EA031730B1 - Антитела к cd52 - Google Patents

Abstract

Предусматриваются антитела к CD52 человека и их антигенсвязывающие фрагменты. Также предусматриваются выделенные нуклеиновые кислоты, рекомбинантные векторы и клетки-хозяева для получения антител и фрагментов. Антитела и фрагменты могут быть применены в терапевтических целях при лечении, например, аутоиммунных заболеваний, рака и отторжения трансплантата.

Description

Настоящее изобретение относится к антителам, более конкретно к антителам, обладающим специфичностью связывания с CD52 человека.

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США № 61/794576, поданной 15 марта 2013 г. Раскрытие указанной предварительной заявки включено в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Предпосылки изобретения

CD52 представляет собой гликозилированный гликозилфосфатдилинозил (GPI)-заякоренный белок клеточной поверхности, который можно найти в изобилии (500000 молекул/клетка) на различных нормальных и злокачественных лимфоидных клетках (например, Т- и В-клетках). См., например, Hale et al., J. Biol. Regul Homeost Agents 15:386-391 (2001); Huh et al., Blood 92: Abstract 4199 (1998); Eisner et al., Blood 88:4684-4693 (1996); Gilleece et al., Blood 82:807-812 (1993); Rodig et al., Clin Cancer Res 12:71747179 (2006); Ginaldi et al., Leuk Res 22:185-191 (1998). CD52 характеризуется низким уровнем экспрессии на миелоидных клетках, таких как моноциты, макрофаги и дендритные клетки, и незначительным уровнем экспрессии, обнаруженной на зрелых естественных клетках-киллерах (NK), нейтрофилах и гематологических стволовых клетках. Там же. В целом, CD52 присутствует по меньшей мере на 95% всех лимфоцитов и моноцитов/макрофагов периферической крови человека (Hale G., et al., The CAMPATH-1 antigen (CD52), Tissue Antigens, 35:178-327 (1990)). CD52 также продуцируется эпителиальными клетками в придатке яичка и семенных протоках,и поглощается спермой во время прохождения через половые пути (Hale et al., 2001, supra; Domagala et al., Med Sci Monit 7:325-331 (2001)). Конкретная биологическая функция CD52 остается неясной, но некоторые данные свидетельствуют о том, что он может быть вовлечен в миграцию и костимуляцию Т-клеток (Rowan et al., Int Immunol 7:69-77 (1995); Masuyama et al., J. Exp. Med. 189:979-989 (1999); Watanabe et al., Clin Immunol 120:247-259 (2006)).

Было разработано несколько моноклональных антител к CD52. Campath-1H® (также известный как алемтузумаб, Campath®, MabCampath®) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело к CD52 человека, которое in vitro демонстрирует мощное цитотоксическое действие (антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) и комплементзависимую цитотоксичность (CDC)). Алемтузумаб распознает эпитоп, который состоит из четырех карбоксиконцевых аминокислот зрелого белка CD52 и части отрицательно заряженного GPI-якоря. Были получены дополнительные моноклональные антитела к CD52 человека. Тем не менее, аффинность связывания некоторых из этих антител уменьшается при хранении и при определенных условиях рН и температуры. Таким образом, существует потребность в антителах к CD52, которые менее склонны подвергаться такому изменению.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к антителам к CD52 человека, созданным с целью сохранить аффинность связывания с течением времени и при высоких значениях рН и температуры. Термины антитело и иммуноглобулин применяются в данном документе взаимозаменяемо. Также предлагаются выделенные нуклеиновые кислоты, рекомбинантные векторы и клетки-хозяева, содержащие последовательность, которая кодирует легкую цепь или тяжелую цепь антитела к CD52, и способ получения антитела к CD52.

Ab26 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело к CD52 человека, содержащее аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 минус сигнальную последовательность и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4 минус сигнальную последовательность. Ab26 снизил аффинность связывания и активность CD52 спустя длительное время хранения. Было неожиданно обнаружено, что варианты Ab26 с определенными заменами отдельной аминокислоты в положении 11 CDR1 легкой цепи (например, моноклональные антитела Ab21, Ab16 и Ab20) не только сохранили или превзошли аффинность связывания Ab26 с CD52 человека, но также продемонстрировали значительно улучшенную стабильность по сравнению с Ab26. Такие вариантные антитела, как Ab21, Ab16 и Ab20, продемонстрировали сопоставимую или улучшенную биологическую активность in vitro и in vivo по сравнению с Ab26. Эти варианты можно применять в терапевтических и диагностических целях.

В некоторых вариантах осуществления антитело к CD52 человека или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 7; CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 8 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 9, и где указанная вариа

- 1 031730 бельная область легкой цепи содержит CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 86; CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 34 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 35. В других вариантах осуществления остаток 11 в SEQ ID NO: 86 может являться K, R, Q, H, S, Y, A, D, E, F, I, L, M, N, Т или V. В одном варианте осуществления остаток 11 в SEQ ID NO: 86 представляет собой K. В другом варианте осуществления остаток 11 в SEQ ID NO: 86 представляет собой R. В еще одном варианте осуществления остаток 11 в SEQ ID NO: 86 представляет собой Q.

В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи антитела к CD52 или фрагмента содержит SEQ ID NO: 59. В дополнительных вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи антитела к CD52 или фрагмента содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 и 83. Например, тяжелые и легкие цепи антитела или фрагмента по настоящему изобретению могут содержать: a) SEQ ID NO: 59 и 68 соответственно; b) SEQ ID NO: 59 и 69 соответственно; с) SEQ ID NO: 59 и 70 соответственно; d) SEQ ID NO: 59 и 71 соответственно; е) SEQ ID NO: 59 и 72 соответственно; f) SEQ ID NO: 59 и 73 соответственно; g) SEQ ID NO: 59 и 74 соответственно; h) SEQ ID NO: 59 и 75 соответственно; i) SEQ ID NO: 59 и 76 соответственно; j) SEQ ID NO: 59 и 77 соответственно; k) SEQ ID NO: 59 и 78 соответственно; l) SEQ ID NO: 59 и 79 соответственно; m) SEQ ID NO: 59 и 80 соответственно; n) SEQ ID NO: 59 и 81 соответственно; о) SEQ ID NO: 59 и 82 соответственно; или р) SEQ ID NO: 59 и 83 соответственно.

В некоторых вариантах осуществления антитело или фрагмент содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности. В дополнительных вариантах осуществления антитело или фрагмент содержит аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57 и 58. Например, антитело или фрагмент может содержать (а) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 49; (b) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 53 или (с) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 54.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению представляет собой иммуноглобулин G (IgG). В дополнительных вариантах осуществления антитело содержит Fc-область иммуноглобулина человека (например, Fc-область IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека). Настоящее изобретение также охватывает антигенсвязывающий фрагмент любого из антител по настоящему изобретению, где указанный фрагмент выбран из группы, состоящей из scFv-фрагмента, Fv-фрагмента, Fabфрагмента, F(ab')₂-фрагмента, минитела, диатела, тритела и тетратела.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению является моноклональным. В других вариантах осуществления антитело и антигенсвязывающий фрагмент являются гуманизированными. Лизин С-конца тяжелой цепи антитела или фрагмента по настоящему изобретению необязательно может быть отщепленным.

Настоящее изобретение также относится к молекуле выделенной нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент, или легкую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент, или обе цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления молекула выделенной нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133 или 134. Настоящее изобретение также охватывает рекомбинантный вектор (например, вектор экспрессии), содержащий указанную молекулу нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает выделенную клетку-хозяин, содержащую указанный вектор.

Настоящее изобретение также относится к выделенной клеточной линии, которая продуцирует антитело к CD52 или его фрагмент, описанные в данном документе, или тяжелую или легкую цепи указанного антитела или его фрагмента. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу получения антитела к CD52 человека или его антигенсвязывающего фрагмента, включающему (1) поддержание клетки-хозяина или клеточной линии, описанной в данном документе, в условиях, подходящих для экспрессии антитела или фрагмента; и (2) выделение антитела или фрагмента.

Настоящее изобретение охватывает композицию, содержащую антитело или антигенсвязывающий фрагмент, описанные в данном документе, и фармацевтически приемлемое средство доставки или носитель.

Настоящее изобретение относится к способу лечения пациента, нуждающегося в этом, включающему введение пациенту эффективного количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает способ лечения аутоиммунного заболевания (например, рассеянного склероза) у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает способ лечения рака (например, хронического лимфобластного лейкоза) у пациента, нуждающегося в этом,

- 2 031730 включающий введение пациенту антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе. Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования ангиогенеза у пациента, нуждающегося в этом, включающему введение пациенту антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, при лечении или для получения лекарственного препарата для лечения аутоиммунного заболевания (например, рассеянного склероза) у пациента, нуждающегося в этом. Настоящее изобретение также относится к применению антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, при лечении или для получения лекарственного препарата для лечения рака (например, хронического лимфобластного лейкоза) у пациента, нуждающегося в этом. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, при лечении избыточного ангиогенеза или для получения лекарственного препарата для ингибирования ангиогенеза у пациента, нуждающегося в этом.

Краткое описание графических материалов

Комплект материалов патента или заявки содержит по меньшей мере один чертеж, выполненный в цвете. Копии этого патента или публикации заявки на патент с цветным чертежом(ами) будут предоставлены Ведомством по запросу и при оплате необходимой пошлины.

На фиг. 1 представлены результаты быстрого скрининга аффинности антител к CD52. Верхняя секция представляет собой маршрутную карту подготовки антител. На графиках средней секции и таблицах нижней секции представлены результаты анализов связывания на BIACORE™ и измерений уровня экспрессии на Octet.

На фиг. 2 представлены результаты экспериментов, характеризующие очищенные антитела к CD52. Верхняя секция представляет собой фотографию геля SDS-PAGE, на которой изображено разделение тяжелой цепи и легкой цепи антител к CD52. Маркеры молекулярной массы изображены на дорожке с отметкой (М). На графике и таблице нижней секции представлены результаты анализов связывания на BIACORE™.

На фиг. 3 представлены фотографии геля SDS-PAGE, на которых изображено получение антител Ab24 и Ab10, продуцируемых в клетках СНО. На геле также показано контрольное антитело к CD52 (CTL) и антитело Ab1. Молекулы 100 кДа и LC-отсечения указаны стрелками.

На фиг. 4 представлена фотография геля SDS-PAGE, на которой изображены молекулы 100 кДа, обнаруженные в антителах Ab24 и Ab 10 с иллюстрацией димера только тяжелой цепи справа. Также изображены результаты для последовательности N-конца.

На фиг. 5 представлены результаты экспериментов, характеризующие дополнительные антитела к CD52. На таблице и графиках представлены результаты анализов связывания на BIACORE™ и измерений уровня экспрессии на Octet. KGN относится к антителу к CD52 с последовательностью тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 и последовательностью легкой цепи SEQ ID NO: 2.

На фиг. 6 представлены результаты экспериментов, характеризующие связывание очищенных антител к CD52 с CD52. Левая секция представляет собой фотографию геля SDS-PAGE, на которой изображены тяжелая цепь и легкая цепь антител дикого типа (CTL) и других антител. Маркеры молекулярной массы показаны на дорожке с отметкой (М). На графике правой секции представлены результаты анализов связывания на BIACORE™.

На фиг. 7 представлен график, отображающий результаты анализа CDC контрольного антитела к CD52 и Ab21, Ab16 и Ab20 антител.

На фиг. 8 представлены результаты анализов активности подавления CD52+ клеток контрольным антителом к CD52 (CTL) и антителами Ab21, Ab16 и Ab20 в трансгенных мышах с CD52 человека. На графике слева отображены результаты, полученные из образцов крови. На графике справа отображены результаты, полученные из образцов селезенки.

На фиг. 9 изображена аминокислотная последовательность белка CD52 дикого типа человека (GenBank, номер доступа ААН00644.1) (SEQ ID NO: 1).

На фиг. 10 изображена аминокислотная последовательность тяжелой цепи полной длины антител Ab26, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 и KGN (SEQ ID NO: 3) и аминокислотная последовательность легкой цепи полной длины антитела Ab26 (SEQ ID NO: 4). Сигнальные последовательности выделены полужирным шрифтом и курсивом, a CDR выделены подчеркиванием.

На фиг. 11 изображена нуклеотидная последовательность полноразмерной тяжелой цепи антител Ab26, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 и KGN (SEQ ID NO: 5) и нуклеотидная последовательности полноразмерной легкой цепи антител Ab26, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, и KGN. Сигнальные последовательности выделены подчеркиванием, а открытые рамки считывания выделены полужирным шриф

- 3 031730 том.

На фиг. 12 изображены аминокислотные последовательности H-CDR1 (SEQ ID NO: 7), H-CDR2 (SEQ ID NO: 8), H-CDR3 (SEQ ID NO: 9), L-CDR2 (SEQ ID NO: 34) и L-CDR3 (SEQ ID NO: 35) антител Ab26, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, и Ab25.

На фиг. 13 изображены аминокислотные последовательности L-CDR1 антител Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 и Ab26.

На фиг. 14 изображены аминокислотные последовательности легкой цепи полной длины антител Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24 и Ab25. CDR выделены подчеркиванием.

На фиг. 15 изображены аминокислотные последовательности вариабельного домена тяжелой и легкой цепи антител Ab26, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab2 3, Ab2 4 и Ab2 5. CDR выделены подчеркиванием.

На фиг. 16 изображены последовательности нуклеиновых кислот вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи антител Ab26, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 и KGN.

На фиг. 17 представлены результаты экспериментов, характеризующие антитело Ab1, выделенное из клеток HEK293. На графике и таблице представлены результаты анализов с применением BIACORE™, измеряющих аффинность Ab1 и двух препаратов Ab26 (CTL1 и CTL2) к пептиду CD52. Верхняя правая секция представляет собой фотографию геля SDS-PAGE в восстанавливающих условиях, на которой изображены тяжелая цепь (НС) и легкая цепь (LC) двух препаратов антител Ab26 (CTL1 и CTL2) и Ab1.

На фиг. 18 представлены результаты экспериментов, характеризующие антитело Ab1, выделенное из клеток СНО. На графиках представлены результаты анализов с применением BIACORE™, измеряющих аффинность антитела Ab1 (нижняя секция) и антитела Ab26 (CTL) (верхняя секция) к пептиду CD52.

На фиг. 19 представлен график, отображающий результаты анализа CDC антитела Ab1 и антитела Ab26 (в качестве контроля). Результаты выражены в относительных единицах флуоресценции (RFU) в зависимости от конечной концентрации антитела в мг/мл.

На фиг. 20 представлены результаты скрининга стабильности антител к CD52. На графике верхней левой секции отображены K_D (нМ) в функциональной зависимости от времени (несколько недель) при 45°С и рН 7,2 для Ab26 (CTL) и вариантных антител. На графике верхней правой секции отображена аффинность по отношению к T0 в функциональной зависимости от времени (несколько недель) при 45°С и рН 7,2 для Ab26 (CTL) и вариантных антител.

На фиг. 21 представлены результаты экспериментов по воздействию инкубации в трехкомпонентном буфере на стабильность антител к CD52. На графике верхней левой секции отображены KD (нМ) на неделе 0, неделе 2 и неделе 4 при 37°С и рН 7,5 для двух препаратов Ab26 (CTL1 и CTL2) и вариантных антител. На графике верхней правой секции отображены K_D (нМ) на неделе 0, неделе 2 и неделе 4 при 45°С и рН 7,4 для Ab26 (CTL) и вариантных антител.

На фиг. 22 представлены результаты анализа Ab26 (CTL), Ab21, Ab16 и Ab20 посредством эксклюзионной хроматографии (SEC)-HPLC после инкубации при 45°С.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение основано на обнаружении, что определенные антитела к CD52 теряют стабильность и демонстрируют снижение аффинности связывания спустя длительное время хранения или при определенных условиях рН и температуры. Были получены различные антитела, содержащие аминокислотные замены в одном положении (положении 11) в CDR1 легкой цепи (L-CDR1) исходных антител. Было обнаружено, что некоторые из этих вариантов антител демонстрируют не только подобные или улучшенные антигенсвязывающие характеристики и биологическую активность, включая активность in vivo, но и повышенную стабильность по сравнению с исходным антителом.

В настоящее изобретение включены антитела к CD52 человека, антигенсвязывающие фрагменты (т.е. части) антител, легкие цепи антител, тяжелые цепи антител и фрагменты этих легких цепей и тяжелых цепей. Настоящее изобретение относится к зрелым антителам или их цепям, таким как гликозилированные антитела, а также незрелому белку или белку-предшественнику антитела. Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновых кислот (например, векторам), которые кодируют как незрелые, так и зрелые белки, к клеткам-хозяевам, которые содержат такие нуклеиновые кислоты, к способам получения незрелых и зрелых белков, а также к способам применения антител.

Антитела и антигенсвязывающие части по настоящему изобретению могут быть применены для лечения субъекта, нуждающегося в этом, например пациента-человека, от различных заболеваний и состояний, опосредованных или вызванных ОЭ52-несущими клетками, таких как симптомы некоторых заболеваний, опосредованных иммунной системой (IMD). Механизм действия может быть таковым, при

- 4 031730 котором антитела к CD52 подавляют такие клетки (например, лимфоциты или раковые клетки CD52⁺), вызывая гибель клеток. Например, такие антитела могут быть применены для лечения аутоиммунных заболеваний (например, рассеянного склероза (MS), ревматоидного артрита, системной красной волчанки, васкулита, миозита и болезни Вегенера) путем подавления лимфоцитов - тип иммуносупрессии, который достигается путем уменьшения популяции циркулирующих лимфоцитов, например Т-клеток и/или В-клеток, что приводит к лимфопении. Антитела по настоящему изобретению также могут быть применены для лечении рака, например лейкозов (например, хронического лимфобластного лейкоза) и лимфомы (например, неходжкинской лимфомы), либо применены при трансплантации тканей (например, трансплантации цельных органов (например, пересадка почки) и трансплантации стволовых клеток). Антитела по настоящему изобретению также могут быть применены для обогащения гемопоэтических стволовых клеток, например, при применении ex vivo (см., например, Lim et al., J. Hematology & Oncology 1:19 (2008)).

Антигенсвязывающие свойства антител по настоящему изобретению.

Антитела по настоящему изобретению характеризуются специфичностью связывания (например, эпитопной специфичностью) или являются селективными в отношении связывания с CD52 человека или его частью. Эти антитела специфически связываются с молекулой CD52 и не связываются специфически с молекулами, которые не являются CD52. Специфическое связывание между антителом к CD52 и CD52 может быть определено, например, путем измерения ЕС₅₀ связывания антитела с клетками CD52⁺ с помощью проточной цитометрии. Специфическое связывание может быть выражено в ЕС₅₀ менее 10 мкг/мл (например, как определено с помощью проточной цитометрии). Антитела, описанные в данном документе, могут обладать специфичностью связывания с CD52 человека или его фрагментом. Анализы связывания могут быть выполнены с выделенным или рекомбинантным CD52 человека, пептидами, полученными из CD52 человека, или клетками, экспрессирующими CD52 человека (например, Т- и/или Вклетками человека, рекомбинантными клетками-хозяевами, экспрессирующими нуклеиновую кислоту, кодирующую CD52 человека, или фракциями клеточных мембран таких клеток). Кроме того, антитела могут обладать специфичностью связывания с одной или несколькими формами CD52 человека (например, гликозилированным CD52 человека; дегликозилированным CD52 человека; негликозилированным CD52 человека и аллельными вариантами). В одном варианте осуществления антитела обладают специфичностью связывания с CD52 человека природного происхождения, эндогенного или дикого типа. Аминокислотная последовательность CD52 человека дикого типа представлена на фиг. 9 (SEQ ID NO: 1).

Антигенсвязывающая аффинность является термином, который описывает прочность связывающего взаимодействия и, как правило, относится к общей прочности связывания антитела с его антигеном. В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению связывается с CD52 человека с указанной аффинностью, например (1) K_D (K_D=K_off (kd)/K_on (ka)) 1x10^-7 M или менее, предпочтительно 1x10^-8 M или менее, более предпочтительно 1x10^-9 M или менее, еще более предпочтительно 1x10^-10 M или менее и наиболее предпочтительно 1x10^-11 M или 1х10^-12М. Например, KD лежит в пределах от 100 нМ до 1 пМ (т.е. от 1x10^-7 до 1x10^-12 М), от 50 нм до 1 пМ, от 5 нМ до 1 пМ или от 1 нМ до 1 пМ. Желаемая антигенсвязывающая аффинность также может быть указана константой скорости Koff 5x10^-1 с^-1 или менее, предпочтительно 1x10^-2 с^-1 или менее, более предпочтительно 1x10^-3 с^-1 или менее, более предпочтительно 1x10⁴ с^-1 или менее, еще более предпочтительно 1x10^-5 с^-1 или менее и наиболее предпочтительно 1x10^-6 с^-1 или менее, что определено с помощью поверхностного плазмонного резонанса. Например, константа скорости K_off может лежать в пределах от 5x10^-1 с^-1 до 1x10^-7 с^-1, от 1x10^-2 с^-1 до 1x10^-6 с^-1 или от 5x10^-3 с^-1 до 1x10^-5 с^-1. Желаемая антигенсвязывающая прочность в конкретном анализе или исходных условиях также может быть указана ЕС50 не более 10 мкг/мл, например ЕС50 0,1-10 мкг/мл.

Антитела по настоящему изобретению включают те, которые связываются с эпитопом на CD52, который является таким же или перекрывает эпитоп CD52, связанный с антителом Ab26 или любым из его вариантов, примеры которых приведены в данном документе. Связывание эпитопов может быть легко определено путем применения различных методик, таких как анализы конкурентного связывания. Применяемый в данном документе термин эпитоп включает любую детерминанту белка, способную специфически связываться с антителом. Эпитопы-детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как аминокислоты и/или углеводные или сахарные боковые цепи, и, как правило, имеют конкретные характеристики трехмерных структур, а также конкретные характеристики зарядов. Эпитоп может быть линейным или конформационным. В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком и взаимодействующей молекулой (такой как антитело) возникают линейно на всем протяжении первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе точки взаимодействия возникают на аминокислотных остатках белка, которые отделены друг от друга в первичной последовательности полипептида.

В одном варианте осуществления для определения того, связывается ли тестируемое антитело с тем же или перекрывающим эпитопом, что и конкретное антитело к CD52 по настоящему изобретению, антителу к CD52 по настоящему изобретению предоставляют возможность связываться с CD52 в условиях его насыщения, а затем измеряют способность тестируемого антитела связываться с CD52. Если тести

- 5 031730 руемое антитело способно связываться с CD52 в то же время, что и эталонное антитело к CD52, то можно сделать вывод, что тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, отличным от того эпитопа, с которым связывается эталонное антитело к CD52. Однако, если тестируемое антитело не способно связываться с CD52 в то же самое время, то можно сделать вывод, что тестируемое антитело связывается с тем же самым эпитопом или перекрывает эпитоп, с которым связывается эталонное антитело к CD52, или с эпитопом, который находится в непосредственной близости от эпитопа, связанного с эталонным антителом. Этот эксперимент можно выполнять с применением ELISA, RIA, BIACORE™ или проточной цитометрии. Для испытания участвует ли антитело к CD52 в перекрестной конкуренции с другим антителом к CD52, можно применять способ конкуренции, описанный выше, в двух направлениях, то есть определять блокирует ли эталонное антитело тестируемое антитело и наоборот.

Также может быть применена сортировка антител в зависимости от связываемого эпитопа для характеристики антител по настоящему изобретению. Выражение сортировка относится к способу группировки антител на основе их антигенсвязывающих характеристик. Процесс сортировки антител с высокой производительностью, основанный на их перекрестной конкуренции, описан в публикации международной заявки на патент № WO 03/48731. Сортировка антител в зависимости от связываемого эпитопа может быть исследована в условиях, когда немеченая форма антитела к CD52 А связывается с синтетическим пептидом, соответствующим последовательности CD52 или CD52-позитивных клеток. Затем добавляют второе меченое антитело к CD52 В и оценивают количество меченого антитела, которое может связаться, по отношению к контрольному образцу, в котором клетки или синтетический пептид ранее не взаимодействовали с антителом к CD52 А. Кроме того, антитела к CD52 А и В могут быть помечены различными флуорохромами или химическими веществами, делающими возможным обнаружение, и можно измерить количество обоих меченых антител, которые могут связаться с CD52антигеном в то же время, с помощью устройства, способного обнаруживать метки, а также измерить количество обоих антител, которые одновременно связываются с CD52-положительными клетками, с помощью проточной цитометрии. Технологии BIACORE™ и Octet позволяют исследовать конкурентное связывание немеченых форм антител. Такое применение немаркированных форм антител является желательным, так как химическая модификация некоторых антител может ухудшить активность связывания. См. также методику, описанную в Jia et al., J. Immunol. Methods 288:91-98 (2004), которую можно применять при осуществлении сортировки антител в зависимости от связываемого эпитопа.

В некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению связываются с CD52 человека с подобной аффинностью или выше, чем у антитела Ab26. В конкретном варианте осуществления антитела по настоящему изобретению характеризуются одинаковой или подобной антителу Ab26 эпитопной специфичностью и биологической функцией (например, функцией подавления лимфоцитов). В одном варианте осуществления антитела по настоящему изобретению связываются с эпитопом, содержащим аминокислотные остатки QTSS CD52 человека.

Структура антител и антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению.

Антитела природного происхождения имеют обычную центральную структуру, в которой две идентичные легкие цепи (приблизительно 24 кДа) и две идентичные тяжелые цепи (приблизительно 55 или 70 кДа) образуют тетрамер. Аминоконцевая часть каждой цепи называется вариабельной (V) областью и может быть выделена из более консервативных константных (С) областей остатка каждой цепи. Внутри вариабельной области легкой цепи (называемой также Vi.-доменом) расположена С-концевая часть, известная как J-сегмент. Внутри вариабельной области тяжелой цепи (называемой также Vn-доменом) расположен D-сегмент в дополнение к J-сегменту. Большая часть вариации аминокислотной последовательности в антителах ограничивается тремя отдельными местами в V-областях, известных как гипервариабельные участки или участки, определяющие комплементарность (CDR), которые непосредственно участвуют в связывании с антигеном. Исходя из аминоконца эти участки обозначены CDR1, CDR2 и CDR3 соответственно. CDR удерживаются вместе более консервативными каркасными областями (FR). Исходя из аминоконца эти области обозначены FR1, FR2, FR3 и FR4 соответственно. Расположение CDR и FR областей и система нумерации были определены по Kabat et а1.,См., Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991); Chothia & Lesk, Canonical Structures for the Hypervariable Regions of Immunoglobulins, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987); и система нумерации IMGT® (The International ImMunoGeneTics Information System®; Lefranc, M.-P., The Immunologist 7, 132-136 (1999)). Можно проводить визуальный осмотр и анализ последовательности для определения границ CDR. Для целей настоящего изобретения последовательности CDR определяли с применением как системы Kabat, так и системы IMGT; при этом, когда CDR, определенные двумя системами, полностью не перекрывают друг друга, включали все остатки последовательностей, определенные обеими системами.

Настоящее изобретение относится к вариантам исходного антитела Ab26. Аминокислотные и нуклеотидные последовательности тяжелой и легкой цепей Ab26 изображены на фиг. 10 и 11 соответственно. Ab26 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4 без сигнальной

- 6 031730 последовательности.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения CDR антитела по настоящему изобретению отличается от Ab26 в аминокислотной последовательности CDR1 легкой цепи по остатку 34 зрелого белка Ab26. Некоторые из этих изменений значительно улучшают стабильность вариантов антитела, не затрагивая его антигенсвязывающие характеристики. Если мутация остатка 34 снижает и антигенсвязывающую аффинность варианта антитела, может быть получена одна или несколько дополнительных мутаций в последовательности антитела (например, в L-CDR1, L-CDR2, L-CDR2, H-CDR1, HCDR2 или H-CDR3) для восстановления аффинности. В некоторых вариантах осуществления остаток 34 изменен от G до K, R, Q, H, S, Y, A, D, E, F, I, L, M, N, Т или V. В некоторых вариантах осуществления изобретения последовательность L-CDR1 антитела к CD52 выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 24, 29, 28, 22, 30, 33, 18, 19, 20, 21, 23, 25, 26, 27, 31 и 32.

Последовательности CDR антител, конкретно проиллюстрированных в данном документе, приведены в табл. 1 ниже, согласно их SEQ ID NO.

Таблица 1

SEQ ID NO антител к CD52

Антитело	H-CDR1	H-CDR2	H-CDR3	L-CDR1	L-CDR2	L-CDR3
АЫ	7	8	9	11	34	35
АЬ2	7	8	9	12	34	35
АЬЗ	7	8	9	13	34	35
АЬ4	7	8	9	14	34	35
АЬ5	7	8	9	15	34	35
АЬб	7	8	9	16	34	35
АЬ7	7	8	9	17	34	35
АЫО	7	8	9	18	34	35
АЫ1	7	8	9	19	34	35
АЫ2	7	8	9	20	34	35
АЫЗ	7	8	9	21	34	35
АЫ4	7	8	9	22	34	35
АЫ5	7	8	9	23	34	35
АЫ6	7	8	9	24	34	35
АЫ7	7	8	9	25	34	35
АЫ8	7	8	9	26	34	35
АЫ9	7	8	9	27	34	35
АЬ20	7	8	9	28	34	35
АЬ21	э	8	9	29	34	35
АЬ22	7	8	9	30	34	35
АЬ23	7	8	9	31	34	35
АЬ24	7	8	9	32	34	35
АЬ25	7	8	9	33	34	35

В некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению являются гуманизированными. Выражение гуманизированное антитело к CD52, применяемое в данном документе, относится к антителу, содержащему один или несколько CDR легкой цепи (CDR1, CDR2 и CDR3) и/или один или несколько CDR тяжелой цепи (CDR1, CDR2 и CDR3) антитела к CD52 с происхождением, отличным от человека, также упоминаемого как антитело донора (например, антитело мыши к CD52), и по меньшей мере часть антитела от человека (например, каркасные области или каркасные и константные области, полученные из легкой цепи и/или тяжелой цепи от человека). Например, гуманизированное антитело представляет собой CDR-привитое антитело с или без изменений каркасной области. В некоторых вариантах осуществления гуманизированные антитела представляют собой деиммунизированные антитела. См., например, Carr, патент США № 7264806, где описаны деиммунизированные антитела, которые были изменены с целью уменьшения количества потенциальных эпитопов Т-клеток для снижения у антитела склонности вызывать иммунный ответ при введении в организм человека.

Могут быть получены изменения в каркасной области, такие как те, при которых заменяют остаток каркасной области от человека остатком из соответствующего положения антитела донора. См. Queen, патент США № 5530101. Может быть получена одна или несколько мутаций, включая делеции, вставки

- 7 031730 и замены одной или нескольких аминокислот в каркасной области. При желании, мутации каркасной области могут быть включены в гуманизированное антитело и сайты для мутации могут быть выбраны с помощью любого подходящего способа, например, как описано в WO 98/06248 и в патенте США № 6407213, полное описание которого включено посредством ссылки. В некоторых случаях одна или несколько аминокислот, фланкирующих один или несколько CDR (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 фланкирующих аминокислот) в исходной каркасной области, также включены в гуманизированное антитело для повышения антигенсвязывающей аффинности. Обратные мутации необязательно могут быть получены в каркасных областях на одном или нескольких остатках для улучшения CD52связывающей аффинности гуманизированного антитела.

Антитела по настоящему изобретению могут отличаться от антитела Ab26 добавлением, делецией или заменой (например, консервативным замещением) одного или нескольких остатков, например отличие по 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, или 12 остаткам от исходных последовательностей.

В качестве примеров настоящее изобретение включает антитела, содержащие тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 68; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 69; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 70; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 71; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 72; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 73; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 74; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR) SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 75; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 76; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 77; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 78; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 79; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 80; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 81; и тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 82; или тяжелую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 59 и легкую цепь, содержащую один или несколько CDR (например, все три CDR), SEQ ID NO: 83.

В одном варианте осуществления антитело по настоящему изобретению характеризуется специфичностью связывания с CD52 человека и содержит (H)-CDR1, H-CDR2, H-CDR3 тяжелой цепи, (L)CDRl, L-CDR2 и L-CDR3 легкой цепи со следующими аминокислотными последовательностями: a) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 18, 34 и 35 соответственно, b) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 19, 34 и 35 соответственно; с) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 20, 34 и 35 соответственно; d) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 21, 34 и 35 соответственно; е) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 22, 34 и 35 соответственно; f) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 23, 34 и 35 соответственно; g) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 24, 34 и 35 соответственно; h) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 25, 34 и 35 соответственно; i) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 26, и 35 соответственно; j) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 27, 34 и 35 соответственно; k) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 28, 34 и соответственно; l) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 29, 34 и 35 соответственно; m) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 30, 34 и 35 соответственно; n) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 31, 34 и 35 соответственно; о) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 32, 34 и 35 соответственно или р) SEQ ID NO: 7, 8, 9, 33, 34 и 35 соответственно.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению содержит L-CDR1, SEQ ID NO: 86 (KSSQSLLYSNXKTYLN), где X представляет собой аминокислоту природного происхождения, выбранную из D, Е, K, R, H, Y, С, N, Q, S, Т, А, V, L, I, M, P, F или W, или нестандартную (например, не природного происхождения) аминокислоту.

Настоящее изобретение также относится к легкой цепи антитела, содержащейся в антителе, описанном в данном документе. В одном варианте осуществления легкая цепь антитела включает L-CDR1, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 и 33. Например, антитело содержит L-CDR1, L-CDR2 и L-CDR3 со следующими аминокислотными после

- 8 031730 довательностями: a) SEQ ID NO: 18, 34 и 35 соответственно; b) SEQ ID NO: 19, 34 и 35 соответственно; с) SEQ ID NO: 20, 34 и 35 соответственно; d) SEQ ID NO: 21, 34 и 35 соответственно; е) SEQ ID NO: 22, 34 и 35 соответственно; f) SEQ ID NO: 23, 34 и 35 соответственно; g) SEQ ID NO: 24, 34 и 35 соответственно; h) SEQ ID NO: 25, 34 и 35 соответственно; i) SEQ ID NO: 26, 34 и 35 соответственно; j) SEQ ID NO: 27, 34 и 35 соответственно; k) SEQ ID NO: 28, 34 и 35 соответственно; l) SEQ ID NO: 29, 34 и 35 соответственно; m) SEQ ID NO: 30, 34 и 35 соответственно; n) SEQ ID NO: 31, 34 и 35 соответственно; о) SEQ ID NO: 32, 34 и 35 соответственно или р) SEQ ID NO: 33, 34 и 35 соответственно.

В табл. 2 перечислены идентификаторы последовательностей (SEQ ID NO) аминокислотных последовательностей тяжелых и легких цепей полной длины и вариабельных доменов антител, конкретно проиллюстрированных в данном документе, а также нуклеотидные последовательности, кодирующие тяжелую и легкую цепи, и вариабельные домены.

Таблица 2

SEQ ID NO антител к CD52

Антитело	ПОЛНАЯ ДЛИНА	ВАРИАБЕЛЬНЫЙ ДОМЕН
Тяжелая	Легкая	Тяжелая	Легкая
ДНК	Амино кислота	ДНК	Амино кислота	ДНК	Амино кислота	ДНК	Амино кислота
АЫ	5	3	112	36	84	59	88	61
АЬ2	5	3	113	37	84	59	89	62
АЬЗ	5	3	114	38	84	59	90	63
АЬ4	5	3	115	39	84	59	91	64
АЬ5	5	3	116	40	84	59	92	65
АЬ6	5	3	117	41	84	59	93	66
АЬ7	5	3	118	42	84	59	94	67
АЫ0	5	3	119	43	84	59	95	68
АЫ1	5	3	120	44	84	59	96	69
АЫ2	5	3	121	45	84	59	97	70
АЫЗ	5	3	122	46	84	59	98	71
АЫ4	5	3	123	47	84	59	99	72
АЫ5	5	3	124	48	84	59	100	73
АЫ6	5	3	125	49	84	59	101	74
АЫ7	5	3	126	50	84	59	102	75
АЫ8	5	3	127	51	84	59	103	76
АЫ9	5	3	128	52	84	59	104	77
АЬ20	5	3	129	53	84	59	105	78
АЬ21	5	3	130	54	84	59	106	79
АЬ22	5	3	131	55	84	59	107	80
АЬ23	5	3	132	56	84	59	108	81
АЬ24	5	3	133	57	84	59	109	82
АЬ25	5	3	134	58	84	59	110	83

В одном варианте осуществления антитело по настоящему изобретению содержит легкую цепь, содержащую последовательность вариабельного домена (V_L) SEQ ID NO: 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 или 83. В другом варианте осуществления антитело содержит легкую цепь, аминокислотная последовательность которой содержит или состоит из SEQ ID NO: 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57 или 58.

В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящему изобретению содержит V_H и V_L, аминокислотные последовательности которых содержат или состоят из: a) SEQ ID NO: 59 и 68 соответственно; b) SEQ ID NO: 59 и 69 соответственно; с) SEQ ID NO: 59 и 70 соответственно; d) SEQ ID NO: 59 и 71 соответственно; е) SEQ ID NO: 59 и 72 соответственно; f) SEQ ID NO: 59 и 73 соответственно; g) SEQ ID NO: 59 и 74 соответственно; h) SEQ ID NO: 59 и 75 соответственно; i) SEQ ID NO: 59 и 76 соответственно; j) SEQ ID NO: 59 и 77 соответственно; k) SEQ ID NO: 59 и 78 соответственно; l) SEQ ID NO: 59 и 79 соответственно; m) SEQ ID NO: 59 и 80 соответственно; n) SEQ ID NO: 59 и 81 соответственно; о) SEQ ID NO: 59 и 82 соответственно или р) SEQ ID NO: 59 и 83 соответственно.

В одном варианте осуществления антитело по настоящему изобретению содержит тяжелую цепь (НС) и легкую цепь (LC), аминокислотные последовательности которых содержат или состоят из: a) SEQ ID NO: 3 и 43 соответственно; b) SEQ ID NO: 3 и 44 соответственно; с) SEQ ID NO: 3 и 45 соответствен

- 9 031730 но; d) SEQ ID NO: 3 и 46 соответственно; e) SEQ ID NO: 3 и 47 соответственно; f) SEQ ID NO: 3 и 48 соответственно; g) SEQ ID NO: 3 и 49 соответственно; h) SEQ ID NO: 3 и 50 соответственно; i) SEQ ID NO: 3 и 51 соответственно; j) SEQ ID NO: 3 и 52 соответственно; k) SEQ ID NO: 3 и 53 соответственно; l) SEQ ID NO: 3 и 54 соответственно; m) SEQ ID NO: 3 и 55 соответственно; n) SEQ ID NO: 3 и 56 соответственно; о) SEQ ID NO: 3 и 57 соответственно или р) SEQ ID NO: 3 и 58 соответственно; каждая последовательность с или без сигнальной последовательности, если она присутствует.

Также в данном документе предлагаются части полных антител, например легкие цепи или тяжелые цепи антител, или части легких и/или тяжелых цепей. Части полных антител включают антигенсвязывающие части полных антител. Выражения антигенсвязывающий фрагмент и антигенсвязывающая часть применяются в данном документе взаимозаменяемо. Антигенсвязывающие фрагменты антител включают, например, одноцепочечные антитела, Fv-фрагменты, Fab-фрагменты, Fab'-фрагменты, Ь(аЬ')₂-фрагменты, Fd-фрагменты, молекулы одноцепочечных Fv (scFv), фрагменты слития scFv-Fc, биспецифические одноцепочечные Fv-димеры, минитела, диатела, тритела, тетратела, антитела с удаленным доменом и однодоменные антитела (dAbs). См., например, Nature Biotechnology 22(9):1161-1165 (2004)). Также настоящее изобретение охватывает антигенсвязывающие молекулы, содержащие V_H и/или V_L. В случае V_H молекула также может содержать одну или несколько СН1, шарнирную, СН2 и CH3 области.

Часть антитела или его фрагменты могут быть получены ферментативным расщеплением или рекомбинантными способами. Например, расщепление папаина или пепсина может быть применено для создания Fab или F(ab')₂-фрагментов соответственно. Антитела также могут быть получены в различных усеченных формах с применением генов антител, в которых один или несколько стоп-кодонов были введены перед естественным местом остановки. Например, рекомбинантная конструкция, кодирующая тяжелую цепь F (ab')₂-фрагмента, может быть разработана с включением последовательностей ДНК, кодирующих CHj-домен и шарнирную область тяжелой цепи. Антигенсвязывающий фрагмент сохраняет специфичность связывания исходного антитела. Привилегированные антигенсвязывающие фрагменты характеризуются специфичностью связывания с CD52 человека дикого типа. Нуклеотидные последовательности (например, ДНК), кодирующие гуманизированные вариабельные области, могут быть сконструированы путем применения способов мутагенеза при помощи ПЦР с изменением существующих последовательностей ДНК (см., например, Kamman, M., et al., Nucl. Acids Res. 17:5404 (1989)). ПЦРпраймеры, кодирующие новые CDR, могут подвергаться гибридизации с образованием ДНК-матрицы ранее гуманизированной вариабельной области, которая основана на той же или очень схожей вариабельной области человека (Sato, K., et al., Cancer Research 53:851-856 (1993)). Если подобная последовательность ДНК не доступна для применения в качестве матрицы, из синтетических олигонуклеотидов может быть сконструирована нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области (см., например., Kolbinger, F., Protein Engineering 8:971-980 (1993)). Последовательность, кодирующая сигнальный пептид, также может быть включена в нуклеиновую кислоту (например, во время синтеза, при вставке в вектор). Если последовательность сигнального пептида недоступна (например, как правило, не присутствует), может быть применена последовательность сигнального пептида от другого антитела (см., например, Kettleborough, С. A., Protein Engineering 4:773-783 (1991)). С помощью этих способов, способов, описанных в данном документе, или других подходящих способов могут быть легко получены различные варианты. Если не указано иное, описание получения и применения антител по настоящему изобретению применимо к антигенсвязывающим фрагментам таких антител.

Антитела по настоящему изобретению могут быть любого изотипа или подтипа, включая IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), IgM, IgA (например, IgA1 и IgA2), IgD и IgE. Антитела могут содержать легкую цепь, полученную либо из к- или λ-легкой цепи.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к варианту антитела или его части, как описано в данном документе, где указанный вариант специфически связывается с CD52 человека, но отличается от эталонного антитела или его части 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотными заменами (например, в CDR области, FR области или константном домене). Например, вариант антитела является по меньшей мере на 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичным эталонному антителу по тяжелой цепи, вариабельному домену тяжелой цепи, легкой цепи или вариабельному домену легкой цепи.

Сходство последовательности или идентичность полипептидов обычно измеряется с помощью программного обеспечения для анализа последовательностей. Программное обеспечение для анализа белка сопоставляет сходные последовательности путем применения критериев сходства, определяя различные замены, делеции и другие модификации, включая консервативные замены аминокислоты. Например, GCG содержит программы, такие как Gap и Bestfit, которые могут быть использованы с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательности или идентичности последовательности между близко родственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды от различных видов организмов, или между белком дикого типа и его мутеином. См., например, GCG Version 6.1. Поли

- 10 031730 пептидные последовательности также можно сравнить, применяя FASTA, программу в GCG Version 6.1, с использованием параметров по умолчанию или рекомендованных параметров. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) обеспечивает выравнивание и процентную идентичность последовательностей в участках с наибольшим сходством между запрашиваемой и найденной последовательностями (Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000)). Другим предпочтительным алгоритмом для сравнения последовательности по настоящему изобретению с базой данных, содержащей большое количество последовательностей от различных организмов, является компьютерная программа BLAST, особенно blastp или tblastn, с использованием параметров по умолчанию. См., например, Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990); Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997); включенном в данный документ посредством ссылки.

Применяемые в данном документе аминокислоты представлены согласно их полным названиям, трехбуквенным кодам, соответствующим им, или согласно однобуквенным кодам, соответствующим им, как указано в следующей таблице:

Полное Название	Трех-Буквенный Код	Одно-Буквенный Код
Аспарагиновая кислота	Asp	D
Глютаминовая кислота	Glu	E
Лизин	Lys	К
Аргинин	Arg	R
Гистидин	His	H
Тирозин	Tyr	Y
Цистеин	Cys	C
Аспарагин	Asn	N
Глутамин	Gin	Q
Серин	Ser	S
Треонин	Thr	T
Глицин	Gly	G
Аланин	Ala	A
Валин	Val	V
Лейцин	Leu	L
Изолейцин	He	I
Метионин	Met	M
Пролин	Pro	P
Фенилаланин	Phe	F
Триптофан	Trp	W

В соответствии с настоящим изобретением один тип аминокислотной замены, который может быть осуществлен, представляет собой замену одного или нескольких цистеинов в антителе, которые могут быть химически активными, другим остатком, таким как, но без ограничений, аланин или серин. В одном варианте осуществления производят замену неканонического цистеина. Замена может быть выполнена в CDR- или каркасной области вариабельного домена или в константном домене антитела. В некоторых вариантах осуществления цистеин является каноническим. Другой тип аминокислотной замены, который может быть осуществлен, представляет собой удаление возможных протеолитических участков в антителе. Такие участки могут встречаться в CDR- или каркасной области вариабельного домена или в константном домене антитела. Замена остатков цистеина и удаление протеолитических участков может снизить риск неоднородности в конечном антителе и тем самым увеличить его однородность. Другой тип аминокислотной замены представляет собой отщепление пар аспарагин-глицин, которые формируют потенциальные участки деамидирования, путем изменения одного или обоих остатков. В другом аспекте настоящего изобретения антитело может быть деиммунизировано для уменьшения его иммуногенности путем применения методик, описанных, например, в публикациях международных заявок на патент WO 98/52976 и WO 00/34317.

Другой тип аминокислотной замены, которая может быть осуществлена в одном из вариантов по настоящему изобретению, представляет собой консервативную замену аминокислоты. Консервативная замена аминокислоты представляет собой замену, при которой аминокислотный остаток замещен другим аминокислотным остатком, содержащим R-группу боковой цепи со сходными химическими свойствами (например, заряд или гидрофобность). В целом, консервативная замена аминокислоты не будет существенно изменять функциональные свойства белка. В случаях, когда две или несколько аминокислотных последовательностей отличаются друг от друга консервативными заменами, процент идентичности

- 11 031730 последовательности или степень сходства можно повышать для коррекции характера консервативности замены. Средства для такой регулировки хорошо известны специалистам в данной области техники. См., например, Pearson, Methods Mol. Biol. 243:307-31 (1994).

Примеры групп аминокислот, которые содержат боковые цепи со сходными химическими свойствами, включают: 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатические гидроксильные боковые цепи: серин и треонин; 3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кислотные боковые цепи: аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота и 7) серосодержащие боковые цепи: цистеин и метионин. Предпочтительные группы консервативного замещения аминокислоты представляют собой валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глютамин. Кроме того, консервативной заменой является любое изменение с положительным значением в матрице логарифмической функции правдоподобия PAM250, раскрытое в Gonnet et al., Science 256:1443-45 (1992). Умеренно консервативной заменой является любое изменение с неотрицательным значением в матрице логарифмической функции правдоподобия PAM250.

В некоторых вариантах осуществления замены аминокислоты в антителе по настоящему изобретению или его антигенсвязывающей части представляют собой те, которые: (1) снижают чувствительность к протеолизу, (2) снижают чувствительность к окислению, (3) изменяют аффинность связывания для образования белковых комплексов, например повышают ADCC и активность CDC антитела, (4) придают или модифицируют другие физико-химические или функциональные свойства таких аналогов, но попрежнему сохраняют специфическое связывание с CD52 человека, (5) удаляют лизин на С-конце и (6) добавляют или удаляют участки гликозилирования. В некоторых вариантах осуществления С-концевой лизин тяжелой цепи антитела к CD52 по настоящему изобретению не присутствует (Lewis et al., Anal., Chem, 66(5): 585-595 (1994)).

В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает новый полипептид, который представляет собой легкую (или тяжелую) цепь антитела по настоящему изобретению, или который представляет собой часть, содержащую вариабельный домен легкой (или тяжелой) цепи. Можно применять такой полипептид, поскольку он может взаимодействовать с противоположной тяжелой (или легкой) цепью антитела с образованием CD52-связывающей молекулы. После того как выбран начальный V_L- или Уц-домен антитела по настоящему изобретению, могут быть выполнены эксперименты по смешиванию и сочетанию, в которых различные пары, содержащие изначально выбранный V_L- или Уц-сегмент. подвергают скринингу на связывание с CD52 для выбора предпочтительной парной комбинации V_L/V_H. Одна определенная последовательность вариабельного домена может быть применена для конструирования функциональных антител к CD52 путем скрининга библиотеки вариабельных доменов для комбинации функциональных парных вариабельных доменов. См., например, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Portolano et al., J. Immunol., 150:880-887 (1993); Beiboer et al., J. Mol. Biol., 296:833-849 (2000); Klimka et al., British Journal of Cancer,. 83:252-260 (2000).

Для диагностических целей или целей анализа (например, визуализации с возможностью, например, мониторинга терапии), антитело (например, его антигенсвязывающий фрагмент) может содержать детектируемую метку. Подходящие детектируемые метки и способы маркировки антитела или его антигенсвязывающего фрагмента хорошо известны в данной области техники. Подходящие детектируемые метки включают, например, радиоизотоп (например, индий-111, технеций-99m или йод-131), позитрониспускающие метки (например, фтор-19), парамагнитные ионы (например, гадолиний(Ш), марганец(П)), эпитоп-метку (маркировка), аффинную метку (например, биотин, авидин), спиновую метку, фермент, флуоресцентную группу или хемилюминесцентную группу. Когда метки не применяются, образование комплекса (например, гуманизированного антитела с CD52 человека) может быть определено с помощью поверхностного плазмонного резонанса, ELISA, FACS или других подходящих способов.

Антитела к CD52 и антигенсвязывающие фрагменты, применяемые в настоящем изобретении, также могут быть конъюгированы с помощью, например, химических реакций или генетических модификаций, с другими фрагментами (например, фрагментами полиэтиленгликоля), что улучшает фармакокинетические характеристики антител, такие как период полувыведения. В некоторых вариантах осуществления антитела к CD52 и антигенсвязывающие фрагменты, применяемые в настоящем изобретении, могут быть связаны с соответствующим цитокином с помощью, например, химической конъюгации или генетических модификаций (например, добавлением кодирующей последовательности цитокина в рамке к кодирующей антитело последовательности, тем самым образуя слитый белок антитело: цитокин).

Настоящее изобретение также относится к иммуноконъюгатам, в которых антитело или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению сопряжен с другим терапевтическим средством, таким как биологически активное соединение (например, цитокины, суперантигены, цитотоксические агенты и токсины). Например, антитело или фрагмент может быть соединен с молекулой растительного или бактериального происхождения (или ее производными), с антителом к интерлейкин-2 или антителами к дифтерийному токсину.

Стабильность антител по настоящему изобретению.

- 12 031730

Антитела по настоящему изобретению являются стабильными при хранении. Антитела по настоящему изобретению могут характеризоваться повышенной стабильностью по сравнению со стабильностью, продемонстрированной Ab26. Стабильность может быть продемонстрирована путем измерения аффинности связывания антитела к CD52 после периода хранения. Чтобы продемонстрировать стабильность, антитело можно подвергнуть инкубации при 37 или 45°С и при рН 7,0, 7,5 или 8,0. Антитело можно инкубировать в буфере, содержащем 10 мМ сукцината, 10 мМ гистидина и 10 мМ фосфата натрия, рН 7,5. Повышенная стабильность может сохраняться по меньшей мере 1 неделю, по меньшей мере 2 недели, по меньшей мере 3 недели, по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере 5 недель, по меньшей мере 6 недель, по меньшей мере 7 недель, по меньшей мере 8 недель, по меньшей мере 9 недель или по меньшей мере 10 недель.

Нуклеиновые кислоты и рекомбинантные векторы.

Настоящее изобретение также относится к молекулам выделенных и/или рекомбинантных (включая, например, практически чистые) нуклеиновых кислот, содержащих последовательности, кодирующие антитело, антигенсвязывающий фрагмент, легкую цепь, тяжелую цепь или вариабельный домен по настоящему изобретению.

Нуклеиновые кислоты, упоминаемые в данном документе как выделенные или очищенные, представляют собой нуклеиновые кислоты, которые были отделены от нуклеиновых кислот геномной ДНК или клеточной РНК их источника происхождения (например, при их нахождении в клетках или в таких смесях нуклеиновых кислот, как библиотеки) и включают нуклеиновые кислоты, полученные описанными в данном документе способами или другими подходящими способами, включая, по существу, чистые нуклеиновые кислоты, нуклеиновые кислоты, полученные путем химического синтеза, комбинацией биологических и химических способов, и рекомбинантные нуклеиновые кислоты, которые были выделены (см., например, Daugherty, b.L. et al., Nucleic Acids Res., 19(9): 2471-2476 (1991); Lewis, A.P. и J.S. Crowe, Gene, 101: 297-302 (1991)).

Нуклеиновые кислоты, упоминаемые в данном документе как рекомбинантные, представляют собой нуклеиновые кислоты, которые были получены с помощью технологии рекомбинантных ДНК, включая нуклеиновые кислоты, которые получают с помощью способов, основанных на методах искусственной рекомбинации, таких как полимеразная цепная реакция (PCR) и/или клонирование в вектор с использованием рестрикционных ферментов. Рекомбинантные нуклеиновые кислоты также представляют собой те, которые являются результатом событий рекомбинации, происходящих в результате естественных механизмов в клетках, но выбраны после введения в клетки нуклеиновых кислот, предназначенных для обеспечения и осуществления возможности необходимого события рекомбинации.

Настоящее изобретение также относится более конкретно к выделенным и/или рекомбинантным нуклеиновым кислотам, содержащим нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, которое обладает специфичностью связывания с CD52 человека, или тяжелую или легкую цепи, или вариабельную область тяжелой цепи, или вариабельную область легкой цепи указанного антитела.

В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109 или 110, которая кодирует VL-аминокислотную последовательность антитела к CD52. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует V.аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 или 83. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует V.аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична V.-аминокислотной последовательности эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Нуклеотидная последовательность, кодирующая V-аминокислотную последовательность Ab26, может быть последовательностью SEQ ID NO: 85. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует V.-аминокислотную последовательность, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 мутаций по сравнению с V.-аминокислотной последовательностью эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Мутации могут быть в CDR или в FR областях.

В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133 или 134, кодирующую легкую цепь аминокислотной последовательности антитела к CD52, либо с или без сигнальной последовательности.

В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57 или 58 либо с или без сигнальной последовательности. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности легкой цепи эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность легкой цепи Ab26, может быть последовательностью SEQ ID NO: 6, с или без сигнальной последовательности. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность легкой цепи, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

- 13 031730

10, 11 или 12 мутаций по сравнению с аминокислотной последовательностью легкой цепи эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Мутации могут быть в CDR, в FR или в константных доменах.

В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую У_н-аминокислотную последовательность антитела к CD52. Например, такая нуклеотидная последовательность может быть последовательностью SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует Vn-аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична V_Hаминокислотной последовательности эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Нуклеотидная последовательность, кодирующая Vu-аминокислотную последовательность Ab26, может быть последовательностью SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует Vu-аминокислотную последовательность, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 мутаций по сравнению с W-аминокислотной последовательностью эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Мутации могут быть в CDR или в FR областях.

В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность тяжелой цепи антитела к CD52, либо с, или без сигнальной последовательности. Например, такая нуклеотидная последовательность может быть последовательностью SEQ ID NO: 5 с или без сигнальной последовательности. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность тяжелой цепи Ab26, может быть последовательностью SEQ ID NO: 5 с или без сигнальной последовательности. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность тяжелой цепи, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 мутаций по сравнению с аминокислотной последовательностью тяжелой цепи эталонного антитела к CD52 (например, Ab26). Мутации могут быть в CDR, в FR или в константных доменах.

Нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению могут быть применены для получения гуманизированных антител, обладающих специфичностью связывания с CD52 человека. Например, нуклеиновая кислота (например, ДНК (например, кДНК), или РНК) или одна или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих гуманизированное антитело по настоящему изобретению, могут быть включены в подходящую конструкцию (например, рекомбинантный вектор) для дальнейшей обработки последовательностей или для получения кодированных антител в подходящих клетках-хозяевах.

Также предлагаются конструкции или векторы (например, векторы экспрессии), подходящие для экспрессии гуманизированного антитела, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека. Доступно разнообразие векторов, включая векторы, которые хранятся в единственном экземпляре или нескольких копиях в клетке-хозяине, или которые оказались интегрированными в хромосому(ы) клеткихозяина. Конструкции или векторы могут быть введены в подходящую клетку-хозяина, и клетки, экспрессирующие гуманизированное антитело по настоящему изобретению, можно получить и хранить в культуре. Можно применять один вектор или несколько векторов для экспрессии гуманизированного антитела, обладающего специфичностью связывания с CD52 человека.

Подходящие векторы экспрессии, например, векторы экспрессии в клетках млекопитающих, также могут содержать ряд компонентов, включая, но без ограничений, один или несколько из следующего: точку начала репликации; селективный маркерный ген; один или несколько элементов, контролирующих экспрессию, таких как элемент контроля транскрипции (например, промотор, энхансер, терминатор) и/или один или несколько сигналов трансляции; последовательность сигнала или последовательность лидера для нацеливания на мембрану или секреции. В конструкции или векторе последовательность сигнального пептида может быть обеспечена конструкцией или вектором, или другим источником. Например, сигналы транскрипции и/или трансляции антитела могут быть применены для управления экспрессией.

Можно вводить промотор для экспрессии в подходящей клетке-хозяине. Промоторы могут быть конститутивными или индуцируемыми. Например, промотор может быть функционально связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей гуманизированное антитело или цепь антитела, таким образом, что он направляет экспрессию кодированного полипептида. Доступно разнообразие подходящих промоторов для прокариотических (например, промоторы lac, tac, T3, Т7 для F.coli) и эукариотических (например, дрожжевая алкогольдегидрогеназа (ADH1), SV40, CMV) хозяев. Специалисты в данной области техники будут в состоянии выбрать подходящий промотор для экспрессии антитела к CD52 или его части по настоящему изобретению.

Кроме того, векторы (например, векторы экспрессии) обычно включают селективный маркер для отбора клеток-хозяев, несущий вектор, и, в случае вектора репликации, точку начала репликации. Гены, кодирующие продукты, которые придают устойчивость к антибиотику или лекарственному средству, представляют собой обычные селективные маркеры и могут быть применены в прокариотических (например, ген β-лактамазы (устойчивость к ампициллину), ген Tet (устойчивость к тетрациклину)) и эука

- 14 031730 риотических клетках (например, гены устойчивости к неомицину (G418 или генетицин), gpt (микофенолокислота), ампициллину или гигромицину). Гены-маркеры дигидрофолат редуктазы дают возможность отбору с метотрексатом в различных хозяевах. Гены, кодирующие генный продукт ауксотрофных маркеров хозяев (например, LEU2, URA3, HIS3), часто применяются в качестве селективных маркеров в дрожжах. Также предусматривается применение вирусных (например, бакуловирусного) или фаговых векторов, и векторов, которые способны интегрироваться в геном клетки-хозяина, таких как ретровирусные векторы.

Таким образом, изобретение относится к молекулам выделенной нуклеиновой кислоты, которые кодируют гуманизированное антитело, гуманизированную легкую цепь, гуманизированную тяжелую цепь по настоящему изобретению. Настоящее изобретение также относится к молекулам выделенной нуклеиновой кислоты, которые кодируют антигенсвязывающую часть антител и их цепи. Полипептидные последовательности, кодируемые нуклеиновыми кислотами по настоящему изобретению, описаны выше и в нижеследующих примерах.

В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота или вектор по настоящему изобретению кодирует тяжелую цепь (или ее антигенсвязывающую часть) или легкую цепь (или ее антигенсвязывающую часть) по настоящему изобретению. В других вариантах осуществления нуклеиновая кислота или вектор по настоящему изобретению кодирует и тяжелую, и легкую цепи (или их антигенсвязывающие части) по настоящему изобретению. Можно применять клетку-хозяин, содержащую как нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь, так и нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь, или одну нуклеиновую кислоту, кодирующую как тяжелые, так и легкие цепи, для получения антитела, содержащего тяжелую и легкую цепи (или антигенсвязывающую часть антитела). Нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь, и нуклеиновая кислота, кодирующая легкую цепь, могут быть размещены на отдельных векторах экспрессии. Они также могут быть размещены на одном векторе экспрессии под тем же или различным контролем экспрессии. См., например, Cabilly, патент США № 6331415; Fang, патент США № 7662623.

Способ получения антител, обладающих специфичностью к CD52 человека.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения антитела к CD52 человека по настоящему изобретению. Антитело по настоящему изобретению можно получать, например, путем экспрессии одной или нескольких рекомбинантных нуклеиновых кислот, кодирующих антитела в подходящей клетке-хозяине. Клетка-хозяин может быть получена с применением любого подходящего способа. Например, конструкции экспрессии (например, один или несколько векторов, например вектор экспрессии в клетках млекопитающих), описанные в данном документе, могут быть введены в подходящую клетку-хозяин, и полученные клетки могут быть сохранены (например, в культуре, в организме животного, в растении) при условиях, подходящих для экспрессии конструкции(ий) или вектора(ов). Подходящие клетки-хозяева могут быть прокариотами, включая бактериальные клетки, такие как B.coli (например, штамм DH5a™ (Invitrogen, Carlsbad, Calif.)), B.subtilis и/или другие подходящие бактерии; эукариотическими клетками, такие как грибковые или дрожжевые клетки (например, Pichia pastoris, Aspergillus sp., Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Neurospora crassa) или другими клетками низших эукариот и клетками высших эукариот, такие как от насекомых (например, клетки Drosophila Schnieder S2, клетки насекомых Sf9 (WO 94/26087 (O'Connor), клетки насекомых TN5B1-4 (HIGH 5) (Invitrogen), млекопитающих (например, клетки COS, такие как COS-1 (АТСС, номер доступа CRL-1650) и COS-7, (АТСС, номер доступа CRL-1651), СНО (например, АТСС, номер доступа CRL-9096), СНО DG44 (Urlaub, G. и Chasin, L.A., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77(7):4216-4220 (1980)), 293 (АТСС, номер доступа CRL-1573), HeLa (АТСС, номер доступа CCL-2), CV1 (АТСС, номер доступа CCL-70), WOP (Dailey, L., et al., J. Virol., 54:739-749 (1985)), 3T3, 293Т (Pear, W.S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90:8392-8396 (1993)), клетки NS0, клетки SP2/0, клетки Hut 78 и т.п.)), или растения (например, табак, Lemna (ряска) и водоросли). (См., например, Ausubel, F.M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons Inc. (1993)). В некоторых вариантах осуществления клеткахозяин не является частью многоклеточного организма (например, растительного или животного), например, она представляет собой выделенную клетку-хозяин или является частью клеточной культуры.

Настоящее изобретение также относится к клеткам, содержащим нуклеиновую кислоту, например, вектор по настоящему изобретению (например, вектор экспрессии). Например, нуклеиновая кислота (например, одна или несколько нуклеиновых кислот), кодирующая тяжелую и легкую цепи гуманизированного антитела, и указанное антитело обладает специфичностью связывания с CD52 человека, или конструкция (т.е. одна или несколько конструкций, например один или несколько векторов), содержащая такую нуклеиновую кислоту(ы), может быть введена в подходящую клетку-хозяин с помощью способа, подходящего отобранной клетке-хозяину (например, трансформации, трансфекции, электропорации, инфекции), с нуклеиновой кислотой(ами), которая является или оказывается функционально связанной с одним или несколькими элементами, контролирующими экспрессию (например, в векторе, в конструкции, созданной в результате процессов в клетке, интегрированной в геном клетки-хозяина). Клеткихозяева можно хранить в условиях, подходящих для экспрессии (например, в присутствии индуктора, в подходящей среде с добавлением соответствующих солей, факторов роста, антибиотиков, питательных

- 15 031730 добавок и т.п.), в результате чего получают кодируемый полипептид(ы). При желании, кодируемый белок (например, гуманизированное антитело, антитело мыши, химерное антитело) могут быть выделены, например, из клеток-хозяев, культуральной среды или молока. Этот способ включает экспрессию в клетке-хозяине (например, клетке молочной железы) трансгенного животного или растения (например, табака) (см., например, WO 92/03918).

Могут быть получены слитые белки, в которых часть антитела (например, антигенсвязывающий фрагмент, цепь антитела) связана с частью, не принадлежащей антителу (т. е. частью, которая не входит в состав антител природного происхождения) в N-концевом положении, С-концевом положении или внутри слитого белка. Например, некоторые варианты осуществления могут быть получены путем введения нуклеиновой кислоты, кодирующей последовательность(и) антитела, в подходящий вектор экспрессии, такой как вектор рЕТ (например, pET-15b, Novagen), фаговый вектор (например, pCANTAB 5 Е, Pharmacia) или другой вектор (например, вектор слияния pRIT2T Protein A, Pharmacia). Полученную конструкцию можно вводить в подходящую клетку-хозяин для экспрессии. При экспрессии могут быть выделены или очищены некоторые гибридные белки из клеточного лизата с помощью подходящего аффинного матрикса (см., например, Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F.M. et al., Eds., Vol. 2, Suppl. 26, pp. 16.4.1-16.7.8 (1991)).

Настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, которая содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту(ы), кодирующую антитело, представленное в данном документе (например, антитело, легкую цепь или тяжелую цепь, вариабельную область легкой цепи или вариабельные области тяжелой цепи). Настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, которая содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту(ы), кодирующую антигенсвязывающую часть антитела или его цепей. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой рекомбинантный вектор (например, вектор экспрессии, вектор экспрессии в клетке млекопитающих) по настоящему изобретению, как упоминается в данном документе.

Настоящее изобретение также относится к способу получения антитела или полипептидной цепи антитела по настоящему изобретению. В одном варианте осуществления способ включает поддержание клетки-хозяина по настоящему изобретению, как описано в данном документе (например, клеткихозяина, содержащей одну или несколько выделенных нуклеиновых кислот, которые кодируют антитело или цепи полипептида (например, легкую цепь и тяжелую цепь, только легкую цепь или только тяжелую цепь по настоящему изобретению) в условиях, подходящих для экспрессии антитела или цепи полипептида. Например, клетку-хозяин можно культивировать на подложке или в суспензии. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает стадию очистки или выделения антитела или цепи полипептида.

Отбор можно выполнять с применением CD52, сопряженного с амином DYNABEADS M-270 (Dynal) в соответствии с рекомендациями производителя. Кроме того, можно проводить отбор с применением биотинилированного CD52 с использованием первичного амина, конкретного реагента сукцинимидил-6-(биотинамидо)гексаноат в соответствии с инструкциями производителя (EZ link NHS LC Biotin, Pierce).

Продукты отборов можно испытывать в качестве периплазматических препаратов скринингом высокой производительности, основанном на конкурентных анализах, которые оценивают способность scFvs или IgG конкурировать за связывание с CD52.

Образцы, способные конкурировать в скрининге высокой производительности, можно подвергать ДНК-секвенированию, как описано в Vaughan et al. (1996) и Osburn et al. (1996). Затем клоны могут быть экспрессированы и очищены, как scFvs или IgG, и можно оценивать их способность связываться с CD52, нейтрализовать CD52 или их комбинацию, например, с помощью анализов, таких как анализа антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) и анализа комплементзависимой цитотоксичности (CDC). Затем можно получать очищенные препараты scFv, как описано в примере 3 в WO 01/66754. Концентрация белка в очищенных препаратах scFv или IgG может быть определена с использованием метода ВСА (Pierce). Аналогичные подходы можно применять для скрининга оптимальной пары (противоположной цепи) тяжелой или легкой цепи установленного антитела (или V_H, или V_L).

Антитела по настоящему изобретению могут быть в виде очищенной или выделенной формы (например, будучи отделенными от молекул (например, пептидов) из источника их происхождения (например, супернатант клеток; в смеси, например, в смеси антител в библиотеке) и включают антитела, полученные описанными в данном документе способами или другими подходящими способами. Выделенные антитела включают практически чистые (по существу, чистые) антитела и антитела, полученные путем химического синтеза, рекомбинантными методами и их комбинацией.

Антитела, содержащие токсичную частицу или токсин.

Настоящее изобретение также относится к антителам, содержим токсичные частицы или токсин. Подходящие токсичные частицы содержат токсин (например, поверхностно-активный токсин, цитотоксин). Токсичная частица или токсин могут быть связаны или конъюгированы с антителом путем применения любого подходящего способа. Например, токсичная частица или токсин могут быть ковалентно связаны с антителом, непосредственно или посредством подходящего линкера. Подходящие линкеры

- 16 031730 могут включать нерасщепляемые или расщепляемые линкеры, например рН-расщепляемые линкеры или линкеры, которые включают сайт расщепления для клеточного фермента. Такие расщепляемые линкеры могут быть применены для получения антитела, которое может высвободить токсичную частицу или токсин после интернализации антитела.

Можно применять различные способы связывания или конъюгации токсичной частицы или токсина с антителом. Конкретный выбранный способ будет зависеть от токсичной частицы или токсина и антитела, которые будут связаны или конъюгированы. При желании, могут быть применены линкеры, содержащие концевые функциональные группы для связывания антитела и токсичной частицы или токсина. Как правило, конъюгация осуществляется путем взаимодействия токсичной частицы или токсина, содержащего реакционноспособную функциональную группу (или он модифицирован с целью содержать реакционноспособную функциональную группу) с помощью линкера либо непосредственно с антителом. Ковалентные связи образуются при взаимодействии токсичной частицы или токсина, содержащего (или он модифицирован с целью содержать) химическую частицу или функциональную группу, которая может, при соответствующих условиях, взаимодействовать со второй химической группой, образуя, таким образом, ковалентную связь. При желании, к антителу или линкеру может быть добавлена подходящая реакционноспособная химическая группа путем применения любого подходящего способа (см., например, Hermanson, С.Т.. Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, Calif. (1996).) Многие комбинации подходящих реакционноспособных химических групп известны в данной области техники; например, аминогруппа может взаимодействовать с электрофильной группой, такой как тозилат, мезилат, галоген, сложный эфир N-гидроксисукцинимидила (NHS) и тому подобное. Тиолы могут взаимодействовать с малеимидом, иодацетилом, акрилолилом, пиридил дисульфидом, 5-тиол-2-нитробензойная кислота-тиолом (TNB-тиол) и тому подобное. Альдегидная функциональная группа может быть сопряжена с амино- или гидразидсодержащими молекулами, и азидная группа может взаимодействовать с трехвалентной фосфорной группой с образованием фосфорной кислоты или фосфоримидной связи. Подходящие способы введения активирующих групп в молекулы известны в данной области техники (см., например, Hermanson, С.Т., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, Calif. (1996)).

Подходящие токсичные частицы и токсины включают, например, мейтансиноид, таксан, калихеамицин, дуокармицин или их производные. Майтанзиноид может быть, например, майтанзинолом или аналогом майтанзинола. Примеры аналогов майтанзинола включают те, которые содержат модифицированное ароматическое кольцо и имеют модификации в других положениях. Майтанзинол и аналоги майтанзинола описаны, например, в патентах США №№ 5208020 и 6333410, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. Майтанзинол может быть сопряжен с антителами и фрагментами антител с применением, например, N-сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионата (также известного как N-сукцинимидил 4-(2-пиридилдитио)пентаноат (или SPP)), 4-сукцинимидил-оксикарбонил-А-(2пиридилдитио)толуола (SMPT), №сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)бутирата (SDPB), 2 иминотиолана или S-ацетилянтарного ангидрида. Таксан может быть, например, таксолом, таксотером или новым таксаном (см., например, WO 01/38318). Калихеамицин может быть, например, бром-комплексом калихеамицина, йод-комплексом калихеамицина или его аналогами и миметиками. Бром-комплексы калихеамицина включают I1-BR, I2-BR, I3-BR, I4-BR, J1-BR, J2-BR и K1-BR. Йод-комплексы калихеамицина включают I1-I, I2-I, I3-I, J1-I, J2-I, L1-I и K1-BR. Калихеамицин и его мутанты, аналоги и миметики описаны, например, в патентах США №№ 4970198, 5264586, 5550246, 5712374 и 5714586, содержание каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки. Аналоги дуокармицина описаны, например, в патентах США №№ 5070092, 5187186, 5641780, 5641780, 4923990 и 5101038, содержание каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

Примеры других токсинов включают без ограничения антиметаболиты, алкилирующие средства, антрациклины, антибиотики и антимитотические средства. Токсин также может быть поверхностноактивным токсином, таким как токсин, который является генератором свободных радикалов, или частицей, содержащей радионуклиды. Токсин может быть белком, полипептидом или пептидом, например, бактериального происхождения или растительным белком.

В качестве токсина также можно применять антисмысловые соединения нуклеиновых кислот, предназначенные для связывания, отмены, содействия деградации или предотвращения выработки мРНК, отвечающей за генерацию конкретного белка-мишени. Антисмысловые соединения включают одно- или двухцепочечные антисмысловые РНК или ДНК, олигонуклеотиды или их аналоги, которые могут специфически гибридизироваться в отдельные молекулы мРНК и предотвращать транскрипцию и/или РНК-обработку молекул мРНК, и/или трансляцию кодируемого полипептида и тем самым вызывать уменьшение в размере соответствующего кодируемого полипептида. Ching, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 10006-10010 (1989); Broder, et al., Ann. Int. Med. 113: 604-618 (1990); Loreau, et al., FEBS Letters 274: 53-56 (1990).

Токсины также могут быть светочувствительными средствами. Подходящие светочувствительные средства включают вещества на основе порфирина, такие как порфимер натрия, зеленые порфирины, хлорин E6, самопроизводное гематопорфирина, фталоцианины, этиопурпурин, тексафрин и т.п.

Токсин может быть антителом или фрагментом антитела, который связывается с внутриклеточной

- 17 031730 целью. Такие антитела или фрагменты антител могут быть направлены на определенные субклеточные компартменты или цели.

Терапевтические способы и композиции.

Фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективное количество одного или нескольких антител и не обязательно фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтически приемлемые носители включают, например, воду, физиологический раствор, забуференный фосфатом физиологический раствор, декстрозу, глицерин, этанол и т.п., а также их комбинации. Фармацевтически приемлемые носители могут дополнительно содержать незначительные количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие средства, консерванты или буферы, которые усиливают срок годности или эффективность слитого белка. Можно составлять композиции для обеспечения быстрого, длительного или замедленного высвобождения активного ингредиента(ов) после введения. Подходящие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. См., например, Remington (2005), The Science and Practice of Pharmacy, A. Gennaro, et al., eds., 21st ed., Mack Publishing Co. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать иммуносупрессивное/иммуномодулирующее и/или противовоспалительное средство. Способ лечения иммунного заболевания у пациента, нуждающегося в таком лечении, может включать введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции. Противодействие активации Т-клеток, опосредованной CD40, может ингибировать нежелательные Т-клеточные ответы, возникающие, например, при аутоиммунных реакциях, отторжении трансплантата или аллергических реакциях. Подавление активации Т-клеток, опосредованной CD40, может смягчить прогрессию и/или тяжесть этих заболеваний.

Применяемый в данном документе термин пациент означает животное, например млекопитающее, включая человека. Пациенту может быть поставлен диагноз иммунного заболевания или рака. Лечение, или лечить, или осуществлять лечение относятся к процессу, включающему облегчение прогрессирования или тяжести симптомов, расстройства, состояния или заболевания. Иммунное заболевание относится к любому заболеванию, связанному с развитием иммунной реакции у индивидуума, включая клеточные и/или гуморальные иммунные реакции. Примеры иммунных заболеваний включают без ограничения воспаление, аллергию, аутоиммунное заболевание или заболевание, связанное с трансплантатом. Аутоиммунное заболевание может быть выбрано из группы, состоящей из системной красной волчанки, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, диабета, псориаза, склеродермии, атеросклероза, воспалительного заболевания кишечника и неспецифического язвенного колита.

Антитела по настоящему изобретению можно применять для подавления иммунитета и уничтожения иммунитета. Антитела нацелены на CD52-экспрессирующие клетки (например, Т- и В-клетки) и уменьшают (или применяемое в данном документе подавляют) их популяцию у субъекта, нуждающегося в этом. Подавление лимфоцитов можно применять при лечении различных заболеваний и состояний, таких как воспаление, аутоиммунные заболевания и рак (например, злокачественное заболевание лимфоцитов (или В-, или Т-клеток)). См., например, Reiff, A., Hematology, 10(2):79-93 (2005). Примеры заболеваний и состояний, которые можно лечить антителами или их антигенсвязывающими частями по настоящему изобретению, включают без ограничения рассеянный склероз, волчанку, ревматоидный артрит, реакцию трансплантат против хозяина (GVHD), воспалительное заболевание таза, васкулит, болезнь Бехчета, гранулематоз Вегенера, синдром Шегрена, увеит, псориаз, склеродермию, полимиозит, диабет I типа (на аутоиммунной основе), аутоиммунные цитопении (например, аутоиммунная нейтропения), PRCA, связанная с невосприимчивостью к переливанию крови, лейкоз и лимфому, такие как неходжкинская лимфома с массивным поражением и В-клеточный хронический лимфолейкоз (CLL). Антитело также можно вводить профилактически для предотвращения возникновения воспаления или рецидива аутоиммунного заболевания или рака. Например, антитело по данному изобретению может быть введено как часть условного режима для подготовки пациента к трансплантации (например, трансплантации стволовых клеток, вливанию аутологичных или аллогенных Т-клеток, или пересадке цельных органов). В некоторых вариантах осуществления антитела и их антигенсвязывающие части по настоящему изобретению применяют для получения лекарственных средств для лечения иммунного заболевания или рака.

Любой подходящий способ или курс может быть применен для введения полипептида антитела или фармацевтической композиции. Способы введения включают, например, парентеральное (например, внутривенная, внутриартериальная, внутримышечная, интратекальная, внутрибрюшинная, подкожная инъекция), оральное (например, с пищей), локальное, местное, ингаляционное (например, внутрибронхиальная, интраназальная или пероральная ингаляция, интраназальные капли) или ректальное, в зависимости от заболевания или состояния, подлежащего лечению.

Терапевтически эффективная доза вводимого полипептида(ов) антитела зависит от многих факторов, включая, например, тип и тяжесть иммунного заболевания, подлежащего лечению, применение комбинированной терапии, курс введения полипептида(ов) антитела или фармацевтической композиции и вес пациента. Не ограничивающий диапазон терапевтически эффективного количества антитела представляет собой 0,1-20 мг/кг и в одном аспекте 1-10 мг/кг в расчете на массу тела пациента. Доза полипеп

- 18 031730 тида(ов) антитела может быть дополнительно установлена по количеству полипептида(ов) антитела, необходимого для CD52-антагонизма в in vitro и/или in vivo моделях болезненного состояния.

Антитело по настоящему изобретению можно вводить в виде одной дозы или нескольких доз в любой момент времени, который считается целесообразным представителем медицинских услуг. Доза может быть определена способами, известными в данной области техники, и может зависеть, например, от возраста индивидуума, чувствительности, допустимого уровня и общего благополучия. Антитело или его часть могут быть введены в виде инфузии в течение нескольких часов, например 3, 4, 5 или 6 ч. Антитело или его часть могут быть введены в различных режимах в зависимости от обстоятельств, например на протяжении двух, трех, четырех, пяти или шести последующих дней, в одном или нескольких циклах, разделенных на 3 или более месяцев, например 12 или 24 месяцев. Общая доза антитела к CD52, вводимая в любом цикле, может быть 10-60 мг. В одном варианте осуществления антитела или части по настоящему изобретению вводят пациенту с применением того же режима дозирования, что для Campath1H®.

Антитела по настоящему изобретению могут быть введены индивидууму (например, человеку) отдельно или в сочетании с другим средством (например, иммунодепрессантом) в комбинированной терапии. Антитело может быть введено до, вместе с или после введения дополнительного средства. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство представляет собой, например, противовоспалительное соединение, такое как сульфасалазин, другое нестероидное противовоспалительное соединение или стероидное противовоспалительное соединение. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство представляет собой другое антитело, подавляющее лимфоциты, такое как другое антитело к CD52, антитело к CD20, антитело к BAFF, антитело к BAFF-R и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство представляет собой, например, цитокин (например, IL-7), антитело к рецептору цитокина или растворимый рецептор, который сдвигает, воздействует на и/или усиливает процесс реконструкции, что ведет к последующему подавлению лимфоцитов, опосредованному антителом к CD52 (см., например, Sportes et al., Cytokine Therapies Ann. N.Y. Acad. Sci. 1182:28-38 (2009)). В другом варианте осуществления можно вводить синтетический пептидный миметик в сочетании с антителом по настоящему изобретению.

Поскольку антитела по настоящему изобретению нацелены на CD52-экспрессирующие клетки, антитела можно применять для подавления типов клеток CD52+, которые не являются Т-клетками и Вклетками. Например, исследования показали, что лейкоциты сосудистого русла (VLC) и Tie2+-моноциты миелоидные клетки, экспрессирующие на высоком уровне CD52 - содействуют ангиогенезу опухоли и способствуют устойчивости опухоли к терапии против VEGF. Pulaski et al., J. Translational Med. 7:49 (2009). Антитела к CD52 по настоящему изобретению, таким образом, можно применять для ингибирования ангиогенеза опухоли путем нацеливания на VLC и Tie2+-моноциты. Для этой цели антитела к CD52 можно вводить системно или локально в месте неоваскуляризации, такой как опухоль. Терапию антителами к CD52 можно применять в сочетании со стандартным подходом при лечении рака, например химиотерапией, операцией или облучением, или с другой целенаправленной терапией, такой как терапия антителами к VEGF. Терапию антителами к CD52 можно применять при лечении, например, рака молочной железы, рака легких, глиомы, рака толстой и прямой кишок, а также при любых других показаниях к применению антител к VEGF. Терапию антителами к CD52 также можно применять при других состояниях с развитием неоваскуляризации, включая не онкологические неоваскулярные синдромы.

Исследования показали, что подавление лимфоцитов алемтузумабом опосредуется нейтрофилами и NK-клетками (Hu et al., Immunology 128:260-270 (2009). Таким образом, в варианте осуществления комбинированной терапии можно вводить пациенту средство, стимулирующее нейтрофилы и NK-клетки, до, во время или после терапии антителами к CD52 для усиления терапии антителами. Стимулирование нейтрофилов и/или NK-клеток включает без ограничения (1) повышение скорости их деления, (2) увеличение экспрессии их клеточной поверхности Fc-рецепторов, соответствующих изотипу антитела к CD52 (например, FcyRIIIa и FcyRIIIb. FcyRII, FcyRI и FcaRI), (3) мобилизацию и увеличение количества циркулирующих клеток, (4) рекрутинг клеток на участки-мишени (например, участки опухолей, воспаления или повреждения ткани), (5) и увеличение их цитотоксической активности. Примеры средств, стимулирующих нейтрофилы и/или NK-клетки, включают, например, гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) (например, LEUKINE® или сарграмостим и молграмостим); гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF) (например, NEUPOGEN® или филграстим, пегилированный филграстим и ленограстим); интерферон-γ (например, ACTIMMUNE®); антагонисты рецептора 4 СХС-хемокина (CXCR4) (например, MOZOBIL™ или плериксафор) и агонисты рецептора 2 СХСхемокина (CXCR2). Количество нейтрофилов у пациента можно периодически контролировать для обеспечения эффективности оптимального лечения. Также количество нейтрофилов у пациента можно устанавливать до начала лечения антителами к CD52. Количество стимулятора можно корректировать на основе количества нейтрофилов у пациента. Можно применять повышенную дозу стимулятора, если количество нейтрофилов у пациента меньше, чем в норме. В периоды нейтропении, к которым может приводить лечение антителами к CD52, также можно вводить более высокую дозу стимулятора нейтрофилов

- 19 031730 для получения максимального результата воздействия антитела к CD52.

Поскольку стимуляция нейтрофилов и/или NK улучшает эффективность терапии антителом к CD52, этот вариант осуществления комбинированной терапии позволяет применять меньшее количество антитела у пациента, сохраняя при этом одинаковую эффективность лечения. Применение меньшего количества антитела к CD52 при сохранении эффективности лечения может помочь уменьшить побочные эффекты антитела к CD52, которые включают иммунный ответ в организме пациента на введенное антитело, а также развитие вторичных аутоиммунных реакций (аутоиммунные реакции, возникающие во время или после лечения антителом к CD52). Этот вариант осуществления комбинированной терапии также пригоден при онкологических состояниях, например, когда у пациента наблюдается нейтропения. В другом варианте осуществления комбинированной терапии можно применять стимулятор регуляторных Т-клеток для усиления терапии антителом к CD52. Было показано, что антитела к CD52 подавляют CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ регуляторные Т-клетки в значительно меньшей степени по сравнению с другими CD4⁺ T-клетками. Регуляторные Т-клетки (также известные как Treg или Т-клетки-супрессоры) представляют собой клетки, которые способны ингибировать пролиферацию и/или функцию других лимфоидных клеток с помощью контакт-зависимых или контакт-независимых (например, продукция цитокинов) механизмов. Были описаны несколько типов регуляторных Т-клеток, включая γδ Т-клетки, естественные киллеры Т-клеток (NKT), CD8⁺ Т-клетки, CD4⁺Т-клетки и двойные негативные CD4^-CD8Tклетки. См., например, Bach et al., Immunol. 3:189-98 (2003). CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ регуляторные Т-клетки были отнесены к естественным регуляторным Т-клеткам; они экспрессируют CD4, CD25 и фактор транскрипции семейства Fox белков FoxP3 (forkhead box p3). Таким образом, в этом варианте осуществления комбинированной терапии можно вводить средство, стимулирующее CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ регуляторные Т-клетки до, во время или после терапии антителом к CD52 для сдвига состава иммунной системы с последующим подавлением лимфоцитов. Средство может, например, активировать эти Т-клетки, стабилизировать и/или расширить популяцию клеток, мобилизовать и увеличить циркуляцию клеток, и/или осуществить рекрутинг клеток на участки-мишени. Примерами таких средств являются рапамицин, активный или скрытый TGF-β (например, TGF-β 1, TGF-βΣ. TGF-[^J>3. TGF-[^J>4 и TGF-[^J>5). IL-10, IL-4, IFN-α, витамин D (например, витамин D3), дексаметазон и микофенолятмофетил (см., например, Barrat et al., J. Exp. Med. 195:603-616 (2002); Gregori et al., J. Immunol. 167: 1945-1953 (2001); Battaglia et al., Blood 105: 4743-4748 (2005); Battaglia et al., J. Immunol. 177:8338-8347 (2006)).

В настоящем изобретении эффективное количество антитела к CD52 для лечения заболевания представляет собой количество, которое помогает подвергаемому лечению субъекту достичь одного или нескольких желаемых клинических конечных результатов. Например, в случае волчанки (чьи проявления включают системную красную волчанку, волчаночный нефрит, кожную красную волчанку, волчанку ЦНС, сердечно-сосудистые проявления, легочные проявления, печеночные проявления, гематологические проявления, желудочно-кишечные проявления, проявления в опорно-двигательном аппарате, неонатальную волчанку, детскую системную красную волчанку, медикаментозную красную волчанку, антифосфолипидный синдром и синдром недостаточности комплемента в результате проявлений волчанки; см, например, Robert G. Lahita, Editor, Systemic Lupus Erythematosus, 4th Ed., Elsevier Academic Press, 2004), клинические конечные результаты можно оценить путем мониторинга системы пораженного органа (например, гематурии и/или протеинурии для волчаночного нефрита) и/или с помощью индекса активности заболевания, который обеспечивает композитный балл тяжести заболевания учитывая несколько систем органов (например, BILAG, SLAM, SLEDAI, ECLAM). См., например, Mandl et al., Monitoring patients with systemic lupus erythematosus in Systemic Lupus Erythematosus, 4^th edition, pp. 619-631, R.G. Lahita, Editor, Elsevier Academic Press, (2004). Антитела или их части по настоящему изобретению можно применять при лечении индивидуума, который ранее получил лечение Campath-1H®, который вызвал выработку нейтрализующих антител к Campath-1H® (например, индивидуальная Campath-1H®невосприимчивость). Например, можно лечить индивидуума с аутоиммунным заболеванием (например, рассеянным склерозом, волчанкой, васкулитом) и/или раком (например, лейкозом (например, хроническим лимфолейкозом), лимфомой (например, неходжкинской лимфомой)), который ранее получал лечение Campath-1H® (например, один или несколько курсов лечения Campath-1H®), который вызвал выработку нейтрализующих антител к Campath-1H®, которые снижают эффективность дальнейшего лечения Campath-1H®. В другом варианте осуществления можно лечить индивидуума, который не поддавался лечению конкретным гуманизированным антителом, описанным в данном документе, одним из других гуманизированных антител, описанных в данном документе.

В качестве примера антитела или их части по настоящему изобретению являются пригодными терапевтическими средствами для лечения рассеянного склероза (MS). MS включает возвратноремиттирующий, вторичный прогрессирующий, первично-прогрессирующий и прогрессивнорецидивирующий рассеянный склероз ((Lublin et al., Neurology 46 (4), 907-11 (1996)), диагноз которого поставлен, например, по истории симптомов и неврологическому обследованию с помощью тестов, таких как магнитно-резонансная томография (МРТ), спинномозговая пункция, исследование вызванных потенциалов и лабораторный анализ образцов крови. Цели при лечении MS заключаются в уменьшении

- 20 031730 риска, частоты и/или тяжести рецидивов, предотвращении или уменьшении инвалидизации, связанной с прогрессированием заболевания, а также содействие восстановлению тканей. Таким образом, количество антитела к CD52, которое способствует достижению клинического конечного результата в соответствии с одной или несколькими из этих целей, является эффективным количеством антитела для лечения. Например, антитело к CD52 или часть по настоящему изобретению могут быть показаны для лечения рецидивирующих форм MS, для замедления или регрессии инвалидизации и уменьшения частоты клинических обострений. Антитело или его часть могут быть испытаны в клинических испытаниях на их эффективность в снижении риска рецидива и риска прогрессирования клинически значимой инвалидизации. Антитело или его часть могут быть введены пациентам с рецидивом или риском развития рецидива, или пациенту, у которого отмечено прогрессирующее ухудшение. См., например, публикацию патента США № 2008/0267954, раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки во всей полноте.

Способы и композиции по настоящему изобретению пригодны при лечении MS-пациентов, у которых наблюдали неоптимальный ответ на предыдущую MS-модифицирующую терапию. MS-пациент может быть пациентом с возвратно-ремиттирующей (RRMS) формой, который ранее получил MSмодифицирующую терапию, например, интерферон β-1η (например, AVONEX® и REBIF®), интерферон β-16 (например, BETASERON® и EXTAVIA®), глатиромерацетат (например, COPAXONE®), митоксантрон (например, NOVANTRONE®), натализумаб (например, TYSABRI®), финголимод (например, GILENYA®) и терифлуномид (например, AUBAGIO™). В одном варианте осуществления в ранее полученной MS-модифицирующей терапии не применяли алемтузумаб (например, САМРАТН, МАВСАМРАТН или LEMTRADA™) или другое антитело к CD52. У пациента, ранее получившего лечение, возможно, был MS-рецидив или возобновление симптомов MS во время лечения или вскоре после лечения (например, в течение одного года). Возобновление симптомов MS может включать новые неврологические симптомы, относящиеся к MS, или их ухудшение, увеличение значения EDSS у пациента (Kurtzke, Neurology 1983;33:1444-52), снижение значения комплексной функциональной оценки при рассеянном склерозе (MSFC) у пациента (Cutter et al., Brain 1999;122 (Pt 5): 871-82), новые или увеличенные черепномозговые или спинномозговые поражения, потеря объема головного мозга и/или нейродегенерация, определяемая оптической когерентной томографией (ОСТ). Например, пациент, возможно, имел по меньшей мере один предыдущий рецидив во время лечения β-интерфероном или глатирамером. У пациента также может присутствовать по меньшей мере одна из следующих характеристик: появление симптомов 10 или менее лет назад до начала первого цикла лечения антителом к CD52; по меньшей мере два приступа в течение двух лет до начала первого цикла лечения антителом к CD52; по меньшей мере один рецидив при лечении β-интерфероном или глатирамером после по меньшей мере шести месяцев лечения; значение расширенной шкалы оценки степени инвалидизации (EDSS) 5,0 или меньше; и черепномозговые и спинномозговые аномалии при магнитно-резонансной томографии (МРТ).

В одном варианте осуществления антитело или часть по настоящему изобретению вводят MSпациенту, страдающему аутоиммунным заболеванием (например, рассеянный склероз (MS)), в режиме, включающем введение первого цикла антитела с последующим по меньшей мере одним дополнительным циклом антитела, где каждый цикл лечения включает 1-5 доз, применяемых в последовательные дни, и где каждый цикл лечения отделен от следующего цикла по меньшей мере 1-24 месяцами (например, 12 месяцев). Например, в одном варианте осуществления пациент с рассеянным склерозом получает первый цикл лечения антителом, содержащий 5 ежедневных доз антитела с последующим по меньшей мере одним дополнительным циклом лечения антителом, при этом лечение происходит через год после первого цикла и включает 3 дозы антитела, применяемых в последовательные дни. В одном варианте осуществления, антитело к CD52 вводят пациенту, страдающему рассеянным склерозом, в течение пяти последовательных дней в дозе 12 мг/сут в первом цикле лечения; и через один год антитело к CD52 вводят пациенту в течение трех последовательных дней в дозе 12 мг/день во втором цикле лечения. В одном варианте осуществления антитело к CD52 вводят пациенту, страдающему рассеянным склерозом, в суммарной дозе 60 мг в течение пяти последовательных дней в первом цикле лечения; и через один год антитело к CD52 вводят пациенту в суммарной дозе 36 мг в течение трех последовательных дней во втором цикле лечения.

В способах и композициях по настоящему изобретению термин год не обозначает точно 365 дней или 12 месяцев. Например, второй цикл антитела к CD52 не должен быть введен в точности через 365 дней или 12 месяцев после первого цикла введения антитела к CD52. Второй цикл может быть инициирован через 365 дней плюс или минус до 6 месяцев, плюс или минус до 5 месяцев, плюс или минус до 4 месяцев, плюс или минус до 3 месяцев, плюс или минус до 2 месяцев, плюс минус до одного месяца, плюс или минус до 4 недель, плюс или минус до 3 недель, плюс или минус до 2 недель или плюс или минус до одной недели после начала первого цикла.

В другом варианте осуществления MS-пациент повторно получает лечение как только наблюдают возобновление симптомов MS (см, например, WO 2008/031626, раскрытие которого включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В некоторых вариантах осуществления может быть необходимо применять более частые курсы лечения (например, каждые четыре месяца, каждые

- 21 031730 шесть месяцев), если у пациентов с более тяжелыми формами MS или более прогрессивными формами других аутоиммунных заболеваний (таких как васкулит, см., например, Walsh et al., Ann Rheum Dis 67:1322-1327 (2008)) отмечается рецидив на ранней стадии после их последнего курса лечения или обнаруживается возобновление симптомов MS. Данное возобновление симптомов MS может быть определено на основе профессиональной оценки лечащим врачом с применением любых средств, которые могут быть доступны для такого врача. В настоящее время врачам доступны различные методы для диагностики возобновления симптомов MS, включая без ограничения клинические проявления (рецидив или прогрессирование неврологической инвалидизации) или магнитно-резонансную томографию (МРТ) головного мозга или спинного мозга. Как хорошо понятно врачам, симптомы заболевания, обнаруженные с помощью МРТ, могут быть указаны появлением новых мозговых или спинномозговых поражений на Т1(усиливается или не усиливается) или Т2-взвешенных изображениях или увеличение объема таких поражений.

Так как диагностические способы MS постоянно развиваются, ожидается, что могут быть дополнительные способы в будущем для обнаружения возобновления симптомов MS (например, коэффициент передачи намагниченности или МР-спектроскопия). Конкретный метод диагностики, применяемый для обнаружения возобновления симптомов MS, не является ограничением заявленного изобретения. В некоторых вариантах осуществления выполняют повторные МРТ в определенные промежутки времени после цикла лечения для определения, есть ли необходимость повторного лечения для любого данного пациента и оптимальный момент времени для повторного лечения такого пациента. В общем, желательно, чтобы повторное лечение происходило до повторного клинического проявления заболевания.

Способы и композиции по настоящему изобретению могут быть применены в сочетании с другими MS-модифицирующими терапиями. Неограничивающие примеры MS-модифицирующих терапевтических средств включают интерферон |3-1a (например, AVONEX® и REBIF®), интерферон Ц-1Ь (например, BETASERON® и EXTAVIA®), глатиромерацетат (например, COPAXONE®), митоксантрон (например, NOVANTRONE®), натализумаб (например, TYSABRI®), финголимод (например, GILENYA®) и терифлуномид (например, AUBAGIO®).

В некоторых вариантах осуществления способы и композиции по настоящему изобретению могут быть применены в сочетании с обобщенным или неспецифическим лечением или терапиями, например стероидами (например, кортикостероидами) или далфампридином (например, AMPYRA®).

В одном аспекте лекарственные препараты, известные специалистам в данной области как эффективные для управления побочными эффектами, связанными с инфузиями, могут быть введены до, во время или после инфузии антитела к CD52. Такие лекарственные препараты включают кортикостероиды (например, метилпреднизолон), ацетаминофенон и антигистаминные препараты (например, димедрол). В некоторых вариантах осуществления пациенты получают внутривенно метилпреднизолон 1 г/день один, два, три, четыре или пять дней подряд в течение цикла лечения антителом по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения пациенты могут дополнительно получать лекарственный препарат, который служит в качестве профилактики против герпеса. Например, пациенты могут получать 200 мг ацикловира (например, ZOVIRAX®) два раза в день во время введения антитела по настоящему изобретению и в течение 28 дней после этого.

Состав будет варьировать в зависимости от выбранного курса введения (например, раствор, эмульсия). Соответствующий состав, содержащий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент для введения, может быть получен в физиологически приемлемом наполнителе или носителе. Композиция может содержать несколько доз или быть в виде композиции из одной дозы. Для растворов или эмульсий подходящие носители включают, например, водные или спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая физиологический раствор и буферные среды. Наполнители парентеральных составов могут включать раствор хлорида натрия, раствор Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера или жирные масла. Наполнители внутривенных составов могут включать различные добавки, консерванты, или жидкость, или питательное вещество, или электролитные наполнители (см, как правило, Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack Publishing Co., PA, 1985). Для ингаляции соединение можно солюбилизировать и помещать в соответствующий дозатор для введения (например, пульверизатор, распылитель или аэрозольный распылитель под давлением).

Диагностические способы и композиции.

Антитела по настоящему изобретению также пригодны в различных способах с областью применения в исследованиях и диагностике. Например, они могут быть применены для обнаружения, выделения и/или очистки CD52 человека или его вариантов (например, с помощью аффинной очистки или других подходящих способов, таких как проточная цитометрия, например, для клеток, таких как лимфоциты в суспензии), и изучения структуры CD52 человека (например, конформации) и функции. Антитела по настоящему изобретению будут пригодны для применения in vitro.

Антитела по настоящему изобретению можно применять в диагностических целях (например, in vitro, ex vivo). Например, гуманизированные антитела по настоящему изобретению можно применять для обнаружения и/или измерения уровня CD52 человека в образце (например, на клетках, экспрессирующих

- 22 031730

CD52 человека в тканях или жидкостях организма, таких как воспалительный экссудат, кровь, сыворотка, жидкость кишечника, ткани, несущие CD52 человека). Образец (например, ткань и/или жидкость организма) могут быть получены от индивидуума и антитело, описанное в данном документе, можно применять в подходящем иммунологическом способе для обнаружения и/или измерения экспрессии CD52 человека, включая такие способы, как проточная цитометрия (например, для клеток в суспензии, таких как лимфоциты), твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), включая хемилюминесцентный анализ, радиоиммуноанализ и иммуногистологию. Изобретение охватывает наборы (например, диагностические наборы), содержащие антитела к CD52, описанные в данном документе.

В одном варианте осуществления предложен способ обнаружения CD52 человека в образце, включающий контактирование образца с антителом по настоящему изобретению в условиях, подходящих для специфического связывания антитела с CD52 человека, и обнаружение образующихся комплексов антитело-CD52. При применении способа могут быть использованы антитела, описанные в данном документе, для анализа нормальных тканей по сравнению с воспаленными тканями (например, от человека) на реактивную способность CD52 человека и/или экспрессию (например, иммуно-гистологически) для обнаружения ассоциации между, например, воспалительным заболеванием кишечника (IBD), аутоиммунными заболеваниями (такими как рассеянный склероз и волчанка), раком (например, неходжкинской лимфомой и хроническим лимфолейкозом) или другими условиями и повышенной экспрессией CD52 человека (например, в пораженных тканях). Таким образом, антитела по настоящему изобретению позволяют применять иммунологические способы оценки присутствия CD52 человека в нормальных и воспаленных тканях, через которые может быть оценено наличие болезни, прогресса болезни и/или эффективность терапии антителом к CD52 человека в лечении заболевания, например воспалительного заболевания.

Кроме того, антитела могут быть применены для изучения тканей после лечения подавляющим терапевтическим антителом к CD52 для оценки, насколько эффективным оказалось подавление, а также для определения, имело ли место любое подавление экспрессии CD52 (Rawstrom et al., Br. J. Heam., 107:148-153 (1999)).

Если не определено иначе, все технические и научные выражения, используемые в данном документе, имеют то же значение, обычно понимаемое специалистом в данной области, к которой принадлежит данное изобретение. Примерные способы и вещества описаны ниже, хотя способы и вещества, подобные или эквивалентные описанным в данном документе, могут быть использованы в практике или при тестировании настоящего изобретения. Все публикации и другие ссылки, упомянутые данном документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае конфликта настоящее описание, включающее определения, будет иметь преимущественную силу. Хотя ряд документов цитируется в данном документе, цитирование ссылок не является признанием того, что любой из этих документов образует часть общеизвестных знаний в данной области. В данном описании и вариантах осуществления слова содержать или его вариации, такие как содержит или содержащий следует понимать как подразумевающий включение указанного целого или группы целых чисел, но не исключение любого другого целого или группы целых чисел. Материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.

Следующие примеры предназначены для иллюстрации способов и веществ по настоящему изобретению. Подходящие модификации и адаптации описанных условий и параметров, обычно встречающихся в технике, которые очевидны специалистам в данной области техники, представлены в пределах объема и сущности настоящего изобретения. Выражения антитело и иммуноглобулин применяются в данном документе взаимозаменяемо. Выражения антигенсвязывающий фрагмент и антигенсвязывающая часть также применяются в данном документе взаимозаменяемо.

Примеры

Следующие примеры предназначены для иллюстрации способов и веществ по настоящему изобретению. Подходящие модификации и адаптации описанных условий и параметров, обычно встречающихся в технике, которые очевидны специалистам в данной области техники, представлены в пределах объема и сущности настоящего изобретения.

Пример 1. Экспрессия и описание антитела Ab 1.

Ab1 антитело было получено из Ab26 путем изменения остатка 33 (в пределах L-CDR1) в легкой цепи Ab26 на Asp. Кроме того, был получен вариант антитела, в котором первые 33 аминокислотных остатка легкой цепи Ab26 были удалены (антитело De133). Легкую цепь ДНК варианта синтезировали в векторах pDONR221 Entry с помощью DNA2.0 в скелете легкой цепи и субклонировали в HEK293вектор экспрессии pCEP4(-E+I) Dest с помощью Gateway cloning. Затем выполняли подготовку полноразмерной ДНК для трансфекции клеток HEK293-EBNA. Все варианты и контрольную легкую цепь исходного Ab26 ко-трансфицировали с тяжелой цепью исходного Ab26 в соотношении 1:1.

Для очистки применяли 160-300 мл трансфицированной среды, чтобы очистить антитела Ab26, De133 и АВ1 с применением колонки HiTrap Protein A, 1 мл (GE) и установкой многоканального насоса. Измеряли А280 в собранных фракциях с помощью NanoDrop. Фракции # 1 и # 2, содержащие большую часть белка, объединяли, сменяли буфер на 50 мМ фосфата натрия, 150 мМ хлорида натрия, рН 6,0 и

- 23 031730 концентрировали с помощью колонок для вырезания Amicon-4, 10 кД. Выход после очистки белка обобщен в табл. 3.

Таблица 3

Выход после очистки белка

Антитело	Объем СМ (мл)	Концентрация белка (мг/мл)	Объем очищенного вещества (мкл)	Общий белок (мг)
АЬ26	300	2,86	370	1058
Del33	160	0, 04	124	4
АЫ	300	1,71	900	1539

Мутант De133 не был экспрессирован или очищен на высоком уровне, вероятно, из-за проблемы неправильного сворачивания, связанного с удалением. Ab1 и Ab26 были успешно очищены до гомогенности для дальнейшей характеристики. N-концевое секвенирование первых 15 аминокислот подтвердило, что все три образца имели ожидаемую последовательность.

Ab26 и Ab1 также экспрессировали в клетках СНО и очищали на колонках белка А. Характеризовали антитела с помощью BIACORE™ на их аффинность к пептиду CD52. Результаты показаны на фиг. 17 и в табл. 4 для антител, продуцируемых в клетках HEK293, и на фиг. 18 и в табл. 5 для антител, продуцируемых в клетках СНО.

Таблица 4 Результаты аффинности связывания антител, экспрессируемых в клетках HEK293

Антитело	ka (х10бМ1с1)	kd (А1)	KD (нМ)
АЬ2б (состав 1)	7,2	0, 01	1,7
АЬ26 (состав 2)	5, 4	0, 01	2,2
АЫ	0,4	0, 58	1480

Таблица 5

Результаты аффинности связывания антител, экспрессируемых . в клетках СНО

Антитело	ка (х106 ЬГ1 А1)	kd (с т)	KD (нМ)
АЬ26	6,2	1,6	2, 6
АЫ	0, 3	38,3	1250

Анализы связывания CD52 с помощью BIACORE™ проводили следующим образом.

Низкий уровень пептида-мимотопа CD52 (CGQNDTSQTSSPSAD (SEQ ID NO: 87)) иммобилизовали на чипе СМ5 химическим методом с тиолом с применением N-концевого Cys. Несколько концентраций антитела к CD52, приготовленных в проточном буфере HBS-EP (от 1 до 20 нМ), вводили на поверхность для контроля связывания. Кинетический анализ проводили с использованием программного обеспечения Scrubber2.

Антитело Ab1 продемонстрировало более 400-кратное снижение аффинности по сравнению с Ab26. Четкого сигнала связывания не наблюдали для антитела Ab1 при концентрациях 1-10 нМ, в то время как Ab26 демонстрировало высокую аффинность связывания (фиг. 17). Применяли более высокие концентрации Ab1 (до 1900 нМ) при попытке получить количественную меру потери аффинности связывания у варианта. Получали значение KD 1250 нМ для из Ab1, продуцированного в СНО, что согласовалось со значением для Ab1, продуцированного в HEK293 (1480 нМ). Уменьшение аффинности отражается в обоих вариантах со снижением скорости при связи и увеличением скорости вне связи при кинетическом связывании.

Анализ активности CDC проводили для оценки влияния потери аффинности на эффекторную функцию путем измерения клеточного уничтожения через комплементзависимую цитотоксичность. Все варианты и вещество контрольного антитела серийно разводили 1:2 на одном цельном черном 96луночном планшете от 2 до 0,002 мг/мл в среде для анализа (IMDM среда, свободная от фенола красного+0,1% BSA). Аккуратно тестировали вещества с концентрацией вещества <2 мг/мл. Комплемент нормальной сыворотки человека (Quidel Corporation) добавляли во все лунки в конечной концентрации 5% (об./об.). Затем добавляли В-лимфоциты Pfeiffer (ATCC) в конечной концентрации 0,6х10⁶ клеток/мл. Отрицательный контроль лизиса клеток (среда анализа + клетки), положительный контроль лизиса клеток (среда анализа + клетки + 2% (вес./об.) Тритон Х-100 и положительный контроль доза-ответ (контрольное вещество 4 мг/мл) вносили на тот же планшет. Реакции инкубировали в течение одного часа в увлажненном, 37°С, 5% CO₂-инкубаторе. Затем добавляли 50 мкл подогретого реагента обнаружения alamarBlue® (Life Technologies) во все лунки с последующей инкубацией в уменьшенном освещении в течение 4 ч. Относительное снижение alamarBlue® измеряли с помощью флуоресцентного планшет- 24 031730 ридера (ех: 530 нм, em: 590, cutoff: 570 нм). Использовали Softmax Pro, v. 5.3 (Molecular Devices) для получения соответствия кривых доза-ответ для модели четырех параметров. Результат представлен на фиг. 19. Как ожидалось, Ab26 (контроль) продемонстрировало зависимое от концентрации уничтожение клеток. Антитело Ab1, полученное в клетках СНО, продемонстрировало едва детектируемую активность CDC в диапазоне тестируемых концентраций. Эти эксперименты позволяют предполагать, что замена одной аминокислоты может существенно влиять на биологическую функцию Ab26.

Пример 2. Анализы аффинности связывания CD52 с антителами к CD52.

Антитела Ab4, Ab3, Ab24, Ab10, Ab12 и Ab25 (см. табл. 1 и 2) экспрессировали в клетках HEK293. Легкую цепь ДНК синтезировали, субклонировали и транзиентно экспрессировали в клетках HEK293 следующим образом. Молекулы ДНК синтезировали в векторах pDONR221 Entry с помощью DNA2.0 в скелете легкой цепи и субклонировали в HEK293-вектор экспрессии рСЕР4(-Е+Ц Dest с помощью Gateway cloning. Вектор экспрессии легкой цепи котрансфицировали с вектором экспрессии тяжелой цепи Ab26 в клетки HEK293. Использовали ДНК Ab26 в качестве контроля для трансфекции. Кондиционированную среду обследовали на уровень экспрессии белка с помощью Octet с применением датчика белка А и на аффинность связывания с CD52 с помощью BIACORE™ с применением чипа пептида CD52. Результаты представлены на фиг. 1.

Антитела Ab24 и Ab10 продемонстрировали высокую аффинность связывания с CD52. Ab4 и Ab3 продемонстрировали низкую аффинность связывания с CD52. Чтобы подтвердить этот вывод, Ab4 и Ab3 очищали с применением колонки белка А для получения дальнейшей характеристики. Гель SDS-PAGE для Ab26 антитела (CTL), Ab26 антитело из двух трансфекций (CTL1 и CTL2), Ab1, Ab4, Ab3, Ab10, Ab24, Ab 12 и Ab25, и результаты связывания пептида CD52 с применением BIACORE™ показаны на фиг. 2.

Результаты для очищенных антител подтвердили первоначальные данные скрининга среды. Ab4 и Ab3 продемонстрировали низкую аффинность связывания с CD52.

Пример 3. Масштабное производство и характеристика антител Ab24 И Ab10.

Антитела Ab24 и Ab10 получали в крупном масштабе в клетках СНО K1 для определения их характеристик связывания с CD52 и ингибирующих свойств. Наблюдали отсечение легкой цепи в двух антителах и наблюдали группу ниже 150 кДа в невосстанавливающем геле (NR) (обозначенное в данном документе как молекулы 100 кДа) (фиг. 3).

Проблема отсечения легкой цепи была сведена к минимуму за счет оптимизации условий культивирования ткани и опуская уровень хранения среды до 4°С. Обнаруживали небольшое количество молекул 100 кДа (ниже 150 кДа), продуцированных несмотря на данные улучшения (фиг. 3). Далее характеризовали два антитела. Обнаруживали 9-12% и 18-20% молекул 100 кДа в двух крупномасштабных приготовлениях Ab24 и Ab10 соответственно, с помощью SEC-HPLC. Эксперимент с применением интактной масс-спектрометрии подтвердил последовательности антител. N-концевое секвенирование молекул с низкой молекулярной массой обеспечило присутствие только N-концевой последовательности тяжелой цепи. После сбора и анализирования молекул 100 кДа в геле SDS-PAGE, наблюдали только тяжелую цепь. Эти результаты позволяют предположить, что молекулы 100 кДа содержали только тяжелую цепь (фиг. 4).

Пример 4. Получение и скрининг дополнительных антител к CD52.

Векторы экспрессии для антител Ab2, Ab6, Ab7, Ab5, Ab13, Ab15, Ab17, Ab18, Ab19, Ab23, Ab22, Ab11, Ab20, Ab16, Ab21 и Ab14 (см. табл. 1 и 2) трансфицировали в клетки HEK293. Все антитела экспрессировали в концентрации >0,2 мкг/мл и кондиционированную среду анализировали с применением датчика белка А с помощью Octet (табл. 5, верхняя секция). Скрининг аффинности к CD52 с помощью BIACORE™ образцов этих сред затем применяли для идентификации основных кандидатов (фиг. 5, средняя и нижняя секции).

Антитела Ab2, Ab6, Ab7 и Ab5 демонстрировали низкую аффинность связывания с CD52. Несколько других антител продемонстрировали высокую аффинность связывания с CD52. Эти антитела включают Ab22, Ab20, Ab21, Ab14, Ab14 и Ab11. Антитела Ab22, Ab20, Ab21, Ab14, Ab14 и Ab11 были изучены дополнительно.

Шесть этих антител (Ab22, Ab20, Ab21, Ab14, Ab14 и Ab11) были масштабированы в одну транзиентную экспрессию TripleFlask/антитело (эта колба имеет три параллельных поверхности роста и обеспечивает общую площадь культуры 500 см²). Антитела очищали из 160 мл кондиционированной среды с применением колонки HiTrap Protein A, 1 мл (GE Healthcare). Восстанавливающий гель SDS-PAGE показал успешную очистку и разумную чистоту антитела (фиг. 6). Для сравнения связывания с CD52 с применением BIACORE™, очищенные образцы разбавляли до 60 и 7,5 нМ в HBS-EP и вводили на чип пептида CD52 #741 (результаты приведены на фиг. 6 для 7,5 нМ). Анализ связывания с применением BIACORE™ подтвердил результат скрининга исходной среды, что данные антитела тесно связываются с пептидом CD52. Кинетический эксперимент на связывание указал следующее оценку аффинности:

(Ab16, Ab21) > Ab26 > (Ab20, Ab11, Ab14, Ab22) > (Ab24, Ab10).

Ab16 и Ab21 продемонстрировали более высокую аффинность, чем Ab26.

- 25 031730

Пример 5. Анализ стабильности антител к CD52.

Чтобы определить, затрагивается ли стабильность вариантов антитела к CD52, применяли условия высокой температуры для сравнения и скрининга вариантов антитела к CD52. Для первичного скрининга применяли Ab26 и выбранные варианты, очищенные из клеток HEK293. Белки (85 мкг) разводили в PBS, рН 7,2, до ~0,4 мг/мл и инкубировали при 45°С в течение 4 недель. Их аффинность к пептиду CD52 измеряли на BIACORE™. Один микрограмм каждого варианта, взятого на неделе #2 и неделе #4, серийно разводили в HBS-EP до 7,5, 2,5 и 0,8 нМ и вводили на чип пептида CD52 #741. Предварительные константы связывания рассчитывали с использованием программного обеспечения Scrubber, которые представлены на фиг. 20 (Ab26 помечено как CTL).

Результаты показывают, что антитела Ab21, Ab 16 и Ab20 сохраняют значительную аффинность связывания с CD52 в течение 4 недель инкубации, что позволяет предполагать, что они более стабильны, чем антитело Ab26. В противоположность этому, антитела Ab10 и Ab22 практически полностью потеряли аффинность связывания с антигеном в течение инкубационного периода времени.

Чтобы подтвердить результаты, полученные в эксперименте инкубации, получали новые порции вариантов и инкубировали в 3-компонентном буфере (10 мМ сукцината, 10 мМ гистидина, 10 мМ фосфат натрия, рН 7,5), наряду с Ab26 антителом, при 37 или 45°С в течение 4 недель. 3 Компонентный буфер обычно применяют в испытаниях технологичности антитела. Количество инкубированного вещества приведено в табл. 6. Антитела Ab21, Ab16 и Ab20 также инкубировали при 45°С в том же буфере. Аликвоты брали на неделе 2 и неделе 4 (Т2 и Т4) для оценки их аффинности к пептиду CD52 с помощью BIACORE™. Каждый образец разбавляли до 7,5, 3,75, 1,875 нМ в HBS-EP и вводили на чип пептида CD52 #741 в течение 3 мин с последующими 3 мин диссоциации в буфере. Выявленные KD отображены на фиг. 21.

Таблица 6 Количество инкубированного вещества в эксперименте с трехкомпонентным буфером

Мутант	Концентрация (мг/мл)
АЬ20	0,363
АЬ22	0,350
АЫ6	0,366
АЬ21	0,391
АЫ4	0,359
АЬ24	0,361
АЫ0	0,382
АЫ1	0,401
CTL1	0,354
CTL2	0,375

Инкубация при	Инкубация при
37°С (мкг)	45°С (мкг)
75	75
75	-
75	75
75	75
75	-
75	-
75	-
75	-
75	-
75	75

Результаты показали, что аффинность связывания антител Ab21, Ab16 и Ab20 осталась прежней или незначительно уменьшилась при 37 и 45°С в течение 4 недель инкубации, тогда как Ab 16 (CTL, CTL1 и CTL2) утратил аффинность связывания с течением времени. KD Ab16 (CTL) изменилась с 4,3 до 1230 нМ после инкубации при 45°С в течение 4 недель, что указывает на уменьшение связывания с CD52. Это говорит о том, что такие мутанты действительно более устойчивы к нестабильности в течение долгого времени по сайту L-CDR1.

Чтобы проверить структурную целостность антител Ab21, Ab16 и Ab20, агрегацию и фрагментацию вариантов, которые разводили в PBS, рН 7,2, до ~0,4 мг/мл и инкубировали при 45°С в течение 4 недель, оценивали с помощью SEC-HPLC Пять микрограмм белка разводили в подвижной фазе (40 мМ фосфата натрия, 500 мМ хлорида натрия, рН 6,0) до 100 мкл общего объема и вводили в колонку TSK Gel G3000 SWxl при условии 0,5 мл/мин в течение 35 мин. Никакой значительной агрегации и ограниченной фрагментации не обнаружили у Ab21, Ab16, Ab20 и Ab26 (CTL) (фиг. 22). Таким образом, потеря аффинности у Ab26, вероятно, не могла быть вызвана потерей структурной целостности.

Пример 6. Биологическая активность антитела к CD52 в анализе активности In Vitro (активность CDC).

Три антитела к CD52 (Ab21, Ab20 и Ab16) оценивали в анализе CDC. Данный анализ применяли для измерения способности антител подвергать лизису В-лимфоциты Pfeiffer в присутствии комплемента. Антитела анализировали отдельно на том же планшете и качественно по сравнению с Ab26 (контроль) (см. фиг. 7).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что активность Ab21 и Ab16 была сопоставима или повышенной по отношению к Ab26. Ab20 продемонстрировал немного более низкую активностью в этом испытании.

- 26 031730

Пример 7. Биологическая активность антител к CD52 в HuCD52-трансгенных мышах.

Три антитела к CD52 (Ab21, Ab20 и Ab 16) также тестировали в huCD52-трансгенных мышах in vivo. HuCD52-трансгенным мышам вводили Ab16, Ab21, Ab20 или Ab16 внутривенно 1 мг/кг (по 5 животных/группа). На 3-й день после инъекции кровь и селезенку анализировали на подавление лимфоцитов при помощи проточной цитометрии. Степень подавления лимфоцитов в крови и селезенке, оцененной проточной цитометрией, представлена на фиг. 8 (Ab26 помечено как CTL).

Полученные результаты свидетельствуют, что поглощение лимфоцитов, индуцированное антителами Ab21, Ab20 и Ab16 в крови и селезенке, оказалось одинаковой или повышенной по отношению к антителу Ab26. Совокупность этих данных подтверждает, что эти антитела к CD52 являются биологически активными in vivo.

В табл. 7 перечислены SEQ ID NO, применяемые в данном документе.

Таблица 7

SEQ ID NO

SEQ ID NO	ТИП	ОПИСАНИЕ
1	Белок полной длины	Белок CD52 дикого типа
2	LC	KGN
3	НС	АЬ26, АЫ, АЬ2, АЬЗ, АЬ4, АЬ5, АЬб, АЫ, АЫО, АЫ1, АЫ2, АЫЗ, АЫ4, АЫ5, АЫб, АЫ7, АЫ8, АЫ9, АЫО, АЬ21, АЬ22, АЫЗ, АЬ24, АЬ25 и KGN
4	LC	АЬ2б
5	НС (нуклеиновая кислота)	АЬ26, АЫ, АЬ2, АЬЗ, АЬ4, АЬ5, АЬб, АЬ7, АЫО, АЫ1, АЫ2, АЫЗ, АЫ4, АЫ5, АЫб, АЫ7, АЫ8, АЫ9, АЫО, АЬ21, АЬ22, АЫЗ, АЬ24, АЬ25 и KGN
6	LC (нуклеиновая кислота)	АЫб

- 27 031730

- 28 031730

33	L-CDR1	Ab25
34	L-CDR2	Ab26, Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, AblO, Abll, Abl2, АЫЗ, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab2 3, Ab24 и Ab25
35	L-CDR3	Ab26, Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, AblO, Abll, Abl2, АЫЗ, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24 и Ab25
36	LC	Abl
37	LC	Ab2
38	LC	Ab3
39	LC	Ab4
40	LC	Ab5
41	LC	Ab6
42	LC	Xbl
43	LC	AblO
44	LC	Abll
45	LC	Abl2
46	LC	Abl3
47	LC	Abl4
48	LC	Ab 15
49	LC	Abl6
50	LC	Abl7
51	LC	Abl8
52	LC	Abl9
53	LC	Ab20
54	LC	Ab21
55	LC	Ab22
56	LC	Ab23
57	LC	Ab24
58	LC	Ab25

- 29 031730

59	VH	Ab26, Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab 6, hbl, AblO, Abll, Abl2, АЫЗ, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 и KGN
60	vL	Ab26
61	vL	TMol
62	vL	Ab2
63	vL	Ab3
64	vL	Ab4
65	vL	Ab5
66	vL	Ab6
67	vL	Kbl
68	vL	AblO
69	vL	Abll
70	vL	Abl2
71	vL	Abl3
72	vL	Abl4
73	vL	Abl5
74	vL	Abl6
75	vL	Abl7
76	vL	Abl8
77	vL	Abl9
78	vL	Ab20
79	vL	Ab21
80	vL	Ab22
81	vL	Ab23
82	vL	Ab24
83	vL	Ab25
84	VH (нуклеиновая кислота)	Ab26, TMol, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, AblO, Abll, Abl2, АЫЗ, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25 и KGN
85	vL (нуклеиновая кислота)	Ab26

- 30 031730

86	L-CDR1	KSSQSLLYSNXKTYLN, где X не является глицином.
87	Пептид	Пептид-мимотоп CD52
88	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ1
89	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ2
90	vL (нуклеиновая кислота)	АЬЗ
91	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ4
92	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ5
93	vL (нуклеиновая кислота)	АЬб
94	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ7
95	vL (нуклеиновая кислота)	АЫО
96	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ1
97	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ2

- 31 031730

98	vL (нуклеиновая кислота)	АЫЗ
99	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ4
100	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ5
101	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ6
102	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ7
103	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ8
104	vL (нуклеиновая кислота)	АЫ9
105	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ20
106	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ21
107	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ22
108	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ23

- 32 031730

109	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ24
110	vL (нуклеиновая кислота)	АЬ25
111	vL (нуклеиновая кислота)	KGN
112	LC (нуклеиновая кислота)	АЫ
113	LC (нуклеиновая кислота)	АЬ2
114	LC (нуклеиновая кислота)	АЬЗ
115	LC (нуклеиновая кислота)	АЬ4
116	LC (нуклеиновая кислота)	АЬ5
117	LC (нуклеиновая кислота)	АЬ6
118	LC (нуклеиновая кислота)	АЬ7
119	LC (нуклеиновая кислота)	АЫО

- 33 031730

- 34 031730

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ДЖЕНЗАЙМ КОРПОРЕЙШН <120> АНТИТЕЛА К CD52 <130> 001662-0041-WO1 <140>

<141>

<150> 61/794,576 <151> 2013-03-15 <160> 136 <170> PatentIn версия 3.5 <210> 1 <211> 61 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens

<400> 1

Leu 5

Phe

Leu

Leu

Leu

Thr 10

Ile

Ser

Leu

Leu

Val 15

Met

Met 1

Lys

Arg

Phe

Val

Gln

Ile

Gln

Thr

Gly

Leu

Ser

Gly

Gln

Asn

Asp

Thr

Ser

Gln

Thr

20

25

30

Ser

Ser

Pro

Ser

Ala

Ser

Ser

Ser

Met

Ser

Gly

Gly

Ile

Phe

Leu

Phe

35

40

45

Phe

Val

Ala

Asn

Ala

Ile

Ile

His

Leu

Phe

Cys

Phe

Ser

50

55

60

<210> 2 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 2

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr Gln Thr 5

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Lys

Gly

Asn

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

- 35 031730

Pro

Gln 50

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu 55

Val

Ser

Lys

Leu

Asp 60

Ser

Gly

Val

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 3 <211> 464 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 3
Met Glu Ala	Pro Ala Gln Leu Leu	Phe Leu	Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1	5	10	15

Asp

Thr Thr

Gly Glu Val Gln Leu Val

25

Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val 30

- 36 031730

Gln

Pro

Gly 35

Gly

Ser

Leu

Arg

Leu 40

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser 45

Gly

Phe

Pro

Phe

Ser

Asn

Tyr

Trp

Met

Asn

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

50

55

60

Leu

Glu

Trp

Val

Gly

Gln

Ile

Arg

Leu

Lys

Ser

Asn

Asn

Tyr

Ala

Thr

65

70

75

80

His

Tyr

Ala

Glu

Ser

Val

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

Asp

Asp

85

90

95

Ser

Lys

Asn

Ser

Leu

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Ser

Leu

Lys

Thr

Glu

Asp

100

105

110

Thr

Ala

Val

Tyr

Tyr

Cys

Thr

Pro

Ile

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

115

120

125

Thr

Val

Thr

Val

Ser

Ser

Ala

Ser

Thr

Lys

Gly

Pro

Ser

Val

Phe

Pro

130

135

140

Leu

Ala

Pro

Ser

Ser

Lys

Ser

Thr

Ser

Gly

Gly

Thr

Ala

Ala

Leu

Gly

145

150

155

160

Cys

Leu

Val

Lys

Asp

Tyr

Phe

Pro

Glu

Pro

Val

Thr

Val

Ser

Trp

Asn

165

170

175

Ser

Gly

Ala

Leu

Thr

Ser

Gly

Val

His

Thr

Phe

Pro

Ala

Val

Leu

Gln

180

185

190

Ser

Ser

Gly

Leu

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Val

Val

Thr

Val

Pro

Ser

Ser

195

200

205

Ser

Leu

Gly

Thr

Gln

Thr

Tyr

Ile

Cys

Asn

Val

Asn

His

Lys

Pro

Ser

210

215

220

Asn

Thr

Lys

Val

Asp

Lys

Lys

Val

Glu

Pro

Lys

Ser

Cys

Asp

Lys

Thr

225

230

235

240

His

Thr

Cys

Pro

Pro

Cys

Pro

Ala

Pro

Glu

Leu

Leu

Gly

Gly

Pro

Ser

245

250

255

Val

Phe

Leu

Phe

Pro

Pro

Lys

Pro

Lys

Asp

Thr

Leu

Met

Ile

Ser

Arg

260

265

270

Thr

Pro

Glu

Val

Thr

Cys

Val

Val

Val

Asp

Val

Ser

His

Glu

Asp

Pro

275

280

285

- 37 031730

Glu Val

Lys

Phe

Asn Trp

Tyr 295

Val

Asp

Gly

Val

Glu 300

Val

His

Asn

Ala

290

Lys

Thr

Lys

Pro

Arg

Glu

Glu

Gln

Tyr

Asn

Ser

Thr

Tyr

Arg

Val

Val

305

310

315

320

Ser

Val

Leu

Thr

Val

Leu

His

Gln

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Glu

Tyr

325

330

335

Lys

Cys

Lys

Val

Ser

Asn

Lys

Ala

Leu

Pro

Ala

Pro

Ile

Glu

Lys

Thr

340

345

350

Ile

Ser

Lys

Ala

Lys

Gly

Gln

Pro

Arg

Glu

Pro

Gln

Val

Tyr

Thr

Leu

355

360

365

Pro

Pro

Ser

Arg

Asp

Glu

Leu

Thr

Lys

Asn

Gln

Val

Ser

Leu

Thr

Cys

370

375

380

Leu

Val

Lys

Gly

Phe

Tyr

Pro

Ser

Asp

Ile

Ala

Val

Glu

Trp

Glu

Ser

385

390

395

400

Asn

Gly

Gln

Pro

Glu

Asn

Asn

Tyr

Lys

Thr

Thr

Pro

Pro

Val

Leu

Asp

405

410

415

Ser

Asp

Gly

Ser

Phe

Phe

Leu

Tyr

Ser

Lys

Leu

Thr

Val

Asp

Lys

Ser

420

425

430

Arg

Trp

Gln

Gln

Gly

Asn

Val

Phe

Ser

Cys

Ser

Val

Met

His

Glu

Ala

435

440

445

Leu

His

Asn

His

Tyr

Thr

Gln

Lys

Ser

Leu

Ser

Leu

Ser

Pro

Gly

Lys

450

455

460

<210> 4 <211> 238 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 4
Met Glu Ala	Pro Ala Gln Leu Leu	Phe Leu	Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1	5	10	15

Asp

Thr Thr

Gly Asp Ile Val Met Thr

25

Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser

- 38 031730

Val

Thr

Pro 35

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser 40

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser 45

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

Asn

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

50

55

60

Pro

Gly

Gln

Ser

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

65

70

75

80

Ser

Gly

Val

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

85

90

95

Thr

Leu

Lys

Ile

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

100

105

110

Cys

Val

Gln

Gly

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

115

120

125

Glu

Ile

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

130

135

140

Ser

Asp

Glu

Gln

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

145

150

155

160

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

165

170

175

Ala

Leu

Gln

Ser

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

180

185

190

Lys

Asp

Ser

Thr

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

195

200

205

Asp

Tyr

Glu

Lys

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

210

215

220

Leu

Ser

Ser

Pro

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

225

230

235

<210> 5 <211> 1404 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /побе=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид”

- 39 031730 <400> 5 cccaccatgg accggagagg agactctcct caggctccag gcaacacatt aacagcctct accccaattg ggcccatcgg ctgggctgcc gccctgacca ctcagcagcg gtgaatcaca aaaactcaca ctcttccccc gtggtggtgg gtggaggtgc gtggtcagcg aaggtctcca cagccccgag caggtcagcc gagagcaatg ggctccttct gtcttctcat tccctgtctc aagccccagc tacagctggt gtgcagcttc ggaagggact atgcggagtc atcttcaaat actattgggg tcttccccct tggtcaagga gcggcgtgca tggtgaccgt agcccagcaa catgcccacc caaaacccaa acgtgagcca ataatgccaa tcctcaccgt acaaagccct aaccacaggt tgacatgcct ggcagccgga tcctctacag gctccgtgat cgggtaaatg gcagcttctc ggagtcggga tggattccca tgagtgggtg tgtgaaaggg gaattccctg ccaaggcacc ggcaccctcc ctacttcccc caccttcccg gccctccagc caccaaggtg gtgcccagca ggacaccctc cgaagaccct gacaaagccg cctgcaccag cccagccccc gtacaccctg ggtcaaaggc gaacaactac caagctcacc gcatgaggct atga ttcctcctgc ggaggcttgg ttcagtaact ggtcaaatta cggttcacca aaaactgaag actgtcacag tccaagagca gaaccggtga gctgtcctac agcttgggca gacaagaaag cctgaactcc atgatctccc gaggtcaagt cgggaggagc gactggctga atcgagaaaa cccccatccc ttctatccca aagaccacgc gtggacaagt ctgcacaacc tactctggct tacagcctgg actggatgaa gattgaaatc tctccagaga acactgccgt tctcctcagc cctctggggg cggtgtcgtg agtcctcagg cccagaccta ttgagcccaa tggggggacc ggacccctga tcaactggta agtacaacag atggcaagga ccatctccaa gggatgagct gcgacatcgc ctcccgtgct ccaggtggca actacacgca ccctgatacc gggttctctg ctgggtccgc taataattat tgattccaaa ttattactgt ctccaccaag tacagcggcc gaactcaggc actctactcc catctgcaac atcttgtgac gtcagtcttc ggtcacatgc cgtggacggc cacgtaccgt gtacaagtgc agccaaaggg gaccaagaac cgtggagtgg ggactccgac gcaggggaac gaagagcctc

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

1260

1320

1380

1404 <210> 6 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поЬе=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 6 cccaccatgg aagccccagc gcagcttctc ttcctcctgc tactctggct ccctgatacc

- 40 031730

accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 7 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /п^е=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид” <400> 7

Gly Phe Pro Phe Ser Asn Tyr Trp Met Asn

5 10 <210> 8 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид” <400> 8

Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser

5 10 15

Val Lys Gly <210> 9 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 41 031730

<220> <221> <223>	источник /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид”
<400>	9

Thr Pro Ile Asp Tyr

1	5
<210> <211> <212> <213>	10 16 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <221> <223>	источник /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид”
<400>	10

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1	5 10 15
<210> <211> <212> <213>	11 16 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <221> <223>	источник /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид”
<400>	11

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1	5 10 15
<210> <211> <212> <213>	12 16 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <221> <223>	источник /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид”
<400>	12

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser His Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1	5 10 15
<210> <211> <212> <213>	13 16 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <221>

источник

- 42 031730 <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 13

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Lys Gly Lys Thr Tyr

5 10 <210> 14 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 14

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Gln Gly Lys Thr Tyr

5 10 <210> 15 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 15

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Gly Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn синтетический

Leu Asn синтетический

Leu Asn <210> 16 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 16

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Thr Gly Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 17 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” синтетический

- 43 031730 <400> 17

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Tyr Gly Lys Thr Tyr

5 10

Leu Asn <210> 18 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 18

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Ala Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 19 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 19

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Asp Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 20 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 20

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Glu Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 21 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 21

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Phe Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn

- 44 031730 синтетический <210> 22 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 22

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn His Lys Thr Tyr

5 10

Leu Asn <210> 23 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 23

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Ile Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 24 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 24

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Lys Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 25 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 25

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Leu Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 26

- 45 031730 синтетический <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /побе=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 26

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Met Lys Thr Tyr

5 10

Leu Asn <210> 27 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 27

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 28 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 28

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gln Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 29 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 29

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Arg Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn <210> 30 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 46 031730 <220>

<221> источник <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 30

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Ser Lys Thr Tyr

5 10 <210> 31 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 31

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Thr Lys Thr Tyr

5 10 <210> 32 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 32

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Val Lys Thr Tyr

5 10 <210> 33 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” <400> 33

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Tyr Lys Thr Tyr

5 10 синтетический

Leu Asn синтетический

Leu Asn синтетический

Leu Asn синтетический

Leu Asn <210> 34 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник

- 47 031730 <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид” <400> 34

Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser

5 <210> 35 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: пептид” синтетический <400> 35

Val Gln Gly Ser His Phe His Thr

5 <210> 36 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 36

Thr Gln 5

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile

Val

Met

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asp

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

- 48 031730

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 37 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /побе=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 37

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

His

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

- 49 031730

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 38 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 38

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile

Val

Met

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Lys

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

- 50 031730

Ser

His

Phe

His 100

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly 105

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile 110

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210

215

<210> 39 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /л^в^Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид

<400> 39

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Gln

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

- 51 031730

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 40 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 40

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile

Val

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Arg

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

- 52 031730

Asp Arg 65

Phe

Ser

Gly

Ser 70

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp 75

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile 80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210

215

<210> 41 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 41

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Thr

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

- 53 031730

Pro

Gln 50

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu 55

Val

Ser

Lys

Leu

Asp 60

Ser

Gly

Val

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210

215

<210> 42 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 42

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

- 54 031730

Tyr Gly

Lys 35

Thr

Tyr

Leu Asn

Trp Val 40

Leu

Gln

Lys

Pro 45

Gly

Gln

Ser

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210

215

<210> 43 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 43

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

- 55 031730

1

5

10

15

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Ala

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 44 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический

- 56 031730 полипептид

<400> 44

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Asp

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210

215

<210> 45 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 57 031730 <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 45

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Glu

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210

215

- 58 031730 <210> 46 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 46

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Phe

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

- 59 031730

Val Thr Lys Ser Phe

210

Asn Arg Gly Glu Cys

215 <210> 47 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 47

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

His

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

- 60 031730

His Lys Val Tyr Ala Cys

195

Glu Val

200

Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

205

Val Thr Lys Ser Phe

210

Asn Arg Gly Glu Cys

215 <210> 48 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 48

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Ile

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

- 61 031730

Tyr

Ser

Leu

Ser 180

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu 185

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr 190

Glu

Lys

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 49 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 49

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Lys

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

- 62 031730

Gly Asn

Ser

Gln

Glu 165

Ser

Val

Thr

Glu

Gln 170

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser 175

Thr

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 50 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 50

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Leu

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

- 63 031730

Pro Arg 145

Glu

Ala

Lys

Val 150

Gln Trp

Lys

Val

Asp 155

Asn Ala

Leu

Gln

Ser 160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 51 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 51

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Met

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

- 64 031730

Leu

Lys 130

Ser

Gly Thr

Ala

Ser 135

Val

Val

Cys

Leu

Leu 140

Asn

Asn

Phe

Tyr

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 52 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 52

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Asn

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

- 65 031730

Thr

Val

Ala Ala 115

Pro

Ser

Val

Phe 120

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser 125

Asp

Glu

Gln

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 53 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 53

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Gln

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

- 66 031730

Ser

His

Phe

His 100

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly 105

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile 110

Lys

Arg

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 54 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 54

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Arg

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

- 67 031730

Ser Arg Val

Glu

Ala 85

Glu

Asp Val

Gly

Val 90

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln 95

Gly

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 55 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 55

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Ser

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

- 68 031730

Asp 65

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser 70

Gly

Ser Gly

Thr Asp 75

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile 80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 56 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 56

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr Gln Thr 5

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Thr

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

- 69 031730

Pro

Gln 50

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu 55

Val

Ser

Lys

Leu

Asp 60

Ser

Gly

Val

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 57 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 57
Asp Ile Val	Met Thr Gln Thr	Pro Leu Ser Leu Ser Val	Thr Pro Gly
1	5	10	15

Gln Pro Ala Ser

Ile Ser Cys Lys Ser

Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 30

- 70 031730

Asn Val

Lys 35

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp 40

Val

Leu

Gln

Lys

Pro 45

Gly

Gln

Ser

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 58 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 58

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

5 10 15

- 71 031730

Gln

Pro

Ala

Ser 20

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser 25

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu 30

Tyr

Ser

Asn

Tyr

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

Arg

100

105

110

Thr

Val

Ala

Ala

Pro

Ser

Val

Phe

Ile

Phe

Pro

Pro

Ser

Asp

Glu

Gln

115

120

125

Leu

Lys

Ser

Gly

Thr

Ala

Ser

Val

Val

Cys

Leu

Leu

Asn

Asn

Phe

Tyr

130

135

140

Pro

Arg

Glu

Ala

Lys

Val

Gln

Trp

Lys

Val

Asp

Asn

Ala

Leu

Gln

Ser

145

150

155

160

Gly

Asn

Ser

Gln

Glu

Ser

Val

Thr

Glu

Gln

Asp

Ser

Lys

Asp

Ser

Thr

165

170

175

Tyr

Ser

Leu

Ser

Ser

Thr

Leu

Thr

Leu

Ser

Lys

Ala

Asp

Tyr

Glu

Lys

180

185

190

His

Lys

Val

Tyr

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

His

Gln

Gly

Leu

Ser

Ser

Pro

195

200

205

Val

Thr

Lys

Ser

Phe

Asn

Arg

Gly

Glu

Cys

210 215 <210> 59 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поЁе=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 59

- 72 031730

Glu 1

Val

Gln Leu

Val 5

Glu

Ser

Gly Gly Gly Leu 10

Val

Gln

Pro

Gly 15

Gly

Ser

Leu

Arg

Leu

Ser

Cys

Ala

Ala

Ser

Gly

Phe

Pro

Phe

Ser

Asn

Tyr

20

25

30

Trp

Met

Asn

Trp

Val

Arg

Gln

Ala

Pro

Gly

Lys

Gly

Leu

Glu

Trp

Val

35

40

45

Gly

Gln

Ile

Arg

Leu

Lys

Ser

Asn

Asn

Tyr

Ala

Thr

His

Tyr

Ala

Glu

50

55

60

Ser

Val

Lys

Gly

Arg

Phe

Thr

Ile

Ser

Arg

Asp

Asp

Ser

Lys

Asn

Ser

65

70

75

80

Leu

Tyr

Leu

Gln

Met

Asn

Ser

Leu

Lys

Thr

Glu

Asp

Thr

Ala

Val

Tyr

85

90

95

Tyr

Cys

Thr

Pro

Ile

Asp

Tyr

Trp

Gly

Gln

Gly

Thr

Thr

Val

Thr

Val

100

105

110

Ser Ser <210> 60 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 60

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

- 73 031730

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val 85 90

Gln Gly

Ser His Phe His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 <210> 61 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 61

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asp

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 62 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 62

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

- 74 031730

His

Gly Lys 35

Thr Tyr

Leu Asn

Trp Val 40

Leu

Gln Lys

Pro 45

Gly

Gln

Ser

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 63 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид

<400> 63

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Lys

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 64

- 75 031730 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 64

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Gln

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 65 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 65

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Arg

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

- 76 031730

Asp Arg 65

Phe

Ser

Gly Ser 70

Gly

Ser

Gly

Thr Asp 75

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile 80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 66 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 66

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Thr

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 67 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

- 77 031730

<400> 67

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Tyr

Gly

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 68 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 68

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Ala

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

- 78 031730

Ser His Phe His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 <210> 69 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 69

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Asp

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 70 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 70
Asp Ile Val	Met Thr Gln Thr	Pro Leu Ser Leu Ser Val	Thr Pro Gly
1	5	10	15

Gln Pro Ala Ser

Ile Ser Cys Lys Ser

Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 30

- 79 031730

Asn Glu Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp Val 40

Leu

Gln Lys

Pro 45

Gly

Gln

Ser

35

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 71 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 71

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Phe

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 72 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 80 031730 <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 72

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

His

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 73 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 73

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Ile

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

- 81 031730

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 74 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 74

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Lys

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 75 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 75

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

5 10 15

- 82 031730

Gln

Pro

Ala

Ser 20

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser 25

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu 30

Tyr

Ser

Asn

Leu

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 76 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 76

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Met

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

- 83 031730 <210> 77 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 77

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Asn

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 78 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 78

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr Gln Thr 5

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Gln

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

- 84 031730

Pro

Gln 50

Arg

Leu

Ile

Tyr Leu 55

Val

Ser

Lys

Leu

Asp 60

Ser

Gly Val

Pro

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 79 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид

<400> 79

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Arg

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 80 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник

- 85 031730 <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 80

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Ser

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 81 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 81

Asp 1

Ile

Val

Met

Thr 5

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Thr

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

- 86 031730

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val 85 90

Gln Gly

Ser His Phe His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 <210> 82 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид”

<400> 82

Gln

Thr

Pro

Leu

Ser 10

Leu

Ser

Val

Thr

Pro 15

Gly

Asp 1

Ile Val

Met

Thr 5

Gln

Pro

Ala

Ser

Ile

Ser

Cys

Lys

Ser

Ser

Gln

Ser

Leu

Leu

Tyr

Ser

20

25

30

Asn

Val

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 83 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид” <400> 83

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

- 87 031730

20

25

30

Asn

Tyr

Lys

Thr

Tyr

Leu

Asn

Trp

Val

Leu

Gln

Lys

Pro

Gly

Gln

Ser

35

40

45

Pro

Gln

Arg

Leu

Ile

Tyr

Leu

Val

Ser

Lys

Leu

Asp

Ser

Gly

Val

Pro

50

55

60

Asp

Arg

Phe

Ser

Gly

Ser

Gly

Ser

Gly

Thr

Asp

Phe

Thr

Leu

Lys

Ile

65

70

75

80

Ser

Arg

Val

Glu

Ala

Glu

Asp

Val

Gly

Val

Tyr

Tyr

Cys

Val

Gln

Gly

85

90

95

Ser

His

Phe

His

Thr

Phe

Gly

Gln

Gly

Thr

Lys

Leu

Glu

Ile

Lys

100

105

110

<210> 84 <211> 342 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид”

<400> 84
gaggtacagc	tggtggagtc	gggaggaggc	ttggtacagc	ctgggggttc	tctgagactc	60
tcctgtgcag	cttctggatt	cccattcagt	aactactgga	tgaactgggt	ccgccaggct	120
ccagggaagg	gacttgagtg	ggtgggtcaa	attagattga	aatctaataa	ttatgcaaca	180
cattatgcgg	agtctgtgaa	agggcggttc	accatctcca	gagatgattc	caaaaacagc	240
ctctatcttc	aaatgaattc	cctgaaaact	gaagacactg	ccgtttatta	ctgtacccca	300
attgactatt	ggggccaagg	caccactgtc	acagtctcct	ca		342

<210> 85 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид”

<400> 85
gacattgtga	tgacccagac	tccactcagt	ttgtcagtta	cccctgggca	accagcctct	60
atctcttgca	agtcaagtca	gagcctctta	tatagtaatg	gaaaaaccta	tttgaactgg	120
gttttacaga	agccaggcca	gtctccacag	cgcctaatct	atctggtgtc	taaactggac	180

- 88 031730 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc

240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac

300 acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa

333 <210> 86 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид” <220>

<221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Любая аминокислота, кроме Gly <400> 86

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Xaa Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 87 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид” <400> 87

Cys Gly Gln Asn Asp Thr Ser Gln Thr Ser Ser Pro Ser Ala Asp 1 5 10 15 <210> 88 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 88

gacattgtga	tgacccagac	tccactcagt	ttgtcagtta	cccctgggca	accagcctct	60
atctcttgca	agtcaagtca	gagcctctta	tatagtgatg	gaaaaaccta	tttgaactgg	120
gttttacaga	agccaggcca	gtctccacag	cgcctaatct	atctggtgtc	taaactggac	180
tctggagtcc	ctgacaggtt	ctctggcagt	ggatcaggaa	cagattttac	actgaaaatc	240

- 89 031730 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa

300

333 <210> 89 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 89 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtcacg cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca gaaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 90 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 90 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaaag cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca gaaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 91 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

- 90 031730 <400> 91 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtcaag cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca gaaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 92 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поЬе=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 92 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtcgcg cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca gaaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 93 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /поДе=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 93 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaccg cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca gaaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 94

- 91 031730 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 94 gacattgtga tgacccagac tccactcagt ttgtcagtta cccctgggca accagcctct60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta tatagttatg gaaaaaccta tttgaactgg120 gttttacaga agccaggcca gtctccacag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac180 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac300 acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa333 <210> 95 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 95 gacattgtga tgacccagac tccactcagt ttgtcagtta cccctgggca accagcctct60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta tatagtaatg caaaaaccta tttgaactgg120 gttttacaga agccaggcca gtctccacag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac180 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac300 acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa333 <210> 96 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид”

<400> 96 gacattgtga	tgacccagac	tccactcagt	ttgtcagtta	cccctgggca	accagcctct	60
atctcttgca	agtcaagtca	gagcctctta	tatagtaatg	ataaaaccta	tttgaactgg	120
gttttacaga	agccaggcca	gtctccacag	cgcctaatct	atctggtgtc	taaactggac	180

- 92 031730 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa

240

300

333 <210> 97 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 97 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaatg cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca aaaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 98 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 98 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaatt cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca ttaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 99 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник

- 93 031730 последовательности синтетический <223> /note=Описание искусственной полинуклеотид” <400> 99 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaatc cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca ataaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 100 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 100 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaata cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca ttaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 101 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 101 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaata cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca agaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333

- 94 031730 <210> 102 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 102 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaatt cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca tgaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 103 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 103 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaatg cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca ataaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 104 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 104 gacattgtga tgacccagac tccactcagt ttgtcagtta cccctgggca accagcctct

- 95 031730

atctcttgca	agtcaagtca	gagcctctta	tatagtaata	ataaaaccta	tttgaactgg	120
gttttacaga	agccaggcca	gtctccacag	cgcctaatct	atctggtgtc	taaactggac	180
tctggagtcc	ctgacaggtt	ctctggcagt	ggatcaggaa	cagattttac	actgaaaatc	240
agcagagtgg	aggctgagga	tgtgggagtt	tattactgcg	tgcaaggttc	acattttcac	300
acgttcggtc	aagggaccaa	gctggagatt	aaa			333

<210> 105 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 105 gacattgtga tgacccagac tccactcagt ttgtcagtta cccctgggca accagcctct60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta tatagtaatc agaaaaccta tttgaactgg120 gttttacaga agccaggcca gtctccacag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac180 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac300 acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa333 <210> 106 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 106 gacattgtga tgacccagac tccactcagt ttgtcagtta cccctgggca accagcctct60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta tatagtaatc gtaaaaccta tttgaactgg120 gttttacaga agccaggcca gtctccacag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac180 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac300 acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa333 <210> 107 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность

- 96 031730 <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 107 gacattgtga tgacccagac tccactcagt ttgtcagtta cccctgggca accagcctct60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta tatagtaata gtaaaaccta tttgaactgg120 gttttacaga agccaggcca gtctccacag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac180 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac300 acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa333 <210> 108 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 108 gacattgtga tgacccagac tccactcagt ttgtcagtta cccctgggca accagcctct60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta tatagtaata ccaaaaccta tttgaactgg120 gttttacaga agccaggcca gtctccacag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac180 tctggagtcc ctgacaggtt ctctggcagt ggatcaggaa cagattttac actgaaaatc240 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac300 acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa333 <210> 109 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 109

gacattgtga	tgacccagac	tccactcagt	ttgtcagtta	cccctgggca	accagcctct	60
atctcttgca	agtcaagtca	gagcctctta	tatagtaatt	tgaaaaccta	tttgaactgg	120
gttttacaga	agccaggcca	gtctccacag	cgcctaatct	atctggtgtc	taaactggac	180
tctggagtcc	ctgacaggtt	ctctggcagt	ggatcaggaa	cagattttac	actgaaaatc	240

- 97 031730 agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgcg tgcaaggttc acattttcac acgttcggtc aagggaccaa gctggagatt aaa

300

333 <210> 110 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 110 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaatg cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca ttaaaaccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 111 <211> 333 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 111 gacattgtga atctcttgca gttttacaga tctggagtcc agcagagtgg acgttcggtc tgacccagac agtcaagtca agccaggcca ctgacaggtt aggctgagga aagggaccaa tccactcagt gagcctctta gtctccacag ctctggcagt tgtgggagtt gctggagatt ttgtcagtta tatagtaaag cgcctaatct ggatcaggaa tattactgcg aaa cccctgggca gaaataccta atctggtgtc cagattttac tgcaaggttc accagcctct tttgaactgg taaactggac actgaaaatc acattttcac

120

180

240

300

333 <210> 112 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид”

- 98 031730 <400> 112

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtgatggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 113 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 113

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtcacggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

- 99 031730 tagtga

726 <210> 114 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 114

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaaaggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 115 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 115

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtcaaggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360

- 100 031730

tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 116 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 116

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtcgcggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 117 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид

- 101 031730 <400> 117

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaccggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 118 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 118

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gttatggaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

- 102 031730 tagtga

726 <210>

<211>

<212>

<213>

119

726

ДНК

Искусственная последовательность <220>

<221>

<223>

источник /note=Описание полинуклеотид” искусственной последовательности: синтетический

<400> 119
cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatgcaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720
tagtga						726

<210>

<211>

<212>

<213>

120

726

ДНК

Искусственная последовательность <220>

<221>

<223>

источник /note=Описание полинуклеотид” искусственной последовательности: синтетический

<400> 120
cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatgataa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300

- 103 031730

aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 121 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 121

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatgaaaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 122 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический

- 104 031730 полинуклеотид”

<400> 122
cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaattttaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 123 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 123

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatcataa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660

- 105 031730 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 720 tagtga

726 <210> 124 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 124

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatattaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 125 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 125

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaataagaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300

- 106 031730

aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 126 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 126

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatttgaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 127 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник

- 107 031730 <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 127

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatgataa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 128 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 128

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaataataa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660

- 108 031730 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 720 tagtga

726 <210> 129 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 129

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatcagaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 130 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 130

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatcgtaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240

- 109 031730

ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 131 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 131

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatagtaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 132 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

- 110 031730 <221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 132

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaataccaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 133 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 133

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatttgaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600

- 111 031730 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 660 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 720 tagtga

726 <210> 134 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид” <400> 134

cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaatgttaa	aacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240
ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 135 <211> 726 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид”

<400> 135
cccaccatgg	aagccccagc	gcagcttctc	ttcctcctgc	tactctggct	ccctgatacc	60
accggagaca	ttgtgatgac	ccagactcca	ctcagtttgt	cagttacccc	tgggcaacca	120
gcctctatct	cttgcaagtc	aagtcagagc	ctcttatata	gtaaaggaaa	tacctatttg	180
aactgggttt	tacagaagcc	aggccagtct	ccacagcgcc	taatctatct	ggtgtctaaa	240

- 112 031730

ctggactctg	gagtccctga	caggttctct	ggcagtggat	caggaacaga	ttttacactg	300
aaaatcagca	gagtggaggc	tgaggatgtg	ggagtttatt	actgcgtgca	aggttcacat	360
tttcacacgt	tcggtcaagg	gaccaagctg	gagattaaac	gaactgtggc	agcaccaagc	420
gtcttcatct	tcccgccatc	tgatgagcag	ttgaaatctg	gaactgcctc	tgttgtgtgc	480
ctgctgaata	acttctatcc	cagagaggcc	aaagtacagt	ggaaggtgga	taacgccctc	540
caatcgggta	actcccagga	gagtgtcaca	gagcaggaca	gcaaggacag	cacctacagc	600
ctcagcagca	ccctgacgct	gagcaaagca	gactacgaga	aacacaaagt	ctacgcctgc	660
gaagtcaccc	atcagggcct	gagctcgccc	gtcacaaaga	gcttcaacag	gggagagtgt	720

tagtga 726 <210> 136 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> источник <223> /note=Описание искусственной последовательности: синтетический пептид” <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (11)..(11) <223> /replace=Arg или Gln или His или Ser или Tyr или Ala или Asp или Glu или Phe или Ile или Leu или Met или Asn или Thr или Val <220>

<221> misc_feature <222> (1)..(16) <223> /note=Вариантный остаток, приведенный в последовательности, не имел преимущества по отношению к остаткам в аннотации для вариантного положения” <400> 136

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Lys Lys Thr Tyr Leu Asn

5 10 15

Claims (27)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Антитело к CD52 человека или его антигенсвязывающий фрагмент, где указанное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1-CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 7-9 соответственно, указанная вариабельная область легкой цепи содержит CDR1-CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 35 соответственно, где остаток 11 в последовательности SEQ ID NO: 86 представляет собой K, R, Q, H, S, Y, A, D, E, F, I, L, M, N, Т или V.
2. 2. Антитело или фрагмент по п.1, где указанное антитело или фрагмент демонстрирует повышенную стабильность по сравнению с антителом, содержащим аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 4 без сигнальной последовательности.

   - 113 031730
3. 3. Антитело или фрагмент по п.1, где остаток 11 в SEQ ID NO: 86 представляет собой:

   (a) K (SEQ ID NO: 24), (b) R (SEQ ID NO: 29) или (c) Q (SEQ ID NO: 28).
4. 4. Антитело или фрагмент по п.1, где (a) указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 59, (b) указанная вариабельная область легкой цепи содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 68-83, или (c) указанная вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 59, и указанная вариабельная область легкой цепи содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 68-83.
5. 5. Антитело к CD52 человека или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело содержит:

   a) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74,

   b) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, или

   c) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79.
6. 6. Антитело по п.1, содержащее:

   (a) тяжелую цепь SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности, (b) легкую цепь, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43-58, или (c) тяжелую цепь SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и легкую цепь, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43-58.
7. 7. Антитело к CD52 человека, содержащее:

   (a) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 49;

   (b) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 53 или (c) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 без сигнальной последовательности и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 54.
8. 8. Антитело или фрагмент по любому из пп.1-5, где указанный фрагмент выбран из группы, состоящей из scFv-фрагмента, Fab-фрагмента, Fv-фрагмента, F(ab')₂-фрагмента, минитела, диатела, тритела и тетратела.
9. 9. Антитело по любому из пп.1-5, где антитело представляет собой иммуноглобулин G (IgG).
10. 10. Антитело или фрагмент по п.9, где указанное антитело включает Fc-область IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека.
11. 11. Антитело или фрагмент по любому из пп.1-5, где С-концевой лизин тяжелой цепи является отщепленным.
12. 12. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент антитела по любому из пп.1-11.
13. 13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент и легкую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент антитела по любому из пп.1-11.
14. 14. Рекомбинантный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.12 или 13.
15. 15. Выделенная клетка-хозяин, которая способна продуцировать антитело или фрагмент по любому из пп.1-11, содержащая нуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжёлую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела или фрагмента, и нуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела или фрагмента.
16. 16. Способ получения антитела или фрагмента по любому из пп.1-11, включающий: (1) поддержание клетки, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент, и нуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь или ее антигенсвязывающий фрагмент, антитела или фрагмента по любому из пп.1-11 в условиях, подходящих для экспрессии антитела или фрагмента; и (2) выделение антитела или фрагмента.
17. 17. Композиция для лечения аутоиммунного заболевания или рака у пациента-человека, нуждающегося в этом, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-11 и фармацевтически приемлемый наполнитель или носитель.
18. 18. Способ лечения рассеянного склероза у пациента-человека, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11.
19. 19. Способ лечения аутоиммунного заболевания у пациента-человека, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11.
20. 20. Способ лечения рака у пациента-человека, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11.

    - 114 031730
21. 21. Способ по п.20, где рак представляет собой хронический лимфолейкоз.
22. 22. Способ ингибирования ангиогенеза у пациента-человека, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11.
23. 23. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11 для получения лекарственного препарата для лечения аутоиммунного заболевания у пациента-человека, нуждающегося в этом.
24. 24. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11 для приготовления лекарственного средства для лечения рассеянного склероза у пациента-человека, нуждающегося в этом.
25. 25. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11 для получения лекарственного препарата для лечения рака у пациента-человека, нуждающегося в этом.
26. 26. Применение по п.25, где рак представляет собой хронический лимфолейкоз.
27. 27. Применение антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-11 для получения лекарственного препарата для ингибирования ангиогенеза у пациента-человека, нуждающегося в этом.

    Тяжелая цепь ®Уровень экспрессии ® Связывание антигена (белок А) (белокС052) ' ^и 1С^язывание пептида CD52 в анализе Biacore, и >рмализованное к концентрациям с применением Biacore АЬ24

    CTL \ j i Связывание пептида CD52 , нормализованное к концентрациям с применением Octet _ Ab2d .

    δ м

    н

    О

    ООО 400

    500 «00 700

    Время

    Время