ES2218024T3 - Derivados de aminoacido enantiomerico anticonvulsionante. - Google Patents

Abstract

Utilización de un compuesto en la configuración R que tiene la fórmula: **FORMULA** en la que Ar es fenilo que está insustituido o sustituido con al menos un grupo halo; Q es alcoxi que contiene uno a seis átomos de carbono, y Q1 es metilo, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de los trastornos del sistema nervioso central en un animal, que comprende la administración a dicho animal necesitado de una cantidad anticonvulsionante eficaz.

Description

Derivados de aminoácido enantiomérico anticonvulsionante.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a una utilización nueva de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de la epilepsia y de otros trastornos del SNC.

Antecedentes de la invención

La aplicación principal de los fármacos anticonvulsionantes es el control y la prevención de las enfermedades relacionadas con la epilepsia o con los trastornos relacionados con el sistema nervioso central. La epilepsia se refiere a muchos tipos de enfermedades recidivas, producidas por descargas neuronales paroxísmicas excesivas en el cerebro; las dos enfermedades generalizadas principales son las ausencias típicas, que están asociadas a espasmos mioclónicos, enfermedades acinéticas, pérdida transitoria de la consciencia, pero sin convulsión y a las convulsiones tonicoclónicas generalizadas que se manifiestan en una serie continua de enfermedades y convulsiones con pérdida de la consciencia.

La base del tratamiento de dichos trastornos ha sido la administración a largo plazo y constante de fármacos anticonvulsionantes. La mayoría de los fármacos que se utilizan son ácidos débiles que, supuestamente, ejercen su acción sobre las neuronas, las células gliales o ambos en el sistema nervioso central. La mayoría de estos compuestos se caracteriza por la presencia de al menos una unidad de amida y uno o más anillos de benceno que están presentes como un grupo fenilo o parte de un sistema cíclico.

Se ha prestado mucha atención al desarrollo de fármacos anticonvulsionantes y hoy en día muchos de tales fármacos son muy conocidos. Por ejemplo, los hidantiones, tal como la fenitoína, sirven para el control de las enfermedades generalizadas y todas las formas de enfermedades parciales. Las oxazolidindionas, tales como la trimetadiona y la parametadiona, se utilizan en el tratamiento de enfermedades no convulsionantes. La fenacemida, una fenilacetilurea, es uno de los anticonvulsionantes empleados actualmente mejor conocidos, aunque recientemente se ha dedicado mucha atención a la investigación de las diazepinas y piperazinas. Por ejemplo, las patentes U.S. nº 4.002.764 y nº 4.178.378 de Allgeier, et al. describen los derivados de diazepina esterificados útiles en el tratamiento de la epilepsia y de otros trastornos nerviosos. La patente U.S. nº 3.887.543 de Nakanishi, et al. describe un compuesto de tieno [2,3-e][1,4]diazepina que presenta también actividad anticonvulsionante y otra actividad depresora. La patente U.S nº 4.209.516 de Heckendorn, et al. se refiere a derivados de triazol que presentan actividad anticonvulsionante y son útiles en el tratamiento de la epilepsia y de enfermedades de la tensión y de la agitación. La patente U.S. nº 4.372.974 de Fish, et al. da a conocer una formulación farmacéutica que contiene un compuesto de aminoácido alifático en la que el ácido carboxílico y la amina primaria se separan en tres o cuatro unidades. La administración de estos compuestos en un intervalo de pH ácido es útil en el tratamiento de los trastornos con convulsión y posee asimismo propiedades ansiolíticas y sedantes.

La patente U.S. nº 5.378.729 de Kohn, et al. da a conocer compuestos y composiciones farmacéuticas con actividad sobre el sistema nervioso central (SNC) que son útiles en el tratamiento de la epilepsia y de otros trastornos del SNC que tienen la forma general siguiente:

1

R es hidrógeno alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, arilo, aril alquilo inferior, heterocíclico, heterocíclico alquil inferior, alquil inferior heterocíclico, cicloalquil inferior, cicloalquil inferior alquil inferior y R está insustituido o está sustituido con al menos un grupo que cede electrones o un grupo donante de electrones.

R_{1} es hidrógeno o alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, arilo alquil inferior, arilo, heterocíclico alquil inferior, heterociclo, cicloalquil inferior, cicloalquil inferior alquil inferior, insustituido o sustituido cada uno con un grupo donante de electrones o un grupo que cede electrones y

R_{2} y R_{3} son independientemente hidrógeno, alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, aril alquilo inferior, arilo, heterocíclico, heterocíclico alquilo inferior, alquil inferior heterocíclico, cicloalquilo inferior, cicloalquil inferior alquilo inferior o Z-Y en el que R_{2} y R_{3} pueden estar insustituidos o sustituidos con al menos un grupo que cede electrones o un grupo donante de electrones;

Z es O, S, S(O)_{a}, NR_{4}, PR_{4} o un enlace químico;

Y es hidrógeno, alquilo inferior, arilo, aril alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, halo, heterocíclico o heterocíclico alquil inferior e Y puede estar insustituido o sustituido con un grupo donante de electrones o un grupo que cede electrones, con la condición de que cuando Y sea halo, Z sea un enlace químico, o

ZY considerados conjuntamente son NR_{4}NR_{5}R_{7}, NR_{4}OR_{5}, ONR_{4}R_{7}, OPR_{4}R_{5}, PR_{4}OR_{5}, SNR_{4}R_{7}, NR_{4}SR_{7}, SPR_{4}
R_{5}, PR_{4}SR_{7}, NR_{4}PR_{5}R_{6}, PR_{4}NR_{5}R_{7},

NR_{4}

\delm{C}{\delm{\dpara}{\delm{O}{}}}

--- R_{5},

\hskip1cm

S

\delm{C}{\delm{\dpara}{\delm{O}{}}}

R_{5},

\hskip1cm

NR_{4}

\delm{C}{\delm{\dpara}{\delm{O}{}}}

--- OR_{5},

\hskip1cm

S

\delm{C}{\delm{\dpara}{\delm{O}{}}}

--- OR_{5}

R_{4}, R_{5} y R_{6} son independientemente hidrógeno, alquilo inferior, arilo, aril alquilo inferior, alquenilo inferior o alquinilo inferior, en los que R_{4}, R_{5} y R_{6} pueden estar insustituidos o sustituidos con un grupo que cede electrones o con un grupo donante de electrones,

R_{7} es R_{6}, COOR_{8} o COR_{8},

R_{8} es hidrógeno, alquilo inferior o aril alquilo inferior y el grupo arilo o alquilo puede estar insustituido o sustituido con un grupo que cede electrones o con un grupo donante de electrones y

n es de 1 a 4 y

a es de 1 a 3.

Desgraciadamente, a pesar de los muchos agentes farmacoterapéuticos disponibles, un porcentaje significativo de la población con epilepsia o trastornos relacionados son asistidos escasamente. Además, ninguno de los fármacos disponibles actualmente son capaces de conseguir el control total de la enfermedad y la mayoría presentan efectos secundarios problemáticos. Pueden aparecer toxicidades por dosificación repetida que no se manifiestan en la administración de corta duración. Debido a que muchos fármacos que requieren administración de larga duración sitúan por último una masa de más en el hígado, incluyendo por ejemplo, la producción de enzima en el hígado o el metabolismo oxidativo que puede generar especies reactivas, muchos anticonvulsionantes han relacionado con éstos la toxicidad en el hígado.

La investigación continúa en este campo para encontrar mejor y más eficaces agentes anticonvulsionantes, especialmente para el tratamiento a largo plazo (administración de larga duración). Obviamente, el fármaco ideal es el que presenta gran actividad farmacológica, mínimos efectos secundarios y es relativamente no tóxico y seguro para el animal que se está tratando. Más específicamente, el fármaco anticonvulsionante ideal es el que satisface los siguientes cuatro criterios: (1) presenta una gran actividad anticonvulsionante (expresada como ED_{50} bajo); (2) presenta una actividad neurológica mínima, (expresada por la dosis tóxica media (TD_{50})), en comparación con su potencia; (3) presenta un índice protector máximo (a veces conocido como selectividad o margen de seguridad) que mide la relación entre las dosis de un fármaco requerido para producir efectos no deseados y deseados y se mide como la relación entre la dosis tóxica media y la dosis eficaz media (TD_{50} /ED_{50}); y (4) es relativamente seguro medido por la dosis letal media (LD_{50}) correspondiente a su potencia y no es tóxico para el animal que se está tratando, p. ej. presenta mínimos efectos desfavorables en el resto del animal tratado, sus órganos, sangre, sus funciones corporales, etc. incluso a altas concentraciones, especialmente durante la administración de larga duración a largo plazo del fármaco. De este modo, por ejemplo, presenta la mínima toxicidad, es decir, poca o ninguna en el hígado. Aunque no es crítica la administración a corto plazo o de corta duración de un anticonvulsionante, ya que el animal puede tolerar algunas bajas concentraciones de toxicidad, el cuarto criterio bosquejado anteriormente es sumamente importante para un anticonvulsionante que se ha de tomar durante un prolongado período de tiempo (administración de larga duración) o en altas dosis. Puede ser el factor más importante en la determinación de qué anticonvulsionante se debe administrar a un paciente, especialmente si se necesita la dosificación crónica.

Por lo tanto, una agente anticonvulsionante que tenga una gran actividad anticonvulsionante, tiene toxicidad neurológica mínima y P. I. máximo (índice protector) puede desgraciadamente presentar tales toxicidades que aparecen en niveles altos repetidos de administración. En tal caso, la dosificación de corta duración del fármaco debe considerarse, pero no debería usarse en un régimen de tratamiento que requiera la administración de corta duración del anticonvulsionante. De hecho, si se requiere un anticonvulsionante para la dosificación repetida en un régimen de tratamiento a largo plazo, un médico puede prescribir un anticonvulsionante que puede tener actividad más débil en comparación con un segundo anticonvulsionante, si presenta una toxicidad relativamente baja para el animal. Un agente convulsionante que reúna los cuatro criterios es muy raro.

Sin embargo, el presente inventor ha descubierto dicho grupo de compuestos que generalmente es potente, presenta toxicidad neurológica mínima, tiene un índice protector elevado y no es relativamente tóxico para los órganos del cuerpo, incluyendo el hígado en la dosificación múltiple.

Sumario de la invención

Por consiguiente, la invención se refiere a la utilización de derivados de N-bencil-2-acetamido propionamida en la configuración de R que tiene la fórmula:

12

en la que

Ar es arilo que está insustituido o sustituido con halo;

Q es alcoxi inferior y

Q_{1} es CH_{3}, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de los trastornos del sistema nervioso central en un animal que comprende la administración de una cantidad anticonvulsionante eficaz a dicho animal que está necesitado del mismo.

La presente invención contempla emplear el compuesto de Fórmula I en una composición farmacéutica. Además, la administración de una cantidad eficaz de los presentes compuestos en sus formas farmacéuticamente aceptables proporciona un régimen excelente para el tratamiento de la epilepsia, la ansiedad nerviosa, la psicosis, el insomnio y otros trastornos nerviosos centrales relacionados.

Estos fármacos presentan gran actividad anticonvulsionante, mínima toxicidad neurológica, gran P. I. y mínima toxicidad. Estos anticonvulsionantes se utilizan en un régimen de tratamiento que requiere la dosis de corta duración y de los mismos para el paciente.

Como se muestra a continuación en la presente memoria, los compuestos de la presente invención presentan efectos mínimos sobre el hígado, lo que contrasta con otros compuestos anticonvulsionantes.

Descripción detallada de la invención

Tal como se utiliza en la presente memoria el término "alcoxi" se refiere a un grupo O-alquilo unido a la cadena principal mediante un puente de oxígeno, en el que alquilo es tal como se definió anteriormente. Los grupos alcoxi son grupos alcoxi inferior que contienen uno a seis átomos de carbono y más preferentemente, uno a tres átomos de carbono. Los grupos alcoxi más preferidos son propoxi, isopropoxi, etoxi y especialmente metoxi.

El término "arilo", cuando se utiliza solo o en combinación, se refiere a un grupo fenilo que está insustituido o sustituido con halo.

El término halo incluye flúor, cloro, bromo, yodo y similares. El halo preferido es el flúor.

Se prefiere que Q, en el compuesto de fórmula I, sea alcoxi con 1 a 3 átomos de carbono. El grupo alcoxi más preferido es propoxi, isopropoxi, etoxi y especialmente metoxi.

El grupo Ar tal como se define en la presente memoria, es fenilo, que puede estar insustituido o sustituido tal como se define en la presente memoria. Lo más preferido es que el grupo arilo, es decir, fenilo, esté insustituido o sustituido con un solo grupo halo. Es más preferible que si está sustituido, el sustituyente halo esté en la posición para o meta. Es aún más preferible que el grupo fenilo esté insustituido.

Ejemplos de los compuestos de la presente invención incluyen:

(R)-N-bencil-2-acetamido-3-metoxi propianomida,

(R)-N-(3-fluorobencil)-2-acetamido-3-metoxipropionamida,

(R)-N-(4-fluorobencil)-2-acetamida-3-metoxipropionamida,

(R)-N-bencil-2-acetamido-3-etoxi propionamida.

Según se indica con el asterisco en la fórmula I, los compuestos de la presente invención contienen al menos un carbono asimétrico. La estequiometría del carbono asimétrico en el asterisco está en la configuración de R. El inventor ha descubierto que el estereoisómero de R en el carbono asimétrico en el asterisco es significativamente más eficaz que el enantiómero de S correspondiente o una mezcla racémica de éste.

Es preferible que el compuesto de la presente invención esté prácticamente puro, es decir, prácticamente exento de impurezas. Es más preferible que los compuestos de la presente invención sean por lo menos el 75% puros (p/p) y más preferentemente mayores de aproximadamente 90% puros (p/p) y lo más preferentemente mayores de aproximadamente 95% puros (p/p).

Es preferible también que los compuestos de la presente invención sean en la práctica enantioméricamente puros, es decir, prácticamente exentos del correspondiente isómero S. Es más preferible que los compuestos de la presente invención contengan por lo menos el 90% (p/p) de estereoisómero R, y más preferentemente más de aproximadamente 95% (p/p) en el estereoisómero R. Por lo tanto, la presente invención contempla los compuestos que tienen como mucho aproximadamente el 10% de isómero S (p/p) y aún más preferentemente menos de aproximadamente 5% de isómero S (p/p).

Los compuestos de la presente invención en la forma R se preparan por técnicas reconocidas en la materia a partir de materiales de partida disponibles en el comercio.

Un procedimiento a título de ejemplo se bosqueja en el esquema 1 a continuación:

Esquema 1

2

Una molécula de D-serina (1) se esterifica en condiciones de acilación con un alcohol tal como el metanol ácido, para proporcionar el correspondiente éster (2). 2 se hace reaccionar con ArCH_{2}NH_{2}, como por ejemplo bencilamina, en condiciones de acilación para formar la correspondiente amida (3). La acilación del grupo amino libre, con un derivado de acilación de

Q_{1}

\delm{C}{\delm{\dpara}{O}}

--- OH,

tal como el ácido acético, o el éster alquílico inferior de ácido acético, o el anhídrido proporciona el derivado de hidroximetilo, o sea,

(4)Ar CH_{2}

\uelm{N}{H}

---

\delm{C}{\delm{\dpara}{O}}

---

\melm{\delm{\para}{CH _{2}  --- OH}}{C}{H}

---

\uelm{N}{H}

---

\uelm{C}{\uelm{\dpara}{O}}

--- Q_{1}

Se determinó la enantiopureza de 4 por técnicas conocidas en la materia, incluyendo el punto de fusión, la rotación óptica y ^{1}H RMN en la adición de un ácido orgánico en la configuración R, como por ejemplo el R(-)-ácido mandélico. Se repitió la cristalización de 4 hasta que se consiguió la enantiopureza de éste. El producto de 4 se transforma en el éter bajo las condiciones de Williamson haciéndole reaccionar con QX, en el que Q es tal como se definió en la presente memoria anteriormente y X es un grupo saliente adecuado, tales como OTs, OMs, o un haluro (p. ej., CH_{3}I) y similares en presencia de una base (p. ej., Ag_{2}O) para formar el producto (5) con la Fórmula I.

Otra variación se representa en el Esquema 2.

Esquema 2

3

Por ejemplo, comenzando con D-serina (1), el tratamiento con un derivado de acilación del ácido acético como por ejemplo el anhídrido acético en ácido acético, da la correspondiente amida 6 que se hace reaccionar a continuación con ArCH_{2}NH_{2} en las condiciones de reacción con acoplamiento del anhídrido mezclado, tal como describe Anderson, et. al., en JACS, 1967, 89, 5012-5017, cuyos contenidos se incorporan en la presente memoria como referencia, para dar el correspondiente compuesto de fórmula:

13

p.ej., 7. La alquilación de este R-producto en presencia de una base en las condiciones de Williamson, como por ejemplo yoduro de metilo en Ag_{2}O, proporciona un producto de Fórmula I (8).

Una vía alternativa se representa en el Esquema 3

Esquema 3

4

La D-serina (1) está protegida con un grupo N-protector conocido en la materia, por técnicas estándar. Por lo tanto se hace reaccionar, por ejemplo, con cloruro de carbobenzoxi (CBZ-Cl, cloroformato de bencilo) generando el aducto 9 de CBZ-D-serina N-protegido. El aducto de serina protegido se transforma en el correspondiente éter en las condiciones de Williamson haciéndolo reaccionar con QX, en la que Q y X se definieron anteriormente (p. ej., CH_{3}I) en presencia de una base (p. ej., Ag_{2}O) para formar un éter 10. En estas condiciones, también se esterifica el ácido. La hidrólisis posterior del grupo éster en 10 permite el acoplamiento de la amida con ArCH_{2}NH_{2} utilizando la metodología de acoplamiento de amidas (p. ej., anhídrido 1,1'-carbonildiimidazol mezclado) para dar la amida 12. La desprotección del grupo N-protector proporciona la amina libre 13 que se hace reaccionar a continuación con un agente de acilación como por ejemplo el anhídrido acético en una base, (p. ej. piridina) para proporcionar el producto (R)-8.

Si es necesario, en alguno de los procedimientos descritos anteriormente, se puede mejorar la pureza óptica del producto por separación adicional del enantiómero S a partir del enantiómero R, por técnicas estándar conocidas en la materia, tal como la cromatografía quiral que utiliza un soporte quiral estándar conocido en la materia.

Como alternativa, en cualquiera de los procedimientos proporcionados anteriormente, se puede utilizar una D-serina racémica como material de partida. Siguiendo los procedimientos en cualquiera de los esquemas bosquejados anteriormente se proporcionaría la mezcla racémica, de forma que se puede resolver en el isómero R por técnicas estándar conocidas en la materia tal como la cromatografía quiral.

Los ingredientes activos de las composiciones terapéuticas y los compuestos de la presente invención presentan excelente actividad anticonvulsionante cuando se administran en cantidades que oscilan desde aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal al día. Este régimen de dosis puede ser ajustado por el médico para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, se pueden administrar varias dosis divididas al día o se puede reducir la dosis proporcionalmente según indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Una ventaja práctica decidida es que el compuesto activo se puede administrar de forma conveniente, como por ejemplo por vía oral, intravenosa (soluble en agua), intramuscular o subcutánea.

El compuesto activo se puede administrar por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o con un excipiente comestible asimilable, o puede estar dentro de cápsulas de gelatina de carcasa dura o blanda, o puede estar prensado en comprimidos, o puede estar incorporado directamente en el alimento de la dieta. Para administración terapéutica oral el compuesto activo se puede incorporar con excipientes y utilizarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, grageas, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, galletas y similares. Dichas composiciones y preparaciones deberían contener al menos 1% del compuesto activo. El porcentaje de las composiciones y preparaciones se puede variar desde luego y puede estar comprendido de forma conveniente entre aproximadamente 5 y aproximadamente 80% del peso de la unidad. La cantidad de compuesto activo en dichas composiciones terapéuticamente útiles es tal que se debe obtener una dosificación adecuada. Las composiciones o preparaciones preferidas según la presente invención se preparan de modo que la forma unitaria de dosificación oral contenga entre aproximadamente 5 y 1.000 mg de compuesto activo.

Los comprimidos, grageas, píldoras, cápsulas y similares pueden contener: un aglutinante como por ejemplo goma de tragacanto, acacia, almidón de maíz o gelatina; excipientes tal como fosfato dicálcico; un agente de disgregación tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico y similares; un lubricante tal como estearato de magnesio y un agente edulcorante tales como sacarosa, lactosa o sacarina se pueden añadir o un agente potenciador del sabor tal como menta, aceite de gualteria o potenciador de sabor de cereza. Cuando la forma unitaria de dosificación sea una cápsula puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un excipiente líquido. Diversos otros materiales pueden estar presentes como recubrimientos o de otra forma modificar la forma física de la unidad de dosificación. Por ejemplo, comprimidos, píldoras o cápsulas pueden estar recubiertos con goma laca, azúcar o ambos. Un jarabe o elixir puede contener el compuesto activo, sacarosa como agente edulcorante, metil y propilparabenos como conservantes, un colorante y potenciador de sabor como por ejemplo esencia de cereza o de naranja. Desde luego, cualquier material utilizado para preparar cualquier forma unitaria de dosificación debería ser farmacéuticamente puro y prácticamente no tóxico en las cantidades empleadas. Además, el compuesto activo se puede preparar en preparaciones y formulaciones de liberación lenta. Por ejemplo, se contemplan formas de dosificación de liberación lenta en las que el ingrediente activo se une a una resina de intercambio iónico que, opcionalmente se puede recubrir con un recubrimiento de barrera de difusión para modificar las propiedades de liberación de la resina.

El compuesto activo se puede también administrar por vía parenteral o intraperitoneal. Las dispersiones se pueden también preparar en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos y en aceites. En las condiciones ordinarias de almacenamiento y utilización, estas preparaciones contienen un conservante para impedir el desarrollo de microorganismos.

Las formas farmacéuticas adecuadas para utilización inyectable incluyen soluciones acuosas estériles (solubles en agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación improvisada de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos la forma debe estar esterilizada y debe ser fluida hasta el punto que sea fácil de inyectar. Debe ser estable en las condiciones de preparación y almacenamiento y debe ser preservada contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El excipiente puede ser un medio disolvente o de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y un polietilenglicol líquido, y similares), sus mezclas adecuadas y aceites vegetales. Se puede mantener la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante la utilización de un revestimiento como por ejemplo lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones y mediante la utilización de tensioactivos. La prevención de la acción de los microorganismos se puede producir mediante varios agentes antibacterianos y antimicóticos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio. La absorción prolongada de composiciones inyectables puede ser producida mediante la utilización en las composiciones de agentes retardantes de la absorción, por ejemplo monoestearato de aluminio y gelatina.

Las soluciones inyectables estériles se preparan por incorporación del compuesto activo en la cantidad requerida en disolventes apropiados con varios de los demás ingredientes enumerados anteriormente, según se necesiten, seguida de esterilización filtrada. En general, las dispersiones se preparan incorporando los diversos ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril que contiene le medio de dispersión básico y los demás ingredientes requeridos a partir de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos de preparación preferidos son el secado al vacío y la técnica de secado por congelación que proporciona un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de su solución filtrada estéril previamente.

Tal como se utiliza en la presente memoria, "excipiente farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antimicóticos, agentes isotónicos y retardadores de absorción y similares. La utilización de dichos medios y agentes para las sustancias farmacéuticamente activas es bien conocida en la técnica. Su utilización en las composiciones terapéuticas está contemplada, excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el ingrediente activo,. Los ingredientes activos complementarios se pueden también incorporar en las composiciones.

Presenta ventajas especialmente formular composiciones parenterales en forma unitaria de dosificación para la facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La forma unitaria de dosificación utilizada en la presente memoria se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para los mamíferos que se han de tratar; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado junto con el excipiente farmacéutico requerido. Lo específico de las nuevas formas unitarias de dosificación de la invención está dispuesto para y depende directamente de (a) las características exclusivas del material activo y el efecto terapéutico particular que se debe conseguir y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de la composición de dicho material activo para el tratamiento de la enfermedad en los seres vivos que padecen un estado patológico en el que la salud corporal está alterada según se da a conocer en la presente memoria con detalle.

El ingrediente activo principal está compuesto para la administración conveniente y eficaz en cantidades eficaces de un excipiente adecuado farmacéuticamente aceptable en una forma unitaria de dosificación, tal como se describió en la presente memoria anteriormente. Una forma de dosificación unitaria puede contener, por ejemplo, el compuesto activo principal en cantidades que oscilan desde aproximadamente 5 a aproximadamente 1000 mg. Expresado en proporciones, el compuesto activo está generalmente presente en aproximadamente 1 a aproximadamente 750 mg/ml de excipiente. En el caso de las composiciones que contienen ingredientes activos adicionales, las dosis se determinan con relación a la dosis y modo de administración habituales de dichos ingredientes.

A menos que se indique lo contrario, los porcentajes son en peso.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término alquilo inferior se refiere a un grupo alquilo que contiene de 1 a 6 átomos de carbono que puede ser de cadena lineal o ramificada.

Para una mejor comprensión de la presente invención se hace referencia a la siguiente descripción y ejemplos:

Procedimientos generales

Se determinaron los puntos de fusión con un aparato de punto de fusión Thomas Hoover y están sin corregir. Se realizaron espectros infrarrojos (IR) en un espectómetro Perkin-Elmer 1330, 283 y un Mattson Genesis y se calibraron frente al enlace a 1601 cm^{-1} de poliestireno. Los valores de absorción están expresados en números de onda (cm^{-1}). Se tomaron espectros de resonancia magnética nuclear de protón (^{1}H RMN) y de carbono (^{13}C RMN) en instrumentos de RMN Nicolet NT-300 y General Electric QE-300. Los desplazamientos químicos (\delta) están en partes por millón (ppm) correspondientes a Me_{4}Si y las constantes de acoplamiento (valores J) están en hertzios. Todas las investigaciones espectrales de masa por ionización química se realizaron en un instrumento MAT TSQ-70 de Finnegan. Los microanálisis fueron proporcionados por Atlantic Microlab Inc. (Norcross, Ga). La cromatografía en capa fina se realizó en portaobjetos de microscópico GHLF prerrecubiertos con gel de sílice (2,5 x 10 cm; Analtech nº 21521).

Ejemplo 1 (R)-N-bencil-2-acetamida-3-metoxipropionamida

Se vertió ácido clorhídrico (8,00 g, 219,4 mmol) en MeOH (250 ml) y a continuación se añadió D-serina (20,00 g, 190,3 mmol). Se calentó la solución de reacción a reflujo (18 horas), se añadió bencilamina (81,6 ml, 761 mmol) y a continuación se calentó la reacción durante dieciocho horas más. Se eliminó el disolvente a presión reducida, se filtraron las sales insolubles y se eliminó el exceso de bencilamina a alto vacío (Kugelrohr). Se disolvió el residuo en agua (100 ml) y se extrajo el producto con CHCl_{3} (8 x 200 ml). Se combinaron las capas orgánicas, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se eliminó el disolvente a presión reducida. Se disgregó el residuo con Et_{2}O (150 ml) y se filtró para dar 10,0 g (27%) del producto enriquecido en R, N-bencil 2-aminohidracrilamida, como sólido blanco: p.f. 74-78ºC.;
[\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)=-1,6º; R_{f} 0,30 (10% MeOH-CHCl_{3}); ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 1,87 (br s, NH_{2}), 3,23 (t, J=5,1 Hz, CH), 3,39-3,55 (m, CH_{2}OH), 4,28 (d, J=5,7 Hz, NHCH_{2}) 4,76 (t, J=5,4 Hz, CH_{2}OH), 7,18-7,32 (m, 5PhH), 8,34 (t J=5,7 Hz, NH), ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}) 41,8 (NHCH_{2}), 56,9 (CH), 64,3 (CH_{2}OH), 126,6 (C_{4}'), 127,0 (2C_{2}' o 2C_{3}'), 128,1 (2C_{2}' o 2C_{3}'), 139,5 (C_{1}), 173,3 (C(O)NH) ppm, MS (+Cl) (intensidad rel.), 195 (M' +1, 53), 117 (100), Mezcla de reacción (+Cl) 195,113 56 (M^{+}+1) (calculado para C_{10}H_{15}N_{2}O_{2}, 195,11335).

A una suspensión agitada de cloruro de metileno (100 ml) de N-bencil-2-aminohidracrilamida enriquecida en R (10,00 g, 51,5 mmol) se añadió anhídrido acético (5,8 ml, 61,8 mmol) y la suspensión de la reacción se agitó a temperatura ambiente (1 hora). Se eliminó el disolvente a presión reducida para dar un sólido blanco. Se disgregó el producto con Et_{2}O (250 ml) para dar 7,60 g (62%) de N-bencil-2-acetamido- hidracrilamida enriquecida en R como un sólido blanco. Se recristalizó (2\times) el producto de reacción utilizando EtOH para dar 3,50 g (29%) del R-N-bencil-2-acetamidohidracrilamida p.f. 148-149ºC.; [\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)=+22,4º; Rf 0,40 (10% MeOH-CHCl_{3}); IR (KBr) 3295, 3090, 2964, 1642, 1533, 1376, 1281, 1051, 705 cm; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,86 (s, C(O)CH_{3}), 3,57 (dd, J=5,7, 5,7 Hz, CH_{2}OH), 4,25-4,31 (m, CH), 4,27 (d, J=5,7 Hz, NHCH_{2}), 4,92 (t, J=5,7 Hz, CH_{2}OH), 7,18-7,32 (m, 5 PhH), 7,94 (d, J=7,8 Hz, NH), 8,38 (t, J=5,7 H, NH), adición de exceso de R-(-) ácido mandélico a una solución de CDCl_{3} de R-N-bencil 2-acetamido hidracrilamida preparada esta memoria anteriormente dio sólo una señal para los protones del acetil metilo; ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}) 22,7 (C(O)CH_{3}), 42,0 (CH_{2}NH), 55,6 (CH), 61,8 (CH_{2}OH), 126,7 (C_{4}'), 127,0 (2C_{2}' o 2C_{3}'), 128,2 (2C_{2}' o C_{3}'), 139,4 (C_{1}'), 169,5 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 170,3 (C(O)CH_{3} o C(O)NH) ppm; MS (+Cl) (intensidad rel.) 237 (M^{+}+1, 100); 219(8); Mr (+Cl) 237,12388 [M'+1] (calculado para C_{12}H_{17}N_{2}O_{3} 374,12392); Anal. (C_{12}H_{16}N_{2}O_{3}), C, H, N.

A una solución agitada en acetonitrilo (300 ml) de (R)-N-bencil-2-acetamido hidroxiacrilamida (2,36 g, 10 mmol) se añadió sucesivamente Ag_{2}O (11,59 g, 50 mmol) y yoduro de metilo (6,2 ml, 100 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 4 días. Se filtraron las sales insolubles y se eliminaron los disolventes al vacío para dar un sólido blanco. Se filtró el residuo con Et_{2}O (100 ml) para dar 2,20 g (88%) del producto identificado anteriormente.

p.f. 143-144ºC, [\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)=+16,4º; Rf 0,47 (10% MeOH-CHCl_{3}); IR (KBr) 3289, 3086, 2923, 2876, 2819, 1636, 1547, 1138, 695 cm^{-1}, ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 2,04 (s, C(O)CH_{3}), 3,38 (s, OCH_{3}), 3,43 (dd, J=7,8, 9,0 Hz, CHH'OCH_{3}), 3,82 (dd, J=4,2, 9,0 Hz, CHH'OCH_{3}), 4,48 (d, J=6,0 Hz, NHCH_{2}), 4,51-4,57 (m, CH), 6,44 (br d, J=5,4 Hz, NH), 6,75 (br s, NH), 7,25-7,37 (m, 5 PhH), adición de exceso de (R)-(-)-ácido mandélico a una solución de CDCl_{3} de (R)-18 dio únicamente una señal para los protones de acetilmetilo y del éter metílico; ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 23,2 (C(O)CH_{3}), 43,5 (CH_{2}NH), 52,4 (CH), 59,1 (OCH_{3}), 71,7 (CH_{2}OCH_{3}), 127,4 (C_{4}'), 127,5 (2C_{2}' o 2C_{3}'), 128,7 (2C_{2}' o 2C_{3}'), 137,9 (C_{1}'), 169,9 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 170,3 (C(O)CH_{3} o C(O)NH) ppm; MS (+Cl) (intensidad rel.) 251 (M^{+}+1, 100); 219(6); Mr(+Cl) 251,139 76 [M'+1] (calculado para C_{13}H_{19}N_{2}O_{3} 251,139 57); Anal. (C_{13}H_{18}N_{2}O_{3}), C, H, N.

Ejemplo 2 Otra Síntesis de (R)-N-bencil 2-acetamida-3-metoxi propionamida (a) Síntesis mejorada de (R)-N-bencil 2-acetamido hidracrilamida

Se añadió Ac_{2}O (4,7 ml, 50 mmol) a una suspensión agitada en AcOH (20 ml) de D-serina (5,26 g, 50 mmol) y a continuación se agitó a temperatura ambiente (24 horas) la suspensión de reacción. Se eliminó el AcOH al vacío para dar un residuo aceitoso y a continuación se añadió THF (150 ml) al residuo. La suspensión en THF se enfrió a -78ºC en N_{2}y 4-metilmorfolina (11,0 ml, 100 mmol). Después de agitar durante dos minutos, se añadió cloroformato de isobutilo (13,0 ml, 100 mmol) conduciendo a la precipitación de un sólido blanco. Se dejó proceder la reacción durante otros dos minutos y a continuación se añadió bencilamina (10,4 ml, 100 mmol) a -78ºC. Se dejó la mezcla reacción a temperatura ambiente (30 minutos) y se filtró la sal hidrocloruro de 4-metilmorfolina. Se concentró la capa orgánica al vacío. Se purificó el producto por cromatografía en columna de flash en gel de SiO_{2} (MeOH al 10%-CHCl_{3}) para dar 3,89 g (33%) como un sólido blanco p.f. 147-148ºC, [\alpha]_{D}^{23} (C=1, MeOH)=+21,7º; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,86 (s, C(O)CH_{3}), 3,57 (dd, J=5,1, 5,1 Hz, CH_{2}O) 4,27-4,31 (m, CH_{2}NH, CH), 4,90 (t, J=5,1 Hz, OH), 7,20-7,31 (m, 5 PhH), 7,93 (d, J=8,1 Hz, NH), 8,37 (t, J=6,0 Hz, NH), la adición de exceso de ácido (R)-(-)-mandélico a una solución de CDCl_{3} del producto de (a) dio solamente una señal para los protones de acetilmetilo.

(b) (R)-N-bencil-2-acetamida-3-metoxipropionamida

Al compuesto preparado en (a) (1,42 g, 6 mmol) en una solución agitada (300 ml) de CH_{3}CN se añadió sucesivamente Ag_{2}O (6,95 g, 30 mmol) y yoduro de metilo (3,7 ml, 60 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 días. Se filtraron las sales insolubles y se eliminó el disolvente al vacío para dar un sólido blanco. Se disgregó el sólido blanco con Et_{2}O (100 ml) para dar 1,30 g (87%) del compuesto identificado anteriormente: p. f. 143-144ºC,
[\alpha]_{D}^{3} (c=1, MeOH)=+16,0ºC; ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 2,04 (s, C(O)CH_{3}), 3,38 (s, OCH_{3}), 3,44 (dd, J=7,5, 9,0 Hz, CH H^{1} OCH_{3}), 3,81 (dd, J=4,2, 9,0 Hz, CHH'OCH_{3}), 4,48 (d, J=5,7 Hz, NHCH_{2}), 4,52-4,58 (m, CH), 6,46 (br d, J = 5,7 Hz, NH), 6,78 (br, s, NH), 7,25-7,37 (m, 5 Ph H), la adición de exceso de ácido (R)-(-)-mandélico a una solución de CDCl_{3} del compuesto identificado anteriormente dio solamente una señal para los protones de los éteres acetílico y metílico.

Ejemplo 3 R-N-(3-fluorobencilo)2-acetamida-3-metoxipropionamida (a) R-N-(3-fluorbencilo)-2-acetamida-hidracrilamida

Utilizando el procedimiento del Ejemplo 2(a) con las siguientes cantidades de D-serina (5,26 g, 50 mmol), Ac_{2}O (5,7 ml, 60 mmol), 4-metilmorfolina (11,0 ml, 100 mmol), cloroformato de isobutilo (13,0 ml, 100 mmol) y sustituyendo 3-fluorbencilamina (11,8 ml, 100 mmol) para bencilamina, dio 4,20 g (33%) del compuesto anterior como un sólido blanco después de la purificación: p. f. 137-138ºC; [\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)=+20,8º; R_{f} 0,32 (10% MeOH-CHCl_{3}); IR (KBr) 3282, 3101, 2944, 1636, 1542, 1252, 1050, 779, 690 cm^{-1}; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,87 (s, C(O)CH_{3}), 3,56-3,63 (m, CH_{2}OH), 4,29 (d, J=6,0 Hz, CH_{2}NH), 4,25-4,30 (m, CH), 4,95 (t, J=5,4 Hz, CH_{2}OH), 7,00-7,09 (m, 3 ArH), 7,29-7,30 (m, 1 ArH), 7,97 (d, J=8,1 Hz, NH), 8,44 (t, J=6,0 Hz, NH), adición de exceso de ácido (R)-(-)-mandélico a una solución de CDCl_{3} de este producto dio solamente una señal para las fracciones de acetilmetilo; ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}) 22,7 (C(O)CH_{3}), 41,6 (CH_{2}N), 53,4 (CH), 61,7 (CH_{2} OH), 113,3 (d, J_{CF}=20,0 Hz, (C_{2}' o C_{4}'), 113,6 (d, J_{CF}=20,7 Hz, C_{2}' o C_{4}'), 122,9 (C_{6}'), 130,1 (d, J_{CF}=8,2 Hz, C_{5}.), 142,6 (d, J_{CF}=7,0 Hz, C_{1}.), 162,3 (d, J_{CF}=241,4 Hz, C_{3}.) 169,6 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 170,5 (C(O)CH_{3} o C(O)NH) ppm; MS (+Cl) (intensidad rel.) 255 (M^{+}+1, 100); M_{r}(+Cl) 255,113 54 [M^{+}+1] (calculado para C_{12}H_{16}FN_{2}O_{3} 255,114 50); Anal. (C_{12}H_{15}FN_{2}O_{3}) C, H, N.

(b) (R)-(N-3-fluorbencil)-2-acetamida-3-metoxipropionamida

Al producto de (a) (2,54 g, 10 mmol) en una solución agitada de CH_{3}CN se añadió sucesivamente Ag_{2}O (11,59 g, 50 mmol) y MeI (6,2 ml, 100 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. Se filtraron las sales insolubles y se eliminó el disolvente al vacío para dar un sólido blanco que se disgregó con Et_{2}O (100 ml) para dar un producto en bruto del compuesto identificado anteriormente. Se identificó posteriormente el producto por cromatografía de flash en gel de SiO_{2}(MeOH al 10%-CHCl_{3}) para dar 2,00 g (75%) del compuesto identificado anteriormente: p. f. 150-151ºC, [\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)=+16,5ºC; R_{f} 0,50 (MeOH al 10% -CHCl_{3}); IR (KBr) 3287, 3072, 2928, 2883, 1634, 1548, 1256, 1142, 785 cm^{-1}, ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 2,05 (s, C(O)CH_{3}), 3,40 (s, OCH_{3}), 3,44-3,47 (m, CHH'OCH_{3}), 3,81-3,85 (m, CHH'OCH_{3}), 4,41-4,50 (m, NHCH_{2}), 4,53-4,59 (m, CH), 6,42 (br s, NH), 6,81 (br s, NH), 6,93-7,05 (m, 3 PhH), 7,26-7,31 (m, 1 PhH); adición de exceso de ácido (R)-(-)-mandélico a una solución de CDCl_{3} del compuesto identificado anteriormente dio solamente una señal para los protones del acetil metilo y los protones del éter metílico; ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}) 22,8 (C(O)CH_{3}), 42,7 (CH_{2}N), 52,6 (CH), 58,9 (OCH_{3}), 72,0 (CH_{2}OCH_{3}), 114,0 (d, J_{CF}=21,5 Hz, C_{2}. y C_{4}.), 122,7 (C_{6}.), 129,9 (d, J_{CF}=7,7 Hz, C_{5}.), 140,6 (d, J_{CF}=6,8 Hz, C_{1}.), 162,9 (d, J_{CF}=244,4 Hz, C_{3}.), 170,2 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 170,5 (C(O)CH_{3} o C(O)NH) ppm; MS (+Cl) (intensidad rel.) 269 (M^{+}+1, 100); M_{r} (+Cl) 269,129 31 [M^{+}+1] (calculado para C_{13}H_{18}FN_{2}O_{3} 269,130 15); Anal. (C_{13}H_{17}FN_{2}O_{3}) C, H, N.

Ejemplo 4 (R)-N-(4-fluorobencil)2-acetamido-3-metoxipropanamida (a) (R)-N-(4-fluorbencil)2-acetamido-hidracrilamida

Utilizando el procedimiento del Ejemplo 2(a) con las siguientes cantidades de D-serina (5,26 g 50 mmol), Ac_{2}O (5,7 ml, 60 mmol), 4-metilmorfolina (11,0 ml, 100 mmol), y cloroformato de isobutilo (13,0 ml, 100 mmol) y sustituyendo 4-fluorbencilamina (11,8 ml, 100 mmol) para bencilamina se preparó el compuesto identificado anteriormente como un sólido blanco después de la purificación (4,08 g, 32%); p. f. 169-170ºC, [\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)=+17,6º; R_{f} 0,31 (MeOH al 10%-CHCl_{3}); IR (KBr) 3289, 3101, 3071, 2936, 1632, 1565, 1543, 1508, 1214, 1053, 814 cm^{-1}, ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,86 (s, C(O)CH_{3}), 3,56 (6, J=5,4 Hz, CH_{2}OH), 4,25 (d, J=6,0 Hz, CH_{2}NH), 4,25-4,29 (m, CH), 4,91 (t, J=5,4 Hz, CH_{2}OH), 7,08-7,14 (m, 2C_{2}.H), 7,25-7,29 (m, 2C_{3}.H), 7,93 (d, J=7,8 Hz, NH), 8,39 (d, J=6,0 Hz, NH), la adición de exceso de ácido (R)-(-)-mandélico a una solución de CDCl_{3} del compuesto identificado anteriormente dio solamente una señal para los protones de acetilmetilo; ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}) 22,7 (C(O)CH_{3}), 41,3 (CH_{2}N), 55,3 m (CH), 61,7 (CH_{2}OH), 114,8 (d, J_{CF}=21,8 Hz, C_{3}), 128,9 (d, J_{CF=}8,0 Hz, C_{2}.), 135,6 (C_{1}.), 161,1 (d, J_{CF}=240,1 Hz, C_{4}.), 169,4 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 170,3 (C(O)CH_{3} o C(O)NH) ppm, MS (+Cl) (intensidad rel.) 255 (M_{+}+1, 100); M_{r}(+Cl) 255,113 60 [M_{+}+1] (calculado para C_{12}H_{16}FN_{2}O_{3} 255,114 50); Anal. (C_{12}H_{15}FN_{2}O_{3}\cdot0,2H_{2}O) C, H, N.

(b) R-N-(4-fluorbencil)-2-acetamido-3-metoxipropanoamida

Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 3(b) para el producto del Ejemplo 4(a) (2,54 g, 10 mmol) en una solución agitada de CH_{3}CN (300 ml) se añadió sucesivamente Ag_{2}O (11,59 g, 50 mmol) y MeI (6,2 ml, 100 mmol) a temperatura ambiente y se agitó a continuación durante 7 días. Se filtraron las sales insolubles y se eliminó el disolvente al vacío para dar un sólido blanco. Se disgregó con Et_{2}O (100 ml) el sólido blanco para dar un producto en bruto. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna de flash (MeOH al 10%-CHCl_{3}) para dar 2,00 g (75%) del producto anterior; p. f. 144-145ºC, [\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)=+12,0º; R_{f} 0,52 (MeOH al 10% -CHCl_{3}); IR (KBr) 3281, 3102, 3072, 2959, 1632, 1547, 1513, 1223, 1100 cm^{-1}, ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 2,04 (s, C(O)CH_{3}), 3,38 (s, OCH_{3}), 3,39-3,46 (m, CHH'OCH_{3}), 3,80-3,84 (m, CHH'OCH_{3}), 4,44 (br d, J=5,4 Hz, CH_{2}NH), 4,48-4,56 (m, CH), 6,42 (br s, NH), 6,76 (br s, NH), 6,99-7,05 (m, 2 PhH), 7,21-7,31 (m, 2 PhH); adición de exceso de ácido (R)-(-)-mandélico a una solución de CDCl_{3} del producto identificado anteriormente dio solamente una señal para las fracciones de acetil metilo y las fracciones del éter metílico, ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 22,9 (C(O)CH_{3}), 42,6 (CH_{2}N), 52,5 (CH), 58,9 (OCH_{3}), 72,0 (CH_{2}OCH_{3}), 115,3 (d, J_{CF}=22,0 Hz, 2C_{3}.), 129,0 (d, J_{CF}=6,9 Hz, 2C_{2}.), 133,7 (C_{1}.), 161, 9 (d, J_{CF}=245,3 Hz, C_{4}.), 170,1 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 170,4 (C(O)CH_{3} o C(O)NH) ppm; MS (+Cl) (intensidad rel.) 269 (M^{+}+1, 100); M_{r} (+Cl) 269,129 6 [M^{+}+1] (calculado para C_{13}H_{18}FN_{2}O_{3} 269,130 15); Anal. (C_{13}H_{17}FN_{2}O_{3}) C, H, N.

Ejemplo 5 N-Bencil 2-Acetamida-3-Metoxipropionamida (a) Cbz-(D) Serina (9)

Se disolvió D-serina (5 g) en agua (85 ml). A esto se añadió MgO (6 g) y éter etílico (40 ml). Se enfrió la mezcla en un baño con hielo a 0ºC. A esta mezcla enfriada en hielo se añadió lentamente, gota a gota cloroformato de bencilo (95%, 11 ml). En el momento de terminar la adición, se agitó la mezcla a 0ºC (2 h) y a continuación se dejó calentar espontáneamente a temperatura ambiente. Se continuó la agitación durante otros 30 minutos. Se filtró la mezcla y se lavó el filtrado con éter etílico (2 x 25 ml). Se separó la capa acuosa y se enfrió en un baño con hielo a 0ºC. El pH de esta capa acuosa enfriada en hielo se ajustó con cuidado a 3,0 utilizando HCl 5 N. La solución acidificada se almacenó en un frigorífico toda la noche. Se aisló por filtración el producto sólido cristalino blanco y se secó al vacío. Se extrajo el filtrado con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos combinados de acetato de etilo se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se evaporó al vacío para obtener cantidades adicionales del producto cristalino blanco. El producto total obtenido fue 7,51 g (68%): p. f. 118-120ºC.

(b) Metil-2-(Carbonbenciloxiamino)-3-Metoxipropionato (10)

A una solución de 9 (1,72 g, 7,21 mmol) en acetonitrilo (150 ml) se añadió yoduro de metilo (10,23 g, 72,1 mmol, 4,5 ml) y óxido de plata (I) (8,4 g, 36 mmol) y se agitó la mezcla en la oscuridad a temperatura ambiente durante 24 horas. Se eliminaron por filtración las sales insolubles y el exceso de óxido de plata y se evaporó el filtrado al vacío para obtener un residuo aceitoso que se sometió a cromatografía en columna de flash (gel de sílice y MeOH al 5%-CHCl_{3}) para obtener el compuesto 10 puro como un aceite amarillo pálido (1,81 g, 94%): R_{f} (MeOH al 10%/CHCl_{3}) 0,75.

(c) Ácido 2-(Carbobenciloxiamino)-3-Metoxipropiónico (11)

Se disolvió el compuesto 10 (0,58 g) en metanol acuoso al 80% (3,0 ml). A esta solución se le añadió K_{2}CO_{3} anhidro (0,5 g) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (8 horas). Se evaporó el metanol al vacío y se puso en suspensión el residuo en agua (50 ml). Se lavó la suspensión acuosa con éter etílico (2 x 25 ml) y a continuación se acidificó a pH 3,0 utilizando HCl 5 N. La fase acuosa acidificada se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). Los extractos de acetato de etilo se combinaron, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se evaporaron al vacío para obtener el compuesto 11 puro como un aceite viscoso transparente (0,52 g, 95%): R_{f} 0,30 (MeOH al 10%/CHCl_{3}).

(d) N-Bencil 2-(Carbobenciloxiamino)-3-Metoxipropionamida (12)

Se enfrió a -78ºC una solución de 11 (0,52 g, 2,04 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) en un baño de acetona con nieve carbónica bajo una atmósfera de N_{2}. Se añadió a ésta con una jeringuilla seca 4-metilmorfolina (0,34 ml, 3,06 mmol). Después de agitar durante 5 minutos, se añadió cloroformato de isobutilo (0,4 ml, 3,06 mmol) con una jeringuilla seca y a continuación se agitó la mezcla durante 5 minutos. Esto fue seguido de adición de bencilamina (0,32 ml, 3,06 mmol). Después de agitar a -78ºC durante 5 minutos, se dejó calentar la reacción a temperatura ambiente y se continuó agitando a temperatura ambiente (30 min). Se eliminó de la reacción la sal hidrocloruro de 4-metilmorfolina por filtración. Se evaporó el filtrado transparente al vacío y se disgregó el residuo con éter etílico (5,0 ml). El producto cristalino blanco obtenido se aisló por filtración después de lavar con pequeñas cantidades de éter y se secó con aire (0,55 g, 78%): p.f.: 112-114ºC, R_{f} 0,6 (MeOH al 10%/CHCl_{3}).

(e) N-Bencil-2-Amino-3-Metoxipropionamida (13)

A una solución del compuesto 12 (122,8 mg, 0,36 mmol) en metanol (2,0 ml) se añadió Pd al 10%-C (11 mg) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente en presencia de gas H_{2} durante 75 min. Se añadió Celite a la mezcla de reacción y se eliminó el catalizador por filtración. Se evaporó al vacío el filtrado transparente para dar el compuesto 13 puro como un aceite transparente viscoso (72 mg, 97%): R_{f} 0,30 (MeOH al 5%/CHCl_{3}).

(f) N-Bencil-2-Acetamido-3-Metoxipropionamida

A una solución del compuesto 13 (0,20 g, 0,98 mmol) en THF anhidro (2,0 mmol) se añade piridina (0,086 g, 1,08 mmol) y a continuación se añaden gota a gota anhídrido acético en (0,2 g, 1,96 mmol). Se agita la reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Se evapora el disolvente al vacío y se purifica el residuo por cromatografía en columna de flash para obtener el compuesto anterior como isómero R.

Ejemplo comparativo 1

Preparación de N-acetil-D,L-alanina-N'-bencilamida

Se añadió lentamente anhídrido acético (2,20 g, 0,022 mol) a una solución de cloruro de metileno (30 ml) de D,L-alanina-N-bencilamida (3,80 g, 0,021 mol) y se dejó agitar a temperatura ambiente (3 h). Se lavó la mezcla a continuación sucesivamente con H_{2}O (15 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró al vacío. Se recristalizó el residuo en CH_{2}Cl_{2}.

Rendimiento: 2,50 g (54%). p. f. 139º-141ºC.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 1,22 (d, J=7,1 Hz, 3H), 1,84 (s, 3H), 4,04-4,50 (m, 3H), 7,26 (s, 5H), 8,11 (br d, J=7,3 Hz, 1H), 8,42 (br t, J=6 Hz, 1H).

^{13}C RMN (DMSO-d_{6}): 18,2, 22,4, 41,9, 48,2, 126,5, 126,9, 128,1 139,4, 168,9, 172,4 ppm.

IR (CHCl_{3}) 3440, 3300, 3005, 1660, 1515 cm^{-1}.

Espectro de masas (modo CI), m/e: 221 (P+I); peso mol. 220,1208 (calculado para C_{12}H_{16}N_{2}O_{2}, 220,1212).

Ejemplos comparativos 2 y 3

Preparación de N-acetil D y L-aminoácido N-bencilamidas

Procedimiento general: Se disolvió la amida del D o L aminoácido (11 mmol) en diclorometano (15 ml) y a continuación se añadió gota a gota al anhídrido acético (1,23 g, 1,40 ml, 12 mmol). Se agitó la solución a temperatura ambiente (18 h) y a continuación se concentró a sequedad. Se cristalizó el residuo en cloroformo/hexano.

Ejemplo comparativo 2

N-acetil-D-alanina-N'-bencilamida

Rendimiento: 1,36 g (56%). p. f. 139º-141ºC. [\alpha]_{D}^{23}=+36,2 (c 2,5, MeOH).

^{1}H RMN (80 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,25 (d, J=7,1 Hz, 3H), 1,86 (s, 3H), 4,04-4,50 (m,1H), 4,30 (d, J=6,0 Hz, 2H), 7,26 (s, 5H), 8,09 (d, J=7,3 Hz, 1H), 8,40 (t, J=6,0 Hz, 1H).

^{13}C RMN (80 MHz, DMSO-d_{6}): 18,3, 22,5, 42,0, 48,4, 126,6, 127,0 (2C), 128,2 (2C), 139,4 169,2, 172,5 ppm.

IR (KBr): 3290, 1635 (br), 1540, 1455, 700, 695 cm^{-1}.

Espectro de masas, m/e (intensidad relativa): 221 (30), 114 (20), 106 (40), 91 (80), 87 (100), 77 (5), 72 (20), 65 (5).

Análisis elemental calculado para C_{12}H_{16}N_{2}O_{2} 65,42% C; 7,34% H; 12,72% N. Obtenido 65,31% C, 7,28% H; 12,63% N.

Ejemplo comparativo 3

N-acetil-L-alanina-N' -bencelamida

Rendimiento: 11,11 g (46%). p. f. 139º-142ºC. [\alpha]_{D}^{23}=-35,3 (c 2,5, MeOH).

^{1}H RMN (80 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 1,23 (d, J=7,2 Hz, 3H), 1,86 (s, 3H), 4,26-4,35 (m, 1H), 4,29 (d, J=5,8 Hz, 2H), 7,22-7,33 (s, 5H), 8,10 (d, J=7,4 Hz, 1H), 8,42 (t, J=5,8 Hz, 1H).

^{13}C RMN (80 MHz, DMSO-d_{6}): 18,3, 22,6, 42,0, 48,4, 126,7, 127,0 (2C), 128,3 (2C) 139,5, 169,2, 172,6 ppm.

IR (KBr): 3290, 1635 (br), 1545, 1450, 700, 695 cm^{-1}.

Espectro de masas, m/e (intensidad relativa): 221 (40), 114 (40), 106 (80), 91 (75), 87 (100), 77 (5), 72 (15), 65 (5).

Análisis elemental calculado para C_{12}H_{16}N_{2}O_{2} 65,42% C; 7,34% H; 12,72% N. Obtenido 65,58% C, 7,32% H; 12,43% N.

Ejemplo comparativo 4

Preparación de D,L-2-acetamido-N-bencil-2-metoxiacetamida

A una solución metanólica (180 ml) de 2-metoxiacetato de metil 2-acetamida (8,73 g, 54 mmol) se añadió rápidamente bencilamina (8,68 g, 8,80 ml, 81 mmol) y a continuación se agitó la mezcla a 50ºC (3 días) durante cuyo tiempo apareció un precipitado beige. Se eliminó el disolvente al vacío y el precipitado resultante se recristalizó en tetrahidrofurano (2X) para dar 7,67 g (32%) del producto deseado como cristales beige: R_{f} 0,35 (cloroformo/metanol 95:5).

p. f. 145º-146ºC.

^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,06 (s, CH_{3}CO), 3,37 (2, CH_{3}O), 4,40-4,35 (m, CH_{2}), 5,52 (d, J=8,7 Hz, CH), 7,12 (d, J=8,7 Hz, NH), 7,20-7,40 (m, Ph, NH).

^{13}C RMN (300 MHz, CDCl_{3}): 23,03 (CH_{3}CO), 43,51 (CH_{2}), 55,84 (CH_{3}O), 78,94 (CH), 127,62 (C_{4}''), 127,70 (2C_{2}'' o 2C_{3}''), 128,70 (2C_{2} o 2C_{3}''), 137,45 (C_{4}''), 166,91 (COCH_{3}), 171,57 (CONH) ppm.

IR (KBr): 1260, 1825 (br), 1550, 1505, 1435, 1390, 1370, 1230, 1120, 1050 935, 890, 690 cm^{-1}.

Espectro de masas, m/e (intensidad relativa): 237 (1), 205 (2), 177 (2), 163 (4), 146 (1), 134 (1), 121 (2), 106 (26), 102 (98), 91 (95), 77 (13), 61 (100).

Análisis elemental calculado para C_{12}H_{16}N_{2}O_{3} 61,00% C; 6,83% H; 11,86% N. Obtenido 60,91% C, 6,85% H; 11,66% N.

Ejemplos comparativos 5 a 7

Síntesis de \alpha-acetamido-N-bencil-2-furanacetamidas sustituidas e insustituidas

Procedimiento general. Se añadió 4-metilmorfolina (1 equiv) a una solución de ácido \alpha-acetamido-2-furanacético (1 equiv) en tetrahidrofurano anhidro (75 ml/10 mmol) entre -10 y -15ºC bajo N_{2}. Después de agitar (2 min), se añadió cloroformato de isobutilo (1 equiv) conduciendo a la precipitación de un sólido blanco. Se dejó continuar la reacción otros 2 minutos más y a continuación se añadió durante 5 min una solución de bencilamina sustituida (1 equiv) en tetrahidrofurano (10 ml/10 mmol) entre -1 y -15ºC. Se dejó agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 min y a continuación se filtró la sal hidrocloruro de 4-metilmorfolina. Se concentró la capa orgánica al vacío y se disgregó el residuo con acetato de etilo y se filtró el sólido blanco restante. La concentración de la capa de acetato de etilo condujo a cantidades adicionales del sólido blanco. Se purificó el producto deseado bien por recristalización o por cromatografía de flash del material sólido combinado.

Ejemplo comparativo 5

(D,L)-\alpha-acetamido-N-bencil-2-furanacetamida

Bencil amina (0,27 g, 2,56 mmol) y ácido racémico \alpha-acetamido-2-furanacético (0,47 g, 2,56 mmol) dio el compuesto deseado. Se recristalizó el producto en acetato de etilo para dar un sólido blanco.

Rendimiento: 0,46 g (65%) R_{f} 0,30 (98:2 cloroformo/metanol). p. f. 177º-178ºC

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 1,90 (s, CH_{3}), 4,31 (d, J=6,0 Hz, CH_{2}), 5,58 (d, J=8,1 Hz, CH), 6,27-6,33 (m, C_{3}H), 6,40-6,44 (m, C_{4}H), 7,20-7,36 (m, 5 PhH), 7,60-7,64 (m, C_{5}H), 8,57 (d, J=8,1 Hz, NH), 8,73 (t, J=6,0 Hz, NH).

Ejemplo comparativo 6

(D)-(-)\alpha-acetamido-N-bencil-2-furanacetamida

Partiendo de ácido D-\alpha-acetamido-2-furanacético (2,45 g, 13,38 mmol) y bencilamina (1,43 g, 13,38 mmol), se obtuvo el producto deseado. Rendimiento: 2,54 g (70%). Se recristalizó el producto posteriormente en acetato de etilo para dar el compuesto del título.

Rendimiento: 2,30 g p. f. 196º-197ºC. [\alpha]^{26}D[c=1, MeOH]=78,3º. La adición de ácido R(-)-mandélico a una solución en CDCl_{3} del producto, dio solamente una señal para los protones de metilacetamida. Espectro de masas, m/e (intensidad relativa) 272 (M+, 2), 184 (2), 165 (2), 140 (8), 139 (88), 138 (34), 97 (46), 96 (100), 91 (63).

Analisis elemental: calculado: 66,16% C; 5,92% H; 10,29% N. Obtenido: 66,09% C; 6,01% H; 10,38% N.

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Ejemplo comparativo 7

(L)-(-)\alpha-acetamido-N-bencil-2-furanacetamida

Ácido L-\alpha-acetamido-2-furanacético (2,83 g, 15,46 mmol) y bencilamina (1,65 g, 15,4 mmol), dio 3,80 g del producto enriquecido deseado. El análisis de ^{1}H RMN con ácido R(-)-mandélico demostró que estaba más del 80% enriquecido en el compuesto del título. Se obtuvo el L-enantiómero puro por recristalización en etanol absoluto.

Rendimiento: 1,60 g p. f. 196º-197ºC. [\alpha]^{26}D[c=1, MeOH]=+79,0º.

Espectro de masas, m/e (intensidad relativa) 273 (M^{+}+1,3), 229 (2), 214 (2), 184 (1), 165 (7), 157 (4), 140 (33), 139 (100), 138 (95), 97 (98), 96 (100), 91 (98).

Analisis elemental: calculado: 66,16% C; 5,92% H; 10,29% N. Obtenido: 65,89% C; 5,86% H; 10,42% N.

Ejemplo comparativo 8

Síntesis de N-bencil 2-acetamidohidracrilamida

A una solución de THF anhidro (400 ml) de N-bencilmalonamato de metil-\alpha-acetamida (14,4 g, 54,5 mmol) se añadió sucesivamente LiCl anhidro (4,62 g, 109 mmol), NaBH_{4} (4,13 g, 109 mmol) y EtOH (200 ml). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente (5 h). Se concentró la suspensión al vacío después de extracción en continuo (12 h) del producto utilizando CHCl_{3} (100 ml) y H_{2}O (250 ml), se recogió la capa orgánica, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se eliminó al vacío para dar un sólido blanco en bruto. Se disgregó el producto en bruto con Et_{2}O (50 ml) para dar 11,45 g (89%) del compuesto anterior: p. f. 201-203ºC; R_{f}0,40 (MeOH al 10%-CHCl_{3}); IR (KBr) 3287, 3085, 2969, 2859, 1648, 1552, 1456, 1055, 697 cm^{-1}; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 1,88 (s, C(O)CH_{3}), 3,59 (dd, J=5,7 Hz, 5,7 Hz, CH_{2}O), 4,19-4,35 (m, CH_{2}NH, CH), 4,92 (t, J=5,7 Hz, OH), 7,10-7,40 (m, 5 PhH), 7,94 (d, J=5,7 Hz, NH), 8,38 (t, J=5,7 Hz, NH); ^{13}C RMN (DMSO-d_{6}.) 22,2 (C(O)CH_{3}), 41,6 (CH_{2}N), 54,9 (CH), 61,3 (CH_{2}OH), 126,2 (C_{4}.), 126,5 (2C_{2}. o 2C_{3}.), 127,7 (2C_{2}. o 2C_{3}.), 138,9 (C_{1}.), 169,1 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 169,9 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), ppm; MS (+Cl) (intensidad relativa) 237 (M^{+}+1, 100), 219 (9), M_{r} (+Cl) 237,123 88 [M^{+}+1] (calculado para C_{12}H_{17}N_{2}O_{3} 237,123 92); Anal. (C_{12}H_{16}N_{2}O_{3}) C, H, N.

Ejemplo comparativo 9

Síntesis de N-bencil 2-acetamido-3-metoxipropionamida (mezcla racémica)

A una solución en CH_{3}CN (500 ml) del producto del Ejemplo Comparativo 8 (2,36 g, 10 mmol) se añadió sucesivamente Ag_{2}O (11,59 g, 50,0 mmo) y CH_{3}I (6,23 ml, 100 mmol) a temperatura ambiente y a continuación se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente (4 d). Se filtraron las sales insolubles y se eliminó el disolvente al vacío para dar un sólido blanco. Se disgregó el residuo con Et_{2}O (50 ml) para dar 2,10 g (84%) del compuesto identificado anteriormente: p. f. 121-122ºC; R_{f}0,47 (MeOH al 10%-CHCl_{3}); IR (KBr) 3290, 3087, 2924, 2878, 2820, 1637, 1548, 1139, 695 cm^{-1}; ^{1}H RMN \delta 2,04 (s, C(O)CH_{3}), 3,38 (s, OCH_{3}), 3,43 (dd, J=7,8, 9,0 Hz, CHH'OCH_{3}), 3,82 (dd, J=4,2, 9,0 Hz, CHH'OCH_{3}), 4,48 (d, J=6,0 Hz, NHCH_{2}), 4,51-4,57 (m, CH), 6,43 (br d, J=5,4 Hz, NH), 6,74 (br s, NH), 7,25-7,37 (m, 5 PhH); ^{13}C RMN (CDCl_{3}) 23,2 (C(O)CH_{3}), 43,5 (CH_{2}N), 52,4 (CH), 59,1 (OCH_{3}), 71,7 (CH_{2}OCH_{3}), 127,4 (C_{4} y 2C_{2}. o 2C_{3}.), 128,7 (2C_{2}. o 2C_{3}.), 137,8 (C_{1}), 170,0 (C(O)CH_{3} o C(O)NH), 170,3 (C(O)CH_{3} o C(O)NH) ppm; MS (+Cl) (intensidad relativa): 251 (M^{+}+1, 100), 219 (100), M_{r} (+Cl) 251,139 39 [M^{+}+1] (calculado para C_{13}H_{19}N_{2}O_{3} 251,139 57); Anal. (C_{13}H_{18}N_{2}O_{3}) C, H, N.

Ejemplo comparativo 10

(S)-N-bencil 2-acetamidohidracrilamida

A una suspensión en AcOH (20 ml) agitada de L-serina (2,63 g, 25 mmol) se añadió Ac_{2}O (2,5 ml, 26,3 mmol) y a continuación la suspensión de la reacción se agitó a temperatura ambiente (24 h). Se eliminó el AcOH al vacío para dar un residuo aceitoso y a continuación se añadió THF (150 ml) al residuo. Se enfrió la suspensión de THF a -78ºC en N_{2} y se añadió 4-metilmorfolina (5,5 ml, 50 mmol). Después de agitar (2 min), se añadió cloroformato de isobutilo (6,5 ml, 50 mmol) conduciendo ala precipitación de un sólido blanco. Se dejó continuar la reacción durante otros dos minutos y a continuación se añadió bencilamina (5,5 ml, 50 mmol) a -75ºC. Se dejó agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente (30 min) y a continuación se filtró la sal hidrocloruro de 4-metilmorfolina. Se concentró al vacío la capa orgánica. Se purificó el producto por cromatografía en columna de flash en gel de SiO_{2}(MeOH al 10%-CHCl_{3}) para dar 2,20 g (37%) del producto anterior como un sólido blanco: p. f. 146º-147ºC; [\alpha]_{D}^{23} (c=1, MeOH)= -21,5º; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 1,86 (s, C(O)CH_{3}), 3,57 (dd, J=5,1 Hz, 5,1 Hz, CH_{2}O), 4,25-4,32 (m, CH_{2}NH, CH), 4,91 (t, J=5,1 Hz, OH), 7,20-7,33 (m, 5 PhH), 7,93 (d, J=8,1 Hz, NH), 8,37 (t, J=5,7 Hz, NH), la adición en exceso de ácido (R)-(-)mandélico a una solución de CDCl_{3} del compuesto identificado anteriormente dio solamente una señal para los protones de acetil metilo.

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Ejemplo comparativo 11

(S)-N-bencil 2-acetamido-3-metoxipropionamida

A una solución agitada en CH_{3}CN (300 ml) del compuesto producido en el Ejemplo Comparativo 10 (1,18 g, 5 mmol) se añadió sucesivamente Ag_{2}O (5,80 g, 25 mmol) y MeI (3,1 ml, 10 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente (4 d). Se filtraron las sales insolubles y se eliminó el disolvente al vacío para dar un sólido blanco. Se disgregó el sólido blanco con Et_{2}O (100 ml) para dar 1,00 g (80%) del compuesto identificado anteriormente: p. f. 143-144ºC [\alpha]^{23}D (c=1, MeOH)=-16,4; ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 2,03 (s, C(O)CH_{3}), 3,38 (s, OCH_{3}), 3,43 (dd, J=7,5, 9,0 Hz, CHH'OCH_{3}), 3,81 (dd, J=4,2, 9,0 Hz, CHH'OCH_{3}), 4,47 (d, J=5,7 Hz, NHCH_{2}), 4,52-4,59 (m, CH), 6,48 (br d, J=6,0 Hz, NH), 6,81 (br s, NH), 7,25-7,37 (m, 5 Ph), la adición en exceso de ácido (R)-(-)-mandélico a una solución de CDCl_{3} del compuesto identificado anteriormente dio solamente una señal para los protones de acetil metilo y del éter metílico.

Ejemplo comparativo 12

(R)-N-bencil 2-acetoamidohidracrilamida

Este compuesto se preparó según los procedimientos descritos en los Ejemplos 1 y 2.

Ejemplo comparativo 13

N-acetil-D,L-fenilglicina-N-bencilamida

Este compuesto se preparó según el procedimiento descrito en la patente U.S. nº 5.378.729, cuyos contenidos se incorporan como referencia. Se disolvió la amida de D,L-fenilglicina (11 mmol) en diclorometano (15 ml) y a continuación se añadió gota a gota anhídrido acético (1,23 g, 1,40 ml, 12 mmol). Se agitó la solución a temperatura ambiente (4 a 6 h) y a continuación se concentró a sequedad. Se recristalizó el residuo en cloroformo/hexano.

Rendimiento: 2,05 g (66%). p. f. 202º-203ºC.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 1,91 (s, 3H), 4,27 (d, J=5,6 Hz, 2H), 5,50 (d, J=7,9 Hz, 1H), 7,21 (s, 5H), 7,36 (s, 5H), 8,38-8,86 (m, 2H).

^{13}C RMN (DMSO-d_{6}): 22,3, 42,0, 56,3, 126,6 (2C), 127,0, 127,1 (2C), 127,4 (2C), 128,1 (2C), 138,9, 139,0, 168,9, 169,9 ppm.

IR (KBr): 3020, 1635, 1580, 1540, 1450, 1265, 745, 690 cm^{-1}.

Espectro de masas, m/e (intensidad relativa): 283 (20), 264 (21), 149 (100), 131 (20), 118 (34), 106 (92), 91 (70), 79 (56), 77 (54), 65 (45), 51 (37).

Análisis elemental calculado para C_{17}H_{18}N_{2}O_{2} 72,31% C; 6,44% H; 9,92% N. Obtenido 72,49% C, 6,47% H; 9,89% N.

Los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de los trastornos nerviosos centrales tales como la epilepsia, ansiedad nerviosa, psicosis, insomnio y similares en animales, p. ej.: mamíferos, tal como el hombre, que lo necesiten. Presentan una actividad convulsionante excelente y desde luego pueden administrarse por lo tanto durante un tratamiento a corto plazo. Además, los compuestos de la presente invención tienen la ventaja añadida de ser útiles en regímenes de fármacos para tratamiento a largo plazo. Los compuestos de la presente invención son sustancialmente no tóxicos, presentando toxicidad mínima, si es que alguna, en el animal tratado como se muestra a continuación en el apartado de farmacología.

Farmacología

Se identificó la actividad anticonvulsionante en los compuestos tanto en ratones macho Carthworth Farms nº 1 albinos (por vía ip) y ratas macho Sprague Dawley albinas [por vía oral (po)]. Se estableció la actividad utilizando el ensayo eléctrico (electrochoque máximo o MES). En el ensayo MES, se utilizó una gota solución de electrolito con anestésico (hemisulfato de butacaína al 0,5% en cloruro de sodio al 0,9%) en los ojos de los animales antes de colocar los electrodos corneales y de la administración de corrientes. Se administró una corriente alterna de 60 ciclos durante 0,2 s. en ambas especies, 50 mA en los ratones y 150 mA en las ratas. Los puntos finales de protección se definieron como la abolición del componente del extensor tónico del limbo posterior de la convulsión provocada. En los ratones, se determinaron los efectos de los compuestos en la actividad motriz espontanea forzada, utilizando una prueba con rotorod. La incapacidad de los animales para mantener su equilibrio durante 1 min. en un rodillo rayado de 1 pulgada de diámetro a 6 rpm en 3 pruebas sucesivas demostró una alteración motriz. Normalmente en estas condiciones mantienen su equilibrio casi indefinidamente. En las ratas, la alteración motriz se evalúa observando la prueba abierta de ataxia, el paso y la postura anormales y/o la pérdida de respuesta a la colocación y del tono muscular. En el estudio de cribado para la identificación del ratón todos los compuestos se administraron en tres niveles de dosis (30, 100 y 300 mg/kg) y en 2 períodos de tiempo (0,5 horas y 4 horas). Típicamente, en la prueba de convulsiones por MES se probó un animal a 30 mg/kg y a 300 mg/kg y tres animales a 100 mg/kg. En la prueba de toxicidad en rotorod se probaron cuatro animales a 30 mg/kg y a 300 mg/kg y ocho animales a 100 mg/kg. Si se observaba actividad a 300 mg/kg, entonces se utilizaban dosis inferiores para hallar los valores de ED_{50}.

La determinación cuantitativa de (ED_{50}) eficaz medio y las dosis tóxicas (TD_{50}) se llevó a cabo en períodos de efecto pico calculados previamente. Se probaron grupos de al menos ocho animales utilizando diferentes dosis del compuesto de la prueba hasta que se determinaron por lo menos: entre 100 y 0% de protección y alteración motriz mínima. Se calculó la dosis de la sustancia experimental requerida para producir el punto final definido en el 50% de los animales en cada prueba y en el intervalo de confianza del 95%.

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Se compararon la eficacia, la toxicidad y los índices PI en los compuestos de la presente invención, con los compuestos que tienen una similitud estructural, estando la diferencia en el sustituyente en R^{2}. Los protocolos para estos compuestos son los descritos anteriormente.

Los resultados de los mismos se proporcionan en la Tabla I.

Como se muestra claramente en los datos anteriores, los enantiómeros de R de la presente invención presentan bastante actividad anticonvulsionante potente. El inventor ha descubierto también que inesperadamente el estereoisómero R es más potente que el correspondiente estereoisómero S y la mezcla racémica.

Los datos de la tabla demuestran claramente que la eficacia de los ejemplos comparativos es significativamente menor que la de los de la presente invención. Solamente el derivado de 2-furilo en la Tabla presenta una potencia comparable.

Además, los compuestos de la presente invención tienen una toxicidad neurológica relativamente baja, considerando la eficacia de la misma. De hecho, tal como demuestran claramente en los datos, la toxicidad neurológica es significativamente inferior en las ratas en las que se administraron los compuestos por vía oral que en los ratones en los que se administraron los compuestos por vía intraperitoneal. De hecho, en las ratas, la toxicidad neurológica de los compuestos de la presente invención es muy baja.

Los índices PI de la presente invención son bastante elevados en el modelo de ratón al que se administraron los compuestos por vía intraperitoneal y especialmente en el modelo de rata al que se administraron los compuestos por vía oral. De los compuestos probados los valores de PI de los compuestos de la presente invención son en general más altos que los de los ejemplos comparativos, excepto para el compuesto en el que R^{2} es CH_{2}OH. Sin embargo, la eficacia de este último compuesto es significativamente menor que la de los compuestos de la presente invención.

Es importante situar los datos de la tabla en la perspectiva apropiada. Observando los datos, es bastante evidente que los compuestos de la presente invención presentan un excelente perfil de fármaco. Por otra parte, basándose en los datos, excepto para los derivados de furilo, los demás compuestos comparativos son fármacos significativamente inferiores en comparación con los compuestos de la presente invención. Aunque en algunos casos, la toxicidad neurológica de los compuestos de los ejemplos comparativos es baja y el valor de PI es satisfactorio, los datos no se pueden examinar al vacío. Es preferible que el fármaco no tenga una potencia baja, incluso si presenta una toxicidad neurológica baja. Después de todo, el objetivo es administrar tan poco fármaco como sea posible para obtener un resultado eficaz; cuanto más fármaco se administre para conseguir un determinado resultado eficaz, mayor será el riesgo de que el fármaco produzca otros efectos, algunos de los cuales son desfavorables, en otros sistemas corporales del paciente. Por lo tanto, excepto para los derivados de furilo, basándose en los datos de la tabla los demás ejemplos comparativos presentan un perfil del fármaco significativamente peor en comparación con los compuestos de la presente
invención.

Existe por lo tanto todavía otro factor que debe ser tenido en cuenta en relación con la toxicidad del fármaco cuando se administra al animal durante períodos prolongados. Obviamente, incluso si el fármaco presenta una actividad anticonvulsionante excelente, y una excelente relación de PI, el fármaco no será útil si el fármaco es tóxico en la dosificación prolongada al paciente. En la industria farmacéutica en relación con los anticonvulsionantes, uno de los patrones utilizados para medir la toxicidad de los fármacos en el animal es la toxicidad en el hígado. El objetivo es descubrir un fármaco que tenga una toxicidad en el hígado relativamente baja o prácticamente mínima.

Basándose en los datos anteriores, tanto el derivado de furilo como los compuestos de la presente invención presentan un perfil de fármaco excelente; y ambos se podrían utilizar en administración prolongada. Sin embargo aunque el compuesto de furilo es bastante activo, como se demostrará más adelante, el compuesto de furilo es más tóxico para el animal, haciéndolo considerablemente más indeseable para la administración prolongada que los compuestos de la presente invención. Por otra parte, los compuestos de la presente invención según se demuestra a continuación son significativamente menos tóxicos que el compuesto de furilo y de hecho presentan poca, si es que alguna, toxicidad en el animal. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención son útiles para su administración al animal tratado durante un período prolongado.

Los experimentos siguientes miden el efecto de un compuesto representativo de la presente invención en el hígado. El fármaco utilizado es el compuesto del Ejemplo 1, es decir, R-N-bencil-2-acetamida-3-metoxipropionamida, denominado en lo sucesivo BAMP.

I. Estudio en el hígado a corto plazo

El protocolo es el siguiente:

Se trataron cuatro grupos de 8 ratas cada uno por administración p.o. al día, durante 4 días con vehículo (grupos 1 y 2), o 3,9 mg/kg del compuesto del Ejemplo 1 (grupo 3) o 100 mg/kg del compuesto del Ejemplo 1 (grupo 4). El día 5, los animales de los grupos 2, 3 y 4 recibieron 3,9 mg/kg del compuesto 1 (en lo sucesivo "BAMP") y los del grupo 1 recibieron otra dosis de vehículo.

Para comprobar que el fármaco era eficaz, se probó la eficacia del fármaco en todos los grupos en el periodo del efecto pico (TPE) frente a la extensión tónica producida por MES, según se describió anteriormente en la presente memoria.

Después de la prueba MES, los animales del grupo 4 recibieron una dosis de 96,1 mg/kg del compuesto del Ejemplo 1, una dosis igual a la diferencia entre el ED_{50} y 100 mg/kg. El día 6, se probó en todos los grupos la respuesta en el periodo de sueño (tiempo de pérdida o recuperación del reflejo adrizante) a una dosis normal de 100 mg/kg, i.p. de hexobarbital. El período de sueño con hexobarbital proporciona una evaluación del metabolismo hepático del fármaco. Siguiendo los resultados de esta prueba, todos los grupos de animales recibieron el mismo tratamiento que habían recibido el día 1. El día 7 tenían una situación de dosificación similar excepto que el grupo 2 recibió 100 mg/kg de BAMP. Los días 8 y 9, se practicó la eutanasia a cuatro ratas de cada uno de los cuatro grupos. Se extrajo sangre en tubos enfriados, se dejó coagular y se centrifugó para separar los RBC (glóbulos rojos). Se congeló el suero a -70ºC hasta que se determinó la actividad de la aminotransferasa de la alanina del suero (sALT), indicado del potencial del daño hepático. Se perfundieron los hígados in situ con solución salina enfriada en hielo, se coagularon en seco, se pesaron, se homogeneizaron en sacarosa 0,25 M y se centrifugaron para separar el retículo endoplásmico (es decir, los macrosomas) y la solución citoplásmica.

Se determinó la concentración de proteína de ambas fracciones subcelulares por el método de Lowry descrito en Lowry et. al.; en J. Biol. Chem. 193, 265-275 (1951) y el rendimiento calculado en proteínas microsómicas. La concentración de proteína de estas dos fracciones subcelulares proporciona la base para el cálculo de todas las concentraciones y actividades enzimáticas.

Se buscaron los cambios en un amplio intervalo de enzimas matabolizadoras de fármaco conocidas por ser alteradas de forma variada mediante tratamientos con fármacos. Se evaluaron tanto las reacciones de la Fase I microsómica y de la solución citoplásmica (oxidaciones catalizadas por el citocromo P450 y la actividad de la quinona oxidorreductasa, respectivamente) como las de conjugación de la Fase II microsómicas (glucuronidación) y de la solución citoplásmica (conjugación de glutatión y sulfato), según el procedimiento descrito en Arch. Biochem. Biophys, 143, 318-329 (1971), cuyos contenidos se incorporan como referencia. La BAMP no presentó pruebas de producir necrosis en el hígado. En conjunto, los resultados obtenidos a partir de una batería de estudios de enzimas hepáticas, sugieren que la fiabilidad para interacciones fármaco a fármaco serias y la toxicidad en el hígado son relativamente bajas para este compuesto.

Como el compuesto presentó mínima toxicidad en el hígado en un estudio de 48 horas, se realizó un estudio mucho más prolongado durante 30 días.

La metodología es la siguiente:

II. Se expusieron cinco grupos de ratas Crl:CD®BR Charles River a BAMP o a una sustancia de referencia (solución acuosa de metilcelulosa al 0,5% [400 cps] en agua destilada) según el siguiente programa de dosificación:

Grupo 1 - vehículo de referencia (10 machos, 10 hembras), 0 mg/kg día

Grupo 2 - bajo (10 machos, 10 hembras), 10 mg/kg día

Grupo 3 - medio bajo (10 machos, 10 hembras), 30 mg/kg día

Grupo 4 - medio alto (10 machos, 10 hembras), 100 mg/kg día

Grupo 5 - alto (10 machos, 10 hembras), 300 mg/kg día

La exposición fue por cebado oral, una vez al día, durante un período de al menos 30 días consecutivos, después de los cuales se sacrificaron todos los animales para la evaluación patológica.

Se pesaron todos los animales una vez antes del comienzo de la dosificación y después de ésta semanalmente. Se recogieron a la terminación muestras de sangre en ayunas (toda la noche) para análisis clínicos y hematología. Se recogieron muestras de sangre del plexo venoso orbital utilizando dióxido de carbono (mezclado con oxígeno) como anestésico.

Se sacrificaron todos los animales en el momento apropiado, por desangramiento, con anestesia de barbitúricos y se sometieron todos a un examen de necroxia.

Se estudiaron las observaciones clínicas en la necroxia y todas las anomalías observadas macroscópicamente se introdujeron directamente en el sistema informático de recolección de datos. Se pesaron en cada animal las cápsulas suprarrenales, el cerebro con el tronco encefálico, el corazón, los riñones, el hígado, los ovarios, la glándula pituitaria, los testículos con los epidídimos y la tiroides con la paratiroides. La pituitaria y la tiroides con la paratiroides se pesaron después de la fijación y todos los demás órganos se pesaron en el momento de la necropsia. Los cambios en el peso del hígado se representan en la Tabla 3.

Como requiere el protocolo, se realizaron evaluaciones histológicas en el hígado solamente de los animales de los Grupos 1 (referencia) y 5 (alto). Todas las observaciones histológicas se introdujeron directamente en el sistema informático de captura de datos. Las lesiones se clasificaron según la gravedad relativa del grado de afectación (1 = mínima, 2 = ligera, 3 = moderada, 4 = moderadamente grave, 5 = grave). En general, mínimo representa el grado mínimo reconocible de forma constante de cualquier alteración histomorfológica, mientras que grave representaría el grado más extremo razonablemente posible, ocupando los otros tres grados una continuidad entre los dos extremos. Los grados son evaluaciones subjetivas, comparativas, basadas en la morfología sola y no están destinadas por sí mismas a implicar ningún grado de alteración funcional.

Resultados

Observaciones macroscópicas - Hubo pocas anomalías macroscópicas descritas. Se encontraban todas frecuentemente en poblaciones normales de ratas de esta cepa y edad; ninguna era indicadora de ningún efecto del tratamiento. Los datos se encuentran en la Tabla 2.

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Histopatología - Todas fueron del tipo que se encuentra a menudo en poblaciones normales de ratas de esta raza y edad. Ninguna se encontró en una distribución por gota que sugeriría un efecto de tratamiento.

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Conclusiones

El hígado de las ratas expuestas a BAMP por cebado oral durante al menos 30 días no presentó ninguna prueba histológica de un efecto desfavorable a la concentración mayor de dosis empleada (300 mg/kg/día).

Se compararon los resultados con los ejemplos comparativos en la Tabla I que presentaba la eficacia mayor y los valores mayores de PI, es decir el compuesto del Ejemplo Comparativo 1 (denominado en lo sucesivo Compuesto A), del Ejemplo Comparativo 6 (denominado en lo sucesivo Compuesto B) y del Ejemplo Comparativo 13 (denominado en lo sucesivo Compuesto C).

Ejemplo comparativo 14

El Compuesto C, es decir, N-acetil-D,L-fenilglicina N-bencilamida se sometió a un tratamiento prolongado de 5 días en actividad anticonvulsionante (electrochoque máximo). Se trataron 3 grupos de 8 animales cada uno de la forma siguiente. Se administró a un grupo un MES, ED_{50} del fármaco de la prueba durante 5 días; se administró al segundo grupo el volumen requerido del vehículo (0,04 ml/10 g de peso corporal) durante 4 días y una única dosis (MES ED_{50}) del fármaco de la prueba el día 5 y se administró al tercer grupo el volumen requerido del vehículo diariamente durante 5 días. En el tiempo del efecto pico de la sustancia experimental el día 5, se sometieron todos los grupos a la prueba de MES y se registró el número de animales protegido. Los componentes de la enfermedad de los animales no protegidos se cronometraron a la décima más próxima de segundo y se determinó la relación extensor/flexor (E/F) S. E. y el índice p. Como la duración del extensor disminuye y la duración del flexor aumenta a medida que se atenúa la convulsión máxima, la relación E/F proporciona una medición de la gravedad de la convulsión.

Todas las ratas sometidas a los estudios de tolerancia en 5 días se mantuvieron en su jaula durante 24 horas y a continuación se les sometió a la prueba de tiempo de sueño con exobarbital (día 6). Se administró a cada rata en cada uno de los 3 grupos 100 mg/kg de exobarbital (i.p.) y se midió el tiempo de sueño con una precisión al minuto. Se calculó el tiempo medio de sueño y S.E. para cada grupo. Si el tiempo medio de sueño del grupo tratado era significativamente menor que el del grupo de referencia tratado, se consideraba sugerente de tolerancia metabólica.

Se sometieron a dos de los tres grupos de animales a la prueba de tiempo de sueño con hexobarbital (grupos de tratamiento prolongado y de referencia con vehículo) continuaron con su régimen de tratamiento original respectivo durante dos días (días 6 y 7) y 24 horas más tarde (días 8) se sometieron a estudios microsómicos en el hígado. Se decapitaron las ratas y se perfundieron los hígados con solución de cloruro de sodio al 0,9%. Se extrajeron los hígados, se pesaron y se homogeneizaron en sacarosa 0,25% m. Se prepararon los microsomas y sus capacidades para metabolizar el fármaco (rendimiento microsómico en proteínas; concentración en citocromo P-450; actividades de p-nitroanisol>O-desmetilasa y NADPH citocromo c reductasa; formación del complejo norbencfetamina MI y se midieron las actividades de glucuronil transferasa, eritromicina desmetilasa y etilmorfina desmetilasa) (Arch. Biochem. Biophys. 143: 318-329, 1971).

Los estudios de larga duración en ratas demuestran que las dosis diarias de 5 días de 48 mg/kg del Compuesto C no tiene un efecto ni en la actividad anticonvulsiva ni en el tiempo de sueño de exobarbital. Al contrario, la administración de larga duración de compuesto C produce algunos sistemas enzimáticos microsómicos en el hígado según indican los aumentos significativos de las actividades de p-nitroanisol O-desmetilasa, etilmorfina desmetilasa y NADPH citocromo c reductasa. Véase la Tabla 4.

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TABLA 4 Resultados de la prueba proyecto de identificación del anticonvulsionante

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Estas observaciones sugieren que el Compuesto C tiene un efecto desfavorable sobre el hígado.

Como demuestran los datos, el Compuesto C presenta un perfil a largo plazo relativamente menor al deseable, es decir, en la dosis del día 7, en la producción de la enzima en el hígado. A 48 mg/kg/día (que es su dosis de una vez eficaz para prevenir la convulsión por MES) p. o. x 7 días, los datos demuestran claramente que se observó la implicación hepática en la producción del enzima en el hígado. Debe observarse que si la dosis de MES-ED_{50} continuara durante 30 días en lugar de 7 días, existe una gran probabilidad de que tengan lugar cambios más profundos probablemente, lo que sugiere que una relación satisfactoria de únicamente 1 podría preverse en un programa de dosificación a 30 días.

Ejemplo comparativo 15

Se probó la toxicidad en el hígado del Compuesto A, es decir, N-acetil-D,L-alanina-N^{3}-bencilamida según el procedimiento descrito en el Ejemplo Comparativo 14.

Los resultados son los siguientes:

Los estudios a largo plazo en 5 días en ratas demuestran que las dosis de diarias de 5 días de 48 mg/kg no producen tolerancia para los efectos anticonvulsionantes (prueba con MES) del Compuesto A en este período de tiempo. Esta interpretación se apoya en la eficacia similar del Compuesto A mediante la prueba de MES, en el tiempo de sueño con hexobarbital aumentado y en la actividad inalterada de la enzima microsómica en el hígado. En vista de que el tiempo de sueño con hexobarbital aumentado en los animales tratados 5 días, se pensó que era importante determinar el efecto in vitro del Compuesto A sobre la actividad de p-nitroanisol O-desmetilasa. La baja potencia inhibidora del Compuesto A (I_{50} = 5000 \mu M) sugiere que existe poca interferencia por el propio compuesto en el metabolismo de hexobarbital en la prueba de sueño. Esto puede indicar que la potenciación del tiempo de sueño con hexobarbital es central y no periférica.

Los estudios de tolerancia en 5 días (MES y las pruebas de tiempo de sueño de hexobarbital) y los estudios de la enzima microsómica del hígado en ratas en 7 días, indican que la tolerancia no se producía por las dosis diarias de 5 días de la MES ED_{50} (48 mg/kg) del Compuesto A (4/8 protegidos en el grupo de referencia a corto plazo de una sola dosis; 3/8 protegidos en el grupo tratado a largo plazo); el tratamiento a corto plazo de 5 días aumentó el período de sueño con hexobarbital con respecto al que producía una dosis única de corta duración (31,7 \pm 1,7, 34,3 \pm 1,1 y 44,4 \pm 1,9 minutos en la referencia del disolvente, en la referencia de corta duración, y en los tratados de 5 días, respectivamente). No hubo cambios significativos en el peso corporal (148,8 \pm 5,9 frente a 140,0 \pm 4,6 g), peso del hígado (7,71 \pm 0,22 frente a 7,22 \pm 0,45 g), proteína microsómica total (32,3 \pm 0,56 \pm 0,04 nmoles/mg), actividad de p-nitroanisol O-desmetilasa (0,50 \pm 0,04 frente a 0,62 \pm 0,07 nmoles/mg/min), actividad de NADPH citocromo c reductasa (95,3 \pm 11,0 frente a 105,0 \pm 4,1 nmoles/mg/min) en el disolvente de referencia ni en los tratados en 7 días, respectivamente. La sustancia experimental (Compuesto A) presentaba muy poca potencia inhibidora (I_{50}: aprox.
5000 \mu M) durante la desmetilación in vitro de p-nitroanisol.

Sin embargo, se ha observado poca, si es que alguna, producción de enzima por el hígado en el estudio de 7 días y el compuesto fue superior a una dosis de 30 días variando el estudio toxicológico según se describió en la presente memoria anteriormente.

Más específicamente, se utilizaron 50 machos y 50 hembras Crl: CoBs® CD (SD) seleccionados de entre 68 ratas machos y 68 hembras (de 4 semanas) como animales de prueba en el estudio 1. Las ratas se alojaron individualmente en jaulas de rejilla de alambre elevadas con alimento (Purina Certified Rodent Chow® 5002) y agua potable (mediante un sistema de suministro de agua automático) disponible a voluntad. El fabricante analizó en cada lote de alimento utilizado las concentraciones de metales pesados especificados, aflatoxina, hidrocarburos clorados, organofosfatos y nutrientes especificados. Se analizaron rutinariamente en una base retrospectiva en el agua potable microorganismos, plaguicidas, metales pesados, alcalinidad y halógenos especificados para contaminación. Ninguno estaba presente en el pienso o en el agua a concentraciones suficientes para interferir en este estudio.

Durante la cuarentena y los periodos del estudio, se registraron la temperatura ambiente y la humedad relativa dos veces al día y y oscilaron entre 64 y 77ºF y entre el 12 y el 51%, respectivamente. Se mantuvo un ciclo de luz artificial de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.

Se seleccionaron ratas para su utilización en el estudio utilizando un procedimiento aleatorio por peso generado por ordenador y se asignaron a los siguientes grupos:

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Después de la distribución al azar, se identificaron las ratas con una marca en la oreja que lleva un número de identificación único permanente. Se asignaron las ratas al azar en grupos de tratamiento en primer lugar eliminando las de pesos corporales extremos (\pm2 desviaciones estándar del peso corporal medio). Los pesos corporales iniciales oscilaron entre 188,9 y 215,4 gramos para los machos y entre 141,8 a 158,8 gramos para las hembras.

Preparación y administración del compuesto

Se pesó la cantidad deseada de carboximetilcelulosa en una balanza apropiada (miligramo), se transfirió a un vaso de precipitados calibrado previamente que contenía dos tercios del valor total de agua destilada y se agitó en un agitador magnético hasta que se formó una solución. Se añadió a continuación agua destilada al volumen final y se agitó hasta conseguir una solución del 0,5% p/v.

En primer lugar se molió en polvo el Compuesto A. Se pesó la cantidad deseada de cada nivel de dosis en una balanza apropiada (miligramo) y se transfirió a un vaso de precipitados. Se añadió al Compuesto A una pequeña cantidad (0,5 a 4 ml) de carboximetilcelulosa al 0,5 % y se mezcló para formar una pasta. Se añadió carboximetilcelulosa (0,5%) al volumen final y se mezcló con un Tissumizer® de Tekmar® durante 2 a 3 minutos y a continuación se mezcló con un agitador magnético durante 2 a 3 minutos. Se prepararon cada semanasuspensiones recientes de carboximetilcelulosa al 0,5% y se almacenaron refrigeradas.

Cada rata recibió el Compuesto A a un factor de dosis de 10 mililitros por kilogramo de peso corporal por cebado entre las 9 a.m. y mediodía cada día. Se calculó el volumen de dosificación para cada rata y se ajustó por el ordenador semanalmente a partir del peso corporal individual registrado más recientemente.

Se administró por vía oral el Compuesto A.

Se tomaron al principio muestras de reserva de carboximetilcelulosa (1 gramo), agua destilada (10 mililitros) y del Compuesto A (1 gramo) y se almacenaron a temperatura ambiente.

Se observó la mortalidad y la moribundez en todas las ratas dos veces al día. Se hicieron observaciones clínicas antes de la dosificación y 1 y 4 horas después de la dosificación. Se registraron todos las señales a medida que se observaban. Se registraron los pesos corporales individuales al inicio del tratamiento, a intervalos semanales y a la terminación en tanto que el consumo de alimentos se registraba semanalmente.

Sacrificio y anatomía patológica macroscópica

Después de 30 ó 31 días de tratamiento, se pesaron las ratas supervivientes, se anestesiaron y se desangraron bajo anestesia de pentobarbital sódico. Se realizaron necropsias completas en cada rata por personal entrenado apropiadamente utilizando procedimientos aprobados por patologistas certificados por el consejo directivo. La necropsia incluyó el examen de lo siguiente:

Superficie externa

Todos los orificios

Cavidad craneal

Cuerpo

Superficie externa del cerebro y médula espinal (posfijación)

Cavidad nasal y senos paranasales

Cavidades torácica, abdominal y pélvica y sus vísceras

Tejidos cervicales y órganos

Se registraron todas las observaciones.

Anatomía patológica macroscópica

Las observaciones en la anatomía patológica macroscópica individuales son las siguientes:

Un posible efecto en los riñones relacionado con el compuesto. Se observó la pelvis dilatada en tres machos y dos hembras del Grupo 5, en un macho de cada uno de los Grupos 3 y 4 y en una hembra del Grupo 1. Otras observaciones indicadas que parecen ser fortuitas y no relacionadas con el compuesto incluían zonas oscuras en los pulmones, hígado, timo, estómago y mucosa vermicular, bazo granular, zona erecta en el hígado, útero distendido con fluido, fluido en la cavidad craneal y testículos pequeños y blandos.

Pesos de los órganos y relaciones órgano/peso corporal

Se pesaron varios órganos y se compararon con la referencia, p. ej.: cerebro con el tronco encefálico, el corazón, el bazo, los riñones, el hígado y los órganos sexuales. Únicamente los pesos del hígado fueron significativamente diferentes del valor de referencia como se muestra en la Tabla 5.

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Por lo tanto, el peso medio del hígado aumentó en los machos del Grupo 4 (300 mg/kg/día \times 30 días) y 5 (1000 mg/kg/día \times 30 días) en el Grupo 5 de hembras. Esto se reflejó en aumentos en las relaciones hígado/peso corporal. Se observó asimismo la relación hígado/peso corporal para los machos del Grupo 3 (100 mg/kg/día \times 30 días). El único cambio observado fue un pequeño aumento en el peso medio del riñón de los machos del Grupo 5.

Por lo tanto, utilizando una dosis diaria de 100 mg/kg como dosis umbral para una dosis potencialmente hepatotóxica, ésta daría una relación de seguridad en el hígado frente a la dosis de anticonvulsionante de 2:1.

Ejemplo comparativo 16

Se evaluó la toxicidad en el hígado del Compuesto C, es decir, D-(-)-\alpha-acetamido-N-bencil-2-furanacetilamida utilizando los procedimientos descritos anteriormente en la presente memoria. Más específicamente, se administró a las ratas por cebado oral varias dosis como por ejemplo 25 mg/kg, 100 mg/kg y 500 mg/kg del fármaco durante un periodo establecido de tiempo. Se alojó a las ratas por separado. Se observó la mortalidad y moribundez en las ratas periódicamente. Al final del estudio, se anestesiaron las ratas supervivientes y se desangraron bajo anestesia. Se realizaron necropsias completas en cada rata por personal entrenado apropiadamente utilizando procedimientos aprobados por patologistas certificados por el consejo directivo y se registraron los resultados.

Cuando se administró a la rata el derivado de D-furilo del Ejemplo Comparativo 6 se manifestó la necrosis hepatocelular a razón de 100 y 25 mg/kg en las ratas tratadas durante 13 semanas.

En la Tabla 6 se resumen los datos en relación con estos compuestos probados BAMP y los compuestos A, B y C.

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Como se demuestra claramente mediante los datos de la Tabla 6, el valor de ED_{50} en la prueba de MES para BAMP es significativamente menor (significativamente más eficaz) que los de los Compuestos A y C y es del mismo orden de magnitud con respecto al Compuesto B. Además, la relación PI de BAMP es significativamente mayor que la de los Compuestos A y C.

Sin embargo, y de manera más importante, BAMP no presenta indicaciones histopatológicas a la dosis mayor (300 mg/kg/día durante 30 días) y presentó una desviación menor a la dosis inferior. Esto está en contraste completo con la patología hepática de los Compuestos A, C y especialmente B. Todos los ejemplos comparativos mostraron significativamente mayor toxicidad hepática que BAMP. Esto se aprecia en la dosis diaria de la relación de seguridad de MES, mostrada en la última columna de la tabla. En esta tabla, se dan la dosis diarias para múltiples días consecutivos a la que se observan las primeras indicaciones de toxicidad hepática. Esta relación, expresada frente a una sola dosis de anticonvulsionante MES por vía oral, es un índice se seguridad para el comienzo de los problemas en el hígado en el momento de la administración de larga duración del fármaco. Tal como se muestra en la tabla, la relación de seguridad para la dosis para señales de aumento del hígado después de 30 días de medicación en comparación con una dosis oral de anticonvulsionante fue 2,1 para el Compuesto A, pero fue 25,6 para BAMP. Para señales histológicas de toxicidad hepática, incluyendo, por ejemplo, la necrosis hepatocelular, la relación de seguridad fue 12,7 para el Compuesto B. En cambio, la dosificación de larga duración de 30 días con BAMP no produjo efectos desfavorables histológicos a 79,6 veces su dosis de anticonvulsionante.

Por lo tanto, la toxicidad de los compuestos de la presente invención cuando se administran al animal durante periodos prolongados es un parámetro importante. Aun cuando un anticonvulsionante tenga eficacia activa, si presenta toxicidad en el animal, es probable que sea un candidato para su utilización en dosificación de larga duración. Por lo tanto, al seleccionar un anticonvulsionante no solo es importante que satisfaga los tres criterios bosquejados anteriormente (gran eficacia, baja toxicidad neurológica y P.I. elevado) sino también el cuarto criterio, baja toxicidad. Los compuestos de la presente invención satisfacen estos criterios.

Por lo tanto, como se demuestra claramente por los datos, los compuestos de la presente invención tienen la toxicidad hepática baja requerida de los fármacos que se han de utilizar en la administración de larga duración y son por lo tanto totalmente seguros.

Por lo tanto, los compuestos de la presente invención presentan un perfil de fármaco excelente. Satisfacen las cuatro características bosquejadas anteriormente, gran potencia, toxicidad neurológica baja en comparación con su potencia, índice protector elevado y toxicidad hepática mínima. Los compuestos de la presente invención no son prácticamente tóxicos para el hígado. Estos compuestos de la presente invención presentan ventajas que no se habían pensado anteriormente. Se pueden utilizar por consiguiente en un régimen de tratamiento que necesite su administración durante periodos de tiempo prolongados de tiempo (administración de larga duración).

Claims (11)

1. Utilización de un compuesto en la configuración R que tiene la fórmula:

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en la que

Ar es fenilo que está insustituido o sustituido con al menos un grupo halo;

Q es alcoxi que contiene uno a seis átomos de carbono, y

Q_{1} es metilo,

para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de los trastornos del sistema nervioso central en un animal, que comprende la administración a dicho animal necesitado de una cantidad anticonvulsionante eficaz.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que el compuesto es sustancialmente enantiopuro.

3. Utilización según la reivindicación 1, en la que Q es alcoxi que contiene de 1 a 3 átomos de carbono.

4. Utilización según la reivindicación 3, en la que Q es metoxi.

5. Utilización según la reivindicación 1, en la que Ar es fenil insustituido.

6. Utilización según la reivindicación 1, en la que halo es flúor.

7. Utilización según la reivindicación 1, en la que Q es alcoxi que contiene de 1 a 3 átomos de carbono y Ar es fenil insustituido.

8. Utilización según la reivindicación 1, en la que el compuesto es (R)-N-bencil 2-acetamido-3-metoxipropionamida.

9. Utilización según la reivindicación 8, en la que el compuesto es sustancialmente enantiopuro.

10. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que el animal es un mamífero.

11. Utilización según la reivindicación 10, en la que el mamífero es el hombre.