)，7.17(1H，ddd，J＝8.1，1.0，2.0Hz)，7.07(1H，s)，6.67(1H，ddd，J＝8.1，1.0，2.2Hz)，3.82(3H，s)，3.75(2H，d，J＝0.7Hz)，2.64(4H，s)，1.71-1.62(4H，m)，1.14(3H，s)。

(实施例1-14)

[5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-乙炔基苯基)胺

质谱(EI，m/z)：360[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.23(1H，s)，7.89(1H，br s)，7.72(1H，ddd，J＝8.0，1.1，2.0Hz)，7.35(1H，t，J＝8.0Hz)，7.18(1H，dt，J＝8.0，1.1Hz)，7.09(1H，s)，3.77(2H，s)，3.50(1H，s)，2.68(4H，s)，1.80-1.67(4H，m)，1.23(3H，s)。

(实施例1-15)

[5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](苯并呋喃-5-基)胺

质谱(EI，m/z)：376[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.12(1H，s)，7.95(1H，d，J＝2.0Hz)，7.76(1H，d，J＝2.2Hz)，7.52(1H，dt，J＝8.8，0.7Hz)，7.41(1H，dd，J＝8.8，2.0Hz)，7.06(1H，s)，6.85(1H，dd，J＝2.3，0.9Hz)，3.76(2H，d，J＝0.5Hz)，2.65(4H，s)，1.70-1.62(4H，m)，1.15(3H，s)。

(实施例1-16)

[5-(4-氨基-4-甲氧基甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](3-溴苯基)胺

质谱(EI，m/z)：444，446[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.23(1H，s)，8.04(1H，t，J＝1.8Hz)，7.65(1H，ddd，J＝8.0，1.8，0.9Hz)，7.26(1H，t，J＝8.0Hz)，7.20(1H，ddd，J＝8.1，1.8，0.9Hz)，7.08(1H，s)，3.74(2H，s)，3.36(3H，s)，3.20(2H，s)，2.76(2H，br s)，2.54(2H，br s)，1.82(2H，ddd，J＝11.0，13.9，5.0Hz)，1.54(2H，d，J＝13.9Hz)。

(实施例1-17)

[5-(4-氨基-4-甲氧基甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](苯并呋喃-5-基)胺

质谱(EI，m/z)：406[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.11(1H，s)，7.93(1H，d，J＝2.0Hz)，7.76(1H，d，J＝2.2Hz)，7.51(1H，dt，J＝8.7，0.8Hz)，7.43(1H，dd，J＝8.8，2.2Hz)，7.06(1H，s)，6.84(1H，dd，J＝2.2，0.7Hz)，3.76(2H，s)，3.33(3H，s)，3.18(2H，s)，2.74(2H，br s)，2.58(2H，br s)，1.83(2H，ddd，J＝13.8，10.0，5.0Hz)，1.54(2H，dt，J＝13.8，4.0Hz)。

(实施例1-18)

(3-溴苯基)[5-(4-氨基-4-甲基氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]胺

质谱(EI，m/z)：414，416[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.25(1H，s)，8.18(1H，t，J＝2.0Hz)，7.55(1H，ddd，J＝8.0，2.0，1.0Hz)，7.26(1H，t，J＝8.0Hz)，7.18(1H，ddd，J＝8.0，2.0，1.0Hz)，7.07(1H，s)，3.70(2H，s)，3.11(2H，d，J＝12.2Hz)，2.49(1H，tt，J＝10.9，4.0Hz)，2.36(3H，s)，2.17(2H，t，J＝11.2Hz)，1.98(2H，d，J＝12.7Hz)，1.47(2H，dq，J＝3.6，12.1Hz)。

(实施例1-19)

[5-(4-氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](4-甲氧基苯基)胺

质谱(EI，m/z)：352[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.08(1H，s)，7.56-7.49(2H，m)，7.02(1H，s)，6.99-6.92(2H，m)，3.81(3H，s)，3.69(2H，d，J＝0.6Hz)，3.06(2H，d，J＝11.1Hz)，2.73(1H，tt，J＝10.8，4.2Hz)，2.16(2H，t，J＝11.1Hz)，1.88(2H，d，J＝12.9Hz)，1.55-1.38(2H，m)。

(实施例1-20)

5-[(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺

质谱(EI，m/z)：370[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.19(1H，s)，7.73-7.68(2H，m)，7.38-7.33(2H，m)，7.08(1H，s)，3.75(2H，d，J＝0.7Hz)，2.65(4H，br s)，1.68-1.58(4H，m)，1.14(3H，s)。

(实施例1-21)

反式-[5-(4-氨基-3-甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](4-氯苯基)胺

实施例1-21的化合物是根据实施例1-1所述的制备方法，使用参考例6-19的化合物来制备的。

质谱(EI，m/z)：370[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.19(1H，s)，7.74-7.67(2H，m)，7.38-7.31(2H，m)，7.07(1H，s)，3.69(2H，s)，3.17-3.07(1H，m)，3.01(1H，ddd，J＝11.7，3.9，1.8Hz)，2.33(1H，ddd，J＝11.7，9.6，3.9Hz)，2.15(1H，td，J＝12.3，2.4Hz)，1.90(1H，ddt，J＝13.2，3.9，2.4Hz)，1.80(1H，t，J＝11.7Hz)，1.62-1.45(2H，m)，0.95(3H，d，J＝6.6Hz)。

(实施例1-22[对映体1])

反式-[5-(4-氨基-3-甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](4-氯苯基)胺[对映体1]

实施例1-22的化合物[对映体1]是根据实施例1-1所述的制备方法，使用参考例6-20的化合物[对映体1]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与实施例1-21的结果相同。

光学纯度：＞99％ee

(大赛璐手性色谱柱(Daicel CHIRALCEL OD-H)，己烷/EtOH/Et₂NH＝80/20/0.1[v/v/v]，1.0ml/min，25℃，270nm，保留时间：8.11min)。

(实施例1-23[对映体2])

反式-[5-(4-氨基-3-甲基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基](4-氯苯基)胺[对映体2]

实施例1-23的化合物[对映体2]是根据实施例1-1所述的制备方法，使用参考例6-21的化合物[对映体2]来制备的。

质谱和¹H-NMR结果与实施例1-21的结果相同。

光学纯度：＞99％ee

(大赛璐手性色谱柱(Daicel CHIRALCEL OD-H)，己烷/EtOH/Et₂NH＝80/20/0.1[v/v/v]，1.0ml/min，25℃，270nm，保留时间：9.72min)。

(实施例2-1)

反式-4-氨基-1-[4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-3-醇

在氮气氛和室温向4-叠氮-1-[4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-3-醇(参考例3-6)(0.242g，0.580mmol)在四氢呋喃(5ml)中的溶液中加入三苯基膦(0.306g，1.17mmol)和水(0.10ml，5.6mmol)，并且将该混合物在50℃搅拌2.5小时。

在反应完成后，将该反应混合物减压浓缩，并将所获得的残留物进行硅胶柱色谱法(洗提溶剂∶氯仿∶甲醇∶28％氨水溶液＝20∶1∶0-6∶1∶0.07(V/V/V))，将包含目标化合物的流分减压浓缩。将所获得的粗产物溶解到甲醇中，然后向该溶液中加入水。过滤收集沉淀的固体，水洗，并减压下干燥以制备实施例2-1的化合物(0.181mg，0.463mmol，产率80％)。

质谱(EI，m/z)：390[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.23(1H，s)，8.13(1H，dd，J＝6.6，2.7Hz)，7.43(1H，ddd，J＝8.9，4.0，2.7Hz)，7.22(1H，t，J＝8.9Hz)，7.10(1H，s)，3.81(1H，d，J＝13.4Hz)，3.69(1H，d，J＝13.4Hz)，3.42-3.30(1H，m)，3.19-3.02(2H，m)，2.56(1H，ddd，J＝11.4，9.0，3.9Hz)，2.19(1H，td，J＝12.0，2.1Hz)，2.02-1.86(2H，m)，1.50(1H，qd，J＝12.8，3.9Hz)。

下文中，实施例2-2到2-3的化合物是根据实施例2-1所述的制备方法来制备的。

(实施例2-2)

反式-4-氨基-1-[4-(苯并呋喃-5-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-3-醇

质谱(EI，m/z)：378[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.12(1H，s)，7.95(1H，d，J＝1.7Hz)，7.75(1H，d，J＝2.1Hz)，7.51(1H，d，J＝8.7Hz)，7.42(1H，dd，J＝8.7，2.1Hz)，7.08(1H，s)，6.86(1H，d，J＝1.7Hz)，3.81(1H，d，J＝13.4Hz)，3.72(1H，d，J＝13.4Hz)，3.41(1H，td，J＝9.3，4.2Hz)，3.18(1H，dd，J＝11.0，4.2Hz)，3.09(1H，br d，J＝12.0Hz)，2.56(1H，ddd，J＝12.0，9.3，4.2Hz)，2.18(1H，td，J＝12.0，2.3Hz)，2.02-1.87(2H，m)，1.54(1H，qd，J＝12.0，4.2Hz)。

(实施例2-3)

反式-4-氨基-1-[4-(3-溴苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-3-醇

质谱(EI，m/z)：416，418[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.25(1H，s)，8.21(1H，dd，J＝2.0，2.0Hz)，7.49(1H，ddd，J＝8.0，1.8，1.0Hz)，7.27(1H，t，J＝7.9Hz)，7.20(1H，ddd，J＝8.0，1.8，1.0Hz)，7.10(1H，s)，3.81(1H，d，J＝13.4Hz)，3.69(1H，d，J＝13.4Hz)，3.38(1H，td，J＝9.6，4.2Hz)，3.17-3.06(2H，m)，2.55(1H，ddd，J＝9.5，11.6，4.0Hz)，2.19(1H，ddd，J＝12.0，2.5，12.0Hz)，1.98-1.91(2H，m)，1.54(1H，dq，J＝4.0，12.5Hz)。

(实施例3-1)

(3-乙炔基苯基)[5-(4-甲基氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]胺

向1-[4-(3-乙炔基苯基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基甲基]哌啶-4-酮(参考例7)(0.75g，2.2mmol)在四氢呋喃中的溶液中加入40％的甲基胺水溶液(0.40ml，4.8mmol)，将该混合物室温搅拌30分钟。然后，向该混合物中加入三乙酰氧基硼氢酸钠(0.75g，3.5mmol)，室温搅拌13小时。

在反应完成后，向该反应混合物中加入甲醇，然后减压浓缩。将所获得的残留物进行硅胶柱色谱法(洗提溶剂∶氯仿∶甲醇∶28％氨水溶液＝9∶1∶0.01-4∶1∶0.01(V/V/V))，并且将包含目标化合物的流分减压浓缩以制备实施例3-1的化合物(0.65g，1.8mmol，产率82％)。

质谱(EI，m/z)：360[M]⁺。

¹H-NMR(CD₃OD)δ：8.23(1H，s)，7.98(1H，t，J＝1.7Hz)，7.65(1H，ddd，J＝8.1，2.0，1.1Hz)，7.34(1H，t，J＝7.9Hz)，7.16(1H，dt，J＝7.6，1.2Hz)，7.09-7.06(1H，m)，3.72(2H，s)，3.49(1H，s)，3.13(2H，d，J＝12.2Hz)，2.56(1H，tt，J＝11.0，4.0Hz)，2.39(3H，s)，2.18(2H，t，J＝11.7Hz)，2.00(2H，d，J＝12.2Hz)，1.57-1.42(2H，m)。

下文中，实施例3-2的化合物是根据实施例3-1所述的制备方法来制备的。

(实施例3-2)

(3-乙炔基苯基)[5-(4-丙-2-炔基氨基哌啶-1-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]胺

质谱(EI，m/z)：384[M]⁺。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：11.06(1H，s)，9.89(1H，s)，8.43(1H，s)，7.96(1H，t，J＝1.8Hz)，7.76(1H，ddd，J＝8.1，2.0，1.1Hz)，7.31(1H，t，J＝7.9Hz)，7.18(1H，dt，J＝7.7，1.3Hz)，6.96(1H，s)，3.69(2H，s)，3.47(2H，d，J＝2.4Hz)，3.07(1H，s)，3.04(2H，br s)，2.86(1H，brm)，2.25(2H，br t，J＝11.0Hz)，2.21(1H，t，J＝2.4Hz)，1.95(2H，br d，J＝10.5Hz)，1.59-1.46(2H，m)。

(配制实施例1)硬胶囊

按如下制备单位胶囊：将常规的两部分硬凝胶胶囊的每个部分用粉末形式的100mg的实施例化合物1、150mg的乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁进行填充，清洗，然后干燥。

(配制实施例2)软胶囊

按如下制备含有100mg活性成分的软胶囊：制备实施例化合物1在消化性油例如大豆油、棉籽油或者橄榄油中的混合物，并且使用正向往复式泵将它注入到凝胶中，清洗，然后干燥。

(配制实施例3)片剂

片剂是根据常规方法，使用100mg的实施例化合物1、0.2mg的胶体二氧化硅、5mg的硬脂酸镁、275mg的微晶纤维素、11mg淀粉和98.8mg乳糖来制备的。同样，如需要，可以将涂层涂覆到该片剂上。

(实验例1)HER2激酶抑制活性(活体外)

本发明化合物的HER2激酶抑制活性是如下来评价的：使用纯化的人重组细胞HER2激酶(Lys676-Val 1255，GST融合(fusion))和合成肽作为基质，并且通过HTRF方法(均匀时间解析荧光方法)来探测该基质的磷酸化水平。具体地，在激酶反应缓冲液(60mM HEPES、5mMMgCl₂、5mM MnCl₂、3mM Na₃VO₄、1.25mM DTT，pH7.5)中混合25ng/孔的活化HER2、200μM的ATP、200ng/孔的FLT3类肽(生物素标记，肽序列是AGGSSDNEYFYVDF)和测试化合物(最终浓度0.01nM-30μM)，来制备50μL/孔的总反应容量，将该混合物室温反应60分钟。然后，停止该磷酸化反应，并且如下来进行HTRF反应：加入包含下面成分的25μL/孔PBS溶液，并且将该混合物在4℃反应12-16小时。将下述成分溶解在PBS(pH7.0)中来制备PBS溶液组合物：60mMEDTA(最终浓度20mM)、1.2M KF(最终浓度400μM)、1mg/mLBSA(最终浓度333μg/mL)、6μg/mL抗-PY20-穴状化合物(Cryptate)(法国Cisbio International，最终浓度2μg/mL)和15μg/mL用XL665标记的链霉亲和素(Streptavidin)(法国Cisbio International，最终浓度5μg/mL)。IC₅₀值是如下来计算的：使用FLT3类肽在不含有测试化合物(仅仅含有DMSO的组)的孔中的平均磷酸化水平作为100％，计算每个含有测试化合物的组的T/C％(T/C＝含有测试化合物的组的磷酸化水平/仅仅含有DMSO的组的磷酸化水平)，并且确定这样的浓度，在该浓度时，T/C％变成来自分别高于和低于所述浓度的两个值的线性函数近似值的50％。

IC₅₀值小于0.01μM的化合物是实施例化合物1-6、1-8、1-10、1-12、1-13、1-16、1-18、3-1和3-2，0.01μM或者更大到小于0.05μM的化合物是实施例化合物1-1到1-5、1-7、1-9、1-11、1-14、1-15和2-1到2-3，0.05μM或者更大到小于0.1μM的化合物是实施例化合物1-17、1-20、1-21和1-22，以及0.1μM或者更大的化合物是实施例化合物1-19和1-23。

(实验例2)细胞毒素活性(活体外)

本发明化合物的细胞毒素活性是使用HER2过表达的胃癌细胞系NCI-N87来研究的。具体地，将适量的细胞在用于培养细胞的96孔板中以50μL/孔接种，并且在37℃和5％-CO₂条件下预培养一整夜。将测试化合物在DMSO中的溶液用介质进行系列稀释，并且以50μL/孔的体积加入到预培养的细胞中。该混合物是这样制备的，即，DMSO的最终浓度变成0.1％。在将该混合物在37℃和5％-CO₂条件下培养72小时之后，加入100μL/孔的CellTiter-Glo溶液(Promega，Madison，WI)，10分钟后使用照度计(Wallac ARVO^TM SX)测量发光，并且确定活细胞数。GI₅₀值是如下来计算的：使用不含测试化合物的孔的平均活细胞数作为100％，计算每个含有测试化合物的组的T/C％(T/C＝含有测试化合物的组的活细胞数/不含测试化合物的组的活细胞数)，并且确定这样的浓度，在该浓度时，T/C％变成来自分别高于和低于所述浓度的两个值的线性函数近似值的50％。

GI₅₀值小于0.02μM的化合物是实施例化合物1-3到1-5、1-7、1-8、1-12到1-14、1-16、1-18、2-3、3-1和3-2，0.02μM或者更大到小于0.05μM的化合物是实施例化合物1-1、1-2、1-6、1-10、1-11、1-15、1-17、1-20、1-21、1-22、2-1和2-2，0.05μM或者更大到小于0.5μM的化合物是实施例化合物1-9、1-19和1-23。

(实验例3)在活体中的抗肿瘤作用

本发明化合物在活体中的抗肿瘤作用是使用HER2过表达的胃癌细胞系来评价的。具体地，使用移植针将大约5mm²的肿瘤碎片皮下移植，或者将适当数目的肿瘤细胞悬浮在盐水(Otsuka PharmaceuticalCo.，Ltd.)中，并且使用玻璃注射器(装备有用于皮下注射的两级针)移植到裸小鼠的右腋窝的皮肤下。在确认了移植的肿瘤已经移植之后，将该小鼠根据肿瘤体积分组。将测试化合物：实施例化合物1-1、1-2、1-5、1-8、1-13、1-14、1-15、1-19、1-20、1-22、2-1、2-3和3-2每个溶解或者悬浮在适当的介质中，并且对小鼠强制口服给药。给药时间根据肿瘤从2周变化到4周，并且该给药是每日进行的，并且节假日周六和周日也给药。使用电子数字游标卡尺依次测量肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且使用下述计算式，在判断日(原则上是最后给药的第二天)通过肿瘤生长抑制率(GI％)来评价。同时，测量体重，并且依次观察一般状态，有效的剂量定义为这样的剂量，即其表现出效果且不导致明显的体重损失或者外观异常。如下表所示，全部的测试化合物表现出优异的抗肿瘤效果。

GI(％)＝(1-A/B)×100

A：在判断日，给予化合物的组的平均肿瘤体积(*)

B：在判断日，未治疗的对照组的平均肿瘤体积(*)

*：该肿瘤体积是通过1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]2来计算的。

(表)

活体内抗肿瘤效果

[表1]

实施例编号	剂量(mg/kg)	肿瘤生长抑制率(％)
			1-1	60	84
1-2	30	75
			1-5	30	90
1-8	30	59
			1-13	30	72
1-14	10	75
			1-15	60	90
1-19	100	44
			1-20	30	57
1-22	60	88
			2-1	100	52
2-3	100	76
			3-2	60	91

工业适用性

本发明的化合物具有有效的HER2激酶抑制活性和优异的抗肿瘤活性，因此作为药品，特别是作为抗肿瘤剂是有用的。

Claims

1.一种式(I)的化合物或者其药用盐：

其中，

T¹是苯基、吲唑基或者苯并呋喃基，

-(R¹)n表示T¹是被相同的或者不同的n个R¹基团取代，n是0-3的整数，

T²是哌啶基，

-(R²)m表示T²是被相同的或者不同的m个R²基团取代，m是0-3的整数，

R³是氢原子、C_1-4烷基或者C_2-6炔基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹是氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、甲氧基或者乙氧基。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R²是氢原子、羟基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基或者2-甲氧基乙基。

4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其中R³是氢原子、甲基、乙基或者2-丙炔基。

5.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其中R³是氢原子。

6.根据权利要求1的化合物，其中式(I)中的下式(II)的基团是下式(IIa)的基团或者是苯并呋喃基，

其中R^1a、R^1b和R^1c各自相同或者不同，并且各自是氢原子、卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基。

7.根据权利要求6所述的化合物，其中R^1a是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，且R^1b和R^1c各自是氢原子。

8.根据权利要求6所述的化合物，其中R^1a和R^1c各自是氢原子，且R^1b是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基。

9.根据权利要求6所述的化合物，其中R^1a和R^1b各自是相同或者不同的且各自是卤素原子、C_1-4烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基或者C_1-4烷氧基，和R^1c是氢原子。

10.根据权利要求1所述的化合物，其中式(I)中的下式(III)的基团是下式(IIIa)的基团，

其中R^2a和R^2b各自相同或者不同且各自是氢原子、羟基或者C_1-4烷基，其中所述的C_1-4烷基可被一个或者两个C_1-4烷氧基取代。

11.根据权利要求10所述的化合物，其中R^2a和R^2b各自相同或者不同，且各自是氢原子或者甲基。

12.根据权利要求10或者权利要求11所述的化合物，其中R³是氢原子。

13.根据权利要求10所述的化合物，其中式(III)的基团是选自下述(IIIb)基团中的任何一种基团：

14.根据权利要求1所述的化合物，其中式(I)的化合物是下述(IV)基团中的任何一种化合物：

15.根据权利要求2-14任一项所述的化合物的药用盐。

16.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-14任一项所述的化合物或者其药用盐作为活性成分。

17.一种HER2抑制剂，其包含根据权利要求1-14任一项所述的化合物或者其药用盐作为活性成分。

18.一种抗肿瘤剂，其包含根据权利要求1-14任一项所述的化合物或者其药用盐作为活性成分。

19.根据权利要求18所述的抗肿瘤剂，其中所述肿瘤是血癌如白血病、淋巴瘤或者多发性骨髓瘤、脑肿瘤、头颈癌、食道癌、胃癌、阑尾癌、结肠癌、肛门癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺癌、胃肠间质肿瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肝癌、间皮瘤、甲状腺癌、肾癌、前列腺癌、神经内分泌肿瘤、黑素瘤、乳腺癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、骨肉瘤、软组织肉瘤、卡波西肉瘤、肌肉瘤、肾癌、膀胱癌、唾腺癌和/或睾丸癌。