CZ157997A3

CZ157997A3 - 84: analog of fluorizided vitamin d3 and pharmaceutical composition containing thereof

Info

Publication number: CZ157997A3
Application number: CZ971579A
Authority: CZ
Inventors: Bernard Michael Hennessy; Milan Radoje Uskokovic
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1996-05-23
Filing date: 1997-05-22
Publication date: 1997-12-17
Also published as: TW374762B; NZ314838A; BR9703373A; NO971934D0; HUP9700927A2; JPH1045712A; UY24563A1; HUP9700927A3; PL320131A1; DE69702812D1; MX9703776A; DE69702812T2; EP0808831A3; YU19997A; CO4840512A1; ZA974334B; KR970074763A; PT808831E; EP0808831B1; IL120842A0

Description

Fluorovaný analog vitaminu D3 a farmaceutický prostředek, který ho obsahu je Oblast techniky

Vynález se týká fluorovaných analogů vitaminu D3, zvláště 16-en-23-in-trifluoranalogů vitaminu D3.

i

Dosavadní stav techniky

Jakkoliv jsou známy různé účinné látky pro ošetřování rakovinových a kožních onemocnění, hledají se stále nové prostředky, které by při zvýšené účinnosti měly co nejméně účinků vedlejších.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je fluorovaný analog vitamínu D3 obecného vzorce I

kde znamená

R atom vodíku, fluoru nebo hydroxylovou skupinu a

X methylenovou skupinu nebo

R hydroxylovou skupinu a

X atom vodíku nebo methylenovou skupinu.

S překvapením sě zjistilo, že sloučeniny vzorce I navozují diferenciaci a inhibici proliferace různých kožních a rakovinových buněčných linií. Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I jsou proto užitečné pro ošetřování hyper pro 1 iferati v nich kožních onemocnění, například lupénky. Sloučeniny vzorce 1' jsou také užitečné při ošetřování neoplastických onemocnění, jako je leukemie a mazové onemocnění žláz, jako jsou například akné a mazotoková dermatitis.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících sloučeninu obecného vzorce I, vhodných pro ošetřování shora uvedených nemocí, při kterých se podává sloučenina obecného vzorce I.

I

Podle výhodného provedení jde o sloučeniny obecného vzorce I, kde znamená R hydroxylovou skupinu.

i

Vynález se také týká směsi obsahující epimery fluorovaného analogu vitaminu D3 obecného vzorce la

kde mají R a X shora uvedený význam.

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I se připravují způsobem podle schéma I a II a podle příkladů praktického provedení.

Schéma I

(CH₃)₃$iO (CH₃)₃SíO

II ^m

VI

Podle schéma I se sloučenina vzorce II, kterou je o sobě známý [3aS,[3{S*), 3aa ,7cc₍7a|B3]-(£3a.₍4₍5,6₁7_f 7a-he xahydr o-Samet hy 1-3-(1-methyl-3-but inyl)-lH-inden-7-yl3 oxy]trimethyls i lan převádí na sloučeninu vzorce III reakcí s butyllithiem a s tritrifluoracetonem v etherovém rozpouštědle, například v tetrahydrofuranu. Reakce se provádí při teplotě -100 až 0 *C, s výhodou při teplotě -78 *C.

Sloučenina vzorce III se převádí na sloučeninu vzorce IV reakcí s tetrabutylamoniumfluoridem v etherovém rozpouštědle, například v tetrahydrofuranu. Reakce se provádí při teplotě 0 až 50 'C, s výhodou při teplotě místnosti a s výhodou v prostředí argonu.

Sloučenina vzorce IV se převádí na sloučeninu vzorce V reakcí s pyridiniumdvojchromanem a 5 pyridinium-p-toluensulfonátem v chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, například v methylenchloridu.

Sloučenina vzorce V se převádí na sloučeninu vzorce VI reakcí trimethylsilylimidazolu v chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, například v methylenchloridu. Reakce se s výhodou provádí v prostředí argonu.

”.T.

Schéma II

Podle schéma II se převádí sloučenina vzorce VI na sloučeninu vzorce lb reakcí s [3S-(lZ,3a,53)]-[2~[[l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-2-methylencyklohexyliden]ethyljdifenylfosfinoxidem v tetrahydrofuranu s výhodou v prostředí argonu v přítomnosti ň-butyllithia jako zásady. Po reakci se odstraní chránící silylové skupiny za použití tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu jakožto rozpouštědle.

Nebo se sloučenina vzorce VI převádí na sloučenina vzorce lc reakcí s [3R-(3a,53,Z)]-3,5-bis[[l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidem v tetrahydrofuranu s výhodou v prostředí argonu. Po reakci se odstraní chránící silylové skupiny.

Nebo se sloučenina vzorce VI převádí na sloučenina vzorce

Id reakcí s [3S-(3α,5β,Z)]-2-[[2-methylen-3-fluor-5-[[(1,1-dimethylethyl)dímethylsilyl]oxy]cyklohexy1 iden]ethyl]dif enylfosj finoxidem v tetrahydrofuranu s výhodou v prostředí argonu. Po reakci se odstraní chránící silylové skupiny.

Nebo se sloučenina vzorce VI převádí na sloučenina vzorce Ie reakcí s [(3S,Z)-2-[2-[2-methylen-5-[[{1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenylf osf inoxidem v tetrahydrofuranu s výhodou v prostředí argonu. Po reakci se odstraní chránící silylové skupiny.

.------Jakýkol iv- -z-působ^odděl-ován í·,- bážný ^: pr a“covn'íkům^:: v-Oboru ^se může používat v kterémkoliv stupni přípravy sloučeniny vzorce I k dělení epimerní směsi pro získání buď (R) nebo (S) epimeru.

Vynález se tedy týká sloučenin obecného obecného vzorce

I, které jsou směsí epimerů (25R) a (25S) stejně jako jednotlivých epimerů nebo diastereomerů (25R) a (25S).

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou podávat orálně na7 příklad ve formě tablet, povlečených tablet, dražé, tvrdých a měkkých želatinových kapslí, roztoků, emulzí a suspenzí. Je však také možné podání rektální například ve formě čípků nebo parenterální, například ve formě vstřikovatelných roztoků. Farmaceutické prostředky podle vynálezu se mohou vyrábět za použití o sobě známých inertních anorganických nebo organických excipientů pro výrobu tablet, povlečených tablet, dražé a měkkých a tvrdých želatinových kapslí. Jakožto excipientů pro výrobu tablet, dražé a tvrdých želatinových kapslí se může používat laktóza, kukuřičný škrob nebo jeho deriváty, mastek, kyselina stearová a její soli. Jakožto vhodné excipienty pro měkké želatinové kapsle se příkladně uvádějí rostlinné oleje, vosky, tuky, polopevné nebo kapalné polyoly v závislosti na povaze účinné látky. Zpravidla však v případě měkkých želatinových kapslí nejsou zapotřebí žádné excipienty. Jakožto vhodné excipienty pro výrobu roztoků a sirupů se příkladně uvádějí voda, polyoly, sacharóza, invertní cukr a glukóza.

I

Jakožto vhodné excipienty pro výrobu vstřikovatelných roztoků se příkladně uvádějí voda, alkoholy, polyoly, glyceroly a rostlinné oleje, Jakožto vhodné excipienty pro výrobu čípků se příkladně uvádějí přírodní nebo ztužené oleje, vosky, tuky a polopevné nebo kaplné polyoly.

Kromě toho mohou farmaceutické prostředky obsahovat konzervační přísady, solubilizéry, stabilizátory, smáčedla, emul-gátory , -s-lad-id-l-a barvi va, -ochucovací př í sady , solí pro- úpravu---- osmotického tlaku, pufry, maskovací činidla a antioxidanty.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat orálně nebo vstřikováním pro ošetřování neoplastických nemocí, jako je například leukemie, teplokrevným živočichům, kteří takové ošetřaní potřebují. Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se podávají zláště orálně dospělým lidem v dávce přibližně 0,25 až 50 μβ denně pro ošetřování neoplastických nemocí, například, leukemie,

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat orálně pro ošetřovaní hyperproliretivních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza, teplokrevným živočichům, kteří takové ošetření potřebují. Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se podávají zvláště orálně dospělým lidem v dávce přibližně 0,25 až 50 pg denně pro ošetřeování hyperproliferativních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza. Sloučeniny vzorce I podle vynálezu se mohou podávat orálně pro ošetřování akné v případě lidí v dávce přibližně 0,25 až 50 Hg denně s výhodou 0,5 až

1,5 μg denně.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat také topicky pro ošetřování hyperproliferativních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza, teplokrevným živočichům, kteří takové ošetření potřebují. Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se podávají zvláště topicky v dávce přibližně 0,5 až 100 μδ denně pro ošetřování hyperproliferativních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou po.—dávat- --také. .topick-y,.- pro ..o.še,-tiřování. -^mazov-é-ho- onemocněnú-ž-laz--, jako jsou například akné a mazotoková dermatitis, v denní dávce přibližně 0,5 až 100 μβ na 1 g farmaceutického prostředku.

Užitečnost sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu při ošetřování ’ neoplastických onemocnění dokládají následující testy.

Diferenciace buněk HL-60

Navozen í di f erenc i ac e buněk HL-60 se zkouší měřením jejich oxidačního potenciálu prostřednictvím redukce nitrotetrazoliové modře (NBT).

Buňky HL-60 se udržují v prostředí RPMI 1640 doplněném 10 % FCS, 2nM L-glutaminu, lmM pyruvátu sodného, 1 % neesenciálních aminokysdelin, 50 J/ml penicilinu a 50 pg/ml streptomycinu (=RPMI/FCS). Do mikrotitrových důlků s plochým dnem se naočkuje 30000 buněk/90 μΐ RPMI/FCS. Zároveň se přidá 10 μΐ derivátů vitaminu D zředěných v kompletním prostředí k.dosažení koncentrace l0~¹¹ až 10⁶ M (zásobní roztoky 10² v ethanolu se udržují na teplotě -20 *C a chrání se před působením světla). Po třech dnech se prostředí odstraní několikakanálkovou pipetou a nahradí se 100 μΐ roztoku NBT [1 mg/ml v PBS s 200 mM forbolmyristatacetatu (PMA)]. Po další jednohodinové inkubací pří teplotě 37 *C se NBT roztok odstraní a přidá se 100 μΐ 10% SDS v 0,01 N kyselině chlorovodíkové. Fotometricky se kvantifikuje množství redukované NBT při 540 nm za použití automatického deskového čítače. Vypočte se střední hodnota tří důlků. Střední směrodaná odchylka (S.E.M.) je 5 až 10 %. Hodnoty se vyjadřují jako procento maximální diferenciace dosažené s 100 až 1000 nM kalcitriolu v téže zkoušce. Koncentrace (nM) vedoucí k 50 % této maximální hodnoty se stanovuje graficky a dává hodnotu ED 50 (tabulka I).

Tabulka f

Sloučenina	EDso(nM)
1,25-DihydroxycholekalciferoI (kal c i triol)	8,0
l,25-(R,S)Dihydroxy-16'en -23-in~2ó-trifluor cholekalciferol	0_; 15
l,25(R,S)-Dihydroxy-l6-en -23-1 n.—26-trifIuor -19-nor- cholekalciferol	0,37
la-FIuoro-25(R,S)-hydroxy-16-en -23-in -26-trifIuor cholekalciferol	3,70
25(R,S)-Hydroxy-16-en -23-in — 26-trifluor cholekalciferol	160,00

/ Užitečnost sloučenin obecného vzorce 1 jako činidla pro ošetřování pro 1 i £erativních onemocnění kůže se stanovuje následujícícm způsobem.

Inhibice keratinocytové proliferace

Buněčná linie HaCaT. - Používá se imortalizovaná lidská buněčná linie HaCaT. Měří se včleňování 3H-thymidinu v exponenciálně rostoucích kulturách po sesuti dnech kultivace

- v^_-p ř ít-om-nosti - z kouš e né .gioučeu řny-. ..........·.—

Buněčná kultura - HaCaT buňkyse kultivují v Eagle modifikovaném prostředí Dulbecco (DMEM) a v živné směsi Ham F12 (F12), 3:1 (objem/objem, ICN), které obsahují 4,5 g/1 glukózy a jsou doplněny 10 % zárodečného telecího séra (Gibco, FCS), l-glutaminem (Gibco, 2mM ) , penicilinem (Gibco, 50 mezinárodních jednotek na ml), streptomycinem (Gibco, 50 μζ/,Ό» ^EGF(10 ng/1), hydrokortisonem (400 ng/ml) toxinem cholery (8,5 ng/ml) a insulinem (5 ng/ml). Buňky se udržují ve vlhkém prostředí, obsahujícím 5 % oxidu uhlkičitého a 95 % vzduchu a pasažují se každé 3 až 4 dny.

Inhibice přijímání ³H-thymidinu - HaCaT buňky (250 buněk v kompletním kultivačním prostředí) se naočkuje do 96 důlkové kultivační misky a inkubuje se při teplotě 37 C v prostředí 5 % oxidu uhličitého a 95 Ί vzduchu po dobu šesti dnů. Inhibitory, rozpuštěné na 1 x koncentraci v IX ethanolu se přidajíbezprostředně na začátku zkoušky. Přidá se ³H-thymidin (3 Ci/mmol, Amersham) v koncentraci 1 pCi/důlek a buňky se pulzačne značí po posledních 6 hodin růstové periody. Buňky se tripsinují po dobu 10 minut při teplotě 37 *C za intenzivního míchání a sklízí se na 96 důlkové GF/C filtrační destičce (Uni Filter, Packard) za použití sklízeče buněk Midro Mate 196 (Packard). Suší se při teplotě 40 ’C ve vakuu po dobu 20 až 30 minut, přidají se 2 μΐ scintilátoru Micro Scint 0 a čitá se radioaktivita, vázaná na filtr na zařízení TOP COUNT (Packard).

Výsledky se vyjadřují jako IC50 a jsou uvedeny v tabulce

II d

TabulkaH

Sloučenina	IC_So(nM)
l,25(R,S)-Dihydroxy-16-en.-23-in :~26-trifÍuor cholekalctferol	10,0
l,25(R,S)-Dihydroxy-16-en -23-in-26-trifluor ~19-nor-cholekalciferol	V
Λα-Fluor -25(R,S)-hydroxy-16-en-23-in ‘-26-trifluor-cholekálciferol	11,0
25(R,S)-Hydroxy-16-en -23-in -26-trifluor ^cholekalciferol	650,00

Užitečnost sloučenin obecného vzorce I jako činidla pro ošetřování mazového onemocnění žláz se stanovuje následujícícm způsobem.

Inhibice lidské sebocytové prcliferace in vitro

Mazové buňky se izolují z mazových žláz dospělého člověka kombinací enzymatických a mechanických způsobů (Doran a kol., Characterization of Human Cells in vitro, J. Invest. Dermatol. 96, str. 34 až 38, 1991). Buňky se kultivují v prostředí Iscove obsahujícím 10 % zárodečného telecího séra a 4 μg/ml dexamethasonu na vrstvu myších fibroblastů 3T3 se zaraženým růs,tem. Buňky se nanesou na prostředí bez zkoušené sLoučeniny a přidá se zkoušená sloučenina v čerstvém prostředí každých 48 hodin. V den sklizně se kultury proláchnou 0,03% ethylendiamintetraoctovou kyselinou v PBS k odstranění pouze 3T3 fibroblastů, načež se provádí inkubace v systému 0,05 % trypsinu/ 0,03 % ethylendiamtetraoctové kyseliny. Buňky se suspendují, intenzivně se zamíchají k přípravě suspenze jediné buňky a čítají se v hemocytometru.

Zásobní roztoky sloučenin se připraví jako 10“² M roztoky v odplyněném 100% ethánolu a ukládají se při teplotě -20 ’C v temnu. V průběhu experimentálního používání se roztoky, rozI dělené na podíly, uvádějí na teplotu, místnosti a používají se přímým zředěním na kompletní prostředí o vhodné koncentraci.

Sloučeniny podle vynálezu se zkouší se zřetelem na inhibici proliferace růstu mazových buněk in vitro při 10^-ť>, 10^-7a 10'⁸ M. Výsledky jsou uvedeny v tabulce III jakožto množství sloučeniny podle vynálezu, potřebné k inhibici proliferace mazových buněk o 50 % (EDso) v nM ve srovnání s prostředím ošetřeným toliko nosičem.

Tabulka flj

Sloučenina	EDso(nM)
l,25(R,S)-Dihydroxy-16-en -23-in :-26-trifluor cholekalciferol

Kalciová zkouška {zkouška tolerance myši)

Hluboké změny kalciové homeostáze silně ovlivňují hmotnostní vývoj zvířat. Tohoto parametru se používá jakožto primárního textu tolerance.

Myším (o hmotnosti 25 až 30 g) se denně podává subkutánně derivát vitaminu D po 4 následující dny. Zaznamená se tělesná hmotnost právě před zkouškou a na konci zkoušky 5. den ošetření. Nejvyšší snášená dávka (HTD) je dávka, která vede k nulovému zvýšení hmotnosti v průběhu zkoušky.

Tabulka fy

Sloučenina.	HTD(pg/kg)
l,25(R,S)-Dihydroxy-16-en—23- in -26-trifluor - cholekalciferol	1,0
1,25(R,S)-Dihydroxy-ló-en -23-in -26-trifluor -19-nor- cholekalciferol	2,0
1 a-Fluoro-25(R,S)-hydroxy-16-en -23-in -26-trifluor ’- cholekalciferol	20,0
25(R,S)-Hydroxy-16-en(-23:in -26-trifluor — choldc alciferol	600_;00

Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 [3aS-[3(lS*),3aa,7a,7ab]]-l,l,l-Trifluor -6-[3a,4,5,6,7,7a-hexahydro3a-methyl-7-[trimethylsilyl)oxy-lH-inden-3-yl]-2-methyl-3-heptin2-ol (epimery) . *

Do roztoku i_ři g (3.80 mmol) of [3aS,[3(S*),3aa,7a,7ab]][[3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3a-methyl-3-(l-methyl-3-butínyl)-lHinden-7-yl]oxy]-trimethylsilanu v. 20 ml bezvodého tetrahydro furanu o teplotě -78 *C se přidá za míchání 2,61 ml (4,18 mmol)

I, 6M n-butyllithia. Míchá se pó dobu jedné hodiny, přidá se 0,68 ml (7,6 mmol) 1,1,1-trίfluoracetonu a reakční směs se míchá po dobu další jedné hodiny při teplotě -78 ’C. Reakce 'se ukončí přidáním nasycené solanky a reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti.Po zředění vodou se extrahuje ethylacetátem. . Spojené extrakty se promyji vodou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se Čistí bleskovou chromatografií na si 1ikagelovém sloupci systémem hexan-ethylacetat 20:1, čímž se získá 1,47 g (96,5 % teorie) amorfního žádaného produktu.

Příklad 2 [3aS-[3(1 S*),3aa,7a,7ab]]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-3a-methyl-3(6,6,6-trifluor -5-hydroxy-l,5-dimethyl -3-hexinyI)-lH-inden-7-oI (epimery) /

' Do míchaného roztoku 1/7 g (3,65 mmol) [3aS,[3(lS*),3aa,7a,7ab]]-l,l,l-trifluor -6-[3a,4,5,6,7,7a-hexahydro3a-methyl-7-[(trimethy-lsilyl) oxy]-lH-inden~3-yl]-2-methyl-3heptin-2-olu(epimery) v 15 ml bezvodého tetrahydrofuranu při teplotě okolí v prostředí argonu se přidá 8 ml (8,0 mmol) IM tetrabutylamoniumfluoridu. Reakční směs se míchá po dobu 90 minut a reakce se ukončí přidáním ledu. Reakční směs se zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Spojené extrakty se promyJ. L. 2 N . roz t o k e m_,h y d r o g.e .n.u.h l i č i. tanu... d.r.a.s e l n é h o ,_ v.o d o u. .a ž.. d o. n.e.u -__ trální reakce a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří, se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na si 1ikagelovém sloupci systémem hexan-ethylacetát 2:1, čímž se získá 1,2 g (100 % teorie) krystalického žádaného produktu. Teplota tání je 78 až 80 'C. [a] + 20,4° (c 0,5, ethanol (EtOH“); iH-NMR (CDC13): d 1.07 (s,3H,CH3), 1,09 (d,3H,J + 6,5 Hz, CH3),

1/0 (dt, ÍH, Jvic = 3 a 12.5 Hz, Jgem = 12/ Hz, CH z' CH2), 1,58 (s,

3H, CH3), 1,71 - 1/8 (m, 5H), 2,00 (m, ÍH, Jvic = 3 a. : 7 Hz, Jgem =

14.5 Hz, CH z CH2), 2/3 - 2/5 (m, 5H); 4,19 (brs, ÍH, CH), 5/0 (brm,

ÍH, CH);

Analýza pro C18H25F2O2 vypočteno: C 65,49 H 7,63 nalezeno: C 65,59 H 7,77

Příklad 3 [3aR-[l(R*),3aa,7ab]]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-methyl-l-(6,6,6trifluor -5-hydroxy-1,5-dimethyl-3-hexinyl)-4H-inden-4-on (epimery)

Do míchaného roztoku 300 mg (0,91 mmol) of [3aS,[3(lS*),3aa, 7a,7ab]]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-methyl-l-(6,6,6-trifluor -5hydroxy]-l,5-dimethyl-3-hexinyl)-lH-inden-7-oli{ (epimery) v. 8 ml bezvodého methylenchloridu se přidá 1,402 g (3,73 mmol) pyridiniumdvojchromanu a 70 mg pyridinium-p-toluensulfonátu a reakční směs se míchá po dobu čtyř hodin. Přidá se 20 ml etheru, míchá se po dobu 20 minut a zfiltruje se přes Celíte. Celitová vrstva se promyje 3 x 50 ml etheru. Spojené filtráty se promyí jí 20 ml ledově chladné IN kyseliny chlorovodíkové, 2N roztokem hydrogenuhličitanu draselného (40 ml), vodou a solankou. Vodná vrstva se extrahuje 2 x 100 ml systému ether-ethylacetát (1:1). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci systémem hexan-ethylacetát 3:1, čímž se získá 272 mg (91,2 % teorie) amorfního žádaného produktu.

Přík.l.a.d..._4. ________________ ___._____ .. _____ [3aR-[1(1 R*),3aa,7ab]]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-methyl-1-(6,6,6trifluor -1,5-dimethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy]-3-hexiiiyl]-4H-inden4-on (epimery)

Do míchaného roztoku 272 mg (0,828 mmol) ' [3aR-[l(R*),3aa,

7ab]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-(6,6,6-trifluor. -5hydroxy-l,5-dimethyl-3-hexinyl)-4H-inden-4-onvt. (epimery) v 6 ml ti bezvodého methylenchloridu se přidá 0,79 mg (5,38 mmol) trimethylsilylimidazolu v prostředí argonu. Reakční směs se míchá při tewplotě místnosti po dobu 2,5 hodin. Reakce sé ukončí přidáním 7 ml vody. Míchá se po dobu 30 minut a extrahuje sě 3 x 120 ml ethylacetátu. Organická vrstva se promyje 5 x směsí vody a solanky, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci systémem hexan-ethylacetát 10:1, čímž se získá 314 mg (94,6 % teorie) žádaného produktu.

Příklad 5

1,25(R,S)-Dihydroxy-16-<?n -23-in ~26-trifluor -cholekalciferol

Do míchaného roztoku 730 mg (1^25 mmol) [3S-(lZ,3a,5b)]-[2[3,5-bis[[l ,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxyl-2-methylenecyklohexyliden ]ethyl]difenylfosfinoxidu v 7 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě -78 ’C přidá 0,758 ml (1,21 mmol) 1,6M n-butyl1ithia v hexanu po kapkách v prostředí argonu. Míchá Se po dobu 5 minut, do vytvořeného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut roztok

314 mg (0584 mmol· ) of [3aR-[l(lR*),3aa,7ab]]3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor -l,5-dimethyl-5[(trimethyl-silyl)oxy]-3-hex nyl]-4H-inden -4-onw, (epimer.) . 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě -7-8-- ^G -po· -d-obu^:r4v5'· 4r©ďřn- a --reakc e-— se- úkončí- př i dání-m-Kt -ml-. -1-:.-1- ¢-, .směsi 2N Rochellovy soli a IN hydrogenuhličitanu draselného. Nechá se ohřát na teplotu místnosťi, přidá se dalších 30 ml roztoku 2N Rochellovy soli a IN hydrogenuhličitanu draselného a extrahuje se 3 x 130 ml ethylacetátu. Organická vrstva se promyje solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci systémem hexan-ethylacetát 40:1, čímž se získá 475 mg trisi lylovaného žádaného produktu,

Do roztoku 475 mg trisilylovaného meziproduktu v 7 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají 4 ml (4 mmol) IM tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu v prostředí argonu. Reakční směs še míchá při teplotě místnosti po dobu 17 hodin, přidají se další 2 in 1 IM tetrabutylamoniumfluoridu a reakční směs se míchá po dobu dalších 5 hodin. Reakce se ukončí přidáním 5 ml vody, míchá se po dobu 20 minut a tetrahydrofuran se odstraní destilací. Zbytek se extrahuje 3 x 120 ml ethylacetátu. Organická vrstva se promyje vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na si 1 ikage1ovém sloupci systémem hexan-ethylacetát 1:35, čímž se získá 270 mg žádaného produktu v podobě bílé pěny.

[a]+ 26° (c 0.2, EtOH); UV (EtOH); lmax:

203nm (e 17500), 263 (14120); 1H-NMR (CDCI3): d 0,72 (s,3H, CH3), 1.13 (d, 3H, J = 6,5 Hz, CH3), 1,58 (s, 3H, CH3), 1,92 (ddd, lR, Jvic = 3.5 a 8,5 Hz, Jgem = 13 Hz, CH z CH2), 2,21 (dd, lH, Jvic = 12 Hz, Jgem = 14 Hz, CH z CH2), 2,61 (dd, *Η, Jvic = 3Hz, Jgem = 13,5 Hz, CH z.'. CH2), 2,82 (brm, CH z CH2), 4,24 (brm, ^!H, CH), 4,45 (brm, lH, CH), 5,02, 5,34 (2s, 2H, CH2), 5,39 (brs, *H, CH), 6,11, 6,38 (AB, 2H, J = 11,2 Hz, 2CH).

Příklad 6 l,25(R,S)-Dihydroxy-l6-en-23-in-26-trifluor ~19-norcholekalciferol ______

Do míchaného roztoku 630 mg (1,1 mmol) of [3R-(3a,5b,Z)-3,5bis[[l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyKlohexyliden jethyl]difenylfosfinoxidu v 7 ml bezvodého tetrahydrofuranu o teplotě -78 ‘C se přidá po kapkách 0,685 ml (1,1 mmol) 1,6M n-butyllithia v hexanu v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut, do získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 5 minut roztok 232 mg (0,579 mmol) [3aR-[l(lR*),3aa,7ab]]-3,3a,

5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor -1,5-dimethyl-5[(trimethylsilyl)oxy]-3-hexynyl]-4H-inden-4-onu. (epimerý) 2 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá po dobu 1,75 hodin při teplotě -78 ’C. Reakce se ukončí přidáním 10 ml směsi 2N Rochellovy soli a IN hydrogenuhličitanu draselného, nechá se ohřát na teplotu místnosti a přidá se 30 ml směsi Rochellovy soli a hydrogenuhličitanu draselného a extrahuje se 3 x 100 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se promyjí solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografii na si 1 ikagelovem sloupci systémem hexan-ethylacetát, Čímž se získá 145 mg trisilyloveného žádaného produktu.

Do míchaného roztoku 145 mg (0,19 mmol) trisilylovaného meziproduktu v 2,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají v prostředí argonu 3 rol (3 mmol) IM tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 65 hodin. Reakce se ukončí přidáním 5 ml vody, reakční směs se míchá po dobu dalších 15 minut, přidá se 20 ml solanky a reakční směs se extrahuje 3 x 90 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se promyjí směsí vody a solanky, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografii na si 1 ikagelovem sloupci, čímž se získá 89 mg (33,9 % teorie) žádaného produktu v podobě bílé pěny.

_τ......(a]+.76\.(c 0.2, EtOH); UV (EtOH); lmax: 242-243 nm (e

27~10Ój’ 250-251 (31*800), 2ó(f(2Í300); ¹ H-NMR: (ČDČÍ3): ď '0,72 (ϊ 3H, CH3), 1,13 (d, 3H, J = 6,3 Hz, CH3), 1,59 (s, 3H, CH3), 1,97 (m, IH), 2,07 (m, IH, CH z: CH2), 2,15-2,55 (m, 8H), 2,72-2,84 (m, 2H, 2 CH z CH2), 4,06 (brm, IH, CH), 4,13 (brm, IH, CH), 5,42 (brs, IH, CH), 5,96, , 6,31 (AB, 2H, J = 11,1 Hz, CH CH).

Příklad 7 la-fluoro-25(R,S)-hydroxy-l6-en·~23-.in<-26-trifluor cholekalciferol

Do roztoku 536 mg (1,14 mmol) of [3S-(3a,5b,Z)-2-[2methylene-3-fluoro-5-[[(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy] cyklohexyliden· ]ethyl]difenylfosf inoxidu v 6 ml bezvodého tetrahydrofuranu o teplotě -78 ’C se přidá po kapkách 0,71 ml {1,14 mmol) 1,6 M n-butyllithia v hexanu v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut, do získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu '10 minut 282 mg (0,704 mmol) [3aR[ 1(1 R*),3aa,7ab]]-3,3a, 5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l- [6,6,6trifluor,-l,5-di-methyl-5 [(trimethylsilyl) oxy] -3-hex nyl]-4Hinden-4-onu (epimery) v 4,5 ml bezvodého tetrahydroEuranu. Reakční směs se míchá po dobu 2,5 hodin při teplotě -78 ‘C. Reakce se ukončí přidáním 10 ml 2N Rochellovy soli, reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a přidá se 25 ml 2N Rochellovy sóli. Extrahuje se 3 x 100 ml ethylacetátu.· Spojené extrakty se promyjí solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci systémem hexan-ethylacetát 30:1 a pak 1:4, čímž se získá 380 mg disilylovaného žádaného produktu.

Do roztoku 380 mg (0,582 mmol) disilylovaného meziproduktu ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají v prostředí- argonu 4 ml (4 mmol) IM tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 17 hodin. Reakce se ukončí př-ídáním 5 ml vody, reakční směs se míchá po dobu dalších 15 minut, přidá se 20 ml solanky a reakční směs se extrahuje 3 x 90 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty se promyjí směsí vody a solanky, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci za použití systému hexan-ethylacetát 2:1 a pak chromatografií HPLC na

YMC-50 mm x 50 cm silikagelovém sloupci za použití systému hexan-ethylacetát 3:2, čímž se získá 233 mg (70,9 X teorie) Žá, i daného prodiiktu v podobě bílé pěny.

[a)+ 22,5° (c 0.2, EtOH); UV (EtOH):

lmax: 242-243 nm (e 11 400), 268-269 (H 050); iH-NMR (CDCI3): d 0.71 (s, 3H, CH3), 1,16 (d, 3H, J = 6,5Hz, CH3), 1/3-1,58 (m, 2H), 1,60 (s, 3H, CH3), 1,60 - 1,88 (m, 4H), 2,02 (m, 2H, CH2), 2,14-2/7 (m, 8H), 2,64 (dd, Jvic - 3,8 Hz, Jgem = 13.5 Hz, CH _z CH2), 2.82 (m, 1H, CH z CH2), 4,24 (m, 1H, CH), 5.12 (s, 1H, CH z CH2), 5/5 (ddd, 1H, J = 3,9, 6.6 Hz, JHF = 49/ Hz, CH), 5/1 (s, 2H, CH a CH z, CH2), 6/2, 6/0 (AB, 2H, J = 11.3 Hz, CH CH).

Příklad 8

25(R,S)-Hydroxy-16-en -23-in -26-trifluor -cholekalciferol

I

Do roztoku 520 mg (1,15 mmol) [5S,Z)-2-[2-[2-methylen 5-[[(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden ]ethyl] difeny1fosfinoxidu v 6 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě -78 ’C přidá po kapkách v prostředí argonu 0,715 ml (1,14 mmol) 1,6M butyllithia v hexanu. Reakční směs se míchá po dobu 5 minut. Do takto vytvořeného červeného roztoku se po kapkách přidá v průběhu 10 minut 287 mg (0,716 mmol)

& trifluor. -l,5-dimethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy]-3-hexinyl]-4H-inden_ _ _4-c>nu (epimery) ve: 4 ml ...bezvodého tetrahydrofuranu. ^.Reakční směs se míchá po dobu dvou hodin při teplotě -78 *C. Reakce se ukončí přidáním 10 ml 2N Rochellovy soli a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Získaná reakční směs se zředí 25 ml 2N Rochellovy soli. Extrahuje se 3 x 100 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se promyjí solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci systémem hexan-ethylacetát 30:1, čímž se získá 364 mg disilylovaného žádaného pro21 duktu .

Do roztoku 364^. mg {0,573 mmol) disilylovaného meziproduktu ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají v prostředí argonu 4 ml (4 mmol.) IM tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml vody, reakční směs se míchá po dobu dalších 10 minut, přidá se 20 ml solanky a reakční směs se extrahuje 3 x 90 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty.se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na si 1 ikagelovem sloupci za použití systému hexan-ethylacetát 2:1 a pak chromatografií HPLC na YMC-50 mm x 50 cm silikagelovém sloupci za použití systému hexan-ethy lacetát 3:2, čímž se získá 238 mg (74 % teorie) žádaného produktu v podobě bílé pěny.

j · [a]+ 47° (c 0.2, EtOH); UV (EtOH):

lmax 206 nm (e 16 000), 263 (15 500); 1h-NMR (CDCI3): d 0,71 (s, 3H, CH3), 1,13 (d, 3H, J = 6,4 Hz, CH3), 1.58 (s, 3H, CH3), 1,93 (m, 1H), 2,03 (ddd, 1H, Jvic = 3 a. 6 Hz, Jgem = 14 Hz, CH CH2), 2,12 - 2,52 (m, ,9H), 2.58 (dd, 1H, Jvic = 3,5 Hz, Jgem = 13 Hz, CH z CH2), 2,82 (m, 1H, CH z CH2), 3,96 (brm, 1H, CH), 4,83 (d, 1H, J = 1,7 Hz, CH _z CH2), 5,06 (s, 1H, CH z CH2), 5_Z39 (brs, 1H, CH), 6,12, 6,23 (AB, 2H, J = 11,3 Hz, CH CH).

Následující farmaceutické prostředky se připravují o sobě známým způsobem.

Příklad A

Měkká želatinová kapsle

Číslo Složka sloučenina obecného vzorce I butylovaný hydroxytoluen (BHT) mg/kapsle 0,0001 až 1,0 0,016 butylovaný hydroxyanisol (BHA) 0,016

Miglyol 812 q.s. 160,000

Příklad B

Měkká želatinová kapsle

Číslo Složka sloučenina obecného vzorce I a-tokoferol

Miglyol 812 q.s.

Příklad C

Topický krém sloučenina obecného vzorce I cetylalkohol stearylalkohol

Spán 60 (sorbitanmonostearát)

Arlacel 165 (směs glycerylmonostearátu / a polyoxyethylenglykolstearátu)

Tween 60 (polysorbát 60) minerální olej propylenglykol propylparaben butylovaný hydroxyanisol (BHA) sorbitolový roztok dinatriumedetát methylparaben destilovaná voda q.s. do mg/kapsle 0,0001 až 1,0 0,016

160,000 mg/g

0,0005 až 0,10

1.5

2.5 2,0

4,0

1,0

4,0

5,0

0,05

2,0

0,01

0,18

100,00 g

Průmyslová využitelnost

Fluorovaný analog vitaminu D3 vhodný pro výrobu farmaceutických prostředků pro ošetřování hyperproliferativních poruch, neoplastických onemocnění a mazového onemocnění žláz.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1, Fluorovaný analog vitaminu D3 obecného vzorce I ii*¹ i

JM31N1SV1A ', 0H3ACl'S AW i avyo £6 >

I ⁵ 01$OQ i í ?, B C 0

Po kde znamená

R atom vodíku, fluoru nebo hydroxylovou skupinu a

X methylenovou skupinu nebo.

R hydroxylovou skupinu a

X atom vodíku nebo methylenovou skupinu.

} /
2. Fluorovaný analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R hydroxylovou skupinu a X má význam uvedený v nároku 1.
3.

Směsi obsahující epimery sloučeniny obecného vzorce la

R kde znamená

R atom vodíku, fluoru nebo hydroxylovou skupinu a

X methylenovou skupinu nebo

R hydroxylovou skupinu a

X atom vodíku nebo methylenovou skupinu.
4. Fluorovaný analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kterým je 1,25(S,R)-dihydroxy-16-en-23-in-26-trifluorcholekalciferol.
5. Fluorovaný analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kterým je 1,25(S,R)-dihydroxy-16-en-23-in-26-trifluor-19-nor-cholekalciferol.
6. Fluorovaný analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kterým je la-fluor-25(S,R)-dihydroxy-16-en-23-in26-trifluorcholekalciferol.
7. Fluorovaný analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kterým je 25(S,R)-dihydroxy-16-en-23-in-26-tri,f luorcholekalcif erol.
8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se t í m , že obsahuje jako účinnou látku fluorovaný analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce X a farmaceuticky vhodný inertní nosič.
9. Fluorovaný analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I pro výrobu farmaceutického prostředku pro ošetřování hyperproliferativních poruch neoplastických onemocnění a mazového onemocnění žláz.