ES2227635T3 - Analogos de vitamina d3. - Google Patents
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Abstract
LOS COMPUESTOS DE FORMULA (I), DONDE R ES HIDROGENO, FLUOR O HIDROXI, R{SUB,2} ES HIDROGENO, ALQUILO DE BAJO PESO MOLECULAR O HALOGENO, X ES = CH{SUB,2} O CUANDO R ES HIDROXI, X ES (H,H) O = CH{SUB,2} Y A ES -, SON UTILES EN EL TRATAMIENTO DE TRASTORNOS HIPERPROLIFERATIVOS DE LA PIEL, ENFERMEDADES NEOPLASICAS, ENFERMEDADES DE GLANDULAS SEBACEAS Y PATOLOGIAS ASOCIADAS CON PIEL FOTOLESIONADA.
Description
Análogos de vitamina D_{3}.
El invento se refiere a análogos de vitamina
D_{3}, particularmente análogos de
20-epi-16-eno de
vitamina D_{3} de la fórmula
en donde R es flúor, R_{2} es
hidrógeno, alquilo inferior o halógeno, X es
=CH_{2}
y A es
2
-CH_{2}-CH_{2}-, con la condición
de que cuando A es -CH_{2}-CH_{2}-, R_{2} es
hidrógeno o alquilo
inferior.
Como aquí se utiliza, "alquilo inferior"
denota un grupo de alquilo de cadena lineal o ramificada que
contiene 1 a 4 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo,
propilo, isopropilo, butilo, t-butilo y similares.
De preferencia alquilo inferior es metilo o etilo. Halógeno
significa flúor, yodo, bromo o cloro, de preferencia, flúor.
Los compuestos de fórmula I difieren de los
compuestos conocidos por la presencia de un átomo de flúor en
posición 1 en lugar de hidroxi. Ejemplos de estos compuestos
1-hidroxi son conocidos por la EP 325279 (que tienen
configuración "natural" en posición 20); Cancer Research 1995,
55, 2822-2830 (que tiene configuración "epi"
en posición 20); y por la WO 92/03414 y JP 7188281 (que tiene
saturación en posición 16).
Los compuestos de fórmula I inducen
diferenciación e inhibición de proliferación en diversas líneas
celulares de piel y cáncer. Así pues, los compuestos de la fórmula
I son útiles como agentes para el tratamiento de enfermedades de
piel hiperproliferativas, tal como, psoriasis. Los compuestos de
fórmula I son también útiles en el tratamiento de enfermedades
neoplásticas, tal como leucemia o cáncer de mama y enfermedades de
glándulas sebáceas, tal como acné o dermatitis seborreica. Los
compuestos de fórmula I, particularmente
1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16,23E-dien-26,27-bishomo-20-epi-colecalciferol
son útiles en el tratamiento de osteoporosis.
Además, cuando se aplican tópicamente a la piel
de un paciente los compuestos de fórmula I invierten las
condiciones asociadas con la fotolesión. Así pues, mediante la
aplicación tópica de compuestos de fórmula I a la piel de pacientes
que se ha lesionado con la exposición al sol puede invertirse los
efectos de arrugas, elastosis y envejecimiento prematuro,
conduciendo a una mejora en el aspecto de la piel. Dicho de otro
modo, con la administración tópica de los compuestos de la fórmula
I se lleva a cabo la aceleración de restauración de la lesión
dermal de modo que se proporciona a la piel con un aspecto mas liso
y joven.
El invento se refiere también a una composición
farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I y un vehículo
farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones pueden utilizarse
en inducir diferenciación e inhibición de proliferación en líneas
celulares de piel y cáncer, particularmente para el tratamiento de
enfermedades de piel hiperproliferativas, tal como psoriasis;
enfermedades neoplásticas, tal como leucemia; y enfermedades de
glándulas sebaceas, tal como acné; así como en la inversión de las
condiciones asociadas con fotolesión, particularmente para el
tratamiento tópico de piel lesionada con la exposición al sol, los
efectos de arrugas, elastosis y envejecimiento prematuro. El
invento se refiere también al empleo de los compuestos de fórmula I
en la preparación de medicamentos para el tratamiento de las
enfermedades y condiciones antes citadas. El invento se refiere
también a un procedimiento para la preparación de compuestos de
fórmula I e intermedios de fórmula XII.
En un compuesto de fórmula I, R_{2} es de
preferencia hidrógeno o flúor. Los compuestos preferidos de
fórmula I son:
1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-colecalciferol;
1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16-en-23-in-26,27-hexafluoro-20-epi-colecalciferol.
Los compuestos de fórmula I se preparan como se
describe mas adelante en los Esquemas I-V y los
ejemplos.
La última etapa en el procedimiento para la
preparación de los compuestos de fórmula I comprende desproteger
compuestos correspondientes conteniendo grupos hidroxilo silil
protegidos.
Esquema
I
en donde R_{2} es como se ha
descrito
antes.
Esquema
II
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en donde R, X y R_{2} son como se
ha descrito
antes.
\newpage
Esquema
III
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en donde R, X son como se ha
descrito antes y R_{2} es hidrógeno o alquilo
inferior.
\newpage
Esquema
IV
\vskip1.000000\baselineskip
en donde R, X y R_{2} son como se
ha descrito
antes.
\newpage
Esquema
V
\vskip1.000000\baselineskip
en donde R, X y R_{2} son como se
ha descrito
antes.
En el Esquema I anterior el compuesto de fórmula
II, un compuesto conocido (B.M. Trost, P.R. Bernstein, P.C.
Funfschilling, J. American Chemical Society 101, 4378
(1979)), se convierte en el compuesto de fórmula III mediante
reacción con anhídrido acético, piridina y dimetilaminopiridina en
un disolvente hidrocarbúrico clorado, tal como diclorometano. La
reacción se lleva a cabo entre 0ºC y 50ºC, de preferencia a
temperatura ambiente, de preferencia bajo una atmósfera de
argón.
El compuesto de fórmula III se convierte en el
compuesto de fórmula IV mediante reacción con una base, tal como,
carbonato sódico en un disolvente alcohólico, tal como metanol,
bajo, de preferencia, una atmósfera de argón.
El compuesto de fórmula IV se convierte en el
compuesto de fórmula V mediante reacción con cloruro de oxalilo y
sulfóxido de dimetilo en un disolvente hidrocarbúrico clorado, tal
como diclorometano, bajo una atmósfera de argón.
El compuesto de fórmula V se convierte en el
compuesto de fórmula VI mediante reacción con benzalacetona en
presencia de catalizador de paladio sobre carbón.
El compuesto de fórmula VI se convierte en el
compuesto de fórmula VII mediante reacción con un
3-trimetilsililpropinal y un ácido Lewis tal como
cloruro de dimetilaluminio en un disolvente hidrocarbúrico clorado,
tal como diclorometano.
El compuesto de fórmula VII se convierte en el
compuesto de fórmula VIII mediante reacción del feniltionocarbonato
correspondiente con hidruro de
tri-n-butilestaño y trietilborano en
tolueno.
El compuesto de fórmula VIII se convierte en el
compuesto de fórmula IX mediante reacción con una base, tal como,
hidróxido sódico en un disolvente alcohólico, tal como etanol. La
reacción se lleva a cabo a una temperatura en la gama de 50ºC a
100ºC, de preferencia 80ºC.
El compuesto de fórmula IX se convierte en el
compuesto de fórmula X mediante reacción con
1-(trimetilsilil)imidazol en un disolvente hidrocarbúrico
clorado, tal como cloruro de metileno anhidro.
El compuesto de fórmula X se convierte en un
compuesto de fórmula XI mediante reacción con el compuesto
correspondiente
de la fórmula
8 en donde R_{2}' es hidrógeno, o alquilo inferior
en presencia de una base tal como
n-butillitio.
La reacción se lleva a cabo, de preferencia a
-78ºC.
Cuando los compuestos de fórmula I en donde
R_{2} es halógeno se preparan, se hace reaccionar el compuesto de
fórmula X con una acetona halogenada, tal como hexafluoroacetona en
presencia de una base tal como n-butillitio.
El compuesto de fórmula XI se convierte en el
compuesto correspondiente de fórmula XII mediante reacción con
fluoruro de tetrabutilamonio en un disolvente etéreo tal como
tetra-hidrofurano.
Como se expone en el Esquema II se convierte un
compuesto de fórmula XII en un compuesto correspondiente de fórmula
XIII mediante reacción con un agente oxidante tal como dicromato de
piridinio en un disolvente hidrocarbúrico clorado tal como, cloruro
de metileno anhidro.
Un compuesto de fórmula XIII se convierte en un
compuesto correspondiente de fórmula XIV mediante reacción con
1-(trimetilsilil)imidazol en un disolvente hidrocarbúrico
clorado tal como cloruro de metileno anhidro.
Un compuesto de fórmula XIV se convierte en el
compuesto correspondiente de fórmula Ia en donde R es flúor
mediante reacción con óxido de
[3S-(3Alfa,5Beta,Z)]-2-[2-[2-metilen-3-fluoro-5-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]-oxi]ciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en un éter como disolvente tal como tetrahidrofurano en presencia
de n-butillitio como base.
En el Esquema III anterior se reduce un compuesto
de fórmula XII a un compuesto correspondiente de fórmula XV mediante
reacción con hidrógeno y catalizador Lindlar en un disolvente
orgánico, tal como, una combinación de acetato de etilo, hexano y
etanol, en presencia de quinolina.
Un compuesto de fórmula XV se convierte en un
compuesto correspondiente de fórmula XVI mediante reacción con
hidrógeno en presencia de un catalizador tal como tetrafluoroborato
de rodio de
1,4-bis(difenilfosfino)butan
1,5-ciclooctadieno y mercurio en un disolvente
hidrocarbúrico clorado, tal como cloruro de metileno.
Un compuesto de fórmula XVI se oxida a un
compuesto correspondiente de fórmula XVII mediante reacción con
dicromato de piridinio en un disolvente hidrocarbúrico clorado, tal
como cloruro de metileno.
Un compuesto de fórmula XVII se convierte en un
compuesto correspondiente de fórmula XVIII mediante reacción con
1-(trimetilsilil)imidazol en un disolvente hidrocarbúrico
clorado, tal como cloruro de metileno.
Un compuesto de fórmula XVIII en el compuesto
correspondiente de fórmula Ib en donde R es flúor mediante
reacción con óxido de
[3S-(3Alfa,5Beta,Z)]-2-[2-[2-[metilen-3-fluoro-5-[[1,1-dimetiletil)dimetilsilil]-oxi]-ciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en presencia de n-butillitio como una base en
tetrahidrofurano anhidro como disolvente, a una temperatura de
-78ºC.
En el Esquema IV anterior se convierte un
compuesto de fórmula XII en un compuesto correspondiente de fórmula
XIX mediante reacción con un agente reductor tal como hidruro de
litio aluminio en un disolvente etéreo, tal como tetrahidrofurano
en presencia de metóxido sódico como una base.
Un compuesto de fórmula XIX se convierte en un
compuesto correspondiente de fórmula XX mediante reacción con un
agente oxidante tal como dicromato de piridinio en un disolvente
hidrocarbúrico clorado, tal como, cloruro de metileno.
Un compuesto de fórmula XX se convierte en un
compuesto correspondiente de fórmula XXI mediante reacción con
1-(trimetilsilil)imidazol en un disolvente hidrocarbúrico
clorado, tal como cloruro de metileno.
Un compuesto de fórmula XXI se convierte en un
compuesto correspondiente de fórmula Ic en donde R es flúor
mediante reacción con óxido de
[3S-(3Alfa,5Beta,Z)]-2-[2-[2-metilen-3-fluoro-5-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]-oxi]-ciclohexiliden]-etil]difenilfosfina
en un éter como disolvente, tal como tetrahidrofurano, en presencia
de una base tal como n-butillitio.
Como se expone en el Esquema V anterior se
convierte un compuesto de fórmula XII en un compuesto
correspondiente de fórmula XXII mediante hidrogenación con
catalizador Lindlar en presencia de quinolina en una mezcla de
disolventes, tal como una combinación de acetato de etilo, hexano y
etanol.
Se convierte un compuesto de fórmula XXII en un
compuesto correspondiente de fórmula XXIII mediante reacción con
agente oxidante tal como dicromato de piridinio en un disolvente
hidrocarbúrico clorado tal como cloruro de metileno.
Se convierte un compuesto de fórmula XXIII en un
compuesto correspondiente de fórmula XXIV mediante reacción con
1-(trimetilsilil)imidazol en un disolvente hidrocarbúrico
clorado, tal como cloruro de metileno.
Un compuesto de fórmula XXIV en el compuesto
correspondiente de fórmula Id en donde R es flúor mediante reacción
con óxido de
[3S-(3Alfa,5Beta,Z)]-2-[2-[2-metilen-3-fluoro-5-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-ciclohexiliden]-etil]difenilfosfina
en un éter como disolvente tal como tetrahidrofurano en presencia
de una base tal como n-butillitio.
Los compuestos de fórmula I pueden administrarse
oralmente, por ejemplo en forma de comprimidos, comprimidos
revestidos, grageas, cápsulas de gelatina dura o blanda,
soluciones, emulsiones o suspensiones. Sin embargo, la
administración puede efectuarse también rectalmente, por ejemplo en
forma de supositorios o parenteralmente, por ejemplo en forma de
soluciones de inyección.
Una composición de conformidad con el invento
puede procesarse con excipientes inorgánicos u orgánicos
farmacéuticamente inertes para la preparación de comprimidos,
comprimidos revestidos, grageas y cápsulas de gelatina dura.
Lactosa, almidón de maíz o sus derivados, talco, ácido esteárico o
sus sales pueden utilizarse como excipientes de esta índole, por
ejemplo, para comprimidos, grageas y cápsulas de gelatina dura.
Excipientes apropiados para cápsulas de gelatina blanda son, por
ejemplo, aceites vegetales, ceras, grasas, polioles
semi-sólidos y líquidos; dependiendo de la
naturaleza del ingrediente activo. Sin embargo no se requiere
usualmente excipientes en el caso de cápsulas de gelatina blanda.
Excipientes apropiados para la preparación de soluciones y jarabes
son, por ejemplo, agua, polioles, sacarosa, azúcar de inversión,
glucosa.
Excipientes apropiados para soluciones de
inyección son, por ejemplo, agua, alcoholes, polioles, glicerol,
aceites vegetales.
Excipientes apropiados para supositorios son, por
ejemplo, aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas, polioles
semi-líquidos o líquidos.
Además los preparados farmacéuticos pueden
contener conservantes, solubilizantes, estabilizantes, agentes
humectantes, emulgentes, edulcorantes, colorantes, saborizantes,
sales para variar la presión osmótica, tampones, agentes de
enmascarado o antioxidantes.
Los compuestos de fórmula I, como se ha descrito
antes, pueden administrarse oralmente o mediante inyección, para el
tratamiento de enfermedades neoplásticas tal como leucemia, a
animales de sangre caliente que precisen un tratamiento de esta
índole. Mas concretamente los compuestos de fórmula I como se ha
descrito antes pueden administrarse oralmente a un humano adulto en
dosis que se encuentran en la gama de alrededor de 0,25 a 50 ug por
día para el tratamiento de enfermedades neoplásticas tal como
leucemia o cáncer de mama.
Los compuestos de fórmula I como se ha descrito
antes pueden administrarse oralmente, para el tratamiento de
enfermedades de la piel hiperproliferativas tal como psoriasis,
carcinomas de células basales, trastornos de queratinización y
queratosis, a animales de sangre caliente que precisen un
tratamiento de esta índole. Mas específicamente, los compuestos de
fórmula I como se ha descrito antes pueden administrarse oralmente
a un humano adulto en dosis que se encuentran en la gama de
alrededor de 0,25 a 50 ug por día para el tratamiento de
enfermedades de la piel hiperproliferativas tal como psoriasis,
carcinomas de células basales, trastornos de queratinización y
queratosis. Estos compuestos pueden administrarse oralmente para
el tratamiento de acné en humanos a una dosis de alrededor de 0,25
a 50 ug por día; de preferencia de 0,5 a 5 ug por día.
Los compuestos de fórmula I como se han descrito
antes pueden administrarse tópicamente, para el tratamiento de
enfermedades de la piel hiperproliferativas tal como psoriasis,
carcinomas de células basales, trastornos de queratinización y
queratosis, a animales de sangre caliente que precisen un
tratamiento de esta índole. Mas específicamente, los compuestos de
fórmula I como se ha descrito antes pueden administrarse tópicamente
en dosis que se encuentran en la gama de alrededor de 0,5 a
alrededor de 100 ug por gramo de formulación tópica por día, para
el tratamiento de enfermedades de la piel hiperproliferativas tal
como psoriasis, carcinomas de células basales, trastornos de
queratinización y queratosis.
Los compuestos de fórmula I, como se ha descrito
antes, pueden también administrarse tópicamente para el tratamiento
de enfermedades de glándulas sebaceas tal como acné o dermatitis
seborreica.
La actividad útil de compuestos de fórmula I como
agentes para el tratamiento de enfermedades neoplásticas puede
demostrarse mediante los procedimientos de prueba siguientes.
Se ensayó la inducción de diferenciación de
células HL-60 midiendo su potencial de estallido
oxidativo via la reducción de nitrobluetetrazolio (NBT).
Se mantuvieron células HL-60 en
medio RPMI 1640 suplementado con suero vacuno fetal al 10% (FCS),
2mM de L-glutamina, 1mM de piruvato sódico, 1% de
aminoácidos no esenciales, 50 U/ml de penicilina y 50 ug/ml de
estroptomicina (RPMI/FCS). Se sembraron células
HL-60 (30.000 células/90 ul de medio
RPMI/suplementado) en pocillos de microtitulación de fondo plano.
Inmediatamente después de la siembra se adicionaron a los pocillos
al mismo tiempo 10 ul de compuestos de prueba diluidos en medio
RPMI suplementado para dar concentraciones finales entre 10^{-11}
y 10^{-6} M (a partir de soluciones stock de 10^{-2} M en
etanol guardado a -20ºC y protegido de la luz). Después de 3 días
se separó el medio de los pocillos con una pipeta multicanal y
sustituyó por 100 ul de solución NBT (1 mg/ml en solución salina
tamponada de fosfato (PBS) con 200 nM de forbol miristato acetato
(PMA). Después de una hora adicional de incubación a 37ºC se separó
la solución de NBT y se adicionó 100 ul de dodecil sulfato sódico
al 10% (SDS) en HCl 0,01 N. La cantidad de NBT reducido se
cuantificó fotométricamente a 540 nm utilizando un lector de placas
automático. Se calculó la media de 3 pocillos. El E.M.S. estuvo
entre 5 y 10%. Los valores se expresaron como porcentaje de
diferenciación máxima obtenido con 100-1000 nM de
calcitriol en el mismo experimento. La concentración (nM) que
conduce al 50% de este valor máximo se determinó gráficamente y se
ofrece en la Tabla I como DE_{50}.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Los derivados 1,25-dihidroxi en
la tabla I no son de conformidad con el invento.
A continuación se exponen las dos líneas
celulares utilizadas en estos experimentos y sus exigencias de
crecimiento:
1. Se desarrollaron células de carcinoma de
mama T47-D en medio RPMI 1640 suplementado con 10
ug/ml de insulina bovina, y 10% de bovina fetal.
2. Se desarrollaron células de carcinoma de
mama MCF-7 en MEM (Eagles) suplementado con
aminoácidos no esenciales, 1 mM de piruvato sódico, 10 ug/ml de
insulina bovina, y 10% de suero bovino fetal.
Se desarrollaron células en un medio apropiado
para retardo de la fase log (confluencia \sim 80%). Luego se
trip-sinizaron células T47-D o
MCF-7 y sembraron a 4000 ó 2000 células/pocillo,
respectivamente. A 24 horas psot siembra se preparó en el mismo
medio dilución en serie de fármacos
etanol-solubilizados y se adicionaron a pocillos
triplicados a una concentración final de l.000 a 0,1 nM y 0,1% de
etanol. En los días 3 a 7 después de adición del fármaco se
adiciona a cada pocillo 50 ul de una solución de MTT 5 mg/ml
(bromuro de
3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio
en solución salina tamponada de fosfato) y se prosigue la
incubación a 37ºC durante 2 horas y media. Luego se revuelven las
placas brevemente mediante centrifugación a 800 xg durante 5
minutos, se aspira medio de los pocillos y se adiciona 50 ul de
etanol/pocillo para disolver el formazan formado durante el periodo
de incubación con MTT. Después de un sacudimiento de 15 minutos se
determina la densidad óptica de cada pocillo en un lector de placas
automático a 570 y 660 nm. Se calcula el porcentaje de inhibición
de desarrollo celular comparando densidades ópticas de células
tratadas con compuestos de prueba con las de células tratadas solo
con etanol al 0,1%. Se determinan los valores CI_{50} basados en
la fórmula Reed and Muench (Reed, L.J., y H. Muench, A simple method
of estimating fity percent endpoint. Am. J. Hyg.
27:493-497 (1938)) y los resultados se exponen a
continuación en la Tabla II.
Los derivados 1,25-dihidroxi en
la tabla II no son de conformidad con el invento.
La actividad útil de compuestos de fórmula I como
agentes para el tratamiento de enfermedad de piel
hiperproliferativa puede demostrarse mediante lo siguiente.
Línea de células HaCat - Se utilizó la línea
celular humana inmortalizada HaCat. Se midió la incorporación de
^{3}H-timidina en cultivos de crecimiento
exponencial después de 6 días de cultivo en presencia del compuesto
de prueba.
Cultivo de células - Se cultivaron células HaCat
en Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) y Nutrient Mixture
Ham's F12 (F12), 3:1 (v/v, ICN) conteniendo 4,5 g/l de glucosa y
suplementado con suero bovio fetal al 10% (Gibco, FCS),
L-glutamina (Gibco, 2mM), penicilina (Gibco, 50
UI/ml), estreptomicina (Gibco, 50/ug/ml), EGF (10 ng/ml),
hidrocrotisona (400 ng/ml), toxina de colera (8,5 ng/ml) e insulina
(5 ng/ml). Las células se mantuvieron en una atmósfera
humidificada conteniendo 5% de CO_{2} y 95% de aire y transitaron
cada 3-4 días.
La inhibición de células -HaCat de absorción de
^{3}H-timidina (250 células en medio de cultivo
completo) se sembró en cubetas de cultivo de 96 pocillos y se
incubo a 37ºC con CO_{2} al 5% y aire al 95% durante 6 días. Se
adicionó inmediatamente, al inicio del ensayo, inhibidores, disuelto
a concentración de 10 x en etanol al 1%. Se adicionó
^{3}H-timidina (5 Ci/mmol, Amersham) a una
concentración de 1 uCi/pocillo y se señalaron con impulsos las
células durante las últimas 6 horas del periodo de crecimiento.
Luego se tripsinizaron las células durante 10 minutos a 37ºC bajo
una vigorosa agitación y se cosecharon sobre una placa de filtro
GF/C de 96 pocillos (Uni Filter, Packard) utilizando una
cosechadora de células Micro Mate 196 (Packard). Después de secado
a 40ºC bajo vacío durante 20-30 minutos se adicionó
20 ul de escintillador Micro Scint 0 (Packard) y se contó la
radioactividad vinculada a los filtros sobre un TOP COUNT (Packard).
Los resultados se exponen en la Tabla III.
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Los derivados 1,25-dihidroxi en
la tabla III no son de conformidad con el invento.
La actividad útil de compuestos de fórmula I como
agentes para el tratamiento de enfermedades de glándulas sebaceas
puede demostrarse mediante lo siguiente.
Se aislaron células sebáceas de glándulas
sebaceas humanas de adultos mediante una combinación de métodos
enzimáticos y mecánicos (Doran et al., Characterization Of
Human Sebaceous Cells In Vitro, J. Invest. Dermatol.
96:341-8 (1991)). Las células se cultivaron en
medio de Iscove conteniendo suero vacuno fetal al 10% y 4 ug/ml de
dexametasona sobre una capa de fibroblastos de ratón 3T3 de
desarrollo detenido. Se plaquearon las células en medio sin el
compuesto de prueba y luego se administró el compuesto de prueba en
medio fresco 24-48 horas después del plaqueado
inicial. A los cultivos se proporcionó medio fresco, conteniendo
el compuesto de prueba, cada 48 horas. El día del cosechado se
lavaron los cultivos con EDTA al 0,03% (ácido etilendiamin
tetroacético) en PBS (solución salina tamponada de fosfato), para
separar solo los fibroblastos 3T3, seguido de incubación en
tripsina al 0,05%/EDTA al 0,03%. Se suspendieron las células,
mezclaron vigorosamente para preparar una suspensión de células
simple y se contaron en un hemocitómetro.
Se formaron soluciones Stock de compuestos como
soluciones 10^{-2} M en etanol al 100% desgaseado y se guardó a
-20ºC en la oscuridad. Durante el uso experimental las soluciones,
que se han alicuotado, se llevaron a la temperatura ambiente y
utilizaron mediante dilución directamente en medio completo hasta la
concentración apropiada.
Se probaron los compuestos respecto a la
inhibición de proliferación de desarrollo de células sebáceas in
vitro a 10^{-6}, 10^{-7} y 10^{-8} M.
Los resultados se resumen en la Tabla IV como la
cantidad de compuesto necesaria para inhibir la proliferación de
células sebaceas en el 50% (DE_{50}) en nM en comparación con un
cultivo tratado con vehículo.
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Los derivados 1,25-dihidroxi en
la tabla IV no son de conformidad con el invento.
Cambios profundos en homeostasis de calcio
afectan fuertemente el desarrollo del peso de ratones.
Ratones (25-30 g de peso
corporal) recibieron administraciones subcutáneas diarias del
compuesto durante 4 días consecutivos. Se registro el peso corporal
justo antes y al final de un período de tratamiento de 5 días. La
"dosis mas alta tolerada" (HTD) es la dosis que resulta en
ganancia de peso cero durante este período de tratamiento. Los
resultados se exponen en la Tabla V.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Los derivados 1,25-dihidroxi en
la tabla V no son de conformidad con el invento.
Los compuestos de fórmula I cuando se aplican
tópicamente a la piel invierten la condición asociada con
fotolesión de modo que moderan y retardan la lesión de la piel
causada por exposición al sol. El daño causado por exposición al
sol puede incluir envejecimiento prematuro, elastosis y formación de
arrugas. Esta lesión es mas pronunciada en pacientes mayores. Con
la aplicación de los compuestos de fórmula I tópicamente a la piel
en una cantidad efectiva para invertir las condiciones asociadas
con fotolesión se produce la aceleración de restauración de la piel
para mejorar la piel con aspecto mas liso y joven. Los compuestos
de fórmula I deben aplicarse a la porción o área de la piel que está
afectada de fotolesión o en donde se desea el tratamiento. El
empleo de los compuestos de fórmula I, de conformidad con este
invento, puede proporcionar los efectos de
anti-envejecimiento y anti-arrugas,
así como favorecer la restauración de piel dañada por el sol.
Un compuesto de fórmula I, o una combinación de
compuestos de fórmula I puede aplicarse de conformidad con este
invento a piel humana en composiciones tópicas convencionales.
Estas composiciones pueden utilizarse para aplicar compuestos de
fórmula I a la piel del cuerpo, particularmente la cara, piernas,
brazos y manos. El método preferido de aplicación de compuestos de
fórmula I tópicamente para producir los mejores efectos debe
empezar cuando un paciente tiene entre 30 y 55 años, cuando empieza
a aparecer elastosis y se vuelve mas pronunciada. Luego esta
composición puede aplicarse de modo continuo a pacientes para
reducir los efectos y lesión asociados con la exposición al sol.
En general es preferible empezar el tratamiento cuando el paciente
alcanza aproximadamente 30 años de edad y continuar el tratamiento
durante su vida, con el fin de que se reduzcan los efectos de
elastosis e impedir cualquier progresión adicional de
fotolesión.
Los compuestos de fórmula I pueden administrase
de conformidad con este invento en cualquier preparación tópica
convencional apropiada, o sea, en combinación con cualquier
vehículo convencional apropiado útil para administración tópica.
Por consiguiente, los compuestos de fórmula I pueden administrarse
de conformidad con este invento en cualquier composición tópica
apropiada tal como crema, ungüento, jabón, solución, loción,
emulsión, champú, y similares. En general para resultados mas
eficaces estas composiciones tópicas contienen de alrededor de
0,0001% a alrededor de 0,1% en peso de la composición total de un
compuesto de fórmula I, siendo especialmente preferidas cantidades
entre alrededor de 0,0001% y alrededor de 0,1% en peso de la
composición. Si se desea pueden utilizarse concentraciones
superiores dependiendo de la naturaleza y extensión de
elastosis.
En la formulación de estas composiciones pueden
utilizarse cualquier base o vehículo darmatológicamente aceptable
atóxico convencional en donde sea estable un compuesto de fórmula
I. Las composiciones preferidas para uso en este invento son
composiciones convencionalmente cosméticas que pueden contener un
ingrediente cosméticamente activo que se administre tópicamente a la
piel humana para proporcionar un efecto cosmético. Entre los
materiales cosméticamente activos convencionales que pueden
utilizarse en esta composición se incluye: filtros solares,
mejoradores de penetración, humectantes, tensoactivos, emolientes,
colorantes, condicionadores, bacteriocidas, astringentes,
detergentes, y similares. Si se desea las composiciones tópicas de
este invento pueden contener agentes de filtro solar apropiados.
Puede utilizarse cualquier agente de filtro solar convencional en la
formulación de las formulaciones que contienen los compuestos de
fórmula I que pueden utilizarse de conformidad con este
invento.
Estas composiciones tópicas que contienen
compuestos de fórmula I pueden contener cualquiera de los
excipientes y aditivos convencionales comúnmente utilizados en la
preparación de composiciones tópicas. Entre los aditivos o
excipientes convencionales, que pueden utilizarse en la preparación
de estas composiciones cosméticas de conformidad con este invento
son los conservantes, espesantes, perfumes y similares. En
adición, pueden incorporarse a estas composiciones antioxidantes
convencionales, tal como hidroxianisoles butilados (BHA), ascorbil
palmitato, propil galato, ácido cítrico, hidroxi tolueno butilado
(BHT), etoxiquin, tocoferol y similares. Estas composiciones tópicas
pueden contener vehículos aceptables convencionales para
aplicaciones tópicas que se utilizan generalmente en estas
composiciones. Estas composiciones pueden contener agentes
espesantes, humectantes, agentes emulgentes y estabilizadores de la
viscosidad, tal como los generalmente utilizados. En adición estas
composiciones pueden contener agentes saborizantes, colorantes y
perfumes que son convencionales en la preparación de
composiciones
cosméticas.
cosméticas.
Las composiciones tópicas que contienen
compuestos de fórmula I pueden aplicarse a la piel y deben aplicarse
de preferencia una vez al día a la piel. Para la obtención de la
inversión de elastosis con el fin de impartir a la piel un aspecto
liso y mas joven, las composiciones tópicas deben aplicarse, de
preferencia, durante un período de 6 meses. Después de ello las
composiciones que contienen compuestos de fórmula I deben aplicarse
de modo continuo para mantener el efecto de piel mas joven y mas
lisa. Estas preparaciones pueden aplicarse de conformidad con la
necesidad del paciente según determine el facultativo que lleve el
caso. En cualquier caso el régimen particular para aplicación de
esta composición a un paciente dependerá típicamente de la edad,
peso y estado de la piel del
individuo.
individuo.
La actividad útil de los compuestos de fórmula I
para invertir la fotolesión en piel expuesta al sol puede
demostrarse como sigue:
Se estabularon ratones sin pelo (hembras, raza
HRS/J, Jackson Labs, de 5-7 semanas de edad al
inicio de los experimentos) en luz amarilla y se irradiaron tres
veces por semana con un banco de 8 lámparas solares Westinghouse
(FS72T12 HO, irradiación máxima a 313 nm) dispuesto unos 20 cm por
encima de los animales. Se midió la potencia de UVB sobre un
International Light Research Radiometer, modelo IL 1700, utilizando
un detector SEE240. Con esta disposición la potencia de la lámpara
fue aproximadamente 3,5 mW/cm^{2} y el tiempo de exposición para
0,06 J/cm^{2} fue de unos 17 segundos; 1 MED es aproximadamente
0,03 J/cm^{2}. La dosis precisa se suministró mediante un
Phototherapy Exposure Control IL 844A. Las dosis diarias fueron de
0,03 J/cm^{2} durante dos semanas, 0,06 J/cm^{2} durante dos
semanas y 0,08 J/cm^{2} posteriormente, hasta que se acumuló una
dosis total de 4 J/cm^{2}. Para efectuar la restauración de la
lesión dermal se interrumpió la irradiación de UVB y se dividieron
los animales en grupos de aproximadamente ocho y se trataron tres
veces por semana con varias concentraciones de análogos de vitamina
D disueltos en etanol. Toda la dosificación se realizó bajo luz
amarilla. Se incluyó un grupo de control tratado con solo acetona.
Se tomaron longitudinalmente tiras de dos cms de piel dorsal del
centro del área irradiada (y tratada). Se mancharon fibras de
elastina con fucsina aldehídica de Luna y colágeno por Van Gieson.
En ese modelo la restauración se define por la aparición de una
dermis normalizada que se extiende desde la epidermis hasta la capa
de elastina comprimida. La extensión de la restauración se refleja
por el ancho de esta zona. En estos estudios, puesto que el ancho
de la zona varia considerablemente, se mide mediante análisis de
imagen el área de la zona sobre una longitud estandard de sección
histológica. Se prueban los compuestos con tres dosis y se calcula
una DE_{50}
aproximada.
aproximada.
Los resultados se exponen en la Tabla VI.
*P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 vs
control de vehículo
El compuesto A es
1,25-dihidroxi-16,23E-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-colecalciferol
(no de conformidad con el invento).
Los ejemplos que siguen se proporcionan para
ampliar la descripción del invento y no deben entenderse como
limitativos en modo alguno.
A una solución magnéticamente agitada de 14,06 g
(25 mmol) de
[1R-[1Alfa(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-octahidro-4-hidroxi-beta,7a-dimetil-1H-inden-1-etanol,
en 75 ml de diclorometano bajo una atmósfera de argón se
adicionaron 47 ml (33,8 g, 331 mmol) de anhídrido acético, seguido
de 53,5 ml de piridina y 1,0 g de dimetilaminopiridina. Después de
3,5 horas se adicionaron 25 ml de metanol. Después de 15 minutos
se vertió la mezcla reaccional en 750 ml de ácido fosfórico 1 M y
se adicionaron 400 ml de diclorometano. Se separaron las fases y
se extrajo la fase acuosa 2 veces mas con 500 ml de diclorometano.
Se lavaron las fases orgánicas con 250 ml de agua seguido de 750 ml
de bicarbonato sódico 1 M para dar, después de secado con
Na_{2}SO_{4}, filtración y evaporación, 19,85 g (rendimiento
cuantitativo) de acetato de
[1R[1Alfa(S*),3aAl-fa,4Beta,7aBeta]]-4-(acetiloxi)-octahidro-Beta,7a-dimetil-1H-inden-1-etanol
en forma de un sólido blanco.
A una solución agitada magnéticamente de 20,81 g
(20,6 mmol) de acetato de
[1R-[1Alfa(S*),3aAlfa,4Beta,7a
Beta]]-4-(acetiloxi)-octahidro-beta,7a-dimetil-1H-inden-1-etanol, en 200 ml de metanol bajo una atmósfera de argón se adicionaron 8,18 g (77,2 mmol) de carbonato sódico. Se agitó la suspensión durante 16 horas y luego se separó la mayor parte del metanol bajo presión reducida sobre un evaporador giratorio. Se distribuyó el concentrado entre 300 ml de agua y 250 ml de éter. Se extrajo la fase acuosa 3 veces mas con 250 ml de éter y se lavaron las fases etéreas con 300 ml de agua, se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó, lo que dio 18,02 g de producto bruto. La cromatografía sobre LC de presión media (Waters 500) dio, mediante elución con hexano-acetato de etilo 2:1, 1,42 g de diacetato no hidrolizado, 16,08 g (rendimiento del 90%) de [1R-[1Alfa(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-4-(acetiloxi)-octahidro-beta,7a-dimetil-1H-inden-1-etanol, en forma de un aceite incoloro.
Beta]]-4-(acetiloxi)-octahidro-beta,7a-dimetil-1H-inden-1-etanol, en 200 ml de metanol bajo una atmósfera de argón se adicionaron 8,18 g (77,2 mmol) de carbonato sódico. Se agitó la suspensión durante 16 horas y luego se separó la mayor parte del metanol bajo presión reducida sobre un evaporador giratorio. Se distribuyó el concentrado entre 300 ml de agua y 250 ml de éter. Se extrajo la fase acuosa 3 veces mas con 250 ml de éter y se lavaron las fases etéreas con 300 ml de agua, se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó, lo que dio 18,02 g de producto bruto. La cromatografía sobre LC de presión media (Waters 500) dio, mediante elución con hexano-acetato de etilo 2:1, 1,42 g de diacetato no hidrolizado, 16,08 g (rendimiento del 90%) de [1R-[1Alfa(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-4-(acetiloxi)-octahidro-beta,7a-dimetil-1H-inden-1-etanol, en forma de un aceite incoloro.
Un matraz de tres cuellos y dos litros, equipado
con agitación magnética, termómetro y embudo de goteo y mantenido
bajo una atmósfera de argón se cargó con 6,62 ml (75,8 mmol) de
cloruro de oxalilo y 50 ml de diclorometano. Se enfrió matraz
hasta -65ºC en un baño de hielo seco:acetona; luego se adicionó a
gotas a una velocidad rápida, durante 20 minutos y manteniendo la
temperatura entre -62º y 63º, una solución de 10,7 ml (151 mmol) de
sulfóxido de dimetilo en 125 ml de diclorometano. Después de la
adición se agitó la reacción durante 5 minutos mas; luego se
adicionó a gotas, durante 20 minutos y manteniendo la temperatura a
-65º, una solución de 16,0 g de
[1R-[1Alfa(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-4-(acetiloxi)-octahidro-Beta,7a-dimetil-1H-inden-1-etanol
en 200 ml de dicloroemtano (secado sobre tamices moleculares
4\ring{A}) Durante la adición se formó un precipitado. Después
de 20 minutos mas a -70º, se adicionó durante 15 minutos una
solución de 42,1 ml (302 mmol) de trietilamina en 75 ml de
diclorometano seco. Se agitó la suspensión durante 45 minutos, se
separó el baño refrigerante, y se dejó que la mezcla reaccional
alcanzara la temperatura ambiente (1 hora y media). La mayor parte
del diclorometano se separó sobre un evaporador giratorio bajo
presión reducida (baño de temperatura ambiente) y se equilibró el
residuo con 500 ml de agua y 750 ml de éter. Se extrajo la fase
acuosa 3 veces con 750 ml de éter y se lavaron las fases etéreas en
contracorriente con 500 ml de agua para dar, después de secado con
Na_{2}SO_{4}, filtración, y evaporación bajo presión reducida,
15,36 g de producto bruto. Cromatografía de presión media sobre
gel de sílice, utilizando hexano-éter 4:1 como el eluente
(fracciones recogidas bajo una atmósfera de nitrógeno) dio 14,95 g
(rendimiento del 94%) de
[1R-[1Alfa-(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-4-(acetiloxi)-octahidro-Alfa-7a-dimetil-1H-inden-1-acetaldehido
como un aceite incoloro.
A una solución agitada magnéticamente de 2,0 g
(7,95 mmol) de
[1R-[1Alfa-(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-4-(aceti-
loxi)-octahidro-Alfa-7a-dimetil-1H-inden-1-acetaldehido en 10 ml de éter bajo una atmósfera de argón se adicionaron 100 mg de paladio sobre carbón al 10%. Después de 20 minutos a temperatura ambiente se filtró la suspensión. Se evaporó el filtrado bajo presión reducida. Al residuo se adicionó 1,40 g (9,5 mmol) de benzalacetona y 200 mg de paladio al 10% sobre carbón. Se desgaseo la suspensión evacuando el matraz y rellenándolo con argón. Luego se sumergió parcialmente el matraz en un baño de aceite de 230ºC durante 30 minutos. Después de enfriamiento el contenido del matraz se sometió a cromatografía instantánea sobre 100 g de gel de sílice para separar la benzalacetona mas polar y su producto de reducción (benzilacetona) de la mezcla de equilibrio de olefinas de indeno \Delta^{17E}, \Delta^{17Z}, \Delta^{16}, y \Delta^{20}, que están presentes en una relación de 65:4:27:4, respectivamente. Cromatografía de presión media sobre columnas de gel de sílice impregnadas con nitrato de plata (dos pasadas) separó el producto deseado (\Delta^{17E}) de las olefinas menos polares (\Delta^{17Z}, \Delta^{16} y \Delta^{20} en orden de elución). La purificación pudo seguirse mediante placas de tlc que se rociaron con una solución al 10% de nitrato de plata en acetonitrilo y aire secado antes del uso. De este modo se obtuvo un total de 976 mg (rendimiento del 55%) de acetato de [3aR-(1E,3aAlfa,4Beta,7aBeta)]-1-etilidenoctahidro-7a-metil-1H-inden-4-ol en forma de un aceite incoloro. La mezcla olefínica mas polar (420 mg, rendimiento del 24%) puede reequilibrarse convenientemente con la adición a una reacción de fragmentación aldehídica subsiguiente.
loxi)-octahidro-Alfa-7a-dimetil-1H-inden-1-acetaldehido en 10 ml de éter bajo una atmósfera de argón se adicionaron 100 mg de paladio sobre carbón al 10%. Después de 20 minutos a temperatura ambiente se filtró la suspensión. Se evaporó el filtrado bajo presión reducida. Al residuo se adicionó 1,40 g (9,5 mmol) de benzalacetona y 200 mg de paladio al 10% sobre carbón. Se desgaseo la suspensión evacuando el matraz y rellenándolo con argón. Luego se sumergió parcialmente el matraz en un baño de aceite de 230ºC durante 30 minutos. Después de enfriamiento el contenido del matraz se sometió a cromatografía instantánea sobre 100 g de gel de sílice para separar la benzalacetona mas polar y su producto de reducción (benzilacetona) de la mezcla de equilibrio de olefinas de indeno \Delta^{17E}, \Delta^{17Z}, \Delta^{16}, y \Delta^{20}, que están presentes en una relación de 65:4:27:4, respectivamente. Cromatografía de presión media sobre columnas de gel de sílice impregnadas con nitrato de plata (dos pasadas) separó el producto deseado (\Delta^{17E}) de las olefinas menos polares (\Delta^{17Z}, \Delta^{16} y \Delta^{20} en orden de elución). La purificación pudo seguirse mediante placas de tlc que se rociaron con una solución al 10% de nitrato de plata en acetonitrilo y aire secado antes del uso. De este modo se obtuvo un total de 976 mg (rendimiento del 55%) de acetato de [3aR-(1E,3aAlfa,4Beta,7aBeta)]-1-etilidenoctahidro-7a-metil-1H-inden-4-ol en forma de un aceite incoloro. La mezcla olefínica mas polar (420 mg, rendimiento del 24%) puede reequilibrarse convenientemente con la adición a una reacción de fragmentación aldehídica subsiguiente.
Un matraz de tres cuellos y dos litros secado con
llama y equipado con agitador, embudo de goteo, termómetro, y
admisión de argón se cargó con 22,3 g (100 mmol) de acetato de
[3aR-(1E,3aAlfa,4Beta,7aBeta)]-1-etilidenoctahidro-7a-metil-1H-inden-4-ol
y 300 ml de diclorometano seco. Se enfrió la solución a -20ºC con
un baño de acetona mediante la adición de hielo seco según sea
necesario. En este punto se adicionaron incrementalmente los
reactivos. Inicialmente se adicionó a gotas rápidamente, durante 5
minutos 200 ml (200 mmol) de cloruro de dimetil aluminio 1M en
hexano, seguido, después de 10 minutos, de lenta adición a gotas
durante 1 hora de 50 ml de una solución de 55,5 g (500 mmol) de
3-trimetil-sililpropinal diluido
hasta 260 ml con diclorometano seco. La adición de reactivos se
repitió de este modo 4 veces mas utilizando 100 ml (100 mmol) de
cloruro de dimetilamonio 1M en hexano adicionado rápidamente
seguido de 50 ml de una solución de
3-trimetilsilil-propinal adicionado
lentamente durante 1 hora. Después de la adición final la TLC
(CH_{2}Cl_{2}-Et_{2}O, 98:2) confirmó la
ausencia de olefina de partida, y se vertió la mezcla reaccional
con vigorosa agitación en 2 litros de solución de sal Rochelle al
20% a la que se adicionó unos 500 g de hielo (la temperatura final
fue de 20º). Se alcalinizó la mezcla con la adición de 25 ml de
hidróxido sódico 4N y se adicionó 1 litro de éter. Se separaron
las fases y se lavó la fase etérea con 500 ml de salmuera. Se
extrajeron las fases acuosas a contracorriente dos veces con 1,5
litro de éter para dar, después de secado con Na_{2}SO_{4},
filtración y evaporación bajo presión reducida, 78 g de un aceite.
La cromatografía de presión media sobre gel de sílice se complicó
por la dificultad de separar los productos de un
sub-producto,
4-trimetilsilil-3-butin-2-ol.
A continuación se tomó ventaja de la volatilidad del
4-trimetilsilil-3-butin-2-ol
para separarlo de las fracciones cromatográficas. Así pues se
obtuvieron 25,54 de isómero mayor puro mas polar, 2,07 g de una
mezcla 87:13 (estimado mediante RMN) de isómeros mayores y menores,
y 0,53 g de isómero menor puro. El rendimiento total de productos
fue del 79% (rendimiento del 77% del isómero
mayor).
mayor).
Una muestra analítica del isómero mayor, acetato
de
[3aS-[3(1R*,2S*,3aBeta,7beta,7aAlfa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[2-hidroxi-1-metil-4-(trimetilsilil)-3-butinil]-3a-metil-1H-inden-7-ol,
obtenido en forma de un sólido blanco a partir de acetato de
etilo-hexano, punto de fusión
66-67º.
Una muestra analítica del isómero menor, acetato
de
[3aS-[3(1R*,2R*,3aBeta,7beta,7aAlfa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[2-hidroxi-1-
metil-4-(trimetilsilil)-3-butinil]-3a-metil-1H-inden-7-ol,
obtenido en forma de un aceite incolo-
ro.
ro.
A una solución agitada magnéticamente de 24,2 g
(69 mmol) de acetato de
[3aS-[3(1R*,2S*,3aBeta,7beta,7aAlfa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[2-hidroxi-1-metil-4-(trimetilsilil)-3-butinil]-3a-metil-1H-inden-7-ol
en 300 ml de diclorometano seco y 23,3 ml de piridina seca se
adicionaron 25,0 g (145 mmol) de fenil
cloro-tionoformato. Se generó un color ámbar
amarillo. Se agitó la mezcla reaccional durante 3 horas y luego se
adicionaron 10 ml de metanol. Después de 15 minutos se transfirió
la mezcla a un embudo separador conteniendo 1 litro de éter. Se
lavó la fase etérea sucesivamente con 2 x 250 ml de ácido fosfórico
1 M, 500 ml de agua, y 500 ml de bicarbonato sódico 1 M. Se
extrajeron las fases acuosas en contracorriente con 500 ml de éter.
Se secaron las fases etéreas combinadas con Na_{2}SO_{4}, se
filtró y se evaporó bajo presión reducida, lo que dio 47 g de
producto bruto. La cromatografía instantánea sobre 500 g de gel de
sílice dio 33,4 g (rendimiento cuantitativo) del éster de
tionocarbonato.
A un matraz de tres cuellos y dos litros,
equipado con agitador, embudo de goteo, termómetro y admisión de
argón cargado con 33,4 g (69 mmol) del éster de tionocarbonato
anterior en 500 ml de tolueno se adicionó rápidamente a gotas,
durante 5 minutos 135 ml (500 mmol) de hidruro de
tri-n-butilestaño, seguido de 276
ml (276 mmol) de trietilborano durante 15 minutos. Después de 1,3
hr, se adicionaron 15 ml mas (56 mmol) de hidruro de
tri-n-butilestaño. Después de 50
minutos se vertió la mezcla reaccional en 500 ml de bicarbonato
sódico al 10% y se adicionaron 500 ml de éter. Se extrajo la fase
acuosa dos veces con 500 ml de éter. Se lavaron las fases etéreas
a contracorriente tres veces con 250 ml de agua; y después de
secado con Na_{2}SO_{4}, filtración y evaporación bajo presión
reducida, dio el producto bruto que se cromatografió de modo
instantáneo sobre 500 g de gel de sílice. El producto conteniendo
fracciones en solución de diclorometano se lavó con carbonato
sódico al 10% para separar el fenol formado en la reacción. La
cromatografía de presión media requirió varias pasadas para separar
los productos y ofreció 16,13 g (70%) de acetato de
[3aS-[3(1S*,3aBeta,7beta,7aAlfa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[1-metil-4-(trimetilsilil)-3-butinil]-3a-metil-1H-inden-7-ol
puro en forma de un aceite incoloro.
A una solución de 5,01 g (15 mmol) de acetato de
[3aS-[(1S*,3aBeta,7beta,7aAlfa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[1-metil-4-(trimetilsilil)-3-butinil]-3a-metil-1H-inden-7-ol
en 50 ml de etanol se adicionaron 30 ml (60 mmol) de hidróxido
sódico 2N y se calentó a 80ºC durante cuatro horas. Luego se
diluyó con 500 ml de agua-salmuera (1:1), y se
extrajo a fondo con acetato de etilo. Se lavaron los extractos
combinados con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se
evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo
(4:1) para dar 3,14 g (95,4%) del compuesto del epígrafe.
A una solución de 3,14 g (14,4 mmol) de
[3aS-[1(S*),3aBeta,7Beta,7aAlfa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[1-metil-3-butinil]-3a-metil-1H-inden-7-ol
en 30 ml de cloruro de metileno anhidro se adicionaron 4,22 ml (28,8
mmol) de 1-(trimetilsilil)imidazol, y se agitó la mezcla
reaccional a temperatura ambiente durante 1 hora. Luego se enfrió
con la adición de hielo triturado y agitación durante 15 minutos.
Después de dilución con agua y salmuera se extrajo a fondo con
hexano. Se lavaron los extractos combinados con agua y salmuera,
se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El
producto bruto se purificó mediante cromatografía FLASH con
hexano-cloruro de metileno (40:1), para dar 3,55 g
(85%) del compuesto del epígrafe.
A una solución de 612 mg (2,10 mmol) de
[3aS-[1(S*),3aBeta,7Beta,7aAlfa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[1-metil-3-butinil]-3a-metil-7-[(trimetilsilil)oxi]-1H-indeno
en 15 ml de éter anhidro a -78ºC se adicionó 1,6 ml (2,52 mmol) de
n-butil-litio 1,6 M en hexano bajo
atmósfera de argón. Después de agitación durante 1 hora a -78ºC se
adicinó 1,5 ml (21 mmol) de acetona anhidra y se prosiguió la
agitación durante 1 hora. Se enfrió la reacción con
agua-salmuera (1:1) y se extrajo a fondo con
acetato de etilo. Se lavaron los extractos combinados con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
La separación mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (9:1) regeneró 166 mg (27%)
de material de partida, y dio 521 mg (71%) del compuesto del
epígrafe.
A una solución agitada de 521 mg (1,50 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,4Beta,7aBeta)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-hidroxi-3-hexinil)-7a-metil-4-(trimetilsilil)oxi]-3H-indeno
en 10 ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 3 ml (3 mmol)
de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M. Se agitó la mezcla a
temperatura ambiente durante 1 hora y media, luego se diluyó con
agua y salmuera y se extrajo a fondo con acetato de etilo. Se
lavaron los extractos combinados con agua y salmuera, se secó sobre
sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El producto bruto
resultó cristalino. Se recristalizó en hexano, lo que dio 360 mg
(87%) del compuesto del epígrafe, punto de fusión
115-116ºC (en hexano).
A una solución de 240 mg (0,868 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,4Beta,7aBeta)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-hidroxi-3-hexinil)-7a-metil-3H-inden-4-ol
en 7 ml de cloruro de metileno anhidro se adicionaron 980 mg (2,6
mmol) de dicromato de piridinio. Se agitó esta mezcla a
temperatura ambiente durante 2 horas, luego se adicionaron 500 mg
mas (1,33 mmol) de dicromato de piridinio y se prosiguió la
agitación durante 2,25 horas. Después de la adición de 30 ml de
éter y agitación durante 15 minutos se filtró la mezcla a través de
Celite, y se lavó la almohadilla de Celite con 3 x 50 ml de acetato
de etilo. Se lavaron los filtrados combinados con 20 ml de HCl 1N,
agua, 40 ml de bicarbonato potásico 2N y una mezcla de agua y
salmuera 1:1. Se reextrajeron las fases acuosas con 2 x 100 ml de
acetato de etilo. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre
sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El producto bruto se
purificó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo 2:1, lo que dio 214 mg
(89%) del compuesto del epígrafe.
A una solución de 214 mg (0,78 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-hidroxi-3-hexinil)-7a-metil-4H-inden-
4-ona en 7 ml de cloruro de metileno anhidro se
adicionaron 750 mg (4,7 mmol) de
1-(trimetilsilil)-imidazol. Se agitó la mezcla
durante 17 horas a temperatura ambiente en una atmósfera de argón y
luego se enfrió con 5 ml de agua y se agitó durante 20 minutos.
Luego se extrajo con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se combinaron
los extractos y se lavaron con 5 x 50 ml de mezcla de agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
El producto bruto se purificó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (12:1), lo que dio 255 mg
(94%) del compuesto del epígrafe.
A una solución agitada de 730 mg (1,25 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[3,5-bis[[1,1-dimetiletil)dimetil-silil]oxi]-2-metilenciclohexiliden]etil]difenilfosfina,
un compuesto conocido, en 7 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC
se adicionó 0,78 ml (1,25 mmol) de
n-butil-litio 1,6M en hexano a gotas
en una atmósfera de argón. Después de agitación durante 5 minutos,
a la solución color rojo así obtenida se adicionó a gotas una
solución de 255 mg (0,736 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-[(tri-metilsilil)oxi]-3-hexinil)-7a-metil-4H-inden-4-ona
en 4,5 ml de tetrahidrofurano anhidro durante un período de 10
minutos, y se agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante 90 minutos.
Luego se enfrió la reacción con la adición de 10 ml de una mezcla
1:1 de sal de Rochelle 2N y bicarbonato potásico 2N y se dejó
calentar hasta temperatura ambiente. Se adicionaron 30 ml mas de
sal Rochelle/bicarbonato potásico y se extrajo la mezcla reaccional
con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se lavaron los extractos tres
veces con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta
sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía
FLASH con hexano-acetato de etilo 40:1, lo que dio
467 mg (89%) del intermedio trisililado. A la solución del
intermedio trisililado (467 mg) en 4,5 ml de tetrahidrofurano
anhidro se adicionaron 7 ml (7 mmol) de un fluoruro de
tetrabutilamonio 1 M en tetrahidrofurano, y se agitó esta mezcla a
temperatura ambiente en atmósfera de argón durante 17 horas. Luego
se enfrió la reacción con la adición de 5 ml de agua y agitación
durante 20 minutos. Luego se separó el
tetrahi-drofurano en vacío, se diluyó el residuo con
agua y se extrajo con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se lavaron
los extractos con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y
se evaporó hasta sequedad. Se purificó el producto bruto mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo 1:5,
lo que dio 250 mg (83%) del compuesto del epígrafe cristalino. Se
recristalizó en 1,5 ml de tetrahidrofurano con la adición de 7 ml
de metil formato; punto de fusión 148-149ºC.
Una mezcla de 1,02 g (3,6 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,4Beta,7aBeta)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-hidroxi-3-hexinil)-7a-metil-3H-inden-4-ol,
13,5 ml de acetato de etilo, 34 ml de hexano, 1,3 ml de etanol
absoluto, 0,067 ml de quinolina y 225 mg de catalizador Lindlar se
hidrogenó a temperatura ambiente durante 3 horas y media. Se filtró
la mezcla reaccional a través de una almohadilla de Celite, que se
lavó subsiguientemente con acetato de etilo. Se lavaron los
filtrados combinados con HCl 1N, agua, bicarbonato potásico 2N, agua
y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta
sequedad. El producto bruto se purificó mediante HPLC preparativa
utilizando gel de sílice con hexano-acetato de etilo
3:2. Dio 954 mg (92,6%) del compuesto del epígrafe, punto de
fusión 88-90ºC (en
CH_{2}Cl_{2}-hexano).
A una solución de 601 mg (2,16 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,4Beta,7aBeta)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-hidroxi-3Z-hexenil)-7a-metil-3H-inden-4-ol
en 35 ml de cloruro de metileno anhidro se adicionaron 120 mg de
tetrafluoroborato de
1,4-bis(difenil-fosfeno)butano-1,5-ciclooctadieno
rodio y una gota de mercurio y luego se hidrogenó utilizando un
aparato Parr a temperatura ambiente y 50 libras por pulgada
cuadrada de presión durante 1,25 horas. La TLC
(hexano-acetato de etilo, 3:2) mostró que se
completó la reacción. Se filtró la mezcla reaccional a través de
una almohadilla de Celite, que luego se lavó con acetato de etilo.
Se evaporaron los filtrados combinados hasta sequedad. La
purificación se realizó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo 3:2, y luego mediante HPLC
preparativa utilizando una columna de gel de sílice con
hexano-acetato de etilo 3:2, 100 ml/min.
Proporcionó 550 mg (91%) de compuesto del epígrafe cristalino.
A una solución de 270 mg (0,963 mmol) de
[(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-hidroxihexanil)-7a-metil-3H-inden-4-ol
en 7 ml de cloruro de metileno anhidro se adicionó 1,58 g (4,2
mmol) de dicromato de piridinio. Se agitó la mezcla reaccional a
temperatura ambiente durante 4,75 horas. Luego se diluyó con 25 ml
de éter, se agitó durante 15 minutos mas y se filtró a través de
una almohadilla de Celite. Se lavó la almohadilla con 3 x 50 ml de
éter. Se lavaron los filtrados combinados con 40 ml de bicarbonato
potásico 2N y mezcla de agua-salmuera. Se lavaron
las fases acuosas con 2 x 90 ml de acetato de etilo. Se secaron
las fases orgánicas combinadas sobre sulfato sódico y se evaporó
hasta sequedad. Se purificó el producto bruto mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo
(2:1), lo que dio 254 mg (95%) del compuesto del epígrafe.
A una solución de 254 mg (0,912 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-hidroxihexanil)-7a-metil-4H-inden-4-ona
en 6 ml de cloruro de metileno anhidro se adicionó 0,8 ml (5,45
mmol) de
1-(tri-metilsilil)-imidazol. Se
agitó la mezcla reaccional a temperatura ambiente bajo argón
durante 4,25 horas. Se enfrió luego con la adición de 5 ml de agua
y agitación durante 20 minutos, y se extrajo con 3 x 90 ml de
acetato de etilo. Se lavaron los extractos con agua y salmuera, se
secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El producto
bruto se purificó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (12:1), lo que dio 308 mg
(96%) del compuesto del epígrafe.
A una solución agitada de 850 mg (1,46 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[3,5-bis[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]-oxi]-2-metilenciclohexiliden]-etil]difenilfosfina
en 9 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,91 ml
(1,46 mmol) de n-butil-litio 1,6M en
hexano a gotas en una atmósfera de argón. Después de agitación
durante 5 minutos se adicionó a gotas a la solución de color rojo
así obtenida una solución de 308 mg (0,878 mmol) de
[(S*),3aR(3aAlfa,7aBeta)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-1-(1,5-dimetil-5-[(trimetilsilil)oxi]-hexanil)-7a-metil-4H-inden-4-ona
en 4,5 ml de tetrahidrofurano anhidro durante un periodo de 10
minutos. Se agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante 2 horas y
luego se enfrió con la adición de 10 ml de mezcla 1:1 de sal de
Rochelle 2N y bicarbonato potásico 2N y mediante calentamiento
hasta temperatura ambiente. Después de la adición de 30 ml de sal
de Rochelle/bicarbonato potásico se extrajo la mezcla con 3 x 100 ml
de acetato de etilo. Se lavaron los extractos combinados con
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
El residuo se purificó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo 50:1, lo que dio 541 mg de
intermedio
sililado.
sililado.
A la solución de este intermedio en 5 ml de
tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 5,5 ml (5,5 mmol) de
fluoruro de tetrabutil amonio 1 M en tetrahidrofurano y se agitó la
solución a temperatura ambiente bajo argón durante 23 horas. Se
enfrió la reacción con 5 ml de agua y agitación durante 20 minutos.
Después de la adición de 25 ml de salmuera se extrajo con 3 x 100
ml de acetato de etilo. Se lavaron los extractos combinados con
agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta
sequedad. Se purificó primero el producto bruto mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo
(1:9), y luego mediante HPLC (columna de gel de sílice) con acetato
de etilo, lo que dio 296 mg (81%) del compuesto del epígrafe
cristalino, punto de fusión 124-125ºC (metil
formato).
En un matraz de forma acorazonada y 100 ml,
equipado con una admisión de gas se dispuso una solución de 1 g
(3,44 mmol) de
[3aS-[1(S*),3aBeta,7Beta,7aAlfa]-3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3-[1-metil-3-butinil]-3a-metil-7-[(trimetilsilil)oxi]-1H-indeno
en 25 ml de tetrahidrofurano anhidro. Después de enfriamiento a
-78ºC se adicionó a gotas, durante un periodo de 10 minutos, 3,2 ml
(5,16 mmol) de n-butil-litio 1,6 M
en hexano, y se agitó la mezcla resultante durante 30 minutos.
Después de adicionar 10 ml de tetrahidrofurano anhidro se insufló
en la mezcla, durante un minuto, una corriente de
hexafluoroacetona. Después de 1 hora y 15 minutos de agitación TLC
mostró que la reacción se había completado en alrededor del 70%.
En este punto se enfrió la reacción con la adición de 25 ml de
salmuera saturada, seguido de calentamiento hasta temperatura
ambiente. Luego se extrajo con hexano. Se lavaron los extractos
orgánicos combinados con salmuera, se secó sobre suflato sódico y
se evaporó hasta sequedad. La purificación del producto bruto se
realizó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (10:1). Esto dio 270 mg
(27%) de material de partida y 1,15 g (73%) del compuesto del
epígrafe.
En el segundo experimento se adicionó a gotas,
durante 10 minutos, a la solución del acetileno de partida 1,38 g
(4,75 mmol) en 20 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC en
atmósfera de argón 4,5 ml (7,2 mmol) de
n-butil-litio 1,6M en hexano.
Después de agitación durante 30 minutos se insufló
hexa-fluoroacetona a una velocidad lenta durante 2
minutos, se agitó durante 30 minutos, se insufló durante un minuto
mas, se agitó durante 60 minutos, y por último se insufló durante
30 segundos y se agitó durante 30 minutos. En este momento la TLC
mostró que se había completado la reacción. En este experimento la
reacción se enfrió con sal de Rochelle 2N y la purificación mediante
cromatografía FLASH se produjo con hexano-acetato de
etilo (14:1). Dio 1,97 g (91%) del compuesto del epígrafe.
A una solución de 1,17 g (2,56 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-
(trifluorometil)-3-hexi-nil]-4-[(trimetilsilil)oxi]-3H-indeno
en 20 ml de tetrahi-drofurano anhidro se
adicionaron 7,12 ml (7,12 mmol) de fluoruro de tetrabutil amonio 1M
en tetrahidrofurano y se agitó en atmósfera de argón durante 3
horas y media. Luego se diluyó la mezcla reaccional con 250 ml de
mezcla de agua-salmuera 1:1, y se extrajo a fondo
con acetato de etilo. Se lavaron los extractos con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
La purificación del producto bruto se llevó a cabo mediante
cromatografía FLASH, lo que dio 946 mg (96%) del compuesto del
epígrafe; punto de fusión 75-76ºC después de
recristalización en hexano.
A una solución de 284 mg (0,74 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3-hexinil]-3H-inden-4-ol
en 10 ml de cloruro de metileno anhidro se adicionó en porciones
2,15 g (5 mmol) de dicromato de piridinio y se agitó la mezcla
reaccional a temperatura ambiente durante 5 horas. Después de la
adición de 50 ml de éter y agitación durante 15 minutos se filtró la
mezcla reaccional a través de almohadilla de Celite, que se lavó
subsiguientemente con 3 x 50 ml de acetato de etilo. Se lavaron
los filtrados combinados con HCl 2N, agua, bicarbonato potásico 2N,
agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, y se evaporó hasta
sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía
FLASH con hexano-acetato de etilo (3:1), para dar
259 mg (91%) del compuesto cristalino del epígrafe.
A una solución agitada de 987 mg (1,69 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[3,5-bis[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-metilenciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 10 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 1,05 ml
(1,69 mmol) de n-butil-litio 1,6M en
hexano a gotas en una atmósfera de argón. Después de agitación
durante 15 minutos a la solución de color rojo así obtenida se
adicionó a gotas una solución de 259 mg (0,677 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3-hexinil]-4H-inden-4-ona
en 5 ml de tetra-hidrofurano anhidro y la mezcla
reaccional así obtenida se agitó a -78ºC durante 1 hora. Luego se
enfrió la reacción mediante adición de solución de sal Rochelle 2N
y se dejó calentar hasta temperatura ambiente. Después de la
adición de salmuera saturada se extrajo a fondo con acetato de
etilo. Se lavaron los extractos combinados con agua y salmuera, se
secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El residuo
se purificó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (9:1), para dar 370 mg de
disilil éter intermedio.
A la solución de este intermedio (370 mg) en 10
ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 3 ml (3 mmol) de un
floruro de tetrabutilamonio 1M en tetrahidrofurano, y se agitó la
mezcla reaccional así obtenida a temperatura ambiente durante la
noche. Luego se diluyó con agua y salmuera y se extrajo a fondo con
4 x 50 ml de acetato de etilo. Se lavaron los extractos combinados
con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, y se evaporó
hasta sequedad. El producto bruto se purificó mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo
(1:4), lo que dio 249 mg (71%) del compuesto del epígrafe como una
espuma.
\newpage
A una suspensión agitada bajo argón de 165 mg
(4,34 mmol) de hidruro de litio aluminio en 15 ml de
tetrahidrofurano anhidro, enfriada en un baño de hielo, se
adicionaron, primero, 235 mg (4,34 mmol) de metóxido sódico sólido,
y luego a gotas 334 mg (0,87 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3-hexenil]-3H-inden-4-ol
disuelto en 10 ml de tetrahidrofurano anhidro. La mezcla
reaccional así obtenida se calentó bajo reflujo (80ºC) durante 2
horas y media, cuando la TLC indicó que la reacción se había
completado. Se enfrió la mezcla en un baño de hielo y luego se
enfrió cuidadosamente con 1 ml de agua y 1 ml de hidróxido sódico
2N. Después de la adición de 20ml de éter se agitó 0,5 hora, se
adicionaron 2,2 g de sulfato de magnesio, se agitó durante media
hora, se filtró y evaporó hasta sequedad. Dio 335 mg (100%) de
compuesto cristalino del epígrafe (TLC puro).
A una solución de 256 mg (0,66 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-
(trifluorometil)-3E-hexenil]-3H-inden-4-ol
en 10 ml de cloruro de metileno anhidro se adicionó en porciones de
1,12 g (3 mmol) de dicromato de piridinio, y se agitó la mezcla
reaccional a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de la
adición de 25 ml de éter y agitación durante 15 minutos se filtró la
mezcla reaccional a través de una almohadilla de Celite, que se
lavó subsiguientemente con 3 x 20 ml de acetato de etilo. Se
lavaron los filtrados combinados con bicarbonato potásico 2N, agua
y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta
sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía
FLASH con cloruro de metileno-acetato de etilo (9:1)
para dar 230 mg (90%) del compuesto del epígrafe cristalino.
A una solución agitada de 268 mg (0,697 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3E-hexenil]-4H-inden-4-ona
en 8 ml de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se
adicionó 0,92 ml (6,27 mmol) de
1-(trimetil-silil)-imidazol, y se
agitó la mezcla reaccional a temperatura ambiente durante la noche.
Luego se diluyó la mezcla reaccional con agua y se extrajo a fondo
con hexano. Se lavaron los extractos combinados con agua y
salmuera hasta neutralidad, se secó sobre sulfato sódico y se
evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo
9:1, lo que dio 310 mg (97%) del compuesto del epígrafe.
A una solución agitada de 725 mg (1,24 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[3,5-bis[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-metilen-ciclohexilien]etil]difenilfosfina
en 15 ml de tetrahidrufurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,78 ml
(1,24 mmol) de n-butil-litio 1,6M en
hexano a gotas en una atmósfera de argón. Después de agitación
durante 5 minutos a la solución de color rojo así obtenida se
adicionó a gotas una solución de 307 mg (0,672 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-
trifluoro-5-(trimetilsilil)oxi-1-metil-5-(trifluoro-metil)-3E-hexenil]-4H-inden-
4-ona en 9 ml de tetrahidrofurano anhidro. Se agitó
la mezcla reaccional a -78ºC durante 2 horas y media y luego se
enfrió con agua y se dejó calentar hasta temperatura ambiente.
Después de dilución adicional con agua se extrajo con 3 x 30 ml de
acetato de etilo. Se lavaron los extractos combinados con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
El intermedio de disilil éter así obtenido se purificó mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo 9:1,
lo que dio 449 mg de intermedio puro (el grupo de
25-sililoxi se hidrolizó durante la reacción).
A la solución de este intermedio (449 mg) en 10
ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 3,6 ml (3,6 mmol) de
un fluoruro de tetrabutil amonio 1M en tetrahidrofurano y la mezcla
reaccional así obtenida se agitó a temperatura ambiente durante la
noche. Se enfrió la reacción con hielo, se agitó 15 minutos,
diluyó con agua y salmuera, y se extrajo con acetato de etilo. Se
lavaron los extractos combinados con agua, se secó sobre sulfato
sódico y se evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó
mediante cromatografía FLASH con hexano-acetato de
etilo (1:2), lo que dio el compuesto del epígrafe en forma de una
espuma blanca, 291 mg (83%).
Una mezcla de 1,62 g (4,21 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3-hexinil]-3H-inden-4-ol,
16 ml de acetato de etilo, 40 ml de hexano, 1,6 ml de etanol
absoluto, 0,080 ml de quinolina y 320 mg de catalizador Lindlar se
agitó bajo atmósfera de hidrógeno durante 70 minutos a temperatura
ambiente. Luego se filtró sobre Celite y se lavó la torta de
filtración con 3 x 60 ml de acetato de etilo. Se lavó el filtrado
con 25 ml de HCl 1N y 4 veces con una mezcla de agua y salmuera.
Se extrajeron las fases acuosas con 2 x 90 ml de acetato de etilo.
Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre sulfato sódico y se
evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó mediante HPLC
sobre columna de gel de sílice con hexano-acetato
de etilo (3:1), flujo 100 ml/min., lo que dio 1,51 g (93%) del
compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco.
A una solución de 750 mg (1,94 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,4Beta,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3Z-hexenil]-3H-inden-4-ol
en 14 ml de cloruro de metileno se adicionó, en porciones, 3,64 g
(9,68 mmol) de dicromato de piridinio y se agitó la mezcla
reaccional a temperatura ambiente durante 5 horas. A la mezcla
reaccional se adicionó luego 30 ml de éter, se agitó durante 15
minutos, se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó
la almohadilla con 3 x 50 ml de éter. Se lavaron los filtrados
combinados con bicarbonato potásico 2N (50 ml) y tres veces con
agua y salmuera 1:1. Se extrajeron las fases acuosas con 2 x 100
ml de acetato de etilo. Se secaron las fases orgánicas combinadas
sobre sulfato sódico y se evaporaron hasta sequedad. El producto
bruto se purificó mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo, lo que dio 720 mg (96,5%)
del compuesto del epígrafe como sólido blanco.
A una solución agitada de 720 mg (1,87 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-trifluorometil-3Z-hexenil]-4H-inden-4-ona
en 13 ml de cloruro de metileno anhidro a temperatura ambiente se
adicionó 1,86 ml (12,68 mmol) de
1-trimetilsilil-imidazol, y se agitó
la mezcla reaccional bajo atmósfera de argón durante 17 horas.
Luego se enfrió la reacción con 7 ml de agua y se agitó durante 15
minutos, se adicionaron 20 ml de salmuera y se extrajo con 3 x 100
ml de acetato de etilo. Se lavaron los extractos combinados cinco
veces con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se
evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó mediante
cromatografía FLASH con hexano-acetato de etilo
(9:1), lo que dio 825 mg (96,5%) del compuesto del epígrafe
amorfo.
A una solución agitada de 555 mg (0,952 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[3,5-bis[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-metilenciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 6 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,595 ml
(0,952 mmol) de n-butil-litio 1,6 M
en hexano a gotas en una atmósfera de argón. Después de agitación
durante 5 minutos, a la solución color rojo así obtenida se
adicionó a gotas una solución de 270 mg (0,591 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-
[6,6,6-trifluoro-5-trimetilsililoxi-1-metil-5-trifluorometil-3Z-hexenil]-4-
inden-4-ona en 4 ml de
tetrahidrofurano anhidro durante un período de 10 minutos. Se
agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante 1,75 horas, y luego se
enfrió con la adición de 10 ml de sal Rochelle 2N y mediante
calentamiento hasta temperatura ambiente. Luego se diluyó con 30
ml de sal Rochelle 2N y se extrajo con 3 x 100 ml de acetato de
etilo. Se lavaron los extractos combinados tres veces con
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
El intermedio bruto sililado se purificó mediante cromatografía
FLASH con hexano-acetato de etilo (10:1), lo que dio
355 mg de intermedio puro. A la solución de este intermedio en 4
ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 3,8 ml (3,8 mmol) de
fluoruro de tetrabutil amonio 1M en tetrahidrofurano bajo argón, y
se agitó la mezcla reaccional a temperatura ambiente durante 15
minutos. Luego se enfrió la reacción con 5 ml de agua y se agitó
durante 19 horas. Después de dilución con 20 ml de salmuera se
extrajo con 3 x 90 ml de acetato de etilo. Se lavaron los extractos
combinados 4 veces con mezcla de agua y salmuera, se secó sobre
sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. Se purificó el
producto bruto mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (1:3), lo que dio 237 mg
(77%) del compuesto del epígrafe cristalino; punto de fusión
120-122ºC (en recristalización de
tetrahidrofurano-metil formato).
(No de conformidad con el
invento)
Una solución de 700 mg (1,23 mmol) de óxido de
[3R-(3Alfa,5Beta,Z)-3,5-bis[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-ciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 7 ml de tetrahidrofurano anhidro se enfrió en un baño de hielo
seco hasta -78ºC y trató con 0,77 ml (1,23 mmol) de
n-butil-litio 1,6M en hexano y se
agitó durante 5 minutos bajo una atmósfera de argón. A esto se
adicionó a gotas en el curso de 10 minutos una solución de 277 mg
(0,607 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta)-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-trimetilsililoxi-1-metil-
5-trifluorometil-3Z-hexenil]-4H-inden-4-ona
en 4 ml de tetrahidrofurano anhidro. La mezcla reaccional así
obtenida se agitó a -78ºC durante 2 horas. Después de la adición
de 10 ml de sal Rochelle 2N se calentó hasta temperatura ambiente.
Después de dilución adicional con 25 ml de sal Rochelle 2N se
extrajo con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se lavaron las fases
orgánicas con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó
hasta sequedad. Se cromatografió el residuo sobre una columna de
gel de sílice con hexano-acetato de etilo (10:1),
seguido de elución con hexano-acetato de etilo
(1:3) para recuperar el precursor A de anillo. Dio 329 mg del
compuesto del epígrafe disililado A de anillo.
A la solución de 329 mg del compuesto del
epígrafe disililado en 2,5 ml de tetrahidrofurano anhidro se
adicionaron 4,4 ml (4,4 mmol) de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M en
tetrahidrofurano y se agitó la mezcla reaccional a temperatura
ambiente durante 65 horas. Luego se enfrió con 10 ml de agua, se
secó durante 15 minutos, se adicionaron 20 ml de salmuera y se
extrajo con 3 x 90 ml de acetato de etilo. Se lavaron las fases
orgánicas combinadas con agua y salmuera, se secó sobre sulfato
sódico y se evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó
primero mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (1:8), y luego mediante
HPLC sobre una columna de gel de sílice, lo que dio 210 mg (68%)
del compuesto del epígrafe en forma de una espuma blanca.
A una solución de 460 mg (0,977 mmol) de óxido de
[3S-(3Alfa,5Beta,Z)]-2-[2-[2-metilen-3-fluoro-5-[[(1,1-dimetiletil)-dimetilsilil]oxi]ciclohexiliden]etil]difenil
fosfina en 6 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó
0,61 ml (0,976 mmol) de
n-butil-litio 1,6 M en hexano a
gotas en una atmósfera de argón. Después de agitación durante 5
minutos se adicionó a gotas durante 10 minutos una solución de 277
mg (0,607 mmol) de
[1(S*),3aR-(3aAlfa,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-(trimetilsilil)oxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3Z-hexenil]-4-inden-4-ona
en 4 ml de tetrahidrofurano anhidro. Luego se agitó la mezcla
reaccional a -78ºC durante 2 horas. Luego se enfrió con 10 ml de
sal Rochelle 2N y se calentó hasta temperatura ambiente. Después
de una dilución adicional con 30 ml de Sal Rochelle 2N se extrajo
con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se lavaron las fases orgánicas
combinadas con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó
hasta sequedad, lo que dio 630 mg de intermedio bruto. Se purificó
mediante cromatografía FLASH con hexano-acetato de
etilo (10:1), lo que dio 220 mg de compuesto del epígrafe
disililado. (El 25-silil éter se hidroliza durante
este procedimiento). A la solución de 220 mg de intermedio
disililado en 4 ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 2,5 ml
(2,5 mmol) de un fluoruro de tetrabutilamonio 1M en
tetrahidrofurano bajo argón, y luego se agitó a temperatura
ambiente durante 18 horas. En este momento se adicionaron 5 ml de
agua y se agitó 15 minutos, seguido de la adición de 20 ml de
salmuera y extracción con 3 x 90 ml de acetato de etilo. Se
lavaron las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera, se secó
sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. Se purificó el
producto bruto mediante cromatografía FLASH con
hexano-acetato de etilo (2:1), lo que dio 170 mg
(53%) del compuesto del epígrafe en forma de una espuma.
A una solución de 740 mg (1,57 mmol) de óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[5-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-3-fluoro-2-metilenciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 8 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó con
agitación 0,98 ml (1,57 mmol) de
n-butil-litio 1,6 M en hexano, a
gotas, bajo argón. Después de agitación durante cinco minutos a la
solución roja así formada se adicionó una solución de 262 mg (0,685
mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-1-metil-5-(trifluorometil)-3-hexinil]-4H-inden-4-ona
en 5 ml de tetrahidrofurano, a gotas durante un período de 10
minutos. Luego se agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante 2
horas. Luego se enfrió mediante adición de 15 ml de una mezcla 1:1
de sal de Rochelle 2N y bicarbonato potásico 2N, seguido de
calentamiento hasta temperatura ambiente. Después de adicionarse
30 ml de la misma mezcla de sales se extrajo 3 x 100 ml de acetato
de etilo. Se lavaron las fases orgánicas combinadas tres veces con
agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta
sequedad. Se purificó el residuo mediante cromatografía FLASH
sobre una columna de gel de sílice con
hexano-acetato de etilo (5:1), lo que dio 250 mg del
compuesto del epígrafe monosililado.
A la solución de 250 ml de intermedio de sililo
en 3 ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 2,8 ml (2,8
mmol) de fluoruro de tetrabutilamonio 1M en tetrahidrofurano bajo
argón. Se agitó la mezcla reaccional a temperatura ambiente
durante 18 horas. Se adicionaron 10 ml de agua y se agitó durante
15 minutos, luego se diluyó con 20 ml de salmuera y se extrajo con
3 x 90 ml de acetato de etilo. Se lavaron las fases orgánicas
cuatro veces con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se
evaporó hasta sequedad. Se purificó el producto bruto mediante
cromatografia FLASH sobre una columna de gel de sílice con
hexano-acetato de etilo (2:1) y mediante HPLC sobre
una columna de sílice. Dio 175 mg (49%) del compuesto del epígrafe
amorfo.
A una solución agitada de 350 mg (0,744 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[5-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]-oxi]-3-fluoro-2-metilenciclohexiliden]-etil]difenilfosfina
en 5 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,463 ml
(0,74 mmol) de n-butil-litio 1,6 M
en hexano a gotas bajo argón. Después de agitación durante 5
minutos a la solución roja así formada se adicionaron 230 mg (0,503
mmol) de
[3aR-[1(S*3E)),3aAlfa,7aBeta]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-1-[6,6,6-trifluoro-1-metil-5-(trifluorometil)-5-[(trimetilsilil)-oxi]-3-hexenil]-4H-inden-4-ona
en 4,5 ml de tetrahidrofurano anhidro a gotas durante un periodo de
10 minutos. Se agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante dos
horas. Luego se enfrió mediante la adición de 10 ml de una mezcla
1:1 de sal Rochelle 2N y bicarbonato potásico 2N y se calentó hasta
temperatura ambiente. Después de adición de 30 ml de la misma
mezcla de sal se extrajo con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se
lavaron las fases orgánicas combinadas tres veces con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
Se purificó el residuo mediante cromatografía FLASH sobre una
columna de gel de sílice con hexano-acetato de
etilo, lo que dio 236 mg del compuesto del epígrafe
disililado.
disililado.
A la solución de 236 mg de intermedio de disililo
en 3,5 ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionó 3 ml (3 mmol) de
un fluoruro de tetrabutilamonio 1M en tetrahidrofurano bajo argón y
se agitó la mezcla reaccional a temperatura ambiente durante 18
horas. El enfriamiento se realizó con la adición de 5 ml de agua y
agitación durante 10 minutos. Después de dilución con 20 ml de
salmuera se extrajo la mezcla con 3 x 90 ml de acetato de etilo.
Se lavaron las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera, se
secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El producto
bruto se purificó mediante cromatografía FLASH sobre una columna de
gel de sílice con hexano-acetato de etilo (2:1) y
HPLC sobre una columna de sílice, lo que dio 140 mg (53%) del
compuesto del epígrafe amorfo.
A una solución agitada de 435 mg (0,746 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[3,5-bis[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-metilenciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 5 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,465 ml
(0,744 mmol) de n-butil-litio 1,6 M
en hexano a gotas bajo argón. Después de agitación durante 5
minutos a esta solución roja obtenida se adicionó una solución de
169 mg (0,451 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,7aBeta]]-1-[5-etil-1-metil-5-[(trimetilsilil)oxi]-3-heptinil]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-4H-inden-4-ona
en 4 ml de tetrahidrofurano anhidro, a gotas, durante un periodo de
10 minutos. Se agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante 2 horas
y media. Luego se enfrió con la adición de 10 ml de una mezcla 1:1
de sal Rochelle 2N y bicarbonato potásico 2N y se calentó hasta
temperatura ambiente. Después de adicionarse 25 ml de la misma
sal, se extrajo con 3 x 90 ml de acetato de etilo. Se lavaron las
fases orgánicas combinadas tres veces con agua y salmuera, se secó
sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. Se purificó el
residuo mediante cromatografía FLASH sobre una columna de gel de
sílice con hexano-acetato de etilo (40:1), lo que
dio 260 mg del compuesto del epígrafe trisililado.
A la solución de 260 mg de intermedio trisililado
en 3 ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 3 ml (3 mmol) de
fluoruro de tetrabutilamonio 1M en tetrahidrofurano en atmósfera de
argón. Se agitó la mezcla reaccional a temperatura ambiente
durante 17 horas, y luego se enfrió mediante la adición de 10 ml
de agua y agitación durante 10 minutos. Después de dilución con 20
ml de agua y salmuera se extrajo con 3 x 80 ml de acetato de etilo.
Se lavaron las fases orgánicas combinadas cuatro veces con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
Se purificó el producto bruto mediante cromatografía FLASH sobre
una columna de gel de sílice con hexano-acetato de
etilo (1:3), lo que dio 158 mg (80%) del compuesto del epígrafe, que
se cristalizó en metil formato, punto de fusión 103- 105ºC.
A una solución agitada de 300 mg (0,525 mmol) de
óxido de
[3R-trans-[2-[3,5-bis[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-ciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 4 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,325 ml
(0,520 mmol) de n-butil-litio 1,6 M
en hexano, a gotas, bajo argón. Después de agitación durante 5
minutos, a la solución roja así obtenida se adicionó una solución de
77 mg (0,205 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,7aBeta]]-1-[5-etil-1-metil-5-[(trimetilsilil)-oxi]-3-heptinil]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-4H-inden-4-ona
en 2,5 ml de tetrahidrofurano anhidro, a gotas, durante un período
de 5 minutos. Se agitó la reacción a -78ºC durante 2 horas y media
y luego se enfrió con la adición de 10 ml de una mezcla 1:1 de sal
Rochelle 2N y bicarbonato potásico 2N y calentó hasta temperatura
ambiente. Después de una dilución adicional con 25 ml de la misma
mezcla de sales se extrajo con 3 x 75 ml de acetato de etilo. Se
lavaron las fases orgánicas combinadas tres veces con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
El residuo se purificó mediante cromatografía FLASH sobre una
columna de gel de sílice con hexano-acetato de
etilo, lo que dio 58 mg del compuesto del epígrafe trisililado.
A una solución de 124 mg de intermedio de
trisililo (obtenido de dos reacciones de acoplamiento precedentes)
en 2,5 ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionaron 2,5 ml (2,5
mmol) de fluoruro de tetrabutilamonio 1M en tetrahidrofurano bajo
argón. Se agitó la mezcla reaccional a temperatura ambiente durante
40 horas. Luego se enfrió con la adición de 10 ml de agua y
agitación durante 15 minutos. Después de dilución con 20 ml de agua
y salmuera, se extrajo con 3 x 70 ml de acetato de etilo. Se
lavaron las fases orgánicas combinadas cuatro veces con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
El producto bruto se purificó mediante cromatografía FLASH sobre
una columna de gel de sílice con hexano-acetato de
etilo (1:7), lo que dio 74 mg (25,3%) de compuesto del epígrafe, que
se recristalizó en metil formato, punto de fusión
130-132ºC.
A una solución agitada de 390 mg (0,829 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[5-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]-oxi]-3-fluoro-2-metilenciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 5 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,53 ml
(0,848 mmol) de n-butil-litio 1,6 M
en hexano, a gotas, bajo argón. Después de agitación durante 5
minutos a la solución roja así obtenida se adicionó una solución de
200 mg (0,534 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,7aBeta]]-1-[5-etil-1-metil-5-[(tri-metilsilil)oxi]-3-
heptinil]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-4H-inden-4-ona
en 4,5 ml de tetrahidrofurano anhidro, a gotas, durante un período
de 10 minutos. Luego se agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante
2 horas, y se enfrió con la adición de 10 ml de una mezcla 1:1 de
sal Rochelle 2N y bicarbonato potásico 2N y calentó hasta
temperatura ambiente. Después de dilución con 30 ml de la misma
mezcla de sales se extrajo con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se
lavaron las fases orgánicas combinadas tres veces con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad.
El residuo se purificó mediante cromatografía FLASH sobre columna
de gel de sílice con hexano-acetato de etilo
(30:1), lo que dio 254 mg del compuesto del epígrafe disililado.
A una solución de 254 mg del intermedio de
disililo en 3,5 ml de tetrahidrofurano anhidro se adicionó bajo
argón 3,5 ml (3,5 mmol) de fluoruro de tetrabutilamonio 1M en
tetrahi-drofurano. Se agitó la mezcla reaccional a
temperatura ambiente durante 18 horas, y luego se enfrió con la
adición de 10 ml de agua y agitación durante 15 minutos. Después
de dilución con 20 ml de agua y salmuera se extrajo con 3 x 80 ml
de acetato de etilo. Se lavaron las fases orgánicas combinadas
cuatro veces con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, y
se evaporó hasta sequedad. El producto bruto se purificó mediante
cromatografía FLASH sobre una columna de gel de sílice con
hexano-acetato de etilo (7:4), y mediante HPLC
sobre una columna de sílice con hexano-acetato de
etilo (3:2), lo que dio 159 mg (67,6%) del compuesto del epígrafe
amorfo.
A una solución agitada de 240 mg (0,51 mmol) de
óxido de
[3S-(1Z,3Alfa,5Beta)]-[2-[5-[[(1,1-dimetiletil)dimetilsilil]-oxi]-3-fluoro-2-metilenciclohexiliden]etil]difenilfosfina
en 5 ml de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC se adicionó 0,319 ml
(0,51 mmol) de n-butil-litio 1,6 M
en hexano, a gotas, bajo argón. Después de agitación durante 5
minutos, a la solución roja así obtenida se adicionó una solución
de 103 mg (0,273 mmol) de
[3aR-[1(S*),3aAlfa,7aBeta]]-1-[5-etil-1-metil-5-[(tri-metil-silil)oxi]-3-
heptinil]-3,3a,5,6,7,7a-hexahidro-7a-metil-4H-inden-4-ona
en 4 ml de tetrahidrofurano anhidro, a gotas, durante un período de
10 minutos. Se agitó la mezcla reaccional a -78ºC durante 2 horas,
luego se dispuso en congelador (-20ºC) durante una hora, se enfrió
con la adición de 10 ml de una mezcla 1:1 de sal Rochelle 2N y
bicarbonato potásico 2N y se calentó hasta temperatura ambiente.
Después de dilución con 25 ml mas de la misma mezcla de sales se
extrajo con 3 x 90 ml de acetato de etilo. Se lavaron las fases
orgánicas combinadas tres veces con agua y salmuera, se secó sobre
sulfato sódico y se evaporó hasta sequedad. El residuo se purificó
mediante cromatografía FLASH sobre una columna de gel de sílice con
hexano-acetato de etilo (1:4), lo que dio 145 mg
del compuesto del epígrafe disililado. A una solución de 145 mg del
intermedio de disililo en 3 ml de tetrahidrofurano anhidro se
adicionó 1,7 ml (1,7 mmol) de fluoruro de tetrabutilamonio 1M en
tetrahidrofurano bajo argón. Se agitó la mezcla reaccional a
temperatura ambiente durante 18 horas, y luego se enfrió con la
adición de 10 ml de agua y agitación durante 15 minutos. Se diluyó
con 20 ml de agua y salmuera y se extrajo con 3 x 80 ml de acetato
de etilo. Se lavaron las fases orgánicas cuatro veces con agua y
salmuera, se secó sobre sulfato sódico, y se evaporó hasta
sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía
FLASH sobre una columna de gel de sílice de 30 mm x 5'' con
hexano-acetato de etilo (3:2), y mediante HPLC
sobre una columna de gel de sílice con
hexano-acetato de etilo (1:1). Dio 90 mg (74%) del
compuesto del epígrafe; punto de fusión 91-92ºC,
cristalización en acetato de metilo-hexano.
Con medios convencionales pueden formularse
cremas, geles y soluciones conteniendo ingredientes dentro de las
proporciones expuestas en los ejemplos A a C que siguen.
Referencia al compuesto A, que es
1,25-dihidroxi-16,23E-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-colecalciferol
(no de conformidad con el invento), en estos ejemplos es
ilustrativo de cualquiera de los compuestos reivindicados.
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Claims (13)
1. Un compuesto de la fórmula
en
donde
R_{2} es hidrógeno, alquilo
C_{1-4} o halógeno, X es
=CH_{2}
y A es
2
-CH_{2}-CH_{2},
con la salvedad de que cuando A es
-CH_{2}-CH_{2}-, R_{2} es hidrógeno o alquilo
C_{1-4}.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde
R_{2} es flúor.
3. El compuesto de la reivindicación 1, en donde
R_{2} es hidrógeno.
4. El compuesto de la reivindicación 1, en donde
R_{2} es alquilo C_{1-4}.
5. El compuesto de la reivindicación 1, en donde
R_{2} es metilo o etilo.
6. Los compuestos
- 1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-colecalciferol,
- 1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16-en-23-in-26,27-hexafluoro-20-epi-colecalciferol,
- 1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16,23E-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-colecalciferol,
- 1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16-en-23-in-26,27-bishomo-20-epi-colecalciferol,
- 1Alfa-fluoro-25-hidroxi-16,23E-dien-26,27-bishomo-20-epi-colecalciferol.
7. Una composición farmacéutica que comprende
una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula I como en la
reivindicación 1, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
8. Un procedimiento para la preparación de los
compuestos de la fórmula I como en la reivindicación 1, que
comprende desproteger compuestos correspondientes que contienen
grupos hidroxi silil protegidos.
9. Los compuestos de fórmula I, como en la
reivindicación 1, para uso en inducir diferenciación e inhibición
de proliferación en líneas celulares de piel y cáncer,
particularmente para tratar enfermedades de piel
hiperproliferativas, tal como psoriasis; enfermedades neoplásticas,
tal como leucemia; y enfermedades de las glándulas sebáceas, tal
como acné, para uso en invertir las condiciones asociadas con
fotolesión, particularmente para el tratamiento tópico de la piel
lesionada con la exposición al sol, los efectos de las arrugas,
elastosis y envejecimiento prematuro y para uso en el tratamiento
de esteoporosis.
10. El empleo de los compuestos de fórmula I
como en la reivindicación 1, para la preparación de composiciones
farmacéuticas.
11. El empleo de acuerdo con la reivindicación
10 para la preparación de composiciones farmacéuticas para inducir
diferenciación e inhibición de proliferación en líneas celulares de
piel y cáncer, particularmente para tratar enfermedades de piel
hiperproliferativas, tal como psoriasis; enfermedades neoplásticas,
tal como leucemia; y enfermedades de las glándulas sebáceas, tal
como acné.
12. El empleo de conformidad con la
reivindicación 10 para la preparación de composiciones
farmacéuticas para invertir las condiciones asociadas con
fotolesión, particularmente para el tratamiento tópico de la piel
lesionada con la exposición al sol, los efectos de las arrugas,
elastosis y envejecimiento prematuro.
13. El empleo de conformidad con la
reivindicación 10 para la preparación de composiciones
farmacéuticas para el tratamiento de osteoporosis.
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