EA037123B1 - Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии - Google Patents

Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии Download PDF

Info

Publication number
EA037123B1
EA037123B1 EA201792465A EA201792465A EA037123B1 EA 037123 B1 EA037123 B1 EA 037123B1 EA 201792465 A EA201792465 A EA 201792465A EA 201792465 A EA201792465 A EA 201792465A EA 037123 B1 EA037123 B1 EA 037123B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
pyrido
pyrimidin
dimethoxyphenyl
methoxyphenyl
fluoro
Prior art date
Application number
EA201792465A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201792465A1 (ru
Inventor
Соонгиу Чой
Амал Дакка
Гари Митчелл Карп
Яна Нарасимхан
Николай Нарышкин
Энтони А. Турпофф
Марла Л. Виталл
Эллен Уэлч
Мэттью Г. Волл
Тяньлэ Ян
Наньцзин Чжан
Сяоянь Чжан
Синь Чжао
Люк Грин
Эммануэль Пинар
Хасан Ратни
Original Assignee
ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК.
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК., Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК.
Publication of EA201792465A1 publication Critical patent/EA201792465A1/ru
Publication of EA037123B1 publication Critical patent/EA037123B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

В настоящем документе представлены соединения формулы (IIa1) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер, где значения R1, R2, Ra, Rb и Rc определены в настоящем документе, способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, и способ увеличения количества белка Smn, с использованием заявленного соединения.

Description

(54) СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СПИНАЛЬНОЙ МЫШЕЧНОЙ АТРОФИИ (31) 61/597,523 (32) 2012.02.10 (33) US (43) 2018.08.31 (62) 201491505; 2013.02.08 (71)(73) Заявитель и патентовладелец:
ПИТИСИ ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. (US); Ф. ХОФФМАНН-ЛЯ РОШ АГ (СН) (72) Изобретатель:
Чой Соонгиу, Дакка Амал, Карп Гари Митчелл, Нарасимхан Яна, Нарышкин Николай, Турпофф Энтони А., Виталл Марла Л., Уэлч Эллен, Волл Мэттью Г., Ян Тяньлэ, Чжан Наньцзин, Чжан Сяоянь, Чжао Синь (US), Грин Люк (СН), Пинар Эммануэль, Ратни Хасан (FR) (74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU) (56) US-B2-6977255
WO-A1-2011085990
US-A-4122274
WO-A1-1993023398
NING SHAO et al. Synthesis and structureactivity relationship (SAR) study of 4-azabenzoxazole analogues as H3 antagonists. Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters, 2012, vol. 22, pp. 2075-2078, реферат, таблица 3, соединения 33, 34, 35
037123 Bl
037123 Bl (57) В настоящем документе представлены соединения формулы (Па1) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер, где значения Rb R2, Ra, Rb и Rc определены в настоящем документе, способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, и способ увеличения количества белка Smn, с использованием заявленного соединения.
Rb
Технология, описанная в настоящем документе, была разработана без поддержки правительства
США.
Перекрестная ссылка
По данной заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на выдачу патента США № 61/597523, поданной 10 февраля 2012 г., которая включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте и для любых целей.
Описание соглашения о совместных исследованиях
Раскрытый объект изобретения был разработан, и заявленное изобретение было осуществлено силами или в интересах одного или нескольких участников соглашения о совместных исследованиях, которое имело силу на момент или до действительной даты подачи заявки на заявленное изобретение;
заявленное изобретение было осуществлено в результате действий, предпринятых в рамках соглашения о совместных исследованиях; и заявка на выдачу патента на заявленное изобретение раскрывает или подлежит изменению с целью раскрытия имен сторон соглашения о совместных исследованиях.
Введение
В настоящем документе представлены соединения, содержащие их композиции и их применения для лечения спинальной мышечной атрофии.
Предпосылки создания изобретения
Спинальная мышечная атрофия (SMA), в своем широком понимании, описывает совокупность врожденных и приобретенных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), характеризующуюся прогрессирующей гибелью двигательных нейронов в спинном мозге и стволе головного мозга, вызывающую мышечную слабость и мышечную атрофию. Наиболее часто встречающаяся форма SMA вызывается мутациями в гене выживаемости двигательных нейронов (SMN) и проявляет себя с разной степенью тяжести, поражая как детей, так и взрослых (Crawford and Pardo, Neurobiol. Dis., 1996, 3:97).
Детская SMA представляет собой наиболее тяжелую форму этого нейродегенеративного нарушения. Симптомы включают мышечную слабость, слабый мышечный тонус, слабый крик, вялость или склонность к падениям, трудности с сосанием или глотанием, накопление секрета в легких или горле, трудности с кормлением и повышенная восприимчивость к инфекциям дыхательных путей. Ноги имеют тенденцию быть более слабыми, чем руки, и основные показатели развития, такие, как способность держать голову или садиться, не могут быть достигнуты. В целом, чем раньше появляются симптомы, тем короче продолжительность жизни. Симптомы появляются вскоре после того, как повреждаются двигательные нейроны. Тяжелые формы заболевания являются фатальными, и для всех форм не существует известного лечения. Течение SMA напрямую зависит от скорости повреждения двигательных нейронов и тяжести проявлений слабости, являющейся результатом повреждений. Дети с тяжелой формой SMA часто подвержены респираторным заболеваниям вследствие слабости мышц, поддерживающих дыхание. Дети с умеренными формами SMA живут намного дольше, хотя им может требоваться серьезное медицинское обслуживание, в особенности тем из них, кто относится к более тяжелому участку спектра заболевания.
Клинический спектр относящихся к SMA нарушений был разделен на следующие пять групп:
(a) SMA 0 типа (внутриутробная SMA) представляет собой наиболее тяжелую форму заболевания и начинается до рождения. Обычно, первым симптомом SMA 0 типа является сниженное движение плода, которое может впервые наблюдаться между 30 и 36 неделями беременности. После рождения такие новорожденные характеризуются ограниченным движением и имеют сложности с глотанием и дыханием.
(b) При SMA 1 типа (детская SMA или болезнь Верднига-Гоффманна) симптомы обычно проявляются между 0 и 6 месяцами. Эта форма SMA также является очень тяжелой. Пациенты никогда не приобретают способность сидеть, и без искусственной вентиляции легких смерть обычно наступает в первые 2 года.
(c) SMA 2 типа (промежуточная SMA) характеризуется началом в возрасте 7-18 месяцев. Пациенты приобретают способность сидеть без посторонней помощи, но никогда не способны самостоятельно стоять или ходить. Прогноз для этой группы во многом зависит от степени вовлеченности дыхательной системы в патологический процесс.
(d) SMA 3 типа (ювенильная SMA или болезнь Кугельберга-Веландера), как правило, диагностируется после 18 месяцев. Лица с SMA 3 типа способны до некоторой степени ходить при этом заболевании, но часто становятся прикованным к инвалидному креслу в юности или во взрослой жизни.
(e) SMA 4 типа (SMA с началом в зрелом возрасте). Слабость обычно начинает проявляться в позднем пубертатном периоде в языке, руках или ногах, а затем распространяется на другие части тела. Течение SMA в зрелом возрасте значительно медленнее и сильно не влияет на продолжительности жизни.
Ген SMN был картирован методом анализа групп сцепления в сложном участке хромосомы 5q. У людей этот участок содержит приблизительно 500 тысяч пар нуклеотидов (т.п.н.), и инвертированная дупликация приводит к двум почти идентичным копиям гена SMN. SMA вызывается инактивирующей мутацией или делецией теломерной копии гена (SMN1) в обоих хромосомах, что приводит к утрате функции гена SMN1. При этом все пациенты сохраняют центромерную копию гена (SMN2), и число ко- 1 037123 пий гена SMN2 у пациента с SMA, как правило, обратно коррелирует с тяжестью заболевания; т.е., пациенты с менее тяжелой формой SMA имеют большее число копий SMN2. Несмотря на это, SMN2 не способен полностью компенсировать утрату функции SMN1 по причине альтернативного сплайсинга экзона 7, вызванного трансляционно молчащей мутацией C^-T в экзоне 7. В результате, большая часть транскриптов, продуцируемых SMN2, не содержат экзона 7 (SMN2 Δ7) и кодируют усеченный белок Smn, который характеризуется нарушенной функцией и быстро деградирует.
Считается, что белок Smn участвует в процессинге и метаболизме РНК, обладая хорошо описанной функцией опосредования сборки специфичного класса комплексов РНК-белок, обозначаемых snRNPs. В двигательных нейронах Smn может иметь и другие функции, однако его роль в предупреждении селективной дегенерации двигательных нейронов является плохо изученной.
В большинстве случаев, SMA диагностируется на основании клинических симптомов и по отсутствию всех копий экзона 7 в гене SMN1, определяемому посредством генетического тестирования. Однако приблизительно в 5% случаев SMA вызывается мутациями, отличными от делеции всего гена SMN1 и отличными от делеции всего экзона 7 в гене SMN1, некоторые из которых известны, а другие еще не определены. В тех случаях, когда тестирование гена SMN1 не представляется возможным, или последовательность гена SMN1 не содержит каких-либо аномалий, индикативными могут служить другие тесты, такие как электромиография (EMG) или мышечная биопсия.
Медицинский уход за пациентами с SMA в настоящее время ограничен поддерживающей терапией, включая искусственную вентиляцию легких, лечебное питание и реабилитационный уход; лекарства, известного адресным воздействием на первопричину заболевания, не существует. Современные способы лечения SMA включают профилактику и ведение вторичных эффектов хронической гибели двигательных нейронов. Основной задачей ведения SMA 1 типа является профилактика и раннее лечение проблем с легкими, которые являются основной причиной смерти в большинстве случаев. Хотя некоторые дети с SMA становятся взрослыми, дети с SMA 1 типа характеризуются продолжительностью жизни менее двух лет.
Было разработано несколько мышиных моделей SMA. В частности, модель SMN Δ7 (Le et al., Hum. Mol. Genet., 2005, 14:845) является носителем как гена SMN2, так и нескольких копий кДНК SMN2 Δ7, и повторяет многие из характерных черт фенотипа SMA 1 типа. Модель SMN Δ7 может применяться как для изучения экспрессии SMN2, так и для количественной оценки двигательной функции и выживаемости. Мышиная модель с C/C-аллелью (Jackson Laboratory, линия № 008714) предоставляет модель с менее тяжелым течением SMA, при которой мыши характеризуются сниженными уровнями как мРНК полноразмерного SMN2 (SMN2 FL), так и белка Smn. Фенотипически мыши с C/C-аллелью характеризуются геном SMN2 и гибридным геном mSmn1-SMN2, который претерпевает альтернативный сплайсинг, но не характеризуются явно выраженной мышечной слабостью. Мышиную модель с C/C-аллелью используют в исследованиях экспрессии SMN2.
В результате более совершенного понимания генетической основы и патофизиологии SMA рассматривалось несколько стратегий лечения, но ни одна из них до сих пор не продемонстрировала успеха в клинике.
Замена гена SMN1 с применением вирусных векторов доставки и замена клеток с применением дифференцированных стволовых клеток SMN1+/+ продемонстрировали эффективность в животных моделях SMA. До того, как указанные подходы могли быть применены в отношении людей, требуется больше исследований с целью оценить безопасность и иммунный ответ и разобраться в требованиях к началу лечения в неонатальном периоде.
Коррекция альтернативного сплайсинга SMN2 в культивируемых клетках также может быть достигнута с применением синтетических нуклеиновых кислот в качестве терапевтических средств: (i) антисмысловые олигонуклеотиды, которые имеют своей мишенью элементы последовательности пре-мРНК SMN2 и сдвигают выход процесса сплайсинга в сторону образования полноразмерной мРНК SMN2 (Passini et al., Sci. Transl. Med., 2011, 3:72ral8 и Hua et al., Nature, 2011, 478:123) и (ii) транс-сплайсинг молекул РНК, который обеспечивает полностью функциональную последовательность РНК, которая заменяет мутантный фрагмент в процессе сплайсинга и производит полноразмерную мРНК SMN1 (Coady and Lorson, J Neurosci., 2010, 30:126).
Другие подходы, находящиеся в процессе изучения, включают поиск лекарств, которые повышают уровни Smn, усиливают остаточную функцию Smn или компенсируют утрату Smn. Было показано, что аминогликозиды усиливают экспрессию стабилизированного белка Smn мРНК SMN2 Δ7 путем промотирования трансляционного считывания аберрантного стоп-кодона, но характеризуются низкой проницаемостью в центральную нервную систему и токсичны при многократном дозированном введении. Было показано, что химиотерапевтические средства, такие как акларубицин, увеличивают содержание белка Smn в клеточной культуре; однако профиль токсичности указанных лекарств делает невозможным их долгосрочное применение на пациентах с SMA. Некоторые лекарства, находящиеся на стадии клинических исследований лечения SMA, включают активаторы транскрипции, такие как ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC) (например, бутираты, вальпроевую кислоту и гидроксимочевина) и стабилизаторы
- 2 037123 мРНК (ингибитор декэппинга мРНК RG3039 производства Repligen), которые призваны увеличивать общее количество РНК, транскрибируемой с гена SMN2. Однако применение ингибиторов HDAC или стабилизаторов мРНК не воздействует адресно на первопричину SMA и может приводить к общему усилению транскрипции и экспрессии генов с потенциальной опасностью для людей.
В качестве альтернативного подхода, для исследования были выбраны нейропротективные средства, такие как олесоксим. Такие стратегии не направлены на усиление продукции функционального Smn для лечения SMA, а вместо этого исследуются в качестве защиты от нейродегенерации дефицитных по Smn двигательных нейронов.
Система, разработанная для идентификации соединений, которые усиливают включение экзона 7 SMN в РНК, транскрибируемую с гена SMN2, и определенные бензоксазольные и бензоизоксазольные соединения, идентифицированные с ее помощью, были описаны в международной заявке PCT/US 2009/003238, поданной 27 мая 2009 г. (опубликована как международная публикация № WO 2009/151546 и публикация США № US 2011/0086833). Система, разработанная для идентификации соединений, которые продуцируют стабилизированный белок Smn с мРНК SMN2 Δ7, и определенные изоиндолиноновые соединения, идентифицированные с ее помощью, были описаны в международной заявке PCT/US 2009/004625, поданной 13 августа 2009 года (опубликована как международная публикация № WO 2010/019236 и публикация США № US 2011/0172284). Каждый из вышеуказанных документов включен в настоящий документ во всей своей полноте и для любых целей.
Все другие документы, ссылки на которые представлены в настоящем документе, включены в настоящую заявку посредством ссылки, как если бы были полностью изложены в настоящем документе.
Несмотря на прогресс, достигнутый в понимании генетической основы и патофизиологии SMA, сохраняется потребность в идентификации соединений, которые изменяют течение спинальной мышечной атрофии, одного из наиболее разрушительных неврологических заболеваний детского возраста.
Сущность изобретения
Согласно одному аспекту, в настоящем документе представлены соединения формулы (IIa1)
Rb
Ra О (Hal) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер, где значения R1, R2, Ra, Rb и Rc определены в настоящем документе. Согласно конкретному варианту осуществления в настоящем документе представлено соединение формулы (IIa1) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер.
SMA обусловлена делецией или мутацией гена SMN1, что приводит к селективной дегенерации дефицитных по Smn двигательных нейронов. Хотя у субъектов-людей сохраняется несколько копий гена SMN2, небольшие количества функционального белка Smn, экспрессируемого с SMN2, полностью не компенсируют утрату Smn, который бы экспрессировался геном SMN1. Соединения, описанные в настоящем документе, основаны, отчасти, на открытии заявителями того факта, что соединение (I Ia1) усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с мини-гена SMN2. Мини-ген воспроизводит процесс альтернативного сплайсинга экзона 7 SMN2, что приводит к скиппингу экзона 7 в большей части транскриптов SMN2. Таким образом, соединения формулы (IIa1) или их форма могут применяться для модулирования включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлены соединения формулы (IIa1) или их свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер, которые могут применяться для модулирования включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Согласно другому конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлено применение соединения формулы (IIa1) для лечения SMA, где соединение усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Без ограничения теорией, соединения формулы (IIa1) усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, и увеличивают уровни белка Smn, продуцируемого геном SMN2, а потому могут применяться для лечения SMA у нуждающегося в этом субъекта-человека.
Согласно определенным вариантам осуществления количество мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2 и не включает экзон 7 SMN2, может применяться в качестве биомаркера для SMA, раскрытого в настоящем документе. Согласно другим вариантам осуществления, количество мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2 и включает экзон 7 SMN2, может применяться в качестве биомаркера для лечения пациента соединением, раскрытым в настоящем документе. Согласно конкретному варианту осуществления пациент является пациентом с SMA. Согласно другому конкретному варианту осуществления пациент не является пациентом с SMA.
В соответствии с указанными вариантами осуществления описанные ниже SMN праймер(ы) и/или SMN зонд могут применяться в методах анализа, таких как PCR (например, qPCR), амплификация по
- 3 037123 типу катящегося кольца и RT-PCR (например, RT-PCR по конечной точке и/или RT-qPCR) для оценки и/или количественного определения количества мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2 и включает или не включает экзон 7 SMN2.
Согласно конкретному варианту осуществления, праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, SMN праймеры, такие как SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO. 2, 9 или 12, и/или SMN зонды, такие как SEQ ID NO. 3 или 10), применяют в методе анализа, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR по конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блоттинг или Саузерн-блоттинг (например, в методе анализа, таком как описанный ниже в разделе Биологические примеры), для определения того, усиливает ли соединение (например, соединение формулы (IIa1) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер) включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2.
Согласно конкретному варианту осуществления, праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, SMN праймеры, такие как SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO. 2, 9 или 12, и/или SMN зонды, такие как SEQ ID NO. 3 или 10), применяют в методе анализа, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR по конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блоттинг или Саузерн-блоттинг (например, в методе анализа, таком как описанный ниже в разделе Биологические примеры), для определения того, усиливает ли соединение (например, соединение формулы (IIa1) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер) включение экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN1.
Согласно конкретному варианту осуществления праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, SMN праймеры, такие как SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO. 2, 9 или 12, и/или SMN зонды, такие как SEQ ID NO. 3 или 10), применяют в методе анализа, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR по конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блоттинг или Саузерн-блоттинг (например, в методе анализа, таком как описанный ниже в разделе Биологические примеры), для определения того, усиливает ли соединение (например, соединение формулы (IIa1) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер) включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2.
Согласно другому варианту осуществления праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, SMN праймеры, такие как SEQ ID NO. 7, 11 или 13 и/или SEQ ID NO. 9 или 12, и/или SMN зонды, такие как SEQ ID NO. 3 или 10), применяют в методе анализа, таком как RTPCR, RT-qPCR, RT-PCR по конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блоттинг или Саузерн-блоттинг (например, в методе анализа, таком как описанный ниже в разделе Биологические примеры), для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2 и включает экзон 7 SMN2 в полученном от пациента образце. Согласно конкретному варианту осуществления, пациент является пациентом с SMA. Согласно другому конкретному варианту осуществления пациент не является пациентом с SMA.
Согласно другому варианту осуществления, праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, SMN праймеры, такие как SEQ ID NO. 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO. 9 или 12, и/или SMN зонды, такие как SEQ ID NO. 3 или 10), применяют в методе анализа, таком как RTPCR, RT-qPCR, RT-PCR по конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блоттинг или Саузерн-блоттинг (например, в методе анализа, таком как описанный ниже в разделе Биологические примеры), для мониторинга ответа пациента на соединение (например, на соединение формулы (IIa1) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер). Согласно конкретному варианту осуществления пациент является пациентом с SMA. Согласно другому конкретному варианту осуществления, пациент не является пациентом с SMA.
Согласно другому варианту осуществления в настоящем документе представлен способ определения того, усиливает ли соединение (например, соединение формулы (I), раскрытое в настоящем документе) включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий (a) приведение мРНК, которая транскрибируется с мини-гена SMN2, описанного в настоящем документе или в международной заявке PCT/US 2009/004625, поданной 13 августа 2009 г. (опубликована как международная публикация № WO 2010/019236), или в публикации США № US 2011/0172284, в присутствии соединения (например, соединения формулы (I), раскрытого в настоящем документе) в контакт с описанным(ыми) в настоящем документе праймером(ами) (например, SEQ ID NO: 1 и/или 2) вместе с компонентами, применимыми, например, для RT-PCR, RT-qPCR, PCR, RT-PCR по конечной точке, qPCR или амплификации по типу катящегося кольца; и (b) определение количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в присутствии соединения относительно количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие соединения указывает на то, что соединение усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2; и (2) отсутствие изменения или отсутствие существенного изменения количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в присутствии соединения относительно количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие соеди- 4 037123 нения указывает на то, что соединение не усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2.
Согласно другому варианту осуществления в настоящем документе представлен способ определения того, усиливает ли соединение (например, соединение формулы (IIa1), раскрытое в настоящем документе) включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий (a) приведение мРНК, которая транскрибируется с мини-гена SMN2, описанного в настоящем документе или в международной заявке PCT/US 2009/004625, поданной 13 августа 2009 г. (опубликована как международная публикация № WO 2010/019236), или в публикации США № US 2011/0172284, в присутствии соединения (например, соединения формулы (I), раскрытого в настоящем документе) в контакт с описанным в настоящем документе зондом (например, SEQ ID NO. 3 или 10) вместе с компонентами, применимыми, например, для RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR по конечной точке, PCR, qPCR, амплификации по типу катящегося кольца и, в случае применимости, Нозерн-блоттинга или Саузерн-блоттинга; и (b) определение количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в присутствии соединения относительно количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие соединения указывает на то, что соединение усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2; и (2) отсутствие изменения или отсутствие существенного изменения количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в присутствии соединения относительно количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие соединения указывает на то, что соединение не усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2.
Согласно другому варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ определения того, усиливает ли соединение (например, соединение формулы (IIa1), раскрытое в настоящем документе) включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий (a) приведение мРНК, которая транскрибируется с мини-гена SMN2, описанного в настоящем документе или в международной заявке PCT/US 2009/004625, поданной 13 августа 2009 г. (опубликована как международная публикация № WO 2010/019236), или в публикации США № US 2011/0172284, в присутствии соединения (например, соединения формулы (I), раскрытого в настоящем документе), в контакт с праймером(ами) (например, SEQ ID NO: 1 или 2) и/или описанным в настоящем документе зондом (например, SEQ ID NO: 3 или 10) вместе с компонентами, применимыми, например, для RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR по конечной точке, PCR, qPCR, амплификации по типу катящегося кольца и, в случае применимости, Нозерн-блоттинга или Саузерн-блоттинга; и (b) определение количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в присутствии соединения относительно количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие соединения указывает на то, что соединение усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2; и (2) отсутствие изменения или отсутствие существенного изменения количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в присутствии соединения относительно количества мРНК, которая транскрибируется с мини-гена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие соединения указывает на то, что соединение не усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2.
Краткое описание фигур
Фиг. 1, ссылка на которую представлена в биологическом примере 1, представляет собой схематический чертеж мини-генной конструкции SMN2-A, которая продуцирует два альтернативно сплайсируемых транскрипта мРНК: полноразмерную мРНК, которая содержит экзон 7, и мРНК Δ7 без экзона 7. Адениновый нуклеотид, вставленный в экзон 7 SMN2-A после нуклеотидного остатка 48, обозначен буквой A. В качестве альтернативы, нуклеотид может быть также выбран из цитозина или тимина. Вследствие инсерции одного нуклеотида (A, C или T) после нуклеотидного остатка 48, полноразмерная мРНК не содержит стоп-кодона в открытой рамке считывания SMN, тогда как мРНК Δ7 содержит стоп-кодон в экзоне 8, который обозначен словом Стоп.
На фиг. 2, ссылка на которую представлена в биологическом примере 1, представлена последовательность ДНК мини-генной конструкции SMN2-A (SEQ ID NO. 21) (фиг. 2a). Как представлено на фиг. 2b, могут быть обнаружены следующие подпоследовательности:
1-70: 5UTR (deg);
71-79: экзон 6: стартовый кодон и сайт BamHI (atgggatcc);
80-190: экзон 6;
191-5959: интрон 6;
5960-6014: экзон 7 с инсерцией аденинового нуклеотида A (положение 6008);
6015-6458: интрон 7;
6459-6481: часть экзона 8;
6482-8146: сайт BamHI (последовательность на 5'-конце); кодирующая люциферазу последователь- 5 037123 ность, начинающаяся с кодона 2 (без кодона инициации); сайт NotI (последовательность на З'-конце);
стоп-кодон TAA; и
8147-8266: 3'UTR (deg).
Для получения SMN1 версии мини-гена шестой нуклеотид экзона 7 (остаток тимина) в мини-генной конструкции SMN2-A заменяют на цитозин с применением метода сайт-направленного мутагенеза. Таким образом, мини-генная конструкция SMN1, сходная с мини-генной конструкцией SMN2-A, содержит один остаток аденина, вставленный после нуклеотидного остатка 48 экзона 7. Мини-генную конструкцию SMN1 называют SMN1-A. По аналогии, нуклеотид, вставляемый в мини-генную конструкцию SMN1 после нуклеотидного остатка 48 экзона 7, может быть также альтернативно выбран из цитозина или тимина.
На фиг. 3, ссылка на которую представлена в биологическом примере 2, отражена коррекция альтернативного сплайсинга мини-гена SMN2 в клетках, обработанных в течение 24 часов возрастающими концентрациями соединения 6 (фиг. 3a) и соединения 170 (фиг. 3b). Уровни полноразмерной мРНК мини-гена SMN2 количественно оценивали с использованием метода количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR). Уровни полноразмерной мРНК мини-гена SMN2 в образцах, обработанных соединением, нормализовали к уровням в образцах, обработанных растворителем, и графически отображали как функцию концентрации соединения.
На фиг. 4, ссылка на которую представлена в биологическом примере 3, отражена коррекция альтернативного сплайсинга SMN2 в фибробластах пациента с SMA 1 типа, обработанных возрастающими концентрациями соединения 6 (фиг. 4a) и соединения 170 (фиг. 4b) в течение 24 ч. Уровни полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 количественно оценивали с использованием метода RT-qPCR. Уровни полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 в образцах, обработанных соединением, нормализовали к уровням в образцах, обработанных растворителем, и графически отображали как функцию концентрации соединения.
На фиг. 5, ссылка на которую представлена в биологическом примере 4, отражена коррекция альтернативного сплайсинга SMN2 в фибробластах пациента с SMA 1 типа, обработанных в течение 24 ч возрастающими концентрациями соединения 6 (фиг. 5a) и соединения 170 (фиг. 5b). Полноразмерную мРНК и мРНК SMN2 Δ7 амплифицировали с использованием метода ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR) по конечной точке и разделяли продукты ПЦР с использованием электрофореза на агарозном геле. Верхняя и нижняя полосы соответствуют полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 соответственно. Интенсивность каждой полосы пропорциональна количеству РНК, содержащейся в образце.
На фиг. 6, ссылка на которую представлена в биологическом примере 5, отражена коррекция альтернативного сплайсинга SMN2 (и гена SMN2, и гибридного мышиного гена Smn1-SMN2) в тканях головного мозга и мышц в модели с C/C-аллелью SMA у мышей в результате лечения дважды в сутки (BID) в течение 10 суток 10 мг/кг соединения 6 (фиг. 6a) и соединения 170 (фиг. 6b). Уровни полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 количественно оценивали с использованием метода RT-qPCR, общее количество полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 принимали за 1, и рассчитывали доли фракций полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7.
На фиг. 7, ссылка на которую представлена в биологическом примере 6, отражена коррекция альтернативного сплайсинга SMN2 (и гена SMN2, и гибридного мышиного гена Smn1-SMN2) в тканях головного мозга и мышц в модели с C/C-аллелью SMA у мышей в результате лечения BID в течение 10 суток 10 мг/кг соединения 6 (фиг. 7a) и соединения 170 (фиг. 7b). Полноразмерную мРНК и мРНК SMN2 Δ7 амплифицировали с использованием метода RT-PCR. Продукты ПЦР разделяли с использованием электрофореза на агарозном геле. Верхняя и нижняя полосы соответствуют полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7, соответственно. Интенсивность каждой полосы пропорциональна количеству РНК, содержащейся в образце.
На фиг. 8, ссылка на которую представлена в биологическом примере 7, отражено дозозависимое усиление экспрессии белка Smn в фибробластах человека с SMA 1 типа, обработанных в течение 48 ч соединением 6 (фиг. 8a) и соединением 170 (фиг. 8b).
На фиг. 9, ссылка на которую представлена в биологическом примере 8, отражено увеличение числа ядерных спеклов (жемчужин) в фибробластах пациента с SMA типа 1, обработанных в течение 48 ч соединением 6 (фиг. 9a) и соединением 170 (фиг. 9b). Спеклы подсчитывали с использованием метода флуоресцентной микроскопии. Число спеклов в образцах, обработанных соединением, нормировали к числу в образцах, обработанных растворителем, и графически отображали как функцию концентрации соединения.
На фиг. 10, ссылка на которую представлена в биологическом примере 9, отображено усиление экспрессии белка Smn (черные кружки) в двигательных нейронах, происходящих из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, полученных из фибробластов пациентов с SMA 1 типа, обработанных соединением 6 (фиг. 10). Уровень белка Smn количественно оценивали с использованием иммуноокрашивания Smn и конфокальной флуоресцентной микроскопии. Уровень белка Smn в образцах, обработанных соединением, нормировали к уровню в образцах, обработанных растворителем, и графически ото- 6 037123 бражали как функцию концентрации соединения.
На фиг. 11, ссылка на которую представлена в биологическом примере 11, отображено усиление экспрессии белка Smn в тканях головного мозга, спинного мозга и мышц в модели с C/C-аллелью SMA у мышей в результате обработки в течение 10 суток BID 10 мг/кг соединения 6 (фиг. 11a, для n=10) и соединения 170 (фиг. 11b, для n=5). Значение p согласно ANOVA на каждой фигуре обозначено тремя звездочками (***) для p <0,001.
На фиг. 12, ссылка на которую представлена в биологическом примере 12, отображено усиление экспрессии белка Smn в тканях в модели новорожденных мышей SMA Δ7 в результате обработки в течение 7 суток один раз в сутки (QD) соединением 6 (головной мозг, фиг. 12a; спинной мозг, фиг. 12b; мышцы, фиг. 12c; и кожа, фиг. 12d, для n=6-9) и соединением 170 (головной мозг, фиг. 12e; спинной мозг, фиг. 12f; мышцы, фиг. 12g, для n=7). Значение p согласно ANOVA на каждой фигуре обозначено одной звездочкой (*) для p<0,05, двумя звездочками (**) для p<0,01 и тремя звездочками (***) для p<0,001.
На фиг. 13, ссылка на которую представлена в биологическом примере 13, отражены различия массы тела в модели новорожденных мышей SMA Δ7 в результате обработки до постнатальных суток (PND) 59 соединением 6 (фиг. 13a) и до PND 92 соединением 170 (фиг. 13b).
На фиг. 14, ссылка на которую представлена в биологическом примере 14, отражено улучшение рефлекса переворачивания в модели новорожденных мышей SMA Δ7 в результате обработки соединением 6 (фиг. 14a) и соединением 170 (фиг. 14b).
На фиг. 15, ссылка на которую представлена в биологическом примере 15, отражено улучшение выживаемости в модели новорожденных мышей SMA Δ7 в результате обработки соединением 6 (фиг. 15a) и соединением 170 (фиг. 15b).
На фиг. 16, ссылка на которую представлена в биологическом примере 15, отражено усиление экспрессии белка Smn в тканях головного мозга, спинного мозга и мышц в модели мышей SMA Δ7 в результате обработки соединением 6 до PND 156 (фиг. 16a) и соединением 170 до PND 185 (фиг. 16b) относительно мышей, обработанных растворителем, и гетерозиготных мышей соответствующей возрастной группы соответственно.
На фиг. 17, ссылка на которую представлена в биологическом примере 16, отражено дозозависимое увеличение мРНК мини-гена SMN1 FL и дозозависимое уменьшение мРНК мини-гена SMN1 Δ7 в клетках HEK293H человека, обработанных в течение 7 часов соединением 6 (фиг. 17a) и соединением 170 (фиг. 17b). Каждую из полноразмерной мРНК мини-гена SMN1 и мРНК мини-гена SMN1 Δ7 амплифицировали с использованием метода RT-PCR, и полученные продукты ПЦР разделяли с использованием электрофореза на агарозном геле. Верхняя и нижняя полосы соответствуют полноразмерной мРНК минигена SMN1 и мРНК мини-гена SMN1 Δ7, соответственно. Интенсивность каждой полосы пропорциональна количеству РНК, присутствующей в образце.
Подробное описание
В настоящем документе представлены соединения формулы (IIa1)
Rb
Re о (Hal) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер, где
Ri представляет собой гетероциклил, выбранный из оксиранила, оксетанила, азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, имидазолидинила, изоксазолидинила, изотиазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила, триазолидинила, оксадиазолидинила, тиадиазолидинила, тетразолидинила, пиранила, дигидро-2Н-пиранила, тиопиранила, 1,3-диоксанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6тетрагидропиридинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, 1,4диазепанила,бензо[d][1,3]диоксолила, 1,4-бензодиоксанила, 2,3-дигидробензо[Ь][1,4]диоксинила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1R)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1R)-ила, (3aR,6aR)гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1R)-ила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2R)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2R)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2R)-ила, гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1R)-ила, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1R)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло [3,4-c]пиррол-(1R)-ила, октагидро-5R-пирроло [3,2-с]пиридинила, октагидро-6R-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4аR,7аR)-октагидро-6R-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aS,7aS)-октагидро-6Rпирроло [3,4-b]пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1R)-ила, (7R,8aS)-гексагидропирроло [1,2а]пиразин-(1R)-ила, (8aS)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1R)-ила, (8аR)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1R)-ила, (8aS)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1R)-ила, (8аИ)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин(1R)-ила, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(2R)-она, октагидро-2R-пиридо[1,2-а]пиразинила, 3-аза
- 7 037123 бицикло[3.1.0]гексила, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-8-a3aбицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (1S,4S)-2,5диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-3,8диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила;
где R1 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем Кд или где Ri необязательно замещен одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями R3;
R2 представляет собой фенил;
где R2 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R6 и необязательно одним дополнительным заместителем R7;
каждый Ra независимо выбирают из водорода, галогена или С1-8алкила;
Rb представляет собой водород, галоген, С1-8алкил или С1-8алкокси;
Rc представляет собой водород, галоген или С1-8алкил;
каждый R3 независимо выбирают из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-С1-8алкила, С1-8алкилкарбонила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8- алкил)амино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил) амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкилкарбониламино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино;
R4 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С1-8алкил, арил-С1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С1-8алкил; где каждый С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R5;
каждый R5 независимо выбирают из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, галоген-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио;
каждый R6 независимо выбирают из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, С2-8алкенила, галоген-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио и
R7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил; где арил представляет собой моноциклический, бициклический или полициклический 6-14-членный ароматический радикал карбоциклической структуры;
гетероарил представляет собой моноциклический, бициклический или полициклический ароматический радикал карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены одним или несколькими гетероатомами, выбранными из атома O, S или N;
гетероциклил представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический, бициклический или полициклический ароматический радикал карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены гетероатомом, выбранными из атома O, S или N.
Варианты осуществления
Согласно одному варианту осуществления соединения формулы (IIa1),R1 представляет собой гетероциклил, выбранный из азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,4-диазепанила, 1, 2, 5, 6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3aS,6aS)-гексαгидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло [3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aS)-гексαгидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло [3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло [3,4Ь]пиридинила, (4aR,7aR)-октaгидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aS,7aS)-октагидро-6H-пирроло[3,4Ь]пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7R,8aS)-гексαгидропирроло[1,2-a]пирαзин-(1H)-ила, (8aS)-гексαгидропирроло[1,2-a]пиразин-(1H)-ила, (8аИ)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо [ 1,2-а]пиразинила, 3 -азабицикло[3.1.0]гексила, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-8-αзабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,5S)-8-αзабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1R,5S)-9-αзабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (1S,4S)-2,5диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-3,8диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или
- 8 037123
6,9-диазаспиро[4.5]децила; где каждый гетероциклил необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем R.
Вариант осуществления соединение, выбранное из группы, состоящей из:
2-(4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(4-метоксифенил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-метоксифенил)-7-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-метоксифенил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- (1,4-диазепан-1-ил)-2-(4-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2—
а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(3,З-диметилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 9 037123
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- (1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4-пропилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-метоксифенил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(3,З-диметилпиперазин-1-ил)-2-(4-метоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3-метоксифенил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-метоксифенил)-7-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(3-метоксифенил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(3-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2 а]пиримидин-4-он,
- (1,4-диазепан-1-ил)-2-(3-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2 — а]пиримидин-4-он,
2-(3-метоксифенил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 10 037123
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-фенил-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-фенил-4Н-пиридо[1,2—
а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-фтор-7-(4-метилпиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-хлорфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(4-хлорфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
7-(пиперазин-1-ил)-2-[3-(трифторметил)фенил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(трифторметил)фенил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(4-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(4-нитрофенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-[4-(диметиламино)фенил]-9-фтор-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-(диметиламино)фенил]-9-фтор-7-[(3R)-3-метилпиперазин1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(2-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-[4-(диметиламино)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-(диметиламино)фенил]-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметилфенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 11 037123
2-[3-(диметиламино)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[3-(диметиламино)фенил]-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-(дифторметокси)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-(дифторметокси)фенил]-7-[ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил] 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3-нитрофенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2—
а]пиримидин-4-он,
2-(4-метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2—
а]пиримидин-4-он,
2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(3,8-диазабицикло[3.2.1]οκτ-3-ил)-2-(3,4диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Н· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метокси-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,5-дифтор-4-гидроксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
4-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-2ил]бензонитрил
- 12 037123
2-[З-фтор-5-(трифторметил)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2- [4-фтор-З-(трифторметил)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[2-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Н· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,5-дифторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
7-(пиперазин-1-ил)-2-[3-(трифторметокси)фенил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-метокси-З-(трифторметокси)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-гидрокси-З-(трифторметокси)фенил]-7-(пиперазин-1-ил) 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-метокси-З-(трифторметокси)фенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-гидрокси-З-(трифторметокси)фенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(2,4-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он,
2-(2,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[3-(дифторметокси)-4-метоксифенил]-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[3-(дифторметокси)-4-гидроксифенил]-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[3-(дифторметокси)-4-метоксифенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[3-(дифторметокси)-4-гидроксифенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 13 037123
2-(3,5-дифторфенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-хлор-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-хлор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-этокси-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-этокси-4-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4· с]пиррол-2 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-5-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-5-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1· ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил) 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4,5-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4-гидроксипиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин· 1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил] 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-метокси-З-метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 14 037123
3-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-2ил]бензонитрил
2-метокси-5-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-2-ил]бензонитрил
2-(З-фтор-4-гидроксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-этокси-3-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2· а]пиримидин-4-он,
2-[З-фтор-4-(2,2,2-трифторэтокси)фенил]-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метилфенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3S)-З-аминопирролидин-1-ил]-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-3-(пропан-2иламино)пирролидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-метокси-З-нитрофенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[З-фтор-4-(метилсульфанил)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,5-дифтор-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,5-дифтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2-(З-фтор-4метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 15 037123
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4 ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-метил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-хлор-5-фторфенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-хлор-5-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-(1-метил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1-ил]-2-(З-фтор-4метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3R,4R)-3-(диметиламино)-4-гидроксипирролидин-1-ил]-2 (З-фтор-4-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[4-(метиламино)пиперидин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-5метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-фтор-З-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил] 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-фтор-З-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-дифтор-5-метоксифенил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1 ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-дифтор-5-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 16 037123
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[ (3S)-3(метиламино)пирролидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-{4[(метиламино)метил]пиперидин-1-ил}-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он,
7-[(3S)-З-аминопирролидин-1-ил]-2-(З-фтор-4-метоксифенил) 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-{4 - [ (диметиламино)метил]пиперидин-1-ил}-2-(3-фтор-4метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
3-фтор-5-{7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4-оксо-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-2-ил}бензонитрил
З-фтор-5-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-2-ил]бензонитрил
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3'S,4'S)-4'-гидрокси-1,3'бипирролидин-1'-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aR)-1метилгексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-5 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1-метил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1-метилпиперидин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4 с]пиррол-2 (1Н)-ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[(3aR,6aS)-5метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он,
- 17 037123
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил] 9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]οκτ-2-ен-З-ил]-2-(3,4диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,5,б-тетрагидропиридин-3-ил) 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-5-(2гидроксиэтил)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aS,6aS)-1метилгексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-5(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-5-(пропан-2ил)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он,
7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1-ил]-2-(З-фтор-4метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(4aR,7aR)-октагидро-6Нпирроло[3,4-Ь]пиридин-6-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3aR,6aS)-5-этилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)ил]-2-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(4aR,7aR)-1-метилоктагидробН-пирроло[3,4-Ь]пиридин-б-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[(3R)-З-метилпиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-(1-метил-1,2,3,бтетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(1R,5S)-8-метил-8азабицикло[3.2.1]οκτ-3-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(2R)-2-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 18 037123
7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2-(З-фтор-4метоксифенил)-9-метил-4Н-пиридо[ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[4-(циклопропиламино)пиперидин-1-ил]-2-(3,4диметоксифенил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[ (3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил] 9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(4-метилпиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил] 9-этил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил) 4Н-пиримидо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4-(метиламино)пиперидин· 1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(этиламино)пиперидин-1-ил]-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(пропан-2-иламино)пиперидин-1· ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(1-циклобутил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(пропан-2-ил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(оксетан-3-ил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-пропил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 19 037123
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-этил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1-пропил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(1-циклобутил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4диметоксифенил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[1-(оксетан-3-ил)1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[1-(пропан-2-ил)-1,2,3,6 тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-этил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он,
2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-(1-циклопропил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4диметоксифенил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7-(1-метил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил) 4Н-пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил) 4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[цис-4-(метиламино)циклогексил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-3-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4(пропиламино)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- 20 037123
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(8aR)-гексагидропирроло[1,2а]пиразин-2 (1Н)-ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2- (3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1-метил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
- ( 3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4-(пропан-2иламино)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(8aS)-гексагидропирроло[1,2а]пиразин-2 (1Н)-ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1-этил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4-(морфолин-4ил)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2гидроксиэтил)амино]пиперидин-1-ил}-9-метил-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1-метилпиперидин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил]-2-(3,4-диметоксифенил)9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2гидроксиэтил)(метил)амино]пиперидин-1-ил}-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-[(3R)-З-метилпиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-[(8aR)гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2метоксиэтил)амино]пиперидин-1-ил}-9-метил-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4[(диметиламино)метил]пиперидин-1-ил}-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(пирролидин-1илметил)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, и
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(пиперидин-1илметил)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
Терминология
Если конкретно не указано иное, то среднему специалисту в данной области техники следует понимать, что химические термины, использованные выше и на всем описании настоящего документа, характеризуются следующими указанными значениями.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкил в общем случае относится к насыщенным углеводородным радикалам, содержащим в цепи с неразветвленной или разветвленной конфигурацией от одного до восьми атомов углерода, включая без ограничения метил, этил, н-пропил (также называемый пропилом или пропанилом), изопропил, н-бутил (также называемый бутилом или бутанилом), изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил (также называемый пентилом или пентанилом), н-гексил (также называемый гексилом или гексанилом), н-гептил (также называемый гептилом или гептанилом), н-октил и т.п. Согласно некоторым вариантам осуществления, С1-8алкил включает без ограничения C1-6-
- 21 037123 алкил, С1-4алкил и т.п. С1-8алкильный радикал необязательно замещен заместителями, описанными в настоящем документе, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин С2-8алкенил в общем случае относится к частично ненасыщенным углеводородным радикалам, содержащим в цепи с неразветвленной или разветвленной конфигурацией от двух до восьми атомов углерода и одну или несколько двойных углерод-углеродных связей, включая без ограничения этенил (также называемый винилом), аллил, пропенил и т.п. Согласно некоторым вариантам осуществления, С2-8алкенил включает без ограничения C2-6алкенил, C2-4алкенил и т.п. C2-8алкенильный радикал необязательно замещен заместителями, описанными в настоящем документе, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин С|-8алкокси в общем случае относится к насыщенным углеводородным радикалам формулы -O-С1-8алкил, содержащим в цепи с неразветвленной или разветвленной конфигурацией от одного до восьми атомов углерода, включая без ограничения метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, н-гексокси и т.п. Согласно некоторым вариантам осуществления, С1-8алкокси включает без ограничения C1-6алкокси, С1-4алкокси и т.п. C1.8_ алкокси радикал необязательно замещен заместителями, описанными в настоящем документе, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин арил в общем случае относится к моноциклическому, бициклическому или полициклическому ароматическому радикалу карбоциклической структуры, включая без ограничения фенил, нафтил, антраценил, флуоренил, азуленил, фенантренил и т.п. Арильный радикал необязательно замещен заместителями, описанными в настоящем документе, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин гетероарил в общем случае относится к моноциклическому, бициклическому или полициклическому ароматическому радикалу карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены, где это позволяет устойчивость структуры, одним или несколькими гетероатомами, такими как атом О, S или N, включая без ограничения фуранил (также называемый фурилом), тиенил (также называемый тиофенилом), пирролил, 2Hпирролил, ЗН-пирролил, пиразолил, 1Н-пиразолил, имидазолил, 1H-имидазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксазолил, 1,3-тиазолил, триазолил (такой как 1Н-1,2,3-триазолил и т.п.), оксадиазолил (такой как 1,2,4-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил и т.п.), тиадиазолил, тетразолил (такой как 1Н-тетразолил, 2Hтетразолил и т.п.), пиридинил (также называемый пиридилом), пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, триазинил, индолил, 1Н-индолил, индазолил, 1Н-индазолил, 2Н-индазолил, индолизинил, изоиндолил, бензофуранил, бензотиенил (также называемый бензотиофенилом), бензоимидазолил, 1Hбензоимидазолил, 1,3-бензотиазолил, 1,3-бензоксазолил (также называемый 1,3-бензооксазолилом), пуринил, 9Н-пуринил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,3-диазинил, 1,2-диазинил, 1,2-диазолинил, 1,4-диазанафталенил, акридинил, фуро[3,2-Ь]пиридинил, фуро[3,2-с]пиридинил, фуро[2,3-с]пиридинил, 6Н-тиено[2,3-Ь]пирролил, тиено[3,2-с]пиридинил, тиено[2,3-d]пиримидинил, 1Hпирроло[2,3-Ь]пиридинил, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинил, 1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридинил, пирроло[1,2а]пиразинил, пирроло[1,2-Ь]пиридазинил, пиразоло[1,5-а]пиридинил, пиразоло[1,5-а]пиразинил, имидазо[1,2-а]пиридинил, 3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридинил, имидазо[1,2-а]пиримидинил, имидазо[1,2с]пиримидинил, имидазо[1,2-Ь]пиридазинил, имидазо[1,2-а]пиразинил, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазолил, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолинил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинил, [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинил и т.п. Гетероарильный радикал необязательно замещен на кольцевом атоме углерода или азота заместителями, описанными в настоящем документе, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин гетероциклил в общем случае относится к насыщенному или частично ненасыщенному моноциклическому, бициклическому или полициклическому ароматическому радикалу карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены, где это позволяет устойчивость структуры, гетероатомом, таким как атом O, S или N, включая без ограничения оксиранил, оксетанил, азетидинил, тетрагидрофуранил, пирролинил, пирролидинил, пиразолинил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, изоксазолинил, изоксазолидинил, изотиазолинил, изотиазолидинил, оксазолинил, оксазолидинил, тиазолинил, тиазолидинил, триазолинил, триазолидинил, оксадиазолинил, оксадиазолидинил, тиадиазолинил, тиадиазолидинил, тетразолинил, тетразолидинил, пиранил, дигидро-2Н-пиранил, тиопиранил, 1,3-диоксанил, 1,2,5,6тетрагидропиридинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, 1,4-диазепанил, 1,3-бензодиоксолил (также называемый бензо[d][1,3]диоксолилом), 1,4бензодиоксанил, 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксинил (также называемый 2,3-дигидробензо[Ь] [1,4]диоксинилом), гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ил, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4Ь]пиррол-(1Н)-ил, (3aR.6aR)-гексагидроnирроло [3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ил, гексагидропирроло [3,4-Ь]пиррол(2Н)-ил, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ил, (3aR.6aR)-гексагидроnирроло|3.4-b|nиррол(2Н)-ил, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ил, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1H)-ил, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ил, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридинил, октагидро6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинил, (4aR.7aR)-окmагидро-6H-nирроло|3.4-b|nиридинил. (4aS,7aS)-октагидро6Н-пирроло [3,4-Ь]пиридинил, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (7R,8aS)-гексагидропир- 22 037123 роло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (8aS)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (8aR)-reKcarugponupроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (8aS)-октагидропирроло[1,2-a]пиразин-(1H)-ил, (8аИ)-октагидропирроло[1,2а]пиразин-(1Н)-ил, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(2Н)-он, октагидро-2Н-пиридо[1,2-а]пиразинил, 3азабицикло[3.1.0]гексил, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексил, 8-азабицикло[3.2.1]октил, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]октил, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енил, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енил, 9-азабицикло[3.3.1]нонил, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептил, (1S,4S)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептил, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октил, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октил, (1R,5S)-3,8диазабицикло[3.2.1]октил, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонил, азаспиро[3.3]гептил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептил, 2,7-диазаспиро[3.5]нонил, 5,8-диазаспиро[3.5]нонил, 2,7-диазаспиро[4.4]нонил, 6,9диазаспиро[4.5]децил и т.п.
Гетероциклильный радикал необязательно замещен на кольцевом атоме углерода или азота заместителями, описанными в настоящем документе, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкокси-C1-8алкил относится к радикалу формулы -C1-8алкил-O-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкокси-C1-8алкиламино относится к радикалу формулы -NH-C1-8алкил-O-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкокси-C1-8алкил)2-амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкил-O-C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкокси-C1-8алкиламино-C1-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1-8алкил-NH-C1-8алкил-O-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкокси-C1-8алкил)2-амино-Cl-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1-8алкил-N(C1-8алкил-O-C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1-8алкил-N(C1-8алкил)(C1-8алкил-O-C1-8алкил).
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкокси-C1-8алкиламино-Cl-8алкил относится к радикалу формулы -C1-8алкил-NH-C1-8алкил-O-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкокси-C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил относится к радикалу формулы -C1-8алкил-N(C1-8алкил-O-C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил относится к радикалу формулы -C1-8алкил-N(C1-8алкил)(C1-8алкил-O-C1-8алкил).
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкоксикарбонил относится к радикалу формулы -C(O)-O-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкоксикарбониламино относится к радикалу формулы -NH-C(O)-O-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкиламино относится к радикалу формулы NH-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкил)2-амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкиламино-C1-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1-8алкил-NH-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкил)2-амино-C1-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1-8алкил-N(C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкиламино-Cl-8алкил относится к радикалу формулы -C1-8алкил-NH-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкил)2-амино-Cl-8алкил относится к радикалу формулы -C1-8алкил-N(C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкиламино-Cl-8алкиламино относится к радикалу формулы -NH-C1-8алкил-NH-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкил)2-амино-C1-8алкиламино относится к радикалу формулы -NH-C1-8алкил-N(C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкиламино-C1-8алкил)2-амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкил-NH-C1-8алкил)2.
Используемый в настоящем документе термин [(C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил]2-амино относится к радикалу формулы -N[C1-8алкил-N(C1-8алкил)2]2.
Используемый в настоящем документе термин (C1-8алкиламино-Cl-8алкил)(Cl-8алкил)амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкил)(C1-8алкил-NH-C1-8алкил).
Используемый в настоящем документе термин [(C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил](C1-8алкил)амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкил)[C1-8алкил-N(C1-8алкил)2].
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкил-карбонил относится к радикалу формулы -С(O)-C1-8алкил.
Используемый в настоящем документе термин C1-8алкил-карбониламино относится к радикалу формулы -NH-C(O)-C1-8алкил.
- 23 037123
Используемый в настоящем документе термин С1-8алкилтио относится к радикалу формулы -S-C1-8- алкил.
Используемый в настоящем документе термин амино-C2-8алкенил относится к радикалу формулы -C2-8алкенил-NH2.
Используемый в настоящем документе термин амино-C1-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1 -8алкил-ИИ2.
Используемый в настоящем документе термин амино-C1-8алкuл относится к радикалу формулы C1-8алкил-NH2.
Используемый в настоящем документе термин амино-C1-8алкuламино относится к радикалу формулы -NH-C1-8алкил-NH2.
Используемый в настоящем документе термин (амино-C1-8алкuл)2-амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкил-NH2)2.
Используемый в настоящем документе термин (амино-C1-8алкuл)(C1-8алкил)амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкил)(C1-8алкил-NH2).
Используемый в настоящем документе термин амино-C2-8алкuнил относится к радикалу формулы -C2-8алкuнил-NH2.
Используемый в настоящем документе термин арил-C1-8алкоксикарбонил относится к радикалу формулы -C(O)-O-C1-8алкuларил.
Используемый в настоящем документе термин арил-C1-8алкuл относится к радикалу формулы -C1-8алкиларил.
Используемый в настоящем документе термин арил-C1-8алкиламино относится к радикалу формулы -NH-C1-8алкuларuл.
Используемый в настоящем документе термин (арил-C1-8алкил)2-амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкuларил)2.
Используемый в настоящем документе термин (арил-C1-8алкuл)(C1-8алкuл)амино относится к радикалу формулы -N(C1-8алкuл)(C1-8алкuларил).
Используемый в настоящем документе термин арил-C1-8алкuламино-C1-8алкuл относится к радикалу формулы -C1-8алкил-NH-C1-3алкuларил.
Используемый в настоящем документе термин (арил-C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил относится к радикалу формулы -C1-8алкuл-N(C1-8алкuларил)2.
Используемый в настоящем документе термин (арил-C1-8алкuл)(C1-8алкuл)амино-C1-8алкuл относится к радикалу формулы -C1-8алкuл-N(C1-8алкuл)(C1-8алкuларил).
Используемый в настоящем документе термин ариламино относится к радикалу формулы -NHарил.
Используемый в настоящем документе термин ариламинокарбонил относится к радикалу формулы -C(O)-NH-арил.
Используемый в настоящем документе термин арилсульфонилокси-C1-8алкuл относится к радикалу формулы -C1-8алкuл-O-SO2-арил.
Используемый в настоящем документе термин бензоксикарбонил относится к радикалу формулы -C(O)-O-CH2-фенил.
Используемый в настоящем документе термин C3-14циклоалкил-C1-8алкuл относится к радикалу формулы -C1 -8алкuл-C3-14циклоалкил.
Используемый в настоящем документе термин C3-14циклоалкиламино относится к радикалу формулы -NH-C3-14циклоалкuл.
Используемый в настоящем документе термин С3-14циклонлкилокси относится к радикалу формулы -O-C3-14циклоалкил.
Используемый в настоящем документе термин гало или галоген в общем случае относится к радикалу атома галогена, включающего фтор, хлор, бром и йод.
Используемый в настоящем документе термин галоген-C1-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1-8алкилгалоген, где C1-8алкил является частично или полностью замещенным одним или несколькими атомами галогена, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин галоген-C1-8алкuл относится к радикалу формулы C1-8алкuлгалоген, где C1-8алкил является частично или полностью замещенным одним или несколькими атомами галогена, где это позволяют доступные валентности.
Используемый в настоящем документе термин гетероарuл-C1-8алкокси относится к радикалу формулы -O-C1-8алкuлгетероарил.
Используемый в настоящем документе термин гетероарил-C1-8алкuл относится к радикалу формулы -C1-8алкuлгетероарил.
Используемый в настоящем документе термин гидрокси относится к радикалу формулы -OH.
Используемый в настоящем документе термин гuдрокси-C1-8алкuл относится к радикалу формулы -C1-8алкuл-OH, где C1-8алкил является частично или полностью замещенным одним или несколькими гидроксирадикалами, где это позволяют доступные валентности.
- 24 037123
Используемый в настоящем документе термин заместитель означает позиционные переменные при атомах основной молекулы, которые присоединены к атому в указанном положении, заменяя один или несколько атомов водорода указанным атомом, при условии, что валентность атома присоединения не превышает доступную валентность или общие валентности, так что замещение приводит к стабильному соединению. Следовательно, комбинации заместителей и/или переменных допустимы, только если такие комбинации приводят к стабильным соединениям. Также следует отметить, что любой описанный или представленный в настоящем документе атом углерода, а также гетероатом, с валентностью, которая предполагает ненасыщенность, считается обладающим числом атомов углерода, достаточным для насыщения описанных или представленных валентностей.
В целях настоящего описания, если одна или несколько замещающих переменных для соединения формулы (IIa1) охватывают функциональные группы, включенные в соединение формулы (IIa1), каждая функциональная группа, встречающая в любом положении в пределах раскрытого соединения, может быть независимо выбрана, и, соответствующим образом, независимо и/или необязательно замещена.
Используемые в настоящем документе термины независимо выбранный или каждый выбранный относится к функциональным переменным в перечне заместителей, которые могут быть более чем единожды присоединены к структуре основной молекулы, где паттерн замещения в каждом случае не зависит от паттерна замещения в любом другом случае. Более того, считается, что использование родового заместителя при основной структуре для соединения, представленного в настоящем документе, включает замену родового заместителя разновидностями заместителей, которые находятся в пределах конкретного класса, т.е. арил может быть независимо заменен фенилом или нафталенилом (также называемым нафтилом) и т.п., так что подразумевается, что полученное соединение подпадает под объем соединений, описанных в настоящем документе.
Подразумевается, что используемый в настоящем документе термин каждый при использовании в выражении, таком как ...арил, арил-C1-8алкил, гетероциклил и гетероциклил-C1-8алкuл, где каждый арил и гетероциклил необязательно замещен одним или двумя заместителями..., включает необязательное, независимое замещение на каждом из арильных и гетероциклильных колец и на арильных и гетероциклильных фрагментах арил-C1-8алкuла и гетероциклил-C1-8алкuла.
Используемый в настоящем документе термин необязательно замещенный означает, что конкретные замещающие переменные, группы, радикалы или фрагменты представляют собой объем класса и могут быть независимо выбраны при необходимости замены одного или нескольких атомов водорода на указанном атоме присоединения основной молекулы.
Используемые в настоящем документе термины стабильное соединение или стабильная структура означают соединение, которое является достаточно устойчивым для выделения его из реакционной смеси и содержащих его составов с приемлемой степенью чистоты с получением эффективного терапевтического средства.
Названия соединений, представленные в настоящем документе, получали с использованием программного обеспечения ACD Labs Index Name, предоставленного ACD Labs, и/или программного обеспечения ChemDraw Ultra, предоставленного CambridgeSoft®. Если название соединения, раскрытого в настоящем документе, противоречит представленной структуре, то представленная структура будет отменять использование названия для определения заданного соединения. Номенклатура замещающих радикалов, определенных в настоящем документе, может слегка отличаться от химического названия, от которого они происходят; специалисту в данной области техники будет понятно, что определение замещающего радикала предусматривает включение радикала, определяемого химическим названием.
Если в настоящем документе не указано иное, то термин SMN относится к гену, ДНК или РНК SMN2 человека. Согласно конкретному варианту осуществления, термин SMN2 относится к гену, ДНК или РНК SMN2 человека.
Нуклеотидные последовательности для генов SMN2 человека известны из уровня техники.
Ген SMN2 может быть обнаружен на на 5'-3' цепи хромосомы 5 человека приблизительно от нуклеотида 69,345,350 приблизительно до нуклеотида 69,374,349. Приблизительные расположения экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 SMN2 в хромосоме 5 человека являются следующими:
от 69,366,468 до 69,366,578 - экзон 6;
от 69,366,579 до 69,372,347 - интрон 6;
от 69,372,348 до 69,372,401 - экзон 7;
от 69,372,402 до 69,372,845 - интрон 7 и от 69,372,846 до 69,373,419 - экзон 8.
Согласно другим конкретным вариантам осуществления, нуклеотидные последовательности экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 SMN2 в примерах, представленных в настоящем документе, используют в нуклеотидных мини-генных конструкциях SMN2, описанных в настоящем документе.
Если в настоящем документе не указано иное, то термин Smn или белок Smn относится к белку Smn человека, который содержит аминокислотные остатки, кодируемые экзонами 1-7 гена SMN1 и/или гена SMN2. Согласно конкретному варианту осуществления белок Smn является стабильным и функциональным in vitro и/или in vivo согласно оценке способами, известными специалисту в данной области
- 25 037123 техники. Согласно другому конкретному варианту осуществления белок Smn представляет собой полноразмерный белок, кодируемый геном SMN2. Согласно другому конкретному варианту осуществления, белок Smn характеризуется аминокислотной последовательностью, обнаруживаемой в GenBank под учетными номерами NP_000335, AAC50473.1, AAA66242.1 или NP_059107.
Если в настоящем документе не указано иное, то используемый в настоящем документе термин усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2 и аналогичные термины относятся к включению полной, интактной, неусеченной последовательности экзона 7 SMN2 в зрелую мРНК, которая согласно оценке способами, известными специалисту в данной области техники, транскрибируется in vitro и/или in vivo с гена SMN2 (т.е., приводит к продукции полноразмерной мРНК SMN2), так что согласно оценке способами, известными специалисту в данной области техники, геном SMN2 in vitro и/или in vivo продуцируются повышенные количества белка Smn; или так что согласно оценке способами, известными специалисту в данной области техники, геном SMN2 in vitro и/или in vivo усиливается экспрессия стабильного и функционального белка Smn; или так что согласно оценке способами, известными специалисту в данной области техники, in vitro и/или in vivo усиливается экспрессия слитого белка, кодируемого мини-геном; или так что геном SMN2 усиливается экспрессия белка Smn у нуждающегося в этом субъекта (например, в животной модели SMA или у субъекта-человека или пациента-человека с SMA).
Используемый в настоящем документе термин существенное изменение в контексте количества мРНК означает, что количество мРНК не изменяется на статистически значимую величину, например, значение р меньше значения, выбранного из 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, 0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005 или 0,00001.
Используемые в настоящем документе термины субъект и пациент используются взаимозаменяемо и относятся к животному или любому живому организму, обладающему чувствительностью и способностью к произвольному движению и для существования которого требуется кислород и органическая пища.
Неограничивающие примеры включают представителей видов человека, лошадей, свиней, крупного рогатого скота, крыс, мышей, собак и кошек. Согласно некоторым вариантам осуществления субъект представляет собой млекопитающее или теплокровное позвоночное. Согласно определенным вариантам осуществления субъект представляет собой животное, отличное от человека. Согласно конкретным вариантам осуществления субъект представляет собой человека. Согласно одному конкретному варианту осуществления субъект представляет собой человека-пациента с SMA.
Используемый в настоящем документе термин пожилой человек относится к человеку в возрасте 65 лет или старше.
Используемый в настоящем документе термин взрослый человек относится к человеку в возрасте 18 лет или старше.
Используемый в настоящем документе термин дети относится к человеку в возрасте от 1 года до 18 лет.
Используемый в настоящем документе термин младенец относится к человеку в возрасте от новорожденного до 1 года.
Используемый в настоящем документе термин начавший ходить ребенок относится к человеку в возрасте от 1 года до 3 лет.
Формы соединений
Используемый в настоящем документе термин форма означает соединение формулы (I), выбранное из его свободной кислоты, свободного основания, фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера.
Согласно определенным описанным в настоящем документе вариантам осуществления соединение формулы (IIa1) или его форму выделяют для использования.
Используемый в настоящем документе термин выделенный означает физическое состояние соединения формулы (IIa1) или его формы после выделения и/или очистки в результате синтеза (например, из реакционной смеси) или из натурального источника, или их сочетания, в соответствии со способом или способами выделения или очистки, описанными в настоящем документе или хорошо известными специалисту в данной области техники (например, хроматография, перекристаллизация и т.п.), с чистотой, достаточной для охарактеризации посредством стандартных аналитических методик, описанных в настоящем документе или хорошо известных специалисту в данной области техники.
Используемый в настоящем документе термин защищенный означает, что функциональная группа на соединении формулы (IIa1) находится в форме, модифицированной для предупреждения нежелательных побочных реакций в защищенном сайте при осуществлении соединением взаимодействия. Подходящие защитные группы будут очевидны среднему специалисту в данной области техники, а также посредством ссылки на стандартные учебники, такие как, например, T.W. Greene et al, Protective Groups in Organic Synthesis (1991), Wiley, New York.
Соединения формулы (IIa1) могут образовывать соли, которые подлежат включению в объем настоящего документа. Если не указано иное, то в настоящем документе ссылки на соединение формулы
- 26 037123 (IIa1) следует понимать как включающие ссылки на их соли. Используемый в настоящем документе термин соль(и) обозначает соли кислот, образованные с неорганическими и/или органическими кислотами, а также соли оснований, образованные с неорганическими и/или органическими основаниями. Кроме того, если соединение формулы (IIa1) содержит как фрагмент основания, такого как без ограничения пиридин или имидазол, так и фрагмент кислоты, такой как без ограничения карбоновая кислота, то могут образовываться цвиттерионы (внутренние соли), которые включены в рамки термина соль(и), используемого в настоящем документе.
Используемый в настоящем документе термин фармацевтически приемлемая соль(и) означает соли соединений, описанных в настоящем документе, которые безопасны и эффективны (т.е., нетоксичны, физиологически приемлемы) для применения на млекопитающих и обладают биологической активностью, хотя также применимы и другие соли. Соли соединений формулы (IIa1) могут быть образованы, например, путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IIa1) с некоторым количеством кислоты или основания, например, с эквивалентным или стехиометрическим количеством, в некоторой среде, такой как среда, в которой соль выпадает в осадок, или в водной среде с последующей лиофилизацией.
Фармацевтически приемлемые соли включают одну или несколько солей кислых или основных групп, присутствующих в описанных в настоящем документе соединениях. Варианты осуществления кислотно-аддитивных солей включают без ограничения ацетат, диацетат, кислый фосфат, аскорбат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, битартрат, борат, бутират, хлорид, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, этансульфонат, формиат, фумарат, гентизинат, глюконат, глюкаронат, глутамат, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, тригидрохлорид, гидройодид, изоникотинат, лактат, малеат, метансульфонат, нафталинсульфонат, нитрат, оксалат, памоат, пантотенат, фосфат, пропионат, сахарат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат (также известный как тозилат), трифторацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п. Один или несколько вариантов осуществления кислотно-аддитивных солей включают хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, тригидрохлорид, ацетат, диацетат, трифторацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п. Более конкретные варианты осуществления включают хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, трифторацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п.
Кроме того, кислоты, которые в целом рассматриваются как подходящие для образования фармацевтически приемлемых солей из фармацевтических соединений-оснований, обсуждаются, например, в P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33, 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; и в The Orange Book (см. веб-сайт для Food & Drug Administration, Washington, D.C.). Указанные раскрытия включены в настоящий документ посредством ссылки.
Подходящие основные соли включают без ограничения соли алюминия, аммония, кальция, лития, магния, калия, натрия, цинка и диэтаноламина. Определенные соединения, описанные в настоящем изобретении, также могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с органическими основаниями (например, с органическими аминами), такими как без ограничения дициклогексиламины, третбутиламины и т.п., и с различными аминокислотами, такими как без ограничения аргинин, лизин и т.п. Основные азотсодержащие группы могут быть кватернизированы такими агентами, как низшие алкилгалиды (например, метил-, этил- и бутилхлориды, бромиды и йодиды), диалкилсульфаты (например, диметил-, диэтил- и дибутилсульфаты), длинноцепочечные галиды (например, децил-, лаурил- и стеарилхлориды, бромиды и йодиды), аралкилгалиды (например, бензил- и фенэтилбромиды) и другие.
Подразумевается, что все такие соли кислот и соли оснований являются фармацевтически приемлемыми солями в рамках объема представленного в настоящем документе описания, и для целей, описанных в настоящем документе, все такие соли кислот и оснований рассматриваются как эквивалентные свободным формам соответствующих соединений.
Соединения формулы (IIa1) могут содержать центры асимметрии или хиральные центры, а потому могут существовать в различных стереоизомерных формах. В настоящее описание подлежат включению все стереоизомерные формы соединений формулы (IIa1), а также их смеси, включая рацемические смеси.
Описанные в настоящем документе соединения формулы (IIa1) могут содержать один или несколько хиральных центров, а потому могут существовать в виде рацемических смесей (R/S) или по существу чистых энантиомеров и диастереоизомеров. Соединения также могут существовать в виде по существу чистых (R) или (S) энантиомеров (если присутствует один хиральный центр). Согласно одному варианту осуществления, описанные в настоящем документе соединения формулы (I) представляют собой (S) изомеры, и могут существовать в виде энантиомерно чистых композиций, по существу содержащих только (S) изомер. Согласно другому варианту осуществления, описанные в настоящем документе соединения формулы (I) представляют собой (R) изомеры, и могут существовать в виде энантиомерно чистых композиций, по существу содержащих только (R) изомер. Специалисту в данной области техники следует осознавать, что при наличии более одного хирального центра, описанные в настоящем документе соединения формулы (I) также могут включать элементы, описываемые согласно рекомендациям по номенкла- 27 037123 туре IUPAC как (R,R), (R,S), (S,R) или (S,S) изомер.
Используемый в настоящем документе термин по существу чистый относится к соединениям, состоящим по существу из одного изомера в количестве, большем или равном 90%, в количестве, большем или равном 92%, в количестве, большем или равном 95%, в количестве, большем или равном 98%, в количестве, большем или равном 99% или в количестве, большем или равном 100% одного изомера.
Согласно одному аспекту, соединение формулы (IIa1) представляет собой по существу чистый (S) энантиомер, присутствующий в количестве, большем или равном 90%, в количестве, большем или равном 92%, в количестве, большем или равном 95%, в количестве, большем или равном 98%, в количестве, большем или равном 99% или в количестве, большем или равном 100%.
Согласно одному аспекту, соединение формулы (IIa) представляет собой по существу чистый (R) энантиомер, присутствующий в количестве, большем или равном 90%, в количестве, большем или равном 92%, в количестве, большем или равном 95%, в количестве, большем или равном 98%, в количестве, большем или равном 99% или в количестве, большем или равном 100%.
Все стереоизомерные формы (например, геометрические изомеры, оптические изомеры, позиционные изомеры и т.п.) соединений согласно настоящему изобретению (включая соли, сольваты, сложные эфиры и пролекарства и их преобразованные пролекарства), которые могут существовать вследствие асимметричных атомов углерода при различных заместителях, включая энантиомерные формы (которые могут существовать даже в отсутствие асимметричных атомов углерода), ротамерные формы, атропоизомеры, диастереоизомерные формы и региоизомерные формы, рассматриваются в рамках объема описания, представленного в настоящем документе. Например, если соединение формулы (IIa1) содержит двойную связь или конденсированное кольцо, то и цис-, и транс-формы, а также смеси охватываются объемом описания, представленного в настоящем документе. Кроме того, например, все кето-енольные и имин-енаминовые таутомерные формы соединений включены в описание, представленное в настоящем документе. Отдельные стереоизомеры соединений формулы (IIa1), описанных в настоящем документе, могут, например, по существу не содержать других изомеров, или могут находиться в рацемической смеси, как описано выше.
Некоторые изотопно-обогащенные соединения (например, соединения, меченные H3 и C14), описанные в настоящем документе, применимы при анализе распределения соединения и/или субстрата в тканях. Особенно предпочтительными являются изотопы, меченные тритием (т.е., H3) и углеродом-14 (т.е., C14), вследствие простоты их получения и обнаружения. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е., «обогащенными дейтерием»), может обеспечивать некоторые терапевтические преимущества, возникающие вследствие большей метаболической стабильности (например, увеличенный период полураспада in vivo или сниженные требования к дозировке), а потому в некоторых случаях оно может быть предпочтительным. Изотопно-обогащенные соединения формулы (IIa1), как правило, могут быть получены с использованием способов, известных специалистам в данной области техники, путем замещения соответствующим изотопно-обогащенным реагентом изотопнонеобогащенного реагента.
Если соединения обогащены дейтерием, то соотношение дейтерий/водород при дейтерированных атомах молекулы существенно превышает соотношение дейтерий/водород, встречающееся в природе.
Описанный в настоящем документе вариант осуществления может включать соединение формулы (IIa1) и его формы, где атом углерода может содержать от 1 до 3 атомов водорода, которые необязательно заменены дейтерием.
Применения соединений
В настоящем документе представлены соединения формулы (IIa1) или их форма, которые усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. С применением способов, описанных в настоящем документе (см. ниже раздел Биологические примеры), было показано, что такие соединения формулы (IIa1) или их форма усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Соответственно, соединения формулы (I) или их форма применимы в качестве усилителей включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2.
Согласно одному аспекту в настоящем документе представлены способы модулирования включения экзона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую с гена SMN2, включающие приведение клетки человека в контакт с соединением формулы (IIa1) или его формой. Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлены способы модулирования включения экзона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую с гена SMN2, включающие приведение клетки человека в контакт с соединением формулы (IIa1) или его формой, которые модулируют экспрессию мини-гена SMN2, описанного в настоящем документе, или в международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Согласно одному варианту осуществления, мини-ген представляет собой мини-ген, описанный в разделе Примеры международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833. Согласно другому варианту осуществления, мини-ген представляет собой мини-ген, описанный ниже в биологическом примере 1. Клетка человека может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или его формой in vitro и/или in vivo, например, в орга- 28 037123 низме отличного от человека животного или в организме человека. Согласно конкретному варианту осуществления клетка человека взята из организма или находится в организме человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления клетка человека взята из организма или находится в организме человека-пациента с SMA. Согласно другому конкретному варианту осуществления, клетка человека взята из организма или находится в организме человека-пациента с SMA, где SMA вызвана активационной мутацией или делецией в гене SMN1 в обеих хромосомах, что приводит к утрате функции гена SMN1. Согласно другому варианту осуществления, клетка человека представляет собой клетку из организма человека-пациента с SMA. Согласно определенным вариантам осуществления, клетка человека взята из линии клеток, такой как GM03813, GM00232, GM09677 и/или GM23240 (доступны от Coriell Institute). Согласно одному варианту осуществления, соединение представляет собой соединение формулы (I) или его форму.
Согласно конкретному варианту осуществления в настоящем документе представлен способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий приведение клетки человека в контакт с соединением формулы (IIa1) или его формой. Согласно другому варианту осуществления в настоящем документе представлен способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий приведение клетки человека в контакт с соединением формулы (IIa1) или его формой, которые усиливают экспрессию мини-гена SMN2, описанного в настоящем документе, или в международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Согласно одному варианту осуществления мини-ген представляет собой мини-ген, описанный в разделе Примеры международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833. Согласно другому варианту осуществления, мини-ген представляет собой мини-ген, описанный ниже в биологическом примере 1. Клетка человека может быть приведена в контакт с соединением формулы (IIa1) или его формой in vitro и/или in vivo, например, в организме отличного от человека животного или в организме человека. Согласно конкретному варианту осуществления, клетка человека взята из организма или находится в организме человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления, клетка человека взята из организма или находится в организме человека-пациента с SMA. Согласно другому конкретному варианту осуществления, клетка человека взята из организма или находится в организме человека-пациента с SMA, где SMA вызвана активационной мутацией или делецией в гене SMN1 в обеих хромосомах, что приводит к утрате функции гена SMN1. Согласно другому варианту осуществления, клетка человека представляет собой клетку из организма человека-пациента с SMA. Согласно определенным вариантам осуществления, клетка человека взята из линии клеток, такой как GM03813, GM00232, GM09677, и/или GM23240 (доступны от Coriell Institute). Согласно одному варианту осуществления, соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно другому аспекту, в настоящем документе представлен способ модулирования включения экзона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую с гена SMN2, включающий введение в модель SMA на отличном от человека животном соединения формулы (IIa1) или его формы. Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ модулирования включения экзона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую с гена SMN2, включающий введение в модель SMA на отличном от человека животном соединения формулы (IIa1) или его формы, которые модулируют экспрессию SMN2 минигена, описанного в настоящем документе, или в международной публикации № WO2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Согласно одному варианту осуществления миниген представляет собой мини-ген, описанный в разделе Примеры международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833. Согласно другому варианту осуществления мини-ген представляет собой мини-ген, описанный ниже в биологическом примере 1. Согласно конкретному варианту осуществления, соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий введение в модель SMA на отличном от человека животном соединения формулы (IIa1) или его формы. Согласно другому конкретному варианту осуществления в настоящем документе представлен способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий введение в модель SMA на отличном от человека животном соединения формулы (IIa1) или его формы, которые усиливают экспрессию мини-гена SMN2, описанного в настоящем документе, или в международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Согласно одному варианту осуществления мини-ген представляет собой мини-ген, описанный в разделе Примеры международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833. Согласно другому варианту осуществления мини-ген представляет собой мини-ген, описанный ниже в биологическом примере 1. Согласно конкретному варианту осуществления соедине
- 29 037123 ние представляет собой соединение формулы (I) или его форму.
Согласно другому аспекту, в настоящем документе представлен способ увеличения количества белка Smn, включающий приведение клетки человека в контакт с соединением формулы! (IIa1) или его формой. Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ увеличения количества белка Smn, включающий приведение клетки человека в контакт с соединением формулы (IIa1), которое усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Согласно другому конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ увеличения количества белка Smn, включающий приведение клетки человека в контакт с соединением формулы (IIa1), которое усиливает включение экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Клетка человека может быть приведена в контакт с соединением формулы (IIa1) или его формой in vitro и/или in vivo, например, в организме отличного от человека животного или в организме человека. Согласно конкретному варианту осуществления, клетка человека взята из организма или находится в организме человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления, клетка человека взята из организма или находится в организме человека-пациента с SMA. Согласно другому варианту осуществления, клетка человека представляет собой клетку из организма человека-пациента с SMA. Согласно определенным вариантам осуществления, клетка человека взята из линии клеток, такой как GM03813, GM00232, GM09677, и/или GM23240 (доступны от Coriell Institute). Согласно одному варианту осуществления, соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно другому аспекту, в настоящем документе представлен способ увеличения количества белка Smn, включающий введение в модель SMA на отличном от человека животном соединения формулы! (IIa1) или его формы. Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ увеличения количества белка Smn, включающий введение в модель SMA на отличном от человека животном соединения формулы (IIa1), которое усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, например, в клеточном или бесклеточном методе анализа, таком как описанные в ниже в разделе Биологические примеры. Согласно другому конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ увеличения количества белка Smn, включающий введение в модель SMA на отличном от человека животном соединения формулы! (IIa1), которое усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, например, в клеточном или бесклеточном методе анализа.
Согласно одному варианту осуществления, соединение формулы (IIa1) усиливает экспрессию минигена, описанного в настоящем документе, или в международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Согласно конкретному варианту осуществления, соединение формулы! (IIa1) усиливает экспрессию мини-гена, описанного в разделе Примеры международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833. Согласно другому конкретному варианту осуществления, соединение формулы! (IIa1) усиливает экспрессию мини-гена, описанного ниже в биологическом примере 1. Согласно одному варианту осуществления, соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно одному варианту осуществления в настоящем документе представлено применение соединения формулы (IIa1) или его формы для получения лекарственного препарата, который усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Согласно другому варианту осуществления, в настоящем документе представлено применение соединения формулы (IIa1) или его формы для получения лекарственного препарата, который усиливает включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, усиливая тем самым экспрессию белка Smn у нуждающегося в этом субъекта-человека. Согласно конкретному варианту осуществления, соединение формулы! (IIa1) или его форма усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2 в описанном в настоящем документе методе анализа (см., например, ниже раздел Биологические примеры). Согласно конкретному варианту осуществления, соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно другому аспекту в настоящем документе представлены способы усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, у нуждающегося в этом субъектачеловека, включающие введение субъекту-человеку эффективного количества соединения формулы (IIa1) или его формы. Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, у нуждающегося в этом субъекта-человека, включающий введение субъекту-человеку эффективного количества соединения формулы (IIa1) или его формы, которые усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, как определено в описанном в настоящем документе методе анализа (см., например, ниже раздел Биологические примеры). Согласно конкретным вариантам осуществления эффективное количество соединения формулы (IIa1) или его формы вводят субъектучеловеку в фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или разбавитель. Согласно конкретному варианту осуществления соединение формулы (IIa1) или его форма усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, в опи
- 30 037123 санном в настоящем документе методе анализа (см., например, ниже раздел Биологические примеры). Согласно конкретному варианту осуществления субъект-человек является пациентом-человеком с SMA. Согласно другому конкретному варианту осуществления субъект-человек является пациентом-человеком с SMA, где SMA вызвана активационной мутацией или делецией в гене SMN1 в обеих хромосомах, что приводит к утрате функции гена SMN1. Согласно одному варианту осуществления соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно другому аспекту в настоящем документе представлен способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с генов SMN2, у нуждающегося в этом субъекта-человека, включающий введение субъекту-человеку эффективного количества соединения формулы (IIa1) или его формы. Согласно конкретному варианту осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форма усиливают включение экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN1, в методе(ах) анализа, описанном(ых) в международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833 (см., например, в указанных публикациях в разделе Примеры), каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Согласно конкретным вариантам осуществления, эффективное количество соединения формулы (IIa1) или его формы вводят субъекту-человеку в фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или разбавитель. Согласно конкретному варианту осуществления субъектчеловек является пациентом-человеком с SMA. Согласно другому конкретному варианту осуществления, субъект-человек является пациентом-человеком с SMA, где SMA вызвана активационной мутацией или делецией в гене SMN1 в обеих хромосомах, что приводит к утрате функции гена SMN1. Согласно одному варианту осуществления, соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно другому варианту осуществления в настоящем документе представлено применение соединения формулы (IIa1) или его формы для получения лекарственного препарата, который усиливает экспрессию белка Smn у нуждающегося в этом субъекта-человека. Согласно конкретному варианту осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форма усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, как определено в описанном в настоящем документе методе анализа (см., например, ниже раздел Биологические примеры). Согласно другому варианту осуществления соединение формулы (IIa1) или его форма усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, как определено в описанном в настоящем документе методе анализа (см., например, ниже раздел Биологические примеры) или в международной публикации № WO 2009/151546 или в публикации заявки на выдачу патента США № 2011/0086833 (см., например, в указанных публикациях в разделе Примеры), каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Согласно конкретному варианту осуществления соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно другому аспекту в настоящем документе представлены способы лечения спинальной мышечной атрофии (SMA), включающие введение субъекту эффективного количества соединения формулы (IIa1) или его формы. Согласно конкретному варианту осуществления, в настоящем документе представлен способ лечения SMA у нуждающегося в этом субъекта-человека, включающий введение субъекту эффективного количества соединения формулы (IIa1) или его формы. Согласно другому конкретному варианту осуществления в настоящем документе представлен способ лечения SMA у нуждающегося в этом субъекта-человека, включающие введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (IIa1) или его формы и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или разбавитель. Согласно одному варианту осуществления соединение представляет собой соединение формулы (IIa1) или его форму.
Согласно другому варианту осуществления в настоящем документе представлен способ лечения SMA у нуждающегося в этом субъекта-человека, включающий введение субъекту эффективного количества соединения формулы (IIa1) или его формы, которые усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2.
Согласно определенным вариантам осуществления лечение SMA соединением формулы (IIa1) или его формой оказывает терапевтический эффект и/или положительный эффект. Согласно конкретному варианту осуществления лечение SMA соединением формулы (IIa1) или его формой приводит к одному, двум или нескольким из следующих эффектов: (i) снижает или облегчает тяжесть SMA; (ii) задерживает начало SMA; (iii) ингибирует прогрессирование SMA; (iv) снижает число госпитализаций субъекта; (v) снижает продолжительность госпитализации субъекта; (vi) увеличивает выживаемость субъекта; (vii) улучшает качество жизни субъекта; (viii) снижает число симптомов, ассоциированных с SMA; (ix) снижает или облегчает интенсивность симптома(ов), ассоциированного(ых) с SMA; (х) снижает продолжительность симптома, ассоциированного с SMA; (xi) предотвращает возвращение симптома, ассоциированного с SMA; (xii) ингибирует развитие или начало симптома SMA и/или (xiii) ингибирует прогрессирование симптома, ассоциированного с SMA.
Симптомы SMA включают мышечную слабость, слабый мышечный тонус, слабый крик, слабый кашель, вялость или склонность к падениям, трудности с сосанием или глотанием, трудности с дыханием, накопление секрета в легких или горле, сжатые кулаки с потными руками, дрожание/вибрирование
- 31 037123 языка; часто, склоненную на одну сторону голову, даже в положении лежа; ноги имеют тенденцию быть более слабыми, чем руки; ноги часто принимают положение «как у лягушки», трудности с кормлением, повышенная восприимчивость к инфекциям дыхательных путей, слабость кишечника/мочевого пузыря, вес ниже нормального значения, неспособность сидеть без посторонней помощи, неспособность ходить, неспособность ползать, гипотонус, арефлексия и множественные врожденные контрактуры (артрогрипоз), ассоциированные с гибелью клеток переднего рога спинного мозга.
Согласно конкретному варианту осуществления лечение SMA соединением формулы (IIa1) или его формой (отдельно или в сочетании с дополнительным средством) приводит к одному, двум или нескольким из следующих эффектов: (i) снижение потери мышечной силы; (ii) увеличение мышечной силы; (iii) снижение мышечной атрофии; (iv) снижение потери двигательной функции; (v) увеличение двигательных нейронов; (vii) снижение гибели двигательных нейронов; (viii) защита от дегенерации дефицитных по SMN двигательных нейронов; (ix) усиление двигательной функции; (х) усиление дыхательной функции; и/или (xi) снижение потери дыхательной функции.
Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (IIa1)
или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер, где
R1 представляет собой гетероциклил, выбранный из оксиранила, оксетанила, азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, имидазолидинила, изоксазолидинила, изотиазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила, триазолидинила, оксадиазолидинила, тиадиазолидинила, тетразолидинила, пиранила, дигидро-2H-пиранила, тиопиранила, 1,3-диоксанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6тетрагидропиридинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, 1,4-диазепанила, бензо[d] [ 1,3]диоксолила, 1,4-бензодиоксанила, 2,3-дигидробензо[b] [ 1,4]диоксинила, гексагидропирроло [3 ,4-Ь]пиррол-( 1 R)-ила, (3 aS,6aS)-гексагидропирроло [3,4-b]пиррол-(1R)-ила, (3 aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1R)-ила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2R)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2R)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2R)-ила, гексагидропирроло [3 ,4-с]пиррол-( 1 R)-ила, (3 aR,6aS)-гексагидропирроло [3,4-c]пиррол-(1R)-ила, (3 aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1R)-ила, октагидро-5R-пирроло[3,2-c]пиридинила, октагидро-6R-пирроло[3,4b]пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6R-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aS,7aS)-октагидро-6R-пирроло[3,4b]пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1R)-ила, (7R,8aS)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин(1R)-ила, (8aS)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1R)-ила, (8aR)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-( 1R)ила, (8aS)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-( 1 R)-ила, (8aR)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1R)-ила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2R)-она, октагидро-2R-пиридо [ 1,2-а]пиразинила, 3 -азабицикло[3.1.0] гексила, (1R,5S)-3 -азабицикло [3.1.0]гексила, 8 -азабицикло [3.2.1] октила, (1R,5 S)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1] нонила, (1R,5 S)-9-азабицикло [3.3.1] нонила, 2,5 -диазабицикло [2.2.1] гептила, (1S,4S)-2,5диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-3,8диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила;
где R1 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем R4; или где R1 необязательно замещен одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями R3;
R2 представляет собой фенил;
где R2 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R6 и необязательно одним дополнительным заместителем R7;
каждый Ra независимо выбирают из водорода, галогена или C1-8алкила;
Rb представляет собой водород, галоген, C1-8алкил или C1-8αлкокси;
Rc представляет собой водород, галоген или C1-8алкил;
каждый R3 независимо выбирают из циано, галогена, гидрокси, оксо, C1-8αлкила, галоген-C1-8алкила, C1-8алкилкарбонила, C1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, C1-8алкокси-C1-8αлкила, C1-8алкоксикарбонила, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, амино-C1-8алкuла, C1-8алкиламино-C1-8алкила, (C1-8алкuл)2-аминоC1-8алкила, амино-C1-8алкиламино, C1-8αлкиламино-C1-8αлкuламино, (C1-8αлкиламино-C1-8αлкuл)2-амино, (C1-8αлкuл)2-амино-C 1-8алкиламино, [(C 1-8αлкил)2-амино-C 1-8алкил]2-амино, (C 1-8αлкuламино-C 1-8αлкuл)(C 1-8алкил)амино, [(C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил](C1-8алкил)амино, C1-8алкокси-C1-8алкиламино, (C1-8алкокси-C1-8алкил)2-амино, (C1-8алкокси-C1-8алкuл)(C1-8алкил)амино, C1-8алкилкарбониламино, C1-8αлкоксикарбониламино, гuдрокси-C1-8αлкuлα, гидрокси-C1-8алкокси-C1-8алкила, гидрокси-C1-8алкuламино, (гидрокси-C1-8алкил)2- 32 037123 амино или (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино;
R4 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С1-8- алкил, арил-С1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С1-8алкил; где каждый C3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R5;
каждый R5 независимо выбирают из галогена, гидрокси, циано, нитро, C1-8алкила, галоген-C1-8алкила, C1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино или C1-8алкилтио;
каждый R6 независимо выбирают из галогена, гидрокси, циано, нитро, C1-8алкила, C2-8алкенила, галоген-C1-8алкила, гидрокси-C1-8алкила, C1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, C1-8алкокси-C1-8алкила, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино или C1-8алкилтио и
R7 представляет собой C3-14циклоалкил, C3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил; где арил представляет собой моноциклический, бициклический или полициклический 6-14-членный ароматический радикал карбоциклической структуры;
гетероарил представляет собой моноциклический, бициклический или полициклический ароматический радикал карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены одним или несколькими гетероатомами, выбранными из атома O, S или N;
гетероциклил представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический, бициклический или полициклический ароматический радикал карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены гетероатомом, выбранными из атома O, S или N.
Популяция пациентов
Согласно некоторым вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят субъекту, страдающему SMA. Согласно другим вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят субъекту с предрасположенностью к SMA или чувствительному к ней. Согласно конкретному варианту осуществления, соединение формулы Согласно определенным вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят субъекту, который получит или может получить положительный эффект от усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2. Согласно конкретным вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят субъекту, который получит или может получить положительный эффект от усиления экспрессии белка Smn.
Согласно определенным вариантам осуществления соединение формулы (IIa1) или его форму вводят человеку в возрасте приблизительно от 0 приблизительно до 6 месяцев, приблизительно от 6 приблизительно до 12 месяцев, приблизительно от 6 приблизительно до 18 месяцев, приблизительно от 18 приблизительно до 36 месяцев, приблизительно от 1 года приблизительно до 5 лет, приблизительно от 5 приблизительно до 10 лет, приблизительно от 10 приблизительно до 15 лет, приблизительно от 15 приблизительно до 20 лет, приблизительно от 20 приблизительно до 25 лет, приблизительно от 25 приблизительно до 30 лет, приблизительно от 30 приблизительно до 35 лет, приблизительно от 35 приблизительно до 40 лет, приблизительно от 40 приблизительно до 45 лет, приблизительно от 45 приблизительно до 50 лет, приблизительно от 50 приблизительно до 55 лет, приблизительно от 55 приблизительно до 60 лет, приблизительно от 60 приблизительно до 65 лет, приблизительно от 65 приблизительно до 70 лет, приблизительно от 70 приблизительно до 75 лет, приблизительно от 75 приблизительно до 80 лет, приблизительно от 80 приблизительно до 85 лет, приблизительно от 85 приблизительно до 90 лет, приблизительно от 90 приблизительно до 95 лет, приблизительно от 95 приблизительно до 100 лет.
Согласно некоторым вариантам осуществления соединение формулы (IIa1) или его форму вводят младенцу. Согласно другим вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят начавшему ходить ребенку. Согласно другим вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят ребенку. Согласно другим вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят взрослому человеку. Согласно еще другим вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят пожилому человеку.
Согласно некоторым вариантам осуществления, соединение формулы (IIa1) или его форму вводят пациенту для предотвращения начала SMA у пациента с риском развития SMA. Согласно другим вариантам осуществления эффективное количество соединения формулы (IIa1) или его формы вводят пациенту для предотвращения начала SMA у пациента с риском развития SMA. Согласно другим вариантам осуществления профилактически эффективное количество соединения формулы (IIa1) или его формы вводят пациенту для предотвращения начала SMA у пациента с риском развития SMA. Согласно другим вариантам осуществления терапевтически эффективное количество соединения формулы (IIa1) или его формы вводят пациенту для предотвращения начала SMA у пациента с риском развития SMA.
Раскрытые в настоящем документе общие способы получения соединений формулы (IIA1) или их форм, описанных в настоящем документе, доступны посредством стандартной хорошо известной методологии синтеза. Многие из исходных веществ являются коммерчески доступными или, в случае недоступности, могут быть получены с использованием описанных ниже путей с использованием методик, известных специалистам в данной области техники. Представленные в настоящем документе схемы син
- 33 037123 теза включают несколько реакционных стадий, каждая из которых, как подразумевается, является самостоятельной и может быть проведена с или без любой(ых) предшествующей(их) или последующей(их) стадии(й). Другими словами, каждая из отдельных стадий реакций в схемах синтеза, приводимых в настоящем документе, рассматривается в отдельности.
Общие схемы синтеза
Схема A.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную, гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме A.
Метилкетоновое соединение A1 взаимодействует с диалкилкарбонатным соединением A1a (где Rx представляет собой C1-4αлкил и т.п.) в присутствии основания (такого как NaH и т.п.) в подходящем растворителе (таком как THF и т.п.) с получением соединения A3. В качестве альтернативы, сложноэфирное соединение A2 взаимодействовует со сложноэфирным соединением уксусной кислоты A2a (где Ry представляет собой C1-4αлкил и т.п.) в присутствии основания (такого как LDA и т.п.) в подходящем растворителе (таком как THF и т.п.) с получением соединения A3. Соединение A3 далее взаимодействует в присутствии спирта (такого как MeOH и т.п.) и катализатора-кислоты (такого как p-TsOH и т.п.) с получением ацетального соединения A4 (где Rz представляет собой C1-4aлкил и т.п.). Соединение A3 или соединение A4 взаимодействует с соединением A5 (где X представляет собой различные реакционноспособные группы, которые могут быть использованы для получения множества функциональных группзаместителей R1 путем осуществления взаимодействия подходящих исходных веществ с соединением A5 или соединением A6 с использованием способов, известных среднему специалисту в данной области техники) в присутствии кислоты (такой как PPA, p-TsOH и т.п.) и подходящего растворителя (такого как DMA и т.п.) с получением соединения A6.
Схема B.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме B.
Соединение B1 взаимодействует с соединением B2, необязательно замещенной гетероциклильной или гетероарильной кольцевой системой (где термин Het относится к амидиноподобному фрагменту, такому как без ограничения 2-аминопиридин, 2-аминопиримидин, 2-аминопиразин, 3-аминопиридазин, 2-аминотиазол, 4-аминотиазол, 4-аминопиримидин и т.п.), в подходящем растворителе (таком как MeOH и т.п.) с получением соединения B3. Соединение B3 взаимодействует со сложноэфирным соединением уксусной кислоты A2a (где Ry представляет собой C1-4aлкил и т.п.) в присутствии основания (такого как LDA и т.п.) в подходящем растворителе (таком как THF и т.п.) с получением соединения B4. Соединение B4 взаимодействует с соединением A5 в присутствии кислоты (такой как PPA, p-TsOH и т.п.) и подходящего растворителя (такого как DMA и т.п.) с получением соединения В5.
Схема C.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме C.
- 34 037123
2,4-Диэфирпиразольное соединение C1 взаимодействует с α-хлоркетоновым соединением C2 в присутствии основания (такого как K2CO3 и т.п.) и подходящего растворителя (такого как ацетон и т.п.) с получением соединения C3. Соединение C3 обрабатывают ацетатом аммония в подходящем растворителе (таком как AcOH и т.п.) с получением соединения C4. Соединение C4 обрабатывают хлорирующим реагентом (таким как POCl3 и т.п.) с получением соединения С5. Соединение C5 взаимодействует с алкилбороновой кислотой (где Z представляет собой B(OH)2, и Rz представляет собой C1.4αлкил и т.п.) или сложным эфиром алкилбороновой кислоты (где Z представляет собой B2(pin)2, также называемый бис(пинаколято)дибороном, и Rz представляет собой C1.4aлкил и т.п.) в присутствии катализатора (такого как Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такого как K2CO3 и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMF и т.п.) с проведением кросс-сочетания по Судзуки с получением соединения C6. Соединение C6 взаимодействует со сложноэфирным соединением уксусной кислоты A2a (где Ry представляет собой C1-4алкил и т.п.) в присутствии основания (такого как LDA и т.п.) в подходящем растворителе (таком как THF и т.п.) с получением соединения C7. Соединение C7 взаимодействует с соединением A5 в присутствии кислоты (такой как p-TsOH, PPTs и т.п.) и подходящим растворителем с получением соединения C8.
Схема D.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную или гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме D.
Соединение A5 взаимодействует со сложноэфирным малоновым соединением D1 (где Rw представляет собой C1-4алкил, 2,4,6-трихлорфенил и т.п.) с получением соединения D2. Соединение D2 обрабатывают хлорирующим реагентом (таким как POCl3 и т.п.) с получением соединения D3. Соединение D3 взаимодействует с R2-замещенной алкилбороновой кислотой (где Z представляет собой B(OH)2) или сложным эфиром алкилбороновой кислоты (где Z представляет собой B2(pin)2), где R2 представляет собой арил или гетероарил, в присутствии катализатора (такого как Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такой как K2CO3 и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMF и т.п.) с проведением кросс-сочетания по Судзуки с получением соединения A6.
Схема E.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме E.
Соединение E1 взаимодействует с соединением D3 в присутствии катализатора (такого как Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такого как K2CO3 и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMF и т.п.) с проведением кросс-сочетания по Судзуки с получением соединения E2. Соединение E2 взаимодействует с соединением C2 в подходящем растворителе (таком как DMSO и т.п.) с получением соединения E3.
Схема F.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую гете- 35 037123 роарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме F.
Необязательно замещенное 2-аминопиридиновое соединение F1 взаимодействует с бромирующим реагентом (таким как Br2 и NBS и т.п.) с получением соединения F2. Соединение F2 взаимодействует с соединением C2 в подходящем растворителе (таком как DMSO и т.п.) с получением соединения F3. Соединение F3 взаимодействует с соединением F3a в присутствии катализатора (такого как Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такого как KoAc и т.п.) в подходящем растворителе (таком как ацетонитрил и т.п.) с получением соединения F4. Соединение F4 взаимодействует с соединением D3 в присутствии катализатора (такого как Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такого как K2CO3 и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMF и т.п.) с проведением кросс-сочетания по Судзуки с получением соединения F5.
Схема G.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме G.
Необязательно замещенное азольное соединение G1 (где термин Het относится к азольной кольцевой системе, необязательно дополнительно содержащей один, два или три дополнительных кольцевых атома азота, где это допустимо с точки зрения валентности) взаимодействует с соединением D3 в подходящем растворителе (таком как DMSO и т.п.) с получением соединения G2.
Схема H.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную, гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме H.
Соединение H1 (где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную, гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему) взаимодействует с реагентом Бредерика, соединением H2 (или DMF-DMA и т.п.), с образованием соединения H3. Соединение H3 взаимодействует с соединением H4 (где X представляет собой различные реакционноспособные группы, которые могут быть использованы для получения множества функциональных групп-заместителей R1 путем осуществления взаимодействия подходящих исходных веществ с соединением H4 или соединением H5 с использованием методик, известных среднему специалисту в данной области техники) с получением соединения H5.
Схема I.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную или гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме I.
D3 (X = Вг)
Соединение D3 (где X представляет собой бром и т.п.) взаимодействует с R2-замещенной алкилбороновой кислотой (где Z представляет собой B(OH)2) или сложным эфиром алкилбороновой кислоты (где Z представляет собой B2(pin)2), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную или гетероарильную кольцевую систему и т.п., в присутствии катализатора (такого как
- 36 037123
Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такого как K2CO3 и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMF и
т.п.) с проведением кросс-сочетания по Судзуки с получением соединения II. Соединение II взаимодействует с R1-H (где R1 содержит нуклеофильную амино или гидроксильную группу и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMSO и т.п.) с получением соединения 13.
Соединение II также может взаимодействовать с R1-замещенной алкилбороновой кислотой (где Z представляет собой B(OH)2) или сложным эфиром алкилбороновой кислоты (где Z представляет собой B2(pin)2) в присутствии палладиевого катализатора (такого как Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такого как K2CO3 и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMF и т.п.) с проведением сочетания по Судзуки с получением соединения 13.
В качестве альтернативы, соединение D3 (где X представляет собой бром и т.п.) может взаимодействовать с R1-H (где R1 содержит нуклеофильную амино или гидроксильную группу и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMSO и т.п.) с получением соединения I2. Соединение I2 взаимодействует с R2замещенной алкилбороновой кислотой (где Z представляет собой B(OH)2) или сложным эфиром алкилбороновой кислоты (где Z представляет собой B2(pin)2) в присутствии катализатора (такого как Pd(dppf)Cl2 и т.п.) и основания (такого как K2CO3 и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DMF и т.п.) с проведением кросс-сочетания по Судзуки с получением соединения I3.
Схема J.
Соединения формулы (IIa1), где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную, гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему, могут быть получены, как представлено ниже на схеме J.
Соединение J1 (где R2 представляет собой моноциклическую или бициклическую арильную, гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему) взаимодействует со сложноэфирным малоновым соединением D1 в присутствии основания (такого как TEA или DIEA и т.п.), кислоты Льюиса (такой как MgCl2 и т.п.) и подходящего растворителя (такого как ACN и т.п.) с получением соединения J2. Соединение J2 обрабатывают хлорирующим реагентом (таким как POCl3 и т.п.) в присутствии основания (такого как основание Хунига и т.п.) с получением соединения J3.
Соединение J3 взаимодействует с соединением J4 (где X представляет собой различные реакционноспособные группы, которые могут быть использованы для получения множества функциональных групп-заместителей R1 путем осуществления взаимодействия подходящих исходных веществ с соединением J4, соединением J5 или соединением J6 с использованием методик, известных среднему специалисту в данной области техники) в присутствии основания (такого как NaH и т.п.) и подходящего растворителя (такого как DMF и т.п.) с получением соединения J5. Сложноэфирные группы соединения J5 могут быть гидролизованы и декарбоксилированы в кислых условиях (таких как TFA и т.п.) в подходящем растворителе (таком как вода и т.п.) с получением соединения J6.
Rb RwO2C^CO2Rw Rb CO2Rw Rb ΚΥύ' D1 -yVW
Λ^Ν ----' JUn 2) H+ JI N
J7 Ra J8 Ra J4 Ra
Соединение J7 (где X представляет собой различные реакционноспособные группы, которые могут быть использованы для получения множества функциональных групп-заместителей Ri путем осуществления взаимодействия подходящих исходных веществ с соединением J7, соединением J8 или соединением J4 с использованием методик, известных среднему специалисту в данной области техники) взаимодействует со сложным диэфирным малоновым соединением D1 в присутствии основания (такого как Cs2CO3 и т.п.), катализатора-металла (такого как CuI и т.п.) и лиганда (такого как 2-никотиновая кислота и т.п.) в присутствии подходящего растворителя (такого как 1,4-диоксан и т.п.) с получением сложного диэфирного соединения J8. Сложноэфирные группы соединения J8 могут быть гидролизованы с использованием основания (такого как NaOH и т.п.) в подходящей системе растворителей (такой как MeOH и вода и т.п.), с последующим декарбоксилированием и подкислением добавлением кислоты (такой как HCl и т.п.) в подходящем растворителе (таком как вода и т.п.) с получением соединения J4.
Конкретные примеры синтеза
Для более детального описания и содействия в понимании, последующие неограничивающие примеры предложены с целью более полной иллюстрации объема соединений, описанных в настоящем документе, и не должны истолковываться как прямо ограничивающие их объем. Варианты соединений,
- 37 037123 описанных в настоящем документе, которые могут быть известны к настоящему времени или разработаны позднее, которые установлены как находящиеся в компетенции специалиста в данной области техники, считаются подпадающими под объем соединений, описанных в настоящем документе и заявленных в представленной ниже формуле изобретения. Указанные примеры иллюстрируют получение определенных соединений. Специалистам в данной области техники следует понимать, что описанные в указанных примерах методики представляют собой методики, описанные средними специалистами в данной области техники, которые хорошо работают в приктике синтеза, а потому представляют собой предпочтительные условия их практического осуществления. Однако следует учитывать, что специалисты в данной области техники должны в полной мере понимать, что в свете раскрытия настоящего изобретения в конкретно раскрытых способах могут быть осуществлены многие изменения с получением, тем не менее, похожего или того же самого результата без выхода рамки сущности и объема настоящего описания.
Если не указано обратное, что кроме как в последующих примерах представленных соединений, все использованные в описании и формуле изобретения числовые показатели, выражающие количества ингредиентов, условия проведения реакций, экспериментальные данные, и т.д., следует понимать с учетом применения термина приблизительно. Соответственно, все такие числовые показатели представляют собой приблизительные значения, которые могут варьировать в зависимости от целевых свойств, которые стремятся получить в реакции, или в результате варьирующих условий проведения реакций. Поэтому, в рамках ожидаемого диапазона воспроизводимости проводимого эксперимента, термин приблизительно относится в контексте полученных данных к диапазону представленных данных, которые могут варьировать в соответствии со стандартным отклонением от среднего значения. Кроме того, применительно к представленным результатам экспериментов полученные данные могут быть округлены в большую или меньшую сторону для единообразного представления данных без ущерба для значащих цифр. Как самое меньшее, но не как попытка ограничить применение теории эквивалентов к объему формулы изобретения, каждый числовой параметр следует истолковывать в свете методик определения числа значимых цифр и округления, использованных специалистами в данной области техники.
Хотя числовые диапазоны и параметры, изложенные в широком понимании объема настоящего описания, представляют собой приблизительные значения, числовые значения, приведенные в представленных ниже примерах, приводятся насколько это возможно точно. Тем не менее, любое числовое значение изначально содержит определенные ошибки, являющиеся результатом непременно существующего стандартного отклонения, обнаруживаемого при их соответствующих опытных замерах.
Примеры соединений
Если не указано иное, то следует понимать, что следующие сокращения, использованные выше и на всем протяжении настоящего документа, характеризуются следующими значениями:
Сокращение Значение
Δ нагревание (химия) или делеция (биология)
АсОН или НОАс уксусная кислота
Ас2О уксусный ангидрид
Аг аргон
ACN ацетонитрил
BINAP 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафалин
В(OiPr)з триизопропилборат
Вос трет-бутоксикарбонил
Вос20 ди-трет-бутилдикарбонат
ВиОН н-бутанол
°C градусы Цельсия
CDI 1,1-карбонилдиимидазол или Ν,N'-карбонилдиимидазол
(СНО)П или (НСНО)П параформальдегид
- 38 037123
сут/ч/мин/с сутки(суток)/час(часов)/минута(минут)/секунда (секунд)
DavePhos 2-дициклогексилфосфино-2'-(Ν,Νдиметиламино)бифенил
DCE 1,2-дихлорэтан
DCM дихлорметан (СН2С12)
DI AD диизопропилазодикарбоксилат
DIEA или DI PEA Ν,N-диизопропилэтиламин
DMA диметилацетамид
DMAP 4-(диметиламино)пиридин
DME 1,2-диметоксиэтан
DMF диметилформамид
DMSO диметилсульфоксид
EDC или EDCI Ν-(3-диметиламинопропил)-Ν'-этилкарбодиимида гидрохлорид
EtOAc этилацетат
EtOH этанол
Et2O диэтиловый эфир
HCOH формальдегид
iPrl йодпропан
JohnPhos (2-бифенил)-ди-трет-бутилфосфин
KOAc ацетат калия
LAH алюмогидрид лития
LC/MS, LCMS или LC-MS жидкостная хроматография/масс-спектрометрия
LDA диизопропиламин лития
LiHMDS или LHMDS бис(триметилсилил)амид лития
MeOH метанол
Mel йодметан
Me-THF 2-метилтетрагидрофуран
Me2Zn диме тилцинк
MnO2 диоксид марганца
MC масс-спектрометрия
NaH гидрид натрия
NaHS гидросульфид натрия
- 39 037123
NaHMDS бис(триметилсилил)амид натрия или гексаметилдисилазид натрия
Nai йодид натрия
NaOAc ацетат натрия
NaOMe метоксид натрия
NBS N-бромсукцинимид
NMP N-метилпирролидон
ЯМР ядерный магнитный резонанс
o/n в течение ночи
Pd палладий
Pd/C палладированный уголь
Pd(dba)2 бис(дибензилиденацетон)палладий
Pd2(dba)3 или Pd2dba3 трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0)
PdCl2(PhCN)2 транс-бис(бензонитрил)дихлорпалладий(II)
PdCl2(dppf), PdCl2dppf или Pd (dppf) Cl2 [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II)
Pd(OAc)2 ацетат палладия(II)
Pd (PPh3) 4 или Pd(Ph3P)4 тетракис(трифенилфосфин)палладий(0)
Pd(PPh3)2Cl2, PdCl2 (PPh3) 2 или PdCl2(Ph3P)2 дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия (II)
PHBu3BF4 или tBu3PHBF4 тетрафторборат три-трет-бутилфосфония
Phi йодбензол
Phi(OTFA)2 [бис(трифторацетокси)йод]бензол
PhMe толуол
Ph-NTf2 или PhNTf2 N-фенилтрифлимид, также называемый как N-фенилбис(трифторметансульфонамид)
POC13 фосфорилхлорид
PPh3 трифенилфосфин
PPA полифосфорная кислота
PPTs пара-толуолсульфонат пиридиния
- 40 037123
Psi давление в фунтах на квадратный дюйм
РуВОР гексафторфосфат (бензотриазол-1илокси)трипирролидинофосфония
к.т. комнатная температура
S-Phos, SPhos или Sphos 2-дициклогексилфосфино-2’,6’-диметоксибифенил
Т3Р пропилфосфоновый ангидрид
TEA, Et3N или NEt3 триэтиламин
Tf2O трифторметансульфоновый ангидрид
TFA трифторуксусная кислота
THF тетрагидрофуран
TLC тонкослойная хроматография
TMS триметилсилан
TMSC1 триметилхлорсилан или триметилсилилхлорид
TMS OK триметилсиланолят калия
t-Bu трет-бутил
TsOH, p-TsOH или pTSA тозиловая кислота или пара-толуолсульфоновая кислота
xantphos 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен
Пример 1. Получение соединения 72
Стадия A:
3'-Фтор-4'-метоксиацетофенон (336 мг, 2 ммоль) растворяли в THF (4 мл). К раствору последовательно добавляли диметилкарбонат (0,42 мл, 5 ммоль) и гидрид натрия (200 мг, 5 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле). Смесь нагревали до 60°C в течение 30 мин. После охлаждения смеси до 0°C, оставшийся гидрид натрия гасили добавлением 1н водного HCl (20 мл). Смесь экстрагировали EtOAc (20 мл). Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток элюировали с силикагеля EtOAc (25%) в гексанах, с получением метил-3-(3-фтор-4метоксифенил)-3-оксопропаноата в виде бледно-желтого масла (405 мг, 89%). МС m/z 227,2 [M+H]+;
1H ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ 7,76 (1H, дд, J=8,6 Гц, 2,1 Гц), 7,72 (1H, дд, J=11,7 Гц, 2,2 Гц), 7,04 (1H, т, J=8,4 Гц), 3,99 (3H, с), 3,97 (2H, с), 3,78 (3H, с).
Стадия B:
Метил-3-(3-фтор-4-метоксифенил)-3-оксопропаноат (405 мг, 1,8 ммоль) растворяли в метаноле (1 мл). К раствору добавляли моногидрат пара-толуолсульфоновой кислоты (17 мг, 0,09 ммоль), а затем триметилортоформиат (0,30 мл, 2,7 ммоль). Раствор перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Летучие вещества удаляли под струей азота с получением неочищенного метил-3-(3-фтор-4-метоксифенил)-3,3 диметоксипропаноата.
1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 7,18-7,15 (3H, м), 3,85 (3H, с), 3,38 (3H, с), 3,10 (6H, с), 2,98 (2H, с).
Стадия C:
К неочищенному веществу (1,8 ммоль), полученному на стадии B, добавляли 5-фторпиридин-2амин (213 мг, 1,9 ммоль). Смесь нагревали неразбавленной до 160°C в течение 1 ч с получением 7-фтор2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (475 мг, 92%). МС m/z 289,2 [M+H]+;
Ή ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ 8,99 (1H, м), 7,92 (1H, дд, J=12,5 Гц, 2,2 Гц), 7,90 (1H, д, 8,5 Гц), 7,88 (1H, м), 7,73 (1H, м), 7,10 (1H, т, J=8,5 Гц), 6,85 (1H, с), 3,99 (3H, с).
Стадия D:
7-Фтор-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (200 мг, 0,7 ммоль) объединяли с пиперазином (430 мг, 3,5 ммоль) в диметилацетамиде (0,5 мл). Смесь перемешивали при 150°C в течение 0,5 ч, а затем подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 0% ^ 8% MeOH (3% NH3) в CH2Cl2. Указанное в заголовке соединение получали в виде желтого порошка (175 мг, 71%). Т.пл. 191195°C; МС m/z 355,0 [M+H]+;
- 41 037123
1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,20 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,07-8,02 (3H, м), 7,67 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,28 (1H, т, J=8,7 Гц), 6,93 (1H, с), 3,13 (4H, м), 2,90 (3H, с), 2,88 (4H, м), 2,34 (1H, шир.с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 1 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 2. Получение соединения 239
Вос \
80° С, 18 ч
НСНО, Н2О,
DCE, NaBH(OAc)3, У Π
к.т., 15 мин 1 О
Стадия A:
Смесь 7-бром-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (250 мг, 0,72 ммоль), (R)-трет-бутил-3-(метиламино)пирролидин-1-карбоксилата (180 мг, 0,90 ммоль), Pd2dba3 (61 мг, 0,065 ммоль), дициклогексил(2',6'-диметоксибифенил-2-ил)фосфина (SPhos, 78 мг, 0,19 ммоль), Cs2CO3 (500 мг, 1,53 ммоль) и 1,2-диметоксиэтана (DME, 2,0 мл) перемешивали в атмосфере аргона при 80°C в течение 18 ч. Реакционную смесь затем разбавляли CH2Cl2/MeOH (9/1) и фильтровали для удаления твердых веществ. Фильтрат концентрировали в условиях вакуума. Путем проведения хроматографии на силикагеле (10% ^ 20% ацетон в CH2Cl2) с последующей промывкой эфиром получали (R)-трет-бутил-3-((2-(3фтор-4-метоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)(метил)амино)пирролидин-1 -карбоксилат (132 мг, 39%) в виде светло-рыжеватого твердого вещества. МС m/z 469,0 [M+H]+.
Стадия B:
Раствор (R)-трет-бутил-3 -((2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7ил)(метил)амино)пирролидин-1-карбоксилата (130 мг, 0,28 ммоль) в CH2Cl2 (2,0 мл) и TFA (500 мкл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь вливали в 1н раствор NaOH (50 мл). Продукт экстрагировали введением в CH2Cl2/EtOH (9/1). Органический слой концентрировали в условиях вакуума. Путем проведения хроматографии на силикагеле (CH2Cl2/MeOH/NH4OH = 9/1/0,1) получали (R)-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-(метил(пирролидин-3-ил)амино)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (82 мг, 79%) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 369,1 [M+H]+.
Стадия C:
Смесь (R)-2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-7-(метил(пирролидин-3 -ил)амино)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-она (45 мг, 0,12 ммоль), DCE (500 мкл), формальдегида (37% мас./мас, в H2O, 200 мкл) и NaBH(OAC)3 (85 мг, 0,40 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь добавляли к водному раствору K2CO3, и экстрагировали указанный в заголовке продукт введением в CH2Cl2. Органический слой концентрировали в условиях вакуума. Путем проведения хроматографии на силикагеле (10% MeOH в CH2Cl2) получали указанное в заголовке соединение (39 мг, 85%) в виде не совсем белого твердого вещества. Т.пл. 143-149°C; МС m/z 383,5 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,13 (д, 1H, J=3 Гц), 8,0-8,1 (м, 3H), 7,69 (д, 1H, J=10 Гц), 7,29 (т, 1H, J=9,0 Гц), 6,90 (с, 1H), 4,58 (м, 1H), 3,92 (с, 3H), 2,93 (3H, с), 2,81 (м, 1H), 2,75 (м, 1H), 2,49 (м, 1H, замаскированный DMSO-d6), 2,20 (м, 2H), 2,28 (с, 3H), 1,76 (м, 1H).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 2 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 3. Получение соединения 6
ЕК\/Х/
О О
Стадия A:
Смесь этил-3-(3,4-диметоксифенил)-3- оксопропаноата (2,02 г, 8,0 ммоль), 2-амино-5-фторпиридина
- 42 037123 (0,897 г, 8,0 ммоль) и p-TsOH (152 мг, 0,8 ммоль) нагревали при 150°C. Смесь плавилась, а затем отверждалась. Спустя 1 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и промывали MeCN с получением 2(3,4-диметоксифенил) -7-фтор-4Н-пиридо [1,2a]пиримидин-4-она в виде желтого твердого вещества (1,356 г, 56%). МС m/z 367,5 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,92 (1H, дд, J=2,9 Гц, 4,8 Гц), 8,11-8,07 (1H, м), 7,85-7,82 (1H, м), 7,77 (1H, д, J=2,1 Гц), 7,09 (1H, д, J=8,6 Гц), 7,06 (1H, с), 6,93 (1H, с), 3,88 (3H, с), 3,84 (3H, с).
Стадия В:
Смесь 2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (1,50 г, 5,0 ммоль), пиперазина (1,29 г, 15 ммоль) и DIEA (1,3 мл, 7,5 ммоль) в DMSO (10 мл) нагревали при 120°C. Спустя 15 ч, летучие вещества удаляли и промывали остаток MeCN с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (1,674 г, 91%). Т.пл. 182-184°C; МС m/z 367,5 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,20 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,04 (1H, дд, J=2,8 Гц, 9,8 Гц), 7,79 (1H, дд, J=2,1 Гц, 8,5 Гц), 7,74 (1H, д, J=2,1 Гц), 7,67 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,07 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,93 (1H, с), 3,87 (3H, с), 3,83 (3H, с), 3,12 (4H, м), 2,88 (4H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 3 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 4. Получение соединения 1
Стадия A:
Смесь этил-3-(3-метоксифенил)-3-оксопропаноата (2,68 мл, 14,0 ммоль) и 2-амино-5-фторпиридина (1,12 г, 10,0 ммоль) в PPA (~5 г) нагревали при 120°C. Спустя 0,5 ч темно-пурпурную смесь охлаждали до комнатной температуры и обрабатывали водой со льдом. Осадок фильтровали, промывали водой и MeCN с получением 2-(4-метоксифенил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде слегка желтого твердого вещества (1,758 г, 65%). МС m/z 271,2 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 3, стадия B, из 7-фтор-2-(4-метоксифенил)-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-она (81 мг, 0,3 ммоль) и пиперазина (12 9 мг, 1,5 ммоль) в DMSO (1 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (66 мг, 66%). Т.пл. 182-184°C; МС m/z 337,3 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,20 (1H, д, J=2,6 Гц), 8,16 (2H, дд, J=2,0 Гц, 7,0 Гц), 8,05 (1H, дд, J=2,7 Гц, 9,7 Гц), 7,67 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,05 (2H, д, J=1,9 Гц, 7,0 Гц), 6,86 (1H, с), 3,83 (3H, с), 3,12 (4H, м), 2,87 (4H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 4 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 5. Получение соединения 81 и соединения 82
2) MeONHMe DIEA, DCM, 0 °C
1)(СОС1)2
DCM, нагрев с обр. хол-ком, 2 ч реагент Джонса ацетон к.т., 15 ч
Ме2СО3
NaH, THF 75 °C
Стадия A:
К раствору 4-метокси-3-(трифторметокси)бензальдегида (1,0 г, 4,5 ммоль) в ацетоне (30 мл) добавляли реагент Джонса (5 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 15 ч добавляли метанол (2 мл) и фильтровали смесь. Фильтрат концентрировали, растворяли в EtOAc и промывали во- 43 037123 дой. Органические фазы сушили и концентрировали с получением 4-метокси-3(трифторметокси)бензойной кислоты в виде белого твердого вещества (1,02 г, 96%). МС m/z 235,2
[M+H]+.
Стадия B:
К раствору 4-метокси-3-(трифторметокси)бензойной кислоты (1,02 г, 4,32 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли оксалилхлорид (5 мл). После нагревания с обратным холодильником в течение 6 ч раствор концентрировали с получением 4-метокси-3-(трифторметокси)бензоилхлорида. Неочищенный хлорангидрид растворяли в DCM (10 мл) и охлаждали до 0°C. Добавляли диизопропилэтиламин (1,56 мл, 9,0 ммоль) и N,O-диметилгидроксиламин (0,658 г, 6,7 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч смесь промывали водой. Органические фазы сушили, концентрировали и подвергали хроматографии (5% EtOAc в CH2Cl2) с получением 4-диметокси-К-метил-3(трифторметокси)бензамид в виде янтарного масла (0,58 г, 48%).
Стадия C:
К раствору 4-диметокси-К-метил-3-(трифторметокси)бензамида (0,58 г, 2,08 ммоль) в THF (8 мл) при 0°C добавляли MeMgBr (3,0М, 0,8 3 мл, 2,5 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 15 ч раствор промывали водой. Органические фазы сушили и концентрировали с получением 1-(4-метокси-3-(трифторметокси)фенил)этанона в виде белого твердого вещества (0,45 г, 96%).
Стадия D:
К раствору неочищенного 1-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)этанона (0,45 г, 2,0 ммоль) м диметилкарбоната (1,5 мл, 18,2 ммоль) в THF (8 мл) при комнатной температуре добавляли NaH (60%, 0,44 г, 10,9 ммоль). После нагревания при 75°C в течение 20 мин смесь гасили добавлением NH4Cl (нас.). Значение pH смеси корректировали до нейтральных значений добавлением 1н HCl. Смесь экстрагировали EtOAc. Органические фазы сушили и концентрировали с получением метил-3-(4-метокси-3(трифторметокси)фенил)-3-оксопропаноата. МС m/z 299,1 [M+H]+. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия E:
Раствор неочищенного метил-3-(4-метокси-3-(трифторметокси)фенил)-3-оксопропаноата (2 ммоль), полученного на стадии D, p-TsOH (38 мг, 0,2 ммоль) и триметоксиметана в MeOH (4 мл) нагревали при 60°C. Спустя 1 ч летучие вещества удаляли и добавляли 2-амино-5-фторпиридин (0,224 г, 2,0 ммоль). Смесь нагревали при 150°C в течение 1 ч охлаждали до комнатной температуры и промывали MeCN с получением 7-фтор-2-(4-метокси-3-(трифторметокси)фенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (146 мг, 21%). МС m/z 355,1 [M+H]+.
Стадия F:
Смесь 7-фтор-2-(4-метокси-3-(трифторметокси)фенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (71 мг, 0,2 ммоль), пиперазина (38 мг, 0,4 ммоль) и диизопропилэтиламина (69 мкл, 0,4 ммоль) в DMSO (0,5 мл) нагревали при 120°C. Спустя 15 ч летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии (20% MeOH в DCM) с получением двух продуктов:
Соединение 81 (8 мг, 9%) получали в виде желтого твердого вещества. Т.пл. 158-162°C; МС m/z 421,1 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-de): δ 8,26 (1H, д, J=2,6 Гц), 8,24 (1H, дд, J=2,2 Гц, 8,8 Гц), 8,19 (1H, м), 8,08 (1H, дд, J=2,8 Гц, 9,7 Гц), 7,75 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,37 (1H, д, J=8,8 Гц), 6,99 (1H, с), 3,94 (3H, с), 3,07 (4H, м), 2,50 (4H, м, замаскированный DMSO-d6); и соединение 82 (9 мг, 11%) получали в виде желтого твердого вещества. Т.пл. 245-248°C; МС m/z 407,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,21 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,11 (1H, м), 8,07-8,03 (2H, м), 7,68 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,11 (1H, д, J=8,6 Гц), 6,87 (1H, с), 3,14 (4H, м), 2,88 (4H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 5 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 6. Получение соединения 70
К суспензии 2-(3,4-диметоксифенил)-9-фтор-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (38 мг, 0,1 ммоль, полученного в соответствии с методиками, описанными в примере 3, стадии A и B, в MeOH (0,5 мл) добавляли NaOMe (0,5M в MeOH, 1 мл, 0,5 ммоль). После нагревания при 80°C в течение 15 ч летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии (10-15% MeOH в CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (18 мг, 45%). Т.пл. 185187°C; МС m/z 397,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,20 (1H, д, J=2,5 Гц), 7,80 (2H, м), 7,08 (1H, д, J=9,0 Гц), 7,00 (1H, с), 6,97 (1H, д, J=2,5 Гц), 3,89 (3H, с), 3,87 (3H, с), 3,83 (3H, с), 3,30 (4H, м), 2,98 (4H, м).
- 44 037123
Пример 7. Получение соединения 74
Стадия A:
К раствору 2-амино-5-метилпиразина (1,09 г, 10 ммоль) в DME (10 мл) добавляли этил-3-бром-2оксопропаноат (1,57 мл, 12,5 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Осадок фильтровали, промывали Et2O и сушили с получением желтого твердого вещества. Твердое вещество суспендировали в EtOH (20 мл) и нагревали при 90°C. Спустя 1,5 ч полученный коричневый раствор концентрировали и корректировали значение pH до 7. Смесь экстрагировали EtOAc. Органические фазы концентрировали, остаток растирали и промывали MeCN с получением этил-6-метилимидазо[1,2a]пиразин-2-карбоксилата в виде коричневого твердого вещества (0,993 г, 48%). МС m/z 206,2 [M+H]+.
Стадия В:
К раствору этил-6-метилимидазо[1,2-a]пиразин-2-карбоксилата (0,971 г, 4,73 ммоль) и EtOAc (0,98 мл, 10 ммоль) в толуоле (2 мл) и Me-THF (8 мл) при комнатной температуре добавляли NaH (60%, 0,503 мг, 12,6 ммоль). После нагревания при 70°C в течение 30 мин, смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили добавлением льда, корректировали значение pH до 7 добавлением 1н HCl и экстрагировали EtOAc. Органические фазы объединяли, сушили, концентрировали и подвергали хроматографии с получением этил-3-(6-метилимидазо[1,2-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата в виде коричневатого масла (0,93 г, 78%).
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 1, стадия B, из этил-3-(6-метилимидазо[1,2-a]пиразин-2-ил)3-оксопропаноата (0,913 г, 3,7 ммоль), моногидрата пара-толуолсульфоновой кислоты (70 мг, 0,37 ммоль) и триметилортоформиата (0,81 мл, 7,4 ммоль) в MeOH (10 мл) получали кеталь, который использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 1, стадия C, из неочищенного диметоксипропаноата (полученного на стадии C) и 2-амино-5-фторпиридина (0,422 г, 3,7 ммоль) получали 7-фтор-2-(6метилимидазо[1,2-a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он в виде коричневатого твердого вещества (0,344 г, 31%). МС m/z 295,9 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 9,09 (1H, с), 8,97-8,96 (1H, м), 8,67 (1H, с), 8,47 (1H, с), 8,15-8,11 (1H, м), 7,85-7,82 (1H, м), 7,08 (1H, с), 2,42 (3H, с).
Стадия E:
Следуя методике, описанной в примере 3, стадия В, из 7-фтор-2-(6-метилимидазо[1,2-a]пиразин-2ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (59 мг, 0,2 ммоль) и пиперазина (52 мг, 0,6 ммоль) в DMSO (0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (28 мг, 39%). Т.пл. 221-225°C; МС m/z 362,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 9,07 (1H, с), 8,62 (1H, с), 8,46 (1H, с), 8,25 (1H, д, J=2,6 Гц), 8,09 (1H, д, J=2,7 Гц, 9,7 Гц), 7,67 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,00 (1H, с), 3,16 (4H, м), 2,90 (4H, м), 2,44 (3H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 7 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 8. Получение соединения 29
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 7, стадия A, из 2-амино-5-метилпиридина (5,41 г, 50 ммоль)
- 45 037123 и этил-3-бром-2-оксопропаноата (7,0 мл, 50 ммоль) в MeOH (50 мл) получали этил-6-метилимидазо[1,2а]пиридин-2-карбоксилат в виде желтоватого твердого вещества (9,50 г, 93%). МС m/z 205,1 [M+H]+.
Стадия В:
Следуя методике, описанной в примере 7, стадия B, из этил-6-метилимидазо[1,2-a]пиридин-2карбоксилата (0,55 г, 2,5 ммоль), EtOAc (0,29 мл, 5,0 ммоль) и NaH (60%, 0,20 г, 5 ммоль) в толуоле (5 мл) получали этил-3-(6-метилимидазо[1,2-a]пиридин-2-ил)-3-оксопропаноат в виде желтого твердого вещества (0,62 г, 100%). МС m/z 243,1 [M+H]+.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 4, стадия A, из этил-3-(6-метилимидазо[1,2-a]пиридин-2ил)-3-оксопропаноата (246 мг, 1,0 ммоль) и 2-амино-5-фторпиридина (334 мг, 1,2 ммоль) в PPA (—5 г) получали 7-фтор-2-(6-метилимидазо[1,2-a]пиридин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он в виде желтого твердого вещества (17 мг, 6%). МС m/z 295,2 [M+H]+.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 3, стадия В, из 7-фтор-2-(6-метилимидазо[1,2-a]пиридин-2ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (17 мг, 0,06 ммоль) и пиперазина (30 мг, 0,3 ммоль) в DMSO (10 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде светло-коричневого твердого вещества (19 мг, 83%). Т.пл. 193-198°C; МС m/z 361,3 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,48 (1H, с), 8,41 (1H, с), 8,25 (1H, д, J=2,6 Гц), 8,06 (1H, дд, J=2,7 Гц, 9,7 Гц), 7,66 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,55 (1H, д, 9,3 Гц), 7,18 (1H, д, J=9,3 Гц), 6,96 (1H, с), 3,23 (4H, м), 3,01 (4H, м), 2,29 (3H, с).
Пример 9. Получение соединения 170 о
NH4OAC
АсОН нагрев с обр. хол-ком 60 ч
МеВ(ОН)2
Pd(PPh3)2CI2
К2СО3, DMF 100 °C, 15 ч >=N λ— EtOH
Ν— нагрев с обр. хол-ком
о
Стадия A:
К раствору диэтил-1H-пиразол-3,5-дикарбоксилата (10,0 г, 47 ммоль) и хлорацетона (3,76 мл, 47 ммоль) в ацетоне (200 мл) добавляли карбонат калия (7,2 г, 52 ммоль). После нагревания при 30°C в течение 6 ч смесь концентрировали для удаления летучих веществ. Остаток переносили в EtOAc и промывали водой. Органические фазы сушили над MgSO4 и концентрировали с получением диэтил-1-(2оксопропил)-1H-пиразол-3,5-дикарбоксилата в виде светло-коричневого твердого вещества, которое использовали непосредственно на следующей стадии. МС m/z 269,1 [M+H]+.
Стадия B:
К раствору диэтил-1-(2-оксопропил)-1H-пиразол-3,5-дикарбоксилата (—47 ммоль) в уксусной кислоте (300 мл) добавляли ацетат аммония (72 г, 940 ммоль). После нагревания с обратным холодильником в течение 48 ч смесь концентрировали до минимального объема и разбавляли водой. Осадок фильтровали, промывали водой и MeCN с получением этил-4-гидрокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2карбоксилата в виде рыжеватого твердого вещества (6,7 г, 64%). МС m/z 222,1 [M+H]+.
Стадия C:
Смесь этил-4-гидрокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата (7,18 г, 32,5 ммоль) в POCl3 (80 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 15 ч. Темную смесь концентрировали и промывали MeCN с получением этил-4-хлор-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата (5,197 г) в виде не совсем белого твердого вещества. Фильтрат концентрировали и подвергали хроматографии с получением дополнительно 1,42 г продукта (6,617 г, 85%). МС m/z 240,1 [M+H]+, 242,1 [M+2+H]+.
Стадия D:
Смесь этил-4-хлор-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата (5,197 г, 21,7 ммоль), MeB(OH)2 (3,90 г, 65,1 ммоль), K2CO3 (14,8 г, 107,5 ммоль) и Pd(PPh3)2Cl2 (456 мг, 0,65 ммоль) в DMF (100 мл) дегазировали и нагревали в атмосфере N2 в течение 15 ч. Смесь концентрировали на роторном испарителе с
- 46 037123 удалением большей части DMF и промывали водой. Остаток подвергали хроматографии (2% ^ 5%
MeOH в CH2Cl2) с получением этил-4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (3,90 г, 82%). МС m/z 220,1 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,54 (1H, с), 7,49 (1H, с), 4,36 (2H, кв., J=7,2 Гц), 2,70 (3H, с), 2,42 (3H, с), 1,34 (3H, т, J=7,2 Гц).
Стадия E:
К раствору трет-бутилацетата (1,63 мл, 12,1 ммоль) в THF (50 мл) при -78°C добавляли LDA (1,5М, 0,97 мл, 14,5 ммоль). Спустя 0,5 ч раствор при -30°C добавляли через канюлю к раствору этил-4,6диметилпиразоло[1,5-a]пирαзин-2-карбоксилата (1,33 г, 6,07 ммоль) в THF (100 мл). Спустя 1 ч смесь гасили добавлением насыщенного NH4Cl, значение pH корректировали до 5-6 и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы сушили и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии (2% ^ 4% MeOH в CH2Cl2) с получением трет-бутил-3-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3оксопропаноата в виде желтого масла (1,696 г, 97%). МС m/z 290,2 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,57 (1H, с), 7,50 (1H, с), 4,02 (2H, с), 2,70 (3H, с), 2,43 (3H, с), 1,38 (9H, с).
Стадия F:
Раствор трет-бутил-3-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата (4,86 г, 16,8 ммоль) в EtOH (30 ммоль) нагревали при 120°C в закрытой крышкой пробирке. Спустя 1 ч раствор охлаждали до комнатной температуры, и удаляли летучие вещества с получением этил-3-(4,6диметилпиразоло[1,5-a]пирαзин-2-ил)-3-оксопропаноата в виде желтого твердого вещества (4,44 г, 98%). МС m/z 262,2 [M+H]+.
Стадия G:
Смесь 2-амино-5-фторпиридина (134 мг, 1,2 ммоль), этил-3-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2ил)-3-оксопропаноата (261 мг, 1,0 ммоль) и PPTs (12,6 мг, 0,05 ммоль) нагревали при 130°C. Спустя 8 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и подвергали хроматографии с получением 2-(4,6диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде желтого твердого вещества (220 мг, 71%). МС m/z 310,2 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,97-8,95 (1H, м), 8,55 (1H, с), 8,16-8,12 (1H, м), 7,87-7,85 (1H, м), 7,56 (1H, с), 7,03 (1H, с), 2,73, (3H, с), 2,43 (3H, с).
Стадия H:
Следуя методике, описанной в примере 3, стадия B, из 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (309 мг, 1,0 ммоль) и пиперазина (1,1 мл, 10 ммоль) в DMA (1,0 мл), получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (313 мг, 80%). Т.пл. 254-256°C;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,55 (1H, с), 8,27 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,12 (1H, дд, J=2,8 Гц, 9,7 Гц), 7,71 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,54 (1H, с), 6,95 (1H, с), 3,25 (4H, м), 2,72 (3H, с), 2,51 (4H, м, замаскированный DMSO-d6), 2,43 (3H, с), 2,25 (3H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 9 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 10. Получение соединения 163
Стадия A: Следуя методике, описанной в примере 5, стадия E, из 2-ацетил-4-метилтиазола (706 мг, 5 ммоль), диметилкарбоната (15 мл, 178 ммоль) и NaH (60% дисперсия в минеральном масле, 1,14 г, 28,5 ммоль) получали метил-3-(4-метилтиазол-2-ил)-3-оксопропаноат. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии. МС m/z 200,1 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 1, стадия B, из 3-(4-метилтиазол-2-ил)-3-оксопропаноата (199 мг, 1,0 ммоль), триметилортоформиата (0,25 мл, 2,25 ммоль) и моногидрата толуолсульфоновой кислоты (14,3 мг, 0,075 ммоль) в MeOH (1,5 мл) получали диметоксипропаноат.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 1, стадия C, из диметоксипропаноата, полученного на стадии B, и 2-амино-4-фторпиридина (201,8 мг, 1,8 ммоль) в DMA (1,5 мл) получали 7-фтор-2-(4метилтиазол-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (175,5 мг, 67%). МС m/z 262,1 [M+H]+.
- 47 037123
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 3, стадия B, из 7-фтор-2-(4-метилтиазол-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-она (52,2 мг, 0,2 ммоль) и пиперазина (86 мг, 1 ммоль) в DMSO (0,8 мл) получали указанное в заголовке соединение (20 мг, 30%). Т.пл. 142-147°C; МС m/z 328,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,27 (1H, дд, J=2,7 Гц, 18,6 Гц), 8,11-8,16 (1H, м), 7,73 (1H, т, J=9,2 Гц), 7,56 (1H, с), 6,88 (1H, д, J=3,2 Гц), 3,29-3,31 (2H, м), 3,16-3,18 (2H, м), 2,89-2,91 (2H, м), 2,67-2,69 (2H, м), 2,47 (3H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 10 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 11. Получение соединения 92
Стадия A:
5-Фторникотиновую кислоту (1,0 г, 7,1 ммоль) растворяли в THF (10 мл) и охлаждали до 0°C. К раствору по каплям добавляли 1,4М раствор метилмагнийбромида в THF/толуоле (3/1) (11,2 мл, 15,6 ммоль). Раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, после чего медленно добавляли 1н водный HCl (50 мл). Смесь распределяли между EtOAc (200 мл) и 1н водным NaOH (200 мл). Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя EtOAc (0% ^ 50%) в гексанах, с получением 1-(5-фторпиридин-3-ил) этанона в виде белого порошка (290 мг, 29%).
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 5, стадия D, из метилкетона, полученного на стадии A, диметилкарбоната (0,44 мл, 5,25 ммоль) и гидрида натрия (210 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 5,25 ммоль) в THF (6 мл) получали метил-3-(5-фторпиридин-3-ил)-3-оксопропаноата в виде не совсем белого порошка (278 мг, 67%).
Стадия C:
Метил-3-(5-фторпиридин-3-ил)-3-оксопропаноат (138 мг, 0,7 ммоль) объединяли с 5-фторпиридин2-амином (90 мг, 0,8 ммоль) и моногидратом толуолсульфоновой кислоты (6 мг, 0,03 ммоль) в диметилацетамиде (0,5 мл). Смесь нагревали до 160°C в течение 1 ч. Смесь охлаждали до 120°C, после чего добавляли пиперазин (300 мг, 3,5 ммоль). Смесь перемешивали при 120°C в течение 1 ч. Смесь наносили на силикагель в CH2Cl2 и элюировали 0% ^ 8% MeOH (3% NH3) в CH2Cl2. Указанное в заголовке соединение получали в виде желтого порошка (37 мг, 16%). Т.пл. 201-208°C; МС m/z 326,2 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 9,25 (1H, с), 8,70 (1H, д, J=2,8 Гц), 8,42 (1H, д, J=10,2 Гц), 8,22 (1H, д, 2,7 Гц), 8,12 (1H, дд, J=9,8 Гц, 2,8 Гц), 7,74 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,11 (1H, с), 3,16 (4H, м), 2,89 (4H, м), 2,37 (1H, шир.с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 11 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 12. Получение соединения 98
- 48 037123
Стадия A:
1Н-индол-5-карбоновую кислоту (1,0 г, 6,2 ммоль) объединяли с гидрохлоридом N,Oдиметилгидроксиламина (907 мг, 9,3 ммоль), гидрохлоридом N-(3-диметиламинопропил)-N'этилкарбодиимида (1,78 г, 9,3 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламином (3,2 мл, 18,6 ммоль) в CH2Cl2 (12 мл). После перемешивания в течение 4 ч при комнатной температуре, смесь промывали водным HCl (1н, 20 мл). Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия B:
Неочищенный продукт, полученный на стадии A, растворяли в THF (20 мл). К раствору по каплям добавляли 1,4М раствор метилмагнийбромида (11,2 мл, 15,6 ммоль) в THF/толуоле (3/1). Раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры. Раствор перемешивали при 50°C в течение 1 ч, после чего медленно добавляли 1н водный HCl (50 мл). Смесь распределяли между EtOAc (200 мл) и 1н водным NaOH (200 мл). Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя EtOAc (0% ^ 50%) в гексанах, с получением 1-(1H-индол-5-ил)этанона в виде белого порошка (323 мг, 33%).
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 5, стадия E, из метилкетона, полученного на стадии B, диметилкарбоната (0,46 мл, 5,5 ммоль) и гидрида натрия (220 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 5,5 ммоль) в THF (6 мл) получали метил-3-(1H-индол-5-ил)-3-оксопропаноат в виде не совсем белого порошка (120 мг, 27%). МС m/z 216,1 [M-H]-.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 11, стадия C, из метил-3-(1H-индол-5-ил)-3-оксопропаноата (98 мг, 0,45 ммоль), 5-фторпиридин-2-амина (56 мг, 0,5 ммоль), моногидрата толуолсульфоновой кислоты (9 мг, 0,05 ммоль) и пиперазина (194 мг, 2,25 ммоль) в диметилацетамиде (0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого порошка (40 мг, 26%). Т.пл. 266-272°C. МС m/z 346,2 [M+H]+;
Ή ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 11,3 (1H, с), 8,46 (1H, с), 8,22 (1H, д, J=2,8 Гц), 8,04 (1H, дд, J=9,7 Гц, 2,8 Гц), 7,95 (1H, д, J=8,7 Гц), 7,69 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,49 (1H, д, J=8,6 Гц), 7,42 (1H, т, J=2,7 Гц), 6,90 (1H, с), 6,57 (1H, м), 3,14 (4H, м), 2,89 (4H, м), 2,36 (1H, шир.с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 12 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 13. Получение соединения 107 но .0
MeMgBr
THF, 50 °C
Н
EDCI, TEA
СН2С12, к.т.
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 12, стадия A, из имидазо[1,2-a]пиридин-7-карбоновой кислоты (1,0 г, 6,2 ммоль), гидрохлорида N,О-диметилгидроксиламина (907 мг, 9,3 ммоль), гидрохлорида N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида (1,78 г, 9,3 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (3,2 мл, 18,6 ммоль) в CH2Cl2 (12 мл) получали N-метокси-N-метилимидазо[1,2-a]пиридин-7-карбоксамид (505 мг, 40%).
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 12, стадия B, из продукта (505 мг, 2,5 ммоль), полученного на стадии A, метилмагнийбромида (3,6 ммоль) в THF (10 мл) получали 1-(имидазо[1,2-a]пиридин-7ил)этанон (275 мг, 70%).
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 5, стадия E, из метилкетона (275 мг, 1,7 ммоль), полученного на стадии B, диметилкарбоната (0,35 мл, 4,25 ммоль) и гидрида натрия (170 мг, 60% дисперсия в ми- 49 037123 неральном масле, 4,25 ммоль) в THF (5 мл) получали метил-3-(имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)-3оксопропаноат в виде не совсем белого порошка (215 мг, 58%).
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 11, стадия C, из метил-3-(имидазо[1,2-a]пиридин-7-ил)-3оксопропаноата (215 мг, 1,0 ммоль), 5-фторпиридин-2-амина (123 мг, 1,1 ммоль), моногидрата толуолсульфоновой кислоты (19 мг, 0,1 ммоль) и пиперазина (430 мг, 5 ммоль) в диметилацетамиде (1,0 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого порошка (40 мг, 12%). Т.пл. 258270°C; МС m/z 347,0 [M+H]+;
1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,65 (1H, д, J=7,2 Гц), 8,46 (1H, с), 8,24 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,11 (1H, дд, J=9,7 Гц, 2,7 Гц), 8,06 (1H, с), 7,75 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,73 (1H, дд, J=7,2 Гц, 2,7 Гц), 7,71 (1H, с), 7,10 (1H, с), 3,16 (4H, м), 2,89 (4H, м), 2,34 (1H, шир.с).
Пример 14. Получение соединения 171
Часть 1, стадия A: Смесь 2-амино-5-фторпиридина (11,20 г, 0,10 моль) и диметилмалонат (57,0 мл, 0,50 моль) нагревали при 230°C в течение 1,5 ч. После охлаждения до комнатной температуры осадок фильтровали и промывали ACN (3 х) с получением 7-фтор-2-гидрокси-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде темного твердого вещества (14 г), которое использовали непосредственно на следующей стадии. МС m/z 181,3 [M+H]+.
Часть 1, стадия B:
Темную смесь неочищенного 7-фтор-2-гидрокси-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (14 д, ~77 ммоль) в POCl3 (50 мл) и DIEA (13,3 мл, 77 ммоль) нагревали при 110°C в течение 15 ч. Летучие вещества удаляли, темный остаток обрабатывали водой со льдом, промывали водой (3х) и сушили с получением коричневого твердого вещества. Неочищенное коричневое твердое вещество подвергали хроматографии (5% MeOH в CH2Cl2) с получением 2-хлор-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде желтого твердого вещества (9,84 г, 50%, 2 этапа). МС m/z 199,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,99 (1H, дд, J=2,8 Гц, 4,7 Гц), 8,27-8,23 (1H, м), 7,85 (1H, дд, J=5,4 Гц, 9,8 Гц), 6,56 (1H, с).
/ Pd(dppf)CI2 DCM
4. —r °' '° K0Ac η £ Г
АЛЛ- ΖΖ ,Β-Βχ ΖΖ “π-----ν
Вг^^О /Ό О-Т- Диоксан X. q ' ‘ 85 °C, 15 ч '''Т
Часть 2:
Смесь 6-бром-2-метилбензо[d]оксазола (1,06 г, 5,0 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2диоксаборолана) (1,40 г, 5,5 ммоль), KoAc (1,47 г, 15 ммоль) и Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2 (122 мг, 0,15 ммоль) в диоксане (8 мл) дегазировали и нагревали в атмосфере N2 при 85°C. Спустя 15 ч смесь разбавляли EtOAc, фильтровали через целит и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии с получением 2-метил6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензо[d]оксазола в виде светло-оранжевого твердого вещества (1,30 г, 100%). МС m/z 260,4 [M+H]+.
F
Pd(dppf)CI2 К2СО3 acn/h2o 60 °C. 2 ч
О
Часть 3, стадия A:
Смесь 2-хлор-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,436 г, 2,2 ммоль), 2-метил-6-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензо[d]оксазола (0,647 г, 2,5 ммоль), Pd(dppf)Cl2 в DCM (90 мг, 0,11 ммоль), K2CO3 (2М, 3,0 мл, 6,0 ммоль) и ACN (6 мл) дегазировали, а затем нагревали в атмосфере N2 при 60°C в течение 3,5 ч. Летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии (2,5% MeOH в CH2Cl2) с получением 7-фтор-2-(2-метилбензо[d]оксазол-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде не совсем белого твердого вещества (0,64 г, 98%). МС m/z 296,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,96-8,95 (1H, м), 8,51 (1H, д, J=1,6 Гц), 8,26 (1H, дд, J=8,5 Гц, 1,6 Гц), 8,16-8,12 (1H, м), 7,91-7,88 (1H, м), 7,78 (1H, д, J=8,4 Гц), 7,17 (1H, с), 2,67 (3H, с).
Часть 3, стадия B:
Смесь 7-фтор-2-(2-метилбензо[d]оксазол-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (60 мг, 0,2 ммоль) и 1-метилпиперазина (0,11 мл, 1,0 ммоль) в DMA (0,3 мл) нагревали при 120°C в течение 15 ч. Летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии с получением указанного в заголовке
- 50 037123 соединения в виде желтого твердого вещества (46 мг, 61%). Т.пл. 178-183°C; МС m/z 376,5 [M+H]+; 1H
ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,47 (1H, д, J=1,5 Гц), 8,25 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,23 (1H, дд, J=1,6 Гц, 8,4 Гц),
8,11 (1H, дд, J=2,8 Гц, 9,7 Гц), 7,76 (1H, д, J=8,6 Гц), 7,74 (1H, д, J=9,9 Гц), 7,06 (1H, с), 3,25 (4H, м), 2,66 (3H, с), 2,25 (3H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 14 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 15. Получение соединения 109
Стадия A:
2-Хлор-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (990 мг, 5 ммоль, полученный в соответствии с методикой, описанной в примере 14, часть 1) объединяли с пинаколовым эфиром 2-аминопиридин-5бороновой кислоты (1,21 г, 5,5 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладием(0) (281 мг, 0,25 ммоль), CH3CN (10 мл) и водным K2CO3 (1М, 10 мл). Смесь нагревали до 80°C в течение 6 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, а затем фильтровали. Собранный осадок промывали CH3CN и сушили в условиях вакуума с получением 2-(6-аминопиридин-3-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде желтого порошка (1,13 г, 88%). МС m/z 257,0 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,90 (1H, м), 8,83 (1H, д, J=2,1 Гц), 8,17 (1H, дд, J=8,8 Гц, 2,5 Гц), 8,07 (1H, м), 7,78 (1H, дд, J=9,8 Гц, 5,3 Гц), 6,87 (1H, с), 6,58 (2H, с), 6,53 (1H, д, 8,9 Гц).
Стадия B.
2-(6-Аминопиридин-3-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (254 мг, 1,0 ммоль) объединяли с хлорацетоном (100 мкл, 1,2 ммоль) в DMSO (360 мкл, 1,65 ммоль). Смесь нагревали до 120°C в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры смесь распределяли между CH2Cl2 и насыщенным водным NaHCO3. Органический слой концентрировали. Остаток элюировали с силикагеля MeOH (0% ^ 6%) в CH2Cl2 с получением 7-фтор-2-(2-метилимидазо[1,2-a]пиридин-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин4-она в виде рыжеватого порошка (136 мг, 46%). МС m/z 295,0 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 9,40 (1H, с), 8,95 (1H, м), 8,14 (1H, м), 7,96 (1H, дд, J=9,5 Гц, 1,9 Гц), 7,85 (2H, м), 7,54 (1H, J=9,4), 7,08 (1H, с), 2,36 (3H, с).
Стадия C:
7-Фтор-2-(2-метилимидазо[1,2-a]пиридин-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (45 мг, 0,15 ммоль) объединяли с пиперазином (65 мг, 0,75 ммоль) в диметилацетамиде (0,5 мл). Смесь нагревали до 150°C в течение 1 ч. Смесь наносили на силикагель и элюировали 0% ^ 8% MeOH (3% NH3) в CH2Cl2 с получением указанного в заголовке соединения в виде рыжеватого порошка (33 мг, 61%). Т.пл. 259267°C; МС m/z 361,1 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 9,36 (1H, с), 8,23 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,10 (1H, дд, J=9,7 Гц, 2,7 Гц), 7,94 (1H, дд, J=9,5 Гц, 1,8 Гц), 7,82 (1H, с), 7,70 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,52 (1H, д, J=9,5 Гц), 6,96 (1H, с), 3,15 (4H, м), 2,89 (4H, м), 2,36 (3H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 15 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 16. Получение соединения 209
Стадия A:
3-Фторпиридин-2-амин (5,0 г, 45 ммоль) объединяли с N-бромсукцинимидом (8,0 г, 45 ммоль) в CH3CN (40 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. К смеси добавляли хлорацетон (4,3 мл, 54 ммоль). Смесь нагревали до 100°C, позволяя выпариться CH3CN. Спустя 1 ч температуру повышали до 120°C в течение 2 ч. Смесь отверждалась при охлаждении. Твердое вещество рас
- 51 037123 творяли в H2O (50 мл). К водному раствору добавляли 100 мл насыщенного водного NaHCO3. Формировался осадок, и его собирали путем вакуум-фильтрования. Твердое вещество промывали H2O и сушили в условиях вакуума. Вещество наносили на силикагель в CH2Cl2 и элюировали EtOAc (0% ^ 30%) в CH2Cl2, с получением 6-бром-8-фтор-2-метилимидазо[1,2-a]пиридина в виде рыжеватого порошка (4,65 г, 45%). МС m/z 229,2 [M+H]+, 231,2 [M+2+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,72 (1H, с), 7,79 (1H, с), 7,39 (1H, д, J=10,7 Гц), 2,35 (3H, с).
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 2, из 6-бром-8-фтор-2-метилимидазо[1,2a]пиридина (912 мг, 4 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) (1,32 г, 4,8 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(П) (163 мг, 0,2 ммоль) и ацетата калия (784 мг, 8 ммоль) получали 8-фтор-2-метил-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)имидазо[1,2a]пиридин. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из неочищенного 8-фтор-2-метил-6(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)имидазо[1,2-a]пиридина, полученного на стадии A, 2-хлор7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (4 ммоль, полученного в примере 14, часть 1, стадия B), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (225 мг, 0,2 ммоль) и водного K2CO3 (1М, 8 мл) получали 7-фтор-2-(8фтор-2-метилимидазо[1,2-a]пиридин-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он в виде рыжеватого порошка (860 мг, 69%). МС m/z 313,0 [M+H]+.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия B, из 7-фтор-2-(8-фтор-2метилимидазо[1,2-a]пиридин-б-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (65 мг, 0,21 ммоль) и пиперазина (90 мг, 1,05 ммоль) получали указанное в заголовке соединение в виде рыжеватого порошка (34 мг, 43%). Т.пл. 282-288°C; МС m/z 379,4 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 9,26 (1H, с), 8,21 (1H, д, J=2,6 Гц), 8,10 (1H, дд, J=9,7 Гц, 2,7 Гц), 7,93 (1H, д, J=2,3 Гц), 7,84 (1H, д, J=12,7 Гц), 7,68 (1H, д, J=9,8 Гц), 6,98 (1H, с), 3,14 (4H, м), 2,88 (4H, м), 2,39 (3H, с), 2,35 (1H, шир.с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 16 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 17. Получение соединения 182
Pd(dppf)CI2
К2СО3
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из 3-фтор-2-метокси-5-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридина (—4,85 ммоль, неочищенный продукт, полученный в соответствии с методикой, описанной в примере 14, часть 2) и 2-хлор-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин4-она (0,64 г, 3,23 ммоль, полученного в примере 14, часть 1) получали 7-фтор-2-(5-фтор-6метоксипиридин-3-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (1,0 г, 100%) в виде коричневого твердого вещества. МС m/z 290,4 [M+H]+.
Стадия B:
Смесь 7-фтор-2-(5-фтор-6-метоксипиридин-3-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (145 мг, 0,5 ммоль) и пиперазина (43 мг, 0,5 ммоль) в DMA (1 мл) нагревали при 120°C. Спустя 4 ч летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии (20% MeOH в CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (63 мг, 36%). Т.пл. 166-170°C; МС m/z 356,4 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,83 (1H, д, J=1,9 Гц), 8,39 (1H, дд, J=1,9 Гц, 11,8 Гц), 8,23 (1H, д, J=2,6 Гц), 8,10 (1H, дд, J=2,7 Гц, 9,7 Гц), 7,71 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,02 (1H, с), 4,03 (3H, с), 3,20 (4H, м), 2, 94 (4H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 17 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 18. Получение соединения 191
- 52 037123
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из 2-хлор-7-фтор-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-она (199 мг, 1 ммоль, полученного в примере 14, часть 1), 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (239,2 mg 1,15 ммоль), Pd(PPh3)4 (57,8 мг, 0,05 ммоль) и K2CO3 (276,4 мг, 2 ммоль) в CH3CN/H2O (1,0 мл/1,0 мл) получали 7-фтор-2-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-4Hпиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (97,6 мг, 40%). МС m/z 245,1 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия B, из 7-фтор-2-(1-метил-1H-пиразол-4ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (48,8 мг, 0,2 ммоль) и (S)-2-метилпиперазина (100 мг, 1 ммоль) в DMSO (0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (32,1 мг, 49,5%). Т.пл. 168-170°C; МС m/z 325,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,35 (1H, с), 8,18 (1H, д, J=2,8 Гц), 8,06 (1H, с), 8,02 (1H, дд, J=9,7 Гц, 2,6 Гц), 7,56 (1H, д, J=9,8 Гц), 6,63 (1H, с), 3,89 (3H, с), 3,54-3,57 (2H, м), 2,99-3,02 (1H, м), 2,80-2,85 (2H, м), 2,58-2,64 (1H, м), 2,24-2,28 (1H, м), 1,05 (3H, д, J=6,3 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 18 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 19. Получение соединения 128
F acn/h2o °C, 3 ч
Pd(PPh3)4
K2CO3
Стадия A:
К раствору 2-хлор-7-фтор-4Н-пиридо[1, 2-a]пиримидин-4-она (199 мг, 1,0 ммоль, полученного в примере 14, часть 1) в 2 мл ацетонитрила при комнатной температуре добавляли 5-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пирроло[2,3-b]пиридин (293 мг, 1,2 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (57,8 мг, 0,05 ммоль) и водный K2CO3 (1М в воде, 2 ммоль). Смесь перемешивали при 85°C в течение 3 ч и охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество отфильтровывали и промывали дихлорметаном, водой и ацетонитрилом с получением 7-фтор-2-(Шпирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (249 мг, 89%). МС m/z 281,1 [M+H]+.
Стадия B:
Раствор 7-фтор-2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (100 мг, 0,36 ммоль) в DMSO (1 мл) обрабатывали пиперазином (154 мг, 1,79 ммоль) при комнатной температуре. Раствор перемешивали при 160°C в течение 30 мин и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь наносили на силикагель без концентрирования и элюировали MeOH (0% ^ 20%) в CH2Cl2 с получением указанного в заголовке соединения (74,8 мг, 60%). Т.пл. 252-255°C; МС m/z 347,1 [M+H]+;
1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц) δ 11,8 (1H, с), 8,95 (1H, д, J=2,0 Гц)), 8,64 (1H, д, J=1,7 Гц), 8,14 (1H, д, J=2,3 Гц), 8,0-7,9 (1H, м), 7,62 (1H, д, J=9,6 Гц), 7,45 (1H, м), 6,9 (1H, с), 6,48 (1H, шир.м), 3,1 (4H, м), 2,85 (4H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 19 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 20. Получение соединения 153
- 53 037123
Стадия A:
2-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (180 мг, 0,53 ммоль), полученный сочетанием по Судзуки в соответствии с методикой, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, объединяли с ди-трет-бутилдикарбонатом (131 мг, 0,6 ммоль) и триэтиламином (85 мкл, 0,6 ммоль) в MeOH (4 мл). Смесь перемешивали при 50°C в течение 2 ч. Смесь фильтровали с получением желтого порошка, который промывали MeOH и сушили в условиях вакуума с получением трет-бутил-4(2-(3-фтор-4-гидроксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперазин-1-карбоксилата (230 мг, 99%). МС m/z 441,0 [M+H]+.
Стадия B:
трет-Бутил-4-(2-(3-фтор-4-гидроксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперазин-1карбоксилат (60 мг, 0,14 ммоль) объединяли с K2CO3 (39 мг, 0,28 ммоль) и йодэтаном (48 мкл, 0,21 ммоль) в DMF (1 мл). Смесь перемешивали при 50°C в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры к смеси по каплям добавляли H2O (0,5 мл). Осадок собирали, промывали H2O и сушили в условиях вакуума.
Стадия C:
К неочищенному продукту, полученному на стадии B, добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл). После отстаивания в течение 10 минут удаляли летучие вещества. Остаток распределяли между CH2Cl2 (4 мл) и водным K2CO3 (1М, 2 мл). Органический слой удаляли и концентрировали с получением указанного в заголвке соединения (36 мг, 70%). Т.пл. 180-186°C; МС m/z 369,1 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,21 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,02 (3H, м), 7,68 (1H, д, J=9,7 Гц), 7,27 (1H, т, J=8,8 Гц), 6,93 (1H, с), 4,20 (2H, кв., J=7,0 Гц), 3,14 (4H, м), 2,88 (4H, м), 2,36 (1H, шир.), 1,39 (3H, т, J=7,0 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 20 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 21. Получение соединения 179
Стадия A:
Смесь 2-хлор-7-фтор-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-она (300 мг, 1,5 ммоль) и 4-метил-Шимидазола (429 мг, 6,0 ммоль) в DMSO (1,5 мл) нагревали при 90°C в течение 15 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли CH3CN. Осадок фильтровали, промывали CH3CN (3х) и сушили с получением 2-(4-метил-1H-имидазол-1-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде не совсем белого твердого вещества (225 мг, 61%). МС m/z 345,4 [M+H]+.
Стадия B:
Смесь 2-(4-метил-1H-имидазол-1-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (73 мг, 0,3 ммоль) и пиперазина (129 мг, 1,5 ммоль) в DMA (0,6 мл) нагревали при 120°C в течение 4 ч. Удаляли DMA и разбавляли смесь CH3CN. Осадок фильтровали, промывали CH3CN (3х) и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (310 мг, 95%). Т.пл. 204-206°C; МС m/z 311,1 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,47 (1H, д, J=1,2 Гц), 8,22 (1H, д, J=2,7 Гц), 8,13 (1H, дд, J=2,8 Гц, 9,6 Гц), 7,69 (1H, д, J=1,1 Гц), 7,63 (1H, д, J=9,6 Гц), 6,68 (1H, с), 3,14 (4H, м), 2,87 (4H, м), 2,16 (3H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 21 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
- 54 037123
Пример 22. Получение соединения 143
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 1, стадия A, из метил-3-(3,4-диметоксифенил)-3оксопропаноата (5,0 г, 20 ммоль), триметилортоформиата (3,5 мл, 30 ммоль) и моногидрата паратолуолсульфоновой кислоты (380 мг, 2 ммоль) в метаноле (50 мл) получали метил-3-(3,4диметоксифенил)-3,3-диметоксипропаноат. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без очистки.
1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 6,93 (3H, м), 3,82 (2H, кв., J=7,2 Гц), 3,75 (3H, с), 3,73 (3H, с), 3,12 (6H, с), 2,92 (2H, с), 0,92 (3H, т, J=7,1 Гц).
Стадия B: К полученному выше кеталю добавляли 5-бромпиридин-2-амин (3,5 г, 20 ммоль). Смесь нагревали до 150°C в течение 2 часов, а затем охлаждали до комнатной температуры. Неочищенный продукт растирали с ацетонитрилом и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (6,8 г, 94%). МС m/z 360,9 [M+H]+, 362,9 [M+2+H]+.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из 7-бром-2-(3,4-диметоксифенил)4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (181 мг, 0,5 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (170 мг, 0,55 ммоль), карбонат калия (207 мг, 1,5 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (36,5 мг, 0,05 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) получали трет-бутил-4-(2-(3,4диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат в виде белого твердого вещества (0,22 мг, 95%). МС m/z 464,1 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,82 (с, 1H), 8,24 (дд, J=1,5, 9 Гц, 1H), 7,85 (дд, J=2, 8,5 Гц, 1H), 7,78 (д, J=2 Гц, 1H), 7,73 (д, J=9,5 Гц, 1H), 7,10 (д, J=9 Гц, 1H), 7,05 (с, 1H), 6,54 (с, 1H), 4,09 (шир.с, 2H), 3,89 (с, 3H), 3,85 (с, 3H), 3,60-3,59 (м, 2H), 2,642,63 (м, 2H), 1,45 (с, 9H).
Стадия D:
Промежуточный продукт, полученный на стадии A, суспендировали в растворе HCl в диоксане (4М, 4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали и распределяли остаток между дихлорметаном и насыщенным водным бикарбонатом натрия. Органические фазы сушили, концентрировали и подвергали хроматографии на колонке с щелочным оксидом алюминия, элюируя дихлорметаном с метанолом (10%), с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (150 мг, 88%). Т.пл. 196-198°C; МС m/z 364,1 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,77 (д, J=2 Гц, 1H), 8,24 (дд, J=2, 9,5 Гц, 1H), 7,85 (дд, J=2, 8,5 Гц, 1H), 7,78 (д, J=2 Гц, 1H), 7,71 (д, J=9,5 Гц, 1H), 7,09 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,03 (с, 1H), 6,60 (с, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,85 (с, 3H), 3,45 (д, J=2,5 Гц, 2H), 2,97 (т, J=5,5 Гц, 2H), 2,41 (шир.с, 2H).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 22 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 23. Получение соединения 188
Смесь 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4 она (30 мг, 0,08 ммоль), формальдегида (0,05 мл, 37%, ~0,8 ммоль) и триацетоксиборгидрида натрия (50 мг, 0,24 ммоль) перемешивали в дихлорметане (1 мл) в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и нейтрализовывали добавлением бикарбоната натрия. Органические фазы сушили и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (26 мг, 83%). Т.пл. 165-168°C; МС m/z 378,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,79 (д, J=2 Гц, 1H), 8,25 (дд, J=2, 9,5 Гц, 1H), 7,85 (дд, J=2, 8,5 Гц, 1H), 7,78 (д, J=2 Гц, 1H), 7,71 (д, J=9,5 Гц, 1H), 7,10 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,04 (с, 1H), 6,56 (с, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,85 (с, 3H), 3,09 (шир.с, 2H), 2,64-2,61 (м, 2H), 2,56 (шир.с,
- 55 037123
2H), 2,51 (с, 3H).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 23 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 24. Получение соединения 144
Стадия А:
Смесь трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (100 мг, 0,22 ммоль, полученного как описано в примере 22, стадия C) и Pd/C (10%) (10 мг) в этилацетате (25 мл) перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через целит, концентрировали и подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя EtOAc/CH2Cl2 (30/70), с получением трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4Hпиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата в виде белого твердого вещества (75 мг, 75%), которое использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки. МС m/z 466,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,57 (с, 1H), 7,80 (дд, J=2,5, 9,5 Гц, 1H), 7,64 (дд, J=2, 8,5 Гц, 1H), 7,57 (д, J=2 Гц, 1H), 7,53 (д, J=9 Гц, 1H), 6,9 (д, J=9 Гц, 1H), 6,82 (с, 1H), 3,92 (шир.с, 2H), 3,69 (с, 3H), 3,65 (с, 3H), 2,78-2,71 (м, 2H), 2,69-2,65 (1H, м), 1,69-1,67 (м, 2H), 1,41-1,38 (м, 2H), 1,24 (с, 9H).
Стадия В:
Следуя методике, описанной в примере 22, стадия D, из продукта, полученного на стадии A, и HCl в диоксане (4М, 3 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (49 мг, 83%). Т.пл. 214-217°C; МС m/z 366,4 [M+H]+; Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,88 (д, J=2 Гц, 1H), 8,09 (дд, J=2, 9,5 Гц, 1H), 7,98 (дд, J=2, 8,5 Гц, 1H), 7,91 (д, J=2 Гц, 1H), 7,88 (д, J=9 Гц, 1H), 7,23 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,15 (с, 1H), 4,02 (с, 3H), 3,98 (с, 3H), 3,30 (д, J=11,5 Гц, 2H), 3,01 (tt, J=2 Гц, 12 Гц, 1H), 2,87 (т, J=12 Гц, 2H), 2,02 (д, J=12,5 Гц, 2H), 1,80-1,73 (м, 2H).
Пример 25. Получение соединения 164
Следуя методике, описанной в примере 23, из 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Hпиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (10 мг, 0,027 ммоль), формальдегида (10 мкл, 37%, 0,13 ммоль) и триацетоксиборгидрида натрия (17 мг, 5,7 ммоль) в дихлорметане (0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (7,6 мг, 73% ). Т.пл. 181-183°C; МС m/z 380,1 [M+H]+;
Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,76 (д, J=2 Гц, 1H), 8,0 (дд, J=2, 9 Гц, 1H), 7,84 (дд, J=2, 8,5 Гц, 1H), 7,77 (д, J=2 Гц, 1H), 7,72 (д, J=9,5 Гц, 1H), 7,09 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,01 (с, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,84 (с, 3H), 2,91 (д, J=9,5 Гц, 2H), 2,73-2,64 (м, 1H), 2,22 (с, 3H), 2,01 (т, J=8,5 Гц, 2H), 1,88-1,85 (м, 2H), 1,71-1,69 (м, 2H).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 25 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 26. Получение соединения 263
Часть 1:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 2, из 7-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4Hпиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (661 мг, 1,8 ммоль), полученного в примере 22, стадия B, KoAc (530 мг, 5,4 ммоль), бис (пинаколато) дибора (700 мг, 2,7 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (60 мг, 0,09 ммоль) в диоксане (5 мл) получали 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он в виде белого твердого вещества (560 мг, 76%). MS m/z 327,1 [M+H]+ для бороновой кислоты.
- 56 037123
Часть 2:
К раствору трет-бутил-3-оксопиперидин-1-карбоксилата (482 метилтетрагидрофуране (2,5 мл) при -78°C в атмосфере аргона по мг, 2,4 ммоль) в 2каплям добавляли раствор бис(триметилсилил)амида натрия (2,6 мл, 2,6 ммоль, 1,0М в THF). Смесь перемешивали при -78°C в течение 1 ч, а затем добавляли раствор N-(5-хлорпиридин-2-ил)-1,1,1-трифтор-N-(трифторметилсульфонил)метансульфонамида (1,0 г, 2,5 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (2,5 мл), а затем оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры в течение 2 ч. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного карбоната натрия, разбавляли эфиром, органические фазы промывали водой, сушили и концентрировали. Неочищенный продукт подвергали хроматографии на колонке с щелочным оксидом алюминия, элюируя 5% этилацетатом в гексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (290 мг, 37%).
о.
о о
Pd(dppf)CI2, К2СО3, ACN
Вос
О.
Часть 3, стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (370 мг, 0,91 ммоль), третбутил-3-(трифторметилсульфонилокси)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (290 мг, 0,88 ммоль), карбоната калия (364 мг, 2,6 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (58 мг, 0,08 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) получали трет-бутил-3-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин1(2H)-карбоксилат в виде белого твердого вещества (0,22 мг, 62%). МС m/z 464,3 [M+H]+.
Часть 3, стадия В:
Следуя методике, описанной в примере 22, стадия В, из трет-бутил-3-(2-(3,4-диметоксифенил)-4оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (220 мг, 0,47 ммоль) и HCl в диоксане (4М, 5 мл) получали указанное в заголовке соединение (160 мг, 79%). Т.пл. 146-150°C; МС m/z 364,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,73 (д, J=2 Гц, 1H), 8,23 (дд, J=2, 9,5 Гц, 1H), 7,85 (дд, J=2, 8,5 Гц, 1H), 7,78 (д, J=2,5 Гц, 1H), 7,71 (д, J=9,5 Гц, 1H), 7,10 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,05 (с, 1H), 6,60 (с, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,85 (с, 3H), 3,29 (шир.с, 2H), 2,40-2,36 (м, 4H).
Пример 27. Получение соединения 237
Стадия А:
К 1-Boc-4-гидроксипиперидину (48,3 мг, 0,24 ммоль) в безводном THF при комнатной температуре медленно добавляли NaH (60% дисперсия в минеральном масле, 12 мг, 0,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и добавляли 2-(3,4-диметоксифенил)-7-F4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (60 мг, 0,2 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при 70°C в течение 3 ч. Для гашения реакционной смеси добавляли небольшое количество воды со льдом. После выпаривания большей части THF к смеси добавляли эфир, осадок фильтровали и сушили с получением трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7-илокси)пиперидин-1 -карбоксилата, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия B:
трет-Бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-илокси)пиперидин-1карбоксилат при 0°C растворяли в CH2Cl2/TFA (0,5 мл/0,5 мл). Смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч до исчезновения исходного вещества. После выпаривания большей части TFA к реакционной смеси
- 57 037123 добавляли ледяной насыщенный NaHCO3. Смесь экстрагировали CH2C12. Органический слой сушили над
MgSO4 и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (57 мг, 74,8% в 2 стадии).
Т.пл. 221-224°C; МС m/z 382,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,58 (1H, д, J=2,9 Гц),, 7,81-7,86 (2H, м), 7,73-7,78 (2H, м), 7,08 (1H, д, J=8,7 Гц), 7,01 (1H, с), 4,82-4,86 (1H, м), 3,87 (3H, с), 3,83 (3H, с),
3,23-3,27 (2H, м), 3,04-3,09 (2H, м), 2,13-2,18 (2H, м), 1,85-1,91 (2H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 27 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 28. Получение соединения 52
Стадия A:
Этил-2-(3,4-диметоксифенил)ацетат (673 мг, 3 ммоль) объединяли с 1-трет-бутокси-N,N,N',N'тетраметилметандиамином (0,68 мл, 3,3 ммоль). Смесь нагревали до 60°C в течение 2 ч. Смесь использовали непосредственно на следующей стадии без выделения продукта реакции.
Стадия B:
4-Хлорпиридин-2-амин (424 мг, 3,3 ммоль) добавляли непосредственно к смеси. Смесь нагревали до 120°C в течение 20 мин. Смесь использовали непосредственно на следующей стадии без выделения продукта реакции.
Стадия C:
К смеси, полученной на стадии В, которую дополнительно перемешивали в течение 30 минут при 120°C, добавляли пиперазин (1,3 г, 15 ммоль). Смесь подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 10% MeOH (1% триэтиламина) в CH2Cl2, с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого порошка (120 мг, 11%). Т.пл. 175-179°C; МС m/z 367,2 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,84 (1H, д, J=8,2 Гц), 8,40 (1H, с), 7,44 (1H, д, J=2,1 Гц), 7,34 (1H, дд, J=8,4 Гц, 2,1 Гц), 7,28 (1H, дд, J=8,2 Гц, 2,8 Гц), 6,99 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,73 (1H, д, J=2,8 Гц), 3,80 (3H, с), 3,78 (3H, с), 3,48 (4H, м), 2,82 (4H, м).
Пример 29. Получение соединения 220
Стадия A: 7-Бром-2-хлор-4H-пирuдо[1,2-a]пиримuдин-4-он (130 мг, 0,5 ммоль), полученный в соответствии с примером 14, часть 1, объединяли с трет-бутилпиперазин-1-карбоксилатом (140 мг, 0,75 ммоль) и триэтиламином (0,14 мл, 1,0 ммоль) в EtOH (2 мл). Смесь нагревали до 80°C в течение 1 часа. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, а затем фильтровали. Собранное вещество подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 0% ^ 50% EtOAc в CH2Cl2, с получением третбутил-4-(7-бром-4-оксо-4H-пирuдо[1,2-a]пиримuдин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (130 мг, 64%). МС m/z 409,4 [M+H]+.
Стадия B:
Промежуточный продукт (0,3 ммоль), полученный на стадии A, объединяли с 3-фтор-4метоксифенилбороновой кислотой (77 мг, 0,45 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладием(0) (35 мг, 0,03 ммоль) в CH3CN (2 мл) и водном K2CO3 (1М, 2 мл). Смесь нагревали при 80°C при энергичном перемешивании в атмосфере аргона в течение 2 ч. Органический слой удаляли и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 0% ^ 50% EtOAc в CH2Cl2.
Стадия C: Boc-защищенный промежуточный продукт, полученный на стадии B, растворяли в трифторуксусной кислоте (1 мл). Спустя 20 минут, летучие вещества удаляли. Остаток распределяли между CH2Cl2 и водным K2CO3 (1М). Органический слой удаляли и концентрировали, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (30 мг, 17%). Т.пл. 202-206°C; МС m/z 355,0 [M+H]+; 1H
- 58 037123
ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,93 (1H, д, J=2,0 Гц), 8,15 (1H, дд, J=9,3 Гц, 2,3 Гц), 7,67 (1H, дд, J=12,7 Гц,
2,3 Гц), 7,54 (1H, м), 7,37 (1H, д, J=9,2), 7,30 (1H, т, J=8,8 Гц), 5,62 (1H, с), 3,90 (3H, с), 3,57 (4H, м), 2,75 (4H, м), 2,42 (1H, шир.с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 29 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 30. Получение соединения 276
Стадия A.
7-Бром-2-хлор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (1,29 г, 5 ммоль) объединяли с 3-фтор-4метоксифенилбороновой кислотой (850 мг, 5 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладием(0) (281 мг, 0,25 ммоль), CH3CN (10 мл) и водным K2CO3 (1М, 10 мл). Смесь нагревали до 80°C в течение 6 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь распределяли между CH2Cl2 (75 мл) и H2O (50 мл). Органический слой собирали и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя
EtOAc (0%^ 50%) в CH2Cl2, с получением 2-хлор-7-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-она в виде белого порошка (520 мг, 34%). МС m/z 305,0 [M+H]+.
Стадия B.
2-Хлор-7-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (180 мг, 0,6 ммоль) объединяли с 4-аминопиперидином (90 мг, 0,9 ммоль) и триэтиламином (165 мкл, 1,2 ммоль) в DMSO (0,75 мл).
Смесь нагревали до 120°C в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры к смеси добавляли CH3CN (2 мл). Смесь фильтровали. Собранное вещество промывали CH3CN и сушили в условиях вакуума с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (115 мг, 52%). Т.пл. 268-283°C; МС m/z 369,3 [M+H]+; Ή ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 8,94 (1H, д, J=2,0 Гц), 8,16 (1H, дд, J=9,3 Гц, 2,3 Гц), 7,68 (1H, дд, J=12,7 Гц, 2,3 Гц), 7,55 (1H, д, J=8,5 Гц), 7,39 (1H, д, J=9,2), 7,30 (1H, т, J=8,9 Гц), 5,70 (1H, с), 5,20 (2H, шир.), 4,36 (2H, шир.), 3,92 (3H, с), 3,04 (3H, м), 1,87 (2H, м), 1,32 (2H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 30 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 31. Получение соединения 85
Часть 1, стадия A:
К суспензии MgCl2 (2,85 г, 30 ммоль) в ацетонитриле (27 мл) при 0°C по каплям добавляли диэтилмалонат (3,4 мл, 30 ммоль) и триэтиламин (8,3 мл, 60 ммоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин. Затем порциями добавляли 3,4-диметоксибензоилхлорид (5,0 г, 25 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее обрабатывали 1н HCl, экстрагиро вали эфиром, сушили и упаривали. Остаток очищали на силикагеле, элюируя этилацетатом (5% ^ 4 0%) в гексанах, с получением диметил-2-(3,4-диметоксибензоил)малоната (7,38 г, 100%). МС m/z 297,1 [M+H]+.
Часть 1, стадия B:
К раствору диметил 2-(3,4-диметоксибензоил)малоната (2,96 г, 10 ммоль) в POCl3 (9,4 мл, 100 ммоль) при комнатной температуре по каплям добавляли DIPEA (2,75 мл, 16,7 ммоль). Смесь затем перемешивали при 100°C в течение 3 ч. В условиях вакуума удаляли POCl3, остаток обрабатывали льдом в воде и экстрагировали эфиром. Органический слой промывали 1н HCl, сушили и упаривали. Остаток очищали на силикагеле, элюируя этилацетатом (5% ^ 50%) в гексанах, с получением указанного в заголовке соединения (2,0 г, 64%). МС m/z 282,9 [M+H]+.
- 59 037123
Часть 2:
К раствору LDA (1,5М, 13,3 мл, 20 ммоль) в THF (15 мл) при -78°C по каплям добавляли раствор 2,5-дифторпиридина (1,15 г, 10 ммоль) в THF (10 мл). Затем, оставляли температуру расти до комнатной температуры, и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего реакционную смесь гасили добавлением водного NH4Cl. Смесь экстрагировали этилацетатом, сушили и упаривали.
Остаток очищали на силикагеле, элюируя этилацетатом (5% ^ 50%) в гексанах, с получением 2-(5фторпиридин-2-ил)ацетонитрила (0,8 г, 59%). МС m/z 137,0 [M+H]+.
Часть 3, стадия A:
К раствору 2-(5-фторпиридин-2-ил)ацетонитрила (44 мг,
0,325 ммоль) в DMF (0,5 мл) добавляли
60% NaH (20 мг, 0,325 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем обрабатывали диметил-2-(хлор(3,4-диметоксифенил)метилен)малонатом (102 мг, 0,325 ммоль). Смесь перемешивали в течение 15 минут, и гасили реакционную смесь добавлением насыщенного раствора NH4Cl. Смесь фильтровали. Твердое вещество промывали водой и использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
Часть 3, стадия B:
Неочищенное твердое вещество, полученное на стадии A, обрабатывали TFA (2,0 мл) и водой (0,2 мл). Смесь перемешивали при 100°C в течение ночи. Затем, растворитель удаляли в условиях вакуума и использовали неочищенный продукт на следующей стадии без дополнительной очистки.
Часть 3, стадия C:
Неочищенный продукт, полученный на стадии В, обрабатывали пиперазином (86 мг, 1,0 ммоль) в DMSO (1,0 мл) при 120°C в течение ночи. Путем удаления растворителя при помощи N2 и последующей очистки на силикагеле с элюированием (10%) в дихлорметане получали указанное в заголовке соединение (30 мг, 25%). Т.пл. 199-202°C; МС m/z 391,2 [M+H]+; Ή ЯМР (500 МГц, CDCb) δ: 8,60 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,98 (1H, д, J=9,8 Гц), 7,59 (1H, дд, J=9,5, 2,5 Гц), 7,20 (1H, дд, J=8,5, 2,2 Гц), 7,12 (1H, д, J=2,2 Гц), 6,93 (1H, д, J=8,2 Гц), 6,52 (1H, с), 3,89 (3H, с), 3,88 (3H, с), 3,23-3,21 (4H, м), 3,05-3,03 (4H, м).
Пример 32. Получение соединения 91
Стадия A:
К раствору 2-(5-фторпиридин-2-ил)ацетонитрила (0,78 г, 5,7 ммоль) в MeOH (15 мл) по каплям добавляли тримектилсилилхлорид (4,4 мл, 34,4 ммоль). Смесь перемешивали при 50°C в течение ночи. Органические летучие вещества удаляли в условиях вакуума, и распределяли остаток между эфиром иводным бикарбонатом натрия. Водный слой экстрагировали эфиром.
Эфирные экстракты объединяли, сушили и упаривали с получением метил-2-(5-фторпиридин-2ил)ацетата в виде масла (0,9 г, 93%), которое использовали без дополнительной очистки. МС m/z 170,1 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 31, часть 3, стадия A, из метил-2-(5-фторпиридин-2ил)ацетата (0,34 г, 2,0 ммоль), 60% NaH (176 мг, 4,4 ммоль) и диметил-2-(хлор(3,4диметоксифенил)метилен)малоната (0,69 г, 2,2 ммоль, полученного в примере 31, часть 1, стадия В) в DMF (3,0 мл) получали целевой диметил-2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4-оксо-4H-хинолизин-1,3дикарбоксилат (0,2 г, 24%). МС m/z 416,1 [M+H]+.
- 60 037123
Стадия C
Раствор диметил-2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4-оксо-4Н-хинолизин-1,3-дикарбоксилата (0,2 г, 0,48 ммоль) в метаноле (6,0 мл) обрабатывали водным LiOH (2,0н, 2,0 мл, 4,0 ммоль) и перемешивали при 90°C в течение 2 ч. Обрабатывали водой, а затем упаривали с получением темного остатка, который обрабатывали TFA (2,0 мл) и водой (0,2 мл) и перемешивали при 100°C в течение 1 ч. Путем удаления растворителя при помощи N2 и последующей хроматографии с элюированием этилацетатом (25% ^ 75%) в гексанах получали 2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4H-хинолизин-4-он (30 мг, 21%). МС m/z 300,2 [M+H]+.
Стадия D
Раствор 2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4H-хинолизин-4-он (30 мг, 0,1 ммоль), (S)-2метилпиперазин (30 мг, 0,3 ммоль) и K2CO3 (27 мг, 0,2 ммоль) в DMSO (0,2 мл) перемешивали при 120°C в течение 48 ч. Путем удаления растворителя при помощи N2 и последующей очистки дихлорметаном и метанолом (10%) получали указанное в заголовке соединение (24 мг, 63%). Т.пл. 243-245°C; МС m/z 380,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ: 8,52 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,46 (1H, д, J=9,8 Гц), 7,30 (2H, дт, J=10,4, 2,2 Гц), 7,22 (1H, д, J=1,9 Гц), 6,98 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,84 (2H, с), 3,96 (3H, с), 3,95 (3H, с), 3,583,54 (2H, м), 3,50 (1H, с), 3,21-3,19 (1H, м), 3,12-3,04 (2H, м), 2,85-2,80 (1H, м), 2,49 (1H, т, J=11,1 Гц), 1,20 (3H, д, J=6,6 Гц).
Пример 33. Получение соединения 106
LHMDS
Pd2(dba)3
DavePhos толуол
МеО2С
NaH, DMF
Стадия A
К смеси Pd2(dba)3 (0,55 г, 0,6 ммоль) и DavePhos (0,50 г, 1,26 ммоль) в толуоле (40 мл) при комнатной температуре в атмосфере аргона по каплям добавляли раствор LHMDS в гексане (1,0М х50 мл, 50 ммоль). Смесь перемешивали в течение 10 мин, а затем охлаждали до -10°C, после чего добавляли третбутилацетат (6,2 мл, 46 ммоль) и дополнительно перемешивали в течение 10 мин. Затем порциями добавляли 2-бром-5-фторпиридин (3,52 г, 20 ммоль). После завершения добавления температуру оставляли повышаться до комнатной температуры и дополнительно перемешивали смесь в течение 1 ч. Затем реакционную смесь гасили добавлением насыщенного раствора NH4Cl. Путем выделения продукта реакции водой с последующим проведением хроматографии с элюированием этилацетатом (0% ^ 20%) в гексанах получали трет-бутил-2-(5-фторпиридин-2-ил)ацетат (2,6 г, 62%).
Стадия B
Следуя методике, описанной в примере 31, часть 3, стадия A, из трет-бутил-2-(5-фторпиридин-2ил)ацетата, 60% NaH (80 мг, 2,0 ммоль) и диметил 2-(хлор(3,4-диметоксифенил)метилен)малоната (0,32 г, 1,0 ммоль, полученного в примере 31, часть 2, стадия B) в DMF (1,0 мл) получали 1-трет-бутил-3метил-2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4-оксо-4H-хинолизин-1,3-дикарбоксилат. Неочищенное твердое вещество использовали непосредственно на следующей стадии без очистки.
Стадия C
Следуя методике, описанной в примере 31, часть 3, стадия B, из неочищенного твердого вещества, полученного на стадии B, TFA (5 мл) и воды (2 мл) получали 2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4Hхинолизин-4-он (145 мг, 48%). МС m/z 300,2 [M+H]+.
Стадия D
Следуя методике, описанной в примере 31, часть 3, стадия C, из 2-(3,4-диметоксифенил)-7-фтор-4Hхинолизин-4-она (75 мг, 0,25 ммоль) и пиперазина (75 мг, 0,87 ммоль) в DMSO (0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (30 мг, 33%). Т.пл. 170-172°C; МС m/z 366,1 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ: 8,53 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,46 (1H, д, J=9,5 Гц), 7,32-7,27 (2H, м), 7,22 (1H, д, J=1,9 Гц), 6,97 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,84 (2H, с), 3,98 (3H, с), 3,95 (3H, с), 3,25-3,20 (4H, м), 3,13-3,07 (4H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 33 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
- 61 037123
Пример 34. Получение соединения 245
Стадия A:
Смесь 5-бром-2-йодпиридина (2,84 г, 10 ммоль), трет-бутилэтилмалоната (3,76 г, 20 ммоль), Cs2CO3 (9,77 г, 30 ммоль), CuI (0,19 г, 1,0 ммоль) и 2-никотиновой кислоты (0,246 г, 2,0 ммоль) в диоксане (20 ммоль) перемешивали при 90°C в течение ночи в атмосфере азота. Затем, смесь обрабатывали водой, экстрагировали этилацетатом, сушили и упаривали. Остаток растворяли в MeOH (100 мл) и воде (40 мл), и добавляли NaOH (1,2 г, 3 0 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, а затем подкисляли до pH 4 добавлением 1н HCl, экстрагировали этилацетатом, сушили и подвергали хроматографии, элюируя этилацетатом (10% ^ 50%) в гексанах, с получением трет-бутил-2-(5-бромпиридин-2-ил)ацетата (1,2 г, 44%).
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 33, стадия B и C, трет-бутил-2-(5-бромпиридин-2-ил)ацетат (0,54 г, 2,0 ммоль) обрабатывали NaH (60% в минеральном масле, 0,16 г, 4,0 ммоль) в DMF (2,0 мл), а затем осуществляли взаимодействие с 2-(хлор(3,4-диметоксифенил)метилен)малонатом (2,0 ммоль). Путем снятия защиты и декарбоксилирования в TFA (5,0 мл) и воде (2,0 мл) при 100°C получали 7-бром-2(3,4-диметоксифенил)-4H-хинолизин-4-он (0,17 г, 68%). МС m/z 360,1 [M+H]+, 362,0 [M+2+H]+.
Стадия C:
Смесь 7-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-хинолизин-4-она (0,17 г, 0,47 ммоль), трет-бутил-4(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (0,18 г, 0,57 ммоль), PdCl2dppf (38 мг, 0,047 ммоль), K2CO3 (2,0М х0,75 мл, 1,5 ммоль) в ацетонитриле (1,5 мл) перемешивали при 100°C в течение 16 ч. Затем смесь обрабатывали водой, экстрагировали этилацетатом, сушили и подвергали хроматографии, элюируя этилацетатом (20% ^ 100%) в дихлорметане, с получением трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-хинолизин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1 (2H)-карбоксилата (0,16 г, 73%). МС m/z 463,3 [M+H]+.
Стадия D:
трет-Бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-хинолизин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1 (2H)карбоксилат (80 мг, 0,17 ммоль) обрабатывали дихлорметаном (1,0 мл) и TFA (1,0 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем смесь упаривали, обрабатывали дихлорметаном и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушили и упаривали с получением указанного в заголовке соединения (63 мг, 100%). Т.пл. 174-176°C; МС m/z 363,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ: 9,04 (1H, с), 7,53 (1H, дд, J=9,2, 1,9 Гц), 7,47 (1H, д, J=9,2 Гц), 7,31 (1H, дд, J=8,5, 2,2 Гц), 7,23 (1H, д, J=2,2 Гц), 6,99 (1H, J=8,2 Гц), 6,86 (2H, шир.с), 6,36 (1H, с), 3,99 (3H, с), 3,97 (3H, с), 3,67-3,60 (2H, м), 3,24-3,13 (2H, м), 2,62-2,55 (2H, м), 2,21 (1H, шир.с).
Пример 35. Получение соединения 249
Следуя методике, описанной в примере 23, из 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4H-хинолизин-4-она (30 мг, 0,083 ммоль), триацетоксиборгидрида натрия (53 мг, 0,25 ммоль) и водного раствора формальдегида (30%, 14 мкл, 0,166 ммоль) в 10% метаноле в дихлорметане (1,0 мл) получали указанное в заголовке соединение (26 мг, 83%). Т.пл. 194-196°C; МС m/z 377,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ: 9,03 (1H, с), 7,51-7,44 (2H, м), 7,29 (1H, дд, J=8,5, 2,2 Гц), 7,21 (1H, д, J=1,9 Гц), 6,98 (1H, J=8,2 Гц), 6,87-6,82 (2H, м), 6,26 (1H, с), 3,98 (3H, с), 3,95 (3H, с), 3,48 (2H, шир.с), 3,06-2,97 (2H, м), 2,90-2,80 (2H, м), 2,65 (3H, с).
- 62 037123
Пример 36. Получение соединения 306
F F
Α^ΝΗ2 РЮ2/Н2 Аж CH3C(OEt)3 il 1 ---------- ίΐ Ί ------------------THF, к.т. TFA кт
Br О Bn ВГ ОН I гм, к.т.
B2Pin2F
F Pd(dppf)CI2,1
Αν -с ο.Βώ>
вг-^0V °C, 15 ч 1
Часть 1, стадия A:
К раствору 2-(бензилокси)-4-бром-6-фторанилина (3,74 г, 12,6 ммоль) в THF (25 мл), полученного из 1,3-дифтор-2-нитробензола в 3 стадии в соответствии с известными методиками (WO 2007/067612), добавляли PtO2 (0,23 г, 1,0 ммоль). После перемешивания в атмосфере водорода (1 атм, баллон) при комнатной температуре в течение 23 ч смесь фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали с получением 2-амино-5-бром-3-фторфенола в виде коричневого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС m/z 206,1 [M+H]+, 208,0 [M+2+H]+.
Часть 1, стадия B:
К раствору неочищенного 2-амино-5-бром-3-фторфенола, полученного на стадии A, в 1,1,1триэтоксиэтане m(10 мл) при комнатной температуре добавляли TFA (0,96 мл, 12,6 ммоль). Спустя 15 ч смесь нейтрализовывали добавлением Na2CO3 и фильтровали. Фильтрат концентрировали и подвергали хроматографии, элюируя CH2Cl2, с получением 6-бром-4-фтор-2-метилбензо[б]оксазола в виде рыжеватого твердого вещества (2,531 г, 88%). МС m/z 230,0 [M+H]+, 232,1 [M+2+H]+.
Часть 1, стадия C:
Смесь 6-бром-4-фтор-2-метилбензо[б]оксазола (2,531 г, 11,0 ммоль),4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'би(1,3,2-диоксаборолана) (3,087 г, 12,2 ммоль), KoAc (3,25 г, 33,2 ммоль) и Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2 (449 мг, 0,55 ммоль) в диоксане (25 мл) дегазировали и нагревали в атмосфере N2 при 85°C. Спустя 15 ч методом LC-MS обнаруживали исчезновение исходного вещества и получение продуктов в виде смеси бороновой кислоты и пинаколового эфира бороновой кислоты в соотношении -2/1:бороновая кислота: МС m/z 196,1 [M+H]+; пинаколовый эфир бороновой кислоты: МС m/z 278,2 [M+H]+. Реакционную смесь концентрировали досуха и использовали как есть на следующей стадии.
Часть 2, стадия A:
Смесь неочищенного пинаколового эфира бороновой кислоты/бороновой кислоты, полученную в части 1 (-4 г, -4 ммоль), 2-хлор-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,792 г, 4,0 ммоль, полученного в примере 14, часть 1), Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2 (146 мг, 0,20 ммоль), K2CO3 (2М, 6,0 мл, 12,0 ммоль) и CH3CN (12 мл) дегазировали, а затем нагревали в атмосфере N2 при 60°C в течение 2,5 ч. Летучие вещества удаляли и промывали остаток водой и CH3CN с получением 7-фтор-2-(4-фтор-2метилбензо[d]оксазол-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде сероватого твердого вещества (1,119 г, 89%). МС m/z 314,2 [M+H]+, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,88-9,01 (1H, м), 8,39-8,48 (1H, м), 8,11-8,20 (2H, м), 7,86-7,96 (1H, м), 7,21-7,29 (1H, м), 2,69 (3H, с).
Часть 2, стадия B:
Смесь 7-фтор-2-(4-фтор-2-метилбензо[d]оксазол-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (63 мг, 0,2 ммоль) и (S)-2-метилпиперазина (30 мг, 0,3 ммоль) в DMA (0,5 мл) нагревали при 120°C в течение 15 ч. Летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии (10-15% MeOH в CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (26 мг, 33%). Т.пл. 207-209°C; МС m/z 394,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,39 (1H, д, J=1,3 Гц), 8,20-8,24 (1H, м), 8,05-8,16 (2H, м), 7,71-7,77 (1H, м), 7,11 (1H, с), 3,56-3,68 (2H, м), 2,98-3,06 (1H, м), 2,78-2,88 (2H, м), 2,68 (3H, с), 2,62-2,68 (1H, м), 2,27-2,34 (1H, м), 1,06 (3H, д, J=6,3 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 36 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
- 63 037123
Пример 37. Получение соединения 443
Стадия A:
Смесь 7-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-она (516 мг, 2,0 ммоль), третбутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата (740 мг, 2,4 ммоль), карбоната калия (828 мг, 6,0 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (144 мг, 0,2 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) дегазировали, а затем нагревали в атмосфере N2 при 60°C в течение ночи. Летучие вещества удаляли, и подвергали остаток хроматографии (30% EtOAc в CH2Cl2) с получением трет-бутил-4-(2-(3,4диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (579 мг, 80%). МС m/z 362,8 [M+H]+.
Стадия B:
К продукту (4 00 мг, 1,1 ммоль), полученному на стадии A, добавляли 1-метил-5-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-индазол (220 мг, 1,2 ммоль), Pd(dppf)Cl2 (40 мг, 0,05 ммоль), карбонат калия (455 мг, 3,3 ммоль) и CH3CN (2 мл). Смесь дегазировали, а затем нагревали при 75°C в течение ночи. Смесь промывали водой и CH3CN. Летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии, элюируя 0-2% MeOH в CH2Cl2, с получением трет-бутил-4-(2-(1-метил-1H-индазол-5-ил)-4оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата в виде не совсем белого твердого вещества (327 мг, 65%). МС m/z 458,5 [M+H]+.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 22, стадия D, из продукта (327 мг, 0,72 ммоль), полученного выше на стадии B, и HCl в диоксане (4М, 5 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (194 мг, 76%). Т.пл. 200-203°C; МС m/z 358,2 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSOd6, 500 МГц) δ 8,80 (д, J=1,6 Гц, 1H), 8,72 (д, J=1,6 Гц, 1H), 8,30-8,26 (м, 2H), 8,22 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,77 (д, J=1,6 Гц, 2H), 7,09 (с, 1H), 6,62 (с, 1H), 4,11 (с, 3H), 3,46-3,44 (м, 2H), 2,98-2,96 (м, 2H), 2,43-2,39 (м, 2H).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 37 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 38. Получение соединения 342
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 9, стадия G, из 2-амино-5-бромпиридина (415 мг, 2,4 ммоль), этил-3-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата (520 мг, 2,0 ммоль) и PPTs (25 мг, 0,1 ммоль) получали 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-7-бром-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он в виде желтого твердого вещества (498 мг, 67%). МС m/z 370,2 [M+H]+, 372,2
- 64 037123
[M+2+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,99-9,09 (1H, м), 8,53-8,62 (1H, м), 8,08-8,18 (1H, м), 7,68-7,75 (1H, м), 7,55-7,63 (1H, м), 7,01-7,09 (1H, м), 2,74 (3H, с), 2,44 (3H, с).
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 22, стадия C, из 7-бром-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (498 мг, 1,3 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (482 мг, 1,56 ммоль), карбоната калия (538 мг, 3,9 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (95 мг, 0,13 ммоль) в ацетонитриле (3 мл) получали трет-бутил-4-(2(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат в виде не совсем белого твердого вещества (0,57 г, 84%). МС m/z 473,5 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,80-8,89 (1H, м), 8,53-8,61 (1H, м), 8,23-8,32 (1H, м), 7,71-7,79 (1H, м), 7,55-7,61 (1H, м), 6,99-7,04 (1H, м), 4,03-4,14 (2H, м), 3,55-3,65 (2H, м), 2,74 (3H, с), 2,53-2,58 (2H, м), 2,43 (3H, с), 1,44 (9H, с).
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 22, стадия D, из трет-бутил-4-(2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата и HCl (2 мл, 4н в диоксане) в CH2Cl2 (4 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (234 мг, 84%). Т.пл. 207-210°C; МС m/z 373,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц,
DMSO-d6) δ 8,80 (1H, с), 8,55-8,60 (1H, м), 8,27-8,32 (1H, м), 7,73-7,78 (1H, м), 7,58-7,63 (1H, м), 7,00-7,05 (1H, м), 6,57-6,65 (1H, м), 3,42-3,47 (2H, м), 2,93-2,98 (2H, м), 2,72-2,76 (2H, м), 2,44 (3H, с), 2,39 (3H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 38 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 39. Получение соединения 629
Смесь (R)-2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-7-(3-метилпиперазин-1-ил)-4Hпиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (48 мг, 0,12 ммоль, полученного в соответствии с примером 9), формальдегида (0,039 мл, 0,48 ммоль, 37% в воде) и триацетоксиборгидрида натрия (51 мг, 0,24 ммоль) перемешивали в дихлорметане (1 мл) в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и нейтрализовывали добавлением бикарбоната натрия. Органические фазы сушили, концентрировали и подвергали хроматографии, элюируя 0-5% MeOH в CH2C12, с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (45 мг, 90%). Т.пл. 257-259°C; МС m/z 418,5 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц,
DMSO-d6) δ 8,56 (1H, с), 8,25-8,26 (1H, м), 8,12-8,14 (1H, м), 7,72-7,74 (1H, м), 7,55 (1H, с), 6,95 (1H, с), 3,60-3,65 (2H, м), 3,08 (2H, кв., J=7,6 Гц), 2,84-2,89 (2H, м), 2,43-2,52 (2H, м, замаскированный DMSO-d6), 2,45 (3H, с), 2,29-2,31 (1H, м), 2,24 (3H, с), 1,33 (3H, т, J=7,6 Гц), 1,91 (3H, д, J=6,2 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 39 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 40. Получение соединения 625 и соединения 626
Стадия A:
Смесь этил-4-хлор-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата (2,39 г, 10 ммоль, полученного в примере 9, стадия C) и метоксида натрия (60 мл, 30 ммоль, 0,5М в MeOH) перемешивали при 30°C в течение 1 ч. Смесь концентрировали для удаления большей части метанола, разбавляли водой и нейтрализовывали добавлением 6н HCl. Белое твердое вещество выпадало в осадок, его фильтровали, промывали
- 65 037123 водой и CH3CN, и сушили с получением этил-4-метокси-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-карбоксилата в виде белого твердого вещества (1,387 г, 62%). МС m/z 222,2 [M-CH3+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 9, стадия E, из трет-бутилацетата (1,6 мл, 12,3 ммоль), LDA (10,2 мл, 15,4 ммоль, 1,5М в THF) и этил-4-метокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата (1,387 г, 6,2 ммоль) получали трет-бутил-3-(4-метокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3оксопропаноат в виде масла (1,35 г, 72%). МС m/z 306,3 [M+H]+;
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,35 (1H, с), 7,27 (1H, с) 4,05 (3H, с), 4,01 (2H, с), 2,36 (3H, с), 1,38 (9H, с).
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 9, стадия F, из трет-бутил-3-(4-метокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата (1,35 г, 4,43 ммоль) и EtOH (10 мл) получали этил-3-(4метокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноат в виде желтоватого твердого вещества, которое использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки. МС m/z 278,3 [M+H]+.
Стадия D:
Смесь этил-3-(4-метокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата (-4,43 ммоль), 2амино-5-фторпиридина (0,596 г, 5,3 ммоль), PPTs (100 мг, 0,4 ммоль) и тетраэтилортосиликата (1,0 мл, 4,43 ммоль) в мета-ксилоле (2,2 мл) нагревали при 130°C. Спустя 15 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и промывали CH2Cl2 с получением 7-фтор-2-(4-метокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде желтого твердого вещества (1,015 г, 70%). МС m/z 326,3 [M+H]+.
Стадия E:
Смесь 7-фтор-2-(4-метокси-6-метилпиразоло [ 1,5-a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4она (98 мг, 0,30 ммоль) и N-метилпиперазина (150 мг, 1,5 ммоль) в DMA (0,6 мл) нагревали при 130°C. Спустя 6 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и подвергали хроматографии, элюируя 5% MeOH в CH2Cl2 и 10% 3,5н NH3 в MeOH/CH2Cl2, с получением соединения 625 (12 мг, 10%) и соединения 626 (8,5 мг, 7%), каждое в виде желтого твердого вещества.
Соединение 625: т.пл. 242-244°C; МС m/z 406,5 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,33-8,38 (1H, м), 8,24-8,30 (1H, м), 8,09-8,15 (1H, м), 7,70-7,74 (1H, м), 7,34-7,39 (1H, м), 6,92-6,96 (1H, м), 4,07 (3H, с), 3,21-3,29 (4H, м), 2,5 (4H, м, замаскированный DMSO-d6), 2,37 (3H, с), 2,26 (3H, с).
Соединение 626: т.пл. 280-283°C; МС m/z 392,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 11,4 (1H, с), 8,24-8,28 (1H, м), 8,09-8,14 (1H, м), 7,70-7,75 (1H, м), 7,63-7,67 (1H, м), 7,48 (1H, с), 6,88 (1H, с), 3,22-3,29 (4H, м), 2,51-2,56 (4H, м), 2,24-2,30 (3H, с), 2,15 (3H, с).
Пример 41. Получение соединения 688
Стадия A:
Смесь этил-4-хлор-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата (0,956 г, 4 ммоль, полученного в примере 9, стадия C), диметиламина (2,1 мл, 4,2 ммоль, 2,0 М в THF) и Et3N (0,84 мл, 6,0 ммоль) нагревали при 60°C. Спустя 15 ч смесь концентрировали, остаток растворяли в EtOAc, промывали водой, сушили и концентрировали с получением этил-4-(диметилaмино)-6-метилпирaзоло[1,5-a]пирaзин-2карбоксилата в виде не совсем белого твердого вещества (0,99 г, 99%). МС m/z 249,3 [M+H]+.
Стадия В:
К раствору этил-4-(диметиламино)-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-карбоксилата (0,99 г, 4,0 ммоль) и EtOAc (1,95 мл, 20 ммоль) в THF (30 мл) при -20°C добавляли LiHMDS (11,1 мл, 10 ммоль, 0,9М в THF). Спустя 1 ч смесь гасили добавлением насыщенного NH4Cl, экстрагировали EtOAc. Органические фазы концентрировали и подвергали хроматографии, элюируя 2% MeOH в DCM, с получением этил-3-(4-(диметиламино)-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата в виде бледно- 66 037123 желтого масла (0,48 г, 40%). МС m/z 291,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7,73 (1H, с), 7,05 (1H,
с), 5,43 (2H, с), 3,96 (2H, кв., J=7,0 Гц), 3,28 (6H, с), 2,20 (3H, с), 1,16 (3H, т, J=7,0 Гц).
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 40, стадия D, из этил-3-(4-(диметиламино)-6метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата (0,48 г, 1,6 ммоль), 2-амино-5-фторпиридина (179 мг, 1,6 ммоль), PPTs (40 мг, 0,16 ммоль) и тетраэтилортосиликата (0,36 мл, 1,6 ммоль) в мета-ксилоле (0,8 мл) получали 2-(4-(диметиламино)-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он в виде желтого твердого вещества (0,39 г, 72%). МС m/z 339,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,92-9,00 (1H, м), 8,06-8,18 (1H, м), 7,91-7,94 (1H, м), 7,85-7,91 (1H, м), 7,55-7,61 (1H, м), 6,98-7,08 (1H, м), 3,36 (6H, с), 2,25 (3H, с).
Стадия D:
Смесь 7-фтор-2-(4-метокси-6-метилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4она (50 мг, 0,15 ммоль) и пиперазина (86 мг, 1,0 ммоль) в DMA (0,5 мл) нагревали при 150°C. Спустя 2 часа, смесь охлаждали до комнатной температуры и промывали CH3CN с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (60 мг, 98%). Т.пл. 245-248°C; МС m/z 405,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,23-8,28 (1H, м), 8,06-8,11 (1H, м), 7,89-7,92 (1H, м), 7,69-7,75 (1H, м), 7,50-7,55 (1H, м), 6,92 (1H, с), 3,35 (6H, с), 3,12-3,19 (4H, м), 2,87-2,92 (4H, м), 2,80 (1H, с), 2,24 (3H, с).
Пример 42. Получение соединения 694
Стадия A:
К смеси 2-(4-этил-6-метилпирαзоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-она (78 мг, 0,2 ммоль, полученного в соответствии с методикой, описанной в примерах 38 и 24) и 2,2-диметил-1,3-диоксан-5-она (72 мг, 0,5 ммоль, 90% техн. чист.) в дихлорэтане (1 мл) добавляли NaBH(OAc)3 (106 мг, 0,5 ммоль) и 1 каплю AcOH. Смесь перемешивали при 60°C. Спустя 1 час, смесь гасили добавлением насыщенного NaHCO3, экстрагировали CH2Cl2, концентрировали и подвергали хроматографии (2-5% MeOH в CH2Cl2) с получением 7-(1-(2,2-диметил-1,3-диоксан-5-ил)пиперидин4-ил)-2-(4-этил-6-метилпиразоло [1,5-a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в виде белого твердого вещества (70 мг, 70%). МС m/z 503,5 [M+H]+; Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,75-8,82 (1H, м), 8,54-8,61 (1H, м), 8,00-8,10 (1H, м), 7,72-7,79 (1H, м), 7,58-7,63 (1H, м), 6,99-7,03 (1H, м), 3,86-3,95 (2H, м), 3,71-3,81 (2H, м), 3,06-3,15 (2H, м), 3,00-3,06 (2H, м), 2,70-2,80 (1H, м), 2,53-2,59 (1H, м), 2,45 (3H, с), 2,28-2,38 (2H, м), 1,82-1,90 (2H, м), 1,59-1,71 (2H, м), 1,32-1,37 (6H, м), 1,27 (3H, с).
Стадия B:
К смеси 7-(1 -(2,2-диметил-1,3-диоксан-5-ил)пиперидин-4-ил)-2-(4-этил-6-метилпиразоло [1,5a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (50 мг, 0,1 ммоль) в THF (10 мл) добавляли HCl (1,3 мл, 2,6 ммоль, 2н). Смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 15 ч смесь обрабатывали избытком 7н NH3 в MeOH, концентрировали и подвергали хроматографии (10% 2,5 н NH3 в MeOH/CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (45 мг, 97%). Т.пл. 228-230°C; МС m/z 463,6 [M+H]+; Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,77-8,84 (1H, м), 8,548,61 (1H, м), 8,02-8,10 (1H, м), 7,90-7,94 (1H, м), 7,74-7,79 (1H, м), 7,57-7,63 (1H, м), 6,99-7,05 (1H, м), 4,21-4,31 (2H, м), 3,42-3,59 (4H, м), 3,10 (2H, кв., J=7,5 Гц), 2,89-3,00 (2H, м), 2,70-2,72 (1H, м), 2,57-2,62 (1H, м), 2,45 (3H, с), 1,79-1,89 (2H, м), 1,63-1,75 (2H, м), 1,34 (3H, т, J=7,5 Гц).
Пример 43. Получение соединения 662
Смесь 2-(4,6-диметилпиразоло [1,5 -а]пиразин-2-ил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [1,2-a] пиримидин-4-она (56 мг, 0,15 ммоль, полученного в соответствии с методикой, описанной в примере 24), 1- 67 037123 бром-2-фторэтана (23 мг, 0,18 ммоль) и K2CO3 (23 мг, 0,18 ммоль) в DMF (1 мл) нагревали при 80°C. Спустя 7 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и подвергали хроматографии (5% MeOH в CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (29 мг, 44%). Т.пл. 197-199°C; МС m/z 421,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,79-8,85 (1H, м), 8,55-8,60 (1H, м), 8,05-8,11 (1H, м), 7,73-7,80 (1H, м), 7,57-7,62 (1H, м), 7,02 (1H, с), 4,59-4,65 (1H, м), 4,48-4,55 (1H, м), 3,01-3,07 (2H, м), 2,69-2,75 (1H, м), 2,74 (3H, с), 2,68-2,72 (1H, м), 2,62-2,67 (1H, м), 2,43 (3H, с), 2,122,21 (2H, м), 1,85-1,88 (2H, м), 1,70-1,88 (2H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 43 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 44. Получение соединения 798
Вос2О
Часть 1, стадия A:
К раствору 2,6-диметилпиперидин-4-она (1,27 г, 10 ммоль, смесь транс/цис изомеров в соотношении ~1,5/1) и ди-трет-бутилдикарбоната (2,40 г, 11 ммоль) в эфире добавляли NaOH (11 мл, 11 ммоль, 1н в воде). Смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 36 ч смесь экстрагировали эфиром. Органические фазы концентрировали и подвергали хроматографии (5-30% EtOAc в гексанах) с получением смеси трет-бутил-2,6-диметил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата в виде смеси транс/цис изомеровв соотношении ~ 1,2/1 (1,99 г, 87%, прозрачное масло). После отстаивания в течение ночи, из масла выпадало твердое вещество, которое фильтровали и промывали эфиром с получением трет-бутил-транс-2,6диметил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (0,376 г, 16%) (95% транс согласно методу 1Н-ЯМР). Ή ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 4,33-4,45 (2H, м), 2,80-2,90 (2H, м), 2,33-2,44 (2H, м), 1,50 (9H, с), 1,26 (6H, д, J=6,9 Гц).
Данные 1Н-ЯМР соотвествовали таковым для транс-изомера в смеси цис- и транс-изомеров (US 200839454, JOC, 1993, 58, 1109-1117).
Часть 1, стадия B:
К раствору трет-бутил-транс-2,6-диметил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (266 мг, 1,17 ммоль) в THF (7 мл) при -78°C добавляли NaHMDS. Спустя 1 ч добавляли N-фенил-бис(трифторметансульфонимид) (0,50 г, 1,4 ммоль) в THF (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, гасили добавлением насыщенного NH4Cl и экстрагировали эфиром. Органические фазы концентрировали и подвергали хроматографии, элюируя 1% EtOAc в гексанах, с получением трет-бутил-транс-2,6-диметил-4-(трифторметилсульфонилокси)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата (0,415 г, 98%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 5,77-5,85 (1H, м), 4,29-4,44 (2H, м), 2,81-2,90 (1H, м), 2,15-2,23 (1H, м), 1,48 (9H, с), 1,37 (3H, д, J=6,6 Гц), 1,24 (3H, д, J=6,6 Гц).
Часть 2, стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 2, из 7-бром-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,74 г, 2,0 ммоль, полученного в примере 38, стадия A), KoAc (590 мг, 6,0 ммоль), бис (пинаколато) дибора (560 мг, 2,2 ммоль) и Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2 (82 мг, 0,1 ммоль) в диоксане (6 мл) получали 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4Hпиридо[1,2-a]пиримидин-7-илбороновую кислоту. Неочищенный промежуточный продукт использовали непосредственно на следующей стадии. МС m/z 336,3 [M+H]+.
Часть 2, стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-илбороновой кислоты (~2 ммоль), трет-бутилтранс-2,6-диметил-4-(трифторметилсульфонилокси)-5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-карбоксилата (0,415 г,
- 68 037123
1,15 ммоль), карбоната калия (3,5 мл, 2,0 М) и Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2 (82 мг, 0,1 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) получали трет-бутил-4-(2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-транс-2,6-диметил-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат в виде желтого твердого вещества (0,5 г, 87%). МС m/z 501,4 [M+H]+.
Часть 2, стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 38, стадия C, из трет-бутил-4-(2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-транс-2,6-диметил-5,6-дигидропиридин-1(2H)карбоксилата (50 мг, 0,1 ммоль) и HCl в диоксане (4М, 0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (25 мг, 62%). Т.пл. 228-231°C; МС m/z 401,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,77-8,82 (1H, м), 8,54-8,58 (1H, м), 8,25-8,32 (1H, м), 7,70-7,76 (1H, м), 7,57 (1H, с), 7,02 (1H, с), 6,50-6,58 (1H, м), 3,64-3,75 (1H, м), 3,08-3,18 (1H, м), 2,73 (3H, с), 2,41-2,44 (1H, м), 2,43 (3H, с), 1,99-2,08 (1H, м), 1,21 (3H, д, J=6,6 Гц), 1,16 (3H, д, J=6,3 Гц).
Пример 45. Получение соединения 764
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 9, стадия Н, из 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)7-фтор-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-она (618 мг,
2,0 ммоль), (R)-трет-бутилпирролидин-3илметилкарбамата (481 мг, 2,4 ммоль) и DMA (2,0 мл) получали (S)-трет-бутил-(1 -(2-(4,6диметилпиразоло [1,5 -a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)пирролидин-3 -ил)метилкарбамат (0,90 г, 92%) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 490,5 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,50-8,59 (1H, м), 7,97-8,03 (1H, м), 7,72-7,82 (2H, м), 7,48-7,57 (1H, м), 7,04-7,08 (1H, м), 6,87-6,94 (1H, м), 3,41-3,50 (2H, м), 3,35-3,41 (1H, м), 2,97-3,16 (3H, м), 2,73 (3H, с), 2,47-2,51 (1H, м, замаскированный DMSO-d6), 2,43 (3H, с), 2,04-2,16 (1H, м), 1,71-1,83 (1H, м), 1,39 (9H, с).
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 38, стадия C, из (S)-трет-бутил-(1-(2-(4,6диметилпиразоло [1,5 -a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)пирролидин-3 -ил)метилкарбамата (0,39 г, 0,8 ммоль), HCl (2,0 мл, 4М в диоксане) и CH2Cl2 (10 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (0,19 г, 62%). Т.пл. 244-246°C; МС m/z 390,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,52-8,57 (1H, м), 7,96-8,03 (1H, м), 7,73-7,80 (2H, м), 7,52 (1H, с), 6,90 (1H, с), 3,42-3,50 (2H, м), 3,34-3,41 (1H, м), 3,10-3,18 (1H, м), 2,73 (3H, с), 2,59-2,70 (2H, м), 2,43 (3H, с), 2,34-2,42 (1H, м), 2,09-2,16 (1H, м), 1,73-1,82 (1H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 45 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 46. Получение соединения 294
Стадия A:
2-Хлор-7-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (182 мг, 0,6 ммоль), полученный в соответствии с примером 30, стадия A, объединяли с трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилатом (222 мг, 0,72 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладием(0) (67 мг, 0,06 ммоль), CH3CN (2 мл) и водным K2CO3 (1М, 2 мл). Смесь нагревали при 80°C в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали с получением трет-бутил-4-(7-(3-фтор-4-метоксифенил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-2-ил)-5,6дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата в виде неочищенного продукта, который использовали непосредст
- 69 037123 венно на следующей стадии.
Стадия B:
трет-Бутил-4-(7-(3-фтор-4-метоксифенил)-4-оксо-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат, полученный на стадии A, растворяли в TFA (2 мл). Спустя 10 минут, летучие вещества удаляли под струей азота. Остаток распределяли между CH2Cl2 и водным K2CO3 (1М). Органический слой наносили на силикагель, элюируя 0-10% MeOH (3% NH3) в CH2Cl2, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (150 мг, 72%). Т.пл. 188-192°C; МС m/z 352,1 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 9,05 (1H, д, J=2,3 Гц), 8,28 (1H, дд, J=9,4 Гц, 2,2 Гц), 7,76 (1H, дд, J=12,7 Гц, 2,3 Гц), 7,70 (1H, д, J=9,3 Гц), 7,63 (1H, м), 7,33 (1H, т, J=8,8 Гц), 7,14 (1H, м), 6,44 (1H, с), 3,92 (3H, с), 3,46 (2H, м), 2,91 (2H, м), 2,39 (2H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 46 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 47. Получение соединения 714 cPrZnBr V7
Br Pd(OAc)2 У 10%Pd/C ±^no2 ^<Ν°2 H2 (3°6ap)
THF, k.t. MeOH, 30 °C
Стадия A:
3-Бром-2-нитропиридин (2,0 г, 10 ммоль) растворяли в THF (20 мл). К смеси добавляли 2дициклогексилфосфино-2',6'-диметоксибифенил (205 мг, 0,5 ммоль) и ацетат палладия(П) (113 мг, 0,5 ммоль). К смеси добавляли циклопропилцинкбромид (15 ммоль, 0,5М в THF). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь концентрировали и подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 0-5% EtOAc в CH2Cl2, с получением 3-циклопропил-2-нитропиридина (1,1 г, 67%) в виде белого твердого вещества. МС m/z 165,2 [M+H]+.
Стадия B:
3-Циклопропил-2-нитропиридин (1,1 г, 6,7 ммоль) растворяли в MeOH (150 мл). Раствор пропускали через картридж, содержащий 10% Pd/C, в атмосфере H2 (30 бар) при 30°C. Раствор концентрировали с получением 3-циклопропил-2-аминопиридина (898 мг, колич.) в виде бесцветного масла. МС m/z 135,1 [M+H]+.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 16, стадия A, из 3-циклопропил-2-аминопиридина (898 мг, 6,7 ммоль), N-бромсукцинимида (1,3 г, 7,4 ммоль), CH3CN (15 мл) и хлорацетона (0,81 мл, 10 ммоль) получали 6-бром-8-циклопропил-2-метилимидазо[1,2-a]пиридин в виде рыжеватого порошка (255 мг, 15%). МС m/z 251,1 [M+H]+, 253,1 [M+2+H]+.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 2, из 6-бром-8-фтор-2-метилимидазо[1,2a]пиридина (255 мг, 1,0 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) (380 мг, 1,5 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(П) (41 мг, 0,05 ммоль) и ацетата калия (196 мг, 2 ммоль) получали 8-циклопропил-2-метил-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)имидазо[1,2-a]пиридин. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия E:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из неочищенного 8-циклопропил-2метил-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)имидазо[1,2-a]пиридина, полученного на стадии
- 70 037123
D, 2-хлор-7-фтор-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-она (1 ммоль, полученного в примере 14, часть 1, стадия
B), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (112 мг, 0,1 ммоль), CH3CN (4 мл) и водного K2CO3 (1М, 4 мл) получали 2-(8-циклопропил-2-метилимидазо[1,2-a]пиридин-6-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он в виде рыжеватого порошка (330 мг, 99%). МС m/z 335,2 [M+H]+.
Стадия F:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия B, из 2-(8-циклопропил-2метилимидазо[1,2-a]пиридин- 6-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (50 мг, 0,15 ммоль) и пиперазина (65 мг, 0,75 ммоль) получали указанное в заголовке соединение в виде рыжеватого порошка (38 мг, 63%). Т.пл. 274-277°C; МС m/z 401,4 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 9,14 (1H, д, J=1,7 Гц), 8,21 (1H, д, J=2,9 Гц), 8,07 (1H, дд, J=9,7 Гц, 2,8 Гц), 7,79 (1H, д, J=1,0 Гц), 7,67 (1H, д, J=9,2 Гц), 7,43 (1H, м), 6,99 (1H, с), 3,14 (4H, м), 2,89 (4H, м), 2,48 (1H, м), 2,37 (3H, с), 2,35 (1H, шир.с), 1,13 (2H, м), 1,04 (2H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 47 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 48. Получение соединения 674
1)NBS
Pd(dppf)CI2 КОАс
1,4-диоксан
Стадия A:
2-Аминоникотиновую кислоту (4,8 г, 35 ммоль) суспендировали в THF (100 мл). К смеси добавляли комплекс боран/THF (40 ммоль, 1М в THF). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Избыток реагента гасили добавлением водного гидроксида калия (2М, 15 мл). Смесь энергично перемешивали в течение 10 мин. Органический слой собирали и концентрировали. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 0-10% MeOH в CH2Cl2, с получением (2-аминопиридин-3ил)метанола (1,0 г, 23%) в виде белого твердого вещества. МС m/z 125,1 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 16, стадия A, из (2-аминопиридин-3-ил)метанола (1,0 г, 8 ммоль), N-бромсукцинимида (1,57 г, 8,8 ммоль), CH3CN (16 мл) и хлорацетона (0,81 мл, 10 ммоль) получали (6-бром-2-метилимидазо[1,2-a]пиридин-8-ил)метанол в виде рыжеватого порошка (82 мг, 4%). МС m/z 241,1 [M+H]+, 243,1 [M+2+H]+.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 2, из 6-бром-8-фтор-2-метилимидазо[1,2a]пиридина (85 мг, 0,35 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолана) (133 мг, 0,53 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(П) (30 мг, 0,035 ммоль) и ацетата калия (69 мг, 0,7 ммоль) получали (2-метил-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)имидазо[1,2а]пиридин-8-ил)метанол. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, из неочищенного (2-метил-6-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-uл)имидазо[1,2-a]пиридин-8-ил)метанола, полученного на стадии С, 2-хлор-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,35 ммоль, полученного в примере 14, часть 1, стадия B, тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (39 мг, 0,035 ммоль), CH3CN (2 мл) и водного K2CO3 (1М, 2 мл) получали 7-фтор-2-(8-(гидроксиметил)-2-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-6-ил)-4H-пиридо [1,2a]пиримидин-4-он в виде рыжеватого порошка (100 мг, 88%). МС m/z 325,2 [M+H]+.
Стадия E:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия B, из 7-фтор-2-(8-(гидроксиметил)-2метилимидазо[1,2-a]пиридин-6-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (120 мг, 0,15 ммоль) и пиперазина (65 мг, 0,7 5 ммоль) получали указанное в заголовке соединение в виде рыжеватого порошка (120 мг, 99%). Т.пл. >320°C; МС m/z 391,3 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц): δ 9,23 (1H, с), 8,24 (1H, д, J=2,6
- 71 037123
Гц), 8,07 (1H, дд, J=9,7 Гц, 2,6 Гц), 7,96 (1H, с), 7,79 (1H, с), 7,73 (1H, д, J=6,7 Гц), 6,87 (1H, с), 4,86 (2H,
с), 3,14 (4H, м), 2,89 (4H, м), 2,37 (3H, с).
Пример 49. Получение соединения 353
1)СН(ОМе)3, p-TsOH,
170°С 10 мин
1.5 ч 80°С
Стадия A:
Этил-3-(3,4-диметоксифенил)-3-оксопропаноат (907 мг, 3,6 ммоль) растворяли в метаноле (2 мл). К раствору добавляли моногидрат пара-толуолсульфоновой кислоты (34,2 мг, 0,18 ммоль), а затем триметилортоформиат (0,59 мл, 5,4 ммоль). Раствор перемешивали при 80°C в течение 1 ч. Летучие вещества удаляли под струей азота. К неочищенному веществу добавляли 5-бромпиримидин-2-амин (550 мг, 3,1 ммоль) и дифениловый эфир (2 мл). Смесь нагревали при 170°C в течение 10 мин. Реакционную смесь пропускали через флэш-колонку с силикагелем (33% гексаны в CH2Cl2) с получением этил-3-(-5бромпиримидин-2(Ш)-илиденамино)-3-(3,4-диметоксифенил)акрилата в виде желтого твердого вещества. МС m/z 408,0 [M+H]+, 410,0 [M+2+H]+.
Стадия B:
К этил-3-(-5-бромпиримидин-2(1H)-илиденамино)-3-(3,4-диметоксифенил)акрилату добавляли дифениловый эфир (2 мл). Реакционную смесь нагревали до 220°C в течение 1,5 ч. Смесь очищали методом хроматографии (100%CH2Cl2) с получением 7-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиримидо[1,2a]пиримидин-4-она (314 мг, 28% в 2 этапа) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 361,9 [M+H]+, 363,9 [M+2+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 9,30 (1H, д, J=2,7 Гц), 9,20 (1H, д, J=2,9 Гц), 7,88 (1H, дд, J=8,5 Гц, 2,6 Гц), 7,79 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,15 (1H, с), 7,11 (1H, д, J=8,5 Гц), 3,88 (3H, с), 3,85 (3H, с).
Стадия C:
Смесь 7-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиримидо[1,2-a]пиримидин-4-она (53,7 мг, 0,15 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (50,5 мг, 0,016 ммоль), Pd(dppf)Cl2 (11 мг, 0,015 ммоль), K2CO3 (62,2 мг, 0,45 ммоль), и ACN (1 мл) дегазировали, а затем нагревали в атмосфере N2 при 80°C в течение ночи. Летучие вещества удаляли и использовали остаток на следующей стадии без очистки. МС m/z 465,4 [M+H]+.
Стадия D:
Раствор трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиримидо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата в CH2Cl2/TFA (0,5 мл/0,5 мл) перемешивали при 0°C в течение 2 ч. После удаления большей части TFA и CH2Cl2 на ротоном испарителе к реакционной смеси добавляли ледяной насыщенный NaHCO3. Смесь экстрагировали CH2Cl2. Органический слой сушили над MgSO4, концентрировали и подвергали хроматографии (5% MeOH в CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества. МС m/z 365, 1 [M+H+].
Пример 50. Получение соединения 486
DMF, 50°С I
DMF,
- 72 037123
Стадия A:
Смесь 2-хлор-7-фтор-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-она (995 мг, 5 ммоль, полученного в примере 14, часть 1), CuI (19,0 мг, 0,1 ммоль), PdCl2(PPh3)2 (70,2 мг, 0,1 ммоль), этинилтриметилсилана (2,1 мл, 15 ммоль), триэтиламина (2,1 мл, 15 ммоль) в DMF (10 мл) дегазировали, а затем нагревали в атмосфере N2 при 50°C в течение ночи. Летучие вещества удаляли и использовали неочищенный 7-фтор-2((триметилсилил)этинил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он на следующей стадии. МС m/z 261,1 [M+H+].
Стадия B:
К раствору неочищенного 7-фтор-2-((триметилсилил)этинил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она в MeOH (33 мл) добавляли карбонат калия (1,0 г, 7,5 ммоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 0,5 ч. После удаления MeOH на роторном испарителе добавляли воду. Осадок фильтровали и очищали методом хроматографии на силикагеле (8% EtOAc в CH2Cl2) с получением 2-этинил-7-фтор-4Н-пиридо[1,2a]пиримидин-4-она (192,1 мг, 20% в 2 этапа) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 189, 1 [M+H+].
Стадия C:
Смесь 2-этинил-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (192,1 мг, 1,0 ммоль), 4-йод-2,6диметилпиридин-3-ола (305,3 мг, 1,2 ммоль), CuI (9,7 мг, 0,05 ммоль), PdCl2 (PPh3)2 (35,8 мг, 0,05 ммоль), триэтиламина (288 мкл, 2 ммоль) в DMF (1,7 мл) дегазировали, а затем нагревали в атмосфере N2 при 40°C в течение ночи. После удаления большей части DMF добавляли воду. Осадок фильтровали и очищали методом хроматографии (14% EtOAC в CH2Cl2) с получением 2-(5,7-диметилфуро[2,3-c]пиридин-2ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (126,3 мг, 41%) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 310,1 [M+H+].
Стадия D:
К раствору 2-(5,7-диметилфуро[2,3-c]пиридин-2-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (46,4 мг, 0,15 ммоль) в DMA (0,5 мл) добавляли пиперазин (64,6 мг, 0,75 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 120°C в течение 2 ч. После удаления большей части DMA к реакционной смеси добавляли CH3CN и формировался осадок. Осадок фильтровали, промывали водой и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (30 мг, 53%). Т.пл. 198-200°C; МС m/z 376,3 [M+H+]; Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,25 (1H, д, J=2,5 Гц), 8,13 (1H, дд, J=9,9 Гц, 2,5 Гц), 7,73 (1H, д, J=9,8 Гц), 7,64 (1H, с), 7,41 (1H, с), 6,94 (1H, с), 3,17 (4H, м), 2,90 (4H, м), 2,71 (3H, с), 2,51 (3H, с), 2,07 (1H, с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 50 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 51. Получение соединения 603
/
диоксан, 100 °C /
Стадия A:
Смесь 5-бромпиридин-2-амина (433 мг, 2,5 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (928 мг, 3,0 ммоль), PdCl2dppf (204 мг, 0,25 ммоль), K2CO3 (1,04 г, 7,5 ммоль) в ацетонитриле (8,0 мл) дегазировали, а затем перемешивали при 80°C в течение ночи. Летучие вещества удаляли и подвергали остаток хроматографии, элюируя 7% MeOH в CH2Cl2, с получением трет-бутил-4-(6-аминопиридин-3-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)карбоксилата в виде светло-желтого масла (599 мг, 87%). МС m/z 276,3 [M+H]+.
Стадия B:
Раствор продукта (599 мг, 2,2 ммоль), полученного на стадии A, в метаноле (10 мл) гидрировали с использованием Pd/C (10%, 60 мг) в шейкере Парра (60 фунт/кв.дюйм) в течение ночи. Смесь фильтро- 73 037123 вали через целит, упаривали и подвергали хроматографии, элюируя 7% MeOH в DCM, с получением трет-бутил-4-(6-аминопиридин-3-ил)пиперидин-1-карбоксилата в виде коричневого масла (600 мг, 99%).
МС m/z 278,3 [M+H]+.
Стадия C:
Смесь продукта (600 мг, 2,2 ммоль), полученного на стадии B, и бис(2,4,6-трихлорфенил)малоната (1,0 г, 2,2 ммоль) в THF (8,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь затем фильтровали и промывали твердое вещество DCM. Осадок на фильтре собирали и сушили с получением трет-бутил-4-(2-гидрокси-4-оксо-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1 -карбоксилата в виде не совсем белого твердого вещества (455 мг, 63%). МС m/z 346,4 [M+H]+.
Стадия D:
К раствору продукта (455 мг, 1,3 ммоль), полученного на стадии C, в DMF (6 мл) при комнатной температуре добавляли NaH (60%, 62 мг, 1,6 ммоль). Смесь перемешивали в течение 15 мин, а затем одной порцией добавляли N-фенилбис(трифторметансульфонамид) (511 мг, 1,4 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Путем обработки водой продукта реакции с последующей очисткой 3% MeOH в CH2Cl2 получали трет-бутил-4-(4-оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4Hпиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилат в виде не совсем белого твердого вещества (521 мг, 84%).
Стадия E:
Смесь продукта (300 мг, 0,62 ммоль), полученного на стадии D, 1-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-1H-индазола (142 мг, 0,81 ммоль), PdCl2dppf (51 мг, 0,062 ммоль), K3PO4 (193 мг, 0,93 ммоль) в диоксане (2,0 мл) дегазировали, а затем перемешивали при 100°C в течение ночи.
Летучие вещества удаляли, и подвергали остаток хроматографии, элюируя 10% MeOH в CH2Cl2, с получением трет-бутил-4-(2-(1-метил-1H-индазол-5-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата с некоторым количеством примесей (-300 мг), который использовали непосредственно на следующей стадии. МС m/z 460,5 [M+H]+.
Стадия F:
Следуя методике, описанной в примере 22, стадия D, из продукта (-300 мг), полученного на стадии E, и HCl в диоксане (4М, 5 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (196 мг, 88%, в 2 этапа). Т.пл. 268-270°C; МС m/z 360,4 [M+H]+; 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц) δ 8,75 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,27 (дд, J=9, 0 Гц, 1,6 Гц, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,00 (дд, J=9 Гц, 1,6 Гц, 1H), 7,76 (д, J=9 Гц, 2H), 7,06 (с, 1H), 4,10 (с, 3H), 3,06 (д, J=10 Гц, 2H), 2,84-2,79 (м, 1H), 2,64-2,59 (м, 2H), 2,04 (шир.с, 1H), 1,81 (д, J=10 Гц, 2H), 1,56-1,53 (м, 2H).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 51 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 52. Получение соединения 769
Стадия A:
В высушенную в печи и заполненную аргоном колбу добавляли 7-бром-2-(4,6диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (270 мг, 0,73 ммоль, полученный в примере 38, стадия A), CuI (3,4 мг, 5%), PdCl2(PPh3)2 (30 мг, 5%), триэтиламин (1 мл) и DMF (1 мл). Полученную смесь трижды продували аргоном, а затем добавляли раствор трет-бутилпроп-2инилкарбамата (0,14 г, 0,88 ммоль) в DMF (1 мл). Смесь нагревали при 80°C в течение ночи, а затем охлаждали до комнатной температуры. После добавления воды полученные твердые вещества фильтровали и последовательно промывали водой и CH3CN с получением трет-бутил-3-(2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)проп-2-инилкарбамата (260 мг, 80%). МС m/z 445,2 [M+H]+.
- 74 037123
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 22, стадия D, из продукта (100 мг, 0,23 ммоль), полученного на стадии A, и HCl в диоксане (4М, 3 мл) получали 7-(3-аминопроп-1-инил)-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он в виде не совсем белого твердого вещества (50 мг, 66%). МС m/z 345,4 [M+H]+.
Стадия C:
Продукт (50 мг, 0,15 ммоль), полученный на стадии C, смешивали с Pd/C (10%, 5 мг) в смеси дихлорметан/метанол (1/1, 2 мл) и перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через целит, концентрировали и подвергали хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя CH2Cl2/MeOH (85/15), с получением 7-(3-аминопропил)-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (45 мг, 89%). МС m/z 349,3 [M+H]+.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 23, из продукта (45 мг, 0,13 ммоль), полученного на стадии B, формальдегида (0,05 мл, 37%, ~0,8 ммоль) и триацетоксиборгидрида натрия (50 мг, 0,24 ммоль) в смеси дихлорметан/метанол (10/1, 1 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (20 мг, 41%). Т.пл. 136-138°C; МС m/z 377,3 [M+H]+. 1H ЯМР (DMSO-d6, 500 МГц) δ 8,84 (д, J=1,6 Гц, 1H), 8,58 (д, J=1,6 Гц, 1H), 8,00 (д, J=9 Гц, 1H), 7,77 (д, J=9 Гц, 1H), 7,60 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,02 (с, 1H), 2,79-2,75 (м, 5H), 2,45 (с, 3H), 2,25 (т, J=10 Гц, 2H), 2,15 (шир.с, 6H), 1,83-1,76 (м, 2H).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 52 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 53. Получение соединения 407
S-Phos, ОPd2(dba)3, Cs2CO3, DME,
PrNH2, DCE,
NaBH(OAc)3, 70° С, 15 мин ΗΝ·
Стадия А:
Смесь 7-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (1,5 г, 4,0 ммоль, полученного способом, описанным в примере 22, стадии A и B), 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декана (660 мкл, 5,05 ммоль), S-Phos (140 мг, 0,34 ммоль), Pd2(dba)3 (92 мг, 0,1 ммоль), Cs2CO3 (3,0 г, 9,2 ммоль), и DME (12 мл) нагревали в атмосфере аргона при 90°C в течение 3 ч. Реакционную смесь затем суспендировали в растворе CH2Cl2 и ацетона и фильтровали. Фильтрат концентрировали в условиях вакуума. Путем проведения хроматографии на силикагеле (1/1 CH2Cl2/EtOAc, а затем 20% ацетона в CH2Cl2) с последующим растиранием с гексанами/эфиром (1/1) получали 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1,4-диокса8-азаспиро[4.5]декан-8-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (878 мг, 50%) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 438,2 [M+H]+.
Стадия B:
Раствор 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил)-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-она (875 мг, 2,0 ммоль) в CH2Cl2/диоксане (1/1 об./об., 28 мл) обрабатывали 6н HCl (7 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, а затем подщелачивали добавлением K2CO3. Смесь экстрагировали введением в CH2Cl2. Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Путем растирания с гексанами/ацетоном (1/1) получали 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(4-оксопиперидин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (758 мг, 96%) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 394,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,27 (1H, d J=2,5 Гц), 8,08 (1H, с), 7,85 (1H, дд, J=8,5 Гц, 2,5 Гц), 7,81 (1H, м), 7,09 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,96 (1H, с), 3,88 (3H, с), 3,84 (3H, с), 3,67 (4H, т, J=6 Гц), 2,64 (3H, с), 2,53 (4H, м, замаскированный DMSO-d6).
Стадия С:
Смесь 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(4-оксопиперидин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4она (50 мг, 0,13 ммоль), NaBH(OAc)3 (65 мг, 0,31 ммоль), DCE (500 мкл) и н-пропиламина (40 мкл, 0,49 ммоль) нагревали при 70°C в течение 15 минт. Реакционную смесь распределяли между водным K2CO3 и CH2Cl2. Органический слой концентрировали в условиях вакуума. Путем проведения хроматографии на силикагеле (10% MeOH в CH2Cl2, а затем CH2Cl2/MeOH/NH4OH=9/l/0,1) получали указанное в заголовке соединение (47 мг, 87%) в виде желтого твердого вещества. Т.пл. 178-184°C; МС m/z 437,5 [M+H]+; 1H
- 75 037123
ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8,17 (1H, д, J=3 Гц), 8,00 (1H, м), 7,84 (1H, дд, J=8,5 Гц, 2 Гц), 7,80 (1H, д,
J=2 Гц), 7,08 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,95 (1H, с), 3,88 (3H, с), 3,84 (3H, с), 3,67 (2H, д, J=12,5 Гц), 2,84 (2H, т,
J=12,5 Гц), 2,61 (3H, с), 2,57 (1H, м), 2,54 (2H, м, замаскированный DMSO-d6 пик), 1,95 (2H, д, J=12,5 Гц),
1,41 (4H, м), 0,89 (3H, т, J=7,5 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 53 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 54. Получение соединения 322
Стадия A:
В смесь 2-метилбензо[d]оксазол-6-карбоновой кислоты (2,54 г, 14,4 ммоль) и SOCl2 (2,05 г, 17,2 ммоль) в толуоле (70 мл) добавляли 6 капель DMF. Затем, смесь перемешивали при 70°C в течение 3 ч, охлаждали и упаривали с получением 2-метилбензо[d]оксазол-6-карбонилхлорида в виде масла, которое отверждалось при отстаивании (2,9 г, 100%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8,27-8,30 (1H, м), 8,13 (1H, дд, J=8,4, 1,7 Гц), 7,74 (1H, дд, J=8,5, 0,6 Гц), 2,73 (3H, с).
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 31, часть 1, стадия A, путем осуществления взаимодействия 2-метилбензо[d]оксазол-6-карбонилхлорида (2,9 г, 14,4 ммоль), диметилмалоната (1,9 г, 14,4 ммоль), MgCl2 (1,37 г, 14,4 ммоль) и триэтиламина (2,9 мл, 28,8 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) получали диметил-2-(2-метилбензо[d]оксазол-6-карбонил)малонат (2,75 г, 66%). МС m/z 292,0 [M+H]+.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 31, часть 1, стадия B, путем осуществления взаимодействия диметил-2-(2-метилбензо[d]оксазол-6-карбонил)малоната (2,75 г, 9,5 ммоль), POCl3 (10 мл) и DIPEA (2,6 мл, 15,8 ммоль) получали диметил-2-(хлор(2-метилбензо[d]оксазол-6-ил)метилен)малонат (0,7 г, 24%). МС m/z 310,1 [M+H]+.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 33, стадия B и C, путем осуществления взаимодействия диметил-2-(хлор(2-метилбензо[d]оксазол-6-ил)метилен)малоната (0,7 г, 2,3 ммоль), трет-бутил-2-(5фторпиридин-2-ил)ацетата (0,57 г, 2,7 ммоль), полученного в примере 33, стадия A, NaH (0,18 г, 4,5 ммоль) в DMF, с последующим осуществлением взаимодействия с TFA и водой при 100°C получали 2(4-амино-3-гидроксифенил)-7-фтор-4H-хинолизин-4-он (0,3 г, 48%). МС m/z 271,2 [M+H]+.
Стадия E:
В смесь 2-(4-амино-3-гидроксифенил)-7-фтор-4H-хинолизин-4-она (0,3 г, 1,1 ммоль) и триметилортоформиата (1,4 мл, 11,1 ммоль) добавляли TFA (0,13 мл, 1,8 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем упаривали с получением 7-фтор-2-(2-метилбензо[d]оксазол- 6ил) -4H-хинолизин-4-она (0,3 г, 99%). МС m/z 295,2 [M+H]+.
Стадия F:
Смесь 7-фтор-2-(2-метилбензо[d]оксазол-6-ил)-4H-хинолизин-4-она (0,15 г, 0,51 ммоль) и (S)-2метилпиперазина (0,2 г, 2,0 ммоль) в DMA (1,0 мл) перемешивали при 130°C в течение ночи. Растворитель удаляли под струей азота, и очищали остаток метанолом в дихлорметане (10%) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (69 мг, 36%). Т.пл. 115-117°C; МС m/z 375,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8,55 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,79 (1H, д, J=1,3 Гц), 7,73 (1H, д, J=7,9 Гц), 7,64 (1H, дд, J=8,2, 1,6 Гц), 7,49 (1H, д, J=9,5 Гц), 7,33 (1H, д, J=2,5 Гц), 6,86-6,91 (2H, м), 3,60 (2H, шир.с), 3,25-3,34 (1H, м), 3,10-3,22 (2H, м), 2,93-3,03 (1H, м), 2,62-2,70 (4H, м), 1,31 (3H, д, J=6,3 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 54 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
- 76 037123
Пример 55. Получение соединения 380
Часть 1, стадия A: Смесь 6-хлорпиридазин-3-амина (0,26 г, 2,0 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата (0,62 г, 2,0 ммоль), PdCl2dppf (0,16 г, 0,2 ммоль), K2CO3 (2,0М, 3,0 мл, 6,0 ммоль) в ацетонитриле (6,0 мл) перемешивали при 100°C в течение ночи. Путем обработки продукта водой с последующей очисткой метанолом в дихлорметане (0-10%) получали трет-бутил-4-(6-аминопиридазин-3-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат (0,51 г, 93%). МС m/z 277,2 [M+H]+.
Часть 1, стадия B:
Раствор трет-бутил-4-(6-аминопиридазин-3-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (0,4 г, 1,4 ммоль) в этаноле (25 мл) гидрировали с использованием Pd(OH)2 на угле (20%, 0,2 г) в шейкере Парра (60 фунт/кв.дюйм) в течение ночи. Смесь фильтровали через целит, упаривали и очищали метанолом в дихлорметане (0-10%) с получением трет-бутил-4-(6-аминопиридазин-3-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,25 г, 62%). МС m/z 279,2 [M+H]+.
Часть 2: В раствор 6-йод-2-метилбензо[d]тиазола (2,24 г, 7,3 ммоль) в THF (15 мл) при -20°C добавляли i-PrMgCl в THF (2,0М, 3,7 мл, 7,4 ммоль). Смесь поддерживали при температуре от -10 до -20°C в течение 1 ч, а затем переносили через канюлю к раствору 5-(бис(метилтио)метилен)-2,2-диметил-1,3диоксан-4,6-диона (1,4 г, 5,6 ммоль) в THF (15 мл). Реакция была слегка экзотермической. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин, после чего гасили добавлением водного раствора NH4Cl. Путем обработки продукта водой с последующей очисткой этилацетатом в дихлорметане (010%) получали 2,2-диметил-5-((2-метилбензо[d]тиазол-6-ил)(метилтио)метилен)-1,3-диоксан-4,6-дион (1,26 г, 64%). МС m/z 350,1 [M+H]+.
затем 240
Часть 3:
Смесь 2,2-диметил-5-((2-метилбензо[d]тиазол-6-ил)(метилтио)метилен)-1,3-диоксан-4,6-диона (0,13 г, 0,36 ммоль) и трет-бутил-4-(6-аминопиридазин-3-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,1 г, 0,36 ммоль) в дифениловом эфире (2,0 мл) перемешивали при 140°C в течение 1 ч. Затем температуру повышали до 240°C и перемешивали в течение 30 мин. Смесь упаривали и очищали остаток методом препаративной HPLC с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (33 мг, 24%). Т.пл. 230-235°C; МС m/z 378,2 [M+H]+; Ή ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,87-8,92 (1H, м), 8,28-8,33 (1H, м), 8,08 (1H, д, J=9,1 Гц), 7,99-8,04 (1H, м), 7,79 (1H, с), 7,26 (1H, с), 3,41-3,48 (2H, м), 3,22-3,32 (1H, м), 3,03-3,11 (2H, м), 2,84 (3H, с), 2,14-2,22 (2H, м), 2,08 (1H, с), 1,92-2,03 (2H, м).
Пример 56. Получение соединения 398
PdCI2dppf, К2СО3 DMF, 88 °C
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 9, стадия G, путем осуществления взаимодействия 6хлорпиридазин-3-амина (0,65 г, 5,0 ммоль), этил-3-(3,4-диметоксифенил)-3-оксопропаноата (1,77 г, 7,0 ммоль) и PPTs (63 мг, 0,25 ммоль) получали 7-хлор-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиримидо[1,2b]пиридазин-4-он (0,23 г, 14%). МС m/z 318,1 [M+H]+.
- 77 037123
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 34, стадия C, путем осуществления взаимодействия 7-хлор2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-она (0,12 г, 0,38 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (0,14 г, 0,45 ммоль), PdCl2dppf (35 мг, 0,038 ммоль), K2CO3 (2,0М, 0,6 мл, 1,2 ммоль) в ацетонитриле (1,2 мл) получали третбутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиримидо[1,2-Ь]nиридαзин-7-ил)-5,6-дигидроnиридин1(2H)-карбоксилат (100 мг, 56%). МС m/z 465,3 [M+H]+.
Стадия C:
Следуя методике, описанной в примере 34, стадия D, путем обработки трет-бутил-4-(2-(3,4диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (100 мг, 0,21 ммоль) TFA (1,0 мл) и дихлорметаном (1,0 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (50 мг, 65%). Т.пл. 195-200°C; МС m/z 365,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,13 (1H, д, J=9,8 Гц), 7,96 (1H, д, J=9,8 Гц), 7,82 (1H, дд, J=8,5, 2,2 Гц), 7,74 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,15 (1H, с), 7,08 (1H, д, J=8,8 Гц), 7,01 (1H, шир.с), 3,87 (3H, с), 3,83 (3H, с), 3,57 (2H, шир.с), 3,00 (2H, шир.с), 2,58 (2H, шир.с).
Пример 57. Получение соединения 402
о
DMF, 80 °C \ О
диоксан 100 °C
Стадия A:
Смесь 5-бромпиразин-2-амина (0,17 г, 1,0 ммоль) и бис(2,4,6-трихлорфенил)малоната (0,56 г, 1,2 ммоль) в THF (4,0 мл) перемешивали при 88°C в течение 1 ч. Затем смесь фильтровали и промывали твердое вещество этилацетатом. Осадок на фильтре собирали и сушили с получением 7-бром-2гидрокси-4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-4-она (0,18 г, 74%). МС m/z 242,0 [M+H]+, 244,0 [M+2+H]+ .
Стадия В:
Следуя методике, описанной в примере 34, стадия С, путем осуществления взаимодействия 7-бром2-гидрокси-4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-4-она (0,18 г, 0,74 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (0,27 г, 0,89 ммоль), PdCl2dppf (60 мг, 0,074 ммоль), K2CO3 (0,31 г, 2,2 ммоль) в DMF (2,5 мл) получали трет-бутил-4-(2-гидрокси-4-оксо4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат (0,18 г, 70%). МС m/z 345,3 [M+H]+.
Стадия C:
В раствор трет-бутил-4-(2-гидрокси-4-оксо-4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (0,18 г, 0,52 ммоль) в DMF (3,0 мл) при комнатной температуре добавляли NaH (60%, 23 мг, 0,57 ммоль). Смесь перемешивали в течение 15 мин, а затем одной порцией добавляли PhNTf2 (0,22 г, 0,62 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи. Путем обработки продукта водой с последующей очисткой этилацетатом в дихлорметане (0-20%) получали трет-бутил-4-(4-оксо-2(трифторметилсульфонилокси)-4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат (0,1 г, 40%). МС m/z 377,1 [M-Boc+H]+.
Стадия D:
Смесь трет-бутил-4-(4-оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-7-ил)5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (80 мг, 0,17 ммоль), 3,4-диметоксифенилбороновой кислоты (46 мг, 0,25 ммоль), PdCl2dppf (14 мг, 0,017 ммоль), K3PO4 (54 мг, 0,25 ммоль) в диоксане (2,0 мл) перемешивали при 100°C в течение 24 ч. Смесь фильтровали, упаривали и очищали этилацетатом в дихлорметане
- 78 037123 (0-20%) с получением трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4Н-пиразино[ 1,2-а]пиримидин-7ил)-5,6-дигидропиридин-1 (2H)-карбоксилата (43 мг, 55%). 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 9,10 (1H, с), 8,61 (1H, с), 7,72 (1H, с), 7,70 (1H, д, J=1,8 Гц), 7,00 (3H, м), 4,19-4,26 (2H, м), 4,03 (3H, с), 3,98 (3H, с), 3,693,76 (2H, м), 2,56-2,67 (2H, м), 1,51 (9H, с).
Стадия E:
Следуя методике, описанной в примере 34, стадия D, путем обработки трет-бутил-4-(2-(3,4диметоксифенил)-4-оксо-4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилата (43 мг, 0,09 ммоль) TFA (1,0 мл) и дихлорметаном (1,0 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (34 мг, 100%). Т.пл. 205-208°C; МС m/z 365,4 [M+H]+; Ή ЯМР (500
МГц, DMSO-d6) δ 9,15 (1H, д, J=0,9 Гц), 8,41 (1H, с), 7,85-7,94 (1H, м), 7,78 (1H, д, J=1,9 Гц), 7,27 (1H, с), 7,11 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,97-7,05 (1H, м), 3,89 (3H, с), 3,84 (3H, с), 3,58 (2H, шир.с), 3,21-3,42 (3H, м), 3, 07 (2H, т, J=5,7 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 57 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 58. Получение соединения 499
Стадия A:
Смесь трет-бутил-4-(6-аминопиридазин-3-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,88 г, 3,2 ммоль) и бис(2,4,6-трихлорфенил)малоната (1,76 г, 3,8 ммоль) в THF (12 мл) перемешивали при 40°C в течение 1 ч. Затем, смесь упаривали и очищали метанолом в дихлорметане (0-10%) с получением трет-бутил-4-(2гидрокси-4-оксо-4H-пиримидо[1,2-b]пиридазин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,69 г, 63%). МС m/z 347,2 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 57, стадия C, путем осуществления взаимодействия третбутил-4-(2-гидрокси-4-оксо-4H-пиримидо[1,2-b]пиридазин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,69 г, 2,0 ммоль), NaH (60%, 88 мг, 2,2 ммоль), PhNTf2 (0,79 г, 2,2 ммоль) в DMF (12 мл) получали трет-бутил-4-(4оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4H-пиримидо[1,2-b]пиридазин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилат (0,87 г, 91%). Ή ЯМР (500 МГц, CDCL) δ 7,90 (1H, д, J=9,5 Гц), 7,61 (1H, д, J=9,5 Гц), 6,45 (1H, с), 4,284,36 (2H, м), 3,20-3,30 (1H, м), 2,82-2,93 (2H, м), 1,94-2,02 (2H, м), 1,75-1,85 (2H, м), 1,49 (9H, с).
Стадия C:
Смесь трет-бутил-4-(4-оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4H-пиримидо[1,2-b]пиридазин-7ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,24 г, 0,5 ммоль), 2-метил-6-(триметилстаннил)бензо[d]оксазола (0,18 г, 0,6 ммоль), Pd(PPh3)4 (58 мг, 0,05 ммоль), CuI (23 мг, 0,12 ммоль) в диоксане (2,0 мл) перемешивали при 90°C в течение ночи. Смесь концентрировали и очищали метанолом в дихлорметане (0-10%). Целевые фракции объединяли и упаривали. Остаток обрабатывали TFA (1,0 мл) и дихлорметаном (1,0 мл) и выбивали продукт, как описано в примере 34, стадия D, с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (86 мг, 48%). Т.пл. 126-128°C; МС m/z 362,2 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 8,20 (1H, с), 7,91-7,99 (2H, м), 7,67 (2H, д, J=8,2 Гц), 7,07 (1H, с), 3,45 (2H, д, J=12,3 Гц), 3,07-3,21 (2H, м), 3,30-3,24 (1H, м), 2,61 (3H, с), 2,14 (4H, шир.с).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 58 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 59. Получение соединения 502
- 79 037123
Стадия А:
Смесь трет-бутил-4-(5-аминопиразин-2-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,2 г, 0,72 ммоль), этил-3(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата (0,21 г, 0,79 ммоль), Si(OEt)4 (0,16 мл, 0,72 ммоль), PPTs (18 мг, 0,072 ммоль) в мета-ксилоле (0,36 мл) перемешивали при 60°C в течение 1 ч, а затем при 130°C в течение ночи. Смесь охлаждали, наносили непосредственно на колонку с силикагелем и очищали метанолом в дихлорметане (0-10%). Путем дополнительной очистки этилацетатом в дихлорметане (20-100%) получали трет-бутил-4-(2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4Hпиразино[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилат (0,117 г, 34%). МС m/z 476,4 [M+H]+.
Стадия B: Следуя методике, описанной в примере 34, стадия D, путем обработки трет-бутил-4-(2(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиразино[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1карбоксилата (117 мг, 0,25 ммоль) TFA (1,0 мл) и дихлорметаном (2,0 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (93 мг, 100%). МС m/z 376,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, метанол^) δ 9,13 (1H, д, J=1,3 Гц), 8,53 (1H, с), 8,27 (1H, д, J=0,6 Гц), 7,55 (1H, д, J=1,3 Гц), 7,28 (1H, с), 3,27-3,34 (2H, м), 2,99-3,09 (1H, м), 2,85-2,96 (2H, м), 2,75 (3H, с), 2,47 (3H, д, J=0,9 Гц), 2,05-2,14 (2H, м), 1,84-1,95 (2H, м).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 59 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 60. Получение соединения 512
Стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 59, стадия A, путем осуществления взаимодействия третбутил-4-(6-аминопиридазин-3-ил)пиперидин-1-карбоксилата (0,28 г, 1,0 ммоль), этил-3-(4,6диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3-оксопропаноата (0,28 г, 1,1 ммоль), Si(OEt)4 (0,22 мл, 1,0 мл), PPTs (25 мг, 0,1 ммоль) в мета-ксилоле (0,5 мл) получали трет-бутил-4-(2-(4,6-диметилпиразоло[1,5a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиримидо[1,2-b]пиридазин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилат (60 мг, 13%). МС m/z 476,4 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 34, стадия D, путем обработки трет-бутил-4-(2-(4,6диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-4-оксо-4H-пиримидо[1,2-b]пиридазин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата (60 мг, 0,13 ммоль) TFA (1,0 мл) и дихлорметаном (1,0 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (47 мг, 100%). МС m/z 376,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 8,27-8,31 (1H, м), 8,06 (1H, д, J=9,5 Гц), 7,78 (1H, с), 7,57 (1H, д, J=0,9 Гц), 7,39 (1H, с), 3,253,30 (2H, м), 3,15-3,23 (1H, м), 2,82-2,90 (2H, м), 2,79 (3H, с), 2,51 (3H, д, J=0,9 Гц), 2,02-2,09 (2H, м), 1,851,96 (2H, м).
Пример 61. Получение соединения 586
- 80 037123
Стадия A:
Смесь 2,5-дибромпиразина (1,45 г, 6,1 ммоль), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (1,13 г, 6,1 ммоль) и K2CO3 (1,26 г, 9,2 ммоль) в NMP (6,0 мл) перемешивали при 120°C в течение ночи. Смесь охлаждали, а затем путем выбивания продукта водой с последующей очисткой этилацетатом в дихлорметане (0-15%) получали трет-бутил-4-(5-бромпиразин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилат (1,45 г, 69%). МС m/z 343,3 [M+H]+, 345,3 [M+2+H]+.
Стадия B:
Смесь трет-бутил-4-(5-бромпиразин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (1,25 г, 3,6 ммоль), LiHMDS (l,0M, 4,4 мл, 4,4 ммоль), Pd(dba)2 (105 мг, 0,18 ммоль), PtBu3 HBF4 (53 мг, 0,18 ммоль) в толуоле (4,4 мл) перемешивали при 40°C в течение ночи в атмосфере Ar. Затем смесь охлаждали, обрабатывали ацетонитрилом (2,0 мл) и 1н HCl (0,2 мл), перемешивали в течение 15 мин и очищали на силикагеле, элюируя метанолом в дихлорметане (0-10%), с получением трет-бутил-4-(5-аминопиразин-2-ил) пиперазин-1карбоксилата (0,96 г, 94%). MC m/z 280,2 [M+H]+.
Стадия C:
Смесь трет-бутил-4-(5-аминопиразин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (0,68 г, 2,4 ммоль), бис(2,4,6трихлорфенил) малонат (1,36 г, 2,9 ммоль) в THF (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 64 ч. Затем, смесь фильтровали. Твердое вещество промывали этилацетатом и сушили с получением трет-бутил-4-(2-гидрокси-4-оксо-4H-пирαзино[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперαзин-1-карбоксилата (0,65 г, 77%). MC m/z 348,3 [M+H]+.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 57, стадия C, путем осуществления взаимодействия третбутил-4-(2-гидрокси-4-оксо-4H-пирαзино[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперαзин-1-карбоксилата (0,65 г, 1,9 ммоль), NaH (60%, 82 мг, 2,1 ммоль) и PhNTf2 (0,74 г, 2,1 ммоль) в DMF (10 мл) получали трет-бутил-4(4-оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4H-пирαзино [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперазин-1 -карбоксилат (0,72 г, 80%). MC m/z 480,2 [M+H]+.
Стадия E:
Следуя методике, описанной в примере 57, стадия D, путем осуществления взаимодействия третбутил-4-(4-оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4H-пирαзино[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперαзин-1карбоксилата (0,38 г, 0,79 ммоль) и 2-метил-2H-индaзол-5-илбороновой кислоты (0,21 г, 1,2 ммоль) в присутствии PdCl2dppf (64 мг, 0,08 ммоль) и K3PO4 (0,25 г, 1,2 ммоль) в диоксане (6,0 мл) получали третбутил-4-(2-(2-метил-2H-индазол-5 -ил)-4-оксо-4H-пиразино [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперазин-1 -карбоксилат (0,22 г, 60%). MC m/z 462,3 [M+H]+.
Стадия F:
Следуя методике, описанной в примере 34, стадия D, путем обработки трет-бутил-4-(2-(2-метил-2Hиндaзол-5-ил)-4-оксо-4H-пирaзино[1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперaзин-1-карбоксилата (0,22 г, 0,48 ммоль) TFA (1,0 мл) и дихлорметаном (1,0 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (0,17 мг, 99%). Т.пл. 160-162°C; MC m/z 362,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, метанол^) δ 9,04 (1H, д, J=1,3 Гц), 8,50 (1H, дд, J=1,6, 0,9 Гц), 8,18 (1H, с), 7,97-8,02 (2H, м), 7,71 (1H, д, J=9,1 Гц), 7,01 (1H, с), 4,23 (3H, с), 3,61-3,67 (4H, м), 3,13-3,20 (4H, м).
Пример 62. Получение соединения 695
Часть 1, стадия A:
В суспензию 1-(1H-пиррол-2-ил)этанона (2,18 г, 20 ммоль) в дихлорметане (100 мл) при -78°C по каплям в течение 30 минут добавляли раствор брома (1,23 мл, 24 ммоль) в дихлорметане (25 мл). Смесь перемешивали при -78°C в течение 10 мин после добавления, а затем вливали в воду со льдом. Водный слой экстрагировали дихлорметаном. Органические экстракты объединяли, сушили и упаривали. Остаток очищали этилацетатом в дихлорметане (0-20%) с получением 1-(4-бром-1H-пиррол-2-ил)этанона (3,48 г, 92%). МС m/z 188,0 [M+H]+, 190,0 [M+2+H]+.
Часть 1, стадия B:
В раствор 1-(4-бром-1H-пиррол-2-ил)этанона (3,48 г, 18,5 ммоль) в DMF (40 мл) при 0°C порциями добавляли NaH (60%, 0,81 г, 20,4 ммоль). Температуру оставляли повышаться до комнатной температуры, и по каплям добавляли 1-хлорпропан-2-он (1,54 мл, 19,4 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Путем обработки продукта водой с последующей очисткой этилацетатом в гексане (5-30%) получали 1-(2-ацетил-4-бром-1H-пиррол-1-ил)пропан-2-он (2,9 г, 64%). 1H ЯМР
- 81 037123 (500 МГц, CDCl3) δ 6,99 (1H, д, J=1,9 Гц), 6,77 (1H, д, J=1,6 Гц), 5,00 (2H, с), 2,39 (3H, с), 2,25 (3H, с).
Часть 1, стадия C:
Смесь 1-(2-ацетил-4-бром-1Н-пиррол-1-ил)пропан-2-она (2,9 г, 11,9 ммоль) и ацетата аммония (18 г, 238 ммоль) в уксусной кислоте (100 мл) перемешивали при 120°C в течение ночи. Затем уксусную кислоту удаляли на роторном испарителе, затем к остатку добавляли воду со льдом, и подщелачивали смесь до pH 9 добавлением NaOH. Смесь экстрагировали этилацетатом. Органические экстракты объединяли, сушили и упаривали. Остаток очищали этилацетатом в дихлорметане (0-10%) с получением 7бром-1,3-диметилпирроло[1,2-a]пиразина (2,4 г, 90%). МС m/z 225,1 [M+H]+, 227,1 [M+2+H]+ .
Часть 1, стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 2, путем осуществления взаимодействия 7-бром1,3-диметилпирроло[1,2-a]пиразина (0,67 г, 3,0 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2диоксаборолана) (0,99 г, 3,9 ммоль), PdCl2dppf (0,24 г, 0,3 ммоль), KoAc (0,88 г, 9,0 ммоль) в диоксане (10 мл) получали 1,3-диметил-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пирроло[1,2-a]пиразин, который использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки. МС m/z 191,2 [M-пинакол+Н]+.
F
PdCI2dppf
K2CO3 ACN, 90 °C
Часть 2, стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия A, путем осуществления взаимодействия 2-хлор-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,3 г, 1,5 ммоль) с 1,3-диметил-7-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пирроло[1,2-a]пиразином (1,5 ммоль) получали 2-(1,3-диметилпирроло[1,2a]пиразин-7-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (0,34 г, 74%). МС m/z 309,2 [M+H]+.
Часть 2, стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 14, часть 3, стадия B, путем осуществления взаимодействия 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-a]пиразин-7-ил)-7-фтор-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,14 г, 0,45 ммоль) с 2,6-диметилпиперазином (0,26 г, 2,27 ммоль) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (57 мг, 32%). Т.пл. 254-256°C; МС m/z 403,4 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 8,20 (1H, д, J=2,8 Гц), 7,99 (1H, д, J=1,6 Гц), 7,84-7,90 (1H, м), 7,72 (1H, д, J=0,6 Гц), 7,58 (1H, д, J=9,5 Гц), 7,25 (1H, т, J=1,1 Гц), 6,69 (1H, с), 3,60 (2H, д, J=9,5 Гц), 3,03-3,11 (2H, м), 2,62 (3H, с), 2,37 (2H, т, J=11,3 Гц), 2,31 (3H, д, J=0,9 Гц), 1,21 (6H, д, J=6,3 Гц).
Как представлено ниже в табл. 1, дополнительные соединения, раскрытые в настоящем документе, могут быть получены в соответствии с примером 62 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции.
Пример 63. Получение соединения 731
Часть 1, стадия A:
Следуя методике, описанной в примере 57, стадия A, путем осуществления взаимодействия 5хлорпиридин-2-амина (2,57 г, 20 ммоль) и бис(2,4,6-трихлорфенил)малоната (10,2 г, 22 ммоль) в THF (100 мл) получали 7-хлор-2-гидрокси-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он (3,89 г, 97%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12,01 (1H, шир.с), 8,89 (1H, д, J=2,2 Гц), 8,10 (1H, дд, J=9,3, 2,4 Гц), 7,44 (1H, д, J=9,5 Гц), 5,19 (1H, шир.с).
Часть 1, стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 57, стадия C, путем осуществления взаимодействия 7-хлор2-гидрокси-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (3,89 г, 19,8 ммоль) с NaH (60%, 0,87 г, 21,8 ммоль) и PhNTf2 (7,78 г, 21,8 ммоль) в DMF (50 мл) получали трифторметансульфонат 7-хлор-4-оксо-4Нпиридо[1,2-a]пиримидин-2-ила (5,9 г, 91%). МС m/z 370,0 [M+H]+.
- 82 037123
Часть 2, стадия A:
В раствор 7-бром-1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразина (1,1 г, 4,9 ммоль) в THF (20 мл) при -78°C по каплям добавляли BuLi (1,6М, 4,7 мл, 7,5 ммоль). Смесь перемешивали при -78°C в течение 30 мин и добавляли триизопропилборат (1,7 мл, 7,4 ммоль). Температуру оставляли медленно повышаться до комнатной температуры. Реакционную смесь гасили добавлением воды (1,0 мл) и упаривали смесь досуха в условиях вакуума. К остатку добавляли трифторметансульфонат 7-хлор-4-оксо-4Н-пиридо[1,2a]пиримидин-2-ила (1,6 г, 4,9 ммоль), PdCl2dppf (0,4 г, 0,49 ммоль), K3PO4 (1,55 г, 7,3 ммоль) и диоксан (40 мл). Смесь перемешивали при 100°C в течение ночи в атмосфере Ar, после чего смесь охлаждали, упаривали и очищали на силикагеле, элюируя метанолом в дихлорметане (0-10%), с получением 7-хлор2-(1,3-диметилпирроло[1,2-a]пиразин-7-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,34 г, 22%). МС m/z 325,2 [M+H]+.
Часть 2, стадия B:
Смесь 7-хлор-2-(1,3-диметилпирроло [1,2-a]пиразин-7-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,2 г, 0,62 ммоль), трет-бутил-4-метилпиперидин-4-илкарбамата (0,17 г, 0,8 ммоль), RuPhos-Pd (22 мг, 0,031 ммоль), RuPhos (14 мг, 0,031 ммоль) и трет-бутоксида натрия (83 мг, 0,87 ммоль) в THF (1,5 мл) перемешивали при 85°C в течение ночи в атмосфере Ar. Затем смесь охлаждали, к ней добавляли уксусную кислоту (1,4 экв.), а затем очищали на силикагеле, элюируя метанолом в дихлорметане (0-10%), с получением трет-бутил-1 -(2-( 1,3-диметилпирроло[1, 2-a]пиразин-7-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7ил)-4-метилпиперидин-4-илкарбамата (70 мг, 22%). МС m/z 503,4 [M+H]+.
Часть 2, стадия C:
трет-Бутил-1-(2-(1,3-диметилпирроло[1,2-a]пиразин-7-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7ил)-4-метилпиперидин-4-илкарбамат (70 мг, 0,14 ммоль) обрабатывали HCl в диоксане (4н, 1,0 мл) в течение 30 мин. Затем растворитель удаляли. Остаток повторно обрабатывали аммиаком в метаноле и упаривали. Остаток очищали метанолом в дихлорметане (0-10%) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (36 мг, 64%). Т.пл. 244-246°C; МС m/z 403,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,22-8,27 (2H, м), 8,04 (1H, дд, J=9,8, 2,8 Гц), 7,96 (1H, с), 7,60 (1H, д, J=9,8 Гц), 7,41 (1H, т, J=1,3 Гц), 6,82 (1H, с), 3,25-3,30 (4H, м), 2,58 (3H, с), 2,27 (3H, д, J=0,9 Гц), 1,47-1,65 (6H, м), 1,10 (3H, с).
Пример 64. Получение соединения 743
Стадия A:
Смесь 7-хлор-2-(1,3-диметилпирроло[1,2-a]пиразин-7-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-она (0,14 г, 0,43 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)карбоксилата (0,2 г, 0,65 ммоль), Pd(OAc)2 (1,9 мг, 0,0086 ммоль), SPhos (7,0 мг, 0,0172 ммоль) и K3PO4 (0,18 г, 0,86 ммоль) в THF (1,0 мл) и воде (0,5 мл) перемешивали при 110°C в течение ночи. Путем обработки продукта водой с последующей очисткой метанолом в дихлорметане (0-10%) получали трет-бутил4-(2-(1,3-диметилпирроло[1,2-a]пиразин-7-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилат (0,13 г, 65%). МС m/z 472,3 [M+H]+.
Стадия B:
Следуя методике, описанной в примере 63, часть 2, стадия C, путем обработки трет-бутил-4-(2-(1,3диметилпирроло[1,2-a]пиразин-7-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-7-ил)-5,6-дигидропиридин- 83 037123
1(2H)-карбоксилата (0,13 г, 0,28 ммоль) HCl в диоксане (1,0 мл) получали указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (5 мг, 5%). Т.пл. 189-191°C; МС m/z 372,3 [M+H]+; 1H ЯМР (500
МГц, метанол-d4) δ 8,81 (1H, д, J=1,9 Гц), 8,03 (2H, д, J=1,6 Гц), 7,71 (1H, с), 7,62 (1H, д, J=9,5 Гц), 7,28 (1H, с), 6,76 (1H, с), 6,41-6,50 (1H, м), 3,58 (2H, д, J=2,5 Гц), 3,15 (2H, т, J=5,8 Гц), 2,63 (3H, с), 2,54 (2H, шир.с), 2,32 (3H, д, J=0,6 Гц).
Пример 65. Получение соединения 804
Стадия A:
5-Фтор-2-нитропиридин (200 мг, 1,41 ммоль), трет-бутил-2,7-диазаспиро[3.5]нонан-2-карбоксилат (319 мг, 1,41 ммоль) и K2CO3 (195 мг, 1,41 ммоль) объединяли в DMSO (8 мл).
Реакционную смесь нагревали при 70°C в течение 15 ч и охлаждали до комнатной температуры, после чего выпаривали растворитель. Путем экстрагирования (CH2Cl2 и H2O) с последующим проведением хроматографии на силикагеле (CH2Cl2/MeOH=98/2) получали сложный трет-бутиловый эфир 7-(6-нитропиридин-3-ил)-2,7-диазаспиро[3.5]нонан-2-карбоновой кислоты (320 мг, 65%) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 349,5 [M+H]+.
Стадия B:
Сложный трет-бутиловый эфир 7-(6-нитро-пиридин-3-ил)-2,7-диазаспиро[3.5]нонан-2-карбоновой кислоты (315 мг, 0,90 ммоль) и Pd/C (32 мг) объединяли в MeOH (40 мл) и помещали в атмосферу водорода (H2 из баллона) на 15 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит и подвергали хроматографии на силикагеле (CH2Cl2/MeOH=98/2) с получением сложного трет-бутилового эфира 7-(6-аминопиридин3-ил)-2,7-диазаспиро[3.5]нонан-2-карбоновой кислоты (227 мг, 78%) в виде не совсем белого твердого вещества. МС m/z 319,6 [M+H]+.
Стадия C:
Смесь сложного трет-бутилового эфира 7-(6-аминопиридин-3-ил)-2,7-диазаспиро[3.5]нонан-2карбоновой кислоты (100 мг, 0,31 ммоль), этил-3-(4,6-диметилпиразоло[1,5-a]пиразин-2-ил)-3оксопропаноата (90 мг, 0,31 ммоль, полученного как описано в примере 9, стадии A-F) и PPTs (87 мг, 0,345 ммоль) в метил-1-бутаноле (2 мл) нагревали при 160°C в течение 15 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, вливали в водный раствор NaOH (1M) и экстрагировали CH2Cl2. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, и подвергали остаток хроматографии на силикагеле (CH2Cl2/MeOH=9/1; и 1% водный NH3) с получением указанного в заголовке продукта (40 мг, 31%) в виде желтого твердого вещества. МС m/z 416,2 [M+H]+. 1H ЯМР (CDCl3, 600 МГц) δ 8,18 (д, J=1,1 Гц, 1H), 8,15 (с, 1H), 7,45 (дд, 1H) 7,80 (д, 1H), 7,32 (с, 1H), 7,11 (с, 1H), 3,51 (м, 2H), 3,42 (д, 1H), 3,36 (д, 1H), 3,15 (м, 2H), 3,00 (д, 1H), 2,97 (д, 1H), 2,79 (с, 3H), 2,52 (с, 3H), 2,10 (м, 2H), 1,89 (м, 2H).
Пример 66. Получение соединения 811
1). n-BuLi
Стадия A:
5-Бромпиридин-2-амин (1,0 г, 5,8 ммоль) в THF (20 мл), охлажденный до -78°C в атмосфере Ar, объединяли с н-BuLi (3,6 мл, 5,8 ммоль, 1,6М в гексанах) и перемешивали в течение 0,5 ч. Добавляли 1,2бис(хлордиметилсилил)этан (1,2 г, 5,8 ммоль) в THF (10 мл) и оставляли смесь нагреваться до темпера
- 84 037123 туры окружающей среды в течение 1 ч. Затем смесь повторно охлаждали до -78°C и добавляли второй эквивалент н-BuLi (3,6 мл, 5,8 ммоль, 1,6М в гексанах). Смесь перемешивали в течение 0,5 ч при -78°C, а затем оставляли нагреваться до температуры окружающей среды в течение 1 ч. Затем смесь повторно охлаждали до -78°C и добавляли третий эквивалент н-BuLi (3,6 мл, 5,8 ммоль, 1,6М в гексанах). Смесь перемешивали в течение 1 ч при -78°C, а затем добавляли трет-бутил-4-оксопиперидин-1-карбоксилат (1,3 г, 6,4 ммоль) в THF (10 мл), и оставляли реакционную смесь нагреваться до температуры окружающей среды. Смесь разбавляли EtOAc, промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали. Остаток элюировали с силикагеля EtOAc (0-100%) в н-гептане с получением трет-бутил-4-(6аминопиридин-3-ил)-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (1,1 г, 64%). MC m/z 294,2 [M+H]+.
Стадия B:
Смесь бис(2,4,6-трихлорфенил)малоната (0,80 г, 1,7 ммоль) и трет-бутил-4-(6-аминопиридин-3-ил)4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата (0,50 г, 1,7 ммоль) нагревали в толуоле (10 мл) при 60°C в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали для удаления летучих веществ. Остаток элюировали с силикагеля MeOH (0-20%) в CH2Cl2 с получением трет-бутил-4-гидрокси-4-(2-гидрокси-4-оксо-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата в виде светло-желтого твердого вещества (0,43 г, 70%). MC m/z 362,3 [M+H]+.
Стадия C:
Смесь трет-бутил-4-гидрокси-4-(2-гидрокси-4-оксо-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1 карбоксилата (0,17 г, 0,5 ммоль), 1,1,1-трифтор-N-фенил-N-(трифторметилсульфонил)метансульфонамида (0,19 г, 0,5 ммоль) и карбоната калия (0,13 г, 0,9 ммоль) в DMF (3 мл) перемешивали при температуре окружающей среды. Спустя 1 ч смесь разбавляли EtOAc, промывали водой, солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали. Остаток элюировали с силикагеля EtOAc (10-50%) в н-гептане с получением трет-бутил-4-гидрокси-4-(4-оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4H-пиридо [1,2a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата в виде кристаллического желтого твердого вещества (0,08 г, 35%). МС m/z 494,3 [M+H]+.
Стадия D:
Следуя методике, описанной в примере 15, стадия A, путем осуществления взаимодействия третбутил-4-гидрокси-4-(4-оксо-2-(трифторметилсульфонилокси)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-7-ил)пиперидин-1-карбоксилата (80 мг, 0,16 ммоль), 8-фтор-2-метил-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)имидазо[1,2-a]пиридина (67 мг, 0,24 ммоль, полученного в примере 16, стадия B), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (9 мг, 0,01 ммоль) и K2CO3 (31 мг, 0,32 ммоль) в смеси MeCN/вода (2 мл/0,3 мл) получали трет-бутил-4-(2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2-a]пиридин-6-ил)-4-оксо-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-7-ил)-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилат в виде не совсем белого кристаллического твердого вещества (60 мг, 75%). MC m/z 494,5 [M+H]+.
Стадия E:
Следуя методике, описанной в примере 24, стадия B, путем осуществления взаимодействия продукта, полученного на стадии D, и HCl в диоксане (4М, 2 мл) получали 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2a]пиридин-6-ил)-7-(4-гидроксипиперидин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он в виде белого твердого вещества (11 мг, 49%). МС m/z 394,4 [M+H]+. 1H ЯМР (DMSO-d6, 300 МГц) δ 9,31 (д, J=1,2 Гц, 1H), 9,01 (д, J=1,8 Гц, 1H), 8,12 (дд, J=9,3, 1,8 Гц, 1H), 7,96 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,88 (дд, J=12,6, 1,2 Гц, 1H), 7,75 (д, J=9,3 Гц, 1H), 7,06 (с, 1H), 5,34 (шир.с, 1H), 2,91 (кажущийся т, J=12,0 Гц, 2H), 2,79 (д, J=12,0 Гц, 2H), 2,39 (с, 3H), 1,89-1,84 (м, 2H), 1,60 (д, J=12,0 Гц, 2H).
В табл. 1 представлены выделенные соединения в форме свободного основания соединения формулы (I), которые могут быть получены в соответствии с методиками указанного примера путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции. Получение любой соли, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереоизомера или таутомера из формы свободного основания соединения формулы (I) также предполагается и дополнительно включено в объем описания, представленного в настоящем документе. В случаях, когда форма свободного основания соединения не была выделена из солевой формы, предполагается, что средний специалист в данной области техники сможет провести необходимые реакции для получения и выделения формы свободного основания соединения.
Термин Соед. представляет собой номер соединения, термин Прим. представляет собой номер примера (где * указывает на то, что соответствующий пример для соединения представлен выше), термин т.пл. представляет собой точку плавления (°C), термин MS представляет собой пик(и) масс-спектрометрии m/z [M+H]+, [M+2+H]+, [M-H]- или [M+2-H]-, термин D представляет собой разложение/разложившееся, термин DR представляет собой интервал разложения, термин S представляет собой размягчение, термин ND указывает на то, что значение не было определено, и термин NI указывает на то, что соединение не было выделено.
- 85 037123
Таблица 1
Пр. Соед. Название Т. пл. МС
4* 1 2-(4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 182-184 337,3
4 2 2-(4-метоксифенил)-7-(4- метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 178-182 351,3
4 3 2-(4-метоксифенил)-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 152-154 351,3
4 4 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 2-(4-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 185-187 365,3
4 5 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(4метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 149-152 351,3
3* 6 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 182-184 367,5
3 7 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(3,3— диметилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 138-140 395,3
3 8 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 181-184 381,3
3 9 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4этилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 159-162 395,3
3 10 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он ND 381,3
3 11 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4-метил-1,4диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 166-168 395,3
3 12 2-(4-метоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 158-160 351,3
3 13 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4- метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- 183-185 381,3
- 86 037123
а]пиримидин-4-он
3 14 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R,5S)-3,5диметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 182-187 395,3
3 15 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4пропилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 185-189 409,3
4 16 2-(4-метоксифенил)-7-(4-метил-1,4диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 137-141 365,3
4 17 7-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-2-(4метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он ND 365,3
4 18 2-(1,З-бензодиоксол-5-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 198-201 351,3
4 19 2-(1,З-бензодиоксол-5-ил)-7-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 235-237 365,2
4 20 2-(1,З-бензодиоксол-5-ил)-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 195-197 365,3
4 21 2-(1,З-бензодиоксол-5-ил)-7-[(3R, 5S) - 3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 198-201 379,3
4 22 2-(3-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 147-149 337,2
4 23 2-(3-метоксифенил)-7-(4- метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 173-175 351,2
4 24 2-(3-метоксифенил)-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 164-166 351,2
4 25 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 2-(3-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 189-191 365,3
4 26 7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(3метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2- 158-160 365,3
- 87 037123
а]пиримидин-4-он
4 27 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 351,2
4 28 2-(3-метоксифенил)-7-(4-метил-1,4- диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 130-132 365,2
8* 29 2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 193-198 361,3
3 30 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 153-158 381,3
4 31 2-(2,З-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 230-232 365,3
4 32 2-(2,З-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)- 7- [ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 205-207 379,3
3 33 2-фенил-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 151-153 307,2
3 34 7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2фенил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 170-173 321,3
4 35 2-(2,З-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)7-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 212-214 379,2
4 36 2-(2,З-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)- 7-(3,З-диметилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 196-198 393,3
4 37 2-(2,З-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 247-250 393,3
4 38 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(2,3-дигидро1,4-бензодиоксин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 180-182 379,3
4 39 2-(2,З-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)- 7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 150-152 393,3
- 88 037123
1 40 2-(3,4-диметоксифенил)-9-фтор-7-(4- 183-185 399,3
метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
1 41 2-(3-хлорфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 185-189 341,2
1 42 2-(4-хлорфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 207-212 341,2
1 43 7-(пиперазин-1-ил)-2-[3- (трифторметил)фенил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 199-207 375,2
1 44 7-(пиперазин-1-ил)-2-[4- (трифторметил)фенил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 285 (D) 375,2
1 45 2-(3-метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 183-187 321,2
1 46 2-(4-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 214-218 325,2
1 47 2-(4-нитрофенил)-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 237-242 352,2
1 48 2-(3,4-диметоксифенил)-9-фтор-7(пиперидин-4-иламино)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 224-226 399,3
3 49 2- [4-(диметиламино)фенил]-9-фтор-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 216-218 368,3
3 50 2-[4-(диметиламино)фенил]-9-фтор-7[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 205-207 382,3
1 51 2- (2-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 142-146 325,2
28* 52 3-(3,4-диметоксифенил)-8-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 175-179 367,2
3 53 2- [4-(диметиламино)фенил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 211-215 350,3
3 54 2-[4-(диметиламино)фенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 199-202 364,3
- 89 037123
3 55 2-(3,4-диметилфенил)-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 186-188 335,2
3 56 2-(3,4-диметилфенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 207-209 349,3
3 57 2-[3-(диметиламино)фенил]-7- (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 178-180 350,2
3 58 2-[3-(диметиламино)фенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 144-146 364,3
3 59 2-[4-(дифторметокси)фенил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 131-133 373,5
3 60 2-[4-(дифторметокси)фенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 166-168 387,2
1 61 2-(3-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 153-156 325,2
1 62 2-(3-нитрофенил)-7- (пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 175 (D) 352,2
1 63 2-(4-метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 192-195 321,2
3 64 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 177-180 385,2
3 65 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-7-[(3S)З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1, 2а]пиримидин-4-он 167-170 399,2
3 66 7-(3,8-диазабицикло[3.2.1]οκτ-3-ил)-2- (3,4-диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 158-161 393,3
1 67 2-[4-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 177-181 405,1
1 68 2-[4-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7- 205-212 419,3
[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4H пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
- 90 037123
1 69 2-[4-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7- 195-200 419,3
[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
6* 70 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метокси-7- (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 185-187 397,3
11 71a 2-(3,5-дифтор-4-гидроксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он NI NI
1* 72 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 191-195 355,0
3 73 4-[4-ОКСО-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-2ил]бензонитрил 146-151 332,1
7* 74 2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 221-225 362,2
7 75 2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)- 7- [ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 235-238 376,2
1 76 2- [З-фтор-5-(трифторметил)фенил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 393
1 77 2- [4-фтор-З-(трифторметил)фенил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 214-217 393,1
1 78 2-[2-метокси-З-(трифторметил)фенил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 194-200 405,1
1 79 2-(3,5-дифторфенил)-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 195-198 343
1 80 7-(пиперазин-1-ил)-2-[3- (трифторметокси)фенил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 140-143 391
5* 81 2-[4-метокси-З-(трифторметокси)фенил]- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 158-162 421,1
- 91 037123
5* 82 2- [4-гидрокси-З- 245-248 407, 2
(трифторметокси)фенил]-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
5 83 2-[4-метокси-З-(трифторметокси)фенил]7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 176-178 435, 9
5 84 2-[4-гидрокси-З- (трифторметокси)фенил]-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 152-155 421, 2
31* 85 2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-7(пиперазин-1-ил)-4Н-хинолизин-1карбонитрил 199-202 391, 2
1 86 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 175-178 369, 1
1 87 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 175-178 369, 1
1 88 2-(6-метоксипиридин-З-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 173-178 338, 2
1 89 2-(2,4-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он 171-173 367, 3
1 90 2-(2,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 172-177 381, 2
32* 91 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-хинолизин-4-он 243-245 380, 2
11* 92 2-(5-фторпиридин-З-ил)-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 201-208 326, 2
11 93 2-(5-фторпиридин-З-ил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 191-199 340, 1
11 94 2-(5-хлорпиридин-З-ил)-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 208-218 342
11 95 2-(5-хлорпиридин-З-ил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- 227-232 356
- 92 037123
а]пиримидин-4-он
1 96 2-(5-хлор-6-метоксипиридин-3-ил)-7- 201-209 372,1
(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
12 97 2-(1Н-индол-6-ил)-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 202-206 346,2
12* 98 2-(1Н-индол-5-ил)-7-(пиперазин-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 266-272 346,2
3 99 2-[3-(дифторметокси)-4-метоксифенил]- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он ND 403,4
3 100 2-[3-(дифторметокси)-4-гидроксифенил]- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 233-237 389,2
3 101 2- [3-(дифторметокси)-4-метоксифенил]7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 167-169 417
3 102 2- [3-(дифторметокси)-4-гидроксифенил]- 7- [ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 192-197 403,2
33 103 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- (пиперазин-1-ил)-4Н-хинолизин-4-он 200-202 354,1
33 104 2- (З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хинолизин-4-он 188-192 368,1
1 105 2-(3,5-дифторфенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 189-194 357,2
33* 106 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1- ил)-4Н-хинолизин-4-он 170-172 366,1
13* 107 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 258-270 347
12 108 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 347
15* 109 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 259-267 361,1
- 93 037123
3 110 2-(З-хлор-4-метоксифенил)-7- 201-203 371, 4
(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он 1 373, 4
3 111 2-(З-хлор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 187-189 385, f 387, 5 5
1 112 2-(З-этокси-4-метоксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 194-196 381, 1
1 113 2-(З-этокси-4-метоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 159-162 395, 1
15 114 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 375, 1
15 115 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 375, 1
15 116 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(2метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 375, 1
15 117 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 181-186 389, 1
7 118 2-(6,8-диметилимидазо[1,2-а]пиразин-2ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 189-192 376, 5
7 119 2-(6,8-диметилимидазо[1,2-а]пиразин-2ил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 202-208 390, 5
9 120 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 195-200 376, 5
9 121 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 192-194 390, 5
22 122 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(2- метилпиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- 197-200 374
- 94 037123
а]пиримидин-4-он
15 123 7-(пиперазин-1-ил)-2-[2- 250-255 415,5
15 124 (трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин-6ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-этилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 228-232 375,5
15 125 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2,3-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 236-240 375,5
2 126 ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3aR,6aS)- 286-290 393,1
2 127 гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2 (1Н)ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(3, 4- 182-185 381,1
19* 128 диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(пиперазин-1-ил)-2-(1Н-пирроло[2,3- 252-255 347,1
19 129 Ь]пиридин-5-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5- 230-233 361,1
19 130 ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 265-268 389,1
9 131 2-(1-метил-1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридин-5ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- ND 404,5
9 132 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(4,6— ND 390,5
14 133 диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7- 219-222 362,5
14 134 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7- 191-193 376,5
14 135 [(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-5-ил)-7- 174-180 392,2
- 95 037123
[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4H пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
14 136 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-5-ил)-7- 228-230 378,1
14 137 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- 175-180 361,5
14 138 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7-[(3S)-3- 166-170 375,5
14 139 метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-5-метоксифенил)-7- 168-170 355,5
14 140 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-5-метоксифенил)-7-[(3S)-3- 154-156 369,5
16 141 метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 270-274 375,1
2 142 ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7- 176-182 395,5
22* 143 [ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6- 196-198 364,1
24* 144 тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-4- 214-217 366,4
1 145 ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-4,5-диметоксифенил)-7- ND 385,5
3 146 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(4- 202-204 383,5
2 147 гидроксипиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S) -3- 156-158 395,4
2 148 (диметиламино)пирролидин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4- 158-161 409,1
- 96 037123 (диметиламино)пиперидин-1-ил ]-4Η· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
14 149 2-(4-метокси-З-метилфенил)-7- 198-203 351,5
(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
14 150 3-[4-ОКСО-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-2ил]бензонитрил 224-231 332,1
14 151 2-метокси-5-[4-оксо-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-2ил]бензонитрил 191-197 362
14 152 2-(З-фтор-4-гидроксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 259-266 341,5
20* 153 2-(4-этокси-3-фторфенил)-7-(пиперазин1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 180-186 369,1
20 154 2-[З-фтор-4-(2,2,2- трифторэтокси)фенил]-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 198-201 423,1
14 155 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-5-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 178-183 362
14 156 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-5-ил)-7[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 376,5
14 157 2-(З-фтор-4-метилфенил)-7-(пиперазин1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 174-176 339,5
14 158 2-(З-фтор-4-метилфенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 175-178 353,5
2 159 7-[(3S)-З-аминопирролидин-1-ил]-2(3,4-диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 148-151 367,1
2 160 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 175 (S) , 216-222 381,1
14 161 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(2-метил-1,3- бензотиазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2- 208-212 392,2
- 97 037123
а]пиримидин-4-он
10 162 7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-(4метил-1,3-тиазол-2-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 225-230 342,1
10* 163 2-(4-метил-1,3-тиазол-2-ил)-7- (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 142-147 328,2
25* 164 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 181-183 380,1
2 165 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S)-3- (пропан-2-иламино)пирролидин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 169-172 409,1
1 166 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-(4-метил- 1,4-диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 176-178 383,1
14 167 2-(4-метокси-З-нитрофенил)-7- (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 183-187 382,5
14 168 2-[З-фтор-4-(метилсульфанил)фенил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 174-176 371,1
15 169 7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-2-(2метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 208-213 389,1
9* 170 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 254-256 390,4
14* 171 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7-(4- метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1, 2- а]пиримидин-4-он 178-183 376,5
14 172 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 233-235 390,3
17 173 2-(5-фтор-6-метоксипиридин-3-ил)-7[ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 175-180 370,5
17 174 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 160-165 384,5
- 98 037123
2-(5-фтор-6-метоксипиридин-3-ил)-4Н пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
14 175 7-[(3R, 5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-5-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 208-212 406, 1
14 176 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-5-ил)-7- (4метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 214-218 392, 1
14 177 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-5-ил)-7-(4- метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 165-170 406, 1
14 178 7-[(8aS)-гексагидропирроло[1,2- а]пиразин-2 (1Н)-ил]-2-(2-метил-1,3- бензотиазол-5-ил)-4Н-пиридо [1,2 — а]пиримидин-4-он 254-256 418, 1
21* 179 2-(4-метил-1Н-имидазол-1-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 204-206 311, 1
21 180 2-(4-метил-1Н-имидазол-1-ил)-7-[(3S)З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо [1,2- а]пиримидин-4-он 204-206 325, 5
2 181 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{[2(метиламино)этил]амино}-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 135-138 355
17* 182 2-(5-фтор-6-метоксипиридин-3-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 166-170 356, 4
17 183 2-(3,5-дифтор-4-метоксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 167-169 373, 4
17 184 2-(3,5-дифтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 182-184 387, 5
2 185 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(З-фтор-4-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 196-201 397, 1
2 186 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- (1,2,3,6- 182-184 352
тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2
- 99 037123
а]пиримидин-4-он
2 187 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-4- ND 381,1
иламино)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он
23* 188 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-метил- 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 165-168 378,3
14 189 2-(З-хлор-5-фторфенил)-7- [ (3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 188-190 373
14 190 2-(З-хлор-5-фторфенил)-7-(пиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 180-184 359,1
18* 191 7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-(1метил-1Н-пиразол-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 168-170 325,2
18 192 2-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 311,1
14 193 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 175-177 376,5
14 194 7-(3,З-диметилпиперазин-1-ил)-2-(2метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 160-162 390,5
14 195 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(2-метил-1,3- бензоксазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 134-137 376,5
14 196 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7-(4- метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 146-150 390,5
14 197 7-[(8aS)-гексагидропирроло[1,2- а]пиразин-2 (1Н)-ил]-2-(2-метил-1,3- бензоксазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 214-217 402,5
14 198 7-[(8aR)-гексагидропирроло[1,2- а]пиразин-2 (1Н)-ил]-2-(2-метил-1,3- бензоксазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 194-199 402,5
- 100 037123
14 199 2-(4,5-диметоксипиридин-2-ил)-7- 207-209 368,4
33 200 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7- [3-(диметиламино)пирролидин-1-ил]-2- 259-261 382,1
33 201 (3-фтор-4-метоксифенил)-4Н-хинолизин4-он 7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(З-фтор-4- ND 368,2
14 202 метоксифенил)-4Н-хинолизин-4-он 7- ( 4-этилпиперазин-1-ил)-2-(2-метил- 212-216 390,5
33 203a 1, З-бензоксазол-6-ил)-4Н-пиридо [1,2- а]пиримидин-4-он 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2- NI NI
23 204 (3-фтор-4-метоксифенил)-4Н-хинолизин4-он 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-(1-метил- 129-132 366
2 205 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7- [ (3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1- 187-192 383,1
2 206 ил]-2-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R,4R)-3-(диметиламино)-4- 223-228 399
2 207 гидроксипирролидин-1-ил]-2-(З-фтор-4- метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7- ( 4-аминопиперидин-1-ил)-2-(3-фтор-4- 173-179 369,1
2 208 метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 2- (З-фтор-4-метоксифенил)-7-[4- 167-171 383,1
16* 209 (метиламино)пиперидин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- 282-288 379,4
16 210 а]пиридин-6-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 255-259 407,1
16 211 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- 262-266 407,6
- 101 037123
a]пиридин-6-ил)-7- (4-метил-1,4 диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
2 212 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- [(3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4- 195-200 381,1
с]пиррол-2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
2 213 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- [(3aR,6aS)-5- метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол- 2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он 204-210 395,1
25 214 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(2гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 145-148 410
14 215 2-(4-фтор-3-метоксифенил)-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 130-135 369,2
14 216 2-(4-фтор-З-метоксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 170-172 355,2
14 217 2-(3,4-дифтор-5-метоксифенил)-7-[(3S)З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 160-164 387,1
14 218 2-(3,4-дифтор-5-метоксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 155-160 373,1
14 219 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 218-220 378,1
29* 220 7-(З-фтор-4-метоксифенил)-2(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 202-206 355
14 221 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 214-216 392,1
2 222 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-3(метиламино)пирролидин-1-ил]-4Н- 208-216 369,1
- 102 037123 пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
2 223 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-{4- 163-170 397,1
2 224 [(метиламино)метил]пиперидин-1-ил}-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-З-аминопирролидин-1-ил]-2-(3- 193-198 355
2 225 фтор-4-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7-{[(3R)-1- 197-202 369,1
2 226 метилпирролидин-3-ил]амино}-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-{4-[(диметиламино)метил]пиперидин-1- 178-185 411,1
14 227 ил}-2-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(6-метоксипиридин-2-ил)-7- 214-218 338,1
14 228 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)- 175-178 308
14 229 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(5-метоксипиридин-З-ил)-7- 192-195 338
14 230 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 3-фтор-5-{7-[(3S)-3-метилпиперазин-1- 185-188 364,2
14 231 ил]-4-оксо-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин2-ил}бензонитрил З-фтор-5-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)- 238-244 350,1
2 232 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-2ил]бензонитрил 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- 226-232 425,1
2 233 [(3'S,4 ' S) -4 '-гидрокси-1,3'бипирролидин-1'-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- 143-147 369,1
14 234 {метил[(3R)-пирролидин-3-ил]амино}-4Н- пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 205-209 390,6
27 235 (2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(1- ND 396,2
- 103 037123 метилпиперидин-4-ил)окси]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
27 236 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3S)- 164-166 368,1
пирролидин-3-илокси]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
27* 237 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-4илокси)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 221-224 382,2
2 238 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4- диметоксифенил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 160-177 395,5
2* 239 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- {метил[(3R)-1-метилпирролидин-З- ил]амино}-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он 143-149 383,5
14 240 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 206-210 404,5
14 241 7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1ил]-2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 189-193 390,5
14 242 7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(2-метил1,З-бензоксазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он ND 376,2
14 243 7-[(3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4с]пиррол-2(1Н)-ил]-2-(2-метил-1,3бензоксазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 388,3
14 244 7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 181-187 390,5
34* 245 2-(3,4-диметоксифенил )-7-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-хинолизин4-он 174-176 363,2
2 246 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7[(3aR,6aR)-1- 205-209 395,2
метилгексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол5(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4- 104 037123
2 247 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7- 186-191 378,2
(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
23 248 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(2- гидроксиэтил)-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 134-137 408,2
35* 249 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-метил- 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нхинолизин-4-он 194-196 377,2
24 250 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7- (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 176-181 380,3
23 251 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 187-196 392,2
25 252 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 170-174 394,2
14 253 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(2-метил-1,3- бензотиазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 205-207 392,2
14 254 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7-(4- метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 158-160 406,1
14 255 7-[(8aS)-гексагидропирроло[1,2- а]пиразин-2 (1Н)-ил]-2-(2-метил-1,3- бензотиазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 250-260 (DR) 418,1
14 256 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 230-234 392,1
2 257 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3aR,6aS)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 215 (S) , 246-251 407,3
9 258 7-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2- 220-223 404,3
- 105 037123
ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
9 259 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-7-[(3R,5S)-3,4,5- триметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 254-260 418,3
2 260 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7- [(3aR,6aS)-5- метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол- 2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он 212-218 421,2
2 261 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4- (диметиламино)пиперидин-1-ил]-9-метил4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 167-171 423,3
22 262 7-[(1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2ен-3-ил]-2-(3,4-диметоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 191-194 390,2
26* 263 2-(3,4-диметоксифенил )-7-(1,2,5,6тетрагидропиридин-3-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 146-150 364,2
14 264 7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1ил]-2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 203-207 390,2
14 265 2-(2-этил-1,3-бензоксазол-6-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 170-175 376,2
14 266 2-(2-этил-1,3-бензоксазол-6-ил)-7[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 168-170 390,2
14 267 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7- [(3aR,6aS)-5- метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол- 2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он 200-204 402,2
29 268 7- ( 8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-2-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 308 (D) 379,2
16 269 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-(4-метилпиперазин-1- 283-286 393,3
- 106 037123 ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
16 270 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2а]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-3- ND 393,3
метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
16 271 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(8aS)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 270-274 419,3
16 272 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(8aR)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 277-280 419,2
16 273 7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(8-фтор-2метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 393,3
16 274 7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1- ил]-2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 300 (D) 407,3
16 275 7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1ил]-2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 294-297 407,3
30* 276 2-(4-аминопиперидин-1-ил)-7-(3-фтор-4метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 268-283 369,3
30 277 2-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1ил]-7-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 167-170 383,2
30 278 2-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1ил]-7-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 167-169 383,2
2 279 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7[(3aR,6aS)-5-(2- 180-186 425,3
гидроксиэтил)гексагидропирроло[3,4с]пиррол-2 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2
а]пиримидин-4-он
- 107 037123
280 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- 207-211 395 3
[(3aS,6aS)-1метилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол5(1H)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-
ОН
2 281 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- [(3aR,6aS)-5-(пропан-2- ил)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол- 2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4он 189-192 423,3
2 282 7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1ил]-2-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 188-191 383,3
14 283 7-(3,З-диметилпиперазин-1-ил)-2-(2метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 200-202 406,3
14 284 7-[(8aR)-гексагидропирроло[1,2- а]пиразин-2 (1Н)-ил]-2-(2-метил-1,3- бензотиазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 254-256 418,2
14 285 7- [4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 420,2
27 286 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7(пиперидин-4-илокси)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 218-220 393,1
16 287 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 245-251 395,2
16 288 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3R,5S)-3,5- диметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 289-295 423,1
16 289 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2а]пиридин-6-ил)-7-(4-метил-1,4диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 239-244 423,2
16 290 2- ( 8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 236-239 409,1
- 108 037123
a]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2 а]пиримидин-4-он
16 291 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-3- 236-239 409,1
16 292 метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 274-280 435,2
16 293 а]пиридин-6-ил)-7-[(8aR)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 269-275 435,2
46* 294 а]пиридин-6-ил)-7-[(8aS)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(3-фтор-4-метоксифенил)-2-(1,2,3,6- 188-192 352,1
39 295 тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 269-275 407,3
39 296 (8-фтор-2-метилимидазо[1,2-а]пиридин6-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 279-282 407,3
39 297 (8-фтор-2-метилимидазо[1,2-а]пиридин6-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2- 250-257 421,3
39 298 (8-фтор-2-метилимидазо[1,2-а]пиридин6-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-7- 157-160 397,2
37 299 (З-фтор-4-метоксифенил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- 177-180 377,2
23 300 ил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- 178-181 391,3
2 301 ил)-7-(1-метил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- 194-201 395,2
- 109 037123
[(4aR,7aR)-октагидро-6Н-пирроло[3,4 b]пиридин-6-ил]-4Н-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он
37 23 302 303 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7- (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7-(1- ND 132-135 359,2 373,3
23 304 метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4- 128-131 387,3
36 305 ил)-2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- 184-186 380,3
36* 306 ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- 207-209 394,3
39 307 ил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7- [ (3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 194-196 408,3
36 308 (4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- 219-221 394,1
36 309 ил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7- ( 4-этилпиперазин-1-ил)-2-(4-фтор-2- 212-214 408,2
36 310 метил-1,3-бензоксазол-6-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- 175-178 422,1
2 311 ил)-7-(4-пропилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3aR,6aS)-5- 157-167 409,1
22 312 этилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол- 2(1Н)-ил]-2-(З-фтор-4-метоксифенил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7- 211-215 366,1
2 313 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- 223-227 409,1
- 110 037123
[(4aR,7aR)-1-метилоктагидро-6Н· пирроло[3,4-b]пиридин-6-ил]-4Н· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
2 314 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7- 177-184 395,2
[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
23 315 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 184-190 380,1
24 316 7-(З-фтор-4-метоксифенил)-2(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 278-281 354,1
25 317 7-(3-фтор-4-метоксифенил)-2-(1метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 202-205 368,1
23 318 7-(1-ЭТИЛ-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол6-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 151-154 405,2
23 319 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- ил)-7-(1-пропил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 159-162 419,3
25 320 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(lR,5S)-8метил-8-азабицикло[3.2.1]οκτ-3-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 406,2
2 321 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(2R)-2метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо [1,2а]пиримидин-4-он ND 381,1
54* 322 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7- [(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н- хинолизин-4-он 115-117 375,3
54 323 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-хинолизин-4-он ND 375,1
39 324 7-[(3S)-4-этил-3-метилпиперазин-1-ил]- 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Нхинолизин-4-он 288-290 403,2
39 325 7-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Н- >300 389,2
- 111 037123
ХИНОЛИЗИН-4-ОН
45 326 7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(2-метил- 288-290 375,2
1,З-бензоксазол-6-ил)-4Н-хинолизин-4он
2 327 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 198-202 383,1
2 328 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(3-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 141-145 411,2
25 329 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7- (1-метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 198-203 382,2
53 330 7-[4-(циклопропиламино)пиперидин-1ил]-2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 141 (S) , 158-161 435,3
39 331 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-3,4- диметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 258-262 423,2
2 332 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R,5S)-3,5диметилпиперазин-1-ил]-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 225-233 409,3
2 333 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R)-3, 4диметилпиперазин-1-ил]-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 148 (S) , 168-177 409,3
9 334 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 169-171 404,4
9 335 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 390,4
9 336 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[(8aS)-гексагидропирроло[1,2а]пиразин-2 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 215-218 416,3
9 337 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-7-[(8aR)-гексагидропирроло[1,2- 228-230 416,4
- 112 037123
а]пиразин-2(1H)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
9 338 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 251-253 404,4
9 339 7- [4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 208-210 418,4
9 340 7-(3,З-диметилпиперазин-1-ил)-2-(4,6— диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 195-197 404,4
9 341 7-(4-циклопропилпиперазин-1-ил)-2(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 189-192 416,4
38* 342 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 207-210 373,3
39 343 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-7-[(3R)-4-этил-З-метилпиперазин- 1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 418,4
2 344 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 191-198 395,3
2 345 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4- (диметиламино)пиперидин-1-ил]-9-этил4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 146-150 437,3
23 346 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(2- гидроксиэтил)-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил]-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 169-179 422,3
14 347 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(2-метил-1,З-бензотиазол-5-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 218-220 420,2
45 348 7- ( 4-аминопиперидин-1-ил)-2-(2-метил- 1,З-бензотиазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 190-192 392,1
45 349 7-[(3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4с]пиррол-2 (1Н)-ил]-2-(2-метил-1,3- ND 404,1
- 113 037123 бензотиазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2 а]пиримидин-4-он
23 350 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 193-197 387,4
23 351 2-ил)-7-(1-метил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо [1,2 — а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 202-204 401,4
23 352 2-ил)-7-(1-этил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 191-193 415,5
49* 353 2-ил)-7-(1-пропил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил )-7-(1,2,3,6- ND 365,1
23 354 тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиримидо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-циклопропил-1,2,3,6- ND 413,4
23 355 тетрагидропиридин-4-ил)-2-(4,6- диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 186-189 415,4
23 356 2-ил)-7- [1-(пропан-2-ил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 7-(1-циклобутил-1,2,3,6- 191-193 427,4
23 357 тетрагидропиридин-4-ил)-2-(4,6- диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- ND 429,3
53 358 2-ил)-7-[1-(оксетан-3-ил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4- ND 409,3
53 359 (метиламино)пиперидин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4- ND 423,4
(этиламино)пиперидин-1-ил]-9-метил-4Н-
- 114 037123 пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
2 360 2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7- 161-169 381,3
(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
39 361 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(пропан-2иламино)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 423,3
23 362 7-(1-циклобутил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 152-154 418,3
23 363 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(пропан-2ил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 116-118 406,3
23 364 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(оксетан- 3-ил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил]4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он 178-180 420,3
23 365 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-пропил1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 158-160 406,2
22 366 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4- (метиламино)циклогекс-1-ен-1-ил]-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 232-235 392,3
23 367 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4- (диметиламино)циклогекс-1-ен-1-ил]-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 162-164 406,2
23 368 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4- [этил(метил)амино]циклогекс-1-ен-1ил}-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 132-134 420,4
23 369 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4- [метил(пропил)амино]циклогекс-1-ен-1ил}-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 116-118 434,4
23 370 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-этил- 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 170-172 392,3
46 371 7-(3,4-диметоксифенил)-2-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 172-178 364,3
- 115 037123
46 372 7-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2a]пиридин-6-ил)-2-(1,2,3,6- ND 376,2
16 373 тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- 260-264 421,3
16 374 а]пиридин-6-ил)-7-[4-(пропан-2ил)пиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 287-292 437,4
46 375 а]пиридин-6-ил)-7-[4-(пропан-2- ил)пиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 197-201 358,2
23 376 2-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 203-207 372,2
23 377 2-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(3,4-диметоксифенил)-2-(1-метил- 149-152 378,3
23 378 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1- 171-177 420,3
23 379 пропил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-циклобутил-1,2,3,6- 167-178 432,3
55 380a тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3, 4- диметоксифенил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7- NI NI
45 381 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2- Ь]пиридазин-4-он 7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(2-метил- 190-194 392,2
45 382 1,З-бензотиазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 7-(З-аминопирролидин-1-ил)-2-(2-метил- 196-200 378,2
14 383 1,З-бензотиазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1- 235-240 406,3
- 116 037123 ил]-2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)
4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
37 384 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7- 124-126 375,2
16 385 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- 258-262 437,5
23 386 а]пиридин-6-ил)-7-[4-(2- метоксиэтил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[1- 180-195 434,3
23 387 (оксетан-3-ил)-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[1- (DR) 153-163 420,4
23 388 (пропан-2-ил)-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-этил- ND 406,4
22 389 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7- 175 (D) 378,3
23 390 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-циклопропил-1,2,3,6- 180-189 418,4
23 391 тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4- диметоксифенил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7-(1- 174-178 392,4
23 392 метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7-(1- 170-172 389,2
23 393 метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6- 178-180 419,2
23 394 тетрагидропиридин-4-ил]-2-(2-метил- 1,З-бензотиазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7-[1- 168-170 417,2
- 117 037123 (пропан-2-ил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2 а]пиримидин-4-он
23 395 7-(1-циклопропил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-2-(2-метил- 158-160 415,3
23 396 1,З-бензотиазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4- 128-130 403,2
39 397 ил)-2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- (DR) 247-249 404,5
56* 398 (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил )-7-(1,2,3,6- 195-200 365,3
9 399 тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 7- [ (IS,4S)-2,5- 218-221 388,3
39 400 диазабицикло[2.2.1]гепт-2-ил]-2-(4,6— диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 188-191 402,3
39 401 2-ил)-7-[(IS,4S)-5-метил-2,5диазабицикло[2.2.1]гепт-2-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 175-177 416,4
57* 402 2-ил)-7-[(IS,4S)-5-этил-2,5диазабицикло[2.2.1]гепт-2-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6- 205-208 365,4
24 403 тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-7- 122-125 354,3
25 404 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1- 155-157 394,4
24 405 этилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[цис-4- 156-158 394,4
- 118 037123 (метиламино)циклогексил]-4Н пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
24 406 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-3ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 126-129 366,3
53* 407 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7- [4(пропиламино)пиперидин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 178-184 437,5
22 408 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 171-177 392,4
24 409 7-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 2-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 255-258 360,4
24 410 7-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-2-(пиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 295-298 378,4
23 411 7-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-2-(1-метил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо [1,2 — а]пиримидин-4-он 218-222 390,4
16 412 7-(4-циклопропилпиперазин-1-ил)-2-(8фтор-2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 254-258 419,4
57 413а 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7ил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он NI NI
2 414 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(8aR)гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он ND 421,4
23 415 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 177-182 406,4
53 416 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4- (пропан-2-иламино)пиперидин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 178-183 437,5
2 417 2-(3,4-диметоксифенил)-7- [ (8aS)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1Н)- 183-189 421,4
- 119 037123 ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин 4-он
23 418 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1- 148-153 420,5
53 419 этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4- 219-224 465,5
9 420 (морфолин-4-ил)пиперидин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2- 202-204 362,2
57 421 ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7- ND 360,1
23 422 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-она гидрохлорид (1/1) 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7-(1- 240-242 374,3
23 423 метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4- 225-227 388,4
24 424 ил)-2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)- 4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7- 222-224 377,1
9 425 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 215-218 444,4
9 426 2-ил)-7-[4-(пирролидин-1-ил)пиперидин- 1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1,4'-бипиперидин-1'-ил)-2-(4,6- 236-238 458,4
9 427 диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 198-200 473,5
9 428 2-ил)-7-[4-(4-метилпиперазин-1- ил)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 192-195 460,4
37 429 2-ил)-7-[4-(морфолин-4-ил)пиперидин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 206-208 358,4
- 120 037123
7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
23 23 430 431 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)7-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4- 137-140 220-223 372,2 386,4
14 432 ил)-2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6- ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2- 204-206 403,4
53 433 (2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2- 185-193 439,4
25 434 гидроксиэтил)амино]пиперидин-1-ил}-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7- (1- 146 408,4
53 435 метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо [1,2а]пиримидин-4-он 7-[4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил]-2- (S) , 166-169 149-155 451,5
25 436 (3,4-диметоксифенил)-9-метил-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1- 157-162 422,4
14 437 этилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо [1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 230-232 429,4
51 438 7-[4-(пирролидин-1-ил)пиперидин-1-ил]- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 298-300 360,1
25 439 7-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7-(1- 240-242 391,4
9 440 метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(6- 230-240 376,2
9 441 метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7 - [ (3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-(6- (DR) 235-240 376,2
метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он (DR)
- 121 037123
9 442 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 258-260 390,3
37* 443 2-(6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7- 200-203 358,2
37 444 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-[6-(диметиламино)пиридин-3-ил]-7- 255-257 348,4
37 445 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил]-2- 208-210 431,4
53 446 (2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2- 164-171 453,5
2 447 гидроксиэтил)(метил)амино]пиперидин-1ил}-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-[(3R)- 140-147 409,2
25 448 З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 218-220 374,3
23 449 7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7-(1- 148-150 372,3
23 450 метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-[6-(диметиламино)пиридин-3-ил]-7-(1- 214-216 362,4
9 451 метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил]-2- 232-235 446,5
24 452 (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- ND 375,4
25 453 2-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 220-222 389,3
25 454 2-ил)-7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 170-172 403,3
- 122 037123
2-ил)-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-4Н пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
2 455 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7[(8aR)-гексагидропирроло[1,2- 180-184 435,3
53 456 а]пиразин-2 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2- 178-182 453,3
9 457 метоксиэтил)амино]пиперидин-1-ил}-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 262-271 404,2
2 458 2-ил)-9-метил-7-(4-метилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 244-256 430,3
2 459 2-ил)-7-[(8aR)-гексагидропирроло[1,2а]пиразин-2(1Н)-ил]-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2- 231-241 432,4
25 460 (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 7-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 227-230 374,3
25 461 2-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 215-218 402,3
25 462 2- [1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7- ( 8-фтор-2-метилимидазо[1,2- 235-238 392,3
23 463 а]пиридин-6-ил)-2-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4- 172-174 386,3
23 464 ил)-2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7-(1- 152-154 400,4
24 465 пропил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-[6-(диметиламино)пиридин-3-ил]-7- 208-210 350,3
(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2 а]пиримидин-4-он
- 123 037123
9 466 7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(6- 220-230 390,3
метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он (DR)
9 467 7-[(8aR)-гексагидропирроло[1,2- а]пиразин-2(1Н)-ил]-2-(6- метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 240-250 (DR) 402,3
9 468 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 240-242 404,3
9 469 7-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]- 2-(6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 254-256 406,3
25 470 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 7- (1-пропилпиперидин-4-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 159-161 402,4
23 471 7 - [ 1-(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-2-(1-метил-1Ниндазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он ND 402,3
9 472 7-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-(6метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 240-244 376,2
38 473 2-(6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 260-265 (DR) 359,2
37 474 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 239-241 358,4
37 475 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7-(1метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 216-218 374,4
25 476 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7-(1метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 226-228 372,3
23 477 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 198-200 386,4
- 124 037123
23 478 7- (1-этилпиперидин-4-ил)-2-(2- 190-192 388,4
метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
23 479 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7ил)-7-[1-(пропан-2-ил)-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 220-222 415,3
22 480 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-9-метил-7-(1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он > 300 387,4
23 481 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-9-метил-7-(1-метил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он ND 401,4
23 482 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-(1-этил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 415,5
23 483 7-(1-циклопропил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-2-(4,6диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 427,4
23 484 2-(6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2- ил)-7-(1-метил-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 126-128 (DR) 373,2
23 485 7- (1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-2-(6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он ND 387,3
50* 486 2-(5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 198-200 376,3
50 487 2-(5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2ил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 256-258 390,2
50 488 2-(5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2- ил)-7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н- 202-204 390,3
- 125 037123
пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
14 489 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 194-196 375,3
14 490 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо [1,2а]пиримидин-4-он 206-208 361,3
14 491 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2- (1-метил-1Н-индазол-5-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 209-212 403,5
14 492 7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-2-(1метил-1Н-индазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 389,4
23 493 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)4Н-пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 205-207 388,4
16 494 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-(4-этилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 264-268 423,4
39 495 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-4-этил-Зметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо [1,2а]пиримидин-4-он 239-245 437,5
39 496 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-4-этил-Зметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо [1,2- а]пиримидин-4-он 234-245 437,5
39 497 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-З-метил-4(пропан-2-ил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 278-281 451,3
39 498 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-З-метил-4(пропан-2-ил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 264-270 451,3
58* 499 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7- (пиперидин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2- 126-128 362,2
b]пиридазин-4-он
- 126 037123
25 500 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-7-(1- 272-275 376,4
25 501 метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2b]пиридазин-4-он 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-2-(2-метил- 284-286 390,4
59* 502 1,З-бензоксазол-6-ил)-4Н-пиримидо[1,2- Ь]пиридазин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- ND 376,4
25 503 2-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 257-259 390,3
25 504 2-ил)-7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- ND 404,3
57 505 2-ил)-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7- 228-230 359,2
23 506 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7-(1- 234-236 373,3
23 507 метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4- ND 387,4
2 508 ил)-2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 241-252 418,5
2 509 2-ил)-7-(4-этилпиперазин-1-ил)-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 213-222 404,5
2 510 2-ил)-9-метил-7-[(3R)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 244-253 418,4
2 511 (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 240-245 432,5
2-ил)-7-[(3R)-4-этил-З-метилпиперазин- 1-ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-
- 127 037123
а]пиримидин-4-он
60* 512 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- ND 376,4
25 513 2-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Н- пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 265-267 390,3
25 514 2-ил)-7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Нпиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 283-285 404,4
2 515 2-ил)-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-4Нпиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 198-200 416,3
24 516 2-ил)-7-(октагидро-5Н-пирроло[3,2с]пиридин-5-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 287-293 394,2
25 517 а]пиридин-6-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 292-296 408,3
25 518 а]пиридин-6-ил)-7-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 240-246 422,3
25 519 а]пиридин-6-ил)-7-(1-этилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 279-285 436,5
2 520 а]пиридин-6-ил)-7- [ 1-(пропан-2- ил)пиперидин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- ND 418,3
58 521 2-ил)-9-метил-7-(4-метил-1,4-диазепан- 1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- ND 361,4
25 522 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2- Ь]пиридазин-4-он 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7-(1- 260-262 375,2
25 523 метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2- Ь]пиридазин-4-он 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-2-(2-метил- 253-255 389,3
2Н-индазол-5-ил)-4Н-пиримидо[1,2-
- 128 037123
b]пиридазин-4-он
524
525
526
527
528
529
530
531
532
533
534
2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 289-291 409,3
а]пиридин-6-ил)-7-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он
2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-(1-этилпиперидин-4ил)-4Н-пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 284-286 423,2
2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[1-(2- гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]-4Нпиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 255-257 439,3
2-(5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2ил)-7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 260-262 404,3
7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 200-202 418,3
2-(5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2ил)-7-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 256-258 420,3
2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин- 4-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 228-230 419,3
2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 246-248 420,4
2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[(3R)-4-(2-гидроксиэтил)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 238-240 434,3
2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7- [ (3S)-4-(2- метоксиэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 179-183 467,3
2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-{ (3S)-4- [2-(2- 201-205 497,3
гидроксиэтокси)этил]-3-метилпиперазин1-ил}-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
- 129 037123
535 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-4-циклопропил- 253-257 449,3
З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
536 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-4-циклобутилЗ-метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 228-232 463,3
537 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-4-(2гидроксиэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 228-234 453,3
538 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-4-(2метоксиэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 215-219 451,3
539 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-4-(2гидроксиэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 270-274 437,3
540 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-{(3S)—4—[2—(2— гидроксиэтокси)этил]-3-метилпиперазин- 1-ил}-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 175-181 481,3
541 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-З-метил-4(пропан-2-ил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 191-194 435,3
542 7-[(3S)-4-циклопропил-З- метилпиперазин-1-ил]-2-(8-фтор-2метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 242-246 433,4
543 7- [ (3S)-4-циклобутил-З-метилпиперазин1-ил]-2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 264-267 447,3
544 7-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-2-(4, 6диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-9- ND 418,3
- 130 037123
метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
14 545 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7-[(3R)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 190-192 375,3
9 546 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 230-233 390,5
9 547 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(4-метилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 250-252 404,5
9 548 2- (4-этил-6-метилпиразоло[1,5 — а]пиразин-2-ил)-7-(4-этилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 250-252 418,5
9 549 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5— а]пиразин-2-ил)-7-[4-(2гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 240-242 434,5
9 550 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(4-этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 258-260 432,5
9 551 7- [4-(диэтиламино)пиперидин-1-ил]-2- (4-этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 232-235 460,6
14 552 7-[(3R, 5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 240-242 389,5
14 553 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7- [ (3S)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо [1,2- а]пиримидин-4-он 206-208 375,4
25 554 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)7-[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 218-220 402,4
16 555 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)- 7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 272-277 361,3
24 556 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)- 7-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 257-260 360,3
- 131 037123
39 557 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)- 285-288 375,3
7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
39 558 7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(2метилимидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 219-222 389,3
25 559 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)- 7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 255-260 374,3
25 560 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-2-(2метилимидазо[1,2-а]пиридин-7-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 229-233 388,4
2 561 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-9-метил-7-[(3S)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 210-219 404,4
2 562 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 273-283 418,4
2 563 7-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 244-253 418,4
2 564 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-9-метил-7-[(3R,5S)-3,4,5- триметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 297-310 432,4
23 565 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 7- [1- (пропан-2-ил)-1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 230-232 400,5
58 566 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- (пиперидин-4-ил)-4Н-пиразино[1,2а]пиримидин-4-он 235-237 361,3
25 567 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7-(1метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиразино[1,2а]пиримидин-4-он 275-277 375,3
- 132 037123
25 568 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-2-(2-метил- 198-200 389,3
25 569 2Н-индазол-5-ил)-4Н-пиразино[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 230-232 405,3
9 570 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 7-{4-[(диметиламино)метил]пиперидин-1- 206-208 432,3
9 571 ил} - 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 177-180 458,5
9 572 2-ил)-7-[4-(пирролидин-1- илметил)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 192-195 472,6
9 573 2-ил)-7-[4-(пиперидин-1- илметил)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4- 182-184 423,3
9 574 [(диметиламино)метил]пиперидин-1-ил}4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7- [4- 194-196 449,5
9 575 (пирролидин-1-илметил)пиперидин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4- 184-186 463,5
25 576 (пиперидин-1-илметил)пиперидин-1-ил]- 4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 200-202 404,4
23 577 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6- 248-250 402,2
25 578 тетрагидропиридин-4-ил]-2-(2- метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- (1- 256-258 374,3
25 579 метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 277-280 375,3
- 133 037123
7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Н-
пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он
25 580 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-2-(2метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 255-258 389,3
25 581 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 250-252 405,3
53 582 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-{4-[(2- гидроксиэтил)(метил)амино]пиперидин-1ил}-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 250-259 462,4
53 583 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-9-метил-7-[4- (пропиламино)пиперидин-1-ил]-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 231-241 446,4
2 584 7-(4-амино-4-метилпиперидин-1-ил)-2- (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 200-203 404,5
58 585 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 7-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиразино[1,2- а]пиримидин-4-он ND 361,3
61* 586 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиразино[1,2а]пиримидин-4-он 160-162 362,3
58 587 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он ND 395,3
58 588 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он ND 375,4
39 589 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиразино[1,2а]пиримидин-4-он ND 376,4
39 590 7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(2-метил- 2Н-индазол-5-ил)-4Н-пиразино[1,2- 214-216 390,4
а]пиримидин-4-он
- 134 037123
39 591 7-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]- 200-202 406,4
25 592 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-4Н- пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 249-251 389,3
25 593 ил)-7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 242-244 403,4
25 594 ил)-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 242-244 419,4
25 595 ил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4ил]-4Н-пиразино [1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 243-245 437,3
53 596 а]пиридин-6-ил)-7-[1-(пропан-2- ил)пиперидин-4-ил]-4Н-пиразино[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 228-236 432,4
53 597 2-ил)-7-[4-(этиламино)пиперидин-1-ил]9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-{4- [бис(2- 218-227 492,4
25 598 гидроксиэтил)амино]пиперидин-1-ил}-2(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 205-207 406,3
25 599 2-(2-метил-1,З-бензоксазол-6-ил)-4Нпиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 2-(8-хлор-2-метилимидазо[1,2- 266-268 439,3
25 600 а]пиридин-6-ил)-7-[1-(2гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 150-152 431,3
50 601 2-ил)-7-[1-(оксетан-3-ил)пиперидин-4ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2- 202-204 404,3
39 602 ил)-7-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 210-212 430,3
- 135 037123
2-ил)-7-(1-метилоктагидро-5Нпирроло [3,2-с]пиридин-5-ил)-4Н· пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
51* 603 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7- 268-270 360,4
25 604 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-2-(1-метил- 184-186 388,5
25 605 1Н-индазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 204-206 404,5
24 606 2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- 194-196 360,4
24 607 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 282-284 374,3
25 608 ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7-[1- ND 402,5
53 609 (пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 221-232 448,4
53 610 2-ил)-7-{4- [ (2- гидроксиэтил)амино]пиперидин-1-ил}-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 218-227 418,4
53 611 2-ил)-9-метил-7-[4- (метиламино)пиперидин-1-ил]-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 215-225 446,4
25 612 2-ил)-9-метил-7-[4-(пропан-2- иламино)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-2-(2-метил- 202-204 388,5
25 613 2Н-индазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 170-172 404,5
2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-4Н·
- 136 037123 пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
25 614 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 200-202 388,5
25 615 ил)-7-(1-метилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 202-204 402,5
25 616 ил)-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 242-244 416,5
25 617 ил)-7-[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- ND 418,5
9 618 ил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 243-245 432,5
9 619 а]пиразин-2-ил)-7-(4-пропилпиперазин1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 255-258 432,5
9 620 а]пиразин-2-ил)-7-[4-(пропан-2- ил)пиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(4-циклопропилпиперазин-1-ил)-2-(4- 258-260 430,5
39 621 этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4-циклобутилпиперазин-1-ил)-2-(4- 275-278 444,5
39 622 этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 205-208 446,5
39 623 а]пиразин-2-ил)-7-[4-(оксетан-3- ил)пиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 176-178 444,5
39 624 2-ил)-7-(1-этилоктагидро-5Н- пирроло[3,2-с]пиридин-5-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 184-187 460,5
2-ил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)октагидро 5Н-пирроло[3,2-с]пиридин-5-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
- 137 037123
40* 625 2-(4-метокси-6-метилпиразоло[1,5- 242-244 406,5
а]пиразин-2-ил)-7-(4-метилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он
40* 626 2-(4-гидрокси-6-метилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-7-(4-метилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 280-283 392,4
25 627 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)7-[1-(пропан-2-ил)пиперидин-4-ил]-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 229-231 403,3
25 628 7-(1-циклобутилпиперидин-4-ил)-2-(2метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 249-251 415,2
39* 629 7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2(4-этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 257-259 418,5
39 630 7-[(3R)-4-этил-3-метилпиперазин-1-ил]- 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 256-258 432,5
39 631 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-[(3R)-З-метил-4пропилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 243-245 446,5
39 632 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-[(3R)-4-(2- гидроксиэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 238-241 448,5
9 633 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 258-260 418,4
9 634 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-[4-(пирролидин-1ил)пиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 229-232 458,6
9 635 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7- [ (3S)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- 202-204 404,4
- 138 037123
а]пиримидин-4-он
9 636 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(4-метил-1,4- 175-180 418,4
16 637 диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 264-271 389,4
16 638 а]пиридин-6-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 230-234 403,4
16 639 а]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 232-236 403,4
25 640 а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 196-198 417,5
25 641 2-ил)-7- [1-(пропан-2-ил)пиперидин-4ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-циклопропилпиперидин-4-ил)-2- 180-183 415,5
25 642 (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-циклобутилпиперидин-4-ил )-2-(4,6- 189-191 429,5
39 643 диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 242-244 446,5
39 644 а]пиразин-2-ил)-7-[(3R)-З-метил-4(пропан-2-ил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-4-циклопропил-З- 244-247 444,5
39 645 метилпиперазин-1-ил]-2-(4-этил-6метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-4-циклобутил-З-метилпиперазин- 261-264 458,6
39 646 1-ил]-2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 216-219 460,5
- 139 037123
a]пиразин-2-ил)-7-[(3R)-З-метил-4 (оксетан-3-ил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
39 647 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-[4-(2- 248-253 433,3
39 648 гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4-циклобутилпиперазин-1-ил)-2-(8- 274-279 443,5
39 649 этил-2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 217-220 447,4
39 650 а]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-4-(2гидроксиэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-4-циклобутил-З-метилпиперазин- 209-212 457,4
39 651 1-ил]-2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 220-223 447,4
39 652 а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-4-(2гидроксиэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-4-циклобутил-З-метилпиперазин- ND 457,5
59 653 1-ил]-2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло [1,5- ND 390,4
25 654 а]пиразин-2-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 261-263 404,5
25 655 а]пиразин-2-ил)-7-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 273-275 418,3
24 656 а]пиразин-2-ил)-7-(1-этилпиперидин-4ил)-4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 236-238 389,4
а]пиразин-2-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Н пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
- 140 037123
25 657 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 190-192 403,5
25 658 а]пиразин-2-ил)-7-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2- (4-этил-6-метилпиразоло[1,5 — 194-196 417,5
25 659 а]пиразин-2-ил)-7-(1-этилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2- (4-этил-6-метилпиразоло[1,5 — 207-209 433,5
25 660 а]пиразин-2-ил)-7-[1-(2гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5— 203-204 431,5
9 661 а]пиразин-2-ил)-7-(1-пропилпиперидин4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5— 185-188 404,5
43* 662 а]пиразин-2-ил)-7-[(3R)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1, 2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 197-199 421,5
43 663 2-ил)-7-[1-(2-фторэтил)пиперидин-4ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 186-188 435,5
43 664 2-ил)-7-[1-(3-фторпропил)пиперидин-4ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2- (4-этил-6-метилпиразоло[1,5 — 245-247 436,5
43 665 а]пиразин-2-ил)-7-[4-(2фторэтил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5— 240-242 450,6
43 6 6 6 а]пиразин-2-ил)-7-[4-(3фторпропил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2- (4-этил-6-метилпиразоло[1,5 — 255-257 450,6
43 667 а]пиразин-2-ил)-7-[(3R)-4-(2фторэтил)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 244-246 464,6
а]пиразин-2-ил)-7-[(3R)-4-(3фторпропил)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н
- 141 037123 пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
43 668 2-(4-этил-6-метилпиразоле[1,5а]пиразин-2-ил)-7-[1-(2фторэтил)пиперидин-4-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 206-208 435,6
43 669 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-7-[1-(3фторпропил)пиперидин-4-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 216-218 449,6
43 670 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-7-{(3R)-4-[2-(2- гидроксиэтокси)этил]-3-метилпиперазин1-ил}-9-метил-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он ND 492,4
24 671 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-9-метил-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 247-255 389,3
25 672 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-9-метил-7-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 237-248 403,4
39 673 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[(3R)-4-(2-гидроксиэтил)-3метилпиперазин-1-ил]-9-метил-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 273-281 448,4
48* 674 2-[8-(гидроксиметил)-2- метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил]-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он >320 391,3
16 675 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он ND 417,4
16 676 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- а]пиридин-6-ил)-7-(4-метил-1,4диазепан-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он ND 417,3
39 677 2-[8-(гидроксиметил)-2- метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил]-7-(4- 262-266 405,3
- 142 037123 метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2-
а]пиримидин-4-он
39 678 7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-[8- (гидроксиметил)-2-метилимидазо[1,2а]пиридин-6-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 258-262 419,3
25 679 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-[1-(пропан-2ил)пиперидин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 228-230 431,5
25 680 7-(1-циклопропилпиперидин-4-ил)-2-(4этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 196-199 429,5
25 681 7-(1-циклобутилпиперидин-4-ил)-2-(4этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он 227-229 443,5
25 682 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-7-[1-(оксетан-3ил)пиперидин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 190-192 445,5
9 683 2-(4-циклопропил-6-метилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 226-229 402,4
9 684 2-(4-циклопропил-6-метилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-7-(4-метилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 238-240 416,5
9 685 2-(4-циклопропил-6-метилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-7-(4-этилпиперазин-1ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 236-238 430,5
9 686 2-(4-циклопропил-6-метилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-7-[4-(2гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 239-241 446,5
25 687 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-(1-пропилпиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 185-187 417,4
41* 688 2-[4-(диметиламино)-6- метилпиразоло [1,5-а]пиразин-2-ил]-7- 245-248 405,4
- 143 037123 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2 а]пиримидин-4-он
14 689 2-(2-метил-1Н-бензимидазол-6-ил)-7-(4- 292-294 375,3
39 690 метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(2-метил- 283-285 389,3
58 691 1Н-бензимидазол-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- 215-217 375,4
58 692 ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Н- пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он 2-(2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)- 249-251 361,3
25 693 7-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2- Ь]пиридазин-4-он 7-[1-(2,2-диметил-1,3-диоксан-5- 236-238 503,5
42* 694 ил)пиперидин-4-ил]-2-(4-этил-6метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[1-(1,З-дигидроксипропан-2- 228-230 463,6
62* 695 ил)пиперидин-4-ил]-2-(4-этил-6метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 254-256 403,4
24 6 96 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7ил)-4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 221-224 388,3
25 697 а]пиридин-6-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 214-218 402,4
25 698 а]пиридин-6-ил)-7-(1-метилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 196-200 416,5
25 6 99 а]пиридин-6-ил)-7-(1-этилпиперидин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 244-247 432,4
а]пиридин-6-ил)-7-[1-(2гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]-4Н пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
- 144 037123
39 700 7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 217-220 417,4
39 701 (8-этил-2-метилимидазо[1,2-а]пиридин6-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 179-182 431,4
25 702 а]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-4-этил-Зметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 231-240 417,4
25 703 2-ил)-7-(1-этилпиперидин-4-ил)-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 224-233 433,3
25 704 2-ил)-7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин- 4-ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(1-циклобутилпиперидин-4-ил )-2-(4,6- 228-237 443,5
25 705 диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- 222-227 388,3
2 706 (1-метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-[4-(диметиламино)-4-метилпиперидин- 237-239 432,4
2 707 1-ил]-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 187-189 432,4
2 708 2-ил)-7-[4-(этиламино)-4- метилпиперидин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 181-183 446,4
2 709 2-ил)-7-[4-метил-4- (пропиламино)пиперидин-1-ил]-4Н- пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 196-198 448,4
25 710 2-ил)-7-{4-[(2-гидроксиэтил)амино]-4метилпиперидин-1-ил}-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-(1-циклобутилпиперидин-4-ил)-9- 232-235 428,4
метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-4Н-
- 145 037123 пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
25 711 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 216-222 418,4
25 712 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 216-223 431,4
62 713 2-ил)-9-метил-7-(1-пропилпиперидин-4- ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7- ND 389,3
47* 714 ил)-7-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-циклопропил-2-метилимидазо[1,2- 274-277 401,4
47 715 а]пиридин-6-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-циклопропил-2-метилимидазо[1,2- 246-250 415,4
47 716 а]пиридин-6-ил)-7-[(3R)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-циклопропил-2-метилимидазо[1,2- 246-250 415,4
47 717 а]пиридин-6-ил)-7-[(3S)-3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(8-циклопропил-2-метилимидазо[1,2- 205-209 429,5
25 718 а]пиридин-6-ил)-7- [ (3R,5S)-3,5диметилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-(1-циклопропилпиперидин-4-ил)-9- 226-231 414,4
25 719 метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-9-метил-2-(2- 237-241 402,5
2 720 метил-2Н-индазол-5-ил)-4Н-пиридо [1,2а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 254-264 390,4
24 721 2-ил)-9-метил-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- 211 374,3
27 722 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- (S) , 223-227 249-252 405,4
- 146 037123
2-ил)-7-[(1-метилпиперидин-4-ил)окси]
4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
9 723 2-(6-метил-4-пропилпиразоло[1,5- 250-252 404,4
9 724 а]пиразин-2-ил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(6-метил- 246-248 418,4
9 725 4-пропилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7- ( 4-этилпиперазин-1-ил)-2-(6-метил-4- 231-233 432,5
9 726 пропилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]- 225-227 448,4
9 727 2-(6-метил-4-пропилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-(6- 195-197 418,4
9 728 метил-4-пропилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-(6- 195-197 418,4
9 729 метил-4-пропилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 249-251 432,5
39 730 2-(6-метил-4-пропилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7- 249-251 431,3
63* 731 ил)-7-[(3R)-З-метил-4-(пропан-2- ил)пиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(4-амино-4-метилпиперидин-1-ил)-2- 244-246 403,3
2 732 (1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 243-251 418,5
16 733 2-ил)-7-[(3S)-З-этилпиперазин-1-ил]-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-[2-метил-8- 325-328 429,3
(трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин-6 ил]-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- 147 037123
а]пиримидин-4-он
16 734 7-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-[2метил-8-(трифторметил)имидазо[1,2- 303-306 443,2
16 735 а]пиридин-6-ил]-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-[2- >320 443,2
16 736 метил-8-(трифторметил)имидазо[1,2- а]пиридин-6-ил]-4Н-пиридо [1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 293-296 457,3
2 737 2-[2-метил-8- (трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин-6ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4-амино-4-метилпиперидин-1-ил)-2- 216-218 418,5
14 738 (4-этил-6-метилпиразоле[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7- 194-196 375,4
24 739 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7- 228-230 374,4
52 740 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(3-аминопроп-1-ин-1-ил)-2-(4,6- 242-244 345,4
14 741 диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7- 170-172 389,4
52 742 [(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(3-аминопропил)-2-(4,6- ND 349,3
64* 743 диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7- 189-191 372,3
38 744 ил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 218-221 429,5
2-ил)-7-(2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2 а]пиримидин-4-он
- 148 037123
38 745 2-(4-этил-6-метилпиразоле[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(2,2,6,6-тетраметил- 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н- 255-258 443,5
45 746 пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 239-242 402,4
2 747 2-ил)-7- [ (3aR,6aS)- гексагидропирроло[3,4-е]пиррол-2(1Н)ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 246-249 416,4
62 748 а]пиразин-2-ил)-7-[(3aR,6aS)- гексагидропирроло[3,4-е]пиррол-2(1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]- 238-241 417,4
62 749 2-(1-этил-3-метилпирроло[1,2- а]пиразин-7-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(1-этил-З- 200-202 403,4
14 750 метилпирроло[1,2-а]пиразин-7-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7- 308-310 389,4
39 751 [ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7- 202-204 403,4
25 752 [ (3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7-(1- 208-210 388,3
25 753 метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7-(1- 162-164 402,4
2 754 этилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- 233-243 375,3
2 755 (пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- ND 389,4
2 756 [(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- ND 389,3
- 149 037123
[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4H пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
2 757 7-[3-(диметиламино)азетидин-1-ил]-2- (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 226-228 390,4
2 758 7-[3-(диэтиламино)азетидин-1-ил]-2- (4, 6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 231-233 418,5
2 759 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[3-(пирролидин-1-ил)азетидин1-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 235-237 416,4
9 760 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(4-этил-6метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 212-214 404,4
45 761 7-[(3aR,6aS)-гексагидропирроло[3, 4- с]пиррол-2 (1Н)-ил]-2-(6-метил-4пропилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 212-214 430,4
38 762 2-(6-метил-4-пропилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 257-260 401,4
38 763 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(1,2,3,6- тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 287-289 387,4
45* 764 7- [ (3S)-3-(аминометил)пирролидин-1ил]-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 244-246 390,4
2 765 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-7-[3-(пиперидин-1-ил)азетидин-1ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 220-223 430,5
24 766 2-(6-метил-4-пропилпиразоло [1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 228-230 403,4
2 767 7-(2,7-диазаспиро[4.4]нон-2-ил)-2- (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2- 208-210 416,4
- 150 037123 ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
14 768 2-(2,7-диметил-2Н-индазол-5-ил)-7-(4- 216-218 389,5
метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
52* 769 7-[3-(диметиламино)пропил]-2-(4,6диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 136-138 377,3
39 770 7-{ (3S)-3- [(диметиламино)метил]пирролидин-1-ил}2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 239-241 418,4
24 771 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-9-метил-7-(пиперидин4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 241-249 403,4
24 772 9-метил-2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7- (пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 212-217 374,3
22 773 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5— а]пиразин-2-ил)-9-метил-7-(1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 265 (D) 401,3
25 774 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5— а]пиразин-2-ил)-9-метил-7-(1- метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 220-227 417,3
51 775 2-(1,7-диметил-1Н-индазол-5-ил)-7(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 220-222 374,2
14 776 2-(1,7-диметил-1Н-индазол-5-ил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 160-163 375,3
14 777 2-(1,7-диметил-1Н-индазол-5-ил)-7[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 248-250 389,3
39 778 7-{ (3S)-3- [(диэтиламино)метил]пирролидин-1-ил}2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 194-196 446,4
2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
- 151 037123
39 779 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- ND 418,4
2 780 2-ил)-7-{(3S)-3- [(этиламино)метил]пирролидин-1-ил}-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-{3-[(диметиламино)метил]азетидин-1- 228-230 404,4
2 781 ил}-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-{3-[(диэтиламино)метил]азетидин-1- 205-207 432,4
62 782 ил}-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(1-этил-З-метилпирроло[1,2- 220-222 429,3
2 783 а]пиразин-7-ил)-7-[(8aS)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 223-233 418,4
25 784 а]пиразин-2-ил)-9-метил-7-[(3R)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 9-метил-2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)-7- 255-263 388,3
39 785 (1-метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 234-240 432,4
25 786 (4-этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин- 2-ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-(1-этилпиперидин-4-ил)-9-метил-2-(1- 236-240 402,4
2 787 метил-1Н-индазол-5-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 227-236 418,4
2 788 а]пиразин-2-ил)-9-метил-7-[(3S)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-[1-(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]- 225-228 418,4
2 789 9-метил-2-(1-метил-1Н-индазол-5-ил)- 4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-2- 235-241 432,4
- 152 037123 (4-этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин
2-ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
25 790 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-7-(1-этилпиперидин-4- 201-208 431,4
22 791 ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- > 240 373,3
25 792 (1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Нпиразино[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(1-циклобутилпиперидин-4-ил)-2-(4- (D) 231-237 457,3
25 793 этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- 210-216 447,4
16 794 а]пиразин-2-ил)-7-[1-(2- гидроксиэтил)пиперидин-4-ил]-9-метил4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 231-235 429,3
16 795 а]пиридин-6-ил)-7-[(8aR)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-этил-2-метилимидазо[1,2- 229-233 429,3
51 796 а]пиридин-6-ил)-7-[(8aS)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 9-метил-2-(2-метил-2Н-индазол-5-ил)-7- 229-235 375,3
2 797 (пиперидин-4-ил)-4Н-пиразино [1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3-(аминометил)пирролидин-1- 214-217 390,4
44* 798 ил]-2-(4,6-диметилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- 228-231 401,3
2 799 2-ил)-7- [ (2S,6S)-2,6-диметил-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-{(3R)-3- 229-231 418,4
- 153 037123
[(диметиламино)метил]пирролидин-1-ил} 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
24 800 7-[(2S,6S)-2,6-диметилпиперидин-4-ил]- 248-250 403,3
16 801 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин2-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- ND 423,5
16 802 а]пиридин-6-ил)-7- [4-(2гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-6-ил)-7-(4- ND 361,5
36 803 метилпиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(4-фтор-2-метил-1,3-бензоксазол-6- ND 420,6
65* 804 ил)-7-[(8aS)-гексагидропирроло[1,2а]пиразин-2 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 7-(2,7-диазаспиро[3.5]нон-7-ил)-2- ND 416,2
14 805 (4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(2- ND 376,1
16 806 метил[1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридин-6ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-[2-метил- ND 443,6
16 807 8-(трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин6-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-метил-6-[7-(4-метилпиперазин-1-ил)- ND 400,6
16 808 4-оксо-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-2ил]имидазо[1,2-а]пиридин-8-карбонитрил 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- ND 389,5
16 809 ил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-(4,7-диазаспиро[2.5]окт-7-ил)-2- ND 401,4
25 810 (2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- ND 392,4
а]пиридин-6-ил)-7-(1-метилпиперидин-4 ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
- 154 037123
66* 811 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2а]пиридин-6-ил)-7-(4- ND 394,4
9 812 гидроксипиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- ND 430,7
9 813 а]пиразин-2-ил)-7-[(8aS)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- ND 430,6
9 814 а]пиразин-2-ил)-7-[(8aR)- гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2 (1Н)- ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1- ND 418,7
9 815 ил]-2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1- ND 418,7
16 816 ил]-2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-4Н-пиридо [1,2- а]пиримидин-4-он 2-(8-фтор-2-метилимидазо[1,2- ND 433,6
9 817 а]пиридин-6-ил)-7-[(8aS)-8a- метилгексагидропирроло[1,2-а]пиразин- 2(1Н)-ил]-4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- ND 432,6
9 818 а]пиразин-2-ил)-7-(4-этилпиперазин-1ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- ND 444,6
16 819 а]пиразин-2-ил)-7- [ (8aS)- гексагидропирроло [1,2-а]пиразин-2 (1Н)ил]-9-метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- ND 403,7
16 820 ил)-7-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Нпиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6- ND 415,7
- 155 037123 ил)-7-[(8aS)-гексагидропирроло[1,2 а]пиразин-2 (1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
16 821 2-(2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6ил)-7-(8а-метилгексагидропирроло[1,2- ND 429,7
9 822 а]пиразин-2 (1Н)-ил)-4Н-пиридо[1,2 — а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1- ND 432,6
9 823 ил]-2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- а]пиразин-2-ил)-9-метил-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- ND 434,6
9 824 а]пиразин-2-ил)-7-{[2-(морфолин-4- ил)этил]амино}-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-{[2-(диметиламино)этил]амино}-2-(4- ND 392,6
9 825 этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-{ [2- ND 406, 6
9 826 (диметиламино)этил](метил)амино}-2-(4этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- ND 392,6
16 827 а]пиразин-2-ил)-7-{метил[2- (метиламино)этил]амино}-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1- ND 403,7
16 828 ил]-2-(2,8-диметилимидазо[1,2— а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2— а]пиримидин-4-он 7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1- ND 403,7
27 829 ил]-2-(2,8-диметилимидазо[1,2— а]пиридин-6-ил)-4Н-пиридо[1,2- а]пиримидин-4-он 7-[2-(диметиламино)этокси]-2-(4-этил- ND 407,6
27 830 6-метилпиразоло [1,5-а]пиразин-2-ил)-9метил-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он 7-[2-(диметиламино)этокси]-2-(4-этил- ND 393,6
- 156 037123
6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ил)4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
831 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- nd 419,5
а]пиразин-2-ил)-7-(пиперидин-4илметокси)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он
832 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- nd 433,6
а]пиразин-2-ил)-7-[2-(пиперидин-1ил)этокси]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин4-он
833 2-(4-этил-6-метилпиразоло[1,5- ND 449 6
а]пиразин-2-ил)-7-[3-(морфолин-4ил)пропокси]-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-он
834 7-[3-(диметиламино)пропокси]-2-(4- nd 407,6 этил-6-метилпиразоло[1,5-а]пиразин-2ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он
835 2-(4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин- nd 416,5
2-ил)-7- [(3aR,6aS)-5метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол2(1Н)-ил]-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4или его соль, изотополог, стереоизомер, рацемат, энантиомер, диастереоизомер или таутомер.
В табл. 2 представлены определенные выделенные соединения в солевой форме соединения формулы (I), которые могут быть получены в соответствии с методиками указанного примера путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакции. Получение любого свободного основания, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереоизомера или таутомера из солевой формы соединения формулы (I) также предполагается и дополнительно включено в объем описания, представленного в настоящем документе. В случаях, когда форма свободного основания соединения не была выделена из солевой формы, предполагается, что средний специалист в данной области техники сможет провести необходимые реакции для получения и выделения формы свободного основания соединения.
Термин Соед. представляет собой номер соединения, термин Прим. представляет собой номер примера (где * указывает на то, что соответствующий пример для соединения представлен выше), термин т.пл. представляет собой точку плавления (°C), термин MS представляет собой пик(и) масс-спектрометрии m/z [M+H]+, [M+2+H]+, [M-H]- или [M+2-H], термин D представляет собой разложение/разложившееся, термин DR представляет собой интервал разложения, термин S представляет собой размягчение, термин ND указывает на то, что значение не было определено, и термин NI указывает на то, что соединение не было выделено.
Таблица 2
Пр. Соед. Название Т.пл. МС
1 71 2-(3,5-дифтор-4-гидроксифенил)-7(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2а]пиримидин-4-она гидрохлорид 290 (D) 359,2
33 203 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил]-2(3-фтор-4-метоксифенил)-4Н-хинолизин4-она ацетат 188-192 396,2
55* 380 2-(2-метил-1,З-бензотиазол-6-ил)-7(пиперидин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2— Ь]пиридазин-4-она трифторацетат (1/1) 230-235 378,2
57 413 2-(1,3-диметилпирроло[1,2-а]пиразин-7ил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)-4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-она гидрохлорид (1/2) >300 373,3
или его свободное основание, изотополог, стереоизомер, рацемат, энантиомер, диастереоизомер или таутомер.
Биологические примеры
С целью более детального описания и содействия в понимании настоящего описания, последующие неограничивающие биологические примеры представлены для более полной иллюстрации объема настоящего описания и не должны истолковываться как особым образом ограничивающие его объем. Та
- 157 037123 кие варианты настоящего описания, которые могут быть известны в настоящее время или могут быть разработаны впоследствии, и которые могли бы находиться в компетенции специалиста в данной области техники, считаются подпадающими под объем настоящего описания и представленными ниже в формуле изобретения. Указанные примеры иллюстрируют тестирование определенных соединений, описанных в настоящем документе, in vitro и/или in vivo и демонстрируют применимость соединений для лечения SMA посредством усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемую с гена SMN2. Соединения формулы (I) усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемую с гена SMN2, и увеличивают уровни белка Smn, продуцируемого геном SMN2, а потому могут использоваться при лечении SMA у нуждающегося в этом субъекта-человека.
Пример 1. Мини-генная конструкция SMN2
Приготовление мини-генных конструкций
ДНК, соответствующую участку гена SMN2, который начинается от 5'-конца экзона 6 (ATAATTCCCCC) (SEQ ID NO. 14) и заканчивается нуклеотидным остатком 23 экзона 8 (CAGCAC) (SEQ ID NO. 15), амплифицируют методом ПЦР с использованием следующих праймеров:
Прямой праймер:
5'-CGCGGATCCATAATTCCCCCACCACCTC-3' (SEQ ID NO. 16)
Обратный праймер:
5'-CGCGGATCCGTGCTGCTCTATGCCAGCA-3' (SEQIDNO. 17)
5'-конец каждого праймера разрабатывали с целью добавления сайта узнавания рестрикционной эндонуклеазы BamHI на 5'-конец экзона 6 (GGATCC) (SEQ ID NO. 18) и 3'-конец после 23-го нуклеотида экзона 8. С применением сайта узнавания рестрикционной эндонуклеазы BamHI, ПЦР фрагмент клонировали в производное оригинального вектора pcDNA 3.1/Hygro, который модифицировали, как раскрыто в патентной публикации США № US 2005/0048549.
В модифицированный вектор добавляли новые UTR с применением сайтов рестрикции HindIII и BamHI, содержащих 5'DEG UTR:
5' - TAGCTTCTTACCCGTACTCCACCGTTGGCAGCACGATCGCACGTCCCACGTGAACCATTGGTA AACCCTG-3' (SEQ ID NO. 19), клонированный в модифицированный вектор pcDNA3.1/Hygro вместе со стартовым кодом выше сайта рестрикции BamHI; и 3'DEG UTR:
5' AT CGAAAGTACAGGACTAGCCTTCCTAGCAACCGCGGGCTGGGAGT СТ GAGACAT САС Т CAAG
ATATATGCTCGGTAACGTATGCTCTAGCCATCTAACTATTCCCTATGTCTTATAGGG-3' (SEQ ID NO. 20), клонированный в модифицированный вектор pcDNA3.1/Hygro с применением сайта узнавания рестрикционной эндонуклеазы NotI и сайта узнавания рестрикционной эндонуклеазы Xhol вместе со стопкодоном сразу ниже сайта рестрикции NotI. Кроме того, с применением сайтов рестрикции BamHI и NotI в вектор клонировали ген люциферазы светлячка без стартового кодона.
Полученный мини-ген содержал (в 5'-3' порядке): 5'-DEG UTR; стартовый кодон; шесть дополнительных нуклеозидов, формирующих сайт рестрикции BamHI; нуклеотидные остатки экзона 6; нуклеотидные остатки интрона 6 SMN2; нуклеотидные остатки экзона 7 SMN2; нуклеотидные остатки интрона 7 SMN2; первые 23 нуклеотидных остатка экзона 8 SMN2; шесть дополнительных нуклеозидов, формирующих сайт рестрикции BamHI; и ген люциферазы светлячка без стартового кодона.
Методом сайт-направленного мутагенеза вставляли один остаток аденозина после нуклеотидного остатка 48 экзона 7 SMN2. Эту мини-генная конструкция называют SMN2-A.
Полученные с мини-генов SMN2 транскрипты, содержащих экзоны 6-8 и находящиеся между интроны, повторяют сплайсинг их эндогенной пре-мРНК (Lorson et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1999, 96(11), 6307). Была создана репортерная конструкция альтернативного сплайсинга SMN2, содержащая экзоны 6-8, находящиеся между интроны и следующий за ними репортерный ген люциферазы. Отличительной чертой этой конструкции является отсутствие стартового кодона в гене люциферазы, инактивация терминирующего кодона (в открытой рамке считывания, которая кодирует белок SMN) экзона 7 посредством вставки нуклеотида после нуклеотидного остатка 48 экзона 7 и добавление стартового кодона (ATG) непосредственно выше экзона 6. После нуклеотидного остатка 48 экзона 7 вставляли один остаток аденозина (SMN2-A).
Мини-ген SMN2 разрабатывали таким образом, чтобы люциферазный репортер находился в рамке со стартовым кодом ATG непосредственно выше экзона 6, если экзон 7 присутствует в мРНК, и чтобы люциферазный репортер находился вне рамки со стартовым кодом ATG непосредственно выше экзона 6, если экзон 7 SMN2 удаляется в процессе сплайсинга пре-мРНК. Кроме того, в отсутствие экзона 7 открытая рамка считывания, которая начинается со стартового кодона ATG непосредственно выше экзона 6, содержит стоп-кодон во фрагменте экзона 8 SMN. Таким образом, в присутствии соединений, которые усиливают включение экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемую с гена SMN2, продуцируется больше транскриптов, содержащих экзон 7 и более функциональный репортер. Схематическая иллюстрация этого описания может быть найдена на фиг. 1.
- 158 037123
Последовательность ДНК мини-генной конструкции SMN2-A (SEQ ID NO. 21) представлена на фиг. 2a. Отображение подпоследовательностей мини-гена SMN2-A представлено на фиг. 2b.
Пример 2. RT-qPCR анализ сплайсинга мРНК мини-гена SMN2 в культивируемых клетках
Для количественной оценки уровня полноразмерной мРНК мини-гена SMN2, содержащей экзон 7 SMN2, в линии клеток HEK293H, стабильно трансфицированных указанным мини-геном и обработанных тестируемым соединением, используют метод анализа, основанный на методе количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR).
Материалы
Материал Источник
Клетки НЕК293Н АТСС, кат. № CRL-1573
Лизирующий буфер Cells-To-Ct Life Technologies, Inc. (ранее Biosystems); кат. № 4399002 Applied
DMEM 96-луночные планшеты с плоским дном Смесь ферментов для RT-PCR Буфер для RT-PCR Набор AgPath-ID для одностадийного проведения RT-PCR Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11960-044 Becton Dickinson; кат. № 353072 Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); № изд. 4388520 (также включена в AgPath-ID Kit; кат. № 4387391) Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); № изд. 4388519 (также включена в набор AgPath-ID; кат. № 4387391) Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); кат. № 4387391
Термоциклер Life Technologies, Inc. (ранее Biosystems); 7900HT Applied
Протокол
Клетки HEK293H, стабильно трансфицированные описанной выше мини-генной конструкцией SMN2-A (10000 клеток на лунку), высевают в 200 мкл культуральной среды (DMEM с добавлением 10% FBS и 200 мкг/мл гигромицина) в 96-луночные планшеты с плоским дном, и сразу перемешивают планшет вращением для обеспечения правильного распределения клеток, образующих ровный монослой клеток. Клетки оставляют прикрепляться, по меньшей мере, в течение 4-6 ч. Тестируемые соединения последовательно разбавляют 100% DMSO в 3,16 раза с получением концентрационной зависимости по 7 точкам. В каждую содержащую клетки лунку добавляют раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в DMSO), и инкубируют планшет в течение 24 часов в клеточном инкубаторе (37°C, 5% CO2, 100% относительная влажность). Для каждой концентрации тестируемого соединения приготавливают 2 повтора. Затем клетки подвергают лизису в лизирующем буфере Cells-To-Ct и хранят лизат при -80°C.
Полноразмерную мРНК мини-гена SMN2-A и мРНК GAPDH количественно оценивают с использованием следующих праймеров и зондов, представленных в табл. 3. Прямой SMN праймер A (SEQ ID NO: 1) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 7 (нуклеотиды 22-40), обратный SMN праймер A (SEQ ID NO: 2) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в кодирующей последовательности люциферазы светлячка, SMN зонд A (SEQ ID NO: 3) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 7 (нуклеотиды 50-54) и экзоне 8 (нуклеотиды 1-21). Сочетание указанных трех олигонуклеотидов обнаруживает лишь мини-гены SMN1 или SMN2 (RT-qPCR) и не обнаруживает эндогенные гены SMN1 или SMN2.
- 159 037123
Таблица 3
Праймеры/зонды Последовательность Источник
Прямой SMN праймер А SEQ ID NO.l: GAAGGAAGGTGCTCACATT PTC1
Обратный SMN праймер А SEQ ID NO.2: TCTTTATGTTTTTGGCGTCTTC PTC1
Прямой SMN зонд А SEQ ID NO.3: 6FAM- AAGGAGAAATGCTGGCATAGAGCAGC-TAMRA PTC1
Прямой hGAPDH зонд SEQ ID NO.4: VIC- CGCCTGGTCACCAGGGCTGCT-TAMRA LTI2
Прямой hGAPDH праймер SEQ ID NO.5: CAACGGATTTGGTCGTATTGG LTI2
Обратный hGAPDH праймер SEQ ID NO.6: T GAT GGCAACAATAT С CAC T T TAC C LTI2
1Праймеры и зонд разработаны PTC Therapeutics, Inc.; коммерчески доступны от Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen).
Прямой и обратный SMN праймеры используют в конечных концентрациях 0,4 мкМ. SMN зонд используют в конечной концентрации 0,15 мкМ. GAPDH праймеры используют в конечных концентрациях 0,2 мкМ, и зонд - в концентрации 0,15 мкМ.
Смесь мини-ген SMN2/GAPDH (общий объем 15 мкл) приготавливают путем смешивания 7,5 мкл 2х буфера для RT-PCR, 0,4 мкл 25 х смеси ферментов для RT-PCR, 0,75 мкл 20х смеси GAPDH праймера/зонда, 4,0075 мкл воды, 2 мкл 10-кратно разбавленного лизата клеток, 0,06 мкл 100 мкМ прямого SMN праймера, 0,06 мкл 100 мкМ обратного SMN праймера и 0,225 мкл 100 мкМ SMN зонда.
ПЦР проводят при следующих температурах в указанное время:
Стадия 1: 48°C (15 мин);
Стадия 2: 95°C (10 мин);
Стадия 3: 95°C (15 с);
Стадия 4: 60°C (1 мин);
затем повтор стадий 3 и 4 всего в течение 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержала и мини-ген SMN2-A, и GAPDH праймеры/зонд (мультиплекс-дизайн), что позволяет одновременно измерять уровни двух транскриптов.
Два продукта сплайсинга SMN продуцируются мини-геном SMN2. Первый продукт сплайсинга, содержащий экзон 7 и соответствующий полноразмерной мРНК SMN2, в настоящем документе называют термином мРНК мини-гена SMN2 FL. Второй продукт сплайсинга без экзона 7 в настоящем документе называют термином мРНК мини-гена SMN2 Δ7.
Увеличение мРНК мини-гена SMN2 FL относительно таковой в клетках, обработанных контролем с растворителем, определяют исходя из данных ПЦР в режиме реального времени с использованием модифицированного метода ΔΔCt (описанного в Livak and Schmittgen, Methods, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (E) рассчитывают из наклона кривой амплификации, индивидуально для мРНК мини-гена SMN2 FL и мРНК GAPDH. Копийности для мРНК мини-гена SMN2 FL и мРНК GAPDH рассчитывают как (1 + E)-Ct, где Ct представляет собой пороговое значение для каждого ампликона. Копийность мРНК мини-гена SMN2 FL нормируют к копийности мРНК GAPDH. Затем, нормированную копийность мРНК мини-гена SMN2 FL в образцах, обработанных тестируемым соединением, делят на нормированную копийность мРНК мини-гена SMN2 FL в клетках, обработанных растворителем, для определения уровня мРНК мини-гена SMN2 FL относительно контроля с растворителем.
Результаты
Как видно на фиг. 3, в клетках, обработанных соединением 6 (фиг. 3 a) и соединением 170 (фиг. 3b), при малых концентрациях повышался уровень мРНК мини-гена SMN2 FL. Два тестируемых соединения полностью восстанавливали включение экзона 7 относительно необработанных клеток.
Для соединений формулы (I) или их формы, представленных в настоящем документе, в табл. 4 представлены значения ECL5x продукции полноразмерной мРНК SMN2, которые рассчитаны из концентрационной зависимости по 7 точкам, полученной для каждого тестируемого соединения в соответствии с методикой, описанной в биологическом примере 2. Термин EC1.5x продукция полноразмерной мРНК SMN2 определен как концентрация тестируемого соединения, которая эффективно увеличивает количество полноразмерной мРНК SMN2 до уровня, в 1,5 раза большего по сравнению с таковым для клеток, обработанных растворителем. Значение EC1.5x продукции полноразмерной мРНК SMN2 между >3 мкМ и <30 мкМ обозначают одной звездочкой (*), значение EC1.5x между >1 мкМ и <3 мкМ обозначают двумя звездочками (**), значение ECL5x между >0,3 мкМ и <1 мкМ обозначают тремя звездочками (***), значение EC1.5x между >0,1 мкМ и <0,3 мкМ обозначают четырьмя звездочками (****), и значение EC1.5x <0,1 мкМ обозначают пятью звездочками (*****).
- 160 037123
Соед. ECi.Sx Таблица 4 Соед. ECi.sx Соед. ECi.sx
1 *** 280 ** 558 * *
2 ** 281 **** 559 * *
3 *** 282 *** 560 * *
4 * * 283 ***** 561 *****
5 * 284 *** 562 ***
6 ***** 285 ***** 563 ****
7 *** 286 *** 564 **
8 **** 287 ***** 565 *****
9 * * 288 ***** 566 *****
10 * * 289 ***** 567 ****
11 *** 290 ***** 568 *****
12 * * * 291 ***** 569 * * * * *
- 161 037123
13 ** 292 ***** 570
14 ** 293 ***** 571
15 ** 294 ***** 572
16 ** 295 ***** 57Э
17 ** 296 ***** 574
18 *** 297 ***** 575
19 ** 298 *** 576
20 ** 299 ***** 577
21 * 300 ***** 578
22 *** 301 ** 579
23 * 302 ***** 580
24 ** 303 ***** 581
25 ** 304 ***** 582
26 * 305 ***** 58Э
27 * 306 ***** 584
28 * 307 ***** 585
29 * 308 ***** 586
30 ***** 309 ***** 587
31 ** ЗЮ ***** 588
32 ** 311 * * * * 589
33 ** Э12 ***** 590
34 ** 313 ** 591
35 * Э14 ***** 592
36 * 315 ***** 59Э
37 ** 316 **** 594
38 * 317 *** 595
39 * 318 ***** 596
40 * 319 ***** 597
41 *** 320 *** 598
- 162 037123
42 ** 321 ** 599
43 **** 322 ***** 600
44 ** 323 * * * * 601
45 * 324 *** 602
46 ** 325 *** 60S
47 ** 326 ** 604
48 * 327 ***** 605
49 * 328 ***** 606
50 * 329 ***** 607
51 * ЗЭ0 **** 608
52 * 331 ***** 609
53 ** 332 *** 610
54 ** 333 * * * * 611
55 * * 334 ***** 612
56 ** 335 ***** 61Э
57 * 336 **** 614
58 * 337 ***** 615
59 ** 338 ***** 616
60 ** 339 ***** 617
61 *** 340 ***** 618
62 * * * * 341 *** 619
63 * * 342 ***** 620
64 * 343 ***** 621
65 * 344 **** 622
66 *** 345 ***** 623
67 * * * * 346 ***** 624
68 * * * * 347 ***** 625
69 *** 348 **** 626
70 * * 349 ***** 627
- 163 037123
71 ** 350 ***** 628
72 * * * * * 351 ***** 629
73 * 352 ***** 6Э0
74 ***** 353 * * * * 631
75 ***** 354 ***** 632
76 * * * 355 ***** 6ЭЭ
77 *** 356 ***** 634
78 ** 357 * * * * 635
79 **** 358 ***** 6Э6
80 ** 359 ***** 637
81 *** 360 ** 638
82 ** 361 **** 639
83 *** 362 *** 640
84 ** 363 *** 641
85 ** 364 ** 642
86 **** 365 **** 643
87 **** 366 ***** 644
88 ** 367 ***** 645
89 ** 368 ***** 646
90 ** 369 ***** 647
91 ** 370 **** 648
92 ** 371 * * * * 649
93 ** 372 ***** 650
94 ** 373 ***** 651
95 ** 374 ***** 652
96 *** 375 ***** 653
97 ** 376 ***** 654
98 ** 377 *** 655
99 * * * 378 ***** 656
- 164 037123
100 * * * 379 * * * * 657 * * * * *
101 * * * 380 * * * * 658 * * * * *
102 * * * 381 * * * * 659 * * * * *
103 * * * 382 ***** 660 * * * * *
104 * * * 383 * * * 661 * * * * *
105 * * * * 384 ***** 662 * * * * *
106 * * * 385 ***** 663 * * * * *
107 * * * 386 * * * 664 * * *
108 * * * * 387 * * * 665 * * * *
109 ***** 388 ***** 666 * * * *
110 * * * * 389 * * 667 * * * * *
111 * * * * 390 * * * 668 * * * * *
112 * * * 391 * * 669 * * * * *
113 * * 392 * * * * 670 * * * * *
114 * * 393 ***** 671 * * * * *
115 ***** 394 * * * * 672 * * * * *
116 * * * * 395 * * * 673 * * * * *
117 ***** 396 * * * * 674 * * * * *
118 * * * * 397 ***** 675 * * * * *
119 * * * * 398 * * * 676 * * * * *
120 ***** 399 * * * 677 * * * * *
121 ***** 400 * * * * 678 * * * * *
122 * * 401 * * * * 679 * * * * *
123 * * 402 ***** 680 * * * * *
124 * * * 403 ***** 681 * * * * *
125 * * * 404 * * * 682 * * *
126 * * * * 405 * * * * 683 * * * * *
127 * * * 406 * * * 684 * * * *
128 * * * 407 ***** 685 * * * *
- 165 037123
129 * * * 408 ***** 686 * * *
130 * * 409 ***** 687 * * * * *
131 ***** 410 ***** 688 * *
132 ***** 411 ***** 689 * * * *
133 ***** 412 ***** 690 * * * * *
134 ***** 413 ***** 691 * * * * *
135 ***** 414 ***** 692 * * * *
136 ***** 415 ***** 693 * *
137 * * * * 416 ***** 694 * * * * *
138 * * * * 417 * * * * 695 * * * * *
139 * * 418 ***** 696 * * * * *
140 * * 419 * * * * 697 * * * * *
141 ***** 420 ***** 698 * * * * *
142 * * * 421 ***** 699 * * * * *
143 ***** 422 ***** 700 * * * * *
144 ***** 423 ***** 701 * * * * *
145 * * 424 ***** 702 * * * * *
146 * * 425 ***** 703 * * * * *
147 * * 426 * * * 704 * * * *
148 * * * * 427 * * 705 * * * * *
149 * * * 428 * * * 706 * * * * *
150 * * * 429 ***** 707 * * * * *
151 * * * * 430 ***** 708 * * * * *
152 * * * * 431 ***** 709 * * * * *
153 * * * 432 ***** 710 * * * * *
154 * * 433 ***** 711 * * * * *
155 * * * * 434 * * * 712 * * * * *
156 * * * 435 * * * * 713 * * * * *
157 * * 436 * * * 714 * * * * *
- 166 037123
158 ** 437 **** 715
159 ** 438 ***** 716
160 ***** 439 **** 717
161 *** 440 ***** 718
162 *** 441 ***** 719
163 ** 442 ***** 720
164 *** 443 ***** 721
165 ** 444 *** 722
166 *** 445 ***** 723
167 ***** 446 ***** 724
168 *** 447 * * * * 725
169 ***** 448 ***** 726
170 ***** 449 ***** 727
171 ***** 450 *** 728
172 ***** 451 ***** 729
173 *** 452 ***** 730
174 ** 453 ***** 731
175 ***** 454 ***** 732
176 *** 455 **** 733
177 **** 456 **** 734
178 *** 457 ***** 735
179 *** 458 ***** 736
180 * * 459 ***** 737
181 ** 460 **** 738
182 *** 461 *** 739
183 ** 462 ***** 740
184 ** 463 ***** 741
185 ***** 4 64 * * * * 742
186 ***** 465 *** 743
- 167 037123
187 ** 466 ***** 744
188 **** 467 ***** 745
189 * * * 468 ***** 746
190 * * * 469 **** 747
191 ** 470 ***** 748
192 kk 471 ***** 749
193 ***** 472 ***** 750
194 ***** 473 ***** 751
195 ***** 474 ***** 752
196 ***** 475 *** 753
197 **** 476 ***** 754
198 ***** 477 ***** 755
199 *** 478 ***** 756
200 ** 479 ***** 757
201 ***** 480 ***** 758
202 * * * 4Q1 ***** 759
203 ** 482 ***** 760
204 ***** 4Q3 ***** 761
205 * * * 484 ***** 762
206 ** 4 Q5 ***** 763
207 ***** 486 ***** 764
208 ***** 487 **** 765
209 ***** 488 ***** 766
210 ***** 489 **** 767
211 ***** 4 go ***** 768
212 **** 491 *** 769
213 **** 492 *** 770
214 *** 493 ***** 771
215 *** 494 ***** 772
- 168 037123
216 *** 495 ***** 773
217 *** 496 ***** 774
218 * * * * 497 ***** 775
219 ***** 498 ***** 776
220 *** 499 ***** 777
221 ***** 500 * * * * 778
222 *** 501 * * * * 779
223 *** 502 ***** 780
224 *** 503 ***** 781
225 ** 504 ***** 782
226 *** 505 ***** 783
227 ** 506 ***** 784
228 ** 507 **** 785
229 *** 508 ***** 786
230 *** 509 ***** 787
231 *** 510 ***** 788
232 ** 511 ***** 789
233 *** 512 ***** 790
234 ***** 513 * * * * 791
235 *** 514 * * * * 792
236 ** 515 ***** 793
237 ** 516 ***** 794
238 *** 517 ***** 795
239 ** 518 ***** 796
240 ***** 519 ***** 797
241 **** 520 **** 798
242 ***** 521 **** 799
243 ***** 522 ***** 800
244 ***** 523 ***** 801
- 169 037123
245 * * * 524 * * * * 802 * *
246 * * 525 * * * * 803 *****
247 ***** 526 * * * 804 *****
248 * * * 527 ***** 805 * * * *
249 * * * 528 ***** 806 *****
250 ***** 529 ***** 807 *****
251 ***** 530 ***** 808 *****
252 * * * * 531 * * * * 809 *****
253 * * 532 ***** 810 *****
254 * * * * 533 ***** 811 * * *
255 * * * 534 ***** 812 *****
256 * * * 535 ***** 813 *****
257 ***** 536 ***** 814 *****
258 ***** 537 ***** 815 *****
259 ***** 538 ***** 816 *****
260 * * * * 539 ***** 817 *****
261 ***** 540 ***** 818 * * * *
262 * * * * 541 * * * * 819 *****
263 * * * 542 ***** 820 *****
264 ***** 543 ***** 821 *****
265 * * 544 ***** 822 * * * *
266 * * 545 * * * * 823 *
267 ***** 546 ***** 824 * * *
268 ***** 547 ***** 825 * * *
269 ***** 548 ***** 826 * * * *
270 ***** 549 ***** 827 *****
271 ***** 550 ***** 828 *****
272 ***** 551 * * * * 829 * * * *
273 ***** 552 * * * 830 *****
274 ***** 553 * * * * 831 * * * *
275 ***** 554 * * * * 832 * * * *
276 * * * 555 * * 833 * * * * *
277 * * 556 * * * 834 * * * * *
278 * * 557 * * 835 * * * * *
279 * * * *
Пример 3. RT-qPCR анализ сплайсинга эндогенной мРНК SMN2 в культивируемых клетках
Для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Δ7 в первичных клетках и линиях клеток, содержащих ген SMN2 и обработанных тестируемым соединением, используют метод анализа, основанный на метода количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR).
- 170 037123
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с SMA 1 типа GM03813 (Coriell Institute)
Лизирующий буфер Cells-To-Ct Life Technologies, Inc. (ранее Biosystems); кат. № 4399002 Applied
DMEM 96-луночные планшеты с плоским дном Смесь ферментов для RT-PCR Буфер для RT-PCR Набор AgPath-ID для одностадийного проведения RT-PCR Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11960-044 Becton Dickinson; кат. № 353072 Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); № изд. 4388520 (также включено в AgPath-ID Kit; кат. № 4387391) Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); № изд. 4388519 (также включен в AgPath-ID Kit; кат. № 4387391) Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); кат. № 4387391
Термоциклер Life Technologies, Inc. (ранее Biosystems); 7900HT Applied
Протокол
Клетки GM03813 от пациента с SMA (5000 клеток на лунку) высевают в 200 мкл культуральной среды (DMEM с добавлением 10% FBS) в 96-луночные планшеты с плоским дном, и сразу перемешивают планшет вращением для обеспечения правильного распределения клеток, образующих ровный монослой клеток. Клетки оставляют прикрепляться, по меньшей мере, в течение 4-6 часов. Тестируемые соединения последовательно разбавляют 100% DMSO в 3,16 раза с получением концентрационной зависимости по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляют раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в DMSO), и в каждую контрольную лунку добавляют 1 мкл DMSO. Планшет инкубируют в течение 24 часов в клеточном инкубаторе (37°C, 5% CO2, 100% относительная влажность). Затем, клетки подвергают лизису в лизирующем буфере Cells-To-Ct, и хранят лизат при -80°C.
мРНК SMN2-специфичных продуктов сплайсинга и мРНК GAPDH идентифицируют с использованием следующих праймеров и зондов, представленных в табл. 5. Прямой SMN FL праймер B (SEQ ID NO: 7) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 7 (нуклеотиды 32-54) и экзоне 8 (нуклеотиды 1-4), прямой SMN Δ7 праймер B (SEQ ID NO: 8) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 6 (нуклеотиды 87-111) и экзоне 8 (нуклеотиды 1-3), обратный SMN праймер B (SEQ ID NO. 9) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 8 (нуклеотиды 39-62), SMN зонд B (SEQ ID NO: 10) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 8 (нуклеотиды 7-36). Указанные праймеры и зонды гибридизуются до нуклеотидных последовательностей, общих для мРНК SMN1 и мРНК SMN2 человека. Поскольку клетки от пациента с SMA, использованные в примере 3, содержат только ген SMN2, методом RT-qPCR можно количественно оценить только полноразмерную мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Δ7.
- 171 037123
Таблица 5
Праймер/зонд Последовательность Источник
Прямой SMN FL праймер В SEQ ID NO.7: GCТСАСАТТGCТTAAATTAAGGAGAAA PTC1
Прямой SMN2 Δ7 праймер В SEQ ID NO.8: T GGC TAT CATAC T GGC TAT TATAT GGAA PTC1
Обратный SMN праймер В SEQ ID NO.9: TCCAGATCTGTCTGATCGTTTCTT PTC1
Прямой SMN зонд В SEQ ID NO.10: 6FAM- C T GGCATAGAGCAGCAC TAAAT GACACCAC-TAMRA PTC1
Прямой hGAPDH зонд SEQ ID NO.4: VIC- CGCCTGGTCACCAGGGCTGCT-TAMRA LTI2
Прямой hGAPDH праймер SEQ ID NO.5: CAACGGATTTGGTCGTATTGG LTI2
Обратный hGAPDH праймер SEQ ID NO.6: T GAT GGCAACAATAT С CAC T T ТАС C LTI2
1Праймеры и зонд разработаны PTC Therapeutics, Inc.; коммерчески доступны от Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen).
Прямые и обратные SMN праймеры используют в конечных концентрациях 0,4 мкМ. SMN зонд используют в конечной концентрации 0,15 мкМ. GAPDH праймеры используют в конечных концентрациях 0,1 мкМ, и зонд - в концентрации 0,075 мкМ.
Смесь SMN-GAPDH (общий объем 10 мкл) приготавливают путем смешивания 5 мкл 2х буфера RT-PCR, 0,4 мкл 25 х смеси ферментов для RT-PCR, 0,25 мкл 20х смеси GAPDH праймер-зонд, 1,755 мкл воды, 2,5 мкл лизата клеток, 0,04 мкл 100 мкМ прямого SMN FL или SMN Δ7 праймера, 0,04 мкл 100 мкМ обратного SMN праймера и 0,015 мкл 100 мкМ зонда.
ПЦР проводят при следующих температурах в указанное время:
Стадия 1: 48°C (15 мин);
Стадия 2: 95°C (10 мин);
Стадия 3: 95°C (15 с);
Стадия 4: 60°C (1 мин); затем повторение стадий 3 и 4 всего в течение 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержит праймеры/зонд либо SMN2 FL и GAPDH, либо SMN2 Δ7 и GAPDH (мультиплекс-дизайн), что позволяет одновременно измерять уровни двух транскриптов.
Эндогенный ген SMN2 дает начало двум альтернативно сплайсированным мРНК. Полноразмерную мРНК SMN2, которая содержит экзон 7, в настоящем документе называют термином мРНК SMN2 FL. Усеченную мРНК без экзона 7 в настоящем документе называют термином мРНК SMN2 Δ7.
Увеличение мРНК SMN2 FL и уменьшение мРНК SMN2 Δ7 относительно таковой в клетках, обработанных контролем с растворителем, определяют исходя из данных ПЦР в режиме реального времени с использованием модифицированного метода ΔΔCt (описанного в Livak and Schmittgen, Methods, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (E) рассчитывают из наклона кривой амплификации, индивидуально для мРНК SMN2 FL, мРНК SMN2 Δ7 и мРНК GAPDH. Копийности для мРНК SMN2 FL, мРНК SMN2 Δ7 и мРНК GAPDH рассчитывают как (1 + E)-Ct, где Ct представляет собой пороговое значение для каждого ампликона. Копийности мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7 нормируют к копийности мРНК GAPDH. Затем, нормированные копийности для мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7 в обработанных тестируемым соединением образцах делят на нормированные копийности мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7, соответственно, в клетках, обработанных растворителем, для определения уровня мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7 относительно контроля с растворителем.
Результаты
Как видно на фиг. 4, клетки, обработанные возрастающими концентрациями соединения 6 (фиг. 4a) и соединения 170 (фиг. 4b), содержат неуклонно больше мРНК SMN2 FL и меньше мРНК SMN2 Δ7, чем обработанные растворителем клетки, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга SMN2.
Пример 4. Анализ сплайсинга эндогенной мРНК SMN2 в культивируемых клетках методом полуколичественной RT-PCR по конечной точке
Для визуализации и количественной оценки уровней полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 в первичных клетках и линиях клеток, содержащих ген SMN2 и обработанных тестируемым соединением, используют анализ сплайсинга методом ПЦР с обратной транскрипцией по конечной точке.
- 172 037123
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с SMA 1 типа GM03813 (Coriell Institute)
Лизирующий буфер Cells-ToCt Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); кат. № 4399002
DMEM Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11960-044
96-луночные планшеты с плоским дном Becton Dickinson; кат. № 353072
ДНК-полимеразная суперсмесь Platinum Tag HiFi Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11304-016
Набор iScript с обратной транскриптазой BioRad; кат. № 170-8890
Гели с 2% агарозы Е и бромидом этидия, 4 8луночный Double Comb Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № G8008-02
Система гель- документирования Система визуализации UVP Gel Doc It 310
Протокол
Клетки GM03813 от пациентов с SMA (5000 клеток на лунку) высевают в 200 мкл культуральной среды (DMEM с добавлением 10% FBS) в 96-луночные планшеты с плоским дном, и сразу перемешивают планшет вращением для обеспечения правильного распределения клеток, образующих ровный монослой клеток. Клетки оставляют прикрепляться по меньшей мере в течение 4-6 ч. Тестируемые соединения последовательно разбавляют 100% DMSO в 3,16 раза с получением концентрационной зависимости по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляют раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в DMSO), и в каждую контрольную лунку добавляют 1 мкл DMSO. Планшет инкубируют в течение 24 ч в клеточном инкубаторе (37°C, 5% CO2, 100% относительная влажность). Затем клетки подвергают лизису в лизирующем буфере Cells-To-Ct, и хранят лизат при -80°C.
мРНК SMN FL и мРНК SMN Δ7 идентифицируют с использованием следующих праймеров, представленных в табл. 6. Указанные праймеры гибридизуются до нуклеотидных последовательностей в экзоне 6 (прямой SMN праймер C, SEQ ID NO: 11) (нуклеотиды 43-63) и экзоне 8 (обратный SMN праймер C, SEQ ID NO: 12) (нуклеотиды 51-73), общих для мРНК SMN1 и мРНК SMN2 человека. Поскольку клетки от пациента с SMA, использованные в примере 4, содержат только ген SMN2, методом RT-PCR можно визуализировать и количественно оценить только полноразмерную мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Δ7.
Таблица 6
Праймер Последовательность Источник
Прямой SMN праймер С SEQ ID NO.11: GATGCTGATGCTTTGGGAAGT PTC1
Обратный SMN праймер С SEQ ID NO.12: CGCTTCACATTCCAGATCTGTC PTC1
1Праймеры разработаны PTC Therapeutics, Inc.
Для синтеза кДНК, 5 мкл лизата, 4 мкл 5х реакционной смеси iScript, 1 мкл обратной транскриптазы и 10 мкл воды объединяют и инкубируют в течение 5 мин при 25°C, затем в течение 30 мин при 42°C, а затем в течение 5 мин при 85°C. Раствор кДНК хранят при -20°C.
Для проведения ПЦР по конечной точке 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной супер-смеси объединяют в 96-луночном наполовину окаймленном планшете для ПЦР. ПЦР проводят при следующих температурах в указанное время: Стадия 1: 94°C (2 мин), Стадия 2: 94°C (30 с), Стадия 3: 55°C (30 с), Стадия 4: 68°C (1 мин), затем повтор стадий 2-4 всего в течение 33 циклов, затем поддержание 4°C.
В течение 14 мин 10 мкл каждого ПЦР образца электрофоретически разделяют на геле с 2% агарозы E, окрашивают красителями двуцепочечной ДНК (dsDNA) (например, бромид этидия) и визуализируют с использованием системы гель-документации.
Результаты
Как видно на фиг. 5, клетки, обработанные возрастающими концентрациями соединения 6 (фиг. 5a)
- 173 037123 или соединения 170 (фиг. 5b), содержат неуклонно больше мРНК SMN2 FL и меньше мРНК SMN2 Δ7, чем обработанные растворителем клетки, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга
SMN2.
Пример 5. RT-qPCR анализ сплайсинга мРНК SMN2 в тканях животного
Для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 в тканях мышей, обработанных тестируемым соединением, используют метод анализа, основанный на методе количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR).
Материалы
Материал Ткани мышей с С/Саллелью SMA Ткани мышей SMA Δ7 Смесь ферментов для RT-PCR Буфер для RT-PCR Набор AgPath-ID для одностадийного проведения RT-PCR Мышиные GAPDH праймеры и зонды Лизирующий реагент QIAzol Мини-набор для жировой ткани RNeasy Источник The Jackson Laboratory, линия № 008714 (Вб . 129-ЗтпУт5+тп1/ЗМЬЕ+МгРь/J) The Jackson Laboratory, линия № 005025 (FVB.Cg-Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg (SMN2) 8 9Ahmb SmnltmlMsd/J) Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems) № изд. 4388520 (также включена в AgPath-ID Kit; кат. № 4387391) Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems) № изд. 4388519 (также включен в AgPath-ID Kit; кат. № 4387391) Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); кат. № 4387391 Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); кат. № 4352339E Qiagen; кат. № 79306 Qiagen; кат. № 74804
5 мм сфера из нержавеющей стали Qiagen; кат. № 69989
TissueLyzer II Qiagen; кат. № 85300
Термоциклер Life Technologies, Inc. (ранее Biosystems); 7900HT Applied
Протокол
Мышам с C/C-аллелью SMA дважды в сутки (BID) в течение 10 суток принудительно перорально вводят тестируемые соединения, ресуспендированные в 0,5% НРМС и 0,1% Tween-80. Образцы тканей собирают и быстро замораживают для очистки РНК.
Образцы тканей (20-40 мг) гомогенизируют в лизирующем реагенте QIAzol в течение 2 мин при 20 Гц в TissueLyser II с использованием одной сферы из нержавеющей стали. После добавления хлороформа гомогенат разделяют на водную и органическую фазы посредством центрифугирования. Экстрагируют РНК, которая распределялась в находящуюся сверху водную фазу, и добавляют этанол для создания соответствующих условий связывания. Затем, образец наносят на центрифужную колонку RNeasy из мини-набора RNeasy, где тотальная РНК связывается с мембраной. РНК элюируют в свободную от РНКазы воду, затем хранят при -20°C, и впоследствии анализируют с использованием TaqMan RT-qPCR на термоциклере 7900HT. Тотальную РНК разбавляют в 10 раз и 2,5 мкл разбавленного образца добавляют к смеси TaqMan RT-qPCR.
Продукты сплайсинга SMN2 идентифицируют с использованием следующих праймеров и зонда, представленных в табл. 7. Прямой SMN FL праймер B (SEQ ID NO: 7) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзонах 7 и 8, прямой SMN Δ7 праймер B (SEQ ID NO: 8) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзонах 6 и 8, обратный SMN праймер B (SEQ ID NO: 9) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 8, SMN зонд B (SEQ ID NO: 10) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 8. Указанные праймеры и зонд гибридизуются до нуклеотидных
- 174 037123 последовательностей, общих для мРНК SMN1 и мРНК SMN2 человека. Поскольку клетки от пациента с
SMA, использованные в примере 5, содержат только ген SMN2, методом RT-qPCR можно количественно оценить только полноразмерную мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Δ7.
Таблица 7
Праймер/зонд Последовательность Источник
Прямой SMN FL праймер В SEQ ID NO.7: GCTCACATTCCTTAAATTAAGGAGAAA PTC1
Прямой SMN Δ7 праймер В SEQ ID NO.8: T GGC TAT CATAC T GGC TAT TATAT GGAA PTC1
Обратный SMN праймер В SEQ ID NO.9: TCCAGATCTGTCTGATCGTTTCTT PTC1
Прямой SMN зонд В SEQ ID NO.10: 6FAM- C T GGCATAGAGCAGCAC TAAATGACACCAC-TAMRA PTC1
1Праймеры и зонд разработаны PTC Therapeutics, Inc.
Прямые и обратные SMN праймеры используют в конечных концентрациях 0,4 мкМ. SMN зонд используют в конечной концентрации 0,15 мкМ. Смесь SMN-GAPDH (общий объем 10 мкл) получают путем объединения 5 мкл 2х буфера для RT-PCR, 0,4 мкл 25х смеси ферментов для RT-PCR, 0,5 мкл 20х смеси GAPDH праймер-зонд, 1,505 мкл воды, 2,5 мкл раствора РНК, 0,04 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,04 мкл 100 мкМ обратного праймера и 0,015 мкл 100 мкМ SMN зонда.
Каждый цикл ПЦР проводят при следующих температурах в указанное время: Стадия 1: 48°C (15 мин); Стадия 2: 95°C (10 мин); Стадия 3: 95°C (15 с); Стадия 4: 60°C (1 мин); затем повторение стадий 3 и 4, всего в течение 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержит праймеры-зонд либо SMN2 FL и mGAPDH, либо SMN2 Δ7 и mGAPDH (мультиплекс-дизайн), что позволяет одновременно измерять уровни двух транскриптов.
Увеличение мРНК SMN2 FL и уменьшение мРНК SMN2 Δ7 относительно таковой в клетках животных, обработанных контролем с растворителем, определяют исходя из данных ПЦР в режиме реального времени с использованием модифицированного метода ΔΔCt (описанного в Livak and Schmittgen, Methods, 2001, 25: 402-8). Эффективность амплификации (E) рассчитывают из наклона кривой амплификации, индивидуально для мРНК SMN2 FL, мРНК SMN2 Δ7 и мРНК GAPDH. Копийности для мРНК SMN2 FL, мРНК SMN2 Δ7 и мРНК GAPDH затем рассчитывают как (1 + E)-Ct, где Ct представляет собой пороговое значение для каждого ампликона. Копийности мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7 нормируют к копийности мРНК GAPDH. Затем, нормированные копийности для мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7 в образцах, обработанных тестируемым соединением, делят на нормированные копийности мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7, соответственно, в клетках, обработанных растворителем, для определения уровня мРНК SMN2 FL и мРНК SMN2 Δ7 относительно контроля с растворителем.
Результаты
Как видно на фиг. 6, ткани животных, обработанных соединением 6 (фиг. 6a) и соединением 170 (фиг. 6b), содержат существенно больше мРНК SMN2 FL и меньше мРНК SMN2 Δ7 по сравнению с животными, обработанными растворителем, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга SMN2.
Пример 6. Анализ сплайсинга эндогенной мРНК SMN2 в тканях животных методом полуколичественной RT-PCR по конечной точке
Для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК и мРНК SMN2 Δ7 в тканях мышей, обработанных тестируемым соединением, используют анализ сплайсинга методом ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR) по конечной точке.
Материалы
Материал Источник
Ткани мышей с С/Саллелью SMA The Jackson Laboratory, линия № 008714 (Вб . 12 9-Srnnltm5 (Smnl/SMN2)Mrph/ J)
Ткани мышей SMA Δ7 The Jackson Laboratory, линия № 005025 (FVB.Cg- Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg (SMN2) 8 9Ahmb SrnnltmlMsd/J)
- 175 037123
Набор для жировой ткани Qiagen RNeasy Qiagen; кат. № 74804
ДНК-полимеразная суперсмесь Platinum Tag HiFi Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11304-016
Набор для RT iScript BioRad; кат. № 170-8890
96-луночный наполовину окаймленный планшет для ПЦР Twin.tec Eppendorf; кат. № 951020389
Гели с 2% агарозы Е и бромидом этидия, 4 8луночный Double Comb Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № G8008-02
Система гель- документирования Система визуализации UVP Gel Doc It 310
Протокол
Мышам с C/C-аллелью SMA в течение 10 суток BID принудительно перорально вводят тестируемые соединения, ресуспендированные в 0,5% НРМС и 0,1% Tween-80. Образцы тканей собирают и быстро замораживают для очистки РНК.
Образцы тканей (20-40 мг) гомогенизируют в лизирующем реагенте QIAzol в течение 2 мин при 20 Гц в TissueLyser II с использованием одной сферы из нержавеющей стали. После добавления хлороформа гомогенат разделяют на водную и органическую фазы посредством центрифугирования. Экстрагируют РНК, которая распределялась в находящуюся сверху водную фазу, и добавляют этанол для создания соответствующих условий связывания. Затем, образец наносят на центрифужную колонку RNeasy из мини-набора RNeasy, где тотальная РНК связывается с мембраной. РНК элюируют в свободную от РНКазы воду, а затем хранят при -20°C.
Продукты сплайсинга SMN2 идентифицируют с использованием следующих амплификационных праймеров, представленных в табл. 8. Указанные праймеры гибридизуются до нуклеотидной последовательности в экзоне 6 (прямой SMN праймер D, SEQ ID NO: 13) (нуклеотиды 22-46) и экзоне 8 (обратный SMN праймер C, SEQ ID NO: 12), общие для мРНК SMN1 и мРНК SMN2.
Таблица 8
Праймер Последовательность Источник
Прямой SMN праймер D SEQ ID NO.13: ATATGTCCAGATTCTCTTGATGATG PTC1
Обратный SMN праймер С SEQ ID NO.12: CGCTTCACATTCCAGATCTGTC PTC1
1 Праймеры разработаны PTC Therapeutics, Inc.
Для синтеза кДНК, 1 мкл раствора РНК (25-50 нг), 4 мкл 5х реакционной смеси iScript, 1 мкл обратной транскриптазы и 10 мкл воды объединяют и инкубируют при 25°C в течение 5 мин, затем при 42°C в течение 30 мин, а затем при 85°C в течение 5 мин. Раствор кДНК хранят при -20°C.
Для проведения ПЦР по конечной точке 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной супер-смеси объединяют в 96-луночном наполовину окаймленном планшете для ПЦР. ПЦР проводят при следующих температурах в указанное время: Стадия 1: 94°C (2 мин), Стадия 2: 94°C (30 с), Стадия 3: 55°C (30 с), Стадия 4: 68°C (1 мин), затем повторение стадий 2-4 всего в течение 33 циклов, затем поддержание при 4°C.
В течение 14 мин 10 мкл каждого ПЦР образца электрофоретически разделяют на геле с 2% агарозы E, окрашивают красителями dsDNA (например, бромид этидия) и визуализируют с использованием системы гель-документирования.
Результаты
Как видно на фиг. 7, ткани мышей, обработанных увеличивающимися концентрациями соединения 6 (фиг. 7a) и соединения 170 (фиг. 7b), содержат неуклонно больше мРНК SMN2 FL и меньше мРНК SMN2 Δ7, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга SMN2.
Пример 7. Анализ белка Smn в культивируемых клетках
Для количественной оценки уровня белка Smn в фибробластах пациента с SMA, обработанных тестируемыми соединениями, используют анализ SMN методом HTRF (гомогенная флуоресценция с временным разрешением). Результаты анализа представлены в табл. 9.
- 176 037123
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с SMA 1 типа GM03813 (Coriell Institute)
Коктейль из ингибиторов протеаз Roche Applied Science; кат. № 11836145001
анти-SMN d2 Blue cap Cisbio; кат. № 63IDC002-SMN
анти-SMN криптат Red cap Cisbio; кат. № 63IDC002-SMN
Восстанавливающий буфер SMN Cisbio; кат. № 63IDC002-SMN-Buffer
DMEM Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11960-044
Лизирующий буфер RIPA 20 мМ Tris-HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1% NP-40, 1% дезоксихолат натрия
Буфер-разбавитель 20 мМ Tris-HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl
Планшетный ридер Envision Perkin Elmer; модель № 2103
Протокол
Клетки размораживают и культивируют в DMEM-10% FBS в течение 72 ч. Клетки обрабатывают трипсином, подсчитывают и ресуспендируют в DMEM-10% FBS до концентрации 2 5000 клеток/мл. Суспензию клеток помещают в 96-луночный планшет в количестве 5000 клеток на лунку и инкубируют в течение 3-5 ч. С целью получения контрольного сигнала в три (3) лунки в 96-луночном планшете клетки не добавляют, а потому они служат в качестве холостой пробы. Тестируемые соединения последовательно разбавляют 100% DMSO в 3,16 раза с получением концентрационной зависимости по 7 точкам кривой. В содержащие клетки лунки переносят 1 мкл раствора тестируемого соединения, и инкубируют клетки в течение 48 ч в клеточном инкубаторе (37°C, 5% CO2, 100% относительная влажность). Для каждой концентрации тестируемого соединения приготавливают три повторных образца.
Спустя 48 ч, надосадочную жидкость удаляют из лунок, к клеткам добавляют 25 мкл лизирующего буфера RIPA, содержащего ингибиторы протеаз, и инкубируют со встряхиванием при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляют 25 мкл разбавителя, затем в 384-луночный планшет переносят 35 мкл полученного лизата, где в каждой лунке содержится 5 мкл раствора антитела (анти-SMN d2 и анти-SMN криптат в разбавлении 1/100 восстанавливающим буфером SMN). Планшет центрифугируют в течение 1 мин с получением на дне лунок раствора, который инкубируют в течение ночи при комнатной температуре. Флуоресценцию при 665 нм и 620 нм измеряют в каждой лунке планшета на планшетном ридере Envision (Perkin-Elmer).
Для каждой лунки с образцом, холостым контролем и контролем с растворителем рассчитывают нормированный сигнал флуоресценции путем деления значения сигнала при 665 нм на значение сигнала при 620 нм. Нормирование сигнала учитывает возможное тушение флуоресценции вследствие эффекта матрикса на лизат. Значение AF (величина процентного содержания белка Smn) для каждой лунки с образцом рассчитывают путем вычитания нормированной средней флуоресценции в лунках с холостым контролем из нормированной флуоресценции для каждой лунки с образцом, с последующим делением разницы на нормированную среднюю флуоресценцию в лунках с холостым контролем и умножением полученного значения на 100. Значение AF для каждого образца представляет собой содержание белка Smn в образцах, обработанных тестируемым соединением. Для расчета кратности увеличения содержания белка Smn относительно контроля с растворителем значение AF для каждого образца делят на значение AF для лунок контроля с растворителем.
Результаты
Как видно на фиг. 8, фибробласты пациента с SMA 1 типа, обработанные соединением 6 (фиг. 8a) и соединением 170 (фиг. 8b), демонстрируют дозозависимое усиление экспрессии белка Smn, измеренной методом HTRF анализа SMN.
Для соединений формулы (I) или их формы, раскрытых в настоящем документе, в табл. 9 представлены значения EC1.5x экспрессии белка Smn, которые рассчитаны исходя из данных концентрационной зависимости по 7 точкам кривой, полученной для каждого тестируемого соединения в соответствии с методикой, описанной в биологическом примере 7. Термин ECL5x экспрессии белка Smn определен как концентрация тестируемого соединения, которая эффективно увеличивает продукцию белка Smn в фибробластах пациента с SMA до количества, в 1,5 раза большего по сравнению с таковым для клеток, обработанных растворителем (DMSO). Значение EC1.5x экспрессии белка Smn между >3 мкМ и <10 мкМ обозначают одной звездочкой (*), значение EC1.5x между >1 мкМ и <3 мкМ обозначают двумя звездочками (**), значение EC1.5x между >0,3 мкМ и <1 мкМ обозначают тремя звездочками (***) и значение EC1.5x <0,3 мкМ обозначают четырьмя звездочками (****).
- 177 037123
Соед. ECA.sx Таблица 9 Соед. ECi.sx Соед. ECA.sx
3 ** 380 *** 626 * *
6 *** 381 * 627 * *
8 * * 382 *** 628 *
18 ** 384 **** 629 ****
20 ** 385 *** 630 * * * *
22 ** 393 *** 631 ***
24 * 396 *** 632 ****
30 ** 397 **** 633 * * * *
43 * * 398 ** 634 * * * *
61 *** 399 *** 635 * * * *
62 *** 400 *** 636 * * * *
66 * 401 *** 637 * * * *
67 *** 402 ** 638 * * * *
69 *** 403 ** 639 ****
71 * 404 ** 640 ****
72 * * * 405 *** 641 * * * *
- 178 037123
74 *** 406 * 642
75 * * * * 409 * * * * 643
79 *** 410 **** 644
82 ** 412 * * * * 645
84 ** 413 * * * * 646
85 * 414 *** 647
86 * * * * 416 ** 648
87 *** 417 ** 649
90 * 420 **** 650
95 ** 422 ** 651
96 *** 423 *** 652
99 *** 424 **** 653
100 *** 425 **** 654
102 *** 426 * * * 655
105 *** 427 * 656
106 ** 428 ** 657
109 **** 429 * * * * 658
115 **** 430 **** 659
116 * 431 * * * * 660
117 * * * * 432 * * * * 661
118 *** 437 * * * 662
119 *** 438 * * * * 663
120 * * * * 439 ** 664
121 * * * * 440 * * * * 665
127 * 441 **** 666
129 * 442 **** 667
130 * 443 **** 668
131 ** 444 ** 669
132 **** 445 * * * 670
- 179 037123
133 **** 446 ** 671
134 **** 448 **** 672
135 **** 449 **** 673
136 **** 451 *** 674
137 * * * 452 **** 675
138 * * * 453 **** 676
141 **** 454 **** 677
143 **** 457 **** 678
144 **** 458 *** 679
148 ** 460 *** 680
150 ** 461 ** 681
152 **** 462 **** 682
160 * * * 463 *** 683
161 ** 464 ** 684
162 ** 466 *** 685
164 ** 467 **** 686
167 ** 468 *** 687
169 **** 469 *** 688
170 **** 470 **** 689
171 **** 471 **** 690
172 **** 472 **** 691
175 * * * 473 **** 692
176 * 474 **** 693
179 *** 475 ** 694
180 ** 476 **** 695
182 *** 477 **** 696
186 *** 478 **** 697
188 480 **** 698
189 * * * 481 **** 699
- 180 037123
190 * * 482 * 700 * * * *
191 * * 484 * * * * 701 * * * *
192 * * 485 * * * * 702 * * * *
193 * * * * 486 * * * * 703 * * * *
194 * * * * 487 * * * * 704 * * * *
195 * * * 488 * * * * 705 * * * *
196 * * * * 489 * * 706 * * * *
197 * * * * 490 * * * 707 * * * *
198 * * * * 491 * * 708 * * * *
199 * * 4 92 * * 709 * * * *
201 * * * 493 * * * 710 * * * *
204 * * * * 494 * * * * 711 * * * *
208 * * * 495 * * * * 712 * * * *
209 * * * * 496 * * * * 713 * * * *
210 * * * * 497 * * * 714 * * * *
211 * * * * 498 * * * * 715 * * * *
212 * * * * 499 * * * * 716 * * *
213 * * * * 500 * * * 717 * * *
214 * * 501 * * * 718 * * *
218 * * 502 * * * * 719 * * * *
219 * * * * 503 * * * * 720 * * * *
221 * * * * 504 * * * * 721 * * * *
224 * * * 505 * * * * 722 * * * *
229 * 506 * * * * 723 * * * *
230 * * 507 * * * 724 * * *
231 * * 508 * * * 725 * * *
234 * * * * 509 * * * 726 * *
235 * * 510 * * * * 727 * * * *
236 * 511 * * 728 * * * *
- 181 037123
240 * * * * 512 * * * * 729 * * *
241 * * * * 513 * * * * 730 * * * *
242 * * * * 514 * * 731 * * * *
243 * * * * 515 * * * * 732 * * *
244 * * * * 516 * * * * 733 * * * *
247 * * * * 517 * * * * 734 * * * *
248 * * * 518 * * * * 735 * * * *
250 * * * * 519 * * * * 736 * * * *
251 * * * * 520 * * * * 737 * * * *
252 * * * 521 * * * * 738 * * * *
254 * * 522 * * * 739 * * * *
256 * * 523 * * * * 740 * * *
257 * * 524 * * * 741 * * * *
258 * * * 525 * * * 742 * * *
259 * * * 526 * * 743 * * * *
260 * * 527 * * * * 744 * * *
261 * * * * 528 * * * * 745 * * * *
262 * * * 529 * * * 746 * * * *
263 * * * 530 * * * * 747 * * * *
264 * * * * 531 * * * 748 * * * *
267 * * * * 532 * * * * 749 * * * *
268 * * * * 533 * * * 750 * * * *
269 * * * * 534 * * * * 751 * * * *
270 * * * * 535 * * * 752 * * * *
271 * * * * 536 * * * * 753 * * * *
272 * * * * 537 * * * * 754 * * * *
273 * * * * 538 * * * 755 * * * *
274 * * * * 539 * * * * 756 * * * *
275 * * * * 541 * * * 757 * * *
- 182 037123
283 **** 542 *** 759
284 *** 543 * * * * 760
285 **** 544 *** 761
286 *** 545 **** 762
287 **** 54 6 * * * * 763
288 **** 547 **** 764
289 **** 548 **** 765
290 **** 549 **** 766
291 **** 550 * * * * 767
292 **** 551 * * * * 768
293 **** 552 *** 769
294 * 553 **** 770
295 **** 554 **** 771
296 **** 555 * * 772
297 **** 556 ** 773
299 **** 561 **** 774
300 **** 563 **** 777
302 **** 565 *** 778
303 **** 566 **** 779
304 **** 567 *** 780
305 **** 568 **** 781
306 **** 569 **** 782
307 **** 570 ** 783
308 **** 571 ** 784
309 **** 572 ** 785
310 *** 573 ** 786
312 **** 576 **** 787
314 *** 577 * * * * 788
316 ** 578 **** 789
- 183 037123
317 ** 579 *** 790
318 **** 580 *** 791
319 **** 581 *** 792
320 ** 582 **** 793
322 *** 583 **** 794
323 ** 584 **** 795
326 ** 585 **** 796
327 **** 586 **** 797
329 ** 587 **** 798
331 **** 588 **** 799
333 ** 589 *** 800
334 **** 590 ** 801
335 **** 591 ** 802
336 **** 592 *** 803
337 **** 593 **** 804
338 **** 594 *** 805
339 **** 595 * * * * 806
340 **** 596 **** 807
341 *** 597 *** 808
342 **** 598 *** 809
343 **** 599 **** 810
344 *** 600 ** 811
346 **** 601 *** 812
349 ** 602 **** 813
350 **** 603 *** 814
351 **** 604 **** 815
352 **** 605 *** 816
354 *** 606 ** 817
355 *** 607 **** 818
- 184 037123
356 *** 608 ** 819
357 *** 609 **** 820
358 ** 610 **** 821
359 ** 612 **** 822
366 **** 613 **** 824
367 * 614 **** 825
368 *** 615 **** 826
369 ** 616 **** 827
370 *** 617 **** 828
371 *** 618 **** 829
372 **** 619 *** 830
373 **** 620 ** 831
374 **** 621 **** 832
375 * * * * 622 ** 833
376 *** 623 **** 834
377 ** 624 **** 835
378
Для соединений формулы (I) или их формы, раскрытых в настоящем документе, в табл. 10 представлены значения максимальной кратности (Кратность) увеличения количества белка Smn, которые были получены исходя из данных концентрационной зависимости по 7 точкам кривой, полученной для каждого тестируемого соединения в соответствии с методикой, описанной в биологическом примере 7. Максимальную кратность увеличения <1,2 обозначают одной звездочкой (*), кратность увеличения между >1,2 и <1,35 обозначают двумя звездочками (**), кратность увеличения между >1,35 и <1,5 обозначают тремя звездочками (***), кратность увеличения между >1,5 и <1,65 обозначают четырьмя звездочками (****), и кратность увеличения >1,65 обозначают пятью звездочками (*****).
- 185 037123
Таблица 10
Соед. Кратность Соед. Кратность Соед. Кратность
1 * * 280 * 558 * *
2 * * 281 * * 559 *
3 * * * 282 * * 560 *
4 * 283 * * * * 561 * * * *
5 * 284 * * * * 562 * *
6 * * * * 285 * * * * * 563 * * * * *
7 * * * 286 * * * * 564 *
8 * * * * 287 ***** 565 * * * *
9 * * * 288 ***** 566 *****
10 * * 289 * * * * 567 * * * *
11 * * * 290 ***** 568 *****
12 * * * 291 * * * * * 569 * * * * *
13 * * 292 * * * * 570 * * * *
14 * * * 293 ***** 571 * * * *
15 * * * 294 * * * 572 * * * *
16 * 295 * * * * 573 * * * *
17 * 296 ***** 574 * *
18 * * * * 297 ***** 575 * * *
19 * * 298 * * * 576 *****
20 * * * * 299 ***** 577 *****
21 * 300 ***** 578 *****
22 * * * 301 * 579 * * * * *
23 * * * 302 ***** 580 *****
24 * * * 303 * * * * 581 *****
25 * 304 ***** 582 *****
26 * * 305 * * * * * 583 * * * * *
27 * 306 ***** 584 *****
- 186 037123
28 ** , 307 **** 585 *****
29 ** * 308 ***** 586 *****
30 *** г* 309 **** 587 ****
31 * 310 *** 588 *****
32 * 311 ** 589 ****
33 * 312 **** 590 ****
34 ** ' 313 * 591 * * * *
35 * 314 **** 592 *****
36 * 315 *** 593 *****
37 * 316 ***** 594 ****
38 * 317 **** 595 * * * *
39 * 318 ***** 596 * * * *
40 * 319 **** 597 * * * *
41 ** * 320 **** 598 *****
42 * 321 *** 599 *****
43 ** * 322 **** 600 ****
44 * 323 *** 601 ****
45 ** ' 324 *** 602 ****
46 ** * 325 *** 603 *****
47 ** * 326 *** 604 *****
48 * 327 **** 605 *****
49 * 328 *** 606 ****
50 ** , 329 **** 607 *****
51 ** 330 ** 608 ****
52 * 331 ***** 609 *****
53 * 332 * 610 *****
54 * ЗЭЭ **** 611 ***
55 * 334 ***** 612 *****
* 335 ***** 613
- 187 037123
57 * 336 *** ** 614 *****
58 * 337 ***' у * 615 ****
59 * 338 ***' ** 616 *****
60 * 339 ***' ** 617 *****
61 340 *** ** 618 *****
62 *** ** 341 *** ** 619 *****
63 ** ' 342 *** ** 620 ***
64 ** ' 343 *** ** 621 *****
65 ** ' 344 *** * 622 * * * *
66 ** * 345 **· * 623 *****
67 ** * 346 *** * 624 *****
68 ** f 347 **· * 625 **
69 348 ** 626 *****
70 * 349 **· * 627 ****
71 b* 350 *** ** 628 ****
72 ** * 351 *** ** 629 *****
73 ** f 352 *** * 630 *****
74 *** ** 353 ** 6Э1 *****
75 *** ** 354 *** * 6Э2 *****
76 ** b 355 *** * 6ЭЭ *****
77 ** f 356 *** * 6Э4 *****
78 * 357 *** * 6Э5 *****
79 *** b* 358 ** * 6Э6 *****
80 * 359 **· * 6Э7 *****
81 ** f 360 * 638 *****
82 *** ** 361 **· * 6Э9 *****
83 * 362 ** * 640 ****
84 *** ** 363 ** 64! *****
*** 364 * 642
- 188 037123
86 * * * * 365 * * * 643 *****
87 * * * * 366 * * * * 644 *****
88 * * 367 * * * 645 *****
89 * * * 368 * * * * 646 *****
90 * * * 369 * * * 647 *****
91 * * 370 ***** 648 *****
92 * * 371 * * * * 649 *****
93 * * 372 ***** 650 *****
94 * * * 373 * * * * 651 *****
95 * * * * 374 ***** 652 *****
96 * * * * 375 * * * * 653 *****
97 * * 376 * * * 654 *****
98 * * * 377 * * * * 655 * * * *
99 * * * * 378 * * * * 656 * * * *
100 ***** 379 * * * 657 *****
101 * * * 380 * * * * 658 *****
102 ***** 381 * * * 659 *****
103 * * * 382 * * * * 660 * * * *
104 * * * 383 * * 661 *****
105 * * * * 384 ***** 662 *****
106 * * * * 385 ***** 663 *****
107 * * 386 * 664 *****
108 * * * 387 * * 665 *****
109 * * * * 388 * * * 666 *****
110 * * * 389 * * 667 *****
111 * * * 390 * 668 *****
112 * * * 391 * 669 *****
113 * * * 392 * * * 670 *****
114 *** 393 *** 671
- 189 037123
115 * * * * 394 ** 672 *****
116 **· * 395 ** 673 ****
117 *** * 396 *** * 674 *****
118 ***' ** 397 ***' ** 675 *****
119 ***' ** 398 ***' ** 676 *****
120 ***' ** 399 *** * 677 *****
121 ***' ** 400 *** * 678 *****
122 **· * 401 ***' ** 679 *****
123 * 402 *** * 680 *****
124 ** 403 *** * 681 *****
125 **· * 404 *** * 682 *****
126 ** 405 *** * 683 *****
127 **· * 406 **· * 684 *****
128 **· * 407 **· * 685 ****
129 **· * 408 ** 686 *****
130 **· * 409 ***' ** 687 ****
131 **· * 410 ***' ** 688 ***
132 *** ** 411 **· * 689 ****
133 *** * 412 ***' ** 690 ****
134 *** ** 413 *** * 691 *****
135 *** * 414 ***' ** 692 *****
136 *** ** 415 **· * 693 ****
137 *** ** 416 **· * 694 *****
138 ***' ** 417 *** * 695 *****
139 **· * 418 **· * 696 *****
140 **· * 419 ** 697 *****
141 *** ** 420 *** * 698 *****
142 **· * 421 **· * 699 *****
143 ***** 422 *** 700
- 190 037123
144 *** * 423 *** * 701 *****
145 * 424 *** ** 702 *****
146 * 425 *** ** 703 *****
147 * 426 ***' * 704 * * * *
148 * 427 **- k 705 *****
149 ** 428 k 706 *****
150 *** * 429 *** * 707 *****
151 * 430 *** * 708 *****
152 ***' ** 431 ***- ** 709 *****
153 ** 432 ***- ** 710 *****
154 * 433 k 711 *****
155 ** 434 ** 712 *****
156 * 435 к 713 *****
157 ** 436 ** 714 *****
158 * 437 *** * 715 *****
159 * 438 ***' k* 716 *****
160 **· * 439 **- k 717 *****
161 **· * 440 *** * 718 ****
162 *** * 441 ***- ** 719 ****
163 **· * 442 *** ** 720 *****
164 *** * 443 *** k* 721 *****
165 ** 444 * * : k 722 *****
166 ** 445 к 723 *****
167 * 446 **· k 724 *****
168 * 447 * 725 *****
169 *** * 448 *** * 726 * * * *
170 ***' ** 449 *** * 727 *****
171 ***' ** 45Q ** 728 *****
172 ***** 451 ***** 729
- 191 037123
173 ** 452 *** * * 730 *****
174 ** 453 *** к* 731 *****
175 *** * 454 *** * 732 ****
176 **' * 455 ** 733 *****
177 ** * 456 **' * 734 *****
178 ** 457 *** * 735 ****
179 ***' ** 458 *** * 736 *****
180 *** * 459 **· к 737 *****
181 * 460 *** * 738 *****
182 *** * 461 *** * 739 *****
183 ** 462 *** ** 740 *****
184 ** 463 *** ** 741 *****
185 **' * 464 *** * 742 *****
186 *** * 465 **· * 743 *****
187 ** 466 *** ** 744 ***
188 ***' ** 467 *** ** 745 *****
189 *** * 468 *** * 746 *****
190 *** * 469 ***' к* 747 *****
191 *** * 470 *** * 748 *****
192 *** ** 471 *** ** 749 *****
193 *** * 472 *** к* 750 *****
194 *** 473 *** * * 751 *****
195 *** * 474 *** * 752 *****
196 *** * 475 **' * 753 *****
197 *** ** 476 *** ** 754 *****
198 *** * 477 *** * 755 *****
199 *** * 478 *** ** 756 *****
200 * 479 ** 757 ****
201 *** 480 ***** 758
- 192 037123
202 ** 481 **** 759 *****
203 * 482 9г 9г 9г 760 9г 9г 9г 9г 9г
204 9г 9г 9г 9г 483 9г 9г 761 9г 9г 9г 9г 9г
205 9г 9г 484 9г 9г 9г 9г 9г 762 9г 9г 9г 9г 9г
206 9г 9г 485 9г 9г 9г 9г 9г 763 9г 9г 9г 9г 9г
207 9г 9г 9г 486 9г 9г 9г 9г 764 9г 9г 9г
208 * * * 487 * * * * 765 * * * *
209 **** 488 * * * * 766 *****
210 **** 489 9г * * * 767 *****
211 **** 490 ***** 768 *****
212 **** 491 * * * * 769 *****
213 9г 9г 9г 4 92 9г 9г 9г 9г 770 9г 9г 9г 9г
214 **** 493 **** 771 *****
215 * * * 494 * * * * 772 *****
216 * * * 495 ***** 773 *****
217 *** 496 ***** 774 *****
218 *** 497 **** 775 ***
219 **** 498 ***** 776 * *
220 ** 499 ***** 777 ***
221 ***** 500 ***** 778 *****
222 * * * 501 ***** 779 *****
223 *** 502 ***** 780 *****
224 **** 503 ***** 781 *****
225 9г 504 9г 9г 9г 9г 9г 782 9г 9г 9г 9г 9г
226 9г 505 9г 9г 9г 9г 783 9г 9г 9г 9г 9г
227 9г 9г 9г 506 9г 9г 9г 9г 784 9г 9г 9г 9г
228 9г 9г 507 9г 9г 9г 9г 785 9г 9г 9г 9г 9г
229 9г 9г 9г 508 9г 9г 9г 9г 786 9г 9г 9г 9г
230 **** 509 **** 787
- 193 037123
231 *** * 510 ***' ** 733 *****
232 * 511 * * * * 789 *****
233 * 512 *** ** 79Q *****
234 ***' ** 513 ***' ** 791 *****
235 *** * 514 ***' ** 792 *****
236 **' * 515 ***' ** 793 *****
237 **' * 516 *** * 794 *****
238 ** 517 *** ** 795 *****
239 * 518 *** * 796 *****
240 *** * 519 ***' ** 797 ***
241 *** a * 520 * * * * 798 *****
242 *** * 521 *** ** 799 *****
243 *** * 522 ***' ** 800 *****
244 *** * 523 ***' ** 801 *****
245 ** 524 *** ** 802 *****
246 * 525 ***' ** 803 *****
247 ***' ** 526 *** * * 804 *****
248 *** * 527 ***' ** 805 *****
249 * 528 *** * 806 *****
250 ***' ** 529 *** ** 807 *****
251 * * * ** 530 *** ** 808 *****
252 *** * 531 *** ** 809 *****
253 * 532 ***' ** 810 *****
254 **' * 533 ***' a 811 *****
255 ** 534 ***' ** 812 *****
256 *** * 535 ***' ** 813 *****
257 *** * 536 *** * 814 *****
258 *** * 537 * * * * 815 *****
259 **** 538 **** 816
- 194 037123
260 **' * 539 *** * 817 *****
261 *** * 540 ** * 818 *****
262 ***' ** 541 *** ** 819 *****
263 *** * 542 ***' * 820 *****
264 ***' * 543 ***' * Q21 *****
265 **' * 544 *** * 822 ****
266 ** 545 ***' ** 823 **
267 ***' * 54 g *** ** 824 ****
268 ***' * 547 ***' * * 825 *****
269 ***' * 548 ***' * * Q2 б *****
270 *** * 549 *** ** 827 *****
271 *** ** 550 *** ** 828 *****
272 *** ** 551 *** ** 829 *****
273 *** ** 552 *** * 830 *****
274 *** ** 553 *** ** 831 ****
275 *** ** 554 *** ** 832 *****
276 * 555 **' * 833 *****
277 ** * 556 **' 834 *****
278 ** 557 * 835 *****
279 **
Пример 8. Метод подсчета жемчужин (подсчет Smn-зависимых ядерных спеклов)
Уровень белка Smn напрямую коррелирует с количеством ядерных фокусов, также известных как жемчужины, образующихся при окрашивании клетки флуоресцентно-мечеными анти-Smn-антителами (Liu and Dreyfuss, EMBO J., 1996, 15:3555). Жемчужины представляют собой мультибелковые комплексы, которые формируются вокруг белка Smn, и метод подсчета жемчужин используют для оценки уровня белка Smn в клетке. Описанный выше метод подсчета жемчужин используют для количественной оценки уровня белка Smn в фибробластах пациента с SMA, обработанных тестируемым соединением.
- 195 037123
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с SMA 1 типа GM03813 (Coriell Institute)
Первичное антитело мышиный анти-SMN клон 2В1 Sigma; кат. № S2944
Вторичное антитело антимышиные Alexa Fluor 555 Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № A21422
Бычий сывороточный альбумин (BSA) Sigma; кат. № A3294
4% параформальдегид Electron Microscopy Sciences; кат. № 15710
Бортезомиб LC Labs,; кат. № B-1408
0,05% Тритон Х-100 Sigma; кат. № 93443-100mL
Заливочная среда - реагент ProLong Gold Antifade с DAP I Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen) кат №№ P7481 и P36935
Стерильные покровные стекла 22χ22 #1 Fisher; кат. № 12-548-B
DMEM Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11960-044
PBS Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 10010-031
Прозрачный лак для ногтей Revlon brand; кат. № 1271-76
Флуоресцентный микроскоп Zeiss Axovert 135 Zeiss
Протокол
Клетки размораживают и инкубируют в DMEM-10% FBS в течение 72 ч, затем обрабатывают трипсином, подсчитывают и ресуспендируют в DMEM-10% FBS до 100000 клеток/мл. Суспензию клеток (2 мл) помещают в 6-луночный культуральный планшет со стерильным покровным стеклом и инкубируют в течение 3-5 ч. Тестируемые соединения последовательно разбавляют 100% DMSO в 3,16 раза с получением кривой разведения по 7 точкам. В каждую лунку, содержащую клетки, добавляют 10 мкл раствора тестируемого соединения, и инкубируют в течение 48 ч в клеточном инкубаторе (37°C, 5% CO2, 100% относительная влажность). Для каждой концентрации тестируемого соединения приготавливают 2 повтора. В качестве контроля используют клетки, содержащие DMSO в конечной концентрации 0,5%.
Культуральную среду удаляют путем аспирации из лунок с покровными стеклами и осторожно трижды промывают холодным PBS. Клетки фиксируют путем инкубации в параформальдегиде в течение 20 минут при комнатной температуре. Затем, клетки дважды промывают холодным PBS, а затем инкубируют в течение 5 мин при комнатной температуре с 0,05% Тритоном X-100 в PBS для пермеабилизирования клеток. После трехкратного промывания фиксированных клеток холодным PBS, клетки блокируют 10% FBS в течение 1 ч. Добавляют 60 мкл первичного антитела, разбавленного 1/1000 блокирующим буфером, и инкубируют смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Клетки трижды промывают PBS, добавляют 60 мкл вторичного антитела, разбавленного 1/5000 блокирующим буфером, а затем инкубируют смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Покровные стекла закрепляют на слайдах при помощи заливочной среды и оставляют сушиться в течение ночи. Со стороны покровного стекла наносят лак для ногтей, и хранят слайды, оберегая от света. Для иммунофлуоресцентной детекции и подсчета используют микроскоп Zeiss Axovert 135 с 63х объективом Plan-Apochromat, NA=1.4. Число жемчужин подсчитывают для >150 ядер и рассчитывают активацию (%), используя в качестве контролей DMSO и 10 нМ бортезомиб. Для каждого тестируемого соединения, исследования на клетках проводят при всех длинах волн для идентификации тестируемых соединений со специфической флуоресценцией.
Результаты
Как видно на фиг. 9, клетки пациента с SMA 1 типа, обработанные соединением 6 (фиг. 9a) и соединением 170 (фиг. 9b), содержат неуклонно больше жемчужин относительно клеток, обработанных DMSO.
Пример 9. Анализ белка Smn в двигательных нейронах человека
Для количественной оценки уровня белка Smn в двигательных нейронах человека, обработанных
- 196 037123 тестируемыми соединениями, используют Smn иммунофлуоресцентную конфокальную микроскопию.
Протокол
Двигательные нейроны человека получают из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с SMA (Ebert et al., Nature, 2009, 457:2770; и Rubin et al., BCM Biology, 2011, 9:42) и обрабатывают разными концентрациями тестируемого соединения в течение 72 ч. Уровень белка Smn в клеточном ядре количественно оценивают с использованием иммуноокрашивания Smn и конфокальной флуоресцентной микроскопии, по существу как описано в Makhortova et al., Nature Chemical Biology, 2011, 7:544. Уровень белка Smn в образцах, обработанных соединением, нормируют к уровню, полученному в образцах, обработанных растворителем, и графически отображают как функцию концентрации соединения.
Результаты
Как видно на фиг. 10, двигательные нейроны человека, обработанные в течение 72 ч возрастающими концентрациями соединения 6, содержат в ядре неуклонно больше белка Smn.
Пример 10. Анализ белка Smn в тканях животного
При данном анализе белка Smn, для определения увеличения уровней белка Smn, продуцируемого геном SMN2, ткани мышей, обработанных тестируемым соединением, сравнивают с тканями мышей, обработанных растворителем (DMSO).
Материалы
Материал Ткани мышей с С/С-аллелью SMA Ткани мышей SMA Δ7 Источник The Jackson Laboratory, strain No.: 008714 (B6.12 9-Srnnltm5 (Smnl/SMN2)Mrph/ J) The Jackson Laboratory, линия № 005025 (FVB.Cg- Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg (SMN2) 8 9Ahmb SmnltmlMsd/J)
Коктейль из ингибиторов протеаз Roche Applied Science; кат. № 11836145001
анти-SMN d2 Blue cap Cisbio; кат. № 63IDC002SMN
анти-SMN криптат Red cap Cisbio; кат. № 63IDC002-SMN
восстанавливающий буфер SMN Cisbio; кат. № 63IDC002-SMN-Buffer
Лизирующий буфер RIPA 20 мМ Трис-HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1% NP-40, 1% дезоксихолат натрия
Буфер-разбавитель 20 мМ Трис-HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl
Набор для ВСА анализа белка Pierce; кат. № 23225
384-луночный белый планшет Nunc; кат. № 351190
Полипропиленовый планшет с V-образным дном Falcon; кат. № 165195
Прозрачный 96-луночный планшет из полистирола Nunc; кат. № 442404
5 мм сферы из нержавеющей стали Qiagen; кат. № 69989
2,0 мл пробирки с замком Eppendorf; кат. № 022363352
96-луночный наполовину окаймленный планшет для ПЦР Twin.tec Eppendorf; кат. № 951020389
TissueLyzer II Qiagen; кат. № 85300
Планшетный ридер Envision Perkin Elmer; модель 2103
- 197 037123
Протокол
Образцы тканей взвешивают в пробирках с замком, и добавляют объем буфера RIPA, содержащий коктейль из ингибиторов протеаз, основываясь на соотношениях массы и объема для каждого типа ткани: головной мозг (50 мг/мл), мышцы (50 мг/мл) и спинной мозг (25 мг/мл).
Ткани гомогенизируют с использованием TissueLyzer путем перемалывания со сферами. В образец добавляют 5 мм сферы из нержавеющей стали и энергично встряхивают на TissueLyzer в течение 5 мин при 30 Гц. Затем, образцы центрифугируют в течение 20 мин при 14000д в микроцентрифуге и переносят гомогенат в планшет для ПЦР. Гомогенаты разбавляют буфером RIPA приблизительно до 1 мг/мл для проведения HTRF и приблизительно до 0,5 мг/мл для измерения общего содержания белка с использованием ВСА анализа белка. Для проведения HTRF анализа SMN, 35 мкл гомогената ткани переносят в 384луночный планшет, содержащий 5 мкл раствора антитела (анти-SMN d2 и анти-SMN криптат в разбавлении 1/100 восстанавливающим буфером SMN). Для получения контрольного сигнала, три (3) лунки в планшете содержат только лизирующий буфер RIPA, а потому служат в качестве холостой пробы. Планшет центрифугируют в течение 1 мин с получением на дне лунок раствора, который инкубируют в течение ночи при комнатной температуре. Флуоресценцию при 665 и 620 нм измеряют в каждой лунке планшета на планшетном ридере Envision (Perkin-Elmer). Общее содержание белка в гомогенате ткани измеряют с использованием BCA анализа в соответствии с протоколом производителя.
Для каждой лунки с образцом, холостым контролем и контролем с растворителем рассчитывают нормированный сигнал флуоресценции путем деления значения сигнала при 665 нм на значение сигнала при 620 нм. Нормирование сигнала учитывает возможное тушение флуоресценции вследствие эффекта матрикса на лизат. Значение AF (величина процентного содержания белка Smn) для каждой лунки с образцом рассчитывают путем вычитания нормированной средней флуоресценции в лунках с холостым контролем из нормированной флуоресценции для каждой лунки с образцом, с последующим делением разницы на нормированную среднюю флуоресценцию в лунках с холостым контролем и умножением полученного значения на 100. Значение AF для каждого образца ткани делят на общее количество белка (определенное с использованием BCA анализа) для данного образца ткани.
Изменение копийности белка Smn для каждого образца ткани относительно контроля с растворителем рассчитывают как выраженную в процентах разницу значения AF в образце ткани в присутствии тестируемого соединения и усредненного значения AF в контроле с растворителем, деленную на усредненное значение AF в контроле с растворителем.
Пример 11. Анализ белка Smn в тканях мышей с C/C-аллелью SMA
Ткани для использования при анализе белка Smn у взрослых мышей с C/C-аллелью SMA, приготавливают, как описано в примере 10. В анализе проводится оценка того, увеличивает ли обработка мышей с C/C-аллелью SMA тестируемым соединением в течение 10 суток уровни белка Smn, продуцируемого геном SMN2.
Материалы
Материал Источник
Ткани мышей с C/C-аллелью SMA The Jackson Laboratory, линия № 008714 (Вб . 12 9-Smnltn5 (Smnl/SMN2)Mrph/ J)
Протокол
Мышам с C/C-аллелью SMA дозированно BID перорально вводят тестируемое соединение (в 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозе (HPMC) с 0,1% Твин-80) или растворитель в количестве 10 мг/кг в 10 суток. Для использования в качестве контроля гетерозиготным мышам соответствующей возрастной группы дозированно вводят растворитель. Ткани для анализа уровней белка собирают в соответствии с примером 10.
Результаты
Как видно на фиг. 11, уровень Smn, нормированный к уровню общего содержания белка, был увеличен в тканях головного мозга, спинного мозга и мышц у взрослых мышей с C/C-аллелью SMA, обработанных соединением 6 в дозе 100 мг/кг BID в течение 10 суток (фиг. 11а) или обработанных соединением 170 в дозе 100 мг/кг BID в течение 10 суток (фиг. 11b), относительно группы с введением растворителя.
Пример 12. Белок Smn в тканях новорожденных мышей SMA Δ7
Для определения того, увеличивает ли обработка тестируемым соединением уровни белка Smn, продуцируемого геном SMN2, используют анализ белка Smn в тканях новорожденных мышей с SMA.
- 198 037123
Материалы
Материал Источник
Ткани мышей The Jackson Laboratory, линия № 005025 (FVB.Cg-
SMA Δ7 Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg(SMN2)89Ahmb
SmnltmlMsd/ J)
Протокол
Г омозиготным нокаутным мышам SMA Δ7 дозированно один раз в сутки (QD) интраперитонеально (IP) вводят тестируемое соединение или растворитель (100% DMSO) начиная с 3-х суток посленатального периода (PND 3) до PND 9. Ткани собирают для анализа уровней белка в соответствии с примером 10.
Результаты
Как видно на фиг. 12, уровень Smn, нормированный к уровню общего содержания белка, был дозозависимо увеличен в тканях головного мозга, спинного мозга, мышц и кожи новорожденных гомозиготных нокаутных мышей SMA Δ7, обработанных соединением 6 (фиг. 12a, 12b, 12c и 12d, соответственно), и в тканях головного мозга, спинного мозга и мышц новорожденных гомозиготных нокаутных мышей SMA Δ7, обработанных соединением 170 (фиг. 12e, 12f и 12g соответственно).
Пример 13. Масса тела новорожденных мышей SMA Δ7
Для определения того, улучшает ли обработка тестируемым соединением массу тела, используют анализ изменения массы тела новорожденных мышей с SMA.
Материалы
Материал Источник
Ткани мышей The Jackson Laboratory, линия® 005025 (FVB.Cg-
SMA Δ7 Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg(SMN2)89Ahmb
SnmltmlMsd/ J)
Протокол
Г омозиготным нокаутным мышам SMA Δ7 QD интраперитонеально (IP) вводят тестируемое соединение или растворитель (100% DMSO) начиная с PND 3 и до момента переключения на пероральное введение BID в 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозе (НРМС) с 0,1% Твин-80 в дозе, превышающей в 3,16 раза дозу, использованную для IP введения. Значения массы тела мышей SMA Δ7, обработанных тестируемым соединения или растворителем, и гетерозиготных мышей соответствующей возрастной группы регистрируют каждые сутки.
Результаты
Как видно на фиг. 13, масса тела новорожденных гомозиготных нокаутных мышей SMA Δ7, обработанных соединением 6 IP QD начиная с PND 3 и до PND 30, а затем перорально BID начиная с PND 31 и до окончания исследования (фиг. 13a), и соединением 170 IP QD начиная с PND 3 и до PND 23, а затем перорально BID начиная с PND 24 и до окончания исследования (фиг. 13b), улучшалась по сравнению с мышами, обработанными растворителем.
Пример 14. Рефлекс переворачивания у новорожденных мышей SMA Δ7
Для определения того, улучшает ли тестируемое соединение рефлекс переворачивания, используют функциональные изменения рефлекса переворачивания у новорожденных мышей с SMA.
Материалы
Материал Источник
Ткани мышей The Jackson Laboratory, линия № 005025 (FVB.Cg-
SMA Δ7 Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg(SMN2)89Ahmb SmnltmlMsd/ J)
Протокол
Г омозиготным нокаутным мышам SMA Δ7 QD интраперитонеально (IP) вводят тестируемое соединение или растворитель (100% DMSO) начиная с PND 3 и до момента переключения на пероральное введение BID в 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозе (НРМС) с 0,1% Твин-80 в дозе, превышающей в 3,16 раза дозу, использованную для IP введения. Рефлекс переворачивания определяют как время, затрачиваемое мышью для переворачивания с вставанием на лапы, после того как она лежала на спине. Рефлекс переворачивания измеряют пять раз для каждой мыши (определив для каждой попытки максимально допустимое время 30 с) с 5 мин между каждым измерением. Время рефлекса переворачивания у гомозиготных нокаутных мышей SMA Δ7, обработанных тестируемым соединением или растворителем, и гетерозиготных мышей соответствующей возрастной группы измеряют на PND 10, 14 и 18 и графически отображают.
Результаты
Как видно на фиг. 14, рефлекс переворачивания у новорожденных гомозиготных нокаутных мышей
- 199 037123
SMA Δ7, обработанных соединением 6 (фиг. 14a) и соединением 170 (фиг. 14b), вводимых IP QD начиная с PND 3, улучшался по сравнению с мышами, обработанными растворителем. Время переворачивания у новорожденных гомозиготных нокаутных мышей SMA Δ7, обработанных соединением, было сходно с таковым для гетерозиготных мышей соответствующей возрастной группы на PND 18.
Пример 15. Выживаемость новорожденных мышей SMA Δ7
Для определения того, улучшает ли выживаемость обработка тестируемым соединением, используют анализ изменения числа выживших с течением времени мышей.
Материалы
Материал Источник
Ткани мышей The Jackson Laboratory, линия № 005025 (FVB.Cg-
SMA Δ7 Tg(SMN2*delta7)4299Ahmb Tg(SMN2)89Ahmb SmnltmlMsd/ J)
Протокол
Г омозиготным нокаутным мышам SMA Δ7 QD интраперитонеально (IP) вводят тестируемое соединение или растворитель (100% DMSO) в промежутке от PND 3 до момента переключения на пероральное введение BID в 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозе (НРМС) с 0,1% Твин-80 в дозе, превышающей в 3,16 раза дозу, использованную для IP введения, с переключением позже на пероральное введение QD в 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозе (НРМС) с 0,1% Твин-80 в дозе, превышающей в 6,32 раза дозу, использованную для IP введения. Число выживших мышей регистрируют каждые сутки и графически отображают в виде процента от общего числа мышей. Ткани мышей SMA Δ7 и гетерозиготных мышей соответствующей возрастной группы собирают для измерения уровней белка Smn и подвергают обработке, как подробно описано в примере 10. Измеренные в тканях уровни белка Smn, нормированные к уровням общего содержания белка, графически отображают в виде процента от уровней белка в тканях гетерозиготных мышей соответствующей возрастной группы, где уровень белка Smn у гетерозиготных мышей принимают за 100%. Уровень белка Smn в тканях мышей, обработанных тестируемым соединением, относительно такового в тканях гетерозиготных мышей указывают в % над каждым столбцом чертежа.
Результаты
Как видно на фиг. 15, выживаемость новорожденных гомозиготных нокаутных мышей SMA Δ7, обработанных соединением 6 (фиг. 15a), вводимым IP QD начиная с PND 3 и до PND 30, а затем перорально BID начиная с PND 31 и до конца исследования, и соединением 170 (фиг. 15b), вводимым IP QD начиная с PND 3 и до PND 23, а затем перорально BID начиная с PND 24 и до конца исследования, улучшалась по сравнению с мышами, обработанными растворителем. Как видно на фиг. 16, уровни белка Smn в тканях головного мозга, спинного мозга и мышц гомозиготных нокаутных мышей SMA Δ7 после обработки соединением 6, вводимым IP 10 мг/кг QD начиная с PND 3 и до PND 30, а затем перорально 30 мг/кг BID начиная с PND 31 и до PND 156 (фиг. 16a), и соединением 170, вводимым IP 3 мг/кг QD начиная с PND 3 и до PND 23, а затем перорально 10 мг/кг BID начиная с PND 24 и до PND 88, и перорально 20 мг/кг QD начиная с PND 89 и до PND 185 (фиг. 16b), были измерены и графически отображены относительно мышей, обработанных растворителем, и гетерозиготных мышей соответствующей возрастной группы.
Пример 16. Полуколичественный RT-PCR анализ сплайсинга мРНК мини-гена SMN1 человека по конечной точке в культивируемых клетках
Для визуализации и количественной оценки уровней полноразмерной мРНК мини-гена SMN1 и мРНК Δ7 человека в первичных клетках и линиях клеток, экспрессирующих мини-генную конструкцию SMN1 человека, обработанных тестируемым соединением, используют RT-PCR анализ.
- 200 037123
Материалы
Материал Источник
Клетки НЕК293Н АТСС; кат. № CRL-1573
Лизирующий буфер Cells-To-Ct Life Technologies, Inc. (ранее Applied Biosystems); кат. № 4399002
Реагент для липидной трансфекции FuGENE-6 Roche Applied Science; кат. № 11 814 443 001
DMEM Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11960-044
96-луночные планшеты с плоским дном Becton Dickinson; кат. № 353072
ДНК-полимеразная супер-смесь Platinum Tag HiFi Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № 11304-016
Набор с RT iScript BioRad; кат. № 170-8890
Гели с 2% агарозой Е и бромидом этидия; 48-луночный Double Comb Life Technologies, Inc. (ранее Invitrogen); кат. № G8008-02
Система гельдокументации Система визуализации UVP Gel Doc It 310
Мини-генная конструкция SMN1 Получение мини-генных конструкций
С использованием методики получения мини-генной конструкции SMN2, описанной в биологическом примере 1, SMN1 версию мини-гена получают путем замены шестого нуклеотида экзона 7 (остаток тимина) в мини-генной конструкции SMN2-A на цитозин с применением метода сайт-направленного мутагенеза. Так, мини-генная конструкция SMN1, сходная с мини-генной конструкцией SMN2-A, содержит остаток аденина, вставленный после нуклеотидного остатка 48 экзона 7. Мини-генную конструкцию SMN1 называют SMN1-A.
Протокол
В 96-луночном планшете клетки HEK293H (10000 клеток на лунку/199 мкл) трансфицируют 15 нг/лунку SMN1-A мини-генной репортерной плазмиды с использованием реагента FuGENE-6. Клетки инкубируют в течение 24 ч после трансфицирования. Тестируемые соединения последовательно разбавляют 100% DMSO в 3,16 раза с получением концентрационной зависимости по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляют раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200* в DMSO). В каждую контрольную лунку добавляют 1 мкл DMSO. Планшет инкубируют в течение 7 часов в клеточном инкубаторе (37°C, 5% CO2, 100% относительная влажность). Затем клетки лизируют в лизирующем буфере CellsTo-Ct, и хранят лизаты при -80°C.
С мини-гена SMN1 получают сплайсированные мРНК SMN. Термин мини-ген SMN1 FL относится к первому продукту сплайсинга, содержащему экзон 7 и соответствующему полноразмерной мРНК SMN1. Термин мини-ген SMN1 Δ7 относится ко второму продукту без экзона 7.
мРНК мини-гена SMN FL и мРНК мини-гена SMN Δ7 амплифицируют с использованием праймеров, представленных в таблице 11. Прямой SMN праймер C (SEQ ID NO. 11) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в экзоне 6 (нуклеотиды 43-63), обратный SMN праймер A (SEQ ID NO. 2) гибридизуется до нуклеотидной последовательности в кодирующей последовательности люциферазы светляка. Сочетание указанных двух олигонуклеотидов обнаруживает только мини-гены SMN1 или SMN2 (RT-PCR) и не обнаруживает эндогенные гены SMN1 или SMN2. Поскольку клетки HEK293H, использованные в примере 16, были трансфицированы только мини-геном SMN1 человека, методом RTPCR можно визуализировать и количественно оценить только полноразмерную мРНК мини-гена SMN1 и мРНК мини-гена SMN1 Δ7.
- 201 037123
Таблица 11
Праймер Последовательность Источник
Прямой SMN праймер С SEQ ID NO.11: GATGCTGATGCTTTGGGAAGT PTC1
Обратный SMN праймер А SEQ ID NO.2: CGCTTCACATTCCAGATCTGTC PTC1
1Праймеры разработаны PTC Therapeutics, Inc.
Для синтеза кДНК, 5 мкл лизата, 4 мкл 5х реакционной смеси iScript, 1 мкл обратной транскриптазы и 10 мкл воды объединяют и инкубируют в течение 5 мин при 25°C, затем в течение 30 мин при 42°C, а затем в течение 5 мин при 85°C. Раствор кДНК хранят при -20°C.
Для постановки ПЦР по конечной точке, 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной супер-смеси объединяют в 96-луночном наполовину окаймленном планшете для ПЦР. ПЦР проводят при следующих температурах в указанное время:
Стадия 1: 94°C (2 мин),
Стадия 2: 94°C (30 с),
Стадия 3: 55°C (30 с),
Стадия 4: 68°C (1 мин), затем повтор стадий 2-4 всего в течение 33 циклов, а затем поддержание при 4°C.
В течение 14 мин 10 мкл каждого ПЦР образца электрофоретически разделяют на геле с 2% агарозы E, окрашивают красителями dsDNA (например, бромид этидия) и визуализируют с использованием системы гель-документирования.
Результаты
Как видно на фиг. 17, клетки, обработанные возрастающими концентрациями соединения 6 (фиг. 17a) и соединения 170 (фиг. 17b), содержат неуклонно больше мРНК мини-гена SMN1 FL и меньше мРНК мини-гена SMN1 Δ7, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга SMN1.
Вне зависимости от того, был ли документ, процитированный в настоящем документе, особым образом и отдельно указан как включаемый посредством ссылки, все документы, процитированные в настоящем документе, включены посредством ссылки в настоящее описание для всех без исключения целей в той же мере, как если бы каждая отдельная ссылка была полностью изложена в настоящем документе.
Хотя выше были подробно описаны определенные варианты осуществления, средним специалистам в данной области техники следует со всей ясностью понимать, что в вариантах осуществления возможны многие модификации, не выходящие за рамки идеи изобретения. Все модификации подлежат включению в объем формулы изобретения, описанной в настоящем документе.

Claims (12)

1. Соединение формулы (IIa1)
Rb
(Hal) или его свободная кислота, свободное основание, фармацевтически приемлемая соль и стереоизомер, где
R1 представляет собой гетероциклил, выбранный из оксиранила, оксетанила, азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, имидазолидинила, изоксазолидинила, изотиазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила, триазолидинила, оксадиазолидинила, тиадиазолидинила, тетразолидинила, пиранила, дигидро-2H-пиранила, тиопиранила, 1,3-диоксанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6тетрагидропиридинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, 1,4-диазепанила, бензо[d][ 1,3]диоксолила, 1,4-бензодиоксанила, 2,3-дигидробензо[b][ 1,4]диоксинила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ила, гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1H)-ила, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1H)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1H)-ила, октагидро-5H-пирроло[3,2-c]пиридинила, октагидро-6H-пирроло[3,4b]пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aS,7aS)-октагидро-6H-пирроло[3,4b]пиридинила, гексагидропирроло[1,2-a]пиразин-(1H)-ила, (7R,8aS)-гексагидропирроло[1,2-a]пиразин(1H)-ила, (8aS)-гексагидропирроло[1,2-a]пиразин-(1H)-ила, (8αR)-гексагuдроnuрроло[1,2-a]nuрαзuн-(1H)- 202 037123 ила, (8aS)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-октагидропирроло [1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, октагидро-2Н-пиридо [ 1,2-а]пиразинила, 3 -азабицикло[3.1.0]гексила, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (1S,4S)-2,5диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-3,8диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила;
где Ri необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем R4 или где R1 необязательно замещен одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями R3;
R2 представляет собой фенил;
где R2 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R6 и необязательно одним дополнительным заместителем R7;
каждый Ra независимо выбирают из водорода, галогена или С1-8алкила;
Rb представляет собой водород, галоген, С1-8алкил или С1-8алкокси;
Rc представляет собой водород, галоген или С1-8алкил;
каждый R3 независимо выбирают из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-С1-8алкила, С1-8алкилкарбонила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8. алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкилкарбониламино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино;
R4 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С1-8алкил, арил-С1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С1-8алкил; где каждый С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R5;
каждый R5 независимо выбирают из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, галоген-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио;
каждый R6 независимо выбирают из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, С2-8алкенила, галоген-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио и
R7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил, где арил представляет собой моноциклический, бициклический или полициклический 6-14-членный ароматический радикал карбоциклической структуры;
гетероарил представляет собой моноциклический, бициклический или полициклический ароматический радикал карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены одним или несколькими гетероатомами, выбранными из атома O, S или N;
гетероциклил представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический, бициклический или полициклический ароматический радикал карбоциклической структуры, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены гетероатомом, выбранными из атома O, S или N.
2. Соединение по п.1, где R1 представляет собой гетероциклил, выбранный из азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,4-диазепанила, 1,2,5,6тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидропирроло [3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3aS,6aS)-гексαгидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, (3aS,6aS)-гексαгидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-(1H)-ила, октагидро5Н-пирроло [3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло [3,4-Ь]пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6Hпирроло [3,4-Ь]пиридинила, (4aS,7aS)-октαгидро-6H-пирроло [3,4-Ь]пиридинила, гексагидропирроло [1,2а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7R,8aS)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-гексαгидропирроло[1,2-a]пирαзин-(1H)-ила, (8aR)-гексαгидропирроло[1,2-a]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-октαгидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-октaгидропирроло [ 1,2-а]пиразин(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо[1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0]гексила, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,5S)-8-αзабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1R,5S)-9азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (1S,4S)-2,5-диαзабицикло[2.2.1]гептила, 2,5диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-
- 203 037123 диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила; где каждый гетероциклил необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем R4.
3. Соединение по п.1, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, ацетат, трифторацетат или соль трифторуксусной кислоты.
4. Способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий контактирование клетки человека с соединением по п.1.
5. Способ по п.4, где клетка представляет собой клетку от пациента с спинальной мышечной атрофией.
6. Способ увеличения количества белка Smn, включающий контактирование клетки человека с соединением по п.1.
7. Способ по п.6, где клетка представляет собой клетку от пациента с спинальной мышечной атрофией.
8. Соединение, где соединение выбирают из группы, состоящей из: 2-(4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(4-метоксифенил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(4-метоксифенил)-7-[(3R)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил] -2-(4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-(1,4-диазепαн-1-ил)-2-(4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(3,3-диметилпиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(4-этилпиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(4-метил-1,4-диазепан-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-метоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(4-метилпиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(4-nропилпиперαзин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-метоксифенил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-(3,3-диметилпиперαзин-1-ил)-2-(4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3 -метоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(3 -метоксифенил)-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(3 -метоксифенил)-7-[(3R)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил] -2-(3 -метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(3 -метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3 -метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(3 -метоксифенил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-фенил-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -2-фенил-4H-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-9-фтор-7-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3 -хлорфенил)-7 -(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-хлорфенил)-7 -(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-(пиперазин-1-ил)-2-[3-(mрифторметил)фенил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 7 -(пиперазин-1 -ил) -2-[4-(трифторметил) фенил] -4Н-пиридо [1,2-a] пиримидин-4 -он, 2-(3 -метилфенил)-7 -(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-нитрофенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[4-(диметиламино)фенил] -9-фтор-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[4-(диметилαмино)фенил]-9-фтор-7-[(3R)-3-метилnиперαзин-1-ил]-4H-nиридо[1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(2-фторфенил)-7-(πиπеразин-1-ил)-4H-πиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[4-(диметиламино)фенил] -7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-[4-(диметиламино)фенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-(3,4-диметилфенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[3 -(диметиламино)фенил] -7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он,
2-[3 -(диметиламино)фенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[4-(дифторметокси)фенил] -7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]nиримидин-4-он, 2-[4-(дифторметокси)фенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
- 204 037123
2-(3 -нитрофенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-метилфенил)-7 -(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-7-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 7-(3,8-диазабицикло[3.2.1]окт-3-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-[4-метокси-3 -(трифторметил)фенил] -7 -(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-[4-метокси-3 -(трифторметил)фенил] -7-[(3R)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[4-метокси-3 -(трифторметил)фенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метокси-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,5-дифтор-4-гидроксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 4-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-2-ил]бензонитрил
2-[3 -фтор-5 -(трифторметил)фенил] -7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[4-фтор-3-(трифторметил)фенил]-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[2-метокси-3 -(трифторметил)фенил] -7 -(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,5-дифторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
7-(пиперазин-1 -ил) -2-[3 -(трифторметокси)фенил] -4Н-пиридо [1,2-a] пиримидин-4-он, 2-[4-метокси-3 -(трифторметокси)фенил] -7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[4-гидрокси-3 -(трифторметокси)фенил] -7 -(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[4-метокси-3 -(трифторметокси)фенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-[4-гидрокси-3 -(трифторметокси)фенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-7-[(3R)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(2,4-диметоксифенил)-7 -(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(2,4-диметоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[3 -(дифторметокси)-4-метоксифенил] -7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[3 -(дифторметокси)-4-гидроксифенил] -7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-[3 -(дифторметокси)-4-метоксифенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-[3 -(дифторметокси)-4-гидроксифенил] -7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,5-дифторфенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -хлор-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -хлор-4-метоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -этокси-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -этокси-4-метоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-2(1H)-ил]-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он,
7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-5-метоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пuримидин-4-он,
2-(3 -фтор-5-метоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(пиперидин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3 -фтор-4,5-диметоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(4-гидроксипиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4 -диметоксифенил) -7-[(3S)-3 -(диметиламино)пирролидин-1 -ил] -4H-пuридо [1,2-a] пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(диметиламино)пиперидин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-метокси-3 -метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пuримидин-4-он, 3-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-2-ил]бензонитрил, 2-метокси-5-[4-оксо-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-2-ил]бензонитрил, 2-(3 -фтор-4-гидроксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пuримидин-4-он, 2-(4-этокси-3 -фторфенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пuримидин-4-он,
2-[3 -фтор-4-(2,2,2-трифторэтокси)фенил] -7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-4-метилфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-4-метилфенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 7-[(3 S)-3 -аминопирролидин-1 -ил] -2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
- 205 037123
2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(1 -метилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3 S)-3-(пропан-2-иламино)пирролидин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-7-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(4-метокси-3 -нитрофенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-[3 -фтор-4-(метилсульфанил)фенил] -7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,5-дифтор-4-метоксифенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,5-дифтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил] -2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-метил-1, 2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3 -хлор-5-фторфенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3 -хлор-5-фторфенил)-7-(пиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
7-[(3 S)-3 -(диметиламино)пирролидин-1-ил] -2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
7-[(3R,4R)-3-(диметиламино)-4-гидроксипирролидин-1-ил]-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
7-(4-аминопиперидин-1-ил)-2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-7-[4-(метиламино)пиперидин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-гексαгидропирроло[3,4-c]пиррол-2(1H)-ил]-4H-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-5-метилгексαгидропирроло[3,4-c]пиррол-2(1H)-ил]-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1 -(2-гидроксиэтил)пиперидин-4-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-фтор-3 -метоксифенил)-7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(4-фтор-3 -метоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-дифтор-5-метоксифенил)-7-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-дифтор-5-метоксифенил)-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3S)-3-(метиламино)пuрролuдин-1-ил]-4H-пuридо[1,2-a]пuримuдuн-4-он, 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-{4-[(метиламино)метил]пиперидин-1-ил}-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
7-[(3 S)-3 -аминопирролидин-1 -ил] -2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
7-{4-[(диметиламино)метил] пиперидин-1 -ил} -2-(3 -фтор-4-метоксифенил) -4Н-пиридо [1,2-a] пиримидин-4-он,
3 -фтор-5-{7-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4-оксо-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-2-ил}бензонитрил,
3 -фтор-5-[4-оксо-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-2-ил]бензонитрил,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3'S,4'S)-4'-гидрокси-1,3'-бипирролидин-1'-ил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
7-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aR)-l-метилгексαгидропирроло[3,4-b]пиррол-5(1H)-ил]-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7 -(1,2,3,6-теmрαгugропuриguн-4-ил)-4H-пuрugо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1 -(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил] -4Н-пиридо [1,2a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(пиперидин-4-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1 -метилпиперидин-4-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-гексαгидропирроло[3,4-c]пиррол-2(1H)-ил]-9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[(3aR,6aS)-5-метилгексαгидропuрроло[3,4-c]пиррол-2(1H)-ил]4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(диметиламино)пиперидин-1 -ил] -9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
7-[(1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ен-3-ил]-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,5,6-теmрαгидропиридин-3-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-5-(2-гидроксиэтил)гексαгидропирроло[3,4-c]пиррол-2(1H)ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aS,6aS)-l-метилгексαгидропирроло[3,4-b]пиррол-5(1H)-ил]-4H- 206 037123 пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(3aR,6aS)-5-(пропан-2-ил)гексагидропирроло[3,4-c]пиррол-2(1H)ил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3R)-3-(диметиламино)пирролидин-1 -ил] -2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(4aR,7aR)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ил]-4H-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
7-[(3aR,6aS)-5-этилгексагидропирроло[3,4-c]пиррол-2(1H)-ил]-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-[(4aR,7aR)-1-метилоктагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ил]-4Hпиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[(3И)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(1R,5S)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(2И)-2-метилпиперазин-1-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-[(3 S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4H-пuрuдо[1,2-a]пuримидuн-4-он, 7-[4-(диметиламино)пиперидин-1-ил] -2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-9-метил-7-(1 -метилпиперидин-4-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
7-[4-(циклопропиламино)пиперидин-1 -ил] -2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил] -9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(3R)-3,4-диметилпиперазин-1-ил]-9-метил-4H-пuрuдо[1,2-a]пuримидuн-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(диметиламино)пиперидин-1 -ил] -9-этил-4H-пuрuдо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1 -(2-гидроксиэтил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил] -9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрαгидропиридин-4-ил)-4H-пиримидо[1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-дuметоксифенил)-9-метил-7-[4-(метиламино)пиперuдин-1-ил]-4H-пuрuдо[1,2-a]пuримидuн-4-он, 2-(3,4 -диметоксифенил) -7 -[4 -(этиламино)пиперидин-1 -ил] -9-метил-4H-пuрuдо [1,2-a] пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7-(пиперазин-1 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он, 2-(3,4-дuметоксифенил)-7-[4-(пропαн-2-илαмино)пиперuдин-1-ил]-4H-пuрuдо[1,2-a]пuримuдин-4-он, 7-(1 -циклобутил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1 -(пропан-2-ил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил] -Ш-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[1-(оксетан-3-ил)-1,2,3,6-теmрагидропuридин-4-ил]-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-nропил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-(1-nропил-1,2,3,6-тетрагuдропиридин-4-ил)-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
7-(1 -циклобутил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4H-пиридо [1,2a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[1 -(оксетан-3 -ил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил] -4Н-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[1-(пропан-2-ил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил]-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-9-метил-4H-пиридо[1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-8-метил-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин4-он,
7-(1 -циклопропил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4H-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-димеmоксuфенuл)-8-метuл-7-(1-меmил-1,2,3,6-mеmрагuдропuридин-4-ил)-4H-пuридо[1,2-a]пи
- 207 037123 римидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиримидо[1,2-Ь]пиридазин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиразино[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-7-(пиперидин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(1 -этилпиперидин-4-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[цис-4-(метиламино)циклогексил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7 -(пиперидин-3 -ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4-(пропиламино)пиперидин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо[1,2-а]пиримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(8аК)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1Н)-ил]-9-метил-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7 -(1 -метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4-(пропан-2-иламино)пиперидин-1 -ил] -4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[(8aS)-гексагидроnирроло[1,2-a]nиразин-2(1H)-ил]-9-метил-4H-nиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7 -(1 -этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-4Н-пиридо [ 1,2-а]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-7-[4-(морфолин-4-ил)пиперидин-1 -ил] -4И-пиридо [ 1,2-a]пuримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2-гидроксиэтил)амино]пиперидин-1 -ил} -9-метил-4H-nuрuдо [1,2a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7 -(1 -метuлпиперидин-4-ил)-4H-пuрuдо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
7-[4-(диэтиламино)пиперидин-1 -ил] -2-(3,4-диметоксифенил)-9-метил-4H-пuрuдо [ 1,2-a]пиримидин4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7 -(1 -этилпиперидин-4-ил)-4H-пuридо [ 1,2-a]пuримuдин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2-гидроксиэтил)(метил)амино]пиперидин-1 -ил} -9-метил-4H-пuридо [ 1,2-a]пuримuдин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4И-пиридо [ 1,2-a]пuримидин-4-он, 2-(3,4-диметоксифенил)-9-этил-7-[(8aR)-гексагидропuрроло[1,2-a]пuразин-2(1H)-ил]-4H-пuридо [ 1,2-a]пuримuдин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(2-метоксиэтил)амино]пиперидин-1-ил} -9-метил-4H-пuридо [1,2a]пuримuдин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-{4-[(диметиламино)метил]пиперидин-1-ил} -4И-пиридо [ 1,2-a]пиримидин-4-он,
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(пирролидин-1 -илметил)пиперидин-1 -ил] -4H-пuрuдо [ 1,2-a]пиримидин-4-он и
2-(3,4-диметоксифенил)-7-[4-(пиперидин-1-илметил)пиперидин-1-ил] -4H-пuрuдо [ 1,2-a]пиримидин4-он, или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Способ усиления включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется с гена SMN2, включающий контактирование клетки человека с соединением по п.8.
10. Способ по п.9, где клетка представляет собой клетку от пациента со спинальной мышечной атрофией.
11. Способ увеличения количества белка Smn, включающий контактирование клетки человека с соединением по п.8.
12. Способ по п.11, где клетка представляет собой клетку от пациента со спинальной мышечной атрофией.
- 208 037123
Фиг. 1 tagcttcttacccgtactccaccgttggcagcacgatcgcacgtcccacgtgaaccattggtaaaccctgatgggatccataattcccccaccacctccc atatgtccagattctcttgatgatgctgatgctttgggaagtatgttaatttcatggtacatgagtggctatcatactggctattatatggtaagtaatcac tcagcatcttttcctgacaatttttttgtagttatgtgactttgttttgtaaatttataaaatactacttgcttctctctttatattactaaaaaataaaaataa aaaaatacaactgtctgaggcttaaattactcttgcattgtccctaagtataattttagttaattttaaaaagctttcatgctattgttagattattttgatt atacacttttgaattgaaattatactttttctaaataatgttttaatctctgatttgaaattgattgtagggaatggaaaagatgggataatttttcataaa tgaaaaatgaaattcttttttttttttttttttttttgagacggagtcttgctctgttgcccaggctggagtgcaatggcgtgatcttggctcacagcaagct ctgcctcctggattcacgccattctcctgcctcagcctcagaggtagctgggactacaggtgcctgccaccacgcctgtctaattttttgtatttttttgtaa agacagggtttcactgtgttagccaggatggtctcaatctcctgaccccgtgatccacccgcctcggccttccaagagaaatgaaatttttttaatgcac aaagatctggggtaatgtgtaccacattgaaccttggggagtatggcttcaaacttgtcactttatacgttagtctcctacggacatgttctattgtatttt agtcagaacatttaaaattattttattttattttattttttttttttttttgagacggagtctcgctctgtcacccaggctggagtacagtggcgcagtctcgg ctcactgcaagctccgcctcccgggttcacgccattctcctgcctcagcctctccgagtagctgggactacaggcgcccgccaccacgcccggctaattt ttttttatttttagtagagacggggtttcaccgtggtctcgatctcctgacctcgtgatccacccgcctcggcctcccaaagtgctgggattacaagcgtg agccaccgcgcccggcctaaaattatttttaaaagtaagctcttgtgccctgctaaaattatgatgtgatattgtaggcacttgtatttttagtaaattaat atagaagaaacaactgacttaaaggtgtatgtttttaaatgtatcatctgtgtgtgcccccattaatattcttatttaaaagttaaggccagacatggtgg cttacaactgtaatcccaacagtttgtgaggccgaggcaggcagatcacttgaggtcaggagtttgagaccagcctggccaacatgatgaaaccttgt ctctactaaaaataccaaaaaaaatttagccaggcatggtggcacatgcctgtaatccgagctacttgggaggctgtggcaggaaaattgctttaatct gggaggcagaggttgcagtgagttgagattgtgccactgcactccacccttggtgacagagtgagattccatctcaaaaaaagaaaaaggcctggca cggtggctcacacctataatcccagtactttgggaggtagaggcaggtggatcacttgaggttaggagttcaggaccagcctggccaacatggtgact actccatttctactaaatacacaaaacttagcccagtggcgggcagttgtaatcccagctacttgagaggttgaggcaggagaatcacttgaacctgg gaggcagaggttgcagtgagccgagatcacaccgctgcactctagcctggccaacagagtgagaatttgcggagggaaaaaaaagtcacgcttcag ttgttgtagtataaccttggtatattgtatgtatcatgaattcctcattttaatgaccaaaaagtaataaatcaacagcttgtaatttgttttgagatcagtt atctgactgtaacactgtaggcttttgtgttttttaaattatgaaatatttgaaaaaaatacataatgtatatataaagtattggtataatttatgttctaa ataactttcttgagaaataattcacatggtgtgcagtttacctttgaaagtatacaagttggctgggcacaatggctcacgcctgtaatcccagcacttt gggaggccagggcaggtggatcacgaggtcaggagatcgagaccatcctggctaacatggtgaaaccccgtctctactaaaagtacaaaaacaaat tagccgggcatgttggcgggcaccttttgtcccagctgctcgggaggctgaggcaggagagtggcgtgaacccaggaggtggagcttgcagtgagcc gagattgtgccagtgcactccagcctgggcgacagagcgagactctgtctcaaaaaataaaataaaaaagaaagtatacaagtcagtggttttggttt tcagttatgcaaccatcactacaatttaagaacattttcatcaccccaaaaagaaaccctgttaccttcattttccccagccctaggcagtcagtacactt tctgtctctatgaatttgtctattttagatattatatataaacggaattatacgatatgtggtcttttgtgtctggcttctttcacttagcatgctattttcaag attcatccatgctgtagaatgcaccagtactgcattccttcttattgctgaatattctgttgtttggttatatcacattttatccattcatcagttcatggaca tttaggttgtttttatttttgggctataatgaataatgttgctatgaacattcgtttgtgttctttttgtttttttggttttttgggttttttttgttttgtttttgtttt tgagacagtcttgctctgtctcctaagctggagtgcagtggcatgatcttggcttactgcaagctctgcctcccgggttcacaccattctcctgcctcagc ccgacaagtagctgggactacaggcgtgtgccaccatgcacggctaattttttgtatttttagtagagatggggtttcaccgtgttagccaggatggtct cgatctcctgacctcgtgatctgcctgcctaggcctcccaaagtgctgggattacaggcgtgagccactgcacctggccttaagtgtttttaatacgtcat tgccttaagctaacaattcttaacctttgttctactgaagccacgtggttgagataggctctgagtctagcttttaacctctatctttttgtcttagaaatct aagcagaatgcaaatgactaagaataatgttgttgaaataacataaaataggttataactttgatactcattagtaacaaatctttcaatacatcttac ggtctgttaggtgtagattagtaatgaagtgggaagccactgcaagctagtatacatgtagggaaagatagaaagcattgaagccagaagagagac agaggacatttgggctagatctgacaagaaaaacaaatgttttagtattaatttttgactttaaattttttttttatttagtgaatactggtgtttaatggtc tcattttaataagtatgacacaggtagtttaaggtcatatattttatttgatgaaaataaggtataggccgggcacggtggctcacacctgtaatcccag cactttgggaggccgaggcaggcggatcacctgaggtcgggagttagagactagcctcaacatggagaaaccccgtctctactaaaaaaaatacaa aattaggcgggcgtggt
- 209 037123 ggtgcatgcctgtaatcccagctactcaggaggctgaggcaggagaattgcttgaacctgggaggtggaggttgcggtgagccgagatcacctcattg cactccagcctgggcaacaagagcaaaactccatctcaaaaaaaaaaaaataaggtataagcgggctcaggaacatcattggacatactgaaaga agaaaaatcagctgggcgcagtggctcacgccggtaatcccaacactttgggaggccaaggcaggcgaatcacctgaagtcgggagttccagatca gcctgaccaacatggagaaaccctgtctctactaaaaatacaaaactagccgggcatggtggcgcatgcctgtaatcccagctacttgggaggctgag gcaggagaattgcttgaaccgagaaggcggaggttgcggtgagccaagattgcaccattgcactccagcctgggcaacaagagcgaaactccgtctc aaaaaaaaaaggaagaaaaatatttttttaaattaattagtttatttattttttaagatggagttttgccctgtcacccaggctggggtgcaatggtgca atctcggctcactgcaacctccgcctcctgggttcaagtgattctcctgcctcagcttcccgagtagctgtgattacagccatatgccaccacgcccagc cagttttgtgttttgttttgttttttgttttttttttttgaga gggtgtcttgctctgtccccca agctgga gtgca gcggcgcgatcttggctca ctgca a get ctgcctcccaggttcacaccattctcttgcctcagcctcccgagtagctgggactacaggtgcccgccaccacacccggctaatttttttgtgtttttagta gagatggggtttcactgtgttagccaggatggtctcgatctcctgaccttttgatccacccgcctcagcctccccaagtgctgggattataggcgtgagc cactgtgcccggcctagtcttgtatttttagtagagtcgggatttctccatgttggtcaggctgttctccaaatccgacctcaggtgatccgcccgccttgg cctccaaaagtgcaaggcaaggcattacaggcatgagccactgtgaccggcaatgtttttaaattttttacatttaaattttattttttagagaccaggtc tcactctattgctcaggctggagtgcaagggcacattcacagctcactgcagccttgacctccagggctcaagcagtcctctcacctcagtttcccgagt agctgggactacagtgataatgccactgcacctggctaatttttatttttatttatttatttttttttgagacagagtcttgctctgtcacccaggctggagt gcagtggtgtaaatctcagctcactgcagcctccgcctcctgggttcaagtgattctcctgcctcaacctcccaagtagctgggattagaggtccccacc accatgcctggctaattttttgtactttcagtagaaacggggttttgccatgttggccaggctgttctcgaactcctgagctcaggtgatccaactgtctcg gcctcccaaagtgctgggattacaggcgtgagccactgtgcctagcctgagccaccacgccggcctaatttttaaattttttgtagagacagggtctcat tatgttgcccagggtggtgtcaagctccaggtctcaagtgatccccctacctccgcctcccaaagttgtgggattgtaggcatgagccactgcaagaaa accttaactgcagcctaataattgttttctttgggataacttttaaagtacattaaaagactatcaacttaatttctgatcatattttgttgaataaaataa gtaaaatgtcttgtgaaacaaaatgctttttaacatccatataaagctatctatatatagctatctatatctatatagctattttttttaacttcctttatttt ccttacagggttttagacaaaatcaaaaagaaggaaggtgctcacattccttaaatataaggagtaagtctgccagcattatgaaagtgaatcttactt ttgtaaaactttatggtttgtggaaaacaaatgtttttgaacatttaaaaagttcagatgttagaaagttgaaaggttaatgtaaaacaatcaatattaa agaattttgatgccaaaactattagataaaaggttaatctacatccctactagaattctcatacttaactggttggttgtgtggaagaaacatactttcac aataaagagctttaggatatgatgccattttatatcactagtaggcagaccagcagacttttttttattgtgatatgggataacctaggcatactgcact gtacactctgacatatgaagtgctctagtcaagtttaactggtgtccacagaggacatggtttaactggaattcgtcaagcctctggttctaatttctcat ttgcaggaaatgctggcatagagcagcacggatccgaagacgccaaaaacataaagaaaggcccggcgccattctatcctctagaggatggaaccg ctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgccctggttcctggaacaattgcttttacagatgcacatatcgaggtgaacatcacgtacgcg gaatacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtgaaaactctcttca attctttatgccggtgttgggcgcgttatttatcggagttgcagttgcgcccgcgaacgacatttataatgaacgtgaattgctcaacagtatgaacattt cgcagcctaccgtagtgtttgtttccaaaaaggggttgcaaaaaattttgaacgtgcaaaaaaaattaccaataatccagaaaattattatcatggatt ctaaaacggattaccagggatttcagtcgatgtacacgttcgtcacatctcatctacctcccggttttaatgaatacgattttgtaccagagtcctttgat cgtgacaaaacaattgcactgataatgaattcctctggatctactgggttacctaagggtgtggcccttccgcatagaactgcctgcgtcagattctcgc atgccagagatcctatttttggcaatcaaatcattccggatactgcgattttaagtgttgttccattccatcacggttttggaatgtttactacactcggat atttgatatgtggatttcgagtcgtcttaatgtatagatttgaagaagagctgtttttacgatcccttcaggattacaaaattcaaagtgcgttgctagta ccaaccctattttcattcttcgccaaaagcactctgattgacaaatacgatttatctaatttacacgaaattgcttctgggggcgcacctctttcgaaaga agtcggggaagcggttgcaaaacgcttccatcttccagggatacgacaaggatatgggctcactgagactacatcagctattctgattacacccgagg gggatgataaaccgggcgcggtcggtaaagttgttccattttttgaagcgaaggttgtggatctggataccgggaaaacgctgggcgttaatcagaga ggcgaattatgtgtcagaggacctatgattatgtccggttatgtaaacaatccggaagcgaccaacgccttgattgacaaggatggatggctacattct ggagacatagcttactgggacgaagacgaacacttcttcatagttgaccgcttgaagtctttaattaaatacaaaggatatcaggtggcc cccgctgaattggaatcgatattgttacaacaccccaacatcttcgacgcgggcgtggcaggtcttcccgacgatgacgccggtgaacttcccgccgcc gttgttgttttggagcacggaaagacgatgacggaaaaagagatcgtggattacgtcgccagtcaagtaacaaccgcgaaaaagttgcgcggagga gttgtgtttgtggacgaagtaccgaaaggtcttaccggaaaactcgacgcaagaaaaatcagagagatcctcataaaggccaagaagggcggaaag tccaaattgcgcggccgctaaatcgaaagtacaggactagccttcctagcaaccgcgggctgggagtctgagacatcactcaagatatatgctcggta acgtatgctctagccatctaactattccctatgtcttataggg
SEQ ID NO. 21
Фиг. 2а
Вставка аденина
Фиг. 2b ш θ 40-1 _□ -ф- мРНК минигена SMN2 FL
Концентрация соединения 6 (мкМ)
Фиг. 3 a
- 210 037123
Фиг. 3b
U.UUl U.U1 υ.Ί Ί 1U
Концентрация соединения 6 (мкМ) Фиг. 4a
Концентрация соединения 170 (мкМ)
Фиг. 4b
Фиг. 5 a
Фиг. 5b
мозг Растворитель соед.6 Растворитель соед.6 100 мг/кг 100 мг/кг
Фиг. 6a
- 211 037123
Растворитель соед. 170 Растворитель соед. 170 10 мг/кг 10 мг/кг
Фиг. 6b
Головной мозг (5 мышей в образце)
Растворитель Соединение 6 (100 мг/кг)
Мышцы (5 мышей в образце)
Растворитель
Соединение 6 (100 мг/кг)
Фиг. 7a
Головной мозг (5 мышей в образце)
Растворитель Соединение 170 (10 мг/кг)
Мышцы (5 мышей в образце) Растворитель Соединение 170 (10 мг/кг)
Фиг. 7b
Фиг. 8a
Фиг. 8b
Фиг. 9a
- 212 037123
Фиг. 9b
Фиг. 10
Фиг. 11a
Фиг. 11b
- 213 037123
Растворитель 3 мг/кг 10 мг/кг 30 мг/кг Соединение 6 Головной мозг Фиг. 12a
10 мг/кг
30 мг/кг
Растворитель 3 мг/кг
Соединение 6 Спинной мозг
Фиг. 12b
Растворитель 3 мг/кг
10 мг/кг
30 мг/кг
Соединение 6 Мышцы
Фиг. 12c
Соединение 6 Кожа
Фиг. 12d
Растворитель 0.1 мг/кг 0.3 мг/кг 1 мг/кг 3 мг/кг 10 мг/кг
Соединение 170 Головной мозг
Фиг. 12e
- 214 037123
Растворитель 0.1 мг/кг 0.3 мг/кг 1 мг/кг 3 мг/кг Юмг/кг
Соединение 170 Спинной мозг
Фиг. 12f
Растворитель 0.1 мг/кг 0.3 мг/кг 1 мг/кг
Соединение 170 Мышцы
Фиг. 12g
Постанатальные сутки
Фиг. 13a
Постанатальные сутки
Фиг. 13b
- 215 037123
Постанатальные сутки
Фиг. 14a
Фиг. 14b
Постанатальные сутки
Фиг. 15a
Постанатальные сутки
Фиг. 15b
Фиг. 16a
- 216 037123
Соед. 170
Фиг. 16b
Фиг. 17a
Фиг. 17b
Евра Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
EA201792465A 2012-02-10 2013-02-08 Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии EA037123B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261597523P 2012-02-10 2012-02-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201792465A1 EA201792465A1 (ru) 2018-08-31
EA037123B1 true EA037123B1 (ru) 2021-02-09

Family

ID=48948163

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201792465A EA037123B1 (ru) 2012-02-10 2013-02-08 Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии
EA201491505A EA029542B1 (ru) 2012-02-10 2013-02-08 ПРОИЗВОДНЫЕ 4Н-ПИРИДО[1,2-а]ПИРИМИДИН-4-ОНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СПИНАЛЬНОЙ МЫШЕЧНОЙ АТРОФИИ

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201491505A EA029542B1 (ru) 2012-02-10 2013-02-08 ПРОИЗВОДНЫЕ 4Н-ПИРИДО[1,2-а]ПИРИМИДИН-4-ОНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СПИНАЛЬНОЙ МЫШЕЧНОЙ АТРОФИИ

Country Status (30)

Country Link
US (6) US9586955B2 (ru)
EP (2) EP3406252B1 (ru)
JP (2) JP6092897B2 (ru)
KR (2) KR102341596B1 (ru)
CN (2) CN108299314A (ru)
AR (1) AR092794A1 (ru)
AU (2) AU2013216870B2 (ru)
BR (1) BR112014019750B1 (ru)
CA (1) CA2863874C (ru)
CL (1) CL2014002100A1 (ru)
CO (1) CO7061082A2 (ru)
CR (1) CR20140376A (ru)
DK (1) DK2812004T3 (ru)
EA (2) EA037123B1 (ru)
EC (1) ECSP14017269A (ru)
ES (1) ES2697174T3 (ru)
HK (1) HK1202077A1 (ru)
HU (1) HUE039779T2 (ru)
IL (2) IL233959A (ru)
MA (1) MA35920B1 (ru)
MX (2) MX354074B (ru)
NZ (1) NZ628186A (ru)
PE (1) PE20142364A1 (ru)
PH (2) PH12014501786B1 (ru)
PL (1) PL2812004T3 (ru)
SG (2) SG10201609188WA (ru)
TR (1) TR201813877T4 (ru)
TW (2) TWI585085B (ru)
UA (1) UA116981C2 (ru)
WO (1) WO2013119916A2 (ru)

Families Citing this family (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10327940B2 (en) 2008-11-09 2019-06-25 3D Systems, Inc. Spiral brace
MX352861B (es) 2011-12-30 2017-12-13 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
EP2809322B9 (en) 2012-01-26 2019-10-30 PTC Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
EP3406252B1 (en) * 2012-02-10 2020-05-13 PTC Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
EA029155B1 (ru) 2012-03-01 2018-02-28 ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии
CN104470909B (zh) 2012-03-23 2018-04-24 Ptc医疗公司 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
US10987370B2 (en) * 2012-12-24 2021-04-27 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Methods of inducing read-through of a nonsense mutation associated with ataxia telangiectasia, Rett syndrome or spinal muscular atrophy by erythromycin or azithromycin
MX2016001963A (es) 2013-08-19 2016-05-26 Hoffmann La Roche Metodo de seleccion.
EP3082820B1 (en) 2013-12-19 2022-07-20 PTC Therapeutics, Inc. Methods for modulating the amount of rna transcripts
US10882868B2 (en) 2014-05-15 2021-01-05 Hoffmann-La Roche Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
EP4241772A3 (en) * 2014-05-15 2023-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Process for the preparation of compounds useful for treating spinal muscular atrophy
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
WO2016040748A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for detection of smn protein in a subject and treatment of a subject
AU2015327836B2 (en) 2014-10-03 2021-07-01 Cold Spring Harbor Laboratory Targeted augmentation of nuclear gene output
EP3242763A4 (en) * 2015-01-05 2018-08-29 Sikorsky Aircraft Corporation Integrated vibration damper for additively manufactured structure and method
JP6749343B2 (ja) * 2015-05-20 2020-09-02 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 脊髄性筋萎縮症を処置するための化合物
EP4249472A3 (en) 2015-05-30 2023-12-13 PTC Therapeutics, Inc. Methods for modulating rna splicing
KR20220105174A (ko) 2015-10-09 2022-07-26 유니버시티 오브 사우스앰톤 유전자 발현의 조절 및 탈조절된 단백질 발현의 스크리닝
WO2017081111A1 (en) * 2015-11-12 2017-05-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Compounds for treating amyotrophic lateral sclerosis
EP3373972B1 (en) * 2015-11-12 2024-03-20 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions for treating spinal muscular atrophy
MX2021001091A (es) 2015-12-10 2022-04-26 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para usarse en el tratamiento o mejoramiento de la enfermedad de huntington.
EP3386978B1 (en) 2015-12-10 2021-01-27 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bridged piperidine derivatives
CN109312343B (zh) 2015-12-14 2022-09-27 冷泉港实验室 用于治疗常染色体显性精神发育迟滞5型和Dravet综合征的反义寡聚体
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
JP6983813B2 (ja) * 2016-04-28 2021-12-17 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft ２−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−２−イルピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの調製のためのプロセス
EP3471779A4 (en) 2016-06-16 2020-07-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMBINATIONS FOR MODULATING THE SMN EXPRESSION
EA201991309A1 (ru) 2016-11-28 2019-11-29 Способы модуляции сплайсинга рнк
AU2017382339B2 (en) 2016-12-22 2024-02-15 Novartis Ag NMDA receptor modulators and uses thereof
EP3634953B1 (en) 2017-06-05 2024-01-03 PTC Therapeutics, Inc. Compounds for treating huntington's disease
JP2020523365A (ja) 2017-06-14 2020-08-06 ピーティーシー セラピューティクス，インコーポレーテッド Ｒｎａスプライシングを改変する方法
MX2019015580A (es) 2017-06-28 2020-07-28 Ptc Therapeutics Inc Metodos para tratar la enfermedad de huntington.
BR112019027717A2 (pt) * 2017-06-28 2020-07-28 Ptc Therapeutics, Inc. métodos para tratar a doença de huntington
RU2020105929A (ru) 2017-08-04 2021-09-06 Скайхоук Терапьютикс, Инк. Способы и композиции для модулирования сплайсинга
RS65031B1 (sr) 2017-08-25 2024-02-29 Stoke Therapeutics Inc Antisens oligomeri za lečenje stanja i bolesti
CN116813648A (zh) * 2017-09-22 2023-09-29 豪夫迈·罗氏有限公司 制备2-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮衍生物的方法
KR20200070367A (ko) 2017-10-23 2020-06-17 스톡 테라퓨틱스, 인크. 넌센스 매개 rna 분해 기반 병태 및 질환 치료를 위한 안티센스 올리고머
CA3094703A1 (en) 2018-03-27 2019-10-03 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating huntington's disease
WO2020004594A1 (ja) * 2018-06-27 2020-01-02 株式会社リボルナバイオサイエンス 脊髄性筋萎縮症の予防または治療剤
EP3814360A1 (en) 2018-06-27 2021-05-05 PTC Therapeutics, Inc. Heteroaryl compounds for treating huntington's disease
EP3814357B1 (en) 2018-06-27 2024-05-01 PTC Therapeutics, Inc. Heterocyclic and heteroaryl compounds for treating huntington's disease
DK3830092T3 (en) 2018-08-03 2023-08-07 Novartis Ag Heteroaromatic nmda receptor modulators and uses thereof
CA3108293A1 (en) * 2018-08-07 2020-02-13 The Children's Hospital Of Philadelphia Alternative splicing regulation of gene expression and therapeutic methods
JP2022521467A (ja) 2019-02-05 2022-04-08 スカイホーク・セラピューティクス・インコーポレーテッド スプライシングを調節するための方法および組成物
EP3920928A4 (en) 2019-02-06 2022-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATION OF SPLICING
US11129829B2 (en) 2019-06-17 2021-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. Methods for modulating splicing
CN110540535B (zh) * 2019-10-23 2020-07-31 上海再启生物技术有限公司 适合放大制备4-(6-氨基吡啶-3-基)取代哌啶的工艺方法
CN111116576A (zh) * 2019-12-01 2020-05-08 北京师范大学 一种喹嗪酮类化合物及其制备方法
JP2023506147A (ja) 2019-12-02 2023-02-15 ストーム・セラピューティクス・リミテッド Ｍｅｔｔｌ３阻害剤としてのポリヘテロ環式化合物
JP2023512116A (ja) 2020-01-28 2023-03-23 プロテゴ バイオファーマ， インコーポレイテッド トランスサイレチンの安定化及びトランスサイレチンの誤った折り畳みの阻害のための化合物、組成物、及び方法
WO2021174167A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
US20230140983A1 (en) 2020-02-28 2023-05-11 Remix Therapeutics Inc. Pyridazine derivatives for modulating nucleic acid splicing
AU2021228770A1 (en) 2020-02-28 2022-09-29 Remix Therapeutics Inc. Thiophenyl derivatives useful for modulating nucleic acid splicing
US20220064638A1 (en) 2020-02-28 2022-03-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating smn2
WO2021174164A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
MX2022012678A (es) 2020-04-08 2023-01-11 Remix Therapeutics Inc Compuestos y metodos para modular el corte y empalme.
WO2021207550A1 (en) 2020-04-08 2021-10-14 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
WO2021231107A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 Stoke Therapeutics, Inc. Opa1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
AU2021300260A1 (en) 2020-07-02 2023-02-09 Remix Therapeutics Inc. 5-[5-(piperidin-4-yl)thieno[3,2-c]pyrazol-2-yl]indazole derivatives and related compounds as modulators for splicing nucleic acids and for the treatment of proliferative diseases
BR112022027107A2 (pt) 2020-07-02 2023-03-14 Remix Therapeutics Inc Derivados de 2-(indazol-5-il)-6-(piperidin-4-il)-1,7-naftiridina e compostos relacionados como moduladores para splicing de ácidos nucleicos e para o tratamento de doenças proliferativas
WO2022070071A1 (en) * 2020-09-30 2022-04-07 Janssen Biotech, Inc. Dihydroorotate dehydrogenase inhibitors
KR20230157367A (ko) 2021-03-17 2023-11-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 신규 티아졸로피리미디논 유도체
TW202321206A (zh) 2021-07-28 2023-06-01 美商普羅泰戈生物製藥股份有限公司 轉甲狀腺素蛋白穩定化合物
EP4396177A1 (en) 2021-08-30 2024-07-10 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
EP4395889A1 (en) 2021-08-30 2024-07-10 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
WO2023034836A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
IL311135A (en) 2021-08-30 2024-04-01 Remix Therapeutics Inc Splicing Modulation Compounds and Methods
CA3230256A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Dominic Reynolds Compounds and methods for modulating splicing
CA3233973A1 (en) 2021-10-13 2023-04-20 Dominic Reynolds Compounds and methods for modulating nucleic acid splicing
TW202330552A (zh) 2021-10-13 2023-08-01 美商雷密克斯醫療公司 調節剪接之化合物及方法
WO2023133229A2 (en) 2022-01-05 2023-07-13 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
WO2023133225A1 (en) 2022-01-05 2023-07-13 Remix Therapeutics Inc. Compounds and methods for modulating splicing
TW202337442A (zh) 2022-01-05 2023-10-01 美商雷密克斯醫療公司 用於調節剪切之化合物及方法
WO2023240236A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of spinal muscular atrophy related disorders
CN117263936B (zh) * 2023-11-21 2024-02-23 中国中医科学院医学实验中心 一种咪唑并[1, 2-a]吡啶衍生物及其制备方法和在中枢神经系统渗透性HDAC6抑制药物中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4122274A (en) * 1977-05-25 1978-10-24 Bristol-Myers Company 3-Tetrazolo-5,6,7,8-substituted-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-ones
WO1993023398A1 (en) * 1992-05-13 1993-11-25 E.I. Du Pont De Nemours And Company Substituted pyrido[1,2-a]pyrimidinone derivatives as fungicides
US6977255B2 (en) * 2000-01-24 2005-12-20 Kinacia Pty. Ltd. Therapeutic morpholino-substituted compounds
WO2011085990A1 (en) * 2010-01-13 2011-07-21 Institut Pasteur Korea Anti - infective pyrido (1,2 -a) pyrimidines

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3558618A (en) 1968-04-01 1971-01-26 Dow Chemical Co Novel 4h-pyrazino(1,2-a)pyrimidine-4-ones
JPS56150091A (en) 1980-03-28 1981-11-20 Janssen Pharmaceutica Nv 3-(1-piperidinylalkyl)-4h-pyrido(1,2-a)pyrimidine- 4-one derivative and its manufacture
US4342870A (en) * 1980-03-28 1982-08-03 Janssen Pharmaceutica N.V. Novel 3-(1-piperidinylalkyl)-4H-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-one derivatives
US5089633A (en) 1987-04-28 1992-02-18 Georgia Tech Research Corporation Substituted isocoumarins
US5726182A (en) * 1990-05-02 1998-03-10 Abbott Laboratories Quinolizinone type compounds
IL122296A0 (en) * 1995-06-06 1998-04-05 Abbott Lab Quinolizinone type compounds
US5869500A (en) 1996-12-13 1999-02-09 Hoffmann-La Roche Inc. Pyridone compounds useful in treating Alzheimer's disease
EP1115724A1 (en) 1998-09-21 2001-07-18 Shire Biochem Inc. Quinolizinones as integrin inhibitors
WO2001030757A1 (fr) * 1999-10-28 2001-05-03 Microcide Pharmaceuticals, Inc. Inhibiteurs de la pompe par liberation de medicaments
WO2002087589A1 (fr) 2001-04-26 2002-11-07 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament permettant d'inhiber une pompe d'elimination de medicament
DE60236322D1 (de) 2001-12-07 2010-06-17 Vertex Pharma Verbindungen auf pyrimidin-basis als gsk-3-hemmer
GB0205281D0 (en) 2002-03-06 2002-04-17 Novartis Ag Organic compounds
WO2004009558A2 (en) 2002-07-24 2004-01-29 Ptc Therapeutics, Inc. Ureido substituted benzoic acid compounds, their use for nonsense suppression and the treatment of diseases caused by such mutations
MXPA05013142A (es) 2003-06-20 2006-03-17 Chiron Corp Compuestos de piridinio [1,2-a]pirimidin-4-ona como agentes anticancer.
BRPI0510560A (pt) 2004-05-04 2007-11-20 Warner Lambert Co pirido[2,3-d] pirimidin-7-onas pirrolil substituìdas e seus derivados como agentes terapêuticos
EP1846397A1 (en) 2005-01-21 2007-10-24 Janssen Pharmaceutica N.V. Novel heterocyclic benzoy[c]chromene derivatives useful as modulators of the estrogen receptors
AR059339A1 (es) 2006-02-09 2008-03-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Derivados de la cumarina para trastornos proliferativos de celulas, composicion farmaceutica y agente terapeutico que los contiene
US8110681B2 (en) * 2006-03-17 2012-02-07 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compounds for the treatment of spinal muscular atrophy and other uses
US8337941B2 (en) 2006-07-27 2012-12-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fluorescent substrates for monoamine transporters as optical false neurotransmitters
US8633019B2 (en) 2008-05-27 2014-01-21 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating spinal muscular atrophy
EP2138493A1 (en) 2008-06-26 2009-12-30 Sanofi-Aventis Substituted pyrimidone derivatives
US8986935B2 (en) 2008-08-13 2015-03-24 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating spinal muscular atrophy
WO2011050245A1 (en) * 2009-10-23 2011-04-28 Yangbo Feng Bicyclic heteroaryls as kinase inhibitors
EP2501231B1 (en) * 2009-11-20 2016-12-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Quinolizidinone carboxamide m1 receptor positive allosteric modulators
MX352861B (es) 2011-12-30 2017-12-13 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
EP2809322B9 (en) 2012-01-26 2019-10-30 PTC Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
EP3406252B1 (en) * 2012-02-10 2020-05-13 PTC Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
EA029155B1 (ru) 2012-03-01 2018-02-28 ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии
CN104470909B (zh) 2012-03-23 2018-04-24 Ptc医疗公司 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
EP4241772A3 (en) 2014-05-15 2023-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Process for the preparation of compounds useful for treating spinal muscular atrophy
JP6749343B2 (ja) 2015-05-20 2020-09-02 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 脊髄性筋萎縮症を処置するための化合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4122274A (en) * 1977-05-25 1978-10-24 Bristol-Myers Company 3-Tetrazolo-5,6,7,8-substituted-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-ones
WO1993023398A1 (en) * 1992-05-13 1993-11-25 E.I. Du Pont De Nemours And Company Substituted pyrido[1,2-a]pyrimidinone derivatives as fungicides
US6977255B2 (en) * 2000-01-24 2005-12-20 Kinacia Pty. Ltd. Therapeutic morpholino-substituted compounds
WO2011085990A1 (en) * 2010-01-13 2011-07-21 Institut Pasteur Korea Anti - infective pyrido (1,2 -a) pyrimidines

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NING SHAO et al. Synthesis and structure-activity relationship (SAR) study of 4-azabenzoxazole analogues as H3 antagonists. Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters, 2012, vol. 22, pp. 2075-2078, реферат, таблица 3, соединения 33, 34, 35 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017122097A (ja) 2017-07-13
JP6363744B2 (ja) 2018-07-25
CN104349777A (zh) 2015-02-11
US9879007B2 (en) 2018-01-30
CL2014002100A1 (es) 2015-10-23
US20180105526A1 (en) 2018-04-19
IL254045B (en) 2019-05-30
EP3406252A1 (en) 2018-11-28
CA2863874A1 (en) 2013-08-15
TWI585085B (zh) 2017-06-01
US9586955B2 (en) 2017-03-07
HUE039779T2 (hu) 2019-02-28
CA2863874C (en) 2021-02-16
IL233959A0 (en) 2014-09-30
JP2015508075A (ja) 2015-03-16
CN104349777B (zh) 2018-05-01
CN108299314A (zh) 2018-07-20
AU2017204248B2 (en) 2019-05-30
PE20142364A1 (es) 2015-01-10
EP2812004A2 (en) 2014-12-17
TWI629274B (zh) 2018-07-11
SG11201404713PA (en) 2014-09-26
HK1202077A1 (en) 2015-09-18
EP2812004B1 (en) 2018-06-27
TW201722942A (zh) 2017-07-01
MX2014009696A (es) 2015-01-14
US11753407B2 (en) 2023-09-12
EA029542B1 (ru) 2018-04-30
UA116981C2 (uk) 2018-06-11
KR102341596B1 (ko) 2021-12-21
US20210276999A1 (en) 2021-09-09
KR20200093066A (ko) 2020-08-04
EA201792465A1 (ru) 2018-08-31
BR112014019750A8 (pt) 2018-01-16
AU2013216870B2 (en) 2017-07-20
PH12014501786A1 (en) 2014-11-10
US20190375750A1 (en) 2019-12-12
SG10201609188WA (en) 2016-12-29
AR092794A1 (es) 2015-05-06
TW201336842A (zh) 2013-09-16
DK2812004T3 (en) 2018-10-15
PH12018501711A1 (en) 2019-09-23
MA35920B1 (fr) 2014-12-01
CR20140376A (es) 2015-01-23
MX354074B (es) 2018-02-12
WO2013119916A2 (en) 2013-08-15
US20240067646A1 (en) 2024-02-29
US10851101B2 (en) 2020-12-01
ES2697174T3 (es) 2019-01-22
AU2013216870A1 (en) 2014-08-28
JP6092897B2 (ja) 2017-03-08
WO2013119916A3 (en) 2013-10-24
CO7061082A2 (es) 2014-09-19
PL2812004T3 (pl) 2019-01-31
KR102137087B1 (ko) 2020-07-24
EP2812004A4 (en) 2015-11-11
NZ628186A (en) 2016-03-31
US20150005289A1 (en) 2015-01-01
TR201813877T4 (tr) 2018-11-21
IL254045A0 (en) 2017-10-31
PH12014501786B1 (en) 2014-11-10
MX2022011699A (es) 2022-11-09
IL233959A (en) 2017-11-30
EP3406252B1 (en) 2020-05-13
BR112014019750A2 (pt) 2017-06-20
AU2017204248A1 (en) 2017-07-13
BR112014019750B1 (pt) 2020-03-03
US20170129885A1 (en) 2017-05-11
KR20140121482A (ko) 2014-10-15
ECSP14017269A (es) 2015-09-30
EA201491505A1 (ru) 2015-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11753407B2 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
EP2797592B1 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
US9399649B2 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
BR112014016443B1 (pt) Mistura de pó e método de fabricação de um componente sinterizado
EP2819519A1 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy