CZ297406B6

CZ297406B6 - Polypeptid, DNA molekula, fúzní protein, farmaceutický prostredek a vakcína s jejich obsahem, expresní vektor, hostitelská bunka, prostredek pro detekci a diagnostický kit

Info

Publication number: CZ297406B6
Application number: CZ0062898A
Authority: CZ
Inventors: G. Reed@Steven; A. W. Skeiky@Yasir; C. Dillon@Davin; Campos-Neto@Antonio; Houghton@Raymond; H. Vedvick@Thomas; R. Twardzik@Daniel
Original assignee: Corixa Corporation
Priority date: 1995-09-01
Filing date: 1996-08-30
Publication date: 2006-12-13
Also published as: NO20070618L; JP4324597B2; DE69630457T2; EP1203817B1; NO20070621L; DE69637879D1; EP1203817A3; ES2262595T3; ES2324529T3; ES2271449T3; DE69636046T2; TR200901109T1; KR19990044347A; JP2001517069A; JP2009159982A; EP1347055B1; NO324372B1; JP4324596B2; BR9610262A; NZ319377A

Abstract

Je popsán polypeptid obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 66 nebo její imunogenní cást odélce alespon 9 aminokyselin, DNA molekula obsahující nukleotidovou sekvenci kódující tento polypeptid, expresní vektor obsahující DNA molekulu, hostitelská bunka transformovaná tímto expresním vektorem, farmaceutický prostredek s obsahem polypeptidu nebo DNA molekuly jako úcinné látky pro indukci protektivní imunity, vakcína obsahující uvedenou úcinnou látku a nespecifický zesilovac imunitní odpovedi, prostredek pro detekci tuberkulózy u pacienta a diagnostický kit, který obsahuje zmínený polypeptid a injekcní stríkacku umoznující kontaktování uvedeného polypeptidu s kozními bunkami pacienta.

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se obecně týká detekce, léčby a prevence infekce Mycobacterium tuberculosis. Vynález se přesněji týká polypeptidu obsahujícího aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 66 nebo její imunogenní část, DNA molekuly obsahující nukleotidovou sekvenci kódující tento polypeptid, expresní vektor obsahující DNA molekulu, hostitelské buňky transformované tímto expresním vektorem, fúzního proteinu obsahujícího uvedený polypeptid, farmaceutického prostředku s obsahem polypeptidu, DNA molekulu nebo fůzního proteinu jako účinné látky, vakcíny obsahující uvedenou účinnou látku, prostředku pro detekci tuberkulosy u pacienta a diagnostického kitu, který obsahuje zmíněný polypeptid.

Dosavadní stav techniky

Tuberkulóza je chronické infekční onemocnění, které je obyčejně způsobeno Mycobacterium tuberculosis. Je hlavním onemocněním v rozvojových zemích a stejně tak je narůstajícím problémem v rozvinutých oblastech světa, s asi 8 milióny nových případů a 3 milióny úmrtí za rok. Ačkoliv může být infekce asymptomatická po značně dlouhé časové období, nejčastěji se onemocnění manifestuje jako akutní plicní zánět, doprovázený horečkou a neproduktivním kašlem. Pokud není léčena, vede obvykle k závažným komplikacím a smrti.

Ačkoliv může být tuberkulóza obyčejně kontrolována za použití intenzivní antibiotické terapie, není takové léčba dostatečná pro prevenci šíření onemocnění. Infikovaní jedinci mohou být po určitou dobu asymptomatičtí, ale infekční. Kromě toho, ačkoliv je spolupráce nemocného při léčbě zásadní, je chování pacienta obtížně sledovatelné. Někteří pacienti nedokončí léčbu, což může vést k její nízké účinnosti a k vývoji rezistence na léky.

Inhibice šíření tuberkulózy vyžaduje účinnou vakcinaci a přesnou, časnou diagnostiku onemocnění. V současné době je vakcinace živou bakterií nejúčinnějším způsobem pro indukci protektivní imunity. Nejčastěji používanou mykobakterií je pro tento účel Bacillus Calmette-Guerin (BCG), avirulentní kmen Mycobacterium bovis. Nicméně, bezpečnost a účinnost BCG je zdrojem kontroverze některé země, jako například USA, nevakcinují populaci. Diagnóza je obyčejně provedena za použití kožního testu, který obsahuje intradermální expozice tuberculin PPD (přečištěný proteinový derivát). Antigen specifická odpověď T-buněk vede k měřitelné induraci v místě injekce po 48 - 72 hodinách po injekci, což ukazuje na expozici mykobakteriálním antigenům. Sensitivita a specificita tohoto testu jsou však problematické a jedinci vakcinovaní BCG nemohou být tímto testem odlišeni od infikovaných jedinců.

Ačkoliv bylo prokázáno, že makrofágy jsou hlavními efektorovými elementy v imunitě proti M. tuberculosis, jsou T-buňky převažujícími induktory takové imunity. Zásadní role T buněk v obraně proti infekci M. tuberculosis je doložena častým výskytem M. tuberculosis u pacientů s AIDS, díky depleci CD4 T buněk, která je spojena s infekcí virem lidské imunodeficience (HIV). Mycobacterium-reaktivní CD4 T buňky produkující ve značném množství interferongamma (IFN-τ), který, jak bylo prokázáno, spouští antimykobakteriální účinky makrofágů u myší. Ačkoliv je role IFN-τ u lidí méně jasná, ukazují studie, že 1,25-dihydroxy-vitamin D3, buď samostatně, nebo v kombinaci s IFN-τ nebo faktorem nekrosy nádorů alfa, aktivuje lidské makrofágy pro inhibici infekce M. tuberculosis. Kromě toho, je známo, že IFN-τ stimuluje lidské makrofágy k výrobě 1,25-dihydroxy vitaminu D3. Obdobně, bylo prokázáno, že IL-12 má významnou úlohu při stimulaci rezistence k infekci M. tuberculosis. Pro přehled imunologie infekce M. tuberculosis viz Chán a Kaufmann v „Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control“, Bloom (vyd.). ASM Press, Washington, D.C., 1994.

-1 CZ 297406 B6

V souladu s tím existuje v oboru potřeba vylepšené vakcíny a způsobů pro prevenci, léčbu a detekci tuberkulózy. Předkládaný vynález splňuje tyto potřeby a dále poskytuje s těmito potřebami související výhody.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je polypeptid obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 66 nebo její imunogenní část o délce alespoň 9 aminokyselin.

Předmětem tohoto vynálezu je dále DNA molekula obsahující nukleotidovou sekvenci kódující polypeptid, která je uvedena výše, zvláště obsahující nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 4.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž expresní vektor obsahující DNA molekulu, která je uveden výše.

Předmětem tohoto vynálezu je také hostitelská buňka transformovaná expresní vektorem, který je uveden výše, přičemž účelně hostitelská buňka je vybrána ze souboru skládajícího se z E. coli, kvasinek a savčích buněk.

Předmětem tohoto vynálezu je též farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje polypeptid nebo DNA molekulu, které jsou popsány výše, a fyziologicky přijatelný nosič. Farmaceutický prostředek se účelně používá pro indukci protektivní imunity.

Předmětem tohoto vynálezu je stejně tak vakcína obsahující polypeptid nebo DNA molekulu, které jsou popsány výše, a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi. S výhodou jde o vakcínu, kde nespecifickým zesilovačem imunitní odpovědi je adjuvans. Vakcína se účelně používá pro indukci protektivní imunity.

Předmětem tohoto vynálezu je v neposlední řadě prostředek pro detekci tuberkulózy u pacienta (a) kontaktování kožních buněk pacienta s jedním nebo více polypeptidy podle nároku 1; a (b) detekováním imunitní odpovědi kůže pacienta a tak detekováním tuberkulózy u pacienta,.

jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje polypeptid zde popsaný v úvodu části označené jako podstata vynálezu. Podle výhodného provedení jde o prostředek pro detekci tuberkulózy u pacienta, kde imunitní odpovědí je indurace, a jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje polypeptid zde popsaný v úvodu části označené jako podstata vynálezu.

Předmětem tohoto vynálezu je konečně diagnostický kit, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje:

(a) polypeptid zde popsaný v úvodu části označené jako postata vynálezu; a (b) injekční stříkačku umožňující kontaktování uvedeného polypeptidu s kožními buňkami pacienta.

Dále se uvádějí podrobnější údaje o předmětném řešení v širších souvislostech.

Tento vynález tedy poskytuje sloučeniny a způsoby pro prevenci a diagnostiku tuberkulózy.

V jednom aspektu jsou poskytnuty polypeptidy obsahující imunogenní část solubilního antigenu M. tuberculosis, nebo varianty takového antigenu, která se liší pouze konzervativní substitucí

-2CZ 297406 B6 a/nebo modifikací. V jednom obecnějším provedení tohoto aspektu má solubilní antigen tyto Nkoncové sekvence:

(a) Asp-Pro-V al-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly·-

Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu; (SEQ ID No. 120) (b) Ala-Val-Giu-Ser-GIy-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-

Ser;(SEQ ID No. 121) (c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-

A!a-Lys-GIu-Gly-Arg; (SEQ ID No. 122) (d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-GIy-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-AIa-Trp-Gly-

Pro; (SEQ ID No. 123) (e) Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val;

(SEQ ID No. 124) (f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro; (SEQ ID.

No. 125) (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-

Pro-Pro-Ser; (SEQ ID No. 126) (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Giy-Thr-Asp-Thr-

Gly; (SEQ ID No. 127) (i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-

Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-AIa-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-PheAla-Asn; (SEQ ID No. 128) (j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala··

Ser; (SEQ ID No. 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-I!e-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-AIa-

Asp; (SEQ ID No. 135) or (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-GIn-Ala-

Gly; (SEQ ID No. 136) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.

V souvisejícím aspektu jsou poskytnuty polypeptidy obsahující imunogenní část solubilního antigenu M. tuberculosis, nebo varianty takového antigenu, která se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací, kde antigen má jednu z následujících N-koncových sekvencí:

(m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-

Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEQ ID No. 137) oř (n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-TyrTyr-Pro-Gly-GIy-Arg-Arg-Xaa-Phe; (SEQ ID No. 129) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.

V jiném obecnějším provedení obsahuje antigen aminokyselinovou sekvencí kódovanou DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se ze SEQ ID NO: 1, 2, 4-10, 13-25, 52, 99 a 101, komplementů uvedených sekvencí a DNA sekvencí, které hybridizují na sekvence SEQ ID NO: 1, 2, 4-10, 13-25, 52, 99 a 101 nebo komplementy uvedených sekvencí za podmínek střední přísnosti.

V souvisejícím aspektu polypeptidy obsahují imunogenní část antigenu M. tuberculosis, nebo varianty takového antigenu, která se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací, kde antigen obsahuje aminokyselinovou sekvenci kódovanou DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se ze SEQ ID NO: 26-51, komplementů uvedených sekvencí a DNA sekvencí, které hybridizují na sekvence SEQ ID NO: 26-51 nebo komplementy uvedených sekvencí za podmínek střední přísnosti.

V souvisejícím obecnějším aspektu jsou poskytnuty DNA sekvence kódující výše uvedené polypeptidy, expresní vektory obsahující tyto DNA sekvence a hostitelské buňky transformované nebo transfektované takovými expresními vektory.

V jiném obecnějším aspektu jsou poskytnuty fúzní proteiny obsahující první a druhý polypeptid, jak jsou uvedeny výše, nebo alternativně polypeptid uvedený výše a známý antigen M. tuberculosis.

V dalším aspektu je poskytnut farmaceutický prostředek (přípravek), který z obecnějšího hlediska obsahují jeden nebo více z výše uvedených polypeptidů nebo DNA molekulu kódující takové polypeptidy, a fyziologicky přijatelný nosič. Dalším aspektem je vakcína obsahující jeden nebo více polypeptidů, jak jsou popsány výše, a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi, spolu s vakcínami obsahujícími jednu nebo více DNA sekvencí kódujících takové polypeptidy a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi.

V ještě jiném aspektu jsou poskytnuty způsoby pro indukci protektivní imunity u pacienta, ve kterých je pacientovi podáno účinné množství alespoň jednoho z polypeptidů.

V ještě jiném aspektu jsou poskytnuty způsoby a diagnostické kity pro detekci tuberkulózy u pacienta. Způsoby spočívají v kontaktování kožních buněk pacienta s jedním nebo více z uvedených polypeptidů a v detekci imunitní odpovědi kůže pacienta. Diagnostické kity obsahují jeden nebo více z výše uvedených polypeptidů v kombinaci s přístrojem dostatečným pro kontaktování polypeptidů s buňkami kůže pacienta. Přitom zmíněným přístrojem je obvykle injekční stříkačka.

Tyto a další aspekty budou jasné z následujícího podrobného popisu a připojených obrázků. Všechny zde citované odkazy jsou zde uvedeny jako odkaz ve své úplnosti.

-4CZ 297406 B6

Popis obrázků na výkresech

Obrázek 1A a 1B ilustrují stimulaci proliferace a produkce IFN-gamma (dále τ) v T-buňkách odvozených od prvního a druhého M. tuberculosis-imunního dárce, za použití 14 kDa, 20 kDa 5 a 26 kDa antigenů, kde tato stimulace je popsána v příkladu 1.

Obrázek 2 ilustruje stimulaci proliferace a produkce IFN-τ v T-buňkách odvozených od M. tuberculosis-imunního jedince za použití dvou reprezentativních polypeptidů TbRa3 a TbRa9.

SEQ	ID	NO:	1	je	DNA	sekvence	TbRal.
SEQ	ID	NO:	2	je	DNA	sekvence	TbRal0.
SEQ	ID	NO:	3	je	DNA	sekvence	TbRal1.
SEQ	ID	NO:	4	je	DNA	sekvence	TbRal2.
SEQ	ID	NO:	5	je	DNA	sekvence	TbRal3.
SEQ	ID	NO:	6	je	DNA	sekvence	TbRal6.
SEQ	ID	NO:	7	je	DNA	sekvence	TbRal7.
SEQ	ID	NO:	8	je	DNA	sekvence	TbRal8.
SEQ	ID	NO:	9	je	DNA	sekvence	TbRal9.

SEQ	ID	NO:	10	je	DNA	sekvence	TbRa24.
SEQ	ID	NO:	11	je	DNA	sekvence	TbRa26.
SEQ	ID	NO:	12	je	DNA	sekvence	TbRa28.
SEQ	ID	NO:	13	je	DNA	sekvence	TbRa29.
SEQ	ID	NO:	14	je	DNA	sekvence	TbRa2A.
SEQ	ID	NO:	15	je	DNA	sekvence	TbRa3.
SEQ	ID	NO:	16	je	DNA	sekvence	TbRa32.
SEQ	ID	NO:	17	je	DNA	sekvence	TbRa35.
SEQ	ID	NO:	18	je	DNA	sekvence	TbRa36.
SEQ	ID	NO:	19	je	DNA	sekvence	TbRa4.
SEQ	ID	NO:	20	je	DNA	sekvence	TbRa9.
SEQ	ID	NO:	21	je	DNA	sekvence	TbRaB.
SEQ	ID	NO:	22	je	DNA	sekvence	TbRaC.
SEQ	ID	NO:	23	je	DNA	sekvence	TbRaD.
SEQ	ID	NO:	24	je	DNA	sekvence	YYWCPG.
SEQ	ID	NO:	25	je	DNA	sekvence	AAMK.
SEQ	ID	NO:	26	je	DNA	sekvence	TbL-23.
SEQ	ID	NO:	27	je	DNA	sekvence	TbL-24.
SEQ	ID	NO:	28	je	DNA	sekvence	TbL-25 .
SEQ	ID	NO:	29	je	DNA	sekvence	TbL-28.
SEQ	ID	NO:	30	je	DNA	sekvence	TbL-29.
SEQ	ID	NO:	31	je	DNA	sekvence	TbH-5.

SEQ	ID	NO:	32	je	DNA	sekvence	TbH-8.
SEQ	ID	NO:	33	je	DNA	sekvence	TbH-9.
SEQ	ID	NO:	34	je	DNA	sekvence	TbM-1.
SEQ	ID	NO:	35	je	DNA	sekvence	TbM-3.
SEQ	ID	NO:	36	je	DNA	sekvence	TbM-6.
SEQ	ID	NO:	37	je	DNA	sekvence	TbM-7.
SEQ	ID	NO:	38	je	DNA	sekvence	TbM-9.
SEQ	ID	NO:	39	je	DNA	sekvence	TbM-12.
SEQ	ID	NO:	40	je	DNA	sekvence	TbM-13.
SEQ	ID	NO:	41	je	DNA	sekvence	TbM-14.
SEQ	ID	NO:	42	je	DNA	sekvence	TbM-15.
SEQ	ID	NO:	43	je	DNA	sekvence	TbH-4.
SEQ	ID	NO:	44	je	DNA	sekvence	TbH-4-fwd.
SEQ	ID	NO:	45	je	DNA	sekvence	TbH-12.
SEQ	ID	NO:	46	je	DNA	sekvence	Tb38-1.
SEQ	ID	NO:	47	je	DNA	sekvence	Tb38-4.
SEQ	ID	NO:	48	je	DNA	sekvence	TbL-17.
SEQ	ID	NO:	49	je	DNA	sekvence	TbL-20.
SEQ	ID	NO:	50	je	DNA	sekvence	TbL-21.
SEQ	ID	NO:	51	je	DNA	sekvence	TbH-16.
SEQ	ID	NO:	52	je	DNA	sekvence	DPEP.
SEQ	ID	NO:	53	je	odvozená aminokyselinová sekvence DPEP.
SEQ	ID	NO:	54	je	proteinová sekvence DPV N-koncového antigenu
SEQ	ID	NO:	55	je	proteinová sekvence AVGS N-koncového

antigenu.

SEQ ID NO: 56 je proteinová sekvence AAMK N-koncového antigenu.

SEQ ID NO: 57 je proteinová sekvence YYWC N-koncového antigenu.

SEQ ID NO: 58 je proteinová sekvence DIGS N-koncového antigenu.

-6CZ 297406 B6

SEQ ID NO:

je proteinová sekvence AEES N-koncového antigenu.

SEQ ID NO: 60 je proteinová sekvence DPEP N-koncového antigenu.

SEQ ID NO: 61 je proteinová sekvence APKT N-koncového

antigenu.	NO:
SEQ	ID
antigenu.
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO :
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:
SEQ	ID	NO:

62	je	proteinová sekvence DPAS	N-koncového
63	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRal.
64	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRalO.
65	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRal1.
66	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRal2.
67	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRal3.
68	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRal6.
69	je	odvozená	ami noky s e 1 i no vá	sekvence	TbRal7.
70	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRal8.
71	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRal9.
72	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa24.
73	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa26.
74	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa28.
75	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa29.
76	je	odvozená	ami noky s e1inová	sekvence	TbRa2A.
77	je	odvozená	aminokysel inová	sekvence	TbRa3.
78	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa32.
79	je	odvozená	ami nokys e1i nová	sekvence	TbRa35.
80	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa36.
81	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa4.
82	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRa9.
83	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRaB.
84	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRaC.
85	je	odvozená	aminokyselinová	sekvence	TbRaD.

SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO
SEQ	ID	NO

je odvozená aminokyselinová sekvence YYWCPG.

je odvozená aminokyselinová sekvence TbAAMK. 8 8 je odvozená aminokyselinová sekvence Tb38-1.

je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-4.

je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-8.

je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-9.

je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-12.

je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 1.

je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 2.

je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 3.

je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 4.

je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 5.

je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 6, je DNA sekvence DPAS.

100 je odvozená aminokyselinová sekvence DPAS.
101	je	DNA sekvence DPV.
102	je	odvozená aminokyselinová	sekvence	DPV.
103	je	DNA sekvence ESAT-6.
104	je	odvozená aminokyselinová	sekvence	ESAT-6.
105	je	DNA sekvence TbH-8-2.
106	je	dna sekvence TbH-9FL.
107	je	odvozená aminokyselinová	sekvence	TbH-9FL.
108	je	DNA sekvence TbH-9-1.
109	je	odvozená aminokyselinová	sekvence	TbH-9-1.
110	je	DNA sekvence TbH-9-4.
111	je	odvozená aminokyselinová	sekvence	TbH-9-4.
112	j e	DNA sekvence Tb38-1F2 IN.
113	j e	DNA sekvence Tb38-2F2 RP.
114	je	odvozená aminokyselinová	sekvence	Tb37-FL.
115	je	odvozená aminokyselinová	sekvence	Tb38-IN.
116	je	DNA sekvence Tb38-1F3.

-8CZ 297406 B6

SEQ ID NO: 117 je odvozená aminokyselinová sekvence Tb38-1F3.

SEQ ID NO: 118 je DNA sekvence Tb38-1F5.

SEQ ID NO: 119 je DNA sekvence Tb38-1F6.

SEQ ID NO: 120 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence DPV.

SEQ ID NO: 121 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence AVGS.

SEQ ID NO: 122 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence AAMK.

SEQ ID NO: 123 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence YYWC.

SEQ ID NO: 124 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence DIGS.

SEQ ID NO: 125 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence AEES.

SEQ ID NO: 126 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence DPEP.

SEQ ID NO: 127 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence APKT.

SEQ ID NO: 128 je dedukovaná aminokyselinová sekvence DPAS.

SEQ ID NO: 129 je proteinová sekvence DPPN N-koncového antigenu.

SEQ ID NO: 130 - 133 jsou proteinové sekvence čtyř DPPD bromkyanových fragmentů.

SEQ	ID	NO:	134	je	N-koncová	proteinová	sekvence	XDS	antigenu
SEQ	ID	NO:	135	je	N-koncová	proteinová	sekvence	AGD	antigenu
SEQ	ID	NO:	136	je	N-koncová	proteinová	sekvence	APE	antigenu
SEQ	ID	NO:	137	je	N-koncová	proteinová	sekvence	XYI	antigenu

Jak bylo uvedeno výše, předkládaný vynález je obecně zaměřen na přípravku a způsobu pro prevenci, léčbu a diagnostiku tuberkulózy. Přípravky podle předkládaného vynálezu zahrnují 5 polypeptidy, které obsahují alespoň jednu imunogenní část antigenu M. tuberculosis, nebo varianty takového antigenu, která se liší pouze v konzervativních substitucích nebo modifikacích. Polypeptidy patřící do rozsahu předkládaného vynálezu zahrnují, ale nejsou omezeny na, imunogenní antigeny M. tuberculosis. „Solubilní proteiny M. tuberculosis“ je protein pocházející z M. tuberculosis, který je přítomen ve filtrátu kultury M. tuberculosis. Jak je zde použito, termín ío „polypeptid“ zahrnuje aminokyselinové řetězce jakékoliv délky, včetně kompletních proteinů (tj. antigenů), ve kterých jsou aminokyselinové zbytky navázány peptidovými vazbami. Proto, polypeptid obsahující imunogenní část jednoho z výše uvedených antigenů se může skládat pouze z imunogenní části, nebo může obsahovat další sekvence. Další sekvence mohou být odvozeny od přirozených antigenů M. tuberculosis, nebo mohou být heterologní, a takové sekvence mohou 15 (ale nemusí) být imunogenní.

„Imunogenní“, jak je zde použito, označuje schopnost vyvolat imunitní odpověď (například buněčnou) u pacienta, jak je člověk, a/nebo v biologickém vzorku. Konkrétně, antigeny, které jsou imunogenní (a imunogenní části nebo jiné varianty takových antigenů) jsou schopné stimu-9CZ 297406 B6 lovat proliferaci buněk, produkci interleukinu-12 a/nebo produkci interferonu-τ v biologickém vzorku obsahujícím jednu nebo více buněk vybraných ze skupiny skládající se zT-buněk, TNK buněk, B-buněk a makrofágů, kde buňky jsou získány od jedince imunního proti M. tuberculosis. Polypeptidy obsahující alespoň imunogenní část jednoho nebo více antigenů M. tuberculosis mohou být, obecně, použity pro detekci tuberkulózy nebo pro indukci protektivní imunity proti tuberkulóze u pacienta.

Přípravky a způsoby podle předkládaného vynálezu také zahrnují varianty výše uvedených polypeptidů. „Varianta“, jak je zde použito, je polypeptid, který se liší od přirozeného antigenu pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích, takže je zachována schopnost polypeptidu indukovat imunitní odpověď. Takové varianty mohou být obecně identifikovány modifikací jedné z výše uvedených polypeptidových sekvencí a hodnocením imunogenních vlastností modifikovaného polypeptidu, za použití, například, reprezentativních postupů zde popsaných.

„Konzervativní substituce“ je taková substituce, při které je jedna aminokyselina substituována za jinou aminokyselinu, která má podobné vlastnosti, takže odborník v oboru peptidové chemie může očekávat, že se sekundární struktura a hydropatický charakter polypeptidu významně nezmění. Obecně, následující skupiny aminokyselin představují konzervativní změny: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gin, asn, er, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; a (5) phe, tyr, trp, his.

Varianty mohou být také (nebo alternativně) modifikovány, například, delecí nebo adicí aminokyselin, které mají minimální vliv na imunogenní vlastnosti, sekundární strukturu a hydropatický charakter polypeptidu. Například, polypeptid může být konjugován se signální (nebo leuderovou) sekvencí v oblasti N-konce proteinu, kde tato sekvence bude ko-translačně nebo post-translačně řídit přenos proteinu. Polypeptid může být také konjugován na spojovací sekvenci nebo na jinou sekvenci pro usnadnění syntézy, přečištění nebo identifikace polypeptidu (například poly-His), nebo pro zvýšení vazby polypeptidu na pevný nosič. Například, polypeptid může být konjugován na Fc region imunoglobulinu.

V příbuzném aspektu jsou popsány kombinační polypeptidy. „Kombinační polypeptid“ je polypeptid obsahující alespoň jednu zvýše uvedených imunogenních části a jednu nebo více dalších imunogenních sekvencí M. tuberculosis, které jsou na sebe navázány peptidovou vazbou za vzniku jednoho aminokyselinového řetězce. Sekvence mohou být navázány přímo (tj. bez vmezeřených aminokyselin), nebo mohou být navázány prostřednictvím spojovací sekvence (např. GlyCys-Gly), která nesnižuje významně imunogenní charakter složek polypeptidu.

Obecně, antigeny M. tuberculosis a DNA sekvence kódující takové antigeny, mohou být připraveny za použití jakéhokoliv z mnoha postupů. Například, solubilní antigeny mohou být izolovány z filtrátu kultury M. tuberculosis za použití postupů, které jsou odborníkům v oboru známé, včetně aniontové výměnné chromatografíe a chromatografíe na reverzní fázi. Přečištěné antigeny jsou potom hodnoceny na svou schopnost vyvolávat vhodnou imunitní odpověď (například buněčnou) za použití, například, reprezentativních metod zde popsaných. Imunogenní antigeny mohou být částečně sekvencovány za použití technik jako je klasická Edmanova chemie (Viz Edman a Berg, Eur. J. Biochem., 80: 116 - 132, 1967.

Imunogenní antigeny mohou také být produkovány rekombinantně za použití DNA sekvence, která kóduje antigen, která je insertována do expresního vektoru a která je exprivována ve vhodného hostiteli. DNA molekuly kódující solubilní antigeny mohou být izolovány vyšetřováním vhodných M. tuberculosis expresních knihoven s antisérem (například králičím) namířeným specificky proti solubilním antigenů M. tuberculosis. DNA sekvence kódující antigeny, které mohou nebo nemusí být solubilní, mohou být identifikovány vyšetřováním vhodných M. tuberculosis genomových nebo cDNA expresních knihoven sérem získaným od pacientů infikovaných M. tuberculosis. Takové vyšetření může být provedeno za použití technik dobře známých v oboru,

- 10CZ 297406 B6 jako jsou techniky popsané v Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold

Sprin Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989.

DNA sekvence kódující solubilní antigeny mohou být také získány vyšetřováním vhodných M. tuberculosis cDNA nebo genomových DNA knihoven na DNA sekvence, které hybridizují s degenerovanými oligonukleotidy odvozenými z částečných aminokyselinových sekvencí izolovaných solubilních antigenů. Degenerované oligonukleotidové sekvence pro použití v takovém vyšetřování mohou být navrženy a syntetizovány, a vyšetřování může být provedeno, například, jak je popsáno v Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Sprin Harbor Laboratories, Cold Sprin Harbor, NY, 1989 (a odkazem tam uvedených). Také může být použita polymerasová řetězová rekce (PCR), za použití výše uvedených oligonukleotidů v metodě dobře v oboru známé, pro izolaci nukleokyselinové sondy z cDNA nebo genomové knihovny. Vyšetření knihovny může být potom provedeno za použití izolované sondy.

Alternativně, genomové nebo cDNA knihovny odvozené od M. tuberculosis mohou být vyšetřovány přímo za použití mononukleámích buněk periferní krve (PBMC) nebo T buněčných linií nebo klonů odvozených od jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Obecně, PBMC a/nebo T buňky pro použití v takových vyšetřeních mohou být připraveny způsobem, který je popsán dále. Přímé vyšetřování knihovny může být obecně provedeno testováním souborů exprimovaných rekombinantních proteinů na jejich schopnost indukovat proliferaci a/nebo produkci interferonuτ v T-buňkách, odvozených od jedince imunního vůči M. tuberculosis. Alternativně, mohou být nejprve vybrány potenciální antigeny pro T-buňky na základě protilátkové reaktivity, jak je popsáno výše.

Bez ohledu na způsob přípravy mají antigeny (nebo jejich imunogenní část) podle předkládaného vynálezu (které mohou, ale nemusí být solubilní) schopnost indukovat imunitní odpověď. Přesněji, antigeny mají schopnost indukovat proliferaci a/nebo produkci cytokinů (tj. interferonu-τ a/nebo interleukinu-12) v T-buňkách, NK buňkách, B-buňkách a/nebo makrofágách odvozených od jedinců imunitních vůči M. tuberculosis. Výtěr typu buněk pro hodnocení imunitní odpovědi na antigen bude, samozřejmě, záviset na požadované odpovědi. Například, produkce interleukinu-12 je nejlépe hodnocena za použití přípravků obsahujících B-buňky a/nebo makrofágy. Jedinec imunní vůči M. tuberculosis je takový jedinec, který je považován ze resistentního na tuberkulózu díky tomu, že má účinnou odpověď T-buněk na M. tuberculosis (tj. je v podstatě bez příznaků onemocnění). Takoví jedinci mohou být identifikováni na základě silně pozitivního (tj. indurace o průměru větším než 10 mm) intradermálního kožního testu v odpovědi na tuberkulózní proteiny (PPD) a podle absence jakýchkoliv známek nebo příznaků tuberkulózy. T-buňky, NK buňky, B-buňky a makrofágy mohou být získány od jedinců imunních vůči M. tuberculosis za použití metod dobře známých v oboru. Například, může být použita příprava PBM (tj. mononukleámích buněk periferní krve) bez další separace jednotlivých složek. PBMC mohou být připraveny, například, za použití densitní centrifugace v Ficoll™ (Winthrop Laboratories, NY). T-buňky použité v testech zde popsaných mohou být také přečištěny přímo z PBMC. Alternativně, mohou být použity obohacené linie buněk reaktivních s mykobakteriálními proteiny, nebo klony T-buněk reaktivní s jednotlivými mykobakteriálními proteiny. Takové klony T buněk mohou být získány, například, kultivací PBMV od jedince imunního vůči M. tuberculosis s mykobakteriálními proteiny po dobu 2-4 týdnů. Tento postup umožní expansi pouze T. buněk specifických pro mykobakteriální proteiny, za vzniku linie složené pouze z takových buněk. Tyto buňky mohou být potom klonovány a testovány s jednotlivými proteiny, za použití metod odborníkům známých, pro přesnější definici individuální specificity T-buněk. Obecně, antigeny, které jsou pozitivní v testech pro proliferaci a/neb produkci cytokinů (tj. produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12) provedených za použití T-buněk, NK-buněk, B-buněk a/nebo makrofágů získaných od jedince imunního vůči M. tuberculosis jsou považovány za imunogenní. Takové testy mohou být provedeny, například, za použití reprezentativních postupů popsaných dále. Imunogenní části takových antigenů mohou být identifikovány za použití stejných testů a mohou být prezentovány spolu s polypeptidy podle předkládaného vynálezu.

-11 CZ 297406 B6

Schopnost polypeptidu (například imunogenního antigenu, nebo jeho části nebo varianty) indukovat proliferaci buněk je hodnocena kontaktováním buněk (například T-buněk a/nebo NKbuněk) s polypeptidem a měřením proliferace buněk. Obecně, množství polypeptidu, které je dostatečné pro hodnocení asi 10⁵ buněk, je v rozmezí od 10 ng/ml do asi 100 pg/ml a výhodně je 10pg/nl. Inkubace polypeptidu s buňkami je typicky provedena při 37 °C po dobu šesti dnů. Po inkubaci s polypeptidem jsou buňky testovány na proliferační odpověď, která může být hodnocena za použití metod dobře v oboru známých, jako je expozice buněk pulzu radioaktivně značeného thymidinu a měření inkorporace značeného thymidinu do buněčné DNA. Obecně, polypeptid, který způsobí alespoň trojnásobné zvýšení proliferace proti základní hodnotě (tj. proliferace pozorovaného pro buňky kultivované bez polypeptidu) je považován za schopný vyvolání proliferace.

Schopnost polypeptidu stimulovat produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12 může být hodnocena kontaktováním buněk s polypeptidem a měřením hladiny interferonu-τ nebo interleukinu-12 produkovaného buňkami. Obecně, množství polypeptidu, které je dostatečné pro hodnocení asi 10⁵ buněk, je v rozmezí od 10 ng/ml do asi 100 pg/ml a výhodně je 10 pg/ml. Polypeptid může, ale nemusí, být imobilizován na pevném nosiči, jako jsou korálky nebo biodegradovatelné mikrosféry, například jak jsou popsány v US patentech 4897268 a 5075109. Inkubace polypeptidu je typicky provedena při 37 °C po dobu šesti dnů. Po inkubaci s polypeptidem jsou buňky testovány na produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12 (nebo jedné nebo více jeho podjednotek), což může být provedeno za použití metod dobře v oboru známých, jako je enzymově vázaný imunosorbentní test (ELISA) nebo, v případě P70 podjednotky 1L-12, biotest, například měřící proliferaci T-buněk. Obecně, polypeptid, který způsobí produkci alespoň 50 pg interferonu-τ na ml supematantu kultury (obsahující 10⁴-10⁵ buněk na ml) je považován za schopný stimulace produkce interferonu-τ. Polypeptid, který stimuluje produkci alespoň lOpg/ml P70 podjednotky IL-12 a/nebo alespoň lOOpg/ml P40 podjednotky IL-12, na 10⁵ makrofágů nebo B-buněk (nebo na 3 x 10⁵ PBMC) je považován za schopný stimulace produkce IL-12.

Obecně, imunogenní antigeny jsou takové antigeny, které stimulují proliferaci a/nebo produkci cytokinů (tj. interferonu-τ a/nebo interleukinu-12) vT-buňkách, NK-buňkách, B-buňkách a/nebo makrofágách získaných od alespoň 25 % jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Mezi těmito imunogenními antigeny mohou být odlišeny polypeptidy mající výhodnější terapeutické vlastnosti na základě rozsahu odpovědi ve výše uvedených testech a na základě procenta jedinců, u kterých je odpověď pozorována. Kromě toho, antigeny, které mají nej výhodnější terapeutické vlastnosti, nebudou stimulovat proliferaci a/nebo produkci cytokinů in vitro u buněk získaných od více než 25 % jedinců, kteří nejsou imunní vůči M. tuberculosis, což eliminuje odpovědi, které nejsou specifické díky buňkám reaktivním vůči M. tuberculosis. Ty antigeny, které indukují odpověď ve vysokém procentu T-buněk, NK-buněk, B-buněk a/nebo makrofágů od jedinců imunních vůči M. tuberculosis (s nízkou odpovědí u přípravků buněk od jiných jedinců) mají nejvýhodnější terapeutické vlastnosti.

Antigeny s nejvýhodnějšími terapeutickými vlastnostmi mohou být také identifikovány na základě jejich schopnosti zmírňovat závažnost infekce M. tuberculosis u pokusných zvířat, pokud jsou podány jako vakcína. Vhodné přípravky pro vakcinaci pro použití u pokusných zvířat jsou podrobně popsány dále. Účinnost může být určena na základě schopnosti antigenu způsobit alespoň 50% redukci počtu bakterií a/nebo alespoň 40% snížení mortality po pokusné infekci. Vhodná pokusná zvířata zahrnují myši, morčata a primáty.

Antigeny mající nej výhodnější terapeutické vlastnosti mohou být obecně identifikovány na základě schopnosti vyvolávat odpověď v intradermálním testu provedeném u jedince s aktivní tuberkulózou, ale nikoliv v testu provedeném na jedinci, který není infikován M. tuberculosis. Obecně mohou být kožní testi provedeny způsobem popsaným dále, kdy se pozitivní odpověď je považována alespoň 5 mm indurace.

- 12CZ 297406 B6

Imunogenní část antigenů podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny a identifikovány za použití známých technik, jako jsou techniky shrnuté v Paul, Fundamental Immunology, 3. vydání, Raven Press, 1993, str. 243-247, a v odkazech tam citovaných. Takové techniky zahrnují vyšetřování polypeptidových částí přirozeného antigenů na jejich imunogenní vlastnosti. Repre5 zentativní testy proliferace a produkce cytokinů mohou být použity v těchto vyšetřováních.

Imunogenní část polypeptidu je část, která v takových reprezentativních testech vyvolává imunologickou odpověď (například proliferaci, produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12), která je významně podobná odpovědi, která je vyvolána kompletním antigenem. Jinými slovy, imunogenní část antigenů může vyvolávat alespoň 20%, a lépe 100%, proliferaci, indukovanou komplet10 ním antigenem v testu proliferace zde popsaném. Imunogenní část antigenů může také, nebo alternativně, vyvolávat alespoň 20%, a lépe 100%, produkce interferonu-τ a/nebo interleukinu12 indukovanou kompletním antigenem v testu proliferace zde popsaném.

Části a jiné varianty antigenů M. tuberculosis mohou být generovány prostřednictvím syntézy 15 nebo rekombinantními prostředky. Syntetické polypeptidy mající méně než přibližně 100 aminokyselin, a obyčejně méně než 50 aminokyselin, mohou být generovány za použití technik v oboru dobře známých. Například, takové polypeptidy mohou být syntetizovány za použití jakékoliv z komerčně dostupných technik syntézy na pevné fázi, jako je Merrifíeldova metoda syntézy na pevné fázi, ve které jsou aminokyseliny sekvenčně přidávány k rostoucímu aminokyselinovému 20 řetězci (viz Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2146, 1963). Vybavení pro automatizovanou syntézu polypeptidů je komerčně dostupné od dodavatelů, jako například od Applied Biosystems, lne., Foster City, CA, a může být použito podle návodu výrobce. Varianty přirozeného antigenů mohou být obecně připraveny za použití standardních technik mutagenese, jako je oligonukleotidy řízená místně specifická mutagenese. Sekce DNA sekvence mohou být také odstraněny za 25 použití standardních technik pro přípravu zkrácených polypeptidů.

Rekombinantní polypeptidy obsahující části a/nebo varianty přirozeného antigenů mohou být snadno připraveny z DNA sekvence kódující polypeptid za použití mnoha technik dobře v oboru známých. Například, supematant z vhodných systémů vektor/hostitel, které secemují rekombi30 nantní protein do kultivačního média, může být nejprve koncentrován za použití komerčně dostupného filtru. Po koncentraci může být koncentrát aplikován na vhodnou matrici pro přečištění jako je afínitní matrice nebo iontová výměnná pryskyřice. Nakonec, pro další přečištění rekombinantního proteinu může být použit jeden nebo více kroků HPLC s reverzní fází.

Jakýkoliv z mnoha expresních vektorů známých v oboru může být použit pro expresi rekombinantních polypeptidů podle předkládaného vynález. Exprese může být provedena v jakékoliv vhodné hostitelské buňce, která byla transformována nebo transfektována expresním vektorem obsahujícím DNA molekulu, která kóduje rekombinantní polypeptid. Vhodné hostitelské buňky zahrnují prokaryoty, kvasinky a vyšší eukaryotické buňky. Výhodně jsou jako hostitelské buňky 40 použity E. coli, kvasinky nebo savčí buněčné linie jako je COS nebo CHO. CNA sekvence exprivovaná tímto způsobem může kódovat přirozeně se vyskytující antigeny, části přirozeně se vyskytujících antigenů nebo jejich jiné varianty.

Obecně, bez ohledu na způsob přípravy, jsou polypeptidy podle předkládaného vynálezu připra45 vény ve významně přečištěné formě. Výhodně jsou polypeptidy alespoň 80% čistoty, lépe alespoň 90% čistoty a nejlépe alespoň 99% čistoty. V jistých výhodných provedeních, podrobněji popsaných dále, jsou významně přečištěné polypeptidy inkorporovány do farmaceutických přípravků nebo vakcíny pro použití v jedné nebo více způsobech podle předkládaného vynálezu.

V určitých specifických provedeních popisuje vynález polypeptidy obsahujících alespoň imunogenní část solubilního antigenů M. tuberculosis, který má následující N-koncové sekvence, nebo jeho varianty, které se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací:

- 13 CZ 297406 B6 (a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-IIe-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-

Gki-Val-Val-Ala-Ala-Leu; (SEQ ID No. 120) (b) Ala-Val-GIu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Giy-Thr-Pro-Ala-Pro-

Ser; (SEQ ID No. 121) (c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-

Ala-Lys-Glu-Giy-Arg; (SEQ ID No. 122) (d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Giy-

Pro; (SEQ ID No. 123) (e) Asp-Ile-Gly-Ser-GIu-Ser-Thr-Glu-Asp-GÍn-Gin-Xaa-Ala-V al;

(SEQ ID No. 124) (f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro; (SEQ ID

No. 125) (g) Asp-Pro-Glu-PrO’Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-AÍa-Ser-

Pro-Pro-Ser; (SEQ ID No. 126) (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-

Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-PheAla-Asn; (SEQ ID No. 128) (j) Xaa-Asp-S er-Glu-Lys- S er-Ala-Thr-Ile-Ly s-V al-Thr-Asp-Ala-

Ser;(SEQID No. 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-IIe-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-

Asp; (SEQ ID No. 135) or (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-GIy-Thr-Val-Gln-Ala-

Gly; (SEQ ID No. 136) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina, výhodně cysteinový zbytek. DNA sekvence kódující 5 antigen identifikovaný jako (g), výše, je uvedena v SEQ ID NO: 52 a polypeptid kódovaný

SEQ ID NO: 52 je uveden v SEQ ID NO: 53. DNA sekvence kódující antigen označený (a) je uvedena v SEQ ID NO: 101; její odvozená aminokyselinová sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 103: DNA sekvence odpovídající antigenu (d), výše, je uvedena v SEQ ID NO: 24 a DNA sekvence odpovídající antigenu (c) je uvedena v SEQ ID NO: 25 a DNA sekvence odpovídající io antigenu (i) je uvedena v SEQ ID NO: 99; její odvozená aminokyselinová sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 100.

- 14CZ 297406 B6

V dalším specifickém provedení popisuje vynález polypeptidy obsahující alespoň imunogenní část antigenu M. tuberculosis, který má následující N-koncové sekvence, nebo jeho varianty, které se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací:

(m) Xaa-Tyr-Ile-AIa-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-IIe-Val-Pro-GÍy-Lys-

Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEQ ID No 137) or (n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-TyrTyr-Pro-GIy-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe; (SEQ ID No. 129) kde Xaa může být jakýkoliv aminokyselina, výhodně cysteinový zbytek.

V jiných specifických provedeních popisuje vynález polypeptidy obsahující alespoň jednu imunogenní část solubilního antigenu M. tuberculosis (nebo variantu takového antigenu), která obsahuje jednu nebo více aminokyselinových sekvencí kódovaných (a) DNA sekvencemi SEQ ID NO: 1, 2, 4-10, 13, 25 a 52; (b) sekvencemi komplementárními k takovým DNA sekvencím, nebo (c) DNA sekvencemi významně homologními k sekvencím v (a) a (b).

V ještě jiných specifických provedeních popisuje vynález polypeptidy obsahující alespoň jednu imunogenní část antigenu M. tuberculosis (nebo variantu takového antigenu), který nemusí být solubilní, která obsahuje jednu nebo více aminokyselinových sekvencí komplementárními k takovým DNA sekvencím, nebo (c) DNA sekvencemi významně homologními k sekvencím v (a) a(b).

Ve specifických provedeních uvedených výše zahrnuje antigen M. tuberculosis varianty, které jsou kódovány DNA sekvencemi, které jsou významně homologní k jedné nebo více DNA sekvencemi zde uvedenými. „Významná homologie“, jak je zde použito, označuje DNA sekvence, které jsou schopné hybridizace za podmínek střední přísnosti. Vhodné podmínky střední přísnosti zahrnují předpromytí v rozsahu 5xSSC, 0,5% SDS, 1,0 mM EDTA (pH 8,0); hybridizaci při 5065 C, 5X SSC, přes noc, nebo, v případě mezidruhové homologie 45 °C, 0,5X SSC; potom dvakrát promytí při 65 °C po dobu 20 minut každým z 2X, 0,5X a 0,2X SSC obsahujícím 0,1% SDS). Takové hybridizující sekvence spadají také do rozsahu předkládaného vynálezu, stejně jako nukleotidové sekvence, které vzhledem k degeneraci genetického kódu, kódují imunogenní polypeptid, který je kódován hybridizující DNA sekvencí.

V souvisejícím aspektu poskytuje předkládaný vynález fúzní proteiny obsahující první a druhý polypeptid podle předkládaného vynálezu, nebo, alternativně, polypeptid podle předkládaného vynálezu a známý antigen M. tuberculosis, jako je 38 kD antigen popsaný výše nebo ESAT-6 (SEQ ID NO: 103 a SEQ ID NO: 104), spolu s variantami takových fúzních proteinů. Fůzní proteiny podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat spojovací peptid mezi prvním a druhým polypeptidem.

DNA sekvence kódující fúzní protein podle předkládaného vynálezu je konstruována za použití známých rekombinantních DNA technik pro seřazení separátních DNA sekvencí kódujících první a druhý polypeptid do vhodného expresního vektoru. 3' konec DNA sekvence kódující první polypeptid je ligován, s nebo bez sekvence spojovacího peptidu, na 5' konec DNA sekvence kódující druhý polypeptid, takže čtecí rámečky sekvencí jsou ve fázi umožňující translaci mRNA dvou DNA sekvencí do fúzního proteinu, který si uchovává biologickou aktivitu jak prvního, tak druhého polypeptidu.

Peptidová spojovací sekvence může být použita pro separaci prvního a druhého polypeptidu dostatečnou vzdáleností pro to, aby bylo zajištěno pro každý polypeptid správné složení jeho sekundární a terciární struktury. Taková peptidová spojovací sekvence je vložena do fúzního pro

-15 CZ 297406 B6 teinu za použití technik v oboru dobře známých. Vhodné peptidové spojovací sekvence mohou být vybrány na základě následujících faktorů: (1) jejich schopnost přijímat flexibilní roztaženou konformaci; (2) jejich neschopnost přijímat sekundární strukturu, která by mohla interagovat s funkčními epitopy na prvním nebo na druhém polypeptidu; a (3) chybění hydrofobních nebo nabitých zbytků, které by mohly interagovat s funkčními epitopy polypeptidů. Výhodné peptidové spojovací sekvence obsahují Gly, Asn a Ser zbytky. Jiné příbuzné neutrální aminokyseliny, jako je Thr a Ala, mohou být také použity ve spojovací sekvenci. Aminokyselinové sekvence, které mohou být výhodně použity jako spojovací sekvence, zahrnují ty, které jsou popsány v Marata et a., Gene 40: 39 - 46, 1985; Murphy et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 83. 8258 8262, 1986; US patent 4 935 233 a US patent 4 751 180. Spojovací sekvence může mít délku od 1 do 20 aminokyselin. Peptidové sekvence nejsou nutné, pokud první a druhé polypeptidy mají neesenciální N-koncové aminokyselinové regiony, které mohou být použity pro separaci funkčních domén a zabránění sterické interference.

Ligované DNA sekvence jsou operativně navázány na vhodné transkripční a translační regulační elementy. Regulační elementy odpovídající za expresi DNA jsou umístěny pouze na 5' konci DNA sekvence kódující první polypeptid. Podobně, stop kodony nutné pro ukončení translace a transkripční terminační signály jsou umístěny pouze na 3' konci DNA sekvence kódující druhý polypeptid.

V jiném aspektu poskytuje předkládaný vynález způsob pro použití jednoho nebo více zvýše uvedených polypeptidů nebo fúzních proteinů (nebo DNA molekul kódujících takové polypeptidy) pro indukci protektivní imunity pro tuberkulóze u pacienta. Jak je zde použito, „pacient“ označuje jakékoliv teplokrevného živočicha, výhodně člověka. Pacient může být postižen onemocněním, nebo může být bez detekovatelného onemocnění a/nebo infekce. Jinými slovy, protektivní imunita může být indukována pro prevenci nebo pro léčbu tuberkulózy.

V tomto aspektu je polypeptid, fúzní protein nebo molekula DNA obyčejně přítomna ve farmaceutickém přípravku a/nebo vakcíně. Farmaceutické přípravky mohou obsahovat jednu nebo více z výše uvedených sekvencí (nebo jejich variant) a fyziologicky přijatelný nosič. Vakcíny mohou obsahovat jeden nebo více z výše uvedených polypeptidů a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi, jako je adjuvans nebo liposom (do kterého je polypeptid inkorporován). Takové farmaceutické přípravky a vakcíny mohou také obsahovat další antigeny M. tuberculosis, buď v kombinovaném polypeptidu nebo v jiném separátním polypeptidu.

Alternativně může vakcína obsahovat DNA kódující jeden nebo více polypeptidů popsaných výše, jako jsou polypeptidy generované in šitu. V takových vakcínách může být DNA přítomna v jakémkoliv z mnoha systémů pro podání v oboru známých, včetně expresních systémů nukleových kyselin, bakteriálních a virových expresních systémů. Vhodné expresní systémy nukleových kyselin obsahují nezbytné DNA sekvence pro expresi u pacienta (jako je vhodný promotor a terminační signál). Bakteriální systém pro podání obsahují podání bakterie (jak je Bacillus Calmette-Guerrin), která exprimuje imunogenní část polypeptidu na svém povrchu. Ve výhodném provedení může být DNA zavedena do organismu za použití virového expresního systému (například viru vakcinie nebo pox viru, retroviru nebo adenoviru), což může obsahovat použití nepatogenních (defektních), replikace-kompetentních virů. Techniky pro vložení DNA do takových expresních systémů jsou odborníkům v oboru dobře známé. DNA může také být „nahá“, jak je to popsáno, například, v Ulmer et al., Science 259: 1745 - 1749, 1993 a Cohen, Science 259: 1691 - 1692, 1993. Vychytávání nahé DNA může být zvýšeno potažením DNA na biodegradovatelné korálky, které jsou účinně transportovány do buněk.

V souvisejícím aspektu může být DNA vakcína jak je popsána výše podána simultánně nebo sekvenčně s polypeptidem podle předkládaného vynálezu a nebo známým antigenem M. tuberculosis, jako je 38 kDa antigen popsaný výše. Například, podání DNA kódujícího polypeptid podle předkládaného vynálezu, buď „nahé“, nebo v systému pro podání popsaném výše, může být následováno podáním antigenu pro zvýšení protektivního imunitního účinku vakcíny.

- 16CZ 297406 B6

Způsoby a frekvence podání, stejně jako dávkování, se bude velmi lišit mezi jednotlivci a může být paralelní k v současné době používané imunizaci za použití BCG. Obecně, farmaceutické kompozice a vakcíny mohou být podány injekčně (například intrakutánně, intramuskulámě, intravenosně nebo subkutánně), intranazálně (například aspirací) nebo orálně. 1 až 3 dávky mohou být podány v průběhu 1 - 36 týdnů. Výhodně jsou podány 3 dávky, v intervalu 3 až 4 měsíců, a dosycovací imunizace mohou být potom podávány periodicky. Alternativní protokoly mohou být vhodné pro jednotlivé pacienty. Vhodnou dávkou je množství DNA nebo polypeptidů, které, při podání popsaném výše, vyvolá imunitní odpověď u imunizovaného pacienta, která je dostatečná pro ochranu pacienta před infekcí M. tuberculosis po dobu alespoň 1-2 let. Obecně, množství polypeptidů v dávce (nebo produkovaného in šitu DNA) je v rozsahu od asi 1 pg do asi 100 mg na kg hostitele, typicky od asi 10 pg do asi 1 mg, a výhodně od asi 100 pg do asi 1 pg. Vhodná velikost dávky se bude velmi lišit po velikosti pacienta, ale typicky bude v rozmezí od asi 0,1 ml do asi 5 ml.

Ačkoliv ve farmaceutickém přípravku podle předkládaného vynálezu může být použit jakýkoliv vhodný nosič v oboru známý, bude se typ nosiče velmi lišit podle způsobu podání. Pro parenterální podání, jako je subkutánní injekce, bude nosič výhodně zahrnovat vodu, fyziologický roztok, alkohol, tuk, vosk nebo pufr. Pro orální podání může být použit jakýkoliv z výše uvedených nosičů nebo pevný nosič, jako je manitol, laktóza, škrob, stearan hořečnatý, sacharin sodný, talek, celulóza, glukóza, sacharóza a uhličitan hořečnatý. Biodegradovatelné mikrosféry (například galaktan kyseliny polymléčné) mohou být také použity jako nosiče pro farmaceutické přípravky podle předkládaného vynálezu. Vhodné biodegradovatelné mikrosféry jsou popsány, například, v US patentech 4 897 268 a 5 075 109.

Ve vakcínách podle předkládaného vynálezu může být pro nespecifické posílení imunitní odpovědi použito jakékoliv z mnoha adjuvans. Většina adjuvans obsahuje sloučeniny navržené pro ochranu antigenů před rychlým katabolismem, jako je hydroxid hlinitý a minerální olej, a nespecifické stimulátory imunitní odpovědi, jako je lipid A, Bordetella pertussis nebo Mycobacterium tuberculosis. Vhodná adjuvans jsou komerčně dostupná jako, například, Freundovo nekompletní adjuvans a Freundovo kompletní adjuvans (Difco laboratories) a Meck Adjuvant 65 (Měrek and Company, Inc., Rahway, NJ). Další vhodná adjuvans zahrnují síran hlinitodraselný, biodegradovatelné mikrosféry, monosforyl lipis A a quil A.

V jiném aspektu vynález poskytuje metody pro použití jednoho nebo více polypeptidů podle předkládaného vynálezu pro diagnostiku tuberkulózy za použití kožního testu. Jak je zde použito, „kožní test“ je test provedený přímo na pacientovi, ve kterém je měřena rekce oddáleného typu přecitlivělosti (DTH) (jako je otok, zčervenání nebo dermatitis) po intradermální injekci jednoho nebo více polypeptidů podle předkládaného vynálezu. Taková injekce může být provedena za použití jakéhokoliv vhodného prostředku dostatečného pro kontaktování polypeptidů nebo polypeptidů s buňkami dermis pacienta, jako je například tuberkulinová injekční stříkačka nebo 1 ml injekční stříkačka. Výhodně je reakce měřena alespoň 48 hodin po injekci, lépe 48 až 72 hodin.

DTH reakce je imunitní odpověď zprostředkovaná buňkami, která je největší u pacientů, kteří byly dříve vystaveni testovanému antigenů (tj. imunogenní části použitého polypeptidů, nebo jeho varianty). Odpověď může být měřena vizuálně, za použití pravítka. Obecně, odpověď větší než 0,5 cm v průměru, lépe větší než 1,0 cm v průměru, je pozitivní odpověď, ukazující na tuberkulózní infekci, která se může nebo nemusí projevovat jako aktivní onemocnění.

Polypeptidy podle předkládaného vynálezu jsou výhodně formulovány, pro použití v kožním testu, jako farmaceutické přípravky obsahující polypeptid a fyziologicky přijatelný nosič, jak je popsáno výše. Takové přípravky typicky obsahují jeden nebo více z výše uvedených polypeptidů v množství od asi 1 μ do asi 100 μg, výhodně od 10 μg do asi 50 μg v objemu 0,1 ml. Výhodně je nosičem použitým v takových farmaceutických přípravcích fyziologický roztok s vhodnými konzervačními činidly, jako je fenol a/nebo Twen 80™.

-17CZ 297406 B6

Ve výhodném provedení je polypeptid použitý v kožním testu dostatečné velikosti, aby zůstával v místě injekce po dobu trvání reakce. Obecně, dostatečný je polypeptid o délce alespoň 9 aminokyselin. Polypeptid je také výhodně zpracován makrofágy během několika hodin po injekci pro prezentaci T-buňkách. Takové polypeptidy mohou obsahovat opakující se úseky jedné nebo více z výše uvedených sekvencí a/nebo další imunogenní nebo neimunogenní sekvence.

Následující příklady jsou uvedeny pro ilustraci, nikoliv jako omezení předkládaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 - Přečištění a charakterizace polypeptidu z filtrátu kultury M. tuberculosis

Tento příklad ilustruje přípravu solubilních polypeptidů M. tuberculosis z filtrátu kultury. Pokud není uvedeno jinak, jsou všechna procenta uvedena jako hmotnost na objem.

M. tuberculosis (buď H37Ra, ATCC č, 25177, nebo H37Rv, ATCC č. 25618) bylo kultivováno ve sterilním GAS médiu při 37 °C po dobu čtrnácti dnů. Médium bylo potom vakuově filtrováno (s ponecháním objemu buněk) přes 0.45 μ filtru ve sterilní 2,5 1 nádoby. Médium bylo potom filtrováno přes 0,2 μ filtr do sterilní 4 1 nádoby a k filtrátu kultury byl přidán NaN₃ v koncentraci 0,04%. Lahve byly potom umístěny v místnosti s teplotou 4 °C.

Filtrát kultury byl koncentrován umístěním filtrátu do 12 1 reservoáru, který byl potom autoklavován a vložením filtrátu do Amicron míchací kyvety která byla vypláchnuta ethanolem a obsahovala 1000 kDa MWCO membránu. Tlak byl udržován do 60 psi za použití plynného dusíku. Tento postup redukoval 12 1 objem na přibližně 50 ml.

Filtrát kultury byl dialyzován do 0,1% hydrogenuhličitanu amonného za použití 8000 kDa MWCO membrány z esteru celulózy, se dvěma výměnami roztoku hydrogenuhličitanu amonného. Koncentrace proteinu byl určena komerčně dostupným BCA testem (Pierce, Rocford, IL).

Dialyzovaný filtrát kultury byl potom lyofilizován a polypeptidy byly resuspendovány v destilované vodě. Polypeptidy byly znovu dialyzovány proti 0,01 mM 1,3 bis(tris(hydroxymethyl)methylamino)propanu, pH 7,5 (Bis-Tris propanový pufr), což bylo východiskem pro aniontovou výměnnou chromatografií. Frakcionace byla provedena za použití gelové vylučovací chromatografie na POROS 146II Q/M aniontové výměnné koloně 4,6 x 100 mm (Perseptive BioSystems, Framingham, MA) uvedené do rovnováhy v 0,01 mM Bis-Tris propanového pufru pH 7,5. Polypeptidy byly eluovány lineárními gradienty 0 - 0,5 M NaCl ve výše uvedeném pufrovacím systému. Eluent z kolony byl sledován při vlnové délce 220 nm.

Soubory polypeptidů eluující z iontové výměnné kolony byly znovu dialyzovány proti destilované vodě a lyofilizovány. Výsledný materiál byl rozpuštěn v 0,1% kyselině trifluoroctové (TFA) H 1,9 ve vodě a polypeptidy byly přečištěny na Delta-Pak Cl8 koloně (Waters, Milford, MA) s velikostí pórů 300 Angstromů, velikostí částic 5 mikronů (3,9 x 150 mm). Polypeptidy byly eluovány z kolony lineárním gradientem 0-60% ředicího pufru (0,1% TFA v acetonitrilu). Rychlost průtoku byla 0,75 ml/minutu a HPLC eluent byl sledován při 214 nm. Frakce obsahující eluované polypeptidy byl odebrány při maximalizaci čistoty jednotlivých vzorků. Bylo získáno asi 200 přečištěných polypeptidů.

Přečištěné polypeptidy byly potom vyšetřovány na schopnost indukovat proliferaci T-buněk v PBMC přípravcích. PBMC od dárků s pozitivním PPD kožním testem a ty T-buňky, které proliferovaly v odpovědi na PPD a surové solubilní proteiny od MTB byly kultivovány v médiu obsahujícím RPMI 1640 doplněné 10% odebraným lidským sérem a 50 pg/ml gentamicinu.

-18CZ 297406 B6

Přečištěné polypeptidy byly přidány ve dvojím provedení v koncentracích 0,5 až 10pg/ml. Po šesti dnech kultivace v 96-jamkových plotnách s plochým dnem v objemu 200 μΐ, bylo 50 μΙ média odebráno z každé jamky pro určení hladin IFN-τ, jak je popsáno výše. Plotny byly potom pulzovány 1 pCi/jamku tritiem značeného thymidinu po dobu dalších 18 hodin, potom byly sklízeny a bylo určeno vychytávání tritin za použití plynné scintilační kamery. Frakce, které způsobovaly v obou provedeních proliferaci trojnásobně vyšší, než je pozorována u buněk kultivovaných pouze za přítomnosti média, byly považovány za pozitivní.

IFN-τ byl měřen za použití enzymově vázaného imunosorbentního testu (ELISA). ELISA plotny byly potaženy myší monoklonální protilátkou namířenou proti lidskému IFN-τ (PharMingen, San Diego, CA) v PBS po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Jamky byly potom blokovány PBS obsahujícím 5% (hmotnost/objem) odtučněné sušené mléko po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Plotny byly potom šestkrát promyty v PBS/0,2/ Tween-20 a vzorky ředěné 1:2 v kultivačním médiu na ELISA plotnách byly inkubovány přes noc při pokojové teplotě. Plotny byly znovu promyty a do každé jamky bylo přidáno polyklonální králičí anti-lidský IFN-τ sérum ředěné 1:3000 vPBS/10% normální kozí sérum. Plotny byly potom inkubovány po dobu 2 hodin při pokojové teplotě, byly promyty a byly přidány anti—králičí IgG s navázanou křenovou peroxidasou (Sigma Chemicals So., St. Louis, MO) v ředění 1:2000 v PBS/5% odtučněné sušené mléko. Po dvou hodinách inkubace při pokojové teplotě byly plotny promyty a byl přidán TMB substrát. Optická densita byla určena při 450 nm za použití 570 nm jako referenční vlnové délky. Frakce, které měly v obou provedeních od dvakrát vyšší než je průměrná OD pro buňky kultivované v médiu samotném, plus 3 standardní odchylky, byly považovány za pozitivní.

Pro sekvencování byly polypeptidy jednotlivě sušeny na Biobrene™ (Perkin Elmer/Applied BioSystems Division, Foster City, CA) ošetřených filtrech ze skelných vláken. Filtry s polypeptidem byly vloženy do Perkin Elmer/Applied BioSystems Division Procise 492 proteinového sekvenátoru. Polypeptidy byly sekvencovány z amino konce za použití tradiční Edmanovi chemie. Aminokyselinová sekvence byla určena pro každý polypeptid srovnání retenční doby PTH aminokyselinového derivátu s vhodnými standardy PTH derivátu.

-19CZ 297406 B6

Za použití postupů výše byly izolovány antigeny mající následující N-koncové sekvence:

(a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-IIe-Asn-Thr-Thr-Xaa-Asn-Tyr-Gly-

Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu; (SEQ ID No. 54) (b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-

Ser; (SEQ ID No. 55) (c) Ala-AIa-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-GIy-Asp-GIy-Pro-Leu-GIu-Ala-

Ala-Lys-GIu-Gly-Arg; (SEQ ID No. 56) (d) T yr-T yr-Trp- C y s-Pro- G Iy-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-

Pro; (SEQ ID No. 57) (e) Asp-Ile-Gly-Ser-Gla-Ser-Thr-Glu-Asp-GIn-Gin-Xaa-AIa-Val;

(SEQ ID No. 58) (f) Aia-Gtu-GIu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-GÍu-Xaa-Ile-Val-Pro; (SEQ ID

No. 59) (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Aia-Ala-

Pro-Pro-Ala; (SEQ ID No. 60) and (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-

Gly; (SEQ ID No. 61) jde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.

Další antigen byl získán za použití kroku přečištění na mikrobore HPLC navíc k postupu popsanému výše. Konkrétně, 20 μΐ frakce obsahující směs antigenů z dříve popsaného kroku chromatografíckého přečištění bylo přečištěno na Aquapore Cl8 koloně (Perkin Elmer/Applied Biosystems Division, Foster City, CA) s póry velikosti 7 mikronů, kolonou velikosti 1 mm x 100 mm, na Perkin Elmer/Applied Biosystems Division Model 172 HPLC. Frakce byly eluovány z kolony za použití lineárního gradientu 1%/minutu acetonitrilu (obsahujícího 0,05% TFA) ve vodě (0,05% TFA) rychlostí toku 80 μΐ/minut. Eluent byl monitorován při 250 nm. Originální frakce byla separována do 4 hlavních píků plus dalších menších složek a byl získán polypeptid, který měl molekulovou hmotnost 12.054 kDa (podle hmotové spektrometrie) a který měl následující N-koncovou sekvenci:

(i) Asp-Pro-Ala-Ser-AJa-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Gln-

Thr- S er-Leu-Leu-Asn-Asn- Leu-Ala-Asp-Pro-Asp-Val-Ser-Phe Ala-Asp (SEQ ID No. 62).

Bylo prokázáno, že tento polypeptid indukuje proliferaci a produkci IFN-τ v přípravcích PBMC za použití testů popsaných výše.

Další solubilní antigeny byly izolovány z filtrátu kultury M. tuberculosis následujícím způsobem. Filtrát kultury M. tuberculosis byl připraven stejným způsobem jako výše. Po dialýze proti BisTris propanovému pufru, při pH 5,5, byla provedena frakcionace za použití aniontové výměnné

-20CZ 297406 B6 chromatografíe na Poros QE koloně 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems) uvedené do rovnováhy Bis-Tris propanovým pufrem pH 5,5. Polypeptidy byly eluovány lineárním gradientem 0 1,5 M NaCl ve výše uvedeném pufrovacím systému při průtoku 10 ml/minutu. Eluens kolony byl monitorován při vlnové délce 214 nm.

Frakce eluující z iontové výměnné kolony byly shromážděny a byly podrobeny chromatografii na reverzní fázi za použití Poros R2 kolony 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems). Polypeptidy byly eluovány z kolony lineárním gradientem od 0 - 100% acetonitrilu (0,1% TFA) při průtoku 5 ml/minutu. Eluens byl monitorován při 214 nm.

Frakce obsahující eluované polypeptidy byly lyofilizovány a resuspendovány v 80 μΐ vodného 0,1% TFA a dále byly podrobeny chromatografii ne reverzní fázi na Vydac C4 koloně 4,6 x 150 m (Western Analytical, Temecula, CA) s lineárním gradientem od 0 - 100% acetonitrilu (0,1% TFA) při průtoku 2 ml/minutu. Eluens byl monitorován při 214 nm.

Frakce s biologickou aktivitou byla separována do jednoho hlavního píku plus dalších menších složek. Western blot tohoto písku na PVDF membráně ukázal tři hlavní proužky o molekulové hmotnosti 14 kDa, 20 kDa a 26 kDa. U těchto polypeptidů byly určeny následující N-koncové sekvence, v příslušném pořadí:

(j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-IIe-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-

Ser; (SEQ ID No. 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-ne-Va'-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-

Asp; (SEQ ID No. 135) and (l) Ala-Pro-Glu-Ser-GIy-Ala-GIy-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-

Giy; (SEQ ID No. 136), kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.

Za použití testů popsaných výše bylo prokázáno, že tyto polypeptidy indukují proliferaci a produkci IFN-τ u PBMC. Obrázky IA a 1B ukazují výsledky takových testů za použití přípravků PBMC od prvního a druhého dárce, v příslušném pořadí.

DNA sekvence, které kódují antigeny označené jako (a), (c), (d) a (g), výše, byly získány vyšetřením genomové M. tuberculosis knihovny za použití ³²P koncově značených degenerovaných oligonukleotidů odpovídajících N-koncové sekvenci a obsahující M. tuberculosis chybné kodony. Vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenu (a), výše, identifikovalo klon mající sekvence uvedenou v SEQ ID NO: 101. Polypeptid kódovaný SEQ ID NO: 101 je uveden v SEQ ID NO: 102. Vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenu (g), výše, identifikovalo klon mající sekvence uvedenou v SEQ ID NO: 52. Polypeptid kódovaný SEQ ID NO: 52 je uveden v SEQ ID NO: 53. Vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenu (d), výše, identifikovalo klon mající sekvenci uvedenou v SEQ ID NO: 24 a vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenu (c), výše, identifikovalo klon mající sekvence uvedenou v SEQ ID NO: 25.

Výše uvedené aminokyselinové sekvence byly srovnávány se známými aminokyselinovými sekvencemi v genové bance za použití DNA STAR systému. Prozkoumávána databáze obsahovala okolo 173000 proteinů a byla kombinována se Swiss, PÍR databázemi spolu s translatovanými proteinovými sekvencemi (Verse 87). Nebyly detekovány žádné signifikantní homologie s aminokyselinovými sekvencemi proti antigeny (a) - (h) a (1).

-21 CZ 297406 B6

Bylo zjištěno, že aminokyselinová sekvence pro antigen (i) je homologní se sekvencí z M. leprae.

Kompletní sekvence M. leprae byla amplifikována z genomové DNA za použití sekvence získané z GENBANK. Tato sekvence byla potom použita pro vyšetření M. tuberculosis knihovny popsané dále v příkladu 2 a byla získána kompletní kopie homologu M. tuberculosis (SEQ ID NO: 99).

Bylo zjištěno, že aminokyselinová sekvence pro antigen (j) je homologní k známému proteinu M. tuberculosis transplatovanému z DNA sekvence. Podle vědomostí vynálezců nebylo doposud popsáno, že by tento protein měl stimulační aktivitu pro T-buňky. Bylo zjištěno, že aminokyselinové sekvence (k) je příbuzná sekvenci z M. leprae.

Výsledky pro reprezentativní antigeny uvedené výše v testech proliferace a IFN-τ produkce provedených za použití tří PPD pozitivních dárců jsou uvedeny v tabulce 1:

Tabulka 1 - Výsledky testu proliferace PBMC a produkce IFN-τ

Sekvence-	Proliferace	IFN-T
(a)	+	-
(c)	4- + +	+ + +
(d)	+ +	+ +
(9)	+ + +	+++
(h)	+++	+ + 4-

V tabulce 1 byla odpověď, která dávala stimulační index (SI) mezi 2 a 4 (vzhledem k buňkám kultivovaných pouze v médiu) počítána jako +, SI 4 - 8 nebo 2 - 4 v koncentraci 1 pg nebo menší byla počítána jako ++ a SI vyšší než 8 byla počítána jako +++. Antigen sekvence (c) měl vysoký SI (+++) pro jednoho dárce a nižší Si (++ a +) pro další dva dárce v proliferačním i IFN-τ testu. Tyto výsledky ukazují, že tyto antigeny jsou schopné indukce proliferace a/nebo produkce IFN-τ.

Příklad 2 - Použití séra od pacienta pro izolaci antigenů M. tuberculosis

Tento příklad popisuje izolaci antigenů z lyzátů M. tuberculosis za pomoci vyšetřování sérem od jedinců infikovaných M. tuberculosis.

Vysušené M. tuberculosis H37Ra (Difco Laboratories) bylo přidáno k 2% roztoku NP40 a třikrát byla provedena střídavě homogenizace a sonikace. Vzniklá suspenze byla centrifugována při 13 000 rpm v mikrocentrifugovaných tubách a supematant byl protlačen přes 0,2 mikronový stříkačkový filtr. Filtrát byl navázán na Macro Prep DEAE korálky (BioRad, Hercules, CA). Korálky byly důkladně promyty 20 mM Tris pH 7,5 a navázané proteiny byly eluovány 1 M NaCl. 1 M NaCl eluát byl dialyzován přes noc proti 10 mM Tris, pH 7,5. Dialyzovaný roztok byl ošetřen DNAsou a RNAsou při koncentraci 0,05 mg/ml po dobu 30 minut při pokojové teplotě a potom a-D-manosidasou, 0,5 U/mg při pH 4,5 po dobu 3 a 4 hodin při pokojové teplotě. Po návratu k pH 7,5 byl materiál frakcionován pomocí FPLC na Bio Scale Q-20 koloně (BioRad). Frakce byly kombinovány do 9 souborů, byly koncentrovány na Centriprep 10 (Amicon, Beverley, MA) a byly vyšetřovány ve Western blotu na svou serologickou aktivitu za použití séra od pacientů

-22CZ 297406 B6 infikovaných M. tuberculosis, které nebylo imunoreaktivní s jinými antigeny podle předkládaného vynálezu.

Nejvíce reaktivní frakce byla potom podrobena SDS-PAGE a byla přenesena do PVDF. Byl vyříznut proužek o přibližně 85 kDa za zisku sekvence:

(m) Xaa-Tyr-Ile-Aia-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-LyS’

Ile-Asn-Val-His-Leu-Val: (SEQ ID No. 137).

kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.

Srovnání této sekvence se sekvencemi v genové bance jak bylo popsáno výše neukázalo žádnou signifikantní homologii se známými sekvencemi.

Příklad 3 - Příprava DNA sekvencí kódujících antigeny M. tuberculosis

Tento příklad popisuje přípravu DNA sekvencí kódujících antigeny M. tuberculosis za pomoci vyšetřování M. tuberculosis expresní knihovny sérem od pacientů infikovaných M. tuberculosis, nebo anti-séra proti solubilním antigenům M. tuberculosis.

A. Příprava solubilních antigenů M. tuberculosis za použití králičího antiséra

Genomová DNA byla izolována z M. tuberculosis kmene H37Ra. DNA byla náhodně rozstřižena a byla použita pro konstrukci expresní knihovny za použití Lambda ZAP expresního systému (Stratagene, La Jolla, CA). Bylo generováno králičí antisérum proti sekrečním proteinům M. tuberculosis kmenů H37Ra, H37Rv a Erdman imunizací králíků koncentrovaným supematantem kultur M. tuberculosis. Přesněji, králíci byli nejprve imunizováni podkožně 200 pg proteinového antigenu v celkovém objemu 2 ml obsahujícím 10 pg muramyl dipeptidu (Calbiochem, La Jolla, CA) a 1 ml nekompletního Freundova adjuvans. O čtyři týdny později byla králíkům podána dosycovací dávka 100 pg antigenu v nekompletním Freundově adjuvans. Nakonec byli králíci imunizováni subkutánně 50 pg proteinového antigenu. Anti-sérum bylo použito pro vyšetřování expresní knihovny, jak je to popsáno v Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Sprin Harbor, NY, 1989. Bakteriofágové plaky exprivující imunoreaktivní antigen byly přečištěny. Byly získány fagemidy z plaků a byla odvozena nukleotidová sekvence klonů M. tuberculosis.

Bylo přečištěno 32 klon. Z těchto 25 představovalo sekvence, které nebyly dříve identifikováno u lidského M. tuberculosis. Rekombinantní antigeny byly exprimovány a přečištěné antigeny byly použity v imunologické analýze popsané v příkladu 1. Proteiny byly indukovány IPTG a byly přečištěny gelovou elucí, jak je popsáno v Skeiky et al., J. Exp. Med. 181: 1527 - 1537, 1995. Reprezentativní sekvence DNA molekul identifikovaných v tomto vyšetření jsou uvedeny v SEQ ID NO: 1 - 25. Odpovídající předpokládané aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v SEQ ID NO: 63 - 87.

Při srovnání těchto sekvencí se známými sekvencemi v genové bance za použití databáze uvedené výše bylo zjištěno, že klony, které jsou zde označené TbRA2A, TbRA16, TbRA18 a TbRA29 (SEQ ID NO: 76, 68, 70, 75) vykazují určitou homologii se sekvencemi dříve identifikovanými v Mycobacterium leprae, ale nikoliv v M. tuberculosis. TbRAl 1, TbRA28 a TbDPEP (SEQ ID NO: 65, 73, 74 a 53) byly dříve identifikovány v M. tuberculosis. Žádná signifikantní homologie nebyla nalezena pro TbRAl, TbRA3, TbRA4, TbRA9, TbRAl0, TbRAl3, TbRAl7, TbRAl9, TbRA29, TbRA32, TbRA36 a překrývající se klony TbRA35 a TbRA12 (SEQ ID NO: 63, 77, 81, 82, 64, 67, 69, 71, 75, 78, 80, 79, 66). Klon TbRa24 se překrývá s klonem TbRa29.

-23 CZ 297406 B6

Výsledky testů proliferace PBMC a produkce IFN-τ provedených pro reprezentativní rekombinantní antigeny za použití přípravků T-buněk od několika různých pacientů imunních vůči M. tuberculosis jsou uvedeny v tabulkách 2 a 3, v příslušném pořadí.

Tabulka 2 - Výsledky proliferace PBMC v odpovědi na reprezentativní solubilní antigeny

Antigen

Pacient

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

TbRal

-

+

4-4-

-

+

-

4-

+

-

TbRa3

-

±

4-4-

-

+

-

4-4-

±

-

TbRa9

-

nt

4-4·

++

nt

TbRal0

-

+

±

4-

nt

±

-

4-

+

-

TbRall

+

4-

++

+

nt

-

4-4-

4- +

+

nt

TbRal2

-

+

4-

±

4-4-

4-

+

-

4-

-

TbRal6

nt

4-

nt

TbRa24

nt

-

nt

TbRa26

-

4-

nt

-

nt

TbRa29

nt

-

nt

TbRa35

4-4-

nt

+ 4-

4-4-

4- +

4-4-

nt

4-4-

nt

TbRaB

nt

-

nt

TbRaC

nt

-

nt

TbRaD

nt

-

nt

AAMK

-

+

-

nt

-

nt

±

nt

YY

-

nt

-

nt

4-

nt

DPEP

-

4-

-

+ 4-

-

nt

4-4-

4-

+

±

nt

Kontrola

-24CZ 297406 B6

Tabulka 3 - Výsledky produkce IFN-τ v PBMC v odpovědi na reprezentativní solubilní antigeny

Antigen

Pacient

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

TbRal

+

+ +

+++

+

-

+

-

TbRa3

-

+

+ +

-

+

-

+ +

±

-

TbRa9

+ +

+

nt

+ 4-

-

nt

TbRalO

+

±

+

nt

±

-

+

-

TbRal1

+

+ +

+

nt

-

+ +

±

nt

TbRal2

-

+

++ +

4-

±

+

-

+

-

TbRal6

nt

+

nt

TbRa24

nt

+

-

nt

TbRa26

+ +

nt

+

4-

nt

TbRa29

nt

+

-

nt

TbRa3 5

+ +

nt

+ +

+ + +

4-4-4-

nt

4-4-

+ +

+++

++ +

+ +

nt

TbRaB

nt

+ +

4-

nt

TbRaC

nt

+

4-

nt

TbRaD

nt

+

4-

nt

AAMK

-

+

-

nt

-

nt

+

nt

YY

-

nt

-

nt

+

nt

DPEP

+

+ + +

+

-

nt

+ 4-4-

+

±

+

nt

Kontrola

-

V tabulkách 1 a 2 byly odpovědi, které dávaly stimulační index (SI) mezi 1, 2 a 2 (vzhledem k buňkám kultivovaným v médiu samotném) počítány jako ±, SI mezi 2-4 byly počítány jako +, SI 4-8 nebo 2-4 při koncentraci 1 pg nebo menší byly počítány jako ++ a SI vyšší než 8 byly počítány jako +++. Kromě toho, účinek koncentrace na proliferaci a produkci interferonu-τ je pro dva z výše uvedených antigenů ukázán na připojených obrázkách. Pro proliferaci i produkci interferonu-τ byl TbRa3 počítán jako ++ a TbRa9 jako +.

Tyto výsledky naznačují, že tyto solubilní antigeny mohou indukovat proliferaci a/nebo produkci interferonu-τ v T-buňkách získaných od jedinců imunních vůči M. tuberculosis.

B. Použití séra od pacienta pro identifikaci DNA sekvence kódující antigeny M. tuberculosis

Genomová DNA knihovna popsaná výše a další H37Rv knihovna byly vyšetřovány za použití souborů séra získaného od pacientů s aktivní tuberkulózou. Pro přípravu H37Rv knihovny byla izolována genomová DNA M. tuberculosis kmene H37Rv, byla podrobena částečnému trávení Sau3A a byla použita pro konstrukci expresní knihovny za použití Lambda Zap expresního systému (Stratagene, La Jolla, Ca). Tři různé soubory séra, každé obsahující sérum získané od tří jedinců s aktivním plicním nebo pleurálním onemocněním, byly použity při expresním vyšetřování. Soubory byly označeny TbL, TbM a TbH, s ohledem na reaktivitu s H37Ra lyzátem (tj. LbL = nízká reaktivita, TbM = střední reaktivita a TbH = vysoká reaktivita) v ELISA i imunoblotovém testu. Také byly použity čtyři soubory séra od sedmi pacientů s aktivní plicní tuberkulózou.

-25 CZ 297406 B6

Žádné sérum nemělo zvýšenou reaktivitu s 38 kDa fosfátovým vazebným proteinem od M. tuberculosis H37Ra.

Všechny soubory byly pre-adsorbovány lyzátem E. coli a byly použity pro vyšetřování H37Ra a H37Rv expresních knihoven, jak je popsáno v Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Sprin Harbor Laboratories, Cold Sprin Harbor, NY, 1989. Bakteriofágové plaky exprivující imunoreaktivní antigen byly přečištěny. Byly získány fagemidy z plaků a byla odvozena nukleotidová sekvence klonů M. tuberculosis.

Bylo přečištěno 32 klonů. Z těchto klonů 31 představuje sekvence, které nebyly dříve identifikovány u lidského M. tuberculosis. Reprezentativní sekvence identifikovaných DNA molekul jsou uvedeny v SEQ ID NO: 26-51 a 105. Z těchto sekvencí, TbH-8 a TbH-8-2 (SEQ ID NO: 105) jsou nesousedící DNA sekvence ze stejného klonu, a TbH^l (SEQ ID NO: 43) a TbH-4-TWD (SEQ ID NO: 44) jsou nesousedící sekvence ze stejného klonu. Aminokyselinové sekvence pro antigeny zde identifikované jako Tb38-1, TbH-4, TbH-8, TbH-9 a TbH-12 jsou uvedeny v SEQ ID NO: 88 - 92. Srovnání těchto sekvencí se známými sekvencemi v genové bance za použití databází uvedených výše neukázalo žádnou signifikantní homologii s TbH-4, TbH-8, TbH-9 a TbM-3, ačkoliv byly nalezeny slabé homologie s TbH-9. Bylo zjištěno, že TbH12 je homologní k 34 kDa antigennímu proteinu dříve identifikovanému u M. paratuberculosis (Acc. č. S28515). Bylo zjištěno, že Tb38-1 je umístěn 34 párů bází upstream od otevřeného čtecího rámečku pro antigen ESAT-6 dříve identifikovaný u M. bovis (Acc. č. U34848) a u M. tuberculosis (Sorensen et al., Infect. Immun. 63: 1710-1717, 1995).

Sondy odvozené od Tb38-1 a TbH-9, obě izolované z H37Ra knihovny, byly použity pro identifikaci klonů v H37Rv knihovně. Tb38-1 hybridizovala na Tb38-1F2, Tb38-1F3, Tb38-1F5 aTb38-lF6 (SEQ ID NO: 112, 113, 116, 118 a 119). (SEQ ID NO: 112 a 113 jsou nesousedící sekvence z klonu Tb38-1F2). VTb38-lF2 byly odvozeny dva otevřené čtecí rámečky; jeden odpovídající Tb37FL (SEQ ID NO: 114), druhý, částečná sekvence, může být homologní k Tb38-1 a je nazván Tb38-IN (SEQ ID NO: 115). Odvozená aminokyselinová sekvence Tb381F3 je uvedena v SEQ ID NO: 117. TbH-9 sonda identifikovala tři klony v H37Rv knihovně: TbH-9-Fl (SEQ ID NO: 106), který může být homologní k TbH-9 (R37Ra), TbH-9-1 (SEQ ID NO: 108) a TbH-9-4 (SEQ ID NO: 110), kde všechny tyto klony jsou těsně příbuzné sekvence k TbH-9. Odvozené aminokyselinové sekvence pro tyto klony jsou uvedeny v SEQ ID NO: 107, 109a 111.

Výsledky testů na T-buňkách provedených sTb38-l, ESAT-6 a jinými reprezentativními rekombinantními antigeny jsou uvedeny v tabulkách 4A, B a 5, v příslušném pořadí, dále:

Tabulka 4A — Výsledky proliferace PBMC v odpovědi na reprezentativní solubilní antigeny

Antigen	Dárce
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
Tb38-1	+ + +	+	-	-	-	++	-	+	-	++	+ + +
ESAT-6	+ + +	+	+	+	-	+	-	+	+	+ +	+ 4- +
TbH-9	+ +	+ +	-	+ 4-	+	+	++	++	4- +	4-4-	+ 4-

-26CZ 297406 B6

Tabulka 4B - Výsledky produkce interferonu-τ PBMC v odpovědi na reprezentativní solubilní antigeny

Antigen	Dárce
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
Tb38-1	+++	+	-	+	+	+++	-	+ +	-	+++	++ +
ESAT-6	+++	+	+	+	4-	+	-	+	+	+++	+++
TbH-9	++	+ +	-	+ + +	±	+	+ + +	+++	+ +	+++	++

Tabulka 5 - Souhrn odpovědi T-buněk na reprezentativní antigeny

Proliferace Interferon-t celkem

Antigen	pac .4	pac. 5	pac. 6	pac. 4	pac.	5 pac.6
TbH9	+ +	++	+ +	++ +	+ +	++	13
TbM7	-	+	-	++	+	-	4
TbH5	-	+	+	+ +	+ +	+ +	8
TbL23	-	+	+	+ +	+ +	+	7,5
TbH4	-	+ +	+	+ +	+ +	+	7
kontrola	-	-	-	-	-	-	0

Tyto výsledky naznačují, že oba antigeny M. tuberculosis a ESAT-6 podle předkládaného vynálezu mohou indukovat proliferace a/nebo produkci interferonu-τ v T-buňkách získaných od ío jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Podle znalostí vynálezců nebylo o ESAT-6 dříve známo, že by stimuloval imunitní odpověď u lidí.

Sada šesti překrývajících se peptidů pokrývajících aminokyselinovou sekvenci antigenu Tb38-1 byla konstruována za použití metody popsané v příkladu 4. Sekvence těchto peptidů, zde označe15 ných jako pepl-6, jsou uvedeny v SEQ ID NO: 93-98, v příslušném pořadí. Výsledky testů na

T-buňkách za použití těchto peptidů jsou uvedeny v tabulkách 6 a 7. Tyto výsledky potvrzují existenci a napomáhají lokalizaci epitopů pro T-buňky v Tb38-1, které jsou schopné indukovat proliferaci a produkci interferonu-τ v T-buňkách získaných od jedinců imunních vůči M. tuberculosis.

-27CZ 297406 B6

Tabulka 6 - Výsledky proliferace PBMC v odpovědi na Tb38-1 peptidy

Peptid	Pacient
	1	2 3	4	5	6 7	8	9	10	11	12	13
pepl	-	-	-	+	-		-	+	-	-	4-
pep2	+	-	-	+	-		+	±	-	-	+
pep3	-	-	-	-	-		+	-	-	-	+
pep4	++		-	-	+		±	±	-	-	+
pep5	+ +	±	-	-	+		+	-	-	-	+
pep6	-	4-4-	-	-	±		+	+	-	-	+
kontrola											-

Tabulka 7 - Výsledky produkce interferonu-τ PBMC v odpovědi na Tb38-1 peptidy

Peptid Pacient

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13
pepl	4-	-	-		+	-	-	-	-	±		-	4-
pep2		-	-		±	-	-		±	+		-	+
pep3	-	-	-		-	-	-	-	±	-		-	+
pep4	+ +	-	-		-	-	4-	-	±			-	4-
pep5	4-4-	+	-		-	-	4-	-	±	-		-	+
pep6	4-	+ 4-	-		-	-	±	-	+	+		-	4-
kontrola

Příklad 4 - Přečištění a charakterizace polypeptidů z tuberkulinového přečištěného proteinového derivátu

Polypeptid M. tuberculosis byl izolován z tuberkulinového přečištěného proteinového derivátu (PPD) následujícím způsobem.

PPD byl připraven podle publikovaného postupu s některými modifikacemi (Seibert, F. et al., Tuberculin purified protein derivative. Preparation and analyses of large quantity for standart. The Američan Review of Tuberculosis 44: 9 - 25, 1941).

M. tuberculosis kmen Rv byl kultivován po dobu 6 týdnů v syntetickém médiu ve válcových lahvích při 37 °C. Nádoby obsahující bakteriální kulturu byly potom zahřátý na 100 °C ve vodní páře po dobu 3 hodin. Kultury byly potom sterilně filtrovány za použití 0,22 μ filtrátu a kapalná fáze byla koncentrována 20-krát za použití membrány s rozlišovací schopností 3 kDa. Proteiny byly jedenkrát sráženy 50% roztokem síranu amonného a 8-krát 25% roztokem síranu amonné-28CZ 297406 B6 ho. Vzniklé proteiny (PPD) byly frakcionovány kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) za použití Cl8 kolony (7,8 x 300 mM; Waters, Milford, MA) v Biocad HPLC systému (Perseptive Biosystems, Framingham, MA). Frakce byly eluovány z kolony lineárním gradientem od 0 - 100% pufru (0,1% TFA v acetonitrilu). Průtok byl 10 ml/minutu a eluent byl monitorován při 214 nm a při 280 nm.

Bylo získáno šest frakcí, byly sušeny, suspendovány v PBS a byly individuálně testovány na morčatech infikovaných M. tuberculosis na indukci reakce oddálené přecitlivělosti (DTH). Bylo zjištěno, že jedna frakce indukuje silnou DTH reakci a ta byla dále frakcionována RP-HPLC na ío microbore Vydac C18 koloně (katalogové č. 218TP5115) na Perkin Elmer/Applied Biosystems

Division Model 172 HPLC. Frakce byly eluovány lineárním gradientem 5 - 100% pufru (0,05% TFA v acetonitrilu) s průtokem 80 μΙ/minutu. Eluent byl monitorován při 215 nm. Bylo získáno 8 frakcí a byly testovány na indukci DTH u morčat infikovaných M. tuberculosis. Bylo zjištěno, že jedna frakce indukuje silnou DTH s asi 16 mm indurací. Další frakce neindukovaly deteko15 vanou DTH. Pozitivní frakce byla podrobena SDS-PAGE gelové elektroforéze a bylo zjištěno, že obsahuje jediný proteinový proužek o molekulové hmotnosti přibližně 12 kDa.

Tento polypeptid, zde označený jako DPPD, byl sekvencován z amino konce za použití Perkin Elmer/Aplied Biosystems Division Procise 492 proteinového sekvenátoru jak bylo popsáno výše 20 a bylo zjištěno, že má N-koncovou sekvenci uvedenou v SEQ ID NO: 129. Srovnání této sekvence se známými sekvencemi v genové bance jak je popsáno výše neukázalo žádné homologie. Byly izolovány čtyři bromkyanové fragmenty DPPD a bylo zjištěno, že mají sekvence uvedené v SEQ ID NO: 130- 133.

Schopnost antigenu DPPD stimulovat lidské PBMC k proliferaci a k produkci IFN-τ byla testována způsobem popsaným v příkladu 1. Jak ukazuje tabulka 8, bylo zjištěno, že DPD stimuluje proliferaci a vyvolává produkci velkých množství IFN-τ; větších než vyvolává komerční PDD.

Tabulka 8 - Výsledky testu proliferace a produkce IFN-τ v odpovědi na DPPD

Dárce PBMC	Stimulátor	Proliferace (CPM)	IFN-Τ (OD )
A	✓ medium	1,089	0,17
	PPD (komerční)	8,394	1,29
	DPPD	13,451	2,21
B	/· medium	450	0,09
	PPD (komerční)	3,929	1,26
	DPPD	6,184	1,49
C	i medium	541	0,11
	PPD (komerční)	8,907	0,76
	DPPD	23,024	>2,70

Příklad 5 - Syntéza syntetických polypeptidů

Polypeptidy mohou být syntetizovány na Millipore 9050 syntezátoru peptidů za použití FMOC chemikálií s HPTU (o-benzotriazol-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorfosfat) aktivací.

-29CZ 297406 B6

Gly-Cys-Gly sekvence může být navázán na amino-konec peptidů pro umožnění konjugace nebo značení peptidů. Odštěpení peptidů ze solidního nosiče může být provedeno za použití následující štěpící směsi: kyselina trifluoroctová:ethandithiol:thioanisol:voda:fenol (40:1:2:2:3). Po štěpení po dobu 2 hodin mohou být peptidy vysráženy v chladném methyl-t-butyl-etheru. Peptidové pelety mohou potom být rozpuštěny ve vodě obsahující 0,1% kyselinu trifluoroctovou (TFA) a mohou být lyofilizovány před přečištěním Cl8 HPCL na reverzní fázi. Gradient 0-60% acetonitrilu (obsahujícího 0,1% TFA) ve vodě (obsahující 0,1% TFA) může být použít pro elucí peptidů. Po lyofilizaci přečištěných frakcí mohou být peptidy charakterizovány za použití elektrosprayové hmotové spektrometrie a aminokyselinovou analýzou.

Z předešlého popisuje zřejmé, že ačkoliv byla pro ilustraci popsána specifická provedení vynálezu, mohou být provedeny jejich různé modifikace, bez narušení rozsahu a duchu předkládaného vynálezu.

Seznam sekvencí (1) Obecné informace (i) Přihlašovatel: Corixa Corporation (ii) Název vynálezu: Sloučeniny a způsoby pro imunoterapii a diagnostiku tuberkulózy (iii) Počet sekvencí: 137 (iv) Adresa pro korespondenci:

(A) Adresa: Seed and Berry LLP (B) Ulice: 6300 Columbia Center, 701 Fifth Avenue (C) Město: Seattle (D) Země: Washington (E) Stát: USA (F) ZIP: 98104-7092 (v) Počítačová čtecí forma:

(A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilní (C) Operační systém: PC—DOS/MS—DOS (D) Software: Petentln Release #1,0, verse #1.30 (vi) Data současné přihlášky:

(A) Číslo přihlášky: US neznámé (B) Datum podání: 27. 8. 1996 (C) Klasifikace:

(vii) Zástupce/Agent-informace:

(A) Jméno: Maki, David J.

(B) Registrační číslo: 31392 (C) Odkaz/číslo rejstříku: 210121.411PC

-30CZ 297406 B6 (ix) Telekomunikační informace:

(A) Telefon: (206) 622^1900 (B) Telefax: (206)682-6031 (2) Informace pro SEQ ID NO: 1:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 766 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 1:

CGAGGCACCG GTAGTTTGAA CCAAACGCAC AATCGACGGG CAAACGAACG GAAGAACACA60

ACCATGAAGA TGGTGAAATC GATCGCCGCA GGTCTGACCG CCGCGGCTGC AATCGGCGCC120

GCTGCGGCCG GTGTGACTTC GATCATGGCT GGCGGCCCGG TCGTATACCA GATGCAGCCG180

GTCGTCTTCG GCGCGCCACT GCCGTTGGAC CCGGCATCCG CCCCTGACGT CCCGACCGCC240

GCCCAGTTGA CCAGCCTGCT CAACAGCCTC GCCGATCCCA ACGTGTCGTT TGCGAACAAG300

GGCAGTCTGG TCGAGGGCGG CATCGGGGGC ACCGAGGCGC GCATCGCCGA CCACAAGCTG360

AAGAAGGCCG CCGAGCACGG GGATCTGCCG CTGTCGTTCA GCGTGACGAA CATCCAGCCG420

GCGGCCGCCG GTTCGGCCAC CGCCGACGH TCCGTCTCGG GTCCGAAGCT CTCGTCGCCG480

GTCACGCAGA ACGTCACGTT CGTGAATCAA GGCGGCTGGA TGCTGTCACG CGCATCGGCG540

ATGGAGTTGC TGCAGGCCGC AGGGNAACTG ATTGGCGGGC CGGNTTCAGC CCGCTGTTCA600

GCTACGCCGC CCGCCTGGTG ACGCGTCCAT GTCGAACACT CGCGCGTGTA GCACGGTGCG660

GTNTGCGCAG GGNCGCACGC ACCGCCCGGT GCAAGCCGTC CTCGAGATAG GTGGTGNCTC720

GNCACCAGNG ANCACCCCCN NNTCGNCNNT TCTCGNTGNT GNATGA766

-31 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 2:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 752 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 2:

ATGCATCACC ATCACCATCA CGATGAAGTC

GACTTCCTCA GCG.4GCTGGA CGCTCCTGCG

GTGGAAGGGC TCCCGCCGGG CTCGGCGTTG

TCCCGGTTCC TACTCGACCA AGCCATCACG

TTTCTCGACG ACGTGACCGT GAGCCGTCGC

TTCAATGTCG TCGATGTCGG GAGTCTCAAC

TCGGCGGTGC TGGCGAACGG CGACGAGGTC

ACCGGACCCA AGCAAGGCGA GGATGACGGG

GCCCCGCGCT GGCCGGGATG TCGATCGGGG

CCCTGATGTC CACCATCTCC AAGATTCGAT

CCCCGCGGGC CTCATTCNGG GGTNTCGGCN

TTGCNAATTC NTTCTTCNCT GCCCNNAAAG

TCCNGGGCCC NTCCTNGAAN CCCCNTCCCC

ACGGTAGAGA CGACCTCCGT CTTCCGCGCA60

CAAGCGGGTA CGGAGAGCGC GGTCTCCGGG120

CTGGTAGTCA AACGAGGCCC CAACGCCGGG180

TCGGCTGGTC GGCATCCCGA CAGCGACATA240

CATGCTGAAT TCCGGHGGA AAACAACGAA300

GGCACCTACG TCAACCGCGA GCCCGTGGAT360

CAGATCGGCA AGCTCCGGTT GGTGTTCTTG420

AGTACCGGGG GCCCGTGAGC GCACCCGATA480

CGGTCCTCCG ACCTGCTACG ACCGGATTTT540

TCTTGGGAGG CTTGAGGGTC NGGGTGACCC600

GGTTTCACCC CNTACCNACT GCCNCCCGGN660

GGACCNTTAN CTTGCCGCTN GAAANGGTNA720

CT752

-32CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 3:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 813 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 3:

CATATGCATC ACCATCACCA TCACACTTCT

CCACGCGACA CCGGGCCCGA TCGATCTGCT

CAGCGCGATG CCCTATGTTT GTCGTCGACT

GCGGCCGGCG GTGCTGCAAA CTACTCCCGG

ATGCTGGTCA CGGCTGTCGT TTTGCTCTGT

ACCTACTGCG AGGAGTTGAA AGGCACCGAT

GACCCGGCCT ACAACATCAA CATCAGCCTG

GAAAATTACA TCGCCCAGAC GCGCGACAAG

CGCGAAGCCC CCTACGAATT GAATATCACC

CGTGGTACGC AGGCCGTGGT GCTCAMGGTC

ACCACGTACA AGGCCTTCGA TTGGGACCAG

CTGTGGCAGG CTGACACCGA TCCGCTGCCA

GAGCAA.CGCA GACCGGGACA ACWGGTATCG

TGAAATTATC ACAACTTCGC AGTCACNAAA

AACCGCCCAG CGCGTCGGGG GCGTCGAGCA60

AGCHGAGTC TGGTCAGGCA TCGTCGTCAG120

CAGATATCGC GGCAATCCAA TCTCCCGCCT180

AGGAATTTCG ACGTGCGCAT CAAGATCTTC240

TGTTCGGG7G TGGCCACGGC CGCGCCCAAG300

ACCGGCCAGG CGTGCCAGAT TCAAATGTCC360

CCCAGTÍACT ACCCCGACCA GAAGTCGCTG420

TTCCTCAGCG CGGCCACATC GTCCACTCCA480

TCGGCCACAT ACCAGTCCGC GATACCGCCG540

TACCACAACG CCGGCGGCAC GCACCCAACG600

GCCTATCGCA AGCCAATCAC CTATGACACG660

GTCGTCTTCC CCATTGTTGC AAGGTGAACT720

ATAGCCGCCN AATGCCGGCT TGGAACCCNG780

NAA813

-33CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 4:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 447 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 4:

CGGTATGMC ACGGCCGCGT CCGATAACTT CCAGCTGTCC CAGGGTGGGC AGGGATTCGC60

CATTCCGATC GGGCAGGCGA TGGCGATCGC GGGCCAGATC CGATCGGGTG GGGGGTCACC120

CACCGTTCAT ATCGGGCCTA CCGCCTTCCT CGGCTTGGGT GHGTCGACA ACAACGGCAA180

CGGCGCACGA GTCCAACGCG TGGTCGGGAG CGCTCCGGCG GCAAGTCTCG GCATCTCCAC240

CGGCGACGTG ATCACCGCGG TCGACGGCGC TCCGATCAAC TCGGCCACCG CGATGGCGGA300

CGCGCTTAAC GGGCATCATC CCGGTGACGT CATCTCGGTG AACTGGCAAA CCAAGTCGGG360

CGGCACGCGT ACAGGGAACG TGACATTGGC CGAGGGACCC CCGGCCTGAT TTCGTCGYGG420

ATACCACCCG CCGGCCGGCC AATTGGA447 (2) Informace pro SEQ ID NO: 5:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 604 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 5:

GTCCCACTGC GGTCGCCGAG TATGTCGCCC AGCAAATGTC TGGCAGCCGC CCAACGGAAT60

CCGGTGATCC GACGTCGCAG GTTGTCGAAC CCGCCGCCGC GGAAGTATCG GTCCATGCCT120

AGCCCGGCGA CGGCGAGCGC CGGAATGGCG CGAGTGAGGA GGCGGGCAAT TTGGCGGGGC180

CCGGCGACGG NGAGCGCCGG AATGGCGCGA GTGAGGAGGT GGNCAGTCAT GCCCAGNGTG240

ATCCAATCAA CCTGNATTCG GNCTGNGGGN CCATTTGACA ATCGAGGTAG TGAGCGCAAA300

TGAATGATGG AAAACGGGNG GNGACGTCCG NTGTTCTGGT GGTGNTAGGT GNCTGNCTGG360

-34CZ 297406 B6

NGTNGNGGNT ATCAGGATGT TCTTCGNCGA AANCTGATGN CGAGGAACAG GGTGTNCCCG

420

NNANNCCNAN GGNGTCCNAN CCCNNNNTCC TCGNCGANAT CANANAGNCG NTTGATGNGA

4Θ0

NAAAAGGGTG GANCAGNNNN AANTNGNGGN CCNAANAANC NNNANNGNNG NNAGNTNGNT

540

NNNTNTTNNC ANNNNNNNTG NNGNNGNNCN NNNCAANCNN NTNNNNGNAA NNGGNTTNTT

600

NAAT

604 (2) Informace pro SEQ ID NO: 6:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 633 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 6:

TTGCANGTCG AACCACCTCA CTAAAGGGAA

CGCTCTAGAA CTAGTGKATM YYYCKGGCTG

TAACGGTCCT GTTACGGTGA TCGAATGACC

CGGGTGCGAA CCCTCACCCT CMCCGGCCG

CGGGATCGGT TTTTCGCGGY GTTGGYCGAC

ATCCTCACCG GYGCCGATCC GGTGTTCTGC ₁₅ GCAGACCGCG CTGCCGGACA TCTCACCGCG

CGCGATCAAC GGCGCCGCGG TCACCGGCGG

GATCGCCTCC GAGCACGCCC GCTTCGNCGA

CTGGGGACTC AGTGTGTGCT TGCCGCAAAA

CCTGACCGGC GACTACCTGT CCGTGACCGA

CAAAAGCTNG AGCTCCACCG CGGTGGCGGC60

CAGSAATYCG GYACGAGCAT TAGGACAGTC120

GACGACATCC TGCTGATCGA CACCGACGAA180

CAGTCCCGYA ACGCGCTCTC GGCGGCGCTA240

GCCGAGGYCG ACGACGACAT CGACGTCGTC300

GCCGGACTGG ACCTCAAGGT AGCTGGCCGG360

GTGGGCGGCC ATGACCAAGC CGGTGATCGG420

GCTCGAACTG GCGCTGTACT GCGACATCCT480

CACCCACGCC CGGGTGGGGC TGCTGCCCAC540

GGTCGGCATC GGNCTGGGCC GGTGGATGAG600

CGC633

-35CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 7:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1362 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 7:

CGACGACGAC GGCGCCGGAG AGCGGGCGCG

CGGCACCACC CAGGAGGGAG TCGAATCATG

CCCCGCCGAG CCGGCGGCGC GGTCGCCGAG

CGGCTGCCCG AGCCGCTCGC CATGCTGTCC

GCGACGTTGC GCGAGACACT GCTGGTGGGC

GCCGCCGCCG TCGCGGCCAG CCTGCGCTGC

CTGTACGCGG CAGGCCAAAC CGACACCGCC

GCCGGTGACC CGAACGCGCC GTATGTGGCG

CCGCCGGCAC CGTTCGGCCC GGATGTCGCC

CACTTCATCG CACGCCTGGT CCTGGTGCTG

CGCGCCCAAC AGCTCATGCG CCGCGCCGGT

AACGGCGATC GACGCGGCCC TGGCCAGAGT60

AAAHTGTCA ACCATATTGA GCCCGTCGCG120

GTCTATGCCG AGGCCCGCCG CGAGTTCGGC180

CCGGACGAGG GACTGCTCAC CGCCGGCTGG240

CAGGTGCCGC GTGGCCGCAA GGAAGCCGTC300

CCCTGGTGCG TCGACGCACA CACCACCATG360

GCGGCGATCT TGGCCGGCAC AGCACCTGCC420

TGGGCGGCAG GAACCGGGAC ACCGGCGGGA480

GCCGAATACC TGGGCACCGC GGTGCAATTC540

CTGGACGAAA CCTTCCTGCC GGGGGGCCCG600

GGACTGGTGT TCGCCCGCAA GGTGCGCGCG660

-36CZ 297406 B6

GAGCATCGGC CGGGCCGCTC CACCCGCCGG CTCGAGCCGC GAACGCTGCC CGACGATCTG 720

GCATGGGCAA CACCGTCCGA GCCCATAGCA ACCGCGTTCG CCGCGCTCAG CCACCACCTG 780

GACACCGCGC CGCACCTGCC GCCACCGACT CGTCAGGTGG TCAGGCGGGT CGTGGGGTCG840

TGGCACGGCG AGCCAATGCC GATGAGCAGT CGCTGGACGA ACGAGCACAC CGCCGAGCTG900

CCCGCCGACC TGCACGCGCC CACCCGTCTT GCCCTGCTGA CCGGCCTGGC CCCGCATCAG960

GTGACCGACG ACGACGTCGC CGCGGCCCGA TCCCTGCTCG ACACCGATGC GGCGCTGGTT1020

GGCGCCCTGG CCTGGGCCGC CTTCACCGCC GCGCGGCGCA TCGGCACCTG GATCGGCGCC1080

GCCGCCGAGG GCCAGGTGTC GCGGCAAAAC CCGACTGGGT GAGTGTGCGC GCCCTGTCGG1140

TAGGGTGTCA TCGCTGGCCC GAGGGATCTC GCGGCGGCGA ACGGAGGTGG CGACACAGGT1200

GGAAGCTGCG CCCACTGGCT TGCGCCCCAA CGCCGTCGTG GGCGTTCGGT TGGCCGCACT1260

GGCCGATCAG GTCGGCGCCG GCCCKGGCC GAAGGTCCAG CTCAACGTGC CGTCACCGAA1320

GGACCGGACG GTCACCGGGG GTCACCCTGC GCGCCCAAGG AA1362 (2) Informace pro SEQ ID NO: 8:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1458 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina o (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

-37CZ 297406 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 8:

GCGACGACCC CGATATGCCG GGCACCGTAG CGAAAGCCGT CGCCGACGCA CTCGGGCGCG60

GTATCGCTCC CGTTGAGGAC ATTCAGGACT GCGTGGAGGC CCGGCTGGGG GAAGCCGGTC120

TGGATGACGT GGCCCGTGK TACATCATCT ACCGGCAGCG GCGCGCCGAG CTGCGGACGG180

CTAAGGCCH GCTCGGCGTG CGGGACGAGT TAAAGCTGAG CKGGCGGCC GTGACGGTAC240

TGCGCGAGCG CTATCTGCTG CACGACGAGC AGGGCCGGCC GGCCGAGTCG ACCGGCGAGC300

TGATGGACCG ATCGGCGCGC TGTGTCGCGG CGGCCGAGGA CCAGTATGAG CCGGGCTCGT360

CGAGGCGGTG GGCCGAGCGG TTCGCCACGC TAHACGCAA CCTGGAATTC CTGCCGAAK420

CGCCCACGTT GATGAACTCT GGCACCGACC TGGGACTGCT CGCCGGCTGT TTTGTTCTGC480

CGATTGAGGA TTCGCTGCAA TCGATCTTTG CGACGCTGGG ACAGGCCGCC GAGCTGCAGC540

GGGCTGGAGG CGGCACCGGA TATGCGTTCA GCCACCTGCG ACCCGCCGGG 6ATCGGGTGG600

CCTCCACGGG CGGCACGGCC AGCGGACCGG TGTCGTTTCT ACGGCTGTAT GACAGTGCCG660

CGGGTGTGGT CTCCATGGGC GGTCGCCGGC GTGGCGCCTG TATGGCTGTG CHGATGTGT720

CGCACCCGGA TATCTGTGAT TTCGTCACCG CCAAGGCCGA ATCCCCCAGC GAGCTCCCGC780

ATTTCAACCT ATCGGTTGGT GTGACCGACG CGTTCCTGCG GGCCGTCGAA CGCAACGGCC840

TACACCGGCT GGTCAATCCG CGAACCGGCA AGATCGTCGC GCGGATGCCC GCCGCCGAGC900

TGTTCGACGC CATCTGCAAA GCCGCGCACG CCGGTGGCGA TCCCGGGCTG GTGTTTCTCG960

ACACGATCAA TAGGGCAAAC CCGGTGCCGG GGAGAGGCCG CATCGAGGCG ACCAACCCGT1020

GCGGGGAGGT CCCACTGCTG CCTTACGAGT CATGTAATCT CGGCTCGATC AACCTCGCCC1080

GGATGCTCGC CGACGGTCGC GTCGACTGGG ACCGGCTCGA GGAGGTCGCC GGTGTGGCGG1140

TGCGGTTCCT TGATGACGTC ATCGATGTCA GCCGCTACCC CKCCCCGAA CTGGGTGAGG1200

CGGCCCGCGC CACCCGCAAG ATCGGGCTGG GAGTCATGGG TTTGGCGGAA CTGCHGCCG1260

CACTGGGTAT TCCGTACGAC AGTGAAGAAG CCGTGCGGn AGCCACCCGG CTCATGCGTC1320

GCATACAGCA GGCGGCGCAC ACGGCATCGC GGAGGCTGGC CGAAGAGCGG GGCGCATTCC1380

CGGCGTTCAC CGATAGCCGG TTCGCGCGGT CGGGCCCGAG GCGCAACGCA CAGGTCACCT 1440

CCGTCGCTCC GACGGGCA1458

-38CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 9:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 862 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 9:

ACGGTGTAAT CGTGCTGGAT CTGGAACCGC

GGCGCAGGGG GCTGGCCCTG GGCATCGCGG

TCATCGCCTT CGTCGACAGC AGOGCCGGTG

CCGCCCAGAG CCATCCGGGC TCGCCGGCAC

AAGGT.AACGC CGCCGCGGCC CCGCCGCAGG

CCGCGGTGCA GCCGCCGCCG GTGCTCAAGG

CCGTCAAAGG TTTGACCAAC GCGCCGCAGT

TGGTGGTCAC CAACATCGGC CTGGTGTCCT

CCGCCTACGT TTACTCGCTG GACAACAAGC

CGAATGAGAC GCTGGTCAAG ACGTTITCCC

GGACCGGGAT GGGATCGGCG CCGCGCTGCC

CCTACAATCT CGTGGTACAA CTGGGCAATC

ATCAGCCGCC GCCGCCGCCC GGGCCGGTAC

CGGAGTCTCC CGCGCAAGGC GGATAATTAT

GACAACCCCT CGCCTCGTGC CG

GTGGCCCGCT ACCTACCGAG ATCTACTGGC 60

TCGTCGTAGT CGGGATCGCG GTGGCCATCG120

CCAAACCGGT CAGCGCCGAC AAGCCGGCCT180

CCCAAGCACC CCAGCCGGCC GGGCAAACCG240

GCCAAAACCC CGAGACACCC ACGCCCACCG300

AAGGGGACGA HGCCCCGAT ÍCGACGCTGG360

ACTACGTCGG CGACCAGCCG AAGTTCACCA420

GTAAACGCGA CGTTGGGGCC GCGGTGKGG480

GGTTGTGGTC CAACCTGGAC TGCGCGCCCT540

CCGGTGAGCA GGTAACGACC GCGGTGACCT600

CATTGCCGCG GCCGGCGATC GGGCCGGGCA660

TGCGCTCGCT GCCGGTTCCG TTCATCCTGA720

CCGCTCCGGG TCCAGCGCAG GCGCCTCCGC780

TGATCGCTGA TGGTCGATTC CGCCAGCTGT840

862

-39CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 10:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 662 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 10:

TTGATCAGCA CCGGCAAGGC GTCACATGCC

GACACCCCGG GCGCCAAGAT CGTCGAAGTA

GTGCCGAAGG GCGTCGTTGT CACCAAGGTC

TTGGTTGCCG CCGTGCGGTC CAAAGCGCCG

CCCTCGGGCG GTAGCCGCAC AGTGCAAGTC

TCGCCGCGCA GTGTTCAAAG CTCGGATATA

TGGTGGTTGG CCGGGCACK GTCGTCGTCG

ACCACAGCGG GCCGCKGTC ACCGAGCTGC

TGGTGGCGGT GTCGGCCGAC GAGGTCGAGA

GCGGGGTGGA CCTGGTGGTG TCGGTCGGCG

CGGAAGCCAC CCGNGACATT CT

TCCCTGGGTG TGCAGGTGAC CAATGACAAA60

GTGGCCGGTG GTGCTGCCGC GAACGCTGGA120

GACGACCGCC CGATCAACAG CGCGGACGCG180

GGCGCCACGG TGGCGCTAAC CTTTCAGGAT240

ACCCTCGGCA AGGCGGAGCA GTGATGAA.GG300

CGGTGGCACC CATGGAACAG CGTGCGGAGT360

TTGACGATCG CACGGCGCAC GGCGATGAAG420

TCACCGAGGC CGGGTTTGTT GTCGACGGCG480

TCCGAAATGC GCTGAACACA GCGGTGATCG540

GGACCGGNGT GACGNCTCGC GATGTCACCC600

622

-40CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 11:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1200 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 11:

GGCGCAGCGG TAAGCCTGTT GGCCGCCGGC

ACCAACAGCT CGTCGTCAGG CGCAGGCGGA

AAGGAGCTCC ACTCCAGCGG CTCGACCGCA

GCCTACGTGC GATCGTGCCC GGGCTACACG

GGGGTGACCC AGTTTCTCAA CAACGAAACC

CCGTCGACCG GTCAACCTGA CCGGTCGGCG

CCGACGGTGT TCGGCCCGAT CGCGATCACC

CTTGACGGAC CCACTACCGC CAAGATTTTC

CAGATCCAAG CCCTCAACTC CGGCACCGAC

CGCAGCGACA AGTCCGGTAC GTCGGACAAC

GGGGCGTGGG GCAAAGGCGC CAGCGAMCG

GGGAACAACG GAACGTCGGC CCTACTGCAG

TGGTCGTTTG CGGTGGGTAA GCAGTTGAAC

GATCCAGTGG CGATCACCAC CGAGTCGGTC

GGACAAGGCA ACGACCTGGT ATTGGACACG

TCTTACCCGA TCGTGCTGGC GACCTATGAG

ACCGGTACTG CGGTAAGGGC GTTTATGCAA . GACCAATACG GCTCCAHCC GTTGCCCAAA

AATGCTATTT CKGACCTAG TGAAGGGAAT

GGGTCGCAAT TTGGGCCGTA TCAGCTATTG

ACACTGGTGT TGACAGCATG CGGCGGTGGC60

ACGTCTGGGT CGGTGCACTG CGGCGGCAAG120

CAAGAAAATG CCATGGAGCA GTTCGTCTAT180

TTGGACTACA ACGCCAACGG GTCCGGTGCC240

GATTTCGCCG GCTCGGATGT CCCGTTGAAT300

GAGCGGTGCG GTTCCCCGGC ATGGGACCTG360

TACAATATCA AGGGCGTGAG CACGCTGAAT420

AACGGCACCA TCACCGTGTG GAATGATCCA480

CTGCCGCCAA CACCGATTAG CGTTATCTTC540

TTCCAGAAAT ACCTCGACGG TGTATCCAAC600

TTCAGCGGGG GCGTCGGCGT CGGCGCCAGC660

ACGACCGACG GGTCGATCAC CTACAACGAG720

ATGGCCCAGA TCATCACGTC GGCGGGTCCG780

GGTAAGACAA TCGCCGGGGC CAAGATCATG840

TCGTCGTTCT ACAGACCCAC CCAGCCTGGC900

ATCGTCTGCT CGAAATACCC GGATGCGACG960

GCCGCGATTG GTCCAGGCCA AGAAGGCCTG1020

TCGTTCCMG CAAAATTGGC GGCCGCGGTG1080

TCGACGGTGA GCGATGCCGT TCCGCAGGTA1140

CGGCTGCTGG GCCGAGGCGG GATGGGCGAG1200

-41 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 12:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1155 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 12:

GCAAGCAGCT GCAGGTCGTG CTGTTCGACG AACTGGGCAT GCCGAAGACC AAACGCACCA60

AGACCGGCTA CACCACGGAT GCCGACGCGC TGCAGTCGTT GTTCGACAAG ACCGGGCATC120

CGTTTCTGCA ACATCTGCTC GCCCACCGCG ACGTCACCCG GCTCAAGGTC ACCGTCGACG180

GGTTGCTCCA AGCGGTGGCC GCCGACGGCC GCATCCACAC CACGTTCAAC CAGACGATCG240

CCGCGACCGG CCGGCTCTCC TCGACCGAAC CCAACCTGCA GAACATCCCG ATCCGCACCG300

ACGCGGGCCG GCGGATCCGG GACGCGTTCG TGGTCGGGGA CGGTTACGCC GAGTTGATGA360

CGGCCGACTA CAGCCAGATC GAGATGCGGA TCATGGGGCA CCTGTCCGGG GACGAGGGCC420

TCATCGAGGC GTTCAACACC GGGGA.GGACC TGTATTCGTT CGTCGCGTCC CGGGTGTTCG480

GTGTGCCCAT CGACGAGGTC ACCGGCGAGT TGCGGCGCCG GGTCAAGGCG ATGTCCTACG540

GGCTGGTTTA CGGGTTGAGC GCCTACGGCC TGTCGCAGCA GTTGAAAATC TCCACCGAGG600

AAGCCAACGA GCAGATGGAC GCGTATTTCG CCCGATTCGG CGGGGTGCGC GACTACCTGC660

GCGCCGTAGT CGAGCGGGCC CGCAAGGACG GCTACACCTC GACGGTGCTG GGCCGTCGCC720

GCTACCTGCC CGAGCTGGAC AGCAGCAACC GTCAAGTGCG GGAGGCCGCC GAGCGGGCGG780

CGCTGAACGC GCCGATCCAG GGCAGCGCGG CCGACATCAT CAAGGTGGCC ATGATCCAGG840

TCGACAAGGC GCTCAACGAG GCACAGCTGG CGTCGCGCAT GCTGCTGCAG GTCCACGACG900

AGCTGCTGTT CGAAATCGCC CCCGGTGAAC GCGAGCGGGT CGAGGCCCTG GTGCGCGACA960

AGATGGGCGG CGCHACCCG CTCGACGTCC CGCTGGAGGT GTCGGTGGGC TACGGCCGCA1020

GCTGGGACGC GGCGGCGCAC TGAGTGCCGA GCGTGCATCT GGGGCGGGAA TTCGGCGATT1080

TTTCCGCCCT GAGTTCACGC TCGGCGCAAT CGGGACCGAG TTTGTCCAGC GTGTACCCGT1140

CGAGTAGCCT CGTCA1155

-42CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 13:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1771 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 13:

GAGCGCCGTC TGGTGTTTGA ACGGTTTTAC CGGTCGGCAT CGGCACGGGC GTTGCCGGGT60

TCGGGCCTCG GGTTGGCGAT CGTCAAACAG GTGGTGCTCA ACCACGGCGG AKGCTGCGC120

ATCGAAGACA CCGACCCAGG CGGCCAGCCC CCTGGAACGT CGATTTACGT GCTGCTCCCC180

GGCCGTCGGA TGCCGATTCC GCAGCTTCCC GGTGCGACGG CTGGCGCTCG GAGCACGGAC240

ATCGAGAACT CTCGGGG7TC GGCGAACGK ATCTCAGTGG AATCTCAGTC CACGCGCGCA300

ACCTAGTTGT GCAGTTACTG TTGAAAGCCA CACCCATGCC AGTCCACGCA TGGCCA4GTT360

GGCCCGAGTA GTGGGCCTAG TACAGGAAGA GCAACCTAGC GACATGACGA ATCACCCACG420

GTATTCGCCA CCGCCGCAGC AGCCGGGAAC CCCAGGTTAT GCTCAGGGGC AGCAGCAAAC480

GTACAGCCAG CAGTTCGACT GGCGTTACCC ACCGTCCCCG CCCCCGCAGC CAACCCAGTA540

CCGTCAA.CCC TACGAGGCGT TGGGTGGTAC CCGGCCGGGT CTGATACCTG GCGTGATTCC600

GACCATGACG CCCCCTCCTG GGATGGTTCG CCAACGCCCT CGTGCAGGCA TGTTGGCCAT660

CGGCGCGGTG ACGATAGCGG TGGTGTCCGC CGGCATCGGC GGCGCGGCCG CATCCCTGGT720

CGGGTTCAAC CGGGCACCCG CCGGCCCCAG CGGCGGCCCA GTGGCTGCCA GCGCGGCGCC780

AAGCATCCCC GCAGCAAACA TGCCGCCGGG GTCGGTCGAA CAGGTGGCGG CCAAGGTGGT840

-43CZ 297406 B6

GCCCAGTGTC GTCATGTTGG AAACCGATCT GGGCCGCCAG TCGGAGGAGG GCTCCGGCAT 900

CATTCTGTCT GCCGAGGGGC TGATCTTGAC CAACAACCAC GTGATCGCGG CGGCCGCCAA960

GCCTCCCCTG GGCAGTCCGC CGCCGAAAAC GACGGTAACC TTCTCTGACG GGCGGACCGC1020

ACCCTTCACG GTGGTGGGGG CTGACCCCAC CAGTGATATC GCCGTCGTCC GTGTTCAGGG1080

CGTCTCCGGG CTCACCCCGA TCTCCCTGGG TTCCTCCTCG GACCTGAGGG TCGGTCAGCC1140

GGTGCTGGCG ATCGGGTCGC CGCTCGGTTT GGAGGGCACC GTGACCACGG GGATCGTCAG1200

CGCTCTCAAC CGTCCAGTGT CGACGACCGG CGAGGCCGGC AACCAGMCA CCGTGCTGGA1260

CGCCATTCAG ACCGACGCCG CGATCAACCC CGGTAACTCC GGGGGCGCGC TGGTGAACAT1320

GAACGCTCAA CTCGTCGGAG TCAACTCGGC CAKGCCACG CTGGGCGCGG ACTCAGCCGA1380

TGCGCAGAGC GGCTCGATCG GTCTCGGTTT TGCGATTCCA GTCGACCAGG CCAAGCGCAT1440

CGCCGACGAG KGATCAGCA CCGGCAAGGC GTCACATGCC TCCCTGGGTG TGCAGGTGAC1500

CAATGACAAA GACACCCCGG GCGCCAAGAT CGTCGAAGTA GTGGCCGGTG GTGCTGCCGC1560

GAACGCTGGA GTGCCGAAGG GCGTCGTTGT CACCAAGGTC GACGACCGCC CGATCAACAG1620

CGCGGACGCG TTGGTTGCCG CCGTGCGGTC CAAAGCGCCG GGCGCCACGG TGGCGCTAAC1680

CTTTCAGGAT CCCTCGGGCG GTAGCCGCAC AGTGCAAGTC ACCCTCGGCA AGGCGGAGCA1740

GTGATGAAGG TCGCCGCGCA GTGTTCAAAG C1771

-44CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 14:

(i) Charakteristika sekvence:

(B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 14:

CTCCACCGCG GTGGCGGCCG CTCTAGAACT AGTGGATCCC CCGGGCTGCA GGAATTCGGC60

ACGAGGATCC GACGTCGCAG GHGTCGAAC CCGCCGCCGC GGAAGTATCG GTCCATGCCT120

AGCCCGGCGA CGGCGAGCGC CGGAATGGCG CGAGTGAGGA GGCGGGCAAT KGGCGGGGC180

CCGGCGACGG CGAGCGCCGG AATGGCGCGA GTGAGGAGGC GGGCAGTCAT GCCCAGCGTG240

ATCCAATCAA CCTGCATTCG GCCTGCGGGC CCATTTGACA ATCGAGGTAG TGAGCGCAAA300

TGAATGATGG AAAACGGGCG GTGACGTCCG CTGTTCTGGT GGTGCTAGGT GCCTGCCTGG350

CGTTGTGGCT ATCAGGATGT TCTTCGCCGA AACCTGATGC CGAGGAACAG GGTGTTCCCG420

TGAGCCCGAC GGCGTCCGAC CCCGCGCTCC TCGCCGAGAT CAGGCAGTCG CTTGATGCGA480

CAAAAGGGTT GACCAGCGTG CACGTAGCGG TCCGAACAAC CGGGAAAGTC GACAGCTTGC540

TGGGTATTAC CAGTGCCGAT GTCGACGTCC GGGCCAATCC GCTCGCGGCA MGGGCGTAT600

GCACCTACAA CGACGAGCAG GGTGTCCCGT HCGGGTACA AGGCGACAAC ATCTCGGTGA660

AACTGTTCGA CGACTGGAGC AATCTCGGCT CGATTTCTGA ACTGTCAACT TCACGCGTGC720

TCGATCCTGC CGCTGGGGTG ACGCAGCTGC TGTCCGGTGT CACGAACCTC CAAGCGCAAG780

GTACCGAAGT GATAGACGGA ATTTCGACCA CCAAAATCAC CGGGACCATC CCCGCGAGCT840

CTGTCAAGAT GCTTGATCCT GGCGCCAAGA GTGCAAGGCC GGCGACCGTG TGGATTGCCC900

AGGACGGCTC GCACCACCTC GTCCGAGCGA GCATCGACC7 CGGATCCGGG TCGATTCAGC960

TCACGCAGTC GAAATGGAAC GAACCCGTCA ACGTCGACTA GGCCGAAGK GCGTCGACGC1020

GTTGNTCGAA ACGCCCTTGT GAACGGTGTC AACGGNAC1058

-45 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 15:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 542 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 15:

GAATTCGGCA CGAGAGGTGA TCGACATCAT

GGCGGCGGAG GCGGTCCAGC GGGCGCGGGA

CATTGAGCAG GACATGGCCG TGGACAGCGC

AGTGTCGTTC AAGATGAGGC CGGCGCAACC

AAATCGCACG GTTTGCGGTT GATTCGTGCG

GCGCGGCCCA GGTCCGCGTG CTGCCGTATC

CCGGAGTTAA TGCTTCGCGT CGACCCGAAC

CCGTGGCCAG CCCGTCGATG CCCGAGTTGC

AGCGTCCGTA GGCGGCGGTG CTGACCGGCT

GG

CGGGACCAGC CCCACATCCT GGGAACAGGC60

TAGCGTCGAT GACATCCGCG TCGCTCGGGT120

CGGCAAGATC ACCTACCGCA TCAAGCTCGA180

GCGCTAGCAC GGGCCGGCGA GCAAGACGCA240

ATTTTGTGTC TGCTCGCCGA GGCCTACCAG300

CAGGCGTGCA TCGCGATTCC GGCGGCCACG360

TGGGCGATCC GCCGGNGAGC TGATCGATGA420

CCGAGGAAAC GTGCTGCCAG GCCGGTAGGA480

CTGCCTGCGC CCTCAGTGCG GCCAGCGAGC540

542

-46CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 16:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 913 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 16:

CGGTGCCGCC CGCGCCTCCG KGCCCCCAT

CACCATCACC GCCTTTGCCG CCGGCACCGC

KGACCCTGG CCGCCGGCGC CGCCATTGCC

GCCGTCGCCA CCGTCGCCGC CGCTGCCGTT

CAA.GCCCGCC GCCGGCACCG TTGCCGCCTT

CCGAACAGCC AMGCACCGTT GCCGCCAGCC

GCCGCCGGAC CCGCCAKAC CGCCGTTCCC

GTTTGCCGCC AATATTCGGC GGGCACCGCC

CACCGAAACA ACAGCCCAAC GGTGCCGCCG

TCACCGCCAG CACCGCCGTT AATGTTTATG

CCGGGCGCCG GAGNGCGTGC CCGCCGGCGC

CGGCCCCGCC GGACCCACCG GTCCCGCCGA

TGGTGCTGCT GAAGCCGTTA GCGCCGGTTC

CGGCCCCGCC GTTGCCGTAC AGCCACCCCC

TGCCGCCGTT GCCGCCATTG CCGCCG7TCC

CGCCGGCGGC CGC

TGCCGCCGTC GCCGATCAGC TGCGCATCGC60

CGGTGGCGCC GGGGCCGCCG ATGCCACCGC120

ATACAGCACC CCGCCGGGGG CACCGHACC180

TCAGGCCGGG GAGGCCGAAT GAACCGCCGC240

TTCCGCCCGC CCCGCCGGCG CCGCCAAHG300

CCGCCGCCGT TAACGGCGCT GCCGGGCGCC360

GTTCGGTGCC CCGCCGHAC CGGCGCCGCC420

AGACCCGCCG GGGCCACCAT TGCCGCCGGG480

GCCCCGCCGT nGCCGCCAT CACCGGCCAT540

AACCCGGTAC CGCCAGCGCG GCCCCTATTG600

CGCCAACGCC CAAAAGCCCG GGGTTGCCAC660

TCCCCCCGTT GCCGCCGGTG CCGCCGCCAT720

CGCSGGTTCC GGCGGTGGCG CCNTGGCCGC780

CGGTGGCGCC GTTGCCGCCA TTGCCGCCAT840

CGCCGCCACC GCCGGNTTGG CCGCCGGCGC900

913 (2) Informace pro SEQ ID NO: 17:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1872 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

-47CZ 297406 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 17:

GACTACG7TG GTGTAGAAAA ATCCTGCCGC CCGCACCCH AAGGCTGGGA CAATTTCTGA60

TAGCTACCCC GACACAGGAG GKACGC-GAT GAGCAATTCG CGCCGCCGCT CACTCAGGTG120

GTCATGGHG CTGAGCGTGC TGGCTGCCGT CGGGCTGGGC CTGGCCACGG CGCCGGCCCA180

GGCGGCCCCG CCGGCCTTGT CGCAGGACCG GTTCGCCGAC TTCCCCGCGC TGCCCCTCGA240

CCCGTCCGCG ATGGTCGCCC AAGTGGCGCC ACAGGTGGTC AACATCAACA CCAAACTGGG300

CTACAACAAC GCCGTGGGCG CCGGGACCGG CATCGTCATC GATCCCAACG GTGTCGTGCT360

GACCAACAAC CACGTGATCG CGGGCGCCAC CGACATCAAT GCGTTCAGCG TCGGCTCCGG420

CCAAACCTAC GGCGTCGATG TGGTCGGGTA TGACCGCACC CAGGATGTCG CGGTGCTGCA480

GCibCGCGG T GCCGGTGGCC TGCCGTCGGC GGCGATCGGT GGCGGCGTCG CGGHGGTGA540

GCCCGTCGTC GCGATGGGCA ACAGCGGTGG GCAGGGCGGA ACGCCCCGTG CGGTGCCTGG600

CAGGGTGGTC GCGCTCGGCC AAACCGTGCA GGCGTCGGAT TCGCTGACCG GTGCCGAAGA660

GACAHGAAC GGGTTGATCC AGTTCGATGC CGCAATCCAG CCCGGTGATT CGGGCGGGCC720

CGTCGTCAAC GGCCTAGGAC AGGTGGTCGG TATGAACACG GCCGCGTCCG ATAACTTCCA780

GCTGTCCCAG GGTGGGCAGG GATTCGCCAT TCCGATCGGG CAGGCGATGG CGATCGCGGG840

CCAAATCCGA TCGGGTGGGG GGTCACCCAC CGTTCATATC GGGCCTACCG CCTTCCTCGG900

CTTGGGTGTT GTCGACAACA ACGGCAACGG CGCACGAGTC CAACGCGTGG TCGGAAGCGC960

TCCGGCGGCA AGTCTCGGCA TCTCCACCGG CGACGTGATC ACCGCGGTCG ACGGCGCTCC1020

GATCAA.CTCG GCCACCGCGA TGGCGGACGC GCHAACGGG CATCATCCCG GTGACGTCAT1080

CTCGGTGAAC TGGCAAACCA AGTCGGGCGG CACGCGTACA GGGAACGTGA CAHGGCCGA1140

GGGACCCCCG GCCTGATTTG TCGCGGATAC CACCCGCCGG CCGGCCAAK GGAHGGCGC1200

CAGCCGTGAT TGCCGCGTGA GCCCCCGAGT TCCGTCTCCC GTGCGCGTGG CAKGTGGAA1260

GCAATGAACG AGGCAGAACA CAGCGTTGAG CACCCTCCCG TGCAGGGCAG TTACGTCGAA1320

-48CZ 297406 B6

GGCGGTGTGG TCGAGCÁTCC GGATGCCAAG

GATCCGACCT GGTTTAAGCA CGCCGTCTFC

GCCAGCGCGG ACGGTTCCGN CGATCTGCGT

TGGCTTGGCA TCGACTGCAT CTGTTGCCGC

GGHACGACA TTCGCGACTT CTACAAGGTG

GTCGCCCTGG TCGACACCGC TCACCGGCGA

AATCACACCT CGGAGTCGCA CCCCTGGTTT

TACGGTGA.CT ATTACGTGTG GAGCGACACC

TTCGTCGACA CCGAAGAGTC GAACTGGTCA

GCACCGATTC π (2) Informace pro SEQ ID NO: 18:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1482 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 18:

CTTCGCCGAA ACCTGATGCC GAGGAACAGG

CCGCGCTCCT CGCCGAGATC AGGCAGTCGC

ACGTAGCGGT CCGAACAACC GGGAAAGTCG

TCGACGTCCG GGCCAATCCG CTCGCGGCAA

GTGTCCCGH TCGGGTACAA GGCGACAACA

ATCTCGGCTC GATTTCTGAA CTGTCAACTT

CGCAGCTGCT GTCCGGTGTC ACGAACCTCC

TTTCGACCAC CAAAATCACC GGGACCATCC

GCGCCAAGAG TGCAAGGCCG GCGACCGTGT

TCCGAGCGAG CATCGACCTC GGATCCGGGT

GACTTCGGCA GCGCCGCCGC CCTGCCCGCC TACGAGGTGC TGGTCCGGGC GTTCTTCGAC GGACTCATCG ATCGCCTCGA CTACCTGCAG CGTTCCTACG ACTCACCGCT GCGCGACGGC CTGCCCGAAT TCGGCACCGT CGACGATTTC GGTATCCGCA TCATCACCGA CCTGGTGATG CAGGAGTCCC GCCGCGACCC AGACGGACCG AGCGAGCGCT ACACCGACGC CCGGATCATC TTCGATCCTG TCCGCCGACA GTTNCTACTG

GTGTTCCCGT GAGCCCGACG GCGTCCGACC

TTGATGCGAC AAAAGGGTTG ACCAGCGTGC

ACAGCTTGCT GGGTATTACC AGTGCCGATG

AGGGCGTATG CACCTACAAC GACGAGCAGG

TCTCGGTGAA ACTGTTCGAC GACTGGAGCA

CACGCGTGCT CGATCCTGCC GCTGGGGTGA

AAGCGCAAGG TACCGAAGTG ATAGACGGAA

CCGCGAGCTC TGTCAAGATG CTTGATCCTG

GGAHGCCCA GGACGGCTCG CACCACCTCG

CGATTCAGCT CACGCAGTCG AAATGGAACG

1380

1440

1500

1560

1620

1680

1740

1800

1860

1872

120

180

240

300

360

420

480

540

600

-49CZ 297406 B6

AACCCGTCAA CGTCGACTAG GCCGAAGTTG CGTCGACGCG nGCTCGAAA CGCCCKGTG 660

AACGGTGTCA ACGGCACCCG AAAACTGACC CCCTGACGGC ATCTGAAAAT TGACCCCCTA720

GACCGGGCGG HGGTGGHA TTCTTCGGTG GTTCCGGCTG GTGGGACGCG GCCGAGGTCG780

CGGTCTTTGA GCCGGTAGCT GTCGCCTTTG AGGGCGACGA CTTCAGCATG GTGGACGAGG840

CGGTCGATCA TGGCGGCAGC AACGACGTCG TCGCCGCCGA AAACCTCGCC CCACCGGCCG900

AAGGCC7TAT TGGACGTGAC GATCAAGCTG GCCCGCTCAT ACCGGGAGGA CACCAGCTGG960

AAGAAGAGGT TGGCGGCCTC GGGCTCAAAC GGAATGTAAC CGACTTCGTC AACCACCAGG1020

AGCGGATAGC GGCCAAACCG GGTGAGTTCG GCGTAGATGC GCCCGGCGTG GTGAGCCTCG1080

GCGAACCGTG CTACCCATTC GGCGGCGGTG GCGAACAGCA CCCGATGACC GGCCTGACAC1140

GCGCGTATCG CCAGGCCGAC CGCAAGATGA GTCTTCCCGG TGCCAGGCGG GGCCCAAAAA1200

CACGACGTTA TCGCGGGCGG TGATGAAATC CAGGGTGCCC AGATGTGCGA TGGTGTCGCG1260

TTTGAGGCCA CGAGCATGCT CAAAGTCGAA CTCTTCCAAC GACTTCCGAA CCGGGAAGCG1320

GGCGGCGCGG ATGCGGCCCT CACCACCATG GGACTCCCGG GCTGACACTT CCCGCTGCAG1380

GCAGGCGGCC AGGTATTCTT CGTGGCTCCA GTTCTCGGCG CGGGCGCGAT CGGCCAGCCG1440

GGACACTGAC TCACGCAGGG TGGGAGCTTT CAATGCTCTT GT1482

-50CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 19:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 876 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 19:

GAATTCGGCA CGAGCCGGCG ATAGCTTCTG

CGTC-CTCGGG GCCACCGCCG GGCGCACCAC

CGGTCACTCG KGCTGCTGG ACGCCACCAA

CGCCTACGAA ATCGGCTACA TCGNGGAAAG

GGAGAACATC TTCTTCTACA TCACCGTCTA

GGAGAACTTC GATCCCGAGG GCGTGCTGGG

GCAACGCACC AACAAGGNGC AGATCCTGGC

GGCAGCACAG ATGCTGGCCG CCGAGTGGGA

TTGGGGCGAG CTAAACCGCG ACGGGGTGGT

TCGGCCGGCG GGCGTGCCCT ACGTGACGAG

CGCGGTGTCG GACTGGATGC GCGCGGTCCC

ATACCTCACG TTGGGCACCG ACGGGTTCGG

TTACTTCAAC ACCGACGCCG AATCCCAGGT

TCGACGGGTG AATATCGACC CATTCGGTGC

ATTCGACGAA GGTGGGGGGT TGCGCCCGAN

GGCCGCGGCC GACCAGATGG CTCGAGGGTT 60

CCTGACCGGT GAGGGCCTGC AACACGCCGA120

CCCGGCGGTG GTTGCCTACG ACCCGGCCH180

CGGACTGGCC AGGATGTGCG GGGAGAACCC240

CAACGAGCCG TACGTGCAGC CGCCGGAGCC300

GGGTATCTAC CGNTATCACG CGGCCACCGA360

CTCCGGGGTA GCGATGCCCG CGGCGCTGCG420

TGTCGCCGCC GACGTGTGGT CGGTGACCAG480

CATCGAGACC GAGAAGCTCC GCCACCCCGA540

AGCGCTGGAG AATGCTCGGG GCCCGGTGAT600

CGAGCAGATC CGACCGTGGG TGCCGGGCAC660

TTTTTCCGAC ACTCGGCCCG CCGGTCGTCG720

TGGTCGCGGT TTTGGGAGGG GTTGGCCGGG780

CGGTCGTGGG CCGCCCGCCC AGTTACCCGG840

TAAGH876

-51 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 20:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1021 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 20:

ATCCCCCCGG GCTGCAGGAA TTCGGCACGA

CAGATTCATA ACGAAHCAC AGCGGCACAA

AGCGAAGACC TGCCGCAGK GGCGAAGCAT

CATGCAATGA TGCTCGTGCA ACACCTGCTC

GTAGACACGG TGCGAAACCA GTTCGACAGA

CAGGAACGCA CAGTCACCGA CCAGGTCGGT

GATTTCCTCG GCGAGCAGTT CATGCAGTGG

TTGATGGCAA CCCTGGTGCG GGnGCCGAT

AACTTCGTCG CACGTGAAGT GGATGTGGCG

GGGGGCCGCC TCTAGATCCC TGGGGGGGAT

TCCAGCCAGG CCHGGTGCG GCCGGGGTGG

CGGNAAAAGT CGATGTCCTC GTACTCATCG

GCTGCCGAGC GGTCAACGAG nGCGGATAT

GCGGTTGGCC CGACCGCCGT GGCCGCACTG

AACAACGTCG GCAGGAGGGG TGGAGCCCGC

CATCAACACC GCACGGGATC GATCTGCGGA

GAGCGCCAGC AGTTGTTTTT CCACCAGCGA

T

GAGACAAAAT TCCACGCGH AATGCAGGAA 60

CAATATGTCG CGATCGCGGT KATKCGAC120

TTTTACAGCC AAGCGGTCGA GGAACGAAAC180

GACCGCGACC TTCGTGTCGA AATTCCCGGC240

CCCCGCGAGG CACTGGCGCT GGCGCTCGAT300

CGGCTGACAG CGGTGGCCCG CGACGAGGGC360

TTCHGCAGG AACAGATCGA AGAGGTGGCC420

CGGGCCGGGG CCAACCTGK CGAGCTAGAG480

CCGGCCGCAT CAGGCGCCCC GCACGCTGCC540

CAGCGAGTGG TCCCGnCGC CCGCCCGTCT600

TGAGTACCAA TCCAGGCCAC CCCGACCTCC660

ACGTTCCAGG AGTACACCGC CCGGCCCTGA720

TCCTTTAACG CAGGCAGTGA GGGTCCCACG780

CTGGTCAGGT ATCGGGGGGT CTTGGCGAGC840

CGGATCCGCA GACCGGGGGG GCGAAAACGA900

GGGGGGTGCG C-GAATACCGA ACCGGTGTAG960

AGCGTTTTCG GGTCATCGGN GGCNNHAAG1020

1021

-52CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 21:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 321 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 21:

CGTGCCGACG AACGGAAGAA CACAACCATG AAGATGGTGA AATCGATCGC CGCAGGTCTG60

ACCGCOGCGG CTGOAATCGG CGCCGCTGCG GCCGGTGTGA CHCGATCAT GGCTGGCGGN120

CCGGTCGTAT ACCAGATGCA GCCGGTCGTC TTCGGCGCGC CACTGCCGH GGACCCGGNA130

TCCGCCCCTG ANGTCCCGAC CGCCGCCCAG TGGACCAGNC TGCTCAACAG NCTCGNCGA“240

CCCAACGTGT CGTTTGNGAA CAAGGGNAGT CTGGTCGAGG GNGGNATCGG NGGNANCGAG300

GGNGNGNATC GNCGANCACA A

321 (2) Informace pro SEQ ID NO: 22:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 373 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 22:

TCTTATCGGT TCCGGTTGGC GACGGGTTTT GGGNGCGGGT GGnAACCCG CTCGGCCAGC60

CGATCGACGG GCGCGGAGAC GTCGACTCCG ATACTCGGCG CGCGCTGGAG CTCCAGGCGC120

CCTCGGTGGT GNACCGGCAA GGCGTGAAGG AGCCGKGNA GACCGGGATC AACGOGAUG180

ACGCGATGAC CCCGATCGGC CGCGGGCAGC GCCAGCTGAT CATCGGGGAC CGCAAGACCG240

GCAAAAACCG CCGTCTGTGT CGGACACCAT CCTCAAACCA GCGGGAAGAA CTGGGAGTCC300

GGTGGATCCC AAGAAGCAGG TGCGCTTGTG TATACGTTGG CCATCGGGCA AGAAGGGGAA360

CTTACCATCG CCG373

-53 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 23:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 352 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 23:

GTGACGCCGT GATGGGATTC CTGGGCGGGG

TGGTTACCCG GGTGCCGCAA GGCTGGTCGT

TCTTGACGGC CTGGTACGGG TTGGCCGATT

TGATCCATGC CGGTACCGGC GGTGTGGGCA

GCGTGGAGGT TTTCGTCACC GCCAGCCGTG

TTGACGACGA NCCATATCGG NGATTCCCNC

CCGGTCCGCT GGCGGTGGTG GATCAGCAAC60

KGCTCAGGC AGCCGCTGTG CCGGTGGTGT120

TAGCCGAGAT CAAGGCGGGC GAATCGGTGC180

TGGCGGCTGT GCAGCTGGCT CGCCAGTGGG240

GNAAGTGGGA CACGCTGCGC GCCATNGNGT300

ACATNCGAAG TTCCGANGGA GA352

-54CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 24:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 726 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 24:

GAAATCCGCG TTCATTCCGT TCGACCAGCG

GCGGTTCGCG GCGCTCATGG GTCACAGCGA

CTAGCGTCCA GKGCTTGCC AGATCGCTTT

GCCGCACGCT CATGCTGGCG GCGTGCATCC

GCGCGCAGTC CGCAGCCCAA ACCGCGCCGG

CTTTCGACCC CGCATGGGGG CCCAACTGGG

GCGACAGCGA CGGCCCCGAC CACAGCCGCG

TGCTTGACGA TCCCGGTGCT GCGCCGCCGC

CGTTGACCGG GCCC-CATCAG CGAATACGCG

CGACCCCCGG CGGGGCAGAT KACGCTCCC

AAAATAGGCG ACGGTTTTGG CAACCGCKG

GGCGACAGCG CCTCCACCAT CGACATCGAC

ATCGTG

GCTGGCGATA ATCGACGMG TGATCAAGCC60

GTAATCAGCA AGTTCTCTGG TATATCGCAC120

CGTACCGTCA TCGCATGTAC CGGTTCGCGT180

TGGCCACGGG TGTGGCGGGT CTCGGGGTCG240

TGCCCGACTA CTACTGGTGC CCGGGGCAGC300

ATCCCTACAC CTGCCATGAC GACTTCCACC360

ACTACCCCGG ACCCATCCTC GAAGGTCCCG420

CCCCGGCTGC CGGTGGCGGC GCATAGCGCT480

TATAAACCCG GGCGTGCCCC CGGCAAGCTA540

GTGCCGATGG ATCGCGCCGT CCGATGACAG600

GAGGACGCTT GAAGGGAACC TGTCATGAAC660

AAGGTTGHA CCCGCACACC CGTTCGCCGG720

726

-55CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 25:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 580 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 25:

CGCGACGACG ACGAACGTCG GGCCCACCAC

GGTCGCCGAC CATATCCAAG CATGCTGGGT

CTGCCCGATG GCGGCCCGGT GAAGTCATTG

ATAGGGAACA ATAGGGGGGT GATTTGGCAG

GGCGGGGCAT GCTCGGCGCC GACCAGGCTC

AGCACTCAAT GGCGGCGATG MGCCCCGGA

AGGGGCGCGG CATTGTGATG CGAGTACCAC

TGACACCCGA CGAAGCCGCC GCACTGGGTG

AGCCCAACGG CGAATGGTCG GCGTTACGCG

TCGGCGATGT ATGCCCAGGA GAACTCTTGG

CGCCTATGCG TTGATGCAGG CGACCGGGAT 60

GCCCACTGAG CGACCTTTTG ACCAGCCGGG120

CGCCGGGGCT TGTGCACCTG ATGAACCCGA180

TTCAATGTCG GGTATGGCTG GAAATCCAAT240

GCGCAGGCGG GCCAGCCCGA ATCTGGAGGG300

CCGGCGACGG TCCTTTGGAA GCAACTAAGG360

TTGAGGGTGG CGGTCGCCTG GTCGTCGAGC420

ACGAACTCAA AGGCGTTACT AGCTAAGACC480

CACACCTTCC GGTAGATGTC CAGTGTCTGC540

ATACAGCGCT580 (2) Informace pro SEQ ID NO: 26:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 160 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 26:

AACGGAGGCG CCGGGGGTTT TGGCGGGGCC GGGGCGGTCG GCGGCAACGG CGGGGCCGGC60

GGTACCGCCG GGTTGTTCGG TGTCGGCGGG GCCGGTGGGG CCGGAGGCAA CGGCATCGCC120

GGTGTCACGG GTACGTCGGC CAGCACACCG GGTGGATCCG160

-56CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 27:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 272 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 27:

GACACCGATA CGATGGTGAT GTACGCCAAC

CA.GCGCACAC CCGACGGCGT GACCATCGGC

AAC-GCGATGG GMTCGACAA GCTGCGGGTA

GAACGCGAAC AGTGGGACGA CGGCAACAAC

GCCTACGAGC GCAACGTACA GACCAACGCC

GTCGACA CGCTCGAGGC GTTCACGATC60

GCGGCCC CGTTCGCGGA GGCGGCTGCC120

CATACCG GAATGGACCC CGTCGTCGCT180

TTGGCGT TGGCGCCCGG TGTCGTTGTC240

CG272 (2) Informace pro SEQ ID NO: 28:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 317 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 28:

GCAGCCGGTG GTTCTCGGAC TATCTGCGCA CGGTGACGCA GCGCGACGTG CGCGAGCTGA60

AGCGGATCGA GCAGACGGAT CGCCTGCCGC GGTTCATGCu CTACCTGGCC GCTATCACCG120

CGCAGGAGCT GAACGTGGCC GAAGCGGCGC GGGTCATCGG GGTCGACGCG GGGACGATCC180

GTTCGGATCT GGCGTGGTTC GAGACGGTCT ATCTGGTACA TCGCCTGCCC GCCTGGTCGC240

GGAATCTGAC CGCGAAGATC AAGAAGCGGT CAAAGATCCA CGTCGTCGAC AGTGGCTTCG 300

CGGCCTGGTT GCGCGGG317 (2) Informace pro SEQ ID NO: 29:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 182 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 29:

GATCGTGGAG CTGTCGATGA ACAGCGTTGC CGGACGCGCG GCGGCCAGCA CGTCGGTGTA60

GCAGCGCCGG ACCACCTCGC CGGTGGGCAG CATGGTGATG ACCACGTCGG CCTCGGCCAC120

CGCTTCGGGC GCGCTACGAA ACACCGCGAC ACCGTGCGCG GCGGCGCCGG ACGCCGCCGT180

GG.182 (2) Informace pro SEQ ID NO: 30:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 308 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 30:

GATCGCGAAG TTTGGTGAGC AGGTGGTCGA CGCGAAAGTC TGGGCGCCTG CGAAGCGGGT60

CGGCGTTCAC GAGGCGAAGA CACGCCTGTC CGAGCTGCTG CGGCTCGTCT ACGGCGGGCA120

GAGGKGAGA TTGCCCGCCG CGGCGAGCCG GTAGCAAAGC HGTGCCGCT GCATCCTCAT180

GAGACTCGGC GGKAGGCAT TGACCATGGC GTGTACCGCG TGCCCGACGA TTTGGACGCT240

CCGTTGTCAG ACGACGTGCT CGAACGCTTT CACCGGTGAA GCGCTACCTC ATCGACACCC300

ACGTTTGG308

-58CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 31:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 267 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 31:

CCGACGACGA GCAACTCACG TGGATGATGG TCGGCAGCGG CATTGAGGAC GGAGAGAATC60

CGGCCGAAGC TGCCGCGCGG CAAGTGCTCA TAGTGACCGG CCGTAGAGGG CTCCCCCGAT120

GGCACCGGAC TATTCTGGTG TGCCGCTGGC CGGTAAGAGC GGGTAAAAGA ATGTGAGGGG180

ACACGATGAG CAATCACACC TACCGAGTGA TCGAGATCGT CGGGACCTCG CCCGACGGCG240

TCGACGCGGC AATCCAGGGC GGTCTGG

267 (2) Informace pro SEQ ID NO: 32:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 189 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 32:

CTCGTGCCGA AAGAATGTGA GGGGACACGA TGAGCAATCA CACCTACCGA GTGATCGAGA60

TCGTCGGGAC CTCGCCCGAC GGCGTCGACG CGGCAATCCA GGGCGGTCTG GCCCGAGCTG120

CGCAGACCAT GCGCGCGCTG GACTGGTTCG AAGTACAGTC AATTCGAGGC CACCTGGTCG180

ACGGAGCGG189

-59CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 33:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 851 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 33:

CTGCAGGGTG GCGTGGATGA GCGTCACC6C

CCGGGTTGCT GCGGCGGCCT ACGAGACGGC

CGCCGAGAAC CGTGCTGAAC TGATGATTCT

CCCGGCGATC GCGGTCAACG AGGCCGAATA

GATGTTTGGC TACGCCGCGG CGACGGCGAC

GGCGCCGGAG ATGACCAGCG CGGGTGGGCT

CTCCGACACC GCCGCGGCGA ACCAGKGAT

GGCCCAGCCC ACGCAGGGCA CCACGCCTTC

CTCGCCGCAT CGGTCGCCGA TCAGCAACAT

GACCAACTCG GGTGTGTCGA TGACCAACAC

GGCGGCGGCC GCCCAGGCCG TGCAAACCGC

GCTGGGCAGC TCGCTGGGTT CTTCGGGTCT

GGCGGCCTCG GTACGGTATG GTCACCGGGA

GAACGGTGGT CCGGCGTAAG GTrTACCCCC

GAAACAGKA C

GGGGCAGGCC GAGCTGACCG CCGCCCAGGT60

GTATGGGCTG ACGGTGCCCC CGCCGGTGAT120

GATAGCGACC AACCTCnGG GGCAAAACAC180

CGGCGAGATG TGGGCCCAAG ACGCCGCCGC240

GGCGACGGCG ACGTTGCTGC CGTTCGAGGA300

CCTCGAGCAG GCCGCCGCGG TCGAGGAGGC360

GAACAATGTG CCCCAGGCGC TGAAACAGK420

TTCCAAGCTG GGTGGCCTGT GGAAGACGGT480

GGTGTCGATG GCCAACMCC ACATGTCGAT540

CTTGAGCTCG ATGTTGAAGG GCTTTGCTCC600

GGCGCAAAAC GGGGTCCGGG CGATGAGCTC660

GGGCGGTGGG GTGGCCGCCA ACTTGGGTCG720

TGGCGGAAAA TATGCANAGT CTGGTCGGCG780

GTTTTCTGGA TGCGGTGAAC TTCGTCAACG840

851

-60CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 34:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 254 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 34:

GATCGATCGG GCGGAAATTT GGACCAGATT CGCCTCCGGC GATAACCCAA TCAATCGAAC60

CTAGATTTAT TCCGTCCAGG GGCCCGAGTA ATGGCTCGCA GGAGAGGAAC CHACTGCTG120

CGGGCACCTG TCGTAGGTCC TCGATACGGC GGAAGGCGTC GACATTTTCC ACCGACACCC180

CCATCCAAAC GTTCGAGGGC CACTCCAGCT TGTGAGCGAG GCGACGCAGT CGCAGGCTGC240

GCTTGGTCAA GATC254 (2) Informace pro SEQ ID NO: 35:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 408 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 35:

CGGCACGAGG ATCCTGACCG AAGCGGCCGC CGCCAAGGCG AAGTCGCTGT TGGACCAGGA60

GGGACGGGAC GATCTGGCGC TGCGGATCGC GGTTCAGCCG GGGGGGTGCG CTGGATTGCG120

CTATAACCTT TTCTTCGACG ACCGGACGCT GGATGGTGAC CAAACCGCGG AGTTCGGTGG180

TGTCAGGHG ATCGTGGACC GGATGAGCGC GCCGTATGTG GAAGGCGCGT CGATCGATTT240

CGTCGACACT ATTGAGAAGC AAGGNITCAC CATCGACAAT CCCAACGCCA CCGGCTCCTG300

CGCGTGCGGG GATTCGTTCA ACTGATAAAA CGCTAGTACG ACCCCGCGGT GCGCAACACG360

TACGAGCACA CCAAGACCTG ACCGCGCTGG AAAAGCAACT GAGCGATG408

-61 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 36:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 181 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 36:

GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGGGCCGGC GGGGCCGGCG60

GGACCGGCGC TAACGGTGGT GCCGGCGGCA ACGCCTGGTT GTTCGGGGCC GGCGGGTCCG120

GCGGNGCCGG CACCAATGGT GGNGTCGGCG GGTCCGGCGG ATTTGTCTAC GGCAACGGCG180

G181 (2) Informace pro SEQ ID NO: 37:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 290 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 37:

GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGTGTCGGC GGCCGGGGCG60

GCGACGGCGT CTTTGCCGGT GCCGGCGGCC AGGGCGGCCT CGGTGGGCAG GGCGGCAATG120

GCGGCGGCTC CACCGGCGGC AACGGCGGTC TTGGCGGCGC GGGCGGTGGC GGAGGCAACG180

CCCCGGACGG CGGCTTCGGT GGCAACGGCG GTAAGGGTGG CCAGGGCGGN ATTGGCGGCG240

GCACTCAGAG CGCGACCGGC CTCGGNGGTG ACGGCGGTGA CGGCGGTGAC290

-62CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 38:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 34 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 38:

GATCCAGTGG CATGGNGGGT GTCAGTGGAA GCAT (2) Informace pro SEQ ID NO: 39:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 155 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xí) Popis sekvence: SEQ ID NO: 39:

GATCGCTGCT CGTCCCCCCC T7GCCGCCGA CGCCACCGGT CCCACCGnA CCGAACAAGC60

TGGCGTGGTC GCCAGCACCC CCGGCACCGC CGACGCCGGA GTCGAACAAT GGCACCGTCG120

TATCCCCACC ATTGCCGCCG GNCCCACCGG CACCG155 (2) Informace pro SEQ ID NO: 40:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 53 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 40:

ATGGCG7TCA CGGGGCGCCG GGGACCGGGC AGCCCGGNGG GGCCGGGGGG TGG 53

-63CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 41:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 132 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 41:

GATCCACCGC GGGTGCAGAC GGTGCCCGCG GCGCCACCCC GACCAGCGGC GGCAACGGCG 60

GCACCGGCGG CAACGGCGCG AACGCCACCG TCGTCGGNGG GGCCGGCGGG GCCGGCGGCA 120

AGGGCGGCAA CG 132 (2) Informace pro SEQ ID NO: 42:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 132 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 42:

GATCGGCGGC CGGNACGGNC GGGGACGGCG GCAAGGGCGG NAACGGGC-GC GCCGNAGCCA 60

CCNGCCAAGA ATCCTCCGNG TCCNCCAATG GCGCGAATGG CGGACAGGGC GGCAACGGCG 120

GCANCGGCGG CA 132

-64CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 43:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 702 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 43:

CGGCACGAGG ATCGGTACCC CGCGGCATCG GCAGCTGCCG ATTCGCCGGG TTTCCCCACC60

CGAGGAAAGC CGCTACCAGA TGGCGCTGCC GAAGTAGGGC GATCCGTTCG CGATGCCGGC120

ATGAACGGGC GGCATCAAAT TAGTGCAGGA ACCTTTCAGT TTAGCGACGA TAATGGCTAT180

AGCACTAAGG AGGATGATCC GATATGACGC AGTCGCAGAC CGTGACGGTG GATCAGCAAG240

AGATTTTGAA CAGGGCCAAC GAGGTGGAGG CCCCGATGGC GGACCCACCG ACTGATGTCC300

CCATCACACC GTGCGAACTC ACGGNGGNTA AAAACGCCGC CCAACAGNTG GTNHGTCCG360

CCGACAACAT GCGGGAATAC CTGGCGGCCG GTGCCAAAGA GCGGCAGCGT CTGGCGACCT420

CGCTGCGCAA CGCGGCCAAG GNGTATGGCG AGGTTGATGA GGAGGCTGCG ACCGCGCTGG480

ACAACGACGG CGAAGGAACT GTGCAGGCAG AATCGGCCGG GGCCGTCGGA GGGGACAGH540

CGGCCGAACT AACCGATACG CCGAGGGTGG CCACGGCCGG TGAACCCAAC TTCATGGATC600

TCAAAGAAGC GGCAAGGAAG CTCGAAACGG GCGACCAAGG CGCATCGCTC GCGCACTGNG660

GGGATGGGTG GAACACTTNC ACCCTGACGC TGCAAGGCGA CG702

-65CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 44:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 298 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 44:

GAAGCCGCAG CGCTGTCGGG CGACGTGGCG

GGCGGCGGGG TGCCGTCGGC GCCG7TGGGA

CCCGCTGGCG CTGGTGACAT TGCCGGCTTA

CTGGGCGGCG GTGGCATGGG AATGCCGATG

AA.GTCCAAGG GTTCTCAGCA GGAAGACGAG

GTCAAAGCGG CATCGCTCGG TGGCGGTGGA60

TCCGCGATCG GGGGCGCCGA ATCGGTGCGG120

GGCCAGGGAA GGGCCGGCGG CGGCGCCGCG180

GGTGCCGCGC ATCAGGGACA AGGGGGCGCC240

GCGCTCTACA CCGAGGATCC TCGTGCCG298

-66CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 45:

(i) Charakteristika sekvence:

(B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 45:

CGGCACGAGG ATCGAATCGC GTCGCCGGGA GCACAGCGTC GCACTGCACC AGTGGAGGAG60

CCATGACCTA CTCGCCGGGT AACCCCGGAT ACCCGCAAGC GCAGCCCGCA GGCTCCTACG120

GAGGCGTCAC ACCCTCGTTC GCCCACGCCG ATGAGGGTGC GAGCAAGCTA CCGATGTACC180

TGAACATCGC GGTGGCAGTG CTCGGTCTGG CTGCGTACTT CGCCAGCTTC GGCCCAATGT240

TCACCCTCAG TACCGAACTC GGGGGGGGTG ATGGCGCAGT GTCCGGTGAC ACTGGGCTGC300

CGGTCGGGGT GGCTCTGCTG GCTGCGCTGC TTGCCGGGGT GGTTCTGGTG CCTAAGGCCA360

AGAGCCATGT GACGGTAGTT GCGGTGCTCG GGGTACTCGG CGTATTTCTG ATGGTCTCGG420

CGACGTTTAA CAAGCCCAGC GCCTATTCGA CCGGTTGGGC ATTGTGGGTT GTGTTGGCTT480

TCATCGTGTT CCAGGCGGH GCGGCAGTCC TGGCGCTCTT GGTGGAGACC GGCGCTATCA540

CCGCGCCGGC GCCGCGGCCC AAGTTCGACC CGTATGGACA GTACGGGCGG TACGGGCAGT600

ACGGGCAGTA CGGGGTGCAG CCGGGTGGGT ACTACGGTCA GCAGGGTGCT CAGCAGGCCG660

CGGGACTGCA GTCGCCCGGC CCGCAGCAGT CTCCGCAGCC TCCCGGATAT GGGTCGCAGT720

ACGGCGGCTA TTCGTCCAGT CCGAGCCAAT CGGGCAGTGG ATACACTGCT CAGCCCCCGG780

CCCAGCCGCC GGCGCAGTCC GGGTCGCAAC AATCGCACCA GGGCCCATCC ACGCCACCTA840

CCGGCTTTCC GAGCTTCAGC CCACCACCAC CGGTCAGTGC CGGGACGGGG TCGCAGGCTG900

GT7CGGCTCC AGTCAACTAT TCAAACCCCA GCGGGGGCGA GCAGTCGTCG TCCCCCGGGG960

GGGCGCCGGT CTAACCGGGC GTTCCCGCGT CCC-GTCGCGC GTGTGCGCGA AGAGTGAACA1020

GGGTGTCAGC AAGCGCGGAC GATCCTCGTG CCGAATTC1058

-67CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 46:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 327 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 46:

CGGCACGAGA GACCGATGCC GCTACCCTCG CGCAGGAGGC AGGTAATTTC GAGCGGATCT 60

CCGGCGACCT GAAAACCCAG ATCGACCAGG TGGAGTCGAC GGCAGGTTCG HGCAGGGCC120

AGTGGCGCGG CGCGGCGGGG ACGGCCGCCC AGGCCGCGGT GGTGCGCTTC CAAGAAGCAG180

CCAATAAGCA GAAGCAGGAA CTCGACGAGA TCTCGACGAA TATTCGTCAG GCCGGCGTCC240

AATACTCGAG GGCCGACGAG GAGCAGCAGC AGGCGCTGTC CTCGCAAATG GGCTTCTGAC300

CCGCTAATAC GAAAAGAAAC GGAGCAAv (2) Informace pro SEQ ID NO: 47:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 170 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 47:

CGGTCGCGAT GATGGCGTTG TCGAACGTGA CCGATTCTGT ACCGCCGTCG TTGAGATCAA60

CCAACAACGT GTTGGCGTCG GCAAATGTGC CGNACCCGTG GATCTCGGTG ATCTTGTTCT120

TCTTCATCAG GAAGTGCACA CCGGCCACCC TGCCCTCGGN TACCTTTCGG170

-68CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 48:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 127 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 48:

GATCCGGCGG CACGGGGGGT GCCGGCGGCA GCACCGCTGG CGCTGGCGGC AACGGCGGGG60

CCGGGGGTGG CGGCGGAACC GGTGGGTTGC TCTTCGGCAA CGGCGGTGCC GGCGGGCACG120

GGGCCGT127 (2) Informace pro SEQ ID NO: 49:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 81 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 49:

CGGCGGCAAG GGCGGCACCG CCGGCAACGG GAGCGGCGCG GCCGGCGGCA ACGGCGGCAA 60

CGGCGGCTCC GGCTCAACG G ot (2) Informace pro SEQ ID NO: 50:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 149 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 50:

GATCAGGGCT GGCCGGCTCC GGCCAGAAGG GCGGTAACGG AGGAGCTGCC GGATTGTTTG 60

GCAACGGCGG GGCCGGNGGT GCCGGCGCGT CCAACCAAGC CGGTAACGGC GGNGCCGGCG 120

GAAACGGTGG TGCCGGTGGG CTGATCTGG 149

-69CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 51:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 355 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 51:

CGGCACGAGA TCACACCTAC CGAGTGATCG

ACGCGGNAAT CCAGGGCGGT CTGGCCCGAG

TCGAAGTACA GTCMTTCGA GGCCACCTGG

CTATGAAAGT CGGCTTCCGC CTGGAGGATT

GGTGCATCAT TAAGCGACTT TTCCAGAACA

ACGGTGGCTC CGCCGAGGCG CTGCCTCCAA

AGATCGTCGG GACCTCGCCC GA.CGGTGTCG60

CTGCGCAGAC CATGCGCGCG CTGGACTGGT120

TCGACGGAGC GGTCGCGCAC TTCCAGGTGA180

CCTGAACCTT CAAGCGCGGC CGATAACTGA240

TCCTGACGCG CTCGAAACGC GGTTCAGCCG300

AATCCCTGCG ACAATTCGTC GGCGG355

-70CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 52:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 999 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 52:

ATGCATCACC ATCACCATCA CATGCATCAG

CGATTGGCGG CACTGGCTAT CGCGGCGATG

CCCGCGACCG CCAACGCCGA TCCGGAGCCA

CCGCCGTCGA CCGCTGCAGC GCCACCCGCA

GCCGCCGCCA ACACGCCGAA TGCCCAGCCG

GACCCGAACG CACCGCCGCC ACCTGTCATT

GACAACCCGG TTGGAGGATT CAGCTTCGCG

GCCCACT7CG ACTACGGTTC AGCACTCCTC

GGACAGCCGC CGCCGGTGGC CAATGACACC

CTTTACGCCA GCGCCGAAGC CACCGACTCC

GGTGAGTTCT ATATGCCCTA CCCGGGCACC

GCCAACGGGG TGTCTGGAAG CGCGTCGTAT

CCGAACGGCC AGATCTGGAC GGGCGTAATC

GGGCCCCCTC AGCGCTGGH TGTGGTATGG

GGCGCGGCCA AGGCGCTGGC CGAATCGATC

GCACCGGCTC CTGCAGAGCC CGCTCCGGCG

CCGACGACAC CGACACCGCA GCGGACCTTA

GTGGACCCCA ACTTGACACG TCGCAAGGGA60

GCCAGCGCCA GCCTGGTGAC CGnGCGGTG120

GCGCCCCCGG TACCCACMC GGCCGCCTCG180

CCGGCGACAC CTGTTGCCCC CCCACCACCG240

GGCGATCCCA ACGCAGCACC TCCGCCGGCC300

GCCCCAAACG CACCCCAACC TGTCCGGATC360

CTGCCTGCTG GCTGGGTGGA GTCTGACGCC420

AGCAAAACCA CCGGGGACCC GCCATTTCCC480

CGTATCGTGC TCGGCCGGCT AGACCAAAAG540

AAGGCCGCGG CCCGGTTGGG CTCGGACATG600

CGGATCAACC AGGAAACCGT CTCGCTCGAC660

TACGAAGTCA AGTTCAGCGA TCCGAGTAAG720

GGCTCGCCCG CGGCGAACGC ACCGGACGCC780

CTCGGGACCG CCAACAACCC GGTGGACAAG840

CGGCCTTTGG TCGCCCCGCC GCCGGCGCCG900

CCGGCGCCGG CCGGGGAAGT CGCTCCTACC960

CCGGCCTGA999

-71 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 53:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 332 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 53:

Met

His

Met

His

Gin

Val Asp

Pro

Asn

Leu

Thr

1

5

10

15

Arg

Lys

Gly

Arg

Leu

Ala

Leu

Ala

Ile Ala

Ala

Met

Ala

Ser

20

25

30

Al 3

Ser

Leu

Val

Thr

Val

Ala

Val

Pro

Ala

Thr Ala

Asn

Ala

Asp

Pro

35

40

45

Glu

Pro

Ala

Pro

Val

Pro

Thr

Ala

Ala Ser

Pro

Ser

Thr

50

55

60

Ala

Pro

Ala

Pro

Ala

Thr

Pro

Val Ala

Pro

65

70

75

80

Ala

Alf

Ala

Asn

Thr

Pro

Asn

Ala

Gin

Pro

Gly Asp

Pro

Asn

Ala

85

90

95

-72CZ 297406 B6

Pro

Ala

Asp

Pro

Asn

Ala

Pro

Val

Ile

Ala

Pro

100

105

110

Asn

Ala

Pro

Gin

Pro

Val

Arg

Ile

Asp

Asn

Pro

Val

Gly

Phe

Ser

115

120

125

Phe

Ala

Leu

Pro

Ala

Gly

Trp

Val

Glu

Ser

Asp

Ala

His

Phe

Asp

130

135

140

Tyr

Gly

Ser

Ala

Leu

Ser

Lys

Thr

T'nr

Gly

Asp

Pro

Phe

Pro

145

150

155

160

Gly

Gin

Pro

Val

Ala

Asn

Asp

Thr

Arg

Ile

Val

Leu

Gly

Arg

165

170

175

Leu

Asp

Gin

Lys

Leu

Tyr

Ala

Ser

Ala

Glu

Ala

Thr

Asp

Ser

Lys

Ala

180

185

190

Ala

Arg

Leu

Gly

Ser

Asp

Met

Gly

Glu

Phe

Tyr

Met

Pro

Tyr

Pro

195

200

205

Gly

Thr

Arg

Ile

Asn

Gin

Glu

Thr

Val

Ser

Leu

Asp

Ala

Asn

Gly

Val

210

215

220

Ser

Gly

Ser

Ala

Ser

Tyr

Glu

Val

Lys

Phe

Ser

Asp

Pro

Ser

Lys

225

230

235

240

Pro

Asn

Gly

Gin

Ile

Trp

Thr

Gly

Val

Ile

Gly

Ser

Pro

Ala

Asn

245

250

255

Ala

Pro

Asp

Ala

Gly

Pro

Gin

Arg

Trp

Phe

Val

Trp

Leu

Gly

260

265

270

Thr

Ala

Asn

Pro

Val

Asp

Lys

Gly

Ala

Lys

Ala

Leu

Ala

Glu

275

280

285

Ser

Ile

Arg

Pro

Leu

Val

Ala

Pro

Ala

Pro

Ala

Pro

Ala

Pro

290

295

300

Ala

Glu

Pro

Ala

Pro

Ala

Pro Ala Pro Ala Gly Glu 1

/al .

Ala

Pro

Thr

305

310

315

320

Pro

Thr

Pro

Thr

Pro i

Gin Arg Thr Leu Pro Ala

325

330

-73CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 54:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 20 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 54:

Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Xaa Asn Tyr Gly Gin Val 15 10 15

Val Ala Ala Leu (2) Informace pro SEQ ID NO: 55:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 55:

Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 56:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 19 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 56:

Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys 15 10 15

Glu Gly Arg

-74CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 57:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 57:

Tyr T'/r Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro 1 “ 5 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 58:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 14 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 58:

Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gin Gin Xaa Ala Val

5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 59:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 13 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 59:

Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro 1 5 10

-75 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 60:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 17 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 60:

Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro

5 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 61:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 61:

Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 62:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 30 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 62:

Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gin Gin Thr Ser 15 10 15

Leu Leu Asn Asn Leu Ala Asp Pro Asp Val Ser Phe Ala Asp

25 30

-76CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 63:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 187 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 63:

Thr

Gly

Ser

Leu Asn Gin

Thr

His

Asn

Arg

Ala

Asn

Glu

Arg

Lys

1

5

10

15

Asn

Thr

Met Lys Met

Val

Lys

Ser

Ile

Ala

Gly

Leu

Thr

Ala

20

25

30

Ala

Ile Gly Ala

Ala

Gly

Val

Thr

Ser

Ile

Met

Ala

35

40

45

Gly

Pro

Val Val Tyr

Gin

Met

Gin

Pro

Val

Phe

Gly

Ala

Pro

50

55

60

Leu

Pro

Leu

Asp Pro Ala

Ser

Ala

Pro

Asp

Val

Pro

Thr

Ala

Gin

65

70

75

80

Leu Thr Ser Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala

90 95

Asn

Lys

Gly

Ser

Leu

Val

Glu

Gly

Ile

Gly

Thr

Glu

Ala

Arg

100

105

110

Ile

Ala

Asp

His

Lys

Leu

Lys

Ala

Glu

His

Gly

Asp

Leu

Pro

115

120

125

Leu

Ser

Phe

Ser

Val

Thr

Asn

Ile

Gin

Pro

Ala

Gly

Ser

Ala

130

135

140

Thr

Ala

Asp

Val

Ser

Val

Ser

Gly

Pro

Lys

Leu

Ser

Pro

Val

Thr

145

150

155

160

Gin

Asn

Val

Thr

Phe

Val

Asn

Gin

Gly

Trp

Met

Leu

Ser

Arg

Ala

165

170

175

Ser

Ala

Met

Glu

Leu

Gin

Ala

Gly

Xaa

180 185

-77CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 64:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 148 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 64:

Asp

Glu

Val

Thr

Val

Glu

Thr

Ser

Val

Phe

Arg

Ala

Asp

Phe

Leu

1

5

10

15

Ser

Glu

Leu

Asp

Ala

Pro

Ala

Gin

Ala

Gly

Thr

Glu

Ser

Ala

Val

Ser

20

25

30

Gly

Val

Glu

Gly

Leu

Pro

Gly

Ser

Ala

Leu

Val

Lys

Arg

35

40

45

Gly

Pro

Asn

Ala

Gly

Ser

Arg

Phe

Leu

Asp

Gin

Ala

Ile

Tnr

Ser

50

55

60

Ala

Gly

Arg

His

Pro

Asp

Ser

Asp

Ile

Phe

Leu

Asp

Val

Thr

Val

65

70

75

80

Ser

Arg

His

Ala

Glu

Phe

Arg

Leu

Glu

Asn

Glu

Phe

Asn

Val

85

90

95

Val

Asp

Val

Gly

Ser

Leu

Asn

Gly

Thr

Tyr

Val

Asn

Arg

Glu

Pro

Val

100

105

HO

Asp

Ser

Ala

Val

Leu

Ala

Asn

Gly

Asp

Glu

Val

Gin

Ile

Gly

Lys

Leu

115

120

125

Arg

Leu

Val

Phe

Leu

Thr

Gly

Pro

Lys

Gin

Gly

Glu

Asp

Gly

Ser

130

135

140

Thr

Gly

Pro

145

-78CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 65:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 230 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 65:

Thr

Ser

Asn

Arg

Pro

Ala

Arg Arg Gly

Arg

Ala

Pro Arg

Asp

Thr

1

5

10

15

Gly

Pro

Asp

Arg

Ser

Ala

Ser Leu Ser

Leu

Val

Arg

His Arg

Arg

Gin

20

25

30

Gin

Arg

Asp

Ala

Leu

Cys

Leu Ser Ser

Thr

Gin

Ile

Ser Arg

Gin

Ser

35

40

45

Asn

Leu

Pro

Ala

Gly Gly Ala

Ala

Asn

Tyr

Ser Arg

Arg

Asn

50

55

60

Phe

Asp

Val

Arg

Ile

Lys

Ile Phe Met

Leu

Val

Thr

Ala Val

Val

Leu

65

70

75

80

Leu

Cys

Ser

Gly

Val

Ala Thr Ala

Ala

Pro

Lys

Thr Tyr

Cys

Glu

90 95

Glu

Leu

Lys

Gly

Thr

Asp

Thr

Gly

Gin

Ala

Cys

Gin

Ile

Gin

Met

Ser

100

105

110

Asp

Pro

Ala

Tyr

Asn

Ile

Asn

Ile

Ser

Leu

Pro

Ser

Tyr

Pro

Asp

115

120

125

Gin

Lys

Ser

Leu

Glu

Asn

Tyr

Ile

Ala

Gin

Thr

Arg

Asp

Lys

Phe

Leu

130

135

140

Ser

Ala

Thr

Ser

Thr

Pro

Arg

Glu

Ala

Pro

Tyr

Glu

Leu

Asn

145

150

155

160

Ile

Thr

Ser

Ala

Thr

Tyr

Gin

Ser

Ala

Ile

Pro

Arg

Gly

Thr

Gin

155

170

175

Ala

Val

Leu

Xaa

Val

Tyr

His

Asn

Ala

Gly

Thr

His

Pro

Thr

180

185

190

-79CZ 297406 B6

Thr

Tyr

Lys

Ala

Phe

Asp

Trp Asp

Gin

Ala

Tyr

Arg

Lys Pro

Ile

195

200

205

Thr

Tyr

Asp

Thr

Leu

Trp

Gin

Ala Asp

Thr

Asp

Pro

Leu

Pro Val

Val

210

215

220

Phe

Pro

Ile

Val

Ala

Arg

225

230

(2) Informace pro SEQ ID NO: 66:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 132 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 66:

Thr

Ala

Ser

Asp

Asn

Phe

Gin

Leu

Ser

Gin

Gly

Gin

Gly

Phe

1

5

10

15

Ala

Ile

Pro

Ile

Gly

Gin

Ala

Met

Ala

Ile

Ala

Gly

Gin

Ile

Arg

Ser

20

25

30

Gly

Ser

Pro

Thr

Val

His

Ile

Gly

Pro

Thr

Ala

Phe

Leu

Gly

35

40

45

Leu

Gly

Val

Asp

Asn

Gly

Asn

Gly

Ala

Arg

Val

Gin

Arg

Val

50

55

60

Val

Gly

Ser

Ala

Pro

Ala

Ser

Leu

Gly

Ile

Ser

Thr

Gly

Asp

Val

65

70

75

80

Ile

Thr

Ala

Val

Asp

Gly

Ala

Pro

Ile

Asn

Ser

Ala

Tnr

Ala

Met

Ala

85

90

95

Asp

Ala

Leu

Asn

Gly

His

Pro

Gly

Asp

Val

Ile

Ser

Val

Asn

Trp

100

105

110

Gin

Thr

Lys

Ser

Gly

Thr

Arg

Thr

Gly

Asn

Val

Thr

' Leu

i Ala

Glu

115 120 125

Gly Pro Pro Ala

130

-80CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 67:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 100 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 67:

Val

Pro

Leu

Arg

Ser

Pro

Ser

Met

Ser

Pro

Ser

Lys

Cys

Leu

Ala

1

5

10

15

Ala

Gin

Arg

Asn

Pro

Val

Ile

Arg

Leu

Ser

Asn

Pro

20

25

30

Pro

Arg

Lys

Tyr

Arg

Ser

Met

Pro

Ser

Pro

Ala

Thr

Ala

Ser

Ala

Gly

35

40

45

Met

Ala

Arg

Val

Arg

Ala

Ile

Trp

Arg

Gly

Pro

Ala

Thr

Xaa

50

55

60

Ser

Ala

Gly

Met

Ala

Arg

Val

Arg

Trp

Xaa

Val

Met

Pro

Xaa

Val

65

70

75

80

Ile

Gin

Ser

Thr

Xaa

Ile

Arg

Xaa

Gly

Pro

Phe

Asp

Asn

Arg

Gly

85

90

95

Ser

Glu

Arg

Lys

100

-81 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 68:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 163 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 68:

Met

Thr

Asp

Ile

Leu

Ile

Asp

Thr

Asp

Glu

Arg

Val

Arg

Thr

1

5

10

15

Leu

Thr

Leu

Asn

Arg

Pro

Gin

Ser

Ara

Asn

Ala

Leu

Ser

Ala

Leu

20

25

30

Arg

Asp

Arg

Phe

Ala

Xaa

Leu

Xaa

Asp

Ala

Glu

Xaa

Asp

35

40

45

Ile

Asp

Val

Ile

Leu

Thr

Gly

Ala

Asp

Pro

Val

Phe

Cys

Ala

Gly

50

55

60

Leu

Asp

Leu

Lys

Val

Ala

Gly

Arg

Ala

Asp

Arg

Ala

Gly

His

Leu

65

70

75

80

Thr

Ala

Val

Gly

His

Asp

Gin

Ala

Gly

Asp

Arg

Asp

Gin

Arg

85

90

95

Arg

Gly

His

Arg

Ala

Arg

Thr

Gly

Ala

Val

Leu

Arg

His

Pro

100

105

110

Asp

Arg

Leu

Arg

Ala

Arg

Pro

Leu

Arg

His

Pro

Arg

Pro

Gly

115

120

125

Ala

His

Leu

Gly

Thr

Gin

Cys

Val

Leu

Ala

Lys

Gly

Arg

130

135

140

His

Arg

Xaa

Gly

Pro

Val

Asp

Glu

Pro

Asp

Arg

Leu

Pro

Val

Arg

145

150

155

160

Asp Arg Arg

-82CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 69:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 344 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 69:

Met

Lys

Phe

Val

Asn

His

Ile

Glu

Pro

Val

Ala

Pro

Arg

Ala

Gly

1

5

10

15

Gly

Ala

Val

Ala

Glu

Val

Tyr

Ala

Glu

Ala

Arg

Glu

Phe

Gly

Arg

20

25

30

Leu

Pro

Glu

Pro

Leu

Ala

Met

Leu

Ser

Pro

Asp

Glu

Gly

Leu

Thr

35

40

45

Ala

Gly

Trp

Ala

Thr

Leu

Arg

Glu

Thr

Leu

Val

Gly

Gin

Val

Pro

50

55

60

Arg

Gly

Arg

Lys

Glu

Ala

Val

Ala

Val

Ala

Ser

Leu

Arg

65

70

75

80

Cys

Pro

Trp

cys

Val

Asp

Ala

His

Thr

Met

Leu

Tyr

Ala

Gly

85

90

95

Gin

Thr

Asp

Thr

Ala

Ile

Leu

Ala

Gly

Thr

Ala

Pro

Ala

100

105

110

Gly

Asp

Pro

Asn

Ala

Pro

Tyr

Val

Ala

Trp

Ala

Gly

Thr

Gly

Thr

115

120

125

Pro

Ala

Gly

Pro

Ala

Pro

Phe

Gly

Pro

Asp

Val

Ala

Glu

Tyr

130

135

140

Leu

Gly

Thr

Ala

Val

Gin

Phe

His

Phe

Ile

Ala

Arg

Leu

Val

Leu

Val

145

150

155

160

Leu

Asp

Glu

Thr

Phe

Leu

Pro

Gly

Pro

Arg

Ala

Gin

Leu

165

170

175

-83 CZ 297406 B6

Met

Arg

Ala

Gly

Leu

Val

Phe

Ala

Arg

Lys

Val

Arg

Ala

Glu

180

185

190

His

Arg

Pro

Gly

Arg

Ser

Thr

Arg

Leu

Glu

Pro

Arg

Thr

Leu

Pro

195

200

205

Asp

Leu

Ala

Trp

Ala

Thr

Pro

Ser

Glu

Pro

Ile

Al a

Thr

Ala

Phe

210

215

220

Ala

Leu

Ser

His

Leu

Asp

Thr

Ala

Pro

His

Leu

Pro

225

230

235

240

Thr

Arg

Gin

Val

Arg

Val

Gly

Ser

Trp

His

Gly

Glu

Pro

245

250

255

Met

Pro

Met

Ser

Arg

Trp

Thr

Asn

Glu

His

Thr

Ala

Glu

Leu

Pro

260

265

270

Ala

Asp

Leu

His

Ala

Pro

Thr

Arg

Leu

Ala

Leu

Thr

Gly

Leu

Ala

275

280

285

Pro

His

Gin

Val

Thr

Asp

Val

Ala

Arg

Ser

Leu

290

295

300

Asp

Thr

Asp

Ala

Leu

Val

Gly

Ala

Leu

Ala

Trp

Ala

Phe

Thr

305

310

315

320

Ala

Arg

Ile

Gly

Thr

Trp

Ile

Gly

Ala

Glu

Gly

Gin

325

330

335

Val

Ser

Arg

Gin

Asn

Pro

Thr

Gly

340

(2) Informace pro SEQ ID NO: 70:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 485 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární

-84CZ 297406 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 70:

Asp

Pro

Asp

Met

Pro

Gly

Thr

Val

Ala

Lys

Ala

Val

Ala

Asp

Ala

1

5

10

15

Leu

Gly

Arg

Gly

Ile

Ala

Pro

Val

Glu

Asp

Ile

Gin

Asp

Cys

Val

Glu

20

25

30

Ala

Arg

Leu

Gly

Glu

Ala

Gly

Leu

Asp

Val

Ala

Arg

Val

Tyr

Ile

35

40

45

Ile

Tyr

Arg

Gin

Arg

Ala

Glu

Leu

Arg

Thr

Ala

Lys

Ala

Leu

50

55

60

Gly

Val

Arg

Asp

Glu

Leu

Lys

Leu

Ser

Leu

Ala

Val

Thr

Val

Leu

65

70

75

80

Arg

Glu

Arg

Tyr

Leu

His

Asp

Glu

Gin

Gly

Arg

Pro

Ala

Glu

Ser

85

90

95

Thr

Gly

Glu

Leu

Met

Asp

Arg

Ser

Ala

Arg

Cys

Val

Ala

Glu

100

105

110

Asp

Gin

Tyr

Glu

Pro

Gly

Ser

Arg

Trp

Ala

Glu

Arg

Phe

Ala

115

120

125

Thr

Leu

Arg

Asn

Leu

Glu

Phe

Leu

Pro

Asn

Ser

Pro

Thr

Leu

Met

130

135

140

Asn

Ser

Gly

Thr

Asp

Leu

Gly

Leu

Ala

Gly

Cys

Phe

Val

Leu

Pro

145

150

155

160

Ile

Glu

Asp

Ser

Leu

Gin

Ser

Ile

Phe

Ala

Thr

Leu

Gly

Gin

Ala

165

170

175

Glu

Leu

Gin

Arg

Ala

Gly

Thr

Gly

Tyr

Ala

Phe

Ser

His

Leu

180

185

190

Arg

Pro

Ala

Gly

Asp

Arg

Val

Ala

Ser

Thr

Gly

Thr

Ala

Ser

Gly

195

200

205

Pro

Val

Ser

Phe

Leu

Arg

Leu

Tyr

Asp

Ser

Ala

Gly

Val

Ser

210

215

220

-85CZ 297406 B6

Met

Gly

Arg

Gly

Ala

Cys

Met

Ala

Val

Leu

Asp

Val

Ser

225

230

235

240

His

Pro

Asp

Ile

Cys

Asp

Phe

Val

Thr

Ala

Lys

Ala

Glu

Ser

Pro

Ser

245

250

255

Glu

Leu

Pro

His

Phe

Asn

Leu

Ser

Val

Gly

Val

Thr

Asp

Ala

Phe

Leu

260

265

270

Arg

Ala

Val

Glu

Arg

Asn

Gly

Leu

His

Arg

Leu

Val

Asn

Pro

Arg

Thr

275

280

285

Gly

Lys

Ile

Val

Ala

Arg

Met

Pro

Ala

Glu

Leu

Phe

Asp

Ala

Ile

290

295

300

Cys

Lys

Ala

His

Ala

Gly

Asp

Pro

Gly

Leu

Val

Phe

Leu

Asp

305

310

315

320

Thr

Ile

Asn

Arg

Ala

Asn

Pro

Val

Pro

Gly

Arg

Gly

Arg

Ile

Glu

Ala

325

330

335

Thr

Asn

Pro

Cys

Gly

Glu

Val

Pro

Leu

Pro

Tyr

Glu

Ser

Cys

Asn

340

345

350

Leu

Gly

Ser

Ile

Asn

Leu

Ala

Arg

Met

Leu

Ala

Asp

Gly

Arg

Val

Asp

355

360

365

Trp

Asp

Arg

Leu

Glu

Val

Ala

Gly

Val

Ala

Val

Arg

Phe

Leu

Asp

370

375

380

Asp

Val

Ile

Asp

Val

Ser

Arg

Tyr

Pro

Phe

Pro

Glu

Leu

Gly

Glu

Ala

385

390

395

400

Ala

Arg

Al a

Thr

Arg

Lys

Ile

Gly

Leu

Gly

Val

Met

Gly

Leu

Ala

Glu

405

410

415

Leu

Ala

Leu

Gly

Ile

Pro

Tyr

Asp

Ser

Glu

Ala

Val

Arg

420

425

430

Leu

Ala

Thr

Arg

Leu

Met

Arg

Ile

Gin

Ala

His

Thr

Ala

435

440

445

Ser Arg Arg

450

Leu Ala Glu Glu Arg Gly Ala Phe Pro Ala Phe Thr Asp

455 460

-86CZ 297406 B6

Ser Arg Phe Ala Arg Ser Gly Pro Arg Arg Asn Ala Gin Val Thr Ser

465 470 475 4Θ0

Val Ala Pro Thr Gly

485 (2) Informace pro SEQ ID NO: 71:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 267 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 71:

Gly

Val

Ile

Val

Leu

Asp

Leu

Glu

Pro

Arg

Gly

Pro

Leu

Pro

Thr

Glu

1

5

10

15

Ile

Tyr

Trp

Arg

Gly

Leu

Ala

Leu

Gly

Ile

Ala

Val

20

25

30

Val

Gly

Ile

Ala

Val

Ala

Ile

Val

Ile

Ala

Phe

Val

Asp

Ser

Ala

35

40

45

Gly

Ala

Lys

Pro

Val

Ser

Ala

Asp

Lys

Pro

Ala

Ser

Ala

Gin

Ser

His

50

55

60

Pro

Gly

Ser

Pro

Ala

Pro

Gin

Ala

Pro

Gin

Pro

Ala

Gly

Gin

Thr

Glu

65

70

75

80

Gly

Asn

Ala

Pro

Gin

Gly

Gin

Asn

Pro

Glu

Thr

Pro

85

90

95

Thr

Pro

Thr

Ala

Val

Gin

Pro

Val

Leu

Lys

Glu

Gly

Asp

100

105

110

Asp

Cys

Pro

Asp

Ser

Thr

Leu

Ala

Val

Lys

Gly

Leu

Thr

Asn

Ala

Pro

115

120

125

Gin

Tyr

Val

Gly

Asp

Gin

Pro

Lys

Phe

Thr

Met

Val

Thr

Asn

-87CZ 297406 B6

lle

Gly

Leu

Val

Ser

Cys

Lys

Arg

Asp

Val

Gly

Ala

Al ά

Val

Leu

Ala

145

150

155

160

Ala

Tyr

Val

Tyr

Ser

Leu

Asp

Asn

Lys

Arg

Leu

Trp

Ser

Asn

Leu

Asp

165

170

175

Cys

Ala

Pro

Ser

Asn

Glu

Thr

Leu

Val

Lys

Thr

Phe

Ser

Pro

Gly

Glu

180

185

190

Gin

Val

Thr

Al a

Val

Thr

Trp

Thr

Gly

Met

Gly

Ser

Ala

Pro

Arg

195

200

205

Cys

Pro

Leu

Pro

Arg

Pro

Ala

lle

Gly

Pro

Gly

Thr

Tyr

Asn

Leu

Val

210

215

220

Val

Gin

Leu

Gly

Asn

Leu

Arg

Ser

Leu

Pro

Val

Pro

Phe

lle

Leu

Asn

225

230

235

240

Gin

Pro

Gly

Pro

Val

Pro

Ala

Pro

Gly

Pro

Ala

Gin

245

250

255

Ala

Pro

Glu

Ser

Pro

Ala

Gin

Gly

260 265 (2) Informace pro SEQ ID NO: 72:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 97 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 72:

Leu lle Ser Thr Gly Lys Ala Ser His Ala Ser Leu Gly Val Gin Val 15 10 15

Thr Asn Asp Lys Asp Thr Pro Gly Ala Lys lle Val Glu Val Val Ala ’ 20 ' 25 30

-88CZ 297406 B6

Gly

Ala

Asn

Ala

Gly

Val

Pro

Lys

Gly

Val

Thr

35

40

45

Lys

Val

Asp

Arg

Pro

Ile

Asn

Ser

Ala

Asp

Ala

Leu

Val

Ala

50

55

60

Val

Arg

Ser

Lys

Ala

Pro

Gly

Ala

Thr

Val

Ala

Leu

Thr

Phe

Gin

Asp

65

70

75

80

Pro

Ser

Gly

Ser

Arg

Thr

Val

Gin

Val

Thr

Leu

Gly

Lys

Ala

Glu

85

90

95

Gin (2) Informace pro SEQ ID NO: 73:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 364 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý ío (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 73:

Gly

Ala

Val

Ser

Leu

Ala

Gly

Thr

Leu

Val

Leu

Thr

Ala

1

5

10

15

Cys

Gly

Thr

Asn

Ser

Gly

Ala

Gly

Thr

Ser

20

25

30

Gly

Ser

Val

His

Cys

Gly

Lys

Glu

Leu

His

Ser

Gly

Ser

35

40

45

Thr

Ala

Gin

Glu

Asn

Ala

Met

Glu

Gin

Phe

Val

Tyr

Ala

Tyr

Val

Arg

50

55

60

Ser

Cys

Pro

Gly

Tyr

Thr

Leu

Asp

Tyr

Asn

Ala

Asn

Gly

Ser

Gly

Ala

65

70

75

80

-89CZ 297406 B6

Gly

Val

Thr

Gin

Phe

Leu

Asn

Glu

ihr

Asp

Phe

Ala

Gly

Ser

Asp

85

90

95

Val

Pro

Leu

Asn

Pro

Ser

Thr

Gly

Gin

Pro

Asp

Arg

Ser

Ala

Glu

Arg

100

105

110

Cys

Gly

Ser

Pro

Ala

Trp

Asp

Leu

Pro

Thr

Val

Phe

Gly

Pro

Ile

Ala

115

120

125

Ile

Thr

Tyr

Asn

Ile

Lys

Gly

Val

Ser

Thr

Leu

Asn

Leu

Asp

Gly

Pro

130

135

140

Thr

Ala

Lys

Ile

Phe

Asn

Gly

Thr

Ile

Thr

Val

Trp

Asn

Asp

Pro

145

150

155

160

Gin

Ile

Gin

Ala

Leu

Asn

Ser

Gly

Thr

Asp

Leu

Pro

Thr

Pro

Ile

165

170

175

Ser

Val

Ile

Phe

Arg

Ser

Asp

Lys

Ser

Gly

Thr

Ser

Asp

Asn

Phe

Gin

180

185

190

Lys

Tyr

Leu

Asp

Gly

Val

Ser

Asn

Gly

Ala

Trp

Gly

Lys

Gly

Ala

Ser

195

200

205

Glu

Thr

Phe

Ser

Gly

Val

Gly

Val

Gly

Ala

Ser

Gly

Asn

Gly

210

215

229

Thr

Ser

Ala

Leu

Gin

Thr

Asp

Gly

Ser

Ile

Thr

Tyr

Asn

Glu

225

230

235

240

Trp

Ser

Phe

Ala

Val

Gly

Lys

Gin

Leu

Asn

Met

Ala

Gin

Ile

Thr

245

250

255

Ser

Ala

Gly

Pro

Asp

Pro

Val

Ala

Ile

Thr

Glu

Ser

Val

Gly

Lys

260

265

270

Thr

Ile

Ala

Gly

Ala

Lys

Ile

Met

Gly

Gin

Gly

Asn

Asp

Leu

Val

Leu

275

280

285

Asp

Thr

Ser

Phe

Tyr

Arg

Pro

Thr

Gin

Pro

Gly

Ser

Tyr

Pro

Ile

290

295

300

Val

Leu

Ala

Thr

Tyr

Glu

Ile

Val

Cys

Ser

Lys

Tyr

Pro

Asp

Ala

Thr

305 310 315 320

-90CZ 297406 B6

Thr Gly Thr Ala Val Arg Ala Phe Met Gin Ala Ala Ile Gly Pro Gly

325 330335

Gin Glu Gly Leu Asp Gin Tyr Gly Ser Ile Pro Leu Pro Lys Ser Phe

340 345350

Gin Ala Lys Leu Ala Ala Ala Val Asn Ala Ile Ser

355360 (2) Informace pro SEQ ID NO: 74:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 309 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 74:

Gin

Ala

Gly

Arg

Ala

Val

Arg

Thr

Gly

His

Ala

Glu

Asp

1

5

10

15

Gin

Thr

His

Gin

Asp

Arg

Leu

His

Gly

Cys

Arg

Ala

Val

20

25

30

Val

Arg

Gin

Asp

Arg

Ala

Ser

Val

Ser

Ala

Thr

Ser

Ala

Arg

Pro

35

40

45

Pro

Arg

His

Pro

Ala

Gin

Gly

His

Arg

Val

Ala

Pro

Ser

50

55

60

Gly

Arg

Pro

His

Pro

His

Val

Gin

Pro

Asp

Arg

65

70

75

80

Arg

Asp

Arg

Pro

Ala

Leu

Asp

Arg

Thr

Gin

Pro

Ala

Glu

His

Pro

85

90

95

Asp

Pro

His

Arg

Gly

Pro

Ala

Asp

Pro

Gly

Arg

Val

Arg

Gly

Arg

100

105

110

Gly

Arg

Leu

Arg

Val

Asp

Gly

Arg

Leu

Gin

Pro

Asp

Arg

Asp

-91 CZ 297406 B6

Ala

Asp

His

Gly

Ala

Pro

Val

Arg

Gly

Arg

Gly

Pro

His

Arg

Gly

Val

130

135

140

Gin

His

Arg

Gly

Pro

Val

Phe

Val

Arg

Val

Pro

Gly

Val

Arg

145

150

155

160

Cys

Ala

His

Arg

Gly

His

Arg

Val

Ala

Pro

Gly

Gin

Gly

165

170

175

Asp

Val

Leu

Arg

Ala

Gly

Leu

Arg

Val

Glu

Arg

Leu

Arg

Pro

Val

Ala

180

185

190

Ala

Val

Glu

Asn

Leu

His

Arg

Gly

Ser

Gin

Arg

Ala

Asp

Gly

Arg

Val

195

200

205

Phe

Arg

Pro

Ile

Arg

Gly

Ala

Arg

Leu

Pro

Ala

Arg

Ser

Arg

210

215

220

Ala

Gly

Pro

Gin

Gly

Arg

Leu

His

Leu

Asp

Gly

Ala

Gly

Pro

Ser

Pro

225

230

235

240

Leu

Pro

Ala

Arg

Ala

Gly

Gin

Pro

Ser

Ala

Gly

Arg

245

250

255

Arg

Ala

Gly

Ala

Glu

Arg

Ala

Aso

Pro

Gly

Gin

Arg

Gly

Arg

His

260

265

270

His

Gin

Gly

His

Asp

Pro

Gly

Arg

Gin

Gly

Ala

Gin

Arg

Gly

Thr

275

280

285

Ala

Gly

Val

Ala

His

Ala

Gly

Pro

Arg

Ala

Val

Arg

290

295

300

Asn Arg Pro Arg Arg

305

-92CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 75:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 580 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 75:

Ser Ala Val Trp Cys Leu Asn Gly Phe Thr Gly Arg His Arg His Gly

10 15

Arg Cys Arg Val Arg Ala Ser Gly Trp Arg Ser Ser Asn Arg Trp Cys

20

25

30

Ser

Thr

Ala

Asp

Cys

Ala

Ser

Lys

Thr

Pro

Thr

Gin

Ala

35

40

45

Ser

Pro

Leu

Glu

Arg

Phe

Thr

Cys

Ser

Pro

Ala

Val

Gly

Cys

50

55

60

Arg

Phe

Arg

Ser

Phe

Pro

Val

Arg

Leu

Ala

Leu

Gly

Ala

Arg

Thr

65

70

75

80

Ser

Arg

Thr

Leu

Gly

Val

Arg

Thr

Leu

Ser

Gin

Trp

Asn

Leu

Ser

85

90

95

Pro

Arg

Ala

Gin

Pro

Ser

Cys

Ala

Val

Tnr

Val

Glu

Ser

His

Thr

His

100

105

110

Ala

Ser

Pro

Arg

Met

Ala

Lys

Leu

Ala

Arg

Val

Gly

Leu

Val

Gin

115

120

125

Glu

Gin

Pro

Ser

Asp

Met

Thr

Asn

His

Pro

Arg

Tyr

Ser

Pro

130

135

140

Pro

Gin

Pro

Gly

Thr

Pro

Gly

Tyr

Ala

Gin

Gly

Gin

Thr

145

150

155

160

Tyr

Ser

Gin

Phe

Asp

Trp

Arg

Tyr

Pro

Ser

Pro

Gin

165

170

175

Pro

Thr

Gin

Tyr

Arg

Gin

Pro

Tyr

Glu

Ala

Leu

Gly

Thr

Arg

Pro

180

185

190

Gly

Leu

Ile

Pro

Gly

Val

Ile

Pro

Thr

Met

Thr

Pro

Gly

Met

195

200

205

-93 CZ 297406 B6

Val

Arg

Gin

Arg

Pro

Arg

Ala

Gly

Met

Leu

Ala

Ile

Gly

Ala

Val

Thr

210

215

220

Ile

Ala

Val

Ser

Ala

Gly

Ile

Gly

Ala

Ser

Leu

Val

225

230

235

240

Gly

Phe

Asn

Arg

Ala

Pro

Ala

Gly

Pro

Ser

Gly

Pro

Val

Ala

245

250

255

Ser

Ala

Pro

Ser

Ile

Pro

Ala

Asn

Met

Pro

Gly

Ser

Val

260

265

270

Glu

Gin

Val

Ala

Lys

Val

Pro

Ser

Val

Met

Leu

Glu

Thr

275

280

285

Asp

Leu

Gly

Arg

Gin

Ser

Glu

Gly

Ser

Gly

Ile

Leu

Ser

Ala

290

295

300

Glu

Gly

Leu

Ile

Leu

Thr

Asn

His

Val

Ile

Ala

Lys

305

310

315

320

Pro

Leu

Gly

Ser

Pro

Lys

Thr

Val

Thr

Phe

Ser

Asp

325

330

335

Gly

Arg

Thr

Ala

Pro

Phe

Thr

Val

Gly

Ala

Asp

Pro

Thr

Ser

Asp

340

345

350

Ile

Ala

Val

Arg

Val

Gin

Gly

Val

Ser

Gly

Leu

Thr

Pro

Ile

Ser

355

360

365

Leu

Gly

Ser

Asp

Leu

Arg

Val

Gly

Gin

Pro

Val

Leu

Ala

Ile

370

375

380

Gly

Ser

Pro

Leu

Gly

Leu

Glu

Gly

Thr

Val

Thr

Gly

Ile

Val

Ser

385

390

395

400

Ala

Leu

Asn

Arg

Pro

Val

Ser

Thr

Gly

Glu

Ala

Gly

Asn

Gin

Asn

405

410

415

Thr

Val

Leu

Asp

Ala

Ile

Gin

Thr

Asp

Ala

Ile

Asn

Pro

Gly

Asn

420

425

430

Ser

Gly

Ala

Leu

Val

Asn

Met

Asn

Ala

Gin

Leu

Val

Gly

Val

Asn

435

440

445

-94CZ 297406 B6

Ser

Ala

Ile Ala

Thr

Leu

Gly

Ala

Asp

Ser

Ala

Asp

Ala

Gin

Ser

Gly

450

455

460

Ser

Ile

Gly Leu

Gly

Phe

Ala

Ile

Pro

Val

Asp

Gin

Ala

Lys

Arg

Ile

465

470

475

480

Ala

Asp

Glu Leu

Ile

Ser

Thr

Gly

Lys

Ala

Ser

His

Ala

Ser

Leu

Gly

485

490

495

Val

Gin

Val Thr

Asn

Asp

Lys

Asp

Thr

Pro

Gly

Ala

Lys

Ile

Val

Glu

500

505

510

Val

Ala

Gly

Ala

Ala Asn

Ala

Gly

Val

Pro

Lys

Gly

Val

515

520

525

Val

Thr

Lys

Val

Asp

Arg Pro

Ile

Asn

Ser

Ala

Asp

Ala

Leu

530

535

540

Val

Ala

Val

Arg

Ser

Lys

Ala Pro

Gly

Ala

Thr

Val

Ala

Leu

Thr

545

550

555

560

Phe

Gin

Asp

Pro

Ser

Gly

Ser Arg

Thr

Val

Gin

Val

Thr

Leu

Gly

565

570

575

Lys Ala Glu Gin

580 (2) Informace pro SEQ ID NO: 76:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 233 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý ío (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 76:

Met Asn Asp Gly Lys Arg Ala Val Thr Ser Ala Val Leu Val Val Leu 15 10 15

Gly Ala Cys Leu Ala Leu Trp Leu Ser Gly Cys Ser Ser Pro Lys Pro 20 25 30

-95 CZ 297406 B6

Asp

Ala

Glu

Gin

Gly

Val

Pro

Val

Ser

Pro Thr

Ala

Ser

Asp

Pro

35

40

45

Ala

Leu

Ala

Glu

Ile

Arg

Gin

Ser

Leu

Asp Ala

Thr

Lys

Gly

Leu

50

55

60

Thr

Ser

Val

His

Val

Ala

Val

Arg

Thr

Gly Lys

Val

Asp

Ser

Leu

65

70

75

80

Leu

Gly

Ile

Thr

Ser

Ala

Asp

Val

Asp

Val

Arg Ala

Asn

Pro

Leu

Ala

85

90

95

Ala

Lys

Gly

Val

Cys

Thr

Tyr

Asn

Asp

Glu

Gin Gly

Val

Pro

Phe

Arg

100

105

110

Val

Gin

Gly

Asp

Asn

Ile

Ser

Val

Lys

Leu

Phe Asp

Asp

Trp

Ser

Asn

115

120

125

Leu

Gly

Ser

Ile

Ser

Glu

Leu

Ser

Thr

Ser

Arg Val

Leu

Asp

Pro

Ala

130

135

140

Ala

Gly

Val

Thr

Gin

Leu

Ser

Gly

Val

Thr Asn

Leu

Gin

Ala

Gin

145

150

155

160

Gly

Thr

Glu

Val

Ile

Asp

Gly

Ile

Ser

Thr

Thr Lys

Ile

Thr

Gly

Thr

165

170

175

Ile

Pro

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Leu

Asp

Pro Gly

Ala

Lys

Ser

Ala

180

185

190

Arg

Pro

Ala

Thr

Val

Trp

Ile

Ala

Gin

Asp

Gly Ser

His

Leu

Val

195

200

205

Arg

Ala

Ser

Ile

Asp

Leu

Gly

Ser

Gly

Ser

Ile Gin

Leu

Thr

Gin

Ser

210

215

220

Lys

Trp

Asn

Glu

Pro

Val

Asn

Val

Asp

225

230

-96CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 77:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 66 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 77:

Val

Ile

Asp

Ile

Gly

Thr

Ser

Pro

Thr

Ser

Trp

Glu

Gin

Ala

1

5

10

15

Ala

Glu

Ala

Val

Gin

Arg

Ala

Arg

Asp

Ser

Val

Asp

Ile

Arg

Val

20

25

30

Ala

Arg

Val

Ile

Glu

Gin

Asp

Met

Ala

Val

Asp

Ser

Ala

Gly

Lys

Ile

35

40

45

Thr

Tyr

Arg

Ile

Lys

Leu

Glu

Val

Ser

Phe

Lys

Met

Arg

Pro

Ala

Gin

50

55

60

Pro Arg (2) Informace pro SEQ ID NO: 78:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 69 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 78:

Val Pro Pro Ala Pro Pro Leu Pro Pro Leu Pro Pro Ser Pro Ile Ser 15 10 15

Cys Ala Ser Pro Pro Ser Pro Pro Leu Pro Pro Ala Pro Pro Val Ala 20 25 30

-97CZ 297406 B6

Pro Gly Pro Pro Met Pro Pro Leu Asp Pro Trp Pro Pro Ala Pro Pro 35 40 45

Leu Pro Tyr Ser Thr Pro Pro Gly Ala Pro Leu Pro Pro Ser Pro Pro 50 55 60

Ser Pro Pro Leu Pro (2) Informace pro SEQ ID NO: 79:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 355 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina io (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 79:

Met

Ser

Asn

Ser

Arg

Ser

Leu

Arg

Trp

Ser

Trp

Leu

Ser

1

5

10

15

Val

Leu

Ala

Val

Gly

Leu

Gly

Leu

Ala

Thr

Ala

Pro

Ala

Gin

Ala

20

25

30

Ala

Pro

Ala

Leu

Ser

Gin

Asp

Arg

Phe

Ala

Asp

Phe

Pro

Ala

Leu

35

40

45

Pro

Leu

Asp

Pro

Ser

Ala

Met

Val

Ala

Gin

Val

Ala

Pro

Gin

Val

50

55

60

Asn

Ile

Asn

Thr

Lys

Leu

Gly

Tyr

Asn

Ala

Val

Gly

Ala

Gly

Tnr

65

70

75

80

Gly

Ile

Val

Ile

Asp

Pro

Asn

Gly

Val

Leu

Tnr

Asn

His

Val

85

90

95

Ile

Ala

Gly

Ala

Thr

Asp

Ile

Asn

Ala

Phe

Ser

Val

Gly

Ser

Gly

Gin

100

105

110

-98CZ 297406 B6

Thr

Tyr

Gly

Val

Asp

Val

Gly

Tyr

Asp

Arg

Thr

Gin

Asp

Val

Ala

115

120

125

Val

Leu

Gin

Leu

Arg

Gly

Ala

Gly

Leu

Pro

Ser

Ala

Ile

Gly

130

135

140

Gly

Val

Ala

Val

Gly

Glu

Pro

Val

Ala

Met

Gly

Asn

Ser

Gly

145

150

155

160

Gly

Gin

Gly

Thr

Pro

Arg

Ala

Val

Pro

Gly

Arg

Val

Ala

Leu

165

170

175

Gly

Gin

Thr

Val

Gin

Ala

Ser

Asp

Ser

Leu

Thr

Gly

Ala

Glu

Thr

180

185

190

Leu

Asn

Gly

Leu

Ile

Gin

Phe

Asp

Al a

Ala

Ile

Gin

Pro

Gly

Asp

Ser

195

200

205

Gly

Pro

Val

Asn

Gly

Leu

Gly

Gin

Val

Gly

Met

Asn

Thr

210

215

220

Ala

Ser

Asp

Asn

Phe

Gin

Leu

Ser

Gin

Gly

Gin

Gly

Phe

Ala

225

230

235

240

Ile

Pro

Ile

Gly

Gin

Ala

Met

Ala

Ile

Ala

Gly

Gin

Ile

Arg

Ser

Gly

245

250

255

Gly

Ser

Pro

Thr

Val

His

Ile

Gly

Pro

Thr

Ala

Phe

Leu

Gly

Leu

260

265

270

Gly

Val

Asp

Asn

Gly

Asn

Gly

Ala

Arg

Val

Gin

Arg

Val

275

280

285

Gly

Ser

Ala

Pro

Ala

Ser

Leu

Gly

Ile

Ser

Thr

Gly

Asp

Val

Ile

290

295

300

Thr

Al a

Val

Asp

Gly

Ala

Pro

Ile

Asn

Ser

Ala

Thr

Ala

Met

Ala

Asp

305

310

315

320

Ala

Leu

Asn

Gly

His

Pro

Gly

Asp

Val

Ile

Ser

Val

Asn

Trp

Gin

325

330

335

Thr

Lys

Ser

Gly

Thr

Arg

Thr

Gly

Asn

Val

Thr

Leu

Ala

Glu

Gly

340

345

350

Pro Pro Ala

355

-99CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 80:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 205 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 80:

Ser

Pro

Lys

Pro

Asp

Ala

Glu

Gin

Gly

Val

Pro

Val

Ser

Pro

Thr

1

5

10

15

Ala

Ser

Asp

Pro

Ala

Leu

Ala

Glu

lle

Arg

Gin

Ser

Leu

Asp

Ala

20

25

30

Thr

Lys

Gly

Leu

Thr

Ser

Val

Hi s

Val

Ala

Val

Arg

Thr

Gly

Lys

35

40

45

Val

Asp

Ser

Leu

Gly

lle

Thr

Ser

Ala

Asp

Val

Asp

Val

Arg

Ala

50

55

60

Asn

Pro

Leu

Ala

Lys

Gly

Val

Cys

Thr

Tyr

Asn

Asp

Glu

Gin

Gly

65

70

75

80

Val

Pro

Phe

Arg

Val

Gin

Gly

Asp

Asn

lle

Ser

Val

Lys

Leu

Phe

Asp

85

90

95

Asp

Trp

Ser

Asn

Leu

Gly

Ser

lle

Ser

Glu

Leu

Ser

Thr

Ser

Arg

Val

100

105

110

Leu

Asp

Pro

Ala

Al a

Gly

Val

Thr

Gin

Leu

Ser

Gly

Val

Thr

Asn

115

120

125

Leu

Gin

Ala

Gin

Gly

Thr

Glu

Val

lle

Asp

Gly

lle

Ser

Thr

Lys

130

135

140

lle

Thr

Gly

Thr

lle

Pro

Ala

Ser

Val

Lys

Met

Leu

Asp

Pro

Gly

- 100CZ 297406 B6

145 150 155 160

Ala

Lys

Ser

Ala

Arg

Pro

Ala

Thr

Val

Trp

Ile

Ala Gin

Asp

Gly

Ser

165

170

175

His

Hi s

Leu

Val

Arg

Ala

Ser

Ile

Asp

Leu

Gly

Ser Gly

Ser

Ile

Gin

180

185

190

Leu

Thr

Gin

Ser

Lys

Trp

Asn

Glu

Pro

Val

Asn

Val Asp

195

200

205

(2) Informace pro SEQ ID NO: 81:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 286 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý ío (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 81:

Gly

Asp

Ser

Phe

Trp

Ala

Asp

Gin

Met

Ala

Arg

Gly

Phe

Val

1

5

10

15

Leu

Gly

Ala

Thr

Ala

Gly

Arg

Thr

Leu

Thr

Gly

Glu

Gly

Leu

Gin

20

25

30

His

Ala

Asp

Gly

His

Ser

Leu

Asp

Ala

Thr

Asn

Pro

Ala

Val

35

40

45

Val

Ala

Tyr

Asp

Pro

Ala

Phe

Ala

Tyr

Glu

Ile

Gly

Tyr

Ile

Xaa

Glu

50

55

60

Ser

Gly

Leu

Ala

Arg

Met

Cys

Gly

Glu

Asn

Pro

Glu

Asn

Ile

Phe

65

70

75

80

Tyr

Ile

Thr

Val

Tyr

Asn

Glu

Pro

Tyr

Val

Gin

Pro

Glu

Pro

Glu

85

90

95

Asn

Phe

Asp

Pro

Glu

Gly

Val

Leu

Gly

Ile

Tyr

Arg

Tyr

His

Ala

100

105

110

- 101 CZ 297406 B6

Ala

Thr

Glu

Gin

Arg

Thr

Asn

Lys

Xaa

Gin

Ile

Leu

Ala

Ser

Gly

Val

115

120

125

Ala

Met

Pro

Ala

Leu

Arg

Ala

Gin

Met

Leu

Ala

Glu

Trp

130

135

140

Asp

Val

Ala

Asp

Val

Trp

Ser

Val

Thr

Ser

Trp

Gly

Glu

Leu

Asn

145

150

155

160

Arg

Asp

Gly

Val

Ile

Glu

Thr

Glu

Lys

Leu

Arg

His

Pro

Asp

Arg

165

170

175

Pro

Ala

Gly

Val

Pro

Tyr

Val

Thr

Arg

Ala

Leu

Glu

Asn

Ala

Arg

Gly

180

185

190

Pro

Val

Ile

Ala

Val

Ser

Asp

Trp

Met

Arg

Ala

Val

Pro

Glu

Gin

Ile

195

200

205

Arg

Pro

Trp

Val

Pro

Gly

Thr

Tyr

Leu

Thr

Leu

Gly

Thr

Asp

Gly

Phe

210

215

220

Gly

Phe

Ser

Asp

Thr

Arg

Pro

Ala

Gly

Arg

Tyr

Phe

Asn

Thr

Asp

225

230

235

240

Ala

Glu

Ser

Gin

Val

Gly

Arg

Gly

Phe

Gly

Arg

Gly

Trp

Pro

Gly

Arg

245

250

255

Arg

Val

Asn

Ile

Asp

Pro

Phe

Gly

Ala

Gly

Arg

Gly

Pro

Ala

Gin

260

265

270

Leu

Pro

Gly

Phe

Asp

Glu

Gly

Leu

Arg

Pro

Xaa

Lys

275

280

285

- 102CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 82:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 173 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 82:

Thr

Lys

Phe

His

Ala

Leu

Met

Gin

Glu

Gin

Ile

His

Asn

Glu

Phe

Thr

1

5

10

15

Ala

Gin

Tyr

Val

Ala

Ile

Ala

Val

Tyr

Phe

Asp

Ser

Glu

Asp

20

25

30

Leu

Pro

Gin

Leu

Ala

Lys

His

Phe

Tyr

Ser

Gin

Ala

Val

Glu

Arg

40 45

Asn

His

Ala

Met

Leu

Val

Gin

His

Leu

Asp

Arg

Asp

Leu

Arg

50

55

60

Val

Glu

Ile

Pro

Gly

Val

Asp

Thr

Val

Arg

Asn

Gin

Phe

Asp

Arg

Pro

65

70

75

80

Arg

Glu

Ala

Leu

Ala

Leu

Ala

Leu

Asp

Gin

Glu

Arg

Thr

Val

Tnr

Asp

85

90

95

Gin

Val

Gly

Arg

Leu

Thr

Ala

Val

Ala

Arg

Asp

Glu

Gly

Asp

Phe

Leu

100

105

110

Gly

Glu

Gin

Phe

Met

Gin

Trp

Phe

Leu

Gin

Glu

Gin

Ile

Glu

Val

115

120

125

Ala

Leu

Met

Ala

Thr

Leu

Val

Arg

Val

Ala

Asp

Arg

Ala

Gly

Ala

Asn

130

135

140

Leu

Phe

Glu

Leu

Glu

Asn

Phe

Val

Ala

Arg

Glu

Val

Asp

Val

Ala

Pro

145

150

155

160

Ala

Ser

Gly

Ala

Pro

His

Ala

Gly

Arg

Leu

165

170

- 103 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 83:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 107 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 83:

Arg

Ala

Asp

Glu

Arg

Lys

Asn

Thr

Met

Lys

Met

Val

Lys

Ser

Ile

1

5

10

15

Ala

Gly

Leu

Thr

Ala

Ile

Gly

Ala

Gly

20

25

30

Val

Thr

Ser

Ile

Met

Ala

Gly

Pro

Val

Tyr

Gin

Met

Gin

Pro

35

40

45

Val

Phe

Gly

Al a

Pro

Leu

Pro

Leu

Asp

Pro

Xaa

Ser

Ala

Pro

Xaa

50

55

60

Val

Pro

Thr

Ala

Gin

Trp

Thr

Xaa

Leu

Asn

Xaa

Leu

Xaa

Asp

65

70

75

80

Pro

Asn

Val

Ser

Phe

Xaa

Asn

Lys

Gly

Ser

Leu

Val

Glu

Gly

Ile

90 95

Gly Gly Xaa Glu Gly Xaa Xaa Arg Arg Xaa Gin

100 105

- 104CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 84:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 125 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 84:

Vsi Leu Ser Val Pro Val Gly Asp Gly Phe Trp Xaa Arg Val Val Asn 15 10 15

Pro Leu Gly Gin Pro Ile Asp Gly Arg Gly Asp Val Asp Ser Asp Thr 20 25 30

Arg

Ala

Leu

Glu

Leu

Gin

Ala

Pro

Ser

Val

Xaa

Arg

Gin

Gly

35

40

45

Val

Lys

Glu

Pro

Leu

Xaa

Thr

Gly

Ile

Lys

Ala

Ile

Asp

Ala

Met

Thr

50

55

60

Pro

Ile

Gly

Arg

Gly

Gin

Arg

Gin

Leu

Ile

Gly

Asp

Arg

Lys

Thr

65

70

75

80

Gly

Lys

Asn

Arg

Leu

Cys

Arg

Thr

Pro

Ser

Asn

Gin

Arg

Glu

85

90

95

Glu

Leu

Gly

Val

Arg

Trp

Ile

Pro

Arg

Ser

Arg

Cys

Ala

Cys

Val

Tyr

100

105

110

Val

Gly

His

Arg

Ala

Arg

Gly

Thr

Tyr

His

Arg

115 120 125

- 105 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 85:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 117 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 85:

Cys

Asp

Ala

Val

Met

Gly

Phe

Leu

Gly

Ala

Gly

Pro

Leu

Ala

Val

1

5

10

15

Val

Asp

Gin

Leu

Val

Thr

Arg

Val

Pro

Gin

Gly

Trp

Ser

Phe

Ala

20

25

30

Gin

Ala

Val

Pro

Val

Phe

Leu

Thr

Ala

Trp

Tyr

Gly

Leu

35

40

45

Ala

Asp

Leu

Ala

Glu

Ile

Lys

Ala

Gly

Glu

Ser

Val

Leu

Ile

His

Ala

50

55

60

Gly

Thr

Gly

Val

Gly

Met

Ala

Val

Gin

Leu

Ala

Arg

Gin

Trp

65

70

75

80

Gly

Val

Glu

Val

Phe

Val

Thr

Ala

Ser

Arg

Gly

Lys

Trp

Asp

Thr

Leu

85

90

95

Arg

Ala

Xaa

Phe

Asp

Xaa

Pro

Tyr

Arg

Xaa

Phe

Pro

His

Xaa

100

105

110

Arg

Ser

Xaa

Gly

115

-106CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 86:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 103 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 86

Met

Tyr

Arg

Phe

Ala

Cys

Arg

Thr

Leu

Met

Leu

Ala

Cys

Ile

Leu

1

5

10

15

Ala

Thr

Gly

Val

Ala

Gly

Leu

Gly

Val

Gly

Ala

Gin

Ser

Ala

Gin

20

25

30

Thr

Ala

Pro

Val

Pro

Asp

Tyr

Trp

Cys

Pro

Gly

Gin

Pro

Phe

Asp

35

40

45

Pro

Ala

Trp

Gly

Pro

Asn

Trp

Asp

Pro

Tyr

Thr

Cys

His

Asp

Phe

50

55

60

His

Arg

Asp

Ser

Asp

Gly

Pro

Asp

His

Ser

Arg

Asp

Tyr

Pro

Gly

Pro

65

70

75

80

Ile

Leu

Glu

Gly

Pro

Val

Leu

Asp

Pro

Gly

Ala

Pro

85

90

95

Pro

Ala

Gly

Ala

100

- 107CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 87:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 88 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 87:

Val

Gin

Cys

Arg

Val

i rp

Leu

Glu

Ile

Gin

Trp

Arg

Gly

Met

Leu

Gly

1

5

10

15

Ala

Asp

Gin

Ala

Arg

Ala

Gly

Pro

Ala

Arg

Ile

Trp

Arg

Glu

His

20

25

30

Ser

Met

Ala

Met

Lys

Pro

Arg

Thr

Gly

Asp

Gly

Pro

Leu

Glu

Ala

35

40

45

Thr

Lys

Glu

Gly

Arg

Gly

Ile

Val

Met

Arg

Val

Pro

Leu

Glu

Gly

50

55

60

Gly

Ara

Leu

Val

Glu

Leu

Thr

Pro

Asp

Glu

Ala

Leu

Gly

65	70	75	80
Asp Glu Leu Lys Gly	Val Thr Ser
85

-108CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 88:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 95 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 88:

Thr

Asp

Ala

Thr

Leu

Ala

Gin

Glu

Ala

Gly

Asn

Phe

Glu

Arg

Ile

1

5

10

15

Ser

Gly

Asp

Leu

Lys

Thr

Gin

Ile

Asp

Gin

Val

Glu

Ser

Thr

Ala

Gly

20

25

30

Ser

Leu

Gin

Gly

Gin

Trp

Arg

Gly

Ala

Gly

Thr

Ala

Gin

Ala

35

40

45

Ala

Val

Arg

Phe

Gin

Glu

Ala

Asn

Lys

Gin

Lys

Gin

Glu

Leu

50

55

60

Asd

Glu

Ile

Ser

Thr

Asn

Ile

Arg

Gin

Ala

Gly

Val

Gin

Tyr

Ser

Arg

65

70

75

80

Ala

Asp

Glu

Gin

Ala

Leu

Ser

Gin

Met

Gly

Phe

85

90

95

(2) Informace pro SEQ ID NO: 89:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 166 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 89:

- 109CZ 297406 B6

Met

Thr

Gin

Ser

Gin

Thr

Val

Thr

Val

Asp

Gin

Glu

Ile

Leu

Asn

1

5

10*

15

Arg

Ala

Asn

Glu

Val

Glu

Ala

Pro

Met

Ala

Asp

Pro

Thr

Asp

Val

20

25

30

Pro

Ile

Thr

Pro

Cys

Glu

Leu

Thr

Xaa

Lys

Asn

Ala

Gin

35

40

45

Xaa

Val

Leu

Ser

Ala

Asp

Asn

Met

Arg

Glu

Tyr

Leu

Ala

Gly

Ala

50

55

60

Lys

Glu

Arg

Gin

Arg

Leu

Ala

Thr

Ser

Leu

Arg

Asn

Ala

Lys

Xaa

65

70

75

80

Tyr

Gly

Glu

Val

Asp

Glu

Ala

Thr

Ala

Leu

Asp

Asn

Asp

Gly

85

90

95

Glu

Gly

Thr

Val

Gin

Ala

Glu

Ser

Ala

Gly

Ala

Val

Gly

Asp

Ser

100

105

110

Ser

Ala

Glu

Leu

Thr

Asp

Thr

Pro

Arg

Val

Ala

Thr

Ala

Gly

Glu

Pro

115

120

125

Asn

Phe

Met

Asp

Leu

Lys

Glu

Ala

Arg

Lys

Leu

Glu

Thr

Gly

Asp

130

135

140

Gin

Gly

Ala

Ser

Leu

Al a

His

Xaa

Gly

Asp

Gly

Trp

Asn

Thr

Xaa

Thr

145

150

155

160

Leu

Thr

Leu

Gin

Gly

Asp

165

(2) Informace pro SEQ ID NO: 90:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 5 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 90:

Arg Ala Glu Arg Met

-110CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 91:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 263 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 91:

Val

Ala

Trp

Met

Ser

Val

Thr

Ala

Gly

Gin

Ala

Glu

Leu

Thr

Ala

1

5

10

15

Gin

Val

Arg

Val

Ala

Tyr

Glu

Thr

Ala

Tyr

Gly

Leu

Thr

20

25

30

Val

Pro

Val

Ile

Ala

Glu

Asn

Arg

Ala

Glu

Leu

Met

Ile

Leu

35

40

45

Ile

Ala

Thr

Asn

Leu

Gly

Gin

Asn

Thr

Pro

Ala

Ile

Ala

Val

Asn

50

55

60

Glu

Ala

Glu

Tyr

Gly

Glu

Met

Trp

Ala

Gin

Asp

Ala

Met

Phe

65

70

75

80

Gly

Tyr

Ala

Tnr

Ala

Thr

Ala

Thr

Ala

Thr

Leu

Pro

Phe

85

90

95

Glu

Ala

Pro

Glu

Met

Thr

Ser

Ala

Gly

Leu

Glu

Gin

Ala

100

105

110

Ala

Val

Glu

Ala

Ser

Asp

Thr

Ala

Asn

Gin

Leu

Met

115

120

125

Asn

Val

Pro

Gin

Ala

Leu

Lys

Gin

Leu

Ala

Gin

Pro

Thr

Gin

Gly

130

135

140

T’nr

Thr

Pro

Ser

Lys

Leu

Gly

Leu

Trp

Lys

Thr

Val

Ser

Pro

145

150

155

160

His

Arg

Ser

Pro

Ile

Ser

Asn

Met

Val

Ser

Met

Ala

Asn

His

Met

165

170

175

Ser

Met

Thr

Asn

Ser

Gly

Val

Ser

Met

Thr

Asn

Thr

Leu

Ser

Met

180

185

190

Leu

Lys

Gly

Phe

Ala

Pro

Ala

Gin

Ala

Val

Gin

Thr

Ala

-111 CZ 297406 B6

195

200

205

Ala

Gin

Asn

Gly

Val

Arg

Ala

Met

Ser

Leu

Gly

Ser

Leu

Gly

210

215

220

Ser

Gly

Leu

Gly

Val

Ala

Asn

Leu

Gly

Arg

Ala

225

230

235

240

Ser

Val

Arg

Tyr

Gly

His

Arg

Asp

Gly

Lys

Tyr

Ala

Xaa

Ser

Gly

245

250

255

Arg

.Asn

Gly

Pro

Ala

260 (2) Informace pro SEQ ID NO: 92:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 303 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 92:

Met

Thr

Tyr

Ser

Pro

Gly

Asn

Pro

Gly

Tyr

Pro

Gin

Ala

Gin

Pro

Ala

1

5

10

15

Gly

Ser

Tyr

Gly

Val

Thr

Pro

Ser

Phe

Ala

His

Ala

Asp

Glu

Gly

20

25

30

Ala

Ser

Lys

Leu

Pro

Met

Tyr

Leu

Asn

Ile

Ala

Val

Ala

Val

Leu

Gly

35

40

45

Leu

Ala

Tyr

Phe

Ala

Ser

Phe

Gly

Pro

Met

Phe

Thr

Leu

Ser

Thr

50

55

60

Glu

Leu

Gly

Asp

Gly

Ala

Val

Ser

Gly

Asp

Thr

Gly

Leu

Pro

65

70

75

80

Val

Gly

Val

Ala

Leu

Al a

Ala

Leu

Ala

Gly

Val

Leu

Val

85

90

95

- 112CZ 297406 B6

Pro

Lys

Ala

Lys

Ser

His

Val

Thr

Val

Ala

Val

Leu

Gly

Val

Leu

100

105

110

Gly

Val

Phe

Leu

Met

Val

Ser

Ala

Thr

Phe

Asn

Lys

Pro

Ser

Ala

Tyr

115

120

125

Ser

Thr

Gly

Trp

Ala

Leu

Trp

Val

Leu

Ala

Phe

Ile

Val

Phe

Gin

130

135

140

Ala

Val

Ala

Al a

Val

Leu

Ala

Leu

Val

Glu

Tor

Gly

Ala

Ile

Thr

145

150

155

160

Ala

Pro

Ala

Pro

Arg

Pro

Lys

Phe

Asp

Pro

Tyr

Gly

Gin

Tyr

Gly

Arg

165

170

175

Tyr

Gly

Gin

Tyr

Gly

Gin

Tyr

Gly

Val

Gin

Pro

Gly

Tyr

Gly

180

185

190

Gin

Gly

Ala

Gin

Ala

Gly

Leu

Gin

Ser

Pro

Gly

Pro

Gin

195

200

205

Gin

Ser

Pro

Gin

Pro

Gly

Tyr

Gly

Ser

Gin

Tyr

Gly

Tyr

Ser

210

215

220

Ser

Pro

Ser

Gin

Ser

Gly

Ser

Gly

Tyr

Thr

Ala

Gin

Pro

Ala

225

230

235

240

Gin

Pro

Ala

Gin

Ser

Gly

Ser

Gin

Ser

His

Gin

Gly

Pro

Ser

245

250

255

Thr

Pro

Thr

Gly

Phe

Pro

Ser

Phe

Ser

Pro

Val

Ser

260

265

270

Ala

Gly

Thr

Gly

Ser

Gin

Ala

Gly

Ser

Ala

Pro

Val

Asn

Tyr

Ser

Asn

275

280

285

Pro

Ser

Gly

Glu

Gin

Ser

Pro

Gly

Ala

Pro

Val

290

295

300

- 113CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 93:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 28 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 93:

Gly Cys Gly Glu Thr Asp Ala

5

Phe Glu Arg Ile Ser Gly Asp (2) Informace pro SEQ ID NO: 94:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 16 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 94:

Asp Gin Val Glu Ser Thr Ala

5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 95:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 27 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 95:

Gly Cys Gly Ser Thr Ala Gly 1 5

Ala Gly Thr Ala Ala Gin Ala

Ala Thr Leu Ala Gin Glu Ala Gly Asn

15

Leu Lys Thr Gin Ile

Gly Ser Leu Gin Gly Gin Trp Arg Gly

15

Ser Leu Gin Gly Gin Trp Arg Gly Ala

15

Ala Val Val Arg

-114CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 96:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 27 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 96:

Gly Cys Gly Gly Thr Ala Ala Gin Ala Ala Val Val Arg Phe Gin Glu 15 10 15

Ala Ala Asn Lys Gin Lys Gin

Glu Leu Asp Glu (2) Informace pro SEQ ID NO: 97:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 27 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 97:

Gly Cys Gly Ala Asn Lys Gin Lys Gin Glu Leu Asp Glu Ile Ser Thr 15 10 15

Asn Ile Arg Gin Ala Gly Val Gin Tyr Ser Arg

25 (2) Informace pro SEQ ID NO: 98:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 28 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 98:

Gly Cys Gly Ile Arg Gin Ala Gly Val Gin Tyr Ser Arg Ala Asp Glu 15 10 15

Glu Gin Gin Gin Ala Leu Ser Ser Gin Met Gly Phe

25

- 115 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 99:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 507 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 99:

ATGAAGATGG TGAAATCGAT CGCCGCAGGT CTGACCGCCG CGGCTGCAAT CGGCGCCGCT60

GCGGCCGGTG TGACTTCGAT CATGGCTGGC GGCCCGGTCG TATACCAGAT GCAGCCGGTC120

GTCTTCGGCG CGCCACTGCC GnGGACCCG GCATCCGCCC CTGACGTCCC GACCGCCGCC180

CAGTTGACCA GCCTGCTCAA CAGCCTCGCC GATCCCAACG TGTCGTTTGC GAACAAGGGC240

AGTCTGGTCG AGGGCGGCAT CGGGGGCACC GAGGCGCGCA TCGCCGACCA CAAGCTGAAG300

AAGGCCGCCG AGCACGGGGA TCTGCCGCTG TCGTTCAGCG TGACGAACAT CCAGCCGGCG360

GCCGCCGGTT CGGCCACCGC CGACGTTTCC GTCTCGGGTC CGAAGCTCTC GTCGCCGGTC420

ACGCAGAACG TCACGTTCGT GAATCAAGGC GGCTGGATGC TGTCACGCGC ATCGGCGATG480

GAGTTGCTGC AGGCCGCAGG GAACTGA

507 (2) Informace pro SEQ ID NO: 100:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 168 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

- 116CZ 297406 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 100:

Met

Lys

Met

Val

Lys

Ser

Ile

Ala

Gly

Leu

Thr

Ala

1

5

10

15

Ile

Gly

Ala

Gly

Val

Thr

Ser

Ile

Met

Ala

Gly

Pro

20

25

30

Vel

Val

Tyr

Gin

Met

Gin

Pro

Val

Phe

Gly

Ala

Pro

Leu

Pro

Leu

35

40

45

Asp

Pro

Ala

Ser

Ala

Pro

Asp

Val

Pro

Thr

Ala

Gin

Leu

Thr

Ser

50

55

60

Leu

Asn

Ser

Leu

Ala

Asp

Pro

Asn

Val

Ser

Phe

Ala

Asn

Lys

Gly

65

70

75

80

Ser

Leu

Val

Glu

Gly

Ile

Gly

Thr

Glu

Ala

Arg

Ile

Ala

Asp

85

90

95

His

Lys

Leu

Lys

Ala

Glu

His

Gly

Asp

Leu

Pro

Leu

Ser

Phe

100

105

110

Ser

Val

Thr

Asn

Ile

Gin

Pro

Ala

Gly

Ser

Ala

Thr

Ala

Asp

115

120

125

Val

Ser

Val

Ser

Gly

Pro

Lys

Leu

Ser

Pro

Val

Thr

Gin

Asn

Val

130

135

140

Thr

Phe

Val

Asn

Gin

Gly

Trp

Met

Leu

Ser

Arg

Ala

Ser

Ala

Met

145

150

155

160

Glu

Leu

Gin

Ala

Gly

Asn

165

-117CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 101:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 500 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 101:

CGTGGCAATG TCGTTGACCG TCGGGGCCGG

CATTAACACC ACCTGCAAK ACGGGCAGGT

GGCTGCCGCA CAGTTCAACG CCTCACCGGT

CGCACCGCCA CCTCAGCGCG CTGCCATGGC

ACAGTACATC GGCCTTGTCG AGTCGGTTGC

GGGCCCCATC CCGCGACCCG GCATCGTCGC

ACGGGCCGCA TCCCGCGACC CGGCATCGTC

CAACGGGCCG CATCTCGTGC CGAATTCCTG

GCCGCCACCG CGGTGGAGCT

GGTCGCCTCC GCAGATCCCG TGGACGCGGT60

AGTAGCTGCG CTCAACGCGA CGGATCCGGG120

GGCGCAGTCC TATTTGCGCA ATTTCCTCGC180

CGCGCAATTG CAAGCTGTGC CGGGGGCGGC240

CGGCTCCTGC AACAACTATT AAGCCCATGC300

CGGGGCTAGG CCAGAHGCC CCGCTCCTCA360

GCCGGGGCTA GGCCAGATTG CCCCGCTCCT420

CAGCCCGGGG GATCCACTAG TTCTAGAGCG480

500 (2) Informace pro SEQ ID NO: 102:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 96 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární

-118CZ 297406 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 102:

Val

Ala

Met

7_Sr u >

Leu

Thr

Val

Gly

Ala

Gly

Val

Ala

Ser

Al a

Asp

Pro

1

5

10

15

Val

Asp

Ala

Va i

Ile

Asn

Thr

Cys

Asn

Tyr

Gly

Gin

Val

Ala

20

25

30

Ala

Leu

Asn

Al a

Thr

Asp

Pro

Gly

Ala

Gin

Phe

Asn

Ala

Ser

35

40

45

Pro

Val

Ala

Gin

Ser

Tyr

Leu

Arg

Asn

Phe

Leu

Ala

Pro

50

55

60

Gin

Arg

Al a

Ala

Met

Ala

Gin

Leu

Gin

Ala

Val

Pro

Gly

Ala

65

70

75

80

Gin

Tyr

Ile

Gly

Leu

Val

Glu

Ser

Val

Ala

Gly

Ser

Cys

Asn

Tyr

85

90

95

(2) Informace pro SEQ ID NO: 103:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 154 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina ío (C) Řetězec: j ednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 103:

ATGACAGAGC AGCAGTGGAA TTTCGCGGGT ATCGAGGCCG CGGCMGCGC AATCCAGGGA 60

AATGTCACGT CCAHCAHC CCTCCHGAC GAGGGGAAGC AGTCCCTGAC CAAGCTCGCA 120

GCGGCCTGGG GCGGTAGCGG TTCGGAAGCG TACC 154

-119CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 104:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 51 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 104:

Met

Thr

Glu

Gin

Trp

Asn

Phe

Ala

Gly

Ile

Glu

Ala

Ser

1

5

10

15

Ala

Ile

Gin

Gly

Asn

Val

Thr

Ser

Ile

His

Ser

Leu

Asp

Glu

Gly

20

25

30

Lys

Gin

Ser

Leu

Thr

Lys

Leu

Ala

Trp

Gly

Ser

Gly

Ser

40 45

Glu Ala Tyr (2) Informace pro SEQ ID NO: 105:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 282 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 105:

CGGTCGCGCA CTTCCAGGTG ACTATGAAAG TCGGCTTCCG NCTGGAGGAT TCCTGAACCT60

TCAAGCGCGG CCGATAACTG AGGTGCATCA TTAAGCGACT TTTCCAGAAC ATCCTGACGC120

GCTCGAAACG CGGCACAGCC GACGGTGGCT CCGNCGAGGC GCTGNCTCCA AAATCCCTGA180

GACAATTCGN CGGGGGCGCC TACAAGGAAG TCGGTGCTGA ATTCGNCGNG TATCTGGTCG240

ACCTGTGTGG TCTGNAGCCG GACGAAGCGG TGCTCGACGT CG282

-120CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 106:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1565 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 106:

GTATGCGGCC ACTGAAGTCG CCAATGCGGC GGCGGCCAGC TAAGCCAGGA ACAGTCGGCA60

CGAGMACCA CGAGAAATAG GGACACGTAA TGGTGGATTT CGGGGCGKA CCACCGGAGA120

TCAACTCCGC GAGGATGTAC GCCGGCCCGG GTTCGGCCTC GCTGGTGGCC GCGGCTCAGA180

TGTGGGACAG CGTGGCGAGT GACCTGTTTT CGGCCGCGTC GGCGTTTCAG TCGGTGGTCT240

GGGGTCTGAC GGTGGGGTCG TGGATAGGTT CGTCGGCGGG TCTGATGGTG GCGGCGGCCT300

CGCCGTATGT GGCGTGGATG AGCGTCACCG CGGGGCAGGC CGAGCTGACC GCCGCCCAGG360

TCCGGGT7GC TGCGGCGGCC TACGAGACGG CGTATGGGCT GACGGTGCCC CCGCCGGTGA420

TCGCCGAGAA CCGTGCTGAA CTGATGATTC TGATAGCGAC CAACCTCTTG GGGCAAAACA480

CCCCGGCGAT CGCGGTCAAC GAGGCCGAAT ACGGCGAGAT GTGGGCCCAA GACGCCGCCG540

CGATGTTTGG CTACGCCGCG GCGACGGCGA CGGCGACGGC GACGTTGCTG CCGTTCGAGG600

- 121 CZ 297406 B6

AGGCGCCGGA GATGACCAGC GCGGGTGGGC TCCTCGAGCA GGCCGCCGCG GTCGAGGAGG 660

CCTCCGACAC CGCCGCGGCG AACCAGTTGA TGAACAATGT GCCCCAGGCG CTGCAACAGC720

TGGCCCAGCC CACGCAGGGC ACCACGCCK CTTCCAAGCT GGGTGGCCTG TGGAAGACGG780

TCTCGCCGCA TCGGTCGCCG ATCAGCAACA TGGTGTCAAT GGCCAACAAC CACATGTCAA840

TGACCAACTC GGGTGTGTCA ATGACCAACA CCTTGAGCTC GATGTTGAAG GGCTTTGCTC900

CGGCGGCGGC CGCCCAGGCC GTGCAAACCG CGGCGCAAAA CGGGGTCCGG GCGATGAGCT960

CGCTGGGCAG CTCGCTGGGT TCTTCGGGTC TGGGCGGTGG GGTGGCCGCC AACHGGGTC1020

GGGCGGCCTC GGTCGGTTCG TTGTCGGTGC CGCAGGCCTG GGCCGCGGCC AACCAGGCAG1080

TCACCCCGGC GGCGCGGGCG CTGCCGCTGA CCAGCCTGAC CAGCGCCGCG GAAAGAGGGC1140

CCGGGCAGAT GCTGGGCGGG CTGCCGGTGG GGCAGATGGG CGCCAGGGCC GGTGGTGGGC1200

TCAGTGGTGT GCTGCGTGK CCGCCGCGAC CCTATGTGAT GCCGCATTCT CCGGCGGCCG1260

GCTAGGAGAG GGGGCGCAGA CTGTCGHAT KGACCAGTG ATCGGCGGTC TCGGTGTTTC1320

CGCGGCCGGC TATGACAACA GTCAATGTGC ATGACAAGTT ACAGGTATTA GGTCCAGGTT1380

CAACAAGGAG ACAGGCAACA TGGCCTCACG TTTTATGACG GATCCGCACG CGATGCGGGA1440

CATGGCGGGC CGTTTTGAAG TGCACGCCCA GACGGTGGAG GACGAGGCTC GCCGGATGTG1500

GGCGTCCGCG CAAAACATTT CCGGTGCGGG CTGGAGTGGC ATGGCCGAGG CGACCTCGCT1560

AGACA1565

-122CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 107:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 391 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 107:

Met

Val

Asp

Phe

Gly

Ala

Leu

Pro Pro

Glu

lle

Asn

Ser

Ala

Arg

Met

1

5

10

15

Tyr

Ala

Gly

Pro

Gly

Ser

Ala

Ser Leu

Val

Ala

Gin

Met

Trp

20

25

30

Asp

Ser

Val

Ala

Ser

Asp

Leu

Phe Ser

Ala

Ser

Ala

Phe

Gin

Ser

35

40

45

Val

Trp

Gly

Leu

Thr

Val

Gly Ser

Trp

lle

Gly

Ser

Ala

Gly

50

55

60

Leu

Met

Val

Ala

Ser

Pro Tyr

Val

Ala

Trp

Met

Ser

Val

Thr

65

70

75

80

Ala

Gly

Gin

Ala

Glu

Leu

Thr

Ala Ala

Gin

Val

Arg

Val

Ala

85

90

95

Ala

Tyr

Glu

Tnr

Ala

Tyr

Gly

Leu Thr

Val

Pro

Val

lle

Ala

100

105

110

Glu

Asn

Arg

Ala

Glu

Leu

Met

lle Leu

lle

Ala

Thr

Asn

Leu

Gly

115

120

125

Gin

Asn

Thr

Pro

Ala

lle

Ala

Val Asn

Glu

Ala

Glu

Tyr

Gly

Glu

Met

130

135

140

Trp

Ala

Gin

Asp

Ala

Met Phe

Gly

Tyr

Ala

Thr

Ala

145

150

155

160

Thr

Ala

Thr

Ala

Thr

Leu

Pro Phe

Glu

Ala

Pro

Glu

Met

Thr

165

170

175

Ser

Ala

Gly

Leu

Glu

Gin Ala

Ala

Val

Glu

Ala

Ser

180

185

190

- 123 CZ 297406 B6

Asp Thr Ala Ala Ala Asn Gin Leu Met Asn Asn Val Pro Gin Ala Leu

195 200 205

Gin Gin Leu Ala Gin Pro Thr Gin Gly Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leu

210 215 220

Gly

Leu

Trp

Lys

Thr

Val

Ser

Pro

His

Arg

Ser

Pro

Ile

Ser

Asn

225

230

235

240

Met

Val

Ser

Met

Ala

Asn

His

Met

Ser

Met

Thr

Asn

Ser

Gly

Val

245

250

255

Ser

Met

Thr

Asn

Thr

Leu

Ser

Met

Leu

Lys

Gly

Phe

Ala

Pro

Ala

260

265

270

Ala

Gin

Ala

Val

Gin

Thr

Ala

Gin

Asn

Gly

Val

Arg

Ala

275

280

285

Met

Ser

Leu

Gly

Ser

Leu

Gly

Ser

Gly

Leu

Gly

290

295

300

Val

Ala

Asn

Leu

Gly

Arg

Ala

Ser

Val

Gly

Ser

Leu

Ser

Val

305

310

315

320

Pro

Gin

Ala

Trp

Ala

Asn

Gin

Ala

Val

Thr

Pro

Ala

Arg

325

330

335

Ala

Leu

Pro

Leu

Thr

Ser

Leu

Thr

Ser

Ala

Glu

Arg

Gly

Pro

Gly

340

345

350

Gin

Met

Leu

Gly

Leu

Pro

Val

Gly

Gin

Met

Gly

Ala

Arg

Ala

Gly

355

360

365

Gly

Leu

Ser

Gly

Val

Leu

Arg

Val

Pro

Arg

Pro

Tyr

Val

Met

370

375

380

Pro

His

Ser

Pro

Ala

Gly

385 390

- 124CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 108:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 259 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 108:

ACCAACACCT TGCACTCNAT GTTGAAGGGC TTAGCTCCGG CGGCGGCTCA GGCCGTGGAA60

ACCGCGGCGG AAAACGGGGT CTGGGCAATG AGCTCGCTGG GCAGCCAGCT GGGTTCGTCG120

CTGGGTTCTT CGGGTCTGGG CGCTGGGGTG GCCGCCAACT TGGGTCGGGC GGCCTCGGTC180

GGTTCGTTGT CGGTGCCGCC AGCATGGGCC GCGGCCAACC AGGCGGTCAC CCCGGCGGCG240

CGGGCGCTGC CGCTGACCA

259 (2) Informace pro SEQ ID NO: 109:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 86 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 109:

Thr

Asn

Thr

Leu

His

Ser

Met

Leu

Lys

Gly

Leu

Ala

Pro

Ala

5

10

15

Gin

Ala

Val

Glu

Thr

Ala

Glu

Asn

Gly

Val

Trp

Ala

Met

Ser

20

25

30

Leu

Gly

Ser

Gin

Leu

Gly

Ser

Leu

Gly

Ser

Gly

Leu

Gly

Ala

35

40

45

Gly

Val

Ala

Asn

Leu

Gly

Arg

Ala

Ser

Val

Gly

Ser

Leu

Ser

50

55

60

Val

Pro

Ala

Trp

Ala

Asn

Gin

Ala

Val

Thr

Pro

Ala

65

70

75

80

Arg

Ala

Leu

Pro

Leu

Thr

85·

- 125CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 110:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1109 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 110:

TACTTGAGAG AATTTGACCT GTTGCCGACG TTGTTTGCTG TCCATCATTG GTGCTAGTTA60

TGGCCGAGCG GAAGGATTAT CGAAGTGGTG GACTTCGGGG CGTTACCACC GGAGATCAAC120

TCCGCGAGGA TGTACGCCGG CCCGGGTTCG GCCTCGCTGG TGGCCGCCGC GAAGATGTGG180

GACAGCGTGG CGAGTGACCT GTTTTCGGCC GCGTCGGCGT TTCAGTCGGT GGTCTGGGGT240

CTGACGACGG GATCGTGGAT AGGTTCGTCG GCGGGTCTGA TGGTGGCGGC GGCCTCGCCG300

TATGTGGCGT GGATGAGCGT CACCGCGGGG CAGGCCGAGC TGACCGCCGC CCAGGTCCGG360

GTTGCTGCGG CGGCCTACGA GACGGCGTAT GGGCTGACGG TGCCCCCGCC GGTGATCGCC420

GAGAACCGTG CTGAACTGAT GATTCTGATA GCGACCAACC TCTTGGGGCA AAACACCCCG480

GCGATCGCGG TCAACGAGGC CGAATACGGG GAGATGTGGG CCCAAGACGC CGCCGCGATG540

TTTGGCTACG CCGCCACGGC GGCGACGGCG ACCGAGGCGT TGCTGCCGK CGAGGACGCC600

CCACTGATCA CCAACCCCGG CGGGCTCCTT GAGCAGGCCG TCGCGGTCGA GGAGGCCATC660

GACACCGCCG CGGCGAACCA GTTGATGAAC AATGTGCCCC AAGCGCTGCA ACAACTGGCC720

CAGCCCACGA AAAGCATCTG GCCGTTCGAC CAACTGAGTG AACTCTGGAA AGCCATCTCG780

CCGCATCTGT CGCCGCTCAG CAACATCGTG TCGATGCTCA ACAACCACGT GTCGATGACC840

AACTCGGGTG TGTCAATGGC CAGCACCTTG CACTCAATGT TGAAGGGCH TGCTCCGGCG900

GCGGCTCAGG CCGTGGAAAC CGCGGCGCAA AACGGGGTCC AGGCGATGAG CTCGCTGGGC960

AGCCAGCTGG GTTCGTCGCT GGGTTCTTCG GGTCTGGGCG CTGGGGTGGC CGCCAACTTG1020

GGTCGGGCGG CCTCGGTCGG TTCGTTGTCG GTGCCGCAGG CCTGGGCCGC GGCCAACCAG1080

GCGGTCACCC CGGCGGCGCG GGCGCTGCC _uog

- 126CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 111:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 341 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 111:

Val

Asp

Phe

Gly

Ala

Leu

Pro

Glu

Ile

Asn

Ser

Ala

Arg

Met

1

5

10

15

Tyr

Ala

Gly

Pro

Gly

Ser

Ala

Ser

Leu

Val

Ala

Lys

Met

Trp

20

25

30

Asp

Ser

Val

Ala

Ser

Asp

Leu

Phe

Ser

Ala

Ser

Ala

Phe

Gin

Ser

35

40

45

Val

Trp

Gly

Leu

Thr

Gly

Ser

Trp

Ile

Gly

Ser

Ala

Gly

50

55

60

Leu

Met

Val

Ala

Ser

Pro

Tyr

Val

Ala

Trp

Met

Ser

Val

Thr

65

70

75

80

- 127CZ 297406 B6

Ala

Tyr

Glu

Thr Ala

Tyr

Gly

Leu

: Thr

Val

! Pro Pro Prc

> Val

Ile Ala

100

105

110

Glu

Asn

Arg

Ala Glu

Leu

Met

Ile

Leu

Ile

! Ala Thr Asn

i Leu

: Leu Gly

115

120

125

Gin

Asn

Thr

Pro Ala

Ile

Ala

Val

Asn-

Glu

Ala

Glu

Tyr

Gly

Glu

Met

130

135

140

Trp

Ala

Gin

Asp Ala

Ala

Met

Phe

Gly

Tyr

Ala

Thr

Ala

145

150

155

160

Thr

Ala

Thr

Glu Ala

Leu

Pro

Phe

Glu

Asp

Ala

Pro

Leu

Ile

Thr

165

170

175

Asn

Pro

Gly

Gly Leu

Leu

Glu

Gin

Ala

Val

Ala

Val

Glu

Ala

Ile

180

185

190

Asp

Thr

Ala

Ala Ala

Asn

Gin

Leu

Met

Asn

Val

Pro

Gin

Ala

Leu

195

200

205

Gin

Leu

Ala Gin

Pro

Thr

Lys

Ser

Ile

Trp

Pro

Phe

Asp

Gin

Leu

210

215

220

Ser

Glu

Leu

Trp Lys

Ala

Ile

Ser

Pro

His

Leu

Ser

Pro

Leu

Ser

Asn

225

230

235

240

Ile

Val

Ser

Met Leu

Asn

His

Val

Ser

Met

Thr

Asn

Ser

Gly

Val

245

250

255

Ser

Met

Ala

Ser Thr

Leu

His

Ser

Met

Leu

Lys

Gly

Phe

Ala

Pro

Ala

260

265

270

Ala

Gin

Ala Val

Glu

Thr

Ala

Gin

Asn

Gly

Val

Gin

Ala

Met

275

280

285

Ser

Leu

G1y Ser

Gin

Leu

Gly

Ser

Leu

Gly

Ser

Gly

Leu

290

295

300

Gly

Ala

Gly

Val Ala

Ala

Asn

Leu

Gly

Arg

Ala

Ser

Val

Gly

Ser

305

310

315

320

- 128CZ 297406 B6

Leu Ser Val Pro Gin Ala Trp Ala Ala Ala Asn Gin Ala Val Thr Pro

325 330 335

Ala Ala Arg Ala Leu

340 (2) Informace pro SEQ ID NO: 112:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 1256 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý o (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 112:

CATCGGAGGG AGTGATCACC ATGCTGTGGC ACGCAATGCC ACCGGAGNTA AATACCGCAC60

GGCTGATGGC CGGCGCGGGT CCGGCTCCAA TGCTTGCGGC GGCCGCGGGA TGGCAGACGC120

TTTCGGCGGC TCTGGACGCT CAGGCCGTCG AGTTGACCGC GCGCCTGAAC TCTCTGGGAG180

AAGCCTGGAC TGGAGGTGGC AGCGACAAGG CGCTTGCGGC TGCAACGCCG ATGGTGGTCT240

GGCTACAAAC CGCGTCAACA CAGGCCAAGA CCCGTGCGAT GCAGGCGACG GCGCAAGCCG300

CGGCATACAC CCAGGCCATG GCCACGACGC CGTCGCTGCC GGAGATCGCC GCCAACCACA360

TCACCCAGGC CGTCCTTACG GCCACCAACT TCTTCGGTAT CAACACGATC CCGATCGCGT420

TGACCGAGAT GGATTATTTC ATCCGTATGT GGAACCAGGC AGCCCTGGCA ATGGAGGTCT480

ACCAGGCCGA GACCGCGGTT AACACGCTTT TCGAGAAGCT CGAGCCGATG GCGTCGATCC540

- 129CZ 297406 B6

TTGATCCCGG CGCGAGCCAG AGCACGACGA

GCTCAACACC GGTTGGCCAG TTGCCGCCGG

AGATGAGCGG CCCGATGCAG CAGCTGACCC

GCCAGGTGGG CGGCACCGGC GGCGGCAACC

TGCTCGGCAC CAGTCCGCTG TCGAACCATC

GCGCGGGCCT GCTGCGCGCG GAGTCGCTAC

CGCTGATGTC TCAGCTGATC GAAAAGCCGG

CCGGATCGTC GGCGACGGGT GGCGCCGCTC

CGCAATCCGG CGGCTCCACC AGGCCGGGTC

GTGAAGAAGA CGACGAGGAC GACTGGGACG

CAACAGACTT CCCGGCCACC CGGGCCGGAA

AGAGAGAAAG TAGTCCAGCA TGGCAGAGAT

ACCCGATCH CGGAATGCCC TCCCCTGGCA

CGGCTACCCA GACCCTCGGC CAACTGGGTG

AGCCGCTGCA GCAGGTGACG TCGHGKCA

CAGCCGACGA GGAAGCCGCG CAGATGGGCC

CGCTGGCTGG TGGATCAGGC CCCAGCGCGG

CTGGCGCAGG TGGGTCGTTG ACCCGCACGC

KGCCCCCTC GGTGATGCCG GCGGCTGCTG

CGGTGGGTGC GGGAGCGATG GGCCAGGGTG

TGGTCGCGCC GGCACCGCTC GCGCAGGAGC

AAGAGGACGA CTGGTGAGCT CCCGTAATGA

GACTTGCCAA CATTTTGGCG AGGAAGGTAA

GAAGACCGAT GCCGCTACCC TCGCGC

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1256 (2) Informace pro SEQ ID NO: 113:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 432 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 113:

CTAGTGGATG GGA.CCATGGC CATTTTCTGC AGTCTCACTG CCTTCTGTGT TGACATTTTG

6CACGCCGGC GGAAACGAAG CACTGGGGTC GAAGAACGGC TGCGCTGCCA TATCGTCCGG

AGCTTCCATA CCTTCGTGCG GCCGGAAGAG CTTGTCGTAG TCGGCCGCCA TGACAACCTC

TCAGAGTGCG CTCAAACGTA TAAACACGAG AAAGGGCGAG ACCGACGGAA GGTCGAACTC

GCCCGATCCC GTGTTTCGCT ATTCTACGCG AACTCGGCGT TGCCCTATGC GAACATCCCA

GTGACGTTGC CTTCGGTCGA AGCCATTGCC TGACCGGCTT CGCTGATCGT CCGCGCCAGG

TTCTGCAGCG CGTTGTTCAG CTCGGTAGCC GTGGCGTCCC ATTTTTGCTG GACACCCTGG

TACGCCTCCG AA

120

180

240

300

360

420

432

- 130CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 114:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 368 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 114:

Met

Leu

Trp

His

Ala

Met

Pro

Glu

Xaa

Asn

Thr

Ala

Arg

Leu

Met

1

5

10

15

Ala

Gly

Ala

Gly

Pro

Ala

Pro

Met

Leu

Ala

Gly

Trp

Gin

20

25

30

Thr

Leu

Ser

Ala

Leu

Asp

Ala

Gin

Ala

Val

Glu

Leu

Thr

Ala

Arg

35

40

45

Leu

Asn

Ser

Leu

Gly

Glu

Ala

Trp

Thr

Gly

Ser

Asp

Lys

Ala

50

55

60

Leu

Ala

Thr

Pro

Met

Val

Trp

Leu

Gin

Thr

Ala

Ser

Thr

70 75 80

Gin

Ala

Lys

Thr

Arg

Ala

Met

Gin

Ala

Thr

Ala

Gin

Ala

Tyr

85

90

95

Thr

Gin

Ala

Met

Ala

Thr

Pro

Ser

Leu

Pro

Glu

Ile

Ala

Asn

100

105

110

His

Ile

Thr

Gin

Ala

Val

Leu

Thr

Ala

Thr

Asn

Phe

Gly

Ile

Asn

115

120

125

Thr

Ile

Pro

Ile

Ala

Leu

Thr

Glu

Met

Asp

Tyr

Phe

Ile

Arg

Met

Trp

130

135

140

- 131 CZ 297406 B6

Asn

Gin

Ala

Leu Ala

Met

Glu

Val

Tyr

Gin

Ala

Glu

Thr

Ala

145

150

155

Asn

Thr

Leu

Phe

Glu Lys

Leu

Glu

Pro

Met

Ala

Ser

Ile

Leu

Asp

165

170

175

Gly

Ala

Ser

Gin

Ser Thr

Thr

Asn

Pro

Ile

Phe

Gly

Met

Pro

Ser

180

185

190

Gly

Ser

Thr

Pro Val

Gly

Gin

Leu

Pro

Ala

Thr

Gin

195

200

205

Leu

Gly

' Gin

Leu

Gly

Glu

Met

Ser

Gly

Pro

Met Gin

Gin

Leu

Thr

Gin

210

215

220

Pro

Leu

Gin

Val

Thr

Ser

Leu

Phe

Ser

Gin Val

Gly

Thr

Gly

225

230

235

240

Gly

Asn

Pro

Ala

Asp

Glu

Ala

Gin Met

Gly

Leu

Gly

245

250

255

Thr

Ser

Pro

Leu

Ser

Asn

His

Pro

Leu

Ala

Gly Gly

Ser

Gly

Pro

Ser

260

265

270

Ala

Gly

Ala

Gly

Leu

Arg

Ala

Glu

Ser

Leu Pro

Gly

Ala

Gly

275

280

285

Ser

Leu

Thr

Arg

Thr

Pro

Leu

Met

Ser

Gin

Leu Ile

Glu

Lys

Pro

Val

290

295

300

Ala

Pro

Ser

Val

Met

Pro

Ala

Gly Ser

Ser

Ala

Thr

Gly

305

310

315

320

Gly

Ala

Pro

Val

Gly

Ala

Gly

Ala

Met

Gly Gin

Gly

Ala

Gin

Ser

325

330

335

Gly

Ser

Thr

Arg

Pro

Gly

Leu

Val

Ala

Pro Ala

Pro

Leu

Ala

Gin

340

345

350

-132CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 115:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 115:

Met Ala Glu Met Lys Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala

5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 116:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 396 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 116:

GATCTCCGGC GACCTGAAAA CCCAGATCGA CCAGGTGGAG TCGACGGCAG GTTCGTTGCA60

GGGCCAGTGG CGCGGCGCGG CGGGGACGGC CGCCCAGGCC GCGGTGGTGC GCTTCCAAGA120

AGCAGCCAAT AAGCAGAAGC AGGAACTCGA CGAGATCTCG ACGAATATTC GTCAGGCCGG180

CGTCCAATAC TCGAGGGCCG ACGAGGAGCA GCAGCAGGCG CTGTCCTCGC AAATGGGCTT240

CTGACCCGCT AATACGAAAA GAAACGGAGC AAAAACATGA CAGAGCAGCA GTGGAATTTC300

GCGGGTATCG AGGCCGCGGC AAGCGCAATC CAGGGAAATG TCACGTCCAT TCATTCCCTC360

CTTGACGAGG GGAAGCAGTC CCTGACCAAG CTCGCA396

-133 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 117:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 80 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 117:

Ile

Ser

Gly

Asp

Leu

Lys

Thr

Gin

Ile

Asp

Gin

Val

Glu

Ser

Tnr

Ala

1

5

10

15

Gly

Ser

Leu

Gin

Gly

Gin

Trp

Arg

Gly

Ala

Gly

Thr

Ala

Gin

20

25

30

Ala

Val

Arg

Phe

Gin

Glu

Ala

Asn

Lys

Gin

Lys

Gin

Glu

35

40

45

Leu

Asp

Glu

Ile

Ser

Thr

Asn

Ile

Arg

Gin

Ala

Gly

Val

Gin

Tyr

Ser

50

55

60

Arg

Ala

Asp

Glu

Gin

Ala

Leu

Ser

Gin

Met

Gly

Phe

65

70

75

80

(2) Informace pro SEQ ID NO: 118:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 387 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 118:

GTGGATCCCG ATCCCGTGTT TCGCTATTCT

TCCCAGTGAC GTTGCCTTCG GTCGAAGCCA

CCAGGTTCTG CAGCGCGTTG TTCAGCTCGG

CCTGGTACGC CTCCGAACCG CTACCGCCCC

TCCCCTCGTC AAGGAGGGAA TGAATGGACG

CCTCGATACC CGCGAAATTC CACTGCTGCT

ATTAGCGGGT CAGAAGCCCA TTTGCGA

ACGCGAACTC GGCGTTGCCC TATGCGAACA60

TTGCCTGACC GGCTTCGCTG ATCGTCCGCG120

TAGCCGTGGC GTCCCATTTT TGCTGGACAC180

AGGCCGCTGC GAGCTTGGTC AGGGACTGCT240

TGACATTTCC CTGGATTGCG CTTGCCGCGG300

CTGTCATGTT TTTGCTCCGT TTCTTTTCGT360

387

- 134CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 119:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 272 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 119:

CGGCACGAGG ATCTCGGTTG GCCCAACGGC GCTGGCGAGG GCTCCGTTCC GGGGGCGAGC60

TGCGCGCCGG ATGCTTCCTC TGCCCGCAGC CGCGCCTGGA TGGATGGACC AGTTGCTACC120

TTCCCGACGT TTCGTTCGGT GTCTGTGCGA TAGCGGTGAC CCCGGCGCGC ACGTCGGGAG180

TGTTGGGGGG CAGGCCGGGT CGGTGGTTCG GCCGGGGACG CAGACGGTCT GGACGGAACG240

GGCGGGGGTT CGCCGATTGG CATCTTTGCC CA

272 (2) Informace pro SEQ ID NO: 120:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 20 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 120:

Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gin Val 15 10 15

Val Ala Ala Leu

- 135 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 121:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 121:

Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser

10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 122:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 19 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 122:

Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys 15 10 15

Glu Gly Arg (2) Informace pro SEQ ID NO: 123:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 123:

Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro

10 15

- 136CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 124:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 14 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 124:

Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gin Gin Xaa Ala Val 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 125:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 13 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 125:

Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro

5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 126:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 17 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 126:

Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro 15 10 15

Ser

- 137CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 127:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 127:

Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 128:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 30 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 128:

Asp Pro Ala Ser Ala Pro Aso Val Pro Thr Ala Ala Gin Leu Thr Ser 15 10 15

Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala Asn

25 30 (2) Informace pro SEQ ID NO: 129:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 22 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 129:

Asp Pro Pro Asp Pro His Gin Xaa Asp Met Thr Lys Gly Tyr Tyr Pro 15 10 15

Gly Gly Arg Arg Xaa Phe

-138 CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 130:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 7 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 130:

Asp Pro Gly Tyr Thr Pro Gly

5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 131:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 10 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (ix) Vlastnosti:

(D) Jiné informace: /poznámka = „Druhý zbytek může být buď Pro, nebo Thr“ (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 131:

Xaa Xaa Gly Phe Thr Gly Pro Gin Phe Tyr

5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 132:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (ix) Vlastnosti:

(D) Jiné informace: /poznámka = „Třetí zbytek může být buď Gin, nebo Leu“ (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 132:

Xaa Pro Xaa Val Thr Ala Tyr Ala Gly

5

- 139CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 133:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 133:

Xaa Xaa Xaa Glu Lys Pro Phe Leu Arg 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 134:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 134:

Xaa Asp Ser Glu Lys Ser Ala Thr Ile Lys Val Thr Asp Ala Ser 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 135:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 135:

Ala Gly Asp Thr Xaa Ile Tyr Ile Val Gly Asn Leu Thr Ala Asp

- 140CZ 297406 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 136:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 136:

Ala Pro Glu Ser Gly Ala Gly Leu Gly Gly Thr Val Gin Ala Gly 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 137:

(i) Charakteristika sekvence:

(A) Délka: 21 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:

(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 137:

Xaa Tyr Ile Ala Tyr Xaa Thr Thr Ala Gly Ile Val Pro Gly Lys Ile 15 10 15

Asn Val His Leu Val

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Polypeptid obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 66 nebo její imunogenní část o délce alespoň 9 aminokyselin.
2. DNA molekula obsahující nukleotidovou sekvenci kódující polypeptid podle nároku 1.
3. DNA molekula podle nároku 2 obsahující nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 4.
4. Expresní vektor obsahující DNA molekulu podle nároku 2.
5. Hostitelská buňka transformovaná expresním vektorem podle nároku 4.
6. Hostitelská buňka podle nároku 5, kde hostitelská buňka je vybrána ze souboru skládajícího se z E. coli, kvasinek a savčích buněk.
7. Farmaceutický prostředek, vy znač u j í cí se tím, že obsahuje polypeptid podle nároku 1 nebo DNA molekulu podle nároku 2 a fyziologicky přijatelný nosič.
8. Farmaceutický prostředek podle nároku 7 pro indukci protektivní imunity, vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle nároku 1 nebo DNA molekulu podle nároku 2 a fyziologicky přijatelný nosič.
9. Vakcína obsahující polypeptid podle nároku 1 nebo DNA molekulu podle nároku 2 a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi.
10. Vakcína podle nároku 9, kde nespecifickým zesilovačem imunitní odpovědi je adjuvans.
11. Vakcína podle nároku 9 nebo 10 pro použití pro indukci protektivní imunity.
12. Prostředek pro detekci tuberkulózy u pacienta (a) kontaktováním kožních buněk pacienta s jedním nebo více polypeptidy podle nároku 1; a (b) detekováním imunitní odpovědi kůže pacienta a tak detekováním tuberkulózy u pacienta, vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle nároku 1.
13. Prostředek podle nároku 12, pro detekci tuberkulózy u pacienta, kde imunitní odpovědí je indurace, vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle nároku 1.
14. Diagnostický kit, vyznačující se tím, že obsahuje:

(a) polypeptid podle nároku 1; a (b) injekční stříkačku umožňující kontaktování uvedeného polypeptidu s kožními buňkami pacienta.