EA029958B1 - Антитела, связывающие фактор роста эндотелия сосудов (vegf)/дельта-подобный лиганд (dll4), и их применение - Google Patents

Антитела, связывающие фактор роста эндотелия сосудов (vegf)/дельта-подобный лиганд (dll4), и их применение Download PDF

Info

Publication number
EA029958B1
EA029958B1 EA201490622A EA201490622A EA029958B1 EA 029958 B1 EA029958 B1 EA 029958B1 EA 201490622 A EA201490622 A EA 201490622A EA 201490622 A EA201490622 A EA 201490622A EA 029958 B1 EA029958 B1 EA 029958B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
zeo
heavy chain
human
cancer
Prior art date
Application number
EA201490622A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490622A1 (ru
Inventor
Остин Л. Гарни
Аарон Кен Сато
Кристофер Джон Бонд
Original Assignee
Онкомед Фармасьютикалс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Онкомед Фармасьютикалс, Инк. filed Critical Онкомед Фармасьютикалс, Инк.
Publication of EA201490622A1 publication Critical patent/EA201490622A1/ru
Publication of EA029958B1 publication Critical patent/EA029958B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/303—Liver or Pancreas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Solid Fuels And Fuel-Associated Substances (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к агентам, связывающим VEGF, агентам, связывающим DLL4, биспецифическим агентам, связывающим VEGF/DLL4, и способам применения указанных агентов для лечения заболеваний, таких как рак. Согласно изобретению предложены антитела, которые специфично связывают VEGF человека, антитела, которые специфично связывают DLL4 человека, и биспецифические антитела, которые специфично связывают VEGF человека и/или DLL4 человека. Согласно изобретению дополнительно предложены способы применения указанных агентов для ингибирования роста опухоли. Также описаны способы лечения рака, включающие введение пациенту, имеющему опухоль или рак, терапевтически эффективного количества агента или антитела согласно изобретению.

Description

Изобретение относится к агентам, связывающим УБОР, агентам, связывающим ЭББ4. биспецифическим агентам, связывающим УЕОР/ПЬЬ4, и способам применения указанных агентов для лечения заболеваний, таких как рак. Согласно изобретению предложены антитела, которые специфично связывают УЕОР человека, антитела, которые специфично связывают ΌΡΡ4 человека, и биспецифические антитела, которые специфично связывают УЕОР человека и/или ΌΡΡ4 человека. Согласно изобретению дополнительно предложены способы применения указанных агентов для ингибирования роста опухоли. Также описаны способы лечения рака, включающие введение пациенту, имеющему опухоль или рак, терапевтически эффективного количества агента или антитела согласно изобретению.
029958
Область техники
Изобретение в целом относится к антителам и другим агентам, которые связывают УБОР, ИЬЬ4 или и УЕОР, и ИЬЬ4, в частности к биспецифическим антителам к УЕОР/ОЬЬ4, а также к способам применения антител или других агентов для лечения заболеваний, таких как рак.
Уровень техники
Ангиогенез играет важную роль в патогенезе множества расстройств, включая солидные опухоли и метастазы. Образование новых кровеносных сосудов необходимо для обеспечения опухоли кислородом и питательными веществами для ее роста и распространения, и, следовательно, ангиогенез представляет собой хорошую мишень для лекарственных средств от рака. В ангиогенезе участвует семейство белков, действующих как ангиогенные активаторы, включая фактор роста эндотелия сосудов (УЕОР-А), УЕОРВ, УЕОР-С, УЕОР-Е и соответствующие рецепторы (УЕОРК-1, УЕОРК-2 и УЕОРК-3). УЕОР-А, также называемый УЕОР или фактором сосудистой проницаемости (УРР), существует в нескольких изоформах, которые возникают в результате альтернативного сплайсинга мРНК одного гена УЕОР, при этом УЕОР165 представляет собой изоформу, имеющую наибольшее биологическое значение. Было показано, что антитела к УЕОР подавляют рост опухолевых клеток в условиях ίη νίίτο и ίη νίνο. Гуманизированное моноклональное антитело к УЕОР, бевацизумаб (АУА§Т1Ы), было разработано и одобрено в Соединенных Штатах в качестве средства для лечения рака. Сигнальный путь Νοίοΐι представляет собой универсальную консервативную систему передачи сигналов. Он участвует в предопределении судьбы клеток в процессе развития, включая формирование зародышевых структур и постэмбриональное обеспечение жизнедеятельности тканей. Кроме того, было установлено, что передача сигналов Νοίοΐι является определяющим фактором в обеспечении жизнедеятельности гематопоэтических стволовых клеток. Была установлена связь пути Νοίοΐι с патогенезом как гематологических, так и солидных опухолей и рака. Было показано, что множество функций клеток и сигналов микроокружения, связанных с онкогенезом, модулируются путем передачи сигналов Νοίοΐι. включая пролиферацию, апоптоз, адгезию и ангиогенез клеток (Εβοη§ и др., 2006, Β1οοά, 107:2223-2233). Кроме того, было показано, что рецепторы Νοίοΐι и/или лиганды рецепторов Νοίοΐι играют потенциально онкогенную роль при множестве видов рака человека, включая острую миелогенную лейкемию, В-клеточную хроническую лимфоцитарную лейкемию, лимфому Ходжкина, множественную миелому, Т-клеточную острую лимфобластную лейкемию, рак головного мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, рак толстого кишечника, рак легких, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы и рак кожи (Εβοη§ и др., 2006, Βίοοά, 107:2223-2233).
Дельта-подобный лиганд 4 (ΌΕΕ4) представляет собой важный компонент пути Νοίοΐι и известен в качестве мишени для терапии рака. ΌΕΕ4 представляет собой лиганд ΝοΙοΚ который содержит Ν’концевой домен, домен Ие11:а/8егга1е/Еад-2 (И§Ь) и тандемные ЕОР-подобные повторы во внеклеточном домене. Сообщалось, что ΌΕΕ4 индуцируется УЕОР и что ΌΕΕ4 может действовать как регулятор отрицательной обратной связи для пролиферации сосудов.
Было показано, что антитела к ΌΕΕ4 усиливают разрастание и ветвление кровеносных сосудов, что приводит к непродуктивному ангиогенезу и уменьшению роста опухоли (Шдиега-Тгойе и др., 2006, ΝαФте, 444:1032-1037). Кроме того, было показано, что антитело к ΌΕΕ4 - 21М18 - ингибирует рост опухоли и уменьшает частоту раковых стволовых клеток вксенотрансплантатных моделях опухоли (Ноеу и др., 2009, Се11 §1еш Се11, 5:168-177; патент США №7750124).
Несмотря на то что были достигнуты существенные успехи в разработке моноклональных антител для применения в лечении рака, все еще существует огромный потенциал для дальнейших улучшений. Один класс молекул антител, подающий надежды на улучшение эффективности и/или уменьшение побочных действий (например, токсичности), представляет собой биспецифические антитела.
Ранее биспецифические молекулы преимущественно получали путем химического перекрестного сшивания двух антител, или они представляли собой гибридные гибридомы или "квадрогибридомы". Одним успешным форматом квадрогибридомы являются антитела ТтюшаЪ, которые представляют собой комбинации молекул из мыши и крысы, которые демонстрируют предпочтительное видоспецифичное спаривание тяжелой/легкой цепей. Совсем недавно произошел прогресс в конструировании антител, в результате которого появилось большое разнообразие новых форматов антител, включая, но не ограничиваясь перечисленными, тандемные 8сРν (би-8сРν), диатела, тандемные диатела (тетратела), одноцепочечные диатела и антитела с двойными вариабельными доменами.
Одной из целей изобретения является получение улучшенных молекул для лечения рака, в частности биспецифических антител, которые специфично связывают УЕОР человека и ΌΕΕ4 человека.
Краткое описание изобретения
Согласно настоящему изобретению предложены антитела, которые связывают УЕОР, ΌΕΕ4 или оба УЕОР и ΌΕΕ4 (агенты, связывающие УЕОР/НЕЬ4), а также композиции, такие как фармацевтические композиции для ингибирования роста опухоли и/или лечения рака, содержащие указанные антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения связывающие агенты представляют собой антитела, фрагменты антител и другие полипептиды, относящиеся к таким антителам. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела специфично связывают УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения антителаспецифично связывают ΌΕΕ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобре- 1 029958
тения указанные антитела представляют собой биспецифические антитела, которые специфично связывают УЕОР человека и ОЬЬ4 человека. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены способы ингибирования роста опухоли путем введения указанных антител субъекту, имеющему опухоль. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены способы лечения рака путем введения предложенных антител нуждающемуся в этом субъекту. В некоторых вариантах реализации изобретения способы лечения рака или ингибирования роста опухоли включают нацеливание антител на раковые стволовые клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения указанные способы включают уменьшение частоты раковых стволовых клеток в опухоли, уменьшение количества раковых стволовых клеток в опухоли, уменьшение онкогенности опухоли и/или уменьшение онкогенности опухоли путем уменьшения количества или частоты раковых стволовых клеток в опухоли. В одном аспекте настоящего изобретения предложено антитело, которое специфично связывает УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения указанное антитело ингибирует связывание УБОР с по меньшей мере одним рецептором УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения указанное антитело ингибирует связывание УЕОР с УЕОРК-1 и/или УЕОРК-2. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело модулирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело дополнительно специфично связывает и/или ингибирует ОЬЬ4 человека, вдобавок к УЕОР человека.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, содержащее СГОК1 тяжелой цепи, содержащий ΝΥ\νΜΗ (8ЕО ΙΌ N0:17), 0ΌΚ.2 тяжелой цепи, содержащий ПЮТ§МОК.Т§УКЕКРКК. (8Е0 ГО N0:18), и СГОК3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΏΌΚΥΥΡΌΜΟΥ (8ЕС) ГО N0:19); и С1Ж1 легкой цепи, содержащий НЛ8Е8У1^'¥С.18Е\1К (8ЕО ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8N^О8 (8Е0 ГО N0:21), и СГОК3 легкой цепи, содержащий ΡΡδΚΕ'νΡνΤΡΟΟ (8Е0 ΙΌ N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ГО N0:11; и/или вариабельную область легкой цепи с последовательностью 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой антитело 219К45, 219Κ45-ΜΒ-21Μ18, 219Κ45-ΜΒ-21Κ79, 219Κ45-ΜΒ-21Κ75 или 219Κ45-ΜΒ-21Κ83. В другом аспекте настоящего изобретения предложено антитело, которое специфично связывает ОЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело ингибирует связывание ОЬЬ4 с по меньшей мере одним рецептором №1сй. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело ингибирует связывание ОЬЬ4 с №1сй1, №1сН2, №1сН3 и/или №1сН4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело ингибирует передачу сигналов №1сй. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело вызывает непродуктивный ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело кроме ОЬЬ4 человека дополнительно специфично связывает и/или ингибирует УЕОР человека.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое связывает ОЬЬ4 человека и содержит СОК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8Е0 ГО N0:13) или ΑΥΥΙΗ (8КС) ГО N0:79), С1Ж2 тяжелой цепи, содержащий ΥIX1X2ΥX3X4ΑΤNΥN^ΚРΚО (8Е0 ГО N0:80), где Х1 представляет собой серин или аланин, Х2 представляет собой серин, аспарагин или глицин, Х3 представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту, и СГОК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:16); и СГОК1 легкой цепи, содержащий КΑ8Е8V^NΥОI8РΜI< (8Е0 ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий /У\8Х)С,8 (8 ЕС) ГО N0:21), и СОК3 легкой цепи, содержащий С)С)8КЕУР\УТ;С,С. (81:0 ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения антитело содержит С0К1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8ЕС) ΙΌ N0:13) или ΑΥΥΙΗ (81:0 ΙΌ N0:79), СОК2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNКΑΤ^ЛУЖСКО (8ЕС) ГО N0:14), и СОК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (8ЕС) ΙΌ N0:16); и С0К1 легкой цепи, содержащий КΑ8К8V^NΥОI8РΜΚ (8Е0 ГО N0:20), СОК2 легкой цепи, содержащий :У\8Ж)С,8 (8ЕС) ГО N0:21), и СОК.3 легкой цепи, содержащий С)С)8КЕУР\УТ;С,С. (8ЕС) ГО N0:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:10; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело
- 2 029958
представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью 8ЕО ГО N0:10; и вариабельную область легкой цепи с последовательностью 8ЕЦ ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело 21К.79 или антитело 219Κ.45-ΜΒ-21Κ.79.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит 0ΌΚ.1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8ЕЦ ГО N0:13) или ΑΥΥΙΗ (8ЕЦ ГО N0:79), 0ΌΚ.2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΑΟΥΚΌΑΤΝΥΝφΚΕΚΟ (8Е0 ΙΌ N0:59), и 0ΌΚ.3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:16); и 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑ8Ρ8V^NΥОI8РΜΚ (8ЕО ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8^08 (8ЕО ΙΌ N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρ8ΚΕνΡ^ΤΡ00 (8Е0 ΙΌ N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:58; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ГО N0:58; и вариабельную область легкой цепи с последовательностью 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело 21К75 или антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ75.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8Е0 ΙΌ N0:13) или ΑΥΥΙΗ (8Е0 ΙΌ N0:79), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥI8NΥNΚΑΤNΥN^ΚРΚО (8Е0 ГО N0:65), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:16); и 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑ8Ρ8V^NΥОI8РΜΚ (8ΙΤ) ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8^08 (8ΙΤ) ΙΌ N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρ8ΚΕνΡ^ΤΡ00 (8Е0 ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:64; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ГО N0:64; и вариабельную область легкой цепи с последовательностью 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложенное антитело представляет собой антитело 21К83 или антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ83.
В некоторых вариантах реализации каждого из упомянутых выше аспектов или вариантов реализации, а также других аспектов и/или вариантов реализации, описанных далее в данной заявке, указанное антитело представляет собой биспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает АРОР человека и вторую мишень. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает ΌΕΡ4 человека и вторую мишень. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает как АЕОР человека, так и ΌΕΡ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело модулирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело ингибирует передачу сигналов №1сй. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело модулирует ангиогенез и ингибирует передачу сигналов №1сй. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело уменьшает количество или частоту раковых стволовых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит две идентичные легкие цепи. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антитело ΙβΟ (например, Ι§02). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий АЕОР человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий NΥ\VΜΗ (8Е0 ГО N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡ8NОΚΤ8ΥΚΡΚРΚΚ (8Е0 ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΡΜΌΥ (8Е0 ГО N0:19). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело дополнительно содержит: 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий Κ.Α8Ρ8V^NΥОI8РΜI< (8Е0 ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8N^О8 (8Е0 ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρ8ΚΕνΡ^ΤΡ00 (8Е0 ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий АРОР человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит (а) 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий NΥ\VΜΗ (8Е0 ГО N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡ8NОΚΤ8ΥΚΡΚРΚΚ (8ЕО ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΡΜΌΥ (8ЕО ΙΌ N0:19), и (Ь) 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑ8Ρ8V^NΥОI8РΜΚ (8Е0 ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8N^О8 (8ЕЦ ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ^^8I<ΡVΡ\VΤРОО (8ЕО ГО N0:22).
- 3 029958
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЕ-4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит ί'.’ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8ЕЦ ГО N0:13) или ΑΥΥΙΗ (8ЕЦ ГО N0:79), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΧ1Χ2ΥΧ3Χ4ΑΤΝΥΝρΚΡΚΟ (8ЕЦ ΙΌ N0:80), где Х1 представляет собой серин или аланин, Х2 представляет собой серин, аспарагин или глицин, Х3 представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту, и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (8ЕЦ ΙΌ N0:16); и 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδνΌΝΥΟΙδΡΜΚ (δΙΑ) ΙΌ N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδ^Οδ (δΙΑ) ΙΌ N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρδΚΕνΡ^ΤΡΟΟ (ХЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΕΌ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ХЕО ГО N0:13), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (ХЕО ГО N0:14), ΥIδδΥNΟΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:15), ΥIΑΟΥΚ^ΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:59), или ΥIδNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:65), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ ®ЕО ГО N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения биспепифическое антитело дополнительно содержит: 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (ХЕО ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (ХЕО ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ^^δΚΕVΡ^ΤΡΟΟ (ХЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΕΌ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит (а) 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ХЕО ГО N0:13), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:14), ΥIδδΥNΟΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:15), ΥIΑΟΥΚ^ΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:59) или ΥIδNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:65), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (ХЕО ГО N0:16), и (Ь) 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий 1АтАУ1Щ¥С,к1;\1к ®ЕО ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΥΑδν/Οδ ХЕО ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρδΚΕνΡ^ΤΡΟΟ (ХЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: а) первый сайт связывания антигена, специфично связывающий νΚΙ человека, и Ь) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΕΌ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий NΥ^ΜΗ ®ЕО ГО N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ ®ЕО ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΌΜΌΥ (ХЕО ГО N0:19); и при этом второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ХЕО ГО N0:13) или ΑΥΥΙΗ (ХЕО ГО N0:79), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΧ1Χ2ΥΧзΧ4ΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:80), где Х1 представляет собой серин или аланин, Χ2 представляет собой серин, аспарагин или глицин, Χ3 представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту, и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (ХЕО ГО N0:16); и 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ ®ЕО ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΥΑδν/Οδ ХЕО ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρδΚΕνΡ^ΤΡΟΟ (ХЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: а) первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и Ь) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΕΌ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий NΥ^ΜΗ ®ЕО ГО N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ ®ЕО ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΌΜΌΥ (ХЕО ГО N0:19); и при этом второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ХЕО ГО N0:13), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (ЬЕО ГО N0:14), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (ХЕО ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (ХЕО ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδ^Οδ ХЕО ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρδΚΈνΡ^ΤΡΟΟ ХЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: а) первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и Ь) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΕΌ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий NΥ\VΜΗ (ХЕО ГО N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий Ό^δ^^Υ^Ε^^ ®ЕО ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΌΜΌΥ ®ЕО ГО N0:19); и при этом второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ ®ЕО ΙΌ N0:13), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥIδδΥNΟΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕО ГО N0:15), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (ХЕО ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (ЬЕО ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (ХЕО ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρδΚΕνΡ^ΤΡΟΟ (ХЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: а) первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и Ь) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΕΌ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, включающий содержащий NΥ\VΜΗ (ХЕО ГО N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ (ХЕО ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой
- 4 029958
цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΡΜΌΥ (8Еф ГО N0:19); и при этом второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8Еф ГО N0:13), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΑΟΥΚΌΑΤΝΥΝΡΚΡΚΟ (8ЕО ГО N0:59), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (8ЕО ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑ8Е8V^NΥОI8ΡΜΚ (8Е0 ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8N^О8 (8Е0 ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ρρ8ΚΒνΡνΤΡ00 (8Е0 ΙΌ N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: а) первый сайт связывания антигена, специфично связывающий νΡΟΡ человека, и Ь) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΡΡ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΜΥνΜΗ (8Е0 ΙΌ N0: 17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡ8NОΚΤ8ΥΚЕΚΡΚΚ (8Е0 ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΡΜΌΥ (8Е0 ГО N0:19); и при этом второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8Е0 ΙΌ N0:13), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥI8NΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚ0 (8Е0 ГО N0:65), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (8Е0 ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑ8Е8V^NΥОI8ΡΜΚ (8Е0 ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8N^О8 (8Е0 ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий φρ8ΚΡνΡνΤΡ00 (8Е0 ΙΌ N0:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает АЕОР человека и содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11, и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает АЕОР человека и содержит: вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11, и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает ΌΡΡ4 человека и содержит: вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:9, 8Е0 ГО N0:10, 8Е0 ГО N0:58 или 8Е0 ГО N0:64; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает ΌΡΡ4 человека и содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:9, 8Е0 ГО N0:10, 8Е0 ГО N0:58 или 8Е0 ГО N0:64; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает АЕОР человека и ΌΡΡ4 человека, и содержит: (а) первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; (Ь) вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:9, 8Е0 ГО N0:10, 8Е0 ГО N0:58 или 8Е0 ГО N0:64; и (с) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к νΈ0Ρ/ΌΡΡ4 содержит (а) первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; (Ь) вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:9; и (с) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к АЕОРГОЕРА содержит (а) первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; (Ь) вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:10; и (с) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к νΈ0Ρ/ΌΡΡ4 содержит (а) первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; (Ь) вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:58; и (с) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к νΈ0Ρ/ΌΡΡ4 содержит (а) первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:11; (Ь) вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:64; и (с) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, связывающее АРОРГОРР4, представляет
- 5 029958
собой биспецифическое антитело, содержащее (а) первый сайт связывания антигена, связывающий УЕОР человека с Кс (константой диссоциации) в диапазоне от приблизительно 0,1 и до приблизительно 1,0 нМ, и (Ь) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий БЬЬ4 человека с Кс В диапазоне от приблизительно 0,1 и до приблизительно 20 нМ. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит две идентичные легкие цепи.
В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, связывающее УЕСР/БЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, выбранное из группы, состоящей из 219К45-МВ-21М18, 219К45-МВ21К79, 219К45-МВ-21К75 и 219К45-МВ-21К83.
В некоторых вариантах реализации каждого из упомянутых выше аспектов, а также других аспектов и/или вариантов реализации, описанных далее в данной заявке, антитело является выделенным.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен полипептид, выбранный из группы, состоящей из: ЗЕО ГО N0:1, ЗЕО ГО N0:2, ЗЕО ГО N0:3, ЗЕО ГО N0:4, ЗЕО ГО N0:5, ЗЕО ГО N0:6, ЗЕО ГО N0:7, ЗЕО ГО N0:8, ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:11, ЗЕО ГО N0:12, ЗЕО ГО N0:46, ЗЕО ГО N0:47, ЗЕО ГО N0:48, ЗЕО ГО N0:49, ЗЕО ГО N0:56, ЗЕО ГО N0:57, ЗЕО ГО N0:58, ЗЕО ГО N0:62, ЗЕО ГО N0:63 и ЗЕО ГО N0:64. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид является выделенным. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид является, по существу, чистым. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид представляет собой антитело или часть антитела, такую как фрагмент антитела. В другом аспекте настоящего изобретения предложены выделенные полинуклеотидные молекулы, включающие полинуклеотид, который кодирует антитела и/или полипептиды из каждого из упомянутых выше аспектов, а также других аспектов и/или вариантов реализации, описанных в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотид содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из: ЗЕО ГО N0:29, ЗЕО ГО N0:30, ЗЕО ГО N0:31, ЗЕО ГО N0:32, ЗЕО ГО N0:33, ЗЕО ГО N0:34, ЗЕО ГО N0:35, ЗЕО ГО N0:36, ЗЕО ГО N0:37, ЗЕО ГО N0:38, ЗЕО ГО N0:39, ЗЕО ГО N0:40, ЗЕО ГО N0:50, ЗЕО ГО N0:51, ЗЕО ГО N0:52, ЗЕО ГО N0:53, ЗЕО ГО N0:54, ЗЕО ГО N0:55, ЗЕО ГО N0:60, ЗЕО ГО N0:61, ЗЕО ГО N0:66, ЗЕО ГО N0:67, ЗЕО ГО N0:68, ЗЕО ГО N0:69, ЗЕО ГО N0:70, ЗЕО ГО N0:71, ЗЕО ГО N0:72, ЗЕО ГО N0:73 и ЗЕО ГО N0:74. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены векторы экспрессии, которые содержат полинуклеотиды, а также клетки, которые содержат векторы экспрессии и/или полинуклеотиды. В некоторых вариантах реализации изобретения клетка представляет собой прокариотическую клетку или эукариотическую клетку.
В других аспектах согласно настоящему изобретению предложены способы ингибирования роста опухоли, включающие приведение во взаимодействие опухоли с эффективным количеством антитела, которое связывает УЕОР, БЬЬ4 или оба УЕОР и БЬЬ4, включая каждое из антител, описанных в данной заявке.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ ингибирования роста опухоли у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела, связывающего УЕОР, БЬЬ4 или оба УЕОР и БЬЬ4, включая каждое из антител, описанных в данной заявке.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ модуляции ангиогенеза у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела, которое связывает УЕОР, БЬЬ4 или оба УЕОР и БЬЬ4, включая каждое из антител, описанных в данной заявке.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ уменьшения онкогенности опухоли у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела, связывающего УЕОР, БЬЬ4 или оба УЕОР и БЬЬ4, включая каждое из антител, описанных в данной заявке.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ уменьшения онкогенности опухоли у субъекта путем уменьшения частоты раковых стволовых клеток в опухоли, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела, связывающего УЕОР, ББСД или оба УЕОР и БЬЬ4, включая каждое из антител, описанных в данной заявке.
В других аспектах согласно настоящему изобретению предложены способы лечения рака у субъекта, включающие введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела, связывающего УЕОР, БЬЬ4 или оба УЕОР и БЬЬ4, включая каждое из антител, описанных в данной заявке.
Дополнительно предложены фармацевтические композиции, содержащие антитело, описанное в данной заявке, и фармацевтически приемлемый носитель, а также линии клеток, которые экспрессируют и/или продуцируют указанные антитела. Также предложены способы лечения рака и/или ингибирования роста опухоли у субъекта (например, у человека), включающие введение субъекту эффективного количества композиции, содержащей предложенное антитело.
В тех случаях, когда аспекты или варианты реализации настоящего изобретения описаны в контексте группы Маркуша или других группировок альтернативных элементов, в объем настоящего изобретения входит не только вся группа, упомянутая как одно целое, но также каждый элемент данной группы отдельно и все возможные подгруппы основной группы, а также основная группа, в которой отсутствует один или более элементов данной группы. В настоящем изобретении также предусмотрено явное исключение одного или более из любых элементов группы из предложенного изобретения.
Краткое описание чертежей
- 6 029958
Фиг. 1 - 1А) гипервариабельные участки (СГОР) тяжелой цепи и легкой цепи биспецифических антител к УЕОР/ОЬЬ4 219К45-МВ-21М18, 219К45-МВ-21М79, 219К45-МВ-21М75 и 219К45-МВ-21М83; 1В) номера последовательностей 8ЕО ГО N0 вариабельной области тяжелой цепи и легкой цепи; 1С) номера последовательностей 8Е0 ГО N0 тяжелой цепи и легкой цепи;
фиг. 2 - анализ методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (НТРР) одновременного связывания биспецифических антител с УЕОР человека и ΌΡΡ4 человека. Результаты представлены в относительных единицах флуоресценции (РЕИ), которые представляют собой отношение относительной интенсивности флуоресценции на 665 нм к относительной интенсивности флуоресценции на 620 нм. 219К45-МВ-21М18 ИА 219К45-МВ-21К79 (--); 219К45 плюс 21М18 (-*-); 219К45 плюс 21К79 (-□-); 219К45 (-▼-); 21М18 21К79 ("°А контрольное антитело ΡΖ-1 И-)·;
фиг. 3 - ингибирование индуцированной УЕОР пролиферации эндотелиальных клеток пупочной вены человека (НИУЕС) биспецифическими антителами к УЕОРГОРР4. Интенсивность флуоресценции считывали, используя длину волны возбуждения, равную 530 нм, и длину волны испускания, равную 590. 219К45-МВ-21М18 (-·-); 219К45-МВ-21К79 (-А-); 219К45 (--); Среда без УЕОР ИА;
фиг. 4 - ингибирование индуцированной ΌΡΡ4 передачи сигналов Νοίαΐι биспецифическими антителами к УЕОР/ОРЬ4. Активность люциферазы измеряли, применяя набор для анализа двойной люциферазы, при этом активность люциферазы светлячка нормировали на активность люциферазы РешПа. 219К45-МВ-21М18 (-·-); 219К45-МВ-21К79 (-"); 21М18 ИА 21К79 НА;
фиг. 5 - ингибирование роста опухоли толстого кишечника ίη νίνο с помощью биспецифического антитела к УЕОР/ОРЬ4. Клетки опухоли толстого кишечника ОМР-С8 вводили путем подкожной инъекции в трансплантат кожи человека у мышей ΝΟΌ/δΟΙΌ. Мышам вводили контрольное антитело ИА антитело к 1ГОРР4 человека - 21М18 (-^-), антитело к УЕОР - бевацизумаб или биспецифическое антитело к УЕОРГОРР4 - 219К45-МВ-21М18 (-▼-)· Результаты представлены в виде объема опухоли (фотонов/с) в зависимости от количества дней, прошедших после лечения. Антитела вводили интраперитонеально в дозе 25 мг/кг раз в неделю;
фиг. 6 - онкогенность клеток опухоли поджелудочной железы после лечения биспецифическими антителами к УЕОР/ОРЬ4. Опухолевые клетки ОМР-РЖ из мышей, которым вводили контрольное антитело, антитело к ШРЬ4 человека - 21М18, антитело к УЕОР - бевацизумаб, или биспецифические антитела к УЕОРГОРР4 - 219К45-МВ-21М18 или 219К45-МВ-21К79, вместе с гемцитабином или без него, обрабатывали с получением суспензии отдельных клеток, и осуществляли серию трансплантаций мышам. 90 клеток из каждой группы лечения вводили путем подкожной инъекции мышам Ν0Ό/δί'.ΊΌ. Опухолям позволяли расти в отсутствии лечения. Результаты представлены в виде объема опухоли (мм3) в день 55. Частота опухолей представлена в виде отношения количества опухолей к общему количеству мышей, которым осуществляли инъекцию, в каждой группе;
фиг. 7 - твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) с биспецифическими антителами. Биспецифические антитела 219К45-МВ-21М18, 219К45-МВ-21К79,219К45-МВ-21К75 и 219К45-МВ-21К83 разбавляли в блокирующем буфере (1 х фосфатно-солевой буферный раствор (ФБР), 0,1% желатин, 0,1% полисорбат-20, рН 7,4), содержащем 2 мкг/мл биотин-ОРР4-ЬРе. Готовили трехкратные серийные разведения антител от 500 до 0,008 нг/мл. Образцы антител инкубировали в течение 2 ч в блокирующем буфере, содержащем биотин-ОРР4-ЬРе. После инкубации образцы антител переносили в аналитический планшет, покрытый УЕОР (100 мкл/лунку) и инкубировали в течение 2 ч. В каждую лунку добавляли конъюгированный с пероксидазой хрена (НРР) стрептавидин и инкубировали в течение 1 ч. В лунки добавляли субстрат тетраметилбензидин (ТМВ), позволяли окраске развиться в течение 10 мин и останавливали реакцию добавлением 2М серной кислоты. Поглощение считывали на 450-650 нм и результаты анализировали, применяя 4-параметрическую подгонку, с помощью программного обеспечения §ойшах Рго;
фиг. 8 - капиллярное изоэлектрическое фокусирование с детекцией непосредственно в капилляре биспецифических антител к УЕОРГОРР4;
фиг. 9 - ингибирование роста опухоли толстого кишечника биспецифическими антителами к УЕОРГОРР4 в модели рецидива опухоли. Клетки опухоли толстого кишечника ОМР-С8 вводили путем подкожной инъекции мышам ΝΟΌ/δΟΙΌ. Мышам вводили контрольное антитело ИА антитело к ОРЬ4 человека - 21М18 ИА антитело к УЕОР - бевацизумаб НА комбинацию 21М18 и бевацизумаба (-▼-), биспецифическое антитело к УЕСРГОЕЕ4 - 219К45-МВ-21М18 НА или биспецифическое антитело к УЕСРГОЕЕ4 - 219К45-МВ-21К79 ИА все в комбинации с иринотеканом. Антитела 21М18 и бевацизумаб вводили интраперитонеально в дозе 7,5 мг/кг раз в неделю, биспецифические антитела 219К45-МВ21М18 и 219К45-МВ-21К79 вводили интраперитонеально в дозе 15 мг/кг раз в неделю, и иринотекан вводили в течение первых 4 недель в дозе 45 мг/кг. Результаты представлены в виде объема опухоли (мм3) в зависимости от количества дней, прошедших после лечения;
фиг. 10 - онкогенность клеток опухоли толстого кишечника ОМР-С3 после лечения биспецифическими антителами к УЕОРГОЕЕ4. Опухоли из мышей, которым вводили контрольное антитело, антитело к ЙОЕЬ4 человека - 21М18, антитело к УЕОР - бевацизумаб, комбинацию 21М18 и бевацизумаба, или биспецифические антитела к УЕОРГОЕЕ4 - 219К45-МВ-21М18 или 219К45-МВ-21К79, вместе с ирино- 7 029958
теканом или без него, обрабатывали с получением суспензии отдельных клеток, и осуществляли серию трансплантаций мышам. 150 клеток из каждой группы лечения вводили путем подкожной инъекции мышам ΝΘΌ/δΟΙΌ. Опухолям позволяли расти в отсутствии лечения. Результаты представлены в виде объема опухоли (мм3) на 68 день;
фиг. 11 - ингибирование роста опухоли толстого кишечника ίη νίνο биспецифическими антителами к УЕОР/ОЬЬ4. Клетки опухоли толстого кишечника ОМР-С8 вводили путем подкожной инъекции мышам ΝΟΌ/δΟΙΌ. Мышам вводили контрольное антитело (’’)> антитело к УЕОР - бевацизумаб или биспецифические антитела к УЕОР/ПЕЬ4 - 219К45-МВ-21М18 (Ή 219К45-МВ-21К75 (-·-), 219К45МВ-21К79 (-°-) или 219К45-МВ-21К83 (-▼’)·
Мышам вводили антитела в виде монотерапии (фиг. 10 А) или в комбинации с иринотеканом (фиг. 10В). Антитела вводили интраперитонеально в дозе 15 мг/кг раз в неделю и иринотекан вводили в дозе 7,5 мг/кг раз в неделю. Результаты представлены в виде объема опухоли (мм3) в зависимости от количества дней, прошедших после лечения.
Подробное описание изобретения
Согласно изобретению предложены новые связывающие агенты, включая, но не ограничиваясь полипептидами, такими как антитела, которые связывают УЕОР и/или ΌΡΡ4 (например, агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4). Также предложены соответствующие полипептиды и полинуклеотиды, композиции, содержащие агенты, связывающие УЕОР/ПЕЬ4, и способы получения агентов, связывающих УЕСР/О6Т4. Дополнительно предложены способы применения новых агентов, связывающих УЕОР/ПЕЬ4, такие как способы ингибирования роста опухоли, способы лечения рака, способы уменьшения онкогенности опухоли, способы уменьшения частоты раковых стволовых клеток в опухоли и/или способы модуляции ангиогенеза.
Было обнаружено моноклональное антитело, которое специфично связывает УЕОР человека 219К.45. Данное антитело обладает аффинностью связывания с УЕОР человека, равной приблизительно 0,67 нМ, и аффинностью связывания с УЕОР мыши, равной приблизительно 23 нМ. Было обнаружено несколько моноклональных антител, которые специфично связывают ΌΡΡ4 человека: 21К.79, 21К.75 и 21К.83. Антитело 21К.79 обладает аффинностью связывания с ΌΡΡ4 человека, меньшей чем 0,1 нМ. Получили биспецифические антитела, которые специфично связывают УЕОР человека и ПЬЬ4 человека: 219К45-МВ-21М18, 219К45-МВ-21К79, 219К45-МВ-21К75 и 219К45-МВ-21К83 (последовательности СОК представлены на фиг. 1). В данной заявке, сочетание букв "МВ" в названии антитела означает "моновалентное/биспецифическое". Биспецифическое антитело 219К45-МВ-21М18 обладает аффинностью связывания с УЕОР человека, меньшей чем 1,0 нМ, и аффинностью связывания с ОЬЬ4 человека, равной приблизительно 16 нМ. Биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К79 обладает аффинностью связывания с УЕОР человека, меньшей чем 1,0 нМ, и аффинностью связывания с ОЬЬ4 человека, меньшей чем 1,0 нМ. Биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К75 обладает аффинностью связывания с ОЕЬ4 человека, равной приблизительно 5 нМ, тогда как биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К83 обладает аффинностью связывания с ОЬЬ4 человека, равной приблизительно 1 нМ. Биспецифические антитела 219К45-МВ-21М18 и 219К45-МВ-21К79 связывают УЕОР мыши (пример 1, табл. 3). Биспецифические антитела к УЕОР/ОЕЬ4 связывают УЕОР человека и ОЕЬ4 человека одновременно (пример 2, фиг. 2). Биспецифические антитела к УЕОР/ОЕЬ4 ингибируют индуцированную УЕОР пролиферацию клеток НИУЕС (пример 3, фиг. 3). Биспецифические антитела к УЕОР/ОЕЬ4 ингибируют индуцированную ОЕЬ4 передачу сигналов Νοίαΐι (пример 4, фиг. 4). Биспецифические антитела к УЕОР/ОЕЕ4 ингибируют рост опухоли (примеры 5, 9, 11 и фиг. 5, 9, 11). Биспецифические антитела к УЕОР/ОЕЬ4 ингибируют онкогенность (примеры 6 и 10 и фиг. 6, 10). Биспецифические антитела к УЕОР/ОЕЬ4 связывают как УЕОР, так и ОЕЬ4 в биспецифическом ИФА (пример 7, фиг. 7). Биспецифические антитела к УЕОР/ОЕЬ4 выделяют и очищают с получением продукта, содержащего по меньшей мере 90% гетеродимерного антитела (пример 8, табл. 7).
Ι. Определения.
Чтобы облегчить понимание настоящего изобретения, ниже приведены определения множества терминов и формулировок.
Термин "антитело" в данной заявке относится к молекуле иммуноглобулина, которая распознает и специфично связывает мишень, такую как белок, полипептид, пептид, углевод, полинуклеотид, липид, или комбинации перечисленных молекул, посредством по меньшей мере одного сайта распознавания антигена в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. В данной заявке в объем термина входят интактные поликлональные антитела, интактные моноклональные антитела, одноцепочечные антитела, фрагменты антител (такие как фрагменты РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2 и Εν), одноцепочечные Рν (8сРν) антитела, мультиспецифические антитела, такие как биспецифические антитела, моноспецифические антитела, моновалентные антитела, химерные антитела, гуманизированные антитела, антитела человека, слитые белки, содержащие сайт связывания антигена антитела, и любая другая модифицированная молекула иммуноглобулина, содержащая сайт распознавания антигена (т.е. сайт связывания антигена), при условии, что антитела проявляют желательную биологическую активность. Антитело может принадлежать к любому из пяти основных классов иммуноглобулинов: 1дА, Ι§Ό, 1дЕ, 1дО и 1дМ, или их подклассов (изо- 8 029958
типов) (например, 1§01 1§02, 1§03, 1§04, 1дА1 и 1дА2), на основании идентичности их константных доменов тяжелой цепи, называемых альфа, дельта, эпсилон, гамма и мю, соответственно. Различные классы иммуноглобулинов обладают различными и хорошо известными субъединичными структурами и трехмерными конфигурациями. Антитела могут быть голыми или конъюгированными с другими молекулами, включая, но не ограничиваясь перечисленными, токсины и радиоактивные изотопы.
Термин "фрагмент антитела" относится к части интактного антитела и относится к антигенным детерминантам вариабельных областей интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничены перечисленными: фрагменты РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2 и Ρν, линейные антитела, одноцепочечные антитела и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. "Фрагмент антитела" в данной заявке включает сайт связывания антигена или сайт связывания эпитопа.
Термин "вариабельная область" антитела относится к вариабельной области легкой цепи антитела или к вариабельной области тяжелой цепи антитела, либо отдельно, либо в комбинации. Каждая из вариабельных областей тяжелых и легких цепей состоит из четырех каркасных областей (РР), соединенных тремя областями, определяющими комплементарность (СЭР), также известными как "гипервариабельные участки". Гипервариабельные участки в каждой цепи удерживаются каркасными областями в непосредственной близости и, вместе с гипервариабельными участками другой цепи, способствуют образованию сайта связывания антигена антитела. Существует по меньшей мере две методики определения гипервариабельных участков: (1) подход, основанный на межвидовой вариабельности последовательностей (т.е. КаЬа! и др., 1991, 8сциспсс5 о£ РгоЮнъ о£ 1ттипо1ощса1 [Шсгсз!, 5-е издание, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд), и (2) подход, основанный на кристаллографических исследованиях комплексов антиген-антитело (А1-Ба/1каш и др., 1997, ί. Мо1. ΒίοΙ., 273:927-948). Кроме того, в данной области техники иногда применяют комбинации данных двух подходов, чтобы определить гипервариабельные участки.
Термин "моноклональное антитело" в данной заявке относится к гомогенной популяции антител, участвующих в высокоспецифичном распознавании и связывании отдельной антигенной детерминанты или эпитопа. Напротив, поликлональные антитела обычно содержат смесь различных антител, направленных против множества различных антигенных детерминант. В объем термина "моноклональное антитело" входят как интактные и полноразмерные моноклональные антитела, так и фрагменты антител (например, РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2, Ρν), одноцепочечные ОсРу) антитела, слитые белки, содержащие часть антитела, и любая другая модифицированная молекула иммуноглобулина, содержащая сайт распознавания антигена (сайт связывания антигена). Более того, "моноклональное антитело" относится к таким антителам, которые получены с помощью любого количества способов, включая, но не ограничиваясь перечисленными, продуцирование гибридомой, селекцию фагов, рекомбинантную экспрессию и трансгенных животных. Термин "гуманизированное антитело" в данной заявке относится к формам не относящихся к человеку (например, мышиных) антител, которые представляют собой специфичные цепи иммуноглобулинов, химерные иммуноглобулины или фрагменты перечисленных молекул, которые содержат минимум не относящихся к человеку последовательностей. Обычно, гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека, в которых остатки гипервариабельных участков замещены на остатки из гипервариабельных участков не относящихся к человеку видов (например, мыши, крысы, кролика или хомяка), которые обладают желательной специфичностью, аффинностью и/или способностью связывания (Топек и др., 1986, Ыа1иге, 321:522-525; КтесБтапн и др., 1988, ЫаШге, 332:323-327; УетБоеуеп и др., 1988, 8с1епсе, 239:1534-1536). В некоторых случаях, остатки каркасной области Ρν иммуноглобулина человека замещают на соответствующие остатки в антителе из не относящихся к человеку видов, которое обладает желательной специфичностью, аффинностью и/или способностью связывания. Гуманизированное антитело можно дополнительно модифицировать путем замены дополнительных остатков в каркасной области Ρν и/или среди замещенных не относящихся к человеку остатков, чтобы улучшить и оптимизировать специфичность, аффинность и/или способность связывания антитела. Обычно, гуманизированное антитело будет содержать, по существу, все из по меньшей мере одного вариабельного домена (обычно, два или три), содержащего все или, по существу, все гипервариабельные участки, которые соответствуют не относящемуся к человеку иммуноглобулину, тогда как все или, по существу, все каркасные области будут представлять собой консенсусные последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело также может содержать по меньшей мере часть константной области или домена (Рс) иммуноглобулина, обычно из иммуноглобулина человека. Примеры способов, используемых для получения гуманизированных антител, описаны, например, в патенте США 5225539.
Термин "антитело человека" в данной заявке относится к антителу, продуцированному человеком, или к антителу, имеющему последовательность аминокислот, соответствующую антителу, продуцированному человеком. Антитело человека можно получить с помощью любой из методик, известных в данной области техники. Данное определение антитела человека, в частности, исключает гуманизированное антитело, содержащее не относящиеся к человеку гипервариабельные участки.
Термин "химерное антитело" в данной заявке относится к антителу, в котором последовательность аминокислот молекулы иммуноглобулина получена из двух или более видов. Обычно, вариабельная область как легкой, так и тяжелой цепи соответствует вариабельной области антител, полученных из одно- 9 029958
го вида млекопитающих (например, мыши, крысы, кролика и т.д.), с желательной специфичностью, аффинностью и/или способностью связывания, тогда как константные области соответствуют последовательностям антител, полученных из других видов (обычно, из человека).
Формулировка "антитело с созревшей аффинностью" в данной заявке относится к антителу с одним или более изменениями в одном или более из его гипервариабельных участков, которые приводят к улучшению аффинности антитела к антигену, по сравнению с исходным антителом, у которого отсутствует такое изменение(я). Данное определение также включает изменения в остатках не из гипервариабельного участка, введенные в сочетании с изменениями остатков гипервариабельного участка. Предпочтительные антитела с созревшей аффинностью будут обладать наномолярными или даже пикомолярными аффинностями к целевому антигену. Антитела с созревшей аффинностью получают с помощью способов, известных в данной области техники. Например, у Магкк и др., 1992, Вю/ТесЬио1оду 10:779783, описано созревание аффинности путем перетасовки доменов УН и УЬ. Неспецифический мутагенез остатков гипервариабельного участка и/или каркасной области описан у ВагЬак и др., 1994, ΡΝΑδ, 91:3809-3813; §сЫег и др., 1995, Сеие, 169:147-155; УеНоп и др., 1995, I. 1ттипо1. 155:1994-2004; .Тасккои и др., 1995, I. 1ттиио1., 154:3310-9; и На\уки15 и др., 1992, I. Мо1. Вю1., 226:889-896. Сайт-направленный мутагенез также можно применять для получения антител с созревшей аффинностью.
Термины "эпитоп" и "антигенная детерминанта" используют взаимозаменяемо в данной заявке, и они относятся к такой части антигена, которая может распознаваться и специфично связываться конкретным антителом. Если антиген представляет собой полипептид, эпитопы могут быть образованы как из смежных аминокислот, так и из несмежных аминокислот, сближенных благодаря третичной укладке белка. Эпитопы, образованные из смежных аминокислот (также называемые линейными эпитопами), обычно сохраняются при денатурации белка, тогда как эпитопы, образованные благодаря третичной укладке (также называемые конформационными эпитопами), обычно утрачиваются при денатурации белка. Эпитоп обычно содержит по меньшей мере 3 и чаще по меньшей мере 5 или 8-10 аминокислот в уникальной пространственной конформации.
Термины "гетеромультимерная молекула", или "гетеромультимер", или "гетеромультимерный комплекс", или "гетеромультимерный полипептид" используют взаимозаменяемо в данной заявке для описания молекулы, содержащей по меньшей мере первый полипептид и второй полипептид, при этом второй полипептид отличается по последовательности аминокислот от первого полипептида на по меньшей мере один аминокислотный остаток. Гетеромультимерная молекула может включать "гетеродимер", образованный первым и вторым полипептидами, или может образовывать третичные структуры более высокого порядка, в которых присутствуют дополнительные полипептиды.
Термины "антагонист" и "антагонистический" в данной заявке относятся к любой молекуле, которая частично или полностью блокирует, ингибирует, уменьшает или нейтрализует биологическую активность мишени и/или сигнального пути (например, пути №1сН). Термин "антагонист" используют в данной заявке для описания любой молекулы, которая частично или полностью блокирует, ингибирует, уменьшает или нейтрализует активность белка. Подходящие антагонистические молекулы, в частности, включают, но не ограничены антагонистическими антителами или фрагментами антител.
Термины "модуляция" и "модулировать" в данной заявке относятся к изменению или альтерации биологической активности. Модуляция включает, но не ограничена стимуляцией или ингибированием активности. Модуляция может представлять собой повышение или снижение активности (например, повышение ангиогенеза или снижение ангиогенеза), изменение связывающих свойств или любое другое изменение биологических, функциональных или иммунологических свойств, связанных с активностью белка, пути или другой биологической точки интереса.
Термины "селективно связывает" или "специфично связывает" означают, что связывающий агент или антитело реагирует или связывается чаще, быстрее, с большей продолжительностью, с большей аффинностью или с некоторой комбинацией перечисленных свойств, с эпитопом, белком или целевой молекулой, чем с альтернативными веществами, включая неродственные белки. В некоторых вариантах реализации "специфично связывает" означает, например, что антитело связывает белок с Кс, равной приблизительно 0,1 мМ или менее, но чаще менее чем приблизительно 1 мкМ. В некоторых вариантах реализации изобретения "специфично связывает" означает, что антитело связывает мишень иногда с Кс, равной по меньшей мере приблизительно 0,1 мкМ или менее, а иногда по меньшей мере приблизительно 0,01 мкМ или менее, и иногда по меньшей мере приблизительно 1 нМ или менее. Вследствие идентичности последовательностей между гомологичными белками у различных видов, специфичное связывание может включать антитело, которое распознает белок более чем одного вида (например, УЕСЕ человека и УЕСЕ мыши). Аналогичным образом, вследствие гомологии внутри некоторых участков полипептидных последовательностей различных белков, специфичное связывание может включать антитело (или другой полипептид или связывающий агент), которое распознает более чем один белок (например, УЕСЕ-А человека и УЕСЕ-В человека). Должно быть очевидно, что, в некоторых вариантах реализации изобретения антитело или связывающая молекула, которая специфично связывает первую мишень, может специфично связывать или не связывать вторую мишень. По этой причине "специфичное связывание" не обязательно требует (хотя может включать) исключительное связывание, т. е. связывание с единственной ми- 10 029958
шенью. Таким образом, антитело может в некоторых вариантах реализации изобретения специфично связывать более чем одну мишень. В некоторых вариантах реализации изобретения один и тот же сайт связывания антигена на антителе может связать несколько мишеней. Например, антитело может, в некоторых случаях, содержать два идентичных сайта связывания антигена, каждый из которых специфично связывает один и тот же эпитоп на двух или более белках. В некоторых альтернативных вариантах реализации изобретения антитело может быть мультиспецифическим и содержать по меньшей мере два сайта связывания антигена с различными специфичностями. В качестве неограничивающего примера биспецифическое антитело может содержать один сайт связывания антигена, который распознает эпитоп на одном белке (например, на УЕСТ человека), и дополнительно содержать второй сайт связывания отличного антигена, который распознает отличный эпитоп на втором белке (например, на 0ЬТ4 человека). Как правило, но не обязательно, упоминание связывания означает специфичное связывание.
Термины "полипептид", и "пептид", и "белок" используют взаимозаменяемо в данной заявке, и они относятся к полимерам аминокислот любой длины. Полимер может быть линейным или разветвленным, он может включать модифицированные аминокислоты и может прерываться не относящимися к аминокислотам молекулами. В объем терминов также входит полимер аминокислот, который был модифицирован самопроизвольно или путем вмешательства; например, путем образования дисульфидной связи, гликозилирования, липидирования, ацетилирования, фосфорилирования или любой другой манипуляции или модификации, такой как конъюгирование с метящим компонентом. В данное определение также включены, например, полипептиды, содержащие один или более аналогов аминокислоты (включая, например, не встречающиеся в природе аминокислоты), а также другие модификации, известные в данной области техники. Должно быть очевидно, что, так как полипептиды согласно настоящему изобретению могут быть на основе антител, в некоторых вариантах реализации изобретения указанные полипептиды могут встречаться в виде отдельных цепей или связанных цепей.
Термины "полинуклеотид" и "нуклеиновая кислота" используют взаимозаменяемо в данной заявке, и они относятся к полимерам нуклеотидов любой длины и включают ДНК и РНК. Нуклеотиды могут представлять собой дезоксирибонуклеотиды, рибонуклеотиды, модифицированные нуклеотиды или основания и/или аналоги перечисленных нуклеотидов, или любой субстрат, который можно включить в полимер с помощью ДНК- или РНК-полимеразы. "Условия высокой строгости" могут представлять собой такие условия, при которых: (1) используют низкую ионную силу и высокую температуру промывки, например 15 мМ хлорид натрия/1,5 мМ цитрат натрия/0,1% додецилсульфат натрия при 50°С; (2) используют в процессе гибридизации денатурирующий агент, такой как формамид, например, 50% (об./об.) формамид с 0,1% бычьим сывороточным альбумином/0,1% фиколлом/0,1% поливинилпирролидоном/50 мМ натрий-фосфатным буфером при рН 6,5 в 5х §§С (0,75М ЫаС1, 75 мМ цитрат натрия) при 42°С; или (3) используют процессе гибридизации 50% формамид в 5х §§С, 50 мМ фосфат натрия (рН 6,8), 0,1% пирофосфат натрия, 5х раствор Денхардта, разрушенную ультразвуком ДНК из молок лососевых (50 мкг/мл), 0,1% ДСН и 10% сульфат декстрана при 42°С, с промывками при 42°С в 0,2х §§С и 50% формамиде, после чего следует промывка высокой строгости, состоящая из 0,1х §§С с добавлением ЭДТА при 55°С.
Термины "идентичный" или "процент идентичности" в контексте двух или более нуклеиновых кислот или полипептидов относятся к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми или обладают определенным процентом нуклеотидов или аминокислотных остатков, которые одинаковы, при сравнении и выравнивании (введении разрывов, при необходимости) для получения максимального соответствия, при этом любые консервативные замены аминокислот не рассматриваются как часть идентичности последовательностей. Процент идентичности можно измерить с применением программного обеспечения или алгоритмов для сравнения последовательностей или путем визуального наблюдения. Различные алгоритмы и программное обеспечение, которые можно применять для выравнивания последовательностей аминокислот или нуклеотидов, хорошо известны в данной области техники. Они включают, но не ограничены перечисленными: ВЬЛ§Т, ЛЫСЫ, Медайди, ВсИТП. ССС ХУ+соп+п Раскаде и их варианты. В некоторых вариантах реализации изобретения две нуклеиновые кислоты или два полипептида согласно настоящему изобретению являются, по существу, идентичными, если они обладают по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% и в некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере 95, 96, 97, 98, 99% идентичностью нуклеотидов или аминокислотных остатков, при сравнении и выравнивании для получения максимального соответствия, что измеряют с применением алгоритма сравнения последовательностей или путем визуального наблюдения. В некоторых вариантах реализации изобретения идентичность присутствует на протяжении участка последовательностей, который имеет длину по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 40-60 остатков, по меньшей мере приблизительно 60-80 остатков, или длину любого целого значения остатков между указанными значениями. В некоторых вариантах реализации изобретения идентичность присутствует на протяжении более длинного участка, чем 60-80 остатков, например на протяжении по меньшей мере приблизительно 80-100 остатков, и в некоторых вариантах реализации
- 11 029958
изобретения последовательности являются, по существу, идентичными на протяжении всех сравниваемых последовательностей, например, на протяжении кодирующего участка последовательности нуклеотидов.
"Консервативная замена аминокислоты" представляет собой такую замену, при которой один аминокислотный остаток заменяют на другой аминокислотный остаток, обладающий аналогичной боковой цепью. Семейства аминокислотных остатков, обладающих близкими боковыми цепями, были описаны в данной области техники, включая основные боковые цепи (например, лизин, аргинин, гистидин), кислые боковые цепи (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженные полярные боковые цепи (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин), неполярные боковые цепи (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бета-разветвленные боковые цепи (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматические боковые цепи (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Например, замена фенилаланина на тирозин представляет собой консервативную замену. Предпочтительно, консервативные замены в последовательностях полипептидов и антител согласно настоящему изобретению не нарушают связывания полипептида или антитела, содержащего данную последовательность аминокислот, с антигеном, с которым связывается полипептид или антитело. Способы идентификации консервативных замен нуклеотидов и аминокислот, которые не нарушают связывания антигена, хорошо известны в данной области техники.
Термин "вектор" в данной заявке означает конструкцию, которая способна доставлять и, как правило, экспрессировать один или более интересующих генов или последовательностей в клетке-хозяине. Примеры векторов включают, но не ограничены перечисленными: вирусные векторы, векторы экспрессии на основе голой ДНК или РНК, плазмидные, космидные или фаговые векторы, векторы экспрессии ДНК или РНК, ассоциированные с катионными конденсирующими агентами, и векторы экспрессии ДНК или РНК, инкапсулированные в липосомы.
Полипептид, антитело, полинуклеотид, вектор, клетка или соединение, которые являются "выделенными", представляют собой полипептид, антитело, полинуклеотид, вектор, клетку или соединение, находящиеся в виде, который не встречается в природе. Выделенные полипептиды, антитела, полинуклеотиды, векторы, клетки или соединения включают такие, которые были очищены до такой степени, что они более не находятся в том виде, в котором они встречаются в природе. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид, антитело, полинуклеотид, вектор, клетка или соединение, которые выделены, являются, по существу, чистыми.
Термин "по существу, чистый" в данной заявке относится к материалу, который по меньшей мере на 50% чистый (т.е. свободный от примесей), по меньшей мере на 90% чистый, по меньшей мере на 95% чистый, по меньшей мере на 98% чистый или по меньшей мере на 99% чистый. Термины "рак" и "раковый" в данной заявке относятся или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, при котором популяция клеток характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают, но не ограничены перечисленными: карциному, бластому, саркому и гематологические виды рака, такие как лимфома и лейкемия.
Термины "опухоль" и "новообразование" в данной заявке относятся к любой массе ткани, которая возникла в результате избыточного роста или пролиферации клеток, либо к доброкачественной (нераковой), либо к злокачественной (раковой), включая предраковые повреждения.
Термин "метастазирование" в данной заявке относится к процессу, с помощью которого рак распространяется или переносится из места происхождения в другие участки организма, с развитием аналогичного ракового повреждения в новом положении. "Метастатическая" или "метастазирующая" клетка представляет собой такую клетку, которая утрачивает адгезионное взаимодействие с соседними клетками и мигрирует через кровоток или лимфу из первичного места заболевания, чтобы внедриться в соседние структуры организма.
Термины "раковая стволовая клетка", и "РСК", и "опухолевая стволовая клетка", и "инициирующая опухоль клетка" используют взаимозаменяемо в данной заявке, и они относятся к раковым клеткам или клеткам опухоли, которые: (1) обладают неограниченным пролиферативным потенциалом; 2) способны к асимметричному делению клеток с образованием одного или более типов потомства дифференцированных клеток, при этом дифференцированные клетки обладают сниженным пролиферативным или дифференцировочным потенциалом; и (3) способны к симметричным делениям клеток для самообновления или самоподдержания. Данные свойства придают раковым стволовым клеткам способность образовывать или формировать опухоль или рак при осуществлении серии трансплантаций хозяину с иммунодефицитом (например, мыши), по сравнению с большинством опухолевых клеток, которые не способны образовывать опухоли. Раковые стволовые клетки совершают самообновление вместо дифференцировки хаотичным образом с образованием опухолей с аномальными типами клеток, которые могут изменяться с течением времени при возникновении мутаций.
Термины "раковая клетка" и "опухолевая клетка" относятся к общей популяции клеток, происходящей из рака, или опухоли, или предракового повреждения, включая как неонкогенные клетки, которые включают основную часть популяции раковых клеток, так и онкогенные стволовые клетки (раковые стволовые клетки). В данной заявке, термины "раковая клетка" или "опухолевая клетка" будут изменять- 12 029958
ся при употреблении вместе с термином "неонкогенные", когда речь будет идти только о клетках, у которых нет способности самообновляться и дифференцироваться, чтобы отличить такие опухолевые клетки от раковых стволовых клеток.
Термин "онкогенные" в данной заявке относится к функциональным особенностям раковой стволовой клетки, включая свойства самообновления (порождения дополнительных онкогенных раковых стволовых клеток) и пролиферации для создания всех других опухолевых клеток (порождение дифференцированных и, следовательно, неонкогенных опухолевых клеток). Термин "онкогенность" в данной заявке относится к способности произвольного образца клеток из опухоли образовывать пальпируемые опухоли в результате серии трансплантаций хозяину с иммунодефицитом (например, мышам). Данное определение также включает обогащенные и/или выделенные популяции раковых стволовых клеток, которые образуют пальпируемые опухоли в результате серии трансплантаций хозяину с иммунодефицитом (например, мышам).
Термин "субъект" относится к любому животному (например, млекопитающему), включая, но не ограничиваясь перечисленными, людей, не относящихся к человеку приматов, псовых, кошачьих, грызунов и тому подобных млекопитающих, которые будут получать конкретное лечение. Обычно, термины "субъект" и "пациент" используют взаимозаменяемо в данной заявке для описания субъекта-человека.
Термин "фармацевтически приемлемый" относится к продукту или соединению, одобренному (или способному получить одобрение) регулирующим органом федерального правительства или правительства штата, или перечисленому в фармакопее США или в другой общепризнанной фармакопее для применения у животных, включая людей.
Термины "фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель или адъювант" или "приемлемый фармацевтический носитель" относятся к вспомогательному веществу, носителю или адъюванту, которые можно вводить субъекту вместе с по меньшей мере одним связывающим агентом (например, антителом) согласно настоящему описанию и которые не нейтрализуют активность связывающего агента. Вспомогательное вещество, носитель или адъювант должны быть нетоксичными при введении со связывающим агентом в дозах, достаточных осуществления терапевтического действия.
Термины "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" или "терапевтическое действие" относятся к количеству связывающего агента, антитела, полипептида, полинуклеотида, малой органической молекулы или другого лекарственного средства, эффективного для "лечения" заболевания или расстройства у субъекта или млекопитающего. В случае рака терапевтически эффективное количество лекарственного средства (например, антитела) обладает терапевтическим действием и, по существу, может уменьшать количество раковых клеток; снижать онкогенность, онкогенную активность или онкогенный потенциал; уменьшать количество или частота раковых стволовых клеток; уменьшать размер опухоли; уменьшать популяцию раковых клеток; ингибировать и/или останавливать инфильтрацию раковых клеток в периферические органы, включая, например, распространение рака в мягкую ткань и кость; ингибировать и/или останавливать метастазирование опухолевых или раковых клеток; ингибировать и/или останавливать рост опухолевых или раковых клеток; облегчать до некоторой степени один или более симптомов, связанных с раком; уменьшать заболеваемость и смертность; улучшать качество жизни; или сочетать такие эффекты. В тех случаях, когда агент, например антитело, предупреждает рост существующих раковых клеток и/или убивает их, его можно назвать цитостатическим и/или цитотоксическим.
Такие термины, как "лечение", или "терапия", или "лечить", или "облегчение", или "облегчать" относятся как к 1) терапевтическим мерам, которые излечивают, замедляют, уменьшают симптомы и/или останавливают прогрессирование диагностированного патологического состояния или расстройства, так и к 2) профилактическим или предупредительным мерам, которые предупреждают или замедляют развитие патологического состояния или расстройства, на которое нацелена данная мера. Таким образом, нуждающиеся в лечении включают тех, кто уже страдает от расстройства; тех, кто предрасположен к данному расстройству; и тех, у кого данное расстройство следует предупредить. В некоторых вариантах реализации изобретения субъекта успешно "лечат" в соответствии со способами согласно настоящему изобретению, если у пациента наблюдается один или более из следующих эффектов: уменьшение количества или полное отсутствие раковых клеток; уменьшение размера опухоли; ингибирование или отсутствие инфильтрации раковых клеток в периферические органы, включая распространение раковых клеток в мягкую ткань и кость; ингибирование или отсутствие метастазирования опухолевых или раковых клеток; ингибирование или отсутствие роста рака; облегчение одного или более симптомов, связанных с конкретным раком; снижение заболеваемости и смертности; улучшение качества жизни; уменьшение онкогенности; уменьшение количества или частоты раковых стволовых клеток; или некоторое сочетание эффектов.
В настоящем описании и формуле изобретения формы единственного числа включают формы множественного числа, если в контексте явно не указано иное.
Должно быть очевидно, что в любой части данной заявки, где варианты реализации описаны вместе с термином "содержащий", также предусмотрены в противном случае аналогичные варианты реализации, описанные в терминах "состоящий из" и/или "состоящий, по существу, из". Также должно быть оче- 13 029958
видно, что в любой части данной заявки, где варианты реализации описаны вместе с формулировкой "состоящий, по существу, из", также предусмотрены в противном случае аналогичные варианты реализации, описанные вместе с формулировкой "состоящий из". В данной заявке предполагают, что термин "и/или", используемый в такой формулировке, как "А и/или В", включает любой из вариантов: А и В; А или В; А (отдельно); и В (отдельно). Аналогичным образом, предполагают, что в объем термина "и/или", используемого в такой формулировке, как "А, В и/или С", входит каждый из следующих вариантов реализации: А, В и С; А, В или С; А или С; А или В; В или С; А и С; А и В; В и С; А (отдельно); В (отдельно) и С (отдельно).
II. Антитела.
Согласно настоящему изобретению предложены агенты, специфично связывающие белки УБОР человека и/или белки ПЬЬ4 человека. Данные агенты в данной заявке называют "агентами, связывающими УЕОР/ПЬЬ4". В объем формулировки "агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4", входят агенты, связывающие только УЕОР, агенты, связывающие только ПЬЬ4, и биспецифические агенты, связывающие как УЕОР, так и ΌΡΕ4. В некоторых вариантах реализации изобретения дополнительно к специфичному связыванию УЕОР и/или ΌΡΕ4, агенты, связывающие УЕОР/ПЬЬ4, дополнительно специфично связывают по меньшей мере одну дополнительную мишень или антиген. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой полипептид. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, специфично связывает УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, специфично связывает ΌΡΕ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, специфично связывающее УЕОР человека и ΌΡΕ4 человека. Полноразмерные последовательности аминокислот (АК) УЕОР человека (УЕОР-А) и ΌΡΕ4 человека известны в данной области техники и подразумеваются в данной заявке в виде 5>ЕО ГО N0:27 (УЕОР) и 8Е0 ГО N0:23 (ПЬЬ4). В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает УЕОР и/или ПЬЬ4 с константой диссоциации (Кс), равной приблизительно 1 мкМ или менее, приблизительно 100 нМ или менее, приблизительно 40 нМ или менее, приблизительно 20 нМ или менее, приблизительно 10 нМ или менее, приблизительно 1 нМ или менее, или приблизительно 0,1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает УЕОР и/или ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 20 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает УЕОР и/или ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 10 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает УЕОР и/или ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает УЕОР и/или ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 0,1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, связывает как УЕОР человека, так и УЕОР мыши с Кс, равной приблизительно 100 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, связывает как УЕОР человека, так и УЕОР мыши с Кс, равной приблизительно 50 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, связывает как ПЬЬ4 человека, так и ПЬЬ4 мыши с Кс, равной приблизительно 100 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, связывает как ПЬЬ4 человека, так и ПЬЬ4 мыши с Кс, равной приблизительно 50 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения константа диссоциации связывающего агента (например, антитела) с УЕОР представляет собой константу диссоциации, которую определяют с применением УЕОР-слитого белка, содержащего по меньшей мере часть УЕОР, иммобилизованного на микрочипе В1асоте. В некоторых вариантах реализации изобретения константа диссоциации связывающего агента (например, антитела) с ПЬЬ4 представляет собой константу диссоциации, которую определяют с применением ПЬЬ4-слитого белка, содержащего по меньшей мере часть ΌΕΕ4, иммобилизованного на микрочипе В1асоте. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ПЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает как УЕОР, так и ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 100 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает как УЕОР, так и ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 50 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает как УЕОР, так и ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 20 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает как УЕОР, так и ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 10 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, связывает как УЕОР, так и ПЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность одного из сайтов связывания антигена может быть
- 14 029958
слабее, чем аффинность другого сайта связывания антигена. Например, Кс одного сайта связывания антигена может составлять приблизительно 1 нМ и Кс второго сайта связывания антигена может составлять приблизительно 10 нМ. В некоторых вариантах реализации изобретения различие в аффинности между двумя сайтами связывания антигена может быть приблизительно двукратным или более, приблизительно трехкратным или более, приблизительно пятикратным или более, приблизительно восьмикратным или более, приблизительно десятикратным или более, приблизительно пятнадцатикратным или более, приблизительно двадцатикратным или более, приблизительно тридцатикратным или более, приблизительно пятидесятикратным или более или приблизительно сократным или более. Модуляция аффинностей двух сайтов связывания антигена может влиять на биологическую активность биспецифического антитела. Например, снижение аффинности сайта связывания антигена к БЬЬ4 или УЕСР может дать желательный эффект, например, пониженную токсичность связывающего агента или повышенный терапевтический индекс. В качестве неограничивающего примера, биспецифическое антитело может содержать (а) первый сайт связывания антигена, который связывает УЕСР человека с Кс в диапазоне от приблизительно 0,1 и до приблизительно 1,0 нМ, и (Ь) второй сайт связывания антигена, который специфично связывает БРЬ4 человека с Кс в диапазоне от приблизительно 0,1 и до приблизительно 20 нМ, от приблизительно 0,5 до приблизительно 20 нМ, от приблизительно 1,0 до 10 нМ. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит две идентичные легкие цепи.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/БЕЕ4 (например, антитело), связывает УЕСР и/или БРЬ4 с концентрацией полумаксимального эффекта (ЕС50), равной приблизительно 1 мкМ или менее, приблизительно 100 нМ или менее, приблизительно 40 нМ или менее, приблизительно 20 нМ или менее, приблизительно 10 нМ или менее, приблизительно 1 нМ или менее, или приблизительно 0,1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/БЕЕ4 (например, антитело), связывает УЕСР и/или БРЬ4 с концентрацией полумаксимального эффекта (ЕС50), равной приблизительно 1 мкМ или менее, приблизительно 100 нМ или менее, приблизительно 40 нМ или менее, приблизительно 20 нМ или менее, приблизительно 10 нМ или менее, приблизительно 1 нМ или менее, или приблизительно 0,1 нМ или менее.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/БЕЕ4. представляет собой антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой рекомбинантное антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой химерное антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой антитело человека. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой антитело 1дА, 1§Б, 1дЕ, 1дС или 1дМ. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой антитело 1дС1. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой антитело 1дС2. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой фрагмент антитела, содержащий сайт связывания антигена. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой биспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой моновалентное, моноспецифическое, бивалентное или мультиспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело конъюгировано с цитотоксической молекулой. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело является выделенным. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело является, по существу, чистым.
Можно проанализировать специфичное связывание агентов, связывающих УЕСЕ/ОЕР4 (например, антител), согласно настоящему изобретению с помощью любого способа, известного в данной области техники. Иммуноанализы, которые можно применять, включают, но не ограничены конкурентными и неконкурентными системами анализа с применением таких методик, как анализ Ыасоте, анализ методом сортировки клеток с возбуждением флуоресценции (РАС8), иммунофлуоресценция, иммуноцитохимия, анализ вестерн-блот, радиоиммуноанализ, ЕЬ1§А, "сэндвич"-иммуноанализ, анализ иммунопреципитации, реакция преципитации, реакция диффузной преципитации в геле, анализ иммунодиффузии, анализ агглютинации, анализ связывания комплемента, иммунорадиометрический анализ, флуоресцентный иммуноанализ, анализ методом гомогенной разрешенной во времени флуоресценции (НТКР) и иммуноанализ на белке А. Такие анализы стандартны и хорошо известны в данной области техники (см., например, Аи8иЬе1 и др., редакторы, 1994-настоящее время, СиггеШ РгоЮсоЕ ίη Мо1еси1аг Вю1о§у, ίοΐιη АПеу & 8ои8, 1пс., Нью-Йорк, Нью-Йорк).
Например, специфичное связывание антитела с УЕСР человека и/или БРЬ4 человека можно определить с применением ЕЬ1§А. Анализ ЕЬ1§А включает получение антигена, покрытие лунок 96луночного микротитрационного планшета антигеном, добавление в лунку антитела или другого связывающего агента, конъюгированного с детектируемым соединением, таким как ферментативный субстрат (например, пероксидаза хрена или щелочная фосфатаза), инкубацию в течение некоторого периода времени и обнаружение присутствия связывающего агента, связанного с антигеном. В некоторых вариантах реализации изобретения связывающий агент или антитело не конъюгировано с детектируемым соединением, но вместо этого в лунку добавляют второе антитело, которое распознает связывающий агент или
- 15 029958
антитело (например, антитело к Ре) и которое конъюгировано с детектируемым соединением. В некоторых вариантах реализации изобретения вместо покрытия лунки антигеном, лунку можно покрыть связывающим агентом или антителом, и можно добавить второе антитело, конъюгированное с детектируемым соединением, после добавления антигена в покрытую лунку. Специалист в данной области техники хорошо осведомлен относительно параметров, которые можно изменить, чтобы повысить детектируемый сигнал, а также относительно других вариантов ЕЫ8Л, известных в данной области техники. В другом примере, специфичное связывание антитела с УЕОР человека и/или 1)1,1,4 человека можно определить, применяя РАСУ. Скрининговый анализ РАСУ может включать получение конструкции кДНК, которая экспрессирует антиген в виде слитого белка, трансфицирование данной конструкцией клеток, экспрессирующих антиген на поверхности клеток, смешивание связывающего агента или антитела с трансфицированными клетками и инкубацию в течение некоторого периода времени. Клетки, связанные связывающим агентом или антителом, можно обнаружить путем применения вторичного антитела, конъюгированного с детектируемым соединением (например, РЕ-конъюгированного антитела к Рс), и проточного питометра. Специалист в данной области техники хорошо осведомлен относительно параметров, которые можно изменить, чтобы оптимизировать детектируемый сигнал, а также относительно других вариантов РАСУ, которые могут улучшить скрининг (например, скрининг для обнаружения блокирующих антител).
Аффинность связывания антитела или другого связывающего агента с антигеном (например, УЕОР или 1)14.4) и скорость диссоциации взаимодействия антитело-антиген можно определить с помощью конкурентного анализа связывания. Один пример конкурентного анализа связывания представляет собой радиоиммуноанализ, включающий инкубацию меченого антигена (например, меченого 3Н или 1251), или его фрагмента или варианта, с интересующим антителом в присутствии возрастающих количеств немеченого антигена, после чего следует детектирование антитела, связанного с меченым антигеном. Аффинность антитела к антигену и скорости диссоциации связывания можно определить по полученным результатам путем анализа графика Скэтчарда. В некоторых вариантах реализации изобретения кинетический анализ В1асоге применяют для определения скоростей ассоциации и диссоциации связывания антител или агентов, которые связывают антиген (например, УЕОР или 1)14,4). Кинетический анализ В1асоге включает анализирование связывания и диссоциации антител с микрочипов, на поверхности которых иммобилизован антиген (например, УЕОР или 1)14,4).
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий УЕОР (например, антитело), специфично связывающий УЕОР человека, при этом агент, связывающий УЕОР (например, антитело), содержит один, два, три, четыре, пять и/или шесть гипервариабельных участков антитела 219Р45 (см. табл. 1). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, содержит один или более гипервариабельных участков 219Р45, два или более гипервариабельных участков 219Р45, три или более гипервариабельных участков 219Р45, четыре или более гипервариабельных участков 219Р45, пять или более гипервариабельных участков 219Р45 или все шесть гипервариабельных участков 219Р45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, связывает УЕОР человека и УЕОР мыши.
_ Таблица 1
219К45
СОК1 тц ΝΥΑΜΗ (δΕζ) ПЗ N0:17)
СОК2 ТЦ ϋΙΝΡδΝΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ. (δΕζ)Π3ΝΟ:18)
сгокз тц ΗΥΟϋΚΥΥΡΕΜΏΥ (δΕζ)Π3ΝΟ:19)
СОК1 лц ΚΑδΕδνΟΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕζ) Ш N0:20)
СОК2 ЛЦ ΑΑδΝφΟδ (δΕφΙϋΝΟάΙ)
сгокз лц 005ΚΕνΡ\νΤΡΟΟ (δΕζ) Ш N0:22)
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий УЕОР (например, антитело), специфично связывающий УЕОР человека, при этом агент, связывающий УЕОР, содержит СОРТ тяжелой цепи, содержащий ΥΥΑΥΥ1ΙI (УЕО II) N0:17), С1Ж2 тяжелой цепи, включающий [)ΙΝΡδ\ΌΚΤδΥΚΗΚΙ4χΚ (УЕО ГО N0:18), и С1Ж3 тяжелой цепи, содержащий I ΙΥΙ)Ι)ΚΥΥΡ1 .Α1Ι)Υ (УЕО ГО N0:19). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, дополнительно содержит С1Ж1 легкой цепи, содержащий ΚΛΥΓΝΥΟΥΥΌΡχРМК (У ЕС) ГО N0:20), С1Ж2 легкой цепи, содержащий ЛЛУХООУ (УЕО ГО N0:21), и С1Ж3 легкой цепи, содержащий ООУКЕУРАТРОО (УЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, содержит: (а) С1Ж1 тяжелой цепи, содержащий ΥΥΆΥ1ΙI (УЕО ГО N0:17), С1Ж2 тяже- 16 029958
лой цепи, содержащий ΌΙΝΡδΝΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ (δΕΟ ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:19), и (Ь) 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΗΑδΕδ\Ό\Υ0ΙδΕ\1Κ (δΕΟ ΙΌ N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδΝΟΟδ (δΕΟ ΙΌ N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ΟΟδΙΗ ΑΊΑνΤΕΟΟ (δΕΟ ΙΌ N0:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий νΕΟΡ (например, антитело), специфично связывающий νΕΟΡ человека, при этом агент, связывающий νΕΟΡ, содержит: (а) 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий №ΥνΜΗ (δΕΟ ΙΌ N0:17), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (Ь) 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ (δΕΟ ΙΌ N0:18), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (с) 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:19), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (ά) 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (δΕΟ ΙΌ N0:20), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (е) 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (δΕΟ ΙΌ N0:21), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; и (ί) 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий 00δΚΕνΡ\νΤΡΟΟ (δΕΟ ΙΌ N0:22), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот. В некоторых вариантах реализации изобретения замены аминокислот представляют собой консервативные замены.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий νΕΟΡ (например, антитело), специфично связывающий νΕΟΡ, при этом агент, связывающий νΕΟΡ, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ N0:11, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ N0:11. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ N0:11, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую δΕΟ ΙΌ N0:11, и вариабельную область легкой цепи, содержащую δΕΟ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из δΕΟ ΙΌ N0:11, и вариабельную область легкой цепи, состоящую, по существу, из δΕΟ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит тяжелую цепь, содержащую δΕΟ ΙΌ N0:49, и легкую цепь, содержащую δΕΟ ΙΌ N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело или другой агент, связывающий νΕΟΡ, содержит тяжелую цепь, содержащую δΕΟ ΙΌ N0:7, и легкую цепь, содержащую δΕΟ ΙΌ N0:8.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, связывает νΕΟΡ с Кс, равной приблизительно 10 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, связывает νΕΟΡ с Кс, равной приблизительно 1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, связывает νΕΟΡ с Кс, равной приблизительно 0,1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, связывает νΕΟΡ с Кс, равной приблизительно 0,01 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один аминокислотный остаток в по меньшей мере одном гипервариабельном участке агента, связывающего νΕΟΡ, заменен на отличную аминокислоту таким образом, что аффинность агента, связывающего νΕΟΡ, к νΕΟΡ изменяется. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность агента, связывающего νΕΟΡ, повышается. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность агента, связывающего νΕΟΡ, снижается. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, связывает νΕΟΡ человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, связывает νΕΟΡ человека и νΕΟΡ мыши.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, содержит тяжелую цепь и легкую цепь антитела 219К45 (с лидерной последовательностью или без). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, представляет собой антитело 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ, включает, состоит, по существу, из или состоит из антитела 219К45.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ (например, антитело),
- 17 029958
связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на УБОР, что и антитело согласно настоящему изобретению. В другом варианте реализации, агент, связывающий УЕОР, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на УЕОР, который перекрывается с эпитопом на УЕОР, связываемым антителом согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на УЕОР, что и антитело 219К45. В другом варианте реализации, агент, связывающий УЕОР, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на УЕОР, который перекрывается с эпитопом на УЕОР, связываемым антителом 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, ингибирует связывание УЕОР с по меньшей мере одним рецептором УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, ингибирует связывание УЕОР человека с УЕОРЕ-1 или УЕОРЕ-2. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, специфично связывает УЕОР и модулирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, специфично связывает УЕОР и ингибирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР, специфично связывает УЕОР и ингибирует рост опухоли.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), специфично связывающийет ΌΡΡ4 человека, при этом агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), содержит один, два, три, четыре, пять и/или шесть гипервариабельных участков антитела 21Е79 (см. табл. 2). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит один или более гипервариабельных участков 21Е79, два или более гипервариабельных участков 21Е79, три или более гипервариабельных участков 21Е79, четыре или более гипервариабельных участков 21Е79, пять или более гипервариабельных участков 21Е79 или все шесть гипервариабельных участков 21Е79. В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), который специфично связывает ΌΡΡ4 человека, при этом агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), содержит один, два, три, четыре, пять и/или шесть гипервариабельных участков антитела 21Е75 (см. табл. 2). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит один или более гипервариабельных участков 21Е75, два или более гипервариабельных участков 21Е75, три или более гипервариабельных участков 21Е75, четыре или более гипервариабельных участков 21Е75, пять или более гипервариабельных участков 21Е75 или все шесть гипервариабельных участков 21Е75. В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), который специфично связывает ΌΡΡ4 человека, при этом агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), содержит один, два, три, четыре, пять и/или шесть гипервариабельных участков антитела 21Е83 (см. табл. 2). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит один или более гипервариабельных участков 21Е83, два или более гипервариабельных участков 21Е83, три или более гипервариабельных участков 21Е83, четыре или более гипервариабельных участков 21Е83, пять или более гипервариабельных участков 21Е83 или все шесть гипервариабельных участков 21Е83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, связывает ΌΡΡ4 человека и ΌΡΡ4 мыши.
_ Таблица 2
21К79 21К75 21К83
СОК1ТЦ ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕЦ ГО N0:13) ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕЦГОИОЛЗ) ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ГО N0:13)
СЭК2 ТЦ ΥΙΑΝΥΝΚΑΤΝΥΝ0ΚΡΚΟ (8ЕЦЮЦО:14) ΥΙΑΟΥΚΏΑΤΝΥΝΟΚΕΚΟ (8ЕЦГОМ):59) ΥΙ3ΝΥΝΚΑΤΝΥΝ0ΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:65)
СЭКЗ ТЦ ΚΟΥϋΥΟνΟΜΟΥ (ЗЕЦ ГО N0:16) ΚΟΥΟΥΟνΟΜΟΥ (ЗЕЦГОИОЛб) ΚΟΥΟΥΟνΟΜΟΥ (δΕΟ ГО N0:16)
СОК1лц ΚΑδΕδνΏΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20) ΚΑδΕδΥΟΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20) ΚΑδΕδνΏΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20)
СЭК2 ЛЦ ΑΑδΝφΟδ (ЗЕЦ ГО N0:21) ΑΑδΝφΟδ (ЗЕ() ГО N0:21) ΑΑδΝφΟδ (δΕΟ ГО N0:21)
сэкз лц ЦЦЗКЕУРЗУТРОО (δΕΟ ГО N0:22) 008КЕХ'Р\УТРСС (δΕΟ ГО N0:22) 005КЕХ'Р\УТРСС (δΕΟ ГО N0:22)
В некоторых вариантах реализации изобретения С1Ж1 тяжелой цепи антитела, связывающего ΌΡΡ4, представляет собой минимальный СРК4 ТЦ, включающий ΑΥΥΙΗ (8ЕР ГО N0:79).
В некоторых вариантах реализации изобретения связывающий агент представляет собой антитело, связывающее ΌΡΡ4 человека и содержащее С1Ж1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8ЕО ГО N0:13) или ΑΥΥΙΗ (8Ер ГО N0:79), СПЕ2 тяжелой цепи, содержащий ΥIX1X2ΥX3X4ΑΤNΥN^ΚРΚО (8Ер ГО N0:80), где Х1 представляет собой серин или аланин, Х2 представляет собой серин, аспарагин или глицин, Х3 представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту, и СРЕЗ тяжелой цепи, содержащий Е1)У1)У1)У'О\ГОУ (8ЕО ГО N0:16); и С1Ж1 легкой
- 18 029958
цепи, содержащий ΚΑδΕδνΌΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ΙΌ N0:20), СЭК2 легкой цепи, содержащий ΑΑδΝφΟδ (δΕΟ ГО N0:21), и СЭК3 легкой цепи, содержащий φφδΚΕνΡνΤΡΟΟ (δΕΟ ΙΌ N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ЭЬЬ4 (например, антитело), который специфично связывает ЭЬЬ4 человека, при этом агент, связывающий ОЬЬ4, содержит СЭК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13), СЭК2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:14), и СЭК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ЭЬЬ4, дополнительно содержит СЭК1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20), СЭК2 легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (δΕΟ ГО N0:21), и СЭК3 легкой цепи, содержащий 00δΚΕνΡ\νΤΡΟΟ (δΕΟ ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит: (а) СЭК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ГО N0:13), СЭК2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:14), и СЭК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ГО N0:16), и (Ь) СЭК1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20), СЭК2 легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (δΕΟ ГО N0:21), и СЭК3 легкой цепи, содержащий φφδΚΕνΡνΤΡΟΟ (δΕΟ ΙΌ N0:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ОЬЬ4 (например, антитело), который специфично связывает ОЬЬ4 человека, при этом агент, связывающий ОЬЬ4, содержит: (а) СЭК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (Ь) СЭК2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:14), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (с) СЭК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ГО N0:16), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (6) СЭК1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (е) СЭК2 легкой цепи, включающий ΑΑδN^Οδ (δΕΟ ГО N0:21), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; и (£) СЭК3 легкой цепи, содержащий ΟΟδΚΕνΡνΤΡΟΟ (δΕΟ ГО N0:22), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот. В некоторых вариантах реализации изобретения замены аминокислот представляют собой консервативные замены.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ОЬЬ4 (например, антитело), который специфично связывает ОЬЬ4, при этом агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:10, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:10. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:10, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, включающую δΕΟ ГО N0:10, и вариабельную область легкой цепи, включающую δΕΟ ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ЭЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из δΕΟ ГО N0:10, и вариабельную область легкой цепи, состоящую, по существу, из δΕΟ ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит тяжелую цепь, содержащую δΕΟ ГО N0:48, и легкую цепь, содержащую δΕΟ ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело или другой агент, связывающий ОЬЬ4, содержит тяжелую цепь, содержащую δΕΟ ГО N0:6, и легкую цепь, содержащую δΕΟ ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой биспецифическое антитело.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ОЬЬ4 (например, антитело), который специфично связывает ОЬЬ4 человека, при этом агент, связывающий ОЬЬ4, содержит СЭК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ГО N0:13), СЭК2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑΟΥΚ^ΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:59), и СЭК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ГО N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, дополнительно содержит СЭК1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20), СЭК2 легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (δΕΟ ГО N0:21), и СЭК3 легкой цепи, содержащий φφδΚΕνΡνΤΡΟΟ (δΕΟ ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит: (а) СЭК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ГО N0:13), СЭК2
- 19 029958
тяжелой цепи, содержащий У1АСУ<ОАТУУУО<Е<С (ЗЕО ГО N0:59), и СГОК3 тяжелой цепи, содержащий КОУОУЭУСМЭУ (ЗЕО ГО N0:16), и (Ь) СГОК1 легкой цепи, содержащий КЛ§Е§У0ЫУС18РМК (ЗЕО ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий ААЗУОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СГОК3 легкой цепи, содержащий ООЗ<ЕУР\\'ТЕС,С, (ЗЕО ГО N0:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ОЬЬ4 (например, антитело), который специфично связывает ОЬЬ4 человека, при этом агент, связывающий ПЬЬ4, содержит: (а) СГОК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:13), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (Ь) СГОК2 тяжелой цепи, содержащий У1АСУ<ОАТУУУ0<Е<С (ЗЕО ГО N0:59), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (с) СГОК3 тяжелой цепи, содержащий КОУОУЭУСМПУ (ЗЕО ГО N0:16), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (Д) СГОК1 легкой цепи, содержащий РАЗЕЗУЭУУС1ЗЕМК (ЗЕО ГО N0:20), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (е) СГОК2 легкой цепи, содержащий ААЗУОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; и (£) СГОК3 легкой цепи, содержащий ООЗКЕУРХУТЕСС (ЗЕО ГО N0:22), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот. В некоторых вариантах реализации изобретения замены аминокислот представляют собой консервативные замены.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), который специфично связывает ΌΡΡ4, при этом агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:58, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:58. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:58, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую ЗЕО ГО N0:58, и вариабельную область легкой цепи, содержащую ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из ЗЕО ГО N0:58, и вариабельную область легкой цепи, состоящую, по существу, из ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит тяжелую цепь, содержащую ЗЕО ГО N0:56, и легкую цепь, содержащую ЗЕО ГО N0:8.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), который специфично связывает ΌΡΡ4 человека, при этом агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит СГОК1 тяжелой цепи, содержащий ТАУУ1Н (ЗЕО ГО N0:13), СГОК2 тяжелой цепи, содержащий ΥIЗNΥNКΑΤNΥN^КЕКС (ЗЕО ГО N0:65), и СГОК3 тяжелой цепи, содержащий КОУОУЭУСМПУ (ЗЕО ГО N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, дополнительно содержит СГОК1 легкой цепи, содержащий РАЗЕЗУОУУС1ЗЕМК (ЗЕО ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий ААЗУОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СГОК3 легкой цепи, содержащий ООЗКЕУРХУТЕСС (ЗЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит: (а) СГОК1 тяжелой цепи, содержащий ТАУУ1Н (ЗЕО ГО N0:13), СГОК2 тяжелой цепи, содержащий У1§НУ№КА.ТНУНрКЕКС (ЗЕО ГО N0:65), и СГОК3 тяжелой цепи, содержащий КОУОУЭУСМЭУ (ЗЕО ГО N0:16), и (Ь) СГОК1 легкой цепи, содержащий КАЗЕЗУЭНУС18ЕМК (ЗЕО ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий ААЗУОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СГОК3 легкой цепи, содержащий ООЗ<КУР\\'ТЕС,С, (ЗЕО ГО N0:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ΌΡΡ4 (например, антитело), который специфично связывает ΌΡΡ4 человека, при этом агент, связывающий ΌΡΡ4, содержит: (а) СГОК1 тяжелой цепи, содержащий ТАУУ1Н (ЗЕО ГО N0:13), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (Ь) СГОК2 тяжелой цепи, содержащий У1ЗУУУРАТУУУ0КЕ1<С (ЗЕО ГО N0:65), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (с) СГОК3 тяжелой цепи, содержащий КОУОУЭУСМПУ (ЗЕО ГО N0:16), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (Д) СГОК1 легкой цепи, содержащий КАЗЕЗУЭНУС1ЗЕМК (ЗЕО ГО N0:20), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; (е) СГОК2 легкой цепи, содержащий ААЗУОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), или его вариант, содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот; и (£) СГОК3 легкой цепи, содержащий ООЗКЕУРХУТЕСС (ЗЕО ГО N0:22), или его вариант,
- 20 029958
содержащий 1, 2, 3 или 4 замены аминокислот. В некоторых вариантах реализации изобретения замены аминокислот представляют собой консервативные замены.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий ОЬЬ4 (например, антитело), который специфично связывает ОЬЬ4, при этом агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО N0:64, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:64. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:64, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8Е0 ГО N0:64, и вариабельную область легкой цепи, содержащую 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8Е0 ГО N0:64, и вариабельную область легкой цепи, состоящую, по существу, из 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит тяжелую цепь, содержащую 8Е0 ГО N0:62, и легкую цепь, содержащую 8Е0 ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения агент представляет собой биспецифическое антитело.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, представляет собой антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую 8Е0 ГО N0:5, и легкую цепь, содержащую 8Е0 ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой биспецифическое антитело.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, связывает ОЬЬ4 с Кс, равной 25 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, связывает ОЬЬ4 с К,с равной 10 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, связывает ОЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 1 нМ илименее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, связывает ОЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 0,1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретенияагент, связывающий ОЬЬ4, связывает ОЬЬ4 с Кс, равной приблизительно 0,01 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один аминокислотный остаток в по меньшей мере одном гипервариабельном участке агента, связывающего ОЬЬ4, заменен на отличную аминокислоту таким образом, что аффинность агента, связывающего ОЬЬ4, к ОЬЬ4 изменяется. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность агента, связывающего ОЬЬ4, повышается. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность агента, связывающего ОЬЬ4, снижается.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит тяжелую цепь и легкую цепь антитела 21К79 (с лидерной последовательностью или без). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, представляет собой антитело 21К79.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит, состоит, по существу, из или состоит из антитела 21К79.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержитвариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела 21К75. Внекоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит тяжелую цепь и легкую цепь антитела 21К75 (с лидерной последовательностью или без). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, представляет собой антитело 21К75.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит, состоит, по существу, из или состоит из антитела 21К75.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит тяжелую цепь и легкую цепь антитела 21К83 (с лидерной последовательностью или без). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, представляет собой антитело 21К83.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4, содержит, состоит, по
- 21 029958
существу, из или состоит из антитела 21К83.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, связывает Ν-концевой фрагмент ОЬЬ4 человека (аминокислоты 1-191 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ:24). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, связывает эпитоп, содержащий аминокислоты 40-47 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ:25. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, связывает эпитоп, содержащий аминокислоты 113-120 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ:25. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, связывает эпитоп, содержащий аминокислоты 40-47 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ:25 и аминокислоты 113 - 120 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ:25. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4 (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ПЬЬ4, что и антитело согласно настоящему изобретению. В другом варианте реализации агент, связывающий ПЬЬ4, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на ПЬЬ4, который перекрывается с эпитопом на ПЬЬ4, связываемым антителом согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4 (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ПЬЬ4, что и антитело 21К79. В другом варианте реализации, агент, связывающий ПЬЬ4, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на ПЬЬ4, который перекрывается с эпитопом на ПЬЬ4, связываемым антителом 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ОЬЬ4 (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ПЬЬ4, что и антитело 21К75. В другом варианте реализации, агент, связывающий ПЬЬ4, представляет собой антитело, связывающее эпитоп на ПЬЬ4, который перекрывается с эпитопом на ПЬЬ4, связываемым антителом 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4 (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ПЬЬ4, что и антитело 21К83. В другом варианте реализации, агент, связывающий ПЬЬ4, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на ПЬЬ4, который перекрывается с эпитопом на ПЬЬ4, связываемым антителом 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, ингибирует связывание ПЬЬ4 с по меньшей мере одним рецептором Νοίαίι. В некоторых вариантах реализации изобретения рецептор Νοίαΐι представляет собой ΝοΙαΙιΕ Νοΐο!2, ΝοΙα1ι3 или ΝοΙα1ι4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, специфично связывает ОЬЬ4 и ингибирует активность ПЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, специфично связывает ПЬЬ4 и ингибирует передачу сигналов Νοίοΐι. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, специфично связывает ОЬЬ4 и модулирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, специфично связывает ОЬЬ4 и ингибирует рост опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, специфично связывает ПЬЬ4 и ингибирует онкогенность. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ПЬЬ4, специфично связывает ОЬЬ4 и уменьшает количество или частоту РСК в опухоли.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, который представляет собой биспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и второй сайт связывания антигена, связывающий мишень, ассоциированную с опухолью. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СГОЕ1 тяжелой цепи, содержащий ΝΥΑΜΗ (8ЕО ГО ΝΟ:17), СГОЕ2 тяжелой цепи, содержащий П1ХР§ЫОКТ§УКЕКРКК (8ЕО ГО ΝΟ:18), и СГОЕ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΏΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (8ЕО ГО ΝΟ:19). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело дополнительно содержит: СГОЕ1 легкой цепи, содержащий КА8Е8УОКХО18РМК (8ЕО ГО ΝΟ:20), СГОЕ2 легкой цепи, содержащий ΛΆδΝΟϋδ (8ЕО ΙΌ ΝΟ:21), и СГОЕ3 легкой цепи, содержащий ОО8КЕУРАТРСС (8ЕО ГО ΝΟ:22). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит (а) СГОЕ1 тяжелой цепи, содержащий ΝΥΑΜΗ (8ЕО ГО ΝΟ:17), С1)Н2 тяжелой цепи, содержащий 1)141^84(..10^2^141241/ (8ЕО ГО ΝΟ:18), и С1)Ю тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΟΙ<ΥΥΡΕΜΌΥ (8ЕО ΙΌ ΝΟ:19), и (Ъ) СГОЕ1 легкой цепи, содержащий КА8Е8УОМУО18РМК (8ЕО ГО ΝΟ:20), С1)Н2 легкой цепи, содержащий АА8ЫРО8 (8ЕО ГО ΝΟ:21), и СГОЕ3 легкой цепи, содержащий ОО8КЕУРАТРСС (8ЕО ГО ΝΟ:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО ΝΟ:11. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело дополнительно содержит вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с
- 22 029958
δΕΟ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий УЕ0Р/ПЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:11, и вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с δΕΟ ΙΌ N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий УЕ0РГОЬЬ4, который представляет собой биспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕ0РГОРЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕ0РГОРЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, и второй сайт связывания антигена, связывающий мишень, ассоциированную с опухолью. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕ0РГОРЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит ί'.'ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13) или ΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:79), СЭК.2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΧιΧ2ΥΧ3Χ4ΑΤΝΥΝ0ΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:80), где Х1 представляет собой серин или аланин, Х2 представляет собой серин, аспарагин или глицин, Х3 представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту, и ί'.'ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:16); и С1Ж1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδνΟΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ΙΌ N0:20), ί'.’ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδΝΟΟδ (δΕΟ ΙΌ N0:21), и ί'.’ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ΟΟδΚΕΥΡνΤΡΟΟ (δΕΟ ΙΌ N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕ0Ρ/ΌΡΡ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее: первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ΌΕΡ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит ί'.’ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13), ί'.’ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΑΝΥΝΚΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:14), ΥΙδδΥΝΟΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:15), ΥΙΑΟΥΚΌΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:59) или ΥΙδΝΥΝΚΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:65), и С1Ж тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, содержащий ί'.'ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13), ί'.’ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΑΝΥΝΚΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:14), и СОК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, содержащий СОК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13), СОК2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙδδΥΝΟΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:15), и СОК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, содержащий СОК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13), СОК2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΑΟΥΚΌΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:59), и СОК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, содержащий СОК1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ΙΌ N0:13), СОК2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙδΝΥΝΚΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ΙΌ N0:65), и ί'.’ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0:16). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело дополнительно содержит: СОЮ легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδΥΌΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20), ί'.’ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδΝΟΟδ (δΕΟ ГО N0:21), и ί'.’ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ΟΟδΚΕΥΡνΤΡΟΟ (δΕΟ ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΡΡ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит (а) ΟΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ГО N0:13), ί'.’ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΑΝΥΝΚΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:14), ΥΙδδΥΝΟΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:15), ΥΙΑΟΥΚΌΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:59) или ΥΙδΝΥΝΚΑΤΝΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ГО N0:65), и С1Ж тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δΕΟ ГО N0:16), и (Ь) ί'.’ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδνΟΝΥΟΙδΡΜΚ (δΕΟ ГО N0:20), ί'.’ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑδΝΟΟδ (δΕΟ ГО N0:21), и ί'.’ΌΚ3 легкой цепи, содержащий ΟΟδΚΕΥΡνΤΡΟΟ (δΕΟ ГО N0:22).
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΟΡΡ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:9, δΕΟ ГО N0:10, δΕΟ ГО N0:58 или δΕΟ ГО N0:64. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело дополнительно содержит вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с δΕΟ ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изо- 23 029958
бретения биспецифический агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с 8ЕО ГО N0:9, 8Е0 ГО N0:10, 8Е0 ГО N0:58 или 8Е0 ГО N0:64; и/или вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен агент, связывающий УЕ0РГОЬЬ4 (например, биспецифическое антитело), который специфично связывает УЕОР человека и ОЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит: а) первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и Ь) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий №ΥΑΜΗ (8Е0 ГО N0:17), СГОР2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡ8NОРΤ8УΚЕΚΡΚР (8Е0 ГО N0:18), и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (8Е0 ГО N0:19); и при этом второй сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8Е0 ГО N0:13) или ΑΥΥΙΗ (8Е0 ГО N0:79), СГОР2 тяжелой цепи, содержащий ΥIX1X2ΥXзX4ΑΤNΥN^ΚΡΚО (8Е0 ГО N0:80), где Х1 представляет собой серин или аланин, Х2 представляет собой серин, аспарагин или глицин, Х3 представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту, и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΡΌΥΌΥΌ\ΟΜΌΥ (8ЕО ΙΌ N0:16); и 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий ΗΑ8Ρ8\Ό\ΥΟΙ8Ε\1Κ (8ЕО ΙΌ N0:20), СГОР2 легкой цепи, содержащий АА8Х0О8 (8Е0 ГО N0:21), и СГОР3 легкой цепи, содержащий 008КЕУР\УТРОО (8Е0 ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий \ЕОР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий ΥΥΧΑΜΗ (8Е0 ΙΌ N0:17), СГОР2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡ8NОΚΤ8ΥΚЕΚΡΚΚ (8Е0 ГО N0:18), и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΏΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СЭР1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8Е0 ΙΌ N0:13), СОР2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚО (8ЕО ГО N0:14), ΥΙ88Υ\ΟΑΤ'\Υ\ΟΚΕΚΟ (8ЕО ΙΌ N0:15), ΥΙΑΟΥΚΟΑΤΑΥΑΟΚΕΚΟ (8ЕО ΙΌ N0:59) или У^ХУХРАТХУХОКРКО (8Е0 ΙΌ N0:65), и СЭР3 тяжелой цепи, содержащий ΡΌΥΌΥΌ\ΟΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СЭР1 легкой цепи, включающий РΑ8Е8У^NУОI8ΡΜΚ (8Е0 ГО N0:20), СГОР2 легкой цепи, содержащий АА8А0О8 (8Е0 ГО N0:21), и СГОР3 легкой цепи, содержащий 008КЕУРУТРОО (8Е0 ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий ΥΥΧΑΜΗ (8Е0 ΙΌ N0:17), СОР2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡ8NОРΤ8УΚЕΚΡΚР (8Е0 ГО N0:18), и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΏΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СЭР1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8Е0 ΙΌ N0:13), СЭР2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑ.ΤNΥN^ΚΡΚО (8Е0 ГО N0:14), и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΡΌΥΌΥΌ\ΟΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СЭР1 легкой цепи, содержащий РΑ8Е8У^NУОI8ΡΜΚ (8Е0 ГО N0:20), СГОР2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8Υ0Ο8 (8Е0 ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий 008КЕУРХУТРОО (8Е0 ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой 219Р45-МВ-21Р79.
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΚΥΑΜΗ (8Е0 ΙΌ N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡ8NОРΤ8УΚЕΚΡΚР (8ЕО ГО N0:18), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΏΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (8ЕО ΙΌ N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (8ЕО ΙΌ N0:13), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙ88Υ\ΟΑΤ\Υ\ΟΚΕΚΟ (8ЕО ΙΌ N0:15), и 0ΌΚ3 тяжелой цепи, содержащий ΡΌΥΌΥΌ\ΟΜΌΥ (8Е0 ΙΌ N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 легкой цепи, содержащий РΑ8Е8У^NУОI8ΡΜΚ (8Е0 ГО N0:20), 0ΌΚ2 легкой цепи, содержащий ΑΑ8Υ0Ο8 (8Е0 ГО N0:21), и 0ΌΚ3 легкой цепи, содержащий 008ΚΕ\ΡΑΤΕΟΟ (8Е0 ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой 219Ρ45-ΜΒ-21Μ18.
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающийет УЕОР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит 0ΌΚ1 тяжелой цепи, содержащий ΥΥΧΑΜΗ (8Е0 ΙΌ N0:17), 0ΌΚ2 тяжелой цепи, содержащий
- 24 029958
БЮТЗ^КТЗУКЕКРКК (ЗЕО ΙΌ N0:18), и СБК3 тяжелой цепи, содержащий НУВБКУУРЬМБУ (ЗЕО ГО N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:13), СБК2 тяжелой цепи, содержащий У1АС¥КОАТ'\¥\ОКЕКС (ЗЕО ГО N0:59), и СБК3 тяжелой цепи, содержащий КБУБУБУОМБУ (ЗЕО ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СБК1 легкой цепи, содержащий К.АЗЕЗУБУУС1ЗЕМК (ЗЕО ГО N0:20), СГОР2 легкой цепи, содержащий ААЗУОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СГОР3 легкой цепи, содержащий ООЗК-ЕУРХУТРСС (ЗЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой 219К45-МВ-21К75.
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий БЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий УУ\¥МН (ЗЕО ГО N0:17), СГОК 2 тяжелой цепи, содержащий ^INРЗNОКΤЗΥКЕКЕКК (ЗЕО ГО N0:18), и СБК3 тяжелой цепи, содержащий I ОГО1Ж¥¥РЕ\11)¥ (ЗЕО ГО N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:13), СБК2 тяжелой цепи, содержащий ΥIЗNΥNКΑΤNΥN^КЕКО (ЗЕО ГО N0:65), и СБК3 тяжелой цепи, содержащий К^Υ^Υ^УОМ^Υ (ЗЕО ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СГОК1 легкой цепи, содержащий КΑЗЕЗУ^NΥОIЗРМК (ЗЕО ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий ААЗУОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СГОК3 легкой цепи, содержащий ООЗК-ЕУРХУТРСС (ЗЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой 219К45-МВ-21К83.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4 (например, биспецифическое антитело), содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:58 или ЗЕО ГО N0:64, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11; вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:58 или ЗЕО ГО N0:64; и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:9, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательностей с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:10, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательностей с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:58, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательностей с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:64, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательностей с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую ЗЕО
- 25 029958
ΙΌ N0:9, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, содержащие 8ЕЦ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8ЕЦ ΙΌ N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8ЕЦ ΙΌ N0:10, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, содержащие 8ЕЦ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8ЕЦ ΙΌ N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8ЕЦ ΙΌ N0:58, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, содержащие 8ЕЦ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8ЕЦ ΙΌ N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8Е0 ΙΌ N0:64, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, содержащие 8ЕЦ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:9, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, состоящие, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:10, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, состоящие, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:58, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, состоящие, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифический агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую, по существу, из 8ЕЦ ΙΌ N0:64, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, состоящие, по существу, из 8Е0 ΙΌ N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи из антитела к АЕОР - 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 - 21М18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 - 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 - 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 - 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЕЕ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи из антитела к АЕОР - 219К45, вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 - 21К79, и две идентичные вариабельные области легкой цепи. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи из антитела к АЕОР - 219К45, вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 - 21М18, и две идентичные вариабельные области легкой цепи. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи из антитела к АЕОР 219К45, вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 - 21К75, и две идентичные вариабельные области легкой цепи. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЕЕ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи из антитела к АЕОР - 219К45, вариабельную область тяжелой цепи из антитела к ΌΕΕ4 21К83, и две идентичные вариабельные области легкой цепи.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый домен СИ3 и второй домен СИ3. каждый из которых модифицирован таким образом, чтобы вызвать образование гетеромультимеров. В некоторых вариантах реализации изобретения первый и второй домены СИ3 модифицируют с применением методики "выступы-во-впадины". В некоторых вариантах реализации изобретения первый и второй домены СИ3 содержат замены аминокислот, которые приводят к изменению электростатических взаимодействий. В некоторых вариантах реализации изобретения первый и второй домены СИ3 содержат замены аминокислот, которые приводят к изменению гидрофобных/гидрофильных взаимодействий.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит константные области тяжелой цепи, выбранные из группы, состоящей из: (а) первой константной области ΙβΟ1 человека, в которой аминокислоты в положениях 253 и 292 заменены на глутамат или аспартат, и второй константной области ΙβΟ1 человека, в
- 26 029958
которой аминокислоты в положениях 240 и 282 заменены на лизин; (Ь) первой константной области 1дО2 человека, в которой аминокислоты в положениях 249 и 288 заменены на глутамат или аспартат, и второй константной области 1дО2 человека, в которой аминокислоты в положениях 236 и 278 заменены на лизин; (с) первой константной области 1дО3 человека, в которой аминокислоты в положениях 300 и 339 заменены на глутамат или аспартат, и второй константной области 1дО3 человека, в которой аминокислоты в положениях 287 и 329 заменены на лизин; и (ά) первой константной области 1дО4 человека, в которой аминокислоты в положениях 250 и 289 заменены на глутамат или аспартат, и второй константной области 1дО4, в которой аминокислоты в положениях 237 и 279 заменены на лизин.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит первую константную область 1дО1 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 253 и 292, при этом указанные аминокислоты представляют собой глутамат или аспартат, и вторую константную область 1дО1 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 240 и 282, при этом указанные аминокислоты представляют собой лизин. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит первую константную область 1дО2 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 249 и 288, при этом указанные аминокислоты представляют собой глутамат или аспартат, и вторую константную область 1дО2 человека с заменами аминокислот в положениях 236 и 278, при этом указанные аминокислоты представляют собой лизин. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит первую константную область 1дО3 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 300 и 339, при этом указанные аминокислоты представляют собой глутамат или аспартат, и вторую константную область 1дО2 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 287 и 329, при этом указанные аминокислоты представляют собой лизин. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит первую константную область 1дО4 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 250 и 289, при этом указанные аминокислоты представляют собой глутамат или аспартат, и вторую константную область 1дО4 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 237 и 279, при этом указанные аминокислоты представляют собой лизин.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит первую константную область 1дО2 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 249 и 288, при этом указанные аминокислоты представляют собой глутамат, и вторую константную область 1дО2 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 236 и 278, при этом указанные аминокислоты представляют собой лизин. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое содержит первую константную область 1дО2 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 249 и 288, при этом указанные аминокислоты представляют собой аспартат, и вторую константную область 1дО2 человека, содержащую замены аминокислот в положениях 236 и 278, при этом указанные аминокислоты представляют собой лизин.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:7. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:5. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:56. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:62. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело дополнительно содержит легкую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:7, тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:5 и две легкие цепи с последовательностью 8Еф ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:7, тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:6 и две легкие цепи с последовательностью 8Еф ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:7, тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:56 и две легкие цепи с последовательностью 8Еф ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:7, тяжелую цепь с последовательностью 8Еф ГО N0:62 и две легкие цепи с последовательностью 8Еф ГО N0:8. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, связывающее УЕОР с Кс, равной приблизительно 50 нМ или менее, приблизительно 25 нМ или менее, приблизительно 10 нМ или менее, прибли- 27 029958
зительно 1 нМ или менее, или приблизительно 0,1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает ЭШ4 с Кс, равной приблизительно 50 нМ или менее, приблизительно 25 нМ или менее, приблизительно 10 нМ или менее, приблизительно 1 нМ или менее, или приблизительно 0,1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСР/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает УЕСР с Кс, равной приблизительно 50 нМ или менее, и связывает ΌΡΡ4 с Кс, равной приблизительно 50 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело связывает УЕСР с Кс, равной приблизительно 25 нМ или менее, и связывает ΌΡΡ4 с Кс, равной приблизительно 25 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело связывает УЕСР с Кс, равной приблизительно 10 нМ или менее, и связывает ΌΡΡ4 с Кс, равной приблизительно 10 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело связывает УЕСР с Кс, равной приблизительно 1 нМ или менее, и связывает ΌΡΡ4 с Кс, равной приблизительно 1 нМ или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСР/ОРЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее один сайт связывания антигена с аффинностью связывания, которая слабее, чем аффинность связывания второго сайта связывания антигена. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело может связывать УЕСР с Кс в диапазоне приблизительно от 0,1 до 1 нМ и может связывать ΌΡΡ4 с К в диапазоне приблизительно от 1 до 10 нМ. Или биспецифическое антитело может связывать УЕСР с Кс в диапазоне приблизительно от 1 до 10 нМ и может связывать ΌΡΡ4 с Кс в диапазоне приблизительно от 0,1 до 1 нМ. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело может связывать ΌΡΡ4 с Кс в диапазоне приблизительно от 0,1 до 1 нМ и может связывать УЕСР с К в диапазоне приблизительно от 1 до 10 нМ. Или биспецифическое антитело может связывать ΌΡΡ4 с К в диапазоне приблизительно от 1 до 10 нМ и может связывать УЕСР с Кс в диапазоне приблизительно от 0,1 до 1 нМ. В некоторых вариантах реализации изобретения различие в аффинности между двумя сайтами связывания антигена может быть приблизительно двукратным более, приблизительно трехкратным или более, приблизительно пятикратным или более, приблизительно восьмикратным или более, приблизительно десятикратным или более, приблизительно пятнадцатикратным или более, приблизительно тридцатикратным или более, приблизительно пятидестикратным или более, или приблизительно стократным или более. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один аминокислотный остаток в по меньшей мере одном гипервариабельном участке сайта связывания антигена с УЕСР заменен на отличную аминокислоту таким образом, что аффинность сайта связывания УЕСР изменяется. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность сайта связывания УЕСР повышается. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность сайта связывания УЕСР снижается. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один аминокислотный остаток в по меньшей мере одном гипервариабельном участке сайта связывания антигена с ΌΡΡ4 заменен на отличную аминокислоту таким образом, что аффинность сайта связывания ΌΡΡ4 изменяется. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность сайта связывания ΌΡΡ4 повышается. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинность сайта связывания ΌΡΡ4 снижается. В некоторых вариантах реализации изобретения аффинности сайтов связывания обоих антигенов УЕСР и ΌΡΡ4 изменены.
Согласно настоящему изобретению предложены полипептиды, включая, но не ограничиваясь антителами, которые специфично связывают УЕСР и/или ΌΕΕ4. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид связывает УЕСР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид связывает ΌΕΕ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид связывает УЕСР человека и УЕСР мыши. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид связывает ΌΕΕ4 человека и ΌΕΕ4 мыши. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСР, включает полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 8ЕО ГО N0:3, 8ЕО ГО N0:4, 8ЕО ГО N0:7, 8ЕО ГО N0:8, 8ЕО ГО N0:11, 8ЕО ГО N0:12, 8ЕО ГО N0:47 и 8ЕО ГО N0:49.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий ΌΕΕ4, содержит полипептид, содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 8ЕЦ ГО N0:1, 8ЕЦ ГО N0:2, 8ЕЦ ГО N0:4, 8ЕС) ГО N0:5, 8ЕС) N0 ГО:6, 8ЕС) ГО N0:8, 8ЕС) ГО N0:9, 8ЕС) ГО N0: 10, 8ЕС) ГО N0:12, 8ЕС) ГО N0:46, 8ЕО ГО N0:48, 8ЕО ГО N0:56, 8ЕО ГО N0:57, 8ЕО ГО N0:58, 8ЕО ГО N0:62, 8ЕО ГО N0:63 и 8ЕО ГО N0:64.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСРГОЕЕ4, содержит полипептид, содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 8ЕЦ ГО N0:1, 8ЕЦ ГО N0:2, 8 ЕС) ГО N0:3, 8ЕС) ГО N0:4, 8ЕС) ГО N0:5, 8 ЕС) ГО N0:6, 8ЕС) ГО N0:7, 8ЕС) ГО N0:8, 8 ЕС) ГО N0:9, 8ЕС) ГО N0:10, 8ЕС) ГО N0:11, 8ЕС) ГО N0:12, 8ЕС) ГО N0:46, 8ЕС) ГО N0:47, 8ЕС) ГО N0:48, 8ЕС) ГО N0:49, 8ЕС) ГО N0:56, 8ЕС) ГО N0:57, 8ЕС) ГО N0:58, 8ЕС) ГО N0:62, 8ЕС) ГО N0:63 и 8ЕС) ГО N0:64.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСРГОЕЕ4, содержит полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 8ЕЦ ГО N0:1, 8ЕЦ ГО N0:2, 8ЕС) ГО N0:5, 8ЕС) ГО N0:6, 8ЕС) ГО N0:9, 8ЕС) ГО N0:10, 8ЕС) ГО N0:46, 8ЕС) ГО N0:48, 8ЕС) ГО N0:56, 8ЕС) ГО N0:57, 8ЕС) ГО N0:58, 8ЕС) ГО N0:62, 8ЕС) ГО N0:63 и 8ЕС) ГО N0:64. В некоторых вари- 28 029958
антах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, дополнительно содержит полипептид, содержщий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 8Е0 ГО N0:3, 8Е0 ГО N0:7, 8Е0 ГО N0:11, 5>Е0 ГО N0:47 и 8Е0 ГО N0:49. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, дополнительно содержит полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 5>Е0 ГО N0:4, 8Е0 ГО N0:8 и 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, содержит полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 8Е0 ГО N0:3, 8Е0 ГО N0:7, 8Е0 ГО N0:11, 5>Е0 ГО N0:47 и 8Е0 ГО N0:49. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4, дополнительно содержит полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 5>Е0 ГО N0: 1, 5>Е0 ГО N0:2, 8Е0 ГО N0:5, 8Е0 ГО N0:6, 8ЕО ГО N0:9, 8ЕО ГО N0:10, 8ЕО ГО N0:46, δ ЕС) ГО N0:48, δΗΟ ГО N0:56, δΗΟ ГО N0:57, δΗΟ ГО N0:58, 8Е0 ГО N0:62, 8Е0 ГО N0:63 и 8Е0 ГО N0:64. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, дополнительно содержит полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: 8Е0 ГО N0:4, 8Е0 ГО N0:8 и 8Е0 ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4 (например, антитело), конкурирует за специфичное связывание УЕОР с антителом, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8Е0 ГО N0:11, и вариабельную область легкой цепи, содержащую 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, конкурирует с антителом 219К45 за специфичное связывание УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, конкурирует за специфичное связывание УЕОР в анализе конкурентного связывания ίη νίίτο. В некоторых вариантах реализации изобретения УЕОР представляет собой УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения УЕОР представляет собой УЕОР мыши. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4 (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на УЕОР, что и антитело согласно настоящему изобретению. В другом варианте реализации, агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на УЕОР, который перекрывается с эпитопом на УЕОР, связываемым антителом согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4 (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на УЕОР, что и антитело 219К45. В другом варианте реализации агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на УЕОР, который перекрывается с эпитопом на УЕОР, связываемым антителом 219К45.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой агент, который конкурирует за специфичное связывание УЕОР с антителом 219К45 (например, в анализе конкурентного связывания).
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4 (например, антитело), конкурирует за специфичное связывание ПЬЬ4 с антителом, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 8Е0 ГО N0:9 8Е0 ГО N0:10, 8Е0 ГО N0:58 или 8Е0 ГО N0:64, и вариабельную область легкой цепи, содержащую 8Е0 ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, конкурирует с антителом 21К79 за специфичное связывание ПЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, конкурирует с антителом 21К75 за специфичное связывание ПЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, конкурирует с антителом 21К83 за специфичное связывание ПЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее УЕОРГОЕЬ4, конкурирует за специфичное связывание ПЬЬ4 в анализе конкурентного связывания ίη νίίτο. В некоторых вариантах реализации изобретения ПЬЬ4 представляет собой ПЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения ПЬЬ4 представляет собой ПЬЬ4 мыши. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4 (например, антитело), связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ΌΕΕ4, что и антитело согласно настоящему изобретению. В другом варианте реализации агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на ΌΕΕ4, который перекрывается с эпитопом на ΌΕΕ4, связываемым антителом согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ΌΕΕ4, что и антитело 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ΌΕΕ4, что и антитело 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, связывает тот же эпитоп, или, по существу, тот же эпитоп, на ΌΕΕ4, что и антитело 21К83. В другом варианте реализации агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой антитело, которое связывает эпитоп на ΌΕΕ4, который перекрывается с эпитопом на ΌΕΕ4, связываемым антителом 21К79. В другом варианте реализации агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой антитело, связывающее эпитоп на ΌΕΕ4, который перекрывается с эпитопом на ΌΕΕ4, связываемым антителом 21К75. В другом варианте реализации агент, связывающий УЕОРГОЕЬ4, представляет собой антитело, связывающее эпитоп на ΌΕΕ4, который перекрывается с эпитопом на ΌΕΕ4, связываемым антителом 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связы- 29 029958
вающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, конкурирующий за специфичное связывание ОЬЬ4 с антителом 21К79 (например, в анализе конкурентного связывания). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, конкурирующий за специфичное связывание ОЬЬ4 с антителом 21К75 (например, в анализе конкурентного связывания). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, который конкурирует за специфичное связывание ОЬЬ4 с антителом 21К83 (например, в анализе конкурентного связывания). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, конкурирующий за специфичное связывание ОЬЬ4 с антителом 21М18 (например, в анализе конкурентного связывания).
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, конкурирующий за специфичное связывание УЕОР и/или ОЬЬ4 с биспецифическим антителом 219Κ45-ΜΒ-21Μ18 (например, в анализе конкурентного связывания). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, конкурирующий за специфичное связывание УЕОР и/или ОЬЬ4 с биспецифическим антителом 219Κ45-ΜΒ-21Μ79 (например, в анализе конкурентного связывания). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, конкурирующий за специфичное связывание УЕОР и/или ОЬЬ4 с биспецифическим антителом 219Κ45-ΜΒ-21Μ75 (например, в анализе конкурентного связывания). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой агент, конкурирующий за специфичное связывание УЕОР и/или ОЬЬ4 с биспецифическим антителом 219Κ45-ΜΒ-21Μ83 (например, в анализе конкурентного связывания).
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСР/ОШ4 (например, антитело), описанный в данной заявке, связывает УЕОР и модулирует активность УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста УЕОР и ингибирует активность УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста УЕОР и модулирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста УЕОР и ингибирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста УЕОР и ингибирует рост опухоли.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОШ4 (например, антитело), описанный в данной заявке, связывает ОЬЬ4 человека и модулирует активность ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 и ингибирует активность ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 и ингибирует активность №1сН. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 и ингибирует передачу сигналов №1сН. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 и модулирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 и вызывает аберрантный ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 и ингибирует рост опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4 (например, антитело), описанный в данной заявке, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает УЕОР человека и модулирует активность УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4 (например, антитело), описанный в данной заявке, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает ОЬЬ4 человека и модулирует активность ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4 (например, антитело), описанный в данной заявке, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает УЕОР человека и ОЬЬ4 человека и модулирует активность как УЕОР, так и ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антагониста УЕОР и антагониста ОЬЬ4 и ингибирует как активность УЕОР, так и активность ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антагониста УЕОР и антагониста ОЬЬ4 и ингибирует активность УЕОР и активность №1сН. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антагониста УЕОР и антагониста ПЬЬ4 и ингибирует активность УЕОР и передачу сигналов №1сН. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антагониста УЕОР и антагониста ПЬЬ4 и модулирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антагониста УЕОР и антагониста ПЬЬ4 и вызывает аберрантный ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антагониста УЕОР и антагониста ПЬЬ4 и ингибирует ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой антагониста УЕОР и антагониста ПЬЬ4 и ингибирует рост опухоли.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4 (например, антитело или биспецифическое антитело), представляет собой антагониста УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, представляет собой антагониста УЕОР и ин- 30 029958
гибирует активность АЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирует активность АЕОР на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 90% или приблизительно 100%. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, который ингибирует активность АЕОР человека, представляет собой антитело 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность АЕОР человека, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность АЕОР человека, представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Μ18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность АЕОР человека, представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность АЕОР человека, представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность АЕОР человека, представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4 (например, антитело), представляет собой антагониста ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 и ингибирует активность ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирует активность ОЬЬ4 на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 90% или приблизительно 100%. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой антитело 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой антитело 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой антитело 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21М18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий активность ОЬЬ4 человека, представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ21К83.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4 (например, антитело), представляет собой антагониста передачи сигналов №1с1г В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирует передачу сигналов №1сН на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 90% или приблизительно 100%. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет собой антитело 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет собой антитело 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет собой антитело 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет собой биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Μ18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий АЕОР/ПЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов №1с1г представляет
- 31 029958
собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов Νοίαίι. представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, ингибирующий передачу сигналов ΝοΙοΗ, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К83.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ЭЬЬ4 (например, антитело), ингибирует связывание УЕОР с по меньшей мере одним рецептором. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, ингибирует связывание УЕОР с УЕОРК-1 или УЕОРК-2. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирует связывание УЕОР с по меньшей мере одним рецептором УЕОР на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 90% или по меньшей мере приблизительно 95%. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание УЕОР человека с по меньшей мере одним рецептором УЕОР, представляет собой антитело 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание УЕОР человека с по меньшей мере одним рецептором УЕОР, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирующий связывание УЕОР человека с по меньшей мере одним рецептором УЕОР, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ21М18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание УЕОР человека с по меньшей мере одним рецептором УЕОР, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание УЕОР человека с по меньшей мере одним рецептором УЕОР, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирующий связывание УЕОР человека с по меньшей мере одним рецептором УЕОР, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ21К83.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4 (например, антитело), ингибирует связывание белка ПЬЬ4 с по меньшей мере одним рецептором Νοίαίι. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирует связывание ПЬЬ4 с Νοίοΐτ 1, ΝοίοΗ2, ΝοΙα1ι3 и/или ΝοΙα1ι4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирует связывание ОБЕ·4 с по меньшей мере одним рецептором Νοίαΐι на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 90% или по меньшей мере приблизительно 95%. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой антитело 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой антитело 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой антитело 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21М18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4, ингибирующий связывание ПЬЬ4 человека с по меньшей мере одним рецептором ΝοΙοΚ представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К83.
Анализы, проводимые в условиях ίη νίνο и ίη νίίΓο, для определения того, ингибирует ли УЕОР или влияет ли на ангиогенез агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4 (или кандидатный агент, связывающий УЕОР/ПЕЬ4), известны в данной области техники. Анализы ангиогенеза ίη νίίτο включают, но не ограничены перечисленными: анализы пролиферации НИУЕС, анализы образования трубки эндотелиальными
- 32 029958
клетками, анализы разрастания (или образования отростков), анализы миграции клеток НЦУЕС и анализы инвазии. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки в присутствии νΕΟΡ и в присутствии агента, связывающего νΕΟΡ/ΟΕ+4. сравнивают с клетками в присутствии νΕΟΡ в отсутствии агента, связывающего νΕΟΡ/ΌΕΕ4, и оценивают влияние на ангиогенез (или биологические эффекты, связанные с ангиогенезом). Анализы ангиогенеза ίη νίνο включают, но не ограничены перечисленными: анализы в матригелевой пробке, анализы в микрокармане роговицы и анализы в куриной хориоаллантоисной мембране (САМ).
Анализы ίη νίνο и ίη νίίτο для определения того, ингибирует ли агент, связывающий νΕΟΕ/ΌΕΕ4 (или кандидатный агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4), активацию или передачу сигналов №1с1г известны в данной области. Например, для измерения уровней передачи сигналов №1сН ίη νίίτο можно применять основанные на клеточной системе анализы репортерного гена люциферазы с применением репортерного вектора Τ.Ρ/Ε^, содержащего несколько копий ΤСΡ-связывающего домена, расположенных против хода транскрипции от репортерного гена люциферазы светлячка (Са/ίΙ и др., 1999, 0Μο§οηο, 18; 5959-66; ТОРЙакЬ, ΜίΠίροΓΟ, Биллерика, Массачусетс). В некоторых вариантах реализации изобретения можно применять основанный на клеточной системе анализ репортерного гена люциферазы с применением репортерного вектора .ΒΡ/Ε^, содержащего несколько копий СΒΡ-связывающего домена против хода транскрипции от репортерного гена люциферазы светлячка. Уровень передачи сигналов №1сН в присутствии одного или более лигандов рецепторов №1сН (например, ΌΕΕ4, экспрессированного на поверхности трансфицированных клеток, или растворимого слитого белка ΌΕΕ4-Ρ^ и в присутствии агента, связывающего νΕΟΡ/ΌΕΕ4 сравнивают с уровнем передачи сигналов №1сН в отсутствии агента, связывающего νΕΟΡ/ΌΕΕ4.
В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, оказывают одно или более из следующих действий: ингибируют пролиферацию опухолевых клеток, ингибируют рост опухоли, уменьшают онкогенность опухоли, уменьшают частоту раковых стволовых клеток в опухоли, запускают гибель опухолевых клеток, предотвращают метастазирование опухолевых клеток, уменьшают выживаемость опухолевых клеток, модулируют ангиогенез, ингибируют ангиогенез, ингибируют продуктивный ангиогенез или вызывают аберрантный ангиогенез.
В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны ингибировать рост опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны ингибировать рост опухоли ίη νίνο (например, в ксенотрансплантатной модели на мышах и/или у человека, имеющего рак). В некоторых вариантах реализации изобретения рост опухоли ингибируется по меньшей мере приблизительно в два раза, приблизительно в три раза, приблизительно в пять раз, приблизительно в десять раз, приблизительно в 50 раз, приблизительно в 100 раз или приблизительно в 1000 раз по сравнению с опухолью, которую не лечили.
В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны уменьшать онкогенность опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способно уменьшать онкогенность опухоли, содержащей раковые стволовые клетки, в модели на животном, такой как ксенотрансплантатная модель на мышах. В некоторых вариантах реализации изобретения агент или антитело, связывающее νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способно уменьшать онкогенность опухоли путем уменьшения количества или частоты раковых стволовых клеток в опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения количество или частота раковых стволовых клеток в опухоли уменьшается по меньшей мере приблизительно в два раза, приблизительно в три раза, приблизительно в пять раз, приблизительно в десять раз, приблизительно в 50 раз, приблизительно в 100 раз или приблизительно в 1000 раз. В некоторых вариантах реализации изобретения уменьшение количества или частоты раковых стволовых клеток определяют с помощью метода серийных разведений, применяя модель на животных. Дополнительные примеры и руководство в отношении применения метода серийных разведений для определения уменьшения количества или частоты раковых стволовых клеток в опухоли можно найти, например, в международной публикации номер ν0 2008/042236; публикации патента США №2008/0064049 и публикации патента США №2008/0178305. В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны модулировать ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны модулировать ангиогенез ίη νίνο (например, в ксенотрансплантатной модели на мышах, и/или у человека, имеющего рак). В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны ингибировать ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны вызывать аберрантный ангиогенез. В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, способны ингибировать ангиогенез и/или вызывать аберрантный ангиогенез, что приводит к непродуктивной васкуляризации.
В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие νΕΟΡ/ΌΕΕ4, описанные в данной заявке, имеют время полужизни в кровотоке мышей, яванских макак или людей, составляющее по меньшей мере приблизительно 2 ч, по меньшей мере приблизительно 5 ч, по меньшей мере приблизительно 10 ч, по меньшей мере приблизительно 24 ч, по меньшей мере приблизительно 3 дня, по меньшей мере приблизительно 1 неделю или по меньшей мере приблизительно 2 недели. В некоторых вариантах
- 33 029958
реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/БЬЬ4, представляет собой антитело 1дС (например, 1дС1 или 1дС2), которое имеет время полужизни в кровотоке мышей, яванских макак или людей, равное по меньшей мере приблизительно 2 ч, по меньшей мере приблизительно 5 ч, по меньшей мере приблизительно 10 ч, по меньшей мере приблизительно 24 ч, по меньшей мере приблизительно 3 дня, по меньшей мере приблизительно 1 неделю или по меньшей мере приблизительно 2 недели. Способы увеличения (или уменьшения) времени полужизни агентов, таких как полипептиды и антитела, известны в данной области техники. Например, известные способы увеличения времени полужизни в кровотоке антител 1дС включают введение мутаций в Ес-область, которые повышают рН-зависимое связывание антител с неонатальным Ес-рецептором (ЕсКи) при рН 6,0 (см., например, публикации патентов США с номерами 2005/0276799, 2007/0148164 и 2007/0122403). Известные способы увеличения времени полужизни в кровотоке фрагментов антител, в которых нет Ес-области, включают такие методики, как пегилирование.
В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие УЕСЕ/БЬЬ4, представляют собой антитела. Поликлональные антитела можно получить с помощью любого известного способа. В некоторых вариантах реализации изобретения поликлональные антитела получают путем иммунизации животного (например, кролика, крысы, мыши, козы, осла) интересующим антигеном (например, очищенным пептидным фрагментом, полноразмерным рекомбинантным белком или слитым белком) путем введения нескольких подкожных или интраперитонеальных инъекций. Антиген возможно может быть конъюгирован с носителем, таким как гемоцианин лимфы улитки (КЬН) или сывороточный альбумин. Антиген (с белком-носителем или без) разбавляют стерильным солевым раствором и, как правило, объединяют с адъювантом (например, с полным или неполным адъювантом Фрейнда) с получением стабильной эмульсии. По прошествии достаточного количества времени, поликлональные антитела получают из иммунизированного животного, обычно, из крови или асцита. Полученные поликлональные антитела можно очистить из сыворотки или асцита в соответствии со стандартными в данной области техники способами, включая, но не ограничиваясь перечисленными: аффинную хроматографию, ионообменную хроматографию, электрофорез в геле и диализ. В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие УЕСЕ/БЬЬ4, представляют собой моноклональные антитела. Моноклональные антитела можно получить, применяя гибридомные способы, известные специалисту в данной области техники (см., например, КоЫег и МПйеш, 1975, ЫаЫге, 256:495-497). В некоторых вариантах реализации изобретения мышь, хомяка или другого подходящего животного-хозяина иммунизируют, применяя гибридомный способ, как описано выше, чтобы вызвать продукцию лимфоцитами антител, которые специфично связывают иммунизирующий антиген. В некоторых вариантах реализации изобретения лимфоциты можно иммунизировать ίη νίΙΐΌ. В некоторых вариантах реализации изобретения иммунизирующий антиген может представлять собой белок человека или его часть. В некоторых вариантах реализации изобретения иммунизирующий антиген может представлять собой белок мыши или его часть. После иммунизации, лимфоциты выделяют и сливают с подходящей линией клеток миеломы, применяя, например, полиэтиленгликоль. Клетки гибридомы подвергают селекции с применением специализированных сред, известных в данной области техники, и неслитые лимфоциты и клетки миеломы не выживают в процессе селекции. Гибридомы, которые продуцируют моноклональные антитела, специфично направленные против выбранного антигена, можно обнаружить с помощью множества способов, включая, но не ограничиваясь перечисленными: иммунопреципитацию, иммуноблоттинг и анализы связывания ίη νίΙΐΌ (например, проточную цитометрию, ЕАС8, ЕЫ§А и радиоиммуноанализ). Гибридомы можно размножать либо в культуре ίη уйго, применяя стандартные способы (IV. Сойшд, 1996, Мοиοс1οиа1 ЛШ|Ьо01е5: Ргшар1е8 анй Ргасйсе, 3-е издание, Асабетю Рге88, Сан-Диего, Калифорния), либо ίη У1уо в виде асцитных опухолей у животного. Моноклональные антитела можно очистить из культуральной среды или асцитной жидкости с помощью способов, стандартных в данной области техники, включая, но не ограничиваясь перечисленными: аффинную хроматографию, ионообменную хроматографию, электрофорез в геле и диализ.
В некоторых вариантах реализации изобретения моноклональные антитела можно получить, применяя методики рекомбинантной ДНК, известные специалисту в данной области техники. Полинуклеотиды, кодирующие моноклональное антитело, выделяют из зрелых В-клеток или клеток гибридомы, например, с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с применением олигонуклеотидных праймеров, которые позволяют специфично амплифицировать гены, кодирующие тяжелую и легкую цепи антитела, и их последовательность определяют, применяя стандартные методики. Выделенные полинуклеотиды, кодирующие тяжелую и легкую цепи, затем клонируют в подходящие векторы экспрессии, которые позволяют продукцию моноклональных антител при трансфекции ими клеток-хозяев, таких как Е.сок, клетки СО8 обезьян, клетки яичника китайского хомячка (СНО) или клетки миеломы, которые в противном случае не продуцируют белки иммуноглобулинов.
В других некоторых вариантах реализации изобретения рекомбинантные моноклональные антитела или их фрагменты можно выделить из библиотек фагового дисплея, экспрессирующих вариабельные домены или гипервариабельные участки из желательных видов (см., например, МсС'аГГеПу и др., 1990, ЫаЫге, 348:552-554; СИсЬкои и др., 1991, Ыа1иге, 352:624-628; и Магкк и др., 1991, 1. Мо1. Вю1., 222:581597).
- 34 029958
Полинуклеотид(ы), кодирующий моноклональное антитело, можно модифицировать, например, применяя технологию рекомбинантной ДНК, чтобы получить альтернативные антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения константные домены легкой и тяжелой цепей, например моноклонального антитела мыши, можно заменить на аналогичные участки, например антитела человека, чтобы получить химерное антитело, или на полипептид, не относящийся к иммуноглобулину, чтобы получить слитое антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения константные области укорачивают или удаляют, чтобы получить желательный фрагмент моноклонального антитела. Сайт-направленный или высокоплотный мутагенез вариабельной области можно применять для оптимизации специфичности, аффинности и т. д. моноклонального антитела.
В некоторых вариантах реализации изобретения моноклональное антитело против УЕОР и/или ΌΡΡ4 представляет собой гуманизированное антитело. Обычно гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека, в которых остатки из гипервариабельных участков заменяют на остатки из гипервариабельного участка не относящихся к человеку видов (например, мыши, крысы, кролика, хомяка и т.д.), которые обладают желательной специфичностью, аффинностью и/или способностью связывания, применяя способы, известные специалисту в данной области техники. В некоторых вариантах реализации изобретения остатки каркасной области Ρν иммуноглобулина человека заменяют на соответствующие остатки в антителе из не относящихся к человеку видов, которое обладает желательной специфичностью, аффинностью и/или способностью связывания. В некоторых вариантах реализации изобретения гуманизированное антитело можно дополнительно модифицировать путем замены дополнительных остатков в каркасной области Ρν и/или остатков из замещенных не относящихся к человеку остатков, чтобы улучшить и оптимизировать специфичность, аффинность и/или способность связывания антитела. Как правило, гуманизированное антитело будет содержать, по существу, все из по меньшей мере одной, и обычно две или три, области вариабельного домена, содержащие все, или, по существу, все, гипервариабельные участки, которые соответствуют не относящемуся к человеку иммуноглобулину, тогда как все, или, по существу, все, каркасные области будут иметь консенсусную последовательность иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах реализации изобретения гуманизированное антитело также может содержать по меньшей мере часть константной области или домена (Рс) иммуноглобулина, обычно, из иммуноглобулина человека. В некоторых вариантах реализации изобретения такие гуманизированные антитела применяют в терапии, так как они позволяют уменьшить иммуногенность и реакции человека против антител мыши (реакции НАМА) при введении человеку. Специалист в данной области техники способен получить функциональное гуманизированное антитело с пониженной иммуногенностью, следуя известным методикам (см., например, патенты США №№ 5225539; 5585089; 5693761 и 5693762).
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/НРЬ4, представляет собой антитело человека. Антитела человека можно непосредственно получить, применяя различные методики, известные в данной области техники. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела человека можно получить из иммортализованных В-лимфоцитов человека, иммунизированных ίη νίΐΓΟ, или из лимфоцитов, выделенных из иммунизированного индивида. В любом случае клетки, которые продуцируют антитело, направленное против целевого антигена, можно получить и выделить (см., например, Со1е и др., 1985, ΜοηοΟοηαΙ ΑηΙίόούία апй Сапсег Τΐιααργ. Αίαη Κ. Ы55. стр. 77; Воетег и др., 1991, ί. ШтипоГ, 147:86-95; и патенты США №№ 5750373; 5567610 и 5229275). В некоторых вариантах реализации изобретения антитело человека можно выбрать из фаговой библиотеки, если данная фаговая библиотека экспрессирует антитела человека (СаидИан и др., 1996, №Циге Вю1есйпо1оду, 14:309-314; δ^ΐ8 и др., 1998, ΡNΑδ, 95:6157-6162; ИоодепЬоот и XV ί Шег, 1991, ί. Μο1. Вю1., 227:381; Μ;·ιγ1<5 и др., 1991, ί. Μο1. Вю1., 222:581). В качестве альтернативы, можно использовать методику фагового дисплея для получения антител человека и фрагментов антител ίη νίΐΐΌ из репертуара генов вариабельных доменов иммуноглобулинов не иммунизированных доноров. Методики получения и применения фаговых библиотек антител также описаны в патентах США №5969108; 6172197; 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915; 6593081; 6300064; 6653068; 6706484 и 7264963; и Яо!Ье и др., 2008, ί. Μο1. Вю1., 376:1182-1200. Как только антитела были идентифицированы, для получения высокоаффинных антител человека можно использовать стратегии созревания аффинности, известные в данной области техники, включая, но не ограничиваясь перечисленными: перетасовку цепей (Μ;·ιγ1<5 и др., 1992, Вю/Гесйпокду, 10:779-783) и сайт-направленный мутагенез. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела человека можно получить в трансгенных мышах, которые содержат локусы иммуноглобулинов человека. При иммунизации, данные мыши способны продуцировать полный репертуар антител человека в отсутствии продукции эндогенных иммуноглобулинов. Такой подход описан в патентах США №№ 5545807;5545806; 5569825; 5625126; 5633425 и 5661016.
В объем настоящего изобретения также входят биспецифические антитела. Биспецифические антитела способны специфично распознавать и связывать по меньшей мере два различных антигена или эпитопа. Различные эпитопы могут находиться либо на одной и той же молекуле (например, два эпитопа на одном белке), либо на различных молекулах (например, один эпитоп на одном белке и один эпитоп на другом белке). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает
- 35 029958
улучшенной эффективностью по сравнению с отдельным антителом или с комбинацией более чем одного антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает пониженной токсичностью по сравнению с отдельным антителом или с комбинацией более чем одного антитела. Специалистам в данной области техники известно, что любой связывающий агент (например, антитело) может обладать уникальной фармакокинетикой (ФК) (например, временем полужизни в кровотоке). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает способностью синхронизировать ФК двух активных связывающих агентов, если два отдельных связывающих агента обладают различными ФК профилями. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает способностью сосредотачивать действие двух связывающих агентов (например, антител) в одной области (например, в опухоли и/или в окружении опухоли). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает способностью сосредотачивать действие двух связывающих агентов (например, антител) на общей мишени (например, на опухоли или на опухолевой клетке). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает способностью нацеливать действие двух связывающих агентов (например, антител) на более чем один биологический путь или биологическую функцию. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает νΕΟΡ и вторую мишень. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает ΌΗ4 и вторую мишень. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает ΥΕΟΡ и ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело специфично связывает νΕΟΡ человека и ОЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело представляет собой моноклональное антитело человека или гуманизированное антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело ингибирует ангиогенез и уменьшает количество или частоту раковых стволовых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело ингибирует рост кровеносных сосудов и ингибирует созревание кровеносных сосудов. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело предупреждает гиперпролиферацию клеток эндотелия. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает пониженной токсичностью и/или побочными действиями. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело обладает пониженной токсичностью и/или побочными действиями по сравнению со смесью двух отдельных антител или с каждым из антител в виде монотерапии. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело имеет повышенный терапевтический индекс. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело имеет повышенный терапевтический индекс по сравнению со смесью двух отдельных антител или с каждым из антител в виде монотерапии.
В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело может специфично распознавать и связывать первый целевой антиген (например, ЭШ), а также второй целевой антиген, такой как эффекторная молекула на поверхности лейкоцита (например, СИ2, СЭ3, СЭ28 или В7) или рецептор Ес (например, СЭ64, СЭ32 или СЭ16), для того чтобы сосредоточить механизмы клеточной защиты на клетке, экспрессирующей первый целевой антиген. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифические антитела можно применять для нацеливания цитотоксических агентов на клетки, которые экспрессируют конкретный целевой антиген. Такие антитела содержат сайт связывания антигена (например, ОЬЬ4 человека) и второй сайт, который связывает цитотоксический агент или радионуклид, связанный с хелатирующим агентом, такой как Ε0ΤυΒΕ, ΌΡΤΑ, Ό0ΤΑ или ТЕТА.
Методики получения биспецифических антител известны специалистам в данной области техники, см., например, Μίΐΐδΐβίη и др., 1983, Манге, 305:537-539; Вгеппап и др., 1985, Зйепсе, 229:81; ЗигезЬ и др., 1986, ΜеίЬοά8 ίη Εηζутο1., 121:120; Τηιιιι^Ι^γ и др., 1991, ΕΜΒ0 ί., 10:3655-3659; δЬа1аЬу и др., 1992, ί. Εχρ. Μеά., 175:217-225; Κοδί^ΐηγ и др., 1992, ί. ^типок, 148:1547-1553; ОгиЬег и др., 1994, ί. Iттиηο1., 152:5368; патент США № 5731168; международную публикацию № ν0 2009/089004 и публикацию патента США № 2011/0123532. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифические антитела содержат константные области тяжелой цепи с модификациями аминокислот, которые являются частью границы между двумя тяжелыми цепями. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифические антитела можно получить, применяя стратегию "выступы-во-впадины" (см., например, патент США № 5731168; КЮдиау и др., 1996, Ργοϊ. Εη§ίη., 9:617-621). Иногда термины в методике "выступы" и "впадины" заменяют на термины "выпячивания" и "полости". В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифические антитела могут содержать измененные шарнирные области, неспособные образовывать дисульфидные связи между тяжелыми цепями (см., например, ν0 2006/028936). В некоторых вариантах реализации изобретения модификации могут включать замены аминокислот, которые приводят к изменению электростатических взаимодействий. В некоторых вариантах реализации изобретения модификации могут включать замены аминокислот, которые приводят к изменению гидрофобных/гидрофильных взаимодействий.
Биспецифические антитела могут представлять собой интактные антитела или фрагменты антител, содержащие сайты связывания антигена. Также предложены антитела с более чем двумя валентностями. Например, можно получить триспецифические антитела (ΤιιΙΙ и др., 1991, ί. Iттиηο1., 147:60). Таким
- 36 029958
образом, в некоторых вариантах реализации изобретения антитела к УЕСЕ и/или ОЬЬ4 являются мультиспецифическими.
В некоторых вариантах реализации изобретения антитела (или другие полипептиды), описанные в данной заявке, могут быть моноспецифическими. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый из одного или более сайтов связывания антигена, которые содержит антитело, способен связывать (или связывает) гомологичный эпитоп на отличных белках. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, представляет собой фрагмент антитела. Фрагменты антител могут обладать функциями или способностями, отличными от таковых у интактных антител; например фрагменты антител могут обладать повышенной способностью проникать в опухоль. Известны различные методики получения фрагментов антител, включая, но не ограничиваясь протеолитическим расщеплением интактных антител. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты антител включают фрагмент Е(аЬ')2, полученный путем расщепления пепсином молекулы антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты антител включают фрагмент ЕаЬ, полученный путем восстановления дисульфидных связей фрагмента Е(аЬ')2. В других вариантах реализации изобретения фрагменты антител включают фрагмент ЕаЬ, полученный путем обработки молекулы антитела папаином и восстановителем. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты антител получают рекомбинантным способом. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты антител включают фрагменты Εν или одноцепочечные Εν ЦсЕу). Фрагменты антител ЕаЬ, Εν и 8сΕν можно экспрессировать с последующей секрецией из Е.соП или других клеток-хозяев, что позволит получить большие количества данных фрагментов. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты антител выделяют из фаговых библиотек антител, что обсуждалось в данной заявке. Например, можно применять способы конструирования библиотек экспрессии ЕаЬ (Нике и др., 1989, §с1еисе, 246:1275-1281), чтобы обеспечить возможность быстрой и эффективной идентификации фрагментов ЕаЬ моноклональных антител с желательной специфичностью к УЕСЕ и/или ОЬЬ4, или их производных, фрагментов, аналогов или гомологов. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты антител представляют собой фрагменты линейных антител. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты антител представляют собой моноспецифические или биспецифические фрагменты. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, представляет собой 8сΕν. Для получения одно цепочечных антител, специфичных к УЕСЕ или ОЬЬ4 (см., например, патент США номер 4946778), можно применять различные методики.
Дополнительно может потребоваться, особенно в случае фрагментов антител, модификация антитела с целью изменения (например, увеличения или уменьшения) времени его полужизни в сыворотке. Этого можно добиться, например, путем включения в фрагмент антитела эпитопа связывания рецептора реутилизации путем мутации подходящего участка в фрагменте антитела или путем включения данного эпитопа в пептидную метку, которую затем сливают с фрагментом антитела на любом его конце или в середине (например, путем синтеза ДНК или пептида). Гетероконъюгированные антитела также входят в объем настоящего изобретения. Гетероконъюгированные антитела состоят из двух ковалентно связанных антител. Такие антитела, например, были предложены для нацеливания иммунных клеток на нежелательные клетки (см., например, патент США №4676980). Также предполагается, что гетероконъюгированные антитела можно получить ίη νίίΐΌ, применяя известные способы химического синтеза белков, включая способы с применением агентов, образующих поперечные связи. Например, иммунотоксины можно сконструировать, применяя реакцию дисульфидного обмена, или путем образования тиоэфирной связи. Примеры подходящих для данной цели реагентов включают иминотиолят и метил-4меркаптобутиримидат.
Для целей настоящего изобретения должно быть очевидно, что модифицированные антитела могут содержать любой тип вариабельной области, который обеспечивает ассоциацию антитела с мишенью (т.е. с УЕСЕ человека или ПЬЬ4 человека). В этом отношении вариабельная область может включать или может быть получена из любого вида млекопитающего, у которого можно вызвать гуморальный иммунный ответ и продукцию иммуноглобулинов против желательного антигена. По этой причине вариабельная область модифицированных антител может происходить, например, из человека, мыши, не относящегося к человеку примата (например, яванских макак, макак и т.д.) или кролика. В некоторых вариантах реализации изобретения как вариабельные, так и константные области модифицированных иммуноглобулинов принадлежат человеку. В других вариантах реализации изобретения вариабельные области совместимых антител (обычно, полученных из не относящегося к человеку источника) можно сконструировать или специально приспособить для того, чтобы улучшить свойства связывания или уменьшить иммуногенность молекулы. В этом отношении вариабельные области, полезные для настоящего изобретения, можно гуманизировать или другим способом изменить путем включения заимствованных последовательностей аминокислот.
В некоторых вариантах реализации изобретения вариабельные домены как в тяжелой, так и в легкой цепи изменяют путем, по меньшей мере, частичного замещения одного или более гипервариабельных участков и, при необходимости, путем частичного замещения каркасной области и модификации и/или изменения последовательности. Хотя гипервариабельные участки могут происходить из антитела
- 37 029958
того же класса или даже подкласса, что и антитело, из которого происходят каркасные области, предусмотрено, что гипервариабельные участки могут происходить из антитела отличного класса и, часто, из антитела из отличного вида. Замена всех гипервариабельных участков на все гипервариабельные участки из донорной вариабельной области не обязательно потребуется для передачи способности связывать антиген от одного вариабельного домена к другому. Скорее, может потребоваться перенос лишь тех остатков, которые необходимы для сохранения активности сайта связывания антигена.
Несмотря на изменения вариабельной области для специалиста в данной области техники очевидно, что модифицированные антитела согласно настоящему изобретению будут включать антитела (например, полноразмерные антитела или их иммунореактивные фрагменты), в которых по меньшей мере часть одного или более доменов константной области была удалена или другим способом изменена для того, чтобы обеспечить желательные биохимические свойства, такие как улучшенное определение местонахождения опухоли или увеличенное время полужизни в сыворотке, по сравнению с антителом с приблизительно такой же иммуногенностью, содержащим нативную или неизмененную константную область. В некоторых вариантах реализации изобретения константная область модифицированных антител будет включать константную область человека. Модификации константной области, совместимые с настоящим изобретением, включают вставки, делеции или замены одной или более аминокислот в одном или более доменах. Модифицированные антитела, описанные в данной заявке, могут включать изменения или модификации в одном или более из трех константных доменов тяжелой цепи (СН1, СН2 или СН3) и/или в константном домене легкой цепи (СЬ). В некоторых вариантах реализации изобретения один или более доменов частично или полностью удалены из константных областей модифицированных антител. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные антитела будут включать конструкции или варианты с удаленным доменом, в которых был удален весь домен СН2 (конструкции ЛСН2). В некоторых вариантах реализации изобретения исключенный домен константной области заменяют на короткий аминокислотный спейсер (например, состоящий из 10 аминокислотных остатков), который обеспечивает некоторую молекулярную гибкость, которую обычно обеспечивает отсутствующая константная область. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные антитела сконструированы таким образом, чтобы слить домен СН3 непосредственно с шарнирным участком антитела. В других вариантах реализации изобретения между шарнирным участком и модифицированными доменами СН2 и/или СН3 вставляют пептидный спейсер. Например, можно экспрессировать конструкции, в которых домен СН2 был удален, а оставшийся домен СН3 (модифицированный или немодифицированный) соединен с шарнирным участком посредством спейсера, состоящего из 5-20 аминокислот. Такой спейсер можно добавить для обеспечения того, чтобы регуляторные элементы константного домена остались свободными и доступными или чтобы шарнирный участок остался гибким. Тем не менее, следует отметить, что аминокислотные спейсеры в некоторых случаях могут оказаться иммуногенными и вызвать нежелательный иммунный ответ против полученной конструкции. Соответственно, в некоторых вариантах реализации изобретения любой спейсер, добавленный к конструкции, будет относительно неиммуногенным, чтобы сохранить желательные биологические свойства модифицированных антител. В некоторых вариантах реализации изобретения в модифицированных антителах константный домен может быть лишь частично удален, или может быть заменено несколько или даже одна аминокислота. Например, мутации одной аминокислоты в выбранных областях домена СН2 может оказаться достаточно, чтобы существенно уменьшить связывание Рс и, тем самым, повысить определение местонахождения раковых клеток и/или проникновение в опухоль. Аналогично, может оказаться желательным простое удаление части одного или более доменов константной области, которые контролируют определенную эффекторную функцию (например, связывание комплемента С1д), которую нужно модулировать. Такое частичное удаление константных областей может улучшать выбранные свойства антитела (время полужизни в сыворотке), при этом оставляя другие желательные функции, связанные с обсуждаемым доменом константной области, интактными. Более того, ссылаясь на описание выше, константные области описанных антител можно модифицировать посредством мутации или замены одной или более аминокислот, которая улучшит профиль полученной в результате этого конструкции. В этом отношении можно нарушить активность, обеспеченную консервативным сайтом связывания (например, связывания Рс), при этом, по существу, сохранив конфигурацию и иммуногенный профиль модифицированного антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные антитела содержат вставку одной или более аминокислот в константной области, чтобы улучшить желательные свойства, такие как снижение или повышение эффекторной функции или создание большего количества сайтов присоединения цитотоксинов или углеводов. В данной области техники известно, что константная область опосредует несколько эффекторных функций. Например, связывание компонента С1 комплемента с Рс-областью антител 1дО или 1дМ (связанных с антигеном) активирует систему комплемента. Активация комплемента важна для опсонизации и лизиса клеточных патогенов. Активация комплемента также стимулирует воспалительный ответ, а также может быть вовлечена в аутоиммунную гиперчувствительность. Кроме того, Рсобласть антитела может связывать клетку, экспрессирующую Рс-рецептор (РсР). Существует множество Рс-рецепторов, которые специфичны к различным классам антител, включая 1§О (гамма-рецепторы), 1дЕ (эпсилон-рецепторы), 1§Л (альфа-рецепторы) и 1дМ (мю-рецепторы). Связывание антитела с Рс- 38 029958
рецепторами на поверхностях клеток запускает множество важных и разнообразных биологических ответов, включая поглощение и разрушение покрытых антителами частиц, клиренс иммунных комплексов, лизис покрытых антителами целевых клеток клетками-киллерами (называемый антителозависимой клеточно-обусловленной цитотоксичностью, или АЭСС), высвобождение медиаторов воспаления, плацентарный перенос и контроль продукции иммуноглобулинов.
В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные антитела приводят к изменению эффекторных функций, что, в свою очередь, влияет на биологический профиль введенного антитела. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения, делеция или инактивация (путем введения точечной мутации или другими способами) домена константной области может снизить связывание Рс-рецептора с модифицированным антителом в кровотоке, таким образом улучшая определение местонахождения раковых клеток и/или проникновение в опухоль. В других вариантах реализации изобретения модификации константной области увеличивают время полужизни антитела в сыворотке. В других вариантах реализации изобретения модификации константной области уменьшают время полужизни антитела в сыворотке. В некоторых вариантах реализации изобретения константную область модифицируют таким образом, чтобы устранить дисульфидные связи или молекулы олигосахаридов. Модификации константной области в соответствии с настоящим изобретением можно легко осуществить, применяя хорошо известные биохимические методики или методики молекулярной инженерии, известные специалистам в данной области техники.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ОЬЬ4, который представляет собой антитело, не обладает одной или большим количеством эффекторных функций. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения антитело не проявляет активность АЭСС. и/или антитело не проявляет активность комплементзависимой цитотоксичности (СЭС). В некоторых вариантах реализации изобретения антитело не связывает Рс-рецептор и/или факторы комплемента. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело не обладает эффекторной функцией.
В объем настоящего изобретения дополнительно входят варианты и эквиваленты, которые, по существу, гомологичны химерным, гуманизированным и человеческим антителам, или фрагментам таких антител, описанным в данной заявке. Варианты и эквиваленты могут включать, например, мутации с консервативными заменами, т.е. с заменой одной или более аминокислот на аналогичные аминокислоты. Например, консервативная замена относится к замене одной аминокислоты на другую аминокислоту, входящую в тот же общий класс, как, например, замена одной кислой аминокислоты на другую кислую аминокислоту, одной основной аминокислоты на другую основную аминокислоту или одной нейтральной аминокислоты на другую нейтральную аминокислоту. То, что подразумевается под консервативной заменой аминокислот, хорошо известно в данной области техники и описано в данной заявке.
Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены способы получения антитела, которое связывает УЕОР и/или ИЕЬ4, включая биспецифические антитела, которые специфично связывают как УЕОР, так и ИЕЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела, которое связывает УЕОР и/или ИЕЬ4, включает применение гибридомных методик. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела, которое связывает УЕОР или ИЕЬ4, или биспецифического антитела, связывающего УЕОР и ИЕЬ4, включает скрининг фаговой библиотеки человеческих антител. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены способы идентификации антитела, связывающего УЕОР и/или ИЕЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга РАС8 на связывание с УЕОР или его частью. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга РАС8 на связывание с ИЕЬ4 или его частью. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга РАС8 на связывание как с УЕОР, так и с ИЕЬ4, или с их частями. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью ЕЬ18А путем скрининга на связывание с УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью ЕЬ18А путем скрининга на связывание с ИЕЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью ЕЬ18А путем скрининга на связывание с УЕОР и ИЕЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга РАС8 на блокирование связывания УЕОР человека с рецептором УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга РАС8 на блокирование связывания ИЕЬ4 человека с рецептором №1сН человека. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга на ингибирование или блокирование передачи сигналов №1сН. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга на ингибирование или блокирование активности УЕОР (например, индукции пролиферации НИУЕС). В некоторых вариантах реализации изобретения антитело обнаруживают с помощью скрининга на модуляцию ангиогенеза.
В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела к УЕОР человека включает иммунизацию млекопитающего полипептидом, включающим аминокислоты 27-232 УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела к УЕОР человека включает иммунизацию млекопитающего полипептидом, содержащим по меньшей мере часть аминокислот 27-232 УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения способ дополнительно
- 39 029958
включает выделение антитела или продуцирующих антитело клеток из млекопитающего. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения моноклонального антитела, связывающего УЕОР, включает: иммунизацию млекопитающего полипептидом, содержащим по меньшей мере часть аминокислот 27-232 УЕОР человека, и выделение продуцирующих антитело клеток из иммунизированного млекопитающего. В некоторых вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает слияние продуцирующих антитело клеток с клетками линии миеломы с получением клеток гибридомы. В некоторых вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает селекцию клетки гибридомы, экспрессирующей антитело, связывающее УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения млекопитающее представляет собой мышь. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело выбирают с помощью полипептида, содержащего по меньшей мере часть аминокислот 27-232 УЕОР человека.
В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела к БЬЬ4 человека включает иммунизацию млекопитающего полипептидом, содержащим аминокислоты 27-529 БЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела к БЬЬ4 человека включает иммунизацию млекопитающего полипептидом, содержащим по меньшей мере часть аминокислот 27-529 БЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения моноклонального антитела, связывающего БЬЬ4, включает: иммунизацию млекопитающего полипептидом, содержащим по меньшей мере часть аминокислот 27-529 БЬЬ4 человека, и выделение продуцирующих антитело клеток из иммунизированного млекопитающего. В некоторых вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает слияние продуцирующих антитело клеток с клетками линии миеломы с получением клеток гибридомы. В некоторых вариантах реализации изобретения способ дополнительно включает селекцию клетки гибридомы, экспрессирующей антитело, которое связывает БЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения млекопитающее представляет собой мышь. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело выбирают с помощью полипептида, содержащего по меньшей мере часть аминокислот 27-529 БЬЬ4 человека.
В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела к УЕОР человека включает скрининг библиотеки экспрессии антител на наличие антител, связывающих УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела БЬЬ4 человека включает скрининг библиотеки экспрессии антител на наличие антител, связывающихт БЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения способ получения антитела к УЕОР человека и/или БЬЬ4 человека включает скрининг библиотеки экспрессии антител на наличие биспецифических антител, связывающихт УЕОР человека и БЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения библиотека экспрессии антител представляет собой фаговую библиотеку. В некоторых вариантах реализации изобретения скрининг включает пэннинг. В некоторых вариантах реализации изобретения библиотеку экспрессии антител (например, фаговую библиотеку) подвергают скринингу с применением по меньшей мере части аминокислот 27-232 УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела, обнаруженные в результате первого скрининга, снова подвергают скринингу с применением по меньшей мере части аминокислот 27-529 БЬЬ4 человека, чтобы идентифицировать биспецифическое антитело, связывающее УЕОР и БЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения библиотеку экспрессии антител (например, фаговую библиотеку) подвергают скринингу с применением по меньшей мере части аминокислот 27-529 БЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела, обнаруженные в результате первого скрининга, снова подвергают скринингу с применением по меньшей мере части аминокислот 27-232 УЕОР человека, чтобы идентифицировать биспецифическое антитело, связывающее УЕОР и БЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, обнаруженное в результате скрининга, представляет собой антагониста УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, обнаруженное в результате скрининга, ингибирует биологические активности, индуцированные УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, обнаруженное в результате скрининга, представляет собой антагониста БЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, обнаруженное в результате скрининга, ингибирует передачу сигналов №&Ь, индуцированную БЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, обнаруженное в результате скрининга, связывает как УЕОР человека, так и УЕОР мыши. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, обнаруженное в результате скрининга, связывает как БЬЬ4 человека, так и БЬЬ4 мыши. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела, описанные в данной заявке, являются выделенными. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела, описанные в данной заявке, являются, по существу, чистыми.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения агенты, связывающие УЕОР/БЬЬ4, представляют собой полипептиды. Полипептиды могут представлять собой рекомбинантные полипептиды, природные полипептиды или синтетические полипептиды, содержащие антитело, или его фрагмент, связывающее УЕОР и/или БЬЬ4. В данной области техники известно, что некоторые последовательности аминокислот связывающих агентов, описанных в данной заявке, можно изменить, не оказав существенного влияния на структуру или функцию белка. Таким образом, настоящее изобретение дополнительно включает изменения полипептидов, которые проявляют существенную активность или которые со- 40 029958
держат участки антитела, или фрагмента указанного антитела, против νΕΟΡ и/или ОЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения варианты последовательности аминокислот полипептидов, связывающих νΕΟΕ/ΩΕΤΑ содержат делеции, вставки, инверсии, повторы и/или другие типы замен.
В некоторых вариантах реализации изобретения полипептиды, описанные в данной заявке, являются выделенными. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептиды, описанные в данной заявке, являются, по существу, чистыми.
Указанные полипептиды, их аналоги и варианты можно дополнительно модифицировать таким образом, чтобы они содержали дополнительные химические молекулы, обычно не являющиеся частью полипептида. Такие модифицированные молекулы могут улучшать или другим образом модулировать растворимость, биологическое время полужизни и/или всасывание полипептида. Указанные молекулы также могут уменьшать или устранять нежелательные побочные действия полипептидов и вариантов. Обзор химических молекул можно найти в ИспипдЮп: ΤΙιο δοίοηοο апй Ргасйсе οί РНагтасу, 21-е издание, 2005 г., Университет естественных наук, Филадельфия, Пенсильвания.
Полипептиды, описанные в данной заявке, можно получить с помощью любого подходящего способа, известного в данной области техники. Такие способы варьируются от способов прямого синтеза белка до конструирования последовательности ДНК, кодирующей полипептидные последовательности, и экспрессии этих последовательностей в подходящем хозяине. В некоторых вариантах реализации изобретения последовательность ДНК конструируют, применяя рекомбинантную технологию, путем выделения или синтеза последовательности ДНК, кодирующей интересующий белок дикого типа. Возможно последовательность можно мутировать посредством сайт-направленного мутагенеза, чтобы получить ее функциональные аналоги. См., например, 2ое11ег и др., 1984, ΡΝΑδ, 81:5662-5066 и патент США №4588585. В некоторых вариантах реализации изобретения последовательность ДНК, кодирующую интересующий полипептид, можно сконструировать путем химического синтеза с применением синтезатора олигонуклеотидов. Олигонуклеотиды можно разработать на основании последовательности аминокислот желательного полипептида и выбора таких кодонов, которые предпочтительны для клеткихозяина, в которой будет синтезироваться интересующий рекомбинантный полипептид. Можно применять стандартные способы синтеза последовательности полинуклеотидов, кодирующей интересующий выделенный полипептид. Например, целую последовательность аминокислот можно использовать для восстановления по ней возможной последовательности гена. Кроме того, можно синтезировать олигомер ДНК, содержащий последовательность нуклеотидов, кодирующую конкретный выделенный полипептид. Например, можно синтезировать несколько небольших олигонуклеотидов, кодирующих части желательного полипептида, а затем лигировать их. Такие отдельные олигонуклеотиды обычно содержат 5'- или 3'липкие концы для комплементарной сборки.
Сразу после сборки (с помощью синтеза, сайт-направленного мутагенеза или другого способа) полинуклеотидных последовательностей, кодирующих конкретный интересующий полипептид, их можно встроить в вектор экспрессии и функционально связать с последовательностью, контролирующей экспрессию, подходящей для экспрессии белка в желательном хозяине. Правильность сборки можно подтвердить путем нуклеотидного секвенирования, картирования с помощью ферментов рестрикции и/или экспрессии биологически активного полипептида в подходящем хозяине. В данной области техники хорошо известно, что для получения высоких уровней экспрессии трансфицированного гена у хозяина, ген должен быть функционально связан с последовательностями, контролирующими транскрипцию и трансляцию, которые функционируют в выбранном для экспрессии хозяине.
В некоторых вариантах реализации изобретения применяют рекомбинантные векторы экспрессии для амплификации и экспрессии ДНК, кодирующей антитела, или их фрагменты, против νΕΟΡ и/или ПЬЬ4 человека. Например, рекомбинантные векторы экспрессии могут представлять собой реплицируемые конструкции ДНК, которые содержат синтетические или полученные из кДНК фрагменты ДНК, кодирующие полипептидную цепь агента, связывающего νΕΟΡ/ΟΚΕ4, такого как антитело к νΕΟΡ или антитело к ПЬЬ4, или его фрагмента, функционально связанные с подходящими элементами, регулирующими транскрипцию и/или трансляцию, полученными из генов млекопитающего, микроба, вируса или насекомого. Единица транскрипции, как правило, включает совокупность: (1) генетического элемента или элементов, играющих регуляторную роль в экспрессии генов, например, промоторов или энхансеров транскрипции, (2) структурной или кодирующей последовательности, которая транскрибируется в мРНК и транслируется в белок, и (3) подходящих последовательностей инициации и терминации транскрипции и трансляции. Регуляторные элементы могут включать последовательность оператора для контроля транскрипции. Способность реплицироваться в хозяине обычно обеспечивает точка начала репликации, дополнительно может быть включен ген селекции для облегчения распознавания трансформантов. Участки ДНК называют "функционально связанными", когда они функционально связаны друг с другом. Например, ДНК сигнального пептида (секреторной лидерной последовательности) функционально связана с ДНК полипептида, если они экспрессируются вместе в виде предшественника, в котором сигнальный пептид участвует в секреции полипептида; промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если он контролирует транскрипцию последовательности; или сайт связывания рибосомы функционально связан с кодирующей последовательностью, если он расположен та- 41 029958
ким образом, чтобы позволить трансляцию. В некоторых вариантах реализации изобретения структурные элементы, предназначенные для применения в дрожжевых системах экспрессии, включают лидерную последовательность, позволяющую секрецию транслированного белка из клетки-хозяина. В других вариантах реализации изобретения если рекомбинантный белок экспрессируется без лидерной или транспортной последовательности, он может содержать остаток метионина на Оконце. Данный остаток возможно может быть впоследствии отщеплен от экспрессированного рекомбинантного белка с получением конечного продукта.
Выбор последовательности, контролирующей экспрессию, и вектора экспрессии зависит от выбора хозяина. Можно использовать большое разнообразие комбинаций хозяина/вектора экспрессии. Полезные векторы экспрессии для эукариотических хозяев включают, например, векторы, содержащие контролирующие экспрессию последовательности из 8ν40, вируса папилломы крупного рогатого скота, аденовируса и цитомегаловируса. Полезные векторы экспрессии для бактериальных хозяев включают известные бактериальные плазмиды, такие как плазмиды из Е.сой, включая рСК1, ρΒΚ322, ρΜΒ9 и их производные, и плазмиды для более широкого диапазона хозяев, такие как М13 и другие нитевидные фаги с одноцепочечными ДНК. Агенты, связывающие АЕОР/ПЕЬ4 (например, полипептиды), согласно настоящему изобретению можно экспрессировать с одного или более векторов. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения полипептид одной тяжелой цепи экспрессируется одним вектором, полипептид второй тяжелой цепи экспрессируется вторым вектором и полипептид легкой цепи экспрессируется третьим вектором. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид первой тяжелой цепи и полипептид легкой цепи экспрессируется одним вектором, а полипептид второй тяжелой цепи экспрессируется вторым вектором. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептиды двух тяжелых цепей экспрессируются одним вектором, а полипептид легкой цепи экспрессируется вторым вектором. В некоторых вариантах реализации изобретения все три полипептида экспрессируются одним вектором. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения полипептид первой тяжелой цепи, полипептид второй тяжелой цепи и полипептид легкой цепи экспрессируются одним вектором.
Подходящие клетки-хозяева для экспрессии полипептида или антитела, связывающего АЕОР/ПЕЬ4 (или белка АЕОР или ΌΕΕ4 для применения в качестве антигена), прокариотические клетки, дрожжевые клетки, клетки насекомых или клетки высших эукариот под контролем подходящих промоторов. Прокариоты включают грамотрицательные или грамположительные организмы, например Е.соП или БасШих. Клетки высших эукариот включают стабильные линии клеток, происходящих от млекопитающего, описанные ниже. Также можно применять бесклеточные системы трансляции. Подходящие векторы клонирования и экспрессии для применения в клетках-хозяевах бактерий, грибков, дрожжей и млекопитающих описаны у РоиуеП и др., 1985, С1отид АссЮгх: Α ЬаЬогакгу Μαηυαΐ, Е18еу1ег, Нью-Йорк, Нью-Йорк. Дополнительные сведения, касающиеся способов получения белков, включая получение антител, можно найти, например, в публикации патента США №2008/0187954, в патентах США №6413746 и 6660501 и в международной публикации патента №\У0 04/009823.
Для экспрессии рекомбинантных полипептидов можно применять различные системы культур клеток млекопитающих или насекомых. Экспрессия рекомбинантных белков в клетках млекопитающих может оказаться предпочтительной, так как такие белки, как правило, имеют правильную укладку, подходящим образом модифицированы и полностью функциональны. Примеры подходящих линий клетокхозяев млекопитающих включают, но не ограничены перечисленными: линии клеток С08-7 (получена из почки обезьяны), Ь-929 (получена из фибробластов мыши), С127 (получена из опухоли молочной железы мыши), 3Τ3 (получена из фибробластов мыши), СНО (получена из яичников китайского хомячка), ШЬа (получена из рака шейки матки человека), ΒΗΚ (получена из фибробластов почки хомяка) и ΗΡΚ-293 (получена из эмбриональной почки человека) и варианты данных линий клеток. Векторы экспрессии млекопитающих могут включать нетранскрибируемые элементы, такие как точка начала репликации, подходящий промотор и энхансер, связанный с геном, который нужно экспрессировать, и другие 5'- или 3'-фланкирующие нетранскрибируемые последовательности и 5'- или 3'-нетранслируемые последовательности, такие как необходимые сайты связывания рибосом, сайты полиаденилирования, донорные и акцепторные сайты сплайсинга и последовательности терминации транскрипции. Экспрессия рекомбинантных белков в бакуловирусе также представляет собой надежный способ получения правильно уложенных и биологически функциональных белков. Бакуловирусные системы для получения гетерологичных белков в клетках насекомого хорошо известны специалистам в данной области техники (см., например, Ьискоу и 8иштег8, 1988, Β^о/ΤесЬηо1о§у, 6:47).
Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены клетки, содержащие агенты, связывающие АЕОР/ПЕЬ4, описанные в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют агенты, связывающие АЕОР/ПЕЬ4, описанные в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют агент, связывающий АЕОР, такой как антитело к АЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое связывает АЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют агент, связывающий ΌΕΕ4, такой как антитело к ΌΕΕ4. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифиче- 42 029958
ское антитело, которое связывает ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифический агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, такой как биспецифическое антитело, которое связывает νΕΟΡ и ПЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют антитело 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют антитело 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют антитело 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют антитело 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 219К45 и сайт связывания антигена из антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 219К45 и сайт связывания антигена из антитела 21М18. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 219К45 и сайт связывания антигена из антитела 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело, которое содержит сайт связывания антигена из антитела 219К45 и сайт связывания антигена из антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Μ18. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ79. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ75. В некоторых вариантах реализации изобретения клетки продуцируют биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ83.
Белки, продуцированные трансформированными хозяевами, можно очистить с помощью любого подходящего способа. Стандартные способы включают хроматографию (например, ионообменную, аффинную и эксклюзионную колоночную хроматографию), центрифугирование, дифференциальную растворимость или любой другой стандартный способ очистки белка. К белку можно присоединить аффинные метки, такие как гексагистидин, домен связывания мальтозы, последовательность внешней оболочки вируса гриппа и глутатионы-трансфераза, чтобы обеспечить возможность легкой очистки путем пропускания через подходящую аффинную колонку. Аффинная хроматография, применяемая для очистки иммуноглобулинов, может включать хроматографию на белке А, белке Ο и белке Ь. Выделенные белки также можно физически охарактеризовать с помощью таких методик, как протеолиз, эксклюзионная хроматография (ЭХ), масс-спектрометрия (МС), ядерный магнитный резонанс (ЯМР), изоэлектрическое фокусирование (ИЭФ), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) и рентгеновская кристаллография. Чистоту выделенных белков можно определить, применяя методики, известные специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь перечисленными: ПААГ/ДСН, ЭХ, капиллярный гель-электрофорез, ИЭФ и капиллярное изоэлектрическое фокусирование (кИЭФ). В некоторых вариантах реализации изобретения супернатанты систем экспрессии, которые секрктируют рекомбинантный белок в культуральные среды, можно сначала сконцентрировать, применяя доступный для приобретения концентратор белка, например, устройство для ультрафильтрации от Αιηχοη или Ροϊΐχοη от ΜίΙΙίροϊΌ. После этапа концентрирования, концентрат можно нанести на подходящую матрицу для очистки. В некоторых вариантах реализации изобретения можно применять анионообменную смолу, например, матрицу или субстрат, содержащий боковые диэтиламиноэтильные (ΌΕΑΕ) группы. Матрицы могут представлять собой акриламид, агарозу, декстран, целлюлозу или другие типы матриц, обычно применяемые для очистки белков. В некоторых вариантах реализации изобретения можно использовать катионообменный этап. Подходящие катионообменники включают различные нерастворимые матрицы, содержащие сульфопропильные или карбоксиметильные группы. В некоторых вариантах реализации изобретения можно использовать гидроксиапатитные среды, включая, но не ограничиваясь керамическим гидроксиапатитом (СНТ). В некоторых вариантах реализации изобретения для дополнительной очистки рекомбинантного белка (например, агента, связывающего νΕΟΡ/ΌΕΕ4) можно применять один или более этапов обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием гидрофобных сред для ОФ-ВЭЖХ, например, силикагеля, содержащего метальные или другие алифатические боковые группы. Некоторые или все из предшествующих этапов очистки, в различных комбинациях, также можно применять для получения гомогенного рекомбинантного белка.
В некоторых вариантах реализации изобретения гетеродимерные белки, такие как биспецифические антитела, очищают с помощью любого из способов, описанных в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифические антитела к νΕΟΡ/ΌΕΕ4 выделяют и/или очищают, применяя по меньшей мере один этап хроматографии. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один этап хроматографии включает аффинную хроматографию. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один этап хроматографии дополнительно включает анионообменную хро- 43 029958
матографию. В некоторых вариантах реализации изобретения выделенный и/или очищенный продукт антитела содержит по меньшей мере 90% гетеродимерного антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения выделенный и/или очищенный продукт антитела содержит по меньшей мере 95, 96, 97, 98 или 99% гетеродимерного антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения выделенный и/или очищенный продукт антитела содержит приблизительно 100% гетеродимерного антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения рекомбинантный белок, полученный в бактериальной культуре, можно выделить, например, сначала путем экстрагирования из осадков клеток, а затем с помощью одного или более этапов концентрирования, высаливания, водной ионообменной или эксклюзионной хроматографии. ВЭЖХ можно применять для конечных этапов очистки. Микробные клетки, используемые для экспрессии рекомбинантного белка, можно разрушить с помощью любого удобного способа, включая циклы замораживания и оттаивания, разрушение ультразвуком, механическое разрушение или применение лизирующих клетки агентов. Способы очистки антител и других белков, известные в данной области техники, также включают, например, способы, описанные в публикациях патентов США №2008/0312425, 2008/0177048 и 2009/0187005.
В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ЭЬЬ4, представляет собой полипептид, который не является антителом. В данной области техники известно множество способов идентификации и получения не являющихся антителами полипептидов, которые связываются с высокой аффинностью с белковой мишенью. См., например, 8кегга, 2007, Сигг. 0ρίη. Βίοί^ΗηοΙ., 18:295304; Ио55е и др., 2006, Рго!ет 8аепсе, 15:14-27; ОШ и др., 2006, Сигг. 0ρίη. Β^οΐесЬηο1., 17:653-658; дгеп, 2008, РЕΒ8 1., 275:2668-76; и 8кегга, 2008, РЕΒ8 1., 275:2677-83. В некоторых вариантах реализации изобретения для получения и/или идентификации полипептида, связывающего УЕОР/ПЕЬ4, который не является антителом, можно использовать методику воспроизведения в фаге или в клетках млекопитающих. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид содержит белковый каркас типа, выбранного из группы, состоящей из белка А, белка О, липокалина, домена фибронектина, домена консенсусного повтора анкирина и тиоредоксина.
В некоторых вариантах реализации изобретения агенты или антитела, связывающие УЕОР/ПЕЬ4, можно применять в любой из множества конъюгированных (т.е. в виде иммуноконъюгата или радиоконъюгата) или неконъюгированных форм. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела можно применять в неконъюгированной форме, чтобы привлечь природные механизмы защиты субъекта, включая комплементзависимую цитотоксичность и антителозависимую клеточную токсичность, для устранения опухолевых или раковых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4 (например, антитело или полипептид), конъюгирован с цитотоксическим агентом. В некоторых вариантах реализации изобретения цитотоксический агент представляет собой химиотерапевтический агент, включая, но не ограничиваясь перечисленными, метотрексат, адриамицин, доксорубицин, мелфалан, митомицин С, хлорамбуцил, даунорубицин или другие интеркалирующие агенты. В некоторых вариантах реализации изобретения цитотоксический агент представляет собой ферментативно активный токсин бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, или его фрагменты, включая, но не ограничиваясь перечисленными: А-цепь дифтерийного токсина, несвязывающие активные фрагменты дифтерийного токсина, А-цепь экзотоксина, А-цепь рицина, А-цепь абрина, А-цепь модецина, альфа-сарцин, белки Л1еигПе5 ίοΓάίί, диантиновые белки, белки Рку1о1асса ашепсапа (ΡΑΡΙ, ΡΑΡΙΙ и ΡΑΡ-8), ингибитор ΜοιηοΓάΚη скагапДа, курцин, кротин, ингибитор 8ар;-юпапа ойтипа118, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трихотецены. В некоторых вариантах реализации изобретения цитотоксический агент представляет собой радиоактивный изотоп для получения радиоконъюгата или конъюгированного с радиоактивной меткой антитела. Доступно множество радионуклидов для получения конъюгированных с радиоактивной меткой антител, включая, но не ограничиваясь перечисленными,
'°Υ, 125Ι, 131Ι, 123Ι, шТп, 131Ш, КП,
1538т, 67Си,
67Оа, 166Ηο,
'Ьи,
186Ке, 188Ке и
Βί. Также можно применять конъюгаты антитела и одного или более низкомолекулярных токсинов, таких как калихеамицин, майтанзиноид, трихотецен и СС1065, и производных данных токсинов, которые обладают активностью токсинов. Конъюгаты антитела и цитотоксических агентов получают с применением множества бифункциональных связывающих белки агентов, включая, но не ограничиваясь перечисленными: ^сукцинимидил-3-(2-пиридилдитиол) пропионат (8ΡΌΡ), иминотиолан (ΙΤ), бифункциональные производные имидоэфиров (такие как диметиладипимидат-ИС1), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис-(пара-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(парадиазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6-диизоцианат) и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол).
ΙΙΙ. Полинуклеотиды.
В некоторых вариантах реализации изобретения в объем настоящего изобретения входят полинуклеотиды, включающие полинуклеотиды, которые кодируют полипептид (или фрагмент полипептида), специфично связывающий УЕОР, ΌΕΕ4, оба УЕОР и ПЬЬ4. В объем термина "полинуклеотиды, кодирующие полипептид" входит полинуклеотид, который содержит только кодирующие полипептид последовательности, а также полинуклеотид, который содержит дополнительные кодирующие и/или некоди- 44 029958
рующие последовательности. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен полинуклеотид, содержащий последовательность полинуклеотидов, кодирующую антитело к УЕСЕ человека или кодирующую фрагмент такого антитела (например, фрагмент, содержащий сайт связывания антигена). В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложен полинуклеотид, содержащий последовательность полинуклеотидов, кодирующую антитело к ОЬЬ4 человека или кодирующую фрагмент такого антитела (например, фрагмент, содержащий сайт связывания антигена). Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению могут быть представлены в виде РНК или в виде ДНК. ДНК включает кДНК, геномную ДНК и синтетическую ДНК; и может быть двухцепочечной или одноцепочечной, и, в случае одноцепочечной, может представлять собой кодирующую нить или некодирующую (антисмысловую) нить.
В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотид включает полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕО ГО N0:1, ЗЕО ГО N0:2, ЗЕО ГО N0:3, ЗЕО ГО N0:4, ЗЕО ГО N0:5, ЗЕО ГО N0:6, ЗЕО ГО N0:7, ЗЕО ГО N0:8, ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:11, ЗЕО ГО N0:12, ЗЕО ГО N0:46, ЗЕО ГО N0:47, ЗЕО ГО N0:48, ЗЕО ГО N0:49, ЗЕО ГО N0:56, ЗЕО ГО N0:57, ЗЕО ГО N0:58, ЗЕО ГО N0:62, ЗЕО ГО N0:63 и ЗЕО ГО N0:64. В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотид включает полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий последовательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕО ГО N0:5, ЗЕО ГО N0:6, ЗЕО ГО N0:7, ЗЕО ГО N0:8, ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:11, ЗЕО ГО N0:12, ЗЕО ГО N0:48, ЗЕО ГО N0:49, ЗЕО ГО N0:56, ЗЕО ГО N0:58, ЗЕО ГО N0:62 и ЗЕО ГО N0: 64. В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотид содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕО ГО N0:29, ЗЕО ГО N0:30, ЗЕО ГО N0:31, ЗЕО ГО N0:32, ЗЕО ГО N0:33, ЗЕО ГО N0:34, ЗЕО ГО N0:35, ЗЕО ГО N0:36, ЗЕО ГО N0:37, ЗЕО ГО N0:38, ЗЕО ГО N0:39, ЗЕО ГО N0:40, ЗЕО ГО N0:50, ЗЕО ГО N0:51, ЗЕО ГО N0:52, ЗЕО ГО N0:53, ЗЕО ГО N0:54, ЗЕО ГО N0:55, ЗЕО ГО N0:60, ЗЕО ГО N0:61, ЗЕО ГО N0:66, ЗЕО ГО N0:67, ЗЕО ГО N0:68, ЗЕО ГО N0:69, ЗЕО ГО N0:70, ЗЕО ГО N0:71, ЗЕО ГО N0:72, ЗЕО ГО N0:73, ЗЕО ГО N0:74, ЗЕО ГО N0:75, ЗЕО ГО N0:76, ЗЕО ГО N0:77 и ЗЕО ГО N0:78.
В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотид включает полинуклеотид, имеющий последовательность нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно на 80% идентичную, по меньшей мере приблизительно на 85% идентичную, по меньшей мере приблизительно на 90% идентичную, по меньшей мере приблизительно на 95% идентичную и, в некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере приблизительно на 96, 97, 98 или 99% идентичную полинуклеотиду, содержащему последовательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕО ГО N0:29, ЗЕО ГО N0:30, ЗЕО ГО N0:31, ЗЕО ГО N0:32, ЗЕО ГО N0:33, ЗЕО ГО N0:34, ЗЕО ГО N0:52, ЗЕО ГО N0:53, ЗЕО ГО N0:55, ЗЕО ГО N0:60, ЗЕО ГО N0:61, ЗЕО ГО N0:66, ЗЕО ГО N0:67, ЗЕО ГО N0:68, ЗЕО ГО N0:69, ЗЕО ГО N0:70, ЗЕО ГО N0:71, ЗЕО ГО N0:72, ЗЕО ГО N0:73, ЗЕО ГО N0:74, ЗЕО ГО N0:75, ЗЕО ГО N0:76, ЗЕО ГО N0:77 и ЗЕО ГО N0:78. В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотид включает полинуклеотид, имеющий последовательность нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно на 80% идентичную, по меньшей мере приблизительно на 85% идентичную, по меньшей мере приблизительно на 90% идентичную, по меньшей мере приблизительно на 95% идентичную и, в некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере приблизительно на 96, 97, 98 или 99% идентичную полинуклеотиду, содержащему последовательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕО ГО N0:35, ЗЕО ГО N0:36, ЗЕО ГО N0:37, ЗЕО ГО N0:38, ЗЕО ГО N0:39, ЗЕО ГО N0:40, ЗЕО ГО N0:50, ЗЕО ГО N0:51, ЗЕО ГО N0:54, ЗЕО ГО N0:68, ЗЕО ГО N0:69, ЗЕО ГО N0:70, ЗЕО ГО N0:71, ЗЕО ГО N0:72, ЗЕО ГО N0:73, ЗЕО ГО N0:74, ЗЕО ГО N0:75, ЗЕО ГО N0:76, ЗЕО ГО N0:77 и ЗЕО ГО N0:78. Также предусмотрен полинуклеотид, который включает полинуклеотид, который гибридизуется с последовательностью ЗЕО ГО N0:29, ЗЕО ГО N0:30, ЗЕО ГО N0:31, ЗЕО ГО N0:32, ЗЕО ГО N0:33, ЗЕО ГО N0:34, ЗЕО ГО N0:35, ЗЕО ГО N0:36, ЗЕО ГО N0:37, ЗЕО ГО N0:38, ЗЕО ГО N0:39, ЗЕО ГО N0:40, ЗЕО ГО N0:50, ЗЕО ГО N0:51, ЗЕО ГО N0:52, ЗЕО ГО N0:53, ЗЕО ГО N0:54, ЗЕО ГО N0:55, ЗЕО ГО N0:60, ЗЕО ГО N0:61, ЗЕО ГО N0:66, ЗЕО ГО N0:67, ЗЕО ГО N0:68, ЗЕО ГО N0:69, ЗЕО ГО N0:70, ЗЕО ГО N0:71, ЗЕО ГО N0:72, ЗЕО ГО N0:73, ЗЕО ГО N0:74, ЗЕО ГО N0:75, ЗЕО ГО N0:76, ЗЕО ГО N0:77 и ЗЕО ГО N0:78. В некоторых вариантах реализации изобретения гибридизация происходит в условиях высокой жесткости.
В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотиды содержат последовательность, кодирующую зрелый полипептид, слитый в одной и той же открытой рамке считывания с полинуклеотидом, который способствует, например, экспрессии и секреции полипептида из клетки-хозяина (например, с лидерной последовательностью, которая функционирует как секреторная последовательность для контролирования транспорта полипептида из клетки). Полипептид, содержащий лидерную последовательность, представляет собой пребелок и может содержать лидерную последовательность, которая отщепляется в клетке-хозяине с образованием зрелой формы полипептида. Полинуклеотиды также могут кодировать пробелок, который представляет собой зрелый белок, содержащий дополнительные аминокислотные остатки на 5'-конце. Зрелый белок, содержащий пропоследовательность, представляет собой пробелок и является неактивной формой белка. Как только пропоследовательность отщепляется, зрелый белок становится активным.
- 45 029958
В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотиды содержат последовательность, кодирующую зрелый полипептид, слитый в одной и той же открытой рамке считывания с маркерной последовательностью, которая обеспечивает возможность, например, очистки кодируемого полипептида. Например, маркерная последовательность может представлять собой гексагистидиновую метку, предоставляемую вектором рОЕ-9, чтобы обеспечить очистку зрелого полипептида, слитого с маркером, в случае бактериального хозяина, или маркерная последовательность может представлять гемагглютининовую (НА) метку, полученную из белка гемагглютинина гриппа, если используют хозяина, являющегося млекопитающим (например, клетки С08-7). В некоторых вариантах реализации изобретения маркерная последовательность представляет собой метку РЬАО, пептид с последовательностью ЭУКООООК (8Е0 ГО N0:45), которую можно применять совместно с другими аффинными метками.
Настоящее изобретение дополнительно относится к вариантам полинуклеотидов, описанным выше в данной заявке, кодирующим, например фрагменты, аналоги и/или производные.
В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложены полинуклеотиды, включающие полинуклеотиды, имеющие последовательность нуклеотидов, по меньшей мере на приблизительно 80% идентичную, по меньшей мере на приблизительно 85% идентичную, по меньшей мере на приблизительно 90% идентичную, по меньшей мере на приблизительно 95% идентичную и, в некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере на приблизительно 96, 97, 98 или 99% идентичную полинуклеотиду, кодирующему полипептид, включающий агент, связывающий УЕОРГОЬЬ4 (например, антитело), или его фрагмент, описанный в данной заявке.
В данной заявке предполагается, что формулировка полинуклеотид, имеющий последовательность нуклеотидов, по меньшей мере, например, на 95% "идентичную" эталонной последовательности нуклеотидов, означает, что последовательность нуклеотидов указанного полинуклеотида идентична эталонной последовательности, за исключением того, что указанная полинуклеотидная последовательность может содержать до пяти точечных мутаций на каждые 100 нуклеотидов эталонной последовательности нуклеотидов. Другими словами, для того, чтобы получить полинуклеотид, имеющий последовательность нуклеотидов, по меньшей мере на 95% идентичную эталонной последовательности нуклеотидов, до 5% нуклеотидов в эталонной последовательности можно удалить или заменить на другой нуклеотид, или множество нуклеотидов, составляющих до 5% всех нуклеотидов в эталонной последовательности, можно вставить в эталонную последовательность. Такие мутации эталонной последовательности могут встречаться в 5'- или 3'-концевых положениях в эталонной последовательности нуклеотидов или в любом месте между этими концевыми положениями, рассеянными либо ηο-отдельности среди нуклеотидов эталонной последовательности, либо в виде одной или более непрерывных групп внутри эталонной последовательности.
Варианты полинуклеотидов могут включать изменения в кодирующих участках, некодирующих участках или в обоих видах участков. В некоторых вариантах реализации изобретения варианты полинуклеотидов содержат изменения, которые порождают молчащие замены, вставки или делеции, но не изменяют свойства или активности кодируемого полипептида. В некоторых вариантах реализации изобретения варианты полинуклеотидов содержат молчащие замены, которые не приводят к изменению последовательности аминокислот полипептида (вследствие вырожденности генетического кода). Варианты полинуклеотидов можно получить для множества целей, например, чтобы оптимизировать кодоны для экспрессии в конкретном хозяине (т.е. заменить кодоны в мРНК человека на такие кодоны, которые предпочтительны для бактериального хозяина, такого как Е.соП). В некоторых вариантах реализации изобретения вариант полинуклеотида содержит по меньшей мере одну молчащую мутацию в некодирующей или кодирующей области последовательности.
В некоторых вариантах реализации изобретения вариант полинуклеотида получают, чтобы модулировать или изменить экспрессию (или уровни экспрессии) кодируемого полипептида. В некоторых вариантах реализации изобретения вариант полинуклеотида получают, чтобы повысить экспрессию кодируемого полипептида. В некоторых вариантах реализации изобретения вариант полинуклеотида получают, чтобы снизить экспрессию кодируемого полипептида. В некоторых вариантах реализации изобретения вариант полинуклеотида обеспечивает повышенную экспрессию кодируемого полипептида по сравнению с исходной полинуклеотидной последовательностью. В некоторых вариантах реализации изобретения вариант полинуклеотида обеспечивает пониженную экспрессию кодируемого полипептида по сравнению с исходной полинуклеотидной последовательностью.
В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один вариант полинуклеотида получают (без изменения последовательности аминокислот кодируемого полипептида), чтобы повысить продукцию гетеромультимерной молекулы. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один вариант полинуклеотида получают (без изменения последовательности аминокислот кодируемого полипептида), чтобы повысить продукцию биспецифического антитела.
В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотиды являются выделенными. В некоторых вариантах реализации изобретения полинуклеотиды являются, по существу, чистыми. Также предложены векторы и клетки, содержащие полинуклеотиды, описанные в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения вектор экспрессии содержит молекулу полинуклеотида. В некоторых
- 46 029958
вариантах реализации изобретения клетка-хозяин содержит вектор экспрессии, содержащий молекулу полинуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения клетка-хозяин содержит молекулу полинуклеотида.
1У. Способы применения и фармацевтические композиции.
Агенты (включая полипептиды и антитела) согласно настоящему изобретению, которые связывают (например, специфично связывают) УЕСЕ и/или ОЬЬ4, полезны для множества применений, включая, но не ограничиваясь перечисленными, терапевтические способы лечения, такие как способы лечения рака. В некоторых вариантах реализации изобретения указанные агенты полезны для ингибирования активности УЕСЕ, ингибирования индуцированной ОЬЬ4 передачи сигналов №1сП. ингибирования роста опухоли, уменьшения объема опухоли, уменьшения частоты раковых стволовых клеток в опухоли, уменьшения онкогенности опухоли, модуляции ангиогенеза и/или ингибирования ангиогенеза. Способы применения могут представлять собой способы ίη νίίΐΌ, ех νί\Ό или ίη νί\Ό. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, представляет собой антагониста УЕСЕ человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, представляет собой антагониста ОЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, представляет собой антагониста как УЕСЕ, так и ОЬЬ4.
В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие УЕСЕ/ОЬЬ4, применяют для лечения заболевания, связанного с ангиогенезом, т.е. повышенным ангиогенезом и/или аберрантным ангиогенезом. В некоторых вариантах реализации изобретения указанное заболевание представляет собой заболевание, зависящее от ангиогенеза. В некоторых вариантах реализации изобретения агенты, связывающие УЕСЕ/ОЬЬ4, применяют для лечения расстройства, характеризуемого повышенными уровнями стволовых клеток и/или клеток-предшественников. Согласно настоящему изобретению предложены способы ингибирования роста опухоли с помощью агентов или антител, связывающих УЕСЕ/ОЬЬ4, описанных в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения способ ингибирования роста опухоли включает приведение во взаимодействие ίη νίίΐΌ опухолевой клетки с агентом, связывающим УЕСЕ/ОЬЬ4 (например, антителом). Например, иммортализованную линию клеток или раковую линию клеток культивируют в среде, в которую добавлено антитело к УЕСЕ, антитело к ОЬЬ4 или биспецифическое антитело к УЕСЕ/ОЬЬ4, чтобы ингибировать рост опухолевых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения опухолевые клетки выделяют из образца пациента, такого как, например, биоптат ткани, плевральный выпот или образец крови, и культивируют в среде, в которую добавлен агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, чтобы ингибировать рост опухолевых клеток.
В некоторых вариантах реализации изобретения способ ингибирования роста опухоли включает приведение во взаимодействие ίη νί\Ό опухоли или опухолевых клеток с агентом, связывающим УЕСЕ/ОЬЬ4 (например, антителом). В некоторых вариантах реализации изобретения приведение во взаимодействие опухоли или опухолевой клетки с агентом, связывающим УЕСЕ/ОЬЬ4, осуществляют в модели на животном. Например, антитело к УЕСЕ, антитело к ОЬЬ4 или биспецифическое антитело к УЕСЕ/ОЬЬ4 можно вводить животному-хозяину с иммунодефицитом (например, мышам N00/8010), имеющему ксенотрансплантат опухоли. В некоторых вариантах реализации изобретения опухолевые клетки и/или раковые стволовые клетки выделяют из образца пациента, такого как, например, биоптат ткани, плевральный выпот или образец крови, и вводят путем инъекции животному-хозяину с иммунодефицитом (например, мышам N00/8010), которому затем вводят агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, чтобы ингибировать рост опухолевых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, вводят одновременно или сразу после введения онкогенных клеток животному, чтобы предупредить рост опухоли ("предупредительная модель"). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, вводят в качестве терапии после того, как опухоли выросли до определенного размера ("терапевтическая модель"). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕ/ОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, специфично связывающее УЕСЕ человека и ОЬЬ4 человека.
В некоторых вариантах реализации изобретения способ ингибирования роста опухоли включает введение субъекту терапевтически эффективного количества агента, связывающего УЕСЕ/ОЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект представляет собой человека. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект имеет опухоль или имел опухоль, которая была удалена. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль содержит раковые стволовые клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения частота раковых стволовых клеток в опухоли уменьшается при введении агента, связывающего УЕСЕ/ОЬЬ4. Согласно настоящему изобретению также предложен способ уменьшения частоты раковых стволовых клеток в опухоли, включающий приведение во взаимодействие опухоли с эффективным количеством агента, связывающего УЕСЕ/ОЬЬ4 (например, биспецифического антитела к УЕСЕ/ОЬЬ4). В некоторых вариантах реализации изобретения способ уменьшения частоты раковых стволовых клеток в опухоли у субъекта, включает введение субъекту терапевтически эффективного количества агента, связывающего УЕСЕ/ОЬЬ4.
В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль представляет собой солидную опухоль. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль представляет собой опухоль, выбранную из груп- 47 029958
пы, состоящей из колоректальной опухоли, опухоли толстого кишечника, опухоли поджелудочной железы, опухоли легкого, опухоли яичника, опухоли печени, опухоли молочной железы, опухоли почки, опухоли предстательной железы, опухоли желудочно-кишечного тракта, меланомы, опухоли шейки матки, опухоли мочевого пузыря, глиобластомы и опухоли головы и шеи. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль представляет собой колоректальную опухоль или опухоль толстого кишечника. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль представляет собой опухоль яичника. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль представляет собой опухоль легкого. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль представляет собой опухоль поджелудочной железы. В некоторых вариантах реализации изобретения опухоль представляет собой опухоль молочной железы. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены способы лечения рака, включающие введение субъекту терапевтически эффективного количества агента, связывающего νΕΟΡ/ΌΕΕ4. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, связывает νΕΟΡ и ингибирует или уменьшает рост рака. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, связывает ПЬЬ4 и ингибирует или уменьшает рост рака. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает νΕΟΡ и ПЬЬ4 и ингибирует или уменьшает рост рака. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, связывает ΥΕΟΡ, препятствует взаимодействиям νΕΟΡ/рецептор νΕΟΡ и ингибирует или уменьшает рост рака. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, связывает ΌΕΕ4, препятствует взаимодействиям ^^^4/NοΐсЬ и ингибирует или уменьшает рост рака. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, связывает как νΕΟΡ, так и ΌΕΕ4, препятствует взаимодействиям νΕΟΡ/рецептор νΕΟΡ и взаимодействиям ^^^4/NοΐсЬ, и ингибирует или уменьшает рост рака. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, связывает ΌΕΕ4, и уменьшает частоту раковых стволовых клеток в раке.
Согласно настоящему изобретению предложены способы лечения рака, включающие введение субъекту (например, субъекту, нуждающемуся в лечении) терапевтически эффективного количества агента, связывающего νΕΟΡ/ΌΕΕ4. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект представляет собой человека. В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта есть раковая опухоль. В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта была опухоль, которую удалили.
В некоторых вариантах реализации изобретения рак/опухоль у субъекта может быть невосприимчива к некоторому виду (видам) лечения. В качестве неограничивающего примера, рак (или опухоль) у субъекта может быть устойчив к химиотерапии. В некоторых вариантах реализации изобретения рак у субъекта может быть устойчив к терапии, направленной против νΕΟΡ, или к терапии, направленной против ΌΕΕ4, или к обоим видам терапии.
В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой рак, выбранный из группы, состоящей из колоректального рака, рака поджелудочной железы, рака легких, рака яичников, рака печени, рака молочной железы, рака почки, рака предстательной железы, рака желудочно-кишечного тракта, меланомы, рака шейки матки, рака мочевого пузыря, глиобластомы и рака головы и шеи. В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой рак яичников. В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой колоректальный рак или рак толстого кишечника. В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой рак поджелудочной железы. В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой рак молочной железы. В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой рак предстательной железы. В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой рак легких. В некоторых вариантах реализации изобретения рак представляет собой гематологический рак, такой как лейкемия или лимфома. В некоторых вариантах реализации изобретения лейкемия или лимфома представляет собой В-клеточную лейкемию или лимфому. В некоторых вариантах реализации изобретения лейкемия или лимфома представляет собой Тклеточную лейкемию или лимфому. В некоторых вариантах реализации изобретения гематологический рак представляет собой острую миелогенную лейкемию, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, острую лимфоцитарную лейкемию, волосатоклеточную лейкемию, хроническую лимфоцитарную лейкемию, множественную миелому, кожную Т-клеточную лимфому или острую Т-клеточную лимфобластную лейкемию.
Согласно настоящему изобретению также предложены способы лечения заболевания или расстройства у субъекта, в которых заболевание или расстройство связано с ангиогенезом. В некоторых вариантах реализации изобретения заболевание или расстройство связано с аберрантным ангиогенезом. В некоторых вариантах реализации изобретения заболевание или расстройство связано с повышенным ангиогенезом. Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены способы модуляции ангиогенеза у субъекта, включающие введение субъекту терапевтически эффективного количества любого из агентов, связывающих νΕΟΡ/ΌΕΕ4, описанных в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, представляет собой антитело, которое связывает νΕΟΡ человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий νΕΟΡ/ΌΕΕ4, представляет собой антитело, которое связывает ПЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент,
- 48 029958
связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает УЕОР человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает ЭШ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, которое связывает УЕОР человека и ОЬЬ4 человека. Дополнительно предложены способы лечения заболевания или расстройства у субъекта, в которых заболевание или расстройство характеризуется повышенным уровнем стволовых клеток и/или клеток-предшественников. В некоторых вариантах реализации изобретения способы лечения включают введение субъекту терапевтически эффективного количества агента, полипептида или антитела, связывающего УЕОР/ЭШ4.
В некоторых вариантах реализации любого из способов, описанных в данной заявке, агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, специфично связывающее УЕОР человека и ОЬЬ4 человека. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕОР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ЭШ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий NΥ\VΜΗ (ЬЕО ГО N0:17), 0ΌΡ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ (ЬЕО ГО N0:18), и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΌΜΟΥ (ЬЕО ГО N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ ®ЕС) ΙΌ N0:13), С1Ж2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕС) ГО N0:14), ΥIδδΥNΟΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (δ ЕС) ГО N0:15), ΥIΑΟΥΚ^ΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (δ ЕС) ГО N0:59) или ΥIδNΥN(δЕС) ГО N0:65), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (δЕС) ΙΌ
N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (ЬЕО ГО N0:20), СОЮ легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (ХЕО ГО N0:21), и СГОР3 легкой цепи, содержащий ΟΟδΚΈνΡνΤΡΟΟ (ЬЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕСР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий NΥVΜΗ ®ЕС) ГО N0:17), СОЮ тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ ®ЕС) ГО N0:18), и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΟΚΥΥΡΌΜΟΥ (ЬЕО ГО N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЬЕО ГО N0:13), СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ (ХЕО ГО N0:14), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΚΟΥΟΥΟνΟΜΟΥ (ЬЕО ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (ЬЕО ГО N0:20), СОЮ легкой цепи, содержащий ΑΑδ^Οδ ХЕС) ГО N0:21), и СОЮ легкой цепи, содержащий (ХккЕЛЗЖ'ЗЗА.С. ХЕС) ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий СЮР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий NΥVΜΗ (ХЕО ГО N0:17), СОЮ тяжелой цепи, содержащий Ώ^δ^Κ^Υ^^^ ®ЕС) ГО N0:18), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΟΚΥΥΡΌΜΟΥ ®ЕС) ГО N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ ®ЕО ГО N0:13), СОЮ тяжелой цепи, содержащий УтУХ.ЛЗтЛ'ОкРкС. ХЕС) ГО N0:15), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΌΥΌνΟΜΌΥ (ЬЕО ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ (ЬЕО ГО N0:20), СОЮ легкой цепи, содержащий ΑΑδN^Οδ (ХЕО ГО N0:21), и СОЮ легкой цепи, содержащий ΟΟδΕΈνΕνΤΡΟΟ (ЬЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий УЕСР человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий NΥVΜΗ (ЬЕО ГО N0:17), СОЮ тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ (ЬЕО ГО N0:18), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΟΚΥΥΡΌΜΟΥ (ЬЕО ГО N0:19), и второй сайт связывания антигена который содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЬЕО ГО N0:13), СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΥΙΑΟΥΚΌΑΤ^^014124(.. ХЕС) ГО N0:59), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΚΟΥΟΥΟνΟΜΟΥ ®ЕС) ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ легкой цепи, содержащий ΚΑδΕδV^NΥΟIδΡΜΚ ®ЕС) ГО N0:20), СОЮ легкой цепи, содержащий ΑΑδ^Οδ ХЕС) ГО N0:21), и СОЮ легкой цепи, содержащий ^^δΚΕVΡVΤΡΟΟ (ХЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело содержит первый сайт связывания антигена, специфично связывающий νΚϊΡ человека, и второй сайт связывания антигена, специфично связывающий ОЬЬ4 человека, при этом первый сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий NΥVΜΗ (ЬЕО ГО N0:17), 0ΌΡ2 тяжелой цепи, содержащий ^INΡδNΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ (ЬЕО ГО N0:18), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΟΚΥΥΡΌΜΟΥ (ЬЕО ГО N0:19), и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЬЕО ГО N0:13), СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΥΙδNΥNΚΑΤNΥN^ΚΡΚΟ ХЕС) ГО N0:65), и СОЮ тяжелой цепи, содержащий ΚΟΥΟΥΟνΟΜΟΥ ®ЕС) ГО N0:16); и при этом как первый, так и второй сайт связывания антигена содержит СОЮ легкой цепи, со- 49 029958
держащий КА§Е§УБНУС18ЕМК (ЗЕО ГО N0:20), СГОР2 легкой цепи, содержащий АА§ЫрС8 (ЗЕО ГО N0:21), и СГОР3 легкой цепи, содержащий ООЗКЕУРАТЕСС (ЗЕО ГО N0:22). В некоторых вариантах реализации любого из способов, описанных в данной заявке, биспецифическое антитело к УЕСЕГОЬЬ4 содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:58 или ЗЕО ГО N0:64, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к УЕСЕГОЬЬ4 содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:9, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к УЕСЕГОЬЬ4 содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:10, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к УЕСЕГОЬЬ4 содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:58, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифическое антитело к УЕСЕГОЬЬ4 содержит первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11, вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:64, и первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12.
В некоторых вариантах реализации любого из способов, описанных в данной заявке, агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой антитело. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой антитело к УЕСЕ. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело к УЕСЕ представляет собой антитело 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой антитело к БЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело к БЬЬ4 представляет собой антитело 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело к БЬЬ4 представляет собой антитело 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело к БЬЬ4 представляет собой антитело 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена из антитела 219К45. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена из антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена из антитела 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее сайт связывания антигена из антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена из антитела 219К45 и второй сайт связывания антигена из антитела 21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена из антитела 219К45 и второй сайт связывания антигена из антитела 21М18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена из антитела 219К45 и второй сайт связывания антигена из антитела 21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый сайт связывания антигена из антитела 219К45 и второй сайт связывания антигена из антитела 21К83. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21М18. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ21К79. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К75. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕСЕГОЬЬ4, представляет собой биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К83.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены фармацевтические композиции,
- 50 029958
содержащие связывающие агенты, описанные в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции дополнительно содержат фармацевтически приемлемую среду. Такие фармацевтические композиции находят применение при ингибировании роста опухоли и/или лечении рака у субъекта (например, у пациента - человека). В некоторых вариантах реализации изобретения согласно настоящему изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие биспецифические антитела, при этом по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% антител в композиции являются биспецифическими антителами или гетеродимерными антителами. В некоторых вариантах реализации изобретения биспецифические антитела представляют собой антитела 1дС (например, 1дС2 или 1дС1). В некоторых вариантах реализации изобретения менее чем приблизительно 10%, менее чем приблизительно 5%, менее чем приблизительно 2% или менее чем приблизительно 1% от всех антител в композициях являются моноспецифическими антителами или гомодимерными антителами. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела в композиции по меньшей мере приблизительно на 98% являются гетеродимерными.
В некоторых вариантах реализации изобретения лекарственные формы получают для хранения и применения путем объединения очищенного антитела или агента согласно настоящему изобретению с фармацевтически приемлемой средой (например, носителем или вспомогательным веществом). Подходящие фармацевтически приемлемые среды включают, но не ограничены перечисленными: нетоксичные буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; соли, такие как хлорид натрия; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты, такие как октадецилдиметилбензилхлорид аммония, хлорид гексаметония, хлорид бензалкония, хлорид бензетония, фенол, бутиловый или бензиловый спирт, алкилпарабены, такие как метилпарабен или пропилпарабен, катехол, резорцинол, циклогексанол, 3-пентанол и мета-крезол; низкомолекулярные полипептиды (например, состоящие из менее чем приблизительно 10 аминокислотных остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; углеводы, такие как моносахариды, дисахариды, глюкоза, манноза или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексные соединения металлов, такие как Ζη-белковые комплексы; и неионные поверхностно-активные вещества, такие как ТАЕЕН или полиэтиленгликоль (ПЭГ). (РепипдЮп: ТНе 8с1епсе апй Ргасйсе οί РЬагтасу, 21-е издание, 2005 г., Университет естественных наук, Филадельфия, Пенсильвания).
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить любым количеством способов для местного или системного лечения. Введение можно осуществлять местно с помощью эпидермальных или трансдермальных пластырей, мазей, лосьонов, кремов, гелей, капель, суппозиториев, спреев, жидкостей и порошков; легочно посредством ингаляции или инсуффляции порошков или аэрозолей, включая применение ингалятора, внутритрахеально и внутриназально; перорально; или парентерально, включая внутривенное, интраартериальное введение, введение внутрь опухоли, подкожное, интраперитонеальное, внутримышечное (например, путем инъекции или инфузии) или интракраниальное (например, интратекальное или интравентрикулярное) введение.
Терапевтическое средство может находиться в лекарственной форме, содержащей одну дозу. Такие лекарственные формы включают таблетки, пилюли, капсулы, порошки, гранулы, растворы или суспензии в воде или безводных средах, или суппозитории. В твердых композициях, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим носителем. Обычные ингредиенты для изготовления таблеток включают кукурузный крахмал, лактозу, сахарозу, сорбит, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния, дикальцийфосфат или камеди, и разбавители (например, воду). Их можно использовать для получения твердой композиции (до придания ей лекарственной формы), содержащей гомогенную смесь соединения согласно настоящему изобретению, или нетоксичной фармацевтически приемлемой соли указанного соединения. Указанную твердую композицию затем разделяют на лекарственные формы, содержащие одну дозу, описанного выше типа. Таблетки, пилюли и т.д., содержащие лекарственную форму или композицию, можно покрыть или иным способом составить, чтобы получить лекарственную форму, дающую преимущество пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля может включать внутреннюю композицию, покрытую внешним компонентом. Более того, два компонента можно разделить с помощью энтеросолюбильного слоя, который препятствует разложению и позволяет внутреннему компоненту в неизменном виде пройти через желудок или задерживает его высвобождение. Для получения таких энтеросолюбильных слоев или покрытий можно применять множество материалов, такие материалы включают множество полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.
Агенты или антитела, связывающие УЕСР/ПЕЬ4, описанные в данной заявке, также можно заключить в микрокапсулы. Такие микрокапсулы получают, например, с помощью способов коацервации или путем полимеризации на границе раздела фаз, например, микрокапсулы из гидроксиметилцеллюлозы или желатина и полиметилметакрилатные микрокапсулы, соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственных средств (например, липосомах, микросферах альбумина, микроэмульсиях, наноча- 51 029958
стицах и нанокапсулах) или в макроэмульсиях, как описано в ЕеттЦоп: ТЬе 8с1епсе αηά РгасЬсе οί РЬагтасу, 21-е издание, 2005 г., Университет естественных наук в Филадельфии, Пенсильвания.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции содержат агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4 (например, антитело), согласно настоящему изобретению, образующий комплекс с липосомами. Способы получения липосом известны специалистам в данной области техники. Например, некоторые липосомы можно получить обращенно-фазовым выпариванием с использованием липидной композиции, содержащей фосфатидилхолин, холестерин и дериватизированный ПЭГ фосфатидилэтаноламин (ПЭГ-ФЭ). Липосомы можно экструдировать через фильтры с определенным размером пор с получением липосом желаемого диаметра.
В некоторых вариантах реализации изобретения можно получить композиции с замедленным высвобождением. Подходящие примеры композиций с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие агент, связывающий УЕОР/ОЕЬ4 (например, антитело), при этом матрицы находятся в виде сформованных изделий (например, пленок или микрокапсул). Дополнительные примеры матриц с замедленным высвобождением включают полиэфиры, гидрогели, такие как поли-2-гидроксиэтилметакрилат или поливиниловый спирт, полилактиды, сополимеры Ь-глутаминовой кислоты и 7-этил-Ь-глутамата, недеградируемый этиленвинилацетат, деградируемые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты, такие как ^υРΚΌN ЭЕР0Т™ (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты и гликолевой кислоты и ацетата лейпролида), ацетат-изобутират сахарозы и поли-Э-(-)-3-гидроксимасляную кислоту. В некоторых вариантах реализации изобретения помимо введения агента, связывающего УЕОР/ОЕЬ4 (например, антитела), способ или лечение дополнительно включает введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента. Дополнительный терапевтический агент можно вводить до, во время и/или после введения агента, связывающего УЕОР/ОЕЬ4. Также предложены фармацевтические композиции, содержащие агент, связывающий УЕОР/ОТЬ4, и дополнительный терапевтический агент(ы). В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент включает 1, 2, 3 или более дополнительных терапевтических агентов.
В комбинированной терапии с по меньшей мере двумя терапевтическими агентами часто используют агенты, которые имеют различные механизмы действия, хотя это не обязательно. Комбинированная терапия с применением агентов с различными механизмами действия может привести к аддитивным или синергическим эффектам. Комбинированная терапия может обеспечить возможность применения более низкой дозы каждого агента, чем когда их применяют в виде монотерапии, что позволяет уменьшить токсичные побочные действия и/или повысить терапевтический индекс по меньшей мере одного из агентов. Комбинированная терапия может уменьшить вероятность того, что появятся устойчивые раковые клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения комбинированная терапия включает терапевтический агент, который, прежде всего, воздействует (например, ингибирует или убивает) на неонкогенные клетки, и терапевтический агент, который, прежде всего, воздействует (например, ингибирует или убивает) на опухолегенные РСК.
Полезные классы терапевтических агентов включают, например, антитубулиновые агенты, ауристатины, вещества, связывающиеся с малой бороздкой спирали ДНК, ингибиторы репликации ДНК, алкилирующие агенты (например, комплексы платины, такие как цисплатин, комплексы моно(платины), комплексы бис(платины) и трехъядерные комплексы платины, а также карбоплатин), антрациклины, антибиотики, антифолаты, антиметаболиты, препараты, повышающие чувствительность к химиотерапии, дуокармицины, этопозиды, фторированные пиримидины, ионофоры, лекситропсины, нитрозомочевины, платинолы, антиметаболиты пуринов, пуромицины, препараты, повышающие чувствительность к лучевой терапии, стероиды, таксаны, ингибиторы топоизомеразы, алкалоиды барвинка или тому подобные агенты. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой алкилирующий агент, антиметаболит, антимитотический агент, ингибитор топоизомеразы или ингибитор ангиогенеза. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой комплекс платины, такой как карбоплатин или цисплатин. В некоторых вариантах реализации изобретения дополнительный терапевтический агент представляет собой комплекс платины в комбинации с таксаном.
Терапевтические агенты, которые можно вводить в комбинации с агентами, связывающими УЕОР/ОТЬ4, включают химиотерапевтические агенты. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения способ или лечение включает введение агента или антитела, связывающего УЕОР, согласно настоящему изобретению в комбинации с химиотерапевтическим агентом или коктейлем из нескольких различных химиотерапевтических агентов. В некоторых вариантах реализации изобретения способ или лечение включает введение агента или антитела, связывающего ОЕЬ4, согласно настоящему изобретению в комбинации с химиотерапевтическим агентом или коктейлем из нескольких различных химиотерапевтических агентов. В некоторых вариантах реализации изобретения способ или лечение включает введение биспецифического антитела согласно настоящему изобретению, которое связывает УЕОР и ОЕЬ4, в комбинации с химиотерапевтическим агентом или коктейлем из нескольких различных химиотерапевтических агентов.
- 52 029958
Химиотерапевтические агенты, подходящие для настоящего изобретения, включают, но не ограничены перечисленными: алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид (СУТ0ХАЩ; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлоретамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин; трофосфамид, урациловый иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антиобитики, такие как аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, калихеамицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марселломицин, митомицины, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-РИ); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пуринов, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидинов, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, арабинозид цитозина, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, 5-РИ; андрогены, такие как калустерон, дростанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналовые препараты, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; восполнители фолиевой кислоты, такие как фолиновая кислота; ацеглатон; гликозид альдофосфамида; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элформитин; ацетат эллиптиния; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; Р8К; разоксан; сизофуран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2"-трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (Ага-С); таксоиды, например, паклитаксел (ТАХ0Ь) и доцетаксел (ТАХ0ТЕЕЕ); хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (УР16); ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навельбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; ибандронат; СРТ11; ингибитор топоизомеразы ЕР8 2000; дифторметилорнитин (ЭМР0); ретиноевая кислота; эсперамицины; капецитабин (ХЕЬ0ПА); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из перечисленных агентов. Химиотерапевтические агенты также включают антигормональные агенты, которые действуют для регуляции или ингибирования действия гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены, включая, например, тамоксифен, ралоксифен, ингибирующие ароматазу 4(5)-имидазолы, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, ΕΥ117018, онапристон и торемифен (РАКЕ8Т0Щ; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и госерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из перечисленных агентов. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой цисплатин. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой карбоплатин. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой паклитаксел.
В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой ингибитор топоизомеразы. Ингибиторы топоизомеразы представляют собой химиотерапевтические агенты, которые препятствуют действию фермента топоизомеразы (например, топоизомеразы I или II). Ингибиторы топоизомеразы включают, но не ограничены перечисленными: гидрохлорид доксорубицина, цитрат даунорубицина, гидрохлорид митоксантрона, актиномицин Ό, этопозид, гидрохлорид топотекана, тенипозид (УМ-26) и иринотекан, а также фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из перечисленных ингибиторов. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой иринотекан.
В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой антиметаболит. Антиметаболит представляет собой химическое соединение, имеющее структуру, которая аналогична структуре метаболита, необходимого для обычных биохимических реакций, но, тем не менее, достаточно отлична, чтобы препятствовать одной или более нормальным функциям клеток, таким как деление клеток. Антиметаболиты включают, но не ограничены перечисленными: гемцитабин, фторурацил, капецитабин, метотрексат натрия, ралтитрексид, пеметрексед, тегафур, арабинозид цитозина, тиогуанин, 5-азацитидин, 6-меркаптопурин, азатиоприн, 6-тиогуанин, пентостатин, фосфат флударабина и кладрибин, а также фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из перечисленных антиметаболитов. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой гемцитабин.
В некоторых вариантах реализации изобретения химиотерапевтический агент представляет собой антимитотический агент, включая, но не ограничиваясь агентами, которые связывают тубулин. В некоторых вариантах реализации изобретения агент представляет собой таксан. В некоторых вариантах реа- 53 029958
лизации изобретения агент представляет собой паклитаксел или доцетаксел, или фармацевтически приемлемую соль, кислоту или производное паклитаксела или доцетаксела. В некоторых вариантах реализации изобретения агент представляет собой паклитаксел (ТАКСОЛ), доцетаксел (ТΛXΟТЕКЕ), паклитаксел, связанный с альбумином (АВКАХАХЕ), паклитаксел, связанный с докозагексановой кислотой (ДГК-паклитаксел), или паклитаксел, связанный с поли-Ь-глутаминовой кислотой (ПГ-паклитаксел). В некоторых альтернативных вариантах реализации изобретения антимитотический агент включает алкалоид барвинка, такой как винкристин, винбластин, винорелбин или виндезин, или его фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные. В некоторых вариантах реализации изобретения антимитотический агент представляет собой ингибитор кинезина Ед5 или ингибитор митотической киназы, такой как Ашота А или Р1к1. В некоторых вариантах реализации изобретения в которых химиотерапевтический агент, который вводят в комбинации с агентом, связывающим УЕОР/ПЕЬ4, представляет собой антимитотический агент, рак или опухоль, от которой лечат, представляет собой рак молочной железы или опухоль молочной железы.
В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент включает такой агент, как малая молекула. Например, лечение может включать комбинированное введение агента, связывающего УЕОР/ОЕЬ4 (например, антитела), согласно настоящему изобретению с малой молекулой, которая действует как ингибитор дополнительных ассоциированных с опухолью белков, включая, но не ограничиваясь перечисленными: ЕОРК, ЕгЪВ2, НЕК2 и/или УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой малую молекулу, ингибирующую сигнальный путь раковых стволовых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой низкомолекулярный ингибитор сигнального пути Νοίοΐι. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой низкомолекулярный ингибитор сигнального пути ΑηΙ. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой низкомолекулярный ингибитор сигнального пути ВМР. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой малую молекулу, ингибирующую передачу сигналов бета-катенина.
В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент включает биологическую молекулу, такую как антитело. Например, лечение может включать комбинированное введение агента, связывающего УЕОР/ПЕЬ4 (например, антитела), согласно настоящему изобретению с другими антителами против дополнительных ассоциированных с опухолью белков, включая, но не ограничиваясь антителами, которые связывают ЕОРК, ЕгЪВ2, НЕК2 и/или УЕОР. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, которое является антителом к маркеру раковой стволовой клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, которое связывает компонент сигнального пути Νοίοΐι. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, которое связывает компонент сигнального пути ΑηΙ. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, которое ингибирует сигнальный путь раковых стволовых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, ингибирующее сигнальный путь Νοίοΐι. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, ингибирующее сигнальный путь ΑηΙ. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, ингибирующее сигнальный путь ВМР. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, ингибирующее передачу сигналов бетакатенина. В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой антитело, которое представляет собой ингибитор или модулятор ангиогенеза (например, антитело к УЕОР или к рецептору УЕОР). В некоторых вариантах реализации изобретения второй терапевтический агент представляет собой бевацизумаб (АУА8Т1Ы), трастузумаб (НЕКСЕРТ1Ы), панитумумаб (УЕСТ1В1Х) или цетуксимаб (ЕКВ1ТИХ). Комбинированное введение может включать совместное введение, либо в одной лекарственной форме, либо с применением отдельных лекарственных форм, или последовательное введение в любом порядке, но, как правило, в течение такого периода времени, чтобы все активные агенты одновременно могли проявить свою биологическую активность.
Более того, лечение агентом, связывающим УЕОР/ОЕЬ4, описанным в данной заявке, может включать комбинированное лечение другими биологическими молекулами, такими как один или более цитокинов (например, лимфокинов, интерлейкинов, факторов некроза опухоли и/или факторов роста), или может сопровождаться хирургическим удалением опухолей, раковых клеток, или любой другой терапией, которую посчитает необходимой лечащий врач.
В некоторых вариантах реализации изобретения лечение включает введение агента, связывающего УЕОР/ОЕЬ4 (например, антитела), согласно изобретению в комбинации с лучевой терапией. Лечение агентом, связывающим УЕОР/ОЕЬ4, можно осуществлять до, во время или после проведения лучевой терапии. Схемы дозирования такой лучевой терапии может определить квалифицированный врач.
Должно быть очевидно, что комбинацию агента, связывающего УЕОР/ПЕЬ4, и дополнительного терапевтического агента можно вводить в любом порядке или параллельно. Лечение агентом, связываю- 54 029958
щим УЕОР/ИЬЬ4 (например, антителом), можно осуществлять до, во время или после введения химиотерапевтических агентов. Комбинированное введение может включать совместное введение, либо в одной лекарственной форме, либо с применением отдельных лекарственных форм, или последовательное введение в любом порядке, но, как правило, в течение такого периода времени, чтобы все активные агенты одновременно могли проявить свою биологическую активность. Получение и схемы приема таких химиотерапевтических агентов можно осуществлять согласно инструкциям производителя, или их может определить опытным путем квалифицированный практикующий врач. Получение и схемы приема таких химиотерапевтических агентов также описаны в ТЬе СЬето1Ьегару Уоигсе Воок, 4-е издание, 2008 г., М.С. Репу, редактор, ЫрршсоИ, АППатз & Айкшз, Филадельфия, Пенсильвания. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4, будут вводить пациентам, которые ранее прошли лечение вторым терапевтическим агентом. В других некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4, и второй терапевтический агент будут вводить, по существу, одновременно или параллельно. Например, субъекту могут вводить агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4 (например, антитело), во время прохождения курса лечения вторым терапевтическим агентом (например, химиотерапевтическим агентом). В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4, будут вводить в течение 1 года после лечения вторым терапевтическим агентом. В некоторых альтернативных вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4, будут вводить в течение 10, 8, 6, 4 или 2 месяцев после лечения любым вторым терапевтическим агентом. В других некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4, будут вводить в течение 4, 3, 2 или 1 недели после лечения любым вторым терапевтическим агентом. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4, будут вводить в течение 5, 4, 3, 2 или 1 дня после лечения любым вторым терапевтическим агентом. Дополнительно должно быть очевидно, что два (или более) агентов или лечений можно вводить субъекту с интервалом в считанные часы или минуты (т.е., по существу, одновременно).
Для лечения заболевания подходящая дозировка агента, связывающего УЕОР/ИЬЬ4 (например, антитела), согласно настоящему изобретению зависит от типа заболевания, от которого лечат, от тяжести и течения заболевания, от ответной реакции на лечение заболевания, от того, вводят ли агент или антитело, связывающее УЕОР/ИЬЬ4, для терапевтических или для профилактических целей, от предшествующей терапии, истории болезни пациента и так далее, на усмотрение лечащего врача. Агент или антитело, связывающее УЕОР/ИЬЬ4, можно вводить однократно или с помощью серии введений продолжительностью от нескольких дней до нескольких месяцев, или до тех пор, пока не произойдет излечение или пока не добьются улучшения болезненного состояния (например, уменьшения размера опухоли). Оптимальные схемы приема можно рассчитать путем измерения накопления лекарственного средства в организме пациента, и они будут изменяться в зависимости от относительной эффективности отдельного антитела или агента. Лечащий врач может определить оптимальные дозировки, методику введения доз и частоту повторения. В некоторых вариантах реализации изобретения дозировка агента или антитела, связывающего УЕОР/ИЬЬ4, составляет от приблизительно 0,01 мкг до приблизительно 100 мг на кг массы тела, от приблизительно 0,1 мкг до приблизительно 100 мг на кг массы тела, от приблизительно 1 мкг до приблизительно 100 мг на кг массы тела, от приблизительно 1 мг до приблизительно 100 мг на кг массы тела, от приблизительно 1 мг до приблизительно 80 мг на кг массы тела, от приблизительно 10 мг до приблизительно 100 мг на кг массы тела, от приблизительно 10 мг до приблизительно 75 мг на кг массы тела или от приблизительно 10 мг до приблизительно 50 мг на кг массы тела. В некоторых вариантах реализации изобретения дозировка антитела или другого агента, связывающего УЕОР/ИЬЬ4, составляет от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 20 мг на кг массы тела. В некоторых вариантах реализации изобретения дозу можно вводить один или более раз ежедневно, еженедельно, ежемесячно или ежегодно. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело или другой агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4, вводят один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели или один раз в месяц. В некоторых вариантах реализации изобретения агент, связывающий УЕОР/ИЬЬ4 (например, антитело), можно вводить сначала в более высокой "ударной" дозе, а затем в виде одной или более доз, ниже изначальной. В некоторых вариантах реализации изобретения частота введения также может изменяться. В некоторых вариантах реализации изобретения схема приема может включать введение первоначальной дозы, а затем дополнительных доз (или "поддерживающих" доз) раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели или раз в месяц. Например, схема приема может включать введение первоначальной ударной дозы, а затем еженедельных поддерживающих доз, составляющих, например, половину от первоначальной дозы. Или схема приема может включать введение первоначальной ударной дозы, а затем поддерживающих доз, составляющих, например, половину от первоначальной дозы раз в две недели. Или схема приема может включать введение трех первоначальных доз в течение 3 недель, а затем поддерживающих доз, например, такого же количества раз в две недели. Или схема приема может включать введение первоначальной дозы, а затем дополнительных доз раз в 3 недели или раз в месяц. Лечащий врач может оценить частоту повторения введений на основании измеренного времени удержания и концентраций лекарственного средства в жидкостях или тканях организма. Успешность терапии можно отслеживать с помощью обычных методик и анализов.
- 55 029958
Специалистам в данной области техники известно, что введение любого терапевтического агента может приводить к побочным действиям и/или токсичности. В некоторых случаях побочные действия и/или токсичность настолько тяжелы, что исключают введение конкретного агента в терапевтически эффективной дозе. В некоторых случаях, лекарственную терапию необходимо отменить, и можно пробовать введение других агентов. Тем не менее, многие агенты одного и того же терапевтического класса часто обладают близкими побочными действиями и/или токсичностью, что подразумевает либо необходимость прекращения терапии у пациента, либо, если это возможно, пациент будет страдать от неприятных побочных действий, связанных с данным терапевтическим агентом.
Побочные действия терапевтических агентов могут включать, но не ограничены перечисленными: крапивницу, кожную сыпь, зуд, тошноту, рвоту, снижение аппетита, диарею, озноб, жар, утомляемость, мышечную ломоту и боль, головные боли, низкое кровяное давление, высокое кровяное давление, гипокалиемию, низкое содержание форменных элементов крови, кровотечение и проблемы с сердцем.
Таким образом, один аспект настоящего изобретения направлен на способы лечения рака у пациента, включающие введение биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 с применением схемы дробного введения, которая может уменьшить побочные действия и/или токсичность, связанные с введением биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4. В данной заявке, "дробное введение" относится к схеме приема с промежутком времени между введениями доз большим, чем раз в неделю, например, введение дозы раз в 2 недели, раз в 3 недели, раз в 4 недели и т. д. В некоторых вариантах реализации изобретения способ лечения рака у пациента-человека включает введение пациенту эффективной дозы биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 в соответствии с дробной схемой приема. В некоторых вариантах реализации изобретения способ лечения рака у пациента-человека включает введение пациенту эффективной дозы биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 в соответствии с дробной схемой приема, и повышение терапевтического индекса биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает введение первоначальной дозы биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 пациенту и введение последующих доз биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 приблизительно раз в 2 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает введение первоначальной дозы биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 пациенту и введение последующих доз биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 приблизительно раз в 3 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает введение первоначальной дозы биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 пациенту и введение последующих доз биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4 приблизительно раз в 4 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы в дробной схеме приема представляют собой приблизительно такое же или меньшее количество, чем первоначальная доза. В других вариантах реализации изобретения последующие дозы представляют собой большее количество, чем первоначальная доза. Специалистам в данной области техники известно, что применяемые дозы будут изменяться в зависимости от клинических целей, которые нужно достичь. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет от приблизительно 0,25 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 0,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 1 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 2,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 7,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 10 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 12,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 15 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза составляет приблизительно 20 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют от приблизительно 0,25 мг/кг до приблизительно 15 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 0,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 1 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 2,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 7,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 10 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения последующие дозы составляют приблизительно 12,5 мг/кг.
В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает: (а) введение пациенту первоначальной дозы биспецифического антитела к УЕОР/БЬЬ4, равной приблизительно 2,5 мг/кг, и (Ь) введение последующих доз, равных приблизительно 2,5 мг/кг, раз в 2 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает: (а) введение пациенту первоначаль- 56 029958
ной дозы биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4, равной приблизительно 5 мг/кг, и (Ь) введение последующих доз, равных приблизительно 5 мг/кг, раз в 2 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает: (а) введение пациенту первоначальной дозы биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4, равной приблизительно 2,5 мг/кг, и (Ь) введение последующих доз, равных приблизительно 2,5 мг/кг, раз в 3 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает: (а) введение пациенту первоначальной дозы биспецифического антитела к
УЕОР/ПЬЬ4, равной приблизительно 5 мг/кг, и (Ь) введение последующих доз, равных приблизительно 5 мг/кг, раз в 3 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает: (а) введение пациенту первоначальной дозы биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4, равной приблизительно 2,5 мг/кг, и (Ь) введение последующих доз, равных приблизительно 2,5 мг/кг, раз в 4 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема включает: (а) введение пациенту первоначальной дозы биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4, равной приблизительно 5 мг/кг, и (Ь) введение последующих доз, равных приблизительно 5 мг/кг, раз в 4 недели. В некоторых вариантах реализации изобретения первоначальная доза и поддерживающие дозы различаются, например, первоначальная доза составляет приблизительно 5 мг/кг и последующие дозы составляют приблизительно 2,5 мг/кг. В некоторых вариантах реализации изобретения дробная схема приема может включать ударную дозу, например, первоначальная доза составляет приблизительно 20 мг/кг и последующие дозы составляют приблизительно 2,5 мг/кг или приблизительно 5 мг/кг, и их вводят раз в 2 недели, раз в 3 недели или раз в 4 недели.
Другой аспект изобретения направлен на способы уменьшения токсичности биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4 у пациента-человека, включающие введение пациенту биспецифического антитела к УЕОР/ОЬЬ4 с применением дробной схемы приема. Другой аспект настоящего изобретения направлен на способы уменьшения побочных действий биспецифического антитела к УЕОР/ОЬЕ-4 у пациентачеловека, включающие введение пациенту биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4 с применением дробной схемы приема. Другой аспект настоящего изобретения направлен на способы повышения терапевтического индекса биспецифического антитела к УЕОР/ЭЬЬ4 у пациента-человека, включающие введение пациенту биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4 с применением дробной схемы приема.
Выбор способа доставки первоначальной и последующих доз делали в соответствии со способностью животного или пациента-человека переносить введение в организм биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4. Таким образом, в любом из аспектов и/или вариантов реализации, описанных в данной заявке, введение биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4 можно осуществлять путем внутривенной инъекции, или внутривенно. В некоторых вариантах реализации изобретения введение осуществляют путем внутривенной инфузии. В любом из аспектов и/или вариантов реализации, описанных в данной заявке, введение биспецифического антитела к УЕОР/ПЬЬ4 можно осуществлять не внутривенным путем.
У. Наборы, содержащие агенты, связывающие УЕОР/ПЬЬ4.
Согласно настоящему изобретению предложены наборы, которые содержат агенты, связывающие УЕОР/ПЬЬ4 (например, антитела), описанные в данной заявке, и которые можно применять для осуществления способов, описанных в данной заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения набор содержит по меньшей мере одно очищенное антитело против УЕОР и/или ОЬЬ4 в одном или более контейнерах. В некоторых вариантах реализации изобретения наборы включают все компоненты, необходимые и/или достаточные для осуществления анализа детектирования, включая все контроли, инструкции по осуществлению анализов и все необходимое программное обеспечение для анализа и представления результатов. Для специалиста в данной области техники очевидно, что описанные агенты, связывающие УЕОР/ПЬЬ4, согласно настоящему изобретению можно легко включить в один из разработанных форматов набора, которые хорошо известны в данной области техники.
Дополнительно предложены наборы, содержащие агент, связывающий УЕОР/ПЬЬ4 (например, биспецифическое антитело к УЕОР/ПЬЬ4), а также по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент. В некоторых вариантах реализации изобретения второй (или более) терапевтический агент представляет собой химиотерапевтический агент. В некоторых вариантах реализации изобретения второй (или более) терапевтический агент представляет собой ингибитор ангиогенеза.
Варианты реализации изобретения согласно настоящему описанию можно дополнительно описать с помощью следующих неограничивающих примеров, в которых подробно описано получение некоторых антител согласно настоящему описанию и способы применения антител согласно настоящему описанию. Для специалистов в данной области техники должно быть очевидно, что можно осуществить множество модификаций как материалов, так и способов, не отклоняясь от объема настоящего описания.
Примеры
Пример 1. Аффинности связывания антител к УЕОР/ПЬЬ4.
К исходных антител к УЕОР - 219Р45 (формат Ι§0), к ОЬЬ4 - 21Р79 (формат Ι§0), к ОЬЬ4 21М18 (формат Ι§0), и биспецифических антител 219Ρ45-ΜΒ-21Μ18 и 219Ρ45-ΜΒ-21Ρ79 определяли, применяя систему Βίη^ΐΌ 2000 от Βίη^ΐΌ Ы£е8с1епсе8 (ОЕ Иеа11Нсаге). Рекомбинантные белки ПЕЬ4-Рс человека или ПЕЬ4-Рс мыши иммобилизовали на чипах на основе карбоксиметилированного декстрана
- 57 029958
(СМ5), применяя стандартную химию аминов (\4 Ιδ44Χ"), и блокировали этаноламином. Рекомбинантный νΕΟΡι65 человека или ΥΤΧίΙή,,ς мыши биотинилировали и иммобилизовали на стрептавидиновых чипах. Готовили двукратные серийные разведения антител от 100 до 0,78 нМ в буфере ΗΒδ-Ρ (0,01М ΗΕΡΕδ рН 7,4, 0,15М №С1, 0,005% полисорбат 20 (об./об.)). Для каждого антитела, все 8 разведений последовательно наносили путем впрыскивания на поверхность определенного чипа. Кинетические данные накапливали в динамике и подгоняли результаты, применяя уравнение одновременной глобальной подгонки, с получением констант сродства (значений Ко) ДЛЯ каждого биспецифического антитела.
_ Таблица 3
Антитело УЕОР человека (нМ) УЕОР мыши (нМ) ОЬЬ4 человека (нМ) ОЬЬ4 мыши (нМ)
219К45 0,67 22,9 Нет связывания Нет связывания
21М18 Нет связывания Нет связывания <0,1 Нет связывания
21К79 Нет связывания Нет связывания <0,1 Нет связывания
219К45-МВ-21 М18 0,36 25,5 16 Нет связывания
219К45-МВ-21К79 0,68 12,5 0,53 Нет связывания
В табл. 3 показано, что у биспецифического антитела 219Κ45-ΜΒ-21 - М18 - константа сродства (Ко) К νΕΟΡ человека составляла 0,36 нМ и Ко, К 1)14,4 человека составляла 16 нМ. У биспецифического антитела 219Κ45-ΜΒ-21Κ79 Ко, к νΕΟΡ человека составляла 0,68 нМ и Ко, к 1)14,4 человека составляла 0,53 нМ. Оба биспецифических антитела продемонстрировали более слабое связывание с νΕΟΡ мыши, по сравнению с νΕΟΡ человека, и ни одно из антител не связывало 1)1X4 мыши. Таким образом, оба биспецифических антитела продемонстрировали сходную аффинность связывания с νΕΟΡ человека, и 219Κ45-ΜΒ-21Κ79 продемонстрировало приблизительно в 30 раз более сильное связывание с 1)14,4 человека, чем 219Κ45-ΜΒ-21Μ18. Более того, биспецифическое антитело 219Κ45-ΜΒ-21Κ79 обладало сходной аффинностью связывания с νΕΟΡ человека, несмотря на тот факт, что биспецифическое антитело моновалентно по отношению к νΕΟΡ, по сравнению с бивалентным исходным антителом.
Было обнаружено несколько дополнительных антител к 1)14,4, которые обладали аффинностями связывания, находящимися посередине между Ко, антител 21М18 и 21Κ79. Два из данных антител к 1)14,4 использовали для получения биспецифических антител к νΕΟΡ/ΌΡΡ4 - 219Κ45-ΜΒ-21Κ75 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ83. Применяя систему Ршсоге 2000, описанную выше, определяли Ко, биспецифических антител к 1)14,4 человека - 219Κ45-ΜΒ-21Κ75 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ83. Сравнение аффинностей связывания с 1)14,4 человека данных четырех биспецифических антител против \4%Д1)14,4 показано в табл. 4.
Гипервариабельные участки биспецифических антител к УРХДОРЮ - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18, 219Κ45ΜΒ-21Κ79, 219Κ45-ΜΒ-21Κ75 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ83, - показаны на фиг. 1А. Номера последовательностей δΕΡ ΙΌ N0 вариабельной области тяжелой цепи и легкой цепи показаны на фиг. 1В и номера последовательностей δΕΟ ΙΌ N0 тяжелой цепи и легкой цепи (с сигнальной последовательностью и без нее) показаны на фиг. 1 С.
Биспецифическое антитело к νΕΟΡ/ΌΡΡ4 - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18 - содержит: (а) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, включающей δΕ(4 ΙΌ N0:75, депонированную в Американской коллекции типовых культур (АТСС), 10801 ишуегзДу ΒουΧναιτΙ, Манассас, Вирджиния, США, 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13233, (Ь) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, включающей δΕΡ ΙΌ N0:33, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13236, и (с) легкую цепь, кодируемую ДНК, включающей δΕΡ ΙΌ N0:34, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13235.
Биспецифическое антитело к νΕΟΡ/ΌΡΡ4 - 219Κ45-ΜΒ-21Κ79 - содержит: (а) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, включающей δΕΡ ΙΌ N0:31, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13232, (Ь) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, содержащей δΕΡ ΙΌ N0:33, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13236, и (с) легкую цепь, кодируемую ДНК, содержащей δΕΡ ΙΌ N0:34, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13235.
Биспецифическое антитело к νΕΟΡ/ΌΡΡ4 - 219Κ45-ΜΒ-21Κ83 - содержит: (а) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, содержащей δΕΟ ΙΌ N0:72, депонированную в АТСС 24 октября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13278, (Ь) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, содержащей δΕΟ ΙΌ N0:33, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13236, и (с) легкую цепь, кодируемую ДНК, содержащей δΕΟ ΙΌ N0:34, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13235.
- 58 029958
Биспецифическое антитело к ’УЕОРГОББ4 - 219Κ45-ΜΒ-21Κ75 - содержит: (а) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, содержащей 8ЕО ГО N0:74, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13234, (Ь) тяжелую цепь, кодируемую ДНК, содержащей 8ЕО ГО N0:33, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13236, и (с) легкую цепь, кодируемую ДНК, содержащей 8ЕО ГО N0:34, депонированную в АТСС 21 сентября 2012 г. согласно условиям Будапештского договора, с присвоенным номером депозита РТА-13235.
Таблица 4
Антитело ΟΌΚ2 тяжелой цепи ОЬЬ4 человека (нМ)
219К45-МВ-21М18 ΥΙ33ΥΝΟΑΤΝΥΝΟΚΓΚΟ (5Е(3 ГО N0:15) 16,00
219К45-МВ-21К79 ΥΙΑΝΥΝΚΑΤΝΥΝΟΚΓΚΟ (5Е(3 ГО N0:14) 0,53
219К45-МВ-21К75 ΥΙΑΟΥΚϋΑΤΝΥΝΟΚΓΚΟ (5Е(3 ГО N0:59) 5,10
219К45-МВ-21К83 ΥΙ3ΝΥΝΚΑΤΝΥΝ0ΚΓΚ0 (5Е(3 ГО N0:65) 1,30
Пример 2. Анализ методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (ПГКБ) одновременного связывания биспецифических антител с УЕОР человека и БББ4 человека.
Для того чтобы охарактеризовать способности связывания некоторых антител и/или смесей антител с обоими белками УЕОР и БББ4, осуществляли анализы методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (ПГКБ). Исследуемые антитела представляли собой биспецифические антитела к ААОБОНА - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ79, исходные антитела 219К45 (против УЕОР), 21Μ18 (против БББ4), 21К79 (против БББ4), комбинацию 219К45 и 21М18, или комбинацию 219К45 и 21К79. Готовили двукратные серийные разведения антител или смесей антител от 3000 до 2,9 нМ в буфере для связывания (1Х ФБР, 0,1% желатин, 0,1% полисорбат 20, 400 мМ фторид калия) и помещали в белый 96-луночный планшет. Равный объем раствора, содержащего 4 мкг/мл меченого 62 БББ4-Рс человека и 21,4 нг/мл меченого криптатом европия АЕОР165 человека, добавляли в каждую лунку до достижения конечного объема, равного 100 мкл (конечные концентрации акцепторного и донорного флуорофоров составляли 2 мкг/мл и 10,7 нг/мл соответственно). Аналитические планшеты инкубировали в течение от 2 ч до ночи и результаты считывали на спектрофотометре для прочтения микропланшетов М5е 8ρβΗΓαΜαχ (\1о1еси1аг Беуюез, Саннивейл, Калифорния) при длине волны возбуждения 314 нм. На фиг. 2 показано, что биспецифические антитела к АЕОРГОББ4 - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ79, - были способны одновременно связывать оба УЕОР человека и БББ4 человека. Важно отметить, что ни одна из комбинаций исходных антител (т.е. 219К45 и 21 М18 или 219К45 и 21К79) не была способна одновременно связывать УЕОР и БББ4. Полученные результаты явно демонстрируют, что биспецифические антитела к АЕОР/ОББ4 - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ79 - способны осуществлять функции, отличные от таковых у простой смеси двух отдельных антител.
Пример 3. Ингибирование пролиферации ΗυνΒΟ биспецифическими антителами к \·ΤΧ'ιΙΙ)1.1.4.
Клетки ПυVΒС получали от Бопга (Уолкерсвилл, Мэриленд) и культивировали в ростовых средах (М199, 10% термоинактивированной фетальной бычьей сыворотки (ТИ-ФБС), 50 мкг/мл этиленгликольбис-(сукцинимидилсукцината) (ЕО8), 1Х гепарин, 1 мМ Б-глутамин). Для анализа пролиферации ΗυУЕС, 96-луночный планшет предварительно покрывали 50 мкл раствора 10 мкг/мл коллагена типа Ι из хвостов крыс (коллаген Ι в 0,02н. уксусной кислоте) и инкубировали при 4°С в течение ночи. После инкубации, из планшета удаляли всю жидкость, чтобы удалить несвязавшийся раствор коллагена Ι, и промывали один раз 200 мкл фосфатно-солевого буферного раствора Дульбекко (ΌΡΒ8). Клетки ΗυVΒС снимали с поверхности культуральных флаконов с помощью специального реагента для субклонов эндотелиальных клеток, и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 мин при 4°С. Клетки ресуспендировали в голодной среде для анализа (М199 и 2% ТИ-ФБС, 1Х гепарин, 5 ед./мл гепарина-глутамина) при плотности 105 клеток/мл. Клетки высевали на покрытый коллагеном аналитический планшет в количестве 5000 клеток/лунку, 50 мкл/лунку. Клетки инкубировали в течение 3 ч при 37°С, промывали один раз, снова добавляли 100 мкл среды для анализа и инкубировали в течение ночи при 37°С. На следующий день готовили смесь с УЕОР человека биспецифических антител 219Κ45-ΜΒ-21Μ18, 219Κ45-ΜΒ-21Κ79, исходного антитела 219К45 или контрольного антитела ΕΖ1 (Κ&Ό Β^озузΐетз, Миннеаполис, Миннесота). Готовили пятикратные серийные разведения антител от 20 мкМ до 0,25 нМ в буфере для анализа в комбинации с УЕОР человека (конечная концентрация 5 нг/мл). Смесь предварительно инкубировали при 37°С в течение 2 ч. Среду удаляли из аналитического планшета и в каждую лунку добавляли смесь 100 мкл антитела/УЕОР человека. После 3-4 дней инкубации среду удаляли, в каждую лунку добавляли аликвоту свежей смеси антитела/УЕОР человека и оставляли инкубироваться в течение еще 4 дней. В день 7, в каждую лунку добавляли 20 мкл реагента аламарового синего Дпуйгодеп, Карлсбад, Калифорния) и инкубировали при 37°С в течение 5-6 ч. Результаты считывали с планшета с помощью спектрофотометра для прочтения микропланшетов М5е 8рес1га\1ах (У1о1еси1а1' Беуюез, Саннивейл, Калифорния),
- 59 029958
используя длину волны возбуждения 539 нм и длину волны испускания 590 нм.
На фиг. 3 показано, что биспецифические антитела к УЕОР/ПЬЬ4 - 219К45-МВ-21М18 и 219К45МВ-21К79, а также исходное антитело к УЕОР - 219К45, ингибировали пролиферацию НИУЕС. Полученные результаты продемонстрировали, что биспецифические антитела были способны ингибировать индуцированную УЕОР пролиферацию клеток НИУЕС.
Пример 4. Ингибирование биспецифическими антителами индуцированной ОБИ4 передачи сигналов Νοίαίι.
Клетки РС3 человека трансфицировали вектором экспрессии, кодирующим полноразмерный рецептор ΝοΙα1ι2 человека, и репортерным вектором люциферазы светлячка, содержащим 8 копий СВР (репортерный вектор 8хСВР-люцифераза), который реагирует на передачу сигналов Νοίαίι. Клетки также трансфицировали репортерным вектором люциферазы Кеш11а (Рготеда, Мадисон, Висконсин) в качестве внутреннего контроля эффективности трансфекции. Очищенным белком ИЕЬ4 человека покрывали 96луночные планшеты при концентрации 100 нг/лунку, и в лунки добавляли клетки РС3-1ис, экспрессирующие ΝοΙα1ι2. Готовили пятикратные серийные разведения биспецифических антител к УЕОР/ПЬЬ4 219К45-МВ-21М18, 219К45-МВ-21К79, исходных антител к ИЕЬ4 - 21М18, 21К79, или контрольного антитела ΕΖ1 от 20 мкг/мл до 0,064 мкг/мл, добавляли в соответствующие лунки и инкубировали в течение ночи. Активность люциферазы определяли с помощью набора для анализа гена двойной люциферазы (Рготеда, Мадисон, Висконсин), при этом активность люциферазы светлячка нормировали на активность люциферазы Кеш11а.
На фиг. 4 показано, что биспецифическое антитело к УЕОР/ОЕЬ4 - 219К45-МВ-21К79 - и исходные антитела к ИЕЬ4 - 21М18 и 21К79 - ингибировали индуцированную ИЕЬ4 передачу сигналов ΝοΕίι. Биспецифическое антитело 219К45-МВ-21М18 ингибировало индуцированную ИЕЬ4 передачу сигналов ΝοΕίι только при высоких концентрациях антитела. Полученные результаты продемонстрировали, что биспецифическое антитело 219К45-МВ-21К79 и, в меньшей степени, биспецифическое антитело 219К45МВ-21М18 были способны ингибировать индуцированную ИЕЬ4 передачу сигналов ΝοΕίι. Таким образом, вместе с результатами, представленными в примере 3, биспецифические антитела к УЕОР/ПЬЬ4 219К45-МВ-21К79 и 219К45-МВ-21М18 - продемонстрировали способность ингибировать как индуцированную УЕОР, так и индуцированную ИЕЬ4 передачу сигналов и/или пролиферацию.
Пример 5. Ингибирование роста опухоли ίη νίνο биспецифическим антителом в модели трансплантата кожи человека.
Была описана модель трансплантата кожи человека, которая включала трансплантат кожи человека и опухолевые клетки человека. Сначала осуществляли трансплантацию кожи человека, а затем в кожный трансплантат имплантировали опухолевые клетки человека, позволяя опухолевым клеткам расти в окружении стромы и сосудистой сети человека (ТаЬЙ8 и др., 2003, Мο1. Сансег ТНег. 2:229-737). Образцы кожи человека получали из ткани крайней плоти новорожденного и трансплантировали на боковую поверхность живота мышей ΝΟΌ-δΟΌ. После создания кожного трансплантата, клетки опухоли толстого кишечника ОМР-С8 (20000 клеток), меченые люциферазой, вводили путем внутрикожной инъекции в кожу человека. Рост опухоли отслеживали путем визуализации биолюминесценции с применением системы визуализации ΓΫΙδ (СаПрег Ы1с δΑι^δ, Маунтин-Вью, Калифорния). Опухолям позволяли расти до тех пор, пока их размеры не достигли 1,2 х 106 фотонов в секунду. Мышей, несущих опухоль, произвольно делили на группы (η = 6 мышей/группу) и лечили контрольным АТ, антителом к ИЕЬ4 человека 21М18, антителом к УЕОР - бевацизумабом, или биспецифическим антителом к УЕОР/ИЕЕ4 - 219К45МВ-21М18. Животных лечили раз в неделю, и антитела вводили интраперитонеально в дозе 25 мг/кг. Рост опухоли отслеживали путем визуализации биолюминесценции в указанные дни. На фиг. 5 показано, что как антитело к ИЕЬ4 человека - 21М18, так и антитело к УЕОР - бевацизумаб, ингибировали рост опухоли в данной модели трансплантата кожи человека/опухоли человека. Более того, биспецифическое антитело к УЕОР/ИЕЕ4 - 219К45-МВ-21М18 - оказалось более эффективным, чем любое из антител к ИЕЬ4 или УЕОР в отдельности. Полученные результаты демонстрируют пользу одновременного нацеливания биспецифического антитела на ИЕЬ4 и УЕОР.
Пример 6. Онкогенность клеток опухоли поджелудочной железы ОМР-РЖ после лечения биспецифическими антителами к УЕОР/ПЬЬ4.
Мышей, несущих клетки опухоли поджелудочной железы ОМР-РЖ, лечили контрольным антителом (15 мг/кг), антителом к ИЕЬ4 человека - 21М18 (15 мг/кг), антителом к УЕОР - бевацизумабом (15 мг/кг), или биспецифическими антителами к УЕОР/ОЕЬ4 - 219К45-МВ-21М18 или 219К45-МВ-21К79 (30 мг/кг), вместе с гемцитабином или без него (70 мг/кг). После четырех недель лечения, опухоли собирали, обрабатывали с получением суспензий отдельных клеток и очищали опухолевые клетки человека от клеток мыши путем иммуномагнитного очищения. 90 опухолевых клеток человека из каждой группы лечения переносили в новую группу мышей (η = 10 мышей/группу). Опухолям позволяли расти в течение 55 дней без какого-либо лечения и измеряли объемы опухоли с помощью электронного циркуля.
На фиг. 6 показаны объемы опухолей для отдельных мышей в каждой группе. Онкогенность клеток, выделенных из мышей, которых лечили антителом к ИЕЬ4 человека - 21М18 - была значительно ниже (у
- 60 029958
5 из 10 мышей развились опухоли) по сравнению с таковой у клеток, выделенных из мышей, которых лечили контрольным антителом, где у 9 из 10 мышей развились опухоли. Снижение частоты роста опухоли свидетельствует об уменьшении частоты раковых стволовых клеток. Наоборот, лечение бевацизумабом не привело к снижению частоты роста опухоли, у 10 из 10 мышей развились опухоли. Аналогично бевацизумабу, лечение гемцитабином в качестве монотерапии не повлияло на частоту роста опухоли, так как у 10 из 10 мышей развились опухоли. Оба биспецифических антитела к АЕОР/ОЕЬ4 - 219Κ45-ΜΒ21Μ18 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ79 - снижали частоту роста опухоли (у 5 из 10 мышей развились опухоли и у 4 из 10 мышей развились опухоли, соответственно). Комбинированное лечение с гемцитабином, похоже, не влияло на частоту роста опухоли. Полученные результаты свидетельствуют о том, что нацеливание на ОШ4 уменьшает частоту раковых стволовых клеток, тогда как нацеливание на АЕОР отдельно не оказывает такого действия. Важно отметить, что полученные результаты свидетельствуют о том, что активность антитела к ПЬЬ4 против РСК сохраняется в биспецифическом антителе.
Пример 7. Анализ ЕП8А биспецифического антитела.
Планшеты №пс шах1зогЬ покрывали АЕОР (ΑΤОΡN, Южная Корея) при концентрации 2 мкг/мл (100 мкл/лунку) и инкубировали в течение ночи при 2-8°С. Биспецифические антитела -219Κ45-ΜΒ21Μ18, 219Κ45-ΜΒ-21Κ79, 219Κ45-ΜΒ-21Κ75 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ.83 - разбавляли в блокирующем буфере (1х ФБР, 0,1% желатин, 0,1% полисорбат-20, рН 7,4), содержащем 2 мкг/мл биотин-ОГГ4-ЬРс. Готовили трехкратные серийные разведения антител от 500 до 0,008 нг/мл. Образцы антител инкубировали в течение 2 ч в блокирующем буфере, содержащем биотин-ОГГ4-НРс. После инкубации образцы антител переносили в аналитический планшет, покрытый АЕОР (100 мкл/лунку), и инкубировали в течение 2 ч. В каждую лунку добавляли конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена (.Гаскзоп йппшпоКезеагсЬ, Вест Гроув, Пенсильвания) и инкубировали в течение 1 ч. В лунки добавляли субстрат 3,3',5,5'тетраметилбензидин (ТМВ), позволяли окраске развиться в течение 10 мин и останавливали реакцию добавлением 2М серной кислоты. Поглощение считывали на 450-650 нм и анализировали результаты, применяя 4-параметрическую подгонку, с помощью программного обеспечения 8ойшах Рго (Μо1еси1а^ Эеуюез, Саннивейл, Калифорния).
На фиг. 7 показаны кривые титрования биспецифических антител - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18 (незакрашенные круги), 219Κ45-ΜΒ-21Κ.79 (незакрашенные квадраты), 219Κ45-ΜΒ-21Κ.75 (незакрашенные треугольники) и 219Κ45-ΜΒ-21Κ.83 (незакрашенные ромбы) - по сравнению с исходным биспецифическим антителом к АЕОР/ОГГ4 (закрашенные круги). Относительные эффективности биспецифических антител по сравнению с исходным биспецифическим антителом показаны в табл. 5.
_ Таблица 5
Антитело Относительная эффективность (%)
219К45-МВ-21М18 67
219К45-МВ-21К79 501
219К45-МВ-21К75 422
219К45-МВ-21К83 222
Биспецифическое антитело - 219Κ45-ΜΒ-21Κ.79 - оказалось наиболее эффективным, приблизительно в 7 раз более эффективным, чем 219Κ45-ΜΒ-21Μ18, что отражает более высокую аффинность сайта связывания антигена 21К79.
Пример 8. Получение биспецифических антител.
Биспецифические антитела получали с помощью линии клеток О8-СИ0. Клетки ΟΗ0Κ18ν (Ьопха ΒΦ^^χ) трансфицировали путем электропорации интересующим геном (генами), соединенным с глутаминсинтетазой (О8) в качестве селектируемого маркера. Трансфектантов и субклонов подвергали скринингу на эффективность продукции антител, и клетки с наибольшей продукцией антител выбирали для продукции в увеличенном масштабе. Клетки растили с помощью процесса с подпиткой и биореакторов с подпиткой. Выделяли антитело, накопившееся в собранной культуральной жидкости (СКЖ), и очищали, применяя хроматографические методики. Линии клеток, продуцирующих биспецифические антитела, - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18.010.017 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ.79.017.003 - культивировали в биореакторах объемом 5 л с механическим перемешиванием в течение 14 дней. Линия клеток 219Κ45-ΜΒ21Μ18.010.017 продуцировала антитело с конечным титром 3,0 г/л и линия клеток 219Κ45-ΜΒ21К79.017.003 продуцировала антитело с конечным титром 0,8 г/л. Линии клеток 219Κ45-ΜΒ-21Κ.75.101 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ.83.113 культивировали в биореакторе волновой системы ^ЛАЕ (ОЕ ЫеаНЬсаге) объемом 25 л, применяя процесс с подпиткой, чтобы добиться конечных титров антител, равных 0,4 г/л. Линии клеток, продуцирующих биспецифические антитела, - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18ΑΟ.138.007, 219Κ45-ΜΒ21Μ18ΑΟ. 038.009, 219Κ45-ΜΒ-21Μ18ΑΟ.142.002, 219Κ45-ΜΒ-21Κ79ΑΟ. 072.014 и 219Κ45-ΜΒ21К.83АО. 129.003 - культивировали в биореакторах объемом 5 л с механическим перемешиванием в течение 14 - 15 дней. Линия клеток 219Κ45-ΜΒ-21Μ18ΑΟ.138.007 продуцировала антитело с конечным титром 1,0 г/л после 14 дней культивирования. Линия клеток 219Κ45-ΜΒ-21Μ18Α0.038.009 продуцировала антитело с конечным титром 1,6 г/л после 14 дней культивирования. Линия клеток 219Κ45-ΜΒ- 61 029958
21М18АО.142.002 продуцировала антитело с конечным титром 2,6 г/л после 14 дней культивирования. Линия клеток 219К45-МВ-21К79АО.072.014 продуцировала антитело с конечным титром 2,1 г/л после 15 дней культивирования. Линия клеток 219К45-МВ-21М18АО.038.009 продуцировала антитело с конечным титром 2,4 г/л после 15 дней культивирования. Культуральную жидкость собирали путем фильтрации культуры каждой из данных четырех линий клеток и подвергали аффинной хроматографии на белке А. Колонку с белком А промывали несколькими буферами, и антитела элюировали, применяя элюирующий буфер с низким рН. Первичное определение чистоты биспецифических антител осуществляли с применением эксклюзионной хроматографии (ЭХ-ВЭЖХ) и изоэлектрического фокусирования (ИЭФ).
Эксклюзионную хроматографию (ЭХ) применяли для определения чистоты продуцированного антитела. ЭХ представляет собой хорошо известный хроматографический метод, в котором молекулы (например, антитела) в растворе разделяют по размерам. ЭХ можно применять для того, чтобы отделить продуцированное антитело от агрегатов и/или примесей, и определить процент продуцированных антител в общей смеси. В данной заявке ЭХ не позволяет разделить гомодимерное антитело и гетеродимерное биспепифическое антитело. Капиллярное изоэлектрическое фокусирование с детекцией непосредственно в капилляре (дкИЭФ) использовали для определения идентичности и чистоты гетеродимеров биспецифического антитела. Применяя дкИЭФ, изоформы антитела разделяют по заряду в соответствии с их изоэлектрическими точками (ρΐ), в результате чего получают "отпечаток" распределения антител по заряду. Способ дкИЭФ также можно применять для определения чистоты, путем отделения гетеродимеров биспецифических антител, пользуясь отличием их ρΐ, от каких-либо гомодимерных продуктов или примесей.
Образцы биспецифических антител анализировали с помощью дкИЭФ на устройстве 1СЕ280 Рго1етЗппр1е (Рго1ет31шр1е, Санта-Клара, Калифорния). Для данного анализа, смесь белков вводили в капилляр, на капилляр подавали высокое напряжение и амфолиты создавали линейный градиент рН по всей длине капилляра. Под действием электрического поля маркеры ρΐ и смесь белков продвигались вдоль капилляра до тех пор, пока они не достигали значения рН, при котором результирующий заряд равен нулю. После завершения изофокусировки, устройство 1СЕ280 осуществляло визуализацию всей колонки путем детектирования с помощью УФ-фотокамеры на длине волны 280 нм, чтобы получить распределение изоформ белков внутри капилляра. Полученную в результате этого электрофореграмму калибровали с использованием внутренних маркеров ρΐ и интегрировали, чтобы установить соответствующие площади процентного соотношения изоформ с различным зарядом в смеси белков. Распределение зарядов для нескольких биспецифических антител к УЕОЕ/ОЕЕ4 показано на фиг. 8. Для данного эксперимента, элюаты с белка А разбавляли водой ΝΊΐΙΙΐΟ до концентрации 6,6 мг/мл. Всего 18 мкл образца смешивали с 100 мкл 8М мочевины, 70 мкл 0,5% метилцеллюлозы, 8 мкл амфолитов РЬагша1у1е 310, 2 мкл маркера с высокой ρΐ и 2 мкл маркера с низкой ρΐ (конечный объем - 200 мкл). В табл. 6 показано процентное содержание антитела, продуцированного линиями клеток 219К45-МВ-21М18.010.017, 219К45-МВ-21К79.017.002, 219К45-МВ-21К75.101, 219К45-МВ-21К83.113, 219К45-МВ-21М18.138.007, 219К45-МВ-21М18АО.038.009, 219К45-МВ-21М18АО.142.002, 219К45-МВ-21К79АО.072.014 и 219К45МВ-21К83АО.129.003, после аффинной хроматографии на белке А, которое определяли с помощью ЭХВЭЖХ. В табл. 6 также показано процентное содержание гетеродимерных антител, продуцированных линиями клеток 219К45-МВ-21М18.010.017, 219К45-МВ-21К79.017.002, 219К45-МВ-21К75.101, 219К45МВ-21К83.113, 219К45-МВ-21М18.138.007, 219К45-МВ-21М18АО.038.009, 219К45-МВ21М18АО.142.002, 219К45-МВ-21К79АО.072.014 и 219К45-МВ-21К83АО.129.003, после аффинной хроматографии на белке А, которое определяли с помощью дкИЭФ.
_ Таблица 6
Линия клеток Титр антитела (г/л) Чистота, определенная с помощью ЭХ (%) Чистота, определенная с помощью ИЭФ (% гетеродимера)
219К45-МВ-21М18.010.017 3,0 73,9 47,2
219К45-МВ-21К79.017.002 0,8 79,3 72,5
219К45-МВ-21К75.101 0,4 91,2 84,9
219К45-МВ-21К83.113 0,4 91,8 91,4
219К45-МВ-21М18.138.007 1,0 92,6 95,8
219К45 -МВ-21Μ18 АО. 03 8.009 1,6 89,6 89,0
219К45-МВ-21М18АО. 142.002 2,6 91,2 84,6
219К45-МВ-21К79АО.072.014 2,1 87,8 84,9
219К45-МВ-21К83АО.129.003 2,4 89,4 90,5
Чистоту продуцированного биспецифического антитела можно дополнительно повысить с помощью дополнительных этапов хроматографии. После аффинной хроматографии на белке А, элюированную фракцию выдерживали при низком рН в течение не менее чем 60 мин при комнатной температуре для инактивации вирусов. Раствор антитела (элюат с колонки с белком А с подведенным рН) загружали
- 62 029958
на колонку с сильным анионообменником. Примеси, связанные с продуктом и процессом, связывались со смолой для анионообменной хроматографии, а проточную фракцию (продуцированное антитело) собирали. В некоторых случаях, чистоту дополнительно улучшали путем применения смолы для хроматографии на мультимодальных разделительных матрицах, такой как керамический гидроксиапатит. В некоторых случаях осуществляли замену буфера продуцированных антител, применяя методики ультрафильтрации и диафильтрации, после чего добавляли вспомогательные вещества. Антитело, включенное в состав лекарственной формы, фильтровали через стерильный фильтр в стерильные контейнеры и хранили охлажденным или замороженным. Чистоту биспецифических антител заново оценивали, применяя ЭХ-ВЭЖХ и ИЭФ.
Таблица 7
Линия клеток Чистота, определенная с помощью ЭХ (%) Чистота, определенная с помощью ИЭФ (% гетеродимера)
219Κ45-ΜΒ-21Μ18.010.017 98,9 98,5
219К45-МВ-21К79.017.002 95,1 99,3
219К45-МВ-21К.75.101 97,2 98,2
219К45-МВ-21К83.113 95,3 91,4
219К45-МВ-21М18.138.007 98,1 100
219К45-МВ-21М18АО. 142.002 99,6 100
219К45-МВ-21К79 АО. 072.014 98,2 100
219К45-МВ-21К83 АО. 129.003 998,6 100
В табл. 7 показано, что очистка биспецифических антител к νΕΟΡ/ΟΟΟΛ с помощью дополнительных этапов хроматографии после очистки на белке А приводила к получению продуцированных антител, которые были от 95 до приблизительно 99% чистыми, что выявили с помощью ЭХ. В результате анализа с помощью ИЭФ определили, что биспецифическое антитело к νΕΟΈ/ΌΕΕ4, очищенное из линии клеток 219Κ.45-ΜΒ-21Μ18.010.017, было на 98,5% гетеродимерным, биспецифическое антитело к \ΤΧ'ιΙΙ)1.1.4, очищенное из линии клеток 219Κ45-ΜΒ-21Κ79.017.002, было на 99,3% гетеродимерным, биспецифическое антитело к VΕΟΕ/^^^4, очищенное из линии клеток 219Κ45-ΜΒ-21Κ75.101, было на 98,2% гетеродимерным, биспецифическое антитело к νΕΟΈ/ΌΕΕ4, очищенное из линии клеток 219Κ45-ΜΒ21К83.113, было на 91,4% гетеродимерным, биспецифическое антитело к VΕΟΕ/^^^4, очищенное из линии клеток 219Κ.45-ΜΒ-21Μ18.138.007, было на 100% гетеродимерным, биспецифическое антитело к VΕΟΕ/^^^4, очищенное из линии клеток 219Κ45-ΜΒ-21Μ18ΑΟ.142.002, было на 100% гетеродимерным, биспецифическое антитело к νΕΟΈ/ΌΕΕ4, очищенное из линии клеток 219Κ45-ΜΒ21Κ.79ΑΟ.072.014, было на 100% гетеродимерным, и биспецифическое антитело к \ΤΧιΙΙ)1.1.4, очищенное из линии клеток 219Κ45-ΜΒ-21Κ83ΑΟ. 129.003, было на 100% гетеродимерным. Полученные результаты продемонстрировали, что этап анионообменной хроматографии сильно повысил процент гетеродимерных антител по сравнению с очисткой с помощью хроматографии на белке А отдельно. Добавление мультимодального этапа хроматографии, например, с применением керамического гидроксиапатита, также может улучшить чистоту мономера (что определяли с помощью ЭХ-ВЭЖХ).
Пример 9. Ингибирование роста опухоли толстого кишечника ОМР-С8 ίη νίνο в модели рецидива опухоли.
Суспензии отдельных клеток ксенотрансплантатов опухоли толстого кишечника ОМР-С8 (20000 клеток) вводили путем подкожной инъекции в боковую поверхность живота мышей N00^.40 в возрасте 6-8 недель. Опухолям позволяли расти в течение 33 дней до тех пор, пока они не достигли среднего объема 240 мм3. Мышей произвольно делили на группы (η = 10 на группу) и лечили антителом к ОЙЕД человека - 21М18, антителом к νΕΟΡ - бевацизумабом, комбинацией антител 21М18 и бевацизумаб, биспецифическим антителом к VΕΟΕ/^^^4 - 219Κ45-ΜΒ-21Μ18, биспецифическим антителом к
VΕΟΕ/^^^4 - 219Κ45-ΜΒ-21Κ79, или контрольным антителом, все антитела вводили в комбинации с иринотеканом. Антитела и иринотекан вводили еженедельно путем инъекции в интраперитонеальную полость. Антитела 21М18 и бевацизумаб вводили в дозе 7,5 мг/кг, биспецифические антитела - 219К45ΜΒ-21Μ18 и 219Κ45-ΜΒ-21Κ79 - вводили в дозе 15 мг/кг, и иринотекан вводили в дозе 45 мг/кг. Иринотекан вводили в течение четырех недель, по истечении этого времени его отменяли, а введение антител продолжали. Отслеживали рост опухоли и измеряли объемы опухолей с помощью электронного циркуля в указанные моменты времени. Результаты выражали в виде среднего ± стандартная ошибка среднего.
На фиг. 9 показано, что антитело к ПЬЬ4 человека - 21М18 - продолжало ингибировать рост опухоли после отмены лечения иринотеканом. Напротив, антитело к νΕΟΡ - бевацизумаб - оказалось неспособным ингибировать возобновление роста опухоли после отмены иринотекана. Комбинация антитела к ПЬЬ4 - 21М18 - и антитела к νΕΟΡ - бевацизумаба - ингибировала возобновление роста опухоли в большей степени, чем любой из агентов отдельно. Более того, биспецифическое антитело к VΕΟΕ/^^^4 - 63 029958
219К45-МВ-21М18 - более эффективно ингибировало возобновление роста опухоли, чем смесь двух указанных антител.
Пример 10. Уменьшение онкогенности опухолей толстого кишечника ОМР-С8.
Суспензии отдельных клеток ксенотрансплантатов опухоли толстого кишечника ОМР-С8 (20000 клеток) вводили путем подкожной инъекции в боковую поверхность живота мышей N00/8010 в возрасте 6-8 недель. Опухолям позволяли расти в течение 33 дней до тех пор, пока они не достигли среднего объема 300 мм3. Мышей произвольно делили на группы (п = 5 на группу) и лечили антителом к ОЬЬ4 21М18, антителом к УЕОР - бевацизумабом, комбинацией антител 21М18 и бевацизумаб, биспецифическим антителом к УЕОР/ОЬЬ4 - 219К45-МВ-21М18, биспецифическим антителом к УЕОР/ОЬЬ4 219К45-МВ-21К79, или контрольным антителом, либо в комбинации с иринотеканом, либо без иринотекана. Антитела и иринотекан вводили еженедельно путем инъекции в интраперитонеальную полость. Антитела 21М18 и бевацизумаб вводили в дозе 7,5 мг/кг, биспецифические антитела - 219К45-МВ21М18 и 219К45-МВ-21К79 - вводили в дозе 15 мг/кг, и иринотекан вводили в дозе 45 мг/кг. Опухоли собирали через 4 недели, обрабатывали с получением суспензий отдельных клеток, и выделяли опухолевые клетки человека. По 150 опухолевых клеток из каждой экспериментальной группы вводили путем подкожной инъекции новой группе мышей (η = 10 на группу), и опухолям позволяли расти в отсутствии лечения. Отслеживали рост опухоли и измеряли объемы опухолей с помощью электронного циркуля.
На фиг. 10 показаны отдельные объемы опухолей в день 68. Антитело к ОЬЬ4 - 21М18, комбинация 21М18 с антителом к УЕОР - бевацизумабом, биспецифические антитела - 219К45-МВ-21М18 и 219К45МВ-21К79, и иринотекан уменьшали частоту роста опухоли при применении в виде монотерапии. Напротив, антитело к УЕОР - бевацизумаб - в качестве монотерапии не влияло на частоту роста опухоли и было сравнимо с контрольным антителом. В группах, которые лечили комбинацией иринотекана и антител, биспецифическое антитело - 219К45-МВ-21М18 - наиболее сильно уменьшало частоту роста опухоли.
Пример 11. Ингибирование роста опухоли толстого кишечника ОМР-С8 ίη νίνο.
Суспензии отдельных клеток ксенотрансплантатов опухоли толстого кишечника ОМР-С8 (50000 клеток) вводили путем подкожной инъекции в боковую поверхность живота мышей N00/800 в возрасте 6-8 недель. Опухолям позволяли расти в течение 21 дня до тех пор, пока они не достигли среднего объема 80 мм3. Мышей произвольно делили на группы (п = 8 на группу) и лечили антителом к ОЬЬ4 21М18, антителом к УЕОР - бевацизумабом, биспецифическими антителами к УЕОР/ОЬЬ4 - 219К45МВ-21М18, 219К45-МВ-21К75, 219К45-МВ-21К79, 219К45-МВ-21К83, или контрольным антителом, либо отдельно, либо в комбинации с иринотеканом. Антитела и иринотекан вводили еженедельно путем инъекции в интраперитонеальную полость. Бевацизумаб и биспецифические антитела - 219К45-МВ21М18, 219К45-МВ-21К75, 219К45-МВ-21К79 и 219К45-МВ-21К83 - вводили в дозе 15 мг/кг и иринотекан вводили в дозе 7,5 мг/кг. Отслеживали рост опухоли и измеряли объемы опухолей с помощью электронного циркуля в указанные моменты времени. Результаты выражали в виде среднего ± стандартная ошибка среднего. В виде монотерапии все четыре биспецифических антитела к УЕОР/ОЬЬ4 проявили улучшенную противоопухолевую активность по сравнению с антителом к УЕОР - бевацизумабом. В комбинации с иринотеканом, лечение биспецифическими антителами к УЕОР/ОЬЬ4 - 219К45-МВ21М18 и 219К45-МВ-21К83 - приводило к самому сильному ингибированию роста опухоли (фиг. 11).
После фазы лечения получали срезы опухолей и анализировали их путем окрашивания гематоксилином и эозином (Н&Е). В опухолях, которые лечили 219К45-МВ-21М18 и 219К45-МВ-21К83 в комбинации с иринотеканом, выявили темно-розовые участки окрашивания, которые свидельствуют об обширной кальцификации. Такое окрашивание характерно для высокой степени некроза ткани опухоли.
Пример 12. Исследование токсичности биспецифических антител у яванских макак не по Надлежащей лабораторной практике (ОЬР).
Исследование токсичности не по ОЬР у яванских макак инициировали, чтобы оценить и сравнить профиль токсичности некоторых из биспецифических антител. Животным вводили дозу, равную 0 мг/кг (контроль), 5 мг/кг (низкая доза) или 30 мг/кг (высокая доза), биспецифического антитела к ОЬЬ4/УЕОР (219К45-МВ-21М18, 219К45-МВ-21К83 или 219К45-МВ-21К79) раз в 2 недели путем внутривенной инфузии. В каждой группе дозы вводили 3 самцам и 3 самкам. Через 15 недель средние массы тела оказались меньше у животных, которые получали высокую дозу 219К45-МВ-21К79, чем у животных, которые получали высокую дозу либо 219К45-МВ-21К18, либо 219К45-МВ-21К83. Кроме того, средние уровни сывороточного альбумина были ниже у животных, которые получали 219К45-МВ-21К79, чем у животных, которые получали либо 219К45-МВ-21К18, либо 219К45-МВ-21К83. Будучи предварительными, данные начальные результаты позволяют предположить, что 219К45-МВ-21К18 и 219К45-МВ-21К83 могут обладать лучшими профилями токсичности по сравнению с 219К45-МВ-21К79.
Должно быть очевидно, что примеры и варианты реализации, описанные в данной заявке, приведены исключительно с целью пояснения, и что специалистам в данной области техники будут предложены их различные модификации или изменения, которые должны быть включены в сущность и область настоящей заявки.
Все публикации, патенты, заявки на патент, интернет-сайты и номера доступа/последовательности
- 64 029958
из баз данных, включая как полинуклеотидные, так и полипептидные последовательности, цитированные в данной заявке, настоящим полностью и во всех отношениях включены в данную заявку посредством ссылки до той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент, заявка на патент, интернетсайт или номер доступа/последовательность из базы данных были конкретно и отдельно указаны как включенные посредством ссылки.
Перечень последовательностей
Тяжелая цепь 21М18 с сигнальной последовательностью (подчеркнута) (ЗЕф ГО N0:1)
МКНЬИЕЕЬЬЬУААРКИУЬЗОУОЬУОЗСАЕУККРбАЗУКТЗСКАЗбУЗЕТАУУТНИУКОАР 606ЬЕШ6У135УЫ6АТЫУЫ0КЕК6РУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗООТАУУУСАКОУО УОУ6МОУИ606ТЬУТУЗЗАЗТК6РЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУЗта ЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗЗбЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЫЕбТОТУТСЫУОНКРЗКГТКУОКТУЕРКС СУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬЕРРКРК0ТЬМ1ЗКТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУОЕКГИУУОбУЕ УНЫАКТКРРЕЕСЕЫЗТЕРУУЗУЬТУУН0О№ЬЫ6КЕУКСКУЗЫК6ЬРАР1ЕКТ13КТК60Р РЕР0УУТЬРРЗКЕЕМТКЫ0УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕ№ЕЗКГС0РЕШУКТТРРМЬО5О63 ЕЕЬУЗЕЬТУОКЗРИООбЫУЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Тяжелая цепь 21К79 с сигнальной последовательностью (подчеркнута) (ЗЕО ГО N0:2)
МКНЬ№ЕЕЬЬЬУААРК№УЬ30У0ЬУ03САЕУККР6АЗУК13СКА36УЗЕТАУУ1Н№УК0АР 606ЬЕШ6У1АЫУЫРАТЫУЫ0КЕК6РУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗООТАУУУСАКОУО УОУ6МОУИ606ТЬУТУЗЗАЗТК6РЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУЗта ЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗЗбЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЫЕбТОТУТСЫУОНКРЗКГТКУОКТУЕРКС СУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬЕРРКРК0ТЬМ1ЗКТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУОЕКГИУУОбУЕ УНЫАКТКРРЕЕСЕЫЗТЕРУУЗУЬТУУН0О№ЬЫ6КЕУКСКУЗЫК6ЬРАР1ЕКТ13КТК60Р РЕР0УУТЬРРЗКЕЕМТКЫ0УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕ№ЕЗКГС0РЕШУКТТРРМЬО5О63 ЕЕЬУЗЕЬТУОКЗРИООбЫУЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Тяжелая цепь 219К45 с сигнальной последовательностью (подчеркнута) (ЗЕО ГО N0:3)
МКНЬИЕЕЬЬЬУААРКИУЬЗОУОЬУОЗСАЕУККРбАЗУКУЗСКАЗбУТЕТЫУИМНИУКОАР бОбЬЕИМбОтаРЗЫбРТЗУКЕКЕКРРУТЬЗУОКЗЗЗТАУМЕЬЗЗЬРЗЕОТАУУЕСПНУО ОКУУРЬМОУИбОбТЬУТУЗЗАЗТКбРЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬбСЬУКОУЕРЕРУТУЗ тЯЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗЗбЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЫЕбТОТУТСЫУОНКРЗКГТКУОКТУЕР КССУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬЕРРКРК0ТЬМ1 ЗРТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУОЕШУУОб УЕУНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫЗТЕРУУЗУЬТУУН0О№ЬЫ6КЕУКСКУЗКГК6ЬРАР1ЕКТ13КТК6 0РРЕР0УУТЬРРЗРЕКМТКЫ0УЗЬТСЬУК6ЕУРЗО1АУЕИЕЗЫбОРЕШУКТТРРМЬКЗО бЗЕЕЬУЗКЬТУОКЗРИООбЫУЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Легкая цепь с сигнальной последовательностью (подчеркнута) (ЗЕО ГО N0:4)
МуЬ0Т0уЕ13ЬЬЬШ36АУ6О IУМТО 3 Ρ ϋ 3 ЬАУЗ Ь 6Е КАТ 13 СКАЗ Е 3 Υ0Ν У 613 ЕМКИ Е ССКР60РРКЬЫУААЗК0636УРОКЕ563636ТОЕТЬТ133Ь0АЕОУАУУУС003КЕУРИ ТЕ666ТКУЕ1ККТУААРЗУЕ1ЕРРЗОЕ0ЬК36ТАЗУУСЬЬКМЕУРКЕАКУ0ИКУОКАЬ03 6КЗОЕЗУТЕ005КОЗТУЗЬЗЗТЬТЬЗКАОУЕКНКУУАСЕУТН06ЬЗЗРУТКЗЕКГК6ЕС
Тяжелая цепь 21М18 без предсказанной сигнальной последовательности (ЗЕО ГО N0:5)
0ν0Εν036ΑΕνΚΚΡ6Α3νΚΙ3ΟΚΑ36Υ3ΕΤΑΥΥΙΗΗνΚ0ΑΡΟ06ΕΕΗΙ6ΥΙ33ΥΝ6ΑΤΝΥ
Ы0КЕК6КУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬКЗЬКЗООТАУУУСАКОУОУОУ6МОУИ606ТЬУТУЗЗА
ЗТКбРЗУЕРЬАРСЗКЗТЗЕЗТААЬбСЬУКОУЕРЕРУТУЗтаЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬСЗЗб
ЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗКЕбТОТУТСКУОНКРЗКГТКУОКТУЕККССУЕСРРСРАРРУАбРЗУЕЬ
ЕРРКРК0ТЬМ15КТРЕУТСУУУ0УЗНЕ0РЕУСЕКГИУУ06УЕУНКАКТКРКЕЕСЕКЗТЕКУ
У5УЬТУУН<20ИШ6КЕУКСКУ5КГК6ЬРАР1ЕКТ15КТК6(2РКЕР(2УУТЬРР5КЕЕМТКК(2
УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕИЕЗК6СРЕЫКУКТТРРМЬОЗО63ЕЕЬУЗЕЬТУОКЗКИ0С6КУ
ЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРСК
Тяжелая цепь 21К79 без предсказанной сигнальной последовательности (ЗЕО ГО N0:6)
0ν0Εν036ΑΕνΚΚΡ6Α3νΚΙ3ΟΚΑ36Υ3ΕΤΑΥΥΙΗΗνΚ0ΑΡΟ06ΕΕΗΙ6ΥΙΑΝΥΝΚΑΤΝΥ
К0КЕК6КУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬКЗЬКЗООТАУУУСАКОУОУОУ6МОУИ606ТЬУТУЗЗА
ЗТКбРЗУЕРЬАРСЗКЗТЗЕЗТААЬбСЬУКОУЕРЕРУТУЗтаЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬСЗЗб
ЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗКЕбТОТУТСКУОНКРЗКГТКУОКТУЕККССУЕСРРСРАРРУАбРЗУЕЬ
ЕРРКРК0ТЬМ13КТРЕУТСУУУ0УЗНЕ0РЕУСЕЫИУУ0СУЕУНЫАКТКРКЕЕСЕЫЗТЕКУ
У5УЬТУУН<20ИШ6КЕУКСКУ5КГК6ЬРАР1ЕКТ15КТК6(2РКЕР(2УУТЬРР5РЕЕМТКК(2
УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕИЕЗК6СРЕЫКУКТТРРМЬОЗО63ЕЕЬУЗЕЬТУОКЗКИ0С6КУ
ЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРбК
- 65 029958
Тяжелая цепь 219К45 без предсказанной сигнальной последовательности (ЛЕО ГО N0:7)
0ν0Εν056ΑΕνΚΚΡ6Α5νκν5ΟΚΑ56ΥΤΓΤΝΥ№ΜΗ№νΚ0ΑΡ606ΕΕ№Μ6ΟΙΝΡ5Ν6ΚΤ5Υ
КЕКЕКРРУТЬ5УОК555ТАУМЕЬ55ЬР5ЕОТАУУЕСТ1НУООКУУРЬМОУИ606ТЬУТУ5
5А5ТК6Р5УЕРЬАРС5Р5Т5Е5ТААЬ6С1ЛЛК0УЕРЕРУТУ5та56АЬТ56УНТЕРАУЬС5
ЗбШЗЬЗЗУУТУРЗЗЕЕбТСТУТСКГУОНКРЗКГТКУОКТУЕРКССУЕСРРСРАРРУАбРЗУ
ΕΕΕΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙ5ΡΤΡΕνΤθνννθν5ΗΕΟΡΕν0ΕΝ1/ίΥνθ6νΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ0ΕΝ5ΤΕ
Р\А5УЬТ\АН0ОЦЬЫ6КЕУКСКУ5ЫК6ЕРАР1ЕКТ15КТК60РРЕР0УУТЬРР5РЕКМТК
Ы0У5ЬТСЬУК6ЕУР5О1АУЕ№Е5Ы60РЕЫЫУКТТРРМЬК5О65ЕЕЬУ5КЬТУОК5Р№0С6
КГУЕ5С5УМНЕАЬНКГНУТ0К5Ь5Ь5Р6К
Легкая цепь без предсказанной сигнальной последовательности (5Е() ГО N0:8)
О1УМТ05РО5ЬАУ5Ь6ЕРАТ15СРА5Е5УОЫУ615ЕМК№Е00КР60РРКЬЫУАА5Ы0С5
6УРОРЕ565656ТОЕТЬТ155Ь0АЕОУАУУУС005КЕУР№ТЕ666ТКУЕ1КРТУААР5У1
ЕРР5ОЕ0ЬК56ТА5\АСЬЬЫЫЕУРРЕАКУ0№КУОЫАЬ056Ы50Е5УТЕ0О5КО5ТУ5Ь55
ТЬТЬ5КАОУЕКНКУУАСЕУТН06Ь55РУТК5ЕЫР6ЕС
Вариабельная область тяжелой цепи 21М18 (5Е() ГО N0:9)
0ν0Εν056ΑΕνΚΚΡ6Α5νΚΙ5ΟΚΑ56Υ5ΕΤΑΥΥΙΗ№νΚ0ΑΡ606ΕΕ№Ι6ΥΙ55ΥΝ6ΑΤΝΥ
Ν0ΚΕΚ6ΡνΤΕΤΤΟΤ5Τ5ΤΑΥΜΕΕΡ5ΕΡ5ΟΟΤΑνΥΥΟΑΡΟΥΟΥθν6ΜΟΥ№606ΤΕντν55
Вариабельная область тяжелой цепи 21К79 (8Е0 ГО N0:10)
0ν0Εν056ΑΕνΚΚΡ6Α5νΚΙ5ΟΚΑ56Υ5ΕΤΑΥΥΙΗ№νΚ0ΑΡ606ΕΕ№Ι6ΥΙΑΝΥΝΡΑΤΝΥ
Ν0ΚΕΚ6ΡνΤΕΤΤΟΤ5Τ5ΤΑΥΜΕΕΡ5ΕΡ5ΟΟΤΑνΥΥΟΑΡΟΥΟΥθν6ΜΟΥ№606ΤΕντν55
Вариабельная область тяжелой цепи 219К45 (8Е0 ГО N0:11)
0ν0Εν056ΑΕνΚΚΡ6Α5νκν5ΟΚΑ56ΥΤΕΤΝΥ№ΜΗ№νΡ0ΑΡ606ΕΕ№Μ6ΟΙΝΡ5Ν6ΡΤ5Υ
КЕКЕКРРУТЬ5УОК555ТАУМЕЬ55ЬР5ЕОТАУУЕСТ1НУООКУУРЬМОУИ606ТЬУТУ55
Вариабельная область легкой цепи (ЛЕО ГО N0:12)
О1УМТ05РО5ЬАУ5Ь6ЕРАТ15СРА5Е5УОЫУ615ЕМК№Е00КР60РРКЬЫУАА5Ы0С5
6УРОРЕ565656ТОЕТЬТ155Ь0АЕОУАУУУС005КЕУР№ТЕ666ТКУЕ1К
ΟϋΚΙ тяжелой цепи 21К75, 21К79, 21К83 и 21М18 (5Е(^ ГО N0:13)
ΤΑΥΥΙΗ
Альтернативный ΟϋΚΙ тяжелой цепи 21К75, 21К79, 21К83 и 21М18 (ЛЕО ГО N0:79)
ΑΥΥΙΗ
СГОВ2 тяжелой цепи 21К79 (ЛЕО ГО N0:14)
ΥΙΑΝΥΝΡΑΤΝΥΝ0ΚΕΚ6
СГОВ2 тяжелой цепи 21М18 (5Е(^ ГО N0:15)
ΥΙ55ΥΝ6ΑΤΝΥΝ0ΚΕΚ6
СГОВЗ тяжелой цепи 21К75, 21К79, 21К83 и 21М18 (5Е(^ ГО N0:16)
ΡΟΥΟΥϋνΟΜΟΥ
ΟϋΚΙ тяжелой цепи 219К45 (5Е(^ ГО N0:17)
ΝΥΐίΜΗ
СГОВ2 тяжелой цепи 219К45 (5Е(^ ГО N0:18)
0ΙΝΡ5Ν6ΡΤ5ΥΚΕΚΕΚΡ
СГОКЗ тяжелой цепи 219К45 (8Е(} ГО N0:19)
ΗΥϋϋΚΥΥΡΕΜΟΥ
ΟϋΚΤ легкой цепи (ЛЕО ГО N0:20)
ΡΑ5Ε5νϋΝΥ6Ι5ЕМК
- 66 029958
СГОВ2 легкой цепи (8Е0 ГО N0:21)
ΑΑ5ΝΦ65
СГОВЗ легкой цепи (8Е0 ГО N0:22)
ООЗКЕУРИТЕбб
ОЬЬ4 человека с сигнальной последовательностью (подчеркнута) (8Е0 ГО N0:23)
МААА5К5А56№АЬЬЬЬУАЬ№00КАА65бУЕОЬОЬОЕ Е1ЫЕР6УЬАЗ 6РРСЕ Р6СРТ ЕЕРУ СЬКНЕ0А\ШЗР6РСТЕ6ТУЗТРУЬ6ТЫЗЕАУРОО33666РЫРЬ0ЬРЕЫЕТ№Р6ТЕЗЫ1Е А№НАР6ООЬРРЕАЬРРОАЫЗК1А1063ЬАУ60Ы№ЬЬОЕ0ТЗТЬТРЬРУЗУРУ1СЗОЫУУ 6ОЫС5РЬСККРЫОНЕ6НУУС0РО6ЫЬ5СЬР6№Т6ЕУС00Р1СЬ56СНЕ0Ы6УС5КРАЕСЬ
и г. г гпи '.жг.ги ΐ чо ΐ г хуиьеи ччьг чиуиы'! ιυι πποπ,διί и1--! и
5Ы560Р5УТСТСРР6УТ6УОСЕЬЕЬ5ЕСО5ЫРСРЫ665СКО0ЕО6УНСЬСРР6УУ6ЬНСЕ
Н5ТЬ5СА05РСЕЫ665СРЕРЫ06АЫУАСЕСРРЫЕТ65ЫСЕККУОРСТ5ЫРСАЫ660СЬЫР
6РЗРМСРСРР6ЕТ6ТУСЕЬНУ30САРЫРСАН66ТСН0ЬЕЫ6ЬМСТСРА6Е36РРСЕУРТЗ
ЮАСАЗЗРСЕЫКАТСУТОЬЗТРТЕУСЫСРУСЕУСЗКСЕЕРУС
ОЬЬ4 человека без предсказанной сигнальной последовательности (8Е0 ГО N0:24)
36УЕ0Ь0Ь0ЕЕ1ЫЕР6УЬА36РРСЕР6СРТЕЕРУСЬКНЕ0А\ШЗР6РСТЕ6ТУЗТРУЬ6Т ЫЗЕАУРООЗЗбббРЫРЬОЬРЕЫЕТИРбТЕЗЫ1ЕА№НАР600ЬРРЕАЬРРРАЫ3ΚΙΑΙΦ 65ЬАУ60Ы№ЬЬОЕ0Т5ТЬТРЬРУ5УРУ1С5ОЫУУ6ОЫС5РЬСККРЫОНЕ6НУУС0РО6ЫЬ 5СЬР6№Т6ЕУС00Р1СЬ56СНЕ0Ы6УС5КРАЕСЬСРР6№06РЬСЫЕС1РНЫ6СРН6ТС5Т Р№0СТСОЕ6№66ЬЕСО0ОЬЫУСТНН5РСКЫ6АТС5Ы560Р5УТСТСРР6УТ6УОСЕЬЕЬ5 ЕСО5ЫРСРЫ665СКО0ЕО6УНСЬСРР6УУ6ЬНСЕН5ТЬ5САО5РСЕЫ665СРЕРЫ06АМУ АСЕСРРЫЕТ63ЫСЕККУОРСТЗЫРСАЫ660СЬЫР6РЗРМСРСРР6ЕТ6ТУСЕЬНУЗОСАР ЫРСАНббТСНОЬЕЫбЬМСТСРАбЕЗбРРСЕУРТЗЮАСАЗЗРСЕЫРАТСУТОЬЗТОТЕУС КГСРУбЕУбЗРСЕЕРУб
Ν-концевая область ОЬЬ4 человека (8Е0 ГО N0:25)
36УЕ0Ь0Ь0ЕЕ1ЫЕР6УЬА36РРСЕР6СРТЕЕРУСЬКНЕ0А\ШЗР6РСТЕ6ТУЗТРУЬ6Т ЫЗЕАУРООЗЗбббРЫРЬОЬРЕЫЕТИРбТЕЗЫ1ЕА№НАР600ЬРРЕАЬРРРАЫ3ΚΙΑΙΦ бЗЬАУбОЫ
Домен О8Ь ОЬЬ4 человека (8Е0 ГО N0:26)
ИЬЬОЕОТЗТЬТРЬРУЗУРУ1СЗОЫУУ6ОЫСЗРЬСККРЫОНЕ6НУУС0РО6ЫЬЗСЬР6№Т6 ЕУС
УЕОР-А человека с сигнальной последовательностью (подчеркнута) (ЗЕО ГО N0:27)
МЫЕЬЬЗИУНИЗЬАЬЬЬУЬННАКИЗОААРМАЕбббОЫННЕХШКЕМРУУОКЗУСНРIЕТЬУО 1Е0ЕУРОЕ1ЕУ1ЕКРЗСУРЬМРС66ССЫОЕ6ЬЕСУРТЕЕЗЫ1ТМ01МР1КРН060Н16ЕМ ЗЕЬ0НЫКСЕСРРККОРАР0ЕККЗУР6К6К60КРКРККЗРУКЗ№ЗУУУ6АРССЬМР№ЗЬР6 РНРСбРСЗЕРРКНЬЕУООРОТСКСЗСКЫТОЗРСКАРОЬЕЬЫЕРТСРСОКРРР
УЕОР-А человека без предсказанной сигнальной последовательности (ЗЕО ГО N0:28)
АРМАЕ6660КГННЕУУКЕМОУУ0Р5УСНР1ЕТЬУ01Е0ЕУРОЕ1ЕУ1ЕКР5СУРЬМРС66С
СЫОЕ6ЬЕСУРТЕЕЗЫ1ТМ01МР1КРН060Н16ЕМЗЕЬ0НЫКСЕСРРККОРАР0ЕККЗУР6
К6К60КРКРККЗРУКЗ№ЗУУУ6АРССЬМР№ЗЬР6РНРС6РСЗЕРРКНЬЕУ0ОР0ТСКСЗС
КЫТОЗРСКАРОЬЕЬЫЕРТСРСОКРРР
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21М18 (13В, вариант 1) (8Е0 ГО N0:29)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСССА6
СТССАССТССТССАСТСТСССССССААСТСААСАААССТССССССТСССТСААСАТСТСС
Т6САА66ССТСС66СТАСТССТТСАСС6СТТАСТАСАТССАСТ666ТСАА6СА66ССССТ
666СА666ССТ66ААТ66АТС66СТАСАТСТССТССТАСААС66С6ССАССААСТАСААС
СА6АААТТСАА666СС6С6Т6АССТТСАССАСС6АСАССТССАССТССАСС6ССТАСАТ6
6ААСТ6С66ТСССТ6С66А6С6АС6АСАСС6СС6Т6ТАСТАСТ6С6ССА6А6АСТАС6АС
ТАССАССТССССАТССАСТАСТССССССАССССАСССТССТСАСССТСТССТСТСССТСС
- 67 029958
АССАА666СССАТСС6Т6ТТСССТСТ66ССССТТ6СТССС6СТССАССТСТ6А6ТСТАСС
6СС6СТСТ666СТ6ССТ66Т6АА66АСТАСТТСССТ6А6ССТ6Т6АСС6Т6ТССТ66ААС
ТСТ66С6СССТ6АССТСТ66С6Т6САСАССТТСССТ6СС6ТССТ6СА6ТССТСС66ССТ6
ТАСТСССТ6ТСТА6С6Т66Т6АСС6Т6ССТТССТССААСТТС66САСССА6АССТАСАСС
Т6ТААС6Т66АССАСАА6ССТТССААСАССАА66Т66АСААСАСС6Т66А6С66АА6Т6С
Т6С6Т66А6Т6СССТССТТ6ТССТ6СТССТССТ6Т66СТ66СССТТСТ6Т6ТТССТ6ТТС
ССТССААА6ССТАА66АСАСССТ6АТ6АТСТССС66АССССТ6АА6Т6АССТ6С6Т66Т6
6Т66АС6Т6ТСССАС6А66АСССТ6А66Т6СА6ТТСААТТ60ТАС6Т66АС66С6Т66А6
6Т6САСААС6ССАА6АССАА6ССТС666А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66Т6
ТСТ6Т6СТ6АСС6Т66Т6САССА66АСТ66СТ6ААС66СААА6ААТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6ССССТАТС6АААА6АССАТСА6САА6АССАА666ССА6ССТ
С6С6А6ССТСА66Т6ТАСАСССТ6ССТСССА6СС666АА6АААТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66А666СТТСТАСССТТСС6АТАТС6СС6Т66А6Т666А6ТСТ
ААС66ССА6ССТ6А6ААСААСТАСАА6АССАССССТССТАТССТ66АСТСС6АС66СТСС
ТТСТТССТ6ТАСТСС6ААСТ6АСС6Т66АСАА6ТССС66Т6ССА6СА666СААС6Т6ТТС
ТССТ6СТСС6Т6АТ6САС6А66СССТ6САСААССАСТАСАСССА6АА6ТСССТ6ТСССТ6
ТСТССТ66САА6ТА6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К79 (13В, вариант 1) (5ЕЦ ГО N0:30)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСССА6
6Т6СА6СТ66Т6СА6ТСТ66С6СС6АА6Т6АА6АААССТ66С6ССТСС6Т6АА6АТСТСС
Т6САА66ССТСС66СТАСТССТТСАСС6ССТАСТАСАТССАСТ666Т6АААСА66САССА
66ССА666АСТ66ААТ66АТС66СТАТАТС6ССААСТАСААСС666ССАССААСТАСААС
СА6АААТТСАА666СС6С6Т6АССТТСАССАСС6АСАССТССАССТССАСА6ССТАСАТ6
6ААСТ6С66ТСССТ6С66А6С6АС6АСАСС6СС6Т6ТАСТАСТ6С6ССА6А6АСТАС6АС
ТАС6АС6Т666САТ66АСТАСТ6666ССА666САСССТ66Т0АСА6Т6ТССТСС6ССТСС
АССАА666ССССТСС6Т6ТТСССТСТ66ССССТТ6СТССС6СТССАССТСТ6А6ТСТАСС
6СС6СТСТ666СТ6ССТ66Т6АА66АСТАСТТСССТ6А6ССТ6Т6АСС6Т6ТССТ66ААС
ТСТ66С6СССТ6АССТСТ66С6Т6САСАССТТСССТ6СС6ТССТ6СА6ТССТСС66ССТ6
ТАСТСССТСТСТАСССТССТСАСССТСССТТССТССААСТТССССАСССАСАССТАСАСС
Т6ТААС6Т66АССАСАА6ССТТССААСАССАА66Т66АСААСАСС6Т66А6С66АА6Т6С
Т6С6Т66А6Т6СССТССТТ6ТССТ6СТССТССТ6Т66СТ66СССТТСТ6Т6ТТССТ6ТТС
ССТССААА6ССТАА66АСАСССТ6АТ6АТСТССС66АССССТ6АА6Т6АССТ6С6Т66Т6
6Т66АС6Т6ТСССАС6А66АСССТ6А66Т6СА6ТТСААТТ60ТАС6Т66АС66С6Т66А6
6Т6САСААС6ССАА6АССАА6ССТС666А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66Т6
ТСТ6Т6СТ6АСС6Т66Т6САССА66АСТ66СТ6ААС66СААА6ААТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6ССССТАТС6АААА6АССАТСА6САА6АССАА666ССА6ССТ
С6С6А6ССТСА66Т6ТАСАСССТ6ССТСССА6СС666АА6АААТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66А666СТТСТАСССТТСС6АТАТС6СС6Т66А6Т666А6ТСТ
ААС66ССА6ССТ6А6ААСААСТАСАА6АССАССССТССТАТССТ66АСТСС6АС66СТСС
ТТСТТССТ6ТАСТСС6ААСТ6АСС6Т66АСАА6ТССС66Т6ССА6СА666СААС6Т6ТТС
ТССТ6СТСС6Т6АТ6САС6А66СССТ6САСААССАСТАСАСССА6АА6ТСССТ6ТСССТ6
ТСТССТ66САА6ТА6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К79 (13В, вариант 2) (5ЕЦ ГО N0:31)
АТ6АА6САССТАТ66ТТСТТТСТАТТАТТА6Т66СС6СТСССС6ТТ666Т6ТТАТС6СА6
6ТТСА6СТА6ТТСА6ТСТ66А6С66АА6ТТАА6АААССТ66А6САТСС6Т6ААААТАА6Т
Т6САА66САТСС66ТТАСТС6ТТСАСС6САТАСТАТАТССАСТ666ТТАААСА66САССА
66АСА666АСТТ6ААТ66АТС66АТАТАТС6СТААТТАТААТА6А6СТАСАААСТАТААС
САААААТТСААА66АС6С6Т6АСТТТСАСААСТ6АСАССТСААССТС6АСА6САТАСАТ6
6ААТТАС66ТСССТАС66ТСТ6АС6АСАСТ6СС6ТТТАСТАТТ6С6СТА6А6АТТАТ6АТ
ТАТ6АТ6ТТ66ААТ66АСТАТТ6666ССА666ААСАСТ66Т0АСА6Т6ТСТТСТ6САТСС
АСТАА666АССАТСС6Т6ТТСССТТТ66ССССТТ6СТСТС6ТТС6АССТСТ6ААТС6АСТ
6СС6СТСТ666АТ6ССТС6Т6ААА6АТТАСТТСССТ6А6ССТ6Т6АСС6ТТТССТ66ААС
ТС666С6СССТААССТСТ66С6Т6САСАСАТТСССТ6СС6ТССТАСА6ТСТТСТ66ССТА
ТАСТСТТТАТСТТС66ТТ6ТТАСС6ТАССТТСТТСТААСТТС66ААСССАААСТТАСАСС
Т6ТААС6ТА6АССАСАА6ССТТС6ААСАССАА66Т66АСААСАСТ6ТТ6А6С6ААА6Т6С
Т6С6ТТ6А6Т6СССТССАТ6ТССТ6САССТССТ6Т66СТ66СССТТСТ6Т6ТТССТ6ТТС
- 68 029958
ССТССААААССТАА66АСАСТСТААТ6АТСТСТС66АСТССТ6А66Т6АСТТ6С6Т66ТТ
6Т66АС6Т6ТСССАС6А66АСССТ6А66Т6СА6ТТСААТТ66ТАС6Т66АС66А6ТС6А6
6Т6САСААТ6СААА6АССАА6ССТС666А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66ТТ
ТСТ6Т6ТТ6АСС6ТТ6Т6САССАА6АСТ66СТ6ААС66СААА6ААТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6ССССТАТС6АААА6АССАТСА6САА6АССАА666ССА6ССТ
С6С6А6ССТСА66Т6ТАСАСССТ6ССТСССА6СС666АА6АААТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66А666СТТСТАСССТТСС6АСАТС6СС6ТТ6А6Т666А6ТСТ
ААС66АСА6СС66А6ААСААСТАСАА6АСТАС6ССТССААТ6СТ66АСТСС6АС66СТСС
ТТСТТССТ6ТАСТСС6ААСТ6АСС6Т66АСАА6ТССС66Т66СА6СА666СААС6Т6ТТС
ТСАТ6СТСС6ТААТ6САС6АА6ССТТ6САСААТСАСТАСАСТСАААА6ТСССТАТССТТА
ТСТССТ66САА6ТА6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 219К45 (13А, вариант 1) (ЗЕО ГО N0:32)
АТ6АА6САТСТ6Т66ТТТТТССТ6ТТ6СТС6Т66С66САСССА6АТ666Т6ТТ6ТСССАА
6Т6СА6СТ66ТССА6А6С6666СТ6А66Т6АА6АААССС66А6САА6С6ТАААА6ТАТС6
Т6ТАА66ССТС6666ТАСАС6ТТТАСАААСТАСТ66АТ6САТТ666Т6С66СА66СТСС6
66АСА6666ТТ66ААТ66АТ666Т6АСАТТААССССТСАААТ66СА6ААСАТСАТАТАА6
6АААА6ТТСАААС6СС6С6ТСАСАСТСТСС6Т66АСАА6ТСАА6СТС6АСТ6С6ТАСАТ6
6ААСТТТС6ТС6СТ6А66ТС66А66АСАС66СА6Т6ТАСТТТТ6САССАТССАТТАТ6АТ
6АСАА6ТАТТАСССТСТ6АТ66АТТАТТ6666ТСА666ТАС6ТТ66ТСАСС6ТСТССА6С
6С6ТС6АС6ААА66ТСССТС66ТАТТТССССТС6СССССТ6СТС6А66ТС6АСАТСС6АА
ТСААСА6СТ6СССТС66СТ6ССТ66ТСААА6АСТАСТТСССА6А6СС66ТААС66Т6ТС6
Т66ААСТС666А6С6СТТАС6ТСС66А6ТССАСАСАТТТСС66С66ТАСТ6СААТССТС6
66АСТ6ТАТТСеТТ6ТС6ТСА6Т66Т6АСТ6ТССС6ТССТССААТТТС666АСТСА6АСС
ТАТАС6Т6СААС6ТС6АССАСАААСССТСАААСАССАА66Т66АТАА6АСА6Т66А6С6С
АА6Т6СТ6С6Т66А6Т6ТССССС6Т6ТСС66САСССССТ6ТС6СС66АСССТСА6ТСТТТ
ТТ6ТТТСС6СС6АА6СССААА6АТАСАСТСАТ6АТСТСАА6ААС6ССС6А66ТААСАТ6С
6Т66Т66ТС6АТ6ТАА6ССАС6А66АТССА6АА6ТАСААТТСААТТ66ТАТ6ТА6АС666
6ТС6А66ТССАТААС6СААА6АС6АААСС6А666АА6А6СА6ТТСААТТС6АСТТТСС66
6Т66Т6ТС66Т6СТТАСА6ТС6ТАСАТСА66АСТ66ТТ6ААС666АА66А6ТАСАА6Т6Т
ААА6ТАТС6ААТАА666ССТТССА6С6СС6АТТ6АААА6АССАТСТССАА6АССААА66А
СА6ССАС6А6А6СС6САА6ТСТАТАС6СТТССТСССА6СС6А6АААА6АТ6АСТАААААС
СА66ТАТС6СТТАС6Т6ТСТС6ТСАА666ТТТСТАСССТТС66АСАТС6С66Т66ААТ66
6А6А6СААТ66АСААСС66ААААСААСТАСАА6АС6АСАСС6ССТАТ6ТТ6АААА6С6АТ
66АТС6ТТТТТССТСТАТТС6АААСТСАС66ТС6АТАА6ТСАС66Т66СА6СА6666ААТ
6Т6ТТСТССТ6ТТСА6Т6АТ6САС6А66С6СТССАСААТСАСТАТАСССА6АААА6ССТ6
ТСАСТТТСССС666ААААТ6А
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 219К45 (13А, вариант 2) (ЗЕО ГО N0:33)
АТ6АА6САССТСТ66ТТСТТССТ6СТССТС6Т66СТ6СТССТС66Т666ТССТСТСССАА 6Т6СА6СТ66ТССА6А6С6666СТ6А66Т6АА6АААССС66А6СТТСС6ТСААА6ТСТСС Т6ТАА66СТТСС66АТАСАССТТТАССААСТАТТ66АТ6САСТ666Т6С66СА66СТССТ 66АСАА666СТ66ААТ66АТ666А6АСАТСААТССТТССААТ66СА6ААССТССТАСАА6 6АААААТТСАААС66С666ТСАСАСТСТСС6Т66АСАА6ТСТА6СТССАСА6СТТАСАТ6 6ААСТСТССТСССТ6С66ТСС6АА6АСАСА6СТ6ТСТАСТТСТ6САССАТССАСТАС6АС 6АСАА6ТАСТАСССТСТ6АТ66АСТАСТ6666ССА666ААСССТ66ТСАСС6Т6ТССА6С 6СТТССАСАААА66АСССТСС6ТСТТТССССТС6СССССТ6СТССС66ТССАСАТСС6АА ТСААСАССТССССТССССТСССТССТСАААСАСТАСТТСССАСАСССТСТСАСАСТСТСС Т66ААСТСС66А6СТСТСАСАТСС66А6ТССАСАСАТТТССТ6СТ6Т6СТССААТССТСС 66АСТ6ТАТТСССТСТССТСС6Т66Т6АСА6Т6ССТТССТССААТТТС666АСАСА6АСС ТАТАСАТ6СААС6Т66АССАСАААСССТССААСАССААА6ТС6АТАА6АСА6Т66А6С6С АА6Т6СТ6С6Т66А6Т6ТСССССТТ6ТССТ6СТСССССТ6Т66СТ66АССТТСС6ТСТТТ СТ6ТТТССТССТАААССТААА6АСАСССТСАТ6АТСТССС66АССССС6А66ТСАСАТ6С 6Т66ТС6ТС6АТ6Т6А6ССАС6А66АСССС6АА6ТССААТТТААТТ66ТАТ6Т66АС666 СТССАССТССАТААСССТААСАССАААССТАСССААСАССАСТТСААТТССАСТТТСССС 6Т66Т6ТСС6Т6СТ6АСС6ТС6ТТСАТСА66АСТ66СТСААС666ААА6ААТАСАААТ6С ААА6ТСТСТААТАА666ССТСССТ6СТССТАТТ6ААААААСААТТТССААААСАААА66А СААССТС666А6ССТСАА6ТСТАСАСАСТ6ССАССТТССС666ААААААТ6АСААААААТ
- 69 029958
СААСТСТСССТСАСАТСТСТССТСААСССАТТСТАСССТТСССАСАТТССТСТССААТСС
СААТССААТССАСААССТСААААСААСТАСААСАСААСАССТССТАТССТСААААСССАТ
СССТССТТТТТССТСТАТТССАААСТСАСАСТССАТААСТСТСССТСССАССАССССААТ
СТСТТСТССТСТТСССТСАТССАССАСССТСТССАСААТСАСТАТАСССАСААААСССТС
ТСССТСТССССТССААААТСА
Последовательность нуклеотидов легкой цепи (ЗЕф ГО N0:34)
АТССТССТССАСАСССАССТСТТСАТСТСССТССТССТСТССАТСТССССССССТАСССС
САСАТССТСАТСАСССАСТССССАСАСТСССТСССТСТСТСТСТСССАСАСССССССАСС
АТСТСТТССАСАСССТСССАСТСССТССАСААСТАССССАТСТССТТСАТСААСТССТТС
САССАСААССССССССАССССССАААССТССТСАТСТАСССССССТССААССАСССАТСТ
66С6Т6ССС6АСС66ТТСТСТ66АТСС66СТСТ66САСС6АСТТТАСССТ6АССАТСА6С
ТСССТССАСССССАССАССТСССССТСТАСТАСТСССАССАСТССАААСАССТССССТСС
АССТТССССССАСССАССААССТССАААТСААССССАСССТССССССТСССТСССТСТТС
АТСТТСССАСССТСССАССАССАССТСААСТССССААСССССТСССТССТСТСССТССТС
ААСААСТТСТАССССССССАССССААССТССАСТССААССТССАСААСССССТССАСТСС
СССААСТСССАССААТСССТСАСССАССАССАСТССААССАСАССАССТАСТСССТСТСС
ТССАСССТСАСССТСТССААСССССАСТАССАСААССАСААССТСТАССССТСССААСТС
АСССАССАСССССТСТССАССССССТСАССААСТССТТСААССССССССАСТСТТАС
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21М18 (ЗЕО ГО N0:35)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССССААСТСААСАААССТССССССТСССТСААСАТС
ТССТССААССССТСССССТАСТССТТСАССССТТАСТАСАТССАСТСССТСААССАСССС
ССТССССАСССССТССААТССАТССССТАСАТСТССТССТАСААСССССССАССААСТАС
ААССАСАААТТСААССССССССТСАССТТСАССАСССАСАССТССАССТССАСССССТАС
АТССААСТССССТСССТССССАСССАССАСАССССССТСТАСТАСТСССССАСАСАСТАС
САСТАССАССТССССАТССАСТАСТССССССАССССАСССТССТСАСССТСТССТСТ
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21К79 (13В) (ЗЕф ГО N0:36)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССССААСТСААСАААССТССССССТСССТСААСАТС
ТССТССААССССТСССССТАСТССТТСАСССССТАСТАСАТССАСТСССТСАААСАСССА
ССАССССАСССАСТССААТССАТССССТАТАТССССААСТАСААСССССССАССААСТАС
ААС САСАААТ Т СААСС СС С СС СТ САС С Т Т САС САС С САСАС С Т ССАС С Т С САСАСС С ТАС
АТССААСТССССТСССТССССАСССАССАСАССССССТСТАСТАСТСССССАСАСАСТАС
САСТАССАССТССССАТССАСТАСТССССССАССССАСССТССТСАСАСТСТССТСС
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21К79 (13В, вариант 2 ) (ЗЕО ГО N0:37)
САССТТСАССТАСТТСАСТСТССАССССААСТТААСАААССТССАССАТСССТСААААТА
АСТТССААСССАТССССТТАСТССТТСАССССАТАСТАТАТССАСТСССТТАААСАСССА
ССАССАСАСССАСТТСААТССАТСССАТАТАТСССТААТТАТААТАСАССТАСАААСТАТ
ААС САААААТ Т САААС САС СС СТ САС Т Т Т САСААС Т САСАС С Т СААС С Т С САСАССАТАС
АТССААТТАСССТСССТАСССТСТСАССАСАСТССССТТТАСТАТТССССТАСАСАТТАТ
САТТАТСАТСТТССААТССАСТАТТССССССАСССААСАСТССТСАСАСТСТСТТСТ
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 219К45 (13А, вариант 1) (ЗЕО ГО N0:38)
СААСТССАССТССТССАСАСССССССТСАССТСААСАААСССССАССААСССТААААСТА
ТССТСТААССССТСССССТАСАССТТТАСАААСТАСТССАТССАТТСССТСССССАСССТ
СССССАСАССССТ Т ССААТ ССАТ СССТ САСАТ ТААС СССТ САААТ СССАСААСАТ САТАТ
ААССААААСТТСАААСССССССТСАСАСТСТСССТССАСААСТСААССТССАСТСССТАС
АТССААСТТТССТСССТСАССТСССАССАСАССССАСТСТАСТТТТССАССАТССАТТАТ
САТСАСААСТАТТАСССТСТСАТССАТТАТТССССТСАСССТАССТТССТСАСССТСТСС
АСС
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 219К45 (13А, вариант 2) (ЗЕО ГО N0:39)
- 70 029958
САА6Т6СА6СТ66ТССА6А6С6666СТ6А66Т6АА6АААССС66А6СТТСС6ТСААА6ТС
ТССТ6ТАА66СТТСС66АТАСАССТТТАССААСТАТТ66АТ6САСТ666Т6С66СА66СТ
ССТ66АСАА666СТ66ААТ66АТ666А6АСАТСААТССТТССААТ66СА6ААССТССТАС
АА66АААААТТСАААС66С666ТСАСАСТСТСС6Т66АСАА6ТСТА6СТССАСА6СТТАС
АТ66ААСТСТССТСССТ6С66ТСС6АА6АСАСА6СТ6ТСТАСТТСТ6САССАТССАСТАС
6АС6АСАА6ТАСТАСССТСТ6АТ66АСТАСТ6666ССА666ААСССТ66ТСАСС6Т6ТСС
А6С
Последовательность нуклеотидов вариабельной области легкой цепи (8Е0 ГО N0:40)
6АСАТС6Т6АТ6АСССА6ТССССА6АСТСССТ66СТ6Т6ТСТСТ666А6А6С666ССАСС
АТСТСТТ6СА6А6ССТСС6А6ТСС6Т66АСААСТАС66САТСТССТТСАТ6АА6Т66ТТС
СА6СА6АА6ССС66ССА6СССССААА6СТ6СТ6АТСТАС6СС6ССТССААССА666АТСТ
66С6Т6ССС6АСС66ТТСТСТ66АТСС66СТСТ66САСС6АСТТТАСССТ6АССАТСА6С
ТСССТ6СА66СС6А66АС6Т66СС6Т6ТАСТАСТ6ССА6СА6ТССААА6А66Т6СССТ66
АССТТС66С66А66САССАА66Т66АААТСАА6
Константная область тяжелой цепи ΙβΟΙ человека (8Е0 ГО N0:41)
А5ТК6Р5УЕРЬАР55К5Т566ТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУ5та56АЬТ56УНТЕРАУЬ055 6ЬУ5Ь55УУТУР555Ь6Т0ТУ1СКМЯНКР5КГТКУОККУЕРК5СОКТНТСРРСРАРЕЬЬ66 Р5УЕЬЕРРКРК0ТЬМ15ΡΤΡΕνΤΟλΛ/νθν5ΗΕΟΡΕνΚΕΝ1/ίΥνθ6νΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ0ΥΝ 5ТУРУУ5УЬТУЬН<201лГЬК6КЕУКСКУ5КГКАЬРАР1ЕКТ15КАК6(2РРЕР(2УУТЬРР5Р0Е ЬТКК0У5ЬТСЬУК6ЕУР5О1АУЕ1лГЕ5К60РЕШУКТТРРУЬО5О65ЕЕЬУ5КЬТУОК5Р1лГ ООбКГУЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Константная область тяжелой цепи 1§02 человека (8Е0 ГО N0:42)
А5ТК6Р5УЕРЬАРС5Р5Т5Е5ТААЬ6СЬУК0УЕРЕРУТУ5та56АЬТ56УНТЕРАУЬ055
бЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗКЕбТОТУТСЫУОНКРЗКГТКУОКТУЕРКССУЕСРРСРАРРУАбРЗУЕ
ЬЕРРКРК0ТЬМ15РТРЕУТС\ЛЛАЖЗНЕ0РЕУСЕШУУ06УЕУНКАКТКРРЕЕСЕК5ТЕР
УУ5УЬТУУН<201лГЬК6КЕУКСКУ5КГК6ЬРАР1ЕКТ15КТК6(2РРЕР(2УУТЬРР5РЕЕМТКК
0У5ЬТС1ЛЛК6ЕУР5О1АУЕ1лГЕ5К60РЕШУКТТРРМЬО5О65ЕЕЬУ5КЬТУОК5Р1лГ006К
УЕ5С5УМНЕАЬНКГНУТ0К5Ь5Ь5Р6К
Константная область тяжелой цепи 1§03 человека (8Е0 ГО N0:43)
А5ТК6Р5УЕРЬАРС5Р5Т566ТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУ5та56АЬТ56УНТЕРАУЬ055
6ЬУ5Ь55УУТУР555Ь6Т0ТУТСКМЯНКР5КГТКУОКРУЕЬКТРЬ6ОТТНТСРРСРЕРК5С
0ТРРРСРРСРЕРК5С0ТРРРСРРСРЕРК5С0ТРРРСРРСРАРЕЬЬ66Р5УЕЬЕРРКРК0Т
ЬМ15РТРЕУТСУУУОУ5НЕОРЕУ0ЕК№УУО6УЕУНКАКТКРРЕЕ0УК5ТЕРУУ5УЬТУЬН
0О1лГЬК6КЕУКСКУ5КГКАЬРАР1ЕКТ15КТК60РРЕР0УУТЬРР5РЕЕМТКК0У5ЬТС1ЛЛК
6ЕУР501АУЕИЕ5560РЕШУКГТТРРМЬ05065ЕЕЬУ5КЬТУОК5Р1лГ006КГ1Е5С5УМНЕ
АЬНЫРЕТОКЗЬЗЬЗРбК
Константная область тяжелой цепи 1§04 человека (8Е0 ГО N0:44)
А5ТК6Р5УЕРЬАРС5Р5Т5Е5ТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУ5та56АЬТ56УНТЕРАУЬ055 6ЬУ5Ь55УУТУР555Ь6ТКТУТСКУ0НКР5КГТКУ0КРУЕ5КУ6РРСР5СРАРЕЕЬ66Р5У ΕΕΕΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙ5ΡΤΡΕνΤθνννθν50ΕΟΡΕν0ΕΝ1/ίΥνθ6νΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ0ΕΝ5ΤΥ РУУЗУЬТУЬНООИЬЫбКЕУКСКУЗКГКбЬРЗЗ ΙΕΚΤΙ 5КАК6<2РРЕР<2УУТЬРР5(2ЕЕМТК К0У5ЬТС1ЛЛК6ЕУР5О1АУЕ1лГЕ5К60РЕШУКТТРРУЬО5О65ЕЕЬУ5РЬТУОК5Р1лГ0Е6 ЫУЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗЬСК
Пептид РЬАСг (5Е(^ ГО N0:45)
ΟΥΚΟΟϋϋΚ
Тяжелая цепь исходного 21К79 с подчеркнутой сигнальной последовательностью, немодифицированная цепь (8Е0 ГО N0:46)
МКНЬ№ЕЕЬЬЬУААРК№УЬ50У0ЬУ056АЕУККР6А5УК15СКА56У5ЕТАУУ1Н№УК0АР
606ΕΕ№Ι6ΥΙΑΝΥΝΡΑΤΝΥΝ0ΚΕΚ6ΡνΤΕΤΤΟΤ5Τ5ΤΑΥΜΕΕΡ5ΕΡ5ΟΟΤΑνΥΥΟΑΡΟΥΟ
УОУ6МОУТС06ТЬУТУ55А5ТК6Р5УЕРЬАРС5Р5Т5Е5ТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУ5та
56АЬТ56УНТЕРАУЬ0556ЬУ5Ь55УУТУР55КЕ6Т0ТУТСКУОНКР5КГТКУОКТУЕРКС
- 71 029958
СУЕСРРСРАРРУАСРЗУЕЬЕРРКРКОТЬМ13РТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУ0ЕШУУОСУЕ
УНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫ5ТЕР\А5УЬТ\АН0О1лГЬЫ6КЕУКСКУ5ЫК6ЬРАР1ЕКТ15КТК60Р
РЕР0УУТЬРР5РЕЕМТКЫ0У5ЬТСЬУК6ЕУР5О1АУЕ1лГЕ5Ы60РЕЫЫУКТТРРМЬО5О65
ЕЕЬУ5КЬТУОК5Р№006ЫУЕ5С5УМНЕАЬНЫНУТ0К5Ь5Ь5Р6К
Тяжелая цепь исходного 219К45 с подчеркнутой сигнальной последовательностью (5Е0 ГО N0:47)
МКНШЕЕЬЬЬУААРК№УЬ50У0ЬУ056АЕУККР6А5УКУ5СКА56УТЕТЕУ№МН№УК0АР
С0СЬЕ1лГМСО1ЫРЗЫСРТЗУКЕКЕКРРУТЬЗУОКЗЗЗТАУМЕЬЗЗЬРЗЕОТАУУЕСТ1НУО
ОКУУРЬМОУИСОСТЬУТУЗЗАЗТКСРЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬССЬУКОУЕРЕРУТУЗ
Ш56АЬТ56УНТЕРАУЬ0556ЬУ5Ь55\ГУТУР55ЫЕ6Т0ТУТСЫУОНКР5ЫТКУОКТУЕР
КССУЕСРРСРАРРУАСРЗУЕЬЕРРКРКОТЬМ13РТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУ0ЕШУУОС
УЕУНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫ5ТЕР\ГУ5УЬТУУН0О1лГЬЫ6КЕУКСКУ5ЫК6ЬРАР1ЕКТ15КТК6
СРРЕР0УУТЬРР5РЕЕМТКЫ0У5ЬТСЬУК6ЕУР5О1АУЕИЕЗЫбОРЕЫЫУКТТРРМЬОЗО
65ЕЕЬУ5КЬТУОК5Р№006ЫУЕ5С5УМНЕАЬНЫНУТ0К5Ь5Ь5Р6К
Тяжелая цепь исходного 21К79 без предсказанной сигнальной последовательности (5Е0 ГО N0:48)
0У0ЬУ056АЕУККР6А5УК15СКА56У5ЕТАУУ1Н1лГУК0АР606ЬЕ1лГ16У1АЫУЫРАТЫУ
ЕСКЕКСКУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЕКЗЕКЗООТАУУУСАКОУОУОУСМОУиСССТЕУТУЗЗА
ЗТКбРЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬбСЬУКОУЕРЕРУТУЗтаЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗЗб
ЬУЗЬЗЗ\ГУТУРЗЗЫЕ6Т0ТУТСЫУОНКРЗЫТКУОКТУЕРКССУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬ
ЕРРКРКОТЬМ13РТРЕУТС\ЛГУОУЗНЕОРЕУ0ЕЫ1лГУУО6УЕУНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫЗТЕРУ
УЗУЬТУУН<2О№Ы\ГСКЕУКСКУЗЫКСЬРАР1ЕКТ13КТКС<2РКЕР<2УУТЬРРЗКЕЕМТКЫ<2
УЗЬТСЬУК6ЕУРЗО1АУЕ№ЕЗЫ60РЕЫЫУКТТРРМЬОЗО63ЕЕЬУЗКЬТУОКЗР1лГ006ЫУ
ЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Тяжелая цепь исходного 219К45 без сигнальной последовательности (5Е0 ГО N0:49)
СУ0ЬУ036АЕУККР6АЗУКУЗСКА36УТЕТЫУ1лГМН1лГУР0АР606ЬЕ1лГМ6О1ЫРЗЫ6РТЗУ
КЕКЕКРРУТЬЗУОКЗЗЗТАУМЕЬЗЗЬРЗЕОТАУУЕСТ1НУООКУУРЬМОУИ606ТЬУТУЗ
ЗАЗТКбРЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬбСЬУКОУЕРЕРУТУЗтаЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗ
ЗбЬУЗЬЗЗХГУТУРЗЗЫЕбТОТУТСЫУОНКРЗЫТКУОКТУЕРКССУЕСРРСРАРРУАбРЗУ
ЕЬЕРРКРКОТЬМ13РТРЕУТС\ЛГУОУЗНЕОРЕУ0ЕЫ1лГУУО6УЕУНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫЗТЕ
РУУЗУЬТУУН<2О1лГЬКГСКЕУКСКУЗКГКСЬРАР1ЕКТ1 ЗКТКС<2РРЕР<2УУТЬРРЗРЕЕМТК
Ы0УЗЬТСЬУК6ЕУРЗО1АУЕ1лГЕЗЫ60РЕЫЫУКТТРРМЬОЗО63ЕЕЬУЗКЬТУОКЗР1лГ006
ЫУЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи исходного 21К79 (5Е0 ГО N0:50)
СААСТССАССТССТССАСТСАСССССССАССТСААСААССССССАССАТСССТСААААТС
ТССТСТААССССТСССССТАСТССТТТАСТСССТАТТАСАТССАТТСССТАААССАСССС
ССАССССАСССАТТССАСТССАТТСССТАТАТССССААТТАСААТССССССАССААСТАТ
ААССАСАААТТСААСССААСССТСАССТТСАСААСССАТАСАТССАСАТССАСССССТАС
АТССААСТТСССАСССТСССАТСАСАТСАСАССССССТАТАСТАТТССССААСАСАТТАС
САСТАТСАТСТСССААТССАСТАТТССССТСААССТАСТСТССТСАСАСТСТССТСС
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи исходного 219К45 (5Е0 ГО N0:51)
САССТАСАССТССТССААТСССССССАСАССТСАААААССССССТСССТСССТАААССТС
АССТССАААСССТСАССТТАТАСАТТСАССААТТАСТССАТССАТТСССТСАСАСАСССС
ССТССАСААССССТТСААТССАТСССАСАТАТСААТСССТССААСССАСССАСТАССТАТ
ААССАСААСТТТААСАССССССТААСАСТСТСССТССАСАААТССТССТСААСССССТАС
АТССАСТТСТСАТСССТССССТСССААСАТАССССССТСТАСТТСТСТАСТАТССАСТАТ
САССАТААСТАСТАСССССТТАТССАСТАСТССССТСАСССААСАТТССТААСССТСАСС
АСС
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи исходного 21К79 с сигнальной
последовательностью (5Е() ГО N0:52)
- 72 029958
АТ6АААСАСТТ6Т66ТТТТТССТСТТ6СТС6Т66СА6СТССТС66Т666ТАСТТТСАСАА
6Т6СА6СТС6Т6СА6ТСА6666С66А66ТСАА6АА6СС666А6САТС66ТСААААТСТС6
Т6ТАА66ССТС6666ТАСТССТТТАСТ6С6ТАТТАСАТССАТТ666ТААА6СА66С6ССА
666СА666АТТ66А6Т66АТТ666ТАТАТС6ССААТТАСААТС6С6С6АС6ААСТАТААС
СА6АААТТСАА666АА666Т6АССТТСАСААС66АТАСАТС6АСАТС6АС66ССТАСАТ6
6ААСТТС6СА6ССТ6С6АТСА6АТ6АСАС66С66ТАТАСТАТТ6С6САА6А6АТТАС6АС
ТАТ6АТ6Т666ААТ66АСТАТТ6666ТСАА66ТАСТСТ66ТСАСА6ТСТССТСС6ССА6С
АССАА666СССТА6С6ТСТТСССТСТ66СТСССТ6СА6СА66А6САССА6С6А6А6САСА
6СС6СССТ666СТ6ССТ66ТСАА66АСТАСТТСССС6ААСС66Т6АС66Т6ТС6Т66ААС
ТСА66С6СТСТ6АССА6С66С6Т6САСАССТТСССА6СТ6ТССТАСА6ТССТСА66АСТС
ТАСТСССТСА6СА6С6Т66Т6АСС6Т6СССТССА6СААСТТС66САСССА6АССТАСАСС
Т6СААС6ТА6АТСАСАА6СССА6СААСАССАА66Т66АСАА6АСА6ТТ6А6С6САААТ6Т
Т6Т6ТС6А6Т6СССАСС6Т6СССА6САССАССТ6Т66СА66АСС6ТСА6ТСТТССТСТТС
СССССААААСССАА66АСАСССТСАТ6АТСТССС66АССССТ6А66ТСАС6Т6С6Т66Т6
6Т66АС6Т6А6ССАС6АА6АСССС6А66ТССА6ТТСААСТ66ТАС6Т66АС66С6Т66А6
6Т6САТААТ6ССАА6АСААА6ССАС666А66А6СА6ТТСААСА6САС6ТТСС6Т6Т66ТС
А6С6ТССТСАСС6ТТ6Т6САССА66АСТ66СТ6ААС66САА66А6ТАСАА6Т6САА66ТС
ТССААСААА66ССТСССА6СССССАТС6А6ААААССАТСТССААААССААА666СА6ССС
С6А6ААССАСА66Т6ТАСАСССТ6СССССАТССС666А66А6АТ6АССАА6ААССА66ТС
А6ССТ6АССТ6ССТ66ТСААА66СТТСТАССССА6С6АСАТС6СС6Т66А6Т666А6А6С
ААТ666СА6СС66А6ААСААСТАСАА6АССАСАССТСССАТ6СТ66АСТСС6АС66СТСС
ТТСТТССТСТАСА6САА6СТСАСС6Т66АСАА6А6СА66Т66СА6СА6666ААС6ТСТТС
ТСАТ6СТСС6Т6АТ6САТ6А66СТСТ6САСААССАСТАСАС6СА6АА6А6ССТСТСССТ6
ТСТСС666ТААА
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи исходного 219К45 с сигнальной
последовательностью (ЗЕО ГО N0:53)
АТ6АААСАССТСТ66ТТСТТТТТ6СТССТ66Т66СА6СТСССС6АТ666Т6СТТА6ССА6
6ТАСА6СТС6Т6СААТС66666СА6А66ТСААААА6ССС66Т6С6ТС66ТААА66ТСА6С
Т6СААА6С6ТСА66ТТАТАСАТТСАС6ААТТАСТ66АТ6САТТ666ТСА6АСА66ССССТ
66АСАА666СТТ6ААТ66АТ666А6АТАТСААТСС6ТС6ААС66АС66АСТА6СТАТАА6
6А6АА6ТТТАА6А66С6С6ТААСАСТ6ТС66Т66АСАААТС6ТССТСААС66ССТАСАТ6
6А6ТТ6ТСАТСССТ6С66ТС66АА6АТАС66С66ТСТАСТТСТ6ТАСТАТССАСТАТ6АС
6АТАА6ТАСТАССС6СТТАТ66АСТАСТ6666ТСА666ААСАТТ66ТААСС6Т6А6СА6С
6С6ТССАСААА666СССТА6С6ТСТТСССТСТ66СТСССТ6СА6СА66А6САССА6С6А6
А6САСА6СС6СССТ666СТ6ССТ66ТСАА66АСТАСТТСССС6ААСС66Т6АС66Т6ТС6
Т66ААСТСА66С6СТСТ6АССА6С66С6Т6САСАССТТСССА6СТ6ТССТАСА6ТССТСА
66АСТСТАСТСССТСА6СА6С6Т66Т6АСС6Т6СССТССА6СААСТТС66САСССА6АСС
ТАСАССТ6СААС6ТА6АТСАСАА6СССА6СААСАССАА66Т66АСАА6АСА6ТТ6А6С6С
АААТ6ТТ6Т6ТС6А6Т6СССАСС6Т6СССА6САССАССТ6Т66СА66АСС6ТСА6ТСТТС
СТСТТССССССААААСССАА66АСАСССТСАТ6АТСТССС66АССССТ6А66ТСАС6Т6С
6Т66Т66Т66АС6Т6А6ССАС6АА6АСССС6А66ТССА6ТТСААСТ66ТАС6Т66АС66С
6Т66А66Т6САТААТ6ССАА6АСААА6ССАС666А66А6СА6ТТСААСА6САС6ТТСС6Т
6Т66ТСА6С6ТССТСАСС6ТТ6Т6САССА66АСТ66СТ6ААС66САА66А6ТАСАА6Т6С
АА66ТСТССААСААА66ССТСССА6СССССАТС6А6ААААССАТСТССААААССААА666
СА6СССС6А6ААССАСА66Т6ТАСАСССТ6СССССАТССС666А66А6АТ6АССАА6ААС
СА66ТСА6ССТ6АССТ6ССТ66ТСААА66СТТСТАССССА6С6АСАТС6СС6Т66А6Т66
6А6А6СААТ666СА6СС66А6ААСААСТАСАА6АССАСАССТСССАТ6СТ66АСТСС6АС
66СТССТТСТТССТСТАСА6САА6СТСАСС6Т66АСАА6А6СА66Т66СА6СА6666ААС
СТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТСАСССТСТССАСААССАСТАСАСССАСААСАСССТС
ТСССТ6ТСТСС666ТААА
Последовательность нуклеотидов вариабельной области легких цепей исходных 21К79 и 219К45 (ЗЕО ГО N0:54)
6АСАТС6Т6АТ6АСССА6ТССССТ6АСТСССТ66СТ6Т6ТСССТ666С6А6А666ССАСС
АТСТССТ6СА6А6ССА6С6ААТСС6ТС6АТААТТАТ66САТТТССТТТАТ6АА6Т66ТТС
СА6СА6АААССА66АСА6ССТССТАА6СТ6СТСАТТТАС6СТ6САТССААССАА666ТСС
6666ТСССТ6АСА66ТТСТСС66СА6С666ТСС66ААСА6АТТТСАСТСТСАССАТСА6С
- 73 029958
А6ССТ6СА66СТ6АА6АТ6Т66СТ6ТСТАТТАСТ6ТСА6СААА6САА66А66Т6ССТТ66
АСАТТС66А66А666АССАА66Т66АААТСААА
Последовательность нуклеотидов легких цепей исходных 21К79 и 219К45 (ЗЕО ГО N0:55)
АТССТССТССАСАСССАССТСТТСАТТТСССТССТССТСТССАТСАССССАСССТАСССС
6АСАТС6Т6АТ6АСССА6ТССССТ6АСТСССТ66СТ6Т6ТСССТ666С6А6А666ССАСС
АТСТССТ6СА6А6ССА6С6ААТСС6ТС6АТААТТАТ66САТТТССТТТАТ6АА6Т66ТТС
СА6СА6АААССА66АСА6ССТССТАА6СТ6СТСАТТТАС6СТ6САТССААССАА666ТСС
6666ТСССТ6АСА66ТТСТСС66СА6С666ТСС66ААСА6АТТТСАСТСТСАССАТСА6С
А6ССТ6СА66СТ6АА6АТ6Т66СТ6ТСТАТТАСТ6ТСА6СААА6САА66А66Т6ССТТ66
АСАТТС66А66А666АССАА66Т66АААТСАААС6ТАС66Т66СТ6СССССТСС6ТСТТС
АТСТТСССССССА6С6АТ6А6СА6СТ6АААА6С66САСТ6ССА6С6Т66Т6Т6ССТ6СТ6
ААТААСТТСТАТСССС666А66ССААА6Т6СА6Т66АА66Т66АТААС6СССТССААА6С
66СААСТСССА66А6А6С6ТСАСА6А6СА66АСА6САА66АСА6САССТАСА6ССТСА6С
А6САСССТ6АСССТ6А6СААА6СС6АСТАС6А6АААСАСААА6ТСТАС6ССТ6С6АА6ТС
АСССАТСА666ССТ6А6СА6СССС6ТСАСААА6А6СТТСААСА6666С6А6Т6ТТ6А
Тяжелая цепь 21К75 без предсказанной сигнальной последовательности (ЗЕО ГО N0:56)
0У0ЬУ056АЕУККР6А5УК15СКА56У5ГТАУУ1Н1лГУК0АР606ЬЕШ6У1А6УКОАТЫУ
Ы0КЕК6РУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗООТАУУУСАРОУОУОУ6МОУ№606ТЬУТУЗЗА
ЗТКСРЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬССЬУКОУЕРЕРУТУЗтаЗСАЬТЗСУНТЕРАУЬОЗЗС
ЬУЗЬЗЗ\2УТУРЗЗЫЕ6Т0ТУТСЫУОНКРЗЫТКУОКТУЕРКССУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬ
ЕРРКРК0ТЬМ13РТРЕУТС\ЛЛЛ0УЗНЕ0РЕУСЕКПлГУУ06УЕУНЕАКТКРРЕЕСЕЕЗТЕРУ
УЗУЬТУУН0О№ЬЫ6КЕУКСКУЗЫК6ЬРАР1ЕКТ13КТК60РРЕР0УУТЬРРЗРЕЕМТКЫ0
УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕ№ЕЗЫ60РЕЫЫУКТТРРМЬОЗО63ЕЕЬУЗЕЬТУОКЗР№006ЫУ
ЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Тяжелая цепь 21К75 с предсказанной сигнальной последовательностью (подчеркнута) (ЗЕО ГО N0:57)
МКНШЕЕЬЬЬУААРК№УЬ50У0ЬУ056АЕУККР6А5УК15СКА56У5ЕТАУУ1Н№УК0АР
606ЬЕ№16У1А6УКОАТЫУЫ0КЕК6РУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗООТАУУУСАРОУО
УОУ6МОУТС06ТЬУТУЗЗАЗТК6РЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУЗта
ЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗЗбЬУЗЬЗЗХАТУРЗЗЫЕбТОТУТСЫУОНКРЗЫТКУОКТУЕРКС
СУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬЕРРКРКОТЬМ15РТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУ0ЕШУУО6УЕ
УНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫЗТЕР\2УЗУЬТ\АН0О№ЬЫ6КЕУКСКУЗЫК6ЬРАР1ЕКТ13КТК60Р
РЕР0УУТЬРРЗРЕЕМТКЫ0УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕ№ЕЗЫ60РЕЫЫУКТТРРМЬОЗО63
ЕЕЬУЗЕЬТУОКЗРИООСЫУЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗЬЗРСК
Вариабельная область тяжелой цепи 2! Р.75 (ЗЕО ГО N0:58)
<2У<2ЬУ(256АЕУККР6А5УК15СКА56У5ЕТАУУ1Н1л?УК(2АР6(26ЬЕ1л?16У1А6УК0АТЕУ
Ы0КЕК6РУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗООТАУУУСАРОУОУОУ6МОУ№606ТЬУТУЗЗ
€ΌΡ2 тяжелой цепи 21К75 (8Е(2 ГО N0:59)
ΥΙΑ6ΥΚΟΑΤΝΥΝ0ΚΕΚ6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 1) (8Е(2 ГО N0:60)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСССА6
6Т6СА6СТ66Т6СА6ТСТ66С6СС6АА6Т6АА6АААССТ66С6ССТСС6Т6АА6АТСТСС
Т6САА66ССТСС66СТАСТССТТСАСС6ССТАСТАСАТССАСТ666ТСАА6СА66ССССТ
66АСА666ССТ66ААТ66АТС66СТАТАТС6СС66СТАСАА66АС6ССАССААСТАСААС
СА6АААТТСАА666СА6А6Т6АССТТСАССАСС6АСАССТССАССТСТАСС6ССТАСАТ6
6ААСТ6С66ТСССТ6С66А6С6АС6АСАСС6СС6Т6ТАСТАСТ6С6ССА6А6АСТАС6АС
ТАС6АС6Т666САТ66АСТАСТ6666ССА666САСАСТС6Т6АСС6Т6ТССТСТ6СТТСС
АССАА666ССССТСС6Т6ТТТССТСТ66ССССТТ6СТССА6АТССАССТСС6А6ТСТАСС
6СС6СТСТ666СТ6ССТС6Т6АА66АСТАСТТСССС6А6ССС6Т6АСА6Т6ТСТТ66ААС
ТСТ66С6СССТ6АССТСС66С6Т6САСАССТТТССА6СТ6Т6СТ6СА6ТССТСС66ССТ6
ТАСТСССТ6ТССТСС6ТС6Т6АСТ6Т6СССТССТССААСТТС66САСССА6АССТАСАСС
- 74 029958
Т6ТААС6Т66АССАСАА6СССТССААСАССАА66Т66АСАА6АСС6Т66ААС66АА6Т6С
Т6С6Т66ААТ6ССССССТТ6ТССТ6ССССТССТ6Т66СТ66СССТА6С6Т6ТТССТ6ТТС
СССССААА6СССАА66АСАСССТ6АТ6АТСТССС66АССССС6АА6Т6АССТ6С6Т66Т6
СТССАТСТСТСССАССАССАСССССАССТССАСТТСААТТССТАССТССАСССССТССАА
6Т6САСААС6ССАА6АССАА6СССА6А6А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66Т6
ТСС6Т6СТ6АСС6Т66Т6САТСА66АСТ66СТ6ААС66СААА6А6ТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6СССССАТС6АААА6АССАТСТСТАА6АССАА6С6АСА6ССС
С6С6А6ССССА66Т6ТАСАСАСТ6ССТССАТССС666АА6А6АТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66АА66СТТСТАССССТСС6АТАТС6СС6Т66ААТ666А6ТСС
ААС66ССА6ССС6А6ААСААСТАСАА6АССАССССССССАТ6СТ66АСТСССАС66СТСА
ТТСТТССТ6ТАСА6С6А6СТ6АСА6Т66АСАА6ТССС66Т66СА6СА666СААС6Т6ТТС
ТССТ6СТСС6Т6АТ6САС6А66СССТ6САСААССАСТАСАСССА6АА6ТСССТ6ТСССТ6
А6СССС66САА6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 1Т) (8Е(^ ГО N0:77)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСТСА6
6Т6СА6СТ66Т6СА6ТСТ66С6СС6АА6Т6АА6АААССТ66С6ССТСС6Т6АА6АТСТСС
Т6САА66ССТСС66СТАСТССТТСАСС6ССТАСТАСАТССАСТ666ТСАА6СА66ССССТ
66АСА666ССТ66ААТ66АТС66СТАТАТС6СС66СТАСАА66АС6ССАССААСТАСААС
СА6АААТТСАА666СА6А6Т6АССТТСАССАСС6АСАССТССАССТСТАСССССТАСАТ6
6ААСТ6С66ТСССТ6С66А6С6АС6АСАСС6СС6Т6ТАСТАСТ6С6ССА6АСАСТАС6АС
ТАС6АС6Т666САТ66АСТАСТ6666ССА666САСАСТС6Т6АСС6Т6ТССТСТ6СТТСС
АССАА666ССССТСС6Т6ТТТССТСТ66ССССТТ6СТССА6АТССАССТСССА6ТСТАСС
6СС6СТСТ666СТ6ССТС6Т6АА66АСТАСТТСССС6А6ССС6Т6АСА6Т6ТСТТ66ААС
ТСТ66С6СССТ6АССТСС66С6Т6САСАССТТТССА6СТ6Т6СТ6СА6ТССТСС66ССТ6
ТАСТСССТ6ТССТСС6ТС6Т6АСТ6Т6СССТССТССААСТТС66САСССА6АССТАСАСС
Т6ТААС6Т66АССАСАА6СССТССААСАССАА66Т66АСАА6АСС6Т66ААС66АА6Т6С
Т6С6Т66ААТ6ССССССТТ6ТССТ6ССССТССТ6Т66СТ66СССТА6С6Т6ТТССТ6ТТС
СССССААА6СССАА66АСАСССТ6АТ6АТСТССС66АССССС6АА6Т6АССТ6С6Т66Т6
6Т66АТ6Т6ТСССАС6А66АСССС6А66Т6СА6ТТСААТТ66ТАС6Т66АСС6С6Т66АА
6Т6САСААС6ССАА6АССАА6СССА6А6А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66Т6
ТСС6Т6СТ6АСС6Т66Т6САТСА66АСТ66СТ6ААС66СААА6А6ТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6СССССАТС6АААА6АССАТСТСТАА6АССАА6С6АСА6ССС
С6С6А6ССССА66Т6ТАСАСАСТ6ССТССАТССС666АА6А6АТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66АА66СТТСТАССССТСС6АТАТС6СС6Т66ААТ666А6ТСС
ААС66ССА6ССС6А6ААСААСТАСАА6АССАССССССССАТ6СТ66АСТСССАС66СТСА
ТТСТТССТ6ТАСА6С6А6СТ6АСА6Т66АСАА6ТССС66Т66СА6СА666СААС6Т6ТТС
ТССТ6СТСС6Т6АТ6САС6А66СССТ6САСААССАСТАСАСССА6АА6ТСССТ6ТСССТ6
А6СССС66САА6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 31-2) (8Е(^ ГО N0:61)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСССА6
6ТТСА6СТА6ТТСА6ТСТ66А6С66АА6ТТАА6АААССТ66А6САТСС6Т6ААААТАА6Т
Т6САА66САТСС66ТТАСТС6ТТСАСС6САТАСТАТАТССАСТ666ТТАААСА66САССА
66АСА666АСТТ6ААТ66АТС66АТАТАТС6СТ66АТАТААА6АТ6СТАСАААСТАТААС
САААААТТСААА66АС6С6Т6АСТТТСАСААСТ6АСАССТСААССТС6АСАССАТАСАТ6
6ААТТАС66ТСССТАС66ТСТ6АС6АСАСТ6СС6ТТТАСТАТТ6С6СТА6АСАТТАТ6АТ
ТАТ6АТ6ТТ66ААТ66АСТАТТ6666ССА666ААСАСТ66Т6АСА6Т6ТСТТСТ6САТСС
АСТАА666АССАТСС6Т6ТТСССТТТ66ССССТТ6СТСТС6ТТС6АССТСТСААТС6АСТ
6СС6СТСТ666АТ6ССТС6Т6ААА6АТТАСТТСССТ6А6ССТ6Т6АСС6ТТТССТ66ААС
ТС666С6СССТААССТСТ66С6Т6САСАСАТТСССТ6СС6Т6СТАСА6ТСТТСТ66ССТА
ТАСТСТТТАТСТТС66ТТ6ТТАСС6ТАССТТСТТСТААСТТС66ААСССАААСТТАСАСС
Т6ТААС6ТА6АССАСАА6ССТТС6ААСАССАА66Т66АСАА6АСТ6ТТ6А6С6ААА6Т6С
Т6С6ТТ6А6Т6СССТССАТ6ТССТ6САССТССТ6Т66СТ66СССТТСТ6Т6ТТССТ6ТТС
ССТССААААССТАА66АСАСТСТААТ6АТСТСТС66АСТССТ6А66Т6АСТТ6С6Т66ТТ
6Т66АС6Т6ТСССАС6А66АСССТ6А66Т6СА6ТТСААТТ66ТАС6Т66АСС6А6ТС6А6
- 75 029958
6Т6САСААТ6СААА6АССАА6ССТС666А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66ТТ
ТСТ6Т6ТТ6АСС6ТТ6Т6САССАА6АСТ66СТ6ААС66СААА6ААТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6ССССТАТС6АААА6АССАТСА6САА6АССАА666ССА6ССТ
С6С6А6ССТСА66Т6ТАСАСССТ6ССТСССА6СС666АА6АААТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66А666СТТСТАСССТТСС6АСАТС6СС6ТТ6А6Т666А6ТСТ
ААС66АСА6СС66А6ААСААСТАСАА6АСТАС6ССТССААТ6СТ66АСТСС6АС66СТСС
ТТСТТССТСТАСТСССААСТСАСССТССАСААСТСССССТСССАССАССССААССТСТТС
ТСАТ6СТСС6ТААТ6САС6АА6ССТТ6САСААТСАСТАСАСТСАААА6ТСССТАТССТТА
ТСТССТ66САА6
Тяжелая цепь 21К83 без предсказанной сигнальной последовательности (8ЕО ГО N0:62)
□У0ЬУ23САЕУККРСАЗУК13СКАЗСУЗЕТАУУт™УК<2АРС<2СЬЕШСУ13ЫУЫР.АТЫУ
Ы0КЕК6РУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗООТАУУУСАРОУОУОУ6МОУ№606ТЬУТУЗЗА
ЗТКбРЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬбСЬУКОУЕРЕРУТУЗтаЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗЗб
ЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЫЕ6Т0ТУТСЫУ0НКРЗКГТКУ0КТУЕРКССУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬ
ЕРРКРКОТЬМ13РТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУ0ЕКПлГУУ06УЕУНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫЗТЕРУ
УЗУЬТУУН0О№ЬЫ6КЕУКСКУЗЫК6ЬРАР1ЕКТ13КТК60РРЕР0УУТЬРРЗРЕЕМТКЫ0
УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕ№ЕЗЫ60РЕЫЫУКТТРРМЬОЗО63ЕЕЬУЗЕЬТУОКЗР№006ЫУ
ЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТОКЗЬЗЬЗРбК
Тяжелая цепь 21К83 с предсказанной сигнальной последовательностью (подчеркнута) (8Е0 ГО N0:63)
МКНЬ№ЕЕЬЬЬУААРК№УЬ30У0ЬУ036АЕУККР6АЗУК13СКА36УЗЕТАУУ1Н№УК0АР С<2СЬЕ№ ΙΟΥΙ5ΝΥΝΚΑΤΝΥΝ<2ΚΕΚΟΚνΤΕΤΤΌΤ5Τ5ΤΑΥΜΕΕΚ5ΕΚ5ΌΌΤΑνΥΥΟΑΚΌΥΌ УОУ6МОУТС06ТЬУТУЗЗАЗТК6РЗУЕРЬАРСЗРЗТЗЕЗТААЬ6СЬУКОУЕРЕРУТУЗта ЗбАЬТЗбУНТЕРАУЬОЗЗбЬУЗЬЗЗУУТУРЗЗЫЕбТОТУТСЫУОНКРЗКГТКУОКТУЕРКС СУЕСРРСРАРРУА6РЗУЕЬЕРРКРКОТЬМ13РТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУОЕШУУ06УЕ УНЫАКТКРРЕЕ0ЕЫЗТЕРУУЗУЬТУУН0О1лГЬЫ6КЕУКСКУЗКГК6ЬРАР1ЕКТ13КТК60Р РЕР0УУТЬРРЗРЕЕМТКЫ0УЗЬТСЬУЕ6ЕУРЗО1АУЕ№ЕЗЫ60РЕЫЫУКТТРРМЬОЗО63 ЕЕЬУЗЕЬТУ0КЗР№006ЫУЕЗСЗУМНЕАЬНКГНУТ0КЗЬЗЬЗР6К
Вариабельная область тяжелой цепи 21К83 (8Е0 ГО N0:64)
0У0ЬУ036АЕУККР6АЗУК13СКА36УЗЕТАУУ1Н1лГУК0АР606ЬЕШ6У13ЫУЫРАТЫУ
Ы0КЕК6РУТЕТТОТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗООТАУУУСАРОУОУОУ6МОУ№606ТЬУТУЗЗ
ΟϋΚ2 тяжелой цепи 21К83 (8Е(2 ГО N0:65)
ΥΙ3ΝΥΝΡΑΤΝΥΝ0ΚΕΚ6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К83 с подчеркнутой сигнальной
последовательностью (13В, вариант 1) (8Е() ГО N0:66)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСССА6
6Т6СА6СТ66Т6СА6ТСТ66С6СС6АА6Т6АА6АААССТ66С6ССТСС6Т6АА6АТСТСС
Т6САА66ССТСС66СТАСТССТТСАСС6ССТАСТАСАТССАСТ666ТСАА6СА66ССССТ
66АСА666ССТ66ААТ66АТС66СТАСАТСТССААСТАСААСС666ССАССААТТАСААС
СА6АААТТСАА666СС6С6Т6АССТТСАССАСС6АСАССТСТАССТСТАСС6ССТАСАТ6
6ААСТ6С66ТСССТ6С66А6С6АС6АСАСС6СС6Т6ТАСТАСТ6С6ССА6А6АСТАС6АС
ТАС6АС6Т666САТ66АСТАСТ6666ССА666САСАСТС6Т6АСС6Т6ТСТА6С6СТТСС
АССАА666ССССТСС6Т6ТТТССТСТ66ССССТТ6СТССА6АТССАССТСС6А6ТСТАСС
6СС6СТСТ666СТ6ССТС6Т6АА66АСТАСТТСССС6А6ССС6Т6АСА6Т6ТССТ66ААС
ТСТ66С6СТСТ6АССТСС66С6Т6САСАССТТТССА6СТ6Т6СТ6СА6ТССТСС66ССТ6
ТАСТСССТ6ТССТСС6ТС6Т6АСТ6Т6СССТССТССААСТТС66САСССА6АССТАСАСС
Т6ТААС6Т66АССАСАА6СССТССААСАССАА66Т66АСАА6АСС6Т66ААС66АА6Т6С
ТСССТССААТСССССССТТСТССТСССССТССТСТСССТСССССТАСССТСТТССТСТТС
СССССААА6СССАА66АСАСССТ6АТ6АТСТССС66АССССС6АА6Т6АССТ6С6Т66Т6
6Т66АТ6Т6ТСССАС6А66АСССС6А66Т6СА6ТТСААТТ66ТАС6Т66АС66С6Т66АА
6Т6САСААС6ССАА6АССАА6СССА6А6А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66Т6
ТСССТССТСАСССТССТССАТСАССАСТСССТСААССССАААСАСТАСААСТССААССТС
ТССААСАА666ССТ6ССТ6СССССАТС6АААА6АССАТСТСТАА6АССАА666АСА6ССС
- 76 029958
С6С6А6ССССА66Т6ТАСАСАСТ6ССТССАТССС666АА6А6АТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТСАССТСТСТССТССААСССТТСТАССССТСССАТАТСССССТССААТСССАСТСС
ААС66ССА6ССС6А6ААСААСТАСАА6АССАССССССССАТ6СТ66АСТСС6АС66СТСА
ТТСТТССТ6ТАСА6С6А6СТ6АСА6Т66АСАА6ТССС66Т66СА6СА666СААС6Т6ТТС
ТССТ6СТСС6Т6АТ6САС6А66СССТ6САСААССАСТАСАСССА6АА6ТСССТ6ТСССТ6
А6СССС66САА6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К83 с подчеркнутой сигнальной последовательностью (13В, вариант 1Т) (8Е0 ГО N0:78)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСТСА6
6Т6СА6СТ66Т6СА6ТСТ66С6СС6АА6Т6АА6АААССТ66С6ССТСС6Т6АА6АТСТСС
Т6САА66ССТСС66СТАСТССТТСАСС6ССТАСТАСАТССАСТ666ТСАА6СА66ССССТ
66АСА666ССТ66ААТ66АТС6ССТАСАТСТССААСТАСААСС666ССАССААТТАСААС
СА6АААТТСАА666СС6С6Т6АССТТСАССАСС6АСАССТСТАССТСТАСС6ССТАСАТ6
6ААСТ6С66ТСССТ6С66А6С6АС6АСАСС6СС6Т6ТАСТАСТ6С6ССА6А6АСТАС6АС
ТАС6АС6Т666САТ66АСТАСТС666ССА666САСАСТС6Т6АСС6Т6ТСТА6С6СТТСС
АССАА666ССССТСС6Т6ТТТССТСТ66ССССТТ6СТССА6АТССАССТСС6А6ТСТАСС
6СС6СТСТ666СТ6ССТС6Т6АА66АСТАСТТСССС6А6ССС6Т6АСА6Т6ТССТ66ААС
ТСТ66С6СТСТ6АССТСС66С6Т6САСАССТТТССА6СТ6Т6СТ6СА6ТССТСС66ССТ6
ТАСТСССТ6ТССТСС6ТС6Т6АСТ6Т6СССТССТССААСТТС66САСССА6АССТАСАСС
Т6ТААС6Т66АССАСАА6СССТССААСАССАА66Т66АСАА6АСС6Т66ААС66АА6Т6С
Т6С6Т66ААТ6ССССССТТ6ТССТ6ССССТССТ6Т66СТ66СССТА6С6Т6ТТССТ6ТТС
СССССААА6СССАА66АСАСССТ6АТ6АТСТССС66АССССС6АА6Т6АССТ6С6Т66Т6
6Т66АТ6Т6ТСССАС6А66АСССС6А66Т6СА6ТТСААТТ66ТАС6Т66АС66С6Т66АА
6Т6САСААС6ССАА6АССАА6СССА6А6А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66Т6
ТСС6Т6СТ6АСС6Т66Т6САТСА66АСТ66СТ6ААС66СААА6А6ТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6СССССАТС6АААА6АССАТСТСТАА6АССАА666АСА6ССС
С6С6А6ССССА66Т6ТАСАСАСТ6ССТССАТССС666АА6А6АТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66АА6ССТТСТАССССТСС6АТАТС6СС6Т66ААТ666А6ТСС
ААС66ССА6ССС6А6ААСААСТАСАА6АССАССССССССАТ6СТ66АСТСС6АС66СТСА
ТТСТТССТ6ТАСА6С6А6СТ6АСА6Т66АСАА6ТССС66Т66СА6СА666СААС6Т6ТТС
ТССТ6СТСС6Т6АТ6САС6А66СССТ6САСААССАСТАСАСССА6АА6ТСССТ6ТСССТ6
А6СССС66САА6
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К.75 с подчеркнутой сигнальной последовательностью (13В, вариант 81-2) (8Е0 ГО N0:67)
АТ6АА6САССТ6Т66ТТСТТТСТ6СТ6СТ66Т66СС6СТСССА6АТ666Т6СТ6ТСССА6
6ТТСА6СТА6ТТСА6ТСТ66А6С66АА6ТТАА6АААССТ66А6САТСС6Т6ААААТАА6Т
Т6САА66САТСС66ТТАСТС6ТТСАСС6САТАСТАТАТССАСТ666ТТАААСА66САССА
66АСА666АСТТ6ААТ66АТС6САТАТАТС6СТ66АТАТААА6АТ6СТАСАААСТАТААС
САААААТТСААА66АС6С6Т6АСТТТСАСААСТ6АСАССТСААССТС6АСА6САТАСАТ6
6ААТТАС66ТСССТАС66ТСТ6АС6АСАСТ6СС6ТТТАСТАТТ6С6СТА6А6АТТАТ6АТ
ТАТ6АТ6ТТ66ААТ66АСТАТТС666ССА666ААСАСТ66Т6АСА6Т6ТСТТСТ6САТСС
АСТАА666АССАТСС6Т6ТТСССТТТ66ССССТТ6СТСТС6ТТС6АССТСТ6ААТС6АСТ
6СС6СТСТ666АТ6ССТС6Т6ААА6АТТАСТТСССТ6А6ССТ6Т6АСС6ТТТССТ66ААС
ТС666С6СССТААССТСТ66С6Т6САСАСАТТСССТ6СС6Т6СТАСА6ТСТТСТ66ССТА
ТАСТСТТТАТСТТС66ТТ6ТТАСС6ТАССТТСТТСТААСТТС66ААСССАААСТТАСАСС
Т6ТААС6ТА6АССАСАА6ССТТС6ААСАССАА66Т66АСАА6АСТ6ТТ6А6С6ААА6Т6С
Т6С6ТТ6А6Т6СССТССАТ6ТССТ6САССТССТ6Т66СТ66СССТТСТ6Т6ТТССТ6ТТС
ССТССААААССТАА66АСАСТСТААТ6АТСТСТС66АСТССТ6А66Т6АСТТ6С6Т66ТТ
6Т66АС6Т6ТСССАС6А66АСССТ6А66Т6СА6ТТСААТТ66ТАС6Т66АС66А6ТС6А6
6Т6САСААТ6СААА6АССАА6ССТС666А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т66ТТ
ТСТ6Т6ТТ6АСС6ТТ6Т6САССАА6АСТ66СТ6ААС66СААА6ААТАСАА6Т6САА66Т6
ТССААСААСССССТСССТСССССТАТССААААСАССАТСАССААСАССААСССССАСССТ
С6С6А6ССТСА66Т6ТАСАСССТ6ССТСССА6СС666АА6АААТ6АССАА6ААССА66Т6
ТСССТ6АССТ6ТСТ66Т66А66ССТТСТАСССТТСС6АСАТС6СС6ТТ6А6Т666А6ТСТ
ААС66АСА6СС66А6ААСААСТАСАА6АСТАС6ССТССААТ6СТ66АСТСС6АС66СТСС
ТТСТТССТ6ТАСТСС6ААСТ6АСС6Т66АСАА6ТССС66Т66СА6СА666СААС6Т6ТТС
- 77 029958
ТСАТССТСССТААТССАССААСССТТССАСААТСАСТАСАСТСААААСТСССТАТССТТА
ТСТССТСССААС
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21К75 (13В, вариант 1) (ЗЕО ГО N0:68)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССССААСТСААСАААССТССССССТСССТСААСАТС
ТССТССААССССТСССССТАСТССТТСАСССССТАСТАСАТССАСТСССТСААССАСССС
ССТССАСАСССССТССААТССАТССССТАТАТСССССССТАСААССАССССАССААСТАС
ААССАСАААТТСААССССАСАСТСАССТТСАССАСССАСАССТССАССТСТАСССССТАС
АТССААСТССССТСССТССССАСССАССАСАССССССТСТАСТАСТСССССАСАСАСТАС
САСТАССАССТССССАТССАСТАСТССССССАССССАСАСТССТСАСССТСТССТСТ
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21К75 (13В, вариант 2) (ЗЕО ГО N0:69)
САССТТСАССТАСТТСАСТСТССАССССААСТТААСАААССТССАССАТСССТСААААТА АСТТССААСССАТССССТТАСТССТТСАССССАТАСТАТАТССАСТСССТТАААСАСССА ССАССАСАСССАСТТСААТССАТСССАТАТАТСССТССАТАТАААСАТССТАСАААСТАТ ААС САААААТ Т С АААС САС СС СТ САС Τ Τ Т САСААС Т 6АСАС С Т СААС С ТС САСА6САТАС АТССААТТАСССТСССТАСССТСТСАССАСАСТССССТТТАСТАТТССССТАСАСАТТАТ САТТАТСАТСТТССААТССАСТАТТССССССАСССААСАСТССТСАСАСТСТСТТСТ
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21К83 (13В, вариант 1) (ЗЕО ГО N0:70)
САССТССАССТССТССАСТСТСССССССААСТСААСАААССТССССССТСССТСААСАТС
ТССТССААССССТСССССТАСТССТТСАСССССТАСТАСАТССАСТСССТСААССАСССС
ССТССАСАСССССТССААТССАТССССТАСАТСТССААСТАСААСССССССАССААТТАС
ААССАСАААТТСААССССССССТСАССТТСАССАСССАСАССТСТАССТСТАСССССТАС
АТССААСТССССТСССТССССАСССАССАСАССССССТСТАСТАСТСССССАСАСАСТАС
САСТАССАССТССССАТССАСТАСТССССССАССССАСАСТССТСАСССТСТСТАСС
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21К75 (13В, вариант 2) (ЗЕО ГО N0:71)
САССТТСАССТАСТТСАСТСТССАССССААСТТААСАААССТССАССАТСССТСААААТА АСТТССААСССАТССССТТАСТССТТСАССССАТАСТАТАТССАСТСССТТАААСАСССА ССАССАСАСССАСТТСААТССАТСССАТАТАТСССТССАТАТАААСАТССТАСАААСТАТ ААС САААААТ Т С АААС САС СС СТ САС Τ Τ Т САСААС Т САСАС С Т СААС С ТС САСАССАТАС АТССААТТАСССТСССТАСССТСТСАССАСАСТССССТТТАСТАТТССССТАСАСАТТАТ САТТАТСАТСТТССААТССАСТАТТССССССАСССААСАСТССТСАСАСТСТСТТСТ
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К83 с подчеркнутой сигнальной последовательностью (13В, вариант 2) (ЗЕО ГО N0:72)
АТСААССАССТАТССТТСТТТСТАТТАТТАСТССССССТСССССТТСССТСТТАТСССАС
СТТСАССТАСТТСАСТСТССАССССААСТТААСАААССТССАССАТСССТСААААТААСТ
ТССААСССАТССССТТАСТССТТСАССССАТАСТАТАТССАСТСССТТАААСАСССАССА
ССАСАСССАСТТСААТССАТСССАТАТАТСТССААТТАТААТАСАССТАСАААСТАТААС
САААААТТСАААССАССССТСАСТТТСАСААСТСАСАССТСААССТССАСАССАТАСАТС
СААТТАСССТСССТАСССТСТСАССАСАСТССССТТТАСТАТТССССТАСАСАТТАТСАТ
ТАТСАТСТТССААТССАСТАТТССССССАСССААСАСТССТСАСАСТСТСТТСТССАТСС
АСТААСССАССАТСССТСТТСССТТТССССССТТССТСТССТТССАССТСТСААТССАСТ
СССССТСТСССАТСССТССТСАААСАТТАСТТСССТСАСССТСТСАСССТТТССТССААС
ТСССССССССТААССТСТССССТССАСАСАТТСССТССССТССТАСАСТСТТСТССССТА
ТАСТСТТТАТСТТСССТТСТТАСССТАССТТСТТСТААСТТСССААСССАААСТТАСАСС
ТСТААССТАСАССАСААСССТТССААСАССААССТССАСААСАСТСТТСАСССАААСТСС
ТСССТТСАСТССССТССАТСТССТССАССТССТСТСССТСССССТТСТСТСТТССТСТТС
ССТССААААССТААССАСАСТСТААТСАТСТСТСССАСТССТСАССТСАСТТСССТССТТ
СТССАССТСТСССАССАССАСССТСАССТССАСТТСААТТССТАССТССАСССАСТССАС
СТССАСААТССАААСАССААСССТССССАССААСАСТТСААСТССАССТТСССССТССТТ
ТСТСТСТТСАСССТТСТССАССААСАСТСССТСААССССАААСААТАСААСТССААССТС
- 78 029958
ТССААСААСССССТСССТСССССТАТССААААСАССАТСАССААСАССААСССССАСССТ
ССССАСССТСАССТСТАСАСССТСССТСССАССССССААСАААТСАССААСААССАССТС
ТСССТСАССТСТСТССТССАССССТТСТАСССТТСССАСАТСССССТТСАСТСССАСТСТ
ААСССАСАСССССАСААСААСТАСААСАСТАССССТССААТССТССАСТСССАССССТСС
ТТСТТССТСТАСТСССААСТСАСССТССАСААСТСССССТСССАССАССССААССТСТТС
ТСАТССТСССТААТССАССААСССТТССАСААТСАСТАСАСТСААААСТСССТАТССТТА
ТСТССТСССААСТАС
Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21К83 (13В, вариант 2) (δΕΟ ГО N0:73)
САССТТСАССТАСТТСАСТСТССАССССААСТТААСАААССТССАССАТСССТСААААТА
ССАССАСАСССАСТТСААТССАТСССАТАТАТСТССААТТАТААТАСАССТАСАААСТАТ ААС САААААТ Т СААА6 САС СС СТ САС ТТТ САСААС Т САСАС С Т СААС С Т С САСАССАТАС АТССААТТАСССТСССТАСССТСТСАССАСАСТССССТТТАСТАТТССССТАСАСАТТАТ САТТАТСАТСТТССААТССАСТАТТССССССАСССААСАСТССТСАСАСТСТСТТСТ
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К75 с подчеркнутой сигнальной последовательностью (13В, вариант 2) (δΕΟ ГО N0:74)
АТСААССАССТАТССТТСТТТСТАТТАТТАСТССССССТСССССТТСССТСТТАТСССАС
СТТСАССТАСТТСАСТСТССАССССААСТТААСАААССТССАССАТСССТСААААТААСТ
ТССААСССАТССССТТАСТССТТСАССССАТАСТАТАТССАСТСССТТАААСАСССАССА
ССАСАСССАСТТСААТССАТСССАТАТАТСССТССАТАТАААСАТССТАСАААСТАТААС
САААААТТСАААССАССССТСАСТТТСАСААСТСАСАССТСААССТССАСАССАТАСАТС
СААТТАСССТСССТАСССТСТСАССАСАСТССССТТТАСТАТТССССТАСАСАТТАТСАТ
ТАТСАТСТТССААТССАСТАТТССССССАСССААСАСТССТСАСАСТСТСТТСТССАТСС
АСТААСССАССАТСССТСТТСССТТТССССССТТССТСТССТТССАССТСТСААТССАСТ
СССССТСТСССАТСССТССТСАААСАТТАСТТСССТСАСССТСТСАСССТТТССТССААС
ТСССССССССТААССТСТССССТССАСАСАТТСССТССССТССТАСАСТСТТСТССССТА
ТАСТСТТТАТСТТСССТТСТТАСССТАССТТСТТСТААСТТСССААСССАААСТТАСАСС
ТСТААССТАСАССАСААСССТТССААСАССААССТССАСААСАСТСТТСАСССАААСТСС
ТСССТТСАСТССССТССАТСТССТССАССТССТСТСССТСССССТТСТСТСТТССТСТТС
ССТССААААССТААССАСАСТСТААТСАТСТСТСССАСТССТСАССТСАСТТСССТССТТ
СТССАССТСТСССАССАССАСССТСАССТССАСТТСААТТССТАССТССАСССАСТССАС
СТССАСААТССАААСАССААСССТССССАССААСАСТТСААСТССАССТТСССССТССТТ
ТСТСТСТТСАСССТТСТССАССААСАСТСССТСААССССАААСААТАСААСТССААССТС
ТССААСААСССССТСССТСССССТАТССААААСАССАТСАССААСАССААСССССАСССТ
ССССАСССТСАССТСТАСАСССТСССТСССАССССССААСАААТСАССААСААССАССТС
ТСССТСАССТСТСТССТССАССССТТСТАСССТТСССАСАТСССССТТСАСТСССАСТСТ
ААСССАСАСССССАСААСААСТАСААСАСТАССССТССААТССТССАСТСССАССССТСС
ТТСТТССТСТАСТСССААСТСАСССТССАСААСТСССССТСССАССАССССААССТСТТС
ТСАТССТСССТААТССАССААСССТТССАСААТСАСТАСАСТСААААСТСССТАТССТТА
ТСТССТСССААСТАС
Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21М18 (вариант 2) (δΕΟ ГО N0:75)
АТСААССАССТАТССТТСТТТСТАТТАТТАСТССССССТСССССТТСССТСТТАТСССАС
СТТСАССТАСТТСАСТСТССАССССААСТТААСАААССТССАССАТСССТСААААТААСТ
ТССААСССАТССССТТАСТССТТСАССССАТАСТАТАТССАСТСССТТАААСАСССАССА
ССАСАСССАСТТСААТССАТСССАТАТАТСТССТСТТАТААТССАССТАСАААСТАТААС
САААААТТСАААССАССССТСАСТТТСАСААСТСАСАССТСААССТССАСАССАТАСАТС
СААТТАСССТСССТАСССТСТСАССАСАСТССССТТТАСТАТТССССТАСАСАТТАТСАТ
ТАТСАТСТТССААТССАСТАТТССССССАСССААСАСТССТСАСАСТСТСТТСТССАТСС
АСТААСССАССАТСССТСТТСССТТТССССССТТССТСТССТТССАССТСТСААТССАСТ
СССССТСТСССАТСССТССТСАААСАТТАСТТСССТСАСССТСТСАСССТТТССТССААС
ТСССССССССТААССТСТССССТССАСАСАТТСССТССССТССТАСАСТСТТСТССССТА
ТАСТСТТТАТСТТСССТТСТТАСССТАССТТСТТСТААСТТСССААСССАААСТТАСАСС
ТСТААССТАСАССАСААСССТТССААСАССААССТССАСААСАСТСТТСАСССАААСТСС
ТСССТТСАСТССССТССАТСТССТССАССТССТСТСССТСССССТТСТСТСТТССТСТТС
- 79 029958
ССТССААААССТАА66АСАСТСТААТ6АТСТСТС66АСТССТ6А66Т6АСТТ6С6Т60ТТ
6Т66АС6Т6ТСССАС6А66АСССТ6А66Т6СА6ТТСААТТ66ТАС6Т66АС66А6ТС0А6
6Т6САСААТ6СААА6АССАА6ССТС666А66ААСА6ТТСААСТССАССТТСС666Т60ТТ
ТСТ6Т6ТТ6АСС6ТТ6Т6САССАА6АСТ66СТ6ААС66СААА6ААТАСАА6Т6САА60Т6
ТССААСАА666ССТ6ССТ6ССССТАТС6АААА6АССАТСА6САА6АССАА666ССА6ССТ
С6С6А6ССТСА66Т6ТАСАСССТ6ССТСССА6СС666АА6АААТ6АССАА6ААССА60Т6
ТСССТСАССТСТСТССТССАССССТТСТАСССТТСССАСАТСССССТТСАСТСССАСТСТ
ААС66АСА6СС66А6ААСААСТАСАА6АСТАС6ССТССААТ6СТ66АСТСС6АС66СТСС
ТТСТТССТ6ТАСТСС6ААСТ6АСС6Т66АСАА6ТССС66Т66СА6СА666СААС6Т6ТТС
ТСАТ6СТСС6ТААТ6САС6АА6ССТТ6САСААТСАСТАСАСТСАААА6ТСССТАТССТТА
ТСТССТ66САА6ТА6
Вариабельная область тяжелой цепи 21М18 (вариант 2) (ЗЕф ГО N0:76)
СА6СТА6ТТСА6ТСТ66А6С66АА6ТТАА6АААССТ66А6САТСС6Т6ААААТАА6ТТ6С
АА66САТСС66ТТАСТС6ТТСАСС6САТАСТАТАТССАСТ666ТТАААСА66САССА06А
СА666АСТТ6ААТ66АТС66АТАТАТСТССТСТТАТААТ66А6СТАСАААСТАТААССАА
АААТТСААА66АС6С6Т6АСТТТСАСААСТ6АСАССТСААССТС6АСА6САТАСАТ60АА
ТТАС66ТСССТАС66ТСТ6АС6АСАСТ6СС6ТТТАСТАТТ6С6СТА6А6АТТАТ6АТТАТ
6АТ6ТТ66ААТ66АСТАТТ6666ССА666ААСАСТ66Т6АСА6Т6ТСТТСТ
Консенсусная последовательность СГОК2 тяжелой цепи антитела к БЬЬ4 (ЗЕО ГО N0:80): ΥΙΧιΧιΥΧίΧ-ιΑΤΝΥΝΟΚΕΚΟ. где Χι представляет собой серин или аланин, Хг представляет собой серин, аспарагин или глицин, Хз представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту.
- 80 029958
<110> ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ОНКОМЕД ФАРМАСЬЮТИКАЛС, ИНК.
<120> АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ФАКТОР РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ (УЕОР)/ДЕЛЬТАПОДОБНЫЙ ЛИГАНД (Е>ЬЬ4), И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> 2293.084РС03
<140> РСТ/ИБ2012/056886
<141> 2012-09-24
<150> ИБ 61/692,978
<151> 2012-08-24
<150> ИБ 61/597,409
<151> 2012-02-10
<150> <151> ИБ 61/538,454 2011-09-23
<160> 80
<170> РаВепЫп версии 3.5
<210> <211> <212> <213> 1 464 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> Тяжелая цепь 21М18 с сигнальной последовательностью
<400> 1
МеВ Ьуз Ηΐ3 Ьеи Тгр РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 А1а А1а Рго Агд Тгр
1 5 10 15
- 81 029958
ναι Ьеи Зег О1п Уа1 20 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег 25 О1у А1а О1и Уа1 30 Ьуз Ьуз
Рго О1у А1а Зег Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг Зег РЪе
35 40 45
ТЪг А1а Туг Туг 11е Ηΐ3 Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи
50 55 60
О1и Тгр 11е О1у Туг 11е Зег Зег Туг Азп О1у А1а ТЪг Азп Туг Азп
65 70 75 80
О1п Ьуз РЪе Ьуз О1у Агд Уа1 ТЪг РЪе ТЪг ТЪг Азр ТЪг Зег ТЪг Зег
85 90 95
ТЪг А1а Туг МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЪг А1а Уа1
100 105 110
Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у МеЬ Азр Туг Тгр
115 120 125
О1у О1п О1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЪг Ьуз О1у Рго
130 135 140
Зег Уа1 РЪе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЪг Зег О1и Зег ТЪг
145 150 155 160
А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЪе Рго О1и Рго Уа1 ТЪг
165 170 175
ναι Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЪг Зег О1у Уа1 Н1з ТЪг РЪе Рго
180 185 190
- 82 029958
А1а Уа1 Ьеи 195 С1п Бег Бег С1у Ьеи 200 Туг Бег Ьеи Бег Бег 205 Уа1 Уа1 ТЪг
ναι Рго Бег Бег Азп РЪе С1у ТЪг О1п ТЪг Туг ТЪг Суз Азп Уа1 Азр
210 215 220
Ηΐ3 Ьуз Рго Бег Азп ТЪг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЪг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз
225 230 235 240
Суз Уа1 С1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а С1у Рго Бег
245 250 255
ναι РЪе Ьеи РЪе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЪг Ьеи МеБ 11е Бег Агд
260 265 270
ТЪг Рго С1и Уа1 ТЪг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и Азр Рго
275 280 285
С1и Уа1 С1п РЪе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а
290 295 300
Ьуз ТЪг Ьуз Рго Агд О1и О1и С1п РЪе Азп Бег ТЪг РЪе Агд Уа1 Уа1
305 310 315 320
Бег Уа1 Ьеи ТЪг Уа1 Уа1 Н1з С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз О1и Туг
325 330 335
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЪг
340 345 350
11е Бег Ьуз ТЪг Ьуз С1у С1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЪг Ьеи
- 83 029958
355 360 365
Рго Рго Зег Агд О1и О1и Мек ТЪг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЪг Суз
370 375 380
Ьеи Уа1 О1и О1у РЪе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег
385 390 395 400
Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго Мек Ьеи Азр
405 410 415
Зег Азр О1у Зег РЪе РЪе Ьеи Туг Зег О1и Ьеи ТЪг Уа1 Азр Ьуз Зег
420 425 430
Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЪе Зег Суз Зег Уа1 Мек НЬз О1и А1а
435 440 445
Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЪг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
450 455 460
<210> 2
<211> 464
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К79 с сигнальной последовательностью
<400> 2
Мек 1 Ьуз НЬз Ьеи Тгр 5 РЪе РЪе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 А1а А1а 10 Рго Агд Тгр 15
Уа1 Ьеи Зег О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз
20 25 30
- 84 029958
Рго О1у А1а 35 Бег Уа1 Ьуз 11е Бег 40 Суз Ьуз А1а Бег О1у 45 Туг Бег РЬе
ТЬг А1а Туг Туг 11е Ηΐ3 Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи
50 55 60
О1и Тгр 11е О1у Туг 11е А1а Азп Туг Азп Агд А1а ТЬг Азп Туг Азп
65 70 75 80
О1п Ьуз РЬе Ьуз О1у Агд Уа1 ТЬг РЬе ТЬг ТЬг Азр ТЬг Бег ТЬг Бег
85 90 95
ТЬг А1а Туг МеЬ О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТЬг А1а Уа1
100 105 110
Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у МеЬ Азр Туг Тгр
115 120 125
О1у О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЬг Ьуз О1у Рго
130 135 140
Бег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Бег Агд Бег ТЬг Бег О1и Бег ТЬг
145 150 155 160
А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг
165 170 175
ναι Бег Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1 ΗΪ8 ТЬг РЬе Рго
180 185 190
А1а Уа1 Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг
- 85 029958
195 200 205
ναι Рго 210 Бег Бег Азп РНе С1у 215 ТНг О1п ТНг Туг ТНг 220 Суз Азп Уа1 Азр
Нгз Ьуз Рго Бег Азп ТНг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТНг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз
225 230 235 240
Суз Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Бег
245 250 255
ναι РНе Ьеи РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТНг Ьеи МеЬ 11е Бег Агд
260 265 270
ТНг Рго О1и Уа1 ТНг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Нгз О1и Азр Рго
275 280 285
О1и Уа1 О1п РНе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Нгз Азп А1а
290 295 300
Ьуз ТНг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РНе Азп Бег ТНг РНе Агд Уа1 Уа1
305 310 315 320
Бег Уа1 Ьеи ТНг Уа1 Уа1 Нгз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг
325 330 335
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТНг
340 345 350
Не Бег Ьуз ТНг Ьуз С1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТНг Ьеи
355 360 365
- 86 029958
Рго Рго 370 Бег Агд О1и О1и МеЕ 375 ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 380 Бег Ьеи ТЬг Суз
Ьеи Уа1 О1и О1у РЬе Туг Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Бег
385 390 395 400
Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго МеЕ Ьеи Азр
405 410 415
Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег О1и Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег
420 425 430
Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Бег Суз Бег Уа1 МеЕ Н1з С1и А1а
435 440 445
Ьеи Ηΐ3 Азп Η13 Туг ТЬг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго С1у Ьуз
450 455 460
<210> 3
<211> 466
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 219К45 с сигнальной последовательностью
<400> 3
МеЕ Ьуз Н1з Ьеи Тгр РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 А1а А1а Рго Агд Тгр
1 5 10 15
Уа1 Ьеи Бег С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Бег С1у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз
20 25 30
Рго С1у А1а Бег Уа1 Ьуз Уа1 Бег Суз Ьуз А1а Бег С1у Туг ТЬг РЬе
- 87 029958
35 40 45
ТАг Азп 50 Туг Тгр МеС Ηΐ3 Тгр 55 Уа1 Агд О1п А1а Рго 60 О1у О1п О1у Ьеи
О1и Тгр МеС О1у Азр 11е Азп Рго Зег Азп О1у Агд ТАг Зег Туг Ьуз
65 70 75 80
О1и Ьуз РАе Ьуз Агд Агд Уа1 ТАг Ьеи Зег Уа1 Азр Ьуз Зег Зег Зег
85 90 95
ТАг А1а Туг МеС О1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег О1и Азр ТАг А1а Уа1
100 105 110
Туг РАе Суз ТАг 11е Ηΐ3 Туг Азр Азр Ьуз Туг Туг Рго Ьеи МеС Азр
115 120 125
Туг Тгр О1у О1п О1у ТАг Ьеи Уа1 ТАг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТАг Ьуз
130 135 140
О1у Рго Зег Уа1 РАе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТАг Зег О1и
145 150 155 160
Зег ТАг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РАе Рго О1и Рго
165 170 175
ναι ТАг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТАг Зег О1у Уа1 ΗΪ8 ТАг
180 185 190
РАе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1
195 200 205
- 88 029958
ναι тЬг ναι 210 Рго Бег Бег Азп 215 РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг 220 Туг ТЬг Суз Азп
ναι Азр Н1з Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд
225 230 235 240
Ьуз Суз Суз Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у
245 250 255
Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е
260 265 270
Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и
275 280 285
Азр Рго О1и Уа1 С1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з
290 295 300
Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Бег ТЬг РЬе Агд
305 310 315 320
ναι Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Уа1 Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз
325 330 335
О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и
340 345 350
Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз ТЬг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг
355 360 365
ТЬг Ьеи Рго Рго Бег Агд О1и Ьуз МеЬ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи
370 375 380
- 89 029958
ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр
385 390 395 400
О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго МеЬ
405 410 415
Ьеи Ьуз Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр
420 425 430
Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Няз
435 440 445
О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго
450 455 460
О1у Ьуз
465
<210> 4
<211> 238
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая цепь с сигнальной последовательностью
<400> 4
Ме; Уа1 Ьеи О1п ТЬг О1п Уа1 РЬе 11е Зег Ьеи Ьеи Ьеи Тгр 11е Зег
1 5 10 15
- 90 029958
О1у А1а Туг О1у 20 Азр 11е Уа1 Мер ТЬг 25 О1п Бег Рго Азр Бег 30 Ьеи А1а
ναι Бег Ьеи О1у О1и Агд А1а ТЬг 11е Бег Суз Агд А1а Бег О1и Бег
35 40 45
ναι Азр Азп Туг О1у 11е Бег РЬе Мер Ьуз Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго
50 55 60
О1у О1п Рго Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг А1а А1а Бег Азп О1п О1у Бег
65 70 75 80
О1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Бег О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг
85 90 95
Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п А1а О1и Азр Уа1 А1а Уа1 Туг Туг Суз
100 105 110
О1п О1п Бег Ьуз О1и Уа1 Рго Тгр ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1
115 120 125
О1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а Рго Бег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго
130 135 140
Бег Азр О1и О1п Ьеи Ьуз Бег О1у ТЬг А1а Бег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи
145 150 155 160
Азп Азп РЬе Туг Рго Агд О1и А1а Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп
165 170 175
А1а Ьеи О1п Бег О1у Азп Бег О1п О1и Бег Уа1 ТЬг О1и О1п Азр Бег
180 185 190
- 91 029958
Ьуз Азр Бег 195 ТЬг Туг Бег Ьеи Бег 200 Бег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи 205 Бег Ьуз А1а
Азр Туг О1и Ьуз Ηΐ3 Ьуз Уа1 Туг А1а Суз О1и Уа1 ТЬг ΗΪ8 С1п С1у
210 215 220
Ьеи Бег Бег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Бег РЬе Азп Агд С1у О1и Суз
225 230 235
<210> 5
<211> 445
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21М18 без предсказанной сигнальной последовательности
<400> 5
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЬе ТЬг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е ΗΪ8 Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
С1у Туг 11е Бег Бег Туг Азп О1у А1а ТЬг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз О1у Агд Уа1 ТЬг РЬе ТЬг ТЬг Азр ТЬг Бег ТЬг Бег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
- 92 029958
Мек О1и Ьеи Агд Бег 85 Ьеи Агд Бег Азр Азр 90 ТЬг А1а Уа1 Туг Туг 95 Суз
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у Мек Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЬг Ьуз О1у Рго Бег Уа1 РЬе
115 120 125
Рго Ьеи А1а Рго Суз Бег Агд Бег ТЬг Бег О1и Бег ТЬг А1а А1а Ьеи
130 135 140
О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Бег Тгр
145 150 155 160
Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи
165 170 175
О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Бег
180 185 190
Бег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Н1з Ьуз Рго
195 200 205
Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз Уа1 О1и
210 215 220
Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи
225 230 235 240
РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мек 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и
245 250 255
- 93 029958
Уа1 ТЪг Суз Уа1 260 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 265 НЬз О1и Азр Рго О1и 270 Уа1 О1п
РЪе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 НЬз Азп А1а Ьуз ТЪг Ьуз
275 280 285
Рго Агд О1и О1и О1п РЪе Азп Зег ТЪг РЪе Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи
290 295 300
ТЪг Уа1 Уа1 НЬз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз
305 310 315 320
Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЪг 11е Зег Ьуз
325 330 335
ТЪг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЪг Ьеи Рго Рго Зег
340 345 350
Агд О1и О1и Мек ТЪг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЪг Суз Ьеи Уа1 О1и
355 360 365
О1у РЪе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п
370 375 380
Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго Мек Ьеи Азр Зег Азр О1у
385 390 395 400
Зег РЪе РЪе Ьеи Туг Зег О1и Ьеи ТЪг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п
405 410 415
О1п О1у Азп Уа1 РЪе Зег Суз Зег Уа1 Мек НЬз О1и А1а Ьеи НЬз Азп
- 94 029958
420 425 430
Нгз Туг ТЪг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
435 440 445
<210> 6
<211> 445
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К79 без предсказанной сигнальной последовательности
<400> 6
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг Зег РЪе ТЪг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е Н1з Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Туг 11е А1а Азп Туг Азп Агд А1а ТЪг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЪе
50 55 60
Ьуз О1у Агд Уа1 ТЪг РЪе ТЪг ТЪг Азр ТЪг Зег ТЪг Зег ТЪг А1а Туг
65 70 75 80
Меб О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
- 95 029958
А1а Агд Азр Туг 100 Азр Туг Азр Уа1 О1у 105 МеБ Азр Туг Тгр О1у 110 О1п О1у
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЬг Ьуз О1у Рго Бег Уа1 РЬе
115 120 125
Рго Беи А1а Рго Суз Бег Агд Бег ТЬг Бег О1и Бег ТЬг А1а А1а Беи
130 135 140
О1у Суз Беи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Бег Тгр
145 150 155 160
Азп Бег О1у А1а Беи ТЬг Бег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи
165 170 175
О1п Бег Бег О1у Беи Туг Бег Беи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Бег
180 185 190
Бег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Н1з Буз Рго
195 200 205
Бег Азп ТЬг Буз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз Уа1 О1и
210 215 220
Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи
225 230 235 240
РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Беи МеБ 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и
245 250 255
Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Нтз О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п
- 96 029958
260 265 270
РЬе Азп Тгр 275 Туг Уа1 Азр О1у Уа1 280 О1и Уа1 Н1з Азп А1а 285 Ьуз ТЬг Ьуз
Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Бег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи
290 295 300
ТЬг Уа1 Уа1 Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз
305 310 315 320
Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз
325 330 335
ТЬг Ьуз О1у С1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Бег
340 345 350
Агд О1и О1и МеЕ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 О1и
355 360 365
О1у РЬе Туг Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Азп О1у О1п
370 375 380
Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго МеЕ Ьеи Азр Бег Азр О1у
385 390 395 400
Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег О1и Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п
405 410 415
О1п О1у Азп Уа1 РЬе Бег Суз Бег Уа1 МеЕ Нгз О1и А1а Ьеи Нгз Азп
420 425 430
- 97 029958
Нгз Туг ТНг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
435 440 445
<210> 7
<211> 447
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К79 без предсказанной сигнальной последовательности
<400> 7
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Бег Уа1 Ьуз Уа1 Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг ТНг РНе ТНг Азп Туг
20 25 30
Тгр Меб Нгз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр Меб
35 40 45
О1у Азр 11е Азп Рго Бег Азп О1у Агд ТНг Бег Туг Ьуз О1и Ьуз РНе
50 55 60
Ьуз Агд Агд Уа1 ТНг Ьеи Бег Уа1 Азр Ьуз Бег Бег Бег ТНг А1а Туг
65 70 75 80
Меб О1и Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТНг А1а Уа1 Туг РНе Суз
85 90 95
ТНг 11е Нгз Туг Азр Азр Ьуз Туг Туг Рго Ьеи Меб Азр Туг Тгр О1у
- 98 029958
100 105 110
О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег О1и Зег ТЬг А1а
130 135 140
А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1
180 185 190
Рго Зег Зег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Н1з
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз
210 215 220
Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Зег Уа1
225 230 235 240
РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг
245 250 255
Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нгз О1и Азр Рго О1и
260 265 270
- 99 029958
Уа1 О1п РАе 275 Азп Тгр Туг Уа1 Азр 280 О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з 285 Азп А1а Ьуз
ТАг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РАе Азп Зег ТАг РАе Агд Уа1 Уа1 Зег
290 295 300
Уа1 Ьеи ТАг Уа1 Уа1 Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз
305 310 315 320
Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТАг 11е
325 330 335
Зег Ьуз ТАг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТАг Ьеи Рго
340 345 350
Рго Зег Агд О1и Ьуз МеС ТАг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТАг Суз Ьеи
355 360 365
Уа1 Ьуз О1у РАе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп
370 375 380
О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТАг ТАг Рго Рго МеС Ьеи Ьуз Зег
385 390 395 400
Азр О1у Зег РАе РАе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТАг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд
405 410 415
Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РАе Зег Суз Зег Уа1 МеС Н1з О1и А1а Ьеи
420 425 430
Нтз Азп Нтз Туг ТАг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
- 100
029958
435
440
445
<210> 8
<211> 217
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая цепь без предсказанной сигнальной последовательности
<400> 8
Азр 1 11е Уа1 МеЕ ТЪг 5 О1п Бег Рго Азр Бег 10 Ьеи А1а Уа1 Бег Ьеи 15 О1у
О1и Агд А1а ТЪг 11е Бег Суз Агд А1а Бег О1и Бег Уа1 Азр Азп Туг
20 25 30
О1у 11е Бег РЪе МеЕ Ьуз Тгр РЪе О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п Рго Рго
35 40 45
Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг А1а А1а Бег Азп О1п О1у Бег О1у Уа1 Рго Азр
50 55 60
Агд РЪе Бег О1у Бег О1у Бег О1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Бег
65 70 75 80
Бег Ьеи О1п А1а О1и Азр Уа1 А1а Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п Бег Ьуз
85 90 95
О1и Уа1 Рго Тгр ТЪг РЪе О1у О1у О1у ТЪг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз Агд
100 105 110
ТЪг Уа1 А1а А1а Рго Бег Уа1 11е РЪе Рго Рго Бег Азр О1и О1п Ьеи
115 120 125
Ьуз Бег О1у ТЪг А1а Бег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЪе Туг Рго
- 101
029958
130 135 140
Агд О1и А1а Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п Зег О1у
145 150 155 160
Азп Зег О1п О1и Зег Уа1 ТЬг О1и О1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг
165 170 175
Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз Няз
180 185 190
Ьуз Уа1 Туг А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Няз О1п О1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1
195 200 205
ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд О1у О1и Суз
210 215
<210> 9
<211> 119
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21М 18
<400> 9
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг Зег РЬе ТЬг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е Ηίδ Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
- 102
029958
О1у Туг 50 11е Бег Бег Туг Азп О1у А1а ТЪг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЪе
55 60
Ьуз О1у Агд Уа1 ТЪг РЪе ТЪг ТЪг Азр ТЪг Бег ТЪг Бег ТЪг А1а Туг
65 70 75 80
МеБ О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у МеБ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Бег Бег
115
<210> <211> <212> <213> 10 119 ПРТ Искусственная [ последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К79
<400> 10
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЪе ТЪг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е Няз Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Туг 11е А1а Азп Туг Азп Агд А1а ТЪг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЪе
- 103
029958
50 55 60
Ьуз 65 О1у Агд Уа1 ТЬг РЬе 70 ТЬг ТЬг Азр ТЬг Бег 75 ТЬг Бег ТЬг А1а Туг 80
Меб О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у Меб Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115
<210> <211> <212> <213> 11 121 ПРТ Искусственная [ последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К79
<400> 11
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Бег Уа1 Ьуз Уа1 Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр Меб Няз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр Меб
35 40 45
О1у Азр 11е Азп Рго Бег Азп О1у Агд ТЬг Бег Туг Ьуз О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз Агд Агд Уа1 ТЬг Ьеи Бег Уа1 Азр Ьуз Бег Бег Бег ТЬг А1а Туг
- 104
029958
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
ТЬг 11е ΗΪ8 Туг Азр Азр Ьуз Туг Туг Рго Ьеи МеЬ Азр Туг Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 12
<211> 111
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область легкой цепи
<400> 12
Азр 1 11е Уа1 МеЬ ТЬг 5 О1п Бег Рго Азр Бег 10 Ьеи А1а Уа1 Бег Ьеи 15 О1у
О1и Агд А1а ТЬг 11е Бег Суз Агд А1а Бег О1и Бег Уа1 Азр Азп Туг
20 25 30
О1у 11е Бег РЬе МеЬ Ьуз Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п Рго Рго
35 40 45
Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг А1а А1а Бег Азп О1п О1у Бег О1у Уа1 Рго Азр
50 55 60
Агд РЬе Бег О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег
65 70 75 80
Бег Ьеи О1п А1а О1и Азр Уа1 А1а Уа1 Туг Туг Суз О1п О1п Бег Ьуз
- 105
029958
85
90
95
О1и Уа1 Рго Тгр ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105 110
<210> 13
<211> 6
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ1 тяжелой цепи 21К75, 21К79, 21К83 и 21М 18
<400> 13
ТЬг А1а Туг Туг 11е Ηίδ
1 5
<210> 14
<211> 17
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ2 тяжелой цепи 21Е7 9
<400> 14
Туг 11е А1а Азп Туг Азп Агд А1а ТЬг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЬе Ьуз 1 5 10 15
О1у
<210> 15
<211> 17
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ2 тяжелой цепи 21М 18
<400> 15
Туг 11е Зег Зег Туг Азп О1у А1а ТЬг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЬе Ьуз 1 5 10 15
- 106 029958
О1у
<210> <211> <212> <213> 16 11 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> СБК3 тяжелой цепи 21К75, 21К79, 21К83 и 21М 18
<400> 16
Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у Мек Азр Туг
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 17 5 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> СВЕ1 тяжелой цепи 219К45
<400> 17
Азп Туг Тгр Мек Няз
1 5
<210> <211> <212> <213> 18 17 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> СВЕ2 тяжелой цепи 219Е45
<400> 18
Азр 11е Азп Рго Бег Азп О1у Агд ТЬг Бег Туг Ьуз О1и Ьуз РЬе Ьуз
1 5 10 15
Агд
- 107 029958
<210> <211> <212> <213> 19 12 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> СВК.3 тяжелой цепи 219К45
<400> 19
Нгз Туг Азр Азр Ьуз Туг Туг Рго Ьеи Мер Азр Туг
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 20 15 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> СВЕ1 легкой цепи
<400> 20
Агд А1а Бег О1и Бег Уа1 Азр Азп Туг О1у 11е Бег РЬе Мер Ьуз
1 5 10 15
<210> <211> <212> <213> 21 7 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> СВЕ2 легкой цепи
<400> 21
А1а А1а Бег Азп О1п О1у Бег
1 5
<210> <211> <212> <213> 22 12 ПРТ Искусственная последовательность
<220> <223> СВЕ.3 легкой цепи
- 108 029958
<400> 22
О1п О1п Зег Ьуз О1и Уа1 Рго Тгр ТЪг РЪе О1у О1у
1 5 10
<210> 23
<211> 522
<212> ПРТ
<213> Ното заряепз
<400> 23
Меб 1 А1а А1а А1а Зег 5 Агд Зег А1а Зег О1у Тгр 10 А1а Ьеи Ьеи Ьеи 15 Ьеи
Уа1 А1а Ьеи Тгр О1п О1п Агд А1а А1а О1у Зег О1у Уа1 РЪе О1п Ьеи
20 25 30
О1п Ьеи О1п О1и РЪе 11е Азп О1и Агд О1у Уа1 Ьеи А1а Зег О1у Агд
35 40 45
Рго Суз О1и Рго О1у Суз Агд ТЪг РЪе РЪе Агд Уа1 Суз Ьеи Ьуз Няз
50 55 60
РЪе О1п А1а Уа1 Уа1 Зег Рго О1у Рго Суз ТЪг РЪе О1у ТЪг Уа1 Зег
65 70 75 80
ТЪг Рго Уа1 Ьеи О1у ТЪг Азп Зег РЪе А1а Уа1 Агд Азр Азр Зег Зег
85 90 95
О1у О1у О1у Агд Азп Рго Ьеи О1п Ьеи Рго РЪе Азп РЪе ТЪг Тгр Рго
100 105 110
- 109
029958
О1у ТЬг РЬе 115 Зег Ьеи 11е 11е О1и 120 А1а Тгр Н1з А1а Рго 125 О1у Азр Азр
Ьеи Агд Рго О1и А1а Ьеи Рго Рго Азр А1а Ьеи 11е Зег Ьуз 11е А1а
130 135 140
11е О1п О1у Зег Ьеи А1а Уа1 О1у О1п Азп Тгр Ьеи Ьеи Азр О1и О1п
145 150 155 160
ТЬг Зег ТЬг Ьеи ТЬг Агд Ьеи Агд Туг Зег Туг Агд Уа1 11е Суз Зег
165 170 175
Азр Азп Туг Туг О1у Азр Азп Суз Зег Агд Ьеи Суз Ьуз Ьуз Агд Азп
180 185 190
Азр Н1з РЬе О1у Н1з Туг Уа1 Суз О1п Рго Азр О1у Азп Ьеи Зег Суз
195 200 205
Ьеи Рго О1у Тгр ТЬг О1у О1и Туг Суз О1п О1п Рго 11е Суз Ьеи Зег
210 215 220
О1у Суз Н1з О1и О1п Азп О1у Туг Суз Зег Ьуз Рго А1а О1и Суз Ьеи
225 230 235 240
Суз Агд Рго О1у Тгр О1п О1у Агд Ьеи Суз Азп О1и Суз 11е Рго Н1з
245 250 255
Азп О1у Суз Агд Н1з О1у ТЬг Суз Зег ТЬг Рго Тгр О1п Суз ТЬг Суз
260 265 270
Азр О1и О1у Тгр О1у О1у Ьеи РЬе Суз Азр О1п Азр Ьеи Азп Туг Суз
- 110
029958
275 280 285
ТЬг Нтз Н1з Бег Рго Суз Ьуз 295 Азп О1у А1а ТЬг Суз 300 Бег Азп Бег О1у
290
О1п Агд Бег Туг ТЬг Суз ТЬг Суз Агд Рго О1у Туг ТЬг О1у Уа1 Азр
305 310 315 320
Суз О1и Ьеи О1и Ьеи Бег О1и Суз Азр Бег Азп Рго Суз Агд Азп О1у
325 330 335
О1у Бег Суз Ьуз Азр О1п О1и Азр О1у Туг Н1з Суз Ьеи Суз Рго Рго
340 345 350
О1у Туг Туг О1у Ьеи Н1з Суз О1и Н1з Бег ТЬг Ьеи Бег Суз А1а Азр
355 360 365
Бег Рго Суз РЬе Азп О1у О1у Бег Суз Агд О1и Агд Азп О1п О1у А1а
370 375 380
Азп Туг А1а Суз О1и Суз Рго Рго Азп РЬе ТЬг О1у Бег Азп Суз О1и
385 390 395 400
Ьуз Ьуз Уа1 Азр Агд Суз ТЬг Бег Азп Рго Суз А1а Азп О1у О1у О1п
405 410 415
Суз Ьеи Азп Агд О1у Рго Бег Агд МеЬ Суз Агд Суз Агд Рго О1у РЬе
420 425 430
ТЬг О1у ТЬг Туг Суз О1и Ьеи Нтз Уа1 Бег Азр Суз А1а Агд Азп Рго
435 440 445
- 111
029958
Суз А1а Нтз О1у О1у ТЬг Суз Нтз Азр Ьеи О1и Азп О1у Ьеи МеЬ Суз
450 455 460
ТЬг Суз Рго А1а О1у РЬе Зег О1у Агд Агд Суз О1и Уа1 Агд ТЬг Зег
465 470 475 480
11е Азр А1а Суз А1а Зег Зег Рго Суз РЬе Азп Агд А1а ТЬг Суз Туг
485 490 495
ТЬг Азр Ьеи Зег ТЬг Азр ТЬг РЬе Уа1 Суз Азп Суз Рго Туг О1у РЬе
500 505 510
Уа1 О1у Зег Агд Суз О1и РЬе Рго Уа1 О1у
515 520
<210> 24
<211> 496
<212> ПРТ
<213> Ното зар1епз
<400> 24
Зег О1у Уа1 РЬе О1п Ьеи О1п Ьеи О1п О1и РЬе 11е Азп О1и Агд О1у
1 5 10 15
Уа1 Ьеи А1а Зег О1у Агд Рго Суз О1и Рго О1у Суз Агд ТЬг РЬе РЬе
20 25 30
Агд Уа1 Суз Ьеи Ьуз Нтз РЬе О1п А1а Уа1 Уа1 Зег Рго О1у Рго Суз
35 40 45
- 112
029958
ТЪг РЪе 50 О1у ТЪг Уа1 Зег ТЪг 55 Рго Уа1 Ьеи О1у ТЪг 60 Азп Зег РЪе А1а
Уа1 Агд Азр Азр Зег Зег О1у О1у О1у Агд Азп Рго Ьеи О1п Ьеи Рго
65 70 75 80
РЪе Азп РЪе ТЪг Тгр Рго О1у ТЪг РЪе Зег Ьеи 11е 11е О1и А1а Тгр
85 90 95
НЬз А1а Рго О1у Азр Азр Ьеи Агд Рго О1и А1а Ьеи Рго Рго Азр А1а
100 105 110
Ьеи 11е Зег Ьуз 11е А1а 11е О1п О1у Зег Ьеи А1а Уа1 О1у О1п Азп
115 120 125
Тгр Ьеи Ьеи Азр О1и О1п ТЪг Зег ТЪг Ьеи ТЪг Агд Ьеи Агд Туг Зег
130 135 140
Туг Агд Уа1 11е Суз Зег Азр Азп Туг Туг О1у Азр Азп Суз Зег Агд
145 150 155 160
Ьеи Суз Ьуз Ьуз Агд Азп Азр НЬз РЪе О1у НЬз Туг Уа1 Суз О1п Рго
165 170 175
Азр О1у Азп Ьеи Зег Суз Ьеи Рго О1у Тгр ТЪг О1у О1и Туг Суз О1п
180 185 190
О1п Рго 11е Суз Ьеи Зег О1у Суз НЬз О1и О1п Азп О1у Туг Суз Зег
195 200 205
Ьуз Рго А1а О1и Суз Ьеи Суз Агд Рго О1у Тгр О1п О1у Агд Ьеи Суз
- 113
029958
210 215 220
Азп О1и Суз 11е Рго Нгз Азп О1у Суз Агд Нгз О1у ТНг Суз Бег ТНг
225 230 235 240
Рго Тгр О1п Суз ТНг Суз Азр О1и О1у Тгр О1у О1у Ьеи РНе Суз Азр
245 250 255
О1п Азр Ьеи Азп Туг Суз ТНг Нгз Нгз Бег Рго Суз Ьуз Азп О1у А1а
260 265 270
ТНг Суз Бег Азп Бег О1у О1п Агд Бег Туг ТНг Суз ТНг Суз Агд Рго
275 280 285
О1у Туг ТНг О1у Уа1 Азр Суз О1и Ьеи О1и Ьеи Бег О1и Суз Азр Бег
290 295 300
Азп Рго Суз Агд Азп О1у О1у Бег Суз Ьуз Азр О1п О1и Азр О1у Туг
305 310 315 320
Нгз Суз Ьеи Суз Рго Рго О1у Туг Туг О1у Ьеи Нгз Суз О1и Нгз Бег
325 330 335
ТНг Ьеи Бег Суз А1а Азр Бег Рго Суз РНе Азп О1у О1у Бег Суз Агд
340 345 350
О1и Агд Азп О1п О1у А1а Азп Туг А1а Суз О1и Суз Рго Рго Азп РНе
355 360 365
ТНг О1у Бег Азп Суз О1и Ьуз Ьуз Уа1 Азр Агд Суз ТНг Бег Азп Рго
370 375 380
- 114
029958
Суз А1а Азп О1у О1у О1п Суз Ьеи Азп Агд О1у Рго Зег Агд МеЬ Суз
385 390 395 400
Агд Суз Агд Рго О1у РЬе ТЬг О1у ТЬг Туг Суз О1и Ьеи Ηίδ Уа1 Зег
405 410 415
Азр Суз А1а Агд Азп Рго Суз А1а Ηίδ О1у О1у ТЬг Суз Н1з Азр Ьеи
420 425 430
О1и Азп О1у Ьеи МеЬ Суз ТЬг Суз Рго А1а О1у РЬе Зег О1у Агд Агд
435 440 445
Суз О1и Уа1 Агд ТЬг Зег 11е Азр А1а Суз А1а Зег Зег Рго Суз РЬе
450 455 460
Азп Агд А1а ТЬг Суз Туг ТЬг Азр Ьеи Зег ТЬг Азр ТЬг РЬе Уа1 Суз
465 470 475 480
Азп Суз Рго Туг О1у РЬе Уа1 О1у Зег Агд Суз О1и РЬе Рго Уа1 О1у
485 490 495
<210> 25
<211> 128
<212> ПРТ
<213> Ното
<400> 25
Зег О1у Уа1 РЬе О1п Ьеи О1п Ьеи О1п О1и РЬе 11е Азп О1и Агд О1у
1 5 10 15
- 115
029958
Уа1 Ьеи А1а Бег 20 О1у Агд Рго Суз О1и 25 Рго О1у Суз Агд ТЬг 30 РЬе РЬе
Агд Уа1 Суз Ьеи Ьуз Н1з РЬе О1п А1а Уа1 Уа1 Бег Рго О1у Рго Суз
35 40 45
ТЬг РЬе О1у ТЬг Уа1 Бег ТЬг Рго Уа1 Ьеи О1у ТЬг Азп Бег РЬе А1а
50 55 60
Уа1 Агд Азр Азр Бег Бег О1у О1у О1у Агд Азп Рго Ьеи О1п Ьеи Рго
65 70 75 80
РЬе Азп РЬе ТЬг Тгр Рго О1у ТЬг РЬе Бег Ьеи 11е 11е О1и А1а Тгр
85 90 95
Н1з А1а Рго О1у Азр Азр Ьеи Агд Рго О1и А1а Ьеи Рго Рго Азр А1а
100 105 110
Ьеи 11е Бег Ьуз 11е А1а 11е О1п О1у Бег Ьеи А1а Уа1 О1у О1п Азп
115 120 125
<210> 26
<211> 63
<212> ПРТ
<213> Ното зар1епз
<400> 26
Тгр Ьеи Ьеи Азр О1и О1п ТЬг Бег ТЬг Ьеи ТЬг Агд Ьеи Агд Туг Бег
1 5 10 15
Туг Агд Уа1 11е Суз Бег Азр Азп Туг Туг О1у Азр Азп Суз Бег Агд
- 116
029958
20 25 30
Ьеи Суз Буз Буз Агд Азп Азр Н1з РЬе О1у Н1з Туг Уа1 Суз О1п Рго
35 40 45
Азр О1у Азп Ьеи Бег Суз Ьеи Рго О1у Тгр ТЬг О1у О1и Туг Суз
50 55 60
<210> 27
<211> 232
<212> ПРТ
<213> Ното зар1епз
<400> 27
МеБ Азп РЬе Ьеи Беи Бег Тгр Уа1 Н1з Тгр Бег Ьеи А1а Беи Беи Ьеи
1 5 10 15
Туг Беи Н1з Н1з А1а Буз Тгр Бег О1п А1а А1а Рго МеБ А1а О1и О1у
20 25 30
О1у О1у О1п Азп Н1з Н1з О1и Уа1 Уа1 Ьуз РЬе МеБ Азр Уа1 Туг О1п
35 40 45
Агд Бег Туг Суз Н1з Рго 11е О1и ТЬг Беи Уа1 Азр 11е РЬе О1п О1и
50 55 60
Туг Рго Азр О1и 11е О1и Туг 11е РЬе Буз Рго Бег Суз Уа1 Рго Ьеи
65 70 75 80
МеБ Агд Суз О1у О1у Суз Суз Азп Азр О1и О1у Ьеи О1и Суз Уа1 Рго
- 117
029958
85 90 95
ТЬг О1и О1и Бег 100 Азп 11е ТЬг Мер О1п 105 11е Мер Агд 11е Ьуз 110 Рго Н1з
О1п О1у О1п Н1з 11е О1у О1и Мер Бег РЬе Ьеи О1п Н1з Азп Ьуз Суз
115 120 125
О1и Суз Агд Рго Ьуз Ьуз Азр Агд А1а Агд О1п О1и Ьуз Ьуз Бег Уа1
130 135 140
Агд О1у Ьуз О1у Ьуз О1у О1п Ьуз Агд Ьуз Агд Ьуз Ьуз Бег Агд Туг
145 150 155 160
Ьуз Бег Тгр Бег Уа1 Туг Уа1 О1у А1а Агд Суз Суз Ьеи Мер Рго Тгр
165 170 175
Бег Ьеи Рго О1у Рго Н1з Рго Суз О1у Рго Суз Бег О1и Агд Агд Ьуз
180 185 190
Н1з Ьеи РЬе Уа1 О1п Азр Рго О1п ТЬг Суз Ьуз Суз Бег Суз Ьуз Азп
195 200 205
ТЬг Азр Бег Агд Суз Ьуз А1а Агд О1п Ьеи О1и Ьеи Азп О1и Агд ТЬг
210 215 220
Суз Агд Суз Азр Ьуз Рго Агд Агд
225 230
<210> 28
<211> 206
<212> ПРТ
- 118
029958
<213> Ното заргепз
<400> 28
А1а Рго МеЕ А1а О1и О1у О1у О1у О1п Азп Н1з Н1з О1и Уа1 Уа1 Ьуз
1 5 10 15
РЬе МеЕ Азр Уа1 Туг О1п Агд Бег Туг Суз Н1з Рго 11е О1и ТЬг Ьеи
20 25 30
Уа1 Азр 11е РЬе О1п О1и Туг Рго Азр О1и 11е О1и Туг 11е РЬе Ьуз
35 40 45
Рго Бег Суз Уа1 Рго Ьеи МеЕ Агд Суз О1у О1у Суз Суз Азп Азр О1и
50 55 60
О1у Ьеи О1и Суз Уа1 Рго ТЬг О1и О1и Бег Азп 11е ТЬг МеЕ О1п 11е
65 70 75 80
МеЕ Агд 11е Ьуз Рго Н1з О1п О1у О1п Н1з 11е О1у О1и МеЕ Бег РЬе
85 90 95
Ьеи О1п Н1з Азп Ьуз Суз О1и Суз Агд Рго Ьуз Ьуз Азр Агд А1а Агд
100 105 110
О1п О1и Ьуз Ьуз Бег Уа1 Агд О1у Ьуз О1у Ьуз О1у О1п Ьуз Агд Ьуз
115 120 125
Агд Ьуз Ьуз Бег Агд Туг Ьуз Бег Тгр Бег Уа1 Туг Уа1 О1у А1а Агд
130 135 140
- 119
029958
Суз Суз Ьеи Меб Рго Тгр Бег Ьеи Рго О1у Рго Н1з Рго Суз О1у Рго
145 150 155 160
Суз Бег О1и Агд Агд Ьуз Н1з Ьеи РЬе Уа1 О1п Азр Рго О1п ТЬг Суз
165 170 175
Ьуз Суз Бег Суз Ьуз Азп ТЬг Азр Бег Агд Суз Ьуз А1а Агд О1п Ьеи
180 185 190
О1и Ьеи Азп О1и Агд ТЬг Суз Агд Суз Азр Ьуз Рго Агд Агд
195 200 205
<210> 29
<211> 1395
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21М 18 (13В, вариант 1)
<400> 29 абдаадсасс бдбддббсбб бсбдсбдсбд дбддссдсбс ссадабдддб дсбдбсссад 60
дбдсадсбдд бдсадбсбдд сдссдаадбд аадааассбд дсдссбссдб даадабсбсс 120
бдсааддссб ссддсбасбс сббсассдсб басбасабсс асбдддбсаа дсаддссссб 180
дддсадддсс бддаабддаб сддсбасабс бссбссбаса асддсдссас саасбасаас 240
садаааббса адддссдсдб дассббсасс ассдасассб ссассбссас сдссбасабд 300
даасбдсддб сссбдсддад сдасдасасс дссдбдбасб асбдсдссад адасбасдас 360
басдасдбдд дсабддасба сбддддссад ддсасссбдд бсассдбдбс сбсбдссбсс 420
ассаадддсс сабссдбдбб сссбсбддсс ссббдсбссс ддбссассбс бдадбсбасс 480
дссдсбсбдд дсбдссбддб дааддасбас ббсссбдадс сбдбдассдб дбссбддаас 540
бсбддсдссс бдассбсбдд сдбдсасасс ббсссбдссд бдсбдсадбс сбссддссбд 600
- 120 029958
БасБсссБдБ сБадсдБддБ дассдБдссБ БссБссаасБ Бсддсассса дассБасасс 660
БдБаасдБдд ассасаадсс ББссаасасс ааддБддаса адассдБдда дсддаадБдс 720
БдсдБддадБ дсссБссББд БссБдсБссБ ссБдБддсБд дсссББсБдБ дББссБдББс 780
ссБссааадс сБааддасас ссБдаБдаБс Бсссддассс сБдаадБдас сБдсдБддБд 840
дБддасдБдБ сссасдадда сссБдаддБд садББсааББ ддБасдБдда сддсдБддад 900
дБдсасаасд ссаадассаа дссБсдддад даасадББса асБссассББ ссдддБддБд 960
БсБдБдсБда ссдБддБдса ссаддасБдд сБдаасддса аадааБасаа дБдсааддБд 1020
Бссаасаадд дссБдссБдс сссБаБсдаа аадассаБса дсаадассаа дддссадссБ 1080
сдсдадссБс аддБдБасас ссБдссБссс адссдддаад аааБдассаа даассаддБд 1140
БсссБдассБ дБсБддБдда дддсББсБас ссББссдаБа БсдссдБдда дБдддадБсБ 1200
аасддссадс сБдадаасаа сБасаадасс ассссБссБа БдсБддасБс сдасддсБсс 1260
ББсББссБдБ асБссдаасБ дассдБддас аадБсссддБ ддсадсаддд саасдБдББс 1320
БссБдсБссд БдаБдсасда ддсссБдсас аассасБаса сссадаадБс ссБдБсссБд 1380
БсБссБддса адБад 1395
<210> 30
<211> 1395
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К79 (13В, вариант 1)
<400> 30
аБдаадсасс БдБддББсББ БсБдсБдсБд дБддссдсБс ссадаБдддБ дсБдБсссад 60
дБдсадсБдд БдсадБсБдд сдссдаадБд аадааассБд дсдссБссдБ даадаБсБсс 120
БдсааддссБ ссддсБасБс сББсассдсс БасБасаБсс асБдддБдаа асаддсасса 180
- 121 029958
ддссадддас СддааСддаС сддсСаСаСс дссаасСаса ассдддссас саасСасаас 240
садаааССса адддссдсдС дассССсасс ассдасассС ссассСссас адссСасаСд 300
даасСдсддС сссСдсддад сдасдасасс дссдСдСасС асСдсдссад адасСасдас 360
СасдасдСдд дсаСддасСа сСддддссад ддсасссСдд СдасадСдСс сСссдссСсс 420
ассаадддсс ссСссдСдСС сссСсСддсс ссССдсСссс ддСссассСс СдадСсСасс 480
дссдсСсСдд дсСдссСддС дааддасСас ССсссСдадс сСдСдассдС дСссСддаас 540
СсСддсдссс СдассСсСдд сдСдсасасс ССсссСдссд СдсСдсадСс сСссддссСд 600
СасСсссСдС сСадсдСддС дассдСдссС СссСссаасС Ссддсассса дассСасасс 660
СдСаасдСдд ассасаадсс ССссаасасс ааддСддаса адассдСдда дсддаадСдс 720
СдсдСддадС дсссСссССд СссСдсСссС ссСдСддсСд дсссССсСдС дССссСдССс 780
ссСссааадс сСааддасас ссСдаСдаСс Ссссддассс сСдаадСдас сСдсдСддСд 840
дСддасдСдС сссасдадда сссСдаддСд садССсааСС ддСасдСдда сддсдСддад 900
дСдсасаасд ссаадассаа дссСсдддад даасадССса асСссассСС ссдддСддСд 960
СсСдСдсСда ссдСддСдса ссаддасСдд сСдаасддса аадааСасаа дСдсааддСд 1020
Сссаасаадд дссСдссСдс сссСаСсдаа аадассаСса дсаадассаа дддссадссС 1080
сдсдадссСс аддСдСасас ссСдссСссс адссдддаад аааСдассаа даассаддСд 1140
СсссСдассС дСсСддСдда дддсССсСас ссССссдаСа СсдссдСдда дСдддадСсС 1200
аасддссадс сСдадаасаа сСасаадасс ассссСссСа СдсСддасСс сдасддсСсс 1260
ССсССссСдС асСссдаасС дассдСддас аадСсссддС ддсадсаддд саасдСдССс 1320
СссСдсСссд СдаСдсасда ддсссСдсас аассасСаса сссадаадСс ссСдСсссСд 1380
СсСссСддса адСад 1395
- 122 029958
<210> 31
<211> 1395
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 21К79 (13В, вариант 2)
<400> 31 абдаадсасс бабддббсбб бсбаббабба дбддссдсбс сссдббдддб дббабсдсад 60
дббсадсбад ббсадбсбдд адсддаадбб аадааассбд дадсабссдб даааабаадб 120
бдсааддсаб ссддббасбс дббсассдса басбабабсс асбдддббаа асаддсасса 180
ддасадддас ббдаабддаб сддабабабс дсбааббаба абададсбас ааасбабаас 240
саааааббса ааддасдсдб дасбббсаса асбдасассб саассбсдас адсабасабд 300
дааббасддб сссбасддбс бдасдасасб дссдбббасб аббдсдсбад адаббабдаб 360
бабдабдббд даабддасба ббддддссад ддаасасбдд бдасадбдбс ббсбдсабсс 420
асбаадддас сабссдбдбб сссбббддсс ссббдсбсбс дббсдассбс бдаабсдасб 480
дссдсбсбдд дабдссбсдб дааадаббас ббсссбдадс сбдбдассдб ббссбддаас 540
бсдддсдссс баассбсбдд сдбдсасаса ббсссбдссд бдсбасадбс ббсбддссба 600
басбсбббаб сббсддббдб бассдбассб бсббсбаасб бсддаассса аасббасасс 660
бдбаасдбад ассасаадсс ббсдаасасс ааддбддаса адасбдббда дсдааадбдс 720
бдсдббдадб дсссбссабд бссбдсассб ссбдбддсбд дсссббсбдб дббссбдббс 780
ссбссаааас сбааддасас бсбаабдабс бсбсддасбс сбдаддбдас ббдсдбддбб 840
дбддасдбдб сссасдадда сссбдаддбд садббсаабб ддбасдбдда сддадбсдад 900
дбдсасаабд сааадассаа дссбсдддад даасадббса асбссассбб ссдддбддбб 960
бсбдбдббда ссдббдбдса ссаадасбдд сбдаасддса аадаабасаа дбдсааддбд 1020
бссаасаадд дссбдссбдс сссбабсдаа аадассабса дсаадассаа дддссадссб 1080
- 123 029958
сдсдадссЕс аддЕдЕасас ссЕдссЕссс адссдддаад аааЕдассаа даассаддЕд 1140
ЕсссЕдассЕ дЕсЕддЕдда дддсЕЕсЕас ссЕЕссдаса ЕсдссдЕЕда дЕдддадЕсЕ 1200
аасддасадс сддадаасаа сЕасаадасЕ асдссЕссаа ЕдсЕддасЕс сдасддсЕсс 1260
ЕЕсЕЕссЕдЕ асЕссдаасЕ дассдЕддас аадЕсссддЕ ддсадсаддд саасдЕдЕЕс 1320
ЕсаЕдсЕссд ЕааЕдсасда адссЕЕдсас ааЕсасЕаса сЕсаааадЕс ссЕаЕссЕЕа 1380
ЕсЕссЕддса адЕад 1395
<210> 32
<211> 1401
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 219К45 (13А, вариант 1
<400> 32
аЕдаадсаЕс ЕдЕддЕЕЕЕЕ ссЕдЕЕдсЕс
дЕдсадсЕдд Ессададсдд ддсЕдаддЕд
ЕдЕааддссЕ сддддЕасас дЕЕЕасааас
ддасаддддЕ ЕддааЕддаЕ дддЕдасаЕЕ
даааадЕЕса аасдссдсдЕ сасасЕсЕсс
даасЕЕЕсдЕ сдсЕдаддЕс ддаддасасд
дасаадЕаЕЕ асссЕсЕдаЕ ддаЕЕаЕЕдд
дсдЕсдасда ааддЕсссЕс ддЕаЕЕЕссс
ЕсаасадсЕд сссЕсддсЕд ссЕддЕсааа
ЕддаасЕсдд дадсдсЕЕас дЕссддадЕс
ддасЕдЕаЕЕ сдЕЕдЕсдЕс адЕддЕдасЕ
дЕддсддсас ссадаЕдддЕ дЕЕдЕсссаа 60
аадааасссд дадсаадсдЕ аааадЕаЕсд 120
ЕасЕддаЕдс аЕЕдддЕдсд дсаддсЕссд 180
аассссЕсаа аЕддсадаас аЕсаЕаЕаад 240
дЕддасаадЕ саадсЕсдас ЕдсдЕасаЕд 300
дсадЕдЕасЕ ЕЕЕдсассаЕ ссаЕЕаЕдаЕ 360
ддЕсадддЕа сдЕЕддЕсас сдЕсЕссадс 420
сЕсдсссссЕ дсЕсдаддЕс дасаЕссдаа 480
дасЕасЕЕсс сададссддЕ аасддЕдЕсд 540
сасасаЕЕЕс сддсддЕасЕ дсааЕссЕсд 600
дЕсссдЕссЕ ссааЕЕЕсдд дасЕсадасс 660
- 124 029958
ЕаЕасдЕдса асдЕсдасса сааасссЕса аасассаадд ЕддаЕаадас адЕддадсдс 720
аадЕдсЕдсд ЕддадЕдЕсс сссдЕдЕссд дсасссссЕд Есдссддасс сЕсадЕсЕЕЕ 780
ЕЕдЕЕЕссдс сдаадсссаа адаЕасасЕс аЕдаЕсЕсаа даасдсссда ддЕаасаЕдс 840
дЕддЕддЕсд аЕдЕаадсса сдаддаЕсса даадЕасааЕ ЕсааЕЕддЕа ЕдЕадасддд 900
дЕсдаддЕсс аЕаасдсааа дасдааассд адддаададс адЕЕсааЕЕс дасЕЕЕссдд 960
дЕддЕдЕсдд ЕдсЕЕасадЕ сдЕасаЕсад дасЕддЕЕда асдддаадда дЕасаадЕдЕ 1020
ааадЕаЕсда аЕаадддссЕ Ессадсдссд аЕЕдаааада ссаЕсЕссаа дассааадда 1080
садссасдад адссдсаадЕ сЕаЕасдсЕЕ ссЕсссадсс дадаааадаЕ дасЕааааас 1140
саддЕаЕсдс ЕЕасдЕдЕсЕ сдЕсаадддЕ ЕЕсЕасссЕЕ сддасаЕсдс ддЕддааЕдд 1200
дададсааЕд дасаассдда ааасаасЕас аадасдасас сдссЕаЕдЕЕ даааадсдаЕ 1260
ддаЕсдЕЕЕЕ ЕссЕсЕаЕЕс дааасЕсасд дЕсдаЕаадЕ сасддЕддса дсаддддааЕ 1320
дЕдЕЕсЕссЕ дЕЕсадЕдаЕ дсасдаддсд сЕссасааЕс асЕаЕассса даааадссЕд 1380
ЕсасЕЕЕссс сдддааааЕд а 1401
<210> 33
<211> 1401
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов тяжелой цепи 219К45 (13А, вариант 2)
<400> 33
аЕдаадсасс ЕсЕддЕЕсЕЕ ссЕдсЕссЕс дЕддсЕдсЕс сЕсддЕдддЕ ссЕсЕсссаа 60
дЕдсадсЕдд Ессададсдд ддсЕдаддЕд аадааасссд дадсЕЕссдЕ сааадЕсЕсс 120
ЕдЕааддсЕЕ ссддаЕасас сЕЕЕассаас ЕаЕЕддаЕдс асЕдддЕдсд дсаддсЕссЕ 180
ддасаадддс ЕддааЕддаЕ дддадасаЕс ааЕссЕЕсса аЕддсадаас сЕссЕасаад 240
даааааЕЕса аасддсдддЕ сасасЕсЕсс дЕддасаадЕ сЕадсЕссас адсЕЕасаЕд 300
- 125 029958
даасЕсЕссЕ сссЕдсддЕс сдаадасаса дсЕдЕсЕасЕ ЕсЕдсассаЕ ссасЕасдас 360
дасаадЕасЕ асссЕсЕдаЕ ддасЕасЕдд ддссадддаа сссЕддЕсас сдЕдЕссадс 420
дсЕЕссасаа ааддасссЕс сдЕсЕЕЕссс сЕсдсссссЕ дсЕсссддЕс сасаЕссдаа 480
ЕсаасадсЕд сссЕсддсЕд ссЕддЕсааа дасЕасЕЕсс сададссЕдЕ сасадЕдЕсс 540
ЕддаасЕссд дадсЕсЕсас аЕссддадЕс сасасаЕЕЕс сЕдсЕдЕдсЕ ссааЕссЕсс 600
ддасЕдЕаЕЕ сссЕсЕссЕс сдЕддЕдаса дЕдссЕЕссЕ ссааЕЕЕсдд дасасадасс 660
ЕаЕасаЕдса асдЕддасса сааасссЕсс аасассааад ЕсдаЕаадас адЕддадсдс 720
аадЕдсЕдсд ЕддадЕдЕсс сссЕЕдЕссЕ дсЕсссссЕд ЕддсЕддасс ЕЕссдЕсЕЕЕ 780
сЕдЕЕЕссЕс сЕааассЕаа адасасссЕс аЕдаЕсЕссс ддасссссда ддЕсасаЕдс 840
дЕддЕсдЕсд аЕдЕдадсса сдаддасссс даадЕссааЕ ЕЕааЕЕддЕа ЕдЕддасддд 900
дЕддаддЕсс аЕаасдсЕаа дассааассЕ адддаададс адЕЕсааЕЕс сасЕЕЕссдд 960
дЕддЕдЕссд ЕдсЕдассдЕ сдЕЕсаЕсад дасЕддсЕса асдддааада аЕасаааЕдс 1020
ааадЕсЕсЕа аЕаадддссЕ сссЕдсЕссЕ аЕЕдаааааа сааЕЕЕссаа аасаааадда 1080
саассЕсддд адссЕсаадЕ сЕасасасЕд ссассЕЕссс дддааааааЕ дасааааааЕ 1140
саадЕсЕссс ЕсасаЕдЕсЕ сдЕсааддда ЕЕсЕасссЕЕ ссдасаЕЕдс ЕдЕддааЕдд 1200
дааЕссааЕд дасаассЕда ааасаасЕас аадасаасас сЕссЕаЕдсЕ саааадсдаЕ 1260
дддЕссЕЕЕЕ ЕссЕсЕаЕЕс сааасЕсаса дЕсдаЕаадЕ сЕсддЕддса дсаддддааЕ 1320
дЕдЕЕсЕссЕ дЕЕссдЕдаЕ дсасдаддсЕ сЕссасааЕс асЕаЕассса даааадссЕд 1380
ЕсссЕсЕссс сЕддааааЕд а 1401
<210> 34
<211> 717
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
- 126 029958
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов легкой цепи
<400> 34
абддбдсбдс адасссаддб дббсабсбсс сбдсбдсбдб ддабсбссдд сдссбасддс 60
дасабсдбда бдасссадбс сссадасбсс сбддсбдбдб сбсбдддада дсдддссасс 120
абсбсббдса дадссбссда дбссдбддас аасбасддса бсбссббсаб даадбддббс 180
садсадаадс ссддссадсс сссааадсбд сбдабсбасд ссдссбссаа ссадддабсб 240
ддсдбдсссд ассддббсбс бддабссддс бсбддсассд асбббасссб дассабсадс 300
бсссбдсадд ссдаддасдб ддссдбдбас басбдссадс адбссааада ддбдсссбдд 360
ассббсддсд даддсассаа ддбддааабс аадсддассд бддссдсбсс сбссдбдббс 420
абсббсссас ссбссдасда дсадсбдаад бссддаассд ссбссдбсдб дбдссбдсбд 480
аасаасббсб асссссдсда ддссааддбд садбддаадд бддасаасдс ссбдсадбсс 540
ддсаасбссс аддаабссдб сассдадсад дасбссаадд асадсассба сбсссбдбсс 600
бссасссбда сссбдбссаа ддссдасбас дадаадсаса аддбдбасдс сбдсдаадбд 660
асссассадд дссбдбссад ссссдбдасс аадбссббса ассддддсда дбдббад 717
<210> 35
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой цепи 21М 18
<400> 35
саддбдсадс бддбдсадбс бддсдссдаа дбдаадааас сбддсдссбс сдбдаадабс
бссбдсаадд ссбссддсба сбссббсасс дсббасбаса бссасбдддб саадсаддсс
ссбдддсадд дссбддаабд дабсддсбас абсбссбссб асаасддсдс сассаасбас
60
120
180
- 127 029958
аассадаааб бсаадддссд сдбдассббс ассассдаса ссбссассбс сассдссбас
абддаасбдс ддбсссбдсд дадсдасдас ассдссдбдб асбасбдсдс сададасбас
дасбасдасд бдддсабдда сбасбддддс садддсассс бддбсассдб дбссбсб
<210> 36
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой 21К79 (13В)
<400> 36
саддбдсадс бддбдсадбс бддсдссдаа дбдаадааас сбддсдссбс сдбдаадабс
бссбдсаадд ссбссддсба сбссббсасс дссбасбаса бссасбдддб дааасаддса
ссаддссадд дасбддаабд дабсддсбаб абсдссаасб асаассдддс сассаасбас
аассадаааб бсаадддссд сдбдассббс ассассдаса ссбссассбс сасадссбас
абддаасбдс ддбсссбдсд дадсдасдас ассдссдбдб асбасбдсдс сададасбас
дасбасдасд бдддсабдда сбасбддддс садддсассс бддбдасадб дбссбсс
<210> 37
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой 21К79 (13В, вариант 2 )
<400> 37
саддббсадс бадббсадбс бддадсддаа дббаадааас сбддадсабс сдбдааааба
адббдсаадд сабссддбба сбсдббсасс дсабасбаба бссасбдддб бааасаддса
ссаддасадд дасббдаабд дабсддабаб абсдсбаабб абаабададс басааасбаб
аассаааааб бсаааддасд сдбдасбббс асаасбдаса ссбсаассбс дасадсабас
240
300
357
цепи
60
120
180
240
300
357
цепи
60
120
180
240
- 128 029958
аЕддааЕЕас ддЕсссЕасд дЕсЕдасдас асЕдссдЕЕЕ асЕаЕЕдсдс ЕададаЕЕаЕ
даЕЕаЕдаЕд ЕЕддааЕдда сЕаЕЕддддс садддаасас ЕддЕдасадЕ дЕсЕЕсЕ
<210> 38
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой 219К45 (13А, вариант 1)
<400> 38
300
357
цепи
саадЕдсадс ЕддЕссадад сддддсЕдад дЕдаадааас ссддадсаад сдЕаааадЕа
ЕсдЕдЕаадд ссЕсддддЕа сасдЕЕЕаса аасЕасЕдда ЕдсаЕЕдддЕ дсддсаддсЕ
ссдддасадд ддЕЕддааЕд даЕдддЕдас аЕЕаассссЕ саааЕддсад аасаЕсаЕаЕ
ааддаааадЕ Есааасдссд сдЕсасасЕс ЕссдЕддаса адЕсаадсЕс дасЕдсдЕас
аЕддаасЕЕЕ сдЕсдсЕдад дЕсддаддас асддсадЕдЕ асЕЕЕЕдсас саЕссаЕЕаЕ
даЕдасаадЕ аЕЕасссЕсЕ даЕддаЕЕаЕ ЕддддЕсадд дЕасдЕЕддЕ сассдЕсЕсс
адс
<210> 39
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов вариабельной области тяжелой 219К45 (13А, вариант 2)
60
120
180
240
300
360
363
цепи
<400> 39
саадЕдсадс ЕддЕссадад сддддсЕдад дЕдаадааас ссддадсЕЕс сдЕсааадЕс
ЕссЕдЕаадд сЕЕссддаЕа сассЕЕЕасс аасЕаЕЕдда ЕдсасЕдддЕ дсддсаддсЕ
ссЕддасаад ддсЕддааЕд даЕдддадас аЕсааЕссЕЕ ссааЕддсад аассЕссЕас
ааддаааааЕ Есааасддсд ддЕсасасЕс ЕссдЕддаса адЕсЕадсЕс сасадсЕЕас
аЕддаасЕсЕ ссЕсссЕдсд дЕссдаадас асадсЕдЕсЕ асЕЕсЕдсас саЕссасЕас
60
120
180
240
300
- 129 029958
дасдасаадЕ асЕасссЕсЕ даЕддасЕас Еддддссадд даасссЕддЕ сассдЕдЕсс 360
адс 363
<210> 40
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность нуклеотидов вариабельной области легкой цепи
<400> 40
дасаЕсдЕда ЕдасссадЕс сссадасЕсс сЕддсЕдЕдЕ сЕсЕдддада дсдддссасс 60
аЕсЕсЕЕдса дадссЕссда дЕссдЕддас аасЕасддса ЕсЕссЕЕсаЕ даадЕддЕЕс 120
садсадаадс ссддссадсс сссааадсЕд сЕдаЕсЕасд ссдссЕссаа ссадддаЕсЕ 180
ддсдЕдсссд ассддЕЕсЕс ЕддаЕссддс ЕсЕддсассд асЕЕЕасссЕ дассаЕсадс 240
ЕсссЕдсадд ссдаддасдЕ ддссдЕдЕас ЕасЕдссадс адЕссааада ддЕдсссЕдд 300
ассЕЕсддсд даддсассаа ддЕддаааЕс аад 333
<210> 41
<211> 330
<212> ПРТ
<213> Ното заргепз
<400> 41
А1а 1 Зег ТЬг Ьуз О1у 5 Рго Зег Уа1 РЬе Рго 10 Ьеи А1а Рго Зег Зег 15 Ьуз
Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
- 130
029958
О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 55 Ьеи О1п Зег Зег 60 О1у Ьеи Туг Зег
50
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг
65 70 75 80
Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Н1з Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Ьуз Уа1 О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЬг Н1з ТЬг Суз Рго Рго Суз
100 105 110
Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго
115 120 125
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз
130 135 140
Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр
145 150 155 160
Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и
165 170 175
О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
180 185 190
Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп
195 200 205
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у
- 131
029958
210 215 220
О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЪг Ьеи Рго Рго Бег Агд Азр О1и
225 230 235 240
Ьеи ТЪг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЪг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЪе Туг
245 250 255
Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Азп О1у О1п Рго О1и Азп
260 265 270
Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЪе РЪе
275 280 285
Ьеи Туг Бег Ьуз Ьеи ТЪг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп
290 295 300
Уа1 РЪе Бег Суз Бег Уа1 МеБ Н1з О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТЪг
305 310 315 320
О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
325 330
<210> 42
<211> 326
<212> ПРТ
<213> Ното
<400> 42
А1а Бег ТЪг Ьуз О1у Рго Бег Уа1 РЪе Рго Ьеи А1а Рго Суз Бег Агд
- 132
029958
1 5 10 15
Зег ТЬг Зег О1и 20 Зег ТЬг А1а А1а Ьеи 25 О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 30 Азр Туг
РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег
35 40 45
О1у Уа1 Ηίδ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг
65 70 75 80
Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Ηίδ Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго
100 105 110
Рго Уа1 А1а О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр
115 120 125
ТЬг Ьеи МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр
130 135 140
Уа1 Зег Ηίδ О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у
145 150 155 160
Уа1 О1и Уа1 Ηίδ Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп
165 170 175
- 133
029958
Зег ТАг РАе Агд 180 Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи 185 ТАг Уа1 Уа1 Н1з О1п 190 Азр Тгр
Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго
195 200 205
А1а Рго 11е О1и Ьуз ТАг 11е Зег Ьуз ТАг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и
210 215 220
Рго О1п Уа1 Туг ТАг Ьеи Рго Рго Зег Агд О1и О1и МеС ТАг Ьуз Азп
225 230 235 240
О1п Уа1 Зег Ьеи ТАг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РАе Туг Рго Зег Азр 11е
245 250 255
А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТАг
260 265 270
ТАг Рго Рго МеС Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РАе РАе Ьеи Туг Зег Ьуз
275 280 285
Ьеи ТАг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РАе Зег Суз
290 295 300
Зег Уа1 МеС Н1з О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТАг О1п Ьуз Зег Ьеи
305 310 315 320
Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
325
<210> 43
<211> 377
- 134
029958
<212> ПРТ
<213> Ното зарЬепз
<400> 43
А1а Зег ТЪг Ьуз О1у Рго Зег Уа1 РЪе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд
1 5 10 15
Зег ТЪг Зег О1у О1у ТЪг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЪе Рго О1и Рго Уа1 ТЪг Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЪг Зег
35 40 45
О1у Уа1 НЬз ТЪг РЪе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег
50 55 60
Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЪг Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЪг О1п ТЪг
65 70 75 80
Туг ТЪг Суз Азп Уа1 Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЪг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Агд Уа1 О1и Ьеи Ьуз ТЪг Рго Ьеи О1у Азр ТЪг ТЪг НЬз ТЪг Суз Рго
100 105 110
Агд Суз Рго О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр ТЪг Рго Рго Рго Суз Рго Агд
115 120 125
Суз Рго О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр ТЪг Рго Рго Рго Суз Рго Агд Суз
130 135 140
- 135
029958
Рго 145 О1и Рго Ьуз Бег Суз 150 Азр ТЬг Рго Рго Рго 155 Суз Рго Агд Суз Рго 160
А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз
165 170 175
Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мек 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1
180 185 190
Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п РЬе Ьуз Тгр Туг
195 200 205
Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и
210 215 220
О1п Туг Азп Бег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Н1з
225 230 235 240
О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз
245 250 255
А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз ТЬг Ьуз О1у О1п
260 265 270
Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Бег Агд О1и О1и Мек
275 280 285
ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго
290 295 300
Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Бег О1у О1п Рго О1и Азп Азп
305 310 315 320
- 136
029958
Туг Азп ТНг ТНг Рго Рго Меб Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РНе РНе Ьеи
325 330 335
Туг Бег Ьуз Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп 11е
340 345 350
РНе Бег Суз Бег Уа1 Меб Нгз О1и А1а Ьеи Нгз Азп Агд РНе ТНг О1п
355 360 365
Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
370 375
<210> 44
<211> 327
<212> ПРТ
<213> Ното зар1епз
<400> 44
А1а Бег ТНг Ьуз О1у Рго Бег Уа1 РНе Рго Ьеи А1а Рго Суз Бег Агд
1 5 10 15
Бег ТНг Бег О1и Бег ТНг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РНе Рго О1и Рго Уа1 ТНг Уа1 Бег Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТНг Бег
35 40 45
О1у Уа1 Нгз ТНг РНе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег
50 55 60
- 137
029958
Ьеи 65 Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг 70 Уа1 Рго Бег Бег Бег 75 Ьеи О1у ТЬг Ьуз ТЬг 80
Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Н1з Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз
85 90 95
Агд Уа1 О1и Бег Ьуз Туг О1у Рго Рго Суз Рго Бег Суз Рго А1а Рго
100 105 110
О1и РЬе Ьеи О1у О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз
115 120 125
Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1
130 135 140
Азр Уа1 Бег О1п О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр
145 150 155 160
О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе
165 170 175
Азп Бег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Н1з О1п Азр
180 185 190
Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Ьеи
195 200 205
Рго Бег Бег 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд
210 215 220
О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Бег О1п О1и О1и МеЬ ТЬг Ьуз
- 138
029958
225 230 235 240
Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Бег Азр
245 250 255
11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз
260 265 270
ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег
275 280 285
Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1и О1у Азп Уа1 РЬе Бег
290 295 300
Суз Бег Уа1 Меб Нгз О1и А1а Ьеи Нгз Азп Нгз Туг ТЬг О1п Ьуз Бег
305 310 315 320
Ьеи Бег Ьеи Бег Ьеи О1у Ьуз
325
<210> 45
<211> 8
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Пептид РЬАО
<400> 45
Азр Туг Ьуз Азр Азр Азр Азр Ьуз
<210> 46
<211> 464
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
- 139
029958
<220>
<223> Тяжелая цепь исходного 21К79
<400> 46
Меб 1 Ьуз Нгз Ьеи Тгр 5 РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 10 А1а А1а Рго Агд 15 Тгр
Уа1 Ьеи Бег О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз
20 25 30
Рго О1у А1а Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЬе
35 40 45
ТЬг А1а Туг Туг 11е Нгз Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи
50 55 60
О1и Тгр 11е О1у Туг 11е А1а Азп Туг Азп Агд А1а ТЬг Азп Туг Азп
65 70 75 80
О1п Ьуз РЬе Ьуз О1у Агд Уа1 ТЬг РЬе ТЬг ТЬг Азр ТЬг Бег ТЬг Бег
85 90 95
ТЬг А1а Туг Меб О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТЬг А1а Уа1
100 105 110
Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у Меб Азр Туг Тгр
115 120 125
О1у О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЬг Ьуз О1у Рго
130 135 140
- 140
029958
Зег 145 Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 150 Рго Суз Зег Агд Зег 155 ТЬг Зег О1и Зег ТЬг 160
А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг
165 170 175
Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго
180 185 190
А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг
195 200 205
Уа1 Рго Зег Зег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр
210 215 220
Н1з Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз
225 230 235 240
Суз Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Зег
245 250 255
Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег Агд
260 265 270
ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Н1з О1и Азр Рго
275 280 285
О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а
290 295 300
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Зег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1
- 141
029958
305 310 315 320
Бег Уа1 Беи ТЬг Уа1 Уа1 Нтз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Буз О1и Туг
325 330 335
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Беи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг
340 345 350
11е Бег Ьуз ТЬг Буз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи
355 360 365
Рго Рго Бег Агд О1и О1и МеБ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз
370 375 380
Беи Уа1 Буз О1у РЬе Туг Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег
385 390 395 400
Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго МеБ Беи Азр
405 410 415
Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег Буз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Буз Бег
420 425 430
Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Бег Суз Бег Уа1 МеБ Нтз О1и А1а
435 440 445
Беи Нтз Азп Нтз Туг ТЬг О1п Буз Бег Беи Бег Беи Бег Рго О1у Ьуз
450 455 460
<210> 47
<211> 466
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
- 142
029958
<220>
<223> Тяжелая цепь исходного 219К45
<400> 47
Мер 1 Ьуз Н1з Ьеи Тгр 5 РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи 10 Уа1 А1а А1а Рго Агд 15 Тгр
Уа1 Ьеи Бег О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз
20 25 30
Рго О1у А1а Бег Уа1 Ьуз Уа1 Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг ТЬг РЬе
35 40 45
ТЬг Азп Туг Тгр Мер Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи
50 55 60
О1и Тгр Мер О1у Азр 11е Азп Рго Бег Азп О1у Агд ТЬг Бег Туг Ьуз
65 70 75 80
О1и Ьуз РЬе Ьуз Агд Агд Уа1 ТЬг Ьеи Бег Уа1 Азр Ьуз Бег Бег Бег
85 90 95
ТЬг А1а Туг Мер О1и Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТЬг А1а Уа1
100 105 110
Туг РЬе Суз ТЬг 11е Н1з Туг Азр Азр Ьуз Туг Туг Рго Ьеи Мер Азр
115 120 125
Туг Тгр О1у О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЬг Ьуз
130 135 140
О1у Рго Бег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Бег Агд Бег ТЬг Бег О1и
- 143
029958
145 150 155 160
Бег ТЬг А1а А1а Ьеи 165 О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз 170 Азр Туг РЬе Рго О1и 175 Рго
Уа1 ТЬг Уа1 Бег Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1 Н1з ТЬг
180 185 190
РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1
195 200 205
Уа1 ТЬг Уа1 Рго Бег Бег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп
210 215 220
Уа1 Азр Н1з Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд
225 230 235 240
Ьуз Суз Суз Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у
245 250 255
Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е
260 265 270
Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и
275 280 285
Азр Рго О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з
290 295 300
Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Бег ТЬг РЬе Агд
305 310 315 320
- 144
029958
Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи 325 ТЪг Уа1 Уа1 Няз О1п 330 Азр Тгр Ьеи Азп О1у 335 Ьуз
О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и
340 345 350
Ьуз ТЪг 11е Зег Ьуз ТЪг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг
355 360 365
ТЪг Ьеи Рго Рго Зег Агд О1и О1и Меб ТЪг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи
370 375 380
ТЪг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЪе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр
385 390 395 400
О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго Меб
405 410 415
Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЪе РЪе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЪг Уа1 Азр
420 425 430
Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЪе Зег Суз Зег Уа1 Меб Няз
435 440 445
О1и А1а Ьеи Няз Азп Няз Туг ТЪг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго
450 455 460
О1у Ьуз
465
<210> 48
<211> 445
- 145
029958
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь исходного 21К79 без предсказанной сигнальной последовательности
<400> 48
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Бег О1у А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЪе ТЪг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е Н1з Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Туг 11е А1а Азп Туг Азп Агд А1а ТЪг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЪе
50 55 60
Ьуз О1у Агд Уа1 ТЪг РЪе ТЪг ТЪг Азр ТЪг Бег ТЪг Бег ТЪг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у МеЕ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЪг Ьуз О1у Рго Бег Уа1 РЪе
115 120 125
- 146
029958
Рго Ьеи 130 А1а Рго Суз Бег Агд 135 Бег ТЬг Бег О1и Бег 140 ТЬг А1а А1а Ьеи
О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Бег Тгр
145 150 155 160
Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1 Нтз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи
165 170 175
О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Бег
180 185 190
Бег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Н1з Ьуз Рго
195 200 205
Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз Уа1 О1и
210 215 220
Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи
225 230 235 240
РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и
245 250 255
Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п
260 265 270
РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз
275 280 285
Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Бег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи
290 295 300
- 147
029958
ТЬг 305 Уа1 Уа1 Н1з О1п Азр 310 Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз 315 О1и Туг Ьуз Суз Ьуз 320
Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз
325 330 335
ТЬг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег
340 345 350
Агд О1и О1и МеЕ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз
355 360 365
О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п
370 375 380
Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго МеЕ Ьеи Азр Зег Азр О1у
385 390 395 400
Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п
405 410 415
О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЕ Н1з О1и А1а Ьеи Нгз Азп
420 425 430
Нгз Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
435 440 445
<210> 49
<211> 447
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
- 148
029958
<220>
<223> Тяжелая цепь исходного 219К45 без сигнальной последовательности
<400> 49
О1п Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 10 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
Тгр Меб Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр Меб
35 40 45
О1у Азр 11е Азп Рго Зег Азп О1у Агд ТЬг Зег Туг Ьуз О1и Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз Агд Агд Уа1 ТЬг Ьеи Зег Уа1 Азр Ьуз Зег Зег Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб О1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг РЬе Суз
85 90 95
ТЬг 11е Н1з Туг Азр Азр Ьуз Туг Туг Рго Ьеи Меб Азр Туг Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег О1и Зег ТЬг А1а
130 135 140
- 149
029958
А1а 145 Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 150 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 155 О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 160
Бег Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1 Нгз ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1
180 185 190
Рго Бег Бег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Нгз
195 200 205
Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз
210 215 220
Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Бег Уа1
225 230 235 240
РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Меб 11е Бег Агд ТЬг
245 250 255
Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Нгз О1и Азр Рго О1и
260 265 270
Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Нгз Азп А1а Ьуз
275 280 285
ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Бег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 Бег
290 295 300
Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Уа1 Нгз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз
305 310 315 320
- 150
029958
Суз Ьуз Уа1 Зег Азп 325 Ьуз О1у Ьеи Рго А1а 330 Рго 11е О1и Ьуз ТЪг 335 11е
Зег Ьуз ТЪг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЪг Ьеи Рго
340 345 350
Рго Зег Агд О1и О1и Мек ТЪг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЪг Суз Ьеи
355 360 365
Уа1 Ьуз О1у РЪе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп
370 375 380
О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго Мек Ьеи Азр Зег
385 390 395 400
Азр О1у Зег РЪе РЪе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЪг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд
405 410 415
Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЪе Зег Суз Зег Уа1 Мек НЬз О1и А1а Ьеи
420 425 430
НЬз Азп НЬз Туг ТЪг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у Ьуз
435 440 445
<210> 50
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи исходного 21К79
<400> 50
саадкдсадс ксдкдсадкс аддддсддад дксаадаадс сдддадсакс ддксаааакс
60
- 151 029958
БсдБдБаадд ссБсддддБа сБссБББасБ дсдБаББаса БссаББдддБ ааадсаддсд 120
ссадддсадд даББддадБд даББдддБаБ аБсдссааББ асааБсдсдс дасдаасБаБ 180
аассадаааБ Бсаадддаад ддБдассББс асаасддаБа саБсдасаБс дасддссБас 240
аБддаасББс дсадссБдсд аБсадаБдас асддсддБаБ асБаББдсдс аададаББас 300
дасБаБдаБд БдддааБдда сБаББддддБ сааддБасБс БддБсасадБ сБссБсс 357
<210> 51
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи исходного 219К45
<400> 51
саддБасадс БсдБдсааБс дддддсадад дБсааааадс ссддБдсдБс ддБаааддБс 60
адсБдсааад сдБсаддББа БасаББсасд ааББасБдда БдсаББдддБ садасаддсс 120
ссБддасаад ддсББдааБд даБдддадаБ аБсааБссдБ сдаасддасд дасБадсБаБ 180
ааддадаадБ ББаададдсд сдБаасасБд БсддБддаса ааБсдБссБс аасддссБас 240
аБддадББдБ саБсссБдсд дБсддаадаБ асддсддБсБ асББсБдБас БаБссасБаБ 300
дасдаБаадБ асБасссдсБ БаБддасБас БддддБсадд даасаББддБ аассдБдадс 360
адс 363
<210> 52
<211> 1392
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь исходного 21К79 с сигнальной последовательностью
<400> 52
аБдааасасБ БдБддБББББ ссБсББдсБс дБддсадсБс сБсддБдддБ асБББсасаа 60
дБдсадсБсд БдсадБсадд ддсддаддБс аадаадссдд дадсаБсддБ сааааБсБсд 120
- 152 029958
ЕдЕааддссЕ сддддЕасЕс сЕЕЕасЕдсд ЕаЕЕасаЕсс аЕЕдддЕааа дсаддсдсса 180
дддсадддаЕ ЕддадЕддаЕ ЕдддЕаЕаЕс дссааЕЕаса аЕсдсдсдас даасЕаЕаас 240
садаааЕЕса адддаадддЕ дассЕЕсаса асддаЕасаЕ сдасаЕсдас ддссЕасаЕд 300
даасЕЕсдса дссЕдсдаЕс адаЕдасасд дсддЕаЕасЕ аЕЕдсдсаад адаЕЕасдас 360
ЕаЕдаЕдЕдд дааЕддасЕа ЕЕддддЕсаа ддЕасЕсЕдд ЕсасадЕсЕс сЕссдссадс 420
ассаадддсс сЕадсдЕсЕЕ сссЕсЕддсЕ сссЕдсадса ддадсассад сдададсаса 480
дссдсссЕдд дсЕдссЕддЕ сааддасЕас ЕЕссссдаас сддЕдасддЕ дЕсдЕддаас 540
ЕсаддсдсЕс Едассадсдд сдЕдсасасс ЕЕсссадсЕд ЕссЕасадЕс сЕсаддасЕс 600
ЕасЕсссЕса дсадсдЕддЕ дассдЕдссс ЕссадсаасЕ Есддсассса дассЕасасс 660
ЕдсаасдЕад аЕсасаадсс садсаасасс ааддЕддаса адасадЕЕда дсдсаааЕдЕ 720
ЕдЕдЕсдадЕ дсссассдЕд сссадсасса ссЕдЕддсад дассдЕсадЕ сЕЕссЕсЕЕс 780
сссссаааас ссааддасас ссЕсаЕдаЕс Есссддассс сЕдаддЕсас дЕдсдЕддЕд 840
дЕддасдЕда дссасдаада ссссдаддЕс садЕЕсаасЕ ддЕасдЕдда сддсдЕддад 900
дЕдсаЕааЕд ссаадасааа дссасдддад дадсадЕЕса асадсасдЕЕ ссдЕдЕддЕс 960
адсдЕссЕса ссдЕЕдЕдса ссаддасЕдд сЕдаасддса аддадЕасаа дЕдсааддЕс 1020
Ессаасааад дссЕсссадс ссссаЕсдад аааассаЕсЕ ссаааассаа адддсадссс 1080
сдадаассас аддЕдЕасас ссЕдссссса Есссдддадд адаЕдассаа даассаддЕс 1140
адссЕдассЕ дссЕддЕсаа аддсЕЕсЕас сссадсдаса ЕсдссдЕдда дЕдддададс 1200
ааЕдддсадс сддадаасаа сЕасаадасс асассЕссса ЕдсЕддасЕс сдасддсЕсс 1260
ЕЕсЕЕссЕсЕ асадсаадсЕ сассдЕддас аададсаддЕ ддсадсаддд даасдЕсЕЕс 1320
ЕсаЕдсЕссд ЕдаЕдсаЕда ддсЕсЕдсас аассасЕаса сдсадаадад ссЕсЕсссЕд 1380
- 153 029958
бсбссдддба аа 1392
<210> 53
<211> 1398
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь исходного 219К45 с сигнальной последовательностью
<400> 53
абдааасасс бсбддббсбб бббдсбссбд дбддсадсбс сссдабдддб дсббадссад 60
дбасадсбсд бдсаабсддд ддсададдбс ааааадсссд дбдсдбсддб аааддбсадс 120
бдсааадсдб саддббабас аббсасдааб басбддабдс аббдддбсад асаддссссб 180
ддасаадддс ббдаабддаб дддадабабс аабссдбсда асддасддас бадсбабаад 240
дадаадббба ададдсдсдб аасасбдбсд дбддасаааб сдбссбсаас ддссбасабд 300
дадббдбсаб сссбдсддбс ддаадабасд дсддбсбасб бсбдбасбаб ссасбабдас 360
дабаадбасб асссдсббаб ддасбасбдд ддбсадддаа саббддбаас сдбдадсадс 420
дсдбссасаа адддсссбад сдбсббсссб сбддсбсссб дсадсаддад сассадсдад 480
адсасадссд сссбдддсбд ссбддбсаад дасбасббсс ссдаассддб дасддбдбсд 540
бддаасбсад дсдсбсбдас садсддсдбд сасассббсс садсбдбссб асадбссбса 600
ддасбсбасб сссбсадсад сдбддбдасс дбдсссбсса дсаасббсдд сасссадасс 660
басассбдса асдбадабса саадсссадс аасассаадд бддасаадас адббдадсдс 720
ааабдббдбд бсдадбдссс ассдбдссса дсассассбд бддсаддасс дбсадбсббс 780
сбсббссссс саааасссаа ддасасссбс абдабсбссс ддассссбда ддбсасдбдс 840
дбддбддбдд асдбдадсса сдаадасссс даддбссадб бсаасбддба сдбддасддс 900
дбддаддбдс абаабдссаа дасааадсса сдддаддадс адббсаасад сасдббссдб 960
дбддбсадсд бссбсассдб бдбдсассад дасбддсбда асддсаадда дбасаадбдс 1020
- 154 029958
ааддСсСсса асаааддссС сссадссссс аСсдадаааа ссаСсСссаа аассаааддд 1080
садссссдад аассасаддС дСасасссСд сссссаСссс дддаддадаС дассаадаас 1140
саддСсадсс СдассСдссС ддСсаааддс ССсСасссса дсдасаСсдс сдСддадСдд 1200
дададсааСд ддсадссдда даасаасСас аадассасас сСсссаСдсС ддасСссдас 1260
ддсСссССсС СссСсСасад саадсСсасс дСддасаада дсаддСддса дсаддддаас 1320
дСсССсСсаС дсСссдСдаС дсаСдаддсС сСдсасаасс асСасасдса даададссСс 1380
СсссСдСсСс сдддСааа 1398
<210> 54
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельные области легких цепей исходных 21К79 и 219К45
<400> 54
дасаСсдСда СдасссадСс сссСдасСсс сСддсСдСдС сссСдддсда дадддссасс 60
аСсСссСдса дадссадсда аСссдСсдаС ааССаСддса СССссСССаС даадСддССс 120
садсадааас саддасадсс СссСаадсСд сСсаСССасд сСдсаСссаа ссаадддСсс 180
ддддСсссСд асаддССсСс сддсадсддд Сссддаасад аСССсасСсС сассаСсадс 240
адссСдсадд сСдаадаСдС ддсСдСсСаС СасСдСсадс ааадсаадда ддСдссССдд 300
асаССсддад дадддассаа ддСддаааСс ааа 333
<210> 55
<211> 717
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкие цепи исходных 21К79 и 219К45
<400> 55
аСддСдсСсс адасссаддС сССсаСССсс сСдсСдсСсС ддаСсадсдд адссСасддд 60
- 155 029958
дасабсдбда бдасссадбс сссбдасбсс сбддсбдбдб сссбдддсда дадддссасс 120
абсбссбдса дадссадсда абссдбсдаб ааббабддса бббссбббаб даадбддббс 180
садсадааас саддасадсс бссбаадсбд сбсабббасд сбдсабссаа ссаадддбсс 240
ддддбсссбд асаддббсбс сддсадсддд бссддаасад абббсасбсб сассабсадс 300
адссбдсадд сбдаадабдб ддсбдбсбаб басбдбсадс ааадсаадда ддбдссббдд 360
асаббсддад дадддассаа ддбддааабс ааасдбасдд бддсбдсссс сбссдбсббс 420
абсббссссс ссадсдабда дсадсбдааа адсддсасбд ссадсдбддб дбдссбдсбд 480
аабаасббсб абссссддда ддссааадбд садбддаадд бддабаасдс ссбссааадс 540
ддсаасбссс аддададсдб сасададсад дасадсаадд асадсассба садссбсадс 600
адсасссбда сссбдадсаа адссдасбас дадааасаса аадбсбасдс сбдсдаадбс 660
асссабсадд дссбдадсад ссссдбсаса аададсббса асаддддсда дбдббда 717
<210> 56
<211> 445
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К75 без предсказанной сигнальной последовательности
<400> 56
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг Зег РЬе ТЬг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е Ηίδ Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
- 156 029958
О1у Туг 11е А1а О1у Туг Ьуз 55 Азр А1а ТЪг Азп Туг Азп О1п 60 Ьуз РЪе
50
Ьуз О1у Агд Уа1 ТЪг РЪе ТЪг ТЪг Азр ТЪг Бег ТЪг Бег ТЪг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у МеЕ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЪг Ьуз О1у Рго Бег Уа1 РЪе
115 120 125
Рго Ьеи А1а Рго Суз Бег Агд Бег ТЪг Бег О1и Бег ТЪг А1а А1а Ьеи
130 135 140
О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЪе Рго О1и Рго Уа1 ТЪг Уа1 Бег Тгр
145 150 155 160
Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЪг Бег О1у Уа1 Н1з ТЪг РЪе Рго А1а Уа1 Ьеи
165 170 175
О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЪг Уа1 Рго Бег
180 185 190
Бег Азп РЪе О1у ТЪг О1п ТЪг Туг ТЪг Суз Азп Уа1 Азр Н1з Ьуз Рго
195 200 205
Бег Азп ТЪг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЪг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз Уа1 О1и
- 157
029958
210 215 220
Суз 225 Рго Рго Суз Рго А1а 230 Рго Рго Уа1 А1а О1у 235 Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи 240
РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и
245 250 255
Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 О1п
260 265 270
РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз
275 280 285
Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Зег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи
290 295 300
ТЬг Уа1 Уа1 Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз
305 310 315 320
Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз
325 330 335
ТЬг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег
340 345 350
Агд О1и О1и МеЕ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 О1и
355 360 365
О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п
370 375 380
- 158
029958
Рго 385 О1и Азп Азп Туг Ьуз 390 ТЪг ТЪг Рго Рго МеБ 395 Ьеи Азр Бег Азр О1у 400
Бег РЪе РЪе Ьеи Туг Бег О1и Ьеи ТЪг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п
405 410 415
О1п О1у Азп Уа1 РЪе Бег Суз Бег Уа1 МеБ Нгз О1и А1а Ьеи Нгз Азп
420 425 430
Нгз Туг ТЪг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
435 440 445
<210> 57
<211> 464
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К75 с предсказанной сигнальной последовательностью
<400> 57
МеБ Ьуз Нгз Ьеи Тгр РЪе РЪе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 А1а А1а Рго Агд Тгр
1 5 10 15
Уа1 Ьеи Бег О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз
20 25 30
Рго О1у А1а Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЪе
35 40 45
ТЪг А1а Туг Туг 11е Нгз Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи
- 159
029958
50 55 60
О1и 65 Тгр 11е О1у Туг 11е 70 А1а О1у Туг Ьуз Азр 75 А1а ТЪг Азп Туг Азп 80
О1п Ьуз РЪе Ьуз О1у Агд Уа1 ТЪг РЪе ТЪг ТЪг Азр ТЪг Зег ТЪг Зег
85 90 95
ТЪг А1а Туг Меб О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЪг А1а Уа1
100 105 110
Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у Меб Азр Туг Тгр
115 120 125
О1у О1п О1у ТЪг Ьеи Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЪг Ьуз О1у Рго
130 135 140
Зег Уа1 РЪе Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЪг Зег О1и Зег ТЪг
145 150 155 160
А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЪе Рго О1и Рго Уа1 ТЪг
165 170 175
Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЪг Зег О1у Уа1 Няз ТЪг РЪе Рго
180 185 190
А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЪг
195 200 205
Уа1 Рго Зег Зег Азп РЪе О1у ТЪг О1п ТЪг Туг ТЪг Суз Азп Уа1 Азр
210 215 220
- 160
029958
Н1з Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз
225 230 235 240
Суз Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Бег
245 250 255
Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мек 11е Бег Агд
260 265 270
ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и Азр Рго
275 280 285
О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а
290 295 300
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Бег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1
305 310 315 320
Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Уа1 Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг
325 330 335
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг
340 345 350
11е Бег Ьуз ТЬг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи
355 360 365
Рго Рго Бег Агд О1и О1и Мек ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз
370 375 380
Ьеи Уа1 О1и О1у РЬе Туг Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег
- 161
029958
385 390 395 400
Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго МеЕ Ьеи Азр
405 410 415
Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег О1и Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег
420 425 430
Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Бег Суз Бег Уа1 МеЕ Нгз О1и А1а
435 440 445
Ьеи Нгз Азп Нгз Туг ТЬг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
450 455 460
<210> 58
<211> 119
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К75
<400> 58
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЬе ТЬг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е Нгз Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Туг 11е А1а О1у Туг Ьуз Азр А1а ТЬг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЬе
50 55 60
- 162
029958
Ьуз 65 О1у Агд Уа1 ТЬг РЬе 70 ТЬг ТЬг Азр ТЬг Бег 75 ТЬг Бег ТЬг А1а Туг 80
Меб О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у Меб Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 115 ТЬг Уа1 Бег Бег
<210> 59
<211> 17
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ2 тяжелой цепи 21К75
<400> 59
Туг 11е А1а О1у Туг Ьуз Азр А1а ТЬг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЬе Ьуз 1 5 10 15
О1у
<210> 60
<211> 1392
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 1)
<400> 60
абдаадсасс бдбддббсбб бсбдсбдсбд дбддссдсбс ссадабдддб дсбдбсссад 60
дбдсадсбдд бдсадбсбдд сдссдаадбд аадааассбд дсдссбссдб даадабсбсс 120
бдсааддссб ссддсбасбс сббсассдсс басбасабсс асбдддбсаа дсаддссссб 180
- 163 029958
ддасадддсс СддааСддаС сддсСаСаСс дссддсСаса аддасдссас саасСасаас 240
садаааССса адддсададС дассССсасс ассдасассС ссассСсСас сдссСасаСд 300
даасСдсддС сссСдсддад сдасдасасс дссдСдСасС асСдсдссад адасСасдас 360
СасдасдСдд дсаСддасСа сСддддссад ддсасасСсд СдассдСдСс сСсСдсССсс 420
ассаадддсс ссСссдСдСС СссСсСддсс ссССдсСсса даСссассСс сдадСсСасс 480
дссдсСсСдд дсСдссСсдС дааддасСас ССссссдадс ссдСдасадС дСсССддаас 540
СсСддсдссс СдассСссдд сдСдсасасс СССссадсСд СдсСдсадСс сСссддссСд 600
СасСсссСдС ссСссдСсдС дасСдСдссс СссСссаасС Ссддсассса дассСасасс 660
СдСаасдСдд ассасаадсс сСссаасасс ааддСддаса адассдСдда асддаадСдс 720
СдсдСддааС дссссссССд СссСдссссС ссСдСддсСд дсссСадсдС дССссСдССс 780
сссссааадс ссааддасас ссСдаСдаСс Ссссддассс ссдаадСдас сСдсдСддСд 840
дСддаСдСдС сссасдадда ссссдаддСд садССсааСС ддСасдСдда сддсдСддаа 900
дСдсасаасд ссаадассаа дсссададад даасадССса асСссассСС ссдддСддСд 960
СссдСдсСда ссдСддСдса СсаддасСдд сСдаасддса аададСасаа дСдсааддСд 1020
Сссаасаадд дссСдссСдс ссссаСсдаа аадассаСсС сСаадассаа дддасадссс 1080
сдсдадсссс аддСдСасас асСдссСсса Ссссдддаад адаСдассаа даассаддСд 1140
СсссСдассС дСсСддСдда аддсССсСас сссСссдаСа СсдссдСдда аСдддадСсс 1200
аасддссадс ссдадаасаа сСасаадасс асссссссса СдсСддасСс сдасддсСса 1260
ССсССссСдС асадсдадсС дасадСддас аадСсссддС ддсадсаддд саасдСдССс 1320
СссСдсСссд СдаСдсасда ддсссСдсас аассасСаса сссадаадСс ссСдСсссСд 1380
адссссддса ад 1392
<210> 61
- 164 029958
<211> 1392
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант Б1-2)
<400> 61
аБдаадсасс БдБддББсББ БсБдсБдсБд дБддссдсБс ссадаБдддБ дсБдБсссад 60
дББсадсБад ББсадБсБдд адсддаадББ аадааассБд дадсаБссдБ дааааБаадБ 120
БдсааддсаБ ссддББасБс дББсассдса БасБаБаБсс асБдддББаа асаддсасса 180
ддасадддас ББдааБддаБ сддаБаБаБс дсБддаБаБа аадаБдсБас ааасБаБаас 240
саааааББса ааддасдсдБ дасБББсаса асБдасассБ саассБсдас адсаБасаБд 300
дааББасддБ сссБасддБс БдасдасасБ дссдБББасБ аББдсдсБад адаББаБдаБ 360
БаБдаБдББд дааБддасБа ББддддссад ддаасасБдд БдасадБдБс ББсБдсаБсс 420
асБаадддас саБссдБдББ сссБББддсс ссББдсБсБс дББсдассБс БдааБсдасБ 480
дссдсБсБдд даБдссБсдБ дааадаББас ББсссБдадс сБдБдассдБ ББссБддаас 540
Бсдддсдссс БаассБсБдд сдБдсасаса ББсссБдссд БдсБасадБс ББсБддссБа 600
БасБсБББаБ сББсддББдБ БассдБассБ БсББсБаасБ Бсддаассса аасББасасс 660
БдБаасдБад ассасаадсс ББсдаасасс ааддБддаса адасБдББда дсдааадБдс 720
БдсдББдадБ дсссБссаБд БссБдсассБ ссБдБддсБд дсссББсБдБ дББссБдББс 780
ссБссаааас сБааддасас БсБааБдаБс БсБсддасБс сБдаддБдас ББдсдБддББ 840
дБддасдБдБ сссасдадда сссБдаддБд садББсааББ ддБасдБдда сддадБсдад 900
дБдсасааБд сааадассаа дссБсдддад даасадББса асБссассББ ссдддБддББ 960
БсБдБдББда ссдББдБдса ссаадасБдд сБдаасддса аадааБасаа дБдсааддБд 1020
Бссаасаадд дссБдссБдс сссБаБсдаа аадассаБса дсаадассаа дддссадссБ 1080
- 165 029958
сдсдадссрс аддрдрасас ссрдссрссс адссдддаад ааардассаа даассаддрд 1140
рсссрдасср дрсрддрдда дддсррсрас ссррссдаса рсдссдррда дрдддадрср 1200
аасддасадс сддадаасаа срасаадаср асдссрссаа рдсрддасрс сдасддсрсс 1260
ррсррссрдр асрссдааср дассдрддас аадрсссддр ддсадсаддд саасдрдррс 1320
рсардсрссд раардсасда адссррдсас аарсасраса срсаааадрс ссрарссрра 1380
рсрссрддса ад 1392
<210> 62
<211> 445
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К83 без предсказанной сигнальной последовательности
<400> 62
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у А1а
1 5 10 15
Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЬе ТЬг А1а Туг
20 25 30
Туг 11е Н1з Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Туг 11е Бег Азп Туг Азп Агд А1а ТЬг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз О1у Агд Уа1 ТЬг РЬе ТЬг ТЬг Азр ТЬг Бег ТЬг Бег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
- 166
029958
МеЕ О1и Ьеи Агд Зег 85 Ьеи Агд Зег Азр Азр 90 ТЬг А1а Уа1 Туг Туг 95 Суз
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у МеЕ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег Уа1 РЬе
115 120 125
Рго Ьеи А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег О1и Зег ТЬг А1а А1а Ьеи
130 135 140
О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр
145 150 155 160
Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи
165 170 175
О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег
180 185 190
Зег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр Н1з Ьуз Рго
195 200 205
Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз Суз Уа1 О1и
210 215 220
Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи
225 230 235 240
РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и
245 250 255
- 167
029958
Уа1 ТЪг Суз Уа1 260 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег 265 НЬз О1и Азр Рго О1и 270 Уа1 О1п
РЪе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 НЬз Азп А1а Ьуз ТЪг Ьуз
275 280 285
Рго Агд О1и О1и О1п РЪе Азп Зег ТЪг РЪе Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи
290 295 300
ТЪг Уа1 Уа1 НЬз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз
305 310 315 320
Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЪг 11е Зег Ьуз
325 330 335
ТЪг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЪг Ьеи Рго Рго Зег
340 345 350
Агд О1и О1и Мек ТЪг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЪг Суз Ьеи Уа1 О1и
355 360 365
О1у РЪе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п
370 375 380
Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго Мек Ьеи Азр Зег Азр О1у
385 390 395 400
Зег РЪе РЪе Ьеи Туг Зег О1и Ьеи ТЪг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п
405 410 415
О1п О1у Азп Уа1 РЪе Зег Суз Зег Уа1 Мек НЬз О1и А1а Ьеи НЬз Азп
- 168
029958
420
425
430
Н1з Туг ТЬг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
435 440 445
<210> 63
<211> 464
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К83 с предсказанной сигнальной последовательностью
<400> 63
МеЬ Ьуз Н1з Ьеи Тгр РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 А1а А1а Рго Агд Тгр
1 5 10 15
Уа1 Ьеи Бег О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз
20 25 30
Рго О1у А1а Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг Бег РЬе
35 40 45
ТЬг А1а Туг Туг 11е Н1з Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи
50 55 60
О1и Тгр 11е О1у Туг 11е Бег Азп Туг Азп Агд А1а ТЬг Азп Туг Азп
65 70 75 80
О1п Ьуз РЬе Ьуз О1у Агд Уа1 ТЬг РЬе ТЬг ТЬг Азр ТЬг Бег ТЬг Бег
85 90 95
- 169
029958
ТЬг А1а Туг Меб 100 О1и Ьеи Агд Бег Ьеи 105 Агд Бег Азр Азр ТЬг 110 А1а Уа1
Туг Туг Суз А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1 О1у Меб Азр Туг Тгр
115 120 125
О1у О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЬг Ьуз О1у Рго
130 135 140
Бег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз Бег Агд Бег ТЬг Бег О1и Бег ТЬг
145 150 155 160
А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг
165 170 175
Уа1 Бег Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго
180 185 190
А1а Уа1 Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг
195 200 205
Уа1 Рго Бег Бег Азп РЬе О1у ТЬг О1п ТЬг Туг ТЬг Суз Азп Уа1 Азр
210 215 220
Н1з Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз ТЬг Уа1 О1и Агд Ьуз Суз
225 230 235 240
Суз Уа1 О1и Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго Уа1 А1а О1у Рго Бег
245 250 255
Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Меб 11е Бег Агд
260 265 270
- 170
029958
ТЬг Рго О1и 275 Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 280 Уа1 Азр Уа1 Зег Н1з 285 О1и Азр Рго
О1и Уа1 О1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а
290 295 300
Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п РЬе Азп Зег ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1
305 310 315 320
Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Уа1 Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг
325 330 335
Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз О1у Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг
340 345 350
11е Зег Ьуз ТЬг Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи
355 360 365
Рго Рго Зег Агд О1и О1и МеЕ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз
370 375 380
Ьеи Уа1 О1и О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Зег
385 390 395 400
Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго МеЕ Ьеи Азр
405 410 415
Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег О1и Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег
420 425 430
Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЕ Нгз О1и А1а
- 171
029958
435 440 445
Ьеи Нгз Азп Нгз Туг ТНг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
450 455 460
<210> 64
<211> 119
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К83
<400> 64
О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Бег О1у
1 5
Бег Уа1 Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а
20
Туг 11е Нгз Тгр Уа1 Ьуз О1п А1а
35 40
О1у Туг 11е Бег Азп Туг Азп Агд
50 55
Ьуз О1у Агд Уа1 ТНг РНе ТНг ТНг
65 70
Меб О1и Ьеи Агд Бег Ьеи Агд Бег
85
А1а Агд Азр Туг Азр Туг Азр Уа1
А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
10
Бег О1у Туг Бег РНе ТНг А1а Туг
25 30
Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
45
А1а ТНг Азп Туг Азп О1п Ьуз РНе
60
Азр ТНг Бег ТНг Бег ТНг А1а Туг
75 80
Азр Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
О1у Меб Азр Туг Тгр О1у О1п О1у
105 110
100
- 172
029958
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115
<210> 65
<211> 17
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ2 тяжелой цепи 21К83
<400> 65
Туг 11е Бег Азп Туг Азп Агд А1а ТЬг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЬе Ьуз 1 5 10 15
О1у
<210> 66
<211> 1392
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К83 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 1)
<400> 66 аЕдаадсасс ЕдЕддЕЕсЕЕ ЕсЕдсЕдсЕд дЕддссдсЕс ссадаЕдддЕ дсЕдЕсссад 60
дЕдсадсЕдд ЕдсадЕсЕдд сдссдаадЕд аадааассЕд дсдссЕссдЕ даадаЕсЕсс 120
ЕдсааддссЕ ссддсЕасЕс сЕЕсассдсс ЕасЕасаЕсс асЕдддЕсаа дсаддссссЕ 180
ддасадддсс ЕддааЕддаЕ сддсЕасаЕс ЕссаасЕаса ассдддссас сааЕЕасаас 240
садаааЕЕса адддссдсдЕ дассЕЕсасс ассдасассЕ сЕассЕсЕас сдссЕасаЕд 300
даасЕдсддЕ сссЕдсддад сдасдасасс дссдЕдЕасЕ асЕдсдссад адасЕасдас 360
ЕасдасдЕдд дсаЕддасЕа сЕддддссад ддсасасЕсд ЕдассдЕдЕс ЕадсдсЕЕсс 420
ассаадддсс ссЕссдЕдЕЕ ЕссЕсЕддсс ссЕЕдсЕсса даЕссассЕс сдадЕсЕасс 480
- 173 029958
дссдсбсбдд дсбдссбсдб дааддасбас ббссссдадс ссдбдасадб дбссбддаас 540
бсбддсдсбс бдассбссдд сдбдсасасс бббссадсбд бдсбдсадбс сбссддссбд 600
басбсссбдб ссбссдбсдб дасбдбдссс бссбссаасб бсддсассса дассбасасс 660
бдбаасдбдд ассасаадсс сбссаасасс ааддбддаса адассдбдда асддаадбдс 720
бдсдбддааб дссссссббд бссбдссссб ссбдбддсбд дсссбадсдб дббссбдббс 780
сссссааадс ссааддасас ссбдабдабс бсссддассс ссдаадбдас сбдсдбддбд 840
дбддабдбдб сссасдадда ссссдаддбд садббсаабб ддбасдбдда сддсдбддаа 900
дбдсасаасд ссаадассаа дсссададад даасадббса асбссассбб ссдддбддбд 960
бссдбдсбда ссдбддбдса бсаддасбдд сбдаасддса аададбасаа дбдсааддбд 1020
бссаасаадд дссбдссбдс ссссабсдаа аадассабсб сбаадассаа дддасадссс 1080
сдсдадсссс аддбдбасас асбдссбсса бсссдддаад адабдассаа даассаддбд 1140
бсссбдассб дбсбддбдда аддсббсбас сссбссдаба бсдссдбдда абдддадбсс 1200
аасддссадс ссдадаасаа сбасаадасс асссссссса бдсбддасбс сдасддсбса 1260
ббсббссбдб асадсдадсб дасадбддас аадбсссддб ддсадсаддд саасдбдббс 1320
бссбдсбссд бдабдсасда ддсссбдсас аассасбаса сссадаадбс ссбдбсссбд 1380
адссссддса ад 1392
<210> 67
<211> 1392
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант З1-2)
<400> 67
абдаадсасс бдбддббсбб бсбдсбдсбд дбддссдсбс ссадабдддб дсбдбсссад 60
- 174 029958
дЕЕсадсЕад ЕЕсадЕсЕдд адсддаадЕЕ аадааассЕд дадсаЕссдЕ дааааЕаадЕ 120
ЕдсааддсаЕ ссддЕЕасЕс дЕЕсассдса ЕасЕаЕаЕсс асЕдддЕЕаа асаддсасса 180
ддасадддас ЕЕдааЕддаЕ сддаЕаЕаЕс дсЕддаЕаЕа аадаЕдсЕас ааасЕаЕаас 240
саааааЕЕса ааддасдсдЕ дасЕЕЕсаса асЕдасассЕ саассЕсдас адсаЕасаЕд 300
дааЕЕасддЕ сссЕасддЕс ЕдасдасасЕ дссдЕЕЕасЕ аЕЕдсдсЕад адаЕЕаЕдаЕ 360
ЕаЕдаЕдЕЕд дааЕддасЕа ЕЕддддссад ддаасасЕдд ЕдасадЕдЕс ЕЕсЕдсаЕсс 420
асЕаадддас саЕссдЕдЕЕ сссЕЕЕддсс ссЕЕдсЕсЕс дЕЕсдассЕс ЕдааЕсдасЕ 480
дссдсЕсЕдд даЕдссЕсдЕ дааадаЕЕас ЕЕсссЕдадс сЕдЕдассдЕ ЕЕссЕддаас 540
Есдддсдссс ЕаассЕсЕдд сдЕдсасаса ЕЕсссЕдссд ЕдсЕасадЕс ЕЕсЕддссЕа 600
ЕасЕсЕЕЕаЕ сЕЕсддЕЕдЕ ЕассдЕассЕ ЕсЕЕсЕаасЕ Есддаассса аасЕЕасасс 660
ЕдЕаасдЕад ассасаадсс ЕЕсдаасасс ааддЕддаса адасЕдЕЕда дсдааадЕдс 720
ЕдсдЕЕдадЕ дсссЕссаЕд ЕссЕдсассЕ ссЕдЕддсЕд дсссЕЕсЕдЕ дЕЕссЕдЕЕс 780
ссЕссаааас сЕааддасас ЕсЕааЕдаЕс ЕсЕсддасЕс сЕдаддЕдас ЕЕдсдЕддЕЕ 840
дЕддасдЕдЕ сссасдадда сссЕдаддЕд садЕЕсааЕЕ ддЕасдЕдда сддадЕсдад 900
дЕдсасааЕд сааадассаа дссЕсдддад даасадЕЕса асЕссассЕЕ ссдддЕддЕЕ 960
ЕсЕдЕдЕЕда ссдЕЕдЕдса ссаадасЕдд сЕдаасддса аадааЕасаа дЕдсааддЕд 1020
Ессаасаадд дссЕдссЕдс сссЕаЕсдаа аадассаЕса дсаадассаа дддссадссЕ 1080
сдсдадссЕс аддЕдЕасас ссЕдссЕссс адссдддаад аааЕдассаа даассаддЕд 1140
ЕсссЕдассЕ дЕсЕддЕдда дддсЕЕсЕас ссЕЕссдаса ЕсдссдЕЕда дЕдддадЕсЕ 1200
аасддасадс сддадаасаа сЕасаадасЕ асдссЕссаа ЕдсЕддасЕс сдасддсЕсс 1260
ЕЕсЕЕссЕдЕ асЕссдаасЕ дассдЕддас аадЕсссддЕ ддсадсаддд саасдЕдЕЕс 1320
- 175 029958
бсабдсбссд баабдсасда адссббдсас аабсасбаса сбсаааадбс ссбабссбба
бсбссбддса ад
<210> 68
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К75 (13В, вариант 1)
<400> 68
1380
1392
саддбдсадс бддбдсадбс бддсдссдаа дбдаадааас сбддсдссбс сдбдаадабс
бссбдсаадд ссбссддсба сбссббсасс дссбасбаса бссасбдддб саадсаддсс
ссбддасадд дссбддаабд дабсддсбаб абсдссддсб асааддасдс сассаасбас
аассадаааб бсаадддсад адбдассббс ассассдаса ссбссассбс бассдссбас
абддаасбдс ддбсссбдсд дадсдасдас ассдссдбдб асбасбдсдс сададасбас
дасбасдасд бдддсабдда сбасбддддс садддсасас бсдбдассдб дбссбсб
60
120
180
240
300
357
<210> 69
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К75 (13В, вариант 2)
<400> 69
саддббсадс бадббсадбс бддадсддаа дббаадааас сбддадсабс сдбдааааба
адббдсаадд сабссддбба сбсдббсасс дсабасбаба бссасбдддб бааасаддса
ссаддасадд дасббдаабд дабсддабаб абсдсбддаб абааадабдс басааасбаб
аассаааааб бсаааддасд сдбдасбббс асаасбдаса ссбсаассбс дасадсабас
абддааббас ддбсссбасд дбсбдасдас асбдссдббб асбаббдсдс бададаббаб
даббабдабд ббддаабдда сбаббддддс садддаасас бддбдасадб дбсббсб
60
120
180
240
300
357
- 176 029958
<210> 70
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К83 (13В, вариант 1)
<400> 70
саддЕдсадс ЕддЕдсадЕс Еддсдссдаа дЕдаадааас сЕддсдссЕс сдЕдаадаЕс 60
ЕссЕдсаадд ссЕссддсЕа сЕссЕЕсасс дссЕасЕаса ЕссасЕдддЕ саадсаддсс 120
ссЕддасадд дссЕддааЕд даЕсддсЕас аЕсЕссаасЕ асаассдддс сассааЕЕас 180
аассадаааЕ Есаадддссд сдЕдассЕЕс ассассдаса ссЕсЕассЕс ЕассдссЕас 240
аЕддаасЕдс ддЕсссЕдсд дадсдасдас ассдссдЕдЕ асЕасЕдсдс сададасЕас 300
дасЕасдасд ЕдддсаЕдда сЕасЕддддс садддсасас ЕсдЕдассдЕ дЕсЕадс 357
<210> 71
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К75 (13В, вариант 2)
<400> 71
саддЕЕсадс ЕадЕЕсадЕс Еддадсддаа дЕЕаадааас сЕддадсаЕс сдЕдааааЕа 60
адЕЕдсаадд саЕссддЕЕа сЕсдЕЕсасс дсаЕасЕаЕа ЕссасЕдддЕ Еааасаддса 120
ссаддасадд дасЕЕдааЕд даЕсддаЕаЕ аЕсдсЕддаЕ аЕааадаЕдс ЕасааасЕаЕ 180
аассаааааЕ Есаааддасд сдЕдасЕЕЕс асаасЕдаса ссЕсаассЕс дасадсаЕас 240
аЕддааЕЕас ддЕсссЕасд дЕсЕдасдас асЕдссдЕЕЕ асЕаЕЕдсдс ЕададаЕЕаЕ 300
даЕЕаЕдаЕд ЕЕддааЕдда сЕаЕЕддддс садддаасас ЕддЕдасадЕ дЕсЕЕсЕ 357
<210> 72
<211> 1395
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
- 177 029958
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К83 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 2)
<400> 72
аЕдаадсасс ЕаЕддЕЕсЕЕ ЕсЕаЕЕаЕЕа дЕддссдсЕс сссдЕЕдддЕ дЕЕаЕсдсад 60
дЕЕсадсЕад ЕЕсадЕсЕдд адсддаадЕЕ аадааассЕд дадсаЕссдЕ дааааЕаадЕ 120
ЕдсааддсаЕ ссддЕЕасЕс дЕЕсассдса ЕасЕаЕаЕсс асЕдддЕЕаа асаддсасса 180
ддасадддас ЕЕдааЕддаЕ сддаЕаЕаЕс ЕссааЕЕаЕа аЕададсЕас ааасЕаЕаас 240
саааааЕЕса ааддасдсдЕ дасЕЕЕсаса асЕдасассЕ саассЕсдас адсаЕасаЕд 300
дааЕЕасддЕ сссЕасддЕс ЕдасдасасЕ дссдЕЕЕасЕ аЕЕдсдсЕад адаЕЕаЕдаЕ 360
ЕаЕдаЕдЕЕд дааЕддасЕа ЕЕддддссад ддаасасЕдд ЕдасадЕдЕс ЕЕсЕдсаЕсс 420
асЕаадддас саЕссдЕдЕЕ сссЕЕЕддсс ссЕЕдсЕсЕс дЕЕсдассЕс ЕдааЕсдасЕ 480
дссдсЕсЕдд даЕдссЕсдЕ дааадаЕЕас ЕЕсссЕдадс сЕдЕдассдЕ ЕЕссЕддаас 540
Есдддсдссс ЕаассЕсЕдд сдЕдсасаса ЕЕсссЕдссд ЕдсЕасадЕс ЕЕсЕддссЕа 600
ЕасЕсЕЕЕаЕ сЕЕсддЕЕдЕ ЕассдЕассЕ ЕсЕЕсЕаасЕ Есддаассса аасЕЕасасс 660
ЕдЕаасдЕад ассасаадсс ЕЕсдаасасс ааддЕддаса адасЕдЕЕда дсдааадЕдс 720
ЕдсдЕЕдадЕ дсссЕссаЕд ЕссЕдсассЕ ссЕдЕддсЕд дсссЕЕсЕдЕ дЕЕссЕдЕЕс 780
ссЕссаааас сЕааддасас ЕсЕааЕдаЕс ЕсЕсддасЕс сЕдаддЕдас ЕЕдсдЕддЕЕ 840
дЕддасдЕдЕ сссасдадда сссЕдаддЕд садЕЕсааЕЕ ддЕасдЕдда сддадЕсдад 900
дЕдсасааЕд сааадассаа дссЕсдддад даасадЕЕса асЕссассЕЕ ссдддЕддЕЕ 960
ЕсЕдЕдЕЕда ссдЕЕдЕдса ссаадасЕдд сЕдаасддса аадааЕасаа дЕдсааддЕд 1020
Ессаасаадд дссЕдссЕдс сссЕаЕсдаа аадассаЕса дсаадассаа дддссадссЕ 1080
сдсдадссЕс аддЕдЕасас ссЕдссЕссс адссдддаад аааЕдассаа даассаддЕд 1140
- 178 029958
бсссбдассб дбсбддбдда дддсббсбас ссббссдаса бсдссдббда дбдддадбсб 1200
аасддасадс сддадаасаа сбасаадасб асдссбссаа бдсбддасбс сдасддсбсс 1260
ббсббссбдб асбссдаасб дассдбддас аадбсссддб ддсадсаддд саасдбдббс 1320
бсабдсбссд баабдсасда адссббдсас аабсасбаса сбсаааадбс ссбабссбба 1380
бсбссбддса адбад 1395
<210> 73
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21К83 (13В, вариант 2)
<400> 73
саддббсадс бадббсадбс бддадсддаа дббаадааас сбддадсабс сдбдааааба 60
адббдсаадд сабссддбба сбсдббсасс дсабасбаба бссасбдддб бааасаддса 120
ссаддасадд дасббдаабд дабсддабаб абсбссаабб абаабададс басааасбаб 180
аассаааааб бсаааддасд сдбдасбббс асаасбдаса ссбсаассбс дасадсабас 240
абддааббас ддбсссбасд дбсбдасдас асбдссдббб асбаббдсдс бададаббаб 300
даббабдабд ббддаабдда сбаббддддс садддаасас бддбдасадб дбсббсб 357
<210> 74
<211> 1395
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 2)
<400> 74
абдаадсасс бабддббсбб бсбаббабба дбддссдсбс сссдббдддб дббабсдсад 60
дббсадсбад ббсадбсбдд адсддаадбб аадааассбд дадсабссдб даааабаадб 120
бдсааддсаб ссддббасбс дббсассдса басбабабсс асбдддббаа асаддсасса 180
- 179 029958
ддасадддас ЕЕдааЕддаЕ сддаЕаЕаЕс дсЕддаЕаЕа аадаЕдсЕас ааасЕаЕаас 240
саааааЕЕса ааддасдсдЕ дасЕЕЕсаса асЕдасассЕ саассЕсдас адсаЕасаЕд 300
дааЕЕасддЕ сссЕасддЕс ЕдасдасасЕ дссдЕЕЕасЕ аЕЕдсдсЕад адаЕЕаЕдаЕ 360
ЕаЕдаЕдЕЕд дааЕддасЕа ЕЕддддссад ддаасасЕдд ЕдасадЕдЕс ЕЕсЕдсаЕсс 420
асЕаадддас саЕссдЕдЕЕ сссЕЕЕддсс ссЕЕдсЕсЕс дЕЕсдассЕс ЕдааЕсдасЕ 480
дссдсЕсЕдд даЕдссЕсдЕ дааадаЕЕас ЕЕсссЕдадс сЕдЕдассдЕ ЕЕссЕддаас 540
Есдддсдссс ЕаассЕсЕдд сдЕдсасаса ЕЕсссЕдссд ЕдсЕасадЕс ЕЕсЕддссЕа 600
ЕасЕсЕЕЕаЕ сЕЕсддЕЕдЕ ЕассдЕассЕ ЕсЕЕсЕаасЕ Есддаассса аасЕЕасасс 660
ЕдЕаасдЕад ассасаадсс ЕЕсдаасасс ааддЕддаса адасЕдЕЕда дсдааадЕдс 720
ЕдсдЕЕдадЕ дсссЕссаЕд ЕссЕдсассЕ ссЕдЕддсЕд дсссЕЕсЕдЕ дЕЕссЕдЕЕс 780
ссЕссаааас сЕааддасас ЕсЕааЕдаЕс ЕсЕсддасЕс сЕдаддЕдас ЕЕдсдЕддЕЕ 840
дЕддасдЕдЕ сссасдадда сссЕдаддЕд садЕЕсааЕЕ ддЕасдЕдда сддадЕсдад 900
дЕдсасааЕд сааадассаа дссЕсдддад даасадЕЕса асЕссассЕЕ ссдддЕддЕЕ 960
ЕсЕдЕдЕЕда ссдЕЕдЕдса ссаадасЕдд сЕдаасддса аадааЕасаа дЕдсааддЕд 1020
Ессаасаадд дссЕдссЕдс сссЕаЕсдаа аадассаЕса дсаадассаа дддссадссЕ 1080
сдсдадссЕс аддЕдЕасас ссЕдссЕссс адссдддаад аааЕдассаа даассаддЕд 1140
ЕсссЕдассЕ дЕсЕддЕдда дддсЕЕсЕас ссЕЕссдаса ЕсдссдЕЕда дЕдддадЕсЕ 1200
аасддасадс сддадаасаа сЕасаадасЕ асдссЕссаа ЕдсЕддасЕс сдасддсЕсс 1260
ЕЕсЕЕссЕдЕ асЕссдаасЕ дассдЕддас аадЕсссддЕ ддсадсаддд саасдЕдЕЕс 1320
ЕсаЕдсЕссд ЕааЕдсасда адссЕЕдсас ааЕсасЕаса сЕсаааадЕс ссЕаЕссЕЕа 1380
ЕсЕссЕддса адЕад 1395
- 180 029958
<210> 75
<211> 1395
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21М18 (вариант 2)
<400> 75
аЕдаадсасс ЕаЕддЕЕсЕЕ ЕсЕаЕЕаЕЕа дЕддссдсЕс сссдЕЕдддЕ дЕЕаЕсдсад 60
дЕЕсадсЕад ЕЕсадЕсЕдд адсддаадЕЕ аадааассЕд дадсаЕссдЕ дааааЕаадЕ 120
ЕдсааддсаЕ ссддЕЕасЕс дЕЕсассдса ЕасЕаЕаЕсс асЕдддЕЕаа асаддсасса 180
ддасадддас ЕЕдааЕддаЕ сддаЕаЕаЕс ЕссЕсЕЕаЕа аЕддадсЕас ааасЕаЕаас 240
саааааЕЕса ааддасдсдЕ дасЕЕЕсаса асЕдасассЕ саассЕсдас адсаЕасаЕд 300
дааЕЕасддЕ сссЕасддЕс ЕдасдасасЕ дссдЕЕЕасЕ аЕЕдсдсЕад адаЕЕаЕдаЕ 360
ЕаЕдаЕдЕЕд дааЕддасЕа ЕЕддддссад ддаасасЕдд ЕдасадЕдЕс ЕЕсЕдсаЕсс 420
асЕаадддас саЕссдЕдЕЕ сссЕЕЕддсс ссЕЕдсЕсЕс дЕЕсдассЕс ЕдааЕсдасЕ 480
дссдсЕсЕдд даЕдссЕсдЕ дааадаЕЕас ЕЕсссЕдадс сЕдЕдассдЕ ЕЕссЕддаас 540
Есдддсдссс ЕаассЕсЕдд сдЕдсасаса ЕЕсссЕдссд ЕдсЕасадЕс ЕЕсЕддссЕа 600
ЕасЕсЕЕЕаЕ сЕЕсддЕЕдЕ ЕассдЕассЕ ЕсЕЕсЕаасЕ Есддаассса аасЕЕасасс 660
ЕдЕаасдЕад ассасаадсс ЕЕсдаасасс ааддЕддаса адасЕдЕЕда дсдааадЕдс 720
ЕдсдЕЕдадЕ дсссЕссаЕд ЕссЕдсассЕ ссЕдЕддсЕд дсссЕЕсЕдЕ дЕЕссЕдЕЕс 780
ссЕссаааас сЕааддасас ЕсЕааЕдаЕс ЕсЕсддасЕс сЕдаддЕдас ЕЕдсдЕддЕЕ 840
дЕддасдЕдЕ сссасдадда сссЕдаддЕд садЕЕсааЕЕ ддЕасдЕдда сддадЕсдад 900
дЕдсасааЕд сааадассаа дссЕсдддад даасадЕЕса асЕссассЕЕ ссдддЕддЕЕ 960
ЕсЕдЕдЕЕда ссдЕЕдЕдса ссаадасЕдд сЕдаасддса аадааЕасаа дЕдсааддЕд 1020
- 181 029958
бссаасаадд дссбдссбдс сссбабсдаа аадассабса дсаадассаа дддссадссб 1080
сдсдадссбс аддбдбасас ссбдссбссс адссдддаад ааабдассаа даассаддбд 1140
бсссбдассб дбсбддбдда дддсббсбас ссббссдаса бсдссдббда дбдддадбсб 1200
аасддасадс сддадаасаа сбасаадасб асдссбссаа бдсбддасбс сдасддсбсс 1260
ббсббссбдб асбссдаасб дассдбддас аадбсссддб ддсадсаддд саасдбдббс 1320
бсабдсбссд баабдсасда адссббдсас аабсасбаса сбсаааадбс ссбабссбба 1380
бсбссбддса адбад 1395
<210> 76
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная область тяжелой цепи 21М 18 (вариант 2)
<400> 76
садсбадббс адбсбддадс ддаадббаад ааассбддад сабссдбдаа аабаадббдс 60
ааддсабссд дббасбсдбб сассдсабас бабабссасб дддббаааса ддсассадда 120
садддасббд аабддабсдд абабабсбсс бсббабаабд дадсбасааа сбабаассаа 180
аааббсааад дасдсдбдас бббсасаасб дасассбсаа ссбсдасадс абасабддаа 240
ббасддбссс басддбсбда сдасасбдсс дбббасбабб дсдсбадада ббабдаббаб 300
дабдббддаа бддасбаббд дддссаддда асасбддбда садбдбсббс б 351
<210> 77
<211> 1392
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К75 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 1Т)
<400> 77
абдаадсасс бдбддббсбб бсбдсбдсбд дбддссдсбс ссадабдддб дсбдбсбсад 60
- 182 029958
дБдсадсБдд БдсадБсБдд сдссдаадБд аадааассБд дсдссБссдБ даадаБсБсс 120
БдсааддссБ ссддсБасБс сББсассдсс БасБасаБсс асБдддБсаа дсаддссссБ 180
ддасадддсс БддааБддаБ сддсБаБаБс дссддсБаса аддасдссас саасБасаас 240
садаааББса адддсададБ дассББсасс ассдасассБ ссассБсБас сдссБасаБд 300
даасБдсддБ сссБдсддад сдасдасасс дссдБдБасБ асБдсдссад адасБасдас 360
БасдасдБдд дсаБддасБа сБддддссад ддсасасБсд БдассдБдБс сБсБдсББсс 420
ассаадддсс ссБссдБдББ БссБсБддсс ссББдсБсса даБссассБс сдадБсБасс 480
дссдсБсБдд дсБдссБсдБ дааддасБас ББссссдадс ссдБдасадБ дБсББддаас 540
БсБддсдссс БдассБссдд сдБдсасасс БББссадсБд БдсБдсадБс сБссддссБд 600
БасБсссБдБ ссБссдБсдБ дасБдБдссс БссБссаасБ Бсддсассса дассБасасс 660
БдБаасдБдд ассасаадсс сБссаасасс ааддБддаса адассдБдда асддаадБдс 720
БдсдБддааБ дссссссББд БссБдссссБ ссБдБддсБд дсссБадсдБ дББссБдББс 780
сссссааадс ссааддасас ссБдаБдаБс Бсссддассс ссдаадБдас сБдсдБддБд 840
дБддаБдБдБ сссасдадда ссссдаддБд садББсааББ ддБасдБдда сддсдБддаа 900
дБдсасаасд ссаадассаа дсссададад даасадББса асБссассББ ссдддБддБд 960
БссдБдсБда ссдБддБдса БсаддасБдд сБдаасддса аададБасаа дБдсааддБд 1020
Бссаасаадд дссБдссБдс ссссаБсдаа аадассаБсБ сБаадассаа дддасадссс 1080
сдсдадсссс аддБдБасас асБдссБсса Бсссдддаад адаБдассаа даассаддБд 1140
БсссБдассБ дБсБддБдда аддсББсБас сссБссдаБа БсдссдБдда аБдддадБсс 1200
аасддссадс ссдадаасаа сБасаадасс асссссссса БдсБддасБс сдасддсБса 1260
ББсББссБдБ асадсдадсБ дасадБддас аадБсссддБ ддсадсаддд саасдБдББс 1320
- 183 029958
БссБдсБссд БдаБдсасда ддсссБдсас аассасБаса сссадаадБс ссБдБсссБд 1380
адссссддса ад 1392
<210> 78
<211> 1392
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь 21К83 с сигнальной последовательностью (13В, вариант 1Т)
<400> 78
аБдаадсасс БдБддББсББ БсБдсБдсБд дБддссдсБс ссадаБдддБ дсБдБсБсад 60
дБдсадсБдд БдсадБсБдд сдссдаадБд аадааассБд дсдссБссдБ даадаБсБсс 120
БдсааддссБ ссддсБасБс сББсассдсс БасБасаБсс асБдддБсаа дсаддссссБ 180
ддасадддсс БддааБддаБ сддсБасаБс БссаасБаса ассдддссас сааББасаас 240
садаааББса адддссдсдБ дассББсасс ассдасассБ сБассБсБас сдссБасаБд 300
даасБдсддБ сссБдсддад сдасдасасс дссдБдБасБ асБдсдссад адасБасдас 360
БасдасдБдд дсаБддасБа сБддддссад ддсасасБсд БдассдБдБс БадсдсББсс 420
ассаадддсс ссБссдБдББ БссБсБддсс ссББдсБсса даБссассБс сдадБсБасс 480
дссдсБсБдд дсБдссБсдБ дааддасБас ББссссдадс ссдБдасадБ дБссБддаас 540
БсБддсдсБс БдассБссдд сдБдсасасс БББссадсБд БдсБдсадБс сБссддссБд 600
БасБсссБдБ ссБссдБсдБ дасБдБдссс БссБссаасБ Бсддсассса дассБасасс 660
БдБаасдБдд ассасаадсс сБссаасасс ааддБддаса адассдБдда асддаадБдс 720
БдсдБддааБ дссссссББд БссБдссссБ ссБдБддсБд дсссБадсдБ дББссБдББс 780
сссссааадс ссааддасас ссБдаБдаБс Бсссддассс ссдаадБдас сБдсдБддБд 840
дБддаБдБдБ сссасдадда ссссдаддБд садББсааББ ддБасдБдда сддсдБддаа 900
- 184 029958
дСдсасаасд ссаадассаа дсссададад даасадССса асСссассСС ссдддСддСд 960
СссдСдсСда ссдСддСдса СсаддасСдд сСдаасддса аададСасаа дСдсааддСд 1020
Сссаасаадд дссСдссСдс ссссаСсдаа аадассаСсС сСаадассаа дддасадссс 1080
сдсдадсссс аддСдСасас асСдссСсса Ссссдддаад адаСдассаа даассаддСд 1140
СсссСдассС дСсСддСдда аддсССсСас сссСссдаСа СсдссдСдда аСдддадСсс 1200
аасддссадс ссдадаасаа сСасаадасс асссссссса СдсСддасСс сдасддсСса 1260
ССсССссСдС асадсдадсС дасадСддас аадСсссддС ддсадсаддд саасдСдССс 1320
СссСдсСссд СдаСдсасда ддсссСдсас аассасСаса сссадаадСс ссСдСсссСд 1380
адссссддса ад 1392
<210> 79
<211> 5
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Альтернативный СВЕ1 тяжелой цепи 21К75, 21К79, 21К83 и 21М 18
<400> 79
А1а Туг Туг 11е Н1з
1 5
<210> 80
<211> 17
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Консенсусная последовательность СВЕ2 тяжелой цепи антитела к РЬЬ4
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<222> (3)..(3)
<223> Хаа представляет собой серин или аланин
<220>
- 185 029958
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<222> (4)..(4)
<223> Хаа представляет собой серин, аспарагин или глицин
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<222> (6)..(6)
<223> Хаа представляет собой аспарагин или лизин
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<222> (7)..(7)
<223> Хаа представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту
<400> 80
Туг 11е Хаа Хаа Туг Хаа Хаа А1а ТЪг Азп Туг Азп О1п Ьуз РЪе Ьуз 1 5 10 15
О1у
- 186 029958

Claims (34)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Биспецифическое антитело, содержащее:
a) первый сайт связывания антигена, специфично связывающий фактор роста эндотелия сосудов (УЕСР) человека, и
b) второй сайт связывания антигена, специфично связывающий дельта-подобный лиганд 4 (ΌΕΕ4) человека,
при этом первый сайт связывания антигена содержит СБК1 тяжелой цепи, содержащий ΝΥΑΜΗ (ЗЕО ГО N0:17), СБК2 тяжелой цепи, содержащий ΌΙΝΡ8Ν^Τ8ΥΚΕΚΡΚΚ (ЗЕО ГО N0:18), и СБК3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΟΌΚΥΎΡΕΜΏΥ (ЗЕО ГО N0:19);
при этом второй сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:13), или ΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:79), СБК2 тяжелой цепи, содержащий ΥΙΧιΧ2ΥΧ3Χ4ΑΤΝΥΝΟΚΕΚΌ (ЗЕО ГО N0:80), где Х1 представляет собой серин или аланин, Х2 представляет собой серин, аспарагин или глицин, Х3 представляет собой аспарагин или лизин и Х4 представляет собой глицин, аргинин или аспарагиновую кислоту, и СГОР3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥБУБУСМВУ (ЗЕО ГО N0:16); и
при этом как первый, так и второй сайты связывания антигена содержат СГОР1 легкой цепи, содержащий ΡΑЗΕЗУ^NΥСIЗРΜI< (ЗЕО ГО N0:20), СГОР2 легкой цепи, содержащий ΑΑЗN^СЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СБК3 легкой цепи, содержащий ООЗЕКУРУТРСС (ЗЕО ГО N0:22).
2. Биспецифическое антитело по п.1, отличающееся тем, что второй сайт связывания антигена содержит СГОР1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:13), СГОР2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚРΚС (ЗЕО ГО N0:14), ΥIЗЗΥNСΑΤNΥN^ΚРΚС (ЗЕО ГО N0:15), ΥΙΑΟΥΚΌΑΤ^ХОЕГкС.. (ЗЕО ГО N0:59), или ΥIЗNΥNСΑΤNΥN^ΚРΚС (ЗЕО ГО N0:65), и СБК3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥΏΥΏνΟΜΏΥ (ЗЕО ГО N0:16).
3. Биспецифическое антитело по п.1 или 2, содержащее:
(a) первую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11;
(b) вторую вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:58 или ЗЕО ГО N0:64; и
(c) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, обладающие по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12.
4. Биспецифическое антитело по п.1 или 2, содержащее:
(a) первую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность ЗЕО ГО N0:11;
(b) вторую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность ЗЕО ГО N0:9, ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:58 или ЗЕО ГО N0:64; и
(c) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, содержащие последовательность ЗЕО ГО N0:12.
5. Биспецифическое антитело по п.4, содержащее:
(a) первую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность ЗЕО ГО N0:11;
(b) вторую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность ЗЕО ГО N0:64; и
(c) первую и вторую вариабельные области легкой цепи, содержащие последовательность ЗЕО ГО N0:12.
6. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-5, представляющее собой моноклональное антитело, рекомбинантное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, антитело человека, !цС1 антитело или ΙβΟ2 антитело.
7. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-5, содержащее первую константную область ΙβΟ2 человека с заменами аминокислот в положениях 249 и 288 последовательности ЗЕО ГО N0:42, при этом указанные аминокислоты заменены на глутамат или аспартат, и вторую константную область ΙβΟ2 человека с заменами аминокислот в положениях 236 и 278 последовательности ЗЕО ГО N0:42, при этом указанные аминокислоты заменены на лизин.
8. Биспецифическое антитело по любому из пп.1-7, которое:
(ί) ингибирует связывание УЕСР с по меньшей мере одним рецептором УЕСР,
(ίί) ингибирует связывание 0БТ4 с по меньшей мере одним рецептором №1с1г
(ίίί) ингибирует передачу сигналов №1с1 и/или
(ίν) модулирует ангиогенез.
9. Биспецифическое антитело, специфично связывающее УЕСР человека и 0БТ4 человека, содержащее:
(ί) тяжелую цепь с последовательностью ЗЕО ГО N0:7;
(ίί) тяжелую цепь с последовательностью ЗЕО ГО N0:5, ЗЕО ГО N0:6, ЗЕО ГО N0:56 или ЗЕО ГО N0:62 и
- 187 029958
(ίίί) две легкие цепи с последовательностью ЗЕО ГО N0:8.
10. Биспецифическое антитело, специфично связывающее УЕОР человека и ББЕ4 человека, содержащее:
(ί) тяжелую цепь с последовательностью ЗЕО ГО N0:7;
(ίί) тяжелую цепь с последовательностью ЗЕО ГО N0:62 и
(ίίί) две легкие цепи с последовательностью ЗЕО ГО N0:8.
11. Биспецифическое антитело, специфично связывающее УЕОР человека и БЕЬ4 человека, при этом указанное антититело содержит:
(a) тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:75, тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:33, и легкую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:34;
(b) тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:31, тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:33, и легкую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:34;
(c) тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:72, тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:33, и легкую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:34; или
(ά) тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:74, тяжелую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:33, и легкую цепь, которую кодирует ДНК, содержащая ЗЕО ГО N0:34.
12. Выделенное антитело, специфично связывающее УЕОР человека, которое содержит:
(a) СБК.1 тяжелой цепи, содержащий НУХУМН (ЗЕО ГО N0:17), СБК.2 тяжелой цепи, содержащий БЮТЗ^КТЗУКЕКРКК. (ЗЕО ГО N0:18), и СБК3 тяжелой цепи, содержащий ΗΥΌΌΚΥΥΡΕΜΌΥ (ЗЕО ГО N0:19); и
(b) СБК.1 легкой цепи, содержащий КЛЗЕЗУБНУОкЕМК (ЗЕО ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий ЛЛЗНООЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СБК.3 легкой цепи, содержащий ООЗКЕУРХУТРСС (ЗЕО ГО N0:22).
13. Выделенное антитело по п.12, которое содержит:
(a) вариабельную область тяжелой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:11; и
(b) вариабельную область легкой цепи, обладающую по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с ЗЕО ГО N0:12.
14. Выделенное антитело по п.12, которое содержит:
(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую ЗЕО ГО N0:11; и
(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую ЗЕО ГО N0:12.
15. Антитело по п.12, содержащее:
(a) тяжелую цепь, содержащую ЗЕО ГО N0:49 или ЗЕО ГО N0:7; и
(b) легкую цепь, содержщую ЗЕО ГО N0:8.
16. Антитело по любому из пп.12-15, ингибирующее связывание УЕОР с по меньшей мере одним рецептором УЕОР.
17. Выделенное антитело, специфично связывающее ОЬЬ4 человека, содержащее:
(a) С1Ж1 тяжелой цепи, содержащий ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:13) или ΑΥΥΙΗ (ЗЕО ГО N0:79), С1Ж2 тяжелой цепи, содержащий ΥIΑNΥNΚΑΤNΥN^ΚРΚО (ЗЕО ГО N0:14), ΥIΑОΥΚ^ΑΤNΥN^ΚРΚО (ЗЕО ГО N0:59) или ΥIЗNΥNΚΑΤNΥN^ΚЕΚО (ЗЕО ГО N0:65), и СБК.3 тяжелой цепи, содержащий ΚΌΥ1)¥1)УС,\ГО¥ (ЗЕО ГО N0:16); и
(b) СБК.1 легкой цепи, содержащий Κ.ЛЗЕЗУ^NΥСIЗЕΜI< (ЗЕО ГО N0:20), СГОК2 легкой цепи, содержащий ЛЛЗНОСЗ (ЗЕО ГО N0:21), и СБК.3 легкой цепи, содержащий ООЗКЕУРУТРСС (ЗЕО ГО N0:22).
18. Антитело по п.17, содержащее:
(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую ЗЕО ГО N0:10, ЗЕО ГО N0:58 или ЗЕО ГО N0:64; и
(b) вариабельную область легкой цепи, содержащую ЗЕО ГО N0:12.
19. Антитело по любому из пп.12-18, представляющее собой моноклональное антитело, рекобинантное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, антитело человека, биспецифическое антитело, антитело 1дО1, антитело 1дО2 или фрагмент антитела, содержащий сайт связывания антигена.
20. Фармацевтическая композиция для ингибирования роста опухоли и/или лечения рака, содержащая антитело по любому из пп.1-19 и фармацевтически приемлемый носитель.
21. Клетка, продуцирующая антитело по любому из пп.1-19.
22. Выделенная молекула полинуклеотида, включающая полинуклеотид, кодирующий антитело по любому из пп.1-19.
23. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.22 для осуществления экспрессии полинуклеотида по
п.22.
- 188 029958
24. Клетка, содержащая полинуклеотид по п.22 для получения антитела по любому из пп.1-19.
25. Применение антитела по любому из пп.1-19 для получения лекарственного средства для лечения
рака.
26. Применение по п.25, отличающееся тем, что рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, рака толстого кишечника, рака яичников, рака поджелудочной железы, рака легких, рака печени, рака молочной железы, рака почки, рака предстательной железы, рака желудочно-кишечного тракта, меланомы, рака шейки матки, рака мочевого пузыря, глиобластомы, рака головы и шеи, лимфомы и лейкемии.
27. Применение по любому из пп.1-19 для получения лекарственного средства для ингибирования роста опухоли.
28. Применение по п.27, отличающееся тем, что опухоль выбрана из группы, состоящей из колоректальной опухоли, опухоли толстого кишечника, опухоли яичника, опухоли поджелудочной железы, опухоли легкого, опухоли печени, опухоли молочной железы, опухоли почки, опухоли предстательной железы, опухоли желудочно-кишечного тракта, меланомы, опухоли шейки матки, опухоли мочевого пузыря, глиобластомы и опухоли головы и шеи.
29. Способ получения антитела по любому из пп.1-19, включающий экспрессию в клетке по меньшей мере одного полинуклеотида по п.22.
30. Способ лечения рака у субъекта, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-19.
31. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанный рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, рака толстого кишечника, рака яичников, рака поджелудочной железы, рака легких, рака печени, рака молочной железы, рака почки, рака предстательной железы, рака желудочнокишечного тракта, меланомы, рака шейки матки, рака мочевого пузыря, глиобластомы, рака головы и шеи, лимфомы и лейкемии.
32. Способ ингибирования роста опухоли, при этом указанный способ включает приведение в контакт указанной опухоли с эффективным количеством антитела по любому из пп.1-19.
33. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанная опухоль выбрана из группы, состоящей из колоректальной опухоли, опухоли толстого кишечника, опухоли яичника, опухоли поджелудочной железы, опухоли легкого, опухоли печени, опухоли молочной железы, опухоли почки, опухоли предстательной железы, опухоли желудочно-кишечного тракта, меланомы, опухоли шейки матки, опухоли мочевого пузыря, глиобластомы и опухоли головы и шеи.
34. Способ по любому из пп.30-33, дополнительно включающий введение указанному субъекту по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента или приведение в контакт указанной опухоли по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим агентом.
Биспецифическое антитело Область, связывающая УЕОР Область, связывающая ОЬЬ4 Тяжелая цепь Тяжелая цепь 219К45-МВ-21М18 СЕЖ1 ΝΥΑΥΜΗ (δΕΟ Ж N0:17) С0К2 ΓΐΙΝΡδΝΟΚΤδΥΚΕΚΡΚΚ (8Ε0ΓΟΚΟ:!δ) СПКЗ НУЕЮКУИЖМОУ (δΕΟ Ж N0:19) С0Д1 ΤΑΥΥΙΗ (8Е0 Ж N0:13) СПК.2 ΥΙδδΥΝΟΑΤΝΥΝΟΚΕΚΟ (δΕΟ Ж N0:15) СОК.З ΚΟΥΠΥΟΥΟΜΟΥ^ (8Ε0ΙΟΝΟ:16) 219К45-МВ-21К79 ΜΥ\ΥΜΗ (δΕΟ Ж МО: 17) ΓΙΝΡδΝΟΚ Τδ Υ К ΕΚΕΚΚ (δΕΟ ΕΙ) N0:18) ΙΪΥΟΟΚΥΥΤΙ.ΜΓίΥ (δΕΟ Ж N0:19) ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ Ж N0:13) ΥίΛΝΥΝΚΛΤΝΥΝΟΚΕΚΟ (δΕΟ ΙΟ N0:14) κυγηγονοΜΠΥ (δΕΟ Π) N0:16) 219К45-МВ-2:К75 ΝΥΨΜΗ (8ΕΟΙΟΝΟ:ί7) ΗΙΝΤ^ΝΟΕΤδΥΚΕΚΕΚΚ (δΕ0ΙΟΝΟ:18) ΚΥΠΟΚΥΥΙΤΜΟΥ (3ΕΟΙΕΝΟ:15·) ΤΑΥΥΙΗ (ЗЕрЕН N0:13) ΥΙΑΟΥΚΠΑΤΝΥΝΟΕΤΚΟ (δΕΟ Ж N0:59) ΚΟΥϋΥΟνΟΜΌΥ (δΕΟ ΙΟ N0:16) 219Е45-МВ-2НЖ ΝΥΑΥΜΗ ίδΕΟ ΙΟ N0:17) ΌΙΝΡδΝΟ ΚΤδΥΚΕΚΕΚΚ ί8ΕΟΙ[)ΝΟ:Ι8) ΗΥΟΟΚΥΎΡΕΜΗΥ (δΕΟ Ж N0:19) ΤΑΥΥΙΗ (δΕΟ ГО N0:13) Υ ί 8ΝΥΝΚΑΤΝΎΝ рКЕКО (8Ε0 ΙΟ N0:65) ΚΟΥΟΥΟΥΟΜΟΥ’' (δΕΟ ΙΟ N0:16)
Биспецифическое антитело Область, связывающая УЕОР, иобласть, связывающая ОЕБ4 Легкая цепь СОШ С0Е2 СОКЗ 219Κ45-ΜΒ-21Μ18 ΚΑ5Ε8ΥΠΝΥΟΪ8ΡΜΚ (δΕΟΙΟΝΟ:20) ΑΑδΝΟθδ (δΕΟ ΙΟ N0:21) 005КЕУР¥/ТРСО (δΕΟ ΙΟ N0:22) 219Κ45-ΜΒ-21Ε79 ΡΛδΕδΥΦΝΥΟίδΡΜΚ (8ΕρΐΟΝΟ:20) ΑΑ8Ν0Ο8 (8Ε0 ΙΟ N0:2 ΐ) ΟΟδΚΕνΡννΤΡΟΟ (8Ε0 ΙΟ N0:22) 219Κ45-ΜΒ-2ΙΚ75 ΚΑδΕδνΟΝΥΌΪδΡΜΚ (δΕ-0 10 N0:20) ΑΑδΝΟθδ (δΕΟ 10 N0:21) ΟΟδΚΕνΕΥνΤΡΟίί (8Ε010 N0:22) 219К45-ШЗ-21К83 ΚΑδΕδΥΟΝΥΟΪδΡΜΚ ί8Εζ>ΪΟΝΟ:20) ΑΑ8ΝΟΟ8 (8Ε0 ΙΟ N0:21) ΟΟδΚΕνρψτΡΏΟ (8Ε0 ϊϋΝΟ:22)
EA201490622A 2011-09-23 2012-09-24 Антитела, связывающие фактор роста эндотелия сосудов (vegf)/дельта-подобный лиганд (dll4), и их применение EA029958B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161538454P 2011-09-23 2011-09-23
US201261597409P 2012-02-10 2012-02-10
US201261692978P 2012-08-24 2012-08-24
PCT/US2012/056886 WO2013044215A1 (en) 2011-09-23 2012-09-24 Vegf/dll4 binding agents and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490622A1 EA201490622A1 (ru) 2014-08-29
EA029958B1 true EA029958B1 (ru) 2018-06-29

Family

ID=47914946

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201490622A EA029958B1 (ru) 2011-09-23 2012-09-24 Антитела, связывающие фактор роста эндотелия сосудов (vegf)/дельта-подобный лиганд (dll4), и их применение

Country Status (33)

Country Link
US (8) US8858941B2 (ru)
EP (2) EP2758073B1 (ru)
JP (1) JP6170496B2 (ru)
KR (1) KR102091293B1 (ru)
CN (2) CN107722122B (ru)
AU (1) AU2013201095C1 (ru)
BR (1) BR112014007035B1 (ru)
CA (1) CA2849562C (ru)
CL (1) CL2014000725A1 (ru)
CO (1) CO6940382A2 (ru)
CR (1) CR20140172A (ru)
CY (1) CY1121148T1 (ru)
DK (2) DK2758073T3 (ru)
EA (1) EA029958B1 (ru)
ES (2) ES2938628T3 (ru)
FI (1) FI3485903T3 (ru)
HK (1) HK1199209A1 (ru)
HR (2) HRP20230078T1 (ru)
HU (2) HUE061002T2 (ru)
IL (1) IL231628B (ru)
IN (1) IN2014KN00871A (ru)
LT (2) LT2758073T (ru)
MX (2) MX361712B (ru)
MY (1) MY188192A (ru)
NI (1) NI201400024A (ru)
PE (1) PE20141537A1 (ru)
PL (2) PL3485903T3 (ru)
PT (2) PT3485903T (ru)
RS (2) RS63965B1 (ru)
SG (1) SG11201400870WA (ru)
SI (2) SI3485903T1 (ru)
TW (1) TWI583699B (ru)
WO (1) WO2013044215A1 (ru)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2009003229A (es) 2006-09-29 2009-06-18 Oncomed Pharm Inc Composiciones y metodos para diagnosticar y tratar cancer.
CN102459346B (zh) 2009-04-27 2016-10-26 昂考梅德药品有限公司 制造异源多聚体分子的方法
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
ES2895226T3 (es) 2009-10-16 2022-02-18 Mereo Biopharma 5 Inc Combinación terapéutica y uso de anticuerpos antagonistas de DLL4 y agentes antihipertensivos
MY160628A (en) 2010-03-02 2017-03-15 Abbvie Inc Therapeutic DLL4 Binding Proteins
MY160445A (en) 2010-08-03 2017-03-15 Abbvie Inc Dual Variable Domain Immunoglobulins And Uses Thereof
US8551479B2 (en) 2010-09-10 2013-10-08 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating melanoma
US9527925B2 (en) 2011-04-01 2016-12-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bispecific binding molecules binding to VEGF and ANG2
BR112014007035B1 (pt) 2011-09-23 2021-05-04 Oncomed Pharmaceuticals, Inc anticorpos biespecíficos que se ligam a vegf/dll4, composição farmacêutica e célula procariótica, fúngica ou de levedura que compreende os mesmos, moléculas de polinucleotídeo, vetor, usos terapêuticos e método para a produção de um anticorpo
US9550830B2 (en) 2012-02-15 2017-01-24 Novo Nordisk A/S Antibodies that bind and block triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1)
CN104662044B (zh) 2012-08-24 2018-10-30 加利福尼亚大学董事会 用于治疗ror1癌症并抑制转移的抗体和疫苗
US20150368329A1 (en) * 2012-10-15 2015-12-24 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods of Treating Ocular Diseases
EP2914961A4 (en) 2012-10-31 2016-04-20 Oncomed Pharm Inc METHODS AND MONITORING A TREATMENT BY AN ANTAGONIST OF DLL4
KR20210111353A (ko) 2012-11-01 2021-09-10 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP3020731B1 (en) * 2013-07-09 2019-06-12 ABLBio Novel dual-targeted protein specifically binding to dll4 and vegf, and use thereof
WO2015130751A1 (en) * 2014-02-26 2015-09-03 Medimmune, Llc Methods of treatment with dll4 antagonists
EP3125937A4 (en) * 2014-04-04 2017-11-01 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Treatment of gastric cancer
TWI593967B (zh) * 2014-05-01 2017-08-01 高雄醫學大學 二級抗體所辨識之抗原決定位及其用途
JP2017526641A (ja) 2014-07-11 2017-09-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｎｏｔｃｈ経路阻害
PE20170192A1 (es) 2014-07-17 2017-03-16 Novo Nordisk As Mutagenesis dirigida al sitio de anticuerpos receptor desencadenante expresado en las meloid tipo 1 (trem-1) para reducir la viscosidad
KR102390359B1 (ko) * 2014-09-29 2022-04-22 삼성전자주식회사 폴리펩타이드, 이를 포함하는 항 VEGF 항체 및 항 c-Met/항 VEGF 이중 특이 항체
DK3212233T3 (da) * 2014-10-31 2020-07-27 Oncomed Pharm Inc Kombinationsterapi til behandling af sygdom
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
AU2016326609B2 (en) * 2015-09-23 2023-03-09 Mereo Biopharma 5, Inc. Methods and compositions for treatment of cancer
JP7253923B2 (ja) * 2016-04-05 2023-04-07 ファイザー・インク 細胞培養プロセス
CN105669871A (zh) * 2016-04-19 2016-06-15 中国药科大学 一种胸腺肽α1的融合蛋白
MX2018016330A (es) 2016-06-27 2020-02-17 Univ California Combinaciones para tratamiento del cáncer.
AU2018258027A1 (en) * 2017-04-24 2019-10-24 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-CD33 antibody agents
EP3668546A4 (en) * 2017-08-18 2021-05-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IMAGE CAPILLARY ISOELECTRIC FOCUSING FOR ANALYSIS OF PROTEIN VARIANTS IN A SAMPLING MATRIX
MA52190A (fr) 2018-04-02 2021-02-17 Bristol Myers Squibb Co Anticorps anti-trem-1 et utilisations associées
AU2019380595A1 (en) 2018-11-15 2021-06-03 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods and monitoring of treatment with VEGF/DLL4 binding agent
WO2021092071A1 (en) 2019-11-07 2021-05-14 Oncxerna Therapeutics, Inc. Classification of tumor microenvironments
CN111234003B (zh) * 2020-02-07 2022-02-01 中国人民解放军第四军医大学 一种用于癌症靶向治疗的短肽及基于其的超声响应纳米载药微泡和应用
AU2022245322A1 (en) 2021-03-25 2023-10-05 Oncxerna Therapeutics, Inc. Targeted therapies in cancer
CN114369158B (zh) * 2021-09-28 2024-04-19 北京亦科信息菌素研究院有限公司 一种抗新冠病毒的信息菌素及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040123343A1 (en) * 2000-04-19 2004-06-24 La Rosa Thomas J. Rice nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement
US20040265307A1 (en) * 2002-06-14 2004-12-30 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
US20100076178A1 (en) * 2008-04-29 2010-03-25 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immumoglobulins and Uses Thereof
US20100150940A1 (en) * 2008-12-12 2010-06-17 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-igf antibodies
US20110165162A1 (en) * 2009-12-01 2011-07-07 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods for Treating Cancers Comprising K-ras Mutations
US20110172398A1 (en) * 2009-10-02 2011-07-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bispecific binding molecules for anti-angiogenesis therapy

Family Cites Families (199)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US994637A (en) 1910-09-14 1911-06-06 Dexter Folder Co Paper-cutting machine.
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
CA1176659A (en) 1981-09-14 1984-10-23 Gerhard Degischer Process for producing n-substituted-n-acetyl-2,6- dialkylanilines
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5681718A (en) 1986-03-14 1997-10-28 Celltech Limited Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5219837A (en) 1990-06-21 1993-06-15 Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of stimulating myelination of cells
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
CA2405246A1 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with alterred binding properties
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
IL101728A (en) 1991-05-03 2007-08-19 Univ Yale Human Abandonment and Delta, Restrictive Areas of Effect in Tophoric Proteins, and Methods Based on Them
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
US5786158A (en) 1992-04-30 1998-07-28 Yale University Therapeutic and diagnostic methods and compositions based on notch proteins and nucleic acids
US20050112121A1 (en) 1992-04-30 2005-05-26 Yale University Therapeutic and diagnostic methods and compositions based on notch proteins and nucleic acids
US5840299A (en) 1994-01-25 1998-11-24 Athena Neurosciences, Inc. Humanized antibodies against leukocyte adhesion molecule VLA-4
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
DK0861261T3 (da) 1995-06-28 2009-12-14 Imp Cancer Res Tech Nukleotid- og proteinsekvenser af hvirveldyrs-Delta-gener og fremgangsmåder baseret derpå
US6706484B1 (en) 1995-08-18 2004-03-16 Morphosys Ag Protein/(poly)peptide libraries
JP4436457B2 (ja) 1995-08-18 2010-03-24 モルフォシス アイピー ゲーエムベーハー 蛋白質／（ポリ）ペプチドライブラリー
US5730977A (en) 1995-08-21 1998-03-24 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Anti-VEGF human monoclonal antibody
JPH09124697A (ja) 1995-11-01 1997-05-13 Toagosei Co Ltd ペプチド及びモノクローナル抗体
ATE319827T1 (de) 1995-11-17 2006-03-15 Asahi Chemical Ind Polypeptid, das die differenzierung unterdrueckt
US20020137890A1 (en) 1997-03-31 2002-09-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6121045A (en) 1997-04-04 2000-09-19 Millennium Biotherapeutics, Inc. Human Delta3 nucleic acid molecules
DE69836131T3 (de) 1997-04-04 2017-06-14 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Neue menschliche delta3-zusammensetzung und deren therapeutische und diagnostische verwendungen
US20030180784A1 (en) 1997-04-04 2003-09-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel human Delta3 compositions and therapeutic and diagnostic uses therefor
US20060122373A1 (en) 1997-04-04 2006-06-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Delta3, FTHMA-070, Tango85, Tango77, SPOIL,NEOKINE, Tango129 and integrin alpha subunit protein and nucleic acid molecules and uses thereof
US20070059302A1 (en) 1997-04-07 2007-03-15 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
ES2273415T3 (es) 1997-04-07 2007-05-01 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-vegf.
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
DE69830901T2 (de) 1997-05-02 2006-05-24 Genentech Inc., San Francisco ein verfahren zur herstellung multispezifischer antikörper die heteromultimere und gemeinsame komponenten besitzen
US7951917B1 (en) 1997-05-02 2011-05-31 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
DK1004669T3 (da) 1997-05-14 2007-08-27 Asahi Chemical Ind Hidtil ukendte differentieringsinhibitor
AU8162898A (en) 1997-06-18 1999-01-04 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Angiogenic modulation by notch signal transduction
US6004528A (en) 1997-09-18 1999-12-21 Bergstein; Ivan Methods of cancer diagnosis and therapy targeted against the cancer stemline
JP2002520007A (ja) 1998-07-13 2002-07-09 イエール ユニバーシティー Ｄｅｌｔａ切断産物およびそれに基づく方法
AU4870599A (en) 1998-07-27 2000-02-21 Amgen, Inc. Delta-related polypeptides
BR0010017A (pt) 1999-04-28 2002-06-11 Univ Texas Composições e processos para o tratamento de câncer por inibição seletiva de vegf
CA2339889C (en) 1999-07-02 2012-01-31 Morphosys Ag Identification of specific binding partners binding to (poly)peptides encoded by genomic dna fragments or ests
US6703221B1 (en) 1999-08-19 2004-03-09 Chiron Corporation Notch receptor ligands and uses thereof
EP1690872A3 (en) 1999-12-01 2006-08-23 Genentech, Inc. Composition and methods for the diagnosis of tumours
US20020028488A1 (en) 2000-06-19 2002-03-07 Sujay Singh Transgenic avian species for making human and chimeric antibodies
US6984522B2 (en) 2000-08-03 2006-01-10 Regents Of The University Of Michigan Isolation and use of solid tumor stem cells
WO2003050502A2 (en) 2001-12-07 2003-06-19 Regents Of The University Of Michigan Prospective identification and characterization of breast cancer stem cells
US8044259B2 (en) 2000-08-03 2011-10-25 The Regents Of The University Of Michigan Determining the capability of a test compound to affect solid tumor stem cells
US6689744B2 (en) 2000-09-22 2004-02-10 Genentech, Inc. Notch receptor agonists and uses
DK1355919T3 (da) 2000-12-12 2011-03-14 Medimmune Llc Molekyler med længere halveringstider, sammensætninger og anvendelser deraf
US7667004B2 (en) 2001-04-17 2010-02-23 Abmaxis, Inc. Humanized antibodies against vascular endothelial growth factor
JP2004536877A (ja) 2001-07-25 2004-12-09 ロランティス リミテッド 免疫療法に用いるノッチシグナル伝達モジュレーター
ATE462006T1 (de) 2001-08-01 2010-04-15 Univ Bristol Isoform des vegfs
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
AU2002339157A1 (en) 2001-11-14 2003-05-26 Lorantis Limited Inhibitors of the notch signalling pathway for use in the treatment of cancer
US20050137130A1 (en) 2001-11-14 2005-06-23 Bodmer Mark W. Medical treatment
CA2465304A1 (en) 2001-11-14 2003-05-22 Lorantis Limited Composition comprising inhibitors of the notch signalling pathway for the modulation of the immune system
PT2314629E (pt) 2002-07-18 2014-01-22 Merus B V Produção recombinante de misturas de anticorpos
GB0216648D0 (en) 2002-07-18 2002-08-28 Lonza Biologics Plc Method of expressing recombinant protein in CHO cells
GB0218879D0 (en) 2002-08-14 2002-09-25 Lorantis Ltd Medical treatment
JP2006515177A (ja) 2002-09-10 2006-05-25 ロランティス リミテッド Ｎｏｔｃｈリガンドタンパク質を含む医薬組成物及び医学的処置
EP1539228B1 (en) 2002-09-11 2010-12-29 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
US7365168B2 (en) 2002-10-15 2008-04-29 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
CN1511850A (zh) 2002-12-31 2004-07-14 王小宁 Mhc-肽抗体多聚体的制备方法
CA2519875C (en) 2003-06-06 2014-01-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of tumor regression with vegf inhibitors
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2004263538B2 (en) 2003-08-08 2009-09-17 Immunomedics, Inc. Bispecific antibodies for inducing apoptosis of tumor and diseased cells
FR2859725B1 (fr) 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
EP1697415A1 (en) 2003-11-12 2006-09-06 Biogen Idec MA Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
AU2004295654A1 (en) 2003-12-05 2005-06-16 Bioinvent International Ab Angiogenesis affecting polypeptides, proteins, and compositions, and methods of use thereof
WO2005074633A2 (en) 2004-02-03 2005-08-18 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for characterizing, regulating, diagnosing, and treating cancer
US20080187954A1 (en) 2004-03-10 2008-08-07 Lonza Ltd. Method For Producing Antibodies
EP1753442A2 (en) 2004-06-10 2007-02-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of administering and using vegf inhibitors for the treatment of human cancer
WO2005124364A1 (en) 2004-06-15 2005-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag The use of cardiac hormones for diagnosing the risk of suffering from a cardiovascular complication as a consequence of cardiotoxic medication
AU2005265071A1 (en) 2004-06-18 2006-01-26 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center VEGF inhibitors for the treatment of malignant pleural effusion
EP1615036B1 (en) 2004-07-07 2007-09-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Multimarker panel for diabetes type 1 and 2
AU2005279347A1 (en) 2004-08-30 2006-03-09 Lonza Biologics Plc. Affinity- plus ion exchange- chromatography for purifying antibodies
JP2008511337A (ja) 2004-09-02 2008-04-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヘテロ多量体分子
US20080254031A1 (en) 2004-09-09 2008-10-16 Exonhit Therapeutics Sa Tumor Specific Genes and Variant Rnas and Uses Thereof as Targets for Cancer Therapy and Diagnosis
ES2387312T3 (es) 2004-09-22 2012-09-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anticuerpos IgG4 humanos estabilizados
US8048418B2 (en) 2004-10-29 2011-11-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic methods for inhibiting tumor growth with combination of Dll4 antagonists and VEGF antagonists
US20060134121A1 (en) 2004-10-29 2006-06-22 Gavin Thurston DII4 antagonists, assays, and therapeutic methods thereof
BRPI0517564A (pt) 2004-11-10 2008-10-14 Hubrecht Lab métodos para modificar o destino de uma célula de adenoma e/ou adenocarcinoma, para induzir a formação de uma célula pós-mitótica a partir de um célula de adenoma e/ou adenocarcinoma e para, pelo menos em parte, diminuir um adenoma e/ou adenocarcinoma intestinal presente em um animal, uso de um inibidor do trajeto de notch, e, composição farmacêutica
EP1812064A4 (en) 2004-11-19 2009-07-08 Cornell Res Foundation Inc USE OF ENDOTHELIAL VASCULAR GROWTH FACTOR RECEPTOR CELLS IN THE TREATMENT AND MONITORING OF CANCER AND IN THE SCREENING OF CHEMOTHERAPEUTIC AGENTS
DK1849009T3 (da) 2005-01-24 2009-01-12 Hoffann La Roche Ag F Anvendelse af cardiachormoner til diagnose af cardiovaskulære risici som fölge af en administration af antiinflammatoriske lægemidler
US7432107B2 (en) 2005-01-24 2008-10-07 Roche Diagnostics Operations, Inc. Cardiac hormones for assessing cardiovascular risk
US7354581B2 (en) 2005-02-11 2008-04-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic combination of a VEGF antagonist and anti-hypertensive agent
EP3623473A1 (en) 2005-03-31 2020-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
EP1868650B1 (en) 2005-04-15 2018-10-03 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CN101213297B (zh) 2005-05-09 2013-02-13 小野药品工业株式会社 程序性死亡-1(pd-1)的人单克隆抗体及单独使用或与其它免疫治疗剂联合使用抗pd-1抗体来治疗癌症的方法
US20070054360A1 (en) 2005-05-12 2007-03-08 Zeren Gao Compositions and methods for modulating immune responses
CA2607699A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Galaxy Biotech, Llc Methods of treating brain tumors with antibodies
US7531172B2 (en) 2005-08-12 2009-05-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating diseases with a VEGF antagonist
US7774903B2 (en) 2005-08-16 2010-08-17 Lummus Corporation Roller gin apparatus, method and system
EP1928486A2 (en) 2005-09-01 2008-06-11 Vasgene Therapeutics, Inc. Methods for using and identifying modulators of delta-like 4
US7906116B2 (en) 2005-09-01 2011-03-15 Parkash Gill Methods for using and identifying modulators of Delta-like 4
TW200732350A (en) 2005-10-21 2007-09-01 Amgen Inc Methods for generating monovalent IgG
JP5129149B2 (ja) 2005-10-31 2013-01-23 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン 癌を処置および診断するための組成物および方法
AU2006326417B2 (en) 2005-12-16 2012-05-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic methods for inhibiting tumor growth with Dll4 antagonists
US20090221549A1 (en) 2006-02-17 2009-09-03 Gilead Colorado, Inc. Antihypertensive therapy
US8133857B2 (en) 2006-03-07 2012-03-13 The Brigham and Women's FHospital, Inc. NOTCH inhibition in the treatment of atherosclerosis
WO2011053822A2 (en) 2009-11-01 2011-05-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Notch inhibition in the treatment and prevention of obesity and metabolic syndrome
US7354582B2 (en) 2006-03-10 2008-04-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of VEGF antagonists for the treatment of malignant gliomas
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
WO2007143689A2 (en) 2006-06-06 2007-12-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for modulating vascular development
KR20090027227A (ko) 2006-06-06 2009-03-16 제넨테크, 인크. 항-ｄｌｌ4 항체 및 이의 사용 방법
WO2007145840A2 (en) 2006-06-13 2007-12-21 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating cancer
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
WO2008019144A2 (en) 2006-08-07 2008-02-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Threapeutic methods for treating vascular eye disorders with dll4 antagonists
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
CN101583624B (zh) * 2006-09-29 2012-11-21 昂考梅德药品有限公司 用于诊断和治疗癌症的组合物及其用途
MX2009003229A (es) 2006-09-29 2009-06-18 Oncomed Pharm Inc Composiciones y metodos para diagnosticar y tratar cancer.
US20110076279A1 (en) 2006-10-20 2011-03-31 Schering Corporation Fully human anti-vegf antibodies and methods of using
WO2008070350A2 (en) 2006-10-27 2008-06-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions related to wrapping of dehydrons
US20100166746A1 (en) 2006-12-04 2010-07-01 Medlmmune Way High potency recombinant antibodies, methods for producing them and use in cancer therapy
EP2099489B1 (en) 2006-12-11 2014-05-21 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating a neoplasm
NO347649B1 (no) 2006-12-14 2024-02-12 Regeneron Pharma Humant antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder human deltaliknende ligand 4 (hDII4), nukleinsyremolekyl som koder for slike og vektor og vert-vektorsystemer, samt fremgangsmåte for fremstilling, sammensetning og anvendelse.
US20080248033A1 (en) 2006-12-19 2008-10-09 Genentech, Inc. VEGF-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and the treatment of early stage tumors
WO2008079326A2 (en) 2006-12-20 2008-07-03 Vasgene Therapeutics, Inc. Methods for using and identifying modulators of delta-like 4
US7691980B2 (en) 2007-01-09 2010-04-06 Bio-Rad Laboratories, Inc. Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers
US20100119526A1 (en) 2007-01-26 2010-05-13 Bioinvent International Ab DLL4 Signaling Inhibitors and Uses Thereof
WO2008137318A1 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating disorders associated with salt or fluid retention
GB0709333D0 (en) 2007-05-15 2007-06-20 Smart Targeting Ltd Binding protein
US8216571B2 (en) 2007-10-22 2012-07-10 Schering Corporation Fully human anti-VEGF antibodies and methods of using
US8592563B2 (en) 2007-10-25 2013-11-26 Philogene, Inc. Antibodies specific to pro-angiogenic isoforms of vascular endothelial growth factor (VEGF)
AR069501A1 (es) 2007-11-30 2010-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti- vegf (factor de crecimiento endotelial vascular)
WO2009075565A1 (en) 2007-12-12 2009-06-18 Erasmus University Medical Center Rotterdam Methods for controlling vasculogenesis
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
DK2235064T3 (en) 2008-01-07 2016-01-11 Amgen Inc A process for the preparation of heterodimeric Fc molecules using electrostatic control effects
EP2287174B8 (en) 2008-01-18 2016-12-07 Bio-Rad Laboratories, Inc. Enhanced purification of antibody fragments by apatite chromatography
EP2947097A1 (en) 2008-04-07 2015-11-25 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against the Notch pathways and uses thereof
SG10201402815VA (en) 2008-04-09 2014-09-26 Genentech Inc Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20100260668A1 (en) 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
MX2011000233A (es) 2008-07-08 2011-05-19 Oncomed Pharm Inc Agentes de union del receptor notch1 y metodos para su uso.
EP2324358A1 (en) 2008-07-23 2011-05-25 F. Hoffmann-La Roche AG Monitoring anti-angiogenesis therapy
EP2321651B1 (en) 2008-07-23 2017-08-23 F. Hoffmann-La Roche AG Identification of subjects being susceptible to anti-angiogenesis therapy
WO2010032060A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Medimmune Llc Antibodies directed to dll4 and uses thereof
CA2742969A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Anti-dll4 antibodies and uses thereof
MA33323B1 (fr) 2009-04-20 2012-06-01 Genentech Inc Thérapie adjuvante de cancer
WO2010124009A2 (en) 2009-04-21 2010-10-28 Schering Corporation Fully human anti-vegf antibodies and methods of using
CN102459346B (zh) 2009-04-27 2016-10-26 昂考梅德药品有限公司 制造异源多聚体分子的方法
TWI513465B (zh) 2009-06-25 2015-12-21 Regeneron Pharma 以ｄｌｌ４拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法
US9308258B2 (en) 2009-07-08 2016-04-12 Amgen Inc. Stable and aggregation free antibody FC molecules through CH3 domain interface engineering
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
NZ598929A (en) 2009-09-01 2014-05-30 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20110195494A1 (en) 2009-10-02 2011-08-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Dll4-binging molecules
ES2895226T3 (es) 2009-10-16 2022-02-18 Mereo Biopharma 5 Inc Combinación terapéutica y uso de anticuerpos antagonistas de DLL4 y agentes antihipertensivos
US20120207673A1 (en) 2009-10-23 2012-08-16 Daniel Christ Modified Variable Domain Molecules And Methods For Producing And Using Same
JO3183B1 (ar) 2010-01-29 2018-03-08 Regeneron Pharma طرق لمعالجة أمراض المناعة الذاتية مضادات dll4
JP6034696B2 (ja) 2010-02-12 2016-11-30 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ポリペプチド発現細胞の同定及び単離の方法
CA2787952C (en) 2010-02-23 2016-07-26 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for the treatment of ovarian cancer
MY160628A (en) 2010-03-02 2017-03-15 Abbvie Inc Therapeutic DLL4 Binding Proteins
JP2014500712A (ja) 2010-11-02 2014-01-16 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
US20130323265A1 (en) 2010-11-15 2013-12-05 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cancer with dll4 antagonists
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
TWI530489B (zh) 2011-03-22 2016-04-21 必治妥美雅史谷比公司 雙（氟烷基）－１，４－苯二氮呯酮化合物
EP2721070A1 (en) 2011-06-17 2014-04-23 Harris, Adrian, L. Methods of enhancing the response to radiation in tumor therapy using anti-dll4 antibodies
BR112014007035B1 (pt) 2011-09-23 2021-05-04 Oncomed Pharmaceuticals, Inc anticorpos biespecíficos que se ligam a vegf/dll4, composição farmacêutica e célula procariótica, fúngica ou de levedura que compreende os mesmos, moléculas de polinucleotídeo, vetor, usos terapêuticos e método para a produção de um anticorpo
US20150005475A1 (en) 2012-02-03 2015-01-01 Medimmune Limited Process for reducing antibody aggregate levels and antibodies produced thereby
RS58964B1 (sr) 2012-03-13 2019-08-30 Hoffmann La Roche Kombinovana terapija za lečenje karcinoma jajnika
BR122022015975B1 (pt) 2012-05-15 2024-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Anticorpos monoclonais, kit para o tratamento de um indivíduo afligido com um câncer, processo para medir pd-l1 membranoso em células tumorais isoladas e uso do anticorpo ou uma porção que se liga ao antígeno do mesmo
AR092325A1 (es) 2012-05-31 2015-04-15 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-dll4 y kit
EP2855523A4 (en) 2012-05-31 2016-02-17 Sorrento Therapeutics Inc ANTIGEN BINDING PROTEINS THAT BIND DLL-4
KR101535341B1 (ko) 2012-07-02 2015-07-13 한화케미칼 주식회사 Dll4에 특이적으로 결합하는 신규한 단일클론항체 및 이의 용도
HRP20211641T1 (hr) 2012-07-13 2022-02-04 Roche Glycart Ag Bispecifična protutijela anti-vegf/anti-ang-2 i njihova primjena u liječenju vaskularnih očnih bolesti
US20140093499A1 (en) 2012-09-28 2014-04-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical combinations comprising dual angiopoietin-2 / dll4 binders and anti-vegf agents
US20150368329A1 (en) 2012-10-15 2015-12-24 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods of Treating Ocular Diseases
EP2914961A4 (en) 2012-10-31 2016-04-20 Oncomed Pharm Inc METHODS AND MONITORING A TREATMENT BY AN ANTAGONIST OF DLL4
KR20210111353A (ko) 2012-11-01 2021-09-10 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
TW201438736A (zh) 2012-11-14 2014-10-16 Regeneron Pharma 以ｄｌｌ４拮抗劑治療卵巢癌之方法
US20140154255A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-vegf antibodies and their uses
EP3020731B1 (en) 2013-07-09 2019-06-12 ABLBio Novel dual-targeted protein specifically binding to dll4 and vegf, and use thereof
WO2015009856A2 (en) 2013-07-16 2015-01-22 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors
WO2015130751A1 (en) 2014-02-26 2015-09-03 Medimmune, Llc Methods of treatment with dll4 antagonists
EP3125937A4 (en) 2014-04-04 2017-11-01 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Treatment of gastric cancer
JP2017526641A (ja) 2014-07-11 2017-09-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｎｏｔｃｈ経路阻害
BR112017000703A2 (pt) 2014-07-16 2017-11-14 Genentech Inc métodos para tratar ou retardar a progressão do câncer, para reduzir ou inibir a reincidência do câncer, para tratar ou retardar a progressão da imunidade tumoral e para aumentar, intensificar ou estimular uma resposta ou função imune e kit
PE20170289A1 (es) 2014-08-19 2017-04-05 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos anti tigit
DK3212233T3 (da) 2014-10-31 2020-07-27 Oncomed Pharm Inc Kombinationsterapi til behandling af sygdom
AU2015369683C1 (en) 2014-12-23 2024-06-20 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to TIGIT
AU2016326609B2 (en) 2015-09-23 2023-03-09 Mereo Biopharma 5, Inc. Methods and compositions for treatment of cancer
CA2994858C (en) 2015-09-25 2024-01-23 Genentech, Inc. Anti-tigit antibodies and methods of use
AU2019380595A1 (en) 2018-11-15 2021-06-03 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods and monitoring of treatment with VEGF/DLL4 binding agent

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040123343A1 (en) * 2000-04-19 2004-06-24 La Rosa Thomas J. Rice nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement
US20040265307A1 (en) * 2002-06-14 2004-12-30 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
US20100076178A1 (en) * 2008-04-29 2010-03-25 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immumoglobulins and Uses Thereof
US20100150940A1 (en) * 2008-12-12 2010-06-17 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-igf antibodies
US20110172398A1 (en) * 2009-10-02 2011-07-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bispecific binding molecules for anti-angiogenesis therapy
US20110165162A1 (en) * 2009-12-01 2011-07-07 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods for Treating Cancers Comprising K-ras Mutations

Also Published As

Publication number Publication date
SI3485903T1 (sl) 2023-02-28
MX2018010331A (es) 2020-09-02
KR20140082719A (ko) 2014-07-02
CN107722122A (zh) 2018-02-23
CL2014000725A1 (es) 2014-09-05
HUE061002T2 (hu) 2023-04-28
US8858941B2 (en) 2014-10-14
CN104168914A (zh) 2014-11-26
US20150098949A1 (en) 2015-04-09
EP2758073A1 (en) 2014-07-30
US9376488B2 (en) 2016-06-28
PL3485903T3 (pl) 2023-06-12
TW201326204A (zh) 2013-07-01
DK2758073T3 (en) 2019-01-14
US20230279101A1 (en) 2023-09-07
CR20140172A (es) 2014-06-19
CY1121148T1 (el) 2020-05-29
US20180305449A1 (en) 2018-10-25
NZ623724A (en) 2016-09-30
LT2758073T (lt) 2019-01-10
SG11201400870WA (en) 2014-04-28
ES2707580T3 (es) 2019-04-04
JP2014530599A (ja) 2014-11-20
IL231628B (en) 2018-12-31
BR112014007035B1 (pt) 2021-05-04
PL2758073T3 (pl) 2019-04-30
HRP20230078T1 (hr) 2023-05-12
MX361712B (es) 2018-12-14
SI2758073T1 (sl) 2019-02-28
US11512128B2 (en) 2022-11-29
PT3485903T (pt) 2023-02-17
US9879084B2 (en) 2018-01-30
LT3485903T (lt) 2023-02-27
CN104168914B (zh) 2017-08-08
US20190062424A1 (en) 2019-02-28
JP6170496B2 (ja) 2017-07-26
ES2938628T3 (es) 2023-04-13
US10730940B2 (en) 2020-08-04
RS63965B1 (sr) 2023-03-31
PE20141537A1 (es) 2014-11-17
HRP20190044T1 (hr) 2019-02-22
IN2014KN00871A (ru) 2015-08-21
HUE042192T2 (hu) 2019-06-28
EP3485903A1 (en) 2019-05-22
CN107722122B (zh) 2022-05-27
NI201400024A (es) 2014-06-26
MX2014003558A (es) 2014-06-23
EP3485903B1 (en) 2022-11-16
WO2013044215A9 (en) 2014-04-03
CA2849562A1 (en) 2013-03-28
DK3485903T3 (da) 2023-02-06
MY188192A (en) 2021-11-24
AU2013201095B2 (en) 2015-09-17
KR102091293B1 (ko) 2020-03-20
US20170183406A1 (en) 2017-06-29
WO2013044215A1 (en) 2013-03-28
CA2849562C (en) 2020-07-21
EP2758073B1 (en) 2018-10-31
EA201490622A1 (ru) 2014-08-29
US20210061903A1 (en) 2021-03-04
WO2013044215A4 (en) 2013-06-27
AU2013201095C1 (en) 2019-12-05
RS58201B1 (sr) 2019-03-29
IL231628A0 (en) 2014-05-28
CO6940382A2 (es) 2014-05-09
US20160362499A1 (en) 2016-12-15
FI3485903T3 (fi) 2023-01-31
PT2758073T (pt) 2019-02-01
US20130164295A1 (en) 2013-06-27
BR112014007035A2 (pt) 2017-04-11
HK1199209A1 (en) 2015-06-26
TWI583699B (zh) 2017-05-21
AU2013201095A1 (en) 2013-04-11
EP2758073A4 (en) 2015-04-29
US9574009B2 (en) 2017-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029958B1 (ru) Антитела, связывающие фактор роста эндотелия сосудов (vegf)/дельта-подобный лиганд (dll4), и их применение
US9987357B2 (en) Methods and monitoring of treatment with a WNT pathway inhibitor
US9266959B2 (en) Methods of treating neuroendocrine tumors using frizzled-binding agents
UA117659C2 (uk) Виділене антитіло, яке специфічно зв&#39;язується з людським r-спондином 3 (rspo3)
JP6967003B2 (ja) がんの処置のための方法および組成物
EA026109B1 (ru) АГЕНТЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С РЕЦЕПТОРОМ Notch1, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
US20150132301A1 (en) Combination Therapy for Treatment of Cancer
US9599620B2 (en) Methods and monitoring of treatment with a DLL4 antagonist
US20160319034A1 (en) Met-binding agents and uses thereof
US20160137744A1 (en) Met-binding agents and uses thereof
US20170023576A1 (en) Notch3 antibodies and uses thereof
US20170022289A1 (en) Methods for treating cancer with notch1 antiboides
US20170157245A1 (en) Treatment of gastric cancer
US20150232570A1 (en) Methods of Treating Hematological Malignancies with Notch1 Antibodies

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM