CZ157897A3 - Vitamin d3 analog, process of its preparation and pharmaceutical composition containing thereof - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález, se týká analogu vitaminu D 3 , zvláště 2O-epi-16-analogů vitaminu D3 a farmaceutického prostředku, který ho obsahuje a je vhodný pro ošetřování neoplastických onemocnění, jako je leukemie nebo rakovina prsu a mazového onemocnění žláz, jako jsou například akné a mazotoková dermatitis. Jsou také vhodné pro ošetřování osteoporózy. Rovněž jsou vhodné ke kosmetickým účelům.

Dosavadní stav t ec h n i k_v

Jakkoliv jsou známy různé účinné látky pro ošetřování rakovinových a kožních onemocnění, hledají se stál. c nové prostředky, které by při zvýšené účinnosti měly co ne. jméně účinků vedl <;j š í c h.

Podstata vyná lezu

Podstatou vynálezu je analog vitaminu D3 obecného vzorce I

kde znamená

R atom vodíku, fluoru nebo hydroxylovou skupinu,

R2 atom vodíku, nižší alkylovou skupinu nebo atom halogenu, X methylenovou skupinu nebo

R hydroxylovou skupinu a

X H,H nebo methylenovou skupinu a

H

A	skupinu -C=C- ,	C = C 1 1	1	C = t	C 1	nebo
		1 1 H		1 H	1 H
	-CH2-CH2- za podmínky,	že v	případě,	kdy A	znamená skupinu
	-CH2-CH2-, znamená R2	atom	vodíku	nebo	nižší	alkylovou

skupinu.

Výrazem nižší alkylová skupina se zde vždy míní alkylová skupina s přímým nebo s rozvětveným řetězcem s 1 až 4 atomy uhlíku, jako je příkladně skupina methylová, ethylová, propylová, isopropylová, butylová a terč.-butylová skupina. S výhodou se nižší alkylovou skupinou míní skupina methylová nebo ethylová. Atomem halogenu se vždy míní atom fluoru, jodu, bromu nebo chloru, zvláště atom fluoru.

S překvapením se zjistilo, že sloučeniny obecného vzorce I navozují diferenciaci a inhibici proliferace různých kožních a rakovinových buněčných linií. Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I jsoxi proto užitečné pro ošetřování hyperproliferativních kožních onemocnění, například lupénky. Sloučeniny obecného vzorce I jsou také užitečné při ošetřování neoplastických onemocnění, jako je leukemie nebo rakovina prsu a mazových onemocnění žláz, jako jsou například akné a mazotoková dermatitis. Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu, zvláště la-fluor-25-hydroxy-16,23E-dien-26,27-bishomo-20-epicholekalciferol jsou také užitčené při ošetřování osteoporózy.

Kromě toho při topickém nanášení na pokožku obracejí sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu stavy spojené s poškozením světlem. Topické nanášení sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu na pokožku poškozenou vystavení slunci působícímu vytváření vrásek, elastózu a předčasné stárnutí může vést naopak ke zlepšení vzhledu pokožky. Jinými slovy topické nanášení sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I vytváří pokožku s hladkým a mladistvým vzhledem.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících sloučeninu obecného vzorce I a farmaceuticky vhodný nosič. Takových farmaceutických prostředků se používá k navození diferenciace a inhibíce proliferace kožních a rakovinových buněčných linií, zvláště pro ošetřování hyperproliferativních onemocnění pokožky, jako je lupénka, neoplastických onemocnění, jako je leukemie a mazových onemocnění žláz jako je akné, jakož také pro ošetřování nežádoucích stavů způsobených sluncem, zvláště pro topické nanášení na místa pokožky poškozená sluněním, vráskami, elastózou a předčasný stárnutím.

Vynález se také týká použití sloučenin podle vynálezu obecného vzorce 1 pro výrobu farmaceutických prostředků pro ošetřování shora uvedených nemocí a stavů. Vynález se také týká způsobu přípravy sloučenin podle vynálezu obecného vzorce I a meziproduktů obecného vzorce XII pro tuto přípravu.

Podle výhodného provedení jde o sloučeniny obecného vzorce I, kde znamená R hydroxylovou skupinu. Ve sloučeninách podle vynálezu obecného vzorce I znamená R2 s výhodou atom vodíku nebo fluoru. Výhodnými sloučeninami podle vynálezu obecného vzorce I jsou

1.25- dihydroxy-16-en-23-ih-20-epi-cholekalciferol,

1.25- dihydroxy-16-en-20-epi-cholekalciferol,

1.25- dihydroxy-16-en-23-in-26,27-hexafluor-20-epi-cholekalci4 f erol, lcr-fluor-25-hydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluor-20-epi-cholekalciferol, la-f'luor-25-hydroxy-16-en-23-in-26,27-hexafluor-20-epi-cholekalciferol,

1.25- dihydroxy-16,23E-dien-26,27-hexafluor-20-epi-cholekalcif e ro 1 ,

1.25- dihydroxy-16₁23Z-dien-26,27-hexafluor-20-epi-cholekalcif erol,

1.25- dihydroxy-16,23Z-dien-19-nor-26,27-hexafluor-20-epi-cholekalc i ferol.

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I se připravují způsobem podle schéma I až V a podle příkladů praktického provedení .

První stupeň způsobu přípravy sloučenin podle vynálezu οι) ecného vzorce 1 zahrnuje odstranění chránící skupiny z odpovídajících sloučenin, obsahujících bydroxyxlovou skupinu, chráněnou silylovou skupinou.

Ve sloučeninách používaných pro způsob přípravy podle schéma I až V mají jednotlivé symboly shora uvedený význam, přičemž pří přípravě podle schéma III znamená R2 atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu.

Schéma II

Schéma I ϊ I

R

Schéma IV

HC?

Ic

Schéma V

HCT

R

Sloučenina vzorce II, používaná při způsobu přípravy podle schéma I, je o sobě známá (B.M. Trošt, P.R. Bernstein, C. F. Funfschi11 ing , J. American Chemical Society 101, str. 4378, 1979) a převádí se na sloučeninu vzorce III reakcí s acetanhydridem, s pyridinem a s dimethylam inopyridinem ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormetban. Reakce se provádí při teplotě 0 až 50 'C, s výhodou při teplotě místnosti, s výhodou v prostředí argonu.

Sloučenina vzorce III se převádí na sloučeninu vzorce IV reakcí se zásadou, jako je například uhličitan sodný, v alkoholovém rozpouštědle, jako je například methanol, s výhodou v prostředí argonu.

Sloučenina vzorce IV se převádí na sloučeninu vzorce V reakcí s oxa ly 1 ch loridem a s dimethy1su1foxidem ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dich1 ořmethan, v prostředí argonu,

Sloučenina vzorce V se převádí na sloučeninu vzorce VI reakcí s benzalacetonem v přítomnosti palladia na uhlí jako katalyzátoru.

Sloučenina vzorce VI se převádí na sloučeninu vzorce VII reakcí s 3-1rimethylsi 1y1prop inalem a s Lewisovou kyselinou, jako je například dimethylaluminiumchlorid, ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormethan.

Sloučenina vzorce VII se převádí na sloučeninu vzorce VIII reakcí odpovídajícího fenylthionokarbonátu s tri-n-butylcínhydridem a s triethylboranem v toluenu.

Sloučenina vzorce VIII se převádí na sloučeninu vzorce IX reakcí se zásadou, jako je například hydroxid sodný, v alkoholovém rozpouštědle, jako je například ethanol. Reakce se pro11 vádí při teplotě 50 až 100 ’C, s výhodou při teplotě 80 C.

Sloučenina vzorce IX se převádí na sloučeninu vzorce X reakcí s 1 -(trimethylsilyl)imidazolem ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například bezvodý dichlormethan.

Sloučenina vzorce X se převádí na sloučeninu vzorce XI reakcí s odpovídající sloučeninou obecného vzorce

C{R₂')3

I o = c

I

C(R₂ ' )3 kde znamená R₂ atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu v přítomnosti zásady, jako je například n-buty11 ithium. Reakce se provádí s výhodou při teplotě -78 ’C.

Pokud se připravuje sloučenina obecného vzorce I, kde znamená R₂ atom halogenu, nechává se reagovat sloučenina vzorce X s halogenovaným acetonem, například s hexafluoracetonem, v přítomnosti zásady, jako je například n-butyl1ithium.

Podle schéma II se sloučenina obecného vzorce XII, převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XIII reakcí s oxidačním činidlem, jako je například pyridiniumdvojchroman ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například bezvodý dichlormethan.

Sloučenina obecného vzorce XIII se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XIV reakcí s 1(trimethy1sily1)imidazolem ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například bezvodý dichlormethan.

Sloučenina obecného vzorce XIV se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ia, kde znamená R hyxdroxylovou skupinu a X methylenovou skupinu, reakcí s [3S-(11,3α,5β)]-l2[3,5-bis[[{l,l-dimethylethyldimethylsilyl]oxy]-2-methylencyk1ohexy1 i den]ethy1]difeny1fosfi noxidem v etherovém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, v přítomnosti n-butyllithia jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XIV převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ia, kde znamená R atom vodíku, reakcí s [ 5S,Z]-[2-[2-[2-methy1en-5-[[(1,1-dimethy1ethy1)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidem v etherovém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, v přítomnosti n-buty 11ithia jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XIV převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ia, kde znamená R atom fluoru, reakcí s [3S - (3a,5|3,Z]-[2-[2-[2- methylen- 3-fluor- 5 - [[(1,1dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenyl fosfinoxidem v etherovém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, v př i tom nos t. i n - bn t y J 1 i t. h i a jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XIV převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ia, kde znamená R hydroxylovou skupinu a X atom vodíku, reakcí s [3R-(3α,5β,2]-3,5-b i s ([(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl] difeny1fosfi nox idem v etherovém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, v přítomnosti n-butyl1ithia jako zásady.

Podle schéma III se sloučenina obecného vzorce XII redukuje na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XV reakcí s vodíkem v přítomnosti Lindlarova katalyzátoru v organickém rozpouštědle, jako je například směs ethylacetátu, hexanu a ethanolu, v přítomnosti chinolinu.

Sloučenina obecného vzorce XV se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XVI reakcí s vodíkem v přítomnosti katalyzátoru například 1,4-bis{difenylfosfin)butan-l,5-cyklo13 oktadienrhodiumtetraf1uorborátu a rtuti ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormethan.

Sloučenina obecného vzorce XVI se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XVII reakcí s pyridiniumdvojchroroanem ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormethan.

Sloučenina obecného vzorce XVII se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XVIII reakcí s 1-(trimethy1si 1y1)imidazo1em ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormethan.

Sloučenina obecného vzorce XVIII převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ib, kde znamená R hydroxylovou skupinu a X methylenovou skupinu, reakcí s [ 3S - { 1 Z , 3c , 5(3) ] - [ 2 [3,5 -b i s[[(1,1-dimethylethyldimethylsilyl]oxy]-2-methylencyk lohexyliden]ethyl]di feny]fosfinoxidem v bezvodém tetrahydrofu raun jako rozpouštědle, v přítomnou Li n -butv 1 1 i .tli i a jako zásady, s výhodouvpři teplotě -78 * C.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XVIII převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ib, kde znamená R hydroxylovou skupinu a X atom vodíku, reakcí s [3R-(3a,5P,Z]-3,5-bis [[(1,l-dímethylethyl)dimethylsílyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]d i feny 1 fosfi nox idem v bezvodém tetrahydrofuranu jako rozpouštědle, v přítomnosti n-buty11 ithi a jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XVIII převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce la, kde znamená R atom fluoru, reakcí s [3S-(3ct,5(3,Z]-[2 - [2 - [2-methylen-3-fluor-5-[[{l,ldimethylethyl)dinethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenyl fosfi nox idem v bezvodém tetrahydrofuranu jako rozpouštědle, v přítomnosti n-buty11ithia jako zásady, při teplotě -78 *C,

Podle schéma IV se sloučenina obecného vzorce XII reduku14 je na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XIX reakcí s redukčním činidlem, jako je například lithiumaluminiumhydrid v etherovém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, v přítomnosti methoxidu sodného jako zásady.

Sloučenina obecného vzorce XIX se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XX reakcí s oxidačním činidlem, jako je například pyridiniumdvojchroman, ve chlorovaném uhlovo díkovém rozpouštědle, jako je například dich1ormethan.

Sloučenina obecného vzorce XX se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XXI reakcí s 1-(trimethylsily1)i midazolem ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormethan.

Sloučenina obecného vzorce XXI se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ic, kde znamená R hydroxylovou skupinu a X methylenovou skupinu, reakcí s f3S-(lZ,3n,53)]-[2[ 3 , 5 - b i s | [ ( 1 , 1 - d i in c t hy 1 e t h y 1 d i in c t h y 1 s i 1 y 1 ] o x y | - 2 - m c 1. h y 1 en c y k 1 ohexy1 iden]ethy1]difeny1fosfi nox idem v etherovém rozpouštěd le, jako je tetrahydrofuran, v přítomnosti n-butyllithia jako zásady .

Nebo se sloučenina obecného vzorce XXI převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ic, kde znamená R atom vodíku, reakcí s [5S,Z]-[2-[2-[2-methy1en-5-[[(1,1-dimethylethy1)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidem v etherovém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, v přítomnosti n-butyllithia jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XXI převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ic, kde znamená R atom fluoru, reakcí s [3S-(3tt,5β,ZJ-[2-[2-[2-methy1en-3-fluor-5-[l(1,1dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl] di f eny1 fosfinoxidem v bezvodém tetrahydrofuranu jako rozpouštědle, v přítomnosti n-butyllithia jako zásady.

Podle schéma V se sloučenina obecného vzorce XII převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XXII hydrogenací v přítomnosti Lindlarova katalyzátoru a chinolinu ve směsi rozpouštědel, jako je například směs ethy láce tátu, hexanu a ethanolu.

Sloučenina obecného vzorce XXII se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XXIII reakcí s oxidačním činidlem, jako je například pyridiniumdvojchroman ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormethan.

Sloučenina obecného vzorce XXIII se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce XXIV reakcí s l-(trimethylsilyl) imidazolem ve chlorovaném uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je například dichlormethan,

Sloučenina obecného vzorce XXIV se převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Id, kde znamená R hydroxylovou skupinu a X methylenovou skupinu, reakcí s [3 S - ( .1 Z. , 3u , 5β ) ] - [ 2 [3,5-bisf[(1,1-dimethyletbyldimethylsi1y1]oxy]-2-methylencyk lohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidem v etherovém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, v přítomnosti n-butyllithia jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XXIV převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Id, kde znamená R hydroxylovou skupinu a X atom vodíku, reakcí s [ 3R-(3d,5β,Z ] -3,5-bis[ [ (1 , l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difeny1fosfinoxidem v bezvodém tetrahydrofuranu jako rozpouštědle, v přítomnosti n-buty11 ithia jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XXIV převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Id, kde znamená R atom vodíku, reakcí s [ 5S,Z ] - [2-(2-(2- methylen- 5-[[{l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidem v etherovém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, v přítomnosti n-butyllithia jako zásady.

Nebo se sloučenina obecného vzorce XXIV převádí na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Id, kde znamená R atom fluoru, reakcí s [33-(3α,5β,Ζ]~[2-[2-[2-ιηβ11ιγ1βη-3-ΠυοΓ-5-[[(1,1dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenyl fosfinoxidem v bezvodém tetrahydrofuranu jako rozpouštědle, v přítomnosti n-buty 11 ithi a jako zásady.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou podávat orálně například ve formě tablet, povlečených tablet, dražé, tvrdých a měkkých želatinových kapslí, roztoků, emulzí a suspenzí. Je však také možné podání rektální například ve formě čípků nebo parenterální, například ve formě vstříkovatelných roztoků. Farmaceutické prostředky podle vynálezu se mohou vyrábět za použití o sobě známých inertních anorganických nebo organických excipientů pro výrobu tablet, povlečených tablet, dražé a měkkých a tvrdých želatinových kapslí, Jakožto excipientů pro výrobu tablet, dražé a tvrdých želatinových kapslí se může používat laktóza, kukuřičný škrob nebo jeho deriváty, mastek, kyselina st carová a její solí. Jakožto vhodné exc i picni, y pro měkké želatinovc kapsle se příkladně uvádějí rostlinné oleje, vosky, tuky, polopevné nebo kapalné polyoly v závislosti na povaze účinné látky. Zpravidla však v případě měkkých želatinových kapslí nejsou zapotřebí žádné excipienty. Jakožto vhodné excipienty pro výrobu roztoků a sirupů se příkladně uvádějí voda, polyoly, sacharóza, invertní cukr a glukóza.

Jakožto vhodné excipienty pro výrobu vstříkovatelných roztoků se příkladně uvádějí voda, alkoholy, polyoly, glyceroly a rostlinné oleje. Jakožto vhodné excipienty pro výrobu čípků se příkladně uvádějí přírodní nebo ztužené oleje, vosky, tuky a polopevné nebo kaplné polyoly.

Kromě toho mohou farmaceutické prostředky obsahovat konzervační přísady, solubilizéry, stabilizátory, smáčedla, emu 1 gátory, sladidla, barviva, ochucovací přísady, soli pro úpravu osmotického tlaku, pufry, maskovací činidla a antioxidanty.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat orálně nebo vstřikováním pro ošetřování neoplastických nemocí, jako je například leukemie, teplokrevným živočichům, kteří takové ošetřaní potřebují. Sloučeniny obecného vzorce 1 podle vynálezu se podávají zláště orálně dospělým lidem v dávce přibližně 0,25 až 50 p g denně pro ošetřování neoplastických nemocí, například leukemie nebo rakoviny prsu.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat. orálně pro ošetřování hyperpro1 ireti vních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza, teplokrevným živočichům, kteří takové ošetření potřebují. Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se podávají zvláště orálně dospělým lidem v dávce přibližně 0,25 až 50 pg denně pro ošetřeování hyperproliferativních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza. Sloučeniny vzorce 1 podle vynálezu se mohou podával, orálně oše t. řo vá n í a k πe v případ ě lidí dávce přibližně 0,25 až 50 pg denně výhodou 0,5 až

1,5 pg denně .

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat také topicky pro ošetřování hyperproliferativních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza, teplokrevným živočichům, kteří takové ošetření potřebují. Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se podávají zvláště topicky v dávce přibližně 0,5 až 100 pg denně pro ošetřování hyperproliferativních kožních onemocnění, jako jsou lupénka, bazální buněčný karcinom, poruchy keratinizace a keratóza.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu se mohou podávat také topicky pro ošetřování mazového onemocnění žláz, jako jsou například akné a mazotoková dermatitis.

Užitečnost sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu při ošetřování neoplastických onemocnění dokládají následující testy.

Diferenciace buněk HL-60

Navození diferenciace buněk HL-60 se zkouší měřením jejích oxidačního potenciálu prostřednictvím redukce nitrotetrazoliové modře (NBT).

Buňky HL-60 se udržují v prostředí RPMI 1640 doplněném 10 X FCS, 2nM L-glutaminu, lmM pyruvátu sodného, 1 X neesenciálních amínokysdelin, 50 J/ml penicilinu a 50 pg/m 1 streptomycinu (=RPMI/FCS). Do mikrotitrových důlků s plochým dnem se naočkuje 30000 buněk/90 pl RPMI/FCS. Bezprostředně po naočkování se přidá 10 μ]. zkoušené sloučeniny zředěné v doplněném prostředí RPMI k dosažení koncentrace 10^-11 až 10⁶ M (zásobní roztoky 10^-2 v ethanolu se udržují na teplotě -20 ’C a chrání se před působením světla). Po třech dnech se prostředí odstraní někulikakanálkovou pipetou a nahradí sc 100 μΐ roztoku NBT [1 mg/ml v solance pufrované fosfátem (PBS) s 200 mM forbolmyristátacetátu (PMA) ] . Po další jednohodinové inkubaci při teplotě 37 ’C se NBT roztok odstraní a přidá se 100 μΐ 10X SDS v 0,01 N kyselině chlorovodíkové. Fotometricky se kvantifikuje množství redukované NBT při 540 nm za použití automatického deskového čítače. Vypočte se střední hodnota tří důlků. Střední směrodaná odchylka (S.E.M.) je 5 až 10 X. Hodnoty se vyjadřují jako procento maximální diferenciace dosažené s 100 až 1000 nM kalcitriolu v téže zkoušce. Koncentrace (nM) vedoucí k 50 X této maximální hodnoty se stanovuje graficky a dává hodnotu ED so (tabulka I).

Tabu 1 ka I

Sloučenina	ED5o (nM)
1,25-Dihydroxy-cholekalciferol	6,0
1,25-Dihydroxy-16-en -23-im 26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalcifero 1	2;0
1,25-Dihydroxy-16,23 E-dien --26, 27-hexafluoro-20-epi- cholekalciferol	0.37 i
1,25-Dihydroxy-l 6,23Z-dien —26; 27-hexafluoro-20-epi- cholekalciferol	2,3
1,25-Dihydroxy -1 6-en -23in -20-epi-cholekaIciferoI	15,0
1,25-Dihydroxy-16-en -20-epiehoiekalcíferol	2 5
la-Fluoro-25-hydroxy-16,23Z dien -26,27-hexafluoro-20-epichole kalciferol	20.0 /
1,25-Dihydroxy-16,23Z-dien - 26,27-hexafluoro-20-epi-19-nor- cholek.alcíferol	4.5 1

Antíprolífertívní aktivita v případě T47-D a MCF-7 buněk prsního karcinomu

Při těchto testech se používá dvou buněčných linií a požadavky na jejich růst jsou následující:

· T47 D buňky prsního karcinomu sc nechávají růst na prostředí RPMI 1640 doplněném 10 Mg/ml hovězího inzulínu a 10 Z zárodečného hovězího séra.

2. MCF-7 buňky prsního karcinomu se nechávají růst na prostředí MEM (Eagles) doplněném neesenciá1ními aminokyselinami, 1 mM pyruvátu sodného, 10 μg/ml hovězího inzulínu a 10 % zárodečného hovězího séra.

Buňky se nechávají růst ve vhodném prostředí k opoždění log fáze ( 80 X slinutí). T47-D nebo MCE-7 buňky se pak trypsinují a očkují se za 4000 nebo 2000 buněk/důlek. 24 hodin po naočkování se připraví sériové zředění v ethanolu solubilizované drogy v témže prostředí a vnese do trojných důlků při konečné koncentraci 1000 až 0,1 nM a 0,1 % ethanolu. Ve třetí až sedmý den po přidání drogy se přidá 50 μ 1 roztoku 5 mg/ml 3-{4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5“difenyltetrazoliumbromidu v solance pufrované fosfátem (MTT) do každého důlku a pokračuje se v inkubaci při teplotě 37 ‘C po dobu 2,5 hodin. Destičky se pak krátce odstředí při 800 x g v průběhu pěti minut, prostředí se odsaje z důlků, přidá se 50 μΐ ethanolu na důlek k rozpuštění vytvořeného formazanu v průběhu inkubace s MTT. Protřepává se 15 minut a stanovuje se optická hustota pro každý důlek v automatickém deskovém čítači při 570 a 600 nu. Vypočte se procentová inhibice růstu buněk porovnáním optické hustoty buněk ošetřených zkoušenou sloučeninou s buňkami ošetřenými toliko 0,1% ethanolem. Stanoví se hodnota ICso na základě vzorce Reeda a Muencha (Reed Ϊ.. J. a H. Muench, A simple method of estimating fifty procent endpoint, Am. J. Hyg. 27, str. 493 až 497, 1938). Výsledky jsou uvedeny v tabulce II.

Tabulka 1I

Sloučenina	T47-D	MCF-7
1,25-Dihydroxy-cholekalcifero]	81.0	149
1,25-Dihydroxy-1 ó-en -23-in 26,27-hexaf)uoro-20-epi-chole- kalciferol	6.7	0j95
1,25-Dihydroxy-1 ó,23E-dien -26.27hexafluoro-20-epi-cholekalciferoI	10.0	ND
1 a-Fluoro-25-hydroxy-16-cn -23-in 26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferol		11
1 a-Fluoro-25-hydroxy-16,23E-dien 26.27- hcxafluoro-20-epi-cholckalcifcrol		9
1,25-Dihydroxy-16-cn -23-i'n -26,27bi sborno-20-epi-cholekalciferol		11
1,25-Dihydroxy-16-en .-23-in - 26,27bishomo- 19-nor-20-epi-cholekalciferol		12
1 a-Fluoro-25-hydroxy-16,23E-dien — 2 6,27- b i s h o Jn o -20 - e p i - c h o 1 e ka i c i í c ro 1		30

Užitečnost sloučenin obecného vzorce I jako činidla pro ošetřováni prolifenativních onemocněni kůže se stanovuje nasledujícícm způsobem.

Inhibice keratinocytové proliferace

Buněčná linie HaCaT. - Používá se i mor ta 1 izováná lidská buněčná linie HaCaT. Měří se včleňování ^H-thvmidinu v exponenciálně rostoucích kulturách po šesti dnech kultivace v přítomnosti zkoušené sloučeniny.

Buněčná kultura - HaCaT buňky se kultivují v Eagle modifikovaném prostředí Dulbecco (DMEM) a v živné směsí Ham F12 (F12), 3:1 (objem/objem, ICN), které obsahují 4,5 g/1 glukózy a jsou doplněny 10 Z zárodečného telecího séra (Gihco, FCS), 1-glutaminem (Gihco, 2mM), penicilinem (Gihco, 50 mezinárod22 nich jednotek na ml), streptomycinem (Gibco, 50 pg/,1), EGF (10 ng/1), hydrokortisonem (400 ng/ml) toxinem cholery {8,5 ng/ml) a insulinem (5 ng/ml). Buňky se udržují ve vlhkém prostředí, obsahujícím 5 % oxidu uhlkičitého a 95 X vzduchu a pasažují se každé 3 až 4 dny.

Inhibice přijímání ³H-1hymidi nu - HaCaT buňky ( 2 50 buněk v kompletním kultivačním prostředí) se naočkuje do 96 důlkové kultivační misky a inkubuje se při teplotě 37 ’C v prostředí 5 4 oxidu uhličitého a 95 % vzduchu po dobu šesti dnu. Inhibitory, rozpuštěné na 1 x koncentraci v 1% ethanolu se přidají bezprostředně na začátku zkoušky. Přidá se ³H-thymidin (3 Ci/mmol, Amersham) v koncentraci 1 pCi/důlek a buňky se pulzačne z ri a čí po posledních 6 hodin růstové periody. Buňky se tripsinují po dobu 10 minut pří teplotě 37 ’C za intenzivního míchání a sklízí se na 96 důlkove GF/C filtrační destičce (Uni Filter, Packard) za použití sklízeče buněk Midro Mate 196 (Packard). Suší se při teplotě 40 *C ve vakuu po dobu 20 až 30 minut., přidají se 2 p] sc i η l. i ) á toru Micro Sein) 0 a čítá se radioaktivita, vázaná na filtr na zařízení TOP C01JNT (Packard)

Výsledky se vyjadřují jako ICso a jsou uvedeny v tabulce lil.

Tabulka 111

Sloučenin a	IC50 (nM)
1,25-Dihydroxy-chole kalciferol	55.0
1,25-Dihydroxy-16-en -23-i.n 26,27-hexafluoro-20-epi-chole kalciferol	50.0
1,25-Dihydroxy-16,23E-dien -26,27hexafluoro-20-cpi-cholekalciferol	0.7
l,25-Dihydroxy-16,23Z-dien -26,27hexafluoro-20-epi-cholek.alciferol	ND
1,25-Dihydroxy-16-en -23-in -20epi-cholekalciferol	93.0
1,25-Dihydroxy -16-en - 20-epichole kalciferol	4.0

Užitečnost sloučenin obecného vzorce I jako činidla pro ošetřování mazového onemocnění žláz se stanovuje následujícím způsobem.

Inhibice lidské sebocytové proliferace in vítro

Mazové buňky se izolují z mazových žláz dospělého člověka kombinací enzymatických a mechanických způsobů (Doran a kol., Characterization of Human Cells in vítro, J. Invest. Dermatol. 96, str. 34 až 38, 1991). Buňky se kultivují v prostředí Iscove obsahujícím 10 % zárodečného telecího séra a 4 pg/ml dexamethasonu na vrstvu myších fibroblastů 3T3 se zaraženým růstem. Buňky se nanesou na prostředí bez zkoušené sloučeniny a přidá se zkoušená sloučenina v čerstvém prostředí každých 48 hodin. V den sklizně se kultury proláchnou 0,03% ethylendiamintetraoctovou kyselinou v PBS k odstranění pouze 3T3 fibroblastů, načež se provádí inkubace v systému 0,05 % trypsinu/ 0,03 % ethylendiamtctraoctové kyseliny. Buňky se suspendují, intenzivně se zamíchají k přípravě suspenze jediné buňky a čítají se v hemocytomctru.

Zásobní roztoky sloučenin se připraví jako 10^-2 M roztoky v odplyněném 100% ethanolu a ukládají se při teplotě -20 *C v temnu, V průběhu experimentálního používání se roztoky, rozdělené na podíly, uvádějí na teplotu místnosti a používají se přímým zředěním na kompletní prostředí o vhodné koncentraci.

Sloučeniny podle vynálezu se zkouší se zřetelem na inhibici proliferace růstu mazových buněk in vítro při 10“⁶, 10^-7 a 10^_G M. Výsledky jsou uvedeny v tabulce IV jakožto množství sloučeniny podle vynálezu, potřebné k inhlbici proliferace mazových buněk o 50 % ,(EDso) v nM ve srovnání s prostředím ošetřeným toliko nosičem.

T a h u 1 k a 1 V

Sloučenina	EDjo (nM)
1,25-Dihydroxycholekalciferol	50
1,25-Dihydroxy-16-en -23-jn 26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferol	<10
1,25-Dihydroxy·· 16,23E-dien -26,27- hexafluoro-20-epi-cholekalciferol	<10
1,25-Dihydroxy-16,23Z-d i en -26,27hexafluoro-20-epi-cholekalciferol	ND
1,25-Dihydroxy-16-en -23-in -20epi-cholekalciferol	50
1,25-Dihydroxy-1 6-en -20-epi- cholekalciferol	<1

Kalciová zkouška (zkouška tolerance myši)

Hluboké změny kalciové lioineostáze silně ovlivňují Hmotnostní vývoj zvířat. Tohoto parametru se používá jakožto primárního testu tolerance.

Myším (o hmotnosti 25 až 30 g ) se denně podává subkutánně derivát vitaminu D po 4 následující dny. Zaznamená se tělesná hmotnost právě před zkouškou a na konci zkoušky 5. den ošetření. “Nejvyšší snášená dávka“ (HTD) je dávka, která vede k nulovému zvýšení hmotnosti v průběhu zkoušky. Výsledky jsou uvedeny v tabulce V.

Tabulka V

Sloučenina	HTD ^g/kg)
1,25-Dihydroxycholekalciferol	0,5
1,25-Dihydroxy-l6-en -23-jn.26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferol	6,0
1,25-Dihydroxy-16,23E-dien .-26,27hexafluoro-20-epi-cholekalciferol	2.5
1,25-Díhydroxy-16,23Z-dien -26,27hexafluoro-20-epi-cholekalciferol	2.5
1,25-Dihydroxy-1 6-en -23-in -20epi-cholecalciferol	100
1,25-Dihydroxy-16-en -20-epicholekalciferol	30
la-Fluoro-25-hydroxy-16,23Z-dien- 26,27-he x aflu oro - 20-ep i-chole kalciferol	S.O
1,25-Dihydroxy· 1 6,23Z-dien -26,27-
hexafluoro-20-epi-19-nor-cholekalciferol	3.0 — . '_

Sloučeniny obecného vzorce I nanesené topícky na pokožku ovlivňují stav po poškození sluncem tak, že mírní a zpožďují poškození pokožky, způsobené sluněními paprsky. Poškození slunečními paprsky může způsobovat předčasné stárnutí pokožky, e1 a s t ó z u a vyt. vaření vrásek. Toto poškození je výraznější u starších osob. Nanesení sloučeniny obecného vzorce I topícky na pokožku v dostatečném množství k odvrácení stavů způsobených sluněními parsky urychluje opravu pokožky a podporuje vytváření hladkého a mladšího vzhledu pokožky. Sloučenina obecného vzorce I se má nanášet na části nebo plochy pokožky, která je ovlivněna slunečními paprsky, nebo která takové ošetření potřebuje. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu působí proti stárnutí a proti vytváření vrásek a podporuje opravu poškození způsobeného slunečními paprsky.

Sloučenina obecného vzorce I nebo směs sloučenin obecného vzorce I se může nanášet na pokožku v podobě běžných prostředků pro ošetřování pokožky, Tyto prostředky se mohou používat k nanášení sloučeniny obecného vzorce I na kůži těla, zvláště na obličej, šíji, paže a ruce, K dosažení nejlepšího účinku se sloučenina obecného vzorce I začne topicky nanášet ve stáří 30 až 55 let, kdy se již začíná projevovat elastóza a stává se výraznější. Takový prostředek se pak může stále používat ke snížení nepříznivého působení slunečních paprsků. Obecně je výhodné začít s ošetřováním osob ve stáří přibližně 30 let a pokračovat celý život, čímž se sníží vlivy elastózy a předchází se jakémukoliv dalšímu progresivnímu poškozování slunečními paprsky.

Sloučenina obecného vzorce I se může podávat podle vynálezu v podobě jakéhokoliv prostředku vhodného k ošetřování pokožky. Sloučeniny obecného vzorce I se tedy mohou podávat podle vynálezu v podobě jakéhokoliv vhodného prostředku, jako jsou například mast., krém, mýdlo, roztok, vodička, emulze a šampon. Obecně se dosahuje nejlepších výsledků, když topicky prostředek obsahuje hmotnostně přibližně 0,00001 až přibližně 0,1 % sloučeniny obecného vzorce I, vztaženo na prostředek jako celek, s výhodou přibližně 0,0001 až přibližně 0,1 % sloučeniny obecného vzorce I. Popřípadě se může použít i vyšších koncentrací v závislosti na povaze a stupni elastózy.

Při formulaci těchto prostředků se může používat jakýchkoliv netoxických, dermatologicky vhodných základů nebo nosičů, ve kterých je sloučenina obecného vzorce I stabilní. Výhodnými prostředky podle vynálezu jsou běžné kosmetické prostředky, které mohou obsahovat kosmeticky účinné složky, které se topicky nanášejí na pokožku k dosažení kosmetického působení. Jakožto běžné kosmeticky aktivní látky, kterých se může použít v takových prostředcích, se příkladně uvádějí sluneční filtry, činidla podporující penetraci, zvlhčovalda, povrchově aktivní činidla, zuvláčňovadla, barviva, kondicionéry, baktericídy, adstringenty a detergenty. Topické prostředky podle vynálezu mohou popřípadě obsahovat vhodné slunění filtry. Může se použít jakýchkoliv slunečních filtrů v prostředcích obsahujících sloučeninu obecného vzorce I podle vynálezu.

Kromě toho se do antioxidanty, na askorbylpalmitát,

Tyto topické prostředky, které obsahují sloučeninu obecného vzorce I, mohou obsahovat jakékoliv běžné excipienty a přísady, běžně používané v topických prostředcích. Jakožto běžné přísady nebo excipienty, které se mohou používat při výrobě kosmetických prostředku podle vynálezu, se příkladně uvádějí konzervační činidla, zahuštovadla a parfémy.

takových prostředků mohou začleňovat běžné příklad butylované hydroxyanisoly (BHA), propylgallát, kyselina citrónová, butylovaný hydroxytoluen (BHT), ethoxychin a tokoferol. Takové topické prostředky mohou obsahovat běžné přijatelné nosiče pro topické prostředky, kterých sc v takových prostředcích běžně používá. Tyt.o prostředky mohou obsahovat zahuštovadla, zvlhčovadla, emulgátory a stabilizátory visko žity, kterých se k takovým účelům běžně používá. Kromě toho takové topické kosmetické prostředky mohou obsahovat vonné látky, barviva a parfémy, který se opět v takových farmaceutických prostředcích běžně používá.

Topické prostředky, obsahující sloučeninu obecného vzorce I, se mohou nanášet na pokožku, přičemž se s výhodou na pokožku nanášejí jednou denně. Pro odstranění elastózy a tak pro dodání hladkosti pokožce a mladšího zjevu, se topické prostředky mají nanášet po dobu šesti měsíců. Pak se prostředky, obsahující sloučeninu obecného vzorce I, mají nanášet trvale k uchování efektu mladší a hladší pokožky. Tyto prostředky se mohou nanášet podle potřeby pacienta, jak předepíše lékař. V každém případě zvláštní režim nanášení tohoto prostředku zpravidla závisí na věku, hmotnosti a na stavu pokožky jednotlivé osoby.

Užitečnost sloučenin obecného vzorce I jako činidla pro ošetřování pokožky poškozené slunečním zářením se stanovuje následujícím způsobem.

Oprava UVB navozeného poškození pokožky holé myši sloučeninou obecného vzorce I

Holá myš (samička, HRS/J kmen, Jackson Labs., stáří 5 až 7 týdnů) se na začátku zkoušky umístí na žlutém světle a ozařuje se třikrát týdne sestavou 8 opalovacích lamp Westinghouse (FS72T12 HO, ozařovací vrchol 313 nm) umístěných 20 cm nad zvířaty, měří se výkon UVB na mezinárodním výzkumném radiometru světla model IL 1700 2a použití SEE24O detektoru. S touto sestavou je výkon lampy přibližně 3,5 mW/cm² a doba expozice pro 0,06 J/cm² je přibližně 17 sekund; 1 MED je přibližně 0,03 J/cm². Přesná dávka se uvolní IL 844A fototerapickou kontrolou vystavení. Denní dávka je 0,03 J/cm² po dobu dvou týdnů, 0,06 J/cm² po dobu dvou týdnů a 0,08 J/cm² posléze až (io akumulace celkové dávky přibližně 4 J/cm², K dosdažení opravy poškození pokožky se UVB ozařování přeruší a zvířata se rozdělí do skupin s přibližně osmi jedinci a ošetřují se třikrát týdně různými koncentracemi analogu vitaminu D, rozpuštěnými v ethanolu. Všechny dávky se vztahují ke žlutému světlu. Sleduje se také kontrolní skupina ošetřená toliko acetonem. Dvoucentimetrové pásky pokožky zad se odeberou podélně pod centrem ozářené a ošetřené plochy. Elastinová vlákna se zabarví aldehydovým fuksinem Luna a kolagen se zabarví Van Giesone, V tomto modelu se oprava poškození definuje jako objevení normalizované dermis rozprostírající se od epidermis dolů k vrstvě stlačeného elastinu. Tato míra opravy poškození se projevuje šířkou této zóny. Jelikož se v těchto studiích šířka zóny podstatně mění, měří se plocha zóny na standardní délce histologické sekce analýzou obrazu. Zkoušejí se sloučeniny ve třech dávkách a vypočítává se přibližná hodnota EDsq. Výsledky jsou uvedeny v tabulce VI.

Tabulka VI Sloučenina Kontrolní Sloučenina A

Dávka (pg) Zóna opravy poškození (mm²) 0,0028 ± 0,0008**

0,1

0,5

0,0282 + 0,0092*** 0,0102 ± 0,0067* * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001 vs kontroní nosič

Sloučeninou A je 1,25-dihydroxy-16,23E-dien-26,27-hexafluoro20-epi-cholekalciferol.

Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení.

Příklady provedení vyňalezu

Příklad 1

Do magneticky míchaného roztoku 14,06 g (25 mmol) 11R - [ 1 Ct (S * )3aa,4(3,7a(3]]oktahydro-4-hydroxy-P,7a-dimethyl-lH-inden-l-ethanolu v 75 ml dichlormethanu se v prostředí argonu přidá 47 ml (33,8 g, 331 mmol) acetanhydridu a pak 53,5 ml pyridinu a 1,0 g dimethylam inopyridi nu. Po 3,5 hodinách se přidá 25 ml methanolu. Po 15 minutách se reakční směs vlije do 750 ml 1M kyseliny fosforečné a přidá se 400 ml dichlormethanu. Fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje dva krát 500 ml vody a pak 750 ml 1 M hydrogenuh1 iči tanu sodného, čímž se získá po vysušení síranem sodným, po filtraci a odpaření 19,85 g (kvantitativní výtěžek) [1R-[la(S*) , 3aα,4(3,7aβ]]-4-(acetyloxy)oktahydro-(3,7adimethyl-lH-inden-l-ethanolacetátu v podobě bílé pevné látky.

Příklad 2

Do magneticky míchaného roztoku 20,81 g (20,6 mmol) [1R[ let (S*) ,3aK,4(3,7aí3] ]-4~(acetyloxy)oktahydro-P,7a-dimethyl-lH inden-l-ethanolacetátu ve 200 mi methanolu se v prostředí ar30 gonu přidá 8,18 g {77,2 mmol) uhličitanu sodného. Suspenze se míchá po dobu 16 hodin a většina methanolu se odstraní za sníženého tlaku na rotační odparce. Koncentrát se rozdělí mezi 300 ml vody a 250 ml etheru. Vodná fáze se extrahuje 3 krát 250 ml etheru a etherové fáze se promyjí 300 ml vody, vysuší se síranem sodným, zf i ltrují se a odpaří se, čímž se získá g surového produktu. Chr omatograf i í na středně tlakem l, C (Waters 500) za použití jako elučního činidla systému 2:1 hexan-ethylacetát se získá 1,42 g nehydrolyzovaného diacetátu, 16,08 g (90 % teorie) [lR-[la(S*),3aa,43,7ap]]-4-(acetyloxy)oktahydroP,7a-dimethy]-lH-inden-l-ethanolu v podobě bezbarvého oleje.

Příklad 3

Do tříhrdlé baňky o obsahu 2 litry, vybavené magnetickým míchadlem, teploměrem a kapací nálevkou a udržované v prostředí argonu se dávkuje 6,62 ml (75,8 mmol) oxaly1chloridu v 50 ml dichlormethanu. Baňka se π cli ladí na teplotu -65 ’C v lázní suchého ledu a acetonu. Rychle se po kapkách přidá roztok 10,7 ml (151 mmol) dimethy1su1foxidu ve 125 ml dichlormethanu v průběhu 20 minut za udržování teploty -62 až -63 *C. Po ukončeném přidání se reakční směs míchá po dobu dalších 5 minut. Přidá se roztok 16,0 g 11R-[ 1 ot ( S* ) , 3aa , 4(3,7a(B] ]-4- ( acet y loxy) ok tahyd r o-(3 , 7a-d i met hy 1 - 1H - i nd en-1 -e t hano lu ve 200 ml dichlormethanu (vysušeném na 0,4 nm molekulárním sítu) v průběhu 20 minut po kapkách za udržování teploty -65 'C. V průběhu přidávání se vytvoří sraženina. Udržuje se dalších 20 minut na teplotě -70’C a v průběhu 15 minut se pak přidá roztok 41,1 ml (302 mmol) triethylaminu v 75 ml suchého dichlormethanu. Suspenze se míchá po dobu 45 minut, chladicí lázeň se odstraní a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti (v průběhu 1,5 hodin), Většina dichlormethanu se odstraní na rotační odparce za sníženého tlaku (pokojová teplota lázně) a zbytek se doplní 500 ml vody a 750 ml etheru. Vodná fáze se extrahuje tři krát 750 ml etheru a etherové fáze se promyjí protiproudně vodou, vysuší se síranem sodným, zfiltrují se a odpaří se za sníženého tlaku, Čímž se získá 15,36 g surového produktu. Středné tlakou chromatografií na silikagelu za použití jako elučního činidla systému 4:1 hexany-ether se získá ( za shromažďování frakcí v prostředí dusíku) 14,95 g (94 % teorie) [lR-[la(S*),3aa,4(3,7aP]]-4-(acetyloxy)oktahydro-a,7a-dimethyllH-inrlen-1-acetaldehydu v podobě bezbarvého oleje.

Příklad 4

Do magneticky míchaného roztoku 2,0 g (7,95 mmol) [ 1R - [ 1 a ( S * ) ,3aa,4[3,7a(3] ]-4-{acetyloxy)oktahydro-a,7a-dimethyllH-inden-1-acetaldehydu v 20 ml etheru v prostředí argonu se přidá 100 mg 10% palladia na uhlí. Po 20 minutách na teplotě místnosti se suspenze zfiltruje. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá 1,40 g (9,5 mmol) benzalacetonu Suspenze se odplyní evakuováním a r g o n c m . B a n k a s e č á s t e č n ě p o n o ří do olejové lázně o teplotě 230 ‘C na dobu 30 minut. Po ochlazení se obsah baňky bleskově ehromatografuje na 100 g silikagelu k odstranění polárnějšího benzalacetonu a jeho redukčního produktu ( benzy1acetonu) v rovnovážné směsi ^{1 7 E} , ^17Z, ^{1 b}, a ²⁰ indenolefinu, které jsou obsaženy v poměru65:4: 27:4. Středně tlakou chromatografií na si 1 ikage1 ovém sloupci, napuštěném dusičnanem stříbrným (dvě fáze), se odddělí žádaný a 200 mg 10% palladia na uhlí baňky a znova se baňka naplní produkt ^17E) od méně polárních olefinu ( ^17Z, ¹⁶ ve sledu eluce). Čištění je možné na destičkách tenkovrstvové chromatografie, které se postříkají 10% roztokem dusičnanu stříbrného v acetonitrilu a vysuší se na vzduchu před použitím. Tak se získá celých 976 mg (55 % teorie) [ 3 a R - [ 1 E , 3 att , 4(37a(3]]-l-ethylidenoktahydro-7a-methyl-lH-inden-4-olacetátu v podobě bezbarvého oleje.

Polárnější olefinová směs (420 mg, 24 % teorie) se může běžně znova vyvážit přidáním do následné aldehydové fragmen32 tační reakce.

Příklad 5 [3aS-[3( 1R* , 2R*S*3a|3,4β, 7an ) ]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-3-[2hydroxy-l-methyl-4-(trimethylsilyl)-3-butinyl]-3a-methyl-l-Hinden-7-olacetát

Do plamenem vysušené tříhrdlé baňky o obsahu 2 litry, vybavené magnetickým míchadlem, teploměrem a kapací nálevkou a vstupem pro argon se dávkuje 22,3 g (100 mmol) [3aR-[1E,3aa4 (3,7 af3 } ]-l-ethylidenoktabydro-7a-methyl-lH-inden-4~olacetátu a 300 ml dlchlormethanu. Roztok se ochladí na teplotu -20 ’ C v acetonové lázni popřípadě za přidání suchého ledu. Rakční činidla se pak přidávají po částech. Zpočátku se rychle po kapkách přidá 200 ml ( 200 mmol) 1M dimethy1 aluminiumch1oridu v hexanu v průběhu 5 minut, po 10 minutách se pomalu po kapkách v průběhu jedné hodiny přidá 50 ml roztoku 55,5 g (500 mmol) 3-t.rimethylsilylpropinalu, zředěných na 2 60 ml suchým dichlormethanem. Přidání reakčních činidel se opakuje tímto způsobem čtyři krát za použití 100 ml (100 mmol) 1M dimethylaluminiumchloridu v hexanu přidávaného rychle a následně 50 ml roztoku 55,5 g (500 mmol) 3-1rimethy1sily1prop inalu, přidávaného pomalu v průběhu jedné hodiny. Po ukončeném přidávání chromatografie v tenké vrstvě (systém dichlormethan-ethylether 98:2) potvrzuje nepřítomnost výchozího olefinu. Reakční směs se vlije za intenzivního míchání do dvou litrů 20% roztoku Rochellovy soli, do kterého se přidá přibližně 500 g ledu (konečná teplota 20 C) . Reakční směs se alkalizuje přidáním 25 ml 4N roztoku hydroxidu sodného a přidá se 1 litr etheru. Fáze se oddělí a etherová fáze se promyje 500 ml solanky. Vodná fáze se extrahuje protiproudným způsobem dva krát 1,5 litry etheru, vysuší se síranem sodným, zfiltruje se a odpaří se zas sníženého tlaku, čímž se získá 78 g oleje, Středně tlaká chromatografie na silikagelu je komplikovaná obtížností oddělení produktů od vedlejšího produktu, 4-trimethylsilyl-3butin-2-olu. Nasedne sc s výhodou těkavý 4-trimethylsilyl-3butin-2-ol odstraní z chromatografických frakcí. Tak se získá 25,54 g polárnějšího čistého hlavního isomeru, 2,07 g směsi 87:13 (stanoveno NMR) hlavního a menších isomerů a 0,53 g čistého menšího isomeru. Celkový vátěžek produktů je 79 X teorie (77 X hlavního isomeru).

Analytickým vzorkem hlavního isomeru je (3aS-[3{lR*,2S*~ 3a(3,4(3,7 aCt) I - 3 a , 4 ,5,6,7 ,7a-hexahydro-3-[2-hydroxy-l-methyl-4 (trimethylsilyl)-3-butinyl]-3a-mettiyl-l-H-inden-7-olacetát, získaný v podobě bílé pevné látky ze systému ethylacetát-hexan o teplotě tání 66 až 67 ‘C.

Analytickým vzorkem menšího isomeru je [3aS-[3(1R*,2R* 3aP,4(3,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-[2-hydroxy-l-methyl-4 (trimethylsilyl)-3-butínyl]-3a-methyL-l-H-índen-7-olacetát, získaný v podobě bezbarvého oleje.

Příklad 6

Do magneticky míchaného roztoku 24,2 g (69 mmol) [3aS-[3(lR*,2S*,3aP,4(3,7aa)]-3a,4,5₁6,7,7a-hexahydro-3“[2-hydroxy-l-methy]-4-(trimethylsilyl )-3-butinyl ]-3a-methyl-l-H-in den-7-olacetátu ve 300 ml suchého dichlormethanu a 23,3 ml suchého pyridinu se přidá 25,0 (145 mmol) fenylchlorthionoformátu. Vyvine se žlutojantarové zabarvení. Reakční směs se míchá po dobu tří hodin a přidá se 20 ml methanolu. Po 25 minutách se reakční směs přenese do dělicí nálevky, obsahující 1 litr etheru. Etherová fáze se promyje postupně 2 x 250 ml 1M kyseliny fosforečné, 500 ml vody a 500 ml 1M hydrogenuh1 i čitanu sodného. Vodná fáze se extrahuje protiproudým způsobem 500 ml etheru. Spojené etherové fáze se vysuší síranem sodným, zfiltrují se a odpaří se za sníženého tlaku, čímž se získá 47 g surového produktu. Bleskovou chrotnatograf i í na silikagelu se získá 33,4 g (kvantitativní výtěžek thionokarbonátového esteru

Do tříhrdlé baňky o obsahu 2 litry, vybavené magnetickým míchadletn, teploměrem a kapací nálevkou a vstupem pro argon se dávkuje 33,4 g (69 mmol) thionokarbonátového esteru v 500 ml toluenu rychle po kapkách, v průběhu 5 minut 135 ml. (500 mmol) tri-n-buty 1 cínhydridu a následně 276 (276 mmol) triethy1boranu v průběhu 15 minut. Po 1,3 hodinách se přidá dalších 15 ml (56 mmol) tri-ri-butylcínhydridu. Po 50 minutách se reakční směs vlije do 500 ml 10% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a přidá se 500 ml etheru. Vodná fáze se extrahuje dva krát 500 ml etheru. Etherové fáze se promyjí proti proudně tři krát 250 ml vody, vysuší se síranem sodným, zfiltrují se a odpaří se za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt, který se bleskově chromatografuje na 500 ml silikagelu. Produkt, obsahující frakce v dicblormethanovém roztoku se promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného k odstranění fenolu, vytvořeného v průběhu reakce. Středně i. láká cliromatografic vyžaduje několik kroků k odstranění vedlejších produktíi a získá se 16,13 g (70 % teorie) čistého [3aS-[(lS*),3af3,4(3,7aa]-3a,4,5,6,7,7ahexahydro-3-[l-methyl-4-(trimethylsilyl)-3-butinyl]-3a-methyl1H-inden-7-olacetátu v podobě bezbarvého oleje.

Příklad 7 [3aS-[(lS*),3a(3,4(3,7aot]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-3-[l-methyl-3butinyl]-3a-methyl-l-H-inden-7-ol

Do roztoku 5,01 g (15 mmol) [ 3 a S - [ (1S * , 3 a (3,4 (3, 7 a a) ] 3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-[1-methy1-4 -(tr iraethyls ily1)-3-but i nyl ]-3a-methyl-l-H-inden-7-olacetátu v 50 ml ethanolu se přidá 30 ml (60 mmol) 2N roztoku hydroxidu sodného a reakční směs se zahříváním udržuje po dobu jedné hodiny na teplotě 80 ’C.

Zředí se 500 ml systému solanka-voda (1:1) a důkladně se extrahuje ethylacetátem. Spojené extrakty se promyjí vodou a so35 laňkou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 4:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 3,14 g (95,4 % teorie) [ 3aS~ [ (1S* ) , 3a(3,4(3,7aa ] -3a , 4 , 5,6,7 , 7ahexahydro-3-[l-methyl-3-butinyl]-3a-methyl-l-H-inden-7-olu,

Příklad 8 [3aS-[(lS*),3a(3,4(3,7aa)-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-ll-methyl3-butinyl]-3a-methyl-7-[(trimethylsilyl)oxy]-lH-inden

Do roztoku 3,14 g (14,4 mmol) [3aS-I(1S*,3ap,4β,7aa)J3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-[l-methyl-3-butinyl]-3a-methyl-l-H inden-7-olu ve 30 ml bezvodého methylenchloridu se přidá 4,22 ml (28,8 mmol) 1-(trimethylsilyl)imidazolu a reakční směs se míchá při tepllotě místnosti po dobu jedné hodiny. Reakce se uklončí přidáním drceného ledu a reakční směs se míchá po dobu 15 minut. Reakční směs se zředí vodou u solanakou a důkladně se extrahuje hexanem. Spojené extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použiti jako elučního činidla systémxi 40:1 hexan-methy 1 enchlor id , čímž se získá 3,55 g (85,4 % teorie) [3aS-({1S*),3a£,4β,7aa]-3a,4,5,67,7a-hexahydro-3-[l-methyl-3-butinyl]-3a-methyl-7-[(trimethylsilyl)oxy]-lH-indenu.

Příklad 9 [(1S*),3aR-(3aP,4P,7att)]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(1,5-dimethyl-5-hydroxy-3-hexinyl)-7a-methyl-4-[(trimethylsilyl)oxyj3H-i nden

Do roztoku 612 mg (2,10 mmol) [3aS-[(lS*),3aP,4P,7aa]3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-[l-methyl-3-butinyl]-3a-methyl-7[(trimethy1silyl)oxy]-1-H-indenu v 15 ml bezvodého etheru se při teplotě -78 ’C přidá 1,6 ml (2,52 mmol) 1,6 M n-buty1lithia v hexanu v prostředí argonu. Míchá se po dobu jedné hodiny při teplotě -78 *C, přidá se 1,5 ml (21 mmol) bezvodého acetonu a míchá se po dobu dalších 1,5 hodin, Reakce se uklončí přidáním směsi vody a solanaky (1:1) a důkladně se extrahuje hexanem. Spojené extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního Činidla systému 9:1 hexan-ethylacetát za regenerace 166 mg (27 %) výchozí látky a za se získání 521 mg (71 % teorie) [(lS*),3aR( 3a(3,4(3,7aa) ]-3a, 4 , 5 , 6 ,7 , 7a-hexahydro-l-( 1,5-dimethyl-5-hydroxy-3-hexinyl)-7a-methy]-4-[(trimethylsilyl)oxy]-3H-índenu.

Příklad 10 [(lS*),3aR-(3a[3,4|3,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l,5-dimethyl“5-hydroxy-3-hexinyl)-7a-methyl-3H-inden-4-ol

Do iníchaního roztoku 521 mg (1,50 mino!) l(lS*),3aR-(3a(34(3,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-di-methyl-5-hydroxy-3hexinyl)-7a-methy1-4-[(trimethy1silyl)oxy]-3H-indenu v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají 3 ml (3 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu, Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodin, zředí se směsí vody a solnaky a důkladně se extrahuje ethylacetátem. Spojené extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt vykrystaluje. Čisti se překrystalováním z hexanu, za získání 360 mg (87 Z teorie) [(lS*),3aR-(3a(3,4|3,7aa)]-3a,45,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-hydroxy-3-hexinyl)-7amethyl-3H-inden-4-olu

Příklad 11 [ (1S * ) , 3aR-(3aP,7a|3) ] - 3 a , 4 , 5 ,6,7 , 7a-Hexahydro-l-( 1 , 5 - d i methyl-5-hydroxy-3-hexinyl)-7a-methyl-3H-inden-4-on

Do roztoku 240 mg ( 0,868 mmol) [ (1S * ) , 3 a R - ( 3 a|3,4 [3,7 aa) ] 3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-hydroxy-3-hexinyl) 7a-methyl-3H-inden-4-olu v 7 ml bezvodého methylenchloridu se přidá 980 (2,6 mmol) pyridiniumdvojchromanu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hodin, přidá se dalších 500 mg (1,33 mmol) pyridiniumdvojchromanu a míchá se dalších 2,25 hodin. Po přidání 30 ml etheru se míchá 15 minut, směs se zfiltruje přes Celíte a celitová vrstva se promyje tři krát 50 ml ethylacetátu . Spojené filtráty se promyjí 20 ml 1N kyseliny chlorovodíkové, vodou, 40 ml 2N roztoku hydrogenuh1 iči tanu draselného a směsí vody a solanky 1:1. Vodné vrstvy se reextrahují dva krát 100 ml ethylacetátu. Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 2:1 hexan-ethylacetát za získání 214 mg (89 % teorie) [ (1S* ) , 3aR-{ 3a(3,7a3) ]-3a , 4,5,6,7,7a-hexahydro-l - (1 , 5 dimethyl-5-hydroxy-3-hexinyl)-7a-methyl-3H-inden-4-onu.

Příklad Ί2 [ (1 S * ) , 3aR-(3a|3,7aj3) ]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l ,5-di-methy1- 5 -[(trimethylsilyl)oxy]-3-hexinyl)-7a-methyl-4H-inden4 -on

Do roztoku 214 mg (0,78 mmol) [( 1S *), 3aR~ ( 3a(3,7a|3) )3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-hydroxy-3-hexinyl) 7 a-methy1-4H-inden-4 - onu v 7 ml bezvodého methylenchloridu se přidá 750 mg (4,7 mmol) l-(trimethylsilyl)imidazolu a reakční směs se míchá při tepllotě místnosti po dobu 17 hodin v prostředí argonu. Reakce se uklončí přidáním 5 ml vody a reakční směs se míchá po dobu 20 minut. Reakční směs se extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se promyjí pět krát 50 ml směsi vody a solanky, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 12:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 255 g (94 % teorie) ( (1 S* ) , 3aR-( 3ap , 7a(3) ] 38

3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-[(trimethylsilyl}o xy]-3-hexinyl)-7a-methyl-4H-inden-4-onu.

Příklad 13 , 25-Dihydroxy-16-en-23-in-20-epi-cholekalciferol

Do míchaného roztoku 7 30 mg (1,25 mmol) [ 3 S — (lZ,3a-5|3)][2-(3,5-bis[[l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxyl-2-methylen cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu, což je sloučenina o sobě známá, v 7 ml tetrahydrofuranu se při teplotě -78 C přidá 0,78 ml (1,2 5 mmol) 1,6M butyllithia v hexanu po kapkách v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut a do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách roztok 225 mg (0,736 mmol) [ (1S* ) , 3aR-( 3αβ , 7 a(3) ] - 3a , 4 , 5,6 , 7 , 7 a-h exabydr o -1 (l,5-dimethyl-5-[(trimethylsilyl)oxy]-3-hexinyl)-7a-methyl-4Hinden-4-onu v 4,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu v průběhu 10 minut, a reakční směs se míchá při teplotě -78 ’ 0 po dobu 90 minu i. Reakce se ukončí přidáním 10 ml. 1:1 směsí 2N Rochellovy soli a 2 N roztoku hydrogenuhličitanu draselného a nechá se ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 30 ml směsi 2 N Rochellovy soli a 2 N roztoku hydrogenuhličitanu draselného a reakční směs se extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí tři krát solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 40:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 467 mg (89 % teorie) trisilylovaného meziproduktu. Do roztoku trisilylovaného meziproduktu (467 mg) v 4,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 7 ml (7 mmol) 1M tetrabuty1amoniumfluoridu v tetrahydrofuranu a tato směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 17 hodin v prostředí argonu. Reakce se ukončí přidáním 5 ml vody a reakční směs se míchá po dobu 20 minut. Tetrahydrofuran se odstraní ve vakuu a zbytek se zředí vodou a extrahuje se tři krát. 100 ml ethy lacetátu. Extrakty se promyjí vodou a solan39 kou, vysuší se síranem sodným, zfiltrují se a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního Činidla systému 1:5 hexan-ethylacetát, čímž se získá 250 mg (83 % teorie) krystalického 1,25-dihydroxy-16-en-23-in-20-epi-cholekalciferolu, který se překrystaluje z 1,5 ml tetrahydrofuranu za přidání 7 ml methy1formátu. Teplota tání je 148 až 149 C.

Příklad 14 [ (1S* ) ,3aR-(3aa,4[3,7ap) ]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l ,5-dimethyl-5-hydroxy-3Z-hexenyl)-7a-iJiethyl-3H-inden-4-ol

Směs 1,02 g (3,6 mmol) [ ( 1 S * ) , 3 a R — ( 3 a Ot, 4 (3,7 a |3 ) ]— 3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-hydroxy-3-hexinyl) 7a-methy1-3H-inden-4-o 1u, 13,5 ml ethy 1 acetátu, 34 ml hexanu, 1,3 ml absolutního ethanolu, 0,067 ml chinolinu a 225 mg Lindlarova katalyzátoru se hydrogenuje při teplotě místnosti po dobu 3,5 hodin. Reakční směs sc zfiltruje přes nelibovou vrstvu, která se pak promyje ethylacetátem. Spojené filtráty se promyjí 1N kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 2N roztokem hydrogenuhličitanu draselného, vodou a solankou, vysuší se síranem sodným, a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí preparativní chromatografií na silikagelu za použití jako e lučního činidla systému 3:2 hexan-ethylacetát, čímž se získá 954 mg (92,6 % teorie) [ ( 1S* ) , 3aR-{ 3aa, 4(3,7a|3) ]-3a , 4,5,6,7,7ahexahydro-l-(1,5-dimethyl-5-hydroxy-3Z-hexenyl)-7a-methyl-3H inden-4-olu.

Př íklad 15 [(lS*),3aR“(3aa,4p,7a(3)]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-hydroxyhexanyl)-7a-methyl-3H-inden-4-ol

Do roztoku 601 mg (2,16 mmol) [ (1S * ) , 3 a R - { 3 aOř, 4(3,7 a(3) ]— 3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-hydroxy-3Z-hexenyl)40 a- tn e t hy 1 - 3H - i n d e n- 4 - o 1 u v 30 ml bezvodého methylenchloridu se přidá 120 mg 1,4-bis(difeny1fosfeno)butan- 1,5-cyklooktanrho diumtetraf luoroborátu a jedna kapka rtuti a směs se hydrogenuje v aparatuře Paar při teplotě místnosti za tlaku 345 kPa po dobu 1,25 hodin. Chromatografie v tenké vrstvě (eluční činidlo systém 3:2 hexan-ethylacetát) dokládá úplnmé proběhnutí reakce. Reakční směs se z filtru je celitovou vrstrvou, která se promyje ethylacetátem. Spojené filtráty se odpaří k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 3:2 hexan-ethylacetát a pak preparativní chromatografi i na si 1 ikage1 ovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 3:2 hexan-ethy1acetát, 100 ml/min, čímž se získá 5 50 mg (91 % teorie) [ (1S* ) , 3aR-( 3aOf, 4(3,7a3) ] 3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-( 1 , 5-dimethyl-5-hydroxyhexanyl)-7a methyl-3H-inden-4-olu.

Příklad 16 [ ( 1 S* ) , 3 a R- ( 3 a α , 7 afá ) J - 3 a ,4,5,6, 7 , 7 a - II e xa li v d r o - 1 - { 1 , 5 -d i met hy 1 5-hydroxyhexanyl)-7a-methyl-311-inden-4-on

Do roztoku 270 mg (0,963 mmol) [(1S*),3aR-(3aOC,4(3,7a(3)]3a,4,5 , 6,7,7a-hexahydro-l-(1,5-dimethyl-5-hydroxyhexanyl)-7a methyl-3H-inden-4-olu v 7 ml bezvodého methylenchloridu se přidá 1,58 g (4,2 mmol) pyridiniumdvojchromanu. Reakční směs se míchá při teplotě míst ti osli po dobu 4,75 hodin. Pak se zředí 25 ml etheru, míchá se dalších 15 minut a zfiltruje se přes celitovou vrstvu, která se pak promyje t ř i krát 50 ml etheru. Spojené filtráty se promyjí 40 ml 2N roztoku hydrogenuhličitanu draselného a směsí vody a solanky. Vodné vrstvy se extrahují dva krát 90 ml ethylacetátu. Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 2:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 254 mg (95 X teorie) [ ( 1S* ) , 3aR-( 3acz , 7a|3 ) ]-3a , 4,5 , 6,7 , 7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-hydroxyhexanyl)-7a-methyl-3H-inden-4-onu.

Příklad 17 [(lS*),3aR-(3aa,7a(3)]-3a,4,5,6,7,7a-Hexahydro-l-(l,5-dimethyl5-[{trimethylsilyl)oxy]hexanyl)-7a-niethyl-3H“inden-4-on

Do roztoku 254 mg (0,912 mmol) [ (1S* ) , 3aR-( 3aa , 7a(3) 1 3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-1 -(1,5-dimethyl-5-hydroxyhexanyl)-7a methy1-3H-inden-4-onu v 6 ml bezvodého methylenchloridu se přidá 0,8 ml (5,45 mmol) l-(trimethylsilyl)imidazolu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4,25 hodin v prostředí argonu. Reakce se ukončí přidáním 5 ml vody a reakční směs se míchá po dobu 20 minut. Reakční směs se extrahuje tři krát 90 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surovy produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 12:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 308 mg (96 X teorie) [(lS*),3aR-(3aa,7a[3)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-J—(1 ,5-dimethyJ-5~f ( t, r i m e t h y 1 s i ] y 1 ) o x y ] h e x a n y 1 ) - 7 a - m e t li y i - 3 H - i n d e n - 4 - o n u .

Příklad 18

1,25-Dihydroxy-16-en-20-epi-cholekalciferol

Do míchaného roztoku 850 mg (1,46 mmol) [3S-(1Ζ,3Π,5β)]~ [2-(3,5-bis[[l,l-dimethylethyl)dímethylsilyl]oxy)-2-methylen cyk1ohexy1iden]ethy1]difeny1fosFi nox idu v 9 ml tetrahydroFuranu se při teplotě -78 'C přidá 0,91 ml (1,46 mmol) 1,6M n-butyllithia v hexanu po kapkách v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut a do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách roztok 308 mg (0,878 mmol) [ (1S * ) , 3 aR - ( 3a(3 , 7 a(3) ] 3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-l-(l,5-dimethyl-5-[(trimethylsilyl)o xy]-3-hexany 1)-7a-methy1-4H-inden-4-onu ve 4,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu v průběhu 10 minut a reakční směs se míchá při teplotě -78 ’C po dobu dvou hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml 1:1 směsi 2N Rochellovy soli a 2N roztoku hydrogen42 uhličitanu draselného a nechá se ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 30 ml směsi 2N Rochellovy soli a 2 N roztoku hydrogenuh1 iči tanu draselného a reakční směs se extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 50:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 541 mg trisi 1y1 ovaného meziproduktu.

Do roztoku trisi 1 y1 ováného meziproduktu v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 5,5 ml (5,5 romol) 1M tetrabutyla moniumfluoridu v tetrahydrofuranu a tato směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 23 hodin v prostředí argonu. Reakce se ukončí přidáním 5 ml vody a reakční směs se míchá po dobu 20 minut. Po přidání 25 ml solanky se směs extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu . Extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným, zfiltrují se a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou cbromatografií za použití jako elučního činidla systému 1:9 hexan-ethylacetát a pak chromatografií HPLC (na silikagelu) za použití jako elučního činidla ethylacetátu, čímž se získá 295 mg (81 X teorie) krystalického l,25-dihydroxy-16-en-20-epi-cholekalciferolu o teplotě tání 124 až 125 * C (methylformát.).

Příklad 19 [3aR-[l(S*),3aa,43,7a|3)]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-methyl-l[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3-hexiny1)-4-((trimethylsilyl)oxy]-3H-inden

Do baňky tvaru srdce o obsahu 100 ml, vybavené vstupem pro plyn se zavede roztok 1 g (3,44 mmol) [3aS-[(lS*),(3aD,7)37a(3)]-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3-(l-methyl-3-butinyl]-3a-met hy1-7-[(trimethy1si ly1)oxy]-1H-indenu ve 25 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Ochladí se na teplotu -78 ’C a po kapkách se v průběhu 10 minut přidá 3,2 ml (5,16 mmol) 1 ,6M n-butyllithia v hexanu a získaná směs se míchá po dobu 30 minut. Přidá se bezvodý tetrahydrofuran s reakční směsí se po dobu jedné minuty probublává proud hexaf1uoracetonu, Po jedné hodině a 15 minutách dokládá chromatografie v tenké vrstvě, že je reakce ze 70 % úplná. V této chvíli se reakce ukončí přidáním 25 ml nasycené solanky a reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti. Reakční směs se extrahuje hexanem. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 10:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 270 mg (27 % teorie) výchozí látkxy a 1,15 g (73 % teorie) [ 3aR-[ 1 ( S* ) , 3act, 4|3 , 7 a|3) ] - 3 , 3 a , 5,6 , 7 , 7 a - h exahyd r o-7amethy1-1-[6,6,G-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(tri fluormethyl) 3-hexinyl)-4 -[(trimethylsilyl)oxy]- 3 H-indenu.

Při druhém pokusu se přidá do roztoku výchozího 1,38 g (4,75 mmol) acet ylenu ve 20 ml bczvodého tetrahydrofuranu pří teplotě -78 ’C v prostředí argonu po kapkách v průběhu 10 minut 4,5 ml (7,2 mmol) 1,6M n-butyl1ithia v hexanu a získaná směs se míchá po dobu 30 minut. Pak se reakční směsí pomalou rychlostí po dobu dvou minut probublává proud hexafluoracetonu, reakční směs se míchá po dobu 30 minut, probublává se hexaf luoraceton po dobu další jedné minuty, míchá se po dobu 60 minut a nakonec se probublává hexafluoraceton po dobu 30 sekund a reakční směs se míchá po dobu 30 minut. Při tomto pokuse se reakce ukončí přidáním 2N Rochellovy soli a surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 14:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 1,97 g (91 % teorie) (3aR-[l(S*),3aK,4[3,7aí3)]-3,3a,5,6,7,7ahexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5(tr i fluormethy1)-3-hex iny1)-4-[(trimethy1s ily1)oxy]-3 H- indenu.

Příklad 20 [3aR-[l(S*),3aOt,4(3,7a|3)]-3,3a, 5,6,7, 7a-Hexahyd ro-7a-methyl-l[6 , 6 , 6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trif 1 nořme t.hyl)-3-hexiny1)-3H-inden-ol

Do roztoku 1,17 g (2,56 mmol) [3aR-[1(S*),3aa,4β,7ββ)]3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxyl-methyl-5-(trifluormethyl)-3~hexinyl)-4-[(trimethylsilyl)oxy] 3H-indenu ve 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 7,12 ml (7,12 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Směs se míchá po dobu 3,5 hodin v prostředí argonu, zředí se 250 ml směsi 1:1 vody a solnaky a důkladně se extrahuje ethylacetátem. Spojené extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií, čímž se získá 946 mg (96 % teorie) [3aR-[l(S*),3aa,4(3,7aP)J-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l[6,6,G-trif.luor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3-hexiny 1 )--311-i nden-o J u o teplotě t. á n í 7 5 uz 7 6 '6 po překrystalování z hexanu.

Příklad 21 [l{S*),3aR-3an,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-ÍIexahydro-7a-methyl-l[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluořme thyl)-3-hexin y 1 ) - 4 H - i n d e η - o n

Do roztoku 284 mg (0,74 mmol) [3aR - [ l(S*),3aa,4(3,7a(3)]3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxy1-tnethy 1 -5-(tr i f luormethy 1)-3-hexiny 1) -3H-inden-olu v 10 ml bezvodého methy1enchloridu se přidá po částech 2,15 g (5 mmol) pyridiniumdvojchromanu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu pěti hodin, Po přidání 30 ml etheru se míchá 15 minut, směs se zfiltruje přes Celíte a celitová vrstva se promyje tři krát 50 ml ethylacetátu. Spojené filtráty se promyjí 2N kyše45 linou chlorovodíkovou, vodou, 2N roztoku hydrogenuh1 iči tanu draselného, vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu.Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 3:1 hexan-ethylacetát za získání 2 59 mg {91 X teorie) krystalického [l(S*),3aR-3act7a[3)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5 hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3-hexinyl)-4H-inden-onu.

Příklad 22

1,25-Dihydroxy-16-en-23-in-26 , 27-hexafluoro-20-epi-cholekalcif e r o 1

Do míchaného roztoku 9 87 mg (1,69 mmol) [ 3S - ( 1 Z , 3a-5(3) ] [ 2 - ( 3 ,5-b i s[ [ 1 ,1-dimethylethyl )dirnet,hylsilyl]oxy]-2-methylen cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě -78 ’C přidá 1,05 ml (1,69 mmol) ,6M n-butyl1 ithia v hexanu po kapkách v prostředí argonu. Míchá se po dobu 15 minut, a do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách roztok 259 mg (0,677 mmol) [ 1 (S* ) , 3aR-3aa7a(3) ] - 3 , 3a, 5 , 6 ,7 ,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6 , 6 ,6-trif luor-5 hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3-hexinyl)-4H-inden-onu v 5 ml bezvodého tetrahydrofuránu a reakční směs se míchá při teplotě -78 ’C po dobu jedné hodiny. Reakce se ukončí přidáním

N Rocheliový soli a nechá se ohřát na teplotu místnosti. Přidá se nasycená solanka a reakční směs se extrahuje důkladně ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 9:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 370 mg trisilylovaného meziproduktu. Do roztoku 370 mg trisilylovaného meziproduktu v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají 3 ml (3 mmol) 1M tetrabutylarooniumfluoridu v tetrahydrof uranu a tato směs se míchá při teplotě místnosti pres noc. Reakční směs se zředí vodou a solankou a extrahuje se diůkladně čtyři krát 50 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 1:4 hexan-ethy lacetát, čímž se získá 249 mg (71 % teorie) l,25-dihydroxy-16-en-23-in-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu v podobě pěny.

Příklad 23 [ 3aR - [ 1 ( S * ) , 3aa,4|3,7a[3) ] - 3 ,3a, 5 ,6 ,7 ,7a-Hexahydro-7a-methyl] - 6 ,6 ,6-tri f luor-5-hydroxy-l-methyl - 5 - ( trifluormethyl ) — 3E — hexenyl)-3H-inden-ol

Do suspenze 165 mg (4,34 ramol) 1 ithi umaluminiumhydridu v 15 ml bezvodého tetrahydrofuranu v prostředí argonu, ochlazené na ledové lázni se nejdříve přidá 235 mg (4,34 mmol) pevného methoxídu sodného a pak po kapkách 334 mg (0,87 mmol) f 3 a R - f 1 ( Ξ * ) , 3 a 0( , 4 β , 7 a (3) ] - 3 , 3 a , 5 , 6 , 7 , 7 a - h e x a h y d r o - 7 a - m e t, h y 1 -1 I 6 ,6,6-tri f 1 uor - 5 - hyd roxy- 1 -meLhy 1 - 5- ( tr i f 1 u o r m e t h y .1) -3-hex i nyl)-3H-inden-olu rozpuštěného v 10 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Takto získaná reakční směs se pod zpětným chladičem vaří (při teplotě 80 ’C) po dobu 2,5 hodin. Chromatografie v tenké vrstvě potrvzuje, že reakce proběhla dokonale. Reakční směs se ochladí v ledové lázni a reakce se ukončí pečlivým přidáním 1 ml vody a 1 ml 2N roztoku hydroxidu sodného. Po přidání 20 ml etheru se míchá po dobu 0,5 hodin, přidá se 2,2 g síranu hořečnatého, míchá se po dobu půl hodiny, zfiltruje se a odpaří se k suchu. Získá se 335 mg (100 % teorie) krystalického [3aR-[1(S*),3aa,4@,7aP)] - 3 ,3a,5,6,7 ,7a-hexahydro-7a-methyl-l[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluorinethyl)-3E-hexenyl)-3H-inden-olu (Čistého podle chromatografie v tenké vrstvě).

Příklad 24

Ll(S*),3aR-(3aa,7a(3)]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-methyl-l47 [6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3E-hexenyl )-4H-inden-4-on

Do roztoku 256 mg (0,66 mmol) [3aR-[l(S*),3aa,4P,7aP)]3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxyl-methyl-5-(trÍfluormethyl)-3E-hexenyl)-3H-inden-olu v 10 ml bezvodého methy1enchloř idu se přidá po částech 1,12 g (3 mmol) pyridiniumdvojchromanu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu čtyř hodin. Po přidání 25 ml etheru se míchá 15 minut, směs se zfiltruje přes Celíte a celitová vrstva se promyje tři krát, 20 ml ethylacetátu. Spojené filtráty se promyjí 2N roztokem hydrogenuhliči tanu draselného, vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromátografií za použití jako e]učni ho činidla systému 9:1 methylenchlorid-ethylacetát za získání 230 mg (90 % teorie) krystalického [ 1 ( S * ) , 3aR-( 3aa , 7a|3) ] - 3,3 a , 5 , 6,7,7a-h e xahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluormet,hy])-3E-hexenyl)-4H-inden-4-onu.

Příklad 25 [l{S*),3aR-(3aDt,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l[6,6,6-trifluor-5-(trimethylsilyl)oxy-l-methyl-5-trifluormethyl)-3E-hexeny])-4H-inden-4-on

Do míchaného roztoku 268 mg (0,697 mmol) [l(S*),3aR(3aa,7a(3)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor 5~hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3E-hexenyl)-4H-inden-4 onu v 8 ml bezvodého methy1ench1 oř idu se přidá při teploltě míst.nosti 0,92 ml (6)27 mmol) l-(trimethylsilyl)imidazolu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se zředí přidáním vody a extrahuje se důkladně hexanem. Spojené extrakty se promyjí vodou a solankou do neutrální reakce, vysuší se síraném'sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 9:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá

310 mg (97 % teorie) [l(S*),3aR-(3aa,7a3)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-(trimethylsilyl)oxy-l-methyl-5-trífluormethyl)-3E-hexenyl) -4H-inden-4-onu.

Příklad 26 l,25-Dihydroxy-16,23E-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalcif e r o 1

Do míchaného roztoku 725 mg (1)24 mmol) [ 3 S - ( 1 Z , 3 Ot, 5β ) ] [2-(3,5-bis[[l,l-d ime thylethyl)dimethylsilyl]oxy]-2-methylen cyklohexyliden]ethylldifenylfosfinoxidu v 15 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při t.eplotě -78 C přidá 0,78 ml (1,24 mmol)

1,6M n-butyllithia v hexanu po kapkách v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut a do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách roztok 307 mg (0,672 mmol) [l(S*),3aR(3aQ,7af3)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor 5-(trimethy]silyl)oxy-l-methyl-5-trifluormethyl)-3E-hexeiiyl) 4II - i n d en - 4 -onu v 9 ml bezvodého tet rabydroíuránu a reakční směs se míchá při teplotě -78 ’C po dobu 2,5 hodin. Reakce se ukončí přidáním vody a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se další voda a reakční směs se extrahuje tři krát 30 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 9:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 449 mg čistého meziproduktu (silyloxyskupina v poloze 25 se hydrolyzuje v průběhu reakce).

Do roztoku tohoto meziproduktu (449 mg) v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 3,6 ml (3,6 mmol) ÍM tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu a tato směs se míchá při teplotě místnosti přes noc.. Do reakční směsi se přidá led, směs se míchá 15 minut, zředí se vodou a solankou a extrahuje se ethylacetátem. Extrakty se promyjí vodou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 1:2 hexan-ethylacetát, čímž se získá 291 mg (83 % teorie) 1,25-dihydroxy-16,23E-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu v podobě pěny.

Příklad 27 [3aR-[l(S*),3aOí,4|3,7a|3)]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-inethyl-l[6 , 6,6-trif]uor-5-hydroxy-l-methyl-'5-(trifluormethyl )-3Z-hexenyl)-3H-inden-4-ol

Směs 1,62 g (4,21 mmol) (3aR-[l(S*),3aCí,43,7a3)]3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxy1-me thy 1-5-( t riflu o rmetdiyl )-3-hexinyl)-3H-inden-4-olu 16 ml ethyláce tátu, 40 ml hexanu, 1,6 ml absolutního ethanolu, 0,08 ml chinolinu a 320 mg Lindlarova katalyzátoru se hydrogenuje v prostředí vodíku při teplotě místnosti po dobu 70 minut. Reakční směs so zf.il tru je přes celit, o vou vrstvu, která se pak promyje tří krát: 60 ml et,hy 1 acetátu . Spojené filtráty sc promyjí 25 ml 1N kyseliny chlorovodíkové a čtyři krát směsí vody a solanky. Vodné vrší,vy se extrahují dva krát 90 ml ethylacetátu. Spojené organické vrst.vy se vysuší síranem sodným, a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí chromatografií HPLC na silikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 3:1 hexan-ethylacetát. za průtoku 100 ml/min, čímž se získá 1,51 g (93 % teorie) [ 3aR-[ 1 ( S* ) , 3aa , 4β , 7af3) ]-3,3a , 5 , 6,7 , 7a hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5(tri fluormethyl ) - 3Z-hexenyl)-3H-inden-4-olu.

Příklad 28 [l(S*),3aR-(3aa,7a(3)]-3₎3a,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-methyl-l[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl) - 3Z-hexenyl)-4H-inden-4-on

Do roztoku 7 50 mg (1,94 mmol) [ 3aR-[ 1 ( S* ) , 3aa , 4β , 7a(3) ] 3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor-5-hydroxyl-methyl-5-(trifluormethyl)-3Z-hexenyl)-3H-inden-4-olu ve 14 ml bezvodého methylenchloridu se přidá po částech 3,64 g (9,68 mmol) pyridiniumdvojchromanu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu pěti hodin. Po přidání 30 ml etheru se míchá 15 minut, směs se zfiltruje pres Celíte a celitová vrstva se promyje tři krát 50 ml etheru. Spojené filtráty se promyjí 2N roztokem hydrogenuhličitanu draselného (50 ml) a tři krát směsí vody a solanky (1:1). Vodná vrstva se extrahuje 2 x 100 ml ethylacetátu, Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému hexanethy 1 a c e t á t za získání 720 mg (96,5 % teorie) [l(S*),3aR(3aa,7ap)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor 5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3Z-hexenyl)-4H-inden-4onu.

Přiklad 29 [1 ( S * ) ,3aR-(3aa,7a(3) ]-3,3a,5,6,7,7a-Hexahydro-7a-methyl-l[6,6,6-trifluor-5-trimethylsi]yloxy-l-meLhyl-5-trifluormethyl3Z-hexenyl]-4H-inden-4-on

Do míchaného roztoku 720 mg (1,87 mmol) [l(S*),3aR(3aa,7a|3)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor 5-hydroxy-l-methyl-5-(trífluormethyl)-3Z-hexenyl)-4H-inden-4 onu v 13 ml bezvodého methylenchloridu se přidá při teploltě místnosti 1,86 ml (12,68 mmol) l-(trimethylsilyl)imidazolu reakční směs se míchá v prostředí argonu po dobu 17 hodin. Reakční směs se zředí přidáním 7 ml vody, míchá se po dobu 15 minut, přidá se 20 ml solanky a extrahuje se tři krát 100 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se promyjí pět krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 9:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá

825 mg (96,5 X teorie) [l(S*),3aR-(3att,7a|3)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-l6,6,6-trifluor-5-trimethylsllyloxy-l~niethyl-5-trifluormethyl-3Z-hexenyl]-4H-inden-4-onu.

Příklad 30 l,25-Dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalcif e r o 1

Do míchaného roztoku 555 mg (0,952 mmol) [ 3 S - (1 Z , 3 Ct, 5 (3 ) ]— [2-{3,5-bis[[(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-2-methylencyklohexyliden]ethylldifenylfosfinoxidu v 6 ml bezvodého tetrahydrof uranu se při teplotě -78 'C přidá 0,595 ml (0,952 mmol) 1,6M n-butyl lithia v hexanu po kapkách v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut a do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách roztok 270 mg (0,591 mmol) [l(S*),3aR(3aa,7a|3)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-l-[6,6,6-trifluor5-trimethylsÍlyloxy-l-methyl-5-tri fluormethyl - 3Z-hexenyl]-4Hi nden--4-onu ve 4 ml bezvodého I.e t.rahydroΓuranu v průběhu 10 minut. Reakční směs se míchá při teplotě -78 ’C po dobu 1,75 hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml 2N roztoku Rochellovy soli a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 30 ml 2N roztoku Rochellovy soli a reakční směs se extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu, Ethylacetátové extrakty se promyjí tři krát solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový silylovaný meziprodukt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 10:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 355 mg čistého meziproduktu.

Do roztoku tohoto meziproduktu ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 3,8 ml (3,8 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu v.prostředí argonu a tato směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 19 hodin. Do reakční směsi se přidá 5 ml vody, směs se míchá 15 minut, zředí se 20 ml solanky a extrahuje se 3 x 90 ml ethylacetátu. Extrakty se pro52 myjí čtyři krát směsí vody a solanky, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromátografií za použití jako elučního činidla systému 1:3 hexariethylacetát, čímž se získá 237 mg (77 X teorie) krystalického l,25-dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu o teplotě tání 120 až 121 * C (po překrystalování ze systému tetrahydrofuran-methylformát) .

Příklad 31 , 25-Dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-19-nor“ cholekalciferol

Roztok 700 mg (1,23 mmol) [ 3R-( 3« , 5(3 , Z ) - ( 3 , 5-b i s [ ( ( 1 ,1dimethylethyl)d i m e thy1s ilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 7 ml bezvodého tetrahydrofuranu se ochladí v lázni suchého ledu na teplotu -78 C a přidá se 0,77 ml (1,23 rnuiol ) 1,6M n - bu t y l 1 i t h i a v hexanu a v prostředí argonu se míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut roztok 277 mg (0,607 mmol) [1(S*)~ 3aR-(3aa,7aP)]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-inethyl-l-[6,6,6-trifliior-5-trimethylsilyloxy-l-methyl-5-trifluormethyl-3Z-hexeny 1 ]-411-i nden-4-onu ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě -78 ’C po dobu dvou hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml 2N roztoku Rochellovy soli a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 25 ml 2N roztoku Rochellovy soli a reakční směs se extrahuje tři krát. 100 ml e thy 1 ac e tátu . Ethy lacetátové extrakty se promyjí solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový meziprodukt, se čistí chromatografií na si1 ikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 10:1 bexan-ethylacetát a následně systému 1:3 hexan-ethylacetát, čímž se získá kruhový A prekursor. Získá se 329 mg kruhového A disilylovaného l,25-dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-19-norcholekalc i f erolu.

Do roztoku 329 mg kruhového A disílylovaného 1 , 25-dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-19-nor-cholekalci ferolu ve 2,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 4,4 ml (4,4 mmol) 1M tetrabuty1amoni umfluoridu v tetrahydrofuranu a tato směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 65 hodin. Do reakční směsi se přidá 10 ml vody, směs se míchá 15 minut, zředí se 20 ml solanky a extrahuje se 3 x 90 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 1:8 hexan-ethylacetát a pak chromatografií HPLC na silikagelovém sloupci, čímž se získá 210 mg (68 X teorie) l,25-dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-19-nor-choleka1ciferolu v podobě bílé pěny.

Př í klad 32 la-Fluoro-25-hydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferol

Do roztoku 460 mg (0,977 mmol) l 3S-( 3 oc, 5|3 , Z ) ] - 2 [ 2-[ 2methylen-3-fluoro-5-[[(1,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy] cyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 6 ml bezvodého tetrahydrof uranu o teplotě -78 ’C se přidá se 0,61 ml (0,976 mmol) 1,6M n-buty11ithia v hexanu a v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut roztok 277 mg (0,607 mmol) [ 1 ( S * ) 3aR-( 3 a a , 7 a β) ] - 3 , 3a,5 ,6 ,7,7a-hexahydro-7a-methyl -1 - [ 6 ,6, 6-trif1uor-5-trimethy lsί 1 y loxy-1-methy1 -5-1rif1uormethy1 - 3Z-hexe ny 1 ) - 4 H-i nden-4 - onu ve 4 ml bezvodého t, e tr ahy dr o f u r anu . Reakční směs se míchá při teplotě -78 'C po dobu dvou hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml 2N roztoku Rochellovy soli a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 30 ml 2N roztoku Rochellovy soli a reakční směs se extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k su54 chu, čímž se získá 630 mg surového meziproduktu. Surový meziprodukt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako e1 učni ho činidla systému 10:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 220 mg disilylovaného la-fluoro-25-hydroxy-16,23Z-dien-26,27hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu. (V průběhu tohoto postupu se silylether v poloze 25 hydrolyzuje.)

Do roztoku 220 mg disilylovaného la-fluoro-25-hydroxy16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 2,5 ml (2,5 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v t.etra hydrof uranu v prostředí argonu a tato směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Do reakční směsi se přidá 5 ml vody, směs se míchá 15 minut, zředí se 20 ml solanky a extrahuje se 3 x 90 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chroraatografií za použití jako elučního činidla systému 2:1 hexan-ethyláce tál, čímž se získá 170 mg (53 % teorie) la-fluoro-25hydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu v podobě bílé pěny.

Příklad 33 lot-Fluoro-25-hydroxy-16-en-23-in-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferol

Do roztoku 740 mg (1,57 mmol) [ 3 S - ( 1 Z , 3 σ , 5 (3) ] - [ 2 - [ 5 [f(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-3-fluor-2-methylencyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 8 ml bezvodého tetrahydrof uranu o teplotě -78 ’C se přidá za míchání se 0,98 ml (1,57 mmol) 1,6M n-buty11 ithia v hexanu a v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut roztok 262 mg (0,685 mmol ) [3aR-[l(S*}-3aa,7a|3]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl1-[6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trífluormethyl)— 3 — he xiny1]-4H-inden-4-onu v 5 ml tetrahydrohydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě -78 'C po dobu dvou hodin. Reakce se ukončí přidáním 15 ml směsi 1:1 2N roztoku Rochellovy soli a 2N roztoku hydrogenuhličitanu draselného a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 30 ml stejné směsi. a reakční směs se extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový meziprodukt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 5:1 hexan-ethylacetát, čímž 250 mg monosilylovaného la-fluoro-25-hydroxy-16-en-23-in-26,27-hexafluoro-20-epicholekalciferolu.

Do roztoku 250 mg monosilylovaného la-fluoro-25-hydroxy16-en-23-in-2fi,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu ve 3 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 2,8 ml (2,8 mmol) 1M tetrabuty 1amoniumf1uoridu v tetrahydrofuranu v prostředí argonu a tato směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Do reakční směsi se přidá 10 ml vody, směs se míchá 15 minut, zředí se 20 ml solanky a extrahuje se 3 x 90 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí čtyři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový prodfikt se čistí bleskovou chromatografií za použití jako elučního činidla systému 2:1 hexan-ethylacetát a chromatografií na sloupci oxidu křemičitého, čímž se získá 175 mg (49 X teorie) a-fluoro-25hydroxy-16-en-23-in-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu v podobě amorfní pevné látky.

Příklad 34 la-Fluoro-25-hydroxy-16,23-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferol

Do míchaného roztoku 350 mg (0,744 mmol) [35-(1Ζ,3θί,5β)](2-í 5-[[(1,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-3-fluor-2-methy1encyk1ohexy1 i den ] ethy 1 ] difeny1fosfi nox idu v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu o teplotě -78 ’C se přidá po kapkách 0,463 ml (0,74 mmol) 1,6M n-buty11 ithia v hexanu a v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut, roztok 230 mg (0,503 mmol) [3aR-[l(S*,3E)-3aa,7a|3]]-3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methy1-1-(6,6,6-trifluor-5-hydroxy-l-methyl-5-(trifluormethyl)-3hexeny 1 J-4H-inden-4-onu ve 4,5 ml bezvodého tetrahydrohydrofuranu. Reakční směs se míchá při teplotě -78 *C po dobu dvou hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml směsí 1:1 2N roztoku Rochellovy soli a 2N roztoku hydrogenuh1 iči tanu draselného a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 30 ml stejné směsi a reakční směs se extrahuje tři krát 100 ml ethylacetátu. Ethy1 acetátové extrakty se promyjí tři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový meziprodukt, se čistí bleskovou chromatografií na si 1 ikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému hexan-ethylacetát, čímž 236 mg disi 1ylováné ho la-l']uoro-25-hyclroxy-lfi,23-dien-26,27~hexaf'luoro-20-epi-cholekelci fenolu.

Do roztoku 236 mg d i s i 1 y 1 ováného lOt-fluoro-25-hydroxy16,23-dien-26,27-hexafluoro-20-epicholekalciferolu ve 3,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají 3 ml (3 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu v prostředí argonu a tato reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Do reakční směsi se přidá 5 ml vody, směs se míchá 10 minut, zředí se 20 ml solanky a extrahuje se 3 x 90 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na si 1 ikage 1 ovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 2:1 hexan-ethylacetát a chromatografií na sloučí oxidu křemičitého, čímž se získá 140 mg (53 % teorie) la-fluoro-25-hydroxy-16,23-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalciferolu v podobě amorfní pevné látky.

Příklad 35

1,25-Dihydroxy-16-en-23-in-26,27-bishomo-20-epi-cholekalcifero 1

Do míchaného roztoku 435 mg (0,746 mmol) [3S(lZ,3a,5|3)]-[2-[3,5-bis[[(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy] 2-methylencyklohexyliden]ethyl]difenylfosfinoxidu v 5 ml b e z vodého tetrahydrofuranu o teplotě -78 ’C se přidá po kapkách 0,465 ml (0,744 mmol) 1 ,6M n-butyllithia v hexanu a v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut roztok 169 mg (0,451 mmol) [ 3aR-[ 1 ( S* ) - 3aa , 7 a(3 ] ] - 1 - [ 5-e thy 1 - 1-methy 1 - 5[(trimethylsilyl)oxy]-3-heptinyl]- 3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7amethy1 -4H-inden-4-onu ve 4 ml bezvodého tetrahydrohydrofurnu. Reakční směs se míchá při teplot.ě -78 ’C po dobu 2,5 hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml směsi 1:1 2N roztoku Rochellovv soli a 2N roztoku hydrogenuh1 iči ta nu draselného a reakční směs sc nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 25 ml stejné směsi a reakční směs se extrahuje tri krát 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí tři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový meziprodukt se čistí bleskovou chromatografií na šili— kagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 40:1 hexan-ethylacetát, čímž 260 mg trisi 1ylovaného 1,25-dihydroxy-16-en-23-in-26,27-bi shomo-20-epi-cholekalciferolu.

Do roztoku 260 mg trisi 1y1 ováného l,2 5-dihydroxy-16-en-2 3in-26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferolu ve 3 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidají 3 ml (3 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu v prostředí argonu a tato reak-ční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 17 hodin. Do reakční směsi se přidá'10 ml vody, směs se míchá 10 minut, zředí se 20 ml solanky a extrahuje se 3 x 80 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí čtyři krát vodou a solankou, vysuší se sí58 raném sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou ohromatografií na silikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 1:3 hexan-ethylacetát, čímž se získá 158 mg (80 % teorie) 1 , 25-dihydroxy-16-en-23 - in-26,27 bishomo-20-epi-cholekalciferolu o teplotě tání 103 až 105 *C po prekrystalování z methylformátu.

Př í klad 36

1,25-Dihydroxy-16-en-23-in-26,27-bishomo-19-nor-20-epi-cholekalc iferol

Do míchaného roztoku 300 mg (0,525 mmol) [ 3R-1. rans- [ 2[3,5 -b i s[[(1,1-d i m e tb y1e thy 1 ) d i me thy1s ilyl]oxy]cyklohexyliden]ethyl]difenyirosfinoxÍdu ve 4 ml bezvodého tetrahydrofuránu o teplotě -78 ’C se přidá po kapkách 0,325 ml (0,520 mmol) 1 ,6M n-butyl lithia v hexanu a v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v prii běhu 5 minut roztok 77 mg (0,205 mmol ) [3aR-[l(S*)-3act,7a[3]]-l-[5-ethyl-l-methyl - 5-[(trimethylsilyl)oxyl-3-heptinyl1- 3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-4H-inden 4-onu ve 2,5 ml bezvodého tetrahydrohydrofurnu. Reakční směs se míchá při teplotě -78 Ό po dobu 2,5 hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml směsi 1:1 2N roztoku Rochellovy soli a 2N roztoku hydrogenuhličitanu draselného a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 25 ml stejné směsi a reakční směs se extrahuje tři krát 75 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí tři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový meziprodukt se čistí bleskovou chromátografií na silikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému hexan-ethylacetát, čímž se získá 58 mg trisi 1ylovaného l,25-dihydroxy-16-en~23in-26 , 27-bishomo-19-nor-20-epi-cho1eka1ciFerolu jako meziproduktu .

Do roztoku 124 mg trisilylovaného l,25-dihydroxy-16^_eu-2359 in-26,27-bishomo-19-nor-20-epi-choleka]ciferolu jako meziproduktu (získaného při dvou předešlých kopulačních reakcích) ve 2,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 2,5 ml (2,5 mmol) 1M tetrabutylamoni umfluoridu v tetrahydrofuranu v prostředí argonu a tato reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 40 hodin. Do reakční směsi se přidá 10 ml vody, směs se míchá 10 minut, zředí se 20 ml vody a solanky a extrahuje se tři krát. 70 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí čtyři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na šili— kagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 1:7 hexan-ethylacetát, čímž se získá 74 mg (25,3 % teorie) 1,25dihydroxy-16-en-23-ín-26,27-bishomo-19-nor-20-epi-cholekalci ferolti o teplotě tání 130 až 132 *C po překrysta 1 ování z methyl formátu.

Příklad 37

1α-E1u o r o- 2 5-h y d r o x y-16 -e n- 2 3 - i n- 2 6,27-bishomo-20-epi-c h o1ekalciferol

Do míchaného roztoku 390 mg ( 0,829 mmol) [3S-(1 Z,3a,5β)][2-[5-[[(l,l-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-3-fluor-2-methy1encyk1ohexy1 i den]ethy1]difeny1fosfi nox idu v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu o teplotě -78 ’C se přidá po kapkách 0,53 ml (0,848 mmol) 1,6M n-butyllithia v hexanu a v prostředí argonu. Míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut roztok 200 mg (0,534 mmol) [3aR-[l(S*)-3aa,7a|3]]-l-[5-ethyl-l-methyl-5“[(trimethylsjlyl)oxy]-3-heptinyl]~3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl-4H inden-4-onu ve 4,5 ml bezvodého tetrahydrohydrofurnu. Reakční směs se míchá při teplotě -78 'C po dobu dvou hodin. Reakce se ukončí přidáním 10 ml směsi 1:1 2N roztoku Rochellovy soli a 2N roztoku hydrogenuhličitanu draselného a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 30 ml stejné směsi a reakční směs se extrahuje tri krát 100 ml ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se promyjí tři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový meziprodukt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 30:1 hexanethy láce tát, čímž se získá 254 mg disilylovaného la-fluoro-25hydroxy-16-en-23-in-26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferolu jako meziproduktu.

Do roztoku 254 mg disilylovaného la-fluoro-25-hydroxy-16en-23-in-26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferolu ve 3,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 3,5 ml (3,5 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu v prostředí argonu a tato reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Do reakční směsi se přidá 10 ml vody, směs se míchá 15 minut, zředí se 20 ml vody a solanky a extrahuje se 3 x 80 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí čtyři, krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 7:4 hexan-ethy1acetát a chromatografií HPLC na sloupci oxidu křemičitého za použití jako elučního činidla systému 3:2 hexan-ethylacetát, čímž se získá 159 mg (67,6 % teorie) la-f1uoro-25-hydroxy- 16-en-23 - in26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferolu.

Příklad 38 ]ot-Fluoro-25“hydroxy-16,23E-dien-26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferol

Do míchaného roztoku 240 mg (0,51 mmol) [3S-(lZ,3ce,5|3)][ 2 - [5 -[[(1,1-dímethylethyl) d i methy1 silyl]oxy]-3-fluor-2-methylencyklohexyl iden]ethyl ]d'ifenylfosf inoxidu v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu o teplotě -78 ’C se přidá po kapkách 0,319 ml (0,51 mmol) 1,6M n-buty11 ithi a v hexanu a v prostředí argonu.

Míchá se po dobu 5 minut. Do takto získaného červeného roztoku se přidá po kapkách v průběhu 10 minut roztok 103 mg (0,273 mino! ) [3a R-[1 (S*,3E)-3aK,7a3]]-l-(5-ethyl-l-methyl-5-[(trimethylsilyl)oxy]-3-heptinyl]- 3,3a,5,6,7,7a-hexahydro-7a-methyl 4H-inden-4-onu ve 4 ml bezvodého tet, rahydrohydrof urnu. Reakční směs sc míchá při teplotě -78 ‘C po dobu dvou hodin a vloží se do mrazáku (teplota -20 ’C) na dobu jedné hodiny. Reakce se ukončí přidáním 10 ml směsi 1:1 2 N roztoku Rochellovy soli a 2 N roztoku hydrogenuhličitanu draselného a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se dalších 25 ml stejné směsí a reakční směs se extrahuje tři krát 90 ml ethylacetátu. Ethy1acetátové extrakty se promyjí tři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový meziprodukt se čistí bleskovou chromatografií na silikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 1:4 hexan-ethylacetát, čímž se získá 145 mg disily1 ováného la-fluoro-25-hydrox y-16,2 3 E-d i e n- 2 6,27-b i shomo- 20 -e p i -c h o 1eka 1 o i f er o 1u jako m e z i p r od u k t, u .

Do roztoku 145 mg disilylovaného lof-fluoro-25-hydroxy16,23E-dien-26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferolu ve 3 ml hezvodého tetrahydrofuranu se přidá 1,7 ml (1,7 mmol) 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu v prostředí argonu a tato reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Do reakční směsi se přidá 10 ml vody, směs se míchá 15 minut, zředí se 20 ml vody a solanky a extrahuje se tři krát 80 ml ethylacetátu. Extrakty se promyjí čtyři krát vodou a solankou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií na 30 mm x 127 mm silikagelovém sloupci za použití jako elučního činidla systému 3:2 hexan-ethylacetát a chromatografií HPLC na sloupci oxidu křemičitého za použití jako elučního činidla systému 1:1 hexan-ethylacetát, čímž se získá 90 mg (74 % teorie) lo-Fluoro25-hydroxy-16,23E-dien-26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferolu o teplotě tání 91 až 92 'C po překrystalování ze systému methyl62 acetát-hexan.

Následující krémy, gely a roztoky, obsahujcící jednotlivé složky, jak níže uvedeno v příkladu A až C, se připravují o sobě známým způsobem. Sloučeninou A se vždy míní 1,25-dihydroxy-16,23-dien-26,27-hexafluor-20-epi-oholeka]ciferol

Příklad A

Krém sloučenina A (hmotnost/hmotnost) 0,00001 až 0,10 cetylalkobo] s t, e a r y 1 a 1 k o h o 1 sorbit.anmonostcarát (Spán 60) minerální olej směs glycerylmonostearátu a polyoxyethy] e n g 1 y k o 1 st.eará l.n ( Λ r .! a cel 1 6 5 ) polysorbát 60 (Tween 60) triglycerid kapry 1 o v é a kapronové kyseliny sorbitolový roztok dinatriumedetát butylovaný hydroxyanisol (BHA) kyselina sorbová sorbát draselný destilovaná voda q.s. do

Příklad B

Gel sloučenin a A butylovaný hydroxyanisol (BHA) hydroxypropylcelulóza ethyla lkohol, USP voda q.s. do

1,5 2 , 5 2,0 2,0

4,0 1,0 5,0 4,0 0,10 0,02 0,20

0,1 až 0,2 100,00

0,02 3,00

45,00

100,00

X (hmotnost/hmotnost) 0,00001 až 0,10

Příklad C

Topicky roztok % (hmotnost/hmotnost)

sloučenina A		0,00001 až 0,10
propy1eng]yko1		10,00
triglycerid kaprylové a	kapronové	kyseliny 30,00
butylováný hydroxyanisol	(RHA)	0,02
ethylalkohol, absolutní	q . s . do	100,00

Pr ňmyslová v y 11 ž i t e 1 η os t

Analog vitaminu Dj vhodný pro výrobu farmaceutických a kosmetických prostředků pro ošetřování hyperproliferativních poruch, neoplastických onemocnění a onemocnění mazových žláz a pro výrobu prostředků pro odstraňování stavů navozených poškozením světlem, zvláště pro topické ošetřování pokožky poškozené slunečním zářením, pokožky vrásčité, s jevy e1 a Rtó z y a předčasného stárnutí.

Claims (15)

1. PATENTOVÉ

   NÁROKY

   WH?

   1. Analog vitaminu Ds obecného vzorce I kde znamená

   R atom vodíku, fluoru nebo hydroxylovou skupinu,

   R2 atom vodíku, nižší alkylovou skupinu nebo atom halogenu, X mol byle novou skupinu nebo

   R hydroxylovou skupinu a

   X (H , H) nebo methylenovou skupinu a

   H

   A skupinu -C = C- , C = C 1 i , C = C 1 1 nebo -CH2-CH2- 1 1 H t 1 Η H za podmínky, že v případě, kdy A znamená skupinu -CH2-CH2- znamená R2 atom vodíku nebo nižší alkylovou skupinu.
2. 2. Analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce 1, kde znamená R hydroxylovou skupinu a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 1.
3. 3. Analog vitaminu D3 podle nároku 2 obecného vzorce I, kde znamená A -C=C- a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 2 .
4. 4. Analog vitaminu D3 podle nároku 2 obecného vzorce I, kde znamená A skupinu -CH2-CH2- a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 2.

   •
5. 5. Analog vitaminu D3 podle nároku 2 obecného vzorce I, kde znamená A skupinu • H

   II II

   C = C nebo C ~ C

   II II

   Η Η H a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 2.
6. 6. Analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R 2 atom fluoru a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 1.

   I. Analog vilaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce J, kde znamená R2 atom vodíku a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 1 .
7. 8. Analog vitaminu Dz podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R2 atom nižší alkylovou, zvláště methylovou nebo • ethylovou skupinu a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 1 .

   •
8. 9. Analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R atom fluoru a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 1 .
9. 10. Analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená X (H,H) a ostatní symboly mají význam uvedený v nároku 1 .

   II. Analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce 1, kterým je

   1,25-dihydroxy-16-en-23-in-20-epi-cholekalciferol,

   1.25- dihydroxy-16-en-20-epi-cholekalciferol,

   1.25- dihydroxy-16-en-23-in-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalcif ero 1 ,

   1.25- dihydroxy-16,23E-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-cholekalcif e r o 1 ,

   1.25- dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro~20-epi-cholekalciferol ,

   1.25- dihydroxy-16,23Z-dien-26,27-hexafluoro-20-epi-19-nor-cholekalcíferol , lK-fluoro-25-hydroxy-16 , 23 7. - dien-26 , 27-hexaf luoro-20-epi-cholekalciferol, ln-fluoro-25-hydroxy-l6-en-23-in-26,27-hexaf luoro-20-epi-choLekalciferol,

   1 ct — f luoro-25-hydroxy-l 6 , 23 Z- d i en-26 , 27-hexaf luoro-20-epi-cholekalciferol ,

   1.25- díhydroxy-16-en-23-in-26,27-bishomo-20-epi-cholekalcifer o 1 , ] , 2 íi - d i. hy d r o x y -1 6 - e n - 2 3 - i n - 2 fi , 2 7 - b j s h om o -1 9 ~ n o r - 2 Ω - o p i - c ho 1 e kalciferol, la-fluoro-25-hydroxy-lG-en-23- i n - 2 6 , 27-bishomo-20-epí-cholekalciferol , la-fluoro-25-hydroxy-16,23E-dien-26,27-bishomo-20-epi-cholekalciferol.
10. 12. Farmaceutický prostředek, v y z n a č u j í c í s e t í m , že obsahuje jako účinnou látku analog vitaminu D3 podle nároku 1 obecného vzorce I a farmaceuticky vhodný inertní nosič .
11. 13. Způsob přípravy analog vitaminu D3 podle nároku 1, vyznačující se straňuje chránící skupina z obecného vzorce I t í m, že se ododpovídající sloučeniny mající hydroxylové skupiny chráněné siiylovou skupinou.
12. 14 .

    Analog vitaminu D3 obecného vzorce 1 podle nároku 1 pro navozování diferenciace a inhibice proliferace kůže a linií rakovinových buněk, zvláště pro ošetřování pro 1 iferativních onemocnění kůže, jako je psoriasis, pro ošetřování neoplastických onemocnění, jako je leukemie a pro ošetřování nemocí mazových žláz, jako je akné.
13. 15. Analog vitaminu D3 obecného vzorce I podle nároku 1 pro odstraňování stavu navozených poškozením světlem, zvláště pro topické ošetřování pokožky poškozené slunečním zářením, vrásky, elastózou a předčasným stárnutím pokožky.
14. 16. Analog vitaminu D 3 obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu farmaceutických prostředků pro navozování diferenciace a inhibicve proliferace kůže a linií rakovinových buněk, zvláště pro ošetřování pro 1 iterativních onemocnění kůže, jako je psoriasis, pro ošetřování neoplastických onemocnění, jako je leukemie a pro ošetřování nemocí mazových žláz, jako je akn e .
15. 17. Analog vitaminu P3 obecného vzorce 1 podle nároku 1 pro výrobu farmaceutických prostředků pro odstraňování stavů navozených poškozením světlem, zvláště pro topické ošetřování pokožky poškozené slunečním zářením, vráskami, elastózou a předčasným stárnutím pokožky.