ES2204885T3 - Medio de cultivo para celulas de ovario de hamster chino (cho) y celulas cho adaptadas. - Google Patents

Medio de cultivo para celulas de ovario de hamster chino (cho) y celulas cho adaptadas.

Info

Publication number
ES2204885T3
ES2204885T3 ES91309596T ES91309596T ES2204885T3 ES 2204885 T3 ES2204885 T3 ES 2204885T3 ES 91309596 T ES91309596 T ES 91309596T ES 91309596 T ES91309596 T ES 91309596T ES 2204885 T3 ES2204885 T3 ES 2204885T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
cells
medium
previous
range
source
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES91309596T
Other languages
English (en)
Inventor
Michael John Keen
Nicholas Timothy Rapson
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wellcome Foundation Ltd
Original Assignee
Wellcome Foundation Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10683864&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2204885(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Wellcome Foundation Ltd filed Critical Wellcome Foundation Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2204885T3 publication Critical patent/ES2204885T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2893—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD52
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0043—Medium free of human- or animal-derived components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6456—Plasminogen activators
    • C12N9/6459—Plasminogen activators t-plasminogen activator (3.4.21.68), i.e. tPA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/32—Amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/34—Sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/36—Lipids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/38—Vitamins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/74—Undefined extracts from fungi, e.g. yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/76—Undefined extracts from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/135—Platelet-derived growth factor [PDGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/33—Insulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C12N2501/392—Sexual steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/395—Thyroid hormones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Liquid Crystal (AREA)

Abstract

UN MEDIO DE CULTIVO BIOQUIMICAMENTE DEFINIDO PARA CULTIVAR LINEAS DE CELULAS DE OVARIOS DE HAMSTER CHINOS (OHC), QUE ESTA ESENCIALMENTE LIBRE DE PROTEINAS, LIPIDOS Y CARBOHIDRATOS AISLADAS DE UNA FUENTE ANIMAL, QUE CONSTA DE AGUA, UN REGULADOR DE OSMOLATILIDAD, UN TAMPON, UNA FUENTE DE ENERGIA, AMINO ACIDOS INCLUYENDO L-GLUTAMINA, UNA FUENTE INORGANICA O DE HIERRO RECOMBINANTE, Y UN FACTOR DE CRECIMIENTO RECOMBINANTE O SINTETICO, Y OPCIONALMENTE VITAMINAS Y CO-FACTORES DE IONES DE HIERRO METALICOS; TAMBIEN CELULAS ADAPTADAS PARA CRECER EN DICHO MEDIO DE CULTIVO.

Description

Medio de cultivo para células de ovario de hámster chino (CHO) y células CHO adaptadas.
La presente invención se refiere a un medio de cultivo definido bioquímicamente para cultivar líneas de células de ovario de hámster chino (OHC) y células adaptadas para crecer en el medio de cultivo.
Las líneas de células de ovario de hámster chino (OHC) fueron cultivadas, primeramente, por Puck (J. Exp. Med. 108, 945, 1958) a partir de una biopsia de un ovario de una hembra de hámster chino. De estas células originales, varios profesionales clonaron un cierto número de sub-líneas con varias deficiencias, una de las cuales, OHC-K1, carece de prolina y es diploide por el gen de la dihidrofolato reductasa (dhfr). A partir de esta línea de células se desarrolla una línea de células OHC dhfr (OHC DUK B11), (PNAS 77, 1980, 4216-4220) que se caracteriza por la pérdida de la función dhfr como consecuencia de una mutación en un gen dhfr y la subsiguiente pérdida del otro gen. Estas células son funcionalmente dhfr^{-}. Se han obtenido, como resultado, otras sub-líneas OHC DUK que también son fenotípicamente dhfr^{-}. Las células OHC que son dhfr^{-} no pueden crecer sin precursores de nucleótidos tales como timidina, hipoxantina, o los nucleosidos equivalentes.
En dichas células OHC se han expresado diversas proteínas que incluyen el gen XGPRT E. Coli (J. Mol. App. Gen. 1981, 1, 165-175), el activador de plasminógeno tipo-tejido humano (Mol. & Cell Biol. 5, 1750-1759, 1985), el interferón inmune (\gamma) humano (PNAS 80 pp 4654-4658), y el interferón beta humano (Molecular and Cellular Biology 4, 166-172, 1984). Una línea celular OHC dhfr^{-} se transfecta con un gen producto y un gen dhfr, lo cual permite la selección de transformantes de células OHC del fenotipo dhfr^{+}. La selección se lleva a cabo cultivando las colonias en medios carentes de timidina e hipoxantina, cuya ausencia impide que crezcan las células no transformadas. Las transformantes expresan normalmente niveles bajos del gen producto en virtud de la co-integración de ambos genes transfectados. Los niveles de expresión para el gen producto se pueden incrementar por amplificación, usando metotrexato. Este fármaco es un inhibidor directo de la enzima dhfr y permite el aislamiento de las colonias resistentes, las cuales han amplificado suficientemente su numero de copias del gen dhfr como para sobrevivir bajo estas condiciones. Puesto que los genes producto y dhfr están por lo general estrechamente relacionados en los transformantes originales, hay normalmente una amplificación concomitante que da como resultado un incremento de la expresión del gen producto deseado.
Un sistema diferente de selección y amplificación se proporciona mediante el marcador genético glutamina sintetasa (o GS), el cual se describe en el documento de patente WO87/04462. Las células OCH que han sido transfectadas con éxito con el gen que codifica la enzima GS y el gen del anticuerpo deseado se pueden seleccionar cultivando colonias en medio carente de glutamina y amplificando mediante la adición de metioninsulfoximina (Msx) como se describe en la solicitud PCT publicada con el número WO87/04462.
Las células OHC diseñadas (aquellas en las cuales una línea de células OHC se transfecta con un gen producto y un gen marcador genético) crecen normalmente en medios de cultivo que contienen suero. (Referencias: J. Mol. App. Gen. 1981, 1, 165-175; Mol. & Cell Biol. 5, 1750-1759, 1985; PNAS 80 pp 4654-4658; Molecular and Cellular Biology 4, 166-172, 1984). El suero de ternera fetal (SBF) es probablemente el suero mas ampliamente utilizado para el cultivo de células de mamíferos, aunque se usan otros sueros de mamíferos. Sin embargo, el uso de suero plantea una serie de problemas. El suero es un producto caro, el cual no es fácil de conseguir en las cantidades necesarias para la producción comercial. Es también un material bioquímicamente no definido. Se sabe que el suero contiene muchos componentes mayoritarios que incluyen albúmina y transferrina y también componentes minoritarios muchos de los cuales no han sido completamente identificados ni sus acciones determinadas, así pues el suero diferirá de lote a lote necesitando, posiblemente, análisis para determinar los niveles de los diversos componentes y sus efectos sobre las células. A menudo, el suero está contaminado con microorganismos tales como virus y micoplasma, muchos de los cuales pueden ser inofensivos pero representarán un factor adicional desconocido. Este problema se ha vuelto más serio en los últimos años con la Encefalopatía Espongiforme Bovina (ESB). A pesar de las mejoras en la detección precoz, es probable que las autoridades reguladoras exijan que los productos bovinos procedan de aquellas áreas que estén libres de infecciones (ESB).
Además, la presencia de proteínas animales en el medio de cultivo puede necesitar largos procedimientos de purificación, en particular la presencia de anticuerpos bovinos en la albúmina de suero bovino (ABS), hace la purificación del anticuerpo deseado expresado por la línea de células OHC recombinante, extremadamente difícil. Es posible eliminar el anticuerpo bovino del medio antes de usarlo, pero este y los productos de análisis adicionales requeridos, aumentan en gran medida el coste global de la producción del producto. Consecuentemente, se ha investigado mucho para encontrar un medio de cultivo desprovisto de componentes de procedencia animal que apoyara el crecimiento celular, especialmente de células OHC. Desgraciadamente, los problemas relacionados con la provisión de un medio de este tipo son numerosos en sí mismos. Las células OHC no crecen fácilmente en condiciones libres de suero. Además, la separación del suero puede eliminar también esos componentes que proporcionan protección celular y actividad desintoxicante.
Mendiaz et al (in vitro Cellular & Development Biology Vol.22, No.2, 1986) describen un medio de cultivo sin suero pero que no está libre de componentes de procedencia animal, para su uso en el cultivo de células OHC K1. El medio es una modificación del medio desarrollado por Ham (Microbiology 53, 288-293, 1965), el cual se conoce como "F12 de Ham". Otros ejemplos de medios se han basado en el medio F12 de Ham como por ejemplo el divulgado en EPA390327 y EP325190. Estos medios contienen transferrina como sustitutivo del suero, pero aunque la transferrina es un derivado de procedencia animal, el medio resultante no presenta los problemas de contaminación relacionados con el uso del suero. Un problema adicional que surge con el uso de medios desprovistos de suero es el de las células OHC recombinantes de apoyo que hacen posible el crecimiento y la expresión del producto. Los medios basados en el F12 de Ham que no se suplementan con suero, generalmente no son suficientemente enriquecedores para apoyar el crecimiento completo o la expresión.
Las células OHC diseñadas son también difíciles de crecer en suspensión. Es muy deseable alcanzar el crecimiento en suspensión cuando se usan células para expresar un producto tal como un anticuerpo. Para la producción de una proteína biológica a escala comercial es preferible poder apoyar el crecimiento en fermentadores que van desde vasos de vidrio de 1 litro a tanques de acero inoxidable de muchos miles de litros. Un medio adecuado debe poder mantener las células frente a simples fuerzas procedentes de impulsores de aspas o turbinas y de efectos de barboteado (es decir, suministro de aire, oxigeno y CO_{2} en forma de burbujas directamente al medio).
La presente invención, además, proporciona un medio de cultivo bioquímicamente definido para cultivar células de OHC diseñadas, que esta esencialmente libre de proteínas, lípidos e hidratos de carbono aislados de una fuente animal, que comprende agua, un regulador de osmolalidad, un tampón, una fuerte de energía, aminoácidos que incluyen L-glutamina, una fuerte inorgánica o de hierro recombinante y un factor de crecimiento sintético o recombinante y opcionalmente iones metálicos no ferrosos, vitaminas y cofactores.
Los componentes del medio son en su mayoría inorgánicos, sintéticos o recombinantes y como tales no se obtienen directamente de ninguna fuente animal. Algunos componentes se pueden obtener de una fuente bacteriana o vegetal. Los componentes recombinantes se preparan bajo altas condiciones de pureza para minimizar el riesgo de contaminación procedente de los tejidos de partida al pasar a las células utilizadas para producir los componentes. Se pueden emplear etapas de purificación adicionales para separar las proteínas de las células. De ese modo, se puede conseguir un medio que está esencialmente libre de todas las proteínas, lípidos e hidratos de carbono aislados a partir de una fuente animal. Los medios de cultivos preferidos de la invención no contienen proteínas, lípidos e hidratos de carbono aislados a partir de una fuente animal.
Es ventajoso mantener la osmolalidad en el intervalo 200-350 mOsm preferiblemente en el intervalo 290-350 mOsm. Los reguladores de osmolalidad son generalmente sales. Aquellas que se pueden usar en el medio incluyen ClNa, ClK, NO_{3}K.
Los tampones se usan en el medio para mantener el pH en el intervalo de 6,5-7,5, lo mas preferentemente alrededor de 7,0. Los tampones de uso en el medio incluyen carbonatos tales como CO_{3}HNa; también, cloruros, sulfatos y fosfatos tales como Cl_{2}Ca.2H_{2}O, SO_{4}Mg.7H_{2}O, PO_{4}H_{2}Na.2H_{2}O, o piruvato sódico, estando tales tampones generalmente presentes en una cantidad de 50-500 mg/litro. Otros tampones, tales como el ácido N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[2-etanosulfónico] conocido también como HEPES y el ácido 3-[N-morfolino]-propanosulfónico, también conocido como MOPS, están generalmente presentes en una cantidad de 1000-10.000 mg/litro.
La fuente de energía de uso en el medio está generalmente presente en una cantidad de 1000-10.000 mg/litro y es preferiblemente un monosacárido como por ejemplo manosa, fructosa, galactosa o maltosa, más preferiblemente glucosa, particularmente D-glucosa.
Los iones metálicos no ferrosos de uso opcional en el medio incluyen magnesio, cobre y zinc; también sodio, potasio y selenio. Los iones generalmente se añaden al medio en forma de sales tales como cloruros y sulfatos. Las cantidades son normalmente similares a aquellas proporcionadas en el medio ISCOVES presentado en la Tabla 1, pero evidentemente se pueden variar.
Las vitaminas y vitaminas cofactores enzimáticos (cofactores) de uso opcional en el medio incluyen vitamina B_{6} (piridoxina), vitamina B_{12} (cianocobalamina) y vitamina K (biotina), presentes en una cantidad de 10-30 mg/litro, vitamina B_{2} (riboflavina) presente en una cantidad de 0,1-10 mg/litro y vitamina B_{1} (tiamina), nicotinamida, vitamina B_{5} (D-pentotenato cálcico), ácido fólico, i-inositol generalmente presentes en una cantidad de 0,2-0,8 mg/litro.
En el medio basal se incluye un factor lipídico como cloruro, ácido lipoico, ácido oleico, fosfatidilcolina o metil lineoleato generalmente en una cantidad de 0,05-10 mg/litro. Se pueden añadir también compuestos que participan en la producción de lípidos, por ejemplo alcoholaminas como la etanolamina.
Es preferible incluir en el medio aminoácidos adicionales seleccionados de:
1
Se prefieren las formas puestas entre paréntesis.
Los aminoácidos son preferiblemente de origen sintético. Las cantidades que normalmente se incluyen varían para cada aminoácido, pero generalmente están en el intervalo de 10-150 mg/ml. Sin embargo, la L-glutamina está presente generalmente a mucha más alta concentración, preferiblemente en el intervalo de 400-600 mg/ml.
Puede ser ventajoso incluir en el medio un indicador de pH, por ejemplo sal sódica de rojo fenol, por ejemplo a 5-50 mg/litro.
El medio A como se presenta en la Tabla 1, es un ejemplo de un medio que proporciona las cantidades preferidas de agua, regulador de osmolalidad, tampón, fuente de energía, aminoácidos, iones metálicos no ferrosos, vitaminas y cofactores como base para un medio de cultivo según la invención. Este medio no contiene hipoxantina o timidina y esta comercialmente disponible de GIBCO Ltd., Unit 4, Cowley Mill Td. Est., Uxbridge UB8 2YG. Es similar a un medio de cultivo publicado (Iscoves and Melcher (1978) J.Exp.Med. 1. 47,923), pero no contiene albúmina de suero bovino, transferrina humana pura o lecitina de soja.
TABLA 1
2
3
La modificación de Iscoves DMEM N. and Melcher (1978), J. Exp. Med. 1.47, 923.
Es preferible añadir al medio selenio (opcionalmente en forma de selenito sódico), generalmente en una cantidad de 0,01-0,2 mg/litro ó ácido L-ascórbico generalmente en una cantidad de 20-50 mg/litro, para ayudar a minimizar los efectos tóxicos potenciales de los iones férricos o ferrosos, y el oxigeno. Además, el uso de agentes quelantes como citrato o ácido etilendiaminotetracético (EDTA) o un captador de radicales libres como alfa-tocoferol (vitamina E), es ventajoso para reducir el daño causado por los radicales libres.
Se pueden añadir al medio antibióticos tales como polimixina, neomicina, penicilina o estreptomicina para prevenir la contaminación bacteriana. Estos, normalmente se incluyen en cantidades de 10.000-100.000 UI/litro.
Los factores de crecimiento que se pueden añadir al medio basal son sintéticos o recombinantes e incluyen la insulina. Se pueden incluir otros factores tales como el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), tiroxina T_{3}, trombina, interleucinas tales como IL2 y IL6, progesterona, hidrocortisona y vitamina E. Para mejorar el crecimiento de las células se puede añadir ácido fólico, vitamina B6 y vitamina B12, las cuales están involucradas en la ruta del folato.
La hormona peptídica insulina (la cual en el presente contexto incluye análogos de la misma tal como Nucellin (marca registrada de Eli Lilly) se obtiene ventajosamente por técnicas de ADN recombinante, pero no se aísla a partir de una fuente animal. Preferentemente, se añade al medio en una cantidad de 5 \mug-5 mg/litro. Nucellin es la forma de insulina preferente para usar en la invención.
La fuente de hierro que no procede de animales que se usa para complementar el medio, es preferentemente inorgánica y se presenta en una cantidad de 0,25-5 mg/litro. Los ejemplos incluyen sales ferrosas y férricas tales como citrato férrico y sulfato ferroso. Los preferidos son las sales de quelatos tales como citrato férrico y citrato de amonio férrico. No obstante, se puede usar cualquier fuente de hierro que no esté aislada a partir de una fuente animal, por ejemplo, quelantes de hierro químicos o portadores de hierro de proteínas recombinantes.
La concentración de iones férricos y ferrosos se debe controlar cuidadosamente, al poder éstos contribuir a producir superóxidos y radicales libres en el medio, los cuales pueden dañar no sólo las células en sí, sino también componentes del medio y el producto final deseado.
También es preferible añadir al medio, un componente tal como putrescina, ventajosamente como una sal tal como ClH, la cual se sabe que juega un papel en el mantenimiento de la estructura del retículo endoplásmico y que ciertas líneas de células OHC la necesitan para mantener el crecimiento. Preferentemente, la putrescina o una sal de la misma se añade en una cantidad de 0,01-1,0 mg/litro.
Hasta la fecha, los medios sin suero divulgados contienen hipoxantina o timidina. Esto puede interrumpir la presión selectiva puesta en el sistema de amplificación y selección de dhfr, como se ha descrito anteriormente. El resultado puede ser la perdida del material genético que expresa el producto y los genes dhfr. Por lo tanto, en otro aspecto de la invención se ha proporcionado un medio de cultivo para el crecimiento de células OHC dhfr^{-} de diseño según la invención, esencialmente libre de hipoxantina y/o timidina.
El medio de cultivo de la presente invención apoya el crecimiento de células OHC y cuando se complementa con un agente adecuado tal como metotrexato para el sistema dhfr, normalmente en una cantidad 0,1-5,0 \muM, (o MSX para el sistema GS), permite una presión selectiva completa que se ejerce sobre las células. Se entenderá que la hipoxantina y la timidina, a concentraciones que son insuficientes para interrumpir la selección del sistema dhfr pueden estar presentes en el medio, pero no se prefiere la presencia de estos dos precursores nucleótidos para usar en la presente invención.
En fermentadores a gran escala, las células de mamíferos son particularmente susceptibles a las simples fuerzas que provienen del barboteo de los vasos con gases y de la mezcla con el impulsor. Para minimizar la ocurrencia de daño celular es ventajoso que el medio contenga un protector celular tal como polietilenglicol, alcoholes pilivinílicos o polioles plurónicos. De estos, se prefiere el poliol F68 Pluronic (marca registrada de BASF Wyandotte Corp) ya que a diferencia de los alcoholes polivinílicos, este no es una substancia tóxica y a diferencia de los polietilenglicoles no interfiere con la purificación aguas abajo.
Además, se pueden obtener mejoras en el crecimiento de células de OHC, suplementando el medio con un péptido digerido, hidrolizados o extractos, tales como Triptona, hidrolizado de caseína, extracto de levadura, o preferentemente peptona de soja digerida con papaína. Las cantidades preferidas son de 1%-0,025% p/v, más preferentemente 0.25% p/v.
Los medios de la invención para el cultivo células OHC recombinantes son capaces de apoyar el crecimiento y la secreción del producto a partir de tales células en suspensión en fermentadores a pequeña y gran escala, en cultivos estáticos y/o agitados. El medio de cultivo según la invención es también capaz de apoyar el crecimiento de células a densidad celular alta, particularmente más de 1 x 10^{5} células/ml hasta o más de 1,5 x 10^{6} células/ml y secreción de producto de 30 mg/l hasta más de 150 mg/l. El medio según la invención es también capaz de apoyar este crecimiento y la secreción de producto en múltiples pases que duran hasta ó más de 6 meses.
El medio se prefiere para la producción de todo tipo de anticuerpos naturales y alterados. La invención, por lo tanto, incluye la producción de anticuerpos humanos en los que las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera son homólogas con esas secuencias de anticuerpos producidas por linfocitos humanos in vivo, o in vitro mediante hibridomas. También, siempre que sean anticuerpos híbridos en los cuales la cadena pesada y ligera sean homólogas a un anticuerpo natural pero estén combinadas de una manera que no ocurriría de modo natural. Por ejemplo, un anticuerpo biespecífico tiene sitios específicos de unión antigénica para más de un antígeno. La región constante del anticuerpo puede estar vinculada a una u otra de las regiones de unión antigénica ó puede proceder de un anticuerpo adicional. Los anticuerpos alterados, por ejemplo anticuerpos híbridos, tienen regiones variables de un anticuerpo y regiones constantes de otro. De ese modo, los anticuerpos híbridos pueden ser especies/híbridos de especies ó clases/híbridos de clases. Tales anticuerpos híbridos pueden tener una o más modificaciones ulteriores para mejorar la capacidad de unión antigénica o para modificar el funcionamiento efector. Los anticuerpos injertados-CDR o los humanizados se incluyen dentro de la invención, en particular Campath 1H (EP328404) (Campath es una marca registrada de The Wellcome Foundation), así como anticuerpos compuestos, en los que partes de las regiones hipervariables, además de a las CDRs, se transfieren a la estructura humana. Se pueden alterar aminoácidos adicionales en la estructura o regiones constantes de tales anticuerpos. La invención, por otro lado, incluye la producción de fragmentos Fab, los cuales son mas o menos equivalentes a las porciones ramificadas Y de las cadenas pesada y ligera; esto incluye fragmentos incompletos o fragmentos que incluyen parte de la región Fc.
En un aspecto adicional de la invención se proporciona una célula OHC de diseño adaptada para crecer en un medio según la invención. En particular una célula OHC diseñada para expresar proteínas tales como un activador de plasminógeno tisular o anticuerpos como los definidos anteriormente. En particular la invención proporciona una línea de células OHC-dhfr transfectadas con un gen que codifica una proteína biológicamente activa y un gen marcador genético dhfr, adaptado para crecer en un medio de cultivo según la invención. La proteína es preferentemente un anticuerpo según se ha definido anteriormente.
Los ingredientes del medio de cultivo se pueden añadir en cualquier orden pero es preferible añadir la fuente de hierro y por último, en el momento en que se use, tirosina, para evitar la precipitación.
Las figuras anexas son solamente para ilustración.
La Figura 1 muestra el crecimiento de C1H 3D11* 44 en WCM5 (medio sin proteína) en un fermentador de 1 litro medido como número de células/ml en más de 90 días.
La Figura 2 muestra la producción de anticuerpos a partir de células C1H 3D11* 44 en WCM5 en un fermentador de 1 litro medido como microgramos de anticuerpo/ml en más de 80 días.
Ejemplo 1 Formulación para el medio WCM4
4
Este medio no contiene hipoxantina, timidina o ácido folínico, los cuales pueden interrumpir la selección del metotrexato. El medio contiene glicina, la cual no puede interrumpir por sí misma la selección. De ese modo, este medio mantiene la selección completa por resistencia del metotrexato.
Ejemplo 2 Formulación para Medio WCM5
5
Ejemplo 3 Producción a partir de C1H3D11*44 en WCM4 y crecimiento
Las células C1H 3D11* son células CHO DUKB11 genéticamente diseñadas (Urlaub and Chasin (1980)) PNAS 77, 7 pp 4216-4220). Las células CHO DUKB11 no pueden producir dihidrofolato reductasa (dhfr). Estas células fueron diseñadas para producir un anticuerpo IgG humanizado, Campath 1H (Winter et al., Nature, 1988, 322, 323-327), usando estructuras plásmidas para expresar las cadenas ligera y pesada del anticuerpo y el dhfr de ratón. La expresión se amplifica y se mantiene usando el folato antagonista del metotrexato. Las células C1H 3D11* que crecían en una monocapa en Iscoves + 10% FBS de Flow, sin aminoácidos esenciales, metotrexato 10^{-6}M y anticuerpos, eran aproximadamente confluentes en un 90%. Estas células se separaron del plástico con tripsina/versena, se lavaron en medio Iscoves sin suplementos, se centrifugaron y se resuspendieron a 5x10^{4}/ml en medio WCM4 + 0,25% de peptona + 0,1% de polietilenglicol (PEG) 10.000 + 0,5% de suero de ternera fetal (SBF) sin metotrexato (MTX). Se prepararon tres frascos de 25 cm^{2} con 10 ml de una suspensión de células + hipoxantina (H), timidina (T) o HT. Estos frascos se incubaron a 36,5ºC en un incubador con atmósfera de CO_{2} al 5%.
Después de 6 días, los frascos se mezclaron y se añadió igual volumen de WCM4 + MTX sin peptona o PEG, y se transfirieron a un frasco de 75 cm^{2}.
Estas células se usaron para sembrar una centrífuga Technner de 500 ml, se incubaron a 36,5ºC girando a 40 rpm. Las células continuaron creciendo sin suero durante un periodo de más de 5 meses y aunque se encontró que las células necesitaban un periodo de adaptación, la velocidad de crecimiento y la viabilidad mejoraron continuamente. El tiempo de duplicación de la población se calculó que era de 73,1 horas por encima de aproximadamente 7 semanas; este disminuyó a 47,4 horas por encima de los 20 días subsiguientes, después se estabilizó. La secreción de anticuerpos permaneció alta, con niveles por encima de 60\mug/ml. Se determinó que el número de copias del gen en estas células no disminuyó, según la intensidad de banda obtenida usando el análisis de transferencia Northem.
En fermentadores, estas células producen anticuerpos por encima de 70 \mum/ml y niveles alcanzados regularmente de 100 \mum/ml o más. A estas células se las denomina C1H 3D11*44.
Ejemplo 4 Crecimiento y producción de C1H 3D11*44 en WCM5 en un fermentador de un litro
Las células C1H 3D11*44 del ejemplo 3 que han estado creciendo sin suero más de 2 meses, se transfirieron a un fermentador SGi de 1 litro con una paleta angular de acero inoxidable que giraba a 70rpm. La temperatura se ajustó a 37ºC, dO_{2} al 10% y control de pH a 7-7,2. El fermentador se sembró en el día 0 con 0,22x10^{6} células/ml en WCM4 (Ejemplo 1), con 0,1% de polietilenglicol (PEG) 10.000 y 0,25% de peptona de soja, y se gaseó al máximo con O_{2}. Las células se pasaron periódicamente usando medio fresco y una tasa de división generalmente entre 1 a 2 y 1 a 4.
Sobre el día 33 el gaseado máximo se reemplazó por un barboteo intenso, el cual se puede esperar que cause más daño físico a las células.
Del día 50 en adelante se usó WCM5 (ejemplo 2) junto con peptona y PEG en vez de WCM4.
Sobre el día 53 el PEG se remplazó por 0,1% de Pluronic F68. El crecimiento resultante y los niveles de anticuerpos alcanzados se muestran en los gráficos adjuntos (Figuras 1 y 2), y demuestran la capacidad de la invención para permitir la producción de anticuerpos sin proteínas en fermentadores, por encima de 100\mug/ml.
Ejemplo 5 Crecimiento de CHO AJ19 MCB1 en WCM4 y comparación con CHO AJ19 MCB1 crecidas en medio que contiene suero
Las células de ovario de hamster chino CHO AJ19 MCB1, obtenidas a partir de células CHO DUK, (Urlaub & Chasin PNAS, 77, 7, pp4216-4220, 1980), se diseñaron genéticamente para producir tPA bajo la selección del metotrexato. Esta línea de células se había crecido habitualmente en un fermentador como un cultivo de suspensión que utilizaba un medio de cultivo normal que consiste en medio RPMI 1640 (GIBCO), suero de bovino adulto hidrolizado con ácido (Imperial) 2,5%, Triptona 0,5%, polimicina 50 UI/ml, neomicina 20 UI/ml, metotrexato (MTX) 50nM.
Se formuló el medio WCM4, para lo cual se añadió:
46B
Peptona de soja N-Z (Sigma P1265) al 0,25% p/v, Polietilenglicol (PEG) 20.000 (Serva, Carbowax 20M) al 0,1% p/v, MTX 1uM.
46C
Extracto de levadura (Sigma Y0500) al 0,25% p/v, PEG 20.000 al 0,1% p/v, MTX 1uM. En este medio el Iscoves en CM4 se remplazó por medio RPMI 1640 (ICN FLOW).
46D
Extracto de levadura al 0,25% p/v, PEG 20.000 al 0,1% p/v, 1uM MTX.
46E
Extracto de levadura al 0.25% p/v, PEG 20.000 al 0,1% p/v, suero de ternera fetal (Imperial) al 0,25%, 1uM MTX.
Los extractos de levadura, Peptona y PEG se prepararon como soluciones al 10% p/v con agua (unidad de producción de medios de Wellcome) y se filtraron a través de un filtro desechable (Gelman, Supor Vac) de 0,2um, después se diluyeron para su empleo. Las células se incubaron a 37ºC en un incubador humidificado que contenía 5% de CO_{2}.
Las células que crecían en medio de cultivo normal se precipitaron mediante centrifugación a 1.2000g +4ºC durante 5 minutos, se lavaron en RPMI 1640 sin suplementos y se precipitaron otra vez. Luego, las células se resuspendieron a 10^{5} cel/min en medio de cultivo normal (46A) y en otros medios (46B, 46C, 46D o 46E). Se sembraron placas de 24 pocillos (pocillos de 16mm Costar) con 1ml/pocillo y se incubaron a 37ºC en un incubador que contenía 5% de CO_{2}. Sobre los días 3, 4, 5 y 6 se contó un pocillo de cada una, usando un hemocitómetro y la exclusión de azul tripan. Se recogieron dos pocillos adicionales de cada una, se mezclaron y se precipitaron a 1.200g +4ºC durante 5 minutos. El sobrenadante se separó y se guardó a -20ºC. Estas muestras se analizaron más tarde por tPA. Sobre el día 6 solamente se recogieron muestras de 46A y 46D.
Resultados Actividades específicas tPA en varias tomas en bruto
El material en bruto producido en los cinco medios diferentes se examinó utilizando un ensayo ELISA validado por control de calidad para medir las concentraciones de antígeno tPA en \mug/ml utilizando la unión a un anticuerpo policlonal frente a tPA, y un ensayo de lisis de coágulo para medir la actividad tPA en UI/ml. Las actividades específicas se calcularon a partir de estos resultados (Tabla 2).
TABLA 2
6 
\newpage
Según la tabla anterior no había cambio de la actividad específica para los cinco materiales en bruto. El rendimiento de tPA a partir de medio B, C y D sin proteínas, fue casi igual al rendimiento de tPA a partir de medio de cultivo estándar en el grupo A y E.
Ejemplo 6 Crecimiento continuo de OHC AJ19MCBI en WCM4
Se precipitaron y lavaron como en el Ejemplo 5, células OHC AJ19MCBI en WCM4 que crecían en medio de cultivo normal y se resuspendieron a 7x10^{4}/ml en 500ml de medio 46B. Estas células se transfirieron a un frasco centrifugador Techne y se incubaron, como se ha indicado anteriormente, agitando a 40rpm. Las células se contaron a varios intervalos de tiempo y subcultivaron usando el mismo medio. Se tomó una muestra para el ensayo de tPA y se trató como en el Ejemplo 5.
La actividad específica de tPA en varios subcultivos de células
Se midió la actividad específica de los sobrenadantes procedentes de diferentes niveles de pases de crecimiento de células en WCM4 con peptona y PEG 20K al 0,1%, mediante combinación de ELISA y ensayo de lisis del coagulo. Las actividades especificas de los diferentes pases de células se resumen en la Tabla 3.
(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 3
8
Durante un periodo de 48 días, de acuerdo a la tasa de división indicada anteriormente, una célula podía dividirse para dar 3,77x10^{8} células. Esto es equivalente a los 31,8 duplicados de población, con un tiempo de duplicación de 38 horas.
Los resultados de los experimentos dirigidos de los Ejemplos 5 y 6 demuestran que el medio sin suero de la presente invención es capaz de apoyar crecimientos de células y rendimientos tPA comparables a los alcanzados en los medios que contienen suero.

Claims (17)

1. Un método para cultivar células OHC recombinantes para obtener un producto, el cual comprende hacer crecer células OHC en un medio que está libre de proteínas, lípidos y carbohidratos aislados a partir de una fuente animal, que incluye transferrina y comprende
agua,
un regulador de osmolalidad para mantener la osmolalidad del medio dentro del intervalo de aproximadamente 200-350 mOsm, un tampón para mantener el pH del medio dentro del intervalo de aproximadamente 6,5-7,5
y una fuente de energía en el intervalo de 1000-10.000 mg/litro,
y además, un suplemento que comprende:
aminoácidos, incluyendo L-glutamina en el intervalo de 400-600 mg/l,
una fuente de hierro recombinante o inorgánica,
una fuente de lípidos en el intervalo de 0,05-10 mg/l
una insulina o análogo de insulina recombinante,
un potenciador del crecimiento celular que está involucrado en la ruta del folato, seleccionado a partir del grupo que consiste en ácido fólico, vitamina B6 y vitamina B12,
en el que dicho medio es capaz de sustentar tanto el crecimiento de células en suspensión a una densidad mayor de
1 x 10^{5} células/ml como la subsiguiente secreción del producto a partir de dichas células en ausencia de suero.
2. Un método según la reivindicación 1, en el que los medios comprenden además un péptido digerido, un hidrolizado o un extracto en el intervalo de 1%-0,025% p/v.
3. Un método según la reivindicación 2, en el que el péptido digerido, el hidrolizado o el extracto se seleccionan a partir del grupo que consiste en Triptona, hidroxilato de caseína, extracto de levadura o peptona de soja digerida con papaína.
4. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los medios comprenden además un factor seleccionado de uno cualquiera del grupo que consiste en PDGF, tiroxina T3, trombina, interleucinas tales como IL2 y IL6, progesterona, hidrocortisona y Vitamina E.
5. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los aminoácidos son uno o más seleccionados de:
L-Alanina
L-Arginina
L-Asparagina
Ácido L-aspártico
L-Cisteína
Ácido L-glutámico
Glicina
L-Histidina
L-Isoleucina
L-Leucina
L-Lisina
L-Metionina
L-Fenilalanina
L-Prolina
L-Serina
L-Treonina
L-Triptófano
L-Tirosina
L-Valina
6. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fuente de energía es un monosacárido.
7. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fuente de hierro recombinante o inorgánica se encuentra en el intervalo de 0,25-5 mg/l.
8. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además selenio o ácido L-ascórbico para ayudar a minimizar los efectos tóxicos potenciales de los iones ferrosos y férricos, y oxigeno.
9. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además agentes quelantes tales como citrato o ácido etilendiaminotetracético (EDTA) o un captador de radicales libres tal como \alpha-tocoferol (Vitamina E) para reducir el daño del radical libre.
10. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además antibióticos tales como polimixina, neomicina, penicilina, o estreptomicina en el intervalo de 10.000-100.000 UI/litro para prevenir la contaminación bacteriana.
11. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además putrescina o una sal de la misma en un intervalo de 0,01-1,0 mg/litro.
12. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además metotrexato.
13. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios comprenden además un protector de células seleccionado a partir del grupo que consiste en polietilenglicol, alcoholes polivinílicos o polioles plurónicos.
14. Un método según la reivindicación 13, en el que el protector celular es Pluronic poliol F68.
15. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la fuente de hierro del medio de cultivo se añade al medio de cultivo al final, para evitar la precipitación.
16. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el producto es un anticuerpo.
17. Un método según la reivindicación 16, en el que el producto es un anticuerpo anti-CDw52.
ES91309596T 1990-10-17 1991-10-17 Medio de cultivo para celulas de ovario de hamster chino (cho) y celulas cho adaptadas. Expired - Lifetime ES2204885T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9022545A GB9022545D0 (en) 1990-10-17 1990-10-17 Culture medium
GB9022545 1990-10-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2204885T3 true ES2204885T3 (es) 2004-05-01

Family

ID=10683864

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES02003143T Expired - Lifetime ES2298301T3 (es) 1990-10-17 1991-10-17 Medio de cultivo para celulas cho y celulas cho adaptadas.
ES91309596T Expired - Lifetime ES2204885T3 (es) 1990-10-17 1991-10-17 Medio de cultivo para celulas de ovario de hamster chino (cho) y celulas cho adaptadas.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES02003143T Expired - Lifetime ES2298301T3 (es) 1990-10-17 1991-10-17 Medio de cultivo para celulas cho y celulas cho adaptadas.

Country Status (13)

Country Link
US (4) US5316938A (es)
EP (3) EP1849862A3 (es)
JP (1) JP2625302B2 (es)
AT (2) ATE382680T1 (es)
AU (1) AU645615B2 (es)
CA (1) CA2053586C (es)
DE (2) DE69133303T2 (es)
DK (2) DK1221476T3 (es)
ES (2) ES2298301T3 (es)
GB (1) GB9022545D0 (es)
IE (1) IE913559A1 (es)
NZ (1) NZ240248A (es)
ZA (1) ZA918249B (es)

Families Citing this family (209)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5292655A (en) * 1990-01-29 1994-03-08 Wille Jr John J Method for the formation of a histologically-complete skin substitute
GB9022545D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
GB9022543D0 (en) * 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Antibody production
JPH0789908B2 (ja) * 1991-02-28 1995-10-04 倉敷紡績株式会社 動物細胞培養用無血清培地
DE4115722A1 (de) * 1991-05-14 1992-11-19 Boehringer Mannheim Gmbh Serumfreies medium zur kultivierung von saeugerzellen
GB9118664D0 (en) * 1991-08-30 1991-10-16 Celltech Ltd Cell culture
US6352707B1 (en) 1992-02-24 2002-03-05 Anton-Lewis Usala Transplant encapsulation in a hydrogel matrix to obscure immune recognition
US6231881B1 (en) 1992-02-24 2001-05-15 Anton-Lewis Usala Medium and matrix for long-term proliferation of cells
IL102929A (en) * 1992-08-24 1996-11-14 Interpharm Lab Ltd Serum-free medium for mammalian cells
DE4313620A1 (de) * 1993-04-26 1994-10-27 Biotechnolog Forschung Gmbh Hamsterzellinien und Verfahren zur Glykoproteingewinnung
USH1532H (en) * 1993-11-03 1996-05-07 Genetics Institute, Inc. Adaption of mammalian cell lines to high cell densities
EP0653487A1 (de) * 1993-11-07 1995-05-17 Ferruccio Dr. Messi Serum- und proteinfrei wachsende Zellen
US5856179A (en) 1994-03-10 1999-01-05 Genentech, Inc. Polypeptide production in animal cell culture
US5512477A (en) * 1994-04-21 1996-04-30 Genzyme Corporation Serum-free medium supplement
US5756341A (en) * 1994-11-10 1998-05-26 Immuno Ag Method for controlling the infectivity of viruses
US5753489A (en) * 1994-11-10 1998-05-19 Immuno Ag Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture
US5698433A (en) * 1994-11-10 1997-12-16 Immuno Ag Method for producing influenza virus and vaccine
US6146873A (en) * 1994-11-10 2000-11-14 Baxter Aktiengesellschaft Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media
US5721121A (en) * 1995-06-06 1998-02-24 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing a tumor necrosis factor receptor immunoglobulin chimeric protein
US6656466B1 (en) 1995-06-06 2003-12-02 Genetech, Inc. Human tumor necrosis factor—immunoglobulin(TNFR1-IgG1) chimera composition
US5705364A (en) * 1995-06-06 1998-01-06 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process
EP0891419A4 (en) * 1996-03-12 2000-03-01 Life Technologies Inc NUTRIENT ADDITIVE FOR HEMATOPOETIC CELL CULTURES
AU2662697A (en) * 1996-04-09 1997-10-29 Board Of Trustees Of Southern Illinois University, The A cultural medium for maintaining neural cells in ambient atmosphere
EP0953041A4 (en) 1996-08-30 2003-01-29 Life Technologies Inc SERUM-FREE CULTURAL MEDIUM FOR MAMMAL CELLS AND THEIR USE
US20040171152A1 (en) * 1996-10-10 2004-09-02 Invitrogen Corporation Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
AU4751697A (en) * 1996-10-10 1998-05-05 Douglas Danner Animal cell culture media comprising plant-derived nutrients
US6692961B1 (en) * 1996-10-11 2004-02-17 Invitrogen Corporation Defined systems for epithelial cell culture and use thereof
US20020012991A1 (en) * 1997-04-07 2002-01-31 Florence Chua Nee Ho Kit Fong Cell culture media for enhanced protein production
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
US6566118B1 (en) * 1997-09-05 2003-05-20 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
US6995006B2 (en) 1997-09-05 2006-02-07 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
WO1999057246A1 (en) * 1998-05-01 1999-11-11 Life Technologies, Inc. Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
US6528286B1 (en) * 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
US6406909B1 (en) * 1998-07-10 2002-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Serum-free medium for culturing animal cells
US7294481B1 (en) * 1999-01-05 2007-11-13 Immunex Corporation Method for producing recombinant proteins
ES2568899T3 (es) 1999-04-09 2016-05-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
US20060286668A1 (en) * 1999-04-30 2006-12-21 Invitrogen Corporation Animal-cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
AT409379B (de) * 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
PE20010288A1 (es) 1999-07-02 2001-03-07 Hoffmann La Roche Derivados de eritropoyetina
AU780810B2 (en) * 1999-08-05 2005-04-21 Baxalta GmbH Recombinant stable cell clone, its production and use thereof
JP4668498B2 (ja) * 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
KR20010056451A (ko) * 1999-12-15 2001-07-04 윤재승 아르기닌이 강화된 동물세포 배양용 배지 조성물
US6811776B2 (en) 2000-12-27 2004-11-02 The Regents Of The University Of Michigan Process for ex vivo formation of mammalian bone and uses thereof
US20020099183A1 (en) * 2000-08-23 2002-07-25 Pluschkell Stefanie Beate Process for the preparation of neutrophil inhibitory factor
WO2002016584A2 (en) * 2000-08-23 2002-02-28 Pfizer Products Inc. Process for the preparation of neutrophil inhibitory factor
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
CA2431964C (en) 2000-12-20 2013-09-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugates of erythropoietin (pep) with polyethylene glycol (peg)
US6506576B2 (en) 2001-03-14 2003-01-14 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Serum-and steroid-free culture media for cerebellar granule neurons
EP1453948A2 (en) * 2001-11-28 2004-09-08 Sandoz Gmbh Cell culture process
US20070148171A1 (en) * 2002-09-27 2007-06-28 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US20080260731A1 (en) * 2002-03-01 2008-10-23 Bernett Matthew J Optimized antibodies that target cd19
US20080254027A1 (en) * 2002-03-01 2008-10-16 Bernett Matthew J Optimized CD5 antibodies and methods of using the same
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US8093357B2 (en) * 2002-03-01 2012-01-10 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
JPWO2003084569A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物含有医薬
EP1520008B1 (en) 2002-07-09 2012-09-05 Baxter International Inc. Animal protein free media for cultivation of cells
US7067279B1 (en) * 2002-08-23 2006-06-27 Immunex Corporation Cell culture performance with betaine
US20060235208A1 (en) * 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
AU2003274011B2 (en) 2002-10-15 2010-03-04 Intercell Ag Nucleic acids coding for adhesion factor of group B streptococcus, adhesion factors of group B streptococcus and further uses thereof
DE10255508A1 (de) * 2002-11-27 2004-06-17 Forschungszentrum Jülich GmbH Verfahren zur Kultivierung von Zellen zur Produktion von Substanzen
AU2003303394B2 (en) † 2002-12-23 2009-02-19 Bristol-Myers Squibb Company Product quality enhancement in mammalian cell culture processes for protein production
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8388955B2 (en) * 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20070275460A1 (en) * 2003-03-03 2007-11-29 Xencor.Inc. Fc Variants With Optimized Fc Receptor Binding Properties
GB0304799D0 (en) 2003-03-03 2003-04-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel method
EP1622941A2 (en) * 2003-03-20 2006-02-08 ImClone Systems Incorporated Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
GB2404665B (en) * 2003-08-08 2005-07-06 Cambridge Antibody Tech Cell culture
AU2004263723B2 (en) * 2003-08-08 2008-12-18 Medimmune Limited Myeloma cell culture in transferrin-free low iron medium
JP4532493B2 (ja) * 2003-09-18 2010-08-25 レイベン バイオテクノロジーズ，インコーポレイティド 細胞培養培地
US8101720B2 (en) * 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
AU2003271194A1 (en) * 2003-10-09 2005-04-21 Daewoong Co., Ltd. Process for purifying human thrombopoietin with high content of sialic acid
CA2542121A1 (en) * 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Genomically modified cell neutralized to serum-free system
CA2543193C (en) 2003-10-27 2015-08-11 Wyeth Removal of high molecular weight aggregates using hydroxyapatite chromatography
EP1697520A2 (en) * 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
US7255288B2 (en) * 2004-03-08 2007-08-14 Wan Shan Chan Aroma therapy for fountain
WO2005092925A2 (en) * 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
US7300773B2 (en) 2004-08-27 2007-11-27 Wyeth Research Ireland Limited Production of TNFR-Ig
TWI384069B (zh) 2004-08-27 2013-02-01 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 多胜肽之製法
TWI374935B (en) 2004-08-27 2012-10-21 Pfizer Ireland Pharmaceuticals Production of α-abeta
US20060074225A1 (en) * 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
AU2011221414B2 (en) * 2004-10-29 2012-09-20 Takeda Pharmaceutical Company Limited Animal Protein-Free Media for Cultivation of Cells
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
WO2006108455A1 (en) * 2004-11-02 2006-10-19 Ares Trading S.A. Serum-free cell culture medium for mammalian cells
US8273553B2 (en) * 2004-11-02 2012-09-25 Ares Trading S.A. Production of growth hormone in serum-free cell culture medium for mammalian cells
EA011749B1 (ru) * 2004-11-02 2009-06-30 Арес Трейдинг С.А. Способ продуцирования гормона роста человека и применение среды, не содержащей сыворотки, для культивирования клеток млекопитающих, экспрессирующих гормон роста человека
EP2332985A3 (en) 2004-11-12 2012-01-25 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) * 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US20070135620A1 (en) * 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) * 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
WO2006076594A2 (en) * 2005-01-12 2006-07-20 Xencor, Inc. Antibodies and fc fusion proteins with altered immunogenicity
JP5523674B2 (ja) 2005-02-11 2014-06-18 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 植物タンパク質加水分解産物を含有する血清フリーの細胞培養液におけるポリペプチドの生産
JP2006310392A (ja) * 2005-04-26 2006-11-09 Toshiba Corp 電子ビーム描画方法及び電子ビーム描画装置
EP1891207A2 (en) * 2005-06-03 2008-02-27 Biovitrum AB Process for cultivating animal cells comprising the feeding of plant-derived peptones
TWI369401B (en) 2005-07-05 2012-08-01 Ares Trading Sa Serum-free culture medium for the production of recombinant gonadotropins
EP1931709B1 (en) * 2005-10-03 2016-12-07 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
CA2625998C (en) 2005-10-06 2015-12-01 Xencor, Inc. Optimized anti-cd30 antibodies
PL2522717T3 (pl) * 2006-01-04 2014-08-29 Baxalta Inc Pożywki do hodowli komórkowych wolne od oligopeptydów
US20070190057A1 (en) 2006-01-23 2007-08-16 Jian Wu Methods for modulating mannose content of recombinant proteins
EP3255141B1 (en) 2006-07-13 2021-12-01 Wyeth LLC Production of antibodies with improved glycosylation pattern
ES2529234T3 (es) 2006-08-04 2015-02-18 Prolong Pharmaceuticals, LLC Eritropoyetina modificada
WO2008022152A2 (en) * 2006-08-14 2008-02-21 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target cd19
EP2500416A1 (en) * 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
MY161866A (en) * 2006-09-13 2017-05-15 Abbvie Inc Cell culture improvements
AU2007299843B2 (en) 2006-09-18 2012-03-08 Xencor, Inc Optimized antibodies that target HM1.24
EP2135081B1 (en) 2007-04-16 2012-12-05 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to cell surface glycosylation
EP2135089B1 (en) * 2007-04-16 2015-09-02 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Comparative analysis of protein conformations by using 2d noesy nmr spectra
WO2008128222A1 (en) * 2007-04-16 2008-10-23 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Analysis of phosphorylated glycans, glycopeptides or glycoproteins by imac
TW200902708A (en) 2007-04-23 2009-01-16 Wyeth Corp Methods of protein production using anti-senescence compounds
TWI601823B (zh) * 2007-04-26 2017-10-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Cell culture methods using media containing high concentrations of amino acids
GB0710614D0 (en) * 2007-06-04 2007-07-11 Lonza Biologics Plc Mammalian expression vector with a highly efficient secretory signal sequence
CN101319200B (zh) * 2007-06-08 2010-05-19 中国科学院大连化学物理研究所 一种适用于微囊化cho细胞的无血清培养基及其应用
US20100221823A1 (en) * 2007-06-11 2010-09-02 Amgen Inc. Method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
US7580304B2 (en) * 2007-06-15 2009-08-25 United Memories, Inc. Multiple bus charge sharing
EP3327132A3 (en) * 2007-08-09 2018-07-18 Wyeth LLC Use of perfusion to enhance production of fed-batch cell culture in bioreactors
US8771988B2 (en) * 2007-10-12 2014-07-08 Hoffmann-La Roche Inc. Protein expression from multiple nucleic acids
SI2235059T1 (sl) 2007-12-26 2015-06-30 Xencor, Inc. Fc variante s spremenjeno vezjo na fcrn
JP5727790B2 (ja) * 2007-12-27 2015-06-03 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 細胞培養プロセス
CA2707524C (en) * 2008-01-09 2016-04-12 Cellca Gmbh Improved culture media additive and process for using it
CA2716801A1 (en) * 2008-03-12 2009-09-17 Wyeth Llc Methods for identifying cells suitable for large-scale production of recombinant proteins
EP2345713A4 (en) * 2008-04-18 2012-07-11 Shanghai Nat Engineering Res Ct Of Antibody Medicine Co Ltd CONCENTRATED CULTURE SOLUTION AND USE METHOD THEREOF
DE102008002210A1 (de) 2008-06-04 2009-12-10 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur fermentativen Herstellung von Erythropoietin
EP2350130B1 (en) * 2008-10-31 2018-10-03 Wyeth LLC Purification of acidic proteins using ceramic hydroxyapatite chromatography
PT2356247E (pt) * 2008-11-12 2015-10-26 Baxalta Inc Método de produção de fator vii isento de soro e de insulina
AU2009327411A1 (en) * 2008-12-19 2010-06-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Feed supplement for mammalian cell culture and methods of use
JP2012513030A (ja) 2008-12-19 2012-06-07 モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 修飾グリカンに関する方法
US9051544B2 (en) 2008-12-30 2015-06-09 Baxter International Inc. Method of enhancing cell growth using alkyl-amine-n-oxide (AANOx)
EP2401383B1 (en) * 2009-02-27 2013-09-18 Novartis AG Methods for selecting eukaryotic cells expressing a heterologous protein
HUE045635T2 (hu) 2009-04-09 2020-01-28 Sartorius Stedim Cellca Gmbh Eljárás továbbfejlesztett egysejtes klónozásra
ES2569238T3 (es) * 2009-07-10 2016-05-09 Linzy O. Scott Iii Procedimientos y composiciones para tratar afecciones médicas relacionadas con la tiroides con folatos reducidos
CA2769361A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Baxter International Inc. Cell culture medium for adamts protein expression
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US20120264688A1 (en) 2009-09-23 2012-10-18 Walter Hinderer Process for the purification of recombinant human erythropoietin (epo), epo thus purified and pharmaceutical compositions comprising same
ES2622366T3 (es) * 2009-10-26 2017-07-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Procedimiento para la producción de una inmunoglobulina glucosilada
WO2011079004A1 (en) * 2009-12-23 2011-06-30 Schering Corporation Cell line 3m
US8362210B2 (en) 2010-01-19 2013-01-29 Xencor, Inc. Antibody variants with enhanced complement activity
PT2563906T (pt) 2010-04-26 2018-02-16 Novartis Ag Processo para cultivo de células cho
RU2644651C2 (ru) 2010-04-26 2018-02-13 Новартис Аг Среда для культивирования клеток
CN102234627B (zh) * 2010-04-30 2015-06-03 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种培养基添加剂及其应用
BR112013000515B1 (pt) 2010-07-08 2021-11-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Método para produzir uma composição de fator von willebrand recombinante (rvwf)
CN103080300B (zh) 2010-08-05 2015-11-25 安姆根有限公司 增加细胞培养物的产率和活力的二肽
WO2012091023A1 (ja) 2010-12-27 2012-07-05 協和発酵キリン株式会社 培地およびキレート剤を含む水溶液の調製方法
US9133493B2 (en) 2011-04-21 2015-09-15 Amgen Inc. Method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
ES2560470T3 (es) 2011-04-29 2016-02-19 Biocon Research Limited Un método para reducir la heterogeneidad de anticuerpos y un proceso de producción de dichos anticuerpos
GB2497249B (en) 2011-07-12 2016-12-28 Foodchek Systems Inc Culture medium,method for culturing salmonella and e.coli and method for detecting salmonella and e.coli
CN103748211B (zh) * 2011-07-13 2016-05-18 食品安全测试系统公司 用于李斯特菌的培养基和培养方法以及检测李斯特菌的方法
KR20140077977A (ko) 2011-10-21 2014-06-24 화이자 인코포레이티드 철을 첨가하여 세포 배양을 개선하는 방법
WO2013126813A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 Amgen Inc. Autologous mammalian models derived from induced pluripotent stem cells and related methods
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9206390B2 (en) 2012-09-02 2015-12-08 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
ES2540753T3 (es) 2012-09-24 2015-07-13 Lonza Biologics Plc. Vectores de expresión que comprenden secuencias quiméricas de promotor y amplificador de citomegalovirus
WO2014143205A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9217168B2 (en) 2013-03-14 2015-12-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
ITTO20130493A1 (it) * 2013-06-14 2014-12-15 Determinants Of Metabolism Res Lab S R L Composizione per l'eliminazione di animali molesti infestanti
JP6195191B2 (ja) * 2013-08-08 2017-09-13 極東製薬工業株式会社 無タンパク質・無脂質培地馴化細胞株を用いた組換えタンパク質の製造方法
JP6190205B2 (ja) * 2013-08-08 2017-08-30 極東製薬工業株式会社 無タンパク質・無脂質培地馴化細胞株、その製造方法及び培地
US11078464B2 (en) 2013-08-30 2021-08-03 Amgen Inc. High titer recombinant AAV vector production in adherent and suspension cells
EP3052640A2 (en) 2013-10-04 2016-08-10 AbbVie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2016049367A1 (en) * 2014-09-24 2016-03-31 Los Alamos National Security, Llc Multi-organ media compositions and methods of their use
ES2962385T3 (es) 2014-10-15 2024-03-18 Amgen Inc Elementos promotores y reguladores para mejorar la expresión de genes heterólogos en células hospederas
JP6432774B2 (ja) * 2014-12-25 2018-12-05 江南化工株式会社 細胞賦活剤
KR20180093086A (ko) 2016-01-06 2018-08-20 론자 리미티드 개선된 생산을 위한 단백질 분해의 억제
US10119117B2 (en) 2016-01-28 2018-11-06 Nanogen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd Universal, glycosylation enhancer, completely chemically defined medium formulation
EP3420072A4 (en) * 2016-02-22 2019-08-28 Agency for Science, Technology and Research CELL CULTURE MEDIUM
US11236520B2 (en) 2016-03-10 2022-02-01 Lonza Ltd Customizable facility
US10689873B2 (en) 2016-03-10 2020-06-23 Lonza Ltd Customizable facility
AU2017251360A1 (en) 2016-04-14 2018-11-01 Lonza Ltd Compositions and methods for the detection of host cell proteins
TWI734775B (zh) * 2016-04-26 2021-08-01 美商美國泰福生技股份有限公司 細胞培養基
KR102536221B1 (ko) 2016-05-03 2023-05-23 론자 리미티드 단백질 생산을 위한 지질 대사의 조정
AU2017277761B2 (en) 2016-06-10 2021-11-11 Lonza Ltd Method for stabilizing proteins
IL307217A (en) 2016-08-02 2023-11-01 Lonza Ag Customizable facility
US20190169675A1 (en) 2016-08-12 2019-06-06 Lonza Ltd Proteomic analysis of host cell proteins
US20190216925A1 (en) 2016-09-16 2019-07-18 Leukocare Ag A Novel Method for Stabilization of a Biopharmaceutical Drug Product During Processing
CN106635958A (zh) * 2016-12-24 2017-05-10 严志海 一种中国仓鼠卵巢细胞培养基
AU2018232698B2 (en) 2017-03-10 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing multispecific antibodies
KR102647165B1 (ko) 2017-06-16 2024-03-14 론자 리미티드 생물 제제 생산을 위한 범용 자체 조절 포유동물 세포주 플랫폼
JP2020533983A (ja) 2017-09-15 2020-11-26 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 目的のポリペプチドのラージスケールの製造間のオンラインバイオマス静電容量モニタリング
CA3083236A1 (en) 2017-12-05 2019-06-13 Lonza Ltd Methods of assaying tropolone
JP7108036B2 (ja) 2018-02-02 2022-07-27 ロンザ リミテッド 細胞選択方法及び細胞代謝改変方法
KR20200133240A (ko) 2018-03-16 2020-11-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 단백질 생산 동안의 대사 효소 활성 및 디술피드 결합 환원
US20190367858A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Lonza Ltd. Midscale Model For Organic Growth and Phasing
US20210324390A1 (en) 2018-07-13 2021-10-21 Lonza Ltd Methods for improving production of biological products by reducing the level of endogenous protein
WO2020028616A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Lonza Ltd Methods for manufacturing recombinant protein comprising a disulfide bond
CN110343666B (zh) * 2019-07-10 2023-05-30 通化东宝药业股份有限公司 一种cho细胞培养的补料培养基及其制备方法和应用
EP4058583A1 (en) 2019-11-14 2022-09-21 Lonza Ltd. Methods of cell selection
SG11202110968VA (en) 2019-12-06 2021-10-28 Regeneron Pharma Anti-vegf protein compositions and methods for producing the same
EP4130238A4 (en) * 2020-03-25 2024-05-15 Ajinomoto Kk HEPES-CONTAINING MEDIUM
WO2022140389A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Amgen Inc. Cell culture method
WO2023045140A1 (zh) * 2021-09-26 2023-03-30 上海迈泰君奥生物技术有限公司 一种提高宿主细胞中抗体表达量的方法
CN113846051B (zh) * 2021-09-28 2023-12-01 无锡多宁生物科技有限公司 一种通用型化学成分限定cho细胞传代培养基及其应用

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE65933C (de) Rheinische Gesellschaft für metall Ventileinrichtung für Spirituskocher
US4205126A (en) 1978-01-01 1980-05-27 Cartaya Oscar A Serum-free cell culture media
SU1662352A3 (ru) * 1982-05-05 1991-07-07 Генентек, Инк (Фирма) Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент активатора плазминогена тканевого типа
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
FR2543158B1 (fr) 1983-03-24 1985-11-15 Inst Nat Sante Rech Med Milieu de culture de cellules animales sans serum, sans hormones et sans facteurs de croissance et procedes de culture primaire et d'obtention de lignees cellulaires utilisant ce milieu
US4767704A (en) * 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4777245A (en) 1984-01-06 1988-10-11 Genelabs Incorporated Non-human primate monoclonal antibodies and methods
EP0164813B1 (en) 1984-06-14 1991-10-09 Teijin Limited Method of cultivating animal or plant cells
JPS6125480A (ja) 1984-07-13 1986-02-04 Nitsusui Seiyaku Kk 細胞用の無血清合成培地
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
GB8531925D0 (en) 1985-12-31 1986-02-05 Bass Plc Propagation of yeast
GB8607679D0 (en) * 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
CA1297434C (en) 1986-04-14 1992-03-17 Kenji Murakami Method of producing peptides, recombinant plasmid for use in the same and animal cells transformed with the same
US4677704A (en) * 1986-04-22 1987-07-07 Huggins Richard A Cleaning system for static charged semiconductor wafer surface
DE3785086T2 (de) 1986-06-04 1993-07-08 Agency Ind Science Techn Zubereitung fuer zellkultur und ihre verwendung.
JPS637780A (ja) 1986-06-28 1988-01-13 Nippon Zenyaku Kogyo Kk 細胞への鉄供給方法
EP0318487B1 (en) * 1986-08-04 1993-10-13 The University Of New South Wales Serum free tissue culture medium containing polymeric cell-protective agent
CS262822B1 (en) 1986-10-03 1989-04-14 Kovar Jan Synthetic medium for the cultivation of myelomic cells
US5045468A (en) 1986-12-12 1991-09-03 Cell Enterprises, Inc. Protein-free culture medium which promotes hybridoma growth
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP2749011B2 (ja) 1987-02-05 1998-05-13 鐘淵化学工業 株式会社 無血清培地で増殖継代可能な細胞およびその取得方法
JPS63196268A (ja) * 1987-02-10 1988-08-15 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 無血清培地で継代増殖可能な形質転換細胞、その育種方法およびその細胞による蛋白質の生産方法
DE3871206D1 (de) 1987-03-24 1992-06-25 Grace W R & Co Basisnaehrmedium fuer eine zellkultur.
CA1341235C (en) 1987-07-24 2001-05-22 Randy R. Robinson Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
AU612404B2 (en) 1987-09-11 1991-07-11 Genentech Inc. Method for increasing the expression of polypeptides in recombinant cell culture
IL87737A (en) * 1987-09-11 1993-08-18 Genentech Inc Method for culturing polypeptide factor dependent vertebrate recombinant cells
EP0316068A1 (en) * 1987-10-09 1989-05-17 Collaborative Research Inc. Modified low molecular weight plasminogen activator and method of preparation
NZ226694A (en) 1987-10-28 1994-04-27 Oncogen Human immunoglobulin produced by recombinant dna techniques
DE3801236A1 (de) * 1988-01-18 1989-07-27 Boehringer Mannheim Gmbh Pentosansulfat-medium
US5846534A (en) 1988-02-12 1998-12-08 British Technology Group Limited Antibodies to the antigen campath-1
ATE95068T1 (de) * 1988-02-12 1993-10-15 British Tech Group Modifizierte antikoerper.
CA1341552C (en) 1988-09-23 2007-10-02 Kenneth Alonso Method of producing human-human hybridomas, the production of monoclonal and polyclonal antibodies therefrom, and therapeutic use thereof
AU4312489A (en) 1988-09-23 1990-04-18 Cetus Corporation Lipid microemulsions for culture media
US4929706A (en) 1988-11-02 1990-05-29 W. R. Grace & Co.-Conn. Cell growth enhancers and/or antibody production stimulators comprising chemically modified hydrophilic polyurea-urethane prepolymers and polymers
JPH0322972A (ja) * 1989-01-12 1991-01-31 Ajinomoto Co Inc 無血清培地
ZA901280B (en) * 1989-02-27 1991-10-30 Lilly Co Eli Tissue culture method
CA2001550A1 (en) * 1989-03-03 1990-09-03 Aaron H. Heifetz Very low protein nutrient medium for cell culture
GB8905669D0 (en) 1989-03-13 1989-04-26 Celltech Ltd Modified antibodies
EP0404003A3 (en) 1989-06-19 1991-10-16 Xoma Corporation Chimeric mouse-human km10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen
EP0493433B1 (en) 1989-09-19 1996-01-10 Centocor, Inc. Method for improving human monoclonal antibody production and cells used therein
DE69028713T3 (de) 1989-12-27 2004-05-13 Centocor, Inc. Schimäre immunoglobuline für cd4-rezeptoren
US5122469A (en) * 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB9022545D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
GB9022543D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Antibody production
DE4115722A1 (de) 1991-05-14 1992-11-19 Boehringer Mannheim Gmbh Serumfreies medium zur kultivierung von saeugerzellen
IE922287A1 (en) 1991-07-15 1993-01-27 Wellcome Found Production of antibodies
EP1266965B1 (en) 1991-07-25 2006-05-24 Biogen Idec Inc. Recombinant antibodies for human therapy
DK0610447T3 (da) 1991-10-15 1999-08-23 Btg Int Ltd CDw52-specifikt antistof til behandling af T-cellemedieret inflammation af leddene
US5429746A (en) 1994-02-22 1995-07-04 Smith Kline Beecham Corporation Antibody purification
AT407255B (de) 1997-06-20 2001-02-26 Immuno Ag Rekombinanter zellklon mit erhöhter stabilität in serum- und proteinfreiem medium und verfahren zur gewinnung des stabilen zellklons
KR20010069066A (ko) 2000-01-12 2001-07-23 이종원 저산소 농도하에서 생존이 가능하도록 하는 동물세포의배양방법
JP2005532415A (ja) 2001-12-11 2005-10-27 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド スタフィロコッカス・アウレウスエキソポリサッカライド及び方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE69133589D1 (de) 2008-02-14
IE913559A1 (en) 1992-04-22
JP2625302B2 (ja) 1997-07-02
AU8591591A (en) 1992-05-07
DK1221476T3 (da) 2008-05-13
USRE41974E1 (en) 2010-11-30
EP1221476A2 (en) 2002-07-10
USRE39792E1 (en) 2007-08-21
EP1849862A2 (en) 2007-10-31
ATE382680T1 (de) 2008-01-15
DE69133303D1 (de) 2003-10-02
EP1849862A3 (en) 2008-02-13
CA2053586A1 (en) 1992-04-18
EP0481791B1 (en) 2003-08-27
DE69133303T2 (de) 2004-06-24
NZ240248A (en) 1994-11-25
EP1221476B1 (en) 2008-01-02
JPH0670757A (ja) 1994-03-15
EP0481791A3 (en) 1992-07-08
CA2053586C (en) 2003-07-29
EP0481791A2 (en) 1992-04-22
ES2298301T3 (es) 2008-05-16
US5316938A (en) 1994-05-31
DE69133589T2 (de) 2009-01-08
ZA918249B (en) 1993-04-16
GB9022545D0 (en) 1990-11-28
US5633162A (en) 1997-05-27
EP1221476A3 (en) 2003-09-17
DK0481791T3 (da) 2003-12-08
ATE248217T1 (de) 2003-09-15
AU645615B2 (en) 1994-01-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2204885T3 (es) Medio de cultivo para celulas de ovario de hamster chino (cho) y celulas cho adaptadas.
IE84174B1 (en) Culture medium for CHO cells and adapted CHO cells
ES2341390T3 (es) Produccion de tnfr-fc.
EP1789571B1 (en) Production of TNFR-Ig in a large-scale production cell culture
US5122469A (en) Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
EP1781803B1 (en) Production of anti-amyloid beta antibodies
WO2008009642A1 (en) Cell culture media
US20060115901A1 (en) Method and media for single cell serum-free culture of CHO cells
ES2535230T3 (es) Método de cultivo celular y utilización del mismo
US20060073591A1 (en) Cell culture media
EP1097194A2 (en) Serum-free medium for culturing animal cells
JP2000517188A (ja) 無血清哺乳動物細胞培養培地およびその使用
US20110183375A1 (en) Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions
EP0659880B1 (en) Medium for culturing animal cells or antibody-producing cells
JP2001120262A (ja) 生理活性物質の産生増強方法
IL100715A (en) Production of enzymatically active glucocerebrosidase from recombinant cells in production medium suitable for cell viability and secretion and stabilization of said enzyme
JP2850430B2 (ja) 細胞培養用無血清培地
US20120264208A1 (en) Materials and methods for enhanced iron uptake in cell culture
JPS63202377A (ja) 新規細胞株
JPH07231783A (ja) 動物細胞培養用無蛋白質培地及び培養方法