JP2019069960A - 抗ｃｄ５２抗体 - Google Patents

Abstract

【課題】抗ヒトＣＤ５２抗体およびその抗原結合性フラグメントが提供される。また、抗体およびフラグメントを作製するための、単離された核酸、組換えベクターおよび宿主細胞も提供される。本抗体およびフラグメントは、例えば、自己免疫疾患、がんおよび移植片拒絶を治療するための治療用途に用いることができる。【解決手段】特定の可変領域配列を持つ抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。【選択図】なし

Description

配列リスト
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットのテキストファイルとして電子的に提出されている配列リストを含み、その全体は参照により本明細書に組み込まれている。上記テキストファイルは、２０１４年３月１１日に作製され、００１６６２−００４１−ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、１４２，５８２バイトのサイズである。

本発明は、一般に、抗体、より詳しくはヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する抗体に関する。

関連出願の相互参照
本願は、２０１３年３月１５日に出願された米国仮出願第６１／７９４，５７６号の優先権を主張する。この仮出願の開示は、その全体で参照により本明細書に組み込まれている。

ＣＤ５２は、さまざまな正常および悪性リンパ系細胞（例えば、ＴおよびＢ細胞）上に豊富に見いだされる（５００，０００分子／細胞）グリコシル化されたグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型細胞表面タンパク質である。例えば、非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６を参照のこと。ＣＤ５２は、単球、マクロファージおよび樹状細胞のような骨髄系細胞ではより低いレベルで発現され、成熟したナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球および造血幹細胞ではほとんど発現が見られない。同上。すべてにおいて、ＣＤ５２は、すべてのヒト末梢血リンパ球および単球／マクロファージの少なくとも９５％に存在する（非特許文献７）。また、ＣＤ５２は、精巣上体および精管の上皮細胞によって産生され、そして生殖管を通過中に精子によって獲得される（非特許文献１、前出；非特許文献８）。ＣＤ５２の厳密な生物学的機能は不明なままであるが、しかし、それがＴ細胞移動および同時刺激に関与しうることは、いくつかの証拠により示唆されている（非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１）。

いくつかの抗ＣＤ５２モノクローナル抗体が開発されている。キャンパス−１Ｈ（Campath-1H）（登録商標）（アレムツズマブ、キャンパス（Campath）（登録商標）、マブキ
ャンパス（MabCampath）（登録商標）としても知られている）は、強力なin vitro細胞傷害作用（抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ））を示すヒト化抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体である。アレムツズマブは、成熟したＣＤ５２タンパク質のカルボキシ末端の４つのアミノ酸からなるエピトープおよび負に荷電したＧＰＩアンカーの部分を認識する。さらなる抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体が作製されている。しかし、これらの抗体のいくつかの結合親和性は、貯蔵中ならびに特定のｐＨおよび温度条件下で低下する。したがって、この変化を受ける傾向が低減された抗ＣＤ５２抗体が必要とされている。

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本発明は、時間の経過に伴ってならびに高いｐＨおよび温度の条件下で結合親和性を保持するように設計された抗ヒトＣＤ５２抗体を特徴とする。「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、本明細書において同じ意味で用いられる。また、抗ＣＤ５２抗体の軽鎖または重鎖をコードする配列を含む、単離された核酸、組換えベクターおよび宿主細胞ならびに抗ＣＤ５２抗体を調製する方法が提供される。

Ａｂ２６は、シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列およびシグナル配列なしの配列番号：４の軽鎖アミノ酸配列を有するヒト化抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体である。Ａｂ２６は、貯蔵中に時間の経過に伴ってＣＤ５２結合親和性および効力が低減する。本発明者らは、予期せぬことに、軽鎖ＣＤＲ１の位置１１で特定の単一アミノ酸置換を伴うＡｂ２６の変異体（例えば、モノクローナル抗体Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０）は、Ａｂ２６のヒトＣＤ５２結合親和性を保持する、または上回るだけでなく、またＡｂ２６と比較して有意に改善された安定性を示すことを発見した。変異体抗体（例えばＡｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０）は、Ａｂ２６と比較してin vitroおよびin vivoで類似のまたは改善された生物学的効力を示している。これらの変異体は、治療および
診断用途に有用である。

いくつかの実施態様において、本発明の抗ヒトＣＤ５２抗体または抗原結合性フラグメントは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、上記重鎖可変領域は、配列番号：７の重鎖ＣＤＲ１；配列番号：８の重鎖ＣＤＲ２；および配列番号：９の重鎖ＣＤＲ３を含み、そして上記軽鎖可変領域は、配列番号：８６の軽鎖ＣＤＲ１；配列番号：３４の軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号：３５の軽鎖ＣＤＲ３を含む。さらなる実施態様において、配列番号：８６中の残基１１は、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｈ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、ＴまたはＶであってもよい。一実施態様において、配列番号：８６の残基１１はＫである。別の実施態様において、配列番号：８６の残基１１はＲである。さらに別の実施態様において、配列番号：８６の残基１１はＱである。

いくつかの実施態様において、抗ＣＤ５２抗体またはフラグメントの重鎖可変領域は、配列番号：５９を含む。さらなる実施態様において、抗ＣＤ５２抗体またはフラグメントの軽鎖可変領域は、配列番号：６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２および８３からなる群から選択される配列を含む。例えば、本発明の抗体またはフラグメントの重鎖および軽鎖は、ａ）それぞれ、配列番号：５９および６８；ｂ）それぞれ、配列番号：５９および６９；ｃ）それぞれ、配列番号：５９および７０；ｄ）それぞれ、配列番号：５９および７１；ｅ）それぞれ、配列番号：５９および７２；ｆ）それぞれ、配列番号：５９および７３；ｇ）それぞれ、配列番号：５９および７４；ｈ）それぞれ、配列番号：５９および７５；ｉ）それぞれ、配列番号：５９および７６；ｊ）それぞれ、配列番号：５９および７７；ｋ）それぞれ、配列番号：５９および７８；ｌ）それぞれ、配列番号：５９および７９；ｍ）それぞれ、配列番号：５９および８０；ｎ）それぞれ、配列番号：５９および８１；ｏ）それぞれ、配列番
号：５９および８２；またはｐ）それぞれ、配列番号：５９および８３を含んでもよい。

いくつかの実施態様において、抗体またはフラグメントは、シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列を含む。さらなる実施態様において、抗体またはフラグメントは、配列番号：４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７および５８からなる群から選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。例えば、抗体またはフラグメントは、（ａ）シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：４９の軽鎖アミノ酸配列；（ｂ）シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：５３の軽鎖アミノ酸配列；または（ｃ）シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：５４の軽鎖アミノ酸配列を含んでもよい。

いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）である。さらなる実施態様において、抗体は、ヒトＦｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＦｃ領域）を含む。また、本発明は、本発明の抗体のいずれかの抗原結合性フラグメントを包含し、ここで、上記フラグメントは、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）₂フラグメント、ミニ抗体、
二特異性抗体、三重特異性抗体および四重特性抗体からなる群から選択される。

いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、モノクローナルである。さらなる実施態様において、抗体および抗原結合性フラグメントは、ヒト化される。本発明の抗体またはフラグメントの重鎖Ｃ末端リジンは、場合により切断されてもよい。

また、本発明は、抗体の重鎖もしくはその抗原結合性フラグメント、または軽鎖もしくはその抗原結合性フラグメント、または両方をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子に関する。いくつかの実施態様において、単離された核酸分子は、配列番号：９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４のヌクレオチド配列を含む。また、本発明は、上記核酸分子を含む組換えベクター（例えば、発現ベクター）を包含する。いくつかの実施態様において、本発明は、上記ベクターを含む単離された宿主細胞を包含する。

また、本発明は、本明細書に記載された抗ＣＤ５２抗体もしくはフラグメント、または上記抗体もしくはフラグメントの重鎖または軽鎖を産生する単離された細胞系統を包含する。いくつかの実施態様において、本発明は、（１）本明細書に記載された宿主細胞または細胞系統を抗体またはフラグメントの発現に適した条件下に維持すること；および（２）抗体またはフラグメントを回収することを含む抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合性フラグメントを作製する方法に関する。

本発明は、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントおよび薬学的に許容しうるビヒクルまたはキャリアを含む組成物を包含する。

本発明は、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を患者に投与することを含む、その必要のある患者を治療する方法に関する。いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含む、その必要のある患者において自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症）を治療する方法を包含する。いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含む、その必要のある患者においてがん（例えば、慢性リンパ性白血病）を治療する方法を包含する。また、本
発明は、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含む、その必要のある患者において血管新生を阻害する方法に関する。

いくつかの実施態様において、本発明は、その必要のある患者において自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症）を治療するための、またはそれを治療する薬剤を製造するための、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントの使用に関する。また、本発明は、その必要のある患者において、がん（例えば、慢性リンパ性白血病）を治療するための、またはそれを治療する薬剤を製造するための、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントの使用に関する。さらに、本発明は、その必要のある患者において、過剰血管新生を治療するための、または血管新生を阻害する薬剤を製造するための、本明細書に記載された抗体または抗原結合性フラグメントの使用に関する。

本特許または本願明細書は、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面付きの本特許または特許出願公開のコピーは、請求し、必要な料金を支払うと、官庁によって提供される。

抗ＣＤ５２抗体の迅速な親和性スクリーニングからの結果を示す。上方のパネルは、抗体調製のフローチャートである。中央パネルのグラフおよび下方パネルの表は、ＢＩＡＣＯＲＥ^TM結合アッセイおよびオクテット発現レベル測定の結果を示す。 精製された抗ＣＤ５２抗体を特徴づける実験からの結果を示す。上方のパネルは、抗ＣＤ５２抗体の重鎖および軽鎖の分離を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。分子量マーカーは、（Ｍ）と記したレーンに示す。下方のパネルのグラフおよび表は、ＢＩＡＣＯＲＥ^TM結合アッセイの結果を示す。 ＣＨＯ細胞中で産生されたＡｂ２４およびＡｂ１０抗体の調製を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真を示す。また、ゲルは、対照の抗ＣＤ５２（ＣＴＬ）抗体およびＡｂ１抗体を示す。１００ｋＤ種およびＬＣクリッピングを矢印で示す。 右側の「重鎖のみ」の二量体の図と共にＡｂ２４およびＡｂ１０抗体中に見いだされる１００ｋＤ種を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真を示す。また、Ｎ末端のシークエンシング結果を示す。 さらなる抗ＣＤ５２抗体を特徴づける実験からの結果を示す。表およびグラフは、ＢＩＡＣＯＲＥ^TM結合アッセイおよびオクテット発現レベル測定の結果を示す。「ＫＧＮ」は、配列番号：３の重鎖配列および配列番号：２の軽鎖配列を有する抗ＣＤ５２抗体のことをいう。 精製された抗ＣＤ５２抗体のＣＤ５２結合を特徴づける実験からの結果を示す。左パネルは、野生型（ＣＴＬ）および他の抗体の重鎖および軽鎖を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。分子量マーカーは、（Ｍ）と記したレーンに示す。右のパネルグラフは、ＢＩＡＣＯＲＥ^TM結合アッセイの結果を示す。 対照の抗ＣＤ５２抗体および抗体Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０のＣＤＣアッセイからの結果を示すグラフである。 ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける対照の抗ＣＤ５２抗体（ＣＴＬ）ならびに抗体Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０のＣＤ５２＋細胞枯渇活性（cell-depleting activity）に関するアッセイの結果を示す。左のグラフは、血液サンプルからの結果を示す。右のグラフは、脾臓サンプルからの結果を示す。 野生型ヒトＣＤ５２タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＨ００６４４．１）（配列番号１）のアミノ酸配列を示す。 抗体Ａｂ２６、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５およびＫＧＮの完全長重鎖アミノ酸配列（配列番号：３）ならびに抗体Ａｂ２６の完全長軽鎖アミノ酸配列（配列番号：４）を示す。シグナル配列は、太字のイタリック体であり、そしてＣＤＲには下線を引いてある。 抗体Ａｂ２６、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５およびＫＧＮの完全長重鎖核酸配列（配列番号：５）ならびに抗体Ａｂ２６、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５およびＫＧＮの完全長軽鎖核酸配列を示す。シグナル配列には下線を引き、そしてオープンリーディングフレームは太字である。 図１１−１の続き。 図１１−２の続き。 図１１−３の続き。 図１１−４の続き。 図１１−５の続き。 図１１−６の続き。 図１１−７の続き。 図１１−８の続き。 図１１−９の続き。 図１１−１０の続き。 図１１−１１の続き。 図１１−１２の続き。 図１１−１３の続き。 抗体Ａｂ２６、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４およびＡｂ２５のＨ−ＣＤＲ１（配列番号：７）、Ｈ−ＣＤＲ２（配列番号：８）、Ｈ−ＣＤＲ３（配列番号：９）、Ｌ−ＣＤＲ２（配列番号：３４）、およびＬ−ＣＤＲ３（配列番号：３５）のアミノ酸配列を示す。 抗体Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５およびＡｂ２６のＬ−ＣＤＲ１のアミノ酸配列を示す。 抗体Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４およびＡｂ２５の完全長軽鎖のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲには下線を引いてある。 図１４−１の続き。 図１４−２の続き。 図１４−３の続き。 図１４−４の続き。 抗体Ａｂ２６、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４およびＡｂ２５の重鎖および軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列を示す。ＣＤＲには下線を引いてある。 図１５−１の続き。 図１５−２の続き。 図１５−３の続き。 抗体Ａｂ２６、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５およびＫＧＮの重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの核酸配列を示す。 図１６−１の続き。 図１６−２の続き。 図１６−３の続き。 図１６−４の続き。 図１６−５の続き。 図１６−６の続き。 ＨＥＫ２９３細胞から精製されたＡｂ１抗体を特徴づける実験からの結果を示す。グラフおよび表は、ＣＤ５２ペプチドに対するＡｂ１およびＡｂ２６の２つの調製物（ＣＴＬ１およびＣＴＬ２）の親和性を測定するＢＩＡＣＯＲＥ^TMアッセイの結果を示す。右上方のパネルは、Ａｂ２６抗体の２つの調製物（ＣＴＬ１およびＣＴＬ２）およびＡｂ１抗体の重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を示す、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。 ＣＨＯ細胞から精製されたＡｂ１抗体を特徴づける実験からの結果を示す。このグラフは、ＣＤ５２ペプチドに対するＡｂ１抗体（下方のパネル）およびＡｂ２６抗体（ＣＴＬ）（上方パネル）の親和性を測定するＢＩＡＣＯＲＥ^TMアッセイの結果を示す。 Ａｂ１抗体およびＡｂ２６抗体（対照）のＣＤＣアッセイからの結果を示すグラフである。結果は、抗体の最終濃度ｍｇ／ｍｌの関数として相対蛍光単位（ＲＦＵ）で表される。 抗ＣＤ５２抗体の安定性スクリーニングからの結果を示す。左上方パネルのグラフは、Ａｂ２６（ＣＴＬ）および変異体抗体に関して、４５℃およびｐＨ７．２で時間（週）の関数としてＫＤ（ｎＭ）を示す。右上方パネルのグラフは、Ａｂ２６（ＣＴＬ）および変異体抗体に関して、４５℃およびｐＨ７．２で時間（週）の関数としてＴ０と比較した親和性を示す。 抗ＣＤ５２抗体の安定性において３成分緩衝液中でのインキュベーションの効果を試験する実験からの結果を示す。左上方パネルのグラフは、Ａｂ２６の２つの調製物（ＣＴＬ１およびＣＴＬ２）および変異体抗体に関する、３７℃およびｐＨ７．５で週０、週２および週４のＫＤ（ｎＭ）を示す。右上方パネルのグラフは、Ａｂ２６（ＣＴＬ）および変異体抗体に関する、４５℃およびｐＨ７．４で週０、週２および週４のＫＤ（ｎＭ）を示す。 ４５℃でインキュベーション後のＡｂ２６（ＣＴＬ）、Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）−ＨＰＬＣ分析からの結果を示す。

本発明の詳述
本発明は、ある種の抗ＣＤ５２抗体が、貯蔵中または特定のｐＨおよび温度条件下で時間の経過に伴って安定性を失い、低下した結合親和性を示すという本発明者らの発見に基づく。本発明者らは、親抗体の軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ−ＣＤＲ１）中の単一の位置（位置１１）でアミノ酸置換を含む変異体抗体を作製している。本発明者らは、これらの変異体抗体のいくつかが、親抗体と比較して、in vivo効力を含む、類似したまたは改善された抗原
結合特性および生物活性だけでなく、また、増強された安定性を示すことを発見した。

本発明には、抗ヒトＣＤ５２抗体、抗体の抗原結合性フラグメント（すなわち、部分）、抗体の軽鎖、抗体の重鎖、およびこれらの軽鎖または重鎖のフラグメントが含まれる。本発明は、成熟した抗体またはその鎖、例えばグリコシル化抗体、ならびに未熟または前
駆体抗体タンパク質に関する。また、本発明は、これらの未熟または成熟タンパク質の両方をコードする核酸分子（例えば、ベクター）、このような核酸を含む宿主細胞、未熟および成熟タンパク質を産生する方法、ならびに抗体を使用する方法に関する。

本発明の抗体および抗原結合部分は、特定の免疫介在性疾患（ＩＭＤ）適応症のような、ＣＤ５２産生細胞によって仲介されるまたは生じるさまざまな疾患および状態に関して、その必要のある対象、例えば、ヒト患者を治療するために用いることができる。作用機序は、抗ＣＤ５２抗体が細胞死を引き起こすことによってそれらの細胞（例えば、リンパ球またはがん性ＣＤ５２⁺細胞）を枯渇させる（deplete）ことでありうる。例えば、本抗体は、リンパ球枯渇（lymphocyte depletion）−循環リンパ球、例えば、Ｔ細胞および／またはＢ細胞の個体数を減らすことによって達成され、結果的にリンパ球減少症になる免疫抑制のタイプを通して、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、血管炎、筋炎およびウェゲナー病（Wegener's disease））
の治療に用いることができる。本発明の抗体は、がん、例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病）およびリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）の治療に用いることもでき、または組織移植（例えば、固形臓器移植（例えば、腎臓移植）および幹細胞移植）に用いることもできる。また、本発明の抗体は、例えば、ex vivo用途で造血幹細胞を富化
するために用いることもできる（例えば、Lim et al., J. Hematology & Oncology 1:19 (2008)を参照のこと）。

本抗体の抗原結合性
本発明の抗体は、ヒトＣＤ５２もしくはその部分に対して結合特異性（例えば、エピトープ特異性）を有するか、またはそれに対する結合に関して選択的である。これらの抗体は、ＣＤ５２分子に特異的に結合し、かつ非ＣＤ５２分子に特異的に結合しない。抗ＣＤ５２抗体とＣＤ５２との間の特異的結合は、例えば、フローサイトメトリーによってＣＤ５２⁺細胞への抗体の結合のＥＣ₅₀を測定することによって明らかにすることができる。
特異的結合は、（例えば、フローサイトメトリーによって測定して）１０μｇ／ｍｌ未満のＥＣ₅₀によって示すことができる。本明細書に記載された抗体は、ヒトＣＤ５２またはそのフラグメントに対して結合特異性を有することができる。結合アッセイは、単離されたまたは組換えヒトＣＤ５２；ヒトＣＤ５２から誘導されたペプチド；またはヒトＣＤ５２を発現する細胞（例えば、ヒトＴおよび／またはＢ細胞、ヒトＣＤ５２をコードする核酸を発現する組換え宿主細胞、またはこのような細胞の細胞膜分画）を用いて実施することができる。さらに、抗体は、ヒトＣＤ５２の１つまたはそれ以上の形態（例えば、グリコシル化ヒトＣＤ５２；脱グリコシル化ヒトＣＤ５２；非グリコシル化ヒトＣＤ５２；および対立遺伝子の変異体）に対して結合特異性を有することができる。一実施態様において、抗体は、自然発生、内在性または野生型ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する。野生型ヒトＣＤ５２のアミノ酸配列を図９に提示する（配列番号１）。

「抗原結合親和性」は、結合相互作用の強度を説明する技術用語であり、典型的に、その抗原に抗体を結合する全体的な強度のことをいう。いくつかの実施態様において、本抗体は、例えば、（１）１×１０^-7Ｍまたはそれ未満、好ましくは１×１０^-8Ｍまたはそれ未満、より好ましくは１×１０^-9Ｍまたはそれ未満、都合よくは１×１０^-10Ｍまたはそ
れ未満、そして最も好ましくは１×１０^-11Ｍまたは１×１０^-12のＫＤ（ＫＤ＝Ｋ_off（
ｋｄ）／Ｋ_on（ｋａ））によって示される親和性でヒトＣＤ５２に結合する。例えば、ＫＤは、１００ｎＭから１ｐＭまで（すなわち、１×１０^-7〜１×１０^-12Ｍ）、５０ｎＭ
から１ｐＭまで、５ｎＭから１ｐＭまで、または１ｎＭから１ｐＭまでの範囲である。また、所望の抗原結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定して、Ｋ_off速度定数５
×１０^-1秒^-1またはそれ未満、好ましくは１×１０^-2秒^-1またはそれ未満、都合よくは１×１０^-3秒^-1またはそれ未満、より好ましくは１×１０^-4秒^-1またはそれ未満、より好ましくは１×１０^-5秒^-1またはそれ未満、そして最も好ましくは１×１０^-6秒^-1またはそれ
未満によって示されうる。例えば、Ｋ_off速度定数は、５×１０^-1秒^-1から１×１０^-7秒^-1まで、１×１０^-2秒^-1から１×１０^-6秒^-1まで、または５×１０^-3秒^-1から１×１０^-5
秒^-1までの範囲であってもよい。また、特定のアッセイまたは設定における所望の抗原結合濃度は、１０μｇ／ｍｌを超えないＥＣ₅₀によって、例えば、０．１〜１０μｇ／ｍｌのＥＣ₅₀によって示されうる。

本発明の抗体は、抗体Ａｂ２６によって結合されるＣＤ５２エピトープと同じまたは重複するＣＤ５２上のエピトープと結合するもの、または本明細書に例示されたその変異体のいずれかを含む。エピトープ結合は、競合的結合アッセイのようなさまざまな技術を用いて容易に決定することができる。本明細書に用いられる「エピトープ」は、抗体に特異的結合が可能な任意のタンパク質決定因子を含む。エピトープの決定因子は、一般に、アミノ酸および／または炭水化物または糖質側鎖のような分子の化学的に活性な表面の集合体からなり、そして一般に特定の三次元構造特性だけでなく、特定の電荷特性を有する。エピトープは「線状」または「立体構造的」であってもよい。線状エピトープでは、タンパク質と相互作用分子（例えば抗体）との間の相互作用の地点のすべては、タンパク質の主要アミノ酸配列に沿って線状に存在する。立体構造エピトープでは、相互作用の地点は、主要ポリペプチド配列中の互いに離れたタンパク質上のアミノ酸残基に存在する。

一実施態様において、試験抗体が、本発明の特定の抗ＣＤ５２抗体の同一または重複するエピトープに結合するかどうかを決定するため、本発明の抗ＣＤ５２抗体を飽和条件下でＣＤ５２に結合させ、次いでＣＤ５２に結合する試験抗体の能力を測定することができる。試験抗体が参照抗ＣＤ５２抗体と同時にＣＤ５２に結合することができる場合、試験抗体が参照抗ＣＤ５２抗体とは異なるエピトープに結合していると推測することができる。しかし、試験抗体がＣＤ５２に同時に結合することができない場合、試験抗体が、参照抗ＣＤ５２抗体によって結合されるエピトープと同じ、もしくは重複するエピトープに、または参照抗体によって結合されるエピトープに隣接したエピトープに結合すると推測することができる。この実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ^TMまたはフローサイトメトリーを用いて実施することができる。抗ＣＤ５２抗体が、他の抗ＣＤ５２抗体と交差競合する（cross-compete）かどうか試験するため、２つの方針で、すなわち、参照抗
体が試験抗体を遮断するかどうか、およびその逆を決定する上述の競合方法を用いてもよい。

エピトープビニング（binning）は、本発明の抗体を特徴づけるために有用でありうる
。「ビニング」という用語は、それらの抗原結合特性に基づいて抗体をグループ化する方法のことをいう。それらの交差競合に基づいて抗体を「ビニング」するハイスループット法は、国際特許出願公開第ＷＯ０３／４８７３１号に記載されている。「エピトープビニング」は、抗ＣＤ５２抗体「Ａ」の非標識形態を、ＣＤ５２の配列に対応する合成ペプチドに、またはＣＤ５２陽性細胞に結合させることによって調べることができる。その後、標識された第２の抗ＣＤ５２抗体「Ｂ」を加え、そして細胞または合成ペプチドが抗ＣＤ５２抗体「Ａ」に以前に曝露されなかった場合の対照サンプルと比較して結合できる標識抗体の量を評価することができる。別法として、抗ＣＤ５２抗体「Ａ」および「Ｂ」は、検出を可能にする異なる蛍光色素または化学物質で標識することができ、そして標識を検出可能な器具を用いて同時にＣＤ５２抗原を結合できる両標識抗体の量を測定することができ、またはフローサイトメトリーによってＣＤ５２陽性細胞を同時に結合する両抗体の量を測定することができる。ＢＩＡＣＯＲＥ^TMおよびオクテット技術により抗体の非標識形態の競合的結合を調べることが可能である。一部の抗体では化学修飾により結合活性を損なうことがありうるため、この抗体の非標識形態の使用は望ましい。また、Jia et al., J. Immunol. Methods 288:91-98 (2004)で記載された技術を参照し、それはエピトープビニングの実施に有用である。

いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、抗体Ａｂ２６の親和性と類似した、またはより良好な親和性でヒトＣＤ５２を結合する。特定の実施態様において、本発明の抗体は、抗体Ａｂ２６と同じ、または類似したエピトープ特異性および生物学的機能（例えば、リンパ球枯渇機能）を有する。一実施態様において、本抗体は、ヒトＣＤ５２のＱＴＳＳアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。

本抗体および抗原結合性フラグメントの構造
自然抗体は、２本の同一の軽鎖（約２４ｋＤ）および２本の同一の重鎖（約５５または７０ｋＤ）が四量体を形成する共通のコア構造を有する。各鎖のアミノ末端部分は、可変（Ｖ）領域として知られており、各鎖の残部のより保存された定常（Ｃ）領域とは区別することができる。軽鎖の可変領域（ＶＬドメインとも呼ばれる）内で、Ｃ末端の部分はＪ領域として知られている。重鎖の可変領域（ＶＨドメインとも呼ばれる）内には、Ｊ領域に加えてＤ領域がある。抗体のアミノ酸配列変異のほとんどは、超可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲｓ）として知られているＶ領域中の３つの別々の位置に限られており、それは抗原結合性に直接関与している。アミノ末端から進んで、これらの領域は、それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と指定されている。ＣＤＲｓは、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）によって適所に保持される。アミノ末端から進んで、これらの領域は、それぞれ、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と指定されている。ＣＤＲおよびＦＲ領域の位置ならびにナンバリングシステムは、Kabatらによって定義されている
。Kabat, E. A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)；Chothia & Lesk, Canonical Structures for the Hypervariable Regions
of Immunoglobulins, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)；およびIMGT（登録商標） numbering system (The International ImMunoGeneTics Iinformation System（登録商標）; Lefranc, M.-P., The Immunologist 7, 132-136 (1999)）を参照のこと。ＣＤＲの境界を確認するために目視検査および配列解析を実施することができる。本発明では、カバットシステムおよびＩＭＧＴシステムの両方を用いてＣＤＲ配列を定める；すなわち、２つのシステムによって定めたＣＤＲが完全に重複しないとき、両方のシステムによって定められた配列からのすべての残基が含まれる。

本発明は、親抗体Ａｂ２６の変異体を特徴とする。Ａｂ２６の重鎖および軽鎖アミノ酸ならびに核酸配列を、それぞれ、図１０および１１に示す。Ａｂ２６は、シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列およびシグナル配列なしの配列番号：４の軽鎖アミノ酸配列を含む。

本発明のいくつかの実施態様において、本抗体のＣＤＲは、成熟したＡｂ２６タンパク質の残基３４で、軽鎖ＣＤＲ１アミノ配列中のＡｂ２６と異なる。これらの変化のいくつかは、その抗原結合特性に影響を及ぼすことなく、変異体抗体の安定性を大いに改善する。残基３４の突然変異により変異体抗体の両方の抗原結合親和性が低下する場合、親和性を回復するため、抗体配列中（例えば、Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２またはＨ−ＣＤＲ３中）に１つまたはそれ以上のさらなる突然変異をもたらしてもよい。いくつかの実施態様において、残基３４は、ＧからＫ、Ｒ、Ｑ、Ｈ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、ＴまたはＶに変えられる。本発明のいくつかの実施態様において、抗ＣＤ５２抗体のＬ−ＣＤＲ１配列は、配列番号：２４、２９、２８、２２、３０、３３、１８、１９、２０、２１、２３、２５、２６、２７、３１および３２からなる群から選択される。

本明細書において具体的に説明された抗体のＣＤＲ配列を、それらの配列番号によって下の表１に記載する。

いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、ヒト化される。本明細書に用いる「抗ＣＤ５２ヒト化抗体」という用語は、ドナー抗体（例えば、マウス抗ＣＤ５２抗体）として引用されることもある、非ヒト由来の抗ＣＤ５２抗体の１つまたはそれ以上の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）および／または１つまたはそれ以上の重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）
を含む抗体；およびヒト由来の抗体の少なくとも一部（例えば、ヒト由来の軽鎖および／または重鎖から誘導された、フレームワーク領域、またはフレームワークおよび定常領域）のことをいう。例えば、ヒト化抗体は、フレームワークの変化を伴うまたは伴わない、ＣＤＲを移植された抗体である。いくつかの実施態様において、ヒト化抗体は、脱免疫化された抗体である。潜在的Ｔ細胞エピトープの数を減らすために改変されており、それによって、ヒトに投与したときに抗体が免疫応答を誘発する傾向が低減された、脱免疫化抗体（de-immunized antibodies）に関しては、例えば、Carrの米国特許第７，２６４，８
０６号を参照のこと。

フレームワーク領域における変更、例えばヒト由来のフレームワーク領域の残基をドナー抗体の対応する位置からの残基で置換するものを行うことができる。Queenの米国特許
第５，５３０，１０１号を参照のこと。フレームワーク領域中の１つまたはそれ以上のアミノ酸の欠失、挿入および置換を含む、１つまたはそれ以上の突然変異をもたらすことができる。所望により、ヒト化抗体ではフレームワーク突然変異を含むことができ、そして突然変異の部位は、例えばＷＯ９８／０６２４８および米国特許第６，４０７，２１３号に記載されたような、なんらかの適した方法を用いて選択することができ、その全開示は、参照により組み込まれている。いくつかの場合、抗原結合親和性を増強するために、親フレームワーク中の１つまたはそれ以上のＣＤＲに隣接する１つまたはそれ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の隣接アミノ酸）も、ヒト化抗体に含まれる。ヒト化抗体のＣＤ５２結合親和性を改善するために、フレームワーク領域中、残基の１つまたはそれ以上で復帰突然変異を場合によりもたらしてもよい。

本発明の抗体は、１つまたはそれ以上の残基の付加、欠失または置換（例えば、保存的置換）によって抗体Ａｂ２６と異なってもよく、例えば、親配列から最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の残基が異なる。

例として、本発明は、配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：６８の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：６９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７０の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７１の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７２の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７３の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７４の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７５の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７６の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７７の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７８の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：７９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：８０の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：８１の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）
を含む重鎖および配列番号：８２の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖；または配列番号：５９の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号：８３の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば、３つのすべてのＣＤＲ）を含む軽鎖を有する抗体を含む。

一実施態様において、本発明の抗体は、ヒトＣＤ５２に対して結合特異性を有し、かつアミノ酸配列が、ａ）それぞれ、配列番号：７、８、９、１８、３４および３５；ｂ）それぞれ、配列番号：７、８、９、１９、３４および３５；ｃ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２０、３４および３５；ｄ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２１、３４および３５；ｅ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２２、３４および３５；ｆ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２３、３４および３５；ｇ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２４、３４および３５；ｈ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２５、３４および３５；ｉ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２６、３４および３５；ｊ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２７、３４および３５；ｋ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２８、３４および３５；ｌ）それぞれ、配列番号：７、８、９、２９、３４および３５；ｍ）それぞれ、配列番号：７、８、９、３０、３４および３５；ｎ）それぞれ、配列番号：７、８、９、３１、３４および３５；ｏ）それぞれ、配列番号：７、８、９、３２、３４および３５；またはｐ）それぞれ、配列番号：７、８、９、３３、３４および３５である、重鎖（Ｈ）−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３、軽鎖（Ｌ）−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２およびＬ−ＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、配列番号：８６（ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＮＸＫＴＹＬＮ）のＬ−ＣＤＲ１を含み、ここで、Ｘは、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｙ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、ＦもしくはＷから選択される天然のアミノ酸または非標準（例えば、非天然）アミノ酸である。

また、本発明は、本明細書に記載された抗体の抗体軽鎖に関する。一実施態様において、抗体軽鎖は、配列番号：１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２および３３からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ１を含む。例えば、抗体は、アミノ酸配列がａ）それぞれ、配列番号：１８、３４および３５；ｂ）それぞれ、配列番号：１９、３４および３５；ｃ）それぞれ、配列番号：２０、３４および３５；ｄ）それぞれ、配列番号：２１、３４および３５；ｅ）それぞれ、配列番号：２２、３４および３５；ｆ）それぞれ、配列番号：２３、３４および３５；ｇ）それぞれ、配列番号：２４、３４および３５；ｈ）それぞれ、配列番号：２５、３４および３５；ｉ）それぞれ、配列番号：２６、３４および３５；ｊ）それぞれ、配列番号：２７、３４および３５；ｋ）それぞれ、配列番号：２８、３４および３５；ｌ）それぞれ、配列番号：２９、３４および３５；ｍ）それぞれ、配列番号：３０、３４および３５；ｎ）それぞれ、配列番号：３１、３４および３５；ｏ）それぞれ、配列番号：３２、３４および３５；またはｐ）それぞれ、配列番号：３３、３４および３５である、Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２およびＬ−ＣＤＲ３を有する。

本明細書に具体的に説明された抗体の完全長重鎖および軽鎖ならびに可変ドメインのアミノ酸配列に加えて重鎖および軽鎖ならびに可変ドメインをコードするヌクレオチド配列の配列識別子（配列番号）を、表２に記載する。

一実施態様において、本発明の抗体は、配列番号：６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２または８３の可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む軽鎖を含む。別の実施態様において、抗体は、アミノ酸配列が配列番号：４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７または５８を含む、またはからなる軽鎖を含む。

いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、アミノ酸配列が、ａ）それぞれ、配列番号：５９および６８；ｂ）それぞれ、配列番号：５９および６９；ｃ）それぞれ、配列番号：５９および７０；ｄ）それぞれ、配列番号：５９および７１；ｅ）それぞれ、配列番号：５９および７２；ｆ）それぞれ、配列番号：５９および７３；ｇ）それぞれ、配列番号：５９および７４；ｈ）それぞれ、配列番号：５９および７５；ｉ）それぞれ、配列
番号：５９および７６；ｊ）それぞれ、配列番号：５９および７７；ｋ）それぞれ、配列番号：５９および７８；ｌ）それぞれ、配列番号：５９および７９；ｍ）それぞれ、配列番号：５９および８０；ｎ）それぞれ、配列番号：５９および８１；ｏ）それぞれ、配列番号：５９および８２；またはｐ）それぞれ、配列番号：５９および８３を含む、またはからなる、ＶＨおよびＶＬを含む。

一実施態様において、本発明の抗体は、アミノ酸配列が、ａ）それぞれ、配列番号：３および４３；ｂ）それぞれ、配列番号：３および４４；ｃ）それぞれ、配列番号：３および４５；ｄ）それぞれ、配列番号：３および４６；ｅ）それぞれ、配列番号：３および４７；ｆ）それぞれ、配列番号：３および４８；ｇ）それぞれ、配列番号：３および４９；ｈ）それぞれ、配列番号：３および５０；ｉ）それぞれ、配列番号：３および５１；ｊ）それぞれ、配列番号：３および５２；ｋ）それぞれ、配列番号：３および５３；ｌ）それぞれ、配列番号：３および５４；ｍ）それぞれ、配列番号：３および５５；ｎ）それぞれ、配列番号：３および５６；ｏ）それぞれ、配列番号：３および５７；またはｐ）それぞれ、配列番号：３および５８を含む、またはからなる重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を含み、各配列は、存在する場合、シグナル配列あり、またはなしである。

また、本明細書では、全抗体の部分、例えば抗体の軽鎖もしくは重鎖、または軽鎖および／もしくは重鎖の部分が提供される。全抗体の部分には、全抗体の抗原結合部分が含まれる。「抗原結合性フラグメント」および「抗原結合部分」の用語は、本明細書において同じ意味で用いられる。抗体の抗原結合性フラグメントには、例えば、単一鎖抗体、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）₂フラグメン
ト、Ｆｄフラグメント、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖＦｃ融合、二重特異性単鎖Ｆｖ二量体、ミニ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特性抗体、ドメイン欠失抗体および単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）が含まれる。例えば、Nature Biotechnology 22(9):1161-1165 (2004))を参照のこと。また、ＶＨおよび／またはＶＬを含む抗原結合性分子も、本発明の範囲内にある。また、ＶＨの場合、分子は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の１つまたはそれ以上を含んでもよい。

抗体部分またはフラグメントは、酵素切断によって、または組換え技術によって産生することができる。例えば、パパインまたはペプシン切断を用いて、それぞれ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）₂フラグメントを生成することができる。また、１つまたはそれ以上の終
止コドンが天然の終始部位の上流に導入されている抗体遺伝子を用いて、さまざまな切断形態で抗体を産生することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）₂フラグメントの重鎖をコー
ドする組換え構築物は、重鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計することができる。抗原結合性フラグメントは、その親抗体の結合特異性を保持している。好ましい抗原結合性フラグメントは、野生型ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する。ヒト化可変領域に関する核酸（例えば、ＤＮＡ）配列コーディングは、既存のＤＮＡ配列を変えるためのＰＣＲ突然変異誘発方法を用いて作製することができる（例えば、Kamman, M., et al., Nucl. Acids Res. 17:5404 (1989)を参照のこと）。
新たなＣＤＲのためのＰＣＲプライマーコーディングを、同じか、または非常に類似したヒト可変領域に基づく、以前にヒト化された可変領域のＤＮＡテンプレートにハイブリダイズすることができる（Sato, K., et al., Cancer Research 53:851-856 (1993)）。類
似したＤＮＡ配列がテンプレートとして入手可能でない場合、可変領域配列をコードしている配列を含む核酸を、合成オリゴヌクレオチドから作製することができる（例えば、Kolbinger, F., Protein Engineering 8:971-980 (1993)を参照のこと）。また、シグナル
ペプチドをコードしている配列を核酸中に組み込むこともできる（例えば、合成において、ベクターへ挿入して）。シグナルペプチド配列が入手できない（例えば、典型的に存在しない）場合、別の抗体からのシグナルペプチド配列を用いることができる（例えば、Kettleborough, C. A., Protein Engineering 4:773-783 (1991)を参照のこと）。これらの
方法、本明細書に記載された方法または他の適した方法を用いて、変異体を容易に産生することができる。特に明記しない限り、本発明の抗体の作製および使用についての議論は、これらの抗体の抗原結合性フラグメントに適用できる。

本発明の抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む、任意のアイソタイプまたはサブタイプであることができる。抗体は、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖から誘導された軽鎖を含んでもよい。

別の態様において、本発明は、本明細書に記載されたような抗体の変異体またはその部分を提供し、ここで、上記変異体は、ヒトＣＤ５２に特異的に結合するが、しかし、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のアミノ酸置換（例えば、ＣＤＲ領域、ＦＲ領域または定常ドメイン中）によって参照抗体またはその部分と異なる。例えば、変異体抗体は、重鎖、重鎖可変ドメイン、軽鎖、または軽鎖可変ドメインにおいて参照抗体に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一である。

ポリペプチドに対する配列類似性または同一性は、典型的に配列解析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む、さまざまな置換、欠失および他の修飾に割り当てられる類似性の測定を用いて、類似した配列を適合させる。例えば、ＧＣＧは、異なる生物種からの相同ポリペプチドのような密接に関連したポリペプチド間で、または野生型タンパク質とその突然変異タンパク質との間で配列相同性または配列同一性を決定するため、デフォルトパラメータを用いて使用することができる「ＧＡＰ」および「Ｂｅｓｔｆｉｔ」のようなプログラムを含んでいる。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照のこと。また、ポリペプチド配列は、デフォルトまたは推奨パラメータを用いるＦＡＳＴＡ、ＧＣＧバージョン６．１のプログラムを用いて比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリーと探索配列との間に最良の重複部分の領域のアラインメントおよびパーセント配列同一性を提供する（Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000)）。本発明の配列を、異なる生物からの多数の配列を含むデータベースと比較するときの別の好ましいアルゴリズムは、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にｂｌａｓｔｐまたはｔｂｌａｓｔｎであり、デフォルトパラメータを用いる。例えば、Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990); Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997)を参照のこと；参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書に用いるとき、「アミノ酸」は、以下の表に示すように、その正式な名称によって、それに対応する３文字表記によって、またはそれに対応する１文字表記によって表される：
正式な名称 ３文字表記 １文字表記
アスパラギン酸 Ａｓｐ Ｄ
グルタミン酸 Ｇｌｕ Ｅ
リジン Ｌｙｓ Ｋ
アルギニン Ａｒｇ Ｒ
ヒスチジン Ｈｉｓ Ｈ
チロシン Ｔｙｒ Ｙ
システイン Ｃｙｓ Ｃ
アスパラギン Ａｓｎ Ｎ
グルタミン Ｇｌｎ Ｑ
セリン Ｓｅｒ Ｓ
トレオニン Ｔｈｒ Ｔ
グリシン Ｇｌｙ Ｇ
アラニン Ａｌａ Ａ
バリン Ｖａｌ Ｖ
ロイシン Ｌｅｕ Ｌ
イソロイシン Ｉｌｅ Ｉ
メチオニン Ｍｅｔ Ｍ
プロリン Ｐｒｏ Ｐ
フェニルアラニン Ｐｈｅ Ｆ
トリプトファン Ｔｒｐ Ｗ

本発明によれば、実施されうるアミノ酸置換の１つのタイプは、化学的に反応性でありうる、抗体中の１つまたはそれ以上のシステインを、別の残基、例えば、限定されるわけではないが、アラニンまたはセリンに変えることである。一実施態様において、非標準システインの置換がある。この置換は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域中で、または抗体の定常ドメイン中で実施することができる。いくつかの実施態様では、システインが標準である。実施されうるアミノ酸置換の別のタイプは、抗体中の潜在的タンパク質分解部位を除去することである。このような部位は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域中に、または抗体の定常ドメイン中に存在しうる。システイン残基の置換およびタンパク質分解部位の除去により、抗体産物の不均一性のリスクが低下し、したがって、その均一性を高めることができる。アミノ酸置換の別のタイプは、残基の一方または両方を変えることによって、潜在的アミド分解部位を形成するアスパラギン−グリシン対を排除することである。本発明の別の態様では、例えば、国際特許出願公開ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に記載された技術を用いて、抗体を脱免疫化してその免疫原性を低下させてもよい。

本発明による変異体の１つで実施されうるアミノ酸置換の別のタイプは、保存的アミノ酸置換である。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似した化学的性質（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基によって置換されるものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的性質を実質的に変えないであろう。２つまたはそれ以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合、パーセント配列同一性または類似性の程度を上向きに調整して置換の保存的性質に関して補正してもよい。この調整を実施する手段は、当業者によく知られている。例えば、Pearson, Methods Mol. Biol. 243:307-31 (1994)を参照のこと。

類似した化学的性質を有する側鎖を有するアミノ酸の基の例には、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リジン、アルギニンおよびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸；および７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが含まれる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタメート−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換では、Gonnet et al., Science 256:1443-45 (1992)に開示されたＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有するなん
らかの変化がある。「適度な保存的」置換では、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負でない値を有するなんらかの変化がある。

特定の実施態様において、本発明の抗体または抗原結合性部分へのアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させるもの、（２）酸化に対する感受性を低下させるもの、（３）例えば、抗体のＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性を増強するために、タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変えるもの、（４）このような類似体の他の物理化学的または機能的性質を付与または改良するが、ヒトＣＤ５２に対する特異的結合をなお保持するもの、（５）Ｃ末端リジンを除去するもの、および（６）グリコシル化部位を付加または除去するものである。いくつかの実施態様において、本発明の抗ＣＤ５２抗体の重鎖のＣ末端リジンは、存在しない（Lewis et al., Anal. Chem, 66(5): 585-595 (1994)）。

一態様において、本発明は、本発明の抗体の軽（または重）鎖である、または軽（または重）鎖の可変ドメインを含有する部分である、新たなおよび新規なポリペプチドを提供する。このようなポリペプチドは、向かい側の抗体重（または軽）鎖と組んでＣＤ５２−結合分子を形成することできるため、有用である。本発明の抗体の最初のＶＬまたはＶＨドメインが選択されたら、「混合および適合（mix and match）」実験を実施してもよく
、ここでは、最初に選択されたＶＬまたはＶＨ部分を含む異なる対を、ＣＤ５２結合に関してスクリーニングして好ましいＶＬ／ＶＨ対組合せを選択する。１つの確定された可変ドメイン配列を用いて、機能性パートナーの可変ドメインのレパートリーに関して可変ドメインライブラリーをスクリーニングすることによってＣＤ５２に対する機能性抗体を操作してもよい。例えば、Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Portolano et al., J. Immunol., 150:880-887 (1993); Beiboer et al., J. Mol. Biol., 296:833-849
(2000); Klimka et al., British Journal of Cancer,. 83:252-260 (2000)を参照のこ
と。

診断または検定目的（例えば、治療のモニタリングが可能となる、例えば画像化）では、抗体（例えば、その抗原結合性フラグメント）は、検出可能な標識を含むことができる。適した検出可能な標識および抗体またはその抗原結合性フラグメントを標識するための方法は、当分野でよく知られている。適した検出可能な標識としては、例えば、放射性同位体（例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍまたはヨウ素−１３１として）、陽電子放出標識（例えば、フッ素−１９）、常磁性イオン（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ））、エピトープ標識（タグ）、親和性標識（例えば、ビオチン、アビジン）、スピン標識、酵素、蛍光基または化学発光基が含まれる。標識を用いないときは、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳまたは他の適した方法によって複合体形成（例えば、ヒト化抗体とヒトＣＤ５２との間の）を決定することができる。

また、本発明に用いる抗ＣＤ５２抗体および抗原結合性フラグメントを、例えば化学反応または遺伝子改変を介して、半減期のような抗体の薬物動態を改善する他の部分（例えば、ペグ化部分）に結合させてもよい。いくつかの実施態様では、本発明に用いる抗ＣＤ５２抗体および抗原結合性フラグメントを、例えば化学結合または遺伝子改変を介して、適したサイトカインに結合させることができる（例えば、フレーム中のサイトカインのコード配列を抗体コード配列に加え、それによって抗体：サイトカイン融合タンパク質を生成する）。

また、本発明は、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントが、生物活性化合物（例えば、サイトカイン、スーパー抗原、細胞毒性薬および毒素）のような別の治療物質に結合された免疫複合体に関する。例えば、抗体またはフラグメントを植物もしくは細菌由来の分子（またはその誘導体）、インターロイキン−２抗体またはジフテリア毒素抗体結合することができる。

本抗体の安定性
本発明の抗体は、貯蔵中に安定である。本発明の抗体は、Ａｂ２６によって示される安定性と比較して増加した安定性を有しうる。安定性は、貯蔵期間後のＣＤ５２に対する抗体の結合親和性を測定することによって示してもよい。安定性を実証するため、抗体を３７℃または４５℃で、そしてｐＨ７．０、７．５または８．０でインキュベートしてもよい。１０ｍＭコハク酸塩、１０ｍＭヒスチジンおよび１０ｍＭリン酸ナトリウムを含有する緩衝液、ｐＨ７．５中で抗体をインキュベートしてもよい。増加した安定性は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、または少なくとも１０週間延長されうる。

核酸および組換えベクター
また、本発明は、本発明の抗体、抗原結合性フラグメント、軽鎖、重鎖、または可変ドメインをコードする配列を含む、単離されたおよび／または組換え（例えば、本質的に純粋を含む）核酸分子に関する。

本明細書において「単離された」または「精製された」といわれる核酸は、それらの由来となる源のゲノムＤＮＡまたは細胞ＲＮＡの核酸（例えば、それらは、細胞中またはライブラリーのような核酸の混合物中に存在するため）から分離されている核酸であり、そして本質的に純粋な核酸、生物学的方法と化学的方法との組合せにより化学合成によって産生された核酸、および単離された組換え核酸を含む、本明細書に記載された方法または他の適した方法によって得られた核酸を含む（例えば、Daugherty, B. L. et al., Nucleic Acids Res., 19(9): 2471-2476 (1991); Lewis, A. P. and J. S. Crowe, Gene, 101:
297-302 (1991)を参照のこと）。

本明細書において「組換え」といわれる核酸は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および／または制限酵素を用いるベクターへのクローニングのような人為的な組換え方法に依存する主要によって生成されたそれらの核酸を含む、組換えＤＮＡ方法論によって産生された核酸である。また、「組換え」核酸は、細胞の自然な仕組みを通して発生する組換え現象から生じるが、しかし、所望の組換え現象が可能であり、かつ起こりうるように設計された核酸の細胞に導入後に選択されるものである。

また、本発明は、より詳しくは、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する抗体、または上記抗体の重鎖もしくは軽鎖、もしくは重鎖可変領域、もしくは軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたおよび／または組換え核酸に関する。

いくつかの実施態様において、核酸分子は、配列番号：９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９または１１０からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、それは抗ＣＤ５２抗体のＶＬアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施態様において、核酸分子は、配列番号：６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２または８３のＶＬアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）のＶＬアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるＶＬアミノ酸配列をコードする。Ａｂ２６のＶＬアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、配列番号：８５であってもよい。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）のＶＬアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の突然変異を含むＶＬアミノ酸配列をコードする。突然変異は、ＣＤＲｓまたはＦＲｓにあってもよい。

いくつかの実施態様では、核酸分子は、配列番号：１１９、１２０、１２１、１２２、
１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３または１３４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、それは抗ＣＤ５２抗体の軽鎖アミノ酸配列をコードしており、シグナル配列あり、またはなしのいずれかである。いくつかの実施態様において、核酸分子は、配列番号：４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７または５８の軽鎖アミノ酸配列をコードしており、シグナル配列をあり、またはなしのいずれかである。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である軽鎖アミノ酸配列をコードする。Ａｂ２６の軽鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、シグナル配列あり、またはなしの配列番号：６であってもよい。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）の軽鎖アミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個の突然変異を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする。突然変異は、ＣＤＲｓ、ＦＲｓ、または定常ドメイン中にあってもよい。

いくつかの実施態様において、核酸分子は、抗ＣＤ５２抗体のＶＨアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。例えば、このヌクレオチド配列は、配列番号：８４であってもよい。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）のＶＨアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるＶＨアミノ酸配列をコードする。Ａｂ２６のＶＨアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、配列番号：８４であってもよい。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）のＶＨアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１個の突然変異を含むＶＨアミノ酸配列をコードする。突然変異は、ＣＤＲｓ中またはＦＲｓ中にあってもよい。

いくつかの実施態様において、核酸分子は、シグナル配列あり、またはなしのいずれかである、抗ＣＤ５２抗体の重鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。例えば、このヌクレオチド配列は、シグナル配列あり、またはなしの配列番号：５であってもよい。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）の重鎖アミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である重鎖アミノ酸配列をコードする。Ａｂ２６の重鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、シグナル配列あり、またはなしの配列番号：５であってもよい。いくつかの実施態様において、核酸分子は、参照抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ａｂ２６）の重鎖アミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１個の突然変異を含む重鎖アミノ酸配列をコードする。突然変異は、ＣＤＲｓ中、ＦＲｓ中、または定常ドメイン中にあってもよい。

本発明の核酸は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化抗体を産生するために用いることができる。例えば、配列のさらなる操作のため、または適した宿主細胞中にコードされた抗体の産生のため、本発明のヒト化抗体をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ（例えばｃＤＮＡ）またはＲＮＡ）または１つもしくはそれ以上の核酸を適した構築物（例えば、組換えベクター）中に組み込むことができる。

また、ヒトＣＤ５２に対して結合特異性を有するヒト化抗体の発現に適した構築物またはベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さまざまなベクターが利用可能であり、宿主細胞中で単一のコピーもしくは複数のコピーで維持されるか、または宿主細胞の染色体に組み込まれることになるベクターが含まれる。構築物またはベクターは、適した宿主細胞に導入することができ、そして本発明のヒト化抗体を発現する細胞は、培養下で産生および維持することができる。ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化抗体
を発現するため、単一のベクターまたは複数のベクターを用いることができる。

適した発現ベクター、例えば哺乳動物細胞発現ベクターは、以下：複製起点；選択可能な標識遺伝子；１つまたはそれ以上の発現調節因子、例えば転写調節因子（例えば、プロモーター、エンハンサー、ターミネーター）、および／または１つもしくは以上の翻訳シグナル；膜標的化または分泌のためのシグナル配列またはリーダー配列の１つまたはそれ以上を含むが、それらに限定されるわけではない多くの成分を含有することもできる。構築物またはベクターにおいて、シグナルペプチド配列は、構築物もしくはベクターまたは他の供給源によって提供されうる。例えば、抗体の転写および／または翻訳シグナルを直接発現に用いることができる。

適した宿主細胞中の発現のため、プロモーターを提供することができる。プロモーターは構成型または誘導型であることができる。例えば、コードされたポリペプチドの発現を導くように、プロモーターを、ヒト化抗体または抗体鎖をコードする核酸に作動可能に連結することができる。原核細胞宿主に適したさまざまなプロモーター（例えば、大腸菌（E. coli）のためのｌａｃ、ｔａｃ、Ｔ３、Ｔ７プロモーター）および真核細胞宿主に適
したさまざまなプロモーター（例えば、イーストアルコール脱水素酵素（ＡＤＨ１）、ＳＶ４０、ＣＭＶ）が利用可能である。当業者は、本発明の抗ＣＤ５２抗体またはその部分を発現するために適当なプロモーターを選択することができる。

さらに、ベクター（例えば、発現ベクター）は、典型的に、ベクターを担持している宿主細胞の選択のための選択可能なマーカー、そして複製可能なベクターの場合、複製起点を含む。抗生物質耐性または薬剤耐性を与える産物をコードする遺伝子は、一般的な選択可能なマーカーであり、そして原核細胞（例えば、β−ラクタマーゼ遺伝子（アンピシリン耐性）、Ｔｅｔ遺伝子（テトラサイクリン耐性）および真核細胞（例えば、ネオマイシン（Ｇ４１８またはジェネティシン）、ｇｐｔ（ミコフェノール酸）、アンピシリン、またはハイグロマイシン耐性遺伝子）中で用いてもよい。ジヒドロ葉酸還元酵素マーカー遺伝子は、さまざまな宿主中でメトトレキセートによる選択を可能にする。宿主の栄養要求性マーカーの遺伝子産物をコードする遺伝子（例えば、ＬＥＵ２、ＵＲＡ３、ＨＩＳ３）は、しばしば酵母の選択可能なマーカーとして用いられる。また、レトロウイルスベクターのような、宿主細胞のゲノムに組み込むことが可能である、ウイルス（例えば、バキュロウイルス）またはファージベクター、およびベクターの使用も、企図される。

したがって、本発明は、本発明のヒト化抗体、ヒト化軽鎖、ヒト化重鎖をコードする単離された核酸分子に関する。また、本発明は、抗体およびその鎖の抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子に関する。本発明の核酸によってコードされるポリペプチド配列を、上に、および以下の実施例に記載する。

いくつかの実施態様において、本発明の核酸またはベクターは、本発明の重鎖（または、その抗原結合部分）または軽鎖（または、その抗原結合部分）をコードする。別の実施態様において、本発明の核酸またはベクターは、本発明の重鎖および軽鎖（または、それらの抗原結合部分）をコードする。重鎖をコードする核酸および軽鎖をコードする核酸の両方、または重鎖および軽鎖の両方をコードする１つの核酸を含有する宿主細胞を用いて、重鎖および軽鎖を含む抗体（または抗体の抗原結合部分）を作製することができる。重鎖をコードする核酸および軽鎖をコードする核酸を、個々の発現ベクター上に配置することができる。また、それらを、同じまたは異なる発現調節下で、単一の発現ベクター上に配置することもできる。例えば、Cabillyの米国特許第６，３３１，４１５号；Fangの米
国特許第７，６６２，６２３号を参照のこと。

ヒトＣＤ５２に対して特異性を有する抗体を産生する方法
本発明の別の態様は、本発明の抗ヒトＣＤ５２抗体を作製する方法に関する。本発明の抗体は、例えば、適した宿主細胞中で抗体をコードする１つまたはそれ以上の組換え核酸の発現によって産生することができる。宿主細胞は、任意の適した方法を用いて産生することができる。例えば、本明細書に記載された発現構築物（例えば、１つまたはそれ以上のベクター、例えば、哺乳動物細胞発現ベクター）を適した宿主細胞に導入することができ、そして生成した細胞を、構築物またはベクターの発現に適した条件下で維持することができる（例えば、培養液中、動物中、植物中）。適した宿主細胞は、細菌細胞、例えば大腸菌（E. coli）（例えば、菌株ＤＨ５α^TM（インビトロゲン（Invitrogen）、カリフ
ォルニア州、カールズバッド）、枯草菌（B. subtilis）および／または他の適した細菌
を含む原核細胞；真核細胞、例えば真菌または酵母細胞（例えば、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、アスペルギルス種（Aspergillus sp.）サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、アカパンカビ（Neurospora crassa））、または他のより下等な真核細胞、およびより高等な真核細胞、例えば昆虫からのもの（例えば、Drosophila Schnieder S2細胞、
Ｓｆ９昆虫細胞（ＷＯ９４／２６０８７（O'Connor）、ＴＮ５Ｂ１−４（ＨＩＧＨ５）昆虫細胞（インビトロゲン）、哺乳動物（例えば、ＣＯＳ細胞、例えばＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−１６５０）およびＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−１６５１）、ＣＨＯ（例えば、ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−９０９６）、ＣＨＯ ＤＧ４４（Urlaub, G. and Chasin, L A., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77(7):4216-4220 (1980)）、２９
３（ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−１５７３）、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ受入番号ＣＣＬ−２）、ＣＶ１（ＡＴＣＣ受入番号ＣＣＬ−７０）、ＷＯＰ（Dailey, L., et al., J. Virol., 54:739-749 (1985)）、３Ｔ３、２９３Ｔ（Pear, W. S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90:8392-8396 (1993)）、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨｕＴ７８細胞およ
び同様のもの））、または植物（例えば、タバコ、アオウキクサ（lemna）（ウキクサ）
、および藻類）（例えば、Ausubel, F. M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons Inc. (1993)を参照のこと）であることができる。いくつかの実施態様において、宿主細胞は、多細胞生物（例えば、植物または動物）の部分でなく、例えば、それは単離された宿主細胞であるか、または細胞培養物の一部である。

また、本発明は、本発明の核酸（例えば、ベクター）を含む細胞（例えば、発現ベクター）に関する。例えば、１つまたはそれ以上の発現調節因子に作動可能に連結されている、または連結されることになる核酸（例えば、ベクター中、細胞の処理によって作製された構築物中、宿主細胞ゲノム中に組み込まれた）を用い、選択された宿主細胞に適した方法（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、感染）によって、ヒトＣＤ５２に対して結合特異性を有するヒト化抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸（すなわち、１つまたはそれ以上の核酸）、またはこのような核酸を含む構築物（すなわち、１つまたはそれ以上の構築物、例えば、１つまたはそれ以上のベクター）を、適した宿主細胞に導入することができる。宿主細胞を、発現に適した条件下で（例えば、誘導剤、適当な塩で補充された適した培地、成長因子、抗生物質、栄養補助物質、などの存在下で）維持し、それによって、コードされたポリペプチドを産生することができる。所望により、コードされたタンパク質（例えば、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ抗体）を、例えば、宿主細胞、培地または乳状液から単離することができる。この方法は、トランスジェニック動物または植物（例えば、タバコ）の宿主細胞（例えば、乳腺細胞）中での発現を包含する（例えば、ＷＯ９２／０３９１８を参照のこと）。

抗体部分（例えば、抗原結合性フラグメント；抗体鎖）が、Ｎ末端位置で、Ｃ末端位置で、または融合タンパク質の内部で非抗体部分（すなわち、自然界に見出される抗体に存在しない部分）に連結されている融合タンパク質を産生することができる。例えば、いくつかの実施態様は、抗体配列をコードしている核酸を、適した発現ベクター、例えばｐＥ
Ｔベクター（例えば、ｐＥＴ−１５ｂ、ノバゲン（Novagen））、ファージベクター（例
えば、ｐＣＡＮＴＡＢ ５Ｅ、ファルマシア（Pharmacia））、または他のベクター（例
えば、ｐＲＩＴ２ＴプロテインＡ融合ベクター、ファルマシア（Pharmacia））に挿入す
ることによって産生することができる。生成した構築物を発現に適した宿主細胞に導入することができる。発現すると、適した親和性マトリックスによって細胞溶解物からいくらかの融合タンパク質を単離または精製することができる（例えば、Current Protocols in
Molecular Biology (Ausubel, F. M. et al., Eds., Vol. 2, 前出26, pp. 16.4.1-16.7.8 (1991)を参照のこと）。

本発明は、本明細書に提供された抗体（例えば、抗体、軽鎖または重鎖、軽鎖可変領域または重鎖可変領域）をコードする組換え核酸を含む宿主細胞に関する。また、本発明は、抗体の抗原結合性部分またはそれらの鎖をコードする組換え核酸を含む宿主細胞に関する。いくつかの実施態様において、宿主細胞は、本明細書において参照するように、本発明の組換えベクター（例えば、発現ベクター、哺乳動物細胞発現ベクター）を含む。

また、本発明は、本発明の抗体または抗体ポリペプチド鎖を調製する方法に関する。一実施態様において、方法は、本明細書に記載された本発明の宿主細胞（例えば、抗体またはポリペプチド鎖（例えば、軽鎖および重鎖、軽鎖のみまたは重鎖のみ）をコードする１つまたはそれ以上の単離された核酸を含有する宿主細胞）を、抗体またはポリペプチド鎖の発現に適した条件下に維持することを含む。例えば、宿主細胞は培養基上で、または懸濁液中で培養することができる。いくつかの実施態様において、方法は、抗体またはポリペプチド鎖を精製または単離するステップを更に含む。

選択は、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ Ｍ−２７０アミン（ダイナル（Dynal））に結合された
ＣＤ５２を用い、製造元の推奨に従って実施することができる。別法として、ビオチン化ＣＤ５２を用いる選択は、第一級アミン特異試薬スクシンイミジル−６−（ビオチンアミド）ヘキサノエートを用い、製造元の説明（ＥＺリンクＮＨＳ ＬＣビオチン（EZ link NHS LC Biotin）、ピアース（Pierce））に従って準備することができる。

選択からのアウトプットは、ＣＤ５２への結合に関して競合するｓｃＦｖｓまたはＩｇＧの能力を測定する競合アッセイに基づいて、ハイスループットスクリーンにおけるペリプラズム標本（periplasmic preparations）として試験することができる。

ハイスループットスクリーンにおいて競合することができるサンプルを、Vaughanら(1996)およびOsburnら(1996)に記載されたようなＤＮＡシークエンシングにかけてもよい。
次いで、クローンをｓｃＦｖｓまたはＩｇＧとして発現させ、そして精製し、そして例えば抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイおよび補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイのようなアッセイを用いて、ＣＤ５２を結合する、ＣＤ５２またはその組合せを中和する、それらの能力について評価する。次いで、精製したｓｃＦｖ標本を、ＷＯ０１／６６７５４の実施例３に記載されたように準備することができる。精製したｓｃＦｖまたはＩｇＧ標本のタンパク質濃度は、ＢＣＡ法（ピアース（Pierce））を用いて決定してもよい。固定された抗体重鎖または軽鎖（またはＶＨもしくはＶＬ）の最適パートナー（反対側の鎖）についてスクリーニングするために、類似のアプローチを用いることができる。

本発明の抗体は、精製または単離された形態（例えば、それらの出所源（例えば、細胞の上清；混合物中、例えばライブラリーの抗体混合物中）となる分子（例えば、ペプチド）から分離されている）、であることができ、そして本明細書に記載された方法または他の適した方法によって得られた抗体を含む。単離された抗体には、実質的に純粋な（本質的に純粋な）抗体、ならびに化学合成、組換え技術およびそれらの組合せによって産生さ
れた抗体が含まれる。

毒素部分または毒素を含有する抗体
また、本発明は、毒素部分または毒素を含む抗体に関する。適した毒素部分は、毒素（例えば、界面活性毒素、サイトトキシン）を含む。なんらかの適した方法を用いて毒素部分または毒素を抗体に連結またはコンジュゲート（conjugate）することができる。例え
ば、毒素部分または毒素を、抗体に直接または適したリンカーを通して共有結合させることができる。適したリンカーとしては、切断されない、または切断可能なリンカー、例えば、ｐＨ切断可能なリンカーまたは細胞酵素の切断部位を含むリンカーが含まれうる。このような切断可能なリンカーは、抗体がインターナライズされた後、毒素部分または毒素を放出することができる抗体を調製するために用いることができる。

抗体に毒素部分または毒素を連結またはコンジュゲートするさまざまな方法を用いることができる。選択される特定の方法は、連結またはコンジュゲートされるべき毒素部分または毒素および抗体に左右されることになる。所望により、抗体および毒素部分または毒素を連結するために、末端官能基を含有するリンカーを用いることができる。一般に、コンジュゲーションは、反応性官能基を含有する（または反応性官能基を含有するように改変されている）毒素部分または毒素をリンカーと、または直接、抗体と反応させることによって実施される。適当な条件下で第２の化学基と反応し、それによって共有結合を形成することができる化学部分または官能基を含有する（または、含有するように改変されている）毒素部分または毒素を反応させることによって共有結合が形成される。所望により、なんらかの適した方法を用いて、適した反応性化学基を抗体またはリンカーに加えることができる（例えば、Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, Calif. (1996)を参照のこと）。多くの適した反応性化学基の組合せが当分野
で知られおり、例えば、アミン基は、トシラート、メシラート、ハロゲン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）などのような求電子基と反応することができる。チオールは、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロイル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などと反応することができる。アルデヒド官能基は、アミン−またはヒドラジド含有分子にカップリングすることができ、そしてアジド基は、三価のリン基と反応してホスホルアミデートまたはホスホルイミド結合を形成することができる。分子に活性基を導入するために適した方法は、当分野で知られている（例えば、Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, Calif. (1996)を参照のこと）。

適した毒素部分および毒素には、例えば、メイタンシノイド、タキサン、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、またはそれらの誘導体が含まれる。メイタンシノイドは、例えば、マイタンシノールまたはマイタンシノール類似体であることができる。マイタンシノール類似体の例には、修飾された芳香環を有するものおよび他の位置で修飾を有するものが含まれる。マイタンシノールおよびマイタンシノール類似体は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号および同第６，３３３，４１０号に記載されており、それらの内容は、参照により本明細書に組み込まれている。マイタンシノールは、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（またはＳＰＰ）としても知られている）、４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−ａ−（２−ピリジルジチオ）−トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＤＰＢ）、２イミノチオランまたはＳ−アセチルコハク酸無水物を用いて、抗体および抗体フラグメントにカップリングすることができる。タキサンは、例えば、タキソール、タキソテールまたは新規なタキサンであることができる（例えば、ＷＯ０１／３８３１８を参照のこと）。カリケアマイシンは、例えば、ブロモ錯体カリケアマイシン、ヨード錯体カリケアマイシン、またはそれらの類似体および模倣体であることができる。ブロモ錯体カリケアマイシン
には、Ｉ１−ＢＲ、Ｉ２−ＢＲ、Ｉ３−ＢＲ、Ｉ４−ＢＲ、Ｊ１−ＢＲ、Ｊ２−ＢＲおよびＫ１−ＢＲが含まれる。ヨード錯体カリケアマイシンには、Ｉ１−Ｉ、Ｉ２−Ｉ、Ｉ３−Ｉ、Ｊ１−Ｉ、Ｊ２−Ｉ、Ｌ１−ＩおよびＫ１−ＢＲが含まれる。カリケアマイシンならびにその突然変異体、類似体および模倣体は、例えば、米国特許第４，９７０，１９８号、同第５，２６４，５８６号、同第５，５５０，２４６号、同第５，７１２，３７４号および同第５，７１４，５８６号に記載されており、それらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれている。デュオカルマイシン類似体は、例えば、米国特許第５，０７０，０９２号、同第５，１８７，１８６号、同第５，６４１，７８０号、同第５，６４１，７８０号、同第４，９２３，９９０号および同第５，１０１，０３８号に記載されており、それらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれている。

他の毒素の例としては、代謝拮抗剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質および抗分裂剤が含まれるが、それらに限定されるわけではない。また、毒素は、界面活性毒素、例えば、フリーラジカル発生剤である毒素または放射性核種含有部分であることもできる。毒素は、例えば、細菌源または植物タンパク質からのタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドであることができる。

また、特定の標的タンパク質を生成する役割を果たすｍＲＮＡを結合する、無効にする、分解を促進する、または産生を妨げるように設計された核酸のアンチセンス化合物を毒素として用いることもできる。アンチセンス化合物には、アンチセンスＲＮＡもしくはＤＮＡ、一または二本鎖、オリゴヌクレオチドまたはそれらの類似体が含まれ、それらは、個々のｍＲＮＡ種に特異的にハイブリダイズすることができ、そしてｍＲＮＡ種の転写および／またはＲＮＡプロセシング、ならびに／またはコードされたポリペプチドの翻訳を妨げ、それによって、それぞれのコードされたポリペプチドの量を低下させる。Ching, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 10006-10010 (1989); Broder, et al., Ann. Int. Med. 113: 604-618 (1990); Loreau, et al., FEBS Letters 274: 53-56 (1990)
。

また、毒素は、光活性剤であることもできる。適した光活性剤には、ポルフィリンベースの物質、例えばポルフィマーナトリウム、グリーンポルフィリン、クロリンＥ６、ヘマトポルフィリン誘導体自体、フタロシアニン、エチオプルプリン（etiopurpurins）、テ
キサフィリン（texaphrin）、などが含まれる。毒素は、細胞内標的を結合する抗体また
は抗体フラグメントであることができる。このような抗体または抗体フラグメントは、限定された細胞内区画または標的を対象とすることができる。

治療の方法および組成物
医薬組成物は、１つまたはそれ以上の抗体の治療有効量および場合により薬学的に許容しうる担体を含む。薬学的に許容しうる担体には、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールおよび同様のもの、ならびにそれらの組合せが含まれる。さらに、薬学的に許容しうる担体には、融合タンパク質の有効期間または有効性を増強する、少量の補助物質、例えば湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤、または緩衝液が含まれうる。組成物は、投与後、活性成分の迅速な、持続性または遅延性の放出をもたらすように処方することができる。それらの調製に適した医薬組成物および方法は、当分野でよく知られている。例えば、Remington (2005), THE SCIENCE AND PRACTICE
OF PHARMACY, A. Gennaro, et al., eds., 21st ed., Mack Publishing Coを参照のこと。医薬組成物は、さらに、免疫抑制／免疫調節剤および／または抗炎症剤を含んでもよい。このような治療を必要とする患者において免疫疾患を治療する方法は、医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含んでもよい。ＣＤ４０介在性Ｔ細胞活性化を弱めることにより、例えば、自己免疫、移植拒絶またはアレルギー反応中に起こる望ましくないＴ細胞反応を抑制できるであろう。ＣＤ４０介在性Ｔ細胞活性化を抑制することにより、こ
れらの疾患の進行および／または重症度を緩和することができるであろう。

本明細書に用いるとき、「患者」は、動物、例えばヒトを含む、哺乳動物を意味する。患者は、免疫疾患またはがんと診断されてもよい。「治療」または「治療する」または「治療すること」は、症状、障害、状態または疾患の進行または重症度を緩和することを含む過程のことをいう。「免疫疾患」は、細胞および／または体液免疫反応を含む、個体における免疫反応の発生と関連する任意の疾患のことをいう。免疫疾患の例には、炎症、アレルギー、自己免疫疾患または移植関連の疾患が含まれるが、それらに限定されるわけではない。自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、糖尿病、乾癬、硬皮症、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患および潰瘍性大腸炎からなる群から選択してもよい。

本発明の抗体は、免疫抑制および免疫消失（immuno-ablation）に有用である。本抗体
は、ＣＤ５２を発現する細胞（例えば、ＴおよびＢ細胞）を目標とし、そしてその必要のある対象において、それらの集団を減らす（または、本明細書に用いるように「枯渇させる」）。リンパ球枯渇は、炎症、自己免疫疾患およびがん（例えば、リンパ球（ＢまたはＴ細胞のいずれか）悪性腫瘍）のようなさまざまな疾患および状態の治療に有用でありうる。例えば、Reiff, A., Hematology, 10(2):79-93 (2005)を参照のこと。本発明の抗体
または抗原結合性部分を用いて治療することができる疾患および状態の例としては、多発性硬化症、狼瘡、関節リウマチ、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、炎症性腸疾患、血管炎、ベーチェット病、ヴェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、乾癬、硬皮症、多発性筋炎、Ｉ型（自己免疫に基づく）糖尿病、自己免疫性血球減少（例えば、自己免疫性好中球減少、輸血依存性難治性ＰＲＣＡ、白血病およびリンパ腫、例えば巨大病変の非ホジキンリンパ腫ならびにＢ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。また、本抗体は、炎症の開始、または自己免疫疾患もしくはがんの再発を予防するために、予防的に投与することができる。例えば、本発明の抗体は、移植（例えば、幹細胞移植、自己の若しくは同種異系のＴ細胞の注入、または固形臓器移植）のための患者を準備する移植前処置の一部として投与することができる。いくつかの実施態様において、本発明の抗体および抗原結合部分は、免疫疾患またはがんを治療する薬剤の製造に用いられる。

抗体ポリペプチドまたは医薬組成物を投与するために、なんらかの適した方法または経路を用いることができる。投与経路には、治療する疾患または状態に応じて、例えば、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内、腹腔内、皮下注射）、経口（例えば、食事）、局所的、局所、吸入（例えば、気管支内、鼻腔内または経口吸入、鼻腔内点滴剤）、または直腸が含まれる。投与される抗体ポリペプチドの治療有効量は、例えば、治療する免疫疾患のタイプおよび重症度、併用療法の使用、抗体ポリペプチドまたは医薬組成物の投与経路、ならびに患者の体重を含む多くの因子に左右される。抗体の治療有効量に関する非限定的な範囲は、患者の体重と関連して０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、そして一態様において、１〜１０ｍｇ／ｋｇである。抗体ポリペプチドの用量は、疾患状態のin vitroおよび／またはin vivoモデルにおいてＣＤ５２拮抗作用に必要な抗体ポリペプチドの量
によってさらに導くことができる。

本発明の抗体は、医療従事者によって適当であると考えられる任意の時点で、単回単位用量または複数用量で投与することができる。投与量は、当分野で知られている方法によって決定することができ、そして例えば、個々の年齢、感受性、耐性および健康全般に応じて決めることができる。抗体または部分は、数時間、例えば、３、４、５または６時間の期間にわたる注入で投与することができる。抗体または部分は、さまざまなレジメンで、必要に応じて、例えば、２、３、４、５または６日連続、１回またはそれ以上のサイクルで、３ヵ月またはそれ以上、例えば１２または２４ヵ月隔てて投与することができる。
任意のサイクルで投与された抗ＣＤ５２抗体の総量は、１０〜６０ｍｇであってもよい。一実施態様において、本発明の抗体または部分は、キャンパス−１Ｈ（Campath-1H）（登録商標）と同じ投与レジメンを用いて患者に投与される。

本発明の抗体は、単独で、または併用療法において他の薬剤（例えば、免疫抑制剤）と共に個体（例えば、ヒト）に投与することができる。抗体は、さらなる薬剤の投与の前に、それと共に、または、その後に投与することができる。いくつかの実施態様において、さらなる薬剤は、例えば、スルファサラジン、他の非ステロイド性抗炎症性化合物またはステロイド性抗炎症性化合物のような抗炎症性化合物である。いくつかの実施態様において、さらなる薬剤は、他のリンパ枯渇（lympho-depleting）抗体、例えば、他の抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＢＡＦＦ抗体、抗ＢＡＦＦ−Ｒ抗体、などである。いくつかの実施態様において、さらなる薬剤は、例えば、抗ＣＤ５２抗体が仲介するリンパ枯渇後に起こる復元過程を歪め、操作し、かつ／または増強するサイトカイン（例えば、ＩＬ−７）、抗サイトカインレセプター抗体または可溶性の受容体である（例えば、Sportes et
al., “Cytokine Therapies: Ann. N.Y. Acad. Sci. 1182:28-38 (2009)を参照のこと）。別の実施態様では、合成ペプチドミメティックを本発明の抗体と共に投与することができる。

本発明の抗体は、ＣＤ５２を発現する細胞を標的とするため、Ｔ細胞およびＢ細胞とは異なるＣＤ５２＋細胞タイプを枯渇させるために用いることもできる。例えば、血管性の白血球（ＶＬＣ）およびＴｉｅ２＋単球−高レベルのＣＤ５２を発現する骨髄系細胞−が、腫瘍の血管新生を促進し、抗ＶＥＧＦ療法に対する腫瘍抵抗性に関与することが、研究により示されている。Pulaski et al., J. Translational Med. 7:49 (2009)。したがっ
て、本発明の抗ＣＤ５２抗体は、ＶＬＣおよびＴｉｅ２＋単球を標的とすることによって腫瘍血管新生を阻害するために用いることができる。この目的のため、抗ＣＤ５２抗体は、全身に、または腫瘍部位のような血管新生の部位に局所的に投与することができる。抗ＣＤ５２抗体療法は、化学療法、手術もしくは放射線のような標準がん治療、または抗ＶＥＧＦ抗体療法のような他の標的療法と共に用いることができる。抗ＣＤ５２抗体療法は、例えば、乳がん、肺がん、神経膠腫、結腸直腸がん、および抗ＶＥＧＦ抗体の他のいずれかの適応症の治療に用いることができる。また、抗ＣＤ５２抗体療法は、非腫瘍学的血管新生状態を含む、他の血管新生状態において用いることができる。

研究は、アレムツズマブによるリンパ球枯渇が、好中球およびＮＫ細胞によって仲介されることを示している（Hu et al., Immunology 128:260-270 (2009)。したがって、併用療法の実施態様において、抗体療法を増強するため、抗ＣＤ５２抗体療法の前に、その間に、またはその後に、好中球およびＮＫ細胞を刺激する薬剤を患者に投与することができる。好中球および／またはＮＫ細胞を刺激することには、（１）それらの分裂速度を高めること、（２）抗ＣＤ５２抗体のアイソタイプに対応しているＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩおよびＦｃαＲＩ）のそれらの細胞表面発現を高めること、（３）循環細胞を動員し、そしてその数増やすこと、（４）標的部位（例えば、腫瘍、炎症または組織損傷の部位）に細胞を集めること、および（５）それらの細胞傷害活性を高めることが含まれるが、それらに限定されるわけではない。好中球および／またはＮＫ細胞を刺激する物質の例には、例えば、顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（例えば、ロイキン（LEUKINE）（登録商標）またはサ
ルグラモスチンおよびモルグラモスチム）；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）（例えば、ニューポジェン（NEUPOGEN）（登録商標）またはフィルグラスティム、ｐｅｇ化フィルグラスティムおよびレノグラスチム）；インターフェロンガンマ（例えば、アクティミューン（ACTIMMUNE）（登録商標））；ＣＸＣケモカインレセプター４（ＣＸＣＲ４）
アンタゴニスト（例えばモゾビル（MOZOBIL）（登録商標）またはプレリキサホル）；お
よびＣＸＣケモカインレセプター２（ＣＸＣＲ２）アゴニストが含まれる。最適な治療有
効性を保証するため、患者の好中球数を定期的にモニターしてもよい。患者の好中球数は、抗ＣＤ５２抗体治療の開始前に測定することもできる。刺激物質の量は、患者の好中球数に基づいて調整することができる。患者が正常な好中球数よりも低い場合、より高用量の刺激物質を用いてもよい。それは抗ＣＤ５２抗体による治療によって生じうる好中球減少の期間中、抗ＣＤ５２抗体の効果を最大にするため、より高用量の好中球刺激物質を投与してもよい。

好中球および／またはＮＫ刺激は、抗ＣＤ５２抗体療法の有効性を改善するため、この併用療法の実施態様により、同様の治療有効性を維持しながら、患者においてより少ない抗体を使用することが可能となる。治療有効性を維持しながら、より少ない抗ＣＤ５２抗体を使用することにより、抗ＣＤ５２抗体の副作用の軽減を助けることができ、それには、投与された抗体に対する患者の免疫応答だけでなく、二次的自己免疫（抗ＣＤ５２抗体治療の間、またはその後に生じる自己免疫）の発生が含まれる。また、この療法の組合せの実施態様は、例えば、患者が好中球減少を有するとき、腫瘍学の状況でも有用である。

併用療法の別の実施態様において、抗ＣＤ５２抗体療法を増強するため、調節性Ｔ細胞の刺激物質を用いることができる。抗ＣＤ５２抗体は、他のＣＤ４⁺Ｔ細胞と比較してＣ
Ｄ４⁺ＣＤ２５⁺ＦｏｘＰ３⁺調節性Ｔ細胞をずっと少ない程度まで枯渇させることが示さ
れている。調節性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」またはサプレッサーＴ細胞としても知られている）は、接触依存性または接触に依存しない（例えば、サイトカイン産生）機構を介して、他のリンパ系細胞の増殖および／または機能を抑制することが可能な細胞である。γδＴ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ＣＤ８⁺Ｔ細胞、ＣＤ４⁺Ｔ細胞およびダブルネガティブＣＤ４^-ＣＤ８^-Ｔ細胞を含むいくつかのタイプの調節性Ｔ細胞が記載されている。例えば、Bach et al., Immunol. 3:189-98 (2003)を参照のこと。ＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺
ＦｏｘＰ３⁺調節性Ｔ細胞は、「自然発生の」調節性Ｔ細胞とよばれており；それらは、
ＣＤ４、ＣＤ２５およびフォークヘッドファミリー転写因子ＦｏｘＰ３（フォークヘッドボックスｐ３）を発現する。したがって、この併用療法の実施態様では、リンパ枯渇後に免疫系の組成物を歪めるために、抗ＣＤ５２抗体療法の前に、その間に、またはその後に、ＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺ＦｏｘＰ３⁺調節性Ｔ細胞を刺激する物質を投与することができる。
この物質は、例えば、それらのＴ細胞を活性化し、細胞の集団を安定化および／または拡大し、細胞の循環を動員および増加し、ならびに／または標的部位に細胞を集めることができる。このような物質の例は、ラパマイシン、活性または潜在性ＴＧＦ−β（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４およびＴＧＦ−β５）、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＦＮ−α、ビタミンＤ（例えば、ビタミンＤ３）、デキサメタゾン、およびミコフェノール酸モフェチルである（例えば、Barrat et al., J. Exp. Med. 195:603-616 (2002); Gregori et al., J Immunol. 167: 1945-1953 (2001); Battaglia et
al., Blood 105: 4743-4748 (2005); Battaglia et al., J. Immunol. 177:8338-8347 (2006)を参照のこと）。

本発明において、疾患を治療するための抗ＣＤ５２抗体の有効量とは、治療した対象が１つまたはそれ以上の所望の臨床的エンドポイントに達するのを助ける量である。例えば、狼瘡（その症状には、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、皮膚エリテマトーデス、ＣＮＳ狼瘡、心血管症状、肺症状、肝臓症状、血液学的症状、胃腸症状、筋骨格症状、新生児エリテマトーデス、小児期全身性エリテマトーデス、薬剤誘発性エリテマトーデス、抗リン脂質抗体症候群、および結果として狼瘡症状になる補体欠損症候群が含まれる；例えば、Robert G. Lahita, Editor, Systemic Lupus Erythematosus, 4th Ed., Elsevier Academic Press, 2004を参照のこと）では、臨床的エンドポイントは、罹患した器官系のモニタリング（例えば、ループス腎炎では血尿および／またはタンパク尿）および／またはいくつかの器官系にわたる疾患重症度の複合スコアを提供する疾患活動性指標（例えば、ＢＩＬＡＧ、ＳＬＡＭ、ＳＬＥＤＡＩ、ＥＣＬＡＭ）を用いることによって測定する
ことができる。例えば、Systemic Lupus Erythematosus, 4th edition, pp. 619-631, R.
G. Lahita, Editor, Elsevier Academic Press, (2004)中のMandl et al., “Monitoring patients with systemic lupus erythematosus”を参照のこと。

本発明の抗体またはその部分は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）で以前に治療されたことがあり、キャンパス−１Ｈ（登録商標）に対する中和抗体を発現している個体（例えばキャンパス−１Ｈ（登録商標）反応しない個体）を治療するために用いることができる。例えば、キャンパス−１Ｈ（登録商標）で以前に治療されたことがあり（例えば、１回またはそれ以上のキャンパス−１Ｈ（登録商標）治療過程）、そしてさらなるキャンパス−１Ｈ（登録商標）治療の有効性を低減するキャンパス−１Ｈに対する中和抗体を発現している、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、狼瘡、血管炎）および／またはがん（例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病）、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫））を有する個体を治療することができる。別の実施態様において、本明細書に記載された特定のヒト化抗体を用いた治療に反応しなくなった個体を、本明細書に記載された他のヒト化抗体の１つで治療することができる。

例えば、本発明の抗体または部分は、多発性硬化症（ＭＳ）の治療に有用な治療剤である。ＭＳには、再発寛解型、二次性進行型、一次性進行型、および進行再発型多発性硬化症が含まれており（（Lublin et al., Neurology 46 (4), 907-11 (1996)）、診断は、例えば、症状の病歴ならびに磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、脊椎穿刺、誘発電位試験、および血液サンプルの実験室分析のような試験を活用した神経学的試験によって行われる。ＭＳでは、治療目標は、再発のリスク、頻度、および／または重症度を低減し、疾患進行から生じる障害を予防または低減し、そして組織修復を促進することである。したがって、これらの目標の１つまたはそれ以上に合わせた臨床的エンドポイントの達成を助ける抗ＣＤ５２抗体の量が、治療にとっての抗体の有効量である。例えば、本発明の抗ＣＤ５２抗体または部分は、身体的障害の蓄積を遅らせるか、または逆転させ、かつ臨床的増悪の頻度を低減するための、再発型のＭＳの治療に適応させることができる。本抗体または部分は、再発リスクおよび臨床的に有意な障害の進行リスクの低減におけるその有効性に関して臨床試験で試験してもよい。本抗体または部分は、すでに再発しているか、もしくは再発するリスクのある患者、または進行性の憎悪を経験している患者に投与することができる。例えば、米国特許公開第２００８／０２６７９５４号を参照し、その開示は、全体として参照により本明細書に組み込まれている。

本発明の方法および組成物は、以前のＭＳ修飾療法に対して最適以下の反応を有したことがあるＭＳ患者を治療する際に有用である。ＭＳ患者は、ＭＳ修飾療法、例えば、インターフェロンベータ−１ａ（例えば、アボネックス（AVONEX）（登録商標）およびレビフ（REBIF）（登録商標））、インターフェロンベータ−１ｂ（例えば、ベータセロン（BETASERON）（登録商標）およびエクスタビア（EXTAVIA）（登録商標））、酢酸ガラティラ
メル（例えば、コパクソン（COPAXONE）（登録商標））、ミトキサントロン（例えば、ノバントロン（NOVANTRONE）（登録商標））、ナタリズマブ（例えば、タイサブリ（TYSABRI）（登録商標））、フィンゴリモド（例えば、ジレニア（GILENYA）（登録商標））、およびテリフルノミド（例えば、AUBAGIO（登録商標））を以前に受けたことがある、再発
寛解型（ＲＲＭＳ）患者であってもよい。一実施態様において、以前のＭＳ修飾療法は、アレムツズマブ（例えば、キャンパス（CAMPATH）、マブキャンパス（MABCAMPATH）また
はレムトラーダ（LEMTRADA）（登録商標））または別の抗ＣＤ５２抗体ではない。以前に治療された患者は、治療中または治療直後（例えば、１年以内）にＭＳ再発または新たなＭＳ活動性を有していてもよい。新たなＭＳ活動性には、ＭＳに起因する新たなまたは悪化している神経学的症状、患者のＥＤＳＳスコア（Kurtzke, Neurology 1983;33:1444-52）の増加、患者の多発性硬化症機能評価（Multiple Sclerosis Functional Composite）
（ＭＳＦＣ）スコア（Cutter et al., Brain 1999;122(Pt 5):871-82）の減少、新たなま
たは広がった頭部病変または脊椎病変、脳容積の減少、および／または光干渉断層法（ＯＣＴ）によって決定された神経変性が含まれうる。例えば、患者は、インターフェロンβまたはグラチラマーによる治療中、以前に少なくとも１回再発したことがあってもよい。また、患者は、以下の特徴の少なくとも１つを有してもよい：抗ＣＤ５２抗体治療の第１サイクル開始の１０年前またはそれ以内の症状の発現；抗ＣＤ５２抗体治療の第１のサイクル開始前の２年間に少なくとも２回の発作；治療の少なくとも６ヵ月後、インターフェロンベータまたはグラチラマーの服用中に少なくとも１回の再発；総合障害評価尺度（Expanded Disability Status Scale）（ＥＤＳＳ）スコア５．０またはそれ未満；ならびに頭部および脊髄の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）の異常。

一実施態様では、本発明の抗体または部分を、抗体の第１サイクルの投与、続いて抗体の少なくとも１回のさらなるサイクルを含むレジメンにおいて、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症（ＭＳ））を有するＭＳ患者に投与し、その際、各治療サイクルは、連続日に適用される１〜５用量を含み、そして各治療サイクルは、次のサイクルから少なくとも１〜２４ヵ月（例えば、１２ヵ月）離れている。例えば、一実施態様において、多発性硬化症を有する患者は、抗体の５日用量を含む抗体の第１サイクル、続いて抗体治療の少なくとも１回のさらなるサイクルで治療され、その際、その治療は第１サイクルの１年後に行われ、そして連続日に適用される抗体の３用量を含む。一実施態様では、抗ＣＤ５２抗体を、第１治療サイクルにおいて１２ｍｇ／日で、連続５日、多発性硬化症を有する患者に投与し；そして１年後、抗ＣＤ５２抗体を、第２治療サイクルにおいて１２ｍｇ／日で連続３日、患者に投与する。一実施態様では、抗ＣＤ５２抗体を、第１治療サイクルにおいて連続５日にわたって総量６０ｍｇで、多発性硬化症を有する患者に投与し；そして１年後、抗ＣＤ５２抗体を、第２治療サイクルにおいて連続３日にわたって総量３６ｍｇで患者に投与する。

本発明の方法および組成物において、「年」は、厳密に３６５日または１２ヵ月に等しくなくてもよい。例えば、抗ＣＤ５２抗体の第２サイクルを、第１サイクルの抗ＣＤ５２抗体が投与されてから厳密に３６５日または１２ヵ月後に投与する必要はない。第２サイクルは、第１サイクルの開始後、３６５日プラスもしくはマイナス６ヵ月まで、プラスもしくはマイナス５ヵ月まで、プラスもしくはマイナス４ヵ月まで、プラスもしくはマイナス３ヵ月まで、プラスもしくはマイナス２ヵ月まで、プラスもしくはマイナス１ヵ月まで、プラスもしくはマイナス４週間まで、プラスもしくはマイナス３週間まで、プラスもしくはマイナス２週間まで、またはプラスもしくはマイナス１週間までに開始してもよい。

別の実施態様において、新たなＭＳ活動性の証拠が観察されたら、ＭＳを有する患者は、再治療のみを行う（例えば、ＷＯ２００８／０３１６２６参照；その開示は、全体として参照により本明細書に組み込まれている）。いくつかの実施態様では、より進行した形態のＭＳまたはより進行性形態の他の自己免疫疾患（例えば血管炎；例えば、Walsh et al., Ann Rheum Dis 67:1322-1327 (2008)を参照のこと）を有する患者が、その最後の治
療過程の後、早期の再発を経験するか、または新たなＭＳ活動性を示す場合、より頻度の高い治療過程（例えば、４ヵ月毎、６ヵ月毎）を行う必要がありうる。新たなＭＳ活動性の証拠は、治療する臨床医に利用可能でありうる任意の手段を用いて、このような臨床医の職業的判断に基づいて明らかにしてもよい。現在、新たなＭＳ活動性を診断するため、臨床医には、臨床的手法（神経学的障害の再発または進行）による、または脳もしくは脊髄の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によるものを含むが、それらに限定されないさまざまな技術が利用可能である。医師によって十分に理解されるように、ＭＲＩを介して検出された疾患活動性は、Ｔ１（増強または非増強）−もしくはＴ２強調画像における新たな脳もしくは脊髄病変の発生によって、またはこのような病変の容積の増加によって示されうる。

ＭＳの診断方法は絶えず発展しているため、今後、新たなＭＳ活動性を検出することに
なるさらなる方法（例えば、磁化移動率またはＭＲ分光法）がありうると予想される。新たなＭＳ活動性を検出するために用いられる特定の診断方法は、請求された発明に限定されるわけではない。特定の実施態様において、任意の所定の患者の再治療が必要かどうか、およびこのような患者の再治療の最適な時点を明らかにするために、治療サイクル後、一定間隔でＭＲＩを繰り返し実施する。一般に、疾患が臨床的に再発する前に、再治療を行うことが望ましい。

本発明の方法および組成物は、他のＭＳ修飾療法と組み合わせて用いてもよい。ＭＳ修飾療法の非限定的な例としては、インターフェロンベータ−１ａ（例えば、アボネックス（AVONEX）（登録商標）およびレビフ（REBIF）（登録商標））、インターフェロンベー
タ−１ｂ（例えばベータセロン（BETASERON）（登録商標）およびエクスタビア（EXTAVIA）（登録商標））、酢酸ガラティラメル（例えば、コパクソン（COPAXONE）（登録商標））、ミトキサントロン（例えば、ノバントロン（NOVANTRONE）（登録商標））、ナタリズマブ（例えば、タイサブリ（TYSABRI）（登録商標））、フィンゴリモド（例えば、ジレ
ニア（GILENYA）（登録商標））、およびテリフルノミド（例えば、AUBAGIO（登録商標））が含まれる。

いくつかの実施態様において、本発明の方法および組成物は、一般化されたまたは非特異的治療または療法、例えばステロイド（例えば、コルチコステロイド）または、ダルファムプリジン（例えば、アンピラ（AMPYRA）（登録商標））と組み合せて用いてもよい。

一態様では、抗ＣＤ５２抗体の注入の前に、その間に、またはその後に、注入関連の副作用を管理するために有効であると当業者に知られている薬物を投与してもよい。このような薬物には、コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン）、アセトアミノフェンおよび抗ヒスタミン薬（例えば、ジフェンヒドラミン）が含まれる。いくつかの実施態様において、患者は、本発明の抗体による治療サイクル中、１、２、３、４または５日連続で静脈内メチルプレドニゾロン１ｇ／日を受ける。

本発明の一実施態様において、患者は、ヘルペスに対する予防として役立つ薬物をさらに受けてもよい。例えば、患者は、本発明の抗体の投与中、１日２回その後、２８日間、アシクロビル（例えば、ゾビラックス（ZOVIRAX）（登録商標））２００ｍｇを受けても
よい。

製剤は、選択された投与経路（例えば、溶液、乳濁液）により変化することになる。投与される抗体または抗原結合性フラグメントを含む適当な組成物は、生理学的に許容しうるビヒクルまたは担体中に調製することができる。組成物は、複数用量または単回単位用量組成物を含むことができる。溶液または乳濁液に関して、適した担体には、例えば、生理食塩水および緩衝化媒体を含む、水性またはアルコール性／水溶液、乳濁液または懸濁液が含まれる。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖加リンゲル液、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液または固定油が含まれうる。静脈内ビヒクルには、さまざまな添加剤、保存剤または液体、栄養分または電解質補充薬が含まれうる（一般に、Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack Publishing Co., PA, 1985を参照のこと）。吸入に際して、化合物を可溶化し、そして投与に適したディスペンサー（例えば、噴霧器、ネブライザーまたは加圧エアゾールディスペンサー）に装填することができる。

診断方法および組成物
また、本発明の抗体は、研究および診断に用途があるさまざまな方法において有用である。例えば、それは、ヒトＣＤ５２またはその変異体の検出、単離および／または精製（例えば、懸濁液中の、リンパ球のような細胞に関して、例えば、親和性精製または他の適
した方法、例えばフローサイトメトリーによる）、ならびにヒトＣＤ５２の構造（例えば、コンフォメーション）および機能の研究に用いることができる。本発明の抗体は、in vitro用途に有用である。

本発明の抗体は、診断用途（例えば、in vitro、ex vivo）に用いることができる。例
えば、本発明のヒト化抗体は、サンプル中のヒトＣＤ５２のレベルの検出および／または測定に用いることができる（例えば、組織または体液、例えば、炎症性滲出液、血液、血清、腸液、ヒトＣＤ５２を担持する組織中のヒトＣＤ５２を発現する細胞において）。サンプル（例えば、組織および／または体液）は、個体から得ることができ、そして本明細書に記載された抗体は、化学発光アッセイ、放射免疫測定法および免疫組織学を含む方法を含めて、フローサイトメトリー（例えば、リンパ球のような懸濁液中の細胞に関して）、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）などの方法を含む、ヒトＣＤ５２発現を検出および／または測定するための適した免疫学的方法で用いることができる。本発明は、本明細書に記載された抗ＣＤ５２抗体を含むキット（例えば、診断キット）を包含する。

一実施態様において、ヒトＣＤ５２に対する抗体の特異的結合に適した条件下で、サンプルを本発明の抗体と接触させること、および形成された抗体−ＣＤ５２複合体を検出することを含む、サンプル中のヒトＣＤ５２を検出する方法が提供される。方法の適用において、本明細書に記載された抗体は、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、自己免疫疾患（例えば多発性硬化症および狼瘡）、がん（例えば非ホジキンリンパ腫および慢性リンパ性白血病）、または他の状態と、ヒトＣＤ５２の発現増加（例えば、患部組織中）との間の関連を見つけるため、ヒトＣＤ５２の反応性および／または発現（例えば、免疫組織学的）について、炎症を起こした組織に対して正常組織（例えば、ヒトから）を分析するために用いることができる。したがって、本発明の抗体により、正常および炎症を起こした組織中でヒトＣＤ５２の存在を評価する免疫学的方法が可能となり、それを通して疾患の存在、疾患の進行および／または疾患、例えば、炎症性疾患の治療における抗ヒトＣＤ５２療法の有効性を評価することができる。

さらに、本抗体は、抗ＣＤ５２治療抗体枯渇による治療後に組織を検査するため、枯渇がどれくらい有効であったかを評価するため、そしてＣＤ５２の発現においてなんらかの下方制御があったかどうかを明らかにするために用いることができる（Rawstrom et al.,
Br. J. Heam., 107:148-153 (1999)）。

特に定義しない限り、本明細書に用いるすべての技術および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例示的な方法および物質を下に記載するが、本発明を実施または試験する際に、本明細書に記載されたものと類似のまたは同等の方法および物質を用いることもできる。本明細書に記載されたすべての刊行物および他の文献は、それらの全体として参照により組み込まれている。矛盾が生じた場合、定義を含む本明細書に従うことになる。多くの文書が本明細書に引用されているが、この引用は、これらの文書のいずれかが当分野で共通の一般的な知識の部分を構成するという承認となるわけではない。本明細書および実施態様を通して、「含む」という単語、または「含む」もしくは「含むこと」のような変化形は、記載された整数または整数の群を包含するが、しかし、他の任意の整数または整数の群を排除しないことを意味するものとして理解される。物質、方法および実施例は、単なる例示であって、限定することを意図するものではない。以下の実施例は、本発明の方法および物質を説明するためのものである。記載された条件およびパラメータの適した変更および適応は、通常、当分野で行われており、それらは当業者にとって明らかであり、本発明の精神および範囲内にある。用語「抗体」および「免疫グロブリン」は、本明細書において同じ意味で用いられる。また、用語「抗原結合性フラグメント」および「抗原結合部分」も、本明細書において同じ意味で用いられる。

以下の実施例は、本発明の方法および物質を説明するためのものである。記載された条件およびパラメータの適した変更および適応は、通常、当分野で行われており、それらは当業者にとって明らかであり、本発明の精神および範囲内にある。

〔実施例１〕抗体Ａｂ１の発現および特徴づけ
Ａｂ２６の軽鎖中の残基３３（Ｌ−ＣＤＲ１内）をＡｓｐに変えることによってＡｂ２６から抗体Ａｂ１を誘導した。さらに、Ａｂ２６の軽鎖のうちの最初の３３個のアミノ酸残基を欠失させた変異体抗体（Ｄｅｌ３３抗体）を生成した。軽鎖主鎖中のＤＮＡ２．０によってｐＤＯＮＲ２２１エントリーベクター中に変異体軽鎖ＤＮＡを合成し、そしてゲートウェイクローニングによってＨＥＫ２９３発現ベクターｐＣＥＰ４（−Ｅ＋Ｉ）Ｄｅｓｔにサブクローニングした。次いで、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞トランスフェクションのため、ラージスケールのＤＮＡ調製を実施した。すべての変異体および親Ａｂ２６対照軽鎖を１：１の比率で親Ａｂ２６重鎖と共トランスフェクトした。

精製のため、トランスフェクトされた培地１６０〜３００ｍｌを使用し、１ｍｌのＨｉＴｒａｐプロテインＡカラム（ＧＥ）および設定されたマルチチャネルポンプを用いてＡｂ２６、Ｄｅｌ３３およびＡｂ１抗体を精製した。集めた分画中のＡ２８０をＮａｎｏＤｒｏｐによって測定した。多くのタンパク質を含有する分画＃１および＃２を合わせ、５０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．０に緩衝液交換し、そしてＡｍｉｃｏｎ−４ １０ｋＤカットアウトカラム（cutout column）を用いて濃縮した
。タンパク質精製の収量を表３にまとめる。

Ｄｅｌ３３突然変異体は、おそらく、欠失と関係がある誤った折り畳みの問題のため、高レベルで発現または精製されなかった。Ａｂ１およびＡｂ２６は、さらなる特徴づけのため、均一に精製することに成功した。最初の１５個のアミノ酸のＮ末端シークエンシングにより、全３つのサンプルが期待された配列を有することが確認された。

また、Ａｂ２６およびＡｂ１をＣＨＯ細胞中で発現させ、そしてプロテインＡカラム上で精製した。ＣＤ５２ペプチドに対するそれらの親和性に関してＢＩＡＣＯＲＥ^TMによって抗体を特徴づけた。ＨＥＫ２９３細胞中で産生された抗体については、図１７および表４、そしてＣＨＯ細胞中で産生された抗体については、図１８および表５に結果を示す。

ＣＤ５２ ＢＩＡＣＯＲＥ^TM結合アッセイは、以下のように実施した：Ｎ末端Ｃｙｓを用いてチオールの化学的性質を介して、低レベルのＣＤ５２ペプチドミオトープ（ＣＧＱＮＤＴＳＱＴＳＳＰＳＡＤ（配列番号：８７））をＣＭ５チップ上に固定化した。ＨＢＳ−ＥＰランニングバッファ（１〜２０ｎＭ）中に調製したいくつかの濃度の抗ＣＤ５２抗体を、表面に注射して結合をモニターした。動態解析は、スクラバー２（Scrubber2）ソ
フトウェアを用いて実施した。

抗体Ａｂ１は、Ａｂ２６と比較して４００倍を超える親和性の低下を示した。
Ａｂ２６が高い結合親和性を示す１−１０ｎＭ濃度で、Ａｂ１抗体による明確な結合シグナルは観察されなかった（図１７）。変異体による結合親和性の喪失に関する定量的尺度を得るために、より高い濃度（１９００ｎＭまで）のＡｂ１を用いた。ＣＨＯで産生されたＡｂ１から得た１２５０ｎＭのＫＤは、ＨＥＫ２９３で産生されたＡｂ１（１４８０ｎＭ）のそれと一致していた。親和性の低下は、結合動態における結合速度（on-rate）の
低下および解離速度（off-rate）の増加の両方に反映される。

親和性喪失がエフェクター機能に影響を及ぼすかどうか評価するため、補体依存性細胞傷害による細胞−死滅を測定することによってＣＤＣ効力検定を実施した。すべての変異体および対照抗体物質を１つのソリッドブラック９６−ウエルプレート全体に、アッセイ培地（フェノール−レッドを含まないＩＭＤＭ培地＋０．１％ＢＳＡ）中２ｍｇ／ｍＬから０．００２ｍｇ／ｍＬまで１：２連続的に希釈した。ストック濃度≦２ｍｇ／ｍＬの物質を、生で試験した。正常ヒト血清補体（クイデルコーポレーション（Quidel Corporation））を５％（ｖ／ｖ）の最終濃度で、すべてのウェルに加えた。次いで、プファイファー（Pfeiffer）ｂ−リンパ球（ＡＴＣＣ）を０．６×１０⁶細胞／ｍＬの最終濃度で加え
た。陰性細胞溶解対照（アッセイ培地＋細胞）、陽性細胞溶解対照（アッセイ培地＋細胞＋２％（ｗ／ｖ）トライトンＸ―１００）、および陽性用量反応対照（４ｍｇ／ｍＬ対照物質）を同じプレート上に含めた。加湿された３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター中で
反応物を１時間インキュベートした。次いで、予熱されたアラマーブルー（alamarBlue）（登録商標）検出試薬（ライフテクノロジーズ（Life Technologies））５０マイクロリ
ットルを、すべてのウェルに加え、続いて減光下で４時間インキュベーションした。アラマーブルーの相対的減少を、蛍光プレートリーダーを用いて測定した（ｅｘ：５３０ｎｍ、ｅｍ：５９０、カットオフ：５７０ｎｍ）。４パラメータモデルに適合する用量−反応
曲線を作成するため、Softmax Pro, v. 5.3（モレキュラーデバイス（Molecular Devices））を用いた。結果を図１９に示す。Ａｂ２６（対照）は、予想どおり濃度依存性の細胞死滅を示した。ＣＨＯ細胞中で産生された抗体Ａｂ１は、試験した濃度範囲で検出可能なＣＤＣ活性を少ししか示さなかった。これらの実験は、単一アミノ酸置換がＡｂ２６の生物学的機能において有意な影響を有しうることを示唆している。

〔実施例２〕抗ＣＤ５２抗体のＣＤ５２結合親和性の分析
抗体Ａｂ４、Ａｂ３、Ａｂ２４、Ａｂ１０、Ａｂ１２およびＡｂ２５（表１および２参照）をＨＥＫ２９３細胞中に発現させた。軽鎖ＤＮＡを、以下のように合成し、サブクローニングし、そしてＨＥＫ２９３細胞中で一時的に発現せた。ＤＮＡ分子を、軽鎖主鎖中のＤＮＡ２．０によってｐＤＯＮＲ２２１エントリーベクター中で合成し、そしてゲートウェイクローニングによってＨＥＫ２９３発現ベクターｐＣＥＰ４（−Ｅ＋Ｉ）Ｄｅｓｔにサブクローニングした。軽鎖発現ベクターを、Ａｂ２６重鎖発現ベクターと共にＨＥＫ２９３細胞中に共トランスフェクトした。トランスフェクションに対する対照としてＡｂ２６ＤＮＡを用いた。タンパク質発現レベルに関して、プロテインＡセンサを用いるオクテット（Octet）によって、そしてＣＤ５２結合親和性に関して、ＣＤ５２ペプチドチッ
プを用いるＢＩＡＣＯＲＥ^TMによって馴化培地をスクリーニングした。
結果を図１に示す。

Ａｂ２４およびＡｂ１０抗体は、強いＣＤ５２結合親和性を示した。Ａｂ４およびＡｂ３は、より低いＣＤ５２結合親和性を示した。この所見を確認するため、さらなる特徴づけのためにプロテインＡカラムを用いてＡｂ４およびＡｂ３を精製した。Ａｂ２６抗体（ＣＴＬ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル、２つのトランスフェクションからのＡｂ２６抗体（ＣＴＬ１およびＣＴＬ２）、Ａｂ１、Ａｂ４、Ａｂ３、Ａｂ１０、Ａｂ２４、Ａｂ１２、およびＡｂ２５ならびにＢＩＡＣＯＲＥ^TM ＣＤ５２のペプチド結合結果を図２に示す。

精製した抗体を用いた結果から、最初の培地のスクリーニングデータが確認された。Ａｂ４およびＡｂ３は、より低いＣＤ５２結合親和性を示した。

〔実施例３〕Ａｂ２４およびＡｂ１０抗体のラージスケール調製および特徴づけ
Ａｂ２４およびＡｂ１０抗体のＣＤ５２結合および阻害性を明らかにするため、それらをＣＨＯ Ｋ１細胞中でより大きなスケールで産生した。２つの抗体で軽鎖クリッピングを観察し；そして非還元（ＮＲ）ゲル（ここでは、「１００ｋＤ種」と表わす）では、１５０ｋＤより下のバンドが観察された（図３）。

組織培養条件を最適化すること、および４℃で培地貯蔵ステップを省くことによって軽鎖クリッピング問題が最小限となった。これらの改善にもかかわらず、少量の１００ｋＤ種（１５０ｋＤ以下）が産生されたようであった（図３）。２つの抗体をさらに特徴づけた。Ａｂ２４およびＡｂ１０の２つのラージスケール調製では、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって、それぞれ、９〜１２％および１８〜２０％の１００ｋＤ種が見いだされた。インタクト質量分析実験により抗体の配列を確認した。低分子量種のＮ末端シークエンシングは、重鎖のＮ末端配列しか存在しないことを示唆した。１００ｋＤ種を集め、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分析したときは、重鎖しか観察されなかった。これらの結果は、１００ｋＤ種が重鎖しか含まないことを示唆している（図４）。

〔実施例４〕さらなる抗ＣＤ５２抗体の調製およびスクリーニング
抗体Ａｂ２、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ５、Ａｂ１３、Ａｂ１５、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２３、Ａｂ２２、Ａｂ１１、Ａｂ２０、Ａｂ１６、Ａｂ２１およびＡｂ１４のための発現ベクター（表１および２参照）をＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。馴化培地をオクテット上のプロテインＡセンサで分析したとき、すべての抗体は＞０．
２μｇ／ｍｌで発現された（図５、上方パネル）。次いで、これらの培地サンプルのＢＩＡＣＯＲＥ^TM ＣＤ５２親和性スクリーニングを用いて有力候補を確認した（図５、中央および下方パネル）。

抗体Ａｂ２、Ａｂ６、Ａｂ７およびＡｂ５は、ＣＤ５２に対して低い結合親和性を有した。いくつかの他の抗体は、ＣＤ５２に対しより高い結合親和性を示した。これらの抗体は、Ａｂ２２、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ１４、Ａｂ１４およびＡｂ１１を含んだ。抗体Ａｂ２２、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ１４、Ａｂ１４およびＡｂ１１を、さらに研究した。

これらの６抗体（Ａｂ２２、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ１４、Ａｂ１４およびＡｂ１１）を１つのトリプルフラスコ（TripleFlask）／抗体一過性発現にスケールアップした。
（このフラスコは、３つの並行成長面を有しており、総培養面積５００ｃｍ２を提供する。）１ｍｌのＨｉＴｒａｐプロテインＡ親和性カラム（ＧＥヘルスケア（GE Healthcare
））を用いて１６０ｍｌの馴化培地から抗体を精製した。還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルは、精製の成功および妥当な抗体純度を示した（図６）。ＢＩＡＣＯＲＥ^TM上のＣＤ５２結合比較のため精製したサンプルをＨＢＳ−ＥＰ中６０および７．５ｎＭまで希釈し、そしてＣＤ５２ペプチド＃７４１チップ上に注射した（７．５ｎＭについては、図６に結果を示す）。ＢＩＡＣＯＲＥ^TM結合分析により、これらの抗体がＣＤ５２ペプチドに対して緊密な結合を有するという最初の培地のスクリーニング結果が確認された。結合動態実験は、以下の親和性ランク：（Ａｂ１６、Ａｂ２１）＞Ａｂ２６＞（Ａｂ２０、Ａｂ１１、Ａｂ１４、Ａｂ２２）＞（Ａｂ２４、Ａｂ１０）Ａｂ１６およびＡｂ２１を示し、そしてＡｂ２１はＡｂ２６より高い親和性を有することが示された。

〔実施例５〕抗ＣＤ５２抗体の安定性の分析
抗ＣＤ５２抗体変異体の安定性が影響を受けているかどうかを明らかにするため、高い温度条件を用いて抗ＣＤ５２抗体変異体を比較および選別した。Ａｂ２６およびＨＥＫ２９３細胞から精製した選ばれた変異体を最初のスクリーニングに用いた。タンパク質（８５μｇ）をＰＢＳ、ｐＨ７．２中で約０．４ｍｇ／ｍｌに希釈し、そして４５℃で４週間インキュベートした。ＣＤ５２ペプチドに対するそれらの結合親和性をＢＩＡＣＯＲＥ^TM上で測定した。週＃２および週＃４で採取した各変異体１マイクログラムをＨＢＳ−ＥＰ中で７．５、２．５および０．８ｎＭまで連続的に希釈し、そしてＣＤ５２ペプチド＃７４１チップ上に注射した。スクラバー（Scrubber）ソフトウェアを用いて予備的な結合定数を算出し、そして図２０に示す（Ａｂ２６は「ＣＴＬ」と表示する）。

結果は、Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０抗体が４週間のインキュベーションにわたって有意なＣＤ５２結合親和性を保持することを示し、それらが抗体Ａｂ２６より安定なことを示唆している。対照的に、Ａｂ１０およびＡｂ２２抗体は、インキュベーション時間にわたって抗原に対するそれらの結合親和性のほとんどを喪失した。

インキュベーション実験で得られた結果を確認するため、変異体の新たな調製を行い、そして「３成分」緩衝液（１０ｍＭコハク酸塩、１０ｍＭヒスチジン、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５）中でＡｂ２６抗体と共に３７℃または４５℃で４週間、インキュベートした。抗体製造性（manufacturability）試験では、典型的に「３成分」緩衝液を
利用した。インキュベートされた物質の量を表６に記載する。また、Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０抗体を同じ緩衝液中、４５℃でインキュベートした。アリコートを週２および週４（Ｔ２およびＴ４）で採取して、ＢＩＡＣＯＲＥ^TMによってＣＤ５２ペプチドに対するそれらの親和性を評価した。各サンプルをＨＢＳ−ＥＰ中で７．５、３．７５および１．８７５ｎＭまで希釈し、そして３分かけてＣＤ５２ペプチド＃７４１チップ上に注射し、続いて緩衝液で３分間解離させた。見かけのＫＤを図２１に示す。

結果は、Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０抗体の結合親和性が、３７℃および４５℃で４週間インキュベーション後、同一のままであったか、またはわずかに低下したのみであったのに対して、Ａｂ２６（ＣＴＬ、ＣＴＬ１およびＣＴＬ２）は時間の経過に伴って結合親和性が失われたことを示唆した。４週間後、４５℃でインキュベーション後、Ａｂ２６（ＣＴＬ）のＫＤは、４．３ｎＭから１２３０ｎＭに変化し、ＣＤ５２に対する結合の低下を示す。これは、これらの突然変異体が、実際に、Ｌ−ＣＤＲ１部位で時間の経過に伴う不安定性に対してより抵抗性であることを示唆している。

Ａｂ２１、Ａｂ１６およびＡｂ２０抗体の構造的完全性を検証するため、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中で約０．４ｍｇ／ｍｌに希釈し、そして４５℃で４週間インキュベートした変異体の凝集および断片化を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって評価した。５マイクログラムのタンパク質を、移動相（４０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．０）中で総体積１００μｌまで希釈し、そしてTSK Gel G3000 SWxlカラム上へ０．５ｍｌ／分で３５分間注射した。Ａｂ２１、Ａｂ１６、Ａｂ２０およびＡｂ２６（ＣＴＬ）では、有意な凝集および限られた断片化が検出されなかった（図２２）。したがって、Ａｂ２６の親和性の喪失は、構造的完全性の喪失によって生じるわけではなさそうである。

〔実施例６〕in vitro効力アッセイ（ＣＤＣ効力）における抗ＣＤ５２抗体の生物活性
３つの抗ＣＤ５２抗体（Ａｂ２１、Ａｂ２０およびＡｂ１６）をＣＤＣアッセイにおいて評価した。このアッセイを用いて補体の存在下でプファイファーＢリンパ球を溶解する抗体の能力を測定した。抗体を同じプレート上で１通り（in singlicate）検定し、そし
てＡｂ２６（対照）と定性的に比較した（図７参照）。

結果は、Ａｂ２１およびＡｂ１６の効力がＡｂ２６に匹敵するか、またはそれよりも改善されたことを示唆した。Ａｂ２０は、この試験においてわずかに低い効力を有した。

〔実施例７〕ＨｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの抗ＣＤ５２抗体の生物活性
また、３つの抗ＣＤ５２抗体（Ａｂ２１、Ａｂ２０およびＡｂ１６）をｈｕＣＤ５２ト
ランスジェニックマウスにおいてもin vivo評価した。Ａｂ２６、Ａｂ２１、Ａｂ２０ま
たはＡｂ１６を、１ｍｇ／ｋｇ（５匹の動物／群）でＨｕＣＤ５２トランスジェニックマウスに静脈注射した。注射後３日目に、リンパ球枯渇に関して、フローサイトメトリーによって血液および脾臓を分析した。フローサイトメトリー分析による血液および脾臓中のリンパ球枯渇の程度を図８に示す（Ａｂ２６は、「ＣＴＬ」として表示する）。

結果は、血液および脾臓中の抗体Ａｂ２１、Ａｂ２０およびＡｂ１６によって誘導されたリンパ球枯渇が、抗体Ａｂ２６と類似しているか、またはそれよりも改善されたようであることを示唆した。まとめると、これらのデータは、これらの抗ＣＤ５２抗体がin vivoで生物学的に活性であることを認めている。

表７に、本明細書に用いた配列番号を記載する。

Claims (42)

1. 重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、
   該重鎖可変領域が、
   （ａ）配列番号：７の重鎖ＣＤＲ１；
   （ｂ）配列番号：８の重鎖ＣＤＲ２；および
   （ｃ）配列番号：９の重鎖ＣＤＲ３
   を含み、
   該軽鎖可変領域が、
   （ａ）配列番号：８６の軽鎖ＣＤＲ１；
   （ｂ）配列番号：３４の軽鎖ＣＤＲ２；および
   （ｃ）配列番号：３５の軽鎖ＣＤＲ３
   を含む、抗体またはその抗原結合性フラグメント。
2. 前記抗体またはフラグメントが、シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列およびシグナル配列なしの配列番号：４の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体と比較して増加した安定性を示す、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。
3. 配列番号：８６中の残基１１が、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｈ、Ｓ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、ＴまたはＶである、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。
4. 配列番号：８６中の残基１１がＫである（配列番号：２４）、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。
5. 配列番号：８６中の残基１１がＲである（配列番号：２９）、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。
6. 配列番号：８６中の残基１１がＱである（配列番号２８）、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。
7. 前記重鎖可変領域が、配列番号：５９を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
8. 前記軽鎖可変領域が、配列番号：６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２および８３からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
9. 前記重鎖および軽鎖が、
   ａ）それぞれ、配列番号：５９および６８；
   ｂ）それぞれ、配列番号：５９および６９；
   ｃ）それぞれ、配列番号：５９および７０；
   ｄ）それぞれ、配列番号：５９および７１；
   ｅ）それぞれ、配列番号：５９および７２；
   ｆ）それぞれ、配列番号：５９および７３；
   ｇ）それぞれ、配列番号：５９および７４；
   ｈ）それぞれ、配列番号：５９および７５；
   ｉ）それぞれ、配列番号：５９および７６；
   ｊ）それぞれ、配列番号：５９および７７；
   ｋ）それぞれ、配列番号：５９および７８；
   ｌ）それぞれ、配列番号：５９および７９；
   ｍ）それぞれ、配列番号：５９および８０；
   ｎ）それぞれ、配列番号：５９および８１；
   ｏ）それぞれ、配列番号：５９および８２；または
   ｐ）それぞれ、配列番号：５９および８３
   を含んでもよい、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
10. シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
11. 配列番号：４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７および５８からなる群から選択される軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
12. 抗体であって
    （ａ）シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：４９の軽鎖アミノ酸配列；
    （ｂ）シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：５３の軽鎖アミノ酸配列；または
    （ｃ）シグナル配列なしの配列番号：３の重鎖アミノ酸配列および配列番号：５４の軽鎖アミノ酸配列
    を含む抗体。
13. 免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
14. 前記フラグメントが、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）₂フラグメント、ミニ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体および四重
    特性抗体からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のフラグメント。
15. 前記抗体がヒトＦｃ領域を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
16. 前記ヒトＦｃ領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＦｃ領域を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
17. 前記ヒトＦｃ領域が、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である、請求項１５に記載の抗体またはフラグメント。
18. 前記ヒトＦｃ領域が、ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域である、請求項１５に記載の抗体またはフラグメント。
19. 前記ヒトＦｃ領域が、ヒトＩｇＧ３のＦｃ領域である、請求項１５に記載の抗体またはフラグメント。
20. 前記ヒトＦｃ領域が、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である、請求項１５に記載の抗体またはフラグメント。
21. 前記抗体がモノクローナルである、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
22. 前記抗体がヒト化される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
23. 前記抗体の重鎖Ｃ末端リジンが切断される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
24. 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントの重鎖もしくはその抗原結合性フラグメント、または軽鎖もしくはその抗原結合性フラグメント、または両方をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子。
25. 配列番号：９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４のヌクレオチド配列を含む、請求項２４に記載の単離された核酸分子。
26. 請求項２４の核酸分子を含む組換えベクター。
27. 前記ベクターが発現ベクターである、請求項２６に記載のベクター。
28. 請求項２６または２７に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。
29. 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメントまたは該抗体もしくはフラグメントの重鎖もしくは軽鎖を産生する単離された細胞系統。
30. 抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合性フラグメントを作製する方法であって、（１）請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントの、重鎖またはその抗原結合性フラグメントをコードするヌクレオチド配列、および軽鎖またはその抗原結合性フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む細胞を抗体またはフラグメントの発現にとって適当な条件下で維持すること；および（２）抗体またはフラグメントを回収することを含む方法。
31. 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントおよび薬学的に許容しうるビヒクルまたは担体を含む組成物。
32. 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を患者に投与することを含む、その必要のある患者を治療する方法。
33. 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含む、その必要のある患者において自己免疫疾患を治療する方法。
34. 前記自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項３３に記載の方法。
35. 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含む、その必要のある患者においてがんを治療する方法。
36. 前記がんが慢性リンパ性白血病である、請求項３５に記載の方法。
37. 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントを患者に投
    与することを含む、その必要のある患者において血管新生を阻害する方法。
38. その必要のある患者において自己免疫疾患を治療する薬剤を製造するための、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
39. 前記自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項３８に記載の使用。
40. その必要のある患者においてがんを治療する薬剤を製造するための、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
41. 前記がんが慢性リンパ性白血病である、請求項４０に記載の使用。
42. その必要のある患者において血管新生を阻害する薬剤を製造するための、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。

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