ES2254738T3

ES2254738T3 - Antibioticos entrecruzados glicopeptido-cefalosporina.

Info

Publication number: ES2254738T3
Application number: ES02769054T
Authority: ES
Inventors: Paul Fatheree; Martin S. Linsell; Daniel D. Long; Daniel Marquess; Edmund J. Moran; Matthew B. Nodwell; S. Derek Turner; James Aggen
Original assignee: Theravance Inc
Current assignee: Innoviva Inc
Priority date: 2001-10-12
Filing date: 2002-10-11
Publication date: 2006-06-16
Anticipated expiration: 2022-10-11
Also published as: US7341993B2; HK1066007A1; UA80098C2; NO334092B1; CN1568325A; US8044195B2; IL160846A; US20080194464A1; US20030130173A1; US20050239691A1; JP2005507907A; US7649080B2; US20080051577A1; HRP20040243A2; SK2052004A3; US7601690B2; PL209757B1; ATE314376T1; EA200400530A1; US20120214967A1

Abstract

Un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que X1 y X2 se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por hidrógeno y cloro; R1 es -Ya-(W)n-Yb-;W se selecciona entre el grupo constituido por -O-, -N(Rd)-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, cicloalquileno(C3-6), arileno (C6-10) y heteroarileno(C2-9); en el que cada grupo arileno, cicloalquileno y heteroarileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre Rb; Ya e Yb son independientemente alquileno(C1-5), o cuando W es cicloalquileno, arileno o heteroarileno, Ya e Yb son independientemente seleccionados entre el grupo constituido por un enlace covalente y alquileno (C1-5); en el que cada grupo alquileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre -ORd-, -NRdRe, CO2Rd, -C(O)NRdRe y -S(O)2NRdRe; R2 es hidrógeno o alquilo(C1-6); cada R3 es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por alquilo(C1-6), alquenilo(C2-6), alquinilo(C2-6), cicloalquilo(C3-6), arilo(C6-10), heteroarilo(C2-9), heterocíclico(C3-6) y Ra; o dos grupos R3 adyacentes están unidos para formar alquileno(C3-6) o -O-alquileno(C1-6)-O-; en el que cada grupo alquilo, alquileno, alquenilo y alquinilo está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por Ra y Rc; y cada grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterocíclico está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por Rb; uno entre R4 y R5 es hidroxilo y el otro es hidrógeno.

Description

Antibióticos entrecruzados glicopéptido-cefalosporina.

Antecedentes de la invención Campo de la invención

Esta invención está dirigida a novedosos compuestos entrecruzados de vancomicina-cefalosporina que son útiles como antibióticos. Esta invención también está dirigida a composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos; a tales compuestos para su uso como agentes antibacterianos; y a procedimientos y productos intermedios para preparar tales compuestos.

Estado de la técnica

En la técnica se conocen diversas clases de compuestos antibióticos que incluyen, por ejemplo, antibióticos \beta-lactámicos, tales como las cefalosporinas, y antibióticos glicopeptídicos, tales como la vancomicina. En Chem. Abstr. 1977, 86, 26406n, se trata el modo de acción de los antibióticos \beta-lactámicos penicilina G y mecilinam en Gaffkya homari. Bajo las condiciones estudiadas, la penicilina G y el mecilinam inhibieron la incorporación del peptidoglicano en la pared celular preexistente de la bacteria G. homari. También se conocen en la técnica compuestos antibióticos entrecruzados. Véase, por ejemplo, la patente estadounidense nº: 5.693.791, concedida a W. L. Truett y titulada "Antibiotics and Process for Preparation"; y el documento WO 99/64049 A1, publicado el 16 de diciembre de 1999, y titulado "Novel Antibacterial Agents".

A pesar de tales compuestos, existe la necesidad de nuevos antibióticos que tengan mejores propiedades, incluyendo, a modo de ejemplo, una mayor potencia frente a bacterias gram-positivas. En concreto, existe la necesidad de nuevos antibióticos que sean altamente eficaces frente a cepas bacterianas resistentes a antibióticos, tales como el Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) y el Staphylococcus epidermitis resistente a la meticilina (SERM).

Resumen de la invención

La presente invención proporciona novedosos compuestos entrecruzados de glicopéptido-cefalosporina que son útiles como antibióticos. Entre otras propiedades, se ha descubierto que los compuestos de esta invención poseen una potencia sorprendente e inesperada contra bacterias gram-positivas incluyendo el Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) y el Staphylococcus epidermitis resistente a la meticilina (SERM).

Por consiguiente, en uno de los aspectos relativos a su composición, esta invención proporciona un compuesto de fórmula I:

1

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que

X^{1} y X^{2} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por hidrógeno y cloro;

R^{1} es -Y^{a}-(W)_{n}-Y^{b}-;

W se selecciona entre el grupo constituido por -O-, -N(R^{d})-, -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, cicloalquileno(C_{3-6}), arileno(C_{6-10}) y heteroarileno(C_{2-9}); en el que cada grupo arileno, cicloalquileno y heteroarileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre R^{b};

Y^{a} e Y^{b} son independientemente alquileno(C_{1-5}), o cuando W es cicloalquileno, arileno o heteroarileno, Y^{a} e Y^{b} son independientemente seleccionados entre el grupo constituido por un enlace covalente y alquileno(C_{1-5}); en el que cada grupo alquileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre -OR^{d}-, -NR^{d}R^{e}, CO_{2}R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e} y -S(O)_{2}NR^{d}R^{e};

R^{2} es hidrógeno o alquilo(C_{1-6});

cada R^{3} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por alquilo(C_{1-6}), alquenilo(C_{2-6}), alquinilo(C_{2-6}), cicloalquilo(C_{3-6}), arilo(C_{6-10}), heteroarilo(C_{2-9}), heterocíclico(C_{3-6}) y R^{a}; o dos grupos R^{3} adyacentes están unidos para formar alquileno(C_{3-6}) o -O-alquileno(C_{1-6})-O-; en el que el grupo alquilo, alquileno, alquenilo y alquinilo está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por R^{a} y R^{c}; cada grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterocíclico está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por R^{b};

uno entre R^{4} y R^{5} es hidroxilo y el otro es hidrógeno;

R^{6} y R^{7} son independientemente hidrógeno o metilo;

R^{8} es hidrógeno o un grupo de fórmula (i):

2

cada R^{a} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por -OR^{d}, halo, -SR^{d}, -S(O)R^{d}, -S(O)_{2}R^{d},
-S(O)_{2}OR^{d}, -S(O)_{2}NR^{d}R^{e}, -NR^{d}R^{e}, -CO_{2}R^{d}, -OC(O)R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e}, -NR^{d}C(O)R^{e}, -OC(O)NR^{d}R^{e}, -NR^{d}C(O)OR^{e}, -NR^{d}C(O)NR^{d}R^{e}, -CF_{3} y -OCF_{3};

cada R^{b} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por alquilo(C_{1-6}), alquenilo(C_{2-6}), alquinilo(C_{2-6}) y R^{a};

cada R^{c} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por cicloalquilo(C_{3-6}), arilo(C_{6-10}), heteroarilo(C_{2-9}) y heterocíclico(C_{3-6}); en el que cada grupo cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterocíclico está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por alquilo(C_{1-6}) y
R^{f};

cada R^{d} y R^{e} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo(C_{1-6}), alquenilo(C_{2-6}), alquinilo(C_{2-6}) cicloalquilo(C_{3-6}), arilo(C_{6-10}), heteroarilo(C_{2-9}) y heterocíclico(C_{3-6}); o R^{d} y R^{e} están unidos, junto con los átomos a los que están enlazados, para formar un anillo heterocíclico(C_{3-6}) que tiene de 1 a 3 heteroátomos independientemente seleccionados entre oxígeno, nitrógeno o azufre; en el que cada grupo alquilo, alquenilo y alquinilo está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por R^{c} y R^{f}; y cada grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterocíclico está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por alquilo(C_{1-6}) y R^{f};

cada R^{f} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por -OH, -O(alquilo(C_{1-6})), -S(alquilo(C_{1-6})), -F, -Cl, -NH_{2}, -NH(alquilo(C_{1-6})), -N(alquilo(C_{1-6}))_{2}, -OC(O)(alquilo(C_{1-6})), -C(O)O(alquilo(C_{1-6})), NHC(O)(alquilo(C_{1-6})), -C(O)OH, -C(O)NH_{2}, -C(O)NH(alquilo(C_{1-6})), -C(O)N(alquilo(C_{1-6}))_{2}, -CF_{3} y -OCF_{3};

m es 0, 1, 2 ó 3; y

n es 0 ó 1.

Esta invención también está dirigida a productos intermedios útiles para preparar compuestos de fórmula I, y sales de los mismos. Por consiguiente, en otro aspecto relativo a su composición, esta invención proporciona un compuesto de fórmula II:

3

o una sal del mismo; en el que

R^{1} y R^{2} son como se define en la presente memoria;

P^{1} y P^{2} son independientemente hidrógeno o un grupo protector de aminas;

P^{3} es hidrógeno o grupo protector de carboxilos;

Q es un grupo saliente o un grupo de fórmula:

4

\vskip1.000000\baselineskip

en el que R^{3} y m son como se definen en la presente memoria; y X^{-} es un anión opcionalmente presente; cuyos compuestos son útiles como productos intermedios para preparar compuestos de fórmula I y/o como antibióticos.

En todavía otro aspecto relativo a su composición, esta invención proporciona un compuesto de fórmula III:

5

o sales del mismo; en el que R^{1}, R^{2}, P^{1} y P^{2} son como se definen en la presente memoria, y P^{4} es hidrógeno o un grupo protector de carboxilos; cuyos compuestos son útiles como productos intermedios para preparar compuestos de fórmula I o II.

En otros aspectos independientes y distintos relativos a la composición, esta invención también proporciona compuestos de fórmulas 2, 5b, 7, 8, 10, 11 y 13 como se definen en la presente memoria, o sales o derivados protegidos de los mismos; cuyos compuestos son útiles como productos intermedios para preparar compuestos de fórmula I y/o como antibióticos.

En otro aspecto relativo a su composición, esta invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Aunque no se pretenda quedar limitados por la teoría, se cree que los compuestos de fórmula I inhiben la biosíntesis de la pared celular bacteriana, inhibiendo de ese modo el crecimiento de las bacterias o causando la lisis de las mismas. Por lo tanto, entre otras propiedades, los compuestos de fórmula I son útiles como antibióticos.

Por consiguiente, los compuestos de esta invención son útiles en un procedimiento de tratamiento de una infección bacteriana en un mamífero, comprendiendo el procedimiento administrar a un mamífero una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Adicionalmente, en otro aspecto relativo a su procedimiento, esta invención proporciona un procedimiento de inhibición del crecimiento de bacterias, comprendiendo el procedimiento poner en contacto bacterias in vitro con una cantidad inhibidora del crecimiento de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En todavía otro aspecto relativo al procedimiento, esta invención proporciona un procedimiento de inhibición de la biosíntesis de la pared celular bacteriana, comprendiendo el procedimiento poner en contacto bacterias in vitro con una cantidad inhibidora de la biosíntesis de la pared celular de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Esta invención también está dirigida a procedimientos para preparar compuestos de fórmula I o una sal de los mismos. Por consiguiente, en otro aspecto relativo al procedimiento, esta invención proporciona un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo, comprendiendo el procedimiento:

(a): hacer reaccionar un glicopéptido de fórmula 1 como el definido en la presente memoria con un compuesto de fórmula 2 como el definido en la presente memoria; o

(b): hacer reaccionar un compuesto de fórmula 10 como el definido en la presente memoria con un compuesto de fórmula 11 como el definido en la presente memoria; o

(c): hacer reaccionar un compuesto de fórmula 9 como el definido en la presente memoria con un compuesto de fórmula 13 como el definido en la presente memoria;

para proporcionar un compuesto de fórmula I o una sal del mismo. En una realización preferida, el procedimiento anterior comprende además la etapa de formar una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I.

Esta invención también está dirigida a un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia. Adicionalmente, esta invención está dirigida al uso de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la elaboración de un medicamento destinado al tratamiento de una infección bacteriana en un mamífero.

Descripción detallada de la invención

Esta invención proporciona novedosos compuestos de glicopéptido-cefalosporina de fórmula I o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Estos compuestos tienen múltiples centros quirales y, en este aspecto, se pretende que los compuestos tengan la estereoquímica mostrada. En concreto, se pretende que la porción glicopeptídica del compuesto tenga la estereoquímica del correspondiente glicopéptido natural (i.e., vancomicina, cloroorienticina A y similares). Se pretende que la porción de cefalosporina de la molécula tenga la estereoquímica de los compuestos de cefalosporina conocidos. Sin embargo, los expertos en la técnica entenderán que en las composiciones de esta invención pueden estar presentes cantidades menores de isómeros que tengan una estereoquímica diferente a la mostrada, con la condición de que la utilidad de la composición en su conjunto no se vea significativamente reducida por la presencia de tales isómeros.

Adicionalmente, la porción de ligamiento de los compuestos de esta invención (i.e., R^{1}) puede contener uno o más centros quirales. Normalmente, esta porción de la molécula será preparada como una mezcla racémica. Sin embargo, si se desea, se pueden usar estereoisómeros puros (i.e., enantiómeros o diastereómeros individuales) o una mezcla enriquecida con estereoisómeros. Todos estos estereoisómeros y mezclas enriquecidas están incluidos en el alcance de esta invención.

Además, los compuestos de esta invención contienen varios grupos ácidos (i.e., grupos de ácidos carboxílicos) y varios grupos básicos (i.e., grupos de aminas primarias y secundarias) y por lo tanto, los compuestos de fórmula I pueden existir en diversas formas salinas. Todas estas formas salinas están incluidas en el alcance de esta invención. Además, como los compuestos de fórmula I contienen un anillo de piridinio, puede estar opcionalmente presente un contraión aniónico para el grupo piridinio, incluyendo, pero no limitándose a, haluros, tales como cloruro; carboxilatos, tales como acetato; y similares.

Además, los expertos en la técnica entenderán que los compuestos lábiles o químicamente inestables, que carecen de cualquier utilidad debido a su inestabilidad, no están incluidos en el alcance de la invención. Por ejemplo, es preferible que los compuestos de fórmula I contengan al menos dos átomos de carbono entre cualquier átomo de oxígeno (-O-), nitrógeno (-N<) o azufre (-S-) del resto -O-R^{1}-N(R^{2})-, pues cuando estos átomos están separados por un único átomo de carbono, el compuesto resultante (i.e., que contiene un grupo acetal, hemiacetal, cetal, hemicetal, aminal, hemiamial o tiocetal, y similares) puede ser hidrolíticamente inestable en condiciones ácidas.

Realizaciones preferidas

En los compuestos de fórmula I, se prefieren los siguientes sustituyentes y valores:

En una realización preferida, la presente invención está dirigida a compuestos de fórmula Ia:

6

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R^{1}, R^{2}, R^{3} y m son como se definen en la presente memoria, incluyendo las realizaciones preferidas.

En una realización preferida, R^{1} es -Y^{a}-Y^{b}-, cuando n es 0. En esta realización, Y^{a} e Y^{b} son independientemente grupos alquileno(C_{1-5}) en los que cada grupo alquileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre -OR^{d}, -NR^{d}R^{e}, -CO_{2}R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e} y -S(O)_{2}NR^{d}R^{e} como se define en la presente memoria. Preferiblemente, Y^{a} e Y^{b} son independientemente seleccionados entre alquileno(C_{1-3}); y más preferiblemente, alquileno(C_{1-2}). Más preferiblemente, Y^{a} e Y^{b} están unidos (i.e., R^{1}) para formar un grupo -(CH_{2})_{2-8}-. Todavía más preferiblemente, Y^{a} e Y^{b} están unidos para formar un grupo -(CH_{2})_{2}-, -(CH_{2})_{3}-, -(CH_{2})_{4}-, -(CH_{2})_{5}- o -(CH_{2})_{6}-. En una realización particularmente preferida, Y^{a} e Y^{b} están unidos para formar un grupo -(CH_{2})_{3}-.

En otra realización preferida, R^{1} es -Y^{a}-W-Y^{b}-, i.e., cuando n es 1. En esta realización, Y^{a} e Y^{b} son independientemente alquileno(C_{1-5}), o cuando W es cicloalquileno, arileno o heteroarileno, Y^{a} e Y^{b} son independientemente seleccionados entre el grupo constituido por un enlace covalente y alquileno(C_{1-5}). En esta realización, cada grupo alquileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados entre -OR^{d}, -NR^{d}R^{e}, -CO_{2}R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e} y -S(O)_{2}NR^{d}R^{e} como se definen en la presente memoria. Cuando Y^{a} o Y^{b} es un grupo alquileno, el grupo alquileno es preferiblemente un grupo alquileno(C_{1-3}); más preferiblemente, un grupo alquileno(C_{1-2}); todavía más preferiblemente, un grupo -(CH_{2})_{1-2}-. En una realización particularmente preferida, Y^{a} e Y^{b} son ambos -CH_{2}- y W es arileno(C_{6-10}) opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre R^{b} como se define en la presente memoria; más preferiblemente, W es fenileno. En otra realización preferida, Y^{a} e Y^{b} son ambos -CH_{2}CH_{2}- y W es -O-.

Cuando está presente, W es preferiblemente arileno(C_{6-10}) u -O-. Más preferiblemente, W es fenileno u -O-.

Preferiblemente, R^{2} es hidrógeno o alquilo(C_{1-3}). Más preferiblemente, R^{2} es hidrógeno.

Cuando está presente, R^{3} es preferiblemente independientemente seleccionado entre alquilo(C_{1-6}), cicloalquilo(C_{3-6}), -OR^{d}, -SR^{d}, -F o -Cl; o dos grupos R^{3} adyacentes están unidos para formar alquileno(C_{3-6}).

En una realización preferida, R^{4} es hidroxilo y R^{5} es hidrógeno. En otra realización preferida, R^{4} es hidrógeno y R^{5} es hidroxilo.

Preferiblemente, R^{6} es hidrógeno y R^{7} es metilo.

Preferiblemente, R^{8} es hidrógeno.

Preferiblemente, uno entre X^{1} y X^{2} es cloro y el otro es hidrógeno; o ambos son cloro. Más preferiblemente, X^{1} y X^{2} son ambos cloro.

En una realización preferida, R^{4} es hidroxilo; R^{5} es hidrógeno; R^{6} es hidrógeno; R^{7} es metilo; R^{8} es hidrógeno; y X^{1} y X^{2} son ambos cloro (i.e., la porción glicopeptídica es vancomicina).

En otra realización preferida R^{4} es hidroxilo; R^{5} es hidrógeno; R^{6} es hidrógeno; R^{7} es metilo; R^{8} es un grupo de fórmula (i); y X^{1} y X^{2} son ambos cloro (i.e., la porción glicopeptídica es cloroorienticina o A82846B),

En una realización preferida, m es 0. En otra realización preferida, m es 1 ó 2; más preferiblemente, 1. En todavía otra realización preferida, m es 2 y los dos grupos R^{3} están unidos para formar un grupo alquileno(C_{3-5}); más preferiblemente, un grupo alquileno(C_{3-4}).

Un grupo preferido de compuestos de fórmula I son aquéllos de fórmula Ia en los que R^{1} es -Y^{a}-(W)_{n}-Y^{b}-, cuando n es 0, e Y^{a} e Y^{b} están unidos para formar un grupo -(CH_{2})_{2-8}-; R^{2} es hidrógeno y m es 0; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En esta realización, R^{1} (i.e., Y^{a} e Y^{b} tomados juntos) es preferiblemente un grupo -(CH_{2})_{2}-, -(CH_{2})_{3}-, -(CH_{2})_{4}-, -(CH_{2})_{5}- o -(CH_{2})_{6}-; más preferiblemente, -(CH_{2})_{3}-.

Otro grupo preferido de compuestos de fórmula I son aquéllos de fórmula Ia, en los que R^{1}, R^{2}, R^{3} y m son como se definen en la tabla I, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Nº. de Ej.	R^{1}
	Y^{a}	W	Y^{b}	n	R^{2}	R^{3}	m
1	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	--	0
2	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2-CH_{3}-	1
3	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-CH_{3}-	1
4	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-CH_{3}-	1
5	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2-CH_{3}O-	1
6	CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-CH_{3}O-	1
7	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-CH_{3}O-	1
8	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2-CH_{3}S-	1
9	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-CH_{3}S-	1
10	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-CH_{3}S-	1

(Continuación)

Nº. de Ej.	R^{1}
	Y^{a}	W	Y^{b}	n	R^{2}	R^{3}	m
11	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2-F-	1
12	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-F-	1
13	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-F-	1
14	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2-Cl-	1
15	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-Cl-	1
16	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-Cl-	1
17	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2-Ph-^{1}	1
18	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-Ph-	1
19	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-Ph-	1
20	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-ciclopropil-	1
21	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-[HOOCCH_{2}S-]	1
22	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	4-NH_{2}C(O)-	1
23	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2,3-di-CH_{3}-	2
24	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3,4-di-CH_{3}-	2
25	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3,5-di-CH_{3}-	2
26	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3,4-di-CH_{3}O-	2
27	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-CH_{3}-4-CH_{3}O-	2
28	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	3-CH_{3}O-4-F-	2
29	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2,3-[-(CH_{2})_{4}-)	2
30	-CH_{2}CH_{2}-	--	-CH_{2}-	0	-H	2,3-(-CH_{2}CH_{2}CH_{2}-)	2
31	-(CH_{2})_{3}-	--	-(CH_{2})_{3}-	0	-H	--	0
32	-CH_{2}CH_{2}-	-O-	-CH_{2}CH_{2}-	1	-H	--	0
33	-CH_{2}-	1,4-(-Ph-)^{2}	-CH_{2}-	1	-H	--	0
^{1}Ph = fenilo
^{2}1,4-(-Ph-) = 1,4-fenileno

En el producto intermedio de fórmula II:

Q es preferiblemente halo o el grupo piridinio definido.

P^{1} es preferiblemente hidrógeno o tert-butoxicarbonilo.

P^{2} es preferiblemente hidrógeno o trifenilmetilo.

P^{3} es preferiblemente hidrógeno o p-metoxibencilo.

R^{1}, R^{2}, R^{3} y m son preferiblemente como se define en la presente memoria, incluyendo cualquier realización preferida, sustituyente o valor.

En el producto intermedio de fórmula III:

P^{1} es preferiblemente hidrógeno o tert-butoxicarbonilo.

P^{2} es preferiblemente hidrógeno, formilo o trifenilmetilo.

P^{4} es preferiblemente hidrógeno, alquilo(C_{1-4}) o p-metoxibencilo.

R^{1} y R^{2} son preferiblemente como se define en la presente memoria, incluyendo cualquier realización preferida, sustituyente o valor.

Definiciones

Al describir los compuestos, las composiciones y los procedimientos de esta invención, los siguientes términos tienen los siguientes significados, a no ser que se indique otra cosa.

El término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo saturado monovalente que puede ser lineal o ramificado. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos alquilo contienen normalmente de 1 a 10 átomos de carbono. Los grupos alquilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, tert-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo y similares.

El término "alquileno" se refiere a un grupo hidrocarburo saturado bivalente que puede ser lineal o ramificado. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos alquileno contienen normalmente de 1 a 10 átomos de carbono. Los grupos alquileno representativos incluyen, a modo de ejemplo, metileno, etano-1,2-diilo ("etileno"), propano-1,2-diilo, propano-1,3-diilo, butano-1,4-diilo, pentano-1,5-diilo y similares.

El término "alquenilo" se refiere a un grupo hidrocarburo insaturado monovalente que puede ser lineal o ramificado, y que tiene al menos un, y normalmente 1, 2 ó 3, enlaces dobles de carbono-carbono. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos alquenilo contienen normalmente de 2 a 10 átomos de carbono. Los grupos alquenilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, etenilo, n-propenilo, isopropenilo, n-but-2-enilo, n-hex-3-enilo y similares.

El término "alquinilo" se refiere a un grupo hidrocarburo insaturado monovalente que puede ser lineal o ramificado, y que tiene al menos un, y normalmente 1, 2 ó 3, enlaces triples de carbono-carbono. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos alquinilo contienen normalmente de 2 a 10 átomos de carbono. Los grupos alquinilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, etinilo, n-propinilo, n-but-2-inilo, n-hex-3-inilo y similares.

El término "arilo" se refiere un hidrocarburo aromático monovalente que tiene un único anillo (i.e., fenilo) o anillos fusionados (i.e., naftaleno). A no ser que se defina otra cosa, tales grupos arilo contienen normalmente de 6 a 10 átomos de carbono en el anillo. Los grupos arilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, fenilo y naftalen-1-ilo, naftalen-2-ilo y similares.

El término "arileno" se refiere a un hidrocarburo aromático bivalente que tiene un único anillo (i.e., fenileno) o anillos fusionados (i.e., naftalenodiilo). A no ser que se defina otra cosa, tales grupos arileno normalmente contienen de 6 a 10 átomos de carbono en el anillo. Los grupos arileno representativos incluyen, a modo de ejemplo, 1,2-fenileno, 1,3-fenileno, 1,4-fenileno, naftalen-1,5-diilo, naftalen-2,7-diilo y similares.

El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo carbocíclico saturado monovalente. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos cicloalquilo normalmente contienen de 3 a 10 átomos de carbono. Los grupos cicloalquilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares.

El término "cicloalquileno" se refiere a un grupo hidrocarburo carbocíclico saturado bivalente. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos cicloalquileno normalmente contienen de 3 a 10 átomos de carbono. Los grupos cicloalquileno representativos incluyen, a modo de ejemplo, ciclopropano-1,2-diilo, ciclobutil-1,2-diilo, ciclobutil-1,3-diilo, ciclopentil-1,2-diilo, ciclopentil-1,3-diilo, ciclohexil-1,2-diilo, ciclohexil-1,3-diilo, ciclohexil-1,4-diilo, y similares.

El término "halo" se refiere a fluoro, cloro, bromo y yodo.

El término "heteroarilo" se refiere a un grupo aromático monovalente que tiene un único anillo o dos anillos fusionados, y que contiene en el anillo al menos un heteroátomo (normalmente, de 1 a 3 heteroátomos) seleccionado entre nitrógeno, oxígeno o azufre. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos heteroarilo contienen normalmente de 5 a 10 átomos totales en el anillo. Los grupos heteroarilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, especies monovalentes de pirrol, imidazol, tiazol, oxazol, furano, tiofeno, triazol, pirazol, isoxazol, isotiazol, piridina, pirazina, piridazina, pirimidina, triazina, indol, benzofurano, benzotiofeno, bencimidazol, benztiazol, quinolina, isoquinolina, quinazolina, quinoxalina y similares, en los que el punto de unión es cualquier átomo de carbono o nitrógeno disponible del anillo.

El término "heteroarileno" se refiere a un grupo aromático bivalente que tiene un único anillo o dos anillos fusionados, y que contiene en el anillo al menos un heteroátomo (normalmente, de 1 a 3 heteroátomos) seleccionado entre nitrógeno, oxígeno o azufre. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos heteroarileno contienen normalmente de 5 a 10 átomos totales en el anillo. Los grupos heteroarileno representativos incluyen, a modo de ejemplo, especies bivalentes de pirrol, imidazol, tiazol, oxazol, furano, tiofeno, triazol, pirazol, isoxazol, isotiazol, piridina, pirazina, piridazina, pirimidina, triazina, indol, benzofurano, benzotiofeno, bencimidazol, benztiazol, quinolina, isoquinolina, quinazolina, quinoxalina y similares, en los que el punto de unión es cualquier átomo de carbono o nitrógeno disponible del anillo.

El término "heterociclilo" o "heterocíclico" se refiere a un grupo (no aromático) monovalente saturado o insaturado que tiene un único anillo o múltiples anillos condensados, y que contiene en el anillo al menos un heteroátomo (normalmente de 1 a 3 heteroátomos) seleccionado entre nitrógeno, oxígeno o azufre. A no ser que se defina otra cosa, tales grupos heterocíclicos normalmente contienen de 2 a 9 átomos totales en el anillo. Los grupos heterocíclicos representativos incluyen, a modo de ejemplo, especies monovalentes de pirrolidina, imidazolidina, pirazolidina, piperidina, 1,4-dioxano, morfolina, tiomorfolina, piperazina, 3-pirrolina y similares, en los que el punto de unión está en cualquier átomo de carbono o nitrógeno disponible del anillo.

El término "cefalosporina" se usa en la presente memoria en su manera reconocida por la técnica para referirse a un sistema de anillos \beta-lactámicos que tiene la siguiente fórmula general y el siguiente sistema de numeración:

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

El término "antibiótico glicopeptídico" o "glicopéptido" se usa en la presente memoria en su manera reconocida por la técnica para referirse a la clase de antibióticos conocidos como glicopéptidos o dalbahpéptidos. Véase, por ejemplo, R. Nagarajan, "Glycopeptide Antibiotics", Marcel Dekker, Inc. (1994) y las referencias citadas en la presente memoria. Los glicopéptidos representativos incluyen vancomicina, A82846A (eremomicina), A82846B (cloroorienticina A), A82846C, PA-42867-A (orienticina A), PA-42867-C, PA-42867-D y similares.

El término "vancomicina" se usa en la presente memoria en su manera reconocida por la técnica para referirse al antibiótico glicopeptídico conocido como vancomicina. En los compuestos de la presente invención, el punto de unión para el resto de enlace está en el "terminal C" de la vancomicina.

El terminal "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal que es aceptable para ser administrada a un paciente, tal como un mamífero (p.ej., sales que tienen una seguridad aceptable en mamíferos para un determinado régimen posológico). Tales sales pueden estar derivadas de bases orgánicas o inorgánicas farmacéuticamente aceptables y de ácidos orgánicos o inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Las sales derivadas de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sal de aluminio, de amonio, de calcio, de cobre, férrica, ferrosa, de litio, de magnesio, mangánica, manganosa, de potasio, de sodio, de zinc y similares. Las particularmente preferidas son las sales de amonio, de calcio, de magnesio, de potasio y de sodio. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, incluyendo aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas naturales y similares, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenciletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Las sales derivadas de ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen de ácido acético, ascórbico, bencenosulfónico, benzoico, canfosulfónico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, glucónico, glucorónico, glutámico, hipúrico, hidrobrómico, hidroclórico, isetiónico, láctico, lactobiónico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, naftalenosulfónico, nicotínico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenosulfónico y similares. Los ácidos particularmente preferidos son el ácido cítrico, hidrobrómico, hidroclórico, maleico, fosfórico, sulfúrico y tartárico.

El término "sal del mismo" se refiere a un compuesto formado cuando el hidrógeno de un ácido es reemplazado por un catión, tal como un catión metálico o un catión orgánico y similares (p.ej., un catión de NH_{4}^{+} y similares). Preferiblemente, la sal es una sal farmacéuticamente aceptable, aunque esto no es necesario para sales de compuestos intermedios que no están destinadas a ser administradas a un paciente.

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para llevar a cabo un tratamiento cuando se administra a un paciente en necesidad de tratamiento.

El término "tratar" o "tratamiento" como se usa en la presente memoria se refiere a tratar o al tratamiento de una enfermedad o una condición médica (tal como una infección bacteriana) en un paciente, tal como un mamífero (particularmente un ser humano o un animal de compañía) que incluye:

(a): prevenir que la enfermedad o la condición médica ocurra, i.e., tratamiento profiláctico de un paciente;

(b): mejorar la enfermedad o la condición médica, i.e., eliminar o causar el retroceso de la enfermedad o la condición médica en un paciente;

(c): eliminar la enfermedad o la condición médica, i.e., aminorar o detener el desarrollo de la enfermedad o la condición médica en un paciente; o

(d): aliviar los síntomas de la enfermedad o la condición médica en un paciente.

El término "cantidad inhibidora del crecimiento" se refiere a una cantidad suficiente para inhibir el crecimiento o la reproducción de un microorganismo, o suficiente para causar la muerte o lisis del microorganismo incluyendo las bacterias gram-positivas.

El término "cantidad inhibidora de la biosíntesis de la pared celular" se refiere a una cantidad suficiente para inhibir la biosíntesis de la pared celular en un microorganismo incluyendo las bacterias gram-positivas.

El término "grupo saliente" se refiera a un grupo o átomo funcional que puede ser reemplazado por otro grupo o átomo funcional en una reacción de sustitución, tal como una reacción de sustitución nucleofílica. A modo de ejemplo, los grupos salientes representativos incluyen grupos de cloro, bromo y yodo; y grupos de éster sulfónico, tales como mesilato, tosilato, brosilato, nosilato y similares; grupos éster activados, tales como 7-azabenzotriazol-1-oxilo y similares; grupos aciloxilo, tales como acetoxilo, trifluoroacetoxilo y similares.

El término "derivados protegidos del mismo" se refiere a un derivado del compuesto especificado en el que uno o más grupos funcionales del compuesto están protegidos de reacciones no deseadas con un grupo protector o bloqueador. Los grupos funcionales que pueden estar protegidos incluyen, a modo de ejemplo, grupos de ácido carboxílico, grupos amino, grupos hidroxilo, grupos tiol, grupos carbonilo y similares. Los grupos protectores representativos para los ácidos carboxílicos incluyen ésteres (tales como un éster de p-metoxibencilo), amidas e hidrazidas; para grupos amino, carbamatos (tales como tert-butoxicarbonilo) y amidas; para grupos hidroxilo, éteres y ésteres; para grupos tiol, tioéteres y tioésteres; para grupos carbonilo, acetales y cetales; y similares. Tales grupos protectores son conocidos por los expertos en la técnica y se describen, por ejemplo, en T. W. Greene y G. M. Wuts, "Protecting Groups in Organic Synthesis", tercera edición, Wiley, Nueva York, 1999, y las referencias citadas en esa
memoria.

El término "grupo protector de aminos" se refiere a un grupo protector adecuado para evitar las reacciones no deseadas en un grupo amino. Los grupos protectores de aminos representativos incluyen, pero no se limitan a, tert-butoxicarbonilo (BOC), tritilo (Tr), benciloxicarbonilo (Cbz), 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), formilo, trimetilsililo (TMS), tert-butildimetilsililo (TBS) y similares.

El término "grupo protector de carboxilos" se refiere a un grupo protector adecuado para evitar reacciones no deseadas en un grupo carboxilo. Los grupos protectores de carboxilos incluyen, pero no se limitan a, ésteres tales como metilo, etilo, tert-butilo, bencilo (Bn), p-metoxibencilo (PMB), 9-fluorenilmetilo (Fm), trimetilsililo (TMS), tert-butildimetilsililo (TBS), difenilmetilo (benzhidrilo, DPM) y similares.

Procedimientos sintéticos generales

Los compuestos entrecruzados de glicopéptido-cefalosporina de esta invención pueden ser preparados a partir de materiales iniciales fácilmente disponibles usando los siguientes procedimientos generales. Se entenderá que cuando se den condiciones de procedimiento normales o preferidas (i.e., temperaturas de reacción, tiempos, proporciones molares de los reactivos, disolventes, presiones, etc), también se pueden usar otras condiciones de procedimiento a no ser que se establezca otra cosa. Las condiciones óptimas de reacción pueden variar con los reactivos o el disolvente que se use en particular, pero tales condiciones pueden ser fácilmente determinadas por cualquier experto en la técnica mediante procedimientos rutinarios de optimización.

Además, como resultará evidente para aquéllos expertos en la técnica, pueden ser necesarios o pueden desearse grupos protectores convencionales para evitar que ciertos grupos funcionales sean sometidos a reacciones no deseadas. La elección de un grupo protector adecuado para un grupo funcional determinado, así como de las condiciones adecuadas para la protección y la desprotección de tales grupos funcionales son conocidas en la técnica. Si se desea, se pueden usar grupos protectores distintos a aquéllos ilustrados en los procedimientos descritos en la presente memoria. Por ejemplo, en T. W. Greene y G. M. Wuts, "Protecting Groups in Organic Synthesis", tercera edición, Wiley, Nueva York, 1999, y las referencias citadas en esa memoria, se describen numerosos grupos protectores, así como su introducción y eliminación.

\newpage

En un procedimiento preferido de síntesis, los compuestos de fórmula I son preparados haciendo reaccionar un glicopéptido de fórmula 1:

8

en el que R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7}, R^{8}, X^{1} y X^{2} son como se definen en la presente memoria, o una sal del mismo, con un compuesto de fórmula 2:

9

en el que R^{1}, R^{2}, R^{3} y m son como se definen en la presente memoria, o una sal o derivado protegido del mismo, para proporcionar un compuesto de fórmula I, o una sal o derivado protegido del mismo.

Normalmente, esta reacción es llevada a cabo mediante el acoplamiento del glicopéptido 1, o una sal del mismo, con aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5 equivalentes, preferiblemente, de aproximadamente 0,9 a aproximadamente 1,1 equivalentes, de un compuesto de fórmula 2 en un diluyente inerte, tal como DMF, usando un reactivo de acoplamiento convencional de ácido carboxílico-amina (péptido). En esta reacción, el glicopéptido 1, o una sal del mismo, normalmente es primero puesto en contacto con un reactivo de acoplamiento en presencia de un exceso, preferiblemente de aproximadamente 1,8 a aproximadamente 2,2 equivalentes, de una amina, tal como diisopropiletilamina, a una temperatura que varía de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 25ºC, preferiblemente, a temperatura ambiente, durante aproximadamente 0,25 a aproximadamente 3 horas. Preferiblemente, luego se añade un exceso de ácido trifluoroacético (normalmente, aproximadamente 2 equivalentes) para formar una sal de TFA de cualquier diisopropiletilamina en exceso. Generalmente, la reacción es entonces enfriada hasta una temperatura de aproximadamente -20ºC hasta aproximadamente 10ºC, preferiblemente, hasta aproximadamente 0ºC, y se añade el producto intermedio 2, seguido de un exceso de 2,4,6-colidina. Normalmente, esta reacción se mantiene a aproximadamente 0ºC durante aproximadamente 1 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada.

Un reactivo de acoplamiento preferido para su uso en esta reacción comprende de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5 equivalentes, preferiblemente, de aproximadamente 0,9 a aproximadamente 1,1 equivalentes, de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP) y de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5 equivalentes, preferiblemente de aproximadamente 0,9 a aproximadamente 1,1 equivalentes, de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) o 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAT). Otros reactivos adecuados de acoplamiento incluyen hexafluorofosfato O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU); cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico (BOP-CI); azida de difenilfosforilo (DPPA); cloruro difenilfosfínico; clorofosfato de difenilo (DPCP) y HOAT; difenilfosfinato de pentafluorofenilo y similares.

Una vez completada la reacción de acoplamiento, se elimina cualquier grupo protector presente en el producto usando procedimientos y reactivos convencionales. Al completar esta reacción, el producto de reacción, i.e., un compuesto de fórmula I, es aislado y purificado usando procedimientos convencionales, tales como cromatografía en columna, CLAR, recristalización y similares.

Los glicopéptidos de fórmula 1 adecuados para su uso en el procedimiento anterior bien se encuentran comercialmente disponibles o pueden ser preparados mediante la fermentación del organismo apropiado productor de glicopéptidos, seguida del aislamiento del glicopéptido a partir del caldo de fermentación resultante usando los procedimientos y el equipo reconocidos por la técnica.

El producto intermedio de cefalosporina 2 usado en el procedimiento anterior se prepara fácilmente a partir de materiales iniciales y reactivos comercialmente disponibles usando procedimientos convencionales. A modo de ejemplo, el producto intermedio 2 puede ser preparado como se muestra en el esquema A:

Esquema A

10

Como se ilustra en el esquema A, primero se hace reaccionar producto intermedio de tiazol 3 (en el que R^{9} es un grupo protector de aminos, tal como un grupo tritilo, y R^{10} es un grupo protector de carboxilos, tal como un grupo etilo) con una amina \omega-funcionalizada de fórmula 4 (en la que R^{1} y R^{2} son como se definen en la presente memoria, R^{11} es un grupo protector de aminos, tal como un grupo tert-butoxicarbonilo (BOC) y Z^{1} es un grupo saliente, tal como cloro, bromo, yodo, mesilato, tosilato y similares) para proporcionar, tras la eliminación del grupo protector de carboxilos (i.e., R^{10}), un producto intermedio de fórmula 5a.

Normalmente, esta reacción es llevada a cabo poniendo primero en contacto 3 con aproximadamente 1,0 a aproximadamente 1,1 equivalentes, preferiblemente, con aproximadamente 1,02 a aproximadamente 1,06 equivalentes, de un compuesto de fórmula 4 en un diluyente inerte, tal como DMF, a una temperatura que varía de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 50ºC, preferiblemente a temperatura ambiente, durante aproximadamente 0,5 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada. Normalmente, esta reacción es llevada a cabo en presencia de un exceso, preferiblemente de aproximadamente 1,1 a aproximadamente 5 equivalentes, de una base, tal como el carbonato de cesio. Adicionalmente, cuando Z^{1} es cloro o bromo, se añade opcionalmente una cantidad catalítica, preferiblemente de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 0,5 equivalentes, de un yoduro de trialquilamonio, tal como yoduro de tetrabutilamonio, para facilitar la reacción generando el derivado de yodo de 4 in situ.

Entonces, la eliminación del grupo protector de carboxilos (i.e., R^{10}) proporciona el producto intermedio 5a. Por ejemplo, cuando el grupo protector de carboxilos es un éster de alquilo, tal como un grupo etilo, el éster es fácilmente hidrolizado al ácido carboxílico poniendo en contacto el éster con un exceso, preferiblemente con aproximadamente 1,1 a aproximadamente 2,5 equivalentes, de un hidróxido de metal alcalino, tal como hidróxido de sodio o hidróxido de potasio. Normalmente, esta reacción es llevada a cabo en un diluyente inerte, tal como etanol, a una temperatura que varía de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 100ºC durante aproximadamente 0,5 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada, para proporcionar el producto intermedio 5a.

Los compuestos de tiazol de fórmula 3 están comercialmente disponibles, por ejemplo, en Aldrich, Milwaukee, WI, o pueden ser preparados a partir de materiales iniciales y reactivos comercialmente disponibles usando procedimientos convencionales.

De manera similar, las aminas \omega-funcionalizadas de fórmula 4 se preparan fácilmente a partir de materiales iniciales y reactivos comercialmente disponibles usando procedimientos convencionales. Los compuestos preferidos de fórmula 4 incluyen, a modo ilustrativo, N-BOC-3-bromopropilamina; N-BOC-6-yodohexilamina; N-BOC-2-(2-yodoetoxi)-etilamina; N-BOC-4-(yodometil)bencilamina y similares. Estos compuestos son fácilmente preparados a partir de materiales iniciales comercialmente disponibles usando reactivos y condiciones de reacción conocidos.

El producto intermedio 5a es entonces clorado para proporcionar el producto intermedio 5b. Normalmente, esta reacción se lleva a cabo poniendo en contacto 5a con de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 1,2 equivalentes de un agente de cloración, tal como N-clorosuccinimida, en un diluyente inerte, tal como cloroformo o DMF, a temperatura ambiente durante aproximadamente 6 a aproximadamente 24 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada.

Entonces se acopla el producto intermedio de 5-cloro-1,3-tiazol 5b con el producto intermedio 6 (en el que R^{12} es hidrógeno o un grupo protector de carboxilos adecuado, tal como un grupo de p-metoxibencilo) para proporcionar el producto intermedio 7. Cuando R^{12} es p-metoxibencilo, el producto intermedio 6 está comercialmente disponible en Otsuka, Japón. Normalmente, esta reacción es llevada a cabo poniendo en contacto 5b con aproximadamente 0,8 a aproximadamente 1 equivalente de 6 en presencia de un reactivo de acoplamiento bajo las condiciones de una reacción de acoplamiento convencional. Un reactivo de acoplamiento preferido para esta reacción es el oxicloruro fosforoso (normalmente, de aproximadamente 1,1 a aproximadamente 1,2 equivalentes) y una cantidad en exceso de una amina, tal como 2,4,6-colidina o diisopropiletilamina. Normalmente, la reacción de acoplamiento es llevada a cabo en un diluyente inerte, tal como THF, a una temperatura que varía de aproximadamente -50ºC a aproximadamente 25ºC durante aproximadamente 0,5 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada, para proporcionar el producto intermedio 7. Para evitar la isomerización, es preferible que esta reacción sea llevada a cabo a -35ºC usando 2,4,6-colidina como base.

Entonces se hace reaccionar el producto intermedio 7 con una piridina o piridina sustituida hasta proporcionar el producto intermedio 8, en el que R^{3} y n son como se definen en la presente memoria. Normalmente, esta reacción es llevada a cabo intercambiando primero el grupo de cloro de 7 por un grupo de yodo, poniendo en contacto 7 con aproximadamente un equivalente de yoduro de sodio en acetona (reacción de Finkelstein) o DMF a temperatura ambiente durante aproximadamente 0,25 a aproximadamente 2 horas. El producto intermedio de yodo resultante, normalmente, es aislado, pero se hace reaccionar in situ con de aproximadamente 1,1 a aproximadamente 1,6 equivalentes de una piridina o una piridina sustituida para proporcionar 8. Normalmente, esta reacción es llevada a cabo a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 a aproximadamente 12 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada. La piridina o piridinas sustituidas usadas en esta reacción bien están comercialmente disponibles o pueden ser preparadas a partir de materiales iniciales y reactivos comercialmente disponibles usando procedimientos convencionales. Los derivados de piridina representativos para su uso en esta reacción incluyen piridina, 2-picolina, 3-picolina, 4-picolina, 2-metoxipiridina, 3-metoxipiridina, 4-metoxipiridina, 2-tiometoxipiridina, 3-tiometoxipiridina, 4-tiometoxipiridina, 4-carboxitiometoxipiridina, 2-fluoropiridina, 3-fluoropiridina, 4-fluoropiridina, 2-cloropiridina, 3-cloropiridina, 4-cloropiridina, 2-fenilpiridina, 3-fenilpiridina, 4-fenilpiridina, 4-ciclopropilpiridina, ácido nicotínico, ácido isonicotínico, nicotinamida, isonicotinamida, 2,3-lutidina, 3,4-lutidina, 3,5-lutidina, 3,4-dimetoxipiridina, 4-metoxi-3-metilpiridina, 4-fluoro-3-metoxipiridina, 2,3-ciclopentenopiridina, 2,3-ciclohexenopiridina y similares.

Alternativamente, se puede acoplar el producto intermedio 5b con un compuesto de fórmula 9:

11

en el que R^{3}, R^{12} y m son como se definen en la presente memoria, para proporcionar el producto intermedio 8. Normalmente, esta reacción es llevada a cabo poniendo en contacto 5b con aproximadamente 0,9 a aproximadamente 1,1 equivalentes de producto intermedio 9, o una sal del mismo, en un diluyente inerte, tal como DMF, en presencia de un agente de acoplamiento, tal como 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC); PyBOP y HOAT o HOBT; HATU; BOP-CI; DPPA; DPCP y HOAT; y similares. Generalmente, la reacción de acoplamiento es llevada a cabo a una temperatura que varía de aproximadamente -40ºC a aproximadamente 25ºC durante aproximadamente 1 a aproximadamente 12 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada. Los compuestos de fórmula 9 se preparan fácilmente a partir del producto intermedio 6, mediante la reacción de 6 con piridina o una piridina sustituida bajo condiciones de reacción similares a las anteriormente descritas.

La eliminación de los grupos protectores del producto intermedio 8 usando procedimientos y reactivos convencionales proporciona entonces el producto intermedio 2 de cefalosporina. Por ejemplo, cuando R^{9} es tritilo, R^{11} es tert-butoxicarbonilo y R^{12} es para-metoxibencilo, los grupos protectores son convencionalmente eliminados tratando 8 con ácido trifluoroacético en exceso y anisol o trietilsilano en exceso en un diluyente inerte, tal como diclorometano o heptano, a la temperatura ambiente durante aproximadamente 1 a aproximadamente 12 horas, o hasta que la reacción es completada. La cefalosporina desprotegida resultante 2, normalmente, es aislada y purificada usando procedimientos convencionales, tales como la precipitación, la liofilización y la CLAR de fase inversa.

Alternativamente, los compuestos de fórmula I pueden ser preparados haciendo reaccionar un derivado glicopeptídico de fórmula 10:

\vskip1.000000\baselineskip

12

o una sal del mismo, en el que R^{1}, R^{2}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7}, R^{8}, X^{1} y X^{2} son como se definen en la presente memoria, con un derivado de cefalosporina de fórmula 11:

13

o una sal o derivado protegido del mismo (en el que R^{3} y m son como se definen en la presente memoria) para proporcionar un compuesto de fórmula I o una sal del mismo.

Normalmente, la reacción se lleva a cabo poniendo en contacto 10 con aproximadamente 1 a aproximadamente 1,5 equivalentes de 11 en un diluyente inerte, tal como agua, metanol o mezclas de los mismos, a un pH que varía de aproximadamente 4 a aproximadamente 6,5. Generalmente, esta reacción es llevada a cabo a una temperatura que varía de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 40ºC durante aproximadamente 1 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada.

Los derivados de vancomicina de fórmula 10 empleados en esta reacción se preparan fácilmente mediante al acoplamiento de la vancomicina, o una sal de la misma, con un derivado de ftalimido de fórmula:

14

en el que R^{1} es como se define en la presente memoria, bajo condiciones convencionales de acoplamiento. Por ejemplo, esta reacción, normalmente, se lleva a cabo poniendo en contacto la vancomicina con aproximadamente 1,1 a aproximadamente 1,2 equivalentes de compuesto de ftalimido en presencia de un reactivo de acoplamiento, tal como PyBOP y HOAT, y similares, y una base adecuada, tal como diisopropiletilamina. Generalmente, la reacción se lleva a cabo en un diluyente inerte, tal como DMF, a una temperatura que varía de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 40ºC durante aproximadamente 0,5 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada. Los compuestos de ftalimido empleados en esta reacción se preparan fácilmente usando procedimientos y reactivos convencionales.

Los derivados de cefalosporina de fórmula 11 pueden ser preparados, por ejemplo, acoplando un compuesto de fórmula 9 anterior con un compuesto de tiazol de fórmula 12:

15

o una sal del mismo, en el que R^{13} es hidrógeno o un grupo protector de aminos (tal como un grupo formilo o tritilo). Normalmente, esta reacción de acoplamiento es llevada a cabo poniendo en contacto 9 con aproximadamente 0,9 a aproximadamente 1,1 equivalentes de 12 en un diluyente inerte, tal como DMF, en presencia de un reactivo de acoplamiento, tal como EDC y HOAT, y una base adecuada, tal como 2,4,6-colidina. Generalmente, esta reacción es llevada a cabo a una temperatura que varía de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 20ºC durante aproximadamente 0,5 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada.

Adicionalmente, los compuestos de fórmula I pueden ser preparados haciendo reaccionar un derivado glicopeptídico de fórmula 13:

16

o una sal del mismo, en el que R^{1}, R^{2}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7}, R^{8}, X^{1} y X^{2} son como se definen en la presente memoria, con un compuesto de la fórmula 9 anterior para proporcionar un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo.

Esta reacción de acoplamiento, normalmente, es llevada a cabo poniendo en contacto 13 con un reactivo de acoplamiento, tal como DIPC y HOAT, y aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 equivalentes de 9 en un diluyente inerte, tal como DMF, en presencia de una base adecuada, tal como 2,4,6-colidina. Generalmente, esta reacción es llevada a cabo a una temperatura que varía de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 40ºC durante aproximadamente 1 a aproximadamente 6 horas, o hasta que la reacción es sustancialmente completada.

El compuesto de fórmula 13 usado en esta reacción se prepara fácilmente mediante el acoplamiento de la vancomicina con el producto intermedio 5b anterior, usando los procedimientos convencionales de acoplamiento descritos en la presente memoria.

En los ejemplos expuestos más abajo, se describen más detalles respecto a las condiciones y los procedimientos específicos de reacción para preparar compuestos representativos de esta invención o productos intermedios de los mismos.

Formulaciones farmacéuticas

Los compuestos entrecruzados de glicopéptido-cefalosporina de esta invención, normalmente, son administrados a un paciente en forma de una composición farmacéutica. Por consiguiente, en un aspecto relativo a su composición, esta invención está dirigida a una composición farmacéutica que comprende un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Se puede usar cualquier vehículo o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de esta invención. La elección de un determinado vehículo o excipiente, o de combinaciones de vehículos o excipientes, dependerá del modo de administración que se esté usando para tratar a un determinado paciente o tipo de infección bacteriana. A este respecto, la preparación de una composición farmacéutica adecuada para un determinado modo de administración, tal como la administración oral, tópica, inhalada o parenteral, es competencia de los expertos en las técnicas farmacéuticas. Adicionalmente, los ingredientes para tales composiciones se encuentran comercialmente disponibles en, por ejemplo, Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178. Con el fin de seguir ilustrando, se describen técnicas convencionales de formulación en "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mace Publishing Co., Filadelfia, PA Edición XVII. (1985) y "Modern Pharmaceutics", Marcel Dekker, Inc. 3ª edición. (G. S. Banker y C.T. Rhodes, Eds.).

Las composiciones farmacéuticas de esta invención normalmente contendrán una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Normalmente, tales composiciones farmacéuticas contendrán del aproximadamente 0,1 al aproximadamente 90% en peso de agente activo, y más generalmente, del aproximadamente 10 al aproximadamente 30% de agente activo.

Las composiciones farmacéuticas preferidas de esta invención son aquéllas adecuadas para una administración parenteral, particularmente, una administración intravenosa. Tales composiciones farmacéuticas comprenden normalmente una solución acuosa fisiológicamente aceptable estéril que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Las soluciones vehículo acuosas fisiológicamente aceptables adecuadas para una administración intravenosa de los agentes activos son conocidas en la técnica. Tales soluciones acuosas incluyen, a modo de ejemplo, dextrosa al 5%, soluciones de Ringer (inyección lactada de Ringer, inyección lactada de Ringer más dextrosa al 5%, inyección acilada de Ringer), Normosol-M, Isolite E y similares.

Opcionalmente, tales soluciones acuosas pueden contener un codisolvente, por ejemplo, polietilen glicol; un agente quelante, por ejemplo, ácido tetraacético de etilenodiamina; un agente de solubilización, por ejemplo, una ciclodextrina; un antioxidante, por ejemplo, metabisulfito de sodio; y similares.

Si se desea, las composiciones farmacéuticas acuosas de esta invención pueden ser liofilizadas y posteriormente reconstituidas con un vehículo adecuado antes de su administración. En una realización preferida, la composición farmacéutica es una composición liofilizada que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Preferiblemente, el vehículo en esta composición comprende sacarosa, manitol, dextrosa, dextrán, lactosa o una combinación de los mismos. Más preferiblemente, el vehículo comprende sacarosa, manitol o una combinación de los mismos.

En una realización, las composiciones farmacéuticas de esta invención contienen una ciclodextrina. Cuando se usa en las composiciones farmacéuticas de esta invención, la ciclodextrina es preferiblemente hidroxipropil-\beta-ciclodextrina o sulfobutil éter \beta-ciclodextrina. En tales formulaciones, la ciclodextrina comprenderá del aproximadamente 1 al 25% en peso; preferiblemente, del aproximadamente 2 al 10% en peso de la formulación. Adicionalmente, la proporción en peso de la ciclodextrina y el agente activo variará normalmente de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 10:1.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención son preferiblemente envasadas en una forma de dosificación unitaria. El término "forma de dosificación unitaria" se refiere a una unidad físicamente diferenciada adecuada para dosificar a un paciente, i.e., cada unidad que contiene una cantidad predeterminada de agente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado bien sola o en combinación con una o más unidades adicionales. Por ejemplo, tales formas de dosificación unitaria pueden estar envasadas en ampollas estériles selladas herméticamente y similares.

Las siguientes formulaciones ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención:

Ejemplo de formulación A

Se prepara una solución congelada adecuada para preparar una solución inyectable como sigue:

Ingredientes	Cantidad
Compuesto activo	10 a 1.000 mg
Excipientes (p.ej., dextrosa)	0 a 50 g
Agua para una solución inyectable	10 a 100 Ml

Procedimiento representativo: se disuelven los excipientes, si los hay, en aproximadamente el 80% del agua para inyección, se añade compuesto activo y se disuelve. Se ajusta el pH con hidróxido de sodio 1M a de 3 a 4,5, y luego se ajusta el volumen hasta el 95% del volumen final con agua para inyección. Se comprueba el pH y se ajusta, si procede, ajustándose el volumen hasta el volumen final con agua para inyección. Entonces se filtra de forma estéril la formulación a través de un filtro de 0,22 micrómetros y se coloca en un vial estéril en condiciones asépticas. Se tapa el vial, se etiqueta y se congela.

Ejemplo de formulación B

Se prepara un polvo liofilizado adecuado para preparar una solución inyectable como sigue:

Ingredientes	Cantidad
Compuesto activo	10 a 1.000 mg
Excipientes (p.ej., manitol y/o sacarosa)	0 a 50 g
Agente de tamponamiento (p.ej., citrato)	0 a 500 mg
Agua para inyección	10 a 100 mL

Procedimiento representativo: se disuelven los excipientes y/o agentes de tamponamiento, si los hay, en aproximadamente el 60% del agua para inyección. Se añade el compuesto activo y se disuelve, ajustando el pH con hidróxido de sodio 1M hasta de 3 a 4,5 y el volumen, hasta el 95% del volumen final con agua para inyección. Se comprueba el pH y se ajusta, si procede, para ajustar luego el volumen hasta el volumen final con agua para inyección. Entonces se filtra de forma estéril la formulación a través de un filtro de 0,22 micrómetros y se coloca en un vial estéril en condiciones asépticas. Entonces la formulación es sometida a criodesecación usando un ciclo apropiado de liofilización. Se tapa el vial (opcionalmente bajo vacío parcial o nitrógeno seco), se etiqueta y almacena bajo refrigeración.

Ejemplo de formulación C

Se prepara una solución inyectable para una administración intravenosa a un paciente a partir del ejemplo de formulación B anterior como sigue:

Procedimiento representativo: se reconstituye el polvo liofilizado del ejemplo de formulación B (p.ej., conteniendo de 10 a 1.000 mg de compuesto activo) con 20 mL de agua estéril, y se diluye más la solución resultante con 80 mL de solución salina estéril en una bolsa de infusión de 100 mL. Luego se administra la solución diluida al paciente por vía intravenosa durante de 30 a 120 minutos.

Utilidad

Los compuestos entrecruzados de glicopéptido-cefalosporina de la invención son útiles como antibióticos. Por ejemplo, los compuestos de esta invención son útiles para tratar o prevenir infecciones bacterianas y otras condiciones médicas relacionadas con las bacterias en mamíferos, incluyendo seres humanos y sus animales de compañía (i.e., perros, gatos, etc.) que están causadas por microorganismos susceptibles a los compuestos de esta invención.

Por consiguiente, los compuestos de esta invención son útiles en un procedimiento de tratamiento de una infección bacteriana en un mamífero, comprendiendo el procedimiento la administración a un mamífero en necesidad de tratamiento, comprendiendo la composición farmacéutica un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

A modo ilustrativo, los compuestos de esta invención son particularmente útiles para tratar o prevenir infecciones causadas por bacterias gram-positivas y microorganismos relacionados. Por ejemplo, los compuestos de esta invención son eficaces para tratar o prevenir infecciones causadas por ciertas especies de enterococos; especies de estafilococos, incluyendo los estafilococos coagulasa-negativos (ECN); especies de estreptococos; especies de listeria; especies de clostridium; especies de bacillus y similares. Los ejemplos de especies bacterianas tratadas eficazmente con los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM); Staphylococcus aureus susceptible a la meticilina (SASM); Staphylococcus aureus susceptible-intermedio a glicopéptidos (SAIG); Staphylococcus epidermitis resistente a la meticilina (SERM); Staphylococcus epidermitis sensible a la meticilina (SESM); Enterococcus faecalis sensible a la vancomicina (EFSV); Enterococcus faecium sensible a la vancomicina (EFSV); Streptococcus pneumoniae resistente a la penicilina (SPRP); Streptococcus pyogenes; y similares. Los compuestos de esta invención son menos eficaces o no eficaces para el tratamiento o la prevención de infecciones causadas por cepas de bacterias que son resistentes tanto a la vancomicina como a las cefalosporinas.

Los tipos representativos de infecciones o las condiciones médicas relacionadas con bacterias que pueden ser tratados o prevenidos con los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, infecciones de la piel o de la estructura cutánea, infecciones del tracto urinario, neumonía, endocarditis, infecciones de la corriente sanguínea relacionadas con el cateterismo; osteomielitis y similares. Al tratar tales condiciones, el paciente ya puede estar infectado con el microorganismo por ser tratado o simplemente, puede ser susceptible a la infección, en cuyo caso el agente activo es administrado profilácticamente.

Los compuestos de esta invención, normalmente, son administrados en una cantidad terapéuticamente eficaz por cualquier vía de administración aceptable. Preferiblemente, los compuestos son administrados parenteralmente. Los compuestos pueden ser administrados en una única dosis diaria o en múltiples dosis al día. El régimen del tratamiento puede requerir la administración durante períodos prolongados de tiempo, por ejemplo, durante varios días o durante de una a seis semanas o más. La cantidad de agente activo administrado por dosis o la cantidad total administrada será normalmente determinada por el médico del paciente, y dependerá de factores tales como la naturaleza y la gravedad de la infección, la edad y la salud general del paciente, la tolerancia del paciente al agente activo, el o los microorganismos causantes de la infección, la vía de administración y similares.

En general, la dosis adecuada variará de aproximadamente 0,25 a aproximadamente 10,0 mg/kg/día de agente activo, preferiblemente, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 mg/kg/día. Para un ser humano de una media de 70 kg, ésta ascendería a de aproximadamente 15 a aproximadamente 700 mg al día de agente activo, o preferiblemente, de aproximadamente 35 a aproximadamente 150 mg al día.

Adicionalmente, los compuestos de esta invención son eficaces para inhibir el crecimiento de bacterias. En esta realización, las bacterias entran en contacto in vitro con una cantidad inhibidora del crecimiento de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Normalmente, una cantidad inhibidora del crecimiento variará de aproximadamente 0,008 \mug/mL a aproximadamente 50 \mug/mL; preferiblemente, de aproximadamente 0,008 \mug/mL a aproximadamente 25 \mug/mL; y más preferiblemente, de aproximadamente 0,008 \mug/mL a aproximadamente 10 \mug/mL. Normalmente, la inhibición del crecimiento bacteriano es evidenciada por una disminución o una falta de reproducción de las bacterias y/o por la lisis de las bacterias, i.e., por un descenso de las unidades formadoras de colonias en un determinado volumen (i.e., por mL) durante un determinado período de tiempo (i.e., por hora) en comparación con bacterias sin tratar.

Los compuestos de esta invención también son eficaces para inhibir la biosíntesis de la pared celular en bacterias. En esta realización, las bacterias entran en contacto in vitro con una cantidad inhibidora de la biosíntesis de la pared celular de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Normalmente, una cantidad inhibidora de la biosíntesis de la pared celular variará de aproximadamente 0,04 \mug/mL a aproximadamente 50 \mug/mL; preferiblemente, de aproximadamente 0,04 \mug/mL a aproximadamente 25 \mug/mL; y más preferiblemente, de aproximadamente 0,04 \mug/mL a aproximadamente 10 \mug/mL. Normalmente, la inhibición de la biosíntesis de la pared celular es evidenciada por la inhibición o la falta de crecimiento de las bacterias, incluyendo la lisis de las
mismas.

Además de contar con sorprendentes e inesperadas propiedades antibacterianas, se ha descubierto que los compuestos de esta invención poseen una seguridad aceptable en mamíferos y una solubilidad acuosa aceptable. Adicionalmente, se ha descubierto que los compuestos de esta invención tienen una capacidad de matar sorprendente e inesperadamente rápida a ciertas bacterias, incluyendo el Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) y Staphylococcus epidermitis resistente a la meticilina (SERM). Estas propiedades, así como la utilidad antibiótica de los compuestos de esta invención, pueden ser demostradas usando diversos ensayos in vitro e in vivo conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, en los siguiente ejemplos se describen con mayor detalle ensayos
representativos.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos sintéticos y biológicos son ofrecidos para ilustrar esta invención y no deben ser interpretados en ningún caso como restricciones del alcance de la misma. En los siguientes ejemplos, las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados, a no ser que se indique otra cosa. Las abreviaturas que no se definen abajo tienen su significado generalmente aceptado.

\vskip1.000000\baselineskip

BOC	=	tert-butoxicarbonilo
UFC	=	Unidades Formadoras de Colonias
DCM	=	diclorometano
DIPEA	=	diisopropiletilamina
DMF	=	N,N-dimetilformamida
DMSO	=	sulfóxido de dimetilo
EtOAc	=	acetato de etilo
HOAT	=	1-hidroxi-7-azabenzotriazol
CLAR	=	Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución
CIM	=	Concentración Inhibidora Mínima
EM	=	Espectrometría de masas
PMB	=	p-metoxibencilo
PyBOP	=	hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidino-fosfonio
THF	=	tetrahidrofurano
CCF	=	Cromatografía de Capa Fina
TFA	=	ácido trifluoroacético

Todas las temperaturas presentadas en los siguientes ejemplos están en grados Celsius (ºC) a no ser que se indique otra cosa. Además, a no ser que se señale otra cosa, los reactivos, los materiales iniciales y los disolventes fueron adquiridos en proveedores comerciales (tales como Aldrich, Fluka, Sigma y similares) y fueron usados sin purificación adicional. El clorhidrato de vancomicina semi-hidratado fue adquirido en Alpharma, Inc., Fort Lee, NJ 07024 (Alpharma AS, Oslo, Noruega).

La CLAR de fase inversa fue comúnmente llevada a cabo usando una columna de C18 y (A) agua al 98%, acetonitrilo al 2%, TFA al 0,1%, con un gradiente en exceso (p.ej., del 0 al aproximadamente 70%) de (B) agua al 10%, acetonitrilo al 90%, TFA al 0,1%, a no ser que se indique otra cosa.

Ejemplo A Síntesis de sal de ácido bis-Trifluoroacético de (7R)-7-[(Z)-2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-(3-aminopropoxiimino)acetamido]-3-[(1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato

La siguiente síntesis está ilustrada, en parte, en el esquema A anterior.

Etapa 1

Preparación de N-(tert-Butoxicarbonil)-3-bromopropilamina (i.e., compuesto 4 en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2} es hidrógeno, R^{11} es BOC y Z^{1} es bromo)

Se suspendió bromhidrato de 3-bromopropilamina (100 g; 457 mmoles) en 1,6 L de THF anhidro. Se enfrió esta mezcla hasta 0ºC en un baño de agua con hielo, y se agitó vigorosamente mientras se añadían 190 mL de trietilamina. Se añadió gota a gota a esta mezcla anhídrido de tert-butoxicarbonilo (112,6 g; 516 mmoles) en 200 mL de THF. Se dejó calentar el baño de hielo hasta la temperatura ambiente, y se agitó la mezcla durante toda la noche, tras lo que una CCF indicó que la reacción se había completado. Se filtró entonces la mezcla, y se concentró el filtrado al vacío. Se diluyó el aceite residual con 1.500 mL de hexano y se almacenó a -20ºC durante 3 días. Entonces se decantó la mezcla y se secó el sólido residual al vacío para proporcionar 101 g (rendimiento del 94%) del producto intermedio base como un sólido blanco cristalino.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta 1,35-1,39 (s, 9H); 1,91-1,95 (m, 2H); 2,99-3,04 (t, 2H); 3,43-3,52 (t, 2H); 6,95-6,99 (t, 1H).

Etapa 2

Preparación de (Z)-2-(2-Trifenilmetilaminotiazol-4-il)-2-(3-N-BOC-aminopropoxiimino)acetato de etilo (i.e., éster de etilo del compuesto 5a, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2} es hidrógeno, R^{9} es trifenilmetilo, R^{11} es BOC y A es hidrógeno)

Se disolvió clorhidrato de (Z)-2-(2-trifenilmetilamino)tiazol-4-il)-2-(hidroxiimino)acetato de etilo (100 g; 202,4 mmoles) en 700 mL de DMF anhidro. Se añadió a esta mezcla agitada carbonato de cesio (230,8 g; 708,5 mmoles) seguido de yoduro de tetrabutilamonio (18,7 g; 50,6 mmoles). Luego se añadió N-BOC-3-bromopropilamina (50,6 g; 212,5 mmoles) en DMF (100 mL) gota a gota durante 30 minutos. Se agitó la mezcla durante dos horas, tras lo que una CLAR indicó que la reacción se había completado. Entonces se filtró la mezcla y se lavó la torta de masa filtrante con 200 mL de DMF. Se disolvió el filtrado en 2 L de acetato de etilo y se lavó con 700 mL de HCl 1N, seguidos de 700 mL de bicarbonato de sodio acuoso saturado y, finalmente, de 500 mL de agua salada. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. Se disolvió el aceite residual en 250 mL de etanol hirviendo y se vertió en un vaso de precipitados. Una vez que el material se había enfriado por completo, se colocó el sólido residual tipo arcilla en un embudo Büchner y se lavó con 50 mL de etanol previamente enfriado hasta -20ºC (NOTA: el producto es moderadamente soluble en etanol, y el uso de cantidades mayores disminuirá el rendimiento total de producto final). Tras secar al aire, se molió el sólido residual en un polvo fino en un mortero y una mano de mortero, y se secó al vacío para dar 117 g (rendimiento del 94%) del producto intermedio base como un polvo fino color hueso.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta 1,01-1,1 (t, 3H); 1,31 (s, 9H); 1,60-1,70 (t, 2H); 2,94-2,99 (m, 2H); 3,95-4,04 (m, 4H); 6,77-6,81 (t, 1H); 6,95 (s, 1H); 7,16-7,38 (m, 15H); 8,80 (s, 1H).

EM m/z: 615,4 [M+H]^{+}.

Etapa 3

Preparación de (Z)-2-(2-Trifenilmetilaminotiazol-4-il)-2-(3-N-BOC-aminopropoxiimino)acetato (i.e., compuesto 5a, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2} es hidrógeno, R^{9} es trifenilmetilo, R^{11} es BOC y A es hidrógeno)

Se suspendió el éster de etilo de la etapa 2 anterior (84,2 g; 137 mmoles) en 400 mL de etanol anhidro y se calentó en un baño de aceite a 80ºC con agitación. Una vez se hubo disuelto todo el material, se añadió gota a gota hidróxido de potasio (23,1 g; 411 mmoles) en 150 mL de etanol a la solución durante 20 minutos. 10 minutos después de haber completado la adición de la base, se comenzó a formar un precipitado, y pasados otros 10 minutos, la mezcla se había vuelto sólida. Se separó la mezcla del baño de aceite y se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron acetato de etilo y agua a la mezcla enfriada, que luego fue vertida en un embudo de decantación. Se lavó la mezcla con ácido fosfórico 1N, lo que causó la formación de un sólido blanco (NOTA: el lavado del producto con un ácido más fuerte, tal como HCl 1N, causa la degradación del producto). Se añadió agua al embudo de decantación para disolver este sólido, y se lavó luego la capa orgánica con bicarbonato de sodio acuoso saturado y agua salada. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío para dar el producto intermedio base (80 g; rendimiento del 99%) como un sólido color habano oscuro.

Etapa 4

Preparación de (Z)-2-(2-Trifenilmetilamino-5-clorotiazol-4-il)-2-(3-N-BOC-aminopropoxiimino)acetato (i.e., compuesto 5b, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2} es hidrógeno, R^{9} es trifenilmetilo, R^{11} es BOC y A es cloro)

Se disolvió el producto intermedio de la etapa 3 anterior (10 g; 17,04 mmoles) en 70 mL de cloroformo y se agitó mientras se añadía N-clorosuccinimida sólida (2,28 g; 17,04 mmoles) (NOTA: los experimentos sugieren que el NCS en exceso puede producir productos secundarios no deseados). Se agitó la mezcla durante toda la noche (un mínimo de 15 horas), tras lo que una CLAR indicó que la reacción se había completado. Entonces se concentró la mezcla al vacío, y se disolvió el residuo en una cantidad mínima de DMF. Se añadió esta mezcla a agua vigorosamente agitada para formar un precipitado que luego fue recogido mediante filtración. Se secó el sólido al aire para dar 9,5 g (rendimiento del 90%) del producto intermedio base como un sólido color habano. La ^{1}H-RMN indicó que sólo quedaba una cantidad mínima de succinimida (NOTA: no es necesario el aislamiento del producto clorado para un acoplamiento correcto en la siguiente etapa, pero los experimentos sugieren que la succinimida residual puede interferir con la posterior sustitución de la piridina). Alternativamente, una vez completada la reacción de cloración, se lavó la mezcla de reacción con agua (x 3), con agua salada, y luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Luego se filtró esta solución y se concentró al vacío para dar el producto intermedio base (90%) como un sólido color
habano.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta 1,37 (s, 9H); 1,63-1,74 (t, 2H); 2,94-2,99 (m, 2H); 3,97-4,05 (t, 2H); 6,80-6,85 (t, 1H); 7,18-7,41 (m, 15H); 8,97 (s, 1H).

EM m/z: 621,3 [M+H]^{+}.

Etapa 5

Preparación de p-metoxibencil éster de (7R)-7-[(Z)-2-(2-trifenilmetilamino-5-clorotiazol-4-il)-2-(3-N-BOC-aminopropoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefem-4-carboxilato (i.e., compuesto 7, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2} es hidrógeno, R^{9} es trifenilmetilo, R^{11} es BOC y R^{12} es p-metoxibencilo)

Se disolvió el producto intermedio de la etapa 4 (0,62 g; 1 mmoles) en 6 mL de THF anhidro, y se añadieron a esta mezcla 0,34 g (0,83 mmoles) de clorhidrato de p-metoxibencil éster de ácido 7-amino-3-clorometilcefalosporánico (i.e., compuesto 6 en el que R^{12} es PMB; adquirido en Otsuka, Japón) en 4 mL de THF anhidro. Se agitó la mezcla resultante bajo nitrógeno y se enfrió hasta -35ºC. Se añadió diisopropiletilamina (0,52 mL; 3 mmoles) a esta mezcla enfriada, seguidos de oxicloruro fosforoso (0,11 mL; 1,2 mmoles). Se agitó esta mezcla a -20ºC durante 30 minutos, y luego se detuvo con THF húmedo y se diluyó con acetato de etilo. Se lavó esta mezcla con agua, HCl 1N, agua salada, y se secó sobre sulfato de sodio para filtrarla y concentrarla hasta dar 0,88 g (rendimiento del 100%) del producto intermedio base como un sólido rojo amarronado. La ^{1}H-RMN indicó la ausencia de isomerización no deseada y succinimida residual.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta 1,37 (s, 9H); 1,63-1,74 (t, 2H); 2,94-2,99 (m, 2H); 3,4-3,74 (c, 2H); 3,75 (s,3H); 3,97-4,05 (t, 2H); 4,40-4,59 (c, 2H); 5,11-5,25 (m, 3H); 5,49-5,54 (m, 1H); 6,75-6,81 (t, 1H); 6,90-6,96 (d, 2H); 7,18-7,41 (m, 17H); 8,97 (s, 1H); 9,41-9,44 (d, 1H).

EM m/z: 972,0 [M+H]^{+}.

(NOTA: los experimentos sugieren que el DIPEA causa isomerización cuando la reacción anterior es llevada a cabo a mayores escalas. Con un procedimiento modificado en el que se usa 2,4,6-colidina como base y se mantiene la temperatura a -35ºC durante toda la reacción, aproximadamente 10 minutos, se evita este problema).

Etapa 6

Preparación de p-metoxibencil éster de (7R)-7-[(Z)-2-(2-trifenilmetilamino-5-clorotiazol-4-il)-2-(3-N-BOC-aminopropoxiimino)acetamido]-3-[(1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato (i.e., compuesto 8, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2} es hidrógeno, R^{9} es trifenilmetilo, R^{11} es BOC, R^{12} es p-metoxibencilo y m es 0)

Se disolvió el producto intermedio de la etapa 5 (500 mg; 0,514 mmoles) en 2 mL de acetona anhidra y se protegió de la luz usando una lámina de metal. Se agitó la solución bajo una atmósfera de nitrógeno y se añadieron 77 mg (0,514 mmoles) de yoduro de sodio, para agitar la mezcla resultante durante 1 hora. Se añadió piridina (63 \muL; 0,772 mmoles) y, tras 90 minutos, se añadió la mezcla a 25 mL de éter de etilo. Se centrifugó la mezcla y se lavó la pella resultante con éter de etilo, para volverla a centrifugar. Se decantó el éter y se secó la pella al vacío para dar un rendimiento cuantitativo del producto intermedio base como un sólido color habano que fue usado sin purificación adicional.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 1,37 (s, 9H); 1,63-1,74 (t, 2H); 2,94-2,99 (m, 2H); 3,3-3,50 (c, 2H); 3,4-3,74 (c, 2H); 3,75 (s, 3H); 3,97-4,05 (t, 2H); 5,10-5,12 (d, 1H); 5,21 (s, 2H); 5,50-5,55 (m, 1H); 5,6 (s, 2H); 6,75-6,81 (t, 1H); 6,90-6,96 (d, 2H); 7,18-7,41 (m, 17H); 8,16-8,21 (t, 2H); 8,61-8,70 (t, 1H); 8,96 (s, 1H); 8,98-9,02 (d, 2H); 9,41-9,44 (d, 1H).

EM m/z: 1.014,2 [M+H]^{+}.

Etapa 7

Preparación de sal de ácido bis-Trifluoroacético de (7R)-7-[(Z)-2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-(3-aminopropoxiimino)acetamido]-3-[(1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato (i.e., compuesto 2, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2} es hidrógeno y m es 0)

Se disolvió el producto intermedio de la etapa 6 (14,4 g) en una mezcla 1:1 de ácido trifluoroacético y diclorometano (120 mL). Se añadieron 6,2 mL de anisol a esta mezcla en agitación, y se agitó la mezcla resultante durante 3 horas a temperatura ambiente. Entonces se concentró la mezcla, se disolvió el residuo en acetato de etilo y se extrajo con agua. Se liofilizaron las capas de agua y se disolvió el polvo resultante en agua, para purificarlo usando una CLAR preparativa de fase inversa. Entonces se liofilizó la solución acuosa purificada resultante para dar 3,3 g (rendimiento del 30%) de producto intermedio base.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 1,80-1,97 (t, 2H); 2,79-2,92 (m, 2H); 3,29-3,57 (c, 2H); 4,02-4,15 (t, 2H); 5,15-5,19 (d, 1H); 5,41-5,63 (c, 2H); 5,83-5,92 (m, 1H); 7,39 (s, 2H); 7,77 (s, 3H); 8,17-8,22 (t, 2H); 8,60-8,70 (t, 1H); 9,0-9,08 (d, 2H); 9,59-9,62 (d, 1H).

EM m/z: 553,1 [M+H]^{+}.

(NOTA: la reacción anterior también puede ser llevada a cabo usando trietilsilano en lugar del anisol. Adicionalmente, se puede aislar el producto usando una valoración con éter de etilo).

Ejemplo B Síntesis de sal de ácido bis-Trifluoroacético de (7R)-7-[(Z)-2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-(3-aminopropoxiimino)acetamido]-3-[(2,3-ciclopenteno-1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato

Usando el procedimiento descrito en el ejemplo A y sustituyendo la 2,3-ciclopentenopiridina (adquirida en Koei, Japón) por piridina en la etapa 6, se obtuvo el producto intermedio base.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 1,82-1,947 (t, 2H); 2,18-2,29 (m, 2H); 2,40-2,58 (m, 2H); 2,81-2,95 (m, 2H); 3,09-3,17 (t, 2H); 3,21-3,30 (t, 2H); 4,10-4,19 (t, 2H); 5,15-5,19 (d, 1H); 5,40-5,61 (c, 2H); 5,83-5,92 (m, 1H); 7,39 (s, 2H); 7,77 (s, 3H); 7,89-7,96 (t, 2H); 8,42-8,48 (d, 1H); 8,62-8,69 (d, 1H); 9,60-9,63 (d, 1H).

EM m/z: 592,5 [M+H]^{+}.

Ejemplo C Síntesis de sal de ácido bis-Trifluoroacético de (7R)-7-[(Z)-2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-(6-aminohexoxiimino)acetamido]-3-[(1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato

Usando el procedimiento descrito en el ejemplo A y sustituyendo la N-BOC-6-yodohexilamina por N-BOC-3-bromopropilamina en la etapa 2 (y eliminando el yoduro de tetrabutilamonio), se obtuvo el producto intermedio base.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta 1,2 ppm (bs, 4H); 1,3 ppm (m, 2H); 1,5 ppm (m, 2H); 2,7 ppm (m, 2H); 3,3 ppm (dd, 2H); 4,0 ppm (t, 3H); 5,1 ppm (d, 1H); 5,5 ppm (dd, 2H); 5,8 (dd, 1H); 7,25 ppm (bs, 2H); 7,6 ppm (bs, 3H); 8,2 ppm (dd, 2H); 8,6 ppm (dd, 1H); 9 ppm (dd, 2H); 9,5 ppm (d, 1H).

EM m/z: 594,3 (M+).

Ejemplo D Síntesis de sal de ácido bis-Trifluoroacético de (7R)-7-[(Z)-2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-(2-(2-aminoetoxi)etoxiimino)acetamido]-3-[(1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato

Se usó el procedimiento del ejemplo A, con la excepción de que se sustituyó la etapa 2 por el siguiente procedimiento:

Etapa 2

Preparación de (Z)-2-(2-Trifenilmetilaminotiazol-4-il)-2-[2-(2-N-BOC-aminoetil)etoxiimino]acetato de etilo (i.e., éster de etilo del compuesto 5a, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{2}-O-(CH_{2})_{2}, R^{2} es hidrógeno, R^{9} es trifenilmetilo, R^{11} es BOC y A es hidrógeno)

Se añadió el producto intermedio de la etapa 1 del ejemplo A (42,5 g; 86 mmoles) a una suspensión agitada de N-BOC-2-(2-yodoetoxi)etilamina (28,5 g; 90 mmoles) (preparada en tres etapas a partir de 2-(2-hidroxietoxi)etanol, i.e., (i) BOC_{2}O, KOH, (ii) MsCl, Et_{3}N e (iii) NaI) y carbonato de cesio (84,1 g; 258 mmoles) en DMF (300 mL). Se agitó la suspensión durante 16 h a temperatura ambiente, tras lo que una CLAR indicó que la reacción se había completado. Entonces se filtró la mezcla de reacción y se lavó la torta de masa filtrante con DMF (100 mL). Se diluyó el filtrado con acetato de etilo (1 L) y se lavó con agua (300 mL), HCl 1N (200 mL), bicarbonato de sodio acuoso saturado (200 mL) y agua salada (200 mL). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna por desorción súbita (acetato de etilo: hexano; 1:1) para proporcionar 49,7 g (rendimiento del 90%) del producto intermedio base como un sólido color hueso.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 2,96 (s, ancho, 2H); 3,20-3,55 (c, 2H); 3,59 (t, 2H); 3,70 (t, 2H); 4,19 (t, 2H); 5,13 (d, 1H); 5,31-5,64 (c, 2H); 5,80 (dd, 1H); 7,40 (s, 2H); 7,87 (s, ancho, 3H); 8,20 (t, 2H); 8,64 (t, 1H); 9,23 (d, 2H); 9,55 (d, 1H).

EM m/z: 503,1 [M-piridina]^{+}.

Ejemplo E Síntesis de sal de ácido bis-Trifluoroacético de (7R)-7-[(Z)-2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-(4-aminometilbenciloxiimino)acetamido]-3-[(1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato

Usando el procedimiento descrito en el ejemplo A y la etapa 2 del ejemplo D, y sustituyendo la N-BOC-4-(yodometil)bencilamina (preparada en cuatro etapas a partir de ácido 4-(aminoetil)benzoico, i.e., (i) BOC_{2}O; KOH, (ii) LiAlH_{4}, (iii) MsCl, Et_{3}N e (iv) NaI) por bromhidrato de 3-bromopropilamina de N-BOC-2-(2-yodoetoxi)-etilamina en la etapa 2, se obtuvo el producto intermedio base.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 3,18-3,59 (c, 2H); 4,00 (s, ancho, 2H); 5,13 (s, 2H); 5,15 (d, 2H); 5,40-5,64 (c, 2H); 5,85 (dd, 1H); 7,38-7,43 (m, 6H); 8,19-8,23 (m, 4H); 8,64 (t, 1H); 9,17 (d, 2H); 9,71 (d, 1H).

EM m/z: 614,1 [M+H]^{+}, 535,1 [M-piridina]^{+}.

Ejemplo F

(Comparativo)

Síntesis de sal de ácido bis-Trifluoroacético de (7R)-7-[(Z)-2-(2-Aminotiazol-4-il)-2-(3-aminopropoxiimino)acetamido]-3-[(1-piridinio)metil]-3-cefem-4-carboxilato

Eliminando la etapa 4 del ejemplo A anterior, se preparó el derivado declorado del producto intermedio del ejemplo A.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 1,75-1,82 (t, 2H); 2,67-2,82 (m, 2H); 3,25-3,61 (c, 2H); 3,98-4,09 (t, 2H); 5,13-5,17 (d, 1H); 5,38-5,58 (c, 2H); 5,79-5,85 (m, 1H); 6,62 (s, 1H); 7,15-7,25 (s, ancho, 2H); 7,60-7,75 (s, ancho, 3H); 8,16-8,19 (t, 2H); 8,58-8,63 (t, 1H); 8,95-9,01 (d, 2H); 9,57-9,60 (d, 1H).

EM m/z: 518,6 [M+H]^{+}.

Ejemplo G Síntesis de 3-(Aminooxi)propil Amida de vancomicina

Etapa 1

Preparación de N-(3-Aminopropoxi)ftalimida

Se disolvieron N-(tert-Butoxicarbonil)-3-bromopropilamina (de la etapa 1 del ejemplo A anterior) (9,58 g; 40,23 mmoles) y N-hidroxiftalimida (6,36 g; 39 mmoles) en 70 mL de DMF anhidro. Se añadió diisopropiletilamina (7,01 mL; 40,23 mmoles) a esta solución, lo que resultó en un color rojo intenso. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 horas, tras lo que se vertió la mezcla de reacción en 500 mL de éter de dietilo. Se filtró el precipitado blanco resultante y se desechó. Se lavó la solución orgánica dos veces con 200 mL de bicarbonato de sodio saturado y otras dos veces con 200 mL de agua. Se secó la solución orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró para dar un sólido blanco. Entonces se disolvió este sólido en 50 mL de DCM y 50 mL de TFA. Tras agitar durante 1 hora, se vertió esta solución en 300 mL de éter de dietilo. Se filtró el precipitado resultante, se lavó con éter de dietilo y se secó al vacío para proporcionar el producto intermedio base como su sal de ácido trifluoroacético.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 1,90 (2H, cn); 2,95 (2H, t); 4,18 (2H, t); 7,79 (4H, s); 7,92 (3H, s ancho).

Etapa 2

Preparación de la 3-(Ftalimidooxi)propil Amida de vancomicina

Se formó un lodo con clorhidrato de vancomicina (10,0 g; 6,74 mmoles) y el producto intermedio de la etapa 1 (2,70 g; 8,09 mmoles) en 100 mL de DMF anhidro. Se añadió diisopropiletilamina (4,70 mL; 26,98 mmoles) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 10 min. Entonces se añadió una solución de PyBOP (5,61 g; 10,78 mmoles) y HOAt (1,65 g; 10,78 mmoles) en DMF (20 mL), y se agitó la reacción a temperatura ambiente. Tras 1hora, se añadió la mezcla de reacción a éter de dietilo (500 mL). Se filtró el precipitado resultante, se lavó con éter de dietilo y se secó al vacío para producir el producto intermedio base como un sólido color hueso.

EM m/z: 1.651,8 [M+H]^{+}.

Etapa 3

Preparación de 3-(Aminooxi)propil Amida de vancomicina

Se formó un lodo con el producto intermedio de la etapa 2 (11,2 g; 6,74 mmoles) en 80 mL de DMF anhidro y se añadió monohidrato de hidracina (0,65 mL; 13,48 mmoles). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 4,5 h, y luego se añadió 1 mL de ácido trifluoroacético a la mezcla de reacción, seguido de 300 mL de éter de dietilo. Tras una agitación vigorosa, se filtró el precipitado resultante, se lavó con éter de dietilo y se secó al vacío. Se purificó el compuesto base mediante CLAR de fase inversa usando un gradiente de agua/metanol para proporcionar el producto intermedio base como un polvo liofilizado.

EM m/z: 1.522,9 [M+H]^{+}.

Ejemplo H Síntesis de Bis-Trifluoroacetato de (7R)-7-[2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-oxoacetamido]-3-(1-piridinio)metil-3-cefem-4-carboxilato

Etapa 1

Preparación de 2-(2-Formilamino-5-clorotiazol-4-il)-2-oxoacetato de etilo

Se formó un lodo con 2-(Formilaminotiazol-4-il)-2-oxoacetato de etilo (9,1 g; 39,87 mmoles) (adquirido en Aldrich, Milwaukee, WI) en 50 mL de DMF anhidro. Se añadió N-Clorosuccinimida (5,6 g; 41,86 mmoles) como un sólido y se agitó la suspensión a temperatura ambiente. Tras 18 horas, se vertió la mezcla de reacción en 500 mL de agua. Se filtró el precipitado blanco resultante, se lavó con agua y se secó al aire para proporcionar el producto intermedio base como un sólido blanco.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta = 1,2 (t, 3H); 4,3 (c, 2H); 8,55 (s, 1H).

Etapa 2

Preparación de ácido 2-(2-Formilamino-5-clorotiazol-4-il)-2-oxoacético

Se añadió NaOH 1M (30 mL; 30 mmoles) al producto intermedio de la etapa 1 (3,6 g; 13,7 mmoles). Se agitó la suspensión resultante a temperatura ambiente durante 2 horas (tras lo que se aclaró la solución) y entonces se añadió HCl 1M (30 mL; 30 mmoles), seguido de 100 mL de agua. Tras una agitación vigorosa, se filtró el precipitado resultante, se lavó con una cantidad mínima de agua fría y se secó al aire para proporcionar el producto intermedio base como un sólido color hueso.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}, 300 MHz): \delta 8,5 (s, 1H).

Etapa 3

Preparación de p-Metoxibencil éster de (7R)-7-[2-(2-Formilamino-5-clorotiazol-4-il)-2-oxoacetamido]-3-clorometil-3-cefem-4-carboxilato

Se formó un lodo con el producto intermedio de la etapa 2 (1,03 g; 4,37 mmoles), clorhidrato de p-metoxibencil éster de ácido 7-amino-3-clorometilcefalosporánico (1,95 g; 4,81 mmoles) y HOAt (0,74 g; 4,81 mmoles) en 15 mL de DMF anhidro. Se purgó el vaso de reacción con nitrógeno y luego se enfrió hasta 0ºC con un baño externo de hielo. Se añadió clorhidrato de 1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,92 g; 4,81 mmoles) a la mezcla de reacción fría, seguida de 2,4,6-colidina (0,64 mL; 4,81 mmoles). Se agitó la reacción a 0ºC durante 2 horas y luego se vertió en 200 mL de HCl 0,5M. Se filtró el precipitado resultante, se lavó con agua y se secó al aire para proporcionar el producto intermedio como un sólido rojo. El compuesto fue usado sin purificación adicional.

EM m/z: 607 (M+Na)^{+}.

Etapa 4

Preparación de p-Metoxibencil éster de (7R)-7-[2-(2-Formilamino-5-clorotiazol-4-il)-2-oxoacetamido]-3-(1-piridinio)metil-3-cefem-4-carboxilato

Se disolvieron el producto intermedio de la etapa 3 (2,5 g; 4,27 mmoles) y yoduro de sodio (0,64 g; 4,27 mmoles) en acetona, y se protegió la mezcla de la luz con una lámina de metal. Se agitó la reacción durante 10 minutos y luego se añadió piridina (0,42 mL; 5,12 mmoles). Entonces se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 1 hora y se añadieron 300 mL de agua. Se filtró el precipitado resultante, se lavó con agua y se secó al aire para proporcionar un sólido rojo. Se purificó este sólido mediante CLAR de fase inversa y se liofilizó la solución acuosa resultante para proporcionar el producto intermedio base como un polvo liofilizado.

EM m/z: 628,1 (M)^{+}.

Etapa 5

Preparación de Bis-Trifluoroacetato de (7R)-7-[2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-oxoacetamido]-3-(1-piridinio)metil-3-cefem-4-carboxilato

Se disolvió el producto intermedio de la etapa 4 (0,11 g; 0,18 mmoles) en 5 mL de metanol y ácido hidroclórico acuoso concentrado (0,5 mL). Se agitó la solución resultante a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se eliminó el metanol al vacío y se añadió acetonitrilo (10 mL). Entonces se concentró la solución al vacío, y se añadió al residuo DCM (2 mL) y TFA (2 mL), para agitar la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadió entonces éter de dietilo (50 mL) y se aisló el producto intermedio base mediante centrifugación. Este producto intermedio fue usado sin purificación adicional.

EM m/z: 479,9 (M)^{+}.

Ejemplo I Síntesis del compuesto 13, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8} son hidrógeno, R^{4} es hidroxilo, R^{7} es metilo, X^{1} y X^{2} son cloro, y m es 0

Etapa 1

Preparación de (Z)-2-(2-Amino-5-clorotiazol-4-il)-2-(3-aminopropoxiimino)acetato

Se disolvió el producto intermedio de la etapa 4 del ejemplo A (0,75 g; 1,21 mmoles) en 5 mL de DCM y 5 mL de ácido trifluoroacético. Tras 1 hora agitando a temperatura ambiente, se añadieron 100 mL de éter de dietilo. Se filtró el precipitado resultante, se lavó con éter de dietilo y se secó al vacío para proporcionar el producto intermedio base como un sólido marrón.

Etapa 2

Preparación del compuesto 13, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8} son hidrógeno, R^{4} es hidroxilo, R^{7} es metilo, X^{1} y X^{2} son cloro, y m es 0

Se formó un lodo con clorhidrato de vancomicina (1,3 g; 0,88 mmoles) y HOAt (0,14 g; 0,88 mmoles) en 3,5 mL de DMSO anhidro. Se añadió una solución de PyBOP (0,46 g; 0,88 mmoles) en 3,5 mL de DMF anhidro, seguida de DIPEA (154 uL, 0,88 mmoles). Tras agitar durante 20 minutos, se añadió una solución del producto intermedio de la etapa 1 (0,22 g; 0,44 mmoles) en 1 mL de DMF, seguida rápidamente de la adición de DIEA (0,54 mL; 3,08 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se añadieron 0,5 mL de ácido trifluoroacético, seguidos rápidamente de la adición de 100 mL de Et_{2}O. Se filtró el precipitado resultante, se lavó con Et_{2}O y se secó al vacío. Se purificó el producto crudo mediante CLAR de fase inversa, y se liofilizó la solución acuosa resultante para proporcionar el compuesto intermedio base como un polvo liofilizado.

EM m/z: 1.711,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 1 Síntesis de un Compuesto de fórmula I, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8} son hidrógeno, R^{4} es hidroxilo, R^{7} es metilo, X^{1} y X^{2} son cloro, y m es 0. (Compuesto 1 de la tabla I)

Se disolvió clorhidrato de vancomicina (4,2 g; 2,8 mmoles) en 40 mL de DMSO. Se añadió una solución de PyBOP (1,3 g; 2,6 mmoles) y HOAT (0,35 g; 2,6 mmoles) en 40 mL de DMF a esta solución, seguida de 0,98 mL (5,68 mmoles) de diisopropiletilamina. Se agitó esta mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se detuvo con 0,44 mL (5,7 mmoles) de ácido trifluoroacético. Entonces se enfrió la mezcla hasta 0ºC, y se añadió una solución del producto intermedio del ejemplo A anterior (1,3 g; 2,6 mmoles) en 20 mL de DMF a 0ºC, seguida de 1,5 mL (11,4 mmoles) de 2,4,6-colidina. Se mantuvo la mezcla a 0ºC durante 4 horas, y luego se detuvo con 1,1 mL de ácido trifluoroacético. Entonces se añadió la mezcla a éter de etilo para formar un precipitado, se centrifugó, se lavó con éter, se decantó y se secó al vacío. Se disolvió el polvo resultante en agua y se purificó usando CLAR preparativa. Se liofilizaron las fracciones que contenían el producto deseado para dar sal de ácido tri-trifluoroacético del compuesto base. Entonces se intercambió el anión de la sal usando resina Amberlita para proporcionar la sal de tri-clorhidrato del compuesto base (1,4 g; rendimiento del 27%) como un polvo blanco.

EM m/z: 953,3 [[M+H]^{+}-piridina]/2; 992,0 [[M+H]^{+}/2.

Adicionalmente, se preparan o prepararon los compuestos 2-30 mostrados en la tabla 1, usando los procedimientos del ejemplo A y el ejemplo 1, usando en lugar de la piridina de la etapa 6 del ejemplo A, las siguientes piridinas sustituidas:

Ejemplo 2: 2-Picolina

Ejemplo 3: 3-Picolina

Ejemplo 4: 4-Picolina

Ejemplo 5: 2-Metoxipiridina

Ejemplo 6: 3-Metoxipiridina

Ejemplo 7: 4-Metoxipiridina

Ejemplo 8: 2-Tiometoxipiridina

Ejemplo 9: 3-Tiometoxipiridina

Ejemplo 10: 4-Tiometoxipiridina

Ejemplo 11: 2-Fluoropiridina

Ejemplo 12: 3-Fluoropiridina

Ejemplo 13: 4-Fluoropiridina

Ejemplo 14: 2-Cloropiridina

Ejemplo 15: 3-Cloropiridina

Ejemplo 16: 4-Cloropiridina

Ejemplo 17: 2-Fenilpiridina

Ejemplo 18: 3-Fenilpiridina

Ejemplo 19: 4-Fenilpiridina

Ejemplo 20: 4-Ciclopropilpiridina

Ejemplo 21: 4-(Carboxitiometoxi)piridina

Ejemplo 22: Isonicotinamida

Ejemplo 23: 2,3-Lutidina

Ejemplo 24: 3,4-Lutidina

Ejemplo 25: 3,5-Lutidina

Ejemplo 26: 3,4-Dimetoxipiridina

Ejemplo 27: 4-Metoxi-3-metilpiridina

Ejemplo 28: 4-Fluoro-3-metoxipiridina

Ejemplo 29: 2,3-Ciclohexenopiridina

Ejemplo 30: 2,3-Ciclopentenopiridina

Las piridinas sustituidas anteriores bien se encuentran comercialmente disponibles o pueden ser preparadas mediante procedimientos según el material publicado.

Ejemplo 31 Síntesis de un Compuesto de fórmula I, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{6}-, R^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8} son hidrógeno, R^{4} es hidroxilo, R^{7} es metilo, X^{1} y X^{2} son cloro, y m es 0. (Compuesto 31 de la tabla I)

Se preparó el compuesto base usando el procedimiento del ejemplo 1 y sustituyendo el producto intermedio del ejemplo C por el producto intermedio del ejemplo A.

EM m/z: 2.026,5 (M^{+}).

Ejemplo 32 Síntesis de un Compuesto de fórmula I, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{2}-O-(CH_{2})_{2}-, R^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8} son hidrógeno, R^{4} es hidroxilo, R^{7} es metilo, X^{1} y X^{2} son cloro, y m es 0. (Compuesto 32 de la tabla I)

Se preparó el compuesto base usando el procedimiento del ejemplo 1 y sustituyendo el producto intermedio del ejemplo D por el producto intermedio del ejemplo A.

EM m/z: 967,9 [(M-piridina)/2]^{+}.

Ejemplo 33 Síntesis de un Compuesto de fórmula I, en el que R^{1} es -CH_{2}-1,4-Ph-CH_{2}-, R^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8} son hidrógeno, R^{4} es hidroxilo, R^{7} es metilo, X^{1} y X^{2} son cloro, y m es 0. (Compuesto 33 de la tabla I)

Se preparó el compuesto base usando el procedimiento del ejemplo 1 y sustituyendo el producto intermedio del ejemplo E por el producto intermedio del ejemplo A.

EM m/z: 1.967,0 [M+H]^{+}; 984,2 [(M-piridina)/2]^{+}.

Ejemplo 34

(Comparativo)

Síntesis de un Compuesto de fórmula I declorado, en el que R^{1} es -(CH_{2})_{3}-, R^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8} son hidrógeno, R^{4} es hidroxilo, R^{7} es metilo, X^{1} y X^{2} son cloro, y m es 0. (Compuesto 34)

Se preparó el compuesto base usando el procedimiento del ejemplo 1 y sustituyendo el producto intermedio de cefalosporina declorada del ejemplo F por el producto intermedio del ejemplo A.

EM m/z: 935,3 [[M+H]^{+}-piridina]/2; 974,9 [M+H]^{+}/2.

Ejemplo 35 Determinación de las Concentraciones Inhibitorias Mínimas (CIM)

Los análisis de las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) fueron realizados usando el procedimiento de microdilución en caldo expuesto en las directrices de NCCLS (véase, NCCLS. 2000. "Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically"; estándar aprobado. 5ª edición., Vol. 20, nº: 2). Las cepas bacterianas fueron obtenidas de la colección ATCC (American Type Tissue Culture Collection), del Hospital de la Universidad de Stanford (SU, Stanford University Hospital), del Kaiser Permanente Regional Laboratory de Berkeley (KPB), del Hospital General de Massachussets (MGH, Massachussets General Hospital), de los centros para el control de enfermedades (CDC, Centers for Disease Control), del Hospital de la Administración de Veteranos de San Francisco (SFVA, San Francisco Veterans' Administration) o del Hospital San Francisco de la Universidad de California (UCSF, University of California San Francisco Hospital). Los enterococos resistentes a la vancomicina fueron fenotipados como Van A o Van B en base a su sensibilidad a la teicoplanina. También se obtuvieron algunos enterococos resistentes a la vancomicina que habían sido genotipados como Van A, Van B, Van C1 o Van C2 de la Cínica Mayo.

En este análisis, se separaron cultivos bacterianos crioconservados de cepas clínicas y de referencia para su aislamiento sobre un medio agar apropiado (i.e., agar de tripticasa de soja, agar de tripticasa de soja con eritrocitos desfibrilados de oveja, agar infusión de cerebro y corazón, agar chocolate). Tras la incubación, para permitir la formación de colonias, se sellaron estas placas con papel parafilm y se almacenaron en refrigeración durante un total de dos semanas. Para preparar los inóculos de análisis y garantizar la baja variabilidad, se pincharon varias colonias del material bacteriano aislado cultivado sobre las placas de agar con un asa de extensión y se transfirieron asépticamente a caldo Mueller-Hinton (complementado con cationes bivalentes hasta los niveles requeridos en base a la certificación del fabricante). Se cultivó el caldo de cultivo durante toda la noche a 35ºC, se diluyó en caldo fresco precalentado y se cultivó hasta una fase logarítmica; esto es equivalente a un estándar 0,5 de MacFarland o 1 x 10^{8} unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/mL). No todas las suspensiones celulares, debido a la variabilidad de las especies, contenían 1 x 10^{8} UFC/mL cuando la turbidez era equivalente al estándar de MacFarland, por lo tanto, se hicieron ajustes aceptables (en base a las directrices de NCCLS) en diluciones de las diferentes cepas bacterianas. Se diluyó el inóculo tal que 100 \muL de este cultivo en caldo Mueller-Hinton, complementado con caldo Mueller-Hinton, o medio de análisis de Haemophilus, distribuidos en una capa sobre una serie diluida serialmente dos veces de concentraciones de antibiótico también en 100 \muL del medio correspondiente, en una placa de microvaloración de 96 pozos, resultaron en una concentración bacteriana inicial de 5 x 10^{5} UFC/mL. Entonces se incubaron las placas de 18-24 horas a 35ºC. Se leyó la CIM visualmente como el pozo con la concentración más baja sin crecimiento bacteriano. El crecimiento bacteriano se define como más de 3 colonias de puntitos, un botón de células precipitadas de más de 2 mm de diámetro o una turbidez obvia.

Las cepas analizadas rutinariamente en la criba inicial incluyeron Staphylococcus aureus sensible a la meticilina (SASM); Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM); Staphylococcus aureus productor de penicilinasa; Staphylococcus epidermitis sensible a la meticilina (SESM); Staphylococcus epidermitis resistente a la meticilina (SERM); Enterococcus faecium sensible a la vancomicina (EFMSV); Enterococcus faecalis sensible a la vancomicina (EFSSV); Enterococcus faecium resistente a la vancomicina también resistente a la teicoplanina (EFMRV Van A); Enterococcus faecium resistente a la vancomicina sensible a la teicoplanina (EFMRV Van B); Enterococcus faecalis resistente a la vancomicina también resistente a la teicoplanina (EFSRV Van A); Enterococcus faecalis resistente a la vancomicina sensible a la teicoplanina (EFSRV Van B); Streptococcus pneumoniae sensible a la penicilina (SPSP) y Streptococcus pneumoniae resistente a la penicilina (SPRP). Debido a la incapacidad del SPSP y SPRP para cultivarse bien en caldo Mueller-Hinton, las CIM con esas cepas fueron determinadas usando bien caldo TS complementado con sangre desfibrilada o con medio de análisis de Haemophilus.

Los compuestos de prueba que tenían una actividad significativa frente a las cepas anteriormente mencionadas fueron entonces analizados en cuanto a los valores de CIM en un panel mayor de aislados clínicos que incluía las especies anteriormente enumeradas, así como estafilococos coagulasa negativa de especies indeterminadas tanto sensibles como resistentes a la meticilina (ECN-SM y ECM-RM). Adicionalmente, estos compuestos de prueba también fueron analizados en cuanto a las CIM frente a microorganismos gram-negativos, tales como Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Haemophilius influenzae y Moraxella catarrhalis.

La tabla II muestra los datos de CIM_{90} para un compuesto de esta invención frente al S. aureus resistente a la meticilina (SARM) y al S. epidermitis resistente a la meticilina (SERM) en comparación con el antibiótico conocido, la vancomicina.

TABLA II Concentraciones Inhibitorias Mínimas (CIM)

Microorganismo	Compuesto de prueba	CIM_{90}^{2} (\mug/mL)
S. aureus resistente a la meticilina (SARM)	Compuesto 1	< 0,1
(n = 53)^{1}	Vancomicina	3
S. epidermitis resistente a la meticilina (SERM) y	Compuesto 1	< 0,1
otros estafilococos coagulasa negativa	Vancomicina	4
(n = 34)
1 Número de cepas analizadas.
2 Concentración inhibitoria mínima para el 90% de las cepas analizadas.

Adicionalmente, como se muestra en la tabla III, los compuestos de esta invención también presentaron sorprendentes e inesperadas CIM frente a diversas cepas de S. aureus resistente a la meticilina en comparación con un derivado declorado relacionado (i.e., compuesto 34).

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA III Concentraciones Inhibitorias Mínimas

Microorganismo	CIM (\mug/mL)
	Comp. 1	Comp. 34
SARM 33591	\leq 0,1	0,17
SARM MED-103	\leq 0,1	0,20
SARM MED-104	0,10	0,58
SARM MED-107	\leq 0,1	0,34
SARM MED-110	0,20	0,49
SARM MED-572	\leq 0,1	< 0,1
SARM MED-84	\leq 0,1	0,29
SARM MED-85	\leq 0,1	0,32
SARM MED-86	\leq 0,1	0,29
SARM MED-87	\leq 0,1	0,49
SARM MED-88	\leq 0,1	0,34
SARM MED-89	\leq 0,1	0,18

Ejemplo 36 Ensayo de curvas de tiempo-muerte

Este ensayo de curvas de tiempo-muerte es un procedimiento para medir la velocidad de la actividad bactericida de un compuesto de prueba. Estos procedimientos son similares a los descritos en V. Lorian, "Antibiotics in Laboratory Medicine", cuarta edición, Williams and Wilkins (1996), páginas: 104-105. Es deseable una curva de tiempo-muerte rápida para prevenir rápidamente la colonización bacteriana y reducir el daño a los tejidos del huésped.

Los inóculos bacterianos fueron preparados como se describe en el ejemplo 35 para la determinación de la CIM. Se diluyeron las bacterias en medio precalentado de matraces agitados y se incubaron con agitación (200 rpm, 35ºC). Las muestras fueron retiradas de los matraces a las 0, 1, 4 y 24 horas, y se enumeraron las bacterias mediante el recuento de la placa. Tras el muestreo inicial, se añadió un compuesto al cultivo del matraz agitado para su análisis. Los recuentos de placa a estos intervalos anteriores y después de la adición del compuesto fueron expresados gráficamente en una curva de tiempo-muerte. La actividad bactericida se define como un descenso logarítmico de \geq 3 (una reducción mayor del o igual al 99,9%) del número de células bacterianas en 24 horas.

En este ensayo, un compuesto de fórmula I, i.e., el compuesto 1, fue bactericida frente al SASM 13709 y al SARM 33591 a una concentración de \leq 1 \mug/mL en 4 horas. Comparando, la vancomicina fue bactericida frente al SASM 13709 y al SARM 33591 a una concentración de 4 \mug/mL en 24 horas.

Ejemplo 37 Estudios de eficacia in vivo en ratones neutropénicos

Se adquirieron animales (ratones CD-1 machos, 20-30 g) en Charles Rivers Laboratories (Gilroy, CA) y se les permitió el acceso a comida y agua a voluntad. Se indujo la neutropenia mediante una inyección intraperitoneal (IP) de 200 mg/kg de ciclofosfamida administrada cuatro y dos días antes de la inoculación de las bacterias.

El organismo usado fue bien una cepa susceptible o resistente de patógenos gram-positivos clínicamente relevantes, tales como Staphilococcus aureus susceptible a la meticilina (SASM 13709) y Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM 33591). La concentración del inóculo bacteriano fue de \sim 10^{6} UFC/mL. Se anestesiaron los animales ligeramente con isoflurano y se inyectaron 50 mL del inóculo bacteriano en el muslo anterior. Una hora después de la inoculación, se administró a los animales intravenosamente vehículo o la dosis apropiada del compuesto de prueba. A las 0 horas y las 24 horas posteriores al tratamiento, se practicó la eutanasia a los animales (asfixia con CO_{2}) y se extrajeron de forma aséptica el muslo anterior y posterior. Se colocó el muslo en 10 mL de solución salina estéril y se homogeneizó. Se colocaron diluciones del producto homogeneizado en placas de agar de soja tríptica que fueron incubadas durante toda la noche. El número de colonias bacterianas de una determinada placa fue multiplicado por el factor de dilución, dividido entre el peso del muslo (en gramos) y expresado como el log de UFC/g. Para cada compuesto de prueba, se estimó la DE_{50} (dosis requerida para producir el 50% de la reducción máxima del valor del muslo).

Usando SARM 33591 en este ensayo, un compuesto de fórmula I, i.e., el compuesto 1, alcanzó una DE_{50} de < 0,20 mg/kg, i.v., en comparación con una DE_{50} de 9 mg/kg, i.v., para la vancomicina.

Ejemplo 38 Determinación de la solubilidad acuosa

La solubilidad acuosa de un compuesto de esta invención fue determinada usando el siguiente procedimiento. Se preparó una solución tamponada de dextrosa al 5% en peso a un pH 2,2, añadiendo 1 mL de ácido hidroclórico 1N (Aldrich) a 99 mL de una solución de dextrosa acuosa al 5% en peso (Baxter).

Entonces se preparó una solución madre de 1 mg/mL para los estándares de calibración, disolviendo 1 mg de compuesto de prueba en 1 mL de DMSO. Se aplicó un vórtice a esta solución durante 30 segundos y luego se sometió a un tratamiento de ultrasonidos durante 10 minutos. Entonces se diluyó la solución madre con agua para preparar los estándares de calibración con las siguientes concentraciones: 50, 125, 250, 375 y 500 ug/mL.

Se pesó cada compuesto de prueba (30 mg) en una unidad de filtración de 0,1 \mum Ultrafree-MC no estéril de Millipore (Millipore UFC30VVOO) y se añadió una barra de agitación magnética a cada unidad. Entonces se añadió la solución tamponada de dextrosa al 5% en peso (750 uL) a cada unidad y se volvió a aplicar un vórtice a estas mezclas durante 5 minutos. Entonces se colocaron las unidades de filtración en una gradilla de tubos Eppendorf, y se colocó la gradilla encima de un agitador magnético. Entonces se valoró cada unidad a pH 3 usando NaOH 1N (VWR) y se centrifugaron las soluciones resultantes a 7.000 rpm durante 5 minutos. Cada unidad fue entonces diluida 200 veces con solución tamponada de dextrosa al 5%, y las mezclas diluidas fueron transferidas a viales auto-muestreadores para su análisis.

Los estándares de calibración y las muestras de análisis fueron analizados mediante CLAR de fase inversa usando las siguientes condiciones:

Columna:	Luna 150 x 4,6 mm; C18; 5u
Fase móvil:	A = 5/95; B = 95/5; ambas = MeCN/H_{2}O; TFA al 0,1%
Procedimiento:	10 m Lido 100 (B al 0-100% en 6 min).
Volumen de inyección:	20 uL
Longitud de onda:	214 nm

Se calculó la solubilidad de cada muestra de análisis comparando el área máxima de la muestra de análisis con respecto de la curva de calibración, y multiplicando por el factor de dilución. Usando el procedimiento anterior con preparaciones de muestras por duplicado, se encontró que el compuesto 1 tiene una solubilidad de > 47,9 mg/mL.

Aunque la presente invención haya sido descrita con referencia a realizaciones específicas de la misma, los expertos en la técnica deberían entender que se pueden realizar diversos cambios y que se pueden sustituir equivalentes sin alejarse del verdadero espíritu y alcance de la invención. Además, se pueden hacer muchas modificaciones para adaptar una situación, un material, una composición de materia, un procedimiento, una etapa o unas etapas de procedimiento concretos al objetivo, espíritu y alcance de la presente invención. Se pretende que todas estas modificaciones pertenezcan al alcance de las reivindicaciones incluidas en la presente memoria. Adicionalmente, todas las publicaciones, las patentes y los documentos de patente citados en la presente memoria están incorporados por referencia en la misma en su totalidad, en la misma medida que si hubieran sido incorporados individualmente por referencia.

Claims

1. Un compuesto de fórmula I:

17

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que

R^{1} es -Y^{a}-(W)_{n}-Y^{b}-;

R^{2} es hidrógeno o alquilo(C_{1-6});

cada R^{3} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por alquilo(C_{1-6}), alquenilo(C_{2-6}), alquinilo(C_{2-6}), cicloalquilo(C_{3-6}), arilo(C_{6-10}), heteroarilo(C_{2-9}), heterocíclico(C_{3-6}) y R^{a}; o dos grupos R^{3} adyacentes están unidos para formar alquileno(C_{3-6}) o -O-alquileno(C_{1-6})-O-; en el que cada grupo alquilo, alquileno, alquenilo y alquinilo está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por R^{a} y R^{c}; y cada grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterocíclico está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por R^{b};

uno entre R^{4} y R^{5} es hidroxilo y el otro es hidrógeno;

R^{6} y R^{7} son independientemente hidrógeno o metilo;

R^{8} es hidrógeno o un grupo de fórmula (i):

18

cada R^{a} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por -OR^{d}, halo, -SR^{d}, -S(O)R^{d}, -S(O)_{2}R^{d},
-S(O)_{2}OR^{d}, -S(O)_{2}NR^{d}R^{e}, -NR^{d}R^{e},-CO_{2}R^{d}, -OC(O)R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e}, -NR^{d}C(O)R^{e}, -OC(O)NR^{d}R^{e}, -NR^{d}C(O)OR^{e}, -NR^{d}C(O)NR^{d}R^{e}, -CF_{3} y -OCF_{3};

m es 0, 1, 2 ó 3; y

n es 0 ó 1.

2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que n es 0, y Y^{a} e Y^{b} son independientemente grupos alquileno(C_{1-5}), en el que cada grupo alquileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre -OR^{d}-, -NR^{d}R^{e}, CO_{2}R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e} y -S(O)_{2}NR^{d}R^{e}.

3. El compuesto según la reivindicación 1, en el que n es 0, y Y^{a} e Y^{b} están unidos para formar un grupo
-(CH_{2})_{2-8}-.

4. El compuesto según la reivindicación 3, en el que n es 0, y Y^{a} e Y^{b} están unidos para formar un grupo -(CH_{2})_{2}-, -(CH_{2})_{3}-, -(CH_{2})_{4}-, -(CH_{2})_{5}- o -(CH_{2})_{6}-.

5. El compuesto según la reivindicación 4, en el que n es 0, y Y^{a} e Y^{b} están unidos para formar un grupo -(CH_{2})_{3}-.

6. El compuesto según la reivindicación 1, en el que n es 1, y Y^{a} e Y^{b} son iguales o diferentes, y cada uno se selecciona entre el grupo constituido por un enlace covalente y alquileno(C_{1-5}) opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados entre -OR^{d}-, -NR^{d}R^{e}, CO_{2}R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e} y -S(O)_{2}NR^{d}R^{e}.

7. El compuesto según la reivindicación 6, en el que W es arileno(C_{6-10}) o -O-.

8. El compuesto según la reivindicación 1, en el que n es 1, y Y^{a} e Y^{b} son ambos -CH_{2}- y W es arileno(C_{6-10}) opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre R^{b}.

9. El compuesto de la reivindicación 8, en el que W es fenileno.

10. El compuesto de la reivindicación 1, en el que n es 1, y Y^{a} e Y^{b} son ambos

-CH_{2}CH_{2}- y W es -O-.

11. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que R^{2} es hidrógeno.

12. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que m es 0.

13. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que m es 1 ó 2 y cada R^{3} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por alquilo(C_{1-6}), cicloalquilo(C_{3-6}), -OR^{d}-, -SR^{d}-, -F o -Cl; o dos grupos R^{3} adyacentes están unidos para formar alquileno(C_{3-6}).

14. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que R^{4} es hidroxilo; R^{5} es hidrógeno; R^{6} es hidrógeno; R^{7} es metilo; R^{8} es hidrógeno; y X^{1} y X^{2} son ambos cloro.

15. El compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{1} es -Y^{a}-(W)_{n}-Y^{b}-, en el que n es 0, y Y^{a} e Y^{b} están unidos para formar un grupo -(CH_{2})_{3}-; R^{2} es hidrógeno; R^{4} es hidroxilo; R^{5} es hidrógeno; R^{6} es hidrógeno; R^{7} es metilo; R^{8} es hidrógeno; X^{1} y X^{2} son ambos cloro; y m es 0.

16. El compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{4} es hidroxilo; R^{5} es hidrógeno; R^{6} es hidrógeno; R^{7} es metilo; R^{8} es hidrógeno; X^{1} y X^{2} son ambos cloro; y R^{1}, R^{2}, R^{3} y m son como se definen en la tabla I.

17. Un compuesto de fórmula II:

19

o una sal del mismo; en el que

P^{1} y P^{2} son independientemente hidrógeno o un grupo protector de aminos;

P^{3} es hidrógeno o grupo protector de carboxilos;

Q es un grupo saliente o un grupo de fórmula:

20

en el que

R^{1} es -Y^{a}-(W)_{n}-Y^{b}-;

Y^{a} e Y^{b} son independientemente alquileno(C_{1-5}), o cuando W es cicloalquileno, arileno o heteroarileno, Y^{a} e Y^{b} son independientemente seleccionados entre el grupo constituido por un enlace covalente y alquileno(C_{1-5}); en el que cada grupo alquileno está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre -OR^{d}, -NR^{d}R^{e}, -CO_{2}R^{d}, -C(O)NR^{d}R^{e} y -S(O)_{2}NR^{d}R^{e};

R^{2} es hidrógeno o alquilo(C_{1-6});

cada R^{3} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por alquilo(C_{1-6}), alquenilo(C_{2-6}), alquinilo(C_{2-6}), cicloalquilo(C_{3-6}), arilo(C_{6-10}), heteroarilo(C_{2-9}), heterocíclico(C_{3-6}) y R^{a}; o dos grupos R^{3} adyacentes están unidos para formar alquileno(C_{3-6}) u -O-alquileno(C_{1-6})-O-; en el que cada grupo alquilo, alquileno, alquenilo y alquinilo está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por R^{a} y R^{c}; cada grupo arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterocíclico está opcionalmente sustituido por 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados entre el grupo constituido por R^{b};

X^{-} es un anión opcionalmente presente;

m es 0, 1, 2 ó 3; y

n es 0 ó 1.

18. Un compuesto de fórmula III:

\vskip1.000000\baselineskip

21

o una sal del mismo; en el que

P^{1} y P^{2} son independientemente hidrógeno o un grupo protector de aminos;

P^{4} es hidrógeno o grupo protector de carboxilos;

R^{1} es -Y^{a}-(W)_{n}-Y^{b}-;

R^{2} es hidrógeno o alquilo(C_{1-6});

cada R^{f} es independientemente seleccionado entre el grupo constituido por -OH, -O(alquilo(C_{1-6})), -S(alquilo(C_{1-6})), -F, -Cl, -NH_{2}, -NH(alquilo(C_{1-6})), -N(alquilo(C_{1-6}))_{2}, -OC(O)(alquilo(C_{1-6})), -C(O)O(alquilo(C_{1-6})), NHC(O)(alquilo(C_{1-6})), -C(O)OH, -C(O)NH_{2}, -C(O)NH(alquilo(C_{1-6})), -C(O)N(alquilo(C_{1-6}))_{2}, -CF_{3} y -OCF_{3}; y

n es 0 ó 1.

19. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16.

20. Un procedimiento de inhibición del crecimiento de bacterias, comprendiendo el procedimiento poner en contacto bacterias in vitro con una cantidad inhibidora del crecimiento de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16.

21. Un procedimiento de inhibición de la biosíntesis de la pared celular bacteriana, comprendiendo el procedimiento poner en contacto bacterias in vitro con una cantidad inhibidora de la biosíntesis de la pared celular de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16.

22. Un procedimiento para preparar un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16; comprendiendo el procedimiento hacer reaccionar un glicopéptido de fórmula 1:

\vskip1.000000\baselineskip

22

\newpage

o una sal del mismo, con un compuesto de fórmula 2:

\vskip1.000000\baselineskip

23

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal del mismo; para proporcionar un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo.

23. Un procedimiento para preparar un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16; comprendiendo el procedimiento hacer reaccionar un compuesto de fórmula 10:

\vskip1.000000\baselineskip

24

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal del mismo, con un compuesto de fórmula 11:

\vskip1.000000\baselineskip

25

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal del mismo; para proporcionar un compuesto de fórmula I o una sal del mismo.

\newpage

24. Un procedimiento para preparar un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16; comprendiendo el procedimiento hacer reaccionar un compuesto de fórmula 9:

26

o una sal del mismo; con un compuesto de fórmula 13:

27

25. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su uso en terapia.

26. Uso del compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para la elaboración de un medicamento destinado al tratamiento de una infección bacteriana en un mamífero.