PT808831E

PT808831E - Analogos fluorados de vitamina d3

Info

Publication number: PT808831E
Application number: PT97107848T
Authority: PT
Inventors: Bernard Michael Hennessy; Milan Radoje Uskokovic
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1996-05-23
Filing date: 1997-05-14
Publication date: 2000-12-29
Also published as: TW374762B; NZ314838A; BR9703373A; NO971934D0; HUP9700927A2; JPH1045712A; UY24563A1; CZ157997A3; HUP9700927A3; PL320131A1; DE69702812D1; MX9703776A; DE69702812T2; EP0808831A3; YU19997A; CO4840512A1; ZA974334B; KR970074763A; EP0808831B1; IL120842A0

Description

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DESCRIÇÃO “ANÁLOGOS FLUORADOS DE VITAMINA D3” A presente invenção diz respeito a análogos da Vitamina D3, particularmente análogos da 16-eno-23-ino-trifluoro de Vitamina D3 de fórmula geral

na qual o símbolo R representa um átomo de hidrogénio ou de flúor e o símbolo X representa um grupo de fórmula =CH2 ou o símbolo R representa um grupo hidroxi e o símbolo X representa um átomo de hidrogénio.

Os compostos de fórmula geral I induzem a diferenciação e a inibição da proliferação em várias linhas celulares da pele e do cancro. Por consequência, os compostos de fórmula geral 1 são úteis como agentes para o tratamento de doenças hiperproliferativas da pele, tais como psoríase. Os compostos de fórmula geral I são também úteis no tratamento de doenças neoplásicas, tais como, leucemia e doenças das glândulas sebáceas tais como acne ou dermatite seborreica.

2 A invenção diz igualmente respeito a uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula geral I que pode ser utilizada num método de tratamento dos estados de doença citados anteriormente mediante administração do composto de fórmula geral I.

Numa forma de realização preferida, o símbolo R representa um grupo hidroxi.

Uma forma de realização da presente invenção é uma mistura que compreende epímeros de fórmula geral

na qual os símbolos R e X tèm os significados definidos antes. Preparam-se os compostos de fórmula geral I tal como se descreve a seguir nos Esquemas I-II e nos Exemplos. 3

ESQUEMA I 3

ο

VI

No Esquema I anterior, converte-se o composto de fórmula geral II, [3aS,[3(S*)53aa,7a,7aP] ]-[[3a,4,5,6,7,7a-hexa-hidro-3a-metil-3-(l-metil-3-butinil)--lH-mden-7-il]-oxi]-trimetilsilano, um composto conhecido, em um composto de fórmula III, mediante reacção com n-butil-lítio e trifluoroacetona no seio de um solvente etéreo tal como tetra-hidrofurano. Realiza-se a reacção a uma temperatura compreendida entre -100°C e 0°C, de preferência -78°C.

Converte-se o composto de fórmula III no composto de fórmula IV mediante reacção com tluoreto de tetrabutil-amónio no seio de um solvente etéreo, 4 4

tal como tetra-hidrofurano. Realiza-se a reacção a uma temperatura compreendida entre 0 e 50°C, de preferência à temperatura ambiente, preferivelmente sob atmosfera de árgon.

Converte-se o composto de fórmula IV no composto de fórmula V mediante reaçcào com dicromato de pindínio e p-tolueno-sulfonato de piridímo no seio de um solvente clorado-hidrogenado tal como cloreto de metileno.

5

No Esquema II anterior, converte-se o composto de fórmula VI no composto de fórmula Ib mediante reacção com óxido de [3S-(lZ,3a,5P)]-[2--[3,5-bis[[ 1,1 -dimetiletil)-dimetilsi]il]-oxi]-2-metilenociclo-hexilideno]-etil]-difeml-fosfina no seio de tetra-hidrofiirano, de preferência sob atmosfera de árgon na presença de n-butil-lítio como base. Esta reacção é seguida pela eliminação dos grupos protectores do radical sililo utilizando fluoreto de tetrabutil-amómo em tetra-hidrofurano como solvente.

Como alternativa, converte-se o composto de fórmula VI no composto de fórmula Ic mediante reacção com óxido de [3R-(3a,5P,Z)-3,5-bis-[[l,l-dimetiletil)--dimetilsilil]-oxi]-ciclo-hexilideno]-etil]-difemlfosfína em tetra-hidrofurano, de preferência sob atmosfera de árgon, seguida pela eliminação dos grupos protectores do radical sililo.

Como alternativa, converte-se o composto de fórmula VI no composto de fórmula Id mediante reacção com óxido de [3S-(3a,5p,Z)-2-[2-metileno-3-fluoro-5--[[(l,l-dimetiletil)-dimetil-silil]-oxi]-ciclo-hexilideno]-etil]-difenil-fosfina em tetra-hidrofurano, de preferência sob atmosfera de árgon, seguida pela eliminação dos grupos protectores do radical sililo.

Como alternativa, converte-se o composto de fórmula VI no composto de fórmula Ie mediante reacção com óxido de [5S,Z)-l-[2-[2-metileno-5-[[(l,l-dimetil--etil)-dimetilsilil]-oxi]-ciclo-hexilideno]-etil]-difenil-fosfina em tetra-hidrofurano, de preferência sob atmosfera de árgon, seguida pela eliminação dos grupos protectores do radical sililo.

Pode utilizar-se qualquer método convencional de separação conhecido

dos técnicos da especialidade em qualquer ponto da preparação de um composto de fórmula geral I para separar a mistura epimérica em quer o epímero (R) ou (S).

Deste modo, a presente invenção diz respeito a compostos de fórmula geral I que representam misturas dos epímeros (25R) e (25S) bem como com os epímeros ou diastereómeros individuais (25R) e (25S).

Podem administrar-se os compostos de fórmula geral I por via oral, por exemplo, sob a forma de comprimidos, comprimidos revestidos, drageias, cápsulas de gelatina dura ou mole, soluções, emulsões ou suspensões. A administração pode, contudo, realizar-se igualmente por via rectal, por exemplo, sob a forma de supositórios ou por via parentérica, por exemplo, sob a forma de soluções injectáveis. A composição de acordo com a invenção pode ser processada com excipientes inorgânicos ou orgânicos inertes sob o ponto de vista farmacêutico, para a preparação de comprimidos, comprimidos revestidos, drageias e cápsulas de gelatina dura. Pode utilizar-se lactose, amido de milho ou os seus derivados, talco, ácido esteárico ou os seus sais e similares, como tais excipientes, por exemplo, para comprimidos, drageias e cápsulas de gelatina dura. Recipientes apropriados para cápsulas de gelatina mole são, por exemplo, óleos vegetais, ceras, gorduras, polióis semi-sólidos e líquidos, e similares; dependendo da natureza do ingrediente activo. Não são necessários habitualmente quaisquer excipientes, contudo, no caso de cápsulas de gelatina mole. Excipientes apropriados para a preparação de soluções e xaropes são, por exemplo, água, polióis, sacarose, açúcar invertido e glicose.

Excipientes apropriados para soluções injectáveis são, por exemplo, água, álcoois, polióis, glicerol, óleos vegetais, e similares. Excipientes apropriados 7 para supositórios são, por exemplo, óleos naturais ou endurecidos, ceras, gorduras, polióis semi-líquidos ou líquidos, e similares.

Além disso, as preparações farmacêuticas podem conter conservantes, solubilizantes, estabilizantes, agentes molhantes, emulsionantes, edulcorantes, corantes, aromatizantes, sais para variar a pressão osmótica, tampões, agentes de mascaramento ou antioxidantes.

Os compostos de fórmula geral I conforme descritos anteriormente podem ser administrados por via oral ou por injecção, para o tratamento de doenças neoplásicas tais como leucemia, a animais de sangue quente com necessidade de tal tratamento. Mais especificamente, os compostos de fórmula geral I conforme descritos anteriormente podem ser administrados por via oral a um humano adulto em dosagens que se encontram compreendidas entre cerca de 0,25 e 50 pg por dia para o tratamento de doenças neoplásicas tais como a leucemia.

Os compostos de fórmula geral I conforme descritos anteriormente podem ser administrados por via oral, para o tratamento de doenças hiperproliferativas tais como psoríase, carcinomas das células basais, perturbações de queratinização e queratose, a animais de sangue quente com necessidade de tal tratamento. Mais especificamente, os compostos de fórmula geral I conforme descritos anteriormente podem ser administrados por via oral a um humano adulto em dosagens que se encontram compreendidas entre cerca de 0,25 e 50 mg por dia para o tratamento de doenças hiperproliferativas da pele tais como psoríase, carcinomas das células basais, perturbações da queratinização e queratose. Esses compostos podem ser administrados por via oral para o tratamento de acne em seres humanos para uma dosagem de cerca de 0,25 a 50 mg por dia; de preferência compreendida entre 0,5 e 5 mg por dia.

Os compostos de fórmula geral I conforme descritos antenormente podem ser administrados por via tópica, para o tratamento de doenças hiperproliferativas da pele tais como a psoríase, carcinomas das células basais, perturbações da queratinização e queratose, a animais de sangue quente com necessidade de um tal tratamento. Mais especificamente, os compostos de fórmula geral I conforme descritos anteriormente podem ser administrados por via tópica em dosagens que se encontram compreendidas entre cerca de 0,5 e 100 mg por grama de formulação tópica por dia, para o tratamento de doenças hiperproliferativas da pele tais como psoríase, carcinomas das células basais, perturbações de queratinização e queratose.

Os compostos de fórmula geral I conforme descritos anteriormente, podem ser igualmente administrados por via tópica para o tratamento de doenças das glândulas sebáceas tais como acne ou dermatite seborreica em doses que se encontram compreendidas entre 0,5 e 100 mg por grama de formulação tópica por dia.

Blood, VOL 78(1) pp 75 - 82 (1991) e Leuk. Res. VOL 19(1) pp 65 - 72 (1995) descrevem ambos os compostos correspondentes da 21,27-hexafluoro de Vitamina D e Leuk. Res descreve igualmente os compostos correspondentes não fluorados - todos com acção antitumor. ZHAO J ET AL : “Enhancement of antiproliferative activity of 1 alpha.,25-dihydroxyvitamin D3 (analogs) by cytochrome P 450 enzyme inhibitors 9 is compound-and cell-type specific” JOURNAL OF STEROID BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, vol. 57, n° 3Λ, FCD 1996, pág. 197 - 202 descrevem derivados de colecalciferol com efeito antiproliferativo, incluindo o composto do exemplo de referência 5-RO-63-6010.

Pode demonstrar-se a actividade útil dos compostos de fórmula geral I como agentes para o tratamento de doenças neoplásicas pelas seguintes técnicas de ensaio.

Diferenciação da célula HL-60 A indução da diferenciação de células HL-60 foi ensaiada mediante medição do seu potencial oxidativo de explosão através de redução de NBT (Nitrobluetetrazólio) (“Azul nitro de tetrazólio”)·

Mantiveram-se as células HL-60 em meio de RPMI 1640 complementado com 10 % de FCS, 2 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sódio, l % de aminoácidos não essenciais, 50 U/ml de penicilina e 50 ,ug/ml de estreptomicina (=RPMI/FCS). Semearam-se 30 000 células/90 μΐ de RPMI/FCS em cavidades de microtitulação de fundo plano. Adicionaram-se 10 μΐ de derivados da vitamina D diluídos em meio completo ao mesmo tempo que se- obtinham concentrações finais compreendidas entre 10'11 e IO-6 M (mantiveram-se soluções de armazenagem de 10'2 M em etanol à temperatura de -20°C e protegidas da luz). Decorridos 3 dias, removeu-se o meio com uma pipeta de canais múltiplos e substituiu-se por 100 μΐ de solução de NBT [1 mg/ml em PBS com 200 mM de miristato-acetato de forbol (PMA)]. Decorrida mais uma hora de incubação à temperatura de 37°C, removeu-se a solução de NBT e adicionaram-se 100 μΐ de 10 10

% de SDS em HC1 0,01 N. Quantificou-se fotometricamente a quantidade do NBT reduzido a 540 nm utilizando um leitor automático de placa. Calculou-se a média de três cavidades. As S.E.M. encontram-se compreendidas entre 5 e 10 %. Expnmiram-se os valores como uma percentagem da diferenciação máxima conseguida com 100- 1000 nM de calcitriol na mesma experiência. A concentração (nM) que conduz a 50 % deste valor máximo é determinada graficamente e é dada como DEjo no Quadro I a seguir.

QUADRO I COMPOSTO DE5o (nM) 1,25-Di-hidroxicolecalciferol (calcitriol) 8,0 1,25-(R,S)-Di-hidroxi-16-eno-23 -ino-26-trifluoro-colecalciferol 0,15 l,25-(R,S)-Di-hidroxi-16-eno-23-ino-26-tnfluoro-19-norcolecalciferol 0,37 la-Fluoro-25(R,S)-hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalciferol 3,70 25-(R,S)-Hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalciferol 160,00

Pode determinar-se a actividade útil dos compostos de fórmula geral I como agentes para o tratamento de doenças hiperproliferativas da pele- de acordo com o seguinte.

Inibição da Proliferação de Queratinócitos

Linha de células HaCaT - Utilizou-se a linha de células humana imortalizadas HaCaT. Mediu-se a incorporação de JH-timidina em culturas com crescimento exponencial após 6 dias de cultura na presença do composto em estudo.

Cultura de célula - Cultivaram-se células HaCaT em Dulbecco’s Moditied Eagle 11 Médium (DMEM) (“Meio de Eagle Modificado por Dulbecco”) e Nutrient Mixture Ham’s (“Mistura Nutriente de Ham”) F12 (F12), 3:1 (v/v, ICN) contendo 4,5 g/1 de glicose e complementado com 10 % de soro fetal de vitela (Gibco, FCS), L-glutamina (Gibco, 2 mM), penicilina (Gibco, 50 Ul/ml), estreptomicina (Gibco, 50 pg/ml), EGF (10 ng/ml), hidrocortisona (400 ng/ml), toxina da cólera (8,5 ng/ml) e insulina (5 ng/ml). Mantiveram-se as células numa atmosfera humidificada que contém 5 % de C02 e 95 % de ar e fez-se passar cada 3-4 dias.

Inibição da Absorção de 3H-timidina - Semearam-se células HaCaT (250 células em meio de cultura completo) em pratos de cultura com 96 cavidades e incubaram-se à temperatura de 37°C com 5 % de C02 e 95 % de ar durante 6 dias. Adicionaram-se inibidores, dissolvidos para uma concentração de 10 x em 1 % de etanol, imediatamente no início do ensaio. Adicionou-se 3H-timidina (5 Ci/mmol, Amersham) e marcaram-se as células com pulsação durante as últimas 6 horas do período de crescimento. Tripsinizaram-se então as células durante 10 minutos à temperatura de 37°C sob uma agitação vigorosa e recolheram-se em uma placa de filtro de 96 cavidades GF/C (Uni Filter, Packard) utilizando um recolhedor de células Micro Mate 196 (Packard). Após secagem à temperatura de 40°G sob vazio durante 20-30 minutos, adicionaram-se 2 μΐ de cintilador de 2 μΐ de Micro Scint 0 (Packard) e contou-se a radioactividade ligada aos filtros num TOP COUNT (Packard).

Os resultados medidos como CI50 encontram-se reunidos no Quadro II a seguir.

12 QUADRO II COMPOSTO CI50 (nM) 1,25(R,S)-Di-hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluorocolecalciferol 10,0 1,25(R,S)-Di-hidroxi-l 6-eno-23-ino-26-trifluoro-19-nor-colecalciferol 5,1 la-Fluoro-25(R,S)-hidroxi-16-eno-23-mo-26-trifluoro-colecalciferol 11,0 2,5(R,S)-Hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalciferol 650,00

Pode demonstrar-se a actividade útil dos compostos de fórmula geral 1 * como agentes para o tratamento de doenças das glândulas sebáceas de acordo com o seguinte.

Inibição de Proliferação de Sebócito Humano In Vitro

Isolaram-se células sebáceas a partir de glândulas sebáceas de um humano adulto pela combinação de métodos enzimáticos e mecânicos (Doran et al., Characterization of Human Cells In Vitro, J. Invest. Dermatol. 96:34-8 (1991)). Cultivaram-se as células em meio de Iscove contendo 10 % de soro fetal de vitela e 4 pg/ml de dexametasona numa camada com fíbroblastos de murganho 3T3 com crescimento interrompido. Colocaram-se as células em placas num meio sem o composto de ensaio e fomeceu-se então o composto de ensaio em meio fresco, contendo o composto em estudo, cada 48 horas. No dia da colheita, lavaram-se as culturas com 0,03 % de EDTA em PBS, para remover apenas os fíbroblastos 3T3, seguida pela incubação em 0,05 % de tripsína/0,03 % de EDTA. Suspenderam-se as células, misturaram-se vigorosamente para preparar uma suspensão única de célula e contou-se num hemocitómetro.

Produziram-se soluções de armazenagem dos compostos como soluções 1 CP M em 100 % de etanol desgasado e guardaram-se à temperatura de -20°C no escuro. Durante o uso experimental, levaram-se as soluções, que tinham sido divididas em alíquotas, até à temperatura ambiente e utilizaram-se mediante diluição directa em meio completo até à concentração apropriada.

Ensaiaram-se os compostos quanto à inibição da proliferação do crescimento das células sebáceas in vitro a 1 θ'6, 10'7 e 10's M.

Os resultados encontram-se reunidos no quadro III a seguir cómo a quantidade de composto necessária para inibir a proliferação das células sebáceas de, 50 % (DE50) em nM quando comparado com uma cultura tratada com o veículo.

QUADRO III COMPOSTO DEso (nM) l,25(R,S)-Di-hidroxi-16-eno-23-mo-26-trifluoro-colecalciferol 1,0

Dependência do Cálcio (ensaio de tolerância em murganhos)

Alterações profundas na homeostase do cálcio afectam fortemente o desenvolvimento do peso dos animais. Utilizou-se este parâmetro como-um ensaio primário para a tolerância.

Murganhos (25-30 gramas de peso do corpo) receberam diariamente administrações subcutâneas do derivado de vitamina D durante 4 dias consecutivos. Registou-se o peso do corpo imediatamente antes e no final de um período de tratamento de 5 dias. A “dose mais elevada tolerada” (HTD) é a dose que dá como resultado um ganho zero de peso durante este período de tratamento.

Os resultados encontram-se reunidos no quadro IV a seguir.

QUADRO IV COMPOSTO HTD (Ug/kg) l,25(R,S)-Di-hidroxi-16-eno-23-ino-26-tnfluoro-colecalciferol LO 1,25(R,S)-Di-hidroxi-16-eno-23 -mo-26-tnfluoro-19-nor-colecalciferol 2,0 1 a-Fluoro-25(R,S)-hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalcíferol 20,0 25(R,S)-Hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-co!ecalciferol 600,00

Proporcionam-se os exemplos seguintes para descrever ainda a invenção e não como limitando a mesma de qualquer modo.

Exemplo 1 [3aS-[3(lS*), 3aa, 7a, 7ab]]-l,l,l-Trifluoro-6-[3a,4,5,6,7,7a-hexa-hidro-3a-metil-7--[trimetilsilil)-oxi-lH-inden-3-il]-2-metil-3-heptin-2-ol (epímero) À solução de 1,1 g (3,80 mmol) de [3aS-[3(lS*),3aa,7a,7ab]]-[[3a,4,5,6, 7,7a-hexa-hidro-3a-metil-3-( 1 -metil-3-butinil)-lH-inden-7-il]-oxi]-trimetilsilano em 20 ml de tetra-hidrofurano anidro à temperatura de -78°C adicionaram-se com agitação 2,61 ml (4,18 mmol) de n-butil-lítio 1,6M. Após agtação durante 1 hora, adicionou-se 0,68 ml (7,6 mmol) de 1,1,1-trifluoroacetona, e agitou-se a mistura reaccional durante mais uma hora à temperatura de 78°C. Extinguiu-se a reacção com salmoura saturada e aqueceu-se até à temperatura ambiente. Após diluição com água, extraiu-se com acetato de etilo. Lavaram-se os extractos reunidos com água, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre coluna de gel de sílica com

ΙΟ hexano-acetato de etilo a 20:1 para se obter 1,47 g (96,5 %) do composto do titulo amorfo.

Exemplo 2 [3aS-[3(lS*), 3aa, 7a, 7ab]]-3a,4,5,6,7,7a-Hexa-hidro-3a-metil-3-(6,6,6-trifluoro-5--hidroxi-1,5-dimetiI-3-hexinil)-1 H-inden-7-ol (epímeros) A solução agitada de 1,47 g (3,65 mmol) de [3aS-[3(lS*),3aa,7a,7ab]]--1,1,1 -trifluoro-6-[3a,4,5,6,7,7a-hexa-hidro-3a-metil-7-[(trimetilsilil)-oxi]-1 h-inden--3-il]-2-metil-3-heptin-2-ol (epímeros) em 15 ml de tetra-hidrofurano anidro à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon adicionaram-se 8 ml (8,0 mmol) de fluoreto de tetrabutil-amónio 1M. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora e meia e extinguiu-se então por adição de gelo. Diluiu-se então com água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavaram-se os extractos reunidos com bicarbonato de potássio 2N, com água até pH neutro, e com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre uma coluna de gel de sílica com hexano/acetato de etilo a 2:1, para se obter 1,2 g (100 %) do composto do título cristalino; P.F. 78 - 80°C, [a]+ 20,4° (c 0,5, etanol (“EtOH”), RMN-'H (CDC13) : d 1,07 (s, 3H, CH3), 1,09 (d, 2H, J + 6,5 Hz, CH3), 1,40 (dt, 1H, Jvic = 3 e 12,5 Hz, Jgem = 12,5 Hz, CH de CH2), 1,58 (s, 3H, CH3), 1,71 - 1,98 (m„5H), 2,00 (m, 1H, Jvic = 3 e 7 Hz, Jgem = 14,5 Hz, CH de CH2), 2,23 - 2,45 (m, 5H); 4,19 (brs, 1H, CH), 5,40 (brm, 1H, CH); Calcul. Para C18H25F302: C 65,49, H 7,63; Encontrada : C 65,59, H 7,77.

Exemplo 3 [3aR-[ 1 (R*),3aa, 7ab]]-3a,4,5,6,7,7a-Hexa-hidro-7a-metil-1 -(6,6,6-trifluoro-5-hidroxi- 16 16

- l,5-dimetil-3-hexinil)-4H-inden-4-ona (epímeros) A uma solução agitada de 300 mg (0,91 mmol) de [3aS,[3(lS*),3aa,7a, -7ab]]-3a,4,5,6,7,7a-hexa-hidro-7a-metil-l-(6,6,6-trifluoro-5-hidroxi]-l,5-dimetil-3--hexinil)-lH-inden-7-ol (epímeros) em 8 ml de cloreto de metileno anidro adicionou-se 1,402 g (3,73 mmol) de dicromato de piridímo e 70 mg de p-tolueno-sulfonato de piridímo e agitou-se a mistura reaccional durante 4 horas. Adicionaram-se 20 g de éter, agitou-se durante 20 minutos e fíltrou-se sobre Celite. Lavou-se o tampão de Celite com 3 x 50 ml de éter. Lavaram-se os filtrados reunidos com 20 ml de HC1 IN arrefecido com gelo, com água, com KHC03 2N (40 ml) com água e com salmoura. Extraíram-se as camadas aquosas com 2 x 100 ml de éter-acetato de etilo a 1:1. Secaram-se as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre gel de sílica com hexano-acetato de etilo a 3:1, para se obter 272 mg (91,2 %) do composto do título amorfo.

Exemplo 4 [3aR-[l(lR*), 3aa, 7ab]]-3a, 4, 5, 6, 7,7a-Hexa-hidro-7a-metil-l(6,6,6-trifluoro-l,5--dimetil-5-[(trimetilsilil)-oxi]-3-heximl]-4H-inden-4-ona (epímeros) A uma solução agitada de 272 mg (0,828 mmol) de [3aR-[l(S>i!),3aa, -7ab]]-3a, 4, 5,6,7,7a-hexa-hidro-7a-metil-l-(6,6,6-trifluoro-5-hidroxi-l,5-dimetil-3--hexinil)-4H-inden-4-ona (epímeros) em 6 ml de cloreto de metileno anidro adicionou-se 0,79 mg (5,38 mmol) de trimetilsilil-imidazol sob atmosfera de árgon. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas e meia e extinguiu-se então com 7 ml de água. Após agitação continua durante 30 minutos

extinguiu-se com 3 x 120 ml de acetato de etilo. Lavaram-se as camadas orgânicas cinco vezes com uma mistura de água e salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre uma coluna de gel de sílica sobre hexano-acetato de etilo a 10:1, para se obter 314 mg (94,6 %) do composto do título.

Exemplo de Referência 5 1,25(R,S)-Dt-hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalciferol A uma solução agitada de 730 mg (1,25 mmol) de óxido de [3S-(lZ,3a, 5b)]-[2-[3,5-bis-[[l,l-dimetiletil)-dimetilsilil]-oxi]-2-metilenociclo-hexilideno]-etil]--difenilfosfina em 7 ml de tetra-hidrofurano anidro à temperautra de -78°C adicionou-se 0,758 ml (1,21 mmol) de n-butil-lítio 1,6M em hexano gota a gota sob atmosfera de árgon. Após agitação durante 5 minutos, à solução vermelha assim formada adicionou-se gota a gota no decurso de um período de 10 minutos uma solução de 314 mg (0,784 mmol) de [3aR-[l(S*),3aa, -7ab]]-3a, 4, 5,6,7,7a-hexa--hidro-7a-metil-l-(6, 6, 6-trifluoro-5-hidroxi-l,5-dimetil-3-hexinil)-4H-inden-4-ona (epímeros) em 5 ml de tetra-hidrofurano anidro. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura de -78°C durante 1 hora e meia e extmguiu-se então mediante adição de 10 ml de uma mistura a 1:1 de sal de Rochelle 2N e bicarbonato de potássio 2N. Após aquecimento até à temperatura ambiente, adicionaram-se mais 30 ml de sal de sal de Rochelle-solução de bicarbonato de potássio e extraiu-se com 3 x 130 ml de acetato de etilo. Lavaram-se as camadas orgânicas com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o resíduo mediante cromatografia FLASH sobre uma coluna de gel de sílica com hexano-acetato de 18 etilo a 40:1, para se obter 475 mg do composto do título trisililado. A solução de 475 mg (0,621 mmol) do intermediário trisililado em 7 ml de tetra-hidrofurano anidro adicionaram-se 4 ml (4 mmol) de fluoreto de tetrabutil--amónio 1M em tetra-hidrofurano sob atmosfera de árgon. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 17 horas, adicionaram-se mais 2 ml de fluoreto de tetrabutil-amónio 1M e agitou-se durante mais 5 horas. Extinguiu-se então com 5 ml de água e, após agitação durante 20 minutos, eliminou-se o tetra-hidrofurano mediante destilação. Extraiu-se o resíduo com 3 x 120 ml de acetato de etilo. Lavaram-se as camadas orgânicas com água e com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre uma coluna de gel de sílica com hexano-acetato de etilo a 1:35 para se obter 270 mg (74,1 %) do composto do título sob a forma de uma espuma branca; [a]+ 26° (c 0,1, EtOH); UV (EtOH); lmax : 203 nm (e 17500), 263 (14120); RMN-lH (CDC13) : d 0,72 (s 3H, CH3), 1,13 (d, 3H, J = 6,5 Hz, CH*), 1,58 (s, 3H, CH3), 1,92 (ddd, 'H, Jvic = 3,5 e 8,5 Hz, Jgem = 13 Hz, CH de CH2), 2,21 (dd, !H, Jvic = 12 Hz, Jgem )= 14 Hz, CH de CH2), 2,61 (dd, *H, Jvic = 3 Hz, Jgem = 13,5 Hz, CH de CH2), 2,82 (brm, lH, CH de-CH2), 4,24 (brm, 'H, CH), 4,45 (brm, 'H, CH), 5,02, 5,34 (2s, 2H, CH2), 5,39 (brs, ‘H, CH), 6,11, 6,38 (AB, 2H, J= 11,2 Hz, 2CH).

Exemplo 6 1,25(R,S)-Di-hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-19-nor-colecalciferol A uma solução agitada de 630 mg (1,1 mmol) de óxido de [3R-(3a,5b,Z)--3,5-bis-[[ 1 ,l-dimetletil)-dimetilsilil]-oxi]-ciclo-hexilideno]-etil]-difenilfosfina em 7 19 ml de tetra-hidrofurano anidro à temperatura de -78°C adicionou-se gota a gota 0,685 ml (1,1 mmol) de N-butil-Iítio I,6M em hexano sob atmosfera de árgon. Após agitação durante 5 minutos, à solução vermelha assim formada adicionou-se gota a gota, no decurso de um intervalo de tempo de 5 minutos, uma solução de 232 mg (0,579 mmol) de [3aR-[l(lR*),3aa,7ab]]-3,3a,5,6,7,7a-hexa-hidro-7a--metil-l-[6,6,6-trifluoro-l,5-dimetil-5-[(trimetilsilil)-oxi]-3-hexinil]-4H-inden-4-ona (epímeros) em 2 ml de tetra-hidrofurano anidro. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura de -78°C durante 1 hora e 3Λ. Extinguiu-se então mediante adição de 10 ml de uma mistura a 1:1 de bicarbonato de potássio 2N e sal de Rochelle 2N, aqueceu-se até à temperatura ambiente e adicionou-se 30 ml de uma mistura de bicarbonato de potássio-sal de Rochelle, extraiu-se com 3 x 100 ml de acetato de etilo. Lavaram-se os extractos reunidos com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre uma coluna de gel de sílica com hexano-acetato de etilo para se obter 145 mg do composto do título trisililado. À solução agitada de 145 mg (0,19 mmol) do intermediário tnsililado em 2,5 ml de tetra-hidrofurano anidro adicionou-se sob atmosfera de árgon 3 ml (3 mmol) de fluoreto de tetrabutil-amónio 1M em tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 65 horas. Extinguiu-se então com 5 ml de água, agitou-se durante 15 minutos, adicionaram-se 20 ml de salmoura e extraiu-se com 3 x 90 ml de acetato de etilo. Lavaram-se os extractos reunidos com uma mistura de água e salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre gel 20 20

de sílica para se obter 89 mg (33,9 %) do composto do título sob a forma de uma espuma branca; [a]+ 76° (c 0,2, EtOH), UV (EtOH); Imax : 242 - 243 nm (e 27,100), 250 - 251 (31,800), 260 (21,300); RMN-!H (CDC13) : d 0,72 (s, 3H, CH3), 1,13 (d, 3H, J = 6,3 Hz, CH3), 1,59 (s, 3H, CH3), 1,97 (m, 1H), 2,07 (m, 1H, CH de CH2), 2,15 - 2,55 (m, 8H), 2,72 - 2,84 (m, 2H, 2 CH de CH2), 4,06 (brm, 1H, CH), 4,13 (brm, 1H, CH), 5,42 (brs, 1H, CH), 5,96, 6,31 (AB, 2H, J = 11,1 Hz, CH CH).

Exemplo 7 I a-fluoro-25(R,S)-hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalciferol A uma solução de 536 mg (1,14 mmol) de óxido de [3S-(3a,5b,Z)-2-[2-metileno-3-fluoro-5-[[( 1,1 -dimetiletil)-dimetilsilil]-oxi]-ciclo-hexilideno]-etil]--difenil-fosfína em 6 ml de tetra-hidrofurano anidro à temperatura de -78°C adicionou-se 0,71 ml (1,14 mmol) de n-butil-lítio 1,6M em hexano, gota a gota, sob atmosfera de árgon. Após agitação durante 5 minutos, à solução vermelha adicionaram-se 282 mg (0,704 mmol) de [3aR-[l(lR*),3aa,7ab]]-3,3a,5,6,7,7a--hexa-hidro-7a-metil-l-[6,6,6-trifhioro-l,5-di-metil-5-[(tiimetilsilil)-oxi]-3-hexinil]--4H-inden-4-ona (epímeros) em 4,5 ml de tetra-hidrofurano anidro gota a gota no decurso de 10 minutos. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura de -78°C durante 2 horas e meia. Extinguiu-se então com 10 ml de um sal de Rochelle e aqueceu-se até à temperatura ambiente. Diluiu-se ainda com 25 ml de sal de Rochelle 2N e extraiu-se então com 3 x 100 ml de acetato de etilo. Lavaram-se as camadas orgânicas reunidas com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o resíduo mediante cromatografia FLASH sobre gel de sílica com hexano-acetato de etilo a 30:1 e depois a 1:4. Obtiveram-se 21 21

380 mg do composto do título dissililado. A uma solução de 380 mg (0,582 mmol) do intermediário dissililado em 4 ml de tetra-hidrofurano anidro adicionaram-se, sob atmosfera de árgon, 4 ml (4 mmol) de fluoreto de tetrabutil-amónio 1M em tetra-hidrofurano. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 17 horas. Extinguiu-se então com 5 ml de água, agitou-se durante 15 minutos, adicionaram-se 20 ml de salmoura e extraiu-se com 3 x 90 ml de acetato de etilo. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com água e com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se primeiramente o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre gel de sílica com hexano-acetato de etilo a 2:1 e depois mediante HPLC sobre uma coluna de sílica YMC-50 mm x 50 cm com hexano-acetato de etilo a 3:1 para se obter 233 mg (70,9 %) do composto do título sob a forma de uma espuma branca; [a]+ 22,5° (c 0,2, EtOII); UV (EtOH): lmax : 242 - 243 nm (e 11,400), 268-269 (11,050); RMN-lH (CDC13) : d 0,71 (s, 3H, CH3), 1,16 (d, 3H, J = 6,5 Hz, CH3), I, 43 - 1,58 (m, 2H), 1,60 (s, 3H, CH3), 1,60 - 1,88 (m, 4H), 2,02 (m, 2H, CH2), 2,14 - 2,47 (m, 8h), 2,64 (dd, Jvic = 3,8 Hz, Jgem = 13,5 Hz, CH de CH2), 2,82 (m, 1H, CH de CH2), 4,24 (m, 1H, CH), 5,12 (s, 1H, CH de CH2), 5,15 (ddd, LH, J = 3,9, 6,6 Hz, JHf = 49,5 Hz, CH), 5,41 (s, 2H, CH e CH de CH2), 6,12, 6,40 (AB, 2H, H = II, 3 Hz, CH CH).

Exemplo 8 25(R,S)-Hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalcifero! A uma solução de 520 mg (1,15 mmol) de óxido de [5S,Z)-2-[2-[2-metil-eno-5-[[(l, 1 -dimetiletil)-dimetilsilil]-oxi]-ciclo-hexilideno]-etil]-difheil-fosfína em 6

ml de tetra-hidrofurano anidro à temperatura de -78°C adicionou-se, gota a gota, sob atmosfera de árgon 0,715 ml (1,14 mmol) de butil-lítio 1,6M em hexano. Após agitação durante 5 minutos, à solução vermelha assim formada adicionaram-se gota a gota, no decurso de 10 minutos, 287 mg (0,716 mmol) de [3aR-[l(lR*),3aa,7ab]]--3, 3a, 5, 6, 7, 7a-hexa-hidro-7a-metil-l-[6,6,6-trifiuoro-l,5-dimetil-5-[(trimetilsilil)--oxi]-3-hexinil]-4H-inden-4-ona (epímeros) em 4 ml de tetra-hidrofurano anidro. Agitou-se então a mistura reaccional à temperatura de -78°C durante 2 horas. Extinguiu-se com 10 ml de um sal de Rochelle 2N e aqueceu-se à temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura resultante com 25 ml de sal de Rochelle 2N e extraiufse com 3 x 100 ml de acetato de etilo. Lavaram-se as camadas orgânicas reunidas com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o resíduo mediante cromatografia FLASH sobre gel de sílica com hexano-acetato de etilo a 30:1, para se obter 364 mg do composto do título dissililado. A uma solução de 364 mg (0,573 mmol) do intermediário dissililado em 4 ml de tetra-hidrofurano anidro adicionaram-se 4 ml (4 mmol) de fluoreto de tetrabutil-amónio 1M em tetra-hidrofurano sob atmosfera de árgon. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 18 horas. Extinguiu-se então com 10 ml de água, agitou-se durante 10 minutos, adicionaram-se 20 ml de salmoura e extraiu-se com 3 x 90 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as camadas orgânicas e lavaram-se com água e com salmoura, secaram-se sobre sulfato de sódio e evaporaram-se até à secura. Purificou-se o produto bruto mediante cromatografia FLASH sobre gel de sílica com hexano-acetato de etilo a 2:1 e em seguida mediante

HPLC sobre uma coluna de sílica YMC 50 mm x 50 cm com hexano-acetato de etilo a 3:2, para se obter 238 mg (74 %) do composto do título sob a forma de uma espuma branca; [a]+ 47° (c 0,2, EtOH), UV (EtOH): lmax : 206 nm (e 16,000), 263 (15,500); RMN-'Η (CDC13) : d 0,71 (s, 3H, CH3), 1,13 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3), 1,58 (s, 3H, CH3), 1,93 (m, 1H), 2,03 (ddd, Jvic = 3 e 6 Hz, Jgem = 14 Hz, CH de CH2), 2,12 - 2,52 (m, 9H), 2,58 (dd, 1H, Jvic = 3,5 Hz, Jgem = 13 Hz, CH de CH2), 2,82 (m, 1H, CH de CH2), 3,96 (brm, IH, CH), 4,83 (d, 1H, J = 1,7 Hz, CH de CH2), 5,06 (s, 1H, CH de CH2), 5,39 (brs, 1H, CH), 6,12, 6,23 (AB, 2H, Η = 11,3 Hz, CH CH).

Podem preparar-se as seguintes composições farmacêuticas de uma maneira conhecida de per si :

EXEMPLO A Cápsula de Gelatina Mole

Item Ingredientes Mg/Cápsula 1 Composto de fórmula geral I 0,0001 - 1,0 2 Hidroxitolueno butilado (BHT) 0,016 3 Hidroxianisol butilado (BHA) 0,016 4 Migliol812 q.b. 160,0 EXEMPLO B Cápsula de Gelatina Mole

Item Ingredientes Mg/Cápsula 1 Composto de fórmula geral 1 0,0001 - 1,0 2 a-Toloferol 0,016 3 Migliol 812 q.b. 160,0 24 EXEMPLO C Creme Tópico m g/g m

Composto de fórmula geral I 0,0005 -0,10 Álcool cetílico 1,5 Álcool estearílico 2,5 Span 60 (monoestearato de sorbitano) 2,0 Arlacel 165 (monoestearato de glicerilo e mistura de estearato de polioxietileno-glicol) 4,0 Tween 60 (polisorbato 60) 1,0 Óleo mineral 4,0 Propileno-glicol 5,0 Propilparabeno 0,05 BHA 0,05 Solução de Sorbitol 2,0 Edetato dissódico 0,01 Metilparabeno 0,18 Água destilada q.b. para 100 gm

Lisboa, 20 de Setembro de 2000

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula geral

na qual o símbolo R representa um átomo de hidrogénio ou de flúor e o símbolo X representa um grupo de fórmula =CH2 ou o símbolo R representa um grupo hidroxi e o símbolo X representa um átomo de hidrogénio.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o símbolo R representar um grupo hidroxi.
3. Mistura que compreende epímeros de fórmula geral

Ia HO R 2 na qual o símbolo R representa um átomo de hidrogénio ou de flúor e o símbolo X representa um grupo de fórmula =CH2 ou quando o símbolo R representa um grupo hidroxi o símbolo X representa um átomo de hidrogénio.
4. Produto de acordo com a reivindicação 3, que é o l,25(R,S)-di-hidroxi--16-eno-23-ino-26-trifluoro-19-nor-colecalciferol.
5. Produto de acordo com a reivindicação 3, que é o la-fluoro-25(R,S)--hidroxi-16-eno-23-ino-26-trifluoro-colecalciferol.
6. Produto de acordo com a reivindicação 3, que é o 25(R,S)-hidroxi-16--eno-23-ino-26-trifluoro-colecalciferol.
7. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz do composto de fórmula geral I tal como descrito na reivindicação 1 e um veículo inerte.
8. Utilização dos compostos de fórmula geral I tal como definidos na reivindicação 1, para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de perturbações hiperproliferativas, doenças neoplásicas e doenças das glândulas sebáceas. Lisboa, 20 de Setembro de 2000

ι RESUMO “ANÁLOGOS FLUORADOS DE VITAMINA D3” Descreve-se um composto de fórmula geral I

na qual o símbolo R representa um átomo de hidrogénio ou de flúor ou um grupo hidroxi e o símbolo X representa um grupo de fórmula =CH2 ou quando o símbolo R representa um grupo hidroxi, o símbolo X representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula =CH2 os quais são úteis no tratamento de perturbações hiperproliferativas, doenças neoplásicas e doenças das glândulas sebáceas.