PT1398379E

PT1398379E - Compostos para imunoterapia e diagnóstico de tuberculose

Info

Publication number: PT1398379E
Application number: PT03021501T
Authority: PT
Inventors: Steven G Reed; Antonio Campos-Neto; Raymond L Houghton; Daniel R Twardzik; Thomas S Vedvick; Yasir A W Skeiky; Davin C Dillon
Original assignee: Corixa Corp
Priority date: 1995-09-01
Filing date: 1996-08-30
Publication date: 2007-01-31
Also published as: EP1398379A2; ATE252640T1; TR200901109T1; NO980883L; DE69636487T2; EP1347055A3; CN1117149C; JP2001517069A; NO20070621L; JP2009159982A; EP1203817B9; CZ62898A3; EP1347055B1; ES2262595T3; NO980883D0; BR9610262A; HK1059282A1; NO20070619L; EP1712628A3; SI0851927T1

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS PARA IMUNOTERAPIA E DIAGNÓSTICO DE TUBERCULOSE"

Campo Técnico A presente invenção refere-se genericamente à detecção, tratamento e prevenção de infecção por Mycobacterium tuberculosis. A invenção refere-se mais particularmente a polipéptidos compreendendo um antigénio de Mycobacterium tuberculosis, ou uma porção ou outra variante do mesmo, e à utilização desses polipéptidos para o diagnóstico e vacinação contra infecção por Mycobacterium tuberculosis.

Antecedentes da Invenção A tuberculose é uma doença infecciosa crónica que é geralmente causada por infecção com Mycobacterium tuberculosis. É uma doença importante em países em desenvolvimento, bem como um problema crescente em áreas desenvolvidas do mundo, com cerca de 8 milhões de novos casos e 3 milhões de mortes por ano. Apesar da infecção poder ser assintomática durante um período de tempo considerável, a doença manifesta-se mais habitualmente como uma inflamação aguda dos pulmões, resultando em febre e numa tosse seca. Se não for tratada, resulta tipicamente em complicações graves e morte.

Embora a tuberculose possa ser geralmente controlada utilizando terapia prolongada com antibióticos, esse tratamento não é suficiente para prevenir a disseminação da doença. Os 1 indivíduos infectados podem ser assintomáticos, mas contagiosos, durante algum tempo. Adicionalmente, embora a adesão ao regime de tratamento pelo doente seja critica, é dificil monitorizar o comportamento do doente. Alguns doentes não completam o tratamento, o que pode conduzir a tratamento ineficaz e ao desenvolvimento de resistência a fármacos. A inibição da disseminação da tuberculose requer vacinação eficaz e diagnóstico precoce e rigoroso da doença. Presentemente, a vacinação com bactérias vivas é o método mais eficiente para induzir imunidade protectora. A micobactéria mais comum empregue para este objectivo é o Bacillus Calmette-Guerin (BCG), uma estirpe avirulenta de Mycobacterium bovis. No entanto, a segurança e eficácia da BCG são uma fonte de controvérsia, e alguns paises, como os Estados Unidos, não vacinam o público em geral. 0 diagnóstico é habitualmente realizado utilizando um teste cutâneo, que envolve exposição intradérmica ao PPD (derivado proteico purificado) da tuberculina. As respostas de células T especificas para antigénios resultam em endurecimento mensurável no sitio da injecção às 48-72 horas após a injecção, o que indica exposição a antigénios micobacterianos. Todavia, a sensibilidade e especificidade deste teste têm sido um problema, não sendo possível distinguir entre indivíduos vacinados com BCG e indivíduos infectados.

Embora tenha sido mostrado que os macrófagos actuam como os principais efectores da imunidade a M. tuberculosis, as células T são os indutores predominantes dessa imunidade. 0 papel essencial das células T na protecção contra infecção por M. tuberculosis é ilustrado pela ocorrência frequente de M. tuberculosis em doentes com SIDA, devido à depleção de células T CD4 associada à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana 2 (VIH). Foi mostrado que as células T CD4 reactivas a micobactérias são produtores potentes de interferão gama (IFN-γ) , que foi mostrado, por sua vez, desencadear os efeitos antimicobacterianos de macrófagos em murganhos. Embora o papel do IFN-γ em humanos seja menos claro, estudos mostraram que a 1,25-di-hidroxi-vitamina D3, quer isoladamente ou em combinação com IFN-γ ou factor de necrose tumoral alfa, activa macrófagos humanos para inibirem a infecção por M. tuberculosis. Adicionalmente, sabe-se que o IFN-γ estimula macrófagos humanos para produzirem 1,25-di-hidroxi-vitamina D3. De modo semelhante, foi mostrado que a IL-12 desempenha um papel na estimulação da resistência à infecção por M. tuberculosis. Para uma revisão da imunologia da infecção por M. tuberculosis ver Chan e Kaufmann em Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control, Bloom (ed.), ASM Press, Washington, DC, 1994.

De acordo com o exposto, existe a necessidade na técnica de vacinas e métodos aperfeiçoados para prevenir, tratar e detectar a tuberculose. A presente invenção cumpre estas necessidades e proporciona ainda outras vantagens relacionadas.

Sumário da Invenção

Em resumo, esta invenção proporciona compostos e sua utilização para prevenir e diagnosticar a tuberculose. Num aspecto, são proporcionados polipéptidos compreendendo um antigénio de M. tuberculosis solúvel ou consistindo de uma porção imunogénica do mesmo.

Num aspecto relacionado, os polipéptidos compreendem um antigénio de M. tuberculosis ou consistem de uma porção imunogénica do mesmo, em que o antigénio compreende uma 3 sequência de aminoácidos codificada pela sequência de ADN especificada na SEQ ID Nos. : 106, e sequências de ADN que hibridam com uma sequência complementar à especificada na SEQ ID N° . : 106, sob condições moderadamente restringentes.

Em aspectos relacionados, são também proporcionadas sequências de ADN codificando os polipéptidos acima, vectores de expressão compreendendo estas sequências de ADN e células hospedeiras transformadas ou transfectadas com esses vectores de expressão.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona proteínas de fusão compreendendo um primeiro e um segundo polipéptido inventivo ou, alternativamente, um polipéptido inventivo e um antigénio de M. tuberculosis conhecido.

Dentro de outros aspectos, a presente invenção proporciona composições farmacêuticas que compreendem um ou mais dos polipéptidos acima, ou uma molécula de ADN codificando esses polipéptidos, e um veículo fisiologicamente aceitável. A invenção também proporciona vacinas compreendendo um ou mais dos polipéptidos descritos acima e um intensificador da resposta imunológica inespecífico, juntamente com vacinas compreendendo uma ou mais sequências de ADN codificando esses polipéptidos e um intensificador da resposta imunológica inespecífico.

Ainda noutro aspecto, são divulgados métodos para induzir imunidade protectora num doente, compreendendo a administração a um doente de uma quantidade eficaz de um ou mais dos polipéptidos acima.

Em aspectos adicionais desta invenção, são proporcionados kits de diagnóstico para detectar tuberculose num doente. Os métodos divulgados compreendem a colocação em contacto de 4 células dérmicas de um doente com um ou mais dos polipéptidos acima e detecção de uma resposta imunológica na pele do doente. Os kits de diagnóstico compreendem um ou mais dos polipéptidos acima em combinação com um dispositivo suficiente para colocação em contacto do polipéptido com as células dérmicas de um doente.

Estes e outros aspectos da presente invenção tornar-se-ão evidentes por referência à seguinte descrição pormenorizada e figuras em anexo.

Descrição Breve das Figuras e Identificadores de Sequências

As Figuras IA e 1B ilustram a estimulação da proliferação e a produção de interferão-γ em células T derivadas de um primeiro e de um segundo dador imune a M. tuberculosis, respectivamente, pelos antigénios de 14 kD, 20 kD e 26 kD descritos no Exemplo 1. A Figura 2 ilustra a estimulação da proliferação e a produção de interferão-γ em células T derivadas de um indivíduo imune a M. tuberculosis pelos dois polipéptidos representativos TbRa3 e TbRa9. SEQ ID. N° . 1 é a sequência de ADN de TbRal. SEQ ID. N° . 2 é a sequência de ADN de TbRal0. SEQ ID. N° . 3 é a sequência de ADN de TbRal1. SEQ ID. N° . 4 é a sequência de ADN de TbRal2. SEQ ID. N° . 5 é a sequência de ADN de TbRal3. SEQ ID. N° . 6 é a sequência de ADN de TbRal6. SEQ ID. N° . 7 é a sequência de ADN de TbRal7. SEQ ID. N° . 8 é a sequência de ADN de TbRal8. SEQ ID. N° . 9 é a sequência de ADN de TbRal9. SEQ ID. N° . 10 é a sequência de ADN de TbRa24 SEQ ID. N° . 11 é a sequência de ADN de TbRa2 6 5 SEQ ID. N° . 12 é a sequência de ADN de TbRa2 8. SEQ ID. N° . 13 é a sequência de ADN de TbRa2 9. SEQ ID. N° . 14 é a sequência de ADN de TbRa2A. SEQ ID. N° . 15 é a sequência de ADN de TbRa3. SEQ ID. N° . 16 é a sequência de ADN de TbRa32. SEQ ID. N° . 17 é a sequência de ADN de TbRa35. SEQ ID. N° . 18 é a sequência de ADN de TbRa3 6. SEQ ID. N° . 19 é a sequência de ADN de TbRa4. SEQ ID. N° . 20 é a sequência de ADN de TbRa9. SEQ ID. N° . 21 é a sequência de ADN de TbRaB. SEQ ID. N° . 22 é a sequência de ADN de TbRaC. SEQ ID. N° . 23 é a sequência de ADN de TbRaD. SEQ ID. N° . 25 é a sequência de ADN de AAMK. SEQ ID. N° . 26 é a sequência de ADN de TbL-23. SEQ ID. N° . 27 é a sequência de ADN de TbL-24. SEQ ID. N° . 28 é a sequência de ADN de TbL-25. SEQ ID. N° . 29 é a sequência de ADN de TbL-28. SEQ ID. N° . 30 é a sequência de ADN de TbL-29. SEQ ID. N° . 31 é a sequência de ADN de TbH-5. SEQ ID. N° . 32 é a sequência de ADN de TbH-8. SEQ ID. N° . 33 é a sequência de ADN de TbH-9. SEQ ID. N° . 34 é a sequência de ADN de TbM-1. SEQ ID. N° . 35 é a sequência de ADN de TbM-3. SEQ ID. N° . 36 é a sequência de ADN de TbM-6. SEQ ID. N° . 37 é a sequência de ADN de TbM-7. SEQ ID. N° . 38 é a sequência de ADN de TbM-9. SEQ ID. N° . 39 é a sequência de ADN de TbM-12. SEQ ID. N° . 40 é a sequência de ADN de TbM-13. SEQ ID. N° . 41 é a sequência de ADN de TbM-14. SEQ ID. N° . 42 é a sequência de ADN de TbM-15. SEQ ID. N° . 43 é a sequência de ADN de TbH-4. SEQ ID. N° . 44 é a sequência de ADN de TbH-4-FWD SEQ ID. N° . 45 é a sequência de ADN de TbH-12. SEQ ID. N° . 46 é a sequência de ADN de Tb38-1. 6 SEQ ID. N° . 47 é a sequência de ADN de Tb38-4. SEQ ID. N° . 48 é a sequência de ADN de TbL-17. SEQ ID. N° . 4 9 é a sequência de ADN de TbL-20. SEQ ID. N° . 50 é a sequência de ADN de TbL-21. SEQ ID. N° . 51 é a sequência de ADN de TbH-16. SEQ ID. N° . 52 é a sequência de ADN de DPEP. SEQ ID. N° . 53 é a sequência de aminoácidos deduzida de DPEP. SEQ ID N ° . 54 é a sequência proteica do Antigénio N-terminal de DPV. SEQ ID N °. 56 é a sequência proteica do Antigénio N-terminal de AAMK. SEQ ID N ° . 60 é a sequência proteica do Antigénio N-terminal de DPEP. SEQ ID. N° . 63 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal. SEQ ID. N° . 64 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal0 . SEQ ID. N° . 65 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal1. SEQ ID. N° . 66 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal2. SEQ ID. N° . 67 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal3 . SEQ ID. N° . 68 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal6. SEQ ID. N° . 69 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal7. SEQ ID. N° . 70 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal8. SEQ ID. N° . 71 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal9. SEQ ID. N° . 72 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa24. 7 SEQ ID. N° TbRa2 6. SEQ ID. N° TbRa2 8. SEQ ID. N° TbRa2 9. SEQ ID. N° TbRa2A. SEQ ID. N° TbRa3. SEQ ID. N° TbRa32. SEQ ID. N° TbRa35. SEQ ID. N° TbRa3 6. SEQ ID. N° TbRa4. SEQ ID. N° TbRa9. SEQ ID. N° TbRaB. SEQ ID. N° TbRaC. SEQ ID. N° TbRaD. SEQ ID. N° TbAAMK. SEQ ID. N° Tb38-1. SEQ ID. N° TbH-4. SEQ ID. N° TbH-8. 73 é a sequência de aminoácidos 74 é a sequência de aminoácidos 75 é a sequência de aminoácidos 76 é a sequência de aminoácidos 77 é a sequência de aminoácidos 78 é a sequência de aminoácidos 79 é a sequência de aminoácidos 80 é a sequência de aminoácidos 81 é a sequência de aminoácidos 82 é a sequência de aminoácidos 83 é a sequência de aminoácidos 84 é a sequência de aminoácidos 85 é a sequência de aminoácidos 87 é a sequência de aminoácidos 88 é a sequência de aminoácidos 89 é a sequência de aminoácidos 90 é a sequência de aminoácidos deduzida deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de de 8 SEQ ID. N° . 91 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH-9. SEQ ID. N° . 92 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH-12 . SEQ ID. N° . 93 é a sequência de aminoácidos do Péptido 1 de Tb38-1 . SEQ ID. N° . 94 é a sequência de aminoácidos do Péptido 2 de Tb38-1 . SEQ ID. N° . 95 é a sequência de aminoácidos do Péptido 3 de Tb38-1. SEQ ID. N° . 9 6 é a sequência de aminoácidos do Péptido 4 de Tb38-1. SEQ ID. N° . 97 é a sequência de aminoácidos do Péptido 5 de Tb38-1. SEQ ID. N° . 98 é a sequência de aminoácidos do Péptido 6 de Tb38-1. SEQ ID. N° . 101 é a sequência de ADN de DPV. SEQ ID. N° . 102 é a sequência de aminoácidos deduzida de DPV. SEQ ID. N° . 103 é a sequência de ADN de ESAT-6. SEQ ID. N° . 104 é a sequência de aminoácidos deduzida de ESAT-6. SEQ ID. N° . 105 é a sequência de ADN de TbH-8-2. SEQ ID. N° . 106 é a sequência de ADN de TbH-9FL. SEQ ID. N° . 107 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH-9F1. SEQ ID. N° . 108 é a sequência de ADN de TbH-9-1. SEQ ID. N° . 109 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH-9-1. SEQ ID. N° . 110 é a sequência de ADN de TbH-9-4. SEQ ID. N° . 111 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH-9-4. SEQ ID. N° . 112 é a sequência de ADN de Tb38-1F2 IN. SEQ ID. N° . 113 é a sequência de ADN de Tb38-2F2 RP. 9 SEQ ID. N° . 114 é a sequência de aminoácidos deduzida de Tb37-FL. SEQ ID. N° . 115 é a sequência de aminoácidos deduzida de Tb38-IN. SEQ ID. N° . 116 é a sequência de ADN de Tb38-1F3. SEQ ID. N° . 117 é a sequência de aminoácidos deduzida de Tb38-1F3 • SEQ ID. N° . 118 é a sequência de ADN de Tb38-1F5. SEQ ID. N° . 119 é a sequência de ADN de Tb38-1F6. SEQ ID. N° . 120 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de DPV. SEQ ID. N° . 126 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de DPEP. SEQ ID. N ° . 129 é a sequência proteica do Antigénio N-terminal de DPPD. SEQ ID. N° , . 130- 133 são as sequências proteicas de quatro fragmentos de DPPD de brometo de cianogénio. SEQ ID. N° . 134 é a sequência proteica N-terminal do antigénio XDS . SEQ ID. N° . 135 é a sequência proteica N-terminal do antigénio AGD. SEQ ID. N° . 136 é a sequência proteica N-terminal do antigénio APE. SEQ ID. N° . 137 é a sequência proteica N-terminal do antigénio XYI.

Descrição Pormenorizada da Invenção é genericamente prevenir, tratar da invenção em pelo menos, um de uma porção

Como notado acima, a presente invenção dirigida a composições e suas utilizações para e diagnosticar tuberculose. As composições questão incluem polipéptidos que compreendem, antigénio de M. tuberculosis ou consiste 10 imunogénica do mesmo. Os polipéptidos no âmbito da presente invenção incluem, mas não se limitam a, antigénios de M. tuberculosis solúveis e imunogénicos. Um "antigénio de M. tuberculosis solúvel" é uma proteína originária de M. tuberculosis que está presente num filtrado de cultura de M. tuberculosis. Como é aqui utilizado, o termo "polipéptido" abrange cadeias de aminoácidos de qualquer comprimento, incluindo proteínas completas (i. e., antigénios), em que os resíduos de aminoácidos estão ligados por ligações peptídicas covalentes. Assim, um polipéptido compreendendo uma porção imunogénica de um dos antigénios acima pode consistir inteiramente da porção imunogénica, ou pode conter sequências adicionais. As sequências adicionais podem derivar do antigénio de M. tuberculosis nativo ou podem ser heterólogas, e essas sequências podem ser (mas não é necessário que sejam) imunogénicas. "Imunogénico", como é aqui utilizado, refere-se à capacidade para induzir uma resposta imunológica (e. g., celular) num doente, tal como um humano, e/ou numa amostra biológica. Em particular, os antigénios que são imunogénicos (e porções imunogénicas dos mesmos ou outras variantes desses antigénios) são capazes de estimular a proliferação celular, a produção de interleucina-12 e/ou a produção de interferão-γ em amostras biológicas compreendendo uma ou mais células seleccionadas do grupo de células T, células NK, células B e macrófagos, em que as células são derivadas de um indivíduo imune a M. tuberculosis. Os polipéptidos compreendendo um ou mais antigénios de M. tuberculosis, ou consistindo de uma porção imunogénica do mesmo, podem ser genericamente utilizados para detectar tuberculose ou para induzir imunidade protectora contra tuberculose num doente. 11

As composições e métodos desta invenção também abrangem variantes dos polipéptidos acima. Uma "variante", como é aqui utilizado, é um polipéptido que difere do antigénio nativo apenas em substituições e/ou modificações conservadoras, de modo que seja retida a capacidade do polipéptido para induzir uma resposta imunológica. Essas variantes podem ser geralmente identificadas por modificação de uma das sequências polipeptidicas acima e avaliação das propriedades imunogénicas do polipéptido modificado utilizando, por exemplo, os métodos representativos aqui descritos.

Uma "substituição conservadora" é aquela em que um aminoácido é substituído por outro aminoácido que tem propriedades semelhantes, de modo que um especialista na técnica da química de péptidos esperaria que a estrutura secundária e natureza hidropática do polipéptido permanecessem substancialmente inalteradas. Em geral, os seguintes grupos de aminoácidos representam alterações conservadoras: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gin, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) vai, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his, e (5) phe, tyr, trp, his.

As variantes também (ou alternativamente) podem ser modificadas, por exemplo, pela delecção ou adição de aminoácidos que têm uma influência mínima nas propriedades imunogénicas, estrutura secundária e natureza hidropática do polipéptido. Por exemplo, um polipéptido pode ser conjugado a uma sequência de sinal (ou líder) na extremidade N-terminal da proteína que dirige, em co-tradução ou pós-tradução, a transferência da proteína. 0 polipéptido também pode ser conjugado a um ligante ou outra sequência para facilidade de síntese, purificação ou identificação do polipéptido (e. g., poli-His), ou para intensificar a ligação do polipéptido a um suporte sólido. Por exemplo, um polipéptido pode ser conjugado à região Fc de uma 12 imunoglobulina.

Num aspecto relacionado, são divulgados polipéptidos de combinação. Um "polipéptido de combinação" é um polipéptido compreendendo, pelo menos, um dos polipéptidos imunogénicos acima, ou consistindo de uma porção imunogénica do mesmo, e uma ou mais sequências de M. tuberculosis imunogénicas adicionais, que são ligadas através de uma ligação peptídica numa única cadeia de aminoácidos. As sequências podem ser ligadas directamente {i. e., sem aminoácidos intermediários) ou podem ser ligadas através de uma sequência ligante (e. g., Gly-Cys-Gly) que não diminua significativamente as propriedades imunogénicas dos polipéptidos componentes.

Em geral, podem preparar-se antigénios de M. tuberculosis e sequências de ADN codificando esses antigénios utilizando qualquer um de uma variedade de métodos. Por exemplo, podem ser isolados antigénios solúveis do filtrado de cultura de M. tuberculosis por métodos conhecidos dos especialistas na técnica, incluindo cromatografia de permuta aniónica e de fase reversa. Os antigénios purificados são depois avaliados quanto à sua capacidade para induzir uma resposta imunológica apropriada (e. g., celular) utilizando, por exemplo, os métodos representativos aqui descritos. Os antigénios imunogénicos podem ser depois parcialmente sequenciados utilizando técnicas, tais como a quimica de Edman tradicional. Ver Edman e Berg, Eur. J. Biochem. 80: 116-132, 1967.

Os antigénios imunogénicos também podem ser produzidos de forma recombinante utilizando uma sequência de ADN que codifica o antigénio, que foi inserida num vector de expressão e expressa num hospedeiro apropriado. As moléculas de ADN codificando antigénios solúveis podem ser isoladas por rastreio de uma 13 biblioteca de expressão apropriada de M. tuberculosis com anti-soros (e. g. , de coelho) produzidos especificamente contra antigénios solúveis de M. tuberculosis. Podem identificar-se sequências de ADN codificadoras de antigénios que podem ou não ser solúveis, por rastreio de uma biblioteca de expressão genómica ou de ADNc de M. tuberculosis apropriada com soros obtidos de doentes infectados com M. tuberculosis. Esses rastreios podem geralmente ser efectuados utilizando técnicas bem conhecidas dos especialistas na técnica, tais como as descritas em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989.

Também podem obter-se sequências de ADN codificando antigénios solúveis por rastreio de uma biblioteca apropriada de ADNc ou ADN genómico de M. tuberculosis quanto a sequências de ADN que hibridam com oligonucleótidos degenerados derivados de sequências de aminoácidos parciais de antigénios solúveis isolados. As sequências oligonucleotidicas degeneradas para utilização nesse rastreio podem ser concebidas e sintetizadas, e o rastreio pode ser efectuado, como descrito (por exemplo) em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (e referências ai citadas). Também pode empregar-se a reacção em cadeia da polimerase (PCR) , utilizando os oligonucleótidos acima em métodos bem conhecidos na técnica, para isolar uma sonda de ácido nucleico a partir de uma biblioteca de ADNc ou genómica. 0 rastreio da biblioteca pode então ser efectuado utilizando a sonda isolada.

Alternativamente, bibliotecas genómicas ou de ADNc derivadas de M. tuberculosis podem ser rastreadas directamente, utilizando células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) ou linhas ou 14 clones de células T derivadas de um ou mais indivíduos imunes a M. tuberculosis. Em geral, as PBMCs e/ou células T para utilização nesses rastreios podem ser preparadas como descrito abaixo. Os rastreios directos de bibliotecas podem ser geralmente efectuados testando agrupamentos de proteínas recombinantes expressas quanto à capacidade para induzir proliferação e/ou produção de interferão-γ em células T derivadas de um indivíduo imune a M. tuberculosis. Alternativamente, os antigénios potenciais de células T podem ser primeiramente seleccionados com base na reactividade de anticorpos, como descrito acima.

Independentemente do método de preparação, os antigénios (e porções imunogénicas dos mesmos) aqui descritos (que podem ou não ser solúveis) têm a capacidade para induzir uma resposta imunogénica. Mais especificamente, os antigénios têm a capacidade para induzir proliferação e/ou produção de citocinas (í. e., produção de interferão-γ e/ou interleucina-12) em células T, células NK, células B e/ou macrófagos derivados de um indivíduo imune a M. tuberculosis. A selecção do tipo de célula para utilização na avaliação de uma resposta imunogénica a um antigénio dependerá, obviamente, da resposta desejada. Por exemplo, a produção de interleucina-12 é muito facilmente avaliada utilizando preparações contendo células B e/ou macrófagos. Um indivíduo imune a M. tuberculosis é aquele considerado resistente ao desenvolvimento de tuberculose em virtude de ter montado uma resposta de células T eficaz a M. tuberculosis (i. e., substancialmente livre de sintomas da doença). Esses indivíduos podem ser identificados com base numa resposta fortemente positiva ao teste intradérmico cutâneo (i. e., endurecimento com diâmetro superior a cerca de 10 mm) a proteínas da tuberculose (PPD) e uma ausência de quaisquer sinais ou sintomas de doença de tuberculose. Podem preparar-se 15 células T, células NK, células B e macrófagos derivados de indivíduos imunes a M. tuberculosis utilizando métodos conhecidos dos especialistas na técnica. Por exemplo, pode empregar-se uma preparação de PBMCs (í. e., células mononucleares do sangue periférico) sem separação adicional de células componentes. As PBMCs podem ser geralmente preparadas, por exemplo, utilizando centrifugação por densidade através de Ficoll™ (Winthrop Laboratories, NY) . As células T para utilização nos ensaios aqui descritos também podem ser purificadas directamente a partir de PBMCs. Alternativamente, pode empregar-se uma linha de células T enriquecida, reactiva contra proteínas micobacterianas, ou clones de células T reactivos contra proteínas micobacterianas individuais. Esses clones de células T podem ser gerados, por exemplo, cultivando PBMCs de indivíduos imunes a M. tuberculosis com proteínas micobacterianas durante um período de 2-4 semanas. Isto permite a expansão apenas das células T específicas para proteínas micobacterianas, resultando numa linha composta apenas por essas células. Estas células podem ser depois clonadas e testadas com proteínas individuais, utilizando métodos conhecidos dos especialistas na técnica, para definir mais rigorosamente a especificidade de células T individuais. Em geral, são considerados imunogénicos os antigénios cujo resultado do teste é positivo em ensaios de proliferação e/ou produção de citocinas (í. e., produção de interferão-γ e/ou interleucina-12) realizados utilizando células T, células NK, células B e/ou macrófagos derivados de um indivíduo imune a M. tuberculosis. Esses ensaios podem ser realizados, por exemplo, utilizando os métodos representativos descritos abaixo. As porções imunogénicas desses antigénios podem ser identificadas utilizando ensaios semelhantes, e podem estar presentes nos polipéptidos aqui descritos. 16 A capacidade de um polipéptido (e. g., um antigénio imunogénico ou uma porção ou outra variante do mesmo) para induzir proliferação celular é avaliada fazendo com que as células (e. g., células T e/ou células NK) entrem em contacto com o polipéptido e medindo a proliferação das células. Em geral, a quantidade de polipéptido que é suficiente para a avaliação de cerca de 105 células varia desde cerca de 10 ng/mL até cerca de 100 ug/mL e, de um modo preferido, é cerca de 10 ug/mL. A incubação do polipéptido com células é tipicamente realizada a 37 °C durante cerca de seis dias. Após a incubação com polipéptido, as células são testadas quanto à resposta proliferativa, que pode ser avaliada por métodos conhecidos dos especialistas na técnica, tais como expondo as células a um impulso de timidina radiomarcada e medindo a incorporação do marcador em ADN celular. Em geral, considera-se que um polipéptido é capaz de induzir proliferação quando resulta num aumento de, pelo menos, três vezes da proliferação acima do ruido de fundo (i. e., a proliferação observada para células cultivadas sem polipéptido). A capacidade de um polipéptido para estimular a produção de interferão-γ e/ou interleucina-12 em células pode ser avaliada fazendo com que as células entrem em contacto com o polipéptido e medindo o nivel de interferão-γ ou interleucina-12 produzido pelas células. Em geral, a quantidade de polipéptido que é suficiente para a avaliação de cerca de 105 células, varia desde cerca de 10 ng/mL até cerca de 100 ug/mL e, de um modo preferido, é cerca de 10 ug/mL. O polipéptido pode, mas não é necessário, ser imobilizado num suporte sólido, tal como uma esférula ou uma microesfera biodegradável, tal como as descritas nas Patentes U.S. Nos. 4897268 e 5075109. A incubação do polipéptido com as células é tipicamente realizada a 37 °C durante cerca de seis dias. Após a incubação com polipéptido, as células são testadas quanto ao interferão-γ e/ou interleucina-12 17 (ou uma ou mais subunidades dos mesmos), que pode ser avaliado por métodos conhecidos dos especialistas na técnica, tais como um imunoensaio de absorção ligado à enzima (ELISA) ou, no caso da subunidade P7 0 da IL-12, um bioensaio tal como um ensaio que mede a proliferação de células T. Em geral, considera-se que um polipéptido é capaz de estimular a produção de interferão-γ quando resulta na produção de, pelo menos, 50 pg de interferão-γ por mL de sobrenadante cultivado (contendo 104-105 células T por mL) . Considera-se que um polipéptido é capaz de estimular a produção de IL-12 quando estimula a produção de, pelo menos, 10 pg/mL da subunidade P70 da IL-12 e/ou, pelo menos, 100 pg/mL da subunidade P40 da IL-12 por 105 macrófagos ou células B (ou por 3 x 105 PBMC).

Em geral, os antigénios imunogénicos são aqueles antigénios que estimulam a proliferação e/ou produção de citocinas (i. e., produção de interferão-γ e/ou interleucina-12) em células T, células NK, células B e/ou macrófagos derivados de, pelo menos, cerca de 25% de indivíduos imunes a M. tuberculosis. Entre estes agentes imunogénicos podem distinguir-se polipéptidos com propriedades terapêuticas superiores com base na magnitude das respostas nos ensaios acima e com base na percentagem de indivíduos para os quais se observa uma resposta. Adicionalmente, os antigénios com propriedades terapêuticas superiores não irão estimular a proliferação e/ou produção de citocinas in vitro em células derivadas de mais de cerca de 25% de indivíduos que não são imunes a M. tuberculosis, desse modo eliminando respostas que não se devem especificamente a células que respondem a M. tuberculosis. Aqueles antigénios que induzem uma resposta numa percentagem elevada de preparações de células T, células NK, células B e/ou macrófagos de indivíduos imunes a M. tuberculosis (com uma baixa incidência de respostas em preparações de células de outros indivíduos) têm propriedades terapêuticas superiores. 18

Também podem identificar-se antigénios com propriedades terapêuticas superiores com base na sua capacidade para diminuir a gravidade da infecção por M. tuberculosis em animais experimentais, quando administrados como vacina. Preparações de vacinas adequadas para utilização em animais experimentais são descritas em pormenor abaixo. Pode determinar-se a eficácia com base na capacidade do antigénio para proporcionar uma redução de, pelo menos, 50% dos números bacterianos e/ou um decréscimo de, pelo menos, cerca de 40% da mortalidade após infecção experimental. Os animais experimentais adequados incluem murganhos, porquinhos-da-india e primatas.

Os antigénios com propriedades superiores de diagnóstico podem ser geralmente identificados com base na capacidade para induzir uma resposta num teste cutâneo intradérmico realizado num indivíduo com tuberculose activa, mas não num teste realizado num indivíduo que não esteja infectado com M. tuberculosis. Os testes cutâneos podem ser geralmente efectuados como descrito abaixo, sendo considerada positiva uma resposta de, pelo menos, 5 mm de endurecimento.

As porções imunogénicas dos antigénios aqui descritos podem ser preparadas e identificadas utilizando técnicas bem conhecidas, como as resumidas em Paul, Fundamental Immunology, 3a ed., Raven Press, 1993, pp. 243-247, e referências ai citadas. Essas técnicas incluem o rastreio de porções polipeptidicas do antigénio nativo quanto a propriedades imunogénicas. Os ensaios representativos de proliferação e produção de citocinas aqui descritos podem ser geralmente empregues nestes rastreios. Uma porção imunogénica de um polipéptido é uma porção que, nesses ensaios representativos, gera uma resposta imunológica (e. g., proliferação, produção de interferão-γ e/ou produção de interleucina-12) que é 19 substancialmente semelhante à gerada pelo antigénio completo. Por outras palavras, uma porção imunogénica de um antigénio pode gerar, pelo menos, cerca de 20% e, de um modo preferido, cerca de 100% da proliferação induzida pelo antigénio completo no ensaio modelo de proliferação aqui descrito. Uma porção imunogénica também, ou alternativamente, pode estimular a produção de, pelo menos, cerca de 20% e, de um modo preferido, cerca de 100% do interferão-γ e/ou interleucina-12 induzida pelo antigénio completo no ensaio modelo aqui descrito.

Podem gerar-se porções e outras variantes de antigénios de M. tuberculosis por meios sintéticos ou recombinantes. Podem gerar-se polipéptidos sintéticos com menos de cerca de 100 aminoácidos, e geralmente menos de cerca de 50 aminoácidos, utilizando técnicas bem conhecidas dos especialistas na técnica. Por exemplo, esses polipéptidos podem ser sintetizados utilizando qualquer uma das técnicas em fase sólida comercialmente disponíveis, como o método de síntese em fase sólida de Merrifield, em que são sequencialmente adicionados aminoácidos a uma cadeia de aminoácidos em crescimento. Ver Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2146, 1963. O equipamento para a síntese automatizada de polipéptidos está disponível comercialmente por fornecedores como a Applied BioSystems, Inc., Foster City, CA, e pode ser operado de acordo com as instruções do fabricante. As variantes de um antigénio nativo podem ser geralmente preparadas utilizando técnicas de mutagénese convencionais, tais como mutagénese dirigida com oligonucleótidos. Também podem remover-se secções da sequência de ADN utilizando técnicas convencionais para permitir a preparação de polipéptidos truncados.

Os polipéptidos recombinantes contendo porções e/ou variantes de um antigénio nativo podem ser facilmente preparados a partir de uma sequência de ADN codificando o polipéptido, 20 utilizando uma variedade de técnicas bem conhecidas dos especialistas na técnica. Por exemplo, os sobrenadantes de sistemas adequados de hospedeiro/vector que segregam proteina recombinante para o meio de cultura podem ser primeiramente concentrados utilizando um filtro disponível comercialmente. Após a concentração, o concentrado pode ser aplicado numa matriz de purificação adequada, tal como uma matriz de afinidade ou uma resina de permuta iónica. Por fim, podem empregar-se um ou mais passos de HPLC de fase reversa para purificar adicionalmente uma proteina recombinante.

Pode empregar-se qualquer um, de uma variedade de vectores de expressão conhecidos dos especialistas na técnica, para expressar polipéptidos recombinantes desta invenção. Pode obter-se expressão em qualquer célula hospedeira apropriada que tenha sido transformada ou transfectada com um vector de expressão contendo uma molécula de ADN que codifica um polipéptido recombinante. As células hospedeiras adequadas incluem células procarióticas, de levedura e eucarióticas superiores. De um modo preferido, as células hospedeiras empregues são de E. coli, levedura ou uma linha de células de mamifero como COS ou CHO. As sequências de ADN expressas desta forma podem codificar antigénios de ocorrência natural, porções de antigénios de ocorrência natural ou outras variantes dos mesmos.

Em geral, independentemente do método de preparação, os polipéptidos aqui divulgados são preparados em forma substancialmente pura. De um modo preferido, os polipéptidos são, pelo menos, cerca de 80% puros, de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 90% puros e de um modo muito preferido, pelo menos, cerca de 99% puros. Em certas formas de realização preferidas, descritas abaixo em pormenor, os polipéptidos substancialmente puros são incorporados em composições farmacêuticas ou vacinas para utilização num ou mais dos métodos 21 aqui divulgados.

Em formas de realização especificas adicionais, a invenção em questão divulga polipéptidos compreendendo, pelo menos, uma porção imunogénica de um antigénio de M. tuberculosis (ou uma variante desse antigénio), que pode ou não ser solúvel, que compreende uma ou mais das sequências de aminoácidos codificadas por (a) a sequência de ADN de SEQ ID Nos. : 106 (b) sequências de ADN substancialmente homólogas a uma sequência de (a).

Nas formas de realização especificas discutidas acima, os antigénios de M. tuberculosis incluem variantes que são codificadas por sequências de ADN que são substancialmente homólogas a uma ou mais das sequências de ADN especif icamente apresentadas aqui. "Homologia substancial", como é aqui utilizado, refere-se a sequências de ADN que são capazes de hibridar em condições moderadamente restringentes. As condições moderadamente restringentes adequadas incluem pré-lavagem numa solução de 5X SSC, 0,5% de SDS, 1,0 mM de EDTA (pH 8,0); hibridação a 50 °C-65 °C, 5X SSC, de um dia para o outro ou, no caso de homologia de espécies cruzadas, a 45 °C, 0,5X SSC; seguida de lavagem duas vezes, a 65 °C durante 20 minutos, com cada um de 2X, 0,5X e 0,2X SSC contendo 0,1% de SDS). Essas sequências de ADN de hibridação também estão no âmbito desta invenção, bem como sequências de nucleótidos que, devido à degenerescência do código genético, codificam um polipéptido imunogénico que é codificado por uma sequência de ADN de hibridação.

Num aspecto relacionado, a presente invenção proporciona proteínas de fusão compreendendo um primeiro e um segundo polipéptido inventivo ou, alternativamente, um polipéptido da presente invenção e um antigénio conhecido de M. tuberculosis, tal como o antigénio de 38 kD descrito acima ou ESAT-β (SEQ ID 22

Nos. 103 e 104), conjuntamente com variantes dessas proteínas de fusão. As proteínas de fusão da presente invenção também podem incluir um péptido ligante entre o primeiro e o segundo polipéptidos.

Constrói-se uma sequência de ADN codificando uma proteína de fusão da presente invenção utilizando técnicas de ADN recombinante conhecidas, para reunir sequências separadas de ADN, codificando o primeiro e segundo polipéptidos, num vector de expressão apropriado. A extremidade 3' de uma sequência de ADN codificando o primeiro polipéptido é ligada, com ou sem um ligante peptídico, à extremidade 5' de uma sequência de ADN codificando o segundo polipéptido de modo que as grelhas de leitura das sequências estejam em fase, para permitir a tradução do ARNm das duas sequências de ADN numa única proteína de fusão que retém a actividade biológica do primeiro e do segundo polipéptidos.

Pode empregar-se uma sequência ligante peptídica para separar o primeiro e o segundo polipéptidos por uma distância suficiente para assegurar que cada polipéptido se enrola nas suas estruturas secundária e terciária. Essa sequência ligante peptídica é incorporada na proteína de fusão utilizando técnicas convencionais bem conhecidas na técnica. Podem escolher-se sequências ligantes peptídicas adequadas com base nos factores seguintes: (1) a sua capacidade para adoptar uma conformação estendida flexível; (2) a sua incapacidade para adoptar uma estrutura secundária que poderia interagir com epitopos funcionais no primeiro e segundo polipéptidos, e (3) a ausência de resíduos hidrófobos ou carregados que poderiam reagir com os epitopos funcionais dos polipéptidos. As sequências ligantes peptídicas preferidas contêm resíduos de Gly, Asn e Ser. Também podem utilizar-se na sequência ligante outros aminoácidos quase neutros, tais como Thr e Ala. As sequências de aminoácidos que 23 podem ser utilmente empregues como ligantes incluem as divulgadas em Maratea et al., Gene 40: 39-46, 1985; Murphy et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 83: 8258-8262, 1986; Patente U.S. N°. 4935233 e Patente U.S. N°. 4751180. A sequência ligante pode ter desde 1 até cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Não são necessárias sequências peptidicas quando o primeiro e segundo polipéptidos têm regiões de aminoácidos N-terminais não essenciais que podem ser utilizadas para separar os dominios funcionais e prevenir a interferência estérica.

As sequências de ADN ligadas estão operativamente ligadas a elementos reguladores da transcrição ou tradução adequados. Os elementos reguladores responsáveis pela expressão de ADN localizam-se apenas a 5' da sequência de ADN codificando os primeiros polipéptidos. De modo semelhante, os codões de terminação necessários para terminar a tradução e sinais de terminação da transcrição só estão presentes a 3' da sequência de ADN codificando o segundo polipéptido.

Noutro aspecto, a presente invenção divulga métodos de utilização de um ou mais dos polipéptidos ou proteínas de fusão acima (ou de moléculas de ADN codificando esses polipéptidos) para induzir imunidade protectora contra tuberculose num doente. Como é aqui utilizado, um "doente" refere-se a qualquer animal de sangue quente, de um modo preferido, um humano. Um doente pode ter uma doença, ou pode estar livre de doença e/ou infecção detectável. Por outras palavras, a imunidade protectora pode ser induzida para prevenir ou tratar tuberculose.

Neste aspecto, o polipéptido, proteína de fusão ou molécula de ADN está geralmente presente numa composição farmacêutica e/ou numa vacina. As composições farmacêuticas podem compreender um ou mais polipéptidos, cada um dos quais pode conter uma ou mais das sequências acima (ou variantes das mesmas), e um 24 veículo fisiologicamente aceitável. As vacinas podem compreender um ou mais dos polipéptidos acima e um intensificador da resposta imunológica inespecífico, tal como um adjuvante ou um lipossoma (no qual é incorporado o polipéptido) . Essas composições farmacêuticas e vacinas também podem conter outros antigénios de M. tuberculosis, quer incorporados num polipéptido de combinação ou presentes num polipéptido separado.

Alternativamente, uma vacina pode conter ADN codificando um ou mais polipéptidos como descritos acima, de modo que o polipéptido seja gerado in situ. Nessas vacinas, o ADN pode estar presente em qualquer um, de uma variedade de sistemas de transferência conhecidos dos especialistas na técnica, incluindo sistemas de expressão de ácidos nucleicos, sistemas de expressão bacterianos e virais.

Os sistemas de expressão de ácidos nucleicos apropriados contêm as sequências de ADN necessárias para expressão no doente (tal como um promotor e sinal de terminação adequados) . Os sistemas de transferência bacterianos envolvem a administração de uma bactéria (como Bacillus-Calmelte-Guerrin) que expressa na sua superfície celular uma porção imunogénica do polipéptido. Numa forma de realização preferida, o ADN pode ser introduzido utilizando um sistema de expressão virai (e. g., vacina ou outro poxvírus, retrovírus ou adenovírus), que pode envolver a utilização de um vírus competente para replicação não patogénico (defeituoso). As técnicas para incorporar ADN nesses sistemas de expressão são bem conhecidas dos especialistas na técnica. 0 ADN também pode ser "nu", como descrito, por exemplo, em Ulmer et al., Science 259: 1745-1749, 1993, e revisto por Cohen, Science 259: 1691-1692, 1993. Pode aumentar-se a captação de ADN nu revestindo com o ADN esférulas biodegradáveis, que são eficientemente transportadas para o interior das células. 25

Num aspecto relacionado, uma vacina de ADN como descrita acima pode ser administrada simultaneamente ou sequencialmente, quer a um polipéptido da presente invenção ou a um antigénio conhecido de M. tuberculosis, tal como o antigénio de 38 kD descrito acima. Por exemplo, a administração de ADN codificando um polipéptido da presente invenção, quer "nu" ou num sistema de transferência como descrito acima, pode ser seguida de administração de um antigénio para intensificar o efeito imunológico protector da vacina.

As vias e frequência de administração, bem como dosagem, irão variar de indivíduo para indivíduo, e podem ser semelhantes às presentemente utilizadas na imunização utilizando BCG. Em geral, as composições farmacêuticas e vacinas podem ser administradas por injecção (e. g., intracutânea, intramuscular, intravenosa ou subcutânea), intranasalmente (e. g., por aspiração) ou oralmente. Podem administrar-se entre 1 e 3 doses durante um período de 1-36 semanas. De um modo preferido, administram-se 3 doses, com intervalos de 3-4 meses, e em seguida podem administrar-se periodicamente vacinações de reforço. Podem ser apropriados protocolos alternativos para doentes individuais. Uma dose adequada é uma quantidade de polipéptido ou ADN que, quando administrada como descrito acima, é capaz de activar uma resposta imunológica num doente imunizado, suficiente para proteger o doente de infecção por M. tuberculosis durante, pelo menos, 1-2 anos. Em geral, a quantidade de polipéptido presente numa dose (ou produzida in situ pelo ADN presente numa dose) varia desde cerca de 1 pg até cerca de 100 mg por kg do hospedeiro, tipicamente desde cerca de 10 pg até cerca de 1 mg e, de um modo preferido, desde cerca de 100 pg até cerca de 1 ug. As doses adequadas irão variar com a estatura do doente, mas tipicamente irão variar desde cerca de 26 0,1 mL até cerca de 5 mL.

Embora qualquer veículo adequado conhecido dos especialistas na técnica possa ser empregue nas composições farmacêuticas desta invenção, o tipo de veículo irá variar dependendo do modo de administração. Para administração parentérica, tal como injecção subcutânea, o veículo compreende, de um modo preferido, água, soro fisiológico, álcool, uma gordura, uma cera ou um tampão. Para administração oral pode empregar-se qualquer um dos veículos acima ou um veículo sólido, tal como manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina sódica, talco, celulose, glucose, sacarose e carbonato de magnésio. Também podem empregar-se microesferas biodegradáveis (e. g., galactideo poliláctico) como veículos para as composições farmacêuticas desta invenção. As microesferas biodegradáveis adequadas são divulgadas, por exemplo, nas Patentes U.S. Nos. 4897268 e 5075109.

Nas vacinas desta invenção pode empregar-se qualquer um de uma variedade de adjuvantes para intensificar inespecificamente a resposta imunológica. A maior parte dos adjuvantes contém uma substância concebida para proteger o antigénio de catabolismo rápido, tal como hidróxido de alumínio ou óleo mineral, e um estimulador inespecífico de respostas imunológicas, tal como lípido A, Bordatella pertussis ou Mycobacterium tuberculosis. Os adjuvantes adequados estão disponíveis comercialmente como, por exemplo, Adjuvante Incompleto de Freund e Adjuvante Completo de Freund (Difco Laboratories) e Adjuvante 65 da Merck (Merck and Company, Inc., Rahway, NJ) . Outros adjuvantes adequados incluem alúmen, microesferas biodegradáveis, monofosforil-lípido A e Quil A.

Noutro aspecto, esta invenção divulga métodos para utilizar um ou mais dos polipéptidos descritos acima para diagnosticar 27 tuberculose utilizando um teste cutâneo. Como é aqui utilizado, um "teste cutâneo" é qualquer ensaio efectuado directamente num doente no qual se mede uma reacção de hipersensibilidade de tipo retardado (DTH) (como inchaço, vermelhidão ou dermatite) após injecção intradérmica de um ou mais polipéptidos como descritos acima. Pode aplicar-se essa injecção utilizando qualquer dispositivo adequado suficiente para que o polipéptido ou polipéptidos entrem em contacto com células dérmicas do doente, tal como uma seringa de tuberculina ou seringa de 1 mL. De um modo preferido, mede-se a reacção, pelo menos, 48 horas após a injecção, de um modo mais preferido, 48-72 horas. A reacção de DTH é uma resposta imunológica mediada por células que é maior em doentes previamente expostos ao antigénio de teste (i. e., a porção imunogénica do polipéptido empregue, ou variante do mesmo). A resposta pode ser medida visualmente, utilizando uma régua. Em geral, uma resposta maior do que cerca de 0,5 cm de diâmetro, de um modo preferido, maior do que cerca de 1,0 cm de diâmetro, é uma resposta positiva indicadora de infecção com tuberculose, que pode ou não manifestar-se como doença activa.

Os polipéptidos desta invenção são, de um modo preferido, formulados para utilização num teste cutâneo, como composições farmacêuticas contendo um polipéptido e um veiculo fisiologicamente aceitável, como descrito acima. Essas composições contêm tipicamente um ou mais dos polipéptidos acima numa quantidade que varia desde cerca de 1 ug até cerca de 100 ug, de um modo preferido, desde cerca de 10 ug até cerca de 50 ug num volume de 0,1 mL. De um modo preferido, o veiculo empregue nessas composições farmacêuticas é uma solução salina com conservantes apropriados, tais como fenol e/ou Tween 80™.

Numa forma de realização preferida, um polipéptido empregue 28 num teste cutâneo tem um tamanho suficiente para permanecer no sitio da injecção durante o período da reacção. Em geral é suficiente um polipéptido com, pelo menos, 9 aminoácidos de comprimento. De um modo preferido, o polipéptido também é degradado por macrófagos, num período de horas após a injecção, para permitir a apresentação a células T. Esses polipéptidos podem conter repetições de uma ou mais das sequências acima e/ou outras sequências imunogénicas ou não imunogénicas. São proporcionados os seguintes Exemplos a título ilustrativo e não limitativo. EXEMPLOS EXEMPLO 1

PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE POLIPÉPTIDOS DO FILTRADO DE CULTURA DE M. TUBERCULOSIS

Este exemplo ilustra a preparação de polipéptidos solúveis de M. tuberculosis do filtrado de cultura. Salvo especificação em contrário, todas as percentagens no exemplo seguinte são em peso por volume.

Cultivou-se M. tuberculosis (quer H37Ra, ATCC N°. 25177, ou H37Rv, ATCC N° . 25618) em meio GAS esterilizado a 37 °C durante catorze dias. 0 meio foi depois filtrado em vácuo (ficando a maioria das células), através de um filtro de 0,45 u, para uma garrafa esterilizada de 2,5 L. O meio foi depois filtrado, através de um filtro de 0,2 u, para uma garrafa esterilizada de 4 L, tendo-se adicionado NaN3 ao filtrado da cultura até uma concentração de 0,04%. As garrafas foram seguidamente colocadas numa sala arrefecida a 4 °C. 29

Concentrou-se o filtrado da cultura, colocando o filtrado num reservatório de 12 L que tinha sido submetido a autoclavagem e enchendo com o filtrado uma célula de agitação Amicon de 400 mL que tinha sido lavada com etanol e continha uma membrana de MWCO de 10000 kDa. Manteve-se a pressão a 60 psi utilizando azoto gasoso. Este método reduziu o volume de 12 L para aproximadamente 50 mL. O filtrado da cultura foi dialisado em 0,1% de bicarbonato de amónio utilizando uma membrana de éster de celulose de MWCO de 8000 kDa, com duas mudas da solução de bicarbonato de amónio. A concentração da proteina foi depois determinada com um ensaio de BCA disponível comercialmente (Pierce, Rockford, IL). O filtrado da cultura dialisado foi seguidamente liofilizado e os polipéptidos foram ressuspensos em água destilada. Os polipéptidos foram dialisados contra 0,01 mM de 1,3-bis[tris(hidroximetil)-metilamino]propano, pH 7,5 (tampão de Bis-Tris propano), as condições iniciais para cromatografia de permuta aniónica. Procedeu-se ao fraccionamento utilizando cromatografia de perfusão em gel numa coluna de permuta aniónica POROS 146 II Q/M de 4,6 mm χ 100 mm (Perseptive BioSystems, Framingham, MA) equilibrada em tampão de Bis-Tris propano a 0,01 mM pH 7,5. Os polipéptidos foram eluidos com um gradiente linear de NaCl 0-0,5 M no sistema de tampão acima. Monitorizou-se o eluente da coluna a um comprimento de onda de 220 nm.

Os agrupamento de polipéptidos que eluiram da coluna de permuta iónica foram dialisados contra água destilada e liofilizados. Dissolveu-se o material resultante em 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA), pH 1,9, em água, e purificaram-se os polipéptidos numa coluna C18 Delta-Pak (Waters, Milford, MA) de dimensão dos poros de 300 Angstrom, dimensão das partículas 30 de 5 mícrones (3,9 χ 150 mm). Os polipéptidos foram eluídos da coluna com um gradiente linear de 0-60% de tampão de diluição (0,1% de TFA em acetonitrilo) . O caudal foi 0,75 mL/minuto e o eluente de HPLC foi monitorizado a 214 nm. Recolheram-se as fracções contendo os polipéptidos eluidos para maximizar a pureza das amostras individuais. Obtiveram-se aproximadamente 200 polipéptidos purificados.

Os polipéptidos purificados foram depois rastreados quanto à capacidade para induzir proliferação de células T em preparações de PBMC. As PBMCs de dadores que se sabe serem positivos no teste cutâneo de PPD e daqueles cujas células T se verificou proliferarem em resposta a PPD e proteínas solúveis em bruto de MTB foram cultivadas em meio compreendendo RPMI 1640 suplementado com 10% de soro humano reunido e 50 ug/mL de gentamicina. Os polipéptidos purificados foram adicionados em duplicado às concentrações de 0,5 até 10 ug/mL. Após seis dias de cultura em placas de fundo redondo de 96 poços num volume de 200 uL, removeram-se de cada poço 50 uL de meio para determinar os níveis de IFN-γ, como descrito abaixo. As placas foram depois submetidas a impulsos de 1 uCi/poço de timidina tritiada durante mais 18 horas e foram recolhidas, tendo-se determinado a captação de trítio utilizando um contador de cintilações gasosas. Consideraram-se positivas as fracções que resultaram em proliferação, nas duas repetições, três vezes maior do que a proliferação observada em células cultivadas apenas em meio.

Mediu-se o IFN-γ utilizando um imunoensaio de absorção ligado à enzima (ELISA). As placas de ELISA foram revestidas com um anticorpo monoclonal de murganho dirigido para o IFN-γ humano (PharMingen, San Diego, CA) em PBS durante quatro horas à temperatura ambiente. Os poços foram depois bloqueados com PBS contendo 5% de leite em pó magro (P/V) durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram depois lavadas seis vezes 31 em PBS/0,2% de TWEEN-20, e as amostras diluídas 1:2 em meio de cultura nas placas de ELISA foram incubadas de um dia para o outro à temperatura ambiente. Lavaram-se novamente as placas e adicionou-se a cada poço um soro policlonal de coelho anti-IFN-γ humano diluído 1:3000 em PBS/10% de soro normal de cabra. As placas foram então incubadas durante duas horas à temperatura ambiente, foram lavadas e adicionou-se IgG anti-coelho acoplado a peroxidase de rábano (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) numa diluição 1:2000 em PBS/5% de leite em pó magro. Após mais duas horas de incubação à temperatura ambiente, lavaram-se as placas e adicionou-se substrato de TMB. A reacção foi terminada passados 20 minutos com ácido sulfúrico a 1 N. Determinou-se a densidade óptica a 450 nm utilizando 570 nm como comprimento de onda de referência. Consideraram-se positivas as fracções cujas duas repetições originaram uma OD duas vezes maior do que a OD média de células cultivadas apenas em meio, mais 3 desvios-padrão .

Para a sequenciação, os polipéptidos foram individualmente secos em filtros de fibra de vidro tratados com Biobrene™ (Perkin Elmer/Applied BioSystems Division, Foster City, CA) . Os filtros com polipéptido foram aplicados num sequenciador de proteínas Procise 492 da Perkin Elmer/Applied BioSystems Division. Os polipéptidos foram sequenciados a partir do terminal amino e utilizando química de Edman tradicional. Determinou-se a sequência de aminoácidos para cada polipéptido comparando o tempo de permanência do derivado de aminoácidos PTH com os padrões apropriados de derivado PTH.

Utilizando o método descrito acima isolaram-se antigénios com as seguintes sequências N-terminais: (a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Xaa-Asn-Tyr-Gly-Gin-Vai-Vai-AIa-AIa-Leu; (SEQ ID N°. 54) 32 (c) Ala-Ala-Met-Lvs-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg; (SEQ ID N°. 56) (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Pro-Ala; (SEQ ID N° . 60) e em que Xaa pode ser qualquer aminoácido.

Isolaram-se, do modo seguinte, antigénios solúveis adicionais do filtrado de cultura de M. tuberculosis. Preparou-se o filtrado da cultura de M. tuberculosis como descrito acima. Após diálise contra tampão de Bis-Tris propano, a pH 5,5, procedeu-se ao fraccionamento utilizando cromatografia de permuta aniónica numa coluna Poros QE de 4,6 χ 100 mm (Perseptive Biosystems) equilibrada em tampão de Bis-Tris propano pH 5,5. Os polipéptidos foram eluidos com um gradiente linear de NaCl 0-1,5 M no sistema de tampão acima, a um caudal de 10 mL/minuto. Monitorizou-se o eluente da coluna a um comprimento de onda de 214 nm.

As fracções que eluiram da coluna de permuta iónica foram reunidas e submetidas a cromatografia de fase reversa utilizando uma coluna Poros R2 de 4,6 χ 100 mm (Perseptive Biosystems). Os polipéptidos foram eluidos da coluna com um gradiente linear de acetonitrilo de 0-100% (0,1% de TFA) a um caudal de 5 mL/minuto.

Monitorizou-se o eluente a 214 nm.

As fracções contendo os polipéptidos eluidos foram liof ilizadas, ressuspensas em 80 uL de 0,1% de TFA aquoso e adicionalmente submetidas a cromatografia de fase reversa numa coluna Vydac C4 de 4,6 χ 150 mm (Western Analytical, Temecula, CA), com um gradiente linear de acetonitrilo de 0-100% (0,1% de TFA), a um caudal de 2 mL/minuto. Monitorizou-se o eluente a 214 nm. 33 A fracção com actividade biológica foi separada num pico principal mais outros componentes menores. A transferência de Western deste pico numa membrana de PVDF revelou três bandas principais de pesos moleculares de 14 kD, 20 kD e 26 kD. Determinou-se que estes polipéptidos têm as seguintes sequências N-terminais, respectivamente: (j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser; (SEQ ID N°. 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp; (SEQ ID N°. 135) e (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly; (SEQ ID N°. 136) em que Xaa pode ser qualquer aminoácido.

Utilizando os ensaios descritos acima, foi mostrado que estes polipéptidos induzem proliferação e produção de IFN-γ em preparações de PBMC. As Figs. IA e B mostram os resultados desses ensaios utilizando preparações de PBMC de um primeiro e de um segundo dador, respectivamente.

Obtiveram-se as sequências de ADN codificando os antigénios designados (a) , (c) e (g) acima por rastreio de uma biblioteca genómica de M. tuberculosis utilizando oligonucleótidos degenerados marcados na extremidade com 32P correspondentes à sequência N-terminal e contendo codões preferenciais de M. tuberculosis. O rastreio efectuado utilizando uma sonda correspondente ao antigénio (a) acima, identificou um clone com a sequência proporcionada em SEQ ID N°. 101. O polipéptido codificado pela SEQ ID N°. 101 é proporcionado em SEQ ID N°. 102. O rastreio efectuado utilizando uma sonda correspondente ao antigénio (g) acima, identificou um clone com a sequência proporcionada em SEQ ID N°. 52. O polipéptido codificado pela 34 SEQ ID N°. 52 é proporcionado em SEQ ID N°. 53. O rastreio efectuado com uma sonda correspondente ao antigénio (c) , identificou um clone com a sequência proporcionada em SEQ ID N°: 25.

Compararam-se as sequências de aminoácidos acima com sequências de aminoácidos conhecidas do banco de genes utilizando o sistema DNA STAR. A base de dados pesquisada contém cerca de 173000 proteínas e é uma combinação das bases de dados Swiss e PIR conjuntamente com sequências de proteínas traduzidas (Versão 87) . Não se detectaram homologias significativas de sequências de aminoácidos para os antigénios (a)-(g) e (1).

Verificou-se que a sequência de aminoácidos para o antigénio (j) é homóloga a uma proteína conhecida de M. tuberculosis traduzida de uma sequência de ADN. Tanto quanto é do conhecimento dos requerentes, não foi previamente mostrado que esta proteína possui actividade estimuladora de células T. Verificou-se que a sequência de aminoácidos para o antigénio (k) está relacionada com uma sequência de M. leprae.

Nos ensaios de proliferação e IFN-γ descritos acima, utilizando três dadores positivos para PPD, os resultados para antigénios representativos, proporcionados acima, são apresentados na Tabela 1: TABELA 1 RESULTADOS DOS ENSAIOS DE PROLIFERAÇÃO DE PBMC E IFN-γ Sequência Proliferação IFN-γ (a) + - (c) + + + + + + (g) + + + + + + 35

Na Tabela 1, as respostas que originaram um índice de estimulação (SI) entre 2 e 4 (em comparação com células cultivadas apenas em meio) receberam a pontuação +, um SI de 4-8 ou 2-4 a uma concentração de 1 ug ou inferior, recebeu a pontuação ++ e um SI superior a 8 recebeu a pontuação +++. Verificou-se que o antigénio da sequência (i) teve um SI elevado (+++) para um dador e SI mais baixo (++ e +) para os outros dois dadores em ambos os ensaios de proliferação e IFN-γ. Estes resultados indicam que estes antigénios são capazes de induzir proliferação e/ou produção de interferão-γ. EXEMPLO 2

UTILIZAÇÃO DE SOROS DE DOENTES PARA ISOLAR ANTIGÉNIOS DE M. TUBÉRCULOSIS

Este exemplo ilustra o isolamento de antigénios de lisado de M. tuberculosis por rastreio com soro de indivíduos infectados com M. tuberculosis.

Adicionou-se H37Ra de M. tuberculosis desidratado (Difco Laboratories) a uma solução de 2% de NP40, tendo sido alternadamente homogeneizada e sonicada três vezes. Centrifugou-se a suspensão resultante a 13 000 rpm em tubos de microcentrifugação e fez-se passar o sobrenadante por um filtro de seringa de 0,2 mícron. Ligou-se o filtrado a esférulas de DEAE Macro Prep (BioRad, Hercules, CA). As esférulas foram extensamente lavadas com 20 mM de Tris pH 7,5 e as proteínas ligadas eluíram com 1 M de NaCl. O eluato de 1 M de NaCl foi dialisado de um dia para o outro contra 10 mM de Tris, pH 7,5.

Tratou-se a solução dialisada com DNase e RNase a 0,05 mg/mL 36 durante 30 minutos à temperatura ambiente e depois com a-D-manosidase, 0,5 U/mg a pH 4,5 durante 3-4 horas à temperatura ambiente. Depois de regressar a pH 7,5, o material foi fraccionado através de FPLC numa coluna Bio Scale-Q-20 (BioRad). As fracções foram combinadas em nove agrupamentos, foram concentradas num Centriprep 10 (Amicon, Beverley, MA) e depois rastreadas, por transferência de Western, quanto à actividade sorológica utilizando um agrupamento de soros de doentes infectados com M. tuberculosis que não era imunologicamente reactivo com outros antigénios da presente invenção. A fracção mais reactiva foi processada em SDS-PAGE e transferida para PVDF. Cortou-se uma banda aproximadamente a 85 kD, que originou a sequência: (m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEQ ID N°. 137) em que Xaa pode ser qualquer aminoácido. A comparação desta sequência com as do banco de genes descrito acima não revelou homologias significativas com sequências conhecidas. EXEMPLO 3

PREPARAÇÃO DE SEQUÊNCIAS DE ADN CODIFICANDO ANTIGÉNIOS DE M. TUBERCULOSIS

Este exemplo ilustra a preparação de sequências de ADN codificando antigénios de M. tuberculosis por rastreio de uma biblioteca de expressão de M. tuberculosis com soros obtidos de 37 doentes infectados com M. tuberculosis ou com anti-soros produzidos contra antigénios solúveis de M. tuberculosis.

A. PREPARAÇÃO DE ANTIGÉNIOS SOLÚVEIS DE M. TUBERCULOSIS UTILIZANDO ANTI-SOROS DE COELHO

Isolou-se ADN genómico da estirpe H37Ra de M. tuberculosis. O ADN foi cisalhado aleatoriamente e utilizado para construir uma biblioteca de expressão utilizando o sistema de expressão Lambda ZAP (Stratagene, La Jolla, CA) . Geraram-se anti-soros de coelho contra proteínas secretoras das estirpes de M. tuberculosis H37Ra, H37Rv e Erdman por imunização de um coelho com sobrenadante concentrado das culturas de M. tuberculosis. Especificamente, o coelho foi primeiramente imunizado subcutaneamente com 200 ug de antigénio proteico num volume total de 2 mL contendo 10 ug de dipéptido muramilo (Calbiochem, La Jolla, CA) e 1 mL de adjuvante de Freund incompleto. Quatro semanas depois, o coelho recebeu uma administração subcutânea de reforço de 100 ug de antigénio em adjuvante de Freund incompleto. Por fim, o coelho foi imunizado intravenosamente quatro semanas mais tarde com 50 ug de antigénio proteico. Utilizaram-se os anti-soros para rastrear a biblioteca de expressão como descrito em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Purificaram-se as placas bacteriofágicas que expressaram antigénios imunologicamente reactivos. Recolheu-se o fagemideo das placas e deduziram-se as sequências de nucleótidos dos clones de M. tuberculosis.

Purificaram-se trinta e dois clones. Destes, 25 representam sequências que não foram previamente identificadas em M. tuberculosis de humano. Os antigénios recombinantes foram 38 expressos e os antigénios purificados foram utilizados na análise imunológica descrita no Exemplo 1. As proteínas foram induzidas com IPTG e purificadas por eluição em gel, como descrito em Skeiky et al.r J. Exp. Med. 181: 1527-1537, 1995. As sequências representativas de moléculas de ADN identificadas neste rastreio são proprcionadas e SEQ ID Nos. : 1-25. As correspondentes sequências de aminoácidos previstas são mostradas em SEQ ID Nos. 63-87.

Por comparação destas sequências com sequências conhecidas do banco de genes utilizando as bases de dados descritas acima, verificou-se que os clones aqui referidos daqui em diante como TbRA2A, TbRAl 6, TbRAl8 e TbRA29 (SEQ ID Nos. 76, 68, 70, 75) mostram alguma homologia com sequências previamente identificadas em Mycobacterium leprae, mas não em M. tuberculosis. TbRA 11, TbRA2 6, TbRA28 e TbDPEP (SEQ ID Nos. : 65, 73, 74, 53) foram previamente identificados em M. tuberculosis. Não se encontraram homologias significativas para TbRAl, TbRA3, TbRA4, TbRA9, TbRAl0, TbRAl3, TbRAl7, TbRal9, TbRA2 9, TbRA32, TbRA36 e os clones com sobreposição TbRA35 e TbRA12 (SEQ ID Nos. 63, 77, 81, 82, 64, 67, 69, 71, 75, 78, 80, 79, 66). O clone TbRa24 tem sobreposição com o clone TbRa29.

Os resultados dos ensaios de proliferação de PBMC e interferão-γ realizados em antigénios recombinantes representativos, e utilizando preparações de células T de vários doentes diferentes imunes a M. tuberculosis, são apresentados nas Tabelas 2 e 3, respectivamente. 39 TABELA 2

RESULTADOS DA PROLIFERAÇÃO DE PBMC PARA ANTIGENIOS SOLÚVEIS REPRESENTATIVOS

Antigénio Doente 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 TbRal - - ± + + - - ± ± - - + ± - TbRa3 - ± + + - ± - - + + ± - - - - TbRa9 - - nt nt + + + + nt nt nt nt nt nt nt TbRal0 - - ± ± ± + nt ± - + ± ± - TbRal1 ± ± + + + + + + nt - + + + + + + ± nt TbRal2 - - + + ± + + + ± ± - + - - TbRal6 nt nt nt nt - + nt nt nt nt nt nt nt TbRa24 nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt TbRa2 6 - + nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt TbRa2 9 nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt TbRa35 + + nt + + + + + + + + nt + + + + + + + + + + nt TbRaB nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt TbRaC nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt TbRaD nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt AAMK - - ± - - - nt - - - nt ± nt YY - - - - - - nt - - - nt + nt DPEP - + - + + - - nt + + ± + ± ± nt Controlo nt = não testado 40 TABELA 3

Antigénio Doente 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 TbRall + ++ +++ + - ± - - + ± — TbRa3 - ± ++ - ± - - ++ ± — - — — TbRa9 + + + nt nt + + - nt nt nt nt nt nt nt TbRalO + + + + + + nt + - + + + - TbRall ± + + + + + + nt - + + + + + + ± nt TbRal2 - - + + ± + + + + ± ± - + - — TbRal6 nt nt nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt TbRa24 nt nt nt nt + - nt nt nt nt nt nt nt TbRa2 6 + + + + nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt TbRa2 9 nt nt nt nt + - nt nt nt nt nt nt nt TbRa35 + + nt + + ++ +++ +++ nt ++ ++ +++ +++ ++ nt TbRaB nt nt nt nt ++ + nt nt nt nt nt nt nt TbRaC nt nt nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt TbRaD nt nt nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt AAMK - — ± - - - nt - — — nt ± nt YY - — - - - - nt - — — nt + nt DPEP + + + +++ + - nt +++ ± + ± ± nt Controlo nt = não testado

RESULTADOS DA PRODUÇÃO DE INTERFERÃO-γ POR PBMC PARA ANTIGENIOS SOLÚVEIS REPRESENTATIVOS

Nas Tabelas 2 e 3, as respostas que originaram um indice de estimulação (SI) entre 1,2 e 2 (em comparação com células cultivadas apenas em meio) receberam a pontuação ±, um SI de 2-4 recebeu a pontuação + , um SI de 4-8 ou 2-4 à concentração de 1 ug ou inferior recebeu a pontuação ++ e um SI superior a 8 recebeu a pontuação +++. Adicionalmente, mostra- -se na Figura em 41 anexo o efeito da concentração sobre a proliferação e produção de interferão-γ para dois dos antigénios acima. Tanto para a proliferação como produção de interferão-γ, o TbRa3 recebeu a pontuação ++ e o TbRa9 +.

Estes resultados indicam que estes antigénios solúveis podem induzir a proliferação e/ou produção de interferão-γ em células T derivadas de um indivíduo imune a M. tuberculosis.

B. UTILIZAÇÃO DE SOROS DE DOENTES PARA IDENTIFICAR SEQUÊNCIAS DE ADN CODIFICANDO ANTIGÉNIOS DE M. TUBERCULOSIS A biblioteca de ADN genómico descrita acima e uma biblioteca adicional de H37Rv foram rastreadas utilizando agrupamentos de soros obtidos de doentes com tuberculose activa. Para preparar a biblioteca de H37Rv, foi isolado ADN genómico da estirpe H37Rv de M. tuberculosis, submetido a digestão parcial com Sau3A e utilizado para construir uma biblioteca de expressão utilizando o sistema de expressão Lambda Zap (Stratagene, La Jolla, Ca). No rastreio de expressão utilizaram-se três agrupamentos diferentes de soros, cada uma contendo soros obtidos de três indivíduos com doença pulmonar ou pleural activa. Os agrupamentos foram designados TbL, TbM e TbH, com referência à reactividade relativa com o lisado de H37Ra (í. e., TbL = baixa reactividade, TbM = reactividade média e TbH = reactividade elevada) tanto nos formatos de ELISA como imunotransferência. Também se empregou um quarto agrupamento de soros de sete doentes com tuberculose pulmonar activa. Nenhum dos soros exibiu reactividade acrescida com a proteína recombinante de ligação a fosfato de H37Ra de 38 kD de M. tuberculosis.

Todos os agrupamentos foram pré-adsorvidos com lisado de 42 E. coli e foram utilizados para rastrear as bibliotecas de expressão de H37Ra e H37Rv, como descrito em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Purificaram-se as placas bacteriofágicas que expressaram antigénios imunologicamente reactivos. Recolheu-se o fagemideo das placas e deduziram-se as sequências de nucleótidos dos clones de M. tuberculosis.

Purificaram-se trinta e dois clones. Destes, 31 representaram sequências que não tinham sido previamente identificadas em M. tuberculosis de humano. As sequências representativas das moléculas de ADN identificadas são proporcionadas em SEQ ID Nos. : 26-51 e 105. Destas, TbH-8 e

TbH-8-2 (SEQ ID N°. 105) são sequências de ADN não contiguas do mesmo clone, e TbH-4 (SEQ ID N°. 43) e TbH-4-FWD (SEQ ID N°. 44) são sequências não contiguas do mesmo clone. As sequências de aminoácidos para os antigénios daqui em diante identificados como Tb38-1, TbH-4, TbH-8, TbH-9 e TbH-12 são mostradas em SEQ ID Nos.: 88-92. A comparação destas sequências com sequências conhecidas do banco de genes utilizando as bases de dados identificadas acima não revelou homologias significativas com TbH-4, TbH-8, TbH-9 e TbM-3, apesar de se terem encontrado homologias fracas com TbH-9. Verificou-se que o TbH-12 é homólogo a uma proteina antigénica de 34 kD previamente identificada em M. paratuberculosis (N° de Acesso S28515). Verificou-se que o Tb38-1 está localizado 34 pares de bases a montante da grelha de leitura aberta para o antigénio ESAT-6, previamente identificado em M. bovis (N° de Acesso U34848) e em M. tuberculosis (Sorensen et al., Infec. Immun. 63: 1710-1717, 1995) .

Utilizaram-se sondas derivadas de Tb38-1 e TbH-9, ambas 43 isolados de uma biblioteca de H37Ra, para identificar clones numa biblioteca de H37Rv. 0 Tb38-1 hibridou com Tb38-1F2, Tb38-1F3, Tb38-1F5 e Tb38-1F6 (SEQ ID Nos. 112, 113, 116, 118 e 119). (As SEQ ID Nos. 112 e 113 são sequências não contíguas do clone Tb38-1F2.) Deduziram-se duas grelhas de leitura aberta em Tb38-1F2; uma corresponde a Tb37FL (SEQ ID N°. 114), a segunda, uma sequência parcial, pode ser a homóloga de Tb38-1 e é denominada Tb38-IN (SEQ ID N°. 115). A sequência de aminoácidos deduzida de Tb38-1F3 está apresentada na ID. SEQ. N°. 117. Uma sonda de TbH-9 identificou três clones na biblioteca de H37Rv: TbH-9-FL (SEQ ID N° . 106), que pode ser o homólogo de TbH-9 (R37Ra) , TbH-9-1 (SEQ ID N° . 108) e TbH-9-4 (SEQ ID N°. 110), todas as quais são sequências altamente relacionadas com TbH-9. As sequências de aminoácidos deduzidas para estes três clones são apresentadas em SEQ ID Nos. 107, 109 e 111.

Os resultados dos ensaios de células T realizados em Tb38-1, ESAT-6 e outros antigénios recombinantes representativos são apresentados nas Tabelas 4A, B e 5, respectivamente, abaixo:

TABELA 4A RESULTADOS DA PROLIFERAÇÃO DE PBMC PARA ANTIGÉNIOS REPRESENTATIVOS Antigénio Dador 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Tb38.1 +++ + - — — ++ — + — ++ +++ ESAT-6 +++ + + + — + — + + ++ +++ TbH-9 ++ ++ — ++ ± ± ++ ++ ++ ++ ++ 44

TABELA 4B RESULTADOS DA PRODUÇÃO DE INTERFERÃO-γ POR PBMC PARA ANTIGÉNIOS REPRESENTATIVOS Antigénio Dador 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Tb38.1 + + + + - + + + + + - + + - + + + +++ ESAT-6 + + + + + + + - + - + + + + + +++ TbH-9 + + + + - + + + ± ± + + + + + + + + + + + ++ TABELA 5 SUMÁRIO DAS RESPOSTAS DE CÉLULAS T PARA ANTIGÉNIOS REPRESENTATIVOS Antigénio Proliferação Interferão -Y Total Doente Doente Doente Doente Doente Doente 4 5 6 4 5 6 TbH9 ++ ++ ++ +++ ++ ++ 13 TbM7 - + - ++ + — 4 TbH5 - + + ++ ++ ++ 8 TbL23 - + ± ++ ++ + 7,5 TbH4 - ++ ± ++ ++ ± 7 Controlo — — — — — — 0

Estes resultados indicam que tanto os antigénios inventivos de M. tuberculosis como ESAT-6 podem induzir proliferação e/ou produção de interferão-γ em células T derivadas de um indivíduo imune a M. tuberculosis. Tanto quanto é do conhecimento dos requerentes, não foi previamente mostrado que o ESAT-6 estimula respostas imunológicas humanas. 45

Foi construído um conjunto de seis péptidos com sobreposição abrangendo a sequência de aminoácidos do antigénio Tb38-1 utilizando o método descrito no Exemplo 4. As sequências destes péptidos, daqui em diante referidos como pepl-6, são proporcionadas em SEQ ID Nos. 93-98, respectivamente. Os resultados de ensaios de células T utilizando estes péptidos são mostrados nas Tabelas 6 e 7. Estes resultados confirmam a existência e ajudam a localizar epitopos de células T em Tb38-1 capazes de induzir proliferação e produção de interferão-γ em células T derivadas de um indivíduo imune a M. tuberculosis. TABELA 6 RESULTADOS DA PROLIFERAÇÃO DE PBMC PARA ANTIGENIOS TB38-1

Antigénio Doente 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 pepl - - - ± - — — — ± — — + pep2 ± - - - ± - - - ± ± — — + pep3 - - - - - - — — ± — — — ± pep4 + + - - - - - + — — ± — — + pep5 + + ± - - - - + — ± — — — + pep6 - + + - - - - ± — ± + — — + Controlo 46 TABELA 7

Antigénio Doente 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 pepl + — - ± - - - - ± — — + pep2 - - ± - - - ± ± — — + pep3 - - - - - - - - ± — — — ± pep4 ++ - - - - - + - + ± — — ± pep5 ++ ± - - - - + - ± — — — + pep6 + ++ - - - - ± - ± + — — + Controlo RESULTADOS DA PRODUÇÃO DE INTERFERÃO-γ POR PBMC PARA ANTIGENIOS DE TB38-1 EXEMPLO 4

PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE UM POLIPÉPTIDO A PARTIR

DO DERIVADO PROTEICO PURIFICADO DA TUBERCULINA

Isolou-se, do modo seguinte, um polipéptido de M. tuberculosis a partir do derivado proteico purificado (PPD) da tuberculina.

Preparou-se PPD como publicado, com algumas modificações (Seibert, F. et al., Tuberculin purified protein derivative. Preparation and analyses of a large quantity for Standard. The American Review of Tuberculosis 44: 9-25, 1941). A estirpe Rv de M. tuberculosis cultivou- se durante 6 semanas em meio sintético em garrafas rotativas a 37 °C. As garrafas contendo o crescimento bacteriano foram depois aquecidas até 100 °C em vapor de água durante 3 horas. As 47 culturas foram filtradas por esterilização utilizando um filtro de 0,22 u e a fase liquida foi concentrada 20 vezes utilizando uma membrana de limite de 3 kD. As proteínas foram precipitadas uma vez com solução a 50% de sulfato de amónio e oito vezes com solução a 25% de sulfato de amónio. As proteínas resultantes (PPD) foram fraccionadas por cromatografia líquida de fase reversa (RP-HPLC) utilizando uma coluna C18 (7,8 χ 300 mM; Waters, Milford, MA) num sistema de HPLC Biocad (Perseptive Biosystems, Framingham, MA). As fracções foram eluídas da coluna com um gradiente linear de 0-100% de tampão (0,1% de TFA em acetonitrilo) . O caudal foi de 10 mL/minuto e o eluente foi monitorizado a 214 nn e 280 nn.

Recolheram-se seis fracções, que foram secas, suspensas em PBS e testadas individualmente em porquinhos-da-índia infectados com M. tuberculosis quanto à indução da reacção de hipersensibilidade do tipo retardado (DTH). Verificou-se que uma fracção induz uma reacção de DTH forte, tendo sido subsequentemente ainda fraccionada por RP-HPLC numa coluna C18 Vydac microbore (N° de Catálogo 218TP5115) num dispositivo de HPLC Modelo 172 da Perkin Elmer/Applied Biosystems Division. As fracções foram eluídas com um gradiente linear de 5-100% de tampão (0,05% de TFA em acetonitrilo), com um caudal de 80 ul/minuto. Monitorizou-se o eluente a 215 nm. Recolheram-se oito fracções, que foram testadas quanto à indução de DTH em porquinhos-da-índia infectados com M. tuberculosis. Verificou-se que uma fracção induz DTH forte com endurecimento de cerca de 16 mm. As outras fracções não induziram DTH detectável. Submeteu-se a fracção positiva a electroforese em gel de SDS-PAGE e verificou-se que continha uma única banda proteica com peso molecular de aproximadamente 12 kD.

Este polipéptido, daqui em diante referido como DPPD, foi sequenciado a partir do terminal amino utilizando um 48 sequenciador de proteínas Procise 492 da Perkin Elmer/Applied Biosystems Division como descrito acima e verificou-se ter a sequência N-terminal mostrada em SEQ ID N°. : 129. A comparação desta sequência com sequências conhecidas do banco de genes descrito acima não revelou homologias conhecidas. Isolaram-se quatro fragmentos de brometo de cianogénio do DPPD, tendo-se verificado terem as sequências mostradas em SEQ ID Nos. : 130-133.

Avaliou-se a capacidade do antigénio DPPD para estimular PBMC humanas a proliferarem e a produzirem IFN-γ como descrito no Exemplo 1. Como mostrado na Tabela 8, verificou-se que o DPPD estimula a proliferação e induz a produção de grandes quantidades de IFN-γ; mais do que a induzida por PPD comercial. TABELA 8 RESULTADOS DOS ENSAIOS DE PROLIFERAÇÃO E INTERFERÃO-γ PARA DPPD Dador de PBMC Estimulador Proliferação (CPM) IFN-γ (OD450 ) A Médio 1,089 0, 17 PPD (comercial) 8,394 1,29 DPPD 13,451 2,21 B Médio 450 0, 09 PPD (comercial) 3, 929 1,26 DPPD 6, 184 1,49 C Médio 541 0,111 PPD (comercial) 8, 907 0,76 DPPD 23,024 >2,70 49 EXEMPLO 5

SÍNTESE DE POLIPÉPTIDOS SINTÉTICOS

Podem sintetizar-se polipéptidos num sintetizador de péptidos Millipore 9050 utilizando química de FMOC com activação por HPTU (Hexafluorofosfato de O-benzotriazolo-N,N,Ν',Ν'-tetrametilurónio) . Pode ligar-se uma sequência Gly-Cys-Gly ao terminal amino do péptido para proporcionar um método de conjugação ou marcação do péptido. A clivagem dos péptidos do suporte sólido pode ser realizada utilizando a seguinte mistura de clivagem: ácido trifluoroacético:etanoditioltioanisole: águarfenol (40:1:2:2:3). Após clivagem durante 2 horas, os péptidos podem ser precipitados em éter t-butilmetílico frio. Os grânulos peptídicos podem ser depois dissolvidos em água contendo 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) e liofilizados antes da purificação por HPLC de fase reversa em C18. Para eluir os péptidos pode utilizar-se um gradiente de 0%-60% de acetonitrilo (contendo 0,1% de TFA) em água (contendo 0,1% de TFA) . Após liofilização das fracções puras, os péptidos podem ser caracterizados utilizando espectrometria de massa com electrospray e por análise de aminoácidos. LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS (1) INFORMAÇÕES GERAIS: (i) REQUERENTE: Corixa Corporation

(ii) TÍTULO DA INVENÇÃO: COMPOSTOS E MÉTODOS PARA IMUNOTERAPIA E DIAGNÓSTICO DE TUBERCULOSE (iii) NÚMERO DE SEQUÊNCIAS: 117 50 (iv) ENDEREÇO PARA CORRESPONDÊNCIA:

(A) DESTINATÁRIO: SEED and BERRY LLP (B) RUA: 6300 Columbia Center, 701 Fifth Avenue (C) CIDADE: Seattle (D) ESTADO: Washington

(E) PAÍS: EUA (F) CÓDIGO POSTAL: 98104-7092 (v) FORMA DE LEITURA POR COMPUTADOR: (A) TIPO DE MEIO: Disquete

(B) COMPUTADOR: PC compatível com IBM

(C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Tiragem #1.0, versão #1.30 (vi) DADOS DO PRESENTE PEDIDO: (A) NÚMERO DO PEDIDO: (B) DATA DE APRESENTAÇÃO: 27-AGOSTO-1996 (C) CLASSIFICAÇÃO: (viii) INFORMAÇÃO DO MANDATÁRIO/AGENTE: (A) NOME: Maki, David J. (B) NÚMERO DO REGISTO: 31392

(C) REFERÊNCIA/NÚMERO DE REGISTO: 210121.411PC (ix) INFORMAÇÕES DE TELECOMUNICAÇÕES: (A) TELEFONE: (206) 622-4900 (B) TELEFAX: (206) 682-6031 51 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 1: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 766 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 1: CSffiGCACCG GTífiTTTSAA CCAAACSCAC AAICGACSSS CAMCGAAGS GmMMÂ 60 ACCATGAASA TGGTGMATC GATCQCCGCA GGTCTGACCG CCEOSGCTflC MTCÊáCGCC 12« GCTGCSGCCS gtgtcacttc gatcatgsct gscgscccgs toetâiacca satscagccg 16« ................... SBCSgttfCr GCCGITM CCGSCÃIÇCG CCCPSCÊT CCGSCOSCC 240 scccastísa ccaêcctect cmcascctc bccgaiccca acstgtostt mmcrn 300 ÊSCAGÍTCTÊS TCGASOSCGS CATCGGSQSC ACCGASSCGC 6CATC6CC6A CCftCA«CT6 360 AASAAfâGCCG CC6AGCACGG GGATCTGCOG CTGTCGTtCA 6CGTGACGM GAtCCAGCCG 420 GC8GCCGCCG GTTCGGCO£ OOTftCGTT TCCSTCTCfíS GICCSAAGCT CTCSTCGCOS 480 GLCACGCAGA ΜΏΐΑΟΠΤ CGIEàMCM fiQCGBCTQBA TGCTSTCAC6 CGCATCSBC6 S40 ATGGíGTOC TGCAGGCCfíC ASSSHAACTS ATlGfiCGGQC CÈGmCAGC CCGPGTTCA 600 GCTACGCCGt CCÊCCXGGTG ACGCGTCCAT GTCGACACt CâQKSlBTA GCACGGTSCG 660 SINTOCAG «GCAC6C ACCGCÒÇfifiT GÇAAGCCGTC OWÂTA6 STÇGTSCTC m

StCAtXftafô MCNXCQCN MMTOGMCIÍRT tCTCGOTT GNATGA 766 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 2: (A) COMPRIMENTO: 752 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples 52 (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:2: ATGCATCACC ATCACCftTCA CGATOMGTC ACGGTÀGASA CGACCmST CTTCCGCGCA m mmantA mmm cgctç§|£:§.....g^scâGerA^asAGAscãc ggtctccqsg 120 GTQâAAGÇ&C TCCCGCCGGG CTCGGCGpG GTGGTMTGA AACGtâGCCC CMCGCCS3S ISO»

Tcaeerrcc tacicgacca MMmm tcggctggtc ggcatcto casogacata < 240 ITItTCÊACG ACGTGACCGT CAOCCGTOGC CATGCTGAAT TCCSST1SSA AAACAACfiAA 300 TTCAATSTC6 Tcmiras rníazM m^mm tcmccgcga gcccctêgat 350 TCSSCGGTGC TBQCGAAC6S CGACGASÊTC CASATCGGCA ASCTCCGGTT QSTGTTÇTTG 420 accggaccca mmmm ssaigacom agtaccgsgg síccgigasc gccccgata m GCCCCGC6CT SSCCGSGATS TCGATCSSGS CGGTCCTCCG ACCT&CTAOG ACCSGATUT 540 ccctsatgtc caccatctcc mgattceat larsoGAse ctteàs^tc ngmaccc ooo CCCCGCGGGC CTCATTCMBS GGlWfCSSCN GGTITCACCC CNTACÍRCT fiCCttCOCâQN 660 TTGCfíAATTc nttcttcnct occcmtm mmmim cnsasciM m TCGííGSGCCC HTCOTAAN CCCCNTCCOC CT 752 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 3: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 813 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:3: 53 CATATGCAIC ACCATCm TCACACTTCT AACC5CM CSCGTCGGeG GCÊTCGAGCA 60

CCACSC$ACA CCGSSCCCGA TCfiAlCTGCT ACTTQAETC TSSTCAGGCA TCGTCSTCAG 12Q gagcgcgatg cccrATsmr fiTcsrcGACT cmatatcgc ggcaatccaa tctcccgcct m 8CSGCCGGCG GTGC IGOM ÇMrrtCCSG AGGAATTTCG ACGTBCGCAT CAA&ATCTTC 240 AIECTGGTCA 03GCTETCGT TTTf5fTCTGT TSTTCG&3TG: TGGCCACGGC CGCSCCCAAS 300 acctaciIÍ.....cstsccagat immm m SK.....ACCCCSACCA GMGTCSCTG 420 á|||ff|n cgsocacatc gtccãctcca 480 CSSÍIIcC.....®ÍÍMff:: GMTTOCC TCSGCCACAT ACCAGICCGC GATÃCQGCGe 540 CSTCSTACGC ÁSGCC6TSST GCrCAMSGTC TACCACMCG CCGGCffiCAC GCACCCAACG 600 ACCACGTACA AGGCCTTCSA TTGGGACCAG SXTATCGCA AGCCMTCAC CTATGACACG 660 CTGTSfiCAÊG CTGACACCGA TCCGCTGCCA GTOSTCTTCC CCATTGTTGC AASGIGAACT 720 GAGCAACGCA GACCG6&CA ACHQGTATCG ÂTAfiCCGCCH AATGCC6GCT TGGAACCCfS 780 TGAMTTÂTC AÇAACTTO AGTCACN.AAA HU 813 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 4: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 447 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:4: 54 CGGTATSAAC ACGGCCGCST {®GAIAftCTT CCAGOTK CASSST5S6C ASSGATKGC 60 CATTCCSATCJSSCASSCSA TS3CSATE6C ÊSSCCWC CSATCSGOTS GGGGGTCACC 120 cAçcGrrtb#: AlfcxTA ccgccttcct csgcttgggt gjtogaca acaacsscm ião CGGCSCACGA GTCÍMCGCG TGGTCGGGAS CSCTCCGGCS 6£AASICTC6 GCATCTCCAC 240 CGSCGACGTS ATCÂCCGCGS TCSACGGCSC TCCGATCMC TCGKCACCG CGATSeCGGA m CGCGCTTMC GSSCATCATC ÇGGGTGACGT CATCTCGGTG MCTCGCMA CCAA5TCGSS 360 CGGDWKST ACAGSSAAOS TBACATTSGC CSABSS&CCC ÓCSSCCIBAT TTCS7C6VS5 420 ATACCACCCG COaSCCSSCC MTTCÊA 447 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 5: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 604 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:5: GICCCACTGC GGTCSCCGAS TAT8TCGCCC AGCAMTGTC TGSCAKCGC CCMCGfiAAT 60 CC66TGATCC ÊACGTCfiCAG GPTfGTC6MC CCSCCSCCGC GGAAGTATCQ GTCCATGCCT 120 agcccgscsa cmmmc cssmtsgcs cgagusaosa $k&sgcaat ttggcggggc m CCGSCGAC6S: «GASCSCCGG MTGGCQC6A gWOGtòGT ÊEHWGTtAT GCCCAGHGTG 240 ATCCAATCAA CCTGNATTCG GlOGNMI CCATTTSACA ATOGAfiSTAG T&A3CGCMA. 300 TGAATGATGG MAACSta GNGACSTCCâ HTGTTCTGGT GfiTBNTAGQT GIOGNCTSS 360 55 mmmrr atcassatst tcttcbncsa Mm&m tmmrn cstgtkcccg 420 mmmmmMmm ccmntcc tcgncganat cmmm mimmm 4βο maáásqsts &ncagnnnn awtng&ggn ccnaamaanc mmmm μμονώιβιτ 540 NNMi¥rm«c A*«oweíTG Man» nocmiicmí nimiihgnm efprr 6õd KAAT 604 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 6: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 633 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:6: ttgcangtcg aaccacctca ctaaagqeaa zrnmm asctccaccg cbgtsscssc 60 ostrrcTAijiftA™^ ímmnm gwcgascat taggaoctc ' 120 TMOSSTCCT GftACGSm TCGAATGACC GACGAtATCC TGCTSATCGA CACCGACGAA 180 csggtgcoaa ccctçaccct mmcm ctemm* acccgctctc mtmmk zm CGGGATOT TTTKHHsY GTTG8YCGAC GCCGAQSYCG ACSAOGAÇAt OSADSTCGtp _ 300 ÃTCCTOCCS CYGCCGATCC SGTBTTCTGC SCCGGACTGG ACCTCAAG6T ÀGCTQGCCGS 360 GCABACCGCG CmcCGGACA TCTCACCGCS GTGGGCGSCC ATGACWJSC CGSTSAICGG 420 CÊCSÃTCAAC C£OSCCG0GS TCACCSSCGG GCTÍGMCTS GCGCTGTACT GCGACATÇCT 480

SATOCCTCC GASCACGCCC GCTFCSNCSA CACCCACSCC CGGGTS&GC TGCTGCGGAC S4D CTGQSGACTC AGTGTGTGCT T6CCSCAAAA SSTCSGCATC GSSOSSSCC GSÍSGATGAG m CCTBACQGSC GACTACCTGr:gOC0ÍW£6A CSC 633 56 CSACifòGAC SGCGCCfôAQ çgscaccacc Cfirnmm CCCCSCCGAG CCGSCSGCGC GCGácírTm mmmff GCCGCCGCCG ICaCÔStCM C7STACGCGG CAG8CCAAAC SCCGGTGACC CSWtócC^ toxcsscAc csirçeif E:: cactítcatcg cascam CGDSCCCAC AGOMCG IPcposgg ¢00820¾ ÍC«@SGCM CAGOGÍCCGA pCACCSCGC CeCÂCCfCC isscacêgcs agccaatbcg

«TGÊnfôGC CâACACCQCC GTATGTGQCG GGATQTrCGCC COSSTGCT6 CCGCGC03GT tMmcm GCCCATASCA GOCAccacT (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 7: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1362 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:7: .ASCÊGGCGCG MCSGCGATC GACGCSGCCC ÍÔÈCCASAST TCÊAATCATG ΑΜΤΓΠίΓΟΑ ACCATATTGA GffiffiTCGCB GSTCGCCGftG {sTOATGCCG ASGCCCfiCCS OmGTTCSQC Otrecnncc CCGGACGAGG GADTGtTtAC 'CGOCÊSCIGê

CAGGTfíCOeC ÔTSSCCCOA GSAAKCGTC ÇCCTGSTStG TCGAC6CACA «CCACCAIG gcgscgatct imcmm ascaccigcc jmásCAé bmcosggac accggcggsa.

GCCGAATACC TCQQCACCQC GUFGCMTTC CT6SAGSAM jÇCTTCCTSCC G9GGSSCCCG GGACTGGTGT TCGGCCSCAA GGTGCGCGCG CTCGASCC6C GWCGCTGCC CGACGATCTG ACCGCSTTCS CCGCQCTCtâ CCACaCCTÊ

CGTCAS5TGG TtAGÔCSSST CGTG9GGTCG

GATGAGCAGT CGC1GGACG* ACGAGCACAC çpXGASCTB 60 m 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 57

cccgccgacc tecacêcgcc cacccstctt sceoiem ccGsccTsac ammM

SF6ACC&CG ACSAGfiTCGC CGGG6CCCGA ITCCCTSCTCfi ACA0C6ATGC G6COSGTT mmcam cctggsccgc cttcaccgcc gcgcggcgca tcêgcaccts gatcgocgcc

QCCGCCSAGS GCCAGSTGTC GCSSCAAAAE CCSACTGGGT GAGTSTOC GCCCTSTCG6 TAGGGTGTCÃ TCSCTGSCCC SAfiGSftTCTC SCQSCSGCGA ACGSAGSTSG CGACACAG5T GâMGCTGCS CCCACTGGCT TGCSCCCCM CGCCGTCSTG SGCGTTCGST TGGCCGCACT rncmm ctcsscêcgg gcccttgêcg gmbgtcxag ctcmcgtgc cgtcaccgaa

aiACCGGACG CTCACOm GTtACCCTGC GGGCCGAAGG M (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 8: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1458 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:8:

GC6ACGACCC C6ATATGCCG GGCACC6TAG CGAAAGCC6T CGCCMGCA CTCSSGCGCG SIATC6CT0C CSTTSASGftC ÀWC^CT SCSTSGASGC CCGGCTGGGG SAASCCGGTC tgsatgacst bgcccgigít tacatcaict mcmm& scocgccgag ctgossacês

CTMfiGCCTT GCTCGGCGTG C^fJKAfiT TAAASCT6AE CTTGGCGSCC 6T6ACSGTAÇ TGCGCGAGOS CTATCTGCTG CACGACGASÇ «CCGGCC GEKCG&STCG ACCSGCGÂGC TGATGGACCG ATCGGCGCSC TGTGTCGCGS CSSCCGAGGA CCAGfATGAS CCSSGCTCST CGAGGCGGTG GGCCGAGCSG TTCSCCAC® TÂTTACGCAA OTGGAATTC CTGCCGAATT CGGCCACGTT GAÍGMCTCT GGCACCGACC TEESACTÊCT OGCCGGCTGT TTTGTTCTGC 960 1020 1B8Q im mm mm 1320 im 60 1¾ ISO 240 300 360 420 58 480 540

CGÃITGAÊGA TTCGCTG.CM TCGATtTÍTS C&CGCTGSÊ ACÃfiGCCfiCC 8ASCTGCÁSC 3$ρβ&1|.....PGGÇACOGGA TATSCGTTCft ôCCACCTCCG ACCCSCCÊSS 0ÂTC6SQT6S cctccacsgs csgcac^cc AsmeACCQs Tramcr mmmm

CSGGTOTT CTCCATGGSC GGTCÊCCGSC ÊMSCÇTâ W®Om CTOTOT CmCCCGGÂ TATCOSAT TTCGTCACCe CttAéSCCÊÁ. AKCCOASC SAfiPtCCGC fglpcr Air^||||::::|||KCfiACÊ precisos sgcostcgaa mmmtc

.....CfctmA AGATCSTCGC GGGGATGCCC GCCGCCGWSC

Aogae^^tcIpaa mm&tm ccggitoa tcccgêgcts GTGnrntG xmmm tagggcaaac cc^sTOS-as^esccs catcsasscs accmcceèít GCQQGQAêGT cccactgctg ccitacgagt CATGTMTCT CGGCTCSATC MCCTCGCCC GSATOCTCGC CfiAGfiMC STC&ACTGSS ACCGGCTCGA GSftBSTCSCC GGTSTGGCQS TGCSGTTCCT TGATGACGÍC ATCÊATfiTCft GCCSCTACCC CTOCCCGM CTGSGTG^G CGSCCCGCQC CACCDSCAAG ATCG6GCTSG GAGTCATGSG TTTGGCSÊAA CTGCTTSOCS CÁCMTAT TCXÍACGÂC MtmmB COTOTW AGCCACCCSG CTCATGCGTC GCATACAGCA SGC6&CGCAC ACGSCAICGC GGAGGCTGGC CjSAAâAiGCSfi GGCGCÁfTCC CGQaSTTCAE CfiATAGCCGG TfÇGCTOI ÉfiGCCCSAG GCGCMCGCA CAfiGTCACCT CCGTCGCTÇC âACfiGGCA (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 9: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 862 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:9: 600 660 720 780 840 m 960:: 102Ô 1086 1140 1200 1260 1320 1389 1440 1458 59

Kcmarm cstgctggat cissmccsc erascccficr mmcm atctactgsg êò eGÊMÊ0Q GCTfílf tfl QSCATCGCSfi TCGTCGTAGT CSGGÂTCSOG STSSCCATCG 120

TCATCfiCCTT C-STCGACAGC ASGSCCGGTG CCAAAlttfiSr CM3CGCCGAC AASCOGGCCT ISO

Wksmm ccatccgggc tcgccggcac tzmmmz ccAeccsscc gsgówccs 240 JWfiffTAACGC CuCCGCSGCC CCSCCGCASG GCDWWCC CSAGACACCC ACSCCCACCG 300 CCGCflGTSCA GCCGCCGCCG GTaCfCMGS AÂeSGGACSÂ TTGCCCOSAT TCGACGCTGS 360 CC^fCAAASG TTI^C^G iMiM" ACTAC6ÍCSS CSACCAGCCG AWTTCACCà 420

TseiffisitAC gtamcgcsa csttsgsbcc scggtghs& 4&o ccGcciAOST· jtmmm sacaacaabc GmGTGsrc zmcasm tscscgccct §40 zBmmkc mmcM ΜΜΠΜ9 ccsstíaeca &êtaacgcc gcsgtgacct êgq G&ACGfiSGAT SSGATCG6CG CMCGCfôCC CATTGCCSCS GCCGGCGATC GSGCCOGGCA 660 CCTACMTCT CG1SS7ACAA CTGGGCMTC TlKGCTCSCT GCCGGTTCCG TTCÀTOCTGá 720 ATCAÊCCeeC GCCQCCGCCC GGGCCêGIAC CCGCTOCGGS TCCAGOSP-G GGGCCÍCCGC 78Θ C6GASTCTCC eeCQCAAGSC 'GSATAATIAT TQAJCGCTGA TGGTC6ATTC CSCOGCTGT 840 GACAACCCCT CGCCTCGT6C CG 862 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 10: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 622 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:10: 60 TÍ&ATCAGCA CCSSCAAGGC GTtaCATQCe TCCCTSGGTG TGCAGSTGAC CAATMCA4A 60 GAí^CCCCaS GCGCCAAGAT CSTCGAMSTA GTGSCCGSTG GTGCTQCCSC SÃAOsaGGÃ TM etiicGAAGS fíCGTtSTTGT mmmt mmaxz miw&m mpescs ieo mamaccs ccsucsgtc owscscog qscgcgcgg tbgcgctaac crntASSftT tm CCCTC83GCG' 6TAGCCSCAC ASTQCAAfiTC ACCCTCSGCA «MCA GTGATÇAAGG 300 T03CCGCSCA QTSTTCMAG CTEGGATATA CGGTQGCACC CATG8AAGAG CGTGCGSAGT m TGGTGETTGG iCCGOGCACTT STCGTCGTCG TífiACSATCG. CAOSSCGCAC GSCGÁTGAÃS 429 ACCACABCfiS GCOSCTTSTC ACCGAGCTGC TCACCEW3QC CGGSTTTGTT GTCSNBGGCG 480 TOTQBCGST STCGSCOàAC GAÊSTCSASA ϊίΧβΛΜΤΚ GCTGMCACA SCS6TGATCC 540 GC^QGUSGA CCTGGTGGTG TCGSIC&GCG GGACCGGNST GAGGNC7CGC GÂTGTCACCC 600 CSfiMfíCCAC CCÊNSSCÍHT CT 622 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 11: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1200 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:ll: SGCGCAGCGS TAÁÊCCTGTT &CCGCGSSC ACMTTGSTGT TGACASCAT5 CGfiCOQTGGC 60 ACCAACAGCT CGICGTCAGG CGCAGBCGGA ACSTCtGGGt CGGTGtftCTG ÊSGCfíG€AA6 120

AAGGAGÇTCC ACTCOSC&G CTCfiACCGCA CAAGAAAATS CCATGG^A QTICGXCIM ISO 61 300 GCCTACGTGC GAlfôHGtCC GGGCTACACG TRsêACTjCA ACGCCAACÊG. GTCCGGTSCC SGÊGTGAÇCC AGTÍTCTCM CMCWACC GATTTOGCeG SCTDGGATST CCCSTOftAT CCGTCGÀCCS SftAACCTSA CCSGTCGGC6 GAÊCÊGTO GTTCCCCQàÇ AieSGACOS CCGACSSWr TCeecCCGAT cgcsãtcãdc taêmtatca asgscstgas cacsctbmt CmACÔSAC CCACTACCGC CAÁMTTTTC ACÊSCACCÂ TCACCGTGUS GÁAmitCA CAGATCCAÂfi CCCTCMCTC ΟΪΚΜΚΕΑΓ. CTGCCGCCAA CAÇCÊATTAG CSsJTÂTCTTC CSCAGDGACA' AfiTCQGSTAC GlCffiACAAC TTÇCAGAAAT ACCTCGACGG IGTATCCAAC SSGGCSTG3G GCAAASSCGC CAGCGAAACG TTCAGCGGSG GCGTCGGCGT CGGCGCCAGC fiSGAACÂACG GMCGTCGGC CCTACTECtó ACGACCGACG GGTOSATCAC CTACAACGAG TGfíTCSTTTft C93TOTAA GCAGTTGAAC ATSÊCCCABA TCATCACGTC GSCGGGTGCG SAlCGASTSG GGA1CACCAC CSASieGSTe GSTMGACM TCGCC^GGC CAASAItAIt* GCACAASGCA ACGACCTGGT ATTGGACACG TCGTCSITCT ACAGACCCAC CCAGCOGGC TCTTACCCGA TCGTGCTSGC GACCTAIGAG ATCGTCTGCT CGAAATACCC ^AllSCGACG ACCeGTACTG CSGTAAGSGC GITTATBCM ÊCCGCSMTS GTOGSCCA ASAAGGCCT6 gttgcccam tcsttccaag caaaattsgc ecccecesm MiscTAilf allccpâ ?g«8Saat tcsâggsfga gcsaigccgi tocscÃa

SGGTCSCAAT TTGGGCCGTA TCA5CTATTG. 03GCTGCTSG GCCGAGGCGG GATGGSCGAG (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 12: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1155 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:12: 3&0 43» 400 540· sm €60 : 720 780 840 900 960 1020 1088 1140 1200 62 GBWeCAGC? SCASSTCGUE CÍSHCGAQG AAOGGGCAT GCtGMGACC MACGCÁCCA 60 AGACCSSCTA OCCAC8SAT eCCÊACÊCGC TGCAGTCGTT fiTTC6ACAA6 ACCGGSCATC 120 cstttctgca ACATCTGprc gcccaccscg acgtcacccg gctcaagstc accstcgacg iso GGTFGCTCCÃ AfiCSSTGGCC GCCGACGGCC GCATCCACAC CACfiTTC/WC ammm 240 COGCGACCGS CCGGCTCTCC TCSACCGMC CCMCCTSCA &ACATCCCG ATCCGCACCG 300 ACGCGG6CG6 GOGSATCEGG QHGCGTIGG T6GTCSGGGA CSGTTACGCC GÁGtmíGA 360 CGGCGSACTA -CAGCCASATC GAGATG0G6A TCAT6S3GCA CCTGÍCCGGS GACSAQGSCC 420 TCATCGAGGC GTTCAACACC GGGMACC TCIATTCGTT CCTCGCGTDC CfiGSUSTTCG 480

ÔT8T8CCCAT CGACSASBnrC ACCGGCfíAGT TQC8GC6CCG GBTÇMÊGCG ATSÍCCTACG S4S GGCTGGTTTA caSGTTGNX GCCIACÊGCC IGICSCABCÂ GTTGAAMTC TCCACCSASG 600 AAfiCCAACGA GCASATG6AC SCGTATfTCG. CÊCGATTC9G CSGGGTGCGÇ GA0ACCTGC 660 SOSCCGTAGT CGAQCGGGCC GGOAQBWG GCTACACCIC GACQGTGCTG GQCCSFCGCC 720 GCTACCT6CC CGASCTGGAC AGCASCAACC GTCMÊTBGG GGAG&CCGCC GCCG6GC5G 780 CGCTGAACÈC GCCSATCOG GSCAGCGCGG CCSACATCAT CWS70XÇ ATGATCCASG 840 TCGACMGGC GCTCMCGAG SCAíaSClSG CGTCGCGCAT SCTGCTGCffi GTCCACSACG 900 AGCTGCTGTT CGAAATCGCC OCCGGTSAAC GCGAGCGGGT CGMGCCCTG GTSC6CSACA 960 ÂGATSGGCSG CGC7TACCCG CÍCGACGTCC QGCTSBtâGT GTO&SIGGSC MSSCCGCA 1020 gctBcíc.....lescc TGAerflccGA Iclfarci gsggcggêaa masasAn ioso TITCOÍIH^ÍIto TÍGSCGCAAT CSSGACCGiAG TTTSTeCAOC GTGTACCCGT 1140 CGAGTAGCCT CGTCA 1155 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 13: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1771 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples 63 (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:13: sflscaccsrc mmim teime csGTcescAT bsgcacgsgc errarasí ....... m stgstgctca Acedes:© attgctcogc 120 cg&pcascçc eaSGAACGT csAmwsT $ctgctccc<! ião PíXEÍCGGA TGCCSAKCC GCAfiCTlCCC fiStQCSACãG CIBSCGCTCS GASCACG^C 240

Anump’ IUPITC S3G:eiMl:::ATCTMfGG MTETCAGTC CAGÊCSCGCA 300 /COTTTfiT - iGGeCA^IT 360 fiGCCCGAfíTA GIGSSOCtAi GCAACGtAfiC SACA|BACSA ATCACCCAC6 420 GTATTCGeCA CCGCCGCÂGC ASCG3SSW CCWQSTTAT GCTCASGSSC AGCAfiCAAAe 4S0 GTACAGCCAG CAÉTTtGÁCT Gscsraccc ACCGTCCCCG CCCCCKASC mamiA 540 cmmccc tacgagbcst tootac casceeesT ctgatacctg Gtsrarnx «o GADCATGACG CCCCCTCCIG GSATGSTTCG CCMCGCCCT CSíSCAfiGCA TOTeCCAT 660 CGGCSCSbT'6 ACMÍMCSS TGGTSTCCGC CSGCATC6GC SGCGOGGCCG CATCCCTSGT 720 c®ttcaac csescAeces ccggccccas cseesscecA gtsgctoa gcgcqgcgcc ?ao MGCATCCeC. GCAGCMACA TGCCSCCSSS GTCâGTCGÂÂ ÇASGTGGtGS CWSSTGGT 8# £CCCAamrc stcatgttqg aaaccwct gêsccsccas tcggaggags sctccggcat 90& CATTCTGTCT GCCGASG66C TSATCTTSAC CAÃCMCCAC PGATCGCGG CGGCCCCCAA 960 64 1020

GCCTCCCC1S SSOTTDCGC CSCDSAWAC GÀÇOGTAACC HCTOMCS SGCSGACCGC ACCCnCACÊ GTGáTGSSSG CTGACCCCAC CASTSATATC fiCCSICfitCC STGTTCAGGS ::: cstctccgíg amctcm mtmm nccrccrcs e«XTÊ«fis rcarrc^scc

GGTGCT8SCS ATOGGFCGC CGCTCGGHT GfiAGSGCACC SISACCTO GGATCGTCAG CGCTCTCMC COtó^^iWKACCSG CGAGGCQ3GC MCGÊÍ» CCGTKTGSA CGCCATTCAS ACCGACGCCG CGATCAACCC CGGTAACTCC GGSS60GC&C TGGTGAACAT MMW&a CTCGTOGSas tcaactcgsc catitgccacg crotósess actcagccsa

TGCGCAGAGC GSCTCGATOS GKTCGSITT TSCfíATFCCA GTCGACCTÈG CCAAGCBCAT CGCCGAC6AG TTCATCtôCA CCGSCAAGGC OTCACAlflCC TCCtPSGSTG TSOffifiTEK «ATGACAM GACACCGCGG GCGCCAAGAT CGTCSAAGTA GISGCCGGTG GTGCTGCCGC mcGam mm&m scgtcgttgt caccaasstc gacgaocscc ogatcaagag CSCGGACGCG TTGGTTGCCG CCGTSC0STC CWAGC^OÊ^GeOSCCACfifi ÍGSCGCTMC çnrcex j$g$pscs gtmccgcac agtgcaastc accctcggca agggqsagca

GlfcMfíG TCGCCGSkI.....líGTTCAAAS C (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 14: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1058 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:14:

CTCCACCGCG GTGGCGGCCG CTCTAGAACT AGTGGATCCC CCGGGCTGCA GGMTTCGGC ACGAGGATCC GACGTCGCAG GTTGTCGAAC CCGCCGCCGC GGAAGTATCG GTCCATGCCT 1080 Π48 1200 3260 1320 1380 1440 1S0G 1560 1620 1680 1740 1771 60 65 120 àscccsgcga cggcêagcgc mtmsxx mmrnm msasmr raocse iw cc&scmcsê csaecgccgg Mimem isme&es: gsgcastcat scccascêig zm ATCCAATCM COSCATTCS GGCT&CaGGC CCATÍTGACA ATC«T« TGA&CGCAAA 300 tsâatqatgs rnmmm gígí.cstccs ctsítihést fiCTàCTAsar -scctcoisg 3se CGTTGTGGCT ATCASSAT6T TCTTCGCCGA AACCTGAIOC CQmmM GST61TCCCG 420

TfiAGCCCGAC GSGGKGGAC CCCSCQCltC ICSCCS^AT CftGGCASTtG CTiGAira 480 CMAAQQ6TT GHXfiGOm CACGTAGCâS TCCGAACMC CGGGMftfiTC GACAÊCTT6C S40 TSGGTATTÀC CAGISCCGAT GTCGACGTCC OGGCCMTCC SCTCGÓSCA AAGSGCGTAT 600. GCCCTACM CGACGAGGAS GSTSTCCCGT TÍCSSGTACA AQGCGACAAC ATOGSTSA 660 AACISTTCSA CGACT6SASC AATCTCÊSCT CSATTICISA ACTGTCAAC? TCACGCGTGC 720 rcsATccTGc eea^srs mmam 'mmmm mmmc camcgcaas ?so GTACCGAAiGT GATAGAC8GA ATOtSACCA CCMMTCAC CGGGACCATtCCCÊQSAGCT 840 CISTCAASAT GCTT6AICCT GSCECCAAGA STSCMGGCC âGGSKCGIS TGSATTGCCC 900 A0GACG6CTC GCACCACCTC GTCCGAGCGA OCATCS^T C®»TCCfiGB TCmiTCAGC 960 TCACGCAGTC GAAATSSAAC GMCCCGia AOGTCGCTA 6GCCSAASTT OTCGACGC 1020 11 íttcntcsaa Aóseeaw mmmit mmm im (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 15: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 542 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:15: 66 60

G4ATTC6GCA CGASAGGTGft TCSACATCAT C5ESACCABC CCCACAICCT GSCAACAfiGC GGCasOSPS GCGGTCCAGC imiÁ TASCGTCSAT SACATCCGCS TCfiCTCGGGT CATrSAEOS GMATGGCCG TGSâCASffiC CGGCAASATC ACCTAQOGtt TCAASCTCGA

agigioiftc wm&mc çsgcgcaacc gcsctagcac gsgcxma gcaasacsca AAATCGCACG ÇJTTTCGE^T GATTCGTGCG ATTTTGTGÍC T6CTCGCCGA. SGCCTACCAG GCGC5GCCCA SGfCCGCGTG CTGCCGIAIC CAGGCfíTGCA mOATTCC GGCGSCCAGS ccGEàÃfíTTAA tbcttcscgt cmctmc IGSàCGATCC GCCGSNGMSC TGATCSATGA CC8TBSCCAS CCCSmTG CCCGAGTTGC CCSSGGAAAC GTGCTGCCAG GCCGGTAGGA A^GTCCSmslECSSCGSTC CTfitfCGaCT CIGCCTSCGC (fcTCAGTSCfc SCCASCGWSC GG (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 16: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 913 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:16: CTOCCSCC OGeSCCTCCÊ TTGCCCCCAT TGCCGCCGTC GCCGÁTCAQC TGCGGAJCGC CAC.CATÇACC 6CCTHGÇC6 CCGGCACCBC CGGTSGCGCC GGGGCCGCCG ATGCPCC6C TTCACCCTGG CCGCCfíSCSC CGCCATtUCC ATACAGCACC CCGGCGGGGG CACCSTTACC 6CCSTCGCCA CCGTCGCCGC CStTQCCGTT TCAGGCCSGG SASSCCSAAT 5AACCGCCSC CAAGCCOKX SGtBSuMXG ITGCCGCCTF TTCCGCCCGC CCCfiCCGGCG CCGCCMm ........ im 240 300 360 420 Am m M2 60 120 ISO 240 67 300 ccsmcmcc.....mmtm eeosame ccgccgccgt taacqscgct gccgsscgcc gccgccbgac cmcmm mzmnm mcmmc ccsocsmc csgcgccgcc

GTTTGCCG€C MXMTCBGC GGSCACCGCC ASACCCGCCG ^CCACCAT TGCCSCCGGS CACCGAMCA ACÍfiCCCMC GST6CCGCCG 6CCCCGCC6T TUCOSÊCAT CACCGSCCAT tcacosccãb cACCGccerr .ΜΤβτττΑΤδ aacccggtac cçmmm mccmm

CCSGGCSCCG GAfâSCGÍGt CCGCCGGCGC CGCCAACGCC CAAAAGCCCS GSSUGCCAC CGGCCCCGCC GGACCCACCG GEFttCGCCGA TCCCCCCGTT GCCGCCGGTG CCGCCGCCAT TGGTGCTGCT GAÁ&CCSTTA GCÊCCSGTTC CGeSGGTTCC GGCSGIGGCG CCNTCSCCSC CGGCCCCGCC SimOGTAC ASCCACCCCC CGG1GGCGCC OTSCCGCCA TTGCCGCCAT TGCGÊCCSTT GCCGCCATTG CCGCCGTTCC CSCCGCCAQC GCCGGfíTTQS CCGCCGGCGC OGCCGGCGêC CSC (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 17: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1872 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:17: SACTAOSTTG GTGTAGMAA ATCCT3CCBC CCSSACeCTT AAGOGGGA CMTTTC1M TAGciACccc mMmm gttactot gascmttcg cgccgccgct cadicasgtb

GTCATSOT: CrfGALCGTÊC IMSCCGT ceSGCTGGGC aOGCCACGG CGCCSGCtXA GSCSGCCCCG CCSGCCmi CGCAGGACC6 GTTCECC&C TlCCCQGCGC TOCCCCTCÇA m m 480 540 600 660 720 780 840 §90 913 60 120 189 68 240

CCC6TCCGC6 ATGGTtSCCC AMTGGCGCC ACAGGTSGÍC MCATCAACA CCAMCTGGS a/mmc gccsisgks ccgsgaccqs catcsíwtc maxtm gwcgtgct mçmm cacgtsatcs cggecí3ccac csacakaat scsttcascs tcssctgcgs cm&ccm mmmm mcsssm tgacqscacc oogatstcg csimam GCTGCGCGGT GlXGGTSGCC TGCCGTCGGC GGCSATCSST GGCGGCGTCG CGSITWGA GCCCGTCGTC SCGATGGSCA ACAGCGSTSG GCASSSCGGA ACSCCCCSTG OGGTSCCTSG CAGGSTQG3t GCGCTC6GCC AMCCGTGCÂ GSCGTC8SAT TCSCTGACCG GIGCCGAASA GACAT7SAAC SGGTTGATCC ASTTCGATQC CGCAATCCAG CCCfiSTGATT CGGGCSGGCC CGTCGTCAAC GSCCTAOGAC ASGTGGTCGS JMmME GCCGCGTCCS ATMCTTGCA gcistcccas mrmm& gátícsccat tccsatosgs caggcgatgo cgatcgcggs

CCAAATCCEA TCGG6TGSGS QSTCACCCAC CGTTCATATC 6S3CCTACCG CC1TCCTCGS CTTGGSTGTT GTCGACAACA ÂCOGCAACGG CGCACGAGTC CAACGCGTGG TC8GAAGCGC TCCGSGGSCA AGTtTCGSGA TCTCCACOGG CGACG1GATC ACCGGfiGTCG ACG3CGCTCC ÊATCAACT1CG SCimSCGA TGSCGGCfiC (SCTTAACGEB CATCAICCCG SlEftCSTCAT CTCGGTGAAC TGSCAAACCA AGTCSGSCGB CACGCSTACA GSSAACGTGA CAHQGCCfíA GGSAÊCCCCG GCCTGATTTG TCGCGSATAC «TCCGCCSG 0CGC£GMTT SÊ&TTGSCGC CASCCGTGA‘T ISCCOTOA GCCCCCGAST TCCGTCTCCC PGCGCGTGS CATTSTGGAA GCAATGMCG AfiSCAfiAftCÁ CAGCGWGAG CACCCTCCCG TGCAGGGCAS TTACGTQSAA GGCGSTGTGG TCSAfíCATCC 6GATGGCAAG GACTTCÊGCA SCGCCGCCfiC CCTGCCCGCC GATCCSACCT GSTTTAABCA CGCCGTCTTC TACfiAfiSÍSC TSGTCCGSSC fíTTCTTCSC GCCAGOGCQG ACGGTrCCGN CGATCTSGGT GGACTCATCG ATCGCCTCGA CTACCTGCAG TGSCTT6GCA HCGACTGCAT CTGT1GCCGC COTCOA£G ACTCACCGCT GCGCGACGGC GSTTACfiACA TFCGCGACTT CTACAAGGTS CTGCCCGAAT TCÊ6CACCGT CGACGÂTTTC m m 4Z0 480 S40 600 660 7Z0 7SQ 840 900 960 1020 1080 1140 1290 1260 1320 1380 144Ô 1500 1560 1620 69 râcccnss tcsacaccgc vmmm sstatoca tcatcacc^a cpsemis aakacadct íbsastcgca cccctssttt ammtcc gccgcsaccc agacggacog

TÃOSeifíACT AITKSIBTS GAGCGACACC ASCfiÁSCGCT AOtfXGACSC CCGSATCATC

TrcercmcA ccGAMwsn: GMcmiCA ttcsaicctg tccgccgaca gttíjctacts

GCACCGATTC TT (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 18: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1482 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:18: CTTCeCCGAA ACOBATGCC SAQGAftCAfiÊ STSTTCCCSr 6A&CCCGACG (XSTCCGÂCÇ CCGCSCTCCT CSCCGAGATC ASGCASTDSC TTGAIG03AC AAAASSOT ACCAGCSTGC ACSIASCGGT CCGAACAACC fiGSAAAfíTCS ACAGCTT5CT GSSTAITAÇC AGTGCCSATG TD3A0STCCS GSCCMTCCG CTCGCSSCM Afí^CGÍATG CACHACAC GA£S4fí€ASG GTGTCCCGIT TCGSGTACM GGCGA£MCA iCTCGSTGM CtffTTtlS^|GACTSS«CA ATUTC8SCTC SATTTCTSAA CIXjTCMCTT CACGCGTGCT CGATCCTSCC GCIGGSGTGA.

.....CGCAGCTGCT STCCÍGTSTC AflGMCOCC AASCfiCAASG INXmSf^ffGKEBfiA tttcsaccc camatcácc mmom. ccseroecrc TsicAAfi^|^Ta«ocits GCGCCAAGtâ TSCMQGCC6 6CSACC6TOT GSATrSCCCA SGAtHSCTDG (CACCACCNÈCCa tççgagqsag CAicfiwrrc miccmi oswtcakt cacscagtcg aaatg&vacs iêeo 1740 1800 1860 1872 60 120 m 240 300 360 4:20 480: 54Ô 70 600 mcccstcaa mramm mmêm cgpcgacgcg mcrcGAM mcccnm AACGSTSTCA AC6GCACCCG MAACmC CCCTGACGSC ATCTGAAAAT TGACCCCCTA SACCGGGCGG TTGSUffiTTA TTOTCGGTG GFCCfiSCTG STGGGAffiCS GCCGASGTtG CGGTCTTTGA 6CCGGTASCT GTCGCCTTTG ASGGCSACGA CTTCASCATB GIGSACGASG CGSTCGATCA TfíGCSGCAGC AAEGACGTCG TCGCCGCCGA AAACCTCGOC CCCCGGCCS MSGCCTTAT TGSACGTGAC GAICACCTG GCCCGCTtAT ACCSG^ÊSA CACCAGCTGG AAGMSAGGT TGGCGGCCTC GDXTCÃAAC GGMDSTAAC CGftCTFCSTC MCCÂCCAGS A6CGGATAGC GXÇAÃACOG SGFGAGTTCS XGTAGÃTG.C SCCCGXGTG GTGASCCTCG GCGAACCGTG CIÁCCCATTC GGCGGCSETS GCGAACAXA £C££ATGA€€ GuCCTGACAC GCGCGTATCG CCAGXCGAC CGCAASATSA STCTÍtCCSÊ TCCCAGSCGS GGCCCAMAA CACSACGTTA TCGCGGXGG TGATGMAfC CAGGSTGCCC ASATSTXGA TGGTGTCGCS TmSffiGGCCA CGAGCATGCT CÂMGíCSAA CTCTTCCMC GACTTCCGAA CCGGGAAGCS GGCGGCGCGG AISCSGCCCT CACCÂCCAT6 GGACTCCCSS XTGAOCTÍ CKXTGCAfi eÊHIcescc abkattctt cgtgscicca gttctcggcg tmtsm cmcmzm

GGACACTGAC TftCGCAGGQ TGtMTTT CMTGCTCTT GT (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 19: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 876 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:19: ewmçGecaítfitáasfil atagcttctõ ôgccgcoscc ^ccagaisg mmmrr €60 73 78« 840 §00 m im 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1482 60 71 120 120 m 240 300 360 420 480 540 600 660 720 7S0 840 876 asnrrcGGG gccaccgccs ggcsoccac cctgaccggt sessccrac aacacgccga oggtcactcs mmcm tmmm ccceGceGrc sttgcctacg «cajccrr

CGCCTACSAA ATCfíSCIACA TCMWÊ CGS/CISÊCC ASBATSTBC6 GGGN3MCCC GGAGAACATC nCTTCTACA TtACCGTCTA úVCGAQCCS TA03TGCAGC CSCCGSASCC GGAGAACTTC GATCCC&ASG SCGTGCTQGS SQSTATCTAC CGKfTArCACS CSGDCACCSA gcmcícacc mm&Bz micctm cfccgsggta gcgatgcccg csgcgctgcg ggcagcacag aisctssxb cceensesA TetcGacecc êáçstgtsgt cogtbaccag

TTSQGSCGAG CTAM0CSC6 A036SGTGGT CATCGAGACC GffiMODC 6CCACCCCSA TCGGCCGGC6 GSCGFSCCCT ACGTGACGAjS AfiCGCTGGAG MTSCKBaS SCCCGGTGAT CGCGGTSTCS GCTSSA7SC SCGtGGTCCC CGAGCASATC CSACOSTO TSCOGOGCAC ATACCTWCS TTQGGGACCfi ACGGSTTCGS TTTTTCOGAC ACTCSGCCCI KjGGTCSTCS mOTGAAC ACCSACGCCG MTCCCAGGT TGGTCGCGGT TtTOAGSG STTGGCC6G5 TCGACGGSn» MTATCGA.CC CATTO&fGC CGGTCGTGSG CCQCC06CCC ASHACCpS ÀTTOiíC^^ 1SC©XCG»I TAAiIÍT (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 20: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1021 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:20: Aiaxcccss GC1ECASGAA TrCQSCACGA &AQACAAAAT TCCÁCGCGTT MTOCAGGAA 60 72 cagwtcata acgmttcac mm^rn cmtatstcg tocgcggi ttatttcgac 120

AGCGAAECC TGCG3CAGTT 8GCGMGCAT TTfTAOéCC MSCSGTESA GSAACGAMC ISO CATSCAATfiA fGCTCGTSCA.ACAXtGCTC GAÇCCOSáCÇ TTCôTSTGGA AATTCCCSGC 240 çtmatm tgcgaaacca (htcgacaga ccccccms cactgêcsct eeeecrcwr soo CAGGÂACSCA CASTCACCGA CCAÊGTtW cmtmm CÊ3TSGCCCS CGACGAGGGC 360 GAirrccics mmmrt catccagts* ttcttgews mmrm b&mmcc 420

TTGATGGCM CCCTGGT5CG GGTTGCCGAT CS66CCGGGS COCCTGTT CGffiCTASSG 4M CCBGCCeCAT CAGGCGCCCC GÍÀISCÍGCC S40 6GSSSCCSCC TCTAGATCCC TQGGSSêGAT CAfíCa^HS TCCCGTTCSC CCGCCC0TCT 600 TCCAGCC46G CCTTGST0CG GCCGQSSTGG TGA.GTACCM TCCAGGCWC CCCSACCTCC &6Í tmmmr cgatgtcctc stactcatob acgttcgagb agtacaccgc ccsscccm 720 GCTCCCGABC SSTCMCGAS TTSCSGATAT TCCTITMCB CAGGCÀGTSÂ GGGTCCCACG 780 GQ3GTTGGCC Ci^OGOTT GSQCMTG CffiGTCAfiGT ATOSQGGST CTTÊGCGAGC 840 MCAACGTCG GCAGGWâEGG TGGAECCC6C CGGATCC6CA SACCSGGSGS GCGAAAACGA 9Θ0 CATCW.CACC GCACfiGSATC 6ATCTGC6SA GGíSGGGTGCG GGMTACCfiA ACCGGTEXAG 960 SASCGCCASG AGTTGíTm CCACCAQC6A AffiGTTTTCS GSTCATCGSH ÊMTTAA6 1020 T 1021 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 21: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 321 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:21: 73 CGTStOSAC6 JpSMGM OCAACCATG MSATCGT®. AATOSATCGC CBWSSTCTS 60 ACEGCC6C9S CnSCMICSS CGCCSCTSCG 3ÇCGGTGTSÁ. CTREATCAT QSCinSQCGSH m

CCSíTCSTAT ACCAGATGCA GCDGGTC6TC TTCSSCGCGC CACTGCCSTT sawCCQEWA ISO TCQàCCCtTG ANGTCCCGAC CGCCSCDCAG TOCO» T6CTCMCÃÊ WCTCGCGÂT 240 CCCAACSTGT CGTTTGÍJSM UffiSSMAGT CTGGTCGAGG GNSGNATCGS fíOGMANCGAG 303 GSNMATC SNCGANCACA A 321 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 22: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 373 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:22: TCTTATOSST TCCGGTIGSC SCGGSTTTÍ GGGNSCe&T GGÍTMCCCG CTCGGCOSC 60 CSÁTÍSACOS SCGCGGAGAC GTCGÀCTCCG ATACTCQSCfi GSCGCTIBSAS CTCCAfiGCGC 120 CCTCG6TCGT 6NACCGGCAA QSCGTSMSG ASCCSTTGNA GACCQGSATC AASOTTTC 180 ACGCSAT&C CCCGATCGGC CGCGGSCAGC GCCA&mr CATSSSSAC CGCAAGACCG 240 GCAAAAACCG CCGTCTGTGT CSGACACCAT CCTCAÃACÇA GCGGGAAGAA CIÊQGA2TCC 300 SGffiSGATCCC AA3MGCAGG TÓCGCTTGTG TATACGTTSG CCATCGQ0CA ASAAGGGGAA 360 CTTACCATCG CCS 3?3 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 23: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 74 (A) COMPRIMENTO: 352 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:23: ÊÍBACGCCGT miaSSATTC OSBSG66BS CCGGTCC5CT GSCGGTôSÍG GATCAGCAAC 60 TSETTACCCS &3TGa'GCM SSCTGGTCST TOTCASSC A0CC6CTS1S CCGSffi&flST 120

TCTTSACGGC CTGGTACGGG TTOCSOT TMCCGASAT CAAJ^CSèSC GMTCGGTEC ISO IGftTCCATGC CGGTACCfíGC G6TGRK35CA TSG06QCTST GCAOCTGGCT CGGCASTMG 240 fiCSlGGAGGT TTTCGTCACC ECCASCCSTS &MABTW8A CACGCFGCSC GCCARJGPÍGT 300

TmC&CGA NCCATATCQS USATTCCCMC ACATKCGAAG· TO03«Í SÂ 353 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 25: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 580 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:25: 75 CQmmm mrnmm mttmm csccratgcs ttgatçcasg m

SmCOSAC CATATCCftAS CATGCTGSST ecCflOGAfi CMOTTia ACOGCGSfó 120 CTÊCCCSAT6 smctmi &AÁSTCATTG CGCCGSGGCT TSTSCACCTG ATEAACQCGA 180 ATAfiQSAACA ÁIAGSSÊ5ST SAnTGSSAfi TTCAATGTCÊ GSTATCGCTG fiUATCCMT 240 GGCâssscAi gctcggdsíx mmrnt gc&caggcgg gccagcccêa atct^agsg ......soo

AfiCACTCMT SGCfâSCÊATG: AÁGCCCCQSÁ CCGGCGACGG TCCTTTSGAA GCAACTMl 360 AMCSCffi CÀTTGTGATS CSASTÁCCÃC TTSAaSSTQS CGSTCSCCTG €TC£íCSAgC m TSACACCCGA C6AABÇCÇCC GCACTGbGTG ÃGfiAACTCAA ABGCSTTACT AGCTAAGteC 480

AscccMcas CBMTSsreG scsracscs mmmc gstagatgtc casistcibc s4ó

icfíGCGATer Amc&m gaactctitsg ATãCASCSCT (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 26: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 160 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:26: MCGSASGCG CCGGSGGTTT TSGCGGOGCC OSGGCGETOG EC^CACQG C&SGGCCGSC 60 GSTACEGCCG G6TTBTTO TGTCGGCSGG eCCQSTSfiSS COeSASSCM CSGCATCGCC 120 66TGTCACGS GTACSTCGGC CAGCACACCG OGTíXATCCG 160 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 27: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 76 (A) COMPRIMENTO: 272 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:27: GACACCSÀTA CE4TSGTGÁT GTACGCCAÃC GTTCTOSACA CGCTCEASGC STTCAÕGÃtC 68 CASGGCACAC COGAÊBsCST GACCATCGSC GAT6CQSCCC CGTTCGCQGA SGC6SCTGCC 120 AASGCGATGG GMTCGACM STSCQTO ATTCATACCG GAATQSACCC CSTCGTUSCT 180 GACGCGAAC ASTBÊGAC®. C^CMCAâC AOSTTGSGGT TGGCSCCCGG TGTCGTUTC 240 6CCTACGAGC GCAACGTACA GACCMCGCC CS 272 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 28: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 317 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:28: GQ&CCGSTG. GmCGGAC TATCTGCSCA CSGTGACSCA GCGCGACSTG CSCGAGCTSA 60 A6CGSATCGA SCASAfCGGAT CGCCTGCC6C 6GHCATSCS CTACÇT6GCC OCTATCACCG 120

C££AlGGA£CT GMCGTGGCC GAôSCGGCBC G5GTCATCSG MTCE4CGOG GGGAOSATCC ISO GTTOSSATCT SGCSTGSTTC 6AGACGGTCT ATCTCSTACA TCGCCTGCCC GCCTGSTC6C 240 GGAATCTGAC CGCGAAGATC A4GMGCGGI CAAAfiATCCA CGTGSTCGAC AGTGÊCTTCC 300 CBGCCTBSTT GC9CSGG 317 77 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 29: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 182 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:29: 60 120 180 182

SATCGTSGAfi CTSnWGA ACASLGTTSC OGÊACGÇfiCS SCSÊCCTO CGT03STGTA dCABCfiCCSG ACCCCTCGC IX3TS3SCAS CATGGTGATG ACCftCSTCBG CCTCGGCCAC cscraeec õcgctaosaa amcgc®c Açmmcses amsccGâ AteccGccsr Θ3 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 30: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 308 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:30: 78 GOTGGCttA£ TTTSGTÊAfiC AfiGTBSTCOA Ç&mmit TGSGCGCCTG OGMSÍGS8T m cgosttcac gmsctsctb cssctcstct acsgcgggca iw &mmm ttgcccgccg ccGtxwGCce stabcaaasc rrerccaarr ggatcctcat iso mmimc ggtta&xat tgaccatsgc gtstaccgcg imamm tttggacgct 240 zcm&TCM kcmmcr CGMCGcrrr mmrm. semecrc atomaccc m Acmm m (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 31: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 267 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:31: CCSACSACGA GCAACICÂCG IBGATGAIBG TCGSCASCGS CATT^AfiGAC GSAGASftATC 60 CGSCC6MGC ISCCfiCGCGS GWOSCICA TASIBACCSB CCGTAGAGSG CTCCCCOGAT 120 èscAecGSAc tattctsgtg moem zmmm mtmm gmmm im ACACGCTEAG CAATCACACC TAGCGA6TBA TtSAGATGGT CGGSACCTCS CC0GACGGC6 240 TCGACGCSGC MTCCAfiQGC 6616156 267 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 32: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 189 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico 79 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:32

CTCGTGCCSA MSAAHIGA GGSGACAGGA TSftGCAATCA CACCTACCGA TOTCÊAGA 'TCGTCSGSAC CTCGCCCGAC GGCGICGftDG CGSCAATCCA GGSCGSTÇTG GCCCSAÊCTS mmàtm gcgcgcgctg gaobsitís aagtacastc aatxcgagsc cacctsgtcg AfòGASCGS

60 120 ISO IS9 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 33: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 851 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:33 80 ascASsõTG scGimTSA scGTCACcaç omrjmcc sasctsaccg ccgcccaggt m ÇÇGSSÍIBtl GCGÓBSCCT «SAGACSSC SWGGSCB ACSGTECCC {^COGGTCAT 120

OsCEGAGAAC {SEM TGATGAUCT 6ATAGC6ACC MCCTCTFSS G&AAAACAC 169 CCGGSOGATC GCGGTCMCS AGSCCGMTA ceeCGWSWB 1GQGCCCMG ACSCC6CCSC 240 firtramssc mcsccaces asxmsM mmmm aecttgctgc cstfcsassa aso OGCSCOSSAG AtmCCAGCS £»0» CCTCSASWS GCCSCCfiCeS TCSASGAGGG 368 CTCCGACACC GCa&SGCGA ACCA0TTGAT GMCMTGTG CCCCASGCGC TQAAACASTT 420 ^CCCAfíCCC AC6CAG0GCA CCACGCCTFC TOCAASCTE OSTOeCCIST mmtm 480 çrcsccecAi..c^tosccsa τmmm gpgtcgatq fiwmm 540 SCCMCTCS- íSsTGfGTO TGACCAACAC CTR3AGCTCS ATGTTGWG «CmsCTCC 600 GSCfiBGGGCC 6C0CAGSCCS TBCAAACCSC GGCGCAAAAC eGEGTCCGSÊ ÇÊAT&GCTC 660 «scTQsscAfíe mtwmrr mesma sosemeG smceccA acttsêstcg ~m SGCGGCCTCG GTACGGTATG STCACCGGSA TÍOT5&MA TAT6CANA6T ClBGTGGGGG 7B0 SAACfiroT cmmm sttoqcccc otttctgga iecgstgaac ttcgtcmds 840 GWAEASTTA C 851 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 34: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 254 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:34 81 GATCGATCSG ®6ΕΑΑΑΤΪΤ SGÂCCASATT CeCUTCCGGC GATMCCCM TWTCGMC 50 CTAEATTTAT TCCGTCCAGG SGCCC6ASTA AIOGCTCGCA QGA&fiGAAC CTTACT5C1G 120 CSGSCACCIG TCGTOTCC TOTÃOSSC GGAAGGCGTC OACATTTTCC ACC6ACACCC 180 ccatccmac gttcoassgo cactocagct tstgagcgas OóSÀCSCÁsr cGwasemc m GCTTGSTCM GATO 2S4 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 35: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 408 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:35: CGGOÂCGAGG ATCCTGACCG AKCGGCCSC CSCOASGCG MSTCGCTGT TGÈÍCCA6GA. 60 mmmm maoscsc tscggatok gsttcagccg ggsggstgcs ctçgattgcs ιζο

CTATAACCTT TFCTTOSACG ACCGGACSCT SSATQSÍBAC CAAACCSCSG mmsm ISO TGTCASGTTG ATCGT8SAGC GÓAÍSAGCSC GCCGTATCTG SAAGSCGDGT CGATOSATTT 240 CGTOGACACT ATTEASftâSC AASGMTTCftC CATCSACMT CCCAACGCCA CCG6CTCCTG 300 CGCSTSmGS eATT^TTCA ACTGATAAAA CSCTASfACG A£CCCeCGGT BMPmm 360 TAOGASCACA CCAA6AÇCTG ACCGCSOBS AAAAGCAACT GAGCSATS 408 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 36: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 181 pares de bases 82 (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:36: gc-ggtstc^ ^igsttoa acss&wcso mmcm &3sgccgsc6 m 9^G§gCGC 6TTCG0(SCC GOSGGTCa* 120 6C6SÉH Immmr :ÍÍÍÍ::fcsàB ATTTCTcmc mmmm ιβα G 181 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 37: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 290 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:37: 8CGGTGTCGG CGGATCCGSC SGGfGGTTGA ACGSCMCGG CSQTGTCGÊC GGCCGGíSXG 60 KSACGeCGT είΤΙΕεαΚΙ C-CCGGCGSCC ASGGC&3CCT CGGTGGGCAQ GGCGGCMTS 120

BQ3GCGGCTC CACCSGC6GC MCÊSCGSTC TTBSCSGCGC gSGGSaTGGC SfAGGCAADS ISO ccccmsg GeGcrreasrr ggcmcsgcs mmmm ccftBGGCfiGN Armescs mo mmmm ceciAcc^c crceeiG mmmm cggcgoítgac. mo (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 38: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 83 (A) COMPRIMENTO: 34 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:38: GATCCAGTGG CATGGNGGGT GTCAGTGGAA GCAT 34 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 39: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 155 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:39: GATCGCTGCT OSTCCCCCCC TTSCCSCOSA COCCACCGSÍ CCCACC6TTA CCGMCMQC TSGCfffEGTC GCCASCÂCOC CCQSCACCGC CSCSCCSSA STC6AACAAT GSCACCSTCS TATCCÍCACC AnGCCSCCB sncccaccqs cacos m 120 155 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 40: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 53 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear 84 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:40: ATGGCGTTCA CGGGGCGCCG GGGACCGGGC AGCCCGGNGG GGCCGGGGGG TGG 53 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 41: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 132 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:41: 6ATCCACCGC GSGTSD^C GGTGCCCSC6 GCGCGACCCC âCCAGCSSC GGCMCE&CG 60 GCACCGeCGS CAAOSSCSCè MCSCCACCG TCSTCGÉM: 6GCCG6CGQS SCCSSCSGCA m A0SSC6SÇAA CG £32 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 42: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 132 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xl) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:42: 85 * GATCGGCGGC «ACGSNC GSQGACGGCG GCAAGSGCG6 NMeSBGQGC GCCSWfiCCA m cmmtmA atcctccsng tcchccaats gcgcsmtog gq&casgsc gscaacqscg m 6CANQG&QG& CA 132 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 43: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 702 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:43: CQGCACG&GS ATCGGTACCC 0SCGKA1GG GCA6CT6CCG ATTGSCCGGê TFTCCCCACC 60 mmmmc mcmcm togcgctgcc swtassbc gaiccsttcg esArsccssc 120

ATSMCffiGC eSCATOWAT TASraC«àSA ACCmCAGT HAGCGACGA. TMTSGCTAT ISO AÊCACTAASfi ABGATGATCC SATATGACSC ASTCSCACAt CGTGACGGIG GATCASCAM 240 mrmm cmmzmt sagêtsgagg; ccccgatsgc egacccaccg actqatstcc 300 CCATCACACC GTGCGAACTC ACGGSQSNTA ÂAMCâCCGC CCMCAGMTG GTUTTGTDCG 360; CCGACMCAT GCSSÊAATAC CTGS033CCG &TGCCAAAGA fflfc CTSGCGAOCT 420 CCTOCM CGCSÊCCMÊ Q&TATGCCS AGGTTSATSA 93AG3CTGCG ACC5CSCTSG 480 ACMCGACGG QSAAffiMCT GT6ÇAGKAS MTDBGCCGG «CCBTCSSA SfiSGACAGlT J4Õ CGfiCCGMCT ÀACCSÁTACG CC5AÍ5IGT6G CCÀCGSCCQG TfiAACCGMC TTCAMTC 600

TtAMGAA6C eGCAAfi&AS CTC6MAC&G SCÊACCAAGS CGCATC6CÍC fiOGCACUSHG 660 GBMTBSe& GAACACTTNC ACCCTGACGC TSCMãGCGA C6 702 86 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 44: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 298 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:44: SAASCC0CAG CGCTGTC6SG CGACGTG&CG GTCÃAAGCSS CATCtsCTCGS TQSCG&TGSA ..........$0 fiGQGQCGQGG TGCCÊTCGGC GCCSTTQGGA TCSCSATCG OGSSCQCCGÂ ATCGGT5CSS m DCCScmscB sac«QM moos/stm cmmm iso ctg®scggcg esisccacsc a mêsdscc zm AASTCCAAGG CTTCTCAGCA SGMGACGAS GCGCTCTACA CCGASSATCt TOÍBí 298 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 45: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1058 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:45: 87 CSGCAC6AGS; AJCGAATCGC fiTCSCOsÊÉA G£A£ASOGTC GÇCTSCACC ABISMAS 6® CCATGACCTA CTCGCCSGST MCCCCSGAT ACCCGPWSC GCAGCCCGCA G6CTCCTÀCG 120 SAÊSSsitAC ACccTCGrrrc scccÃCscos mmssmt ghscaascta ccsatstacc is® TGAACAltSC SGTSÍOGTS CÍÇGGTtTíCK CTGOGTACTT CGCCÂ9CTTC ÍMXCAATGT 240 TCACCCTCAS ΤΑΕΧΒΑΑΓΓΟ GOGGSGKÍTG ATGSCGCAGT GTCCGGUSAC AtíGSSCXGC 300 CSSTCSGT GGDCTGCTB ffilSCSm TTGCCGG&GT GSTIÇTBGTS CGTMGSCCA 360 ASAS6CATGT GAOSSTAGTT KGGTGCTCG QG6TACTCSS OSTATTTCTG ÂWItíCffi 420 CGACGTT7M CAAáCCCMC GCÇTATTCSÁ CCGSTTG6GC AT1TOS1? 6T6TTGGCTT 460 TCAJCSTGTT CCASGCGSTT GCfiSCAGTCC TQS-CGCTCTT SeTGSASACC GSCSCTATCA 540 CCSCGCCSGC GCCGQ3SCCC MGTTCêACC CÊTATSSACA ÊIACG8SCGS TACSGGCAGT 600 AçsescAsm cssâsiGCAS ccesBsi actacostca gcaôsstsct cascasgcco m CÍÍ&CA GTOXCOSSC CCSCAGCAGT CTCCGCMCC TCCOGfiATAT 6GGTC6S&T 720 ACGGCGGCTA TTCffrCÇAfiT ccsasccaat cmtmm ATACÂÇTSCT CASCCCCCSG 780 CCCAfíCCGCC GGCGCA6TCC GSSltGCMC AATC8CACCA GSGCCCATCC AÇGCCACCTA 840 CCSGCTTÍCC GASCTTCASC CCACCACCAC CSSTCAÊTGC CSGSACGGGS TCGCAfiGCTS 900 GTTCGGCTCC AÊTCAACTAT TCAAACCCCA GCGGGSSCSA 6CASTCSTCS TCCCCCGGSG 960 6GSCSCCGGT tTMCCGSGC STTCCCGCGT CCGSTCSCSC SUGTSCGCGA AGASTGAACA 1020 GGÊTGTCAGC AASOGCGSAC GATCCTCGI6 CC6AATTC 1058 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 46: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 327 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear 88 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:46: QSBCfiaSfGk fiftCCSATQCC GCTÃCCCTCS CfiCAfiGASSC ASSTAATTTC «C6SATCT 60 ccggcgacct gaaaacccas msmmÊ immam: mmms Trecame 120 mimtmm cgctosgg fmmm mtmtm sstgcgcttc tmmm im CCAATAAGCA GAtâCAE&AA CTCfâC&m TCTCGACW TATTCGTCAS SCCGSCSTCC 240 MTACTM: GSCCSACGAS SAÊCAlSCAiGC ASSCGtTCTFC CTC6CAAATS SSCTTCmAC 300 CDSCTMTAC GMAAGMAC GQAECAA 327 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 47: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 170 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:47: C6OT&&T GAT5SCGTT6 TCGMCGTSA CCÊA77GTGÍ ACCGCCGTCG 60 CCMCMCST STTGÊCGTCG «CAMTSFGC CSHACCffiTG GATCTCS3T6 ATCTfSTTCT 120 TCHWCAG SAÃG&CA CCGOCCACCC TGCCCTCGGH TACCTTTCGG 170 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 48: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 127 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico 89 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:48: GA7CCSGCGG CACGGGSGGr «CCGSCQSCA GCACCGC7SG CfiCmOSC MCflaGâSG& 60 CC0SGGSTG6 CGGCGSMCC GSTSGGTTGC TCTTCGGCAA CGGCSGTSCC GQCQSGGACG m GSGCCST 127 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 49: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 81 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:49: 03SCGGCMG GGCGSCACOG GQGSCAACQ6 GAGCQGCGCG GCCGÊCSGCA ACSBCQGCAA 60 aaecfiGtOtc gscitoics g ai (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 50: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 149 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear 90 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:50: GWWGSBCT aSCCGGCTCC: GGOmWS GOCTAtfGG AGâAfiCtGCC GÊftTTStTTG 60 SCMCQ3CGG GGCCGGNG6T GCCeSCSOÊt C€MC€AAÊC CSGXMQSBC QMGCCGGCS m &w€mw tgccggtegs ctsãtgt86 m (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 51: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 355 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:51: CSGCACGAfiA TCACACCTAC 'OGÍSs^ GACG0I5TCG 60 ACGCGGftMT CCNSGGCaST CTSGCCGSAG CTGCGCmC airascs C11SACTGGT 120 TCGMSTACA GTCAATFCGA G5CCACCTGS TCGAOSMC (MCGC6CAC TOCA^TIA 180 iliie*;® .....gfSÈCÉC CSATAADTGA 240 GSTBCATCAT TAAGCGACTT TPCCASAACA TCCTTSACGCG CTCGftMCGC GCTTCAGCCG 300

ACGGTG5CTC CGCCGAGQCG CTfiCC-TCCM AATCCCISCS ACMTTCSTC GGCGG 3SS (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 52: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 999 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples 91 (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:52: ATSCATCACC ATCACCATCA CATGCATCAG STG^CCCCA ACTTGACACG TCGCAAGGGA 60 CGATTGGCGG ÒClfíSOAT ÇGCÊfiCfíATG GCCAGCGCCA GCCTBSTSAC COTTSCGGTG 120 CCOBC&ADCfi CCMCGCCGA TCCSSAGCCA GC&OfXCCGS TACCCACAAC GSCCGCCTCG 180 CCSCCGTCGA ÇCGCTCCA3C GCCACCCGCA CCSSCSACAC 06TTGCCCC CCÇAÇCACCG 240 GCCGCCGCCA ACACGCCGAA TGCCCAGCCG GGCGATCGCA ACGCtóWCC TCCSCCGGCC 300 GACCCfiAACQ: CACCGCCGCC ACCTOATT GCCCCMACS CACCCCAACC TSTCCGSATC 3601 GACMCCC6GI llBCCTOCTS GCTSSSTC» GTUnSACGCC 420; GCCCACTTCG ACTACSGTFC ABCACTTO ASCAAAACCA CCG&ttttCC «CCATTTCCC 480 Ê&CAGCCGC C&CGffTS&C CAATSACACC CSTATCGT6C TCêIÍÍSCT ABSCCÃAMS §40 CTTTACECCA GCSCCSAAGC CACCSACTCC MSSCCSCSG CCCGGTTSGS CTGGSACATG 600 gêtsasttct atatgcccta cce^scajcc csfiATCAACC mmsm ctcgctcgac mo sccaacgqgg TffrcTSSAAS cqcstcgtat mmmcA AGTFCAStfiA tccsasxmg 720 CC&AACGGCC AfíATCTSGAC GQSCalAAJC fiBODOSOCCS CGGtGMCGC ACC6GAC6CC ?S0 6S6CCCCCTC ASCGCTGSn TGTSãTATGS CTCGSBCCG CCAACAACCC 6STSSACAAG 840 GGCGCGGCCA AGGCGCTGSC CG4ATCGATC CGGCCTTTGG TCGCCCCGCC SCCGQCGCfiS 900 &CACCGGCTC C1GCAGASCC GGCTCC8QC6 CCSSCSCC6G CCGÇGGMST CQCTCCIACC m ccoacgacac osacaccgca «MG«xm ccgecctga m (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 53: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 332 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido 92 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:53:

Met His His His His His His 1 iet I His Gin Vai Asp Pro . Asn Leu Thr 1 5 10 15 Arg Arg Lys Gly Arg Leu Ala / Ma ! Leu Ala : lie Ala Ala ! Met , Ala Ser 20 25 30 Ala Ser Leu Vai Thr Vai Ala ’ Vai Pro Ala Thr Ala Asn . Ala Asp Pro 35 40 45 Glu Pro Ala Pro Pro Vai Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro Ser Thr 50 55 60 Ala Ala Ala Pro i Pro m í Pro Ala Thr Pro Vai ; Ala i: Prc i Pro Pro Pro 65 ?e 75 80 Ala Alá *Ala Asr i Thr Pr< i Aso Ala Sln Pro sb t Pro ? Ásr t Ala Ala 85 90 95 Pro Pro Pro Ala Asp Prc s A$ri Ala Pró Pro Pro !' Pro ' Vai lie s Ala Pro uo 105 110 ! Mn Ala prõ Gin Pro Va" Arg m Asp Asn Pro Vai Gly Gly f Phe Ser 115 m 125 Phe Ala teu Pro Alâ Gly 1 Tr$t Vai Glu Ser Asp ^ Ala Ala HIS Phe Asp 130 135 140 Tyr Gly Ser Ala Leu Leu Ser Lys Thr Thr Gly Asp Pro Prc Phe Pro 145 150 155 160 eiy Gin Pro Pro 'Pro vai Pãê ÃSil Asp Thr Arg 11 fi Vai teu Gly Arg 165 170 175 93 leu Àsp Gin lys leu Tyr Ala Ser Ais 61« Ala Tftr Aspf Ser iy$ Ala im ias ' 190

Ala Ala Arg leu Gly Ser Asp Het ôly GTu Phe Tyr Het Pro Tyr Pro 1S5 m 20 5 61 y Thr Arf II e feft Gin Sly Thr Vai Ser teu Asp Ala tert Sly Vai 210 ‘215 220

Ser 61y Ser Ala Ser Tyr Tyr 61 u Vsl Lys Phe Ser Asp Pro Ser Lys 225 230 235 240

Pró Asn Gly Gin lie Trp Thr Gly Vai Ilê Gly Ser Pr» Ala Ala Asrs m 250 255

Ala Pro Asp Ala Siy Pro PfO Gin Arg Trp Phe Vai Vai Trp Leu 61 y 2ÊO 265 270

Thr Ala Asei As» Pro VâT Asp.Lys 61 y Ala Ala Lys Ala Leu Ala 61 u 275 286 288

Ser Ile Arg Pro leu Vai Ala pro Pro Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 290 295 300

Ala Glu Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ais Sly Glu Vai Ala Pro Tbr 305 318 315 320

Pro Tbf Thr Pro Thr Pro 61 r Arg Thr Lee Pro Ala 325 330 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 54: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:54: 94 Α$ρ· Ppç ¥31 Asp A] a Vãl 11& A$n Ihf Tbr Kâã Àsíí Tyr Sly Gin ¥al a s io m

Va] Ala Ala Léu 20 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 56: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 19 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:56:

Ala Ala ffefc iys Pro Arg Títr fily Asp 61 y Pro leu 61U Ala Ala Lys 15 10 15 61 u Sly Arg (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 60: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 17 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:60:

Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Vai Pro Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro 1 5 10 15

Ala 95 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 63: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 187 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:63:

Thr 61y Ser leu A$n SI λ Thr His A$n Arg Arg Ala Asn Glu Are Lys 1 5 10 15’

Asn Thr Thr Het ty§ fôat Vai Lys Ser Ite Ala Ala STy Leu Thr Ata ZS .25 30

Ala Ala Ala He Gly Ala Ala Ala Ala. Gly Vâl Thr Ser He Het Ala 3S 40 4S

Gly. Gly Pro Vai Vai lyr Gin Két Gin Pro Vai Vai Phe.GTy Ala Pro 50 55 55 leu Pro Leu Asp Pro Ala Ser Ala Pr© Asp Vai Pro Thr Ala Ala Slo 65 70 75 80

Leu Thr Ser Leu Leu AssuSer leu Ala Asp Pro Asn Vai Ser Phe Ala 85 90 95

Aso lys Gly Ser Lai Vai Glu Gly Gly ITe Gly Gly Thr 61 u Ala Arg 109 105 m

De Ala Asp tlís Lys leu lys Lys Ala Ala Glu Bis Gly Asp Leu Pro· 115 lia» 125

Leu Ser Phé Ser Vai Thr Asn lie Gin Pro Ala Ala Ala Sly Ser Ala 130 135 m 96

Thr Ala Asp Vai Ser Vai Ser Gly Pro tys leu Ser Ser Pro Vai TJir 1.45 ISO 155 160

Gin Asn Vai Thr Phe Vai Asn STo Gly Gly Trp Het leu Ser Arg Ala 165 m m

Ser Ala Het Glu leu leu Gin Ala Ala Gly Xaa 186 IBS (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 64: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 148 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:64:

Asp Glu Vai Thr Vai Glu Thr Thr Ser vai Phe Arg Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Ser Glu leu Asp Ala Pro Ala Gin Ala Gly Thr Glu Ser Ala Vai Ser 20 25 30 Gly Vai Glu Gly leu Pro Pro Gly Ser Ala Leu Leu Vai Vai Ly$ Arg 35 40 45 Gly Pro Asn Ala Gly Ser Arg Phe leu Leu Asp Gin Ala Ile Thr Ser 50 55 60 Ala Gly Arg His Pro Asp Ser Asp Ile Phe Leu Asp Asp Vai Thr Vai 65 70 75 80 Ser Arg Arg His Ala Glu Phe Arg leu Glu Asn Asn Glu Phe Asn Vai 85 90 95 97

Vai Asp Vai Gly Ser Leu Asn Gly Thr Tyr Vai Asn Arg Glu Pro Vai 100 105 110

Asp Ser Ala Vai Leu Ala Asn Gly Asp Glu Vai Gin lie Gly Lys Leu 115 120 125

Arg Leu Vai Phe Leu Thr Gly Pro Lys Gin Gly Glu Asp Asp Gly Ser 130 135 140

Thr Gly Gly Pro 145 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 65: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 230 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:65:

Thr Ser Asn Arg Pm Ala Arg Arg Gly Arg Arg Ala Pro Arg Aso Thr 1 & 10 IS Gly Pro Asp Arg Ser ATa Ser Leu Ser Leu Vai Arg m$ Arg Arg Gin 20 25 M Gin Arg Asp Ala Léu Cys Leu Ser Ser Thr Gin ile Ser Arg Gin Ser- 35 40 45 Asn Leu Pro Pro Ala Ala Gly Gly Ala Ala Asn Tyr Ser Arg Arg Asn 50 55 60 Phe Asp Vai Arg lie Lys íle Phe Set Leu Vai Thr Ala Vai Vai leu 65 70 75 80 Leu Cys Cys Ser Gly Vai Ala Thr Ala Ala Pro Lys Thr Tyr Cys Glu 85 90 95 98 61 u Leu Lys. Gly Thr Asp Thr S1y GU AU Cys 01« He 61« Met Ser loo m m

Asp Pro Ala Tyr Aso IIe Aso Ile Ser Lee Pro Ser Tyr Tyr Pro A$p 115 120 125

Gin Lys Ser teu Sl u Mu Tyr ile AU SI π Thr Arg Asp lys Phe Leu 130 135 140 Sêr AU Âlâ Ur Sèr Sêr Thr Pro Arg Slu Ala Pro Tyr 61U Leu Asn 145 ISO: 1SS 160 ile Thr Ser Ala Thr Tyr G1n Ser Ala Ile Pro Pro Arg Gly Thr Gltt 165 170 175 AU Vai Va1 teu Xaa Vai Tyr His Asn AU G1/ Gly Br ms Pro Ihr ISO IBS 190

Thr Thr Tyr Lys AU Phe Asp Trp ASp Sln Ala Tyr Arg Lys Pro He 195 2® 205

Ihr 'íyr Asp Thr Leu Trp Gin Ala Asp Thr .Asp: Pro Leu Pro Vai Vai 210 215 220

Phe Pro íle Vai AU Arg 225 230 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 66: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 132 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:66: 99

Thr Ala Aí a Ser Asp As« Phe Gin Leu Ser Gfe Sly Gly Gin Gly Phe 1 5 10 15 Ala lie Pro lie Gly Gin Ala Hêt Ala He Ala Gly Gin li e Arg Ser 20 25 30 61 y Gly eiy Ser Pro Thr Vai Hls He Gly Pra Thr Ala leu Gly 35 40 45 Leu Gly Vãl Vai Asp Aso Aso Gly Aso Gly Ala Arg Vai 61 n Arg Vai so 55 60 Vai Sly Ser Ala Pro Ala Ala Ser Leu 61 y He Ser Thr Gly Asp Vai 65 n 75 60 Tle Thr Ala Vai As p Sly Ala Pro lie Asn Ser Ala Thr Ala Hêt Alá ás 90 95 Asp Ala Leu Asm Gly His ffís Pro 61 y Asp Vai He Ser Vai Μ»: Trp 19a 10S no 61« Thr Lys Ser Sly Sly Thr Aro Thr Gly Asn Vai Thr Leu Ala 61 u 115 ' 120 12$

Gly pro Pro Ala 130 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 67: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 100 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:67: 100

Vai Pro Lei* Arg Ser- Pm Ser Het Ser Pro Ser Lys Cys Leu Ala Ala 1 5 10 15

Ala SliB Arç Asn Pro Vai Ile Are Arg Arg Arg Leu Ser Asn Pró Pro ! 20 25 30

Pro Arg lys Tyr Arg Ser M@t Pro Ser Pro Ala Thr Ala Ser Ala Gly m- 40 4S

Het Ala Arg Vai Arg Arg Arg Ala He Trp Arg Sly Pro Ala Thr Xaa 50 S5 60

Ser Ala 61 y Het Ala Arg Vil Arg Arg Trp Xaa Vil Het Pro Xaa Vai 65 70 * 75 80

Ile Glo Ser Thr Xaa IIe Arg Xia Xaa Sly Pro- Ftse Asp Asn Arg 01 y 85 90 95

Ser Glu: Arg Lys 100 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 68: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 163 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (Q) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:68: 101 Hèt Thr Asp Âs-p 1¼ Leu leis He Asp Thr* Asp Glu Arg Vai Arg Thr 1 s m 15

Leu Thr Leu âsji Arg Pro Gin Ser Arg Asn Ala teu Ser Ala Ala leu 20 25 30

Arg Asp Arg pbe Pne Ala Xaa Leu Xaa Asp· Ala Gly im Asp Asp Asp 35 40 45

He Asp Vai Vai He Leu Thr Gly Ma A$p IPrd Vai Phe Cys Ala Gly 50 55 S§

Leu Asp Leu lys Vai Ala Gly Arg Ala Âsp Arg Ala Ala Gly His Leu 65 76 75 80 ITir Ala Vai Gly Gly Bis Asp Gin Ala Gly Asp Arg Arg Asp Gin .Arg 85 90 95

Arg Arg Gly His Arg Arg Ala Arg Thr Gly Ala Vai leu Arg Mis Pro 1 m lês " uó

Asp Arg Leu Arg Ala Arg Pro Leu Arg Arg Hls Pro Arg Pra Gly Gly 115 120 12S

Ala Ala Ala :Bis Leu Gly Thr Gin Cys Vai Leu Ala Ala Lys Gly Arg. 130 135 140

His Arg xaa Gly Pro Vai Asp 61 u Pro .Asp Arg Arg Leu Pra Vai Arg 145 ISO 155 150

Asp Arg Arg (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 69: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 344 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:69: 102

Het Lys Phe Vai Asn His Ile Glu Pro Vai Ala Pro Arg Arg Ala Gly 1 5 10 15 Gly Ala Vai Ala Glu Vai Tyr Ala Glu Ala Arg Arg Glu Phe Gly Arg 20 25 30 Leu Pro Glu Pro Leu Ala Met Leu Ser Pro Asp Glu Gly Leu Leu Thr 35 40 45 Ala Gly Trp Ala Thr Leu Arg Glu Thr Leu Leu Vai Gly Gin Vai Pro 50 55 60 Arg Gly Arg Lys Glu Ala Vai Ala Ala Ala Vai Ala Ala Ser Leu Arg 65 70 75 80 Cys Pro Trp Cys Vai Asp Ala His Thr Thr Het Leu Tyr Ala Ala Gly 85 90 95 Gin Thr Asp Thr Ala Ala Ala Ile Leu Ala Gly Thr Ala Pro Ala Ala 100 105 110 Gly Asp Pro Asn Ala Pro Tyr Vai Ala Trp Ala Ala Gly Thr Gly Thr 115 120 125 Pro Ala Gly Pro Pro Ala Pro Phe Gly Pro Asp Vai Ala Ala Glu Tyr 130 135 140 Leu Gly Thr Ala Vai Gin Phe His Phe Ile Ala Arg Leu Vai Leu Vai 145 150 155 160 Leu Leu ASp Glu Thr Phe Leu Pro Gly Gly Pro Arg Ala Gin Gin Leu 165 170 175 103

Het Arg Arg Ala Gly Sly Leu Vai Pbe A]a Arg Lys Vai Arg Ala Slu ISO IBS 190 H1s Arg Pró 61 y Arg Ser Thr Arg Arg Leu 61 u Pro Arg Thr im Pro m 2m aos

Asp Asp Leu Ala Trp Ala Thr Pro Ser G;lu Pro Il§ Alá Ur Ala Pfce 210 215 220

Ala Ala Ley Ser H1$ His Leu Asp Thr Ala Pro His Leu Pro Pro Pro 225 230 235 240

Thr Arg Glrs Vai Vai Arg Arg Vai Vil S1.y Ser Trp His Sly Sly Pro 245 2SS 255 fet Pro Het Ser Ser Arg Trp Thr Aso Glu His Thr Ala Êlulfeu Pm 260 m 270

Ala Asp Leu His Ala Pro Thr Arg: teu Ala leu Leu Thr Sly leu Ala 275 2S0 265

Pro His Gin Vai Thr Asp Asp Asp Vai Ala Ala Ala Arg Ser Leis Leu 290 295 300

Asp Thr Asp Ala Ala leu Vai Sly Ala Leu Ala Trp Ala Ala Phe Thr 305 310 315 320

Ala Ala Arg Arg lie Sly Thr Trp fie Gly Ais Ala Ala 61 u Gly Gin 325 330 335

Vai Ser Arq 61 rs Aso Pro Thr Gly ’ 340 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 70: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 485 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:70: 104

Asp Asp Pro Asp Het Pro Gly Thr Vai Ala Lys Ala Vai Ala Asp Ala 1 ~ 5 10 . 15

Leu Gly Arg Gly Ile Ala Pro Vai Glu Asp Ile Gin Asp Cys Vai Glu 20 25 30

Ala Arg Leu Gly Glu Ala Gly Leu Asp Asp Vai Ala Arg Vai Tyr Ile 35 40 45

Ile Tyr Arg Gin Arg Arg Ala Glu Leu Arg Thr Ala Lys' Ala Leu Leu 50 55 60

Gly Vai Arg Asp Glu Leu Lys Leu Ser Leu Ala Ala Vai Thr? Vai Leu 65 70 75 80

Arg Glu Arg Tyr Leu Leu Hls Asp Glu Gin Gly Arg Pro Ala Glu Ser 85 90 95

Thr Gly Glu Leu Het Asp Arg-Ser Ala Arg Cys Vai Ala Ala Ala Glu 100 ' 105 110

Asp Gin Tyr Glu Pro Gly Ser Ser Arg Arg Trp Ala Glu Arg Phe Ala 115 . 120 125

Thr Leu Leu Arg Asn Leu Glu Phe Leu Pro Asn Ser Pro Thr Leu Met . 130 ‘ 135 140

Asn Ser Gly Thr Asp Leu Gly Leu Leu Ala Gly Cys Phe Vai Leu Pro 145' 150 155 160

Ile Glu Asp Ser Leu Gin Ser Ile Phe Ala Thr Leu Gly Gin Ala Ala 165 . 170 175

Glu Leu Gin Arg Ala Gly Gly Gly Thr Gly Tyr Ala Phe Ser His Leu 180 185 . 190

Arg Pro Ala Gly Asp Arg Vai Ala Ser Tnr Gly Gly Thr Ala Ser Gly 195 200 20S

Pro Vai Ser Phe Leu Arg Leu Tyr Asp Ser Ala- Ala Gly Vai Vai Ser 210 215 220 105

Het Sly Sly Arg Arg Arg Gly Ala Cys Hei Ala Vai leu Asp Va! Ser m 230 235 246 His Pro Asp 11 i Cys Asp Phe Vai Thr Ala Lys Ala Glu Ser Pro Ser 245 250 255 Gslu Leu Pro His Phe Asn Leu Ser Vai Gly fel Thr Asp Ala Phe Leu 2® 265 27D Arg Ala Vai Slu Arg Asn Sly Leu His Arg Leu Vai Asn Pro Arg Thr m 250 285 Gly Lys Ile Vai Ala Arg Met Pro Ala Ala filu Leu Phe Mp Ala He 29B 295 300 Cys Lys Ala Ala His Ala Gly Sly Asp Pro Gly Leu fel Phé leu Asp 3ÕS 310 315 326 Thr He Mn Arg Ala 325 ÂSEÍ PfÚ fel Pro Sly 330 Arg Sly Arg Ile Glu 335 Ala Thr Asn Pro Cys Gly Glu Vai Pro leu Leu pro Tyr Glu Ser Cys Asn 34Θ 345 m teu Sly Ser Ile Asn Leu Ala Arg Hei Leu Ala Mp Gly Arg fel Asp 3S5 350 365 Tr:p Asp 371 Arg Leu Slu fila Vai 375 Ala 61 y Vai Ala fel 380 Arg Phe Leu Asp Asp fel Ile Asp Vai Ser Arg Tyr Pro Phe Pru Slu Leu Gly Glu Ala m 390 395 400 Ala Arg Ala Thr Arg Lys ílê Gly leu 61y Vai Het Siy Leu Ata Glu 40S 4Μ 415 Leu Uu Atà Ala leu Sly Ile Pm Tyr Asp Ser Slu Slu Ala Vai Arg 420 425 430 Lei* Ala ΊϊΐΓ Arg Leu Mel Arg Arg Ile Gtn Gin Ala Ala His Thr Ala 435 440 445 Ser Arg Arg teu Ala Glu Glu Arg fily Ala Phe Pro Ala Phe Thr Asp 450 455 450

Ser Arg Phe Ala Arg Ser fily Pro Arg Arg Asn Ala 61 n Vai Thr Ser 46S 470 475 480 fel Ala Pro Tfor fily 495 106 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 71: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 267 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:71: 61 y Vai Π® fel leu Asp Leis 61 u Pro Arg Sly Pro Leu Pro Thr 61 u 1 5 10 15 IIe Tyr Trp Arg Arg Arg Sly Leu Ala leu 61 y ik Ala Vai Vai fel 20 25 30 fel Gly lie Ala Vai Ala II e Vai lie Ala Phe Vai Asp Ser Ser Ala 35 4Q 4$

Gly Ala Lys Pro Vai Ser Ala Asp Lys Pro Ala Ser Ala Gin Ser His 58 55 50

Pro Qly Ser Pro Ala Pro Gin Ala Pm Gin Pro Ala Qly Gin Thr 61 u 65 76 75 80

Gly Asn Ala Ala Ala Ala Pro Pro Gin Gly Gin Ásn Pro 61u Thr Pro 85 9Ô 95

Thr Pro Thr Ala A1a fel SIrs Pro Pro Pro Vai Leu Lys 61o Sly Asp 160 m Π0

Asp Cys Pro Asp Ser Thr Leu: Ala Vai Lys Sly Leu Thr Asn Ala Pro m 123 125

Gin Tyr Tyr Vai 61y Ãsp Gin Pro lys Phs Thr Het fel Vai Thr Asn 107 140 140 Ile Gly Leu Vil Ser Cys lys Arg Asp Vil Gly Ala Ala Vai lai AU 145 150 1S5 160 Ala Tyr Vai Tyr Ser leu Asp fers Lys Arg Lai Trp >er Aifl leu Asp 165 170 175 Cys Ala pro Ser Asn Giu Thr Leu Vai lys Thr Phe Ser Pro Gly m 180 185 190 Sln Vai Thr Thr Ala Vai Thr Tfp Thr Gly Het Gly Ser Ala. Pro Arg 195 zm zm

Cys Pr o Leu Pro Arg Pr o Ala Ile Gly Pm Gl_y Thr Tyr Asn Liu Vai 210 .215 220

Vai Sín leu Gly Asn leu Arg Ser leu Pro Vai Pro Phe Ile Leu Mn £25· 230 23S 240

Sln Pro· Pro Pro Pró Pro Gly Pró Vâl Pré Ala Pro Gly Pro Ala Gin .245 250 256

Ala Pro Pro Pro 61u Ser Pro Ala Sln Gly Gly ; 260 266 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 72: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 97 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:72:

Leu: He Ser Thr Gly Lys Ala Ser His Ala Ser Leu Sly Vai Gin Vai

1 5 10 IS

Thr As π Asp Lys- Mp Thr Pro Gly Ala tys Ile Vai Glu Vai Vai Ala m 2$ 30 108

Sly Giy Ala Ala Ais Asn Ala Giy Vai Pro tys Giy Vai vai Vai Ihr 35 40 45 Lys Vaí Asp Asp Arg Pro lie Asn Ser Ala Asp Ala Leo Vai Ala Ala 50 ss 60 ¥al Arg Ser lys Ala Pro Giy Ala Thr Vai Ala Leu Ihr Phe Sln Asp m n 7S: 80 Pro Ser Giy Giy Ser Arg Thr Vai 6ΪΒ Vai Tihr t m Sly l.ys Ala Glu és m 95 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 73: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 364 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:73:

Giy Ala Ala Vai Ser Las Leo Ala Ala Giy Thr Uu Vai Leu Thr Ala 1 £ 1.0 15

Cys Giy Giy Gly Thr Asn Ser Ser Ser Ser Giy Ala Giy Giy Ihr Ser 20 25 30

Giy Ser Vai Nts €y$ Giy Sly tys tys 81 u Leo His Ser Ser Giy Ser 35 40 45

Thr Ala 61« Glu Asn Ala Met 61u Gin Phe Vai Tyr Ala- Tyr Vai Ar-g 50 55 50

Ser Cys Pró Giy Tyr Ihr Lei? Asp Tyr Asn Ala Aso Giy Ser Giy Ala S5 70 75 80 109

Gly Vai Thr 61 n Pfie teu Asn Asn Slu Thr Asp Phe Ala Gly Ser Asp 86' 90: 95

Vai Pro Leu Α&π Pro Ser Thr Gly 61 n Pro A$p Arg Ser Ala 81 u Arg 100 MS 110

Cys Gly Ser pro Ala Trp Asp Leu Pro Thr Vai Phe Gly Pro íle Ala m 120 125

He Thr Tyr Asn Ile lys Gly Vai Ser Thr Léu Mn Leu Asp Sly Pro 130 135 140

Thr Thr Ala Lys Ile Phe Asn Gly Thr lis Thr Vai Trp Asm Asp Pro

145 150 155 TfiQ

Gin Ile Gin Ala tey Asm Ser Gly Thr Asp Leu Pro Pro Thr Pro Ile 16S 170 175

Ser Vai Ile Ptíe Arg Ser Asp Lys Ser Sly Thr Ser Asp Asn Phe 61 n 180 18$ ISO

Lys Tyr Le.u Asp Gly Vai Ser Asn Gly Ala Trp Sly Lys Gly Ala Ser 195 Zm 2QS

Slu Thr Phe Ser Gly STy Vai Gly Vai Gly Aia Ser Gly Asn Mn Gly 210 215 220

Thr Ser Ala Leu Leu 81o Thr Thr Asp Gly Ser He Thr Tyr Asn 81 w 225 230 23$ 240

Trp Ser Pfte Ala Vai Gly Lys Gin Leu Asn Jtet Ala Gin Ile He Thr 245 250 255

Ser Ala Gly Pro Asp Pro Vai Ala He Thr Thr 81 u Ser Vai Gly lys 260 265 270

Thr lie Ala Sly Ala. lys Ile Met Gly Gin Gly Asn Asp Leu Vai teu 275 280 285

Mp Thr Ser Ser Phe Tyr Arg Pro Thr Gin Pro Gly Ser Tyr Pro Ile 290 295 300

Vai Leu Ala Thr Tyr Gly Ile Vai Cys Ser Lys Tyr Pro Asp Ala Thr 305 310 3ÍS 320

Thr Sly Thr Ala Vai Arg Ala fhe Met Gin Ala AU Ile Sly Pro Sly 325 338 32®

Gin Glu Sly Leu Asp 61 n Tyr Gly Ser II# Pro leu Pro Lys. Ser Phé 340 345 350

Gin Ale Lys Leu Ala Ale AU Vai Mn Ala Ile Ser 355 360 110 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 74: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 309 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:74:

Arg Ala Vai Arg Arg Thr Gly HiS Ala GÍU Asp M 15 Arg Leu Hfs HiS Gly tys Arg Arg Ala Ala Vai 25 30 Arg Asa Ser Vai Ser Ala Thr Ser Ala Arg Pro 40 45 Ala m® ss Gly His Arg Arg Arg 60 vai Ala Pro Ser Pró Hl s Pro HiS Hi s Vai Gin Pro Asp Asp Arg 70 75 80“ leu Leu Asp Arg ihf Êln Pro Ala Èlli HiS Pro 95 m Pro Ala Asp Pro Gly Arg Vai Arg Êly Arg 185 110 m Asp Asp Gly Arg Leu 61 r Pro Asp Arg Asp

Gin Ala Ala Ala Gly 1 5

Gin Thr His Gin Asp m

Vai: Vai Arg 61 n Asp 35

Pro Arg Arg Hi$ Pro se

Sly Giy Ar§ Arg Arg ss

Arg Asp Arg Pr* Ala 85

Asp Pm Kfs·’ Arg Arg 101

Sly Arg LèU: Arg Arg 111 115 m 125

Ala Ã$p His Gly AM Prú Vai Arg Gly Arg Gly Pr o Hl S Arg £ly Vai 138 135 140 gin Hls Ârg Sly 61y Pro Vai Phe Vai Arg Arg Vai Pro Sly Vai Arg 145 150' 155. 160

CyS Alâ Hls Arg Arg Gly HlS Arg Arg Vai Ala Ala Pro Gly Glm Gly m m 175

Asp Vai Leu Arg Ala Gly Leu Arg Vai Glu Arg Leu Arg Pro Vai Ala 180 185 190

Ala Vál 61 u Asn lm Hls Arg Sliy Ser Gin Arg AM Asp Sly Arg Vai 195 200 205 PPe Ârg Pro II e Arg Arg Sly AM Arg Leu Pro AM Arg Arg $ér Arg m 215 220

Ais Gly Pro Gin Gly Arg Leu Hís Leu Asp Gly AM Gly Pro Ser Pro 22S 30 235 240 Líhí Pro AM Arg AM Gly Gin Gin Gin Pro Ser Ser Ala Gly Gly Arg 245 250 255

Arg AM Gly Gly AM Glu Arg AM Asp Pro Gly Gin Arg Gly Arg H1s 260 265 270

Hfs Gin Gly Gly Hls Asp Pro Sly Arg 81 n Gly AM Gin Arg Gly Thr 275 280 285

Ala Gly 'Vai Ala HM Ala Ala Ala Gly Pro Ar§ Arg AM AM Vai Arg a0 235 300

Asm Arg Pro Arg Arg 305 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 75: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 580 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear 112 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:75:

Ser Ala Vai Trp £ys Leu Mn Gly Phe ΤΤϊγ Sljf Arg His Arg Hls Sly 1 5 lfl 15

Arg Cys Arg Vs1 Arg Ala Ssr Gly Iro Arg Ser Ser Asrs Arg Trp Cys 20 25 33

Ser Thr Thr Ala Asp Cys Cys Ala. Ser Lys Thr Pro Thr Gin Ala Ala 35 ' m 45

Ser Pro leu 61 u Arg Arg Phe Thr Cys Cys Ser pre Ala Vai Sly Cys 50 55 60

Arg Phe Arg Ser Phe Pro ¥al Arg Arg Leu Ala Lee Gly Ala Arg Thr 65 70 7S 80

Ser Arg Thr Leu Gly Vai Arg Arg Thr teu Ssr Gin Trp Asn leu Ser

Pro Arg Ais Gin Prct Ser Cys Ala Vai Thr Vai Slu Ser H1$ Thr Hls

; 100 1 05 UO

Ala Ser Pro Arg Het Ala Lyã Leu Ala Arg Vai Vai Gly Leu Vai Gin Í1S 23 125

Glu Glu Gin Pro Ser Asp Met Thr Asn Hls Pro Arg Tyr Ser Pro Pro m 135 140

Pro GTn Gin Pro Gly Thr Pro· Sly Tyr Ala Gin-Gly Gin Gin Gin íhr 145 ISO 155 160

Tyr Ser Gin Slrs Phe Âsp Trp Arg Tyr Pro Pro Ser Pro Pro Pro Gin

Ifô Ϊ70 175

Pro Thr Gin Tyr Arg Gin Pro Tyr Glu Ala Leu Gly Gly Thr Arg Pro 180 IS5 196

Sly Leu He Pro Sly Vai He Pro Thr Met Thr Pro Pro Pro Gly ffet 195 263 265 113

Vai Arg Gin Arg Pm Arg Ala Gly ãlÓ 2X5

Ile Ala Vai Vai Ser Ala Gly íle 225 230

Gly Phe Asm Arg Ala Pro Ala 6ly 245

Ssr Ala Ala Pro Ser Ile Pm Ala -'260

Slu Sín Vai Ala Ala tys Vai Vai 275' 280

Asp Leu Gly Arg Gin Ser Glu Glu 290 296

Gly Gly Leu íle leu Thr Aso Aso 305 313 Pro Pro leu Gly Ser Pro 32S Pro Pro Gly Arg Thr Ala 34:0 Pro Phe Thr Vai Ile Ala fel Vai Ar§ Vai 61n Sly 355 360 Leu Gly Ser Sér Ser Asp leu Ar§ 370 375 61y Ser Pro Leu Gly leu 61u Gly 386 390

Ala teu ksn Arg Pro Vai Ser Thr 405

Thr Vai Leu Asp Ala Ile Gin Thr 423

Ser 61y Sly AI a teu Vai Aso Het 435 440

Het Las Ala Ile Gly Ala Vai Thr 220

Gly Sly Ala Ala Ala Ser leu Vai 235 240

Pro Ser Gly Gly Pro Vai Ala Ala 2S0 25S

Ala Asn Met Pro Pr o 61 y Ser Vai 265 ' 270

Pro Ser Vai Vai Mèt Ley Glu Thr 285

Sly Ser Gly íle Ile Leu 'Ser Ala 300

His Vai Ile Alá Ala. Ala Ala Lys 315 32Õ

Lys Thr Thr Vai Ihr Phe Ser Asp 330 33S

Vai Gly Ala Asp Pro thr Ser Asp 345 3S0

Vai Ser Gly Leu Thr Pm Ile Ser 365 Vâl Sly Gin Pro Vai Leu: Ala Ile 380

Thr Vai Iftr Ihf Gly Ile Vai Ser 395 4®

Thr Gly 61 u Ala Gly Ase Gin Asn 4.10 415

Asp· Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn 425 430

Aso Ala Gin Leu Vai Gly Vai Asn 446 114

Ser Ala líe Ala Thr teu Gly Ala Asp Ser Ala Asp ATe Gin Ser Gly 450 455 460

Ser Ile Gly Léu Gly Phe Ala 11 e Pro Vai Asp Gin Ala Lys. Arg IIe 4SS 470 475 480 .Ata Asp Gly Leu Oe Ser Thr Gly Lys Ala Ser Bis Ala Ser Leu Gly 485 490 495

Vai Gin Vai Thr· Asn Asp Lys Asp Thr Pró Gly Ala Lys IIe Vai 81 u SOO 505 510

Vai Vai Ala Gly Gly Ala Ala Aia Asrs Ala Gly Vai Aro lys Gly Vai 515 520 525

Vai Vai Thr Lys Vai Asp Asp Arg Pro Oe Asn Ser Ala Asp Ala Leu 530' 535 540

Vai Ala Ala Vai Arg Ser Lys Ala Pre Gly Ala Thr Vai Ala leo Ifir 54S 550 555 560

Phe Gin Asp Pr o Ser Sly Gly Ser Arg Thr Vai Gin Vai thr leu Gly 565 ’ 570 575 lys Ala 81 u filo 580 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 76: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 233 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:76:

Met Asn Asp Gly Lys Af§ Ala Vai Thr Ser Ala Vai Leu vai Vai Leu 1 S 1Θ 15 115 G1y Ala Cys Lêit Ala Leu Trp Leu Ser Gly Cy$ Sei" Ser Pro ty$ Pro 20 25 30

Asp AU Glu Gly Gin Gly Vai Pro Vai Ser m Ifcr Ala Ser Asp Pro 35 40 45

Ala Leu Leu Ala 61 u 1¼ Arg Gin Ser leu A$p Ala Thr lys Gly Leu 50 5S m

Thr Ser m HH Vai Ala Vai Arg Thr Thr Gly lys Vai Asp Ser Leu m 70 75 80 teu Gly He Thr Ser Ala Asp Vai Asp Vai Arg AU Asm pro leu Ala 85 m 95

Ala Lys Gly Vai Cys Thr Tyr Asn Asp Glu 61 n Gly Vai Pro Pte Arg 100 105 110

Vai Gin Gly Asp Asm Ile Ser Vai: Lys Leu Phe Asp .Asp Trp Ser Asm 115 120 12S

Leu Gly Ser. lie Ser Glu Leu Ser Thr Ser Arg Vai Leu Asp Pro Ala 130 135 148

Ala Gly Vai Thr 61 n Leu Lm Ser 81,v Vai Thr Asm teu Gin Ala Gin

145 150 155 ISO

Gly Thr 61 ti Vai Ile-Asp Gly He Ser Thr Thr tys He Thr Gly Thr 105 170 175

He pro AU Ser Ser Vai Lys Het Leu Asp Pro Gly Ala Lys Ser Ala ISO 18S 190

Arg Pro Alá Thr Vai Trp He Ala Gin Mp Gly Ser Hls His leu Vai 195 200 205

Afg Ale Ser Ile Asp Leu Sly Ser Gly Ser Ile GIrs leu Thr Gin Ser 210 215 220 lys Trp Asm Glu Pro Vai Aso Vai Asp 225 230 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 77: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 66 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido 116 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:77:

Vai Ile Asp He Ile Sly Thr Ser Pfq Tbr Ser Trp Sltí 61o Ala Ala l S 10 18

Ala filu Ala Vai Gin Arq Ala Arq A$p Ser Vai Asp Asp Ile Arg Vai 20 “ " 25 30

Ala Arg Vai Oe Gin Gin Asp Met Ala Vai Asp Ser Ala Gly Lys Ha 35 40 45

Ur Tyr Arg He lys leu Gly Vai Ser Phe los ftet Arg Pro Ala Gin 50 55 60

Pr& Arg 65 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 78: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 69 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:78:

Vai Pro Are Ala Pro pro Leu iro Pro Leu Pm Pro Ser pro lie Ser 1 S Μ 15

Cys Ala Ser Pro Pro Ser Pr o Pre Leu Pro Pro Ala Pro Pr o Vai Ala 20 25 30 117

Pro S!y Pro Pro Het Pro Pro Lm A$p Pro Trp Pro Pro Ala Pro Fro 35 40 '45 teu Pro Tyr Ser T¥ir Pro Pro Gly Ala Pro Leu Pro Pro Ser Pro Pro 50 55 60

Ser Pro Pro Lee Pro 65 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 79: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 355 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:79:

Het 1 Ser Asn Vai Leu Alá Ale Pro Pro 35 Pro Leu 50 Asp Asn Ile Asn 65 61 y He Vai He Ala Gly

Ser Arg Arg Arg Ser Leu Arg Trp Ser Trp Leu Leu Ser S M 15

Ala Vai Gly Leu Gly leu Ala Tísr Ala Pro Ala 51o Al$ m m m

Ala Uu Ser Gin A$p Ara Phe Ala Aso Phe Pro Ala teu 46 45

Pro Ser Ala Het Vai Ala Gin Vai Ala Pro Gin Vai Vai 55 m

Thr Lys Leu Gly Tyr Asn Aso Ala Vai Gly Ala Sly Thr 70 75 BQ 11 é Asp Pra Aso Gly Vai Vil Leu: Thr Asn Aso Hls Vai 85 90 95

Ala Thr-Asp lie Aso Ala Phe Ser Vai Gly Ser Gly Gin 100 10$ HO 118

Thr Tyr Gly Val Asp Val Val Gly Tyr Asp Arg Ihr Gin Asp Val Ate 115 120 125 Val leu Gin teu Arg Gly Ala Gly Gly leu Pro Ser Ala Ala Ile Gly 130 135 140 Gly Gly Vai Ate Val Sly GTtí Pm Val Val Ala «et Gly ãsn Sèf Gly 145 ISO 155 160 Sly G1r Gly Gly Thr Pro Arg Ate Val Pro Sly Arg Val Val Ate Leu 165 170 175 Gly Gin Thr Val Gin Ala Ser Asp Ser Leu Ihr Gly Ala Gly 61 u Ihr 180 185 m teu Asn Gly leu n§ 61 n Phe Asp Ala Ate Ile Gin Pm siy Asp Ser 195 200 205 Gly Gly Pro Val Val Asn Gly leu Gly Gin Val Val Gly Het Asn Ihr 210 215 220 Ais 225 Ate Ser Mp A$n Phe 230 Gin Leu Ser Sln Gly 235 Gly Gin Gly Pbe Ate 240 Ile Pro Πβ Gly Gin Ala «et Ala De Ala Gly Gin ne Arg· Ser Gly 245 m 255 Gly Gly Ser Pro Thr Val H1$ lie oiy Pro Thr Ate Phe Lea Sly leu 2® 265 270 Gly Vai Vai Asp Asn Aso Gly Asn Gly Ala Arg Val Gin Arg Val Val 275 2B0 285 Gly Ser Ala Pré Ala Ala Ser Leu Gly Ile Ser Ihr Gly .Asp Val ru 290 295 300 Ihr Ala Vai Asp Gly Ala Pro Ile ásn Ser Ala Thr Ate Het AU Asp 305 310 315 320 Ala im Asn Gly Hls H1$ Pro Gly Asp Val ile Ser val Asn Trp Gin 32S 330 335 Thr tys Ser Gly Gly TNr Arg Thr Gly Asn Val Thr leu Ate Gly Gly 340 345 35¾

Pro Pro Ala 355 119 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 80: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 205 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:80:

Ser Pr© Lys Pr© Asp Ala 61 u 61u SIπ 61 y Vai Pr© Vai Ser Pro Thr 1 5 m 15

Ala Sér Asp Pr© Ala leu Leu Ala 61 u Oe Arg 61© Ser Leu Asp Ala 20 25 30

Thr lys 6ly teu Thr Ser Vai His Vil Ala ¥al Arg Thr Thr 61 y Lys 35 40 45

Vai Asp Ser Leu Leu 61y He Thr Ser Ala Asp Vai Asp Vai Arg Ala 5Q 55 6S

Asrs Pro Leu Ala Ala Lys 61y Vai Cys Thr Tyr Asrt Asp Glu Gin 61 y 65 ?0 75 80

Vai Pro Phe Arg Vai Gírs Gly Asp Asn lie Ser- Vai Lys Leu Phe Asp

85 90 SS

Asp Trp Ser Asrt Leu 61 y Ser Ile Ser 61 u Leu Ser Thr Ser Arg Vai i 100 105 110

Leu .Asp Pr© Ala Ala 61y Vai Thr 61n Leu Leu Ser Sly Vai Thr As© 05 120 125

Leu 61© Ala Gin 61 y Thr 51a 'Vai He Asp 61 y He Ser Thr Thr Lys 130 m ÍM 11 ê Thr 61 y Thr IIe Pro Ala Ser Ser Vai Lys Het Leu Asp Pr© 61y 120 145

ISO

1SS 169

Ala Lys Ser Ala Arg Pre Ala Thr Vai Tr$j He Ala Gin Asp Gly 165 170 175

His His Leu Vai Arg Ala Ser He Asp teu Gly Ser Gly Ser He Gin ISO 1M ISO

Leu Thr 61 rt Ser lys Trp Asn 61 u Pre VAI A$n Vai Asp ISS 200 205 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 81: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 286 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:81: 61 y Asp Ser Pise Trp Ala Alâ Ala Asp Gin Met Ala Arg Gly Pfte Vai

1 S 10 IS leu Gly Ala Thr Ala Gíy Arg Thr Thr leu Thr Gly 61 u Gly Leu Gira 20 25 30

His Ala Asp Sly His Ser Leu Leu Leu Asp Ala Thr Asn Pro Ala Vai 35 40 45

Vai Ala Tyr Asp Pre Ala Phe Ala Tyr Slu He Sly Tyr ile Xaa 61 u 50 55 60

Ser Gly Leu Ala Ara Ket Cys Gly Glu Asp Pro siu Asp He Phe Pht 65 70 75 80

Tyr Ilè Thr Vai Tyr Asn 51 u Pro· Tyr Vai 61 r» pro Pro 61 u Pro 61u 85 90 95

Asr Phe Asp Pro 61 u Sly Vai Leu Gly Sly He Tyr Arg Tyr Bis Ala 160 105 110 121

Ala Thr Q]y Gin Arg Thr Asr Lys Xaa 61 n IIe Leu Ala Ser 61 y fel 115 120 125

Ala Het Pro Ala Ala leu Arg Ala Ala Gin Wet L§u Ala Ala 61« Trp 130 135 140

Asp Vai Ala Ala Asp fel Trp Ser Vai Thr Ser Trp 61 y 61 y Leu Aso 145 ISO 155 160

Arg Asp fily fel Vai Ile 6?« Ihr 61« lys Leu Ar$ Hts Pro Asp Arg 165 170 175

Pro Ala fily Vai Pro Tyr Vai Thr Arg Ala Leu Slu Asa Ala Arg fily ISO 185 190

Pro Vai He Ala fel Ser Asp Trp Hat Arg Ala fel Pr» 61« 61» Ile 1% 200: 205

Aff Prp Trp fel Pro Sly Thr Tyr Leu Thr Leu Gly Thr Asp Sly Phe ' .210 215 220 fily Phe Ser Asp Thr Arg Pro- Ala Sly Arg Arg Tyr Phe Aso Ihr Asp 225 230 235 240

Ala 61« Ssr Slo Vai Sly Arg fily Pte Sly Arg Siy Trp Pro 61 y Arg

245 250 2SS

Arg Vai Asn lie Asp Pro Fbe 61y Ala Sly Arg fily Pro Pro Aia 61o : 200 265 270 tey Pro Gly Pfee Asp 61 u 61 y Sly fily Uu Arg Pro Xas Lys 275 m 285 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 82: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 173 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:82: 122 tftr iys Phe His Ala Leu Mêt Gin Glu 61 fi He Bis fen Glu Phe Thr l 5 10 15

Ala Ala Sim Gin Tyr Vai Ala He Ala Vai Tyr Phe Asp Ser SI u-Asp 20 25 m

Leu Pro Gin Leu Ala tys His Phe tyr Ser Gin Ala Vai Glu Glu Arg 36 40 45 Âsh His Ala Het Het Leu Vai Gin His Lai Leu Asp Ar§ Asp Leu Arg 50 56 m

Va1 Glu ITe Pro Gly Vai Asp Thr Vai Arg Asn Gin Phe Asp Arg Pro 65 70 75 80

Arg Glu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Asp Gin Glu Arg thr Vai Thr Asp 85 90 95

Gin Vai Sly Arg Leu Thr Ala Vai Ala Arg Asp Glu Giy Asp Phe teu lÓQ 105 110 61y Glu Gin Piie Het Gin Trp Fhe Leu Gin Slu 61« He Glu Glu Vai 115 120 125

Ala Leu Het Ala Thr Leu Vai Arg Vai Ala Asp Arg Ala Gly-Ala Asm 130 135 140 teu Phe Glu teu Slu Asm Phe 1%! Ala Ârg Glu Vai Asp Vai Ala Pro

145 ISO 155 ISO

Ala Ala Ser Gly Ala Pro His Ala Ala Sly Gly Arg leu 165 170 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 83: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 107 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:83: 123

Arg Ala Asp Slu Arg Lys Asa Thr Utr Hat Lys ftet Vaí Lys Ser lie 1 5 10 15 AU Ala Gly Leu Thr Ala AU Ala Ala ÍU Gly Ala AU Ala Ala Gly 20 25 30 Vãl Thr Ser íle Hat AU Gly Gly Pro fel Vai Tyr GU ftet GU Pm 3S AO 45 Vâ! Vai Pbe Gly AU Pm Lee Pro Leu Asp Pro Xaa Ser AU Fro fea B0 55 68

Vai Pro Thr Ala AU Gin Trp Thr las Leu Leu Asrt fâá Leu fea Asp 6S 70 75 80

Pm Ase Vai Ser Ptoe fea Asn Lys Gly Ser leu fel GU Sly Gly Ile 85 90 95

Sly Sly fea (1! u Sly Xas Ua Arg Arg Xae Oln 100 105 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 84: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 125 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:84:

Vai leu Ser Vai Pm fel Gly Asj> Gly Phe Trp Xaa Arg Vai Vai Aso 1 5 18 15

Pro teu Gly Gin Pro Ile Asp Gly Arg Gly Ast) Vai fep Ser As.p Thr 20 25 30 124

Arg Arg Ala leu Qle leu Gin Ala Pro Ser Vã! Vâl Xaâ Arg: Gin Gly “ 35 40 45

Vai Lys Giu Pr# teu Xaâ Thr Sly Π& lys Ala He Asp Ala Het thr 50 Β 6Θ

Pro He Gly Arg Gly Gin Arg Gin leu ile lie Gly Asp Arg Ly$ Thr 65 ?® 75 80

Gly Lys Âsn Arg Arg leu Cys Arg Thr Pro Ser Ser Asn Gin Arg Giu 85 90 95

Giu Leu Gly Vai Arg Trp Ile Pro Arg Ser Arg Cys Ala Cys Vai Tyt 180 m 110

Vai Gly Hi$ Arg Ala Arg Arg Gly Thr Tyr His Arg Arg 115 ' lá) 125 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 85: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 117 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:85:

Cys Asp Ala Vsi Het Gly Phe Leu Gly Gly A1a Gly Pro Leu Ala Vsl 1 5 10 15

Vai Asp Gin Gin leu Vai Thr Arg Vai Pro· Gin Gly Trp Ser Phe Ala 20 2S 30

Sln Ala Ala Ala Vai Pm Vai Vai Pht Léu Thr Ala Trp Tyr S1y leu 35 40 «5

Ala Asp Leu Ala Giu lie Lys Ala Gly Giu Ser Vai Leu Ile His Ala 50 SS 50

Gly Thr Gly Sly Vai Gly Het Aía Ala Vai Gin Leu Ala Arg Gin Trp 125 70 7S ao G!y Vai SIu Vai Pite Vai Thr Ala Sér Arg Sly ty$ Trp Asp H*r Leu S£ 90 95

Arg Ala Xaa Xaa Fhe Asp Asp Xaa Pro Tyr Arg Xaa Pfte Pro Hl s· Xâa ; 100 105 110

Arg Ser Ser Xaa Gly 115' (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 87: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 88 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:87: Váí Slrt Cys Arg Vai Tro Leu Sly He S!n Trp Arg Sly Het Leu Sly 1 S ' 10 15

20 25 M

Ser Het Ala Ala Het tys Pra Arg Thr Sly Asp Sly Pm leu Glu Ala 35 40 45

Thr lys Glu Sly Arg Gly IIe Vai Met Arg Vai Pro Leu Sly Sly Sly 50 55 60

Sly Arg im Vai Va1 Glu Leu Thr Pro Asp Glu Ala Ala Ala leu Sly 65 70 75 80

Asp Sly Leu Lys Sly Vai Hw* Ser S5 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 88: 126 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 95 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:88:

Thr A$;p Ala Ala Leu Ais Gin Glu Ala Qly A$n 1¾ Glu Arg He 1 S 10 15

Ser Gly Asp Leu tys Br Gin Ile Asp Gin Vai Èlu Ser Tfrr Ala Sly 20 2S 3Ò Sér Leu Gin G1y $Tm Trp Arg Gly Ala Ala 61y Tftr Ala Ala 61n Ala 35 40' ' 45

Ala Vaí Vai Arç Pbe Gín Glu Ala Ala âsn Lys G1n Lys Sln Sli: leu 50 55 60

Asp fí1u He Ser· Thr Asn Ile Ara Gin Ala Gly Vai Sln Tyr Ser Ara 65' 70 75 Bfl

Ala Asp Glii 61 u Gin Gin Gin Ala Leu Sêr Ser 61 n Het Sly Pte 85 90 95 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 89: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 166 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:89: 127 ítet Thr Sífl Ser 61η Tbr fel Thr Vai Asp 61 n Sln Glu ikvtetí Asn 1 5 10 15

Arg Ais Âsn Glu Vai 61 u Ala f¥& Het Ais Asp Pre Pro TTsr Asp Vai ; 20 25 $)

Prt> fie Thr Pm ty$ 61 u leu Ihr íísa Xaa lys Ãsn Ala Ala Gin Gin 35 40 45

Xaa Vai Leu Ser Ala Asp A$n Het Arg 61 u Tyr Leu Ala Ala Gly Ala S0 55 60

Lys 61 u Arg Gin Ar-g Leu Ala Ur Ser Leu Arg fen Ala Ala Lys Xas 6S 70 75 80

Tyr Gly 61 y Vai Asp 61 u 61 u Ala Ala Thr Ala Leu Asp Asíj Asp Gly as m 95 61u 61 y Thr Vai Gin Ala 61u Ser Ala Gly Ala fel Gly Gly Asp Ser 1D0 105 110

Ser Ala Glu Leu Thr Asp Thr Pr o Arg Vai Ale Thr Ala 61y 61 u Pr o 13,5 120 125

Asm Pbe Het Asp Uu lys 61u Ala Ala Arg Lys Leu 61 u Thr Sly Asp 130 135 140 61 n 61 y AH-Ser leu AH H1s Xaa Sly Asp 61y Trp Asr* Thr Xaa Thr 145 150 155 160

Leu Thr Ley ÍIM Gly Asp Í65 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 90: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 5 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:90:

Arg Ala Glu Arg Het 1 5 128 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 91: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 263 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:91:

Wl Ala Trp Met Ser Vai Thr AVs Gly Glh Ala 61 u Leu Thr AH Ala l 5 10 15 SI» Vai Arg Vai Ala AI a Ala Ala Tyr £tu Thr Â1 â Tyr Sly leu Thr 23 25 30 Vel Pro Pro Pr® Hl lie Ala Gui Asn Arg AH Gly leu Met ITe leu 35 43 45 m Ai a Thr Asn Leu Leu Gly Jl Asfs Thr Pro Ala lie Ala vai Asn 58 55 60 61U AH 61 u Tyr Gly 61U «et Trp Ala Gin Asp AH Ala Ala ffet Phe 65 70 75 ao Gly Tyr Ala Ais Ala m Thr Ala Thr Ai 3 Thr 50 Ala Thr Leu Leu Pro 9S Phe 61 u Clu Ai a Pro m u Het Thr Ser Ala 61y 61y leu leu 61 u Gin AI â 109 105 110 AH Ala Vai Glu 51 y Ais Ser Asp Thr Ala Ala AH Asn STn Leu Met 115. m 125 Asn Âsn Vai Pr® 6¼ Ai 3 Leu Lys 51 n Leu AH mn Prs Thr 61 n Gly 130 135 m Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leti Gly 61 y teu Trp tys Thr Vâ1 Sêr Pro 145 150 155 im Hls Aí*$ Sèr Pré Ile Ser Aso Met Vai Ser Jtet Ala Asn Asn ΉΗ Met 165 173 175 Ser Ket Thr Asn Ser Gly Vai Ser Hat Thr Asn Thr leu Ser Ser Met 180 185 190 Leu ly$ si y Phe Ala Pro Ala Ala Ala Ala Slh Ala Vai 61 n Thr Ala 129 208 195

Ala Gin As« Sly Vai Arg Ala Net Ser Ser teu fily Ser Ser leu 61y 210 215 220

Ser Ser Gly leu Sly Sly Sly Vai Ala Ala .Asm Leu Sly Arf Ala Ais 225 230 235 240

Ser VaT Arg Tyr Gly Hls Arg A$p Sly Sly tys Tyr Ala Xaa Ser Sly 245 ' 250 .255

Arg Arg Asn Sly Sly Pro Ala (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 92: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 303 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:92

Het Thr Tyr Ser Are Sly As« Pre Gly Tyr Pro Sln Ala 61« Pro Ala 1 5 10 15

Sly Ser Tyr Gly Gly Vai Thr Pro Ser Phe Ala His Ala Asp 61 u Gly 21 25 30

Ala Ser lys leu Pro Het Tyr Leu Asrt IIe Ala Vai Ala Vai Leu- Gly 35 40 45

Lej A‘a Ala Tyr Fhs Ala Ser Phe Gly Pro Het Piie Thr Leu. Ser Thr 50 SS 60

Glu teu Gly Gly) Gly Asp Sly Ala Vai Ser Gly Asp Thr Gly teu Pm 65 70 75 80

Vai Sly Vai Ala Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Sly Vai Vai leu Vai 85 90 95 130

Pro Lys AH lys Ser Hl s Vai Thr Vai Vai Ala Vai Leu Gly fel La* ISO IS5 110

Sly Vai Phe Leu Het Vai Ser AH Thr Phe Asn· Lys Pro Ser Ala Tyr 11,5 120 125

Ser Hir 61 y Trp AH Leu Trp Vai Vai leu AH Phe lis Vai Phe Sin 130 135 140

Ala fel Ala Ala Vai Leu Ala ím Leu Vai Slu Ttr Sly Ala IH Thr 145 150 155 160 AH Pro AH Pro Arg Pro lys Pfte Asp Pro Tyr Gly GH Tyr SlyArg 165 170 175

Tyr Gly G1 π Tyr 61 y Slft Tyr Gly Vai GH Pro 01y Sly Tyr Tyr 61y ISO ias 190

Slrt SH 61y Ala Slrt Sln Ala AH Sly Leu 6lrs Ser Pro Sly Pro Gin

195 200 SOS

Gin Ser Pro 0H Pro Pro Sly Tyr Sly Ser GH Tyr Sly Sly Tyr Ser 210 215 £20

Ser Ssr Pro Ser 6!n Ser Gly Ser Sly Tyr Thr Ala Gin- Pro Pro AH 225 230 235 24Ó

Sln Pro Pro AH Gin Ser Gly Ser SH Sln Ser M1s 61 n G1y Pro Ser 245 258 255

Thr Pro Pro Thr Gly Ptie Pro Ser Phe Ssr Pro Pro Pro Pro Hl Ser ; 260 265 270 AH Gly liar Sly Ser Gin Ala Gly Ser AH Pro Vai Asn Tyr Ser Aso 275 280 285

Pro Ser Gly Gly Gly 6H Ser Ser Ser Pro Gly Gly Ala Pro fel 290 295 300 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 93: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear 131 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:93: 61 y Cys 61y SÈu Thr Asp Ale Ala Thr Leu Ala 61 n 6íu Ala Sly Asn 1 5 10 15 PPs 61 y Ar$ He Ser 61 y Asp Leu Lys Thr 61 n lie

30 2S (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 94: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:94:

Asp 61 fi Vai Slu Ser Hir Ala 6ty Ser Leu 61n Sly 61rt Trp Arg Sly I 5 10 15 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 95: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:95: 132 Êly Cys Gíy Ser íhr Ala G1y Ser Leu Gin Sly Gin Trp Arf Gly Ala 1 5 13 15

Ala Sly Thr Ala AU Gin Ala .Ala líal Vai Arg £0 £5 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 96: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:96:

Gly Cys Gly Gly Thr .Ala Ala Sln Ala Ala Vai Vai Arg The Gin G!u 1 5 10 IS

Ala Ala Asn Lys Gin Lys Gin Glu Leu Asp Glu (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 97: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:97: fily Cys Gly Ala Asn tys Sln tys Gin Êlu Leu Asp Glu lie Ser Thr 1 5 .10 15 133

Asa lis Arg Gin Ais Gly Vai Glr> Tyr S&r Ar§ 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 98: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:98: 61y Cys fíly He Arg Stnt Ata Sty Va! Sln Tvr Ser Arg Ala Asp Siy i s ie- ' is

Gtu Stn GTrs Glrs Ala Leu Ser Ser Gin Jtefc Síy Pfte aa 2$ (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 101: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 500 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:101: 134 CGTGGCAATG TCGTTGACCG TCGGGGCCGG GSTCGCCTCC GCAGATCCCG T6GACGCGGT 60 CATTAACACC ACCTGCAATT ACGGGCAGGT AGTAGCTGCG CTCAACGCGA CGGATCCGG6 120 GGCTGCCGCA CAGTTCAACG CCTCACCGGT GGCGCAGTCC TATTTGCGCA ATTTCCTCGC 180 CGCACCGCCA CCTCAGCGCG CTGCCATGGC CGCGCAATTG CAAGCTGT5C CGGGSGCG6C 240 ACAGTACATG GGCCTTGTCG AGTCGGTTGC CGGCTCCTBC AACAACTATT AAGCCCATGC 300 GGGCCCCATC CCGCGACCCG GCATCGTCGC CGGGGCTAGG CCAGATTGCC CCGCTCCTCA 360 ACGGGCCGCA TCCCGCGACC CGGCATC&TC GCCGGGGCTA GGCCAGATTG CCCCGCTCCT 420 CAACSGGÇCG CATCTCGT6C CGAATTCCTG CAGCCCGGGG GATCCACTAG TTCTAGAGCG 480 GCCGCCACCG CGGTGGAGCT 500 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 102: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 96 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:102:

Vai Ala Het Ser Leu Thr Vai Gly Ala Gly fel Ala Ser Ala a$p Pro I 5 10 15

Vai Asp Ala fel He Asn Tír Thr Cys Am Tyr Sly Gin fel Vai Ala 1120 2S .......... 30

Ala leu Asn AU· Thr Asp Pro Gly Ala Ala Ala Gin Phe Asn Ala Ser 35 40 45

Pro fel Ala Gin Ser 'Tyr Uu Arg A%n PHe Leu Ala Ais Pro Pro Pro 59 55 60

Gin Arg Ala Ala fet Ala Ala Gin Leu Gin Ala Vai Pro Gly Ala Ata 65 79 75 50 61 n Tyr íle Gly Leu Vai Stu Ser Vai AU Gly Ser Cys Asn .Asn Tyr 85 90 9-5 135 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 103: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 154 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:103: ATGACAGASC AGCAGTSGAA mCTOST ATC6AG6CCG -CSSOUtiCec AAKCAlSGGA 60 mrêtcâogt cotwtc ecrccrmc agtccctgac mmrcm m GCSSCCTSSG ÊCffiGTA0O3S TTOGWSCè TACC 154 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 104: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 51 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:104: 136

Het Tfcr'Êlu 61n 61n Trp Asn Phs Ala 61y 11« SU Ala Ala Ala Ser

1 5 10 IS

Ala íle Gin 61 y Asn Vai Thr Ser lie Nis Ser Leu Leu Asp 61 u Gly 20 25 30

Lys Gin Ser leu Tbr Lys Leu Alà AU AU Trp Gly Gly Ser Gly Ser 35 40 45

Slu Ala Tyr 50 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 105: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 282 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:105: CGSTCGCGCA CTTCCAGfílG ACTATGAAAG TCSGCTÍCCG KCTGGAGGAT KCimCCT Tmmms ccgataacis aggtgcaica ttmgcgact tttccagmc mamm GCTCSÀMCG CGSDCAGCC SAfiGSTQSCT CCGÍlCGftSGC GCTGMCTCCA AAATGCCT6A GACMTTC® CGSGGGCGCC TACAAGSAAG TCGGTGCTGA ATTCGKCGNG TATCTGGICG ACCTSTSTGG TCIGMAGCCG SAOSAAGCGS T6CTC6ÃCGT €6 60 120 180 240 282 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 106: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1565 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico 137 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:106: GTATGCeGCC ACTSAÁST03 CCAÃTGCSGC GQCeGCCAGC TAAGCCASBA ACASTCGSCA 60 ogagaaacca cgagaaatas ggacaostm TfíSTGGArrr cggggcgtta ctmmm m

TCMCTCCGC GAGGATSTAC GCft&CCCGG STTCSGCCTC SCTSGTGGCC SCÈSCTCASA IBS TGTGGSACAS CGTGGGSAGT QÃCCfSmT DSÈCCSCSTC GSCSimM TCõSTGGfCT 240 ÔGGGTCTGAC 6GTGGGGTCG T6GATASGTT CGTCGGCGS3 TCTGATSGPS SCGGCGGCCT 300 CGCC3TATQT SSOGTGMTG 43C6TCACCG CGGGGCAâGC CGAGCTtsACC GCCGCCCAG6 360 TCCSGG17GC IGCGSÇGGCÇ TACSA&£GG C6TATGSGCT GACGGTGCCC CCGCC^ÍGA 420 :iTOSCMAA CCGTGCTGAA CWGATTC TGAIAGCGíC CAACCTCTTG GfiBCMAACA 480 CCCCSSCGAT CGCGGTCAAC S^ãSCCOAAT ACGSCGASAT ST6GGCCCAA GACGCCGCCG 540

CGATGTITGG CTACTOCG fiCSACGGOGA C&TGACGGC GACGTTGCTG CC&TTCfíASG SOO «GCGCCG3A GAÍGACCAGC fiCfíQGTGGSC TCCTOSCA SSCCGCCGCG GTCG»GG 660 CCTCCGACAC CSCCSQSGCG MCCM17GA TGMCMTGÍ ÕCCCCAGGCG CTCAWÊC ?20 TGsccDAGce cmmm accacdcctt cttccawbct gsgtoccts tggaagac® ?t& tctcgccgca tcggtcsccg Awmm issrercAAT qgccaacmc cacatstcm m tgaccaactc êsetctgtca AiaccMã cmmm mmmm sscrmcrc 900 cggcgsosgc c&wwm; gtcomccg smmm cssggtccgg gcgatsásct 96o mamem cteectcgst tctttotc tgggoggtgg ggtubgccgcc AAoreesie 1020 GMiPC GGUÇGÊTTCS TrGTCSSTSC CSCASSCCTG GGCCSCÊGCe AACCAGGCAÕ 1088 immmc sGcaMcs ctsgcsctga cmccmc cmmtcm ímaagagsgc imo 138 1200 1200 1260 1320 1380 1.440 1500 1560 15fi$ zamcmi gcteggcsgg ctgccsgtgg sec.AGATG.ss cgccagggcc qsibsibgsc tc^cííst ecTscspn ccsccscgajc cctatgtgat secscattct ccsgcggccg

SgtoGAG GGGSCSCASA CMCSITÁT TISACCAGIS ATCeGCGGTC TCGêTGTTTC CGGGGCCSGC TApCAACA CTCMTBTBC ATSAWAÊTT AGAGSTATTA SSTCCAÔSTÍ trnmm hcmmu ibgcctcacg ttttatgacs gatccgcacg csatscgqsa catsqcgggc csiTTTBAAS hgcacsccca gacgsigsas mmm£iz sccgsaigtg

QSCeiCCSCG CMAACÂWT CCGgS® CTGGASTGGC ÂTGGCCGA33 CGACCTCGCT «wca (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 107: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 391 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:107:

Hat Vaí Asp Phe Gly Ata teu Pro Fro Glu Ile Asrs Ser Ala Arg Het 15 10 15

Tyr Ala Gly Pro GTy Ser Ala Ser Leu Vai Ala Alá Ala Gin Wet Trp 20 25 30

Asp Ser Vai Ala Ser Asp leu Pite Ser Ala Ala Ser Ala Phe Gin Ser 35 40 45

Vai Vai Trp Gly Leu Thr Vai Gly Ser Trp Ile Gly Ser Ser Alá Gly 50 5$ 60

Leu Hêt Vai AI3 Ala Ala Ser Pro Tyr Vál Ala Trp Het Ser Vai Thr 65 70 75 30

Ala Sly Gin Ala Glu teu Thr Ala Ala Gin Vai Arg Vai Ala Ala Ala 85 m 05 139

Ala Tyr 6½ Thr Ala Tyr Sly leu Thr Vai Pro Pro Pro Vai Ile Alã 100 IQS 110 Glu Asn Arg Ala Gkt Leu Het Ile leu He Alá Thr Aso Leu Leu Gly 115 120 125 Sln Asís Thr Pro Ala Ile Ala Vai Asn Glu Ala Glu Tyr Gly Glu het 130 135 140 Trp Ala Gin Asp AI s Ala Ala het Phè Gly Tyr Ala Ala Ale Thr Ala 145 150 155 160 Thr AI B Thr Ala Thr teu Leu Pro Phe Glu Glu Ala Pro Glu Het Thr 165 170 175 Ser' Ala Gly 61y Leu Leu Glu Sln Alâ Ala Ala m Glu Glu Ala Ser 180 185 190 Asp Thr Ala Ale Ais A$n Gin teu mt Asn Asn Vai Pro Gin Ala teu m 200 205 61 n 61 n leu Ala 61 n Pro Thr Gin Sly Thr Thr Pro Ser Ser lys Leu 210 215 220

Met Vai Ser Het Ala Asn Asn Bis Het Ser Het Thr Asn Ser Gly Vai 24S 2S0 255

Ser Hat Ihr Mn fhr Leu Ser Ser Met Lau Lys Sly Pie Ala Pro Ala 260 2S5 270

Ala Ais Ala Gin Ala Vai 61 π Thr Ai a Ala Gin Aso Sly Vai Arg Ala 275 280 205

Bet Ser Ser Lee Gly Ser Ser teu Sly Ser Ser Sly Leu Sly 61 y G1.y 290 295 300

Vai Ala Ala Asn teu: Sly /¾¾ Ala Ala Ser Vai Gly Ser Leu Ser Vai 305 m 315 320

Pro Sln Ala Tfp Ala Ala Ala Asa Glfi Ala Vai Thr Pro Ala Ala Arg 325 330 335 140

Ais teu Pro Leu Thr Ser teu Tftir Ser AI® Ala filu Ar} Gly Pr© sty ' MS MS 3B0 61 n Het Leu 61 y G1y Leu Pr© Vai èly 61r :Het Ôly Ala Arg Ala 61y 355 360 365

Gly 61 y Leu Ser Gly Vai Leu Arg Vai Pro Pro Arg Pro Tyr Vai Het 3?0 3?5 380

Pro Ris Ser Pro Ala Ala Sly 385 391 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 108: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 259 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:108: ABCAACACCT TSCACTCKAT 6TT6MSGGC 'TOCTCCas CGGCGGCTCA GSGCGTCGAA 60 ACCGCGGCGS AAAACSMT CI^GGCAATG AQCTCGCTae ÕCAGCCAGC? GGGTTCfiTCG m

ClSGGTTCÍT CSGSTCTQ6G CSÇTGSGfiTS SCCfiCCAACT TGSJTCGGGC GGCCTCSGTC 186 rtfflGT CGGIGCCSCC AGCATGSGCC 6CGGCC&: AfieCSSKAC CCCGSCGGCS 246 xrncmrn csctgaíca 259 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 109: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 86 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido 141 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:109:

Thr Am íhr Leu His Ser Met Leu Lys Gty teu Ala Pro Ala Ala Ais 1 5 10 15

Gin Ala Vai Glu Fm' Ala Ala Slu Asn £1y Vai Trp Ala Het Ser Ser 20 25 30

Lai Gly Ser S1n leu Gly Ser Ser leu Gly Ser Ser Gly Leu 61 y Ala 35 m 45

Gly Vâl Ala Ala Asn leu Gly Ar§ Ala Ala Ser Vai Gly Ser Leu Ser 50 $5 es

Vai Pro Pro Ala Trp Ala Ala Ala A$n Gin Ala Vai %r Pro Ala Ala 55 70 75 GO

Arg Ak tas Pre Leu "ftr as (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 110: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1109 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:110: 142 TACÍTSAGAG MTHS&CT GTTGCCSACG TTGITTSCTG TGCATCATTG GÍGCMTTA 60 mç|AGCG msmγγατ cgaagtséié sacttcggss cettk&íz mmicm m TCCGCGAGGA IGTACGCCGG CCCSSSTtCG GCCTCGCTGG 1SSCCGCCGC SMGATGISS 180 GACAGCGrGG CGAGT&A.CCT GTTTTCSGCC TOCffiCGI TTCAGTCGST GGIC1QSSST 240 CTGACSACGG GftTCeraSAT ASSTTCeTCa «GÊ6TCTGA TGGTGGCGSC GSCCITCÊCCS 300 TATffTGSCST âGATGASGGT CACCGCGGGS CAGSCCGÃBC TGACCSCCGC CCAGGTCCGG 360 STTSCTSCGG OGSCCTACGA 6ACSGCSTAT SGÊCTGAeGG TGCCCCC6CC GGTGATCSCC 420

SpAACOÊfG CTSAAC.TGAT GATTCTSATA GCGACCMCC TCTTQSBGCA AAACACCCCG #0 1 GCGCTCGCGG TCAAQ3ABGC CSAATACGGG; SÃSATGTGSG CCCAftfiACGC CGCCGCGATG 540

TfTSGCmCS CCGCCAC6GC GGCGAOSECG ACCÊAGGCGT TBCTKCSTT CGAGGACGGC 600 CCACTEATCA COWCCCCGB GíSGCTCCTT GAGCAGGCCG TCGCGGTCGA GGASGCCATC 560 GACACCGCCG CQGCQAACCft GTTSAtGAAt AATSTGCCCC MGCGCT6CA ACAACTGGCC 720 CASCCCACGA MAGCATCT6 GCCGTTCSAG CAACHÊAÊTS AACTCTGSM AGCCÃTCTCG 780 CGSCATCTGT CGCCGCTCAG CAACATCSTG TCGATGCTCA ACAACGACGT GTCGATGACC §40 AACTOGGGTG TGTCAATGGC CC€ACtTT6 CACTCAATST TGAAGGGCTf TGCTCCGGCG 900 6CGGCTCA0G CCSUSGAMC CGCfíGCGCAA AACGGGGTCC AGGCGATGAG CTCGCTGGGC 960 AGCCAfiCTQG GTTCSTCSCT GSSTTC77C6 ffiTÕfêGSGS CTGSGSlGGC CSCCAAOTG 1020 GGTCGGSCSG CCTCGSTCGG TTCGTT6TCG GTGCOSCASS eCTSGGCOGC GGCCAACCAG 1080 GC6GTCACCC CÊGCGGCGCG GGCGCTGCC 1109 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 111: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 341 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear 143 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:lll:

Vai Vál Asp Phe 61 y Ala Leu: Pro Pro Glu He Asn Ser Ala Arg fiet 1. 5 10 15

Tyr Ala 61 y Pro Gly Ser Ala Ser Leu Vai Ala Ala Ak Lys Met Trp

m 25 M

Asp Ser Vaí Ala Ser Asp Leu Phe Ser Ala Ala Ser Ala Phe 61n Ser 35 40 45

Vai Vai Trp Gly Leu Thr Thr Gly Ser Trp II e Sly Ser Ser Ala 61y 50 S5 60

Leu: ífet Vai Ala Ak Ala Ser· Pro Tyr Vai Ala Trp Hei Ser Vtl Thr €5 70 75 Ô0

Ala Gly 01 n Ala 61 u leu Thr Ala Ala 61 n Vai Arg Vai Ala Ale Ala 65 66 95

Ala Tyr 61 u Thr Ala Tyr 61 y Leu Thr Vai Pm Pro Pro Vai Ile .Ala 100 105 110

Glu Asn Arg Ala Êlu Leu fctet De leu He AU Thr Asn leu Leu Gly 11 & 120 125

Gin Asn Thr Pro Ak He Ala Vai Asn. Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met 130 135 m

Trp Ala 61 n Asp Ak Ala Ala Het Phe Gly Tyr Ala Ala Thr Ala Alt 145 ISO 155 160

Thr AU Thr Glu Ak Lee leu Pro Phe Glu Asp AU Pro Leu Ile Thr 170 175 Âsn Pro Gly Sly Leu Leu 61 a Sk Ala Vai Ala Vai 61 u Glu Ak lie ISO Í65 m

Asp Thr Ak Ala Ak Asa GTíí Leu Het Asn Asn Vai Pro 51« Ala teu 195 200 2 05 61o 61 r Leu Ala 61n Pro Thr Lys Ser Ile Trp Pro Phe Asp· Gin Leu 210 215 220

Ser Glu Leu Trp Lys Ak He Ser Pro Hls Leu Ser Pro Leu Ser Aso 225 236 235 2:43 144

Asn ftis Vai Ser Het Ttsr Asn Ser Sly Vai 250 2SS His Sár Hat leu Lys Sly Pte Ate Pro Ate 265 270 Thr Ala Ate 61 n Asn Sly Vai S!n Ate Het 280 2B5 Leu Gly Ser Ser Leu Sly Ser Ser STy Leis 295 300 .Asn leu Sly Arg Ate Ala Ser Vai Gly Ser 315 320 Trp Ala Ate Ala Asn Gin Ala ¥al Thr Pro 330 335 II e Vai Ser Met Leu Asn 245 Sér tfet AI a Ser Thr L&s m

Ala Ate Gin Ala vai £!u 2?5

Ser Ser Leu Sly Ser Slrs m

Gly Ate Sly Vai Ala Ala 30S 31e leu Ser Vai Pro Gin Ala 325

Ala .Ala Arg Ate Lsu 340 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 112: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1256 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:112: 145 mcBmm mmmm aigcteuogc

G6ÇT&ÂTGSÇ CGSCSCSfiGT CCSSCTCCM rmcflfiCGSC tctgsãosgt «sccstcs mccimm tsbagstcqc agcsacaass

SGCTACMAC ÇGCGTtMCA CftâGCCAtâft CGSCATACAC CCASSCCATÊ fiCCAQSACGC TCACCCASGC CGTOTACS SCCACCMCT li^ÇSASAT ÊSATTATTTC ATCffiTAW mprncm saccgcssit mccscttt

TTGATCCCõâ CSCGASCCAG AGOCGACGA SCTCMCACC QBTTGGCCftfi TTCCC5CC&3 MTGAGfG-G CCCtiATSCAfi CftSCTGACCC GCCAGSTffiíS CGGCftOOQGC fiGCBSCAACC 7GCTCGGCAC CAGTCCGCTG TDSWCCATC QQ3Q3SGCCT GCTGCGCGCG GASTCGCTAC CGCTGATSTC TCAGCTSATC GAAMfiCCQS CCGSATCGTC QSC&ACSSST GGCGCCÊCTC

ACGCAATiSCC ACCGGAGNTA MTACCfíCAC tgctosgc ggccgcggêa mmCSC

AGTTGACCGC ÍKDSCClEftACOT-ΙΒβ CGCmàÇSGC TBCAftCfiXÔ A1TOGIC? CCCGmSCOAT GCÂGGCGACG GCGCA4GCCG CGTCGCTGCC GfíASATCGCC GCCAACQMgA.;. TCTTCSGTÁT CMCAEfiATC C0Gf||CSÍ 6SAACCAG6C tâCCCI&GCA ATSQAGSTCT TCGftGAAGCT CG^ASCCfíATO (JOSTCSATCC ACCCGATCTT CGGMTSXC TDCCCTSGCA CGGCTACCCA SftCCCTCGSC CMC1SSGTG ASCCGCTGCA GCAGGmCG TCGTWTCA ftfiCCGAOaA GGMGCCQGG CÁSATSGGCC CGC1GGCTGG TGGATCASGC CCCAGCGCGS CUSGCGCAGS TGSSTCfiTTG ACGGGCAQGC ilGCCCCaC GGTGÁ1GCCG GCGGCTGCT6 0BE>n8G6TQC SGGAGCGA.TG GGCCAGGGTG CGCMTCCGG CGGCTCCACC AGSCCGGGTC 1SGTCGCGCC SGCACCGCTC SffiOÊ6« mAGMâA CGCGAGGAC GAClBGSACG AAGAGSACGft CWGffiCT CCCGIMTSA CMCAGACTT ttOGSCCKC CGGGCCGÊM GACTTGCCAA CATTTTSGGB A6GM661M AGAGAGAAAG TASTCCMCA TGGCAfiAGAT GAAGACCGAT GCCGCTACCC TCGCGC (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 113: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 432 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico 60 120 180 240 300 360 420 54B soa 060 ?20 700 840 900 960 1Q2D Ι080 1140 1200 1266 146 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:113: CTASTSGATG GGACCATGSC CATTTTCTGC AGTfTCACTG CCTTCISTGT TGACATTTTG m gcacgccgsc gsaaacgaag cactgsggtc mmcm: tgcgctgcca tatcgtccgg 120 ÃÊCITGCATA COTC8TBC6 GCCGSAASAG CTT5ICGTAG TCGGCCÊCCA 1GACAACCTC 180 W&Gim CTCAAAC6TA TAAACACGAG AAASGSCGAG ACCGACSSAA OSfCSMCTC 240 gbxgktccc srsTTTcecr AnciAcsce mctcggcgt tsccciktsc saacatccca soo GIGACGTTGC CTTCGGTCSA AGCCATTSCC TCACCGGCTT CGCTGATCST CCGCSCCAGG 360 1TCTCCA6CG CST7GTTCAG CTCGGTABCC STGGC6TCCC ATTtFTSCTG GACACCCTGG 420 TACGCCTCCG AA............................. 432 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 114: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 368 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:114: ftet Leu Trp His Ai3 Het Pro Pro Glu Xaa Asri Thr Ala Arg Leu Met 1 ' S 10 15

Ala 61jf Ala Sly Pro Alá Pro Met Leu Ala Ai a Ala Ala Sly Trp Gin 20 25 38

Thf Leu Ser Ala Ala Leu Asp Ala Gin Ala Vai Glu Leu TTtr Ala Arg 35 40 45 147

Leu Asn Ser teu 61 y GTu Ala Trp Ihr My Sly 61y Ser Asp tys Ala m 55 60 Leu Ala Ais Ala Thr Pro Het Vai Vai Trp leu Gin Ihr Alâ Ser Thr 65 ?£S 75 80 Gin Ala Lys thr Arq Ala Het Gin Ala Thr Ala Glu Ala AI 3 Ala Tyr m 90 95 Thr Siri Ais «et Ala Thr Thr Pro Ser ley Pro Gi« líe Ala Ala Asn 100 105 110 His II é Thr filo Ais vai leu Ihr AU Thr A$ri Phe Phe Giy Ile As ri 115 m 12$ inr lie Pro Ile Aia leu Thr Gltf Het Asp Tyr Phe Ile Arg Het Trp 130 135 140 Asm Gin Alã Alã Leu AU Het Glu Vai Tyr Gin Ala Glu Thr AU Vai 145 150 155 160 Ãsrs Thr lar The 61« Lys Leu 61 u Pm Het AU Ser lie Leu Asp Prõ 165 170 05 Gly Ala Sef Gin Ser Thr Thr Asn Pro Ile Pte Gly Het Pro Ser Pro 180 18S 190 Gly Ser Ser Thr Pre Vai Gty Gin leu Pro Pro Ala AU Thr Gin Thr 195 200 205 leu Gly Gin Leu Gly Glu Hat Ser Gly Pro Het Gin Gin leu Thr Gin 210 215 220 Pro teu Gin 01« Vsl Thr Ser Leu Fhe Ser Glrs Vai Sly Gly Thr Gly 225 230 235 240 Gly Gly Aso Pro AU ÂSp Glu S1:0 Ala AI â Gin Het Gly Leu Leu Gly 245 250 26S Thr Ser Pro Leu Ser Asn His Pro leu Aia Gly Gly Ser Sly Pro Ser 260 26$ 270 Ala Gly Ala Gly Ley Leu Ari Ala· Glu Ser Leu Pro Sly Aia Sly siy 275 280 28$ Ser Leu Thr Arg Thr Pro Leu Het Ser Gin Leu Ile Glu Lys Pro Vaí 2Μ 295 300 148

Ala Pro Ser vai Met Pro Ala Ala Ala Ala úly Ser Ser Ala Tfhr ôly 30S 310 315 320

Gly Ak Ala Pro Vai. Gly Ala Gly Ala Kst Gly filn Gly Ala Gin Ser 325 330 335

Gly Gly SerTrir Arg Pro Gly teu Vai Ala Pro Ala Pro Leu Ala 61 n ; .340 34S 350

Glu Arg Glu 61 u Asp Asp Gin Asp Asp Trp Asp Glu Glu A$p A$p Trp 355 360 365 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 115: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 12 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:115:

Mst Ala Glu Hêfc ly$. Thr Asp .Ala Ala Thr leu Ais 1 5 10 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 116: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 396 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:116: 149 M 120 180 240 300 350 356

GATCTCCSSC GACC1SAAAA CCCASATCSA CGASSIfiSAS T0GAC6GCÁG STTOTO GGBCCACTGG CGCGGDGSGG CQGGGACSSC CSCCCAGGCC GCSGTGGTGC GCTTCCAMSA agcagccmt mcmmc mmrm csagatctcg acgaatattc gtcmsgccqs

C8TCCAATAC TOGASSGCCG ACSAGSAfiCA MàCS CTGTCCTGSC MA1B3SOT ctgacccsct 4láMM Chaaacgsagc λααααελτμ cmmcmíA ÊUSMTTTC gcgêstatcg ApUHc aagMmc hwmê igacstcca? tcattccctc cttBags gsaascaoc cctmm. ctcsca (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 117: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 80 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:117

Ile Ser Gly Asp leu Lys Thr Glrs Ile A$p Gin Vai Gtu Ser Thr Ala 1.5 W 15

Gly Ser ieu Gin Gly Gin Trp Arg Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gin 20 25 35

Ala Ala Vai Vai Arg J%e Gin Siy Ala Ala Asn lys Gin Lys Gin Glu 35 40 45

Leu Asp Gly Oe Ser Thr Asn 11 e Arg Gin Ala Gly Vai Gin Tyr Ser 50 55 fiO

Arg Ala Asp Glu Glu Gin Gin Gin Ala leu Ser Ser Gin Het Gly Phe 65 ?0 75 80 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 118: 150 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 387 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:118: gtggatccos ATCCCGT6TT tcgctattct mcmm ggosttgccc m mcmm GTOCTTCS GTCGAASCCA TltCCTSACC 6SCTTCSCTG atcgtccgcg 120 CCÃSSTTCIS. CASOSCGITS TTG^TCGG TA6CCGTGSC 6TCCCATUT TSCTSÊACAC 180 CCnajrAOK CTCCGMCCÔ CTACCGCCCC AGSCC6CIGC GA6ETTSGTC «ACTGCI 240 TCCCCTCGTC AAGBtâfiSAA TSAATÊGACS TGACATTfCC CT9SATT6CG CTTGCCSCGG 300 CCTCGATACC CGCGAMTTC CCTSCTSCT CTBTCAWTT TTTGCICOJT nCTTTTCGT 360 ATTAGCGGST CASAAGCCCA TÍTGCSA 387 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 119: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 272 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:119: 151

CGGCACGAÉfô ATCTCGSm OCOCAAOSSC SCTeGCSASS SCTCCSTTCC «M &D TGC^GCOSG ATiQCTTÇCTC TGCCCGCASC CQCGOCTGGA ISGATSSACC A0TTSCWCC 120 tagogêisac cccsscscsc «otosas im cGsfiirTtQ Gccsass^p zmcma- gsacssaacg 2¾ GGCSGSSmf^ CA 272 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 120: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:120:

Asp Pro Vai Asp Ala ¥al Me Asri Thr Thr Cys Asn Tyr Siy Gin Vai 1 5 10 15 I Vai Ala Ala Leu 20 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 126: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 17 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:126: 152

Asp Prs Glti; Pro ATâ Prú Pro Vai Pro llir Tftr Ala Aís Ser Pro Pro 1 S 10 15

Ser (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 129: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:129:

Asp Pro Pro Mp Pro HH 01 π Xaa Asp Mst Thr Çys 61y Tyr Tyr Pro 1 S 10 is

Sly 61y Arg Arg: Xaa. Phs-20 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°: 130: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 7 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:130: 153

Asp Pro 61y Tyr Wir Pro 61y I 5 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°:131: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (ix) CARACTERÍSTICA: (D) OUTRAS INFORMAÇÕES: /nota= "O Segundo Resíduo Pode Ser Quer Uma Pro ou Uma Thr" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:131: Χβδ xaa ety Phe Thr Sly Pro filn Fhe Tyr I 5 ίΰ (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°:132: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 9 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (ix) CARACTERÍSTICA: 154 (D) OUTRAS INFORMAÇÕES: /nota= "O Terceiro Resíduo Pode Ser Quer Uma Gin ou Uma Leu" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:132:

Xâa Pro Xaa Vai Thr Ala Tyr Ala Gly 1 S (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°:133: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 9 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:133: X&â Xaa Xaa Glu Lys Pro Phe Leu Arg 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°:134: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:134: 155

Xas Asp Ser 61 u Lys Ser Afã Thr Ile Lys Vai Thr Asp Ala Ser I S 10 15 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°:135: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:135:

Ala Gly Asp Thr Xaa Ile Tyr Ile Vai Gly Asn Leu Thr Ala Asp 1 s as (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°:136: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:136: Ala Pro Gly Ser Gly Ala Gly Leu Gly Gly Tnr Vai Gin Ala Gly i s io m 156 (2) INFORMAÇÕES PARA SEQ ID N°:137: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: (D) TOPOLOGIA: linear (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:137:

Xaa Tyr 11 e Ala Tyr X43 Tbr Thr Ala 61y íle Vai Pro Sly Lys Ile 1 5 10 is

Mo Vàl iHis Leu Vai SD

REIVINDICAÇÕES 157

Claims

1. Polipéptido isolado: (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma.

2. Polipéptido isolado de acordo com a reivindicação 1, compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

3. Polipéptido de acordo quer com a reivindicação 1 ou 2, consistindo da sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

4. Molécula de ácido desoxirribonucleico recombinante, compreendendo uma sequência de nucleótidos codificando um polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

5. Molécula de ácido desoxirribonucleico recombinante de acordo com a reivindicação 4, compreendendo uma sequência de nucleótidos codificando um polipéptido consistindo de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

6. Molécula de ácido desoxirribonucleico recombinante de acordo quer com a reivindicação 4 ou 5, compreendendo uma sequência de nucleótidos de SEQ ID N°: 106.

7. Molécula de ácido desoxirribonucleico recombinante de acordo com a reivindicação 6, consistindo de uma sequência de nucleótidos de SEQ ID N°: 106. 2

8. Vector de expressão compreendendo uma molécula de ácido desoxirribonucleico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7.

9. Célula hospedeira isolada, transformada com um vector de expressão de acordo com a reivindicação 8.

10. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 9, em que a célula hospedeira é seleccionada do grupo consistindo de células de E. coli, levedura e mamífero.

11. Proteína de fusão compreendendo um polipéptido: (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma.

12. Proteína de fusão de acordo com a reivindicação 11, compreendendo um polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

13. Polipéptido de combinação: compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; e uma ou mais sequências imunogénicas adicionais de Mycobacterium, que estão ligadas através de uma ligação peptídica.

14. Composição farmacêutica compreendendo um polipéptido: 3 (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma; e um veiculo fisiologicamente aceitável.

15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 14, em que o polipéptido consiste de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107 e um veiculo fisiologicamente aceitável.

16. Composição farmacêutica compreendendo uma molécula de ácido desoxirribonucleico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 17 e um veiculo fisiologicamente aceitável.

17. Composição farmacêutica compreendendo uma proteina de fusão de acordo quer com a reivindicação 11 ou 12 e um veiculo fisiologicamente aceitável.

18. Composição farmacêutica compreendendo um polipéptido de combinação de acordo com a reivindicação 13 e um veiculo fisiologicamente aceitável.

19. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18 para utilização na indução de imunidade protectora num doente.

20. Vacina compreendendo um polipéptido: (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma; e um intensificador da resposta imunológica inespecifico. 4

21. Vacina de acordo com a reivindicação 20, em que o polipéptido consiste de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

22. Vacina compreendendo uma molécula de ácido desoxirribonucleico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7 e um intensificador da resposta imunológica inespecifico.

23. Vacina compreendendo uma proteína de fusão de acordo quer com a reivindicação 11 ou 12 e um intensificador da resposta imunológica inespecifico.

24. Vacina compreendendo um polipéptido de combinação de acordo com a reivindicação 13 e um intensificador da resposta imunológica inespecifico.

25. Vacina de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 24, em que o intensificador da resposta imunológica inespecifico é um adjuvante.

26. Utilização de um polipéptido: (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma; na preparação de uma vacina para induzir imunidade protectora num doente. 5

27. Utilização de acordo com a reivindicação 26, em que o polipéptido consiste de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

28. Utilização de um ácido desoxirribonucleico recombinante de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7, uma proteina de fusão de acordo quer com a reivindicação 11 ou 12, um polipéptido de combinação de acordo com a reivindicação 13 ou uma composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, na preparação de uma vacina para induzir imunidade protectora num doente.

29. Utilização de um polipéptido: (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma; na preparação de um diagnóstico para detectar tuberculose num doente.

30. Utilização de acordo com a reivindicação 29, em que o polipéptido consiste de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107.

31. Kit diagnóstico compreendendo: (a) um polipéptido: (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou 6 (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma; e (b) dispositivo suficiente para que o referido polipéptido entre em contacto com as células dérmicas de um doente.

32. Kit diagnóstico de acordo com a reivindicação 31 compreendendo: (a) um polipéptido consistindo de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 107; e (b) dispositivo suficiente para que o referido polipéptido entre em contacto com as células dérmicas de um doente.

33. Processo para a produção de um polipéptido: (i) compreendendo uma sequência de aminoácidos de Mycobacterium tuberculosis de SEQ ID N°: 107; ou (ii) consistindo de uma porção imunogénica da mesma; compreendendo os passos: (a) inserção de uma sequência de ADN que codifica o referido polipéptido num vector de expressão; (b) transformação ou transfecção de uma célula hospedeira isolada apropriada com o referido vector de expressão; e 7 34. 35. (c) expressão do polipéptido na referida célula hospedeira. Processo de acordo com a reivindicação 33, em que o polipéptido consiste de uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N° : 107. Processo de acordo com a reivindicação 33 ou 34, em que a sequência de ADN que codifica o polipéptido compreende uma sequência de nucleótidos de SEQ ID N°: 106. Processo de acordo com a reivindicação 35, em que a sequência de ADN que codifica o polipéptido consiste de uma sequência de nucleótidos de SEQ ID N°: 106. 36.