CZ300953B6 - Polypeptid, farmaceutický prostredek a vakcína s jeho obsahem, zpusob prípravy a použití polypeptidu, DNA molekula a její použití, expresní vektor, hostitelská bunka, fúsní protein a diagnostický kit - Google Patents

Polypeptid, farmaceutický prostredek a vakcína s jeho obsahem, zpusob prípravy a použití polypeptidu, DNA molekula a její použití, expresní vektor, hostitelská bunka, fúsní protein a diagnostický kit Download PDF

Info

Publication number
CZ300953B6
CZ300953B6 CZ20090166A CZ2009166A CZ300953B6 CZ 300953 B6 CZ300953 B6 CZ 300953B6 CZ 20090166 A CZ20090166 A CZ 20090166A CZ 2009166 A CZ2009166 A CZ 2009166A CZ 300953 B6 CZ300953 B6 CZ 300953B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
ala
gly
seq
pro
val
Prior art date
Application number
CZ20090166A
Other languages
English (en)
Inventor
G. Reed@Steven
A. W. Skeiky@Yasir
C. Dillon@Davin
Campos-Neto@Antonio
Houghton@Raymond
H. Vedvick@Thomas
R. Twardzik@Daniel
Original Assignee
Corixa Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27541835&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ300953(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Corixa Corporation filed Critical Corixa Corporation
Publication of CZ300953B6 publication Critical patent/CZ300953B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Jsou popsány polypeptidy, farmaceutické prostredky a vakcíny s jeho obsahem, zpusob prípravy a použití takového polypeptidu, DNA molekula a její použití, expresní vektor obsahující takovou molekulu, hostitelská bunka transformované tímto expresním vektorem, fúsní protein obsahující uvedený polypeptid a diagnostický kit s obsahem polypeptidu. Predkládaný vynález se obecne týká detekce, lécby a prevence infekce Mycobacterium tuberculosis.

Description

Oblast techniky
Předkládaný vynález se obecně týká detekce, léčby a prevence infekce Mycobacterium tuberculosis. Konkrétně tento vynález se týká polypeptidů, farmaceutických prostředků a vakcíny s jejich to obsahem, způsobu přípravy a použití takového polypeptidu, DNA molekula a jejího použití, expresního vektoru obsahujícího takovou molekulu, hostitelské buňky transformované tímto expresním vektorem, fúsního proteinu obsahujícího uvedený polypeptid a diagnostického kitu s obsahem polypeptidu.
Dosavadní stav techniky
Tuberkulosa je chronické infekční onemocnění, které je obyčejně způsobeno Mycobacterium tuberculosis. Je hlavním onemocněním v rozvojových zemích a stejně tak je narůstajícím probléio mem v rozvinutých oblastech světa, s asi 8 miliony nových případů a 3 miliony úmrtí za rok.
Ačkoliv může být infekce asymptomatická po značně dlouhé časové období, nejčastěji se onemocnění manifestuje jako akutní plicní zánět, doprovázený horečkou a neproduktivním kašlem. Pokud není léčena, vede obvykle k závažným komplikacím a smrti.
Ačkoliv může být tuberkulosa obyčejně kontrolována za použití intenzivní antibiotické terapie, není taková léčba dostatečná pro prevenci šíření onemocnění. Infikovaní jedinci mohou být po určitou dobu asymptomatičtí, ale infekční. Kromě toho, ačkoliv je spolupráce nemocného při léčbě zásadní, je chování pacienta obtížně sledovatelné. Někteří pacienti nedokončí léčbu, což může vést k její nízké účinnosti a k vývoji resistence na léky.
Inhibice šíření tuberkulosy vyžaduje účinnou vakcinaci a přesnou, Časnou diagnostiku onemocnění. V současné době je vakcinace živou bakterií nej účinnějším způsobem pro indukci protektivní imunity. Nejčastěji používanou mykobakterií je pro tento účel Bacillus Calmette-Guerin (BCG), avirulentní kmen Mycobacterium bovis. Nicméně, bezpečnost a účinnost BCG je zdro35 jem kontroverse a některé země, jako například USA, nevakcinují populaci. Diagnosa je obyčejně provedena za použití kožního testu, který obsahuje intradermální expozici tuberculin PPD (přečištěný proteinový derivát). Antigen specifická odpověď T-buněk vede k měřitelné induraci v místě injekce po 48 až 72 hodinách po injekci, což ukazuje na expozici mykobakteriálním antigenům. Sensitivita a specifická tohoto testu jsou však problematické a jedinci vakcinovaní BCG nemohou být tímto testem odlišeni od infikovaných jedinců.
Ačkoliv bylo prokázáno, že makrofágy jsou hlavními efektorovými elementy v imunitě proti M. tuberculosis, jsou T-buňky převažujícími induktory takové imunity. Zásadní role T buněk v obraně proti infekci M. tuberculosis je doložena častým výskytem M. tuberculosis u pacientů s AIDS, díky depleci CD4 T buněk, která je spojena s infekcí virem lidské imunoeficience (HIV). Mycobacterium-reaktivní CD4 T buňky produkují ve značném množství interferon-gamma (IFN-τ), který, jak bylo prokázáno, spouští antimykobakteriální účinky makrofágů u myší. Ačkoliv je role IFN-τ u lidí méně jasná, ukazují studie, že 1,25-dihydroxy-vitamin D3, buď samostatně, nebo v kombinaci s IFN-τ nebo faktorem nekrosy nádorů alfa, aktivuje lidské makrofágy pro inhibici infekce M. tuberculosis. Kromě toho, je známo, že IFN-τ stimuluje lidské makrofágy k výrobě 1,25-dihydroxy vitaminu D3. Obdobně, bylo prokázáno, že IL-12 má významnou úlohu pri stimulaci resistence k infekci M. tuberculosis. Pro přehled imunologie infekce M. tuberculosis viz Chán a Kaufmann v „Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control“, Bloom (vyd.), ASM Press, Washington, D.C., 1994.
V souladu s tím existuje v oboru potřeba vylepšené vakcíny a způsobů pro prevenci, léčbu a detekci íuberkulosy. Předkládaný vynález splňuje tyto potřeby a dále poskytuje s těmito potřebami související výhody.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu je polypeptid obsahující (i) aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 88;
(ii) imunogenní část aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88;
(iii) variantu aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88, která se liší pouze v konzervativních i ? substitucích a/nebo modifikacích.
Podle výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 88.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který sestává z aminokyselinovové sekvence SEQ ID NO: 88.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který obsahuje imunogenní část aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 94.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který sestává z imunogenní části aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který sestává z aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 94.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který obsahuje variantu aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88, která se liší pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je polypeptid, který sestává z varianty aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88, která se liší pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích.
Předmětem tohoto vynálezu je dále DNA molekula, která obsahuje nukleotidovou sekvenci kódující jakýkoli polypeptid popsaný svrchu.
Podle výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je DNA molekula, která obsahuje nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 46.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je DNA molekula, která sestává z nukleotidové sekvence SEQ ID NO: 46.
Předmětem tohoto vynálezu je také expresní vektor, který obsahuje jakoukoli DNA molekulu popsanou svrchu.
Předmětem tohoto vynálezu je rovněž hostitelská buňka transformovaná expresním vektorem uvedeným svrchu.
Podle výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je hostitelská buňka, která je vybrána ze 5 souboru sestávajícího z E. coli, kvasinek a savčích buněk.
Předmětem tohoto vynálezu je taktéž fúsní protein obsahující jakýkoli polypeptid popsaný svrchu.
Předmětem tohoto vynálezu je také farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje jakýkoli polypeptid uvedený svrchu a fyziologicky přijatelný nosič.
Podle výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje jakoukoli DNA molekulu a fyziologicky přijatelný nosič.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje fúsní protein uvedený svrchu a fyziologicky přijatelný nosič.
Předmětem tohoto vynálezu je taky vakcína, která obsahuje jakýkoli polypeptid uvedený svrchu a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je vakcína, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje jakoukoli DNA molekulu a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je vakcína, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje fúsní protein popsaný svrchu a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi.
Podle jiného výhodného provedení předmětem tohoto vynálezu je vakcína, jejíž podstata spočívá 30 v tom, že nespecifickým zesilovačem imunitní odpovědi je adjuvans.
Předmětem tohoto vynálezu je rovněž použití jakéhokoli polypeptidu popsaného svrchu, pro výrobu léčiva pro léčení nebo prevenci infekce M, tuberculosis.
Předmětem tohoto vynálezu je také použití jakékoli DNA molekuly pro výrobu léčiva pro léčení nebo prevenci infekce M. tuberculosis.
Předmětem tohoto vynálezu je též použití jakéhokoli polypeptidu pro výrobu diagnostika pro detekci infekce M. tuberculosis.
Předmětem tohoto vynálezu je také diagnostický kit, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje (a) jakýkoli polypeptid vymezený svrchu a (b) přístroj umožňující kontaktování uvedeného polypeptidu s kožními buňkami pacienta.
Předmětem tohoto vynálezu je konečně způsob přípravy jakéhokoli polypeptidu uvedeného svrchu, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje kroky:
(a) insertování DNA sekvence, která kóduje uvedený polypeptid, do expresního vektoru;
(b) transformování nebo transfekování vhodné hostitelské buňky tímto expresním vektorem; a (c) exprimování polypeptidu v uvedené hostitelské buňce.
Dále jsou uvedeny podrobnější údaje, které souvisejí s předmětným vynálezem. Kromě toho jsou také uvedeny srovnávací údaje a údaje umožňující zařadit předmětný vynález do širších souvislostí. Řecké písmeno „gamma“ je označováno symbolem
Farmaceutický prostředek obsahující jeden nebo více polypeptidů popsaných výše a fyziologicky přijatelný nosič je dále označován také jako farmaceutický přípravek.
Způsob pro indukci protektivní imunity u pacienta spočívá v tom, že pacientovi je podán farmaceutický prostředek popsaný výše.
io
Způsob pro indukci protektivní imunity u pacienta spočívá vtom, že pacientovi je podána vakcína vymezená výše.
Způsob pro detekci tuberkulosy u pacienta spočívá v tom, že obsahuje:
(a) kontaktování kožních buněk pacienta s jedním nebo více polypeptidy vymezenými výše a (b) detekování imunitní odpovědi kůže pacienta a tak detekování tuberkulosy u pacienta.
Výše uvedený způsob pro detekci tuberkulosy u pacienta spočívá v tom, že imunitní odpovědí je indurace.
Uvedeno ve stručnosti, tento vynález tedy poskytuje sloučeniny a způsoby pro prevenci a diagnostiku tuberkulosy. V jednom aspektu jsou poskytnuty polypeptidy obsahující imunogenní část solubilního antigenu M. tuberculosis, nebo varianty takového antigenu, která se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací. V jednom provedení tohoto aspektu má solubilní antigen následující N-koncové sekvence:
(a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-ThrÁSys-Asn-Tyr-GlyGln-Val-Val-Ala-Ala-Leu; (SEQ ID No. 120) (b) Ala-Val-Glti-Ser-Gly-MevLeu^Ala-Leu-GIy-Thr-Pro-Ala-Pro·*
Ser, (SEQ ID No. 121) (c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg^Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-AlaAla-Lys-Glu-Gly-Arg; (SEQ ID No. 122) (d) TyT-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-GlyPro; (SEQ ID No. 123) (e) Asp-IIe-Gly-Scr-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-GlnOln-Xaa-Ala-Val;
(SEQ ID No. 124) (f) Ala-GluOIu-Ser-Ik-Ser-Thr-Xaa-GIu-Xaa-Ik-Val-Pro; (SEQ ID No. 125) (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-SerPro-Pro-Ser, (SEQ ID No. 126) (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-GIu-GIu-Leu-Lys-GIy-Thr-Asp-ThrGly; (SEQ ID No. 127) (i) Asp-Pro-Ala-Ser-AIa-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-AIa-Ala-GlDi-LeuThr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-PheAla-Asn; (SEQ ID No. 128) (j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-AlaSer; (SEQ ID No. 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-IIe-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-AlaAsp; (SEQ ID No. 135) oř (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-AiaGly. (SEQ ID No. 136) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.
V souvisejícím aspektu jsou poskytnuty polypeptidy obsahující imunogenní část solubilního antigenu M. tuberculosis, nebo varianty takového antigenu, která se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací, kde antigen má jednu z následujících N-koncových sekvencí;
(m) Xaa-Tyr41e-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-GÍy-ne-Vai-Pro-Gly-LysIle-Asn-Val-His*Leu-Val; (SEQ ID No. 137) oř (n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-TyrTyr-Pro-GIy-GIy-Arg-Arg-Xaa-Phe; (SEQ ID No. 129) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina, in
V jiném provedení obsahuje antigen aminokyselinovou sekvenci kodovanou DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se ze SEQ ID NO: l, 2,4-10, 13-25, 52,99 a 101, komplementů uvedených sekvencí a DNA sekvencí, které hybridizují na sekvence SEQ ID NO: 1, 2, 4-10, 13-25, 52,99 a 101 nebo komplementy uvedených sekvencí za podmínek střední přísnosti.
V souvisejícím aspektu polypeptidy obsahují imunogenní část antigenu M. tuberculosis, nebo varianty takového antigenu, která se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací, kde antigen obsahuje aminokyselinovou sekvenci kodovanou DNA sekvencí vybranou ze skupiny skládající se ze SEQ ID NO: 26-51, komplementů uvedených sekvencí a DNA sekvencí, které hybridizují na sekvence SEQ ID NO: 26-51 nebo komplementy uvedených sekvencí za podmínek střední přísnosti.
V souvisejícím aspektu jsou poskytnuty DNA sekvence kódující výše uvedené polypeptidy, expresní vektory obsahující tyto DNA sekvence a hostitelské buňky transformované nebo trans25 fektované takovými expresními vektory.
V jiném aspektu předkládaný vynález poskytuje fúsní proteiny obsahující první a druhý polypeptid podle předkládaného vynálezu, nebo alternativně, polypeptid podle předkládaného vynálezu a známý antigen M. tuberculosis.
s
V dalších aspektech předkládaný vynález poskytuje farmaceutické přípravky, které obsahují jeden nebo více z výše uvedených polypeptidů nebo DNA molekulu kódující takové polypeptidy, a fyziologicky přijatelný nosič. Vynález také poskytuje vakcínu obsahující jeden nebo více polypeptidů jak jsou popsány výše a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi, spolu s vakcínami io obsahujícími jednu nebo více DNA sekvencí kódujících takové polypeptidy a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi,
V ještě jiném aspektu jsou poskytnuty způsoby pro indukcí protektivní imunity u pacienta, ve kterých je pacientovi podáno účinné množství jednoho nebo více z výše uvedených polypeptidů.
V ještě jiném aspektu předkládaného vynálezu jsou poskytnuty způsoby a diagnostické kity pro detekci tuberkulosy u pacienta. Způsoby obsahují kontaktování kožních buněk pacienta s jedním nebo více z uvedených polypeptidů a detekci imunitní odpovědi kůže pacienta. Diagnostické kity obsahují jeden nebo více zvýše uvedených 7 polypeptidů v kombinaci s přístrojem dostatečným pro kontaktování polypeptidu s buňkami kůže pacienta.
Tyto a další aspekty předkládaného vynálezu budou jasné z následujícího podrobného popisu a připojených obrázků. Všechny zde citované odkazy jsou zde uvedeny jako odkaz ve své úplnosti.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázky 1A a IB ilustrují stimulaci proliferace a produkce IFN-τ v T-buňkách odvozených od 30 prvního a druhého M. tuberculosis-immuního dárce, v příslušném pořadí, za použití 14 kDa, kDa a 26 kDa antigenu, kde tato stimulace je popsána v příkladu 1.
Obrázek 2 ilustruje stimulaci proliferace a produkce IFN-τ v T-buňkách odvozených od M. tuberculosis-immuního jedince za použití dvou representativních polypeptidů TbRa3 a TbRa9.
SEQ ID NO: 1 je DNA sekvence TbRal. SEQ ID NO: 2 je DNA sekvence TbRalO. SEQ ID NO: 3 je DNA sekvence TbRal 1.
SEQ ID NO: 4 je DNA sekvence TbRal 2. SEQ ID NO: 5 je DNA sekvence TbRal 3. SEQ ID NO: 6 je DNA sekvence TbRal 6. SEQ ID NO: 7 je DNA sekvence TbRal 7. SEQ IDNO: 8 je DNA sekvence TbRal8.
SEQ ID NO: 9 je DNA sekvence TbRa 19. SEQ ID NO: 10 je DNA sekvence TbRa24. SEQ ID NO: 11 je DNA sekvence TbRa26. SEQ IDNO: 12 je DNA sekvenceTbRa28. SEQ ID NO: 13 je DNA sekvence TbRa29.
SEQ ID NO: 14 je DNA sekvence TbRa2A, SEQ ID NO: 15 je DNA sekvence TbRa3. SEQ ID NO: 16 je DNA sekvence TbRa32. SEQ ID NO: 17 je DNA sekvence TbRa35. SEQ ID NO: 18 je DNA sekvence TbRa36.
SEQ ID NO: 19 je DNA sekvence TbRa4.
SEQ ID NO: 20 je DNA sekvence TbRa9.
SEQ ID NO: 21 je DNA sekvence TbRaB.
SEQ ID NO: 22 je DNA sekvence TbRaC.
SEQ ID NO: 23 je DNA sekvence TbRaD.
SEQ ID NO: 24 je DNA sekvence YYWCPG.
SEQ ID NO: 25 je DNA sekvence AAMK.
SEQ ID NO: 26 je DNA sekvence TbL-23.
SEQ ID NO: 27 je DNA sekvence TbL-24.
SEQ ID NO: 28 je DNA sekvence TbL-25.
SEQ ID NO: 29 je DNA sekvence TbL-28.
SEQ ID NO: 30 je DNA sekvence TbL-29.
SEQ ID NO: 31 je DNA sekvence TbH-5.
SEQ ID NO: 32 je DNA sekvence TbH-8.
SEQ ID NO: 33 je DNA sekvence TbH-9.
SEQ ID NO: 34 je DNA sekvence TbM-1.
SEQ ID NO: 35 je DNA sekvence TbM-3.
SEQ ID NO: 36 je DNA sekvence TbM-6.
SEQ ID NO: 37 je DNA sekvence TbM-7.
SEQ ID NO: 3 8 je DNA sekvence TbM-9.
SEQ ID NO: 39 je DNA sekvence TbM-12.
SEQ ID NO: 40 je DNA sekvence TbM-13.
SEQ ID NO: 41 je DNA sekvence TbM-14.
SEQ ID NO: 42 je DNA sekvence TbM-15.
SEQ ID NO: 43 je DNA sekvence TbH-4.
SEQ ID NO: 44 je DNA sekvence TbH-4-fwd.
SEQ ID NO: 45 je DNA sekvence TbH-12.
SEQ ID NO: 46 je DNA sekvence Tb3 8—1.
SEQ ID NO: 47 je DNA sekvence Tb38^1.
SEQ ID NO: 48 je DNA sekvence TbL-17.
SEQ ID NO: 49 je DNA sekvence TbL-20.
SEQ ID NO: 50 je DNA sekvence TbL-21.
SEQ ID NO: 51 je DNA sekvence TbH-16.
SEQ ID NO: 52 je DNA sekvence DPEP.
SEQ ID NO: 53 je odvozená aminokyselinová sekvence DPEP.
SEQ ID NO: 54 je proteinová sekvence DPV N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 55 je proteinová sekvence AVGS N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 56 je proteinová sekvence AAMK N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 57 je proteinová sekvence YYWC N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 58 je proteinová sekvence DIGS N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 59 je proteinová sekvence AEES N-koncového antigenů. SEQ ID NO; 60 je proteinová sekvence DPEP N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 61 je proteinová sekvence APKT N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 62 je proteinová sekvence DPAS N-koncového antigenů. SEQ ID NO: 63 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal.
SEQ ID NO: 64 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal 0.
SEQ ID NO: 65 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal 1.
SEQ ID NO: 66 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal2.
SEQ ID NO: 67 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal 3.
SEQ ID NO: 68 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRaló.
SEQ ID NO: 69 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal 7.
SEQ ID NO: 70 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal 8.
SEQ ID NO: 71 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRal9.
SEQ ID NO: 72 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa24.
SEQ ID NO: 73 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa26.
SEQ ID NO: 74 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa28.
.1
ΙΟ
SEQ ID NO: 75 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa29.
SEQ ID NO: 76 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa2A.
SEQ ID NO: 77 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa3.
SEQ ID NO: 78 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa32.
SEQ ID NO: 79 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa35.
SEQ ID NO: 80 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa36.
SEQ ID NO: 81 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa4.
SEQ ID NO: 82 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRa9.
SEQ ID NO: 83 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRaB.
SEQ ID NO: 84 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRaC.
SEQ ID NO: 85 je odvozená aminokyselinová sekvence TbRaD.
SEQ ID NO: 86 je odvozená aminokyselinová sekvence YYWCPG.
SEQ ID NO: 87 je odvozená aminokyselinová sekvence TbAAMK.
SEQ ID NO: 88 je odvozená aminokyselinová sekvence Tb38-1.
SEQ ID NO: 89 je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-4.
SEQ ID NO; 90 je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-8.
SEQ ID NO: 91 je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-9.
SEQ ID NO: 92 je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-12.
SEQ ID NO: 93 je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 1.
SEQ ID NO: 94 je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 2.
SEQ ID NO: 95 je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 3.
SEQ ID NO: 96 je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 4.
SEQ ID NO: 97 je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 5.
SEQ ID NO: 98 je aminokyselinová sekvence Tb38-1 peptid 6.
SEQ ID NO: 99 je DNA sekvence DPAS.
SEQ ID NO: 100 je odvozená aminokyselinová sekvence DPAS.
SEQ ID NO: 101 je DNA sekvence DPV.
SEQ ID NO: 102 je odvozená aminokyselinová sekvence DPV.
SEQ ID NO: 103 je DNA sekvence ESAT-6.
SEQ ID NO: 104 je odvozená aminokyselinová sekvence ESAT-6.
SEQ ID NO: 105 je DNA sekvence TbH-8-2,
SEQ ID NO: 106 je DNA sekvence TbH-9FL.
SEQ ID NO; 107 je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-9FL.
SEQ ID NO: 108 je DNA sekvence TbH-9-1.
SEQ ID NO: 109 je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-9-l.
SEQ ID NO: 110 je DNA sekvence TbH-9-4.
SEQ ID NO: 111 je odvozená aminokyselinová sekvence TbH-9-4.
SEQ ID NO: 112 je DNA sekvence Tb3 8-1F2 IN.
SEQ ID NO: 113 je DNA sekvence Tb38-2F2 RP.
SEQ ID NO; 114 je odvozená aminokyselinová sekvence Tb37-FL.
SEQ ID NO: 115 je odvozená aminokyselinová sekvence Tb38-IN.
SEQ ID NO: 116 je DNA sekvence Tb38-1F3.
SEQ ID NO: 117 je odvozená aminokyselinová sekvence Tb38-1F3.
SEQ ID NO: 118 je DNA sekvence Tb38-1F5.
SEQ ID NO: 119 je DNA sekvence Tb38-1F6.
SEQ ID NO: 120 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence DPV. SEQ ID NO: 121 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence AVGS. SEQ ID NO: 122 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence AAMK, SEQ ID NO: 123 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence YYWC. SEQ ID NO: 124 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence DIGS. SEQ ID NO: 125 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence AEES. SEQ ID NO: 126 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence DPEP. SEQ ID NO: 127 je dedukovaná N-koncová aminokyselinová sekvence APKT. SEQ ID NO: 128 je dedukovaná aminokyselinová sekvence DPAS.
SEQ ID NO: 129 je proteinová sekvence DPPN N-koncového antigenu.
SEQ ID NO: 130-133 jsou proteinové sekvence čtyř DPPD bromkyanových fragmentů.
SEQ ID NO: 134 je N-koncová proteinová sekvence XDS antigenu.
SEQ ID NO: 135 je N-koncová proteinová sekvence AGD antigenu.
SEQ ID NO: 136 je N-koncová proteinová sekvence APE antigenu.
SEQ ID NO: 137 je N-koncová proteinová sekvence XYI antigenu.
Jak bylo uvedeno výše, předkládaný vynález je obecně zaměřen na přípravky a způsoby pro prevenci, léčbu a diagnostiku tuberkuiosy. Přípravky podle předkládaného vynálezu zahrnují polypeptidy, které obsahují alespoň jednu imunogenní část antigenu M.tuberculosis, nebo varianty ío takového antigenu, která se liší pouze v konzervativních substitucích nebo modifikacích. Polypeptidy patřící do rozsahu předkládaného vynálezu zahrnují, ale nejsou omezeny na, imunogenní antigeny M. tuberculosis. „Solubilní protein M. tuberculosis''je protein pocházející z M. tuberculosis, který je přítomen ve filtrátu kultury M. tuberculosis. Jak je zde použito, termín „polypeptid“ zahrnuje aminokyselinové řetězce jakékoliv délky, včetně kompletních proteinů (tj. anti15 genů), ve kterých jsou aminokyselinové zbytky navázány peptidovými vazbami. Proto, polypeptid obsahující imunogenní část jednoho zvýše uvedených antigenů se může skládat pouze z imunogenní části, nebo může obsahovat další sekvence. Další sekvence mohou být odvozeny od přirozených antigenů M. tuberculosis, nebo mohou být heterologní, a takové sekvence mohou (ale nemusí) být imunogenní.
„Imunogenní“, jak je zde použito, označuje schopnost vyvolat imunitní odpověď (například buněčnou) u pacienta, jako je člověk, a/nebo v biologickém vzorku. Konkrétně, antigeny, které jsou imunogenní (a imunogenní části nebo jiné varianty takových antigenů) jsou schopné stimulovat proliferaci buněk, produkci Ínterleukinu-12 a/nebo produkci interferonu-τ v biologickém vzorku obsahujícím jednu nebo více buněk vybraných ze skupiny skládající se z T-buněk, NK buněk, B-buněk a makrofágů, kde buňky jsou získány odjedince imunního proti M. tuberculosis. Polypeptidy obsahující alespoň imunogenní část jednoho nebo více antigenů M. tuberculosis mohou být, obecně, použity pro detekci tuberkuiosy nebo pro indukci protektivní imunity proti tuberkulose u pacienta.
Přípravky a způsoby podle předkládaného vynálezu také zahrnují varianty výše uvedených polypeptidů. „Varianta“, jak je zde použito, je polypeptid, který se liší od přirozeného antigenu pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích, takže je zachována schopnost polypeptidu indukovat imunitní odpověď. Takové varianty mohou být obecně identifikovány modifikací jedné z výše uvedených polypeptidových sekvencí a hodnocením imunogenních vlastností modifikovaného polypeptidu, za použití, například, representativních postupů zde popsaných.
„Konzervativní substituce“ je taková substituce, při které je jedna aminokyselina substituována za jinou aminokyselinu, která má podobné vlastnosti, takže odborník v oboru peptidové chemie může očekávat, že se sekundární struktura a hydropatický charakter polypeptidu významně nezmění. Obecně, následující skupiny aminokyselin představují konzervativní změny: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gin, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; a (5) phe, tyr, trp, his.
Varianty mohou být také (nebo alternativně) modifikovány, například, deleci nebo adicí aminokyselin, které mají minimální vliv na imunogenní vlastnosti, sekundární strukturu a hydropatický charakter polypeptidu. Například, polypeptid může být konjugován se signální (nebo leaderovou) sekvencí v oblasti N-konce proteinu, kde tato sekvence bude ko-translacně nebo post-translaěně řídit přenos proteinu. Polypeptid může být také konjugován na spojovací sekvenci nebo na jinou sekvenci pro usnadnění syntesy, přečištění nebo identifikace polypeptidu (například poly-His), nebo pro zvýšení vazby polypeptidu na pevný nosič. Například, polypeptid může být konjugován na Fc region imunoglobulinu.
V příbuzném aspektu jsou popsány kombinační polypeptidy. „Kombinační polypeptid“ je poly55 peptid obsahující alespoň jednu z výše uvedených imunogenních částí a jednu nebo více dalších
CZ 300953 Bó imunogenních sekvencí M, tuberculosis, které jsou na sebe navázány peptidovou vazbou za vzniku jednoho aminokyselinového řetězce. Sekvence mohou být navázány přímo (tj. bez vmezeřených aminokyselin), nebo mohou být navázány prostřednictvím spojovací sekvence (například Gly-Cys-Gly), která nesnižuje významně imunogenní charakter složek polypeptidů.
Obecně, antigeny M. tuberculosis a DNA sekvence kódující takové antigeny, mohou být připraveny za použití jakéhokoliv z mnoha postupů. Například, solubilní antigeny mohou být izolovány z filtrátu kultury M. tuberculosis za použití postupů, které jsou odborníkům v oboru známé, včetně aniontové výměnné chromatografie a chromatografie na reversní fázi. Přečištěné antigeny io jsou potom hodnoceny na svou schopnost vyvolávat vhodnou imunitní odpověď (například buněčnou) za použití, například, representativních metod zde popsaných. Imunogenní antigeny mohou být částečně sekvencovány za použití technik jako je klasická Edmanova chemie (Viz
Edman a Berg, Eur. J. Biochem., 80: 116-132, 1967.
Imunogenní antigeny mohou také být produkovány rekombinantně za použití DNA sekvence, která kóduje antigen, která je insertována do expresního vektoru a která je exprivována ve vhodného hostiteli. DNA molekuly kódující solubilní antigeny mohou být izolovány vyšetřováním vhodných M. tuberculosis expresních knihoven s antiserem (například králičím) namířeným specificky proti solubilním antigenů M. tuberculosis. DNA sekvence kódující antigeny, které mohou nebo nemusí být solubilní, mohou být identifikovány vyšetřováním vhodných M. tuberculosis genomových nebo cDNA expresních knihoven sérem získaným od pacientů infikovaných M. tuberculosis. Takové vyšetření může být provedeno za použití technik dobře známých v oboru, jako jsou techniky popsané v Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Sprin Harbor, NY, 1989.
DNA sekvence kódující solubilní antigeny mohou být také získány vyšetřováním vhodných M. tuberculosis cDNA nebo genomových DNA knihoven na DNA sekvence, které hybridizují s degenerovanými oligonukleotidy odvozenými z částečných aminokyselinových sekvencí izolovaných solubilních antigenů. Degenerované oligonukleotidové sekvence pro použití v takovém vyšetřování mohou být navrženy a syntetizovány, a vyšetřování může být provedeno, například, jak je popsáno v Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Sprin Harbor Laboratories, Cold Sprin Harbor, NY, 1989 (a odkazem tam uvedených). Také může být použita polymerasová řetězová reakce (PCR), za použití výše uvedených oligonukleotidů v metodě dobře v oboru známé, pro izolaci nukleokyselinové sondy z cDNA nebo genomové knihovny. Vyšet35 ření knihovny může být potom provedeno za použití izolované sondy.
Alternativně, genomové nebo cDNA knihovny odvozené od M. tuberculosis mohou být vyšetřovány přímo za použití mononukleámích buněk periferní krve (PBMC) nebo T buněčných linií nebo klonů odvozených od jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Obecně, PBMC a/nebo
T buňky pro použití v takových vyšetřeních mohou být připraveny způsobem, který je popsán dále. Přímé vyšetřování knihovny může být obecně provedeno testováním souborů exprivovaných rekombinantních proteinů na jejich schopnost indukovat proliferaci a/nebo produkci interferonu-τ v T-buňkách odvozených od jedince imunního vůči M. tuberculosis. Alternativně, mohou být nejprve vybrány potenciální antigeny pro T-buňky na základě proti látkové reaktivity, jak je popsáno výše.
Bez ohledu na způsob přípravy mají antigeny (nebo jejich imunogenní část) podle předkládaného vynálezu (které mohou, ale nemusí být solubilní) schopnost indukovat imunitní odpověď. Přesněji, antigeny mají schopnost indukovat proliferaci a/nebo produkci cytokinů (tj. interferonu-τ a/nebo interleukinu-12) v T-buňkách, NK buňkách, B-buňkách a/nebo makrofágách odvozených od jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Výběr typu buněk pro hodnocení imunitní odpovědi na antigen bude, samozřejmě, záviset na požadované odpovědi. Například, produkce interleukinu-12 je nejlépe hodnocena za použití přípravků obsahujících B-buňky a/nebo makrofágy. Jedinec imunní vůči M. tuberculosis je takový jedinec, který je považován za resistentního na tuberkulosu díky tomu, že má účinnou odpověď T-buněk na M. tuberculosis (tj. je v podstatě bez příznaků onemocnění). Takoví jedinci mohou být identifikováni na základě silně pozitivního (tj. indurace o průměru větším než 10 mm) intradermálního kožního testu v odpovědi na tuberkulosní proteiny (PPD) a podle absence jakýchkoliv známek nebo příznaků tuberkulosy, T-buňky, NK buňky, B-buňky a makrofágy mohou být získány od jedinců imunních vůči M. tuberculosis za použití metod dobře známých v oboru. Například, může být použita příprava PBMC (tj. mononukleámích buněk periferní krve) bez další separace jednotlivých složek. PBMC mohou být připraveny, například, za použití densitní centrifugace v Ficoll™ (Winthrop Laboratories, NY). T-buňky použité v testech zde popsaných mohou být také přečištěny přímo z PBMC. Alternativně, mohou být použity obohacené linie buněk reaktivních s mykobakteriálními proteiny, nebo ío klony T-buněk reaktivní sjednotlivými mykobakteriálními proteiny. Takové klony T buněk mohou být získány, například, kultivací PBMC od jedince imunního vůči M. tuberculosis s mykobakteriálními proteiny po dobu 2 až 4 týdnů. Tento postup umožní expansi pouze T buněk specifických pro mykobakteriální proteiny, za vzniku linie složené pouze z takových buněk. Tyto buňky mohou být potom klonovány a testovány sjednotlivými proteiny, za použití metod odborníkům známých, pro přesnější definici individuální specificity T-buněk. Obecně, antigeny, které jsou pozitivní v testech na proliferaci a/nebo produkci cytokinů (tj. produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12) provedených za použití T-buněk, NK-buněk, B-buněk a/nebo makrofágů získaných od jedince imunního vůči M. tuberculosis jsou považovány za imunogenní. Takové testy mohou být provedeny, například, za použití representativních postupů popsaných dále. Imunogenní části takových antigenů mohou být identifikovány za použití stejných testů a mohou být presentovány spolu s polypeptidy podle předkládaného vynálezu.
Schopnost polypeptidu (například imunogenního antigenu, nebo jeho části nebo varianty) indukovat proliferaci buněk je hodnocena kontaktováním buněk (například T-buněk a/nebo
NK-buněk) s polypeptidem a měřením proliferace buněk. Obecně, množství polypeptidu, které je dostatečné pro hodnocení asi 105 buněk, je v rozmezí od 10 ng/ml do asi 100 pg/ml a výhodně je 10 pg/ml. Inkubace polypeptidu s buňkami je typicky provedena při 37 °C po dobu šesti dnů. Po inkubaci s polypeptidem jsou buňky testovány na proliferační odpověď, která může být hodnocena za použití metod dobře v oboru známých, jako je expozice buněk pulsu radioaktivně značeného thymidinu a měření inkorporace značeného thymidinu do buněčné DNA. Obecně, polypeptid, který způsobí alespoň trojnásobné zvýšení proliferace proti základní hodnotě (tj. proliferace pozorované pro buňky kultivované bez polypeptidu) je považován za schopný vyvolání proliferace.
Schopnost polypeptidu stimulovat produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12 může být hodnocena kontaktováním buněk s polypeptidem a měřením hladiny interferonu-τ nebo interleukinu-12 produkovaného buňkami. Obecně, množství polypeptidu, které je dostatečné pro hodnocení asi 105 buněk, je v rozmezí od 10 ng/ml do asi 100 pg/ml a výhodně je 10 pg/ml. Polypeptid může, ale nemusí, být imobilizován na pevném nosiči, jako jsou korálky nebo bio40 degradovatelné mikrosféry, například jak jsou popsány v patentech US 4 897 268 a US 5 075 109. Inkubace polypeptidu je typicky provedena při 37 °C po dobu šesti dnů. Po inkubaci s polypeptidem jsou buňky testovány na produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12 (nebo jedné nebo více jeho podjednotek), což může být provedeno za použití metod dobře v oboru známých, jako je enzymově vázaný imunosorbentní test (ELISA) nebo, v případě P70 podjednotky IL-12, biotest, například měřící proliferaci T-buněk. Obecně, polypeptid, který způsobí produkci alespoň 50 pg interferonu-τ na ml supematantu kultury (obsahující ΙΟ4-105 buněk na ml) je považován za schopný stimulace produkce interferonu-τ. Polypeptid, který stimuluje produkci alespoň 10 pg/ml P70 podjednotky IL-12 a/nebo alespoň 100 pg/ml P40 podjednotky IL—12, na 10s makrofágů nebo B-buněk (nebo na 3 x 105 PBMC) je považován za schopný stimulace produkce IL-12.
Obecně, imunogenní antigeny jsou takové antigeny, které stimulují proliferaci a/nebo produkci cytokinů (tj. interferonu-τ a/nebo interleukinu-12) vT-buňkách, NK-buňkách, B-buňkách a/nebo makrofágách získaných od alespoň 25 % jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Mezi těmito imunogenními antigeny mohou být odlišeny polypeptidy mající výhodnější terapeutické vlastnosti na základě rozsahu odpovědi ve výše uvedených testech a na základě procenta jedinců, u kterých je odpověď pozorována. Kromě toho, antigeny, které mají nej výhodnější terapeutické vlastnosti, nebudou stimulovat proliferací a/nebo produkci cytokinů in vitro u buněk získaných od více než 25 % jedinců, kteří nejsou imunní vůči M. tuberculosis, což eliminuje odpovědi, které nejsou specifické díky buňkách reaktivním vůči M, tuberculosis. Ty antigeny, které indukují odpověď ve vysokém procentu T-buněk, NK-buněk, B-buněk a/nebo makrofágů od jedinců imunních vůči M. tuberculosis (s nízkou odpovědí u přípravků buněk od jiných jedinců) mají nej výhodnější terapeutické vlastnosti.
io Antigeny s nej výhodnějšími terapeutickými vlastnostmi mohou být také identifikovány na základě jejich schopnosti zmírňovat závažnost infekce M. tuberculosis u pokusných zvířat, pokud jsou podány jako vakcína. Vhodné přípravky pro vakcinaci pro použiti u pokusných zvířat jsou podrobně popsány dále. Účinnost může být určena na základě schopnosti antigenu způsobit alespoň 50% redukci počtu bakterií a/nebo alespoň 40% snížení mortality po pokusné infekci.
Vhodná pokusná zvířata zahrnují myši, morčata a primáty.
Antigeny mající nej výhodnější terapeutické vlastnosti mohou být obecně identifikovány na základě schopnosti vyvolat odpověď v intradermálním testu provedeném u jedince s aktivní tuberkulosou, ale nikoliv v testu provedeném na jedinci, který není infikován M. tuberculosis,
Obecně mohou být kožní testy provedeny způsobem popsaným dále, kdy za pozitivní odpověď je považována alespoň 5 mm indurace.
Imunogenní části antigenů podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny a identifikovány za použití dobře známých technik, jako jsou techniky shrnuté v Paul, Fundamental Immunology,
3. vydání, Raven Press, 1993, str. 243-247, a v odkazech tam citovaných. Takové techniky zahrnují vyšetřování polypeptidových částí přirozeného antigenu na jejich imunogenní vlastnosti. Representativní testy proliferace a produkce cytokinu mohou být použity v těchto vyšetřováních. Imunogenní část polypeptidu je část, která v takových representativních testech vyvolává imunologickou odpověď (například proliferací, produkci interferonu-τ a/nebo interleukinu-12), která je významně podobná odpovědi, která je vyvolána kompletním antigenem. Jinými slovy, imunogenní část antigenu může vyvolávat alespoň 20%, a lépe 100%, proliferací indukovanou kompletním antigenem v testu proliferace zde popsaném. Imunogenní část antigenu může také, nebo alternativně, vyvolávat alespoň 20 %, a lépe 100 %, produkce ínterferonu-τ a/nebo interleukinu12 indukovanou kompletním antigenem v testu proliferace zde popsaném.
Části a jiné varianty antigenů M. tuberculosis mohou být generovány prostřednictvím syntesy nebo rekombinantními prostředky. Syntetické polypeptidy mající méně než přibližně 100 aminokyselin, a obyčejně méně než 50 aminokyselin, mohou být generovány za použití technik v oboru dobře známých. Například, takové polypeptidy mohou být syntetizovány za použití jakékoliv z komerčně dostupných technik syntesy na pevné fázi, jako je Merrifieldova metoda syntesy na pevné fázi, ve které jsou aminokyseliny sekvenčně přidávány k rostoucímu aminokyselinovému řetězci (viz Merrifíeld, J. Am. Chem. Soc. 85: 2 149-2 146, 1963). Vybavení pro automatizovanou syntesu polypeptidů je komerčně dostupné od dodavatelů, jako například od Applied Biosystems, lne., Foster City, CA, a může být použito podle návodu výrobce. Varianty přirozené45 ho antigenu mohou být obecně připraveny za použití standartních technik mutagenese, jako je oligonukleotidy řízená místně specifická mutagenese. Sekce DNA sekvence mohou být také odstraněny za použití standartních technik pro přípravu zkrácených polypeptidů.
Rekombinantní polypeptidy obsahující části a/nebo varianty přirozeného antigenu mohou být snadno připraveny z DNA sekvence kódující polypeptid za použití mnoha technik dobře v oboru známých. Například, supematant z vhodných systémů vektor/hostitel, které secemují rekombinantní protein do kultivačního média, může být nejprve koncentrován za použití komerčně dostupného filtru. Po koncentraci může být koncentrát aplikován na vhodnou matrici pro přečištění jako je afinitní matrice nebo iontová výměnná pryskyřice. Nakonec, pro další přečištění rekombinantního proteinu může být použit jeden nebo více kroků HPLC s reversní fází.
Jakýkoliv z mnoha expresních vektorů známých v oboru může být použit pro expresi rekombinantních polypeptidů podle předkládaného vynálezu. Exprese může být provedena v jakékoliv vhodné hostitelské buňce, která byla transformována nebo transfektována expresním vektorem obsahujícím DNA molekulu, která kóduje rekombinantní polypeptid. Vhodné hostitelské buňky zahrnují prokaryoty, kvasinky a vyšší eukaryotické buňky. Výhodně jsou jako hostitelské buňky použity E. coli, kvasinky nebo savčí buněčné linie jako je COS nebo CHO. DNA sekvence exprivovaná tímto způsobem může kodovat přirozeně se vyskytující antigeny, části přirozeně se vyskytujících antigenů nebo jejich jiné varianty.
Obecně, bez ohledu na způsob přípravy, jsou polypeptidy podle předkládaného vynálezu připraveny ve významně přečištěné formě. Výhodně jsou polypeptidy alespoň 80% čistoty, lépe alespoň 90% čistoty a nejlépe alespoň 99% čistoty. V jistých výhodných provedeních, podrobněji popsaných dále, jsou významně přečištěné polypeptidy inkorporovány do farmaceutických pří15 pravků nebo vakcín pro použití v jedné nebo více způsobech podle předkládaného vynálezu.
V určitých specifických provedeních popisuje vynález polypeptidy obsahující alespoň imunogenní část solubilního antigenu M. tuberculosis, který má následující N-koncové sekvence, nebo jeho varianty, které se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací:
_ n.
(a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-GlyGln-Val-VaVAla-Ala-Leu; (SEQ ID No. 120) (b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-ProSer, (SEQ ID No, 121) (c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-AlaAla-Lys-Glu-Gly-Arg; (SEQ ID No. 122) (d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-GlyPro; (SEQ ID No. 123) (e) Asp-Ile-Gly-Ser-GIu-Ser-Thr-GIu-Asp-Gln-GIn-Xaa-Ala-Val;
(SEQ ID No. 124) (f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro; (SEQ ID No. 125) (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Aia-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Ala-SerPro-Pro-Ser; (SEQ ID No. 126) (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-ThrGly; (SEQ ID No. 127) (i) Asp-PTO-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-LeuThr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-PheAla-Asn; (SEQ ID No. 128) (j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-AIa-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-AlaSer; (SEQ ID No. 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-AlaAsp;(SEQ ID No. 135) oř (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-AlaGly; (SEQ ID No. 136) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina, výhodně cysteinový zbytek. DNA sekvence kódující antigen identifikovaný jako (g), výše, je uvedena v SEQ ID NO: 52 a polypeptid kódovaný 5 SEQ ID NO: 52 je uveden v SEQ ID NO: 53. DNA sekvence kódující antigen označený (a) je uvedena v SEQ ID NO: 101; její odvozená aminokyselinová sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 103. DNA sekvence odpovídající antigenu (d), výše, je uvedena v SEQ ID NO: 24 a DNA sekvence odpovídající antigenu (c) je uvedena v SEQ ID NO: 25 a DNA sekvence odpovídající antigenu (i) je uvedena v SEQ ID NO: 99; její odvozená aminokyselinová sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 100.
io
V dalším specifickém provedení popisuje vynález polypeptidy obsahující alespoň imunogenní část antigenu M. tuberculosis, který má následující N-koncové sekvence, nebo jeho varianty, které se liší pouze konzervativní substitucí a/nebo modifikací:
(m) Xaa-Tyr-íle-AIa-Tyr-Xaa-Thi-Thr-Aia-Gly-Ile-Val-Pro-GIy-LysIle-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEQ ID No 137) or (n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-GIn-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-TyrTyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phc; (SEQ ID No. 129) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina, výhodně cysteinový zbytek.
V jiných specifických provedeních popisuje vynález polypeptidy obsahující alespoň jednu imunogenní část solubilního antigenu M. tuberculosis (nebo variantu takového antigenu), která obsahuje jednu nebo více aminokyselinových sekvencí kódovaných (a) DNA sekvencemi io SEQ ID NO: 1, 2, 4-10, 13, 25 a 52; (b) sekvencemi komplementárními k takovým DNA sekvencím, nebo (c) DNA sekvencemi významně homologními k sekvencím v (a) a (b).
V ještě jiných specifických provedeních popisuje vynález polypeptidy obsahující alespoň jednu imunogenní část antigenu M. tuberculosis (nebo variantu takového antigenu), který nemusí být solubilní, která obsahuje jednu nebo více aminokyselinových sekvencí kódovaných (a) DNA sekvencemi SEQ ID NO: 26 a 51; (b) sekvencemi komplementárními k takovým DNA sekvencím, nebo (c) DNA sekvencemi významně homologními k sekvencím v (a) a (b).
Ve specifických provedeních uvedených výše zahrnuje antigen M. tuberculosis varianty, které jsou kódovány DNA sekvencemi, které jsou významně homologní k jedné nebo více DNA sekvencemi zde uvedenými. „Významná homologie“, jak je zde použito, označuje DNA sekvence, které jsou schopné hybridizace za podmínek střední přísnosti. Vhodné podmínky střední přísnosti zahrnují předpromytí v roztoku 5xSSC, 0,5% SDS, 1,0 mm EDTA (pH 8,0); hybridizaci při 50 až 65, 5X SSC, přes noc, nebo, v případě mezidruhové homologie při 45 °C, 0,5X SSC;
potom dvakrát promytí při 65 °C po dobu 20 minut každým z 2X, 0,5X a 0,2X SSC obsahujícím 0,1% SDS). Takové hybridizující sekvence spadají také do rozsahu předkládaného vynálezu, stejně jako nukleotidové sekvence, které vzhledem k degeneraci genetického kódu, kódují imunogenní polypeptid, který je kodován hybridizující DNA sekvencí.
V souvisejícím aspektu poskytuje předkládaný vynález fúsní proteiny obsahující první a druhý polypeptid podle předkládaného vynálezu, nebo, alternativně, polypeptid podle předkládaného vynálezu a známý antigen M. tuberculosis, jako je 38 kDa antigen popsaný výše nebo ESAT-6 (SEQ ID NO: 103 a SEQ ID NO: 104), spolu s variantami takových fúsních proteinů. Fúsní proteiny podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat spojovací peptid mezi prvním a dru35 hým polypeptidem.
DNA sekvence kódující fúsní protein podle předkládaného vynálezu je konstruována za použití známých rekombinantních DNA technik pro seřazení separátních DNA sekvencí kódujících první a druhý polypeptid do vhodného expresního vektoru. 3'konec DNA sekvence kódující první polypeptid je ligován, snebo bez sekvence spojovacího peptidu, na 5' konec DNA .sekvence kódující druhý polypeptid, takže čtecí rámečky sekvencí jsou ve fázi umožňující translaci mRNA dvou DNA sekvencí do fúsního proteinu, který si uchovává biologickou aktivitu jak prvního, tak druhého polypeptidů.
Peptidová spojovací sekvence může být použita pro separaci prvního a druhého polypeptidů dostatečnou vzdáleností pro to, aby bylo zajištěno pro každý polypeptid správné složení jeho sekundární a terciární struktury. Taková peptidová spojovací sekvence je vložena do fúsního proteinu za použití technik v oboru dobře známých. Vhodné peptidové spojovací sekvence _ i ς _
CZ 300953 Bó mohou být vybrány na základě následujících faktorů: (1) jejich schopnosti přijímat flexibilní roztaženou konformaci; (2) jejich neschopnosti přijímat sekundární strukturu, která by mohla interagovat s funkčními epitopy na prvním nebo na druhém polypeptidu; a (3) chybění hydrofobních nebo nabitých zbytků, které by mohly interagovat s funkčními epitopy polypeptidů. Výhodné peptidové spojovací sekvence obsahují Gly, Asn, a Ser zbytky. Jiné příbuzné neutrální aminokyseliny, jako je Thr a Ala, mohou být také použity ve spojovací sekvenci. Aminokyselinové sekvence, které mohou být výhodně použity jako spojovací sekvence, zahrnují ty, které jsou popsány v Marata etal., Gene 40: 39-46, 1985; Murphy etal., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 83: 8 258-8 262, 1986; patent US 4 935 233 a patent US 4 751 180. Spojovací sekvence může mít io délku od I do 20 aminokyselin. Peptidové sekvence nejsou nutné, pokud první a druhé polypeptidy mají neesenciální N-koncové aminokyselinové regiony, které mohou být použity pro separaci funkčních domén a zabránění sterické interference.
Ligované DNA sekvence jsou operativně navázané na vhodné transkripční a translační regulační elementy. Regulační elementy odpovídající za expresi DNA jsou umístěny pouze na 5' konci DNA sekvence kódující první polypeptid. Podobně, stop kodony nutné pro ukončení translace a transkripční terminační signály jsou umístěny pouze na 3' konci DNA sekvence kódující druhý polypeptid.
2ϋ V jiném aspektu poskytuje předkládaný vynález způsob pro použiti jednoho nebo více z výše uvedených polypeptidů nebo fúsních proteinů (nebo DNA molekul kódujících takové polypeptidy) pro indukci protektivní imunity proti tuberkulose u pacienta. Jak je zde použito, „pacient“ označuje jakékoliv teplokrevného živočicha, výhodně člověka. Pacient může být postižen onemocněním, nebo může být bez detekovatelného onemocnění a/nebo infekce. Jinými slovy, protektivní imunita může být indukována pro prevenci nebo pro léčbu tuberkulosy,
V tomto aspektu je polypeptid, fúsní protein nebo molekula DNA obyčejně přítomna ve farmaceutickém přípravku a/nebo vakcíně. Farmaceutické přípravky mohou obsahovat jeden nebo více polypeptidů, z nichž každý může obsahovat jednu nebo více z výše uvedených sekvencí (nebo so jejich variant) a íýziologicky přijatelný nosič. Vakcíny mohou obsahovat jeden nebo více z výše uvedených polypeptidů a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi, jako je adjuvans nebo liposom (do kterého je polypeptid inkorporován). Takové farmaceutické přípravky a vakcíny mohou také obsahovat další antigeny M.tuberculosis, buď v kombinovaném polypeptidu,nebo v jiném separátním polypeptidu.
Alternativně může vakcína obsahovat DNA kódující jeden nebo více polypeptidů popsaných výše, jako jsou polypeptidy generované in šitu. V takových vakcínách může být DNA přítomna v jakémkoliv z mnoha systémů pro podání v oboru známých, včetně expresních systémů nukleových kyselin, bakteriálních a virových expresních systémů. Vhodné expresní systémy nukleových kyselin obsahují nezbytné DNA sekvence pro expresi u pacienta (jako je vhodný promotor a terminační signál). Bakteriální systémy pro podání obsahují podání bakterie (jako je Bacillus Calmette-Guerrin), která exprivuje imunogenni část polypeptidu na svém povrchu. Ve výhodném provedení může být DNA zavedena do organismu za použití virového expresního systému (například viru vakcínie nebo pox viru, retroviru nebo adenoviru), což může obsahovat použití nepatogenních (defektních), replikace-kompetentních virů. Techniky pro vložení DNA do takových expresních systémů jsou odborníkům v oboru dobře známé. DNA může také být „nahá“, jak je to popsáno, například, v Ulmer etal., Science 259: 1 745-1 749, 1993 a Cohen, Science 259: 1 691-1 692, 1993. Vychytávání nahé DNA může být zvýšeno potažením DNA na biodegradovatelné korálky, které jsou účinně transportovány do buněk.
V souvisejícím aspektu může být DNA vakcína jak je popsána výše podána simultáně nebo sekvenčně s polypeptidem podle předkládaného vynálezu a nebo známým antigenem M. tuberculosis, jako je 38 kDa antigen popsaný výše. Například, podání DNA kódující polypeptid podle předkládaného vynálezu, buď „nahé“, nebo v systému pro podání popsaném výše, může být následováno podáním antigenu pro zvýšení protektivního imunitního účinku vakcíny.
Způsoby a frekvence podání, stejně jako dávkování, se bude velmi lišit mezi jednotlivci a může být paralelní k v současné době používané imunizaci za použití BCG. Obecně, farmaceutické kompozice a vakcíny mohou být podány injekčně (například intrakutánně, intramuskulámě, intra5 venosně nebo subkutánně), intranasálně (například aspirací) nebo orálně. 1 až 3 dávky mohou být podány v průběhu 1 až 36 týdnů. Výhodně jsou podány 3 dávky, v intervalu 3 až 4 měsíců, a dosycovací imunizace mohou být potom podávány periodicky. Alternativní protokoly mohou být vhodné pro jednotlivé pacienty. Vhodnou dávkou je množství DNA nebo polypeptidu, které, při podání popsaném výše, vyvolá imunitní odpověď u imunizovaného pacienta, která je dostatečná io pro ochranu pacienta před infekcí M. tuberculosis po dobu alespoň 1 až 2 let. Obecně, množství polypeptidu v dávce (nebo produkované in šitu DNA) je v rozsahu od asi 1 pg do asi 100 mg na kg hostitele, typicky od asi 10 pg do asi 1 mg, a výhodně od asi 100 pg do asi 1 pg. Vhodná velikost dávky se bude velmi lišit podle velikosti pacienta, ale typicky bude v rozmezí od asi 0,1 ml do asi 5 ml.
Ačkoliv ve farmaceutickém přípravku podle předkládaného vynálezu může být použit jakýkoliv vhodný nosič v oboru známý, bude se typ nosiče velmi lišit podle způsobu podání. Pro parenterální podání, jako je subkutánní injekce, bude nosič výhodně zahrnovat vodu, fyziologický roztok, alkohol, tuk, vosk nebo pufr. Pro orální podání může být použit jakýkoliv z výše uvedených nosičů nebo pevný nosič, jako je manitol, laktossa, škrob, steran hořečnatý, sacharin sodný, talek, celulosa, gluoosa, sacharosa a uhličitan hořečnatý. Biodegradovatelné mikrosféry (například galaktan kyseliny polymléčné) mohou být také použity jako nosiče pro farmaceutické přípravky podle předkládaného vynálezu. Vhodné biodegradovatelné mikrosféry jsou popsány, například, v patentech US 4 897 268 a US 5 075 109.
Ve vakcínách podle předkládaného vynálezu může být pro nespecifické posílení imunitní odpovědi použito jakékoliv z mnoha adjuvans. Většina adjuvans obsahuje sloučeniny navržené pro ochranu antigenu před rychlým katabolismem, jako je hydroxid hlinitý a minerální olej, a nespecifické stimulátory imunitní odpovědi, jako je lipid A, Bordetella pertussis nebo Mycobacterium tuberculosis. Vhodná adjuvans jsou komerčně dostupná jako, například, Freundovo nekompletní adjuvans a Freundovo kompletní adjuvans (Difco laboratories) a Merck Adjuvant 65 (Merck and Company, lne., Rahway, NJ). Další vhodná adjuvans zahrnují síran híinitodraselný, biodegradovatelné mikrosféry, monofosforyl lipid A a quil A.
V jiném aspektu vynález poskytuje metody pro použití jednoho nebo více polypeptidů podle předkládaného vynálezu pro diagnostiku tuberkulosy za použití kožního testu. Jak je zde použito, „kožní test“ je test provedený přímo na pacientovi, ve kterém je měřena reakce oddáleného typu přecitlivělosti (DTH) (jako je otok, zčervenání nebo dermatitis) po intradermální injekci jednoho nebo více polypeptidů podle předkládaného vynálezu. Taková injekce může být provedena za
4o použití jakéhokoliv vhodného prostředku dostatečného pro kontaktování polypeptidu nebo polypeptidů s buňkami dermis pacienta, jako je například tuberkulinová injekční stříkačka nebo Iml injekční stříkačka. Výhodně je reakce měřena alespoň 48 hodin po injekci, lépe 48 až 72 hodin.
DTH reakce je imunitní odpověď zprostředkovaná buňkami, která je největší u pacientů, kteří byly dříve vystaveni testovanému antigenu (tj. imunogenní části použitého polypeptidu, nebo jeho varianty). Odpověď může být měřena vizuálně, za použití pravítka. Obecně, odpověď větší než 0,5 cm v průměru, lépe větší než 1,0 cm v průměru, je pozitivní odpověď, ukazující na tuberkulosní infekci, která se může nebo nemusí projevovat jako aktivní onemocnění.
Polypeptidy podle předkládaného vynálezu jsou výhodně formulovány, pro použití v kožním testu, jako farmaceutické přípravky obsahující polypeptid a fyziologicky přijatelný nosič, jak je popsáno výše. Takové přípravky typicky obsahují jeden nebo více z výše uvedených polypeptidů v množství od asi 1 μ do asi 100 pg, výhodně od 10 do asi 50 pg v objemu 0,1 ml. Výhodně je nosičem použitým v takových farmaceutických přípravcích fyziologický roztok s vhodnými kon55 zervačními činidly, jako je fenol a/nebo Tween 80™.
_ 17 _
Ve výhodném provedení je polypeptid použitý v kožním testu dostatečné velikosti, aby zůstával v místě injekce po dobu trvání reakce. Obecně, dostatečný je polypeptid o délce alespoň 9 aminokyselin. Polypeptid je také výhodně zpracován makrofágy během několika hodin po injekcí pro s presentaci T-buňkám, Takové polypeptidy mohou obsahovat opakující se úseky jedné nebo více z výše uvedených sekvencí a/nebo další imunogenní nebo neimunogenní sekvence.
Následující příklady jsou uvedeny pro ilustraci, nikoliv jako omezení předkládaného vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 - Přečištění a charakterizace polypeptidů z filtrátu kultury M. tuberculosis
Tento příklad ilustruje přípravu solubtlních polypeptidů M. tuberculosis z filtrátu kultury. Pokud není uvedeno jinak, jsou všechna procenta uvedena jako hmotnost na objem.
M. tuberculosis (buď H37Ra, ATCC č, 25177, nebo H37Rv, ATCC č. 25618) bylo kultivováno 20 ve sterilním GAS médiu při 37 °C po dobu čtrnácti dnů. Médium bylo potom vakuově filtrováno (s ponecháním objemu buněk) přes 0,45 μ filtr do sterilní 2,5 I nádoby. Médium bylo potom filtrováno přes 0,2 μ filtr do sterilní 4 1 nádoby a k filtrátu kultury byl přidán NaN3 v koncentraci 0,04 %, Lahve byly potom umístěny v místnosti s teplotou 4 °C.
Filtrát kultury byl koncentrován umístěním filtrátu do 121 reservoáru, který byl potom autoklavován a vložením filtrátu do Amicron míchací kyvety, která byla vypláchnuta ethanolem a obsahovala 10 000 kDa MWCO membránu. Tlak byl udržován na 60 psí za použití plynného dusíku. Tento postup redukoval 12 I objem na přibližně 50 ml.
Filtrát kultury byl dialyzován do 0,1% hydrogenuhličitanu amonného za použití 8000 kDa MWCO membrány z esteru celulosy, se dvěma výměnami roztoku hydrogenuhličitanu amonného. Koncentrace proteinu byla určena komerčně dostupným BCA testem (Pierce, Rocford, ÍL).
Dialyzovaný filtrát kultury byl potom lyofilizován a polypeptidy byly resuspendovány v dešti lo35 váné vodě. Polypeptidy byly znovu dialyzovány proti 0,01 mm 1,3-bis(tris(hydroxymethyl)methylamino)propanu, pH 7,5 (Bis-Tris propanový pufr), což bylo východiskem pro aniontovou výměnnou chromatografií. Frakcionace byla provedena za použití gelové vylučovací chromatografie na POROS 146 II Q/M aniontové výměnné koloně 4,6 x 100 mm (Perseptive BioSystems, Framingham, MA) uvedené do rovnováhy v 0,01 mm Bis-Tris propanového pufru pH 7,5. Poly40 peptidy byly eluovány lineárními gradienty 0 až 0,5 M NaCI ve výše uvedeném pufrovacím systému. Eluent z kolony byl sledován při vlnové délce 220 nm.
Soubory polypeptidů eluující z iontové výměnné kolony byly znovu dialyzovány proti destilované vodě a lyofilizovány. Výsledná materiál byl rozpuštěn v 0,1% kyselině trifluoroctové (TFA) pH 1,9 ve vodě a polypeptidy byly přečištěny na Delta-Pak Cl8 koloně (Waters, Milford, MA) s velikostí párů 300 Angstromů, velikostí částic 5 mikronů (3,9x150 mm). Polypeptidy byly eluovány z kolony lineárním gradientem 0 až 60% ředicího pufru (0, 1% TFA v acetonitrilu). Rychlost průtoku byla 0,75 ml/minutu a HPLC eluent byl sledován při 214 nm. Frakce obsahující eluované polypeptidy byly odebrány pro maximalizaci čistoty jednotlivých vzorků. Bylo získáno asi 200 přečištěných polypeptidů.
Přečištěné polypeptidy byly potom vyšetřovány na schopnost indukovat proliferaci T-buněk v PBMC přípravcích. PBMC od dárců s pozitivním PPD kožním testem a ty T-buňky, které proliferovaly v odpovědi na PPD a surové solubilní proteiny od MTB byly kultivovány v médiu obsahujícím RPMI 1640 doplněné 10% odebraným lidským sérem a 50 pg/ml gentamicinu. PřeCZ 300953 B6 čištěné polypeptidy byly přidány ve dvojím provedení v koncentracích 0,5 až 10 pg/ml. Po šesti dnech kultivace v 96-jamkových plotnách s plochým dnem v objemu 200 μί, bylo 50 μί média odebráno z každé jamky pro určení hladin IFN-t, jak je popsáno výše. Plotny byly potom pulsovány 1 pCi/jamku tritiem značeného thymidinu po dobu dalších 18 hodin, potom byly sklízeny a byly určeno vychytávání tritia za použití plynné scintilační kamery. Frakce, které způsobovaly v obou provedeních proliferaci trojnásobně vyšší, než je pozorována u buněk kultivovaných pouze za přítomnosti media, byly považovány za pozitivní.
IFN-τ byl měřen za použití enzymově vázaného imunosorbentního testu (ELISA). ELISA plotny ío byly potaženy myší monoklonální protilátkou namířenou proti lidskému IFN-τ (PharMingen, San
Diego, CA) v PBS po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Jamky byly potom blokovány PBS obsahujícím 5% (hmotnost/objem) odtučněné sušené mléko po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Plotny byly potom šestkrát promyty v PBS/0,2/ Tween-20 a vzorky ředěné 1:2 v kultivačním médiu na ELISA plotnách byly inkubovány přes noc při pokojové teplotě. Plotny byly znovu promyty a do každé jamky bylo přidáno polyklonální králičí anti-lidský IFN-τ sérum ředěné 1:3000 v PBS/10% normální kozí sérum. Plotny byly potom inkubovány po dobu 2 hodin při pokojové teplotě, byly promyty a byly přidány anti—králičí IgG s navázanou křenovou peroxidasou (Sigma Chemicals So., st. Louis, MO) v ředění 1:2000 v PBS/5% odtučněné sušené mléko. Po dvou hodinách inkubace při pokojové teplotě byly plotny promyty a byl přidán TMB substrát.
Optická densita byla určena při 450 nm za použití 570 nm jako referenční vlnové délky. Frakce, které měly v obou provedeních OD dvakrát vyšší než je průměrná OD pro buňky kultivované v médiu samotném, plus 3 standartní odchylky, byly považovány za pozitivní.
Pro sekvencování byly polypeptidy jednotlivě sušeny na Biobrene™ (Perkin Elmer/Applied
BioSystems Division, Foster City, CA) ošetřených filtrech ze skelných vláken. Filtry s polypeptidem byly vloženy do Perkin Elmer/Applied BioSystems Division procise 492 proteinového sekvenátoru. Polypeptidy byly sekvencovány z amino konce za použití tradiční Edmanovi chemie. Aminokyselinová sekvence byla určena pro každý polypeptid srovnáním retenční doby PTH aminokyselinového derivátu s vhodnými standardy PTH derivátu.
iq
Za použití postupů popsaných výše byly izolovány antigeny mající následující N-koncové sekvence;
(a) Asp-ProVal-Asp-Ala-Val-Ilc-Asn-Thr-Thr-Xaa-Asn-Tyr-GlyGln-Val-Val-AIa-Ala-Leu; (SEQ ID No. 54) (b) Ala-V at-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Tbr-Pro-Ala-ProSer; (SEQ ID No. 55) (c) Ala^Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-AlaAla-Lys-Glu-Gly-Arg; (SEQ ID No. 56) (d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-GlyPro; (SEQ ID No, 57) (e) Asp-Ile-Gly^Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gi η-Xaa- Ala-Val;
(SEQ ID No. 58) (f) Ala^Giu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-GIu-Xaa-Ile-Val-Pro; (SEQ ID No. 59) (g) Asp-Pro-GIu-Pro-Ala-Pro-Pro-VaNPro-Thr-Ala-Ala-Ala-AlaPro-Pro-Ala; (SEQ ID No. 60) and (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-ThrGly; (SEQ ID No. 61) kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina,
Další antigen byl získán za použití kroku přečištění na microbore HPCL navíc k postupu popsanému výše. Konkrétně, 20 μί frakce obsahující směs antigenů z dříve popsaného kroku chromatografického přečištění bylo přečištěno na Aquapore Cl8 koloně (Perkin Elmer/Applied Biosystems Division, Foster City, CA) s póry velikosti 7 mikronů, kolonou velikosti io 1 mm x 100 mm, na perkin Elmer/Applied Biosystems Division Model 172 HPLC. Frakce byly eluovány z kolony za použití lineárního gradientu 1%/minutu acetonitrilu (obsahujícího 0,05%
TFA) ve vodě (0,05% TFA) rychlostí toku 80 μΙ/minutu. Eluent byl monitorován při 250 nm. Originální frakce byla separována do 4 hlavních píků plus dalších menších složek a byl získán polypeptid, který měl molekulovou hmotnost 12.054 kDa (podle hmotové spektrometrie) a který měl následuj ící N-koncovou sekvenci:
(Í) Asp-Pro-Ala-Ser- Ala-Pro-Asp-V al-Pro-Thr-Ala-Ala-GIn-GlnThr-Ser-LeU'LeU'Asn-Asn-Leu-Ala-Asp-Pro-Asp-Val-Ser-PheAla-Asp (SEQ ID No. 62),
Bylo prokázáno, že tento polypeptid indukuje proliferaci a produkci IFN-τ v přípravcích PBMC za použití testů popsaných výše.
Další solubilní antigeny byly izolovány z filtrátu kultury M. tuberculosis následujícím způsobem. Filtrát kultury M. tuberculosis byl připraven stejným způsobem jako výše. Po dialýze proti Bis-Tris propanovému pufru, při pH 5,5, byla provedena frakcionace za použití aniontové výměnné chromatografie na Poros QE koloně 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems) uvedené do rovnováhy Bis-Tris propanovým pufrem pH 5,5. Polypeptidy byly eluovány lineárním gradientem 0 až 1,5 MNaCl ve výše uvedeném pufrovacím systému při průtoku 10 ml/minutu. Eluens kolony byl monitorován při vlnové délce 214 nm.
Frakce eluující z iontové výměnné kolony byly shromážděny a byly podrobeny chromatografii na reversní fázi za použití Poros R2 kolony 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems). Polypeptidy byly eluovány z kolony lineárním gradientem od 0 až 100 % acetonitrilu (0,1% TFA) při průtoku 5 ml/minutu. Eluens byl monitorován při 214 nm.
ío Frakce obsahující eluované polypeptidy byly lyofilizovany a resuspendovány v 80 μΐ vodného 0,1% TFA a dále byly podrobeny chromatografii ne reversní fázi na Vydac C4 koloně 4,6 x 150 mm (Western Analytical, Temecula, CA) s lineárním gradientem od 0 až 100 % acetonitrilu (0,1% TFA) při průtoku 2 ml/minutu. Eluens byl monitorován při 214 nm.
Frakce s biologickou aktivitou byla separována do jednoho hlavního píku plus dalších menších složek. Western blot tohoto píku na PVDF membráně ukázal tři hlavní proužky o molekulové hmotnosti 14 kDa, 20 kDa a 26 kDa. U těchto polypeptidů byly určeny následující N-koncové sekvence, v příslušném pořadí:
(j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lvs-Val-Thr-Asp-AlaSer; (SEQ ID No. 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Iie-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-AIaAsp; (SEQ IĎ No. 135) and (l) Ala^Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Giy-Tíir-Val-Gln-AlaGly; (SEQ ID No. 136), kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.
Za použití testů popsaných výše bylo prokázáno, že tyto polypeptidy indukují proliferaci a produkci ÍFN-τ u PBMC. Obrázky 1A a 1B ukazují výsledky takových testů za použití přípravků PBMC od prvního a druhého dárce, v příslušném poradí.
DNA sekvence, které kódují antigeny označené jako (a), (c), (d) a (g), výše, byly získány vyšetřením genomové M. tuberculosis knihovny za použití 32p koncově značených degenerovaných oligonukleotidů odpovídajících N-koncové sekvenci a obsahující M. tuberculosis chybné kodony. Vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenů (a), výše, identifikovalo klon mající sekvence uvedenou v SEQ ID NO: 101. Polypeptid kódovaný SEQ ID NO: 101 je uveden v SEQ ID NO: 102. Vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenů (g), výše, identifikovalo klon mající sekvence uvedenou v SEQ ID NO: 52. Polypeptid kódovaný SEQ ID NO: 52 je uveden v SEQ ID NO: 53. Vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenů (d), výše, identifikovalo klon mající sekvence uvedenou v SEQ ID NO: 24 a vyšetření provedené za použití sondy odpovídající antigenů (c), výše, identifikovalo klon mající sekvence uvedenou v SEQ ID NO: 25.
Výše uvedené aminokyselinové sekvence byly srovnávány se známými aminokyselinovými sekvencemi v genové bance za použití DNA STAR systému. Prozkoumávána database obsaho40 vala okolo 173 000 proteinů a byla kombinována se Swiss, PIR databázemi spolu s translatovanými proteinovými sekvencemi (Verse 87). Nebyly detekovány žádné signifikantní homologie s aminokyselinovými sekvencemi pro antigeny (a)-<h) a (1).
_ 71
Bylo zjištěno, že aminokyselinová sekvence pro antigen (i) je homologní se sekvencí z M. leprae. Kompletní sekvence M. leprae byla amplifikována z genomové DNA za použití sekvence získané z GENBANK, Tato sekvence byla potom použita pro vyšetřování M. tuberculosis knihovny popsané dále v příkladu 2 a byla získána kompletní kopie homologu M. tuberculosis (SEQ ID NO: 99).
Bylo zjištěno, že aminokyselinová sekvence pro antigen (j) je homologní k známému proteinu M. tuberculosis translatovanému z DNA sekvence. Podle vědomostí vynálezců nebylo doposud popsáno, že by tento protein měl stimulační aktivitu pro T-buňky. Bylo zjištěno, že aminokyselin io nové sekvence (k) je příbuzná sekvenci z M. leprae.
Výsledky pro representativní antigeny uvedené výše v testech proliferace a IFN-τ produkce provedených za použití tří PPD pozitivních dárců jsou uvedeny v tabulce 1:
Tabulka 1 - Výsledky testu proliferace PBMC a produkce IFN-τ
sekvence Proliferace IFN-T
(a) -
(c) +++ 4-++
(d) ++ ++
(g) +++ +++
(h) +++ +++
V tabulce 1 byla odpověd1, která dávala stimulační index (SI) mezi 2 a 4 (vzhledem k buňkám kultivovaným pouze v médiu) počítána jako +, SI 4-8 nebo 2-4 v koncentraci 1 μg nebo menší byla počítána jako ++ a SI vyšší než 8 byla počítána jako +++. Antigen sekvence (c) měl vysoký SI (+++) pro jednoho dárce a nižší SI (++ a +) pro další dva dárce v proliferačním i ÍFN-τ testu. Tyto výsledky ukazují, že tyto antigeny jsou schopné indukce proliferace a/nebo produkce IFN-τ.
Příklad 2 - Použití séra od pacienta pro izolaci antigenů M. tuberculosis
Tento příklad popisuje izolaci antigenů z lyzátů M. tuberculosis za pomoci vyšetřování sérem od jedinců infikovaných M. tuberculosis.
Vysušené M. tuberculosis H37Ra (Difco Laboratories) bylo přidáno k 2% roztoku NP40 a třikrát byla provedena střídavě homogenizace a sonikace. Vzniklá suspenze byla centrifugována při 13 000 rpm v mi krocentr i fugových tubách a supematant byl protlačen přes 0,2 mikronový stříkačkový filtr. Filtrát byl navázán na Macro Prep DEAE korálky (BioRad, Hercules, CA). Korálky byly důkladně promyty 20 mm Tris pH 7,5 a navázané proteiny byly eluovány 1 M NaCl.
1 M NaCl eluát byl dialyzován přes noc proti 10 mm Tris, pH 7,5. Dialyzovaný roztok byl ošetřen DNAsou a RNAsou při koncentraci 0,05 mg/ml po dobu 30 minut při pokojové teplotě a potom a-D-manosidasou, 0,5 U/mg při pH 4,5 po dobu 3 až 4 hodin při pokojové teplotě. Po návratu k pH 7,5 byl materiál frakcionován pomocí FPLC na Bio Scale Q-20 koloně (BioRad). Frakce byly kombinovány do 9 souborů, byly koncentrovány na Centriprep 10 (Amicon,
Beverley, MA) a byly vyšetřovány ve Western blotu na svou serologickou aktivitu za použití séra od pacientů infikovaných M. tuberculosis, které nebylo imunoreaktivní sjinými antigeny podle předkládaného vynálezu.
Nejvíce reaktivní frakce byla potom podrobena SDS-PAGE a byla přenesena do PVDF. Byl vyříznut proužek o přibližně 85 kDa za zisku sekvence:
(m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Aia-Gly-íle-Val-Pro-Gly-Lys* Ile-Asn-Val-His-Leu-Val: (SEQ ID No. 137), kde Xaa může být jakákoliv aminokyselina.
Srovnání této sekvence se sekvencemi v genové bance jak bylo popsáno výše neukázalo žádnou signifikantní homologii se známými sekvencemi.
ío Příklad 3 - Příprava DNA sekvencí kódujících antigeny M. tuberculosis
Tento příklad popisuje přípravu DNA sekvencí kódujících antigeny M. tuberculosis za pomoci vyšetřování M. tuberculosis expresní knihovny sérem od pacientů infikovaných M. tuberculosis, nebo anti-séra proti sotubilním antigenům M. tuberculosis.
A. Příprava solubilních antigenu M. tuberculosis za použití králičího antiséra
Genomová DNA byla izolována z M. tuberculosis kmene H37Ra. DNA byla náhodně rozstřižena a byla použita pro konstrukci expresní knihovny za použití Lambda ZAP expresního systému (Stratagene, La Jolla, CA). Bylo generováno králičí antisérum proti sekrečním proteinům M. tuberculosis kmenů H37Ra, H37Rv a Erdman imunizací králíků koncentrovaným supcmatantem kultur M. tuberculosis. Přesněji, králíci byli nejprve imunizováni podkožně 200 pg proteinového antigenu v celkovém objemu 2 ml obsahujícím 10 pg muramyl dipeptidu (Calbiochem, La Jolla, CA) a 1 ml nekompletního Freundova adjuvans. O čtyři týdny později byla králíkům podá25 na dosycovací dávka 100 pg antigenu v nekompletním Freundově adjuvans. Nakonec byli králíci imunizováni subkutánně 50 pg proteinového antigenu. Anti-sérum bylo použito pro vyšetřování expresní knihovny, jak je to popsáno v Sambrook et al., Molecular Clon ing: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Sprin Harbor, NY, 1989. Bakteriofágové plaky exprívující imunoreaktivní antigen byly přečištěny. Byly získány fagemidy z plaků a byla odvozena nukleotidová sekvence klonů M, tuberculosis.
Bylo přečištěno 32 klonů. Z těchto 25 představovalo sekvence, které nebyly dříve identifikovány u lidského M. tuberculosis. Rekombinantní antigeny byly exprivovány a přečištěné antigeny byly použity v imunologické analýze popsané v příkladu 1. Proteiny byly indukovány IPTG a byly přečištěny gelovou elucí, jak je popsáno v Skeiky et al., J. Exp. Med. 181: 1 527-1 537, 1995. Representativní sekvence DNA molekul identifikovaných v tomto vyšetření jsou uvedeny v SEQ ID NO: 1-25. Odpovídající předpokládané aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v SEQ ID NO: 63-87.
Pri srovnání těchto sekvencí se známými sekvencemi v genové bance za použití databáze uvedené výše bylo zjištěno, že klony, které jsou zde označené TbRA2A, TbRA16, TbRAlS aTbRA29 (SEQ ID NO: 76, 68, 70, 75) vykazují určitou homologii se sekvencemi dříve identifikovanými v Mycobacterium leprae, ale nikoliv v M. tuberculosis. TbRall, TbRA26, TbRA28 aTbDPEP (SEQ ID NO: 65, 73, 74 a 53) byly dříve identifikovány v M. tuberculosis. Žádná signifikantní homologie nebyla nalezena pro TbRAl, TbRA3, TbRA4, TbRA9, TbRalO, TbRA13, TbRA17, TbRA19, TbRA29, TbRA32, TbRA36 a překrývající se klony TbRA35 aTbRA12 (SEQ ID NO: 63, 77, 81, 82, 64, 67, 69, 71, 75, 78, 80, 79, 66). Klon TbRa24 se překrývá s klonem TbRa29.
CZ 300953 Bó
Výsledky testů proliferace PBMC a produkce IFN-τ provedených pro representativní rekombinantní antigeny za použití přípravků ΐ -buněk od několika různých pacientů imunních vůči M. tuberculosis jsou uvedeny v tabulkách 2 a 3.
Tabulka 2 - Výsledky proliferace PBMC v odpovědi na representativní solubilní antigeny
Antigen Pacient
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
TbRal - - + ++ - - + + - - + + -
TbRa3 - + ++ - + - - ++ + - - - -
TbRa9 - - nt nt ++ ++ nt nt nt nt nt nt nt
TbRalO - - ± + ± + nt + - + + + -
TbRall + ± + ++ ++ + nt - ++ ++ ++ ± nt
TbRal2 - - + + + ++ + + + - + - -
TbRal6 nt nt nt nt - + nt nt nt nt nt nt nt
TbRa24 nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt
TbRa26 - + nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt
TbRa29 nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt
TbRa35 ++ nt ++ ++ ++ ++ nt ++ ++ ++ ++ +4- nt
TbRaB nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt
TbRaC nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt
TbRaD nt nt nt nt - - nt nt nt nt nt nt nt
AAMK - - + - - nt - - - nt + nt
YY - - - - - - nt - - nt + nt
DPEP - - ++ - - nt ++ + + + + nt
Kontrola
Tabulka 3 - Výsledky produkce IFN-τ v PBMC v odpovědi na representativní solubilní antigeny
Antigen Pacient
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
TbRal 4- ++ +++ + - ± - - + ± -
TbRa3 - + ++ - + - - ++ + - - - -
TbRa9 ++ + nt nt ++ - nt nt nt nt nt nt nt
TbRalO + + + + + nt + - + ± ± -
TbRall ± + ++ + nt - ++ ++ ++ + nt
TbRalž - - + + + +++ + ± + - + - -
TbRal6 nt nt nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt
TbRa24 nt nt nt nt + - nt nt nt nt nt nt nt
TbRa26 ++ ++ nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt
TbRa29 nt nt nt nt + - nt nt nt nt nt nt nt
TbRa35 ++ nt ++ ++ +++ +++ nt ++ ++ +++ +++ ++ nt
TbRaB nt nt nt nt + nt nt nt nt nt nt nt
TbRaC nt nt nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt
TbRaD nt nt nt nt + + nt nt nt nt nt nt nt
AAMK - - ± - - - nt - - - nt + nt
YY - - - - - - nt - - - nt + nt
DPEP + + + +++ + - nt +++ + + + nt
Kontrola -
V tabulkách 1 a 2 byly odpovědi, které dávaly stimulační index (SI) mezi 1,2 a 2 (vzhledem k buňkám kultivovaným v médiu samotném) počítány jako ±, SI mezi 2^4 byly počítány jako +, SI 4-8 nebo 2-A při koncentraci I pg nebo menší byly počítány jako ++ a SI vyšší než 8 byly počítány jako +++. Kromě toho, účinek koncentrace na proliferaci a produkci interferonu-τ je pro dva z výše uvedených antigenů ukázán na připojených obrázkách. Pro proliferaci i produkci interferonu-τ byl TbRa3 počítán jako ++ a TbRa9 jako +.
io
Tyto výsledky naznačují, že tyto solubilní antigeny mohou indukovat proliferaci a/nebo produkci interferonu-τ v T-buňkách získaných od jedinců imunních vůči M. tuberculosis.
B. Použití séra od pacienta pro identifikaci DNA sekvence kódující antigeny M. tuberculosis
Genomová DNA knihovna popsaná výše a další H37Rv knihovna byly vyšetřovány za použití souborů séra získaného od pacientů s aktivní tuberkulosou. Pro přípravu H37Rv knihovny byla izolována genomová DNA M. tuberculosis kmene H37Rv, byla podrobena částečnému trávení Sau3A a byla použita pro konstrukci expresní knihovny za použití Lambda Zap expresního systému (Stratagene, La Jolla, Ca). Tři různé soubory séra, každé obsahující sérum získané od tří jedinců s aktivním plicním nebo pleurálním onemocněním, byly použity při expresním vyšetřování. Soubory byly označeny TbL, TbM a TbH, s ohledem na reaktivitu sH37Ra lyzátem (tj· TbL = nízká reaktivita, TbM = střední reaktivita a TbH = vysoká reaktivita) v ELISA i imunobtotovém testu. Také byly použity čtyři soubory séra od sedmi pacientů s aktivní plicní tuberku
CZ 300953 Bó losou. Žádné sérum nemělo zvýšenou reaktivitu s 38 kDa fosfátovým vazebným proteinem od M. tuberculosis H37Ra.
Všechny soubory byly pre-adsorbovány lyzátem E. co!i a byly použity pro vyšetřování H37Ra a H37Rv expresních knihoven, jak je popsáno v Sambrook etal., Molecular cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold sprin Harbor, NY, 1989. Bakteriofágové plaky exprivující imunoreaktivní antigen byly přečištěny. Byly získány fagemidy z plaků a byla odvozena nukleotidová sekvence klonů M. tuberculosis.
io Bylo přečištěno 32 klonů. Z těchto klonů 31 představuje sekvence, které nebyly dříve identifikovány u lidského M.tuberculosis. Representativní sekvence identifikovaných DNA molekul jsou uvedeny v SEQ ID NO: 26-51 a 105. Z těchto sekvencí, TbH-8 a TbH-8-2 (SEQ ID NO: 105) jsou nesousedící DNA sekvence ze stejného klonu, a TbH^t (SEQ ID NO: 43) a TbH-4-FWD (SEQ ID NO: 44) jsou nesousedící sekvence ze stejného klonu. Aminokyselinové sekvence pro antigeny zde identifikované jako Tb38-1, TbH-4. TbH-8, TbH-9 a TbH-12 jsou uvedeny v SEQ ID NO: 88-92. Srovnání těchto sekvencí se známými sekvencemi v genové bance za použití databází uvedených výše neukázalo žádnou signifikantní homologii s TbH-4, TbH-8, TbH-9 a TbM-3, ačkoliv byly nalezeny slabé homologie s TbH-9. Bylo zjištěno, že TbH12 je homologní k 34 kDa antigennímu proteinu dříve identifikovanému u M. paratuberculosis (Acc.
č. S28515). Bylo zjištěno, že Tb38—1 je umístěn 34 párů bází upstream od otevřeného čtecího rámečku pro antigen ESAT-6 dříve identifikovaný u M. bovis (Acc. Č. Ό34848) a u M. tuberculosis (Sorensen et al., Infect. Immun. 63: 1 710-1 717, 1995).
Sondy odvozené od Tb38— 1 a TbH-9, obě izolované z H37Ra knihovny, byly použity pro ídenti25 fikaci klonů v H37Rv knihovně. Tb38-l hybridízovala na Tb38-1F2, Tb38-1F3, Tb38-IF5 a Tb38-1F6 (SEQ ID NO: 112, 113, 116, 118 a 119). (SEQ ID NO: 112 a 113 jsou nesousedící sekvence z klonu Tb38-1F2). VTb38-lF2 byly odvozeny dva otevřené čtecí rámečky; jeden odpovídající Tb37FL (SEQ ID NO: 114), druhý, částečná sekvence, může být homologní k Tb38—1 a je nazván Tb38-IN (SEQ ID NO: 115), Odvozená aminokyselinová sekvence Tb38- 1F3 je uvedena v SEQ ID NO: 117. TbH-9 sonda identifikovala tri klony v H37Rv knihovně: TbH-9-FL (SEQ ID NO: 106), který může být homologní k TbH-9 (R37Ra), TbH-9-l (SEQ ID NO: 108) a TbH-9-4 (SEQ ID NO: 110), kde všechny tyto klony jsou těsně příbuzné sekvence k TbH-9. Odvozené aminokyselinové sekvence pro tyto klony jsou uvedeny v SEQ ID NO: 107, 109 a 111.
Výsledky testů na T-buňkách provedených sTb38-l, ESAT-6 a jinými representativními rekombinantními antigeny jsou uvedeny v tabulkách 4A, B a 5, v příslušném pořadí, dále:
Tabulka 4A - Výsledky proliferace PBMC v odpovědi na representativní solubilní antigeny
Antigen Dárce
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tb38-1 +4+ + - - — ++ - + - ++ +++
ESAT-6 +++ + + - + + + ++ +++
TbH-9 ++ ++ - ± + ++ ++ ++
Tabulka 4B - Výsledky produkce interferonu-r PBMC v odpovědi na representativní solubilní antigeny
Antigen Dárce
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
TB38-1 +++ + - + + +++ - ++ - +++ +++
ESAT-6 +++ + + + + + - + + +++ +++
TbH-9 ++ ++ - +++ + ± +++ +++ ++ +++ ++
Tabulka 5 - Souhrn odpovědi T-buněk na representativní antigeny
Proliferace Interferon-τ celkem
Antigen pac.4 pac.5 pac.6 pac.4 pac. 5 pac.6
TbH9 ++ ++ ++ +++ ++ ++ 13
TbH7 - + - ++ + - 4
TbH5 - + + 4-+ ++ ++ 8
TbL23 - 4- + ++ ++ ± 7,5
TbH4 - +4- + ++ -H- ± 7
kontrola - - - - - - 0
Tyto výsledky naznačují, že oba antigeny M. tuberculosis a ESAT-6 podle předkládaného vynálezu mohou indukovat proliferaci a/nebo produkci interferonu-τ v T-buňkách získaných od jedinců imunních vůči M. tuberculosis. Podle znalostí vynálezců nebylo o ESAT-6 dříve známo, že by stimuloval imunitní odpověď u lidí.
Sada šesti překrývajících se peptidů pokrývajících aminokyselinovou sekvenci antigenu Tb38—1 byla konstruována za použití metody popsané v příkladu 4. Sekvence těchto peptidů, zde označených jako pepl-6, jsou uvedeny v SEQ ID NO: 93-98, v příslušném pořadí. Výsledky testů na T-buňkách za použití těchto peptidů jsou uvedeny v tabulkách 6 a 7. Tyto výsledky potvrzují existenci a napomáhají lokalizaci epitopů pro T-buňky v Tb38-1, které jsou schopné indukovat proliferaci a produkci interferonu-τ v T-buňkách získaných od jedinců imunních vůči M. tuberculosis.
.07 _
Tabulka 6 - Výsledky proliferace PBMC v odpovědi na Tb38-1 peptidy
Peptid Paciént
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
pepl - - - - ± - - - + - - 4·
pep2 + - - - + - - + ± - - +
pep3 - - - - - - - - - +
pep4 4-4- - - - - - + + + - - +
pepb 4-4- ± - - - - + + - - -
pep6 4-4- - - - - + + + - -
kontrola
Tabulka 7 - Výsledky produkce interferonu-τ PBMC v odpovědi na Tb38-1 peptidy
Peptid Pacient
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
ΡθΡΙ + - - ± - - - - + - - 4-
pep2 - - - + - - - ± + - - +
pep3 - - - - - - - + - - - +
pep4 ++ - - - - + - + + - - +
pep5 +4- - - - + - + - - - +
pepó + +4- - - - + - ± 4- - - 4-
kontrola
Příklad 4 - Přečištění a charakterizace polypeptidu z tuberkulinového přečištěného proteinového derivátu
Polypeptid M. tuberculosis byl izolován z tuberkulinového přečištěného proteinového derivátu (PPD) následujícím způsobem.
PPD byl připraven podle publikovaného postupu s některými modifikacemi (Seibert, F. et al, io Tuberculin purifíed protein derivative. Preparation and analyses of large quantity for standart.
The American Review of Tuberculosis 44: 9-25, 1941).
M. tuberculosis kmen Rv byl kultivován po dobu 6 týdnů v syntetickém médiu ve válcových lahvích při 37 °C. Nádoby obsahující bakteriální kulturu byly potom zahřátý na 100 °C ve vodní páře po dobu 3 hodin. Kultury byly potom sterilně filtrovány za použití 0,22 μ filtru a kapalná fáze byla koncentrována 20-krát za použití membrány s rozlišovací schopností 3 kDa. Proteiny byly jedenkrát sráženy 50% roztokem síranu amonného a 8-krát 25% roztokem síranu amonného. Vzniklé proteiny (PPD) byly frakcionovány kapalinovou chromatografií na reversní fázi (RP-HPLC) za použití C18 kolony (7,8x300 mm; Waters, Milford, MA) v Biocad HPLC systému (Perseptive Biosystems, Framingham, MA). Frakce byly eluovány z kolony lineárním gradientem od 0- 100% pufru (0,1% TFA v acetonitrilu). Průtok byl 10 ml/minutu a eluent byl monitorován při 214 nm a při 280 nm.
Bylo získáno šest frakcí, byly sušeny, suspendovány v PBS a byly individuálně testovány na morčatech infikovaných M. tuberculosis na indukci reakce oddálené přecitlivělosti (DTH). Bylo io zjištěno, že jedna frakce indukuje silnou DTH reakci a ta byla dále frakcionována RP-HPLC na microbore Vydac Cl8 koloně (katalogové č. 218TP5115) na Perkin Elmer/Applied Biosystems
Division Model 172 HPLC. Frakce byly eluovány lineárním gradientem 5 až 100% pufru (0,05% TFA v acetonitrilu) s průtokem 80 μί/minutu, Eluent byl monitorován při 215 nm. Bylo získáno 8 frakcí a byly testovány na indukci DTH u morčat infikovaných M. tuberculosis. Bylo zjištěno, že jedna frakce indukuje silnou DTH s asi 16 mm indurací. Další frakce neindukovaly detekovatelnou DTH. Pozitivní frakce byla podrobena SDS-PAGE gelové elektroforese a bylo zjištěno, že obsahuje jediný proteinový proužek o molekulové hmotnosti přibližně 12 kDa.
Tento polypeptid, zde označený jako DPPD, byl sekvencován z amino konce za použití perkin
Elmer/Applied Biosystems Division Procise 492 proteinového sekvenátoru jak bylo popsáno výše a bylo zjištěno, že má N-koncovou sekvenci uvedenou v SEQ ID NO: 129. Srovnání této sekvence se známými sekvencemi v genové bance jak je popsáno výše neukázalo žádné homologie. Byly izolovány čtyři bromkyanové fragmenty DPPD a bylo zjištěno, že mají sekvence uvedené v SEQ ID NO: 130-133.
Schopnost antigenu DPPD stimulovat lidské PBMC k proliferaci a k produkci IFN-τ byla testována způsobem popsaným v příkladu 1. Jak ukazuje tabulka 8, bylo zjištěno, že DPPD stimuluje proliferaci a vyvolává produkci velkých množství IFN-τ; větších než vyvolává komerční PPD.
Tabulka 8 - Výsledky testu proliferace a produkce IFN-τ v odpovědi na DPPD
Dárce PBMC Stimulátor Proliferace (CPM) IFM-, (OD450)
A medium 1,089 0,17
PPD (komerční) 8,394 1,29
DPPD 13,451 2,21
B medium 450 0,09
PPD (komerční) 3,929 1,26
DPPD 6,184 1,49
C médium 541 0,11
PPD (komerční) 8,907 0,76
DPPD 23,024 >2,70
TO
Příklad 5 - Syntesa syntetických polypeptidů
Polypeptidy mohou být syntetizovány na Míllipore 9050 sytezátoru peptidů za použití FMOC chemikálii s HPTU (o-benzotriazol-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorfosfat) aktivací.
GlyCys-Gly sekvence může být navázána na amino-konec peptidu pro umožnění konjugace nebo značení peptidu. Odštěpení peptidů ze solidního nosiče může být provedeno za použití následující štěpící směsi: kyselina trifluoroctová:ethandithiol:thioanisol:voda:ťenol (40:1:2:2:3). Po štěpení po dobu 2 hodin mohou být peptidy vysráženy v chladném methyl—t—butyl—etheru. Peptidové pelety mohou potom být rozpuštěny ve vodě obsahující 0,1% kyselinu trifluoroctovou ío (TFA) a mohou být lyofilizovány před přečištěním CIS HPCL na reversní fázi. Gradient 0 až 60% acetonitrilu (obsahujícího 0,1% TFA) ve vodě (obsahující 0,1% TFA) může být použit pro eluci peptidů. Po lyofilizaci přečištěných frakcí mohou být peptidy charakterizovány za použití elektrosprayové hmotové spektrometrie a aminokyselinovou analýzou.
Z předešlého popisu je zřejmé, že ačkoliv byla pro ilustraci popsána specifická provedení vynálezu, mohou být provedeny jejich různé modifikace, bez narušení rozsahu a duchu předkládaného vynálezu.
Seznam sekvencí (1) Obecné informace (i) Přihlašovatel: Corixa Corporation (ii) Název vynálezu: Sloučeniny a způsoby pro imunoterapii a diagnostiku tuberkulosy (iii) Počet sekvencí: 137 (iv) Adresa pro korespondenci:
(A) Adresa: Seed and Berry LLP (B) Ulice: 6300 Columbia Center, 701 Fifth Avenue (C) Město: Seattle (D) Země: Washington (E) Stát: USA (F) ZIP: 98104-7092 (v) Počítačová čtecí forma:
(A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilní (C) Operační systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Petentln Release#1.0, verse#1.30 (vi) Data současné přihlášky:
(A) Číslo přihlášky: US neznámé so (B) Datum podání: 27.8.1996 (C) Klasifikace:
(viii) Zástupce/Agent-informace:
(A) Jméno: Maki, David J.
(B) Registrační číslo: 31392 g (C) Odkaz/číslo rejstříku: 210121.41 IPC (ix) Telekomunikační informace:
(A) Telefon: (206) 622-4900 i o (B) Telefax: (206) 682-6031 (2) Informace pro SEQ ID NO: 1:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 766 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 1:
CGAGGCACCG GTAGTTTGAA CCAAACGCAC AATCGACGGG CAAACGAACG GAAGAACACA 60
ACCATGAAGA TGGTGAAATC GATCGCCGCA GGTCTGACCG CCGCGGCTGC AATCGGCGCC 120
GCTGCGGCCG GTGTGACTTC GATCATGGCT GGCGGCCCGG TCGTATACCA GATGCAGCCG 180
GTCGTCTTCG GCGCGCCACT GCCGTTGGAC CCGGCATCCG CCCCTGACGT CCCGACCGCC 240
GCCCAGTTGA CCAGCCTGCT CAACAGCCTC GCCGATCCCA ACGTGTCGTT TGCGAACAAG 300
GGCAGTCTGG TCGAGGGCGG CATCGGGGGC ACCGAGGCGC GCATCGCCGA CCACAAGCTG 360
AAGAAGGCCG CCGAGCACGG GGATCTGCCG CTGTCGTTCA GCGTGACGAA CATCCAGCCG 420
GCGGCCGCCG GTTCGGCCAC CGCCGACGTT TCCGTCTCGG GTCCGAAGCT CTCGTCGCCG 480
GTCACGCAGA- ACGTCACGTT CGT6AATCAA GGCGGCTGGA TGCTGTCACG CGCATCGGCG 540
ATGGAGnGC TGCAGGCCGC AGGGNAACTG ATTGGCGGGC CGGNTTCAGC CCGCTGTTCA 600
GCTACGCCGC CCGCCTGGTG ACGCGTCCAT CTCGAACACT CGCGCGTGTA GCACGGTGCG 660
GTNTGCGCAG GGNCGCACGC ACCGCCCGGT GCAAGCCGTC CTCGAGATAG GTGGTGNCTC 720
GNCACCAGNG ANCACCCCCN NNTCGNCNNT TCTCGNTGNT GNATGA 756 _ 11 (2) Informace pro SEQ ID NO: 2;
(i) Charakteristika sekvence:
' (Λ) Délka: 752 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 2:
ATGCATCACC ATCACCATCA CGATGAAGTC ACGGTAGAGA CGACCTCCGT CTTCCGCGCA 60
GACTTCCTCA GCGAGCTGGA CGCTCCTGCG CAAGCGGGTA CGGAGAGCGC GGTCTCCGGG 120
GTGGAAGGGC TCCCGCCGGG CTCGGCGTTG CTGGTAGTCA AACGAGGCCC CAACGCCGGG 180
TCCCGGTTCC TACTCGACCA AGCCATCACG TCGGCTGGTC GGCATCCCGA CAGCGACATA 240
TTTCTCGACG ACGTGACCGT GAGCCGTCGC CATGCTGAAT TCCGGTTGGA AAACAACGAA 300
TTCAATGTCG TCGATCTCGG GAGTCTCAAC GGCACCTACG TCAACCGCGA GCCCGTGGAT 360
TCGGCGGTGC TGGCGAACGG CGACGAGGTC CAGATCGGCA AGCTCCGGTT GGTGTTCTTG 420
ACCGGACCCA AGCAAGGCGA GGATGACGGG AGTACCGGGG GCCCGTGAGC GCACCCGATA 480
GCCCCGCGCT GGCCGGGATG TCGATCGGGG CGGTCCTCCG ACCTGCTACG ACCGGATTTT 540
CCCTGATGTC CACCATCTCC AAGATTCGAT TCTTGGGAGG CTTGAGGGTC NGGGTGACCC 600
CCCCGCGGGC CTCATTCNGG GGTNTCGGCN GGTTTCACCC CNTACCNACT GCCNCCCGGN 660
TTGCNAATTC NTTCTTCNCT GCCCNNAAAG GGACCNTTAN CTTGCCGCTN GAAANGGTNA 720
TCCNGGGCCC NTCCTNGAAN CCCCNTCCCC CT
752 (2) Informace pro SEQ ID NO: 3:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 813 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ IDNO: 3:
CATATGCATC ACCATCACCA TCACACTTCT AACCGCCCAG CGCGTCGGGG GCGTCGAGCA 60
CCACGCGACA CCGGGCCCGA TCGATCTGCT AGCTTGAGTC TGGTCAGGCA TCGTCGTCAG 120
CAGCGCGATG CCCTATGTTT GTCGTCGACT CAGATATCGC GGCAATCCAA TCTCCCGCCT 180
GCGGCCGGCG GTGCTGCAAA CTACTCCCGG AGGAATTTCG ACGTGCGCAT CAAGATCTTC 240
ATGCTGGTCA CGGCTGTCGT TTTGCTCTGT TGTTCGGGTG TGGCCACGGC CGCGCCCAAG 300
ACCTACTGCG AGGAGTTGAA AGGCACCGAT ACCGGCCAGG CGTGCCAGAT TCAAATGTCC 360
GACCCGGCCT ACAACATCAA CATCAGCCTG CCCAGTTACT ACCCCGACCA GAAGTCGCTG 420
GAAAATTACA TCGCCCAGAC GCGCGACAAG TTCCTCAGCG CGGCCACATC GTCCACTCCA 480
CGCGAAGCCC CCTACGAATT GAATATCACC TCGGCCACAT ACCAGTCCGC GATACCGCCG 540
CGTGGTACGC AGGCCGTGGT GCTCAMGGTC TACCACAACG CCGGCGGCAC GCACCCAACG 600
ACCACGTACA AGGCCTTCGA TTGGGACCAG GCCTATCGCA AGCCAATCAC CTATGACACG 660
CTGTGGCAGG CTGACACCGA TCCGCTGCCA GTCGTCTTCC CCATTGTTGC AAGGTGAACT 720
GAGCAACGCA GACCGGGACA ACMGGTATCG ATAGCCGCCN AATGCCGGCT TGGAACCCNG 780
TGAAATTATC ACMCTTCGC AGTCACNAAA NAA 813 . π.
(2) Informace pro SEQ ID NO: 4:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 447 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 4:
CGGTATGMC ACGGCCGCGT CCGATAACTT CCAGCTGTCC CAGGGTGGGC AGGGATTCGC 60
CATTCCGATC GGGCAGGCGA TGGCGATCGC GGGCCAGATC CGATCGGGTG GGGGGTCACC 120
CACCGTTCAT ATCGGGCCTA CCGCCTTCCT CGGCTTGGGT GTTGTCGACA ACAACGGCAA 180
CGGCGCACGA GTCCAACGCG TGGTCGGGAG CGCTCCGGCG GCAAGTCTCG GCATCTCCAC 240
CGGCGACGTG ATCACCGCGG TCGACGGCGC TCCGATCAAC TCGGCCACCG CGATGGCGGA 300
CGCGCTTAAC GGGCATCATC CCGGTGACGT CATCTCGGTG AACTGGCAAA CCAAGTCGGG 360
CGGCACGCGT ACAGGGAACG TGACATTGGC CGAGGGACCC CCGGCCTGAT TTCGTCGYGG 420
ATACCACCCG CCGGCCGGCC AATTGGA 447 (2) Informace pro SEQ ID NO: 5:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 604 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence; SEQ ID NO: 5:
GTCCCACT6C GGTCGCCGAG TATGTCGCCC AGCAAATGTC TGGCAGCCGC CCAACGGAAT 60
CCGGTGATCC GACGTCGCAG 6TTGTCGAAC CCGCCGCCGC GGAAGTATCG GTCCATGCCT 120
AGCCCGGCGA CGGCGAGCGC CGGAATGGCG CGAGTGAGGA GGCGGGCAAT TTGGCGGGGC 180
CCGGCGACGG NGAGCGCCGG AATGGCGCGA GTGAGGAGGT GGNCAGTCAT GCCCAGNGTG 240
ATCCAATCAA CCTGNATTCG GNCTGNGGGN CCATTTGACA ATCGAGGTAG TGAGCGCAAA 300
TGAATGATGG AAAACGGGNG GNGAC5TCCG NTGTTCTGGT GGTGNTAGGT GNCTGNCTGG 360
NGTNGNGGNT ATCAGGATGT TCTTCGNCGA AANCTGATGN CGAGGMCAG GGTGTNCCCG 420
NNANNCCNAN GGNGTCCNAN CCCNNNNTCC TCGNCGANAT CANANAGNCG NUGATGNGA 480
NAAAAGGGTG GANCAGNNNN AANTNGNGGN CCNAANAANC NNNANNGNNG NNAGNTNGNT 540
NNNTNTTNNC ANNNNNNNTG NNGNNGNNCN NNNCAANCNN NTNNNNGNAA NNGGNTIKTT 600
NAAT 604 (2) Informace pro SEQ ID NO: 6:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 633 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý ío (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 6:
KGCANGTCG AACCACCTCA CTAAAGGGAA CAAAAGCTNG AGCTCCACCG CGGTGGCGGC 60
CGCTCTAGAA CTAGTGKATH YYYCKGGCTG CAGSAATYCG GYACGAGCAT TAGGACAGTC 120
TAACGGTCCT GTTACGGTGA TCGAATGACC GACGACATCC TGCTGATCGA CACCGACGAA 180
CGGGTGCGAA CCCTCACCCT CAACCGGCCG CAGTCCCGYA ACGCGCTCTC GGCGGCGCTA 240
CGGGATCGGT TTTTCGCGGY GTTGGYCGAC GCCGAGGYCG ACGACGACAT CGACGTCGTC 300
ATCCTCACCG GYGCCGATCC GGTGTTCTGC GCCGGACTGG ACCTCAAGGT AGCTGGCCGG 360
GCAGACCGCG CTGCCGGACA TCTCACCGCG GTGGGCGGCC ATGACCAAGC CGGTGATCGG 420
CGCGATCAAC GGCGCCGCGG TCACCGGCGG GCTCGAACTG GCGCTGTACT GCGACATCCT 480
GATCGCCTCC GAGCACGCCC GCTTCGNCGA CACCCACGCC CGGGTGGGGC TGCTGCCCAC 540
CTGGGGACTC AGTGTGTGCT TGCCGCAAAA GGTCGGCATC GGNCTGGGCC GGTGGATGAG 600
CCTGACCGGC GACTACCTGT CCGTGACCGA CGC 633
(2) Informace pro SEQ ID NO: 7:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: I 362 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární i« (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 7:
CGACGACGAC GGCGCCGGAG AGCGGGCGCG AACGGCGATC GACGCGGCCC TGGCCAGAGT 60
CGGCACCACC CAGGAGGGAG TCGAATCATG AAATTTGTCA ACCATATTGA GCCCGTCGCG 120
CCCCGCCGAG CCGGCGGCGC GGTCGCCGAG GTCTATGCCG AGGGCCGCCG CGAGTTCGGC 180
CGGCTGCCCG AGCCGCTCGC CATGCTGTCC CCGGACGAGG GACTGCTCAC CGCCGGCTGG 240
GCGACGTTGC GCGAGACACT GCTGGTGGGC CAGGTGCCGC GTGGCCGCAA GGAAGCCGTC 300
GCCGCCGCCG TCGCGGCCAG CCTGCGCTGC CCCTGGTGCG TCGACGCACA CACCACCATG 360
CTGTACGCGG CAGGCCAAAC CGACACCGCC GCGGCGATCT TGGCCGGCAC AGCACCTGCC 420
GCCGGTGACC CGAACGCGCC GTATGTGGCG TGGGCGGCAG GAACCGGGAC ACCGGCGGGA 480
CCGCCGGCAC CGTTCGGCCC GGATGTCGCC GCCGAATACC TGGGCACCGC GGTGCAATTC 540
CACTTCATCG CACGCCTGGT CCTGGTGCTG CTGGACGAAA CCTTCCTGCC GGGGGGCCCG 600
CGCGCCCAAC AGCTCATGCG CCGCGCCGGT GGACTGGTGT TCGCCCGCAA GGTGCGCGCG 660
GAGCATCGGC CGGGCCGCTC CACCCGCCGG CTCGAGCCGC GAACGCTGCC CGACGATCTG 720
GCATGGGCAA CACCGTCCGA GCCCATAGCA ACCGCGTTCG CCGCGCTCAG CCACCACCTG 7Θ0
GACACCGCGC CGCACCTGCC GCCACCGACT CGTCAGGTGG TCASGCGGGT CGTGGGGTCG 840
TGGCACGGCG AGCCAATGCC GATGAGCAGT CGCTGGACGA ACGAGCACAC CGCCGAGCTC 900
CCCGCCGACC TGCACGCGCC CACCCGTCH GCCCTGCTGA CCGGCCTGGC CCCGCATCAG 960 GTGACCGACG ACGACGTCGC CGCGGCCCGA TCCCTGCTCG ACACCGATGC GGCGCTGGn 1020 GGCGCCCTGG CCTGGGCCGC CTTCACCGCC GCGCGGCGCA TCGGCACCTG GATCGGCGCC 1080 GCCGCCGAGG GCCAGGTGTC GCGGCAAAAC CCGACTGGGT GAGT6TGCGC GCCCTGTCGG 1140 TAGGGTCTCA TCGCTGGCCC GAGGGAKTC GCQGCGGCGA ACGGAGGTGG CGACACAGGT 1200 GGMGCTGCG CCCACTGGCT TGCGCCCCAA CGCCGTCGTG GGCGTTCGGT TCGCCGCACT 1260 GGCCGATCAG GTCGGCGCCG GCCCTTGGCC GAAGGTCCAG CTCAACGTGC CGTCACCGAA 1320 GGACCGGACG GTCACCGGGG GTCACCCTGC GCGCCCAAGG AA 1362 (2) Informace pro SEQ ID NO: 8:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 458 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 8:
GCGACGACCC CGATATGCCG GGCACCGTAG CGAAAGCCGT CGCCGAGGCA CTCGGGCGCG 60
GTATCGCTCC CGTTGAGGAC ATTCAGGACT GCGTGGAGGC CCGGCTGGGG GAAGCCGGTC 120
TGGATGACGT GGCCCGTGTT TACATCATCT ACCGGCAGCG GCGCGCCGAG CTGCGGACGG 180
CTAAGGCCTT GCTCGGCGTG CGGGACGAGT TAAAGCTGAG CTTGGCC-GCC GTGACGGTAC 240
TGCGCGAGCG CTATCTGCTG CACGACGAGC AGGGCCGGCC GGCCGAGTCG ACCGGCGAGC 300
TGATGGACCG ATCGGCGCGC TGTGTCGCGG CGGCCGAGGA CCAGTATGAG CCGGGCTCGT 360
CGAGGCGGTG GGCCGAGCGG TTCGCCACGC TATTACGCAA CCTGGAATTC CTGCCGAATT 420
CGCCCACGTT GATGAACTCT GGCACCGACC TGGGACTGCT CGCCGGCTGT TTTGTTCTGC 480
CGATTGAGGA TTCGCTGCAA TCGATCTITG CGACGCTGGG ACAGGCCGCC GAGCTGCAGC 540
GGGCTGGAGG CGGCACCGGA TATGCGTTCA GCCACCTGCG ACCCGCCGGG GATCGGGTGG 600
CCTCCACGGG CGGCACGGCC AGCGGACCGG TGTCGTfTCT ACGGCTGTAT GACAGTGCCG 660
CGGGTGTGGT CTCCATGGGC GGTCGCCGGC GTGGCGCCTG TATGGCTGTG CTTGATGTGT 720
CGCACCCGGA TATCTGTGAT TTCGTCACCG CCAAGGCCGA ATCCCCCAGC GAGCTCCCGC 780
ATíTCAACCT ATCGGTTGGT GTGACCGACG CGTTCCTGCG GGCCGTCGAA CGCAACGGCC 840
TACACCGGCT GGTCAATCCG CGAACCGGCA AGATCGTCGC GCGGATGCCC GCCGCCGAGC 900
TGTTCGACGC CATCTGCAAA GCCGCGCACG CCGGTGGCGA TCCCGGGCTG GTGTTTCTCG 960
ACACGATCAA TAGGGCAAAC CCGGTGCCGG GGAGAGGCCG CATCGAGGCG ACCAACCCGT 1020
GCGGGGAGGT CCCACTGCTG CCTTACGAGT CATGTAATCT CGGCTCGATC AACCTCGCCC 1080
GGATGCTCGC CGACGGTCGC GTCGACTGGG ACCGGCTCGA GGAGGTCGCC GGTGTGGCGG 1140
TGCGGTTCCT TGATGACGTC ATCGATGTCA GCCGCTACCC CTTCCCCGAA CTGGGTGAGG 1200
CGGCCCGCGC CACCCGCAAG ATCGGGCTGG GAGTCATGGG TTTGGCGGAA CTGCTTGCCG 1260
CACTGGGTAT TCCGTACGAC AGTGAAGAAG CCGTGCGGTT AGCCACCCGG CTCATGCGTC 1320
GCATACAGCA GGCGGCGCAC ACGGCATCGC GGAGGCTGGC CGAAGAGCGG GGCGCATTCC 1380
CGGCGTTCAC CGATAGCCGG TTCGCGCGGT CGGGCCCGAG GCGCAACGCA CAGGTCACCT 1440
CCGTCGCTCC GACGGGCA
1458 (2) Informace pro SEQ ID NO: 9:
(i) Charakteristika sekvence:
s (A) Délka: 862 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 9:
ACGGTGTAAT CGTGCTGGAT CTGGAACCGC GTGGCCCGCT ACCTACCGAG ATCTACTGGC 60
GGCGCAGGGG GCTGGCCCTG GGCATCGCGG TCGTCGTAGT CGGGATC6CG GTGGCCATCG 120
TCATCGCCTT CGTCGACAGC AGCGCCGGTG CCAAACCGGT CAGCGCCGAC AAGCCGGCCT 180
CCGCCCAGAG CCATCCGGGC TCGCCGGCAC CCCAAGCACC CCAGCCGGCC GGGCÁAACCu 240
AAGGTAACGC CGCCGCGGCC CCGCCGCAGG GCCAAAACCC CGAGACACCC ACGCCCACCG 300
CCGCGGTGCA GCCGCCGCCG GTGCTCAAGG AAGGGGACGA TTGCCCCGAT TCGACGCTGG 360
CCGTCAAAGG TTTGACCAAC GCGCCGCAGT ACTACGTCGG CGACCAGCCG AAGTTCACCA 420
TGGTGGTCAC CAACATCGGC CTGGTGTCCT GTAAACGCGA CGTTGGGGCC GCGGTGTTGG 480
CCGCCTACGT TTACTCGCTG GACAACAAGC GGHGTGGTC CAACCTGGAC TGCGCGCCCT 540
CGAATGAGAC GCTGGTCAAG ACGTiTTCCC CCGGTGAGCA GGTAACGACC GCGGTGACCT 600
GGACCGGGAT GGGATCGGCG CCGCGCTGCC CATTGCCGCG GCCGGCGATC GGGCCGGGCA 660
CCTACAATCT C6TGGTACAA CTGGGCAATC TGCGCTCGCT GCCGGTTCCG TTCATCCTGA 720
ATCAGCCGCC GCCGCCGCCG GGGCCGGTAC CCGCTCCGGG TCCAGCGCAG GCGCCTCCC-C 780
CGGAGTCTCC CGCGCAAGGC GGATAATTAT TGATCGCTGA TGGTCGATTC CGCCAGCTCT 840
GACAACCCCT CGCCTCGTGC CG 862 τη (2) Informace pro SEQ ID NO: 10:
(i) Charakteristika sekvence:
(Λ) Délka: 622 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 10:
TTGATCAGCA CCGGCAAGGC GTCACATGCC TCCCTGGGTG TGCAGGTGAC CAATGACAAA 60
GACACCCCGG GCGCCAA6AT CGTCGAAGTA GTGGCCGGTG GTGCTGCCGC GAACGCTGGA 120
GTGCCGAAGG GCGTCGTTGT CACCAAfiGTC GACGACCGCC CGATCAACAG CGCGGACGCG 180
TTGGTTGCCG CCGTGCGGTC CAAAGCGCCG GGCGCCACGG TGGCGCTAAC CTTTCAGGAT 240
CCCTCGGGCG GTAGCCGCAC AGTGCAAGTC ACCCTCGGCA AGGCGGAGCA GTGATGAAGG 300
TCGCCGCGCA GTGTTCAAAG CTCGGATATA CGGTGGCACC CATGGAACAG CGTGCGGAGT 360
TGGTGGTTGG CCGGGCACTT GTCGTCGTCG TTGACGATCG CACGGCGCAC GGCGATGAAG 420
ACCACAGCGG GCCGCTTGTC ACCGAGCTGC TCACCGAGGC CGGGTTTGTT GTCGACGGCG 480
TGGTGGCGGT GTCGGCCGAC GAGGTCGAGA TCCGAAATGC GCTGAACACA GCGGTGATCG 540
GCG6GGTGGA CCTGGTGGTG TCGGTCGGCG GGACCGGNGT GACGNCTCGC GATGTCACCC 600
CGGAAGCCAG CCGNGACATT CT
622 (2) Informace pro SEQ ID NO: 11:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 200 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 11:
GGCGCAGCGG TAAGCCTGTT GGCCGCCGGC ACACTGGTGT TGACAGCATG CGGCGGTGGC 60 ACCAACAGCT CGTCGTCAGG CGCAGGCGGA ACGTCTGGGT CGGTGCACTG CGGCGGCAAG 120
AAGGAGCTCC ACTCCAGCGG CTCGACCGCA CAAGAAAATG CCATGGAGCA GTTCGTCTAT 180
GCCTACGTGC GATCGTGCCC GGGCTACACG TTGGACTACA ACGCCAACGG GTCCGGTGCC 240
GGGGTGACCC AGTTTCTCAA CAACGAAACC GATTTCGCCG GCTCGGATGT CCCGTTGAAT 300
CCGTCGACCG GTCAACCTGA CCGGTCGGCG GAGCGGTGCG GTTCCCCGGC ATGGGACCTG 360
CCGACGGTGT TCGGCCCGAT CGCGATCACC TACAATATCA AGGGCGTGAG CACGCTGAAT 420
CTTGACGGAC CCACTACCGC CAAGATTTTC AACGGCACCA TCACCGTGTG GAATGATCCA 480
CAGATCCAAG CCCTCAACTC CGGCACCGAC CTGCCGCCAA CACCGATTAG CGTTATCTTC 540
CGCAGCGACA AGTCCGGTAC GTCGGACAAC TTCCAGAAAT ACCTCGACGG TGTATCCAAC 600
GGGGCGTGGG GCAAAGGCGC CAGCGAAACG TTCAGCGGGG GCGTCGGCGT CGGCGCCAGC 660
GGGAACAACG GAACGTCGGC CCTACTGCAG ACGACCGACG GGTCGATCAC CTACAACGAG 720
TGGTCGTTTG CGGTGGGTAA GCAGTTGAAC ATGGCCCAGA TCATCACGTC GGCGGGTCCG 780
GATCCAGTGG CGATCACCAC CGAGTCGGTC GGTAAGACAA TCGCCGGGGC CAAGATCATG 840
GGACAAGGCA ACGACCTGGT ATTGGACACG TCGTCGTTCT ACAGACCCAC CCAGCCTGGC 900
TCTTACCCGA TCGTGCTGGC GACCTATGAG ATCGTCTGCT CGAAATACCC GGATGCGACG 960
ACCGGTACTG CGGTAAGGGC GTTTATGCAA GCCGCGATTG GTCCAGGCCA AGAAGGCCTG 1020
GACCAATACG GCTCCATTCC GTTGCCCAAA TCGTTCCAAG CAAAATTGGC GGCCGCGGTG 1080
AATGCTATTT CTTGACCTAG TGAAGGGAAT TCGACGGTGA GCGATGCCGT TCCGCAGGTA 1140
GGGTCGCAAT TTGGGCCGTA TCAGCTATTG CGGCTGCTGG GCCGAGGCGG GATGGGCGAG 1200 _ A 1
Cl 300953 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 12:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 155 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 12:
GCAAGCAGCT GCAGGTCGTG CTGTTCGACG AACTGGGCAT GCCGAAGACC AAACGCACCA 60
AGACCGGCTA CACCACGGAT GCCGACGCGC TGCAGTCGTT GTTCGACAAG ACCGGGCATC 120
CGTTTCTGCA ACATCTGCTC GCCCACCGCG ACGTCACCCG GCTCAAGGTC ACCGTCGACG 180
GGTTGCTCCA AGCGGTGGCC GCCGACGGCC GCATCCACAC CACGTTCAAC CAGACGATCG 240
CCGCGACCGG CCGGCTCTCC TCGACCGAAC CCAACCTGCA GAACATCCCG ATCCGCACCG 300
ACGCGGGCCG GCGGATCCGG GACGCGTTCG TGGTCGGGGA CGGTTACGCC GAGTTGATGA 360
CGGCCGACTA CAGCCAGATC GAGATGCGGA TCATGGGGCA CCTGTCCGGG GACGAGGGCC 420
TCATCGAGGC GTTCAACACC GGGGAGGACC TGTATTCGTT CGTCGCGTCC CGGGTGTTCG 480
GTGTGCCCAT CGACGAGGTC ACCGGCGAGT TGCGGCGCCG GGTCAAGGCG ATGTCCTACG 540
GGCTGGTTTA CGGGTTGAGC GCCTACGGCC TGTCGCAGCA GTTGAAAATC TCCACCGAGQ 600
AAGCCAACGA GCAGATGGAC GCGTATTTCG CCCGATTCGG CGGGGTGCGC GACTACCTGC 660
GCGCCGTAGT CGAGCGGGCC CGCAAGGACG GCTACACCTC GACGGTGCTG GGCCGTCGCC 720
GCTACCTGCC CGAGCTGGAC AGCAGCAACC GTCAAGTGCG GGAGGCCGCC GAGCGGGCGG 780
CGCTGAACGC GCCGATCCAG GGCAGCGCGG CCGACATCAT CAAGGTGGCC ATGATCCAGG 840
TCGACAAGGC GCTCAACGAG GCACAGCTGG CGTCGCGCAT GCTGCTGCAG GTCCACGACG 900
AGCTGCTGTT CGAAATCGCC CCCGGTGAAC GCGAGCGGGT CGAGGCCCTG GTGCGCGACA 960
AGATGGGCGG CGCTTACCCG CTCGACGTCC CGCTGGAGGT GTCGGTGGGC TACGGCCGCA 1020
GCTGGGACGC GGCGGCGCAC TGAGTGCCGA GCGTGCATCT GGGGCGGGAA TTCGGCGATT 1080
TTTCCGCCCT GAGTTCACGC TCGGCGCAAT CGGGACCGAG TTTGTCCAGC GTGTACCCGT 1140
CGAGTAGCCT CGTCA 1155 (2) Informace pro SEQ ID NO: 13:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 771 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 13:
GAGCGCCGTC TGGTGTTTGA ACGGTTTTAC CGGTCGGCAT CGGCACGGGC GTTGCCGGGT 60
TCGGGCCTCG GGTTGGCGAT CGTCAAACAG GTGGTGCTCA ACCACGGCGG ATTGCTGCGC 120
ATCGAAGACA CCGACCCAGG CGGCCAGCCC CCTGGAACGT CGATTTACGT GCTGCTCCCC 180
GGCCGTCGGA TGCCGATTCC GCAGCTTCCC GGTGCGACGG CTGGCGCTCG GAGCACGGAC 240
ATCGAGAACT CTCGGGGTTC GGCGAACGTT ATCTCAGTGG AATCTCAGTC CACGCGCGCA 300
ACCTAGTTGT GCAGTTACTG TTGAAAGCCA CACCCATGCC AGTCCACGCA TGGCCAAGTT 360
GGCCCGAGTA GTGGGCCTAG TACAGGAAGA 6CAACCTAGC GACATGACGA ATCACCCACG 420
GTATTCGCCA CCGCCGCAGC AGCCGGGAAC CCCAGGTTAT GCTCAGGGGC AGCAGCAAAC 480
GTACAGCCAG CAGTTCGACT GGCGTTACCC ACCGTCCCCG CCCCCGCAGC CAACCCAGTA 540
CCGTCAACCC TACGAGGCGT TGGGTGGTAC CCGGCCGGGT CTGATACCTG GCGTGATTCC 600
GACCATGACG CCCCCTCCTG GGATGGTTCG CCAACGCCCT CGTGCAGGCA TGTTGGCCAT 660
CGGCGCGGTG ACGATAGCGG TGGTGTCCGC CGGCATCGGC GGCGCGGCCG CATCCCTGGT 720
CGGGTTCAAC CGGGCACCCG CCGGCCCCAG CGGCGGCCCA GTGGCTGCCA GCGCGGCGCC 780
AAGCATCCCC GCAGCAAACA TGCCGCCGGG GTCGGTCGAA CAGGTGGCGG CCAAGGTGGT 840
ΛΊ
GCCCAGTGTC GTCATGTTGG AAACCGATCT GGGCCGCCAG TCGGAGGAGG GCTCCGGCAT 900 CATTCTGTCT GCCGAGGGGC TGATCTTGAC CAACAACCAC GTGATCGCGG CGGCCGCCAA 960 GCCTCCCCTG GGCAGTCCGC CGCCGAAMC GACGGTAACC TTCTCTGACG GGCGGACCGC 1020 ACCCTTCACG GTGGTGGGGG CTGACCCCAC CAGTGATATC GCCGTCGTCC GTGTTCAGGG 1080 CGTCTCCGGG CTCACCCCGA TCTCCCTGGG TTCCTCCTCG GACCTGAGGG TCGGTCAGCC 1140 GGTGCTGGCG ATCGGGTCGC CGCTCGGTTT GGAGGGCACC GTGACCACGG GGATCGTCAG 1200 CGCTCTCAAC CGTCCAGTGT CGACGACCGG CGAGGCCGGC AACCAGAACA CCGTGCTGGA 1260 CGCCATTCAG ACCGACGCCG CGATCAACCC CGGTAACTCC GGGGGCGCGC TGGTGAACAT 1320 GAACGCTCAA CTCGTCGGAG TCAACTCGGC CATTGCCACG CTGGGCGCGG ACTCAGCCGA 1380 TGCGCAGAGC GGCTCGATCG GTCTCGGTTT TGCGATTCCA GTCGACCAGG CCAAGCGCAT 1440 CGCCGACGAG TTGATCAGCA CCGGCAAGGC GTCACATGCC TCCCTGGGTG TGCAGGTGAC 1500
CAATGACAAA GACACCCCGG GCGCCAAGAT CGTCGAAGTA GTGGCCGGTG GTGCTGCCGC 1560
GAACGCTGGA GTGCCGAAGG GCGTCGTTGT CACCAAGGTC GACGACCGCC CGATCAACAG 1620 CGCGGACGCG TTGGTTGCCG CCGTGCGGTC CAAAGCGCCG GGCGCCACGG TGGCGCTAAC 1680 CTTTCAGGAT CCCTCGGGCG GTAGCCGCAC AGTGCAAGTC ACCCTCGGCA AGGCGGAGCA 1740 GTGATGAAGG TCGCCGCGCA GTGTTCAAAG C 1771 (2) Informace pro SEQ ID NO: 14:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 058 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 14:
CTCCACCGCG GTGGCGGCCG CTCTAGAACT AGTGGATCCC CCGGGCTGCA GGAATTCGGC 60 acgaggatcc gacgtcgcag gttgtcgaac ccgccgccgc ggaagtatcg gtccatgcct 120
AGCCCGGCGA CGGCGAGCGC CGGAATGGCG CGAGTGAGGA GGCGGGCAAT TTGGCGGGGC 180
CCGGCGACGG CGAGCGCCGG AATGGCGCGA GTGAGGAGGC GGGCAGTCAT GCCCAGCGTC 240
ATCCAATCAA CCTGCATTCG GCCTGCGGGC CCATTÍGACA ATCGAGGTAG TGAGCGCAAA 300
TGAATGATGG AAAACGGGCG GTGACGTCCG CTGTTCTGGT GGTGCTAGGT GCCTGCCTGG 360
CGTTGTGGCT ATCAGGATGT TC7TCGCCGA AACCTGATGC CGAGGAACAG GGTGTTCCCG 420 TGAGCCCGAC GGCGTCCGAC CCCGCGCTCC TCGCCGAGAT CAGGCAGTCG CTTGATGCGA 480
CAAAAGGGTT GACCAGCGTG CACGTAGCGG TCCGAACAAC CGGGAAAGTC GACAGCTTGC 540
TGGGTATTAC CAGTGCCGAT GTCGACGTCC GGGCCAATCC GCTCGCGGCA AAGGGCGTAT 600
GCACCTACAA CGACGAGCAG GGTGTCCCGT TTCGGGTACA AGGCGACAAC ATCTCGGTGA 660
AACTGTTCGA CGACTGGAGC AATCTCGGCT CGATiTCTGA ACTGTCAACT TCACGCGTGC 720
TCGATCCTGC CGCTGGGGTG ACGCAGCTGC TGTCCGGTGT CACGAACCTC CAAGCGCAAG 780
GTACCGAAGT GATAGACGGA ATTTCGACCA CCAAAATCAC CGGGACCATC CCCGCGAGCT 840
CTGTCAAGAT GCTTGATCCT GGCGCCAAGA GTGCAAGGCC GGCGACCGTG TGGATTGCCC 900
AGGACGGCTC GCACCACCTC GTCCGAGCGA GCATCGACCT CGGATCCGGG TCGATTCAGC 960
TCACGCAGTC GAAATGGAAC GAACCCGTCA ACGTCGACTA GGCCGAAGK GCGTCGACGC 1020
GTTGNTCGAA ACGCCCTTGT GAACGGTGTC AACGGNAC 1058
(2) Informace pro SEQ ID NO: 15;
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 542 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 15:
GAATTCGGCA CGAGAGGTGA TCGACATCAT CGGGACCAGC CCCACATCCT GGGAACAGGC 60
GGCGGCGGAG GCGGTCCAGC GGGCGCGGGA TAGCGTCGAT GACATCCGCG TCGCTCGGGT 120
CATTGAGCAG GACATGGCCG TGGACAGCGC CGGCAAGATC ACCTACCGCA TCAAGCTCGA 180
AGTGTCGTTC AAGATGAGGC CGGCGCAACC GCGCTAGCAC GGGCCGGCGA GCAAGACGCA 240
AAATCGCACG GTTTGCGGn GATTCGTGCG ATTTTGTGTC TGCTCGCCGA GGCCTACCAG 300
GCGCGGCCCA GGTCCGCGTG CTGCCGTATC CAGGCGTGCA TCGCGATTCC GGCGGCCACG 360
CCGGAGTTAA TGCTTCGCGT CGACCCGAAC TGGGCGATCC GCCGGNGAGC TGATCGATGA 420
CCGTGGCCAG CCCGTCGATG CCCGAGTTGC CCGAGGAAAC GTGCTGCCAG GCCGGTAGGA 480
AGCGTCCGTA GGCGGCGGTG CTGACCGGCT CTGCCTCCGC CCTCAGTCCG GCCAGCGAGC 540
GG
542 (2) Informace pro SEQ ID NO: 16:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 913 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární to (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 16:
CGGTGCCGCC CGCGCCTCCG TTGCCCCCAT TGCCGCCGTC GCCGATCAGC TGCGCATCGC 60
CACCATCACC GCCTTTGCCG CCGGCACCGC CGGTGGCGCC GGGGCCGCCG ATGCCACCGC 120
TTGACCCTGG CCGCCGGCGC CGCCATTGCC ATACAfiCACC CCGCCGGGGG CACCGHACC 180
GCCGTCGCCA CCGTCGCCGC CGCTGCCGTT TCAfiGCCGGG GAGGCCGAAT GAACCGCCGC 240
CAAGCCCGCC GCCGGCACCG TTGCCGCCTT TTCCGCCCGC CCCGCCGGCG CCGCCAATTG 300
CCGAACAGCC AMGCACCGTT GCCGCCAGCC CCGCCGCCGT TAACGGCGCT GCCGGGCGCC 360
GCCGCCGGAC CCGCCAKAC CGCCGTTCCC GTTCGGTGCC CCGCCGTTAC CGGCGCCGCC 420
GTTTGCCGCC AATATTCGGC GGGCACCGCC AGACCCGCCG GGGCCACCAT TGCCGCCGGG 480
CACCGAAACA ACAGCCCAAC GGTGCCGCCG GCCCCGCCGT TTGCCGCCAT CACCGGCCAT 540
TCACCGCCAG CACCGCCGH AATGTTTATG AACCCGGTAC CGCCAGCGCG GCCCCTATTG 600
CCGGGCGCCG GAGNGCGTGC CCGCCGGCGC CGCCAACGCC CAAAAGCCCG GGGTTGCCAC 660
CGGCCCCGCC GGACCCACCG GTCCCGCCGA TCCCCCCGn GCCGCCGGTG CCGCCGCCAT 720
TGGTGCTGCT GAAGCCGTTA GCGCCGGTTC CGCSGGTTCC GGCGGTGGCG CdfTGGCCGC 780
CGGCCCCGCC GTTGCCGTAC AGCCACCCCC CGGTGGCGCC GTTGCCGCCA TTGCCGCCAT 840
TGCCGCCGTT GCCGCCATTG CCGCCGTTCC CGCCGCCACC GCCGGNTTCG CCGCCGGCGC 900 CGCCGGCGGC CGC 913 (2) Informace pro SEQ ID NO: 17:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 872 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární . π.
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 17:
GACTACGTTG GTGTAGAAAA ATCCTGCCGC CCGGACCCTT AAGGCTGGGA CAATTTCTGA 60
TAGCTACCCC GACACAGGAG GTTACGGGAT GAGCAATTCG CGCCGCCGCT CACTCAGGTG 120
GTCATGGTTG CTGAGCGTGC TGGCTGCCGT CGGGCTGGGC CTGGCCACGG CGCCGGCCCA 180
GGCGGCCCCG CCGGCCTTGT CGCAGGACCG GTTCGCCGAC TTCCCCGCGC TGCCCCTCGA 240
CCCGTCCGCG ATGGTCGCCC AAGTGGCGCC ACAGGTGGTC AACATCAACA CCAAACTGGG 300
CTACAACAAC GCCGTGGGCG CCGGGACCGG CATCGTCATC GATCCCAACG GTGTCGTGCT 360
GACCAACAAC CACGTGATCG CGGGCGCCAC CGACATCAAT GCGTTCAGCG TCGGCTCCGG 420
CCAAACCTAC GGCGTCGATG TGGTCGGGTA TGACCGCACC CAGGATGTCG CGGTGCTGCA 480
GCTGCGCGGT GCCGGTGGCC TGCCGTCGGC GGCGATCGGT GGCGGCGTCG CGGTTGGTGA 540
GCCCGTCGTC GCGATCGGCA ACAGCGGTGG GCAGGGCGGA ACGCCCCGTG CGGTGCCTGG 600
CAGGGTGGTC GCGCTCGGCC AAACCGTGCA GGCGTCGGAT TCGCTGACCG GTGCCGAAGA 660
GACATTGAAC GGGTTGATCC AGTTCGATGC CGCAATCCAG CCCGGTGATT CGGGCGGGCC 720
CGTCGTCAAC GGCCTAGGAC AGGTGGTCGG TATGAACACG GCCGCGTCCG ATAACTTCCA 780
GCTGTCCCAG GGTGGGCAGG GATTCGCCAT TCCGATCGGG CAGGCGATGG CGATCGCGGG 840
CCAAATCCGA TCGGGTGGGG GGTCACCCAC CGTTCATATC GGGCCTACCG CCTTCCTCGG 900
CTTGGGTGTT GTCGACAACA ACGGCAACGG CGCACGAGTC CAACGCGTGG TCGGAAGCGC 960
TCCGGCGGCA AGTCTCGGCA TCTCCACCGG CGACGTGATC ACCGCGGTCG ACGGCGCTCC 1020
GATCAACTCG GCCACCGCGA TGGCGGACGC GCTTAACGGG CATCATCCCG GTGACGTCAT 1080
CTCGGTGAAC TGGCAAACCA AGTCGGGCGG CACGCGTACA GGGAACGTGA CATTGGCCGA 1140
GGGACCCCCG GCCTGATTTG TCGCGGATAC CACCCGCCGG CCGGCCAATT GGATTGGCGC 1200
CAGCCGTGAT TGCCGCGTGA GCCCCCGAGT TCCGTCTCCC GTGCGCGTGG CATTGTGGAA 1260
GCAATGAACG AGGCAGAACA CAGCGHGAG CACCCTCCCG TGCAGGGCAG TTACGTCGAA 1320
GGCGGTGTGG TCGAGCATCC GGATGCCAAG GACTTCGGCA GCGCCGCCGC CCTGCCCGCC GATCCGACCT GGTTTAAGCA CGCCGTCTTC TACGAGGTGC TGGTCCGGGC GTTCTTCGAC GCCAGCGCGG ACGGTTCCGN CGATCTGCGT GGACTCATCG ATCGCCTCGA CTACCTGCAG TGGCTTGGCA TCGACTGCAT CTGTTGCCGC CGTTCCTACG ACTCACCGCT GCGCGACGGC
6GTTACGACA TTCGCGACTT CTACAAGGTG CTGCCCGAAT TCGGCACCGT CGACGATTTC GTCGCCCTGG TCGACACCGC TCACCGGCGA GGTATCCGCA TCATCACCGA CCTGGTGATG AATCACACCT CGGAGTCGCA CCCCTGGTTT CAGGAGTCCC GCCGCGACCC AGACGGACCG TACGGTGACT ATTACGTGTG GAGCGACACC AGCGAGCGCT ACACCGACGC CCGGATCATC TTCGTCGACA CCGAAGAGTC GAACTGGTCA TTCGATCCTG TCCGCCGACA GTTNCTACTG GCACCGATTC TT (2) Informace pro SEQ ID NO: 18:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 482 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 18:
CTTCGCCGAA ACCTGATGCC GAGGAACAGG GTGTTCCCGT GAGCCCGACG GCGTCCGACC CCGCGCTCCT CGCCGAGATC AGGCAGTCGC TTGATGCGAC AAAAGGGTTG ACCAGCGTGC ACGTAGCGGT CCGAACAACC GGGAAAGTCG ACAGCTTGCT GGGTATTACC AGTGCCGATG TCGACGTCCG GGCCAATCCG CTCGCGGCAA AGGGCGTATG CACCTACAAC GACGAGCAGG GTGTCCCGTT TCGGGTACAA GGCGACAACA TCTCGGTGAA ACTGTTCGAC GACTGGAGCA ATCTCGGCTC GATTTCTGAA CTGTCAACTT CACGCGTGCT CGATCCTCCC GCTGGGGTGA CGCAGCTGCT GTCCGGTGTC ACGAACCTCC AAGCGCAAGG TACCGAAGTG ATAGACGGAA TTTCGACCAC CAAAATCACC GGGACCATCC CCGCGAGCTC TGTCAAGATG CTTCATCCTG GCGCCAAGAG TGCAAGGCCG GCGACCGTGT GGATTGCCCA GGACGGCTCG CACCACCTCG TCCGAGCGAG CATCGACCTC GGATCCGGGT CGATTCAGCT CACGCAGTCG AAATGGAACG
1380
1440
1500
1560
1620
1680
1740
1800
1860
1872
120
180
240
300
360
420
480
540
600 _ 1O _
AACCCGTCAA CGTCGACTAG GCCGAAGTTG CGTCGACGCG TTGCTC6AAA CGCCCTTGTG 660
AACGGTGTCA ACGGCACCCG AAAACTGACC CCCTGACGGC ATCTGAAAAT TGACCCCCTA 720
GACCGGGCGG TTGGTGGTTA TTCTTCGGTG GTTCCGGCTG GTGGGACGCG GCCGAGGTCG 780
CGGTCTTTGA GCCGGTAGCT GTCGCCTTTG AGGGCGACGA CTTCAGCATG GTGGACGAGG 840
CGGTCGATCA TGGCGGCAGC AACGACGTCG TCGCCGCCGA AAACCTCGCC CCACCGGCCG 900
AAGGCCTTAT TGGACGTGAC GATCAAGCTG GCCCGCTCAT ACCGGGAGGA CACCAGCTGG 960
AAGAAGAGGT TGGCGGCCTC GGGCTCAAAC GGAATGTAAC CGACTTCGTC AACCACCAGG 1020
AGCGGATAGC GGCCAAACCG GGTGAGTTCG GCGTAGATGC GCCCGGCGTG GTGAGCCTCG 1080
GCGAACCGTG CTACCCATTC GGCGGCGGTG GCGAACAGCA CCCGATGACC GGCCTGACAC 1140
GCGCGTATCG CCAGGCCGAC CGCAAGATGA GTCTTCCCGG TGCCAGGCGG GGCCCAAAAA 1200
CACGACGTTA TCGCGGGCGG TGATGAAATC CAGGGTGCCC AGATGTGCGA TGGTGTCGCG 1260
TTTGAGGCCA CGAGCATGCT CAAAGTCGAA CTCTTCCAAC GACTTCCGAA CCGGGAAGCG 1320
GGCGGCGCGG ATGCGGCCCT CACCACCATG GGACTCCCGG GCTGACACTT CCCGCTGCAG 1380
GCAGGCGGCC AGGTATTCTT CGTGGCTCCA GTTCTCGGCG CGGGCGCGAT CGGCCAGCCG 1440
GGACACTGAC TCACGCAGGG TGGGAGCTTT CAATGCTCTT GT 1482 (2) Informace pro SEQ ID NO: 19:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 876 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 19:
GAATTCGGCA CGAGCCGGCG ATAGCTTCTG GGCCGCGGCC GACCAGATGG CTCGAGGGTT 60 CGTGCTCGGG GCCACCGCCG GGCGCACCAC CCTGACCGGT GAGGGCCTGC AACACGCCGA 120
CGGTCACTCG TTGCTGCTGG ACGCCACCAA CCCGGCGGTG GTTGCCTACG ACCCGGCCH 180
CGCCTACGAA ATCGGCTACA TCGNGGAAAG CGGACTGGCC AGGATGTGCG GGGAGAACCC 240
GGAGAACATC TTCTTCTACA TCACCGTCTA CAACGAGCCG TACGTGCAGC CGCCGGAGCC 300
GGAGAACTTC GATCCCGAGG GCGTGCTGGG GGGTATCTAC CGNTATCACG CSGCCACCGA 360
GCAACGCACC AACAAGGNGC AGATCCTGGC CTCCGGGGTA GCGATGCCCG CGGCGCTGCG 420
GGCAGCACAG ATGCTGGCCG CCGAGTGGGA TGTCGCCGCC GACGTGTGGT CGGTGACCAG 480
TTGGGGCGAG CTAAACCGCG ACGGGGTGGT CATCGAGACC GAGAAGCTCC GCCACCCCGA 540
TCGGCCGGCG GGCGTGCCCT ACGTGACGAG AGCGCTGGAG AATGCTCGGG GCCCGGTGAT 600
CGCGGTGTCG GACTGGATGC GCGCGGTCCC CGAGCAGATC CGACCGTGGG TGCCGGGCAC 660
ATACCTCACG TTGGGCACCG ACGGGTTCGG TTTTTCCGAC ACTCGGCCCG CCGGTCGTCG 720
TTACTTCAAC ACCGACGCCG AATCCCAGGT TGGTCGCGGT TTTGGGAGGG GTTGGCCGGG 780
TCGACGGGTG AATATCGACC CATTCGGTGC CGGTCGTGGG CCGCCCGCCC AGTTACCCGG 840
ATTCGACGAA GGTGGGGGGT TGCGCCCGAN TAAGTT 876 _ Sl
Cl 300953 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 20:
(i) Charakteristika sekvence:
(Λ) Délka: t 021 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 20:
ATCCCCCCGG GCTGCAGGAA TTCGGCACGA GAGACAAAAT TCCACGCGTT AATGCAGGAA 60 CAGATTCATA ACGAATTCAC AGCGGCACAA CAATATGTCG CGATCGCGGT TTATTTCGAC 120
AGCGAAGACC TGCCGCAGTT GGCGAAGCAT TTTTACAGCC AAGCGGTCGA GGAACGAAAC 180
CATGCAATGA TGCTCGTGCA ACACCTGCTC GACCGCGACC TTCGTGTCGA AATTCCCGGC 240
GTAGACACGG TGCGAAACCA GTTCGACAGA CCCCGCGAGG CACTGGCGCT GGCGCTCGAT 300
CAGGAACGCA CAGTCACCGA CCAGGTCGGT CGGCTGACAG CGGTGGCCCG CGACGAGGGC 360
GATTTCCTCG GCGAGCAGTT CATGCAGTCG TTCTTGCAGG AACAGATCGA AGAGGTGGCC 420
TTGATGGCAA CCCTGGTGCG GCTTGCCGAT CGGGCCGGGG CCAACCTGTT CGAGCTAGAG 480
AACTTCGTCG CACGTGAAGT GGATGTGGCG CCGGCCGCAT CAGGCGCCCC GCACGCTGCC 540
GGGGGCCGCC TCTAGATCCC TGGGGGGGAT CAGCGAGTGG TCCCGTTCGC CCGCCCGTCT 600
TCCAGCCAGG CCTTGGTGCG GCCGGGGTGG TGAGTACCAA TCCAGGCCAC CCCGACCTCC 660
CGGNAAAAGT CGATGTCCTC GTACTCATCG ACGTTCCAGG AGTACACCGC CCGGCCCTGA 720
GCTGCCGAGC GGTCAACGAG TTGCGGATAT TCCTTTAACG CAGGCAGTGA GGGTCCCACG 780
GCGGTTGGCC CGACCGCCGT GGCCGCACTG CTGGTCAGGT ATCGGGGGuT CTTGGCGAGC 840
AACAACGTCG GCAGGAGGGG TGGAGCCCGC CGGATCCGCA GACCGGGGGG GCGAAAACGA 900
CATCAACACC GCACGGGATC GATCTGCGGA GGGGGGTGCG GGAATACCGA ACCGGTGTAG 960
GAGCGCCAGC AGTTCTTTTT CCACCAGCGA AGCGTTTTCG GGTCATCGGN GGCNNTTAAG 1020
T 1021 (2) Informace pro SEQ ID NO: 21:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 321 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 21:
CGTGCCGACG AACGGAAGAA CACAACCATG AAGATGGTGA AATCGATCGC CGCAGGTCTG 60
ACCGCCGCGG CTGCAATCGG CGCCGCTGCG GCCGGTGTGA CTTCGATCAT GGCTGGCGGN 120
CCGGTCGTAT ACCAGATGCA GCCGGTCGTC TTCGGCGCGC CACTGCCGTT GGACCCGGNA 180
TCCGCCCCTG ANGTCCCGAC CGCCGCCCAG TGGACCAGNC TGCTCAACAG NCTCGNCGAT 240
CCCAACGTGT CGTTTGNGAA CAAGGGNAGT CTGGTCGAGG GNGGNATCGG NGGNANCGAG 300
GGNGNGNATC GNCGANCACA A 321 (2) Informace pro SEQ ID NO: 22: is (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 373 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 22:
TCTTATCGGT TCCGGTTGGC GACGGGTTTT GGGNGCGGGT GGTTAACCCG CTCGGCCAGC 60
CGATCGACGG GCGCGGAGAC GTCGACTCCG ATACTCGGCG GGCGCTGuAG CTCCAGGCGC 120
CCTCGGTGGT GNACCGGCAA GGCGTGAAGG AGCCGTTGNA GACCGGGATC AAGGCGATTG 180
ACGCGATGAC CCCGATCGGC CGCGGGCAGC GCCWSCTGAT CATCGGGGAC CGCAAGACCG 240
GCAAAAACCG CCGTCTGTGT CGGACACCAT CCTCAAACCA GCGGGAAGAA CTGGGAGTCC 300
GGTGGATCCC AAGAAGCAGG TGCGCTTGTG TATACGTTGG CCATCGGGCA AGAAGGGGAA 360
CTTACCATCG CCG 373
(2) Informace pro SEQ ID NO: 23:
(i) Charakteristika sekvence:
s (A) Délka: 352 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 23:
GTGACGCCGT GATGGGATTC CTGGGCGGGG CCGGTCCGCT GGCGGTGGTG GATCAGCAAC 60
TGGTTACCCG GGTGCCGCAA GGCTGGTCGT TTGCTCAGGC AGCCGCTGTG CCGGTGGTGT 120
TCTTGACGGC CTGGTACGGG KGGCCGAH TAGCCGAGAT CMGGCGGGC GMTCGGTGC 180
TGATCCATGC CGGTACCGGC GGTGTGGGCA TGGCGGCTGT GCAGCTGGCT CGCCAGTGGG 240
GCGTGGAGGT TTTCGTCACC GCCAGCCGTG GNAAGTGGGA CACGCTGCGC GCCATNGNGT 300
TTGACGACGA NCCATATCGG NGATTCCCNC ACATNCGAAG TTCCGANGGA GA
352 (2) Informace pro SEQ ID NO: 24:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 726 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární in (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 24:
GAAATCCGCG TTCATTCCGT TCGACCAGCG GCTGGCGATA ATCGACGAAG TGATCAAGCC 60
GCGGTTCGCG GCGCTCATGG GTCACAGCGA GTAATCAGCA AGTTCTCTCG TATATCGCAC 120
CTAGCGTCCA GTTGCTTGCC AGATCGCTTT CGTACCGTCA TCGCATGTAC CGGTTCGCGT 180
GCCGCACGCT CATGCTGGCG GCGTGCATCC TGGCCACGGG TGTGGCGGGT CTCGGGGTCG 240
GCGCGCAGTC CGCAGCCCAA ACCGCGCCGG TGCCCGACTA CTACTGGTGC CCGGGGCAGC 300
CTTTCGACCC CGCATGGGGG CCCAACTGGG ATCCCTACAC CTGCCATGAC GACTTCCACC 360
GCGACAGCGA CGGCCCCGAC CACAGCCGCG ACTACCCCGG ACCCATCCTC GAAGGTCCCG 420
TGCTTGACGA TCCCGGTGCT GCGCCGCCGC CCCCGGCTGC CGGTGGCGGC GCATAGCGCT 480
CGTTGACCGG GCCGCATCAG CGWTACGCG TATAAACCCG GGCGTGCCCC CGGCAAGCTA 540
CGACCCCCGG CGGGGCAGAT TTACGCTCCC GTGCCGATGG ATCGCGCCGT CCGATGACAG 600
AAAATAGGCG ACGGTTTTGG CAACCGCTTG GAGGACGCTT GAAGGGAACC TGTCATGAAC 660
GGCGACAGCG CCTCCACCAT CGACATCGAC AAGGTTGTTA CCCGCACACC CGTTCGCCGG 720
ATCGTG 726
Cl 300953 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 25:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 580 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 25:
CGCGACGACG ACGAACGTCG GGCCCACCAC CGCCTATGCG TTGATGCAGG CGACCGGGAT 60
GGTCGCCGAC CATATCCAAG CATGCTGGGT GCCCACTGAG CGACCTTTTG ACCAGCCGGG 120
CTGCCCGATG GCGGCCCGGT GAAGTCATTG CGCCGGGGCT TGTGCACCTG ATGAACCCGA 180
ATAGGGAACA ATAGGGGGGT GATTTGGCAG TTCAATGTCG GGTATGGCTG GAAATCCAAT 240
GGCGGGGCAT GCTCGGCGCC GACCAGGCTC GCGCAGGCGG GCCAGCCCGA ATCTGGAGGG 300
AGCACTCAAT GGCGGCGATG AAGCCCCGGA CCGGCGACGG TCCTTTGGAA GCAACTAAGG 360
AGGGGCGCGG CATTCTCATG CGAGTACCAC TTGAGGGTGG CGGTCGCCTG GTCGTCGAGC 420
TGACACCCGA CGAAGCCGCC GCACTGGGTG ACGAACTCAA AGGCGTTACT AGCTAAGACC 480
AGCCCAACGG CGAATGGTCG GCGTTACGCG CACACCTTCC GGTAGATGTC CAGTGTCTGC 540
TCGGCGATGT ATGCCCAGGA GAACTCTTGG ATACAGCGCT 580 (2) Informace pro SEQ ID NO: 26:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 160 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 26:
AACGGAGGCG CCGGGGGTTT TGGCGGGGCC GGGGCGGTCG GCGGCAACGG CGGGGCCGGC 60
GGTACCGCCG GGTTCTTCGG TGTCGGCGGG GCCGGTGGGG CCGGAGGCAA CGGCATCGCC 120
GGTGTCACGG GTACGTCGGC CAGCACACCG GGTGGATCCG 160 (2) Informace pro SEQ ID NO: 27:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 272 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xí) Popis sekvence: SEQ ID NO: 27:
GACACCGATA CGATGGTGAT GTACGCCAAC GTTGTCGACA CGCTCGAGGC GTTCACGATC 60
CAGCGCACAC CCGACGGCGT GACCATCGGG GATGCGGCCC CGTTCGCGGA GGCGGCTGCC 120
AAGGCGATGG GAATCGACAA GCTGCGGGTA ATTCATACCG GAATGGACCC CGTCGTCGCT 180
GAACGCGAAC AGTGGGACGA CGGCAACAAC ACGTTGGCGT TGGCGCCCGG TGTCGTTCTC 240
GCCTACGAGC GCAACGTACA GACCAACGCC CG 272 (2) Informace pro SEQ ID NO: 28:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 317 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 28:
GCAGCCGGTG GTTCTCGGAC TATCTGCGCA CGGTGACGCA GCGCGACGTG CGCGAGCTGA 60
AGCGGATCGA GCAGACGGAT CGCCTGCCGC GGTTCATGCG CTACCTGGCC GCTATCACCG 120
CGCAGGAGCT GAACGTGGCC GAAGCGGCGC GGGTCATCGG GGTCGACGCG GGGACGATCC 180
GTTCGGATCT GGCGTGGTTC GAGACGGTCT ATCTGGTACA TCGCCTGCCC GCCTGGTCC-C 240
GGAATCTGAC CGCGAAGATC AAGAAGCGGT CAAAGATCCA CGTCGTCGAC AGTGGCTTCG 300
CGGCCTGGTT GCGCGGG 317
- 57 .
CZ 300953 Bó (2) Informace pro SEQ ID NO: 29;
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 182 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 29:
GATCGTGGAG CTGTCGATGA ACAGCGTTGC CGGACGCGCG GCGGCCAGCA CGTCGGTGTA 60
GCAGCGCCGG ACCACCTCGC CGGTGGGCAG CATGGTGATG ACCACGTCGG CCTCGGCCAC 120
CGCTTCGGGC GCGCTACGAA ACACCGCGAC ACCGTGCGCG GCGGCGCCGG ACGGCGCCGT 180
GG 182 (2) Informace pro SEQ ID NO: 30:
[5 (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 308 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 30:
GATCGCGAAG TITGGTGAGC AGGTGGTCGA CGCGAAAGTC TGGGCGCCTG CGAAGCGGGT 60 CGGCGTTCAC GAGGCGAAGA CACGCCTGTC CGAGCTGCTG CGGCTCGTCT ACGGCGGGCA 120 GAGGTTGAGA TTGCCCGCCG CGGCGAGCCG GTAGCAAAGC TTGTGCCGCT GCATCCTCAT 180 GAGACTCGGC GGTTAGGCAT TGACCATGGC GTGTACCGCG TGCCCGACGA TTTGGACGCT 240
CCGTTGTCAG ACGACGTGCT CGAACGCTTT CACCGGTGAA GCGCTACCTC ATCGACACCC 300 ACGTTTGG 308 (2) Informace pro SEQ ID NO: 31:
(i) Charakteristika sekvence;
(A) Délka: 267 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární to (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 31:
CCGACGACGA 6CAACTCACG TGGATGATGG TCGGCAGCGG CATTGAGGAC GGAGAGAATC 60
CGGCCGAAGC TGCCGCGCGG CAAGTGCTCA TAGTGACCGG CCGTAGAGGG CTCCCCCGAT 120
GGCACCGGAC TATTCTGGTG TGCCGCTGGC CGGTAAGAGC GGGTAAAAGA ATGTGAGGGG 180
ACACGATGAG CAATCACACC TACCGAGTGA TCGAGATCGT CGG6ACCTCG CCCGACGGCG 240
TCGACGCGGC AATCCAGGGC GGTCTGG 267 (2) Informace pro SEQ ID NO: 32:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 189 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 32:
CTCGTGCCGA AAGAATGTGA GGGGACACGA TGAGCAATCA CACCTACCGA GTGATCGAGA 60 TCGTCGGSAC CTCGCCCGAC GGCGTCGACG CGGCAATCCA GGGCGGTCTG GCCCGAGCTG 120 CGCAGACCAT GCGCGCGCTG GACTGGTTCG AAGTACAGTC MTTCGAGGC CACCTGGTCG 180 ACGGAGCGG 189
(2) Informace pro SEQ ID NO: 33:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 851 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 33:
CTGCAGGGTG GCGTGGATGA GCGTCACCGC GGGGCAGGCC GAGCTGACCG CCGCCCAGGT 60
CCGGGTTGCT GCGGCGGCCT ACGAGACGGC GTATGGGCTG ACGGTGCCCC CGCCGGTGAT 120
CGCCGAGAAC CGTGCTGAAC TGATGATTCT GATAGCGACC AACCTCTTGG GGCAAAACAC 180
CCCGGCGATC GCGGTCAACG AGGCCGAATA CGGCGAGATG TGGGCCCAAG ACGCCGCCGC 240
GATGTTTGGC TACGCCGCGG CGACGGCGAC GGCGACGGCG ACGTTGCTGC CGTTCGAGGA 300
GGCGCCGGAG ATGACCAGCG CGGGTGGGCT CCTCGAGCAG GCCGCCGCGG TCGAGGAGGC 360
CTCCGACACC GCCGCGGCGA ACCAGTTGAT GAACAATGTG CCCCAGGCGC TGAAACAGTT 420
GGCCCAGCCC ACGCAGGGCA CCACGCCTTC TTCCAAGCTG GGTGGCCTGT GGAAGACGGT 480
CTCGCCGCAT CGGTCGCCGA TCAGCAACAT GGTGTCGATG GCCAACAACC ACATGTCGAT 540
GACCAACTCG GGTGTGTCGA TGACCAACAC CTTGAGCTCG ATGTTGAAGG GCTTTGCTCC 600
GGCGGCGGCC GCCCAGGCCG TGCAAACCGC GGCGCAAAAC GGGGTCCGGG CGATGAGCTC 660
GCTGGGCAGC TCGCTGGGTT CTTCGGGTCT GGGCGGTGGG GTGGCCGCCA ACTTGGGTCG 720
GGCGGCCTCG GTACGGTATG GTCACCGGGA TGGCGGAAAA TATGCANAGT CTGGTCGGCG 780
GAACGGTGGT CCGGCGTAAG GTTTACCCCC GTTTTCTGGA TGCGGTGAAC TTCGTCAACG 840
GAAACAGTTA C
851
CZ 300953 Bó (2) Informace pro SEQ ID NO: 34:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 254 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 34:
GATCGATCGG GCGGAAATTT GGACCAGATT CGCCTCCGGC GATAACCCAA TCAATCGAAC 60
CTAGATTTAT TCCGTCCAGG GGCCCGAGTA ATGGCTCGCA GGAGAGGAAC CTTACTGCTG 120
CGGGCACCTG TCGTAGGTCC TCGATACGGC GGAAGGCGTC GACATTTTCC ACCGACACCC 180
CCATCCAAAC GTTCGAGGGC CACTCCAGCT TGTGAGCGAG GCGACGCAGT CGCAGGCTGC 240
GCTTGGTCAA GATC 254 (2) Informace pro SEQ ID NO: 35:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 408 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 35:
CGGCACGAGG ATCCTGACCG AAGCGGCCGC CGCCAAGGCG AAGTCGCTGT TGGACCAGGA 60
GGGACGGGAC GATCTGGCGC TGCGGATCGC GGTTCAGCCG GGGGGGTGCG CTGGATTGCG 120
CTATAACCTT TTCTTCGACG ACCGGACGCT GGATGGTGAC CAAACCGCGG AGTTCGGTGG 180
TGTCAGGTTG ATCGTGGACC GGATGAGCGC GCCGTATGTG GAAGGCGCGT CGATCGATTT 240 CGTCGACACT ATTGAGAAGC AAGGNTTCAC CATCGACAAT CCCAACGCCA CCGGCTCCTG 300 CGCGTGCGGG GATTCGTTCA ACTGATAAAA CGCTAGTACG ACCCCGCGGT GCGCAACACG 360 TACGAGCACA CCAAGACCTG ACCGCGCTGG AAAAGCAACT GAGCGATG 408 r i (2) Informace pro SEQ ID NO: 36:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 181 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 36:
GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGGGCCGGC GGGGCCGGCG 60 GGACCGGCGC TAACGGTGGT GCCGGCGGCA ACGCCTGGTT GTTCGGGGCC GGCGGGTCCG 120 GCGGNGCCGG CACCAATGGT GGNGTCGGCG GGTCCGGCGG ATTTGTCTAC GGCAACGGCG 180 G 181 (2) Informace pro SEQ ID NO: 37:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 290 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 37:
GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGTGTCG6C GGCCGGGGCG 60 GCGACGGCGT CTTTGCCGGT GCCGGCGGCC AGGGCGGCCT CGGTGGGCAG GGCGGCAATG 120 GCGGCGGCTC CACCGGCGGC AACGGCGGTC TTCGCGGCGC GGGCGGTGGC GGAGGCAACG 180 CCCCGGACGG CGGCTTCGGT GGCAACGGCG GTAAGGGTGG CCAGGGCGGN ATTCGCGGCG 240 GCACTCAGAG CGCGACCGGC CTCGGNGGTG ACGGCGGTGA CGGCGGTGAC 290
(2) Informace pro SEQ ID NO: 38:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 34 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 38:
GATCCAGTGG CATG6NGGGT GTCAGTGGAA GCAT (2) Informace pro SEQ ID NO: 39:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 155 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 39:
GATCGCTGCT CGTCCCCCCC TTGCCGCCGA CGCCACCGGT CCCACCGnA CCGAACAAGC 60
TGGCGTGGTC GCCAGCACCC CCGGCACCGC CGACGCCGGA GTCGAACAAT GGCACCGTCG 120
TATCCCCACC ATTGCCGCCG GNCCCACCGG CACCG 355 (2) Informace pro SEQ ID NO: 40:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 53 párů bází 30 (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 40:
ATGGCGTTCA CGGGGCGCCG GGGACCGGGC AGCCCGGNGG GGCCGGGGGG TGG (2) Informace pro SEQ ID NO: 41:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 132 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 41:
GATCCACCGC GGGTGCAGAC GGTGCCCGCG GCGCCACCCC GACCAGCGGC GGCAACGGCG 60
GCACCGGCGG CAACGGCGCG AACGCCACCG TCGTCGGNGG GGCCGGCGGG GCCGGCGGCA 120
AGGGCGGCAA CG 132 (2) Informace pro SEQ ID NO: 42:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 132 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina ío (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 42:
GATCGGCGGC CGGNACGGNC GGGGACGGCG GCAAGGGCQG NAACGGGGGC GCCGNAGCCA 60 CCNGCCAAGA ATCCTCCGNG TCCNCCAATG GCGCGAATGG CGGACAGGGC GGCAACGGCG 120 GCANCGGCGG CA 132 (2) Informace pro SEQ ID NO: 43:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 702 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 43:
CGGCACGAGG ATCGGTACCC CGCGGCATCG GCAGCTGCCG ATTCGCCGGG TTTCCCCACC 60
CGAGGAAAGC CGCTACCAGA TGGCGCTGCC GAAGTAGGGC GATCCGTTCG CGATGCCGGC 120
ATGAACGGGC GGCATCAAAT TAGTGCAGGA ACCTTTCAGT TTAGCGACGA TAATGGCTAT 180
AGCACTAAGG AGGATGATCC GATATGACGC AGTCGCAGAC CGTGACGGTG GATCAGCAAG 240
AGATTOGAA CAGGGCCAAC GAGGTGGAGG CCCCGATGGC GGACCCACCG ACTGATGTCC 300
CCATCACACC GTGCGAACTC ACGGNGGNTA AAAACGCCGC CCAACAGNTG GTNTTGTCCG 360
CCGACAACAT GCGGGAATAC CTGGCGGCCG GTGCCAAAGA GCGGCAGCGT CTGGCGACCT 420
CGCTGCGCAA CGCGGCCAAG GNGTATGGCG AGGTTGATGA GGAGGCTGCG ACCGCGCTGG 480
ACAACGACGG CGAAGGAACT GTGCAGGCAG AATCGGCCGG GGCCGTCGGA GGGGACAGTT 540
CGGCCGAACT AACCGATACG CCGAGGGTGG CCACGGCCGG TGAACCCAAC TTCATGGATC 600
TCAAAGAAGC GGCAAGGAAG CTCGAAACGG GCGACCAAGG CGCATCGCTC GCGCACTGNG 660
GGGATGGGTG GAACACTTNC ACCCTGACGC TGCAAGGCGA CG 702 (2) Informace pro SEQ ID NO: 44:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 298 párů bází ίο (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 44:
GAAGCCGCAG CGCTGTCGGG CGACGTGGCG GTCAAAGCGG CATCGCTCGG TGGCGGTGGA 60
GGCGGCGGGG TGCCGTCGGC GCCGTTCGGA TCCGCGATCG GGGGCGCCGA ATCGGTGCGG 120
CCCGCTGGCG CTGGTGACAT TGCCGGCTTA GGCCAGGGAA GGGCCGGCGG CGGCGCCGCG 180
CTGGGCGGCG GTGGCATGGG AATGCCGATG GGTGCCGCGC ATCAGGGACA AGGGGGCGCC 240
AAGTCCAAGG GTTCTCAGCA GGAAGACGAG GCGCTCTACA CCGAGGATCC TCGTGCCG 298
-6S CZ 300953 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 45:
(i) Charakteristika sekvence:
s (Λ) Délka: I 058 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární o (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 45:
CGGCACGAGG ATCGAATCGC GTCGCCGGGA GCACAGCGTC GCACTGCACC AGTGGAGGAG 60
CCATGACCTA CTCGCCGGGT AACCCCGGAT ACCCGCAAGC GCAGCCCGCA GGCTCCTACG 120
GAGGCGTCAC ACCCTCGTTC GCCCACGCCG ATGAGGGTGC GAGCAAGCTA CCGATGTACC 180
TGAACATCGC GGTGGCAGTG CTCGGTCTGG CTGCGTACTT CGCCAGCTTC GGCCCAATGT 240
TCACCCTCAG TACCGAACTC GGGGGGGGTG ATGGCGCAGT GTCCGGTGAC ACTGGGCTGC 300
CGGTCGGGGT GGCTCTGCTG GCTGCGCTGC TTGCCGGGGT GGTTCTGGTG CCTAAGGCCA 360
AGAGCCATGT GACGGTAGTT GCGGTGCTCG GGGTACTCGG CGTATTTCTG ATGGTCTCGG 420
CGACGTTTAA CAAGCCCAGC GCCTATTCGA CCGGTTGGGC ATTGTGGGTT GTGTTGGCTT 480
TCATCGTGTT CCAGGCGGTT GCGGCAGTCC TGGCGCTCTT GGTGGAGACC GGCGCTATCA 540
CCGCGCCGGC GCCGCGGCCC AAGTTCGACC CGTATGGACA GTACGGGCGG TACGGGCAGT 600
ACGGGCAGTA CGGGGTGCAG CCGGGTGGGT ACTACGGTCA GCAGGGTGCT CAGCAGGCCG 660
CGGGACTGCA GTCGCCCGGC CCGCAGCAGT CTCCGCAGCC TCCCGGATAT GGGTCGCAGT 720
ACGGCGGCTA TTCGTCCAGT CCGAGCCAAT CGGGCAGTGG ATACACTGCT CAGCCCCCGG 780
CCCAGCCGCC GGCGCAGTCC GGGTCGCAAC AATCGCACCA GGGCCCATCC ACGCCACCTA 840
CCGGCTTTCC GAGCTTCAGC CCACCACCAC CGGTCAGTGC CGGGACGGGG TCGCAGGCTG 900
GTTCGGCTCC AGTCAACTAT TCAAACCCCA GCGGGGGCGA GCAGTCGTCG TCCCCCGGGG 960
CGGCGCCGGT CTAACCGGGC GTTCCCGCGT CCGGTCGCGC GTGTGCGCGA AGAGTGAACA 1020
GGGTGTCAGC AAGCGCGGAC GATCCTCGTG CCGAATTC
1058 (2) Informace pro SEQ ID NO: 46:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 327 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 46:
CGGCACGAGA GACCGATGCC GCTACCCTCG CGCAGGAGGC AGGTAATTTC GAGCGGATCT 60
CCGGCGACCT GAAAACCCAG ATCGACCAGG TGGAGTCGAC GGCAGGTTCG TTGCAGGGCC 120
AGTGGCGCGG CGCGGCGGGG ACGGCCGCCC AGGCCGCGGT GGTGCGCTTC CAAGAAGCAG 180
CCAATAAGCA GAAGCAGGAA CTCGACGAGA TCTCGACGAA TATTCGTCAG GCCGGCGTCC 240
AATACTCGAG GGCCGACGAG GAGCAGCAGC AGGCGCTGTC CTCGCAAATG GGCTTCTGAC 300
CCGCTAATAC GAAAAGAAAC GGAGCAA 327 (2) Informace pro SEQ ID NO: 47:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 170 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie; lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 47:
CGGTCGCGAT GATGGCGTTG TCGAACGTGA CCGATTCTGT ACCGCCGTCG TTGAGATCAA 60
CCAACAACGT GTTGGCGTCG GCAAATGTGC CGNACCCGTG GATCTCGGTG ATCTTGTTCT 120
TCTTCATCAG GAAGTGCACA CCGGCCACCC TGCCCTCGGN TACCTTTCGG 170 (2) Informace pro SEQ ID NO: 48:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 127 párů bází 30 (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární _ A 7 .
CZ 300953 Bó (xi) Popis sekvence; SEQ ID NO; 48:
GATCCGGCGG CACGGGGGGT GCCGGCGGCA GCACCGCTGG CGCTGGCGGC AACGGCGGGG 60
CCGGGGGTGG CGGCGGAACC GGTGGGTTGC TCTTCGGCM CGGCGGTGCC GGCGGGCACG 120
GGGCCGT 127 (2) Informace pro SEQ ID NO: 49:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 81 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina ío (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 49:
CGGCGGCAAG GGCGGCACCG CCGGCAACGG GAGCGGCGCG GCCGGCGGCA ACGGCGGCAA 60
CGGCGGCTCC GGCTCAACG G 81 (2) Informace pro SEQ ID NO: 50:
(í) Charakteristika sekvence:
(A) Délka; 149 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 50:
GATCAGGGCT GGCCGGCTCC GGCCAGAAGG GCGGTAACGG AGGAGCTGCC GGATTGTITG 60
GCAACGGCGG GGCCGGNGGT GCCGGCGCGT CCAACCAAGC CGGTAACGGC GGNGCCGGCG 120
GAAACGGTGG TGCCGGTGGG CTGATCTGG 149 (2) Informace pro SEQ ID NO: 51:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 355 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 51:
CGGCACGAGA TCACACCTAC CGAGTGATCG AGATCGTCGG GACCTCGCCC GACGGTGTCG 60
ACGCGGNAAT CCAGGGCGGT CTGGCCCGAG CTGCGCAGAC CATGCGCGCG CTGGACTGGT 120
TCGAAGTACA GTCAATTCGA GGCCACCTGG TCGACGGAGC GGTCGCGCAC TTCCAGGTGA 180
CTATGAAAGT CGGCTTCCGC CTGGAGGATT CCTGAACCTT CAAGCGCGGC CGATAACTGA 240
GGTGCATCAT TAAGCGACTT TTCCAGAACA TCCTGACGCG CTCGAAACGC GGTTCAGCCG 300
ACGGTGGCTC CGCCGAGGCG CTGCCTCCAA AATCCCTGCG ACAATTCGTC GGCGG 355 (2) Informace pro SEQ ID NO: 52:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 999 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina i o (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární
- AQ _ (xi) Popis sekvence; SEQ ID NO: 52:
ATGCATCACC ATCACCATCA CATGCATCAG GTGGACCCCA ACTTGACACG TCGCAAGGGA 60
CGATTGGCGG CACTGGCTAT CGCGGCGATG GCCACCGCCA GCCTGGTGAC CGTTGCGGTG 120
CCCGCGACCG CCAACGCCGA TCCGGAGCCA GCGCCCCCGG TACCCACAAC GGCCGCCTCG 180
CCGCCGTCGA CCGCTGCA6C GCCACCCGCA CCGGCGACAC CTGTTGCCCC CCCACCACCG 240
GCCGCCGCCA ACACGCCGAA TGCCCAGCCG GGCGATCCCA ACGCAGCACC TCCGCCGGCC 300
GACCCGAACG CACCGCCGCC ACCTGTCATT GCCCCAAACG CACCCCAACC TGTCCGGATC 360
GACAACCCGG TTGGAGGATT CAGCTTCGCG CTGCCTGCTG GCTGGGTGGA GTCTGACGCC 420
GCCCACTTCG ACTACGGTTC AGCACTCCTC AGCAAAACCA CCGGGGACCC GCCATTTCCC 480
GGACAGCCGC CGCCGGTGGC CAATGACACC CGTATCGTGC TCGGCCGGCT AGACCAAAAG 540
CTTTACGCCA GCGCCGAAGC CACCGACTCC AAGGCCGCGG CCCGGTTGGG CTCGGACATG 600
GGTGAGTTCT ATATGCCCTA CCCGGGCACC CGGATCAACC AGGAAACCGT CTCGCTCGAC 660
GCCAACGGGG TGTCTGGAAG CGCGTCSTAT TACGAAGTCA AGTTCAGCGA TCCGAGTAAG 720
CCGAACGGCC AGATCTGGAC GGGCGTAATC GGCTCGCCCG CGGCGAACGC ACCGGACGCC 780
GGGCCCCCTC AGCGCTGGTT TGTGGTATGG CTCGGGACCG CCAACAACCC GGTGGACAAG 840
GGCGCGGCCA AGGCGCTGGC CGAATCGATC CGGCCTTTGG TCGCCCCGCC GCCGGCGCCG 900
GCACCGGCTC CTGCAGAGCC CGCTCCGGCG CCGGCGCCGG CCGGGGAAGT CGCTCCTACC 960
CCGACGACAC CGACACCGCA GCGGACCTTA CCGGCCTGA 999 (2) Informace pro SEQ ID NO: 53:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 332 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 53:
Met His His His His His His Met His Gin Val Asp Pro Asn Leu Thr
1 5 10 15
Arg Arg Lys Gly Arg Leu Ala Ala Leu Ala Ile Ala Ala Met Ala Ser
20 25 30
Ala Ser Leu Val Thr Val Ala Val Pro Ala Thr Ala Asn Ala Asp Pro
35 40 45
Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro Ser Thr
50 55 60
Ala Ala Ala Pro Pro Ala Pro Ala Thr Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro
65 70 75 80
Ala Ala' Ala Asn Thr Pro Asn Ala Gin Pro Gly Asp Pro Asn Ala Ala
85 90 95
- 71 .
Pro Pro Pro Ala Asp Pro Asn Ala Pro Pro Pro Pro Val Ile Ala Pro 100 105 110
Asn Ala Pro Gin Pro Val Arg Ile Asp Asn Pro Val Gly Gly Phe Ser 115 120 125
Phe Ala Leu Pro Ala Gly Trp Val Glu Ser Asp Ala Ala His Phe Asp 130 135 140
Tyr Gly Ser Ala Leu Leu Ser Lys Thr Thr Gly Asp Pro Pro Phe Pro
145 150 155 160
Gly Gin Pro Pro Pro Val Ala Asn Asp Thr Arg Ile Val Leu Gly Arg
165 170 175
Leu Asp Gin Lys Leu Tyr Ala Ser Ala Glu Ala Thr Asp Ser Lys Ala 180 185 190
Ala Ala Arg Leu Gly Ser Asp Met Gly Glu Phe Tyr Met Pro Tyr Pro
195
200
205
Gly Thr Arg Ile Asn Gin Glu Thr Val Ser Leu Asp Ala Asn Gly Val 210 215 220
Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Tyr Glu Val Lys Phe Ser Asp Pro Ser Lys
225 230 235 240
Pro Asn Gly Gin Ile Trp Thr Gly Val Ile Gly Ser Pro Ala Ala Asn
245 250 255
Ala Pro Asp Ala Gly Pro Pro Gin Arg Trp Phe Val Val Trp Leu Gly 260 265 270
Thr Ala Asn Asn Pro Val Asp Lys Gly Ala Ala Lys Ala Leu Ala Glu 275 280 285
Ser Ile Arg Pro Leu Val Ala Pro Pro Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro 290 295 300
Ala Glu Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Gly Glu Val Ala Pro Thr 305 310 315 320
Pro Thr Thr Pro Thr Pro Gin Arg Thr Leu Pro Ala 325 330
CZ JVUVOJ BO (2) Informace pro SEQ ID NO: 54:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 20 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 54:
Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Xaa Asn Tyr Gly Gin Val 15 10 15
Val Ala Ala Leu 20 (2) Informace pro SEQ ID NO: 55: is (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 55:
Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 56:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 19 aminokyselin 30 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 56:
Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys 15 10 15
Glu Gly Arg
73CZ 300953 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 57:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 57:
Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 58:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 14 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 58:
Asp lle Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gin Gin Xaa Ala Val 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 59:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 13 aminokyselin 30 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 59:
Ala Glu Glu Ser lle Ser Thr Xaa Glu Xaa lle Val Pro „15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 60:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 17 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 60:
Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro 15 10 15
Ala (2) Informace pro SEQ ID NO: 61:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina io (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 61:
Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly 15 IQ 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 62:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 30 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 62:
Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gin Gin Thr Ser 15 io 15
Leu Leu Asn Asn Leu Ala Asp Pro Asp Val Ser Phe Ala Asp 20 25 30 (2) Informace pro SEQ ID NO: 63:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 187 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 63:
Thr Gly Ser Leu Asn Gin Thr His Asn Arg Arg Ala Asn Glu Arg Lys 15 10 15
Asn Thr Thr Met Lys Met Val Lys Ser Ile Ala Ala Gly Leu Thr Ala 20 25 30
Ala Ala Ala Ile Gly Ala Ala Ala Ala Gly Val Thr Ser Ile Met Ala 35 40 45
Gly Gly Pro Val Val Tyr Gin Met Gin Pro Val Val Phe Gly Ala Pro 50 55 60
Leu Pro Leu Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gin
70 75 80
Leu Thr Ser Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala
90 95
Asn Lys Gly Ser Leu Val Glu Gly Gly Ile Gly Gly Thr Glu Ala Arg 100 105 110
ile Ala Asp His Lys Leu Lys Lys Ala Ala Glu His Gly Asp Leu Pro
115 120 125
Leu Ser Phe Ser Val Thr Asn Ile Gin Pro Ala Ala Ala Gly Ser Ala
130 135 140
Thr Ala Asp Val Ser Val Ser Gly Pro Lys Leu Ser Ser Pro Val Thr
145 150 155 160
Gin Asn Val Thr Phe Val Asn Gin Gly Gly Trp Met Leu Ser Arg Ala
165 170 175
Ser Ala Met Glu Leu Leu Gin Ala Ala Gly Xaa 180 185 (2) Informace pro SEQ ID NO: 64:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 148 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 64:
Asp Glu Val Thr Val Glu Thr Thr Ser Val Phe Arg Ala Asp Phe Leu 15 10 15
Ser Glu Leu Asp Ala Pro Ala Gin Ala Gly Thr Glu Ser Ala Val Ser 20 25 30
Gly Val Glu Gly Leu Pro Pro Gly Ser Ala Leu Leu Val Val Lys Arg 35 40 45
Gly Pro Asn Ala Gly Ser Arg Phe Leu Leu Asp Gin Ala Ile Thr Ser 50 55 60
Ala Gly Arg His Pro Asp Ser Asp Ile Phe Leu Asp Asp Val Thr Val
70 75 80
Ser Arg Arg His Ala Glu Phe Arg Leu Glu Asn Asn Glu Phe Asn Val
90 95
Val Asp Val Gly Ser Leu Asn Gly Thr Tyr Val Asn Arg Glu Pro Val 100 105 110
Asp Ser Ala Val Leu Ala Asn Gly Asp Glu Val Gin Ile Gly Lys Leu 115 120 125
Arg Leu Val Phe Leu Thr Gly Pro Lys Gin Gly Glu Asp Asp Gly Ser 130 135 140
Thr Gly Gly Pro 145 . 77 CZ 300953 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 65:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 230 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec; jednoduchý (D) Topologie: lineární to (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 65:
Thr Ser Asn Arg Pro Ala Arg Arg Gly Arg Arg Ala Pro Arg Asp Thr 15 10 15
Gly Pro Asp Arg Ser Ala Ser Leu Ser Leu Val Arg His Arg Arg Gin 20 25 30
Gin Arg Asp Ala Leu Cys Leu Ser Ser Thr Gin Ile Ser Arg Gin Ser 35 40 45
Asn Leu Pro Pro Ala Ala Gly Gly Ala Ala Asn Tyr Ser Arg Arg Asn 50 55 60
Phe Asp Val Arg Ile Lys Ile Phe Met Leu Val Thr Ala Val Val Leu
70 75 80
Leu Cys Cys Ser Gly Val Ala Thr Ala Ala Pro Lys Thr Tyr Cys Glu
90 95
Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly Gin Ala Cys Gin Ile Gin Met Ser 100 105 110
Asp Pro Ala Tyr Asn Ile Asn Ile Ser Leu Pro Ser Tyr Tyr Pro Asp 115 120 125
Gin Lys Ser Leu Glu Asn Tyr Ile Ala Gin Thr Arg Asp Lys Phe Leu 130 135 140
Ser Ala Ala Thr Ser Ser Thr Pro Arg Glu Ala Pro Tyr Glu Leu Asn
145 150 155 160
Ile Thr Ser Ala Thr Tyr Gin Ser Ala Ile Pro Pro Arg Gly Thr Gin
165 170 175
Ala Val Val Leu Xaa Val Tyr His Asn Ala Gly Gly Thr His Pro Thr 180 185 190
Thr Thr Tyr Lys Ala Phe Asp Trp Asp Gin Ala Tyr Arg Lys Pro Ile 195 200 205
Thr Tyr Asp Thr Leu Trp Gin Ala Asp Thr Asp Pro Leu Pro Val Val 210 215 220
Phe Pro Ile Val Ala Arg
225 230 (2) Informace pro SEQ ID NO: 66:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 132 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 66:
Thr Ala Ala Ser Asp Asn Phe Gin Leu Ser Gin Gly Gly Gin Gly Phe 15 10 15
Ala Ile Pro Ile Gly Gin Ala Met Ala Ile Ala Gly Gin Ile Arg Ser 20 25 30
Gly Gly Gly Ser Pro Thr Val His Ile Gly Pro Thr Ala Phe Leu Gly 35 40 45
Leu Gly Val Val Asp Asn Asn Gly Asn Gly Ala Arg Val Gin Arg Val 50 55 60
Val Gly Ser Ala Pro Ala Ala Ser Leu Gly Ile Ser Thr Gly Asp Val
70 75 80
Ile Thr Ala Val Asp Gly Ala Pro Ile Asn Ser Ala Thr Ala Met Ala
90 95
Asp Ala Leu Asn Gly His His Pro Gly Asp Val Ile Ser Val Asn Trp 100 105 110
Gin Thr Lys Ser Gly Gly Thr Arg Thr Gly Asn Val Thr Leu Ala Glu 115 120 125
Gly Pro Pro Ala 130 _ 70 (2) Informace pro SEQ ID NO: 67:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 100 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 67:
Val Pro Leu Arg Ser Pro Ser Met Ser Pro Ser Lys Cys Leu Ala Ala 15 10 15
Ala Gin Arg Asn Pro Val Ile Arg Arg Arg Arg Leu Ser Asn Pro Pro 20 25 30
Pro Arg Lys Tyr Arg Ser Met Pro Ser Pro Ala Thr Ala Ser Ala Gly 35 40 45
Met Ala Arg Val Arg Arg Arg Ala Ile Trp Arg Gly Pro Ala Thr Xaa 50 55 60
Ser Ala Gly Met Ala Arg Val Arg Arg Trp Xaa Val Met Pro Xaa Val
70 75 80
Ile Gin Ser Thr Xaa Ile Arg Xaa Xaa Gly Pro Phe Asp Asn Arg Gly
90 95
Ser Glu Arg Lys 100
CZ 300953 Bó (2) Informace pro SEQ ID NO: 68:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 163 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 68:
Met Thr Asp Asp Ile Leu Leu Ile Asp Thr Asp Glu Arg Val Arg Thr 15 10 15
Leu Thr Leu Asn Arg Pro Gin Ser Arg Asn Ala Leu Ser Ala Ala Leu 20 25 30
Arg Asp Arg Phe Phe Ala Xaa Leu Xaa Asp Ala Glu Xaa Asp Asp Asp 35 40 45
Ile Asp Val Val Ile Leu Thr Gly Ala Asp Pro Val Phe Cys Ala Gly 50 55 60
Leu Asp Leu Lys Val Ala Gly Arg Ala Asp Arg Ala Ala Gly His Leu
70 75 80
Thr Ala Val Gly Gly His Asp Gin Ala Gly Asp Arg Arg Asp Gin Arg
90 95
Arg Arg Gly His Arg Arg Ala Arg Thr Gly Ala Val Leu Arg His Pro 100 105 110
Asp Arg Leu Arg Ala Arg Pro Leu Arg Arg His Pro Arg Pro Gly Gly 115 120 125
Ala Ala Ala His Leu Gly Thr Gin Cys Val Leu Ala Ala Lys Gly Arg 130 135 140
His Arg Xaa Gly Pro Val Asp Glu Pro Asp Arg Arg Leu Pro Val Arg 145 150 155 160
Asp Arg Arg
O T (2) Informace pro SEQ ID NO: 69:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 344 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 69:
Met Lys Phe Val Asn His lle Glu Pro Val Ala Pro Arg Arg Ala Gly 15 10 15
Gly Ala Val Ala Glu Val Tyr Ala Glu Ala Arg Arg Glu Phe Gly Arg 20 25 30
Leu Pro Glu Pro Leu Ala Met Leu Ser Pro Asp Glu Gly Leu Leu Thr 35 40 45
Ala Gly Trp Ala Thr Leu Arg Glu Thr Leu Leu Val Gly Gin Val Pro 50 55 60
Arg Gly Arg Lys Glu Ala Val Ala Ala Ala Val Ala Ala Ser Leu Arg
70 75 80
Cys Pro Trp Cys Val Asp Ala His Thr Thr Met Leu Tyr Ala Ala Gly
90 95
Gin Thr Asp Thr Ala Ala Ala lle Leu Ala Gly Thr Ala Pro Ala Ala 100 105 110
Gly Asp Pro Asn Ala Pro Tyr Val Ala Trp Ala Ala Gly Thr Gly Thr 115 120 125
Pro Ala Gly Pro Pro Ala Pro Phe Gly Pro Asp Val Ala Ala Glu Tyr 130 135 140
Leu Gly Thr Ala Val Gin Phe His Phe lle Ala Arg Leu Val Leu Val
145 150 155 160
Leu Leu Asp Glu Thr Phe Leu Pro Gly Gly Pro Arg Ala Gin Gin Leu
165 170 175
CZ 3UUV53 B6
Met Arg Arg Ala Gly Gly Leu Val Phe Ala Arg Lys Val Arg Ala Glu 180 185 190
His Arg Pro Gly Arg Ser Thr Arg Arg Leu Glu Pro Arg Thr Leu Pro 195 200 205
Asp Asp Leu Ala Trp Ala Thr Pro Ser Glu Pro Ile Ala Thr Ala Phe 210 215 220
Ala Ala Leu Ser His His Leu Asp Thr Ala Pro His Leu Pro Pro Pro
225 230 235 240
Thr Arg Gin Val Val Arg Arg Val Val Gly Ser Trp His Gly Glu Pro
245 250 255
Met Pro Met Ser Ser Arg Trp Thr Asn Glu His Thr Ala Glu Leu Pro 260 265 270
Ala Asp Leu His Ala Pro Thr Arg Leu Ala Leu Leu Thr Gly Lei Ala 275 280 285
Pro His Gin Val Thr Asp Asp Asp Val Ala Ala Ala Arg Ser Leu Leu 290 295 300
Asp Thr Asp Ala Ala Leu Val Gly Ala Leu Ala Trp Ala Ala Phe Thr
305 310 315 320
Ala Ala Arg Arg Ile Gly Thr Trp Ile Gly Ala Ala Ala Glu Gly Gin
325 330 335
Val Ser Arg Gin Asn Pro Thr Gly 340 (2) Informace pro SEQ ID NO: 70:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 485 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý ío (D) Topologie: lineární
-87 CZ 300953 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 70:
Asp Asp Pro Asp Het Pro Gly Thr Val Ala Lys Ala Val Ala Asp Ala 15 10 15
Leu Gly Arg Gly Ile Ala Pro Val Glu Asp Ile Gin Asp Cys Val Glu 20 25 30
Ala Arg Leu Gly Glu Ala Gly Leu Asp Asp Val Ala Arg Val Tyr Ile 35 40 45
Ile Tyr Arg Gin Arg Arg Ala Glu Leu Arg Thr Ala Lys Ala Leu Leu 50 55 60
Gly Val Arg Asp Glu Leu Lys Leu Ser Leu Ala Ala Val Thr Val Leu
70 75 80
Arg Glu Arg Tyr Leu Leu His Asp Glu Gin Gly Arg Pro Ala Glu Ser
90 95
Thr Gly Glu Leu Het Asp Arg Ser Ala Arg Cys Val Ala Ala Ala Glu 100 105 110
Asp Gin Tyr Glu Pro Gly Ser Ser Arg Arg Trp Ala Glu Arg Phe Ala 115 120 125
Thr Leu Leu Arg Asn Leu Glu Phe Leu Pro Asn Ser Pro Thr Leu Met 130 135 140
Asn Ser Gly Thr Asp Leu Gly Leu Leu Ala Gly Cys Phe Val Leu Pro
145 150 155 160
Ile Glu Asp Ser Leu Gin Ser Ile Phe Ala Thr Leu Gly Gin Ala Ala
165 170 175
Glu Leu Gin Arg Ala Gly Gly Gly Thr Gly Tyr Ala Phe Ser His Leu 180 185 190
Arg Pro Ala Gly Asp Arg Val Ala Ser Thr Gly Gly Thr Ala Ser Gly 195 200 205
Pro Val Ser Phe Leu Arg Leu Tyr Asp Ser Ala Ala Gly Val Val Ser 210 215 220
O
CZ JUU95J BO
Met Gly Gly Arg Arg Arg Gly Ala Cys Met Ala Val Leu Asp Val Ser
225 230 235 240
His Pro Asp Ile Cys Asp Phe Val Thr Ala Lys Ala Glu Ser Pro Ser
245 250 255
Glu Leu Pro His Phe Asn Leu Ser Val Gly Val Thr Asp Ala Phe Leu 260 265 270
Arg Ala Val Glu Arg Asn Gly Leu His Arg Leu Val Asn Pro Arg Thr 275 280 285
Gly Lys Ile Val Ala Arg Met Pro Ala Ala Glu Leu Phe Asp Ala Ile 290 295 300
Cys Lys Ala Ala His Ala Gly Gly Asp Pro Gly Leu Val Phe Leu Asp
305 310 315 320
Thr Ile Asn Arg Ala Asn Pro Val Pro Gly Arg Gly Arg Ile Glu Ala
325 330 335
Thr Asn Pro Cys Gly Glu Val Pro Leu Leu Pro Tyr Glu Ser Cys Asn 340 345 350
Leu Gly Ser Ile Asn Leu Ala Arg Met Leu Ala Asp Gly Arg Val Asp 355 360 365
Trp Asp Arg Leu Glu Glu Val Ala Gly Val Ala Val Arg Phe Leu Asp 370 375 380
Asp Val Ile Asp Val Ser Arg Tyr Pro Phe Pro Glu Leu Gly Glu Ala
385 390 395 400
Ala Arg Ala Thr Arg Lys Ile Gly Leu Gly Val Met Gly Leu Ala Glu
405 410 415
Leu Leu Ala Ala Leu Gly Ile Pro Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Val Arg 420 425 430
Leu Ala Thr Arg Leu Met Arg Arg Ile Gin Gin Ala Ala His Thr Ala 435 440 445
Ser Arg Arg Leu Ala Glu Glu Arg Gly Ala Phe Pro Ala Phe Thr Asp 450 455 460
- RS .
Cl 300953 B6
Ser Arg Phe Ala Arg Ser Gly Pro Arg Arg Asn Ala Gin Val Thr Ser 465 470 475 480
Val Ala Pro Thr Gly 485 (2) Informace pro SEQ ID NO: 71:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 267 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý to (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 71:
Gly Val Ile Val Leu Asp Leu Glu Pro Arg Gly Pro Leu Pro Thr Glu 15 10 15
Ile Tyr Trp Arg Arg Arg Gly Leu Ala Leu Gly Ile Ala Val Val Val 20 25 30
Val Gly Ile Ala Val Ala Ile Val Ile Ala Phe Val Asp Ser Ser Ala 35 40 45
Gly Ala Lys Pro Val Ser Ala Asp Lys Pro Ala Ser Ala Gin Ser H1s 50 55 60
Pro Gly Ser Pro Ala Pro Gin Ala Pro Gin Pro Ala Gly Gin Thr Glu
70 75 80
Gly Asn Ala Ala Ala Ala Pro Pro Gin Gly Gin Asn Pro Glu Thr Pro
90 95
Thr Pro Thr Ala Ala Val Gin Pro Pro Pro Val Leu Lys Glu Gly Asp 100 105 110
Asp Cys Pro Asp Ser Thr Leu Ala Val Lys Gly Leu Thr Asn Ala Pro 115 120 125
Gin Tyr Tyr Val Gly Asp Gin Pro Lys Phe Thr Met Val Val Thr Asn
Ile Gly Leu Val Ser Cys Lys Arg Asp Val Gly Ala Ala Val Leu Ala
145 150 155 160
Ala Tyr Val Tyr Ser Leu Asp Asn Lys Arg Leu Trp Ser Asn Leu Asp
165 170 175
Cys Ala Pro Ser Asn Glu Thr Leu Val Lys Thr Phe Ser Pro Gly Glu 180 185 190
Gin Val Thr Thr Ala Val Thr Trp Thr Gly Met Gly Ser Ala Pro Arg 195 200 205
Cys Pro Leu Pro Arg Pro Ala Ile Gly Pro Gly Thr Tyr Asn Leu Val 210 215 220
Val Gin Leu Gly Asn Leu Arg Ser Leu Pro Val Pro Phe Ile Leu Asn
225 230 235 240
Gin Pro Pro Pro Pro Pro Gly Pro Val Pro Ala Pro Gly Pro Ala Gin
245 250 255
Ala Pro Pro Pro Glu Ser Pro Ala Gin Gly Gly 260 265 (2) Informace pro SEQ ID NO: 72:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 97 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 72:
Leu Ile Ser Thr Gly Lys Ala Ser His Ala Ser Leu Gly Val Gin Val 15 10 15
Thr Asn Asp Lys Asp Thr Pro Gly Ala Lys Ile Val Glu Val Val Ala 20 25 30 _ C-7
Gly Gly Ala Ala Ala Asn Ala Gly Val Pro Lys Gly Val Val Val Thr 35 40 45
Lys Val Asp Asp Arg Pro Ile Asn Ser Ala Asp Ala Leu Val Ala Ala 50 55 60
Val Arg Ser Lys Ala Pro Gly Ala Thr Val Ala Leu Thr Phe Gin Asp
70 75 80
Pro Ser Gly Gly Ser Arg Thr Val Gin Val Thr Leu Gly Lys Ala Glu
90 95
Gin (2) Informace pro SEQ ID NO: 73:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 364 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 73:
Gly Ala Ala Val Ser Leu Leu Ala Ala Gly Thr Leu Val Leu Thr Ala 15 10 15
Cys Gly Gly Gly Thr Asn Ser Ser Ser Ser Gly Ala Gly Gly Thr Ser 20 25 30
Gly Ser Val His Cys Gly Gly Lys Lys Glu Leu His Ser Ser Gly Ser 35 40 45
Thr Ala Gin Glu Asn Ala Met Glu Gin Phe Val Tyr Ala Tyr Val Arg 50 55 60
Ser Cys Pro Gly Tyr Thr Leu Asp Tyr Asn Ala Asn Gly Ser Gly Ala 65 70 75 80 nn
CZ 3IMI9S3 B6
Gly Val Thr Gin Phe Leu Asn Asn Glu Thr Asp Phe Ala Gly Ser Asp 85 90 95
Val Pro Leu Asn Pro Ser Thr Gly Gin Pro Asp Arg Ser Ala Glu Arg 100 105 Π0
Cys Gly Ser Pro Ala Trp Asp Leu Pro Thr Val Phe Gly Pro Ile Ala 115 120 125
Ile Thr Tyr Asn Ile Lys Gly Val Ser Thr Leu Asn Leu Asp Gly Pro 130 135 140
Thr Thr Ala Lys Ile Phe Asn Gly Thr Ile Thr Val Trp Asn Asp Pro
145 150 155 150
Gin Ile Gin Ala Leu Asn Ser Gly Thr Asp Leu Pro Pro Thr Pro Ile
155 170 175
Ser Val Ile Phe Arg Ser Aso Lys Ser Gly Thr Ser Asp Asn Phe Gin 180 ‘ 185 190
Lys Tyr Leu Asp Gly Val Ser Asn Gly Ala Trp Gly Lys Gly Ala Ser 195 200 205
Glu Thr Phe Ser Gly Gly Val Gly Val Gly Ala Ser Gly Asn Asn Gly 210 215 220
Thr Ser Ala Leu Leu Gin Thr Thr Asp Gly Ser Ile Thr Tyr Asn Glu
225 230 235 240
Trp Ser Phe Ala Val Gly Lys Gin Leu Asn Met Ala Gin Ile Ile Thr
245 250 255
Ser Ala Gly Pro Asp Pro Val Ala Ile Thr Thr Glu Ser Val Gly Lys 260 265 270
Thr Ile Ala Gly Ala Lys Ile Met Gly Gin Gly Asn Asp Leu Val Leu 275 280 285
Asp Thr Ser Ser Phe Tyr Arg Pro Thr Gin Pro G1y Ser Tyr Pro Ile 290 295 300
Val Leu Ala Thr Tyr Glu Ile Val Cys Ser Lys Tyr Pro Asp Ala Thr 305 310 315 320
-84.
Thr Gly Thr Ala Val Arg Ala Phe Met Gin Ala Ala Ile Gly Pro Gly 325 330 335
Gin Glu Gly Leu Asp Gin Tyr Gly Ser Ile Pro Leu Pro Lys Ser Phe 340 345 350
Gin Ala Lys Leu Ala Ala Ala Val Asn Ala Ile Ser 355 360 (2) Informace pro SEQ ID NO: 74:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 309 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 74:
Gin Ala Ala Ala Gly Arg Ala Val Arg Arg Thr Gly His Ala Glu Asp 15 10 15
Gin Thr His Gin Asp Arg Leu His His Gly Cys Arg Arg Ala Ala Val 20 25 30
Val Val Arg Gin Asp Arg Ala Ser Val Ser Ala Thr Ser Ala Arg Pro 35 40 45
Pro Arg Arg His Pro Ala Gin Gly His Arg Arg Arg Val Ala Pro Ser 50 55 60
Gly Gly Arg Arg Arg Pro His Pro His His Val Gin Pro Asp Asp Arg
70 75 80
Arg Asp Arg Pro Ala Leu Leu Asp Arg Thr Gin Pro Ala Glu His Pro
90 95
Asp Pro His Arg Arg Gly Pro Ala Asp Pro Gly Arg Val Arg Gly Arg 100 105 110
Gly Arg Leu Arg Arg Val Asp Asp Gly Arg Leu Gin Pro Asp Arg Asp
Ala Asp His Gly Ala Pro Val Arg Gly Arg Gly Pro His Arg Gly Val 130 135 140
Gin His Arg Gly Gly Pro Val Phe Val Arg Arg Val Pro Gly Val Arg
145 150 155 160
Cys Ala His Arg Arg Gly His Arg Arg Val Ala Ala Pro Gly Gin Gly
165 170 175
Asp Val Leu Arg Ala Gly Leu Arg Val Glu Arg Leu Arg Pro Val Ala 180 185 190
Ala Val Glu Asn Leu His Arg Gly Ser Gin Arg Ala Asp Gly Arg Val 195 200 205
Phe Arg Pro lle Arg Arg Gly Ala Arg Leu Pro Ala Arg Arg Ser Arg 210 215 220
Ala Gly Pro Gin Gly Arg Leu His Leu Asp Gly Ala Gly Pro Ser Pro
225 230 235 240
Leu Pro Ala Arg Ala Gly Gin Gin Gin Pro Ser Ser Ala Gly Gly Arg
245 250 255
Arg Ala Gly Gly Ala Glu Arg Ala Asp Pro Gly Gin Arg Gly Arg His 260 265 270
His Gin Gly Gly His Asp Pro Gly Arg Gin Gly Ala Gin Arg Gly Thr 275 280 285
Ala Gly Val Ala His Ala Ala Ala Gly Pro Arg Arg Ala Ala Val Arg 290 295 300
Asn Arg Pro Arg Arg 305 _ 01 (2) Informace pro SEQ ID NO: 75:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 580 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 75:
Ser Ala Val Trp Cys Leu Asn Gly Phe Thr Gly Arg His Arg His Gly 15 10 15
Arg Cys Arg Val Arg Ala Ser Gly Trp Arg Ser Ser Asn Arg Trp Cys 20 25 30
Ser Thr Thr Ala Asp Cys Cys Ala Ser Lys Thr Pro Thr Gin Ala Ala 35 40 45
Ser Pro Leu Glu Arg Arg Phe Thr Cys Cys Ser Pro Ala Val Gly Cys 50 55 60
Arg Phe Arg Ser Phe Pro Val Arg Arg Leu Ala Leu Gly Ala Arg Thr
70 75 80
Ser Arg Thr Leu Gly Val Arg Arg Thr Leu Ser Gin Trp Asn Leu Ser
90 95
Pro Arg Ala Gin Pro Ser Cys Ala Val Thr Val Glu Ser His Thr His 100 105 110
Ala Ser Pro Arg Het Ala Lys Leu Ala Arg Val Val Gly Leu Val Gin 115 120 125
Glu Glu Gin Pro Ser Asp Het Thr Asn His Pro Arg Tyr Ser Pro Pro 130 135 140
Pro Gin Gin Pro Gly Thr Pro Gly Tyr Ala Gin Gly Gin Gin Gin Thr
145 150 155 160
Tyr Ser Gin Gin Phe Asp Trp Arg Tyr Pro Pro Ser Pro Pro Pro G1n
165 170 175
Pro Thr Gin Tyr Arg Gin Pro Tyr Glu Ala Leu Gly Gly Thr Arg Pro 180 185 190
Gly Leu Ile Pro Gly Val Ile Pro Thr Met Thr Pro Pro Pro Gly Het 195 200 205
Val Arg Gin Arg Pro Arg Ala Gly Met Leu Ala Ile Gly Ala Val Thr 210 215 220
Ile Ala Val Val Ser Ala Gly Ile Gly Gly Ala Ala Ala Ser Leu Val
225 230 235 240
Gly Phe Asn Arg Ala Pro Ala Gly Pro Ser Gly Gly Pro Val Ala Ala
245 250 255
Ser Ala Ala Pro Ser Ile Pro Ala Ala Asn Met Pro Pro Gly Ser Val 260 265 270
Glu Gin Val Ala Ala Lys Val Val Pro Ser Val Val Met Leu Glu Thr 275 280 285
Asp Leu Gly Arg Gin Ser Glu Glu Gly Ser Gly Ile lle Leu Ser Ala 290 295 300
Glu Gly Leu Ile Leu Thr Asn Asn His Val Ile Ala Ala Ala Ala Lys
305 310 315 320
Pro Pro Leu Gly Ser Pro Pro Pro Lys Thr Thr Val Thr Phe Ser Asp
325 330 335
Gly Arg Thr Ala Pro Phe Thr Val Val Gly Ala Asp Pro Thr Ser Asp 340 345 350
Ile Ala Val Val Arg Val Gin Gly Val Ser Gly Leu Thr Pro Ile Ser 355 360 365
Leu Gly Ser Ser Ser Asp Leu Arg Val Gly Gin Pro Val Leu Ala Ile 370 375 380
Gly Ser Pro Leu Gly Leu Glu Gly Thr Val Thr Thr Gly Ile Val Ser
385 390 395 400
Ala Leu Asn Arg Pro Val Ser Thr Thr Gly Glu Ala Gly Asn Gin Asn
405 410 415
Thr Val Leu Asp Ala Ile Gin Thr Asp Ala Ala Ile Asn Pro Gly Asn 420 425 430
Ser Gly Gly Ala Leu Val Asn Met Asn Ala Gin Leu Val Gly Val Asn 435 440 445 _ ΟΊ
Ser Ala Ile Ala Thr Leu Gly Ala Asp Ser Ala Asp Ala Gin Ser Gly 450 455 460
Ser Ile Gly Leu Gly Phe Ala Ile Pro Val Asp Gin Ala Lys Arg Ile
465 470 475 480
Ala Asp Glu Leu Ile Ser Thr Gly Lys Ala Ser His Ala Ser Leu Gly
485 490 495
Val Gin Val Thr Asn Asp Lys Asp Thr Pro Gly Ala Lys Ile Val Glu 500 505 510
Val Val Ala Gly Gly Ala Ala Ala Asn Ala Gly Val Pro Lys Gly Val 515 520 525
Val Val Thr Lys Val Asp Asp Arg Pro Ile Asn Ser Ala Asp Ala Leu 530 535 540
Val Ala Ala Val Arg Ser Lys Ala Pro Gly Ala Thr Val Ala Leu Thr
545 550 555 560
Phe Gin Asp Pro Ser Gly Gly Ser Arg Thr Val Gin Val Thr Leu Gly
565 570 575
Lys Ala Glu Gin 580 (2) Informace pro SEQ ID NO: 76:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 233 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 76:
Met Asn Asp Gly Lys Arg Ala Val Thr Ser Ala Val Leu Val Val Leu 15 10 15
Gly Ala Cys Leu Ala Leu Trp Leu Ser Gly Cys Ser Ser Pro Lys Pro 20 25 30
Asp Ala Glu Glu Gin Gly Val Pro Val Ser Pro Thr Ala Ser Asp Pro 35 40 45
Ala Leu Leu Ala Glu Ile Arg Gin Ser Leu Asp Ala Thr Lys Gly Leu 50 55 60
Thr Ser Val His Vál Ala Val Arg Thr Thr Gly Lys Val Asp Ser Leu
70 75 80
Leu Gly Ile Thr Ser Ala Asp Val Asp Val Arg Ala Asn Pro Leu Ala
90 95
Ala Lys Gly Val Cys Thr Tyr Asn Asp Glu Gin Gly Val Pro Phe Arg 100 105 110
Val Gin Gly Asp Asn Ile Ser Val Lys Leu Phe Asp Asp Trp Ser Asn 115 120 125
Leu Gly Ser Ile Ser Glu Leu Ser Thr Ser Arg Val Leu Asp Pro Ala 130 135 140
Ala Gly Val Thr Gin Leu Leu Ser Gly Val Thr Asn Leu Gin Ala Gin
145 150 155 160
Gly Thr Glu Val Ile Asp Gly Ile Ser Thr Thr Lys Ile Thr Gly Thr
165 170 175
Ile Pro Ala Ser Ser Val Lys Het Leu Asp Pro Gly Ala Lys Ser Ala 180 185 190
Arg Pro Ala Thr Val Trp Ile Ala Gin Asp Gly Ser His His Leu Val 195 200 205
Arg Ala Ser Ile Asp Leu Gly Ser Gly Ser Ile Gin Leu Thr Gin Ser 210 215 220
Lys Trp Asn Glu Pro Val Asn Val Asp 225 230 (2) Informace pro SEQ ID NO: 77:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 66 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý ío (D) Topologie: lineární _ ας .
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 77:
Val Ile Asp Ile Ile Gly Thr Ser Pro Thr Ser Trp Glu Gin Ala Ala 15 10 15
Ala Glu Ala Val Gin Arg Ala Arg Asp Ser Val Asp Asp Ile Arg Val 20 25 30
Ala Arg Val Ile Glu Gin Asp Met Ala Val Asp Ser Ala Gly Lys Ile 35 40 45
Thr Tyr Arg Ile Lys Leu Glu Val Ser Phe Lys Met Arg Pro Ala Gin 50 55 60
Pro Arg 65 (2) Informace pro SEQ ID NO: 78:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 69 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina i o (C) Řetězec; jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 78:
Val Pro Pro Ala Pro Pro Leu Pro Pro Leu Pro Pro Ser Pro Ile Ser 15 10 15
Cys Ala Ser Pro Pro Ser Pro Pro Leu Pro Pro Ala Pro Pro Val Ala 20 25 30
Pro Gly Pro Pro Met Pro Pro Leu Asp Pro Trp Pro Pro Ala Pro Pro 35 40 45
Leu Pro Tyr Ser Thr Pro Pro Gly Ala Pro Leu Pro Pro Ser Pro Pro 50 55 60
Ser Pro Pro Leu Pro (2) Informace pro SEQ ID NO: 79:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 355 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 79:
Met Ser Asn Ser Arg Arg Arg Ser Leu Arg Trp Ser Trp Leu Leu Ser 15 10 15
Val Leu Ala Ala Val Gly Leu Gly Leu Ala Thr Ala Pro Ala Gin Ala 20 25 30
Ala Pro Pro Ala Leu Ser Gin Asp Arg Phe Ala Asp Phe Pro Ala Leu 35 40 45
Pro Leu Asp Pro Ser Ala Met Val Ala Gin Val Ala Pro Gin Val Val 50 55 60
Asn Ile Asn Thr Lys Leu Gly Tyr Asn Asn Ala Val Gly Ala Gly Thr
70 75 80
Gly Ile Val Ile Asp Pro Asn Gly Val Val Leu Thr Asn Asn His Val
90 95
Ile Ala Gly Ala Thr Asp Ile Asn Ala Phe Ser Val Gly Ser Gly Gin 100 105 110
-07CZ 300953 B6
Thr Tyr Gly Val Asp Val Val Gly Tyr Asp Arg Thr Gin Asp Val Ala 115 120 125
Val Leu Gin Leu Arg Gly Ala Gly Gly Leu Pro Ser Ala Ala Ile Gly 130 135 140
Gly Gly Val Ala Val Gly Glu Pro Val Val Ala Met Gly Asn Ser Gly
145 150 155 160
Gly Gin Gly Gly Thr Pro Arg Ala Val Pro Gly Arg Val Val Ala Leu
165 170 175
Gly Gin Thr Val Gin Ala Ser Asp Ser Leu Thr Gly Ala Glu Glu Thr 180 185 190
Leu Asn Gly Leu Ile Gin Phe Asp Ala Ala Ile Gin Pro Gly Asp Ser 195 200 205
Gly Gly Pro Val Val Asn Gly Leu Gly Gin Val Val Gly Met Asn Thr 210 215 220
Ala Ala Ser Asp Asn Phe Gin Leu Ser Gin Gly Gly Gin Gly Phe Ala
225 230 235 240
Ile Pro Ile Gly Gin Ala Met Ala Ile Ala Gly Gin Ile Arg Ser Gly
245 250 255
Gly Gly Ser Pro Thr Val His Ile Gly Pro Thr Ala Phe Leu Gly Leu 260 265 270
Gly Val Val Asp Asn Asn Gly Asn Gly Ala Arg Val Gin Arg Val Val 275 280 285
Gly Ser Ala Pro Ala Ala Ser Leu Gly Ile Ser Thr Gly Asp Val Ile 290 295 300
Thr Ala Val Asp Gly Ala Pro Ile Asn Ser Ala Thr Ala Met Ala Asp
305 310 315 320
Ala Leu Asn Gly His His Pro Gly Asp Val Ile Ser Val Asn Trp Gin
325 330 335
Thr Lys Ser Gly Gly Thr Arg Thr Gly Asn Val Thr Leu Ala Glu Gly 340 345 350
Pro Pro Ala 355 (2) Informace pro SEQ ID NO: 80:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 205 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 80:
Ser Pro Lys Pro Asp Ala Glu Glu Gin Gly Val Pro Val Ser Pro Thr 15 10 15
Ala Ser Asp Pro Ala Leu Leu Ala Glu Ile Arg Gin Ser Leu Asp Ala 20 25 30
Thr Lys Gly Leu Thr Ser Val His Val Ala Val Arg Thr Thr Gly Lys 35 40 45
Val Asp Ser Leu Leu Gly Ile Thr Ser Ala Asp Val Asp Val Arg Ala 50 55 60
Asn Pro Leu Ala Ala Lys Gly Val Cys Thr Tyr Asn Asp Glu Gin Gly
70 75 80
Val Pro Phe Arg Val Gin Gly Asp Asn Ile Ser Val Lys Leu Phe Asp
90 95
Asp Trp Ser Asn Leu Gly Ser Ile Ser Glu Leu Ser Thr Ser Arg Val 100 105 110
Leu Asp Pro Ala Ala Gly Val Thr Gin Leu Leu Ser Gly Val Thr Asn 115 120 125
Leu Gin Ala Gin Gly Thr Glu Val Ile Asp Gly Ile Ser Thr Thr Lys 130 135 140
Ile Thr Gly Thr Ile Pro Ala Ser Ser Val Lys Met Leu Asp Pro Gly _ ÚO
145 150 155 160
Ala Lys Ser Ala Arg Pro Ala Thr Val Trp lle Ala Gin Asp Gly Ser 16S 170 175
His His Leu Val Arg Ala Ser lle Asp Leu Gly Ser Gly Ser lle Gin 180 185 190
Leu Thr Gin Ser Lys Trp Asn Glu Pro Val Asn Val Asp 195 200 205 (2) Informace pro SEQ ID NO: 81:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 286 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 81:
Gly Asp Ser Phe Trp Ala Ala Ala Asp Gin Met Ala Arg Gly Phe Val 15 10 15
Leu Gly Ala Thr Ala Gly Arg Thr Thr Leu Thr Gly Glu Gly Leu Gin 20 25 30
His Ala Asp Gly His Ser Leu Leu Leu Asp Ala Thr Asn Pro Ala Val 35 40 45
Val Ala Tyr Asp Pro Ala Phe Ala Tyr Glu lle Gly Tyr lle Xaa Glu 50 55 60
Ser Gly Leu Ala Arg Met Cys Gly Glu Asn Pro Glu Asn lle Phe Phe
70 75 80
Tyr lle Thr Val Tyr Asn Glu Pro Tyr Val Gin Pro Pro Glu Pro Glu
90 95
Asn Phe Asp Pro Glu Gly Val Leu Gly Gly lle Tyr Arg Tyr His Ala 100 105 110
Ala Thr Glu Gin Arg Thr Asn Lys Xaa Gin Ile Leu Ala Ser Gly Val 115 120 125
Ala Met Pro Ala Ala Leu Arg Ala Ala Gin Met Leu Ala Ala Glu Trp 130 135 140
Asp Val Ala Ala Asp Val Trp Ser Val Thr Ser Trp Gly Glu Leu Asn
145 150 155 160
Arg Asp Gly Val Val Ile Glu Thr Glu Lys Leu Arg His Pro Asp Arg
165 170 175
Pro Ala Gly Val Pro Tyr Val Thr Arg Ala Leu Glu Asn Ala Arg Gly 180 185 190
Pro Val Ile Ala Val Ser Asp Trp Met Arg Ala Val Pro Glu Gin Ile 195 200 205
Arg Pro Trp Val Pro Gly Thr Tyr Leu Thr Leu Gly Thr Asp Gly Phe 210 215 220
Gly Phe Ser Asp Thr Arg Pro Ala Gly Arg Arg Tyr Phe Asn Thr Asp
225 230 235 240
Ala Glu Ser Gin Val Gly Arg Gly Phe Gly Arg Gly Trp Pro Gly Arg
245 250 255
Arg Val Asn Ile Asp Pro Phe Gly Ala Gly Arg Gly Pro Pro Ala Gin 260 265 270
Leu Pro Gly Phe Asp Glu Gly Gly Gly Leu Arg Pro Xaa Lys 275 280 285 _ mi (2) Informace pro SEQ ID NO: 82:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 173 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 82:
Thr Lys Phe His Ala Leu Met Gin Glu Gin Ile His Asn Glu Phe Thr
1 5 10 15
Ala Ala Gin Gin Tyr Val Ala Ile Ala Val Tyr Phe Asp Ser Glu Asp
20 25 30
Leu Pro Gin Leu Ala Lys His Phe Tyr Ser Gin Ala Val Glu Glu Arg
35 40 45
Asn His Ala Met Met Leu Val Gin His Leu Leu Asp Arg Asp Leu Arg
50 55 60
Val Glu Ile Pro Gly Val Asp Thr Val Arg Asn Gin Phe Asp Arg Pro
65 70 75 80
Arg Glu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Asp Gin Glu Arg Thr Val Thr Asp
90 95
Gin Val Gly Arg Leu Thr Ala Val Ala Arg Asp Glu Gly Asp Phe Leu
100 105 110
Gly Glu Gin Phe Met Gin Trp Phe Leu Gin Glu Gin Ile Glu Glu Val
115 120 125
Ala Leu Met Ala Thr Leu Val Arg Val Ala Asp Arg Ala Gly Ala Asn
130 135 140
Leu Phe Glu Leu Glu Asn Phe Val Ala Arg Glu Val Asp Val Ala Pro
145 150 155 160
Ala Ala Ser Gly Ala Pro His Ala Ala Gly Gly Arg Leu
165 170 (2) Informace pro SEQ ID NO: 83:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 107 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 83:
Arg Ala Asp Glu Arg Lys Asn Thr Thr Het Lys Met Val Lys Ser Ile 15 10 15
Ala Ala Gly Leu Thr Ala Ala Ala Ala Ile Gly Ala Ala Ala Ala Gly 20 25 30
Val Thr Ser Ile Met Ala Gly Gly Pro Val Val Tyr Gin Met Gin Pro 35 40 45
Val Val Phe Gly Ala Pro Leu Pro Leu Asp Pro Xaa Ser Ala Pro Xaa 50 55 60
Val Pro Thr Ala Ala Gin Trp Thr Xaa Leu Leu Asn Xaa Leu Xaa Asp
70 75 80
Pro Asn Val Ser Phe Xaa Asn Lys Gly Ser Leu Val Glu Gly Gly Ile
90 95
Gly Gly Xaa Glu Gly Xaa Xaa Arg Arg Xaa Gin 100 105 _ 1ΛΊ (2) Informace pro SEQ ID NO: 84:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 125 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 84:
Val Leu Ser Val Pro Val Gly Asp Gly Phe Trp Xaa Arg Val Val Asn 15 10 15
Pro Leu Gly Gin Pro Ile Asp Gly Arg Gly Asp Val Asp Ser Asp Thr 20 25 30
Arg Arg Ala Leu Glu Leu Gin Ala Pro Ser Val Val Xaa Arg Gin Gly 35 40 45
Val Lys Glu Pro Leu Xaa Thr Gly Ile Lys Ala Ile Asp Ala Met Thr 50 55 60
Pro Ile Gly Arg Gly Gin Arg Gin Leu Ile Ile Gly Asp Arg Lys Thr
70 75 80
Gly Lys Asn Arg Arg Leu Cys Arg Thr Pro Ser Ser Asn Gin Arg Glu
90 95
Glu Leu Gly Val Arg Trp Ile Pro Arg Ser Arg Cys Ala Cys Val Tyr 100 105 110
Val Gly His Arg Ala Arg Arg Gly Thr Tyr His Arg Arg 115 120 125 (2) Informace pro SEQ ID NO: 85:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 117 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 85:
Cys Asp Ala Val Met Gly Phe Leu Gly Gly Ala Gly Pro Leu Ala Val 15 10 15
Val Asp Gin Gin Leu Val Thr Arg Val Pro Gin Gly Trp Ser Phe Ala 20 25 30
Gin Ala Ala Ala Val Pro Val Val Phe Leu Thr Ala Trp Tyr Gly Leu 35 40 45
Ala Asp Leu Ala Glu Ile Lys Ala Gly Glu Ser Val Leu Ile His Ala 50 55 60
Gly Thr Gly Gly Val Gly Met Ala Ala Val Gin Leu Ala Arg Gin Trp
70 75 80
Gly Val Glu Val Phe Val Thr Ala Ser Arg Gly Lys Trp Asp Thr Leu
90 95
Arg Ala Xaa Xaa Phe Asp Asp Xaa Pro Tyr Arg Xaa Phe Pro His Xaa 100 105 110
Arg Ser Ser Xaa Gly 115 ιης .
(2) Informace pro SEQ ID NO: 86:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 103 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 86:
Met Tyr Arg Phe Ala Cys Arg Thr Leu Met Leu Ala Ala Cys Ile Leu 15 10 15
Ala Thr Gly Val Ala Gly Leu Gly Val Gly Ala Gin Ser Ala Ala Gin 20 25 30
Thr Ala Pro Val Pro Asp Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp 35 40 45
Pro Ala Trp Gly Pro Asn Trp Asp Pro Tyr Thr Cys His Asp Asp Phe 50 55 60
His Arg Asp Ser Asp Gly Pro Asp His Ser Arg Asp Tyr Pro Gly Pro
70 75 80
Ile Leu Glu Gly Pro Val Leu Asp Asp Pro Gly Ala Ala Pro Pro Pro
90 95
Pro Ala Ala Gly Gly Gly Ala 100 (2) Informace pro SEQ ID NO: 87:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 88 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 87:
Val Gin Cys Arg Val Trp Leu Glu Ile Gin Trp Arg Gly Het Leu Gly 15 10 15
Ala Asp Gin Ala Arg Ala Gly Gly Pro Ala Arg Ile Trp Arg Glu His 20 25 30
Ser Het Ala Ala Het Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala 35 40 45
Thr Lys Glu Gly Arg Gly Ile Val Met Arg Val Pro Leu Glu Gly Gly 50 55 60
Gly Arg Leu Val Val Glu Leu Thr Pro Asp Glu Ala Ala Ala Leu Gly 65 70 75 80
Asp Glu Leu Lys Gly Val Thr Ser 85 . im _
CZ 300953 Bó (2) Informace pro SEQ ID NO: 88:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 95 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 88:
Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala Gin Glu Ala Gly Asn Phe Glu Arg Ile
S 10 15
Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gin Ile Asp Gin Val Glu Ser Thr Ala Gly
25 30
Ser Leu Gin Gly Gin Trp Arg Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gin Ala 35 40 45
Ala Val Val Arg Phe Gin Glu Ala Ala Asn Lys Gin Lys Gin Glu Leu 50 55 60
Asp Glu Ile Ser Thr Asn Ile Arg Gin Ala Gly Val Gin Tyr Ser Arg 65 70 75 80
Ala Asp Glu Glu Gin Gin Gin Ala Leu Ser Ser Gin Met Gly Phe 85 90 95 (2) Informace pro SEQ ID NO: 89: is (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 166 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý
2ϋ (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 89:
Met Thr Gin Ser Gin Thr Val Thr Val Asp Gin Gin Glu Ile Leu Asn 15 10 15
Arg Ala Asn Glu Val Glu Ala Pro Met Ala Asp Pro Pro Thr Asp Val 20 25 30
Pro Ile Thr Pro Cys Glu Leu Thr Xaa Xaa Lys Asn Ala Ala Gin Gin 35 40 45
Xaa Val Leu Ser Ala Asp Asn Met Arg Glu Tyr Leu Ala Ala Gly Ala 50 55 60
CL 300953 B6
Lys Glu Arg Gin Arg Leu Ala Tbr Ser Leu Arg Asn Ala Ala Lys Xaa
70 75 80
Tyr Gly Glu Val Asp Glu Glu Ala Ala Thr Ala Leu Asp Asn Asp Gly
90 95
Glu Gly Thr Val Gin Ala Glu Ser Ala Gly Ala Val Gly Gly Asp Ser 100 105 110
Ser Ala Glu Leu Thr Asp Thr Pro Arg Val Ala Thr Ala Gly Glu Pro 115 120 125
Asn Phe Het Asp Leu Lys Glu Ala Ala Arg Lys Leu Glu Thr Gly Asp 130 135 140
Gin Gly Ala Ser Leu Ala H1s Xaa Gly Asp Gly Trp Asn Thr Xaa Thr 145 150 155 160
Leu Thr Leu Gin Gly Asp 165 (2) Informace pro SEQ ID NO: 90:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 5 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 90;
Arg Ala Glu Arg Met l 5 . mo (2) Informace pro SEQ ID NO: 91:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 263 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární lo (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 91:
Val Ala Trp Met Ser Val Thr Ala Gly Gin Ala Glu Leu Thr Ala Ala 15 10 15
Gin Val Arg Val Ala Ala Ala Ala Tyr Glu Thr Ala Tyr Gly Leu Thr 20 25 30
Val Pro Pro Pro Val Ile Ala Glu Asn Arg Ala Glu Leu Met Ile Leu 35 40 45
Ile Ala Thr Asn Leu Leu Gly Gin Asn Thr Pro Ala Ile Ala Val Asn 50 55 60
Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met Trp Ala Gin Asp Ala Ala Ala Met Phe
70 75 80
Gly Tyr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Leu Leu Pro Phe
90 95
Glu Glu Ala Pro Glu Met Thr Ser Ala Gly Gly Leu Leu Glu Gin Ala 100 105 110
Ala Ala Val Glu Glu Ala Ser Asp Thr Ala Ala Ala Asn Gin Leu Met 115 120 125
Asn Asn Val Pro Gin Ala Leu Lys Gin Leu Ala Gin Pro Thr Gin Gly 130 135 140
Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leu Gly Gly Leu Trp Lys Thr Val Ser Pro
145 150 155 160
His Arg Ser Pro Ile Ser Asn Met Val Ser Met Ala Asn Asn His Met
165 170 175
Ser Met Thr Asn Ser Gly Val Ser Met Thr Asn Thr Leu Ser Ser Met 180 185 190
Leu Lys Gly Phe Ala Pro Ala Ala Ala Ala Gin Ala Val Gin Thr Ala
195 200 205
Ala Gin Asn Gly Val Arg Ala Met Ser Ser Leu Gly Ser Ser Leu Gly 210 215 220
Ser Ser Gly Leu Gly Gly Gly Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg Ala Ala
225 230 235 240
Ser Val Arg Tyr Gly H1 s Arg Asp Gly Gly Lys Tyr Ala Xaa Ser Gly
245 250 255
Arg Arg Asn Gly Gly Pro Ala 260 (2) Informace pro SEQ ID NO: 92:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 303 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý io (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 92:
Met Thr Tyr Ser Pro Gly Asn Pro Gly Tyr Pro Gin Ala Gin Pro Ala 15 10 15
Gly Ser Tyr Gly Gly Val Thr Pro Ser Phe Ala His Ala Asp Glu Gly 20 25 30
Ala Ser Lys Leu Pro Met Tyr Leu Asn Ile Ala Val Ala Val Leu Gly 35 40 45
Leu Ala Ala Tyr Phe Ala Ser Phe Gly Pro Met Phe Thr Leu Ser Thr 50 55 60
Glu Leu Gly Gly Gly Asp Gly Ala Val Ser Gly Asp Thr Gly Leu Pro
70 75 80
Val Gly Val Ala Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Gly Val Val Leu Val
90 95
I 1 1
CZ 300953 Bé
Pro Lys Ala Lys Ser His Val Thr Val Val Ala Val Leu Gly Val Leu 100 105 110
Gly Val Phe Leu Met Val Ser Ala Thr Phe Asn Lys Pro Ser Ala Tyr 115 120 125
Ser Thr Gly Trp Ala Leu Trp Val Val Leu Ala Phe Ile Val Phe Gin 130 135 140
Ala Val Ala Ala Val Leu Ala Leu Leu Val Glu Thr Gly Ala Ile Thr
145 150 155 160
Ala Pro Ala Pro Arg Pro Lys Phe Asp Pro Tyr Gly Gin Tyr Gly Arg
165 170 175
Tyr Gly Gin Tyr Gly Gin Tyr Gly Val Gin Pro Gly Gly Tyr Tyr Gly 180 185 190
Gin Gin Gly Ala Gin Gin Ala Ala Gly Leu Gin Ser Pro Gly Pro Gin 195 200 205
Gin Ser Pro Gin Pro Pro Gly Tyr Gly Ser Gin Tyr Gly Gly Tyr Ser 210 215 220
Ser Ser Pro Ser Gin Ser Gly Ser Gly Tyr Thr Ala Gin Pro Pro Ala
225 230 235 240
Gin Pro Pro Ala Gin Ser Gly Ser Gin Gin Ser His Gin Gly Pro Ser
245 250 255
Thr Pro Pro Thr Gly Phe Pro Ser Phe Ser Pro Pro Pro Pro Val Ser 260 265 270
Ala Gly Thr Gly Ser Gin Ala Gly Ser Ala Pro Val Asn Tyr Ser Asn 275 280 285
Pro Ser Gly Gly Glu Gin Ser Ser Ser Pro Gly Gly Ala Pro Val 290 295 300 (2) Informace pro SEQ ID NO: 93:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 28 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 93:
Gly Cys Gly Glu Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala Gin Glu Ala Gly Asn 15 10 15
Phe Glu Arg Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gin Ile 20 25 (2) Informace pro SEQ ID NO: 94:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 16 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 94:
Asp Gin Val Glu Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gin Gly Gin Trp Arg Gly 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 95:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 27 aminokyselin 30 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 95:
Gly Cys Gly Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gin Gly Gin Trp Arg Gly Ala 15 10 15
Ala Gly Thr Ala Ala Gin Ala Ala Val Val Arg
-1 n _ (2) Informace pro SEQ ID NO: 96:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 27 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetézec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 96:
Gly Cys Gly Gly Thr Ala Ala Gin Ala Ala Val Val Arg Phe Gin Glu 15 10 15
Ala Ala Asn Lys Gin Lys Gin Glu Leu Asp Glu 20 25 (2) Informace pro SEQ ID NO: 97:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 27 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 97:
Gly Cys Gly Ala Asn Lys Gin Lys Gin Glu Leu Asp Glu Ile Ser Thr 15 10 15
Asn Ile Arg Gin Ala Gly Val Gin Tyr Ser Arg 20 25 (2) Informace pro SEQ ID NO: 98:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 28 aminokyselin 30 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 98:
Gly Cys Gly Ile Arg Gin Ala Gly Val Gin Tyr Ser Arg Ala Asp Glu 15 10 15
Glu Gin Gin Gin Ala Leu Ser Ser Gin Met Gly Phe 20 25 (2) Informace pro SEQ ID NO: 99:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 507 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 99:
ATGAAGATGG TGAAATCGAT CGCCGCAGGT CTGACCGCCG CGGCTGCAAT CGGCGCCGCT 60
GCGGCCGGTG TGACTCGAT CATGGCTGGC GGCCCGGTCG TATACCAGAT GCAGCCGGTC 120
GTCTTCGGCG CGCCACTGCC GTTGGACCCG GCATCCGCCC CTGACGTCCC GACCGCCGCC 180
CAGTTGACCA GCCTGCTCAA CAGCCTCGCC GATCCCAACG TGTCGTTTGC GAACAAGGGC 240
AGTCTGGTCG AGGGCGGCAT CGGGGGCACC GAGGCGCGCA TCGCCGACCA CAAGCTGAAG 300
AAGGCCGCCG AGCACGGGGA TCTGCCGCTG TCGTTCAGCG TGACGAACAT CCAGCCGGCG 360
GCCGCCGGTT CGGCCACCGC CGACGTTTCC GTCTCGGGTC CGAAGCTCTC GTCGCCGGTC 420
ACGCAGAACG TCACGTTCGT GAATCAAGGC GGCTSGATGC TGTCACGCGC ATCGGCGATG 480
GAGTTGCTGC AGGCCGCAGG GAACTGA 507 _ i i ς (2) Informace pro SEQ ID NO: 100:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 168 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 100:
Met Lys Met Val Lys Ser lle Ala Ala Gly Leu Thr Ala Ala Ala Ala 15 10 15 lle Gly Ala Ala Ala Ala Gly Val Thr Ser lle Met Ala Gly Gly Pro 20 25 30
Val Val Tyr Gin Met Gin Pro Val Val Phe Gly Ala Pro Leu Pro Leu 35 40 45
Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gin Leu Thr Ser 50 55 60
Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala Asn Lys Gly
70 75 80
Ser Leu Val Glu Gly Gly lle Gly Gly Thr Glu Ala Arg lle Ala Asp
90 95
His Lys Leu Lys Lys Ala Ala Glu His Gly Asp Leu Pro Leu Ser Phe 100 105 110
Ser Val Thr Asn lle Gin Pro Ala Ala Ala Gly Ser Ala Thr Ala Asp 115 120 125
Val Ser Val Ser Gly Pro Lys Leu Ser Ser Pro Val Thr Gin Asn Val 130 135 140
Thr Phe Val Asn Gin Gly Gly Trp Met Leu Ser Arg Ala Ser Ala Met 145 150 155 160
Glu Leu Leu Gin Ala Ala Gly Asn 165 (2) Informace pro SEQ ID NO: 101: (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 500 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 101:
CGTGGCAATG TCGTTGACCG TCGGGGCCGG GGTCGCCTCC GCAGATCCCG TGGACGCGGT 60
CATTAACACC ACCTGCAATT ACGGGCAGGT AGTAGCTGCG CTCAACGCGA CGGATCCGGG 120
GGCTGCCGCA CAGTTCAACG CCTCACCGGT GGCGCAGTCC TATTTGCGCA ATTTCCTCGC 180
CGCACCGCCA CCTCAGCGCG CTGCCATGGC CGCGCAATTG CAAGCTGTGC CGGGGGCGGC 240
ACAGTACATC GGCCTTGTCG AGTCGGTTCC CGGCTCCTGC AACAACTATT AAGCCCATGC 300
GGGCCCCATC CCGCGACCCG GCATCGTCGC CGGGGCTAGG CCAGATTGCC CCGCTCCTCA 360
ACGGGCCGCA TCCCGCGACC CGGCATCGTC GCCGGGGCTA GGCCAGATTG CCCCGCTCCT 420
CAACGGGCCG CATCTCGTGC CGAATTCCTC CAGCCCGGGG GATCCACTAG TTCTAGAGCG 480
GCCGCCACCG CGGTGGAGCT 500 (2) Informace pro SEQ ID NO: 102:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 96 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 102:
Val Ala Met Ser Leu Thr Val Gly Ala Gly Val Ala Ser Ala Asp Pro 15 10 15
Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gin Val Val Ala 20 25 30
Ala Leu Asn Ala Thr Asp Pro Gly Ala Ala Ala Gin Phe Asn Ala Ser 35 40 45
Pro Val Ala Gin Ser Tyr Leu Arg Asn Phe Leu Ala Ala Pro Pro Pro 50 55 60
Gin Arg Ala Ala Met Ala Ala Gin Leu Gin Ala Val Pro Gly Ala Ala
70 75 80
Gin Tyr Ile Gly Leu Val Glu Ser Val Ala Gly Ser Cys Asn Asn Tyr
90 95 _ 1 I 7 (2) Informace pro SEQ ID NO: 103:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 154 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 103:
ATGACAGAGC AGCAGTGGAA TTTCGCGGGT ATCGAGGCCG CGGCAAGCGC AATCCAGGGA
AATGTCACGT CCATTCATTC CCTCCTTGAC GAGGGGAAGC AGTCCCTGAC CAAGCTCGCA
GCGGCCTGGG GCGGTAGCGG TTCGGAAGCG TACC
120
154 (2) Informace pro SEQ ID NO: 104:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 51 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 104:
Met Thr Glu Gin Gin Trp Asn Phe Ala Gly Ile Glu Ala Ala Ala Ser 15 10 15
Ala Ile Gin Gly Asn Val Thr Ser Ile His Ser Leu Leu Asp Glu Gly 20 25 30
Lys Gin Ser Leu Thr Lys Leu Ala Ala Ala Trp Gly Gly Ser Gly Ser 35 40 45
Glu Ala Tyr 50 (2) Informace pro SEQ ID NO: 105: (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 282 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 105:
CGGTCGCGCA CTTCCAGGTG ACTATGAAAG TCGGCTTCCG NCTGGAGGAT TCCTGAACCT 60
TCAAGCGCGG CCGATMCTG AGGTGCATCA TTAAGCGACT TTTCCAGAAC ATCCTGACGC 120
GCTCGAAACG CGGCACAGCC GACGGTGGCT CCGNCGAGGC GCTGNCTCCA AAATCCCTGA 180
GACAATTCGN CGGGGGCGCC TACMGGAAG TCGGTGCTGA ATTCGNCGNG TATCTGGTCG 240
ACCTGTGTGG TCTGNAGCCG GACGAAGCGG TGCTCGACGT CG 282 (2) Informace pro SEQ ID NO: 106:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 565 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý ío (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 106:
GTATGCGGCC ACTGAAGTCG CCAATGCGGC GGCGGCCAGC TAAGCCAGGA ACAGTCGGCA 60
CGAGAAACCA CGAGAAATAG GGACACGTAA TGGTGGATTT CGGGGCGTTA CCACCGGAGA 120
TCAACTCCGC GAGGATGTAC GCCGGCCCGG GTTCGGCCTC GCTGGTGGCC GCGGCTCAGA 180
TGTGGGACAG CGTGGCGAGT GACCTGTTTT CGGCCGCGTC GGCGTTTCAG TCGGTGGTCT 240
GGGGTCTGAC GGTGGGGTCG TGGATAGGTT CGTCGGCGGG TCTGATGGTG GCGGCGGCCT 300
CGCCGTATGT GGCGTGGATG AGCGTCACCG CGGGGCAGGC CGAGCTGACC GCCGCCCAGG 360
TCCGGGTTGC TGCGGCGGCC TACGAGACGG CGTATGGGCT GACGGTGCCC CCGCCGGTGA 420
TCGCCGAGAA CCGTGCTGAA CTGATGATTC TGATAGCGAC CAACCTCTTG GGGCAAAACA 480
CCCCGGCGAT CGCGGTCAAC GAGGCCGAAT ACGGCGAGAT GTGGGCCCAA GACGCCGCCG 540
CGATGTTTGG CTACGCĚGCG GCGACGGCGA CGGCGACGGC GACGTTGCTG CCGTTCGAGG 600 i in
AGGCGCCGGA GATGACCAGC GCGGGTGGGC TCCTCGAGCA GGCCGCCGCG GTCGAGGAGG 660
CCTCCGACAC CGCCGCGGCG AACCAGTTGA TGAACAATGT GCCCCAGGCG CTGCAACAGC 720
TGGCCCAGCC CACGCAGGGC ACCACGCCTT CTTCCAAGCT GGGTGGCCTG TGGAAGACGG 780
TCTCGCCGCA TCGGTCGCCG ATCAGCAACA TGGTGTCAAT GGCCAACAAC CACATGTCAA 840
TGACCAACTC GGGTGTGTCA ATGACCAACA CCTTGAGCTC GATGTTGAAG GGCTTTGCTC 900
CGGCGGCGGC CGCCCAGGCC GTGCAAACCG CGGCGCAAAA CGGGGTCCGG GCGATGAGCT 960
CGCTGGGCAG CTCGCTGGGT TCTTCGGGTC TGGGCGGTGG GGTGGCCGCC AACTTGGGTC 1020
GGGCGGCCTC GGTCGGTTCG TTGTCGGTGC CGCAGGCCTG GGCCGCGGCC AACCAGGCAG 1080
TCACCCCGGC GGCGCGGGCG CTGCCGCTGA CCAGCCTGAC CAGCGCCGCG GAAAGAGGGC 1140
CCGGGCAGAT GCTGGGCGGG CTGCCGGTGG GGCAGATGGG CGCCAGGGCC GGTGGTSGGC 1200
TCAGTGGTGT GCTGCGTGTT CCGCCGCGAC CCTATGTGAT GCCGCATTCT CCGGCGGCCG 1260
GCTAGGAGAG GGGGCGCAGA CTGTCGTTAT TTGACCAGTG ATCGGCGGTC TCGGTGTTTC 1320
CGCGGCCGGC TATGACAACA GTCAATGTGC ATGACAAGTT ACAGGTATTA GGTCCAGGTT 1380
CAACAAGGAG ACAGGCAACA TGGCCTCACG TTHATGACG GATCCGCACG CGATGCGGGA 1440
CATGGCGGGC CGTTTTGAAG TGCACGCCCA GACGGTGGAG GACGAGGCTC GCCGGATGTG 1500
GGCGTCCGCG CAAAACATTT CCGGTGCGGG CTGGAGTGGC ATGGCCGAGG CGACCTCGCT 1560
AGACA
1565 (2) Informace pro SEQ ID NO: 107:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 391 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 107:
Met Val Asp Phe Gly Ala Leu Pro Pro Glu Ile Asn Ser Ala Arg Met 15 10 15
Tyr Ala Gly Pro Gly Ser Ala Ser Leu Val Ala Ala Ala Gin Met Trp 20 25 30
Asp Ser Val Ala Ser Asp Leu Phe Ser Ala Ala Ser Ala Phe Gin Ser 35 40 45
Val Val Trp Gly Leu Thr Val Gly Ser Trp Ile Gly Ser Ser Ala Gly 50 55 60
Leu Met Val Ala Ala Ala Ser Pro Tyr Val Ala Trp Met Ser Val Thr 65 70 75 80
Ala Gly Gin Ala Glu Leu Thr Ala Ala Gin Val Arg Val Ala Ala Ala
85 90 95
Ala Tyr Glu Thr Ala Tyr Gly Leu Thr Val Pro Pro Pro Val Ile Ala
100 105 110
Glu Asn Arg Ala Glu Leu Het Ile Leu Ile Ala Thr Asn Leu Leu GTy
115 120 125
Gin Asn Thr Pro Ala Ile Ala Val Asn Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met
130 135 140
Trp Ala Gin Asp Ala Ala Ala Het Phe Gly Tyr Ala Ala Ala Thr Ala
145 150 155 160
Thr Ala Thr Ala Thr Leu Leu Pro Phe Glu Glu Ala Pro Glu Met Thr
165 170 175
Ser Ala Gly Gly Leu Leu Glu Gin Ala Ala Ala Val Glu Glu Ala Ser
180 185 190
_ 131
Asp Thr Ala Ala Ala Asn Gin Leu Met Asn Asn Val Pro Gin Ala Leu 195 200 205
Gin Gin Leu Ala Gin Pro Thr Gin Gly Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leu 210 215 220
Gly Gly Leu Trp Lys Thr Val Ser Pro His Arg Ser Pro Ile Ser Asn
225 230 235 240
Met Val Ser Met Ala Asn Asn His Met Ser Met Thr Asn Ser Gly Val
245 250 255
Ser Met Thr Asn Thr Leu Ser Ser Met Leu Lys Gly Phe Ala Pro Ala 260 265 270
Ala Ala Ala Gin Ala Val Gin Thr Ala Ala Gin Asn Gly Val Arg Ala 275 280 285
Met Ser Ser Leu Gly Ser Ser Leu Gly Ser Ser Gly Leu Gly Gly Gly 290 295 300
Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg Ala Ala Ser Val Gly Ser Leu Ser Val
305 310 315 320
Pro Gin Ala Trp Ala Ala Ala Asn Gin Ala Val Thr Pro Ala Ala Arg
325 330 335
Ala Leu Pro Leu Thr Ser Leu Thr Ser Ala Ala Glu Arg Gly Pro Gly 340 345 350
Gin Met Leu Gly Gly Leu Pro Val Gly Gin Met Gly Ala Arg Ala Gly 355 360 365
Gly Gly Leu Ser Gly Val Leu Arg Val Pro Pro Arg Pro Tyr Val Met 370 375 380
Pro His Ser Pro Ala Ala Gly
385 390 (2) Informace pro SEQ ID NO: 108:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 259 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární to (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 108:
ACCMCACCT TGCACTCNAT GTT6MGGGC TTAGCTCCGG CGGCG6CTCA GGCCGTGGAA 60
ACCGCGGCGG AAAACGGGGT CTGGGCAATG AGCTCGCTGG GCAGCCAGCT GGGTTCGTCG 120
CTGGGTTCTT CGGGTCTGGG CGCTGGGGTG GCCGCCAACT TGGGTCGGGC GGCCTCGGTC 180
GGTTCGTTGT CGGTGCCGCC AGCATGGGCC GCGGCCAACC AGGCGGTCAC CCCGGCGGCG 240
CGGGCGCTGC CGCTGACCA 259 (2) Informace pro SEQ ID NO: 109:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 86 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 109:
Thr Asn Thr Leu His Ser Met Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Ala Ala 15 10 15
Gin Ala Val Glu Thr Ala Ala Glu Asn Gly Val Trp Ala Met Ser Ser 20 25 30
Leu Gly Ser Gin Leu Gly Ser Ser Leu Gly Ser Ser Gly Leu Gly Ala 35 40 45
Gly Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg Ala Ala Ser Val Gly Ser Leu Ser 50 55 60
Val Pro Pro Ala Trp Ala Ala Ala Asn Gin Ala Val Thr Pro Ala Ala 65 70 75 80
Arg Ala Leu Pro Leu Thr 85 _ ni (2) Informace pro SEQ ID NO: 110:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 109 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 110:
TACTTGAGAG AATTTGACCT GTTGCCGACG TTGTTTGCTG TCCATCATTG GTGCTAGTTA 60
TGGCCGA6CG GAAGGATTAT CGAAGTGGTG GACTTCGGGG CGTTACCACC GGAGATCAAC 120
TCCGCGAGGA TGTACGCCGG CtCGGGTTCG GCCTCGCTGG TGGCCGCCGC GAAGATGTGG 180
GACAGCGTGG CGAGTGACCT GTTTTCGGCC GCGTCGGCGT TTCAGTCGGT GGTCTGGGGT 240
CTGACGACGG GATCGTGGAT AGGTTCGTCG GCGGGTCTGA TGGTGGCGGC GGCCTCGCCG 300
TATGTGGCGT GGATGAGCGT CACCGCGGGG CAGGCCGAGC TGACCGCCGC CCAGGTCCGu 360
GTTGCTGCGG CGGCCTACGA GACGGCGTAT GGGCTGACGG TGCCCCCGCC GGTGATCGCC 420
GAGAACCGTG CTGAACTGAT GATTCTGATA GCGACCAACC TCTTGGGGCA AAACACCCCG 430
GCGATCGCGG TCAACGAGGC CGAATACGGG GAGATGTGGG CCCAAGACGC CGCCGCGATG 540
TTTGGCTACG CCGCCACGGC GGCGACGGCG ACCGAGGCGT TGCTGCCGTT CGAGGACGCC 600
CCACTGATCA CCAACCCCGG CGGGCTCCTT GAGCAGGCCG TCGCGGTCGA GGAGGCCATC 660
GACACCGCCG CGGCGAACCA GTTGATGAAC AATGTGCCCC AAGCGCTGCA ACAACTGGCC 720
CAGCCCACGA AAAGCATCTG GCCGTTCGAC CAACTGAGTG AACTCTGGAA AGCCATCTCG 780
CCGCATCTGT CGCCGCTCAG CAACATCGTG TCGATGCTCA ACAACCACGT GTCGATGACC 840
MCTCGGGTG TGTCAATGGC CAGCACCTTG CACTCAATGT TGAAGGGCTT TGCTCCGGCG 900
GCGGCTCAGG CCGTGGAAAC CGCGGCGCAA AACGGGGTCC AGGCGATGAG CTCGCTGGGC 960
AGCCAGCTGG GTTCGTCGCT GGGTTCTTCG GGTCTGGGCG CTGGGGTGGC CGCCAACTTG 1020
GGTCGGGCGG CCTCGGTCGG TTCGTTGTCG GTGCCGCAGG CCTGGGCCGC GGCCAACCAG 1080
GCGGTCACCC CGGCGGCGCG GGCGCTGCC 1109 (2) Informace pro SEQ ID NO: 111:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 341 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 111:
Val Val Asp Phe Gly Ala Leu Pro Pro Glu Ile Asn Ser Ala Arg Met 15 10 15
Tyr Ala Gly Pro Gly Ser Ala Ser Leu Val Ala Ala Ala Lys Met Trp 20 25 30
Asp Ser Val Ala Ser Asp Leu Phe Ser Ala Ala Ser Ala Phe Gin Ser 35 40 45
Val Val Trp Gly Leu Thr Thr Gly Ser Trp Ile Gly Ser Ser Ala Gly 50 55 50
Leu Met Val Ala Ala Ala Ser Pro Tyr Val Ala Trp Met Ser Val Thr 7Ω 7R nn
Ala Gly Gin Ala Glu Leu Thr Ala Ala Gin Val Arg Val Ala Ala Ala 85 90 95
Ala Tyr Glu Thr Ala Tyr Gly Leu Thr Val Pro Pro Pro Val Ile Ala 100 105 110
Glu Asn Arg Ala Glu Leu Met Ile Leu Ile Ala Thr Asn Leu Leu Gly Π5 120 125
Gin Asn Thr Pro Ala Ile Ala Val Asn Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met 130 135 140
Trp Ala Gin Asp Ala Ala Ala Met Phe Gly Tyr Ala Ala Thr Ala Ala
145 150 155 160
Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Pro Phe Glu Asp Ala Pro Leu Ile Thr
165 170 175
Asn Pro Gly Gly Leu Leu Glu Gin Ala Val Ala Val Glu Glu Ala Ile 180 185 190
Asp Thr Ala Ala Ala Asn Gin Leu Met Asn Asn Val Pro Gin Ala Leu 195 200 205 nc
Cl 300953 B6
Gin Gin Leu Ala Gin Pro Thr Lys Ser Ile Trp Pro Phe Asp Gin Leu 210 215 220
Ser Glu Leu Trp Lys Ala Ile Ser Pro His Leu Ser Pro Leu Ser Asn
225 230 235 240
Ile Val Ser Het Leu Asn Asn His Val Ser Het Thr Asn Ser Gly Val
245 250 255
Ser Het Ala Ser Thr Leu His Ser Het Leu Lys Gly Phe Ala Pro Ala 260 265 270
Ala Ala Gin Ala Val Glu Thr Ala Ala Gin Asn Gly Val Gin Ala Het 275 280 285
Ser Ser Leu Gly Ser Gin Leu Gly Ser Ser Leu Gly Ser Ser Gly Leu 290 295 300
Gly Ala Gly Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg Ala Ala Ser Val Gly Ser
305 310 315 320
Leu Ser Val Pro Gin Ala Trp Ala Ala Ala Asn Gin Ala Val Thr Pro
325 330 335
Ala Ala Arg Ala Leu
340 (2) Informace pro SEQ ID NO: 112:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 1 256 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 112:
CATCGGAGGG AGTGATCACC ATGCTGTGGC ACGCAATGCC ACCGGAGNTA AATACCGCAC 60 GGCTGATGGC CGGCGCGGGT CCGGCTCCAA TGCTTGCGGC GGCCGCGGGA TGGCAGACGC 120
TTTCGGCGGC TCTGGACGCT CAGGCCGTCG AGnGACCGC GCGCCTGAAC TCTCTGGGAG 180
AAGCCTGGAC TGGAGGTGGC AGCGACAAGG CGCTTGCGGC TGCAACGCCG ATGGTGGTCT 240
GGCTACAAAC CGCGTCAACA CAGGCCAAGA CCCGTGCGAT GCAGGCGACG GCGCAAGCCG 300
CGGCATACAC CCAGGCCATG GCCACGACGC CGTCGCTGCC GGAGATCGCC GCCAACCACA 360
TCACCCAGGC CGTCCTTACG GCCACCAACT TCTTCGGTAT CAACACGATC CCGATCGCGT 420
TGACCGAGAT GGATTATTTC ATCCGTATGT GGAACCAGGC AGCCCTGGCA ATGGAGGTCT 480
ACCAGGCCGA GACCGCGGTT AACACGCTTT TCGAGAAGCT CGAGCCGATG GCGTCGATCC 540
TTGATCCCGG CGCGAGCCAG AGCACGACGA ACCCGATCTT CGGAATGCCC TCCCCTGGCA 600
GCTCAACACC GGTTGGCCAG TTGCCGCCGG CGGCTACCCA GACCCTCGGC CAACTGGGTG 660
AGATGAGCGG CCCGATGCAG CAGCTGACCC AGCCGCTGCA GCAGGTGACG TCGTTGTTCA 720
GCCAGGTGGG CGGCACCGGC GGCGGCAACC CAGCCGACGA GGAAGCCGCG CAGATGGGCC 780
TGCTCGGCAC CAGTCCGCTG TCGAACCATC CGCTGGCTGG TGGATCAGGC CCCAGCGCGG 840
GCGCGGGCCT GCTGCGCGCG GAGTCGCTAC CTGGCGCAGG TGGGTCGTTG ACCCGCACGC 900
CGCTGATGTC TCAGCTGATC GAAAAGCCGG TTGCCCCCTC GGTGATGCCG GCGGCTGCTG 960
CCGGATCGTC GGCGACGGGT GGCGCCGCTC CGGTGGGTGC GGGAGCGATG GGCCAGGGTG 1020
CGCAATCCGG CGGCTCCACC AGGCCGGGTC TGGTCGCGCC GGCACCGCTC GCGCAGGAGC 1080
GTGAAGAAGA CGACGAGGAC GACTGGGACG AAGAGGACGA CTGGTGAGCT CCCGTAATGA 1140
CAACAGACTT CCCGGCCACC CGGGCCGGAA GACTTGCCAA CATTTTGGCG AGGAAGGTAA 1200
AGAGAGAAAG TAGTCCAGCA TGGCAGAGAT GAAGACCGAT. GCCGCTACCC TCGCGC 1256 . 177 _
Cl 300953 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 113:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 432 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární ío (xí) Popis sekvence: SEQ ID NO: 113:
CTAGTG6ATG GGACCATGGC CATTTTCTGC AGTCTCACTG CCÍTCTGTGT TGACATTTTG 60
GCACGCCGGC GGAAACGAAG CACTGGGGTC GAAGAACGGC TGCGCTGCCA TATCGTCCGG 120
AGCTTCCATA CCTTCGTGCG GCCGGAAGAG CTTGTCGTAG TCGGCCGCCA TGACAACCTC 180
TCAGAGTGCG CTCAAACGTA TAAACACGAG AAAGGGCGAG ACCGACGGAA GGTCGAACTC 240
GCCCGATCCC GTGTTTCGCT ATTCTACGCG AACTCGGCCT TGCCCTATGC GAACATCCCA 300 GTGACGTTGC CTTCGGTCGA AGCCATTGCC TGACCGGCTT CGCTGATCGT CCGCGCCAGG 360
TTCTGCAGCG CGTTGTTCAG CTCGGTAGCC GTGGCGTCCC ATTTTTGCTG GACACCCTGG 420
TACGCCTCCG AA
432 (2) Informace pro SEQ ID NO: 114:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 368 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 114:
Met Leu Trp His Ala Met Pro Pro Glu Xaa Asn Thr Ala Arg Leu Met 15 10 15
Ala Gly Ala Gly Pro Ala Pro Met Leu Ala Ala Ala Ala Gly Trp Gin 20 25 30
Thr Leu Ser Ala Ala Leu Asp Ala Gin Ala Val Glu Leu Ihr Ala Arg 35 40 45
Leu Asn Ser Leu Gly Glu Ala Trp Thr Gly Gly Gly Ser Asp Lys Ala 50 55 60
Leu Ala Ala Ala Thr Pro Met Val Val Trp Leu Gin Thr Ala Ser Thr
70 75 80
Gin Ala Lys Thr Arg Ala Met Gin Ala Thr Ala Gin Ala Ala Ala Tyr
90 95
Thr Gin Ala Met Ala Thr Thr Pro Ser Leu Pro Glu Ile Ala Ala Asn 100 105 110
His Ile Thr Gin Ala Val Leu Thr Ala Thr Asn Phe Phe Gly Ile Asn 115 120 125
Thr Ile Pro Ile Ala Leu Thr Glu Met Asp Tyr Phe Ile Arg Met Trp 130 135 140 i nn
Asn Gin Ala Ala leu Ala Met Glu Val Tyr Gin Ala Glu Thr Ala Val
145 150 155 160
Asn Thr Leu Phe Glu Lys Leu Glu Pro Met Ala Ser Ile Leu Asp Pro
165 170 17:5
Gly Ala Ser Gin Ser Thr Thr Asn Pro Ile Phe Gly Met Pro Ser Pro 180 185 WO
Gly Ser Ser Thr Pro Val Gly Gin Leu Pro Pro Ala Ala Thr Gin Thr 195 200 205
Leu Gly Gin Leu Gly Glu Met Ser Gly Pro Met Gin Gin Leu Thr Gin 210 215 220
Pro Leu Gin Gin Val Thr Ser Leu Phe Ser Gin Val Gly Gly Thr Gly
225 230 235 240
Gly Gly Asn Pro Ala Asp Glu Glu Ala Ala Gin Met Gly Leu Leu Gly
245 250 255
Thr Ser Pro Leu Ser Asn His Pro Leu Ala Gly Gly Ser Gly Pro Ser 260 265 270
Ala Gly Ala Gly Leu Leu Arg Ala Glu Ser Leu Pro Gly Ala Gly Gly 275 280 285
Ser Leu Thr Arg Thr Pro Leu Met Ser Gin Leu Ile Glu Lys Pro Val
290 295 300
Ala Pro Ser Val Met Pro Ala Ala Ala Ala Gly Ser Ser Ala Thr Gly
305 310 315 320
Gly Ala Ala Pro Val Gly Ala Gly Ala Met Gly Gin Gly Ala Gin Ser
325 330 335
Gly Gly Ser Thr Arg Pro Gly Leu Val Ala Pro Ala Pro Leu Ala Gin
340 345 350
Glu Arg Glu Glu Asp Asp Glu Asp Asp Trp Asp Glu Glu Asp Asp Trp 355 360 365
CZ 300953 B<5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 115:
(í) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 115:
Met Ala Glu Met Lys Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 116:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 396 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 116:
GATCTCCGGC GACCTGAAAA CCCAGATCGA CCAGGTGGAG TCGACQGCAG GTTCGTTGCA 60
GGGCCAGTGG CGCGGCGCGG CGGGGACGGC CGCCCAGGCC GCGGTGGTGC GCTTCCAAGA 120
AGCAGCCAAT AAGCAGAAGC AGGAACTCGA CGAGATCTCG ACGAATATTC GTCAGGCCGG 180
CGTCCAATAC TCGAGGGCCG ACGAGGAGCA GCAGCAGGCG CTGTCCTCGC AAATGGGCTT 240
CTGACCCGCT AATACGAAAA GAAACGGAGC AAAAACATGA CAGAGCAGCA GTGGAATTTC 300
GCGGGTATCG AGGCCGCGGC AAGCGCAATC CAGGGAAATG TCACGTCCAT TCATTCCCTC 360
CTTGACGAGG GGAAGCAGTC CCTGACCAAG CTCGCA 396 (2) Informace pro SEQ ID NO: 117:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: SO aminokyselin 30 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární
Ί 1 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 117:
Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gin Ile Asp Gin Val Glu Ser Thr Ala 15 10 15
Gly Ser Leu Gin Gly Gin Trp Arg Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gin 20 25 30
Ala Ala Val Val Arg Phe Gin Glu Ala Ala Asn Lys Gin Lys Gin Glu 35 40 45
Leu Asp Glu Ile Ser Thr Asn Ile Arg Gin Ala Gly Val Gin Tyr Ser 50 55 60
Arg Ala Asp Glu Glu Gin Gin Gin Ala Leu Ser Ser Gin Met Gly Phe 65 70 75 80 (2) Informace pro SEQ ID NO: 118:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 387 párů bází 10 (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 118:
GTGGATCCCG ATCCCGTGTT TCGCTATTCT ACGCGAACTC GGCGTTGCCC TATGCGAACA 60
TCCCAGTGAC GTTGCCTTCG GTCGAAGCCA TTGCCTGACC GGCTTCGCTG ATCGTCCGCG 120
CCAGGTTCTG CAGCGCGTTG TTCAGCTCGG TAGCCGTGGC GTCCCATTTT TGCTGGACAC 180
CCTGGTACGC CTCCGAACCG CTACCGCCCC AGGCCGCTGC GAGCTTGGTC AGGGACTGCT 240
TCCCCTCGTC AAGGAGGGAA TGAATGGACG TGACATTTCC CTGGATTGCG CTTGCCGCGG 300
CCTCGATACC CGCGAAATTC CACTCCTGCT CTGTCATGTT TTTGCTCCGT TTCTTTTCGT 360 |5 ATTAGCGGGT CAGAAGCCCA TTTGCGA 387 (2) Informace pro SEQ ID NO: 119:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 272 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: jednoduchý (D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 119:
CGGCACGAGG ATCTCGGnG GCCCMCGGC GCTGGCGAGG GCTCCGnCC GGGGGCGAGC 60
TGCGCGCCGG ATGCTTCCTC TGCCCGCAGC CGCGCCTGGA TGGATGGACC AGTTGCTACC 120
TTCCCGACGT TTCGITCGGT GTCTGTGCGA TAGCGGTGAC CCCGGCGCGC ACGTCGGGAG 180
TGTTGGGGGG CAGGCCGG6T CGGTGGTTCG GCCGGGGACG CAGACGGTCT GGACGGAACG 240
GGCGGGGGTT CGCCGATTGG CATCITTGCC CA 272 (2) Informace pro SEQ ID NO: 120:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 20 aminokyselin io (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 120:
Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gin Val 15 10 15
Val Ala Ala Leu (2) Informace pro SEQ ID NO: 121:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 121:
Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 122: 30 (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 19 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina m CZ 300953 B6 (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 122:
Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys 15 10 15
Glu Gly Arg (2) Informace pro SEQ ID NO: 123:
(i) Charakteristika sekvence: io (A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 123:
Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 124:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 14 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 124:
Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gin Gin Xaa Ala Val 1 5 10 jo (2) Informace pro SEQ ID NO: 125:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 13 aminokyselin 35 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 125:
Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 126:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 17 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární io (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 126:
Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro 15 10 15
Ser (2) Informace pro SEQ ID NO: 127:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 127:
Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 128:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 30 aminokyselin 30 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 128:
Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gin Leu Thr Ser 15 10 15
Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala Asn 20 25 30 (2) Informace pro SEQ ID NO: 129: (i) Charakteristika sekvence:
Ί C (A) Délka: 22 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 129:
Asp Pro Pro Asp Pro His Gin Xaa Asp Met Thr Lys Gly Tyr Tyr Pro 15 io 15
Gly Gly Arg Arg Xaa Phe 20 (2) Informace pro SEQ ID NO: 130:
io (i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 7 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 130:
Asp Pro Gly Tyr Thr Pro Gly 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 131:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 10 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (ix) Vlastnosti;
(D) Jiné informace: /poznámka = „Druhý zbytek může být buď Pro, nebo Thr“ (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 131:
Xaa Xaa Gly Phe Thr Gly Pro Gin Phe Tyr 1 5 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 132:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (ix) Vlastnosti:
(D) Jiné informace: /poznámka = „Třetí zbytek může být buď Gin, nebo Leu“ (xí) Popis sekvence: SEQ ID NO: 132:
Xaa Pro Xaa Val Thr Ala Tyr Ala Gly 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 133:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 133:
Xaa Xaa Xaa Glu Lys Pro Phe Leu Arg 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 134:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 134:
Xaa Asp Ser Glu Lys Ser Ala Thr Ile Lys Val Thr Asp Ala Ser 15 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 135:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin 40 (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 135:
Ala Gly Asp Thr Xaa Ile Tyr Ile Val Gly Asn Leu Thr Ala Asp
- 1 ΊΊ _ (2) Informace pro SEQ ID NO: 136:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 15 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 136:
Ala Pro Glu Ser Gly Ala Gly Leu Gly Gly Thr Val Gin Ala Gly 1 5 10 15 (2) Informace pro SEQ ID NO: 137:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 21 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (C) Řetězec:
(D) Topologie: lineární (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 137:
Xaa Tyr Ile Ala Tyr Xaa Thr Thr Ala Gly Ile Val Pro Gly Lys Ile 15 10 15
Asn Val His Leu Val

Claims (15)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Polypeptid obsahující (í) aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 88;
    (ii) imunogenní část aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88;
    (iii) variantu aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88, která se liší pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích,
  2. 2. Polypeptid podle nároku 1, obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 88.
  3. 3. Polypeptid podle nároku 2, sestávající z aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88.
    45
  4. 4. Polypeptid podle nároku 1, obsahující imunogenní část aminokyselinové sekvence
    SEQ ID NO: 88.
  5. 5. Polypeptid podle nároku 4, obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 94,
  6. 6. Polypeptid podle nároku 4, sestávající z imunogenní části aminokyselinové sekvence 5 SEQ ID NO: 88.
  7. 7. Polypeptid podle nároku 6, sestávající z aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 94.
  8. 8. Polypeptid podle nároku 4, obsahující variantu aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88, io která se liší pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích.
  9. 9. Polypeptid podle nároku 8, sestávající z varianty aminokyselinové sekvence SEQ ID NO: 88, která se liší pouze v konzervativních substitucích a/nebo modifikacích.
    15
  10. 10. DNA molekula obsahující nukleotidovou sekvenci kódující polypeptid podle jakéhokoli z nároků 1 až 9.
  11. 11. DNA molekula podle nároku 10, obsahující nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 46.
  12. 12. DNA molekula podle nároku 11» sestávající z nukleotidové sekvence SEQ ID NO: 46.
  13. 13. Expresní vektor obsahující DNA molekulu podle jakéhokoli z nároků 10 až 12.
  14. 14. Hostitelská buňka transformovaná expresním vektorem podle nároku 13,
    25 15. Hostitelská buňka podle nároku 14, která je vybrána ze souboru sestávajícího z E. coli, kvasinek a savčích buněk.
    16. Fúsní protein obsahující polypeptid podle jakéhokoli z nároků 1 až 9.
    17. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle 30 jakéhokoli z nároků 1 až 9 a fyziologicky přijatelný nosič.
    18. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje DNA molekulu podle jakéhokoli z nároků 10 až 12 a fyziologicky přijatelný nosič.
    35 19. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje fusní protein podle nároku 16 a fyziologicky přijatelný nosič.
    20. Vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle jakéhokoli z nároků 1 až 9 a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi.
    21. Vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje DNA molekulu podle jakéhokoli z nároků 10 až 12 a nespecifický zesilovač imunitní odpovědi.
    22. Vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje fúsní protein podle nároku 16 a nespe45 cifický zesilovač imunitní odpovědi.
    23. Vakcína podle jakéhokoli z nároků 20 až 22, vyznačující se tím, že nespecifickým zesilovačem imunitní odpovědi je adjuvans.
    50 24. Použití polypeptidu podle jakéhokoli z nároků 1 až 9 pro výrobu léčiva pro léčení nebo prevenci infekce M. tuberculosis.
    25. Použití DNA molekuly podle jakéhokoli z nároků 10 až 12 pro výrobu léčiva pro léčení nebo prevenci infekce M. tuberculosis.
    1 ΊΩ
    26. Použití polypeptidu podle jakéhokoli z nároků 1 až 9 pro výrobu diagnostika pro detekci infekce M. tuberculosis.
    27. Diagnostický kit, vyznačující se tím, že obsahuje (a) polypeptid podle jakéhokoli z nároků 1 až 9 a (b) přístroj umožňující kontaktování uvedeného polypeptidu s kožními buňkami pacienta.
    ío 28. Způsob přípravy polypeptidu podle jakéhokoli z nároků laž9, vyznačující se tím, že obsahuje kroky:
    (a) insertování DNA sekvence, která kóduje uvedený polypeptid, do expresního vektoru;
  15. 15 (b) transformování nebo transfekovaní vhodné hostitelské buňky tímto expresním vektorem; a (c) exprimování polypeptidu v uvedené hostitelské buňce.
CZ20090166A 1995-09-01 1996-08-30 Polypeptid, farmaceutický prostredek a vakcína s jeho obsahem, zpusob prípravy a použití polypeptidu, DNA molekula a její použití, expresní vektor, hostitelská bunka, fúsní protein a diagnostický kit CZ300953B6 (cs)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US52343695A 1995-09-01 1995-09-01
US53363495A 1995-09-22 1995-09-22
US62087496A 1996-03-22 1996-03-22
US65968396A 1996-06-05 1996-06-05
US68057496A 1996-07-12 1996-07-12

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ300953B6 true CZ300953B6 (cs) 2009-09-23

Family

ID=27541835

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0062898A CZ297406B6 (cs) 1995-09-01 1996-08-30 Polypeptid, DNA molekula, fúzní protein, farmaceutický prostredek a vakcína s jejich obsahem, expresní vektor, hostitelská bunka, prostredek pro detekci a diagnostický kit
CZ20090166A CZ300953B6 (cs) 1995-09-01 1996-08-30 Polypeptid, farmaceutický prostredek a vakcína s jeho obsahem, zpusob prípravy a použití polypeptidu, DNA molekula a její použití, expresní vektor, hostitelská bunka, fúsní protein a diagnostický kit
CZ20060387A CZ300688B6 (cs) 1995-09-01 1996-08-30 Polypeptid, farmaceutický prostredek a vakcína s jeho obsahem, zpusob prípravy a použití polypeptidu, molekula rekombinantní DNA a její použití, expresní vektor, hostitelská bunka, fúsní porotein a diagnostický kit

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0062898A CZ297406B6 (cs) 1995-09-01 1996-08-30 Polypeptid, DNA molekula, fúzní protein, farmaceutický prostredek a vakcína s jejich obsahem, expresní vektor, hostitelská bunka, prostredek pro detekci a diagnostický kit

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20060387A CZ300688B6 (cs) 1995-09-01 1996-08-30 Polypeptid, farmaceutický prostredek a vakcína s jeho obsahem, zpusob prípravy a použití polypeptidu, molekula rekombinantní DNA a její použití, expresní vektor, hostitelská bunka, fúsní porotein a diagnostický kit

Country Status (24)

Country Link
EP (5) EP0851927B1 (cs)
JP (5) JP4382160B2 (cs)
KR (1) KR100433750B1 (cs)
CN (1) CN1117149C (cs)
AT (5) ATE252640T1 (cs)
AU (1) AU727602B2 (cs)
BR (2) BR9610262B1 (cs)
CA (3) CA2684425A1 (cs)
CY (2) CY2570B1 (cs)
CZ (3) CZ297406B6 (cs)
DE (4) DE69637879D1 (cs)
DK (4) DK1398379T3 (cs)
ES (4) ES2262595T3 (cs)
HK (1) HK1059282A1 (cs)
HU (2) HU227778B1 (cs)
IL (1) IL123506A (cs)
MX (1) MX9801638A (cs)
NO (4) NO324372B1 (cs)
NZ (1) NZ319377A (cs)
PL (1) PL186774B1 (cs)
PT (4) PT1203817E (cs)
SI (1) SI0851927T1 (cs)
TR (5) TR200403064T2 (cs)
WO (1) WO1997009428A2 (cs)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6991797B2 (en) 1993-07-02 2006-01-31 Statens Serum Institut M. tuberculosis antigens
US6641814B1 (en) 1997-04-02 2003-11-04 Statens Serum Institut Nucleic acids fragments and polypeptide fragments derived from M. tuberculosis
US6592877B1 (en) 1995-09-01 2003-07-15 Corixa Corporation Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
US6458366B1 (en) 1995-09-01 2002-10-01 Corixa Corporation Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis
US6290969B1 (en) 1995-09-01 2001-09-18 Corixa Corporation Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
BR9712298A (pt) * 1996-10-11 2000-10-24 Corixa Corp Polipeptìdeo, molécula de dna, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira, processo para detectar infecção por m. tuberculosis em uma amostra biológica, kit diagnóstico, anticorpos monoclonal, e, policlonal, e, proteìna de fusão
US6544522B1 (en) 1998-12-30 2003-04-08 Corixa Corporation Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis antigens and their uses
US6627198B2 (en) 1997-03-13 2003-09-30 Corixa Corporation Fusion proteins of Mycobacterium tuberculosis antigens and their uses
US6350456B1 (en) 1997-03-13 2002-02-26 Corixa Corporation Compositions and methods for the prevention and treatment of M. tuberculosis infection
US6982085B2 (en) 1997-04-02 2006-01-03 Statens Serum Institut TB diagnostic based on antigens from M. tuberculosis
ES2291810T3 (es) * 1997-04-02 2008-03-01 Statens Serum Institut Fragmentos de acido nucleico y fragmentos de polpeptidos derivados de m. tuberculosis.
US7037510B2 (en) 1997-04-18 2006-05-02 Statens Serum Institut Hybrids of M. tuberculosis antigens
US6555653B2 (en) * 1997-05-20 2003-04-29 Corixa Corporation Compounds for diagnosis of tuberculosis and methods for their use
US6613881B1 (en) * 1997-05-20 2003-09-02 Corixa Corporation Compounds for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis and methods of their use
WO1999004005A1 (en) * 1997-07-16 1999-01-28 Institut Pasteur A polynucleotide functionally coding for the lhp protein from mycobacterium tuberculosis, its biologically active derivative fragments, as well as methods using the same
AU750173B2 (en) * 1997-11-10 2002-07-11 Statens Serum Institut Nucleic acid fragments and polypeptide fragments derived from M. tuberculosis
EP1484405A1 (en) * 1997-11-10 2004-12-08 Statens Serum Institut Nucleic acid fragments and polypeptide fragments derived from M. Tuberculosis
TR200002938T2 (tr) * 1998-04-07 2001-02-21 Corixa Corporation Mikrobakteri tüberküloz antijenlerinin füzyon proteinleri ve bunların kullanımı
GB9808720D0 (en) * 1998-04-23 1998-06-24 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
WO2000026248A2 (en) * 1998-11-04 2000-05-11 Isis Innovation Limited Tuberculosis diagnostic test
US6465633B1 (en) 1998-12-24 2002-10-15 Corixa Corporation Compositions and methods of their use in the treatment, prevention and diagnosis of tuberculosis
AU2594500A (en) * 1998-12-24 2000-07-31 Corixa Corporation Methods for using mycobacterium tuberculosis molecules as immunological adjuvants
EP2087906A1 (en) 1999-05-04 2009-08-12 The University of Medicine and Dentistry of New Jersey Proteins expressed by Mycobacterium tuberculosis and not by BCG and their use as diagnostic reagents and vaccines
US7009042B1 (en) * 1999-10-07 2006-03-07 Corixa Corporation Methods of using a Mycobacterium tuberculosis coding sequence to facilitate stable and high yield expression of the heterologous proteins
US6316205B1 (en) 2000-01-28 2001-11-13 Genelabs Diagnostics Pte Ltd. Assay devices and methods of analyte detection
AU2001241738A1 (en) 2000-02-25 2001-09-03 Corixa Corporation Compounds and methods for diagnosis and immunotherapy of tuberculosis
AU6867801A (en) 2000-06-20 2002-01-02 Corixa Corp Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis
WO2003070187A2 (en) 2002-02-15 2003-08-28 Corixa Corporation Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis
ITRM20040091A1 (it) 2004-02-19 2004-05-19 Istituto Naz Per Le Malattie Test immunologico rapido per la diagnosi ed il monitoraggio dell'infezione tubercolare.
FI119445B (fi) * 2004-10-29 2008-11-14 Waertsilae Finland Oy Polttomoottorin polttoaineen syöttöjärjestelmän paineen värähtelyn vaimennin
WO2006053871A2 (en) 2004-11-16 2006-05-26 Crucell Holland B.V. Multivalent vaccines comprising recombinant viral vectors
CA2821389C (en) 2005-04-29 2015-11-17 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Novel method for preventing or treating m tuberculosis infection
FR2952058B1 (fr) 2009-10-29 2013-10-04 Centre Nat Rech Scient Procede de ligation native de polypeptides
MX2012008790A (es) 2010-01-27 2012-08-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Antigenos de tuberculosis modificados.
KR20140029376A (ko) 2010-12-14 2014-03-10 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 미코박테리움 항원성 조성물
FR2971509B1 (fr) * 2011-02-16 2013-02-22 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de peptides par assemblage de multiples fragments peptidiques
CN103290030A (zh) * 2012-02-23 2013-09-11 上海交通大学 一种结核分枝杆菌标志物HtdY的重组蛋白及其制备方法和临床应用
EP2844282B1 (en) * 2012-05-04 2019-06-12 Pfizer Inc Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
BR112016023040A2 (pt) * 2014-04-04 2018-01-16 Vestaron Corporation processo para aumentar a atividade ou toxicidade de um peptídeo
GB201513176D0 (en) 2015-07-27 2015-09-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel methods for inducing an immune response
FR3048286B1 (fr) * 2016-02-26 2021-01-22 Omunis Peptides immunogenes et leur utilisation
CN107304231B (zh) * 2016-04-18 2021-01-01 华中农业大学 一种结核分枝杆菌融合蛋白及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995001440A1 (en) * 1993-07-02 1995-01-12 Statens Seruminstitut Diagnostic skin test for tuberculosis
WO1995001441A1 (en) * 1993-07-02 1995-01-12 Statens Serumsinstitut Tuberculosis vaccine

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2244539A1 (en) * 1973-07-13 1975-04-18 Mitsui Pharmaceuticals Tuberculin active proteins and peptides prepn - from tubercle bacillus
FR2265402A1 (en) * 1974-03-29 1975-10-24 Mitsui Pharmaceuticals Tuberculin active proteins and peptides prepn - from tubercle bacillus
US4876089A (en) * 1984-09-06 1989-10-24 Chiron Corporation Feline leukemia virus protein vaccines
US4751180A (en) 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
US4935233A (en) 1985-12-02 1990-06-19 G. D. Searle And Company Covalently linked polypeptide cell modulators
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
US4897268A (en) 1987-08-03 1990-01-30 Southern Research Institute Drug delivery system and method of making the same
FR2677365B1 (fr) * 1991-06-07 1995-08-04 Pasteur Institut Proteines de mycobacterium et applications.
US5330754A (en) * 1992-06-29 1994-07-19 Archana Kapoor Membrane-associated immunogens of mycobacteria

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995001440A1 (en) * 1993-07-02 1995-01-12 Statens Seruminstitut Diagnostic skin test for tuberculosis
WO1995001441A1 (en) * 1993-07-02 1995-01-12 Statens Serumsinstitut Tuberculosis vaccine

Also Published As

Publication number Publication date
EP1398379A2 (en) 2004-03-17
ATE252640T1 (de) 2003-11-15
TR200901109T1 (tr) 2012-02-21
NO980883L (no) 1998-04-27
DE69636487T2 (de) 2007-05-03
EP1347055A3 (en) 2003-11-26
CN1117149C (zh) 2003-08-06
JP2001517069A (ja) 2001-10-02
NO20070621L (no) 1998-04-27
JP2009159982A (ja) 2009-07-23
EP1203817B9 (en) 2006-08-16
CZ62898A3 (cs) 1999-10-13
EP1347055B1 (en) 2009-03-18
ES2262595T3 (es) 2006-12-01
NO980883D0 (no) 1998-02-27
BR9610262A (pt) 1999-07-06
HK1059282A1 (en) 2004-06-25
NO20070619L (no) 1998-04-27
EP1712628A3 (en) 2007-05-23
SI0851927T1 (en) 2004-02-29
HU227778B1 (en) 2012-02-28
IL123506A (en) 2004-12-15
ES2271449T3 (es) 2007-04-16
EP1398379B1 (en) 2006-08-23
JP4324597B2 (ja) 2009-09-02
DE69636487D1 (de) 2006-10-05
DE69636046D1 (de) 2006-05-24
CA2684425A1 (en) 1997-03-13
IL123506A0 (en) 1998-10-30
NZ319377A (en) 2000-01-28
DE69636046T2 (de) 2006-11-23
CA2653566C (en) 2013-06-25
MX9801638A (es) 1998-05-31
HUP9900902A3 (en) 2001-03-28
EP1712628B1 (en) 2011-06-22
PT1203817E (pt) 2006-08-31
JP2006187292A (ja) 2006-07-20
EP1347055A2 (en) 2003-09-24
DE69630457D1 (de) 2003-11-27
PL325373A1 (en) 1998-07-20
DE69630457T2 (de) 2004-11-25
AU727602B2 (en) 2000-12-14
PT1398379E (pt) 2007-01-31
CZ300688B6 (cs) 2009-07-15
NO336288B1 (no) 2015-07-13
DK1347055T3 (da) 2009-06-29
CA2653566A1 (en) 1997-03-13
EP1712628A2 (en) 2006-10-18
ES2324529T3 (es) 2009-08-10
PL186774B1 (pl) 2004-02-27
EP0851927A2 (en) 1998-07-08
KR19990044347A (ko) 1999-06-25
ATE323165T1 (de) 2006-04-15
KR100433750B1 (ko) 2004-09-01
EP0851927B1 (en) 2003-10-22
EP1203817B1 (en) 2006-04-12
ES2210392T3 (es) 2004-07-01
ATE337399T1 (de) 2006-09-15
BR9612997B1 (pt) 2012-01-10
TR199800411T1 (xx) 1998-05-21
JP4324596B2 (ja) 2009-09-02
PT851927E (pt) 2004-03-31
DK1203817T3 (da) 2006-08-14
PT1347055E (pt) 2009-06-19
CA2230885A1 (en) 1997-03-13
CN1200147A (zh) 1998-11-25
DK0851927T3 (da) 2004-01-26
DE69637879D1 (de) 2009-04-30
WO1997009428A2 (en) 1997-03-13
DK1398379T3 (da) 2007-01-08
WO1997009428A3 (en) 1997-07-17
JP4382160B2 (ja) 2009-12-09
ATE426025T1 (de) 2009-04-15
EP1203817A3 (en) 2003-01-29
NO324372B1 (no) 2007-10-01
CY2612B2 (en) 2010-12-22
HUP9900902A2 (hu) 1999-07-28
CZ297406B6 (cs) 2006-12-13
HU225979B1 (en) 2008-02-28
ATE513915T1 (de) 2011-07-15
CY2570B1 (en) 2008-07-02
EP1203817A2 (en) 2002-05-08
TR200806258T2 (tr) 2008-10-21
NO20070618L (no) 1998-04-27
JP2006149406A (ja) 2006-06-15
TR200806259T2 (tr) 2008-10-21
EP1398379A3 (en) 2004-07-14
JP2007228972A (ja) 2007-09-13
BR9610262B1 (pt) 2013-11-26
AU7158696A (en) 1997-03-27
JP4324618B2 (ja) 2009-09-02
CA2230885C (en) 2010-02-02
TR200403064T2 (tr) 2005-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU727602B2 (en) Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
US6290969B1 (en) Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
US6592877B1 (en) Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
US6458366B1 (en) Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis
EP1012293B1 (en) Compounds for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis and methods of their use
SA99200488B1 (ar) تركيبات وطرق لاج والوقاية من الاصابة بعدوي بكتيريا العصيات الفطرية للدرنM.tuberculosis
US6350456B1 (en) Compositions and methods for the prevention and treatment of M. tuberculosis infection
PT2154248E (pt) Compostos e métodos para diagnóstico de tuberculose
WO1998016646A9 (en) Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
US6338852B1 (en) Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis
CZ126699A3 (cs) Polypeptid obsahující antigenní část rozpustného antigenu M. tuberculosis nebo variantu uvedeného antigenu, molekula DNA kódující tento polypeptid, expresivní vektor, hostitelská buňka, způsoby diagnostiky infekce M. tuberculosis a diagnostické kity
AU4036597A (en) Compounds and methods for treatment and diagnosis of mycobacterial infections
AU765833B2 (en) Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
MXPA99003392A (en) Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
MXPA99003393A (en) Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20160830