ES2210392T3 - Compuestos para la inmunoterapia y el diagnostico de la tuberculosis. - Google Patents

Abstract

SE REVELAN UNOS COMPUESTOS Y METODOS PARA INDUCIR INMUNIDAD PROTECTORA CONTRA LA TUBERCULOSIS. LOS COMPUESTOS APORTADOS INCLUYEN POLIPEPTIDOS QUE CONTIENEN AL MENOS UNA PORCION INMUNOGENICA DE UNA O MAS PROTEINAS DE M. TUBERCULOSIS Y MOLECULAS DE ADN QUE CODIFICAN TALES POLIPEPTIDOS. DICHOS COMPUESTOS PUEDEN SER FORMULADOS EN VACUNAS Y/O COMPOSICIONES FARMACEUTICAS PARA INMUNIZACION CONTRA LA INFECCION POR M. TUBERCULOSIS, O PUEDEN USARSE PARA EL DIAGNOSTICO DE LA TUBERCULOSIS.

Description

Compuestos para la inmunoterapia y el diagnóstico de la tuberculosis.

La presente invención se refiere en general al diagnóstico, tratamiento y profilaxis de la infección por Mycobacterium tuberculosis. La invención se refiere más concretamente a polipéptidos que tienen un antígeno de Mycobacterium tuberculosis, o una parte u otra variante del mismo, y al uso de dichos polipéptidos para el diagnóstico y vacunación contra la infección por Mycobacterium tuberculosis.

La tuberculosis es una enfermedad crónica, infecciosa, causada generalmente por infección con Mycobacterium tuberculosis. Es una enfermedad grave en los países en desarrollo y un problema creciente en las regiones desarrolladas de la Tierra, produciéndose aproximadamente 8 millones de casos nuevos y 3 millones de muertes al año. Si bien la infección puede no presentar síntomas durante un periodo de tiempo considerable, la enfermedad se manifiesta habitualmente por una inflamación aguda de los pulmones con aparición de fiebre y tos sin expectoración. Si no se trata la enfermedad, suelen producirse complicaciones graves con resultado de muerte.

A pesar de que la tuberculosis puede controlarse en general mediante la utilización de una terapia de larga duración con antibióticos, dicho tratamiento no basta para prevenir la propagación de la enfermedad. Los individuos infectados pueden no presentar síntomas, pero pueden ser transmisores durante algún tiempo. Por otra parte, aunque es fundamental observar el tratamiento, es difícil controlar el comportamiento del paciente. Algunos pacientes no completan el tratamiento, lo cual puede anular la eficacia del mismo y provocar el desarrollo de resistencia al
medicamento.

La contención de la propagación de la tuberculosis precisa una vacunación eficaz y un diagnóstico temprano de la enfermedad. Actualmente, el método de vacunación más eficaz para inducir inmunología de protección es mediante bacterias vivas. La micobacteria más utilizada para este propósito es Bacillus Calmette-Guerin (BCG), una cepa no virulenta de Mycobacterium bovis. Sin embargo, la seguridad y eficacia del BCG es motivo de controversia y en algunos países como los Estados Unidos de América no se vacuna a la población. El diagnóstico se consigue normalmente mediante un ensayo cutáneo, que implica la exposición intradérmica a la tuberculina PPD (derivado proteico purificado). Las respuestas antigenoespecíficas de las células T provocan una induración mensurable en el lugar de la inyección a las 48-72 horas de la misma, lo cual indica exposición a antígenos micobacterianos. No obstante, la sensibilidad y especificidad de este ensayo ha constituido un problema, y no pueden diferenciarse las personas vacunadas con BCG de las personas infectadas.

Aunque se ha demostrado que los macrófagos actúan como los principales determinantes de la inmunidad frente a la M. tuberculosis, los inductores predominantes de dicha inmunidad son las células T. El papel esencial de las células T en la protección contra la infección por M. tuberculosis viene ilustrado por la frecuencia de dicha infección en pacientes de SIDA, causada por la pérdida de células T CD4, asociada a la infección por virus de inmunodeficiencia humana (VIH). Las células T CD4 reactivas a la micobacteria han demostrado ser potentes productores de gamma-interferón (IFN-\gamma), el cual ha demostrado a su vez que activa los efectos antimicobacterianos de macrófagos en ratón. Si bien el papel del IFN-\gamma no está tan claro en ensayos clínicos, existen estudios que demuestran que la 1,25-dihidroxivitamina D3, sola o en combinación con IFN-\gamma o factor alfa de necrosis tumoral, activa los macrófagos del organismo humano para inhibir la infección por M. tuberculosis. Es más, se sabe que el IFN-\gamma estimula los macrófagos del organismo humano para fabricar 1,25-dihidroxivitamina D3. De modo semejante, se ha demostrado que IL-12 desempeña un cierto papel en la estimulación de resistencia a la infección por M. tuberculosis. Ver la reseña sobre inmunología de la infección por M. tuberculosis de Chan y Kaufmann en Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control, Bloom (ed.), ASM Press, Washington, DC, 1994.

Por consiguiente, hay una necesidad en el estado de la técnica de obtener mejores vacunas y métodos de profilaxis, tratamiento y diagnóstico para la tuberculosis. La presente invención satisface esta necesidad y ofrece además otras ventajas relacionadas con ellos.

De acuerdo con la presente invención se provee un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido codificada por una secuencia de DNA de ID. SEC. No:4.

La invención también provee una molécula de DNA que incluye el polipéptido de la presente invención y un vector de expresión que incluye la molécula de DNA de acuerdo con la presente invención, una célula hospedante transformada con el vector de expresión de acuerdo con la presente invención, una proteína de fusión que comprende el polipéptido de la presente invención en combinación con TbH9, ESAT-6 o Ra35, un compuesto farmacéutico y una vacuna que incluye el polipéptido de la presente invención, una molécula de DNA de la presente invención o una proteína de fusión de la presente invención y un excipiente fisiológicamente aceptable.

También se provee la utilización del polipéptido de la presente invención en un método de diagnóstico de la tuberculosis en un paciente y un equipo de diagnóstico constituido por a) el polipéptido de la presente invención y b) un dispositivo suficiente para poner en contacto dicho polipéptido con las células dérmicas de un paciente.

Breve descripción de las figuras y de los identificadores de secuencia

Las figuras 1 A y B representan la estimulación de proliferación y producción de interferón-\gamma por los antígenos 14 Kd, 20 Kd y 26 Kd descritos en el ejemplo 1 en células T procedentes de un primer y segundo donante inmunes a M. tuberculosis, respectivamente.

La figura 2 representa la estimulación de proliferación y producción de interferón-\gamma por los dos polipéptidos representativos TbRa3 y TbRa9 en células T procedentes de un individuo inmune a la M. tuberculosis.

ID. SEC. No.1 es la secuencia de DNA de TbRa1.

ID. SEC. No.2 es la secuencia de DNA de TbRa10.

ID. SEC. No.3 es la secuencia de DNA de TbRa11.

ID. SEC. No.4 es la secuencia de DNA de TbRa12.

ID. SEC. No.5 es la secuencia de DNA de TbRa13.

ID. SEC. No.6 es la secuencia de DNA de TbRa16.

ID. SEC. No.7 es la secuencia de DNA de TbRa17.

ID. SEC. No.8 es la secuencia de DNA de TbRa18.

ID. SEC. No.9 es la secuencia de DNA de TbRa19.

ID. SEC. No.10 es la secuencia de DNA de TbRa24.

ID. SEC. No.11 es la secuencia de DNA de TbRa26.

ID. SEC. No.12 es la secuencia de DNA de TbRa28.

ID. SEC. No.13 es la secuencia de DNA de TbRa29.

ID. SEC. No.14 es la secuencia de DNA de TbRa2A.

ID. SEC. No.15 es la secuencia de DNA de TbRa3.

ID. SEC. No.16 es la secuencia de DNA de TbRa32.

ID. SEC. No.17 es la secuencia de DNA de TbRa35.

ID. SEC. No.18 es la secuencia de DNA de TbRa36.

ID. SEC. No.19 es la secuencia de DNA de TbRa4.

ID. SEC. No.20 es la secuencia de DNA de TbRa9.

ID. SEC. No.21 es la secuencia de DNA de TbRaB.

ID. SEC. No.22 es la secuencia de DNA de TbRaC.

ID. SEC. N° 23 es la secuencia de DNA de TbRaD.

ID. SEC. N° 24 es la secuencia de DNA de YYWCPG.

ID. SEC. N° 25 es la secuencia de DNA de AAMK.

ID. SEC. N° 26 es la secuencia de DNA de TbL-23.

ID. SEC. N° 27 es la secuencia de DNA de TbL-24.

ID. SEC. N° 28 es la secuencia de DNA de TbL-25.

ID. SEC. N° 29 es la secuencia de DNA de TbL-28.

ID. SEC. N° 30 es la secuencia de DNA de TbL-29.

ID. SEC. N° 31 es la secuencia de DNA de TbH-5.

ID. SEC. N° 32 es la secuencia de DNA de TbH-8.

ID. SEC. N° 33 es la secuencia de DNA de TbH-9.

ID. SEC. N° 34 es la secuencia de DNA de TbM-1.

ID. SEC. N° 35 es la secuencia de DNA de TbM-3.

ID. SEC. N° 36 es la secuencia de DNA de TbM-6.

ID. SEC. N° 37 es la secuencia de DNA de TbM-7.

ID. SEC. N° 38 es la secuencia de DNA de TbM-9.

ID. SEC. N° 39 es la secuencia de DNA de TbM-12.

ID. SEC. N° 40 es la secuencia de DNA de TbM-13.

ID. SEC. N° 41 es la secuencia de DNA de TbM-14.

ID. SEC. N° 42 es la secuencia de DNA de TbM-15.

ID. SEC. N° 43 es la secuencia de DNA de TbH-4.

ID. SEC. N° 44 es la secuencia de DNA de TbFI-4-FWD.

ID. SEC. N° 45 es la secuencia de DNA de TbH-12.

ID. SEC. N° 46 es la secuencia de DNA de Tb38-1.

ID. SEC. N° 47 es la secuencia de DNA de Tb38-4.

ID. SEC. N° 48 es la secuencia de DNA de TbL-17.

ID. SEC. N° 49 es la secuencia de DNA de TbL-20.

ID. SEC. N° 50 es la secuencia de DNA de TbL-21.

ID. SEC. N° 51 es la secuencia de DNA de TbH-16.

ID. SEC. N° 52 es la secuencia de DNA de DPEP.

ID. SEC. N° 53 es la secuencia deducida de aminoácido de DPEP.

ID. SEC. N° 54 es la secuencia de proteína del antígeno DPV N-terminal.

ID. SEC. N° 55 es la secuencia de proteína del antígeno AVGS N-terminal.

ID. SEC. N° 56 es la secuencia de proteína del antígeno AAMK N-terminal.

ID. SEC. N° 57 es la secuencia de proteína del antígeno YYWC N-terminal.

ID. SEC. N° 58 es la secuencia de proteína del antígeno DIGS N-terminal.

ID. SEC. N° 58 es la secuencia de proteína del antígeno AEES N-terminal.

ID. SEC. N° 60 es la secuencia de proteína del antígeno DPEP N-terminal.

ID. SEC. N° 61 es la secuencia de proteína del antígeno APKT N-terminal.

ID. SEC. N° 62 es la secuencia de proteína del antígeno DPAS N-terminal.

ID. SEC. N° 63 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRal.

ID. SEC. N° 64 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa10.

ID. SEC. N° 65 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa11.

ID. SEC. N° 66 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa12.

ID. SEC. N° 67 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa13.

ID. SEC. N° 68 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa16.

ID. SEC. N° 69 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa17.

ID. SEC. N° 70 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa18.

ID. SEC. N° 71 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa19.

ID. SEC. N° 72 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa24.

ID. SEC. N° 73 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa26.

ID. SEC. N° 74 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa28.

ID. SEC. N° 75 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa29.

ID. SEC. N° 76 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa2A.

ID. SEC. N° 77 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa3.

ID. SEC. N° 78 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa32.

ID. SEC. N° 79 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa35.

ID. SEC. N° 80 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa36.

ID. SEC. N° 81 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa4.

ID. SEC. N° 82 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRa9.

ID. SEC. N° 83 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRaB.

ID. SEC. N° 84 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRaC.

ID. SEC. N° 85 es la secuencia deducida de aminoácido de TbRaD.

ID. SEC. N° 86 es la secuencia deducida de aminoácido de YYWCPG.

ID. SEC. N° 87 es la secuencia deducida de aminoácido de TbAAMK.

ID. SEC. N° 88 es la secuencia deducida de aminoácido de Tb38-1.

ID. SEC. N° 89 es la secuencia deducida de aminoácido de TbH-4.

ID. SEC. N° 90 es la secuencia deducida de aminoácido de TbH-8.

ID. SEC. N° 91 es la secuencia deducida de aminoácido de TbH-9.

ID. SEC. N° 92 es la secuencia deducida de aminoácido de TbH-12.

ID. SEC. N° 93 es la secuencia de aminoácido de Tb38-1 Péptido 1.

ID. SEC. N° 94 es la secuencia de aminoácido de Tb38-1 Péptido 2.

ID. SEC. N° 95 es la secuencia de aminoácido de Tb38-1 Péptido 3.

ID. SEC. N° 96 es la secuencia de aminoácido de Tb38-1 Péptido 4.

ID. SEC. N° 97 es la secuencia de aminoácido de Tb38-1 Péptido 5.

ID. SEC. N° 98 es la secuencia de aminoácido de Tb38-1 Péptido 6.

ID. SEC. N° 99 es la secuencia de DNA de DPAS.

ID. SEC. N° 100 es la secuencia deducida de aminoácido de DPAS.

ID. SEC. N° 101 es la secuencia de DNA de DVP.

ID. SEC. N° 102 es la secuencia deducida de aminoácido de DVP.

ID. SEC. N° 103 es la secuencia de DNA de ESAT-6.

ID. SEC. N° 104 es la secuencia deducida de aminoácido de ESAT-6.

ID. SEC. N° 105 es la secuencia de DNA de TbH-8-2.

ID. SEC. N° 106 es la secuencia de DNA de TbH-9FL.

ID. SEC. N° 107 es la secuencia deducida de aminoácido de TbH-9FL.

ID. SEC. N° 108 es la secuencia de DNA de TbH-9-1.

ID. SEC. N° 109 es la secuencia deducida de aminoácido de TbH-9-1.

ID. SEC. N° 110 es la secuencia de DNA de TbH-9-4.

ID. SEC. N° 111 es la secuencia deducida de aminoácido de TbH-9-4.

ID. SEC. N° 112 es la secuencia de DNA de Tb38-1F2 IN.

ID. SEC. N° 113 es la secuencia de DNA de Tb38-2F2 RP.

ID. SEC. N° 114 es la secuencia deducida de aminoácido de Tb37-FL.

ID. SEC. N° 115 es la secuencia deducida de aminoácido de Tb38-IN.

ID. SEC. N° 116 es la secuencia de DNA de Tb38-1F3.

ID. SEC. N° 117 es la secuencia deducida de aminoácido de Tb38-1F3.

ID. SEC. N° 118 es la secuencia de DNA de Tb38-1F5.

ID. SEC. N° 119 es la secuencia de DNA de Tb38-1F6.

ID. SEC. N° 120 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de DPV.

ID. SEC. N° 121 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de AVGS.

ID. SEC. N° 122 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de AAMK.

ID. SEC. N° 123 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de YYWC.

ID. SEC. N° 124 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de DIGS.

ID. SEC. N° 125 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de AEES.

ID. SEC. N° 126 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de DPEP.

ID. SEC. N° 127 es la secuencia deducida de aminoácido N-terminal de APKT.

ID. SEC. N° 128 es la secuencia deducida de aminoácido de DPAS.

ID. SEC. N° 129 es la secuencia de proteína de DPPD del antígeno N-terminal.

ID. SEC. N° 130-133 son las secuencias de proteína de cuatro fragmentos de cianógeno bromuro de DPPD.

ID. SEC. N° 134 es la secuencia de proteína N-terminal del antígeno XDS.

ID. SEC. N° 135 es la secuencia de proteína N-terminal del antígeno AGD.

ID. SEC. N° 136. es la secuencia de proteína N-terminal del antígeno APE.

ID. SEC. N° 137 es la secuencia de proteína N-terminal del antígeno XYI.

Como se ha indicado anteriormente, la presente invención está dirigida en general a los compuestos y su utilización en la profilaxis, tratamiento y diagnóstico de la tuberculosis. Los compuestos de la invención comprenden un polipéptido del tipo definido en la reivindicación 1. Los polipéptidos en el ámbito de la presente invención comprenden, sin exclusión de otros posibles, antígenos solubles inmunógenos de M. tuberculosis. Un "antígeno soluble de M. tuberculosis" es una proteína de origen M. tuberculosis, que está presente en un filtrado de cultivo de M. tuberculosis.

"Inmunógeno", tal como se utiliza aquí, se refiere a la capacidad de provocar una respuesta inmune (por ejemplo, celular) en un paciente, por ejemplo, una persona, y/o en una muestra biológica. En particular, los antígenos que son inmunógenos (y las partes inmunógenas u otras variantes de dichos antígenos) pueden estimular la proliferación de células, la producción de interleucina-12 y/o la producción de interferón-\gamma en muestras biológicas constituidas por una o varias células seleccionadas del grupo de las células T, células NK, células B y macrófagos, procediendo las células de un individuo inmune a M. tuberculosis. Generalmente pueden utilizarse polipéptidos que tienen al menos una parte inmunógena de uno o varios antígenos de M. tuberculosis para el diagnóstico de la tuberculosis o para inducir a un paciente inmunidad protectora frente a la tuberculosis.

En un aspecto relacionado se divulgan polipéptidos de combinación. Un "polipéptido de combinación" es un polipéptido constituido por al menos una de las partes inmunógenas arriba indicadas y una o varias secuencias inmunógenas adicionales de M. tuberculosis, unidas mediante un enlace peptídico en una única cadena de aminoácido. Las secuencias pueden unirse directamente (es decir sin intervención de aminoácidos) o a través de una secuencia de conector (por ejemplo, Gly-Cys-Gly), que no merma de modo importante las propiedades inmunógenas de los componentes polipeptídicos.

En general, los antígenos de M. tuberculosis, y las secuencias de DNA que codifican dichos antígenos, pueden prepararse mediante diversos procedimientos. Por ejemplo, pueden aislarse antígenos solubles a partir de un filtrado de cultivo de M. tuberculosis por procedimientos conocidos por el experto familiarizado con el estado de la técnica, incluyendo la cromatografía de intercambio aniónico y la de fase inversa. Después se evalúan los antígenos purificados en relación con su capacidad de provocar una respuesta inmune apropiada (por ejemplo, celular) utilizando, por ejemplo, los métodos representativos aquí descritos. Seguidamente los antígenos inmunógenos pueden secuenciarse parcialmente utilizando técnicas como el procedimiento químico Edman tradicional. Véase Edman and Berg, Eur. J. Biochem. 80: 116-132, 1967.

Los antígenos inmunógenos también pueden prepararse por recombinación utilizando una secuencia de DNA que codifica el antígeno, la cual ha sido insertada en un vector de expresión y está expresada en un hospedante apropiado. Pueden aislarse moléculas de DNA que codifican antígenos solubles escrutando una biblioteca de expresión apropiada de M. tuberculosis con antisueros (por ejemplo, de conejo) cultivados específicamente frente a antígenos solubles de M. tuberculosis. Pueden identificarse secuencias de DNA que codifican antígenos, que pueden ser solubles o insolubles, escrutando una biblioteca genómica o de expresión de cDNA apropiada de M. tuberculosis con sueros obtenidos de pacientes infectados con M. tuberculosis. Estos escrutinios pueden hacerse generalmente utilizando técnicas conocidas por el experto familiarizado con el estado de la técnica, como las descritas en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989.

También pueden obtenerse secuencias de DNA que codifican antígenos solubles por escrutinio de una biblioteca cDNA o genómica de DNA apropiada de M. tuberculosis en busca de secuencias de DNA que se hibridan a oligonucleótidos anómalos derivados de secuencias parciales de aminoácido de antígenos aislados solubles. Pueden diseñarse y sintetizarse secuencias de oligonucleótido anómalo para su utilización en ese tipo de escrutinio, y el escrutinio puede realizarse como se describe, por ejemplo, en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (y en las referencias allí citadas). También puede emplearse una reacción de cadena de polimerasa (PCR), utilizando los oligonucleótidos anteriores en métodos bien conocidos en el estado de la técnica, para aislar una sonda de ácido nucléico de una biblioteca de cDNA o genómica. A continuación puede realizarse el escrutinio de la biblioteca utilizando la sonda aislada.

Como alternativa pueden escrutarse directamente bibliotecas genómicas o de cDNA procedentes de M. Tubérculosis utilizando células mononucleares periféricas de la sangre (PBMC) o líneas de células T o clones procedentes de uno o varios individuos inmunes a la M. tuberculosis. En general, las PBMC y/o las células T de utilización en dichos escrutinios pueden prepararse del modo descrito más adelante. Generalmente pueden realizarse escrutinios directos de bibliotecas ensayando dotaciones (pools) de proteínas expresadas recombinantes en relación con su capacidad para inducir la proliferación y/o la producción de interferon-\gamma en células T procedentes de un individuo inmune a la M. tuberculosis. Como alternativa pueden seleccionarse primero posibles antígenos de células T basándose en la reactividad de los anticuerpos, como se ha expuesto anteriormente.

Al margen del método de preparación, los antígenos (y sus partes inmunógenas) descritos aquí (que pueden ser solubles o insolubles) son capaces de inducir una respuesta inmune. Más concretamente, los antígenos tienen la propiedad de inducir la proliferación y/o la producción de citocina (es decir la producción de interferón-\gamma y/o interleucina-12) en células T, células NK, células B y/o macrófagos procedentes de un individuo inmune a la M. tuberculosis. Desde luego la selección del tipo de célula a utilizar en la evaluación de una respuesta inmune a un antígeno dependerá de la respuesta deseada. Por ejemplo, la producción de interleucina-12 se evalúa más fácilmente utilizando preparados que contienen células B y/o macrófagos. Un individuo inmune a la M. tuberculosis es aquel que se considera resistente al desarrollo de la tubérculosis por haber generado una respuesta eficaz de las células T a la M. tuberculosis (es decir que está básicamente libre de síntomas de la enfermedad). Estos individuos pueden reconocerse por una respuesta fuertemente positiva (es decir una induración de diámetro superior a 10 mm) a proteínas (PPD) de tuberculosis en un ensayo intradérmico y por la ausencia de cualquier síntoma de la enfermedad. Se pueden preparar células T, células NK, células B y macrófagos procedentes de individuos inmunes a la M. Tubérculosis utilizando métodos conocidos por el experto familiarizado con el estado de la técnica. Por ejemplo, se puede utilizar una preparación de células PBMC (células mononucleares periféricas de la sangre), sin ulterior separación de componentes celulares. Las células PBMC pueden prepararse en general en hematocrito de Ficoll^{TM} (Winthrop Laboratories, NY). Las células T para utilización en los ensayos aquí descritos pueden purificarse directamente a partir de células PBMC. Alternativamente puede utilizarse una línea de células T enriquecida, reactiva frente a proteínas micobacterianas, o clones de células T reactivos a proteínas micobacterianas individuales. Estos clones de células T pueden crearse, por ejemplo, mediante cultivo de células PBMC procedentes de individuos inmunes a la M. tuberculosis con proteínas micobacterianas durante un periodo de 2-4 semanas. Esto permite el desarrollo de células T, que son únicamente específicas de las proteínas micobacterianas, obteniéndose una línea constituida únicamente por dichas células. A continuación se pueden clonar dichas células y ensayarse con proteínas individuales, utilizando métodos conocidos por el experto familiarizado con el estado de la técnica, para definir con mayor precisión la especificidad de las células T individuales. En general se consideran inmunógenos los antígenos que dan positivo en ensayos de proliferación y/o producción de citocina (producción de interferon-\gamma y/o interleucina-12) realizados utilizando células T, células NK, células B y macrófagos procedentes de un individuo inmune a la M. tuberculosis. Dichos ensayos pueden realizarse, por ejemplo, utilizando los procedimientos representativos descritos más abajo. Las partes inmunógenas de dichos antígenos pueden identificarse mediante ensayos similares y pueden estar presentes en los polipéptidos descritos aquí.

La capacidad de un polipéptido (por ejemplo, un antígeno inmunógeno o una parte u otra variante del mismo) para inducir la proliferación de células se evalúa poniendo en contacto las células (por ejemplo, células T y/o células NK) con el polipéptido y midiendo la proliferación de las células. En general, la cantidad de polipéptido requerida para la evaluación de aproximadamente 10^{5} células oscila entre 10 ng/ml y 100 \mug/ml, siendo preferentemente de unos 10 \mug/ml. La incubación de polipéptido con células se realiza normalmente a 37°C durante aproximadamente seis días. Después de la incubación con polipéptido se ensayan las células para ver su respuesta de proliferación, la cual puede evaluarse por métodos conocidos por el experto familiarizado con el estado de la técnica, por ejemplo, exponiendo las células a una señal de timidina marcada con radioisótopo y midiendo la incorporación de éste al DNA de las células. En general, un polipéptido se considera capaz de inducir proliferación cuando produce un aumento de proliferación celular de al menos el triple de la de referencia (es decir la proliferación observada en células cultivadas sin polipéptido).

La capacidad de un polipéptido de estimular la producción de interferón-\gamma y/o interleucina-12 en células puede evaluarse poniendo en contacto las células con el polipéptido y midiendo el nivel de interferón-\gamma o interleucina-12 producido por las células. En general, la cantidad de polipéptido requerida para la evaluación de aproximadamente 10^{5} células oscila entre 10 ng/ml y 100 \mug/ml, siendo preferentemente de unos 10 \mug/ml. El polipéptido puede fijarse, aunque no es necesario, a un soporte sólido, por ejemplo, una perla o una microesfera biodegradable como las descritas en la patente U.S. n°4.897.268 y 5.075.109. La incubación de polipéptido con células se realiza habitualmente a 37°C durante unos seis días. Después de la incubación con polipéptido se ensayan las células para ver la cantidad que tienen de interferón-\gamma y/o interleucina-12 (o de una o varias subunidades de estos), lo cual puede evaluarse por métodos conocidos por el experto familiarizado con el estado de la técnica, por ejemplo, mediante un ensayo inmunosorbente de vinculación enzimática (ELISA) o, en el caso de la subunidad IL-12 P70, un ensayo biológico de medición de proliferación de células T. En general se considera capaz de estimular la producción de interferón-\gamma a un polipéptido que produce al menos 50 pg de interferón-\gamma por ml de sobrenadante cultivado (conteniendo 10^{4}-10^{5} células T por ml). Se considera capaz de estimular la producción de IL-12 a un polipéptido que estimula la producción de al menos 10 pg/ml de la subunidad KL-12 P70, y/o al menos 100 pg/ml de la subunidad IL-12 P40, por cada 10^{5} macrófagos o células B (o por cada 3 x 10^{5} células PBMC).

En general, los antígenos inmunógenos son aquellos que estimulan la proliferación y/o la producción de citocina (es decir la producción de interferón-\gamma y/o interleucina12) en células T, células NK, células B y/o macrófagos procedentes de al menos aproximadamente el 25% de individuos inmunes a la M. tuberculosis. Basándose en la magnitud de las respuestas observadas en los ensayos anteriores y en el porcentaje de individuos, en los cuales se observa una respuesta, pueden distinguirse los polipéptidos con mayores propiedades terapéuticas entre los antígenos inmunógenos mencionados. Además, los antígenos con mayores propiedades terapéuticas no estimularán la proliferación y/o producción de citocina in vitro en células procedentes de más de aproximadamente el 25% de individuos que no son inmunes a la M. tuberculosis, eliminando de este modo las respuestas que no son debidas específicamente a las células que responden a la M. tuberculosis. Los antígenos que inducen una respuesta en un elevado porcentaje de células T, células NK, células B y/o preparados de macrófagos procedentes de individuos inmunes a la M. tuberculosis (con una baja incidencia de respuestas en preparados de células procedentes de otros individuos) poseen mayores propiedades terapéuticas.

Los antígenos con mayores propiedades terapéuticas pueden identificarse también basándose en su capacidad de reducir la gravedad de la infección por M. tuberculosis en animales de laboratorio cuando se administran en forma de vacuna. A continuación se describen con detalle preparados adecuados de vacunación para su utilización en animales de laboratorio. La eficacia puede determinarse basándose en la capacidad del antígeno para reducir el número de bacterias en al menos un 50% aproximadamente y/o para reducir la mortalidad en al menos un 40% aproximadamente tras la infección experimental. Entre los animales de laboratorio adecuados se encuentran los ratones, conejillos de Indias y primates.

Los antígenos con mayores propiedades de diagnóstico pueden identificarse generalmente basándose en su capacidad de provocar una respuesta en un ensayo intradérmico realizado en un individuo con tuberculosis activa, pero no en un ensayo realizado en un individuo no infectado con M. tuberculosis. Los ensayos cutáneos pueden realizarse en general del modo descrito más adelante, considerándose positivos cuando la respuesta produce una induración de al menos 5 mm.

Las partes inmunógenas de los antígenos aquí descritos pueden prepararse e identificarse mediante técnicas bien conocidas, como las que se encuentran resumidas en Paul, Fundamental Immunology, 3ª ed., Raven Press, 1993, pág. 243-247 y las referencias allí citadas. Dichas técnicas incluyen el escrutinio de partes de polipéptido del antígeno original para encontrar propiedades inmunógenas. Los ensayos representativos de proliferación y producción de citocina descritos aquí pueden utilizarse generalmente para estos escrutinios. Una parte inmunógena de un polipéptido es una parte que, en dichos ensayos representativos, genera una respuesta inmune (por ejemplo, proliferación, producción de interferón-\gamma y/o producción de interleucina-12), que es esencialmente similar a la generada por el antígeno completo en toda su longitud. En otras palabras, una parte inmunógena de un antígeno puede generar al menos el 20% aproximadamente, preferiblemente el 100% aproximadamente, de la proliferación inducida por el antígeno completo en el ensayo de proliferación ilustrativo aquí descrito. Una parte inmunógena puede estimular también, o alternativamente, la producción de al menos el 20% aproximadamente, y preferiblemente el 100% aproximadamente, del interferón-\gamma y/o de la interleucina-12 inducida por el antígeno completo en el ensayo ilustrativo aquí descrito.

Las partes y otras variantes de los antígenos de M. tuberculosis pueden generarse por síntesis o por recombinación. Polipéptidos sintéticos con menos de aproximadamente 100 aminoácidos, y generalmente menos de aproximadamente 50 aminoácidos, pueden obtenerse mediante técnicas bien conocidas por el experto familiarizado con el estado de la técnica. Dichos polipéptidos pueden sintetizarse, por ejemplo, utilizando cualquiera de las técnicas en fase sólida comercialmente disponibles, como el método de síntesis en fase sólida Merrifield, en el cual se añaden secuencialmente aminoácidos a una cadena de aminoácidos en crecimiento. Ver Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 55. 2149-2146, 1963. Existen equipos de síntesis automática de polipéptidos comercialmente disponibles, por ejemplo, los de Applied BioSystems, Inc., Foster City, CA, que pueden manejarse siguiendo las instrucciones del fabricante. Generalmente pueden prepararse variantes de un antígeno original mediante técnicas estándar de mutagénesis, como las mutagénesis por oligonucleótidos dirigidas a lugares específicos. También es posible eliminar secciones de la secuencia de DNA mediante técnicas estándar para poder preparar polipéptidos truncados.

Pueden prepararse fácilmente polipéptidos recombinantes conteniendo partes y/o variantes de un antígeno indígena a partir de una secuencia de DNA que codifica el polipéptido mediante diferentes técnicas bien conocidas por el experto familiarizado con el estado de la técnica. Por ejemplo, pueden concentrarse primero los sobrenadantes de sistemas hospedante/vector adecuados que segregan proteína recombinante en caldos de cultivo utilizando un filtro comercial. Después de la concentración puede aplicarse el concentrado a una matriz de purificación adecuada, por ejemplo, una matriz de afinidad o una resina de intercambio iónico. Por último, se pueden emplear una o varias etapas de HPLC de fase inversa para incrementar la purificación de una proteína recombinante.

Para expresar los polipéptidos recombinantes de la presente invención puede utilizarse un vector de expresión de entre los conocidos por el experto familiarizado con el estado de la técnica. La expresión puede conseguirse en cualquier célula hospedante adecuada, que haya sido transformada o "transfectada" con un vector de expresión conteniendo una molécula de DNA que codifica un polipéptido recombinante. Entre las células hospedantes adecuadas se encuentran las procariotas, la levadura y células eucariotas superiores. Las células hospedantes utilizadas preferentemente son E. coli, levadura o una línea de células de mamífero, por ejemplo, COS o CHO. Las secuencias de DNA expresadas de este modo pueden codificar antígenos naturalmente espontáneos, partes de antígenos naturalmente espontáneos, u otras variantes de los mismos.

En general, al margen del método de preparación, los polipéptidos divulgados aquí se preparan en forma básicamente pura. Los polipéptidos tienen, preferentemente, un grado mínimo de pureza del 80% aproximadamente, con mayor preferencia de al menos el 90% aproximadamente, siendo la preferencia máxima de al menos el 99% aproximadamente. En algunas realizaciones de preferencia, que se describen detalladamente más adelante, se incorporan los polipéptidos básicamente puros a los compuestos farmacéuticos o vacunas para su utilización en uno o varios de los métodos divulgados aquí.

Se divulgan polipéptidos constituidos por al menos una parte inmunógena de un antígeno soluble de M. tuberculosis conteniendo una de las siguientes secuencias N-terminales, o una variante de la misma que difiere únicamente en sustituciones conservadoras y/o modificaciones:

(a)

Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu; (ID. SEC. N° 120)

(b)

Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-AlaPro-Ser; (ID. SEC. N° 121)

(c)

Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-GluAla-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg; (ID. SEC. N° 122)

(d)

Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-TrpGly-Pro; (ID. SEC. N° 123)

(e)

Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-AlaVal; (ID. SEC. N° 124)

(f)

Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro; (ID. SEC. N° 125)

(g)

Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-AlaSer-Pro-Pro-Ser, (ID. SEC. N° 126)

(h)

Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-AspThr-Gly; (ID. SEC. N° 127)

(i)

Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-GinLeu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-ValSer-Phe-Ala-Asn; (ID. SEC. N° 128)

(j)

Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-lle-Lys-Val-Thr-AspAla-Ser, (ID. SEC. N° 134)

(k)

Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-ThrAla-Asp; (ID. SEC. N° 135) o

(l)

Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-GlnAla-Gly; (ID. SEC. N° 136)

donde Xaa puede ser cualquier aminoácido, preferentemente un resto de cisteína. En ID. SEC. N° 52 se provee una secuencia de DNA que codifica el antígeno identificado arriba como (g), y en ID. SEC. N° 53 se provee el poli- péptido codificado por ID. SEC. N° 52. En ID. SEC. N° 101 se provee una secuencia de DNA que codifica el antígeno definido arriba como (a); su secuencia deducida de aminoácido se provee en ID. SEC. N° 102. En ID. SEC. N° 24 se provee una secuencia de DNA correspondiente al antígeno (d) arriba indicado, en ID. SEC. N° 25 una secuencia de DNA correspondiente al antígeno (c) y en SEC No. 99 una secuencia de DNA correspondiente al antígeno (i); en ID. SEC. N° 100 se provee su secuencia deducida de aminoácido. Asimismo se divulgan polipéptidos constituidos por al menos una parte inmunógena de un antígeno de M. tuberculosis teniendo una de las siguientes secuencias N-terminales, o una variante de la misma que difiere únicamente en sustituciones conservadoras y/o modificaciones:

(m)

Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (ID. SEC. N° 137) o

(n)

Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe; (ID. SEC. N° 129)

donde Xaa puede ser cualquier aminoácido, preferentemente un resto de cisteína.

Asimismo se divulgan polipéptidos constituidos por al menos una parte inmunógena de un antígeno soluble de M. tuberculosis (o una variante de dicho antígeno) constituido por una o varias de las secuencias de aminoácido codificadas por (a) las secuencias de DNA correspondientes a ID. SEC. Nos.: 1,2,4-10,13-25 y 52; (b) los complementos de dichas secuencias de DNA, o (c) secuencias de DNA básicamente homólogas de una secuencia en (a) o (b).

También se divulgan polipéptidos que tienen al menos una parte inmumógena de un antígeno de M. tuberculosis (o una variante de un antígeno de ese tipo), que puede ser soluble o insoluble y tiene una o varias de las secuencias de aminoácido codificadas por (a) las secuencias de DNA de ID. SEC. Nos.: 26-51, (b) los complementos de dichas secuencias de DNA o (c) las secuencias de DNA básicamente homólogas de una secuencia en (a) o (b).

En las divulgaciones anteriores los antígenos de M. tuberculosis incluyen variantes codificadas por secuencias de DNA que son básicamente homólogas de una o varias de las secuencias de DNA enumeradas aquí. "Homología básica", como se utiliza aquí, se refiere a secuencias de DNA capaces de hibridarse en condiciones moderadamente rigurosas. Entre las condiciones moderadamente rigurosas se encuentra el prelavado en una solución de 5X SSC, 0,5% SDS, 1,0 mM EDTA (pH 8,0); la hibridación a 50°C-65°C, 5X SSC, durante la noche o, en el caso de homología de especies cruzadas, a 45°C, 0,5X SSC; seguida de dos lavados a 65°C durante 20 minutos (conteniendo 2X SSC, 0,5X SSC y 0,2X SSC cada una 0,1% de SDS). Este tipo de secuencias de DNA de hibridación también están dentro del ámbito de la presente invención, como también lo están las secuencias de nucleótido que, debido al deterioro del código, codifican un polipéptido inmunógeno codificado por una secuencia de DNA hibridante.

Aquí se divulgan proteínas de fusión conteniendo el polipéptido de la invención o, como alternativa, un polipéptido de la presente invención y un antígeno de M. tuberculosis conocido, como el antígeno 38 kD descrito anteriormente o el ESAT-6 (ID. SEC. Nos. l03 y 104), junto con variantes de dichas proteínas de fusión. Las proteínas de fusión de la presente invención pueden tener también un péptido conector entre el primer y el segundo polipéptido.

Se construye una secuencia de DNA que codifica una proteína de fusión de la presente invención mediante las conocidas técnicas de recombinación de DNA para ensamblar secuencias de DNA separadas que codifican el primer y segundo polipéptido en un vector de expresión adecuado. El extremo 3' de una secuencia de DNA que codifica el primer polipéptido está ligado, con o sin péptido conector, al extremo 5' de una secuencia de DNA que codifica el segundo polipéptido, de modo que los marcos de lectura de las secuencias están en fase para permitir la traducción mRNA de las dos secuencias de DNA en una única proteína de fusión, que conserva la actividad biológica del primer y el segundo polipéptido.

Puede utilizarse una secuencia de un péptido conector para separar el primer y segundo polipéptido a una distancia suficiente que garantice que cada polipéptido se pliegue a su estructura secundaria y terciaria. Una secuencia de péptido conector de este tipo se incorpora a la proteína de fusión mediante técnicas estándar bien conocidas en el estado de la técnica. Pueden elegirse secuencias de péptido conector adecuadas basándose en los factores siguientes: (1) su capacidad para adoptar una conformación flexible extendida; (2) su incapacidad para adoptar una estructura secundaria que pueda interactuar con epitopos funcionales en el primer y segundo polipéptido; y (3) la ausencia de restos hidrófobos o con carga eléctrica que puedan reaccionar con los epitopos funcionales del polipéptido. Las secuencias de péptido conector preferidas contienen restos Gly, Asn y Ser. También pueden utilizarse en la secuencia del péptido conector otros aminoácidos prácticamente neutros como Thr y Ala. Entre las secuencias de aminoácido que pueden ser útiles como conector se encuentran las divulgadas en Maratea et al., Gene 40:39-46, 1985; Murphy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:8258-8262, 1986; patente U.S. n° 4.935.233 y patente U.S. n° 4.751.180. La secuencia del conector puede tener una longitud de 1 a aproximadamente 50 aminoácidos. No se necesitan secuencias de péptido cuando el primer y segundo polipéptido cuentan con regiones de aminoácido N-terminal no fundamentales, que pueden utilizarse para distanciar los dominios funcionales y evitar el impedimento estérico.

Las secuencias de DNA ensambladas están conectadas funcionalmente a elementos reguladores de transcripción o traducción. Los elementos reguladores responsables de la expresión del DNA se encuentran únicamente en 5' de la secuencia DNA que codifica los primeros polipéptidos. Análogamente, los cordones de parada requeridos para detener las señales de terminación de traducción y transcripción se encuentran únicamente en 3' de la secuencia de DNA que codifica el segundo polipéptido.

También se divulgan métodos de utilización de uno o varios de los polipéptidos o proteínas de fusión (o moléculas de DNA que codifican dichos polipéptidos) arriba mencionados para inducir en un paciente inmunidad de protección frente a la tuberculosis. El término "paciente", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a cualquier animal de sangre caliente, preferentemente un animal racional. Un paciente puede estar afectado por una enfermedad, o puede estar libre de enfermedad y/o infección detectables. En otras palabras, la inmunidad de protección se puede inducir para prevenir o para tratar la tubérculosis.

En estos métodos, el polipéptido, la proteína de fusión o la molécula de DNA se encuentra generalmente en un compuesto farmacéutico y/o una vacuna. Los compuestos farmacéuticos pueden contar con uno o varios polipéptidos, cada uno de los cuales puede tener una o varias de las secuencias (o variantes de las mismas) arriba indicadas, y un excipiente fisiológicamente aceptable. Las vacunas pueden contar con uno o varios de los polipéptidos arriba indicados y un potenciador de respuesta inmunológica no específico, como un adyuvante o un liposoma (al cual va incorporado el polipéptido). Este tipo de compuestos farmacéuticos y vacunas pueden contener también otros antígenos de la M. tuberculosis, bien dentro de un polipéptido combinado o dentro de un polipéptido independiente.

Como alternativa, una vacuna puede contener DNA que codifica uno o varios polipéptidos, como los descritos anteriormente, de modo que se genere el polipéptido in situ. En este tipo de vacunas puede estar el DNA dentro de un sistema de suministro de los varios conocidos por el experto familiarizado con el estado de la técnica, incluyendo los sistemas de expresión ácido-nucléico y los sistemas de expresión bacterianos y víricos. Los sistemas de expresión ácido nucléicos apropiados contienen las secuencias de DNA necesarias para la expresión en el paciente (por ejemplo, un promotor adecuado y una señal de terminación). Los sistemas de suministro bacterianos comprenden la administración de una bacteria (por ejemplo, Bacillus-Calmette-Guerrin), que exprese una parte inmunógena del polipéptido en la superficie de su célula. En una realización preferida de la invención, puede introducirse el DNA utilizando un sistema de expresión vírico (por ejemplo, vaccinia u otros virus de la viruela, retrovirus, o adenovirus), el cual puede comprender la utilización de un virus competente de replicación no patógeno (defectuoso). Las técnicas de introducción de DNA en dichos sistemas de expresión son bien conocidas por el experto familiarizado con el estado de la técnica. El DNA también puede estar "desnudo", como se describe, por ejemplo, en Ulmer et al., Science 259:1745-1749, 1993 y se reseña en Cohen, Science 259:1691-1692, 1993. La admisión de DNA desnudo puede aumentarse recubriendo el DNA con perlas biodegradables, que se transportan eficazmente al interior de las células.

Se divulga asimismo que una vacuna DNA del tipo descrito puede administrarse simultáneamente o de modo secuencial con un polipéptido de la presente invención o un antígeno conocido de M. tuberculosis como el antígeno 38 kD descrito anteriormente. Por ejemplo, a la administración de DNA que codifica un polipéptido de la presente invención, "desnudo" o en un sistema de suministro como se ha descrito anteriormente, puede seguir la administración de un antígeno para potenciar la acción inmunógena de la vacuna.

Las vías y frecuencia de administración, así como la dosificación, variarán de un individuo a otro y pueden ir paralelas a las utilizadas actualmente en la inmunización con BCG. En general, los compuestos farmacéuticos y las vacunas pueden administrarse por inyección (por ejemplo, intracutánea, intramuscular, intravenosa o subcutánea), a través de la nariz (por ejemplo, por aspiración) o por vía oral. Pueden suministrarse entre 1 y 3 dosis durante un periodo de 1-36 semanas. Se administran preferentemente 3 dosis a intervalos de 3-4 meses, y después pueden administrarse dosis de refuerzo periódicamente. Para determinados pacientes puede ser apropiado utilizar protocolos alternativos. Una dosis adecuada es una cantidad de polipéptido o DNA que, cuando se administra del modo descrito, es capaz de provocar en un paciente inmunizado una respuesta inmune suficiente para protegerle de la infección por M. tuberculosis durante al menos 1-2 años. En general, la cantidad de polipéptido presente en una dosis (o generada in situ por el DNA en una dosis) varía entre aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg. de hospedante, habitualmente entre aproximadamente 10 \mug y aproximadamente 1 mg, preferiblemente entre aproximadamente 100 pg y aproximadamente 1 \mug. La cantidad de las dosis adecuada varía con el tamaño del paciente, pero está habitualmente entre aproximadamente 0,1 ml y 5 ml.

Si bien puede utilizarse en el compuesto farmacéutico de la presente invención cualquier excipiente apropiado conocido por el experto familiarizado con el estado de la técnica, el tipo de excipiente varía con el modo de administración. En caso de administración parenteral, como la inyección subcutánea, el excipiente contiene preferentemente agua, solución salina, alcohol, una grasa, una cera o un sistema amortiguador. En caso de administración oral puede utilizarse cualquiera de los excipientes anteriores o un excipiente sólido como manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, talco, celulosa, glucosa, sacarosa y carbonato de magnesio. También pueden utilizarse microesferas biodegradables (por ejemplo, galacturo poliláctico) como excipientes en los compuestos farmacéuticos de la presente invención. Se divulgan microesferas biodegradables apropiadas, por ejemplo, en las patentes USA n° 4.897.268 y 5.075.109.

En las vacunas de la presente invención pueden utilizarse distintos adyuvantes para la potenciación no específica de respuesta inmune. La mayoría de los adyuvantes contienen una sustancia destinada a proteger al antígeno del catabolismo rápido, por ejemplo, hidróxido de aluminio o aceite mineral, y un estimulante no específico de respuestas inmunes como el lípido A, la Bortadella pertussis o el Mycobacterium tuberculosis. Los adyuvantes apropiados se comercializan como, por ejemplo, Adyuvante Incompleto de Freund y Adyuvante Completo de Freund (Laboratorios Difco) y Adyuvante Merck 65 (Merck and Company, Inc., Rahway, NJ). Otros adyuvantes adecuados incluyen el alumbre, las microesferas biodegradables, el lípido A monofosforilo y el quil A.

Asimismo se divulgan aquí métodos de utilización de uno o varios de los polipéptidos descritos anteriormente para diagnosticar la tuberculosis mediante un ensayo cutáneo. Un "ensayo cutáneo" como los utilizados aquí es cualquier ensayo realizado directamente en un paciente, en el que se mide una reacción de hipersensibilidad retardada (DTH) (por ejemplo, en forma de inflamación, enrojecimiento o dermatitis) después de una inyección intradérmica de uno o varios polipéptidos como los descritos anteriormente. Esta inyección puede llevarse a cabo mediante el uso de cualquier dispositivo apropiado y suficiente para poner en contacto el polipéptido o polipéptidos con las células dérmicas del paciente, por ejemplo, una jeringa de tuberculina o una jeringa de 1 ml. La reacción se mide preferentemente al menos 48 horas después de la inyección, con mayor preferencia después de 48-72 horas.

La reacción DTH es una respuesta inmune por intermedio de las células, que es mayor en los pacientes que han estado expuestos previamente al antígeno de ensayo (es decir a la parte inmunógena del polipéptido utilizado o a una variante de ésta). La respuesta puede medirse visualmente utilizando una regla. En general se considera una respuesta como positiva cuando su medida es superior a aproximadamente 0,5 cm de diámetro, preferentemente superior a aproximadamente 1,0 cm de diámetro, indicando la existencia de una infección por tuberculosis, que puede manifestarse o no como enfermedad activa.

Para su utilización en un ensayo cutáneo el polipéptido de la presente invención se formula preferentemente en forma de compuesto farmacéutico que contiene un polipéptido y un excipiente fisiológicamente aceptable, como se ha descrito anteriormente. Dichos compuestos contienen habitualmente uno o varios de los polipéptidos anteriores en una cantidad que varía entre aproximadamente 1 \mug y aproximadamente 100 \mug, preferentemente entre aproximadamente 10 4 \mug y aproximadamente 50 \mug en un volumen de 0,1 ml. El excipiente utilizado preferentemente en este tipo de compuestos farmacéuticos es una solución salina con los conservantes adecuados, por ejemplo, fenol y/o Tween
80^{TM}.

A continuación se exponen unos ejemplos ilustrativos, sin exclusión de otros posibles.

Ejemplos

Ejemplo comparativo 1

Purificación y caracterización de polipéptidos a partir de filtrado de cultivo de M. tuberculosis

Este ejemplo expone la preparación de polipéptidos solubles de M. tuberculosis a partir de filtrado de cultivo. Salvo indicación en contrario, todos los porcentajes del ejemplo son en peso por unidad de volumen.

M. tuberculosis (H37Ra, ATCC n° 25177, o H37Rv, ATCC n° 25618) se cultivó en caldo de cultivo GAS estéril a 37°C durante catorce días. A continuación se filtró el caldo mediante vacío (dejando la mayoría de las células) a través de un filtro de 0,45 \mu al interior de un frasco de 2,5 l. Después se filtró el caldo a través de un filtro de 0,2 \mu al interior de un frasco de 4 l y se añadió NaN_{3} al filtrado de cultivo hasta una concentración de 0,04%. A continuación se colocaron los frascos en una cámara a 4°C.

Se concentró el filtrado de cultivo introduciéndolo en un depósito de 12 l tratado en autoclave y alimentando el filtrado al interior de una cuba de agitación Amicon de 400 ml enjuagada con etanol y conteniendo una membrana MWCO de 10.000 kDa. Se mantuvo la presión a 60 psi utilizando gas nitrógeno. Este procedimiento redujo el volumen de 12 l a aproximadamente 50 ml.

Se dializó el filtrado de cultivo al interior de una solución de bicarbonato amónico al 0,1% a través de una membrana de éster celulósico MWCO de 8.000 kDa, cambiando dos veces la solución de bicarbonato amónico. A continuación se determinó la concentración proteínica mediante un ensayo comercial BCA (Pierce, Rockford, IL).

El filtrado de cultivo dializado se liofilizó a continuación y se volvió a hacer una suspensión de los polipéptidos en agua destilada. Se dializaron los polipéptidos frente a 0,01 mM de 1,3-bis[tris(hidroximetil)-metilamino]propano, pH 7,5 (tampón bis-tris propano), condiciones iniciales de cromatografía de intercambio aniónico. El fraccionamiento se realizó por cromatografía de perfusión sobre gel en una columna de intercambio aniónico POROS 146 II Q/M de 4,6 x 100 mm (Perseptive BioSystems, Framingham, MA) equilibrada a pH 7,5 en 0,01 mM de tampón bis-tris propano. Se eluyeron los polipéptidos con un gradiente lineal de 0-0,5 M de NaCl en el sistema amortiguador arriba mencionado. El eluyente de la columna se controló a una longitud de onda de 220 nm.

Las dotaciones de polipéptidos que eluyen de la columna de intercambio iónico se dializaron frente a agua destilada y se liofilizaron. El material resultante se disolvió en solución acuosa de ácido trifluoroacético (TFA) al 0,1% de pH 1,9 y los polipéptidos se purificaron en una columna Delta-Pak C18 (Waters, Milford, MA) de 300 Angstrom de tamaño de poro, 5 micras de tamaño de partícula y dimensiones 3,9 x 150 mm. La elución de los polipéptidos de la columna se llevó a cabo con un gradiente de dilución lineal de 060% de tampón (0,1% de TFA en acetonitrilo). El caudal unitario fue de 0,75 ml/minuto y el eluyente de HPLC se controló a 214 nm. Se recogieron fracciones conteniendo los polipéptidos eluidos para aumentar al máximo la pureza de las muestras individuales. Se obtuvieron aproximadamente 200 polipéptidos purificados.

A continuación se escrutaron los polipéptidos purificados en relación con su capacidad de inducción de proliferación de células T en preparados PBMC. Las células PBMC de donantes encontrados positivos al ensayo cutáneo con PPD y cuyas células T muestran una proliferación como respuesta al PPD se cultivaron con proteínas solubles crudas de MTB en un caldo conteniendo RPMI 1640 con un suplemento del 10% de suero humano de dotación y 50 \mug/ml de gentamicina. Se añadieron polipéptidos purificados por duplicado a concentraciones de 0,5 a 10 \mug/ml. Tras seis días de cultivo en placas de 96 cápsulas de fondo redondo en un volumen de 200 \mul se extrajeron 50 \mul de caldo de cada cápsula para la determinación de los niveles de IFN-\gamma, como se describe más adelante. A continuación se señalaron las placas con 1 \muCi/cápsula de timidina tritiada durante otras 18 horas, se recogieron y se determinó la absorción de tritio mediante un contador de gas por centelleo. Se consideraron positivas las fracciones con una proliferación en ambas réplicas tres veces mayor que la proliferación observada en células cultivadas en caldo de cultivo solo.

IFN-\gamma se midió mediante un ensayo inmunosorbente de unión enzimática (ELISA). Las placas ELISA se revistieron con un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido a IFN-\gamma humano (PharMingen, San Diego, CA) en PBS durante cuatro horas a temperatura ambiente. Las cápsulas se inactivaron a continuación tratando con PBS conteniendo 5%(p/v) de leche desnatada en polvo durante 1 hora a temperatura ambiente. A continuación se lavaron las placas seis veces en PBS/0,2% TWEEN-20 y las muestras diluidas en relación 1:2 en caldo de cultivo de las placas ELISA se incubaron durante la noche a temperatura ambiente. Se volvieron a lavar las placas y se añadió a cada cápsula un suero policlonal de conejo con IFN-\gamma antihumano diluido 1:3000 en PBS/10% de suero normal de cabra. A continuación se incubaron las placas durante dos horas a temperatura ambiente, se lavaron y se añadió IgG anticonejo de rábano picante ligado mediante peroxidasa (Sigma Chemical So., St. Louis, MO) a una dilución 1:2000 en PBS/5% de leche desnatada en polvo. Después de otra incubación de dos horas a temperatura ambiente se lavaron las placas y se añadió substrato TMB. Se detuvo la reacción después de 20 min. con ácido sulfúrico 1 N. Se determinó la densidad óptica a 450 nm utilizando 570 nm como longitud de onda de referencia. Se consideraron positivas las fracciones resultantes en ambas réplicas con una DO dos veces mayor que la DO promedio de las células cultivadas únicamente en caldo de cultivo, más 3 desviaciones estándar.

Para secuenciar se secaron los polipéptidos individualmente en filtros de fibra de vidrio tratados con Biobrene™ (Perkin Elmer/Applied BioSystems Division, Foster City, CA). Los filtros con polipéptido se cargaron en un secuenciador de proteínas Perkin Elmer/Applied BioSystems Division Procise 492. Se secuenciaron los polipéptidos a partir del grupo amino terminal utilizando el procedimiento químico tradicional de Edman. Se determinó la secuencia de aminoácidos para cada polipéptido por comparación del tiempo de retención del derivado aminoácido de PTH con los estándares apropiados de PTH.

Mediante el procedimiento descrito más arriba se aislaron antígenos con las siguientes secuencias N-terminales:

(a)

Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala.-Ala- Leu; (ID. SEC. N° 54)

(b)

Ala-Val-Glu-Ser-Gly.-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser; (ID. SEC. N° 55)

(c)

Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg; (ID. SEC. N° 56)

(d)

Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro; (ID. SEC. N° 57)

(e)

Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val; (ID. SEC. N° 58)

(f)

Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro; (ID. SEC. N° 59)

(g)

Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Pro-Ala, (ID. SEC. N° 60) y

(h)

Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly; (ID. SEC. N° 61)

donde Xaa puede ser un aminoácido cualquiera.

Mediante una fase de purificación HPLC de microporo, suplementaria al procedimiento arriba descrito, se aisló un antígeno adicional. Concretamente, se purificaron 20 \mul de una fracción compuesta por una mezcla de antígenos procedentes de la etapa de purificación cromatográfica anteriormente descrita en una columna Aquapore C18 (Perkin Elmer/Applied BioSystems Division, Foster City, CA) con un tamaño de poro de 7 micras, dimensiones de la columna 1 mm x 100 mm en un Perkin Elmer/Applied Biosystems Division Model 172 HPLC. Se eluyeron fracciones desde la columna con un gradiente lineal de 1%/minuto de acetonitrilo (con 0,05% de TFA) en agua (0,05% TFA) y un caudal unitario de 80 pl/minuto. Se controló el eluyente a 250 nm. Se separó la fracción original en 4 picos principales más otros componentes más pequeños y se obtuvo un polipéptido con un peso molecular de 12.054 Kd (por espectrometría de masa) y la siguiente secuencia N-terminal:

(i)

Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Gln-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Asn-Leu-Ala-Asp-Pro-Asp-ValSer-Phe-Ala-Asp; (ID. SEC. N° 62).

Este polipéptido demostró tener capacidad de inducción de proliferación y producción de IFN-\gamma en preparados de PBMC utilizando los ensayos arriba descritos.

Se aislaron otros antígenos solubles a partir de filtrado de cultivo de M. tuberculosis del modo siguiente. El filtrado de cultivo de M. tuberculosis se preparó del modo descrito arriba. Después de dializar frente a tampón BisTris propano, a pH 5,5, se realizó el fraccionamiento por cromatografía de intercambio aniónico en una columna Poros QE de 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems) equilibrada en tampón Bis-Tris propano a pH 5,5. Se eluyeron los polipéptidos con un gradiente lineal de NaCl de 0-1,5 M en el sistema amortiguador mencionado y un caudal unitario de 10 ml/min. Se controló el eluyente de la columna a una longitud de onda de 214 nm.

Se recogieron las fracciones eluyentes procedentes de la columna de intercambio fónico y se sometieron a cromatografía de fase inversa en una columna Poros R2 de 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems). Los polipéptidos se eluyeron de la columna con un gradiente lineal de 0-100% de acetonitrilo (0,1% de TFA) y un caudal unitario de 5 ml/min. Se controló el eluyente a 214 nm.

Las fracciones que contenían los polipéptidos eluídos se liofilizaron y se volvió a hacer una suspensión en 80 pl de solución acuosa de TFA al 0,1%, sometiéndolas a continuación a cromatografía de fase inversa en una columna Vydac C4 de 4,6 x 150 mm (Western Analytical, Temecula, CA) con un gradiente lineal de 0-100% de acetonitrilo (0,1% de TFA) y un caudal unitario de 2 ml/min. El eluyente se controló a 214 nm.

La fracción con actividad biológica se separó en un pico principal más otros componentes más pequeños. La técnica de Western Blot en membrana PVDF correspondiente a dicho pico principal reveló tres bandas principales de pesos moleculares 14 Kd, 20 Kd y 26 Kd. Se comprobó que estos polipéptidos tenían las siguientes secuencias N-terminales, respectivamente:

(j)

Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-AspAla-Ser, (ID. SEC. N° 134)

(k)

Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-ThrAla-Asp; (ID. SEC. N° 135) y

(l)

Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-GlnAla-Gly; (ID. SEC. N° 136), donde Xaa puede ser un aminoácido cualquiera.

Utilizando los ensayos arriba mencionados se demostró que estos polipéptidos inducen la proliferación y la producción de IFN-\gamma en preparados de PBMC. Las fig. 1A y B ilustran los resultados de dichos ensayos utilizando preparados PBMC procedentes de un primer y segundo donante, respectivamente.

Las secuencias DNA que codifican los antígenos designados anteriormente como (a), (c), (d) y (g) se obtuvieron escrutando una biblioteca genómica de M. Tubérculosis mediante utilización de oligonucleótidos anómalos marcados en los extremos con ^{32}P correspondientes a la secuencia N-terminal y conteniendo cordón de elección de M. tuberculosis. El escrutinio realizado utilizando una sonda correspondiente al antígeno (a) arriba indicado identificó un clon con la secuencia provista en ID. SEC. N° 101. El polipéptido codificado por ID. SEC. N° 101 es provisto en ID. SEC. N° 102. El escrutinio realizado utilizando una sonda correspondiente al antígeno (g) arriba indicado identificó un clon con la secuencia provista en ID. SEC. N° 52. El polipéptido codificado por ID. SEC. N° 52 es provisto en ID. SEC. N° 53. El escrutinio realizado utilizando una sonda correspondiente al antígeno (d) arriba indicado identificó un clon con la secuencia provista en ID. SEC. N° 24 y el escrutinio realizado utilizando una muestra correspondiente al antígeno (c) arriba indicado identificó un clon con la secuencia provista en ID. SEC. N° 25.

Las secuencias de aminoácido anteriores se compararon con secuencias de aminoácido conocidas en el banco de genes utilizando el sistema ENA STAR. La base de datos estudiada contiene unas 173.000 proteínas y es una combinación de las bases de datos suiza y PIR junto con secuencias traducidas de proteínas (versión 87). No se detectaron homologías significativas con las secuencias de aminoácidos para los antígenos (a)-(h) y (l).

La secuencia de aminoácido para el antígeno (i) resultó ser homóloga de una secuencia de M. leprae. La secuencia completa de M. leprae se amplificó a partir de DNA genómico utilizando la secuencia obtenida de GENBANK. Luego se utilizó esta secuencia para escrutar la biblioteca de M. tuberculosis descrita más adelante en el ejemplo 2 y se obtuvo una copia de la secuencia homóloga completa de M. tuberculosis (ID. SEC. N° 99).

La secuencia de aminoácido para el antígeno (j) resultó ser homóloga de una proteína conocida de M. tuberculosis traducida de una secuencia de DNA. Según el leal saber y entender del inventor no se ha demostrado hasta el momento que esta proteína presente actividad estimuladora de las células T. La secuencia de aminoácido para el antígeno (k) resultó estar relacionada con una secuencia de M. leprae.

En los ensayos de proliferación y de IFN-\gamma descritos anteriormente, utilizando tres donantes con reacción positiva a PPD, los resultados correspondientes a los antígenos representativos provistos anteriormente se presentan en la tabla 1:

TABLA 1 Resultados de los ensayos de proliferación PBMC e IFN-\gamma

Secuencia	Proliferación	IFN-\gamma
(a)	+	-
(c)	+++	+++
(d)	++	++
(g)	+++	+++
(h)	+++	+++

En la tabla 1, las respuestas con un índice de estimulación (SI) entre 2 y 4 (comparado con células cultivadas únicamente en caldo de cultivo) se han calificado +, mientras que un SI de 4-8 ó 2-4 a una concentración de 1 \mug o inferior se ha calificado ++ y un SI superior a 8 se ha calificado +++. El antígeno de secuencia (i) posee un índice alto SI(+++) para un donante y un índice bajo SI(++ y +) para los otros dos donantes, tanto en el ensayo de proliferación como en el de IFN-\gamma. Estos resultados indican que estos antígenos son capaces de inducir proliferación y/o producción de interferón-\gamma.

Ejemplo comparativo 2

Utilización de sueros de paciente para aislar antígenos de M. tuberculosis

Este ejemplo ilustra el aislamiento de antígenos de lisato de M. tuberculosis por escrutinio con suero de individuos infectados con M. tuberculosis.

Se añadió M. tuberculosis H37Ra desecado (Difco Laboratories) a una solución de NP40 al 2%, y se homogeneizó y trató con sonido alternativamente tres veces. La suspensión resultante se centrifugó a 13.000 r.p.m. en tubos de microcentrífuga y el sobrenadante se pasó por un filtro de jeringa de 0,2 micras. El filtrado se fijó a perlas Macro Prep DEAE (BioRad, Hercules, CA). Se lavaron exhaustivamente las perlas con 20 mM de Tris de pH 7,5 y se eluyeron las proteínas fijadas con NaCl 1M. El producto de la elución con NaCl 1M se dializó durante la noche frente a 10 mM de Tris, pH 7,5. La solución dializada se trató con DNasa y RNasa en cantidad de 0,05 mg/ml durante 30 min. a temperatura ambiente y después con \alpha-D-manosidasa, 0,5 u/mg a pH 4,5 durante 3-4 horas a temperatura ambiente. Después de ajustar de nuevo a pH 7,5, se fraccionó el material mediante FPLC en una columna Bio Scale-Q-20 (BioRad). Se combinaron las fracciones en nueve dotaciones, se concentraron en un Centriprep 10 (Amicon, Beverly, MA) y después se escrutaron mediante técnica Western Blot para detectar la actividad serológica utilizando una dotación de suero de pacientes infectados por M. tuberculosis que no presentaba reacción inmune con otros antígenos de la presente invención. La fracción más reactiva se pasó por SDS-PAGE y se transfirió a PVDF. Se encontró una banda a aproximadamente 85 Kd llevando la secuencia:+

(m)

Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (ID. SEC. N° 137), donde Xaa puede ser cualquier aminoácido.

La comparación de esta secuencia con las del banco de genes descritas anteriormente no revelaron homologías significativas con secuencias conocidas.

Ejemplo 3 Preparación de secuencias de DNA que codifican antígenos de M. tuberculosis

Este ejemplo ilustra la preparación de secuencias de DNA que codifican antígenos de M. tuberculosis mediante el escrutinio de una biblioteca de expresión de M. tuberculosis con sueros obtenidos de pacientes infectados de M. tuberculosis, o con antisueros generados frente a antígenos solubles de M. tuberculosis.

A. Preparación de antígenos solubles de M. tuberculosis utilizando antisueros de conejo

Se aisló DNA genómico a partir de la cepa H37Ra de M. tuberculosis. El DNA se cortó de modo aleatorio y se utilizó para construir una biblioteca de expresión mediante el sistema de expresión Lambda ZAP (Stratagene, La Jolla, CA). Los antisueros de conejo se generaron frente a proteínas secretorias de las cepas de M. tuberculosis H37Ra, H37Rv y Erdman por inmunización de un conejo con sobrenadante concentrado de los cultivos de M. tuberculosis. Concretamente, el conejo se inmunizó primero por vía subcutánea con 200 \mug de antígeno de proteína en un volumen total de 2 ml conteniendo 10 \mug de dipéptido de muramilo (Calbiochem, La Jolla, CA) y 1 ml de adyuvante incompleto de Freund. Cuatro semanas después se reforzó la inmunización por inyección subcutánea al conejo de 100 \mug de antígeno en adyuvante incompleto de Freund. Por último se inmunizó el conejo por vía intravenosa pasadas cuatro semanas con 50 \mug de antígeno de proteína. Los antisueros se utilizaron para escrutar la biblioteca de expresión del modo descrito en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Se purificaron plaquetas bacteriófagas que expresaban antígenos inmunorreactivos. Se rescató el fagémido de las plaquetas y se dedujeron las secuencias de nucleótido de los clones de M. tuberculosis.

Se purificaron treinta y dos clones. De ellos, 25 representan secuencias que no han sido identificadas previamente en la M. tuberculosis humana. Se expresaron antígenos recombinantes y se utilizaron antígenos purificados en el análisis inmunológico descrito en el ejemplo 1. Las proteínas se indujeron por IPTG y se purificaron por elución sobre gel, como se describe en Skeiky et al., J. Exp. Med. 181:1527-1537, 1995. Las secuencias representativas de las moléculas de DNA identificadas en este escrutinio se encuentran en. los ID. SEC. Nos.: 1-25. Las correspondientes secuencias de aminoácido pronosticadas se muestran en los ID. SEC. Nos. 63-87.

Al comparar estas secuencias con secuencias conocidas del banco de genes utilizando las bases de datos anteriormente descritas se encontró que los clones, designados de aquí en adelante como TbRA2A, TbRA16, TbRA18 y TbRA29 (ID. SEC. Nos. 76,68,70,75), muestran cierta homología con secuencias previamente identificadas en el Mycobacterium leprae, pero no en el M. tuberculosis. Los TbRA11, TbRA26, TbRA28 y TbDPEP (ID. SEC. Nos. 65,73,74,53) han sido identificados previamente en M. tuberculosis. No se encontraron homologías significativas con TbRA1, TbRA3, TbRA4, TbRA9, TbRA10, TbRA13, TbRA17, TbRA19, TbRA29, TbRA32, TbRA36 y los clones superpuestos TbRA35 y TbRAl2 (ID. SEC. Nos. 63,77,81,82,64,67,69,71,75,78,80,79,66). El clon TbRa24 se superpone al clon TbRa29.

Los resultados de los ensayos PBMC de proliferación e interferón-\gamma realizados con antígenos recombinantes representativos, utilizando preparados de células T procedentes de distintos pacientes inmunes a M. tuberculosis, se presentan en las tablas 2 y 3, respectivamente.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 2 Resultados de proliferación de PBMC por antígenos solubles representativos

1

TABLA 3 Resultados de producción de interferón-\gamma en PBMC por antígenos solubles representativos

2

En las tablas 2 y 3 las respuestas con un índice de estimulación (SI) entre 1,2 y 2 (comparado con células cultivadas únicamente en caldo de cultivo) se han calificado +-, un SI de 2-4 se ha calificado +, un SI de 4-8 ó de 2-4 a una concentración de 1 \mug o inferior se ha calificado ++ y un SI superior a 8 se ha calificado +++. Además, en la figura adjunta se muestra el efecto de la concentración en la proliferación y la producción de interferón-\gamma para dos de los antígenos indicados más arriba. Tanto para la proliferación como para la producción de interferón-\gamma TbRa3 se calificó ++ y TbRa9 se calificó +.

Estos resultados indican que estos antígenos solubles pueden inducir la proliferación y/o la producción de interferón-\gamma en células Z derivadas de un individuo inmune a la M. tuberculosis.

B. Utilización de sueros de paciente en la identificación de DNA que codifica antígenos de M. tuberculosis

La biblioteca de DNA genómico descrita anteriormente y una biblioteca H37Rv adicional se escrutaron utilizando dotaciones de sueros obtenidos de pacientes con tubérculosis activa. Para preparar la biblioteca H37Rv se aisló DNA genómico de la cepa H37Rv de M. tuberculosis, se sometió a digestión parcial Sau3A y se utilizó para construir una biblioteca de expresión mediante el sistema de expresión Lambda Zap (Stratagene, La Jolla, Ca.). Para el escrutinio de la expresión se utilizaron tres dotaciones de sueros diferentes, cada uno de ellos conteniendo sueros obtenidos de tres individuos con enfermedad pulmonar o pleural declarada. Las dotaciones se denominaron TbL, TbM y TbH, refiriéndose a la reactividad relativa con lisato de H37Ra (es decir Tbl = reactividad baja, TbM = reactividad media, y TbH = reactividad alta) tanto en el formato ELISA como en el WB. También se utilizó una cuarta dotación de sueros de siete pacientes con tuberculosis pulmonar declarada. Todos los sueros demostraron una falta de aumento de la reactividad con la proteína recombinante de enlace con fosfato 38 kD de la cepa H37Ra de M. tuberculosis.

Todas las dotaciones se adsorbieron previamente con lisato de E. coli y se utilizaron para escrutar las bibliotecas de expresión H37Ra y H37Rv, como se describe en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Se purificaron plaquetas bacteriófagas que expresaban antígenos inmunorreactivos. Se rescató el fagémido de las plaquetas y se dedujeron las secuencias de nucleótido de los clones de M. tuberculosis.

Se purificaron treinta y dos clones. De ellos, 31 representan secuencias que no han sido identificadas previamente en la M. tuberculosis humana. En ID. SEC. Nos.: 26-51 y 105 se han provisto secuencias representativas de las moléculas de DNA identificadas. De estas, las TbH-8 y TbH-8-2 (ID. SEC. No.105) son secuencias de DNA no contiguas del mismo clon, y las TbH-4 (ID. SEC. No.43) y TbH-4-FWD (ID. SEC. No.44) son secuencias no contiguas del mismo clon. En los ID. SEC. Nos.: 88-92 se muestran secuencias de aminoácido para los antígenos, denominadas a partir de aquí Tb38-1, TbH-4, TbH-8, TbH-9 y TbH-12. La comparación de estas secuencias con secuencias conocidas del banco de datos utilizando las bases de datos identificadas arriba reveló que no existen homologías significativas con TbH-4, TbH-8, TbH9 y TbM-3, aunque se encontraron homologías débiles con TbH-9. Se encontró que TbH-12 era homóloga a una proteína antígena 34 kD identificada previamente en M. tuberculosis (Acc. N° S28515). Se encontró que Tb38-1 estaba localizado 34 parejas de bases más arriba del marco de lectura abierto para el antígeno ESAT-6 previamente identificado en M. bovis (Acc. n° U34848) y en M. tuberculosis (Sorensen et al., Infec. Immun. 63:1710-1717, 1995).

Se utilizaron sondas derivadas de Tb38-1 y TbH-9, ambas aisladas a partir de una biblioteca de H37Ra, para identificar clones en una biblioteca H37Rv. Tb38-1 se hibridó a Tb38-1F2, Tb38-1F3, Tb38-1F5 y Tb38-1F6 (ID. SEC. Nos. 112, 113,116,118 y 119). (ID. SEC. Nos.112 y 113 son secuencias no contiguas del clon Tb38-1F2). En Tb38-1F2 se dedujeron dos marcos de lectura abiertos; uno corresponde a Tb37FL (ID. SEC. N° 114), el segundo, una secuencia parcial, puede ser el homólogo de Tb38-1 y se le denomina Tb38-IN (ID. SEC. N° 115). La secuencia de aminoácido deducida de Tb381F3 se presenta en ID. SEC. No.117. Una sonda TbH-9 identificó tres clones en la biblioteca H37Rv: TbH-9-FL (ID. SEC. No.106), que puede ser el homólogo de TbH-9 (R37Ra), TbH-9-1 (ID. SEC. No.108), y TbH-9-4 (ID. SEC. No.110), todas las cuales son secuencias muy relacionadas con TbH-9. Las secuencias deducirlas de aminoácido para estos tres clones están presentes en ID. SEC. Nos. 107,109 y 111.

Los resultados de ensayos de células T realizados sobre Tb38-1, ESAT-6 y otros antígenos recombinantes representativos se incluyen a continuación en las tablas 4A, B y 5, respectivamente:

TABLA 4A Resultados de proliferación en PBMC por antígenos representativos

3

TABLA 4B Resultados de producción de interferón-\gamma en PBMC por antígenos representativos

4

TABLA 5 Resumen de respuestas de células T a antígenos representativos

5

Estos resultados indican que tanto los antígenos de M. tuberculosis de la invención como ESAT-6 pueden inducir proliferación y/o producción de interferón-\gamma en células T obtenidas de un individuo inmune a M. tuberculosis. Según el mejor saber y entender del inventor, ESAT-6 no ha demostrado estimular hasta la fecha respuestas inmunes en seres humanos.

Se construyó un juego de seis péptidos superpuestos cubriendo la secuencia de aminoácido del antígeno Tb38-1 utilizando el método descrito en el ejemplo 4. Las secuencias de estos péptidos, denominadas a partir de aquí pep 16, están provistas en ID. SEC. Nos. 93-98, respectivamente. Los resultados de los ensayos en células T utilizando dichos péptidos se muestran en las tablas 6 y 7. Los resultados confirman la existencia de epitopos de células T, y ayudan a localizarlos en Tb38-1, los cuales son capaces de inducir proliferación y producción de interferón-\gamma en células T obtenidas de un individuo inmune a M. tuberculosis.

TABLA 6 Resultados de proliferación en PBMC por péptidos Tb38-1

6

TABLA 7 Resultados de producción de interferón-\gamma en PBMC por péptidos Tb38-1

7

Ejemplo comparativo 4

Purificación y caracterización de un polipéptido a partir de un derivado proteínico purificado de tuberculina

Se aisló un polipéptido de M. tuberculosis a partir de un derivado proteínico purificado (PPD) de tuberculina del modo siguiente.

Se preparó PPD como se describe en la bibliografía con alguna modificación (Seibert, F. et al., derivado proteínico purificado de Tuberculina. Preparación y análisis de una cantidad grande para estándar. The American Review of Tuberculosis 44:9-25, 1941).

Se cultivó cepa Rv de M. tuberculosis durante 6 semanas en caldo sintético en frascos rotativos a 37°C. A continuación se calentaron los frascos conteniendo el cultivo bacteriano a 100°C en vapor de agua durante 3 horas. Se filtraron los cultivos en medio estéril utilizando un filtro de 0,22 \mu y se concentró la fase líquida 20 veces utilizando una membrana interceptora 3kD. Se precipitaron las proteínas una vez con solución de sulfato amónico al 50% y ocho veces con solución de sulfato amónico al 25%. Las proteínas resultantes (PPD) se fraccionaron por cromatografía en fase líquida inversa (RP-HPLC) utilizando una columna C18 (7,8 x 300 mm; Waters, Milford, MA) en un sistema Biocad HPLC (Perseptive Biosystems, Framingham, MA). Las fracciones se eluyeron de la columna con un gradiente lineal de 0-100% de tampón (0,1% de TFA en acetonitrilo). El caudal unitario fue de 10 ml/minuto y el eluyente se controló a 214 nm y 280 nm.

Se recogieron seis fracciones, se secaron, se hicieron suspensiones en PBS y se ensayaron por separado en cobayas infectados con M. tuberculosis para determinar la inducción de reacción de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH). Se encontró que una fracción inducía una fuerte reacción DTH y se volvió a fraccionar por RP-HPLC en una columna de microporos Vydac C18 (N° de CAT. 218TP5115) en un Perkin Elmer/Applied Biosystems Division Modelo 172 HPLC. Las fracciones se eluyeron con un gradiente lineal de 5-100% de tampón (0,05% TFA en acetonitrilo) y un caudal unitario de 80 \mul/minuto. El eluyente se controló a 215 nm. Se recogieron ocho fracciones y se ensayaron para determinar la inducción de DTH en cobayas infectados con M. tuberculosis. Se encontró una fracción que inducía una fuerte reacción DTH de aproximadamente 16 mm de induración. El resto de las fracciones no indujo DTH apreciable. La fracción positiva se sometió a electroforesis de gel SDS-PAGE y se determinó que contenía una banda de proteína simple de peso molecular 12 kD aproximadamente.

Este polipéptido, denominado a partir de aquí DPPD, se secuenció a partir del amino terminal utilizando un secuenciador de proteínas Perkin Elmer/Applied Biosystems Division Procise 492 según se ha descrito anteriormente y se encontró que tenía la secuencia N-terminal indicada en ID. SEC. No.:129. La comparación de esta secuencia con secuencias conocidas del banco de genes como se ha descrito anteriormente no reveló homologías conocidas. Se aislaron cuatro fragmentos cianógeno bromuro de DPPD y se encontró que tenían las secuencias indicadas en ID. SEC. Nos.:130-133.

Se ensayó la capacidad del antígeno DPPD para estimular la proliferación de PBMC humanas y la producción de IFN-\gamma como se ha descrito en el ejemplo 1. Como se aprecia en la tabla 8, DPPD estimula la proliferación y suscita la producción de grandes cantidades de IFN-\gamma; más que las suscitadas por PPD comercial.

TABLA 8 Resultados de los ensayos de proliferación e interferón-\gamma con DPPD

8

Ejemplo 5 Síntesis de polipéptidos sintéticos

Pueden sintetizarse polipéptidos en un sintetizador de péptidos Millipore 9050 utilizando química FMOC con activación HPTU (hexafluorofosfato de o-benzotriazol-N,N,N',N',-tetrametiluranio). Puede unirse una secuencia Gly-Cis-Gly al extremo amino del péptido para facilitar un método de conjugación o marcado del péptido. La disociación de los péptidos del soporte sólido puede llevarse a cabo utilizando la siguiente mezcla de disociación: ácido trifluoroacético:etanoditiol:tioanisol:agua:fenol (40:1:2:2:3). Después de disociar durante 2 horas pueden precipitarse los péptidos en éter metilbutírico frío. A continuación pueden disolverse los gránulos de péptido en agua conteniendo 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) y liofilizarse antes de la purificación por HPLC de fase inversa en columna C18. Para eluir los péptidos puede utilizarse un gradiente de 0%-60% de acetonitrilo (conteniendo 0,1% de TFA) en agua (conteniendo 0,1% de TFA). Después de la liofilización de las fracciones puras se pueden caracterizar los péptidos mediante espectrometría de masas con pulverización eléctrica y mediante análisis de aminoácidos.

(1) INFORMACIÓN GENERAL:

\vskip0.666000\baselineskip

(i)

SOLICITANTES: Corixa Corporation

\vskip0.666000\baselineskip

(ii)

TÍTULO DE LA INVENCIÓN: COMPUESTOS Y MÉTODOS PARA LA INMUNOTERAPIA Y DIAGNOSIS DE TUBERCULOSIS

\vskip0.666000\baselineskip

(iii)

NÚMERO DE SECUENCIAS: 137

\vskip0.666000\baselineskip

(iv)

DIRECCIÓN POSTAL:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

DIRECCIÓN: SEED and BERRY LLP

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

CALLE: 6300 Columbia Center, 701 Fith Avenue

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

POBLACIÓN: Seattle

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

ESTADO: Washington

\vskip0.333000\baselineskip

(E)

PAÍS: EEUU

\vskip0.333000\baselineskip

(F)

CP: 98104-7092

\vskip0.666000\baselineskip

(v)

FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

TIPO DE SOPORTE: Disco blando

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

ORDENADOR: IBM compatible

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

SOFTWARE: Patentin Release #1.0. Versión #1.30

\vskip0.666000\baselineskip

(vi)

DATOS DE SOLICITUD ACTUALES:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

NÚMERO DE SOLICITUD:

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

FECHA DE PRESENTACIÓN: 27-AGO-1996

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

CLASIFICACIÓN:

\vskip0.666000\baselineskip

(viii)

INFORMACIÓN RELATIVA AL ABOGADO/AGENTE:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

NOMBRE: Maki, David J.

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

NÚMERO DE REGISTRO: 31.392

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

NÚMERO DE REFERENCIA/EXPEDIENTE: 210121.411PC

\vskip0.666000\baselineskip

(ix)

INFORMACIÓN RELATIVA A LA TELECOMUNICACIÓN:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

TELÉFONO: (206) 622-4900

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TELEFAX: (206) 682-6031

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 1:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 766 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 1:

9

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 2:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 752 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 2:

10

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 3:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 813 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 3:

11

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 4:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 477 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA:ID. SEC. Nº:4:

12

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. Nº: 5:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 604 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. Nº: 5:

13

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 6:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 633 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 6:

\vskip1.000000\baselineskip

14

15

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 7:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1362 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 7:

\vskip1.000000\baselineskip

16

17

18

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 8:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1458 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 8:

\vskip1.000000\baselineskip

19

20

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 9:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 862 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. Nº: 9:

21

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 10:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 622 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 10:

\vskip1.000000\baselineskip

22

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 11:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.200 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 11:

23

24

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 12:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.155 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 12:

\vskip1.000000\baselineskip

25

26

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 13:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.771 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 13:

\vskip1.000000\baselineskip

27

28

29

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 14:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.058 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 14:

30

31

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 15:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 542 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 15:

\vskip1.000000\baselineskip

32

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 16:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 913 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 16:

33

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 17:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.872 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 17:

\vskip1.000000\baselineskip

34

35

36

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 18:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.482 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 18:

\vskip1.000000\baselineskip

37

38

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 19:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 876 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 19:

\vskip1.000000\baselineskip

39

40

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 20:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.021 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 20:

\vskip1.000000\baselineskip

41

42

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 21:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 321 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 21:

\vskip1.000000\baselineskip

43

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 22:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 373 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 22:

\vskip1.000000\baselineskip

44

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 23:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 352 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 23:

45

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 24:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 726 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 24:

\vskip1.000000\baselineskip

46

47

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 25:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 580 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 25:

\vskip1.000000\baselineskip

48

49

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 26:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 160 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 26:

\vskip1.000000\baselineskip

50

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 27:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 272 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 27:

\vskip1.000000\baselineskip

51

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 28:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 317 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 28:

\vskip1.000000\baselineskip

52

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 29:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 182 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 29:

\vskip1.000000\baselineskip

53

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 30:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 308 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 30:

54

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 31:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 267 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 31:

\vskip1.000000\baselineskip

55

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 32:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 189 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 32:

56

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 33:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 851 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 33:

\vskip1.000000\baselineskip

57

570

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 34:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 254 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 34:

\vskip1.000000\baselineskip

58

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 35

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 408 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 35:

59

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 36:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 181 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 36:

\vskip1.000000\baselineskip

60

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 37:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 290 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 37:

61

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 38:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 34 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 38:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.333000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATCCAGTGG CATGGNGGGT GTCAGTGGAA GCAT

\hfill

34

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 39:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 155 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 39:

\vskip1.000000\baselineskip

62

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 40:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 53 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 40:

\vskip1.000000\baselineskip

63

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 41:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 132 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 41:

\vskip1.000000\baselineskip

64

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 42:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 132 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N 42:

\vskip1.000000\baselineskip

65

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 43:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 702 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 43:

66

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 44:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 298 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 44:

67

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 45:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.058 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 45:

\vskip1.000000\baselineskip

68

69

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE E:L ID. SEC. N°: 46:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 327 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 46:

\vskip1.000000\baselineskip

70

\newpage

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 47:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 170 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 47:

\vskip1.000000\baselineskip

71

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 48:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 127 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 48:

\vskip1.000000\baselineskip

72

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 49:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 81 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 49:

\vskip1.000000\baselineskip

73

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 50:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 149 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 50:

\vskip1.000000\baselineskip

74

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 51:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 355 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 51:

\vskip1.000000\baselineskip

75

76

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 52:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 999 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 52:

77

78

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 53:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 332 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 53:

\vskip1.000000\baselineskip

79

80

800

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 54:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 54:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Xaa Asn Tyr Gly Gln Val}

\sac{Val Ala Ala Leu}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 55:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 55:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 56:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 56:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys}

\sac{Glu Gly Arg}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 57:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 57:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gln Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 58:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 14 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 58:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gln Gln Xaa Ala Val}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 59:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 13 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 59:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 60:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 17 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 60:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro}

\sac{Ala}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 61:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 61:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 62:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 62:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln Gln Thr Ser}

\sac{Leu Leu Asn Asn Leu Ala Asp Pro Asp Val Ser Phe Ala Asp}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 63:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 187 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 63:

90

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 64:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 148 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 64:

91

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 65:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 230 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 65:

\vskip1.000000\baselineskip

92

93

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 66:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 132 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 66:

\vskip1.000000\baselineskip

94

95

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 67:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 100 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 67:

\vskip1.000000\baselineskip

96

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 68:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 163 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 68:

97

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 69:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 344 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 69:

98

99

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE E:L ID. SEC. N°: 70:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 485 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 70:

\vskip1.000000\baselineskip

100

101

102

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 71:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 267 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 71:

\vskip1.000000\baselineskip

103

104

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 72:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 97 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 72:

\vskip1.000000\baselineskip

105

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 73:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 364 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 73:

\vskip1.000000\baselineskip

106

107

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 74:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 309 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 74:

\vskip1.000000\baselineskip

108

109

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 75:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 580 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 75:

\vskip1.000000\baselineskip

110

111

112

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 76:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 233 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 76:

\vskip1.000000\baselineskip

113

114

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 77:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 66 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 77:

\vskip1.000000\baselineskip

115

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 78:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 69 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. Nº: 78:

116

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 79:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 355 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 79:

\vskip1.000000\baselineskip

117

118

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 80:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 205 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 80:

119

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 81:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 286 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 81:

120

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 82:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 173 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 82:

\vskip1.000000\baselineskip

121

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 83:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 107 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 83:

122

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 84:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 125 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. Nº: 84:

\vskip1.000000\baselineskip

123

124

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 85:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 117 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 85:

\vskip1.000000\baselineskip

125

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 86:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 133 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 86:

126

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 87:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 88 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 87:

\vskip1.000000\baselineskip

127

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 88:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 95 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 88:

\vskip1.000000\baselineskip

128

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 89:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 166 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 89:

129

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 90:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 5 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 90:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Arg Ala Glu Arg Met}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 91:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 263 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 91:

131

\newpage

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 92:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 303 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 92:

\vskip1.000000\baselineskip

132

133

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 93:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 28 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 93:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gly Cys Gly Glu Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala Gln Glu Ala Gly Asn}

\sac{Phe Glu Arg Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gln Ile}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 94:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 94:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Gln Val Glu Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg}

\sac{Gly}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 95:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 95:

\newpage

\sa{Gly Cys Gly Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg Gly Ala}

\sac{Ala Gly Thr Ala Ala Gln Ala Ala Val Val Arg}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 96:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 96:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gly Cys Gly Gly Thr Ala Ala Gln Ala Ala Val Val Arg Phe Gln Glu}

\sac{Ala Ala Asn Lys Gln Lys Gln Glu Leu Asp Glu}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 97:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 97:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gly Cys Gly Ala Asn Lys Gln Lys Gln Glu Leu Asp Glu Ile Ser Thr}

\sac{Asn Ile Arg Gln Ala Gly Val Gln Tyr Ser Arg}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 98:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 28 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 98:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Gly Cys Gly Ile Arg Gln Ala Gly Val Gln Tyr Ser Arg Ala Asp Glu}

\sac{Glu Gln Gln Gln Ala Leu Ser Ser Gln Met Gly Phe}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 99:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 507 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 99:

\vskip1.000000\baselineskip

140

141

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 100:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 168 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 100:

142

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 101:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 500 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 101:

143

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 102:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 96 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 102:

\vskip1.000000\baselineskip

144

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 103:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 154 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 103:

\vskip1.000000\baselineskip

145

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 104:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 51 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 104:

\vskip1.000000\baselineskip

146

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 105:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 282 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 105:

147

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 106:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.565 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 106:

148

149

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 107:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 391 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 107:

150

151

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 108:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 259 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 108:

\vskip1.000000\baselineskip

152

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 109:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 86 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 109:

153

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 110:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.109 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 110:

\vskip1.000000\baselineskip

154

155

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 111:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 341 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 111:

\vskip1.000000\baselineskip

156

157

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 112:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 1.256 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 112:

\vskip1.000000\baselineskip

158

159

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 113:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 432 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 113:

\vskip1.000000\baselineskip

160

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 114:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 368 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 114:

\vskip1.000000\baselineskip

161

162

163

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 115:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 12 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 115:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Met Ala Glu Met Lys Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 116:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 396 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 116:

\vskip1.000000\baselineskip

164

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 117:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 80 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 117:

\vskip1.000000\baselineskip

165

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 118:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 387 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 118:

\vskip1.000000\baselineskip

166

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 119:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 272 parejas base

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido nucléico

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 119:

\vskip1.000000\baselineskip

167

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 120:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA: Simple

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 120:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gln Val}

\sac{Val Ala Ala Leu}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 121:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 121:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 122:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 122:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 123:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 123:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gln Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 124:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 14 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 124:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gln Gln Xaa Ala Val}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 125:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 13 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 125:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 126:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 17 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 126:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro}

\sac{Ser}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 127:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\newpage

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 127:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 128:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 128:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln Leu Thr Ser}

\sac{Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala Asn}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE El ID. SEC. N°: 129:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 129:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Pro Asp Pro His Gln Xaa Asp Met Thr Lys Gly Tyr Tyr Pro}

\sac{Gly Gly Arg Arg Xaa Phe}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 130:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 7 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 130:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Asp Pro Gly Tyr Thr Pro Gly}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 131:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 10 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(ix)

CARACTERÍSTICA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

OTRA INFORMACIÓN: /nota = "El segundo resto puede ser un Pro o un Thr"

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 131:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Xaa Xaa Gly Phe Thr Gly Pro Gln Phe Tyr}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 132:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 9 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(ix)

CARACTERÍSTICA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

OTRA INFORMACIÓN: /nota = "El tercer resto puede ser un Gln o un Leu"

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 132:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Xaa Pro Xaa Val Thr Ala Tyr Ala Gly}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 133:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 9 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 133:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Xaa Xaa Xaa Glu Lys Pro Phe Leu Arg}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 134:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 134:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Xaa Asp Ser Glu Lys Ser Ala Thr Ile Lys Val Thr Asp Ala Ser}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 135:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 135:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Gly Asp Thr Xaa Ile Tyr Ile Val Gly Asn Leu Thr Ala Asp}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE EL ID. SEC. N°: 136:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 136:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Ala Pro Glu Ser Gly Ala Gly Leu Gly Gly Thr Val Gln Ala Gly}

\vskip0.666000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN SOBRE E:L ID. SEC. N°: 137:

\vskip0.666000\baselineskip

(1)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.333000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 21 aminoácidos

\vskip0.333000\baselineskip

(B)

TIPO: Aminoácido

\vskip0.333000\baselineskip

(C)

TIPO DE CADENA:

\vskip0.333000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.666000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: ID. SEC. N°: 137:

\vskip1.000000\baselineskip

\sa{Xaa Tyr Ile Ala Tyr Xaa Thr Thr Ala Gly Ile Val Pro Gly Lys Ile}

\sac{Asn Val His Leu Val}

Claims (14)

1. Un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácido codificada por una secuencia de DNA de ID. SEC. No:4.

2. Una molécula de DNA que tiene una secuencia de núcleotido que codifica un polipéptido según la reivindicación 1.

3. Un vector de expresión que tiene una molécula de DNA según la reivindicación 2.

4. Una célula hospedante transformada con un vector de expresión según la reivindicación 3.

5. La célula hospedante de la reivindicación 4, caracterizada por estar seleccionada la célula hospedante del grupo que comprende E. coli, levadura y células de mamífero.

6. Una proteína de fusión que tiene: un polipéptido según la reivindicación 1 y TbH9; o un polipéptido según la reivindicación 1 y ESAT-6; o un polipéptido según la reivindicación 1 y Ra35.

7. Un compuesto farmacéutico constituido por:

un polipéptido según la reivindicación 1; o una molécula de DNA según la reivindicación 2; o una proteína de fusión según la reivindicación 6; y un excipiente fisiológicamente aceptable.

8. Una vacuna constituida por:

un polipéptido según la reivindicación 1; o una molécula de DNA según la reivindicación 2; o una proteína de fusión según la reivindicación 6; y un potenciador no específico de respuesta inmune.

9. Una vacuna según la reivindicación 8, caracterizada por ser el potenciador no específico de respuesta inmune un adyuvante.

10. Un compuesto farmacéutico según la reivindicación 7 para utilización en un método de inducción de inmunidad protectora en un paciente, comprendiendo dicho método la administración del compuesto farmacéutico al paciente.

11. Una vacuna según las reivindicaciones 8 ó 9 para utilización en un método de inducción de inmunidad protectora en un paciente, comprendiendo dicho método la administración de la vacuna al paciente.

12. Un compuesto con un polipéptido según la reivindicación 1 para utilización en un método de detección de tuberculosis en un paciente, comprendiendo dicho método:

(a) la puesta en contacto de células dérmicas de un paciente con uno o varios polipéptidos según la reivindicación 1, y

(b) la detección de una respuesta inmune en la piel del paciente y la consiguiente detección de tuberculosis en el paciente.

13. Un compuesto según la reivindicación 12, caracterizado por ser la respuesta inmune una induración.

14. Un equipo de diagnóstico constituido por:

(a) un polipéptido según la reivindicación 1; y

(b) un dispositivo suficiente para poner en contacto dicho polipéptido con las células dérmicas de un paciente.