ES2250193T3 - Vacuna contra la influenza. - Google Patents

Vacuna contra la influenza.

Info

Publication number
ES2250193T3
ES2250193T3 ES00966084T ES00966084T ES2250193T3 ES 2250193 T3 ES2250193 T3 ES 2250193T3 ES 00966084 T ES00966084 T ES 00966084T ES 00966084 T ES00966084 T ES 00966084T ES 2250193 T3 ES2250193 T3 ES 2250193T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
antigen
influenza
vaccine
virus
dose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES00966084T
Other languages
English (en)
Inventor
Erik SmithKline Beecham Biologicals S.A. D'HONDT
Norbert Saechsisches Serumwerk Dresden HEHME
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GlaxoSmithKline Biologicals SA
GlaxoSmithKline Biologicals Dresden
Original Assignee
SmithKline Beecham Biologicals SA
Saechsisches Serumwerk Dresden
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10861908&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2250193(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by SmithKline Beecham Biologicals SA, Saechsisches Serumwerk Dresden filed Critical SmithKline Beecham Biologicals SA
Application granted granted Critical
Publication of ES2250193T3 publication Critical patent/ES2250193T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16251—Methods of production or purification of viral material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Una composición de vacuna de influenza monovalente que comprende un componente del virus de influenza el que es un antígeno de virus de influenza derivado del huevo en dosis baja de una cepa de virus de influenza que está asociada con un brote de pandemia, o que tiene el potencial para ser asociado con un brote de pandemia, en combinación con un adyuvante adecuado, en el que la dosis baja de antígeno es menor que 15 ìg de hemaglutinina por dosis o no más que 15 ìg por dosis de vacuna combinada y en el que el adyuvante es una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio.

Description

Vacuna contra la influenza.
Esta invención se refiere a formulaciones de vacunas nuevas, procedimientos para su preparación y su uso para profilaxis o terapia. En particular la presente invención se refiere a vacunas para administración durante pandemias.
El virus de influenza es uno de los virus más ubicuos presentes en el mundo, que afectan tanto a seres humanos como al ganado, siguiendo un patrón aún impredecible de epidemias regulares y pandemias irregulares.
Si bien se considera a menudo que la influenza es una enfermedad trivial, puede tener un impacto devastador. Los brotes se reportaron a través de la historia. Se conocen más de 30 epidemias o pandemias que han ocurrido desde 1580 alrededor del mundo, cuatro de ellas en este siglo.
Los síntomas usuales de influenza incluyen tos, fiebre, dolor de cabeza y dolores musculares. Muchos enfermos desarrollan complicaciones o infecciones bacterianas secundarias las que pueden ser muy serias e incluso mortales.
Durante los períodos entre pandemias, circulan los virus de influenza relacionados con aquellos provenientes de la epidemia anterior. Los virus se distribuyen entre la gente con diversos niveles de inmunidad obtenida por infecciones anteriores. Tal circulación, a lo largo de un período usualmente de 2-3 años, promueve la selección de nuevas cepas que han cambiado lo suficiente como para causar una epidemia de nuevo entre la población general; a este proceso se lo llama "deriva antigénica". Las "variantes de deriva" pueden tener impactos distintos en diferentes comunidades, regiones, países o continentes en cualquier año, si bien durante varios años su impacto total es frecuentemente
similar.
Las epidemias de influenza típicas causan incrementos en la incidencia de neumonía y enfermedad respiratoria baja como testimonian las tasas de hospitalización o mortalidad incrementadas. Los ancianos o aquellos con enfermedades crónicas de base son los que tienen más probabilidades de experimentar tales complicaciones, pero también la población infantil puede sufrir enfermedades severas.
Los virus de influenza nuevos emergen en intervalos impredecibles con un antígeno superficie clave, la hemaglutinina, de un subtipo totalmente diferente del de las cepas que circulan de la estación anterior. A este fenómeno se lo llama "cambio antigénico". Se cree que al menos en las pandemias pasadas ocurrió cuando un virus de influenza de una especie diferente, como puede ser un virus de influenza aviar o porcina, cruzó la barrera de especies. Si dichos virus tienen el potencial de diseminarse de persona a persona, pueden diseminarse en todo el mundo en pocos meses a un año, dando como resultado una pandemia.
Las características de una cepa de virus influenza que le otorgan el potencial para causar un brote pandémico son: contener una nueva hemaglutinina comparada con la hemaglutinina en las cepas circulantes en el momento; capacidad de ser transmitida horizontalmente en la población de seres humanos y patogenicidad para los seres humanos. Una hemaglutinina nueva puede ser una que no haya sido evidente en la población humana durante un período de tiempo extendido, probablemente varias décadas, tal como H2. O puede ser una hemaglutinina que no haya estado circulando en la población humana con anterioridad, por ejemplo H5, H9 o H6, las que se encontraron en aves. En cualquier caso la mayoría, o al menos una gran proporción de, o aún la población entera, no ha estado en contacto previamente con el antígeno y es inmunológicamente indefensa frente a éste.
Los virus de influenza H2N2 circularon entre 1957 y 1968 cuando fueron desplazados por el subtipo H3N2 el que causó la última pandemia del siglo pasado. Actualmente la gente que ha estado expuesta previamente al H2N2 probablemente sea aquella cuya edad supera los treinta años. Se ha sugerido que un virus que contenga H2 podría causar una nueva pandemia porque una porción creciente de la población del mundo que nació después del año 1968 debería ser inmunológicamente indefensa. Para investigar si esta dicotomía teórica en referencia a la inmunidad de la población frente a H2 es un hecho cierto, se llevó a cabo un estudio seroepidemiológico en 400 individuos y se midieron anticuerpos contra H2.
Este estudio fue llevado a cabo en Alemania y las pruebas de anticuerpo se desarrollaron en Sächsische Serumwerk (Dresden, Alemania), usando una Prueba de Inhibición de Hemaglutinación (HIT) específica para el antígeno H2. Los títulos son la inversa de la máxima dilución de suero que inhibe la hemaglutinación. Los resultados confirman el estado de indefensión inmunológica de aquellos menores de 30 años de edad ya que sólo 7 de 200 sujetos tuvieron un título de anticuerpo medible en el bajo intervalo de 10 a 20.
Los datos además mostraron que una proporción significativa de personas por encima de los 30 años es aún seropositiva para H2, 30 años o más después de la infección. La cantidad de seropositivos (HIT \geq 10) es del 90%, En algunas de las muestras de suero, los títulos de anti-H2 (HIT) son tan altos como 640 y el título medio geométrico (GMT) para todos los participantes seropositivos del estudio mayores de 30 años fue 65. Un HIT \geq 40 se considera protector.
Estas observaciones confirman la posibilidad de que un virus H2 pueda diseminarse en la población menor de 30 años. Teniendo en cuenta la demografía actual y el hecho de que la gente menor de 30 años representa una gran parte de la población mundial, es posible que un virus H2 pueda volver a causar una pandemia. Esta dicotomía en la población mundial además evolucionará en los próximos años, incrementando el pool de personas susceptibles.
Hace dos años se aisló influenza con H5 (H5N1), que es un virus de influenza aviaria, de seres humanos en Hong Kong. Sin embargo el virus no se transmitió de persona a persona y por lo tanto no tuvo la capacidad para provocar una pandemia.
Ciertos grupos generalmente tienen un mayor riesgo de ser infectados con influenza en una situación de pandemia. Los mayores, los enfermos crónicos y niños pequeños son particularmente susceptibles pero muchas personas jóvenes y aparentemente saludables también están en riesgo. Para la influenza H2, la parte de la población nacida tras 1968 tiene un riesgo. Es importante que estos grupos sean protegidos efectivamente tan pronto como sea posible y de una manera sencilla.
Otro grupo de personas que está en mayor riesgo son los viajeros. Hoy en día la gente viaja más que antes y las regiones donde emergen muchos de los virus nuevos, China y Sudeste de Asia, se han convertido en destinos populares de viajes en los últimos años. Este cambio en los patrones de viaje permite a nuevos virus llegar a todo el globo en cuestión de semanas más que en meses o años.
Por ello para estos grupos de personas existe una necesidad particular de vacunación para protegerlos contra la influenza en una situación de pandemia o una situación potencial de pandemia.
Se está realizando un gran de esfuerzo en establecer una estrategia internacional eficaz para reaccionar frente a una situación de pandemia y es la Organización Mundial de la Salud quien la está implementando. Una medida clave es el desarrollo de una estrategia de vacuna de pandemia y hasta ahora esto no se ha alcanzado en el grado requerido para abordar una pandemia de gripe.
Ahora se ha visto sorpresivamente que vacunas que resultarán útiles en una situación de pandemia pueden ser formuladas rápidamente y en una manera específica. En particular se descubrió que una vacuna de virus de influenza a baja dosis que contiene virus purificado y como adyuvante una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio, que se puede producir de manera suficientemente rápida y económica como para permitir vacunar poblaciones a gran escala, es efectiva en seres humanos.
En el pasado se han usado comercialmente preparaciones en crudo de vacuna de influenza totalmente inactivada con adyuvante de sales de aluminio, derivadas de huevos. Sin embargo, el producto era poco purificado y bastante reactogénico y el enfoque se abandonó a finales de la década del 70.
Más recientemente, las vacunas de las diferentes influenzas, más altamente purificadas, mejor caracterizadas se combinaron con adyuvantes en un intento de mejorar la inmunogenicidad en adultos y en ancianos. A pesar del incremento significativo en la respuesta inmune en ratones, una cantidad de aproximaciones usando adyuvantes de nueva generación no pudieron ser confirmadas en el hombre. En todos estos estudios, se usó el contenido regular de 15 \mug de antígeno de hemaglutinina para preparar las vacunas formuladas. Los Documentos WO 00/15251y WO 00/47222 describen composiciones de influenza con adyuvantes con aluminio. El Documento WO 01/21151 describe el uso de una preparación de antígeno del virus de influenza no vivo en la preparación de una vacuna para una vacunación intranasal de dosis única contra la influenza.
Un informe reciente (Kistner y col. (1999) en Inactivated Influenza Vaccines Prepared in Cell Culture, Dev. Biol. Sand, Basel, Karger. Vol. 98, páginas 101-110) describe un primer estudio en el que vacuna derivada de cultivo celular que contiene tres cepas mezcladas de influenza con Al(OH)_{3} fue administrada a chimpancés. Esto indujo una respuesta sistémica que fue tan buena con una dosis de hemaglutinina de 1,5 \mug por cepa como con la estándar de 15 \mug de hemaglutinina por cepa. Este estudio fue dirigido con el objeto de desarrollar una vacuna de virus entero de influenza derivada de células Vero, la que completa todos los requerimientos convencionales de la Farmacopea Europa, la OMS y otras organizaciones regulatorias para una vacuna de virus de influenza.
Para una vacuna de influenza estándar para uso de rutina puede haber dificultades asociadas con el uso de sales de aluminio como adyuvantes. Las vacunas de influenza están planificadas para usarse anualmente y las inyecciones repetidas de Al^{3+} pueden ser indeseables. Pero para una situación de pandemia que puede ocurrir sólo algunas veces en un siglo, no se excluye el uso de Al^{3+}.
La presente invención por lo tanto provee en un aspecto una composición de vacuna que comprende una dosis baja de antígeno de virus de influenza de una sola cepa de virus de influenza que está asociada con un brote de pandemia o tiene el potencial para ser asociado con un brote de pandemia, en combinación con un adyuvante, en la que el adyuvante es una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio.
La vacuna de la presente invención se provee en una dosis eficaz para prevenir la infección por influenza o para proveer protección contra la influenza, en particular para proveer protección contra la morbilidad o mortalidad por influenza.
Las formulaciones de la vacuna de la presente invención contienen de preferencia una cantidad inmunoprotectora de antígeno. Las formulaciones de la vacuna de la presente invención pueden prepararse mediante técnicas convencionales.
Las composiciones de la vacuna de la invención pueden administrarse en una dosis única.
El uso de una dosis baja de antígeno y el uso de una única cepa de influenza (es decir una vacuna monovalente) contribuye a la velocidad requerida para reaccionar frente a una situación de pandemia.
Una dosis baja de antígeno de virus de influenza en la composición de acuerdo con la invención es una cantidad de antígeno que está por debajo de la dosis de vacuna aceptadas en la actualidad para vacunas de influenza para seres humanos que es 10-15 \mug de antígeno de hemaglutinina por cepa, normalmente 15 \mug de acuerdo con regulaciones tales como aquellas publicadas por EMEA en Europa.
Alternativamente, las composiciones de vacuna de acuerdo con la invención se administran en más de una dosis, particularmente en dos dosis y de preferencia en dos dosis administradas simultáneamente (en la misma ocasión) por vías diferentes. Así, la invención provee un régimen de dos dosis que comprende la administración de una vacuna sistémica y una local (mucosa), de preferencia simultáneamente (o durante una visita única). La administración de una vacuna mucosa así como una vacuna parenteral mejora la respuesta inmune en particular la respuesta de anticuerpos IgA, lo que contribuye a la protección contra la infección por influenza.
En una forma de realización de preferencia, las composiciones de vacunas se administran tanto por vía parenteral, por ejemplo por vía intramuscular, como por vía mucosa, particularmente por vía intranasal. En esta forma de realización, se necesitarán normalmente dos formulaciones diferentes, esto es una formulación para administración parenteral y una formulación para administración mucosa. Estas formulaciones pueden por ejemplo comprender diferentes adyuvantes y/o diferentes cantidades de antígeno. O pueden simplemente comprender diferentes volúmenes de líquido.
Por lo tanto, la presente invención también provee un equipo que comprende al menos los dos componentes siguientes:
(i)
una dosis baja de antígeno de virus de influenza formulado con un adyuvante adecuado para la administración parentental; y
(ii)
una dosis baja de antígeno de virus de influenza para administración por vía mucosa, en un dispositivo de administración para mucosas tal como un dispositivo de vaporización intranasal.
Los dispositivos de vaporización intranasal están disponibles comercialmente, por ejemplo el administrador bi-dosis de Pfeiffer GmbH.
Tal esquema de administración por doble vía proveerá una respuesta inmune sistémica y una respuesta inmune local, siendo esta última de preferencia en el sitio normal de entrada del virus durante la infección (es decir en la mucosa nasal).
De preferencia, la dosis de antígeno combinada de los dos componentes en esta forma de realización de la invención es menor que la convencional 10-15 \mug de antígeno hemaglutinina por cepa.
Por lo tanto, la dosis baja o la dosis baja combinada de acuerdo con la invención está generalmente por debajo de 10 \mug de hemaglutinina, de preferencia por debajo de 8 \mug de hemaglutinina, de más preferencia entre 0,1 y 7,5 \mug de hemaglutinina y de mayor preferencia entre 1 y 5 \mug de hemaglutinina por dosis de vacuna. La dosis de preferencia es significativamente menor que en las vacunas de influenza convencionales para permitir la producción de cantidades mayores de vacunas de influenza para una situación de pandemia que las que podrían ser posibles usando vacunas de influenza corrientes con las dosis habituales. De igual manera la dosis de antígeno necesita ser suficientemente grande para proveer suficiente protección.
Generalmente, el volumen de vacuna de acuerdo con la invención, administrada por vía parenteral tal como por vía intramuscular, será de aproximadamente 0,5 ml y el volumen de vacuna administrada por vía mucosa tal como vía intranasal será de menor volumen, de preferencia aproximadamente 0,2 ml, por ejemplo 0,1 ml en cada narina.
El antígeno del virus de influenza en la composición de vacunas de acuerdo con la invención necesita ser obtenible mediante un procedimiento rápido y eficiente para alcanzar las necesidades de una vacuna para pandemias. En la actualidad el procedimiento de preferencia es mediante el crecimiento de virus de influenza en huevos y purificando el fluido alantoico recolectado. Los huevos pueden ser acumulados en grandes cantidades en poco tiempo. Los procedimientos de cultivo celular, tal como el crecimiento de los virus en líneas celulares de riñón de perro tal como MDCK o células similares a MDCK, o en células Vero, pueden también ser adecuadas pero no son de preferencia en el contexto de la presente invención.
El virus de influenza en la composición de la vacuna es de preferencia en la forma de partículas de virus enteros, pero pueden ser alternativamente virus fraccionados preparados mediante procedimientos convencionales.
La vacuna de virus fraccionados puede prepararse mediante procedimientos conocidos en la técnica, tal como el procedimiento descrito en las patentes Nº DD 300 833 y DD 211 4444. Tradicionalmente la gripe fraccionada se produjo usando un tratamiento con solvente/detergente, tal como el fosfato de tri-n-butilo o dietiléter en combinación con Tween^{TM} (conocido como fraccionamiento "Tween-éter") y este procedimiento aún se usa en algunas instalaciones de producción. Otros agentes de fraccionamiento que se emplean actualmente incluyen detergentes o enzimas proteolíticas o sales biliares, por ejemplo deoxicolato de sodio como se describe en la patente Nº DD 155 875, incorporada en este documento como referencia. Los detergentes que pueden usarse como agentes de fraccionamiento incluyen detergentes catiónicos por ejemplo bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB), otros detergentes iónicos por ejemplo laurilsulfato, taurodeoxicolato o detergentes no iónicos tales como Triton X-100 (por ejemplo en un procedimiento descrito en Lina y col., 2000, Biologicals 28, 95-103) y Triton N-101, o combinaciones de dos o más detergentes cualesquiera.
Sin embargo, una ventaja de una vacuna de virus entero sobre una vacuna de virus fraccionado para una situación de pandemia es que evita la incertidumbre acerca de si la vacuna de virus fraccionado puede ser producida exitosamente para una nueva cepa del virus de influenza. Para algunas cepas los detergentes convencionales usados para producir el virus fraccionado pueden dañar el virus y volverlo inútil. Aunque siempre existe la posibilidad de usar detergentes diferentes y/o desarrollar procedimientos diferentes para producir una vacuna de virus fraccionado, esto podría requerir tiempo, del que puede no disponerse en una situación de pandemia.
Además de un mayor grado de certeza con un virus completo, hay también una mayor producción de vacunas que para virus fraccionado ya que se pierden cantidades considerables de antígeno durante las etapas de purificación adicionales necesarias para la preparación de una vacuna fraccionada adecuada.
Sin embargo, para una combinación en la que la vacuna se administra por vía intranasal y parenteral, puede resultar una de preferencia la vacuna fraccionada para la formulación intranasal mientras que para la formulación parenteral puede ser de preferencia una vacuna de virus entero inactivado.
La vacuna particularmente de preferencia para la formulación intranasal es la que ha sido inactivada o fraccionada y contiene de preferencia tensioactivos no iónicos tales como detergentes seleccionados entre los octil nonilfenoxi polioxietanoles (por ejemplo las series disponibles comercialmente Triton^{TM}) y ésteres de polioxietilensorbitán (series Tween^{TM}), en particular Triton X-100 o Tween 80 o una combinación de ambos.
Los detergentes pueden ser reactivos residuales restantes del proceso de separación o purificación y/o pueden ser agregados a la formulación del virus fraccionado/inactivado o sus concentraciones pueden ser ajustadas.
De forma similar, los agentes fraccionamiento tales como los derivados del ácido cólico y en particular deoxicolato de sodio (NaDOC), pueden estar presentes en las composiciones de vacunas de acuerdo con la invención, generalmente en trazas.
El uso de un adyuvante de aluminio en la composición de la vacuna de acuerdo con la invención permite el uso de una dosis más baja de antígeno de virus que en las vacunas convencionales.
El adyuvante para las vacunas administradas por vía parenteral de acuerdo con la invención, es una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio. De preferencia el fosfato de aluminio está presente en una concentración mayor que el hidróxido de aluminio por dosis de vacuna.
La cantidad total de sal de aluminio por dosis de vacuna de 0,5 ó 1 ml está normalmente en el intervalo de 0,1-2.0, de preferencia en el intervalo de 0,4-1,0 mg. La composición adyuvante de preferencia es una que comprende fosfato de aluminio e hidróxido de aluminio, en la que la cantidad de fosfato de aluminio en relación con la cantidad de hi-
dróxido de aluminio es de al menos 2:1, de más preferencia 5:1 y de mayor preferencia al menos 8:1 ó 9:1, en peso.
Para una vacuna administrada por vía mucosa es importante asegurar que el tamaño de los antígenos virales se adapta a la penetración por mucosa. Esto puede ser tenido en cuenta mediante los detergentes o agentes de fraccionamiento presentes en la formulación. Alternativamente, o adicionalmente, puede emplearse un adyuvante para mucosa adecuado conocido en la técnica, por ejemplo un agente potenciador de la absorción tal como un éter de polioxietileno o éster de fórmula general (I):
(I)HO(CH_{2}CH_{2}O)_{n}-A-R
en el que n es 1-50, A es un enlace o -C(O)-, R es alquilo C_{1-50} o fenilalquilo C_{1-50}.
Los tensioactivos de preferencia que se adecuan a la fórmula (I) son moléculas en las que n es 4-24, de más preferencia 6-12 y de aún más preferencia 9; el componente R es C_{1-50}, de preferencia alquilo C_{4}-C_{20} y de más preferencia alquilo C_{12}. Un ejemplo particularmente de preferencia es el éter de polioxietilen-9-laurilo (laureth 9) que se describe en el índice de Merck (12th ed: entrada 7717, Merck & Co. Inc., Whitehouse Station, N.J., USA; ISBN 0911910-12-3). El laureth 9 se forma haciendo reaccionar óxido de etileno con alcohol de dodecilo y tiene un promedio de nueve unidades de óxido de etileno.
En un aspecto adicional, la invención provee un procedimiento para proveer una respuesta de inmunidad primaria contra un virus de influenza en un individuo o población sin inmunidad primaria cuyo procedimiento comprende la administración al individuo o población de una vacuna de baja hemaglutinina o vacuna combinada como se describe en este documento.
En otro aspecto la invención provee un procedimiento para la producción de una vacuna para la influenza para una situación de pandemia cuyo procedimiento comprende la mezcla de un antígeno de virus de influenza de una única cepa de virus de influenza que está asociada a un brote pandémico o tiene el potencial para ser asociada con un brote pandémico, con una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio y que provee lotes de vacunas que contienen menos de 10 \mug de antígeno hemaglutinina por dosis, o menos de 10 \mug por dosis combinada.
En aún otro aspecto la invención provee un procedimiento para purificar el antígeno de virus de influenza para uso en una vacuna, cuyo procedimiento comprende la etapa de tratamiento de una mezcla que contiene el antígeno del virus de influenza con una proteasa para digerir proteínas diferentes a las del virus de influenza.
La purificación se lleva a cabo en una preparación de la recolección de virus de influenza de un cultivo. Sorpresivamente, las partículas del virus de influenza son resistentes a la etapa de digestión por la proteasa. Una proteasa de preferencia para el procedimiento es la tripsina, la que de preferencia se usa en una concentración de entre 0,1-10 \mug/ml de tripsina pura. Alternativamente las enzimas proteasas que pueden usarse incluyen plasmina y quimotripsina.
Normalmente, la etapa de digestión con proteasa se lleva a cabo después que el antígeno del virus de influenza ha sido parcialmente purificado por una o más etapas de separación física tal como centrifugación y filtración. Cuando el producto deseado es una vacuna de virus entero, la etapa de digestión con proteasa se lleva a cabo antes de una etapa de inactivación del virus.
El procedimiento de purificación de acuerdo con la invención puede ser usado con éxito para proveer un antígeno purificado del virus de influenza en la forma de un virus fraccionado o entero sustancialmente libre de proteínas contaminantes de la célula huésped, adecuado para usarse en una vacuna.
La expresión "sustancialmente libre de proteínas contaminantes de la célula huésped" significa que menos del 10%, de preferencia menos del 8%, y de mayor preferencia menos del 5% de la proteína total es proteína de la célula huésped como la que se detecta mediante el escaneo de los geles de poliacrilamida teñidos con Coomassie. En el caso de influenza cultivada en huevos, la proteína huésped predominante es la ovalbúmina que llega a ser aproximadamente hasta el 60-70% de la masa total de proteína del fluido alantoico. La ovoalbúmina está presente en la preparación del virus purificado de influenza de preferencia en una concentración menor del 1%, de más preferencia menos del 0,1% y de mayor preferencia de sólo aproximadamente 0,05% del contenido total de proteína como se evalúa mediante el escaneo de geles teñidos.
En otro aspecto, la invención provee el uso de una dosis o una dosis combinada menor que 10 \mug, o menor que 8 \mug, o desde 1 hasta 7,5 \mug o desde 1 hasta 5 \mug de antígeno de hemaglutinina de virus de influenza de una única cepa del virus de influenza asociada con un brote pandémico o que tenga el potencial para ser asociado con un brote pandémica y una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio, en la fabricación de una vacuna para prevenir la influenza.
Otros adyuvantes son adecuados para el uso en la composición de la vacuna de acuerdo con la invención incluyen una variedad de adyuvantes capaces de realzar la respuesta inmune de los antígenos del virus.
Uno de esos adyuvantes es el monofosforil lípido A 3 De-O-(acilado) (3D-MPL). Éste se describe por ejemplo en el documento GB 2220211 (Ribi). Químicamente, se trata de una mezcla de monofosforil lípido A 3 De-O-acilado con 4, 5 ó 6 cadenas aciladas y se fabrica en Ribi Immunochem Montana. Una forma de preferencia del monofosforil lípido A 3 De-O-acilado se describe en el documento PE 0 698 454. La forma de preferencia del 3-D-MPL es de partículas no mayores de 120 nm, normalmente 60-120 nm, de preferencia de aproximadamente 100 nm de diámetro o aún menores (como se describe en el documento PE 0 689 454).
3D-MPL estará habitualmente presente en el intervalo de 10 \mug-100 \mug, de preferencia 25-50 \mug por dosis en la que el antígeno estará presente típicamente en un intervalo de 2-50 \mug por dosis.
Otro adyuvante adecuado es QS21, que es una fracción no tóxica, purificada por HPLC, de una saponina de la corteza del árbol sudamericano Quillaja Saponaria Molina. Opcionalmente puede mezclarse con 3D-MPL, opcionalmente juntos con un vehículo.
En el documento US 5.057.540 se describe un procedimiento para producir QS21.
Las formulaciones adyuvantes no reactogénicas que contienen QS21 son también adecuadas para ser usadas en las composiciones de las vacunas de acuerdo con la invención y se describen por ejemplo en el documento WO 96/33739. Tales formulaciones que comprenden QS21 y colesterol han demostrado ser adyuvantes exitosos cuando se formulan conjuntamente con un antígeno.
Las combinaciones de diferentes adyuvantes, tales como los mencionados anteriormente, también se contemplan como proveedores de un adyuvante que es adecuado para el uso en la invención. Por ejemplo, QS21 puede formularse conjuntamente con 3D-MPL. La proporción de QS21:3D-MPL estará típicamente en el orden de 1:10 hasta 10:1; de preferencia 1:5 hasta 5:1 y a menudo sustancialmente 1:1. El intervalo de preferencia para un sinergismo óptimo es 2,5:1 hasta 1:1 3D-MPL:QS21.
Ventajosamente, las composiciones de las vacunas de acuerdo con la invención pueden formularse con un vehículo, usualmente en combinación con uno de los adyuvantes alternativos descritos anteriormente. El vehículo puede ser, por ejemplo, una emulsión de aceite en agua, o una sal de aluminio.
La emulsión de aceite en agua de preferencia comprende un aceite metabolizable tales como escualeno, alfa tocoferol y Tween 80. Adicionalmente, la emulsión de aceite en agua puede contener span 85 y/o lecitina.
Típicamente en una vacuna para la administración en seres humanos estarán presentes QS21 y 3D-MPL en un intervalo de 1 \mug-200 \mug, tal como 10-100 \mug, de preferencia 10 \mug-50 \mug por dosis. Típicamente, la emulsión de aceite en agua comprenderá desde 2 hasta 10% de escualeno, desde 2 hasta 10% de alfa tocoferol y desde 0,3 hasta 3% de Tween 80. De preferencia, la proporción de escualeno con respecto a alfa tocoferol es igual o menor que 1 ya que esto provee una emulsión más estable. Puede también estar presente span 85 en un nivel de 1%. En algunos casos, puede ser ventajoso que las vacunas de la presente invención contengan además un estabilizador.
Las emulsiones de alcohol en agua no tóxicas contienen de preferencia aceite no tóxico, por ejemplo escualeno, un emulsionante, por ejemplo Tween 80, en un vehículo acuoso. El vehículo acuoso puede ser, por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato.
Una formulación adyuvante alternativa particularmente potente que incluye QS21, 3D-MPL y tocoferol en una emulsión de aceite en agua se describe en el documento WO 95/17210.
La invención se describirá además a continuación en los siguientes ejemplos.
Ejemplos Ejemplo 1 Preparación de cantidades masivas monovalentes para la vacuna de influenza completa
La cantidad masiva de vacuna se preparó de acuerdo con el diagrama de flujo mostrado en la Figura 1A. La Figura 1B muestra un diagrama de flujo general para el procedimiento de purificación, incluyendo la etapa opcional de incubación con tripsina.
Producción del virus entero monovalente crudo Preparación del inóculo del virus
En el día de la inoculación de los huevos embrionados se prepara un inóculo fresco mezclando el lote de trabajo a sembrar con un tampón fosfato que contiene sulfato de gentamicina en una concentración de 0,5 mg/ml e hidrocortisona en una concentración de 25 \mug/ml (cepa viral dependiente). El inóculo de virus se mantiene a 2-8ºC.
Inoculación de huevos embrionados
Para la replicación del virus se usan huevos embrionados de nueve a once días. Los huevos se incuban en granja antes de la llegada a la planta de fabricación y se transfieren a cuartos de producción tras la decontaminación de las cáscaras. Los huevos se inoculan con 0,2 ml de inóculo del virus en un aparato de inoculación automático de huevos.
Los huevos inoculados son incubados a la temperatura apropiada (cepa viral dependiente) durante 48 a 96 horas. Al final del período de incubación, los embriones se matan por medio del enfriado de los huevos y se almacenan durante 12-60 horas a 2-8ºC.
Recolección
El fluido alantoico de los huevos embrionados enfriados se recolecta mediante máquinas de recolección de huevos apropiadas. Usualmente, se pueden recolectar de 8 a 10 ml de fluido alantoico por huevo. Para la cantidad masiva de virus monovalente crudo se agrega 0,100 mg/ml de tiomersal (en un procedimiento alternativo, no se agrega el tiomersal).
Concentración y purificación del virus entero desde el fluido alantoico 1. Clarificación
El fluido alantoico recolectado se clarifica por centrifugación a velocidad moderada (intervalo: 4000-14000 g).
2. Etapa de adsorción
Para obtener un gel de CaHPO_{4} en el pool de virus clarificado, se agregan soluciones de Na_{2}HPO_{4} 0,5 mol/l y CaCl_{2} 0,5 mol/l para alcanzar una concentración final de CaHPO_{4} de 1,5 g a 3,5 g de CaHPO_{4}/litro dependiendo de la cepa del virus.
Tras la sedimentación durante al menos 8 horas, se elimina el sobrenadante y se resolubiliza el sedimento que contiene el virus de influenza agregando solución de EDTA-Na_{2} 0,26 mol/l, dependiente de la cantidad de CaHPO_{4} usada.
3. Filtración
El sedimento resuspendido se filtra en una membrana filtrante de 6 \mum.
4. Centifugación en gradiente de sacarosa
El virus de influenza se concentra mediante centrifugación isopícnica en un gradiente lineal de sacarosa (0,55%). La velocidad de flujo es 8-15 litros/hora.
Al final de la centrifugación, se recupera el contenido del rotor en tres fracciones diferentes (la sacarosa se mide en un refractómetro):
- fracción 1 sacarosa 55- aproximadamente 52%
- fracción 2 sacarosa aproximadamente 52*-26%
- fracción 3 sacarosa* 26-20%
* dependiente de cepa viral
La fracción 2 se diluye con tampón fosfato.
En esta etapa, el producto se denomina "concentrado de virus entero monovalente".
Filtración estéril
El material de virus entero se filtra en membranas de filtración finalizando con una membrana de 0,2 \mum. Al finalizar la filtración, se lavan los filtros con tampón fosfato. Como resultado, el volumen final de la fracción filtrada 2 es 5 veces el volumen de la fracción original.
Inactivación
El material monovalente filtrado se diluye con tampón fosfato para reducir el contenido de proteína total a un máximo de 250 \mug/ml. Se agrega formaldehído hasta una concentración final de 250 \mug/ml y la inactivación tiene lugar a 20ºC \pm 2ºC durante al menos 72 horas.
Filtración estéril final
La concentración de proteína del material inactivado se ajusta aproximadamente a 500 \mug/ml de proteína, se filtra previamente en membranas terminando con 0,8 \mum y finalmente se filtra en membranas terminando con 0,2 \mum.
Dependiendo de la cepa del virus la última membrana de filtración puede ser 0,8 \mum. En esta etapa, el producto se denomina "cantidad masiva final monovalente".
Almacenamiento
La cantidad masiva final monovalente se almacena a 2-8ºC durante un máximo de 18 meses.
Pureza
La pureza se determinó por escaneado de D.O. de geles de poliacrilamida teñidos con Coomassie. Los picos se determinaron manualmente. Los resultados se muestran en la tabla a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
Proteínas Virales (HA, NP, M) %
H3N2 Dímero HA1 + 2 NP M Otras proteínas
HA virales y
derivadas
de células
huéspedes %
A/Syd/5/97 10,34 22,34 25,16 37,33 4,83
A/Nan933/95 8,17 15,8 40,09 30,62 5,32
B
B/Har/7/94 5,71 24,07 15,64 50 4,58
B/Yam/166/98 0,68 27,62 21,48 46,02 4,2
H1N1
A/Tex/36/91 33,42 24,46 34,33 7,79
A/Bay/262/95 32,73 35,72 27,06 4,49
H2N2
A/sing/1/57 2,8 39,7 21,78 32,12 3,6
Procedimiento alternativo incluyendo la etapa con tripsina Digestión con tripsina
Tras la etapa de filtración estéril, el material estéril se somete a una etapa de tripsinización. La tripsina pura, por ejemplo, la tripsina porcina pura disponible comercialmente que tiene una actividad específica desde 10.000 hasta 15.000 unidades/mg se agrega hasta una concentración final de 0,1-10 \mug/ml. La mezcla se incuba durante 2 horas a 37ºC, agitando suavemente. Luego el material es refrigerado para enfriarlo y procesarlo posteriormente.
Ultrafiltración
Tras la digestión de la tripsina, el material puede ser sometido a ultrafiltración antes o después de la inactivación (como se describió anteriormente).
El material del virus se ultrafiltra en membranas con un límite de exclusión medio de 20.000 a 50.000 D. Durante la ultrafiltración, el contenido de formaldehído y sacarosa se reduce considerablemente.
Tras una primera reducción del volumen de 4 veces, el volumen permanece constante durante la ultrafiltración (diafiltración) mediante el agregado de tampón fosfato y solución salina tamponada con fosfato.
Resultados
La vacuna de virus entero de influenza preparada de acuerdo con el procedimiento con tripsina se analizó en geles de poliacrilamida teñidos con Coomassie. Las proteínas virales migraron a la misma posición que las proteínas virales que no sufrieron la etapa con digestión con tripsina, indicando que las proteínas virales no fueron digeridas por la proteasa.
Ejemplo 2 Preparación de dosis de vacuna desde las cantidades masivas de vacunas
La vacuna final se prepara mezclando las cantidades masivas de vacunas finales preparadas como se describió en el Ejemplo, con mezcla de adyuvante y tampón final de tal manera que se obtiene el contenido antigénico blanco y una concentración de sales de Al de 0,5 mg por dosis. El tampón usado contiene varias sales, como se muestra en la lista a continuación. El adyuvante es una mezcla de AlPO_{4} y Al(OH)_{3} y se usa en una proporción de 3,6 mg de AlPO_{4} y 0,4 mg de Al(OH)_{3} por 4 mg/ml de solución stock.
Composición del tampón
Agua destilada 0,800 l
NaCl 7,699 g
KCl 0,200 g
MgCl_{2} \cdot 6 H_{2}O 0,100 g
Na_{2}HPO_{4} \cdot 12 H_{2}O 2,600 g
KH_{2}PO_{4} 0,373 g
llevado a un volumen final de 1 litro con agua destilada.
El procedimiento es el siguiente:
1. Usar la mezcla de adyuvante a 10-15ºC.
2. Agregar tampón de vacuna final a 15-20ºC y agitar suavemente con agitador magnético.
3. Mientras se mezcla agregar la cantidad masiva de vacuna apropiada a 5-10ºC.
4. Continuar mezclando durante 10 á 30 minutos a temperatura ambiente.
5. Llevar la vacuna adsorbida a una habitación fría esperando para el llenado.
6. El volumen de vacuna final es de 0,5 ml por dosis.
Ejemplo 3 Datos clínicos - vacuna de influenza fraccionada en dosis bajas con adyuvante de sales de aluminio
Los datos siguientes provienen de un ensayo clínico en el que se preparó una vacuna triple contra la gripe de acuerdo con el esquema de fabricación general de la vacuna disponible comercialmente Fluarix (Marca Registrada) (la que es una vacuna fraccionada para la gripe). En la práctica, la cantidad masiva de material trivalente final se mezcló con adyuvante de aluminio como se describió en el Ejemplo 2. Se prepararon varias dosis diferentes de HA.
Se probaron los lotes de vacuna en dos poblaciones de diferentes edades, 18-60 años y > 60 años, con 1,8 \mug por dosis por cepa y 3,75 \mug por dosis por cepa. Sevacunaron 50 voluntarios en cada grupo.
Los datos correspondientes a las dosis de 1,8 y 3,75 \mug por cepa se presentan en las tablas a continuación.
Actividad Inhibitoria de la Hemaglutinación (HAI) de Anticuerpos Séricos de Suero Específicos de Gripe
Se tratan los sueros (50 \mul) con 200 \mul RDE (enzima destructora de receptor) durante 16 horas a 37ºC. La reacción se detiene con 150 \mul de citrato de Na 2,5% y se inactivan los sueros a 56ºC durante 30 minutos. Se prepara una dilución 1:10 agregando 100 \mul de PBS. Posteriormente, se preparan series de dilución al doble en placas de 96 pocillos (fondo en V) diluyendo 25 \mul de suero (1:10) con 25 \mul de PBS. Se agregan 25 \mul de antígenos de referencia a cada pocillo a una concentración de 4 unidades hemaglutinantes por 25 \mul. Se mezclan el antígeno y la dilución de antisuero con una mezcladora de placas de microtitulación y se incuban durante 60 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente se agregan 50 \mul de glóbulos rojos de pollo (RBC) (0,5%) y se dejan sedimentar los RBCs durante una hora a temperatura ambiente. El título HAI corresponde a la inversa de la última dilución de suero que inhibe completamente la hemaglutinación inducida por virus.
\vskip1.000000\baselineskip
Vacuna adsorbida Vacuna adsorbida
3,75 \mug/DOSIS/CEPA 1,8 \mug/DOSIS/CEPA
H1N1 H3N2 B H1N1 H3N2 B
Factor de
seroconversión
< 60 a 5 4,2 2,8 3,5 3,6 2,0
> 60 a 3,1 3,2 1,6 2,5 3,0 1,8
Tasa de
seroconversión
< 60 a 57 5,5 28 51 45 24
> 60 a 44 4,4 13 38 38 13
Tasa de
protección
< 60 a 89 87 100 82 76 98
> 60 a 81 71 100 64 67 100
Tasa protectoras (%) en grupos de edad 18-60 años
3,75 \mug/dosis/cepa 1,8 \mug/dosis/cepa
Pre Post Pre Post
Contra H1N1 43 89 45 82
Contra H3N2 40 87 24 76
Contra B 85 100 82 98
El criterio EU para el grupo de 18-60 años es el siguiente:
- Factor de seroconversión > 2,5
- Tasa de seroconversión > 40%
- Tasa de protección tras la vacunación > 70%.
De los datos en las tablas puede concluirse que el criterio EU para el factor de seroconversión, tasa de seroconversión y tasa de protección excede en las 2 poblaciones de diferentes edades para ambas dosificaciones diferentes probadas contra las cepas A de influenza.
Las tasas de protección contra el virus B fueron sobre el 80 y el 90% antes de la vacunación en los dos grupos de prueba respectivamente. Esta seropositividad previa a la vacunación para la cepa B afecta negativamente la respuesta a la vacuna. A pesar de esto los anticuerpos contra la cepa B fueron el doble tras la vacunación dando como resultado una tasa de protección cercana al 100%.
Por lo tanto, una vacuna formulada con menos de 4 \mug de HA por cepa y adyuvante de aluminio tiene un perfil reactogénico aceptable (datos no mostrados) y puede inducir una respuesta inmune que está en total conformidad con los tres criterios EU en ambas poblaciones del estudio. En base a las observaciones hechas en este ensayo, se puede concluir que una vacuna adsorbida en dosis baja es adecuada para uso en una situación de pandemia.
Ejemplo 4 Perfil reactogénico de una vacuna de virus entero monovalente en baja dosis, purificada y adsorbida en sal de aluminio
Se prepararon cantidades masivas monovalente de influenza completa de acuerdo con el Ejemplo 1 y la Figura 1 (procedimiento sin tripsina), y se formuló una vacuna monovalente para la influenza de acuerdo con el Ejemplo 2.
En la etapa de purificación del virus completo, aparte de la centrifugación en gradiente de sacarosa aplicada generalmente, se formaron pellets con la fracción rica en virus seleccionada para eliminar más eficientemente los contaminantes derivados del huevo.
El virus entero se inactivó con formaldehído a una concentración de 250 \mug/ml (comparado con el procedimiento de inactivación para la vacuna fraccionada que se logra con una combinación de deoxicolato de sodio (NaDOC) y exposición a formaldehído a 50 \mug/ml).
Una vez purificado e inactivado, se adsorbió el antígeno a una mezcla de hidróxido y fosfato de aluminio en una concentración de 0,05 mg y 0,45 mg por dosis respectivamente.
La pureza fue muy superior a la pureza de las vacunas con adyuvantes de virus enteros del pasado, en las que se usaba fluido alantoico puro o diluido.
El contenido de antígeno del virus entero fue de 7,5 \mug/dosis de A/Sydney/5/97. Se seleccionó esta dosificación como el peor escenario (como la mayor dosificación de antígeno que pudiera seleccionarse para una vacuna monovalente de pandemia) para investigar el límite superior de reactogenicidad.
En base a las observaciones del Ejemplo 3 y el hecho de que el virus entero es al menos tan inmunogénico como la vacuna fraccionada, resulta evidente que se usará una dosis de antígeno más baja.
Se realizó una comparación estadística de la reactogenicidad, los acontecimientos principalmente locales observados tras la vacunación, con losdatos obtenidos con la vacuna fraccionada de influenza Fluarix, de SmithKline Beecham Biologicals.
Se seleccionaron las reacciones locales para la comparación porque éstas pueden ser medidas con precisión y son más indicativas para una reacción local tras la administración de una vacuna que contiene adyuvante de aluminio.
Alcance Vacuna Vacuna Vacuna Vacuna
fraccionada fraccionada fraccionada fraccionada
monovalente monovalente monovalente monovalente
no adsorbida no adsorbida adsorbida adsorbida
A/SYDNEY A/SYDNEY A/SYDNEY A/SYDNEY
(15 \mug/dosis) (7,5 \mug/dosis) (7,5 \mug/dosis) (7,5 \mug/dosis)
(planeado n = 48 n = 49 n = 50 n = 48
4 x 50
n = 200)
n = 196
Resultados
(%)
Reacciones locales 23% 2% 32% 42%
y sistémicas
Reacciones sistémicas 17% 6% 6% 6%
Reacciones locales 27% 33% 42% 19%
Sin reacciones 33% 39% 20% 33%
La prueba Mann-Whitney U es una prueba estadística para comparar 2 poblaciones y para probar la hipótesis 0 de que dos poblaciones de resultados tienen funciones de distribución idénticas contra la hipótesis alternativas de que dos funciones de distribución difieren solamente con respecto a ubicación (mediana), si acaso.
El resultado de la comparación de la reactogenicidad de la vacuna con adyuvante de virus entero en baja dosis monovalente de los resultados de los ensayos clínicos con Fluarix (Marca Registrada) en 1996, `97 y `99 muestra que no hay diferencias significativas en el nivel P 0,05.
Esta observación avala el uso de la vacuna con adyuvante de virus entero, aún con una dosificación de antígeno superior que la dosificación suficiente para inducir altas tasas de protección contra la influenza.
Ejemplo 5 Inmunogenicidad de una vacuna de virus entero monovalente en baja dosis con adyuvante con sales de aluminio en una población sin inmunidad primaria
Se preparó una vacuna con virus entero de influenza de acuerdo con el Ejemplo 1 y la Figura 1 (procedimiento sin tripsina) y se formularon vacunas para la influenza monovalentes conteniendo diferentes cantidades de HA como se describió en el Ejemplo 2.
El antígeno usado en el estudio se preparó con A/Singapore/1/57 (H2N2). El subtipo H2N2 no ha circulado en seres humanos desde 1968 y los participantes del estudio cuya edad fue \leq 30 años eran inmunológicamente indefensos frente al antígeno. Se midió el estatus inmune y la respuesta inmune como títulos de inhibición de hemaglutinación en muestras de sueros.
La respuesta inmune en los días 10 y 21 puede considerarse una respuesta primaria verdadera mientras que todos los otros valores representan una respuesta a la revacunación. El resultado muestra el título medio geométrico (GMT) del respectivo grupo del estudio.
H2N2 Día Fluido 15 ADS. 7,5 ADS. 3,75 ADS. 1,9
\mug/Dosis \mug/Dosis \mug/Dosis \mug/Dosis
\leq 30 años n = 50 n = 47 n = 48 n = 51
0 5 6 6 6
10 18 16 18 13
2ª vac. \rightarrow 21 26 34 39 25
42 126 93 95 63
Los resultados presentados en la tabla anterior demuestran que una vacuna devirus entero monovalente con un contenido de antígeno HA tan bajo como 1,9 \mug/dosis provoca una respuesta inmune equivalente a la del grupo control (15 \mug HA/dosis, sin aluminio) en el grupo sin inmunidad primaria del estudio (\leq 30 años, d = 10,21).
A pesar de que los títulos de HI están por debajo del nivel protector tras una inmunización, se alcanza un título protector (\geq 1:40) en todos los grupos tras dos inmunizaciones. No está firmemente establecido si el criterio desarrollado paralas respuestas de revacunación es completamente aplicable en la evaluación de la respuesta inmune primaria. Queda por evaluarse el valor de un título "no protector" en el caso de una infección con virus de influenza.
Estos resultados avalan el uso de una vacuna para la influenza adsorbida en aluminio de virus entero de baja dosis para la primera inmunización de una población sin inmunidad primaria en una situación de pandemia.

Claims (22)

1. Una composición de vacuna de influenza monovalente que comprende un componente del virus de influenza el que es un antígeno de virus de influenza derivado del huevo en dosis baja de una cepa de virus de influenza que está asociada con un brote de pandemia, o que tiene el potencial para ser asociado con un brote de pandemia, en combinación con un adyuvante adecuado, en el que la dosis baja de antígeno es menor que 15 \mug de hemaglutinina por dosis o no más que 15 \mug por dosis de vacuna combinada y en el que el adyuvante es una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio.
2. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 en la que el antígeno del virus de influenza está en la forma de virus de influenza entero purificado.
3. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 en la que la cantidad de fosfato de aluminio excede la cantidad de hidróxido de aluminio.
4. Una composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la que la cantidad total de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio está en el intervalo de 0,4 a 1,0 \mug por dosis de vacuna.
5. Una composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la que la dosis baja de antígeno es menor que 10 \mug de hemaglutinina por dosis o por dosis de vacuna combinada.
6. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 5 en la que la dosis de antígeno está entre 0,1 \mug y 7,5 \mug o entre 1 y 5 \mug de hemaglutinina por dosis o por dosis de vacuna combinada.
7. Una composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la que el antígeno del virus de influenza está sustancialmente libre de contaminación de células huésped.
8. Una composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones1 a 7 en la que el componente del virus de influenza está purificado mediante un procedimiento que incluye una etapa de incubación con proteasa para digerir proteínas diferentes a las del virus de influenza.
9. Un equipo que comprende:
(i)
una dosis baja de un antígeno de virus de influenza formulado con una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio para administración por vía parenteral; y
(ii)
una dosis baja de antígeno de virus de influenza para administración por víamucosa, en un dispositivo de administración para mucosas tal como un dispositivo de vaporización intranasal;
en el que el componente de virus de influenza es un antígeno de virus de influenza derivado de huevo de una cepa de virus de influenza que está asociadacon un brote de pandemia o que tiene el potencial para ser asociado con un brote de pandemia, y en el que la dosis baja de antígeno es menor que 15 \mug de hemaglutinina por dosis y no más que 15 \mug por dosis de vacuna combinada.
10. El equipo de acuerdo con la reivindicación 9 en el que la dosis de antígeno combinado de las formulaciones parenteral y mucosa es de no más que 15 \mug de hemaglutinina.
11. El equipo de acuerdo con la reivindicación 10 en el que la dosis de antígenocombinado es menor que 10 \mug de hemaglutinina.
12. El equipo de acuerdo con la reivindicación 10 o reivindicación 11 en el que el antígeno de influenza en (i) es un virus entero inactivado y el antígeno de influenza en (ii) es virus fraccionado.
13. Un procedimiento para la producción de una vacuna de influenza para una situación de pandemia que comprende mezclar antígeno de virus de influenza derivado de huevo de una única cepa de virus de influenza que está asociada con un brote de pandemia o tiene el potencial para ser asociado con un brote de pandemia, con una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio y que provee lotes de vacunas o equipos de vacuna que contienen menos que 10 \mug de antígeno de hemaglutinina por dosis o no más que 15 \mug de hemaglutinina por dosis combinada.
14. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 13 en el que el antígeno está altamente purificado.
15. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 13 o la reivindicación 14 en el que el antígeno del virus de influenza está en la forma de partículas de virus enteros de influenza.
16. La composición de vacuna o equipo o procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en los que el antígeno está seleccionado de un antígeno H2 tal como el H2N2 y un antígeno H5 tal como el H5N1.
17. Un procedimiento para producir antígeno del virus de influenza para uso en una vacuna, cuyo procedimiento está de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 y comprende la etapa de incubación de una mezcla que contiene partículas de virus de influenza con una proteasa para digerir proteínas diferentes a las del virus de influenza.
18. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 17 en el que la etapa de digestión con proteasa se lleva a cabo tras la purificación parcial del antígeno del virus de influenza por una o más etapas de separación física.
19. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 18 en el que la etapa de digestión con proteasa se lleva a cabo antes de la etapa de inactivación del virus.
20. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 19 en el que el procedimiento de purificación comprende las etapas de:
(i)
proveer una mezcla de virus de influenza cultivados y proteínas del huésped, recolectados de un cultivo;
(ii)
purificar parcialmente el virus de influenza en la mezcla por una o más etapas de purificación física.
(iii)
llevar a cabo la etapa de digestión con proteasa en la mezcla parcialmente purificada para digerir las proteínas del huésped;
(iv)
inactivar el virus de influenza;
(v)
purificar además el virus de influenza por al menos una etapa de filtración.
21. El uso de menos de 10 \mug o menos de 8 \mug, o desde 1-7,5 \mug o desde 1-5 \mug de antígeno hemaglutinina de virus de influenza derivado de huevo de una única cepa de influenza asociada con un brote de pandemia o que tiene el potencial para ser asociado con un brote de pandemia y de una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio, en la fabricación de un lote de vacuna o equipo de vacuna para la protección contra la infección por virus de influenza.
22. El uso de acuerdo con la reivindicación 21 para la fabricación de una vacuna de dos dosis para administración por vías parenteral y mucosa simultánea, en el que la hemaglutinina para administración por vía parenteral ha sido formulada con una combinación de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio.
ES00966084T 1999-09-30 2000-09-27 Vacuna contra la influenza. Expired - Lifetime ES2250193T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9923176 1999-09-30
GBGB9923176.3A GB9923176D0 (en) 1999-09-30 1999-09-30 Novel composition

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2250193T3 true ES2250193T3 (es) 2006-04-16

Family

ID=10861908

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES05077465T Expired - Lifetime ES2359982T3 (es) 1999-09-30 2000-09-27 Vacuna de la gripe.
ES00966084T Expired - Lifetime ES2250193T3 (es) 1999-09-30 2000-09-27 Vacuna contra la influenza.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES05077465T Expired - Lifetime ES2359982T3 (es) 1999-09-30 2000-09-27 Vacuna de la gripe.

Country Status (15)

Country Link
US (2) US7238349B1 (es)
EP (4) EP1618889B8 (es)
JP (4) JP2003510291A (es)
AT (2) ATE499113T1 (es)
AU (1) AU774921B2 (es)
BR (1) BR0014386A (es)
CA (2) CA2386014C (es)
CY (2) CY1111908T1 (es)
DE (3) DE60024112T2 (es)
DK (2) DK1618889T3 (es)
ES (2) ES2359982T3 (es)
GB (1) GB9923176D0 (es)
HK (1) HK1048434B (es)
PT (1) PT1618889E (es)
WO (1) WO2001022992A2 (es)

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003091401A2 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Medimmune Vaccines, Inc. Multi plasmid system for the production of influenza virus
US7465456B2 (en) 2002-04-26 2008-12-16 Medimmune, Llc Multi plasmid system for the production of influenza virus
DE602004020189D1 (de) * 2003-01-30 2009-05-07 Novartis Vaccines & Diagnostic Adjuvante influenza-vakzine
AU2012201973B2 (en) * 2003-02-25 2014-05-22 Medimmune, Llc Methods of producing influenza vaccine compositions
US20060110406A1 (en) 2003-02-25 2006-05-25 Medimmune Vaccines, Inc. Refrigerator-temperature stable influenza vaccine compositions
KR101190932B1 (ko) * 2003-02-25 2012-10-16 메디뮨 엘엘씨 인플루엔자 백신 조성물의 제조 방법
TWI350174B (en) * 2003-03-12 2011-10-11 Wyeth Corp Adjuvanted bovine vaccines
ES2345492T3 (es) 2003-12-23 2010-09-24 Medimmune, Llc Sistema multiplasmido para la produccion del virus de la gripe.
JP5600375B2 (ja) 2004-03-09 2014-10-01 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド インフルエンザウイルスワクチン
DE602005024827D1 (de) 2004-09-09 2010-12-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Verminderung von potentiellen iatrogenen risiken in verbindung mit influenza impfstoffen
WO2006062637A2 (en) 2004-11-03 2006-06-15 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Influenza vaccination
US20090028903A1 (en) * 2005-03-23 2009-01-29 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Novel use
JP5869744B2 (ja) 2005-03-23 2016-02-24 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム Ｃｄ４ｔ細胞および／または改善された記憶ｂ細胞応答を誘導するためのインフルエンザウイルスおよび水中油型エマルジョンアジュバントの使用
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
US20110180430A1 (en) 2005-11-04 2011-07-28 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Adjuvanted influenza vaccines including cytokine-inducing agents
CA2628152C (en) 2005-11-04 2016-02-02 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
NZ568211A (en) 2005-11-04 2011-11-25 Novartis Vaccines & Diagnostic Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
WO2007052155A2 (en) 2005-11-04 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant
PL1951300T3 (pl) 2005-11-04 2012-03-30 Novartis Ag Zmiana równowagi TH1/TH2 w szczepionkach typu split przeciwko grypie zawierających adjuwant
EA014028B1 (ru) 2005-11-04 2010-08-30 Новартис Вэксинс Энд Диагностикс Срл Эмульсии, содержащие свободное поверхностно-активное вещество в водной фазе в качестве адъюванта сплит вакцин против гриппа
PL1957104T3 (pl) * 2005-11-04 2012-08-31 Novartis Vaccines And Diagnostics S R L Szczepionki przeciwgrypowe doraźnie adsorbowane na adiuwantach glinowych
NZ567980A (en) * 2005-11-04 2012-01-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Administration routes (intranasal or mucosal and parenteral or intramuscular) for priming/boosting with influenza vaccines
DK1976559T6 (da) 2006-01-27 2020-04-06 Seqirus Uk Ltd Influenzavacciner indeholdende hæmagglutinin og matrixproteiner
EP2004226A1 (en) 2006-03-24 2008-12-24 Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH & Co. KG Storage of influenza vaccines without refrigeration
US9072701B2 (en) * 2006-04-21 2015-07-07 St. Jude Children's Research Hospital Avian influenza viruses, vaccines, compositions, formulations, and methods
US20110206692A1 (en) 2006-06-09 2011-08-25 Novartis Ag Conformers of bacterial adhesins
CN101500603A (zh) 2006-06-15 2009-08-05 诺华有限公司 节省佐剂的多剂量流感疫苗接种方案
PL2422810T3 (pl) * 2006-07-17 2015-03-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Szczepionka przeciw grypie
KR101696727B1 (ko) * 2006-07-17 2017-01-16 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 인플루엔자 백신
CA2583555C (en) * 2006-07-17 2020-01-07 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Influenza vaccine
US20080014217A1 (en) * 2006-07-17 2008-01-17 Emmanuel Jules Hanon Influenza vaccine
GB0614460D0 (en) * 2006-07-20 2006-08-30 Novartis Ag Vaccines
CA2663196A1 (en) 2006-09-11 2008-03-20 Novartis Ag Making influenza virus vaccines without using eggs
CN101522218B (zh) 2006-10-12 2012-09-26 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 包含水包油乳液佐剂的疫苗
GB0622282D0 (en) 2006-11-08 2006-12-20 Novartis Ag Quality control methods
NZ577405A (en) 2006-12-06 2012-08-31 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus
TW200908994A (en) 2007-04-20 2009-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
JP5666905B2 (ja) 2007-06-18 2015-02-12 メディミューン，エルエルシー ヘマグルチニンポリペプチド中に変化を有するインフルエンザｂウイルス
CN101085348B (zh) * 2007-06-18 2010-08-18 南京农业大学 用于禽流感灭活抗原的鼻腔免疫复合佐剂
EA201070066A1 (ru) 2007-06-27 2010-06-30 Новартис Аг Вакцины против гриппа с низким содержанием добавок
EP2173866A2 (en) * 2007-06-29 2010-04-14 Avianax, LLC Vaccine production for pathogenic bird viral diseases
US8084594B2 (en) * 2007-07-13 2011-12-27 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture H2N3 influenza A viruses and methods of use
JP5731198B2 (ja) 2007-09-27 2015-06-10 イムノバクシーン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｖａｃｃｉｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ． インビボでのポリヌクレオチドの送達のための連続疎水相を含む担体におけるリポソームの使用
US20100209452A1 (en) * 2007-10-03 2010-08-19 Immunovaccine Technologies, Inc Compositions comprising an antigen, an amphipathic compound and a hydrophobic carrier, and uses thereof
GB0810305D0 (en) * 2008-06-05 2008-07-09 Novartis Ag Influenza vaccination
EP2227251A1 (en) * 2007-12-06 2010-09-15 GlaxoSmithKline Biologicals SA Influenza composition
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
CA2710480A1 (en) 2007-12-24 2009-07-02 Novartis Ag Assays for adsorbed influenza vaccines
WO2009111486A2 (en) * 2008-03-04 2009-09-11 The Regents Of The University Of California Reversing the immune decline of aging by a nutraceutical antioxidant in mice
EP2589392B1 (en) 2008-03-05 2016-11-30 Sanofi Pasteur Process for stabilizing an adjuvant containing vaccine composition
EP2268309B1 (en) * 2008-03-18 2015-01-21 Novartis AG Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens
WO2009131995A1 (en) * 2008-04-21 2009-10-29 Nanobio Corporation Nanoemulsion influenza vaccine
JP5715051B2 (ja) 2008-06-05 2015-05-07 イムノバクシーン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｖａｃｃｉｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ． リポソーム、抗原、ポリヌクレオチド及び疎水性物質の連続相を含む担体を含む組成物
US9421251B2 (en) 2008-06-25 2016-08-23 Novartis Ag Rapid responses to delayed booster immunisations
EP2318044B1 (en) 2008-08-01 2015-12-02 Gamma Vaccines Pty Limited Influenza vaccines
DK2396032T3 (en) 2009-02-10 2016-12-19 Seqirus Uk Ltd Influenza vaccines with reduced amounts of squalene
NZ595234A (en) 2009-03-24 2013-12-20 Novartis Ag Adjuvanting meningococcal factor h binding protein
DE102010018462A1 (de) 2009-04-27 2011-04-07 Novartis Ag Impfstoffe zum Schutz gegen Influenza
CA2763440A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Novartis Ag Assays for influenza virus hemagglutinins
CN102695523A (zh) 2009-09-10 2012-09-26 诺华有限公司 针对呼吸道疾病的组合疫苗
CA2774555A1 (en) * 2009-09-25 2011-03-31 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunodiffusion assay for influenza virus
KR20120088721A (ko) 2009-10-09 2012-08-08 씨바이오 리미티드 샤페로닌 10 변이체
DE102009056884B4 (de) 2009-12-03 2021-03-18 Novartis Ag Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
SI2380558T2 (sl) 2009-12-03 2019-11-29 Novartis Ag Izdelava emulzije z razmestitvijo interakcijske in protitlačne komore za mikrofluidizacijo
DE102009056883B4 (de) 2009-12-03 2012-08-16 Novartis Ag Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
CL2012001399A1 (es) 2009-12-03 2013-03-08 Novartis Ag Metodo para fabricar adyuvante para vacuna (emulsion aceite/agua con escualeno, polisorbato 80 y trioleato de sorbitan), que comprende (i) formar primera emulsion en homogenizador desde un contendor a otro para formar segunda emulsion, (ii) y microfluidizar primera emulsion para formar segunda emulsion.
EP2356983B1 (en) 2009-12-03 2013-02-20 Novartis AG Circulation of components during homogenization of emulsions
DE102009056871A1 (de) 2009-12-03 2011-06-22 Novartis AG, 4056 Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
NZ599881A (en) 2009-12-03 2014-01-31 Novartis Ag Hydrophilic filtration during manufacture of vaccine adjuvants
EA027142B1 (ru) 2010-05-12 2017-06-30 Новартис Аг Улучшенные способы получения сквалена
US9657359B2 (en) 2010-09-07 2017-05-23 Novartis Ag Generic assays for detection of mamalian reovirus
US9821051B1 (en) 2010-10-28 2017-11-21 Seqirus UK Limited Reducing hospitalization in elderly influenza vaccine recipients
WO2012100302A1 (en) 2011-01-27 2012-08-02 Gamma Vaccines Pty Limited Combination vaccines
US10105435B2 (en) 2011-10-06 2018-10-23 Immunovaccine Technologies Inc. Liposome compositions comprising an adjuvant that activates or increases the activity of TLR2 and uses thereof
EP2791680B1 (en) 2011-12-12 2015-12-09 Novartis AG Assay for influenza virus hemagglutinins
US10596246B2 (en) 2011-12-29 2020-03-24 Glaxosmithkline Biological Sa Adjuvanted combinations of meningococcal factor H binding proteins
ES2732229T3 (es) 2012-03-23 2019-11-21 Pitney Pharmaceuticals Pty Ltd Inhibidores de cinasa para el tratamiento del cáncer
CA2875683A1 (en) 2012-06-05 2013-12-12 The Australian National University Vaccination with interleukin-4 antagonists
US9982240B2 (en) 2012-08-03 2018-05-29 Sanofi Pasteur Production of infectious influenza viruses
CN105496999A (zh) 2012-08-06 2016-04-20 皮特尼制药股份有限公司 治疗mTOR通路相关的疾病的化合物
GB201218195D0 (en) 2012-10-10 2012-11-21 Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie Composition
ES2727686T3 (es) 2012-12-17 2019-10-17 Newsouth Innovations Pty Ltd Tratamiento de enfermedades que implican mucina
WO2014100857A1 (en) 2012-12-24 2014-07-03 Cell Ideas Pty Ltd Vaccines for the treatment of cancer and compositions for enhancing vaccine efficacy
RU2523614C1 (ru) * 2013-04-09 2014-07-20 Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации Вакцина против гриппа и способ ее получения
EP3016968B1 (en) 2013-07-01 2019-06-26 Newsouth Innovations Pty Limited Diagnosis and treatment of autoimmune diseases
US10286062B2 (en) * 2013-07-09 2019-05-14 Texas Tech University System Universal influenza vaccine
KR20160036669A (ko) * 2013-07-31 2016-04-04 주식회사 쿠라레 투명성, 열 균열 현상 억제가 우수한 폴리비닐 아세탈 필름
ES2721306T3 (es) 2014-12-02 2019-07-30 Novartis Ag Fabricación de composiciones que contienen tensioactivo
AU2016236770B2 (en) 2015-03-26 2022-03-10 Gpn Vaccines Pty Ltd Streptococcal vaccine
US11013795B2 (en) 2015-06-26 2021-05-25 Seqirus UK Limited Antigenically matched influenza vaccines
HUE051783T2 (hu) 2015-07-07 2021-03-29 Seqirus Uk Ltd Eljárás immunogén hemagglutinin mennyiségi meghatározására
CN105251002B (zh) * 2015-11-13 2019-02-15 中国人民解放军第三军医大学 一种水包油型纳米乳佐剂及其mrsa纳米乳佐剂疫苗和制备方法
MX2019011599A (es) 2017-03-30 2019-12-19 Univ Queensland Moleculas quimericas y usos de las mismas.
AU2021252164A1 (en) 2020-04-09 2022-12-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
EP4171514A1 (en) 2020-06-30 2023-05-03 Seqirus UK Limited Cold filtration of oil-in-water emulsion adjuvants
CN111803625B (zh) * 2020-09-09 2020-12-18 天津中逸安健生物科技有限公司 一种亚单位流感疫苗裂解剂及其应用

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD155875A1 (de) 1980-12-31 1982-07-14 Willy Nordheim Verfahren zur herstellung eines ballaststoffarmen inaktivierten influenzaimpfstoffes
DD211444A3 (de) 1982-08-19 1984-07-11 Saechsisches Serumwerk Verfahren zur herstellung von influenza-impfstoffen
GB8300467D0 (en) 1983-01-08 1983-02-09 Wellcome Found Equine influenza
DD300833A7 (de) 1985-10-28 1992-08-13 Saechsische Landesgewerbefoerd Verfahren zur herstellung von inaktivierten influenza-vollvirusimpfstoffen
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US5376369A (en) * 1987-11-03 1994-12-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Vaccine adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
GB8821049D0 (en) * 1988-09-08 1988-10-05 Health Lab Service Board Method & composition for treatment & prevention of viral infections
US5149531A (en) * 1990-06-27 1992-09-22 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Method of using cold-adapted live influenza virus vaccine as an antiviral agent against influenza
US5589174A (en) * 1992-09-17 1996-12-31 Takara Shuzo Co., Ltd. Anti-human influenza virus antibody
CA2156525A1 (en) * 1993-02-19 1994-09-01 Susan Dillon Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a
CN1124013A (zh) * 1993-02-19 1996-06-05 史密丝克莱恩比彻姆公司 含3-邻位-脱酰基的单磷酰基脂质a的流感疫苗组合物
HU219056B (hu) * 1993-03-23 2001-02-28 Smithkline Beecham Biologicals Sa 3-O-Dezacilezett monofoszforil-lipid A-t tartalmazó vakcinakészítmény
US6387378B1 (en) * 1993-09-09 2002-05-14 George P. Shibley Device for storage and mucosal delivery of biological or pharmaceutical materials to animals
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
JP3836874B2 (ja) * 1994-02-24 2006-10-25 ノババックス インコーポレイテッド 免疫アジュバントとして少ラメラ脂質小胞を含むワクチン
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US5916879A (en) * 1996-11-12 1999-06-29 St. Jude Children's Research Hospital DNA transcription unit vaccines that protect against avian influenza viruses and methods of use thereof
US6013632A (en) * 1997-01-13 2000-01-11 Emory University Compounds and their combinations for the treatment of influenza infection
TW570803B (en) * 1997-04-09 2004-01-11 Duphar Int Res Influenza vaccine
DE69838992T2 (de) * 1997-09-05 2008-12-24 Glaxosmithkline Biologicals S.A., Rixensart Öl-in-Wasser Emulsionen mit Saponinen
GB9718901D0 (en) * 1997-09-05 1997-11-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU756828B2 (en) * 1997-12-02 2003-01-23 Powderject Vaccines, Inc. Transdermal delivery of particulate vaccine compositions
WO1999047555A1 (en) * 1998-03-20 1999-09-23 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
AT408615B (de) * 1998-09-15 2002-01-25 Immuno Ag Neue influenzavirus-impfstoffzusammensetzung
AT407958B (de) * 1999-02-11 2001-07-25 Immuno Ag Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation
PL355287A1 (en) * 1999-09-24 2004-04-05 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Intranasal influenza virus vaccine
MY134424A (en) 2001-05-30 2007-12-31 Saechsisches Serumwerk Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal
US20090028903A1 (en) * 2005-03-23 2009-01-29 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Novel use
JP5869744B2 (ja) * 2005-03-23 2016-02-24 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム Ｃｄ４ｔ細胞および／または改善された記憶ｂ細胞応答を誘導するためのインフルエンザウイルスおよび水中油型エマルジョンアジュバントの使用
WO2007052155A2 (en) 2005-11-04 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant
PL2422810T3 (pl) * 2006-07-17 2015-03-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Szczepionka przeciw grypie
KR101696727B1 (ko) * 2006-07-17 2017-01-16 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 인플루엔자 백신
US20080014217A1 (en) * 2006-07-17 2008-01-17 Emmanuel Jules Hanon Influenza vaccine
TW200908994A (en) * 2007-04-20 2009-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP2227251A1 (en) * 2007-12-06 2010-09-15 GlaxoSmithKline Biologicals SA Influenza composition

Also Published As

Publication number Publication date
JP2012021030A (ja) 2012-02-02
CA2616210C (en) 2014-05-06
ATE499113T1 (de) 2011-03-15
CA2386014A1 (en) 2001-04-05
PT1618889E (pt) 2011-05-10
DE122011100035I1 (de) 2011-12-15
ES2359982T3 (es) 2011-05-30
HK1048434B (zh) 2006-07-28
EP1618889A3 (en) 2006-06-14
AU774921B2 (en) 2004-07-15
WO2001022992A3 (en) 2001-05-17
CY2011008I2 (el) 2014-04-09
EP1216053B1 (en) 2005-11-16
EP2269637A1 (en) 2011-01-05
JP2008001725A (ja) 2008-01-10
WO2001022992A2 (en) 2001-04-05
EP1618889B1 (en) 2011-02-23
GB9923176D0 (en) 1999-12-01
ATE309821T1 (de) 2005-12-15
BR0014386A (pt) 2002-06-18
EP1216053A2 (en) 2002-06-26
US7238349B1 (en) 2007-07-03
CY1111908T1 (el) 2014-04-09
CA2616210A1 (en) 2001-04-05
JP2003510291A (ja) 2003-03-18
CY2011008I1 (el) 2014-04-09
HK1048434A1 (en) 2003-04-04
EP1618889B8 (en) 2011-04-20
AU7660200A (en) 2001-04-30
EP1618889A2 (en) 2006-01-25
US20070141078A1 (en) 2007-06-21
DK1216053T3 (da) 2006-03-20
DE60024112D1 (de) 2005-12-22
CA2386014C (en) 2014-05-13
DE60024112T2 (de) 2006-08-24
EP3103473A1 (en) 2016-12-14
DE60045668D1 (de) 2011-04-07
DK1618889T3 (da) 2011-06-06
JP2014205726A (ja) 2014-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2250193T3 (es) Vacuna contra la influenza.
ES2318020T3 (es) Composicion de vacuna contra la gripe.
ES2377761T3 (es) Vacuna contra la gripe de emulsión de aceite en agua
ES2367081T3 (es) Procedimiento para la replicación de virus de la gripe en cultivo celular y los virus de la gripe que pueden obtenerse por el procedimiento.
JP4763197B2 (ja) 新規ワクチン
US10398771B2 (en) Process for producing influenza vaccine
WO2005113756A1 (en) Method
ES2621487T3 (es) Nueva composición de vacuna contra la gripe
ES2361981T3 (es) Formulaciones de vacunas de la gripe para administración intradérmica.
Treanor et al. New approaches to influenza vaccine